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2023-110666化合物またはその塩、組成物、化学発光方法、化学発光シグナル測定方法、試薬、試薬キットおよび被検物質測定方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023110666
(43)【公開日】2023-08-09
(54)【発明の名称】化合物またはその塩、組成物、化学発光方法、化学発光シグナル測定方法、試薬、試薬キットおよび被検物質測定方法
(51)【国際特許分類】
C07F 9/655 20060101AFI20230802BHJP
G01N 21/64 20060101ALI20230802BHJP
【ＦＩ】
C07F9/655 CSP
G01N21/64 F
【審査請求】未請求
【請求項の数】21
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022012252
(22)【出願日】2022-01-28
(71)【出願人】
【識別番号】390014960
【氏名又は名称】シスメックス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】宇野 真之介
(72)【発明者】
【氏名】久保 卓也
【テーマコード（参考）】
2G043
4H050
【Ｆターム（参考）】
2G043AA01
2G043DA02
2G043EA01
4H050AA01
4H050AB92
4H050AC10
4H050AD17
4H050BA95
4H050BB12
4H050BB14
4H050BC19
4H050BE30
(57)【要約】 （修正有）
【課題】高い発光効率を示す１，２－ジオキセタン誘導体の提供。
【解決手段】例えば、下記構造式［Ｉ－Ｐ］で表される化合物またはその塩が示される。
【選択図】なし
【解決手段】例えば、下記構造式［Ｉ－Ｐ］で表される化合物またはその塩が示される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩。
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１－８アルキル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、Ｃ３－１８アルキル基またはＣ３－７シクロアルキル基であり；
Ｒ１およびＲ２、Ｒ１およびＲ３、または、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい環を形成してもよく；
Ｘは、Ｈまたはケージング基であり；
Ｌは、不存在であるか、式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４：
（各式中、
Ｍは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、
波線は、Ｘとの結合点を表し、
アスタリスクは、Ｙとの結合点を表す）
で表されるリンカーであり；
式Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３中のベンゼン環は、ハロ基、アルキル基、シクロアルキル基、およびアルコキシ基からなる群より選ばれる置換基で置換されていてもよく；
で表されるリンカーであり；
Ｙは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり；
Ｒ４は、Ｈであるか、または、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した電子求引基であり；および
Ａは、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である］
【化1】
Ｒ１は、Ｃ１－８アルキル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、Ｃ３－１８アルキル基またはＣ３－７シクロアルキル基であり；
Ｒ１およびＲ２、Ｒ１およびＲ３、または、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい環を形成してもよく；
Ｘは、Ｈまたはケージング基であり；
Ｌは、不存在であるか、式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４：
【化2】
Ｍは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、
波線は、Ｘとの結合点を表し、
アスタリスクは、Ｙとの結合点を表す）
で表されるリンカーであり；
式Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３中のベンゼン環は、ハロ基、アルキル基、シクロアルキル基、およびアルコキシ基からなる群より選ばれる置換基で置換されていてもよく；
で表されるリンカーであり；
Ｙは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり；
Ｒ４は、Ｈであるか、または、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した電子求引基であり；および
Ａは、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である］
【請求項2】
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合している、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項3】
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、－Ｃ≡Ｃ－Ｅである、請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項4】
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルである、請求項１～３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項5】
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したアリール基であり、
当該アリール基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－１８アルキル基である、
請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
当該アリール基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－１８アルキル基である、
請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項6】
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したフェニル基であり、
当該フェニル基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－８アルキル基である、
請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
当該フェニル基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－８アルキル基である、
請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項7】
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮである、請求項１～６のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項8】
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したハロ基もしくは－ＣＮである、請求項１～７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項9】
Ｘが、Ｈ、トリアルキルシリル基、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、３，４，６－トリメチル－２，５－ジオキソベンジル基、２－（３－カルボキシ－４－ニトロフェニル）－Ｓ－Ｓ－エチルオキシカルボニル基、４－アジドベンジルオキシカルボニル基、あるいは、式Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、またはＸ７：
（式中、
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基である、請求項１～８のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【化3】
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基である、請求項１～８のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項10】
下記（１）～（４）のいずれかを満たす、請求項１～９のいずれかに記載の化合物またはその塩：
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ３：
で表される基である；
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ１またはＸ２：
で表される基である。
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ３：
【化4】
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ１またはＸ２：
【化5】
【請求項11】
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環を形成している、請求項１～１０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項12】
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成している、請求項１～１１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と、水性溶媒とを含む組成物。
【請求項14】
Ｘがケージング基である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
界面活性剤をさらに含む、請求項１３または１４に記載の組成物。
【請求項16】
Ｘがケージング基である請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩を、前記ケージング基を遊離させる物質と反応させる工程を含む、化学発光方法。
【請求項17】
Ｘが、式Ｘ３：
で表されるケージング基であり、前記ケージング基を遊離させる物質がアルカリホスファターゼである、請求項１６に記載の化学発光方法。
【化6】
【請求項18】
請求項１６または１７に記載の化学発光方法により発生した化学発光シグナルを測定する工程を含む、化学発光シグナルの測定方法。
【請求項19】
Ｘがケージング基である請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、請求項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬。
【請求項20】
Ｘがケージング基である請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、請求項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む第１試薬と、
前記ケージング基を遊離させる物質を含む第２試薬と、
を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬キット。
前記ケージング基を遊離させる物質を含む第２試薬と、
を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬キット。
【請求項21】
検体中の被検物質を測定する方法であって、
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してケージング基を遊離させる物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記ケージング基を遊離させる物質を、Ｘがケージング基である請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む、方法。
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してケージング基を遊離させる物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記ケージング基を遊離させる物質を、Ｘがケージング基である請求項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、化合物またはその塩、組成物、化学発光方法、化学発光シグナル測定方法、試薬、試薬キットおよび被検物質測定方法に関する。
【背景技術】
【0002】
１，２－ジオキセタン誘導体は、酵素などの化学物質との反応をトリガーとして化学発光を誘導することができる化合物である。例えば、特許文献１には、式ＩＶｂ：
で表され、当該式中のＡが、－ＣＮ、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｅ等のπ＊アクセプター基であり、当該π＊アクセプター基が、－Ｙ－Ｌ－Ｒ４基に対してオルト位またはパラ位に結合した、化合物が開示されている。
【化1】
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】米国特許出願公開第２０１９／２９０７８７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明は、高い発光効率を示す化合物またはその塩、これを含む組成物、試薬、および試薬キットを提供することを課題とする。また、本発明は、当該化合物またはその塩を用いた化学発光方法、化学発光シグナル測定方法、および被検物質測定方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0005】
上記の課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、１，２－ジオキセタンの３位に結合するベンゼン環が、特定の置換基、すなわち、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基を有する化合物が、高い発光効率を示すことを見出した。
【0006】
本開示は、下記の実施態様を包含する：
［項１］
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩。
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１－８アルキル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、Ｃ３－１８アルキル基またはＣ３－７シクロアルキル基であり；
Ｒ１およびＲ２、Ｒ１およびＲ３、または、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい環を形成してもよく；
Ｘは、Ｈまたはケージング基であり；
Ｌは、不存在であるか、式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４：
（各式中、
Ｍは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、
波線は、Ｘとの結合点を表し、
アスタリスクは、Ｙとの結合点を表す）
で表されるリンカーであり；
式Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３中のベンゼン環は、ハロ基、アルキル基、シクロアルキル基、およびアルコキシ基からなる群より選ばれる置換基で置換されていてもよく；
で表されるリンカーであり；
Ｙは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり；
Ｒ４は、Ｈであるか、または、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した電子求引基であり；および
Ａは、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である］
［項２］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合している、項１に記載の化合物またはその塩。
［項３］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、－Ｃ≡Ｃ－Ｅである、項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項４］
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルである、項１～３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項５］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したアリール基であり、
当該アリール基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－１８アルキル基である、
項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項６］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したフェニル基であり、
当該フェニル基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－８アルキル基である、
項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項７］
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮである、項１～６のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項８］
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したハロ基もしくは－ＣＮである、項１～７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項９］
Ｘが、Ｈ、トリアルキルシリル基、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、３，４，６－トリメチル－２，５－ジオキソベンジル基、２－（３－カルボキシ－４－ニトロフェニル）－Ｓ－Ｓ－エチルオキシカルボニル基、４－アジドベンジルオキシカルボニル基、あるいは、式Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、またはＸ７：
（式中、
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基である、項１～８のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１０］
下記（１）～（４）のいずれかを満たす、項１～９のいずれかに記載の化合物またはその塩：
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ３：
で表される基である；
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ１またはＸ２：
で表される基である。
［項１１］
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環を形成している、項１～１０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１２］
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成している、項１～１１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１３］
項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と、水性溶媒とを含む組成物。
［項１４］
Ｘがケージング基である、項１３に記載の組成物。
［項１５］
界面活性剤をさらに含む、項１３または１４に記載の組成物。
［項１６］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩を、前記ケージング基を遊離させる物質と反応させる工程を含む、化学発光方法。
［項１７］
Ｘが、式Ｘ３：
で表されるケージング基であり、前記ケージング基を遊離させる物質がアルカリホスファターゼである、項１６に記載の化学発光方法。
［項１８］
項１６または１７に記載の化学発光方法により発生した化学発光シグナルを測定する工程を含む、化学発光シグナルの測定方法。
［項１９］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬。
［項２０］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、請求項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む第１試薬と、
前記ケージング基を遊離させる物質を含む第２試薬と、
を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬キット。
［項２１］
検体中の被検物質を測定する方法であって、
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してケージング基を遊離させる物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記ケージング基を遊離させる物質を、Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む、方法。
［項１］
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩。
【化2】
Ｒ１は、Ｃ１－８アルキル基であり；
Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、Ｃ３－１８アルキル基またはＣ３－７シクロアルキル基であり；
Ｒ１およびＲ２、Ｒ１およびＲ３、または、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい環を形成してもよく；
Ｘは、Ｈまたはケージング基であり；
Ｌは、不存在であるか、式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、またはＬ４：
【化3】
Ｍは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり、
波線は、Ｘとの結合点を表し、
アスタリスクは、Ｙとの結合点を表す）
で表されるリンカーであり；
式Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３中のベンゼン環は、ハロ基、アルキル基、シクロアルキル基、およびアルコキシ基からなる群より選ばれる置換基で置換されていてもよく；
で表されるリンカーであり；
Ｙは、不存在であるか、－Ｏ－または－ＮＨ－であり；
Ｒ４は、Ｈであるか、または、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した電子求引基であり；および
Ａは、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である］
［項２］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合している、項１に記載の化合物またはその塩。
［項３］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、－Ｃ≡Ｃ－Ｅである、項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項４］
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルである、項１～３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項５］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したアリール基であり、
当該アリール基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－１８アルキル基である、
項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項６］
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したフェニル基であり、
当該フェニル基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれる電子求引基で置換されており、
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－８アルキル基である、
項１または２に記載の化合物またはその塩。
［項７］
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮである、項１～６のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項８］
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合したハロ基もしくは－ＣＮである、項１～７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項９］
Ｘが、Ｈ、トリアルキルシリル基、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、３，４，６－トリメチル－２，５－ジオキソベンジル基、２－（３－カルボキシ－４－ニトロフェニル）－Ｓ－Ｓ－エチルオキシカルボニル基、４－アジドベンジルオキシカルボニル基、あるいは、式Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、またはＸ７：
【化4】
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基である、項１～８のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１０］
下記（１）～（４）のいずれかを満たす、項１～９のいずれかに記載の化合物またはその塩：
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ３：
【化5】
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘが式Ｘ１またはＸ２：
【化6】
［項１１］
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環を形成している、項１～１０のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１２］
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成している、項１～１１のいずれかに記載の化合物またはその塩。
［項１３］
項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と、水性溶媒とを含む組成物。
［項１４］
Ｘがケージング基である、項１３に記載の組成物。
［項１５］
界面活性剤をさらに含む、項１３または１４に記載の組成物。
［項１６］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩を、前記ケージング基を遊離させる物質と反応させる工程を含む、化学発光方法。
［項１７］
Ｘが、式Ｘ３：
【化7】
［項１８］
項１６または１７に記載の化学発光方法により発生した化学発光シグナルを測定する工程を含む、化学発光シグナルの測定方法。
［項１９］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬。
［項２０］
Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩、あるいは、請求項１３～１５のいずれかに記載の組成物を含む第１試薬と、
前記ケージング基を遊離させる物質を含む第２試薬と、
を含む、検体中の被検物質を測定するための試薬キット。
［項２１］
検体中の被検物質を測定する方法であって、
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してケージング基を遊離させる物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記ケージング基を遊離させる物質を、Ｘがケージング基である項１～１２のいずれかに記載の化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む、方法。
【発明の効果】
【0007】
本発明により、高い発光効率を示す化合物またはその塩、これを含む組成物、試薬、および試薬キットが提供される。また、本発明により、当該化合物またはその塩を用いた化学発光方法、化学発光シグナル測定方法、および被検物質測定方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【発明を実施するための形態】
【0009】
１．定義
本明細書中、ハロ基とは、ハロゲンで構成される一価の基をいう。ハロ基としては、例えば、フルオロ基（－Ｆ）、クロロ基（－Ｃｌ）、ブロモ基（－Ｂｒ）、ヨード基（－Ｉ）などが挙げられる。
本明細書中、ハロ基とは、ハロゲンで構成される一価の基をいう。ハロ基としては、例えば、フルオロ基（－Ｆ）、クロロ基（－Ｃｌ）、ブロモ基（－Ｂｒ）、ヨード基（－Ｉ）などが挙げられる。
【0010】
本明細書中、アルキル基とは、直鎖状または分岐状の飽和炭化水素から１個の水素原子を除いた一価の基をいう。アルキル基の炭素原子の数は、特に限定されるものではないが、例えば１～２０である。アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基、イソヘキシル基、ｎ－へプチル基、イソヘプチル基、ｎ－オクチル基、イソオクチル基、２－エチルヘキシル基、ｎ－ノニル基、イソノニル基、ｎ－デシル基、イソデシル基、ｎ－ウンデシル基、ｎ－ドデシル基（ラウリル基）、イソラウリル基、ｎ－トリデシル基、イソトリデシル基、ｎ－テトラデシル基（ミリスチル基）、イソミリスチル基、ｎ－ペンタデシル基、イソペンタデシル基、ｎ－ヘキサデシル基（パルミチル基）、イソパルミチル基、ｎ－ヘプタデシル基、イソヘプタデシル基、ｎ－オクタデシル基（ステアリル基）、イソステアリル基などが挙げられる。
【0011】
本明細書中、Ｃ１－８アルキル基とは、炭素数が１～８個の直鎖状または分岐状アルキル基をいう。Ｃ１－８アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基、イソヘキシル基、ｎ－へプチル基、イソヘプチル基、ｎ－オクチル基、イソオクチル基、２－エチルヘキシル基などが挙げられる。
【0012】
本明細書中、Ｃ３－１８アルキル基は、炭素数が３～１８個の直鎖状または分岐状アルキル基をいう。Ｃ３－１８アルキル基としては、例えば、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基、イソヘキシル基、ｎ－へプチル基、イソヘプチル基、ｎ－オクチル基、イソオクチル基、２－エチルヘキシル基、ｎ－ノニル基、イソノニル基、ｎ－デシル基、イソデシル基、ｎ－ウンデシル基、ｎ－ドデシル基（ラウリル基）、イソラウリル基、ｎ－トリデシル基、イソトリデシル基、ｎ－テトラデシル基（ミリスチル基）、イソミリスチル基、ｎ－ペンタデシル基、イソペンタデシル基、ｎ－ヘキサデシル基（パルミチル基）、イソパルミチル基、ｎ－ヘプタデシル基、イソヘプタデシル基、ｎ－オクタデシル基（ステアリル基）、イソステアリル基などが挙げられる。
【0013】
本明細書中、シクロアルキル基とは、飽和脂肪族炭化水素環に由来する一価の基をいう。シクロアルキル基の炭素原子の数は、特に限定されるものではないが、例えば３～２０である。シクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基、ノルボルニル基、アダマンチル基などが挙げられる。
【0014】
本明細書中、Ｃ３－７シクロアルキル基とは、炭素数が３～７個のシクロアルキル基をいう。具体的には、Ｃ３－７シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基などが挙げられる。
【0015】
本明細書中、アリール基とは、芳香族炭化水素環に由来する一価の基をいう。アリール基の炭素原子の数は、特に限定されるものではないが、例えば６～２０である。アリール基としては、例えば、フェニル基、インデニル基、ナフチル基、フルオレニル基、フェナントレニル基、アントラセニル基などが挙げられる。
【0016】
本明細書中、アルコキシ基とは、－Ｏ－アルキルで表される基をいう。当該基におけるアルキルは、上記の「アルキル基」と同義である。アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ－ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ｎ－ペントキシ基、イソペントキシ基、ネオペントキシ基、ｔｅｒｔ－ペントキシ基、ｎ－ヘキソキシ基、イソヘキソキシ基などが挙げられる。
【0017】
本明細書中、ケージング基（保護基とも称される）とは、１，２－ジオキセタニルフェノラートのような不安定な化学種の発生を防止するための基をいう。ケージング基は、加水素分解、加水分解、酵素反応などの化学的プロセスにより、または電気分解、光分解などの物理的プロセスによりアンケージング（脱保護とも称される）することができる。アンケージングにより発生する化学種は、例えば励起状態になることができ、励起状態から基底状態に戻る際に発光し得る。
【0018】
ケージング基の一例としては、トリアルキルシリル基、ジアルキルモノアリールシリル基、モノアルキルジアリールシリル基、トリアリールシリル基などが挙げられる。トリアルキルシリル基としては、例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基などのトリＣ１－４アルキルシリル基などが挙げられる。ジアルキルモノアリールシリル基としては、例えば、ジメチルフェニルシリル基などのジＣ１－４アルキルモノＣ６－１０アリールシリル基などが挙げられる。モノアルキルジアリールシリル基としては、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基などのモノＣ１－４アルキルジＣ６－１０アリールシリル基などが挙げられる。トリアリールシリル基としては、例えば、トリフェニルシリル基などのトリＣ６－１０アリールシリル基などが挙げられる。
【0019】
ケージング基の別の例としては、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、３，４，６－トリメチル－２，５－ジオキソベンジル基、２－（３－カルボキシ－４－ニトロフェニル）－Ｓ－Ｓ－エチルオキシカルボニル基、４－アジドベンジルオキシカルボニル基などが挙げられる。
【0020】
ケージング基のさらに別の例としては、式Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、またはＸ７：
（式中、
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基などが挙げられる。
【化8】
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基などが挙げられる。
【0021】
本明細書中、ケージング基を遊離（または脱離）させる物質は、アンケージング物質と表記する場合がある。アンケージング物質としては、例えば、Ｘが（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基である場合、グルタチオンであり、Ｘが式Ｘ２で表される基である場合、過酸化水素であり、Ｘが式Ｘ３で表される基である場合、アルカリホスファターゼであり、Ｘが式Ｘ４で表される基であり、Ｒ７が、酵素により切断可能なアミノ酸配列（例：Phe－Lys、シトルリン－Val、またはGly－Phe－Leu－Glyを含むアミノ酸配列のような、カテプシンＢにより切断可能なアミノ酸配列；Ｎ－カルボベンゾイル－Ala－Ala－Asn－エチレンジアミンを含むアミノ酸配列のような、レグマインにより切断可能なアミノ酸配列；γ―Glu－を含むアミノ酸配列のような、γ－グルタミルトランスペプチダーゼにより切断可能なアミノ酸配列）を有する場合、当該酵素であり、Ｘが式Ｘ５で表される基（β－ガラクトシル基）である場合、β－ガラクトシダーゼである。
【0022】
本明細書中、アミノ酸残基とは、代表的には、下記式：
（式中、Ｒ７１およびＲ７２は、各々独立して、アミノ酸の側鎖である）
で表される基をいう。アミノ酸残基としては、例えば、グリシン残基、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、セリン残基、トレオニン残基、システイン残基、メチオニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、リシン残基、アルギニン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、ヒスチジン残基、トリプトファン残基、プロリン残基などが挙げられる。
【化9】
で表される基をいう。アミノ酸残基としては、例えば、グリシン残基、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、セリン残基、トレオニン残基、システイン残基、メチオニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、リシン残基、アルギニン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、ヒスチジン残基、トリプトファン残基、プロリン残基などが挙げられる。
【0023】
本明細書中、電子求引基とは、ハメットの置換基定数σｐ値が正である官能基をいう。σｐ値の定義、および、各官能基のσｐ値は、例えば、Hansch, C et al., Chem. Rev., 91, pp. 165-195 (1991) 等を参照することができる。「電子求引基」としては、例えば、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯ－Ｃ１－１８アルキル、－ＣＯＨ、－ＣＯ－Ｃ１－１８アルキル、－ＳＯ２Ｈ、－ＳＯ２－Ｃ１－１８アルキルなどが挙げられる。
【0024】
本明細書中、検体とは、生体から採取された試料であり、被検物質を含有する可能性のある試料をいう。検体は、液状試料および固体試料のいずれであってもよい。液状試料としては、血液試料、脳脊髄液、喀痰、気管支肺胞洗浄液、鼻咽頭拭い液、リンパ液、尿、大便、唾液などが例示される。血液試料は、血漿、血清または全血である。液状試料は、固体試料を可溶化したものであってもよい。固体試料としては、切除組織などが例示される。被検物質の検出は、インビトロでの検体中の被検物質の検出およびインビボでの検体中の被検物質の検出を含む。
【0025】
本明細書中、被検物質とは、後述の化学発光プローブ、組成物、試薬、試薬キット、または被検物質測定方法によって検出される、検体中の物質をいう。被検物質としてはタンパク質、ペプチド、核酸などが挙げられる。これらの被検物質は、検体中に遊離状態で存在していてもよいし、細胞、リポタンパク質、ベシクル、ウイルスなどの表面や内部に存在していてもよい。
【0026】
２．式［Ｉ］で表される化合物またはその塩
式［Ｉ］において、Ａが、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である化合物が、高い発光効率を示すことを見出した。
式［Ｉ］において、Ａが、－Ｃ≡Ｃ－Ｅ（式中、Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－アルキル、または置換基で置換されていてもよいアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、もしくは３Ｈ－インドール－１－イウム基である）、または、電子求引基で置換されているアリール基である化合物が、高い発光効率を示すことを見出した。
【0027】
Ａは、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合していることが好ましく、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合していることがより好ましい。
【0028】
一実施形態において、Ａは、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合した、－Ｃ≡Ｃ－Ｅであることが好ましく、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、－Ｃ≡Ｃ－Ｅであることがより好ましい。
【0029】
Ｅが、置換基で置換されているアリール基、ピリジニル基、ピリジニウム基、３Ｈ－インドリル基、または３Ｈ－インドール－１－イウム基である場合、当該置換基の数は、１つであっても複数（例えば、２つ、３つ、または４つ）であってもよい。
【0030】
Ｅは、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルであることが好ましく、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、または－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキルであることがより好ましく、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、または－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキルであることがさらに好ましく、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＯＯＣＨ３、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、または－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＣＨ３であることがさらにより好ましい。
【0031】
一実施形態において、Ａは、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位またはパラ位に結合した、電子求引基で置換されているアリール基であることが好ましく、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、電子求引基で置換されているアリール基であることがより好ましい。前記アリール基は、フェニル基などのＣ６－１０アリール基であることが好ましい。前記電子求引基は、－ＣＯＯＲ８、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯ－Ｒ９、および－ＳＯ２－Ｒ１０からなる群より選ばれることが好ましく、－ＣＯＯＲ８であることがより好ましく、－ＣＯＯＨであることがさらに好ましい。前記電子求引基の数は、１つであっても複数（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）であってもよい。
【0032】
Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、各々独立して、ＨまたはＣ１－１８アルキル基であることが好ましく、ＨまたはＣ１－８アルキル基であることがより好ましい。
【0033】
Ｒ１は、好ましくはＣ１－６アルキル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基などのＣ１－４アルキル基である。
【0034】
Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、分岐状Ｃ３－１８アルキル基またはＣ３－７シクロアルキル基であることが好ましい。分岐状Ｃ３－１８アルキル基としては、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、イソヘキシル基、イソヘプチル基、イソオクチル基、２－エチルヘキシル基、イソノニル基、イソデシル基、イソラウリル基、イソトリデシル基、イソミリスチル基、イソペンタデシル基、イソパルミチル基、イソヘプタデシル基、イソステアリル基などが挙げられる。
【0035】
Ｒ２およびＲ３は、例えば、これらが結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい環、好ましくは置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環、より好ましくは置換基で置換されていてもよい架橋環を形成している。前記架橋環は、炭素数５～１０個の架橋環であることが好ましく、当該架橋環としては、例えば、ノルボルナン環、キュバン環、アダマンタン環などが挙げられる。これらのうち、アダマンタン環が特に好ましい。前記置換基は、好ましくはハロ基、より好ましくはクロロ基である。前記環が前記置換基で置換されている場合、前記置換基の数は、１つであっても複数（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）であってもよい。
【0036】
Ｒ４は、好ましくはＨであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基、－ＯＨ、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＯ－Ｃ１－１８アルキル、－ＣＯＨ、－ＣＯ－Ｃ１－１８アルキル、－ＳＯ２Ｈ、もしくは－ＳＯ２－Ｃ１－１８アルキルであり、より好ましくはＨであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであり、さらに好ましくはＨであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮである。
【0037】
Ｘは、Ｈ、トリアルキルシリル基、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、３，４，６－トリメチル－２，５－ジオキソベンジル基、２－（３－カルボキシ－４－ニトロフェニル）－Ｓ－Ｓ－エチルオキシカルボニル基、４－アジドベンジルオキシカルボニル基、あるいは、式Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、またはＸ７：
（式中、
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基であることが好ましい。
【化10】
Ｒ７は、１つのアミノ酸残基、または、複数のアミノ酸残基が連結した基であり、これらの基のＣ末端がＮＨに連結しており、
波線は、Ｌとの結合点を表す）
で表される基であることが好ましい。
【0038】
Ｙ、Ｌ、およびＸは、下記（１）～（４）のいずれかの組合せが好ましい。
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘがケージング基、好ましくは式Ｘ３で表される基である；
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘがケージング基、好ましくは式Ｘ１またはＸ２で表される基である。
（１）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨである；
（２）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが不存在であり、Ｘがケージング基、好ましくは式Ｘ３で表される基である；
（３）Ｙが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｌが式Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３もしくはＬ４で表されるリンカーであり、Ｍが－Ｏ－または－ＮＨ－であり、Ｘがケージング基である；あるいは
（４）Ｙが不存在であり、Ｌが不存在であり、Ｘがケージング基、好ましくは式Ｘ１またはＸ２で表される基である。
【0039】
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩は、溶液中においてイオンの状態であり得る。例えば、当該化合物またはその塩が、カルボキシ基またはヒドロキシ基を有する場合は、溶液中において－ＣＯＯ－または－Ｏ－となり得る。
【0040】
一実施形態において、
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルであり、
Ｒ２およびＲ３が、各々独立して、分枝状Ｃ3－18アルキル基またはＣ3－7シクロアルキル基であるか、これらと結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環を形成しており；
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、フェニル、－Ｃ６Ｈ４Ｏ－Ｃ１－８アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ１－８アルキル、４－ピリジニル、メチルピリジニウム－４－イル、３，３－ジメチル－３Ｈ－インドリル、または１，３，３－トリメチル－３Ｈ－インドール－１－イウム－２－イルであり、
Ｒ２およびＲ３が、各々独立して、分枝状Ｃ3－18アルキル基またはＣ3－7シクロアルキル基であるか、これらと結合する炭素原子と一緒になって、置換基で置換されていてもよい縮合環、スピロ環、または架橋環を形成しており；
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位もしくはパラ位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
【0041】
一実施形態において、
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、または－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキルであり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており；
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
Ｅが、－ＣＯＯＨ、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキル、－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨ、または－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯ－Ｃ1－4アルキルであり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており；
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
【0042】
一実施形態において、
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
（ｉ）Ｅが－Ｈであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基である；または
（ｉｉ）Ｅが－ＣＯＯＨであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基である；または
（ｉｉｉ）Ｅが－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基であり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており、
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－Ｃ≡Ｃ－Ｅであり、
（ｉ）Ｅが－Ｈであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基である；または
（ｉｉ）Ｅが－ＣＯＯＨであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基である；または
（ｉｉｉ）Ｅが－Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨであり、Ｙが－Ｏ－であり、Ｌが不存在であり、ＸがＨ、トリアルキルシリル基、もしくは式Ｘ３で表される基であり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており、
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
【0043】
一実施形態において、
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－ＣＯＯＨで置換されているアリール基であり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており、
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
Ａが、－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した－ＣＯＯＨで置換されているアリール基であり、
Ｒ２およびＲ３が、これらと結合する炭素原子と一緒になって、ハロ基で置換されていてもよいアダマンタン環を形成しており、
Ｒ４が、Ｈであるか、または－Ｙ－Ｌ－Ｘ基に対してオルト位に結合した、ハロ基もしくは－ＣＮであることが好ましい。
【0044】
式［Ｉ］で表される化合物は、好ましくは下記式［Ｉ－Ａ］、［Ｉ－Ｂ］、［Ｉ－Ｃ］、［Ｉ－Ｄ］、［Ｉ－Ｅ］、［Ｉ－Ｆ］、［Ｉ－Ｇ］、［Ｉ－Ｈ］、［Ｉ－Ｉ］、［Ｉ－Ｊ］、［Ｉ－Ｋ］、［Ｉ－Ｌ］、［Ｉ－Ｍ］、［Ｉ－Ｎ］、または［Ｉ－Ｏ］で表される化合物である：
【0045】
【化11】
Ａｒは、電子求引基で置換されているアリール基であり、
Ｘ１は、式Ｘ１またはＸ２で表される基であり、
Ｘ２は、Ｈ、トリアルキルシリル基、または式Ｘ３で表される基であり、
Ｘ３は、Ｈ、トリアルキルシリル基、または、式Ｘ３、Ｘ５、Ｘ６、もしくはＸ７で表される基であり、
Ｘ４は、（２，４－ジニトロフェニル）スルホニル基、または、式Ｘ４で表され且つＲ７が複数のアミノ酸残基が連結し、酵素により切断可能なアミノ酸配列を有する基であり、
Ａ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｌ、およびＹは、前記と同じである）。
【0046】
式［Ｉ］で表される化合物は、さらに好ましくは下記式［Ｉ－Ｐ］、［Ｉ－Ｑ］、［Ｉ－Ｒ］または［Ｉ－Ｓ］で表される化合物である：
【化12】
【0047】
式［Ｉ］で表される化合物は、例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはラセミ混合物の形態で存在し得る。
【0048】
式［Ｉ］で表される化合物の塩は、無機塩であってもよく、有機塩であってもよい。前記塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例：ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩）、アルカリ土類金属塩（例：カルシウム塩、マグネシウム塩）、他の金属塩（例：アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩）、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩、アミン塩（例：ｔ－オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩）、無機酸塩（例：フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩）、有機酸塩（例：メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩）、アミノ酸塩（例：グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩）などが挙げられる。
【0049】
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩は、フルオロフォアと結合してコンジュゲートを形成していてもよい。フルオロフォアとしては、例えば、フルオレセイン色素（例：ＦＡＭ）、ローダミン色素（例：ＴＡＭＲＡ）、クマリン色素、シアニン色素、ピレン色素、ボロンジピロメテン色素などが挙げられる。
【0050】
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩は、特に限定されるものではないが、例えば、下記の反応式に従って製造することができる。
（式中、
Ｈａｌｏは、ハロ基であり、
Ｒ５は、Ｈ、あるいは式Ｘ１またはＸ２で表される基（但し、破線はＡとの結合点を表す）であり、
Ｑ１およびＱ２は、各々独立して、１つ以上のハロ基で置換されていてもよいアルキル基であり、
Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｌ、およびＹは、前記と同じである）。
【化13】
Ｈａｌｏは、ハロ基であり、
Ｒ５は、Ｈ、あるいは式Ｘ１またはＸ２で表される基（但し、破線はＡとの結合点を表す）であり、
Ｑ１およびＱ２は、各々独立して、１つ以上のハロ基で置換されていてもよいアルキル基であり、
Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｌ、およびＹは、前記と同じである）。
【0051】
工程（ｉ）は、ホーナー・ワズワース・エモンズ反応である。典型的には、式［ＶＩＩ］で表される化合物をアルコール、テトラヒドロフラン、１，２－ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシドなどの溶媒に溶解し、水素化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、炭酸カリウム、ｎ－ブチルリチウムなどの塩基を添加してアニオンを発生させた後、式［ＶＩ］で表される化合物を添加することにより反応を行う。当該反応は、例えば－７８℃～還流温度で実施することができる。
【0052】
工程（ｉｉ）は、ハロゲン化反応である。典型的には、式［Ｖ］で表される化合物をトルエンなどの溶媒に溶解し、Ｎ－ヨードスクシンイミドなどのハロゲン化剤を添加することにより反応を行う。当該反応は、例えば０～３０℃で実施することができる。
【0053】
工程（ｉｉｉ）は、カップリング反応［例えば薗頭カップリング反応、鈴木カップリング反応］である。薗頭カップリングの場合、典型的には、式［ＩＶ］で表される化合物と、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）などのパラジウム触媒と、ヨウ化銅（Ｉ）などの銅塩と、イソプロピルアミン、トリエチルアミンなどの塩基（溶媒にもなり得る）との混合物に、式［ＩＩＩ］で表され且つＲ５がＨである化合物を添加することにより反応を行う。前記混合物には、トリアルキルホスフィン、トリアリールホスフィンなどの配位子を添加してもよい。前記反応は、例えば５～３０℃で実施することができる。鈴木カップリングの場合、典型的には、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）などのパラジウム触媒、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシビフェニル（Ｓｐｈｏｓ）などの配位子、およびリン酸カリウムなどの塩基の存在下、式［ＩＶ］で表される化合物を、式［ＩＩＩ］で表され且つＲ５が式Ｘ１またはＸ２で表される基である化合物と反応させる。前記反応は、例えば、水と、テトラヒドロフラン、トルエン、ジオキサンなどの有機溶媒との混合溶媒中で実施することができる。また、前記反応は、例えば５～１００℃で実施することができる。
【0054】
工程（ｉｖ）は、式［ＩＩ］で表される化合物を一重項酸素と反応させる工程である。当該反応は、例えば、溶媒（例：ジクロロメタン、ジクロロエタン、四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素および／またはメタノール、エタノールなどのアルコール）および光増感剤（例：メチレンブルー、ローズベンガル、テトラフェニルポルフィン）の存在下、式［ＩＩ］で表される化合物を、酸素雰囲気中で光照射する方法により実施することができる。当該反応は、例えば５～３０℃で実施することができる。
【0055】
各工程の反応に供する化合物が、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基などを有する場合、これらの基を、必要に応じて汎用の保護基で保護し、反応後に保護基を脱保護してもよい。各工程の反応生成物は、必要に応じて、洗浄、蒸留、ろ過、クロマトグラフィー、再結晶などにより精製してもよい。
【0056】
３．化学発光プローブ
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩は、インビトロ又はインビボでの被検物質の検出のためのプローブ（以下、「化学発光プローブ」ともいう）として用いられ得る。インビトロでの検体中の被検物質の検出は、例えば酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）により行うことができる。インビボでの被検物質の検出は、インビボイメージングと呼ばれ、例えば米国特許出願公開第２０１９／２９０７８７号に記載の方法によることができる。
式［Ｉ］で表される化合物またはその塩は、インビトロ又はインビボでの被検物質の検出のためのプローブ（以下、「化学発光プローブ」ともいう）として用いられ得る。インビトロでの検体中の被検物質の検出は、例えば酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）により行うことができる。インビボでの被検物質の検出は、インビボイメージングと呼ばれ、例えば米国特許出願公開第２０１９／２９０７８７号に記載の方法によることができる。
【0057】
４．組成物
一実施形態において、組成物は、式［Ｉ］で表される化合物またはその塩と、溶媒とを含む。溶媒は、有機溶媒であってもよいが、水性溶媒であってもよい。水性溶媒としては、例えば、水、生理食塩水、緩衝液などが挙げられる。緩衝液としては、例えば、ＨＥＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ＭＯＰＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳなどのグッド緩衝液、トリス塩酸緩衝液、オーレンベロナール緩衝液、イミダゾール塩酸緩衝液などが挙げられる。緩衝液に含まれる緩衝剤は１種であっても２種以上であってもよい。必要に応じて、緩衝液にグリシンを添加してもよい。
一実施形態において、組成物は、式［Ｉ］で表される化合物またはその塩と、溶媒とを含む。溶媒は、有機溶媒であってもよいが、水性溶媒であってもよい。水性溶媒としては、例えば、水、生理食塩水、緩衝液などが挙げられる。緩衝液としては、例えば、ＨＥＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ＭＯＰＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳなどのグッド緩衝液、トリス塩酸緩衝液、オーレンベロナール緩衝液、イミダゾール塩酸緩衝液などが挙げられる。緩衝液に含まれる緩衝剤は１種であっても２種以上であってもよい。必要に応じて、緩衝液にグリシンを添加してもよい。
【0058】
前記組成物において、水性溶媒の量は、式［Ｉ］で表される化合物またはその塩１００質量部に対して、例えば１０４～１０１０質量部、好ましくは１０５～１０９質量部、さらに好ましくは１０６～１０８質量部である。
【0059】
前記組成物は、添加剤をさらに含んでいてもよい。添加剤としては、例えば、界面活性剤、塩などが挙げられる。添加剤は１種単独で、または２種以上を組み合わせて使用することができる。
【0060】
前記組成物は、界面活性剤を含まなくても高い発光効率を示すが、界面活性剤を含むことにより、さらに高い発光効率を示し得る。界面活性剤としては、界面活性を有する限り、特に限定されない。界面活性剤は、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、または両性イオン界面活性剤であることができる。これらのうち、非イオン界面活性剤が好ましい。非イオン界面活性剤としては、例えばソルビタンモノラウレートなどのソルビタン脂肪酸エステル；Tween（商標）－20、Tween（商標）－40、Tween（商標）－60、Tween（商標）－80などのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；グリセリンモノステアレートなどのグリセリン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレングリセリルモノステアレートなどのポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル；ポロキサマー188などのポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール；Triton（商標） X-100などのポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルなどが挙げられる。
【0061】
界面活性剤の量は、式［Ｉ］で表される化合物またはその塩１００質量部に対して、例えば１０～１０６質量部、好ましくは１００～１０５質量部である。
【0062】
塩としては、例えば、塩化マグネシウムなどの塩化物、酢酸ナトリウムなどの酢酸塩などが挙げられる。塩の量は、式［Ｉ］で表される化合物またはその塩１００質量部に対して、例えば１～１０４質量部、好ましくは１０～１０００質量部である。
【0063】
当該組成物は、インビトロ又はインビボでの被検物質の検出に用いられ得る。インビトロでの検体中の被検物質の検出は、例えばＥＩＡにより行うことができる。インビボでの被検物質の検出は、インビボイメージングと呼ばれ、例えば米国特許出願公開第２０１９／２９０７８７号に記載の方法によることができる。
【0064】
５．化学発光方法
一実施形態において、化学発光方法は、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩を、アンケージング物質と反応させる工程を含む。当該アンケージング物質としては、上記「１．定義」で記載したものと同じものを使用することができる。当該アンケージング物質は、好ましくは酵素である。例えば、式［Ｉ］のＸが式Ｘ３で表されるケージング基である場合、当該アンケージング物質は、アルカリホスファターゼであり得る。
一実施形態において、化学発光方法は、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩を、アンケージング物質と反応させる工程を含む。当該アンケージング物質としては、上記「１．定義」で記載したものと同じものを使用することができる。当該アンケージング物質は、好ましくは酵素である。例えば、式［Ｉ］のＸが式Ｘ３で表されるケージング基である場合、当該アンケージング物質は、アルカリホスファターゼであり得る。
【0065】
前記反応では、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩１００質量部に対して、アンケージング物質は、例えば１０―１０～１０１０質量部、好ましくは１０―７～１０７質量部使用することができる。
【0066】
前記反応の反応温度および反応時間は、反応が進行する限り特に制限されない。反応温度としては、酵素の至適温度であることができ、例えば２５～４５℃である。反応時間としては、例えば３０秒～３時間であり、好ましくは５０秒～２時間、さらに好ましくは１６０秒～２時間である。
【0067】
６．化学発光シグナルの測定方法
一実施形態において、化学発光シグナルの測定方法は、上記「５．化学発光方法」に記載の化学発光方法により発生した化学発光シグナルを測定する工程を含む。当該工程において、化学発光シグナルの測定には、シグナルの有無を検出すること、およびシグナルの強度を定量することを含む。化学発光シグナルの測定は公知の方法により行うことができる。具体的には、市販のルミノメーター、化学発光免疫測定（ＣＬＩＡ）用の装置などを用いることができる。
一実施形態において、化学発光シグナルの測定方法は、上記「５．化学発光方法」に記載の化学発光方法により発生した化学発光シグナルを測定する工程を含む。当該工程において、化学発光シグナルの測定には、シグナルの有無を検出すること、およびシグナルの強度を定量することを含む。化学発光シグナルの測定は公知の方法により行うことができる。具体的には、市販のルミノメーター、化学発光免疫測定（ＣＬＩＡ）用の装置などを用いることができる。
【0068】
７．試薬
式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩、当該化合物またはその塩からなる化学発光プローブ、あるいは、当該化合物またはその塩を含有する組成物は、試薬として提供され得る。当該試薬は、インビトロでの被検物質の検出に好適に用いられる。インビトロでの検体中の被検物質の検出は、例えばＥＩＡにより行うことができる。前記化学発光プローブおよび組成物は、それぞれ、上記「３．化学発光プローブ」および「４．組成物」で記載したものを使用することができる。
式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩、当該化合物またはその塩からなる化学発光プローブ、あるいは、当該化合物またはその塩を含有する組成物は、試薬として提供され得る。当該試薬は、インビトロでの被検物質の検出に好適に用いられる。インビトロでの検体中の被検物質の検出は、例えばＥＩＡにより行うことができる。前記化学発光プローブおよび組成物は、それぞれ、上記「３．化学発光プローブ」および「４．組成物」で記載したものを使用することができる。
【0069】
前記試薬において、式［Ｉ］のＸがケージング基である化合物またはその塩の濃度は、被検物質の種類および測定条件などに応じて適宜設定することができ、例えば０．０１μＭ～１０ｍＭ、好ましくは０．１μＭ～１ｍＭである。
【0070】
前記試薬は、通常、溶媒を含んでいる。溶媒としては、例えば、上記「４．組成物」で記載した溶媒と同じものが挙げられる。また、前記試薬は、他の任意成分、例えば、防腐剤、抗酸化剤、安定剤などの添加剤を含んでいてもよい。
【0071】
８．試薬キット
上記の試薬は、通常容器に収容されてユーザに提供される。当該容器は、箱に梱包され、試薬キットとしてユーザに提供されてもよい。当該箱には、試薬キットの使用方法などを記載した添付文書を同梱してもよい。図４に前記試薬キットの提供形態の一例を示す。当該試薬キット１１において、１２は梱包箱を示し、１３は前記試薬を収容した容器を示し、１４は添付文書を示す。
上記の試薬は、通常容器に収容されてユーザに提供される。当該容器は、箱に梱包され、試薬キットとしてユーザに提供されてもよい。当該箱には、試薬キットの使用方法などを記載した添付文書を同梱してもよい。図４に前記試薬キットの提供形態の一例を示す。当該試薬キット１１において、１２は梱包箱を示し、１３は前記試薬を収容した容器を示し、１４は添付文書を示す。
【0072】
試薬キットの別の実施形態は、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩、当該化合物またはその塩からなる化学発光プローブ、あるいは、当該化合物またはその塩を含有する組成物を含む第１試薬と、前記アンケージング物質を含む第２試薬とを含む。第１試薬は、上記「７．試薬」で記載したものを使用することができる。
【0073】
第２試薬において、アンケージング物質としては、上記「１．定義」で記載したものと同じものが挙げられる。アンケージング物質の濃度は、当該アンケージング物質の種類および測定条件などに応じて適宜設定することができ、例えば１０―１８Ｍ～１Ｍ、好ましくは１０―１５Ｍ～１Ｍである。
【0074】
第２試薬は、通常、溶媒を含んでいる。溶媒としては、例えば、上記「４．組成物」で記載した溶媒と同じものが挙げられる。また、前記試薬は、他の任意成分、例えば、防腐剤、抗酸化剤、安定剤などの添加剤を含んでいてもよい。
【0075】
第１試薬および第２試薬は、別々の容器に収容し、当該容器を箱に梱包してユーザに提供してもよい。当該箱には、試薬キットの使用方法などを記載した添付文書を同梱してもよい。図５に、前記試薬キットの提供形態の一例を示す。当該試薬キット２１において、２２は箱梱包を示し、２３ａは第１試薬を収容した容器、２３ｂは第２試薬を収容した容器、２４は添付文書を示す。
【0076】
９．被検物質測定方法
一実施形態において、検体中の被検物質を測定する方法は、
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してアンケージング物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記アンケージング物質を、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む。
一実施形態において、検体中の被検物質を測定する方法は、
固相上に、前記被検物質と、前記被検物質に結合する捕捉体と、前記被検物質に結合してアンケージング物質を含む検出体とを含む免疫複合体を形成する工程と、
前記免疫複合体中の前記アンケージング物質を、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩と反応させ、化学発光シグナルを発生させる工程と、
前記化学発光シグナルを測定することにより、前記被検物質を測定する工程と、
を含む。
【0077】
検体中の被検物質を測定する方法は、公知の免疫学的測定方法に基づく方法であればよく、好ましくは酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ法）、さらに好ましくはサンドイッチＥＬＩＳＡ法に基づく方法である。また、米国特許第５２３６８４９号公報に記載の免疫複合体転移法を用いることもできる。
【0078】
免疫複合体を形成する工程において、固相としては、特に限定されるものではないが、例えば、ラテックス、ゴム、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、スチレン－ブタジエン共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ポリアクリルアミド、ポリメタクリレート、スチレン－メタクリレート共重合体、ポリグリシジルメタクリレート、アクロレイン－エチレングリコールジメタクリレート共重合体、ポリビニリデンジフルオライド(PVDF)、シリコーン、アガロース、ゼラチン、赤血球、シリカゲル、ガラス、不活性アルミナ、磁性体などが挙げられる。これらは１種単独であっても２種以上を組み合わせてもよい。固相の形状としては、例えば、粒子、マイクロプレート、マイクロチューブ、膜、試験管などが挙げられ、それらの中でも粒子が特に好ましい。一実施形態において、固相は磁性粒子であることが好ましい。当該磁性粒子は、基材としてＦｅ２Ｏ３および／またはＦｅ３Ｏ４、コバルト、ニッケル、フィライト、マグネタイトなどを含む粒子が挙げられる。
【0079】
被検物質に結合する捕捉体は、固相上に結合して被検物質を捕捉し得る限り、特に制限されないが、例えば、抗原、抗体などであり得る。検出体は、被検物質に結合してアンケージング物質を含み得る。当該アンケージング物質としては、上記「１．定義」で記載したものと同じものが挙げられ、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩と反応して化学発光シグナルを発生させる。検出体としては、例えば、アンケージング物質で標識された抗体などが挙げられる。
【0080】
被検物質が抗体Ａである場合、抗原が抗体Ａを捕捉するための捕捉体として機能する。検体が抗体Ａを含む場合、当該検体と抗原と検出用抗体Ｂとを含む免疫複合体が形成され得る。当該免疫複合体を含む溶液と、抗原を固定できる固相とを接触させることにより、当該免疫複合体を固相上に形成できる。あるいは、抗原があらかじめ固定された固相と、検体と、検出用抗体とを接触させることにより、上記免疫複合体を固相上に形成できる。
【0081】
捕捉体の固相への固定の態様は、特に限定されない。例えば、捕捉体と固相とを直接的に結合させてもよいし、捕捉体と固相とを別の物質を介して間接的に結合させてもよい。直接的な結合としては、例えば、物理的吸着、架橋剤による共有結合などが挙げられる。間接的な結合としては、例えば、ビオチン類（ビオチン、および、デスチオビオチン、オキシビオチンなどのビオチン類縁体を含む）とアビジン類（アビジン、および、ストレプトアビジン、タマビジン（登録商標）などのアビジン類縁体を含む）の組合せ、ハプテンと抗ハプテン抗体（例：２，４－ジニトロフェニル基（ＤＮＰ基）を有する化合物と抗ＤＮＰ抗体）の組合せなどが利用できる。一実施形態において、あらかじめビオチン類で修飾した捕捉体と、あらかじめアビジン類を結合した固相とを用いることにより、ビオチン類とアビジン類との結合を介して、捕捉体を固相上に固定できる。
【0082】
免疫複合体の形成工程と化学発光シグナルを発生させる工程との間に、複合体を形成していない未反応の遊離成分を除去するＢ／Ｆ（Ｂｏｕｎｄ／Ｆｒｅｅ）分離を行ってもよい。未反応の遊離成分とは、免疫複合体を構成しない成分をいう。例えば、被検物質と結合しなかった捕捉体および検出体などが挙げられる。Ｂ／Ｆ分離の手段は特に限定されないが、固相が粒子であれば、遠心分離によりＢ／Ｆ分離ができる。固相がマイクロプレートやマイクロチューブなどの容器であれば、未反応の遊離成分を含む液を除去することによりＢ／Ｆ分離ができる。また、固相が磁性粒子の場合は、磁石で磁性粒子を磁気的に拘束した状態でノズルによって未反応の遊離成分を含む液を吸引除去することによりＢ／Ｆ分離ができ、自動化の観点で好ましい。未反応の遊離成分を除去した後、免疫複合体を捕捉した固相をＰＢＳなどの適切な水性媒体で洗浄してもよい。
【0083】
化学発光シグナルを発生させる工程において、式［Ｉ］においてＸがケージング基である化合物またはその塩１００質量部に対して、アンケージング物質の量が、例えば、１０―１０～１０１０質量部、好ましくは１０―７～１０７質量部となるようにして、両者を反応させることが好ましい。
【0084】
化学発光シグナルを測定する工程は、例えば、上記「６．化学発光シグナルの測定方法」に記載の方法により実施することができる。
【実施例0085】
以下に、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【0086】
＜合成例＞
（参考例１）
（参考例１）
【0087】
【化14】
【0088】
３－ヒドロキシベンズアルデヒド（５０．０ｇ、０．４１ｍｏｌ）のメタノール（ＭｅＯＨ）溶液（５００ｍＬ）にオルトぎ酸トリメチル（１３０ｇ、１．２２ｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムトリブロミド（Ｂｕ４ＮＢｒ３）（１５．０ｇ、０．０３ｍｏｌ）を加えて、室温で終夜撹拌した。反応溶液を水に加えて、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、３－（ジメトキシメチル）フェノールを黄色液体として得た。（７５．０ｇ、ｑｕａｎｔ．）
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２１－７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．９９－７．０１（ｍ、２Ｈ）、６．８５－６．８７（ｍ、１Ｈ）、５．３６（ｓ、１Ｈ）、３．３５（ｓ、６Ｈ）．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２１－７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．９９－７．０１（ｍ、２Ｈ）、６．８５－６．８７（ｍ、１Ｈ）、５．３６（ｓ、１Ｈ）、３．３５（ｓ、６Ｈ）．
【0089】
（参考例２）
【0090】
【化15】
【0091】
参考例１の化合物（７５．０ｇ）とイミダゾール（４１．８ｇ、０．６１ｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液（７５０ｍＬ）にｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（ＴＢＳＣｌ）（７４．１ｇ、０．４９ｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応溶液を水に加えて、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５０：１～２０：１）で精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（３－（ジメトキシメチル）フェノキシ）ジメチルシランを無色液体として得た（８０．０ｇ、６９％（２ステップ））。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２３（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｓ、１Ｈ）６．８０（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｓ、１Ｈ）、３．３３（ｓ、９Ｈ）、１．００（ｓ、６Ｈ）、０．２１（ｓ、６Ｈ）．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２３（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｓ、１Ｈ）６．８０（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｓ、１Ｈ）、３．３３（ｓ、９Ｈ）、１．００（ｓ、６Ｈ）、０．２１（ｓ、６Ｈ）．
【0092】
（参考例３）
【0093】
【化16】
【0094】
参考例２の化合物（８０．０ｇ、０．２８ｍｏｌ）と亜りん酸トリメチル（５２．７ｇ、０．４２ｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（８００ｍＬ）を０℃に冷却し、塩化チタン（ＩＶ）（８０．５ｇ、０．４２ｍｏｌ）を滴下した。反応溶液を０℃で１時間撹拌した。反応溶液を水に加えて、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３０／１～１０／１）で精製し、ジメチル（（３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）（メトキシ）メチル）ホスホネートを無色液体として得た（５７．０ｇ、５６％）。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２４（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）６．８３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．６６－３．７３（ｍ、６Ｈ）、３．３９（ｓ、３Ｈ）、０．９９（ｓ、９Ｈ）、０．２１（ｓ、６Ｈ）．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２４（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）６．８３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．６６－３．７３（ｍ、６Ｈ）、３．３９（ｓ、３Ｈ）、０．９９（ｓ、９Ｈ）、０．２１（ｓ、６Ｈ）．
【0095】
（参考例４）
【0096】
【化17】
【0097】
参考例３の化合物（５７．０ｇ、０．１６ｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液（５７０ｍＬ）を－７８℃に冷却し、窒素雰囲気下でｎ－ブチルリチウム（ｎ－ＢｕＬｉ）（２．５Ｍ、１１０ｍＬ、０．２８ｍｏｌ）を加えた。反応溶液を窒素雰囲気下、－７８℃で１時間撹拌した。５－クロロ－２－アダマンタノン（３５．０ｇ、０．１９ｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン溶液（１５０ｍＬ）を－７８℃で滴下して加えた。反応溶液を窒素雰囲気下、－７８℃で３０分間撹拌した。反応溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液に加えて、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３０／１～１０／１）で精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（３－（（Ｚ）－（（１Ｒ、３Ｓ、５Ｓ、７Ｓ）－５－クロロアダマンタン－２－イリデン）（メトキシ）メチル）フェノキシ）ジメチルシランを無色液体として得た（３０．０ｇ、４５％）。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２３（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８－６．８３（ｍ、２Ｈ）３．４６（ｓ、１Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、２．７９（ｓ、１Ｈ）、２．１６－２．２８（ｍ、７Ｈ）、１．７１－１．８５（ｍ、４Ｈ）．１．００（ｓ、９Ｈ）、０．２２（ｓ、６Ｈ）．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２３（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８－６．８３（ｍ、２Ｈ）３．４６（ｓ、１Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、２．７９（ｓ、１Ｈ）、２．１６－２．２８（ｍ、７Ｈ）、１．７１－１．８５（ｍ、４Ｈ）．１．００（ｓ、９Ｈ）、０．２２（ｓ、６Ｈ）．
【0098】
（参考例５）
【0099】
【化18】
【0100】
参考例４の化合物（３０．０ｇ、７１．６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３００ｍＬ）を０℃に冷却し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）のテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ、８０ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を０℃で３０分間撹拌した。反応溶液を水に加えて、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、３－（（Ｚ）－（（１Ｒ、３Ｓ、５Ｓ、７Ｓ）－５－クロロアダマンタン－２－イリデン）（メトキシ）メチル）フェノールを無色液体として得た（２４ｇ、ｑｕａｎｔ．）。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２１－７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．８１－６．８６（ｍ、３Ｈ）、３．４５（ｓ、１Ｈ）、３．３２（ｓ、３Ｈ）、２．８１（ｓ、１Ｈ）、２．１５－２．３０（ｍ、７Ｈ）、１．８５－１．８６（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．７９（ｍ、３Ｈ）．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．２１－７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．８１－６．８６（ｍ、３Ｈ）、３．４５（ｓ、１Ｈ）、３．３２（ｓ、３Ｈ）、２．８１（ｓ、１Ｈ）、２．１５－２．３０（ｍ、７Ｈ）、１．８５－１．８６（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．７９（ｍ、３Ｈ）．
【0101】
（参考例６）
【0102】
【化19】
【0103】
参考例５の化合物（２４ｇ）のトルエン溶液（５００ｍＬ）を０℃に冷却し、Ｎ－ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）（１７．７ｇ、７８．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌した。反応溶液を水に加えて、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２０／１～３／１）で精製し、５－（（Ｚ）－（（１Ｒ、３Ｓ、５Ｓ、７Ｓ）－５－クロロアダマンタン－２－イリデン）（メトキシ）メチル）－２－ヨードフェノールを白色固体として得た（９．３ｇ、３０％（２ステップ））。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．６６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９４（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄｄ、Ｊ＝１．６、８．０Ｈｚ１Ｈ）、５．４１（ｓ、１Ｈ）、３．４５（ｓ、１Ｈ）、３．３１（ｓ、３Ｈ）、２．８０（ｓ、１Ｈ）、２．１５－２．２７（ｍ、７Ｈ）、１．８５－１．８６（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．７８（ｍ、３Ｈ）．Ｍａｓｓ Ｃａｌｃｄ．：４３０；ＭＳ Ｆｏｕｎｄ：４３１［Ｍ＋Ｈ］＋．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．６６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９４（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄｄ、Ｊ＝１．６、８．０Ｈｚ１Ｈ）、５．４１（ｓ、１Ｈ）、３．４５（ｓ、１Ｈ）、３．３１（ｓ、３Ｈ）、２．８０（ｓ、１Ｈ）、２．１５－２．２７（ｍ、７Ｈ）、１．８５－１．８６（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．７８（ｍ、３Ｈ）．Ｍａｓｓ Ｃａｌｃｄ．：４３０；ＭＳ Ｆｏｕｎｄ：４３１［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0104】
（参考例７）
【0105】
【化20】
【0106】
参考例６の化合物（４３０．７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）（１１５．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）、ヨウ化銅（Ｉ）（３８．１ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３）（５２．５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）、ジイソプロピルアミン（ｉＰｒ２ＮＨ）（２ｍＬ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（４ｍＬ）を混合し、アルゴン雰囲気下、室温で３０分間撹拌した。４－エチニル安息香酸メチル（３２０．４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を加え、８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却後、反応溶液をジクロロメタンで希釈し、セライト濾過した。有機層を１Ｎ塩酸、水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製し、式［ＩＩ－Ａ］で表される化合物を黄色固体として得た（２２２．４ｍｇ、４８％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４６１［Ｍ-Ｈ］－．
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４６１［Ｍ-Ｈ］－．
【0107】
（参考例８）
【0108】
【化21】
【0109】
亜りん酸トリアリル（Ｐ（ＯＡｌｌｙｌ）３）（７１．６μＬ、０．５１ｍｍｏｌ、６ｅｑ）の無水ジクロロメタン溶液（２ｍＬ）を０℃に冷却し、ヨウ素（１０８．５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、５ｅｑ）を加えた。０℃で５分間撹拌し、室温に戻した。参考例７の化合物（３９．６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とＤＭＡＰ（６２．７ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ、６ｅｑ）の無水ジクロロメタン溶液（２ｍＬ）に室温で滴下して加えた。室温で４０分間撹拌した後、ジクロロメタンで希釈し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｂ］で表される化合物を赤色液体として得た（２８．７ｍｇ、５５％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：６２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：６２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0110】
（参考例９）
【0111】
【化22】
【0112】
参考例８の化合物（１２７．１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）のテトラヒドロフラン溶液（３ｍＬ）にぎ酸（３８．５μＬ、１．０２ｍｍｏｌ、５ｅｑ）、トリエチルアミン（３４．１μＬ、０．２４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２３．６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加え、５０℃で１時間撹拌した。室温に冷却後、溶媒を減圧除去した。残渣をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１～３／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｃ］で表される化合物を黄色固体として得た（１６０．４ｍｇ、ｑｕａｎｔ．）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５２７［Ｍ－Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５２７［Ｍ－Ｈ］－。
【0113】
（実施例１）
【0114】
【化23】
【0115】
参考例９の化合物（６０．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とメチレンブルー（２ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）／メタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、酸素雰囲気下で光（ＬＥＤ、２５Ｗ、５０００Ｋ）を照射しながら４５分間撹拌した。反応溶液をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール＝１／１）で精製し、粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［Ｉ－Ｐ］で表される化合物を白色固体として得た（８．６ｍｇ、１３％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５５９［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５５９［Ｍ-Ｈ］－。
【0116】
（参考例１０）
【0117】
【化24】
【0118】
参考例６の化合物（１．２９ｇ、３．０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１７３．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）、ヨウ化銅（Ｉ）（５７．１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）、トリフェニルホスフィン（７８．７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）、ジイソプロピルアミン（５ｍＬ）、トリエチルアミン（１０ｍＬ）を混合し、アルゴン雰囲気下、室温で３０分間撹拌した。トリメチルシリルアセチレン（１．２４ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、９０℃で２時間撹拌した。室温に冷却後、反応溶液をジクロロメタンで希釈し、セライト濾過した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（１Ｍ、テトラヒドロフラン）を加えた。室温で２０分間撹拌し、溶媒を減圧除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｄ］で表される化合物を褐色固体として得た（８２０．２ｍｇ、８３％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３２７［Ｍ-Ｈ］－．
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３２７［Ｍ-Ｈ］－．
【0119】
（参考例１１）
【0120】
【化25】
【0121】
参考例１０の化合物（３２．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、脱水ピリジン（１６９．２μＬ、２．１０ｍｍｏｌ、２１ｅｑ）の脱水ジクロロメタン溶液（５ｍＬ）を０℃に冷却し、塩化ホスホリル（９３．２μＬ、１．０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を滴下して加えた。アルゴン雰囲気下、０℃で３．５時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。トルエンを加えて溶媒を減圧除去する操作を２回繰り返し、粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［ＩＩ－Ｅ］で表される化合物を白色固体として得た（１７．１ｍｇ、４２％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４０７［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４０７［Ｍ-Ｈ］－。
【0122】
（実施例２）
【0123】
【化26】
【0124】
参考例１１の化合物（１４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とローズベンガルＢポリスチレン結合型（２０ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）／メタノール（０．５ｍＬ）に加え、酸素雰囲気下で光（ＬＥＤ、２５Ｗ、５０００Ｋ）を照射しながら１時間撹拌した。反応溶液を綿栓ろ過し、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［Ｉ－Ｑ］で表される化合物を白色固体として得た（４．５ｍｇ、３０％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４３９［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４３９［Ｍ-Ｈ］－。
【0125】
（参考例１２）
【0126】
【化27】
【0127】
参考例１０の化合物（６１１．７ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とイミダゾール（２５３．３ｍｇ、３．７２ｍｍｏｌ、２ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１９ｍＬ）にｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（４２０．５ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加えた。反応溶液をアルゴン雰囲気下、室温で３０分間撹拌した。反応溶液にイミダゾール（１２６ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（２１０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、０．７ｅｑ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧除去し、残渣を得た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝２０／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｆ］で表される化合物を無色液体として得た（７２０．６ｍｇ、８７％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４４３［Ｍ+Ｈ］＋。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４４３［Ｍ+Ｈ］＋。
【0128】
（参考例１３）
【0129】
【化28】
【0130】
参考例１２の化合物（６８０．５ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）の脱水テトラヒドロフラン溶液（８ｍＬ）を－７８℃に冷却し、窒素雰囲気下でｎ－ブチルリチウムのｎ－ヘキサン溶液（２．６Ｍ、１．７７ｍＬ、４．６１ｍｏｌ、３ｅｑ）を滴下して加えた。反応溶液を窒素雰囲気下、－７８℃で３０分間撹拌した。クロロぎ酸メチル（５８９．９μＬ、７．６８ｍｍｏｌ、５ｅｑ）を加え、室温で1時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液をゆっくり加え、酢酸で２回抽出し、水、飽和食塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、残渣を得た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝２０／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｇ］で表される化合物を淡黄色液体として得た（７７４．１ｍｇ、ｑｕａｎｔ．）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５０１［Ｍ+Ｈ］＋
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５０１［Ｍ+Ｈ］＋
【0131】
（参考例１４）
【0132】
【化29】
【0133】
参考例１３の化合物（７５１．６ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（７．５ｍＬ）に、テトラブチルアンモニウムフルオリドのテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ、１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を加え、室温で２０分間撹拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、残渣を得た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｈ］で表される化合物を白色固体として得た（４５６．３ｍｇ、７９％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３８５［Ｍ+Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：３８５［Ｍ+Ｈ］－。
【0134】
（参考例１５）
【0135】
【化30】
【0136】
参考例１４の化合物（５０．３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、脱水ピリジン（２１９．９μＬ、２．７３ｍｍｏｌ、２１ｅｑ）の脱水ジクロロメタン溶液（２．６ｍＬ）を０℃に冷却し、塩化ホスホリル（１２１．２μＬ、１．３ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を滴下して加えた。アルゴン雰囲気下、０℃で４０分間撹拌し、溶媒を減圧除去した。トルエンを加えて溶媒を減圧除去する操作を２回繰り返し、残渣を得た。残渣を水（２ｍＬ）に懸濁し、水酸化カリウム（２１８．８ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ、３０ｅｑ）を加え、室温で５分間撹拌した。反応溶液をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［ＩＩ－Ｊ］で表される化合物を白色固体として得た（３６．６ｍｇ、６２％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４５１［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４５１［Ｍ-Ｈ］－。
【0137】
（実施例３）
【0138】
【化31】
【0139】
参考例１５の化合物（３６．６ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とローズベンガルＢポリスチレン結合型（３０ｍｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）／メタノール（２ｍＬ）に加え、酸素雰囲気下で光（ＬＥＤ、２５Ｗ、５０００Ｋ）を照射しながら２時間撹拌した。反応溶液を綿栓ろ過し、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［Ｉ－Ｒ］で表される化合物を白色固体として得た（１８．４ｍｇ、４７％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８３［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８３［Ｍ-Ｈ］－。
【0140】
（参考例１６）
【0141】
【化32】
【0142】
参考例６の化合物（２１５．４ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）安息香酸メチル（１９６．６ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）（２２．９ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）、ＳＰｈｏｓ（２０．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ），リン酸カリウム（２１２．３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、２ｅｑ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）を混合し、アルゴン雰囲気下、室温で２８時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｋ］で表される化合物を白色固体として得た（１６３．９ｍｇ、７５％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４３９［Ｍ-Ｈ］＋．
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：４３９［Ｍ-Ｈ］＋．
【0143】
（参考例１７）
【0144】
【化33】
【0145】
亜りん酸トリアリル（９６．１μＬ、０．６９ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）の無水ジクロロメタン溶液（２ｍＬ）を０℃に冷却し、ヨウ素（１３９．９ｍｇ、０．５５ｍｍｏ２ｅｑ）を加えた。０℃で５分間撹拌し、室温に戻した後、参考例７の化合物（１２１．９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とＤＭＡＰ（１０１．０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ、３ｅｑ）の無水ジクロロメタン溶液（３ｍＬ）に室温で滴下して加えた。室温で２時間撹拌した後、ジクロロメタンで希釈し、有機層を１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｌ］で表される化合物を得た（１１４．１ｍｇ、６９％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0146】
（参考例１８）
【化34】
【0147】
参考例１７の化合物（６０．４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍＬ）にぎ酸（１９．０μＬ、０．５０ｍｍｏｌ、５ｅｑ）、トリエチルアミン（１６．９μＬ、０．１２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１．７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加え、６０℃で１０分間撹拌した。室温に冷却後、溶媒を減圧除去した。残渣をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール＝４／１～１／１）で精製し、式［ＩＩ－Ｎ］で表される化合物を白色固体として得た（４４．１ｍｇ、８７％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５０３［Ｍ－Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５０３［Ｍ－Ｈ］－。
【0148】
（実施例４）
【0149】
【化35】
【0150】
参考例１８（３５．９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とメチレンブルー（２ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）／メタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、酸素雰囲気下で光（ＬＥＤ、２５Ｗ、５０００Ｋ）を照射しながら３０分間撹拌した。反応溶液をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール＝１／１０）で精製し、粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（溶離液Ａ：水、５ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：アセトニトリル、Ａ／Ｂ＝９０／１０－１０／９０（２０分間））で精製し、式［Ｉ－Ｓ］で表される化合物を白色固体として得た（２．９ｍｇ、８％）。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５３５［Ｍ-Ｈ］－。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：５３５［Ｍ-Ｈ］－。
【0151】
＜試験例１＞
１、２－ジオキセタン誘導体（実施例１～４、比較例１～２）のジメチルスルホキシド溶液（１ｍＭ、５μＬ）を反応溶液１５５μＬに加え、４２℃で１時間保温した。アルカリホスファターゼ１ｐｍｏｌを含む溶液２０μＬを加え、４２℃で１０時間発光シグナルを計測し、その積算値を算出した。反応溶液は緩衝液（塩化マグネシウムおよびSapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific社）を含む緩衝液（ｐＨ９．６））とＨＩＳＣＬ Ｒ４試薬（シスメックス株式会社）を２：１で混合したものを用いた。
１、２－ジオキセタン誘導体（実施例１～４、比較例１～２）のジメチルスルホキシド溶液（１ｍＭ、５μＬ）を反応溶液１５５μＬに加え、４２℃で１時間保温した。アルカリホスファターゼ１ｐｍｏｌを含む溶液２０μＬを加え、４２℃で１０時間発光シグナルを計測し、その積算値を算出した。反応溶液は緩衝液（塩化マグネシウムおよびSapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific社）を含む緩衝液（ｐＨ９．６））とＨＩＳＣＬ Ｒ４試薬（シスメックス株式会社）を２：１で混合したものを用いた。
【0152】
試験例１の結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、実施例１～４は、比較例１（ＣＤＰ－Star(商標)）および比較例２（ＡｑｕａＳｐａｒｋ（商標））に比べて、化学発光効率が高かった。
【0153】
＜試験例２＞
１、２－ジオキセタン誘導体（実施例１～４）のジメチルスルホキシド溶液を反応溶液１５５μＬに加え、４２℃で１時間保温した。アルカリホスファターゼを含む溶液２０μＬを加え、４２℃で５分間保温した後、化学発光強度を測定した。反応溶液は緩衝液（塩化マグネシウムおよびSapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific）を含む緩衝液（ｐＨ９．６））とＨＩＳＣＬ Ｒ４試薬（シスメックス株式会社）を２：１で混合したものを用いた。実施例３は、Sapphire-II（商標）Enhancerを添加したもの（S (+)）およびSapphire-II（商標）Enhancerを添加していないもの（S (-)）の２種類を用いた。
１、２－ジオキセタン誘導体（実施例１～４）のジメチルスルホキシド溶液を反応溶液１５５μＬに加え、４２℃で１時間保温した。アルカリホスファターゼを含む溶液２０μＬを加え、４２℃で５分間保温した後、化学発光強度を測定した。反応溶液は緩衝液（塩化マグネシウムおよびSapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific）を含む緩衝液（ｐＨ９．６））とＨＩＳＣＬ Ｒ４試薬（シスメックス株式会社）を２：１で混合したものを用いた。実施例３は、Sapphire-II（商標）Enhancerを添加したもの（S (+)）およびSapphire-II（商標）Enhancerを添加していないもの（S (-)）の２種類を用いた。
【0154】
実施例１～４の検出限界（Limit of Detection（LOD））は表１に示される通りであった。また、図２Ａ～２Ｅに示される通り、計測されたカウント値はアルカリホスファターゼの濃度に依存することがわかった。
【表1】
【0155】
＜試験例３＞
試験例１の条件で数時間経過後に、分光蛍光光度計 F-7000（株式会社 日立ハイテクサイエンス）で測定し、最大発光波長を測定した。
試験例１の条件で数時間経過後に、分光蛍光光度計 F-7000（株式会社 日立ハイテクサイエンス）で測定し、最大発光波長を測定した。
【0156】
実施例１～４の最大発光波長は表２に示される通りであった。
【0157】
【表2】
【0158】
＜試験例４＞
研究用全自動高感度免疫測定装置ＨＩ－１０００（シスメックス株式会社）とＢ型肝炎ウイルス表面抗原キット ＨＩＳＣＬ（商標） ＨＢｓＡｇ試薬（シスメックス株式会社）を用いてＨＩＳＣＬ（商標） ＨＢｓＡｇキャリブレータ（シスメックス株式会社）を測定した。実施例３の測定には、ＨＩＳＣＬ Ｒ５試薬の代わりに、１、２－ジオキセタン誘導体（実施例３）のジメチルスルホキシド溶液を緩衝液（塩化マグネシウムを含む緩衝液（ｐＨ９．６））に希釈し（実施例３の終濃度：93μM）、遮光条件下４２℃で１時間保温し、室温に戻したものを使用した。なお、当該緩衝液には、Sapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific）は含まれていなかった。
研究用全自動高感度免疫測定装置ＨＩ－１０００（シスメックス株式会社）とＢ型肝炎ウイルス表面抗原キット ＨＩＳＣＬ（商標） ＨＢｓＡｇ試薬（シスメックス株式会社）を用いてＨＩＳＣＬ（商標） ＨＢｓＡｇキャリブレータ（シスメックス株式会社）を測定した。実施例３の測定には、ＨＩＳＣＬ Ｒ５試薬の代わりに、１、２－ジオキセタン誘導体（実施例３）のジメチルスルホキシド溶液を緩衝液（塩化マグネシウムを含む緩衝液（ｐＨ９．６））に希釈し（実施例３の終濃度：93μM）、遮光条件下４２℃で１時間保温し、室温に戻したものを使用した。なお、当該緩衝液には、Sapphire-II（商標）Enhancer（Thermo Fischer Scientific）は含まれていなかった。
【0159】
図３に示される通り、HISCLカウント値はHBsAgの濃度に依存することが分かった。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図3】
【図4】
【図5】