特開 2023-134735 強化されたキメラ抗原受容体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023134735

(43)【公開日】2023-09-27

(54)【発明の名称】強化されたキメラ抗原受容体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230920BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20230920BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230920BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20230920BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230920BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20230920BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20230920BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230920BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20230920BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230920BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230920BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230920BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230920BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230920BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20230920BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20230920BHJP

   A61K 35/51 20150101ALI20230920BHJP

   A61K 35/14 20150101ALI20230920BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230920BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230920BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/86 Z

C07K19/00

C07K16/30

C07K14/47

C12N5/10

C12N5/0783

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/06

A61P29/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K49/00

A61K47/68

A61K35/17

A61K35/28

A61K35/545

A61K35/51

A61K35/14

A61K48/00

A61K39/395 C

A61K39/395 L

A61P37/04

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023117421

(22)【出願日】2023-07-19

(62)【分割の表示】P 2020503988の分割

【原出願日】2018-07-25

(31)【優先権主張番号】62/536,934

(32)【優先日】2017-07-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】500039463

【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム

【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ

【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】ソニー オーン アン

(72)【発明者】

【氏名】エンリ リウ

(72)【発明者】

【氏名】エリザベス シュポール

(72)【発明者】

【氏名】ケイティ レズヴァニ

(57)【要約】      （修正有）

【課題】免疫細胞療法で使用するための改善されたＣＡＲを提供する。
【解決手段】ＣＡＲのヒンジ領域における切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）および／またはヒト化ｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供される。前記ＣＡＲを発現する免疫細胞ならびに免疫障害の処置におけるそれらの使用方法がさらに提供される。本発明は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）を前記ＣＡＲの前記ヒンジに含み、前記Ｅｖ３ヒンジは細胞外ドメインと少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを連結するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

明細書に記載の発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、２０１７年７月２５日付で出願された米国特許仮出願第６２／５３６，９３４号に基づく優先権の利益を主張し、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表の援用
２８９ＫＢ（マイクロソフトウィンドウズ（登録商標）で計測）であり、２０１８年７月２３日に生成された、「ＵＴＦＣＰ１３３１ＷＯ．ｔｘｔ」という名称のファイルに含まれる配列表は、電子申請によって本願とともに出願され、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

背景
１．分野
本発明は、一般に免疫学および分子生物学の分野に関する。より詳細には、本発明は免疫細胞に対するものなどの強化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。

【0004】

２．関連技術の説明
癌と診断された患者が利用できる診断および処置の選択肢の技術的進歩にもかかわらず、予後は依然として不良である場合が多く、多くの患者は治癒することができない。免疫療法は、様々な腫瘍と診断された患者に、強力でありながら標的を絞った処置を提供することが期待され、正常な組織に損傷を与えることなく悪性腫瘍細胞を根絶する可能性がある。理論的には、免疫系のＴ細胞は、腫瘍細胞に特異的なタンパク質パターンを認識し、多様なエフェクター機構によってそれらの破壊を媒介することができる。養子Ｔ細胞療法またはＮＫ細胞療法などのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞の投与は、患者自身の免疫細胞の腫瘍根絶能力を利用して増幅し、その後、正常な組織に損傷を与えることなく残存腫瘍を効果的に除去するような状態で、これらのエフェクターを患者に戻す試みである。一般に、ＣＡＲは、ヒンジおよび膜貫通領域を介してＴ細胞シグナル伝達分子の細胞質ドメインに結合した腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的な抗体の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。しかし、免疫細胞療法の臨床使用での多くの欠点により、癌の処置におけるこのアプローチの十分な活用が損なわれる。従って、免疫細胞療法で使用するための改善されたＣＡＲにはまだ満たされていないニーズがある。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

要旨
特定の実施形態では、本開示は、強化されたキメラ抗原受容体、ならびに癌および自己免疫障害を含む疾患および障害の処置のためのそれらの使用方法を提供する。一実施形態では、エンドドメインまたは機能性ＥＧＦ結合ドメインを含まない、Ｅｖ３（またはｔＥｖ３）と呼ばれる、切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩが提供される。特定の態様では、Ｅｖ３は、ＥＧＦＲの切断型ドメイン１（Ｌ１）、切断型ドメイン２（ＣＲ１）、ドメイン３（Ｌ２）、およびドメイン４（ＣＲ２）（図２Ｂに示す通り）を含む。一部の態様では、Ｅｖ３はＣＡＲのヒンジ領域に位置してよく、ＣＡＲ検出および／またはＣＡＲ発現細胞の除去に使用することができる。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト化ｓｃＦｖとＥｖ３ヒンジの両方を含む。もう一つの実施形態では、ＣＡＲのヒト化抗原結合ドメイン、例えばヒト化単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）などが提供される。さらなる実施形態は、これらの実施形態の１または複数のＣＡＲを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞を被験体に投与することにより、免疫関連障害を処置する方法を提供する。

【0006】

もう一つの実施形態では、前記ＣＡＲのヒンジにＥｖ３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供され、前記Ｅｖ３ヒンジは細胞外ドメインと少なくとも１つの細胞内免疫シグナル伝達ドメインを連結する。一部の態様では、Ｅｖ３ヒンジは、ＥＧＦＲｖＩＩＩの膜貫通ドメインおよび非機能性エクトドメインを含む。特定の態様では、Ｅｖ３ヒンジはＥＧＦＲｖＩＩＩエンドドメインを含まない。一部の態様では、ＥＧＦＲｖＩＩＩの非機能性エクトドメインは、上皮成長因子（ＥＧＦ）との結合能が本質的にない。

【0007】

一部の態様では、Ｅｖ３ヒンジは、配列番号２と少なくとも８０％、例えば少なくとも８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の配列同一性をもつアミノ酸配列を含む。一部の態様では、Ｅｖ３ヒンジは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。

【0008】

Ｅｖ３は、配列番号２、

【化1】

（部分ドメイン１－部分ドメイン２－ドメイン３－ドメイン４を含む）を含むか、あるいは、配列番号２に対して少なくとも８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有することがある。特定の態様では、Ｅｖ３には１、２、３、またはそれを超える変更があることがある。

【0009】

一部の態様では、Ｅｖ３ヒンジは、配列番号１に対して少なくとも８０％、例えば少なくとも８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％などの配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。特定の態様では、Ｅｖ３ヒンジは、配列番号１のヌクレオチド配列によってコードされる。

【0010】

特定の態様では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖからなる群から選択される抗原結合ドメインを含む。一部の態様では、抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含む。特定の態様では、ｓｃＦｖは、さらにヒト化ｓｃＦｖとして規定される。一部の態様では、ヒト化ｓｃＦｖは、実施形態によるｓｃＦｖである。

【0011】

一部の態様では、ＣＡＲの前記抗原結合領域は、１またはそれを超える腫瘍関連抗原に結合する。特定の態様では、１またはそれを超える腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＲＯＲ１、ＣＤ２０、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮腫瘍抗原、メラノーマ関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１およびＣＤ９９からなる群から選択される。特定の態様では、１またはそれを超える腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３１９、ＣＤ１２３、ＣＤ５、ＲＯＲ１、メソテリン、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１、および／またはＣＤ９９である。一部の態様では、ｓｃＦｖはＥＧＦＲ結合ドメインを含まない。

【0012】

特定の態様では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０、ＣＤ４０、またはそれらの組合せを含む。特定の態様では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、ＤＡＰ１２を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、ＩＬ－１５を含む。特定の一態様では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＤＡＰ１２、およびＩＬ－１５を含む。

【0013】

一部の態様では、ＣＡＲは自殺遺伝子をさらに含む。特定の態様では、自殺遺伝子は誘導性カスパーゼ９である。

【0014】

一実施形態では、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む単離された抗原特異的ヒト化単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が提供され、ｓｃＦｖは、
（ａ）ＣＤ１９特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号８のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤ１２３特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号１４のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）メソテリン特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号２０のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＲＯＲ１特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号２６のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤ５特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号３２のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＬＬ－１特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号６０のアミノ酸配列を含む；
（ｇ）ＣＤ９９特異的であり、Ｖ_Ｌが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｈ）（ａ）～（ｇ）のいずれか一つのフレームワーク領域に対して９０％の配列同一性を有する配列
である。

【0015】

一部の態様では、ｓｃＦｖ配列は、配列番号６、１２、１８、２４、または３０のフレームワーク領域に対して９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の配列同一性を含み、前記配列のＣＤＲに対して１００％の配列同一性を含む。特定の態様では、前記配列のＣＤＲは、１、２、または３つの変更を有し得る。

【0016】

一部の態様では、ｓｃＦｖはＣＤ１９特異的であり、Ｖ_Ｌは配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは配列番号８のアミノ酸配列を含む。特定の一態様では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ｓｃＦｖはＣＤ１２３特異的であり、Ｖ_Ｌは配列番号１３のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは配列番号１４のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＣＤ１２３特異的ｓｃＦｖは配列番号１２のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖはメソテリン特異的であり、Ｖ_Ｌは配列番号１９のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは配列番号２０のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、メソテリン特異的ｓｃＦｖは配列番号１８のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖはＲＯＲ１特異的であり、Ｖ_Ｌは配列番号２５のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは配列番号２６のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＲＯＲ１特異的は配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖはＣＤ５特異的であり、Ｖ_Ｌは配列番号３１のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｈは配列番号３２のアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＣＤ５特異的は配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

【0017】

一部の態様では、ｓｃＦｖは、配列番号６、１２、１８、２４、または３０のアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも９５％、例えば少なくとも９６、９７、９８、または９９％などの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0018】

本明細書では、上記の実施形態の単離されたｓｃＦｖをコードする単離されたポリヌクレオチドがさらに提供される。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号３、９、１５、２１、または２７を含む。その他の態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号３、９、１５、２１、または２７に対して少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の配列同一性を有する配列を含む。

【0019】

本明細書では、これらの実施形態の単離されたヌクレオチドを含む発現ベクターも提供される。一部の態様では、ベクターはさらにウイルスベクターとして規定される。

【0020】

本明細書では、本実施形態のいずれか１つによるＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸がさらに提供される。

【0021】

また、本明細書では、本実施形態のヒト化ｓｃＦｖおよび／または前記ＣＡＲのヒンジ領域において切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）を含むＣＡＲを発現するように操作された宿主細胞が提供される。一部の態様では、ＣＡＲは、本実施形態のいずれか一つによる。一部の態様では、ＣＡＲをコードするＤＮＡは細胞のゲノムに組み込まれている。

【0022】

一部の態様では、宿主細胞はさらにＣＡＲ免疫細胞として規定される。特定の態様では、免疫細胞はＴ細胞、末梢血リンパ球、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または幹細胞である。特定の態様では、免疫細胞はＴ細胞またはＮＫ細胞である。一部の態様では、幹細胞は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である。特定の態様では、免疫細胞はｉＰＳ細胞に由来する。一部の態様では、Ｔ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、またはγδＴ細胞である。特定の態様では、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。一部の態様では、免疫細胞は同種または自己である。一部の態様では、免疫細胞は末梢血、臍帯血、または骨髄から単離されている。特定の態様では、免疫細胞は、臍帯血から単離されている。特定の態様では、臍帯血は、２またはそれを超える個々の臍帯血ユニットからプールされている。

【0023】

本明細書では、本実施形態のいずれかによる免疫細胞集団を含む薬学的組成物がさらに提供される。また、本明細書では、免疫関連障害における使用のための本実施形態のいずれか一つによる免疫細胞集団を含む組成物が提供される。

【0024】

もう一つの実施形態では、ヒト化ｓｃＦｖおよび／またはＥｖ３ヒンジを含むものなどの本実施形態のいずれか一つの有効量のＣＡＲ免疫細胞を投与することを含む、被験体において免疫関連障害を処置する方法が提供される。

【0025】

上記実施形態の一部の態様では、免疫関連障害は、癌、自己免疫障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶反応、または炎症症状である。特定の態様では、免疫関連障害は炎症症状であり、免疫細胞にはグルココルチコイドレセプターの発現が本質的にない。特定の態様では、免疫関連障害は癌である。一部の態様では、免疫細胞は自己または同種である。一部の態様では、癌は固形癌または血液悪性腫瘍である。

【0026】

さらなる態様では、この方法はさらに、少なくとも第２の治療薬を投与することを含む。一部の態様では、少なくとも第２の治療薬は、化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、または生物療法を含む。特定の態様では、免疫細胞および／または少なくとも第２の治療薬は、静脈内に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局所的に、または直接注射または灌流によって投与される。

【0027】

一部の態様では、この方法はさらに、抗ＥＧＦＲ抗体を投与することを含む。一部の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体はモノクローナル抗体である。特定の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブまたはパニツムマブである。一部の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してＥｖ３－ＣＡＲ免疫細胞を選択的に除去する。特定の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体は、検出可能なタグおよび／または細胞傷害性薬物に融合されている。一部の態様では、この方法はさらに、検出可能なタグを画像化し、それによりＥｖ３－ＣＡＲ免疫細胞を検出することをさらに含む。特定の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害性薬物に融合されている。一部の態様では、細胞傷害性薬物は、Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞において自殺遺伝子の活性化を誘導する。一部の態様では、細胞傷害性薬物はＥｖ３－ＣＡＲ免疫細胞の除去をもたらす。

【0028】

本発明のその他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、本発明の精神および範囲内の様々な変更および修正は、この詳細な説明から当業者に明らかになるので、詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施形態を示してはいるが、例示のためだけに記載されていることを理解されたい。

【0029】

以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明の特定の態様をさらに実証するために含まれている。本発明は、本明細書に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせて、１またはそれを超えるこれらの図面を参照することにより、よりよく理解され得る。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1-1】図１Ａ～図１Ｂは、現在のＣＡＲとＥｖ３－ＣＡＲのデザインの比較を示す図である。図１Ａは、Ｅｖ３のストークは、ｓｃＦｖなどによる抗原結合からのシグナルを伝達する統合構造として、ならびに「オフ」スイッチとして機能し、その結果、セツキシマブなどの臨床的にアクセス可能な抗体によって認識されて、ＣＡＲ陽性免疫細胞を除去することができる。図１Ｂは、Ｔ細胞の使用など、ＣＡＲを超える強化として、ＤＡＰ１２をＥｖ３－ＤＡＰ１２ ＣＡＲのシグナルブースターとして利用して、ＮＫ細胞におけるＣＡＲ機能の有効性を増加させることができる。

【図1-2】図１Ａ～図１Ｂは、現在のＣＡＲとＥｖ３－ＣＡＲのデザインの比較を示す図である。図１Ａは、Ｅｖ３のストークは、ｓｃＦｖなどによる抗原結合からのシグナルを伝達する統合構造として、ならびに「オフ」スイッチとして機能し、その結果、セツキシマブなどの臨床的にアクセス可能な抗体によって認識されて、ＣＡＲ陽性免疫細胞を除去することができる。図１Ｂは、Ｔ細胞の使用など、ＣＡＲを超える強化として、ＤＡＰ１２をＥｖ３－ＤＡＰ１２ ＣＡＲのシグナルブースターとして利用して、ＮＫ細胞におけるＣＡＲ機能の有効性を増加させることができる。

【0031】

【図2-1】図２Ａは、エンドドメインおよびＥＧＦ結合ドメインを含むＥＧＦＲと比較したＥｖ３を示す模式図である。図２Ｂは、ＥＧＦＲバリアントおよび断片（ｆｒａｇｍｅｔｓ）を示す模式図である。図２Ｃは、細胞外ドメインのみを含むＥｖ３の配列である。

【図2-2】図２Ａは、エンドドメインおよびＥＧＦ結合ドメインを含むＥＧＦＲと比較したＥｖ３を示す模式図である。図２Ｂは、ＥＧＦＲバリアントおよび断片（ｆｒａｇｍｅｔｓ）を示す模式図である。図２Ｃは、細胞外ドメインのみを含むＥｖ３の配列である。

【図2-3】図２Ａは、エンドドメインおよびＥＧＦ結合ドメインを含むＥＧＦＲと比較したＥｖ３を示す模式図である。図２Ｂは、ＥＧＦＲバリアントおよび断片（ｆｒａｇｍｅｔｓ）を示す模式図である。図２Ｃは、細胞外ドメインのみを含むＥｖ３の配列である。

【0032】

【図3-1】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【図3-2】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【図3-3】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【図3-4】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【図3-5】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【図3-6】図３Ａ～図３Ｅは、抗原ＣＤ１９（Ａ）、ｈＣＤ１９（Ｂ）、ＣＤ１２３（Ｃ）、ｈＣＤ１２３（Ｄ）、およびＣＤ９９（Ｅ）のレトロウイルスベクターの図である。図３Ｆは、他のｓｃＦｖと置き換えることができるＣＤ１９に対するヒト化ｓｃＦｖを使用する、ＣＡＲ２．０のマップ。

【0033】

【図4-1】図４Ａは、Ｅｖ３抗体が、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ２８．ＣＤ３ζ、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＤＡＰ１２．ＣＤ３ζまたはヒト化ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ３ζ形質導入ＮＫ細胞を認識することを示す。図４Ｂは、ＣＤ１９^＋Ｒａｊｉ腫瘍標的に対するＣＡＲ．１９形質導入ＮＫ細胞の殺傷活性を評価するクロム放出アッセイにおいて、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ２８．ＤＡＰ１２ ＮＫ細胞が、複数のエフェクター：標的比でＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を死滅させるのにＣＡＲ１９．ＩｇＧ１．ＣＤ２８．ＣＤ３ｚ形質導入ＮＫ細胞と同じくらい有効であることが示されたことを示す。

【図4-2】図４Ａは、Ｅｖ３抗体が、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ２８．ＣＤ３ζ、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＤＡＰ１２．ＣＤ３ζまたはヒト化ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ３ζ形質導入ＮＫ細胞を認識することを示す。図４Ｂは、ＣＤ１９^＋Ｒａｊｉ腫瘍標的に対するＣＡＲ．１９形質導入ＮＫ細胞の殺傷活性を評価するクロム放出アッセイにおいて、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ２８．ＤＡＰ１２ ＮＫ細胞が、複数のエフェクター：標的比でＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を死滅させるのにＣＡＲ１９．ＩｇＧ１．ＣＤ２８．ＣＤ３ｚ形質導入ＮＫ細胞と同じくらい有効であることが示されたことを示す。

【0034】

【図5-1】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-2】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-3】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-4】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-5】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-6】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【図5-7】図５Ａは、ＣＡＲのヒト化のプラットフォームを示す概略図である。図５Ｂは、モノクローナル抗体配列分析を示す。

【0035】

【図6】図６は、抗体のアイソタイプ、アロタイプ、およびイディオタイプを表す概略図である。抗体の構造決定因子は、単離され、分析および後続のＣＤＲ／フレームワークグラフティングに使用される要素を定義するために描かれている。ヒト免疫グロブリンの５つの主要なアイソタイプは、示されるように（ＩｇＧ１、２、３、４、ＩｇＡ１、２）さらに下位分類される。

【0036】

【図7-1】図７Ａは、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈを含むｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ領域には下線が引かれている。図７Ｂは、配列の同一性または相似性によってそれぞれの種の起源を検証するための、ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのＢＬＡＳＴ分析を示す。図７Ｃは、ｍＣＤ１９ ｓｃＦｖとヒト化ＣＤ１９ ｓｃＦｖを比較した分析の要約を示す。

【図7-2】図７Ａは、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈを含むｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ領域には下線が引かれている。図７Ｂは、配列の同一性または相似性によってそれぞれの種の起源を検証するための、ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのＢＬＡＳＴ分析を示す。図７Ｃは、ｍＣＤ１９ ｓｃＦｖとヒト化ＣＤ１９ ｓｃＦｖを比較した分析の要約を示す。

【図7-3】図７Ａは、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈを含むｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ領域には下線が引かれている。図７Ｂは、配列の同一性または相似性によってそれぞれの種の起源を検証するための、ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびｍＣＤ１９ ｓｃＦｖのＢＬＡＳＴ分析を示す。図７Ｃは、ｍＣＤ１９ ｓｃＦｖとヒト化ＣＤ１９ ｓｃＦｖを比較した分析の要約を示す。

【0037】

【図8-1】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-2】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-3】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-4】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-5】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-6】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-7】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【図8-8】図８Ａ～図８Ｄ：図８Ａは、３Ｄ構造モデリングを示す概略図を示す。図８Ｂ～図８Ｄは、ヒトＣＤ１９可変軽鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。完全に自動化されたタンパク質構造相同性モデラーであるＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ^＊を使用して、ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインの３次元モデルを生成した（具体例として抗ＣＤ１９を示す）。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ内で自動的にアクセスされるＰＤＢ構造ファイルを使用して抽出した。

【0038】

【図9-1】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【図9-2】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【図9-3】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【図9-4】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【図9-5】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【図9-6】図９Ａ～図９Ｃは、ヒトＣＤ１９可変重鎖の３Ｄ構造モデリングを示す。図９Ａは、ｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメインの特定の例について、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬで、スコア（ＧＭＱＥ）およびマッチング法（ＢＬＡＳＴまたはＨＨｂｌｉｔｓ）を使用して、最も一致する（構造的に相同な）構造のリストを生成したことを示す。図９Ｂ～図９Ｃは、その後、最高のスコア構造（２ｆｇｗ）を、下のパネルに示されるようにｈＣＤ１９Ｖ_Ｌドメイン（「標的」）とアラインさせたことを示す。

【0039】

【図10-1】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-2】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-3】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-4】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-5】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-6】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【図10-7】図１０Ａは、マウス抗体からのＣＤＲ領域の同定および単離（左上）、ヒトフレームワーク領域の抜粋（右パネル）、およびヒトフレームワーク／マウスＣＤＲグラフティング（左下）を示す、ヒトフレームワークグラフティングの概略図を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のように配列分析から収集される。図１０Ｂは、特定のＩｇドメインの「ヒト化度」を列挙するために、Ｔ２０スコアリングシステムを使用するモノクローナル抗体のベースラインヒト化スコアリングを示す（Ｇａｏら、２０１３）。対照として、スコアリングおよび比較のために現在市場にある抗体からＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインを抽出した。示された抗体のヒト化度のスコア（右端の列）はＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインについて収載される。図１０Ｃは、商業市場向けに承認された初期の治療用抗体はマウスまたはキメラ抗体（可変マウス領域＋ヒト定常領域）であり、後の承認はヒト化またはヒト抗体である傾向があることを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。図１０Ｄは、抗体のＦＤＡ承認の年までの可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。ヒト化度スコアは、同じ種類の抗体（マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト）に群がる傾向があり、ヒト化度スコアの増加はヒト化度の内容に相関する。Ｖ_Ｈドメインはサイズが大きいため、ヒト化度スコアが（Ｖ_Ｌと比較して）低くなる傾向がある。図１０Ｅは、示された抗体のヒト化スコアリングを示す。抗治療抗体応答の頻度は％として示され、評価された患者群の大きさが括弧内に示されている。一般に、ヒトまたはヒト化抗体が多いほど、臨床使用で免疫原性が報告される回数が少なくなる。図１０Ｆは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号１）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号３）の可変軽鎖のヒト化スコアリングを示す。図１０Ｇは、ｈＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号２）およびｍＣＤ１９－ＣＡＲ（配列番号４）の可変重鎖のヒト化スコアリングを示す。

【0040】

【図11-1】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-2】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-3】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-4】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-5】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-6】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-7】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【図11-8】図１１Ａは、ＣＤ１９－ＣＡＲおよびｈＣＤ１９－ＣＡＲ構築物の概略図を示す。図１１Ｂは、ＣＡＲの形質導入効率を示す。図１１Ｃは、Ｋ５６２細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対する異なるＣＡＲ構築物の細胞傷害性を示す。図１１Ｅは、示されたエフェクター：標的比でＫ５６２またはＲａｊｉ細胞に対する対照ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲまたはヒト化ＣＤ３ζ／ＩｇＧ１ ＣＡＲを有する細胞の細胞傷害性アッセイを示す。

【0041】

【図12-1】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-2】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-3】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-4】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-5】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-6】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-7】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-8】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-9】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【図12-10】図１２Ａは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ形質導入を示す。図１２Ｂは、ＮＫ細胞の成長曲線を示す。図１２Ｃは、細胞株でのＣＤ３１９発現を示す。図１２Ｄ～Ｆは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｇは、Ｋ５６２、ＭＭ．１Ｓ、およびＯＰＭ２を含む示された細胞型に対するＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞を用いる細胞傷害性アッセイを示す。図１２Ｈ～Ｉは、ＣＤ３１９－ＣＡＲ ＮＫ細胞がエフェクター表現型を有することを示す。

【発明を実施するための形態】

【0042】

例示の実施形態の説明
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に基づく細胞免疫療法は、癌の処置において、特に白血病およびリンパ腫の処置にかなりの有効性を示している。それにもかかわらず、現在利用可能なＣＡＲは、様々な設計上の欠陥を含む可能性がある。ＣＡＲを使用して標的癌免疫療法のために免疫細胞を再プログラムする最近の臨床結果は、強力な抗腫瘍細胞傷害性を示している。大部分のＣＡＲ単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）モジュールはマウス抗体の誘導体であるため、ヒト抗マウス免疫反応は、このようにして得られたＣＡＲの効力を損なう。

【0043】

従って、一部の実施形態では、本開示は、抗原に対してヒト化ＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を操作するプラットフォーム技術を提供する。抗原には、ＣＤ１９（ｈＣＤ１９ＣＡＲ）、ＣＤ１２３（ｈＣＤ１２３ＣＡＲ）、メソテリン（ｈＭｅｓｏＣＡＲ）、ＲＯＲ１（ｈＲＯＲ１ＣＡＲ）、ＣＤ５（ｈＣＤ５ＣＡＲ）、ＣＬＬ－１（ｈＣＬＬ－１ＣＡＲ）、および／またはＣＤ９９（ｈＣＤ９９ＣＡＲ）ならびに癌または自己免疫障害などの疾患の処置のために標的となり得るその他の抗原が含まれ得る。従って、特定の実施形態では、本開示は、ヒト化ＣＡＲおよび癌の処置におけるそれらの使用方法をさらに提供する。

【0044】

一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ、具体的にはＣＡＲのｓｃＦｖのヒト化のためのプラットフォームを提供する。このプロセスは、実施例１に記載される５つのモジュールコンポーネントに従う。これらには、配列解析、３Ｄ構造モデリング、ヒトフレームワークグラフティング、ヒト化スコアリング、および機能分析が含まれ得る。次に、ＩｇＧは、ヒト化プロセスに焦点を合わせ、アロタイプ（すなわち、同じアイソタイプのバージョン）の広範な配列変異を利用して、ヒトフレームワークの選択を微調整する（図２）。

【0045】

最初のステップでは、ヒト重鎖および軽鎖の抗体配列を、ＧｅｎＢａｎｋなどの供給源からのローカルデータベースで精選することができる。可変ドメインは、ＩｇＢＬＡＳＴ（ＢＬＡＳＴの１つのバージョン）を使用してアラインさせて、アロタイプを線引きし、相同性に従って配列を分類することができる。次いで、ＣＤＲ領域を特定することができ、フレームワーク配列をカタログに登録する（図１Ａ）。次いで、例えばタンパク質構造相同性モデラー（例えば、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ）を使用して、３Ｄ構造モデリングを実行することができる。

【0046】

一部の実施形態では、免疫細胞は、本明細書に記載されるヒト化ｓｃＦｖでＣＡＲを発現するように操作されている。免疫細胞は、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞、例えば末梢血、臍帯血、または骨髄由来の浸潤リンパ球に由来するものなどであってよい。本発明のヒト化プラットフォームから誘導されるｓｃＦｖを含む免疫細胞は、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）産生の可能性と、遺伝子組み換え免疫細胞療法製品の関連する免疫介在性拒絶反応を軽減することができる。

【0047】

従って、さらなる実施形態は、ヒト化ｓｃＦｖを有するＣＡＲを発現する免疫細胞を投与することによって疾患または障害を処置する方法を提供する。これらの方法を使用することにより、免疫拒絶反応が低下し、注入された細胞療法製品の持続性が長くなる。処置することができる例となる被験体としては、ＣＤ１９^＋ＣＬＬ、ＡＬＬおよびＮＨＬを有する癌患者；ＡＭＬ、ＣＭＬ．ＭＤＳおよびＢＰＤＣＮをはじめとするＣＤ１２３陽性悪性腫瘍；子宮頸癌、子宮内膜癌、および頭頚部癌をはじめとするメソテリン陽性癌；ＣＬＬ（例えば、以前にＣＡＲ療法を受けていないかまたはＣＤ１９陰性疾患でＣＤ１９－ＣＡＲの後に再発した人）、乳癌、卵巣癌および膵臓癌をはじめとするＲＯＲ１陽性悪性腫瘍；ＡＬＬおよびＮＨＬをはじめとするＣＤ５陽性悪性腫瘍ならびに胸腺癌が挙げられる。

【0048】

さらなる実施形態では、本開示は、切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩを含むＣＡＲを提供し、該受容体は、細胞質エンドドメインまたは機能性ＥＧＦ結合ドメインを含まず、本明細書においてＥｖ３と呼ばれる。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、多形神経膠芽腫および肺癌などの腫瘍細胞にのみ見出され、上皮細胞などの正常なＥＧＦＲ発現細胞には見出されないＥＧＦＲ変異体である。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、エクソン２～７の欠失（８０１塩基対のインフレーム欠失、野生型と比較して２６７アミノ酸が欠損）をもたらす体細胞変異を有する。ＥＧＦＲｖＩＩＩの欠失は、ドメイン１および２の大部分も網羅し、その結果切断型ドメイン１および切断型ドメイン２がもたらされる。さらに、ＥＧＦＲｖＩＩＩは、余分なグリシン残基（アミノ酸６～２７３はグリシン残基；すなわちＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤに置き換えられる）を生成するエクソン１とエクソン８との融合の結果として特異的エピトープを有し、これは例えば多形神経膠芽腫の場合には腫瘍特異的抗原を形成する。

【0049】

Ｅｖ３（またはｔＥｖ３）と呼ばれる、本明細書で提供される切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩは、エンドドメインまたは機能性ＥＧＦ結合ドメインを含まない。具体的には、Ｅｖ３細胞外ドメインは、ａ）シグナル伝達、ｂ）ＣＡＲ陽性を割り当てるための細胞マーカー、およびｃ）抗体結合（例えば、セツキシマブとの）による細胞除去のための抗原マーカーのために、膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインを除くＣＡＲのストークとして使用することができる。特定の態様では、Ｅｖ３は、ＥＧＦＲの切断型ドメイン１（Ｌ１）、切断型ドメイン２（ＣＲ１）、ドメイン３（Ｌ２）、およびドメイン４（ＣＲ２）（図２Ｂに示す通り）を含む。Ｅｖ３の例となる配列は図２Ｃに示される。本発明のＥｖ３は、図２Ｃの配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を含み得る。セツキシマブ結合部位（ドメイン３内）は、Ｅｖ３と野生型ＥＧＦＲ細胞外ドメインの両方で保存される。セツキシマブ（および／またはパニツムマブ）結合部位に加えて、Ｅｖ３エピトープは、その他の抗体（例えば、ＭＲ１、ｍＡｂ ８０６、およびＤＨ８．３）の追加の結合部位を提示する。

【0050】

本明細書で提供されるＣＡＲは、Ｅｖ３を、ｓｃＦｖ（すなわち抗原認識ドメイン）とシグナル伝達ドメイン（すなわちＣＤ２８およびＣＤ３ζ）を共有結合する抗原安全スイッチを兼ねることができる統合シグナル伝達ヒンジとして使用することができる。Ｅｖ３は、インビトロおよびインビボでのＣＡＲ免疫細胞の検出も可能にする。その上、Ｅｖ３ヒンジは、遺伝的負荷（ＣＡＲ）の保持を保証する。

【0051】

本明細書で提供されるＥｖ３ヒンジのさらなる態様は、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的であり、他の組織および細胞、例えば上皮細胞などに存在するＥＧＦＲのドメインＩＩＩおよびＩＶと交差反応しない抗体、例えばＭＲ１などによって標的となるその能力である。セツキシマブおよびパニツムマブは、臨床的に利用可能な抗体であってＦＤＡに承認されているので、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ５、ＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ９９、およびメソテリンなどの異なる抗原特異性をもつ各ＣＡＲのイディオタイプ抗体の規制承認を得る必要がない。Ｅｖ３－ＣＡＲを標的にする能力は、ＣＡＲ陽性細胞および／または制御された細胞除去を検出するために使用することができる。細胞除去は、サイトカイン放出症候群、神経毒性、および／またはオンターゲットまたはオフ腫瘍活性などの有害事象の場合に望ましいことがある。Ｅｖ３はＴ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞で標準的に発現しないので、Ｅｖ３を強制発現させると、遺伝子組換免疫細胞を特異的にマークすることになる。最後に、Ｅｖ３は、シグナル伝達エンドドメイン（細胞質ドメインが除去されるため）またはＥＧＦ結合ドメインを含まず、Ｅｖ３を含むＣＡＲは、細胞の外側または内側のいずれにおいてもＥＧＦシグナル伝達経路（例えば、ＡＲ、ＡＲＦ４、ＣＡＶ１、ＣＡＶ３、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＤ４４、ＣＤＣ２５Ａ、ＣＲＫ、ＣＴＮＮＢ１、ＤＣＮ、ＥＧＦ、ＧＲＢ１４、Ｇｒｂ２、ＪＡＫ２、ＭＵＣ１、ＮＣＫ１、ＮＣＫ２、ＰＫＣα、ＰＬＣＧ１、ＰＬＳＣＲ１、ＰＴＰＮ１、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＲＫ、ＳＨ２Ｄ３Ａ、ＳＨ３ＫＢＰ１、ＳＨＣ１、ＳＯＳ１、Ｓｒｃ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５Ａ、ＵＢＣ、ＷＡＳ）に応答またはクロストークしないことになる。従って、特定の態様では、これらの遺伝子産物はいずれも、Ｅｖ３－ＣＡＲＳのＥｖ３ヒンジに干渉しないと予想される。特定の態様では、Ｅｖ３には１、２、３、またはそれを超える変更があることがある。

【0052】

さらなる態様では、Ｅｖ３－ＣＡＲの機能、有効性、および細胞の持続性は、ＮＫ細胞活性化の重要な要素であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）シグナル伝達モジュールをＥｖ３－ＤＡＰ１２－ＣＡＲに組み込むことによってさらに強化され得る。

【0053】

さらなる実施形態は、本明細書で提供されるＣＡＲをＴ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞に導入する方法を提供する。ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞は、癌の処置などのために被験体に投与されてよい。特に、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置され得る癌には、白血病およびリンパ腫、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などが含まれる。
Ｉ．定義

【0054】

本明細書において使用される、指定された成分に関して「本質的に含まない」は、指定された成分が意図的に組成物に配合されていないこと、および／または汚染物質としてまたは微量でのみ存在することを意味するために本明細書で使用される。そのため、組成物の意図しない汚染から生じる指定された成分の総量は、０．０５％をはるかに下回り、好ましくは０．０１％を下回る。最も好ましいのは、指定された成分が標準的な分析方法では検出することができない組成物である。

【0055】

本明細書において使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、１つまたは複数を意味し得る。本明細書の１または複数の請求項において、「含む」という語と併せて使用される場合、「ａ」または「ａｎ」という語は１つまたは複数を意味し得る。

【0056】

請求項における用語「または」の使用は、代替物のみを指すように明示的に示されていない限り、または代替物が相互に排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、代替物および「および／または」のみを指す定義を支持する。本明細書において使用される場合、「もう一つの」は、少なくとも第２のまたはそれよりも多くを意味し得る。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、述べた値のプラスマイナス５％を意味する。

【0057】

用語「外因性」は、細胞または生物のタンパク質、遺伝子、核酸、またはポリヌクレオチドに関連して使用される場合、人工的手段または自然な手段によって細胞または生物に導入されたタンパク質、遺伝子、核酸、またはポリヌクレオチドを指す；あるいは細胞に関連して使用される場合、この用語は、単離されて、その後に人工的手段または自然な手段によって他の細胞または生物に導入された細胞を指す。外因性核酸は、異なる生物または細胞由来のものであってもよいし、あるいはそれは生物または細胞内で自然に生じる核酸の１またはそれを超える追加のコピーであってもよい。外因性細胞は、異なる生物由来であってもよいし、またはそれは同じ生物由来であってもよい。限定されない例として、外因性核酸とは、天然の細胞にある染色体位置とは異なる染色体位置にあるか、そうでなければ自然界に見られるものとは異なる核酸配列が隣接している核酸である。

【0058】

「発現構築物」または「発現カセット」は、転写を指示することができる核酸分子を意味する。発現構築物には、最小でも、１またはそれを超える所望の細胞型、組織または器官での遺伝子発現を指示する、１またはそれを超える転写制御要素（例えばプロモーター、エンハンサーまたはその機能的に等価な構造など）が含まれる。さらなる要素、例えば転写終結シグナルなどが含まれていてもよい。

【0059】

「ベクター」または「構築物」（遺伝子送達系または遺伝子導入「ビヒクル」と呼ばれることもある）とは、インビトロまたはインビボのいずれかで、宿主細胞に送達されるポリヌクレオチドを含む高分子または分子の複合体を指す。

【0060】

一般的な種類のベクターである「プラスミド」は、染色体ＤＮＡから独立して複製することができる、染色体ＤＮＡとは別の染色体外ＤＮＡ分子である。場合によっては、それは環状で二重鎖である。

【0061】

本明細書において使用される、用語「患者」または「被験体」とは、生きている哺乳類生物、例えばヒト、サル、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、またはそれらのトランスジェニック種を指す。特定の実施形態では、患者または被験体は霊長類である。ヒト患者の限定されない例は、成人、少年、幼児および胎児である。

【0062】

「免疫障害」、「免疫関連障害」、または「免疫介在性障害」とは、免疫応答が疾患の発症または進行において重要な役割を果たす障害を指す。免疫介在性疾患には、自己免疫障害、同種移植片拒絶、移植片対宿主病ならびに炎症およびアレルギー症状が含まれる。

【0063】

「免疫応答」は、刺激に対するＢ細胞、またはＴ細胞、または先天性免疫細胞などの免疫系の細胞の応答である。一実施形態では、応答は特定の抗原に特異的である（「抗原特異的応答」）。

【0064】

用語「腫瘍関連抗原」、「腫瘍抗原」、および「癌細胞抗原」は、本明細書において同義的に使用される。いずれの場合も、これらの用語は癌細胞によって特異的または優先的に発現されるタンパク質、糖タンパク質、または炭水化物を指す。

【0065】

「エピトープ」は、アミノ酸配列の特異性によって決定される、抗体によって認識される抗原の部位である。２つの抗体は、競合結合アッセイで測定されるように、各々が他方の抗原との結合を競合的に抑制（ブロック）する場合、同じエピトープに結合すると言われる。あるいは、一方の抗体の結合を減少または排除する抗原の大部分のアミノ酸変異が他方の結合を減少または排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。２つの抗体は、各々が他方の抗原との結合を部分的に抑制する場合、かつ／または一方の抗体の結合を減少または排除する一部のアミノ酸変異が他方の結合を減少または排除する場合、重複するエピトープを有すると言われる。

【0066】

疾患または症状の「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、疾患の徴候または症候を緩和するために、１またはそれを超える薬物を患者に投与することを含み得るプロトコルを実行することを指す。処置の望ましい効果には、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解または予後の改善が含まれる。緩和は、疾患または症状の徴候または症候が現れる前、ならびに出現した後に起こり得る。従って、「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」には、疾患または望ましくない症状の「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」が含まれ得る。加えて、「処置（Ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、徴候または症候の完全な緩和を必要とせず、治癒を必要とせず、具体的には患者にわずかな効果しか与えないプロトコルを含む。

【0067】

「有効」という用語は、その用語が本明細書および／または特許請求の範囲で使用されている場合、所望される、期待される、または意図される結果を達成するのに十分であることを意味する。「有効量」、「治療上有効な量」または「薬剤有効量」は、患者または被験体を化合物で処置する状況で使用される場合、疾患を処置または予防するために被験体または患者に投与される場合の化合物の量が、疾患のそのような処置または予防をもたらすために十分な量であることを意味する。

【0068】

「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」には、（１）疾患の病態または総体症状を経験または表示している被験体または患者においてその疾患を抑制すること（例えば、病態および／または総体症状のさらなる進展を停止させること）、（２）疾患の病態または総体症状を経験または表示している被験体または患者においてその疾患を改善すること（例えば、病態および／または総体症状を逆転させること）、および／または（３）疾患の病態または総体症状を経験または表示している被験体または患者において疾患またはその症候の測定可能な減少をもたらすことが含まれる。

【0069】

「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」には、（１）リスクがある、かつ／または疾患の素因があるかもしれないが、疾患の病態または総体症状の一部または全部をまだ経験または表示していない被験体または患者において疾患の発症を抑制すること、および／または（２）リスクがある、かつ／または疾患の素因があるかもしれないが、疾患の病態または総体症状の一部または全部をまだ経験または表示していない被験体または患者において疾患の病態または総体症状の発症を遅らせることが含まれる。

【0070】

本明細書において使用される、用語「１または複数のフレームワーク領域」とは、ＣＤＲの足場として作用する抗体の可変領域の領域を指す。従って、フレームワーク領域は、可変軽鎖および可変重鎖の非ＣＤＲ配列を含み得る。可変領域のＣＤＲは、Ｓｅｌａ－Ｃｕｌａｎｇら、２０１３年（参照によりその全文が本明細書に援用される）に記載されているＫａｂａｔナンバリングシステムを使用するなど、当技術分野で公知の方法によって決定することができる。Ｋａｂａｔ（ＣＩＴＥ）により記載されるシステムは、抗体のあらゆる可変領域に適用可能な明確な残基番号付けシステムを提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。

【0071】

本明細書において一般的に使用される場合、「薬学的に許容され得る」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー応答、または合理的な利益／リスク比に見合ったその他の問題または合併症なく、人間および動物の組織、器官、および／または体液と接触して使用するのに適している化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。

【0072】

「薬学的に許容され得る塩」とは、上で定義されるように薬学的に許容され得、所望の薬理活性を有する本明細書に開示される化合物の塩を意味する。そのような塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、および同類のものなどの無機酸で形成された酸付加塩；あるいは、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、３－フェニルプロピオン酸、４，４’－メチレンビス（３－ヒドロキシ－２－エン－１－カルボン酸）、４－メチルビシクロ［２．２．２］オクタ－２－エン－１－カルボン酸、酢酸、脂肪族モノおよびジカルボン酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコへプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、ラウリル硫酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、ｏ－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、シュウ酸、ｐ－クロロベンゼンスルホン酸、フェニル置換アルカン酸、プロピオン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、ターシャリーブチル酢酸、トリメチル酢酸、および同類のものなどの有機酸で形成された酸付加塩が含まれる。薬学的に許容され得る塩には、存在する酸性プロトンが無機または有機塩基と反応できる場合に形成され得る塩基付加塩も含まれる。許容され得る無機塩基には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アルミニウムおよび水酸化カルシウムが含まれる。許容され得る有機塩基には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミンおよび同類のものが含まれる。塩が全体として薬理学的に許容され得る限り、本発明の任意の塩の一部を形成する特定の陰イオンまたは陽イオンは決定的に重要ではないということを認識する必要がある。薬学的に許容され得る塩のさらなる例ならびにその調製および使用方法は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ＆Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ ｅｄｓ．，Ｖｅｒｌａｇ Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００２）に記載されている。

【0073】

「薬学的に許容され得る担体」、「薬物担体」、または単に「担体」は、化学薬品の運搬、送達、および／または輸送に関与する有効成分の薬剤とともに処方される薬学的に許容され得る物質である。薬物担体を使用して薬物の送達および有効性を改善することができ、それには、例えば、薬物バイオアベイラビリティを調節し、薬物代謝を減少させ、かつ／または薬物毒性を低減する制御放出技術が含まれる。一部の薬物担体は、特異的な標的部位への薬物送達の有効性を高めることができる。担体の例としては、リポソーム、ミクロスフェア（例えば、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）製）、アルブミンミクロスフェア、合成ポリマー、ナノファイバー、タンパク質－ＤＮＡ複合体、タンパク質複合体、赤血球、ウイロソームおよびデンドリマーが挙げられる。

【0074】

本明細書において使用される場合、用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、例えば、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体を指すことがあり、特定の免疫エフェクター細胞に人工的な特異性をグラフティングする操作された受容体を包含し得る。ＣＡＲを用いて、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に付与し、それにより多数の特異的Ｔ細胞を例えば養子細胞療法で用いるために生成することができる。特定の実施形態では、ＣＡＲは細胞の特異性を例えば腫瘍関連抗原に向ける。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内活性化ドメイン、膜貫通ドメイン、および腫瘍関連抗原結合領域を含む細胞外ドメインを含む。特定の態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインおよびエンドドメインのＣＤ３ζに融合した、モノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の融合を含む。その他のＣＡＲ設計の特異性は、受容体（例えば、ペプチド）のリガンドに由来するか、またはデクチンなどのパターン認識受容体に由来してよい。場合によっては、抗原認識ドメインの間隔を改変して、活性化誘発性細胞死を減少させることができる。場合によっては、ＣＡＲは、さらなる共刺激シグナル伝達のドメイン、例えばＣＤ３ζ、ＦｃＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＤＡＰ１０、および／またはＯＸ４０を含む。一部の例では、分子をＣＡＲと共発現させることができ、それには、共刺激分子、イメージング用のレポーター遺伝子（例えば、ポジトロン放出断層撮影用）、プロドラッグの添加時にＴ細胞を条件付きで除去する遺伝子産物、ホーミング受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、サイトカイン、およびサイトカイン受容体が含まれる。

【0075】

用語「抗原提示細胞（ＡＰＣ）」とは、免疫系の特定のエフェクター細胞によって認識可能なペプチドＭＨＣ複合体の形で１またはそれを超える抗原を提示することができ、それにより提示されている１つまたは複数の抗原に対する有効な細胞性免疫応答を誘導する、細胞のクラスを指す。ＡＰＣは、マクロファージ、Ｂ細胞、内皮細胞、活性化Ｔ細胞、および樹状細胞などの無傷の全細胞；あるいは、天然に存在するかまたは合成のその他の分子、例えばβ２－ミクログロブリンと複合体化する精製ＭＨＣクラスＩ分子などであってよい。多くの種類の細胞は、Ｔ細胞認識のために、それらの細胞表面に抗原を提示する能力があり得るが、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答のためにナイーブＴ細胞を活性化するのに有効な量の抗原を提示する能力を有するのは樹状細胞のみである。

【0076】

用語「培養」とは、適切な培地での細胞のインビトロ維持、分化、および／または増殖を指す。「濃縮された」とは、全細胞に対して、生物内に存在する組織において見られるよりも大きな割合で存在する細胞を含む組成物を意味する。

【0077】

「抗癌」剤は、例えば、癌細胞の死滅を促進する、癌細胞においてアポトーシスを誘発する、癌細胞の増殖速度を低下させる、転移の発生率または数を低下させる、腫瘍サイズを縮小する、腫瘍増殖を抑制する、腫瘍または癌細胞への血液供給を減少させる、癌細胞または腫瘍に対する免疫応答を促進する、癌の進行を防ぐまたは抑制する、または癌を有する被験体の寿命を延ばすことによって、被験体において癌細胞／腫瘍に悪影響を及ぼすことができる。

【0078】

本明細書において使用される場合、用語「自殺遺伝子」は、死滅のために細胞を選択的に標的化するために使用され得る遺伝子として規定される。

【0079】

ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）が特定の割合（例えば、８０％、８５％、９０％、または９５％）の「配列同一性」または「相同性」をもう一つの配列に対して有するということは、アラインさせると、２つの配列を比較する際に、その塩基（またはアミノ酸）の割合が同じになることを意味する。このアライメントおよび相同性パーセントまたは配列同一性パーセントは、当技術分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ
ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，ｓｅｃｔｉｏｎ ７．７．１８，Ｔａｂｌｅ ７．７．１．に記載されているものを使用して決定することができる。好ましくは、デフォルトパラメータをアライメントに使用する。好ましいアライメントプログラムは、ＢＬＡＳＴであり、デフォルトパラメータを使用する。特に、好ましいプログラムは、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰであり、以下のデフォルトパラメータを使用する：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０配列；ソート＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ＧＥＮＢＡＮＫ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧＥＮＢＡＮＫ ＣＤＳ翻訳＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。

【0080】

本明細書において使用される場合、用語「切断型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）」とは、全長タンパク質またはタンパク質のドメインよりも短いタンパク質の断片またはタンパク質のドメインを指す。トランケーションは、全長配列の１またはそれを超えるアミノ酸、例えば５、１０、１５、２０、２５、３０またはそれを超えるアミノ酸の除去によるものであり得る。
ＩＩ．免疫細胞

【0081】

本開示の特定の実施形態は、Ｅｖ３をＣＡＲのヒンジとして、かつ／またはヒト化ｓｃＦｖをｃＡＲの抗原結合ドメインとして用いてＣＡＲを発現する免疫細胞に関する。免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、またはγδＴ細胞）、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳＣ）細胞）であってよい。一部の実施形態では、細胞は、単球または顆粒球、例えば、骨髄系細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、および／または好塩基球である。本明細書では、免疫細胞を産生および操作する方法、ならびに養子細胞療法のために細胞を使用および投与する方法も提供され、その場合、細胞は自己または同種であり得る。従って、免疫細胞は、癌細胞を標的にするためなどの免疫療法として使用することができる。

【0082】

免疫細胞は、被験体、特にヒト被験体から単離されたものであり得る。免疫細胞は、関心対象の被験体、例えば特定の疾患または症状を有する疑いのある被験体、特定の疾患または症状の素因を有する疑いのある被験体、または特定の疾患または症状の治療を受けている被験体などから得ることができる。免疫細胞は、被験体に存在する任意の場所から収集することができ、それには、限定されるものではないが、血液、臍帯血、脾臓、胸腺、リンパ節、および骨髄が含まれる。単離された免疫細胞は、直接使用してもよいし、凍結などによって一定期間保存してもよい。

【0083】

免疫細胞は、それらが存在する組織から濃縮／精製されてよく、それには、限定されるものではないが、血液（血液バンクまたは臍帯血バンクによって収集された血液を含む）、脾臓、骨髄、外科手術中に除去および／または曝露された組織、ならびに生検手順によって得られた組織が含まれる。免疫細胞が濃縮、単離、および／または精製される組織／器官は、生体および非生体の被験体から単離されてよく、非生体被験体は臓器提供者である。特定の実施形態では、免疫細胞は、血液、例えば末梢血または臍帯血などから単離される。一部の態様では、臍帯血から単離された免疫細胞は、ＣＤ４陽性またはＣＤ８陽性Ｔ細胞の抑制によって測定されるような免疫調節能力が強化されている。特定の態様では、免疫細胞は、強化された免疫調節能力のために、プールされた血液、特にプールされた臍帯血から単離される。プールされた血液は、２またはそれを超える供給源、例えば３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える供給源（例えば、ドナー被験体）などに由来してよい。

【0084】

免疫細胞の集団は、治療を必要とする被験体、または免疫細胞活性の低下に関連する疾患に罹患している被験体から得ることができる。従って、細胞は、治療を必要とする被験体にとって自己となる。あるいは、免疫細胞の集団は、ドナー、好ましくは組織適合性が一致したドナーから得ることができる。免疫細胞集団は、末梢血、臍帯血、骨髄、脾臓、または免疫細胞が前記被験体またはドナーに存在するその他の器官／組織から収集することができる。免疫細胞は、被験体および／またはドナーのプール、例えばプールされた臍帯血などから単離することができる。

【0085】

免疫細胞の集団が被験体とは異なるドナーから得られる場合、得られた細胞は、被験体に導入することができるという点で被験体適合性であるという条件で、ドナーは同種であることが好ましい。同種ドナー細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合性であってもなくてもよい。
Ａ．Ｔ細胞

【0086】

一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。機能性抗腫瘍エフェクター細胞の誘導、活性化、および増殖のためのいくつかの基本的なアプローチは、この２０年間に記載されている。これらには、自己細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）など；自己ＤＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体で被覆したビーズを使用してエクスビボで活性化させたＴ細胞、または標的細胞膜の捕捉によって単離された細胞；抗宿主腫瘍Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を自然に発現する同種細胞；および「Ｔボディ」として公知の抗体様腫瘍認識能力を示す腫瘍反応性ＴＣＲまたはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝的に再プログラムまたは「リダイレクト」された非腫瘍特異的自己または同種細胞が含まれる。これらのアプローチは、本明細書に記載される方法で使用され得るＴ細胞の調製および免疫化のための多数のプロトコルを生み出した。

【0087】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ、臍帯、またはリンパ器官に由来する。一部の態様では、細胞はヒト細胞である。細胞は、一般に初代細胞、例えば被験体から直接単離された細胞および／または被験体から単離されて凍結された細胞などである。一部の実施形態では、細胞には、Ｔ細胞の１またはそれを超えるサブセットまたはその他の細胞型、例えばＴ細胞集団全体、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、およびそれらの亜集団など、例えば機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、増殖、再循環、局在性、および／または持続能、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官または区画での存在、マーカーまたはサイトカイン分泌プロファイル、および／または分化の程度によって定義される細胞などが含まれる。処置される被験体に関して、細胞は同種および／または自己であり得る。一部の態様、例えば既製技術などでは、細胞は多能性および／または万能性であり、例えば人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞などである。一部の実施形態では、この方法には、本明細書に記載されるように、被験体から細胞を単離し、それらを調製、処理、培養、および／または操作し、凍結保存の前後に同じ患者にそれらを再導入することが含まれる。

【0088】

Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^＋および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）のサブタイプおよび亜集団には、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、エフェクターＴ細胞（Ｔ_ＥＦＦ）、メモリーＴ細胞およびそのサブタイプ、例えば幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣ_Ｍ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣ_Ｍ）、エフェクターメモリーＴ（Ｔ_ＥＭ）、または最終分化エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然および適応制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えばＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、α／βＴ細胞、およびδ／γＴ細胞がある。

【0089】

一部の実施形態では、１またはそれを超えるＴ細胞集団は、表面マーカーなどの特定のマーカーに陽性の細胞、または特定のマーカーに陰性の細胞が濃縮されているかまたは枯渇している。場合によっては、そのようなマーカーは、Ｔ細胞の特定の集団（例えば、非メモリー細胞）では存在しないかまたは比較的低いレベルで発現するが、Ｔ細胞の特定の他の集団（例えば、メモリー細胞）では存在するかまたは比較的高いレベルで発現するマーカーである。

【0090】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞、例えばＢ細胞、単球、またはＣＤ１４などの他の白血球細胞などで発現するマーカーのネガティブ選択によりＰＢＭＣ試料から分離される。一部の態様では、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋選択ステップを使用してＣＤ４^＋ヘルパーおよびＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離する。そのようなＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋集団は、１またはそれを超えるナイーブ、メモリー、および／またはエフェクターＴ細胞亜集団で発現するかまたは比較的高度に発現するマーカーのポジティブまたはネガティブ選択によって亜集団にさらに選別され得る。

【0091】

一部の実施形態では、ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、例えばそれぞれの亜集団に関連する表面抗原に基づくポジティブまたはネガティブ選択などにより、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮または枯渇される一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞の濃縮は、有効性を高めるため、例えば投与後の長期生存、増殖、および／または生着を改善するために実行される。これは一部の態様ではそのような亜集団において特に堅牢である。

【0092】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。この方法では、腫瘍試料は患者から得られ、単細胞懸濁液が得られる。単細胞懸濁液は、任意の適切な方法で例えば機械的に（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、Ｃａｌｉｆ．のｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）解離装置を使用して腫瘍を脱凝集させる）または酵素的に（例えばコラゲナーゼまたはＤＮアーゼで）得ることができる。腫瘍の酵素消化物の単細胞懸濁液はインターロイキン－２（ＩＬ－２）で培養される。

【0093】

培養したＴ細胞は、プールし、急速に増殖することができる。急速増殖は、約１０～約１４日間の期間にわたって、抗原特異的Ｔ細胞の数の少なくとも約５０倍の（例えば、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍の、またはそれを超える）増加をもたらす。より好ましくは、急速増殖は、約１０～約１４日間の期間にわたって、少なくとも約２００倍の（例えば、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍の、またはそれを超える）増加をもたらす。

【0094】

増殖は、当技術分野で公知のいくつかの方法のいずれかによって達成することができる。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球およびインターロイキン－２（ＩＬ－２）かインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のいずれかの存在下で非特異的Ｔ細胞受容体刺激を用いて急速増殖させることができ、ＩＬ－２が好ましい。非特異的Ｔ細胞受容体刺激には、およそ３０ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標），Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．から入手可能）が含まれ得る。あるいは、Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖因子、例えば３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５（ＩＬ－２が好ましい）の存在下で、必要に応じてベクターから発現させることができる癌の１またはそれを超える抗原（その抗原性部分、例えば１または複数のエピトープ、または細胞を含む）、例えばヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチドによるインビトロでの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の刺激によって急速増殖させることができる。インビトロで誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現する抗原提示細胞にパルスされた癌の同じ１または複数の抗原による再刺激によって急速増殖する。あるいは、例えば、照射自己リンパ球または照射ＨＬＡ－Ａ２^＋同種リンパ球およびＩＬ－２でＴ細胞を再刺激することができる。

【0095】

自己Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞の成長および活性化を促進するＴ細胞増殖因子を発現するように改変することができる。適切なＴ細胞増殖因子としては、例えば、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、およびＩＬ－１２が挙げられる。適切な改変方法は当技術分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３^ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。特定の態様では、改変された自己Ｔ細胞はＴ細胞増殖因子を高レベルで発現する。Ｔ細胞増殖因子コード配列、例えばＩＬ－１２のコード配列などは、Ｔ細胞成長因子コード配列への作動可能な結合が高レベルの発現を促進するプロモーターと同様に、当技術分野で容易に入手可能である。
Ｂ．ＮＫ細胞

【0096】

一部の実施形態では、免疫細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。ＮＫ細胞は、多様な腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、ならびに骨髄および胸腺の一部の正常細胞に対して自発的な細胞傷害性を有するリンパ球の亜集団である。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺、および胸腺で分化および成熟する。ＮＫ細胞は、ヒトのＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＣＤ８などの特定の表面マーカーによって検出することができる。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原受容体、ｐａｎＴマーカーＣＤ３、または表面免疫グロブリンＢ細胞受容体を発現しない。

【0097】

特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、当技術分野で周知の方法によってヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、未刺激白血球除去製品（ＰＢＳＣ）、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣｓ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣｓ）、骨髄、または臍帯血から誘導される。特に、臍帯ＣＢがＮＫ細胞を誘導するために使用される。特定の態様では、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞のエクスビボでの増殖について以前に記載された方法によって単離され増殖される（Ｓｐａｎｈｏｌｔｚら、２０１１；Ｓｈａｈら、２０１３）。この方法では、ＣＢ単核細胞をフィコール密度勾配遠心分離によって分離し、バイオリアクターでＩＬ－２および人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに培養する。７日後、細胞培養からＣＤ３を発現している細胞を全て除去し、さらに７日間再培養する。細胞は再びＣＤ３が枯渇し、ＣＤ５６^＋／ＣＤ３^－細胞またはＮＫ細胞の割合を決定するために特徴付けられる。他の方法では、臍帯ＣＢは、ＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２を含む培地で培養することによって、ＣＤ３４^＋細胞の単離およびＣＤ５６^＋／ＣＤ３^－細胞への分化によりＮＫ細胞を誘導するために使用される。
Ｃ．幹細胞

【0098】

一部の実施形態では、本開示の免疫細胞は、幹細胞、例えば人工多能性幹細胞（ＰＳＣ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、または造血幹細胞（ＨＳＣ）であってよい。

【0099】

本明細書において使用される多能性幹細胞は、一般にｉＰＳ細胞またはｉＰＳＣと略される人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞であってよい。生殖細胞を除いて、どの細胞もｉＰＳＣの出発点として使用することができる。例えば、細胞型は、ケラチノサイト、線維芽細胞、造血細胞、間葉系細胞、肝細胞、または胃細胞であり得る。細胞の分化の程度や、細胞が収集される動物の年齢に制限はない；未分化前駆細胞（体性幹細胞を含む）および最終的に分化した成熟細胞でさえ、本明細書に開示される方法において体細胞の供給源として使用することができる。

【0100】

当業者に公知の方法を使用して、体細胞を再プログラムしてｉＰＳ細胞を産生することができる。一般に、核再プログラム因子を使用して体細胞から多能性幹細胞を生成する。一部の実施形態では、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇ、およびＬｉｎ２８のうちの少なくとも３つ、または少なくとも４つが使用される。他の実施形態では、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－ＭｙｃおよびＫｌｆ４が使用されるか、またはＯｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇ、およびＬｉｎ２８が使用される。

【0101】

いったん誘導されると、ｉＰＳＣは多能性を維持するのに十分な培地で培養され得る。特定の実施形態では、規定されていない条件を使用してもよい；例えば、幹細胞を未分化状態に維持するために、線維芽細胞フィーダー細胞でまたは線維芽細胞フィーダー細胞にさらされた培地で多能性細胞を培養することができる。一部の実施形態では、細胞は、フィーダー細胞として、細胞分裂を終わらせるために放射線または抗生物質で処理したマウス胚線維芽細胞の共存下で培養される。あるいは、多能性細胞は、ＴＥＳＲ（商標）培地またはＥ８（商標）／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ８（商標）培地などの規定のフィーダー非依存培養系を用いて、本質的に未分化状態で培養および維持することができる。
ＩＩＩ．強化されたキメラ抗原受容体
Ａ．切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）

【0102】

特定の実施形態では、本開示は、抗原結合領域を１または複数の細胞内シグナル伝達ドメインに共有結合させることにより、ＣＡＲのヒンジまたはストーク領域としてＥｖ３を含む強化されたＣＡＲを提供する。抗原結合領域は、マウス抗ヒト抗体などの抗体に由来する抗抗原結合ドメインに由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含み得る。ｓｃＦｖはどんな潜在的抗原も標的化することができる。ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖのフレームワーク領域などでヒト化されていてもよい。特定の態様では、検出抗体または除去抗体への接近しやすさ（例えば、ＡＤＣＣ経由）は維持される。

【0103】

Ｅｖ３は、配列番号２、

【化2】

（部分ドメイン１－部分ドメイン２－ドメイン３－ドメイン４を含む）を含むか、あるいは、配列番号２に対して少なくとも８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有することがある。特定の態様では、Ｅｖ３には１、２、３、またはそれを超える変更があることがある。

【0104】

一実施形態では、マウス抗ヒトＣＤ１９モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＣＤ１９Ｅｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＣＤ１９Ｅｖ３－ＣＡＲは、ｈＣＤ１９Ｅｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化ＣＤ１９（ｈＣＤ１９）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＣＤ１９Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＣＤ１９Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0105】

一実施形態では、マウス抗ヒトＣＤ１２３モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＣＤ１２３Ｅｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＣＤ１２３Ｅｖ３－ＣＡＲは、ｈＣＤ１２３Ｅｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化ＣＤ１２３（ｈＣＤ１２３）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＣＤ１２３Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＣＤ１２３Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0106】

一実施形態では、マウス抗ヒトメソテリンモノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＭｅｓｏＥｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＭｅｓｏＥｖ３－ＣＡＲは、ｈＭｅｓｏＥｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化Ｍｅｓｏ（ｈＭｅｓｏ）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＭｅｓｏＥｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＭｅｓｏＥｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0107】

一実施形態では、マウス抗ヒトＲＯＲ１モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＲＯＲ１－Ｅｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＲＯＲ１－Ｅｖ３－ＣＡＲは、ｈＲＯＲ１Ｅｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化ＲＯＲ１（ｈＲＯＲ１）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＲＯＲ１－Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＲＯＲ１－Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0108】

一実施形態では、マウス抗ヒトＣＤ５モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＣＤ５Ｅｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＣＤ５Ｅｖ３－ＣＡＲは、ｈＣＤ５Ｅｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化ＣＤ５（ｈＣＤ５）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＣＤ５Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＣＤ５Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0109】

一実施形態では、マウス抗ヒトＣＤ９９モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖ、膜貫通ドメインを含むＥｖ３ヒンジ、ＣＤ２８エンドドメイン、およびＣＤ３ζエンドドメインをＮ末端からＣ末端まで含むＣＤ９９Ｅｖ３－ＣＡＲが提供される。もう一つの実施形態では、ＣＤ５Ｅｖ３－ＣＡＲは、ｈＣＤ９９Ｅｖ３－ＣＡＲと呼ばれるヒト化ＣＤ９９（ｈＣＤ９９）を含む。ＣＡＲは、ＤＡＰ１２エンドドメインをＥｖ３膜貫通ドメインとＣＤ３ζエンドドメインとの間などにさらに含むことができる（ＣＤ９９Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲまたはｈＣＤ９９Ｅｖ３ＤＡＰ１２－ＣＡＲなど）。

【0110】

ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２～７の突然変異の結果である。それにより、受容体には完全なリガンド結合ドメインがないので、突然変異受容体は既知のリガンドと結合することができなくなる。本開示の切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｅｖ３は、ＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞内ドメインまたはエンドドメインの欠失をさらに含む。従って、Ｅｖ３は、機能性ＥＧＦ結合ドメインまたはＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。

【0111】

Ｅｖ３ヒンジは、配列番号１および／または配列番号２のアミノ酸配列のヌクレオチド配列を含み得る。特定の実施形態では、Ｅｖ３ヒンジは、配列番号１または配列番号２と少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の配列同一性を有する。Ｅｖ３ヒンジ領域は、配列番号２の断片を含んでよく、または受容体断片のＮ末端またはＣ末端に追加のアミノ酸を含んでもよい。Ｅｖ３の例となる模式図は図２に示される。

【0112】

切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩをＣＡＲのヒンジ領域に含めると、遺伝子積荷の保持が可能になる。Ｅｖ３は、安全スイッチおよび／またはインビトロまたはインビボでのＣＡＲの検出にも使用することができる。一体化したＥｖ４ヒンジは、検出または細胞除去のために、臨床的にアクセス可能なモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）などの抗体によって認識されることができる。その上、Ｅｖ３は、リガンド結合ドメインを含まない；従って、内因性機能または他の経路とのクロストークはない。Ｅｖ３は、ＣＡＲシグナル伝達にも役割を果たし、腫瘍特異的であり、ＣＡＲ療法の副作用を最小限に抑えることができる。
Ｂ．抗原

【0113】

本明細書で提供されるＣＡＲは、疾患または障害の処置において有用な抗原特異性を有し得る。本明細書で提供されるＣＡＲは、１を超える抗原、例えば２つの抗原などを含み得る。例となる抗原としては、限定されるものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、メソテリン、ＣＤ５、ＣＤ４７、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＣＤ９９、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＣＳ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＲＯＲ－１、ＣＤ９９、メソテリン、またはＢＣＭＡが挙げられる。

【0114】

本明細書で提供されるヒト化プラットフォームは、任意の所与抗原に対するヒト化ＣＡＲの開発に使用され得る。ヒト化ＣＡＲを伴う、例となる抗原としては、限定されるものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、メソテリン、ＣＤ５、ＣＤ４７、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＣＤ９９、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＣＳ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＲＯＲ－１、またはＢＣＭＡが挙げられる。

【0115】

一実施形態では、コードされた軽鎖可変領域は、ヒトＰＨ０８７９生殖系列配列の１、２、３または４つ全てのフレームワーク領域を含む。ｈＣＤ１９のコードされた重鎖可変領域は、ヒトＡＣＤ４３４４２生殖系列配列の１、２、３または４つ全てのフレームワーク領域を含み得る。

【0116】

一実施形態では、コードされた抗原結合ドメインは、配列番号６、１２、１８、２４、３０、５８または６１のアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態では、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、本明細書に提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２または３の改変（例えば、置換）であるが１０、２０または３０を超えない改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、または配列番号７、１３、１９、２５、３１、５９または６３のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域；ならびに／あるいは配列番号：８、１４、２０、２６、３２、６０または６４の重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１、２または３の改変（例えば、置換）であるが１０、２０または３０を超えない改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；あるいは配列番号６、１２、１８、２４、３０、５８または６１のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含む。

【0117】

一部の実施形態では、ＣＤ１９のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＣＤ１９（ｈＣＤ１９）ｓｃＦｖは、配列番号７

【化3】

の可変軽鎖配列および配列番号８

【化4】

の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖのＶ_Ｌは、配列番号４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ１９ ｓｃＦｖのＶ_Ｈは、配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0118】

一部の実施形態では、ＣＤ１２３のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＣＤ１２３（ｈＣＤ１２３）ｓｃＦｖは、配列番号１３の可変軽鎖配列と配列番号１４の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＣＤ１２３ ｓｃＦｖは、配列番号１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号１４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＣＤ１２３ ｓｃＦｖは、配列番号１２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＣＤ１２３ ｓｃＦｖは、配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ１２３ ｓｃＦｖのＶ_Ｌは、配列番号１０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ１２３ ｓｃＦｖのＶ_Ｈは、配列番号１１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0119】

一部の実施形態では、メソテリンのヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化メソテリン（ｈＭｅｓｏ）ｓｃＦｖは、配列番号１９の可変軽鎖配列と配列番号２０の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＭｅｓｏ ｓｃＦｖは、配列番号１９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号２０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＭｅｓｏ ｓｃＦｖは、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＭｅｓｏ ｓｃＦｖは、配列番号１５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＭｅｓｏ ｓｃＦｖのＶ_Ｌは、配列番号１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＭｅｓｏ ｓｃＦｖのＶ_Ｈは、配列番号１７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0120】

一部の実施形態では、ＲＯＲ１のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＲＯＲ１（ｈＲＯＲ１）ｓｃＦｖは、配列番号２５の可変軽鎖配列と配列番号２６の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＲＯＲ１ ｓｃＦｖは、配列番号２５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号２６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＲＯＲ１ ｓｃＦｖは、配列番号２４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＲＯＲ１ ｓｃＦｖは、配列番号２１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＲＯＲ１ ｓｃＦｖのＶ_Ｌは、配列番号２２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＲＯＲ１ ｓｃＦｖのＶ_Ｈは、配列番号２３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0121】

一部の実施形態では、ＣＤ５のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＣＤ５（ｈＣＤ５）ｓｃＦｖは、配列番号３１の可変軽鎖配列と配列番号３２の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＣＤ５ ｓｃＦｖは、配列番号３１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号３２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＣＤ５ ｓｃＦｖは、配列番号３０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＣＤ５ ｓｃＦｖは、配列番号２７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ５
ｓｃＦｖのＶ_Ｌは、配列番号２８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。ｈＣＤ５ ｓｃＦｖのＶ_Ｈは、配列番号２９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0122】

一部の実施形態では、ＣＤ９９のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＣＤ９９（ｈＣＤ９９）ｓｃＦｖは、配列番号６３の可変軽鎖配列と配列番号６４の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号６３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号６４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号６１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号６１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0123】

一部の実施形態では、ＣＤ９９のヒト化ｓｃＦｖが本明細書で提供される。ヒト化ＣＤ９９（ｈＣＤ９９）ｓｃＦｖは、配列番号５９の可変軽鎖配列と配列番号６０の可変重鎖を有し得る。その他の態様では、ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号５９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｌおよび／または配列番号６０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶ_Ｈを含み得る。ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号５８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ｈＣＤ９９ ｓｃＦｖは、配列番号５７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされていてよい。

【0124】

遺伝子操作された抗原受容体の標的とされる抗原の中には、養子細胞療法を介して標的となる疾患、状態、または細胞型の状況で発現する抗原がある。疾患および状態の中には、増殖性、腫瘍性、および悪性の疾患および障害があり、それには、血液癌、免疫系の癌、例えばリンパ腫、白血病、および／または骨髄腫、例えばＢ、Ｔ、および骨髄性白血病、リンパ腫、ならびに多発性骨髄腫を含む癌および腫瘍が含まれる。一部の実施形態では、抗原は、正常または非標的細胞または組織、自己免疫または同種免疫障害に関連する抗原、または病原体特異的抗原と比較して、疾患または状態の細胞、例えば腫瘍または病原細胞で選択的に発現または過剰発現する。その他の実施形態では、抗原は正常細胞で発現し、かつ／または操作された細胞で発現する。

【0125】

任意の適切な抗原が本発明の方法に使用されてよい。例となる抗原としては、限定されるものではないが、感染病原体、自己（ａｕｔｏ－／ｓｅｌｆ－）抗原、腫瘍／癌関連抗原、および腫瘍新抗原からの抗原分子が挙げられる。特定の態様では、抗原には、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｕｃ－１、Ｈｅｒ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ－１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、およびＣＥＡが含まれる。

【0126】

腫瘍関連抗原は、前立腺、乳房、結腸直腸、肺、膵臓、腎臓、中皮腫、卵巣、またはメラノーマの癌に由来し得る。例となる腫瘍関連抗原または腫瘍細胞由来抗原としては、ＭＡＧＥ１、３、およびＭＡＧＥ４；ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ ＥＳＯ １としても公知）；ＳＡＧＥ；およびＨＡＧＥまたはＧＡＧＥが挙げられる。腫瘍抗原のこれらの限定されない例は、メラノーマ、肺癌腫、肉腫、および膀胱癌腫などの広範な腫瘍型で発現している。前立腺癌腫瘍関連抗原としては、例えば、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸ホスファターゼ、ＮＫＸ３．１、および前立腺の６回膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）が挙げられる。

【0127】

その他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ－１、ＨＡＳＨ－１、ＨａｓＨ－２、ＣｒｉｐｔｏおよびＣｒｉｐｔｉｎが含まれる。さらに、腫瘍抗原は、自己ペプチドホルモン、例えば多くの癌の処置に有用な短い１０アミノ酸長ペプチドである全長性腺刺激ホルモン放出ホルモンなどであってよい。

【0128】

腫瘍抗原には、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ発現などの腫瘍関連抗原発現を特徴とする癌由来の腫瘍抗原が含まれる。関心対象の腫瘍関連抗原には、メラノサイト－メラノーマ系列抗原ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ－７、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質などの系列特異的腫瘍抗原が含まれる。実例となる腫瘍関連抗原としては、限定されるものではないが、１またはそれを超える、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ－Ｍｙｃ、細胞質セリン／トレオニンキナーゼ（例えば、Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ、Ｃ－Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＲＴ－１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、－１０、ＧＡＧＥ－１、－２、－８、ＧＡＧＥ－３、－４、－５、－６、－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＭＡＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ－ａｂｌ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体チロシンキナーゼ（例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）（特に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、細胞質チロシンキナーゼ（例えば、ｓｒｃ－ファミリー、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、転写のシグナルトランスデューサーおよび活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴＳ、およびＳＴＡＴＥ、低酸素誘導因子（例えば、ＨＩＦ－１およびＨＩＦ－２）、核内因子カッパＢ（ＮＦ－Ｂ）、Ｎｏｔｃｈ受容体（例えば、Ｎｏｔｃｈ１－４）、ｃ－Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、およびそれらの調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ－３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌腫－５Ｔ４、ＳＭ２２－α、炭酸脱水酵素Ｉ（ＣＡＩ）およびＩＸ（ＣＡＩＸ）（Ｇ２５０としても公知）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソセリアン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｎ）、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧｓＳ、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＦＡＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ｆｏｓ関連抗原１、ＣＢＸ２、ＣＬＤＮ６、ＳＰＡＮＸ、ＴＰＴＥ、ＡＣＴＬ８、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＡＤ２Ｌ１、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＳＵＮＣ１、ＬＲＲＮ１およびイディオタイプに由来するかまたはそれを含む腫瘍抗原が挙げられる。

【0129】

抗原には、腫瘍細胞で変異した遺伝子、または正常細胞と比較して腫瘍細胞で異なるレベルで転写された遺伝子に由来するエピトープ領域またはエピトープペプチド、例えば、テロメラーゼ酵素、サバイビン、メソテリン、変異ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再配列、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異または野生型ｐ５３、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１、およびＮ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ－Ｖなどの異常発現イントロン配列など；骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫で特有のイディオタイプを生成する免疫グロブリン遺伝子のクローン再編成；ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６およびＥ７などの腫瘍ウイルスプロセスに由来するエピトープ領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原；エプスタインバーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的発現を伴う非変異癌胎児性タンパク質、例えば癌胎児性抗原およびαフェトプロテインなどが含まれ得る。

【0130】

その他の実施形態では、抗原は、ウイルス、真菌、寄生虫、および細菌などの病原性微生物または日和見病原性微生物（本明細書では感染症微生物とも呼ばれる）から入手または誘導される。特定の実施形態では、そのような微生物に由来する抗原には、全長タンパク質が含まれる。

【0131】

その抗原が本明細書に記載の方法での使用に企図される実例となる病原生物には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂ、およびＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルスおよびＪＣウイルス）、アデノウイルス、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）を含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属の種、および肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の種が含まれる。当業者に理解されるように、本明細書に記載される抗原として使用するこれらおよび他の病原性微生物に由来するタンパク質、およびこのタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、出版物およびＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）、ＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などの公共データベースで特定することができる。

【0132】

ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来する抗原には、ＨＩＶビリオン構造タンパク質（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ｐ１７、ｐ２４）、プロテアーゼ、逆転写酵素、またはｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｒおよびｖｐｕにコードされるＨＩＶタンパク質が含まれる。

【0133】

単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２）に由来する抗原としては、限定されるものではないが、ＨＳＶ後期遺伝子から発現するタンパク質が挙げられる。後期の遺伝子群は、主にビリオン粒子を形成するタンパク質をコードする。そのようなタンパク質には、ウイルスカプシドを形成する（ＵＬ）５つのタンパク質：ＵＬ６、ＵＬ１８、ＵＬ３５、ＵＬ３８および主要なカプシドタンパク質ＵＬ１９、ＵＬ４５、およびＵＬ２７が含まれる。これらはそれぞれ本明細書に記載される抗原として使用することができる。本明細書に記載される抗原としての使用が企図されるその他の実例となるＨＳＶタンパク質には、ＩＣＰ２７（Ｈ１、Ｈ２）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）および糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タンパク質が含まれる。ＨＳＶゲノムは少なくとも７４個の遺伝子を含み、それぞれが潜在的に抗原として使用され得るタンパク質をコードしている。

【0134】

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する抗原には、ＣＭＶ構造タンパク質、ウイルス複製の前初期および初期段階で発現するウイルス抗原、糖タンパク質ＩおよびＩＩＩ、カプシドタンパク質、コートタンパク質、低マトリックスタンパク質ｐｐ６５（ｐｐＵＬ８３）、ｐ５２（ｐｐＵＬ４４）、ＩＥ１および１Ｅ２（ＵＬ１２３およびＵＬ１２２）、ＵＬ１２８－ＵＬ１５０の遺伝子クラスターからのタンパク質産物（Ｒｙｋｍａｎら、２００６）、エンベロープ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、ｇＨ、ｇＮ、およびｐｐ１５０が含まれる。当業者に理解されるように、本明細書に記載される抗原として使用するためのＣＭＶタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）、およびＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などの公共データベースで特定されてよい。

【0135】

特定の実施形態での使用が企図されるＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｎウイルス（ＥＢＶ）に由来する抗原には、ＥＢＶ溶解タンパク質ｇｐ３５０およびｇｐ１１０、Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｎ核抗原（ＥＢＮＡ）－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡ－リーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ）および潜伏膜タンパク質（ＬＭＰ）－１、ＬＭＰ－２ＡおよびＬＭＰ－２Ｂを含む潜伏周期感染中に産生されるＥＢＶタンパク質が含まれる。

【0136】

本明細書での使用が企図される呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に由来する抗原には、ＲＳＶゲノムによってコードされる１１のタンパク質、またはその抗原断片：ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ（ヌクレオカプシドタンパク質）、Ｍ（マトリックスタンパク質）ＳＨ、ＧおよびＦ（ウイルスコートタンパク質）、Ｍ２（第２のマトリックスタンパク質）、Ｍ２－１（伸長因子）、Ｍ２－２（転写調節）、ＲＮＡポリメラーゼ、およびリンタンパク質Ｐが含まれる。

【0137】

使用が企図される水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に由来する抗原には、ＶＳＶゲノムによってコードされる５つの主要なタンパク質、およびその抗原断片：巨大タンパク質（Ｌ）、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）、およびマトリックスタンパク質（Ｍ）のいずれか１つが含まれる。

【0138】

特定の実施形態での使用が企図されるインフルエンザウイルスに由来する抗原には、血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ１－Ｆ２、およびＰＢ２が含まれる。

【0139】

例となるウイルス抗原には、限定されるものではないが、アデノウイルスポリペプチド、アルファウイルスポリペプチド、カリシウイルスポリペプチド（例えば、カリシウイルスカプシド抗原）、コロナウイルスポリペプチド、ジステンパーウイルスポリペプチド、エボラウイルスポリペプチド、エンテロウイルスポリペプチド、フラビウイルスポリペプチド、肝炎ウイルス（ＡＥ）ポリペプチド（Ｂ型肝炎コアまたは表面抗原、Ｃ型肝炎ウイルスＥ１またはＥ２糖タンパク質、コア、または非構造タンパク質）、ヘルペスウイルスポリペプチド（単純ヘルペスウイルスまたは水痘帯状疱疹ウイルス糖タンパク質を含む）、感染性腹膜炎ウイルスポリペプチド、白血病ウイルスポリペプチド、マールブルグウイルスポリペプチド、オルトミクソウイルスポリペプチド、パピローマウイルスポリペプチド、パラインフルエンザウイルスポリペプチド（例えば、血球凝集素およびノイラミニダーゼポリペプチド）、パラミクソウイルスポリペプチド、パルボウイルスポリペプチド、ペスチウイルスポリペプチド、ピコルナウイルスポリペプチド（例えば、ポリオウイルスカプシドポリペプチド）、ポックスウイルスポリペプチド（例えば、ワクシニアウイルスポリペプチド）、狂犬病ウイルスポリペプチド（例えば、狂犬病ウイルス糖タンパク質Ｇ）、レオウイルスポリペプチド、レトロウイルスポリペプチド、およびロタウイルスポリペプチドも含まれる。

【0140】

特定の実施形態では、抗原は細菌抗原であってよい。特定の実施形態では、関心対象の細菌抗原は、分泌ポリペプチドであってよい。その他の特定の実施形態では、細菌抗原には、細菌の外側細胞表面に露出したポリペプチドの一部または複数の部分を有する抗原が含まれる。

【0141】

使用が企図されるメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）をはじめとするＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属の種に由来する抗原には、毒性調節因子、例えばＡｇｒ系、ＳａｒおよびＳａｅ、Ａｒｌ系、Ｓａｒホモログ（Ｒｏｔ、ＭｇｒＡ、ＳａｒＳ、ＳａｒＲ、ＳａｒＴ、ＳａｒＵ、ＳａｒＶ、ＳａｒＸ、ＳａｒＺおよびＴｃａＲ）、Ｓｒｒ系およびＴＲＡＰなどが含まれる。抗原として機能し得るその他のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓタンパク質には、Ｃｌｐタンパク質、ＨｔｒＡ、ＭｓｒＲ、アコニターゼ、ＣｃｐＡ、ＳｖｒＡ、Ｍｓａ、ＣｆｖＡおよびＣｆｖＢが含まれる（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００８ Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｅｄ．Ｊｏｄｉ Ｌｉｎｄｓａｙを参照）。黄色ブドウ球菌の２つの種（Ｎ３１５およびＭｕ５０）のゲノムが配列決定されており、例えばＰＡＴＲＩＣ（ＰＡＴＲＩＣ：Ｔｈｅ ＶＢＩ ＰａｔｈｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｎｙｄｅｒら、２００７）で公開されている。当業者に理解されるように、抗原として使用するためのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓタンパク質も、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）、およびＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などのその他の公共データベースで特定されてよい。

【0142】

本明細書に記載される特定の実施形態での使用が企図されるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来する抗原には、ニューモリシン、ＰｓｐＡ、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）、ＮａｎＡ、ＮａｎＢ、ＳｐｎＨＬ、ＰａｖＡ、ＬｙｔＡ、Ｐｈｔ、およびピリンタンパク質（ＲｒｇＡ；ＲｒｇＢ；ＲｒｇＣ）が含まれる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの抗原タンパク質も当技術分野で公知であり、一部の実施形態では抗原として使用することができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの毒性株の完全なゲノム配列は配列決定されており、当業者に理解されるように、本明細書で使用するＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質も、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）、およびＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などのその他の公共データベースで特定されてよい。本開示による抗原の特に関心対象であるタンパク質には、肺炎球菌の表面で露出すると予測される病原性因子およびタンパク質が含まれる。

【0143】

抗原として使用され得る細菌抗原の例としては、限定されるものではないが、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓポリペプチド、Ｂａｃｉｌｌｕｓポリペプチド、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓポリペプチド、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａポリペプチド、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａポリペプチド、Ｂｏｒｒｅｌｉａポリペプチド（例えば、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ ＯｓｐＡ）、Ｂｒｕｃｅｌｌａポリペプチド、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒポリペプチド、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａポリペプチド、Ｃｈｌａｍｙｄｉａポリペプチド、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍポリペプチド、Ｃｏｘｉｅｌｌａポリペプチド、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｉｌｕｓポリペプチド、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａポリペプチド、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａポリペプチド、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａポリペプチド、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍポリペプチド、Ｈａｅｍｏｂａｒｔｏｎｅｌｌａポリペプチド、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓポリペプチド（例えば、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型外膜タンパク質）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒポリペプチド、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａポリペプチド、Ｌ型細菌ポリペプチド、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａポリペプチド、Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチド、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａポリペプチド、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａポリペプチド、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａポリペプチド、Ｎｅｏｒｉｃｋｅｔｔｓｉａポリペプチド、Ｎｏｃａｒｄｉａポリペプチド、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａポリペプチド、Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド（すなわちＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅポリペプチド）（本明細書の記載を参照）、Ｐｒｏｔｅｕｓポリペプチド、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓポリペプチド、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａポリペプチド、Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａポリペプチド、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａポリペプチド、Ｓｈｉｇｅｌｌａポリペプチド、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド、Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｍタンパク質）、Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）ポリペプチド、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａポリペプチド、およびＹｅｒｓｉｎｉａポリペプチド（例えば、Ｙ ｐｅｓｔｉｓ Ｆ１およびＶ抗原）が含まれる。

【0144】

真菌抗原の例としては、限定されるものではないが、Ａｂｓｉｄｉａポリペプチド、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍポリペプチド、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａポリペプチド、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓポリペプチド、Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓポリペプチド、Ｂｉｐｏｌａｒｉｓポリペプチド、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓポリペプチド、Ｃａｎｄｉｄａポリペプチド、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓポリペプチド、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓポリペプチド、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓポリペプチド、Ｃｕｒｖａｌａｒｉａポリペプチド、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎポリペプチド、Ｅｘｏｐｈｉａｌａポリペプチド、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍポリペプチド、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａポリペプチド、Ｍａｄｕｒｅｌｌａポリペプチド、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａポリペプチド、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍポリペプチド、Ｍｏｎｉｌｉｅｌｌａポリペプチド、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａポリペプチド、Ｍｕｃｏｒポリペプチド、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓポリペプチド、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍポリペプチド、Ｐｈｉａｌｅｍｏｎｉｕｍポリペプチド、Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａポリペプチド、Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａポリペプチド、Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａポリペプチド、Ｐｓｅｕｄｏｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍポリペプチド、Ｐｙｔｈｉｕｍポリペプチド、Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍポリペプチド、Ｒｈｉｚｏｐｕｓポリペプチド、Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍポリペプチド、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘポリペプチド、Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍポリペプチド、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎポリペプチド、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎポリペプチド、およびＸｙｌｏｈｙｐｈａポリペプチドが含まれる。

【0145】

原虫寄生虫抗原の例としては、限定されるものではないが、Ｂａｂｅｓｉａポリペプチド、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍポリペプチド、Ｂｅｓｎｏｉｔｉａポリペプチド、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍポリペプチド、Ｅｉｍｅｒｉａポリペプチド、Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎポリペプチド、Ｅｎｔａｍｏｅｂａポリペプチド、Ｇｉａｒｄｉａポリペプチド、Ｈａｍｍｏｎｄｉａポリペプチド、Ｈｅｐａｔｏｚｏｏｎポリペプチド、Ｉｓｏｓｐｏｒａポリペプチド、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａポリペプチド、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａポリペプチド、Ｎｅｏｓｐｏｒａポリペプチド、Ｎｏｓｅｍａポリペプチド、Ｐｅｎｔａｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓポリペプチド、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが含まれる。蠕虫寄生虫抗原の例としては、限定されるものではないが、Ａｃａｎｔｈｏｃｈｅｉｌｏｎｅｍａポリペプチド、Ａｅｌｕｒｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓポリペプチド、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａポリペプチド、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓポリペプチド、Ａｓｃａｒｉｓポリペプチド、Ｂｒｕｇｉａポリペプチド、Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍポリペプチド、Ｃａｐｉｌｌａｒｉａポリペプチド、Ｃｈａｂｅｒｔｉａポリペプチド、Ｃｏｏｐｅｒｉａポリペプチド、Ｃｒｅｎｏｓｏｍａポリペプチド、Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓポリペプチド、Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅポリペプチド、Ｄｉｐｅｔａｌｏｎｅｍａポリペプチド、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍポリペプチド、Ｄｉｐｌｙｄｉｕｍポリペプチド、Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａポリペプチド、Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓポリペプチド、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓポリペプチド、Ｆｉｌａｒｏｉｄｅｓポリペプチド、Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓポリペプチド、Ｌａｇｏｃｈｉｌａｓｃａｒｉｓポリペプチド、Ｌｏａポリペプチド、Ｍａｎｓｏｎｅｌｌａポリペプチド、Ｍｕｅｌｌｅｒｉｕｓポリペプチド、Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓポリペプチド、Ｎｅｃａｔｏｒポリペプチド、Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓポリペプチド、Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍポリペプチド、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａポリペプチド、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓポリペプチド、Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａポリペプチド、Ｐａｒａｆｉｌａｒｉａポリペプチド、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓポリペプチド、Ｐａｒａｓｃａｒｉｓポリペプチド、Ｐｈｙｓａｌｏｐｔｅｒａポリペプチド、Ｐｒｏｔｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓポリペプチド、Ｓｅｔａｒｉａポリペプチド、Ｓｐｉｒｏｃｅｒｃａポリペプチド Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒａポリペプチド、Ｓｔｅｐｈａｎｏｆｉｌａｒｉａポリペプチド、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓポリペプチド、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓポリペプチド、Ｔｈｅｌａｚｉａポリペプチド、Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓポリペプチド、Ｔｏｘｏｃａｒａポリペプチド、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａポリペプチド、Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓポリペプチド、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓポリペプチド、Ｕｎｃｉｎａｒｉａポリペプチド、およびＷｕｃｈｅｒｅｒｉａポリペプチド。（例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ（ＰｆＣＳＰ））、スポロゾイト表面タンパク質２（ＰｆＳＳＰ２）、肝臓状態抗原１のカルボキシル末端（ＰｆＬＳＡ１ ｃ－ｔｅｒｍ）、および輸出タンパク質１（ＰｆＥｘｐ－１）、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓポリペプチド、Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓポリペプチド、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａポリペプチド、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａポリペプチド、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａポリペプチド、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａポリペプチドが含まれる。

【0146】

外部寄生虫抗原の例としては、限定されるものではないが、ノミ；カタダニおよびヒメダニを含むマダニ；ハエ、例えばユスリカ、カ、スナバエ、ブユ、ウシアブ、のサシバエ、メクラアブ、ツェツェバエ、サシバエ、ハエ幼虫症の原因となるハエおよびブヨ；あり；クモ、シラミ；コダニ；および半翅類の昆虫、例えばトコジラミおよびサシガメなど由来のポリペプチド（抗原ならびにアレルゲンを含む）が含まれる。
Ｃ．キメラ抗原受容体

【0147】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原は細胞の表面に発現したタンパク質である。一部の実施形態では、ＣＡＲはＴＣＲのようなＣＡＲであり、抗原は処理されたペプチド抗原、例えば細胞内タンパク質のペプチド抗原であり、これはＴＣＲのように、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の状況において細胞表面で認識される。

【0148】

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ａ）細胞内シグナル伝達ドメイン、ｂ）ヒンジおよび膜貫通ドメイン、例えばＥｖ３ヒンジなど、およびｃ）抗原結合領域を含む細胞外ドメインを含む。

【0149】

一部の実施形態では、操作された抗原受容体には活性化または刺激ＣＡＲ、共刺激ＣＡＲ（国際公開第２０１４／０５５６６８号参照）、および／または抑制性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖら、２０１３参照）をはじめとする、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が含まれる。ＣＡＲには一般に、一部の態様ではリンカーおよび／または１またはそれを超える膜貫通ドメインを介して１またはそれを超える細胞内シグナル伝達成分に連結された細胞外抗原（またはリガンド）結合ドメインが含まれる。そのような分子は、一般に、天然の抗原受容体を通るシグナル、共刺激受容体と組み合わせたそのような受容体を通るシグナル、および／または共刺激受容体のみを通るシグナルを模倣するかまたはそれに近似する。

【0150】

本開示の特定の実施形態は、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および１またはそれを超えるシグナル伝達モチーフを含む細胞外ドメインを含む、免疫原性を低下させるためにヒト化されているＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む、抗原特異的ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸をはじめとする核酸の使用に関する。特定の実施形態では、ＣＡＲは、１またはそれを超える抗原間の共有スペースを含むエピトープを認識し得る。特定の実施形態では、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の可変領域、および／またはその抗原結合断片を含み得る。もう一つの実施形態では、その特異性は、受容体に結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来する。

【0151】

ヒトＣＡＲ核酸は、ヒト患者の細胞免疫療法を強化するために使用されるヒト遺伝子であってよいと企図される。特定の実施形態では、本発明は、全長ＣＡＲｃＤＮＡまたはコード領域を含む。抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖の断片、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１０９，３０４号に記載されるものを含み得る。断片また、ヒト抗原特異的抗体の任意の数の異なる抗原結合ドメインであり得る。より具体的な実施形態では、断片は、ヒト細胞での発現のためのヒトコドン使用に最適化された配列によってコード化された抗原特異的ｓｃＦｖである。

【0152】

配置は、ダイアボディまたは多量体などの多量体であり得る。多量体は、軽鎖および重鎖の可変部分をダイアボディに交差対合することにより形成される可能性が最も高い。構築物のヒンジ部分は、完全に除去されることから、最初のシステインが維持される、セリンよりもプロリンの置換、最初のシステインまでの切断など、複数の代替形を有することができる。Ｆｃ部分は除去され得る。安定している、かつ／または二量体化するタンパク質は、この目的に役立ち得る。例えば、ヒト免疫グロブリン由来のＣＨ２またはＣＨ３ドメインなど、Ｆｃドメインの１つだけを使用することがあり得る。二量体化を改善するために改変されたヒト免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもあり得る。免疫グロブリンのヒンジ部分だけを使用することもあり得る。ＣＤ８αの部分を使用することもあり得る。

【0153】

一部の実施形態では、ＣＡＲ核酸は、その他の共刺激受容体、例えば膜貫通ドメインおよび改変されたＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインなどをコードする配列を含む。その他の共刺激受容体としては、限定されるものではないが、１またはそれを超えるＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられる。ＣＤ３ζによって開始される一次シグナルに加えて、ヒトＣＡＲに挿入されたヒト共刺激受容体によって提供される追加シグナルは、ＮＫ細胞の完全な活性化に重要であり、インビボでの持続性および養子免疫療法の治療上の成功を改善するのに役立ち得る。ＣＡＲは、１またはそれを超えるサイトカイン、例えばＩＬ－１５などを発現することがある。１またはそれを超えるサイトカインを含めることにより、インビボでの持続性が促進され得る。一部の態様では、ＣＡＲは、ヒト化ｓｃＦｖ、ＣＤ３ζ、ＤＡＰ１２、およびＩＬ－１５などの抗原結合ドメインを、必要に応じてＥｖ３ヒンジと組み合わせて含む。

【0154】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、特定の抗原（またはマーカーもしくはリガンド）、例えば養子療法の標的となる特定の細胞型で発現する抗原、例えば癌マーカー、および／または減衰反応を誘発することを目的とした抗原、例えば正常または非罹患細胞型で発現する抗原など、に特異的に構築されている。従って、ＣＡＲは一般にその細胞外部分に１またはそれを超える抗原結合分子、例えば１またはそれを超える抗原結合断片、ドメイン、または部分、あるいは１またはそれを超える抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲには、抗原結合部分または抗体分子の部分、例えばモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の重鎖可変（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変（Ｖ_Ｌ）鎖由来の単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）が含まれる。

【0155】

キメラ抗原受容体の特定の実施形態では、受容体の抗原特異的部分（抗原結合領域を含む細胞外ドメインと呼ばれることもある）は、腫瘍関連抗原または病原体特異的抗原結合ドメインを含む。抗原には、パターン認識受容体、例えばデクチン－１に認識される炭水化物抗原が含まれる。腫瘍関連抗原は、それが腫瘍細胞の細胞表面で発現する限り、どんな種類のものであってもよい。腫瘍関連抗原の例となる実施形態には、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＣＤ２０、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、ＣＤ５６、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｍｅｔ、ＡＫＴ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、上皮腫瘍抗原、メラノーマ関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓなどが含まれる。特定の実施形態では、ＣＡＲはサイトカインと共発現させて、腫瘍関連抗原の量が少ない場合に持続性を改善し得る。例えば、ＣＡＲは、ＩＬ－１５と共発現させてよい。

【0156】

キメラ受容体をコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ源、ｃＤＮＡ源から得てもよいし、または（例えば、ＰＣＲを介して）合成してもよいし、またはそれらの組合せであってもよい。ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、イントロンがｍＲＮＡを安定化することは見出されているので、ｃＤＮＡまたはその組合せを使用することが望ましい場合がある。また、ｍＲＮＡを安定化させるために内因性または外因性の非コード領域を使用することはさらに有利であり得る。

【0157】

キメラ構築物は、裸のＤＮＡとしてまたは適切なベクター中で免疫細胞に導入することができると企図される。裸のＤＮＡを使用するエレクトロポレーションにより、細胞を安定にトランスフェクトする方法は、当技術分野で公知である。裸のＤＮＡとは、一般に、発現に適した配向でプラスミド発現ベクターに含まれるキメラ受容体をコードするＤＮＡを指す。

【0158】

あるいは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター）を使用して、キメラ構築物を免疫細胞に導入することができる。本開示の方法による使用に適切なベクターは、免疫細胞において非複製的である。例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶ、またはＢＰＶに基づくベクターなど、多数のベクターがウイルスに基づくことが公知であり、そのベクターでは細胞内で維持されるウイルスのコピー数は細胞の生存力を維持するのに十分なほど少ない。

【0159】

一部の態様では、抗原特異的結合、または認識成分は、１またはそれを超える膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。一部の実施形態では、ＣＡＲには、ＣＡＲの細胞外ドメインと融合した膜貫通ドメインが含まれる。一実施形態では、ＣＡＲ中のドメインの１つと自然に関連している膜貫通ドメインが使用される。一部の例では、膜貫通ドメインは、アミノ酸置換によって選択または修飾されて、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとのそのようなドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑える。

【0160】

一部の実施形態では膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来する。供給源が天然の場合、ドメインは一部の態様において膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域には、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、およびＤＡＰ分子に由来する（すなわち、少なくとも膜貫通領域を含む）ものが含まれる。あるいは、膜貫通ドメインは、一部の実施形態において合成である。一部の態様では、合成膜貫通ドメインは、主にロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含む。一部の態様では、フェニルアラニン、トリプトファン、バリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインの両端にある。

【0161】

特定の実施形態では、ＮＫ細胞などの免疫細胞を遺伝的に改変するための本明細書に開示されるプラットフォーム技術は、（ｉ）エレクトロポレーション装置（例えば、ヌクレオフェクター）を使用する非ウイルス遺伝子導入、（ｉｉ）エンドドメイン（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζ、またはその他の組合せ）を介してシグナル伝達するＣＡＲ、（ｉｉｉ）抗原認識ドメインを細胞表面に接続する可変長の細胞外ドメインを有するＣＡＲ、および、場合によっては、（ｉｖ）ＣＡＲ^＋免疫細胞を堅牢にかつ数値的に拡大できるようにするＫ５６２由来の人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（Ｓｉｎｇｈら、２００８；Ｓｉｎｇｈら、２０１１）を含む。

【0162】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、レトロウイルスによって細胞に形質導入されていてよい。レトロウイルスベクターは、ｐＳＦＧ４ベクターであってよい。レトロウイルス導入ベクターｐＳＦＧ４は、５’ＬＴＲ、ｐｓｉパッケージングシーケンス、および３’ＬＴＲを含むモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）由来のウイルス成分を運ぶ、ｐＵＣ１９プラスミド（ＨｉｎｄＩＩＩとＥｃｏＲＩ制限酵素部位間の大きな断片［２．６３ｋｂ］）に基づく骨格を含む。ＬＴＲはレトロウイルスプロウイルスの両側に見られる長い末端反復配列であり、導入ベクターの場合、目的の遺伝子積荷（本発明者らの例では主にＣＡＲおよび関連する遺伝子成分）を囲んでいる。ヌクレオカプシドによるパッケージングの標的部位であるｐｓｉパッケージング配列も、５’ＬＴＲとＣＡＲコード配列の間に挟まれてシスに組み込まれている。従って、ｐＳＦＧ４導入ベクターの基本構造は、ｐＵＣ１９ 配列－５’ＬＴＲ－ｐｓｉパッケージング配列－関心の遺伝子積荷－３’ＬＴＲ－ｐＵＣ１９配列として概説され得る。
Ｄ．抗原提示細胞

【0163】

マクロファージ、Ｂリンパ球、および樹状細胞をはじめとする抗原提示細胞は、特定のＭＨＣ分子の発現により区別される。ＡＰＣは、抗原を内在化し、その抗原の一部を、これらの細胞外膜上のＭＨＣ分子とともに再発現する。主要組織適合複合体（ＭＨＣ）は、複数の遺伝子座を含む大きな遺伝子複合体である。ＭＨＣの遺伝子座は、クラスＩおよびクラスＩＩ ＭＨＣと呼ばれる２つの主要なクラスのＭＨＣ膜分子をコードする。Ｔヘルパーリンパ球は一般にＭＨＣクラスＩＩ分子に関連する抗原を認識し、Ｔ細胞傷害性リンパ球はＭＨＣクラスＩ分子に関連する抗原を認識する。ヒトではＭＨＣはＨＬＡ複合体と呼ばれ、マウスではＨ－２複合体と呼ばれる。

【0164】

ａＡＰＣ系は、少なくとも１つの外因性補助分子を含んでよい。任意の適切な数および組合せの補助分子を用いてよい。補助分子は、共刺激分子および接着分子などの補助分子から選択してもよい。例となる共刺激分子には、ＣＤ８６、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、４１ＢＢリガンド、およびＩＬ－２１が含まれる。接着分子には、セレクチンなどの炭水化物結合糖タンパク質、インテグリンなどの膜貫通結合糖タンパク質、カドヘリンなどのカルシウム依存性タンパク質、および細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）などの単回膜貫通型免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリータンパク質などを挙げることができ、これらは、例えば、細胞対細胞、または細胞対マトリックスの接触を促進する。例となる接着分子には、ＬＦＡ－３およびＩＣＡＭｓ、例えばＩＣＡＭ－１が含まれる。共刺激分子および接着分子を含む、例となる補助分子の選択、クローニング、調製、および発現に有用な技法、方法、および試薬。
ＩＶ．使用方法

【0165】

一部の実施形態では、本開示は、本開示のＣＡＲ（例えば、Ｅｖ３ヒンジおよび／またはヒト化ｓｃＦｖを有するＣＡＲ）を発現する有効量の免疫細胞を投与することを含む免疫療法のための方法を提供する。一実施形態では、医学的疾患または障害は、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移植によって処置される。本開示の特定の実施形態では、癌または感染は、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移植によって処置される。本明細書では、個体に有効量の抗原特異的細胞療法を投与することを含む、個体において癌を処置するかまたは癌の進行を遅らせる方法が提供される。本発明の方法は、免疫障害、固形癌、血液癌、およびウイルス感染の処置に適用され得る。

【0166】

特定の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲを発現する免疫細胞、例えばＮＫ細胞および／またはＴ細胞を、前記癌によって発現される抗原に特異的な抗原結合ドメインとともに投与することにより、癌患者を処置するための方法が提供される。例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の被験体をＣＤ１９－Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞で処置して、癌幹細胞などのＣＤ１９－陽性細胞を除去することができる。その他の態様では、被験体は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、または形質細胞様樹状細胞白血病（ＰＤＣＬ）を有していてよく、ＣＤ１２３－Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞で処置され得る。さらなる態様では、被験体はＴ細胞白血病およびリンパ腫を有し、ＣＤ５－Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞で処置されてよい。ＣＬＬ、乳癌、膵臓癌または肺癌を有する被験体は、ＲＯＲ１－Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞で処置されてよい。子宮頸癌、子宮内膜癌または卵巣癌を有する被験体は、Ｍｅｓｏ－Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞で処置されてよい。

【0167】

多発性骨髄腫（ＭＭ）またはその他のＣＤ３１９を発現する癌の被験体は、ＣＤ３１９－ＣＡＲ免疫細胞で処置することができる。一部の態様では、アミロイドーシスの患者は、ＣＤ３１９陽性細胞、例えば癌幹細胞などを除去することによって処置される。一部の態様では、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）またはくすぶり型骨髄腫の患者は、ＣＤ３１９－ＣＡＲ免疫細胞で処置される。自己免疫障害、例えば関節リウマチ、ＳＬＥ、または自己免疫性溶血性貧血などでＣＤ３１９陽性細胞を有する被験体は、本実施形態の免疫細胞によって処置され得る。特定の態様では、ＣＤ３１９を発現する癌は、Ｅｖ３－ＣＡＲを発現する免疫細胞をＣＤ３１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ３ζ、ＤＡＰ１２、およびＩＬ－１５とともに投与することによって処置される。

【0168】

一部の実施形態では、本明細書で提供されるＥｖ３ ＣＡＲを含む細胞は、抗ＥＧＦＲ抗体によって除去および／または検出され得る。例となる抗ＥＧＦＲ抗体としては、限定されるものではないが、セツキシマブ（アービタックス）およびパニツムマブ（ベクティビックス）ならびにバイオ後続品が挙げられる。これらの抗体は両方とも、結腸直腸癌の処置のためにＦＤＡによって承認されている。一部の実施形態では、Ｅｖ３－ＣＡＲを発現する細胞の検出は、検出可能なタグを有する抗ＥＧＦＲ抗体の投与を含む。その他の態様では、Ｅｖ３－ＣＡＲを発現している細胞の除去は、ＡＤＣＣを誘発する抗ＥＧＦＲ抗体の投与を含む。一部の態様では、抗ＥＧＦＲ抗体は、プロドラッグまたは細胞傷害性薬物、例えば毒素などと融合させてよい。

【0169】

本発明の処置方法が有用な腫瘍には、悪性細胞型、例えば固形腫瘍または血液腫瘍に見出されるものなどが含まれる。例となる固形腫瘍としては、限定されるものではないが、膵臓、結腸、盲腸、胃、脳、頭、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、メラノーマ、前立腺、および乳房からなる群から選択される器官の腫瘍を挙げることができる。例となる血液腫瘍には、骨髄の腫瘍、Ｔ細胞またはＢ細胞の悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、骨髄腫、および同類のものが含まれる。本明細書で提供される方法を用いて処置され得る癌のさらなる例としては、限定されるものではないが、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃまたはｓｔｏｍａｃｈ）癌（胃腸癌および胃腸間質癌を含む）、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮の癌腫、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、様々な種類の頭頸部癌、およびメラノーマが挙げられる。

【0170】

癌は具体的には以下の組織型のものである可能性があるが、これらに限定されるものではない：新生物、悪性；癌腫；未分化癌腫；巨細胞および紡錘細胞の癌腫；小細胞癌腫；乳頭癌腫；扁平上皮癌腫；リンパ上皮癌腫；基底細胞癌腫；毛母癌腫；移行上皮癌腫；乳頭移行上皮癌腫；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管細胞癌腫；肝細胞癌腫；肝細胞癌腫と胆管細胞癌腫の併発；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープの腺癌；腺癌、家族性大腸腺腫症；固形癌腫；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌腫；好酸性癌腫；好酸性腺癌；好塩基性癌腫；明細胞腺癌；顆粒細胞癌腫；濾胞腺癌；乳頭状および濾胞状腺癌；非被嚢性硬化性癌腫；副腎皮質癌腫；類内膜（ｅｎｄｏｍｅｔｒｏｉｄ）癌腫；皮膚付属器癌腫；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳道腺癌；粘表皮癌腫；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；漿液性乳頭状嚢胞腺癌；粘液嚢胞腺癌；粘液腺癌；印環細胞癌腫；浸潤性乳管癌腫；髄様癌腫；小葉癌腫；炎症性癌腫；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌腫；扁平上皮化生を伴う腺癌；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜細胞腫；悪性顆粒膜細胞腫；悪性アンドロブラストーマ；セルトリ細胞癌腫；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫瘍；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性メラノーマ；無色素性メラノーマ；表在拡大型メラノーマ；悪性黒子型メラノーマ；末端黒子型メラノーマ；結節性メラノーマ；大色素性母斑の悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胎生期癌；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺腫；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；悪性血管周皮腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽腫；間葉性軟骨肉腫；骨の巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル芽細胞歯牙肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル芽細胞線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫、上衣腫；星状細胞腫；原形質性星状細胞腫；線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；神経膠芽腫；乏突起膠細胞腫；乏突起膠芽細胞腫；原始神経外肺葉性；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン側肉芽腫；小リンパ球性悪性リンパ腫；びまん性大細胞型悪性リンパ腫；濾胞性悪性リンパ腫；菌状息肉腫；その他の特定の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；マスト細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ性肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；マスト細胞性白血病；巨核芽球性白血病；骨髄肉腫；毛様細胞性白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病。

【0171】

特定の実施形態は、白血病の処置方法に関する。白血病は血液または骨髄の癌であり、血液細胞、通常白血球細胞（白血球）の異常な増殖（増殖による産生）を特徴とする。これは、血液腫瘍と呼ばれる疾患の幅広いグループの一部である。白血病は、様々な疾患に及ぶ広義の用語である。白血病は臨床的および病理学的にその急性型と慢性型に分けられる。

【0172】

本開示の特定の実施形態では、免疫細胞は、それを必要とする個体、例えば癌または感染症を患っている個体などに送達される。次いで、細胞は個体の免疫系を強化して、それぞれの癌または病原細胞を攻撃する。場合によっては、個体には、１またはそれを超える用量の免疫細胞が与えられる。個体に２またはそれを超える用量の免疫細胞が与えられる場合には、投与と投与の間の期間は、個体での伝播に十分な時間を確保する必要があり、特定の実施形態では、用量と用量の間の期間は１、２、３、４、５、６、７日、またはそれを超える。

【0173】

本開示の特定の実施形態は、免疫介在性障害を処置または予防する方法を提供する。一実施形態では、被験体は自己免疫疾患を有する。自己免疫疾患の限定されない例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック・スパート（ｃｅｌｉａｃ ｓｐａｔｅ）皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡（ｃｉｃａｔｒｉｃａｌ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ神経障害、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓ ｅｒｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型または免疫介在性真性糖尿病、重症筋無力症、ネフローゼ症候群（例えば微小変化型、巣状糸球体硬化症、または膜性腎症など）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬の関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症状群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎（例えば結節性多発性動脈炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、または疱疹状皮膚炎 脈管炎など）、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。従って、本明細書に開示される方法を使用して処置され得る自己免疫疾患のいくつかの例としては、限定されるものではないが、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型真性糖尿病、クローン病；潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、糸球体腎炎、強直性脊椎炎、脈管炎、または乾癬が挙げられる。被験体は、喘息などのアレルギー障害を有していてもよい。

【0174】

さらにもう一つの実施形態では、被験体は、移植臓器または幹細胞のレシピエントであり、免疫細胞は拒絶を予防および／または処置するために使用される。特定の実施形態では、被験体は、移植片対宿主病を有するかまたは発症するリスクがある。ＧＶＨＤは、血縁ドナーかまたは非血縁ドナーのいずれかの幹細胞を使用するかまたは含む、あらゆる移植の合併症の可能性がある。ＧＶＨＤには、急性と慢性の２種類がある。急性ＧＶＨＤは、移植後最初の３カ月以内に現れる。急性ＧＶＨＤの徴候には、手および足に赤みを帯びた皮膚の発疹が広がり、皮膚が剥がれたり水疱ができたりして、さらに重症になり得ることが含まれる。急性ＧＶＨＤは胃および腸に影響を与える可能性もあり、その場合、けいれん、吐き気および下痢が起こる。皮膚および目の黄変（黄疸）は、急性ＧＶＨＤが肝臓に影響を及ぼしたことを示す。慢性ＧＶＨＤは、その重症度に応じてランク付けされる。ステージ／グレード１は軽度であり、ステージ／グレード４は重度である。慢性ＧＶＨＤは、移植の３か月後またはそれ以降に発症する。慢性ＧＶＨＤの症候は急性ＧＶＨＤの症状に類似しているが、さらに、慢性ＧＶＨＤは目の粘液腺、口の唾液腺、および胃の内壁と腸を潤滑する腺にも影響を与える可能性がある。本明細書に開示される免疫細胞の集団のいずれかを利用することができる。移植臓器の例としては、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、肺および／または心臓などの固形臓器移植、あるいは膵島、肝細胞、筋芽細胞、骨髄、または造血またはその他の幹細胞などの細胞移植片が含まれる。移植は、顔の組織などの複合移植であり得る。免疫細胞は、移植前に、移植と同時に、または移植後に投与することができる。一部の実施形態では、免疫細胞は、移植片の前に、例えば移植片の少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも４週、または少なくとも１カ月前に投与される。ある特定の、限定されない例では、治療上有効な量の免疫細胞の投与は、移植の３～５日前に行われる。

【0175】

一部の実施形態では、免疫細胞療法の前に、被験体に骨髄非破壊的リンパ球除去化学療法を投与することができる。骨髄非破壊的リンパ球除去化学療法は、任意の適切なそのような治療法であり得、それは任意の適切な経路によって投与され得る。骨髄非破壊的リンパ球除去化学療法は、例えば、特に癌が転移性であり得るメラノーマである場合、シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含み得る。シクロホスファミドおよびフルダラビンの例となる投与経路は、静脈内である。同様に、任意の適切な用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンを投与することができる。特定の態様では、およそ６０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドが２日間投与され、その後におよそ２５ｍｇ／ｍ^２のフルダラビンが５日間投与される。

【0176】

特定の実施形態では、免疫細胞の成長および活性化を促進する増殖因子が、免疫細胞と同時に、または免疫細胞に続いて被験体に投与される。免疫細胞増殖因子は、免疫細胞の成長および活性化を促進する任意の適切な増殖因子であってよい。適切な免疫細胞増殖因子の例には、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、およびＩＬ－１２が含まれ、これらは単独で使用されてもよいし、多様な組合せ、例えばＩＬ－２とＩＬ－７、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－１２とＩＬ－７、ＩＬ－１２とＩＬ－１５、またはＩＬ－１２とＩＬ２などで使用されてもよい。

【0177】

治療上有効な量の免疫細胞は、非経口投与、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内、または関節内注射、または注入をはじめとする、多くの経路によって投与することができる。

【0178】

養子細胞療法で使用する免疫細胞の治療上有効な量は、処置される被験体において望ましい効果を達成する量である。例えば、これは、進行を抑制するため、または自己免疫または同種免疫疾患の退縮を引き起こすために必要な、あるいは自己免疫疾患によって引き起こされる症状、例えば疼痛および炎症などを緩和できる免疫細胞の量であり得る。それは、炎症、例えば疼痛、浮腫および体温上昇などに関連する症候を軽減するために必要な量であり得る。また、それは移植された臓器の拒絶反応を減少または防止するために必要な量でもあり得る。

【0179】

免疫細胞集団は、疾患に合った処置計画で投与することができ、例えば１回または２、３回の用量を１日から数日にわたって投与して疾患状態を改善するか、あるいは定期的な用量を長期にわたって投与して疾患の進行を抑制し、疾患の再発を防ぐことができる。製剤に用いられる正確な用量は、投与経路にも依存することになり、疾患または障害の重篤度は、開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。免疫細胞の治療有効量は、処置される被験体、苦痛の重症度と種類、および投与方法に依存することになる。一部の実施形態では、ヒト被験体の処置で使用され得る用量は、少なくとも３．８×１０^４、少なくとも３．８×１０^５、少なくとも３．８×１０^６、少なくとも３．８×１０^７、少なくとも３．８×１０^８、少なくとも３．８×１０^９、または少なくとも３．８×１０^１０の免疫細胞／ｍ^２に及ぶ。特定の実施形態では、ヒト被験体の処置で使用される用量は、約３．８×１０^９から約３．８×１０^１０の免疫細胞／ｍ^２に及ぶ。さらなる実施形態では、免疫細胞の治療上有効な量は、約５×１０^６細胞／ｋｇ体重から約７．５×１０^８細胞／ｋｇ体重、例えば約２×１０^７細胞～約５×１０^８細胞／ｋｇ体重、または約５×１０^７細胞～約２×１０^８細胞／ｋｇ体重で変動し得る。免疫細胞の正確な量は、被験体の年齢、体重、性別、および生理学的症状に基づいて、当業者によって容易に決定される。有効量は、インビトロまたは動物モデルの試験系から得られた用量反応曲線から推定することができる。

【0180】

免疫細胞は、免疫介在性障害の処置のための１またはそれを超えるその他の治療薬と併用して投与されてよい。併用療法には、限定されるものではないが、１またはそれを超える抗菌剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤および抗真菌剤）、抗腫瘍剤（例えば、フルオロウラシル、メトトレキサート、パクリタキセル、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシン、またはビンクリスチン）、免疫除去剤（例えば、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシン、またはビンクリスチン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、またはグルココルチコイド、例えばデキサメタゾンまたはプレドニゾンなど）、抗炎症剤（例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾンまたはプレドニゾンなどのグルココルチコイド、あるいはアセチルサリチル酸、イブプロフェンまたはナプロキセンナトリウムなどの非ステロイド系抗炎症剤）、サイトカイン（例えば、インターロイキン－１０またはトランスフォーミング増殖因子β）、ホルモン（例えば、エストロゲン）、またはワクチンが含まれ得る。さらに、限定されるものではないが、カルシニュリン抑制剤（例えば、シクロスポリンおよびタクロリムス）；ｍＴＯＲ抑制剤（例えば、ラパマイシン）；ミコフェノール酸モフェチル、抗体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＩＶＩＧ、またはＢ細胞を認識）；化学療法剤（例えば、メトトレキサート、トレオスルファン、ブスルファン）；照射；またはケモカイン、インターロイキンまたはそれらの抑制剤（例えば、ＢＡＦＦ、ＩＬ－２、抗ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＪＡＫキナーゼ抑制剤）をはじめとする免疫抑制剤または寛容誘発剤を投与することができる。そのような追加の医薬品は、所望の効果に応じて、免疫細胞の投与の前、投与の最中、または投与の後に投与することができる。細胞および薬剤のこの投与は、同じ経路または異なる経路で、同じ部位または異なる部位のいずれかで行うことができる。
Ｂ．薬学的組成物

【0181】

本明細書では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）と薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物および製剤も提供される。

【0182】

本明細書に記載される薬学的組成物および製剤は、所望の純度を有する有効成分（例えば抗体またはポリペプチドなど）を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の１またはそれを超える随意の薬学的に許容され得る担体と混合することによって調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２２^ｎｄ
ｅｄｉｔｉｏｎ、２０１２）。薬学的に許容され得る担体は、一般に、用いられる投与量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、それには、限定されるものではないが、リン酸、クエン酸、およびその他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
Ｃ．併用療法

【0183】

特定の実施形態では、本実施形態の組成物および方法は、少なくとも１つの追加の療法と組み合わせた免疫細胞集団を伴う。追加の療法は、放射線療法、手術（例えば、乳腺腫瘍摘出術および乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述の組み合わせであってよい。追加の療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形であってよい。

【0184】

一部の実施形態では、追加の療法は、低分子酵素抑制剤または抗転移剤の投与である。一部の実施形態では、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、処置の副作用の発生および／または重症度を低下させることを目的とする薬剤、例えば、抗吐き気剤など）の投与である。一部の実施形態では、追加の療法は放射線療法である。一部の実施形態では、追加の療法は手術である。一部の実施形態では、追加の療法は放射線療法と手術の併用である。一部の実施形態では、追加の療法はガンマ線照射である。一部の実施形態では、追加の療法は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路、ＨＳＰ９０抑制剤、チューブリン抑制剤、アポトーシス抑制剤、および／または化学防御剤を標的とする療法である。追加の療法は、当技術分野で公知の１またはそれを超える化学療法剤であってよい。

【0185】

免疫細胞療法は、追加の癌療法、例えば免疫チェックポイント療法などと比べて、前に、最中に、後に、または様々な組合せで投与されてよい。投与は、同時から数分から数日から数週間の範囲の間隔で行うことができる。免疫細胞療法が追加の治療薬とは別に患者に提供される実施形態では、一般に、２つの化合物が有利な併用効果を患者になお発揮することが可能なように、各送達の時間の間にかなりの時間が経って期限が過ぎないようにする。そのような場合、互いに約１２～２４または７２時間以内、より具体的には互いに約６～１２時間以内に患者に抗体療法および抗癌療法を提供し得ることが企図される。一部の状況では、それぞれの投与の間に数日（２、３、４、５、６または７日）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８週間）が経過する場合には、処置の期間を大幅に延長することが望ましいことがある。

【0186】

様々な組合せを用いることができる。以下の例では、ＣＡＲ免疫細胞療法は「Ａ」であり、抗癌療法は「Ｂ」である。
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ
Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ

【0187】

本実施形態の化合物または療法の患者への投与は、存在する場合は薬剤の毒性を考慮に入れて、そのような化合物の投与のための一般的なプロトコルに従うことになる。そのため、一部の実施形態では、併用療法に起因する毒性を監視するステップがある。
１．化学療法

【0188】

幅広い種類の化学療法剤を、本実施形態に従って使用することができる。用語「化学療法」とは、癌を処置する薬物の使用を指す。「化学療法剤」は、癌の処置の際に投与される化合物または組成物を意味するために使用される。これらの薬剤または薬物は、細胞内の活動モード、例えば、細胞周期に影響を与えるかどうか、およびどの段階で影響を与えるかによって分類される。あるいは、薬剤は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡの間に介入する能力、または核酸合成に影響を与えることにより染色体異常および有糸分裂異常を誘発する能力に基づいて特徴付けられ得る。

【0189】

化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなど；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）など；エチレンイミンおよび、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチルオロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、およびウラシルマスタードなど；ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなど；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩ（ｇａｍｍａｌＩ）およびカリチアマイシンオメガ１（ｏｍｅｇａＩ１））など；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；ビスホスホネート、例えばクロドロネートなど；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣなど、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）など；葉酸類似体、例えばデノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトレキサートなど；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニンなど；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、およびフロクスウリジンなど；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトンなど；抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）、例えばミトタンおよびトリロスタンなど；葉酸補充剤、例えばフォリン酸など；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサマイトシンなど；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリニック酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体、例えばシスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチンなど；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ抑制剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｌｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸など；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、ゲムシタビエン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｅｎ）、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ抑制剤、トランス白金、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体が含まれる。
２．放射線療法

【0190】

ＤＮＡ損傷を引き起こし、広範に使用されているその他の因子には、γ線、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の指示された送達として一般に公知のものが含まれる。マイクロ波、陽子線照射、およびＵＶ照射などのＤＮＡ損傷因子のその他の形態も企図される。これらの因子はすべて、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復、ならびに染色体の集合および維持に対する広範囲の損傷に影響を与える可能性が最も高いと思われる。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３～４週間）に対する５０～２００レントゲンの一日線量から２０００～６０００レントゲンの単回線量までの範囲である。放射性同位体の線量範囲は大きく異なり、同位体の半減期、放出される放射線の強度および種類、ならびに新生細胞による取り込みに依存する。
３．免疫療法

【0191】

当業者は、追加の免疫療法が実施形態の方法と組み合わせて、またはそれと併せて使用されてよいことを理解するであろう。癌の処置の状況において、免疫療法は、一般に、癌細胞を標的として破壊することを免疫エフェクター細胞および分子の使用に頼る。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））は、そのような一例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の一部のマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体は、単独で治療のエフェクターとして働く場合もあれば、細胞の死滅に実際に影響を及ぼすために他の細胞を動員する場合もある。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法薬、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）と結合され、標的化剤として働く場合がある。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を保有するリンパ球であってよい。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。

【0192】

抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）は、細胞を死滅させる薬物と共有結合しているモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含み、併用療法で使用されてよい。このアプローチは、抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性と非常に強力な細胞傷害性薬を組み合わせ、その結果、濃縮されたレベルの抗原で腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装した」ＭＡｂをもたらす。薬物の標的化送達はまた、正常組織でのその曝露を最小限に抑え、毒性の減少と治療係数の改善をもたらす。例となるＡＤＣ薬物としては、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）およびＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）が挙げられる。

【0193】

免疫療法の一態様では、腫瘍細胞は、ターゲティングに適している、すなわち他の細胞の大部分には存在しない、いくつかのマーカーを有していなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれもが、本実施形態の状況でのターゲティングに好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、シアリルルイス抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニン受容体、ｅｒｂ Ｂおよびｐ１５５が挙げられる。免疫療法の代替態様は、抗癌効果と免疫刺激効果を組み合わせることである。免疫刺激分子も存在し、それには、サイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、γ－ＩＦＮなど、ケモカイン、例えばＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８など、および増殖因子、例えばＦＬＴ３リガンドなどが含まれる。

【0194】

免疫療法の例としては、免疫アジュバント、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼン、および芳香族化合物）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＴＮＦ；遺伝子療法、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびｐ５３；およびモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧＭ２、および抗ｐ１８５が含まれる。１またはそれを超える抗癌療法は、本明細書に記載される抗体療法とともに用いることができると企図される。

【0195】

一部の実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント抑制剤であってよい。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を上げるか、シグナルを下げる。免疫チェックポイント遮断によって標的となり得る抑制性免疫チェックポイントには、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２としても公知）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）およびＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が含まれる。特に、免疫チェックポイント抑制剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的とする。

【0196】

免疫チェックポイント抑制剤は、小分子などの薬物、リガンドまたは受容体の組換え体、または特にヒト抗体などの抗体であり得る。免疫チェックポイントタンパク質またはその類似体の既知の抑制剤を使用してよく、特に抗体のキメラ化、ヒト化またはヒト型を使用してよい。当業者が知るように、代替および／または同等の名称が、本開示で言及される特定の抗体に使用されていることがある。そのような代替名および／または同等名は、本開示の文脈において交換可能である。例えば、ランブロリズマブはＭＫ－３４７５およびペンブロリズマブの代替名および同等名でも公知である。

【0197】

一部の実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１とそのリガンド結合パートナーの結合を抑制する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。もう一つの実施形態では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１とその結合パートナーの結合を抑制する分子である。具体的な態様では、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１である。もう一つの実施形態では、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２とその結合パートナーの結合を抑制する分子である。具体的な態様では、ＰＤＬ２結合パートナーはＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。

【0198】

一部の実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびＣＴ－０１１からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても公知のニボルマブは、使用してよい抗ＰＤ－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、およびＳＣＨ－９００４７５としても公知のペムブロリズマブは、例となる抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても公知のＣＴ－０１１は、抗ＰＤ－１抗体でもある。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ－２２４は、ＰＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性受容体である。

【0199】

本明細書で提供される方法で標的となり得るもう一つの免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても公知の細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）である。ヒトＣＴＬＡ－４の完全なｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ－４はＴ細胞の表面に見出され、抗原提示細胞の表面のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合すると「オフ」スイッチとして機能する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面に発現し、抑制シグナルをＴ細胞に伝達する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８に類似し、両方の分子は、それぞれＢ７－１およびＢ７－２と呼ばれる、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。ＣＴＬＡ４は抑制シグナルをＴ細胞に伝達するが、ＣＤ２８は刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞にも見出され、それらの機能に重要であり得る。Ｔ細胞受容体およびＣＤ２８によるＴ細胞の活性化は、Ｂ７分子の抑制性受容体であるＣＴＬＡ－４の発現増加につながる。

【0200】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント抑制剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドである。

【0201】

本発明の方法での使用に適切な抗ヒト－ＣＴＬＡ－４抗体（またはそれに由来するＶＨおよび／またはＶＬドメイン）は、当技術分野で周知の方法を使用して生成され得る。あるいは、当該分野で認識される抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例となる抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても公知）またはその抗原結合断片および変異体である。その他の実施形態では、抗体は、イピリムマブの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたはＶＲを含む。従って、一実施形態では、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、およびイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。もう一つの実施形態では、抗体は、上記の抗体と同じＣＴＬＡ－４上のエピトープとの結合について競合し、かつ／または結合する。もう一つの実施形態では、抗体は、上述の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％、または９９％可変領域同一性）を有する。
４．手術

【0202】

癌患者の約６０％は何らかの種類の手術を受けることになり、それには予防手術、診断的または病期決定手術、根治手術および緩和手術が含まれる。根治手術には、癌性組織の全部または一部を物理的に除去、切除、および／または破壊する切除術が含まれ、他の療法、例えば本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法、および／または代替療法などと併用することができる。腫瘍切除術とは、腫瘍の少なくとも一部の物理的な除去を指す。腫瘍切除術に加えて、手術による処置には、レーザー手術、凍結手術、電気手術、および顕微鏡制御手術（モース術）が含まれる。

【0203】

癌性細胞、組織、または腫瘍の一部または全部を切除すると、体内に空洞が形成されることがある。処置は、灌流、直接注射、または追加の抗癌療法による領域の局所適用によって達成されてよい。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６、または７日ごと、あるいは１、２、３、４、および５週ごと、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月ごとに繰り返すことができる。これらの処置も同様に様々な投与量のものであってよい。
５．その他の薬剤

【0204】

処置の治療効果を改善するために、その他の薬剤を本実施形態の特定の態様と組み合わせて使用し得ることが企図される。これらの追加の薬剤には、細胞表面受容体およびギャップ結合のアップレギュレーションに影響を及ぼす薬剤、細胞増殖抑制剤および分化剤、細胞接着の抑制剤、アポトーシス誘導物質に対する過剰増殖性細胞の感受性を高める薬剤、またはその他の生物剤が含まれる。ギャップ結合の数を増やすことによる細胞間シグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖性細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増加させる。その他の実施形態では、細胞増殖抑制剤または分化剤を本実施形態の特定の態様と組み合わせて使用して、処置の抗過剰増殖効力を改善することができる。細胞間接着の抑制剤は、本実施形態の有効性を改善することが企図される。細胞間接着抑制剤の例は、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）抑制剤およびロバスタチンである。さらに、アポトーシスに対する過増殖性細胞の感受性を増加させるその他の薬剤、例えば抗体ｃ２２５などを、本実施形態の特定の態様と組み合わせて使用して、処置効力を改善することができ得ることが企図される。
Ｖ．製造品またはキット

【0205】

免疫細胞を含む製造品またはキットも本明細書において提供される。製造品またはキットは、免疫細胞を使用して個体の癌を処置するかまたは癌の進行を遅らせるため、または癌を有する個体の免疫機能を高めるための説明書を含む添付文書をさらに含むことができる。本明細書に記載される抗原特異的免疫細胞はどれでも製造品またはキットに含められてよい。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが含まれる。容器は、ガラス、プラスチック（例えばポリ塩化ビニルまたはポリオレフィンなど）、または金属合金（例えばステンレス鋼またはハステロイ）などの多様な材料から形成されてよい。一部の実施形態では、容器は製剤を保持し、容器上のラベル、または容器に関連付けられたラベルは、使用方法を示すことができる。製造品またはキットには、その他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明書付きの添付文書をはじめとする、商業的およびユーザーの観点から望ましいその他の材料がさらに含まれてよい。一部の実施形態では、製造品には、１またはそれを超える別の薬剤（例えば、化学療法剤、および抗腫瘍剤）がさらに含まれる。１またはそれを超える薬剤に適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが含まれる。
ＶＩ．実施例

【0206】

以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含められる。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実践において十分に機能するために発明者によって発見された技術を表し、したがって、その実践に好ましいモードを構成すると見なされ得ることを当業者は理解するべきである。しかし、当業者は、本開示に照らして、多くの変更が開示された特定の実施形態において行われ、それでもなお本発明の精神および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を得ることができることを理解するはずである。
実施例１－切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）ＣＡＲの開発

【0207】

Ｅｖ３－ＣＡＲは、Ｅｖ３ストークがｓｃＦｖなどによる抗原結合からのシグナルを変換する統合構造として機能するように設計された。また、「オフ」スイッチは、セツキシマブなどの臨床的にアクセス可能な抗体によってＣＡＲ陽性免疫細胞を除去することが認識され得ることを意味する（図１Ａ）。Ｅｖ３－ＣＡＲは、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインをさらに含むことができ、Ｅｖ３－ＤＡＰ１２－ＣＡＲと名付けられる。エンドドメインおよびＥＧＦ結合ドメインを含むＥＧＦＲと比較したＥｖ３を示す模式図が図２に示される。

【0208】

様々な抗原結合ドメインを有するＥｖ３－ＣＡＲまたはＥｖ３－ＤＡＰ１２－ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクターは、図３Ａ～３Ｄに示されるように生成された。抗原結合ドメインは、マウス抗ヒト抗体に由来するｓｃＦｖとヒト化ｓｃＦｖの両方であった。ベクターは、ＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、そして必要に応じてＤＡＰ１２を含む。ベクターは、自殺遺伝子である誘導性カスパーゼ９も含む。

【0209】

ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ２８．ＣＤ３ζ、ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＤＡＰ１２．ＣＤ３ζまたはヒト化ＣＡＲ１９．Ｅｖ３．ＣＤ３ζをはじめとするＣＤ１９特異的ＣＡＲをＮＫ細胞に形質導入した（図４Ａ）。ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、ＣＤ１９^＋ＲａｊｉまたはＫ５６２細胞を死滅させる際のその効力について試験した（図４Ｂ）。ＣＡＲ１９－Ｅｖ３－ＣＤ２８－ＤＡＰ１２－ＣＡＲ ＮＫ細胞は、最大の細胞傷害性を有することが観察された。従って、ＣＡＲのヒンジ領域でＤＡＰ１２エンドドメインと組み合わせてＥｖ３を使用すると、標的細胞に対して非常に細胞傷害性の高いＣＡＲが生成される。
実施例２－ヒト化ＣＡＲの開発

【0210】

ヒト化ＣＡＲを産生する際に用いるヒト化ｓｃＦｖを生成するためのプラットフォームを開発した。構造的な制約により、一部の残基は抗原結合により寄与するため、３Ｄモデリングを使用して、重要である可能性のある相互作用を特定し、ヒト化ＣＡＲを生成した。以下に詳述する段階的なプロセスは、以前のサイクルを改善するために反復して繰り返され得る。

【0211】

本明細書で提供されるＣＡＲヒト化ワークフローは、以下に詳述され、図５Ａに示される５つの基本プロセスモジュールを含む。

【0212】

モジュールＩは、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）配列解析を含む。ＢＬＡＳＴプログラムを、マウスｍＡｂ配列などの開始クエリに対して最も一致する免疫グロブリン（ＩＧ）配列の検索に用いた（図５Ｂ）。ＢＬＡＳＴは、ヌクレオチド配列とアミノ酸配列を連続（１対１）かまたは並列（バッチ）で解析することができるほか、精選された配列データベースを含む生殖細胞系遺伝子データベースを同時に検索することができるので、最適なマッチング変数（Ｖ遺伝子）を取得する可能性が最大になる。参照配列について、生殖細胞系変数（Ｖ）、多様性（Ｄ）および結合（Ｊ）遺伝子のデータベースを使用して、ＩＧ
Ｖドメインフレームワーク領域（ＦＲ１－４）および相補性決定領域（ＣＤＲ）を描写した。各抗体について、可変ドメインを、各々が遺伝子Ｖ、Ｄ、およびＪ遺伝子を含む複数の遺伝子によってコードされている、軽鎖および重鎖について分析した。この研究の焦点は主に、各ＦＲおよびＣＤＲ領域の境界を見出し、データベース内の他のＩＧ配列と比較する、定義された領域の状況で変動を比較するＶ遺伝子にある。

【0213】

ゲノム配列内の個々の変動（すなわち、１，０００ｂｐのＤＮＡ配列あたり１つの一塩基多型と推定される）により、生殖細胞系列ＩＧ配列は数千のアロタイプ（すなわち、対立遺伝子または遺伝子のバージョン）を含む（図６）。ヒトアロタイプのデータベースを生成し、ＣＡＲのヒト化に活用した。

【0214】

一例として、マウス抗体（クローンＦＭＣ６３）から抗ヒトＣＤ１９結合ドメインＶＬおよびＶＨ配列を形質転換するために、ＣＤＲ移植により特定のヒトアロタイプを使用してヒト化ドメインを誘導した（図７Ａ）。図７ＡのＣＤＲ領域には下線が引かれている。

【0215】

フレームワーク配列のソースは、図７Ｂに示されるＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｈｕｌら、１９９７）分析により確認された。さらに、配列相同性および同一性は容易に定量化され、図７Ｃに要約されている。比較として、新規に作成された配列を以前に利用可能な配列と比較し、実質的かつ容易に区別可能な違いがアミノ酸およびヌクレオチドレベルで検出された。

【0216】

モジュールＩＩは３Ｄ構造モデリングで構成された。抗原結合のための重要な残基を特定するために、３Ｄ構造を構築して構築物を評価した。ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬは、ヒト化ｍＡｂの３次元モデルを作成するために使用されたタンパク質構造相同性モデラーである。構造ファイルは、相同性モデリングのテンプレートとして構造抗体データベースであるＳＡｂＤａｂから抽出された。ＶＬおよびＶＨドメインのＣＤＲ領域の３Ｄコンフォメーションを特徴付ける例として、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ（Ａｒｎｏｌｄら、２００６；Ｂｅｎｋｅｒｔら、２０１１）アルゴリズムを使用する相同性モデリングを、以下の一次アミノ酸配列とともに使用した。

【化5】

【0217】

ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬテンプレートライブラリー（ＳＭＴＬバージョン２０１７－０６－２８、ＰＤＢリリース２０１７－０６－２３）を、標的配列ｈＣＤ１９ Ｖ_ＬおよびｈＣＤ１９ Ｖ_Ｈに一致する進化的関連構造についてＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７）およびＨＨＢｌｉｔｓ（Ｒｅｍｍｅｒｔら、２０１２）で検索した。

【0218】

全体として、１３，５３５個のテンプレートがｈＣＤ１９ Ｖ_Ｌで見出され、２ｆｇｗ．１．Ａが最良適合を示し（図８Ａ）、さらなる解析に使用された。標的配列（ｈＣＤ１９ Ｖ_Ｌ）をＳＭＴＬに含まれる一次アミノ酸配列に対してＢＬＡＳＴで検索した。合計７６１個のテンプレートが見出された。最初のＨＨｂｌｉｔｓプロファイルを、Ｒｅｍｍｅｒｔらによって概説された手順を使用して構築し、その後、ＮＲ２０に対してＨＨｂｌｉｔｓを１回反復した。このようにして得たプロファイルを、次にＳＭＴＬのすべてのプロファイルに対して検索した。合計１２，９４６個のテンプレートが見出された。

【0219】

全体で、１４，６３１個のテンプレートがｈＣＤ１９ Ｖ_Ｈに見出され、４ｕｖ７．１．Ｂが最良適合を示し（図８Ａ）、さらなる解析に使用された。標的配列（ｈＣＤ１９ Ｖ_Ｌ）をＳＭＴＬに含まれる一次アミノ酸配列に対してＢＬＡＳＴで検索した。合計７５５個のテンプレートが見出された。最初のＨＨｂｌｉｔｓプロファイルを、Ｒｅｍｍｅｒｔらによって概説された手順を使用して構築し、その後、ＮＲ２０に対してＨＨｂｌｉｔｓを１回反復した。このようにして得たプロファイルを、次にＳＭＴＬのすべてのプロファイルに対して検索した。合計１３，９６４個のテンプレートが見出された。

【0220】

テンプレート選択：識別された各テンプレートについて、テンプレートの品質は標的とテンプレートのアライメントの特徴から予測されていた。次に、モデル作成のために最高品質のテンプレートが選択された。

【0221】

モデル構築：ＰｒｏＭｏｄ３を使用して、標的とテンプレートのアライメントに基づいてモデルを構築した。標的とテンプレートの間で保存されていた座標は、テンプレートからモデルにコピーされた。断片ライブラリーを使用して挿入および欠失をリモデリングした。次いで、側鎖を再構築した。最後に、結果として得られるモデルのジオメトリを、力場を使用して正規化した。ＰｒｏＭｏｄ３によるループモデリングが失敗した場合、ＰＲＯＭＯＤ－ＩＩを用いて代わりのモデルを構築した（Ｇｅｕｘら、１９９７）。

【0222】

モデル品質の推定：全体および残基ごとのモデル品質は、ＱＭＥＡＮスコアリング関数を使用して評価した（Ｂｅｎｋｅｒｔら、２０１１）。パフォーマンスを改善するために、個々のＱＭＥＡＮ用語の重みは、特にＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ向けにトレーニングされていた。

【0223】

ｈＣＤ１９ Ｖ_ＬおよびｈＣＤ１９ Ｖ_Ｈの３次元モデルは、ＣＤＲ残基が水相を露出し、抗原結合特性と一貫してパラトープ表面を形成できたことを示した。

【0224】

モジュールＩＩＩはヒトフレームワークグラフティングで構成された。合成ＣＡＲ構築プロセスの一環として、堅牢で信頼性の高いＣＤＲ移植手法がプラットフォーム技術に含められた。抗原結合配列（ＣＤＲ）を特定し、カスタム分析アルゴリズム（従来のＫａｂａｔ／ＩＭＧＴと新規方法の組合せ）を使用して抗体可変ドメインから選択的ヒトフレームワーク配列（重要な残基の相同性および位置に基づいて慎重に精選されたカスタムデータベース）にスプライシングして、堅牢な発現のための全長ヒト化ｓｃＦｖのパネルを作成した。

【0225】

ｓｃＦｖの完全なヒト化は、ＣＡＲを改変した治療細胞の持続性および生存力を確実にするヒト抗マウス反応性の可能性を減らすと同時に、臨床応用のためにｍＡｂの抗原結合ドメインをＣＡＲに組み込むプロセスに不可欠なステップである。本発明のＣＡＲヒト化プラットフォームの効力は、発現の特徴付け、機能性の検証、および前臨床試験のための、少なくとも５つの高品質な全長ヒト化ＣＡＲのパネルの新規作成によって示された。

【0226】

モジュールＩＶは、ヒト化スコアリングを含む。ＣＡＲのヒト化プロセスの一環として、スコアリングメトリックを使用して、合成構築物を定量化し、客観的に評価した。Ｔ２０^１スコアリングアルゴリズムを、図１０Ｂに収載される一連の市販のおよびＦＤＡに承認されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に適用してその有用性を試験した。予想通り、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ（図１０Ｃ）配列は、ヒト化の程度が高くなるほど、より高いスコアを示す。興味深いことに、Ｖ_Ｌ配列は、対のＶ_Ｈ配列と比較してＴ２０スコアが高くなる傾向がある。

【0227】

相関分析として、ＦＤＡに承認された抗体治療薬に関する情報を評価し、パブリックドメインの処方情報から、報告された免疫原性のレベルを患者において観察した。図１０Ｅに要約されるように、ヒト化のレベルが高いほど、患者において報告された免疫毒性の事例の減少と相関する傾向がある。

【0228】

ヒト化スコアリングの一例として、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ配列のＴ２０スコアを、ｈＣＤ１９ＣＡＲと比較したｍＣＤ１９ＣＡＲのヒト化プロセスの前後で評価した（図１０Ｆ～Ｇ）。実際に、より高いＴ２０スコアが、両方の処理された断片（ヒト化Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ）に観察された。ワークフローは反復的であるため、ＣＡＲヒト化プロセスを使用して、免疫原性が低く、持続性が高く、機能が堅牢なＣＡＲを生成することができる。

【0229】

本明細書において開示および特許請求される方法はすべて、本開示に照らして過度の実験を行うことなく作成および実行することができる。本発明の組成物および方法は、好ましい実施形態に関して記載されているが、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の方法および本明細書に記載される方法のステップまたはステップの順序に変化が加えられてもよいことは当業者に明らかであろう。より具体的には、同じまたは同様の結果を達成しながら、化学的にも生理学的にも関連する特定の薬剤を本明細書に記載される薬剤の代わりに使用してよいことは明らかであろう。当業者に明らかなそのような類似の置換および改変はすべて、添付される特許請求の範囲によって定義される本発明の精神、範囲および概念内にあるとみなされる。
参考文献
以下の参考文献は、本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順またはその他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。

【化6】

米国特許第７，１０９，３０４号

【0230】

特定の態様では例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）を前記ＣＡＲの前記ヒンジに含み、前記Ｅｖ３ヒンジは細胞外ドメインと少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを連結するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
（項目２）
前記Ｅｖ３ヒンジが、ＥＧＦＲｖＩＩＩの膜貫通ドメインおよび非機能性エクトドメインを含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３）
前記Ｅｖ３ヒンジが、ＥＧＦＲｖＩＩＩエンドドメインを含まない項目１に記載のＣＡＲ。
（項目４）
ＥＧＦＲｖＩＩＩの前記非機能性エクトドメインが上皮成長因子（ＥＧＦ）と本質的に結合しない項目２に記載のＣＡＲ。
（項目５）
前記Ｅｖ３ヒンジが、ＥＧＦＲの切断型ドメイン１、切断型ドメイン２、ドメイン３、およびドメイン４を含む項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６）
ＥＧＦＲの前記ドメイン３およびドメイン４が切断型でない項目５に記載のＣＡＲ。
（項目７）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目８）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目９）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号２のアミノ酸配列を含む項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１０）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号１と少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされている項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１１）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされている項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１２）
前記Ｅｖ３ヒンジが、配列番号１のヌクレオチド配列によってコードされている項目１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１３）
前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインが、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖからなる群から選択される抗原結合ドメインを含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目１４）
前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖを含む項目１３に記載のＣＡＲ。
（項目１５）
前記ｓｃＦｖが、さらにヒト化ｓｃＦｖとして規定される項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目１６）
前記ＣＡＲの前記抗原結合領域が、１またはそれを超える腫瘍関連抗原に結合する項目１３～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１７）
前記１またはそれを超える腫瘍関連抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＲＯＲ１、ＣＤ２０、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮腫瘍抗原、メラノーマ関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒα、κ鎖、λ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ、およびＣＤ９９からなる群から選択される項目１６に記載のＣＡＲ。
（項目１８）
前記１またはそれを超える腫瘍関連抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ３１９、ＣＤ１２３、ＣＤ５、ＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ９９、ＣＬＬ－１、および／またはメソテリンである、項目１６に記載のＣＡＲ。
（項目１９）
前記ｓｃＦＶがＥＧＦＲ結合ドメインを含まない項目１３～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目２０）
前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０、ＣＤ４０、またはそれらの組合せを含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２１）
前記少なくとも１つのシグナル伝達ドメインがＤＡＰ１２を含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２２）
前記ＣＡＲがＩＬ－１５を含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２３）
前記ＣＡＲがＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＤＡＰ１２、およびＩＬ－１５を含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２４）
前記ＣＡＲが自殺遺伝子をさらに含む項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２５）
前記自殺遺伝子が誘導性カスパーゼ９である項目２４に記載のＣＡＲ。
（項目２６）
軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む、単離された抗原特異的ヒト化単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であって、前記ｓｃＦｖが、
（ａ）ＣＤ１９特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号８のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤ１２３特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号１４のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）メソテリン特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号２０のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＲＯＲ１特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号２６のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤ５特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号３２のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）ＣＬＬ－１特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号６０のアミノ酸配列を含む；
（ｇ）ＣＤ９９特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または
（ｈ）（ａ）～（ｇ）のいずれか一つのフレームワーク領域に対して９０％の配列同一性を有する配列
であるヒト化単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）。
（項目２７）
前記ｓｃＦｖがＣＤ１９特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号８のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目２８）
前記ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖが配列番号６のアミノ酸配列を含む項目２７に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目２９）
前記ｓｃＦｖがＣＤ１２３特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号１４のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３０）
前記ＣＤ１２３特異的ｓｃＦｖが配列番号１２のアミノ酸配列を含む項目２９に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３１）
前記ｓｃＦｖがメソテリン特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号２０のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３２）
前記メソテリン特異的ｓｃＦｖが配列番号１８のアミノ酸配列を含む項目３１に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３３）
前記ｓｃＦｖがＲＯＲ１特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号２６のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３４）
前記ＲＯＲ１特異的が配列番号２４のアミノ酸配列を含む項目３３に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３５）
前記ｓｃＦｖがＣＤ５特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号３１のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号３２のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３６）
前記ＣＤ５特異的が配列番号３０のアミノ酸配列を含む項目３５に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３７）
前記ｓｃＦｖがＣＤ９９特異的であり、前記Ｖ_Ｌが配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｈが配列番号６４のアミノ酸配列を含む項目２６に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３８）
前記ＣＤ９９特異的が配列番号６２のアミノ酸配列を含む項目３５に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目３９）
前記ｓｃＦｖが、配列番号６、１２、１８、２４、または３０のアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む項目２６～３８のいずれか一項に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目４０）
前記ｓｃＦｖが、配列番号６、１２、１８、２４、または３０のアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む項目２６～３８のいずれか一項に記載のヒト化ｓｃＦｖ。
（項目４１）
項目２６～３８のいずれか一項に記載の単離されたヒト化ｓｃＦｖをコードする単離されたポリヌクレオチド。
（項目４２）
前記ポリヌクレオチドが、配列番号３、９、１５、２１、または２７を含む項目４１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目４３）
項目４１に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（項目４４）
前記ベクターが、さらにウイルスベクターとして規定される項目４３に記載のベクター。
（項目４５）
前記ヒト化ｓｃＦｖが、項目２６～３８のいずれか一項に記載のｓｃＦｖである項目１５に記載のＣＡＲ。
（項目４６）
項目１～２５および４５に記載のＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
（項目４７）
項目２６～３８のいずれか一項に記載のヒト化ｓｃＦｖおよび／または前記ＣＡＲの前記ヒンジ領域において切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ（Ｅｖ３）を含むＣＡＲを発現するように操作された宿主細胞。
（項目４８）
前記ＣＡＲが、項目１～２５のいずれか一項に記載のＣＡＲである項目４７に記載の細胞。
（項目４９）
前記宿主細胞がさらにＣＡＲ免疫細胞として規定される項目４７に記載の細胞。
（項目５０）
前記免疫細胞がＴ細胞、末梢血リンパ球、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または幹細胞である項目４９に記載の細胞。
（項目５１）
前記免疫細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である項目４９に記載の細胞。
（項目５２）
前記幹細胞が間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である項目５０に記載の細胞。
（項目５３）
前記免疫細胞がｉＰＳ細胞に由来する項目４９に記載の細胞。
（項目５４）
前記Ｔ細胞がＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、またはγδＴ細胞である項目５０に記載の細胞。
（項目５５）
前記Ｔ細胞が細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である項目５０に記載の細胞。
（項目５６）
前記免疫細胞が同種である項目４９に記載の細胞。
（項目５７）
前記免疫細胞が自己である項目４９に記載の細胞。
（項目５８）
前記免疫細胞が末梢血、臍帯血、または骨髄から単離されている項目４９に記載の細胞。
（項目５９）
前記免疫細胞が臍帯血から単離されている項目４９に記載の細胞。
（項目６０）
前記臍帯血が２またはそれを超える個々の臍帯血ユニットからプールされている項目５９に記載の細胞。
（項目６１）
前記ＣＡＲをコードするＤＮＡが前記細胞の前記ゲノムに組み込まれている項目４７に記載の細胞。
（項目６２）
項目４７～６１のいずれか一項に記載の細胞集団を含む薬学的組成物。
（項目６３）
免疫関連障害における使用のための、項目４７～６１のいずれか一項に記載の細胞集団を含む組成物。
（項目６４）
有効量の項目４７～６１のいずれか一項に記載の細胞を前記被験体に投与することを含む、被験体において免疫関連障害を処置する方法。
（項目６５）
前記免疫関連障害が、癌、自己免疫障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶反応、または炎症症状である項目６４に記載の方法。
（項目６６）
前記免疫関連障害が炎症症状であり、前記免疫細胞にはグルココルチコイドレセプターの発現が本質的ない項目６４に記載の方法。
（項目６７）
前記免疫細胞が自己である項目６４に記載の方法。
（項目６８）
前記免疫細胞が同種である項目６４に記載の方法。
（項目６９）
前記免疫関連障害が癌である項目６４に記載の方法。
（項目７０）
前記癌が固形癌または血液悪性腫瘍である項目６９に記載の方法。
（項目７１）
少なくとも第２の治療薬を投与することをさらに含む項目６４に記載の方法。
（項目７２）
前記少なくとも第２の治療薬が化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、または生物療法を含む項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記免疫細胞および／または前記少なくとも第２の治療薬が静脈内に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病変内に、経皮的に、皮下に、局所的に、または直接注射または灌流によって投与される項目７１に記載の方法。
（項目７４）
抗ＥＧＦＲ抗体を投与することをさらに含む項目６４に記載の方法。
（項目７５）
前記抗ＥＧＦＲ抗体がモノクローナル抗体である項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブまたはパニツムマブである項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記抗ＥＧＦＲ抗体が、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してＥｖ３－ＣＡＲ免疫細胞を選択的に除去する項目７４～７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
前記抗ＥＧＦＲ抗体が、検出可能なタグおよび／または細胞傷害性薬物に融合されている項目７４～７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記検出可能なタグを画像化し、それにより前記Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞を検出することをさらに含む項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記抗ＥＧＦＲ抗体が、細胞傷害性薬物に融合されている項目７４～７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
前記細胞傷害性薬物が、前記Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞において前記自殺遺伝子の活性化を誘導する項目７９に記載の方法。
（項目８２）
前記細胞傷害性薬物が、前記Ｅｖ３－ＣＡＲ免疫細胞の前記除去をもたらす項目７８に記載の方法。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図3-4】

【図3-5】

【図3-6】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図5-4】

【図5-5】

【図5-6】

【図5-7】

【図6】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図8-4】

【図8-5】

【図8-6】

【図8-7】

【図8-8】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図9-4】

【図9-5】

【図9-6】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図10-4】

【図10-5】

【図10-6】

【図10-7】

【図11-1】

【図11-2】

【図11-3】

【図11-4】

【図11-5】

【図11-6】

【図11-7】

【図11-8】

【図12-1】

【図12-2】

【図12-3】

【図12-4】

【図12-5】

【図12-6】

【図12-7】

【図12-8】

【図12-9】

【図12-10】

【配列表】

2023134735000001.app

【外国語明細書】