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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023109898
(43)【公開日】2023-08-08
(54)【発明の名称】治療抗体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230801BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230801BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230801BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230801BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230801BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230801BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230801BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230801BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20230801BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230801BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230801BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20230801BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230801BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230801BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230801BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230801BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230801BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
C12P21/02 C
A61P35/00
A61P35/02
A61P35/04
A61P37/06
A61P37/02
A61P19/02
A61P29/00 101
A61K39/395 E
A61K39/395 T
A61K39/395 B
A61K39/395 J
【審査請求】有
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023082797
(22)【出願日】2023-05-19
(62)【分割の表示】P 2021114157の分割
【原出願日】2016-03-30
(31)【優先権主張番号】62/146,843
(32)【優先日】2015-04-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/146,504
(32)【優先日】2015-04-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/301,582
(32)【優先日】2016-02-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】トレーシー チャ－チェン クオ
(72)【発明者】
【氏名】ハビエル フェルナンド チャパロ リガース
(72)【発明者】
【氏名】ウェイ チェン
(72)【発明者】
【氏名】エイミー シャオ－ルー チェン
(72)【発明者】
【氏名】エドワード デリック パスクア
(72)【発明者】
【氏名】トーマス ジョン ヴァン ブラーコム
(72)【発明者】
【氏名】レイラ マリー ブースタニー
(72)【発明者】
【氏名】ウェイシェン ホー
(72)【発明者】
【氏名】イーク アンディ イェン
(72)【発明者】
【氏名】パーヴェル ストラップ
(72)【発明者】
【氏名】アーヴィンド ラジュパル
(57)【要約】 （修正有）
【課題】多発性骨髄腫の治療剤を提供する。
【解決手段】本発明は、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）およびＣＤ３（表面抗原分類３）に特異的に結合する抗体、例えば、全長抗体またはこれらの抗原結合断片に関する。本発明はまた、ＢＣＭＡを発現する細胞に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫疾患）を処置するための、ＢＣＭＡ抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体薬物コンジュゲート）、ＢＣＭＡ抗体を含む組成物、ならびにＢＣＭＡ抗体およびこれらのコンジュゲートを使用する方法に関する。本発明はさらに、ＣＤ３および腫瘍細胞抗原に特異的に結合するヘテロ多量体抗体（例えば、ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗体）に関する。このようなヘテロ多量体抗体を含む組成物、このようなヘテロ二量体抗体を生成および精製するための方法、ならびに診断剤および治療剤におけるこれらの使用も提供される。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）およびＣＤ３（表面抗原分類３）に特異的に結合する抗体、例えば、全長抗体またはこれらの抗原結合断片に関する。本発明はまた、ＢＣＭＡを発現する細胞に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫疾患）を処置するための、ＢＣＭＡ抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体薬物コンジュゲート）、ＢＣＭＡ抗体を含む組成物、ならびにＢＣＭＡ抗体およびこれらのコンジュゲートを使用する方法に関する。本発明はさらに、ＣＤ３および腫瘍細胞抗原に特異的に結合するヘテロ多量体抗体（例えば、ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗体）に関する。このようなヘテロ多量体抗体を含む組成物、このようなヘテロ二量体抗体を生成および精製するための方法、ならびに診断剤および治療剤におけるこれらの使用も提供される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、抗体が、（ｉ）配列番号１５０、１５１、または１５２を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１５３または１５４を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５５を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；および／または（ｉ）配列番号２０９を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２２１を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２２を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
抗体が、配列番号３３を含むＶＨ領域および配列番号３４を含むＶＬ領域を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
治療有効量の請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項4】
請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項5】
請求項４に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項6】
請求項１または２に記載の抗体または抗原結合断片を組換え産生する単離宿主細胞。
【請求項7】
抗体または抗原結合断片を生成する方法であって、抗体または抗原結合断片の産生をもたらす条件下で請求項６に記載の宿主細胞を培養することと、宿主細胞または培養物から抗体または抗原結合断片を単離することとを含む、方法。
【請求項8】
対象におけるＢＣＭＡを発現する細胞に関連した状態の処置剤であって、有効量の請求項１または２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３に記載の医薬組成物を含む、処置剤。
【請求項9】
状態が、がんである、請求項８に記載の処置剤。
【請求項10】
がんが、多発性骨髄腫、悪性形質細胞新生物、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーレル病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症に関連したびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性カストルマン病において生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、ならびに他のＢ細胞関連リンパ腫からなる群から選択されるＢ細胞関連がんである、請求項９に記載の処置剤。
【請求項11】
ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍増殖または進行の阻害剤であって、有効量の請求項１または２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３に記載の医薬組成物を含む、阻害剤。
【請求項12】
対象におけるＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移の阻害剤であって、有効量の請求項１または２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３に記載の医薬組成物を含む、阻害剤。
【請求項13】
ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍退縮の誘導剤であって、有効量の請求項１または２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３に記載の医薬組成物を含む、誘導剤。
【請求項14】
状態が、自己免疫障害である、請求項８に記載の処置剤。
【請求項15】
自己免疫障害が、全身性エリテマトーデスまたは関節リウマチである、請求項１４に記載の処置剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）および／またはＣＤ３（表面抗原分類３）に特異的に結合する抗体、例えば、全長抗体またはこれらの抗原結合断片に関する。本発明はまた、ＢＣＭＡを発現する細胞に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫疾患）を処置するためのＢＣＭＡ抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）、ＢＣＭＡ抗体を含む組成物、ならびにＢＣＭＡ抗体およびこれらのコンジュゲートを使用する方法に関する。本発明はさらに、ＣＤ３および腫瘍細胞抗原に特異的に結合するヘテロ多量体抗体（例えば、ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗体）に関する。このようなヘテロ多量体抗体を含む組成物、このようなヘテロ多量体抗体を生成および精製するための方法、ならびに診断剤および治療剤におけるこれらの使用も提供される。
【背景技術】
【0002】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、またはＴＮＦＲＳＦ１７）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡは、ｔ（４；１６）転座を含有する悪性ヒトＴ細胞リンパ腫において同定された。その遺伝子は、Ｂ細胞系統において選択的に発現され、形質芽球および形質細胞、抗体分泌細胞において最高に発現される。ＢＣＭＡは、それぞれ１μＭならびに１６ｎＭの親和性を伴って、２つのリガンド、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）（Ｂリンパ球刺激物質（ＢＬｙＳ）およびＡＰＯＬ関連白血球発現リガンド（ＴＡＬＬ－１）とも呼ばれる）ならびに増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）を結合させる。ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦがＢＣＭＡに結合すると、ＮＦ－カッパＢ、Ｅｌｋ－１、ｃ－Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ、およびｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼを伴うシグナリングカスケードが促進され、それにより、細胞生存および増殖のためのシグナルが生じる。
【0003】
ＢＣＭＡは、悪性Ｂ細胞、ならびに多発性骨髄腫、形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、および慢性リンパ球性白血病を含めたＢリンパ球を伴ういくつかのがんでも発現される。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および関節リウマチなどの形質芽球が関与する自己免疫疾患では、ＢＣＭＡ発現抗体産生細胞は、自分自身を攻撃する自己抗体を分泌する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
多発性骨髄腫の場合では、毎年、約２４，０００の新しい症例が米国において新たに診断されており、この数は、米国において新たに診断される血液がんの約１５％を占める。毎年、平均で１１，０００の死亡例が多発性骨髄腫から生じ、平均５年生存率は、約４４％であり、生存期間中央値は、５０～５５カ月である。多発性骨髄腫の現在の処置は、形質細胞アポトーシスおよび／または破骨細胞活性の低下に焦点が置かれている（例えば、化学療法、サリドマイド、レナリドミド、ビスホスホネート、および／またはプロテアソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））もしくはカルフィルゾミブなど）。しかし、多発性骨髄腫は、不治の疾患のままであり、ほとんどすべての患者は、これらの作用物質に対する耐性を発生させており、最終的には再発する。したがって、抗体および他の免疫療法剤を含む抗ＢＣＭＡアンタゴニスト（例えば、二重特異性抗体または抗体－薬物コンジュゲート）の使用などの多発性骨髄腫の代替の処置は、優れた治療剤をもたらすはずである。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本明細書に開示の発明は、ＢＣＭＡおよび／またはＣＤ３に結合する治療抗体を対象とする。ＢＣＭＡを含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）も提供される。さらに、ＣＤ３および腫瘍細胞抗原に特異的に結合するヘテロ多量体抗体（例えば、二重特異性抗体）（例えば、ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗体）も提供される。
【0006】
一態様では、本発明は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、（ａ）（ｉ）配列ＳＹＸ１ＭＸ２（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＰであり；Ｘ２は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである）（配列番号３０１）、ＧＦＴＦＸ１ＳＹ（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳである）（配列番号３０２）、またはＧＦＴＦＸ１ＳＹＸ２ＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＡもしくはＰであり、Ｘ３は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである（配列番号３０３）を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＡＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＧＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＹＡＤＸ９Ｘ１０ＫＧ（式中、Ｘ１は、Ｉ、Ｖ、Ｔ、Ｈ、Ｌ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｆ、Ｍ、もしくはＶであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ４は、Ｓ、Ｑ、Ｔ、Ａ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、もしくはＦであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｋ、Ｇ、もしくはＣであり、Ｘ８は、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｗ、Ｈ、もしくはＧであり、Ｘ９は、Ｖ、Ｒ、もしくはＬであり、Ｘ１０は、ＧもしくはＴである）（配列番号３０５）、またはＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｌ、Ｆ、もしくはＭであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ４は、ＧもしくはＳであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、もしくはＷである）（配列番号３０６）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＶＳＰＩＸ１Ｘ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＹであり、Ｘ２は、ＡもしくはＳであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｑ、Ｌ、Ｐ、もしくはＥである）（配列番号３０７）、またはＹＷＰＭＸ１Ｘ２（式中、Ｘ１は、Ｄ、Ｓ、Ｔ、もしくはＡであり、Ｘ２は、Ｉ、Ｓ、Ｌ、Ｐ、もしくはＤである）（配列番号３０８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／あるいは（ｂ）（ｉ）配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２（式中、Ｘ１は、Ｒ、Ｇ、Ｗ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｌ、Ｃ、もしくはＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、もしくはＲであり、Ｘ４は、Ｑ、Ｃ、Ｅ、Ｖ、もしくはＩであり、Ｘ５は、Ｓ、Ｐ、Ｇ、Ａ、Ｒ、もしくはＤであり、Ｘ６は、Ｖ、Ｇ、Ｉ、もしくはＬであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｐ、もしくはＧであり、Ｘ８は、Ｓ、Ｐ、Ｆ、Ａ、Ｍ、Ｅ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、もしくはＹであり、Ｘ９は、Ｉ、Ｔ、Ｖ、Ｅ、Ｓ、Ａ、Ｍ、Ｑ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、もしくはＦであり、Ｘ１０は、ＹもしくはＦであり、Ｘ１１は、Ｌ、Ｗ、もしくはＰであり、Ｘ１２は、Ａ、Ｓ、もしくはＧである）（配列番号３０９）を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列Ｘ１ＡＳＸ２ＲＡＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＤであり、Ｘ２は、ＳもしくはＩであり、Ｘ３は、ＴもしくはＰである）（配列番号３１０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｋ、Ｒ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｅ、Ｋ、もしくはＣであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｆ、もしくはＳであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１１）、またはＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｖ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｅ、Ｋ、Ｃ、Ｆ、もしくはＹであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｓ、もしくはＦであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１２）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【0007】
別の態様では、ＢＣＭＡに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号２、３、７、８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８３、８７、９２、９５、９７、９９、１０１、１０４、１０６、１１０、１１２、１１４、１１８、１２０、１２２、１２５、１２７、３１３、３１４、３６３、もしくは３６５に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号１、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、３１７、８１、８２、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９６、９８、１００、１０２、１０３、１０５、１０７、１０８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１６、１１７、１１９、１２１、１２３、１２４、１２６、１２８、３１５、３１６、もしくは３６４に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号１５０、１５１、１５２、１５６、もしくは１５７を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６９、１５４、１９４、１５９、１９５、１９６、１６２、１５８、１９８、１７７、１７８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０６、２０７、２０８、もしくは１７２を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５５、１６１、１９７、２０５、もしくは１６４を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、かつ／または、ＶＬ領域は、（ｉ）配列番号２０９、２７１、２７３、２７５、２５１、２７７、２６０、２７９、２４５、２８３、２８５、２８７、２９０、２９２、２３５、２９７、もしくは２９９を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２２１を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２５、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８１、２８２、２８４、２８６、２８８、２８９、２９１、２９３、２９４、２２９、２９６、２９８、もしくは３００を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１１２に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１個もしくは数個の保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつ／あるいはＶＬ領域は、配列番号３８に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１個もしくは数個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３５７に示した配列を含む軽鎖、および配列番号３５８に示した配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２０９４を有する発現ベクターによって産生されるＶＨ領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２０９３を有する発現ベクターによって産生されるＶＬ領域を含む。
【0008】
別の態様では、本発明は、本発明のＢＣＭＡ抗体の特異的部位で操作されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む単離抗体を提供する。一部の実施形態では、タグは、Ｑ、ＬＱＧ、ＬＬＱＧＧ（配列番号３１８）、ＬＬＱＧ（配列番号４５４）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号４５５）、ＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号４５６）、ＧＬＬＱＧ（配列番号４５７）、ＬＬＱ、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ（配列番号４５８）、ＧＬＬＱＧＧＧ（配列番号４５９）、ＧＬＬＱＧＧ（配列番号４６０）、ＧＬＬＱ（配列番号４６１）、ＬＬＱＬＬＱＧＡ（配列番号４６２）、ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）、ＬＬＱＹＱＧＡ（配列番号４６４）、ＬＬＱＧＳＧ（配列番号４６５）、ＬＬＱＹＱＧ（配列番号４６６）、ＬＬＱＬＬＱＧ（配列番号４６７）、ＳＬＬＱＧ（配列番号４６８）、ＬＬＱＬＱ（配列番号４６９）、ＬＬＱＬＬＱ（配列番号４７０）、ＬＬＱＧＲ（配列番号４７１）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号４７３）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号４７６）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号４７７）、ＬＬＱＧＰ（配列番号４７８）、ＬＬＱＰ（配列番号４７９）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号４８０）、ＬＬＱＡＰＧＫ（配列番号４８１）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号４８２）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号４８３）、およびＬＬＱＬＱＧ（配列番号４８４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0009】
一つの変形では、本発明は、本発明のＢＣＭＡ抗体の２２２、３４０、または３７０位でアシルドナーグルタミン含有タグおよびアミノ酸修飾を含む単離抗体を提供する。一部の実施形態では、アミノ酸修飾は、リシンからアルギニンへの置換である。
【0010】
一部の実施形態では、本発明のＢＣＭＡ抗体は、リンカーをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ（アセチル－リシン－グリシン）、アミノカプロン酸、Ａｃ－Ｌｙｓ－β－Ａｌａ（アセチル－リシン－β－アラニン）、アミノ－ＰＥＧ２（ポリエチレングリコール）－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ３－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ（アセチル－リシン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、アミノカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、［（３Ｒ，５Ｒ）－１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］プロパノイル｝ピペリジン－３，５－ジイル］ビス－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、［（３Ｓ，５Ｓ）－１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］プロパノイル｝ピペリジン－３，５－ジイル］ビス－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、プトレシン、およびＡｃ－Ｌｙｓ－プトレシンからなる群から選択される。
【0011】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、抗体または抗原結合断片は、細胞傷害性剤、免疫調節剤、造影剤、治療タンパク質、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートされている、コンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、作用物質は、それだけに限らないが、アントラサイクリン、オーリスタチン、カンプトテシン、コンブレタスタチン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、インドリノ－ベンゾジアゼピン二量体、メイタンシン、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、タキサン、ビンカアルカロイド、ツブリシン、ヘミアステルリン、スプリセオスタチン、プラジエノライド、およびこれらの立体異性体、アイソスター、類似体、または誘導体を含めた細胞傷害性剤である。例えば、細胞傷害性剤は、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤ）、０１０１（２－メチルアラニル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－｛［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（１，３－チアゾール－２－イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン－１－イル｝－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、３３７７（Ｎ，２－ジメチルアラニル－Ｎ－｛（１Ｓ，２Ｒ）－４－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシル－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル｝－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、０１３１（２－メチル－Ｌ－プロリ－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシ－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、または０１２１（２－メチル－Ｌ－プロリ－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（２Ｓ）－１－メトキシ－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である。
【0012】
一部の実施形態では、本発明は、式：抗体－（アシルドナーグルタミン含有タグ）－（リンカー）－（細胞傷害性剤）を含むコンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、アミノ酸配列ＬＬＱＧ（配列番号３１９）および／またはＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号３３９）を含み、リンカーは、アセチル－リシン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニルまたはアミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２を含む。一部の実施形態では、コンジュゲートは、１）抗体－ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号３３９）－（アセチル－リシン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ））－０１０１、２）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号３１９）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、および３）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号３１９）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７からなる群から選択される。一部の実施形態では、コンジュゲートは、抗体位置２２２でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換をさらに含む。一部の実施形態では、コンジュゲートは、抗体位置Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ａでアミノ酸置換をさらに含む。
【0013】
別の態様では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体を生成する方法であって、ＢＣＭＡ抗体の産生をもたらす条件下で宿主細胞を培養することと、宿主細胞または培養物からＢＣＭＡ抗体を単離することとを含む、方法が提供されている。
【0014】
別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡ発現に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫障害）を処置するための医薬の製造における本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用を提供する。一部の実施形態では、腫瘍増殖または進行を阻害するための医薬の製造における本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移を阻害するための医薬の製造における本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。一部の実施形態では、腫瘍退縮を誘導するための医薬の製造における本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。
【0015】
別の態様では、本発明は、ＣＤ３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３４５、３４７、３４９、３５１、４４４、３５４、３５６、３７８、４４２、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、もしくは４００に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５５、３７７、４４３、４４５、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、もしくは３９９に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２４もしくは３８８に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３２３もしくは３８７に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号３３１、３３２、３３３、４０１、４０２、４０３、４０７、４０８、４１５、４１６、４１８、４１９、４２０、４２４、４２５、４２６、４４６、４４７、もしくは４４８に示した配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号３３４、３３６、３３７、３３８、３３９、４０４、４０５、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１７、４１８、４２１、４２２、４２７、４２８、４４９、もしくは４５０に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３３５、４０６、４２３、４２９、もしくは４５１に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびに／または、ＶＬ領域は、（ｉ）配列番号３４０、３４３、４３０、４３１、４３５、もしくは４４０、４４１に示した配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３４１、４３３、４５２、もしくは４３６に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３４２、４３２、４３４、４３７、４３８、４３９、４４６、もしくは４５３に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号３３１、３３２、３３３、４０１、４０７、もしくは４０８に示した配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号３３６、４０４、４０５、もしくは４１７に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３３５もしくは４０６に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびに／または、ＶＬ領域は、（ｉ）配列番号３４３もしくは４４１に示した配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３４１もしくは４３６に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３４２もしくは４３９に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２５１３を有する発現ベクターによって産生されるＶＨ領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２５１２を有する発現ベクターによって産生されるＶＬ領域を含む。
【0016】
別の態様では、ＣＤ３に特異的に結合し、本明細書に記載の本発明の抗ＣＤ３抗体と競合する単離抗体が提供されている。
【0017】
別の態様では、本発明は、二重特異性抗体であって、ヒト免疫エフェクター細胞に位置したエフェクター抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員することができる二重特異性抗体の第１の抗体可変ドメインを含み、標的抗原に特異的に結合することができる二重特異性抗体の第２の抗体可変ドメインを含む全長ヒト抗体であり、第１の抗体可変ドメインは、配列番号３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３４５、３４７、３４９、３５１、４４４、３５４、３５６、３７８、４４２、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、もしくは４００に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、および／または配列番号３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５５、３７７、４４３、４４５、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、もしくは３９９に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、二重特異性抗体を提供する。一部の実施形態では、第１の抗体可変ドメインは、（ｉ）配列番号３３１、３３２、３３３、４０１、４０２、４０３、４０７、４０８、４１５、４１６、４１８、４１９、４２０、４２４、４２５、４２６、４４６、４４７、もしくは４４８に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３３４、３３６、３３７、３３８、３３９、４０４、４０５、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１７、４１８、４２１、４２２、４２７、４２８、４４９、もしくは４５０に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号３３５、４０６、４２３、４２９、もしくは４５１に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または（ｉ）配列番号３４０、３４３、４３０、４３１、４３５、もしくは４４０、４４１に示した配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３４１、４３３、４５２、もしくは４３６に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３４２、４３２、４３４、４３７、４３８、４３９、４４６、もしくは４５３に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。一部の実施形態では、第１の抗体可変ドメインは、配列番号３２４もしくは３８８に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３２３もしくは３８７に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含み、第２の抗体可変ドメインは、配列番号１１２に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３８に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【0018】
一部の実施形態では、第２の抗体可変ドメインは、（ａ）（ｉ）配列ＳＹＸ１ＭＸ２（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＰであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである）（配列番号３０１）、ＧＦＴＦＸ１ＳＹ（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳである）（配列番号３０２）、またはＧＦＴＦＸ１ＳＹＸ２ＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＡもしくはＰであり、Ｘ３は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである）（配列番号３０３）を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＡＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＧＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＹＡＤＸ９Ｘ１０ＫＧ（式中、Ｘ１は、Ｉ、Ｖ、Ｔ、Ｈ、Ｌ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｆ、Ｍ、もしくはＶであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ４は、Ｓ、Ｑ、Ｔ、Ａ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、もしくはＦであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｋ、Ｇ、もしくはＣであり、Ｘ８は、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｗ、Ｈ、もしくはＧであり、Ｘ９は、Ｖ、Ｒ、もしくはＬであり、Ｘ１０は、ＧもしくはＴである）（配列番号３０５）、またはＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｌ、Ｆ、もしくはＭであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ４は、ＧもしくはＳであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、もしくはＷである）（配列番号３０６）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＶＳＰＩＸ１Ｘ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＹであり、Ｘ２は、ＡもしくはＳであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｑ、Ｌ、Ｐ、もしくはＥである）（配列番号３０７）、またはＹＷＰＭＸ１Ｘ２（式中、Ｘ１は、Ｄ、Ｓ、Ｔ、もしくはＡであり、Ｘ２は、Ｉ、Ｓ、Ｌ、Ｐ、もしくはＤである）（配列番号３０８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／あるいは（ｂ）（ｉ）配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２（式中、Ｘ１は、Ｒ、Ｇ、Ｗ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｌ、Ｃ、もしくはＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、もしくはＲであり、Ｘ４は、Ｑ、Ｃ、Ｅ、Ｖ、もしくはＩであり、Ｘ５は、Ｓ、Ｌ、Ｐ、Ｇ、Ａ、Ｒ、もしくはＤであり、Ｘ６は、Ｖ、Ｇ、もしくはＩであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｅ、Ｄ、もしくはＰであり、Ｘ８は、Ｓ、Ｐ、Ｆ、Ａ、Ｍ、Ｅ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、もしくはＹであり、Ｘ９は、Ｉ、Ｔ、Ｖ、Ｅ、Ｓ、Ａ、Ｍ、Ｑ、Ｙ、Ｈ、もしくはＲであり、Ｘ１０は、ＹもしくはＦであり、Ｘ１１は、Ｌ、Ｗ、もしくはＰであり、Ｘ１２は、Ａ、Ｓ、もしくはＧである）（配列番号３０９）を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列Ｘ１ＡＳＸ２ＲＡＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＤであり、Ｘ２は、ＳもしくはＩであり、Ｘ３は、ＴもしくはＰである）（配列番号３１０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｋ、Ｒ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｅ、Ｋ、もしくはＣであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｆ、もしくはＳであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１１）、またはＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｖ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｅ、Ｋ、Ｃ、Ｆ、もしくはＹであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｓ、もしくはＦであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１２）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。一部の実施形態では、第２の抗体可変ドメインは、（ｉ）配列番号１５０、１５１、１５２、１５６、１５７、３４８、３４９、３５３、３５４、もしくは３５５に示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６９、１５４、１９４、１５９、１９５、１９６、１６２、１５８、１９８、１７７、１７８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０６、２０７、２０８、１７２、３５０、３５１、３５６、もしくは３５７に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５５、１６１、１９７、２０５，１６４、もしくは３５２、もしくは３５８に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、かつ／または（ｉ）配列番号２０９、２７１、２７３、２７５、２５１、２７７、２６０、２７９、２４５、２８３、２８５、２８７、２９０、２９２、２３５、２９７、２９９、もしくは３６１に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２２１、３５９、もしくは３６２に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１１、２２５、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８１、２８２、２８４、２８６、２８８、２８９、２９１、２９３、２９４、２２９、２９６、２９８、３００、もしくは３６０に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【0019】
一部の実施形態では、（ａ）第１の抗体可変ドメインは、（ｉ）配列番号３３１、３３２、３３３、４０１、４０７、もしくは４０８に示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号３３６、４１７、４０４、もしくは４０５に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３３５もしくは４０６に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、および／または（ｉ）配列番号３４３もしくは４４１に示した配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３４１もしくは４３６に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３４２もしくは４３９に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含み、（ｂ）第２の抗体可変ドメインは、（ｉ）配列番号１５１、１５６、もしくは１５７に示した配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１５８もしくは１５９に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１５５に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖ＶＨ領域を含む、かつ／または（ｉ）配列番号２０９に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２２１に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２５に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【0020】
一部の実施形態では、二重特異性抗体の第１および第２の抗体可変ドメインはともに、ヒトＩｇＧ２（配列番号４９３）のヒンジ領域内の２２３、２２５、および２２８位ならびにＣＨ３領域内の４０９または３６８位（ＥＵ番号付けスキーム）でアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ２の２６５位でアミノ酸修飾をさらに含む。
【0021】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは二重特異性）またはこれらのコンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）のいずれかを含む医薬組成物を提供する。
【0022】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは二重特異性）またはこれらのコンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）のいずれかを組換え産生する細胞株も提供する。
【0023】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは二重特異性）またはこれらのコンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）のいずれかをコードする核酸も提供する。本発明は、本明細書に記載のこれらの抗体のいずれかの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする核酸も提供する。
【0024】
本発明は、有効量の本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは二重特異性）またはこれらのコンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）のいずれかを含むキットも提供する。
【0025】
本発明は、必要とする対象における状態を処置する（例えば、腫瘍増殖／進行阻害、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移阻害、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍退縮誘導）方法であって、本明細書に記載の単離抗体（例えば、ＢＣＭＡ）もしくは結合断片、二重特異性抗体（ＢＣＭＡ－ＣＤ３二重特異性）、またはこれらのコンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）を準備することと、前記抗体またはコンジュゲートを前記対象に投与することとを含む、方法も提供する。
【0026】
対象における腫瘍抗原を発現する悪性細胞に関連した状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法も提供されている。一部の実施形態では、状態は、がんである。一部の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、悪性形質細胞新生物、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーレル病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、炎症に関連したびまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性カストルマン病において生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、ならびに他のＢ細胞関連リンパ腫からなる群から選択されるＢ細胞関連がんである。一部の実施形態では、状態は、自己免疫障害、例えば、全身性エリテマトーデスまたは関節リウマチなどである。
【0027】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスのものである。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、グリコシル化された定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、１つまたは複数のヒトＦｃガンマ受容体への結合親和性が増大した定常領域を含む。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図1A】本発明の選択された抗ＢＣＭＡ抗体とヒトＢＣＭＡとの相互作用のフィット曲線を含む二重参照センサーグラムを表すグラフである。
【図1B】本発明の選択された抗ＢＣＭＡ抗体とヒトＢＣＭＡとの相互作用のフィット曲線を含む二重参照センサーグラムを表すグラフである。
【図1C】本発明の選択された抗ＢＣＭＡ抗体とヒトＢＣＭＡとの相互作用のフィット曲線を含む二重参照センサーグラムを表すグラフである。
【図1D】本発明の選択された抗ＢＣＭＡ抗体とヒトＢＣＭＡとの相互作用のフィット曲線を含む二重参照センサーグラムを表すグラフである。
【図2】Ｐ６Ｅ０１＿ＶＨＶＬ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、Ｐ４Ｇ４－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、およびＰ１Ａ１１－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１を含むＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける様々な抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを表すグラフである。ＮＮＣは、陰性対照非ＢＣＭＡ抗体である。「ＬＣＱ０５」および「ＬＣＱ０４」は、それぞれ、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ配列番号４７４および４７５に対応する。
【図3】１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－０１０１、３）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－０１０１、４）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、および５）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１とコンジュゲートしたＬ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１抗体を含むＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＮＮＣは、対照非ＢＣＭＡ抗体である。「ＬＣＱ０５」およびＨ７ｃは、それぞれ、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ配列番号４７４および配列番号４５４に対応する。
【図4】やはり、１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、３）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、４）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、および５）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１とコンジュゲートしたＬ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１抗体を含むＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＮＮＣは、対照非ＢＣＭＡ抗体（抗体－Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１）である。「ＬＣＱ０５」およびＨ７ｃは、それぞれ、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ配列番号４７４および配列番号４５４に対応する。
【図5】やはり、ＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。抗ＢＣＭＡ抗体ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ－Ｃ２９（「Ｃｏｍｂｏ Ｃ２９ ＤＩ」）は、３ｍｇ／ｋｇのＮＮＣ、対照非ＢＣＭＡ抗体（抗体－Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１）と比較して０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３８ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量でＨ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－１３１にコンジュゲートされている。Ｈ７ｃは、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ配列番号４５４に対応する。
【図6A】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図6B】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図6C】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図6D】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図6E】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図6F】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。二重特異性抗体の単回用量後のＢ細胞枯渇が、スタディ前カウントのパーセンテージとして示されている。
【図7A】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図7B】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図7C】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図7D】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図7E】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図7F】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞動態を二重特異性抗体の単回用量後に追跡した。
【図8A】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｔ細胞動態および増殖に対する一価ＣＤ３抗体の効果を分析した。
【図8B】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｔ細胞動態および増殖に対する一価ＣＤ３抗体の効果を分析した。
【図9A】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を分析した。
【図9B】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を分析した。
【図9C】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を分析した。
【図9D】カニクイザルにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を表すグラフである。Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を分析した。
【図10A】選択した抗ＣＤ３抗体が、ヒトおよびカニクイザルＰＢＭＣに対してチミジン取込み読み値を有したことを示すグラフである。
【図10B】選択した抗ＣＤ３抗体が、ヒトおよびカニクイザルＰＢＭＣに対してチミジン取込み読み値を有したことを示すグラフである。
【図11A】すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有することを示すグラフである。
【図11B】すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有することを示すグラフである。
【図11C】すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有することを示すグラフである。
【図11D】すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有することを示すグラフである。
【図12】ヒト抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の単回用量が、正所性ＭＭ１．Ｓ骨髄腫モデルにおいて用量依存的様式で腫瘍退縮をもたらしたことを示すグラフである。
【図13】ヒト抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の二回用量が、正所性Ｍｏｌｐ８骨髄腫モデルにおいて腫瘍退縮を増大させたことを示すグラフである。
【図14】単独の、または多発性骨髄腫のスタンダードオブケア（レナリドミドもしくはボルテゾミブ）と組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体が、正所性Ｍｏｌｐ８腫瘍モデルにおいて、組み合わせたレナリドミドおよびボルテゾミブより効果的であることを示すグラフである。
【図15A】カルフィルゾミブ、レナリドミド、およびドキソルビシンが、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体単独と比較して、ＯＰＭ２細胞上で抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の機能に対して負の効果を有さないことを示すグラフである。
【図15B】カルフィルゾミブ、レナリドミド、およびドキソルビシンが、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体単独と比較して、ＯＰＭ２細胞上で抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の機能に対して負の効果を有さないことを示すグラフである。
【図15C】カルフィルゾミブ、レナリドミド、およびドキソルビシンが、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体単独と比較して、ＯＰＭ２細胞上で抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の機能に対して負の効果を有さないことを示すグラフである。
【図16】各分子単独と比較した、カルフィルゾミブおよびレナリドミドと組み合わせたときの抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の機能に対する相乗効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0029】
本明細書に開示の発明は、ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に特異的に結合する抗体および抗体コンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）を提供する。本発明は、これらの抗体およびコンジュゲートをコードするポリヌクレオチド、これらの抗体およびコンジュゲートを含む組成物、ならびにこれらの抗体およびコンジュゲートを作製する方法も提供する。さらに、本明細書に開示の発明は、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する抗体、ならびにＣＤ３および腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ）に特異的に結合するヘテロ二量体抗体（例えば、二重特異性抗体）を提供する。本発明は、これらの抗体をコードするポリヌクレオチド、これらの抗体を含む組成物、ならびにこれらの抗体を作製するおよび使用する方法も提供する。本発明はさらに、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは二重特異性抗体）またはこれらのコンジュゲート（ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）を使用して、がんまたは自己免疫疾患などの対象における悪性ＢＣＭＡ発現に関連した状態を処置するための方法を提供する。
【0030】
一般的な技法
本発明の実施は、別段に示されていない限り、当技術分野の技術の範囲内である分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣例的な技法を使用することになる。このような技法は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などに完全に説明されている。
本発明の実施は、別段に示されていない限り、当技術分野の技術の範囲内である分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣例的な技法を使用することになる。このような技法は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などに完全に説明されている。
【0031】
定義
「抗体」は、免疫グロブリン分子であって、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置した、少なくとも１つの抗原認識部位を通じて標的、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどに特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子である。本明細書では、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、ならびにドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ抗体を含む）、ならびに抗体を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成も包含する。抗体は、任意のクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＭなど（またはそのサブクラス）の抗体を含み、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および３次元配置は、周知である。
「抗体」は、免疫グロブリン分子であって、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置した、少なくとも１つの抗原認識部位を通じて標的、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどに特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子である。本明細書では、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、ならびにドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ抗体を含む）、ならびに抗体を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成も包含する。抗体は、任意のクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＭなど（またはそのサブクラス）の抗体を含み、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および３次元配置は、周知である。
【0032】
抗体の「抗原結合断片」または「抗原結合部分」という用語は、本明細書では、所与の抗原（例えば、ＢＣＭＡまたはＣＤ３）に特異的に結合する能力を保持するインタクト抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクト抗体の断片によって果たされうる。用語の抗体の「抗原結合断片」内に包含される結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４～５４６、１９８９）、ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）がある。
【0033】
標的（例えば、ＢＣＭＡタンパク質またはＣＤ３タンパク質）に「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で互換的に使用される）抗体、抗体コンジュゲート、またはポリペプチドは、当技術分野でよく理解されている用語であり、このような特異的または優先的結合を判定する方法も、当技術分野で周知である。分子が特定の細胞または物質と、それが代替の細胞または物質と反応または会合するより、頻繁に、急速に、大きい継続時間および／または大きい親和性で、反応または会合する場合、分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を呈すると言われる。抗体は、標的に、それが他の物質に結合するより大きい親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより大きい継続時間で結合する場合、「特異的に結合し」または「優先的に結合する」。例えば、ＢＣＭＡエピトープまたはＣＤ３エピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、抗体であって、それが他のＢＣＭＡエピトープ、非ＢＣＭＡエピトープ、他のＣＤ３エピトープ、または非ＣＤ３エピトープに結合するより、大きい親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより大きい継続時間でこのエピトープを結合させる、抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的または優先的に結合してもよく、結合しなくてもよいことも理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を必ずしも要求しない（しかし、それは、排他的結合を含むことができる）。一般に、しかし必ずしもではないが、結合への言及は、優先的結合を意味する。
【0034】
抗体の「可変領域」は、単独または組合せで、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。当技術分野で公知であるように、重および軽鎖の可変領域は、それぞれ、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって近接して一緒に保持されており、他の鎖からのＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを判定するための少なくとも２つの技法：（１）異種間配列変異性に基づく手法（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ））、および（２）抗原抗体複合体の結晶学的スタディに基づく手法（Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７～９４８）が存在する。本明細書では、ＣＤＲは、いずれかの手法によって、または両手法の組合せによって定義されるＣＤＲを指すことができる。
【0035】
可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ、接触、ならびに／もしくはコンホメーション定義、または当技術分野で周知のＣＤＲ判定の任意の方法の定義に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、Ｋａｂａｔらによって元来定義された超可変領域として同定される場合がある。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．を参照。ＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａらによって元来記述された構造的ループ構造として同定することもできる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７～８８３、１９８９を参照。ＣＤＲ同定の他の手法としては、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェア（現在、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用して導出される「ＡｂＭ定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２～７４５、１９９６に示された、観察される抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」がある。ＣＤＲの「コンホメーション定義」として本明細書で呼ばれる別の手法では、ＣＤＲの位置を、抗原結合にエンタルピー的寄与をする残基として同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６～１１６６、２００８を参照。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記手法の１つに厳密には従わない場合があるが、それにもかかわらず、これらは、特定の残基もしくは残基の群、またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合に著しくインパクトを与えないという予測または実験的所見を踏まえると短くまたは長くすることができるとはいえ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部と重なることになる。本明細書では、ＣＤＲは、手法の組合せを含めた当技術分野で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用される方法は、これらの手法のいずれかによって定義されるＣＤＲを利用することができる。１つを超えるＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触、および／またはコンホメーション定義のいずれかに従って定義されうる。
【0036】
本明細書では、「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる可能性がある天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一抗原部位に向けられて、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に向けられている。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られるものとしての抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を要求すると解釈されるべきでない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５、１９７５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することができる。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２～５５４、１９９０に記載された技法を使用して作られるファージライブラリーから単離することもできる。
【0037】
本明細書では、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはこれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合部分配列など）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、またはウサギなどのＣＤＲ由来の残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体内にも移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列内にも見出だされないが、抗体性能をさらに洗練および最適化するのに含められる残基を含みうる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むことになる。ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように修飾されたＦｃ領域を有する抗体が好適である。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に関して変更されている１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、またはＣＤＲ Ｈ３）を有し、これらのＣＤＲは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【0038】
本明細書では、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のものに対応するアミノ酸配列を有する、かつ／または当業者に公知もしくは本明細書に開示のヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製された抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。１つのこのような例は、マウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して生成されうる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、この場合ファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９～３１４、１９９６；Ｓｈｅｅｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、９５：６１５７～６１６２、１９９８；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１、１９９１；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１、１９９１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座が内因性遺伝子座の代わりに遺伝子導入で導入された動物、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されたマウスの免疫化によって作製することもできる。この手法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号に記載されている。代わりに、ヒト抗体は、標的抗原に向けられた抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化することによって調製されてもよい（このようなＢリンパ球は、個体からもしくはｃＤＮＡの単細胞クローニングから回収することができ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫されうる）。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁、１９８５；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６～９５、１９９１、および米国特許第５，７５０，３７３号を参照。
【0039】
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体などを指すように意図されている。
【0040】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、好ましくは相対的に短い（例えば、１０～１００アミノ酸）、任意の長さのアミノ酸の鎖を指すのに本明細書で互換的に使用される。鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、これは、修飾アミノ酸を含むことができ、かつ／または非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、天然に、あるいは介入；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他のマニピュレーションもしくは修飾、例えば、標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどによって修飾されたアミノ酸鎖も包含する。例えば、アミノ酸の１種または複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、および当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義内に含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合鎖として存在しうることが理解される。
【0041】
「一価抗体」は、１分子当たり１つの抗原結合部位を含む（例えば、ＩｇＧまたはＦａｂ）。一部の事例では、一価抗体は、１つを超える抗原結合部位を有しうるが、結合部位は、異なる抗原由来である。
【0042】
「単一特異性抗体」は、１分子当たり２つの同一の抗原部位を含み（例えば、ＩｇＧ）、その結果、２つの結合部位は、抗原上の同一のエピトープを結合させる。よって、これらは、１つの抗原分子への結合を互いに競合する。自然において見つかるほとんどの抗体は、単一特異性である。一部の事例では、単一特異性抗体は、一価抗体でもありうる（例えば、Ｆａｂ）。
【0043】
「二価抗体」は、１分子当たり２つの抗原結合部位を含む（例えば、ＩｇＧ）。一部の事例では、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は、二重特異性でありうる。
【0044】
「二重特異性」または「デュアル特異性」は、２つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッド抗体である。二重特異性抗体の２つの抗原結合部位は、２つの異なるエピトープに結合し、これらのエピトープは、同じまたは異なるタンパク質標的上に存在しうる。
【0045】
「二官能性」は、２本のアーム中に同一の抗原結合部位（すなわち、同一のアミノ酸配列）を有する抗体であるが、各結合部位は、２つの異なる抗原を認識しうる。
【0046】
「ヘテロ多量体」、「ヘテロ多量体複合体」、または「ヘテロ多量体ポリペプチド」は、少なくとも第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む分子であって、第２のポリペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸残基によって第１のポリペプチドとアミノ酸配列が異なる、分子である。ヘテロ多量体は、第１および第２のポリペプチドによって形成される「ヘテロ二量体」を含むことができ、または第１および第２のポリペプチドに加えてポリペプチドが存在するより高い秩序の三次構造を形成しうる。
【0047】
「ヘテロ二量体」、「ヘテロ二量体タンパク質」、「ヘテロ二量体複合体」、または「ヘテロ多量体ポリペプチド」は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む分子であって、第２のポリペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸残基によって第１のポリペプチドとアミノ酸配列が異なる、分子である。
【0048】
「ヒンジ領域」、「ヒンジ配列」、およびこれらの変形は、本明細書では、例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、ＩｍｍｕｎｏＢｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．、ＮＹ）（４版、１９９９）；Ｂｌｏｏｍら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）、６：４０７～４１５；Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、（１９９７）、２０９：１９３～２０２に例示されている当技術分野で公知の意味を含む。
【0049】
「免疫グロブリン様ヒンジ領域」、「免疫グロブリン様ヒンジ配列」、およびこれらの変形は、本明細書では、免疫グロブリン様または抗体様分子（例えば、イムノアドヘシン）のヒンジ領域およびヒンジ配列を指す。一部の実施形態では、免疫グロブリン様ヒンジ領域は、そのキメラ形態を含めて、任意のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４サブタイプ由来であり得、もしくはそれに由来し得、またはＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＭ由来であり得、例えば、キメラＩｇＧ１／２ヒンジ領域でありうる。
【0050】
用語「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」は、本明細書では、活性化されて標的細胞の生存能に影響しうるヒト免疫系内の細胞の天然レパートリー内の細胞を指す。標的細胞の生存能は、細胞生存、増殖、および／または他の細胞と相互作用する能力を含みうる。
【0051】
本発明の抗体は、当技術分野で周知の技法、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、もしくはこのような技術の組合せ、または当技術分野において容易に分かる他の技術を使用して生成することができる（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ，Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：１６２８～５０、１９９９、およびＦｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、３７３（４）：９２４～４０、２００７を参照）。
【0052】
当技術分野で公知であるように、本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはこれらの類似体、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによって鎖中に組み込まれうる任意の基質でありうる。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびこれらの類似体などを含みうる。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、鎖を集合させる前または後に授けることができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチドコンポーネントによって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどによって重合後にさらに修飾されてもよい。修飾の他のタイプとしては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドの１つまたは複数の類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）を有するものおよび荷電連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を有するもの、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ－Ｌ－リシンなど）などを含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結を有するもの（例えば、アルファアノマー核酸など）など、ならびにポリヌクレオチドの無修飾形態がある。さらに、糖の中に通常存在するヒドロキシル基のいずれも、例えば、ホスホネート基、リン酸基によって置き換えられ、標準的な保護基によって保護され、もしくは追加のヌクレオチドへの追加の連結をもたらすように活性化され得、または固体支持体にコンジュゲートされうる。５’および３’末端ＯＨは、リン酸化し、またはアミン、もしくは１～２０炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルも、標準的な保護基に誘導体化されうる。ポリヌクレオチドは、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－、または２’－アジド－リボース、炭素環糖類似体、アルファ－またはベータ－アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロースまたはリキソースなど、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、およびメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体を含めた、当技術分野で一般に公知であるリボースまたはデオキシリボース糖の類似型も含有することができる。１個または複数のホスホジエステル連結を代替の連結基によって置き換えることができる。これらの代替の連結基としては、それだけに限らないが、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）（式中、各ＲまたはＲ’は、独立に、Ｈ、またはエーテル（－Ｏ－）連結を含有してもよい置換もしくは非置換のアルキル（１～２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはアラルジルである）によって置き換えられている実施形態がある。ポリヌクレオチド中のすべての連結が同一である必要はない。前記記述は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めて本明細書に言及されるすべてのポリヌクレオチドに当てはまる。
【0053】
当技術分野で公知であるように、抗体の「定常領域」は、単独または組合せで抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
【0054】
本明細書では、「実質的に純粋な」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、さらにより好ましくは少なくとも９８％純粋、最も好ましくは少なくとも９９％純粋である材料を指す。
【0055】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートを取り込むためのベクターのレシピエントでありうる、またはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然の、偶発的な、または意図的な突然変異に起因して元の親細胞と必ずしも完全に同一でない場合がある（形態において、またはゲノムＤＮＡ補体において）。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。
【0056】
当技術分野で公知であるように、用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域でありうる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動しうるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、位置Ｃｙｓ２２６におけるアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端に伸びるように通常定義される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスのものである。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２つの定常領域、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。
【0057】
当技術分野で使用される場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好適なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体を結合させるもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライスされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは同様のアミノ酸配列を有し、その細胞質ドメインが主に異なる。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７～９２、１９９１；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５～３４、１９９４；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０～４１、１９９５に総説されている。「ＦｃＲ」には、新生児受容体、ＦｃＲｎも含まれ、これは、母体ＩｇＧの胎仔への移動を担う（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７、１９７６；およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９、１９９４）。
【0058】
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、第１の抗体またはその抗原結合断片（もしくは部分）が、第２の抗体またはその抗原結合部分の結合と十分同様の様式でエピトープに結合し、その結果、第１の抗体のその同族エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下で検出可能に低下することを意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に低下する残された選択は、当てはまりうるが、そうである必要はない。すなわち、第１の抗体は、第２の抗体が第１の抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合を阻害することなく、第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害することができる。しかし、各抗体が、他の抗体のその同族エピトープまたはリガンドとの結合を、同じ、より大きい、またはより少ない程度であってもなくても検出可能に阻害する場合、抗体は、これらのそれぞれのエピトープの結合を互いに「交差競合する」と言われる。競合および交差競合する抗体はともに、本発明によって包含されている。このような競合または交差競合が起こる機構（例えば、立体障害、コンホメーション変化、または共通エピトープもしくはその部分への結合）にかかわらず、当業者は、本明細書に提供される教示に基づいて、このような競合および／または交差競合する抗体が包含され、本明細書に開示の方法に有用でありうることを理解するはずである。
【0059】
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節などがある。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して査定することができる。
【0060】
「天然配列Ｆｃ領域」は、自然において見つかるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列と異なり、それでも天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書のバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは、これらと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、これらと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有することになる。
【0061】
用語「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に帰する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、それだけに限らないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、食作用、Ｃ１ｑ結合、および細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節がある。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して査定することができる。エフェクター機能の例示的な測定は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑ結合によるものである。
【0062】
本明細書では、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、引き続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されたものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを使用して査定することができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞がある。代替としてまたは追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２～６５６に開示されたものなどの動物モデルにおいて査定することができる。
【0063】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、補体系の第１のコンポーネント（Ｃ１ｑ）の同族抗原と複合体形成した分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性化を査定するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６）に記載されたＣＤＣアッセイを実施することができる。
【0064】
本明細書では、「処置」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法である。本発明の目的に関して、有益なまたは所望の臨床結果としては、それだけに限らないが、以下：新生物もしくはがん性細胞の増殖の低減（もしくはこれらの細胞の破壊）、新生物細胞の転移の阻害、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）の緩解、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）から生じる症状の低下、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）に罹患している者の生活の質の増大、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）を処置するのに要求される他の薬物療法の用量の低下、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）の進行の遅延、ＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）の治癒、および／またはＢＣＭＡ関連疾患（例えば、がんもしくは自己免疫疾患）を有する患者の生存期間の延長のうちの１つまたは複数がある。
【0065】
「寛解させること」は、ＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを投与しないことと比較した１つまたは複数の症状の軽減または改善を意味する。「寛解させること」は、症状の継続時間の短縮または低減も含む。
【0066】
本明細書では、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、任意の１つまたは複数の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用に関して、有益なまたは所望の結果としては、疾患、その合併症、および疾患の発生中に提示する中間病理学的表現型の生化学的な、組織学的な、および／または行動上の症状を含めた疾患のリスクの排除もしくは低減、重症度の軽減、または発症の遅延がある。治療的使用に関して、有益なまたは所望の結果としては、臨床結果、例えば、様々なＢＣＭＡ関連疾患または状態（多発性骨髄腫など）の発生率の低減または１つもしくは複数の症状の寛解、疾患を処置するのに要求される他の薬物療法の用量の低下、別の薬物療法の効果の増強、および／あるいは患者のＢＣＭＡ関連疾患の進行の遅延などがある。有効投与量は、１回または複数回の投与で投与することができる。本発明の目的に関して、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、直接的または間接的に予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されているように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて実現されてもよく、または実現されなくてもよい。よって、「有効投与量」は、１種または複数の治療剤の投与との関連で考慮することができ、単剤は、１種または複数の他の作用物質と併せて、望ましい結果が実現され得、または実現される場合、有効量で与えられていると見なすことができる。
【0067】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物には、それだけに限らないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットが含まれる。
【0068】
本明細書では、「ベクター」は、宿主細胞内に目的の１種または複数の遺伝子または配列を送達し、好ましくは宿主細胞内でこれらを発現させることができる構築物を意味する。ベクターの例としては、それだけに限らないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド、またはファージベクター、カチオン性縮合剤と会合したＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に被包されたＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある特定の真核細胞がある。
【0069】
本明細書では、「発現制御配列」は、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーでありうる。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結される。
【0070】
本明細書では、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」には、活性成分と組み合わされたとき、成分が生物活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である任意の材料が含まれる。例として、それだけに限らないが、標準的な薬学的担体、例えば、リン酸緩衝溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、および様々なタイプの湿潤剤のいずれかが挙げられる。エアロゾルまたは非経口投与に好適な希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または通常の（０．９％）生理食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５を参照）。
【0071】
用語「アシルドナーグルタミン含有タグ」または「グルタミンタグ」は、本明細書では、トランスグルタミナーゼアミンアクセプターとして作用する１個または複数のＧｌｎ残基を含有するポリペプチドまたはタンパク質を指す。例えば、ＷＯ２０１２０５９８８２およびＷＯ２０１５０１５４４８を参照。
【0072】
用語「ｋｏｎ」または「ｋａ」は、本明細書では、抗体の抗原への会合に関する速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎ／ｋａおよびｋｏｆｆ／ｋｄ）ならびに平衡解離定数は、全抗体(whole antibody)（すなわち、二価）および単量体ＢＣＭＡタンパク質を使用して測定される。
【0073】
用語「ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」は、本明細書では、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関する速度定数を指す。
【0074】
用語「ＫＤ」は、本明細書では、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
【0075】
本明細書で「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体に向けられた実施形態を含む（かつ記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。数値範囲は、範囲を定義している数値を含む。
【0076】
実施形態が言い回し「含む」を用いて本明細書に記載されている場合は必ず、「からなる」および／または「から本質的になる」の観点から記載されている別段の類似の実施形態も提供されていることが理解される。
【0077】
本発明の態様または実施形態が選択肢のマーカッシュ群または他の分類の観点から記載されている場合、本発明は、個々に群の各メンバーおよび主群のすべての可能性がある亜群のほかに全体として列挙された群全体だけでなく、群メンバーの１つまたは複数を欠く主群も包含する。本発明は、主張した発明における群メンバーのいずれかの１つまたは複数の明確な除外も想定する。
【0078】
別段の定義のない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書が定義を含めて支配する。本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、述べた整数または整数の群を含むことを暗示するが、任意の他の整数または整数の群の除外を暗示しない。脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
【0079】
例示的な方法および材料が本明細書に記載されているが、本明細書に記載したものと同様のまたは等価な方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および実施例は、例示的なだけであり、限定的であるように意図されていない。
【0080】
ＢＣＭＡ抗体およびそれを作製する方法
本発明は、ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ（例えば、配列番号３５３または受託番号：Ｑ０２２２３－２））に結合し、以下の特性：（ａ）対象におけるＢＣＭＡを発現する悪性細胞に関連した状態（例えば、多発性骨髄腫などのＢ細胞関連がん）の１つまたは複数の症状を処置し、防止し、寛解させる；（ｂ）対象（ＢＣＭＡを発現する悪性腫瘍を有する）における腫瘍増殖または進行を阻害する；（ｃ）対象（ＢＣＭＡを発現する１個または複数の悪性細胞を有する）におけるＢＣＭＡを発現するがん（悪性）細胞の転移を阻害する）；（ｆ）ＢＣＭＡを発現する腫瘍の退縮（例えば、長期間退縮）を誘導する；（ｄ）ＢＣＭＡを発現する悪性細胞において細胞傷害活性を発揮する；および（ｅ）他のまだ同定されていない因子とのＢＣＭＡ相互作用を遮断する、のうちのいずれか１つまたは複数によって特徴付けられる抗体を提供する。
本発明は、ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ（例えば、配列番号３５３または受託番号：Ｑ０２２２３－２））に結合し、以下の特性：（ａ）対象におけるＢＣＭＡを発現する悪性細胞に関連した状態（例えば、多発性骨髄腫などのＢ細胞関連がん）の１つまたは複数の症状を処置し、防止し、寛解させる；（ｂ）対象（ＢＣＭＡを発現する悪性腫瘍を有する）における腫瘍増殖または進行を阻害する；（ｃ）対象（ＢＣＭＡを発現する１個または複数の悪性細胞を有する）におけるＢＣＭＡを発現するがん（悪性）細胞の転移を阻害する）；（ｆ）ＢＣＭＡを発現する腫瘍の退縮（例えば、長期間退縮）を誘導する；（ｄ）ＢＣＭＡを発現する悪性細胞において細胞傷害活性を発揮する；および（ｅ）他のまだ同定されていない因子とのＢＣＭＡ相互作用を遮断する、のうちのいずれか１つまたは複数によって特徴付けられる抗体を提供する。
【0081】
一態様では、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、（ａ）（ｉ）配列ＳＹＸ１ＭＸ２（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＰであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである）（配列番号３０１）、４ＧＦＴＦＸ１ＳＹ（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳである）（配列番号３０２）、またはＧＦＴＦＸ１ＳＹＸ２ＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＡもしくはＰであり、Ｘ３は、Ｔ、Ｎ、もしくはＳである）（配列番号３０３）を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＡＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＧＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＹＡＤＸ９Ｘ１０ＫＧ（式中、Ｘ１は、Ｉ、Ｖ、Ｔ、Ｈ、Ｌ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｆ、Ｍ、もしくはＶであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ４は、Ｓ、Ｑ、Ｔ、Ａ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、もしくはＦであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｋ、Ｇ、もしくはＣであり、Ｘ８は、Ｆ、Ｙ、Ｐ、Ｗ、Ｈ、もしくはＧであり、Ｘ９は、Ｖ、Ｒ、もしくはＬであり、Ｘ１０は、ＧもしくはＴである）（配列番号３０５）、またはＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、Ｌ、Ｆ、もしくはＭであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、Ｄ、Ａ、Ｓ、もしくはＭであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ｆ、もしくはＷであり、Ｘ４は、ＧもしくはＳであり、Ｘ５は、ＧもしくはＴであり、Ｘ６は、Ｎ、Ｓ、Ｐ、Ｙ、もしくはＷである）（配列番号３０６）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＶＳＰＩＸ１Ｘ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、ＡもしくはＹであり、Ｘ２は、ＡもしくはＳであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｑ、Ｌ、Ｐ、もしくはＥである）（配列番号３０７）、またはＹＷＰＭＸ１Ｘ２（式中、Ｘ１は、Ｄ、Ｓ、Ｔ、もしくはＡであり、Ｘ２は、Ｉ、Ｓ、Ｌ、Ｐ、もしくはＤである）（配列番号３０８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または（ｉ）配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２（式中、Ｘ１は、Ｒ、Ｇ、Ｗ、Ａ、もしくはＣであり、Ｘ２は、Ａ、Ｐ、Ｇ、Ｌ、Ｃ、もしくはＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、もしくはＲであり、Ｘ４は、Ｑ、Ｃ、Ｅ、Ｖ、もしくはＩであり、Ｘ５は、Ｓ、Ｐ、Ｇ、Ａ、Ｒ、もしくはＤであり、Ｘ６は、Ｖ、Ｇ、Ｉ、もしくはＬであり、Ｘ７は、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｐ、もしくはＧであり、Ｘ８は、Ｓ、Ｐ、Ｆ、Ａ、Ｍ、Ｅ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、もしくはＹであり、Ｘ９は、Ｉ、Ｔ、Ｖ、Ｅ、Ｓ、Ａ、Ｍ、Ｑ、Ｙ、Ｈ、Ｒ、もしくはＦであり、Ｘ１０は、ＹもしくはＦであり、Ｘ１１は、Ｌ、Ｗ、もしくはＰであり、Ｘ１２は、Ａ、Ｓ、もしくはＧである）（配列番号３０９）を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列Ｘ１ＡＳＸ２ＲＡＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＤであり、Ｘ２は、ＳもしくはＩであり、Ｘ３は、ＴもしくはＰである）（配列番号３１０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｋ、Ｒ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｅ、Ｋ、もしくはＣであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｆ、もしくはＳであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１１）、またはＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｑ、Ｅ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｓ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、もしくはＹであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｒ、Ｖ、Ｄ、Ａ、Ｈ、Ｅ、Ｋ、Ｃ、Ｆ、もしくはＹであり、Ｘ３は、Ｗ、Ｓ、もしくはＦであり、Ｘ４は、ＬもしくはＩである）（配列番号３１２）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片が提供されている。
【0082】
別の態様では、ＢＣＭＡに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、抗体は、配列番号２、３、７、８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８３、８７、９２、９５、９７、９９、１０１、１０４、１０６、１１０、１１２、１１４、１１８、１２０、１２２、１１２、１２５、１２７、３１３、３１４、３６３、もしくは３６５に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、および／または配列番号１、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、３１７、８０、８１、８２、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９６、９８、１００、１０２、１０３、１０５、１０７、１０８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１６、１１７、１１９、１２１、１２３、１２４、１２６、１２８、３１５、３１６、もしくは３６４に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片が提供されている。
【0083】
一部の実施形態では、表１に列挙した部分的軽鎖配列のいずれか１つおよび／または表１に列挙した部分的重鎖配列のいずれか１つを有する抗体が提供されている。
【0084】
【表1-1】
【0085】
【表1-2】
【0086】
【表1-3】
【0087】
【表1-4】
【0088】
【表1-5】
【0089】
【表1-6】
【0090】
【表1-7】
【0091】
【表1-8】
【0092】
【表1-9】
【0093】
【表1-10】
【0094】
【表1-11】
【0095】
【表1-12】
【0096】
【表1-13】
【0097】
【表1-14】
【0098】
【表1-15】
【0099】
【表1-16】
【0100】
【表1-17】
【0101】
【表1-18】
【0102】
【表1-19】
【0103】
【表1-20】
【0104】
【表1-21】
【0105】
【表1-22】
【0106】
【表1-23】
【0107】
【表1-24】
【0108】
【表1-25】
【0109】
【表1-26】
【0110】
【表1-27】
【0111】
【表1-28】
【0112】
【表1-29】
【0113】
【表1-30】
【0114】
【表1-31】
【0115】
【表1-32】
【0116】
【表1-33】
【0117】
表１において、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ配列に下線が引かれており、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ配列が太字である以下の重鎖ＣＤＲ２配列を除いて、下線を引いた配列は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字は、ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ配列である。
Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ａｎｄＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１
Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ａｎｄＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１
【0118】
本発明は、ＢＣＭＡに対する抗体のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、およびＣＤＲ接触領域を含む）も提供する。ＣＤＲ領域の判定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。一部の実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組合せ（「組み合わせたＣＤＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）でありうることが理解される。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。言い換えれば、１つを超えるＣＤＲを有する実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組合せＣＤＲ、またはこれらの組合せのいずれかでありうる。表２は、本明細書に提供されるＣＤＲ配列の例を提供するものである。
【0119】
【表2-1】
【0120】
【表2-2】
【0121】
【表2-3】
【0122】
【表2-4】
【0123】
【表2-5】
【0124】
【表2-6】
【0125】
【表2-7】
【0126】
【表2-8】
【0127】
【表2-9】
【0128】
【表2-10】
【0129】
【表2-11】
【0130】
【表2-12】
【0131】
【表2-13】
【0132】
【表2-14】
【0133】
【表2-15】
【0134】
【表2-16】
【0135】
【表2-17】
【0136】
【表2-18】
【0137】
【表2-19】
【0138】
【表2-20】
【0139】
【表2-21】
【0140】
【表2-22】
【0141】
【表2-23】
【0142】
【表2-24】
【0143】
【表2-25】
【0144】
【表2-26】
【0145】
【表2-27】
【0146】
【表2-28】
【0147】
【表2-29】
【0148】
【表2-30】
【0149】
【表2-31】
【0150】
【表2-32】
【0151】
【表2-33】
【0152】
【表2-34】
【0153】
【表2-35】
【0154】
【表2-36】
【0155】
【表2-37】
【0156】
【表2-38】
【0157】
一部の実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡに結合し、Ｐ６Ｅ０１／Ｐ６Ｅ０１、Ｐ６Ｅ０１／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１；Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１を含めた本明細書に記載の抗体と競合する抗体を提供する。
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１を含めた本明細書に記載の抗体と競合する抗体を提供する。
【0158】
一部の実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片であって、配列番号１１２に示した配列を含むＶＨ領域を含むおよび／または配列番号３８に示した配列を含むＶＬ領域を含む、抗体または抗原結合断片を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＭＹＤＡＳＩＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＱＳＷＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３５７）を含む軽鎖、および配列ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＧＳＬＰＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＷＰＭＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３５８）を含む重鎖を含む。
【0159】
一部の実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片であって、配列番号２、３２、４２、もしくは７８に示した配列を含むＶＨ領域を含む、および／または配列番号６、１６、４３、もしくは８５に示した配列を含むＶＬ領域を含む、抗体または抗原結合断片を提供する。
【0160】
一部の実施形態では、本発明は、ＣＤＲ接触領域に基づくＢＣＭＡ抗体に対する抗体のＣＤＲ部分も提供する。ＣＤＲ接触領域は、抗原について抗体に特異性を植え付ける抗体の領域である。一般に、ＣＤＲ接触領域は、抗体の適切なループ構造を維持して特異的抗原を結合させるために束縛されているＣＤＲおよびバーニアゾーン内に残基位置を含む。例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６～１１６６、２００７を参照。ＣＤＲ接触領域の判定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。
【0161】
ＢＣＭＡ（ヒトＢＣＭＡ（例えば、（配列番号３５３）など）に対する本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体の結合親和性（ＫＤ）は、約０．００２ｎＭ～約６５００ｎＭでありうる。一部の実施形態では、結合親和性は、約６５００ｎＭ、６０００ｎＭ、５９８６ｎＭ、５５６７ｎＭ、５５００ｎＭ、４５００ｎＭ、４０００ｎＭ、３５００ｎＭ、３０００ｎＭ、２５００ｎＭ、２１３４ｎＭ、２０００ｎＭ、１５００ｎＭ、１０００ｎＭ、７５０ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１９３ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１９ｎＭ、１８ｎＭ、１７ｎＭ、１６ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、８ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５．５ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００２ｎＭのいずれかである。一部の実施形態では、結合親和性は、６５００ｎＭ、６０００ｎＭ、５５００ｎＭ、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、３０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、９００ｎＭ、８００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭのいずれか未満である。
【0162】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のまたは方法を使用して作製されたおよび本明細書に記載の特性を有する抗体を含む、医薬組成物を含めた組成物を包含する。本明細書では、組成物は、ＢＣＭＡに結合する１種もしくは複数の抗体および／または１種もしくは複数のこれらの抗体をコードする配列を含む１種もしくは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、当技術分野で周知である、緩衝液を含む薬学的に許容できる賦形剤などの適当な賦形剤をさらに含みうる。
【0163】
本発明は、これらの抗体のいずれかを作製する方法も提供する。本発明の抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解によって、上述した組換え法（すなわち、単一もしくは融合ポリペプチド）によって、または化学合成によって生成することができる。抗体のポリペプチド、特に、最大で約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、好都合なことには化学合成によって作製される。化学合成の方法は、当技術分野で公知であり、市販されている。例えば、抗体は、固相法を使用して自動ポリペプチドシンセサイザーによって生成することができる。米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第６，３３１，４１５号も参照。
【0164】
本発明は、本発明の抗体由来の１種または複数の断片または領域を含む融合タンパク質も包含する。一実施形態では、配列番号１、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、３１７、８１、８２、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９６、９８、１００、１０２、１０３、１０５、１０７、１０８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１６、１１７、１１９、１２１、１２３、１２４、１２６、１２８、８０、３１５、３６、もしくは３６４に示した可変軽鎖領域の少なくとも１０の連続したアミノ酸、および／または配列番号２、３、７、８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８３、８７、９２、９５、９７、９９、１０１、１０４、１０６、１１０、１１２、１１４、１１８、１２０、１２２、１１２、１２５、１２７、３１３、３１４、３６３、もしくは３６５に示した可変重鎖領域の少なくとも１０のアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供されている。他の実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸および／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供されている。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１および２、１および３、４および２、５および２、６および２、４および７、４および８、４および３、９および８、９および３、１０および７、１０および８、１０および３、１１および７、１１および８、１１および３、１２および３、１３および７、１３および８、１４および３、１５および２、１６および２、１７および２、１８および２、１９および２、２０および２、２１および２、２２および２、２３および２、１６および２４、１６および２５、１６および２６、１６および２７、１６および２８、１６および２９、１６および３０、１６および３１、１６および３、１６および３２、１６および２、１８および２４、１８および２５、１８および２６、１８および２７、１８および２８、１８および２９、１８および３０、１８および３１、１８および３、１８および３２、１９および２４、１９および２５、１９および２６、１９および２７、１９および２８、１９および２９、１９および３０、１９および３１、１９および３、１９および３２、２０および２４、２０および２５、２０および２６、２０および２７、２０および２８、２０および２９、２０および３０、２０および３１、２０および３、２０および３２、２１および２４、２１および２８、２１および３１、２１および３、２１および３２、２２および２４、２２および２５、２２および２６、２２および２７、２２および２８、２２および２９、２２および３０、２２および３２、２３および２５、２３および２６、２３および２７、２３および２９、２３および３０、２３および３１、２３および３、２３および３２、３４および３３、３６および３５、３８および３７、４０および３９、４１および３３、４３および４２、４５および４４、４７および４６、４９および４８、５１および５０、５３および５２、５５および５４、５７および５６、５９および５８、６１および６０、６３および６２、６５および６４、６７および６６、６９および６８、７１および７０、７３および７２、７５および７４、７７および７６、７９および７８、３１７および７８、７９および７８、８１および７８、８２および７８、８４および８３、８５および７８、８６および７８、８８および８７、８９および７８、９０および７８、９１および７８、９３および９２、９４および７８、９６および９５、９８および９７、３８および７８、１０２および１０１、１０３および７８、１０５および１０４、１０７および１０６、１０８および７８、１０９および７８、１１１および１１０、３８および１１２、１１３および１１２、１１５および１１４、１１６および７６、１１７および１１２、１１９および１１８、１２１および１２０、１２３および１２２、１２４および１１２、１２６および１２５、１２８および１２７、８０および３６３、または３６４および３６５の中から選択される配列対のいずれかに示した軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、１種または複数のＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤＲ Ｈ３（ＶＨ ＣＤＲ３）および／またはＣＤＲ Ｌ３（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む。本発明の目的に関して、融合タンパク質は、１種または複数の抗体、および天然分子に付着されていない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列または別の領域由来の相同配列を含有する。例示的な異種配列としては、それだけに限らないが、「タグ」、例えば、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグなどがある。タグは、当技術分野で周知である。
【0165】
本発明は、本発明の抗体をコードする単離ポリペプチド、ならびにポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【0166】
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗体Ｐ６Ｅ０１／Ｐ６Ｅ０１、Ｐ６Ｅ０１／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１；Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１の重鎖および／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持されてもよく、次いで宿主細胞を将来使用するために増やし、凍結させることができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１の重鎖および／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持されてもよく、次いで宿主細胞を将来使用するために増やし、凍結させることができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
【0167】
本発明は、本発明の抗体のｓｃＦｖも包含する。単鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを使用することにより、軽および／または重鎖可変領域を連結することによって作製される（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３～４２６、１９８８）。連結ペプチドの一例は、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号４９８）であり、これは、一方の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端との間のおよそ３．５ｎｍを架橋する。他の配列のリンカーも設計および使用されている（Ｂｉｒｄら、１９８８、上記）。リンカーは、短い柔軟なポリペプチドであるべきであり、好ましくは、約２０未満のアミノ酸残基から構成されるべきである。リンカーは、ひいては、追加の機能、例えば、薬物の付着または固体支持体への付着などのために修飾することができる。単鎖バリアントは、組換えで、または合成的に生成されうる。ｓｃＦｖの合成生産のために、自動シンセサイザーを使用することができる。ｓｃＦｖの組換え産生のために、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含有する適当なプラスミドを、酵母、植物、昆虫、もしくは哺乳動物細胞などの真核生物、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの原核生物の適当な宿主細胞内に導入することができる。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣例的なマニピュレーションによって作製することができる。結果として生じるｓｃＦｖは、当技術分野で公知の標準的なタンパク質精製技法を使用して単離することができる。
【0168】
単鎖抗体の他の形態、例えば、ダイアボディまたはミニボディなども包含されている。ダイアボディは、重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）ドメインが単一ポリペプチド鎖上であるが、リンカーであって、短すぎて同じ鎖上の２つのドメインの間で対合を可能にすることができず、それによってドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対合させ、２つの抗原結合部位を創製する、リンカーを使用して発現される二価二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８、１９９３；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１～１１２３、１９９４を参照）。ミニボディは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域およびＣＨ３ドメインに融合した天然抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含む。例えば、ＵＳ５，８３７，８２１を参照。
【0169】
別の態様では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。さらに他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号４８６および配列番号４８５に示したポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む：
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＣＣＡＡＣＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＧＴＣＣＴＡＣＣＣＧＡＴＧＴＣＧＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＡＧＣＣＡＴＣＧＧＡＧＧＡＴＣＧＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＣＧＣＣＧＡＴＡＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＣＴＣＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号４８６）
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＧＣＴＡＴＣＴＣＧＣＧＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＣＣＣＧＡＣＣＧＣＴＴＣＴＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＣＴＣＧＡＡＣＣＧＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＴＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＣＣＧＣＴＧＡＣＧＴＴＴＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
（配列番号４８５）
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＣＣＡＡＣＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＧＴＣＣＴＡＣＣＣＧＡＴＧＴＣＧＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＡＧＣＣＡＴＣＧＧＡＧＧＡＴＣＧＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＣＧＣＣＧＡＴＡＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＣＴＣＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号４８６）
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＧＡＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＧＣＴＡＴＣＴＣＧＣＧＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＣＣＣＧＡＣＣＧＣＴＴＣＴＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＣＴＣＧＡＡＣＣＧＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＴＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＣＣＧＣＴＧＡＣＧＴＴＴＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
（配列番号４８５）
【0170】
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号４８８および配列番号４８７に示したポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む：
Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＡＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＡＴＣＧＣＣＧＣＧＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４８８）
Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ重鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＴＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
（配列番号４８７）
Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＡＣＣＴＴＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＡＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＡＴＣＧＣＣＧＣＧＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４８８）
Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ重鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＣＣＣＣＣＣＡＧＣＴＴＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
（配列番号４８７）
【0171】
さらに他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号４９０および配列番号４８９に示したポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む：
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＴＣＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＧＴＧＧＴＴＡＡＧＧＧＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＴＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＴＣＧＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４９０）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＴＣＣＧＴＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＴＡＴＴＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＴＴＡＴＴＧＡＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＴＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＡＴＴＧＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＧＡＧＣＧＴＴＧＧＣＣＡＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＧ
（配列番号４８９）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＴＣＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＧＴＧＧＴＴＡＡＧＧＧＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＴＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＴＣＧＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４９０）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＴＣＣＧＴＴＴＣＣＧＣＧＴＡＴＴＡＴＴＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＴＴＡＴＴＧＡＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＴＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＡＴＴＧＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＧＡＧＣＧＴＴＧＧＣＣＡＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＧ
（配列番号４８９）
【0172】
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号４９２および配列番号４９１に示したポリヌクレオチドのいずれかまたは両方を含む：
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＡＴＴＴＣＴＧＡＴＴＴＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＴＣＧＴＴＡＡＧＧＧＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＴＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４９２）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＴＣＣＧＴＴＴＣＣＧＡＴＣＴＧＴＡＴＴＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＴＴＡＴＴＧＡＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＴＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＡＴＴＧＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＧＡＣＴＴＧＧＣＣＡＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＧ
（配列番号４９１）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６重鎖可変領域
ＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＡＴＴＴＣＴＧＡＴＴＴＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＴＡＴＣＧＴＴＡＡＧＧＧＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＴＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＴＡＴＴＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号４９２）
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＧＣＴＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＴＣＣＧＴＴＴＣＣＧＡＴＣＴＧＴＡＴＴＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＴＴＡＴＴＧＡＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＣＴＡＴＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＧＧＴＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＡＴＴＧＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＧＡＣＴＴＧＧＣＣＡＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＧ
（配列番号４９１）
【0173】
発現ベクター、およびポリヌクレオチド組成物の投与は、本明細書でさらに記載されている。
【0174】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
【0175】
任意のこのような配列に相補的なポリヌクレオチドも、本発明によって包含されている。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）であっても二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成）またはＲＮＡ分子でありうる。ＲＮＡ分子としては、イントロンを含有し、１対１の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡがある。追加のコードまたは非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在しうるが、その必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材に連結されている場合があるが、その必要はない。
【0176】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体もしくはその部分をコードする内在性配列）を含み得、またはこのような配列のバリアントを含みうる。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が天然免疫反応性分子と比べて減少されないような１個または複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は一般に、本明細書に記載した通りに査定されうる。バリアントは、好ましくは、天然抗体またはその部分をコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、なおより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を呈する。
【0177】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように最大対応に関して整列されるとき同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、比較ウィンドウにわたって配列を比較して配列類似性の局所領域を同定および比較することによって実施される。「比較ウィンドウ」は、本明細書では、少なくとも約２０の連続した位置、通常３０～約７５、または４０～約５０のセグメントを指し、このウィンドウでは、配列が、同じ数の連続した位置の参照配列と、２つの配列が最適に整列された後比較されうる。
【0178】
比較のための配列の最適な整列は、デフォルトのパラメータを使用して、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式中のＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ － Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓに記載されたいくつかの整列スキームを具現化する。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、５巻、補遺３、３４５～３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６～６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１～１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８年、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１～１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．、１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．、４：４０６～４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８０：７２６～７３０において。
【0179】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較することによって判定され、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列について、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０パーセントまたはそれ未満、通常５～１５パーセント、または１０～１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含みうる。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列中に存在する位置の数を判定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を参照配列中の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）によって除し、結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【0180】
バリアントも、または代わりに、天然遺伝子またはその部分もしくは相補体に実質的に相同でありうる。このようなポリヌクレオチドバリアントは、天然抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
【0181】
適当な「中程度にストリンジェントな条件」は、５× ＳＳＣ、０．５％ ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予洗；５０℃～６５℃、５× ＳＳＣで、一晩のハイブリダイジング；その後の、０．１％ ＳＤＳを含有する２×、０．５×、および０．２× ＳＳＣのそれぞれを用いた６５℃で２０分にわたる２回の洗浄を含む。
【0182】
本明細書では、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度および高温、例えば、５０℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用し；（２）ハイブリダイゼーション中に、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃で、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムとともに、ｐＨ６．５の０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを使用し；または（３）０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃での、および５５℃での５０％ホルムアミド中の洗浄、その後の５５℃でのＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を伴って、４２℃で、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ ＳＤＳ、および１０％デキストラン硫酸を使用するものである。当業者は、プローブ長などの因子に対応する必要に応じて温度、イオン強度などをどのように調整するかを認識するであろう。
【0183】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが当業者によって理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列と最小限の相同性を担持する。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。さらに、本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加、および／または置換などの１個または複数の突然変異の結果として変更されている内在性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有しうるが、その必要はない。対立遺伝子は、標準技法（ハイブリダイゼーション、増幅、および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
【0184】
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当技術分野で周知であり、本明細書で詳細に記載される必要はない。当業者は、本明細書で提供される配列および市販のＤＮＡシンセサイザーを使用して所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【0185】
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに論じられるように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを適当なベクター中に挿入することができ、次にベクターを、複製および増幅のために適当な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入されうる。細胞は、直接取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ－接合、または電気穿孔によって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内に維持され、または宿主細胞ゲノム内に一体化されうる。このように増幅されたポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照。
【0186】
代わりに、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の複製を可能にする。ＰＣＲ技術は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号、および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【0187】
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離したＤＮＡを使用し、それを適当な宿主細胞内に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡへと転写されたとき、ＲＮＡを、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上記に示されているように当業者に周知の方法を使用して単離することができる。
【0188】
適当なクローニングベクターは、標準技法に従って構築することができ、または当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されるように意図された宿主細胞によって変動しうるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有することになり、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一標的を有することができ、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択において使用することができるマーカーの遺伝子を持つことができる。適当な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ブルースクリプト（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらおよび多くの他のクローニングベクターは、市販供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどから入手可能である。
【0189】
発現ベクターは一般に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの一体部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないことが暗示される。適当な発現ベクターとしては、それだけに限らないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含めたウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターがある。ベクターコンポーネントとして一般に、それだけに限らないが、以下：シグナル配列；複製起点；１種もしくは複数のマーカー遺伝子；適当な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）のうちの１種または複数を挙げることができる。発現（すなわち、翻訳）のために、１種または複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および停止コドンなども通常要求される。
【0190】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染因子である場合）を含めたいくつかの適切な手段のいずれかによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することになることが多い。
【0191】
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、目的の抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的に使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例としては、それだけに限らないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞がある。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照。適当な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＢ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）など）および酵母（Ｓ．セレビジエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、Ｓ．ポンべ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）；またはＫ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）がある。好ましくは、宿主細胞は、宿主細胞内で、存在する場合、目的の対応する内因性抗体またはタンパク質のものより、約５倍超、より好ましくは１０倍超、さらにより好ましくは２０倍超のレベルでｃＤＮＡを発現する。ＢＣＭＡまたはＢＣＭＡドメイン（例えば、ドメイン１～４）への特異的結合についての宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。
【0192】
本発明の代表的な材料は、２０１５年４月１５日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）において寄託された。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２０９４を有するベクターは、ヒト化ＢＣＭＡ抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２０９３を有するベクターは、ヒト化ＢＣＭＡ抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項とその下の規制（ｔｈｅ ｐｒｏｖｉｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｕｄａｐｅｓｔ Ｔｒｅａｔｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｐｏｓｉｔ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｔｈｅｒｅｕｎｄｅｒ）（ブダペスト条約）の下で行われた。これは、寄託の日付から３０年間の寄託物の生存培養の維持を保証する。寄託物は、ブダペスト条約の条項の下で、かつＰｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間の同意を条件として、ＡＴＣＣによって利用可能にされることになり、この同意は、関係する米国特許の発行の後、またはいずれか早くなる任意の米国もしくは外国特許出願が公衆に公開された後、公衆に寄託物の培養物の子孫の永続的かつ非制限的利用可能性を保証し、米国特許法第１２２条およびそれに準じた長官規則（８８６ＯＧ６３８を特に参照して連邦規則法典第３７巻第１．１４条を含む）に従って権利を与えられていると米国特許商標庁長官によって判定された者への子孫の利用可能性を保証するものである。
【0193】
本願の代理人は、寄託中の材料の培養物が、適当な条件下で培養されたときに、死に、または失われ、または破壊された場合、材料を、別の同じものと通知時に即座に置き換えることに同意した。寄託した材料の利用可能性は、任意の政府の権限下でその特許法に従って与えられた権利に違反して本発明を実施するライセンスとして解釈されるべきでない。
【0194】
ＢＣＭＡ抗体コンジュゲート
本発明は、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片のコンジュゲート（または免疫複合体）であって、抗体または抗原結合断片は、直接的またはリンカーを介して間接的に標的免疫療法の作用物質（例えば、細胞傷害性剤）にコンジュゲートされている（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）、コンジュゲートも提供する。例えば、細胞傷害性剤は、細胞傷害性剤部分の腫瘍（例えば、ＢＣＭＡ発現腫瘍）への標的化局所的送達のために、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片に連結またはコンジュゲートすることができる。
本発明は、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片のコンジュゲート（または免疫複合体）であって、抗体または抗原結合断片は、直接的またはリンカーを介して間接的に標的免疫療法の作用物質（例えば、細胞傷害性剤）にコンジュゲートされている（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）、コンジュゲートも提供する。例えば、細胞傷害性剤は、細胞傷害性剤部分の腫瘍（例えば、ＢＣＭＡ発現腫瘍）への標的化局所的送達のために、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片に連結またはコンジュゲートすることができる。
【0195】
細胞傷害性剤または他の治療剤を抗体にコンジュゲートするための方法は、様々な刊行物に記載されている。例えば、リシン側鎖アミンを通じて、またはコンジュゲーション反応を行うために鎖間ジスルフィド結合を還元することによって活性化されたシステインスルフヒドリル基を通じて化学修飾を抗体中に行うことができる。例えば、Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、５７９：２０９２～２０９６、２００５、およびＧｅｎｔｌｅら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１５：６５８～６６３、２００４を参照。規定された化学量論比での特異的薬物コンジュゲーションのために抗体の特異的部位で操作された反応性システイン残基も記載されている。例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６：９２５～９３２、２００８を参照。トランスグルタミナーゼおよびアミンの存在下でポリペプチドを操作することによって反応性にされたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミン（すなわち、アシルドナーとして共有結合を形成する能力）を使用するコンジュゲーション（例えば、反応性アミンを含む、またはそれに付着した細胞傷害性剤）も、国際出願ＷＯ２０１２／０５９８８２およびＷＯ２０１５０１５４４８に記載されている。
【0196】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、抗体の特異的部位（例えば、カルボキシル末端、アミノ末端、またはＢＣＭＡ抗体中の別の部位で）で操作されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む。一部の実施形態では、タグは、アミノ酸グルタミン（Ｑ）またはアミノ酸配列ＬＱＧ、ＬＬＱＧＧ（配列番号３１８）、ＬＬＱＧ（配列番号４５４）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号４５５）、ＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号４５６）、ＧＬＬＱＧ（配列番号４５７）、ＬＬＱ、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ（配列番号４５８）、ＧＬＬＱＧＧＧ（配列番号４５９）、ＧＬＬＱＧＧ（配列番号４６０）、ＧＬＬＱ（配列番号４６１）、ＬＬＱＬＬＱＧＡ（配列番号４６２）、ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）、ＬＬＱＹＱＧＡ（配列番号４６４）、ＬＬＱＧＳＧ（配列番号４６５）、ＬＬＱＹＱＧ（配列番号４６６）、ＬＬＱＬＬＱＧ（配列番号４６７）、ＳＬＬＱＧ（配列番号４６８）、ＬＬＱＬＱ（配列番号４６９）、ＬＬＱＬＬＱ（配列番号４７０）、ＬＬＱＧＲ（配列番号４７１）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号４７３）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号４７６）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号４７７）、ＬＬＱＧＰ（配列番号４７８）、ＬＬＱＰ（配列番号４７９）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号４８０）、ＬＬＱＡＰＧＫ（配列番号４８１）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号４８２）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号４８３）、およびＬＬＱＬＱＧ（配列番号４８４）を含む。
【0197】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、抗体の特異的部位で操作されたアシルドナーグルタミン含有タグを含み、タグは、ＢＣＭＡ抗体の軽鎖カルボキシル末端で操作されたアミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）またはＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、抗体の特異的部位で操作されたアシルドナーグルタミン含有タグを含み、タグは、ＢＣＭＡ抗体の重鎖における残基Ｔ１３５の後で操作されたアミノ酸配列ＬＬＱＧ（配列番号４５４）を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、抗体の特異的部位で操作されたアシルドナーグルタミン含有タグを含み、タグは、ＢＣＭＡ抗体の重鎖カルボキシル末端で操作されたアミノ酸配列ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）またはＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２）を含み、重鎖カルボキシル末端のリシン残基は、欠失されている。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体の２９７位（ＥＵ番号付けスキーム）でアミノ酸置換を含む。例えば、アミノ酸アスパラギン（Ｎ）を、ＢＣＭＡ抗体の２９７位でグルタミン（Ｑ）またはアラニン（Ａ）と置換することができる。
【0198】
アシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２、３４０、または３７０位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含む単離抗体も提供されており、修飾は、アミノ酸欠失、挿入、置換、突然変異、またはこれらの任意の組合せである。したがって、一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体の特異的部位（例えば、重もしくは軽鎖のカルボキシル末端、抗体重鎖中の残基Ｔ１３５、または別の部位）でコンジュゲートされたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｑ、ＬＱＧ、ＬＬＱＧＧ（配列番号３１８）、ＬＬＱＧ（配列番号４５４）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号４５５）、ＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号４５６）、ＧＬＬＱＧ（配列番号４５７）、ＬＬＱ、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ（配列番号４５８）、ＧＬＬＱＧＧＧ（配列番号４５９）、ＧＬＬＱＧＧ（配列番号４６０）、ＧＬＬＱ（配列番号４６１）、ＬＬＱＬＬＱＧＡ（配列番号４６２）、ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）、ＬＬＱＹＱＧＡ（配列番号４６４）、ＬＬＱＧＳＧ（配列番号４６５）、ＬＬＱＹＱＧ（配列番号４６６）、ＬＬＱＬＬＱＧ（配列番号４６７）、ＳＬＬＱＧ（配列番号４６８）、ＬＬＱＬＱ（配列番号４６９）、ＬＬＱＬＬＱ（配列番号４７０）、ＬＬＱＧＲ（配列番号４７１）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号４７３）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号４７６）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号４７７）、ＬＬＱＧＰ（配列番号４７８）、ＬＬＱＰ（配列番号４７９）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号４８０）、ＬＬＱＡＰＧＫ（配列番号４８１）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号４８２）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号４８３）、およびＬＬＱＬＱＧ（配列番号４８４））、および抗体の２２２、３４０、または３７０位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含む本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートが提供されている。一部の実施形態では、アミノ酸修飾は、リシンからアルギニンへの置換（例えば、Ｋ２２２Ｒ、Ｋ３４０Ｒ、またはＫ３７０Ｒ）である。
【0199】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体軽鎖のＣ末端で操作された配列ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体軽鎖のＣ末端で操作された配列ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体重鎖のＣ末端で操作された配列ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、重鎖カルボキシ末端のリシン残基は、欠失されている。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体の重鎖における残基Ｔ１３５の後に操作された配列ＬＬＱＧ（配列番号４５４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。
【0200】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体において２９７位で操作されたグルタミン、または２９７位でアスパラギン（Ｎ）から別のアミノ酸へのアミノ酸置換を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体軽鎖のＣ末端で操作された配列ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、ＢＣＭＡ抗体の２９７位におけるアスパラギン（Ｎ）からグルタミン（Ｑ）へのアミノ酸置換、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはコンジュゲートは、ＢＣＭＡ抗体の重鎖の残基Ｔ１３５の後に操作された配列ＬＬＱＧ（配列番号４５４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグ、ＢＣＭＡ抗体の２９７位におけるアスパラギン（Ｎ）からアラニン（Ａ）へのアミノ酸置換、および抗体の２２２位（ＥＵ番号付けスキーム）におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。
【0201】
本発明のＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片にコンジュゲートすることができる作用物質として、それだけに限らないが、細胞傷害性剤、免疫調節剤、造影剤、治療タンパク質、バイオポリマー、またはオリゴヌクレオチドを挙げることができる。
【0202】
細胞傷害性剤の例としては、それだけに限らないが、アントラサイクリン、オーリスタチン、ドラスタチン、コンブレタスタチン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノ－ベンゾジアゼピン二量体、エンジイン、ゲルダナマイシン、メイタンシン、ピューロマイシン、タキサン、ビンカアルカロイド、カンプトテシン、ツブリシン、ヘミアステルリン、スプリセオスタチン、プラジエノライド、およびこれらの立体異性体、アイソスター、類似体、または誘導体がある。
【0203】
アントラサイクリンは、細菌ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に由来し、広範囲のがん、例えば、白血病、リンパ腫、乳がん、子宮がん、卵巣がん、および肺がんなどを処置するのに使用されている。例示的なアントラサイクリンとしては、それだけに限らないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン（すなわち、アドリアマイシン）、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロンがある。
【0204】
ドラスタチンならびにこれらのペプチド類似体および誘導体、オーリスタチンは、抗がんおよび抗真菌活性を有すると示されてきた高度に強力な抗有糸分裂剤である。例えば、米国特許第５，６６３，１４９号およびＰｅｔｔｉｔら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４２：２９６１～２９６５、１９９８を参照。例示的なドラスタチンおよびオーリスタチンとしては、それだけに限らないが、ドラスタチン１０、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、オーリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤまたはモノメチルドラスタチン１０）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦまたはＮ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン）、ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥまたはＮ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－ノルエフェドリン）、５－ベンゾイル吉草酸－ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、および他の新規のオーリスタチン（米国公開第２０１３／０１２９７５３号に記載されたものなど）がある。一部の実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１０１（２－メチルアラニル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－｛［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（１，３－チアゾール－２－イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン－１－イル｝－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である：
【0205】
【化1】
【0206】
一部の実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する３３７７（Ｎ，２－ジメチルアラニル－Ｎ－｛（１Ｓ，２Ｒ）－４－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシル－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル｝－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である：
【0207】
【化2】
【0208】
一部の実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１３１－ＯＭｅ（Ｎ，２－ジメチルアラニル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－３－｛［（２Ｓ）－１－メトキシ－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である：
【0209】
【化3】
【0210】
他の実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１３１（２－メチル－Ｌ－プロリ（ｐｒｏｌｙ）－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシ－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である：
【0211】
【化4】
【0212】
他の実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する０１２１（２－メチル－Ｌ－プロリ－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（２Ｓ）－１－メトキシ－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）である：
【0213】
【化5】
【0214】
カンプトテシンは、酵素トポイソメラーゼＩを阻害する細胞傷害性キノリンアルカロイドである。カンプトテシンおよびその誘導体の例としては、それだけに限らないが、トポテカンおよびイリノテカン、ならびにＳＮ－３８などのこれらの代謝産物がある。
【0215】
コンブレタスタチンは、腫瘍において血管破壊性質を有する天然フェノールである。例示的なコンブレタスタチンおよびこれらの誘導体としては、それだけに限らないが、コンブレタスタチンＡ－４（ＣＡ－４）およびオンブラブリンがある。
【0216】
デュオカルマイシンおよびＣＣ－１０６５は、細胞傷害性効力を有するＤＮＡアルキル化剤である。ＢｏｇｅｒおよびＪｏｈｎｓｏｎ、ＰＮＡＳ ９２：３６４２～３６４９（１９９５）を参照。例示的なデュオカルマイシンおよびＣＣ－１０６５としては、それだけに限らないが、（＋）－デュオカルマイシンＡおよび（＋）－デュオカルマイシンＳＡ、（＋）－ＣＣ－１０６５、ならびにそれだけに限らないが、構造：
【0217】
【化6】
【0218】
【化7】
【0219】
【化8】
【0220】
エンジインは、９および１０員環、または共役三重－二重－三重結合の環系の存在によって特徴付けられる抗腫瘍細菌産物のクラスである。例示的なエンジインとしては、それだけに限らないが、カリケアマイシン、エスペラマイシン、ウンシアラマイシン、ジネマイシン、およびこれらの誘導体がある。
【0221】
ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０（熱ショックタンパク質９０）に結合し、抗腫瘍薬として使用されているベンゾキノンアンサマイシン抗生物質である。例示的なゲルダナマイシンとしては、それだけに限らないが、１７－ＡＡＧ（１７－Ｎ－アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン）および１７－ＤＭＡＧ（１７－ジメチルアミノエチルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン）がある。
【0222】
ヘミアステルリンおよびその類似体（例えば、ＨＴＩ－２８６）は、チューブリンに結合し、正常な微小管動態を混乱させ、化学量論量で微小管を解重合する。
【0223】
メイタンシンまたはこれらの誘導体メイタンシノイドは、チューブリンの重合の阻害を通じて有糸分裂中に微小管形成を阻害することによって細胞増殖を阻害する。Ｒｅｍｉｌｌａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１８９：１００２～１００５、１９７５を参照。例示的なメイタンシンおよびメイタンシノイドとしては、それだけに限らないが、メルタンシン（ＤＭ１）およびその誘導体、ならびにアンサミトシンがある。
【0224】
ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ）およびインドリノ－ベンゾジアゼピン二量体（ＩＧＮ）は、二重鎖ＤＮＡに結合する１種または複数のイミン官能基またはこれらの等価物を含有する抗腫瘍剤である。ＰＢＤおよびＩＧＮ分子は、天然産物アントラマイシンに基づき、プリン－グアニン－プリン配列を優先して配列選択的様式でＤＮＡと相互作用する。例示的なＰＢＤおよびこれらの類似体には、それだけに限らないが、ＳＪＧ－１３６が含まれる。
【0225】
スプリセオスタチンおよびプラジエノライドは、スプライシングを阻害し、スプライセオソーム、ＳＦ３ｂと相互作用する抗腫瘍化合物である。スプリセオスタチンの例としては、それだけに限らないが、スプリセオスタチンＡ、ＦＲ９０１４６４、および
【0226】
【化9】
【0227】
タキサンは、抗チューブリン剤または有糸分裂阻害剤として作用するジテルペンである。例示的なタキサンとしては、それだけに限らないが、パクリタキセル（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標））およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））がある。
【0228】
ツブリシンは、微小管を解重合し、有糸分裂停止を誘導することが示された粘液細菌の株から単離される天然産物である。例示的なツブリシンとしては、それだけに限らないが、ツブリシンＡ、ツブリシンＢ、およびツブリシンＤがある。
【0229】
ビンカアルカロイドも抗チューブリン剤である。例示的なビンカアルカロイドとしては、それだけに限らないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンがある。
【0230】
したがって、一部の実施形態では、細胞傷害性剤は、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤ）、０１０１（２－メチルアラニル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－｛［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（１，３－チアゾール－２－イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン－１－イル｝－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、３３７７（Ｎ，２－ジメチルアラニル－Ｎ－｛（１Ｓ，２Ｒ）－４－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシル－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル｝－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、０１３１（２－メチル－Ｌ－プロリ－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（１Ｓ）－１－カルボキシ－２－フェニルエチル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、０１３１－ＯＭｅ（Ｎ，２－ジメチルアラニル－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－３－｛［（２Ｓ）－１－メトキシ－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチルＬ－バリンアミド）、０１２１（２－メチル－Ｌ－プロリ－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－１－｛（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－｛［（２Ｓ）－１－メトキシ－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル］アミノ｝－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］ピロリジン－１－イル｝－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）、および（２Ｓ，３Ｚ）－５－｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－｛（２Ｅ，４Ｅ）－５－［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－７－（２－ヒドラジニル－２－オキソエチル）－４－ヒドロキシ－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタ－５－イル］－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル｝－２，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル］アミノ｝－５－オキソペンタ－３－エン－２－イルアセテートからなる群から選択される。
【0231】
一部の実施形態では、作用物質は、免疫調節剤である。免疫調節剤の例としては、それだけに限らないが、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、シロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、グルココルチコイドおよびその類似体、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、造血因子、インターロイキン（例えば、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、およびＩＬ－２１）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球－コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージ－コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン－α、－β、および－γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、ならびにトロンボポエチン、またはこれらの組合せがある。
【0232】
一部の実施形態では、作用物質部分は、造影剤（例えば、フルオロフォアまたはキレーター）、例えば、フルオレセイン、ローダミン、ランタニドリン光体、およびこれらの誘導体、またはキレーターに結合した放射性同位体などである。フルオロフォアの例としては、それだけに限らないが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（例えば、５－ＦＩＴＣ）、フルオレセインアミダイト（ＦＡＭ）（例えば、５－ＦＡＭ）、エオシン、カルボキシフルオレセイン、エリトロシン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（例えば、Ａｌｅｘａ３５０、４０５、４３０、４８８、５００、５１４、５３２、５４６、５５５、５６８、５９４、６１０、６３３、６４７、６６０、６８０、７００、または７５０）、カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）（例えば、５－ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、およびスルホローダミン（ＳＲ）（例えば、ＳＲ１０１）がある。キレーターの例としては、それだけに限らないが、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン，１－グルタル酸－４，７－酢酸（デフェロキサミン）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、および１，２－ビス（ｏ－アミノフェノキシ）エタン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸）（ＢＡＰＴＡ）がある。
【0233】
フルオロフォアの例としては、それだけに限らないが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（例えば、５－ＦＩＴＣ）、フルオレセインアミダイト（ＦＡＭ）（例えば、５－ＦＡＭ）、エオシン、カルボキシフルオレセイン、エリトロシン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（例えば、Ａｌｅｘａ３５０、４０５、４３０、４８８、５００、５１４、５３２、５４６、５５５、５６８、５９４、６１０、６３３、６４７、６６０、６８０、７００、または７５０）、カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）（例えば、５－ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、およびスルホローダミン（ＳＲ）（例えば、ＳＲ１０１）がある。
【0234】
一部の実施形態では、治療用または診断用放射性同位体、または他の標識（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ標識）を、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片へのコンジュゲーションのために作用物質中に組み込むことができる。放射性同位体または他の標識の例としては、それだけに限らないが、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１４Ｃ、１５Ｎ、１５Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１２１Ｔｅ、１２２Ｔｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２５Ｔｅ、１２６Ｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、１３３Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１５３Ｐｂ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６５Ｔｍ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９７Ｐｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２０１Ｔｌ、２０３Ｈｇ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ａｃ、または２２５Ａｃがある。
【0235】
一部の実施形態では、作用物質は、それだけに限らないが、毒素、ホルモン、酵素、および増殖因子を含めた治療タンパク質である。
【0236】
毒素タンパク質（またはポリペプチド）の例としては、それだけに限らないが、ジフテリア（例えば、ジフテリアＡ鎖）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素およびエンドトキシン、リシン（例えば、リシンＡ鎖）、アブリン（例えば、アブリンＡ鎖）、モデッシン（例えば、モデッシンＡ鎖）、アルファ－サルシン、アレウリテス・フォルジ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン－Ａ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルス性タンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、フィトラカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテセン、阻害剤シスチンノット（ＩＣＫ）ペプチド（例えば、セラトトキシン）、ならびにコノトキシン（例えば、ＫＩＩＩＡまたはＳｍＩＩＩａ）がある。
【0237】
一部の実施形態では、作用物質は、生体適合性ポリマーである。本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片は、生体適合性ポリマーにコンジュゲートさせて血清半減期および生物活性を増大させ、かつ／またはｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長することができる。生体適合性ポリマーの例としては、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその誘導体など、および双性イオン含有生体適合性ポリマー（例えば、ホスホリルコリン含有ポリマー）がある。
【0238】
一部の実施形態では、作用物質は、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドである。
【0239】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、式：抗体－（アシルドナーグルタミン含有タグ）－（リンカー）－（細胞傷害性剤）を含み、アシルドナーグルタミン含有タグは、抗体または抗原結合断片の特異的部位で（例えば、重もしくは軽鎖のカルボキシル末端で、抗体重鎖中の残基Ｔ１３５の後で、または別の部位で）操作されており、タグは、リンカー（例えば、１種または複数の反応性アミン（例えば、一級アミンＮＨ２）を含有するリンカー）にコンジュゲートされており、リンカーは、細胞傷害性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは他のオーリスタチン、例えば、０１０１、０１３１、もしくは３３７７など）にコンジュゲートされている、コンジュゲートを提供する。
【0240】
１種または複数の反応性アミンを含有するリンカーの例としては、それだけに限らないが、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ（アセチル－リシン－グリシン）、アミノカプロン酸、Ａｃ－Ｌｙｓ－β－Ａｌａ（アセチル－リシン－β－アラニン）、アミノ－ＰＥＧ２（ポリエチレングリコール）－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ３－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２（もしくはアミノＰＥＧ６－プロピオニル）、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ（アセチル－リシン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、アミノカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、［（３Ｒ，５Ｒ）－１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］プロパノイル｝ピペリジン－３，５－ジイル］ビス－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、［（３Ｓ，５Ｓ）－１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］プロパノイル｝ピペリジン－３，５－ジイル］ビス－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、プトレシン、またはＡｃ－Ｌｙｓ－プトレシンがある。
【0241】
一部の実施形態では、コンジュゲートは、１）抗体－ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり；２）抗体－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｎ２９７Ｑを含み；３）抗体－ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｎ２９７Ｑを含み；４）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号４５４）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１であり、Ｎ２９７Ａを含み；５）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号４５４）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７であり、Ｎ２９７Ａを含み；６）抗体－ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１である。一部の実施形態では、例えば、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）またはＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体の軽鎖のＣ末端で操作されている。他の実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、ＬＬＱＧＡ（配列番号４６３）またはＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２））は、抗体の重鎖のＣ末端で操作されており、Ｃ末端のリシン残基は欠失されている。一部の実施形態では、例えば、ＬＬＱＧ（配列番号４５４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体重鎖中の残基Ｔ１３５の後で操作されており、または抗体重鎖中のアミノ酸残基Ｅ２９４－Ｎ２９７を置き換える。抗体の例としては、それだけに限らないが、Ｐ６Ｅ０１／Ｐ６Ｅ０１、Ｐ６Ｅ０１／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１；Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１がある。
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｐ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１がある。
【0242】
一つの変形では、コンジュゲートは、２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換をさらに含む。したがって、例えば、コンジュゲートは、１）抗体－ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｋ２２２Ｒを含み；２）抗体－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｎ２９７ＱおよびＫ２２２Ｒを含み；３）抗体－ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｎ２９７ＱおよびＫ２２２Ｒを含み；４）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号４５４）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１であり、Ｎ２９７ＡおよびＫ２２２Ｒを含み；５）抗体－ＬＬＱＧ（配列番号４５４）－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７であり、Ｎ２９７ＡおよびＫ２２２Ｒを含み；６）抗体－ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－０１０１であり、Ｋ２２２Ｒを含む。一部の実施形態では、例えば、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７４）またはＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号４７５）を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体の軽鎖のＣ末端で操作されている。他の実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、ＬＬＱＧＡ（配列番号４７３）またはＬＬＱＧＰＰ（配列番号４７２））は、抗体の重鎖のＣ末端で操作されており、Ｃ末端のリシン残基は欠失されている。一部の実施形態では、例えば、ＬＬＱＧ（配列番号４５４）を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体重鎖中の残基Ｔ１３５の後で操作されており、または抗体重鎖中のアミノ酸残基Ｅ２９４－Ｎ２９７を置き換える。抗体の例としては、それだけに限らないが、Ｐ６Ｅ０１／Ｐ６Ｅ０１、Ｐ６Ｅ０１／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１；Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＬＧＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＫＷ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＬ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＰ、Ｌ１．ＧＤＦ／Ｌ３．ＮＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＫＷ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＮＹ／Ｐ６Ｅ０１、
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、またはＰ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１がある。
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＳ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＡＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＦＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ１．ＰＨ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＲ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＹＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＬＴ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＨＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＹＡ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＤＹ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＹＱ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＬＴ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ２．ＱＬ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＹＡ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＥ、Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＡＱ
Ｌ３．ＰＹ／Ｌ３．ＫＦ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０
Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６
Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９
Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４
ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、またはＰ４Ｇ４、またはＰ１Ａ１１がある。
【0243】
ＣＤ３抗体およびこれらを作製する方法
本発明は、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３（配列番号５０２；または受託番号：ＮＭ＿０００７３３．３））に結合する抗体をさらに提供する。
本発明は、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３（配列番号５０２；または受託番号：ＮＭ＿０００７３３．３））に結合する抗体をさらに提供する。
【0244】
一態様では、ＣＤ３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３４５、３４７、３４９、３５１、４４４、３５４、３５６、３７８、４４２、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、もしくは４００に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５５、３７７、４４３、４４５、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、もしくは３９９に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片が提供されている。
【0245】
別の態様では、ＣＤ３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号３３１、３３２、３３３、４０１、４０２、４０３、４０７、４０８、４１５、４１６、４１８、４１９、４２０、４２４、４２５、４２６、４４６、４４７、もしくは４４８に示した配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号３３４、３３６、３３７、３３８、３３９、４０４、４０５、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１７、４１８、４２１、４２２、４２７、４２８、４４９、もしくは４５０に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３３５、４０６、４２３、４２９、もしくは４５１に示した配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびに／または（ｉ）配列番号３４０、３４３、４３０、４３１、４３５、もしくは４４０、４４１に示した配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号３４１、４３３、４５２、もしくは４３６に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３４２、４３２、４３４、４３７、４３８、４３９、４４６、もしくは４５３に示した配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片が提供されている。
【0246】
一部の実施形態では、表３に列挙した部分的軽鎖配列のいずれか１つおよび／または表３に列挙した部分的重鎖配列のいずれか１つを有する抗体が提供されている。
【0247】
【表3-1】
【0248】
【表3-2】
【0249】
【表3-3】
【0250】
【表3-4】
【0251】
【表3-5】
【0252】
表３では、下線が引かれた配列は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字は、ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ配列である。
【0253】
本発明は、ＣＤ３に対する抗体のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、およびＣＤＲ接触領域を含む）も提供する。ＣＤＲ領域の判定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。一部の実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組合せ（「組み合わせたＣＤＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）でありうることが理解される。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。言い換えれば、１つを超えるＣＤＲを有する実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組合せＣＤＲ、またはこれらの組合せのいずれかでありうる。表４は、本明細書に提供されるＣＤＲ配列の例を提供する。
【0254】
【表4-1】
【0255】
【表4-2】
【0256】
【表4-3】
【0257】
【表4-4】
【0258】
【表4-5】
【0259】
【表4-6】
【0260】
【表4-7】
【0261】
【表4-8】
【0262】
本発明は、本発明の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド、ならびにポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【0263】
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗体ｈ２Ｂ４、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｗｔ ＶＬ＿ＴＫ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｙａｅｓ ＶＬ＿ＴＫ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｙａｄｓ ＶＬ＿ＴＫ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｙａｐｓ ＶＬ＿ＴＫ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ－Ｓ５５Ｙ、ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ－Ｓ１０５Ｑ、ｈ２Ｂ４－ｖＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ－Ｓ５５Ｙ／Ｓ１０５Ｑ、２Ｂ４、ｈ２Ｂ４－１１、１Ｃ１０、１Ａ４、７Ａ３、２５Ａ８、１６Ｇ７、ｈ２５Ａ８－Ｂ５、ｈ２５Ａ８－Ｂ８、ｈ２５Ａ８－Ｂ１２、ｈ２５Ａ８－Ｂ１３、ｈ２５Ａ８－Ｃ５、ｈ２５Ａ８－Ｃ８、ｈ２５Ａ８－Ｄ１３、ｈ２５Ａ８－Ｅ１３、ｈ２５Ａ８－Ｆ１３、またはｈ２５Ａ８－Ｇ１３の重鎖および／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持されてもよく、次いで宿主細胞を将来使用するために増やし、凍結させることができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
【0264】
本発明は、本発明の抗体由来の１つまたは複数の断片または領域を含む融合タンパク質も包含する。一実施形態では、配列番号３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３４４、３４６、３４８、３５０、４４５、３５２、３５５、４４３、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、もしくは３９９に示した可変軽鎖領域の少なくとも１０の連続したアミノ酸、および／または配列番号３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３４５、３４７、３４９、３５１、３５４、３５６、４４４、４４２、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、もしくは４００に示した可変重鎖領域の少なくとも１０のアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供されている。他の実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸および／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供されている。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号３１９および３２０、３２１および３２２、３２３および３２４、３２５および３２６、３２７および３２８、３２９および３３０、３４４および３４５、３４６および３４７、３４８および３４９、３５０および３５１、４４５および４４４、３５２および３５４、３５５および３５６、４４３および４４２、３７７および３７８、３７９および３８０、３８１および３８２、３８３および３８４、３８５および３８６、３８７および３８８、３８９および３９０、３９１および３９２、３９３および３９４、３９５および３９６、３９７および３９８、または３９９および４００の中から選択される配列対のいずれかに示した軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、１種または複数のＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤＲ Ｈ３（ＶＨ ＣＤＲ３）および／またはＣＤＲ Ｌ３（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む。本発明の目的に関して、融合タンパク質は、１種または複数の抗体、および天然分子に付着されていない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列もしくは別の領域由来の相同配列を含有する。例示的な異種配列としては、それだけに限らないが、「タグ」、例えば、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグなどがある。タグは、当技術分野で周知である。
【0265】
融合ポリペプチドは、当技術分野で公知の方法によって、例えば、合成的にまたは組換えで創製することができる。典型的には、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載の組換え法を使用してこれらをコードするポリヌクレオチドを調製し、発現させることによって作製されるが、これらは、例えば、化学合成を含めた当技術分野で公知の他の手段によっても調製することができる。
【0266】
本発明におけるＣＤ３抗体の代表的な材料は、２０１５年９月１１日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）において寄託された。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２５１３を有するベクターは、ヒト化ＣＤ３抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２２５１２を有するベクターは、ヒト化ＣＤ３抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項とその下の規制（ブダペスト条約）の下で行われた。これは、寄託の日付から３０年間の寄託物の生存培養の維持を保証する。寄託物は、ブダペスト条約の条項の下で、かつＰｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間の同意を条件として、ＡＴＣＣによって利用可能にされることになり、この同意は、関係する米国特許の発行の後、またはいずれか早くなる任意の米国もしくは外国特許出願が公衆に公開された後、公衆に寄託物の培養物の子孫の永続的かつ非制限的利用可能性を保証し、米国特許法第１２２条およびそれに準じた長官規則（８８６ ＯＧ ６３８を特に参照して連邦規則法典第３７巻第１．１４条を含む）に従って権利を与えられていると米国特許商標庁長官によって判定された者への子孫の利用可能性を保証するものである。
【0267】
本願の代理人は、寄託中の材料の培養物が、適当な条件下で培養されたときに、死に、または失われ、または破壊された場合、材料を、別の同じものと通知時に即座に置き換えることに同意した。寄託した材料の利用可能性は、任意の政府の権限下でその特許法に従って与えられた権利に違反して本発明を実施するライセンスとして解釈されるべきでない。
【0268】
二重特異性抗体および作製する方法
少なくとも２種の異なる抗原に対して結合特異性を有する二重特異性抗体、モノクローナル抗体は、本明細書に開示の抗体を使用して調製することができる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０、１９８６）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、異なる特異性を有する２本の重鎖を伴った２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の同時発現に基づいていた（ＭｉｌｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５、５３７～５３９、１９８３）。
少なくとも２種の異なる抗原に対して結合特異性を有する二重特異性抗体、モノクローナル抗体は、本明細書に開示の抗体を使用して調製することができる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０、１９８６）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、異なる特異性を有する２本の重鎖を伴った２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の同時発現に基づいていた（ＭｉｌｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５、５３７～５３９、１９８３）。
【0269】
二重特異性抗体を作製する一手法によれば、所望の結合特異性（抗体－抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常領域配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とのものである。融合物の少なくとも１つの中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好適である。免疫グロブリン重鎖融合物、および必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクター内に挿入され、適当な宿主生物内にコトランスフェクトされる。これは、構築物に使用される不等比の３本のポリペプチドが最適の収率をもたらす実施形態において、３本のポリペプチド断片の相互の比率の調整に大きな柔軟性をもたらす。しかし、等比での少なくとも２本のポリペプチド鎖の発現が高い収率をもたらすとき、または比が特に重要でないとき、２本または３本すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【0270】
一手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）から構成される。二重特異性分子の一方の半分のみに免疫グロブリン軽鎖を有するこの非対称構造は、望まれない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進する。この手法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０４６９０号に記載されている。
【0271】
別の手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第１のヒンジ領域内のアミノ酸修飾から構成され、第１のヒンジ領域内の置換された／置き換えられたアミノ酸は、別のアーム中の第２のヒンジ領域内の対応するアミノ酸と反対電荷を有する。この手法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載されている。
【0272】
別の手法では、所望のヘテロ多量体またはヘテロ二量体タンパク質（例えば、二重特異性抗体）の形成は、第１と第２の免疫グロブリン様Ｆｃ領域（例えば、ヒンジ領域および／またはＣＨ３領域）との間の界面を変更または操作することによって増強される。この手法では、二重特異性抗体は、ＣＨ３領域から構成され得、ＣＨ３領域は、第１のＣＨ３ポリペプチドおよび第２のＣＨ３ポリペプチドを含み、これらは一緒に相互作用してＣＨ３界面を形成し、ＣＨ３界面内の１個または複数のアミノ酸は、ホモ二量体形成を不安定化し、ホモ二量体形成に静電気的に不都合でない。この手法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載されている。
【0273】
別の手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム中のエピトープ（例えば、ＢＣＭＡ）に向けられた抗体に操作されたグルタミン含有ペプチドタグ、およびトランスグルタミナーゼの存在下で別のアーム中の第２のエピトープに向けられた第２の抗体に操作された別のペプチドタグ（例えば、Ｌｙｓ含有ペプチドタグまたは反応性内因性Ｌｙｓ）を使用して生成することができる。この手法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号（ＷＯ２０１２／０５９８８２号）に記載されている。
【0274】
本発明の別の態様では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（例えば、二重特異性抗体）は、全長ヒト抗体を含み、ヘテロ二量体タンパク質の第１の抗体可変ドメインは、ヒト免疫エフェクター細胞に位置したエフェクター抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員することができ、ヘテロ二量体タンパク質の第２の抗体可変ドメインは、標的抗原に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、ヒト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、免疫学的に不活性なＦｃ領域を含む。
【0275】
ヒト免疫エフェクター細胞は、当技術分野で公知の様々な免疫エフェクター細胞のいずれかでありうる。例えば、免疫エフェクター細胞は、それだけに限らないが、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むヒトリンパ系細胞系列のメンバーでありうる。免疫エフェクター細胞はまた、例えば、限定することなく、単球、好中性顆粒球、および樹状細胞を含むがこれらに限らないヒト骨髄系列のメンバーでありうる。このような免疫エフェクター細胞は、エフェクター抗原の結合によって活性化されると標的細胞に対する細胞傷害性もしくはアポトーシス効果、または他の所望の効果を有しうる。
【0276】
エフェクター抗原は、ヒト免疫エフェクター細胞で発現される抗原（例えば、タンパク質またはポリペプチド）である。ヘテロ二量体タンパク質（例えば、ヘテロ二量体抗体または二重特異性抗体）によって結合されうるエフェクター抗原の例としては、それだけに限らないが、ヒトＣＤ３（またはＣＤ３（表面抗原分類）複合体）、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ２５、ＣＤ６４、およびＣＤ８９がある。
【0277】
標的細胞は、ヒトにとって天然または外来である細胞でありうる。天然の標的細胞では、細胞は、悪性細胞に形質転換されている場合があり、または病理学的に修飾されている場合がある（例えば、ウイルス、マラリア原虫、または細菌に感染した天然標的細胞）。外来標的細胞では、細胞は、侵入病原体、例えば、細菌、マラリア原虫、またはウイルスなどである。
【0278】
標的抗原は、疾患状態（例えば、炎症疾患、増殖性疾患（例えば、がん）、免疫学的障害、神経疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、感染疾患（例えば、ウイルス感染症もしくは寄生虫感染症）、アレルギー反応、グラフト対宿主疾患、または宿主対グラフト疾患における標的細胞上で発現される。標的抗原は、エフェクター抗原ではない。標的抗原の例としては、それだけに限らないが、ＢＣＭＡ、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＣＣＲ５（ケモカイン受容体５型）、ＣＤ１９、ＨＥＲ（ヒト上皮成長因子受容体）－２／ｎｅｕ、ＨＥＲ－３、ＨＥＲ－４、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＭＵＣ－１（ムチン）、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ７、ＣＩｈＣＧ、ルイス－Ｙ、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３０、ガングリオシドＧＤ３、９－Ｏ－アセチル－ＧＤ３、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、フコシルＧＭ１、ポリＳＡ、ＧＤ２、カルボアンヒドラーゼＩＸ（ＭＮ／ＣＡ ＩＸ）、ＣＤ４４ｖ６、Ｓｈｈ（ソニックヘッジホッグ）、Ｗｕｅ－１、形質細胞抗原、（膜結合型）ＩｇＥ、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＣＣＲ８、ＴＮＦ－アルファ前駆体、ＳＴＥＡＰ、メソテリン、Ａ３３抗原、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、Ｌｙ－６；デスモグレイン４、Ｅ－カドヘリンネオエピトープ、胎児アセチルコリン受容体、ＣＤ２５、ＣＡ１９－９マーカー、ＣＡ－１２５マーカー、およびＭＩＳ（ミュラー管抑制物質）受容体ＩＩ型、ｓＴｎ（シアル化Ｔｎ抗原；タグ－７２）、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化抗原）、エンドシアリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＬＧ、ＳＡＳ、およびＣＤ６３がある。
【0279】
一部の実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（例えば、二重特異性抗体）は、全長ヒト抗体を含み、ヘテロ二量体タンパク質の第１の抗体可変ドメインは、ヒト免疫エフェクター細胞に位置したエフェクター抗原（例えば、ＣＤ３抗原）に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員することができ、ヘテロ二量体タンパク質の第２の抗体可変ドメインは、標的抗原（例えば、ＣＤ２０抗原またはＥｐＣＡＭ）に特異的に結合することができ、ヘテロ二量体タンパク質の第１および第２の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ２（配列番号４９３）のヒンジ領域内の２２３、２２５、および２２８位（例えば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、ならびにＣＨ３領域内の４０９または３６８位（（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付けスキーム））でアミノ酸修飾を含む。
【0280】
一部の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の第１および第２の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ１（配列番号４９４）のヒンジ領域内の２２１および２２８位（例えば、（Ｄ２２１ＲまたはＤ２２１Ｅ）および（Ｐ２２８ＲまたはＰ２２８Ｅ））、ならびにＣＨ３領域内の４０９または３６８位（（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付けスキーム））でアミノ酸修飾を含む。
【0281】
一部の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の第１および第２の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ４（配列番号４９５）のヒンジ領域内の２２８位（例えば（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、およびＣＨ３領域内の４０９または３６８位（（例えば、Ｒ４０９またはＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付けスキーム））でアミノ酸修飾を含む。
【0282】
別の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の第１の抗体可変ドメインは、配列番号３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３４５、３４７、３４９、３５１、４４４、３５４、３５６、３７８、４４２、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、もしくは４００に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５５、３７７、４４３、４４５、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、または３９９に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含み、ヘテロ二量体タンパク質第２の抗体可変ドメインは、配列番号２、３、７、８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８３、８７、９２、９５、９７、９９、１０１、１０４、１０６、１１０、１１２、１１４、１１８、１２０、１２２、１２５、１２７、３１３、３１４、３６３、もしくは３６５に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号１、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、３１７、８１、８２、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９６、９８、１００、１０２、１０３、１０５、１０７、１０８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１６、１１７、１１９、１２１、１２３、１２４、１２６、１２８、３１５、もしくは３６４に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【0283】
別の実施形態では、第１の抗体可変ドメインは、配列番号３２４もしくは３８８に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３２３もしくは３８７に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含み、第２の抗体可変ドメインは、配列番号１１２に示した重鎖可変（ＶＨ）配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または配列番号３８に示した軽鎖可変（ＶＬ）配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【0284】
本発明において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの突然変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合的に修飾された抗体を含めた、要求される特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成を包含しうる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラもしくはヒト化抗体を含む）でありうる。
【0285】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡまたはＣＤ３抗体は、モノクローナル抗体である。例えば、ＢＣＭＡまたはＣＤ３抗体は、ヒト化モノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体である。
【0286】
一部の実施形態では、抗体は、修飾定常領域、例えば、限定することなく、免疫応答を誘発する潜在性が増大した定常領域などを含む。例えば、定常領域は、Ｆｃガンマ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、またはＦｃγＩＩＩなどに対する増大した親和性を有するように修飾されてもよい。
【0287】
一部の実施形態では、抗体は、修飾定常領域、例えば、免疫学的に不活性である、すなわち、免疫応答を誘発する潜在性が低減された定常領域などを含む。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３～２６２４、１９９９；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；および／または英国特許出願第９８０９９５１８号に記載されたように修飾される。Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４でありうる。Ｆｃは、突然変異Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１を含有するヒトＩｇＧ２（ＩｇＧ２Δａ）であり得、ここでアミノ酸残基は、野生型ＩｇＧ２配列を参照して番号付けられている。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３～２６２４、１９９９。一部の実施形態では、抗体は、以下の突然変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含む（Ａｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４０、５８５～５９３、２００３）：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）、番号付けは、野生型ＩｇＧ４を参照したものである。さらに別の実施形態では、Ｆｃは、欠失Ｇ２３６を有するヒトＩｇＧ４ Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｂ）である。別の実施形態では、Ｆｃは、ヒンジ安定化突然変異Ｓ２２８からＰ２２８を含有する任意のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、またはＩｇＧ４Δｃ）である（Ａａｌｂｅｒｓｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５、９～１９、２００２）。別の実施形態では、Ｆｃは、非グリコシル化Ｆｃ（aglycosylated Fc）でありうる。
【0288】
一部の実施形態では、定常領域は、オリゴ糖付着残基（Ａｓｎ２９７など）および／または定常領域内のグリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって非グリコシル化されている。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化について酵素的に非グリコシル化されている。定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化について、酵素的に、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によって非グリコシル化されている場合がある。
【0289】
一部の実施形態では、定常領域は、Ｆｃガンマ受容体結合を除去または低減する修飾定常領域を有する。例えば、Ｆｃは、突然変異Ｄ２６５を含有するヒトＩｇＧ２であり得、ここでアミノ酸残基は、野生型ＩｇＧ２配列（配列番号４９３）を参照して番号付けられている。したがって、一部の実施形態では、定常領域は、配列番号４９６に示した配列：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＲＶＲＣＰＲＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
を有する修飾定常領域を有する。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＲＶＲＣＰＲＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
を有する修飾定常領域を有する。
【0290】
一部の実施形態では、定常領域は、配列番号４９７に示した配列：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＥＶＥＣＰＥＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＥＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
を有する修飾定常領域を有する。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＥＶＥＣＰＥＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＥＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
を有する修飾定常領域を有する。
【0291】
ＢＣＭＡまたはＣＤ３への抗体の結合親和性を判定する１つのやり方は、抗体の単官能性Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによるものである。単官能性Ｆａｂ断片を得るために、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで切断し、または組換えで発現させることができる。抗体のＢＣＭＡ Ｆａｂ断片の親和性は、事前固定化ストレプトアビジンセンサーチップ（ＳＡ）を備えた表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）、またはＨＢＳ－ＥＰランニング緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）を使用する抗マウスＦｃもしくは抗ヒトＦｃによって判定することができる。ビオチン化またはＦｃ融合ヒトＢＣＭＡを、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液中に希釈して０．５μｇ／ｍＬ未満の濃度にし、多様な接触時間を使用して個々のチップチャネルに注入して、抗原密度の２つの範囲、詳細な速度論的スタディのための５０～２００応答単位（ＲＵ）またはスクリーニングアッセイのための８００～１，０００ＲＵを実現することができる。再生スタディは、２５％ｖ／ｖエタノール中の２５ｍＭ ＮａＯＨが、２００の注入にわたってチップ上のＢＣＭＡの活性を保ちながら、結合したＦａｂを有効に除去することを示した。典型的には、精製Ｆａｂ試料の連続希釈液（０．１～１０×のスパン濃度（ｓｐａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）によりＫＤを推定した）が１００μＬ／分で１分間注入され、最大で２時間の解離時間が許容される。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準物質として既知濃度（アミノ酸分析によって判定される）Ｆａｂを使用してＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によって判定される。動的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを使用して、１：１ラングミュア結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ、Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ、Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、６、９９～１１０）に包括的にデータをフィッティングすることによって同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。このプロトコールは、ヒトＢＣＭＡ、別の哺乳動物のＢＣＭＡ（マウスＢＣＭＡ、ラットＢＣＭＡ、または霊長類ＢＣＭＡなど）、およびＢＣＭＡの異なる形態（例えば、グリコシル化ＢＣＭＡ）を含めた任意のＢＣＭＡへの抗体の結合親和性の判定に使用するのに適している。抗体の結合親和性は一般に、２５℃で測定されるが、３７℃でも測定されうる。
【0292】
本明細書に記載の抗体は、当技術分野で公知の任意の方法によって作製されうる。ハイブリドーマ細胞株の生産に関して、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般に、本明細書でさらに記載される通り、抗体刺激および生産の確立された慣例的な技法に合わせたものである。ヒトおよびマウス抗体の生産のための一般的な技法は、当技術分野で公知であり、かつ／または本明細書に記載されている。
【0293】
ヒトを含めた任意の哺乳動物対象またはこれら由来の抗体産生細胞を、ヒトを含めた哺乳動物およびハイブリドーマ細胞株の生産のための基礎として機能を果たすようにマニピュレートすることができることが企図されている。典型的には、宿主動物は、本明細書に記載したものを含めてある量の免疫原を腹腔内、筋肉内、経口的、皮下、足底内、および／または皮内に接種される。
【0294】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５～４９７、１９７５の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を使用して、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｉｎ Vｉｔｒｏ、１８：３７７～３８１、１９８２によって改良されたようにリンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。それだけに限らないが、Ｘ６３－Ａｇ８．６５３およびｔｈｅ Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ製のものを含めた入手可能な骨髄腫株をハイブリダイゼーションに使用することができる。一般に、本技法では、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合する。融合後、細胞は、融合培地から分離され、ヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的増殖培地中で増殖されてハイブリダイズしていない親細胞が排除される。血清を補充された、または血清を含まない本明細書に記載の培地のいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するのに使用することができる。細胞融合技法の別の選択肢として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して本主題発明のモノクローナル抗体を生産してもよい。ハイブリドーマは、必要に応じて増やされおよびサブクローニングされ、上清が、慣例的なイムノアッセイ手順（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫アッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性についてアッセイされる。
【0295】
抗体の供給源として使用されうるハイブリドーマは、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、またはこれらの部分に特異的なモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマのすべての誘導体、子孫細胞を包含する。
【0296】
このような抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで増殖させることができる。モノクローナル抗体は、必要に応じて、慣例的な免疫グロブリン精製手順、例えば、硫安分画、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などによって培養基または体液から単離することができる。望まれない活性は、存在する場合、例えば、調製物を固相に付着した免疫原からできた吸着剤上で走らせ、免疫原から所望の抗体を溶出または放出させることによって除去することができる。二官能性剤または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基によるコンジュゲーション）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基による）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である）を使用して、免疫される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートしたヒトＢＣＭＡもしくはＣＤ３、または標的アミノ酸配列を含有する断片で宿主動物を免疫すると、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を得ることができる。
【0297】
必要に応じて、目的の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）をシーケンシングすることができ、次いでポリヌクレオチド配列を発現または繁殖のためにベクター中にクローニングすることができる。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持されてもよく、次いで宿主細胞を将来使用するために増やし、凍結させることができる。細胞培養での組換えモノクローナル抗体の生産は、当技術分野で公知の手段によってＢ細胞から抗体遺伝子をクローニングすることによって実行することができる。例えば、Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、３２９、１１２、２００８；米国特許第７，３１４，６２２号を参照。
【0298】
代替案では、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化する」ため、または親和性もしくは抗体の他の特性を改善するための遺伝子マニピュレーションに使用することができる。例えば、抗体がヒトにおける臨床治験および処置に使用される場合、定常領域をヒト定常領域により近く似せて免疫応答を回避するように操作することができる。ＢＣＭＡまたはＣＤ３へのより大きい親和性、およびＢＣＭＡの阻害におけるより大きい効力を得るように抗体配列を遺伝的にマニピュレートすることが望ましい場合がある。
【0299】
モノクローナル抗体をヒト化するのに４つの一般的な工程が存在する。これらは、（１）出発抗体軽および重可変ドメインのヌクレオチドおよび予測アミノ酸配列の判定、（２）ヒト化抗体の設計、すなわち、どの抗体フレームワーク領域をヒト化プロセス中に使用するかの決定、（３）実際のヒト化方法論／技法、ならびに（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，８０７，７１５号；同第５，８６６，６９２号；同第６，３３１，４１５号；同第５，５３０，１０１号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５８５，０８９号；および同第６，１８０，３７０号を参照。
【0300】
ヒト定常領域に融合したげっ歯類または修飾げっ歯類Ｖ領域およびこれらの関連ＣＤＲを有するキメラ抗体を含めた、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３～２９９、１９９１、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：４２２０～４２２４、１９８９、Ｓｈａｗら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３８：４５３４～４５３８、１９８７、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７：３５７７～３５８３、１９８７を参照。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常領域と融合する前にヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）内にグラフトされたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３～３２７、１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４～１５３６、１９８８、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２～５２５、１９８６を参照。別の参考文献には、組換え操作されたげっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開第０５１９５９６号を参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療用途の継続時間および有効度を制限するげっ歯類抗ヒト抗体分子に向けた望まれない免疫応答を最小限にするように設計される。例えば、抗体定常領域を、それが免疫学的に不活性である（例えば、補体溶解を誘発しない）ように操作することができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照。やはり利用されうる抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９：２４７１～２４７６、１９９１によって、ならびに米国特許第６，１８０，３７７号；同第６，０５４，２９７号；同第５，９９７，８６７号；同第５，８６６，６９２号；同第６，２１０，６７１号；および同第６，３５０，８６１号において、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号において開示されている。
【0301】
上記に論じたヒト化抗体に関する一般的原理は、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシにおいて使用するために抗体をカスタマイズするのにも適用可能である。さらに、本明細書に記載の抗体をヒト化する１つまたは複数の態様は、例えば、ＣＤＲ移植、フレームワーク突然変異、およびＣＤＲ突然変異と組み合わせてもよい。
【0302】
一つの変形では、完全ヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販マウスを使用することによって得ることができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはよりロバストな免疫応答を生じさせるように設計されたトランスジェニック動物も、ヒト化またはヒト抗体の生成に使用することができる。このような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）製Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、ならびにＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）製ＨｕＭＡｂ－マウス（登録商標）およびＴＣマウス（商標）である。
【0303】
代替案では、抗体を、当技術分野で公知の任意の方法を使用して組換えで作製し、発現させてもよい。別の代替案では、抗体は、ファージディスプレイ技術によって組換えで作製されうる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；同第５，５８０，７１７号；同第５，７３３，７４３号；および同第６，２６５，１５０号；ならびにＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３～４５５、１９９４を参照。代わりに、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２～５５３、１９９０）を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト化抗体および抗体断片を生成することができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子が、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子中にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上で機能的抗体断片として表示される。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的性質に基づく選択は、これらの性質を呈する抗体をコードする遺伝子の選択ももたらす。よって、ファージは、Ｂ細胞の性質の一部を模倣する。ファージディスプレイは、様々なフォーマットで実施することができる。総説について、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、３：５６４～５７１、１９９３を参照。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４～６２８、１９９１は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小ランダムコンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。非免疫化ヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体を、Ｍａｒｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７、１９９１、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１２：７２５～７３４、１９９３によって記載された技法に本質的に従って単離することができる。天然の免疫応答では、抗体遺伝子は、高い割合で突然変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入される変化の一部は、より高い親和性を付与することになり、高親和性表面免疫グロブリンを表示するＢ細胞は、後続の抗原チャレンジの間に優先的に複製および分化される。この自然過程は、「鎖シャッフリング」として公知の技法を使用することによって模倣することができる。（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１０：７７９～７８３、１９９２）。本方法では、ファージディスプレイによって得られる「一次」ヒト抗体の親和性は、重および軽鎖Ｖ領域遺伝子を、非免疫化ドナーから得られるＶドメイン遺伝子の天然に存在するバリアントのレパートリー（レパートリー）と順次置き換えることによって改善することができる。この技法は、ｐＭ～ｎＭ範囲内の親和性を有する抗体および抗体断片の生産を可能にする。非常に大きいファージ抗体レパートリー（「マザーオブオールライブラリー」としても公知）を作製するためのストラテジーは、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２１：２２６５～２２６６、１９９３によって記載された。遺伝子シャフリングを、げっ歯類抗体からヒト抗体を導出するのに使用することもでき、この場合、ヒト抗体は、出発げっ歯類抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープ刷り込み（epitope imprinting）」とも呼ばれるこの方法によれば、ファージディスプレイ技法によって得られたげっ歯類抗体の重または軽鎖Ｖドメイン遺伝子が、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられ、げっ歯類－ヒトキメラを創製する。抗原の選択が、機能的な抗原結合部位を回復することができるヒト可変領域の単離をもたらし、すなわち、エピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込みする）。プロセスが残存するげっ歯類Ｖドメインを置き換えるために繰り返されると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３号を参照）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類抗体の伝統的なヒト化と異なり、この技法は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基を有さない完全ヒト抗体をもたらす。
【0304】
抗体は、宿主動物から抗体および抗体産生細胞を最初に単離し、遺伝子配列を得、遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）内で組換えで抗体を発現させることによって組換えで作製することができる。使用されうる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳中で抗体配列を発現させることである。植物または乳中で、組換えで抗体を発現させるための方法は開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９：２７５６、２００１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＤ．Ｈｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３：６５、１９９５；ならびにＰｏｌｌｏｃｋら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１４７、１９９９を参照。抗体の誘導体、例えば、ヒト化、単鎖などを作製するための方法は、当技術分野で公知である。
【0305】
イムノアッセイおよび蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーソーティング技法も、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または目的の腫瘍抗原に特異的である抗体を単離するのに使用することができる。
【0306】
本明細書に記載の抗体は、多くの異なる担体に結合されうる。担体は、活性および／または不活性でありうる。周知の担体の例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱がある。担体の特質は、本発明の目的に関して可溶性または不溶性でありうる。当業者は、結合抗体にとって適当な他の担体が分かり、または日常の実験を使用してこのようなものを確認することができるであろう。一部の実施形態では、担体は、心筋を標的にする部分を含む。
【0307】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣例的な手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離およびシーケンシングされる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好適な供給源として機能を果たす。単離されると、ＤＮＡを発現ベクター（ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターなど）中に配置することができ、次いでこれらは、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞内でのモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号を参照。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重および軽鎖定常領域のコード配列を置換することによって、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８１：６８５１、１９８４、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合で連結することによって修飾されてもよい。その様式で、本明細書のモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。
【0308】
本明細書に記載のＢＣＭＡまたは目的の腫瘍抗原抗体は、当技術分野で公知の方法を使用して同定し、または特徴付けることができ、それによってＢＣＭＡまたは他の腫瘍抗原発現レベルの低減が検出および／または測定される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡとともに候補剤をインキュベートし、結合および／またはＢＣＭＡ発現レベルの付随的低減をモニターすることによって同定される。結合アッセイは、精製ＢＣＭＡポリペプチドを用いて、またはＢＣＭＡポリペプチドを天然に発現する、もしくはそれを発現するようにトランスフェクトされた細胞を用いて実施されうる。一実施形態では、結合アッセイは、競合的結合アッセイであり、この場合、候補抗体の、既知のＢＣＭＡ抗体とＢＣＭＡ結合を競合する能力が評価される。アッセイは、ＥＬＩＳＡフォーマットを含めて様々なフォーマットで実施することができる。
【0309】
最初の同定の後、候補ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体の活性を、標的にされた生物活性を試験することが知られているバイオアッセイによってさらに確認および洗練することができる。代わりに、バイオアッセイを使用して候補を直接的にスクリーニングすることができる。抗体を同定し、特徴付けるための方法の一部は、実施例に詳細に記載されている。
【0310】
ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体は、当技術分野で周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、一方法は、それが結合するエピトープを同定すること、または「エピトープマッピング」である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９の１１章に記載されている、抗体－抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドベースアッセイを含めて、タンパク質上のエピトープの場所をマッピングし、特徴付けるための当技術分野で公知の多くの方法が存在する。追加の例では、エピトープマッピングを使用して、抗体が結合する配列を判定することができる。エピトープマッピングは、様々な供給元、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ １５、８２１９ ＰＨ Ｌｅｌｙｓｔａｄ、オランダ）から市販されている。エピトープは、直鎖状エピトープ、すなわち、アミノ酸の単一ストレッチ中に含有されたもの、または必ずしも単一ストレッチ中に含有されなくてもよいアミノ酸の３次元相互作用によって形成されるコンホメーションエピトープでありうる。様々な長さ（例えば、少なくとも４～６アミノ酸長）のペプチドを単離または合成し（例えば、組換えで）、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体との結合アッセイに使用することができる。別の例では、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体が結合するエピトープは、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原配列に由来する重複ペプチドを使用し、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体による結合を判定することによって、系統的スクリーニングで判定することができる。遺伝子断片発現アッセイによれば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原をコードするオープンリーディングフレームがランダムに、または特定の遺伝子構築によって断片化され、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原の発現された断片の試験される抗体との反応性が判定される。遺伝子断片は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＰＣＲによって生成され、次いで転写され、放射性アミノ酸の存在下で翻訳されてタンパク質にされうる。次いで、抗体の放射性標識されたＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原断片への結合が免疫沈降およびゲル電気泳動によって判定される。ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上に表示されるランダムペプチド配列の大きいライブラリー（ファージライブラリー）を使用することによって同定することもできる。代わりに、重複ペプチド断片の定義されたライブラリーは、単純な結合アッセイで試験抗体への結合について試験することができる。追加の例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験、およびアラニンスキャニング突然変異誘発を実施して、エピトープ結合に要求される、十分な、かつ／または必要な残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験を、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは他の腫瘍抗原タンパク質の様々な断片が、別の種（例えば、マウス）由来のＢＣＭＡからの配列と置き換えられた（交換された）突然変異体ＢＣＭＡ、ＣＤ３、もしくは他の腫瘍抗原、または密接に関連しているが抗原性の異なるタンパク質（例えば、Ｔｒｏｐ－１）を使用して実施することができる。突然変異体ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原への抗体の結合を査定することによって、抗体結合に対する特定のＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原断片の重要性を査定することができる。
【0311】
ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体を特徴付けるのに使用されうるさらに別の方法は、同じ抗原、すなわち、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原上の様々な断片に結合することが公知の他の抗体との競合アッセイを使用して、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するか否かを判定することである。競合アッセイは、当業者に周知である。
【0312】
発現ベクターを、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または他の腫瘍抗原抗体を直接発現させるのに使用することができる。当業者は、ｉｎ ｖｉｖｏで外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号；同第６，４１３，９４２号；および同第６，３７６，４７１号を参照。発現ベクターの投与としては、注射、経口投与、粒子銃、またはカテーテル挿入投与を含めた局所または全身投与、および局部投与がある。別の実施形態では、発現ベクターは、交感神経幹もしくは神経節に、または冠動脈、心房、心室、もしくは心膜内に直接投与される。
【0313】
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的化送達も使用することができる。受容体媒介ＤＮＡ送達技法は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１９９３、１１：２０２；Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｆ Ｄｉｒｅｃｔ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ、Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編、１９９４；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３：６２１、１９８８；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：５４２、１９９４；Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：３６５５、１９９０；およびＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６：３３８、１９９１に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物は、遺伝子療法プロトコールにおける局所投与のための約１００ｎｇ～約２００ｍｇのＤＮＡの範囲内で投与される。約５００ｎｇ～約５０ｍｇ、約１μｇ～約２ｍｇ、約５μｇ～約５００μｇ、および約２０μｇ～約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲も、遺伝子療法プロトコール中に使用されうる。治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達することができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源のものでありうる（一般に、Ｊｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１：５１、１９９４；Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、５：８４５、１９９４；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９５、１：１８５；およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、６：１４８、１９９４を参照）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物または異種プロモーターを使用して誘導することができる。コード配列の発現は、構成的であり得、または調節されうる。
【0314】
所望のポリヌクレオチドの送達および所望の細胞内での発現のためのウイルス系ベクターは、当技術分野で周知である。例示的なウイルス系ビヒクルとしては、それだけに限らないが、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号；同第ＷＯ９４／０３６２２号；同第ＷＯ９３／２５６９８号；同第ＷＯ９３／２５２３４号；同第ＷＯ９３／１１２３０号；同第ＷＯ９３／１０２１８号；同第ＷＯ９１／０２８０５号；米国特許第５，２１９，７４０号および同第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；および欧州特許第０３４５２４２号を参照）、アルファウイルス系ベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－６７；ＡＴＣＣ ＶＲ－１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－３７３；ＡＴＣＣ ＶＲ－１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ－９２３；ＡＴＣＣ ＶＲ－１２５０；ＡＴＣＣ ＶＲ １２４９；ＡＴＣＣ ＶＲ－５３２））、ならびにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号；同第ＷＯ９３／１９１９１号；同第ＷＯ９４／２８９３８号；同第ＷＯ９５／１１９８４号、および同第ＷＯ９５／００６５５号を参照）がある。Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、１９９２、３：１４７に記載された死滅アデノウイルス（killed adenovirus）に連結されたＤＮＡの投与も使用することができる。
【0315】
それだけに限らないが、死滅アデノウイルス単独に連結された、または連結されていないポリカチオン凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、３：１４７、１９９２を参照）；リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６４：１６９８５、１９８９を参照）；真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号；同第ＷＯ９６／１７０７２号；同第ＷＯ９５／３０７６３号；および同第ＷＯ９７／４２３３８号を参照）、ならびに細胞膜との核電荷中和または融合を含めた、非ウイルス送達ビヒクルおよび方法も使用されうる。裸のＤＮＡも使用することができる。例示的な裸のＤＮＡ導入方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用しうるリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号；同第ＷＯ９４／２３６９７号；同第ＷＯ９１／１４４４５号；およびＥＰ０５２４９６８に記載されている。追加の手法は、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１４：２４１１、１９９４およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９１：１５８１、１９９４に記載されている。
【0316】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のまたは方法を使用して作製されたおよび本明細書に記載の特性を有する抗体を含む医薬組成物を含めた組成物を包含する。本明細書では、組成物は、ＣＤ３および腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ）に結合する１種もしくは複数の抗体、ならびに／または１種もしくは複数のこれらの抗体をコードする配列を含む１種もしくは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、当技術分野で周知である、緩衝液を含む薬学的に許容できる賦形剤などの適当な賦形剤をさらに含みうる。
【0317】
本発明は、これらの抗体のいずれかを作製する方法も提供する。本発明の抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解によって、上述した組換え法（すなわち、単一もしくは融合ポリペプチド）によって、または化学合成によって生成することができる。抗体のポリペプチド、特に、最大で約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、好都合なことには化学合成によって作製される。化学合成の方法は、当技術分野で公知であり、市販されている。例えば、抗体は、固相法を使用して自動ポリペプチドシンセサイザーによって生成することができる。米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第６，３３１，４１５号も参照。
【0318】
２つの共有結合で連結された抗体を含むヘテロコンジュゲート抗体も、本発明の範囲内である。このような抗体は、免疫系細胞を望まれない細胞に向けるのに（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染を処置するのに（ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／００３６０号および同第ＷＯ９２／２００３７３号；ＥＰ０３０８９）使用されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作製されうる。適当な架橋剤および技法は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【0319】
キメラまたはハイブリッド抗体も、架橋剤を伴うものを含めて合成タンパク質化学の公知の方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで調製することができる。例えば、免疫毒素を、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル－４－メルカプトブチルイミデートがある。
【0320】
組換えヒト化抗体では、Ｆｃγ部分を修飾してＦｃγ受容体ならびに相補体および免疫系との相互作用を回避することができる。このような抗体を調製するための技法は、ＷＯ９９／５８５７２号に記載されている。例えば、抗体がヒトにおける臨床治験および処置に使用される場合、定常領域をヒト定常領域により近く似せて免疫応答を回避するように操作することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および同第５，８６６，６９２号を参照。
【0321】
本発明は、抗体の性質に著しく影響しない機能的に等価な抗体、ならびに活性および／または親和性が増強または低下したバリアントを含めた、本明細書に記載の本発明のバリアントの抗体およびポリペプチドへの修飾を包含する。例えば、アミノ酸配列を突然変異させて、ＢＣＭＡおよび／またはＣＤ３への所望の結合親和性を有する抗体を得ることができる。ポリペプチドの修飾は、当技術分野で日常の行為であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。修飾ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換、機能活性を著しく有害に変化させない、もしくはポリペプチドのそのリガンドに対する親和性を成熟させる（増強する）アミノ酸の１個もしくは複数の欠失もしくは付加、または化学的類似体の使用を有するポリペプチドがある。
【0322】
アミノ酸配列挿入には、１残基～１００またはそれ超の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、またはエピトープタグに融合した抗体がある。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、抗体のＮまたはＣ末端への、酵素または血液循環中の抗体の半減期を増大させるポリペプチドの融合物がある。
【0323】
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１個のアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されている。置換突然変異誘発にとって最も興味深い部位としては、超可変領域があるが、ＦＲ変化も企図されている。保存的置換は、「保存的置換」の表題の下で表５に示されている。このような置換が生物活性を変化させる場合、表５に「例示的置換」と命名された、またはアミノ酸クラスへの言及において以下でさらに記載されるより実質的な変化を導入することができ、生成物をスクリーニングすることができる。
【0324】
【表5】
【0325】
抗体の生物学的性質における実質的な改変は、（ａ）例えば、シートもしくはへリックスコンホメーションとしての置換のエリア内のポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩の維持に対するこれらの効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在するアミノ酸残基は、共通の側鎖の性質に基づいて諸群に分けられる：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）電荷を有さない極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ．
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）電荷を有さない極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ．
【0326】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのうちのメンバーを別のクラスに交換することによって行われる。
【0327】
抗体の適切なコンホメーションの維持に関与していない任意のシステイン残基も、一般にセリンと置換して分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止することができる。反対に、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、システイン結合を抗体に加えてその安定性を改善することができる。
【0328】
アミノ酸修飾は、１個または複数のアミノ酸の変更または修飾から可変領域などの領域の完全な再設計に及びうる。可変領域内の変化は、結合親和性および／または特異性を変更しうる。一部の実施形態では、せいぜい１個～５個の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。他の実施形態では、せいぜい１個～３個の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。さらに他の実施形態では、ＣＤＲドメインは、ＣＤＲ Ｈ３および／またはＣＤＲ Ｌ３である。
【0329】
修飾は、グリコシル化および非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾、例えば、異なる糖でのグリコシル化、アセチル化、およびリン酸化などを有するポリペプチドも含む。抗体は、これらの定常領域内の保存された位置でグリコシル化されている（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６５：１１１～１２８、１９９７；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、ＴｉｂＴＥＣＨ、１５：２６～３２、１９９７）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：１３１１～１３１８、１９９６；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２９：４１７５～４１８０、１９９０）、ならびに糖タンパク質のコンホメーションおよび提示された三次元表面に影響しうる、糖タンパク質の部分同士間の分子内相互作用（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、上記；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７：４０９～４１６、１９９６）に影響する。オリゴ糖はまた、所与の糖タンパク質を特異的な認識構造に基づいてある特定の分子に向けるように機能を果たしうる。抗体のグリコシル化も抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響すると報告されている。特に、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）、バイセクティングＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼのテトラサイクリン調節発現を有するＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａら、Ｍａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１７：１７６～１８０、１９９９）。
【0330】
抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型は、炭水化物部分の、アスパラギン残基の側鎖への付着を指す。トリペプチド配列アスパラギン－Ｘ－セリン、アスパラギン－Ｘ－トレオニン、およびアスパラギン－Ｘ－システイン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素的付着のための認識配列である。よって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が創製される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１種のヒドロキシアミノ酸、最も一般にセリンまたはトレオニンへの付着を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用されうる。
【0331】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、好都合なことには、アミノ酸配列が上述したトリペプチド配列のうちの１種または複数（Ｎ結合型グリコシル化部位について）を含有するようにアミノ酸配列を変更することによって達成される。変更は、元の抗体の配列に対する１個または複数のセリンまたはトレオニン残基の付加またはこれらによる置換によって行うこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位について）。
【0332】
抗体のグリコシル化パターンは、基礎をなすヌクレオチド配列を変更することなく変更することもできる。グリコシル化は、抗体を発現させるのに使用される宿主細胞に概ね依存する。潜在的な治療剤としての組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現に使用される細胞型は、ネイティブ細胞であることはまれであるので、抗体のグリコシル化パターンの変形が予期されうる（例えば、Ｈｓｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：９０６２～９０７０、１９９７を参照）。
【0333】
宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生中にグリコシル化に影響する要因には、増殖モード、培地処方、培養密度、酸素化、ｐＨ、精製スキームなどが含まれる。オリゴサッカライド生成に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含めた、特定の宿主生物において実現されるグリコシル化パターンを変更する様々な方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号；同第５，５１０，２６１号、および同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化またはある特定のタイプのグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ Ｈ）、Ｎ－グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して糖タンパク質から酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞は、ある特定のタイプの多糖のプロセシングにおいて不完全であるように遺伝子操作することができる。これらのおよび同様の技法は、当技術分野で周知である。
【0334】
修飾の他の方法としては、それだけに限らないが、酵素的手段、酸化的置換、およびキレート化を含めた当技術分野で公知のカップリング技法の使用がある。修飾は、例えば、イムノアッセイ用標識の付着に使用することができる。修飾ポリペプチドは、当技術分野で確立された手順を使用して行われ、当技術分野で公知の標準アッセイを使用してスクリーニングすることができ、これらの一部は、以下および実施例に記載されている。
【0335】
本発明の一部の実施形態では、抗体は、ヒトＦｃガンマ受容体への親和性が増大した定常領域などの修飾定常領域を含み、免疫学的に不活性もしくは部分的に不活性であり、例えば、補体媒介溶解を誘発せず、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激せず、もしくはマクロファージを活性化せず、または以下：補体媒介溶解の誘発、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の刺激、もしくはミクログリアの活性化のうちの任意の１つもしくは複数において活性が低減されている（無修飾抗体と比較して）。定常領域の異なる修飾を使用して、エフェクター機能の最適なレベルおよび／または組合せを実現することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８６：３１９～３２４、１９９５；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７：４９６３～９、１５７：４９６３～４９６９、１９９６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８～４１８４、２０００；Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３～２６２４；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されているように修飾される。他の実施形態では、抗体は、以下の突然変異：Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２配列を参照したアミノ酸番号付け）を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３～２６２４。さらに他の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。一部の実施形態では、定常領域は、定常領域内のＮグリコシル化認識配列の一部であるグリコシル化アミノ酸残基またはフランキング残基を突然変異させることによってＮ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。例えば、Ｎグリコシル化部位Ｎ２９７は、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異されうる。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによる炭水化物の除去など）、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によってＮ結合型グリコシル化の変わりに非グリコシル化されうる。
【0336】
他の抗体修飾としては、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号に記載されているように修飾された抗体がある。これらの抗体は、標的分子に向けられた結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域のすべてまたは一部に実質的に相同のアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、標的の著しい補体依存性溶解または細胞媒介性破壊を誘発することなく、標的分子を結合させることができる。一部の実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂを特異的に結合させることができる。これらは、典型的には、２つまたはそれ超のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。このようにして修飾された抗体は、慣例的な抗体療法に対する炎症性および他の有害反応を回避するために、長期抗体療法で使用するのに特に適している。
【0337】
本発明は、親和性成熟した実施形態を含む。例えば、親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって生成することができる（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３、１９９２；Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ、９１：３８０９～３８１３、１９９４；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７～１５５、１９９５；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４～２００４、１９９５；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０～９、１９９５、Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９～８９６、１９９２；およびＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０５８１８４号）。
【0338】
以下の方法を抗体の親和性を調整するため、およびＣＤＲを特徴付けるために使用することができる。抗体のＣＤＲを特徴付け、かつ／または抗体などのポリペプチドの結合親和性を変更する（改善するなど）の１つのやり方は、「ライブラリースキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。一般に、ライブラリースキャンニング突然変異誘発は、以下のように働く。ＣＤＲ内の１個または複数のアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている方法を使用して２個またはそれ超（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０など）のアミノ酸と置き換えられる。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（一部の実施形態では、分析されているアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２つまたはそれ超のメンバーの複雑性を有する（２個またはそれ超のアミノ酸が位置毎に置換される場合）。一般に、ライブラリーは、天然（非置換）アミノ酸を含むクローンも含む。各ライブラリーからの少数のクローン、例えば、約２０～８０クローン（ライブラリーの複雑性に依存する）が、標的ポリペプチド（または他の結合標的）への結合親和性についてスクリーニングされ、結合が増大した、同じ、低下した、または結合しない候補が同定される。結合親和性を判定するための方法は、当技術分野で周知である。結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用して判定することができ、この分析は、約２倍またはそれ超の結合親和性の差異を検出する。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）は、出発抗体がすでに相対的に高い親和性、例えば、約１０ｎＭまたはそれ未満のＫＤで結合する場合、特に有用である。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴を使用するスクリーニングは、本明細書で実施例において記載されている。
【0339】
結合親和性は、Ｋｉｎｅｘａ Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動、および／または酵母ディスプレイを使用して判定することができる。結合親和性は、適当なバイオアッセイを使用してスクリーニングすることもできる。
【0340】
一部の実施形態では、ＣＤＲ内のあらゆるアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている突然変異誘発法（これらの一部は、本明細書に記載されている）を使用して２０種すべての天然アミノ酸と置き換えられる（一部の実施形態では、１つずつ）。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（一部の実施形態では、分析されているアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２０メンバーの複雑性を有する（２０種すべてのアミノ酸が位置毎に置換される場合）。
【0341】
一部の実施形態では、スクリーニングされるライブラリーは、２つまたはそれ超の位置内に置換を含み、この位置は、同じＣＤＲ内であっても、２つまたはそれ超のＣＤＲ内であってもよい。よって、ライブラリーは、１つのＣＤＲ内の２つまたはそれ超の位置において置換を含みうる。ライブラリーは、２つまたはそれ超のＣＤＲ内の２つまたはそれ超の位置において置換を含みうる。ライブラリーは、３、４、５、またはそれ超の位置において置換を含み得、前記位置は、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ内で見つかる。置換は、低冗長性コドンを使用して調製されうる。例えば、Ｂａｌｉｎｔら、Ｇｅｎｅ、１３７（１）：１０９～１８、１９９３の表２を参照。
【0342】
ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３および／またはＣＤＲＬ３でありうる。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、および／またはＣＤＲＨ３のうちの１種または複数でありうる。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、または拡張ＣＤＲでありうる。
【0343】
結合が改善された候補をシーケンシングし、それによって親和性を改善するＣＤＲ置換突然変異体（「改善された」置換とも呼ばれる）を同定することができる。結合する候補もシーケンシングし、それによって結合を保持するＣＤＲ置換を同定することができる。
【0344】
複数ラウンドのスクリーニングを行うことができる。例えば、結合が改善された候補（それぞれ１種または複数のＣＤＲの１つまたは複数の位置でアミノ酸置換を含む）は、各改善されたＣＤＲ位置（すなわち、置換突然変異体が結合の改善を示したＣＤＲ内のアミノ酸位置）で少なくとも元のおよび置換されたアミノ酸を含有する第２のライブラリーの設計にも有用である。このライブラリーの調製、およびスクリーニングまたは選択は、以下でさらに論じられている。
【0345】
ライブラリースキャンニング突然変異誘発はまた、改善された結合、同じ結合、低下した結合、または結合無しを伴う頻発するクローンも抗体－抗原複合体の安定性について各アミノ酸位置の重要性に関する情報をもたらす限りにおいて、ＣＤＲを特徴付けるための手段を提供する。例えば、ＣＤＲの位置が、２０種すべてのアミノ酸に変更されたときに結合を保持する場合、その位置は、抗原結合に要求される見込みのない位置として同定される。反対に、ＣＤＲの位置が、小さいパーセンテージの置換のみにおいて結合を保持する場合、その位置は、ＣＤＲ機能に重要である位置として同定される。よって、ライブラリースキャンニング突然変異誘発法は、多くの異なるアミノ酸（２０種すべてのアミノ酸を含む）に変更することができるＣＤＲ内の位置、および変更することができない、または少数のアミノ酸に変更することができるだけであるＣＤＲ内の位置に関する情報を生成する。
【0346】
親和性が改善された候補は、第２のライブラリー中で組み合わせることができ、第２のライブラリーは、改善されたアミノ酸、その位置における元のアミノ酸を含み、所望のスクリーニングまたは選択法を使用して望まれる、または許容されるライブラリーの複雑性に応じて、その位置で追加の置換をさらに含むことができる。さらに、必要に応じて、隣接するアミノ酸位置を少なくとも２種またはそれ超のアミノ酸にランダム化することができる。隣接するアミノ酸のランダム化は、突然変異体ＣＤＲ内に追加のコンホメーション柔軟性を許容することができ、それはひいては、より大きい数の改善突然変異の導入を許容または促進しうる。ライブラリーは、第１のラウンドのスクリーニングにおいて親和性の改善を示さなかった位置での置換も含みうる。
【0347】
第２のライブラリーは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用するスクリーニング、ならびにファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、およびリボソームディスプレイを含めた選択について当技術分野で公知の任意の方法を使用する選択を含めた、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、結合親和性が改善および／または変更されたライブラリーメンバーについてスクリーニングまたは選択される。
【0348】
本発明は、固体支持体へのカップリングを促進する作用物質（ビオチンまたはアビジンなど）にコンジュゲートされた（例えば、連結された）抗体を含む組成物も提供する。簡単にするために、これらの方法が本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体実施形態のいずれにも適用されるという理解で、抗体に、一般に参照を行う。コンジュゲーションは一般に、本明細書に記載のこれらのコンポーネントの連結を指す。連結（これは一般に、少なくとも投与のために近接会合でこれらのコンポーネントを固定することである）は、任意の数のやり方で実現されうる。例えば、作用物質と抗体との間の直接反応が、それぞれが他方と反応することができる置換基を有する場合、可能である。例えば、一方の求核基、例えば、アミノまたはスルフヒドリル基などは、他方のカルボニル含有基、例えば、アンヒドリドもしくは酸ハロゲン化物など、または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することができる。
【0349】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
【0350】
任意のこのような配列に相補的なポリヌクレオチドも、本発明によって包含されている。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）であっても二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成）またはＲＮＡ分子でありうる。ＲＮＡ分子としては、イントロンを含有し、１対１の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子がある。追加のコードまたは非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在しうるが、その必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材に連結されている場合があるが、その必要はない。
【0351】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体もしくはその部分をコードする内在性配列）を含み得、またはこのような配列のバリアントを含みうる。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が天然免疫反応性分子と比べて減少されないような１個または複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は一般に、本明細書に記載した通りに査定されうる。バリアントは、好ましくは、天然抗体またはその部分をコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、なおより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を呈する。
【0352】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように最大対応に関して整列されるとき同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、比較ウィンドウにわたって配列を比較して配列類似性の局所領域を同定および比較することによって実施される。「比較ウィンドウ」は、本明細書では、少なくとも約２０の連続した位置、通常３０～約７５、または４０～約５０のセグメントを指し、このウィンドウでは、配列が、同じ数の連続した位置の参照配列と、２つの配列が最適に整列された後比較されうる。
【0353】
比較のための配列の最適な整列は、デフォルトのパラメータを使用して、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式中のＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ － Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓに記載されたいくつかの整列スキームを具現化する。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、５巻、補遺３、３４５～３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６～６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１～１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８年、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１～１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．、１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．、４：４０６～４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８０：７２６～７３０において。
【0354】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較することによって判定され、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列について、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０パーセントまたはそれ未満、通常５～１５パーセント、または１０～１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含みうる。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列中に存在する位置の数を判定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を参照配列中の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）によって除し、結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【0355】
バリアントも、または代わりに、天然遺伝子またはその部分もしくは相補体に実質的に相同でありうる。このようなポリヌクレオチドバリアントは、天然抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
【0356】
適当な「中程度にストリンジェントな条件」は、５× ＳＳＣ、０．５％ ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予洗；５０℃～６５℃、５× ＳＳＣで、一晩のハイブリダイジング；その後の、０．１％ ＳＤＳを含有する２×、０．５×、および０．２× ＳＳＣのそれぞれを用いた６５℃で２０分にわたる２回の洗浄を含む。
【0357】
本明細書では、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度および高温、例えば、５０℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用し；（２）ハイブリダイゼーション中に、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃で、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムとともに、ｐＨ６．５の０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを使用し；または（３）０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃での、および５５℃での５０％ホルムアミド中の洗浄、その後の５５℃でのＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を伴って、４２℃で、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ ＳＤＳ、および１０％デキストラン硫酸を使用するものである。当業者は、プローブ長などの因子に対応する必要に応じて温度、イオン強度などをどのように調整するかを認識するであろう。
【0358】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが当業者によって理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列と最小限の相同性を担持する。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。さらに、本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加、および／または置換などの１個または複数の突然変異の結果として変更されている内在性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有しうるが、その必要はない。対立遺伝子は、標準技法（ハイブリダイゼーション、増幅、および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
【0359】
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当技術分野で周知であり、本明細書で詳細に記載される必要はない。当業者は、本明細書で提供される配列および市販のＤＮＡシンセサイザーを使用して所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【0360】
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに論じられるように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを適当なベクター中に挿入することができ、次にベクターを、複製および増幅のために適当な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入されうる。細胞は、直接取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ－接合、または電気穿孔によって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内に維持され、または宿主細胞ゲノム内に一体化されうる。このように増幅されたポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照。
【0361】
代わりに、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の複製を可能にする。ＰＣＲ技術は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号、および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【0362】
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離したＤＮＡを使用し、それを適当な宿主細胞内に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡへと転写されたとき、ＲＮＡを、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上記に示されているように当業者に周知の方法を使用して単離することができる。
【0363】
適当なクローニングベクターを、標準技法に従って構築することができ、または当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されるように意図された宿主細胞によって変動しうるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有することになり、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一標的を有することができ、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択において使用することができるマーカーの遺伝子を持つことができる。適当な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ブルースクリプト（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらおよび多くの他のクローニングベクターは、市販供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどから入手可能である。
【0364】
発現ベクターは一般に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの一体部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないことが暗示される。適当な発現ベクターとしては、それだけに限らないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含めたウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターがある。ベクターコンポーネントとして一般に、それだけに限らないが、以下：シグナル配列；複製起点；１種もしくは複数のマーカー遺伝子；適当な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）のうちの１種または複数を挙げることができる。発現（すなわち、翻訳）のために、１種または複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および停止コドンなども通常要求される。
【0365】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染因子である場合）を含めたいくつかの適切な手段のいずれかによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することになることが多い。
【0366】
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、目的の抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的に使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例としては、それだけに限らないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞がある。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照。適当な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＢ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）など）および酵母（Ｓ．セレビジエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、Ｓ．ポンべ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）；またはＫ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）がある。好ましくは、宿主細胞は、宿主細胞内で、存在する場合、目的の対応する内因性抗体またはタンパク質のものより、約５倍超、より好ましくは１０倍超、さらにより好ましくは２０倍超のレベルでｃＤＮＡを発現する。ＢＣＭＡまたはＢＣＭＡドメイン（例えば、ドメイン１～４）への特異的結合についての宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。
【0367】
二重特異性抗体を使用する方法［治療用途］
本発明の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または二重特異性）および抗体コンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）は、それだけに限らないが、治療的処置方法および診断的処置方法を含めた様々な用途において有用である。
本発明の抗体（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ３、または二重特異性）および抗体コンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡ抗体－薬物コンジュゲート）は、それだけに限らないが、治療的処置方法および診断的処置方法を含めた様々な用途において有用である。
【0368】
一態様では、本発明は、対象におけるＢＣＭＡ発現に関連した状態を処置するための方法を提供する。一部の実施形態では、対象におけるＢＣＭＡ発現に関連した状態を処置する方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む。ＢＣＭＡ発現に関連した状態としては、それだけに限らないが、異常なＢＣＭＡ発現、変更されたもしくは異所性のＢＣＭＡ発現、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞、および増殖性障害（例えば、がん）、または自己免疫障害がある。
【0369】
別の態様では、本発明は、Ｂ細胞関連がん、または腫瘍抗原を発現する悪性細胞を処置するための方法を提供する。一部の実施形態では、必要とする対象におけるＢ細胞関連がんを処置する方法であって、ａ）本明細書に記載の二重特異性抗体を準備することと、ｂ）前記患者に前記二重特異性抗体を投与することとを含む、方法が提供されている。一部の実施形態では、対象における腫瘍抗原を発現する悪性細胞に関連した状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の二重特異性抗体を含む有効量の医薬組成物を投与することを含む、方法が提供されている。
【0370】
したがって、一部の実施形態では、対象におけるがんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。本明細書では、がんは、それだけに限らないが、多発性骨髄腫、悪性形質細胞新生物、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーレル病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、炎症に関連したびまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性カストルマン病において生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間の特徴を有する未分類のＢ細胞リンパ腫、ならびに他のＢ細胞関連リンパ腫を含めたＢ細胞関連がんでありうる。
【0371】
一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。他の実施形態では、対象におけるＢＣＭＡを発現する転移細胞を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。他の実施形態では、対象における悪性細胞内の腫瘍退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。
【0372】
一部の実施形態では、対象における自己免疫障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。
【0373】
本明細書では、自己免疫障害としては、それだけに限らないが、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、糖尿病（Ｉ型）、多発性硬化症、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、橋本脳症、重症筋無力症、悪性貧血、反応性関節炎、シェーグレン症候群、急性播種性脳脊髄炎、無ガンマグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（antiphospholipid syndrome）、抗合成酵素症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性腸症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多腺内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性じん麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、ベーチェット病、キャッスルマン病、寒冷凝集素病、クローン病、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、胃腸類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、ギランバレー症候群、汗腺膿瘍、特発性血小板減少性紫斑病、ナルコレプシー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、再発性多発性軟骨炎、リウマチ熱、側頭動脈炎、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、血管炎、およびウェジナー肉芽腫症がある。
【0374】
別の態様では、本発明は、必要とする対象におけるＢＣＭＡ発現に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫障害）を処置するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）が提供されている。一部の実施形態では、必要とする対象におけるＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移を阻害するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）が提供されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍退縮を誘導するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）が提供されている。
【0375】
別の態様では、本発明は、必要とする対象におけるＢＣＭＡ発現に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫障害）を処置するのに使用するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートが提供されている。一部の実施形態では、必要とする対象におけるＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移を阻害するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートが提供されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞を有する対象における腫瘍退縮を誘導するための、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートが提供されている。
【0376】
別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡ発現に関連した状態（例えば、がんまたは自己免疫障害）を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用を提供する。一部の実施形態では、腫瘍増殖または進行を阻害するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する悪性細胞の転移を阻害するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。一部の実施形態では、腫瘍退縮を誘導するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用が提供されている。
【0377】
別の態様では、ＢＣＭＡ発現に関連した状態を検出、診断、および／またはモニターする方法が提供されている。例えば、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）は、造影剤および酵素－基質標識などの検出可能部分で標識することができる。本明細書に記載の抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏイメージング（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ）などのｉｎ ｖｉｖｏ診断アッセイ、または染色試薬に使用することもできる。
【0378】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、追加の形態の療法で対象を処置する工程をさらに含む。一部の実施形態では、追加の形態の療法は、それだけに限らないが、化学療法、放射線、手術、ホルモン療法、および／または追加の免疫療法を含めた追加の抗がん療法である。
【0379】
一部の実施形態では、追加の形態の療法は、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートに加えて、１種または複数の治療剤を投与することを含む。１種または複数の治療剤は、それだけに限らないが、第２の抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）抗体（例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、抗ムチン様糖タンパク質抗体、抗ＴＮＦ抗体、および／または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体（例えば、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）））、血管新生阻害剤、細胞傷害性剤（例えば、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン）、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、メイタンシン、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド）、ツブリシン、ピリミジン類似体（例えば、フルオロウラシル）、白金含有剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン）、アルキル化剤（例えば、メルファラン、シクロホスファミド、またはカルムスチン）、およびヘミアステルリン）、免疫調節剤（例えば、プレドニゾンおよびレナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）））、抗炎症剤（例えば、デキサメタゾン）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ボロゾール、フォルメスタン、またはテストラクトン）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）（［（１Ｒ）－３－メチル－１－［［（２Ｓ）－１－オキソ－３－フェニル－２－［（ピラジニルカルボニル）アミノ］プロピル］アミノ］ブチル］ボロン酸などのボルテゾミブ、またはカルフィルゾミブ）、ならびにタモキシフェンなどの他の作用物質を含めた化学療法剤でありうる。
【0380】
例えば、一部の実施形態では、多発性骨髄腫を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート、および１種または複数の他の治療剤、例えば、化学療法剤（例えば、ドキソルビシンもしくはカルフィルゾミブ）、またはサリドマイドもしくはその誘導体（例えば、レナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）））を含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。一部の実施形態では、１種または複数の他の治療剤は、ボルテゾミブ（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、メルファラン、プレドニゾン、ドキソルビシン、レナリドミド、サリドマイド、プレドニゾン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、シクロホスファミド、カルフィルゾミブ、およびビンクリスチンからなる群から選択している。一部の実施形態では、他の治療剤は、ボルテゾミブ（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、メルファラン、レナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））、カルフィルゾミブ、ドキソルビシン、またはプレドニゾンである。したがって、多発性骨髄腫を処置する方法であって、それを必要とする患者に本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート、ならびにボルテゾミブ、レナリドミド、カルフィルゾミブ、およびドキソルビシンからなる群から選択される１種または複数の他の治療剤を含む有効量の組成物を投与することを含む、方法が提供されている。一部の実施形態では、患者は、以前の多発性骨髄腫療法に対して再発性または難治性である。
【0381】
抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、任意の適当な経路を介して個体に投与することができる。本明細書に記載した例は、利用可能な技法を限定するように意図されておらず、例示するものであるように意図されていることが当業者によって理解されるべきである。したがって、一部の実施形態では、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、例えば、ボーラスのような静脈内投与、またはある時間にわたる持続インフュージョンによるもの、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、頭蓋内、経皮、皮下、関節内、舌下、滑液包内によるもの、吹送、髄腔内、経口、吸入、もしくは局部的な経路を介したものなどの公知の方法に合わせて個体に投与される。投与は、全身性、例えば、静脈内投与、または局在的でありうる。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含めた液体製剤用の市販のネブライザーが、投与に有用である。液体製剤は、直接的に噴霧することができ、凍結乾燥粉末を再構成後に噴霧することができる。代わりに、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化することができ、または凍結乾燥し、粉砕した粉末として吸入することができる。
【0382】
一実施形態では、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、部位特異的なまたは標的化された局所的送達技法を介して投与される。部位特異的なまたは標的化された局所的送達技法の例としては、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの様々なインプラント可能なデポー供給源、あるいは局所的送達カテーテル、例えば、インフュージョンカテーテル、留置カテーテル、またはニードルカテーテルなど、合成移植片、外膜ラップ、シャントおよびステントまたは他のインプラント可能デバイス、部位特異的担体、直接注射、あるいは直接塗布がある。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号および米国特許第５，９８１，５６８号を参照。
【0383】
抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの様々な製剤を投与に使用することができる。一部の実施形態では、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、そのまま投与されうる。一部の実施形態では、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートおよび薬学的に許容できる賦形剤は、様々な製剤中に存在しうる。薬学的に許容できる賦形剤は、当技術分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは粘稠度を与え、または希釈剤として作用することができる。適当な賦形剤としては、それだけに限らないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、様々なオスモル濃度のための塩、封入剤、緩衝液、ならびに皮膚浸透エンハンサーがある。賦形剤ならびに非経口および非経口でない（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達用の製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５に示されている。
【0384】
一部の実施形態では、これらの作用物質は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために製剤化される。したがって、これらの作用物質は、薬学的に許容できるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液などと組み合わせることができる。特定の投与レジメン、すなわち、用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体およびその個体の医療歴に依存することになる。
【0385】
本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）によるものを含めて、任意の適当な方法を使用して投与することができる。抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、本明細書に記載されるように、吸入を介して投与することもできる。一般に、抗体（例えば、ＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）およびＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与に関して、最初の候補投与量は、約２ｍｇ／ｋｇでありうる。本発明の目的に関して、典型的な１日投与量は、上述した要因に応じて約３μｇ／ｋｇ～３０μｇ／ｋｇ～３００μｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ超の範囲でありうる。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの投与量が使用されうる。数日またはそれ超にわたる繰り返し投与に関して、状態に応じて、処置は、症状の所望の抑制が起こるまで、または十分な治療レベルが実現されて、例えば、腫瘍増殖／進行もしくはがん細胞の転移が阻害もしくは遅延されるまで持続される。例示的な投薬レジメンは、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、その後の約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量、またはその後の隔週の約１ｍｇ／ｋｇの維持用量の投与を含む。他の例示的な投薬レジメンは、漸増用量（例えば、１ｍｇ／ｋｇの初期用量、および１週間またはそれより長い時間毎の１回または複数回のより高い用量への段階的増加）の投与を含む。他の投与レジメンも、専門家が実現するように望む薬物動態学的減衰のパターンに応じて有用でありうる。例えば、一部の実施形態では、１週間に１回から４回の投薬が企図されている。他の実施形態では、月１回または隔月に１回または３カ月毎の投薬が企図されている。この療法の進行は、慣例的な技法およびアッセイによって容易にモニターされる。投薬レジメン（抗体（例えば、使用されるＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む）は、経時的に変動しうる。
【0386】
本発明の目的に関して、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの適切な投与量は、使用される抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート（あるいはその組成物）、処置される症状のタイプおよび重症度、作用物質が治療目的で投与されるか否か、以前の療法、患者の病歴および作用物質への応答、患者の投与される作用物質に関するクリアランス速度、ならびに主治医の自由裁量に依存することになる。典型的には、臨床医は、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを、所望の結果を実現する投与量に到達するまで投与することになる。用量および／または頻度は、処置の過程にわたって変動しうる。半減期などの経験的な考慮事項は一般に、投与量の判定に寄与する。例えば、ヒト免疫系に適合する抗体、例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などを使用して、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防止することができる。投与の頻度は、療法の過程にわたって判定および調整することができ、一般に、しかし必ずしもではないが、症状の処置および／または抑制および／または寛解および／または遅延、例えば、腫瘍増殖阻害または遅延などに基づく。代わりに、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの連続持続製剤（sustained continuous release formulation）が適切でありうる。持続放出を実現するための様々な製剤およびデバイスが当技術分野で公知である。
【0387】
一実施形態では、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与量は、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの１回または複数回の投与を与えられている個体において経験的に判定されうる。個体は、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの漸増投与量を与えられる。効力を査定するために、疾患のインジケータが採用されうる。
【0388】
本発明における方法による抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与は、例えば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、および熟練した専門家に公知の他の要因に応じて連続的または断続的でありうる。抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与は、予め選択された時間にわたって本質的に連続的であり得、または一連の間隔を置いた投薬でありうる。
【0389】
一部の実施形態では、１種を超える抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートが存在しうる。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種の異なる、またはそれ超の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートが存在しうる。一般に、これらの抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートは、互いに悪影響しない相補的活性を有しうる。例えば、以下の抗体の１種または複数を使用することができる：ＢＣＭＡまたはＣＤ３上の１つのエピトープに向けられた第１のＢＣＭＡまたはＣＤ３抗体およびＢＣＭＡまたはＣＤ３上の異なるエピトープに向けられた第２のＢＣＭＡまたはＣＤ３抗体。
【0390】
本発明によって使用される抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの治療用製剤は、所望の程度の純度を有する抗体を任意選択の薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５）と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で貯蔵するために調製される。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸など；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含みうる。
【0391】
抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８、１９８５；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０、１９８０；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されたものなどの当技術分野で公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ－誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じるように、規定された孔サイズのフィルターに通して押出される。
【0392】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）における、またはマクロエマルジョンにおける、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入することもできる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５に開示されている。
【0393】
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の適当な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスがあり、このマトリックスは、造形品の形態、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルにある。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸と７エチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよびロイプロリド酢酸塩から構成される注射用ミクロスフェア）など、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸がある。
【0394】
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌したものでなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜に通す濾過によって容易に達成される。治療抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート組成物は一般に、滅菌したアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿孔可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル中に入れられる。
【0395】
本発明による組成物は、経口、非経口、もしくは直腸投与、または吸入もしくは吹送による投与のための単位剤形、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、粉末、顆粒剤、溶液もしくは懸濁液、または坐剤などでありうる。
【0396】
錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分は、薬学的担体、例えば、慣例的な錠剤化成分、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはガムなど、および他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合されて、本発明の化合物またはその無毒性の薬学的に許容できる塩の均質混合物を含有する固形予備製剤組成物が形成される。これらの予備製剤組成物を均質として言及するとき、それは、活性成分が組成物全体にわたって均等に分散しており、その結果組成物が、同等に有効な単位剤形、例えば、錠剤、ピル、およびカプセル剤などに容易に細分されうることを意味する。次いでこの固形予備製剤組成物は、０．１～約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上述したタイプの単位剤形に細分される。新規組成物の錠剤またはピルは、被覆または別に配合されて、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供することができる。例えば、錠剤またはピルは、内側投与および外側投与コンポーネントを含み得、後者は、前者の上の外被の形態にある。２つのコンポーネントは、腸溶性層によって分離することができ、この腸溶性層は、胃内での崩壊に耐えるように機能を果たし、内側コンポーネントが十二指腸中にインタクトで通過し、または放出が遅延されることを可能にする。様々な材料をこのような腸溶性層または被覆剤に使用することができ、このような材料としては、いくつかのポリマー酸、およびポリマー酸のシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物がある。
【0397】
適当な表面活性剤としては、特に、非イオン剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）などがある。表面活性剤を含む組成物は、好都合なことには０．０５から５％の間の表面活性剤を含むことになり、０．１から２．５％の間でありうる。必要であれば、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルが添加されうることが理解されるであろう。
【0398】
適当なエマルジョンは、市販の脂肪エマルジョン、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などを使用して調製することができる。活性成分は、予備混合エマルジョン組成物中に溶解させてもよく、または代わりにこれは、油（例えば、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、もしくは扁桃油）、およびリン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質、もしくはダイズレシチン）と水を混合すると形成されるエマルジョン中に溶解させてもよい。エマルジョンの張性を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースが添加されうることが理解されるであろう。適当なエマルジョンは、典型的には最大で２０％の油、例えば、５から２０％の間の油を含有することになる。脂肪エマルジョンは、０．１から１．０μｍ、特に０．１から０．５μｍの間の脂肪滴を含み、５．５～８．０の範囲内のｐＨを有しうる。
【0399】
エマルジョン組成物は、抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートをＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはそのコンポーネント（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロール、および水）と混合することによって調製されるものでありうる。
【0400】
吸入または吹送用の組成物は、薬学的に許容できる水性もしくは有機溶媒またはその混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記に示した適当な薬学的に許容できる賦形剤を含有しうる。一部の実施形態では、組成物は、局所的または全身的効果のために経口または鼻呼吸経路によって投与される。好ましくは滅菌した薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスを使用することによって霧状にすることができる。霧状にされた溶液は、噴霧器から直接的に呼吸される場合があり、または噴霧器は、フェイスマスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸機に取り付けられてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから好ましくは経口的または経鼻的に投与されうる。
【0401】
組成物
本発明の方法で使用される組成物は、有効量の本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む。このような組成物の例、およびどのように製剤化するかは、先のセクションおよび以下にも記載されている。一部の実施形態では、組成物は、１種または複数の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む。例えば、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体は、ヒトＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡを認識する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、所望の免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発することができる定常領域を含む。他の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、望まれないまたは望ましくない免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発しない定常領域を含む。
本発明の方法で使用される組成物は、有効量の本明細書に記載の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む。このような組成物の例、およびどのように製剤化するかは、先のセクションおよび以下にも記載されている。一部の実施形態では、組成物は、１種または複数の抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートを含む。例えば、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体は、ヒトＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡを認識する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡまたはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、所望の免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発することができる定常領域を含む。他の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体は、望まれないまたは望ましくない免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発しない定常領域を含む。
【0402】
組成物は、１種を超える抗体（例えば、ＢＣＭＡもしくはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性）またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート（例えば、ＢＣＭＡまたはＣＤ３およびＢＣＭＡの異なるエピトープを認識するＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体の混合物）を含みうることが理解される。他の例示的な組成物は、同じエピトープを認識する１種を超えるＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ抗体、もしくはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート、またはＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）もしくはＣＤ３およびＢＣＭＡ（ヒトＣＤ３およびＢＣＭＡ）の異なるエピトープに結合するＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、もしくはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの異なる種を含む。
【0403】
本発明で使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含みうる。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、緒投与量および諸濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸など；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含みうる。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書でさらに記載されている。
【0404】
キット
本発明は、本方法で使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート、および本明細書に記載の本発明の方法のいずれかに従って使用するための指示書を含む１つまたは複数の容器を含む。一般に、これらの指示書は、上述した治療的処置のためのＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与の記述を含む。
本発明は、本方法で使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲート、および本明細書に記載の本発明の方法のいずれかに従って使用するための指示書を含む１つまたは複数の容器を含む。一般に、これらの指示書は、上述した治療的処置のためのＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの投与の記述を含む。
【0405】
本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートの使用に関する指示書は一般に、意図された処置のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）、またはサブユニット用量でありうる。本発明のキットに供給される指示書は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）上の書面による指示書であるが、機械可読な指示書（例えば、磁気または光記憶ディスクに収容される指示書）も許容できる。
【0406】
本発明のキットは、適当な包装内に存在する。適当な包装としては、それだけに限らないが、バイアル、瓶、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封マイラーまたはビニール袋）などがある。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザ）、またはミニポンプなどのインフュージョンデバイスなどと組み合わせて使用するためのパッケージも企図されている。キットは、滅菌したアクセスポートを有しうる（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルでありうる）。容器も、滅菌したアクセスポートを有しうる（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルでありうる）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、ＢＣＭＡ抗体、ＣＤ３－ＢＣＭＡ二重特異性抗体、またはＢＣＭＡ抗体コンジュゲートである。容器は、第２の医薬活性剤をさらに含みうる。
【0407】
キットは、追加のコンポーネント、例えば、緩衝液および解釈情報などを提供してもよい。通常、キットは、容器および容器上のまたは容器に付随したラベルまたは添付文書を含む。
【0408】
以下の実施例は、例示的な目的のみのために提供されており、決して本発明の範囲を限定するように意図されていない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の様々な改変が、上記の記述から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に入る。
【実施例0409】
（実施例１）
２５℃および／または３７℃におけるｈＢＣＭＡ／ヒトＩｇＧ相互作用の動態および親和性の判定
本実施例は、２５℃および３７℃における様々な抗ＢＣＭＡ抗体の動態および親和性を判定する。
２５℃および／または３７℃におけるｈＢＣＭＡ／ヒトＩｇＧ相互作用の動態および親和性の判定
本実施例は、２５℃および３７℃における様々な抗ＢＣＭＡ抗体の動態および親和性を判定する。
【0410】
すべての実験は、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴バイオセンサー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）で実施した。抗ＢＣＭＡ抗体のアレイを、Ａｂｄｉｃｈｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、４１１、１３９～１５１（２０１１）に記載されたものと同様にＢｉｏ－Ｒａｄ ＧＬＣセンサーチップ上でアミンカップリング法を使用して調製した。固定化についての分析温度は、２５℃であり、ランニング緩衝液は、ＨＢＳ－Ｔ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４）であった。１ｍＭ ＥＣＤおよび０．２５ｍＭ ＮＨＳの混合物を３０μＬ／分の流量で３分間注入することによって分析物（水平）方向にチャネルを活性化した。ＩｇＧを、１０ｍＭアセテート ｐＨ４．５緩衝液中２０μｇ／ｍＬで、３０μＬ／分で１．５分間リガンド（垂直）方向にこれらを注入することによって活性化されたスポット上に固定化した。活性化された表面は、１Ｍエタノールアミン、ｐＨ８．５を３０μＬ／分で３分間分析物方向に注入することによってブロックした。
【0411】
ｈＢＣＭＡ結合分析の分析温度は、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを補充したＨＢＳ－Ｔ＋のランニング緩衝液中３７℃または２５℃であった。速度論的滴定法をＡｂｄｉｃｈｅらに記載されたように相互作用分析に使用した。ｈＢＣＭＡ（ヒトＢＣＭＡ）分析物を、低～高濃度の一連の注入を使用して分析物方向に注入した。使用した濃度は、０．０８ｎＭ、０．４ｎＭ、２ｎＭ、１０ｎＭ、および５０ｎＭ（５倍希釈係数および５０ｎＭのトップ濃度を用いた５メンバーシリーズ）であった。所与の分析物希釈液の会合時間は、２分であった。５０ｎＭ ｈＢＣＭＡ注入直後に、解離を２時間モニターした。ｈＢＣＭＡ分析物注入の前に、緩衝液をｈＢＣＭＡ分析物サイクルにおける同じ会合および解離時間を使用して５回注入して、二重参照目的（Ｍｙｓｚｋａ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、１２、２７９～２８４（１９９９）に記載された二重参照）のための緩衝液ブランクセンサーグラムを準備した。
【0412】
センサーグラムを二重参照し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン４．１．１（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）中の質量輸送速度論的滴定（ｍａｓｓ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｋｉｎｅｔｉｃ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）モデルを用いて１：１ラングミュアにフィッティングした。センサーグラムおよびフィッティングを図１に示し、本発明の様々な抗ＢＣＭＡ抗体の動態および親和性パラメータを表６Ａ～６Ｃに示す。
【0413】
【表6】
【0414】
【表7-1】
【0415】
【表7-2】
【0416】
【表7-3】
【0417】
【表7-4】
【0418】
【表8-1】
【0419】
【表8-2】
【0420】
（実施例２）
ＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞上のヒト抗ＢＣＭＡ抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、本発明の様々なＢＣＭＡ抗体によるＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞の結合を実証する。
ＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞上のヒト抗ＢＣＭＡ抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、本発明の様々なＢＣＭＡ抗体によるＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞の結合を実証する。
【0421】
マウスＩｇＧ２ａにおいて発現されるヒト抗ｈＢＣＭＡの結合を、フローサイトメトリーによってＢＣＭＡ発現細胞（ＫＭＳ１２ＢＭ、Ｌ３６３、ＭＭ１Ｓ、およびＫＭＳ１２ＰＥ）で査定した。２５０，０００細胞を、結合緩衝液（ＰＢＳ（リン酸緩衝溶液）＋０．２％ ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン））１００μＬ中の抗体０．５μｇとともにインキュベートし、その後Ａｌｅｘ Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗マウスＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともにインキュベートした。表７は、様々なＢＣＭＡ抗体（例えば、Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、およびＰ６Ｅ０１／Ｈ３ＴＡＱ）によるＢＣＭＡ陽性腫瘍細胞上のＭＦＩ（平均蛍光強度）を示す。
【0422】
【表9】
【0423】
（実施例３）
ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの細胞傷害性
本実施例は、ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの効力を例示する。
ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの細胞傷害性
本実施例は、ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの効力を例示する。
【0424】
ヒト抗ＢＣＭＡ（Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１、Ｌ３．ＰＹ／Ｈ３．ＴＡＱ、Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、およびＡ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６）抗体を、２、４、および６の薬物抗体比（ＤＡＲ）についてグルタミン含有トランスグルタミナーゼ（「Ｑ」）タグで操作された（例えば、ＬＣＱ０５、Ｈ７ｃ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ａ／Ｈ７ｃ、Ｎ２９７Ｑ／ＬＣＱ０５）ヒトＩｇＧ１サブタイプとして発現させた。それぞれ、ＴＧ１７は、配列番号４７２（ＬＬＱＧＰＰ）に対応し、ＬＣＱ０５は、配列番号４７４（ＧＧＬＬＱＧＰＰ）に対応し、Ｈ７ｃは、配列番号４５４（ＬＬＱＧ）に対応し、表８に示したようにＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１（アセチル－リシン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－Ａｕｒ３３７７、またはアミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－Ａｕｒ０１３１とコンジュゲートさせた。一事例では、トランスグルタミナーゼタグは、軽鎖、重鎖、または軽および重鎖の組合せにおいて操作することができる。他の事例では、トランスグルタミナーゼタグ（例えば、Ｑ）は、ヒトＩｇＧの２９７位（ＥＵ番号付けスキーム）などの抗体の部位で操作される。例えば、野生型アミノ酸アスパラギン（Ｎ）を、本発明のＢＣＭＡ抗体の２９７位でグルタミンまたはアラニンと置換する（Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ａ）。次いでＡｕｒ０１０１、Ａｕｒ３３７７、およびＡｕｒ０１３１への抗ＢＣＭＡ抗体コンジュゲーションを、特異的部位（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端もしくはアミノ末端、２９７位、または抗体の別の部位で）で標的化されるグルタミンまたはグルタミンタグを持つ抗ＢＣＭＡ抗体とペイロード（例えば、ＭＭＡＤ、Ａｕｒ０１０１、Ａｕｒ３３７７、またはＡｕｒ０１３１）のアミン含有誘導体との間の微生物トランスグルタミナーゼ触媒アミド基転移反応を介して実現した。一部の事例では、２２２、３４０、または３７０位（ＥＵ番号付けスキームによる）における野生型アミノ酸リシンをアミノ酸アルギニンと置き換えた（「Ｋ２２２Ｒ」、「Ｋ３４０Ｒ」、または「Ｋ３７０Ｒ」）。例えば、Ｋ２２２Ｒ置換は、より均質な抗体およびペイロードコンジュゲート、抗体とペイロードとの間のより良好な分子間架橋、および／または抗体軽鎖のＣ末端上のグルタミンタグとの鎖間架橋の著しい低下をもたらすという意外な効果を有することが判明した。
【0425】
アミド基転移反応では、抗体上のグルタミンは、アシルドナーとして作用し、アミン含有化合物は、アシルアクセプター（アミンドナー）として作用した。１～１５０μＭの濃度の精製抗ＢＣＭＡ抗体を、ｐＨ範囲６．２～８．８の１０～１０００ｍＭ ＮａＣｌ、および２５ｍＭ ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸］またはＴｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液中、０．２３～０．５５％（ｗ／ｖ）ストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）トランスグルタミナーゼ（ＡＣＴＩＶＡ（商標）、Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ、日本）の存在下で、５μＭ～１５ｍＭの間の範囲の５～１００モル過剰のアシルアクセプターとともにインキュベートした。反応条件を個々のアシルアクセプター誘導体について調整し、最適な効率および特異性は、典型的には、７５ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．５中の３３μＭ抗体、０．６７ｍＭ誘導体、および０．３７８％（ｗ／ｖ）トランスグルタミナーゼで観察された。２０～３７℃で１～２４時間インキュベートした後、抗体を、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製の市販の疎水性相互作用クロマトグラフィーなどの当業者に公知の標準的なクロマトグラフィー法を使用してブチルセファロース高性能（ブチルＨＰ）樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ）で精製した。
【0426】
次いで標的発現（ＭＭ１．Ｓ、ＫＭＳ１２ＢＭ、およびＬ３６３）細胞を、３０００細胞／ウェルで透明底プレートに播種した。細胞を、４倍連続希釈抗体－薬物コンジュゲートを用いて三つ組で処置した。細胞生存能を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって処置して９６時間後に判定した。相対的な細胞生存能は、未処置対照のパーセンテージとして判定した。ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって計算した。表８は、トランスグルタミナーゼタグおよびリンカーによって細胞傷害性剤０１０１、３３７７、および０１３１にコンジュゲートされた本発明のすべてのヒト抗ＢＣＭＡ抗体が、ＢＣＭＡ発現細胞内で強力な細胞殺傷活性を発揮することを示す。
【0427】
【表10】
【0428】
（実施例４）
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍退縮を誘導する
本実施例は、ＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍退縮を誘導する
本実施例は、ＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
【0429】
ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、正所性モデルにおいてルシフェラーゼおよびＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）を発現する多発性骨髄腫細胞株ＭＭ１．Ｓを用いて実施した。１０００万個のＭＭ１．Ｓ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌ＣＢ１７／ＳＣＩＤ動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にする。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について１～３Ｅ６の平均に到達したとき、動物を群にランダム化し、単回用量の抗体軽鎖のＣ末端でＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ｖｃ０１０１とコンジュゲートしたヒト抗ＢＣＭＡ抗体および対照コンジュゲートをボーラス尾静脈注射によって投与した。動物が後肢麻痺、ＭＭ１．Ｓ正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を殺した。図２は、Ｐ６Ｅ０１／Ｐ６Ｅ０１－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１；Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１；Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１；Ｐ４Ｇ４－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１；およびＰ１Ａ１１－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１を含めて、３ｍｇ／ｋｇでの単回用量の様々なヒト抗ＢＣＭＡ ＡＤＣが、陰性対照（ＮＮＣ）と比較して腫瘍進行を阻害することを示す。
【0430】
本スタディは、ＢＣＭＡ－ＡＤＣでの処置が多発性骨髄腫の進行を阻害することを実証する。
【0431】
（実施例５）
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍退縮および阻害を誘導する
本実施例も、ＭＭ１．Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍退縮および阻害を誘導する
本実施例も、ＭＭ１．Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
【0432】
ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、正所性モデルにおいてルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現する多発性骨髄腫細胞株ＭＭ１．Ｓを用いて実施した。１０００万個のＭＭ１．Ｓ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌ＣＢ１７／ＳＣＩＤ動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にする。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について１～３Ｅ６の平均に到達したとき、動物を群；１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、３）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、４）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、５）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、および６）対照コンジュゲートＬＣＱ０４／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１にランダム化した。単回用量のヒト抗ＢＣＭＡ ＡＤＣおよび対照コンジュゲートをボーラス尾静脈注射によって投与した。動物が後肢麻痺、ＭＭ１．Ｓ正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を殺した。図３は、単回用量の１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１および２）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７とコンジュゲートされたヒト抗ＢＣＭＡ Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１抗体が腫瘍退縮をもたらしたことを示す。単回用量の１）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、２）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、および３）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１とコンジュゲートされたヒト抗ＢＣＭＡ Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１抗体は、腫瘍阻害をもたらした。
【0433】
したがって、本スタディは、ＢＣＭＡ－ＡＤＣでの処置が多発性骨髄腫の退縮を誘導し、進行を阻害することを実証する。
【0434】
（実施例６）
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍阻害を誘導する
本実施例も、ＫＭＳ１２ＢＭ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
抗ＢＣＭＡ ＡＤＣは、正所性多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍阻害を誘導する
本実施例も、ＫＭＳ１２ＢＭ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示する。
【0435】
ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、正所性モデルにおいてルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現する多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ１２ＢＭを用いて実施した。生後６～８週の雌ＮＳＧ動物を１００ｃＧｙで照射し、照射して２４時間後に、１０００万個のＫＭＳ１２ＢＭ ＬｕｃＧＦＰ細胞を尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にする。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について５Ｅ６の平均に到達したとき、動物を群；１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０、３）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、４）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、５）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、および６）対照コンジュゲートＬＣＱ０４／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１にランダム化した。単回用量のヒト抗ＢＣＭＡ ＡＤＣおよび対照コンジュゲートをボーラス尾静脈注射によって投与した。動物が、ＫＭＳ１２ＢＭ正所性モデルのエンドポイントである、全身体重の１５％超を失ったとき、動物を殺した。図４は、単回用量の１）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－３３７７、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、３）ＬＣＱ０５／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１、４）Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、および５）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ／ＬＣＱ０５－ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ａｕｒ０１０１とコンジュゲートされたヒト抗ＢＣＭＡ Ｌ３．ＰＹ／Ｐ６Ｅ０１抗体が腫瘍阻害をもたらしたことを示す。
【0436】
したがって、本スタディは、ＢＣＭＡ－ＡＤＣでの処置が多発性骨髄腫の退縮を誘導し、進行を阻害することをさらに実証する。
【0437】
（実施例７）
ＭＭ１Ｓ正所性モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの用量応答曲線
本実施例は、ＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力をさらに例示する。
ＭＭ１Ｓ正所性モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣの用量応答曲線
本実施例は、ＭＭ１Ｓ正所性多発性骨髄腫モデルにおける抗ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力をさらに例示する。
【0438】
ＢＣＭＡ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、正所性モデルにおいてルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現する多発性骨髄腫細胞株ＭＭ１．Ｓを用いて実施した。１０００万個のＭＭ１．Ｓ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌ＣＢ１７／ＳＣＩＤ動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にする。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について１．２Ｅ６の平均に到達したとき、動物を群；１）０．１ｍｇ／ｋｇ Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、２）０．３８ｍｇ／ｋｇ Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、３）０．７５ｍｇ／ｋｇ Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、４）１．５ｍｇ／ｋｇ Ｈ７ｃ／Ｎ２９７Ａ／Ｋ２２２Ｒ－アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２－０１３１、および５）３ｍｇ／ｋｇ対照コンジュゲートＮ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ－ＡｃＬｙｓ－ＶＣ－０１０１にランダム化した。単回用量のヒト抗ＢＣＭＡ ＡＤＣおよび対照コンジュゲートをボーラス尾静脈注射によって投与した。動物が後肢麻痺、ＭＭ１．Ｓ正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を殺した。図５は、単回用量の上記群１）－４）とコンジュゲートされたヒト抗ＢＣＭＡ ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９抗体が、０．１ｍｇ／ｋｇで開始する腫瘍退縮および０．７５ｍｇ／ｋｇで開始する最大１００日の腫瘍阻害をもたらしたことを示す。
【0439】
したがって、本スタディは、ＢＣＭＡ－ＡＤＣでの処置が多発性骨髄腫における腫瘍退縮および腫瘍阻害を誘導することを実証する。
【0440】
（実施例８）
ヘテロ二量体抗体の生成および精製
本実施例は、本願のヘテロ二量体抗体の生成および精製を記載する。
ヘテロ二量体抗体の生成および精製
本実施例は、本願のヘテロ二量体抗体の生成および精製を記載する。
【0441】
ヒト特異的抗ＣＤ３抗体の可変領域を、それぞれ以下の突然変異２２１Ｒ、２２８Ｒ、およびＫ４０９Ｒ；または２２３Ｒ、２２５Ｒ、２２８Ｒ、およびＫ４０９Ｒを含有するヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２ΔＡ中にクローニングし、ｈＩｇＧ１ ＲＲＲまたはＩｇＧ２ΔＡ－ＲＲＲＲと呼んだ。
【0442】
抗標的抗体の可変領域を、それぞれ以下の突然変異２２１Ｅ、２２８Ｅ、Ｌ３６８Ｅまたは２２３Ｅ、２２５Ｅ、２２８Ｅ、およびＬ３６８Ｅを含有するヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２ΔＡ中にクローニングし、ｈＩｇＧ１ＥＥＥまたはｈＩｇＧ２ΔＡ－ＥＥＥＥと呼んだ。
【0443】
ヘテロ二量体を、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載された通り、ｈＩｇＧ１ ＲＲＲまたはＩｇＧ２ΔＡ－ＲＲＲＲ突然変異を有する抗ＣＤ３ ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ΔＡを、ｈＩｇＧ１ＥＥＥまたはｈＩｇＧ２ΔＡ－ＥＥＥＥ突然変異を有する抗標的抗体とともに、１ｍＭまたは２ｍＭ ＧＳＨを含むＰＢＳ中で３７℃にて２４時間インキュベートすることによって調製した。ヘテロ二量体を、以下に記載するようにイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。
【0444】
すべてのヘテロ二量体をイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。簡単に言えば、Ｆｃ－ヘテロおよびＦｃ－ホモ二量体の分析的イオン交換分離を、弱カチオン交換ＤＩＯＮＥＸ Ｐｒｏｐａｃ ＷＣＸ－１０Ｇ（４×５０ｍｍ）カラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００クォータナリポンプＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｃ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）で実行した。５％緩衝液Ａ（２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．４）中のタンパク質を注入し、１ｍｌ／分の流量で２０分の期間にわたって２５％～７５％緩衝液Ｂ（２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．４および５００ｍＭ ＮａＣｌ）の勾配で溶出させた。より大きいスケールのＦｃ－ヘテロ二量体精製は、弱カチオン交換ＤＩＯＮＥＸ Ｐｒｏｐａｃ ＷＣＸ－１０Ｇ（４×２５０ｍｍ）カラムを備えたＡｋｔａエクスプローラー（ＧＥ）で実施した。５％緩衝液Ａ（２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．４）中のタンパク質を注入し、１ｍｌ／分の流量で６０分の期間にわたって１５％～７５％緩衝液Ｂ（２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．４および５００ｍＭ ＮａＣｌ）の勾配で溶出させた。
【0445】
（実施例９）
２５℃および／または３７℃におけるｈＣＤ３／ヒトＩｇＧ相互作用の動態および親和性の判定
本実施例は、２５℃および３７℃における様々な抗ＣＤ３抗体の動態および親和性を判定する。
２５℃および／または３７℃におけるｈＣＤ３／ヒトＩｇＧ相互作用の動態および親和性の判定
本実施例は、２５℃および３７℃における様々な抗ＣＤ３抗体の動態および親和性を判定する。
【0446】
すべての実験は、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴バイオセンサー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）で実施した。抗ＣＤ３抗体のアレイを、Ａｂｄｉｃｈｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、４１１、１３９～１５１（２０１１）に記載されたものと同様にＢｉｏ－Ｒａｄ ＧＬＣセンサーチップ上でアミンカップリング法を使用して調製した。固定化についての分析温度は、２５℃であり、ランニング緩衝液は、ＨＢＳ－Ｔ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４）であった。１ｍＭ ＥＣＤおよび０．２５ｍＭ ＮＨＳの混合物を３０μＬ／分の流量で３分間注入することによって分析物（水平）方向にチャネルを活性化した。ＩｇＧを、１０ｍＭアセテート ｐＨ４．５緩衝液中２０μｇ／ｍＬで、３０μｇ／ｍＬで１．５分間リガンド（垂直）方向にこれらを注入することによって活性化されたスポット上に固定化した。活性化された表面は、１Ｍエタノールアミン、ｐＨ８．５を３０μＬ／分で３分間分析物方向に注入することによってブロックした。
【0447】
ｈＣＤ３結合分析の分析温度は、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを補充したＨＢＳ－Ｔ＋のランニング緩衝液中３７℃または２５℃であった。速度論的滴定法をＡｂｄｉｃｈｅらに記載されたように相互作用分析に使用した。ｈＣＤ３（ヒトＣＤ３）分析物を、低～高濃度の一連の注入を使用して分析物方向に注入した。使用した濃度は、０．０８ｎＭ、０．４ｎＭ、２ｎＭ、１０ｎＭ、および５０ｎＭ（５倍希釈係数および５０ｎＭのトップ濃度を用いた５メンバーシリーズ）であった。所与の分析物希釈液の会合時間は、２分であった。５０ｎＭ ｈＣＤ３注入直後に、解離を２時間モニターした。ｈＣＤ３分析物注入の前に、緩衝液をｈＣＤ３分析物サイクルにおける同じ会合および解離時間を使用して５回注入して、二重参照目的（Ｍｙｓｚｋａ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、１２、２７９～２８４（１９９９）に記載された二重参照）のための緩衝液ブランクセンサーグラムを準備した。
【0448】
センサーグラムを二重参照し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン４．１．１（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）中の質量輸送速度論的滴定モデルを用いて１：１ラングミュアにフィッティングした。本発明の様々な抗ＣＤ３抗体の動態および親和性パラメータを表９に示す。
【0449】
【表11】
【0450】
（実施例１０）
Ｂ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、ＣＤ２０＋細胞における抗ＣＤ３－抗ＣＤ２０二重特異性抗体の効力を実証する。
Ｂ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、ＣＤ２０＋細胞における抗ＣＤ３－抗ＣＤ２０二重特異性抗体の効力を実証する。
【0451】
カニクイザルスタディを、施設内動物管理使用委員会に従って、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｎｅｖａｄａで行った。動物（ｎ＝２）に、５００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、または０．０２μｇ／ｋｇの用量で二重特異性抗ＣＤ２０／ｈ２Ｂ４抗体を静脈内ボーラス注射を介して投薬した。動物を１日２回および各血液収集時点で観察した。フローサイトメトリーおよびサイトカイン分析用の血液は、ｉ．ｖ．投薬に使用されていない末梢血管からＫ２ＥＤＴＡチューブ中に収集した。
【0452】
効力は、フローサイトメトリーによって末梢血中のＢ細胞およびＴ細胞を測定することによって判定した。全血を示された時点で収集し、分析するまで４℃に保った。赤血球をＡＣＫ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）で室温にて５分間溶解させ、白血球を遠心分離によってペレット化した。ＰＢＳ＋２％ ＦＢＳ中のカニクイザルＣＤ１９（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｋｉ６７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を認識する蛍光標識抗体を含有するカクテルで４℃にて１時間、細胞を染色した。Ｋｉ６７分析について、細胞をＣＤ４およびＣＤ８で最初に染色し、次いで製造者の指示に従ってＢＤ ｃｙｏｔｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定／透過化した後、Ｋｉ６７を細胞内染色した。ＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターでの細胞の取得を、染色直後に実行した。
【0453】
得られたＢ細胞数を、スタディ前Ｂ細胞数のパーセンテージとして図６Ａ～６Ｆにグラフ化した。単回用量後の長期のＢ細胞枯渇は、２μｇ／ｋｇという低い用量で実現された。Ｂ細胞枯渇は、すべての用量で見られた。枯渇効果の継続時間は、用量依存性であった。
【0454】
得られたＣＤ８＋ Ｔ細胞数を、スタディ前ＣＤ８＋ Ｔ細胞数のパーセンテージとして図７Ａ～７Ｆにグラフ化した。最初の再局在化の後、Ｔ細胞レベルは、スタディの継続時間にわたってベースラインレベルまたはそれより上に回復した。
【0455】
（実施例１１）
ＣＤ８＋ Ｔ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、Ｔ細胞動態および活性化に対する一価抗ＣＤ３抗体の効力を実証する。
ＣＤ８＋ Ｔ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、Ｔ細胞動態および活性化に対する一価抗ＣＤ３抗体の効力を実証する。
【0456】
実施例１０に記載した通り、カニクイザルスタディを行い、フローサイトメトリーによって末梢血中のＴ細胞を測定することによって、効力を判定した。カニクイザル（ｎ＝２）に、抗ＣＤ２０／ｈ２Ｂ４またはＮＮＣ（非特異的抗体）／ｈ２Ｂ４を０．２μｇ／ｋｇで、ｉ．ｖ．で毎週投薬した。ＣＤ２０標的化二重特異性抗体と対照的に、ＮＮＣ／ｈ２Ｂ４は、フローサイトメトリーによって測定した場合、血液中のＣＤ８＋ Ｔ細胞動態に対して皆無かそれに近い効果を有する。Ｋｉ６７をＴ細胞活性化のマーカーとして使用した。
【0457】
得られたＴ細胞数を、スタディ前ＣＤ８＋ Ｔ細胞数のパーセンテージとして図８Ａ～８Ｂにグラフ化した。ＣＤ２０／ｈ２Ｂ４二重特異性抗体を投薬されたカニクイザルでは、Ｋｉ６７＋ Ｔ細胞は、投薬後３日目と７日目の間で増加し、ピークとなり、Ｔ細胞活性化を示した。しかし、ＮＮＣ／ｈ２Ｂ４を投薬されたカニクイザルでは、Ｋｉ６７＋ Ｔ細胞の増加はなかった。
【0458】
（実施例１２）
Ｂ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を実証する。
Ｂ細胞上のヒト抗ＣＤ３二重特異性抗体のフローサイトメトリー
本実施例は、Ｂ細胞枯渇に対する抗ＣＤ３アーム親和性の効果を実証する。
【0459】
実施例１０に記載した通り、カニクイザルスタディを行い、フローサイトメトリーによって末梢血中のＴ細胞を測定することによって、効力を判定した。二重特異性抗体は、異なる親和性を有する４種の抗ＣＤ３抗体アームと対合した抗ＣＤ２０アームを用いて作製した。０．２μｇ／ｋｇでの単回ｉ．ｖ．投薬後に、フローサイトメトリーによって末梢血中のＢ細胞を測定することによって、効力を判定した。
【0460】
図９Ａ～９Ｄでは、得られたＢ細胞数がスタディ前Ｂ細胞数のパーセンテージとしてグラフ化されている。Ｂ細胞枯渇の効力は、抗ＣＤ３アーム親和性と相関する。
【0461】
（実施例１３）
ＢＣＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介殺傷についての二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３ ｈＩｇＧ２ΔＡ二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
ＢＣＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介殺傷についての二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、ＢＣＭＡ陽性細胞における抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３ ｈＩｇＧ２ΔＡ二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
【0462】
ヒト抗ＢＣＭＡ（Ｐ５Ａ２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｐ５Ｃ１、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、Ｌ３ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ、およびＡ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１）、ならびにヒト抗ＣＤ３（Ｈ２Ｂ４）抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＥＥＥＥで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
【0463】
ＰＢＭＣ由来のＣＤ３＋ Ｔ細胞を、Ｐａｎ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用してネガティブ選択した。標的発現（ＫＭＳ１２ＰＥ、Ｌ３６３、およびＭｏｌｐ８）細胞ならびにＣＤ３＋ Ｔ細胞を、透明なＵ底プレートに、それぞれ２００００および１０００００細胞／ウェルで播種した。細胞を、１０倍連続希釈二重特異性抗体を用いて三つ組で処置した。細胞死を、ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって、処置して２０時間後に判定した。細胞の細胞傷害性を、未処置エフェクター＋標的対照ウェルのパーセンテージとして判定した。ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって計算した。表１０は、すべてのヒト抗ＢＣＭＡ＿Ｈ２Ｂ４二重特異性抗体がＢＣＭＡ発現細胞において細胞殺傷活性を発揮することを示す。
【0464】
【表12】
【0465】
（実施例１４）
マウスハイブリドーマクローン化抗ＣＤ３抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴付け
本実施例は、抗体スクリーニングのためのヒト／カニクイザルＰＢＭＣ細胞におけるマウスハイブリドーマからクローニングされた抗ＣＤ３のｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化／増殖を例示する。
マウスハイブリドーマクローン化抗ＣＤ３抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴付け
本実施例は、抗体スクリーニングのためのヒト／カニクイザルＰＢＭＣ細胞におけるマウスハイブリドーマからクローニングされた抗ＣＤ３のｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化／増殖を例示する。
【0466】
ヒト抗ＣＤ３抗体を免疫マウスからクローニングし、マウスＩｇＧ１として発現させ、プロテインＡ親和性ビーズによって精製した。ヒト／カニクイザル末梢血単核細胞（ｈｕ／ｃｙＰＢＭＣ）を、地元の血液銀行から得た血液フィルターからフィコール（密度：１．０８３ｇ／ｍＬ、ＧＥ）密度勾配遠心分離によって準備した。赤血球を、ＬＣＫ緩衝液（１５５ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、１００ｍＭ ＥＤＴＡ；Ｇｉｂｃｏ）中で室温にて３分間インキュベートすることによって除去した。細胞を６００ｇで５分間遠心分離した。溶解した赤血球を含有する上清を廃棄し、ＰＢＭＣを１×ＰＢＳ／１％ ＢＳＡ／１ｍＭ ＥＤＴＡ ５０ｍｌで２回洗浄した。ペレット化された細胞を培養基、Ｘ－ＶＩＶＯ－１５、無血清培地（Ｌｏｎｚａ）中１ｍｌ当たり１０７細胞に調整し、ＰＢＭＣを丸底９６ウェル組織培養プレートに１ウェル当たり１０６（１００μｌ）として播種した。選択したＡｂを、ヒトＰＢＭＣと混合するために１ｍＬ当たり１０００ｎｇから１ｎｇに１０×連続希釈し、カニクイザルＰＢＭＣと混合するために１ｍＬ当たり５０００ｎｇから２００ｎｇに５×連続希釈した。３Ｈ－チミジン取込みによるＰＢＭＣ Ｔ細胞増殖の分析のために、２日培養を三つ組で実施した。培養の最後の１６時間の間に、３Ｈ－チミジン（０．５ｍＣｉ／ウェル）を添加し、取込みを測定した。細胞を収穫し、溶解させ、ＤＮＡをガラス－繊維フィルター上に捕捉した。シンチレーションベータ－カウンターでカウントすることによる増殖の尺度としての放射能（ｃｐｍ）。
【0467】
図１０Ａおよび１０Ｂは、選択した抗ＣＤ３ １Ａ４、１Ｃ１０、２Ｂ４、および７Ａ３抗体がヒトおよびカニクイザルＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）に対してチミジン取込みの読み値を有したことを示す。表１１は、Ｂｉａｃｏｒｅ測定によるこれらのＫＤを示す。ｉｎ ｖｉｔｒｏ 特徴付けは、抗ＣＤ３ １Ｃ１０および２Ｂ４抗体が陽性対照ＳＰ３４抗ＣＤ３抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と同様であることを示す。
【0468】
【表13】
【0469】
（実施例１５）
Ｔ細胞媒介殺傷に対する二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、健康ドナーから単離した汎Ｔ細胞と混合したＳＷ４８０における抗ＥｐＣａｍ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
Ｔ細胞媒介殺傷に対する二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、健康ドナーから単離した汎Ｔ細胞と混合したＳＷ４８０における抗ＥｐＣａｍ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
【0470】
Ａ：抗ＣＤ抗体ｈ２Ｂ４－１ｄ、ＴＫ、ｈｎｐｓＴＫ、およびｙａｅｓＴＫ
ヒト抗ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－１ｄ（またはｈ２Ｂ４）、ｈ２Ｂ４－ＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｗｔ ＶＬ＿ＴＫ）、ｈ２Ｂ４－ｈｎｐｓＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ）、およびｈ２Ｂ４－ｙａｅｓＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｙａｅｓ ＶＬ＿ＴＫ））抗体、ならびにヒト抗ＥｐＣａｍ抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＲＲＲＲまたはＥＥＥＥで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
ヒト抗ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－１ｄ（またはｈ２Ｂ４）、ｈ２Ｂ４－ＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｗｔ ＶＬ＿ＴＫ）、ｈ２Ｂ４－ｈｎｐｓＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ）、およびｈ２Ｂ４－ｙａｅｓＴＫ（またはｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｙａｅｓ ＶＬ＿ＴＫ））抗体、ならびにヒト抗ＥｐＣａｍ抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＲＲＲＲまたはＥＥＥＥで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
【0471】
ＳＷ４８０を細胞殺傷アッセイの標的細胞株として選択し、エフェクター細胞およびヒトＴ細胞をヒト末梢血単核細胞（ｈｕＰＢＭＣ）から精製した。標的およびエフェクター細胞を９６ウェル丸底プレートの５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する細胞培養基中に播種した。標的細胞の数を２×１０４細胞／ウェルで一定に保った。１ｍＬ当たり３μｇ～３ｐｇの二重特異性抗体の１０倍連続希釈液を細胞に三つ組で添加した。全反応体積は、２００μＬであった。反応物を４８および７２時間インキュベートした。細胞傷害性を分析するために、細胞溶解すると放出された安定な細胞質内酵素である乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）を、ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）によって定量的に測定した。プレートをＶｍａｘ速度論的マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４９０ｎＭにて読み取った。光学密度値を、培地バックグラウンドならびに標的およびエフェクター細胞の自発的溶解に対して補正した。特異的細胞傷害性を以下の式によって計算した：
［％特異的溶解＝試料の４９０ｎＭ読み取り－Ｅ＋Ｔ混合対照の４９０ｎＭ読み取り）／（全Ｔ溶解の４９０ｎＭ読み取り－培地対照の４９０ｎＭ読み取り）×１００％］
［％特異的溶解＝試料の４９０ｎＭ読み取り－Ｅ＋Ｔ混合対照の４９０ｎＭ読み取り）／（全Ｔ溶解の４９０ｎＭ読み取り－培地対照の４９０ｎＭ読み取り）×１００％］
【0472】
図１１Ａおよび１１Ｂは、すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有したこと、および抗体媒介性Ｔ細胞活性化をＴ細胞活性化マーカーによってモニターしていたことを示す。表１２Ａは、これらのＥＣ５０を示す。表１２Ｂは、二重特異性抗体フォーマットに対するＢｉａｃｏｒｅ ＫＤを示す。
【0473】
【表14】
【0474】
【表15】
【0475】
Ｂ：抗ＣＤ抗体ｍ２５Ａ８、ｈ２５Ａ８－Ｂ１２、およびｈ２５Ａ８－Ｂ１３
ヒト抗ＣＤ３ ｈ２Ｂ４（ｈ２Ｂ４＿１ｄ）ならびにｈ２５Ａ８（ｍ２５Ａ８、ｈ２５Ａ８－Ｂ１２、およびｈ２５Ａ８－Ｂ１３）、ならびにヒト抗ＥｐＣａｍ抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＲＲＲＲまたはＥＥＥＥで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
ヒト抗ＣＤ３ ｈ２Ｂ４（ｈ２Ｂ４＿１ｄ）ならびにｈ２５Ａ８（ｍ２５Ａ８、ｈ２５Ａ８－Ｂ１２、およびｈ２５Ａ８－Ｂ１３）、ならびにヒト抗ＥｐＣａｍ抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＲＲＲＲまたはＥＥＥＥで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
【0476】
図１１Ｃおよび１１Ｄは、すべてのヒト抗ＥｐＣａｍ＿抗ＣＤ３二重特異性抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏ設定で細胞殺傷活性を有したこと、および抗体媒介性Ｔ細胞活性化をＴ細胞活性化マーカーによってモニターしていたことを示す。表１２Ｃは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺傷のＥＣ５０を示す。表１２Ｄは、３７℃での二重特異性抗体フォーマットに対するＢｉａｃｏｒｅ動態を示す。表１２Ｅは、ＳＥＣ－ＭＡＬＳ（マルチアングル光散乱を伴ったサイズ排除クロマトグラフィー）およびＤＳＣ（示差走査熱量測定）を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴付けを示す。
【0477】
【表16】
【0478】
【表17】
【0479】
【表18】
【0480】
（実施例１６）
原発性骨髄腫患者試料のＴ細胞媒介殺傷に対する二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、原発性骨髄腫細胞における抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
原発性骨髄腫患者試料のＴ細胞媒介殺傷に対する二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、原発性骨髄腫細胞における抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を例示する。
【0481】
ヒト抗ＢＣＭＡ（Ｐ５Ａ２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、およびＰ６Ｅ０１ Ｌ３ＰＹ／Ｈ３ＴＡＱ）、ならびにヒト抗ＣＤ３（ｈ２Ｂ４）抗体を、実施例８に記載した通り、二重特異性交換のためにＥＥＥＥまたはＲＲＲＲで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡとして発現させた。
【0482】
骨髄腫患者由来の全骨髄単核細胞を、透明なＵ底プレートに、３０００～５０００骨髄腫細胞／ウェルをもたらした全骨髄単核細胞数で播種した。細胞を１０倍連続希釈した二重特異性抗体で処置した。処置して５日後に、全生存細胞を、ＣＤ１３８およびＣＤ３８に対する抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＡ）を使用してフローサイトメトリーによって判定した。細胞を、ＰＢＳ＋０．５％ ＦＢＳ中、４℃で３０分間、抗体とともにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中のＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）を４℃で３０分間細胞に添加した。ＢＤフローサイトメーターで細胞を取得する前に、細胞を洗浄し、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、ＯＲ）を添加した。パーセント生細胞を、計数ビーズを使用して処置済み対未処置ウェル中の生細胞数として判定した。ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって計算した。
【0483】
表１３Ａは、すべてのヒト抗ＢＣＭＡ＿ｈ２Ｂ４二重特異性抗体が骨髄腫患者試料に対して細胞殺傷活性を有すること、および患者Ｔ細胞が機能的なエフェクター細胞であることを示す。表１３Ｂは、異なるエフェクターと標的（Ｅ：Ｔ）の比での多発性骨髄腫患者試料に対する１種の抗ＢＣＭＡ二重特異性の殺傷を示す。
【0484】
【表19】
【0485】
【表20】
【0486】
（実施例１７）
抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を投与されたカニクイザル由来の抗体分泌細胞のＥＬＩＳＰＯＴ
本実施例は、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を用いたカニクイザルにおけるＩｇＧ分泌細胞の枯渇を例示する。
抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を投与されたカニクイザル由来の抗体分泌細胞のＥＬＩＳＰＯＴ
本実施例は、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を用いたカニクイザルにおけるＩｇＧ分泌細胞の枯渇を例示する。
【0487】
カニクイザル（ｎ＝２）に、１日目および８日目に１００μｇ／ｋｇおよび３００μｇ／ｋｇの２回の用量で、二重特異性抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３抗体（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ＿ＴＫ）、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１／Ｈ２Ｂ４、およびＣｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９／Ｈ２Ｂを静脈内ボーラス注射を介して投薬した。動物を１日２回および各血液収集時点で観察した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を－６、４、および１０日目にサンプリングした。骨髄試料を、動物を解剖した１０日目に採取した。
【0488】
血液を、ヘパリンナトリウムを含有するＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（登録商標）ＣＰＴ（商標）細胞調製チューブ中に収集し、密度勾配にかけ、次いでＰＢＭＣを遠心分離後に勾配界面で収集した。
【0489】
骨髄（大腿骨由来）の試料を、１００％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）およそ５ｍＬをフラッシュすることによって収集し、次いで単一細胞懸濁液を、緩衝液５０ｍｌ中にフラッシュされた骨髄を懸濁させることによって調製した。
【0490】
細胞を、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｖｉｓｉｏｎを使用して計数し、完全なＲＰＭＩ１６４０培養基を用いて、ＰＢＭＣについて１ｍＬ当たり５×１０６細胞および骨髄細胞について１ｍＬ当たり２×１０６細胞の濃度に調整した。全ＩｇＧ分泌細胞を、Ｍａｂｔｅｃｈ製ＥＬＩＳｐｏｔＢＡＳＩＣキット（＃３８５０－２ＨＷ－Ｐｌｕｓ）を使用して数え上げた。簡単に言えば、ＰＢＭＣまたは骨髄細胞を指定濃度（５×１０５／ウェルのＰＢＭＣおよび２×１０５／ウェルの骨髄細胞）で３連ウェルに添加し、次いで細胞をプレート中で連続希釈した。一晩インキュベートした後、プレートを洗浄し、ビオチン化検出抗体を添加した。プレートを２時間インキュベートし、ストレプトアビジン－ＨＲＰを１時間添加した。ＩｇＧスポットを、ＴＭＢ基質溶液を使用して可視化し、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒシステム（ＣＴＬ）およびＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ ５．１ソフトウェアを使用して計数した。データを、三つ組試料からのＩｇＧ分泌細胞の平均（＋／－ＳＤ）数として表した。
【0491】
ＰＢＭＣ中および骨髄中の得られたＩｇＧ分泌細胞数をそれぞれ表１４Ａおよび１４Ｂに列挙する。ＩｇＧ分泌細胞の枯渇が、投薬前と比較したＰＢＭＣならびにビヒクルおよび陰性対照と比較した骨髄中の両抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体について見られた。用量依存効果が骨髄において見られた。
【0492】
【表21】
【0493】
【表22】
【0494】
（実施例１８）
抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性は、ＭＭ１．Ｓ腫瘍モデルにおいて腫瘍退縮および阻害を誘導する。
本実施例は、正所性ＭＭ１．Ｓ骨髄腫モデルにおける腫瘍退縮および阻害を例示する。
抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性は、ＭＭ１．Ｓ腫瘍モデルにおいて腫瘍退縮および阻害を誘導する。
本実施例は、正所性ＭＭ１．Ｓ骨髄腫モデルにおける腫瘍退縮および阻害を例示する。
【0495】
ＢＣＭＡ二重特異性のｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、ルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現するＭＭ１．Ｓ正所性モデルを用いて実施した。腫瘍細胞注射の１日前に、マウスを、ＲＳ ２０００ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｒｒａｄｉａｔｏｒ（ＲＡＤ Ｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｇｉｅｓ、ＧＡ）を使用して１００ｃＧｙで照射した。５００万個のＭＭ１．Ｓ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌Ｎｏｄ／Ｓｃｉｄ／ＩＬ２Ｒｇ－／－（ＮＳＧ）動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にした。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について１５Ｅ６の平均に到達したとき、動物に、ＰＢＭＣ由来の２０００万個の増やしたＴ細胞をボーラス尾静脈によって注射した。簡単に言えば、ＡｌｌＣｅｌｌｓ（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）から購入した汎Ｔ細胞を、ヒトＴ細胞活性化／エクスパンションキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）で活性化した。３日後、１５Ｕ／ｍＬのＩＬ２（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を１１日目まで２日毎に添加した。細胞を収穫し、活性化／エクスパンションビーズを磁気的に除去し、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、再懸濁させた。Ｔ細胞注射の１日後に、マウスを上述の通りイメージングし、動物を７匹のマウスの群；０．０３ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇのＡ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、ならびに０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、および０．３ｍｇ／ｋｇのＣｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９にランダム化した。単回用量のヒト抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｗｔ ＶＬ＿ＴＫ）二重特異性および陰性（ＮＮＣ）対照二重特異性抗体をボーラス尾静脈注射によって投与した。動物が後肢麻痺、ＭＭ１．Ｓ正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を屠殺した。図１２は、単回用量のヒト抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体が用量依存的様式で腫瘍退縮をもたらしたことを示す。
【0496】
（実施例１９）
２回用量の抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性は、攻撃的なＭｏｌｐ８腫瘍モデルにおいて腫瘍退縮を誘導する。
本実施例は、正所性Ｍｏｌｐ８骨髄腫モデルにおける２回用量の抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を用いた腫瘍退縮を例示する。
２回用量の抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性は、攻撃的なＭｏｌｐ８腫瘍モデルにおいて腫瘍退縮を誘導する。
本実施例は、正所性Ｍｏｌｐ８骨髄腫モデルにおける２回用量の抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体を用いた腫瘍退縮を例示する。
【0497】
ＢＣＭＡ二重特異性のｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、ルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現するＭｏｌｐ８正所性モデルを用いて実施した。２００万個のＭｏｌｐ８ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌ＮＳＧ動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にした。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。トータルフラックスがすべての動物について２５Ｅ６の平均に到達したとき、７匹のマウスの３つの群；１）Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、０．３ｍｇ／ｋｇ、２）Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、０．３ｍｇ／ｋｇ、２回用量、および３）ＮＮＣ＿２Ｂ４、０．３ｍｇ／ｋｇ、２回用量にランダム化した。動物に、実施例１８に記載した通りに、２０００万個の増やしたＴ細胞をボーラス尾静脈によって注射した。Ｔ細胞注射の２日後に、マウスに二重特異性抗体を投薬した。動物が、１５％超の体重減少、Ｍｏｌｐ８正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を屠殺した。図１３は、２回用量のヒト抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｗｔ ＶＬ＿ＴＫ）二重特異性抗体が腫瘍退縮を増大させたことを示す。
【0498】
（実施例２０）
正所性Ｍｏｌｐ８腫瘍モデルにおける多発性骨髄腫のスタンダードオブケアと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性
本実施例は、ボルテゾミブまたはレナリドミドと組み合わせたとき抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３ 二重特異性抗体に対する拮抗作用なし、および組み合わせたボルテゾミブおよびレナリドミドと比較して抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体でのより良好な効能を実証する。
正所性Ｍｏｌｐ８腫瘍モデルにおける多発性骨髄腫のスタンダードオブケアと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性
本実施例は、ボルテゾミブまたはレナリドミドと組み合わせたとき抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３ 二重特異性抗体に対する拮抗作用なし、および組み合わせたボルテゾミブおよびレナリドミドと比較して抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体でのより良好な効能を実証する。
【0499】
ＢＣＭＡ二重特異性のｉｎ ｖｉｖｏ効力スタディを、ルシフェラーゼおよびＧＦＰを発現するＭｏｌｐ８正所性モデルを用いて実施した。２００万個のＭｏｌｐ８ ＬｕｃＧＦＰ細胞を、生後６～８週の雌ＮＳＧ動物中に尾静脈を通じて静脈内注射した。Ｄ－ルシフェリン（Ｒｅｇｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を腹腔内注射し（１５ｍｇ／ｍＬで動物１匹当たり２００μＬ）、その後イソフルオランで麻酔し、引き続いて全身生物発光イメージング（ＢＬＩ）を行って、全身腫瘍組織量のモニタリングを可能にした。腫瘍細胞によって発現されるルシフェラーゼとルシフェリンとの相互作用によって放出される生物発光シグナルを、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用してイメージングによって捕捉し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用してトータルフラックス（光子／秒）として定量化した。動物に、実施例１８に記載した通りに、２０００万個の増やしたＴ細胞を７日目にボーラス尾静脈によって注射した。Ｔ細胞注射の２日後に、マウスをイメージングし、１７Ｅ６のトータルフラックスの平均／群を有するマウス７匹の５つの群：１）Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、０．３ｍｇ／ｋｇ、２）Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇボルテゾミブ、３）Ｃｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、０．３ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇレナリドミド、４）１ｍｇ／ｋｇボルテゾミブおよび５０ｍｇ／ｋｇレナリドミド、ならびに５）ビヒクルにランダム化した。抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３（ＰＢＳ中）をボーラス尾静脈注射によって注射し、ボルテゾミブ（ＰＢＳ中）を腹腔内注射を介して投与し、レナリドミド（３０％ ＰＥＧ４００／５％プロピレングリコール／０．５％ Ｔｗｅｅｎ８０）を経口強制飼養を介して投与した。ビヒクルは、３０％ ＰＥＧ４００／５％プロピレングリコール／０．５％ Ｔｗｅｅｎ８０からなっており、これを、経口強制飼養を介して投与した。動物が、１５％超の体重減少、Ｍｏｌｐ８正所性モデルのエンドポイントを呈したとき、動物を屠殺した。図１４は、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ－ＴＫ）二重特異性抗体のボルテゾミブまたはレナリドミドとの組合せが、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体の効力に対して負の効果を有さなかったことを示す。このモデルでは、単独の、またはレナリドミドまたはボルテゾミブと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体は、組み合わせたレナリドミドおよびボルテゾミブより効果的である。
【0500】
（実施例２１）
ＯＰＭ２細胞株に対するレナリドミド、カルフィルゾミブ、またはドキソルビシンと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、二重特異性抗体単独と比較して、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体活性についてカルフィルゾミブ、ドキソルビシン、およびレナリドミドと組み合わせたとき、Ｔ細胞機能に対する有害作用がないことを例示する。
ＯＰＭ２細胞株に対するレナリドミド、カルフィルゾミブ、またはドキソルビシンと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、二重特異性抗体単独と比較して、抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性抗体活性についてカルフィルゾミブ、ドキソルビシン、およびレナリドミドと組み合わせたとき、Ｔ細胞機能に対する有害作用がないことを例示する。
【0501】
ＰＢＭＣ由来のＣＤ３＋ Ｔ細胞を、Ｐａｎ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用してネガティブ選択した。ＯＰＭ２細胞およびＣＤ３＋ Ｔ細胞を、透明なＵ底プレートに、それぞれ２００００および１０００００細胞／ウェルで播種した。ＯＰＭ２およびＣＤ３＋ Ｔ細胞を、スタンダードオブケアとともに３７℃で２時間、最初にインキュベートした。１．５６ｎＭカルフィルゾミブおよび６．２５ｎＭドキソルビシンを、０．０２％ ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ中に希釈した。レナリドミドを、１９５ｎＭで０．１％ ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ中に希釈した。細胞を、１０倍連続希釈した二重特異性抗体で処置した。処置して３日後に、全生存細胞を、ＣＤ１３８、ＣＤ４、およびＣＤ８に対する抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用してフローサイトメトリーによって判定した。細胞を、ＰＢＳ＋０．５％ ＦＢＳ中、４℃で３０分間、抗体とともにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中のＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）を４℃で３０分間細胞に添加した。ＢＤフローサイトメーターで細胞を取得する前に、細胞を洗浄し、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、ＯＲ）を添加した。パーセント生細胞を、計数ビーズを使用して処置済み対未処置ウェル中の生細胞数として判定した。図１５Ａ、１５Ｂ、および１５Ｃはそれぞれ、カルフィルゾミブ、レナリドミド、およびドキソルビシンが、ＯＰＭ２細胞上のＣｏｍｂｏ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９－ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ－ＴＫ）二重特異性抗体の機能に対して負の効果を有さないことを示す。
【0502】
（実施例２２）
ＫＭＳ１２ＢＭ細胞株に対するレナリドミドおよびカルフィルゾミブと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、各分子単独と比較した、カルフィルゾミブおよびレナリドミドと組み合わせたときの抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性機能に対する相乗効果を例示する。
ＫＭＳ１２ＢＭ細胞株に対するレナリドミドおよびカルフィルゾミブと組み合わせた抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性のｉｎ ｖｉｔｒｏスタディ
本実施例は、各分子単独と比較した、カルフィルゾミブおよびレナリドミドと組み合わせたときの抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性機能に対する相乗効果を例示する。
【0503】
ＰＢＭＣ由来のＣＤ３＋ Ｔ細胞を、Ｐａｎ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用してネガティブ選択した。ＫＭＳ１２ＢＭ細胞およびＣＤ３＋ Ｔ細胞を、透明なＵ底プレートに、それぞれ２００００および１０００００細胞／ウェルで播種した。細胞を、カルフィルゾミブと、およびレナリドミドについて一連の濃度と組み合わせて０．０１７ｎＭ抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３二重特異性で処置した。１．２５ｎＭカルフィルゾミブを、０．０２％ ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ中に希釈した。レナリドミドは、４倍希釈した４μＭから開始して、０．１％ ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ中に希釈した。処置して３日後に、全生存細胞を、ＣＤ１３８、ＣＤ４、およびＣＤ８に対する抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＡ）を使用してフローサイトメトリーによって判定した。細胞を、ＰＢＳ＋０．５％ ＦＢＳ中、４℃で３０分間、抗体とともにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中のＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）を４℃で３０分間細胞に添加した。ＢＤフローサイトメーターで細胞を取得する前に、細胞を洗浄し、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、ＯＲ）を添加した。パーセント生細胞を、計数ビーズを使用して処置済み対未処置ウェル中の生細胞数として判定した。図１６は、試験した濃度で、カルフィルゾミブ、レナリドミド、および抗ＢＣＭＡ／ＣＤ３（ｈ２Ｂ４－ＶＨ－ｈｎｐｓ ＶＬ－ＴＫ）二重特異性抗体は、極めて少ない単剤細胞傷害性機能を有したことを示す。３種すべての作用物質を組み合わせたとき、相乗効果が、ＫＭＳ１２ＢＭ細胞内で、用量依存的なレナリドミド濃度で観察された。
【0504】
開示した教示を、様々な用途、方法、キット、および組成物を参照して記載してきたが、様々な変更および改変を、本明細書の教示および以下の請求項に係る発明から逸脱することなく行うことができることが理解されるであろう。上記の実施例は、開示した教示をより良好に例示するために提供されており、本明細書に提示した教示の範囲を限定するように意図されていない。本教示をこれらの例示的な実施形態の観点から記載してきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数の変形および改変が過度の実験を用いることなく可能であることを容易に理解するであろう。すべてのこのような変形および改変は、本教示の範囲内である。
【0505】
特許、特許出願、論文、教科書などを含めた本明細書に引用されたすべての参考文献、およびこれらに引用された参考文献は、これらが既に組み込まれていない程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。それだけに限らないが、定義された用語、用語使用法、記載した技法などを含めて、組み込まれた文献および同様の資料の１つまたは複数が本願と異なり、または矛盾する事象では、本願が支配する。
【0506】
上記の記載および実施例は、本発明のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らが企図したベストモードを記載する。しかし、どんなに詳述される上記事項がテキストに現れることがあっても、本発明は、多くのやり方で実施することができ、本発明は、添付の特許請求の範囲およびこれらの任意の均等物に従って解釈されるべきであることが理解されるであろう。
【図1-1】
【図1-2】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図6-3】
【図7-1】
【図7-2】
【図7-3】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10】
【図11-1】
【図11-2】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15-1】
【図15-2】
【図16】
【配列表】