特開2023-133192ポリオキシエチレン誘導体の製造方法、ポリオキシエチレン化合物の定量方法及び分析用ラベル化試薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023133192
(43)【公開日】2023-09-22
(54)【発明の名称】ポリオキシエチレン誘導体の製造方法、ポリオキシエチレン化合物の定量方法及び分析用ラベル化試薬
(51)【国際特許分類】
C08G 65/329 20060101AFI20230914BHJP
【ＦＩ】
C08G65/329
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023033321
(22)【出願日】2023-03-06
(31)【優先権主張番号】P 2022035886
(32)【優先日】2022-03-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000004341
【氏名又は名称】日油株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100097490
【弁理士】
【氏名又は名称】細田 益稔
(74)【代理人】
【識別番号】100097504
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 純雄
(72)【発明者】
【氏名】羽村 健
(72)【発明者】
【氏名】神谷 昌樹
【テーマコード（参考）】
4J005
【Ｆターム（参考）】
4J005AA04
4J005AA12
4J005BD01
4J005BD05
4J005BD06
(57)【要約】
【課題】ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を原料としてヒドロキシ基を誘導体化し、高分子量ポリオキシエチレン誘導体を製造する際に、未反応のヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を迅速かつ高精度で定量可能とすることである。
【解決手段】未反応のヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量する。
【選択図】 なし
【解決手段】未反応のヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量する。
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の前記ヒドロキシ基を誘導体化することによって、前記ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体を生成させるのに際して、
未反応の前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
未反応の前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
【請求項2】
前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物が下式（１）で表されることを特徴とする、請求項１記載のヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
（式（１）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ、０～２，５００であり、かつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ１は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、かつｔが０の場合にはＸ１はヒドロキシ基であり、
Ｘ２はヒドロキシ基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
【化1】
（式（１）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ、０～２，５００であり、かつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ１は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、かつｔが０の場合にはＸ１はヒドロキシ基であり、
Ｘ２はヒドロキシ基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
【請求項3】
前記ヒドロキシ基が誘導体化された前記高分子量ポリオキシエチレン誘導体が下式（２）で表されることを特徴とする、請求項１または２記載のヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
（式（２）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
【化2】
（式（２）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
【請求項4】
前記ラベル化試薬が、下式（３）で表されるイソシアネート試薬であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載のヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
【化3】
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
【請求項5】
式（３）で表されることを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の分析用ラベル化試薬。
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
【化3】
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
【請求項6】
高分子量ポリオキシエチレン誘導体に含まれる、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を定量する方法であって、
ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の定量方法。
ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の定量方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポリオキシエチレン誘導体の製造方法、ポリオキシエチレン化合物の定量方法及び分析用ラベル化試薬に関する発明である。
【背景技術】
【0002】
ホルモンやサイトカイン、酵素などの生体関連物質などを用いた医薬品は、通常生体内へ投与されると、腎臓における糸球体濾過や肝臓や脾臓などにおけるマクロファージによる取り込みによって、生体内から速やかに排出されてしまう。そのため血中半減期が短く、十分な薬理効果を得ることが困難であることが多い。この問題を解決するため、生体関連物質にポリオキシエチレン（ＰＥＧ）などの水溶性ポリマーによって化学修飾する試みが行われている。その結果、分子量の増大や水和層の形成などにより生体関連物質などの血中半減期を延長することが可能となる。また、これらの修飾により、生体関連物質などの毒性や抗原性の低下、凝集性の改善などの効果が得られることも良く知られている。
【0003】
ＰＥＧ誘導体の構造は、通常、修飾するタンパク質などの表面に存在するアミノ基、メルカプト基、カルボキシ基、不飽和結合などの官能基と化学的に結合する活性基をポリオキシエチレン末端に有する。例えば、アミノ基に対して修飾させる場合はホルミル基、エポキシ基、ｐ－ニトロフェニルエステル基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル基などの活性基、メルカプト基に対してはメルカプト基、マレイミジル基、置換マレイミジル基、アリル基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル基などの活性基、カルボキシル基に対しては、メルカプト基、アミノ基などの活性基、不飽和結合に対してはメルカプト基などの活性基をＰＥＧ末端に有する。
【0004】
しかし、特に低分子薬剤やペプチドを修飾する場合には、ＰＥＧ誘導体と結合させる反応性官能基が少ないため、溶解性の向上などの効果が得られにくいという問題点がある。また、数多くのＰＥＧ誘導体で修飾すると薬剤やペプチドの活性点を封鎖してしまい、それ自身が持つ機能、薬効を十分に発現できなくなるという問題点がある。そこで、近年は、生理活性物質の機能や薬効を低下させずに、最小限の修飾数でも効率的にその効果を得るため、より高分子量のＰＥＧ誘導体が用いられるようになっている。
【0005】
これらの医薬用途を目的とした活性基を有するＰＥＧ誘導体（活性化ＰＥＧ誘導体）は、これを修飾して生産される薬剤の性能や安全性の観点から、不純物が少なく、さらに、生産過程で副生した不純物や残存した原料および中間体について適切な管理が求められている。例えば、バッチ製造が主流である医薬品産業においては、残存した原料や副生した不純物量等について生産の任意の工程で試験を実施し、試験中はその工程で一時待機し、試験の合格を確認した上で次の工程に進むケースがある。
【0006】
現在、直鎖型や分岐型などの様々な骨格を有する活性化ＰＥＧ誘導体が開発されており、その製造方法により副生する不純物は様々であるが、一般的に活性化ＰＥＧ誘導体は、ヒドロキシ基を有したＰＥＧ化合物（ＰＥＧ－ＯＨ）を原料もしくは中間体として、ヒドロキシ基を改変または活性基を結合するなどの誘導体化工程を経て生産されている。このため、生産過程で得られるヒドロキシ基が誘導体化されたＰＥＧ誘導体や最終生成物である活性化ＰＥＧ誘導体には、ヒドロキシ基の誘導体化が不十分な場合にＰＥＧ－ＯＨが微量成分として残存する。
また、微量成分として残存したＰＥＧ－ＯＨは、活性化ＰＥＧ誘導体の生産工程において目的とする化合物以外の不純物となり、純度低下につながるケースがある。
また、微量成分として残存したＰＥＧ－ＯＨは、活性化ＰＥＧ誘導体の生産工程において目的とする化合物以外の不純物となり、純度低下につながるケースがある。
【0007】
このことから、誘導体化したＰＥＧ誘導体中に微量に残存した未反応のＰＥＧ－ＯＨ量を、ヒドロキシ基の誘導体化工程において、高感度に定量し、適切に管理可能な製造方法が求められている。
特に、高分子量ＰＥＧ誘導体は近年需要が高まっていることから、高分子量ＰＥＧ－ＯＨのヒドロキシ基を誘導体化する工程において、誘導体化した高分子量ＰＥＧ誘導体中に微量に残存した高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を高感度に定量し、適切に管理する製造方法は、高分子量ＰＥＧ誘導体の純度向上のために重要である。
特に、高分子量ＰＥＧ誘導体は近年需要が高まっていることから、高分子量ＰＥＧ－ＯＨのヒドロキシ基を誘導体化する工程において、誘導体化した高分子量ＰＥＧ誘導体中に微量に残存した高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を高感度に定量し、適切に管理する製造方法は、高分子量ＰＥＧ誘導体の純度向上のために重要である。
【0008】
また、ここでいう適切な管理とは、微量に残存した高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を誘導体化工程内で高感度に定量し、分析結果を基に誘導体化された高分子量ＰＥＧ誘導体の活性基の導入率などの品質特性に影響を与えない範囲であることを確認し、反応や精製工程などの所定の工程を完了させ、次の工程に移行することであり、品質特性に影響を与える範囲である場合には、反応時間を延長する、または精製工程を追加するなどの適切な処置を行うことである。
【0009】
さらに、微量に残存した高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を適切に管理する場合には、製品の安定性や生産性の観点から所定の工程を速やかに完了させ、次の工程に移行する必要があるため、使用する高感度な定量法に簡便さや迅速性も求められる。例えば、高分子量ＰＥＧ－ＯＨの定量に時間を要した場合、所定の工程を完了できず、生産時間が増大し、また、工程途中で製品の劣化につながるケースがある。
【0010】
ＰＥＧ－ＯＨの定量法としては、中和滴定法、電位差滴定法およびピリジン－塩化アセチル法などの滴定法があるが、これらの定量法は一般的にＰＥＧ－ＯＨが主成分である場合の分析手法である。また、分析誤差が大きく、さらに分析試料の分子量が大きいほど、その誤差の影響は大きくなることから、誘導体化された高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる微量の未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの高感度な定量法として適していない。
【0011】
また、高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる高分子量ＰＥＧ－ＯＨを高感度に定量する分析手段として核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ法）が知られている（例えば、特許文献１参照）。
より簡便なＮＭＲ法としては、トリクロロアセチルイソシアネートなどのイソシアネート試薬などをラベル化試薬としてＰＥＧ－ＯＨを非プロトン性の重溶媒中でラベル化させた後、１Ｈ－ＮＭＲ測定で求める方法がある（例えば、非特許文献１）。
より簡便なＮＭＲ法としては、トリクロロアセチルイソシアネートなどのイソシアネート試薬などをラベル化試薬としてＰＥＧ－ＯＨを非プロトン性の重溶媒中でラベル化させた後、１Ｈ－ＮＭＲ測定で求める方法がある（例えば、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0012】
【非特許文献1】“ A simple method for determining protic end-groups of synthetic polymers by 1H NMR spectroscopy”, Almar Postma et. al., “Polymer” 47 (2006) pages 1899-1911
【特許文献】
【0013】
【特許文献1】特許第4412461号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
ところで、特許文献１では、ラベル化試薬として塩化メタンスルホニルを用いており、微量に残存した未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨをラベル化し、１Ｈ－ＮＭＲ分析で定量することが可能である。しかし、特許文献１の構成では、ラベル化後に精製操作が必要となり、工程内管理に必要な簡便さや迅速性が欠如する課題がある。
【0015】
また、非特許文献１記載のＮＭＲ法では、ＰＥＧ－ＯＨが主成分である場合には定量することが可能である。しかし、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる微量成分として存在する未反応のＰＥＧ－ＯＨを定量する場合には、ＰＥＧ鎖中のプロトンピークのマルチプレットが大きくなり、ノイズの増大やベースラインのゆがみなどに影響が生じ、ラベル化されたＰＥＧ－ＯＨ由来のピークのＳ／Ｎ比が小さくなり、測定誤差が大きくなり、定量性に課題がある。
【0016】
この点、ＮＭＲ法において目的ピークのＳ／Ｎ比を改善する手法としては、一般的に試料濃度を上げることやＮＭＲ測定時に積算回数を大きくするまたは事前飽和法などを目的のピーク以外の巨大ピークに適用する方法が知られている。
【0017】
しかし、高分子量ＰＥＧ誘導体の試料濃度を上げた場合には、サンプル溶液の粘度が増大し、目的のピークのスペクトル幅が大きくなり、測定誤差が大きくなることが知られている。また、事前飽和法は適用する巨大ピーク周辺のピーク強度に影響を与えることが知られており、定量性に影響を与えるケースがある。
【0018】
本発明は、上記課題を鑑みなされたものであり、高分子量ＰＥＧ－ＯＨのヒドロキシ基を誘導体化する工程において、誘導体化された高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を簡易かつ迅速で高感度に定量することで、生産時間を短縮し、高分子量ＰＥＧ－ＯＨを適切に管理可能とすることである。
【課題を解決するための手段】
【0019】
上述したように、特許文献１では、ラベル化試薬由来のプロトンピークがラベル化された高分子量ＰＥＧ－ＯＨ由来のプロトンピークと重複し、ピーク分離が不十分であることから、ラベル化後に精製操作が必要となり、工程内管理に必要な迅速性が欠如する課題があった。この点、非特許文献１の手法では、ラベル化試薬由来およびラベル化されたＰＥＧ－ＯＨ由来のプロトンピークのピーク分離が可能である。しかし、高分子量ＰＥＧ誘導体中に含まれる高分子量ＰＥＧ－ＯＨを定量する手法としては、定量性に課題があった。
【0020】
さらに、高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる微量の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの定量は、従来の１Ｈ－ＮＭＲ法では課題があり、未反応の微量な高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を１Ｈ－ＮＭＲ法で工程内管理できる高分子量ＰＥＧ誘導体の製造方法は提供されていない。
【0021】
本発明者らは鋭意検討を重ねた結果、ヒドロキシ基を誘導体化した高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる微量に残存した未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨを重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリング用いた１Ｈ－ＮＭＲ法で迅速かつ高感度に定量し、ヒドロキシ基を誘導体化する工程においてＰＥＧ－ＯＨ量を適切に管理可能な、迅速性と定量性を兼ね備えた分析法により、生産時間を短縮可能な高分子量ＰＥＧ誘導体の製造方法ならびに高分子量ＰＥＧ－ＯＨのラベル化試薬を見出した。
【0022】
すなわち本発明は以下の[１]～[６]に関する。
[１] ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の前記ヒドロキシ基を誘導体化することによって、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体を生成させるのに際して、
未反応の前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
［２］ 前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物が下式（１）で表されることを特徴とする、［１］の方法。
（式（１）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ、０～２，５００であり、かつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ１は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、かつｔが０の場合にはＸ１はヒドロキシ基であり、
Ｘ２はヒドロキシ基であり、
Ｚは２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
［３］ 前記ヒドロキシ基が誘導体化された前記高分子量ポリオキシエチレン誘導体が下式（２）で表されることを特徴とする、［１］または［２］の方法。
（式（２）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
［４］ 前記ラベル化試薬が、下式（３）で表されるイソシアネート試薬であることを特徴とする、［１］～［３］のいずれか一つの方法。
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
［５］ 式（３）で表されることを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の分析用ラベル化試薬。
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
［６］ 高分子量ポリオキシエチレン誘導体に含まれる、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を定量する方法であって、
ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の定量方法。
[１] ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の前記ヒドロキシ基を誘導体化することによって、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体を生成させるのに際して、
未反応の前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法。
［２］ 前記ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物が下式（１）で表されることを特徴とする、［１］の方法。
【化1】
（式（１）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ、０～２，５００であり、かつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ１は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、かつｔが０の場合にはＸ１はヒドロキシ基であり、
Ｘ２はヒドロキシ基であり、
Ｚは２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
［３］ 前記ヒドロキシ基が誘導体化された前記高分子量ポリオキシエチレン誘導体が下式（２）で表されることを特徴とする、［１］または［２］の方法。
【化2】
（式（２）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
［４］ 前記ラベル化試薬が、下式（３）で表されるイソシアネート試薬であることを特徴とする、［１］～［３］のいずれか一つの方法。
【化3】
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
［５］ 式（３）で表されることを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の分析用ラベル化試薬。
【化3】
（式（３）中、Ｒは電子求引性基を有する有機基を示す。）
［６］ 高分子量ポリオキシエチレン誘導体に含まれる、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を定量する方法であって、
ヒドロキシ基を有する前記高分子量ポリオキシエチレン化合物を重溶媒中でラベル化試薬を用いてラベル化し、ラベル化後の溶液を用いて事前飽和法と逆ゲート付きデカップリングを用いたプロトン核磁気共鳴分光法で定量することを特徴とする、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の定量方法。
【発明の効果】
【0023】
本発明によれば、ヒドロキシ基を有する高分子量ＰＥＧ化合物を誘導体化する工程において、微量に残存した未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量を１Ｈ－ＮＭＲ法で迅速かつ高感度に定量することで、生産過程において適切に管理でき、生産に係る時間を短縮し、高純度の高分子量の末端活性化ＰＥＧ誘導体の提供が可能となる。
【発明を実施するための形態】
【0024】
以下、本発明のヒドロキシ基が誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体の製造方法、ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の定量方法及びヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物の分析用ラベル化試薬について詳細に説明する。
ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物（本明細書では「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」と略称することがある）のヒドロキシ基を誘導体化する工程（高分子量ポリオキシエチレン誘導体を生成させるのに際して、）とは、高分子量ＰＥＧ－ＯＨを原料として、ワンポット合成による多段階の反応を含む反応工程および精製工程からなる目的の誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体（本明細書では「高分子量ＰＥＧ誘導体」と略称することがある）を得る一連の製造工程のことである。高分子量ＰＥＧ－ＯＨを原料としていれば、ワンポット合成における反応の段階数に制限は無いが、好ましくは２段階である。
ヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物（本明細書では「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」と略称することがある）のヒドロキシ基を誘導体化する工程（高分子量ポリオキシエチレン誘導体を生成させるのに際して、）とは、高分子量ＰＥＧ－ＯＨを原料として、ワンポット合成による多段階の反応を含む反応工程および精製工程からなる目的の誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体（本明細書では「高分子量ＰＥＧ誘導体」と略称することがある）を得る一連の製造工程のことである。高分子量ＰＥＧ－ＯＨを原料としていれば、ワンポット合成における反応の段階数に制限は無いが、好ましくは２段階である。
【0025】
高分子量ＰＥＧ－ＯＨのヒドロキシ基を誘導体化する反応としては、例えばエステル化、エーテル化、メシル化、シアノエチル化、シリル化などである。ワンポット合成の具体的な例としては、例えば以下のものがある。
・ ヒドロキシ基を塩化メタンスルホニルでメシル化した後、同反応系にナトリウムメトキシドを添加し、メトキシ基とする２段階の反応
・ ヒドロキシ基をフタルイミド基に置換した後、ヒドラジンなどで脱保護し、アミノ基とする２段階の反応
・ ヒドロキシ基に塩基性条件下で無水カルボン酸を作用させ、エステル化してカルボン酸体とした後に同反応系にＮ－ヒドロキシスクシンイミドを加えて活性基を導入する反応
・ ヒドロキシ基を塩化メタンスルホニルでメシル化した後、同反応系にナトリウムメトキシドを添加し、メトキシ基とする２段階の反応
・ ヒドロキシ基をフタルイミド基に置換した後、ヒドラジンなどで脱保護し、アミノ基とする２段階の反応
・ ヒドロキシ基に塩基性条件下で無水カルボン酸を作用させ、エステル化してカルボン酸体とした後に同反応系にＮ－ヒドロキシスクシンイミドを加えて活性基を導入する反応
【0026】
本発明において、高分子量ＰＥＧ誘導体中の未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨをラベル化するにあたり、使用する重溶媒としては、非プロトン性の重溶媒であれば制限は特になく、例えば、重ジメチルスルホキシド、重ジメチルホルムアミド、重ジクロロメタン、重アセトン、重クロロホルム、重アセトニトリル、重テトラヒドロフラン、重ベンゼンなどが挙げられ、好ましくは、重ジメチルスルホキシド、重ジメチルホルムアミド、重ジクロロメタン、重アセトン、重クロロホルム、重アセトニトリルを例示できる。より好ましくは重ジメチルスルホキシド、重ジクロロメタン、重クロロホルムであり、さらに好ましくは重クロロホルムである。
【0027】
本発明において、プロトン核磁気共鳴分光法（以下、１Ｈ－ＮＭＲ法と略称することがある）では、基準ピークを定める必要がある。基準ピークとしては、重溶媒に含まれる溶媒ピークや基準物質として添加するテトラメチルシランまたはヘキサメチルジシロキサンに由来するピークなどがあり、好ましくはテトラメチルシランもしくはヘキサメチルジシロキサンであり、より好ましくはテトラメチルシランである。
【0028】
本発明では、事前飽和法は、１Ｈ－ＮＭＲ法においてＰＥＧ鎖由来プロトンピークに適用され、そのケミカルシフトは重溶媒により異なるが、例えば、重クロロホルムを重溶媒として用いた場合は、３．５６ｐｐｍである。
【0029】
また、事前飽和法は、特定周波数のラジオ波を事前に照射することで極大ピークのシグナル強度を低減することができ、ラジオ波の出力により極大ピークのシグナル強度を制御することが可能である。ただし、ラジオ波の出力が大きすぎると極大ピーク周辺のピークのシグナル強度も小さくなり、小さすぎると目的ピークのＳ／Ｎ比は改善できないため、ラジオ波の出力を核磁気共鳴装置の減衰器により減衰量として制御する必要がある。減衰量として好ましくは４０～９０ｄＢ、より好ましくは５０～８０ｄＢ、さらに好ましくは６０～７０ｄＢである。
【0030】
本発明において、高分子量ＰＥＧ誘導体中の高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量は、所定のケミカルシフトに検出されるピーク積分値を基準（以下、「定量用基準ピーク」と略称することがある）として、ラベル化試薬であるイソシアネート試薬（詳細は後述する）により、高分子量ＰＥＧ－ＯＨがラベル化後の化合物のウレタン結合の酸素原子横のメチレン基に由来するピーク（以下、「目的物由来ピーク」と略称することがある）の積分値から算出することができる。
【0031】
さらに、高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量の定量において、定量用基準ピークを設定する必要があるが、この定量用基準ピークは、事前飽和法の影響が小さい範囲で、かつ目的物由来ピークのケミカルシフトと重複しないケミカルシフトにピークが検出されればよく、ＰＥＧ鎖由来プロトンのケミカルシフト値から０．５ｐｐｍ以上離れた周波数に検出されることが好ましく、０．９ｐｐｍ以上離れていることがより好ましい。定量用基準ピークの好ましい様態としては、例えば基準ピークであるテトラメチルシランに由来するピーク積分値や、高分子量ＰＥＧ誘導体に由来するピーク積分値などを定量用基準ピークとしてもよく、また、トリフェニルメタンなどの定量用基準物質を添加して、定量用基準物質に由来するピーク積分値を定量用基準ピークとしてもよい。好ましくは高分子量ＰＥＧ誘導体に由来するピークまたは定量用基準物質に由来するピークである。
【0032】
１Ｈ－ＮＭＲ法では、天然存在比の低い１３Ｃとカップリングしたピークが主信号の両サイドにサテライト信号として検出されることが知られている。例えば、隣接する炭素原子と結合した１Ｈの１．１％は、１．１％含まれる１３Ｃとのスピン結合により分裂し、主信号の両サイドに０．５５％の高さのサテライト信号として検出され、目的物ピークの積分値が小さくなり、定量性に影響が生じる。１Ｈ－ＮＭＲ法での定量は、サテライト信号による定量性への影響を排除するために、１３Ｃとのカップリングによる信号の分裂を発生させない逆ゲート付きデカップリング法を採用した。
【0033】
未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨを１Ｈ－ＮＭＲ法で定量する工程としては、ワンポット合成による多段階の反応を含む反応工程中もしくは精製工程中であり、好ましくは反応工程中である。
【0034】
１Ｈ－ＮＭＲ法による未反応の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの定量下限値は、小さければ小さいほど好ましく、本発明によれば、後述するが、０．２重量％まで定量することが可能である。
【0035】
好適な実施形態においては、高分子量ＰＥＧ－ＯＨが下式（１）で表される。
【化1】
【0036】
以下、式（１）中の基について詳細に説明する。
式（１）中のＯＡ１およびＯＡ２は下式（４）で表される２価のオキシエチレン基であり、＊がＺとの結合位置を示し、＊＊がＬ１またはＬ２との結合位置を示し、式（４）中のｎはオキシエチレン基の付加モル数であり、後述するａまたはｂである。
式（１）中のＯＡ１およびＯＡ２は下式（４）で表される２価のオキシエチレン基であり、＊がＺとの結合位置を示し、＊＊がＬ１またはＬ２との結合位置を示し、式（４）中のｎはオキシエチレン基の付加モル数であり、後述するａまたはｂである。
【化4】
【0037】
ａおよびｂは、独立してそれぞれ、０～２，５００であり、かつａ＋ｂは２００以上である。ａ、ｂはそれぞれ、好ましくは０～１，１００である。また、ａ＋ｂは２００以上であるが、２００～３，５００が好ましく、２００～２，５００が更に好ましい。
なお、「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」および「高分子量ＰＥＧ誘導体」の「高分子量」とは、各ポリオキシエチレン部分を構成するオキシエチレン基の合計付加モル数が２００以上であることを意味するものとする。すなわち、本発明の「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」および「高分子量ＰＥＧ誘導体」の分子量は、サイズ排除クロマトグラフィーや質量分析法などにより求められる数平均分子量であり、８８００以上、２２００００以下であることが好ましい。
なお、「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」および「高分子量ＰＥＧ誘導体」の「高分子量」とは、各ポリオキシエチレン部分を構成するオキシエチレン基の合計付加モル数が２００以上であることを意味するものとする。すなわち、本発明の「高分子量ＰＥＧ－ＯＨ」および「高分子量ＰＥＧ誘導体」の分子量は、サイズ排除クロマトグラフィーや質量分析法などにより求められる数平均分子量であり、８８００以上、２２００００以下であることが好ましい。
【0038】
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよい。これらは、好ましくは、エステル結合、アミド結合、エーテル結合、チオエーテル結合、ウレタン結合、ウレア結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、より好ましくは、エステル結合、アミド結合、エーテル結合、ウレタン結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基である。特に好ましい態様は、下記の群（Ｉ）に示される式（ｚ１）、（ｚ２）、（ｚ３）、（ｚ４）、（ｚ５）、（ｚ６）、（ｚ７）、（ｚ８）、（ｚ９）および（ｚ１０）からなる群より選ばれた一種以上の２価のスペーサーである。好ましくは、下記の群（Ｉ）に示される式（ｚ１）、（ｚ２）、（ｚ３）、（ｚ４）、（ｚ５）、（ｚ６）、（ｚ７）、（ｚ８）、（ｚ９）および（ｚ１０）からなる群より選ばれた２種以上、５種以下の２価のスペーサーを組み合わせてもよい。
【0039】
群（Ｉ）
【化5】
【0040】
群（Ｉ）に示される式（ｚ１）、（ｚ２）、（ｚ３）、（ｚ４）、（ｚ５）、（ｚ６）、（ｚ７）、（ｚ８）、（ｚ９）および（ｚ１０）において、「＊」はＯＡ１またはＯＡ２との結合位置を示し、「＊＊」はＸ１またはＸ２との結合位置を示す。
【0041】
式（ｚ１）において、ｒは１～１０の整数を示し、好ましくは１～６の整数を示し、更に好ましくは１～５の整数を示す。
【0042】
式（ｚ２）～式（ｚ１０）において、ｒは独立してそれぞれ、０～１０の整数を示し、好ましくは０～６の整数を示し、更に好ましくは０～５の整数を示す。また、式（ｚ２）～式（ｚ１０）中のそれぞれのｒは同一でも、異なっていてもよい。
【0043】
式（１）中のｐまたはｑは、Ｘ１またはＸ２と結合するＬ１またはＬ２の繰り返し単位を示し、独立してそれぞれ０または１であり、０の場合は単結合を示し、Ｘ１およびＸ２がヒドロキシ基の場合、ｐおよびｑは０が好ましい。
【0044】
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８である。
【0045】
Ｘ１は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、かつｔが０の場合にはＸ１はヒドロキシ基である。
Ｘ２はヒドロキシ基である。
式（１）中のＸ１、Ｘ２の定義におけるヒドロキシ基とは、（－ＯＨ）で表される１価の官能基である。
Ｘ２はヒドロキシ基である。
式（１）中のＸ１、Ｘ２の定義におけるヒドロキシ基とは、（－ＯＨ）で表される１価の官能基である。
【0046】
式（１）中のＸ１の定義におけるアルコキシ基とは、（－ＯＲ１）で表される１価の官能基である。Ｒ１は置換されていてもよい炭化水素基であり、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等のアルキル基、ベンジル基、トリチル基またはアリル基が好ましい。
Ｒ１の炭素数は１～３０が好ましく、１～２０が更に好ましい。
Ｒ１の炭素数は１～３０が好ましく、１～２０が更に好ましい。
【0047】
式（１）中のＸ１の定義におけるアジド基とは（－Ｎ３）で表される１価の官能基である。
式（１）中のＸ１の定義におけるオキシカルボニル基とは、（－ＣＯＯＲ２）で表される１価の官能基であり、Ｒ２は置換されていてもよい炭化水素基または下式（ｒ１）～（ｒ３）で表される基である。置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば炭素数１～６の直鎖状または分岐状の炭化水素基、ペンタフルオロフェニル基、ｐ－ニトリフェニル基などが挙げられ、Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等のアルキル基、ベンジル基、ペンタフルオロフェニル基、ｐ－ニトリフェニル基または式（ｒ１）が好ましい。
式（１）中のＸ１の定義におけるオキシカルボニル基とは、（－ＣＯＯＲ２）で表される１価の官能基であり、Ｒ２は置換されていてもよい炭化水素基または下式（ｒ１）～（ｒ３）で表される基である。置換されていてもよい炭化水素基としては、例えば炭素数１～６の直鎖状または分岐状の炭化水素基、ペンタフルオロフェニル基、ｐ－ニトリフェニル基などが挙げられ、Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等のアルキル基、ベンジル基、ペンタフルオロフェニル基、ｐ－ニトリフェニル基または式（ｒ１）が好ましい。
【0048】
【化6】
【0049】
式（１）中のＸ１の定義におけるオキシカルボニルオキシ基とは、（－ＯＣＯＯＲ３）で表される１価の官能基であり、Ｒ３は炭化水素基または下式（ｒ１）（ｒ４）で表される基である。Ｒ３の炭素数は１～１０が好ましく、１～６が更に好ましい。Ｒ３はメチル基、エチル基、プロピル基等のアルキル基、式（ｒ１）または式（ｒ４）で表される基が好ましく、式（ｒ１）または式（ｒ４）で表される基がより好ましく、さらに好ましくは式（ｒ１）である。
【0050】
【化7】
【0051】
式（１）中のＸ１の定義におけるオキシカルバモイル基とは、（－ＮＨＣＯＯＲ４）で表される１価の官能基であり、Ｒ４は置換されていてもよい炭化水素基である。Ｒ４の炭素数は１～２０が好ましく、１～１４が更に好ましい。Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等のアルキル基、ベンジル基、アリル基、２，２，２－トリクロロエチル基、２－（トリメチルシリル）エチル基または９－フルオレニルメチル基が好ましく、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ベンジル基、アリル基、２，２，２－トリクロロエチル基、２－（トリメチルシリル）エチル基または９－フルオレニルメチル基がより好ましい。
【0052】
式（１）中のＸ１の定義におけるシアノ基とは、（－ＣＮ）で表される１価の官能基である。
【0053】
式（１）中のＸ１の定義におけるシリル基とは、（－Ｓｉ（Ｒ５Ｒ６Ｒ７））で表される１価の官能基である。Ｒ５～Ｒ７は炭化水素基であり、同一であっても異なっていてもよく、Ｒ５～Ｒ７の炭素数は１～1０が好ましく、１～７が更に好ましい。例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ドデシル基、オクチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等のアルキル基、フェニル基またはベンジル基であり、シリル基の好ましい様態としては下式（ｒ５）～（ｒ９）で表される基である。
【0054】
【化8】
【0055】
式（１）中のＸ１の定義におけるアシルオキシ基とは、（－ＯＣＯＲ８）で表される１価の官能基であり、Ｒ８は置換されていてもよい炭化水素基である。Ｒ８の炭素数は１～１０が好ましく、１～6が更に好ましい。好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等のアルキル基、フェニル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基である。
【0056】
式（１）中のＸ１の定義におけるスルホニル基とは、（－Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ９）で表される１価の官能基であり、Ｒ９はメチル基、ビニル基、トリフルオロメチル基、フェニル基、ｐ－メチルフェニル基、ｏ－ニトロフェニル基、ｐ－ニトロフェニル基、２，４，６－トリメチルフェニル基、２，４，６－トリイソプロピルフェニル基、ペンタフルオロフェニル基またはクロロメチル基であり、好ましくはメチル基、ビニル基、トリフルオロメチル基またはｐ－メチルフェニル基であり、より好ましくはメチル基またはビニル基である。
【0057】
式（１）中のＸ１の定義におけるイミド基とは、下式（ｒ１０）、（ｒ１１）、（ｒ１２）で表される基であり、好ましくは式（ｒ１０）である。
【0058】
【化9】
【0059】
式（ｒ１１）中のＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立してそれぞれ水素原子または炭素数１～５の炭化水素基である。Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３が水素原子、または、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３が水素原子かつＲ１０がメチル基、または、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２が水素原子かつＲ１３がメチル基、または、Ｒ１１、Ｒ１２が水素原子かつＲ１０、Ｒ１３がメチル基であることが好ましい。
【0060】
式（ｒ１１）中のＹ１はエーテル基、メチレン基、ジメチルビニリデン基のいずれかの基であり、これらの中でもエーテル基（すなわち酸素原子）が好ましい。
【0061】
式（ｒ１２）中のＹ２は水素原子または炭素数１～５の炭化水素基であり、好ましくは水素原子または炭素数１～５の炭化水素基である。炭素数１～５の炭化水素基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等が挙げられ、好ましくは水素原子、メチル基またはエチル基であり、より好ましくは水素原子である。
【0062】
式（１）中のＺの定義における２～８個の水酸基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物は、Ｚ（ＯＨ）ｓ＋ｔと表記される。残基Ｚは、化合物Ｚ（ＯＨ）ｓ＋ｔからすべての（ｓ＋ｔ個の）ヒドロキシ基を除いた残基である。
残基Ｚは、窒素原子および／または酸素原子を有していてよい炭化水素基であることが好ましく、窒素原子および／または酸素原子を有していてよい飽和炭化水素基であることが更に好ましい。また、この炭化水素基の炭素数は２～１８であることが好ましく、２～１６であることが更に好ましい。具体的には、以下の態様を例示できる。
・炭素原子および水素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。
・炭素原子、水素原子および酸素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各酸素原子を介して二つの飽和炭化水素基同士がエーテル結合している。
・炭素原子、水素原子および窒素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各窒素原子を介して三つの飽和炭化水素基同士がＮ－Ｃ結合している。
・炭素原子、水素原子、酸素原子および窒素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各酸素原子を介して二つの飽和炭化水素基同士がエーテル結合しており、各窒素原子を介して三つの飽和炭化水素基同士がＮ－Ｃ結合している。
好適な実施形態においては、残基Ｚは、例えば群（ＩＩ）に記載される式（ｚ１１）～式（ｚ２０）の残基が挙げられる。
群（ＩＩ）
残基Ｚは、窒素原子および／または酸素原子を有していてよい炭化水素基であることが好ましく、窒素原子および／または酸素原子を有していてよい飽和炭化水素基であることが更に好ましい。また、この炭化水素基の炭素数は２～１８であることが好ましく、２～１６であることが更に好ましい。具体的には、以下の態様を例示できる。
・炭素原子および水素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。
・炭素原子、水素原子および酸素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各酸素原子を介して二つの飽和炭化水素基同士がエーテル結合している。
・炭素原子、水素原子および窒素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各窒素原子を介して三つの飽和炭化水素基同士がＮ－Ｃ結合している。
・炭素原子、水素原子、酸素原子および窒素原子からなる炭素原子数２～２１の飽和炭化水素基。各酸素原子を介して二つの飽和炭化水素基同士がエーテル結合しており、各窒素原子を介して三つの飽和炭化水素基同士がＮ－Ｃ結合している。
好適な実施形態においては、残基Ｚは、例えば群（ＩＩ）に記載される式（ｚ１１）～式（ｚ２０）の残基が挙げられる。
群（ＩＩ）
【0063】
【化10】
【0064】
本発明の好ましい様態は式（ｚ１１）、式（ｚ１３）、式（ｚ１６）、式（ｚ１７）または式（ｚ２０）であり、より好ましい様態は式（ｚ１１）、式（ｚ１３）または式（ｚ１７）である。
【0065】
式（１）の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの好適な様態のひとつである以下の式（４）において、式（１）中のＺは式（ｚ１１）である。
（式（４）中、ａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｘ１およびＸ２は前述と同義である。）
【化11】
【0066】
式（１）の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの好適な様態のひとつである以下の式（５）において、式（１）中のＺは式（ｚ１３）である。
（式（５）中、ａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｘ１およびＸ２は前述と同義である。）
【化12】
【0067】
式（１）の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの好適な様態のひとつである以下の式（６）において、式（１）中のＺは式（ｚ１６）である。
（式（６）中、ａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｘ１およびＸ２は前述と同義である。）
【化13】
【0068】
式（１）の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの好適な様態のひとつである以下の式（７）において、式（１）中のＺは式（ｚ１７）である。
（式（７）中、ａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｘ１およびＸ２は前述と同義である。）
【化14】
【0069】
式（１）の高分子量ＰＥＧ－ＯＨの好適な様態のひとつである以下の式（８）において、式（１）中のＺは式（ｚ２０）である。
（式（８）中、ａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｘ１およびＸ２は前述と同義である。）
【化15】
【0070】
本発明に係る誘導体化された高分子量ポリオキシエチレン誘導体は下式（２）で表される。
【化2】
【0071】
（式（２）中、
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
ＯＡ１およびＯＡ２はオキシエチレン基であり、
ａおよびｂは、独立してそれぞれ０～２，５００であってかつａ＋ｂは２００以上であり、
Ｌ１およびＬ２は、独立してそれぞれ、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合およびチオエーテル結合から選択される結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、前記アルキレン基は一分子中で互いに同一又は異なっていてもよく、
ｐおよびｑは、独立してそれぞれ、０または１であり、
ｓおよびｔは、独立してそれぞれ０～８であり、かつ２≦ｓ＋ｔ≦８であり、
Ｘ３およびＸ４は、独立してそれぞれ、アルコキシ基、アジド基、オキシカルボニル基、オキシカルボニルオキシ基、オキシカルバモイル基、シアノ基、シリル基、アシルオキシ基、スルホニル基またはイミド基であり、
Ｚは、２～８個のヒドロキシ基を有しかつ２～２１個の炭素原子を有する化合物からすべての前記ヒドロキシ基を除いた残基である。）
【0072】
式（２）で表される本発明の高分子量ポリオキシエチレン誘導体中の説明（詳しくはａ、ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｐ、ｑ、ｓ、ｔ、Ｚ）は上述の通りであり、Ｘ３およびＸ４は、式（１）で表される本発明のヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物中のＸ１と同義である。
【0073】
本発明で使用するラベル化試薬が下式（３）で表される。
【化3】
【0074】
式（３）中のＲは電子求引性基を有する有機基であり、電気求引性基とは水素原子と比較して、結合している原子側から電子を引き付けやすい置換基のことであり、例えば群（ＩＩＩ）に記載される式（ｒ１３）～式（ｒ４９）の有機基が挙げられる。
群（ＩＩＩ）
群（ＩＩＩ）
【化16】
【0075】
特に好ましい様態は式（ｒ１３）、（ｒ１４）、（ｒ１７）、（ｒ１９）、（ｒ２４）、（ｒ２７）、（ｒ３１）、（ｒ３３）、（ｒ３４）、（ｒ３５）、（ｒ３８）、（ｒ４０）、（ｒ４２）、（ｒ４３）、（ｒ４４）、（ｒ４５）、（ｒ４６）、（ｒ４７）、（ｒ４８）または（ｒ４９）であり、より好ましい形態は式（ｒ１３）、（ｒ２３）、（ｒ４４）、（ｒ４５）、（ｒ４６）、（ｒ４７）、（ｒ４８）または（ｒ４９）であり、さらに好ましい形態は式（ｒ１３）である。また、「＊＊＊」は－（Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）の窒素原子との結合位置を示す。
【0076】
本発明において、式（３）で表されるラベル化試薬は、未反応のヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を十分にラベル化できるよう過剰量を用いれば特に使用量に制限は無いが、重溶媒中に含まれる高分子量ポリオキシエチレン化合物に対して、１～１００当量用いることが好ましく、より好ましくは１０～１００当量、さらに好ましくは３０～１００当量である。
【0077】
本発明において高分子量ポリオキシエチレン化合物の分析用ラベル化試薬は式（３）で表され、式（３）の説明は上述の通りであり、１Ｈ－ＮＭＲ分析に限らず、高速液体クロマトグラフィー分析等の他の分析に用いてもよい。
【実施例0078】
本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。高分子量ＰＥＧ誘導体に含まれる高分子量ＰＥＧ－ＯＨ量の定量精度を示し、なお、本発明は以下の実施例に限られるものではない。
１Ｈ－ＮＭＲは、日本電子株式会社製の核磁気共鳴装置（ＪＮＭ－ＥＣＺ４００またはＪＮＭ－ＥＣＡ６００）から得た。測定にはφ５ｍｍチュ－ブを用い、重水素化溶媒には、内部標準物質としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を含有するＣＤＣｌ３を用いた。
１Ｈ－ＮＭＲは、日本電子株式会社製の核磁気共鳴装置（ＪＮＭ－ＥＣＺ４００またはＪＮＭ－ＥＣＡ６００）から得た。測定にはφ５ｍｍチュ－ブを用い、重水素化溶媒には、内部標準物質としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を含有するＣＤＣｌ３を用いた。
【0079】
[実施例１：ＰＥＧカルボン酸に含まれるＰＥＧ－ＯＨの定量性評価]
【化17】
【0080】
式（１０）で表されるＰＥＧ－ＯＨ（分子量 ２０，０００）からＰＥＧ－Ｏ－（ＣＨ２）５－ＣＯＯＨ（分子量 ２０，０００）を得るエーテル化反応において、未反応のＰＥＧ－ＯＨ（分子量 ２０，０００）の定量性を以下記載の要領で添加回収試験により確認した。
【0081】
すなわち、式（１０）のＰＥＧ－Ｏ－（ＣＨ２）５－ＣＯＯＨと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＭＥ－２００ＨＣ」(数平均分子量：２０，１８５) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、式（１０）のＰＥＧ－ＯＨと同様の構造である日油社製「ＭＥＨ－２０Ｔ」(数平均分子量：１９，６８９)を、日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＭＥ－２００ＨＣ」に対して０．１～１．０重量％となるよう添加し、実験１～実験４の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムに溶解したトリフェニルメタン（１０μｇ／μＬ）を８０μＬ、重クロロホルムを６２０μＬそれぞれ加え、溶解させた。その後、それぞれのサンプルにトリクロロアセチルイソシアネート（ＴＣＩ品）２０μＬを加え、転倒混和した。転倒混和後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて事前飽和法をＰＥＧ鎖由来プロトンピーク（３．５６ｐｐｍ）に適用し、逆ゲート付きデカップリングを用いた次の条件で測定した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
【0082】
定量用基準ピークの積分値を０．６５４８とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／２）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／２）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0083】
【表1】
【0084】
表１に記載の通り、式（１０）のＰＥＧ－Ｏ－（ＣＨ２）５－ＣＯＯＨに含まれるＰＥＧ－ＯＨは、ＰＥＧ－Ｏ－（ＣＨ２）５－ＣＯＯＨに対して少なくとも０．４重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．４重量％まで定量できることを確認した。
【0085】
[実施例２：（ＰＥＧ）２－フタルイミドに含まれる（ＰＥＧ）２－ＯＨの定量性評価]
【化18】
【0086】
式（１１）で表される（ＰＥＧ）２－ＯＨ（分子量 １０，０００）から（ＰＥＧ）２－ＮＨ２（分子量 １０，０００）を得る２段階反応のワンポット合成中、１段階目の（ＰＥＧ）２－ＯＨから（ＰＥＧ）２－ＰＩを得るフタルイミド化反応において、未反応の（ＰＥＧ）２－ＯＨ（分子量 １０，０００）の定量性を、以下記載の要領で添加回収試験により確認した。
【0087】
式（１１）の（ＰＥＧ）２－ＰＩと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ２ＡＣ－ＧＬ２－１００ＥＩ」(数平均分子量：１０，０８２) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、式（１１）の（ＰＥＧ）２－ＯＨと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ２ＡＣ－ＧＬ２－１００ＨＯ」(数平均分子量：９，９７５)を「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ２ＡＣ－ＧＬ２－１００ＥＩ」に対して０．２５～０．５０重量％となるよう添加し、実験５、６の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムに溶解したトリフェニルメタン（１０μｇ／μＬ）を８０μＬ、重クロロホルムを６２０μＬそれぞれ加え、溶解させた。その後、それぞれのサンプルにトリクロロアセチルイソシアネート（ＴＣＩ品）２０μＬを加え、転倒混和した。転倒混和後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて事前飽和法をＰＥＧ鎖由来プロトンピーク（３．５６ｐｐｍ）に適用し、逆ゲート付きデカップリングを用いた次の条件で測定した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－ＣＨ（（－ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＯＣＨ３）－ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３、４．３４ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：５０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：２５６
定量用基準ピークの積分値を０．３２７４とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／１）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－ＣＨ（（－ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＯＣＨ３）－ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３、４．３４ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：５０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：２５６
定量用基準ピークの積分値を０．３２７４とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／１）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0088】
【表2】
【0089】
表２に記載の通り、（ＰＥＧ）２－ＰＩに含まれる（ＰＥＧ）２－ＯＨは、（ＰＥＧ）２－ＰＩに対して０．２５重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．２５重量％まで定量できることを確認した。
【0090】
[実施例３：ＰＥＧ－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に含まれるＰＥＧ－ＯＨの定量性評価]
【化19】
【0091】
式（１２）で表される（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階反応であるワンポット合成中、２段階目の（Ｍｓ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得るメトキシ化反応において、未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５の定量性を、以下記載の要領で添加回収試験により確認した。
【0092】
式（１２）の（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５と同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２－２００ＢＺ」(数平均分子量：１９，４５１) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、式（１２）の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５と同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２－２００ＢＨ」(数平均分子量：１９，８５９)を、「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２－２００ＢＺ」に対して０．１～１．０重量％となるよう添加し、実験７～１０の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムを７００μＬそれぞれ加えて溶解させた。その後、それぞれのサンプルにトリクロロアセチルイソシアネート（ＴＣＩ品）２０μＬを加え、転倒混和した。転倒混和後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて事前飽和法をＰＥＧ鎖由来プロトンピーク（３．５６ｐｐｍ）に適用し、逆ゲート付きデカップリングを用いた次の条件で測定した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ ２ －Ｃ６Ｈ５、４．５４ｐｐｍ
目的物ピーク：－（（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３）２、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を２．０００とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／４）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ ２ －Ｃ６Ｈ５、４．５４ｐｐｍ
目的物ピーク：－（（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３）２、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を２．０００とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／４）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0093】
【表3】
【0094】
表３に記載の通り、式（１２）の（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に含まれる（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５は、（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に対して０．２重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．２重量％まで定量できることを確認した。
【0095】
[実施例４：４ａｒｍ ＰＥＧ－ＣＮに含まれる４ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨの定量性評価
【化20】
【0096】
式（１３）で表される４ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨから４ａｒｍ ＰＥＧ－ＣＮを得るシアノエチル化反応において、未反応の４ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨの定量性を以下記載の要領で添加回収試験により確認した。
【0097】
式（１３）の４ａｒｍ ＰＥＧ－ＣＮと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＰＴＥ－２００ＣＮ」(数平均分子量：２０，０８６) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、式（１３）の「４ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨ」と同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＰＴＥ－２００００」(数平均分子量：２０，５６８)を、「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＰＴＥ－２００ＣＮ」に対して０．１～１．０重量％となるよう添加し、実験１１～１４の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムに溶解したトリフェニルメタン（１０μｇ／μＬ）を８０μＬ、重クロロホルムを６２０μＬそれぞれ加えて溶解した。その後、それぞれのサンプルにトリクロロアセチルイソシアネート（ＴＣＩ品）２０μＬを加え、転倒混和した。転倒混和後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて事前飽和法をＰＥＧ鎖由来プロトンピーク（３．５６ｐｐｍ）に適用し、逆ゲート付きデカップリングを用いた次の条件で測定した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－[（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３]４、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を０．６５４８とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／８）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、５．５５ｐｐｍ）
目的物ピーク：－[（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３]４、４．４２ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を０．６５４８とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／８）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0098】
【表4】
【0099】
表４に記載の通り、４ａｒｍ ＰＥＧ－ＣＮに含まれる４ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨは、４ａｒｍ ＰＥＧ－ＣＮに対して、０．４重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．４重量％まで定量できることを確認した。
【0100】
[実施例５：８ａｒｍ ＰＥＧ－ＶＳに含まれる８ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨの定量性評価]
【化21】
【0101】
式（１４）で表される８ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨから８ａｒｍ ＰＥＧ－ＶＳを得るビニルスルホン化反応において、未反応の８ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨの定量性を以下記載の要領で添加回収試験により確認した。
【0102】
式（１４）の８ａｒｍ ＰＥＧ－ＶＳと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＨＧＥＯ－４００ＶＳ」(数平均分子量：４０，７３１) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、式（１４）の８ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨと同様の構造である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＨＧＥＯ－４００００」(数平均分子量：４３，５７３)を、「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＨＧＥＯ－４００ＶＳ」に対して０．１～１．０重量％となるよう添加し、実験１５～１８の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムに溶解したトリフェニルメタン（１０μｇ／μＬ）を８０μＬ、重クロロホルムを６２０μＬそれぞれ加え、溶解させた。その後、それぞれのサンプルにトリクロロアセチルイソシアネート（ＴＣＩ品）２０μＬを加え、転倒混和した。転倒混和後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて事前飽和法をＰＥＧ鎖由来プロトンピーク（３．５６ｐｐｍ）に適用し、逆ゲート付きデカップリングを用いた次の条件で測定した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、ｐｐｍ）
目的物ピーク：－[（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３]８、ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を１．３０９６とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／１６）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：トリフェニルメタン（（Ｃ６Ｈ５）３－ＣＨ、ｐｐｍ）
目的物ピーク：－[（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－ＯＣＨ２ ＣＨ ２ －ＯＣＯＮＨ－ＣＯＣＣｌ３]８、ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ＿ｉｒｒｄｅｃ
減衰器：６０ｄＢ
測定温度：２５℃
積算回数：１０２４
定量用基準ピークの積分値を１．３０９６とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／１６）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0103】
【表5】
【0104】
表５に記載の通り、式（１４）の８ａｒｍ ＰＥＧ－ＶＳに含まれる８ａｒｍ ＰＥＧ－ＯＨは、８ａｒｍ ＰＥＧ－ＶＳに対して０．２重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．２重量％まで定量できることを確認した。
【0105】
[比較例１：（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に含まれる（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５の定量性評価]
実施例３で示した（Ｍｓ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階目のメトキシ化工程において、未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を、特許文献１に記載の方法によって、以下記載の要領で添加回収試験により定量性を確認した。特許文献１記載の方法は、すなわち塩化メタンスルホニルをラベル化試薬とした方法である。
実施例３で示した（Ｍｓ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階目のメトキシ化工程において、未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を、特許文献１に記載の方法によって、以下記載の要領で添加回収試験により定量性を確認した。特許文献１記載の方法は、すなわち塩化メタンスルホニルをラベル化試薬とした方法である。
【0106】
（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５相当品である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２－２００ＢＺ」(数平均分子量：１９，４５１) １００ｍｇを仕込んだスクリュー管に、（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を塩化メタンスルホニルでラベル化した（Ｍｓ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５相当品である日油社製「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ２ＭＳ－ＧＬ２－２００ＢＺ」(数平均分子量：１９，６０７)を「ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２－２００ＢＺ」に対して０．１～２．０重量％となるよう添加し、実験１９～２２の各サンプルを得た。各サンプルに対して、重クロロホルムを７００μＬそれぞれ加えて溶解させた後、それぞれのサンプルを核磁気共鳴装置にて次の条件で測定した。
事前飽和法や逆ゲート付きデカップリングは適用していない。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ ２ －Ｃ６Ｈ５、４．５４ｐｐｍ
目的物ピーク：－（（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－Ｏ－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ ３ ）２、３．００ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ
測定温度：２５℃
積算回数：１２８
定量用基準ピークの積分値を２．０００とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／６）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
事前飽和法や逆ゲート付きデカップリングは適用していない。
基準ピーク：ＴＭＳ
定量用基準ピーク：－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ ２ －Ｃ６Ｈ５、４．５４ｐｐｍ
目的物ピーク：－（（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－Ｏ－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ ３ ）２、３．００ｐｐｍ
Ｐｕｌｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ｓｉｎｇｌｅ＿ｐｕｌｓｅ
測定温度：２５℃
積算回数：１２８
定量用基準ピークの積分値を２．０００とした時、下式に従い各サンプルの添加回収率を算出した。
添加回収率（％）＝（目的物ピーク積分値／６）×１００
添加回収率の許容範囲は±３０％として添加回収可能な範囲を確認した。
【0107】
【表6】
【0108】
表６に記載の通り、（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に含まれる（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５は、（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に対して０．２重量％まで定量できることを確認できた。すなわち、（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５に含まれる未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５は、０．２重量％以上の範囲で添加回収可能、すなわち０．２重量％まで定量できた。これは、実施例３で示した定量性と同等であり、本発明に係る分析法が既報と同等の定量精度であることが示された。
【0109】
[実施例６：本発明における製造時間の評価]
特許文献１に記載の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階反応であるワンポット合成において、反応工程の完了確認のために本発明に係る分析法を用いた場合に要する製造時間について、下記要領にて評価した。
特許文献１に記載の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階反応であるワンポット合成において、反応工程の完了確認のために本発明に係る分析法を用いた場合に要する製造時間について、下記要領にて評価した。
【0110】
すなわち、特許文献１の実施例１６－４に従い、（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５（２００ｇ）を原料として、９時間かけて２回目のアルキルエーテル化まで実施した後、本発明に係る分析法、すなわち、下記要領で反応工程の完了を確認した。
【0111】
反応溶液を５ｍＬサンプリングして、析出物を吸引ろ過にてろ別除去した。得られたろ液に酢酸エチル１００ｍＬを加え、５分間窒素雰囲気下で撹拌した。その後、ヘキサン１００ｍＬを加え、１０分間撹拌して結晶を析出させた後、吸引ろ過にて結晶を回収した。
【0112】
回収した結晶を１時間減圧乾燥して得られた乾固物のうち１００ｍｇを重クロロホルム０．７ｍＬに溶解した。ここにトリクロロアセチルイソシアネート２０μＬを添加し、転倒混和した。後、実施例３と同じ測定条件の１Ｈ－ＮＭＲ分析にて未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量を確認し、反応が完了していることを確認した。
【0113】
反応溶液のサンプリングから３時間かけた分析にて、未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量が０．２％以下であることを確認した後、特許文献１の実施例１６－４に従い、６時間かけて水洗、脱水および晶析を行った後、８時間減圧乾燥して、総製造時間２６時間で（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得た。
【0114】
[比較例２：従来法における製造時間の評価]
特許文献１に記載の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階反応であるワンポット合成において、反応工程の完了確認のために塩化メタンスルホニルをラベル化試薬として使用して未反応の場合に、（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量を確認する製造時間について下記要領にて評価した。
特許文献１に記載の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５から（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得る２段階反応であるワンポット合成において、反応工程の完了確認のために塩化メタンスルホニルをラベル化試薬として使用して未反応の場合に、（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量を確認する製造時間について下記要領にて評価した。
【0115】
特許文献１の実施例１６－４に従い、（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５（２００ｇ）を原料として、９時間かけて２回目のアルキルエーテル化まで実施した後、特許文献１の実施例２７に記載の方法、すなわち下記要領で反応工程の完了を確認した。
【0116】
反応溶液を２０ｍＬサンプリングして、析出した塩化物を吸引ろ過にてろ別除去した。得られたろ液に酢酸エチル３００ｍＬを加え、５分間窒素雰囲気下で撹拌した。その後、ヘキサン３００ｍＬを加え、３０分間撹拌して結晶を析出させた後、吸引ろ過にて結晶を回収した。
【0117】
回収した結晶を５時間減圧乾燥して得られた乾固物のうち３．０ｇを丸底フラスコに仕込んだ後、トルエン１００ｇを加えて１時間加熱還流してトルエン５０ｇと水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン０．０９５ｇを加えて４０℃に加温、塩化メタンスルホニル０．０５４ｇを添加し、４０℃で３時間反応させた。反応終了後、析出した塩化物を吸引ろ過にてろ別除去した。得られたろ液に酢酸エチル１００ｍＬを加え、５分間窒素雰囲気下で撹拌した。その後、ヘキサン１００ｍＬを加え、１０分間撹拌して結晶を析出させた後、吸引ろ過にて結晶を回収した。
【0118】
回収した結晶を６時間減圧乾燥して得られた結晶のうち２０ｍｇを重クロロホルム０．７ｍＬに溶解し、比較例１と同じ測定条件の１Ｈ－ＮＭＲ分析にて未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量を確認し、反応が完了していることを確認した。
【0119】
反応溶液のサンプリングから１７時間かけた分析にて、未反応の（ＨＯ－ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５量が０．２％以下であることを確認した後、特許文献１の実施例１６－４に従い、６時間かけて水洗、脱水および晶析を行った後、８時間減圧乾燥して、総製造時間４０時間で（ＰＥＧ）２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ５を得た。
すなわち、実施例６と比較して１４時間長い製造時間を要した。
すなわち、実施例６と比較して１４時間長い製造時間を要した。
【0120】
以上のことから本発明は、従来法と比較して十分に生産時間を短縮できることが示された。
【産業上の利用可能性】
【0121】
本発明によればヒドロキシ基を有する高分子量ポリオキシエチレン化合物を原料としてヒドロキシ基を誘導体化して高分子量ポリオキシエチレン誘導体を得る生産において、工程分析にかかる時間を短縮し、総製造時間を短縮することができる。