特開 2023-138857 タイランスタチン類似体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023138857

(43)【公開日】2023-10-02

(54)【発明の名称】タイランスタチン類似体

(51)【国際特許分類】

   C07D 493/10 20060101AFI20230922BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230922BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230922BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/351 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/4196 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/42 20060101ALI20230922BHJP

   A61K 31/4245 20060101ALI20230922BHJP

【ＦＩ】

C07D493/10

A61P35/00

A61P35/02

A61K47/68

A61K39/395 L

A61K39/395 T

A61K31/351

A61K31/4196

A61K31/42

A61K31/4245

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023131900

(22)【出願日】2023-08-14

(62)【分割の表示】P 2020516382の分割

【原出願日】2018-09-19

(31)【優先権主張番号】62/561,060

(32)【優先日】2017-09-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/686,781

(32)【優先日】2018-06-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】519337927

【氏名又は名称】ピーエイチ・ファーマ・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＰＨ ＰＨＡＲＭＡ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】バス・ジャンマラマダカ

(72)【発明者】

【氏名】キンバリー・アン・ティプトン

(72)【発明者】

【氏名】サンジーブ・サティアル

(72)【発明者】

【氏名】ホヨン・ホ

(57)【要約】

【課題】 疾患を処置する方法を提供すること
【解決手段】 本発明は、新規な細胞毒性化合物及びこれらの細胞毒性化合物と細胞結合剤とからなる細胞毒性複合体を提供する。より詳細には、本発明は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）中で細胞毒性小分子毒素として有用な新規なタイランスタチンＡ類似体に関する。本発明は更に、これらの細胞毒性化合物及びＡＤＣを含む組成物、ならびにがんをはじめとする病的状態を治療するためにこれらの毒素及びＡＤＣを使用する方法に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

明細書に記載の発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法施行規則（３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１５３条第（ｂ）（１）項の
下で出願された非仮出願であり、米国特許法（３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．）第１１９条第（ｅ）
項に基づき、２０１７年９月２０日出願の仮出願第６２／５６１，０６０号及び２０１８
年６月１９日出願の仮出願第６２／６８６，７８１号に対する優先権を主張するものであ
り、当該出願の内容をその全容にわたって参照によって本明細書に援用するものである。

【0002】

本発明は、新規な細胞毒性化合物及びこれらの細胞毒性化合物と細胞結合剤とからなる
細胞毒性複合体に関する。より詳細には、本発明は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）中で細胞
毒性小分子毒素として有用な新規なタイランスタチンＡ類似体に関する。本発明は更に、
これらの細胞毒性化合物及びＡＤＣを含む組成物、ならびにがんをはじめとする病的状態
を治療するためにこれらの毒素及びＡＤＣを使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

直接またはリンカーを介した薬物の抗体との複合体化では、薬物の複合体化のための化
学基の種類及び位置、薬物放出の機序、薬物放出を与える構造的要素、ならびに放出され
た遊離薬物の構造的改変をはじめとするさまざまな因子が考慮される。さらに、薬物が抗
体の内在化後に放出されるものである場合、薬物放出の機序は、複合体の細胞内トラフィ
ッキングと一致していなければならない。

【0004】

抗体薬物複合体（ＡＤＣ、免疫複合体としても知られる）は、抗がん剤としての大きな
効用が実証されている。ＡＤＣ内では、治療剤（細胞毒性薬物または毒素とも称する）が
、その抗原ががんまたは他の増殖性細胞により発現される（腫瘍関連抗原）抗体と共有結
合によって連結されている。この抗体が抗原と結合することによってＡＤＣをがん部位に
送達する。そこで共有結合による連結の切断、または抗体の分解によって治療剤が放出さ
れる。一方、ＡＤＣが血液系を循環している間は、治療剤は抗体と連結されているために
不活性である。そのため、ＡＤＣ中に用いられる治療剤は、その放出が高度に局在化され
ているため、通常の化学療法剤よりも大幅に強力なものとすることができる。

【0005】

多くの異なる薬物クラスで抗体による送達が試みられてきたが、適当な毒性プロファイ
ルを有しつつ抗体薬物複合体としての有効性が示された薬物のクラスはわずかである。奏
功した薬物クラスの１つに、真核生物のＲＮＡスプライシングの極めて強力な阻害剤であ
る、スプライソスタチンＣ及びタイランスタチンＡなどのＦＲ９０１４６４の類似体があ
る。これらの化合物は、スプライソソームの不可欠な構成成分であるＵ２ ｓｎＲＮＡサ
ブコンプレックスのＳＦ３ｂサブユニットに強く結合する（Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ，
Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１６，２７：１８８
０－１８８８）。

【0006】

米国特許第９，１６９，２６４号及び同第９，５０４，６６９号 （いずれもＳｕｂｒ
ａｍａｎｙａｍら）は、ＡＤＣのペイロードとして有用なスプライソスタチン系化合物、
及びＡＤＣとの関連で有用なペイロードリンカー化合物を開示している。当該特許はさら
に、がんをはじめとする病的状態の治療におけるこれらの化合物の使用について開示して
いる。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、主として抗がん剤である（ただしそれに限定されない）化合物及び化合物を
含有する医薬組成物、その調製、化合物の使用に関する。

【0008】

一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）：

【化1】

［式中、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－Ｎ
Ｈ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣ
Ｈ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｘは、－Ｈまたは－ＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0009】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ）：

【化2】

［式中、
Ｌは、リンカーであり、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－Ｎ
Ｈ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または、－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍ
ＣＨ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0010】

更なる態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ）：
Ｔ－Ｌ’－Ａｂ （ＩＩＩ）
［式中、
Ｌは、リンカー部分であり、
Ｔは、式（Ｉ’）：

【化3】

（式中、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－Ｎ
Ｈ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または、－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍ
ＣＨ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である）
の基であり、
Ａｂは、抗体である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0011】

更に別の態様によれば、本発明は、式（Ｉ）または式（ＩＩＩ）の化合物の化合物もし
くは化合物群、及び／またはそれらの塩もしくは塩群の医薬組成物であって、治療有効量
の化合物（複数可）または塩（複数可）と、薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦
形剤とを含む、医薬組成物に関する。かかる医薬組成物は、治療有効量の当業者には周知
の別の化学療法剤を更に含むことができる。

【0012】

別の実施形態によれば、本発明は、がんを治療するための方法であって、治療を要する
患者に、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩＩ）の化合物及び／またはそれらの塩もし
くは塩群を投与することを含み、前記量は、腫瘍細胞またはがん細胞を殺滅する、もしく
はその増殖を阻害するうえで有効である、方法に関する。

【0013】

更なる態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物を製造する方法であって、抗体
を式（ＩＩ）の化合物と反応させることを含む方法に関する。

【0014】

別の態様によれば、本発明は、がんを治療するためのキットであって、本発明の医薬組
成物とその使用説明書とを含むキットに関する。

【0015】

本発明の他の目的は、以下の明細書及び特許請求の範囲を読むことで当業者にとって明
らかとなろう。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】異なる用量の化合物１０、化合物１１、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、または溶媒のみによる処置後の雌性ＢＡＬＢ／ｃ系ヌードマウスにおけるＮＣＩ－Ｎ８７由来腫瘍の腫瘍体積測定値の平均±ＳＥＭ（平均の標準誤差）を示す。黒の矢印は、マウスに試験物を注射した日を示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本出願は、特定の方法または特定の組成物に限定されず、したがって、広く異なりうる
。本出願の範囲は付属の特許請求の範囲及びそれらの均等物によってのみ限定されるもの
であるので、本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明することを目
的としたものであり、限定を目的としたものではない点も理解されるべきである。

【0018】

本発明は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）中の細胞毒性小分子として有用な新規なタイラン
スタチン類似体化合物、及びＡＤＣとの関連で有用な、薬物リンカー化合物としても知ら
れる毒素リンカー化合物に関する。本発明は更に、これらの細胞毒性化合物及びＡＤＣを
含む組成物、ならびにがんをはじめとする病的状態を治療するためにこれらの毒素及びＡ
ＤＣを使用する方法に関する。

【0019】

定義及び略語
別段の定義がなされないかぎり、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用
語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有
するものとする。本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法及び材料を、
本出願の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法及び材料につい
て以下に記載する。

【0020】

本明細書で使用するところの「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）なる用語は
、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を含む。特定の実施形態では、抗体は、４本のペプチド鎖
、すなわち、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重鎖（ＨＣ）と２本の軽鎖
（ＬＣ）からなる完全長抗体である。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲまたは
ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とからなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣ
Ｈ３の３つのドメインで構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲまたは
ＶＬ）と、１個のドメインＣＬからなる軽鎖定常領域とからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、
相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に分けることができる。これらの領
域の間には、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）がある。各ＶＨおよびＶＬは、
アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤ
Ｒ３、およびＦＲ４の順序で配列された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成されている
。

【0021】

本明細書における「抗体」なる用語は広義の意味で使用され、具体的には、所望の生物
学的活性を示す限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量
体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含む（Ｍｉｌ
ｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００３，１７０：４８５４－４８
６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、または他の種に由来するものであって
よい。抗体は、特定の抗原を認識して結合することが可能な、免疫系によって産生される
タンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，２００１，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ）。標的抗原は、多くの抗体上のＣＤＲによって認識される、エピトープとも呼ばれ
る多くの結合部位を一般的に有している。異なるエピトープに特異的に結合するそれぞれ
の抗体は、異なる構造を有している。したがって、１つの抗原は、複数の対応する抗体を
有しうる。抗体は、完全長の免疫グロブリン分子、または完全長の免疫グロブリン分子の
免疫学的活性部分、すなわち、対象とする標的の抗原またはその部分と免疫特異的に結合
する抗原結合部位を含む分子を含み、かかる標的には、これらに限定されるものではない
が、がん細胞または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれる。本
明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子のいずれのタイプ（例えば、
ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２
、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであってもよ
い。免疫グロブリンはいずれの種に由来するものであってもよい。しかしながら、一態様
では、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ由来のものである。

【0022】

「抗体フラグメント」は、完全長抗体の一部、一般的には、その抗原結合領域又は可変
領域を含む。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフ
ラグメント；ダイアボディ、線状抗体、ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｅｌ．，２００４，１７（４）：３１５－３
２３）、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生産されるフラグメント、抗イディオタイプ（
抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗
原、一本鎖抗体分子に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されるいずれかのエピトー
プ結合フラグメント；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。

【0023】

特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭである
。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、ま
たはＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２である。

【0024】

特定の実施形態では、細胞結合剤は、抗原結合に重要な配列を抗体と共有する、モノク
ローナル抗体の「抗原結合部分」である（例えば、本明細書に参照により援用するところ
の米国特許第７，３４２，１１０号及び同第７，５５７，１８９号に記載されるｈｕＭｙ
９－６またはその関連抗体）。

【0025】

本明細書で使用するところの抗体の「抗原結合部分」（または、本明細書では「抗体フ
ラグメント」と互換的に呼ぶ場合もある）なる用語には、抗原に特異的に結合する能力を
維持した抗体の１つ以上のフラグメントが含まれる。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体
の特定のフラグメントによって行われうることが示されている。抗体の「抗原結合部分」
なる用語に包含される結合フラグメントの例としては、（これらに限定されるものではな
いが、）（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価
のフラグメント（例えば、パパインで消化した抗体は、２個の抗原結合Ｆａｂフラグメン
トと、抗原に結合しない１個のＦｃフラグメントの３つのフラグメントを生じる））、（
ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント（ヒンジ領域においてジスルフィド結合によって連結
された２個のＦａｂフラグメントからなる二価のフラグメント（例えば、ペプシンで消化
した抗体は、二価の抗原結合Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントと、抗原に結合しないｐＦｃ’
フラグメントの２個のフラグメントを生じる）及びその関連するＦ（ａｂ’）一価単位）
、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント（すなわち、Ｆａｂに含
まれる重鎖の部分）、（ｉｖ）抗体の一本のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ
フラグメント、及び関連するジスルフィド結合されたＦｖ、（ｖ）ＶＨドメインからなる
ｄＡｂ（ドメイン抗体）またはｓｄＡｂ（シングルドメイン抗体）フラグメント、ならび
に（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。特定の実施形態では、抗
原結合部分は、ｓｄＡｂ（シングルドメイン抗体）である。

【0026】

特定の実施形態では、抗原結合部分には、天然に存在する抗体には見られない要素また
は配列以外に、抗原に特異的に結合する能力を維持した抗体の１つ以上のフラグメントを
更に含む特定の操作された、または組換え誘導体（または「誘導体抗体」）も含まれる。

【0027】

例えば、Ｆｖフラグメントの２個のドメインＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコード
されているが、これらのドメインは、標準的な組換え法を用い、ＶＬ領域とＶＨ領域とが
連結されて１価の分子を形成した１本のタンパク質鎖として生成されることを可能とする
合成リンカーにより、連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）
。本明細書に記載されるすべての実施形態において、ｓｃＦＶのＮ末端は、ＶＨドメイン
（すなわち、Ｎ－ＶＨ－ＶＬ－Ｃ）またはＶＬドメイン（すなわち、Ｎ－ＶＬ－ＶＨ－Ｃ
）であってよい。

【0028】

２個のｓｃＦＶを連結することによって二価（ｄｉｖａｌｅｎｔまたはｂｉｖａｌｅｎ
ｔ）の一本鎖可変フラグメント（ｄｉ－ｓｃＦｖｓ、ｂｉ－ｓｃＦｖｓ）を作製すること
ができる。これにより、２個のＶＨ領域と２個のＶＬ領域を有する一本のペプチド鎖を生
じ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａｓｃＦｖ）が与えられる。ｔｒｉ－ｓｃＦｖのような更なる
タンデムリピートを、３つ以上のｓｃＦｖを、頭部と尾部とをつなぐように連結すること
によって同様に作製することができる。

【0029】

特定の実施形態では、ｓｃＦｖを２個の可変領域が互いに対して折り畳まれるには短す
ぎる（アミノ酸約５個）リンカーペプチドで連結することによってｓｃＦｖ同士を二量体
化させ、ダイアボディを形成させることができる。ダイアボディは、二重特異性または単
一特異性でありうる。ダイアボディは、対応するｓｃＦｖと比較して最大で４０倍、より
低い解離定数を有することが示されており、したがって、標的に対してより高い親和性を
有する。

【0030】

更により短いリンカー（アミノ酸１個または２個）によって、トリマー、またはいわゆ
るトリアボディまたはトリボディが形成される。同様にテトラボディも作製されている。
これらは、標的に対してダイアボディよりも更に高い親和性を示す。ダイアボディ、トリ
アボディ、及びテトラボディは、まとめて「ＡＶＩＢＯＤＹ（商標）」細胞結合剤（また
は、単に「ＡＶＩＢＯＤＹ」）と呼ばれる場合もある。つまり、２個、３個、または４個
の標的結合領域（ＴＢＲ）を有するＡＶＩＢＯＤＹは、ダイアボディ、トリアボディ、及
びテトラボディとして一般的に知られる。詳細については例えば、それらの教示内容の全
体を本明細書に参照により援用するところの米国特許出願公開第２００８／０１５２５８
６号及び同第２０１２／０１７１１１５号を参照されたい。

【0031】

これらのフォーマットはいずれも、２種以上の異なる抗原に対する特異性を有する可変
領域で構成することができ、その場合、これらは二重特異性抗体または多重特異性抗体の
種類である。例えば、特定の二重特異性のタンデムなｄｉ－ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細
胞結合体（ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ）（ＢｉＴＥ）とし
て知られている。特定の実施形態では、タンデムｓｃＦｖまたはダイアボディ／トリアボ
ディ／テトラボディ内のそれぞれのｓｃＦｖは、同じまたは異なる結合特異性を有するこ
とができ、それぞれがＮ末端ＶＨまたはＮ末端ＶＬを独立して有することができる。

【0032】

Ｆｃａｂは、抗体のＦｃ定常領域から作製された抗体フラグメントである。Ｆｃａｂは
可溶性タンパク質として発現させることができ、または、ＩｇＧなどの完全長抗体内に操
作により戻してｍＡｂ２を作製することができる。ｍＡｂ２は、正常なＦｃ領域の代わり
にＦｃａｂを有する完全長抗体である。これらの更なる結合部位により、ｍＡｂ２二重特
異性モノクローナル抗体は、２個の異なる標的に同時に結合することができる。

【0033】

天然の抗体は、２個の同じ抗原結合ドメインを発現している点で単一特異性であるが二
価である。これに対して、特定の実施形態では、特定の操作された抗体誘導体は、それぞ
れが異なる標的特異性を有する２個以上の異なる抗原結合ドメインを有する二重または多
重特異性分子である。二重特異性抗体は、それぞれが異なる特異性を有する２個の抗体産
生細胞を融合することによって作製することができる。これらの「クアドローマ」（ｑｕ
ａｄｒｏｍａ）は、２本の異なる軽鎖と２本の異なる重鎖とがクアドローマ内で複数の形
態で自由に組換えを生じたために、複数の分子種を生じた。それ以来、二重特異性のＦａ
ｂ、ｓｃＦｖ及び完全長ｍＡｂが、様々な技術を用いて作製されている（上記を参照）。

【0034】

二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）タンパク質は、２つの抗原／エピト
ープを同時に標的とする二重特異性ＩｇＧの一種である。この分子は、従来のＩｇＧと同
様の構成でＦｃ領域と各定常領域を有している。しかしながら、ＤＶＤ－Ｉｇタンパク質
は、分子の各アームが２個の可変ドメイン（ＶＤ）を含んでいる点で特徴的である。アー
ム内のＶＤ同士はタンデムに連結され、異なる結合特異性を有することができる。

【0035】

三重特異性抗体誘導体分子も、例えば、２個の異なるＦａｂと１個のＦｃを有する二重
特異性抗体を発現させることによって作製することができる。１つの例として、ＢｉＵＩ
Ｉと呼ばれるマウスＩｇＧ２ａ抗Ｅｐ－ＣＡＭ，ラットＩｇＧ２ｂ抗ＣＤ３クアドローマ
があり、これは、Ｅｐ－ＣＡＭを発現する腫瘍細胞、ＣＤ３を発現するＴ細胞、及びＦＣ
_δＲＩを発現するマクロファージを共局在化させ、それにより免疫細胞の共刺激機能及び
抗腫瘍機能を増強させると考えられている。

【0036】

プロボディは、正常組織中では不活性な状態であるが、疾患微小環境中で特異的に活性
化される（例えば、疾患微小環境中に多く存在する、または特異的なプロテアーゼによる
プロテアーゼ切断によって）完全な組換えのマスキングされたモノクローナル抗体である
。同様なマスキング法を、本明細書中に記載される抗体またはその抗原結合部分のいずれ
にも使用することができる。

【0037】

イントラボディは、細胞内で機能して細胞内抗原に結合するように、細胞内で局在化す
るように改変された抗体である。イントラボディは、細胞質に留まってもよく、または核
局在化シグナルを有してもよく、またはＥＲにターゲティングするためのＫＤＥＬ配列を
有してもよい。イントラボディは、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）であってもよく、超安定性を
有する改変された免疫グロブリンＶＬドメインであってもよく、より還元性の高い細胞内
環境に対して耐性のある選択された抗体であってもよく、またはマルトース結合タンパク
質もしくは他の安定した細胞内タンパク質との融合タンパク質として発現させてもよい。
こうした最適化は、イントラボディの安定性及び構造を向上させるものであり、本明細書
中に記載される抗体またはその抗原結合部分のいずれに対しても広く応用できる。

【0038】

本発明の抗原結合部分または誘導体抗体は、それらが由来する／作製される元となる抗
体と比較して、実質的に同じまたは同一の（１）軽鎖及び／または重鎖のＣＤＲ３領域、
（２）軽鎖及び／または重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域、または（３）軽
鎖及び／または重鎖領域を有してもよい。これらの領域内の配列は、ＣＤＲ領域内の置換
を含む、保存的アミノ酸置換を有してもよい。特定の実施形態では、保存的置換は１、２
、３、４、または５つ以下である。別の実施形態では、抗原結合部分または誘導体抗体は
、それらが由来する／作製される元となる抗体と少なくとも約９０％、９５％、９９％、
または１００％同一である軽鎖領域及び／または重鎖領域を有する。これらの抗原結合部
分または誘導体抗体は、抗体と比較して、標的抗原に対して実質的に同じ結合特異性及び
／または親和性を有することができる。特定の実施形態では、抗原結合部分または誘導体
抗体のＫ_ｄ及び／またはｋ_ｏｆｆ値は、本明細書中に記載される抗体の、１０倍（高いま
たは低い）、５倍（高いまたは低い）、３倍（高いまたは低い）、または２倍（高いまた
は低い）の範囲内のものである。

【0039】

特定の実施形態では、抗原結合部分または誘導体抗体は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、
またはキメラ抗体に由来する／これらから操作により作製することができ、当該分野で認
識される任意の方法に従って作製することができる。

【0040】

本明細書で使用するところの「モノクローナル抗体」なる用語は、実質的に均質な抗体
の集団から得られる抗体を指す（すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し
うる可能性のある自然発生変異を例外として同一である）。モノクローナル抗体は高度に
特異的であり、単一の抗原部位を標的としている。「モノクローナル」なる修飾語は、実
質的に均質な抗体の集団から得られたものであるという抗体の特性を示し、いずれかの特
定の方法による抗体の産生を要するものとして理解されるべきではない。

【0041】

「モノクローナル抗体」なる用語は、具体的には、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特
定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する
配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するか
または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同
であるような「キメラ」抗体、ならびに所望の生物学的活性を示す限り、かかる抗体のフ
ラグメントを含む。

【0042】

非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する
最小限の配列を含んだキメラ抗体である。多くの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超
可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び容量を有する、マウス、ラット、ウ
サギ、または非ヒト霊長類などのヒト以外の種の超可変領域（ドナー抗体）に由来する残
基で置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合により、ヒト免疫
グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換される。更
に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、ドナー抗体にも見られない残基を含んでもよ
い。これらの改変は、抗体の性能を更に向上させるために行われる。一般にヒト化抗体は
、超可変ループのすべてまたはほぼすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ
のすべてまたはほぼすべてがヒト免疫グロブリン配列のものであるような、少なくとも１
つ、一般的には２つの可変ドメインのほぼすべてを含む。ヒト化抗体は、場合により、免
疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのもの
を更に含む。

【0043】

「システイン操作抗体」とは、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基に置換された抗
体である。本開示によれば、システイン操作抗体のチオール基（複数可）を、式（Ｉ）の
タイランスタチン類似体毒素または式（ＩＩ）の毒素リンカー化合物に結合させて抗体薬
物複合体（ＡＤＣ）化合物を形成することができる。特定の化合物では、置換される残基
は抗体のアクセス可能な部位にある。これらの残基をシステインに置換することにより、
反応性チオール基が抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書で更に述べるように
、抗体を薬物部分と結合させてＡＤＣを形成することができる。例えば、システイン操作
抗体は、軽鎖または重鎖内に非システイン天然残基のシステインへの単一変異を有する抗
体であってよい（軽鎖では例えば、カバット番号付けに従ってＧ６４Ｃ、Ｋ１４９Ｃまた
はＲ１４２Ｃ、重鎖ではカバット番号付けに従ってＤ１０１ＣまたはＶ１８４ＣまたはＴ
２０５Ｃ）。特定の例では、システイン操作抗体は、各完全長抗体（すなわち、２本の重
鎖と２本の軽鎖を有する抗体）が２個の操作されたシステイン残基を有するように、重鎖
または軽鎖のいずれかに単一のシステイン変異を有する。システイン操作抗体及びその調
製方法は、米国特許出願公開第２０１２／０１２１６１５号、米国特許第７，５２１，５
４１号；Ｓｈｅｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１２，３
０（２）：１８４－１８９；Ｓｕｋｕｍａｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，
２０１５，３２：１８８４－１８９３に開示される （本明細書にこれらの全容を参照に
より援用する）。

【0044】

「治療有効量」なる用語は、哺乳動物の疾患または障害を治療するうえで有効な薬物の
量を指す。がんの場合では、薬物の治療有効量は、がん細胞の数を減少させ、腫瘍サイズ
を縮小し、がん細胞の周辺臓器への浸潤を阻止し（すなわち、一定程度遅らせ、好ましく
は止める）、腫瘍の転移を阻止し（すなわち、一定程度遅らせ、好ましくは止める）、腫
瘍増殖を一定程度阻害し、かつ／またはがんに関連する症状の１つ以上を一定程度緩和す
ることができる。薬物は、存在するがん細胞の増殖を阻止し、かつ／またはがん細胞を殺
滅することができるものであれば、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性でありうる。が
ん治療において、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価し、かつ／ま
たは反応率（ＲＲ）を求めることによって測定することができる。治療有効量は、化合物
、治療される疾患または障害の重症度、ならびに治療される患者の年齢、体重などに応じ
て異なる。

【0045】

「相当量」なる用語は、集団、混合物、または試料の大半、すなわち、５０％超のこと
を指す。

【0046】

「細胞毒性活性」または「細胞毒性」なる用語は、ＡＤＣまたはＡＤＣの細胞内代謝産
物の細胞殺滅、細胞増殖抑制、または抗増殖作用を指す。細胞毒性活性は、半数の細胞が
生存する単位体積当たりの濃度（モル濃度または質量濃度）であるＩＣ_５０値として表す
ことができる。

【0047】

「疾患」とは、薬物または抗体薬物複合体による治療が効果を示す任意の状態である。
これには、哺乳動物を問題となる疾患に罹患しやすくする病的状態を含む慢性及び急性障
害または疾患が含まれる。本明細書で治療される疾患の非限定的な例としては、良性及び
悪性のがん、白血病及びリンパの悪性疾患、神経性、グリア性、アストロサイト性、視床
下部性、ならびに他の腺性、マクロファージ性、上皮性、間質性、及び割腔性疾患、なら
びに炎症性、血管新生性、及び免疫性疾患が挙げられる。

【0048】

「がん」及び「がん性」なる用語は、調節されない細胞増殖によって一般的に特徴付け
られる、哺乳動物における病的状態または疾患を指す、またはこれを述べて言う。「腫瘍
」は、１つ以上のがん性細胞を含む。

【0049】

「患者」なる用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。

【0050】

「治療する」または「治療」なる用語は、文脈上そうでない旨が示されない限り、再発
を防止するための治療処置及び予防措置を指し、その目的は、がんの発生または転移など
の望ましくない生理学的変化または疾患を阻止または遅延（軽減）することにある。本発
明の目的では、有益なまたは望ましい臨床成績としては、これらに限定されるものではな
いが、検出可能であるか検出不能であるかによらず、症状の緩和、疾患の程度の減弱、疾
患の安定した（すなわち悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または鈍化、疾患の状態の
改善または緩和及び寛解（部分または完全）が挙げられる。「治療」は、治療を受けなか
った場合に期待される生存期間と比較して生存期間が延びることも意味する。治療を要す
る対象としては、状態または疾患を既に有している者ばかりでなく、状態または疾患に罹
りやすい者も含まれる。

【0051】

がんとの関連において、「治療する」なる用語には、腫瘍細胞、がん細胞、または腫瘍
の増殖を阻害すること、腫瘍細胞またはがん細胞の複製を阻害すること、腫瘍負荷全体を
低減することまたはがん性細胞の数を減少させること、及び、疾患に関連する１つ以上の
症状を改善すること、のいずれかまたはすべてが含まれる。

【0052】

自己免疫疾患との関連において、「治療する」なる用語には、これらに限定されるもの
ではないが、自己免疫抗体を産生する細胞を含む、自己免疫疾患に関連した細胞の増殖を
阻害すること、自己免疫－抗体負荷を低減すること、及び、自己免疫疾患の１つ以上の症
状を改善すること、のいずれかまたはすべてが含まれる。

【0053】

感染症との関連において、「治療する」なる用語には、感染症を引き起こす病原体の増
殖、分裂、または複製を阻害すること、及び感染症の１つ以上の症状を改善すること、の
いずれかまたはすべてが含まれる。

【0054】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「アルキル」なる用語は、示
された数の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素のことを指す（例えば、
「Ｃ_１～Ｃ_８」アルキルは、１～８個の炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素原子
の数が示されていない場合、アルキル基は、１～８個の炭素原子、好ましくは１～６個の
炭素原子を有する。「アルキル」なる用語は、任意の飽和度またはレベルを有する基、す
なわち、一重炭素－炭素結合のみを有する基、１つ以上の二重炭素－炭素結合を有する基
、１つ以上の三重炭素－炭素結合を有する基、及び一重、二重、三重炭素－炭素結合の組
み合わせを有する基を含むことを具体的には意図している。特定の飽和度が想定される場
合には、「アルカニル」、「アルケニル」、及び「アルキニル」のような表現が用いられ
る。代表的な直鎖のＣ_１～Ｃ_８アルキルとしては、これらに限定されるものではないが、
メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチ
ル、及び、ｎ－オクチルが挙げられ、分枝鎖のＣ_１～Ｃ_８アルキルとしては、これらに限
定されるものではないが、－イソプロピル、－ｓｅｃ－ブチル， －イソブルチル、－ｔ
ｅｒｔ－ブチル、－イソペンチル、及び－２－メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ_２～Ｃ
_８アルキルとしては、これらに限定されるものではないが、ビニル、アリル、１－ブテニ
ル、２－ブテニル、イソブチレニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－メチル－１
－ブテニル、２－メチル－２－ブテニル、２，３－ジメチル－２－ブテニル、１－ヘキシ
ル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、アセチレニル、プロピニル、１－ブチニル、２－ブチ
ニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル及び３－メチル－１－ブチニルが挙げられる。

【0055】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「アルキレン」なる用語は、
記載された数の炭素原子、一般的には１～１８個の炭素原子を有し、親アルカンの同じま
たは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子が外れることによって生じる２個の一価の
基中心を有する、飽和した、分枝鎖もしくは直鎖または環状の炭化水素基のことを指す。
一般的なアルキレン基としては、これらに限定されるものではないが、メチレン （－Ｃ
Ｈ_２－）、１，２－エチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２－）、１，３－プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ
_２ＣＨ_２－）、１，４－ブチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などが挙げられる。
「Ｃ_１～Ｃ_１０」直鎖アルキレンは、式－（ＣＨ_２）_１～１０－の直鎖の飽和炭化水素基
である。Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチ
レン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、及びデカレンが挙
げられる。本発明の特定の実施形態では、アルキレンは、１～９個、１～８個、１～７個
、及び１～６個の炭素原子を有する。

【0056】

本明細書で使用するところの「化合物」または「化合物群」なる用語は、タイランスタ
チン類似体を指し、本明細書に開示される一般式に包含されるすべての特定の化合物を含
む。化合物はその化学構造及び／または化学名によって同定することができる。化学構造
と化学名とが矛盾する場合、化学構造がその化合物が何であるかを決定する。化合物は、
１つ以上のキラル中心及び／または二重結合を有することができ、したがって、二重結合
異性体（すなわち、幾何異性体）、エナンチオマーまたはジアステレオマーなどの立体異
性体として存在しうる。したがって、キラル中心における立体化学が指定されない場合、
本明細書に示される化学構造は、立体異性体的に純粋な形態（例えば、幾何的純粋、エナ
ンチオマー純粋、またはジアステレオマー純粋）ならびにエナンチオマー混合物及び立体
異性体混合物を含むこれらのキラル中心におけるすべての可能な形態を包含する。エナン
チオマー混合物及び立体異性体混合物は、当業者には周知の分離法またはキラル合成法を
用いてそれらの構成エナンチオマーまたは立体異性体に分割することができる。化合物は
、エノール型、ケト型、及びそれらの混合物を含むいくつかの互変異性体として存在する
場合もある。したがって、本明細書に示される化学構造は、示される化合物のすべての可
能な互変異性体を包含するものである。化合物はまた、１個以上の原子が通常自然界に見
られる原子質量と異なる原子質量を有する同位体標識された化合物も含む。化合物に取り
込ませることができる同位体の例としては、これらに限定されるものではないが、^２Ｈ、
^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、及び^１８Ｏが挙げられる。化合物は、非溶媒和
型としてだけでなく、水和型を含む溶媒和型として、また、Ｎオキシドとして存在しても
よい。一般的に、水和型、溶媒和型、及びＮオキシド型は、本開示の範囲内に含まれる。
特定の化合物は、複数の結晶または非晶質形態として存在しうる。一般的に、すべての物
理的形態は本明細書で想到される使用において等価であり、本開示の範囲内に含まれるも
のとする。更に、化合物の部分構造が示される場合、括弧は、その部分構造の分子の残り
の部分との結合点を示すことを理解すべきである。

【0057】

特に断らない限り、それ自体または別の語との組み合わせとしての「ヘテロアルキル」
なる用語は、特に断らない限り、記載される数の炭素原子と、Ｏ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓ及び／ま
たはＰからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子とからなる、完全に飽和している
かまたは１～３の不飽和度を有する、安定な直鎖もしくは分枝鎖の炭化水素、またはそれ
らの組み合わせを意味し、場合により、窒素及び硫黄原子が酸化され、窒素ヘテロ原子が
場合により四級化されてもよい。ヘテロ原子（複数可）Ｏ、Ｎ、及びＳは、ヘテロアルキ
ル基のいずれの内部の位置に配置されてもよい。ヘテロ原子Ｓｉは、アルキル基が分子の
残りの部分に結合される位置を含むヘテロアルキル基の任意の位置に配置することができ
る。２個以下のヘテロ原子が連続してもよい。

【0058】

「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを指す。

【0059】

「ハロ（Ｃ_１～６アルキル）」は、１～３個または１～２個のハロ基で置換されたＣ_１
～６アルキル基を指す（Ｃ_１～６アルキル及びハロは本明細書に定義されるとおりである
）。かかる用語には、例えば、ＣＦ_３が含まれる。

【0060】

「エポキシ」、または「エポキシ基」、または「エポキシ残基」なる用語は、一重結合
によって連結された炭素原子と１個の酸素原子とからなる３員環を指す。したがって、「
エポキシド」なる用語は、少なくとも１つの定義されたエポキシ基を含む化合物を指す。

【0061】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「アリール」なる用語は、親
芳香族環系の１個の炭素原子から１個の水素原子が外れることによって生じる、６～２０
個の炭素原子、好ましくは、６～１４個の炭素原子を有する、置換または非置換の一価の
芳香族炭化水素基を意味する。一般的なアリール基としては、これらに限定されるもので
はないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリセン、アントラセン、
アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、
ヘキサフェン、ヘキサレン、ａｓ－インダセン、ｓ－インダセン、インダン、インデン、
ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ－２,４－ジエ
ン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、
ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタ
レンなどから誘導される基が挙げられる。好ましくは、アリール基は６～２０個、より好
ましくは６～１２個の炭素原子を含む。置換芳香族基（例えば、アリール基）は、１個以
上、好ましくは１～５個の以下の基で置換されてよい。すなわち、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキル）、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、
－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’
、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、ハロゲン、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’
）_２、及び－ＣＮ（ただし、各Ｒ’は－Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、Ｃ_１～Ｃ_８ヘテロアル
キル、及びアリールから独立して選択される）。いくつかの実施形態では、置換芳香族基
は、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣＯＮＨ_２、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’及び－ＳＲ’の
うちの１つ以上を更に含むことができる。

【0062】

本明細書で使用するところの「ヘテロアリール」なる用語は、窒素、酸素、及び硫黄か
ら選択される少なくとも１つのヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含む、５
～１４員、例えば５～６員の芳香族複素環式環を指す。ヘテロアリールは、単環式、二環
式、または三環式環系であってよい。代表的ヘテロアリールとしては、トリアゾリル、テ
トラゾリル、オキサジアゾリル、ピリジル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベ
ンゾチオフェニル、キノリニル、ピロリル、インドリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾ
リル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソオキサ
ゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリ
アジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ピリミジニル、アゼピニル、オ
キセピニル、及びキノキサリニルがある。ヘテロアリールは場合により置換される。一般
的な置換基としては、これらに限定されるものではないが、－Ｘ、－Ｒ、－Ｏ－、－ＯＲ
、－ＳＲ、－Ｓ－、－ＮＲ_２、－ＮＲ_３、＝ＮＲ、－ＣＸ_３、－ＣＮ、－ＯＣＮ、－ＮＲ
Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ、－ＯＳ（＝Ｏ）_２
ＯＲ、－Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）
（ＯＲ）_２、ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、－ＣＯ_２
Ｒ、－ＣＯ_２－、－Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｏ
）ＮＲ_２、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ_２、－Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ_２、Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアルキル、
Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分（た
だし、各Ｘは、独立してハロゲン－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、または－Ｉであり、各Ｒは、独
立して－ＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）が挙げられる。

【0063】

「ヒドロキシ」なる用語は－ＯＨ基を指す。

【0064】

「置換アルキル」なる用語は、１個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換され
たアルキルを意味する。一般的な置換基としては、これらに限定されるものではないが、
－Ｘ、－Ｒ、－Ｏ－、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｓ－、－ＮＲ_２、－ＮＲ_３、＝ＮＲ、－ＣＸ_３
、－ＣＮ、－ＯＣＮ、＝Ｎ_２、－ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、－ＳＯ_３－、
－ＳＯ_３Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ、－ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ、－Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ、－Ｓ（＝
Ｏ）Ｒ、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、－ＰＯ_３ ^２－、ＰＯ_３Ｈ
_２、－ＡｓＯ_２Ｈ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、－ＣＯ_２Ｒ、
－ＣＯ_２、－Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ
_２、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ_２、－Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ_２、Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアルキル、Ｃ_６～
Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分（ただし、
各Ｘは、独立してハロゲン－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、または－Ｉであり、各Ｒは、独立して
－ＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルである）が挙げられる。ハロゲンで置換された置換アルキ
ルは、本明細書ではハロアルキルと呼ばれる場合もある。本明細書に記載されるアリール
、アルキレン、ヘテロアルキレン、及びアルキルまたはアルキレン部分を含むもしくは含
まない他の基も、同様に置換されてよい。

【0065】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「アラルキル」は、上記で定
義したアリール基で置換された上記で定義したアルキル基を意味する。

【0066】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル
」は、３～８個の炭素原子（環員とも呼ばれる）と、Ｎ、Ｏ、Ｐ、またはＳから独立して
選択される１～４個のヘテロ原子環員とを有し、親環系の環原子から１個の水素原子が外
れることにより生じる、一価または二価の置換または非置換の芳香族または非芳香族単環
式または二環式環系のことを指す。同様に、特に断らない限り、それ自体または別の語の
一部としての「Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリル」は、３～１０個の炭素原子（環員とも呼ば
れる）と、Ｎ、Ｏ、Ｐ、またはＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子環員とを
有し、親環系の環原子から１個の水素原子が外れることにより生じる、一価または二価の
置換または非置換の芳香族または非芳香族単環式または二環式環系のことを指す。ヘテロ
シクリル内の１つ以上のＮ、ＣまたはＳ原子が酸化されてもよい。ヘテロ原子を含む環は
、芳香族でも非芳香族でもよい。１０個よりも多い炭素を有するヘテロシクリル基、例え
ば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、また
は２０個の炭素を有する環または環系も可能であり、「ヘテロシクリル」なる用語が特定
の炭素の数に言及せずに用いられている場合には、Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリルとともに
包含される。同様に、３個よりも少ない炭素を有するヘテロシクリル基、例えば、１個ま
たは２個の炭素を有する環が可能であり、「ヘテロシクリル」なる用語が特定の炭素の数
に言及せずに用いられている場合には包含される。「ヘテロシクロアルキル」なる用語は
、すべての炭素原子が飽和した（すなわち、水素または下記に示した別の置換基に結合さ
れ、二重結合も三重結合も含まない）非芳香族ヘテロシクリル環または環系を指す。特定
の実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は一般的に３～５員を有し、１～２個のヘテロ
原子を有する。特定の実施形態では、ヘテロシクロアルキルはエポキシであってよい。

【0067】

特に断らない限り、ヘテロシクリルは、任意のヘテロ原子または炭素原子においてその
ペンダント基に結合されており、これにより安定した構造を与える。Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシ
クリルの代表例としては、これらに限定されるものではないが、テトラヒドロフラニル、
オキセタニル、ピラニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフ
ェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、ピロリル、チオフェニル（チオペン）、フラニル
、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、
ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリ
ル、及びテトラゾリルが挙げられる。Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル、またはＣ_３～Ｃ_１０ヘ
テロシクリルは、これらに限定されるものではないが、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、Ｃ_１～Ｃ_８
ヘテロアルキル、－ＯＲ、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｏ
Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）
Ｒ’、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、ハロゲン、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）
_２及び－ＣＮを含む最大７個の基で置換されてもよい（ただし、各Ｒ’は、－Ｈ、Ｃ_１～
Ｃ_８アルキル、Ｃ_１～Ｃ_８ヘテロアルキル及びアリールから独立して選択される）。特定
の実施形態では、置換ヘテロシクリルは、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣＯＮＨ_２
、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’及び－ＳＲ’のうちの１つ以上を有してもよい。

【0068】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「ヘテロアラルキル」は、上
記で定義した芳香族ヘテロシクリル基で置換された上記で定義したアルキル基を意味する
。

【0069】

特に断らない限り、それ自体または別の語の一部としての「Ｃ_３～Ｃ_８カルボシクリル
」は、親環系の環原子から１個の水素原子または２個の水素原子が外れることで生じる、
３員、４員、５員、６員、７員または８員の一価または二価の置換または非置換の飽和ま
たは不飽和の非芳香族単環式または二環式の炭素環式環である。同様に、特に断らない限
り、それ自体または別の語の一部としての「Ｃ_３～Ｃ_１０カルボシクリル」は、親環系の
環原子から１個の水素原子が外れることで生じる、３員、４員、５員、６員、７員、８員
、９員または１０員の一価または二価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族
単環式または二環式の炭素環式環である。代表的なＣ_３～Ｃ_８カルボシクリルとしては、
これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、
シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、１，３－シクロヘキサジエ
ニル、１，４－シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、１，３－シクロヘプタジエニル
、１，３，５－シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル、シクロオクタジエニル、ビシ
クロ（１１１）ペンタン、及びビシクロ（２２２）オクタンが挙げられる。Ｃ_３～Ｃ_８カ
ルボシクリル基、またはＣ_３～Ｃ_１０カルボシクリル基は、非置換であるか、またはこれ
らに限定されるものではないが、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、Ｃ_１～Ｃ_８ヘテロアルキル、－Ｏ
Ｒ’、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ
_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（＝Ｏ）
_２Ｒ’、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）_２及び
－ＣＮを含む最大７個の基で置換されてもよい（ただし、各Ｒ’は、－Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_８ア
ルキル、Ｃ_１～Ｃ_８ヘテロアルキル及びアリールから独立して選択される）。１０個より
も多い炭素を有するカルボシクリル基、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５
個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個の炭素を有する環系も可能であり、
「カルボシクリル」なる用語が特定の炭素の数に言及せずに用いられている場合には、Ｃ
_３～Ｃ_１０カルボシクリルとともに包含される。

【0070】

「シクロアルキル」なる用語は、すべての炭素原子が飽和した（すなわち、水素または
下記に示した別の置換基に結合され、二重結合も三重結合も含まない）カルボシクリル環
または環系を指す。

【0071】

「キラル」なる用語は、鏡像関係の相手と重ね合わせることができない性質を有する分
子のことを指し、「アキラル」なる用語は鏡像関係の相手と重ね合わせることができる分
子のことを指す。

【0072】

「立体異性体」なる用語は、同じ化学組成を有するが、原子又は基の空間内での配置に
関して異なる化合物を指す。

【0073】

「ジアステレオマー」とは、分子同士が互いの鏡像とならないような２個以上のキラル
中心を有する立体異性体のことを指す。ジアステレオマー同士は、例えば、融点、沸点、
スペクトル特性、及び反応性などの物理的性質が異なる。ジアステレオマーの混合物は、
電気泳動およびクロマトグラフィーなどの高分解能の分析手法によって分離することがで
きる。

【0074】

「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」なる用語は、光学活性を有さない、２種類のエナン
チオマー種の等モル混合物のことを指す。

【0075】

アミノ酸の「誘導体」には、例えば、アルキル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸
化などによる親アミノ酸の共有結合による置換または修飾を有するアミノ酸を含む。「誘
導体」の定義には、例えば、置換された結合及び当該技術分野では周知の他の修飾を有す
るアミノ酸の１つ以上の類似体が更に含まれる。

【0076】

「天然アミノ酸」とは、文脈上そうでない旨が示されない限り、アルギニン、グルタミ
ン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、リシン、グリシン、アラニン、ヒス
チジン、セリン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、スレオニン、システイン、
メチオニン、ロイシン、アスパラギン、イソロイシン、及びバリンを指す。

【0077】

本明細書で使用するところの「薬学的に許容される塩」なる語句は、化合物の薬学的に
許容される有機または無機塩を指す。化合物は通常、少なくとも１個のアミノ基を含有し
、したがってこのアミノ基と酸付加塩を形成することができる。例示的な塩としては、こ
れらに限定されるものではないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、
臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳
酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パント
テン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩
、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グ
ルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩（メシラート）、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスル
ホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸（すなわち、１，１’－メチレン－ビ
ス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩が挙げられる。薬学的に許容される塩に
は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンなどの別の分子を含有させること
を行いうる。対イオンは、親化合物の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分であ
ってよい。更に、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数の荷電原子を有することが
できる。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合、複数の対イオンを有
することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１個以上の荷電原子及び／ま
たは１個以上の対イオンを有することができる。

【0078】

「ローディング」または「薬物ローディング」なる用語は、ＡＤＣ分子中の抗体１個当
たりの細胞毒性化合物の平均の数を表すか、またはそのような数を指す。薬物ローディン
グは、抗体１個当たり１～１０個の薬物の範囲とすることができる。これは、しばしば、
ＤＡＲ、または薬物抗体比と呼ばれる。本明細書に記載されるＡＤＣの組成物は一般的に
１～２０のＤＡＲを有し、特定の実施形態では、１～８、２～８、２～６、２～５、及び
２～４のＤＡＲを有する。一般的なＤＡＲ値は、２、４、６及び８である。抗体１個当た
りの薬物の平均の数、すなわちＤＡＲ値は、例えば、ＵＶ／可視分光法、質量分析法、Ｅ
ＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けることができる。定
量的ＤＡＲ値を測定してもよい。場合により、特定のＤＡＲ値を有する均質なＡＤＣの分
離、精製、及び特性評価を、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって行うことが
できる。

【0079】

ＤＡＲは、抗体上の結合部位の数によって制限されうる。２つの一般的な結合手段とし
て、システインチオール残基とのスルフィド結合を介したもの、及び、リシン残基とのア
ミド結合を介したものがある（Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ
ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１６，２７：１８８０－１８８８を参照）。例え
ば、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみまたはいくつかのシステイ
ンチオール基を有してもよく、またはそれを介してリンカー単位を結合させることができ
る１個のみまたはいくつかの充分な反応性を有するチオール基を有してもよい。いくつか
の実施形態では、システインチオールは、鎖間のジスルフィド結合を形成するシステイン
残基のチオール基である。いくつかの実施形態では、システインチオールは、鎖間のジス
ルフィド結合を形成しないシステイン残基のチオール基である。抗体中の大部分のシステ
インチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）のよ
うな還元剤で還元する必要がある。一般的には、理論上の最大数よりも少ない数の薬物部
分が、複合体化反応の間に抗体に結合される。抗体は、例えば、リンカーまたはリンカー
中間体と反応しない多くのリシン残基を含みうる。最も反応性の高いリシン基のみが、反
応性リンカー試薬と反応して抗体とアミン結合を形成することができる。抗体を変性条件
に曝すことでリシンまたはシステインなどの反応性求核基を露出させることができる。

【0080】

ＡＤＣのローディング（薬物／抗体比）は、（ｉ）抗体に対する薬物リンカーのモル過
剰量を制限すること、(ii)複合体化の反応時間または温度を制限すること、及び(iii)シ
ステインチオール基修飾の還元的条件を部分的に制限または制限することを含むいくつか
の異なる方法で制御することが可能である。複数の求核基が薬物リンカーと反応する場合
、得られる生成物は、抗体１個当たりの１個以上の薬物部分の分布を有するＡＤＣの混合
物である。抗体１個当たりの薬物の平均の数は、例えば、抗体に対して特異的であり、か
つ薬物に対しても特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算する
ことができる。個々のＡＤＣは、質量分析によって混合物中で同定し、例えば疎水性相互
作用クロマトグラフィーのようなＨＰＬＣによって分離することができる。

【0081】

「保護基」なる用語は、分子内の反応性官能基に結合される際に官能基の反応性を遮蔽
、低減または抑制する原子の集団を指す。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，“
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，
（Ｗｉｌｅｙ，２^ｎｄ ｅｄ．１９９１） ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，
“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ
”，Ｖｏｌｓ．１－８ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７１－１９９
６）に見ることができる。代表的なアミノ保護基としては、これらに限定されるものでは
ないが、ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボ
ニル（ＣＢＺ）、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、トリメチルシリル（ＴＭＳ
）、２－トリメチルシリル－エタンスルホニル（ＳＥＳ）、トリチル及び置換トリチル基
、アリルオキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、及
びニトロ－ベラトリルオキシカルボニル（ＮＶＯＣ）などが挙げられる。代表的なヒドロ
キシ保護基としては、これらに限定されるものではないが、ベンジル及びトリチルエーテ
ルなどの、ヒドロキシル基がアシル化またはアルキル化されたもの、ならびにアルキルエ
ーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテル及びアリルエーテ
ルが挙げられる。

【0082】

以下に、特定の好ましい治療方法、化合物、及びこれらの化合物を投与する方法につい
て詳細に言及する。本発明は、これらの好ましい化合物及び方法に限定されるものではな
く、本明細書より発行される請求項（複数可）によって定義されるものである。

【0083】

薬物毒素化合物
本発明の薬物化合物は、天然に存在する細胞毒性化合物であるタイランスタチンＡの類
似体または薬学的に許容されるその塩である。タイランスタチンＡは、Ｂ．ｔｈａｉｌａ
ｎｄｅｎｓｉｓ ＭＳＭＢ４３の培養液から特定された３つの構造的に似た天然産物（Ａ
、Ｂ、及びＣ）のうちの１つである。これらの天然産物は、インビトロの強力なｐｒｅ－
ｍＲＮＡ阻害活性及びヒトがん細胞株において抗増殖活性を有する（Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ
．， Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，２０１３，７６（４）：６８５－６９３）。

【0084】

一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）：

【化4】

［式中、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－Ｎ
Ｈ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣ
Ｈ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｘは、－Ｈまたは－ＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0085】

特定の例示的な実施形態では、Ｒは、

【化5】

からなる群から選択される。

【0086】

別の実施形態では、本発明の化合物は、

【化6】

からなる群から選択される。

【0087】

本発明の化合物の合成法を以下の実施例のセクションに示す。
リンカー単位（Ｌ）及びリンカー部分（Ｌ’）

【0088】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ）：

【化7】

［式中、
Ｌは、リンカーであり、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
； －Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ
^ｂ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－
ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－
ＮＲ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣ
Ｈ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0089】

特定の例示的な実施形態では、Ｌは、式（Ａ^１）、式（Ａ^２）、式（Ａ^３）、式（Ａ^４
）、及び式（Ａ^５）：

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ｙは、Ｂｒ、Ｉ、または

【化13】

である）
からなる群から選択される。

【0090】

他の例示的な実施形態では、Ｒは、

【化14】

からなる群から選択される。

【0091】

リンカーは、薬物と抗体とを連結して抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために用い
ることができる二官能性または多官能性化合物である。かかる複合体は、例えば、腫瘍関
連抗原を標的とする免疫複合体を形成するうえで有用である。かかる複合体は、腫瘍細胞
への細胞毒性薬物の選択的送達を可能とする。ＡＤＣ内でリンカーは毒素を抗体に結合す
る役割を果たす。

【0092】

本発明との関連において、「リンカー」（Ｌ）は、１つ以上の毒素薬物部分を抗体（Ａ
ｂ）と連結して式ＩＩＩの抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために用いることができ
る二官能性または多官能性部分である。いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体（ＡＤ
Ｃ）は、薬物と共有結合し、更に抗体と共有結合するための反応性官能基を有するリンカ
ーを用いて調製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体（Ａｂ）のシ
ステインチオールが、１つのＡＤＣを調製するためにリンカーまたは式ＩＩの薬物－リン
カー中間体の反応性官能基と結合を形成することができる。

【0093】

リンカーＬは二官能性化合物の一方の反応部位を介して共有結合され、他方の官能部位
はその後の抗体との結合に利用可能な状態となっている。リンカーＬは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｓ
、またはハロゲンから選択される１～２００個の非水素原子を有する部分であり、場合に
より、エーテル、オキソ、カルボキシル、カルボキサミド、カルボキサミジル、ウレタニ
ル、分枝状、環状、不飽和、アミノ酸、複素環、芳香族または複素芳香族部分を含む。リ
ンカーＬは、非分枝状または分枝状、柔軟または剛性、短鎖または長鎖であってよく、有
用と思われる任意の組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカー
Ｌの少なくとも一部がポリアルキレンオキシドポリマー領域を有してよく、これにより、
式（ＩＩＩ）の化合物の溶解度を高めることができる。いくつかの実施形態では、リンカ
ーＬは、エチレングリコールの繰り返し単位を有することができ、約１個～約２５個、ま
たはその間の任意の数の所定の数の繰り返しエチレングリコール単位を有することができ
る。いくつかの実施形態では、Ｌは、約１個～約４個、約３個～約２０個、約４個～約１
５個、約５個～約１２個、または約６個～約１０個のエチレングリコール単位を有するこ
とができる。

【0094】

いくつかの実施形態では、リンカーＬの少なくとも一部は、式（ＩＩＩ）の化合物の高
い溶解度を与えうる１つ以上のアミノ酸残基を有してよく、または標的との結合性を高め
る、標的結合剤との相溶性を高める、または標的結合の認識性を高めるアミノ酸配列を与
えることができる。他の実施形態では、リンカーＬは、プロテアーゼに対する適当な基質
モチーフを与える１つ以上のアミノ酸部分を含むことができる。かかる実施形態は、グリ
シン、アラニン、フェニルアラニン、リシン、アルギニン、バリン、及びシトルリンから
選択されるアミノ酸を含む。リンカーＬに、選択されるプロテアーゼに対して特異的な基
質モチーフを与える一群のアミノ酸部分が組み込まれている場合、式（ＩＩＩ）の細胞毒
性薬物化合物は、標的と結合した複合体から放出されて局在化した細胞毒性作用をもたら
すことができる。かかる基質モチーフは、当該技術分野では周知のものであり、必要に応
じてリンカーＬに組み込むことで標的と結合した複合体からの選択的放出を可能とするこ
とができる。この選択性は、薬物抗体複合体の局在化された送達領域内に所望のプロテア
ーゼが予め存在することが分かっていることに基づいたものとすることができる。ポリ酸
、多糖類、またはポリアミンなどの他のポリマータイプの部分をリンカーＬに組み込むこ
ともできる。置換芳香族または複素芳香族部分などの他の部分を用いることで、剛性を高
めるか、または反応性部分ともしくは式（ＩＩＩ）の化合物と連結するための合成による
アクセス部位を内部の置換基に与えることができる。

【0095】

リンカーＬの他方の第２の官能部位は、後で抗体を結合させるために利用可能であり、
これにより、リンカーを介して本発明の毒素を抗体に共有結合させることができる。この
第２の反応性部位は、例えば、抗体単位（例えば抗体）上に存在する求核基に対する反応
性を有する求電子基である。抗体上の有用な求核基としては、これらに限定されるもので
はないが、スルフヒドリル、ヒドロキシル、及びアミノ基が挙げられる。抗体の求核基の
ヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基に対する反応性を有し、リンカー単位と共有結
合を形成する。有用な求電子基としては、これらに限定されるものではないが、マレイミ
ド及びハロアセトアミド基が挙げられる。求電子基は、抗体を連結するのに好都合な部位
を与える。

【0096】

別の実施形態では、リンカー単位は、抗体上に存在する求電子基に対する反応性を有す
る求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基としては、これらに限定さ
れるものではないが、アルデヒド及びケトンカルボニル基が挙げられる。リンカー単位の
求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応して、抗体と共有結合を形成することが
できる。リンカー単位上の有用な求核基としては、これらに限定されるものではないが、
ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキ
シレート、及びアリールヒドラジドが挙げられる。抗体上の求電子基は、リンカー単位を
結合するのに好都合な部位を与える。いくつかの実施形態では、求電子基として、

【化15】

（式中、波線はＬとの結合部位を示し、
Ｒ^４は、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、またはＢｒであり、ｑは、０、１、または２である
）
が挙げられる。

【0097】

アミノ官能基もまた、カルボン酸または化合物の活性化エステルと反応してアミド結合
を形成することができることから、リンカー単位に対する有用な反応部位である。一般的
に、本発明のペプチド系化合物は、２個以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片間にペ
プチド結合を形成することによって調製することができる。

【0098】

一態様では、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成
することが可能な官能基を有する。かかる反応性官能基の非限定的な例としては、マレイ
ミド、ハロアセトアミド、α－ハロアセチル、ピリジルジスルフィド、スクシンイミドエ
ステルなどの活性化エステル、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド、４－ニトリフェニルエス
テル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸
クロリド、スルホニルクロリド、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる
（例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，２００４，１５（４）：７６５－７７３の７６６頁の複合体化の方法、及び本明
細書の実施例を参照）。

【0099】

いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可
能な官能基を有する。かかる求電子基の例としては、これらに限定されるものではないが
、アルデヒド及びケトンカルボニル基が挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカー
の反応性官能基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応して、抗体単位と共有結合を形
成することができる。反応性官能基の非限定的な例としては、これらに限定されるもので
はないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジ
ンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられる。

【0100】

リンカーは、これらに限定されるものではないが、ストレッチャー単位、ペプチド模倣
体単位、ペプチド単位、及びスペーサー単位を含む１つ以上のリンカー成分を含むことが
できる（Ｊ．Ｌｕ．，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，２０１６，１７：５
６１を参照）。例示的なリンカー成分及びリンカー試薬としては、これらに限定されるも
のではないが、ｐ－アミノ安息香酸－バリン－シトルリン（「ＰＡＢＡ－ｖａｌ－ｃｉｔ
」）、６－マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、
バリン－シトルリン（「ｖａｌ－ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、バリン－アラニン（「ｖａ
ｌ－ａｌａ」または「ｖａ」）、アラニン－フェニルアラニン（「ａｌａ－ｐｈｅ」）、
フェニルアラニン－リシン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）、グリシン－フェニルアラニン－ロイシン
－グリシン（「ＧＦＬＧ」）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ
－スクシンイミジル ４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、４－（
Ｎ－マレイミドメチル） シクロヘキサン－１ カルボキシレート（「ＭＣＣ」）、４－
（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸 Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル（「ＳＭＣＣ」）、Ｎ－スクシンイミジル ４－（２－ピリジルチオ）ブタノエー
ト（「ＳＰＤＢ」）、及びスルホ－Ｎ－スクシンイミジル ４－（２－ピリジルチオ）ブ
チレート（「スルホ－ＳＰＤＢ」）が挙げられる。本明細書に記載される様々なリンカー
成分が当該技術分野で周知である。例示的なリンカー成分としては、これらに限定される
ものではないが、バリン－シトルリン単位が２個以上のエチレンオキシ単位（ＰＥＧ）、
例えば２個～１０個のＰＥＧ単位に結合された、「ＶＣ－２ｘＰＥＧ」、「ＶＡ－２ｘＰ
ＥＧ」、及び「ＶＣ－８ｘＰＥＧ」、及び「ＶＡ－８ｘＰＥＧ」が挙げられる。

【0101】

リンカーは、薬物または毒素の放出を促進する「切断可能なリンカー」とすることがで
きる。切断可能なリンカーの非限定的な例としては、酸不安定性リンカー（例えば、ヒド
ラジンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えばペプチド感受性）リンカー、光不安定性リ
ンカー、またはジスルフィド含有リンカーが挙げられる（Ｃｈａｒｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９２，５２：１２７－１３１；米国特許第５，２０
８，０２０号）。

【0102】

リンカーの実施形態の更なる例は、本明細書に参照により明示的に援用するところの米
国特許第７，４９８，２９８号に記載されている。

【0103】

本明細書との関連において、Ｌ’部分は二官能性リンカーの中心部分であり、薬物がこ
の中心部分を介して抗体に共有結合された後、抗体薬物複合体中に残る。Ｌ’部分は、求
電子基または求核基である第２の官能部位が上記に述べたように抗体と反応して共有結合
を形成している点を除いて、リンカーＬについて上記に述べたのと同様である。Ｎ－ヒド
ロキシスクシンイミドアセテートエステル（ＮＨＳエステル）リンカーから誘導され、上
記に述べたように抗体上のリシン残基に結合することが可能なＬ’部分の非限定的な例を
式（Ｂ^１）に示す。すなわち、

【化16】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。抗体上のシステイ
ン残基に結合することが可能なマレイミド単位を含むＬ’部分の更なる非限定的な例を式
（Ｂ^２）に示す。すなわち、

【化17】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。抗体上のシステイ
ン残基に結合することが可能なアミド単位を含むＬ’部分の更なる非限定的な例を式（Ｂ
^３）に示す。すなわち、

【化18】

抗体上のシステイン残基に結合することが可能なアミド単位を含むＬ’部分の別の非限
定的な例を式（Ｂ^４）に示す。すなわち、

【化19】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。

【0104】

Ｌが、式（Ａ^４）を含む場合、

【化20】

例えば、リシン残基に由来する抗体上の利用可能な－ＮＨ_２基が式（Ａ^４）を置換し、
抗体と式（Ｉ）の化合物との間の直接的結合を生じる。

【0105】

抗体単位（ＡｂまたはＡＢ）
上記で述べたように、本明細書における「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）
なる用語は、最も広い意味で用いられ、具体的には、完全なモノクローナル抗体、ポリク
ローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望
の生物学的活性を示す抗体フラグメントを含む。更に、本明細書に記載される本発明の特
定の態様は抗体薬物複合体について言及するが、複合体の抗体部分は、受容体、抗原、ま
たは任意の標的細胞集団に関連する他の受容性部分と、特異的に結合するか、または反応
によって会合するか、または複合体を形成するものに置き換えることが可能である点が更
に想定される。例えば、抗体を含む代わりに、本発明の複合体は、治療的にまたは他の形
で生物学的に改変しようとする細胞集団の受容体、抗原または他の受容性部分と結合する
、複合体を形成する、または反応するターゲティング分子を含むことができる。かかる分
子の例は、より低分子量のタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチド、レクチン、糖タ
ンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養素輸送分子（これらに限定されるものではないが
、トランスフェリンなど）、または他の任意の細胞結合分子もしくは物質を含む。特定の
態様では、抗体または他のそのようなターゲティング分子は、抗体または他のターゲティ
ング分子が相互作用する特定の標的細胞集団に薬物を送達するように作用する。

【0106】

別の態様において、本発明は、式ＩＩＩの抗体薬物複合体化合物に関し、抗体ＡＢは、
ゲムツズマブ、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ペルツズマブ（パージェ
タ（登録商標））、イラツムマブ、イノツズマブ、ピナツズマブ、エプラツズマブ、ポラ
ツズマブ、コルツキシマブ、ロブツズマブ、サシツズマブ、アネツマブ、アプルツマブ、
アラツムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、アジンツキシズマブ、ベバシズマブ(アバ
スチン（登録商標）)、ビバツズマブ、ブレンツキシマブ、カミダンルマブ、カンツズマ
ブ、セツキシマブ(エルビタックス（登録商標）)、コフェツズマブ、デニンツズマブ、デ
ュルバルマブ、エロツズマブ、エンフォルツマブ、グレムバツムマブ、イブリツモマブ、
イラダツズマブ、インダツキシマブ、インダスツズマブ、ラベツズマブ、ラディラツズマ
ブ、ラプリツキシマブ、リファスツズマブ、ロンカスツキシマブ、ロルブツズマブ、ルパ
ルツマブ、ミラツズマブ、ミルベツキシマブ、ナラツキシマブ、ナタリズマブ、ネシツム
マブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、パニツムマブ
、ペルツズマブ、リツキシマブ(リツキサン（登録商標）)、ロバルピツズマブ、シルトラ
ツマブ、ソフィツズマブ、テリソツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、及びバダス
ツキシマブから選択される。特定の好ましい実施形態では、抗体ＡＢは、トラスツズマブ
、ペルツズマブ、ゲムツズマブ、及びバダスツキシマブからなる群から選択される。

【0107】

抗体単位上に存在しうるヘテロ原子としては、硫黄（一実施形態では、抗体のスルフヒ
ドリル基に由来）、酸素（一実施形態では、抗体のカルボニル、カルボキシルまたはヒド
ロキシル基に由来）及び窒素（一実施形態では、抗体の一級または二級アミノ基に由来）
が挙げられる。これらのヘテロ原子は、抗体の天然の状態にある抗体、例えば天然に存在
する抗体上に存在してもよく、または化学修飾を介して抗体に導入されてもよい。

【0108】

一実施形態では、抗体単位はスルフヒドリル基を有し、抗体単位はスルフヒドリル基の
硫黄原子を介して結合する。

【0109】

別の実施形態において、抗体は、活性化エステル（かかるエステルとしては、これらに
限定されるものではないが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、
及びｐ－ニトロフェニルエステルが挙げられる）と反応することができ、それにより抗体
単位の窒素原子とカルボニルとからなるアミド結合を形成することができるリジン残基を
有する。

【0110】

更に別の態様では、抗体単位は、１つ以上のスルフヒドリル基を導入するように化学修
飾することができる１つ以上のリシン残基を有する。リシンを修飾するために使用するこ
とができる試薬には、これらに限定されるものではないが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミ
ド酢酸エステル（ＮＨＳエステル）、Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート
（ＳＡＴＡ）および２－イミノチオラン塩酸塩（トラウト試薬）が挙げられる。

【0111】

別の実施形態では、抗体単位は、１つよりも多いスルフヒドリル基を有するように化学
修飾することができる１つよりも多い炭水化物基を有することができる。

【0112】

更に別の実施形態において、抗体単位は、酸化されてアルデヒド基を与えることができ
る１つ以上の炭水化物基を有することができる。対応するアルデヒドは、例えば、ヒドラ
ジンおよびヒドロキシルアミンなどの反応部位と結合を形成することができる。薬物の結
合または会合のためのタンパク質の修飾の他のプロトコルは、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，
Ｖｏｌ．２， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （２００２）に記載されている。

【0113】

有用なポリクローナル抗体は、免疫化された動物の血清に由来する抗体分子の不均質な
集団である。有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定因子（例えば、がん細胞抗原
、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、また
はそれらのフラグメント）に対する均質な抗体の集団である。対象とする抗原に対するモ
ノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、培養中で継続的な細胞株による抗体分子の産生を与える
、当該技術分野では周知の任意の技術を使用することによって調製することができる。

【0114】

有用なモノクローナル抗体としては、これらに限定されないが、ヒトモノクローナル抗
体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラモノクローナル抗体が
挙げられる。ヒトモノクローナル抗体は、当該技術分野において周知の多くの技術のいず
れによっても作製することができる。

【0115】

抗体は二重特異性抗体でもよい。二重特異性抗体を作製する方法は当該技術分野では周
知のものである。

【0116】

抗体は、標的細胞（例えば、腫瘍関連抗原、がん細胞抗原、ウイルス抗原、または微生
物抗原）に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性なフラグメント、誘導体もしくは類
似体、または腫瘍細胞もしくはマトリックスに結合する他の抗体であってもよい。この点
に関し、「機能的に活性な」とは、フラグメント、誘導体または類似体が、そのフラグメ
ント、誘導体または類似体が由来する抗体が認識したものと同じ抗原を認識する抗抗イデ
ィオタイプ抗体を誘発することができることを意味する。詳細には、例示的な実施形態で
は、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、その抗原を特異的に認識するＣＤ
Ｒ配列のＣ末端側にあるフレームワークまたはＣＤＲ配列の欠失によって高めることがで
きる。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するには、ＣＤＲ配列を含んだ合成ペプ
チドを、当該技術分野では周知の任意の結合アッセイ法（例えば、ＢＩＡコアアッセイ）
によって抗原との結合アッセイに使用することができる。

【0117】

他の有用な抗体としては、これらに限定されるものではないが、Ｆ（ａｂ’）_２フラグ
メント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラ
ボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＦＶなどの抗体のフラグメント、または抗体と同じ特異性
を有する他の任意の分子が挙げられる。

【0118】

更に、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して作製することができる、ヒト部分および非
ヒト部分の両方を含んだキメラ抗体及びヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗体が有
用な抗体である。キメラ抗体とは、異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、例
えば、マウスモノクローナルに由来する可変領域と、ヒト免疫グロブリンの定常領域とを
有するものなどである。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する非ヒト種由来の抗
体分子である。このようなキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該技術分野
では周知の組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。

【0119】

完全ヒト抗体は特に望ましく、内因性の免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現す
ることはできないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニ
ックマウスを使用して産生させることができる。このトランスジェニックマウスを、通常
の方法で、選択された抗原、例えば本発明のポリペプチドの全体または一部で免疫する。
抗原を標的とするモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて得ることが
できる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分
化の間に再構成された後、クラススイッチ及び体細胞変異を生じる。したがって、こうし
た技術を使用することで、治療に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体を当業者
には周知の方法を用いて作製することが可能である。他のヒト抗体は、多くの企業より商
業的に入手することができる。

【0120】

選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択」と呼ばれる技術を用いて
作製することができる。この手法では、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を
誘導するために、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体を使用する。
ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野では周知の様々な
技術を使用して作製することもできる。

【0121】

他の実施形態において、抗体は、抗体の融合タンパク質、または機能的に活性であるそ
のフラグメントであり、例えば、抗体は、共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して、
Ｎ末端またはＣ末端のいずれかにおいて、抗体に由来しない別のタンパク質のアミノ酸配
列（またはその一部、好ましくはタンパク質の少なくとも１０、２０または５０個のアミ
ノ酸からなる部分）と融合される。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは、定常ド
メインのＮ末端において他のタンパク質と共有結合される。

【0122】

抗体は、修飾された、すなわち、そのような共有結合が、抗体がその抗原結合免疫特異
性を保持することを可能とするものであれば、任意の種類の分子の共有結合によって修飾
された類似体及び誘導体を含む。例えば、これらに限定されるものではないが、抗体の誘
導体および類似体としては、例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、
アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞性
抗体単位または他のタンパク質との連結などによって更に修飾されているものが挙げられ
る。多くの化学修飾のいずれも、これらに限定されるものではないが、特異的な化学的切
断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの存在下での代謝的合成などを含む周知の
技術によって行うことができる。更に、類似体または誘導体は、１つ以上の非天然アミノ
酸を含んでもよい。

【0123】

抗体は、Ｆｃ受容体と相互作用するアミノ酸残基の改変（例えば、置換、欠失または付
加）を有することができる。詳細には、抗体は、抗ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との相
互作用に関与するものとして同定されているアミノ酸残基の改変を有することができる。

【0124】

がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、市販のものを入手するか、または例えば化
学合成もしくは組み換え発現技術などの当業者には周知の任意の方法によって作製するこ
とができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、
例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献刊行物から、ま
たは通常のクローニング及びシークエンシングによって取得することができる。

【0125】

特定の実施形態では、がんの治療用の周知の抗体を使用することができる。がん細胞抗
原に対して免疫特異的な抗体は、市販のものを入手するか、または例えば組み換え発現技
術などの当業者には周知の任意の方法によって作製することができる。がん細胞抗原（腫
瘍関連抗原）に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、Ｇｅ
ｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献刊行物から、または通常のク
ローニング及びシークエンシングによって取得することができる。

【0126】

腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の例としては、これらに限定されるものではないが、ここに記
載するＴＡＡ（１）～（１００）が挙げられる。便宜上、多くの場合で、いずれも当該技
術分野では周知のものであるこれらの抗原に関連する情報を以下に記載するが、多くの場
合でこの情報には、名称、別称、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号及び主な参考文献（複数可）に
続き、米国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列
の同定表記が含まれる。ＴＡＡ（１）～（１００）に対応する核酸及びタンパク質配列は
、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的データベースにおいて入手可能である。抗体により標的とさ
れる腫瘍関連抗原としては、引用される参考文献において特定されている配列に対して少
なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を有するすべ
てのアミノ酸配列変異体及びアイソフォーム、または引用される参考文献に見出される配
列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的性質もしくは特性を示すものが挙げられる。例
えば、変異体配列を有するＴＡＡは一般に、対応する記載の配列を有するＴＡＡと特異的
に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書に具体的に引用される参考文
献中の配列及び開示内容を、参照によって明示的に援用するものである。

【0127】

ＴＡＡの具体的な非限定例としては、以下のものが挙げられる。すなわち、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体－ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ
＿００１２０３）、ｔｅｎ Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９
４，２６４（５１５５）：１０１－１０４、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９７，１４（１１）
：１３７７－１３８２、ＷＯ２００４／０６３３６２（請求項２）、ＷＯ２００３／０４
２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３／１３４７９０（３８～３９頁）、ＷＯ２００２
／１０２２３５（請求項１３、２９６頁）、ＷＯ２００３／０５５４４３（９１～９２頁
）、ＷＯ２００２／９９１２２（実施例２、５２８～５３０頁）、ＷＯ２００３／０２９
４２１（請求項６）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図１１２）、ＷＯ２００
２／９８３５８（請求項１、１８３頁）、ＷＯ２００２／５４９４０（１００～１０１頁
）、ＷＯ２００２／５９３７７（３４９～３５０頁）、ＷＯ２００２／３０２６８（請求
項２７、３７６頁）、ＷＯ２００１／４８２０４（実施例、図４）ＮＰ＿００１１９４骨
形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１－相互参照：ＭＩＭ：
６０３２４８、ＮＰ＿００１１９４．１、ＡＹ０６５９９４。
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４８６
）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９９，２５５（２
），２８３－２８８、Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９５（６６９９）：２８８－２９１、
Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，
２６７（１６）：１１２６７－１１２７３）、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）
、ＷＯ２００４／０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１
２）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２
）、ＷＯ２００２／９９０７４（請求項１９、１２７～１２９頁）、ＷＯ２００２／８６
４４３（請求項２７、２２２、３９３頁）、ＷＯ２００３／００３９０６（請求項１０、
２９３頁）、ＷＯ２００２／６４７９８（請求項３３、９３～９５頁）、ＷＯ２０００／
１４２２８（請求項５、１３３～１３６頁）、ＵＳ２００３／２２４４５４（図３）、Ｗ
Ｏ２００３／０２５１３８（請求項１２、１５０頁）、ＮＰ＿００３４７７溶質輸送体フ
ァミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋システム）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿
００３４７７．３－Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、相互参照：ＭＩＭ：６００１８２、ＮＰ
＿００３４７７．３、ＮＭ＿０１５９２３、ＮＭ＿００３４８６＿１。
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０
１２４４９）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００１，６１（１５），５８５７－５８６０、
Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．
Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３－１４５２８）、ＷＯ２００４／０６５５７７（請求
項６）、ＷＯ２００４／０２７０４９（図１Ｌ）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、
ＷＯ２００４／０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）
、ＵＳ２００３／１５７０８９（実施例５）、ＵＳ２００３／１８５８３０（実施例５）
、ＵＳ２００３／０６４３９７（図２）、ＷＯ２００２／８９７４７（実施例５、６１８
～６１９頁）、ＷＯ２００３／０２２９９５（実施例９、図１３Ａ、実施例５３、１７３
頁、実施例２、図２Ａ）、ＮＰ＿０３６５８１前立腺の６回膜貫通上皮抗原。相互参照：
ＭＩＭ：６０４４１５、ＮＰ＿０３６５８１．１、ＮＭ＿０１２４４９＿１。
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ３６１４８
６）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１，２７６（２９）：２７３７１－２７３７５
、ＷＯ２００４／０４５５５３（請求項１４）、ＷＯ２００２／９２８３６（請求項６、
図１２）、ＷＯ２００２／８３８６６（請求項１５、１１６～１２１頁）、ＵＳ２００３
／１２４１４０（実施例１６）。相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７、ＡＡＫ７４１２０
．３、ＡＦ３６１４８６＿１。
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａ
ｎｋ受託番号ＮＭ＿００５８２３）、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，２６９（２），８０５－８０８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９９，９６（２０）：１１５３１－１１５３６、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９６，９３（１）：１３６－１
４０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０（３７）：２１９８４－２１９９０
）、ＷＯ２００３／１０１２８３（請求項１４）、（ＷＯ２００２／１０２２３５（請求
項１３、２８７～２８８頁）、ＷＯ２００２／１０１０７５（請求項４、３０８～３０９
頁）、ＷＯ２００２／７１９２８（３２０～３２１頁）、ＷＯ９４１０３１２（５２～５
７頁）、相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１、ＮＰ＿００５８１４．２、ＮＭ＿００５８２
３＿１。
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体フ
ァミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体
３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６４２４）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０
０２，２７７（２２）：１９６６５－１９６７２、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９９９，６２（
２）：２８１－２８４、Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９９，２５８（３）：５７８～５８２）、ＷＯ
２００４／０２２７７８（請求項２）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００
２／１０２２３５（請求項１３、３２６頁）、ＥＰ８７５５６９（請求項１、１７～１９
頁）、ＷＯ２００１／５７１８８（請求項２０、３２９頁）、ＷＯ２００４／０３２８４
２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４、１３９～１４０頁）、相互参
照：ＭＩＭ：６０４２１７、ＮＰ＿００６４１５．１、ＮＭ＿００６４２４＿１。
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、Ｓ
ＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボス
ポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、
（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢ０４０８７８）、Ｎａｇａｓｅ Ｔ
．，ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ Ｒｅｓ．，２０００，７（２）：１４３～１５０）、ＷＯ２
００４／０００９９７（請求項１）、ＷＯ２００３／００３９８４（請求項１）、ＷＯ２
００２／０６３３９（請求項１、５０頁）、ＷＯ２００１／８８１３３（請求項１、４１
～４３、４８～５８頁）、ＷＯ２００３／０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３／
１０１４００（請求項１１）、受託番号：Ｑ９Ｐ２８３、ＥＭＢＬ、ＡＢ０４０８７８、
ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ、ＨＧＮＣ：１０７３７。
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ
、ＲＩＫＥＮｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０
Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ３５８６２８）、Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００２，６２：２５４６－２５５３、ＵＳ２００３／１２９
１９２（請求項２）、ＵＳ２００４／０４４１８０（請求項１２）、ＵＳ２００４／０４
４１７９（請求項１１）、ＵＳ２００３／０９６９６１（請求項１１）、ＵＳ２００３／
２３２０５６（実施例５）、ＷＯ２００３／１０５７５８（請求項１２）、ＵＳ２００３
／２０６９１８（実施例５）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３／０２５
１４８（請求項２０）、相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８、ＡＡＱ８８９９１．１、Ａ
Ｙ３５８６２８＿１。
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４６３
）、Ｎａｋａｍｕｔａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ
．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９１，１７７：３４－３９、Ｏｇａｗａ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９１，１７８，２４
８－２５５、Ａｒａｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．，１９９２，５６
：１３０３－１３０７、Ａｒａｉ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１
９９３，２６８：３４６３－３４７０、Ｓａｋａｍｏｔｏ Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ
Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１
９９１，１７８：６５６－６６３、Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ Ｎ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，２６８：３８７３－３８７９、Ｈａｅｎｄｌｅｒ
Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９２，
２０：ｓ１－Ｓ４、Ｔｓｕｔｓｕｍｉ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９９９，２２
８：４３－４９、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００２，９９：１６８９９－１６９０３、Ｂｏｕ
ｒｇｅｏｉｓ Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ
．，１９９７，８２，３１１６－３１２３、Ｏｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２：２１５８９－２１５９６、Ｖｅｒｈｅｉｊ，Ｊ．
Ｂ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．，２００２，１０８：２２３－２２５、Ｈｏｆｓ
ｔｒａ，Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９７，
５：１８０－１８５、Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｅ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，
１９９４，７９：１２５７－１２６６、Ａｔｔｉｅ Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏ
ｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９５，４：２４０７－２４０９、Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ Ａ．，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９６，５：３５１－３５４、Ａｍｉｅ
ｌ Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５－３５７，１９９６、
Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９６，１２：
４４５－４４７、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，
１９９８，１０３：１４５－１４８、Ｆｕｃｈｓ， Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅ
ｄ．，２００１，７：１１５－１２４、Ｐｉｎｇａｕｌｔ Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ
．Ｇｅｎｅｔ．，２００２，１１１，１９８－２０６、ＷＯ２００４／０４５５１６（請
求項１）、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４／０４００００（請
求項１５１）、ＷＯ２００３／０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５
（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／６１０８７（
図１）、ＷＯ２００３／０１６４９４（図６）、ＷＯ２００３／０２５１３８（請求項１
２、１４４頁）、ＷＯ２００１／９８３５１（請求項１、１２４～１２５頁）、ＥＰ５２
２８６８（請求項８、図２）、ＷＯ２００１／７７１７２（請求項１、２９７～２９９頁
）、ＵＳ２００３／１０９６７６、ＵＳ６，５１８，４０４（図３）、ＵＳ５，７７３，
２２３（請求項１ａ、欄３１～３４）、ＷＯ２００４／００１００４。
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎ
ｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７７６３）、ＷＯ２００３／１０４２７５（請求項１）、Ｗ
Ｏ２００４／０４６３４２（実施例２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、
ＷＯ２００３／０８３０７４（請求項１４、６１頁）、ＷＯ２００３／０１８６２１（請
求項１）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図９３）、ＷＯ２００１／６６６８
９（実施例６）、相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４、ＮＰ＿０６０２３３．２、Ｎ
Ｍ＿０１７７６３＿１。
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡ
ＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、
前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号
ＡＦ４５５１３８）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３－１５８２（２００
２））、ＷＯ２００３／０８７３０６、ＵＳ２００３／０６４３９７（請求項１、図１）
、ＷＯ２００２／７２５９６（請求項１３、５４～５５頁）、ＷＯ２００１／７２９６２
（請求項１、図４Ｂ）、ＷＯ２００３／１０４２７０（請求項１１）、ＷＯ２００３／１
０４２７０（請求項１６）、ＵＳ２００４／００５５９８（請求項２２）、ＷＯ２００３
／０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３／０６０６１２（請求項１２、図１０）、
ＷＯ２００２／２６８２２（請求項２３、図２）、ＷＯ２００２／１６４２９（請求項１
２、図１０）、相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８、ＡＡＮ０４０８０．１、ＡＦ４５５
１３８＿１。
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ
、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ
受託番号ＮＭ＿０１７６３６）。Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００１，９８（１９）：１０６９２－１０６９７、
Ｃｅｌｌ，２００２，１０９（３）：３９７－４０７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０
０３，２７８（３３）：３０８１３－３０８２０、ＵＳ２００３／１４３５５７（請求項
４）、ＷＯ２０００／４０６１４（請求項１４、１００～１０３頁）、ＷＯ２００２／１
０３８２（請求項１、図９Ａ）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０
０２／３０２６８（請求項２７、３９１頁）、ＵＳ２００３／２１９８０６（請求項４）
、ＷＯ２００１／６２７９４（請求項１４、図１Ａ～Ｄ）、相互参照：ＭＩＭ：６０６９
３６、ＮＰ＿０６０１０６．２、ＮＭ＿０１７６３６＿１。
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌
種由来の成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１
２）。Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９８９，８（
７）：１９８７－１９９１、Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９１，４９（３）：
５５５－５６５、ＵＳ２００３／２２４４１１（請求項１）、ＷＯ２００３／０８３０４
１（実施例１）、ＷＯ２００３／０３４９８４（請求項１２）、ＷＯ２００２／８８１７
０（請求項２、５２～５３頁）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図５８）、Ｗ
Ｏ２００２／１６４１３（請求項１、９４～９５頁、１０５頁）、ＷＯ２００２／２２８
０８（請求項２、図１）、ＵＳ５，８５４，３９９（実施例２、欄１７～１８）、ＵＳ５
，７９２，６１６（図２）、相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５、ＮＰ＿００３２０３．１
、ＮＭ＿００３２１２＿１。
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／Ｅｐｓｔｅｉｎ
Ｂａｒｒウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２ Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ２６０
０４）、Ｆｕｊｉｓａｋｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８９，２６
４（４）：２１１８－２１２５）、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．，１９８８，１６７：１０４７－１０６６、Ｍｏｏｒｅ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８７，８４：９１９４－９１
９８、Ｂａｒｅｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，３５：
１０２５－１０３１、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８６，８３：５６３９－５６４３、Ｓｉｎｈａ Ｓ．Ｋ
．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９３，１５０：５３１１－５３２０、Ｗ
Ｏ２００４／０４５５２０（実施例４）、ＵＳ２００４／００５５３８（実施例１）、Ｗ
Ｏ２００３／０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００４／０４５５２０（実施例４）、Ｗ
Ｏ９１０２５３６（図９．１～９．９）、ＷＯ２００４／０２０５９５（請求項１）、受
託番号：Ｐ２００２３、Ｑ１３８６６、Ｑ１４２１２、ＥＭＢＬ、Ｍ２６００４、ＡＡＡ
３５７８６．１。
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）
、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）。Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００３，１００（７）：４１２６
－４１３１、Ｂｌｏｏｄ，２００２，１００（９）：３０６８－３０７６、Ｍｕｌｌｅｒ
，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，２２（６）：１６２１－１
６２５、ＷＯ２００４／０１６２２５（請求項２、図１４０）、ＷＯ２００３／０８７７
６８、ＵＳ２００４／１０１８７４（請求項１、１０２頁）、ＷＯ２００３／０６２４０
１（請求項９）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２）、ＵＳ２００２／１５０５７３
（請求項５、１５頁）、ＵＳ５，６４４，０３３、ＷＯ２００３／０４８２０２（請求項
１、３０６頁及び３０９頁）、ＷＯ９９／５５８６５８、ＵＳ６，５３４，４８２（請求
項１３、図１７Ａ／Ｂ）、ＷＯ２０００／５５３５１（請求項１１、１１４５～１１４６
頁）、相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５、ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６
＿１。
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホ
スファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ
受託番号ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，２００３
，１３（１０）：２２６５－２２７０、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００２，５４
，（２）：８７－９５、Ｂｌｏｏｄ，２００２，９９（８）：２６６２－２６６９、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００１，９８（１７）：９７７２
－９７７７、Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ
．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００１，２８０（３）：７６８－７７５、ＷＯ２００４／０１６２
２５（請求項２）、ＷＯ２００３／０７７８３６、ＷＯ２００１／３８４９０（請求項５
、図１８Ｄ－１～１８Ｄ－２）、ＷＯ２００３／０９７８０３（請求項１２）、ＷＯ２０
０３／０８９６２４（請求項２５）、相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９、ＮＰ＿１１０３
９１．２、ＮＭ＿０３０７６４＿１。
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１１７３０）Ｃｏｕｓｓｅ
ｎｓ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２３０（４７３０）：１１３２
－１１３９）、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３１
９：２３０－２３４、Ｓｅｍｂａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８５，８２：６４９７－６５０１、Ｓｗｉｅｒｃｚ， Ｊ
．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２００４，１６５：８６９－８８０
、Ｋｕｈｎｓ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，２７４
：３６４２２－３６４２７、Ｃｈｏ Ｈ．－Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９
３，４２１：７５６－７６０、Ｅｈｓａｎｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，
１９９３，１５：４２６－４２９、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２０
０４／０２７０４９（図１Ｉ）、ＷＯ２００４／００９６２２、ＷＯ２００３／０８１２
１０、ＷＯ２００３／０８９９０４（請求項９）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項
１）、ＵＳ２００３／１１８５９２、ＷＯ２００３／００８５３７（請求項１）、ＷＯ２
００３／０５５４３９（請求項２９、図１Ａ～Ｂ）、ＷＯ２００３／０２５２２８（請求
項３７、図５Ｃ）、ＷＯ２００２／２２６３６（実施例１３、９５～１０７頁）、ＷＯ２
００２／１２３４１（請求項６８、図７）、ＷＯ２００２／１３８４７（７１～７４頁）
、ＷＯ２００２／１４５０３（１１４～１１７頁）、ＷＯ２００１／５３４６３（請求項
２、４１～４６頁）、ＷＯ２００１／４１７８７（１５頁）、ＷＯ２０００／４４８９９
（請求項５２、図７）、ＷＯ２０００／２０５７９（請求項３、図２）、ＵＳ５，８６９
，４４５（請求項３、欄３１～３８）、ＷＯ９６３０５１４（請求項２、５６～６１頁）
、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４／０４３３６１（請求項７）、ＷＯ２
００４／０２２７０９、ＷＯ２００１／００２４４（実施例３、図４）、受託番号：Ｐ０
４６２６、ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６７、ＡＡＡ３５８０８．１。ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６１、
ＡＡＡ３５８０８．１。
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１８７２８）、Ｂａｒｎ
ｅｔｔ Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９８８，３：５９－６６、Ｔａｗａ
ｒａｇｉ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１９８８，１５０：８９－９６、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００２，９９：１６８９９－
１６９０３、ＷＯ２００４／０６３７０９、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２０
０４／０４４１７８（実施例４）、ＷＯ２００４／０３１２３８、ＷＯ２００３／０４２
６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２／８６４
４３（請求項２７、４２７頁）、ＷＯ２００２／６０３１７（請求項２）、受託番号：Ｐ
４０１９９、Ｑ１４９２０、ＥＭＢＬ、Ｍ２９５４１、ＡＡＡ５９９１５．１。ＥＭＢＬ
、Ｍ１８７２８。
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＢＣ０１７０２３）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００２，９９（２６）：１６８９９－１
６９０３、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／６４７９８（請求
項３３、８５～８７頁）、ＪＰ０５００３７９０（図６～８）、ＷＯ９９４６２８４（図
９）、相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０、ＡＡＨ１７０２３．１、ＢＣ０１７０２３＿１
。
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ
１８４９７１）、Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，２０
０３，１３：２２６５－２２７０、Ｍｕｎｇａｌｌ Ａ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕ
ｒｅ，２００３，４２５：８０５－８１１、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，
Ｃｅｌｌ，２００１，１０４：９－１９、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１，１６７：３５４５－３５４９、Ｐａｒｒｉｓｈ－Ｎｏｖ
ａｋ Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：４７５１７
－４７５２３、Ｐｌｅｔｎｅｖ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０
０３，４２：１２６１７－１２６２４、Ｓｈｅｉｋｈ Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，２００４，１７２：２００６－２０１０、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１
）、ＵＳ２００４／００５３２０（実施例５）、ＷＯ２００３／０２９２６２（７４～７
５頁）、ＷＯ２００３／００２７１７（請求項２、６３頁）、ＷＯ２００２／２２１５３
（４５～４７頁）、ＵＳ２００２／０４２３６６（２０～２１頁）、ＷＯ２００１／４６
２６１（５７～５９頁）、ＷＯ２００１／４６２３２（６３～６５頁）、ＷＯ９８３７１
９３（請求項１、５５～５９頁）、受託番号：Ｑ９ＵＨＦ４、Ｑ６ＵＷＡ９、Ｑ９６ＳＨ
８、ＥＭＢＬ、ＡＦ１８４９７１、ＡＡＦ０１３２０．１。
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ２２
９０５３）、Ｇａｒｙ Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２０００，２５６：３９－
１４７、Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，２００３，１
３：２２６５－２２７０、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００２，９９：１６８９９－１６９０３、
ＵＳ２００３／１８６３７２（請求項１１）、ＵＳ２００３／１８６３７３（請求項１１
）、ＵＳ２００３／１１９１３１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２２（
請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２６（請求項１）、ＵＳ２００３／１１９
１２１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２９（請求項１）、ＵＳ２００３
／１１９１３０（請求項１）、ＵＳ２００３／１１９１２８（請求項１、図５２）、ＵＳ
２００３／１１９１２５（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ
２００２／０２６３４（請求項１）。
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎ
ｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４４４２）Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ，１９９１，６（６）：１０５７－１０６１、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９
５，１０（５）：８９７－９０５、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．, １９９８,
２１：３０９－３４５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．，２０００，１９６：１７７－２
４４、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０００／５３２１６（請求項
１、４１頁）、ＷＯ２００４／０６５５７６（請求項１）、ＷＯ２００４／０２０５８３
（請求項９）、ＷＯ２００３／００４５２９（１２８～１３２頁）、ＷＯ２０００／５３
２１６（請求項１、４２頁）、相互参照：ＭＩＭ：６００９９７、ＮＰ＿００４４３３．
２、ＮＭ＿００４４４２＿１。
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＸ０９２３２８）ＵＳ２
００４／０１０１８９９（請求項２）、ＷＯ２００３／１０４３９９（請求項１１）、Ｗ
Ｏ２００４／０００２２１（図３）、ＵＳ２００３／１６５５０４（請求項１）、ＵＳ２
００３／１２４１４０（実施例２）、ＵＳ２００３／０６５１４３（図６０）、ＷＯ２０
０２／１０２２３５（請求項１３、２９９頁）、ＵＳ２００３／０９１５８０（実施例２
）、ＷＯ２００２／１０１８７（請求項６、図１０）、ＷＯ２００１／９４６４１（請求
項１２、図７ｂ）、ＷＯ２００２／０２６２４（請求項１３、図１Ａ～１Ｂ）、ＵＳ２０
０２／０３４７４９（請求項５４、４５～４６頁）、ＷＯ２００２／０６３１７（実施例
２；３２０～３２１頁、請求項３４、３２１～３２２頁）、ＷＯ２００２／７１９２８（
４６８～４６９頁）、ＷＯ２００２／０２５８７（実施例１、図１）、ＷＯ２００１／４
０２６９（実施例３、１９０～１９２頁）、ＷＯ２０００／３６１０７（実施例２、２０
５～２０７頁）、ＷＯ２００４／０５３０７９（請求項１２）、ＷＯ２００３／００４９
８９（請求項１）、ＷＯ２００２／７１９２８（２３３～２３４頁、４５２～４５３頁）
、ＷＯ０１１６３１８。
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＪ２９７４３
６）Ｒｅｉｔｅｒ Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５：１７３５－１７４０、Ｇｕ Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎ
ｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９：１２８８－１２９６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ
．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０００，２７５（３）：７８３－７８８、ＷＯ２００４０
／２２７０９、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４／０１８５５３（請求
項１７）、ＷＯ２００３／００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００２／８１６４６（請求
項１、１６４頁）、ＷＯ２００３／００３９０６（請求項１０、２８８頁）、ＷＯ２００
１／４０３０９（実施例１、図１７）、ＵＳ２００１／０５５７５１（実施例１、図１ｂ
）、ＷＯ２０００／３２７５２（請求項１８、図１）、ＷＯ１９９８／５１８０５（請求
項１７、９７頁）、ＷＯ１９９８／５１８２４（請求項１０、９４頁）、ＷＯ１９９８／
４０４０３（請求項２、図１Ｂ）、受託番号：Ｏ４３６５３、ＥＭＢＬ、ＡＦ０４３４９
８、ＡＡＣ３９６０７．１。
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２６０７６３）、ＡＡＰ１４９５４脂
肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１－ホモサピ
エンス種：ホモサピエンス（ヒト）ＷＯ２００３／０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２
００３／０００８４２（請求項１）、ＷＯ２００３／０２３０１３（実施例３、請求項２
０）、ＵＳ２００３／１９４７０４（請求項４５）、相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９
、ＡＡＰ１４９５４．１、ＡＹ２６０７６３＿１。
（２６）ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎ
ｂａｎｋ受託番号ＡＦ１１６４５６）、ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．
１－Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ，２００１，２９３（５５３７）、２１０８－２１１１、ＷＯ２００４／０５８３
０９、ＷＯ２００４／０１１６１１、ＷＯ２００３／０４５４２２（実施例、３２～３３
頁）、ＷＯ２００３／０１４２９４（請求項３５、図６Ｂ）、ＷＯ２００３／０３５８４
６（請求項７０、６１５～６１６頁）、ＷＯ２００２／９４８５２（欄１３６～１３７）
、ＷＯ２００２／３８７６６（請求項３、１３３頁）、ＷＯ２００２／２４９０９（実施
例３、図３）、相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９、ＮＰ＿４４３１７７．１、ＮＭ＿０５
２９４５＿１、ＡＦ１３２６００。
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォーム、ＢＬ－ＣＡＭ、Ｌｙｂ
－８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ－２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＫ０
２６４６７）、Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９１，１７３
：１３７－１４６、ＷＯ２００３／０７２０３６（請求項１、図１）、相互参照：ＭＩＭ
：１０７２６６、ＮＰ＿００１７６２．１、ＮＭ＿００１７７１＿１。
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベ
ータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合により相互作用し、ＩｇＭ分子と表面上で複合体を形成し
、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４
、分子量：２５０２８ ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ
受託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）ＷＯ２００３／０８８８０８、ＵＳ２００３／０２
２８３１９、ＷＯ２００３／０６２４０１（請求項９）、ＵＳ２００２／１５０５７３（
請求項４、１３～１４頁）、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）、ＷＯ９２０７
５７４（図１）、ＵＳ５，６４４，０３３、Ｈａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
，１９９２，１４８（５）：１５２６－１５３１、Ｍｕｅｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９９２，２２：１６２１－１６２５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ
，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９４，４０（４）：２８７－２９
５、Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
９９２，９０（１）：１４１－１４６、Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
９９２，１４８（２）６３３－６３７、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ
Ｊ．，１９８８，７（１１）：３４５７－３４６４。
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって
活性化され、リンパ球遊走及び体液性免疫において機能し、ＨＩＶ－２感染症、ならびに
恐らく、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において働くＧタンパク質共役
型受容体）、３７２ａａ、ｐＩ：８．５４ 分子量：４１９５９ ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子
染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７０７．１）、ＷＯ２０
０４／０４００００、ＷＯ２００４／０１５４２６、ＵＳ２００３／１０５２９２（実施
例２）、ＵＳ６，５５５，３３９（実施例２）、ＷＯ２００２／６１０８７（図１）、Ｗ
Ｏ２００１／５７１８８（請求項２０、２６９頁）、ＷＯ２００１／７２８３０（１２～
１３頁）、ＷＯ２０００／２２１２９（実施例１、１５２～１５３頁、実施例２、２５４
～２５６頁）、ＷＯ１９９９／２８４６８（請求項１、３８頁）、ＵＳ５，４４０，０２
１（実施例２、欄４９～５２）、ＷＯ９４２８９３１（５６～５８頁）、ＷＯ１９９２／
１７４９７（請求項７、図５）、Ｄｏｂｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．，１９９２，２２：２７９５－２７９９、Ｂａｒｅｌｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｊ．，１９９５，３０９：７７３－７７９。
（３０）ＨＬＡ－ＤＯＢ（ペプチドに結合し、ＣＤ４＋Ｔリンパ球にそれらを提示する
、ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．
５６、分子量：３０８２０ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎ
ｋ受託番号ＮＰ＿００２１１１．１）、Ｔｏｎｎｅｌｌｅ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ
．，１９８５，４（１１）：２８３９－２８４７、Ｊｏｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９８９，２９（６）：４１１－４１３、Ｂｅｃｋ，ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２２８：４３３－４４１、Ｓｔｒａｕｓｂ
ｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００２，９
９：１６８９９－１６９０３、Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．，１９８７，２６２：８７５９－８７６６、Ｂｅｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．，１９９６，２５５：１－１３、Ｎａｒｕｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕ
ｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，２００２，５９：５１２－５１９、ＷＯ９９５８６５８（請求項
１３、図１５）、ＵＳ６，１５３，４０８（欄３５～３８）、ＵＳ５，９７６，５５１（
欄１６８～１７０）、ＵＳ６，０１１，１４６（欄１４５～１４６）、Ｋａｓａｈａｒａ
，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９８９，３０（１）：６６－６８、
Ｌａｒｈａｍｍａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８５，２６０（２
６）：１４１１１－１４１１９。
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、シナプス伝
達及び神経発生に関与し得る、細胞外ＡＴＰによって開閉されるイオンチャネル、欠損す
ると特発性の排尿筋不安定の病態生理に寄与し得る）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、
分子量：４７２０６ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受
託番号ＮＰ＿００２５５２．２）、Ｌｅ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９
７，４１８（１－２）：１９５－１９９、ＷＯ２００４／０４７７４９、ＷＯ２００３／
０７２０３５（請求項１０）、Ｔｏｕｃｈｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ
．，２０００，１０：１６５－１７３、ＷＯ２００２／２２６６０（請求項２０）、ＷＯ
２００３／０９３４４４（請求項１）、ＷＯ２００３／０８７７６８（請求項１）、ＷＯ
２００３／０２９２７７（８２頁）。
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ－２）、ｐＩ：８．６６、分子量
：４０２２５ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｎ
Ｐ＿００１７７３．１）、ＷＯ２００４／０４２３４６（請求項６５）、ＷＯ２００３／
０２６４９３（５１～５２頁、５７～５８頁）、ＷＯ２０００／７５６５５（１０５～１
０６頁）、Ｖｏｎ Ｈｏｅｇｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９０，１
４４（１２）：４８７０－４８７７、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００２，９９：１６８９９－１６９０３。
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）
ファミリーのＩ型膜タンパク質、Ｂ細胞の活性化及びアポトーシスを制御し、機能消失は
、全身性エリテマトーデス患者における疾患活性の増加に関連する）、６６１ａａ、ｐＩ
：６．２０、分子量：７４１４７ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａ
ｎｋ受託番号ＮＰ＿００５５７３．１）、ＵＳ２００２／１９３５６７、ＷＯ９７０７１
９８（請求項１１、３９～４２頁）、Ｍｉｕｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１
９９６，３８（３）：２９９－３０４、Ｍｉｕｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９
８，９２：２８１５－２８２２、ＷＯ２００３／０８３０４７、ＷＯ９７４４４５２（請
求項８、５７～６１頁）、ＷＯ２０００／１２１３０（２４～２６頁）。
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメイン
を含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定上の受容体、Ｂ－リンパ球分化において役
割を有し得る）、４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、分子量：４６９２５ ＴＭ：１［Ｐ］遺
伝子染色体：１ｑ２１－１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７０．１）、
ＷＯ２００３／０７７８３６、ＷＯ２００１／３８４９０（請求項６、図１８Ｅ－１～１
８－Ｅ－２）、Ｄａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ
ＳＡ，２００１，９８（１７）：９７７２－９７７７、ＷＯ２００３／０８９６２４（請
求項８）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３／０８９６２４（請求項７）
。
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞の
成長及びリンパ腫形成に潜在的な役割を有する推定上の免疫受容体、転座による遺伝子の
制御解除が一部のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）、９７７ａａ、ｐＩ：６．８８ 分子量：１
０６４６８ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｈｕｍａ
ｎ：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ
３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１
８７、ＡＹ３５８０８５；Ｍｏｕｓｅ：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０
６５５８；ＮＰ＿１１２５７１．１、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図９７）
、Ｎａｋａｙａｍａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍｕｎ．，２０００，２７７（１）：１２４－１２７、ＷＯ２００３／０７７８３６、Ｗ
Ｏ２００１／３８４９０（請求項３、図１８Ｂ－１～１８Ｂ－２）。
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定
上の膜貫通プロテオグリカン、成長因子のＥＧＦ／ヘレグリンファミリー及びホリスタチ
ンに関連する）、３７４ａａ、ＮＣＢＩ受託番号：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７
、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５７２７６、ＮＣＢＩ遺伝子：２３６
７１、ＯＭＩＭ：６０５７３４、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｑ９ＵＩＫ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受
託番号ＡＦ１７９２７４、ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６、Ｗ
Ｏ２００４／０７４３２０、ＪＰ２００４／１１３１５１、ＷＯ２００３／０４２６６１
、ＷＯ２００３／００９８１４、ＥＰ１２９５９４４（６９～７０頁）、ＷＯ２００２／
３０２６８（３２９頁）、ＷＯ２００１／９０３０４、ＵＳ２００４／２４９１３０、Ｕ
Ｓ２００４／０２２７２７、ＷＯ２００４／０６３３５５、ＵＳ２００４／１９７３２５
、ＵＳ２００３／２３２３５０、ＵＳ２００４／００５５６３、ＵＳ２００３／１２４５
７９、Ｈｏｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０００，６７：１４６－１５２
、Ｕｃｈｉｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１９９９，２６６：５９３－６０２、Ｌｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．，２０００，６０：４９０７－１２、Ｇｌｙｎｎｅ－Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．
，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９４（２）：１７８－８４。
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ（ｓｉｌｖｅｒ ｈｏｍｏｌｏｇ）、ＳＩＬ
Ｖ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、ＭＥ２０、ｇｐ１００）ＢＣ００
１４１４、ＢＴ００７２０２、Ｍ３２２９５、Ｍ７７３４８、ＮＭ＿００６９２８、Ｍｃ
Ｇｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００９，１０６（３３）：１３７３１－１３７３６、Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ
．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００９，２８４（４），２２９６
－２３０６。
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのホリスタチン様ドメイン１を有す
る膜貫通タンパク質、トモレグリン１）、Ｈ７３６５、Ｃ９ｏｒｆ２、Ｃ９ＯＲＦ２、Ｕ
１９８７８、Ｘ８３９６１、ＮＭ＿０８０６５５、ＮＭ＿００３６９２、Ｈａｒｍｓ，Ｐ
．Ｗ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，２００３，１７（２１），２６２４－２６２９、Ｇｅｒ
ｙ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００３，２２（１８）：２７２３－２７
２７。
（３９）ＧＤＮＦ－Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤ
ＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ－アルファ１
、ＧＦＲ－ＡＬＰＨＡ－１）、Ｕ９５８４７、ＢＣ０１４９６２、ＮＭ＿１４５７９３
ＮＭ＿００５２６４、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．
，２００９，２９（８），２２６４－２２７７、Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ
．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８２（６５８６）：８０－８３。
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合物、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ－Ｅ、ＳＣ
Ａ－２、ＴＳＡ－１）、ＮＰ＿００２３３７．１、ＮＭ＿００２３４６．２、ｄｅ Ｎｏ
ｏｉｊ－ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２
００３，１０３（６）：７６８－７７４、Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏ
ｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，２００２，２２（３）：９４６－９５２。
（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ（ｓｈｉｓａ ｈｏｍｏｌｏｇ）２（Ｘｅｎｏｐ
ｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、ＮＰ＿００１００７５３９．１、ＮＭ＿００１
００７５３８．１、Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２
００７，３０６（２）：４８０－４９２、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎ
ｏｍｅ Ｒｅｓ．，２００３，１３（１０）：２２６５－２２７０。
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６－Ｄ、ＭＥＧ
Ｔ１）、ＮＰ＿０６７０７９．２、ＮＭ＿０２１２４６．２、Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．，ｅｔ
ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００２，８０（１）：１１３－１２３、Ｒｉｂａｓ，Ｇ
．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，１６３（１）：２７８－２８７。
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合型受容体５、ＧＰＲ４９
、ＧＰＲ６７）、ＮＰ＿００３６５８．１、ＮＭ＿００３６６７．２、Ｓａｌａｎｔｉ，
Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．，２００９，１７０（５）：５３
７－５４５、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００３
，３７（３）：５２８－５３３。
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔがん原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ
１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ－ＥＬＥ１）、Ｎ
Ｐ＿０６６１２４．１、ＮＭ＿０２０９７５．４、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ ａｌ
．，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．，２００９，１００（１０）：１８９５－１９０１、Ｎａｒ
ｉｔａ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００９，２８（３４）：３０５８－
３０６８。
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合物、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４
８、ＦＬＪ３５２２６）、ＮＰ＿０５９９９７．３、ＮＭ＿０１７５２７．３、Ｉｓｈｉ
ｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００７，６７（２４）：１１
６０１－１１６１１、ｄｅ Ｎｏｏｉｊ－ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，（２００３，１０３（６）：７６８－７７４。
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、ＮＰ＿００
６１３４．１、ＮＭ＿００６１４３．２、Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ Ｓｉｎｎｅ
ｔｔ，Ｄ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９９，１０５（１－２）：１６２－１６４、Ｏ
’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９６，３９４（３）
：３２５－３２９。
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７
５、ＡＸＯＲ１２）、ＮＰ＿１１５９４０．２、ＮＭ＿０３２５５１．４、Ｎａｖｅｎｏ
ｔ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００９，７５（６）：
１３００－１３０６、Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２
００９，２９（２）：６１７－６２３。
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯ
Ｃ２５３９８２）、ＮＰ＿８５９０６９．２、ＮＭ＿１８１７１８．３、Ｇｅｒｈａｒｄ
，Ｄ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，２００４，１４（１０Ｂ）：２１
２１－２１２７。
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３
）、ＮＰ＿０００３６３．１、ＮＭ＿０００３７２．４、Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．，ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２００９，４１（８）：９２０－９２５、Ｎａｎ，Ｈ
．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００９，１２５（４）：９０９－９１
７。
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、Ｆ
ＬＪ１４６２７）、ＮＰ＿００１１０３３７３．１、ＮＭ＿００１１０９９０３．１、Ｃ
ｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，２００３，１３（１０）
：２２６５－２２７０、Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０
０６，４４０（７０８２）：３４６－３５１。
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ
１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、ＮＰ＿０７８８０７．１、ＮＭ＿０２４５３１
．３、Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００３，１００（１１）：６７５９－６７６４、Ｔａｋｅｄａ，
Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２００２，５２０（１－３）：９７－１０
１。
（５２）シアル酸に結合する免疫グロブリン様レクチンファミリーのメンバーであるＣ
Ｄ３３は、６７ｋＤａのグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、発生運命が
決定した骨髄単球性前駆細胞及び赤血球前駆細胞以外に、ほとんどの骨髄性白血病細胞及
び単球性白血病細胞上で発現する。これは、最初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ
系細胞、または非造血系細胞には見られない（Ｓａｂｂａｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９８５，７５：７５６－５６、Ａｎｄｒｅｗｓ，ｅｔ ａｌ．
，Ｂｌｏｏｄ，１９８６，６８：１０３０－５）。ＣＤ３３は、その細胞質尾部に２個の
チロシン残基を有し、これらの各々に、多くの阻害性受容体に見られる免疫受容体チロシ
ンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に類似する疎水性残基が続いている。
（５３）ＣＬＬ－１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）は、Ｃ型レクチン
／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコード
する。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質フォールドを共有し、細胞接着、
細胞間シグナル伝達、糖タンパク質ターンオーバー、ならびに炎症及び免疫応答における
役割などの多様な機能を有する。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、顆粒球
及び単球の機能の負の調節因子である。この遺伝子のいくつかの選択的スプライス転写産
物変異体がこれまでに記載されているが、これらの変異体のうちのいくつかに関しては完
全長の性質が決定されていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー
遺伝子複合体領域内の他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーと密接に関連し
ている（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｋ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，
１９９９，９（５）：５８５－９０；ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌ
ｏｏｄ，２００７，１１０（７）：２６５９－６６；Ｃｈｅｎ，Ｃ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０７（４）：１４５９－６７；Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ａ．Ｓ．
，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，３６（８）：２１５９－６
９；Ｂａｋｋｅｒ，Ａ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００５，６４
（２２）：８４４３－５０；Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ａ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．，２００４，２７９（１５）：１４７９２－８０２）。ＣＬＬ－１は、単一
のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のいずれにも結合することが予測されて
いない）、ストーク領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短い細胞質
尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体であることが示されている。
（５４）ＣＤ７０（ＣＤ２７リガンド；ＣＤ２７－Ｌ）；ＣＤ２７に結合するサイトカ
イン）は、Ｔ細胞活性化における役割を担い、共刺激されたＴ細胞の増殖を誘導し、細胞
溶解性Ｔ細胞の生成を高める。ＣＤ７０タンパク質は、Ｔ及びＢ細胞リンパ腫などの高度
に活性化されたリンパ球で発現する（Ｉｓｒａｅｌ，Ｂ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．
Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００５，４（１２）：２０３７－４４；Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，
Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１７，１９９（１０）：３７００
－３７１０；Ｌｅｉｇｈ，Ｎ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１７，
１９９（１）：３３６－３４７；Ｉｔａｎｉ，Ｈ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅ
ｓ．，２０１６，１１８（８）：１２３３－４３；Ｂｕｒｃｈｉｌｌ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ
ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，４５（１１）：３１４０－９；Ａｌ
ｌａｍ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１４，１９３（２）：８７１
－８）．
（５５）ＣＬＤＮ１８．２（クローディン－１８ スプライスバリアント２）；ＣＬＤ
Ｎ１８は、ヒト遺伝子クローディン１８をコードする。これはクローディン－１８、ＳＦ
ＴＡ５、及びＳＦＴＰＪとしても知られる。コードされるタンパク質は、２６１個のアミ
ノ酸長及び２７．９ｋＤａの質量を有する。ＣＬＤＮ１８は、クローディンファミリーの
メンバーである（ＷＯ ２０１３／１６７２９５、ＷＯ２０１６／１６６１２２）。タイ
トジャンクション分子であるクローディン１８アイソタイプ２（ＣＬＤＮ １８．２）は
、クローディン１８のがん関連スプライスバリアントである。ＣＬＤＮ１８．２は、２個
の小さい細胞外ループを有する４つの膜貫通ドメインを有する２７．８ｋＤａの膜貫通タ
ンパク質である（ループ１は疎水性領域１及び疎水性領域２に含まれ、ループ２は疎水性
領域３及び４に含まれる）。ＣＬＤＮ１８．２は、短寿命の分化した胃上皮細胞でのみ発
現し、他のいずれの正常ヒト組織でも検出されない、極めて選択性の高い胃系統抗原であ
る。この抗原は、胃食道癌及び膵癌をはじめとする多様なヒトのがんにおいて顕著なレベ
ルで異所性に発現する（Ｓａｈｉｎ，Ｕ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．，２００８，１４（２３）：７６２４－３４）。ＣＬＤＮ１８．２タンパク質は、
胃癌のリンパ節転移において、また、遠隔転移においてもしばしば検出される。ＣＬＤＮ
１８．２は、ｓｉＲＮＡ技術による標的の発現低下が胃癌細胞の増殖の阻害につながるこ
とから、ＣＬＤＮ１８．２陽性腫瘍細胞の増殖に関与していると考えられる。１ＭＡＢ３
６２は、ＣＬＤＮ１８．２を標的とするＩｇＧ１サブタイプのキメラモノクローナル抗体
である。１ＭＡＢ３６２は、ＣＬＤＮ１８．２の第１細胞外ドメインを高い親和性かつ特
異性で認識し、密接に関連したクローディン１８のスプライスバリアント１を含む他のい
ずれのクローディンファミリーのメンバーにも結合しない。
（５６）ＣＤ１５１（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １５１
、Ｔｓｐａｎ２４、ＰＥＴＡ－３、ＳＦＡ－１）；Ｒａｐｈ血液型由来のヒト遺伝子。Ｃ
Ｄ１５１遺伝子によってコードされるタンパク質は、テトラスパンファミリーとしても知
られる４回膜貫通スーパーファミリーのメンバーである。これらのメンバーの多くは、４
つの疎水性ドメインの存在によって特徴付けられる細胞表面タンパク質である。これらの
タンパク質は、細胞の発生、活性化、増殖、及び運動性の調節において役割を担うシグナ
ルトランスダクション事象を媒介する。このコードされたタンパク質は、インテグリン及
び他の４回膜貫通スーパーファミリーのタンパク質と複合体を形成することが知られてい
る細胞表面糖タンパク質である。このタンパク質は、細胞接着をはじめとする細胞プロセ
スに関与しており、インテグリンのトラフィッキング及び／または機能を調節すると考え
られる。このタンパク質は、細胞運動性、がん細胞の浸潤及び転移を増大させる。同じタ
ンパク質をコードする複数の選択的にスプライスされた転写バリアントがこの遺伝子につ
いて記載されている（Ｂｅｒｄｉｔｃｈｅｖｓｋｉ Ｆ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．，２
００２，１１４（Ｐｔ ２３）：４１４３－５１；Ａｓｈｍａｎ，Ｌ．Ｋ．，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｈｏｍｅｏｓｔ．Ａｇｅｎｔｓ，２００３，１６（３）：２２３－６；
Ｓｉｎｃｏｃｋ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ
．，１９９７，４５（４）：５１５－２５；Ｆｉｔｔｅｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃ
ｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１９９８，１３９８（１）：７５－８５；Ｓｉｎ
ｃｏｃｋ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．，１９９９，１１２（Ｐｔ
６）：８３３－４４；Ｓｔｅｒｋ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ
．，２０００，１４９（４）：９６９－８２；Ｚｈａｎｇ，Ｘ．Ａ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｅｌｌ．，２００２，１３（１）：１－１１）。
（５７）ＩＴＧａＶ（インテグリンα－Ｖ，ＣＤ５１；ＭＳＫ８；ＶＮＲＡ；ＶＴＮＲ
）；ヒトのタンパク質はＩＴＧＡＶ遺伝子によってコードされる。（Ｓｏｓｎｏｓｋｉ，
Ｄ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９８８，８１（６）：１９
９３－８）。ＩＴＧＡＶは、インテグリンのαＶ鎖をコードする。インテグリンはα鎖と
β鎖からなるヘテロ二量体の膜内在性タンパク質である。αＶ鎖は、翻訳後切断を受けて
ジスルフィド結合でつながった重鎖と軽鎖を生じ、これが複数のインテグリンβ鎖と組み
合わされることで異なるインテグリンを形成する。既知の関連するβ鎖としては、それぞ
れ細胞外マトリックスリガンドと相互作用することができるβ鎖（β鎖１、３、５、６、
及び８、「ＩＴＧＢ１」、「ＩＴＧＢ３」、「ＩＴＧＢ５」、「ＩＴＧＢ６」、及び「Ｉ
ＴＧＢ８」）があり、これらのうちでおそらく最も研究されているαＶβ３インテグリン
はビトロネクチン受容体（ＶＮＲ）と呼ばれている。接着以外に、多くのインテグリンは
シグナルトランスダクションを促進することが知られている。ＩＴＧＡＶ遺伝子の過剰発
現は、大腸直腸癌（Ｗａｉｓｂｅｒｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．，２０１４，３４（１０）：５５９９－６０７）及び前立腺癌（Ｃｏｏｐｅｒ，Ｃ
．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，２００２，４（３）：１９１－４）の進行
及び転移に関連している。モノクローナル抗体インテツムマブ及びアビツズマブは、一部
の腫瘍細胞にみられるこのタンパク質を標的としている（Ｅｌｅｚ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．
，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１５，２６（１）：１３２－４０）。

【0128】

更なる例示的な抗原としては、これらに限定されるものではないが、（５８）ネクチン
－４、（５９）ＦＧＦＲ２、（６０）ＦＧＦＲ３、（６１）ｇｐＮＭＢ、（６２）ＧＵＣ
Ｙ２Ｃ、（６３）ＣＬＤＮ６、（６４）ｃＭＥＴ、（６５）ＣＥＡＣＡＭ４、（６６）Ｃ
ＥＡＣＡＭ５、（６７）ＣＤ２９、（６８）ＣＤ３７、（６９）ＣＤ３５２、（７０）Ｃ
Ｄ２４８、（７１）ＭＵＣ１、（７２）ＣＤ１２３、（７３）ＢＣＭＡ、（７４）ＡＤＡ
Ｍ９、（７５）５Ｔ４、（７６）Ｐ－カドヘリン、（７７）ＣＡ９、（７８）ＣＤ１３８
、（７９）ＣＤ１６６、（８０）ＣＤ７１、（８１）ＣＤ２２、（８２）ＣＤ２０、（８
３）ＣＤ７４、（８４）ＤＬＬ３、（８５）葉酸受容体α、（８６）ＩＴＧａ２、（８７
）ＩＴＧａ３、（８８）ＬＡＭＰ１、（８９）ＬＩＶ－１、（９０）ＭＭＰ１４、（９１
）ＬＲＣＣ１５、（９２）ＭＳＬＮ、（９３）ＰＭＳＡ、（９４）ＰＲＬＲ、（９５）Ｐ
ＴＫ７、（９６）ＳＬＡＭＦ７、（９７）ＳＣＬ４４Ａ４、（９８）ＳＬＴＲＫ５、（９
９）ＴＭ４ＳＦ１、及び（１００）ＴＲＯＰ２が挙げられる。

【0129】

本発明の特定の実施形態では、ＴＡＡは、ＨＥＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ７０、ＭＵＣ１／
ＣａｎＡｇ、ＭＵＣ１６、ＣＤ１５１及びＩＴＧａＶからなる群から選択される。

【0130】

抗体薬物複合体(毒素リンカー抗体)化合物
別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ）：
Ｔ－Ｌ’－Ａｂ （ＩＩＩ）
［式中、
Ｌ’は、リンカー部分であり、
Ｔは、式（Ｉ’）：

【化21】

（式中、
Ｒは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１；場合により、ハロゲン、－ＣＦ_３、－Ｃ_１～６アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ_１～６アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ_５～６ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ^２）＝Ｎ－Ｒ^３；－ＣＨ（ＣＦ_３）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－ＳＯ_２－Ｎ
Ｈ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ^ａＲ^ｂ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^１は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｎ－ＣＲ^ａＲ^ｂ（ＣＨ_２）_ｍＣ
Ｈ_３であり、
Ｒ^ａとＲ^ｂとは、それらが結合した原子とともにＣ_３～１０の複素環式環を形成し、
Ｒ^２は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３または－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である）
の基であり、
Ａｂは、抗体である］
の化合物または化合物群またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。

【0131】

特定の例示的な実施形態では、Ｌ’は、式（Ｂ^１）、式（Ｂ^２）、式（Ｂ^３）、及び式
（Ｂ^４）：

【化22】

【化23】

【化24】

【化25】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）
からなる群から選択される。

【0132】

特定の例示的な実施形態では、Ｒは、

【化26】

からなる群から選択される。

【0133】

式（ＩＩＩ）の非限定的な１つの例は、式（Ｃ^１）：

【化27】

（式中、Ｒ及びｑは上記と同様であり、Ａｂは上記と同様の抗体である）を有する。式
（ＩＩＩ）の更なる非限定的な例は、式（Ｃ^２）：

【化28】

（式中、Ｒは上記と同様であり、Ａｂは上記と同様の抗体である）を有する。式（ＩＩ
Ｉ）の別の非限定的な例は、式（Ｃ^３）：

【化29】

（式中、Ｒは上記と同様であり、Ａｂは上記と同様の抗体である）を有する。式（ＩＩ
Ｉ）の更なる非限定的な例は、式（Ｃ^４）：

【化30】

（式中、Ｒは上記と同様であり、Ａｂは上記と同様の抗体であり、ｎは、上記と同様、
１、２、または３である）を有する。式（ＩＩＩ）の別の非限定的な例は、式（Ｃ^５）：

【化31】

（式中、Ｒは上記と同様であり、Ａｂは上記と同様の抗体であり、ｑは、上記と同様、
３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を有する。

【0134】

例示的な実施形態では、抗体は、下記（１）～（１００）から選択される１つ以上の腫
瘍関連または細胞表面受容体に結合する。すなわち、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ型）；（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１
、ＳＬＣ７Ａ５）；（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺６回膜貫通上皮抗原）；（４）ＭＵＣ１
６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）；（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強
因子、メソテリン）；（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４
Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依
存性リン酸輸送体３ｂ）；（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５
、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマド
メイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び
短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）；（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０
Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ
１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；（９）ＥＴＢＲ（エンド
セリンＢ型受容体）；（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０
３１５）；（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１
、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパ
ク質１、前立腺６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）；（１２）Ｔｒｐ
Ｍ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電
位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、
ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子）；（１４）ＣＤ
２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容
体）またはＨｓ ７３７９２）；（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ
（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）；（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ
４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰ
ＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）；（１７）ＨＥＲ２；（１８）ＮＣＡ；（１９）ＭＤＰ；（２
０）ＩＬ２０Ｒα；（２１）ブレビカン；（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ；（２３）ＡＳＬＧ６５
９；（２４）ＰＳＣＡ；（２５）ＧＥＤＡ；（２６）ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受
容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）；（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイ
ソフォーム）；（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アル
ファ）；（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）；（３０）ＨＬＡ－ＤＯＢ
（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））；（３１）Ｐ２Ｘ５（プリ
ン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）；（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分
化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ－２）；（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、
ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；（３４）ＦｃＲＨ
１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）；（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンス
ーパーファミリー受容体転座関連２）；（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカ
ン）；（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ
１７、ＳＩ、ＳＩＬ）；（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのホリスタチン様ドメ
イン１を有する膜貫通タンパク質、トモレグリン－１）；（３９）ＧＤＮＦ－Ｒａ１（Ｇ
ＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ
１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－ＡＬＰＨＡ－１）；（
４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ－Ｅ、ＳＣＡ－
２、ＴＳＡ－１）；（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ２（アフリカツメガエル）、Ｓ
ＨＩＳＡ２）；（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６
－Ｄ、ＭＥＧＴ１）；（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役
受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔプロト癌遺伝子、ＭＥＮ
２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４
、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ－ＥＬＥ１）；（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子
座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）；（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタ
ンパク質共役受容体１９、Ｍｍ．４７８７）；（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、
ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）；（４８）ＡＳＰＨＤ１
（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）；（４
９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）；（
５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１
４６２７）；（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１
、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；（５２）ＣＤ３３；（５３）ＣＬＬ－
１；（５４）ＣＤ７０（ＣＤ２７リガンド、ＣＤ２７－Ｌ）；（５５）ＣＬＤＮ１８．２
（クローディン－１８ スプライスバリアント２）；（５６）ＣＤ１５１（Ｃｌｕｓｔｅ
ｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １５１、Ｔｓｐａｎ２４、ＰＥＴＡ－３、
ＳＦＡ－１）；（５７）ＩＴＧａＶ（インテグリン アルファ－Ｖ、ＣＤ５１；ＭＳＫ８
；ＶＮＲＡ；ＶＴＮＲ）；（５８）ネクチン－４；（５９）ＦＧＦＲ２；（６０）ＦＧＦ
Ｒ３；（６１）ｇｐＮＭＢ；（６２）ＧＵＣＹ２Ｃ；（６３）ＣＬＤＮ６；（６４）ｃＭ
ＥＴ；（６５）ＣＥＡＣＡＭ４；（６６）ＣＥＡＣＡＭ５；（６７）ＣＤ２９；（６８）
ＣＤ３７；（６９）ＣＤ３５２；（７０）ＣＤ２４８；（７１）ＭＵＣ１；（７２）ＣＤ
１２３；（７３）ＢＣＭＡ；（７４）ＡＤＡＭ９；（７５）５Ｔ４；（７６）Ｐ－カドヘ
リン；（７７）ＣＡ９；（７８）ＣＤ１３８；（７９）ＣＤ１６６；（８０）ＣＤ７１；
（８１）ＣＤ２２；（８２）ＣＤ２０；（８３）ＣＤ７４；（８４）ＤＬＬ３；（８５）
葉酸受容体α；（８６）ＩＴＧａ２；（８７）ＩＴＧａ３；（８８）ＬＡＭＰ１；（８９
）ＬＩＶ－１；（９０）ＭＭＰ１４；（９１）ＬＲＣＣ１５；（９２）ＭＳＬＮ；（９３
）ＰＭＳＡ；（９４）ＰＲＬＲ；（９５）ＰＴＫ７；（９６）ＳＬＡＭＦ７；（９７）Ｓ
ＣＬ４４Ａ４；（９８）ＳＬＴＲＫ５；（９９）ＴＭ４ＳＦ１；及び（１００）ＴＲＯＰ
２。

【0135】

本発明の特定の実施形態では、抗体は、トランスグルタミナーゼの存在下、アシルドナ
ーグルタミン含有タグ（例えば、Ｇｌｎ含有ペプチドタグまたはＱタグ）を有するように
操作されたＦｃ含有もしくはＦａｂ含有ポリペプチド、またはペプチドエンジニアリング
（例えば、ポリペプチドのアミノ酸の欠失、挿入、置換、変異、またはこれらの任意の組
み合わせ）によって反応性とされた（すなわち、アミン及びトランスグルタミナーゼの存
在下でアシルドナーとして共有結合を形成することができる）内因性グルタミンを介して
結合する。

【0136】

特定の実施形態では、本発明は、上記の抗体薬物複合体及び付随する定義のいずれかに
関し、抗体薬物複合体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の本発明の
化合物を含む。特定の例示的な実施形態では、抗体薬物複合体は、１、２、３、または４
個の本発明の化合物を含む。

【0137】

抗体と共有結合により連結される毒素の数は、特定の毒性化合物及び抗体に応じて異な
りうる。一実施形態では、１～４個の毒素が連結される。別の実施形態では、約１～約４
個の毒素が連結される。更なる実施形態では、約１～約６個の毒素が連結される。複数の
毒素が連結される実施形態では、式（ＩＩＩ）の抗体（Ａｂ）は、共有結合によって結合
された複数のＴ－Ｌ’－単位を有する。

【0138】

抗体薬物複合体のローディング（薬物／抗体比）は、異なる方法で制御することが可能
であり、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物リンカー中間体である式（ＩＩ）の化合物のモ
ル過剰量を制限する、(ii)複合体化の反応時間または温度を制限する、及び(iii)システ
インチオール基修飾の還元的条件を部分的に制限または制限することによって行うことが
できる。

【0139】

複数の求核基が薬物と反応する場合、得られる生成物は、抗体に結合された１つ以上の
薬物部分の分布を有する式（ＩＩＩ）の抗体薬物複合体化合物の混合物である。抗体１個
当たりの薬物の平均の数は、抗体に対して特異的であり、かつ薬物に対しても特異的であ
る二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算することができる。個々の抗体薬
物複合体分子を質量分析によって混合物中で同定し、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用ク
ロマトグラフィーによって分離することができる（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｅｌ．，２００６，１９（７）：２９９－
３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００
４，１０：７０６３－７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｅｆｆｅ
ｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐ
ｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－
ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，” Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，
２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍ
ａｒｃｈ ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ
ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，” Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏ
ｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００
４を参照）。特定の実施形態では、単一のローディング値を有する均質な抗体薬物複合体
を、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合体化混合物から単離することができ
る。

【0140】

インビトロ細胞増殖アッセイ
本発明の細胞毒性薬物化合物及び抗体薬物複合体は、インビトロで様々ながん細胞株の
増殖を抑制する能力について評価することができる。

【0141】

一般的に、細胞毒性薬物またはＡＤＣの細胞毒性もしくは細胞増殖抑制活性は、受容体
タンパク質（例えばＨＥＲ２）を有する哺乳動物細胞を細胞培養培地中でＡＤＣの抗体に
曝露し、細胞を約６時間～５日間の時間にわたって培養し、細胞生存率を測定することに
よって測定される。細胞に基づいたインビトロアッセイを用いることで、本発明のＡＤＣ
の生存率（増殖率）、細胞毒性、及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性）が測定され
る。

【0142】

例えば、細胞毒性薬物またはＡＤＣのインビトロ有効性は、細胞増殖アッセイにより測
定される。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ
Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙは、甲虫類ルシフェラーゼの組換え発現に基づいた、市
販されている（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）ホモジニアスなア
ッセイ法である（米国特許第５，５８３，０２４号、同第５，６７４，７１３号、及び同
第５，７００，６７０号）。この細胞増殖アッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である
ＡＴＰの存在量に基づいて培養中の生細胞の数を測定するものである（Ｃｒｏｕｃｈ，ｅ
ｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１９９３，１６０：８１－８８；米国
特許第６，６０２，６７７）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは９
６ウェルフォーマットで行われるため、自動化された高スループットスクリーニング（Ｈ
ＴＳ）に適している（Ｃｒｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，１
９９５，６：３９８－４０４）。このホモジニアスなアッセイ法では、単一の試薬（Ｃｅ
ｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を血清添加培地中で培養した細胞に直接加え
る。細胞洗浄、培地の除去、及び複数回のピペッティング工程を必要としない。この系は
、試薬の添加及び混合の１０分後に３８４ウェルフォーマットで１５細胞／ウェルと少な
い数の細胞を検出する。細胞は細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣで継続的に処理するか、
または細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣで処理した後、薬物化合物またはＡＤＣから分離
することができる。一般的に、短時間（すなわち３時間）処理した細胞では、継続的に処
理した細胞と同様の有効性が示された。

【0143】

インビボ有効性
本発明の細胞毒性薬物またはＡＤＣのインビボ有効性は、腫瘍増殖の阻害における標的
依存性及び用量依存性効果を測定するためのマウスにおける腫瘍異種移植片実験により試
験することができる。細胞毒性薬物またはＡＤＣの有効性は、腫瘍細胞の標的抗原発現と
相関しうる。

【0144】

細胞毒性薬物またはＡＤＣの有効性は、がん細胞の同種移植片または異種移植片をげっ
歯類に移植し、腫瘍を細胞毒性薬物またはＡＤＣで処理することによりインビボで測定さ
れる。細胞株、細胞毒性薬物の用量、がん細胞上に存在する受容体に対するＡＤＣの抗体
結合の特異性、投与レジメン、及び他の因子に応じて異なる結果が予想される。細胞毒性
薬物またはＡＤＣのインビボ有効性は、Ｈｅｒ２を発現するＫＰＬ４及びＣＤ２２を発現
するＢＪＡＢを含む、中～高レベルの腫瘍関連抗原を発現するトランスジェニック外植片
マウスモデルを用いて測定することができる。被検動物を、細胞毒性薬物またはＡＤＣで
１回処理し、数週間、例えば３～６週間にわたって監視することにより、腫瘍倍加時間、
殺細胞数対数値（ｌｏｇ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌ）、及び腫瘍縮小率を測定することができ
る。フォローアップの用量反応及び複数用量実験を行うことができる。

【0145】

例えば、本発明の抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビボ有効性は、高発現ＨＥＲ２トランスジ
ェニック外植片マウスモデルにより測定することができる（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００８，６８：９２８０－９０）。同種移植片を、ハ
ーセプチン（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）療法に対して反応しないかま
たは反応が弱いＦｏ５ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖させる。被検動物を所
定の用量レベル（ｍｇ／ｋｇ）のＡＤＣまたはプラシーボバッファーコントロール（溶媒
）で１回または複数回処理し、２週間以上にわたって監視して腫瘍倍加時間、殺細胞数対
数値（ｌｏｇ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌ）、及び腫瘍縮小率を測定する。

【0146】

医薬組成物及び投与方法
他の実施形態では、本発明の別の態様は、有効量の本発明の化合物及び／またはその抗
体薬物複合体と、薬学的に許容される担体もしくは溶媒とを含む医薬組成物または剤形に
関する。

【0147】

本発明の医薬組成物は、組成物を患者に投与することを可能とする任意の形態とするこ
とができる。例えば、組成物は、固体または液体の形態とすることができる。一般的な投
与経路としては、これらに限定されるものではないが、非経口、眼内、及び腫瘍内が挙げ
られる。非経口投与としては、皮下注射、静脈内、筋肉内、または胸骨内注射もしくは注
入法が挙げられる。一態様では、組成物は非経口投与される。特定の実施形態では、組成
物は静脈内投与される。

【0148】

医薬組成物は、本発明の化合物及び／またはその複合体が、患者に組成物を投与した際
に生体利用可能となるように製剤化することができる。組成物は１つ以上の投与単位の形
態を有することができ、例えば、錠剤は単回分の投与単位となりえ、液体の形態の本発明
の化合物及び／またはその抗体薬物複合体の容器は複数回分の投与単位を保持することが
できる。

【0149】

薬学的に許容される担体または溶媒は、固体または粒子状であってよく、したがって、
組成物は例えば錠剤または粉剤の形態である。担体（複数可）は液体であってもよい。更
に、担体（複数可）は粒子状であってもよい。

【0150】

組成物は、例えば、溶液、エマルション、または懸濁液などの液体の形態であってもよ
い。注射によって投与するための組成物中には、界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、
懸濁化剤、緩衝剤、安定化剤、及び等張化剤のうちの１つ以上が含まれてもよい。

【0151】

液体の組成物は、組成物が溶液、懸濁液、または他の同様の形態であるかによらず、以
下のもののうちの１つ以上を含むことができる。すなわち、滅菌希釈液、例えば、注射用
水、食塩水（好ましくは生理食塩水）、リンゲル液、等張食塩水、固定油、例えば、溶媒
または懸濁媒として機能しうる合成モノグリセリドまたはジグリセリド、ポリエチレング
リコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗
菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコ
ルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミンテトラ酢
酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、またはアミノ酸、及び塩化ナトリ
ウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤。非経口組成物は、アンプル、使い捨て注
射器、またはガラス、プラスチックもしくは他の材料でできた複数回用量用のバイアル中
に封入することができる。生理食塩水は代表的な賦形剤である。注射用の組成物は、滅菌
されていることが好ましい。

【0152】

特定の疾患または状態の治療に有効な本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体
の量は、疾患または状態の性質によって決まり、標準的な臨床的方法によって決定するこ
とができる。更に、インビトロまたはインビボのアッセイを用いて最適な用量範囲を特定
することができる。組成物中に用いられる正確な用量は投与経路にも依存し、医師の判断
及びそれぞれの患者の状況に応じて決められるべきである。任意の特定の個人に対する特
定の用量レベルは、化合物または抗体薬物複合体の活性、年齢、体重、一般的な身体的及
び精神的健康状態、遺伝的因子、環境要因、性別、食事内容、投与時間、投与経路、排出
速度、及び治療される特定の問題の重症度を含む、広範な因子によって決定される。

【0153】

組成物は、適当な用量が得られるように有効量の本発明の化合物及び／またはその抗体
薬物複合体を含む。一般的に、この量は、組成物の重量にして、本発明の組成物及び／ま
たはその抗体薬物複合体の少なくとも約０．０１重量％である。例示的な実施形態では、
医薬組成物は、非経口剤形が約０．０１重量％～約２重量％の本発明の化合物及び／また
はその抗体薬物複合体を含有するように調製される。

【0154】

静脈内投与用には、組成物は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１～約１００ｍｇの本
発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体を含むことができる。一態様では、組成物
は、患者の体重１ｋｇ当たり約１～約１００ｍｇの本発明の化合物及び／またはその抗体
薬物複合体を含むことができる。別の態様では、投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１～
約２５ｍｇ／ｋｇの範囲の本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体である。

【0155】

一般的に、患者に投与される本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体の用量は
、通常、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇである。一態
様では、患者に投与される用量は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１
０ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、患者に投与される用量は、患者の体重１ｋｇ当たり
約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。更に別の態様では、患者に投与される用
量は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである。更に別の態
様では、投与される用量は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋ
ｇである。更なる態様では、投与される用量は、患者の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ／ｋｇ
～約３ｍｇ／ｋｇである。

【0156】

特定の実施形態では、複数の本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体を、治療
を要する範囲に局所的に投与することが望ましい場合もある。これは、例えば、これらに
限定されるものではないが、術中の局所注入；例えば術後に創傷ドレッシング材と組み合
わせた局所塗布；注射により；カテーテルにより；またはインプラント（インプラントは
、多孔質、非多孔質のもの、またはサイラスティックメンブレンなどのメンブレンを含む
ゼラチン質材料のもの、または繊維である）によって行うことができる。一実施形態では
、投与は、がん、腫瘍、または新生もしくは前新生組織の部位（または以前の部位）に直
接注射することによって行うことができる。別の実施形態では、投与は、自己免疫疾患の
症状発現部位（または以前の部位）に直接注射することによって行うことができる。

【0157】

更に別の実施形態では、本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体は制御放出シ
ステムによって送達することができ、これらに限定されるものではないが例えばポンプま
たは各種ポリマー材料を使用することができる。更に別の実施形態では、制御放出システ
ムを、本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体の標的（例えば肝臓）の近くに配
置することができ、これにより、全身用量に比べてわずかな量しか必要としない。

【0158】

「担体」なる用語は、これとともに化合物及び／またはその抗体薬物複合体が投与され
る希釈剤、補助剤、または賦形剤のことを指す。かかる医薬担体は、水及び、石油、動物
、植物または合成由来の油などの液体であってよい。担体は、生理食塩水またはこれに類
するものであってよい。更に、助剤、安定化剤、及び他の剤を使用することもできる。一
実施形態では、患者に投与される際、化合物または複合体及び薬学的に許容される担体は
、無菌状態である。水は、化合物または複合体を静脈内投与する場合の代表的な担体であ
る。生理食塩水ならびにデキストロース及びグリセロール水溶液を液体担体として、特に
注射液として使用することもできる。本発明の組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤も
しくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでもよい。

【0159】

一実施形態では、本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体は、静脈内投与に適
合された医薬組成物の製造における当業者には周知の手順に従って製剤化される。一般的
に、静脈内投与するための担体または溶媒は、無菌の等張バッファー水溶液である。必要
に応じて、組成物は可溶化剤を含んでもよい。静脈内投与するための組成物は、場合によ
り、注射部位の痛みを緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでもよい。一
般的に、各成分は、例えば、活性剤の量を示したアンプルなどの密封された容器中で、凍
結乾燥された乾燥粉末または無水濃縮物として、別々に、または単位剤形として互いに混
合されて供給される。本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体が点滴によって投
与される場合、例えば、無菌の医薬品グレードの水または生理食塩水の入った点滴ボトル
によって分注することができる。本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体が注射
により投与される場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを、投与に先立って各
成分が混合されるように与えることができる。

【0160】

固体であるかまたは液体の形態であるかによらず、本発明の組成物は、がんの治療に用
いられる更なる治療剤（複数可）を含むことができる。例えば、化合物及び／またはそれ
らの抗体薬物複合体は、抗体、アルキル化剤、血管新生阻害剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡクリ
ーバー、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ小溝結合剤、エンジイン、熱ショックタン
パク質９０阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、免疫調節剤、微小管安定化剤、ヌク
レオシド（プリンまたはピリミジン）類似体、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、
トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、及びセリン／スレ
オニンキナーゼ阻害剤などと組み合わせて投与することができる。特定の治療剤としては
、アダリムマブ、アンサマイトシンＰ３、アウリスタチン、ベンダムスチン、ベバシズマ
ブ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリスタチンＡ、カ
ンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、シスプラ
チン、クラドリビン、シタラビン、クリプトフィシン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウ
ノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダイネミシンＡ、エ
ポシロン、エトポシド、フロキシウリジン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、ゲフ
ィチニブ、ゲムシタビン、イピリムマブ、ヒドロキシウレア、イマチニブ、インフリキシ
マブ、インターフェロン、インターロイキン、β－ラパコン、レナリドミド、イリノテカ
ン、メイタンシン、メクロレタミン、メルファラン、６－メルカプトプリン、メトトレキ
セート、マイトマイシンＣ、ニロチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、プロカル
バジン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド（ＳＡＨＡ）、６－チオグアニジン、チ
オテパ、テニポシド、トポテカン、トラスツズマブ、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン
、ビンクリスチン、及びビンデシンが挙げられる。

【0161】

化合物及び抗体薬物複合体の治療的用途
本発明の別の態様は、がんを治療するために本発明の化合物、それらの抗体薬物複合体
、及びその医薬組成物を使用する方法に関する。特定の実施形態では、複合体は、複合体
特異的な腫瘍またはがん薬物のターゲティングを可能とし、それにより本発明の化合物の
全体的な毒性を低減する。別の実施形態では、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞に結
合する。別の実施形態では、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞の表面上にある腫瘍細
胞またはがん細胞抗原に結合する。別の実施形態では、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん
細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍細胞またはがん細胞抗原に結合
する。特定の腫瘍細胞またはがん細胞に対する抗体単位の特異性は、最も効果的に治療さ
れる腫瘍またはがんを決定するうえで重要となりうる。

【0162】

本発明の化合物及び／またはその抗体薬物複合体によって治療することができる特定の
種類のがんとしては、これらに限定されるものではないが、膀胱、乳房、頸部、結腸、子
宮内膜、腎臓、肺、食道、卵巣、前立腺、膵臓、皮膚、胃、及び睾丸のがん、ならびに、
これらに限定されるものではないが、白血病及びリンパ腫を含む血液がんが挙げられる。

【0163】

一態様では、本明細書で提供される抗体薬物複合体は、がん細胞の増殖を阻害する方法
であって、細胞の表面上の腫瘍関連抗原への抗体または抗体薬物複合体の結合を可能とす
る条件下で細胞を抗体薬物複合体に曝露し、それにより細胞の増殖を阻害することを含む
方法で使用される。特定の実施形態では、方法は、インビトロまたはインビボの方法であ
る。更なる実施形態では、細胞は、リンパ球、リンパ芽球、単球、または骨髄単球細胞で
ある。

【0164】

別の態様では、薬剤として使用するための細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣが提供され
る。更なる態様では、治療方法において使用するための細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣ
が提供される。特定の実施形態では、がんの治療に使用するための細胞毒性薬物化合物ま
たはＡＤＣが提供される。特定の実施形態では、本発明は、有効量の細胞毒性薬物化合物
またはＡＤＣを個人に投与することを含む、個人を治療する方法において使用するための
細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣを提供する。１つのそのような実施形態では、方法は、
有効量の例えば本明細書に記載されるような少なくとも１つの更なる治療剤を個人に投与
することを更に含む。

【0165】

更なる態様では、本発明は、薬剤の製造または調製における細胞毒性薬物化合物または
ＡＤＣの使用を提供する。一実施形態では、薬剤は、がんを有する個人に有効量の薬剤を
投与することを含むがんの治療方法のためのものである。１つのそのような実施形態では
、方法は、有効量の例えば本明細書に記載されるような少なくとも１つの更なる治療剤を
個人に投与することを更に含む。

【0166】

更なる態様では、本発明はがんを治療するための方法を提供する。一実施形態では、方
法は、腫瘍関連発現抗原の検出によって特徴付けられるそのようながんを有する個人に有
効量の本発明の抗体薬物複合体を投与することを含む。１つのそのような実施形態では、
方法は、有効量の少なくとも１つの更なる治療剤を個人に投与することを更に含む。

【0167】

本発明の細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣは、単独で、または他の剤と組み合わせて治
療に用いることができる。例えば、本発明の細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣは、化学療
法剤などの少なくとも１つの更なる治療剤と同時投与することができる。

【0168】

本明細書に示されるそのような併用療法には、複合投与（同じまたは別々の製剤中に２
種以上の治療剤が含まれる場合）、及び分離投与が包含され、その場合、本発明の細胞毒
性薬物化合物またはＡＤＣの投与は、更なる治療剤及び／または助剤の投与の前、同時、
及び／または後に行うことができる。本発明の細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣは、放射
線治療と併用することもできる。

【0169】

本発明の細胞毒性薬物化合物またはＡＤＣ（及び任意の更なる治療剤）は、非経口、肺
内、及び鼻腔内、ならびに局所治療が望ましい場合には病巣内投与を含む任意の適当な手
段によって投与することが可能である。非経口投与には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔
内、または皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が一時的であるかまたは長期的であるか
に一部基づいて、例えば静脈内または皮下注射などの注射によるなど、任意の適当な経路
によって行うことができる。これらに限定されるものではないが、異なる時点にわたった
単回または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投与計画が本明細書
において想到される。

【0170】

以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のために示すものではない。

【実施例0171】

合成の実験手順
各実験は、特に酸素または湿度に影響される試薬または中間体が用いられる場合、不活
性雰囲気（窒素またはアルゴン）で一般的に行う。市販の溶媒及び試薬を、更なる精製を
行わず、必要に応じて無水溶媒を含めて一般的に使用する。質量分析データは、液体クロ
マトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）、または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）より報
告される。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データの化学シフトは、用いられる重水素化溶媒からの
残留ピークを基準としてパーツ・パー・ミリオン（ｐｐｍ、δ）で表される。

【0172】

一般的に、反応後に薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳまたはＨＰＬＣを行い、必要に
応じてワークアップを行う。精製は実験間で異なり、一般に、溶離剤／勾配に使用される
溶媒及び溶媒比は適切な保持時間を与えるように選択される。特に断らない限り、逆相Ｈ
ＰＬＣ画分は凍結乾燥／乾燥凍結によって濃縮する。中間体及び最終化合物は、窒素下、
密閉容器またはフラスコ中、０℃または室温で保管する。

【0173】

一般的手順Ａ１ タイランスタチン類似体毒素化合物の調製
上記に述べたＲ基を有する本発明の化合物を調製する第１の工程では、Ｒ基を有するカ
ルボン酸（式（ＩＶ））を、アミノピラン（化合物８）とカップリングさせて中間体アミ
ド（式（Ｖ））を生成する。

【化32】

【0174】

Ｎ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）（０．１２ｍＬ，１．０ｍｍｏｌ，６．０当量）、１
－エチル－３－（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）（１９６ｍｇ，
１．０ｍｍｏｌ，６．０当量）、及び酸（式（ＩＶ））（１０８ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ
，２．０当量）のジクロロメタン溶液（０．６ｍＬ）を、２５℃のジクロロメタン（５ｍ
Ｌ）に溶解したアミン８の攪拌溶液に順番に加えた。２時間後、反応混合物を塩化アンモ
ニウムの飽和水溶液（５．０ｍｌ）でクエンチし、各相を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（
３×２ｍｌ）で抽出し、加え合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃
縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中
、１０～３０％酢酸エチル）により精製してアミド（式（Ｖ））（７４ｍｇ，０．２４ｍ
ｍｏｌ，７３％）を無色油状物として得た。

【0175】

Ａ．Ｋ．Ｇｈｏｓｈらにより述べられる手順に基本的に従って、中間体アミド（式（Ｖ
））を、Ｘがメチルである式（Ｉ）に変換した（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１８，８
３（９）：５１８７－５１９８）。

【化33】

【0176】

一般的手順Ａ２ タイランスタチン類似体毒素化合物の調製
あるいは、上記に述べたＲ基を有する本発明の化合物を調製する第１の工程では、Ｒ基
を有するカルボン酸（式（ＩＶ））を、アミノピラン（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，
５－ジメチル－６－（（Ｅ）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）テトラヒ
ドロ－２Ｈ－ピラン－３－アミン（化合物８）とカップリングさせて式（Ｖ）の中間体ア
ミドを生成する。式（Ｖ）の中間体アミドを、グラブス第２世代触媒（グラブスＩＩ触媒
）を使用してメチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－ビニル
－１， ６－ジオキサスピロ ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物９）と
反応させ、Ｘがメチルである式（Ｉ）の化合物を得た。

【化34】

【0177】

化合物８（２当量）及び式（ＩＶ）のカルボン酸（１当量）をテトラヒドロフラン（Ｔ
ＨＦ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（８．３当量）に溶解し
、Ｔ_３Ｐ（登録商標）（プロピルホスフィン酸無水物；酢酸エチル中、５０％）（５当量
）を室温で加えた。反応混合物を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって出発物質が
消費されたことが示されるまでおよそ３時間攪拌した。混合物を真空下で濃縮して粗生成
物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して所望の式（Ｖ）の中間体アミ
ドを得た。

【0178】

精製した式（Ｖ）の中間体アミド（１当量）をジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、化
合物９（２当量）及びグラブスＩＩ触媒（３．３当量）をアルゴン雰囲気下、室温で攪拌
しながら加えた。混合物を、ＴＬＣによって出発物質が消費されたことが示されるまで４
０℃でおよそ５時間攪拌した。反応混合物をセライトパッドに通して濾過し、ＤＣＭで洗
浄した。溶媒を真空下で除去して粗生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣで精製して式（Ｉ
）の化合物を得た。

【0179】

一般的手順Ｂ１ 毒素リンカー化合物の調製

【化35】

【0180】

上記に述べたＲ基を有する本発明の毒素リンカー化合物の合成では、式（Ｉ）のカルボ
ン酸部分と選択されたリンカー上のアミンとの間にアミド結合を形成させて式（ＩＩ）を
得る。

【0181】

式（Ｉ）の毒素（０．４７ｍｍｏｌ，１．０当量）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メ
チレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシドヘ
キサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（０．５８ｍｍｏｌ，１．２当量）及びＤＩＥＡ
（ヒューニッヒ塩基，０．１ｍＬ）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）に加えた混合物を周囲温度で
６０分間攪拌する。この混合物にリンカー（０．５０ｍｍｏｌ，１．０６当量）をＤＩＥ
Ａ（ヒューニッヒ塩基）（０．１ｍＬ）とともに加えた。得られた混合物を３０分間攪拌
する。反応液に水性ワークアップを行う。リンカーと結合された毒素を含む所望の式（Ｉ
Ｉ）の生成物を、フラッシュクロマトグラフィーによる更なる精製によって得る。

【0182】

一般的手順Ｂ２ 毒素リンカー化合物の調製
あるいは、上記に述べたＲ基及びＬ基を有する本発明の毒素リンカー化合物の合成は、
スキーム（Ｉ）、スキーム（ＩＩ）またはスキーム（ＩＩＩ）に示されるようにして調製
することができる。
スキーム（Ｉ）

【化36】

スキーム（ＩＩ）

【化37】

スキーム（ＩＩＩ）

【化38】

【0183】

一般的手順Ｃ１ 抗体薬物複合体の調製
市販の治療抗体（Ａｂ）をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ，Ｌｏｎｚａ）
中に透析する。次いで、透析した抗体（５～１０ｍｇ／ｍＬ）を、反応性Ｎ－ヒドロキシ
スクシンイミドエステルまたはマレイミドを含むジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中、
１０ｍＭの式（ＩＩ）の毒素リンカー化合物（３～１２当量）と、５０ｍＭホウ酸緩衝液
（ｐＨ８．７）中、室温で２時間反応させる。場合により、５０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ
８．７）はダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ，Ｌｏｎｚａ）に置き換えられる
。場合により、リンカー－毒素の溶解度／反応性を高めるため、ジメチルアセトアミド（
ＤＭＡ）またはＤＭＳＯを加えて最終反応混合物中、１０～１５（ｖ／ｖ）％の総有機溶
媒成分とする。次いで、反応混合物を、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ－２５Ｍバッファー交換カラムを製造者の指示にしたがって使用してＤＰＢＳ（ｐＨ
７．４） 中にバッファー交換する。粗物質を、ＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシス
テムをＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム及びＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離剤ととも
に使用してサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により精製する。次いで、ＡＫＴＡ
からプールしたモノマー画分を濃縮し、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ－２５Ｍバッファー交換カラムを製造者の指示にしたがって使用して１０ｍＭコハク
酸ナトリウムバッファー、５．４％トレハロース（ｐＨ５．１）中にバッファー交換する
。式（ＩＩＩ）のＡＤＣを純度についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及び液
体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析（ＬＣ－ＥＳＩ Ｍ
Ｓ）により更に特性評価して薬物抗体比（ローディング）を計算する。タンパク質濃度を
ＵＶ分光光度計により測定する。

【0184】

一般的手順Ｃ２ 抗体薬物複合体の代替的調製
あるいは、複合体を調製するための還元及び再酸化後にシステイン操作抗体をＰＢＳ（
リン酸緩衝生理食塩水）バッファーに溶解して氷上で冷却する。ピリジルジスルフィド、
マレイミド、またはブロモアセトアミドなどのチオール反応性基で活性化された、約１．
５モル～２０当量の過剰量の式（ＩＩ）に基づく薬物リンカー中間体をＤＭＳＯに溶解し
、アセトニトリル及び水に希釈し、ＰＢＳ中で冷却、還元、及び再酸化した抗体に加えた
。通常、薬物リンカーは、ＤＭＳＯストックから、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）中、約
２０ｍＭの濃度で抗体に加え、約１～約２４時間、反応混合物のＬＣ－ＭＳ分析により測
定して反応が完了するまで監視する。反応が完了した時点で、エチルマレイミドなどの過
剰量のキャッピング試薬を加えて反応を停止させ、未反応の抗体チオール基をキャッピン
グする。複合体化混合物をＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＦＦカラムにロードして溶出させて過剰
な薬物リンカー及び他の不純物を除去する。反応混合物を遠心限外濾過により濃縮し、シ
ステイン操作した抗体薬物複合体をＰＢＳ中、Ｇ２５樹脂に通して精製し、溶出により脱
塩し、滅菌条件下で０．２μｍフィルターに通して濾過し、凍結保存する。

【0185】

例えば、抗体薬物複合体の粗生成物を２０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）で希釈し
た後、カチオン交換カラムにかける。カラムを少なくとも１０カラム体積分の２０ｍＭコ
ハク酸ナトリウム（ｐＨ５）で洗浄し、抗体をＰＢＳで溶出する。抗体薬物複合体を、ゲ
ル濾過カラムを使用して２４０ｍＭのスクロースと、２０ｍＭ Ｈｉｓ／酢酸塩（ｐＨ５
）中に配合する。抗体薬物複合体をＵＶ分光光度法により特性評価してタンパク質濃度を
決定し、分析用ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）により凝集分析を行い、また、
リシンＣエンドペプチダーゼによる処理の前後にＬＣ－ＭＳにより特性評価する。

【0186】

実施例１
（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－（（３Ｒ，
４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－４－ヒドロキシ－７－（２－メトキシ－２－オキソエチル）－１，
６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）－３－メチルペンタ－２，４－ジエ
ニル）－２，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミノ）－５－オキソ
ペント－３－エン－２－イル ベンゾエート（化合物１）の合成

【0187】

パートＡ：

【化39】

【0188】

工程１．ｔｅｒｔ－ブチル ４－ヒドロキシペント－２－イノエート（化合物２ａ）
ＴＨＦ（６００ｍＬ）中、プロピオール酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１ａ）（１０ｇ，
７９．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬＤＡ（ＴＨＦ中、２．０Ｍ）（４３．６ｍｌ，８７．
２０ｍｍｏｌ）を－７８℃で加えた。反応混合物を－７８℃で５０分間攪拌した後、アセ
トアルデヒド（４．４５ｍｌ，７９．２８ｍｍｏｌ）を同じ温度で滴下した。反応混合物
を同じ温度で２時間、攪拌した。反応の進行を出発物質が消費されるまでＴＬＣ（石油エ
ーテル中、２５％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．２，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反
応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（４００ｍｌ）でクエンチし、２０分間攪拌した。次い
で、生成物をジエチルエーテル（２×４００ｍｌ）中間で抽出し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、粗生成物を単離した。生成物をカラムクロマトグラフ
ィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃ）により
精製して、化合物２ａ（７ｇ，５２％）を黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ＝ ５．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４
．５０ （５重線， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４３ （ｓ， ９Ｈ）， １．３２
（ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）．

【0189】

工程２．５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペント－３－エン－２－イル ベン
ゾエート（化合物３ａ）の合成
化合物２ａ（２ｇ，１１．７６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶かした溶液を
－１０℃に冷却した後、トリエチルアミン（８．０２ｍｌ，５８．８２ｍｍｏｌ）及びＤ
ＭＡＰ（１４３ｍｇ，１．１７６ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、塩化ベンゾイル（１．３
６ｍｌ，１１．７６４ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下した。反応混合物を２時間にわたっ
て室温まで昇温し、攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃ
，ＲＦ＝０．５，ＵＶ及びＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応終了後、反応混合
物をＤＣＭ（２００ｍｌ）で希釈した後、水及びブライン溶液（１×６０ｍｌ）で洗浄し
、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、カラムクロマトグラフィー（
１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、６％ＥｔＯＡｃ）により精製して
化合物３ａ（１．３５ｇ，４２％）を黄色の粘着性液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４０
０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ＝ ７．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ），
７．７４ － ７．６７ （ｍ， １Ｈ）， ７．６０ － ７．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７
６ （ｑ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ
）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）．

【0190】

工程３．５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペント－３－エン－２－イル ベン
ゾエート（化合物４ａ）
化合物３ａ（１ｇ，３．６４ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡＣ：ヘキサン（３０ｍｌ＋１０ｍＬ
）に溶かした溶液に、アルゴンパージ下でキノリン（０．４ｍｌ）及びリンドラー触媒（
４９６ｍｇ，４．６７ｍｍｏｌ）を加えた。５分間パージした後、反応混合物を水素バル
ーン圧下で３時間、攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、５％ＥｔＯＡｃ，
ＲＦ＝０．３，ＵＶ及びＫＭｎＯ_４活性物質）によって監視した。反応終了後、反応混合
物をセライトに通して濾過し、濾液を真空下で濃縮し、粗生成物を単離した。粗生成物を
カラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、１２
％ＥｔＯＡｃ）により精製し、真空下で濃縮及び乾燥して化合物４ａ（６００ｍｇ，６０
％）を黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ＝
７．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７０ － ７．６３ （ｍ， １Ｈ）
， ７．５７ － ７．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．３９ － ６．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ５
．７９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， １．５０ － １．３８ （ｍ， １２Ｈ
）．

【0191】

工程４．（Ｚ）－４－（ベンゾイルオキシ）ペント－２－エン酸（化合物５ａ）
化合物４ａ（６００ｍｇ，２．１７３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かした
攪拌溶液を－１０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（２．４ｍｌ）を反応混合物に滴下した
。反応混合物を２５℃まで昇温させ、３時間攪拌した。反応の進行を出発物質が消費され
るまでＴＬＣ（石油エーテル中、３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．１５，ＵＶ及びＫＭｎＯ
_４活性物質）により監視した。反応終了後、粗生成物を、ｎ－ペンテン（２×１０ｍｌ）
中、５０％ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥して化合物５ａ（２２０ｍｇ，４６
％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ＝
１２．６４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７
．７０ － ７．６４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５７ － ７．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４４
－ ６．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．７ Ｈｚ， １Ｈ）， １．
４３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ３Ｈ）；Ｄ_２Ｏ（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）
δ ＝ ８．０１ － ７．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７０ － ７．６３ （ｍ， １Ｈ），
７．５８ － ７．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４４ － ６．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ５．
８９ － ５．８３ （ｍ， １Ｈ）， １．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ３Ｈ）；Ｌ
ＣＭＳ： ９５．４１％ （２２１．２３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ ２．０８分．

【0192】

パートＢ：

【化40】

【0193】

工程１．（４Ｓ，５Ｒ）－３－ｔｅｒｔ－ブチル ４－メチル ２，２，５－トリメチ
ルオキサゾリジン－３，４－ジカルボキシレート（化合物２ｂ）
２，２－ジメトキシプロパン（１５９．１ｍＬ，１２８５ｍｍｏｌ）を、化合物１ｂ（
１５０ｇ，６４２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に２３℃で加
え、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（３．９６ｍＬ，３２．１３ｍｍｏｌ）を加え
た。次いで、反応混合物を２３℃で３０分間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中
、５０％ＥｔＯＡｃ；Ｒ_ｆ：０．６，ＰＭＡ視認）により監視した。反応終了後、混合物
をブライン（１０００ｍｌ）でクエンチした。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、真空下で濾過及び濃縮して粗生成物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィ
ー（ヘキサン中、１～５％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精
製して化合物２ｂ（１４５ｇ，８２．８５％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （
４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ： １．３６ － １．４２ （ｍ， ９ Ｈ） １．
４８ （ｓ， ３ Ｈ） １．５４ － １．６７ （ｍ， ６ Ｈ） ３．７６ （ｓ， ３ Ｈ）
３．８６ － ４．０２ （ｍ， １ Ｈ） ４．０７ － ４．１９ （ｍ， １ Ｈ）．

【0194】

工程２．（４Ｓ，５Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル ４－ホルミル－２，２，５－トリメチル
オキサゾリジン－３－カルボキシレート（化合物３ｂ）
化合物２ｂ（１３０ｇ，４７５．６ｍｍｏｌ）を－７８℃の乾燥トルエン（７５０ｍｌ
）に加えた攪拌溶液に、ＤＩＢＡＬ－Ｈ（１分、トルエン）（７１３ｍｌ，７１３ｍｍｏ
ｌ）を加えた。添加後、混合物を－７８℃で更に１０分間攪拌し、－７８℃の冷却ＭｅＯ
Ｈ（２２０ｍｌ）を徐々に加えることによってクエンチした。得られた白色エマルション
を氷冷した１Ｎ ＨＣｌ（２０００ｍｌ）に攪拌下で１５分かけて注ぎ、次いで、この水
性混合物をＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ×２）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真
空下で濾過及び濃縮して粗生成物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキ
サン中、１～５％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化
合物３ｂ（１００ｇ，８６．９５％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
Ｍｈｚ， クロロホルム－ｄ） δ： １．３６ （ｄ， Ｊ＝６．１０ Ｈｚ， ３ Ｈ） １
．４０ － １．５２ （ｍ， ９ Ｈ） １．５７ － １．７２ （ｍ， ６ Ｈ） ３．６７
－ ３．８４ （ｍ， １ Ｈ） ４．０２ － ４．１０ （ｍ， １ Ｈ） ９．３６ － ９．
４７ （ｍ， １ Ｈ）．

【0195】

工程３．（４Ｒ，５Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル ２，２，５－トリメチル－４－ビニルオ
キサゾリジン－３－カルボキシレート（化合物４ｂ）
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（２９３ｇ，８２２ｍｍｏｌ）を０℃のＴＨ
Ｆ（７５０ｍｌ）に溶かした溶液に、ＫＯｔＢｕ（９２ｇ，８２２ｍｍｏｌ）を一度に加
えた。得られた混合物を同じ温度で１時間攪拌した後、ＴＨＦ（２５０ｍｌ）に溶かした
化合物３ｂ（１００ｇ，４１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１２時間攪拌した。
反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、１０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_ｆ：０．５，ＰＭＡ視認）によ
り監視した。２３℃まで冷却した後、反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（１０００ｍｌ）
でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ×２）で抽出した。加え合わせた有機層をブラ
イン（１０００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濾過及び濃縮し
て粗生成物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、１～５％Ｅｔ
ＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物４ｂ（８０ｇ，８
０．８０％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－
ｄ） δ ｐｐｍ １．２８ （ｄ， Ｊ＝５．９９ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．３８ － １．４９
（ｍ， ９ Ｈ） １．５１ （ｓ， ３ Ｈ） １．５６ － １．６３ （ｍ， ３ Ｈ） ３．
７２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１．３１ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．７８ － ３．８６ （ｍ， １ Ｈ）
５．１６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝７．８５ Ｈｚ， ２ Ｈ） ５．６６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．
４３ Ｈｚ， １ Ｈ）．

【0196】

工程４．ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ，４Ｒ）－４－ヒドロキシペンタ－１－エン－３－イ
ルカルバメート（化合物５ｂ）
化合物４ｂ（８０ｇ，３３１．４ｍｍｏｌ）を２３℃のＭｅＯＨ（２．０ｌ）に溶かし
た攪拌溶液に、カンファースルホン酸（７．７ｇ，３３．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応
混合物を２３℃で４８時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、４０％ＥｔＯＡ
ｃ；Ｒ_ｆ：０．２５，ＰＭＡ視認）により監視した。反応終了後、反応混合物を飽和Ｎａ
ＨＣＯ_３溶液（１０００ｍｌ）でクエンチし、真空下で溶媒の大部分を除去した。水性残
渣をＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ×２）で抽出した。加え合わせた有機層をブライン（１０
００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濾過及び濃縮して粗生成物
を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、１０→４０％ＥｔＯＡｃ
）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物５ｂ（５８ｇ，８６．９
５％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ）
δ ｐｐｍ １．２３ （ｄ， Ｊ＝６．３２ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．４６ （ｓ， ９ Ｈ） １
．９４ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ３．８７ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝５．９９， ３．０５ Ｈｚ，
１ Ｈ） ４．０２ － ４．１２ （ｍ， １ Ｈ） ４．８７ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ５．２
１ － ５．２６ （ｍ， １ Ｈ） ５．２８ － ５．３１ （ｍ， １ Ｈ） ５．８４ （ｄ
ｄｄ， Ｊ＝１７．１９， １０．４９， ５．１２ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９４．
３６％ （２０２．１４， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．５０分．

【0197】

工程５．ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ，４Ｒ）－４－（２－メチルアリルオキシ）ペント－
１－エン－３－イルカルバメート（化合物６ｂ）
化合物５ｂ（４０ｇ，１９８．７３ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＭＦ（２５０ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に臭化メタアリル（１０７．３ｇ，７９５．９ｍｍｏｌ）を加えた。フラス
コをアルミ箔で包み、酸化銀（６９ｇ，２９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２３℃
で２４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、１０％ＥｔＯＡｃ；Ｒ_ｆ：０．
４，ＰＭＡ視認）により監視した。２３℃で２４時間後、反応混合物をエーテル（５００
ｍｌ）で希釈し、セライトに通して濾過し、更なるエーテル（５００ｍｌ）で洗浄した。
次いで濾液を水（５×５００ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で抽出し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４
で乾燥し、真空下で濾過及び濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサ
ン中、２．５→１０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製し
て化合物６ｂ（４０．５ｇ，７９．８８％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４
００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．１６ （ｄ， Ｊ＝６．３２ Ｈｚ，
３ Ｈ） １．４５ （ｓ， ９ Ｈ） １．６８ － １．７７ （ｍ， ３ Ｈ） ３．５１ －
３．６３ （ｍ， １ Ｈ） ３．７５ － ３．８６ （ｍ， １ Ｈ） ３．８９ － ４．０１
（ｍ， １ Ｈ） ４．１２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝７．０８ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．７９ － ４
．９１ （ｍ， ２ Ｈ） ４．９４ （ｄ， Ｊ＝０．８７ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０９ － ５
．２５ （ｍ， ２ Ｈ） ５．８９ （ｄｄｄ， Ｊ＝１７．２２， １０．４６， ５．４５
Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ７８．４８％ （２５６．３３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．
６９分．

【0198】

工程６．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ，３Ｒ）－２，５－ジメチル－３，６－ジヒドロ－２
Ｈ－ピラン－３－イル）カルバメート（化合物７ｂ）
化合物６ｂ（３５ｇ，１３７ｍｍｏｌ）をベンゼン（５００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液
に２３℃のグラブスＩＩ触媒（２．３ｇ，２．７４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。
次いで反応混合物を３時間還流した。２３℃まで冷却した後、酢酸鉛（ＩＶ）（１．８ｇ
，４．１１ｍｍｏｌ）を加え、２３℃で更に１２時間攪拌した。反応をＴＬＣ （ヘキサ
ン中、１０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_Ｆ＝０．３，ＰＭＡ視認）により監視した。真空下で溶媒を
真空下で除去し、粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、２．５→１０％
ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物７ｂ（２６ｇ
，８３．６０％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム
－ｄ） δ ｐｐｍ １．１６ － １．２２ （ｍ， ３ Ｈ） １．４４ （ｓ， ９ Ｈ） １
．６１ （ｓ， ３ Ｈ） ３．５７ － ３．６６ （ｍ， １ Ｈ） ３．８６ － ３．９４
（ｍ， １ Ｈ） ３．９７ （ｓ， １ Ｈ） ３．９８ － ４．０６ （ｍ， １ Ｈ） ４．
６０ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．６６ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．５６ － ５．６２ （ｍ， １ Ｈ）
；ＬＣＭＳ： ９４．００％ （２２８．２９， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．３５分．

【0199】

工程７．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ）－２，５－ジメチル－６－オキソ－３，６
－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバメート（化合物８ｂ）
化合物７ｂ（３０ｇ，１３２．１ｍｍｏｌ）を２３℃のベンゼン（１２００ｍｌ）に溶
かした攪拌溶液に、セライト（１２０ｇ）、ピリジニウムジクロメート（９９．３ｇ，３
６４．３ｍｍｏｌ）、及びｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（７０ｗｔ％水溶液，４
７．５ｍｌ，５２８．６ｍｍｏｌ）を加えた。２３℃で５時間後、反応混合物をセライト
に通して濾過し、酢酸エチル（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空
下で濾過及び濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、７．５→
３０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカゲル（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物８
ｂ（１８ｇ，５６．６０％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ク
ロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．３８ （ｄ， Ｊ＝６．４４ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．４２
－ １．４９ （ｍ， ９ Ｈ） １．９２ － １．９７ （ｍ， ３ Ｈ） ４．２１ － ４．
３１ （ｍ， １ Ｈ） ４．５１ － ４．６５ （ｍ， ２ Ｈ） ６．６３ （ｄｄ， Ｊ＝６
．３２， １．４３ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９６．９１％ （２４２．１７， Ｍ＋
Ｈ）， ＲＴ： １．６８分．

【0200】

工程８．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－２，５－ジメチル－６－オキソテ
トラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバメート（化合物９ｂ）
化合物８ｂ（２５ｇ，１０３．６１ｍｍｏｌ）を２３℃のエタノール（５００ｍｌ）に
溶かした攪拌溶液にＰｔＯ_２（４７０ｍｇ，２．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応フラスコ中
の雰囲気を水素に変えた。反応混合物を、ＴＬＣ（ヘキサン中、３０％ＥｔＯＡｃ；Ｒ_Ｆ
＝０．３５，ＰＭＡ視認）により監視しながら２３℃で２４時間攪拌した。２３℃で２４
時間後、反応混合物を濾紙に通して濾過し、溶媒を真空下で除去して化合物９ｂ（２５ｇ
，９９％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ）
δ ｐｐｍ １．１６ － １．２５ （ｍ， ４ Ｈ） １．２９ － １．３８ （ｍ， ５ Ｈ
） １．３９ － １．５４ （ｍ， １２ Ｈ） ２．４９ － ２．７１ （ｍ， ２ Ｈ） ４
．０３ － ４．１９ （ｍ， １ Ｈ） ４．４１ － ４．５５ （ｍ， １ Ｈ） ４．６４
－ ４．８２ （ｍ， １ Ｈ）．

【0201】

工程９．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－６－アリル－６－ヒドロキシ－２
，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバメート（化合物１０ｂ）
化合物９ｂ（２５ｇ，１０２．７ｍｍｏｌ）を－７８℃のＴＨＦ（３００ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に窒素雰囲気下でアリルマグネシウムクロリド（１．４Ｍ ＴＨＦ溶液，１
４６ｍｌ，２０５．４ｍｍｏｌ）をフラスコ側壁に沿って加えた。同じ温度で１．５時間
の後、反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（５００ｍｌ）でクエンチした。水性残渣をＥｔＯＡ
ｃ（２×５００ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層をブライン（５００ｍｌ）で洗浄
し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濾過及び濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマ
トグラフィー（ヘキサン中、１０→５０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メ
ッシュ）上で精製して化合物１０ｂ（２０ｇ，６８．２５％）を淡黄色油状物として得た
。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．１３ （ｄ， Ｊ
＝７．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）１．１６ （ｄ， Ｊ＝６．３ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．４５ （ｓ，
９ Ｈ） １．９３ － ２．０３ （ｍ， １ Ｈ） ２．１０ － ２．２９ （ｍ， １ Ｈ）
２．６８ － ２．８０ （ｍ， １ Ｈ） ３．２４ － ３．３９ （ｍ， ２ Ｈ） ３．６
５ － ３．７６ （ｍ， １ Ｈ） ４．７１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．０６ Ｈｚ， １ Ｈ）
５．０５ － ５．２２ （ｍ， ２ Ｈ） ５．７８ － ６．０２ （ｍ， １ Ｈ）．

【0202】

工程１０．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－アリル－２，５－ジ
メチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバメート（化合物１１ｂ）
化合物１０ｂ（５ｇ，１７．５４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液
に、窒素雰囲気下で２，２，２－トリフルオロエタノール（１０ｍｌ，１４０．３ｍｍｏ
ｌ）及びトリエチルシラン（２８ｍｌ，１７５．４ｍｍｏｌ）を２３℃で加えた。反応を
－７８℃まで冷却し、ＢＦ_３・ＯＥｔ_２錯体（８．６ｍｌ，７０．１６ｍｍｏｌ）をフラ
スコ側壁に沿ってゆっくりと加えた。同じ温度で更に３時間の後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶
液（１００ｍｌ）を－７８℃で加え、各層を分離した。水性残渣をＥｔＯＡｃ（３×５０
ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２
ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濾過及び濃縮した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフ
ィー（ヘキサン中、２→１２．５％ＥｔＯＡｃ）によりシリカゲル（１００～２００メッ
シュ）上で精製して化合物１１ｂ（１．８ｇ，３８．２９％）を無色油状物として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．９８ － １．０７
（ｍ， ３ Ｈ） １．１０ － １．２１ （ｍ， ３ Ｈ） １．４５ （ｄ， Ｊ＝１．４３
Ｈｚ， ９ Ｈ） １．６８ － １．８１ （ｍ， １ Ｈ） １．９５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝２．
７４ Ｈｚ， ２ Ｈ） ２．０３ － ２．２０ （ｍ， １ Ｈ） ２．２４ － ２．４１ （
ｍ， １ Ｈ） ３．３７ － ３．６８ （ｍ， ３ Ｈ） ４．７８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．０
６ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．９８ － ５．１５ （ｍ， ２ Ｈ） ５．７１ － ５．８８ （ｍ
， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ６０．３３％ （２７０．３３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．７４
分．

【0203】

工程１１．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－
（（Ｅ）－３－メチル－４－オキソブト－２－エン－１－イル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピ
ラン－３－イル）カルバメート（化合物１２ｂ）
化合物１１ｂ（３．６ｇ，１３．３６ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に、窒素雰囲気下でメタクロレイン（２２ｍｌ，２６７．２ｍｍｏｌ）、次
いでニトロ－グレラ触媒（８９７ｍｇ，１．３３６ｍｍｏｌ）を加えた。２３℃で１２時
間の後、溶媒を真空下で除去した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中
、１０→２５％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合
物１２ｂ（２．２ｇ，５２．８８％）を淡黄色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．０７ （ｄ， Ｊ＝７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ
） １．１６ （ｄ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．４５ （ｓ， ９ Ｈ） １．７６
（ｓ， ３ Ｈ） １．８５ － １．９９ （ｍ， ２ Ｈ） ２．３４ － ２．４５ （ｍ，
１ Ｈ） ２．５６ （ｄｔ， Ｊ＝１５．４１， ７．４６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．５３ －
３．６８ （ｍ， ３ Ｈ） ４．７３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝９．２９ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．５
０ － ６．５７ （ｍ， １ Ｈ） ９．４２ （ｓ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８６．６９％
（３１２．３１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．５２分．

【0204】

工程１２．ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－
（（Ｅ）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン
－３－イル）カルバメート（化合物１３ｂ）
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（３．７ｇ，１０．５９ｍｍｏｌ）を０℃の
ＴＨＦ（２５ｍｌ）に溶かした攪拌懸濁液に、窒素雰囲気下でＫＯｔＢｕ（１．１ｇ，９
．８８ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、ＴＨＦ（１５ｍｌ）に加えた化合物１２ｂ（２．
２ｇ，７．０６４ｍｍｏｌ）を同じ温度でカニューレで滴下し、更なるＴＨＦ（５ｍｌ）
ですすいだ。２３℃で２時間の後、反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（５０ｍｌ）でクエンチ
し、真空下で溶媒の大部分を除去した。水性残渣をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）で抽出し
た。加え合わせた有機層をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、
真空下で濾過及び濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、１→
１０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物１３ｂ
（１．５ｇ，６８．８０％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，
クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．０３ （ｄ， Ｊ＝７．４１ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．１
５ （ｄ， Ｊ＝６．３２ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．４４ （ｓ， ９ Ｈ） １．７２ － １．８
０ （ｍ， ３ Ｈ） １．８４ － １．９７ （ｍ， ２ Ｈ） ２．１９ － ２．３０ （ｍ
， １ Ｈ） ２．３３ － ２．４４ （ｍ， １ Ｈ） ３．５１ （ｔｄ， Ｊ＝７．２８，
２．６７ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．５４ － ３．６６ （ｍ， ２ Ｈ） ４．６９ － ４．８１
（ｍ， １ Ｈ） ４．９５ （ｄ， Ｊ＝１０．６８ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．１１ （ｄ， Ｊ
＝１７．４４ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．４６ （ｔ， Ｊ＝６．９８ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．３７
（ｄｄ， Ｊ＝１７．３８， １０．７４ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９４．５８％ （
３１０．３７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．９６分．

【0205】

工程１３．（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ）－３－メチ
ルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－アミン（化合
物８）
化合物１３ｂ（１．５ｇ，４．８４ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（４０ｍｌ）に溶かし
た攪拌混濁液に窒素雰囲気下で臭化亜鉛（５．４５ｇ，２４．２３ｍｍｏｌ）を加えた。
反応混合物を２３℃で４８時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中、１０％ＭｅＯ
Ｈ；Ｒ_Ｆ＝０．１，ＵＶ視認）により監視した。反応終了後、反応混合物をＤＣＭ（５０
ｍｌ）で希釈し、濾過してからＤＣＭ（１００ｍｌ）で洗浄し、濾液を真空下で濃縮して
化合物８（１．６ｇ粗生成物）を淡黄色ゴム状物として得た。これを更なる精製を行わず
に次の工程で直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐ
ｐｍ １．０３ － １．２０ （ｍ， ３ Ｈ） １．２３ － １．３２ （ｍ， ３ Ｈ） １
．３４ － １．４３ （ｍ， ３ Ｈ） １．７３ － １．８１ （ｍ， ３ Ｈ） １．８８
－ ２．００ （ｍ， １ Ｈ） ２．０９ － ２．５４ （ｍ， ３ Ｈ） ３．４２ － ３．
５３ （ｍ， １ Ｈ） ３．５８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．８７ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．６６ －
３．８９ （ｍ， ２ Ｈ） ４．８７ － ５．０４ （ｍ， １ Ｈ） ５．０８ － ５．２
１ （ｍ， １ Ｈ） ５．３６ － ５．５３ （ｍ， １ Ｈ） ６．１９ － ６．４６ （ｍ
， １ Ｈ） ６．７０ － ７．１２ （ｍ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８１．６２％ （２１０
．１８， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．８０分．

【0206】

パートＣ：

【化41】

【0207】

工程１．（２Ｒ，３Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）－２Ｈ－ピラン
－４（３Ｈ）－オン（化合物２ｃ）の合成
化合物１ｃ（１３７．５ｇ，０．９４１ｍｏｌｅ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（５．９ｇ，０
．０２６ｍｏｌｅ）をＡＣＮ（５５０ｍｌ）に溶かした混合物に、酢酸ビニル（２５０ｇ
，２．９０７ｍｏｌｅ）を室温で加えた。反応混合物を６０℃で２４時間攪拌した。反応
混合物をセライトに通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で洗浄した。溶媒を減圧下
で濃縮して粗生成物を得た。残渣をアセトン（６８ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（６８ｍｌ）との
混合物から再結晶化して化合物２ｃ（７５ｇ，５５％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ＝ ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．９ Ｈ
ｚ， １Ｈ）， ５．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３０ （ｄ， Ｊ ＝
５．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．００ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１６ －
４．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８２ － ３．７６ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ － ３．
６６ （ｍ， １Ｈ）．

【0208】

工程２．（２Ｒ，３Ｒ）－３－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）－２－（（
ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）－２Ｈ－ピラン－４（３Ｈ）－オン（
化合物３ｃ）
化合物２ｃ（１００ｇ，０．６９ｍｏｌ）をＤＭＦ（１９００ｍｌ）に溶かした溶液に
、ＴＢＳ－Ｃｌ（２７７ｇ，２．６５ｍｏｌ）及びイミダゾール（１４０．９ｇ，２．０
７ｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ
（石油エーテル中、５％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．５，ＵＶ活性物質）により監視した。反
応終了後、反応混合物をジエチルエーテル（２５００ｍｌ）で希釈し、水（１０００ｍｌ
）及びブライン（１０００ｍｌ）で洗浄した。ジエチルエーテル層を無水硫酸ナトリウム
で乾燥した後、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー
（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、２％ＥｔＯＡｃ）により精製し
て化合物３ｃ（２００ｇ，７７．５％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ＝ ７．３０ － ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０
（ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１
８ （ｔｄ， Ｊ ＝ ２．６， １２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８
Ｈｚ， ２Ｈ）， ０．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １８Ｈ）， ０．２３ （ｓ，
３Ｈ）， ０．１１ － ０．０５ （ｍ， ６Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９９．４８％ （３７３．
３７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ３．４７分．

【0209】

工程３．メチル ２－（（２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリ
ルオキシ）－６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）－４－オキソテ
トラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセテート（化合物４ｃ）
化合物３ｃ（５５ｇ，０．１４７ｍｏｌ）をＤＣＭ（２０００ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、ｔｅｒｔ－ブチル（１－メトキシビニルオキシ）ジメチルシラン（５５ｇ，０．２
９２ｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した後、ＢＦ_３．Ｅｔ_２Ｏ
（６３．２５ｇ，３．０３ｍｏｌ）を－７８℃で加えた。反応混合物を－７８℃で１時間
攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、１５％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．５，Ｐ
ＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（５００ｍｌ）でクエンチ
し、ＤＣＭ（２×２５０ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３（５
００ｍｌ）及びブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
した後、濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１０
０～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、３％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合
物４ｃ（２５ｇ，３７．９％）を透明ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨ
ｚ， クロロホルム－ｄ） δ ＝ ４．９２ － ４．７２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３３ （ｄ
， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９１ － ３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７４ －
３．５８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８３ － ２．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５２ － ２．
３８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９９ － ０．７９ （ｍ， １８Ｈ）， ０．１５ （ｓ， ３Ｈ
）， ０．１１ － ０．０１ （ｍ， ９Ｈ）．

【0210】

工程４．メチル ２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリ
ルオキシ）－６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）－４－メチレン
テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセテート（化合物５ｃ）
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１２ｇ，０．０３３ｍｏｌ）を０℃のＴＨ
Ｆ（１８０ｍｌ）に加えた懸濁液に、ＫＯｔＢｕ（３．３３ｇ，０．０２９ｍｏｌ）のＴ
ＨＦ（８０ｍｌ）溶液を加えた。１時間後、化合物４ｃ（１０ｇ，０．０２２ｍｏｌ）の
ＴＨＦ（６０ｍｌ）溶液を滴下した。次いで、反応混合物を２５℃とし、１時間攪拌した
。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、５％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．３，ＰＭＡ活性物
質）により監視した。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯ
Ａｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、
濾過及び濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶
離剤、石油エーテル中、５％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物５ｃ（４ｇ，４０．４％
）を黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ＝
５．０７ （ｓ， １Ｈ）， ４．８９ － ４．８６ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ － ４．２
３ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７５ － ３．
６６ （ｍ， ５Ｈ）， ３．４７ （ｔｄ， Ｊ ＝ ４．７， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２
．６５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．３， １５．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４８ （ｄｄ， Ｊ ＝
６．８， １５．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４２ － ２．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９５
－ ０．８４ （ｍ， １８Ｈ）， ０．１２ － ０．０１ （ｍ， １２Ｈ）．

【0211】

工程５．メチル－２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリ
ルオキシ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－メチレンテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２
－イル）アセテート（化合物６ｃ）
化合物５ｃ（７５．１ｇ，０．１６８ｍｏｌｅ）をＭｅＯＨ（７５１ｍｌ）に溶かした
攪拌溶液に、ＰＰＴＳ（５９．４ｇ，０．２３６ｍｏｌｅ）を室温で加えた。反応混合物
を室温で１６時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、２５％ＥｔＯＡｃ，
ＲＦ＝０．３，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（１２
７０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×１５００ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過及び濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィ
ー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、２５％ＥｔＯＡｃ）により精
製して化合物６ｃ（３９ｇ，６９．８％）を黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４
００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ＝ ５．１１ （ｓ， １Ｈ）， ４．８８ （ｓ，
１Ｈ）， ４．４２ － ４．３５ （ｍ， １Ｈ）， ３．９３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ
， １Ｈ）， ３．７１ － ３．６４ （ｍ， ５Ｈ）， ３．５６ － ３．５０ （ｍ， １
Ｈ）， ２．７３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， １５．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５１ － ２
．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．８， １３．４ Ｈｚ， １Ｈ），
２．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．９４ － ０．９１ （ｍ， ９Ｈ）
， ０．１０ － ０．０８ （ｍ， ３Ｈ）， ０．０５ － ０．０３ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣ
ＭＳ： ８０．１７％ （３３１．３９， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．７８分．

【0212】

工程６．メチル ２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－５－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリ
ルオキシ）－６－ホルミル－４－メチレンテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセ
テート（化合物７ｃ）
塩化オキサリル（１７．２ｇ，０．１３６ｍｏｌ）を－７８℃のＤＣＭ（２１４ｍｌ）
に溶かした攪拌溶液に、ＤＭＳＯ（２１ｇ，０．２７ｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合
物を－７８℃～－６０℃まで２０分間、攪拌した。化合物６ｃ（３０ｇ，０．０９ｍｏｌ
）のＤＣＭ（４１４ｍｌ）溶液を、－７８℃で３０分間、滴下した。反応混合物を－４５
℃まで３０分間かけてゆっくりと昇温した。ＴＥＡ（５２．８ｇ，０．５２２ｍｏｌ）を
－４５℃で加え、反応混合物を０℃まで１０分間かけて昇温した。反応の進行をＴＬＣ（
石油エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．３５，ＰＭＡ活性物質）により監視した
。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（５００ｍｌ）でクエンチし、ＤＣＭ（２×５００ｍＬ）
で抽出した。有機層をブライン（１０００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥した後、濾過及び濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（１００～２０
０シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物７ｃ
（２２ｇ，７３．８％）を黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ク
ロロホルム－ｄ） δ ＝ ９．７６ － ９．７３ （ｍ， １Ｈ）， ５．０５ － ５．００
（ｍ， １Ｈ）， ４．９３ － ４．８７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ４．
３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２９ － ４．２０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ － ４．０８ （
ｍ， １Ｈ）， ３．７３ － ３．６７ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７８ － ２．６９ （ｍ，
１Ｈ）， ２．５５ － ２．４０ （ｍ， １Ｈ）， ２．２７ － ２．２０ （ｍ， ２Ｈ）
， ０．９６ － ０．８７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．１２ － －０．０２ （ｍ， ６Ｈ）；Ｌ
ＣＭＳ： ９７．５３％ （３２９．３４， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．６０分．

【0213】

工程７：メチル ２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリ
ルオキシ）－４－メチレン－６－ビニルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセテ
ート（化合物８ｃ）
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（２８ｇ，０．０７８ｍｏｌ）を０℃のＴＨ
Ｆ（３８１ｍｌ）に加えた懸濁液に、ＫＯｔＢｕ（７．９ｇ，０．０７０ｍｏｌ）を加え
た。１時間後、化合物７ｃ（１４ｇ，０．０４２ｍｏｌｅ）のＴＨＦ（１３６１ｍｌ）溶
液を滴下した。混合物を０℃で１時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、
１０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．５，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物を飽和
ＮＨ_４Ｃｌ（１２００ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍｌ）で抽出した。
ＥｔＯＡｃ層をブライン（１０００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してから
、濾過及び濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／
溶離剤、石油エーテル中、２％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物８ｃ（５．８ｇ，４１
．７％）を透明ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ
） δ ｐｐｍ ０．０４ （ｄ， Ｊ＝７．０８ Ｈｚ， ６ Ｈ） ０．８８ － ０．９５ （
ｍ， ９ Ｈ） ２．３０ － ２．３９ （ｍ， １ Ｈ） ２．４０ － ２．５７ （ｍ， ２
Ｈ） ２．７０ （ｄｄ， Ｊ＝１４．９９， ７．４７ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．６２ － ３．
７１ （ｍ， ３ Ｈ） ３．８３ （ｄ， Ｊ＝６．６５ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９０ － ３．
９９ （ｍ， １ Ｈ） ４．３７ （ｔｔ， Ｊ＝６．９６， ４．８１ Ｈｚ， １ Ｈ） ４
．８８ （ｄ， Ｊ＝０．６５ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０９ （ｓ， １ Ｈ） ５．１８ － ５
．３７ （ｍ， ２ Ｈ） ５．８３ （ｄｄｄ， Ｊ＝１７．１７， １０．７４， ６．１０
Ｈｚ， １ Ｈ）．

【0214】

工程８．メチル ２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－ヒドロキシ－４－メチレン－６－
ビニルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセテート（化合物９ｃ）
化合物８ｃ（５．６ｇ，０．０１７ｍｏｌｅ）をＴＨＣ（５２ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、ＴＢＡＦ（５．１５ｇ，０．０１９ｍｏｌｅ、ＴＨＦ中、１Ｍ）を０℃で加えた。
反応混合物を室温で８時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、３０％Ｅｔ
ＯＡｃ，ＲＦ＝０．２，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ
（１００ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×３００ｍｌ）で抽出した。有機層をブラ
イン（６００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してから、濾過及び濃縮した。
粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテ
ル中、２０％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物９ｃ（２．５ｇ，６８．８％）を黄色ゴ
ム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １
．９７ － ２．０８ （ｍ， １ Ｈ） ２．３３ － ２．５５ （ｍ， ３ Ｈ） ２．６８
（ｄｄ， Ｊ＝１５．１３， ７．６７ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．６９ （ｓ， ３ Ｈ） ３．９
３ （ｔ， Ｊ＝５．４８ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．０６ － ４．１４ （ｍ， １ Ｈ） ４．３
４ （ｄｔ， Ｊ＝１２．４４， ６．１７ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．９５ （ｓ， １ Ｈ） ５
．１２ （ｓ， １ Ｈ） ５．２６ － ５．４２ （ｍ， ２ Ｈ） ５．８６ （ｄｄｄ， Ｊ
＝１７．２６， １０．８０， ６．１４ Ｈｚ， １ Ｈ）．

【0215】

工程９．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－ビニル－
１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物９）
化合物９ｃ（１．１ｇ，０．００５１ｍｏｌ）をＤＣＭ（８６ｍｌ）に溶解し、－２０
℃まで冷却した。これに、バナジルアセトアセテート（１２５ｍｇ，０．０００４７ｍｏ
ｌ）を加え、次いでｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（１．７１ｍｌ，０．０１７ｍ
ｏｌ）の溶液を加えた。混合物を０℃まで２時間かけてゆっくりと昇温させた。反応混合
物を室温で２４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、４０％ＥｔＯＡｃ
，Ｒｆ＝０．２，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物をカラムクロマトグラフ
ィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、３５％ＥｔＯＡｃ）により
精製して化合物９（６００ｍｇ）を無色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ Ｍ
Ｈｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．７６ － １．９３ （ｍ， ２ Ｈ） １．９９
－ ２．１４ （ｍ， ２ Ｈ） ２．６０ － ２．７４ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８４ － ３．
０２ （ｍ， ２ Ｈ） ３．４３ － ３．５５ （ｍ， １ Ｈ） ３．７０ （ｓ， ３ Ｈ）
４．１７ － ４．２９ （ｍ， １ Ｈ） ４．４２ － ４．５５ （ｍ， １ Ｈ） ５．２６
－ ５．４５ （ｍ， ２ Ｈ） ５．９３ （ｄｄｄ， Ｊ＝１７．４５， １０．６９， ５
．４８ Ｈｚ， １ Ｈ）．

【0216】

パートＤ：

【化42】

【0217】

工程１．（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミ
ノ）－５－オキソペント－３－エン－２－イル ベンゾエート（化合物１ｄ）
化合物８（２００ｍｇ，０．９５５ｍｍｏｌ）及び化合物５ａ（１２６ｍｇ，０．５７
３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（６１６ｍｇ，４
．７５５ｍｍｏｌ）及びＴ_３Ｐ（登録商標）（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（９１１ｍｇ，２
．８６５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で３時間、攪拌した。反応の進行
を出発物質が消費されるまでＴＬＣ（石油エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．５
，ＵＶ活性物質）により監視した。反応溶媒を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成
物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、
１２％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物１ｄ（１２０ｍｇ，３０％）を無色ゴム状物と
して得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ８．０１ －
８．１１ （ｍ， ２ Ｈ） ７．５０ － ７．６２ （ｍ， １ Ｈ） ７．３９ － ７．４
７ （ｍ， ２ Ｈ） ６．４７ － ６．５７ （ｍ， １ Ｈ） ６．２６ － ６．４４ （ｍ
， ２ Ｈ） ５．９２ － ６．０８ （ｍ， ２ Ｈ） ５．７０ － ５．８０ （ｍ， １ Ｈ
） ５．３９ － ５．５１ （ｍ， １ Ｈ） ５．１１ （ｄ， Ｊ＝１７．３３ Ｈｚ， １
Ｈ） ４．９６ （ｄ， Ｊ＝１０．７９ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９２ － ４．０４ （ｍ，
１ Ｈ） ３．６３ － ３．７３ （ｍ， １ Ｈ） ３．５０ － ３．５８ （ｍ， １ Ｈ）
２．４１ （ｄｑ， Ｊ＝１５．１０， ７．６１ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．２１ － ２．３３
（ｍ， １ Ｈ） １．８９ － ２．０２ （ｍ， ３ Ｈ） １．７２ － １．８４ （ｍ，
５ Ｈ） １．４８ － １．５９ （ｍ， ８ Ｈ） １．２３ － １．３０ （ｍ， ３ Ｈ）
１．１３ － １．２０ （ｍ， ４ Ｈ） １．０１ － １．０９ （ｍ， ４ Ｈ） ０．８１
－ ０．９６ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．７１％ （４１２．３７， Ｍ＋Ｈ），
ＲＴ： ２．９２及び２．９４分．

【0218】

工程２．（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－（
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－４－ヒドロキシ－７－（２－メトキシ－２－オキソエチル
）－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）－３－メチルペンタ－２，
４－ジエニル）－２，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミノ）－５
－オキソペント－３－エン－２－イル ベンゾエート（化合物１）
化合物１ｄ（１１５ｍｇ，０．２７９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶
液に、化合物９（１８１ｍｇ，２．８３ｍｍｏｌ）及びグラブスＩＩ触媒（４７ｍｇ，０
．０５５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、室温で加えた。反応混合物を４０℃で４時間攪
拌した。反応の進行をＴＬＣにより監視したところ、出発物質は両方とも依然、存在して
いた。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧
下で残渣となるまで濃縮した。残渣を再びＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、グラブスＩＩ触媒
（４７ｍｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で２３時間攪拌した。
反応の進行を化合物９が消費されるまでＴＬＣ（石油エーテル中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ
Ｆ＝０．１，ＵＶ活性物質）により監視した。

【0219】

反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（２ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧下で
濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した［移動相Ａ：１０ｍｍ
ＡＢＣ、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ（１５０×１９）ｍｍ
，５ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３０，２０／３０，２０／６０，２０．５
，９０，２２／９０；流速：１８ｍｌ／分；溶解度：ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度］。
各画分を凍結乾燥して純粋な化合物１（１１ｍｇ，６％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ７．９８ － ８．１０ （ｍ
， ２ Ｈ） ７．４９ － ７．５９ （ｍ， １ Ｈ） ７．３７ － ７．４８ （ｍ， ２ Ｈ
） ６．４７ － ６．５７ （ｍ， １ Ｈ） ６．３３ － ６．４５ （ｍ， ２ Ｈ） ６．
２８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．９９ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．９３ － ６．０９ （ｍ， １ Ｈ）
５．７２ － ５．８１ （ｍ， １ Ｈ） ５．６２ （ｄｄ， Ｊ＝１５．７９， ６．１４
Ｈｚ， １ Ｈ） ５．４７ － ５．５６ （ｍ， １ Ｈ） ４．４４ － ４．５４ （ｍ，
１ Ｈ） ４．２１ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．５８ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９９ （ｂｒ ｄｄ，
Ｊ＝４．８２， ２．６３ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．６２ － ３．７５ （ｍ， ４ Ｈ） ３．
４７ － ３．５７ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８６ － ３．０２ （ｍ， ２ Ｈ） ２．５３ －
２．７４ （ｍ， ２ Ｈ） ２．３３ － ２．４８ （ｍ， １ Ｈ） ２．２０ － ２．３１
（ｍ， ３ Ｈ） ２．１０ － ２．１８ （ｍ， １ Ｈ） １．８９ － ２．０４ （ｍ，
４ Ｈ） １．６９ － １．８６ （ｍ， ７ Ｈ） １．３８ － １．５０ （ｍ， ３ Ｈ）
１．２２ － １．３３ （ｍ， ３ Ｈ） １．１４ － １．２０ （ｍ， ３ Ｈ） １．０１
－ １．１１ （ｍ， ３ Ｈ） ０．７９ － ０．９３ （ｍ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９３
．７１％ （６１２．４９， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ５．０９， ５．１３分．

【0220】

実施例２
（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－（（３Ｒ，
４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－４－ヒドロキシ－７－（２－メトキシ－２－オキソエチル）－１，
６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）－３－メチルペンタ－２，４－ジエ
ニル）－２，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミノ）－５－オキソ
ペント－３－エン－２－イル ４－フルオロベンゾエート（化合物２）の合成

【0221】

パートＡ：

【化43】

【0222】

工程１．５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペント－３－エン－２－イル ４－
フルオロベンゾエート（化合物２ｅ）
化合物１ｅ（１ｇ，９．４１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かした溶液を－
１０℃まで冷却した後、トリエチルアミン（６．４１ｍｌ，４７．０５ｍｍｏｌ）及びＤ
ＭＡＰ（１１５ｍｇ，０．９４１ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、４－フルオロベンゾイル
クロリド（１．４３ｍｌ，１２．２３３ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下した。反応混合物
を２時間かけて室温まで冷却した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、１０％ＥｔＯ
Ａｃ，ＲＦ＝０．３，ＵＶ及びＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応終了後、反応
混合物をＤＣＭ（１００ｍｌ）で希釈した後、水及びブライン溶液（１×５０ｍｌ）で洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、粗化合物を単離した。粗
化合物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル
中、５％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物２ｅ（９００ｍｇ，５３％）を灰白色固体と
して得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ＝ ８．１２ － ８
．０４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１７ － ７．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７６ （ｑ， Ｊ
＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．４９
（ｓ， ９Ｈ）．

【0223】

工程２．５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソペント－３－エン－２－イル ４－
フルオロベンゾエート（化合物３ｅ）
化合物２ｅ（９００ｍｇ，３．０８ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡＣ：ヘキサン（３０ｍｌ＋１
０ｍｌ）に溶かした溶液に、アルゴンパージ下でキノリン（０．５ｍｌ）及びリンドラー
触媒（５２０ｍｇ，４．８８ｍｍｏｌ）を加えた。５分間パージした後、反応混合物を水
素バルーン圧下で３時間、攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、１０％Ｅｔ
ＯＡｃ，ＲＦ＝０．３６，ＵＶ及びＫＭｎＯ_４活性物質）によって監視した。反応終了後
、反応混合物をセライトに通して濾過し、濾液を真空下で濃縮し、粗生成物を単離した。
粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテ
ル中、６％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物３ｅ（６０５ｍｇ，６６％）を黄色の粘着
性の液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ＝８．０
４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８
Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．３８ － ６．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８３ － ５．７６ （ｍ，
１Ｈ）， １．５０ － １．４０ （ｍ， １２Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．６３％ （２９５
．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ４．３０分．

【0224】

工程３．（Ｚ）－４－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ペント－２－エン酸（化合
物４ｅ）
化合物３ｅ（６００ｍｇ，２．０４ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かした攪
拌溶液を－１０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（２．４ｍｌ）を反応混合物に滴下した。
反応混合物を２５℃まで昇温させ、３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル
中、３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．１５，ＵＶ及びＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した
。反応終了後、反応混合物を真空下で濃縮し、粗化合物を、ｎ－ペンテン（２×１０ｍｌ
）中、５０％ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥して化合物４ｅ（３８３ｍｇ，７
８％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ
＝ １２．６４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．０３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， ８．７ Ｈｚ
， ２Ｈ）， ７．３６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．４３ － ６．３２ （
ｍ， ２Ｈ）， ５．８４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４３ （ｄ， Ｊ
＝ ６．１ Ｈｚ， ３Ｈ）；Ｄ_２Ｏ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ＝ ８．０
７ － ８．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ － ７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４２ －
６．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８８ － ５．８３ （ｍ， １Ｈ）， １．４６ － １．４
１ （ｍ， ３Ｈ）．

【0225】

パートＢ：

【化44】

【0226】

工程１．（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミ
ノ）－５－オキソペンタ－３－エン－２－イル ４－フルオロベンゾエート（化合物１ｆ
）
化合物８（４００ｍｇ，１．９１ｍｍｏｌ）、化合物４ｅ（２７３ｍｇ，１．１４ｍｍ
ｏｌ）をＴＨＦ（１２ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ，９．５５
ｍｍｏｌ）及びＴ３Ｐ（１．８２ｇ）を室温で加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌し
た。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．２，ＰＭＡ活
性物質）により監視した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグ
ラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃ）に
より精製して化合物１ｆ（２２０ｍｇ）を無色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４０
０ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．９９ － １．０８ （ｍ， ３ Ｈ） １
．１１ － １．２０ （ｍ， ３ Ｈ） １．３６ － １．４４ （ｍ， ３ Ｈ） １．４７
－ １．５５ （ｍ， ５ Ｈ） １．６９ － １．８５ （ｍ， ４ Ｈ） １．８９ － ２．
０３ （ｍ， ２ Ｈ） ２．１９ － ２．３２ （ｍ， １ Ｈ） ２．３４ － ２．４９ （
ｍ， １ Ｈ） ３．４９ － ３．５９ （ｍ， １ Ｈ） ３．６２ － ３．７５ （ｍ， １
Ｈ） ３．９１ － ４．０４ （ｍ， １ Ｈ） ４．８７ － ５．０１ （ｍ， １ Ｈ） ５
．１１ （ｄ， Ｊ＝１７．４４ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．８１ Ｈ
ｚ， １ Ｈ） ５．７６ （ｄｄｄ， Ｊ＝１１．６１， ５．９４， １．２０ Ｈｚ， １
Ｈ） ５．８８ － ６．０９ （ｍ， ２ Ｈ） ６．１８ － ６．５８ （ｍ， ３ Ｈ） ７
．０５ － ７．１６ （ｍ， ２ Ｈ） ７．９９ － ８．１０ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ
： ８７．８％ （４３０．０７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．５０分．

【0227】

工程２．（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－（
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－４－ヒドロキシ－７－（２－メトキシ－２－オキソエチル
）－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）－３－メチルペンタ－２，
４－ジエニル）－２，５－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミノ）－５
－オキソペンタ－３－エン－２－イル ４－フルオロベンゾエート（化合物２）
化合物１ｆ（１００ｍｇ，０．２３２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌
溶液に、化合物９（１５０ｍｇ，０．６５７ｍｍｏｌｅ）及びグラブスＩＩ触媒（４１ｍ
ｇ，０．２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、室温で加えた。反応混合物を４０℃で５時間
攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、５０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．１，Ｕ
Ｖ活性物質）により監視した。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（２ｍＬ）
で洗浄した。溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した［Ｘ Ｂ
ｒｉｄｇｅカラム（１５０×１９）ｍｍ，５ｕ；移動相Ａ：１０ｍｍ ＡＢＣ；移動相Ｂ
：アセトニトリル；方法：－（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３０，２０／３０；流速：－
１８ｍｌ／分；溶解度：－ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度］。得られた各画分を凍結乾燥
して純粋な化合物２（５．８ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨ
ｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．９９ － １．０９ （ｍ， ３ Ｈ） １．１３
－ １．２０ （ｍ， ３ Ｈ） １．２２ － １．３６ （ｍ， １ Ｈ） １．５２ （ｂｒ
ｓ， １ Ｈ） １．６９ － １．８４ （ｍ， ７ Ｈ） １．８８ － ２．０５ （ｍ， ３
Ｈ） ２．１０ － ２．３１ （ｍ， ２ Ｈ） ２．３３ － ２．４７ （ｍ， １ Ｈ） ２
．６０ － ２．７８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８８ － ３．０４ （ｍ， ２ Ｈ） ３．４８
－ ３．５８ （ｍ， ２ Ｈ） ３．６２ － ３．７６ （ｍ， ４ Ｈ） ３．９８ （ｂｒ
ｄｄ， Ｊ＝５．２６， ２．８５ Ｈｚ， ２ Ｈ） ４．１０ － ４．２４ （ｍ， １ Ｈ
） ４．４０ － ４．５６ （ｍ， １ Ｈ） ５．５２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ５．５８ －
５．６８ （ｍ， １ Ｈ） ５．７２ － ５．８１ （ｍ， ２ Ｈ） ５．８９ － ６．１０
（ｍ， ２ Ｈ） ６．３２ － ６．５８ （ｍ， ２ Ｈ） ７．１０ （ｔ， Ｊ＝８．５５
Ｈｚ， １ Ｈ） ７．９５ － ８．１１ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９４．３７％ （
６３０．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ４．７３分及び４．７７分．

【0228】

実施例３
メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（２Ｓ，
３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリ
アゾール－１－イル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ
－ピラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－８－ヒドロキシ－１，
６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物３）の合成

【0229】

パートＡ：

【化45】

【0230】

工程１．エチル ２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イ
ル）プロパノエート（化合物２ｇ）
化合物１ｇをＡＣＮ（１００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液にＣｓ_２ＣＯ_３（１２５．６ｇ
，３８６．１５ｍｍｏｌ）及びエチル２－ブロモプロパノエート（３９．４３ｍｌ，２８
３．１５ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を室温で１６時間攪拌した。反応の進行を
ＴＬＣ（ＤＣＭ中、５％ＭｅＯＨ，Ｒｆ＝０．５，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反
応終了後、反応混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で洗浄した。濾液を水（２×
２００ｍｌ）、ブライン（２×２００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで
乾燥し、濃縮して３５ｇの粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（１００～２００メッシ
ュ）を使用して、ＤＣＭ中、２％ＭｅＯＨで溶出させる順相カラムクロマトグラフィーに
より精製した。回収された画分を蒸発させて化合物２ｇ（３０ｇ，５９．１７％）を淡黄
色液体として得た。所望の異性体をＮＯＥ分析によって確認した。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ５．２２ － ５．３４ （ｍ， １ Ｈ）， ４
．０３ － ４．１８ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．１６ （ｓ， ３
Ｈ）， １．６０ （ｄ， Ｊ＝７．２３ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．０６ － １．１９ （ｍ
， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ７５．０７％ （１９８．１７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．１８
分．

【0231】

工程２．２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－Ｎ
－メトキシ－Ｎ－メチルプロパンアミド（化合物３ｇ）
化合物２ｇ（５ｇ，２５．３８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍｌ／ｍｍｏｌ）に溶か
した攪拌溶液に、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．９ｇ ５０．７６ｍ
ｍｏｌ）、次いでイソプロピルマグネシウムクロリド－塩化リチウム錯体（５８．５７ｍ
ｌ，７６．１４ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中、１．３Ｍ）を０℃で徐々に加えた。混合物を室温で
３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（未希釈のＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３，ＰＭＡ活性
物質）により監視した。反応終了後、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、酢酸エ
チル（３×５０ｍｌ）で抽出してから硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発さ
せて化合物３ｇ（３．９ｇ，７３．５８％）を淡黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ
（４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ５．２７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．３
８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．４３ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．３４
（ｓ， ３ Ｈ）， １．６６ （ｓ， ３ Ｈ）， １．６１ （ｄ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ：
７９．０７％ （２１３．０１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．４０分．

【0232】

工程３．２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）プロ
パナール（化合物４ｇ）
化合物３ｇ（３．９ｇ，１８．３９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８ｍｌ）に溶かした攪拌溶液
に、ＬＡＨ（１０．１１ｍｌ，２０．２３ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中、２．０Ｍ）を加えた。添
加の後、反応混合物を０℃で２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（未希釈のＥｔＯＡｃ
；Ｒｆ＝０．２５，２，４－ＤＮＰ活性物質）により監視した。反応終了後、飽和塩化ア
ンモニウム水溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出してから無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて化合物４ｇ（２．６ｇ，９２％）を得た
。粗生成物を精製せずに次の工程で使用した。アルデヒド化合物を^１Ｈ ＮＭＲにより確
認した。

【0233】

工程４．（Ｚ）－メチル ４－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール
－１－イル）ペント－２－エノエート（化合物５ｇ）
メチル ２－（ビス（２，２，２－トリフルオロエトキシ）ホスホリル）アセテート（
５．４ｇ，１６．９ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、１８－
クラウン－６（２２．４３ｇ，８４．９６ｍｍｏｌ）及びＫＨＭＤＳ（１６．９９ｍｌ，
１６．９９ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中、１．０Ｍ）を－７５℃で加え、反応混合物を２０分間攪
拌した。次いで、ＴＨＦ（５ｍｌ）に加えた化合物４ｇ（２．６ｇ，１６．９９３ｍｍｏ
ｌ）を反応混合物に加え、これを２５℃まで昇温させてから２時間攪拌した。反応の進行
をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３，ＵＶ活性物質）により監視し
た。反応終了後、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、生成物を酢酸エチル（３×
５０ｍｌ）で抽出してから無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて３
ｇの粗生成物を得た。粗生成物をヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃを用いてシリカカラムに
より精製した。回収された画分中の生成物をＵＶにより同定し、減圧下で蒸発させて化合
物５ｇ（５００ｍｇ，１４．０８％）を淡黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４０
０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： ６．４８－６．５３ （ｄｄ， Ｊ＝８．８
Ｈｚ １ Ｈ）， ６．１９－６．２３ （ｍ， １ Ｈ）， ５．８７－５．８４ （ｄ， Ｊ
＝１．２ Ｈｚ １ Ｈ）， ３．７６ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．４２ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．
３４ （ｓ， ３ Ｈ）， １．５８－ １．６０ （ｄ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ７４．７９
％ （２１０．１１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．２４分．

【0234】

工程５．（Ｚ）－４－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イ
ル）ペント－２－エン酸（化合物６ｇ）
化合物５ｇ（５００ｍｇ，１６．９９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８ｍｌ）及び水（２ｍｌ）
に溶かした攪拌溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（１２０．５７ｇ，２．８７ｍｍｏｌ）を加え
た。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中、２０％ＭｅＯ
Ｈ，Ｒｆ＝０．４，ＵＶ活性物質）により監視した。反応終了後、溶媒を減圧下で蒸発さ
せて粗生成物を得て、これを酸及び塩基処理で処理した。粗化合物を１ｍｌの水に溶解し
、ジエチルエーテル（５ｍｌ）で抽出した。分離した水層を飽和クエン酸（０．２ｍｌ，
ｐＨ＝５）で酸性化し、ＤＣＭ（２×２０ｍｌ）中、２０％ＭｅＯＨで抽出した。分離し
た有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を蒸発させて３００ｍｇの所望の
生成物を得た。この３００ｍｇの最終生成物を前のバッチ（８０ｍｇ，ＬＣＭＳ９７％）
と加え合わせ、水（１ｍｌ）で洗浄し、濾過した固体を真空下で乾燥して化合物６ｇ（２
４０ｍｇ，３９．０２％）を灰白色固体として得た。オレフィン性二重結合のＪＪ定常カ
ップリングにより、この化合物がＺ幾何異性体であることが示された。^１Ｈ ＮＭＲ （４
００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： １２．７６ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ６．
３６ （ｄｄ， Ｊ＝１１．１８， ８．９９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．００ － ６．１６ （
ｍ， １ Ｈ）， ５．８３ （ｄ， Ｊ＝１１．４０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．３０ （ｓ，
３ Ｈ）， ２．１８ （ｓ， ３ Ｈ）， １．４８ （ｄ， Ｊ＝６．５８ Ｈｚ， ３ Ｈ）
；ＬＣＭＳ： ９８．６４％ （１９６．２２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．１０分．

【0235】

パートＢ：

【化46】

【0236】

工程１．（Ｚ）－４－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イ
ル）－Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ）－３－メチ
ルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）ペント－２－エ
ンアミド（化合物１ｈ）
化合物８（３００ｍｇ，１．４３５ｍｍｏｌ）、化合物６ｇ（１６７．６ｍｇ，０．８
５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（９２４ｍｇ，７
．１５ｍｍｏｌｅ）及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（１．３６ｇ，４．２９ｍｍｏ
ｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯ
Ａｃ，ＲＦ＝０．１，ＵＶ活性物質）により監視した。反応溶媒を減圧下で濃縮して粗生
成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲル／溶離剤
、石油エーテル中、９０％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物１ｈ（１３０ｍｇ，２３．
５％）を無色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ）
δ ｐｐｍ ６．５３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１．９６ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２３ － ６．４２
（ｍ， ２ Ｈ） ５．８１ － ５．９４ （ｍ， １ Ｈ） ５．６８ － ５．７８ （ｍ，
１ Ｈ） ５．４５ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．０９ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．３０ （ｓ， ２ Ｈ）
５．０５ － ５．１６ （ｍ， １ Ｈ） ４．８８ － ５．０３ （ｍ， １ Ｈ） ４．１
２ （ｑ， Ｊ＝７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ） ３．８９ － ３．９９ （ｍ， １ Ｈ） ３．６
４ － ３．７６ （ｍ， １ Ｈ） ３．５１ － ３．６０ （ｍ， １ Ｈ） ２．７２ － ２
．９０ （ｍ， １ Ｈ） ２．３２ － ２．５０ （ｍ， ７ Ｈ） ２．１９ － ２．２９
（ｍ， ２ Ｈ） ２．０８ － ２．１４ （ｍ， ３ Ｈ） ２．０５ （ｓ， ５ Ｈ） １．
８７ － １．９８ （ｍ， ３ Ｈ） １．７０ － １．８５ （ｍ， ４ Ｈ） １．５９ （
ｄｄ， Ｊ＝６．６０， ３．１８ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．３９ － １．４６ （ｍ， ３ Ｈ
） １．１９ － １．３３ （ｍ， １１ Ｈ） １．０９ － １．１９ （ｍ， ３ Ｈ） １
．０１ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝１６．１４， ７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ） ０．８１ － ０．９
２ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８２．３％ （３８７．３８， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．
３１， ２．３５分．

【0237】

工程２．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（
（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（３，５－ジメチル－１Ｈ－１，２，
４－トリアゾール－１－イル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒド
ロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－８－ヒドロキ
シ－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物３）
化合物１ｈ（１００ｍｇ，０．２５８ｍｍｏｌ）及び化合物９（１００ｍｇ，０．４３
８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、グラブスＩＩ触媒（６５．７
ｍｇ，０．０７７４ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、室温で加えた。反応混合物を４０℃
で５時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（１００％ＥｔＯＡｃ，ＵＶ活性物質）により監
視した。反応混合物をセライトパッドに通して濾過し、ＤＣＭ（２ｍＬ）で洗浄した。溶
媒を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した［移動相
Ａ：１０ｍｍ ＡＢＣ、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ（１５０
×１９ｍｍ），５ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３０，２０／３０，２０／６
０，２０．５，９０，２２／９０；流速：１８ｍｌ／分；溶解度：－ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水
；周囲温度］。回収された画分を凍結乾燥して純粋な生成物化合物３（３ｍｇ，１．９％
）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐ
ｐｍ ６．４４ － ６．６０ （ｍ， １ Ｈ） ６．２２ － ６．４３ （ｍ， ２ Ｈ） ５
．８６ （ｔｄ， Ｊ＝７．２３， １．３２ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．７７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝
９．２１ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．５８ － ５．７２ （ｍ， １ Ｈ） ５．５１ （ｂｒ ｔ，
Ｊ＝７．０２ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．４４ － ４．５６ （ｍ， １ Ｈ） ４．２０ （ｂｒ
ｔ， Ｊ＝６．８０ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．８７ － ４．００ （ｍ， ２ Ｈ） ３．６０
－ ３．７６ （ｍ， ５ Ｈ） ３．４５ － ３．５７ （ｍ， ３ Ｈ） ２．８９ － ３．
０２ （ｍ， ２ Ｈ） ２．６１ － ２．７８ （ｍ， ４ Ｈ） ２．４０ － ２．４９ （
ｍ， ４ Ｈ） ２．２９ － ２．３８ （ｍ， ９ Ｈ） ２．１３ － ２．２６ （ｍ， ４
Ｈ） ２．０７ － ２．１１ （ｍ， ３ Ｈ） １．８８ － ２．０３ （ｍ， ４ Ｈ） １
．７１ － １．８５ （ｍ， ６ Ｈ） １．５１ － １．５５ （ｍ， ３ Ｈ） １．４７
（ｂｒ ｄ， Ｊ＝２．８５ Ｈｚ， ２ Ｈ） １．４３ （ｓ， ６ Ｈ） １．２２ － １．
３５ （ｍ， ３ Ｈ） １．１６ （ｄ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， ３ Ｈ） ０．９８ （ｄ，
Ｊ＝７．４５ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ７５％ （５８７．１７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ
： ２．９５分．

【0238】

実施例４
メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－（（１Ｅ，３Ｅ）
－５－（（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（イソオキサゾール－３－イ
ル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イ
ル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－１，６－ジオキサスピロ［２．
５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物４）の合成

【0239】

パートＡ：

【化47】

【0240】

工程１．イソオキサゾール－３－イルメタノール（化合物２ｉ）
エチル イソオキサゾール－３－カルボキシレート（化合物１ｉ）（２４ｇ，１７０．
２ｍｍｏｌ）をエタノール（４００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液を０℃まで冷却し、水素化
ホウ素ナトリウム（１６．１７ｇ，４２５．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３時間攪拌し
た。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中、１０％メタノール，Ｒｆ：０．３，ヨウ素及びＵＶ
活性物質）により監視した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、氷冷水（３０ｍｌ）でクエ
ンチし、ＤＣＭ（６×５００ｍｌ）中、１０％メタノールで抽出し、有機層を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。有機溶媒を減圧下で蒸発させて化合物２ｉ（１６．８ｇ，９９．３
２％）を無色油状物として得た。ＧＣＭＳ： ５６％ （９９ Ｍ／Ｚ）， ＲＴ： ５．１
０９分；^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ２．２３８ （
Ｓ， １ Ｈ）， ４．８１３ （ｓ， ２ Ｈ） ６．４２８－ ６．３８６ （ｄ， Ｊ＝２
Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３９２ （ｄ， Ｊ＝２ Ｈｚ， １ Ｈ）．

【0241】

工程２．３－（ブロモメチル）イソオキサゾール（化合物３ｉ）
化合物２ｉ（１６．８ｇ，１６９．６９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３５０ｍｌ）に溶かした
攪拌溶液を０℃まで冷却し、トリフェニルホスフィン（４４．５ｇ，１６９．６９ｍｍｏ
ｌ）及びＣＢｒ_４（５６．２７ｇ，１６９．６９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時
間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、２０％酢酸エチル、Ｒｆ：０．７，ヨウ
素及びＵＶ活性物質）により監視した。反応混和物を水（２×１００ｍｌ）、ブライン溶
液（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過、濃縮して粗生成物
を淡黄色液体（２３ｇ）として得て、これを、シリカゲル（１００～２００メッシュ）を
使用し、ヘキサン中、１０％酢酸エチルで溶出する順相カラムクロマトグラフィーにより
精製した。回収された画分を蒸発させて化合物３ｉ（１６．５ｇ，６２．６％）を淡黄色
液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ４．
４６１ （ｓ， ２ Ｈ） ６．４６３ （ｄ， Ｊ＝１．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３９６ （
ｄ， Ｊ＝１．６ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５％ （１６２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ：
１．６９分．

【0242】

工程３．２－（イソオキサゾール－３－イル）アセトニトリル（化合物４ｉ）
化合物３ｉ（１６．５ｇ，１０２．４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（３５ｍｌ）及び水（１５
ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、０℃のＫＣＮ（９．９２ｇ，１５３．７２ｍｍｏｌ）を加
えた後、反応液を２５℃にまで昇温させて３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサ
ン中、３０％酢酸エチル、Ｒｆ：０．５，ＫＭＮＯ_４活性物質）により監視した。反応混
合物を水（１００ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍｌ）で抽出した。加え合わ
せた有機層を水（１００ｍｌ）及びブライン溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４
で乾燥し、減圧下で濃縮して粗化合物（１２ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～
２００メッシュ）及び溶離剤としてヘキサン中、２０％ＥｔＯＡｃを使用して順相カラム
クロマトグラフィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化合物４ｉ（８ｇ，７
２．７％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ
） δ ｐｐｍ ３．８７ （ｓ， ２ Ｈ） ６．４９ （ｄ， Ｊ＝１．４７ Ｈｚ， １ Ｈ）
８．４８ （ｄ， Ｊ＝１．４７ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９６．５７％ （１０９．
０９， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．１９分．

【0243】

工程４．２－（イソオキサゾール－３－イル）プロパンニトリル（化合物５ｉ）
化合物４ｉ（８ｇ，９２．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍｌ）溶液に、０℃のＫＯｔ
Ｂｕ（９．３５ｇ，８３．３３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間攪拌した。次いで、
ヨウ化メチル（２８ｍｌ，４６２．５ｍｍｏｌ）を反応液に０℃で加え、反応混合物を２
５℃まで昇温させてから１６時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％酢
酸エチル、Ｒｆ＝０．４５，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応終了後、混合物
を濾過し、濾液を酢酸エチル（２５０ｍｌ）で希釈し、水（１００ｍｌ）及びブライン溶
液（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して粗化合
物（１５ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用し、ヘキサ
ン中、１５％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマトグラフィーにより精製した。回収
された画分を蒸発させて化合物５ｉ（５ｇ，５５．３７％）を淡黄色液体として得た。^１
Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．７４８－１．７３０
（ｄ， Ｊ＝ ７， ３ Ｈ）， ４．１７８－ ４．１１３ （ｍ， １Ｈ）， ６．４９ （ｄ
， Ｊ＝１．４７ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．４８ （ｄ， Ｊ＝１．４７ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣ
ＭＳ： ９２．６６％ （１２３．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．４４分．

【0244】

工程５．エチル ２－（イソオキサゾール－３－イル）プロパノエート（化合物６ｉ）
化合物５ｉ（４．５ｇ，３６．８８ｍｍｏｌ）のエタノール（４５ｍｌ）溶液に、１，
４－ジオキサン（４５ｍｌ）中の４．０Ｍ ＨＣｌを２５０ｍｌ試験管内で加えた後、試
験管を密封した。試験管を８０℃まで加熱し、２４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（
ヘキサン中、３０％酢酸エチル，Ｒｆ＝０．７，ＫＭＮＯ_４活性物質）により監視した。
反応終了後、反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶かし、ＮａＨＣ
Ｏ_３溶液（２×５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、及びブライン溶液（５０ｍｌ）で洗浄した
。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して粗化合物（３．５ｇ）を得て、これ
を、シリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用し、ヘキサン中、１０％酢酸エチルで
溶出する順相カラムクロマトグラフィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化
合物６ｉ（６ｇ，９６．３％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ
， クロロホルム －ｄ） δ ｐｐｍ ８．３４ － ８．３８ （ｍ， １ Ｈ） ６．３７ －
６．４２ （ｍ， １ Ｈ） ４．１５ － ４．２２ （ｍ， ２ Ｈ） ３．９６ － ４．０
３ （ｍ， １ Ｈ） １．５５ － １．５８ （ｍ， ３ Ｈ） １．２５ － １．２８ （ｍ
， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８８．８０ ％ （１７０．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．９７
分．

【0245】

工程６．２－（イソオキサゾール－３－イル）－Ｎ－メトキシ－Ｎ－メチルプロパンア
ミド（化合物７ｉ）
化合物６ｉ（６ｇ，３５．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に
Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（６．９２ｇ，７１ｍｍｏｌ）を加え、反応
混合物を０℃に冷却した。次いで、イソプロピルマグネシウムクロリド－塩化リチウム錯
体を加えた（１．３Ｍ）（１０９．２ｍｌ，１４２ｍｍｏｌ）。反応混合物を０℃で３時
間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％酢酸エチル、Ｒｆ：０．４，ＫＭ
ＮＯ_４活性物質）により監視した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液を用いてクエ
ンチし、酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層を硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧下で濃縮して粗化合物（９ｇ）を得た。粗生成物をヘキサン中、５０％
酢酸エチルを溶離剤として用いてシリカゲルカラムにより精製した。純粋な画分を回収し
、減圧下で蒸発させて化合物７ｉ（２ｇ，３０．６２％）を淡黄色油状物として得た。^１
Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．５０ （ｄ， Ｊ＝７
．０２ Ｈｚ， ３ Ｈ） ３．２１ （ｓ， ３ Ｈ） ３．６３ － ３．７１ （ｍ， ３ Ｈ
） ４．５３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．１４ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．４５ （ｄ， Ｊ＝１．５３
Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３３ （ｄ， Ｊ＝１．５３ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９７．０
５％ （１８５．２２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．２３分．

【0246】

工程７．２－（イソオキサゾール－３－イル）プロパナール（化合物８ｉ）
化合物７ｉ（２ｇ，１０．８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に
ＬＡＨ（５．４３ｍｌ，１０．８７ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中、２Ｍ）を－７０℃で加えた。添
加の後、反応混合物を０℃で１時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％
酢酸エチル、ＲＦ＝０．１５，２，４－ＤＮＰ活性物質）により監視した。反応終了後、
混合物を硫酸ナトリウムのスラリーでクエンチし、室温で３０分間攪拌した。固体を濾過
し、酢酸エチル（５０ｍｌ）で洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で
蒸発させて化合物８ｉ（１．２ｇ）を得た。粗生成物を精製せずに次の工程で使用した。
^１Ｈ ＮＭＲは、９．８ｐｐｍに特徴的なアルデヒドプロトンを示し、積分値は０．１２
であった（他のピークの値は不純化合物のために記載しない）。

【0247】

工程８．（Ｚ）－メチル ４－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）ペント
－２－エノエート（化合物９ｉ）
１８－クラウン－６（１９．１８ｇ，７２．５８ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル ２
－（ジフェノキシホスホリル）アセテート（３．３４ｇ，９．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４
０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＫＨＭＤＳの１Ｍ ＴＨＦ溶液（９．６ｍｌ，９．６ｍ
ｍｏｌ）を－７５℃で滴下した。添加後、反応混合物を－７５℃で２０分間攪拌した。次
いで、ＴＨＦ（１０ｍｌ）に加えた化合物８ｉ（１．２ｇ，１４．５１ｍｍｏｌ）を、反
応混合物に－７５℃で加えた。添加の後、反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応の進
行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％酢酸エチル、ＲＦ＝０．６，ＵＶ活性物質）により監視
した。反応終了後、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×３０ｍ
ｌ）で抽出してから無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて４ｇの粗
生成物を得た。粗生成物をヘキサン中、１５％酢酸エチルを勾配として用いてシリカカラ
ムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化合物９ｉ（４３０ｍｇ，
１９．６％）を黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム
－ｄ） δ ｐｐｍ １．４２ （ｄ， Ｊ＝７．０２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．５５ （ｓ，
９ Ｈ） ５．００２ － ４．９６１ （ｍ， １ Ｈ） ５．７９６－５．７６７ （ｄ， Ｊ
＝１１．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２５５－６．１９６ （ｍ， ２ Ｈ） ８．３１６－８．
３１２ （ｄ， Ｊ＝１．６ Ｈｚ， １ Ｈ）；Ｚ幾何学異性体をオレフィン結合のＪＪ定
常カップリング値により確認した。１１．６ Ｈｚ；ＬＣＭＳ： ８５．７８％ （２２４
．２６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．４９分．

【0248】

工程９．（Ｚ）－４－（イソオキサゾール－３－イル）ペント－２－エン酸（化合物１
０ｉ）
化合物９ｉ（４２０ｍｇ，１．８８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４２ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、ＴＦＡ（４．２ｍｌ，４１．５０ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、混合物を４時間攪拌
した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、３０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．１，ＵＶ活
性物質）により監視した。反応終了後、溶媒を減圧下、２５℃で蒸発させて粗生成物を得
た。粗化合物を分取ＨＰＬＣ［移動相Ａ：１０ ＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリルカラム
：Ｘ ｓｅｌｅｃｔフェニルヘキシル（１５０×１９）ｍｍ，５ｕ；流速：１６ｍｌ／分
；方法：０／２０，２／２０，１０／５０；溶解度：－ＡＣＮ＋水＋ＴＨＦ；周囲温度］
により精製して化合物１０ｉ（１４２ｍｇ，４５．２％）を無色油状物として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ １．３３ （ｄ， Ｊ＝７．０
２ Ｈｚ， ３ Ｈ） ４．９０ － ５．０２ （ｍ， １ Ｈ） ５．８１ （ｄ， Ｊ＝１１．
４０ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．３１ （ｔ， Ｊ＝１０．７４ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．５７ （ｄ
， Ｊ＝１．３２ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．８１ （ｄ， Ｊ＝１．３２ Ｈｚ， １ Ｈ） １２
．３１ （ｓ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９８．１６％ （１６６．１５， Ｍ－Ｈ）， ＲＴ
： １．４３分．

【0249】

パートＢ：

【化48】

【0250】

工程１．（Ｚ）－Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－
イル）－４－（イソオキサゾール－３－イル）ペント－２－エンアミド（化合物１ｊ）
化合物８（１５０ｍｇ，０．７１６ｍｍｏｌ）及び化合物１０ｉ（１１９ｍｇ，０．７
１６ｍｍｏｌ）を２３℃のＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．
６５ｍｌ，３．５８ｍｍｏｌ）及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（０．６８ｍＬ，２
．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（
ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_ｆ＝０．６，ＵＶ視認）により監視した。反応終了後
、反応混合物を真空下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィ
ー（ヘキサン中、２０→５０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上
で精製して化合物１ｊ（１３０ｍｇ，５０．７８％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ８．２７ － ８．３２ （ｍ，
１ Ｈ） ６．３７ （ｄｄ， Ｊ＝１７．３３， １０．６８ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２４ －
６．３０ （ｍ， １ Ｈ） ６．１４ （ｔｄ， Ｊ＝１１．２０， ９．９７ Ｈｚ， １
Ｈ） ５．７２ － ５．８８ （ｍ， ２ Ｈ） ５．４０ － ５．５０ （ｍ， １ Ｈ） ５
．０６ － ５．２１ （ｍ， ２ Ｈ） ４．９６ （ｄ， Ｊ＝１０．５７ Ｈｚ， １ Ｈ）
３．９１ － ４．０２ （ｍ， １ Ｈ） ３．６３ － ３．７３ （ｍ， １ Ｈ） ３．５１
－ ３．５９ （ｍ， １ Ｈ） ２．３３ － ２．４５ （ｍ， １ Ｈ） ２．１９ － ２．
３１ （ｍ， １ Ｈ） １．９１ － １．９９ （ｍ， ２ Ｈ） １．８１ （ｄｄｄ， Ｊ＝
９．９２， ４．９６， ２．４５ Ｈｚ， １ Ｈ） １．７６ （ｓ， ３ Ｈ） １．４３
－ １．５０ （ｍ， ４ Ｈ） １．２４ － １．２８ （ｍ， ３ Ｈ） １．１５ （ｄｄ，
Ｊ＝１３．１９， ６．４３ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．０２ （ｄｄ， Ｊ＝１３．９５， ７
．４１ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９３．５８％ （３５９．４０， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ
： ２．７３分及び２．７５分．

【0251】

工程－２．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－（（１
Ｅ，３Ｅ）－５－（（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（イソオキサゾー
ル－３－イル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラ
ン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－１，６－ジオキサス
ピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物４）
化合物１ｊ（１２０ｍｇ，０．３３５ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に、化合物９（１１４ｍｇ，０．５０２ｍｍｏｌ）及びグラブスＩＩ触媒（
８５ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を４０℃で５時間攪
拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_Ｆ＝０．１，ＵＶ視認
）により監視した。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（５ｍｌ）で洗浄し、
濾液を減圧下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した［移動相
Ａ：１０ｍｍ ＡＢＣ；移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－ｓｅｌｅｃｔフェニル
ヘキシル（１５０×１９）ｍｍ，５ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／２０，２／２０，１２
／５５，２０．５０／９０，２２／９０；流速：１６ｍｌ／分；周囲温度］。回収された
画分を凍結乾燥して化合物４（５ｍｇ）を淡褐色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４
００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ８．３０ （ｓ， １ Ｈ） ６．３８ （ｂ
ｒ ｄ， Ｊ＝１５．８９ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２８ （ｄｄ， Ｊ＝３．３０， １．５９
Ｈｚ， １ Ｈ） ６．０７ － ６．２０ （ｍ， １ Ｈ） ５．８０ － ５．８７ （ｍ，
１ Ｈ） ５．７６ （ｄｄ， Ｊ＝１１．１３， ３．０６ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．６３ （ｄ
ｄ， Ｊ＝１５．７７， ６．２４ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．５２ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．８５
Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０５ － ５．２３ （ｍ， １ Ｈ） ４．５０ （ｄｄｄ， Ｊ＝１１
．６８， ７．１５， ４．８９ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．２１ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．７２ Ｈ
ｚ， １ Ｈ） ３．９２ － ４．０１ （ｍ， １ Ｈ） ３．６３ － ３．７５ （ｍ， ７
Ｈ） ３．４６ － ３．５８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８９ － ３．０３ （ｍ， ２ Ｈ） ２
．６０ － ２．７４ （ｍ， ２ Ｈ） ２．３４ － ２．４６ （ｍ， １ Ｈ） ２．１３
－ ２．３２ （ｍ， ３ Ｈ） １．９０ － １．９９ （ｍ， ２ Ｈ） １．７１ － １．
８５ （ｍ， ６ Ｈ） １．４７ （ｄｄ， Ｊ＝６．９７， ２．５７ Ｈｚ， ３ Ｈ） １
．１５ （ｄｄ， Ｊ＝１３．４５， ６．３６ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．０２ （ｄｄ， Ｊ＝
１４．１８， ７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９２．４５％ （５５９．３， Ｍ
＋Ｈ）， ＲＴ： ４．７５分及び４．８０分．

【0252】

実施例５
メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－（（１Ｅ，３Ｅ）
－５－（（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（３－メトキシイソオキサゾ
ール－５－イル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピ
ラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－１，６－ジオキサスピロ［
２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物５）の合成

【0253】

パートＡ：

【化49】

【0254】

工程１．メチル ３－メトキシイソオキサゾール－５－カルボキシレート（化合物２ｋ
）
メチル ３－ヒドロキシイソオキサゾール－５－カルボキシレート（化合物１ｋ）（２
３．５ｇ，１６．４３３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液にＫ_２Ｃ
Ｏ_３（３４．０１ｇ，２４．６５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を１０分間攪拌した。
次いで、ヨウ化メチル（１５．３５ｍｌ）を加え、反応液を２９℃まで昇温させてから１
６時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、２０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．７，
ＵＶ活性物質）により監視した。反応混合物を水（１００ｍｌ）で希釈し、６Ｎ ＨＣｌ
をｐＨ約４となるまで加えることによって酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽
出した。有機層をブライン溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過、
濃縮して粗生成物を粗生成物（３０ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～２００メ
ッシュ）を使用し、石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマトグ
ラフィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化合物２ｋ（２０ｇ，７２．８％
）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐ
ｐｍ： ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．０３ （ｓ， ３ Ｈ）， ６．５４ （ｓ， １ Ｈ
）；ＬＣＭＳ： ９９．１６％ （１５８．０７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．４３分．

【0255】

工程２．（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）メタノール（化合物３ｋ）
化合物２ｋ（２０ｇ，１２７．３８ｍｍｏｌ）を０℃に冷却したメタノール（２００ｍ
ｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＮａＢＨ_４（１２．０４７ｇ，３１８．４７ｍｍｏｌ）を少
量ずつ加えた。反応液を２０℃まで昇温させ、５時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘ
キサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．３，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混
合物を０℃のＮＨ_４Ｃｌ水溶液（２０ｍｌ）でクエンチした。溶媒を減圧下、３０℃で蒸
発させて残渣を得て、これを水（１００ｍｌ）で希釈し、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）中、
１０％ＭｅＯＨで抽出した。加え合わせた有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎ
ａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過、濃縮して化合物３ｋ（１３ｇ，７９％）を淡黄色液体として
得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ： ２．４９ （ｓ
， １ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．６４ （ｄ， Ｊ＝５．７０ Ｈｚ， ２ Ｈ
）， ５．８８ （ｓ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９８．８４％ （１３０．０６， Ｍ＋Ｈ）
， ＲＴ： ０．９０分．

【0256】

工程３．５－（ブロモメチル）－３－メトキシイソオキサゾール（化合物４ｋ）
化合物３ｋ（１３ｇ，１００．７７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶かした攪拌
溶液に、ＴＰＰ（２６．４ｇ，１００．７７ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ_４（３３．４２ｇ，１
００ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、反応混合物を２５℃まで昇温させ、２時間攪拌した。
反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、２０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．８，ＵＶ活性物質）に
より監視した。反応混和物を水（２×１００ｍｌ）及びブライン溶液（１００ｍｌ）で洗
浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過、濃縮して粗生成物を淡黄色液体（２３ｇ
）として得て、これを、シリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用し、溶離剤として
石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマトグラフィーにより精製
した。回収された画分を蒸発させて化合物４ｋ（１５ｇ，７８％）を淡黄色液体として得
た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ： ５．９４ （ｓ，
１Ｈ）， ４．３３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９７ （Ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９２．１５
％ （１９２．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．５９分．

【0257】

工程４．２－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）アセトニトリル（化合物５
ｋ）
化合物４ｋ（１５ｇ，７８．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１５０ｍｌ）及び水（４０ｍ
ｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＫＣＮ（７．６５ｇ，１１７．８０ｍｍｏｌ）を０℃で加え
、反応液を２５℃まで昇温させ、３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３
０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．３，ヨウ素活性物質）により監視した。反応混合物を水（１
００ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層を
水（１００ｍｌ）及びブライン溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減
圧下で濃縮して粗化合物（１２ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～２００メッシ
ュ）を使用し、石油エーテル中、１５％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマトグラフ
ィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化合物５ｋ（６ｇ，５５％）を淡黄色
固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ： ６
．００ （ｓ， １ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．７９ （ｓ， ２ Ｈ）；ＬＣ
ＭＳ： ７７．９９％ （１３８．９２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．５４分．

【0258】

工程５．２－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）プロパンニトリル（化合物
６ｋ）
化合物５ｋ（６ｇ，４３．４７８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（６０ｍｌ）に加えた懸
濁液に、Ｋ_２ＣＯ_３（６．６ｇ，４７．８２５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、反応液を２０分
間攪拌した。ヨウ化メチル（１６．２２ｍｌ，２６０．８６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル
（２０ｍｌ）溶液を反応液に０℃で加えた。添加の後、反応混合物を２５℃まで昇温させ
、４８時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．４，ＫＭｎＯ
_４活性物質）により監視した。反応終了後、混合物を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃ（１５０
ｍｌ）で希釈し、水（５０ｍｌ）及びブライン溶液（５０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮ
ａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して粗化合物（９ｇ）を得て、これを、シリカゲル（
１００～２００メッシュ）を使用し、石油エーテル中、８％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カ
ラムクロマトグラフィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化合物６ｋ（３ｇ
，４５％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ
） δ ｐｐｍ： ５．９６ （ｓ， １ Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９９ （ｓ
， ３ Ｈ）， １．７１ （ｄ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．７２％ （１５３．２１，
Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．４３分．

【0259】

工程６．メチル ２－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）プロパノエート（
化合物７ｋ）
化合物６ｋ（３ｇ，１９．７３６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍｌ）溶液に、１，４－
ジオキサン（２０ｍｌ）中、４．０Ｍ ＨＣｌを１００ｍｌの密封した試験管内で加え、
７０℃に加熱してから２４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％Ｅｔ
ＯＡｃ，ＲＦ＝０．６，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応終了後、反応混合物を濃
縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に溶かし、ＮａＨＣＯ_３溶液（２×５０ｍｌ）、
水（５０ｍｌ）、及びブライン溶液（５０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾
燥し、減圧下で濃縮して粗化合物（３．５ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～２
００メッシュ）を使用し、石油エーテル中、５％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマ
トグラフィーにより精製した。回収された画分を蒸発させて化合物７ｋ（３ｇ，８３％）
を淡黄色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ
ｐｐｍ： ５．８０ （ｓ， １ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８２ （ｍ， １
Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３ Ｈ）， １．５５ （ｄ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９４．４８％
（１８６．２２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．５４分．

【0260】

工程７．Ｎ－メトキシ－２－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）－Ｎ－メチ
ルプロパンアミド（化合物８ｋ）
化合物７ｋ（３ｇ，１６．２１６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン
塩酸塩（３．１６ｇ，３２．４３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に
、イソプロピルマグネシウムクロリド－塩化リチウム錯体（３７．４２ｍｌ，４８．６４
８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。添加の後、反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応の進
行をＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．３，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応
終了後、反応混合物を０℃の飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×
１００ｍｌ）で抽出した。加え合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮
して粗生産物（５ｇ）を得て、これを、シリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用し
、石油エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃで溶出する順相カラムクロマトグラフィーにより精
製した。回収された画分を蒸発させて化合物８ｋ（２．１ｇ，６０％）を淡黄色液体とし
て得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ： ５．８０ （
ｓ， １ Ｈ）， ４．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｓ
， ３ Ｈ）， ３．２１ （ｓ， ３Ｈ）， １．４７ （ｄ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９７．
２２％ （２１５．２３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．４０分．

【0261】

工程８．２－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）プロパナール（化合物９ｋ
）
化合物８ｋ（１．８ｇ，８．４１１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、ＬＡＨ（４．２ｍｌ，８．４１１ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中、２Ｍ）を－７８℃で加え、
混合物を－７８℃で３０分間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝
０．４、２，４－ＤＮＰ活性物質）により監視した。反応終了後、反応液を硫酸ナトリウ
ムのスラリーでクエンチし、室温で３０分間攪拌した。未溶解の固体を濾過し、酢酸エチ
ル（５０ｍｌ）で洗浄した。濾液を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で蒸発させて化合物
９ｋ（１．１ｇ）を得た。粗生成物を精製せずに次の工程で使用した。アルデヒド化合物
の存在を^１Ｈ ＮＭＲにより確認した。

【0262】

工程９．（Ｚ）－ｔｅｒｔ－ブチル ４－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル
）ペント－２－エノエート（化合物１０ｋ）
１８－クラウン－６（１９．１８ｇ，７２．５８ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル ２
－（ジフェノキシホスフィノ）アセテート（４．６１ｇ，１４．５１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ
（５０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（１４．５１ｍｌ，１４．５１ｍｍｏ
ｌ，ＴＨＦ中、１Ｍ）を－７８℃で滴下した。添加後、反応混合物を－７８ ℃で４０分
間攪拌した。次いで、化合物９ｋ（１．１ｇ，１４．５１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ
）溶液を、反応混合物に－７８℃で加えた。添加の後、反応混合物を室温で２時間攪拌し
た。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、２０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．７，ＰＭＡ活性物
質）により監視した。反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、
酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出してから硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下
で蒸発させて粗生成物（３ｇ）を得て、これをヘキサン中、２％ＥｔＯＡｃの勾配を用い
てシリカカラムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化合物１０ｋ
（３５０ｍｇ，１９％）を黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロ
ホルム－ｄ） δ ｐｐｍ： １．４０ （ｄ， Ｊ＝７．０２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．４５
－ １．５２ （ｍ， ９ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．８７ － ４．９７ （ｍ
， １ Ｈ）， ５．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ５．７７ （ｄ， Ｊ＝１１．４０ Ｈｚ， １
Ｈ）， ６．１０ （ｄｄ， Ｊ＝１１．１８， ９．８７ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９
１．９４％ （２５４．３１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．６０分．

【0263】

工程１０．（Ｚ）－４－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）ペント－２－エ
ン酸（化合物１１ｋ）
化合物１０ｋ（３５０ｍｇ，１．３８３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３５ｍｌ）に溶かした攪
拌溶液に、２９℃のＴＦＡ（３．１７ｍｌ，４１．５０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６時
間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、３０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．２，
ＵＶ活性物質）により監視した。反応終了後、溶媒を減圧下、２５℃で蒸発させて粗生成
物を得た。粗化合物をｎ－ペンタン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、固体残渣を減圧下で乾燥
して化合物１１ｋ（２０２ｍｇ，８７％）を灰白色固体として得た。ＪＪ定常カップリン
グ値により、Ｚ幾何学異性体の形成が確認された。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ： １２．６２ （ｂｒ， １Ｈ）， ６．２５ （ｄｄ， Ｊ＝１１
．１８， ９．８７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．０６ （ｓ， １Ｈ）， ５．８７ （ｄ， Ｊ＝
１１．４０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８０ － ４．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８６ （ｓ
， ３ Ｈ）， １．３２ （ｄ， Ｊ＝７．０２ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９０．０９
％ （１９８．２４， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．５４分．

【0264】

パートＢ：

【化50】

【0265】

工程１．（Ｚ）－Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）－
４－（３－メトキシイソオキサゾール－５－イル）ペント－２－エンアミド（化合物１ｍ
）
化合物８（３００ｍｇ，１．４３５ｍｍｏｌ）、化合物１１ｋ（１７０ｍｇ，０．８６
１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（９２５ｍｇ，７
．１７５ｍｍｏｌ）及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（１．３６ｇ，４．３０５ｍｍ
ｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油
エーテル中、２０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．５，ＵＶ活性物質）により監視した。反応溶
媒を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１００～
２００シリカゲル／溶離剤、石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物
１ｍ（９０ｍｇ，１６％）を無色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，
クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．３７ （ｄｄ， Ｊ＝１７．６１， １０．７６ Ｈｚ
， １ Ｈ） ５．９７ － ６．０７ （ｍ， １ Ｈ） ５．７０ － ５．８１ （ｍ， ２ Ｈ
） ５．６６ （ｓ， １ Ｈ） ５．４６ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．０９ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．
０７ － ５．２２ （ｍ， ２ Ｈ） ４．９６ （ｄ， Ｊ＝１０．７６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３
．９４ （ｄ， Ｊ＝１．９６ Ｈｚ， ４ Ｈ） ３．６８ （ｑ， Ｊ＝６．６８ Ｈｚ， １
Ｈ） ３．５５ （ｔｄ， Ｊ＝７．２１， ２．６９ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．３４ － ２．
４６ （ｍ， １ Ｈ） ２．２５ （ｄｔ， Ｊ＝１５．１６， ７．５８ Ｈｚ， １ Ｈ）
１．９５ （ｑ， Ｊ＝３．４２ Ｈｚ， ２ Ｈ） １．７８ － １．８５ （ｍ， １ Ｈ）
１．７６ （ｓ， ３ Ｈ） １．４１ （ｄｄ， Ｊ＝６．８５， １．９６ Ｈｚ， ３ Ｈ）
１．２１ － １．３０ （ｍ， ２ Ｈ） １．１５ （ｔ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， ３ Ｈ）
１．０２ （ｔ， Ｊ＝７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．７３％ （３８９．
３６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．７１及び２．７４分．

【0266】

工程２．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－８－ヒドロキシ－７－（（１Ｅ
，３Ｅ）－５－（（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－５－（（Ｚ）－４－（３－メトキシイソ
オキサゾール－５－イル）ペント－２－エンアミド）－３，６－ジメチルテトラヒドロ－
２Ｈ－ピラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－１，６－ジオキサ
スピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物５）
化合物１ｍ（７７ｍｇ，０．１９８ｍｍｏｌ）及び化合物９（７７ｍｇ，０．３３７ｍ
ｍｏｌ）をＤＣＭ（８ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、グラブスＩＩ触媒（５０ｍｇ，０．
０５９ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、室温で加えた。反応混合物を４０℃で５時間攪拌
した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、５０％ＥｔＯＡｃ，ＲＦ＝０．１，ＵＶ活
性物質）により監視した。反応混合物をセライトパッドに通して濾過し、ＤＣＭ（２ｍｌ
）で洗浄した。溶媒を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより
精製した［移動相Ａ：１０ｍｍ ＡＢＣ、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－Ｂｒ
ｉｄｇｅ（１５０×１９）ｍｍ，５ｕ；カラム：方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３
０，２０／３０，２０／６０，２０．５，９０，２２／９０；流速：１８ｍｌ／分；溶解
度：ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度］。加え合わせた画分を凍結乾燥して純粋な生成物化
合物５（７．５ｍｇ，６．４％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨ
ｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．３７ （ｄ， Ｊ＝１５．７８ Ｈｚ， １ Ｈ）
６．０２ （ｄｄｄ， Ｊ＝１１．１８， ９．７６， ２．５２ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．６８
－ ５．８０ （ｍ， ２ Ｈ） ５．５７ － ５．６７ （ｍ， ２ Ｈ） ５．５１ （ｂｒ
ｔ， Ｊ＝７．１３ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０６ － ５．２２ （ｍ， １ Ｈ） ４．４３ －
４．５５ （ｍ， １ Ｈ） ４．２０ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．６９ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９
４ （ｄ， Ｊ＝１．７５ Ｈｚ， ４ Ｈ） ３．６１ － ３．７３ （ｍ， ４ Ｈ） ３．４
６ － ３．５７ （ｍ， ２ Ｈ） ２．８７ － ３．０２ （ｍ， ２ Ｈ） ２．６０ － ２
．７４ （ｍ， ２ Ｈ） ２．３３ － ２．４８ （ｍ， ２ Ｈ） ２．２０ － ２．３２
（ｍ， ２ Ｈ） ２．１６ （ｄｄ， Ｊ＝１３．８１， ５．４８ Ｈｚ， １ Ｈ） １．９
０ － １．９８ （ｍ， ２ Ｈ） １．７１ － １．８５ （ｍ， ６ Ｈ） １．４１ （ｄ
ｄ， Ｊ＝７．０２， １．９７ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．１４ （ｔ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ，
３ Ｈ） １．０１ （ｔ， Ｊ＝７．３４ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９０．６５％ （
５８９．１１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ３．９５， ４．０１分．

【0267】

実施例６
メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（２Ｓ，
３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，６－ジメチル－５－（（Ｚ）－４－（５－メチル－１，２，４
－オキサジアゾール－３－イル）ペント－２－エンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン
－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－８－ヒドロキシ－１，６－ジオ
キサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテートの合成（化合物６）

【0268】

パートＡ：

【化51】

【0269】

工程１．エチル ３－（ヒドロキシルアミノ）－３－イミノ－２－メチルプロパノエー
ト（化合物２ｎ）
エチル ２－シアノプロパノエート（化合物１ｎ）（２０ｇ，１５．７ｍｍｏｌ）をＴ
ＨＦ（５００ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＫＯｔＢｕの溶液（３１４ｍｌ，３１．４ｍ
ｍｏｌ，ＴＨＦ中、１Ｍ）を０℃で加えた。１０分後、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２７
ｇ，３９．３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４８時間攪拌した。反応の進行をＴ
ＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．１，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視
した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、残渣を溶離剤としてヘキサン中、４０％酢酸エチ
ルを使用してシリカカラムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化
合物２ｎ（５．５ｇ，２１．８％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ Ｍ
Ｈｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ １．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１５ Ｈｚ， ３ Ｈ），
１．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１５ Ｈｚ， ３ Ｈ ）， ３．１０ － ３．２０ （ｍ， １
Ｈ）， ３．９２ － ４．２３ （ｑ， ２ Ｈ）， ５．３１ － ５．４５ （ｂｒ， ２
Ｈ）；ＬＣＭＳ： ４３．４％ （１６１．１３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ ０．３７分及び４
９．４８％ （１６１．１３， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ ０．４１分．

【0270】

工程２．エチル ２－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロ
パノエート（化合物３ｎ）
化合物２ｎ（５．５ｇ，３４．３ｍｍｏｌ）をピリジン（５０ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、無水酢酸（９．７ｍｌ，１０．３ｍｍｏｌ）を密封した試験管内で室温で加えた。
反応混合物を１２０℃で２４時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％Ｅ
ｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．５，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応混合物を減圧下で
蒸発させ、残渣を溶離剤としてヘキサン中、２０％酢酸エチルを使用してシリカカラムに
より精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化合物３ｎ（４．５ｇ，７１．
４％）を黄色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ）
δ ｐｐｍ １．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０９ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．５８ － １．６２
（ｄ， ３ Ｈ）， ２．６１ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８９ － ４．００ （ｑ， １ Ｈ），
４．１５ － ４．２６ （ｑ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８６．５６％ （１８５．２２，
Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．４８分．

【0271】

工程３．２－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロパン酸（
化合物４ｎ）
化合物３ｎ（４．５ｇ，２４．４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（４５ｍｌ，
４：４：１）に溶かした攪拌溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（４ｇ，９．７ｍｍｏｌ）を０℃
で加え、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０
％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．１，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応混合物を減圧
下で蒸発させ、残渣のｐＨを６Ｎ ＨＣｌ（約１０ｍｌ）を用いて約１に調整した後、酢
酸エチル（２５ｍｌ×２）で抽出した。加え合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４を用いて乾燥
し、減圧下で濃縮して化合物４ｎ（３．５ｇ，９２％）を無色油状物として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ １．４１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２
３ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ２．５７ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８８ － ３．９７ （ｑ， １ Ｈ
）， １２．６５ － １２．８２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９４．３８％ （１
５７．１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．０５分．

【0272】

工程４．Ｎ－メトキシ－Ｎ－メチル－２－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾー
ル－３－イル）プロパンアミド（化合物５ｎ）
化合物４ｎ（３．５ｇ，２２．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍｌ）に溶かした攪拌溶
液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（６．４ｇ，３３．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４．５ｇ，３３．６
ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１１．７ｍｌ，６７．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。１０分
後、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．２ｇ，３３．６ｍｏｌ）を０℃で
加えた。反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０
％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．２，ＫＭｎＯ_４活性物質）により監視した。反応混合物をＤＣ
Ｍ（４０ｍｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｍｌ）で洗浄した。有機層
を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を減圧下で蒸発させて５ｇの粗化合物５ｎ
を得た。粗化合物を、溶離剤としてヘキサン中、４０％酢酸エチルを用いてシリカカラム
により精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化合物５ｎ（２．２ｇ，５０
％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ
ｐｐｍ １．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０３ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ２．６０ （ｓ， ３ Ｈ），
３．２６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．７２ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．３４ － ４．４２ （ｑ，
１ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９６．６５％ （２００．１６， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．２１分
．

【0273】

工程５．２－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロパナール
（化合物６ｎ）
ＬＡＨ（３８０ｍｇ，１０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に化合
物５ｎ（１ｇ，５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２０ｍｌ）を０℃でゆっくりと加えた。反
応混合物を室温で１時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、４０％ＥｔＯＡｃ
、Ｒｆ：０．３，ＫＭｎＯ_４活性及び２，４－ＤＮＰわずかに活性）により監視した。反
応混合物を、０℃の１Ｎ ＨＣｌ（約３ｍｌ）を用いてクエンチし、１０分間攪拌した後
、酢酸エチル（２０ｍｌ）を加えた。反応混合物をセライトパッドに通して濾過した。濾
液を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、体積を減少させて４ｍｌ（約８００ｍｇ，粗生成物
）の化合物６ｎとした。化合物６ｎを更に精製することなく工程６に使用した。ＥＳＭＳ
：４０．４％（１４１．１，Ｍ＋Ｈ），ＲＴ＝２．２４分（粗生成物）；注：^１Ｈ ＮＭ
Ｒは読み取り可能なスペクトルを与えなかった。

【0274】

工程６．メチル（Ｚ）－４－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル
）ペント－２－エノエート（化合物７ｎ）
１８－クラウン－６－エーテル（７．５ｇ，２８．５ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（３０ｍ
ｌ）に溶かした攪拌溶液に、メチル ２－（ビス（２，２，２－トリフルオロエトキシ）
ホスホリル）アセテート（１．３ｍｌ，６．２ｍｍｏｌ）を０℃で加え、次いでＴＨＦ（
６．２ｍｌ，６．２ｍｍｏｌ）中、１Ｍ ＫＨＭＤＳを－７８℃で加えた。反応混合物を
－７８℃に３０分間維持した後、乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）に加えた化合物６ｎ（約８００
ｍｇ）を－７８℃で加えた。反応混合物を室温まで徐々に昇温させ、同じ温度で２時間攪
拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．５，ＫＭｎＯ
_４活性物質）により監視した。反応混合物をＨ_２Ｏ（３０ｍｌ）を用いてクエンチし、酢
酸エチル（５０ｍｌ×２）で抽出した。加え合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、
減圧下で濃縮して６００ｍｇの粗化合物７ｎを得た。粗化合物を、溶離剤としてヘキサン
中、１０％酢酸エチルを用いてシリカカラムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧
下で蒸発させて化合物７ｎ（４２０ｍｇ，ＬＣＭＳによる純度５９％，３７％）を黄色油
状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．
４４ － １．４８ （ｄ， ３ Ｈ）， ２．５７ （ｓ， ３ Ｈ） ３．７４ （ｓ， ３ Ｈ
）， ５．０１ － ５．１０ （ｑ， １ Ｈ）， ５．９２ － ５．８９ （ｄ， Ｊ ＝ １
０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．３５ － ６．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０ Ｈｚ， １ Ｈ）；Ｌ
ＣＭＳ： ５９％ （１９７．２１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．５７分．オレフィン結合の
ＪＪカップリング定数値によりＺ幾何学異性体を確認： １０ Ｈｚ．

【0275】

工程７．（Ｚ）－４－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）ペン
ト－２－エン酸（化合物８ｎ）
化合物７ｎ（５５０ｍｇ，２８ｍｍｏｌ，ＬＣＭＳによる純度８０％）をジオキサン（
１０ｍｌ）及び２Ｎ ＨＣｌ（５ｍｌ）に加えた。反応混合物を５５℃で４８時間加熱し
た。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．１，ＫＭｎＯ_４活
性）により監視した。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣを用いて精製して純粋
な化合物８ｎ（１３８ｍｇ，２８．６％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４０
０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ １．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０２ Ｈｚ， ３
Ｈ）， ２．５５ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．８６ － ５．０８ （ｑ， １ Ｈ）， ５．８４
（ｄｄ， Ｊ ＝ １１．４０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．２４ （ｍ， Ｊ ＝ １０．５２ Ｈｚ
， １ Ｈ）， １１．６４ － １２．９６ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９８．５９
％ （１８３．２１， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．４分．

【0276】

パートＢ：

【化52】

【0277】

工程－１．（Ｚ）－Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（
Ｅ）－３－メチルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）
－４－（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）ペント－２－エンアミ
ド（化合物１ｐ）
化合物８（１５０ｍｇ，０．７１６ｍｍｏｌ）、化合物８ｎ（１３０ｍｇ，０．７１６
ｍｍｏｌ）を２３℃のＴＨＦ（５ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．６５ｍ
ｌ，２．３８５ｍｍｏｌ）及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（０．６８ｍＬ，１．４
３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２３℃で３時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（
ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_ｆ＝０．６，ＵＶ視認）により監視した。反応終了後
、反応混合物を真空下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィ
ー（ヘキサン中、１０→５０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上
で精製して化合物１ｐ（１３０ｍｇ，４８．６８％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．４５－６．３３ （ｍ， １
Ｈ） ６．１７ － ６．１２ （ｍ， １ Ｈ） ６．０７ － ６．０１ （ｍ， １ Ｈ） ５
．８５－５．７９ （ｍ， １Ｈ） ５．４６－５．４５ （ｍ， １Ｈ） ５．１３－５．０
９ （ｍ， １Ｈ） ４．９７－４．８８ （ｍ， １Ｈ） ３．９６ （ｂｒ， １Ｈ） ３．
６８－３．６６ （ｍ， １Ｈ） ３．５５－３．５２ （ｍ， １Ｈ） ２．５６ ９ｓ， ３
Ｈ） ２．３９－２．３５ （ｍ， １Ｈ） ２．２７－２．２１ （ｍ， １Ｈ） ２．０４
－１．９８ （ｍ， １Ｈ） １．９３－１．９０ （ｍ， ２Ｈ） １．８２－１．７６ （
ｍ， ３Ｈ） １．４９－１．４６ （ｍ， ３Ｈ） １．２８－１．２１ （ｍ ５Ｈ） １．
１６－１．１０ （ｍ， ３Ｈ） １．０６－０．９７ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．
９８％ （３７４．４２， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ２．６１分及び２．６３分．

【0278】

工程２．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（
（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，６－ジメチル－５－（（Ｚ）－４－（５－メチル－１
，２，４－オキサジアゾール－３－イル）ペント－２－エンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ
－ピラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエニル）－８－ヒドロキシ－１，
６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物６）
化合物１ｐ（１２０ｍｇ，０．３２１ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に、化合物９（１０９ｍｇ，０．４８１ｍｍｏｌ）及びグラブスＩＩ触媒（
８１ｍｇ，０．０９６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を４０℃で５時間
攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_Ｆ＝０．１，ＵＶ視
認）により監視した。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（５ｍｌ）で洗浄し
、濾液を減圧下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した［移動
相Ａ：１０ｍｍ ＡＢＣ、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ（１５
０×１９）ｍｍ，５ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３０，２０／６０，２０．
５０／９０，２２／９０；流速：１８ｍｌ／分；溶解度：ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度
］。回収された画分を凍結乾燥して化合物６（５ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．３１ － ６．４４ （ｍ，
１ Ｈ） ５．９９ － ６．１９ （ｍ， ２ Ｈ） ５．７７ － ５．８９ （ｍ， １ Ｈ）
５．６３ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝１５．８９， ６．２５ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．４５ － ５．
５６ （ｍ， １ Ｈ） ５．０２ － ５．１７ （ｍ， １ Ｈ） ４．８３ － ４．９６ （
ｍ， １ Ｈ） ４．４４ － ４．５４ （ｍ， １ Ｈ） ４．２０ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．６
９ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９０ － ４．０２ （ｍ， １ Ｈ） ３．６１ － ３．７７ （ｍ
， ４ Ｈ） ３．４４ － ３．５８ （ｍ， ３ Ｈ） ２．８８ － ３．０２ （ｍ， ２ Ｈ
） ２．６１ － ２．７６ （ｍ， ２ Ｈ） ２．５６ （ｓ， ３ Ｈ） ２．３８ （ｔｄ，
Ｊ＝１４．８５， ７．３４ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．１２ － ２．２９ （ｍ， ２ Ｈ） １
．８７ － ２．０４ （ｍ， ３ Ｈ） １．７０ － １．８４ （ｍ， ５ Ｈ） １．４８
（ｄｄ， Ｊ＝６．９１， ４．７１ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．０８ － １．２０ （ｍ， ３
Ｈ） ０．９４ － １．０７ （ｍ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９６．４３％ （５７４．１５
， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ３．５９分及び３．６４分．

【0279】

実施例７
メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（２Ｓ，
３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，６－ジメチル－５－（（Ｚ）－４－メチル－５－（（３－メチ
ルオキセタン－３－イル）オキシ）ペント－２－エンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラ
ン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－８－ヒドロキシ－１
，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物７）の合成

【0280】

パートＡ：

【化53】

【0281】

工程１．３－メチルオキセタン－３－オール（化合物２ｑ）
オキセタン－３－オン（化合物２ｑ）（２５ｇ，３４６．９ｍｍｏｌ）を乾燥ジエチル
エーテル（１．２５ｌ）に溶かした攪拌溶液に、ジエチルエーテル（１２７．２ｍＬ，３
８１．６ｍｍｏｌ）中、３Ｍメチルマグネシウムブロミドを０℃で２時間かけて滴下した
。反応物を０℃で２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、４０％ＥｔＯＡｃ
；Ｒｆ：０．２，ＰＭＡ活性）により監視した。反応物を０℃の飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（約
１Ｌ）を用いて１時間かけてゆっくりとクエンチした。有機層を分離し、再び水層をＤＣ
Ｍ中、１０％ＭｅＯＨ（２００ｍｌ×５）で抽出した。加え合わせた有機層を無水Ｎａ_２
ＳＯ_４で乾燥し、２０℃で減圧下で蒸発させて化合物２ｑ（１６ｇ，５２％）を橙色油状
物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ１．３８
－ １．４０ （ｓ， ３ Ｈ） ４．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．
４３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．９２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５．５０ （ｓ， １ Ｈ）；ＧＣＭＳ ＝
９８．８７％．

【0282】

工程２．エチル ２－（（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）メチル）アク
リレート（化合物４ｑ）
化合物２ｑ（１０．５ｇ，１１９．１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２０ｍＬ）に溶かした
攪拌溶液にＮａＨ（５．７２ｇ，２３８．３３ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ加えた。反応
混合物を０℃で３０分攪拌した後、化合物３ｑ（２３ｇ，１１９．１６ｍｍｏｌ）を０℃
で加え、室温で２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、１０％ＥｔＯＡｃ，
Ｒｆ：０．５，ＵＶ及びＰＭＡ活性）により監視した。反応混合物を氷冷水（１２０ｍｌ
）を用いてクエンチし、ジエチルエーテル（１００ｍｌ×３）を用いて抽出した。加え合
わせた有機層を冷水（１００ｍｌ×３）で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。有機層を減圧下で蒸発させ、残渣を溶離剤としてヘキサン中、１０％酢酸
エチルを使用してシリカカラムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させ
て化合物４ｑ（７ｇ，２９％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ
， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １．２９ － １．３４ （ｔ， ３ Ｈ）， １．５８
－ １．６０ （ｓ， ３ Ｈ）， ４．１３ （ｓ， Ｊ ＝ １．６７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４
．２０ － ４．２７ （ｑ， ２ Ｈ）， ４．３７ － ４．４０ （ｄ， ２ Ｈ）， ４．７
３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５．９３ （ｓ， １ Ｈ） ６．３２ （ｓ
， Ｊ ＝ １．５５ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ７１．７９％ （２０１．２３， Ｍ＋
Ｈ）， ＲＴ ＝ １．５７分．

【0283】

工程３．エチル ２－メチル－３－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）プ
ロパノエート（化合物５ｑ）
化合物４ｑ（７ｇ，３５ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に
窒素下で１０％Ｐｄ／Ｃ（２ｇ）を加えた。反応混合物を水素ブラダー（約２０ｐｓｉ）
を使用して水素雰囲気下、室温で４８時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、
１０％ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ：０．５，ＰＭＡ活性物質）により監視した。反応混合物をセラ
イトベッドに通して濾過し、酢酸エチル（２００ｍｌ×２）で洗浄した。反応混和物を減
圧下で蒸発させて化合物５ｑ（６ｇ，８４％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （
４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ０．９９ － １．１３ （ｄ， ３ Ｈ），
１．１４ － １．２６ （ｔ， ３ Ｈ）， １．３２ － １．４４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２
．５７ － ２．６７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．３４ － ３．４７ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０
０ － ４．１４ （ｑ， ２ Ｈ）， ４．２２ － ４．２８ （ｄ， ２ Ｈ）， ４．４０
－ ４．４８ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８５．８９％ （２０３．２， Ｍ＋Ｈ）， Ｒ
Ｔ ＝ ２．７２分．

【0284】

工程４．２－メチル－３－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）プロパン－
１－オール（化合物６ｑ）
化合物５ｑ（１ｇ，４．９５ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液
にＬＡＨ（２８２ｍｇ，７．４２ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を室温で１６時間攪拌
した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．２，ＫＭｎＯ_４
活性）により監視した。反応混合物を氷冷水（２０ｍｌ）を用いて０℃でクエンチし、室
温で１時間攪拌した。反応混合物をセライトベッドに通して濾過し、ＤＣＭ中、１０％Ｍ
ｅＯＨ（２０ｍｌ×５）で洗浄した。生成物をＤＣＭ中、１０％ＭｅＯＨ（２０ｍｌ×７
）を用いて母液から抽出した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧
下で蒸発させて粗化合物６ｑ（７００ｍｇ，８８％）を無色油状物として得た。^１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ０．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８０
Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．４３ （ｓ， ３ Ｈ）， １．６６ － １．７６ （ｍ， １ Ｈ）
， ３．１１ － ３．３９ （ｍ， ５ Ｈ）， ４．２３ － ４．２６ （ｄ， ２ Ｈ），
４．３７ － ４．４１ （ｔ， １ Ｈ）， ４．４６ － ４．５０ （ｄ， ２ Ｈ）．

【0285】

工程５．２－メチル－３－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）プロパナー
ル（化合物７ｑ）
化合物６ｑ（５００ｍｇ，３．１２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶
液にデス－マーチンペルヨージナン（ＤＭＰ）（１．７２ｇ，４．０６ｍｍｏｌ）を０℃
で加え、室温で２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、３０％ＥｔＯＡｃ、
Ｒｆ：０．６，２，４－ＤＮＰ及びＫＭｎＯ_４活性）により監視した。反応混合物を飽和
ＮａＨＣＯ_３溶液（約２０ｍｌ）を用いてクエンチし、セライトベッドに通して濾過し、
ジクロロメタン（３０ｍｌ×２）で洗浄した。生成物をジクロロメタン（２０ｍｌ×２）
を用いて母液から抽出した。加え合わせた有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧
下で蒸発させた。残基物を溶離剤としてヘキサン中、１５％酢酸エチルを用いてシリカカ
ラムにより精製した。純粋な画分を回収し、減圧下で蒸発させて化合物７ｑ（２７０ｍｇ
，５４％）を無色ゴム状化合物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホル
ム－ｄ） δ ｐｐｍ １．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．１９ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．５４ （ｓ
， ３ Ｈ）， ２．４８ － ２．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．４４ － ３．６２ （ｍ，
２ Ｈ）， ４．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．５７ － ４．７５
（ｄ， ２ Ｈ）， ９．６０ － ９．８０ （ｓ， １ Ｈ）．

【0286】

工程６．メチル（Ｚ）－４－メチル－５－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキ
シ）ペント－２－エノエート（化合物８ｑ）
１８－クラウン－６－エーテル（２．２７ｇ，８．５４ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０
ｍｌ）に溶かした攪拌溶液に、メチル ２－（ビス（２，２，２－トリフルオロエトキシ
）ホスホリル）アセテート（５９７ｍｇ，１．８７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた後、ＴＨＦ
（１．７ｍｌ，１．７０ｍｍｏｌ）中、１Ｍ ＫＨＭＤＳを－７８℃で加えた。反応混合
物を－７８℃に３０分間維持し、次いで乾燥ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶かした化合物７ｑ（２
７０ｍｇ，１．７０ｍｍｏｌ）を－７８℃で加え、反応混合物を１．５時間で徐々に室温
にまで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、２０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．５
，ＫＭｎＯ_４活性）により監視した。反応混合物を氷冷水（１０ｍｌ）を用いてクエンチ
し、酢酸エチル（１０ｍｌ×２）中で抽出した。加え合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾
燥し、減圧下で蒸発させて６００ｍｇの粗化合物７ｑを得た。粗化合物を、溶離剤として
ヘキサン中、８％酢酸エチルを用いてシリカカラムにより精製した。純粋な画分を回収し
、減圧下で蒸発させて化合物７ｑ（１７０ｍｇ，４６％）を無色油状物として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．
６０ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３８ （ｓ， ３ Ｈ） ３．２５ （ｍ， Ｊ ＝ ６．４２，
２．０２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．４５ － ３．６８ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．２４ （ｄ，
Ｊ＝６．６０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．４７ （ｍ， Ｊ ＝ ５．６９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５
．７８ － ５．８７ （ｄ， １ Ｈ）， ６．１４ － ６．２４ （ｄｄ， １ Ｈ）；ＬＣ
ＭＳ： ７２％ （２１５．４， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ ＝ １．６８分．

【0287】

工程７．（Ｚ）－４－メチル－５－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）ペ
ント－２－エン酸（化合物９ｑ）
化合物７ｑ（１７０ｍｇ，０．７９４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍｌ）及びＨ_２Ｏ（０．
５ｍｌ）に溶かした攪拌溶液にＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（１００ｍｇ，２．３８ｍｍｏｌ）を室
温で加えた。反応混合物を室温で７２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、
７０％ＥｔＯＡｃ；Ｒｆ：０．２，ＫＭｎＯ_４活性）により監視した。反応混合物を減圧
下で蒸発させ、水（１０ｍｌ）で希釈し、ＤＣＭ中、１０％ＭｅＯＨ（５ｍｌ×１０）で
洗浄した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌを用いて酸性化してｐＨ約２に調整した。粗生成
物をＤＣＭ中、１０％ＭｅＯＨ（１０ｍｌ×３）を用いて抽出した。有機層を分離し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で蒸発させて化合物９ｑ（１１９ｍｇ，７５％）を無
色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ０
．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８０ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．４３ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．２４
（ｄ， Ｊ ＝ ６．３６ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．５１ － ３．６５ （ｍ， １ Ｈ）， ４
．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３６ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８１ Ｈ
ｚ， ２ Ｈ）， ５．７１ － ５．７４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２， ０．７７ Ｈｚ， １ Ｈ
） ６．０６ － ６．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０， ９．７６ Ｈｚ， １ Ｈ）． １２．１
２ － １２．３３ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）；ＥＬＳＤ： ９８．４７％ （２０１．１， Ｍ
＋Ｈ）， ＲＴ ＝ ２．４４分． オレフィン結合のＪＪカップリング定数値によりＺ幾何
学異性体を確認： Ｊ＝１２， １０ Ｈｚ．

【0288】

パートＢ：

【化54】

【0289】

工程１．（Ｚ）－Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－
イル）－４－メチル－５－（（３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）ペント－２－
エンアミド（化合物１ｒ）
化合物８（１００ｍｇ，０．４７７ｍｍｏｌ）、（Ｚ）－４－メチル－５－（（３－メ
チルオキセタン－３－イル）オキシ）ペント－２－エン酸（化合物１ｑ）（９５ｍｇ，０
．４７７ｍｍｏｌ）を２３℃のＴＨＦ（５ＭＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（０
．４３ｍＬ，２．３８５ｍｍｏｌ）及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（０．４５ｍＬ
，１．４３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応の進行をＴ
ＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_ｆ＝０．５，ＵＶ視認）により監視した。反応
終了後、反応混合物を真空下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグ
ラフィー（ヘキサン中、１０→５０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシ
ュ）上で精製して化合物１ｒ（７５ｍｇ，４０．１０％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．３７ （ｄｄ， Ｊ＝１
７．３８， １０．５２ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．０３ － ６．１７ （ｍ， １ Ｈ） ５．６
８ － ５．８５ （ｍ， ２ Ｈ） ５．４６ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．１４ Ｈｚ， １ Ｈ）
５．１１ （ｄ， Ｊ＝１７．４４ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．９６ （ｄ， Ｊ＝１０．６８ Ｈ
ｚ， １ Ｈ） ４．６１ － ４．７５ （ｍ， ２ Ｈ） ４．２８ － ４．３７ （ｍ， ２
Ｈ） ３．８５ － ４．０５ （ｍ， １ Ｈ） ３．４７ － ３．７３ （ｍ， ４ Ｈ） ３
．３３ － ３．４２ （ｍ， １ Ｈ） ３．１４ － ３．２５ （ｍ， １ Ｈ） ２．３２
－ ２．４５ （ｍ， １ Ｈ） ２．１９ － ２．３０ （ｍ， １ Ｈ） １．８７ － ２．
０７ （ｍ， ３ Ｈ） １．４９ － １．６４ （ｍ， １２ Ｈ） １．２４ － １．３２
（ｍ， ３ Ｈ） １．１６ － １．２２ （ｍ， ２ Ｈ） １．１０ － １．１５ （ｍ，
２ Ｈ） １．０５ （ｔｄ， Ｊ＝４．８２， ２．２３ Ｈｚ， ５ Ｈ） ０．９９ （ｄ，
Ｊ＝７．３０ Ｈｚ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８９．５５％ （３９２．１３， Ｍ＋Ｈ）
， ＲＴ： ２．２１分．

【0290】

工程２．メチル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）－７－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（
（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，６－ジメチル－５－（（Ｚ）－４－メチル－５－（（
３－メチルオキセタン－３－イル）オキシ）ペント－２－エンアミド）テトラヒドロ－２
Ｈ－ピラン－２－イル）－３－メチルペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－８－ヒドロ
キシ－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル）アセテート（化合物７）
化合物１ｒ（７０ｍｇ，０．１７８ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶かし
た攪拌溶液に、窒素雰囲気下で化合物９（６１ｍｇ，０．２６８ｍｍｏｌ）及びグラブス
ＩＩ触媒（４５ｍｇ，０．０５３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で５時間攪拌
した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_Ｆ＝０．１，ＵＶ視認）
により監視した。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（５ｍｌ）で洗浄し、濾
液を減圧下で濃縮して粗化合物を得た。粗残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した［移動相Ａ
：１０ｍｍ ＡＢＣ、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ（１５０×
１９）ｍｍ，５ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：０／３０，２／３０，２０／６０，２０．５０
／９０，２２／９０；流速：１８ｍｌ／分；溶解度：ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度］。
回収された画分を凍結乾燥して化合物７（３．５ｍｇ）を白色固体として得た。^１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ｐｐｍ ７．５７ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝１
２．３９， ８．００ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１５．７８ Ｈｚ， １
Ｈ） ５．９９ － ６．０８ （ｍ， １ Ｈ） ５．６８ － ５．７８ （ｍ， １ Ｈ） ５
．５８ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝１６．００， ５．０４ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．５２ （ｂｒ ｔ
， Ｊ＝６．９１ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．９２ Ｈｚ， １ Ｈ）
４．４４ － ４．５３ （ｍ， ２ Ｈ） ４．１９ － ４．３２ （ｍ， ４ Ｈ） ３．７７
（ｄｄｔ， Ｊ＝１５．６５， １２．９１， ６．５５， ６．５５ Ｈｚ， １ Ｈ） ３
．６５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．９２ Ｈｚ， ２ Ｈ） ３．６０ （ｓ， ３ Ｈ） ３．４６
－ ３．５４ （ｍ， １ Ｈ） ３．２３ － ３．２７ （ｍ， ３ Ｈ） ３．２０ （ｄｄ，
Ｊ＝６．２５， ２．５２ Ｈｚ， ２ Ｈ） ２．７６ （ｄ， Ｊ＝５．２６ Ｈｚ， １
Ｈ） ２．６７ （ｄｔ， Ｊ＝４．００， ２．２７ Ｈｚ， ３ Ｈ） ２．５８ － ２．６
５ （ｍ， １ Ｈ） ２．１５ － ２．３６ （ｍ， ３ Ｈ） １．７７ － １．９１ （ｍ
， ２ Ｈ） １．７０ （ｓ， ３ Ｈ） １．６５ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝６．４７， ３．４
０ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．５３ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ＝１２．９３， ３．７３ Ｈｚ， １ Ｈ
） １．４２ （ｓ， ３ Ｈ） １．０３ － １．１１ （ｍ， ３ Ｈ） ０．９１ － ０．
９９ （ｍ， ６ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９５．８１％ （５９２．２４， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ：
３．７２分及び３．７４分．

【0291】

実施例８
（Ｚ）－５－（（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－（（３Ｒ
，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－７－（２－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ
）－２－オキソエチル）－４－ヒドロキシ－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン
－５－イル）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）－２，５－ジメチルテト
ラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アミノ）－５－オキソペンタ－３－エン－２－イル
４－フルオロベンゾエート（化合物１０）の合成

【0292】

パートＡ：

【化55】

【0293】

工程１．（Ｚ）－５－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－２，５－ジメチル－６－（（Ｅ
）－３－メチルペンタ－２，４－ジエニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルアミ
ノ）－５－オキソペンタ－３－エン－２－イル ４－フルオロベンゾエート（化合物１ｆ
）
室温の化合物８（４００ｍｇ，１．９１ｍｍｏｌｅ）の攪拌溶液に、ＴＨＦ（１２ｍｌ
）に溶かした化合物４ｅ（２７３ｍｇ，１．１４ｍｍｏｌｅ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ
，９．５５ｍｍｏｌｅ）、及びＴ_３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中、５０％）（１．８２ｇ）を室温で
加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（石油エーテル中、３
０％ＥｔＯＡｃ，Ｒ_Ｆ＝０．２，ＰＭＡ活性）により監視した。反応混合物を減圧下で濃
縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１００～２００シリカゲ
ル／溶離剤、石油エーテル中、１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して化合物１ｆ（２２０ｍ
ｇ）を無色ゴム状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ）
δ ｐｐｍ ０．９９ － １．０８ （ｍ， ３ Ｈ） １．１１ － １．２０ （ｍ， ３ Ｈ
） １．３６ － １．４４ （ｍ， ３ Ｈ） １．４７ － １．５５ （ｍ， ５ Ｈ） １．
６９ － １．８５ （ｍ， ４ Ｈ） １．８９ － ２．０３ （ｍ， ２ Ｈ） ２．１９ －
２．３２ （ｍ， １ Ｈ） ２．３４ － ２．４９ （ｍ， １ Ｈ） ３．４９ － ３．５９
（ｍ， １ Ｈ） ３．６２ － ３．７５ （ｍ， １ Ｈ） ３．９１ － ４．０４ （ｍ，
１ Ｈ） ４．８７ － ５．０１ （ｍ， １ Ｈ） ５．１１ （ｄ， Ｊ＝１７．４４ Ｈｚ
， １ Ｈ） ５．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．８１ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．７６ （ｄｄｄ，
Ｊ＝１１．６１， ５．９４， １．２０ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．８８ － ６．０９ （ｍ，
２ Ｈ） ６．１８ － ６．５８ （ｍ， ３ Ｈ） ７．０５ － ７．１６ （ｍ， ２ Ｈ）
７．９９ － ８．１０ （ｍ， ２ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ８７．８％ （４３０．０７， Ｍ＋
Ｈ）， ＲＴ： ２．５０分及び２．５２分．

【0294】

パートＢ：

【化56】

【0295】

工程１．２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－ヒドロキシ－４－メチレン－６－ビニルテ
トラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）酢酸（化合物１ｓ）
化合物８ｃ（６００ｍｇ，２．８３ｍｍｏｌ）を２３℃のＴＨＦ（９ｍＬ）及び水（１
ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に水酸化リチウム一水和物（１７８ｍｇ，４．２４ｍｍｏｌ）
を加えた。反応混合物を２３℃で１６時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中、１
０％ＭｅＯＨ；Ｒ_Ｆ：０．１，ＰＭＡ視認）により監視した。反応終了後、ＴＨＦを減圧
下で蒸発させた。得られた残渣を飽和クエン酸で酸性化し、ＤＣＭ中、１０％ＭｅＯＨ（
３×５０ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して化合
物１ｓ（２００ｍｇ）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳ
Ｏ－ｄ_６） δ ｐｐｍ １２．１５ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ５．８７ （ｄｄｄ， Ｊ＝１７
．３３， １０．７３， ４．９５ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．１１ － ５．３１ （ｍ， ３ Ｈ
） ５．０５ （ｓ， １ Ｈ） ４．８３ （ｓ， １ Ｈ） ４．１４ － ４．２６ （ｍ，
１ Ｈ） ３．８３ － ３．９４ （ｍ， １ Ｈ） ３．６８ （ｔ， Ｊ＝６．２４ Ｈｚ，
１ Ｈ） ３．１７ （ｄ， Ｊ＝５．１４ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．４３ （ｄｄ， Ｊ＝６．９
７， ４．０３ Ｈｚ， ２ Ｈ） ２．２０ － ２．３８ （ｍ， ２ Ｈ）．

【0296】

工程２．２，５－ジオキソピロリジン－１－イル ２－（（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－５－
ヒドロキシ－４－メチレン－６－ビニルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセテ
ート（化合物２ｓ）
化合物１ｓ（２００ｍｇ，１．００８ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシピロリジン－２，
５－ジオン（１７４ｍｇ，１．５１３ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かし
た攪拌溶液に、ＥＤＣ塩酸塩（２８９ｍｇ，１．５１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２
３℃で１２時間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＴＬＣシステム：ヘキサン中、５０％Ｅ
ｔＯＡｃ；Ｒ_ｆ＝０．４，ＰＭＡ視認）により監視した。反応終了後、溶媒を減圧下で濃
縮して粗生成物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、２０～５
０％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物２ｓ（１
８０ｇ，６０．６０％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロ
ロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ５．８７ （ｄｄｄ， Ｊ＝１７．４４， １０．７９， ５．
９９ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．３１ － ５．４４ （ｍ， ２ Ｈ） ５．１５ （ｓ， １ Ｈ）
５．０２ （ｄ， Ｊ＝０．９８ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．３７ （ｑｄ， Ｊ＝６．６８， ４
．３６ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．１４ － ４．２２ （ｍ， １ Ｈ） ３．９６ （ｔ， Ｊ＝５
．３４ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．８９ （ｄｄ， Ｊ＝６．５４， ３．２７ Ｈｚ， ２ Ｈ）
２．７９ － ２．８６ （ｍ， ４ Ｈ） ２．５１ － ２．５９ （ｍ， １ Ｈ） ２．３９
－ ２．４８ （ｍ， １ Ｈ） ２．３０ （ｄ， Ｊ＝５．９９ Ｈｚ， １ Ｈ）；ＬＣＭ
Ｓ： ７９．１０％ （２９６．０９， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： １．３７分．

【0297】

工程３．２，５－ジオキソピロリジン－１－イル ２－（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）
－８－ヒドロキシ－７－ビニル－１，６－ジオキサスピロ［２．５］オクタン－５－イル
）アセテート（化合物３ｓ）
化合物２ｓ（１８０ｍｇ，０．６０９ｍｍｏｌ）を－２０℃のＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶
かした溶液に、バナジルアセチルアセトナート（１６ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）及びｔ
ｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）（デカン中、５．５Ｍ）（０．２２ｍＬ
）を加えた。次いで、得られた混合物を０℃まで昇温させ、２時間攪拌した。２時間後、
反応混合物を２３℃まで昇温し、１８時間攪拌した。ＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯ
Ａｃ，Ｒ_ｆ＝０．２，ＰＭＡ視認）により反応終了が確認された後、溶媒を減圧下で濃縮
して粗生成物を得た。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中、３０～６０
％ＥｔＯＡｃ）によりシリカ（１００～２００メッシュ）上で精製して化合物３ｓ（１１
０ｍｇ，５８．２０％）を淡黄色液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロ
ロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ６．００ （ｓ， １ Ｈ） ５．４４ （ｄｔ， Ｊ＝１７．４
１， １．５４ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．３１ － ５．３６ （ｍ， １ Ｈ） ４．５１ － ４
．５９ （ｍ， １ Ｈ） ４．２０ － ４．２７ （ｍ， １ Ｈ） ３．４８ － ３．５５
（ｍ， １ Ｈ） ３．１０ － ３．２０ （ｍ， １ Ｈ） ２．９６ － ３．０６ （ｍ，
２ Ｈ） ２．７９ － ２．９０ （ｍ， ６ Ｈ） ２．７０ （ｄ， Ｊ＝４．４７ Ｈｚ，
１ Ｈ） ２．０５ （ｔ， Ｊ＝２．３４ Ｈｚ， １ Ｈ） １．９０ － ２．０１ （ｍ，
２ Ｈ）．

【0298】

工程４．（Ｚ）－５－（（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－６－（（２Ｅ，４Ｅ）－５－
（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）－７－（２－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル
）オキシ）－２－オキソエチル）－４－ヒドロキシ－１，６－ジオキサスピロ［２．５］
オクタン－５－イル）－３－メチルペンタ－２，４－ジエン－１－イル）－２，５－ジメ
チルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アミノ）－５－オキソペンタ－３－エン－
２－イル ４－フルオロベンゾエート（化合物１０）
化合物１ｆ（１００ｍｇ，０．２３３ｍｍｏｌ）を２３℃のＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶か
した攪拌溶液に、窒素雰囲気下で化合物３ｓ（１０８ｍｇ，０．５０２ｍｍｏｌ）及びグ
ラブスＩＩ触媒（５９ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で６時
間攪拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中、５０％ＥｔＯＡｃ；Ｒ_Ｆ＝０．１，ＵＶ
視認）により監視した。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭ（５ｍｌ）で洗浄
した。濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。ＬＣＭＳ分析により、所望の生成物が収
率１５％で未反応の化合物１ｆとともに示された。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し
た。回収された画分を凍結乾燥して化合物１０（１１ｍｇ）を白色固体として得た（収率
７％）。生成物を分取ＨＰＬＣによりジアステレオマーの混合物として単離した［移動相
Ａ：０．１％葉酸、移動相Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｓｙｎｅｒｇｙ ｐｏｌａｒ（
２５０×２１．２）ｍｍ，４ｕ；方法：（Ｔ／％Ｂ）：６５：３５（イソクラチック）；
流速：１８ｍｌ／分；溶解度：ＡＣＮ＋ＴＨＦ＋水；周囲温度］。^１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ８．０５ （ｄｄｄ， Ｊ＝８．６０， ５．６
５， ２．４１ Ｈｚ， ２ Ｈ） ７．１０ （ｔ， Ｊ＝８．５５ Ｈｚ， ２ Ｈ） ６．３
６ － ６．５８ （ｍ， ２ Ｈ） ５．９１ － ６．０８ （ｍ， ２ Ｈ） ５．７６ （ｄ
ｄ， Ｊ＝１１．６２， ５．４８ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．６４ （ｄｄ， Ｊ＝１５．７８，
５．９２ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．５４ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ４．４８ － ４．６０ （ｍ
， １ Ｈ） ４．２３ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９８ （ｂｒ ｄｄ
， Ｊ＝５．２６， ２．８５ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．６８ （ｑ， Ｊ＝６．２８ Ｈｚ， １
Ｈ） ３．５４ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．６７ Ｈｚ， ２ Ｈ） ３．０２ － ３．２０ （ｍ
， ２ Ｈ） ２．９９ （ｄ， Ｊ＝４．６０ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．７５ － ２．９０ （ｍ
， ４ Ｈ） ２．６９ （ｄ， Ｊ＝４．６０ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．３４ － ２．４８ （ｍ
， １ Ｈ） ２．１１ － ２．３１ （ｍ， ２ Ｈ） １．８６ － ２．０５ （ｍ， ４ Ｈ
） １．７３ － １．８４ （ｍ， ４ Ｈ） １．５３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝６．５８ Ｈｚ，
３ Ｈ） １．１７ （ｔ， Ｊ＝６．１４ Ｈｚ， ３ Ｈ） １．０４ （ｔ， Ｊ＝７．５６
Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ： ９６．５８％ （７１３．２７， Ｍ＋Ｈ）， ＲＴ： ４．
６３分及び４．６７分．

【0299】

実施例９
トラスツズマブ抗体とのＡＤＣである化合物１１、及びパリビズマブ抗体とのＡＤＣで
ある化合物１２の合成

【化57】

【0300】

化合物１０をトラスツズマブと結合させたものである化合物１１、及び化合物１０をパ
リビズマブと結合させたものである化合物１２を、Ａｒｌｏｔｔａ， ｅｔ ａｌ．（Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０１８，７（１）：６）より適用した手順で合成した。２１ｍｇ
の市販のトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｙｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｈｙｄｅ Ｐａｒｋ，Ｎ
Ｙ）及び５ｍｇのパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ；Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｙｅｒｓ Ｉｎｃ．）を元の製造業者の添付文書に記
載の製剤として濃度３ｍｇ／ｍＬで調製し、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ（商標）透析装
置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用
してコンジュゲーションバッファー［（５０ｍＭホウ酸塩）（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ，Ｈ
ａｖｅｒｉｌｌ，ＭＡ）、５０ｍＭ ＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）
、２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ）、ｐＨ８．５］中に透析した。ジメチルアセトアミド
（ＤＭＡ；ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，Ｃａ）を各製剤に加え
て全有機含有量を１０％ｖ／ｖとした。次いで各抗体をＤＭＡ中、２０ｍＭのストックか
らの８モル当量の化合物１０と反応させた。コンジュゲーション反応液を、室温で２時間
、シェーカーのテーブル上でインキュベートした。未反応の化合物１０をクエンチするた
め、８０モル当量のＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ；Ｓｉｇｍａ）を加え、室温で振盪
しながら１時間インキュベートした。ＡＤＣを精製し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）ＰＤ－
１０ Ｇ－２５脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ ）を
使用してバッファーを保存バッファー［１０ｍＭ ヒスチジン（ＶＷＲ）、５０ｍＭ ト
レハロース（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ），ｐＨ ６．０］に
交換した。ＡＤＣの最終的な回収率及び濃度を、ＵＶ／Ｖｉｓ分光測光法（４ｍＬの５．
０ｍｇ／ｍＬの化合物１１；３．２ｍＬの１．１ｍｇ／ｍＬの化合物１２）を用いて決定
した。薬物抗体比（ＤＡＲ）をＵＶ／Ｖｉｓ分光測光法により決定し、ＬＣ－ＭＳ質量シ
フト（化合物１１について３．５、化合物１２について２．８）を用いて確認した。Ｓｕ
ｐｅｒｄｅｘ（登録商標）Ｉｎｃｒｅａｓｅ ５／１５０ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌ
ｔｈｃａｒｅ）でサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて各ＡＤＣについて凝
集分析を行ってモノマー種の完全性を確保した（化合物１１について＞９８％、化合物１
２について＞９９％）。各ＡＤＣのエンドトキシン含有量は、ＴｏｘｉｎＳｅｎｓｏｒ（
商標）Ｇｅｌ Ｃｌｏｔ Ａｓｓａｙ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ，Ｇ
ｒａｎｄ Ｃａｙｍａｎ，Ｃａｙｍａｎ Ｉｓｌａｎｄｓ）を用いて≦１ＥＵ／ｍＬと確
認された。

【0301】

同様の手順に従って、リシン残基とのアミド結合が薬物複合体を形成した、開示される
発明の更なるＡＤＣを合成した。異なる毒素で化合物２を置き換え、アミド以外のリンカ
ーを用いてＡＤＣを作製することもできる。更に、標的とするがん細胞に応じてトラスツ
ズマブ及びパリビズマブ以外の抗体に置換することもできる。

【0302】

実施例１０
インビトロ細胞アッセイ
１日目に、所定の細胞数／ウェルで培地中に、がん細胞株ＳＫＢＲ３、ＨＣＣ１９５４
、ＭＣＦ７、及びＭＤＡＭＢ２３１とともに９６ウェルプレートを播種する。各細胞株に
ついてタイランスタチンＡを毒性の陽性対照試験化合物として用い、希釈剤のみを陰性対
照として用いる。各プレートを３７℃の加湿したＣＯ_２インキュベーター中で２０時間イ
ンキュベートした。２日目に試験する各試験化合物の希釈液を調製する。各試料の初期の
ワーキングストックを適当な培地中で調製する。次いで、培地中、１／３の連続希釈液を
各試験化合物について調製する。５ｕｌの希釈液を約１００ｕｌの細胞の各ウェルに加え
る。最終試料濃度は、ｎＭ～ｐＭの範囲とする（１／３の連続希釈液として）。すべての
試料について二重／または三重のデータポイントを得る。Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇの列の
ウェルを用いてプレート当たり３つ／２つの試料を調製する。次いで、各プレートを３７
℃の加湿したＣＯ_２インキュベーター中で７２時間インキュベートする。

【0303】

５日目に、以下の手順を用いてＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）試薬を使用
して細胞生存率を読み取る。培地を９６ウェルプレートから吸引する。１００ｕｌのＣｅ
ｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏ
ｎ，ＷＩ）を各ウェルに加える。各プレートを室温で１０分間インキュベートする。生じ
た発光をＴｅｃａｎ Ｕｌｔｒａ（登録商標）プレートリーダーを使用して読み取る。

【0304】

得られたデータを分析し、濃度（ｎＭ）に対する生存率（％）としてプロットする。得
られた曲線を非線形回帰を用いてフィッティングする。各試験化合物のＩＣ_５０を計算し
、表にする。

【0305】

本発明の化合物の毒性は、上記のアッセイで以下のがん細胞株を用いて同様にして調べ
ることもできる。すなわち、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＨＬ－６０（ＴＢ）、Ｋ－５６２、ＭＯ
ＬＴ－４、ＲＰＭＩ－８２２６、及びＳＲを含む白血病細胞株；Ａ５４９／ＡＴＣＣ、Ｅ
ＫＶＸ、ＨＯＰ－６２、ＨＯＰ－９２、ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＮＣＩ－Ｈ２３、ＮＣＩ－Ｈ
３２２Ｍ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、及びＮＣＩ－Ｈ５２２を含む非小細胞肺癌細胞株；ＣＯＬ
Ｏ２０５、ＨＣＣ－２９９８、ＨＣＴ－１１６、ＨＣＴ－１５、ＨＴ２９、ＫＭ１２、及
びＳＷ－６２０を含む大腸癌細胞株；ＳＦ－２６８、ＳＦ－５３９、ＳＮＢ－１９、ＳＮ
Ｂ－７５、及びＵ２５１を含むＣＮＳ癌細胞株；ＬＯＸ ＩＭＶＩ、ＭＡＬＭＥ－３Ｍ、
Ｍ１４、ＳＫ－ＭＥＬ－２、ＳＫ－ＭＥＬ－２８、ＳＫ－ＭＥＬ－５、ＵＡＣＣ－２５７
、及びＵＡＣＣ－６２を含むメラノーマ癌細胞株；ＩＧＲＯＶ１、ＯＶＣＡＲ－３、ＯＶ
ＣＡＲ－４、ＯＶＣＡＲ－５、ＯＶＣＡＲ－８、及びＳＫ－ＯＶ－３を含む卵巣癌細胞株
；７８６－０、Ａ４９８、ＡＣＨＮ、ＣＡＫＩ－１、ＲＸＦ ３９３、ＳＮ １２Ｃ、Ｔ
Ｋ－１０、及びＵＯ－３１を含む腎細胞癌細胞株；ＭＣＦ７、ＨＳ ５７８Ｔ、ＭＤＡ－
ＭＢ－４３５、ＢＴ－５４９、Ｔ－４７Ｄ、及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８を含む乳癌細胞株
；ならびに前立腺癌株ＰＣ－３及びＤＵ－１４５。

【0306】

実施例１１
インビトロ細胞アッセイ
また、本発明の化合物のインビトロ細胞毒性は、本実施例で述べるようにして測定する
こともできる。マッコイ５ａ改変培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標），Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）＋１０％ウシ胎児血清中、１８０μｌのＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣ
Ｃ、カタログ番号ＣＣＬ－２４７）を白色不透明９６ウェルプレート中に５０００細胞／
ウェルの密度で播種し、５％ＣＯ_２インキュベーター中、３７０℃で２４時間インキュベ
ートした。細胞播種の２４時間後、２０μＬの１０×試験化合物を、試験化合物の最終濃
度がμＭ濃度となるように希釈した。１０μＭ～０．０００１μＭまで半対数希釈を用い
た。プロマイシン及び非処理細胞を陽性対照として用いた。細胞を各化合物と、５％ＣＯ
_２インキュベーター中、３７０℃で７２時間インキュベートした。７２時間後、１００μ
ｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌ
ｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ
，ＷＩ；カタログ番号Ｇ７５７３）を各プレートに加え、室温で３０分間インキュベート
した。ＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０５ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（
ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して発光シグナルを捕捉した。
Ｘ軸上に薬物の濃度を、Ｙ軸上に平均阻害率（％）の値をプロットすることにより、Ｇｒ
ａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ
Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）で非線形回帰カーブフィッティング（Ｓ字状用量反応）を用いてデー
タを分析した。

【0307】

表１に、示される毒性化合物について観察された細胞毒性をまとめて示す。

【表1】

【0308】

実施例１２
毒性化合物のインビトロ細胞毒性
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ（登録商標））より異なる癌細胞
株を入手した。細胞を、加湿した５％ＣＯ_２インキュベーター中、ＲＰＭＩ １６４０、
Ｌ－グルタミン、及び１０％ＦＢＳからなる培地中で培養した。細胞を標準的な組織培養
技術を用いて必要に応じて継代した。細胞を回収し、ウェル当たり５０００個の細胞密度
で９６ウェル組織培養処理プレートに播いた。細胞を加湿した５％ＣＯ_２インキュベータ
ー中で約２４時間平衡化させた後、示した濃度の試験化合物で処理した。細胞を３日間、
培地を変えずに各試験化合物に曝露した。処理期間の後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（
登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ試薬溶
液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ；カタログ番号Ｇ７５７３）を各
ウェルに導入した。その後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ含有プレートを、Ｓｐｅｃｔｒｏ
Ｍａｘ（登録商標）ｉＤ３マルチモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ，ＬＬＣ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で読み取った。発光度は生細胞の
数によって決定された。細胞毒性５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒ
ｉｓｍ ７．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）の非
線形回帰分析を用いて計算した。

【0309】

以下の表に、示されるがん細胞株ＮＣＩ－Ｈ２３、ＤＵ１４５、ＳＷ４８０、ＳＫＯＶ
３、Ａ５４９、ＨＴ２９、ＳＫ－ＭＥＳ－１、ＳＫＢＲ３、ＨＣＴ１１６、ＭＣＦ７、Ｎ
８７、及びＡ４３１（ＡＴＣＣ名称）に対して指定された毒素化合物について観察された
細胞毒性（ＩＣ_５０）（ｎＭ）をまとめる。表２は、化合物２、４及び６の細胞毒性を示
す。

【表2】

【0310】

表３は、タイランスタチンＡを陽性対照として用いた、２つのヒト膵臓癌細胞株ＰＡＮ
Ｃ１０．０５及びＰＡＮＣ０５．０４に対する化合物１～７の細胞毒性を示す。

【表3】

【0311】

表４は、示される癌細胞株ＨＬ６０、ＫＧ－１、ＮＣＩ－Ｈ６９、ＳＫ－ＭＥＬ－１、
ＨＥＬ－９２．１．７、及びＫ５６２ （ＡＴＣＣ名称）に対する化合物２、４、及び６
の細胞毒性データを示す。

【表4】

【0312】

実施例１３
ＡＤＣのインビトロ細胞毒性
実施例１２で述べたものと同様の手順で、ＡＤＣ化合物１１の細胞毒性を、示されるが
ん細胞株について測定した。化合物１２を陰性対照として使用した。

【表5】

【0313】

実施例１４
皮下ＮＣＩ－Ｎ８７の処置におけるインビボ有効性試験
雌性Ｂａｌｂ／ｃ系ヌードマウスにおけるヒト胃癌異種移植
がんのヒト胃癌異種移植モデルであるＮＣＩ＝Ｎ８７（ＡＴＣＣ（登録商標）受託番号
ＣＲＬ－５８２２（商標））を使用して開示される発明のＡＤＣのインビボ有効性を試験
した。マトリゲルと混合（１：１）した０．１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳに加え
た１×１０^７個のＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍細胞を、６～８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃ系ヌードマ
ウスの右脇腹に注射した。腫瘍細胞接種の日を０日目とし、腫瘍体積を週２回測定した。
ノギスを使用して腫瘍体積を２次元で測定し、体積を式Ｖ ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２（ただ
し、Ｖは腫瘍体積、Ｌは腫瘍長さ（最長の腫瘍寸法）、Ｗは腫瘍幅（Ｌに垂直な最長の腫
瘍寸法)である）を用いてｍｍ^３で表した。平均腫瘍サイズが１５０～３００ｍｍ^３に達
した時点でマウスを無作為化し、８つの処置群に分けた。

【0314】

処置群は下記に示す通りである。なお、「Ｑ４ｄ^＊４」は、全体で４回の用量の原薬を
６日目に開始して各用量の間に４日間の間隔をおいて投与したことを意味する。
第１群：溶媒（ＰＢＳ）のみ、Ｑ４ｄ^＊４；
第２群：１ｍｇ／ｋｇの化合物１１、Ｑ４ｄ^＊４
第３群：３ｍｇ／ｋｇの化合物１１、Ｑ４ｄ^＊４；
第４群：３ｍｇ／ｋｇの化合物１１、６日目に単一用量；
第５群：３ｍｇ／ｋｇの化合物１２、Ｑ４ｄ^＊４；
第６群：１０ｍｇ／ｋｇの化合物１１、６日目に単一用量；
第７群：１０ｍｇ／ｋｇのＫａｄｃｙｌａ、６日目に単一用量；
第８群：３ｍｇ／ｋｇのＫａｄｃｙｌａ、Ｑ４ｄ^＊４。

【0315】

８つの群のそれぞれに、示される試験物を静脈内注射により投与した。溶媒（ＰＢＳ）
及び化合物１２を陰性対照として使用して溶媒（ＰＢＳ）の影響及び本試験においてＡＤ
Ｃで送達される分子としての化合物１０の標的と独立した作用を調べた。Ｋａｄｃｙｌａ
（登録商標）（アド－トラスツズマブエムタンシン；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ， Ｓｏｕｔｈ
Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， ＣＡ）を比較物質及びＡＤＣの陽性対照として投与した。

【0316】

注射後、６日目、９日目、１２日目、１５日目、１９日目、２１日目、２３日目、２５
日目、２７日目、２９日目、及び３１日目に各マウスで腫瘍体積を測定して腫瘍体積の低
減における各処置の効果を判定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０４ソフトウ
ェアを使用してデータ分析を行った。

【0317】

図１は、データをグラフで表したものを示す。表３Ａ及び３Ｂは、図１の数値ベースを
示したものであり、「平均」は平均の腫瘍体積（ｍｍ^３）を示す。ＳＥＭは平均の標準誤
差を示し、Ｎは実験群の個々の動物の数を表す。

【表6-1】

【表6-2】

【0318】

これらのインビボ実験の結果は、ＰＢＳ溶媒単独（第１群）または化合物１２で処置し
たマウス（第５群）は、処置後に観察される腫瘍体積の減少を示さなかったことを示して
いる。実際、これらの動物で腫瘍は時間とともに増大し続けた。予想されたように、陽性
対照のＫａｄｃｙｌａ（第７群及び第８群）は腫瘍体積を減少させた。複数の用量レベル
及びスケジュールの化合物１１のインビボ有効性（第２群、第３群、第４群、及び第６群
）が、腫瘍体積の減少によって明確に示された。腫瘍体積の減少の度合いは、Ｋａｄｃｙ
ｌａ群で観察されたのと同様であった。

【0319】

最初の投与後の体重減少が第３群、第４群、第５群、及び第６群で観察された（それぞ
れ、化合物１１（３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４^＊４）、化合物１１（３ｍｇ／ｋｇ、単一用量）、
化合物１２（３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４^＊４）、及び化合物１１（１０ｍｇ／ｋｇ、単一用量）
）。死亡につながる体重減少が第４群、第５群、及び第６群で観察された（それぞれ、化
合物１１（３ｍｇ／ｋｇ、単一用量）、化合物１２（３ｍｇ／ｋｇ、ｓ（Ｑ４^＊４）、及
び化合物１２（１０ｍｇ／ｋｇ、単一用量））。最も重篤な作用は第６群（化合物１１（
１０ｍｇ／ｋｇ、単一用量））で観察され、９日目に処置群を構成する１０匹のうち１０
匹のマウスが死亡していることが見出された。重い体重減少（開始体重の１５％超）を回
復させるために給水及び食餌による介入を行ったにもかかわらず、第３群（化合物１１（
３ｍｇ／ｋｇ、単一用量））の１０匹のマウスのうち、２匹が翌日死亡した。化合物１２
の第５群のうち、１匹のマウスで１５．９４％の体重減少がみられ、安楽死させた。有害
事象の数及び重症度は、投与した化合物１０のＡＤＣの用量レベルと相関しており、ＨＥ
Ｒ２をターゲティングしない化合物１２及びＨＥＲ２をターゲティングした化合物１１で
観察された。したがって、体重減少及び死亡は、ＡＤＣとの関連でリンカー毒素である化
合物１０の濃度の増大の作用によるものと考えられた。

【0320】

本明細書で触れられるすべての刊行物及び特許出願は、あたかもそれぞれの個々の刊行
物及び特許出願が詳細かつ個別に参照により援用されていることが示されているものと同
様にして、それらの全容を本明細書に参照により援用するものとする。

【0321】

上記の記載から、本発明の特定の実施形態を例示の目的で本明細書に記載したが、様々
な改変を本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる点は認識されよう
。したがって、本発明は、付属の特許請求の範囲による場合を除き、限定されない。

【0322】

本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。
（項１）
式（Ｉ）：

【化1】

［式中、
Ｒは、－（ＣＨ _２ ） _ｎ －Ｒ ^１ ；場合により、ハロゲン、－ＣＦ _３ 、－Ｃ _１～６ アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ _１～６ アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ _５～６ ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ ^２ ）＝Ｎ－Ｒ ^３ ；－ＣＨ（ＣＦ _３ ）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－ＳＯ _２ －Ｎ
Ｈ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ ^１ は、－Ｏ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｎ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ Ｃ
Ｈ _３ であり、
Ｒ ^ａ とＲ ^ｂ とは、それらが結合した原子とともにＣ _３～１０ の複素環式環を形成し、
Ｒ ^２ は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
Ｒ ^３ は、－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｏ－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
Ｘは、－Ｈまたは－ＣＨ _３ であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
（項２）
Ｒが、

【化2】

からなる群から選択される、上記項１に記載の化合物。
（項３）

【化3】

【化4】

からなる群から選択される化合物。
（項４）
式（ＩＩ）：

【化5】

［式中、
Ｌは、リンカーであり、
Ｒは、－（ＣＨ _２ ） _ｎ －Ｒ ^１ ；場合により、ハロゲン、－ＣＦ _３ 、－Ｃ _１～６ アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ _１～６ アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ _５～６ ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ ^２ ）＝Ｎ－Ｒ ^３ ；－ＣＨ（ＣＦ _３ ）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－ＳＯ _２ －Ｎ
Ｈ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ ^１ は、－Ｏ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｎ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ Ｃ
Ｈ _３ であり、
Ｒ ^ａ とＲ ^ｂ とは、それらが結合した原子とともにＣ _３～１０ の複素環式環を形成し、
Ｒ ^２ は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
Ｒ ^３ は、－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｏ－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である］
の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
（項５）
Ｌが、式（Ａ ^１ ）、式（Ａ ^２ ）、式（Ａ ^３ ）、式（Ａ ^４ ）、及び式（Ａ ^５ ）：

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ｙは、Ｂｒ、Ｉ、または

【化11】

である）
からなる群から選択される、上記項４に記載の化合物。
（項６）
Ｒが、

【化12】

からなる群から選択される、上記項４または５に記載の化合物。
（項７）
構造１０：

【化13】

を有する、上記項４～６に記載の化合物。
（項８）
式（ＩＩＩ）：
Ｔ－Ｌ’－Ａｂ （ＩＩＩ）
［式中、
Ｌは、リンカー部分であり、
Ｔは、式（Ｉ’）：

【化14】

(式中、
Ｒは、－（ＣＨ _２ ） _ｎ －Ｒ ^１ ；場合により、ハロゲン、－ＣＦ _３ 、－Ｃ _１～６ アルキル
、及び－Ｏ－Ｃ _１～６ アルキルのうちの１つ以上で置換された－Ｃ _５～６ ヘテロアリール
；－Ｃ（Ｒ ^２ ）＝Ｎ－Ｒ ^３ ；－ＣＨ（ＣＦ _３ ）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ
）ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｃ（ハロゲン）＝ＣＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－ＳＯ _２ －Ｎ
Ｈ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ ；－Ｏ（ＣＯ）－アリール；－Ｏ（ＣＯ）－ヘテロアリール；－Ｎ
Ｒ ^ａ Ｒ ^ｂ ；及び、－ＮＨ－ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ ^１ は、－Ｏ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｎ－ＣＲ ^ａ Ｒ ^ｂ （ＣＨ _２ ） _ｍ Ｃ
Ｈ _３ であり、
Ｒ ^ａ とＲ ^ｂ とは、それらが結合した原子とともにＣ _３～１０ の複素環式環を形成し、
Ｒ ^２ は、－ＣＮまたは－ＮＨ（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
Ｒ ^３ は、－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ または－Ｏ－（ＣＨ _２ ） _ｍ ＣＨ _３ であり、
各ｎは、独立して１、２、または３であり、
各ｍは、独立して０、１、２、または３である）
の基であり、
Ａｂは、抗体である］
の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
（項９）
Ｒが、

【化15】

からなる群から選択される、上記項８に記載の化合物または塩。
（項１０）
Ｌ’が、式（Ｂ ^１ ）、式（Ｂ ^２ ）、式（Ｂ ^３ ）、及び式（Ｂ ^４ ）：

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）
からなる群から選択される、上記項８または９に記載の化合物。
（項１１）
前記式（ＩＩＩ）の化合物が、

【化20】

【化21】

【化22】

【化23】

及び

【化24】

（式中、ｑは、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、ｎは、１、２、３、
または４である）
からなる群から選択される、上記項８～１０のいずれか１項に記載の化合物または塩。
（項１２）
構造１１：

【化25】

（式中、ｔｒａｓはトラスツズマブである）
を有する、上記項８に記載の化合物。
（項１３）
前記抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ゲムツズマブ、及びバダスツキシマブか
らなる群から選択される、上記項８～１１のいずれか１項に記載の化合物または塩。
（項１４）
前記抗体が、１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する、上記項８～１
３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
（項１５）
前記抗体が、ＨＥＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ７０、ＭＵＣ１／ＣａｎＡｇ、ＭＵＣ１６、Ｃ
Ｄ１５１及びＩＴＧａＶからなる群から選択される、上記項８～１２、及び上記項１４の
いずれか１項に記載の化合物または塩。
（項１６）
治療有効量の上記項８～１５のいずれか１項に記載の前記化合物または塩と、薬学的に
許容される希釈剤、担体、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
（項１７）
治療有効量の上記項１６に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、がんの治療
方法。
（項１８）
前記がんが、膀胱、乳房、頸部、結腸、子宮内膜、腎臓、肺、食道、卵巣、前立腺、膵
臓、皮膚、胃、及び睾丸のがん、白血病及びリンパ腫から選択される、上記項１７に記載
のがんの治療方法。
（項１９）
治療有効量の第２の治療剤を投与することを更に含む、上記項１７に記載のがんの治療
方法。
（項２０）
上記項４に記載の式（ＩＩ）の化合物を抗体と反応させることを含む、上記項８に記載
の式（ＩＩＩ）の化合物を製造する方法。
（項２１）
治療に使用するための上記項１６に記載の医薬組成物。
（項２２）
がんの治療を要するヒトのがんを治療する方法で使用するための上記項１７に記載の医
薬組成物であって、前記ヒトに治療有効量の前記医薬組成物を投与することを含み、前記
がんが、膀胱、乳房、頸部、結腸、子宮内膜、腎臓、肺、食道、卵巣、前立腺、膵臓、皮
膚、胃、及び睾丸のがん、白血病及びリンパ腫から選択される、前記医薬組成物。
（項２３）
ａ）上記項１６に記載の医薬組成物と、
ｂ）使用説明書と、を含む、がんを治療するためのキット。

【図1】