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特開2023-116554抗ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023116554

(43)【公開日】2023-08-22

(54)【発明の名称】抗ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用

(51)【国際特許分類】

A61K 39/395 20060101AFI20230815BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20230815BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20230815BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20230815BHJP

A61K 47/68 20170101ALI20230815BHJP

A61K 38/05 20060101ALI20230815BHJP

C07K 16/40 20060101ALN20230815BHJP

C12N 15/13 20060101ALN20230815BHJP

C07K 16/28 20060101ALN20230815BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 Y

A61P35/00

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K39/395 P

A61K47/68

A61K38/05

C07K16/40 ZNA

C12N15/13

C07K16/28

【審査請求】有

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023088505

(22)【出願日】2023-05-30

(62)【分割の表示】P 2020522279の分割

【原出願日】2018-06-26

(31)【優先権主張番号】62/525,993

(32)【優先日】2017-06-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】592054292

【氏名又は名称】ザロックフェラーユニバーシティー

(71)【出願人】

【識別番号】520001017

【氏名又は名称】インスピルナ，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000671

【氏名又は名称】ＩＢＣ一番町弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】タヴァゾイ，ソハイル

(72)【発明者】

【氏名】タヴァゾイ，マスード

(72)【発明者】

【氏名】ハルベルグ，ニルズヘンリク

(57)【要約】（修正有）

【課題】癌を治療するための抗体薬物コンジュゲート、その製造方法、および治療方法を提供する。
【解決手段】（ｉ）Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭＥＲＴＫの双方）に特異的に結合する抗体と、（ｉｉ）前記抗体に直接共役されているか、またはリンカーを介して前記抗体に共役されている細胞毒性剤とを含む抗体薬物コンジュゲート、並びに、当該抗体薬物コンジュゲートを含み、当該抗体薬物コンジュゲートに含有される前記抗体が内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する組成物が提供される。本開示はまた、（ｉ）ＭＥＲＴＫに特異的に結合して内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体と、（ｉｉ）前記抗体に直接共役されているか、またはリンカーを介して前記抗体に共役されている細胞毒性剤とを含む抗体薬物コンジュゲートを投与することによりがんを治療する方法をも提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のヒト
ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項2】

前記抗体または抗原結合断片がマウスＭＥＲＴＫにさらに特異的に結合する、請求項１
に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項3】

前記抗体がヒトＭＥＲＴＫの細胞外ドメインを特異的に認識し、前記細胞外ドメインが
配列番号５８のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体薬物コンジュゲート
。

【請求項4】

前記抗体が、ヒトＭＥＲＴＫへの結合についてＧａｓ－６と競合する、請求項１～３の
いずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項5】

前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項6】

前記抗体が、２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである、
請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項7】

前記重鎖のそれぞれが、配列番号１の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤ
Ｒ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む可変領域（ＶＨ）を含む、請求項６に記載の
抗体薬物コンジュゲート。

【請求項8】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２のＣＤＲ１、配
列番号７のＣＤＲ２、および配列番号１２のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項9】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号３のＣＤＲ１、配
列番号８のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項10】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号４のＣＤＲ１、配
列番号９のＣＤＲ２、および配列番号１３のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項11】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号５のＣＤＲ１、配
列番号１０のＣＤＲ２、および配列番号１４のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体薬
物コンジュゲート。

【請求項12】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号３のＣＤＲ１、配
列番号６のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項13】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２５のＣＤＲ１、
配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項14】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２６のＣＤＲ１、
配列番号３１のＣＤＲ２、および配列番号３６のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項15】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２７のＣＤＲ１、
配列番号３２のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項16】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２８のＣＤＲ１、
配列番号３３のＣＤＲ２、および配列番号３７のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項17】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２９のＣＤＲ１、
配列番号３４のＣＤＲ２、および配列番号３８のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項18】

前記重鎖のそれぞれが可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが配列番号２７のＣＤＲ１、
配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む、請求項６に記載の抗体
薬物コンジュゲート。

【請求項19】

前記軽鎖のそれぞれが、配列番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９の
ＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む可変領域（ＶＬ）を含む、請求項６、７
、９または１２のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項20】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号１６のＣＤＲ１、
配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２３のＣＤＲ３を含む、請求項６または８に記
載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項21】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号１７のＣＤＲ１、
配列番号２１のＣＤＲ２、および配列番号２４のＣＤＲ３を含む、請求項６または１０に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項22】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号１８のＣＤＲ１、
配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む、請求項６または１１に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項23】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号３９のＣＤＲ１、
配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む、請求項６、１３、１５
または１８のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項24】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号４０のＣＤＲ１、
配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４７のＣＤＲ３を含む、請求項６または１４に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項25】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号４１のＣＤＲ１、
配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤＲ３を含む、請求項６または１６に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項26】

前記軽鎖のそれぞれが可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが配列番号４２のＣＤＲ１、
配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む、請求項６または１８に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項27】

前記重鎖が、配列番号４９を含む可変領域（ＶＨ）を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項28】

前記軽鎖が、配列番号５０を含む可変領域（ＶＬ）を含む、請求項６または２７に記載
の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項29】

前記重鎖が、配列番号５１を含む可変領域（ＶＨ）を含む、請求項６に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項30】

前記軽鎖が、配列番号５２を含む可変領域（ＶＬ）を含む、請求項６または２９に記載
の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項31】

ヒト由来定常領域を含む、請求項６～３０のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲ
ート。

【請求項32】

前記重鎖の定常領域が、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３、およびガンマ４からなる群か
ら選択されるアイソタイプを有する、請求項３１に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項33】

前記抗体またはその抗原結合断片がヒト化されている、請求項１～３２のいずれか１項
に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項34】

前記抗体が、約３ピコモーラー（ｐＭ）～約４００ｐＭの範囲の解離定数（Ｋ_Ｄ）でヒ
トＭＥＲＴＫに結合する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲー
ト。

【請求項35】

前記抗体が、約３ｐＭ～約４００ｐＭの範囲のＫ_ＤでマウスＭＥＲＴＫに結合する、請
求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項36】

前記抗体または抗原結合断片が、乳癌細胞の存在下、インビトロで内皮細胞の遊走を阻
害し、前記遊走がコントロール抗体で処理された内皮細胞と比較して３０％超阻害される
、請求項１～３５のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項37】

前記抗体または抗原結合断片が、インビトロでヒト血管内皮細胞のＭＥＲＴＫのリン酸
化を促進する、請求項１～３６のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項38】

前記抗体または抗原結合断片が、インビトロで癌細胞上のＭＥＲＴＫのリン酸化を促進
しない、請求項１～３７のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項39】

前記抗体または抗原結合断片が、インビボで腫瘍血管新生を阻害する、請求項１～３８
のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項40】

前記抗体または抗原結合断片が、内皮細胞の非存在下、インビトロでのトランスウェル
遊走アッセイにおいて多形膠芽腫細胞株Ａ１７２の遊走を阻害しない、請求項１～３９の
いずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項41】

前記抗体または抗原結合断片が、多形性膠芽腫細胞株Ａ１７２上のＭＥＲＴＫの発現レ
ベルを低下させない、請求項１～４０のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項42】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号１の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
配列番号６のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項43】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ
２、および配列番号１２のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその抗
原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項44】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ
２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその抗
原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項45】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号９のＣＤＲ
２、および配列番号１３のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその抗
原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項46】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号５のＣＤＲ１、配列番号１０のＣＤ
Ｒ２、および配列番号１４のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその
抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項47】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号６のＣＤＲ
２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその抗
原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項48】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣ
ＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項49】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣ
ＤＲ２、および配列番号３６のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項50】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣ
ＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項51】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣ
ＤＲ２、および配列番号３７のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項52】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣ
ＤＲ２、および配列番号３８のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項53】

（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３０のＣ
ＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはそ
の抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカ
ーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項54】

【請求項55】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号１６の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２３の
ＣＤＲ３を含む、請求項４２、４４または４７に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項56】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、および配列番号２４のＣＤＲ３を含む、請
求項４５に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項57】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む、請
求項４６に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項58】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む、請
求項４８、５０または５３に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項59】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４７のＣＤＲ３を含む、請
求項４９に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項60】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤＲ３を含む、請
求項５１に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項61】

前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、前記ＶＬが配列番
号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む、請
求項５３に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項62】

前記抗体が免疫グロブリンであり、前記抗原結合断片が前記免疫グロブリンの一部であ
る、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項63】

前記抗体が免疫グロブリンである、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の抗体薬物
コンジュゲート。

【請求項64】

前記抗体または抗原結合断片がヒト化されている、請求項４２～６３のいずれか１項に
記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項65】

前記抗体または抗原結合断片がヒト由来定常領域を含む、請求項４２～６３のいずれか
１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項66】

前記抗体がヒト化免疫グロブリンである、請求項６５に記載の抗体薬物コンジュゲート
。

【請求項67】

前記抗体が二重特異性抗体である、請求項１～４および４２～６１のいずれか１項に記
載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項68】

（Ｉ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンである抗体部分と、
（ＩＩ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ＩＩＩ）任意のリンカーと、
を含み、
前記免疫グロブリンは、
（Ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番
号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または、
（Ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番
号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
を含み、
前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介
して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項69】

（Ｉ）（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）
配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブリン；並びに、
（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）
配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；
からなる群から選択される参照抗体とＭＥＲＴＫへの結合について競合する抗体である抗
体部分と、
（ＩＩ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ＩＩＩ）任意のリンカーと、
を含み、
前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介
して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項70】

前記抗体部分の前記薬物部分に対するモル比が１：１～１：８である、請求項１～６９
のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項71】

前記抗体部分の前記薬物部分に対するモル比が１：３～１：５である、請求項１～６９
のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項72】

前記リンカーを含み、前記リンカーが切断可能なリンカーである、請求項１～７１のい
ずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項73】

前記リンカーを含み、前記リンカーが切断不能なリンカーである、請求項１～７１のい
ずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項74】

前記細胞毒性剤が、小分子、ヌクレオチド、ペプチド、または非抗体タンパク質である
、請求項１～７３のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項75】

前記細胞毒性剤が小分子である、請求項１～７３のいずれか１項に記載の抗体薬物コン
ジュゲート。

【請求項76】

前記細胞毒性剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、イ
ンドリノベンゾジアゼピン、カリケアマイシン、カンプトテシン類似体、デュオカルマイ
シン、チューブリン阻害剤、チューブリシンまたはチューブリシン類似体、アンベルスタ
チン２６９、ドキソルビシン、抗生物質、アントラサイクリン、微小管阻害剤、スプライ
セオスタチン、またはタイランスタチンである、請求項７４に記載の抗体薬物コンジュゲ
ート。

【請求項77】

前記細胞毒性剤がモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリス
タチンＦ（ＭＭＡＦ）である、請求項７６に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項78】

前記細胞毒性剤がＤＭ１またはＤＭ４である、請求項７６に記載の抗体薬物コンジュゲ
ート。

【請求項79】

前記リンカーが存在しない、請求項１～７８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュ
ゲートの製造方法であって、
（ａ）前記細胞毒性剤を前記抗体部分に直接共役させて、抗体薬物コンジュゲートを製
造し、（ｂ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製することを含む、製造方法。

【請求項80】

前記リンカーを含む、請求項１～７８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート
の製造方法であって、
（ａ）前記リンカーを前記抗体部分に直接共役させて、リンカー抗体部分を製造するこ
とと、（ｂ）前記リンカー抗体部分の前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役させて、
抗体薬物コンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製す
ることと、をこの順に含む、製造方法。

【請求項81】

前記リンカーを含む、請求項１～７８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート
の製造方法であって、
（ａ）前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役させて、リンカー細胞毒性剤部分を製
造することと、（ｂ）前記リンカー細胞毒性剤部分の前記リンカーを前記抗体部分に直接
共役させて、抗体薬物コンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲ
ートを精製することと、をこの順に含む、製造方法。

【請求項82】

請求項１～７８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲートの治療的有効量、およ
び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項83】

請求項８２に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記
対象における癌の治療方法。

【請求項84】

前記癌が、肺、乳房、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、
結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺の癌である、
請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記癌が、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫またはカポジ肉腫
である、請求項８３に記載の方法。

【請求項86】

前記癌が乳癌である、請求項８４に記載の方法。

【請求項87】

前記癌がトリプルネガティブ乳癌である、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記対象に他の治療薬を投与することをさらに含む、請求項８３～８７のいずれか１項
に記載の方法。

【請求項89】

前記他の治療薬が前記癌を治療するためのものである、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

前記他の治療薬が、乳癌の治療に使用される薬剤、黒色腫の治療に使用される薬剤、免
疫療法、または血管新生阻害剤である、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記他の治療薬が、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル、シクロホスフ
ァミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズ
マブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブ、およびラパチニブジトシレートか
らなる群から選択される、乳癌を治療するのに使用される薬剤である、請求項９０に記載
の方法。

【請求項92】

前記他の治療薬が、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、およびダカルバジンからなる群か
ら選択される、黒色腫を治療するのに使用される薬剤である、請求項９０に記載の方法。

【請求項93】

前記他の治療薬が、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤で
ある抗体である、請求項９０に記載の方法。

【請求項94】

前記他の治療薬が、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブ、およびソラフ
ェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である、請求項９０に記載の方法。

【請求項95】

前記対象がヒトである、請求項８３～９４のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
この出願は、３５ＵＳＣ§１１９（ｅ）の下で、２０１７年６月２８日に出願された米
国仮出願第６２／５２５，９９３号の優先権を主張する。

【0002】

電子的に提出された配列表の参照
この出願は、２０１７年６月１６日に作成された２９キロバイトのサイズの「Sequence
Listing.txt」という名称のテキストファイルとして、この出願とともに提出された配列
表を参照により組み込むものとする。

【0003】

１．分野
本開示によれば、（ｉ）Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）（例えば、ヒトＭＥＲ
ＴＫ、またはヒトおよびマウスＭＥＲＴＫの双方）に特異的に結合する抗体と、（ｉｉ）
前記抗体に直接共役されているか、またはリンカーを介して前記抗体に共役されている細
胞毒性剤とを含む抗体薬物コンジュゲート、並びに、当該抗体薬物コンジュゲートを含み
、当該抗体薬物コンジュゲートに含有される前記抗体が内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝
達を作動する組成物が提供される。本開示はまた、（ｉ）ＭＥＲＴＫに特異的に結合して
内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体と、（ｉｉ）前記抗体に直接共役され
ているか、またはリンカーを介して前記抗体に共役されている細胞毒性剤とを含む抗体薬
物コンジュゲートを投与することによりがんを治療する方法をも提供する。

【0004】

２．背景
Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）（ｃ－ｍｅｒ、ＭＥＲ、癌原遺伝子ｃ－Ｍｅｒ
、受容体チロシンキナーゼＭｅｒＴＫ、チロシンプロテインキナーゼＭｅｒ、ＳＴＫキナ
ーゼ、ＲＰ３８、またはＭＧＣ１３３３４９とも呼ばれる）は、受容体チロシンキナーゼ
のＴＡＭファミリーのメンバーであり、ＡＸＬおよびＴＹＲＯ３キナーゼも含む。ＭＥＲ
ＴＫは、リガンド、特に注目されるのは可溶性タンパク質であるＧａｓ－６の結合による
活性化を介して、細胞外空間からのシグナルを変換する。Ｇａｓ－６がＭＥＲＴＫに結合
すると、その細胞内ドメインでＭＥＲＴＫの自己リン酸化が誘導され、下流のシグナル活
性化が起こる（ＣｕｍｍｉｎｇｓＣＴｅｔａｌ．，（２０１３）ＣｌｉｎＣａｎ
ｃｅｒＲｅｓ１９：５２７５－５２８０；ＶｅｒｍａＡｅｔａｌ．，（２０
１１）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ１０：１７６３－１７７３）。

【0005】

ＭＥＲＴＫ受容体は、膜結合型と可溶型の両方で存在している。細胞外ドメインは切断
されて可溶性の細胞外ドメインを生成することができ、この可溶性の細胞外ドメインは、
膜結合型ＭＥＲＴＫに結合する可溶性Ｇａｓ－６リガンドの能力および／または利用可能
性を低下させることにより、細胞上のＭＥＲＴＫ受容体の活性化を負に調節するデコイ受
容体として作用するとの仮説がある（ＳａｔｈｅｒＳｅｔａｌ．，（２００７）Ｂ
ｌｏｏｄ１０９：１０２６－１０３３）。その結果、ＭＥＲＴＫは、癌の進行、血管新
生、および転移に関連する２つの役割を有している。一方で、内皮細胞上のＭＥＲＴＫの
Ｇａｓ－６活性化は、共培養システムにおける癌細胞による内皮細胞の動員を阻害する。
内皮動員は、腫瘍の血管新生、腫瘍の成長、および転移を可能にする癌細胞の重要な特徴
である。しかしながら、他方で、ＭＥＲＴＫは癌細胞において反対の役割を果たしており
、その過剰発現は、おそらく切断されたＭＥＲＴＫを放出して可溶性のＭＥＲＴＫ細胞外
ドメインタンパク質をデコイ受容体として生成することにより、転移の増加をもたらす。
したがって、腫瘍細胞は、デコイ受容体として作用する可溶性の形態の細胞外ＭＥＲＴＫ
受容体を分泌し、可溶性Ｇａｓ－６リガンドが内皮細胞上のＭＥＲＴＫを活性化する能力
（および／または利用可能性）を低下させ、最終的に内皮動員、血管新生、および癌の進
行を引き起こす（ＰｎｇＫＪｅｔａｌ．，（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ４８１：１
９０-１９４）。

【0006】

歴史的に、癌の治療のため、ＭＥＲＴＫの活性化剤ではなく阻害剤を生成するための努
力がなされてきた（例えば、抗癌化合物として開発された強力な小分子ＭＥＲＴＫ阻害剤
である、化合物ＵＮＣ１０６２）。これは、ＭＥＲＴＫは癌遺伝子としてのみ機能すると
考えられていたためである（ＬｉｕＪｅｔａｌ.（２０１３）ＥｕｒＪＭｅｄ
Ｃｈｅｍ６５：８３－９３；ＣｕｍｍｉｎｇｓＣＴｅｔａｌ．（２０１３）
ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１９：５２７５－５２８０；ＶｅｒｍａＡｅｔ
ａｌ．（２０１１）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ１０：１７６３－１７７３）。
癌細胞および内皮細胞におけるＭＥＲＴＫの二重の役割を考えると、一般的にＭＥＲＴＫ
の活性化をもたらす分子（例えば、内皮細胞および癌細胞の両方）での治療により、内皮
細胞の動員および転移が増加する可能性がある。ただし、癌細胞ではなく内皮細胞のＭＥ
ＲＴＫのシグナル伝達を活性化する化合物は、腫瘍の血管新生と転移の魅力的な治療薬に
なる可能性がある。

【0007】

したがって、ＭＥＲＴＫに特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する抗体を用いた治療の選択肢が必要とされている。

【0008】

近年、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、最も急速に成長しているがん治療薬のク
ラスの１つとなっている（ＢｅｃｋＡｅｔａｌ．（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤ
ｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗ
ｎＳ、（２０１５）ＢｉｏｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５）。

【0009】

本明細書における参考文献の引用は、それが本開示に対する先行技術であるという承認
として解釈されるべきではない。

【発明の概要】

【0010】

３．概要
本発明は、（ａ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭＥ
ＲＴＫの双方）に特異的に結合し、内皮細胞のヒトＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つま
たは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーとを含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部
分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されてい
る、抗体薬物コンジュゲートを提供する。

【0011】

本発明の抗体薬物コンジュゲートの抗体部分であり得る、非限定的かつ例示的な抗ＭＥ
ＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片を以下に記載する。

【0012】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
ヒトＭＥＲＴＫの細胞外ドメインを特異的に認識する。別の特定の実施形態では、本明細
書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、マウスＭＥＲＴＫの細胞外ドメ
インを特異的に認識する。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体
またはその抗原結合断片は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスＭＥＲＴＫの両方）への結合についてＧａｓ－６と競合する。特定の実施形態では、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または抗原結合断片はモノクローナルである。別の特
定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、２つ
の同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである。

【0013】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0014】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0015】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0016】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１３）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0017】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0018】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0019】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0020】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0021】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0022】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を刺激する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0023】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭ
ＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0024】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0025】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0026】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２；および／また
は
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0027】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0028】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0029】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両
方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0030】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両
方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0031】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両
方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹ（配列番号４５）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0032】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両
方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0033】

特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＨＣＤ
Ｒのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。特定の実施形態では、抗体またはその
抗原結合断片は、表１または表３のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表１または表３のＶＨＣＤＲ２を含む。特
定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表１または表３のＶＨ
ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。特
定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ１９のＶＨＣ
ＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。

【0034】

特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＬＣＤ
Ｒのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗
体またはその抗原結合断片は、表２または表４のＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施
形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表２または表４のＶＬＣＤＲ
２を含む。特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表２また
は表４のＶＬＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原
結合断片は、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表２
）を含む。特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ１
９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。

【0035】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３。

【0036】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＳＱＤＶＧＤＡのＶＬ（配列番号１６）ＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３。

【0037】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３。

【0038】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１３）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３。

【0039】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３；および／また
は
（ｄ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）を含むＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３。

【0040】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３。

【0041】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３。

【0042】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３。

【0043】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３。

【0044】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２；および／また
は
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹの（配列番号４５）ＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３。

【0045】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３。

【0046】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３。

【0047】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可
変領域配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、ま
たはヒトとマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮のＭＥＲＴＫシグナル伝
達を作動する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５１のアミノ酸配列
を含む重鎖可変領域配列を含む。

【0048】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭ
ＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、また
はヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグ
ナル伝達を作動する、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５２のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む。

【0049】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重
鎖可変領域と、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。別の
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭ
ＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体
またはその断片は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配
列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0050】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗体は、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む。一部の実施
形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、およ
びＩｇＡ_２からなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。特定の実施形態では、軽鎖
定常領域は、ＩｇＧκおよびＩｇＧλからなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。
いくつかの実施形態において、抗体は、１つまたは複数のヒトＦｃガンマ受容体に対する
結合親和性が増加した定常領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、１つまた
は複数のヒトＦｃガンマ受容体に対する結合親和性が低下した定常領域を含む。

【0051】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス両
方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載の抗体と同じＭＥＲＴＫ（例
えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両方のＭＥＲＴＫ）のエピトープに結合す
る抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片である。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例
えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、
内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片
は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭＥＲＴＫの両方）
への結合について、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片と競合す
る抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片である。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴ
Ｋ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に
結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を刺激する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原
結合断片は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトとマウスの両方のＭＥＲ
ＴＫ）への結合について、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片と
競合する第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、前記競合は、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片の存在下での前記第１の抗Ｍ
ＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒ
トおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への結合の８０％超（例えば、８５％、９０％、９
５％、９８％、または８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％、もしくは８５
％～９５％）の低下として示される。

【0052】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する
、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体またはキメラ抗体である
。特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗体は、約３ｐＭ～約４００ｐＭの範囲のＫ_Ｄで、ＭＥＲＴＫ（
例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に結合する。特
定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は単離されている。特定の実施形態では、本明
細書に記載の抗体はモノクローナル抗体である。

【0053】

別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖可変領域および／ま
たは軽鎖可変領域、または重鎖および／または軽鎖をコードする核酸分子が本明細書に記
載される。特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号５３または配列番号５５の核酸配
列を含む重鎖可変領域をコードする。別の特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号５
４または配列番号５６の核酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする。特定の実施形態では
、核酸分子は単離されている。

【0054】

特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖可変領域および／
または軽鎖可変領域、または重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含
むベクター（例えば、単離されたベクター）が本明細書に記載される。特定の実施形態に
おいては、上記ポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞が本明細書に記載される
。宿主細胞の例には、大腸菌、シュードモナス、バチルス、ストレプトミセス、酵母、Ｃ
ＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬ
ａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７
、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、および組織培養中のヒ
ト細胞がある。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドが発現され、抗体が産生さ
れるように宿主細胞を培養することを含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、また
はヒトおよびマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナ
ル伝達を作動する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片を製造する方法が本明細書に
記載される。

【0055】

別の実施形態において、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートおよび薬学的に許容
される担体を含む医薬組成物が本明細書により提供される。医薬組成物は、癌の治療に使
用されうる。

【0056】

特定の実施形態においては、対象に本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートの有効量
を投与することを含む、対象の癌を治療する方法が本明細書により提供される。別の実施
形態では、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の癌を治療す
る方法が本明細書により提供される。特定の実施形態では、癌を治療する方法は、内皮細
胞の遊走の阻害、血管新生の阻害、および／または腫瘍進行の阻害をもたらす。

【0057】

特定の実施形態では、本明細書により提供される方法によって治療される癌は、肺、乳
房、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、子宮頸
部、子宮の癌、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺の癌である。いくつかの実施
形態において、治療される癌は、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽
腫またはカポジ肉腫である。

【0058】

特定の実施形態では、本明細書で提供される方法により治療される癌は、乳癌である。
特定の実施形態では、本明細書で提供される方法により治療される癌は、トリプルネガテ
ィブ乳癌である。

【0059】

特定の実施形態では、癌を治療する方法は、追加の治療薬を対象に投与することをさら
に含む。本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは本明細書に記載の医薬組成物と
組み合わせて対象に投与することができる追加の治療薬の例は、以下のセクション５．６
および５．７に記載されている。

【0060】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートと組み合わせて対象に
投与される追加の治療薬は、乳癌の治療に使用される薬剤、黒色腫の治療に使用される薬
剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。

【0061】

特定の実施形態において、追加の治療薬は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリ
タキセル（タキソール（登録商標））、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラス
チン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシ
ン、ペルツズマブ、およびラパチニブジトリレートからなる群から選択される、乳癌の治
療に使用される薬剤である。

【0062】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＢＲＡＦ阻害薬、ＭＥＫ阻害薬、およびダカル
バジンからなる群から選択される黒色腫の治療に使用される薬剤である。

【0063】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、または
ＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。

【0064】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチ
ニブ、およびソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である。

【0065】

特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により治療される対象はヒトである。

【0066】

一形態では、（ａ）ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内
皮細胞のヒトＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体またはその抗原結合断片である抗体
部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意の
リンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または
、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲートが本明
細書により提供される。

【0067】

前述の形態の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウスＭＥＲＴＫ
にさらに特異的に結合する。

【0068】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体はヒトＭＥＲＴＫの細胞
外ドメインを特異的に認識し、当該細胞外ドメインは配列番号５８のアミノ酸配列を含む
。

【0069】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、ヒトＭＥＲＴＫへの
結合についてＧａｓ－６と競合する。

【0070】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体で
ある。

【0071】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、２つの同一の軽鎖お
よび２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである。

【0072】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
配列番号：６のＣＤＲ２、および配列番号：１１のＣＤＲ３を含む可変領域（ＶＨ）を含
む。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号
１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣ
ＤＲ３を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0073】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、重鎖のそれぞれは可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号
２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ２、および配列番号１２のＣＤＲ３を含む。そのよう
な特定の実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは可変領域（ＶＬ）を含み
、当該ＶＬは配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号：２０のＣＤＲ２、および配列番号：２
３のＣＤＲ３を含む。

【0074】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号３のＣＤ
Ｒ１、配列番号８のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む、そのような特定の
実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列
番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、および配列番号２２
のＣＤＲ３を含む。

【0075】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号４のＣＤ
Ｒ１、配列番号９のＣＤＲ２、および配列番号１３のＣＤＲ３を含む。そのような特定の
実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列
番号１７のＣＤＲ１、配列番号：２１のＣＤＲ２、および配列番号：２４のＣＤＲ３を含
む。

【0076】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号５のＣＤ
Ｒ１、配列番号１０のＣＤＲ２および配列番号１４のＣＤＲ３を含む。このような特定の
実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列
番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0077】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号３のＣＤ
Ｒ１、配列番号６のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような特定の
実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列
番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、および配列番号２２
のＣＤＲ３を含む。

【0078】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、重鎖のそれぞれは可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号
２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む。その
ような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当
該ＶＬは配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤ
Ｒ３を含む。

【0079】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号２６のＣ
ＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、および配列番号３６のＣＤＲ３を含む。このような特
定の実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは
配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号：４４のＣＤＲ２、および配列番号：４７のＣＤＲ３
を含む。

【0080】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号２７のＣ
ＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む、そのような特
定の実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは
配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含
む。

【0081】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号２８のＣ
ＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、および配列番号３７のＣＤＲ３を含む。そのような特
定の実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは
配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤＲ３を含
む。

【0082】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号２９のＣ
ＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、および配列番号３８のＣＤＲ３を含む。

【0083】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、当該ＶＨは配列番号２７のＣ
ＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような特
定の実施形態のさらなる一実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは
配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含
む。そのような特定の実施形態の別のさらなる実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）
を含み、当該ＶＬは配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号
４６のＣＤＲ３を含む。

【0084】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号１５の相
補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号：１９のＣＤＲ２、および配列番号：２２のＣＤＲ
３を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0085】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号１６のＣ
ＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２３のＣＤＲ３を含む。

【0086】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号１７のＣ
ＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、および配列番号２４のＣＤＲ３を含む。

【0087】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは配列番号１８のＣＤＲ
１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0088】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号３９のＣ
ＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0089】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号４０のＣ
ＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４７のＣＤＲ３を含む。

【0090】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号４１のＣ
ＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤＲ３を含む。

【0091】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、各軽鎖は可変領域（ＶＬ）を含み、当該ＶＬは配列番号４２のＣ
ＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0092】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、重鎖は可変領域（ＶＨ）を含み、これは配列番号４９を含む。そ
のような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖は配列番号５０を含む可変領域
（ＶＬ）を含む。

【0093】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、軽鎖は配列番号５０を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0094】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、重鎖は配列番号５１を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような
実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖は配列番号５２を含む可変領域（ＶＬ）を含む
。

【0095】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態
の特定の実施形態では、軽鎖は配列番号５２を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0096】

抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである、先行す
る実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト由来
定常領域を含む。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、重鎖定常領域は
、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３、およびガンマ４からなる群から選択されるアイソタイ
プを有する。

【0097】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片
はヒト化されている。

【0098】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、約３ｐＭ～約４００
ｐＭの範囲の解離定数Ｋ_ＤでヒトＭＥＲＴＫに結合する。

【0099】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体は、約３ｐＭ～４００ｐ
Ｍの範囲のＫ_ＤでマウスＭＥＲＴＫに結合する。

【0100】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
乳癌細胞の存在下、インビトロで内皮細胞の遊走を阻害し、前記遊走はコントロール抗体
で処理された内皮細胞と比較して３０％超阻害される。

【0101】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
インビトロでヒト血管内皮細胞のＭＥＲＴＫのリン酸化を促進する。

【0102】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
インビトロで癌細胞上のＭＥＲＴＫのリン酸化を促進しない。

【0103】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
インビボで腫瘍血管新生を阻害する。

【0104】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
内皮細胞の非存在下、インビトロでのトランスウェル遊走アッセイにおいて多形膠芽腫細
胞株Ａ１７２の遊走を阻害しない。

【0105】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、
多形性膠芽腫細胞株Ａ１７２上のＭＥＲＴＫの発現レベルを低下させない。

【0106】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号１の相補性決定領域
（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領
域（ＶＨ）を含む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞
毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞
毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗
体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのよ
うな形態の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）を
さらに含み、当該ＶＬは配列番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣ
ＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0107】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２のＣＤＲ１、配列
番号７のＣＤＲ２、および配列番号１２のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗
体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つま
たは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体
部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されて
いる、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該Ｖ
Ｌは配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２３のＣＤＲ３
を含む。

【0108】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号３のＣＤＲ１、配列
番号８のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗
体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つま
たは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体
部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されて
いる、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該Ｖ
Ｌは配列番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣ
ＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0109】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号４のＣＤＲ１、配列
番号９のＣＤＲ２、および配列番号１３のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗
体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つま
たは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体
部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されて
いる、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該Ｖ
Ｌは配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、および配列番号２４のＣＤＲ３
を含む。

【0110】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号５のＣＤＲ１、配列
番号１０のＣＤＲ２、および配列番号１４のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む
抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つ
または複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗
体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役され
ている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定の
実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該
ＶＬは配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、および配列番号２２のＣＤＲ
３を含む。

【0111】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号３のＣＤＲ１、配列
番号６のＣＤＲ２、および配列番号１１のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗
体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つま
たは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体
部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されて
いる、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該Ｖ
Ｌは配列番号１５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣ
ＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0112】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２５のＣＤＲ１、配
列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当
該ＶＬは配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤ
Ｒ３を含む。

【0113】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２６のＣＤＲ１、配
列番号３１のＣＤＲ２、および配列番号３６のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当
該ＶＬは配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４７のＣＤ
Ｒ３を含む。

【0114】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２７のＣＤＲ１、配
列番号３２のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当
該ＶＬは配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤ
Ｒ３を含む。

【0115】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２８のＣＤＲ１、配
列番号３３のＣＤＲ２、および配列番号３７のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当
該ＶＬは配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤ
Ｒ３を含む。

【0116】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２９のＣＤＲ１、配
列番号３４のＣＤＲ２、および配列番号３８のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。

【0117】

別の形態では、（ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、配列番号２７のＣＤＲ１、配
列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１
つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。そのような形態の特定
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当
該ＶＬは配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号：４６のＣ
ＤＲ３を含む。そのような形態の別の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片
は軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、当該ＶＬは配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４
４のＣＤＲ２、および配列番号：４６のＣＤＲ３を含む。

【0118】

前述の形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体は免疫グロブリンであり、抗原結合
断片は免疫グロブリンの一部である。

【0119】

前述の形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は免疫グロ
ブリンである。

【0120】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片
はヒト化されている。

【0121】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片
は、ヒト由来定常領域を含む。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、抗
体またはその抗原結合断片は、ヒト化免疫グロブリンである。

【0122】

抗体がモノクローナル抗体または２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫
グロブリンではない、前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体また
はその抗原結合断片は二重特異性抗体である。

【0123】

別の形態では、（Ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンである抗体部
分と、（Ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（Ｃ）任意のリ
ンカーと、を含み、前記免疫グロブリンは、（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重
鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、前
記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して
前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。

【0124】

別の形態では、（Ａ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンである抗体部
分と、（Ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（Ｃ）任意のリ
ンカーと、を含み、前記免疫グロブリンは、（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重
鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、前
記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して
前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。

【0125】

別の態様では、（Ｉ）ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンである抗体部
分と、（ＩＩ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（ＩＩＩ）任
意のリンカーと、を含み、前記免疫グロブリンは、（Ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸
配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領
域；または、（Ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉ
ｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；を含み、前記細胞毒性剤は、前記
抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役さ
れている、抗体薬物コンジュゲートが本明細書により提供される。

【0126】

別の形態では、（Ｉ）（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
および（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブ
リン；並びに、（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（
ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；か
らなる群から選択される参照抗体とＭＥＲＴＫへの結合について競合する抗体である抗体
部分と、（ＩＩ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（ＩＩＩ）
任意のリンカーと、を含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、
または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲート
が本明細書により提供される。

【0127】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体部分の薬物部分に対する
モル比が１：１～１：８である。

【0128】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体部分の薬物部分に対する
モル比が１：３～１：５である。

【0129】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートはリ
ンカーを含み、当該リンカーは切断可能なリンカーである。

【0130】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートはリ
ンカーを含み、当該リンカーは切断不能なリンカーである。

【0131】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、細胞毒性剤は小分子、ヌクレ
オチド、ペプチド、または非抗体タンパク質である。このような特定の実施形態のさらな
る一実施形態では、細胞毒性剤は小分子である。

【0132】

前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、細胞毒性剤は、アウリスタチ
ン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、カリケ
アマイシン、カンプトテシン類似体、デュオカルマイシン、チューブリン阻害剤、チュー
ブリシンまたはチューブリシン類似体、アンベルスタチン２６９、ドキソルビシン、抗生
物質、アントラサイクリン、微小管阻害剤、スプライセオスタチン、またはタイランスタ
チンである。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、細胞毒性剤は、モノ
メチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）で
ある。そのような特定の実施形態の別のさらなる実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１また
はＤＭ４である。

【0133】

別の形態では、リンカーが存在しない上述の形態／実施形態のいずれかに記載の抗体薬
物コンジュゲートを製造する方法が本明細書により提供され、この方法は、（ａ）前記細
胞毒性剤を前記抗体部分に直接共役させて、抗体薬物コンジュゲートを製造し、（ｂ）前
記抗体薬物コンジュゲートを精製することを含む。

【0134】

別の形態では、リンカーを含む、上述の形態／実施形態のいずれかに記載の抗体薬物コ
ンジュゲートの製造方法が本明細書により提供され、この方法は、（ａ）前記リンカーを
前記抗体部分に直接共役させて、リンカー抗体部分を製造することと、（ｂ）前記リンカ
ー抗体部分の前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役させて、抗体薬物コンジュゲート
を製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製することと、をこの順に含
む。

【0135】

別の形態では、リンカーを含む、上述の形態／実施形態のいずれかに記載の抗体薬物コ
ンジュゲートの製造方法が本明細書により提供され、この方法は、（ａ）前記リンカーを
前記細胞毒性剤に直接共役させて、リンカー細胞毒性剤部分を製造することと、（ｂ）前
記リンカー細胞毒性剤部分の前記リンカーを前記抗体部分に直接共役させて、抗体薬物コ
ンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製することと、
をこの順に含む。

【0136】

別の形態では、前述の形態／実施形態のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲートの治
療有効量、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書により提供される
。

【0137】

別の形態では、前述の形態に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するこ
とを含む、前記対象における癌の治療方法が本明細書により提供される。

【0138】

癌を治療する方法の前述の形態の特定の実施形態では、癌は肺、乳房、骨、卵巣、胃、
膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜
、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺の癌である。そのような特定の実施形態の特定の実施
形態では、癌は乳癌である。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態では、癌は
トリプルネガティブ乳癌である。

【0139】

癌を治療する方法の前述の形態の特定の実施形態では、癌は肉腫、扁平上皮癌、黒色腫
、神経膠腫、神経膠芽腫、神経芽腫またはカポジ肉腫である。

【0140】

癌を治療する方法の前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、上記方法
は、追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。

【0141】

上記方法が追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む実施形態の特定の実施形態
では、追加の治療薬は上記癌を治療するためのものである。

【0142】

追加の治療薬が前記癌を治療するためのものである実施形態の特定の実施形態では、当
該追加の治療薬は、乳癌の治療に使用される薬剤、黒色腫の治療に使用される薬剤、免疫
療法、または血管新生阻害剤である。そのような特定の実施形態のさらなる一実施形態で
は、追加の治療薬は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル、シクロホスフ
ァミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズ
マブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブ、およびラパチニブジトシレートか
らなる群から選択される、乳癌を治療するのに使用される薬剤である。そのような特定の
実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤
、およびダカルバジンからなる群から選択される、黒色腫を治療するのに使用される薬剤
である。そのような特定の実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴ
ＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。そのよう
な特定の実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥ
ＧＦＲ２阻害剤、スニチニブ、およびソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻
害剤である。

【0143】

癌を治療する方法の前述の形態／実施形態のいずれかの特定の実施形態では、対象はヒ
トである。

【0144】

４．図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0145】

【図1】図１Ａおよび１Ｂ：ＭＥＲＴＫの配列。Ａ）抗体産生のためにマウスを免疫するのに使用される組換えＭＥＲＴＫペプチドの概略図。このペプチドは、ＭＥＲＴＫの細胞外ドメイン（図１Ｂを参照）、短鎖連結ペプチド（ＩＥＧＲＭＤ）、およびヒトＩｇＧ_１の一部で構成されている。Ｂ）図１Ａに記載の組換えＭＥＲＴＫペプチドで使用されるＭＥＲＴＫの部分を示す完全長ヒトＭＥＲＴＫの配列（配列番号５７）（太字および下線付き配列；配列番号５８）。

【図2】図２：ＭＥＲＴＫモノクローナル抗体スクリーン。単一のハイブリドーマクローンから回収されたＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体の結合特性を特徴付けるのに使用される抗体捕獲ＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す図。抗体クローンは、第１列でＭ１からＭ２０まで任意に名付けられている。ＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体のいくつかは、第２列の大きな（＞３．５）ＯＤ値で示されるように、ＭＥＲＴＫに対して高い親和性結合を示した。これらの抗体の一部は、第３列の低い（＜２．５）ブロッキングＯＤ値で示されるように、ＭＥＲＴＫのＧａｓ－６への結合も中和した。

【図3】図３：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９およびＭ６は内皮動員を阻害する。生理学的濃度のモノクローナル抗体Ｍ６またはＭ１９のいずれかが、転移性乳癌細胞による内皮動員を有意に阻害できることを示す図。２．５×１０^４個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を４重に播種した。５×１０^４個のＨＵＶＥＣ細胞の癌細胞へのトランスウェル遊走を、２００ｎｇ／ｍＬのコントロール抗体（ＩｇＧ）またはスクリーニングから分離されたＭＥＲＴＫ結合抗体の存在下で評価した。トランスウェルインサートを介して移動した細胞の画像を取得し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して細胞をカウントした。Ｎ＝４。内皮細胞の動員を著しく阻害するモノクローナル抗体（Ｍ６およびＭ１９）は、それぞれ赤色および緑色で標識されている。エラーバーは平均の標準誤差を表す。

【図4】図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃ：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９は内皮細胞上のＭＥＲＴＫを活性化する。Ａ）ＨＵＶＥＣ細胞を、ＦＢＳなし＋Ｍ１９なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ１９なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９のいずれかで１６時間処理し、活性化（リン酸化）されたＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）およびＭＥＲＴＫとＡＫＴとの合計レベルについてのウエスタンブロット分析を行った。示されているように、Ｍ１９抗体による処理は、活性化されたＭＥＲＴＫのレベルを増加させた。Ｂ）Ｍ１９抗体処理によるＭＥＲＴＫ活性化の定量であり、図４Ａのウエスタンブロットのデータに基づき、Ｍ１９処理および未処理のＨＵＶＥＣ細胞から分離されたＰ－ＭＥＲＴＫのＭＥＲＴＫに対するタンパク質発現レベルの比として算出した。Ｃ）ＨＵＶＥＣ細胞については、Ｐ－ＭＥＲＴＫのウエスタンブロット分析の前に、３０分間、示されているようにＭ１９抗体の濃度を増加させて処理した。Ｍ１９治療の用量を増やすと、ＭＥＲＴＫの活性化が増加することに注目すべきである。

【図5】図５Ａおよび５Ｂ：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ６は内皮細胞上のＭＥＲＴＫを活性化する。Ａ）ＨＵＶＥＣ細胞を、活性化（リン酸化）ＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）およびＭＥＲＴＫの合計レベルのウエスタンブロット分析の１６時間前に、ＦＢＳなし＋Ｍ６なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ６なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ６、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬのＭ６のいずれかで処理した。示されているように、Ｍ６抗体による処理は、活性化されたＭＥＲＴＫのレベルを増加させた。Ｂ）Ｍ６抗体処理によるＭＥＲＴＫ活性化の定量であり、図５Ａのウエスタンブロットデータに基づき、Ｍ６処理および未処理ＨＵＶＥＣ細胞から分離されたＰ－ＭＥＲＴＫのＭＥＲＴＫに対するタンパク質発現レベルの比として算出した。

【図6】図６：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９は癌細胞上のＭＥＲＴＫを活性化しない。ＬＭ２乳癌細胞を、ＦＢＳなし＋Ｍ１９抗体なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ１９抗体なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９抗体、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９抗体のいずれかで１６時間処理した後、活性化されたＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）およびＭＥＲＴＫの合計レベルについてのウエスタンブロット分析を行った。示されているように、Ｍ１９抗体で処理した癌細胞では検出可能なレベルのＰ－ＭＥＲＴＫは誘導されなかった。

【図7】図７：Ｍ１９は高い親和性でヒトＭＥＲＴＫに結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、ヒトＭＥＲＴＫ（ｈＭｅｒ）に対するＭ１９の抗体結合動態（Ｍｅｒ－Ｍ１９）を示す図。精製されたＭ１９をＡＭＱセンサーに１μｇ／ｍＬの濃度でロードし、溶液中の検体に対する結合を試験した。すべての検体は、５ｎＭから合計７濃度の２倍希釈系列で調製した。動的フィットは、１：１モデルを使用して計算し、各濃度についてのローカルフィットおよび全体的なグローバルフィットを行った。全体的なグローバルフィットにより計算されたヒトＭＥＲＴＫへのＭ１９の結合の結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、３２６ピコモルであった。

【図8】図８：Ｍ１９はマウスＭＥＲＴＫに高い親和性で結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、マウスＭＥＲＴＫ（ｍｓＭｅｒ）に対するＭ１９の抗体結合動態（Ｍｅｒ－Ｍ１９）を示す図。精製されたＭ１９をＡＭＱセンサーに１μｇ／ｍＬの濃度でロードし、溶液中の検体に対する結合を試験した。すべての検体は、５ｎＭから合計７濃度の２倍希釈系列で調製した。動的フィットは、１：１モデルを使用して計算し、各濃度についてのローカルフィットおよび全体的なグローバルフィットを行った。全体的に計算されたマウスＭＥＲＴＫへのＭ１９結合のグローバルフィット結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、３０５ピコモルであった。

【図9】図９Ａおよび９Ｂ：Ｍ１９による処置は、インビボでのトリプルネガティブ乳癌の原発腫瘍の増殖および転移を阻害する。Ａ）２５０μｇのコントロール抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体のいずれかで隔週処置したマウスにおける２０００ＭＤＡ－ＭＢ－２３１または５０００Ｌｍ１ａ１乳癌細胞の乳腺脂肪体での腫瘍成長である。Ｂ）２５０μｇのコントロール抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体のいずれかで隔週処置したマウスにおける乳腺脂肪体に、Ｌｍ１ａ１乳癌細胞を両側注射した。９８日後、肺を摘出し、Ｈ＆Ｅ染色のために処理し、転移性結節の数を数えた。Ｎ＝４。エラーバーは平均の標準誤差を表す。スチューデントのＴ検定を使用してＰ値を取得した（^＊ｐ＜０．０５）。

【図10】図１０：Ｍ１９による処置は、インビボでの血管新生を阻害する。２５０μｇのコントロール抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体で週に２回処置した、５８日間成長した乳腺の脂肪体における異種移植腫瘍を、ＤＡＰＩおよびＣＤ３１で二重染色した。閾値ＣＤ３１シグナルを使用して、血管密度を定量化した。Ｎ＝４。エラーバーは平均の標準誤差を表す。スチューデントのＴ検定を使用してＰ値を取得した（^＊ｐ＜０．０５）。

【図11】図１１：Ｍ６は高い親和性でＭＥＲＴＫに結合する。Ｍ６は、高い親和性でヒトＭＥＲＴＫに結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、ヒトＭＥＲＴＫ（ｈＭｅｒ）に対するＭ６の抗体結合動態（Ｍｅｒ－Ｍ６）を示す図。精製されたＭ６をＡＭＱセンサーに１μｇ／ｍＬの濃度でロードし、溶液中の検体に対する結合を試験した。すべての検体は、５ｎＭから合計７濃度の２倍希釈系列で調製した。動的フィットは、１：１モデルを使用して計算し、各濃度についてのローカルフィットおよび全体的なグローバルフィットを行った。全体的に計算されたＭ６のヒトＭＥＲＴＫへの結合についての結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、４．６ピコモルであった。

【図12】図１２：Ｍ６による処置は、インビボでのトリプルネガティブ乳癌の原発腫瘍成長を阻害する。２５０μｇのコントロール抗体またはＭ６抗体のいずれかで、隔週、２１日間処置したマウスにおける２０００ＭＤＡ－ＭＢ－２３１による乳腺の脂肪体での腫瘍成長である。Ｎ＝４。エラーバーは平均の標準誤差を表す。

【発明を実施するための形態】

【0146】

５．詳細な説明
本明細書によれば、（ａ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスＭＥＲＴＫの双方）に特異的に結合し、内皮細胞のヒトＭＥＲＴＫシグナル伝達を作
動する抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合断片である
抗体部分と、（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、（ｃ）任
意のリンカーとを含み、前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、また
は、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されている、抗体薬物コンジュゲートが提
供される。本開示で使用される「共役」という用語は、共有結合により結合していること
を意味するものとし、これは直接または介在する共有結合構造を介して行うことができる
。

【0147】

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：１～１
：２０の薬物部分に対する抗体部分のモル比を有する。特定の実施形態では、本明細書で
提供される抗体薬物コンジュゲートは、１：１～１：１５の薬物部分に対する抗体部分の
モル比を有する。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートは
、１：１～１：１２の薬物部分に対する抗体部分のモル比を有する。特定の実施形態では
、本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートは、１：１～１：８の薬物部分に対する
抗体部分のモル比を有する。好ましい実施形態では、本明細書で提供される抗体薬物コン
ジュゲートは、１：３～１：５の薬物部分に対する抗体部分のモル比を有する。特定の実
施形態では、本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートは、１：３である薬物部分に
対する抗体部分のモル比を有する。別の特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体
薬物コンジュゲートは、１：４である薬物部分に対する抗体部分のモル比を有する。別の
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートは、１：５である薬
物部分に対する抗体部分のモル比を有する。

【0148】

薬物部分は、抗体部分の１つまたは複数の鎖に結合する。いくつかの実施形態において
、薬物部分は、抗体部分の１つの鎖に結合する（例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合
、または抗体部分が免疫グロブリン（四量体である）などの多鎖抗体もしくはその抗原結
合断片である場合）。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の２つ以上の鎖に結合す
る（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合断片である場合）。特
定の実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンの２つの同一の鎖、例えば重鎖または軽
鎖に結合している。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分のすべての鎖に結合してい
る（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合断片である場合）。

【0149】

特定の実施形態では、薬物部分は、抗体の定常領域の１つまたは複数の部位に結合して
いる。特定の実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンである抗体のＦｃ領域に結合し
ている。

【0150】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスＭＥＲＴＫの両方）の細
胞外ドメインを特異的に認識する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ
抗体またはその抗原結合断片は、ジャーカット細胞で発現される１８５キロダルトン（ｋ
Ｄ）のＭＥＲＴＫグリコフォーム、単球細胞系Ｕ９３７における２０５ｋＤのＭＥＲＴＫ
グリコフォーム、ヒト白血病細胞（例えば、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病）で発現
される１３５～１４０ｋＤのＭＥＲＴＫグリコフォーム、およびヒト白血病細胞（例えば
、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病）で発現される１７０～１９０のｋＤのＭＥＲＴＫ
グリコフォームに結合しない。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体
またはその抗原結合断片は、癌細胞上のＭＥＲＴＫの発現レベルを低下させない。特定の
実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、多形膠芽
腫細胞株Ａ１７２上のＭＥＲＴＫの発現レベルを低下させない。特定の実施形態では、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は単離されている。特定の実施
形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５７
のアミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫタンパク質に特異的に結合する。別の特定の実施形
態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５８の
アミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫの細胞外領域に特異的に結合する。別の特定の実施形
態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５８に
特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその
抗原結合断片は、ＭＥＲＴＫに結合する２つの抗原結合部位を含む。特定の実施形態では
、２つの抗原結合部位はＭＥＲＴＫ上の同じエピトープに結合する。特定の実施形態では
、２つの抗原結合部位は同一のＣＤＲを含む。

【0151】

抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え産生抗体、
単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キ
メラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量
体抗体、抗体軽鎖モノマー、抗体重鎖モノマー、抗体軽鎖ダイマー、抗体重鎖ダイマー、
抗体軽鎖－抗体重鎖ペア、イントラボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗
体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、ジ
スルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗
抗Ｉｄ抗体を含む）が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体はポリク
ローナル抗体である。好ましい実施形態では、本明細書に記載の抗体はモノクローナル抗
体である。抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、Ｉｇ
Ｇ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１またはＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ
_２ａまたはＩｇＧ_２ｂ）でありうる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ｉ
ｇＧ抗体、またはそのクラスもしくはサブクラスである。特定の実施形態では、抗体はヒ
ト化モノクローナル抗体である。別の特定の実施形態では、抗体はヒトモノクローナル抗
体であり、好ましくは免疫グロブリンである。

【0152】

本明細書で使用する用語「抗原結合断片」、「抗原結合領域」、および同様の用語は、
抗体分子に抗原に対する特異性を付与するアミノ酸残基を含む抗体分子の一部を指す（例
えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））。抗原結合領域は、例えば、げっ歯類（例えば、マウ
ス、ラットまたはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来することができる。
例として、抗原結合断片には、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、および上記の抗体のい
ずれかの抗原結合断片が含まれる。

【0153】

本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は互換的
に使用され、当技術分野で一般的である。可変領域は通常、抗体の一部、一般的には抗体
間で配列が大きく異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性に使用され
る軽鎖または重鎖の一部を指す。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる
領域に集中しているが、可変ドメインのより高度に保存された領域はフレームワーク領域
（ＦＲ）と呼ばれる。特定のメカニズムまたは理論に拘束されることを望まないが、軽鎖
および重鎖のＣＤＲが抗体と抗原との相互作用および特異性に主に関与すると考えられて
いる。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変
領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）の可変領域である。特
定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよび霊長類（例えば、
非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

【0154】

ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、および
Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの定義を含む、当技術分野におけるさまざまな方法で定義される。Ｋ
ａｂａｔの定義は配列の可変性に基づいており、ＣＤＲ領域を予測するために最も一般的
に使用される定義である（Ｋａｂａｔ，ＥｌｖｉｎＡ．ｅｔａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓ
ｔ。Ｂｅｔｈｅｓｄａ：ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ
、１９８３）。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造ループ領域の位置に基づいている（Ｃｈｏ
ｔｈｉａｅｔａｌ．，（１９８７）ＪＭｏｌＢｉｏｌ１９６：９０１－９１７
）。Ｋａｂａｔの定義とＣｈｏｔｈｉａの定義との妥協案であるＡｂＭの定義は、Ｏｘｆ
ｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒｏｕｐ（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）によ
って作成された抗体構造モデリングのためのプログラムの統合パッケージである（Ｍａｒ
ｔｉｎＡＣＲｅｔａｌ．，（１９８９）ＰＮＡＳ８６：９２６８－９２７２）
。Ｃｏｎｔａｃｔの定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている（ｂｉｏｉ
ｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）（ＭａｃＣａｌｌｕｍＲＭｅｔａｌ。、（１９９６
）ＪＭｏｌＢｉｏｌ５：７３２－７４５を参照）。ＩＭＧＴの定義はＩＭＧＴから
のものです（「ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム
（登録商標）Ｗｅｂサイトｉｍｇｔ．ｏｒｇ、創設者およびディレクター：Ｍａｒｉｅ－
ＰａｕｌｅＬｅｆｒａｎｃ、モンペリエ、フランス）。Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの定義はＡ
ｂＭとＫａｂａｔとの組み合わせである（Ｐｒｅｓｔａｅｔａｌ．，（１９９７）Ｃ
ａｎｃｅｒＲｅｓ５７：４５９３－４５９９）。

【0155】

本明細書には、上記のような抗ＭＥＲＴＫ抗体およびその抗原結合断片をコードする相
補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離された核酸（ポリヌクレオチド）も記載されている。
細胞毒性剤がペプチドもしくはタンパク質である場合、または細胞毒性剤およびリンカー
（存在する場合）がペプチドまたはタンパク質である場合、抗体薬物コンジュゲートをコ
ードする核酸も提供される。本明細書にさらに記載されるのは、そのような抗ＭＥＲＴＫ
抗体もしくはその抗原結合断片または抗体薬物コンジュゲートをコードする核酸（ポリヌ
クレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）および細胞（例えば、宿主細胞）
である。本明細書には、そのような抗体または抗体薬物コンジュゲートを製造する方法も
記載されている。

【0156】

他の形態では、本明細書によれば、（ｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片、
および（ｉｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合断片に直接結合しているか、また
は、リンカーを介して抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合断片に結合している細胞毒
性剤を含む抗体薬物コンジュゲートの製造方法が提供される。

【0157】

他の形態では、本明細書によれば、（ｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片、
および（ｉｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合断片に直接結合しているか、また
は、リンカーを介して抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合断片に結合している細胞毒
性剤を含む抗体薬物コンジュゲートの有効量を対象に投与することを含む、対象における
癌の治療方法が提供される。関連する組成物（例えば、医薬組成物）およびキットも提供
される。

【0158】

５．１抗体部分
本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートの抗体部分であり得る非限定的かつ例示
的な抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片を、以下に提示する。

【0159】

５．１．１配列およびバリアント
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌ
ａｒｙにより定義される、表１または表３の抗体のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実
施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ
、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによ
り定義される、表１または表３の抗体のＶＨＣＤＲ２を含む。一部の実施形態では、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉ
ａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙにより定義される、
表１または表３の抗体のＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記
載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表１または表３の抗体のＶＨＣＤＲ
のうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の第１行のＶＨＣＤＲ、抗体Ｍ
６のＫａｂａｔＶＨＣＤＲのすべて）を含む。

【0160】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌ
ａｒｙにより定義される、表２または表４の抗体のＶＬＣＤＲ１を含む。一部の実施形
態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃ
ｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙにより定
義される、表２または表４の抗体のＶＬＣＤＲ２を含む。一部の実施形態では、本明細
書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、
ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙにより定義される、表２
または表４の抗体のＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、表２または表４の抗体のＶＬＣＤＲのう
ちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の第１行のＶＨＣＤＲ、抗体Ｍ６の
すべてのＫａｂａｔＶＨＣＤＲ）を含む。

【0161】

【表1】

【0162】

【表2】

【0163】

【表3】

【0164】

【表4】

【0165】

【表5】

【0166】

【表6】

【0167】

【表7】

【0168】

【表8】

【0169】

【表9】

【0170】

【0171】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0172】

【0173】

【0174】

【0175】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0176】

【0177】

【0178】

【0179】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0180】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0181】

【0182】

【0183】

【0184】

【0185】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0186】

【0187】

【0188】

【0189】

【0190】

【0191】

【0192】

【0193】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＳＱＤＶＧＤＡのＶＬ（配列番号１６）ＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３。

【0194】

【0195】

【0196】

【0197】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３。

【0198】

【0199】

【0200】

【0201】

【0202】

【0203】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
ＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３；および／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３。

【0204】

特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、上記のＣＤＲの１つ、２つ、３
つ、４つ、５つ、または６つすべてを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結
合断片は、表１または表３のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体また
はその抗原結合断片は、表１または表３のＶＨＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態で
は、抗体またはその抗原結合断片は、表１または表３のＶＨＣＤＲ３を含む。いくつか
の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表２または表４のＶＬＣＤＲ１を含
む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表２または表４のＶＬ
ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表２または
表４のＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は
、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、Ｖ
ＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。特定の実施形態では、抗体または
その抗原結合断片は、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ
３（表２）を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ１９の
ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。特定の実施形
態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、
ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む（表１
および表２）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｍ１９のＶＬ
ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およ
びＶＨＣＤＲ３を含む（表３および表４）。

【0205】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0206】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0207】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0208】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0209】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0210】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１３）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３
、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0211】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ
３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0212】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２；および
／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0213】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0214】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２；および／また
は
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹ（配列番号４５）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0215】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0216】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（
ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは：
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２；およ
び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３のＶＨＣＤＲ３、
を含み、かつ、
（ｉｉ）前記ＶＬは：
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１；および／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２；および／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、
を含む。

【0217】

特定の実施形態では、ＶＨは上記のＶＨＣＤＲの２つまたは３つすべてを含み、およ
び／またはＶＬは上記のＶＬＣＤＲの２つまたは３つすべてを含む。特定の実施形態で
は、ＶＨは表１または表３の抗体の１つのＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態で
は、ＶＨは表１または表３の抗体の１つのＶＨＣＤＲ２を含む。特定の実施形態では、
ＶＨは表１または表３の抗体の１つのＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、
ＶＬは表２または表４の抗体の１つのＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、
ＶＬは表２または表４の抗体の１つのＶＬＣＤＲ２を含む。特定の実施形態において、
ＶＬは表２または表４の抗体の１つのＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態におい
て、ＶＨは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表１
）を含む。。特定の実施形態では、ＶＨは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ
２、およびＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、抗体Ｍ６のＶ
ＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。特定の実施形態
では、ＶＬは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（
表４）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および
ＶＨＣＤＲ３（表３）を含み、ＶＬは、抗体Ｍ１９のＣＤＲのＶＬＣＤＲのＶＬＣ
ＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。いくつかの実施形態で
は、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、抗体
Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（表１）を含み、ＶＬは
、抗体Ｍ６のＣＤＲのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（表２）
を含む。

【0218】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する
、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４９のアミノ
酸配列（表５）を含む重鎖可変領域配列（例えば、抗体Ｍ６のＶＨ）を含む。別の特定の
実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方の
ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本明細
書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５１のアミノ酸配列（表６）を含む
重鎖可変領域配列（表６）（例えば、抗体Ｍ１９のＶＨ）を含む。

【0219】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの
両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５０のアミノ酸配列（表５）
を含む軽鎖可変領域配列（例えば、抗体Ｍ６のＶＬ）を含む。別の特定の実施形態では、
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に
特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本明細書に記載の抗体
またはその抗原結合断片は、配列番号５２のアミノ酸配列（表６）を含む軽鎖可変領域配
列（例えば、抗体Ｍ１９のＶＬ）を含む。

【0220】

特定の一実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウ
スの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動す
る、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配
列を含む重鎖可変領域、および（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（
例えば、抗体Ｍ６のＶＨおよびＶＬ）を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例
えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、
内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本明細書に記載の抗体またはその抗原結
合断片は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｂ）配列番
号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（例えば、抗体Ｍ１９のＶＨおよびＶＬ）。

【0221】

好ましい実施形態において、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒ
トおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、
（Ａ）配列番号１のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、配列番号１１のＶＨ
ＣＤＲ３、配列番号１５のＶＬＣＤＲ１、配列番号１９のＶＬＣＤＲ２、および配
列番号２２のＶＬＣＤＲ３；
（Ｂ）配列番号２のＶＨＣＤＲ１、配列番号７のＶＨＣＤＲ２、配列番号１２のＶＨ
ＣＤＲ３、配列番号１６のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、および配
列番号２３のＶＬＣＤＲ３；
（Ｃ）配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号８のＶＨＣＤＲ２、配列番号１１のＶＨ
ＣＤＲ３、配列番号１５のＶＬＣＤＲ１、配列番号１９のＶＬＣＤＲ２、および配
列番号２２のＶＬＣＤＲ３；
（Ｄ）配列番号４のＶＨＣＤＲ１、配列番号９のＶＨＣＤＲ２、配列番号１３のＶＨ
ＣＤＲ３、配列番号１７のＶＬＣＤＲ１、配列番号２１のＶＬＣＤＲ２、および配
列番号２４のＶＬＣＤＲ３；
（Ｅ）配列番号５のＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２、配列番号１４のＶ
ＨＣＤＲ３、配列番号１８のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、および
配列番号２２のＶＬＣＤＲ３；または、
（Ｆ）配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、配列番号１１のＶＨ
ＣＤＲ３、配列番号１５のＶＬＣＤＲ１、配列番号１９のＶＬＣＤＲ２、および配
列番号２２のＶＬＣＤＲ３、
を含むヒト化抗体またはそのヒト化抗原結合断片である。

【0222】

特定の形態において、本明細書に記載の抗体は、そのＶＨドメイン単独、またはそのＶ
Ｌドメイン単独、またはその３つのＶＨＣＤＲ単独、またはその３つのＶＬＣＤＲ単
独により記載され得る。例えば、相補的な軽鎖または重鎖をヒト軽鎖または重鎖のライブ
ラリーからそれぞれ同定することによってマウス抗αＶβ３抗体をヒト化し、高い親和性
または元の抗体の親和性よりも高い親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらすことにつ
いて記載しており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＲａｄｅｒＣｅ
ｔａｌ．（１９９８）ＰＮＡＳ９５：８９１０－８９１５を参照。また、特定のＶＨ
ドメイン（またはＶＬドメイン）を使用して相補的な可変ドメインについてライブラリー
をスクリーニングすることにより特定の抗原に結合する抗体を作製する方法を説明してお
り、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＣｌａｃｋｓｏｎＴｅｔａｌ
．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８も参照。また、特定のＶＨドメ
インを使用して相補的なＶＬドメインについてライブラリー（例えば、ヒトＶＬライブラ
リー）をスクリーニングし、次いで選択されたＶＬドメインを使用して追加の相補的な（
例えば、ヒトの）ＶＨドメインの選択をガイドすることにより特定の抗原に結合する抗体
を作製する方法を記載し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＫｉｍＳＪ
％ＨｏｎｇＨＪ，（２００７）ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌ４５：５７２－も参照。

【0223】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ま
たはＣＤＲ３）領域および／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３
）領域に沿った１つまたは複数のＣＤＲの位置は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ
、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への免疫特異的な結合が維持される（例
えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少
なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が維持される）限り、１、２、３
、４、５、または６アミノ酸位置で異なっていてもよい。別の実施形態では、本明細書に
記載の抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域および／または
ＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域に沿った１つまたは複数のＣ
ＤＲの長さは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方の
ＭＥＲＴＫ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、実質的に、例えば、少なくと
も５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％
、少なくとも９５％が維持される）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそ
れ以上のアミノ酸だけ異なっていてもよい。別の実施形態では、本明細書に記載のＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および
／またはＶＬＣＤＲ３のアミノ末端および／またはカルボキシ末端は、ＭＥＲＴＫ（例
えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への免疫特異的な
結合が維持される（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、
少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が維持され
る）限り、本明細書に記載の１つまたは複数のＣＤＲと比較して、１つ、２つ、３つ、４
つ、５つまたはそれ以上のアミノ酸だけ長くてもよいし、短くてもよい。本明細書で使用
する「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、お
よび「特異的に認識する」という用語は、当業者によって理解されるように、抗体の文脈
における類似の用語であり、抗原結合部位を介して抗原（例えば、エピトープまたは免疫
複合体）に結合する抗体およびその抗原結合断片を指し、当該抗体または抗原結合断片と
他の抗原との交差反応性を排除するものではない。当技術分野で知られている任意の方法
を使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭ
ＥＲＴＫ）への免疫特異的な結合が維持されているかどうかを確認することができ、例え
ば、後述する実施例４および実施例７（セクション６）に結合アッセイおよび条件につい
ての記載がある。

【0224】

特定の形態において、本明細書には、抗ＭＥＲＴＫ抗体、あるいは、重鎖および／また
は軽鎖（例えば、重鎖のみ、軽鎖のみ、または重鎖および軽鎖の両方）を含むその抗原結
合断片が記載される。軽鎖に関して、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴ
Ｋ抗体またはその抗原結合断片の軽鎖はカッパ軽鎖である。別の特定の実施形態では、本
明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片の軽鎖はラムダ軽鎖である。さ
らに別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断
片の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。

【0225】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は軽鎖を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または
抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、お
よびＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２および表４に列挙されたもの）を含み、当該軽鎖の
定常領域は、カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥ
ＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫
特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は軽鎖を含
み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸
配列を含み、当該軽鎖の定常領域は、カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。本明細
書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は交換可能であり
、当技術分野で共通の意味を有する。定常領域は、抗体の一部分であり、例えば、抗体の
抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター
機能を示すことができる軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グ
ロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存さ
れたアミノ酸配列を有している。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は
、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する。

【0226】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体ま
たはその抗原結合断片は軽鎖を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６ま
たは抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２
、およびＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２および表４に列挙されたもの）を含み、当該軽
鎖の定常領域は、ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に
免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は軽鎖
を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２のアミ
ノ酸配列を含み、当該軽鎖の定常領域は、ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。特
定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する
。

【0227】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体ま
たはその抗原結合断片は軽鎖を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６ま
たは抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２
、およびＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２および表４に列挙されたもの）を含み、当該軽
鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖の定常領域のアミノ酸配列を含む
。特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は軽鎖を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸は、配列番号５０または
配列番号５２のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖またはヒト
ラムダ軽鎖の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原
結合断片は、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、
当技術分野で開示されており、例えば、ＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）
を参照。

【0228】

重鎖に関して、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗
原結合断片の重鎖は、アルファ（α）重鎖、デルタ（δ）重鎖、イプシロン（ε）重鎖、
ガンマ（γ）重鎖またはミュー（μ）重鎖であり得る。別の特定の実施形態において、本
明細書に記載の抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）重鎖、ヒトデルタ（δ）重鎖、ヒトイ
プシロン（ε）重鎖、ヒトガンマ（γ）重鎖またはヒトミュー（μ）重鎖を含み得る。

【0229】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は重鎖を含み、当該重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または
抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、お
よびＶＨＣＤＲ３（すなわち、表１および表３に列挙されたもの）を含み、当該重鎖の
定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形
態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲ
ＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断
片は重鎖を含み、当該重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４９または配列番号５
１のアミノ酸配列を含み、当該重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖の定常領域のア
ミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＭＥＲＴＫシ
グナル伝達を作動する。

【0230】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は重鎖を含み、当該重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または
抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、お
よびＶＨＣＤＲ３（すなわち、表１および表３に列挙されたもの）を含み、当該重鎖の
定常領域は、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られているヒト重鎖のアミノ酸を含
む。特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウ
スの両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはそ
の抗原結合断片は重鎖を含み、当該重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４９また
は配列番号５１のアミノ酸配列を含み、当該重鎖の定常領域は、本明細書に記載のまたは
当技術分野で公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗
原結合断片は、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する。ヒト定常領域配列の非限定的な例は
、当技術分野で開示されており、例えば、上述したＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（
１９９１）を参照。

【0231】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）
および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、Ｉ
ｇＡまたはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、Ｉ
ｇＡまたはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施
形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方の
ＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原
結合断片は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含み、定常領
域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子のア
ミノ酸配列を含み、これは免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、Ｉｇ
Ｇ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１およびＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス
（例えば、ＩｇＧ_２ａおよびＩｇＧ_２ｂ）である。特定の実施形態では、定常領域は、
ヒトのＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ免疫グロブリン分子のアミ
ノ酸配列を含み、これは免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ
_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１およびＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（
例えば、ＩｇＧ_２ａおよびＩｇＧ_２ｂ）である。

【0232】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片のＦ
ｃ領域に、１つ、２つまたはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を導入して、抗体
の１つまたは複数の機能特性を変更する。

【0233】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片
のＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵイン
デックス）によるナンバリングによる、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基２３１～３
４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基３４１～４４７）および／ま
たはヒンジ領域）に、１つ、２つまたはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を導入
して、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗
体またはその抗原結合断片の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の
親和性を減少または増加させる抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域にお
ける変異、およびそのような変異をＦｃ受容体またはその断片に導入する技術は、当技術
分野の当業者に知られている。Ｆｃ受容体に対する抗体またはその抗原結合断片の親和性
を変化させることができる抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片のＦｃ受容体におけ
る変異の例は、例えば、ＳｍｉｔｈＰｅｔａｌ．２０１２）ＰＮＡＳ１０９：６
１８１－６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、および国際公開第ＷＯ０２／０６
０９１９；ＷＯ９８／２３２８９；およびＷＯ９７／３４６３１に記載されており、これ
らは参照により本明細書に組み込まれる。

【0234】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、グリコシル化定常領域を含
む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、グリコシル化されて
いない定常領域を含む。フコース含量が減少した抗体は、例えばＦｃγＲＩＩＩａなどの
Ｆｃ受容体に対する親和性が増加していることが報告されている。したがって、特定の実
施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、フコース含量が低いか、
またはフコースを含有していない。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に
知られている技術を使用して作製することができる。例えば、抗体またはその抗原結合断
片は、フコシル化の能力が欠損しているかまたは欠如している細胞で発現され得る。特定
の例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを
持つ細胞株を使用して、フコース含量が減少した抗体を産生することができる。ポテリジ
ェント（登録商標）システム（ロンザ）は減少したフコース含量を有する抗体またはその
抗原結合断片を作製することができるシステムの一例である。あるいは、フコース含量が
低減された、またはフコースを含有しない抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、
以下によって作製され得る：（ｉ）フコシル化を防止または低減する条件下で細胞を培養
する；（ｉｉ）フコースの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉｉ）
例えば非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後の、所望の炭水化物の翻訳後付加；ま
たは（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合断片を選択するための糖タ
ンパク質の精製。フコースを含有しない、またはフコース含量の減少した抗体またはその
抗原結合断片を作製する方法については、例えば、ＬｏｎｇｍｏｒｅＧＤ＆Ｓｃｈ
ａｃｈｔｅｒＨ（１９８２）ＣａｒｂｏｈｙｄｒＲｅｓ１００：３６５－９２、お
よびＩｍａｉ－ＮｉｓｈｉｙａＨｅｔａｌ，．（２００７）ＢＭＣＢｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．７：８４を参照。

【0235】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を
作動する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、重鎖および／
または軽鎖を含み、（ｉ）当該重鎖は、（ａ）抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ
のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（すな
わち、表１および表３に列挙されたもの）を含む可変領域、並びに（ｂ）ヒトＩｇＧ重鎖
の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含むか、並びに／あるいは、（
ｉｉ）当該軽鎖は、（ａ）抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有
するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２および表
４に列挙されたもの）を含む可変領域、並びに（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ
酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。

【0236】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を
作動する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は重鎖および／ま
たは軽鎖を含み、（ｉ）当該重鎖は（ａ）配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配
列を含む可変領域、並びに（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重
鎖ドメインを含むか、並びに／あるいは、（ｉｉ）当該軽鎖は、配列番号５０または配列
番号５２のアミノ酸配列を含む可変領域、並びに（ｂ）ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインの
アミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。

【0237】

２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性百分率の決定は、数学
的アルゴリズムを使用して行うこともできる。２つの配列の比較に使用される数学的アル
ゴリズムの具体的かつ非限定的な例は、ＫａｒｌｉｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ
（１９９０）ＰＮＡＳ９０：５８７３－５８７７により修正された、ＫａｒｌｉｎＳ
＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ８７：２２６４－２２６８のアル
ゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，
（１９９０）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴ
プログラムに組み込まれている。本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を
得るためには、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索が、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパ
ラメーターセット、たとえばスコア＝１００、ワード長＝１２で実行可能である。本明細
書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るためには、ＢＬＡＳＴタンパク質
検索が、例えば、スコア５０、ワード長＝３に設定されたＸＢＬＡＳＴプログラムパラメ
ータを用いて実行可能である。比較の目的でギャップ付きアライメントを取得するには、
ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ２
５：３３８９３４０２に記載されているように、ギャップ付きＢＬＡＳＴを利用可能で
ある。あるいは、ＰＳＩＢＬＡＳＴを使用して、分子間の離れた関係を検出する反復探
索を行ってもよい（上記）。ＢＬＡＳＴ、ギャップＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩＢＬＡＳ
Ｔプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ
）のデフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブ上の
全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）、Ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ
）。配列の比較に使用される数学的アルゴリズムの別の具体的かつ非限定的な例は、Ｍｙ
ｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ４：１１１７のアルゴリズ
ムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧシーケンスアラインメントソフトウェアパ
ッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。
アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合には、ＰＡＭ１２０
重み残差表、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を使用可能である。

【0238】

２つの配列間の同一性百分率は、ギャップを許可するかどうかにかかわらず、上記と同
様の手法を使用して決定され得る。同一性百分率の計算では、通常、完全一致のみがカウ
ントされる。

【0239】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４９または配列番号５１のＶ
Ｈのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少
なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨを含む。特定の実施
形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥ
ＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗ＭＥＲ
ＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４９または配列番号５１のＶＨのアミノ酸
配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５
％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、当該抗体または
抗原結合断片は、表１～表４に記載のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬ
ＣＤＲ）と同一のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲ）を含む
。

【0240】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５０または配列番号５２のＶ
Ｌのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少
なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬを含む。特定の実施
形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥ
ＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗ＭＥＲ
ＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５０または配列番号５２のＶＬのアミノ酸
配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５
％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬを含み、当該抗体または抗原結合
断片は、表１～表４に記載のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲ
）と同一のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲ）を含む。

【0241】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号４９または配列番号５
１のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なく
とも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメ
イン、および（ｉｉ）配列番号５０または配列番号５２のＶＬドメインのアミノ酸配列に
対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、ま
たは少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。特定の実施形態では、
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に
免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗ＭＥＲＴＫ抗体ま
たはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号４９または配列番号５１のＶＨドメインのアミ
ノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも
９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメイン、および（ｉｉ）配
列番号５０または配列番号５２のＶＬドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％
、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の
配列同一性を有するＶＬドメインを含み、当該抗体または抗原結合断片は、表１～表４に
記載のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲ）と同一のＣＤＲ（例
えば、ＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲ）を含む。

【0242】

別の形態において、本明細書によれば、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｍ６また
は抗体Ｍ１９）と同じかまたは重複するＭＥＲＴＫのエピトープ（例えば、ヒトＭＥＲＴ
Ｋ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫのエピトープ）に結合する抗体が開示さ
れる。本明細書で使用される「エピトープ」は、当技術分野における用語であり、抗体が
特異的に結合することができる抗原の局所的な領域を意味する。エピトープは、例えば、
ポリペプチドの連続したアミノ酸（線形または隣接エピトープ）であってもよいし、１つ
または複数のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域から構成されていてもよい（立体配座
、非線形、不連続、または非連続のエピトープ）。特定の実施形態において、抗体のエピ
トープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析
と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）、アレイベースのオリ
ゴペプチドスキャニングアッセイ、および／または突然変異誘発マッピング（例えば、部
位特異的突然変異誘発マッピング）により決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、
当技術分野で既知の方法（例えば、ＧｉｅｇｅＲｅｔａｌ．，（１９９４）Ａｃｔ
ａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４
）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９９０））ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅ
ｍ１８９：１－２３；ＣｈａｙｅｎＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２
６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９７６）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５１
：６３００－６３０３）のいずれかを使用して達成することができる。抗体：抗原結晶は
、よく知られているＸ線回折技術を使用して研究でき、Ｘ－ＰＬＯＲ（ＹａｌｅＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ、Ｉｎｃ．に
よって配布された；例えば、ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ１
１４＆１１５、ｅｄｓＷｙｃｋｏｆｆＨＷｅｔａｌ．；ＵＳＰａｔｅｎｔ
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．２００４／００１４１９４を参照）、およびＢＵＳＴＥ
Ｒ（ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９３）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏ
ｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：３７－６０；ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（
１９９７）ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：３６１－４２３、ｅｄＣａｒｔｅｒ
ＣＷ；ＲｏｖｅｒｓｉＰｅｔａｌ．，（２０００）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌ
ｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５６（Ｐｔ１０）：１３１６－１３
２３）などのコンピューターソフトウェアを使用して修正可能である。突然変異誘発マッ
ピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。例え
ば、アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の説明についてはＣ
ｈａｍｐｅＭｅｔａｌ．，（１９９５）およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＢＣ＆
ＷｅｌｌｓＪＡ（１９８９）を参照。さらに、ＭＥＲＴＫ（たとえば、ヒトＭＥＲＴＫ
、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）の同じかまたは重複するエピトープを認
識して結合する抗体は、イムノアッセイなどの日常的な手法を使用して、例えばある抗体
が他の抗体の標的抗原への結合を阻害する能力を示すこと（すなわち、競合結合アッセイ
）により同定することができる。競合結合アッセイを使用して、２つの抗体があるエピト
ープに対して同様の結合特異性を持っているかどうかを判断することもできる。競合的結
合は、試験中の免疫グロブリンがＭＥＲＴＫなどの共通の抗原への参照抗体の特異的結合
を阻害するアッセイにおいて決定され得る。例えば、固相での直接または間接的な放射免
疫測定法（ＲＩＡ）、固相での直接または間接的な酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイ
ッチ競合アッセイ（ＳｔａｈｌｉＣｅｔａｌ．，（１９８３）ＭｅｔｈｏｄｓＥ
ｎｚｙｍｏｌ９：２４２－２５３を参照）；固相での直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（
ＫｉｒｋｌａｎｄＴＮｅｔａｌ．，（１９８６）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３７：３
６１４－９を参照）；固相での直接標識アッセイ、固相での直接標識サンドイッチアッセ
イ（ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓ
ｓを参照）；Ｉ－１２５標識を使用した固相での直接ラベルＲＩＡ（ＭｏｒｅｌＧＡ
ｅｔａｌ．，（１９８８）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２５（１）：７－１５を参照）；
固相での直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（ＣｈｅｕｎｇＲＣｅｔａｌ．，（１９９
０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６－５２）；直接ラベル化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈ
ａｕｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９０）ＳｃａｎｄＪＩｍｍｕｎｏｌ３２：７
７－８２）といった多くのタイプの競合結合アッセイが知られている。典型的に、そのよ
うなアッセイは、固体表面結合した精製抗原（例えば、ヒトＭＥＲＴＫなどのＭＥＲＴＫ
）またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識の試験免疫グロブリンおよび標識された
参照免疫グロブリンの使用を伴う。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面
または細胞に結合した標識の量を測定することにより測定できる。通常、試験免疫グロブ
リンは過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在すると、共通の抗原への参照抗
体の特異的結合を少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％
、７０～７５％またはそれよりも多く阻害する。競合結合アッセイは、標識抗原または標
識抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成され得る。このアッセイの一般的
なバージョンでは、抗原は９６ウェルプレートに固定されている。次に、放射能標識また
は酵素標識を使用して、標識抗体の抗原への結合を阻害する非標識抗体の能力を測定する
。さらなる詳細については、例えば、ＷａｇｅｎｅｒＣｅｔａｌ．，（１９８３）
ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３０：２３０８－２３１５；ＷａｇｅｎｅｒＣｅｔａｌ．
，（１９８４）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ６８：２６９－２７４；Ｋｕｒｏ
ｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９０）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５０：４８７２－４８７
９；ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９２）ＩｍｍｕｎｏｌＩｎｖｅｓｔ２
１：５２３－５３８；ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａ１１：３９１－４０７、およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、ＥｄＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤｅｄｉｔｏｒｓｓｕｐｒａ，
ｐｐ．３８６－３８９。

【0243】

特定の形態では、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイ（これは、標識抗原
または標識抗体を使用して、あらゆる数の異なる形式で構成できる）において２つの抗体
が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合には、競合結合アッセイを使用
することで、ある抗体が、例えば用量依存的に、別の抗体（例えば、参照抗体と実質的に
同じかまたは重複するエピトープに結合する抗体）によって競合的に阻害されるかどうか
を決定できる。特定の実施形態では、抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｍ６
または抗体Ｍ１９）を用いた競合結合アッセイで試験することができる。

【0244】

別の形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、Ｅ
ＬＩＳＡ競合アッセイまたは表面プラズモン共鳴）を使用して決定される、ＭＥＲＴＫ（
例えば、ヒトＭＥＲＴＫまたはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への結合について
本明細書に記載の抗体（例えば、Ｍ６またはＭ１９）と（例えば、用量依存的に）競合し
、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体が本明細書により開示される。別の
形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳ
Ａ競合アッセイまたは懸濁液アレイまたは表面プラズモン共鳴）を使用して決定される、
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫまたはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への
本明細書に記載の抗体（例えば、Ｍ６またはＭ１９）の結合を（例えば、用量依存的に）
競合的に阻害する抗体が本明細書により開示される。

【0245】

特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫまたはヒトおよびマウ
スの両方のＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体が自己競合するのと同程
度に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫまたはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ
）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗体が本明細書により開示される。
特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウ
スの両方のＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する第１の抗体が
本明細書により開示され、その競合は当該第１の抗体のＭＥＲＴＫへの結合の、８０％を
超える（例えば、８５％、９０％、９５％、９８％、または８０％～８５％、８０％～９
０％、８５％～９０％、または８５％～９５％）低下として示される。

【0246】

特定の形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）への特異的な結合について、配列番号４９または配列番号５１のア
ミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸配
列を有するＶＬドメインを含む抗体と（例えば、用量依存的に）競合する抗体が本明細書
により開示される。

【0247】

特定の形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）への特異的な結合について、（ｉ）表１または表３に列挙されてい
る抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨ
ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、および（ｉｉ）表２または表４に列挙されている抗体のＶ
ＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤ
Ｒ３を含むＶＬドメインを含む抗体と（例えば、用量依存的に）競合する抗体が本明細書
により開示される。ＶＨＣＤＲおよびＶＬ
特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）への特異的な結合について、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲおよびＶ
ＬＣＤＲ（表１および表２）を含む抗体と（例えば、用量依存的に）競合する抗体が本
明細書により開示される。

【0248】

特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）への特異的な結合について、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲおよび
ＶＬＣＤＲ（表３および表４）を含む抗体と（例えば、用量依存的に）競合する抗体が
本明細書により開示される。

【0249】

別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片
は、（ｉ）表１または表３に列挙されている抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、および（ｉｉ）
表２または表４に列挙されている抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、
ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体と同じかまたは重
複するエピトープに免疫特異的に結合する。

【0250】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号５０のアミノ酸配列
を有するＶＬドメインを含む抗体Ｍ６と同じかまたは重複するエピトープに免疫特異的に
結合する。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原
結合断片は、配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号５２の
アミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体Ｍ６と同じかまたは重複するエピトープに
免疫特異的に結合する。当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、Ｘ線
結晶学、ＥＬＩＳＡアッセイなど）を使用して、２つの抗体が同じエピトープに結合する
かどうかを判断することができる。

【0251】

親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）および平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含むがこれらに限定
されない、当技術分野で知られている多くの方法で測定および／または表現することがで
きる。Ｋ_Ｄは、バイオレイヤー干渉法などの当業者に知られている技術によって決定する
ことができる。特定の実施形態では、Ｋ_Ｄは、後述するセクション６の実施例４または実
施例７に記載されるように決定される。

【0252】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片、Ｍ
ＥＲＴＫへの結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその
抗原結合断片、または本明細書に記載の抗体と同じかまたは重複するエピトープに結合す
る抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、
４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２ｎＭ未
満、１．５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．７５ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未
満、０．１ｎＭ未満、０．０５ｎＭ未満、０．０２５ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満、また
は０．００５ｎＭ未満のＫ_ＤでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよ
びマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の
抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片、ＭＥＲＴＫへの結合について本明細書に記載
の抗体と競合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片、または本明細書に記載の抗
体と同じかまたは重複するエピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断
片は、およそ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２
．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、０
．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００５ｎＭのＫ_Ｄ
でＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ
）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその
抗原結合断片、ＭＥＲＴＫへの結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗ＭＥＲＴ
Ｋ抗体またはその抗原結合断片、または本明細書に記載の抗体と同じかまたは重複するエ
ピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、約３ｐＭ～約４００ｐ
ＭのＫ_ＤでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭ
ＥＲＴＫ）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または
その抗原結合断片は、約０．３ｎＭのＫ_ＤでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、また
はヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に結合する。別の特定の実施形態では、本明細
書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、約４．６ｐＭのＫ_ＤでＭＥＲＴ
Ｋ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に結合する
。本明細書で使用される「約」という用語は、数値または数値範囲の変更に使用される場
合、値または範囲の５％から１０％大きい偏差および５％から１０％小さい偏差が、記載
された値または範囲の意図する意味内に留まることを意味する。

【0253】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のエピトープは、抗体を製造するための免
疫原として使用される。抗体を産生するための方法については、例えば、後述するセクシ
ョン５．２を参照。

【0254】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
例えば、ＢｅｃｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓ
ｃｏｖ１６：３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗｎＳ，（２０１
５）ＢｉｏｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣｏｍｂｓＪＲａｎ
ｄＯｗｅｎＳＣ（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ１７：３３９－３
５１；ＪａｃｋｓｏｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓＲｅｓＤｅｖ２０
：８５２－８６６；または、ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨｕｒｖｉｔｚＳＡｅ
ｄ．（２０１６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅ
ｎｔａｌｓ，ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉ
ｌｅｙに記載された方法により、薬物部分との結合を促進するため、特に部位特異的な結
合を促進するために、当技術分野で知られている方法によって操作または改変される。薬
物部分との結合を促進する目的で抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片を操作または
改変するのに使用することができる非限定的かつ例示的な方法（ＢｅｃｋＡｅｔａ
ｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１５－３３７を
参照）としては、１つまたは複数の追加のシステインまたはセレノシステインの追加、非
天然アミノ酸工学、結合を支援できる特定の酵素によって認識可能な１つまたは複数のア
ミノ酸タグの追加、グリカンのリモデリング、アミノ末端セリンの追加、および天然のシ
ステイン架橋が挙げられる。

【0255】

５．１．２抗体部分の機能的特徴
いくつかの形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、内皮細胞上のＭＥ
ＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）の活性
を、少なくともおよそ、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１
５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１０
０倍増大させる。ＭＥＲＴＫの活性は、本明細書に記載の方法または当業者に知られてい
る方法、例えば、ＭＥＲＴＫのリン酸化の量を測定することにより、測定され得る。別の
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫのリン酸化の増加によって測定されるＭＥＲＴＫ活性の
増加は、抗体を含まない内皮細胞、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異
的に結合しない抗体）を含む内皮細胞のＭＥＲＴＫ活性（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、また
はヒトとマウスの両方のＭＥＲＴＫ活性）に対して少なくとも３倍、４倍、５倍、６倍、
７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、または３０倍である。特定の実施形態では
、ＭＥＲＴＫ活性の増加は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または
１００％である。特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ活性の増加は、後述する実施例３に記
載されるように評価される。

【0256】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、ＭＥＲＴＫへの結
合について、Ｇａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）と競合する。いくつかの実施形態で
は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｇａｓ－６がＭＥＲＴＫ（例えば
、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）へ結合するのを阻害す
る（例えば、完全に阻害するか、部分的にのみ阻害する）。いくつかの実施形態において
、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）
に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、本明細書に記載
の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知のまたは本明細書に記載の
アッセイにより評価した場合に、内皮細胞上でＧａｓ－６（例えば、ヒトまたはマウスの
Ｇａｓ－６）がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方の
ＭＥＲＴＫ）に結合するのを、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％以上、
５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１０％を超え
て阻害する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結
合断片の存在下でのＧａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒト
ＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）への結合の阻害を評価するの
に使用されるアッセイは、後述する実施例１に記載の抗体捕捉ＥＬＩＳＡである。

【0257】

特定の実施形態では、内皮細胞におけるＭＥＲＴＫリン酸化のレベルは、後述する実施
例３に記載されるようなホスホＭＥＲＴＫ特異的ウエスタンブロッティングにより測定さ
れる。

【0258】

特定の実施形態では、内皮細胞上のＭＥＲＴＫリン酸化のレベルを促進する（すなわち
、増加させる）本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、インビト
ロで癌細胞（例えば、乳癌細胞）上のＭＥＲＴＫリン酸化を促進しない（すなわち、増加
させない）。特定の実施形態において、癌細胞におけるＭＥＲＴＫリン酸化のレベルは、
後述する実施例３に記載されるようなホスホ－ＭＥＲＴＫ特異的ウエスタンブロッティン
グにより測定される。

【0259】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、癌細胞（例えば、
乳癌細胞）の存在下、インビトロでＭＥＲＴＫを発現する内皮細胞の遊走を阻害する。い
くつかの特定の実施形態において、内皮細胞の遊走は、本明細書に記載のおよび／または
当業者に既知の方法によって評価した場合に、少なくとも１０％、２０％、３０％、３５
％、４０％、５０％、または６０％阻害される。いくつかの特定の実施形態では、内皮細
胞の遊走は、本明細書に記載のおよび／または当業者に知られている方法で評価した場合
に、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％阻害される。移動の程度
は、本明細書に記載されているおよび／または当業者に知られている方法によって評価す
ることができる。阻害は、抗体を含まないかまたは無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに
免疫特異的に結合しない抗体）を含むＭＥＲＴＫ発現内皮細胞の遊走の程度に対する相対
的なものであってもよい。特定の実施形態では、内皮細胞の遊走を評価するのに使用され
るアッセイは、後述する実施例２に記載されているトランスウェル遊走アッセイである。

【0260】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、内皮細胞の非存在下でのインビ
トロのトランスウェル遊走アッセイにおいて、多形膠芽腫細胞株Ａ１７２の遊走を阻害し
ない。

【0261】

特定の実施形態において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマ
ウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を
作動する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍内の血管
新生を阻害する。いくつかの実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも１０％、２０
％、３０％、４０％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、または７５％である。特
定の実施形態では、血管新生の阻害は少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、また
は７０％である。血管新生の阻害は、本明細書に記載のおよび／または当業者に知られて
いる方法によって評価することができる。阻害は、抗体を含まないかまたは無関係の抗体
（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）を含む場合の血管新生レベルに対
する相対的なものであってもよい。特定の実施形態では、インビボで血管新生を評価する
のに使用されるアッセイは、後述する実施例６に記載されている通りである。

【0262】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動
する、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍（例えば、ヒ
ト乳癌腫瘍）の進行を阻害する。腫瘍の進行の阻害は、少なくとも１０％、２０％、３０
％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％である。腫瘍の進行は、本明細書に
記載のおよび／または当業者に知られている方法によって評価することができる。腫瘍の
進行は、抗体を含まないかまたは無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合
しない抗体）を含む場合の腫瘍の状態に対する相対的なものであってもよい。特定の実施
形態では、腫瘍の進行を評価するのに使用されるアッセイは、後述する実施例５および実
施例８に記載されているマウス腫瘍移植モデルである。

【0263】

５．２．抗体の製造
５．２．１．抗体の製造およびスクリーニング
本明細書には、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方
のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する抗体ま
たはその抗原結合断片を製造する方法も記載されている。

【0264】

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、抗体の合成のための当該分野で公知
の任意の方法、例えば、化学合成または組換え発現技術によって、製造することができる
。本明細書に記載される方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分
析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成および修飾、
核酸ハイブリダイゼーション、および当業者の範囲内の関連分野における従来の技術を使
用する。これらの技術は、例えば、本明細書で引用された参考文献に記載されており、文
献で十分に説明されている。例えば、ＭａｎｉａｔｉｓＴｅｔａｌ．，（１９８２
）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｃ
ｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋＪｅｔａｌ．，（１９８９），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：Ａ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐ
ｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ；ＳａｍｂｒｏｏｋＪ
ｅｔａｌ．，（２００１）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔ
ｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＡｕｓｕｂｅｌＦＭ
ｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉ
ｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７年および年次更新）；Ｃｕｒｒ
ｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ（１９８７年および年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃ
ｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，Ｉ
ＲＬＰｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，
ＩＲＬＰｒｅｓｓ；ＢｉｒｒｅｎＢｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅ
ｎｏｍｅＡｎａｌｙｓｉｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳ
ｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓを参照。

【0265】

特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、例えば合成、遺伝子工学を介した
ＤＮＡ配列の作製を伴う任意の手段により調製、発現、作製または単離された抗体（例え
ば、組換え抗体）である。特定の実施形態では、そのような抗体は、動物または哺乳動物
（例えば、ヒト）のインビボでの抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しないＤＮＡ
配列によってコードされる配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、
ヒトＭＥＲＴＫ（配列番号５７）またはその細胞外ドメイン（配列番号５８）を免疫原と
して使用することを含む方法によって作製される。

【0266】

特定の形態において、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む、Ｍ
ＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免
疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、抗ＭＥＲＴＫ抗体ま
たはその抗原結合断片を作製する方法が本明細書に記載される。特定の形態において、本
明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌ
クレオチドを含む細胞または宿主細胞）を用いて、本明細書に記載の抗体またはその抗原
結合断片を発現させる（例えば、組換え発現させる）ことを含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、
ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、
内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断
片を作製する方法が本明細書に記載される。特定の実施形態では、細胞は単離された細胞
である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが当該細胞に導入されている。特
定の実施形態では、この方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体またはその抗原結
合断片を精製する工程をさらに含む。

【0267】

ポリクローナル抗体を製造する方法は、当技術分野で知られている（例えば、第１１章
：ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（２
００２）第５版、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭら編、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ
、ニューヨークを参照）。

【0268】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によ
り製造される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、お
よびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用などの当技術分野で知
られている多種多様な技術を使用して作製することができる。例えば、モノクローナル抗
体は、本明細書に記載の抗体またはその断片、例えばそのような抗体の軽鎖および／また
は重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換え的に製造することができる。クローン細胞
株およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の調製方法は、当技術分野で周知であ
る（例えば、上述した、第１１章：：ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（２００２）第５版、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭらを参照）。
例えば、モノクローナル抗体は、ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏ
ｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，２ｎｄｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉ
ｎｇＧＪｅｔａｌ．，ｉｎ：ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎ
ｄＴ－ＣｅｌｌＨｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ，
１９８１）；及びＫｏｈｌｅｒＧ＆ＭｉｌｓｔｅｉｎＣ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５に記載のように当技術分野で公知のハイブリドーマ技術を用いて製造され
得る。ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を製造およびスクリーニングする方法は、
当技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、マウス（またはラット、サル
、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、またはイヌなどの他の動物）を抗原（例えば、ＭＥ
ＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ））で免
疫することができる。そして、免疫反応が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体が
マウス血清で検出されると、マウスの脾臓が採取され、脾臓細胞が単離される。次いで、
脾臓細胞を周知の技術により、任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、アメリカンタイプカル
チャーコレクション（ＡＴＣＣ（登録商標））（マナッサス、バージニア州）から入手可
能な細胞株ＳＰ２０からの細胞に融合し、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは
、限界希釈によって選択され、クローン化される。

【0269】

このように調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは融合されていない親骨髄腫細
胞の成長または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含む適切な培地に播種されて増殖
する。ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ
、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に対するモノクローナル抗体の産生につ
いてアッセイする。所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブ
リドーマ細胞が同定された後、標準的な方法（上述したＧｏｄｉｎｇＪＷ（Ｅｄ），Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃ
ｔｉｃｅ）により、クローンをサブクローンし、増殖させ、培地から分離することができ
る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当技術
分野で知られている方法、例えば、免疫沈降法、または放射性免疫測定法（ＲＩＡ）や酵
素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロでの結合アッセイによって決定さ
れる。

【0270】

特定の実施形態において、単一細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマま
たは宿主細胞）により産生されるモノクローナル抗体が本明細書に記載され、当該抗体は
、例えば、当技術分野で公知の、または本明細書で提供される実施例１に記載のようなＥ
ＬＩＳＡまたは他の抗原結合アッセイまたは競合結合アッセイにより測定した場合に、Ｍ
ＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免
疫特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体はキメラ抗体またはヒト
化抗体であり得る。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（
例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は単一特異性抗体
または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。

【0271】

本明細書に記載の抗体には、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよび
マウスの両方のＭＥＲＴＫ）を認識する抗体断片が含まれ、当業者に知られている任意の
技術によって作製することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂおよびＦ（ａｂ’
）_２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を生成する）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２断片
を生成する）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解により製造で
きる。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一アームの１つに対応し、重鎖のＶＨドメイン
およびＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、ヒンジ
領域のジスルフィド結合により連結された抗体分子の２つの抗原結合アームを含む。

【0272】

さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、当技術分野で公知の様々な
ファージディスプレイ法を使用して製造することもできる。ファージディスプレイ法では
、機能的抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を運ぶファージ粒子
の表面に表示する。特に、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、
動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラ
リー）から増幅される。ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲ
によりｓｃＦｖリンカーと組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。
ベクターは大腸菌内にエレクトロポレートされ、大腸菌はヘルパーファージに感染する。
これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３などの繊維状ファ
ージであり、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは通常、ファージの遺伝子ＩＩＩまたは遺
伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメ
インを発現するファージは、例えば、標識抗原または固体表面またはビーズに結合または
捕捉された抗原を使用して、抗原で選択または特定することができる。本明細書に記載の
抗体を作製するために使用できるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａ
ｎＵｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１８２：４
１－５０；ＡｍｅｓＲＳｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ
ｏｄｓ１８４：１７７－１８６；ＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈＣＡｅｔａｌ．，
（１９９４）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ２４：９５２－９５８；ＰｅｒｓｉｃＬ
ｅｔａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ１８７：９－１８；ＢｕｒｔｏｎＤＲ＆Ｂａｒ
ｂａｓＣＦ（１９９４）ＡｄｖａｎＩｍｍｕｎｏｌ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ
出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９
１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６
、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、およびＷＯ９７／１３８４４、並びに
米国特許第５，６９８，４２６、５，２２３，４０９、５，４０３，４８４、５，５８０
，７１７、５，４２７，９０８、５，７５０，７５３、５，８２１，０４７、５，５７１
，６９８、５，４２７，９０８、５，５１６，６３７、５，７８０，２２５、５，６５８
，７２７、５，７３３，７４３および５，９６９，１０８号に記載のものがある。

【0273】

上記の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード
領域を単離し、ヒト抗体などの抗体全体、またはその他の望ましい抗原結合断片を生成す
るために使用し、例えば、以下に説明するように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、
酵母、および細菌などのあらゆる望ましい宿主で発現させることができる。Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ’およびＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体断片を組換えにより産生する技術も、ＰＣＴ公
開番号ＷＯ９２／２２３２４；ＭｕｌｌｉｎａｘＲＬｅｔａｌ．，（１９９２）Ｂ
ｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１２（６）：８６４－９；ＳａｗａｉＨｅｔａｌ．，
（１９９５）ＡｍＪＲｅｐｒｏｄＩｍｍｕｎｏｌ３４：２６－３４；及びＢｅｔ
ｔｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１－１０４３
に開示されているものなど、当技術分野で知られている方法を使用して実施可能である。

【0274】

一形態では、抗体全体を生成するために、ＶＨヌクレオチド配列またはＶＬヌクレオチ
ド配列、制限部位、および制限部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用し
て、テンプレート、例えばｓｃＦｖクローンからＶＨ配列またはＶＬ配列を増幅すること
ができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインをＶＨ
定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを
ＶＬ定常領域、例えばヒトのカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニ
ングすることができる。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する
１つのベクターにクローニングしてもよい。次いで、当業者に公知の技術を使用して、重
鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを細胞株に同時トランスフェクトして、完全長抗
体、例えばＩｇＧを発現する安定なまたは一過性の細胞株を生成する。

【0275】

キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。
例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウスまたはラットのモノクロー
ナル抗体の可変領域を含むことができる。キメラ抗体を産生する方法は、当技術分野で知
られている。例えば、ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１
２０２－７；ＯｉＶＴ＆ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ４：２１４－２２１；ＧｉｌｌｉｅｓＳＤｅｔａｌ．，（１９８９）ＪＩ
ｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１－２０２；並びに、米国特許第５，８０
７，７１５号、４，８１６，５６７号、４，８１６，３９７号、および６，３３１，４１
５号を参照。

【0276】

ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列
を実質的に有するフレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グ
ロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲとを含む。特定の実施形態では、ヒト
化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫
グロブリンのものを含む。この抗体には、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およ
びＣＨ４領域も含まれ得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇ
Ｅなどの免疫グロブリンの任意のクラス、並びにＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３およびＩ
ｇＧ_４などの任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティン
グ（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、並びに米国特
許第５，２２５，５３９号、５，５３０，１０１号、および５，５８５，０８９号）、ベ
ニアリングまたはリサーフェシング（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号およびＥＰ５１９５
９６号；ＰａｄｌａｎＥＡ（１９９１）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２８（４／５）：４
８９－４９８；ＳｔｕｄｎｉｃｋａＧＭｅｔａｌ．，（１９９４）ＰｒｏｔＥｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６））：８０５－８１４；およびＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔ
ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特
許第５，５６５，３３２号）に開示されている技術や、例えば、米国特許第６，４０７，
２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号；Ｔａ
ｎＰｅｔａｌ．，（２００２）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６９：１１１９－２５；Ｃ
ａｌｄａｓＣｅｔａｌ．，（２０００）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１３（５）：３
５３－６０；ＭｏｒｅａＶｅｔａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ２０（３）
：２６７－７９；ＢａｃａＭｅｔａｌ．，（１９９７）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ
２７２（１６）：１０６７８－８４；ＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔａｌ．，（１９９６
）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ９（１０）：８９５９０４；ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａ
ｌ．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９
７７ｓ；ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａｌ．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５５（
８）：１７１７－２２；ＳａｎｄｈｕＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ１５０（２）：４０
９－１０及びＰｅｄｅｒｓｅｎＪＴｅｔａｌ．，（１９９４）ＪＭｏｌＢｉｏ
ｌ２３５（３）：９５９－７３に記載の技術を含むが、これらに限定されない、当技術
分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。参照によりその全体が本明細
書に組み込まれる、米国出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１（２００５年２
月２４日）も参照されたい。

【0277】

多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製する方法が開示されており、例えば、米
国特許第７，９５１，９１７号；７，１８３，０７６号；８，２２７，５７７号；５，８
３７，２４２号；５，９８９，８３０号；５，８６９，６２０号；６，１３２，９９２号
および８，５８６，７１３号を参照。

【0278】

単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当技術分野で周知の方法により産生さ
れ得る。ＲｉｅｃｈｍａｎｎＬ＆ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓＳ（１９９９）ＪＩｍｍ
ｕｎｏｌ２３１：２５－３８；ＮｕｔｔａｌｌＳＤｅｔａｌ．，（２０００）Ｃ
ｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌｄｅ
ｒｍａｎｓＳ，（２００１）ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４（４）：２７７－３０２
；米国特許第６，００５，０７９号；および国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、ＷＯ９
４／２５５９１号およびＷＯ０１／４４３０１号を参照。

【0279】

さらに、ＭＥＲＴＫ抗原に免疫特異的に結合する抗体を利用して、当業者に周知の技術
を使用して抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を作製することができる。（例えば
、ＧｒｅｅｎｓｐａｎＮＳ＆ＢｏｎａＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢＪ７（５）：
４３７－４４４；およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆＡ（１９９１）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４
７（８）：２４２９－２４３８を参照）。

【0280】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体と同じかまたは重複
するＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ
）のエピトープに結合する、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその
抗原結合断片である。特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体のいずれか（例え
ば、Ｍ６またはＭ１９）のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウ
スの両方のＭＥＲＴＫ）への結合を競合的に阻害する、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗
ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片である。ヒト抗体は、当該分野で公知の任意の方
法を使用して産生され得る。例えば、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、
ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用できる。特に、
ヒトの重鎖および軽鎖の免疫グロブリン遺伝子の複合体を、ランダムに、または相同組換
えによりマウス胚性幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒトの重鎖および軽鎖の
遺伝子に加えて、ヒトの可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚性幹細胞に導
入することができる。マウスの重鎖および軽鎖の免疫グロブリン遺伝子については、相同
組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別に、またはこれと同時にその機能
を失わせることができる。特に、Ｊ_Ｈ領域のホモ接合体の欠失により、内因性の抗体産生
が阻害される。改変された胚性幹細胞は培養され、胚盤胞にマイクロインジェクションさ
れて、キメラマウスが作られる。次に、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現する
ホモ接合の子世代を作製する。このトランスジェニックマウスは、選択された抗原、例え
ば抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ）の全部または一部を用いて通常の方法で免疫される。抗原
に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫トランスジ
ェニックマウスから取得することができる。トランスジェニックマウスが保有するヒト免
疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化中に再配列し、その後クラススイッチングおよ
び体細胞変異を受ける。したがって、そのような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ
、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するた
めのこの技術の概要については、例えば、ＬｏｎｂｅｒｇＮ＆ＨｕｓｚａｒＤ（１９
９５）ＩｎｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ１３：６５－９３を参照。ヒト抗体およびヒト
モノクローナル抗体を産生するためのこの技術およびそのような抗体を産生するためのプ
ロトコールの詳細な議論については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９
６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５および米国特許第５，４１３，９２３、５，
６２５，１２６、５，６３３，４２５、５，５６９，８２５、５，６６１，０１６、５，
５４５，８０６、５，８１４，３１８および５，９３９，５９８を参照。ヒト抗体を産生
できるマウスの例には、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｉｎｃ．；米国
特許第６，０７５，１８１および６，１５０，１８４）、ＨｕＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（商標）
（Ｍｅｄｅｒｅｘ、Ｉｎｃ．／ＧｅｎＰｈａｒｍ；米国特許第５，５４５，８０６およ
び５，５６９，８２５）、ＴｒａｎｓＣｈｒｏｍｏＭｏｕｓｅ（商標）（キリン）お
よびＫＭＭｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）がある。

【0281】

ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）
に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを
使用した上記のファージディスプレイ法などの、当技術分野で知られているさまざまな方
法で作製できる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、および第
５，８８５，７９３号；および国際公開第ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３
、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３
３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１も参照。

【0282】

いくつかの実施形態では、マウス－ヒトハイブリドーマを使用してヒト抗体を産生する
ことができる。たとえば、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト
末梢血リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマ
ウス－ヒトハイブリドーマを作製し、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスクリーニ
ングして、標的抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよび
マウスの両方のＭＥＲＴＫ））に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌す
るものを決定することができる。そのような方法は知られており、当技術分野で開示され
ている。例えば、ＳｈｉｎｍｏｔｏＨｅｔａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ４６：１９－２３；ＮａｇａｎａｗａＹｅｔａｌ．，（２００５）
ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１４：２７－３１を参照。

【0283】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する
抗体またはその抗原結合断片を産生する方法は、後述する実施例１に記載されている。

【0284】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウス
の両方のＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動する
抗体またはその抗原結合断片をスクリーニングおよび選択する方法は、後述する実施例１
に記載されている。

【0285】

本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片が産生されると、免疫グロ
ブリン分子を精製するための当技術分野で公知の任意の方法、例えばクロマトグラフィー
（例えば、イオン交換、アフィニティー、特に、プロテインＡ後の特定の抗原に対するア
フィニティー、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、また
はタンパク質精製のためのその他の標準的な手法により精製することができる。さらに、
本明細書に記載の抗体は、精製を促進するために、本明細書に記載されるかまたは当技術
分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。

【0286】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、
単離または精製される。一般的に、単離された抗体は、単離された抗体とは異なる抗原特
異性を持つ他の抗体を実質的に含まない抗体である。例えば、特定の実施形態では、本明
細書に記載の抗体の調製物は、細胞物質および／または化学前駆体を実質的に含まない。
「細胞物質を実質的に含まない」という用語には、抗体が単離または組換え生産される細
胞の細胞成分から分離されている抗体の調製物が含まれる。したがって、細胞物質を実質
的に含まない抗体には、およそ３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、
または０．１％（乾燥重量）未満の異種のタンパク質（本明細書では「混入タンパク質」
とも呼ばれる）および／または抗体の変異体、例えば抗体の異なる翻訳後修飾の形態また
は他の異なる抗体のバージョン（例えば、抗体断片）を有する抗体の調製物が含まれる。
抗体が組換えにより産生される場合、それはまた、一般に培地を実質的に含まない、すな
わち、培地はタンパク質調製物の体積のおよそ２０％、１０％、２％、１％、０．５％、
または０．１％未満を占める。抗体が化学合成により生成される場合、それは一般に化学
前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、タンパク質の合成に関与する
化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のそのような調製物は
、対象の抗体以外の化学前駆体または化合物をおよそ３０％、２０％、１０％、または５
％（乾燥重量で）未満で有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は単離また
は精製されている。

【0287】

５．２．２ポリヌクレオチド
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）
の抗原に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、
可変軽鎖領域および／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド、並びに、ベクター、例えば、当該ポリヌクレオチドの宿主細胞（例えば、大
腸菌および哺乳動物細胞）における効率的な発現のためのポリヌクレオチドを含むベクタ
ーもまた、本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは単
離または精製されている。

【0288】

本明細書で使用される「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の
天然源に（例えば、マウスまたはヒトに）存在する他の核酸分子から分離されたものであ
る。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組換え技術によって産生さ
れる場合には他の細胞物質または培地を実質的に含まないか、または、化学合成される場
合には化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。例えば、「実質的に含まない
」という用語には、およそ１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１
％未満の他の物質、例えば細胞物質、培地、他の核酸分子、化学前駆体および／または他
の化学物質、を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物が含まれる。

【0289】

特定の形態において、ＭＥＲＴＫポリペプチド（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異
的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合断片、並びに
、ＭＥＲＴＫポリペプチドへの結合についてこのような抗体と（例えば、用量依存的に）
競合するか、またはこのような抗体のエピトープと同じかまたは重複するエピトープに結
合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に開示され
る。

【0290】

特定の形態において、本明細書に記載の抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に記載される。ポリヌクレオチドは、本明細書
に記載のＶＨＣＤＲ（例えば、表１および表３を参照）を含む重鎖をコードするヌクレ
オチド配列を含むことができる。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＶＬＣＤＲ（
例えば、表２および表４を参照）を含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことが
できる。

【0291】

特定の実施形態において、例えば表１または表３に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ
Ｒ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含むＭＥＲＴＫアゴニスト抗体
をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に開示される。特定の
実施形態では、例えば表２または表４に記載のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および
ＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含むＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードする
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に開示される。特定の実施形態にお
いて、例えば表１または表３に記載のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣ
ＤＲ３を含む３つのＶＨ鎖ＣＤＲ、並びに、例えば表２および表４に記載のＶＬＣＤＲ
１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含むＭＥＲＴＫ
アゴニスト抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に記載
される。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、Ｍ６のＶＨＣＤ
Ｒ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（すなわち、配列番号１、６、および１１
；配列番号２、７および１２；配列番号３、８、および１１；配列番号４、９、および１
３；配列番号５、１０、および１４；または配列番号３、６、および１１）をコードする
。特定の実施形態において、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、Ｍ６のＶＬＣＤＲ
１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（すなわち、配列番号１５、１９、および２
２；配列番号１６、２０、および２３；配列番号１７、２１、および２４；または配列番
号１８、２０、および２２）をコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリ
ヌクレオチドは、Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（すな
わち、配列番号１、６、および１１；配列番号２、７および１２；配列番号３、８、およ
び１１；配列番号４、９、および１３；配列番号５、１０、および１４；または配列番号
３、６、および１１）、並びに、３つのＭ６のＶＬＣＤＲ（すなわち、配列番号１５、
１９、および２２；配列番号１６、２０、および２３；配列番号１７、２１、および２４
；または配列番号１８、２０、および２２）をコードする。

【0292】

特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１
、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（すなわち、配列番号２５、３０、および３５
；配列番号２６、３１、および３６；配列番号２７、３２、および３５；配列番号２８、
３３、および３７；配列番号２９、３４、および３８；または配列番号２７、３０、およ
び３５）をコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、Ｍ
１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３（例えば、配列番号３９
、４３、および４６；配列番号４０、４４、および４７；配列番号４１、４５、および４
８；または配列番号：４２、４４、および４６）をコードする。特定の実施形態では、本
明細書に記載のポリヌクレオチドは、Ｍ１９の３つのＶＨＣＤＲ（すなわち、配列番号
２５、３０、および３５；配列番号２６、３１、および３６；配列番号２７、３２、およ
び３５；配列番号２８、３３、または３７；配列番号２９、３４、および３８；または配
列番号２７、３０、および３５）、並びに、Ｍ１９の３つのＶＬＣＤＲ（すなわち、配
列番号３９、４３、および４６；配列番号：４０、４４、および４７；配列番号４１、４
５、および４８；または配列番号：４２、４４、および４６）をコードする。

【0293】

特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ
酸配列（配列番号４９または５１）を含む重鎖可変領域を含む本明細書に記載の抗ＭＥＲ
ＴＫ抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当該抗体はＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭ
ＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する。特定
の実施形態において、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸
配列（配列番号５０または５２）を含む軽鎖可変領域を含む本明細書に記載の抗ＭＥＲＴ
Ｋ抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当該抗体はＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥ
ＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する。特定の
実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含
む重鎖可変領域、および配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む本明細書
に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当該抗体はＭＥＲＴＫ
（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的
に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号５１
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域を含む本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当
該抗体はＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲ
ＴＫ）に免疫特異的に結合する。

【0294】

特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号５３または配列
番号５５の核酸配列を含むＶＨをコードする。特定の実施形態では、本明細書に記載のポ
リヌクレオチドは、配列番号５４または配列番号５６の核酸配列を含むＶＬをコードする
。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号５３の核酸配列
を含むＶＨ、および配列番号５４の核酸配列を含むＶＬをコードする（例えば、Ｍ６）。
別の特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号５５の核酸配
列を含むＶＨ、および配列番号５６の核酸配列を含むＶＬをコードする（例えば、Ｍ１９
）。

【0295】

特定の形態において、軽鎖および重鎖、例えば別個の軽鎖および重鎖を含む抗体をコー
ドするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に開示される。軽鎖に関して
、特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、カッパ軽鎖をコードする
ヌクレオチド配列を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド
は、ラムダ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。さらに別の特定の実施形態では、
本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む本明
細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、本明細書
に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよび
マウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達
を作動する、本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当該抗体は軽
鎖を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２のい
ずれかのアミノ酸配列を含むことができ、当該軽鎖の定常領域はヒトカッパ軽鎖の定常領
域を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ
（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的
に結合し、内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動し、軽鎖を含む、本明細書に記載の
抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、当該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列
番号５０または配列番号５２のいずれかのアミノ酸配列を含むことができ、軽鎖の定常領
域はヒトラムダ軽鎖の定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0296】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合
断片（例えば、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン）をコードする最適化されたポ
リヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合
断片（例えば、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン）をコードする最適化されてい
ないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的な）ポリヌクレオチドにハイ
ブリダイズできる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体ま
たは抗原結合断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＭＥ
ＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合断片をコードする最適化されていないポリヌク
レオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高ストリンジェンシー条件下でハイブリ
ダイズする。特定の実施形態では、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはそ
の抗原結合断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＭＥＲ
ＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合断片をコードする最適化されていないヌクレオチ
ド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高ストリンジェンシー、中または低ストリンジ
ェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。特定の実施形態では、本
明細書に記載のポリヌクレオチドはコドン最適化されている。ハイブリダイゼーション条
件に関する情報は開示されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許
出願公開第２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２～７３）を参照。

【0297】

当該分野で公知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ、ポリヌクレオチド
のヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に記載の抗体およびこれらの抗体の修飾バ
ージョンをコードするヌクレオチド配列は、当技術分野で周知の方法を使用して決定でき
る、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、
抗体をコードする核酸を生成するように組み立てられる。抗体をコードするこのようなポ
リヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（
例えば、ＫｕｔｍｅｉｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９４）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ１７：２４２－６に記載されている）、簡単に言えば、抗体をコードする配列の部
分を含有するオリゴヌクレオチドを重複させ、それらのオリゴヌクレオチドをアニーリン
グおよびライゲーションし、そしてライゲーションされたオリゴヌクレオチドをＰＣＲに
より増幅する。

【0298】

あるいは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で周知
の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング法）を使用して、適切な供給源（例
えば、ハイブリドーマ）からの核酸から生成できる。例えば、既知の配列の３’および５
’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産
生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実行することができる。
そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする配列を
含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の可変軽鎖領域
および／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅され
た核酸は、例えばキメラ抗体およびヒト化抗体を作製するために、宿主細胞での発現およ
びさらなるクローニングのためにベクターにクローニングすることができる。

【0299】

特定の抗体をコードする核酸を含むクローンが入手できないが、抗体分子の配列がわか
っている場合には、当該免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成するか、または
適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリーまたは、本明細書に記載の抗体を発現
するために選択されたハイブリドーマ細胞などの抗体を発現する組織または細胞から作製
され、または核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ、もしくは単離されたｃＤＮＡライブラリ
ー）から、配列の３’および５’にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣ
Ｒ増幅により、または、例えば当該抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮ
Ａクローンを同定するための特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを
使用したクローニングにより、取得することができる。次いで、ＰＣＲにより生成された
増幅核酸は、当該分野で周知の任意の方法を使用して複製可能なクローニングベクター中
にクローニングされ得る。

【0300】

本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用
して（例えば、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的
に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離および配
列決定することができる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの供給源として機能
し得る。単離されると、ＤＮＡは発現ベクター中に導入され、これはその後に、他の方法
では免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズ
ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯＧＳシステム（商標）（ロンザ）から
のＣＨＯ細胞）、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主
細胞においてＭＥＲＴＫアゴニスト抗体の合成を行う。

【0301】

抗体全体を作製するには、ＶＨまたはＶＬのヌクレオチド配列、制限部位、および制限
部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンのＶＨ配
列またはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して
、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインを重鎖定常領域、例えばヒトガンマ４定常領域を発現するベク
ターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを軽鎖定常領域、例えば、
ヒトのカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる
。特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、プロモー
ター、分泌シグナル、可変ドメインのクローニング部位、定常ドメイン、および選択マー
カーを含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにク
ローニングすることもできる。重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に公
知の技術を用いて、完全長の抗体（例えば、ＩｇＧ）を発現する安定したまたは一過性の
細胞株を生成する細胞株に同時トランスフェクトされる。

【0302】

ＤＮＡは、例えば、マウス配列の代わりにヒトの重鎖および軽鎖定常ドメインのコード
配列で置換することにより、または非免疫グロブリンポリぺプチドのコード配列の全部ま
たは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合により連結することにより修飾すること
もできる。

【0303】

本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドに、高ストリンジェンシー、中ス
トリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブ
リダイズするポリヌクレオチドもまた、本明細書に開示される。特定の実施形態では、本
明細書に記載のポリヌクレオチドは、高ストリンジェンシー、中または低ストリンジェン
シーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書で提供されるＶＨ（配列番号４９もし
くは５１）および／またはＶＬ（配列番号５０もしくは５２）をコードするポリヌクレオ
チドにハイブリダイズする。

【0304】

ハイブリダイゼーション条件は当該分野で開示されており、当業者に知られている。例
えば、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションには、約４５℃での６×塩
化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中のフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダ
イゼーションと、それに続く約５０～６５℃での０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での
１回以上の洗浄が含まれ得る；高ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション
には、約４５℃での６×ＳＳＣ中のフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーションと、
それに続く約６８℃での０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中での１回以上の洗浄が含まれ
得る。他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーショ
ンは当業者に公知で、開示されており、例えば、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，
ｅｄｓ．，（１９８９）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａ
ｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．Ｉ、ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａ
ｔｅｓ、Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，ニューヨーク、６
．３．１－６．３．６および２．１０．３ページを参照。

【0305】

【0306】

５．２．３細胞およびベクター
宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞での組換え発現のためのＭＥＲＴＫアゴニスト抗体
またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベ
クター（例えば、発現ベクター）も本明細書に開示される。本明細書に記載のＭＥＲＴＫ
アゴニスト抗体またはその抗原結合断片（例えば、ヒト抗体またはヒト化抗体）を組換え
発現するためのそのようなベクターを含む宿主細胞も本明細書に開示される。

【0307】

ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）
に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、本明細書に記載の全長抗体、抗体の
重鎖および／もしくは軽鎖、または単鎖抗体）の組換え発現は、当該抗体をコードするポ
リヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を伴う。本明細書に記載の抗体分子、抗体の重
鎖および／または軽鎖、またはその抗原結合断片（例えば重鎖および／または軽鎖可変領
域）をコードするポリヌクレオチドが得られたら、当技術分野で周知の技術を使用する組
換えＤＮＡ技術によって当該抗体分子の産生のためのベクターを作製することができる。
したがって、抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）をコードするヌクレオチド
配列を含むポリヌクレオチドを発現させることによりタンパク質を調製する方法が本明細
書に開示される。当業者に周知の方法を使用して、抗体または抗体断片（例えば、軽鎖ま
たは重鎖）をコードする配列および適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクタ
ーを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、
合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。プロモーターに作動可能に連結され
た、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖または軽鎖、抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖または
軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合断片、あるいは重鎖または軽鎖のＣＤＲをコードす
るヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも本明細書に開示される。そのようなベク
ターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、国際公開
第ＷＯ８６／０５８０７およびＷＯ８９／０１０３６；並びに米国特許第５，１２２，４
６４号を参照）を含むことができ、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖および軽鎖の両方の
全体の発現のために抗体の可変ドメインをそのようなベクターにクローニングすることが
できる。

【0308】

発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に移され、次いで、得
られた細胞は、従来の技術によって培養されて、本明細書に記載の抗体またはその抗原結
合断片を産生し得る。したがって、宿主細胞における配列の発現のためのプロモーターに
作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、またはその重鎖
もしくは軽鎖、またはその断片、または本明細書に記載の単鎖抗体をコードするポリヌク
レオチドを含む宿主細胞が本明細書に開示される。本明細書で使用される場合、「宿主細
胞」との用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株
由来の細胞であり得る。特定の実施形態では、「宿主細胞」という用語は、ある核酸分子
でトランスフェクトされた細胞およびそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を意味す
る。そのような細胞の子孫は、例えば後続の世代または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組
み込みで起こり得る突然変異または環境の影響により、核酸分子でトランスフェクトされ
た親細胞と同一ではなくてもよい。

【0309】

様々な宿主－発現ベクターシステムを利用して、本明細書に記載の抗体分子を発現させ
ることができる。そのような宿主－発現システムは、それによって目的のコード配列が産
生されてその後精製され得る媒体を意味するが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転
換またはトランスフェクトすると、本明細書に記載の抗体分子をインサイチュで発現でき
る細胞も意味する。これらには、例えば、抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオ
ファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された
細菌（例えば、大腸菌および枯草菌）；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベク
ターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス・ピキア）；抗体をコードする配列
を含む組換えウイルス（例えば、バキュロウイルス）発現ベクターに感染した昆虫細胞シ
ステム；抗体をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワ
ーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した、または
、抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド
）で形質転換された植物細胞システム（例えば、クラミドモナス・ラインハーディなどの
緑藻）；あるいは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオ
ネインプロモーター）、または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデ
ノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え
発現コンストラクトを保有する哺乳動物細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ
１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、
ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ
－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４
０、ＹＢ／２０およびＢＭＴ１０細胞）があるがこれらに限定されない。特定の実施形態
では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を発現する細胞は、ＣＨＯ細胞、例
えばＣＨＯＧＳＳｙｓｔｅｍ（商標）（ロンザ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実
施形態では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞
株である。特定の実施形態では、哺乳動物発現ベクターはｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）また
はｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に全長の組換え抗体分子の発現のた
めに、大腸菌などの細菌細胞または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が組換え抗体分子
の発現に使用される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類
細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーター要素などの
ベクターと組み合わせると、抗体の効果的な発現システムである（ＦｏｅｃｋｉｎｇＭ
Ｋ＆ＨｏｆｓｔｅｔｔｅｒＨ（１９８６）Ｇｅｎｅ４５：１０１－５；およびＣｏｃ
ｋｅｔｔＭＩｅｔａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ８（７）：
６６２－７）。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０
細胞によって産生される。特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、
またはヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、内皮細胞のＭＥＲ
ＴＫシグナル伝達を作動する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現
は、構成的プロモーター、誘導性プロモーターまたは組織特異的により調節される。

【0310】

細菌系では、発現される抗体分子の用途に応じて、多くの発現ベクターを有利に選択で
きる。例えば、抗体分子の医薬組成物の製造のために、そのような抗体を大量に生産する
場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ま
しい場合がある。このようなベクターとしては、以下に制限されないが、大腸菌発現ベク
ターｐＵＲ２７８（ＲｕｅｔｈｅｒＵ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ－ＨｉｌｌＢ（１９８３）Ｅ
ＭＢＯＪ２：１７９１－１７９４）（ここで抗体コード配列は、ｌａｃＺコード領域
とインフレームになるように個別にベクターにライゲーションすることができ、これによ
り融合タンパク質が産生される）；ｐＩＮベクター（ＩｎｏｕｙｅＳ＆Ｉｎｏｕｙｅ
Ｍ（１９８５）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ１３：３１０１－３１０９；ＶａｎＨｅ
ｅｋｅＧ＆ＳｃｈｕｓｔｅｒＳＭ（１９８９）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２４：５５
０３－５５０９）などが挙げられる。例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、外来ポリペ
プチドをグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現
させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックス
グルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合と、それに続く遊離グルタチオンの存
在下での溶出により溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターはトロ
ンビンまたはＸａ因子によるプロテアーゼ切断部位を含むように設計されているため、ク
ローニングされた標的遺伝子産物はＧＳＴ部分から放出される。

【0311】

昆虫系では、例えば、オートグラファ・カリフォルニア核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰ
Ｖ）をベクターとして使用して外来遺伝子を発現させることができる。ウイルスはスポド
プテラ・フルギプルダの細胞で増殖する。抗体をコードする配列は、ウイルスの非必須領
域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（
例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。

【0312】

哺乳動物宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現システムを利用できる。アデノウ
イルスを発現ベクターとして使用する場合には、目的の抗体をコードする配列をアデノウ
イルス転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロモーターおよび三分節リーダー配列に連結
することができる。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換え
によりアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領
域Ｅ１またはＥ３）に挿入すると、生存可能であり感染宿主で抗体分子を発現し得る組換
えウイルスが得られる（例えば、ＬｏｇａｎＪ＆ＳｈｅｎｋＴ（１９８４）ＰＮＡＳ
８１（１２）：３６５５－９を参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率的な翻
訳には、特定の開始シグナルも必要になる場合がある。これらのシグナルとしては、ＡＴ
Ｇ開始コドンおよび隣接配列が挙げられる。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を
確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと同相でなければならない
。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方のさまざ
まな起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネ
ーターなどを含めることによって高めることができる（例えば、ＢｉｔｔｅｒＧｅｔ
ａｌ．，（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４を参
照）。

【0313】

加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を
修飾およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のその
ような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク
質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞には、タンパク質および遺伝子産物の
翻訳後プロセシングおよび修飾のための特徴的かつ特定のメカニズムがある。適切な細胞
株または宿主システムを選択して、発現された外来タンパク質の正しい修飾および処理を
保証することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切なプロセシン
グ、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞機構を保有する真核生物宿主細胞を使用
することができる。そのような哺乳動物宿主細胞としては、以下に限定されないが、ＣＨ
Ｏ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、
ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリ
ン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、Ｃ
ＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ
、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／
２０、ＢＭＴ１０およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。特定の実施形態では、本明
細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で産生される
。

【0314】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、フコース含量
が低いか、またはフコースを含有しない。そのような抗体は、当業者に知られている技術
を使用して産生することができる。例えば、当該抗体は、フコシル化する能力を欠損して
いるかまたは欠如している細胞で発現され得る。特定の例では、α１，６－フコシルトラ
ンスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株を使用して、フコース
含量が低下した抗体またはその抗原結合断片を産生することができる。ポテリジェント（
登録商標）システム（ロンザ）は、フコース含量が減少した抗体またはその抗原結合断片
を作製するのに使用することができるシステムの一例である。

【0315】

組換えタンパク質の長期にわたる高収量での生産のために、安定した発現細胞を作製す
ることができる。例えば、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結
合断片を安定して発現する細胞株を作製することができる。特定の実施形態では、本明細
書に記載の細胞は、会合して本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を形成する軽
鎖／軽鎖可変ドメインおよび重鎖／重鎖可変ドメインを安定に発現する。

【0316】

特定の形態では、ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、適切
な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネータ
ー、ポリアデニル化部位など）、および選択可能なマーカーによって制御されたＤＮＡで
宿主細胞を形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、作製さ
れた細胞を濃縮培地で１～２日間増殖させ、その後選択培地に切り替える。組換えプラス
ミドの選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドを染色体に安定し
て組み込み、増殖して増殖巣を形成することを可能にし、この増殖巣はその後にクローニ
ングされ細胞株で増殖し得る。この方法は、本明細書に記載のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体
またはその抗原結合断片を発現する細胞株を作製するために有利に使用され得る。そのよ
うな作製された細胞株は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリー
ニングおよび評価に特に有用であり得る。

【0317】

これらに限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＷｉｇｌｅｒＭ
ｅｔａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ１１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチン
グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌ
ｓｋｉＷ（１９６２）ＰＮＡＳ４８（１２）：２０２６－２０３４）およびアデニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＬｏｗｙＩｅｔａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌ
ｌ２２（３）：８１７－２３）の遺伝子などの多くの選択システムが、それぞれｔｋ細
胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞で用いられ得る。また、代謝拮抗剤耐性は、以
下の遺伝子の選択の基礎として用いられ得る：メトトレキサートに対する耐性を付与する
ｄｈｆｒ（ＷｉｇｌｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ７７（６）：３５
６７－７０；Ｏ’ＨａｒｅＫｅｔａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ７８：１５２７
－３１）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎＲＣ＆
ＢｅｒｇＰ（１９８１）ＰＮＡＳ７８（４）：２０７２－６）；アミノグリコシドＧ
－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（ＷｕＧＹ＆ＷｕＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ３：８７－９５；ＴｏｌｓｔｏｓｈｅｖＰ（１９９３）ＡｎｎＲｅｖ
ＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ３２：５７３－５９６；ＭｕｌｌｉｇａｎＲ
Ｃ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９２６－９３２；およびＭｏｒｇａｎＲＡ＆
ＡｎｄｅｒｓｏｎＷＦ（１９９３）ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ６２：１９１－
２１７；ＮａｂｅｌＧＪ＆ＦｅｌｇｎｅｒＰＬ（１９９３）ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ１１（５）：２１１－５）；およびハイグロマイシンに対する耐性を付与
するｈｙｇｒｏ（ＳａｎｔｅｒｒｅＲＦｅｔａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ３０
（１－３）：１４７－５６）。組換えＤＮＡ技術の分野で一般的に知られている方法は、
所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用でき、そのような方法は、例えば、
その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，
（ｅｄｓ．），ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉ
ｏｌｏｇｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆サンズ、ニューヨーク（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌ
ｅｒＭ、ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＡＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０）；Ｄｒ
ａｃｏｐｏｌｉＮＣｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌ
ｓｉｎＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１
９９４）の第１２章および第１３章；Ｃｏｌｂｅｒｅ－ＧａｒａｐｉｎＦｅｔａｌ．
，（１９８１）ＪＭｏｌＢｉｏｌ１５０：１－１４に開示されている。

【0318】

抗体分子の発現レベルは、ベクターの増幅によって増加させることができる（レビュー
については、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎＣＲ＆ＨｅｎｔｓｃｈｅｌＣＣＧ、ＤＮＡクロー
ニングにおける哺乳動物細胞でのクローン化遺伝子の発現のための遺伝子増幅に基づくベ
クターの使用、Ｖｏｌ．３（アカデミックプレス、ニューヨーク、１９８７年））。抗体
を発現するベクター系のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する
阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピー数が増加する。増幅領域は抗体遺
伝子に関連しているため、抗体の産生も増加する（ＣｒｏｕｓｅＧＦｅｔａｌ．，
（１９８３）ＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ３：２５７－６６）。

【0319】

宿主細胞は、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクターである、重鎖由来ポリペプチド
をコードする第１ベクターおよび軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２ベクターで同時
トランスフェクトすることができる。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの
同等の発現を可能にする同一の選択マーカーを含むことができる。宿主細胞は、異なる量
の２つ以上の発現ベクターで同時トランスフェクトすることができる。例えば、宿主細胞
は、以下の比率のいずれかで第１の発現ベクターと第２の発現ベクターとをトランスフェ
クトすることができる：１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１
：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３
５、１：４０、１：４５、または１：５０。

【0320】

あるいは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現すること
ができる単一のベクターを使用することができる。このような発現ベクターでは、両方の
遺伝子の転写が共通のプロモーターによって駆動され、その一方で、第１の遺伝子からの
ｍＲＮＡの翻訳はキャップ依存性のスキャン機構によることができ、第２の遺伝子からの
ｍＲＮＡの翻訳はキャップに依存しないメカニズム、例えば、ＩＲＥＳによることができ
る。

【0321】

特定の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の１つまたは複数の鎖のＮ末端またはＣ末
端に（直接または、ペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）融合したペプ
チドまたはタンパク質である。例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合、薬物部分はｓｃ
ＦｖのＮ末端またはＣ末端で（直接または、ペプチドもしくはタンパク質であるリンカー
を介して）融合することができる。特定の実施形態では、抗体部分が多鎖抗体またはその
抗原結合断片である場合、薬物部分は抗体部分の鎖の１つに（直接または、ペプチドもし
くはタンパク質であるリンカーを介して）融合することができる。免疫グロブリンである
抗体の場合、特定の実施形態では、両方の重鎖を薬物部分に（直接または、ペプチドもし
くはタンパク質であるリンカーを介して）融合することができ、および／または両方の軽
鎖を薬物部分に（直接または、ペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）融
合することができる。そのような特定の実施形態においては、宿主細胞、好ましくは哺乳
動物細胞での組換え発現のために、薬物部分および抗体部分またはその鎖、および薬物部
分と抗体部分との間のリンカー（存在する場合）から構成される融合タンパク質をコード
するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば発現ベクター）が
本明細書で提供される。また、薬物部分および抗体部分またはその鎖、および薬物部分と
抗体部分との間のリンカー（存在する場合）から構成される融合タンパク質を組換えによ
り発現するためのそのようなベクターを含むエクスビボ宿主細胞も本明細書により提供さ
れる。そのようなベクターおよびエクスビボ宿主細胞の特徴および作製方法は、抗ＭＥＲ
ＴＫ抗体について上述したものと同じであり得る。また、本明細書では、融合タンパク質
をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが当該エクスビボ宿主細胞によっ
て発現されて融合タンパク質を産生するような条件下でこのようなエクスビボ宿主細胞を
培養することを含む、薬物部分および抗体部分またはその鎖、および薬物部分と抗体部分
との間のリンカー（存在する場合）から構成される融合タンパク質を製造する方法もまた
提供される。

【0322】

５．３．抗体薬物コンジュゲートの機能特性
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲートは、インビトロで
ＭＥＲＴＫ発現内皮細胞の細胞死を引き起こす。いくつかの特定の実施形態では、インビ
トロで細胞死を測定するための当業者に公知の方法により評価したときに、本明細書に記
載の抗体薬物コンジュゲートの存在下で一定期間培養されたＭＥＲＴＫ発現内皮細胞の少
なくとも１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、５０％、または６０％が当該期間の
終点で死滅している。他の特定の実施形態では、細胞死を受けるＭＥＲＴＫ発現内皮細胞
の百分率は、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートの存在下で一定期間培養したとき
に、抗体薬物コンジュゲートなしで培養した場合（例えば、一切の抗体薬物コンジュゲー
トなしで培養した場合、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合し
ない抗体）を含む抗体薬物コンジュゲートとともに培養した場合、または本明細書に記載
の非コンジュゲート抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくは非コンジュゲート抗ＭＥＲＴＫ抗原結合断
片とともに培養した場合）と比較して、少なくとも５０％、１００％、２倍、３倍、５倍
、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い。上
記期間は、例えば、およそ１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、１６時間、１日
、２日、３日、４日、５日、６日、または１週間であり得る。

【0323】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは、腫瘍内の血管新生
を阻害する。いくつかの実施形態では、血管新生の阻害は少なくとも１０％、２０％、３
０％、４０％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、または７５％である。特定の実
施形態では、血管新生の阻害は少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、または７０
％である。血管新生の阻害は、本明細書に記載のおよび／または当業者に知られている方
法によって評価することができる。阻害は、抗体薬物コンジュゲートなし（例えば、一切
の抗体薬物コンジュゲートなしで培養した場合、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴ
Ｋに免疫特異的に結合しない抗体）を含む抗体薬物コンジュゲートとともに培養した場合
、または本明細書に記載の非コンジュゲート抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくは非コンジュゲート
抗ＭＥＲＴＫ抗原結合断片とともに培養した場合）の血管新生のレベルに対する相対的な
ものであってもよい。特定の実施形態では、インビボで血管新生を評価するために使用さ
れるアッセイは、後述する実施例６に記載されている通りである。

【0324】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは、腫瘍（例えば、ヒ
ト乳癌腫瘍）の進行を阻害する。腫瘍進行の阻害は、少なくとも１０％、２０％、３０％
、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％である。腫瘍の進行は、本明細書に記
載のおよび／または当業者に知られている方法によって評価することができる。腫瘍の進
行は、抗体－薬物コンジュゲートなし（例えば、一切の抗体薬物コンジュゲートなしで培
養した場合、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）
を含む抗体薬物コンジュゲートとともに培養した場合、または本明細書に記載の非コンジ
ュゲート抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくは非コンジュゲート抗ＭＥＲＴＫ抗原結合断片とともに
培養した場合）の腫瘍の状態に対する相対的なものであってもよい。特定の実施形態では
、腫瘍の進行を評価するために使用されるアッセイは、後述する実施例５および実施例８
に記載されているマウス腫瘍移植モデルである。

【0325】

５．４薬物部分およびリンカー
抗体薬物コンジュゲートで使用される細胞毒性剤は、ペイロードまたは弾頭と称される
こともよくある。抗体薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞毒性剤のほとんどはＤ
ＮＡまたは微小管を標的とし細胞毒性の高い効力を有する（約１０^－１０～１０^－１２Ｍ
のＩＣ_５０範囲）（ＢｅｃｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）、ＮａｔＲｅｖＤｒ
ｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１５－３３７）。細胞毒性剤は、小分子、ヌクレオチド、
ペプチド、または非抗体タンパク質であり得る。特定の実施形態では、細胞毒性剤は小分
子である。別の特定の実施形態では、細胞毒性剤は非抗体タンパク質である。本発明によ
る抗体薬物コンジュゲートに使用できる非限定的かつ例示的な細胞毒性剤は、Ｂｅｃｋ
Ａｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１
５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗｎＳ、（２０１５）Ｂｉｏｓｃｉ
Ｒｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣｏｍｂｓＪＲａｎｄＯｗｅｎＳＣ
（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ１７：３３９－３５１；Ｊａｃｋｓｏ
ｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓＤｅｖ２０：８５２－８６６
；ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨｕｒｖｉｔｚＳＡｅｄ．，（２０１６）Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，Ｄｒｕｇ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉｌｅｙに開示されている
。特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートで使用される細胞毒性剤は、アウリスタ
チン（モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡ
Ｆ）、Ａｕｒ０１０１、ＰＦ０６３８０１０１、アウリスタチンＷ、またはアウリスタチ
ンＦなど）またはその誘導体、メイタンシノイド（ＤＭ１またはＤＭ４など）、ピロロベ
ンゾジアゼピン（ＰＢＤ）（ＳＧＤ１８８２またはＳＧ３１９９など）、インドリノベン
ゾジアゼピン（ＤＧＮ４６２またはＤＧＮ５４９など）、カリケアマイシン（オゾガマイ
シン）（ＣＭ１など）、カンプトテシン類似体（ＳＮ３８、ＤＸ－８９５１ｆ、またはＤ
Ｘ－８９５１ｆ誘導体）、デュオカルマイシン（セコ－デュオカルマイシン－ヒドロキシ
－ベンズアミド－アザインドール（セコ－ＤＵＢＡ）、マイナーグルーブ結合アルキル化
剤（ＭＧＢＡ）、またはＭＥＤ－２４６０など）、チューブリン阻害剤（クリプトフィシ
ンなど）、チューブリシンまたはチューブリシン類似体（ＡＺ１３５９９１８５など）、
アンベルスタチン２６９、ドキソルビシン、抗生物質（リファローグなど）、アントラサ
イクリン（ＰＮＵ－１５９６８２など）、微小管阻害剤（リゾキシンなど）、スプライセ
オスタチン、またはタイランスタチンである。特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲ
ートで使用される細胞毒性剤はＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。別の特定の実施形態では
、抗体薬物コンジュゲートで使用される細胞傷害剤はＤＭ１またはＤＭ４である。

【0326】

本明細書で使用される「小分子」という用語は、モル当たり約１０，０００グラム未満
の分子量を有する有機化合物または無機化合物（例えば、ヘテロ有機化合物または有機金
属化合物であり得る）を意味する。特定の実施形態において、小分子は、モル当たり約５
，０００グラム未満、またはモル当たり約２，０００グラム未満、またはモル当たり約１
，０００グラム未満、またはモル当たり約５００グラム未満、またはモル当たり約１００
グラム未満の分子量を有する。

【0327】

いくつかの実施形態では、細胞毒性剤は抗体部分に直接結合している。他の実施形態に
おいて、細胞毒性剤は、リンカーを介して抗体部分に結合している。本発明において用い
られる適切なリンカーは、オフターゲットの毒性を制限すべく血流中で安定であり、細胞
毒性剤の放出を可能とするために癌の部位では不安定である（ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄ
ＢｒｏｗｎＳ，（２０１５）ＢｉｏｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５を
参照）。本発明において使用することができる非限定的かつ例示的なリンカーは、Ｂｅｃ
ｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：
３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗｎＳ，（２０１５）Ｂｉｏｓｃ
ｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣｏｍｂｓＪＲａｎｄＯｗｅｎ
ＳＣ（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ１７：３３９－３５１；Ｊａｃｋ
ｓｏｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓＤｅｖ２０：８５２－８
６６；ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨｕｒｖｉｔｚＳＡｅｄ．，（２０１６）Ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，Ｄｒ
ｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉｌｅｙに開示されて
いる。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、リソソームプロテアーゼに感受性
のモチーフ（例えば、カテプシンＢ）、酸性ｐＨに感受性のモチーフ（例えば、ヒドラゾ
ン）、またはグルタチオンによって減らすことができるジスルフィド架橋を含むモチーフ
を有する切断可能なリンカーである。他の実施形態では、リンカーは非切断性リンカーで
ある。限定ではなく例として、リンカーは、小分子、ヌクレオチド、ペプチド、または非
抗体タンパク質であり得る。特定の実施形態では、リンカーは小分子である。特定の実施
形態では、抗体薬物コンジュゲートで使用されるリンカーは、カテプシンＢ、ヒドラゾン
、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレ
ート（ＳＭＣＣ）、マレイミドカプロン酸（ｍｃ）、バリン－シトルリン（ｖｃ）、Ｎ－
ヒドロキシスクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（ス
ルホＳＰＤＢ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエ
ート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエート（
ＳＰＰ）、バリン－アラニン（ｖａ）、ポリエチレングリコール８－バリン－シトルリン
（ＰＥＧ８－ｖａ）、ｍｂ－ｖｃ、ＣＬ２Ａ、切断可能なｖｃベースのリンカー、または
フレキシマーポリマーリンカーである。

【0328】

本発明において使用することができる非限定的かつ例示的なリンカー－薬物部分のペア
は、ＢｅｃｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏ
ｖ１６：３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗｎＳ，（２０１５）
ＢｉｏｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣｏｍｂｓＪＲａｎｄ
ＯｗｅｎＳＣ（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ１７：３３９－３５１
；ＪａｃｋｓｏｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓＤｅｖ２０：
８５２－８６６；ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨｕｒｖｉｔｚＳＡｅｄ．，（２
０１６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ
ｓ，ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉｌｅｙに
開示されている。特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートのリンカー－薬物部分の
ペアは、ｖｃ－ＭＭＡＥ、ｍｃ－ＭＭＡＦ、ＳＭＣＣ－ＤＭ１、スルホＳＰＤＢ－ＤＭ４
、ＳＰＤＢ－ＤＭ４、ＳＰＰ－ＤＭ１、ｖａ－ＳＧＤ１８８２、ポリエチレングリコール
８（ＰＥＧ８）－ｖａ－ＳＧ３１９９、スルホＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２、ヒドラゾン－Ｃ
Ｍ１、ｖｃ－ｓｅｃｏ－ＤＵＢＡ、ｍｂ－ｖｃ－ＭＧＢＡ、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８、ＤＸ－
８９５１誘導体を伴うペプチドリンカー、ヒドラゾン－ドキソルビシン、切断可能なｖｃ
ベースのリンカー－Ａｕｒ０１０１、ｖｃ－ＰＦ０６３８０１０１、アウリスタチンＦを
伴うフレキシマーポリマーリンカー、切断可能なリンカー－チューブリン阻害剤、または
ｖｃ－リファローグである。

【0329】

５．５．抗体薬物コンジュゲートの製造
別の形態では、リンカーが存在しない、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートの製
造方法であって、（ａ）前記細胞毒性剤を前記抗体部分に直接共役させて、抗体薬物コン
ジュゲートを製造し、（ｂ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製することを含む製造方法
が、本明細書により提供される。

【0330】

別の形態では、リンカーを含む、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートの製造方法
であって、（ａ）前記リンカーを前記抗体部分に直接共役させて、リンカー抗体部分を製
造することと、（ｂ）前記リンカー抗体部分の前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役
させて、抗体薬物コンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲート
を精製することと、をこの順に含む製造方法が、本明細書により提供される。

【0331】

別の形態では、リンカーを含む、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートの製造方法
であって、（ａ）前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役させて、リンカー細胞毒性剤
部分を製造することと、（ｂ）前記リンカー細胞毒性剤部分の前記リンカーを前記抗体部
分に直接共役させて、抗体薬物コンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コ
ンジュゲートを精製することと、をこの順に含む製造方法が本明細書により提供される。

【0332】

共役および精製ステップは、ＢｅｃｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅ
ｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒ
ｏｗｎＳ，（２０１５）ＢｉｏｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣ
ｏｍｂｓＪＲａｎｄＯｗｅｎＳＣ（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａ
ｌ１７：３３９－３５１；ＪａｃｋｓｏｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓｓ
ＲｅｓＤｅｖ２０：８５２－８６６；または、ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨ
ｕｒｖｉｔｚＳＡｅｄ．，（２０１６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇ
ａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉｌｅｙに記載の方法などの、抗体薬物コンジュゲートの製造に
使用される当技術分野で知られている方法によって実施することができる。いくつかの実
施形態において、薬物部分は、抗体部分（例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合、また
は抗体部分が多鎖抗体である場合には、免疫グロブリン（四量体である）またはその抗原
結合断片など）の１つの鎖に結合している。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分（
抗体部分が多鎖抗体である場合には、免疫グロブリンまたはその抗原結合断片など）の２
つ以上の鎖に結合している。特定の実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンの２つの
同一の鎖、例えば重鎖または軽鎖に結合している。他の実施形態において、薬物部分は、
抗体部分（抗体部分が多鎖抗体である場合には、免疫グロブリンまたはその抗原結合断片
など）のすべての鎖に結合している。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コ
ンジュゲートはクロマトグラフにより精製される。別の特定の実施形態では、本明細書に
記載の抗体薬物コンジュゲートは遠心分離により精製される。限定ではなく例として、抗
体薬物コンジュゲートの生成に使用できる共役化学は、チオールとマレイミド、チオール
と自己加水分解マレイミド、チオールとフェニルオキサジアゾールスルホン、オキシムラ
イゲーション、アルコキシアミンからケト基への反応、ひずみ促進アジド－アルキン環化
付加（ＳＰＡＡＣ）、銅を含まないクリックケミストリー、ホルミルグリシンに酸化され
たシステイン、ヒドラジノ－イソ－ピクテ－シュペングラー（ＨＩＰＳ）ライゲーション
、グルタミン残基と第一級アミンからのγ－カルボキシアミド基のライゲーション、ライ
ゲーションＬＰＥＴＧとポリグリシンモチーフの第一級アミン、マレイミドと６－チオフ
コース、ヒドラジドのフコース特異的共役、過ヨウ素酸塩酸化（アルデヒド）とアミノオ
キシペイロード、ひずみ促進アルキンアジド環状付加、Ｃ２－ケト－ｇａｌオキシム化、
部位選択性アルデヒド酸化とオキシムライゲーション、オキシムライゲーションＮＨ２と
インドールベースの５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン誘導体、チオールとビス
スルホン、チオールとジブロモマレイミド、チオールとマレイミドの後にｐＨ９．２処理
（４５℃、４８時間）、またはチオールとアリールプロピオニトリル（ＢｅｃｋＡｅ
ｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１６：３１５－３
３７を参照）。

【0333】

本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片は、セクション５．２に記
載のように生成することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ
抗体またはその抗原結合断片は、薬物部分との結合を促進するため、特に薬物部分との部
位特異的な結合を促進するために、当技術分野で知られている方法によって、例えば、Ｂ
ｅｃｋＡｅｔａｌ．，（２０１７）ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ１
６：３１５－３３７；ＰｅｔｅｒｓＣａｎｄＢｒｏｗｎＳ，（２０１５）Ｂｉｏ
ｓｃｉＲｅｐ３５：ａｒｔ：ｅ００２２５；ＭｃＣｏｍｂｓＪＲａｎｄＯｗｅ
ｎＳＣ（２０１５）ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ１７：３３９－３５１；Ｊａ
ｃｋｓｏｎＤＹ（２０１６）ＯｒｇＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓＤｅｖ２０：８５２
－８６６；または、ＯｌｉｖｉｅｒＫＪａｎｄＨｕｒｖｉｔｚＳＡｅｄ．，（
２０１６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａ
ｌｓ，ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ，Ｗｉｌｅｙ
に記載の方法によって、作製または改変される。薬物部分との結合を促進するために本明
細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合断片を作製または改変するのに使用す
ることができる非限定的かつ例示的な方法としては、１つまたは複数の追加のシステイン
またはセレノシステインの追加、非天然アミノ酸工学、結合を支援できる特定の酵素によ
って認識可能な１つまたは複数のアミノ酸タグの追加、グリカンのリモデリング、アミノ
末端セリンの追加、および天然のシステイン架橋が挙げられる。

【0334】

リンカーおよび細胞毒性剤は、それぞれリンカーおよび細胞毒性剤を生成するための当
技術分野で知られている任意の方法によって生成することができる。

【0335】

５．６．医薬組成物
本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組
成物が本明細書により提供される。特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートは精製
されている。特定の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートは、治療的有効量で医薬組成
物中に存在する。

【0336】

特定の実施形態では、医薬組成物に含まれる抗体薬物コンジュゲートの集団は、１～２
０の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有する。ＤＡＲは、抗体に結合された細胞毒性剤の平均数
である。別の特定の実施形態では、医薬組成物に含まれる抗体薬物コンジュゲートの集団
は１～１５のＤＡＲを有する。別の特定の実施形態では、医薬組成物に含まれる抗体薬物
コンジュゲートの集団は１～１２のＤＡＲを有する。別の特定の実施形態では、医薬組成
物に含まれる抗体－薬物コンジュゲートの集団は１～８のＤＡＲを有する。別の特定の実
施形態では、医薬組成物に含まれる抗体薬物コンジュゲートの集団は３～５のＤＡＲを有
する。別の特定の実施形態では、医薬組成物に含まれる抗体薬物コンジュゲートの集団は
、３．５～４のＤＡＲを有する。

【0337】

賦形剤または安定剤であり得る許容される担体は、使用される用量および濃度で受容者
に対して無毒であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン
酸およびメチオニンなどの抗酸化剤；保存料（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモ
ニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノー
ル、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール、メチルパラベンまたはプロピルパラベ
ンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペ
ンタノール、ｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清
アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの
親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、また
はリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキ
ストリンなどの他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレ
ハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（
例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵ
ＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活
性剤が挙げられるが、これらに限定されない。。

【0338】

特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に記載の
抗体薬物コンジュゲート、および任意に１つまたは複数の追加の予防薬または治療薬を含
む。特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に記載
の抗体薬物コンジュゲートの有効量、および任意に１つまたは複数の追加の予防薬または
治療薬を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物および／または抗体薬
物コンジュゲートを、本明細書に記載の追加の治療薬のいずれかの治療有効量と組み合わ
せることができる（後述するセクション５．７．２を参照）。

【0339】

いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートは、医薬組成物に含まれる唯一の有
効成分である。

【0340】

本明細書に記載の医薬組成物を使用して、癌を治療することができる。

【0341】

非経口製剤で使用される薬学的に許容される担体としては、水性ビヒクル、非水性ビヒ
クル、抗菌剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔薬、懸濁剤および分散剤、乳化剤、
金属イオン封鎖剤またはキレート剤、および他の薬学的に許容される物質が挙げられる。
水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロ
ース注射液、滅菌水注射液、デキストロースおよび乳酸加リンゲル注射液が挙げられる。
非水性の非経口ビヒクルとしては、植物起源の固定油、綿実油、コーン油、ゴマ油、落花
生油が挙げられる。静菌性または静真菌性の濃度の抗菌剤は、フェノールまたはクレゾー
ル、水銀、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキ
シ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムを
含む複数回投与容器に包装された非経口製剤に追加され得る。等張剤としては、塩化ナト
リウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝剤としては、リン酸塩およびクエン酸塩
が挙げられる。酸化防止剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔薬として
は塩酸プロカインが挙げられる。懸濁剤および分散剤としては、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが
挙げられる。乳化剤は、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）。金属イオ
ンの金属イオン封鎖剤またはキレート剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。医薬用担体と
しては、水混和性ビヒクル用のエチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレン
グリコールや、ｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸も含まれ
る。

【0342】

医薬組成物は、対象への投与のあらゆる経路のために製剤化されてもよい。投与経路の
具体例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、および非経口が挙げられる。本明細書
では、皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与も企図されて
いる。注射剤は、液体溶液または懸濁液、注射前の液体中の溶液または懸濁液に適した固
体形態、またはエマルジョンのいずれかとして、従来の形態で調製することができる。注
射剤、液剤、および乳剤には、１つ以上の賦形剤も含まれる。適切な賦形剤は、例えば、
水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールである。さらに、必要
に応じて、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度
向上剤、および他のそのような薬剤、例えば酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン
、オレイン酸トリエタノールアミンおよびシクロデキストリンなどの少量の非毒性補助物
質も含むことができる。

【0343】

抗体薬物コンジュゲートの非経口投与用製剤としては、注射の準備ができた無菌溶液、
使用直前に溶媒と混合する準備ができた、皮下注射錠等の凍結乾燥粉末などの無菌乾燥可
溶性製品、注射の準備ができた無菌懸濁液、使用直前にビヒクルと混合する準備ができた
滅菌乾燥不溶性製品、および滅菌エマルジョンが挙げられる。溶液は水性でも非水性でも
よい。

【0344】

静脈内投与する場合、適切な担体としては、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢ
Ｓ）、並びに増粘剤および可溶化剤（グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピ
レングリコールなど）およびそれらの混合物を含む溶液が挙げられる。

【0345】

抗体薬物コンジュゲートを含む局所混合物は、局所および全身投与について記載されて
いるように調製される。得られる混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどであり得、
クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ
剤、ペースト、フォーム、エアロゾル、潅注、スプレー、座薬、包帯、皮膚パッチまたは
局所投与に適した他の製剤として製剤化され得る。

【0346】

本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは、インハレーションなどの局所適用用のエ
アロゾルとして製剤化することができる（例えば、炎症性疾患、特に喘息、の治療に有用
なステロイドの送達のためのエアロゾルを記載する米国特許第４，０４４，１２６号、第
４，４１４，２０９号および第４，３６４，９２３号を参照）。気道への投与のためのこ
れらの製剤は、単独のまたはラクトースなどの不活性担体と組み合わせた、噴霧器用のエ
アロゾルまたは溶液の形で、または吹送用の微粉末であり得る。そのような場合、製剤の
粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では１０ミクロン未満の直径を
有する。

【0347】

本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは、眼中などの皮膚または粘膜への局所塗布
といった部分または局所塗布用に、ゲル、クリーム、およびローションの形で、または眼
への塗布用に、または嚢内もしくは脊髄内への塗布用に製剤化することができる。局所投
与としては、経皮送達のため、眼または粘膜への投与のため、または吸入療法のためのも
のが考えられる。抗体薬物コンジュゲートの点鼻液を単独で、または他の薬学的に許容さ
れる賦形剤と組み合わせて投与することもできる。

【0348】

イオン導入装置および電気泳動装置を含む経皮パッチは、当業者に周知であり、抗体薬
物コンジュゲートを投与するために使用することができる。例えば、そのようなパッチは
、米国特許第６，２６７，９８３号、第６，２６１，５９５号、第６，２５６，５３３号
、第６，１６７，３０１号、第６，０２４，９７５号、第６，０１０７１５号、第５，９
８５，３１７号、第５，９８３，１３４号、第５，９４８，４３３号、および第５，８６
０，９５７号に開示されている。

【0349】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、
凍結乾燥粉末であり、溶液、エマルジョンおよび他の混合物として投与するために再構成
することができる。また、固体またはゲルとして再構成および処方することもできる。凍
結乾燥粉末は、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される
誘導体を適切な溶媒に溶解することにより調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾
燥粉末は無菌である。溶媒は、粉末または粉末から調製された再構成溶液の安定性または
他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含んでもよい。使用できる賦形剤としては、デキス
トロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、
グルコース、スクロースまたは他の適切な薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
溶媒はまた、一実施形態ではほぼ中性のｐＨで、クエン酸塩、リン酸ナトリウムまたはリ
ン酸カリウムなどの緩衝液、または当業者に知られている他のそのような緩衝液を含んで
もよい。溶液のその後の当業者に公知の標準条件下での滅菌濾過とそれに続く凍結乾燥に
より、所望の製剤が提供される。一実施形態において、得られた溶液は、凍結乾燥のため
にバイアルに分配される。各バイアルには、化合物の単回の用量または複数回の用量が含
まれる。凍結乾燥粉末は、約４℃～室温などの適切な条件下で保存できる。

【0350】

この凍結乾燥粉末を注射用水で再構成すると、非経口投与で使用するための製剤が提供
される。再構成のために、凍結乾燥粉末を滅菌水または他の適切な担体に加える。正確な
量は、選択した化合物によって異なる。そのような量は経験的に決定できる。

【0351】

本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートおよび本明細書により提供される他の組成物
は、特定の組織、受容体、または治療対象の身体の他の領域を標的とするように製剤化す
ることもできる。多くのそのような標的化方法は、当業者に周知である。そのような標的
化方法はすべて、本組成物で使用するために本明細書で企図される。標的化方法の非限定
的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、６，２７４，５５２、６
，２７１，３５９、６，２５３，８７２、６，１３９，８６５、６，１３１，５７０、６
，１２０，７５１、６，０７１，４９５、６，０６０，０８２、６，０４８，７３６、６
，０３９，９７５、６，００４，５３４、５，９８５，３０７、５，９７２，３６６、５
，９００，２５２，５，８４０，５および５，７０９，８７４を参照。特定の実施形態で
は、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは腫瘍を標的とする。

【0352】

インビボ投与に使用される組成物は無菌であり得る。これは、例えば、滅菌ろ過膜によ
るろ過により容易に達成される。

【0353】

５．７用途および方法
５．７．１．治療上の用途および方法
５．７．１．１．癌
一形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の抗体
薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、
対象の癌を治療する方法が本明細書により提供される。特定の実施形態では、本明細書に
記載の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物をそれを必要とする対象に投与すること
を含む、対象の癌を治療する方法が本明細書により提供される。特定の実施形態では、本
明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物をそれを必要とする対象に投与
することを含む、血管新生を阻害するために内皮細胞のＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動す
ることが望ましい、癌を治療する方法が本明細書に提示される。

【0354】

特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは本明細書に
記載の医薬組成物の、癌を有する対象への投与は、以下の効果の少なくとも１つ、２つ、
３つ、４つまたはそれ以上を達成する：（ｉ）癌の１つ以上の症状の重症度の減少または
改善；（ｉｉ）癌に関連する１つ以上の症状の持続期間の短縮；（ｉｉｉ）癌に関連する
症状の再発の予防；（ｉｖ）対象の入院の減少；（ｖ）入院期間の短縮；（ｖｉ）対象の
生存率の増加；（ｖｉｉ）別の治療の治療効果の強化または改善；（ｖｉｉｉ）癌に関連
する１つ以上の症状の進行または発症の抑制；（ｉｘ）癌に関連する症状の数の減少；（
ｘ）当該分野で周知の方法により評価される生活の質の改善；（ｘ）腫瘍の再発の抑制；
（ｘｉ）腫瘍および／またはそれに関連する１つ以上の症状の退縮（ｘｉｉ）腫瘍および
／またはそれに関連する１つ以上の症状の進行の抑制；（ｘｉｉｉ）腫瘍の成長の減少；
（ｘｉｖ）腫瘍サイズ（例えば、体積または直径）の減少；（ｘｖ）新たに形成される腫
瘍の形成の減少；（ｘｖｉ）原発腫瘍、局所腫瘍、および／または転移性腫瘍の予防、根
絶、除去、または制御；（ｘｖｉｉ）転移の数またはサイズの減少；（ｘｖｉｉｉ）死亡
率の減少；（ｘｉｘ）無再発生存期間の増加；（ｘｘ）磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ダイ
ナミック造影ＭＲＩ（ＤＣＥ－ＭＲＩ）、Ｘ線、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャ
ン、または陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンなどの当業者に利用可能な従来の方法
によって測定したときに、腫瘍のサイズは維持されて増加しないか、または、標準治療の
投与後の腫瘍の増加未満の増加を示す、および／または（ｘｘｉ）患者の寛解期間の延長
。

【0355】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、肺、乳房、
骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、子宮頸部、
子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺の癌である。いくつかの実施形態では
、癌は肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫またはカポジ肉腫である
。いくつかの実施形態では、これらの方法に従って治療される癌は転移性である。

【0356】

特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は乳癌である。特定
の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、トリプルネガティブ乳
癌である。トリプルネガティブ乳癌とは、遺伝子Ｈｅｒ２（Ｎｅｕとも称される）、エス
トロゲン受容体（ＥＲとも称される）、またはプロゲステロン受容体（ＰＲとも称される
）の遺伝子を発現しない乳房組織に由来するかまたは当該乳房組織で成長する腫瘍または
細胞を意味する。

【0357】

本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」との用語は互換的に使用される。
いくつかの実施形態において、対象は、霊長類（例えば、サルまたはヒト）などの哺乳動
物であり、最も好ましくはヒトである。

【0358】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは対象に投与される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の異なる抗体薬物コンジュゲートが対象
に投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートは、本明細書に記載さ
れる１つ以上の他の治療と組み合わされて対象に投与される（上記セクション５．７．２
）。

【0359】

５．７．１．２投与経路および用量
本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは組成物は、様々な経路で対象に送達さ
れ得る。これらの経路としては、以下に制限されないが、非経口、鼻腔内、気管内、経口
、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜および皮下経路が挙げられ
る。例えば、インヘラーまたはネブライザーの使用、およびスプレーとして使用するため
のエアロゾル化剤を含む製剤による肺投与も使用できる。一実施形態において、本明細書
に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは組成物は、対象に非経口投与される。特定の実施
形態では、前記非経口投与は静脈内、筋肉内、または皮下である。特定の実施形態では、
抗体薬物コンジュゲートは、対象に静脈内投与される。

【0360】

症状の治療および／または予防に有効となる抗体薬物コンジュゲートまたは組成物の量
は、疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術により決定することができる。

【0361】

組成物で使用される正確な用量は、投与経路、および癌の種類にも依存し、医師の判断
および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効用量は、投与手段、標
的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、健康など）、患者がヒトか動物か、投与され
た他の薬物、または治療が予防的か治療的かによって変動し得る。治療用量は、安全性と
有効性を最適化するために最適に調整される。

【0362】

特定の実施形態では、最適な用量範囲の特定を支援するために、インビトロアッセイが
使用される。有効用量は、インビトロまたは動物モデルの試験系から得られた用量反応曲
線から推定できる。

【0363】

抗体薬物コンジュゲートの場合、投与量は患者の体重に対して、約０．０００１～１０
０ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．０１～１５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例えば、投
与量は１ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、７
０ｋｇの患者についてそれぞれ言い換えれば、７０ｍｇまたは７００ｍｇまたは７０～７
００ｍｇの範囲内であり得る。いくつかの実施形態では、患者に投与される用量は、患者
の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ～約２０ｍｇである。一般的に、外来ポリペプチドに対する
免疫応答のため、ヒト抗体は他の種由来の抗体よりも人体内での半減期が長い。したがっ
て、ヒト抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートの投与量を減らし、投与頻度を減らすこと
が可能な場合が多い。

【0364】

例示的な治療計画は、１年または数年以上、または数年の間隔にわたって、２週間に１
回または月に１回または３～６か月に１回の投与を伴う。いくつかの方法では、２つ以上
の抗体薬物コンジュゲートが対象に同時に投与される。抗体薬物コンジュゲートは、通常
複数回投与される。単回投与の間隔は、毎週、毎月、３か月ごと、６か月ごと、または１
年ごとである。

【0365】

５．７．２．併用療法
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物をそ
れを必要とする対象に投与することを含む、対象の癌を治療するための本明細書で提供さ
れる方法は、対象に１つ以上の追加の治療薬を投与することをさらに含む。特定の実施形
態では、追加の治療薬は癌を治療するためのものである。特定の実施形態では、追加の治
療薬は、本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートによる治療の副作用を治療するための
ものである。

【0366】

特定の実施形態では、追加の薬剤は、乳癌の治療に使用される薬剤、黒色腫の治療に使
用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。

【0367】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキ
セル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン
、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、
ペルツズマブ、およびラパチニブジトシレートからなる群から選択される乳癌の治療に使
用される薬剤である。

【0368】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＢＲＡＦ阻害薬、ＭＥＫ阻害薬、およびダカル
バジンからなる群から選択される黒色腫を治療するために使用される薬剤である。

【0369】

特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、または
ＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。

【0370】

【0371】

他の実施形態では、追加の治療薬は表１０に列挙された薬剤である。

【0372】

【表10-1】

【0373】

【表10-2】

【0374】

【表10-3】

【0375】

【表10-4】

【0376】

【表10-5】

【0377】

【表10-6】

【0378】

【表10-7】

【0379】

本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートは、追加の治療薬と同時にまたは連続して（
前および／または後に）投与することができる。抗体薬物コンジュゲートおよび追加の治
療薬は、同じまたは異なる組成物中で、そして同一または異なる投与経路によって投与す
ることができる。（本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは追加の治療薬である
）第１の治療は、癌患者への（本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートまたは追加の治
療薬である）第２の治療の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、
２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間
、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、同時または
その後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１
２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、
５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。特定の実施形態では、抗
体薬物コンジュゲートと組み合わせて対象に投与される追加の治療薬は、同じ組成物（医
薬組成物）で投与される。他の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートと組み合わされて
投与される追加の治療薬は、抗体薬物コンジュゲートとは異なる組成物中で対象に投与さ
れる（例えば、２つ以上の医薬組成物が使用される）。

【0380】

５．８．キット
また、本明細書に記載の１つ以上の抗体薬物コンジュゲートを含むキットも本明細書に
より提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の抗体薬物コンジュゲ
ートなどの本明細書に記載の医薬組成物の成分の１つ以上で満たされた１つ以上の容器を
含む医薬パックまたはキットが本明細書により提供される。いくつかの実施形態では、キ
ットは、本明細書に記載の医薬組成物および予防薬または治療薬を含む。

【0381】

そのような容器に随意的に関連付けられるのは、医薬品または生物学的製品の製造、使
用または販売を規制する政府機関によって規定された形態の通知、剤形、および／または
それらの使用説明書である。特定の実施形態では、キットに含まれる説明書は、医薬組成
物の投与のための投与量および／または投与計画に関するガイダンスを提供する。

【0382】

医薬品包装材料の例には、ブリスターパック、ボトル、パケット、サシェ、チューブ、
吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、および選択された医薬組成物およ
び意図された投与および治療の方法に適した包装材料が含まれるが、これらに限定されな
い。

【0383】

本明細書で提供されるキットは、活性成分を投与するために使用される装置をさらに含
むことができる。そのような装置の例には、シリンジ、無針注射器、点滴バッグ、パッチ
および吸入器が含まれるが、これらに限定されない。

【0384】

本明細書で提供されるキットは、成分を投与するために使用できる薬学的に許容される
ビヒクルをさらに含むことができる。例えば、成分が非経口投与のために再構成されなけ
ればならない固体形態で提供される場合、キットは、成分が溶解して非経口投与に適した
粒子状物質を含まない滅菌溶液を形成できるか、または経口投与用の懸濁液として再構成
され得る適切なビヒクルの密封容器を含むことができる。薬学的に許容されるビヒクルの
例としては、注射用水ＵＳＰ、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース
注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、および乳酸加リンゲル注射液を含
むがこれに限定されない水性ビヒクル；エチルアルコール、ポリエチレングリコール、ポ
リプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない水混和性ビヒクル；コーン油、綿
実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安
息香酸ベンジルを含むがこれらに限定されない非水性ビヒクルが挙げられる。

【0385】

以下の実施例は、限定の目的ではなく例示として提供される。

【実施例0386】

６．実施例
６．１．実施例１：高親和性ＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体の作製
本実施例では、ＭＥＲＴＫに結合し、そのリン酸化を活性化することによって、転移性
乳癌細胞による内皮動員を阻害するモノクローナル抗体について記載する。本実施例に記
載の抗体を作製するためにマウスを免疫化するのに使用されるペプチド抗原は、Ｒ＆Ｄシ
ステムから購入した（ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＭｅｒＦｃＣｈｉｍｅ
ｒａ、＃ＣＦ８９１－ＭＲ－１００）。これは、間に介在する小さな連結ペプチド（ＩＥ
ＧＲＭＤ）でヒトＩｇＧ１タンパク質（Ｐｒｏ１００－Ｌｙｓ３３０）のＦｃ領域の一部
に融合したＭＥＲＴＫの細胞外ドメインの大部分（Ａｒｇ２６からＡｌａ４９９；配列番
号５８）から構成されるキメラペプチドである。当該キメラペプチドの概略については、
図１Ａを参照。マウスをこのキメラペプチドで免疫した後、免疫したマウスから単離した
Ｂ細胞を骨髄腫細胞株に融合させることにより、ハイブリドーマライブラリーを作製した
。次に、これらのハイブリドーマの上清を単離し、後述するセクション６．１．１に記載
されているように、抗体捕捉競合ＥＬＩＳＡアッセイ（図２）を使用してＭＥＲＴＫに結
合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した。これを同定した後、後述するセク
ション６．１．２に記載されているように、抗体捕捉競合ＥＬＩＳＡアッセイ（図２）を
使用して、ＭＥＲＴＫのＧａｓ－６への結合を阻害できる抗体を産生するハイブリドーマ
を同定するために、ＭＥＲＴＫに高い親和性を持つ抗体を産生するハイブリドーマをスク
リーニングした。単一クローンの（モノクローナル）ハイブリドーマ細胞を単離するため
に、ハイブリドーマライブラリーで分離およびスクリーニングを実施した。このライブラ
リーから９６０個の単一ハイブリドーマクローン（モノクローナル）をスクリーニングし
、高い親和性でＭＥＲＴＫに結合してＧａｓ－６の結合を中和するモノクローナル抗体を
産生するクローンを同定した。

【0387】

６．１．１。ＭＥＲＴＫ結合のＥＬＩＳＡ捕捉アッセイ：
ＭＥＲＴＫに結合するモノクローナル抗体を同定するために、ＥＬＩＳＡ抗体捕捉アッ
セイを使用して、組換えＭＥＲＴＫタンパク質で免疫化したマウスから作製された各ハイ
ブリドーマクローンから産生された分泌抗体をスクリーニングした。最初に、ポリスチレ
ンプレートをコーティング抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）；ロット番号：Ｊａｃｋｓ
ｏｎ９８９５９；抗体濃度１０μｇ／ｍＬ）でコーティングした。次いで、各モノクロ
ーナルハイブリドーマクローンからの一次抗体を含む上清をプレートの各ウェルに加えた
。次に、タグ付き抗原（組換えヒトＭｅｒ－Ｆｃ；ＲｎＤシステム＃８９１－ＭＲ；ロッ
ト番号：ＣＸＫ０２１１０５１；濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加した。次いで
、検出抗体（ホースラディッシュペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ｃ）；ロット番号：Ｊａｃｋｓｏｎ８６９５４；希釈度：１／５０００）を各ウェルに
添加した。これに続いて、ＨＲＰ基質を添加し、その後停止溶液を添加して反応を完了さ
せた。各ウェルからのシグナル（ＯＤ）を、分光光度計を使用して読み取った。試験した
９６０個のハイブリドーマクローンのうち、２０個が１より大きいＯＤ値を示し、ヒトＭ
ＥＲＴＫへの有意な結合親和性を示した。ＯＤ読み取り値が１であると、陰性対照（抗体
のない空の培地）で観察されたシグナル（ＯＤ値は０．２２であった）の少なくとも４倍
であることを示す。これらの２０個のクローンを、Ｍ１からＭ２０まで任意に命名し、図
２に列挙している。図２の２番目の列（見出し「Ｍｅｒ」）は、各クローンのＯＤ測定値
（結合親和性を示す）を示している。

【0388】

６．１．２．競合的Ｇａｓ－６結合ＥＬＩＳＡアッセイ
ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６の結合を阻害する抗体を同定するために、上記２０個のＭＥ
ＲＴＫ結合抗体（Ｍ１～Ｍ２０）について、Ｇａｓ－６競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイを
行った。最初に、ポリスチレンプレートを組換えヒトＧａｓ－６（ＲｎＤシステム、ｒｈ
Ｇａｓ６、＃８８５－ＧＳ－０５０、濃度７μｇ／ｍＬ）でコーティングした。次に、各
モノクローナルハイブリドーマクローンからの一次抗体を含む上清をプレートの各ウェル
に添加した。同時に、組換えヒトＭＥＲＴＫ（Ｍｅｒ－ＦｃＲｎＤシステム、＃８９１
－ＭＲ；ロット番号：ＣＸＫ０２１１０５１；濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加
した。次いで、検出抗体（ホースラディッシュペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］共役ヤギ抗ヒ
トＩｇＧ（Ｆｃ）；ロット番号：Ｊａｃｋｓｏｎ８６９５４；希釈度：１／５０００）
を各ウェルに添加した。これに続いて、ＨＲＰ基質および停止溶液を添加して反応を完了
させた。シグナル（ＯＤ）を、分光光度計を使用して各プレートから測定した。このアッ
セイで試験したすべてのハイブリドーマクローンのうち、１１個のＯＤ値は２．４未満で
あり、ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６の結合を阻害したことが示された。陰性対照（抗体のな
い空の培地）で観察されたシグナルが２．４３であったことから、ＯＤ読み取り値が２．
４であることはＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６の結合を阻害したことを示す。これらの２０個
のクローンを図２に示す。図２の３番目の列（見出し「（Ｍｅｒ＋Ｃｌｏｎｅ）」）は、
各クローンのＯＤ測定値（Ｇａｓ－６結合の阻害の量を示す）を示す。

【0389】

２つのモノクローナル抗体（Ｍ６およびＭ１９）を、トランスウェル内皮遊走アッセイ
を使用した転移細胞による内皮動員を阻害できるかどうかなどの、さらなる研究のために
選択した。

【0390】

６．２．実施例２：Ｍ１９およびＭ６抗体は、インビトロでトリプルネガティブ乳癌細
胞による内皮細胞の動員を阻害することができる
ＭＥＲＴＫの活性化による内皮動員を阻害できるモノクローナル抗体を同定するために
、上記実施例１に記載のスクリーニングで作製された高親和性のＧａｓ－６競合モノクロ
ーナル抗体を、トランスウェルを使用したインビトロでの内皮動員アッセイで試験した。
転移性であるＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞を、多孔質のトランスウェルインサート
を通してＨＵＶＥＣＳを動員する能力をアッセイ可能なボイデンチャンバーの底部に配置
した。上記スクリーニングからのＭＥＲＴＫ結合抗体（高親和性抗体と低親和性抗体との
両方を含む）を生理的濃度でトランスウェルに個別に添加した。試験したすべての抗体の
中で、Ｍ１９およびＭ６が、陰性対照の抗体ＩｇＧ（図３）に対してＨＵＶＥＣ細胞の動
員（遊走細胞／フィールド）を最も有意に阻害した（遊走細胞の５０％減少）。このこと
は、モノクローナル抗体Ｍ１９およびＭ６の、ヒト転移性癌細胞によるヒト内皮細胞の動
員を阻害する能力を示している（図３）。

【0391】

６．３．実施例３：Ｍ１９およびＭ６抗体は、内皮細胞でのＭＥＲＴＫのリン酸化を活
性化する
Ｍ１９およびＭ６が実際にＭＥＲＴＫを活性化する抗体であることを確認するために、
ウエスタンブロット分析を実施して、Ｍ１９またはＭ６抗体処理の有無による、内皮細胞
（ＨＵＶＥＣ）が発現しているリン酸化（活性化）ＭＥＲＴＫのレベルを定量化した（図
４、図５）。

【0392】

ウエスタンブロット分析を行うために、ＨＵＶＥＣ細胞（またはＬＭ２乳癌細胞）を、
１０％ＦＢＳを含むＥＧＭ－２培地（Ｌｏｎｚａ、ｃａｔ＃ＣＣ－３１６２）で８０％コ
ンフルエンスまで増殖させた。所定の条件下で１６時間インキュベートした後、細胞をＰ
ＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ、それぞれのＣａ
ｔ＃１１８３６１７０００１および０４９０６８４５００１）を含む１ｍＬＲＩＰＡ緩
衝液（Ｇ－Ｂｉｏｓｃｅｉｎｃｅ、Ｃａｔ＃７８６－４９０）で溶解させた。次いで、細
胞溶解物からのタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。タンパ
ク質の検出には、次の一次抗体を使用した：リン酸化－ＭＥＲＴＫ（ＦａｂＧｅｎｎｉｘ
、ｃａｔ＃ＰＭＫＴ－１４０ＡＰ）、ＭＥＲＴＫ（Ａｂｃａｍ、ｃａｔ＃ａｂ５２９６８
）、リン酸化－Ａｋｔ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｃａｔ＃
ｓｃ－７９８５Ｒ）、およびＡｋｔ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ、ｃａｔ＃ｓｃ－１６１８）。適切なＨＲＰ共役二次抗体（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ）を使用して、一次抗体を検出した。

【0393】

特定の抗体で処理した培養細胞は、慢性（１６時間）および急性（３０分）の両方の抗
体処理中に用量依存的に内皮細胞上のＭＥＲＴＫの活性化を増加させた（図４、図５）。
興味深いことに、Ｍ１９抗体での処理はＬＭ２乳癌細胞のＭＥＲＴＫの活性化を増加させ
なかった（図６）。

【0394】

６．４．実施例４：Ｍ１９はヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫに高い親和性で結合
する
本実施例は、Ｍ１９抗体がヒトおよびマウスの両方のＭＥＲＴＫに高い親和性（～０．
３ｎＭのＫ_Ｄ）で結合することを示している。組換えヒトおよびマウスＭＥＲＴＫに対す
るＭ１９抗体の結合親和性を特徴付けるために、バイオレイヤー干渉法を用いて生体分子
相互作用分析を実施した（図７および図８）。Ｍ１９とマウスおよびヒトの両方のＭＥＲ
ＴＫとの間に結合が観察された。全体的なグローバルフィットから、ヒトおよびマウスの
ＭＥＲＴＫへのＭ１９の結合の結合親和性（Ｋ_Ｄ）は同等である（Ｋ_Ｄ＝～０．３ｎＭ）
と算出された（図７、図８）。

【0395】

６．５．実施例５：Ｍ１９の治療的投与は、インビボでのヒト乳癌の腫瘍進行を阻害す
る
本実施例は、ＭＥＲＴＫを活性化する抗体であるＭ１９が、ヒト乳癌のマウスモデルに
おいてインビボで腫瘍の進行および腫瘍の転移を阻害できることを実証している。モノク
ローナル抗体Ｍ１９がインビボで腫瘍の負荷を軽減し、腫瘍の進行を阻害できるかどうか
を試験するために、成長因子を低減させたマトリゲルと２０００ＭＤＡ－ＭＢ－２３１
または５０００Ｌｍ１ａ１細胞とを１：１の比率で混合し、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの
乳腺脂肪体に両側から注入した。この手術後、Ｍ１９抗体またはコントロールＩｇＧ抗体
の２５０μｇの腹腔内注射を行い、その後週に２回注射した。触知可能な腫瘍の腫瘍サイ
ズを、口径を使用して毎週測定した。Ｍ１９抗体を用いた治療により、インビボでのトリ
プルネガティブ乳癌の原発腫瘍の増殖（図９Ａ）および転移（図９Ｂ）の両方が有意な治
療的阻害を示した。

【0396】

６．６．実施例６：Ｍ１９はインビボで腫瘍の血管新生を阻害する
Ｍ１９抗体による治療的処置がインビボで血管新生の阻害をもたらすかどうかを調べる
ために、Ｍ１９で処置したマウスおよび未処置マウスの腫瘍内の血管密度を定量化した。
２０００ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの乳腺体に両側から注射し
た。２５０μｇのＭ１９抗体またはコントロールＩｇＧ抗体で処置してから５８日後に、
腫瘍を切除し、血管密度を定量した（図１０）。実際、Ｍ１９抗体による治療的処置は、
インビボでの血管新生の有意な阻害（＞５０％）をもたらした（図１０）。

【0397】

６．７．実施例７：Ｍ６は両方のヒトＭＥＲＴＫに高い親和性で結合する
本実施例は、Ｍ６抗体が組換えヒトＭＥＲＴＫに高い親和性（～４．６ピコモルのＫ_Ｄ
）で結合することを示している。Ｍ６抗体の結合親和性を特徴付けるために、バイオレイ
ヤー干渉法を使用して生体分子相互作用分析を実施した（図１１）。Ｍ６とヒトＭＥＲＴ
Ｋとの間で結合が観察された。全体的なグローバルフィットはから、ヒトＭＥＲＴＫへの
Ｍ６の結合の結合親和性（Ｋ_Ｄ）は約４．６ピコモルと算出された（図１１）。

【0398】

６．８．実施例８：Ｍ６の治療的投与はインビボでのヒト乳癌の腫瘍の進行を阻害する
本実施例は、ＭＥＲＴＫを活性化する抗体Ｍ６が、ヒト乳癌のマウスモデルにおいてイ
ンビボで腫瘍の進行を阻害できることを示している。モノクローナル抗体Ｍ６がインビボ
で腫瘍の負荷を軽減し、腫瘍の進行を阻害できるかどうかを試験するために、成長因子を
低減させたマトリゲル（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と２０００ＭＤＡ－ＭＢ－２
３１乳癌細胞とを１：１の比率で混合し、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの乳腺脂肪体の両側に
注射した。この手術後、Ｍ６抗体またはコントロールＩｇＧ抗体を腹腔内に注射し、続い
て週２回注射した。触知可能な腫瘍の腫瘍サイズを、口径を使用して毎週測定した。実際
、週２回のＭ６抗体による治療は、腫瘍サイズの有意な減少をもたらした（図１２）。

【0399】

６．９．実施例９：Ｍ６およびＭ１９の抗体配列
Ｍ１９およびＭ６をさらに特徴付けるために、これらの抗体の重鎖および軽鎖の可変領
域の配列を決定した。Ｍ６の重鎖および軽鎖の可変領域の両方のアミノ酸配列を表５に示
す。Ｍ６の重鎖および軽鎖の可変領域の両方の核酸配列を表７に示す。Ｍ６のＣＤＲのア
ミノ酸配列を表１（ＶＨの場合）および表２（ＶＬの場合）に示す。

【0400】

Ｍ１９の重鎖および軽鎖の可変領域の両方のアミノ酸配列を表６に示す。Ｍ６の重鎖お
よび軽鎖の可変領域の両方の核酸配列を表８に示す。Ｍ１９のＣＤＲのアミノ酸配列は表
３（ＶＨの場合）および表４（ＶＬの場合）に示されている。

【0401】

本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるものではな
い。実際、記載されたものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図
面から当業者に明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含
まれることが意図されている。

【0402】

６．１０．実施例１０：抗ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体薬物コンジュゲートを用いた転移
性トリプルネガティブ乳癌の治療
実施例１（セクション６．１）に記載のモノクローナル抗体Ｍ６はヒト化されており、
マレイミドカプロン酸（ｍｃ）（すなわち、リンカー）を介して細胞毒性剤であるモノメ
チルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）に結合されている。抗ＭＥＲＴＫ抗体－薬物コンジュ
ゲートは精製され、転移性トリプルネガティブ乳がんを呈する患者に静脈内投与される。
この患者は、臨床評価による応答について、抗体薬物コンジュゲート投与の前、投与の間
、および投与の後にモニタリングされる。

【0403】

本明細書に引用されている全ての文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）は
、それぞれの個々の文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）がすべての目的の
ためにその全体が参照により引用されていることが具体的かつ個別的に明記されているの
と同程度に、その全体が参照により、すべての目的で本明細書に引用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

2023116554000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2023-06-29

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である抗体部分と、
（ｂ）それぞれが細胞毒性剤である１つまたは複数の薬物部分と、
（ｃ）任意のリンカーと、
を含み、
前記細胞毒性剤は、前記抗体部分に直接共役されているか、または、前記リンカーを介して前記抗体部分に共役されており、
前記抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、および配列番号３６のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４７のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｉｖ）前記ＶＨは、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、および配列番号３７のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、および配列番号４８のＣＤＲ３を含む；
（ｖ）前記ＶＨは、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、および配列番号３８のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む；または
（ｖｉ）前記ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、および配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、および配列番号４６のＣＤＲ３を含む、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項2】

前記抗体が免疫グロブリンである、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項3】

前記抗体またはその抗原結合断片がヒト化されている、請求項１または２に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項4】

前記抗体または抗原結合断片がヒト由来定常領域を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項5】

前記抗体が二重特異性抗体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項6】

前記ＶＨは、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項7】

前記リンカーを含み、前記リンカーが切断可能なリンカーである、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項8】

前記リンカーを含み、前記リンカーが切断不能なリンカーである、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項9】

前記細胞毒性剤がモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項10】

前記細胞毒性剤がＳＮ３８である、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。

【請求項11】

前記リンカーを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲートの製造方法であって、
（ａ）前記リンカーを前記細胞毒性剤に直接共役させて、リンカー細胞毒性剤部分を製造することと、（ｂ）前記リンカー細胞毒性剤部分の前記リンカーを前記抗体部分に直接共役させて、抗体薬物コンジュゲートを製造することと、（ｃ）前記抗体薬物コンジュゲートを精製することと、をこの順に含む、製造方法。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲートの治療的有効量、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項13】

癌の治療方法において使用するための請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記癌が、肺、乳房、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺の癌である、または前記癌が、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫またはカポジ肉腫である、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記癌が乳癌、任意選択にトリプルネガティブ乳癌である、請求項１４に記載の医薬組成物。

【外国語明細書】

IP Force 特許公報掲載プロジェクト 2022.1.31 β版