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特開2023-127958タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整ための剤及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023127958
(43)【公開日】2023-09-14
(54)【発明の名称】タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整ための剤及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 1/00 20060101AFI20230907BHJP
C08B 37/16 20060101ALI20230907BHJP
【ＦＩ】
C07K1/00
C08B37/16
【審査請求】未請求
【請求項の数】17
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022031958
(22)【出願日】2022-03-02
(71)【出願人】
【識別番号】504132881
【氏名又は名称】国立大学法人東京農工大学
(71)【出願人】
【識別番号】504157024
【氏名又は名称】国立大学法人東北大学
(74)【代理人】
【識別番号】100165179
【弁理士】
【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡
(74)【代理人】
【識別番号】100188558
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100175824
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100152272
【弁理士】
【氏名又は名称】川越 雄一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100181722
【弁理士】
【氏名又は名称】春田 洋孝
(72)【発明者】
【氏名】村岡 貴博
(72)【発明者】
【氏名】野尻 涼矢
(72)【発明者】
【氏名】奥村 正樹
【テーマコード（参考）】
4C090
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C090AA01
4C090AA08
4C090BA10
4C090BB04
4C090BB12
4C090BB36
4C090BB55
4C090BB63
4C090BB68
4C090BB99
4C090DA11
4C090DA23
4H045AA10
4H045AA30
4H045EA60
4H045FA67
4H045GA45
(57)【要約】
【課題】タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤、前記剤を含むタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット、前記剤を用いたタンパク質のフォールディング方法、タンパク質の凝集抑制方法、及びタンパク質の保管方法を提供する。
【解決手段】シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤。Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表し、Ｙ１は、２価の連結基を表す。＊は、結合手を表す。
［化１］
【選択図】なし
【解決手段】シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤。Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表し、Ｙ１は、２価の連結基を表す。＊は、結合手を表す。
［化１］
【特許請求の範囲】
【請求項1】
シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［式中、Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表し、Ｙ１は、２価の連結基を表す。＊は、結合手を表す。］
【化1】
【請求項2】
前記水酸基が、２位の水酸基及び６位の水酸基からなる群より選択される少なくとも１個の水酸基である、請求項１に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【請求項3】
前記シクロデキストリンが、βシクロデキストリンである、請求項１又は２に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【請求項4】
前記式（Ｉ）で表される基が、下記式（Ｉ－１）で表される基である、請求項１～３のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［式中、Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表し、Ｙ１１は、アミド結合を含む２価の連結基、又はアルキレン基を表す。＊は、結合手を表す。］
【化2】
【請求項5】
前記化合物（Ａ）が、下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）又は（Ｉ－１－６ＳＨ）で表される化合物である、請求項１に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【化3】
【請求項6】
請求項１～５のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤と、疎水性基を含む化合物とを含む、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
【請求項7】
前記疎水性基を含む化合物が、分子量５０～１０００の化合物である、請求項６に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
【請求項8】
前記疎水性基が、炭化水素基である、請求項６又は７に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
【請求項9】
前記疎水性基を含む化合物が、アダマンタンである、請求項６に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
【請求項10】
酸化剤をさらに含む、請求項６～９のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
【請求項11】
請求項１～５のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションする工程を含む、タンパク質のフォールディング方法。
【請求項12】
前記インキュベーションを、疎水性基を含む化合物の共存下で行う、請求項１１に記載のタンパク質のフォールディング方法。
【請求項13】
前記インキュベーションを、酸化剤の共存下で行う、請求項１１又は１２に記載のタンパク質のフォールディング方法。
【請求項14】
前記タンパク質が、アンフォールディングされたタンパク質及びミスフォールディングされたタンパク質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、請求項１１～１３のいずれか一項に記載のタンパク質のフォールディング方法。
【請求項15】
タンパク質を含む溶液中に、請求項１～５のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の凝集抑制方法。
【請求項16】
タンパク質を含む溶液中に、請求項１～５のいずれか一項に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の保管方法。
【請求項17】
下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物。
【化4】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整ための剤及びその使用に関する。特に、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整ための剤及びキットに関する。また、タンパク質のフォールディング方法、タンパク質の凝集抑制方法、及びタンパク質の保管方法に関する。
【背景技術】
【0002】
天然構造が崩れた、タンパク質のフォールディング中間体は、アミロイド線維形成などを起因とする神経変性疾患の原因となる。フォールディング中間体の化学的、生物学的性質を解明することは、疾患プロセスの理解と治療法、治療薬の開発につながる。しかし、フォールディング中間体の構造は不安定であり、制御して取り扱うことが困難である。そのため、フォールディング中間体の研究のためには、フォールディング中間体形成の制御が求められる。
【0003】
天然構造でジスルフィド結合を有するタンパク質のフォールディングには、ジスルフィド結合の形成が関与している。ジスルフィド結合を有するタンパク質のフォールディング方法としては、タンパク質のフォールディング過程に還元剤と酸化剤とを共存させ、ジスルフィド結合の形成と切断とを繰り返し起こすことで、最安定な天然構造へと導く方法がある。その際用いられる典型的な還元剤としては、グルタチオン（ＧＳＨ）、β－メルカプトエタノール（β－ＭＥ）、及びジチオスレイトール（ＤＴＴ）、酸化剤としては、グルタチオン酸化体（ＧＳＳＧ）が挙げられる。
【0004】
また、特許文献１では、効率的にタンパク質フォールディング可能な還元剤として、１－（２－メルカプトエチル）グアニジンが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特開２０１９－２１０２５８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
フォールディング中間体の化学的、生物学的性質の解明のためには、フォールディング中間体形成の制御が求められる。また、タンパク質研究のためには、タンパク質の凝集抑制技術が求められる。
【0007】
そこで、本発明は、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤、前記剤を含むタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット、前記剤を用いたタンパク質のフォールディング方法、タンパク質の凝集抑制方法、及びタンパク質の保管方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は以下の態様を含む。
［１］シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［１］シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【0009】
【化1】
【0010】
［２］前記水酸基が、２位の水酸基及び６位の水酸基からなる群より選択される少なくとも１個の水酸基である、［１］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［３］前記シクロデキストリンが、βシクロデキストリンである、［１］又は［２］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［４］前記式（Ｉ）で表される基が、下記式（Ｉ－１）で表される基である、［１］～［３］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［３］前記シクロデキストリンが、βシクロデキストリンである、［１］又は［２］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
［４］前記式（Ｉ）で表される基が、下記式（Ｉ－１）で表される基である、［１］～［３］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【0011】
【化2】
【0012】
［５］前記化合物（Ａ）が、下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）又は（Ｉ－１－６ＳＨ）で表される化合物である、［１］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤。
【0013】
【化3】
【0014】
［６］［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤と、疎水性基を含む化合物とを含む、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［７］前記疎水性基を含む化合物が、分子量５０～１０００の化合物である、［６］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［８］前記疎水性基が、炭化水素基である、［６］又は［７］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［９］前記疎水性基を含む化合物が、アダマンタンである、［６］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［１０］酸化剤をさらに含む、［６］～［９］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［１１］［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションする工程を含む、タンパク質のフォールディング方法。
［１２］前記インキュベーションを、疎水性基を含む化合物の共存下で行う、［１１］に記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１３］前記インキュベーションを、酸化剤の共存下で行う、［１１］又は［１２］に記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１４］前記タンパク質が、アンフォールディングされたタンパク質及びミスフォールディングされたタンパク質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、［１１］～［１３］のいずれか１つに記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１５］タンパク質を含む溶液中に、［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の凝集抑制方法。
［１６］タンパク質を含む溶液中に、［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の保管方法。
［１７］下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物。
［７］前記疎水性基を含む化合物が、分子量５０～１０００の化合物である、［６］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［８］前記疎水性基が、炭化水素基である、［６］又は［７］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［９］前記疎水性基を含む化合物が、アダマンタンである、［６］に記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［１０］酸化剤をさらに含む、［６］～［９］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット。
［１１］［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションする工程を含む、タンパク質のフォールディング方法。
［１２］前記インキュベーションを、疎水性基を含む化合物の共存下で行う、［１１］に記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１３］前記インキュベーションを、酸化剤の共存下で行う、［１１］又は［１２］に記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１４］前記タンパク質が、アンフォールディングされたタンパク質及びミスフォールディングされたタンパク質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、［１１］～［１３］のいずれか１つに記載のタンパク質のフォールディング方法。
［１５］タンパク質を含む溶液中に、［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の凝集抑制方法。
［１６］タンパク質を含む溶液中に、［１］～［５］のいずれか１つに記載のタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤を共存させることを含む、タンパク質の保管方法。
［１７］下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物。
【0015】
【化4】
【発明の効果】
【0016】
本発明によれば、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤、前記剤を含むタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット、前記剤を用いたタンパク質のフォールディング方法、タンパク質の凝集抑制方法、及びタンパク質の保管方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】β－シクロデキストリン－２ＳＨ（β－ＣＤ２ＳＨ）の合成例で得られたβ－ＣＤ２ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを示す。
【図2】β－シクロデキストリン－６ＳＨ（β－ＣＤ６ＳＨ）の合成例で得られたβ－ＣＤ６ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを示す。
【図3】ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング速度を示す。アダマンタン（－）：β－ＣＤ２ＳＨ及び酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）存在下；アダマンタン（＋）：アダマンタン、β－ＣＤ２ＳＨ及び酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）存在下。
【図4】ＲＮａｓｅ Ａフォールディング反応中のジスルフィド結合の形成過程を示す。ＧＳＨ：グルタチオン及びＧＳＳＧ存在下；β－ＣＤ６ＳＨ：β－ＣＤ６ＳＨ及びＧＳＳＧ存在下；β－ＣＤ２ＳＨ：β－ＣＤ２ＳＨ及びＧＳＳＧ存在下。Ｒ：ＲＮａｓｅ Ａ還元体；１ＳＳ：ＲＮａｓｅ Ａフォールディング中間体（ジスルフィド結合１つ）；２ＳＳ：ＲＮａｓｅ Ａフォールディング中間体（ジスルフィド結合２つ）；３ＳＳ：ＲＮａｓｅ Ａフォールディング中間体（ジスルフィド結合３つ）；４ＳＳ／Ｎ：ＲＮａｓｅ Ａの天然構造と完全酸化型非天然構造の混合物。
【図5】β－ＣＤ２ＳＨによるリゾチームの凝集抑制効果を示す。リゾチームは９６℃で加熱後に冷却した。１．５（ｈ）：冷却から１．５時間後；６（ｈ）：冷却から６時間後。β－ＣＤ２ＳＨ（＋）：β－ＣＤ２ＳＨ存在下；β－ＣＤ２ＳＨ（－）：β－ＣＤ２ＳＨ非存在下。
【発明を実施するための形態】
【0018】
＜タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤＞
本開示の第１の態様は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤である。本態様の剤は、シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む。
本開示の第１の態様は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤である。本態様の剤は、シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、下記式（Ｉ）で表される基で置換された化合物（Ａ）を含む。
【0019】
【化5】
【0020】
（化合物（Ａ））
化合物（Ａ）は、シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、前記式（Ｉ）で表される基（以下、「基（Ｉ）」ともいう）で置換された化合物である。シクロデキストリンは、複数個のＤ－グルコースが、α－１，４グリコシド結合により結合した環状オリゴ糖である。シクロデキストリンとしては、例えば、α－シクロデキストリン（グルコース６個；α－ＣＤ）、β－シクロデキストリン（グルコース７個；β－ＣＤ）、及びγ－シクロデキストリン（グルコース８個；γ－ＣＤ）が挙げられる。中でも、シクロデキストリンとしては、β－ＣＤが好ましい。
化合物（Ａ）は、シクロデキストリンの少なくとも１個の水酸基が、前記式（Ｉ）で表される基（以下、「基（Ｉ）」ともいう）で置換された化合物である。シクロデキストリンは、複数個のＤ－グルコースが、α－１，４グリコシド結合により結合した環状オリゴ糖である。シクロデキストリンとしては、例えば、α－シクロデキストリン（グルコース６個；α－ＣＤ）、β－シクロデキストリン（グルコース７個；β－ＣＤ）、及びγ－シクロデキストリン（グルコース８個；γ－ＣＤ）が挙げられる。中でも、シクロデキストリンとしては、β－ＣＤが好ましい。
【0021】
化合物（Ａ）は、シクロデキストリン骨格を有し、且つ前記シクロデキストリン骨格が有する水酸基の少なくとも１個が、基（Ｉ）で置換されている。すなわち、化合物（Ａ）は、シクロデキストリンを構成するＤ－グルコースが有する水酸基の少なくとも１個が、基（Ｉ）で置換された構造を有している。置換される水酸基の数は、特に限定されない。シクロデキストリンがα－ＣＤである場合、前記式（Ｉ）で表される基で置換される水酸基の数としては、例えば、１～１８個、１～１０個、１～６個、１～４個、１～３個、２個、又は１個が挙げられる。シクロデキストリンがβ－ＣＤである場合、基（Ｉ）で置換される水酸基の数としては、例えば、１～２１個、１～１８個、１～１０個、１～６個、１～４個、１～３個、２個、又は１個が挙げられる。シクロデキストリンがγ－ＣＤである場合、基（Ｉ）で置換される水酸基の数としては、例えば、１～２４個、１～２１個、１～１８個、１～１０個、１～６個、１～４個、１～３個、２個、又は１個が挙げられる。前記式（Ｉ）で表される基で置換される水酸基の数としては、１個が好ましい。
【0022】
基（Ｉ）で置換される水酸基の位置は、特に限定されない。基（Ｉ）で置換される水酸基は、１位の水酸基でもよく、２位の水酸基でもよく、６位の水酸基でもよい。１位の水酸基及び２位の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよく、及び１位の水酸基及び６位の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよく、２位の水酸基及び６位の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよく、１位の水酸基、２位の水酸基及び６位の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよい。
１個のＤ－グルコース内で１つの水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよく、１個のＤ－グルコース内で２つ以上の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよい。１個のＤ－グルコースの水酸基のみが基（Ｉ）で置換されてもよく、２個以上のＤ－グルコースの水酸基が置換されてもよい。
１個のＤ－グルコース内で１つの水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよく、１個のＤ－グルコース内で２つ以上の水酸基が基（Ｉ）で置換されてもよい。１個のＤ－グルコースの水酸基のみが基（Ｉ）で置換されてもよく、２個以上のＤ－グルコースの水酸基が置換されてもよい。
【0023】
基（Ｉ）で置換される水酸基は、２位の水酸基及び６位の水酸基からなる群より選択される少なくとも１個の水酸基が好ましい。一実施形態において、化合物（Ａ）は、シクロデキストリンの２位の水酸基１個が基（Ｉ）で置換された化合物である。一実施形態において、化合物（Ａ）は、シクロデキストリンの６位の水酸基１個が基（Ｉ）で置換された化合物である。
【0024】
≪式（Ｉ）で表される基；基（Ｉ）≫
前記式（Ｉ）中、Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表す。Ｘは、硫黄原子が好ましい。
前記式（Ｉ）中、Ｘは、硫黄原子又はセレン原子を表す。Ｘは、硫黄原子が好ましい。
【0025】
前記式（Ｉ）中、Ｙ１は、２価の連結基を表す。Ｙ１における２価の連結基としては、置換基を有してもよい２価の炭化水素基、ヘテロ原子を含む２価の連結基が挙げられる。
【0026】
Ｙ１における置換基を有してもよい２価の炭化水素基は、脂肪族炭化水素基でもよく、芳香族炭化水素基でもよいが、脂肪族炭化水素基が好ましい。
脂肪族炭化水素基は、飽和脂肪族炭化水素基でもよく、不飽和脂肪族炭化水素基でもよいが、飽和脂肪族炭化水素基が好ましい。脂肪族炭化水素基は、直鎖状脂肪族炭化水素基でもよく、分岐鎖状脂肪族炭化水素基でもよく、環状脂肪族炭化水素基でもよい。
直鎖状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数１～１０が好ましく、炭素原子数１～６がより好ましく、炭素原子数１～４がさらに好ましく、炭素原子数２～３が特に好ましい。
分岐鎖状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数２～１０が好ましく、炭素原子数２～６がより好ましく、炭素原子数２～４がさらに好ましく、炭素原子数３～４が特に好ましい。
環状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数３～１０が好ましく、炭素原子数３～８がより好ましく、炭素原子数３～６がさらに好ましく、炭素原子数３～４が特に好ましい。環状脂肪族炭化水素基は、単環式基でもよく、多環式基でもよいが、単環式基が好ましい。
脂肪族炭化水素基は、飽和脂肪族炭化水素基でもよく、不飽和脂肪族炭化水素基でもよいが、飽和脂肪族炭化水素基が好ましい。脂肪族炭化水素基は、直鎖状脂肪族炭化水素基でもよく、分岐鎖状脂肪族炭化水素基でもよく、環状脂肪族炭化水素基でもよい。
直鎖状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数１～１０が好ましく、炭素原子数１～６がより好ましく、炭素原子数１～４がさらに好ましく、炭素原子数２～３が特に好ましい。
分岐鎖状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数２～１０が好ましく、炭素原子数２～６がより好ましく、炭素原子数２～４がさらに好ましく、炭素原子数３～４が特に好ましい。
環状の脂肪族炭化水素基は、炭素原子数３～１０が好ましく、炭素原子数３～８がより好ましく、炭素原子数３～６がさらに好ましく、炭素原子数３～４が特に好ましい。環状脂肪族炭化水素基は、単環式基でもよく、多環式基でもよいが、単環式基が好ましい。
【0027】
前記脂肪族炭化水素基は、置換基を有してもよい。前記置換基は、特に限定されないが、例えば、アミノ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシ基、アルコキシ基等が挙げられる。
【0028】
芳香族炭化水素基は、芳香環を少なくとも１つ有する炭化水素基である。芳香環は、４ｎ＋２個のπ電子をもつ環状共役系であれば、特に限定されず、単環式でもよく、多環式でもよい。芳香環は、炭素原子数５～３０が好ましく、炭素原子数５～２０がより好ましく、炭素原子数６～１５がさらに好ましく、炭素原子数６～１２が特に好ましい。ただし、前記炭素原子数には、置換基における炭素原子数を含まないものとする。
芳香環として具体的には、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン等の芳香族炭化水素環；前記芳香族炭化水素環を構成する炭素原子の一部がヘテロ原子で置換された芳香族複素環等が挙げられる。芳香族複素環におけるヘテロ原子としては、酸素原子、硫黄原子、窒素原子等が挙げられる。芳香族複素環として具体的には、ピリジン環、チオフェン環等が挙げられる。
芳香環として具体的には、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン等の芳香族炭化水素環；前記芳香族炭化水素環を構成する炭素原子の一部がヘテロ原子で置換された芳香族複素環等が挙げられる。芳香族複素環におけるヘテロ原子としては、酸素原子、硫黄原子、窒素原子等が挙げられる。芳香族複素環として具体的には、ピリジン環、チオフェン環等が挙げられる。
【0029】
前記芳香族炭化水素基は、置換基を有してもよい。前記置換基は、特に限定されないが、例えば、アルキル基、アミノ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシ基、アルコキシ基等が挙げられる。
【0030】
Ｙ１におけるヘテロ原子を含む２価の連結基は、炭素原子及び水素原子に加えてヘテロ原子を含む２価の連結基である。ヘテロ原子としては、例えば、窒素原子、酸素原子、及び硫黄原子が挙げられる。ヘテロ原子を含む２価の連結基としては、例えば、アルキレン基を構成するメチレン基（－ＣＨ２－）の一部が、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１－、－ＮＲ１－、－ＮＲ１－Ｃ（＝ＮＲ２）－（Ｒ１及びＲ２は、炭素原子数１～３のアルキル基、又は炭素原子数１～３のアシル基）、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｏ－からなる群より選択される少なくとも１個の基で置換された基が挙げられる。前記アルキレン基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよいが、直鎖状が好ましい。直鎖状アルキレン基としては、炭素原子数１～１０が挙げられ、炭素原子数１～６が好ましく、炭素原子数１～４がより好ましく、炭素原子数１～３がさらに好ましく、炭素原子数２～３が特に好ましい。分岐鎖状アルキレン基としては、炭素原子数２～１０が挙げられ、炭素原子数２～６が好ましく、炭素原子数２～４がより好ましく、炭素原子数２～３がさらに好ましい
ヘテロ原子を含む２価の基は、メチレン基の一部が－ＮＨ－で置換された直鎖状アルキレン基が好ましい。
ヘテロ原子を含む２価の基は、メチレン基の一部が－ＮＨ－で置換された直鎖状アルキレン基が好ましい。
【0031】
基（Ｉ）は、下記式（Ｉ－１）で表される基が好ましい。
【0032】
【化6】
【0033】
前記式（Ｉ－１）中、Ｘは前記式（Ｉ）中のＸと同じである。
【0034】
前記式（Ｉ－１）中、Ｙ１１は、アミド結合（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－）を含む２価の連結基、又は炭素原子数１～６のアルキレン基を表す。
【0035】
アミド結合を含む２価の連結基としては、アルキレン基を構成するメチレン基（－ＣＨ２－）の一部がアミド結合で置換された基；及びペプチドを含む２価の連結基が挙げられる。
前記アルキレン基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよいが、直鎖状が好ましい。直鎖状アルキレン基としては、炭素原子数１～１０が挙げられ、炭素原子数１～６が好ましく、炭素原子数１～４がより好ましく、炭素原子数１～３がさらに好ましく、炭素原子数２～３が特に好ましい。分岐鎖状アルキレン基としては、炭素原子数２～１０が挙げられ、炭素原子数２～６が好ましく、炭素原子数２～４がより好ましく、炭素原子数２～３がさらに好ましい。
前記ペプチドを含む２価の連結基としては、２～１０個のアミノ酸残基を有するペプチドを含む連結基が挙げられる。前記ペプチドが有するアミノ酸残基は、２～８個が好ましく、２～６個が好ましく、２～４個がさらに好ましく、２～３個が特に好ましい。
前記アルキレン基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよいが、直鎖状が好ましい。直鎖状アルキレン基としては、炭素原子数１～１０が挙げられ、炭素原子数１～６が好ましく、炭素原子数１～４がより好ましく、炭素原子数１～３がさらに好ましく、炭素原子数２～３が特に好ましい。分岐鎖状アルキレン基としては、炭素原子数２～１０が挙げられ、炭素原子数２～６が好ましく、炭素原子数２～４がより好ましく、炭素原子数２～３がさらに好ましい。
前記ペプチドを含む２価の連結基としては、２～１０個のアミノ酸残基を有するペプチドを含む連結基が挙げられる。前記ペプチドが有するアミノ酸残基は、２～８個が好ましく、２～６個が好ましく、２～４個がさらに好ましく、２～３個が特に好ましい。
【0036】
Ｙ１１におけるアルキレン基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよいが、直鎖状が好ましい。直鎖状アルキレン基は、炭素原子数１～４が好ましく、炭素原子数１～３がより好ましく、炭素原子数２～３がさらに好ましい。分岐鎖状アルキレン基は、炭素原子数２～６であり、炭素原子数２～４が好ましく、炭素原子数３～４がより好ましい。
【0037】
化合物（Ａ）の具体例としては、下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）又は（Ｉ－１－６ＳＨ）で表される化合物が挙げられるが、これらに限定されない。下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物は、β－ＣＤ２ＳＨである。下記式（Ｉ－１－６ＳＨ）で表される化合物は、β－ＣＤ６ＳＨである。
【0038】
【化7】
【0039】
化合物（Ａ）は、塩の形態であってもよい。塩としては、特に制限されず、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩；又は塩酸、燐酸、硝酸、硫酸、亜硫酸等の無機酸との塩；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸との塩等が挙げられる。
化合物（Ａ）は、溶媒和物の形態であってもよい。溶媒和物としては、特に限定されず、例えば、水和物；アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール）、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等の溶媒との溶媒和物が挙げられる。
化合物（Ａ）は、溶媒和物の形態であってもよい。溶媒和物としては、特に限定されず、例えば、水和物；アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール）、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等の溶媒との溶媒和物が挙げられる。
【0040】
≪化合物（Ａ）の合成方法≫
化合物（Ａ）は、公知の方法を組み合わせて合成することができる。例えば、化合物（Ａ）の合成は、以下のように行うことができる。
まず、シクロデキストリンに対し、基（Ｉ）で置換する水酸基にｐ－トルエンスルホニル基（トシル基）を導入する。次いで、前記トシル基に対し、ジスルフィド結合若しくはジセレン結合を有する化合物を反応させて、前記水酸基にジスルフィド結合若しくはジセレン結合を有する基を導入する。次いで、還元剤を用いて、前記ジスルフィド結合若しくはジセレン結合を還元することで、化合物（Ａ）を得ることができる。
化合物（Ａ）の合成例の一例を以下に示すが、これに限定されない。下記合成例は、β－シクロデキストリンの２位の水酸基のうちの１つを、基（Ｉ）で置換した場合の例である。
化合物（Ａ）は、公知の方法を組み合わせて合成することができる。例えば、化合物（Ａ）の合成は、以下のように行うことができる。
まず、シクロデキストリンに対し、基（Ｉ）で置換する水酸基にｐ－トルエンスルホニル基（トシル基）を導入する。次いで、前記トシル基に対し、ジスルフィド結合若しくはジセレン結合を有する化合物を反応させて、前記水酸基にジスルフィド結合若しくはジセレン結合を有する基を導入する。次いで、還元剤を用いて、前記ジスルフィド結合若しくはジセレン結合を還元することで、化合物（Ａ）を得ることができる。
化合物（Ａ）の合成例の一例を以下に示すが、これに限定されない。下記合成例は、β－シクロデキストリンの２位の水酸基のうちの１つを、基（Ｉ）で置換した場合の例である。
【0041】
【化8】
【0042】
上記合成例では、モノ－２－Ｏ－（ｐ－トルエンスルホニル）－β－シクロデキストリン（１）に、化合物（２）を反応させて、化合物（３）を得る。次いで、還元剤を用いて、化合物（３）のＸ－Ｘ結合ご還元することで、化合物（Ａ）を得る。
【0043】
（任意成分）
本態様の剤は、前記化合物（Ａ）に加えて、任意成分を含んでもよい。任意成分は、化合物（Ａ）の機能を損なわない限り、特に限定されない。任意成分としては、例えば、疎水性基を含む化合物（以下、「疎水性基含有化合物」ともいう）、酸化剤等が挙げられる。本態様の剤が化合物（Ａ）に加えて任意成分を含む場合、本態様の剤は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための組成物であってもよい。
本態様の剤は、前記化合物（Ａ）に加えて、任意成分を含んでもよい。任意成分は、化合物（Ａ）の機能を損なわない限り、特に限定されない。任意成分としては、例えば、疎水性基を含む化合物（以下、「疎水性基含有化合物」ともいう）、酸化剤等が挙げられる。本態様の剤が化合物（Ａ）に加えて任意成分を含む場合、本態様の剤は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための組成物であってもよい。
【0044】
≪疎水性基含有化合物≫
本態様の剤は、化合物（Ａ）のタンパク質フォールディング作用の調整のために、疎水性基含有化合物を含んでもよい。
疎水性基含有化合物は、シクロデキストリンのゲスト分子として機能し得る化合物であれば、特に限定されない。シクロデキストリンは、環状構造内部が疎水性であり、ホスト－ゲスト相互作用により、環状構造の内部に疎水性化合物を包接することができる。ホスト－ゲスト相互作用により、化合物（Ａ）に疎水性基含有化合物が包接されると、化合物（Ａ）のタンパク質フォールディング速度が抑制される。
疎水性基含有化合物としては、例えば、分子量５０～１０００の化合物が挙げられる。疎水性基含有化合物の分子量は、５０～８００が好ましく、５０～５００がより好ましく、５０～３００がさらに好ましく、５０～２００が特に好ましい。
本態様の剤は、化合物（Ａ）のタンパク質フォールディング作用の調整のために、疎水性基含有化合物を含んでもよい。
疎水性基含有化合物は、シクロデキストリンのゲスト分子として機能し得る化合物であれば、特に限定されない。シクロデキストリンは、環状構造内部が疎水性であり、ホスト－ゲスト相互作用により、環状構造の内部に疎水性化合物を包接することができる。ホスト－ゲスト相互作用により、化合物（Ａ）に疎水性基含有化合物が包接されると、化合物（Ａ）のタンパク質フォールディング速度が抑制される。
疎水性基含有化合物としては、例えば、分子量５０～１０００の化合物が挙げられる。疎水性基含有化合物の分子量は、５０～８００が好ましく、５０～５００がより好ましく、５０～３００がさらに好ましく、５０～２００が特に好ましい。
【0045】
疎水性基含有化合物が有する疎水性基は、特に限定されないが、炭化水素基が好ましい。炭化水素基としては、例えば、炭素原子数３～３０の炭化水素基が挙げられる。炭化水素基は、炭素原子数６～２０が好ましく、炭素原子数６～１８がより好ましく、炭素原子数８～１６がさらに好ましく、炭素原子数８～１４が特に好ましい。
疎水性基は、１価の基であってもよく、２価の基であってもよく、３価以上の基であってもよい。
疎水性基は、１価の基であってもよく、２価の基であってもよく、３価以上の基であってもよい。
【0046】
前記炭化水素基は、脂肪族炭化水素基であってもよく、芳香族炭化水素基であってもよい。
脂肪族炭化水素基は、飽和脂肪族炭化水素基でもよく、不飽和脂肪族炭化水素基でもよい。脂肪族炭化水素基は、直鎖状の脂肪族炭化水素基でもよく、分岐鎖状の不飽和炭化水素基でもよく、環状の脂肪族炭化水素基でもよい。
直鎖状又は分岐鎖状の脂肪族炭化水素基としては、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基又はアルキレン基、直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基又はアルケニレン基、直鎖状又は分岐鎖状のアルキニル基又はアルキニレン基が挙げられる。
環状の脂肪族炭化水素基は、単環式基であってもよく、多環式基であってもよい。単環式基としては、例えば、モノシクロアルカン環、モノシクロアルケン環、又はモノシクロアルキン環を含む基等が挙げられる。モノシクロアルカンとしては、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロシクロオクタン、シクロノナン、シクロデカン等が挙げられる。モノシクロアルケンとしては、例えば、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロシクロオクテン、シクロノネン等が挙げられる。が、これらに限定されない。モノシクロアルキンとしては、例えば、シクロペンチン、シクロヘキシン、シクロヘプチン、シクロシクロオクチン、シクロノニン等が挙げられる。多環式基としては、例えば、アダマンタン、ノルボルナン、ノルボルネン、ビシクロ［２．２．２］オクタタン、トリシクロ［５．２．１．０２，６］デカン、トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン、テトラシクロ［６．２．１．１３，６．０２，７］ドデカン等の環骨格を含む基が挙げられる。
脂肪族炭化水素基は、飽和脂肪族炭化水素基でもよく、不飽和脂肪族炭化水素基でもよい。脂肪族炭化水素基は、直鎖状の脂肪族炭化水素基でもよく、分岐鎖状の不飽和炭化水素基でもよく、環状の脂肪族炭化水素基でもよい。
直鎖状又は分岐鎖状の脂肪族炭化水素基としては、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基又はアルキレン基、直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基又はアルケニレン基、直鎖状又は分岐鎖状のアルキニル基又はアルキニレン基が挙げられる。
環状の脂肪族炭化水素基は、単環式基であってもよく、多環式基であってもよい。単環式基としては、例えば、モノシクロアルカン環、モノシクロアルケン環、又はモノシクロアルキン環を含む基等が挙げられる。モノシクロアルカンとしては、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロシクロオクタン、シクロノナン、シクロデカン等が挙げられる。モノシクロアルケンとしては、例えば、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロシクロオクテン、シクロノネン等が挙げられる。が、これらに限定されない。モノシクロアルキンとしては、例えば、シクロペンチン、シクロヘキシン、シクロヘプチン、シクロシクロオクチン、シクロノニン等が挙げられる。多環式基としては、例えば、アダマンタン、ノルボルナン、ノルボルネン、ビシクロ［２．２．２］オクタタン、トリシクロ［５．２．１．０２，６］デカン、トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン、テトラシクロ［６．２．１．１３，６．０２，７］ドデカン等の環骨格を含む基が挙げられる。
【0047】
芳香族炭化水素基は、単環式でもよく、多環式でもよい。芳香族炭化水素基は、芳香族炭化水素環を含むものが好ましい。芳香族炭化水素基が含む芳香環の数は、１～６個が挙げられ、１～５個が好ましく、１～４個がより好ましく、１～３個がさらに好ましく、１～２個が特に好ましい。芳香族炭化水素基としては、ベンゼン、フルオレン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、テトラヒドロナフタレン等の環骨格を含む基が挙げられる。
【0048】
化合物（Ａ）がα－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有基としては、炭素原子数３～１８のｎ－アルキル基が挙げられる。具体例としては、ｎ－ブチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－オクチル基、及びｎ－ドデシル基等が挙げられる。
化合物（Ａ）がβ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基としては、炭素原子数６～１８の多環式脂肪族炭化水素基、及び炭素原子数３～１０の分子鎖状アルキル基が挙げられる。具体例としては、例えば、アダマンチル基、エチルアダマンチル基、ノルボルニル基、イソボルニル基、ｔｅｒｔ－ブチル基が挙げられる。
化合物（Ａ）がγ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有基としては、ｎ－アルキル基、シクロアルキル基が挙げられる。具体例としては、例えば、ｎ－オクチル基、ｎ－ドデシル基、及びシクロドデシル基が挙げられる。
化合物（Ａ）がβ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基としては、炭素原子数６～１８の多環式脂肪族炭化水素基、及び炭素原子数３～１０の分子鎖状アルキル基が挙げられる。具体例としては、例えば、アダマンチル基、エチルアダマンチル基、ノルボルニル基、イソボルニル基、ｔｅｒｔ－ブチル基が挙げられる。
化合物（Ａ）がγ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有基としては、ｎ－アルキル基、シクロアルキル基が挙げられる。具体例としては、例えば、ｎ－オクチル基、ｎ－ドデシル基、及びシクロドデシル基が挙げられる。
【0049】
疎水性基含有化合物の疎水性基以外の部分は、疎水性基含有化合物が、化合物（Ａ）のゲスト分子として機能する限り、特に限定されない。疎水性基以外の部分は、疎水性であってもよく、親水性であってもよい。疎水性基含有化合物としては、例えば、炭化水素が挙げられる。
化合物（Ａ）がα－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、炭素原子数３～１８のｎ－アルカンが挙げられる。具体例としては、ｎ－ブタン、ｎ－ヘキサン、ｎ－オクタン、及びｎ－ドデカン等が挙げられる。
化合物（Ａ）がβ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、炭素原子数６～１８の多環式脂肪族炭化水素、及び炭素原子数３～１０の分子鎖状アルカンが挙げられる。具体例としては、例えば、アダマンタン、エチルアダマンタン、ノルボルナン、イソボルナン、イソブタンが挙げられる。
化合物（Ａ）がγ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、ｎ－アルカン、シクロアルカンが挙げられる。具体例としては、例えば、ｎ－オクタン、ｎ－ドデカン、及びシクロドデカンが挙げられる。
化合物（Ａ）がα－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、炭素原子数３～１８のｎ－アルカンが挙げられる。具体例としては、ｎ－ブタン、ｎ－ヘキサン、ｎ－オクタン、及びｎ－ドデカン等が挙げられる。
化合物（Ａ）がβ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、炭素原子数６～１８の多環式脂肪族炭化水素、及び炭素原子数３～１０の分子鎖状アルカンが挙げられる。具体例としては、例えば、アダマンタン、エチルアダマンタン、ノルボルナン、イソボルナン、イソブタンが挙げられる。
化合物（Ａ）がγ－シクロデキストリン骨格を有する場合、疎水性基含有化合物としては、ｎ－アルカン、シクロアルカンが挙げられる。具体例としては、例えば、ｎ－オクタン、ｎ－ドデカン、及びシクロドデカンが挙げられる。
【0050】
≪酸化剤≫
本態様の剤は、タンパク質中のチオール基を酸化させジスルフィド結合を形成させるために、酸化剤を含んでもよい。化合物（Ａ）による還元作用と、酸化剤による酸化作用とにより、タンパク質中のチオール・ジスルフィド結合交換反応を繰り返されることで、それに伴ったタンパク質構造変化を誘起させ、最安定な天然構造へと導かれる。
本態様の剤は、タンパク質中のチオール基を酸化させジスルフィド結合を形成させるために、酸化剤を含んでもよい。化合物（Ａ）による還元作用と、酸化剤による酸化作用とにより、タンパク質中のチオール・ジスルフィド結合交換反応を繰り返されることで、それに伴ったタンパク質構造変化を誘起させ、最安定な天然構造へと導かれる。
【0051】
酸化剤は、タンパク質へのジスルフィド結合導入に使用されるものを特に制限なく使用することができる。酸化剤としては、例えば、酸化型グルタチオン、酸化型ジチオスレイトール、酸化型セレノグルタチオン、グルタレドキシン類（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎｓ）、シスチン、酸化型シスタミン、酸化型セレノシスタミン、過酸化水素、ジアミド、フェリシアン化カリウム等が挙げられる。
中でも、実際の生体反応で使用される観点から、酸化型グルタチオンが好ましい。
中でも、実際の生体反応で使用される観点から、酸化型グルタチオンが好ましい。
【0052】
本態様の剤は、タンパク質フォールディングを調整するために用いることができる。本態様の剤の存在下でタンパク質フォールディングを行う場合、フォールディング反応液に疎水性基含有化合物を添加することにより、タンパク質フォールディング速度を調整することができる。より具体的には、フォールディング反応液中に存在する化合物（Ａ）の量に対して、疎水性基含有化合物の量を多くすることにより、タンパク質フォールディング速度を遅くすることができる。一方、フォールディング反応液中に存在する化合物（Ａ）の量に対して、疎水性基含有化合物の量を少なくすることにより、タンパク質フォールディング速度を早くすることができる。化合物（Ａ）と疎水性基含有化合物とのモル比（化合物（Ａ）：疎水性基含有化合物）は、例えば、５０：１～１：５０の間で変化させることができる。
【0053】
本態様の剤は、タンパク質の凝集を抑制するために用いることができる。本態様の剤をタンパク質と共存させることにより、タンパク質の凝集を抑制することができる。本態様の剤をタンパク質の凝集抑制剤として用いる場合、本態様の剤の使用量としては、タンパク質のモル量に対して、例えば、１～１０００倍のモル量が挙げられる。本態様の剤の使用量は、タンパク質のモル量に対して、例えば、５０～８００倍のモル量が好ましく、１００～６００倍のモル量がより好ましく、３００～６００倍のモル量がさらに好ましい。
【0054】
本態様の剤を適用するタンパク質は、ジスルフィド結合を有するタンパク質であれば、特に限定されない。タンパク質が有するジスルフィド結合の数は、特に限定されず、１個以上であればよい。タンパク質が有するジスルフィド結合の数は、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、又は１～５個等が挙げられる。
タンパク質の分子量は、特に限定されないが、例えば、１,０００～１０,０００,０００が挙げられ、１,０００～２５０,０００が好ましい。
タンパク質の分子量は、特に限定されないが、例えば、１,０００～１０,０００,０００が挙げられ、１,０００～２５０,０００が好ましい。
【0055】
＜タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット＞
本開示の第２の態様は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のためのキットである。本態様のキットは、第１の態様の剤と、前記疎水性基含有化合物とを含む。
本開示の第２の態様は、タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のためのキットである。本態様のキットは、第１の態様の剤と、前記疎水性基含有化合物とを含む。
【0056】
第１の態様の剤は、上記で説明したとおりである。本態様のキットでは、第１の態様の剤は、疎水性基含有化合物を含有しないものを用いることができる。本態様のキットでは、第１の態様の剤は、酸化剤を含有しないものを用いることができる。
【0057】
疎水性基含有化合物は、上記で説明したとおりである。化合物（Ａ）がβ－シクロデキストリン骨格を含む場合、疎水性基含有化合物としては、アダマンタンが好ましい。
【0058】
（任意の構成）
本態様のキットは、第１の態様の剤及び疎水性基含有化合物に加えて、任意の構成を含んでもよい。任意の構成としては、例えば、酸化剤、緩衝液等の各種試薬類、及び使用説明書等が挙げられる。
本態様のキットは、第１の態様の剤及び疎水性基含有化合物に加えて、任意の構成を含んでもよい。任意の構成としては、例えば、酸化剤、緩衝液等の各種試薬類、及び使用説明書等が挙げられる。
【0059】
酸化剤としては、前記「＜タンパク質凝集抑又はタンパク質フォールディング調整のための剤＞」の項で挙げたものと同様のものが挙げられる。酸化剤としては、酸化型グルタチオンが好ましい。
【0060】
緩衝液は、タンパク質、化合物（Ａ）、疎水性基含有化合物、及び酸化剤等を溶解させて、タンパク質フォールディング反応を行うために用いることができる。緩衝液は、濃縮液（例えば、１～１０倍濃縮液）であってもよく、使用時に希釈して用いてもよい。緩衝液は、生化学分野で通常用いられるものを特に制限なく使用することができる。緩衝液としては、例えば、トリス緩衝液、ＭＥＳ緩衝液及びトリシン緩衝液等のアミン系緩衝液；リン酸緩衝液；及びＧｏｏｄ’ｓ ｂｕｆｆｅｒｓ等が挙げられる。緩衝液のｐＨとしては、ｐＨ４～１０が挙げられる。緩衝液のｐＨは、ｐＨ５～９が好ましく、ｐＨ７～９がより好ましく、ｐＨ７～８がさらに好ましい。
【0061】
本態様のキットは、タンパク質フォールディング反応を実施するために用いることができる。本態様のキットは、第１の態様の剤と疎水性基含有化合物を含むため、フォールディング反応液中の化合物（Ａ）と疎水性基含有化合物とのモル比を適宜調整することができる。そのため、前記モル比の調整により、タンパク質フォールディング速度を適宜調整することができる。
本態様のキットは、タンパク質凝集を抑制するために用いてもよい。
本態様のキットは、タンパク質凝集を抑制するために用いてもよい。
【0062】
＜タンパク質のフォールディング方法＞
本開示の第３の態様は、タンパク質のフォールディング方法である。本態様のタンパク質のフォールディング方法は、第１の態様の剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションする工程を含む。
本開示の第３の態様は、タンパク質のフォールディング方法である。本態様のタンパク質のフォールディング方法は、第１の態様の剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションする工程を含む。
【0063】
（タンパク質をインキュベーションする工程；タンパク質フォールディング工程）
タンパク質のインキュベーションは、適切な緩衝液に、タンパク質、及び第１の態様の剤（例えば、化合物（Ａ））を溶解してフォールディング反応液を調製し、インキュベーションすることで行うことができる。当該インキュベーションを行うことにより、タンパク質フォールディング反応を行うことができる。
タンパク質のインキュベーションは、適切な緩衝液に、タンパク質、及び第１の態様の剤（例えば、化合物（Ａ））を溶解してフォールディング反応液を調製し、インキュベーションすることで行うことができる。当該インキュベーションを行うことにより、タンパク質フォールディング反応を行うことができる。
【0064】
緩衝液としては、上記「＜タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット＞」の項で挙げたものを用いることができる。
【0065】
フォールディング反応液中のタンパク質濃度は、特に限定されないが、例えば、フォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１００μＭが挙げられる。タンパク質濃度は、０．５～５０μＭが好ましく、１～２０μＭがより好ましく、１～１０μＭがさらに好ましい。
【0066】
フォールディング反応液中の化合物（Ａ）の濃度は、特に限定されないが、例えば、フォールディング反応液中の最終濃度として、０．０１～１００ｍＭが挙げられる。化合物（Ａ）の濃度は、０．０５～５０ｍＭが好ましく、０．１～２０ｍＭがより好ましく、０．５～１０ｍＭがさらに好ましい。
【0067】
フォールディング反応液は、タンパク質及び第１の態様の剤に加えて、上記疎水性基含有化合物を含んでもよい。すなわち、タンパク質のインキュベーションは、化合物（Ａ）及び疎水性基含有化合物の共存下で行ってもよい。フォールディング反応液中の疎水性基含有化合物の濃度は、特に限定されないが、例えば、フォールディング反応液中の最終濃度として、０．００１～１００ｍＭが挙げられる。疎水性基含有化合物の濃度は、０．００１～５０ｍＭが好ましく、０．０１～２０ｍＭがより好ましく、０．０５～１０ｍＭがさらに好ましい。
化合物（Ａ）と疎水性基含有化合物とのモル比（化合物（Ａ）：疎水性基含有化合物）は、例えば、５０：１～１：５０の間で変化させることができる。化合物（Ａ）に対し、疎水性化合物の量を多くすると、フォールディング速度を遅くすることができる。化合物（Ａ）に対し、疎水性化合物の量を少なくすると、フォールディング速度を速くすることができる。
化合物（Ａ）と疎水性基含有化合物とのモル比（化合物（Ａ）：疎水性基含有化合物）は、例えば、５０：１～１：５０の間で変化させることができる。化合物（Ａ）に対し、疎水性化合物の量を多くすると、フォールディング速度を遅くすることができる。化合物（Ａ）に対し、疎水性化合物の量を少なくすると、フォールディング速度を速くすることができる。
【0068】
フォールディング反応液は、タンパク質及び第１の態様の剤に加えて、酸化剤を含んでもよい。すなわち、タンパク質のインキュベーションは、化合物（Ａ）及び酸化剤の共存下で行ってもよい。酸化剤としては、上記で挙げたものを用いることができる。フォールディング反応液中の酸化剤の濃度は、特に限定されないが、例えば、フォールディング反応液中の最終濃度として、０．００１～１００ｍＭが挙げられる。酸化剤の濃度は、０．００１～５０ｍＭが好ましく、０．０１～２０ｍＭがより好ましく、０．０５～１０ｍＭがさらに好ましい。
化合物（Ａ）と酸化剤とのモル比（化合物（Ａ）：酸化剤）としては、例えば、２０：１～１：１が好ましく、１０：１～２：１がより好ましい。
化合物（Ａ）と酸化剤とのモル比（化合物（Ａ）：酸化剤）としては、例えば、２０：１～１：１が好ましく、１０：１～２：１がより好ましい。
【0069】
フォールディング反応液は、タンパク質、第１の態様の剤、疎水性基含有化合物、及び酸化剤を含むことが好ましい。すなわち、タンパク質のインキュベーションは、化合物（Ａ）、疎水性基含有化合物、及び酸化剤の共存下で行うことが好ましい。
【0070】
インキュベーションに用いるタンパク質は、１個以上のジスルフィド結合を有する限り、特に限定されない。タンパク質は、上記と同様のものが挙げられる。タンパク質としては、アンフォールディングされたタンパク質、及びミスフォールディングされたタンパク質が挙げられる。
アンフォールディングされたタンパク質とは、１個以上のジスルフィド結合が酸化されて、１個以上のジスルフィド結合が切断されたタンパク質である。タンパク質のアンフォールディングは、還元剤を用いて行うことができる。還元剤としては、化合物（Ａ）を用いてもよく、他の還元剤（例えば、グルタチオン、β－メルカプトエタノール、ジチオスレイトール等）を用いてもよい。
ミスフォールディングされたタンパク質とは、１個以上のジスルフィド結合が最安定の天然構造以外の構造で形成されているタンパク質である。ミスフォールディングされたタンパク質は、例えば、酸化剤と還元剤とを併用することで作製することができる。
アンフォールディングされたタンパク質とは、１個以上のジスルフィド結合が酸化されて、１個以上のジスルフィド結合が切断されたタンパク質である。タンパク質のアンフォールディングは、還元剤を用いて行うことができる。還元剤としては、化合物（Ａ）を用いてもよく、他の還元剤（例えば、グルタチオン、β－メルカプトエタノール、ジチオスレイトール等）を用いてもよい。
ミスフォールディングされたタンパク質とは、１個以上のジスルフィド結合が最安定の天然構造以外の構造で形成されているタンパク質である。ミスフォールディングされたタンパク質は、例えば、酸化剤と還元剤とを併用することで作製することができる。
【0071】
インキュベーション温度は、タンパク質フォールディング反応の進行が可能な温度であれば、特に限定されない。インキュベーション温度は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション温度としては、例えば、１０～５０℃が挙げられ、２０～４０℃が好ましく、２５℃～３５℃がより好ましい。
インキュベーション時間は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション時間としては、例えば、１～６００分が挙げられる。フォールディングの状態を経時的に観察し、最安定な天然構造となった時点で、インキュベーションを終了してもよい。フォールディング状態の観察には、例えば、４－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ－４’－Ｍａｌｅｉｍｉｄｙｌｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－Ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ Ａｃｉｄ（ＡＭＳ）等のチオール基修飾剤を用いることができる。
インキュベーション時間は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション時間としては、例えば、１～６００分が挙げられる。フォールディングの状態を経時的に観察し、最安定な天然構造となった時点で、インキュベーションを終了してもよい。フォールディング状態の観察には、例えば、４－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ－４’－Ｍａｌｅｉｍｉｄｙｌｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－Ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ Ａｃｉｄ（ＡＭＳ）等のチオール基修飾剤を用いることができる。
【0072】
（任意工程）
本態様の方法は、前記インキュベーション工程に加えて、任意工程を含んでもよい。任意工程としては、例えば、タンパク質をアンフォールディングする工程、フォールディングされたタンパク質を単離する工程等が挙げられる。
本態様の方法は、前記インキュベーション工程に加えて、任意工程を含んでもよい。任意工程としては、例えば、タンパク質をアンフォールディングする工程、フォールディングされたタンパク質を単離する工程等が挙げられる。
【0073】
≪タンパク質アンフォールディング工程≫
本態様の方法は、前記インキュベーション工程（タンパク質フォールディング工程）の前に、タンパク質をアンフォールディングする工程を含んでもよい。
タンパク質をアンフォールディングする工程は、還元剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションすることにより行うことができる。還元剤としては、上記で挙げたものを用いることができる。タンパク質のアンフォールディングには、タンパク質変性剤（例えば、グアニジン塩酸塩、尿素等）を用いてもよい。
タンパク質のアンフォールディング反応は、タンパク質、酸化剤、及びタンパク質変性剤を、水等の媒体に溶解してタンパク質アンフォールディング反応液を調製し、インキュベーションすることにより行ってもよい。
タンパク質濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１００μＭが挙げられる。タンパク質濃度は、０．５～５０μＭが好ましく、１～２０μＭがより好ましく、１～１０μＭがさらに好ましい。
還元剤の濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１０００ｍＭが挙げられる。酸化剤の濃度は、１～５００ｍＭが好ましく、１０～３００ｍＭがより好ましく、５０～２００ｍＭがさらに好ましい。
変性剤の濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１００Ｍが挙げられる。変性剤の濃度は、０．５～５０Ｍが好ましく、１～３０Ｍがより好ましく、１～２０Ｍがさらに好ましい。
アンフォールディング反応液のｐＨとしては、例えば、ｐＨ５～１０が挙げられ、ｐＨ６～９．５が好ましく、ｐＨ７～９がより好ましく、ｐＨ８～９がさらに好ましい。
本態様の方法は、前記インキュベーション工程（タンパク質フォールディング工程）の前に、タンパク質をアンフォールディングする工程を含んでもよい。
タンパク質をアンフォールディングする工程は、還元剤の存在下で、タンパク質をインキュベーションすることにより行うことができる。還元剤としては、上記で挙げたものを用いることができる。タンパク質のアンフォールディングには、タンパク質変性剤（例えば、グアニジン塩酸塩、尿素等）を用いてもよい。
タンパク質のアンフォールディング反応は、タンパク質、酸化剤、及びタンパク質変性剤を、水等の媒体に溶解してタンパク質アンフォールディング反応液を調製し、インキュベーションすることにより行ってもよい。
タンパク質濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１００μＭが挙げられる。タンパク質濃度は、０．５～５０μＭが好ましく、１～２０μＭがより好ましく、１～１０μＭがさらに好ましい。
還元剤の濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１０００ｍＭが挙げられる。酸化剤の濃度は、１～５００ｍＭが好ましく、１０～３００ｍＭがより好ましく、５０～２００ｍＭがさらに好ましい。
変性剤の濃度としては、例えば、アンフォールディング反応液中の最終濃度として、０．１～１００Ｍが挙げられる。変性剤の濃度は、０．５～５０Ｍが好ましく、１～３０Ｍがより好ましく、１～２０Ｍがさらに好ましい。
アンフォールディング反応液のｐＨとしては、例えば、ｐＨ５～１０が挙げられ、ｐＨ６～９．５が好ましく、ｐＨ７～９がより好ましく、ｐＨ８～９がさらに好ましい。
【0074】
インキュベーション温度は、タンパク質アンフォールディング反応の進行が可能な温度であれば、特に限定されない。インキュベーション温度は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション温度としては、例えば、１０～５０℃が挙げられ、２０～４０℃が好ましく、２０℃～３５℃がより好ましい。
インキュベーション時間は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション時間としては、例えば、１～６００分が挙げられ、１０～５００分が好ましく、３０～４００分がより好ましく、６０～３００分がさらに好ましい。アンフォールディングの状態を経時的に観察し、全てのジスルフィド結合が還元された時点で、インキュベーションを終了してもよい。
インキュベーション時間は、タンパク質の種類に応じて適宜選択することができる。インキュベーション時間としては、例えば、１～６００分が挙げられ、１０～５００分が好ましく、３０～４００分がより好ましく、６０～３００分がさらに好ましい。アンフォールディングの状態を経時的に観察し、全てのジスルフィド結合が還元された時点で、インキュベーションを終了してもよい。
【0075】
インキュベーション後、アンフォールディング反応液の透析等を行い、変性剤及び還元剤等を除去してもよい。
【0076】
≪タンパク質単離工程≫
本態様の方法は、前記インキュベーション工程（タンパク質フォールディング工程）の後に、フォールディングされたタンパク質を単離する工程を含んでもよい。タンパク質の単離には、公知のタンパク質単離方法を特に制限なく、用いることができる。タンパク質単離法としては、例えば、塩析、透析、カラムクロマトグラフィー等が挙げられる。
本態様の方法は、前記インキュベーション工程（タンパク質フォールディング工程）の後に、フォールディングされたタンパク質を単離する工程を含んでもよい。タンパク質の単離には、公知のタンパク質単離方法を特に制限なく、用いることができる。タンパク質単離法としては、例えば、塩析、透析、カラムクロマトグラフィー等が挙げられる。
【0077】
＜タンパク質の凝集抑制方法＞
本開示の第４の態様は、タンパク質の凝集抑制方法である。本態様の方法は、タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を共存させることを含む。
本開示の第４の態様は、タンパク質の凝集抑制方法である。本態様の方法は、タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を共存させることを含む。
【0078】
タンパク質溶液は、タンパク質を水又は緩衝液等に溶解することにより、調製することができる。緩衝液としては、上記と同様のものが挙げられる。タンパク質溶液のｐＨは、特に限定されず、タンパク質の種類により、適宜選択することができる。タンパク質溶液のｐＨとしては、例えば、ｐＨ４～１０が挙げられる。タンパク質溶液のｐＨは、ｐＨ５～９が好ましく、ｐＨ７～９がより好ましく、ｐＨ７～８がさらに好ましい。
タンパク質溶液中のタンパク質濃度は、特に限定されない。タンパク質濃度としては、例えば、０．１～１０００μＭが挙げられる。タンパク質濃度としては、例えば、１～５００μＭが好ましく、５～３００μＭがより好ましく、１０～１００μＭがさらに好ましい。
タンパク質溶液中のタンパク質濃度は、特に限定されない。タンパク質濃度としては、例えば、０．１～１０００μＭが挙げられる。タンパク質濃度としては、例えば、１～５００μＭが好ましく、５～３００μＭがより好ましく、１０～１００μＭがさらに好ましい。
【0079】
第１の態様の剤（例えば、化合物（Ａ））は、タンパク質溶液に添加して溶解させることにより、タンパク質溶液中に共存させることができる。タンパク質溶液中の化合物（Ａ）の濃度は、タンパク質溶液中の最終濃度として、例えば、０．１～１０００ｍＭが挙げられる。化合物（Ａ）の濃度としては、例えば、１～５００ｍＭが好ましく、５～３００ｍＭがより好ましく、５～１００ｍＭがさらに好ましい。
化合物（Ａ）のモル濃度としては、タンパク質のモル濃度に対して、例えば、１～１０００倍のモル濃度が挙げられる。化合物（Ａ）のモル濃度は、タンパク質のモル濃度に対して、例えば、５０～８００倍が好ましく、１００～６００倍がより好ましく、３００～６００倍がさらに好ましい。
化合物（Ａ）のモル濃度としては、タンパク質のモル濃度に対して、例えば、１～１０００倍のモル濃度が挙げられる。化合物（Ａ）のモル濃度は、タンパク質のモル濃度に対して、例えば、５０～８００倍が好ましく、１００～６００倍がより好ましく、３００～６００倍がさらに好ましい。
【0080】
タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を添加して、タンパク質と化合物（Ａ）とを共存させることにより、タンパク質の凝集を効果的に抑制することができる。
【0081】
＜タンパク質の保管方法＞
本開示の第５の態様は、タンパク質の保管方法である。本態様の方法は、タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を共存させることを含む。
本開示の第５の態様は、タンパク質の保管方法である。本態様の方法は、タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を共存させることを含む。
【0082】
タンパク質溶液中での、第１の態様の剤の共存は、上記と同様に行うことができる。
タンパク質溶液は、適切な容器に、第１の態様の剤を含むタンパク質溶液を入れて、保管すればよい。容器としては、例えば、プラスチック製容器、ガラス製容器等が挙げられる。
保管温度は、特に限定されないが、例えば、０～４０℃が挙げられる。保管温度は、０～３０℃が好ましく、０～２０℃がより好ましく、０～１０℃がさらに好ましい。
タンパク質溶液は、適切な容器に、第１の態様の剤を含むタンパク質溶液を入れて、保管すればよい。容器としては、例えば、プラスチック製容器、ガラス製容器等が挙げられる。
保管温度は、特に限定されないが、例えば、０～４０℃が挙げられる。保管温度は、０～３０℃が好ましく、０～２０℃がより好ましく、０～１０℃がさらに好ましい。
【0083】
タンパク質溶液中に、第１の態様の剤を添加して、タンパク質と化合物（Ａ）とを共存させて保管することにより、保管中にタンパク質が凝集することを抑制することができる。
【0084】
＜化合物＞
本開示の第６の態様は、下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物である。本態様の化合物は、第１の態様の剤として利用することができる。
本開示の第６の態様は、下記式（Ｉ－１－２ＳＨ）で表される化合物である。本態様の化合物は、第１の態様の剤として利用することができる。
【0085】
【化9】
【実施例0086】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0087】
＜β－シクロデキストリン－２ＳＨの合成例＞
以下のスキームにより、β－シクロデキストリン－２ＳＨ（β－ＣＤ２ＳＨ）を合成した。
以下のスキームにより、β－シクロデキストリン－２ＳＨ（β－ＣＤ２ＳＨ）を合成した。
【0088】
【化10】
【0089】
（化合物（２）の合成）
ナスフラスコに、Ｍｏｎｏ－２－Ｏ－（ｐ－ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ（化合物１；２００．２ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ，東京化成工業）を加え、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，４ｍＬ，キシダ化学）に溶解させた。次に、シスタミン二塩酸塩（３５０．２ｍｇ，１．５５ｍｍｏｌ，東京化成工業）と水酸化ナトリウム（１４４．３ｍｇ，３．６０７５ｍｍｏｌ，キシダ化学）とを精製水（１ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に滴下した。滴下後、８０℃に昇温し、４８時間攪拌した。室温に冷却した後、エタノール（キシダ化学）を加え、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、化合物２を得た。収量：１５８．５ｍｇ、収率：８０．６％。
ナスフラスコに、Ｍｏｎｏ－２－Ｏ－（ｐ－ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ（化合物１；２００．２ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ，東京化成工業）を加え、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，４ｍＬ，キシダ化学）に溶解させた。次に、シスタミン二塩酸塩（３５０．２ｍｇ，１．５５ｍｍｏｌ，東京化成工業）と水酸化ナトリウム（１４４．３ｍｇ，３．６０７５ｍｍｏｌ，キシダ化学）とを精製水（１ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に滴下した。滴下後、８０℃に昇温し、４８時間攪拌した。室温に冷却した後、エタノール（キシダ化学）を加え、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、化合物２を得た。収量：１５８．５ｍｇ、収率：８０．６％。
【0090】
（β－ＣＤ２ＳＨの合成）
窒素雰囲気下で、化合物２（１１３．８ｍｇ，０．０８９６ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，０．７５ｍＬ，関東化学）に溶解させた。次に、ジチオトレイトール（ＤＴＴ，２７．９ｍｇ，０．１８１ｍｍｏｌ，ナカライテスク）をあらかじめ窒素バブリングにより脱気した精製水（０．２５ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に加えた。その後、室温で２０時間攪拌した。エタノール（キシダ化学）を加え、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、β－ＣＤ２ＳＨを得た。収量：１６．５ｍｇ、収率：１５．４％。得られたβ－ＣＤ２ＳＨの１Ｈ ＮＭＲ解析（溶媒：重ＤＭＳＯ、測定温度：２５℃）を行い、構造を確認した。β－ＣＤ２ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを図１に示す。
窒素雰囲気下で、化合物２（１１３．８ｍｇ，０．０８９６ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，０．７５ｍＬ，関東化学）に溶解させた。次に、ジチオトレイトール（ＤＴＴ，２７．９ｍｇ，０．１８１ｍｍｏｌ，ナカライテスク）をあらかじめ窒素バブリングにより脱気した精製水（０．２５ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に加えた。その後、室温で２０時間攪拌した。エタノール（キシダ化学）を加え、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、β－ＣＤ２ＳＨを得た。収量：１６．５ｍｇ、収率：１５．４％。得られたβ－ＣＤ２ＳＨの１Ｈ ＮＭＲ解析（溶媒：重ＤＭＳＯ、測定温度：２５℃）を行い、構造を確認した。β－ＣＤ２ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを図１に示す。
【0091】
＜β－シクロデキストリン－６ＳＨの合成＞
以下のスキームにより、β－シクロデキストリン－６ＳＨ（β－ＣＤ６ＳＨ）を合成した。
以下のスキームにより、β－シクロデキストリン－６ＳＨ（β－ＣＤ６ＳＨ）を合成した。
【0092】
【化11】
【0093】
（化合物５の合成）
化合物３（シスタミン二塩酸塩、６８１．５ｍｇ，３．０３ｍｍｏｌ，東京化成工業）を５Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ，水酸化ナトリウム（キシダ化学）を用いて調製）に溶解させ、塩化メチレン（１０ｍＬ，５回，ＡＧＣ）で抽出した。回収した有機層に硫酸ナトリウム（キシダ化学）を加え、濾過した。濾液を減圧留去、真空乾燥し、化合物４を得た。続けて、化合物４が入ったナスフラスコに、Ｍｏｎｏ－６－Ｏ－（ｐ－ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ（β－ＣＤ－６－ＯＴｓ，１３０．２ｍｇ，０．１０１ｍｍｏｌ，東京化成工業）を加え、７０℃に昇温し、６時間攪拌した。室温に冷やした後、アセトン（関東化学）を加えて、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、化合物５を得た。収量：４９．９ｍｇ、収率：３８．９％。
化合物３（シスタミン二塩酸塩、６８１．５ｍｇ，３．０３ｍｍｏｌ，東京化成工業）を５Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ，水酸化ナトリウム（キシダ化学）を用いて調製）に溶解させ、塩化メチレン（１０ｍＬ，５回，ＡＧＣ）で抽出した。回収した有機層に硫酸ナトリウム（キシダ化学）を加え、濾過した。濾液を減圧留去、真空乾燥し、化合物４を得た。続けて、化合物４が入ったナスフラスコに、Ｍｏｎｏ－６－Ｏ－（ｐ－ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ（β－ＣＤ－６－ＯＴｓ，１３０．２ｍｇ，０．１０１ｍｍｏｌ，東京化成工業）を加え、７０℃に昇温し、６時間攪拌した。室温に冷やした後、アセトン（関東化学）を加えて、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、化合物５を得た。収量：４９．９ｍｇ、収率：３８．９％。
【0094】
（β－ＣＤ６ＳＨの合成）
窒素雰囲気下で、化合物５（４９．９ｍｇ，０．０３９３ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，１．５ｍＬ，関東化学）に溶解させた。次に、ジチオトレイトール（ＤＴＴ，１２．１ｍｇ，０．０７８４ｍｍｏｌ，ナカライテスク）をあらかじめ窒素バブリングにより脱気した精製水（０．５ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に加えた。その後、室温で１０時間攪拌した。アセトン（関東化学）を加えて、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、β－ＣＤ６ＳＨを得た。収量：２７．７ｍｇ、収率：５９．０％。得られたβ－ＣＤ６ＳＨの１Ｈ ＮＭＲ解析（溶媒：重ＤＭＳＯ、測定温度：２５℃）を行い、構造を確認した。β－ＣＤ６ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを図２に示す。
窒素雰囲気下で、化合物５（４９．９ｍｇ，０．０３９３ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，１．５ｍＬ，関東化学）に溶解させた。次に、ジチオトレイトール（ＤＴＴ，１２．１ｍｇ，０．０７８４ｍｍｏｌ，ナカライテスク）をあらかじめ窒素バブリングにより脱気した精製水（０．５ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をフラスコ内に加えた。その後、室温で１０時間攪拌した。アセトン（関東化学）を加えて、沈殿物を回収した。沈殿物をアセトンで洗浄し、バキュームオーブンで乾燥させて、β－ＣＤ６ＳＨを得た。収量：２７．７ｍｇ、収率：５９．０％。得られたβ－ＣＤ６ＳＨの１Ｈ ＮＭＲ解析（溶媒：重ＤＭＳＯ、測定温度：２５℃）を行い、構造を確認した。β－ＣＤ６ＳＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトルデータを図２に示す。
【0095】
＜還元変性タンパク質の作製＞
モデル基質としてＲＮａｓｅ Ａを採用した（M.M. Lyles, H.F. Gilbert., Biochemistry. 1991 30(3):613-9.）。ＲＮａｓｅ Ａは４本のジスルフィド結合を有すタンパク質であり、当該分野におけるモデル基質として一般である。
ＲＮａｓｅ Ａ（ｓｉｇｍａ）の還元変性体（４つのジスルフィド結合の還元体）を作製するために、ＲＮａｓｅ Ａ １６．０ｍｇを、６Ｍ グアニジン塩酸及び１００ｍＭ ＤＴＴの存在下、ｐＨ８．７、２５℃で、２時間インキュベートし、１０ｍＭ ＨＣｌで透析した。さらに、２回透析を行い、ＤＴＴ等を除いて溶液を１０ｍＭ ＨＣｌに交換した（M.M. Lyles, H.F. Gilbert., Biochemistry. 1991 30(3):613-9.）。
モデル基質としてＲＮａｓｅ Ａを採用した（M.M. Lyles, H.F. Gilbert., Biochemistry. 1991 30(3):613-9.）。ＲＮａｓｅ Ａは４本のジスルフィド結合を有すタンパク質であり、当該分野におけるモデル基質として一般である。
ＲＮａｓｅ Ａ（ｓｉｇｍａ）の還元変性体（４つのジスルフィド結合の還元体）を作製するために、ＲＮａｓｅ Ａ １６．０ｍｇを、６Ｍ グアニジン塩酸及び１００ｍＭ ＤＴＴの存在下、ｐＨ８．７、２５℃で、２時間インキュベートし、１０ｍＭ ＨＣｌで透析した。さらに、２回透析を行い、ＤＴＴ等を除いて溶液を１０ｍＭ ＨＣｌに交換した（M.M. Lyles, H.F. Gilbert., Biochemistry. 1991 30(3):613-9.）。
【0096】
＜ＲＮａｓｅ Ａ活性評価＞
（ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応）
フォールディング促進効果を評価するために、上記で調製した還元変性ＲＮａｓｅ Ａの活性回復測定を行った。チオール化合物（β－ＣＤ２ＳＨ）１ｍＭ及びジスルフィド化合物（酸化型グルタチオン；ＧＳＳＧ）０．２ｍＭの存在下で、８μＭ ＲＮａｓｅ Ａを含む緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ）を３０℃でインキュベートした。
（ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応）
フォールディング促進効果を評価するために、上記で調製した還元変性ＲＮａｓｅ Ａの活性回復測定を行った。チオール化合物（β－ＣＤ２ＳＨ）１ｍＭ及びジスルフィド化合物（酸化型グルタチオン；ＧＳＳＧ）０．２ｍＭの存在下で、８μＭ ＲＮａｓｅ Ａを含む緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ）を３０℃でインキュベートした。
【0097】
（ＲＮａｓｅ Ａ活性測定）
経時的に上記反応液を分取し、ＲＮａｓｅ Ａの基質となるシチジン ２’：３’－環状一リン酸（ｃｙｔｉｄｉｎｅ ２’：３’－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ：ｃＣＭＰ）を含む同緩衝液で希釈し、最終濃度８μＭ ＲＮａｓｅ Ａ、０．６ｍＭ ｃＣＭＰとした。分光光度計により２８４ｎｍの吸光度の変化を測定し、天然構造へフォールディングされたＲＮａｓｅ Ａの核酸分解活性を定量した。
経時的に上記反応液を分取し、ＲＮａｓｅ Ａの基質となるシチジン ２’：３’－環状一リン酸（ｃｙｔｉｄｉｎｅ ２’：３’－ｃｙｃｌｉｃ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ：ｃＣＭＰ）を含む同緩衝液で希釈し、最終濃度８μＭ ＲＮａｓｅ Ａ、０．６ｍＭ ｃＣＭＰとした。分光光度計により２８４ｎｍの吸光度の変化を測定し、天然構造へフォールディングされたＲＮａｓｅ Ａの核酸分解活性を定量した。
【0098】
（実施例１）
以下の条件で、ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応を行った。条件（２）では、フォールディング反応液を調製後、フォールディング反応液に対して、３０℃で３分３０秒間超音波を照射した。その後、フォールディング反応液を濾過した。濾過後のフォールディング反応液にＲＮａｓｅ Ａを添加し、インキュベートした。
（１）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（２）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ／０．１ｍＭアダマンタン（東京化成工業）
経時的に反応液を分取し、上記のようにＲＮＡ Ａの活性測定を行った。
以下の条件で、ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応を行った。条件（２）では、フォールディング反応液を調製後、フォールディング反応液に対して、３０℃で３分３０秒間超音波を照射した。その後、フォールディング反応液を濾過した。濾過後のフォールディング反応液にＲＮａｓｅ Ａを添加し、インキュベートした。
（１）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（２）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ／０．１ｍＭアダマンタン（東京化成工業）
経時的に反応液を分取し、上記のようにＲＮＡ Ａの活性測定を行った。
【0099】
結果を図３に示す。アダマンタンを添加することにより、ＲＮａｓｅ Ａの天然構造へのフォールディングが遅れることが確認された。この結果から、アダマンタンの添加により、タンパク質のフォールディング速度を調節できることが示された。
【0100】
（実施例２）
ＲＮａｓｅ Ａ分子内にジスルフィド結合が形成される過程を観察するため、遊離チオール基修飾試薬である４－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ－４’－Ｍａｌｅｉｍｉｄｙｌｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－Ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ Ａｃｉｄ（ＡＭＳ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ジスルフィド結合を形成していないチオール基のみを選択的に修飾した。
ＲＮａｓｅ Ａ分子内にジスルフィド結合が形成される過程を観察するため、遊離チオール基修飾試薬である４－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ－４’－Ｍａｌｅｉｍｉｄｙｌｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－Ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ Ａｃｉｄ（ＡＭＳ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ジスルフィド結合を形成していないチオール基のみを選択的に修飾した。
【0101】
以下の条件で、ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応を行った。
（１）１ｍＭ グルタチオン（ＧＳＨ）／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（２）１ｍＭ β―ＣＤ６ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（３）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（１）１ｍＭ グルタチオン（ＧＳＨ）／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（２）１ｍＭ β―ＣＤ６ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
（３）１ｍＭ β―ＣＤ２ＳＨ／０．２ｍＭ ＧＳＳＧ
【0102】
経時的に反応液を分取し、最終濃度５ｍＭとなるようにＡＭＳを加えることで反応をクエンチした。このサンプルを、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）に供することで、ＲＮａｓｅ Ａ 内ジスルフィド結合の導入度を評価した。
【0103】
結果を図４に示す。（１）～（３）のいずれの条件でも、インキュベーション３０分以上でＲＮａｓｅ Ａの還元体（図中の「Ｒ」）がほぼ消失していることが確認された。この結果は、ＲＮａｓｅ Ａのフォールディング反応によりＲＮａｓｅ Ａの部分的なフォールディング形成が進行し、ＲＮａｓｅ Ａの部分的なフォールディング中間体が形成されて、ＲＮａｓｅ Ａ還元体が消失することを示す。
【0104】
（実施例３）
３０μＭ リゾチーム、１２．７５ｍＭ β－ＣＤ２ＳＨを含む水溶液を、９６℃で、２０分間加熱した。冷却し、１．５時間後及び６時間後に、水中に溶解しているリゾチーム濃度を測定した。
３０μＭ リゾチーム、１２．７５ｍＭ β－ＣＤ２ＳＨを含む水溶液を、９６℃で、２０分間加熱した。冷却し、１．５時間後及び６時間後に、水中に溶解しているリゾチーム濃度を測定した。
【0105】
結果を図５に示す。β－ＣＤ２ＳＨの存在下では、β－ＣＤ２ＳＨの非存在と比較して、リゾチーム残存濃度が増加した。この結果は、β－ＣＤ２ＳＨが、タンパク質の凝集抑制効果を有することを示す。
【産業上の利用可能性】
【0106】
本発明によれば、タンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のための剤、前記剤を含むタンパク質凝集抑制又はタンパク質フォールディング調整のためのキット、前記剤を用いたタンパク質のフォールディング方法、タンパク質の凝集抑制方法、及びタンパク質の保管方法が提供される。本発明により提供される剤は、タンパク質フォールディング調整剤、タンパク質凝集抑制剤、タンパク質フォールディング促進剤、及びタンパク質フォールディング速度調節剤として使用することができる。タンパク質フォールディング速度調節剤は、タンパク質フォールディング中間種の生化学的特性解析を行う上で有用である。タンパク質凝集抑制剤は、タンパク質を用いた実験、及びタンパク質試薬の保管等に有用である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】