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特開2023-139249絹－ヒアルロン酸系組織フィラー、及びそれを用いる方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023139249
(43)【公開日】2023-10-03
(54)【発明の名称】絹－ヒアルロン酸系組織フィラー、及びそれを用いる方法
(51)【国際特許分類】
A61L 27/22 20060101AFI20230926BHJP
A61L 27/20 20060101ALI20230926BHJP
A61P 23/00 20060101ALI20230926BHJP
A61K 31/167 20060101ALI20230926BHJP
A61L 27/48 20060101ALI20230926BHJP
【ＦＩ】
A61L27/22
A61L27/20
A61P23/00
A61K31/167
A61L27/48
【審査請求】有
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023122912
(22)【出願日】2023-07-28
(62)【分割の表示】P 2020520437の分割
【原出願日】2018-06-26
(31)【優先権主張番号】62/641,095
(32)【優先日】2018-03-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/525,131
(32)【優先日】2017-06-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】516092706
【氏名又は名称】エボルブド バイ ネイチャー， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100107766
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠重
(74)【代理人】
【識別番号】100070150
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠彦
(74)【代理人】
【識別番号】100135079
【弁理士】
【氏名又は名称】宮崎 修
(72)【発明者】
【氏名】グレゴリー・エイチ・アルトマン
(72)【発明者】
【氏名】ペン・シュー
(72)【発明者】
【氏名】エルレイ・ジン
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ヒアルロン酸及び絹タンパク質断片ベースの生体適合性組織フィラーを提供する。
【解決手段】絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、麻酔剤と、を含む生体適合性組織フィラーであって、前記ＨＡの一部、前記ＳＰＦの一部、又は前記ＨＡの一部及び前記ＳＰＦの一部の両方が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。
【選択図】図３８
【解決手段】絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、麻酔剤と、を含む生体適合性組織フィラーであって、前記ＨＡの一部、前記ＳＰＦの一部、又は前記ＨＡの一部及び前記ＳＰＦの一部の両方が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。
【選択図】図３８
【特許請求の範囲】
【請求項1】
絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、麻酔剤と、を含む生体適合性組織フィラーであって、前記ＨＡの一部、前記ＳＰＦの一部、又は前記ＨＡの一部及び前記ＳＰＦの一部の両方が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む１以上のリンカー部分によって変性又は架橋されており、
前記絹タンパク質断片が、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、
前記変性又は架橋されたＨＡ又はＳＰＦが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含み、
変性又は架橋が、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテルである架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られることを特徴とする生体適合性組織フィラー。
前記絹タンパク質断片が、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、
前記変性又は架橋されたＨＡ又はＳＰＦが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含み、
変性又は架橋が、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテルである架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られることを特徴とする生体適合性組織フィラー。
【請求項2】
変性又は架橋が、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、及び／又は約２個～約２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる、請求項１に記載の組織フィラー。
【請求項3】
前記麻酔剤が、リドカインであり、好ましくは、約０．００１％～約５％の濃度である、請求項１又は２に記載の組織フィラー。
【請求項4】
前記組織フィラーにおけるＨＡの総濃度が、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１から３のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項5】
前記絹タンパク質が、絹フィブロインであり、好ましくは、絹フィブロインがセリシンを実質的に含まない、請求項１から４のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項6】
前記絹タンパク質が、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する、請求項１から５のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項7】
前記ＳＰＦが、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する、請求項１から５のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項8】
前記組織フィラーにおけるＳＰＦの総濃度が、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１から７のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項9】
前記組織フィラーが、約２５Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から８のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項10】
前記組織フィラーが、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する、請求項１から９のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項11】
前記組織フィラーが、光の最大９５％を散乱透過する、請求項１から１０のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項12】
前記組織フィラーが、光の約０．１％～約７５％を透過する請求項１から１１のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項13】
医薬における使用のための、好ましくは、皮膚状態の治療における使用のための、請求項１から１２のいずれかに記載の組織フィラー。
【請求項14】
請求項１から１２のいずれかに記載の組織フィラーの非治療的美容的使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年６月２６日出願の米国仮特許出願第６２／５２５，１３１号及び２０１８年３月９日出願の米国仮特許出願第６２／６４１，０９５号の利益を主張する。これらの出願のそれぞれの全内容を、参照により本明細書に援用する。
本願は、２０１７年６月２６日出願の米国仮特許出願第６２／５２５，１３１号及び２０１８年３月９日出願の米国仮特許出願第６２／６４１，０９５号の利益を主張する。これらの出願のそれぞれの全内容を、参照により本明細書に援用する。
【背景技術】
【0002】
絹（シルク）は、様々な昆虫及びクモから生み出される天然高分子である。絹は、フィラメントコアタンパク質、絹フィブロイン、及び非フィラメント状タンパク質、セリシンからなる膠状コーティングを含む。絹は、歴史的に、医療分野での使用のために研究されてきている。ヒアルロン酸（ヒアルロナン）は、全身に分布し、結合組織及び上皮組織に存在するグリコサミノグリカンである。その生体適合性及び構造的な利点のために、医療機器及び移植材料に有用な成分である。
【0003】
人体の軟組織は、その構造を一部、細胞外マトリックスに負っており、細胞外マトリックスは、コラーゲン、エラスチン、及びグリコサミノグリカンを含む。軟組織構造に歪曲、変形、又は他の変化をもたらす軟組織の欠陥が発生し得る。このような構造は、欠陥部位に沈着し欠陥を改善することができる組織フィラーを使用することによって復元することができる。例えば、組織フィラーを顔面の皺の部位に配し、皺を伸ばすことができる。
【0004】
しかし、特定の組織欠陥への組織フィラーの適用を可能にすることができる調節可能な特性をもたらしつつ、多くの組織欠陥を改善する新たな組織フィラーが当技術分野で必要とされている。
【発明の概要】
【0005】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、抗炎症剤からなる群から選択される活性剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部がアルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、グリコサミノグリカンは、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＨＡの総量に対する架橋ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１５％である。幾つかの実施形態において、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の１以上である。
【0006】
幾つかの実施形態では、架橋ＨＡは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含む架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、２～２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。
【0007】
幾つかの実施形態において、本発明は、有機化合物及び／又は無機化合物を更に含む組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、無機化合物は、カルシウムヒドロキシアパタイトを含む。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトは、約１μｍ～約１００μｍ、約１μｍ～約１０μｍ、約２μｍ～約１２μｍ、約３μｍ～約１０μｍ、約４μｍ～約１５μｍ、約８μｍ～約１２μｍ、約５μｍ～約１０μｍ、約６μｍ～約１２μｍ、約７μｍ～約２０μｍ、約９μｍ～約１８μｍ、又は約１０μｍ～約２５μｍの直径を有する粒子として処方される。幾つかの実施形態では、カルシウムヒロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％～約５％である。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０１１％、約０．０１２％、約０．０１３％、約０．０１４％、約０．０１５％、約０．０１６％、約０．０１７％、約０．０１８％、約０．０１９％、又は約０．０２％である。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．０５％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．２５％、約０．３％、約０．３５％、約０．４％、約０．４５％、約０．５％、約０．５５％、約０．６％、約０．６５％、約０．７％、約０．７５％、約０．８％、約０．８５％、約０．９％、約０．９５％、約１％、約１．０５％、約１．１％、約１．１５％、約１．２％、約１．２５％、約１．３％、約１．３５％、約１．４％、約１．４５％、約１．５％、約１．５５％、約１．６％、約１．６５％、約１．７％、約１．７５％、約１．８％、約１．８５％、約１．９％、約１．９５％、又は約２％である。幾つかの実施形態では、有機化合物は、グリシン、Ｌ－プロリン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択されるアミノ酸を含む。
【0008】
幾つかの実施形態において、本発明は、ＨＡを含む組織フィラーであって、前記ＨＡが、連鎖球菌又は枯草菌から得られる組織フィラーに関する。
【0009】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、麻酔剤はリドカインである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける麻酔剤の濃度は、約０．００１％～約５％である。幾つかの実施形態では、組織フィラー中のリドカインの濃度は、約０．３％である。
【0010】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られ、前記組織フィラーがゲルである生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーはヒドロゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＨＡの総濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＨＡの総濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける架橋ＨＡの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける架橋ＨＡの濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。
【0011】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られ、前記組織フィラーが絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、絹タンパク質は、絹フィブロインである。幾つかの実施形態では、絹タンパク質は、セリシンを実質的に含まない絹フィブロインである。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、低分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、中程度の分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは高分子量を有する。幾つかの実施形態では、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、約１．５～約３．０の多分散性を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、最大６０％の結晶化度を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態において、ＳＰＦの総量に対する架橋ＳＰＦの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％～約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％～約１５％である。幾つかの実施形態において、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の１以上である。
【0012】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られ、前記組織フィラーが絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部が架橋されている生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦは、アルカン又はアルキル鎖、及び／又はエーテル基をを含む架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含む架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦは、第二級アルコールを含む架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、２～２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部は、ＨＡに架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部は、ＳＰＦに架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーはゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーはヒドロゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。
【0013】
一実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーであって、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られ、前記組織フィラーが任意に、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部が架橋されている生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、皮膚フィラー（ｄｅｒｍａｌ ｆｉｌｌｅｒ）である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、注入可能である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約２５Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約２５Ｐａ、約２６Ｐａ、約２７Ｐａ、約２８Ｐａ、約２９Ｐａ、約３０Ｐａ、約３１Ｐａ、約３２Ｐａ、約３３Ｐａ、約３４Ｐａ、約３５Ｐａ、約３６Ｐａ、約３７Ｐａ、約３８Ｐａ、約３９Ｐａ、約４０Ｐａ、約４１Ｐａ、約４２Ｐａ、約４３Ｐａ、約４４Ｐａ、約４５Ｐａ、約４６Ｐａ、約４７Ｐａ、約４８Ｐａ、約４９Ｐａ、約５０Ｐａ、約５１Ｐａ、約５２Ｐａ、約５３Ｐａ、約５４Ｐａ、約５５Ｐａ、約５６Ｐａ、約５７Ｐａ、約５８Ｐａ、約５９Ｐａ、約６０Ｐａ、約６１Ｐａ、約６２Ｐａ、約６３Ｐａ、約６４Ｐａ、約６５Ｐａ、約６６Ｐａ、約６７Ｐａ、約６８Ｐａ、約６９Ｐａ、約７０Ｐａ、約７１Ｐａ、約７２Ｐａ、約７３Ｐａ、約７４Ｐａ、約７５Ｐａ、約７６Ｐａ、約７７Ｐａ、約７８Ｐａ、約７９Ｐａ、約８０Ｐａ、約８１Ｐａ、約８２Ｐａ、約８３Ｐａ、約８４Ｐａ、約８５Ｐａ、約８６Ｐａ、約８７Ｐａ、約８８Ｐａ、約８９Ｐａ、約９０Ｐａ、約９１Ｐａ、約９２Ｐａ、約９３Ｐａ、約９４Ｐａ、約９５Ｐａ、約９６Ｐａ、約９７Ｐａ、約９８Ｐａ、約９９Ｐａ、約１００Ｐａ、約１０１Ｐａ、約１０２Ｐａ、約１０３Ｐａ、約１０４Ｐａ、約１０５Ｐａ、約１０６Ｐａ、約１０７Ｐａ、約１０８Ｐａ、約１０９Ｐａ、約１１０Ｐａ、約１１１Ｐａ、約１１２Ｐａ、約１１３Ｐａ、約１１４Ｐａ、約１１５Ｐａ、約１１６Ｐａ、約１１７Ｐａ、約１１８Ｐａ、約１１９Ｐａ、約１２０Ｐａ、約１２１Ｐａ、約１２２Ｐａ、約１２３Ｐａ、約１２４Ｐａ、又は約１２５Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。幾つかの実施形態において、本明細書では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約１Ｐａ・ｓ、約１．５Ｐａ・ｓ、約２Ｐａ・ｓ、約２．５Ｐａ・ｓ、約３Ｐａ・ｓ、約３．５Ｐａ・ｓ、約４Ｐａ・ｓ、約４．５Ｐａ・ｓ、約５Ｐａ・ｓ、約５．５Ｐａ・ｓ、約６Ｐａ・ｓ、約６．５Ｐａ・ｓ、約７Ｐａ・ｓ、約７．５Ｐａ・ｓ、約８Ｐａ・ｓ、約８．５Ｐａ・ｓ、約９Ｐａ・ｓ、約９．５Ｐａ・ｓ、又は約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。
【0014】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における状態を治療する方法、及び／又はそれを必要とする被験体における美容治療の方法であって、前記被験体に、生体適合性組織フィラーの治療有効量を投与することを含み、前記生体適合性組織フィラーが、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、澱粉、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンと；麻酔剤とを含み、前記グリコサミノグリカンの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む架橋部分によって架橋され、前記架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られ、前記組織フィラーが任意に、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部が架橋されている生体適合性組織フィラーである方法に関する。幾つかの実施形態では、状態は、皮膚の状態である。幾つかの実施形態において、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、及び皺からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。幾つかの実施形態では、被験体への組織フィラーの投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織フィラーによって誘導される炎症応答に比べ、炎症応答が低減される。幾つかの実施形態では、被験体への組織フィラーの投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織フィラーによって誘導されるコラーゲン産生に比べ、コラーゲン産生が増大する。
【0015】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。実施形態において、本発明は、絹及びヒアルロン酸から調製することができる組織フィラーを含む。
【0016】
幾つかの実施形態において、本発明は、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、本発明は、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約８０ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。
【0017】
幾つかの実施形態において、本発明は、最大約０％～１００％ＳＰＦと架橋された、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＳＰＦと架橋させた。幾つかの実施形態では、架橋度は、最大約１００％である。
【0018】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＳＰＦの最大約０％～１００％がＳＰＦと架橋され、前記ＳＰＦは、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である生体適合性組織フィラーに関する。
【0019】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＨＡの最大１００％が、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＨＡと架橋されている生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％がＳＰＦと架橋され、前記ＳＰＦは、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。
【0020】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＨＡの０％～１００％が非架橋である生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％が架橋され、前記ＳＰＦは、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。幾つかの実施形態では、ＨＡは全て非架橋である。
【0021】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＳＰＦの０％～１００％がＨＡと架橋されている生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦとＨＡを、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いて架橋させた。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ－ＨＡの架橋度が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、ＨＡの最大１００％がＨＡと架橋されている。幾つかの実施形態では、ＨＡを、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＨＡと架橋させた。幾つかの実施形態では、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である。幾つかの実施形態では、ＨＡは全て非架橋である。
【0022】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％が架橋され、前記ＳＰＦは、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。幾つかの実施形態では、ＨＡは全て非架橋である。
【0023】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、ＳＰＦの少なくとも０．１％がＨＡと架橋されている生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦとＨＡを、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いて架橋させた。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ－ＨＡの架橋度が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、ＨＡの最大１００％がＨＡと架橋されている。幾つかの実施形態では、ＨＡを、ＢＤＤＥなどの架橋剤、又は本明細書に記載の他の架橋剤の１つを用いてＨＡと架橋させた。幾つかの実施形態では、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である。幾つかの実施形態では、ＨＡは全て非架橋である。
【0024】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）とを含み、前記ＳＰＦが、セリシンを実質的に欠いている生体適合性組織フィラーに関する。
【0025】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性ゲル組織フィラーに関する。
【0026】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性ヒドロゲル組織フィラーに関する。
【0027】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖と、水とを含む生体適合性ゲル組織フィラーに関する。
【0028】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約０％～約６０％の結晶化度を有する生体適合性組織フィラーに関する。
【0029】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖と、更に活性剤とを含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態において、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、血管拡張剤、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤であることができる。一実施形態では、麻酔剤はリドカインである。
【0030】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む注入可能な生体適合性組織フィラーに関する。
【0031】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。
【0032】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーを製造する方法であって、ＳＰＦ溶液を提供することと、前記溶液に、プロトン供与性種であることができるゲル化促進剤を添加することとを含む方法に関する。
【0033】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーを製造する方法であって、ＳＰＦ溶液を提供することと、前記溶液を機械的励起に付すこととを含む方法に関する。
【0034】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における状態を治療する方法であって、前記被験体に、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーの治療有効量を投与することを含む方法に関する。幾つかの実施形態では、状態は、皮膚の状態である。幾つかの実施形態において、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、及び皺であることができる。
【0035】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における美容治療の方法であって、前記被験体に、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーの有効量を投与することを含む方法に関する。
【0036】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、被験体の皮膚部分に、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーを投与することを含む。
【0037】
一実施形態では、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーを投与することを含む本発明の方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療であることができる。
【0038】
一実施形態では、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーを投与することを含む本発明の方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療であることができる。
【0039】
一実施形態では、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性組織フィラーは、投与後少なくとも約３日間、生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。
【0040】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0041】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0042】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0043】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0044】
幾つかの実施形態において、ＳＰＦの総量の対する架橋ＳＰＦの量（％ｗ／ｗ）は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。
【0045】
幾つかの実施形態では、ＳＰＦの架橋度は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。
【0046】
幾つかの実施形態において、ＨＡの総量の対する架橋ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３重量％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。
【0047】
幾つかの実施形態では、ＨＡの架橋度は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。
【0048】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。
【0049】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。
【0050】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、架橋は、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。
【0051】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、架橋は、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。
【0052】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラーゲル（例えば、皮膚フィラーゲル）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ゲルは、更に水を含む。
【0053】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラーゲル（例えば、皮膚フィラーゲル）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ゲルは、更に水を含む。
【0054】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラーヒドロゲル（例えば、皮膚フィラーヒドロゲル）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ヒドロゲルは、更に水を含む。
【0055】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラーヒドロゲル（例えば、皮膚フィラーヒドロゲル）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ヒドロゲルは、更に水を含む。
【0056】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、又は６０％超の結晶化度を有する。
【0057】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、又は６０％超の結晶化度を有する。
【0058】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、活性剤を更に含む。幾つかの実施形態において、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤からなる群から選択される。一実施形態では、麻酔剤はリドカインである。
【0059】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、活性剤を更に含む。幾つかの実施形態において、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤からなる群から選択される。一実施形態では、麻酔剤はリドカインである。
【0060】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する生体適合性の注入可能な組織フィラー（例えば、注入可能な皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。
【0061】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性の注入可能な組織フィラー（例えば、注入可能な皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。
【0062】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する生体適合性組織フィラー（例えば、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。
【0063】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する生体適合性組織フィラー（例えば、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する皮膚フィラー）に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部は、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。
【0064】
幾つかの実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性織フィラー（例えば、皮膚フィラー）を製造する方法であって、ＳＰＦと多糖とを含む組成物を提供することと、前記溶液に、架橋剤、架橋前駆体、活性化剤、又はゲル化促進剤を添加することとを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0065】
幾つかの実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含む生体適合性織フィラー（例えば、皮膚フィラー）を製造する方法であって、ＳＰＦと多糖とを含む組成物を提供することと、前記溶液に、架橋剤、架橋前駆体、活性化剤、又はゲル化促進剤を添加することとを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。
【0066】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における状態（例えば、皮膚の状態）を治療する方法であって、前記被験体に、生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）の治療有効量を投与することを含み、前記生体適合性組織フィラーが、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、及び皺からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。
【0067】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における状態（例えば、皮膚の状態）を治療する方法であって、前記被験体に、生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）の治療有効量を投与することを含み、前記生体適合性組織フィラーが、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、及び皺からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。
【0068】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における美容治療の方法であって、前記被験体に、生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）の有効量を投与することを含み、前記生体適合性組織フィラーが、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。
【0069】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における美容治療の方法であって、前記被験体に、生体適合性組織フィラー（例えば、皮膚フィラー）の有効量を投与することを含み、前記生体適合性組織フィラーが、約１．５～約３．０の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、多糖とを含み、前記ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦと架橋されている。幾つかの実施形態では、多糖の一部が多糖と架橋されている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を更に含む。幾つかの実施形態において、架橋の一部が自己架橋である。幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。幾つかの実施形態では、多糖は、ヒアルロン酸（ＨＡ）である。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。
【0070】
幾つかの実施形態において、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）と麻酔剤とを含む生体適合性組織フィラーに関し、前記ＨＡの一部が、アルカン又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの１以上を含む１以上のリンカー部分によって変性されており、前記リンカー部分が、リンカーの一端で前記ＨＡに結合している。幾つかの実施形態では、変性は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、組織フィラー中のＨＡは、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％、約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０約、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％の変性度（ＭｏＤ）を有する。幾つかの実施形態において、組織フィラーにおけるＨＡの総量に対する変性ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。
【0071】
幾つかの実施形態では、変性ＨＡは、架橋ＨＡを含み、前記架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１５％である。
【0072】
幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＨＡは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、約２～約２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。
【0073】
幾つかの実施形態において、組織フィラーは、有機化合物及び／又は無機化合物を更に含む。幾つかの実施形態では、無機化合物は、カルシウムヒドロキシアパタイトを含む。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトは、約１μｍ～約１００μｍ、約１μｍ～約１０μｍ、約２μｍ～約１２μｍ、約３μｍ～約１０μｍ、約４μｍ～約１５μｍ、約８μｍ～約１２μｍ、約５μｍ～約１０μｍ、約６μｍ～約１２μｍ、約７μｍ～約２０μｍ、約９μｍ～約１８μｍ、又は約１０μｍ～約２５μｍの直径を有する粒子として処方される。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％～約５％である。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０１１％、約０．０１２％、約０．０１３％、約０．０１４％、約０．０１５％、約０．０１６％、約０．０１７％、約０．０１８％、約０．０１９％、又は約０．０２％である。幾つかの実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．０５％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．２５％、約０．３％、約０．３５％、約０．４％、約０．４５％、約０．５％、約０．５５％、約０．６％、約０．６５％、約０．７％、約０．７５％、約０．８％、約０．８５％、約０．９％、約０．９５％、約１％、約１．０５％、約１．１％、約１．１５％、約１．２％、約１．２５％、約１．３％、約１．３５％、約１．４％、約１．４５％、約１．５％、約１．５５％、約１．６％、約１．６５％、約１．７％、約１．７５％、約１．８％、約１．８５％、約１．９％、約１．９５％、又は約２％である。幾つかの実施形態では、有機化合物は、グリシン、Ｌ－プロリン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択されるアミノ酸を含む。
【0074】
幾つかの実施形態において、ＨＡは、連鎖球菌又は枯草菌から得られる。幾つかの実施形態において、活性剤はリドカインである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける活性剤の濃度は、約０．００１％～約５％である。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるリドカインの濃度は、約０．３％である。
【0075】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示される組織フィラーは、ゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、ヒドロゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＨＡの総濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＨＡの総濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける変性又は架橋ＨＡの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける変性又は架橋ＨＡの濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。
【0076】
幾つかの実施形態において、開示される組織フィラーは、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を更に含む。幾つかの実施形態では、絹タンパク質は、絹フィブロインである。幾つかの実施形態では、絹タンパク質は、セリシンを実質的に含まない絹フィブロインである。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、低分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、中分子量を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは高分子量を有する。幾つかの実施形態では、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、約１．５～約３．０の多分散性を有する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、最大６０％の結晶化度を有する。
【0077】
幾つかの実施形態において、本発明は、ＨＡとＳＰＦとを含み、前記ＳＰＦの一部が変性又は架橋されている組織フィラーに関する。幾つかの実施形態において、ＳＰＦの総量に対する変性又は架橋ＳＰＦの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦの変性度又は架橋度は、約１％～約１００％である。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦの変性度又は架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦの変性度又は架橋度は、約１％～約１５％である。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦの変性度又は架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の１以上である。
【0078】
幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦは、アルカン又はアルキル鎖、及び／又はエーテル基を含むリンカー又は架橋部分を含み、前記リンカー又は架橋部分が、前記リンカー又は架橋部分の一端でＳＰＦに結合している。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、変性又は架橋ＳＰＦは、第二級アルコールを含むリンカー又は架橋部分を含む。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、変性又は架橋剤、変性又は架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋剤及び／又は変性又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される変性又は架橋剤、変性又は架橋前駆体、又は活性化剤を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を用いて得られる。
【0079】
幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、約２～約２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られる。幾つかの実施形態では、変性又は架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される変性又は架橋剤及び／又は変性又は架橋前駆体を用いて得られる。
【0080】
幾つかの実施形態において、本発明は、ＨＡとＳＰＦとを含み、ＳＰＦの一部がＨＡに架橋されている組織フィラーに関する。幾つかの実施形態において、本発明は、ＨＡとＳＰＦとを含み、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、ゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、ヒドロゲルである。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、更に水を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおけるＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける変性又は架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、組織フィラーにおける変性又は架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。
【0081】
幾つかの実施形態において、本発明は、変性又は架橋ＨＡ及び／又は変性又は架橋ＳＰＦを含み、皮膚フィラーである組織フィラーに関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは生分解性である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは注入可能である。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約２５Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約２５Ｐａ、約２６Ｐａ、約２７Ｐａ、約２８Ｐａ、約２９Ｐａ、約３０Ｐａ、約３１Ｐａ、約３２Ｐａ、約３３Ｐａ、約３４Ｐａ、約３５Ｐａ、約３６Ｐａ、約３７Ｐａ、約３８Ｐａ、約３９Ｐａ、約４０Ｐａ、約４１Ｐａ、約４２Ｐａ、約４３Ｐａ、約４４Ｐａ、約４５Ｐａ、約４６Ｐａ、約４７Ｐａ、約４８Ｐａ、約４９Ｐａ、約５０Ｐａ、約５１Ｐａ、約５２Ｐａ、約５３Ｐａ、約５４Ｐａ、約５５Ｐａ、約５６Ｐａ、約５７Ｐａ、約５８Ｐａ、約５９Ｐａ、約６０Ｐａ、約６１Ｐａ、約６２Ｐａ、約６３Ｐａ、約６４Ｐａ、約６５Ｐａ、約６６Ｐａ、約６７Ｐａ、約６８Ｐａ、約６９Ｐａ、約７０Ｐａ、約７１Ｐａ、約７２Ｐａ、約７３Ｐａ、約７４Ｐａ、約７５Ｐａ、約７６Ｐａ、約７７Ｐａ、約７８Ｐａ、約７９Ｐａ、約８０Ｐａ、約８１Ｐａ、約８２Ｐａ、約８３Ｐａ、約８４Ｐａ、約８５Ｐａ、約８６Ｐａ、約８７Ｐａ、約８８Ｐａ、約８９Ｐａ、約９０Ｐａ、約９１Ｐａ、約９２Ｐａ、約９３Ｐａ、約９４Ｐａ、約９５Ｐａ、約９６Ｐａ、約９７Ｐａ、約９８Ｐａ、約９９Ｐａ、約１００Ｐａ、約１０１Ｐａ、約１０２Ｐａ、約１０３Ｐａ、約１０４Ｐａ、約１０５Ｐａ、約１０６Ｐａ、約１０７Ｐａ、約１０８Ｐａ、約１０９Ｐａ、約１１０Ｐａ、約１１１Ｐａ、約１１２Ｐａ、約１１３Ｐａ、約１１４Ｐａ、約１１５Ｐａ、約１１６Ｐａ、約１１７Ｐａ、約１１８Ｐａ、約１１９Ｐａ、約１２０Ｐａ、約１２１Ｐａ、約１２２Ｐａ、約１２３Ｐａ、約１２４Ｐａ、又は約１２５Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、Ｇ’は、約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、約１Ｐａ・ｓ、約１．５Ｐａ・ｓ、約２Ｐａ・ｓ、約２．５Ｐａ・ｓ、約３Ｐａ・ｓ、約３．５Ｐａ・ｓ、約４Ｐａ・ｓ、約４．５Ｐａ・ｓ、約５Ｐａ・ｓ、約５．５Ｐａ・ｓ、約６Ｐａ・ｓ、約６．５Ｐａ・ｓ、約７Ｐａ・ｓ、約７．５Ｐａ・ｓ、約８Ｐａ・ｓ、約８．５Ｐａ・ｓ、約９Ｐａ・ｓ、約９．５Ｐａ・ｓ、又は約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。幾つかの実施形態では、複素粘度は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。
【0082】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における状態を治療する方法であって、前記被験体に、変性又は架橋ＨＡ及び／又は変性又は架橋ＳＰＦを含む組織フィラーの治療有効量を投与することを含む方法に関する。幾つかの実施形態では、状態は、皮膚の状態である。幾つかの実施形態において、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、及び皺からなる群から選択される。
【0083】
幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体における美容治療の方法であって、前記被験体に、変性又は架橋ＨＡ及び／又は変性又は架橋ＳＰＦを含む組織フィラーの有効量を投与することを含む方法に関する。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、被験体の真皮領域に投与される。幾つかの実施形態において、前記方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。幾つかの実施形態では、前記方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。
【0084】
本明細書に開示される方法の幾つかの実施形態では、組織フィラーは、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。本明細書に開示される方法の幾つかの実施形態では、被験体への組織フィラーの投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織フィラーによって誘導される炎症応答に比べ、炎症応答が低減される。
【0085】
本明細書に開示される方法の幾つかの実施形態では、被験体への組織フィラーの投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織フィラーによって誘導されるコラーゲン産生に比べ、コラーゲン産生が増大する。
【0086】
本発明で開示する実施形態を、添付の図面を参照して更に説明することとする。示した図面は必ずしも縮尺通りではなく、その代わり一般に、本発明で開示する実施形態の原理を例示する際に強調がなされている。
【図面の簡単な説明】
【0087】
【図19】図１９は、１００℃の抽出温度、３０分間の抽出時間、及び１００℃の臭化リチウムの条件で処理した絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の影響をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変化させた）。
【図20】図２０は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び１００℃の臭化リチウムの条件で処理した絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の影響をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変化させた）。
【図21】図２１は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び１４０℃の臭化リチウムの条件で処理した絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の影響をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変化させた）。
【図22】図２２は、１００℃の抽出温度、３０分間の抽出時間、及び１４０℃の臭化リチウムの条件で処理した絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の影響をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変化させた）。
【図23】図２３は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び８０℃の臭化リチウムの条件で処理した絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の影響をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変化させた）。
【図26】図２６は、水又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の各種濃度での絹／ＨＡ水性製剤の写真であり、絹／ＨＡ製剤が均質で不透明な溶液であることを示す。最初のマークのないバイアルが対照バイアル（水中２２ｍｇ／ｍＬのＨＡ）である。
【図29】図２９は、対照皮膚フィラー（リドカインを含む市販のＨＡフィラー）を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である。炎症の程度の上昇が、肉芽腫性領域の程度で反映される。市販のフィラーは、青色／灰色の物質として観察される。この物質に関連する肉芽腫性炎症は、７日間で観察することができる。
【図30】図３０は、対照皮膚フィラー（リドカインを含む市販のＨＡフィラー）を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である。市販品は、青色／灰色の物質として観察される。３０日間目に、線維症を伴う炎症を観察することができる。
【図31】図３１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍＬのＨＡ、９．６ｍｇ／ｍＬの絹、ＢＤＤＥ架橋）。対照注入と比較して減少した肉芽腫性領域は、無視できる程度の急性炎症応答、及び対照と比較して良好な絹－ＨＡフィラーの生分解性を示す。７日間目では殆ど炎症がない。炎症は局所的であり、発見するのが困難な場合がある。インプラント材料は観察されない。
【図32】図３２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍＬのＨＡ、９．６ｍｇ／ｍＬの絹、ＢＤＤＥ架橋）。３０日間目で、炎症は非常に発見しにくく、最小限である。インプラント材料は観察されない。
【図33】図３３は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍＬのＨＡ、０．４８ｍｇ／ｍＬの絹、ＢＤＤＥ架橋）。７日間目に、フィラーは、局所的で軽度な炎症をもたらす。炎症は慢性的である。この炎症は、局所的であり且つ最小限あったので、同定に綿密な評価を必要とした。インプラント材料は観察されない。
【図34】図３４は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍＬのＨＡ、０．４８ｍｇ／ｍＬの絹、ＢＤＤＥ架橋）。３０日間目の画像は、更に低い程度の炎症を示す。７日間目のインプラントと比較して、同定が更に困難であった。インプラント材料は観察されない。
【図39】図３９は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＬ－表２５）。
【図40】図４０は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２３．７６ｍｇ／ｍＬのＨＡ、０．２４ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＭ－表２５）。
【図41】図４１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＮ－表２５）。
【図42】図４２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＯ－表２５）。
【図43】図４３は、ゲル分解についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである（表２５の製剤－ＢＤＤＥ架橋製剤は大部分が分解される；スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；４－重度）。
【0088】
上に特定した図面により本発明で開示した実施形態を示したが、考察において言及されるように、他の実施形態も考慮される。本開示は、代表するものであり限定するものではない例示的な実施形態を提示する。本発明で開示する実施形態の原理の範囲及び趣旨に包含される多くの他の改変形態及び実施形態を、当業者は案出することができる。
【発明を実施するための形態】
【0089】
絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む組織フィラーが本明細書に開示される。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、ＳＰＦ及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含むことができる本明細書に記載の組成物から調製される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、皮膚フィラーであることができる。
【0090】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約５ｋＤａ～約５ＭＤａ、約１００ｋＤａ～約４ＭＤａ、又は約５００ｋＤａ～約３ＭＤａのＭＷを有するＨＡを使用することにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約５５０ｋＤａ、約６００ｋＤａ、約６５０ｋＤａ、約７００ｋＤａ、約７５０ｋＤａ、約８００ｋＤａ、約８５０ｋＤａ、約９００ｋＤａ、約９５０ｋＤａ、約１０００ｋＤａ、約１０５０ｋＤａ、約１１００ｋＤａ、約１１５０ｋＤａ、約１２００ｋＤａ、約１２５０ｋＤａ、約１３００ｋＤａ、約１３５０ｋＤａ、約１４００ｋＤａ、約１４５０ｋＤａ、約１５００ｋＤａ、約１５５０ｋＤａ、約１６００ｋＤａ、約１６５０ｋＤａ、約１７００ｋＤａ、約１７５０ｋＤａ、約１８００ｋＤａ、約１８５０ｋＤａ、約１９００ｋＤａ、約１９５０ｋＤａ、約２０００ｋＤａ、約２０５０ｋＤａ、約２１００ｋＤａ、約２１５０ｋＤａ、約２２００ｋＤａ、約２２５０ｋＤａ、約２３００ｋＤａ、約２３５０ｋＤａ、約２４００ｋＤａ、約２４５０ｋＤａ、約２５００ｋＤａ、約２５５０ｋＤａ、約２６００ｋＤａ、約２６５０ｋＤａ、約２７００ｋＤａ、約２７５０ｋＤａ、約２８００ｋＤａ、約２８５０ｋＤａ、約２９００ｋＤａ、約２９５０ｋＤａ、約３０００ｋＤａ、約３０５０ｋＤａ、約３１００ｋＤａ、約３１５０ｋＤａ、約３２００ｋＤａ、約３２５０ｋＤａ、約３３００ｋＤａ、約３３５０ｋＤａ、約３４００ｋＤａ、約３４５０ｋＤａ、約３５００ｋＤａ、約３５５０ｋＤａ、約３６００ｋＤａ、約３６５０ｋＤａ、約３７００ｋＤａ、約３７５０ｋＤａ、約３８００ｋＤａ、約３８５０ｋＤａ、約３９００ｋＤａ、約３９５０ｋＤａ、又は約４０００ｋＤａのＭＷを有するＨＡを使用することにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。ＨＡの前記ＭＷのいずれかを、任意の可能な割合で、ＨＡの任意の他の前記ＭＷと混合することができる。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、高ＭＷのＨＡを低ＭＷのＨＡと混合して製造され、前記高ＭＷのＨＡの割合は、約０．０１％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％、又は約９９．５％、又は約９９．９％である。
【0091】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約５ｋＤａ～約３５ｋＤａの分子量を有する絹ＳＰＦを使用することにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約５ｋＤａ、又は約６ｋＤａ、又は約７ｋＤａ、又は約８ｋＤａ、又は約９ｋＤａ、又は約１０ｋＤａ、又は約１１ｋＤａ、又は約１２ｋＤａ、又は約１３ｋＤａ、又は約１４ｋＤａ、又は約１５ｋＤａ、又は約１６ｋＤａ、又は約１７ｋＤａ、又は約１９ｋＤａ、又は約１９ｋＤａ、又は約２０ｋＤａ、又は約２１ｋＤａ、又は約２２ｋＤａ、又は約２３ｋＤａ、又は約２４ｋＤａ、又は約２５ｋＤａ、又は約２６ｋＤａ、又は約２７ｋＤａ、又は約２８ｋＤａ、又は約２９ｋＤａ、又は約３０ｋＤａのＭＷを有する絹ＳＰＦを使用することにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。
【0092】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約８０ｍｇ／ｍｌ、又は約８１ｍｇ／ｍｌ、又は約８２ｍｇ／ｍｌ、又は約８３ｍｇ／ｍｌ、又は約８４ｍｇ／ｍｌ、又は約８５ｍｇ／ｍｌ、又は約８６ｍｇ／ｍｌ、又は約８７ｍｇ／ｍｌ、又は約８８ｍｇ／ｍｌ、又は約８９ｍｇ／ｍｌ、又は約９０ｍｇ／ｍｌ、又は約９１ｍｇ／ｍｌ、又は約９２ｍｇ／ｍｌ、又は約９３ｍｇ／ｍｌ、又は約９４ｍｇ／ｍｌ、又は約９５ｍｇ／ｍｌ、又は約９６ｍｇ／ｍｌ、又は約９７ｍｇ／ｍｌ、又は約９８ｍｇ／ｍｌ、又は約９９ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ、又は約１０１ｍｇ／ｍｌ、又は約１０２ｍｇ／ｍｌ、又は約１０３ｍｇ／ｍｌ、又は約１０４ｍｇ／ｍｌ、又は約１０５ｍｇ／ｍｌ、又は約１０６ｍｇ／ｍｌ、又は約１０７ｍｇ／ｍｌ、又は約１０８ｍｇ／ｍｌ、又は約１０９ｍｇ／ｍｌ、又は約１１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１１１ｍｇ／ｍｌ、又は約１１２ｍｇ／ｍｌ、又は約１１３ｍｇ／ｍｌ、又は約１１４ｍｇ／ｍｌ、又は約１１５ｍｇ／ｍｌ、又は約１１６ｍｇ／ｍｌ、又は約１１７ｍｇ／ｍｌ、又は約１１８ｍｇ／ｍｌ、又は約１１９ｍｇ／ｍｌ、又は約１２０ｍｇ／ｍｌ、又はそれより高いＨＡの初期濃度を用いることにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。
【0093】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の皮膚フィラーは、総ＨＡ及び絹ＳＰＦの約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約１．１％、又は約１．２％、又は約１．３％、又は約１．４％、又は約１．５％、又は約１．６％、又は約１．７％、又は約１．８％、又は約１．９％、又は約２％、又は約２．１％、又は約２．２％、又は約２．３％、又は約２．４％、又は約２．５％、又は約２．６％、又は約２．７％、又は約２．８％、又は約２．９％、又は約３％、又は約３．１％、又は約３．２％、又は約３．３％、又は約３．４％、又は約３．５％、又は約３．６％、又は約３．７％、又は約３．８％、又は約３．９％、又は約４％、又は約４．１％、又は約４．２％、又は約４．３％、又は約４．４％、又は約４．５％、又は約４．６％、又は約４．７％、又は約４．８％、又は約４．９％、又は約５％の絹ＳＰＦ濃度を有する。
【0094】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、又は約１２００のＭｎを有するＰＥＧＤＥ架橋剤を使用することにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。
【0095】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、又は約５５℃での架橋工程を含む反応条件を用いることにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約１５分間、約１６分間、約１７分間、約１８分間、約１９分間、約２０分間、約２１分間、約２２分間、約２３分間、約２４分間、約２５分間、約２６分間、約２７分間、約２８分間、約２９分間、約３０分間、約３１分間、約３２分間、約３３分間、約３４分間、約３５分間、約３６分間、約３７分間、約３８分間、約３９分間、約４０分間、約４１分間、約４２分間、約４３分間、約４４分間、約４５分間、約４６分間、約４７分間、約４８分間、約４９分間、約５０分間、約５１分間、約５２分間、約５３分間、約５４分間、約５５分間、約５６分間、約５７分間、約５８分間、約５９分間、約６０分間、約６１分間、約６２分間、約６３分間、約６４分間、又は約６５分間の架橋工程を含む反応条件を用いることにより、本明細書に記載のプロセスによって製造される。
【0096】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、遊離ＨＡ、例えば非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、総ＨＡ（架橋ＨＡ及び非架橋ＨＡ）の約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９、約１％、又は約１．１％、又は約１．２％、又は約１．３％、又は約１．４％、又は約１．５％、又は約１．６％、又は約１．７％、又は約１．８％、又は約１．９％、又は約２％、又は約２．１％、又は約２．２％、又は約２．３％、又は約２．４％、又は約２．５％、又は約２．６％、又は約２．７％、又は約２．８％、又は約２．９％、又は約３％、又は約３．１％、又は約３．２％、又は約３．３％、又は約３．４％、又は約３．５％、又は約３．６％、又は約３．７％、又は約３．８％、又は約３．９％、又は約４％、又は約４．１％、又は約４．２％、又は約４．３％、又は約４．４％、又は約４．５％、又は約４．６％、又は約４．７％、又は約４．８％、又は約４．９％、又は約５％、約５．１％、又は約５．２％、又は約５．３％、又は約５．４％、又は約５．５％、又は約５．６％、又は約５．７％、又は約５．８％、又は約５．９％、又は％、又は約６％、又は約６．１％、又は約６．２％、又は約６．３％、又は約６．４％、又は約６．５％、又は約６．６％、又は約６．７％、又は約６．８％、又は約６．９％、又は約７％、又は約７．１％、又は約７．２％、又は約７．３％、又は約７．４％、又は約７．５％、又は約７．６％、又は約７．７％、又は約７．８％、又は約７．９％、又は約８％、又は約８．１％、又は約８．２％、又は約８．３％、又は約８．４％、又は約８．５％、又は約８．６％、又は約８．７％、又は約８．８％、又は約８．９％、又は約９％、又は約９．１％、又は約９．２％、又は約９．３％、又は約９．４％、又は約９．５％、又は約９．６％、又は約９．７％、又は約９．８％、又は約９．９％、又は約１０％含む。幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、遊離ＨＡを含まない。
【0097】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、又は約３０ｍｇ／ｍｌでＨＡを含む。
【0098】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％、約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０％、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％のＭｏＤを有する。
【0099】
幾つかの実施形態では、皮膚フィラーは、約５Ｎ、約６Ｎ、約７Ｎ、約８Ｎ、約９Ｎ、約１０Ｎ、約１１Ｎ、約１２Ｎ、約１３Ｎ、約１４Ｎ、約１５Ｎ、約１６Ｎ、約１７Ｎ、約１８Ｎ、約１９Ｎ、約２０Ｎ、約２１Ｎ、約２２Ｎ、約２３Ｎ、約２４Ｎ、又は約２５Ｎの噴射力を有する。幾つかの実施形態では、噴射力は、３０Ｇ針を介する注入に関する。
【0100】
本明細書で提供される組織フィラーは、ＳＰＦ、例えば、架橋ＳＰＦ及び／又は非架橋ＳＰＦ、及びヒアルロン酸、例えば、架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＨＡなどの１以上の成分を更に含む組成物を含む。本明細書で使用するとき、架橋ＳＰＦは、同一又は非同一ＳＰＦと架橋されたＳＰＦを意味する。架橋ＳＰＦは、ホモ架橋ＳＰＦと呼ぶこともできる。本明細書で使用するとき、架橋ＨＡは、同一又は非同一のＨＡと架橋されたＨＡを意味する。架橋ＨＡは、ホモ架橋ＨＡと呼ぶこともできる。本明細書で提供される組織フィラーは、ＨＡに架橋されたＳＰＦ及び／又はＳＰＦに架橋されたＨＡを含むこともできる。ＨＡに架橋されたＳＰＦ及び／又はＳＰＦに架橋されたＨＡを、架橋ＳＰＦ－ＨＡ、又はヘテロ架橋ＳＰＦ－ＨＡと呼ぶこともできる。
【0101】
幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、単相である。幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、二相、又は多相である。幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、非架橋ポリマー相、例えば、非架橋ＳＰＦ、及び／又は非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、架橋された相、例えば、架橋ＳＰＦ、及び／又は架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、液相、例えば、水及び／又は水溶液を含む。幾つかの実施形態では、水溶液はＳＰＦを含むことができる。幾つかの実施形態では、水相は、ＨＡを含むことができる。幾つかの実施形態において、液相は、非架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＳＰＦなどの非架橋ポリマーを含んでもよい。
【0102】
幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、担体相を含む。このように、開示の組成物は、単相又は多相の組成物であることができる。本明細書で使用するとき、「担体相」という用語は、「担体」と同義であり、ヒドロゲルの流動性を増大させるために使用される材料を意味する。担体は、有利には、生理学的に許容される担体であり、医薬組成物に有用な１の以上の従来の賦形剤を含むことができる。本明細書で使用するとき、「生理学的に許容される担体」という用語は、生物の正常な機能に合った、又はそれを特徴とする担体を意味する。このように、哺乳動物に投与された場合、ヒドロゲルと担体を含む組成物の投与は、長期的又は永久的に有害な影響を実質的に及ぼさない。本組織フィラーは、その体積の主要部が水又は生理食塩水である担体を含む。しかし、他の有用な担体としては、ヒドロゲルの（針を介する）目的ホスト環境への押出性又は侵入性を改善する任意の生理学的に許容される材料を含む。潜在的な担体としては、生理的緩衝溶液、血清、他のタンパク質溶液、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、又は多糖を含むポリマーから構成されるゲルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。この潜在的な担体はのいずれも、天然由来であっても、全合成物であっても、又はそれらの組合せのいずれであってもよい。
【0103】
一実施形態では、本明細書で提供される組成物は、変性ＳＰＦ、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、変性ＨＡ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、ホモ架橋ＳＰＦ、ホモ架橋ＨＡ、及びヘテロ架橋ＳＰＦ－ＨＡの１以上を含む。
【0104】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び非架橋ＳＰＦを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0105】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0106】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0107】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0108】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0109】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0110】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0111】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。
【0112】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、架橋ＳＰＦを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、ＳＰＦ及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含む。一態様では、本明細書に記載のＳＰＦ／ＨＡ系組成物は、ＨＡ架橋部分を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＳＰＦ－ＨＡ架橋部分を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、非架橋ＨＡを含む。幾つかの実施形態において、組成物は、非架橋ＳＰＦを含むことができる。幾つかの実施形態において、組成物は、少なくとも１つの更なる剤を含むことができる。幾つかの実施形態において、組成物は、架橋ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又はＨＡ－ＨＡを含み、様々な程度の生体吸収性及び／又は生体再吸収性を有する組成物をもたらす。
【0113】
幾つかの実施形態において、ＨＡは、マトリックス中に架橋される。幾つかの実施形態において、ＨＡマトリックスは、１以上のＳＰＦをカプセル化又はを半カプセル化する。幾つかの実施形態では、ＨＡは、１以上のＳＰＦと架橋されている。
【0114】
幾つかの実施形態では、組織フィラー、又はその一部は、生体適合性、生分解性、生体吸収性、生体再吸収性、又はそれらの組合せである。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される組織フィラーは、流体成分、例えば、実質的に１つ以上の流体を含む単一の流体又は溶液が挙げられる。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、水又は水溶液を含む。幾つかの実施形態では、組織フィラーは、例えば、組織の外科的切除後などで、当技術分野で知られた任意の手段によって皮下に注入可能、移植可能、又は、送達可能である。幾つかの実施形態において、組成物は、皮膚フィラーである。幾つかの実施形態において、組成物は無菌である。
【0115】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、約１％（ｗ／ｗ）のＳＰＦ及び約０．３％（ｗ／ｗ）のリドカインを含むことができる。
【0116】
絹タンパク質断片（ＳＰＦ）とヒアルロン酸（ＨＡ）とを含む組成物を製造する方法、ＳＰＦとＨＡとを含む組成物を送達する方法、及びＳＰＦとＨＡとを含む組成物を使用する治療の方法が、本明細書に提供される。
【0117】
定義
本明細書で使用するとき、「フィブロイン」という用語は、カイコフィブロイン、昆虫又はクモ絹タンパク質、又は組換え絹フィブロインを含む。実施形態では、フィブロインは、カイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）から得られる。
本明細書で使用するとき、「フィブロイン」という用語は、カイコフィブロイン、昆虫又はクモ絹タンパク質、又は組換え絹フィブロインを含む。実施形態では、フィブロインは、カイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）から得られる。
【0118】
本明細書で使用する場合、「セリシンを実質的に含まない」又は「セリシン実質的に欠いている」という用語は、セリシンタンパク質の大部分が除去された絹繊維、及び／又はセリシンタンパク質の大部分が除去された絹繊維から作製されたＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約９．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約８．０％（ｗ／ｗ）のセリシン有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約７．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約６．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約５．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．１％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約１．０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約２．０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）のセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．１％（ｗ／ｗ）未満のセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０５％（ｗ／ｗ）未満のセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを意味する。実施形態では、絹源が、沸騰している（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に約３０分間～約６０分間の処理時間添加されるときに、約２６重量％～約３１重量％の脱ガム損失（ｄｅｇｕｍｍｉｎｇ ｌｏｓｓ）が得られる。
【0119】
本明細書で使用するとき、「実質的に均質な」という用語は、同定された分子量の周りに正規分布で分布している純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を意味することができる。本明細書で使用するとき、「実質的に均質な」という用語は、本開示の組成物全体を通して、例えばリドカインなどの添加剤の均一な分布を意味することができる。
【0120】
本明細書で使用するとき、「無機残渣を実質的に含まない」という用語は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示すことを意味する。実施形態では、無機残渣を実質的に含まないは、０．０５％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示す組成物を意味する。実施形態では、無機残渣を実質的に含まないは、０．０１％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示す組成物を意味する。実施形態では、無機残渣の量は０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。実施形態では、無機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。
【0121】
本明細書で使用するとき、「有機残渣を実質的に含まない」という用語は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示すことを意味する。実施形態では、有機残渣を実質的に含まないは、０．０５％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示す組成物を意味する。実施形態では、有機残渣を実質的に含まないは、０．０１％（ｗ／ｗ）以下の残渣を示す組成物を意味する。実施形態では、有機残渣の量は０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。実施形態では、有機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。
【0122】
本明細書で使用するとき、「非架橋」という用語は、個々のマトリックスポリマー分子、高分子、及び／又はモノマー鎖を結合する分子間結合の欠如を意味する。このように、非架橋マトリックスポリマーは、分子間結合によって他のマトリックスポリマーに結合されていない。
【0123】
本開示の組織フィラー、組成物、又はその一部は、「生体適合性」を示す又は「生体適合性」であり、これは、組成物が、実質的に毒性がない、有毒でない、生理学的反応がなく、且つ免疫拒絶を生じないことにより、生体組織又は生体システムと適合することを意味する。「生体適合性」という用語は、本明細書に定義される「生体吸収性」、「生体再吸収性」、及び「生分解性」という用語を包含する。
【0124】
本開示の組織フィラー、組成物、又はその一部は、「生体吸収性」、「生体再吸収性」及び／又は「生分解性」であることができる。本明細書で使用するとき、「生体吸収性」という用語は、消失が起こり得るメカニズム（溶解、分解、吸収、及び排泄など）が何であるかによらず、体内移植時に消失する材料又は物質を意味する。本明細書で使用するとき、「生体吸収性」という用語は、体に吸収されることができることを意味する。本明細書で使用するとき、「生分解性」という用語は、生理学的条件下で副生成物に分解し得る材料を意味する。そのような生理学的条件は、例えば、加水分解（加水分解を介する分解）、酵素触媒（酵素分解）、機械的相互作用などが挙げられる。本明細書に使用するとき、「生分解性」という用語は、「生体再吸収性」という用語も包含し、これは、生理学的条件下で分解し、ホスト生物に生体再吸収される生成物に分解される、即ち、ホスト生物の生化学系の代謝産物となる材料又は物質を記述する。本明細書で使用するとき、「生体吸収性」及び「生体再吸収性」という用語は、細胞媒介性分解、酵素分解、及び／又は生体吸収性ポリマーの加水分解、及び／又は生体組織からの生体再吸収性ポリマーの除去などのプロセスを包含することが当業者に理解される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載のＳＰＦ－ＨＡの組成物及び材料は、生体適合性、生体再吸収性、生体吸収性、及び／又は生分解性であることができる。
【0125】
本明細書に記載の組織フィラーが生分解性又は生体再吸収性である場合、それらは、少なくとも約１日間、又は少なくとも約２日間、又は少なくとも約３日間、又は少なくとも約４日間、又は少なくとも約５日間、又は少なくとも約１０日間、又は少なくとも約１５日間、又は少なくとも約２０日間、又は少なくとも約２５日間、又は少なくとも約３０日間、又は少なくとも約３５日間、又は少なくとも約４０日間、又は少なくとも約４５日間、又は少なくとも約５０日間、又は少なくとも約６０日間、又は少なくとも約７０日間、又は少なくとも約８０日間、又は少なくとも約９０日間、又は少なくとも約１００日間、又は少なくとも１１０日間、又は少なくとも約１２０日間、又は少なくとも約１３０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１５０日間、又は少なくとも約１６０日間、又は少なくとも約１７０日間、又は少なくとも約１８０日間、又は少なくとも約１９０日間、又は少なくとも約２００日間、又は少なくとも約２５０日間、又は少なくとも約３００日間、又は少なくとも少なくとも約１年間、又は少なくとも約２年間、生分解又は生体再吸収に対して抵抗性を示すことができ、又はそれらは、約５日間未満、又は最大約１０日間、又は最大約１５日間、又は最大約２０日間、又は最大約２５日間、又は最大約３０日間、又は最大約３５日間、又は最大約４０日間、又は最大約４５日間、又は最大約５０日間、又は最大約６０日間、又は最大約７０日、又は最大約８０日間、又は最大約９０日間、又は最大約１００日間、又は最大約１１０日間、又は最大約１２０日間、又は最大約１３０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１５０日間、又は最大約１６０日間、又は最大約１７０日間、又は最大約１８０日間、又は最大約１９０日間、又は最大約２００日間、又は最大約２５０日間、又は最大約３００日間、又は最大約１年間、又は最大約２年間、生分解に対して抵抗性を示すことができる。
【0126】
本明細書に記載の組織フィラーが生体吸収性である場合、それらは、少なくとも約１日間、又は少なくとも約２日間、又は少なくとも約３日間、又は少なくとも約４日間、又は少なくとも約５日間、又は少なくとも約１０日間、又は少なくとも約１５日間、又は少なくとも約２０日間、又は少なくとも約２５日間、又は少なくとも約３０日間、又は少なくとも約３５日間、又は少なくとも約４０日間、又は少なくとも約４５日間、又は少なくとも約５０日間、又は少なくとも約６０日間、又は少なくとも約７０日間、又は少なくとも約８０日間、又は少なくとも約９０日間、又は少なくとも約１００日間、又は少なくとも１１０日間、又は少なくとも約１２０日間、又は少なくとも約１３０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１５０日間、又は少なくとも約１６０日間、又は少なくとも約１７０日間、又は少なくとも約１８０日間、又は少なくとも約１９０日間、又は少なくとも約２００日間、又は少なくとも約２５０日間、又は少なくとも約３００日間、又は少なくとも少なくとも約１年間、又は少なくとも約２年間、生体吸収に対して抵抗性を示すことができ、又はそれらは、約５日間未満、又は最大約１０日間、又は最大約１５日間、又は最大約２０日間、又は最大約２５日間、又は最大約３０日間、又は最大約３５日間、又は最大約４０日間、又は最大約４５日間、又は最大約５０日間、又は最大約６０日間、又は最大約７０日間、又は最大約８０日間、又は最大約９０日間、又は最大約１００日間、又は最大約１１０日間、又は最大約１２０日間、又は最大約１３０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１５０日間、又は最大約１６０日間、又は最大約１７０日間、又は最大約１８０日間、又は最大約１９０日間、又は最大約２００日間、又は最大約２５０日間、又は最大約３００日間、又は最大約１年間、又は最大約２年間、生体吸収に対して抵抗性を示すことができる。
【0127】
本明細書に記載するとき、生分解性、生体吸収性、及び生体再吸収性の程度は、例えば、生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収を遅らせる１以上の剤を本明細書に記載の組成物に添加することにより、変更及び／又は制御することができる。また、生分解性、生体吸収性、及び生体再吸収性の程度は、本明細書に記載のポリマー材料中に存在する高分子架橋の程度を増加又は減少させることにより、変更及び／又は制御することができる。例えば、本明細書に記載の組成物の生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収の速度は、本明細書に記載のポリマー材料中の架橋の量を減少させることによって増加させることができる。或いは、本明細書に記載の組織フィラー及び組成物の生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収の速度は、本明細書に記載のポリマー材料中の架橋の量を増加させることによって減少させることができる。
【0128】
本開示の組織フィラー及び組成物は、「低アレルギー性」であり、これは、それらがアレルギー反応を比較的起こしにくいことを意味する。そのような低アレルギー性は、参加者が局所的に長期間、その皮膚に本開示の組成物を適用することによって証明することができる。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約７日間である。実施形態では、前記長期間は、約１４日間である。実施形態において、前記長期間は、約２１日間である。実施形態では、前記長期間は、約３０日間である。実施形態において、前記長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、無期限からなる群から選択される。
【0129】
本明細書で使用するとき、「低分子量」絹は、約５ｋＤａ～約２０ｋＤａの分子量を有する絹タンパク質断片を意味する。幾つかの実施形態では、特定の絹タンパク質断片の目標低分子量は、約１１ｋＤａであることができる。
【0130】
本明細書で使用するとき、「中分子量」絹は、約２０ｋＤａ～約５５ｋＤａの分子量を有する絹タンパク質断片を意味する。幾つかの実施形態では、特定の絹タンパク質断片の目標低分子量は、約４０ｋＤａであることができる。
【0131】
本明細書で使用するとき、「高分子量」絹は、約５５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの分子量を有する絹タンパク質断片を意味する。幾つかの実施形態では、特定の絹タンパク質断片の目標低分子量は、約１００ｋＤａ～約１４５ｋＤａであることができる。
【0132】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される分子量、例えば、低分子量ＳＰＦ、中分子量ＳＰＦ、高分子量ＳＰＦはそれぞれ、当業者によって理解されるように、天然又は組換えタンパク質（例えば、天然又は組換え絹タンパク質）に含まれるアミノ酸のお約の数に変換することができる。例えば、アミノ酸の平均重量は、約１１０ダルトン、即ち、１１０ｇ／ｍｏｌであり得る。したがって、幾つかの実施形態では、直鎖状タンパク質の分子量を１１０ダルトンで除すことを、その中に含まれるアミノ酸残基数の近似に使用することができる。
【0133】
本明細書で使用するとき、「多分散性」という用語は、所与のポリマーサンプルにおける分子量分布の尺度を意味する。多分散性は、重量平均分子量（Ｍｗ）を数平均分子量（Ｍｎ）で除することによって計算することができる。本明細書で使用するとき、「重量平均分子量」（Ｍｗ）という用語は、一般に、それらのサイズにしたがうポリマー分子の寄与に依存する分子量測定値を意味する。重量平均分子量は、以下の式によって定義することができる。
式中、Ｍｉは、鎖の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の鎖の数である。本明細書で使用するとき、「数平均分子量」（Ｍｎ）という用語は、一般に、サンプル中の全ポリマー分子の総重量を、サンプル中のポリマー分子の総数で除することにより計算される分子量測定値を意味する。数平均分子量は、以下の式によって定義することができる。
式中、Ｍｉは、鎖の分子量であり、Ｎｉは、その分子量の鎖の数である。例えば、全てのポリマー鎖が等しい単分散ポリマーは、１の多分散性（Ｍｗ／Ｍｎ）を有する。一般に、分子量平均は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定することができる。多分散性指数が大きいほど、分子量はより広い。
【数1】
【数2】
【0134】
本明細書で使用するとき、「組織フィラー」という用語は、ボリュームを付加する、サポートを付加する、又はその他の方法で軟組織欠損を治療するために、軟組織の内部又は周辺に設けることができる材料を広く意味する。「組織フィラー」という用語はまた、皮膚フィラーを包含する。しかし、「皮膚フィラー」という用語は、フィラーの送達の場所及びタイプに関していかなる限定を課すものと解釈されるべきではない。それにもかかわらず、本明細書に記載の皮膚フィラーは、一般に、皮膚フィラーの真皮下の複数レベルでの使用及び送達を包含することができる。本明細書で使用するとき、「軟組織」という用語は、体の他の構造及び器官を結合、支持、又は囲むものを意味することができる。例えば、本明細書に記載の軟組織は、限定されるものではないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ）、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管や動脈、神経、及び滑膜（皮内）組織を含むことができる。
【0135】
本明細書で使用するとき、「エポキシ由来の架橋剤」という用語は、例えば、エポキシド基を含む架橋前駆体、例えば、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ、又はＰＥＧＤＧＥ）、又は絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片ポリエポキシリンカーを用いることによって得られる同一又は別のポリマー鎖に２つの部分間の分子ブリッジを意味する。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ポリマーの側鎖に含む、ポリマー鎖中の反応中心と反応することにより、エポキシド環が開環して、第二級アルコールとの新たな結合を形成する（スキーム１）。反応性基としては、限定されるものではないが、カルボキシル基、アミノ基、又はヒドロキシル基などの求核基を挙げることができる。
【化1】
【0136】
本明細書で使用するとき、「自己架橋」は、ａ）類似の化学的性質のポリマーの二本鎖間の架橋、例えば、ヒアルロン酸の二本鎖間の架橋又はＳＰＦの二本鎖間の架橋、又はｂ）環状エステル（ラクトン）、環状アミド、架橋部分を含む環状構築物などを形成するための同一ポリマー鎖上の架橋基間の架橋、例えば、ヒアルロン酸の同一鎖上の２つの基間の架橋又は同一のＳＰＦ鎖上の２つ基間の架橋、のいずれかを意味する。
【0137】
本明細書で使用するとき、「ゼロ長架橋」及び／又は「結合を含む架橋」及び／又は「活性化剤を用いる架橋」は、別々のポリマー鎖上又は同一のポリマー鎖上のいずれかの２つの基間での架橋であって、前記基が互いに直接反応し、追加の架橋部分がそれらの間に挿入されない架橋を意味する。カルボン酸基とアミン又はアルコールとの間の架橋であって、これらの基の一方が活性化剤、例えば、カルボジイミドによって活性化される架橋は、ゼロ長架橋の例である。
【0138】
本明細書で使用するとき、「チンダル現象」及び／又は「チンダリング」は、組織フィラーを投与した一部の患者で生じる有害事象である。チンダル現象は、組織フィラーが注入された皮膚部位における青色変色の出現によって特徴付けられ、これは、半透明の表皮を通して見える可視皮膚フィラー組成物を表す。粒子断面が特定の範囲内、通常、可視光波長よりも幾分短い又は近いとき、光散乱微粒子状物質が、光透過性媒体中に分散されたときにチンダル現象が観察される。チンダル現象の下では、より長い波長の光（例えば、赤色）が媒体を介してより大きな程度透過される一方で、より短波長の光（例えば、青色）が散乱を介してより大きい程度に反射され、媒体が青色に着色されているという全体的な印象を与える。
【0139】
絹タンパク質断片
幾つかの実施形態では、絹タンパク質ベース組成物と絹タンパク質断片、又はその製造方法は、それらの全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１５／００９３３３４０号明細書、同第２０１５／００９４２６９号明細書、同第２０１６／０１９３１３０号明細書、同第２０１６／００２２５６０号明細書、同第２０１６／００２２５６１号明細書、同第２０１６／００２２５６２号明細書、同第２０１６／００２２５６３号明細書、同第２０１６／０２２２５７９号明細書、同第２０１６／０２８１２９４号明細書、及び米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、及び同第９，５４５，３６９号明細書に記載されているものを含むことができる。
幾つかの実施形態では、絹タンパク質ベース組成物と絹タンパク質断片、又はその製造方法は、それらの全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１５／００９３３３４０号明細書、同第２０１５／００９４２６９号明細書、同第２０１６／０１９３１３０号明細書、同第２０１６／００２２５６０号明細書、同第２０１６／００２２５６１号明細書、同第２０１６／００２２５６２号明細書、同第２０１６／００２２５６３号明細書、同第２０１６／０２２２５７９号明細書、同第２０１６／０２８１２９４号明細書、及び米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、及び同第９，５４５，３６９号明細書に記載されているものを含むことができる。
【0140】
本明細書で使用するとき、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、絹由来のペプチド及び／又はタンパク質の混合物、組成物、又は集団を一般に意味する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、様々な用途のために複数の産業に亘って使用することができる実質的に純粋且つ高度にスケーラブルなＳＰＦ混合溶液として製造される。溶液は、未処理の純粋で無傷の絹タンパク質材料から生成され、セリシンを除去し、断片混合物の所望の重量平均分子量（Ｍｗ）及び多分散性を達成するために加工される。選択した方法のパラメータは、使用目的に応じて異なる最終絹タンパク質断片の特性を達成するように変更することができる。得られる最終断片溶液は、プロセス汚染物質の検出不能なレベル、医薬、医療、消費者化粧品市場で許容されるレベルのＰＰＭを有する純粋な絹タンパク質断片と水である。溶液中の絹タンパク質断片の濃度、サイズ、及び多分散性は、所望の用途及び性能要件に応じて更に変更することができる。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約８０ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の多分散性を有する。
【0141】
実施形態において、本明細書に記載の絹タンパク質断片は、溶液中又は固体として調製でき、固体は、本明細書に記載されるように、生理的溶液（例えば、水、生理食塩水など）又はＨＡのゲル中に懸濁させる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の絹タンパク質断片は、ＨＡのゲルにそれを充填する前に、リポソーム又はミクロスフェア中に調製できる。
【0142】
実施形態では、本開示の絹溶液は、本明細書に記載の組織フィラー組成物を生成するために使用することができる。実施形態では、溶液は、本明細書に記載の組織フィラーを調製するためにＨＡ及び更なる剤とホモジナイズされ得るゲルを生成するために使用することができる。利用される絹溶液及び膜又はゲルを鋳造するための方法に応じて、様々な特性が達成される。
【0143】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーにおけるＳＰＦ含有量（重量％）は、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１％、又は少なくとも２％、又は少なくとも３％、又は少なくとも４％、又は少なくとも５％、又は少なくとも６％、又は少なくとも７％、又は少なくとも８％、又は少なくとも９％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１１％、又は少なくとも１２％、又は少なくとも１３％、又は少なくとも１４％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも１６％、又は少なくとも１７％、又は少なくとも１８％、又は少なくとも１９％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２１％、又は少なくとも２２％、又は少なくとも２３％、又は少なくとも２４％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３１％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３３％、又は少なくとも３４％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３６％、又は少なくとも３７％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも３９％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４１％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４３％、又は少なくとも４４％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４６％、又は少なくとも４７％、又は少なくとも４８％、又は少なくとも４９％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５１％、又は少なくとも５２％、又は少なくとも５３％、又は少なくとも５４％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５６％、又は少なくとも５７％、又は少なくとも５８％、又は少なくとも５９％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６１％、又は少なくとも６２％、又は少なくとも６３％、又は少なくとも６４％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６６％、又は少なくとも６７％、又は少なくとも６８％、又は少なくとも６９％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７１％、又は少なくとも７２％、又は少なくとも７３％、又は少なくとも７４％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７６％、又は少なくとも７７％、又は少なくとも７８％、又は少なくとも７９％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８１％、又は少なくとも８２％、又は少なくとも８３％、又は少なくとも８４％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８６％、又は少なくとも８７％、又は少なくとも８８％、又は少なくとも８９％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９１％、又は少なくとも９２％、又は少なくとも９３％、又は少なくとも９４％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％である。
【0144】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーにおけるＳＰＦ含有量（重量％）は、最大０．０１％、又は最大０．１％、又は最大０．２％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１％、又は最大２％、又は最大３％、又は最大４％、又は最大５％、又は最大６％、又は最大７％、又は最大８％、又は最大９％、又は最大１０％、又は最大１１％、又は最大１２％、又は最大１３％、又は最大１４％、又は最大１５％、又は最大１６％、又は最大１７％、又は最大１８％、又は最大１９％、又は最大２０％、又は最大２１％、又は最大２２％、又は最大２３％、又は最大２４％、又は最大２５％、又は最大２６％、又は最大２７％、又は最大２８％、又は最大２９％、又は最大３０％、又は最大３１％、又は最大３２％、又は最大３３％、又は最大３４％、又は最大３５％、又は最大３６％、又は最大３７％、又は最大３８％、又は最大３９％、又は最大４０％、又は最大４１％、又は最大４２％、又は最大４３％、又は最大４４％、又は最大４５％、又は最大４６％、又は最大４７％、又は最大４８％、又は最大４９％、又は最大５０％、又は最大５１％、又は最大５２％、又は最大５３％、又は最大５４％、又は最大５５％、又は最大５６％、又は最大５７％、又は最大５８％、又は最大５９％、又は最大６０％、又は最大６１％、又は最大６２％、又は最大６３％、又は最大６４％、又は最大６５％、又は最大６６％、又は最大６７％、又は最大６８％、又は最大６９％、又は最大７０％、又は最大７１％、又は最大７２％、又は最大７３％、又は最大７４％、又は最大７５％、又は最大７６％、又は最大７７％、又は最大７８％、又は最大７９％、又は最大８０％、又は最大８１％、又は最大８２％、又は最大８３％、又は最大８４％、又は最大８５％、又は最大８６％、又は最大８７％、又は最大８８％、又は最大８９％、又は最大９０％、又は最大９１％、又は最大９２％、又は最大９３％、又は最大９４％、又は最大９５％、又は最大９６％、又は最大９７％、又は最大９８％、又は最大９９％、又は最大９９．５％、又は最大９９．９％である。
【0145】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーにおけるＳＰＦ含有量（重量％）は、約０．０１％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％、又は約９９．５％、又は約９９．９％である。
【0146】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーにおけるＳＰＦ含有量（重量％）は、約０．０１％～約１００％、又は約０．０１％～約９９．９％、又は約０．０１％～約７５％、又は約０．１％～約９５％、又は約１％～約９５％、又は約１０％～約９５％、又は約０．１％～約１％、又は約０．１％～約２％、又は約０．１％～約３％、又は約０．１％～約４％、又は約０．１％～約５％、又は約０．１％～約６％、又は約０．１％～約７％、又は約０．１％～約８％、又は約０．１％～約９％、又は約０．１％～約１０％、又は約０．１％～約１１％、又は約０．１％～約１２％、又は約０．１％～約１３％、又は約０．１％～約１４％、又は約０．１％～約１５％、又は約０．１％～約１６％、又は約０．１％～約１７％、又は約０．１％～約１８％、又は約０．１％～約１９％、又は約０．１％～約２０％、又は約０．１％～約２１％、又は約０．１％～約２２、又は約０．１％～約２３％、又は約０．１％～約２４％、又は約０．１％～約２５％、又は約１％～約２％、又は約１％～約３％、又は約１％～約４％、又は約１％～約５％、又は約１％～約６％、又は約１％～約７％、又は約１～約８％、又は約１％～約９％、又は約１％～約１０％、又は約１％～約１１％、又は約１％～約１２％、又は約１％～約１３％、又は約１％～約１４％、又は約１％～約１５％、又は約１％～約１６％、又は約１％～約１７％、又は約１％～約１８％、又は約１％～約１９％、又は約１％～約２０％、又は約１％～約２１％、又は約１％～約２２％、又は約１％～約２３％、又は約１％～約２４％、又は約１％～約２５％、又は約１０％～約２０％、又は約１０％～約２５％、又は約１０％～約３０％、又は約１０％～約３５％、又は約１０％～約４０％、又は約１０％～約４５％、又は約１０％～約５０％、又は約１０％～約５５％、又は約１０％～約６０％、又は約１０％～約６５％、又は約１０％～約７０％、又は約１０％～約７５％、又は約１０％～約８０％、又は約１０％～約８５％、又は約１０％～約９０％、又は約１０％～１００％である。
【0147】
本明細書に記載のＳＰＦは、ＳＰＦのペプチド及び／又はタンパク質の結晶化度に応じて様々な機械的及び物理的特性を有することができる。実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、タンパク質の結晶性のため、可溶ではない。実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、水溶液中で可溶である。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約３分の２の結晶性部分と、約３分の１のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約半分の結晶性部分と約半分のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９９％の結晶性部分と１％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９５％の結晶性部分と５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９０％の結晶性部分と１０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８５％の結晶性部分と１５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８０％の結晶性部分と２０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７５％の結晶性部分と２５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７０％の結晶性部分と３０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６５％の結晶性部分と３５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６０％の結晶性部分と４０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５０％の結晶性部分と５０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、４０％の結晶性部分と６０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３５％の結晶性部分と６５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３０％の結晶性部分と７０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２５％の結晶性部分と７５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２０％の結晶性部分と８０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１５％の結晶性部分と８５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１０％の結晶性部分と９０％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５％の結晶性部分と９５％のアモルファス領域を含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１％の結晶性部分と９９％のアモルファス領域を含む。
【0148】
幾つかの実施形態では、ＳＰＦの物理的及び機械的性質は、αヘリックス及び／又はランダムコイル領域のＳＰＦ組成物中での存在の程度に応じて変化する。幾つかの実施形態において、本明細書に開示されるＳＰＦヒドロゲルは、αヘリックス及びランダムコイル領域を実質的に含まないタンパク質構造を有する。これらの実施形態の態様では、ヒドロゲルは、例えば、約５％のαヘリックスとランダムコイル領域、約１０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約１５％のαヘリックス及びランダムコイル領域、約２０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約２５％のαヘリックスとランダムコイル領域、約３０％のαヘリックス及びランダムコイル領域、約３５％のαヘリックスとランダムコイル領域、約４０％のαヘリックス及びランダムコイル領域、約４５％のαヘリックスとランダムコイル領域、又は約５０％のαヘリックスとランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。これらの実施形態の他の態様では、ヒドロゲルは、例えば、最大５％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大１０％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大１５％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大２０％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大２５％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大３０％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大３５％のヘリックスとランダムコイル領域、最大４０％のαヘリックスとランダムコイル領域、最大４５％のαヘリックスとランダムコイル領域、又は最大５０％のαヘリックスとランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。これらの実施形態の更に他の態様において、ヒドロゲルは、例えば、約５％～約１０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約５％～約１５％のαヘリックスとランダムコイル領域、約５％～約２０％のαヘリックス及びランダムコイル領域、約５％～約２５％のαヘリックスとランダムコイル領域、約５％～約３０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約５％～約４０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約５％～約５０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約１０％～約２０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約１０％～約３０％のαヘリックスとランダムコイル領域、約１５％～約２５％のαヘリックス及びランダムコイル領域、約１５％～約３０％のαヘリックスとランダムコイル領域、又は約１５％～約３５％のαヘリックス及びランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。
【0149】
幾つかの実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、貯蔵条件、絹のパーセント並びに出荷の数及び出荷条件に応じて１０日間～３年間の保管安定性を有する（即ち、水溶液中で貯蔵した場合、それらは、徐々に又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の明らかな凝集及び／又は経時的な分子量の増大がない）。更にｐＨを変化させて、絹の早過ぎる折り畳み（ｆｏｌｄｉｎｇ）及び凝集を防止することによって、保管寿命を延長させることができ及び／又はシッピング条件を支援することができる。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、室温（ＲＴ）で、最大２週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大４週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大６週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大８週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１０週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１２週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、約４週間～約５２週間の保管安定性を有する。以下の表１は、本開示のＳＰＦ組成物の実施形態についての保管安定性試験結果を示す。
【表1】
【0150】
ビタミン（例えば、ビタミンＣ）など知られた添加剤を本開示のＳＰＦ液組成物に添加して、室温（ＲＴ）で１０日間～３年間安定なゲルを作製することができる。ＳＰＦ組成物及び添加剤を含むＳＰＦ組成物のいずれも、貯蔵及びシッピング条件に応じて１０日間～１０年間の向上された保管制御のために凍結乾燥することができる。凍結乾燥された絹パウダーはまた、医療、消費者、及び電子市場の原料として使用することができる。更に、凍結乾燥絹粉末は、保管後、水、ＨＦＩＰ、又は有機溶液に再懸濁して、各種濃度の絹溶液、例えば、最初に生成されるものよりも高濃度の溶液などを作製することができる。別の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、含有される水が１０質量％未満の乾燥タンパク質形態を作製するために、ロトサームエバポレータ又は当技術分野で知られた他の方法を用いて乾燥される。
【0151】
本明細書に開示される組織フィラー及び方法で使用されるＳＰＦは、種々の方法で操作及び含有させることができ（例えば、溶液の形態）、他の材料（例えば、ＨＡ）と組み合わせて、本明細書に記載の組織フィラー組成物を調製することができる。以下は、本開示の絹溶液の調製における及び調製のための種々のパラメータの好適な範囲の非限定的な例である。本開示の絹溶液は、これらのパラメータの１以上（必ずしも全てを含んでいなくてもよい）を含み、そのようなパラメータの範囲の種々の組合せを用いて調製することができる。
【0152】
実施形態では、溶液中の絹（％）は、３０％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２５％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２０％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１９％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１８％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１７％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１６％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１５％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１４％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１３％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１２％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１１％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１０％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、９％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、８％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、７％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、５％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、４％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、３％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．９％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．８％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．７％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．６％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．４％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．３％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．２％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．２％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．３％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．４％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．６％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．７％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．８％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．９％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、３％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、４％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、５％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、７％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、８％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、９％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１０％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１１％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１２％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１３％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１４％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１５％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１６％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１７％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１８％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１９％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２０％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２５％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～３０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～２５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～２０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～１５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～１０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～９％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～８％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～７％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～６．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～６％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～５．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～４．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～４％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～３．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～３％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～２．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～２．０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～２．４％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～４．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～４％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～３．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～３％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５％～２．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１～４％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％～３．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％～３％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％～２．５％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％～２．４％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１％～２％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２０％～３０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１％～６％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６％～１０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６％～８％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６％～９％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１０％～２０％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１１％～１９％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１２％～１８％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１３％～１７％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１４％～１６％である。
【0153】
実施形態では、本明細書に記載の絹組成物は、ＨＡと組み合わせて、組織フィラー組成物を形成することができる。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、３０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～３０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～２５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～２０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～１５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～１０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～６．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～５．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～４．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～３．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～２．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～２．０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～２．４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～４．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～３．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．５％～２．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１～４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％～３．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％～３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％～２．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％～２．４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１％～２％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、２０％～３０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、０．１％～６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、６％～１０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、６％～８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、６％～９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１０％～２０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１１％～１９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１２％～１８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１３％～１７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中の絹（重量％）は、１４％～１６％である。
【0154】
実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、検出不能～３０％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、検出不能～５％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、１％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、２％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、３％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、４％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、５％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、１０％である。実施形態では、溶液又は組織フィラー組成物中のセリシン（％）は、３０％である。
【0155】
実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～１年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、４～５年間である。
【0156】
実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１０日間～６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、６ヶ月間～１２ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１２ヶ月間～１８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１８ヶ月間～２４ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、２４ヶ月間～３０ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、３０ヶ月間～３６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、３６ヶ月間～４８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組織フィラーに含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、４８ヶ月間～６０ヶ月間である。
【0157】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５ｋＤａ～１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～６ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６ｋＤａ～１７ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７ｋＤａ～３９ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３９ｋＤａ～８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８０ｋＤａ～１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。
【0158】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２００ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１９０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１７０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１６０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１００ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～９０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～７０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～６０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。
【0159】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１～５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５～１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１０～１５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５～２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２０～２５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５～３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３０～３５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３５～４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、４０～４５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、４５～５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５０～５５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５５～６０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６０～６５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６５～７０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、７０～７５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、７５～８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８０～８５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８５～９０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、９０～９５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、９５～１００ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１００～１０５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１０５～１１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１１０～１１５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１１５～１２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１２０～１２５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１２５～１３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１３０～１３５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１３５～１４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１４０～１４５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１４５～１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５０～１５５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５５～１６０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１６０～１６５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１６５～１７０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７０～１７５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７５～１８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１８０～１８５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１８５～１９０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１９０～１９５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１９５～２００ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２００～２０５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２０５～２１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２１０～２１５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２１５～２２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２２０～２２５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２２５～２３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２３０～２３５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２３５～２４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２４０～２４５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２４５～２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５０～２５５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５５～２６０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２６０～２６５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２６５～２７０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２７０～２７５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２７５～２８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２８０～２８５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２８５～２９０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２９０～２９５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２９５～３００ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３００～３０５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３０５～３１０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３１０～３１５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３１５～３２０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３２０～３２５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３２５～３３０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３３０～３３５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３５～３４０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３４０～３４５ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３４５～３５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する。
【0160】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の１以上を含む絹タンパク質を含むことができる。
【0161】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の１以上を含む絹タンパク質を含むことができる。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹及び中分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、中分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。
【0162】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹及び中分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９、約９５：５～約５：９５、約９０：１０～約１０：９０、約７５：２５～約２５：７５、約６５：３５～約３５：６５、又は約５５：４５～約４５：５５である。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５、約９５：５～約４５：５５、約９０：１０～約３５：６５、約７５：２５～約１５：８５、約６５：３５～約１０：９０、又は約５５：４５～約１：９９である。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、又は約１：１である。実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約１：９、約１：８、約１：７、約１：６、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、又は約１：１である。
【0163】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９、約９５：５～約５：９５、約９０：１０～約１０：９０、約７５：２５～約２５：７５、約６５：３５～約３５：６５、又は約５５：４５～約４５：５５である。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５、約９５：５～約４５：５５、約９０：１０～約３５：６５、約７５：２５～約１５：８５、約６５：３５～約１０：９０、又は約５５：４５～約１：９９である。幾つかの実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。
【0164】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、中分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。幾つかの実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９、約９５：５～約５：９５、約９０：１０～約１０：９０、約７５：２５～約２５：７５、約６５：３５～約３５：６５、又は約５５：４５～約４５：５５である。幾つかの実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５、約９５：５～約４５：５５、約９０：１０～約３５：６５、約７５：２５～約１５：８５、約６５：３５～約１０：９０、又は約５５：４５～約１：９９である。幾つかの実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。
【0165】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。実施形態では、低分子量の絹と、中分子量の絹と、高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約１：１：８、１：２：７、１：３：６、１：４：５、１：５：４、１：６：３、１：７：２、１：８：１、２：１：７、２：２：６、２：３：５、２：４：４、２：５：３、２：６：２、２：７：１、３：１：６、３：２：５、３：３：４、３：４：３、３：５：２、３：６：１、４：１：５、４：２：４、４：３：３、４：４：２、４：５：１、５：１：４、５：２：３、５：３：２、５：４：１、６：１：３、６：２：２、６：３：１、７：１：２、７：２：１、又は８：１：１である。実施形態では、低分子量の絹と、中分子量の絹と、高分子量の絹との間のｗ／ｗ比は、約３：０．１：０．９、３：０．２：０．８、３：０．３：０．７、３：０．４：０．６、３：０．５：０．５、３：０．６：０．４、３：０．７：０．３、３：０．８：０．２、又は３：０．９：０．１である。
【0166】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１～約５．０の多分散性を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１．５～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１～約１．５の多分散性を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１．５～約２．０の多分散性を有する。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーに含有される絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約２．０～約２．５の多分散性を有する。実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む本開示の組成物は、約２．０～約３．０の多分散性を有する。実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む本開示の組成物は、約２．５～約３．０の多分散性を有する。
【0167】
実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラーは、検出不能なレベルのＬｉＢｒ残渣を含む。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、２５ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、５０ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、７５ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。
【0168】
実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を有するＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラーは、検出不能なレベルのＮａ２ＣＯ３残渣を含む。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書に記載の組織フィラー中のＮａ２ＣＯ３残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。
【0169】
実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、５０～１００％である。実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、６０～１００％である。実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、７０～１００％である。実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、８０～１００％である。実施形態では、水溶解度は、９０～１００％である。実施形態では、本開示の絹フィブロインベースの断片は、水溶液中において非可溶性である。
【0170】
実施形態では、有機溶液中における、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、５０～１００％である。実施形態では、有機溶液中における、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、６０～１００％である。実施形態では、有機溶液中における、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、７０～１００％である。実施形態では、有機溶液中における、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、８０～１００％である。実施形態では、有機溶液中における、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、９０～１００％である。実施形態では、本開示の絹フィブロインベースの断片は、有機溶液中において非可溶性である。
【0171】
本開示の組成物に使用される絹タンパク質の断片を作製する方法は、米国特許出願公開第２０１５／００９３３３４０号明細書、同第２０１５／００９４２６９号明細書、同第２０１６／０１９３１３０号明細書、同第２０１６／００２２５６０号明細書、同第２０１６／００２２５６１号明細書、同第２０１６／００２２５６２号明細書、同第２０１６／００２２５６３号明細書、同第２０１６／０２２２５７９号明細書、及び同第２０１６／０２８１２９４号明細書、並びに米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、及び同第９，５４５，３６９号明細書に示されており、これらの全体を参照により本明細書に援用する。しかしながら、例示的な方法が図１に示され、同図は、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片（ＳＰＦ）を作製するための種々の実施形態を示すフローチャートである。例示した工程のすべてが、必ずしも、本開示のすべての絹溶液を加工するために必要とされるわけではないことを理解すべきである。図１、工程Ａに例示したように、繭（熱処理されているか又は熱処理されていない）、絹繊維、絹粉末又はクモ絹を、絹供給源として使用することができる。カイコからの未加工の絹繭から出発した場合、その繭を切断して小片、例えばほぼ均等なサイズのピースにすることができる（工程Ｂ１）。次いで、未加工の絹を抽出し、濯いでセリシンを除去する（工程Ｃ１ａ）。これによって、セリシンを実質的に含まない未加工の絹が得られる。一実施形態では、水を８４℃～１００℃の温度（理想的には沸点）に加熱し、次いでＮａ２ＣＯ３（炭酸ナトリウム）を沸騰水に加えて、Ｎａ２ＣＯ３を完全に溶解させる。未加工の絹を沸騰水／Ｎａ２ＣＯ３（１００℃）に加え、約１５～９０分間浸漬させ、より長期の時間沸騰させることによって、より小さい絹タンパク質断片がもたらされる。一実施形態では、水の体積は約０．４×未加工の絹重量に等しく、Ｎａ２ＣＯ３の体積は約０．８４８×未加工の絹重量に等しい。一実施形態では、水の体積は０．１×未加工の絹重量に等しく、Ｎａ２ＣＯ３の体積は２．１２ｇ／Ｌで維持される。これを図６及び図７に示す：２６～３１パーセントの全般的な絹質量損失（ｙ軸）によって実証されるように、絹質量（ｘ軸）を、同じ体積の抽出溶液（即ち、同じ体積の水及び濃度のＮａ２ＣＯ３）中で変動させ、セリシン除去（セリシンを実質的に含まない）を遂行した。続いて、水に溶解したＮａ２ＣＯ３溶液を排出させ、過剰の水／Ｎａ２ＣＯ３を、絹フィブロイン繊維から除去する（例えば、手動によるか、機械を使用した脱水サイクルなどによってフィブロイン抽出物をリングアウトする（ｒｉｎｇ ｏｕｔ））。得られる絹フィブロイン抽出物を、一般に約４０℃～約８０℃の温度範囲で、水の体積を少なくとも１回変えて（必要な回数だけ繰り返す）、温水～熱水で濯いで、吸着したセリシン又は汚染物質を除去する。得られる絹フィブロイン抽出物は、実質的にセリシンが欠乏した絹フィブロインである。一実施形態では、得られる絹フィブロイン抽出物を、約６０℃の温度で、水で濯ぐ。一実施形態では、各サイクルのための濯ぎ水の体積は、０．１Ｌ～０．２Ｌ×未加工の絹重量に等しい。濯ぎ効果を最大にするために、濯ぎ水を掻き混ぜる、回転させる又は循環させると有利であり得る。濯いだ後、過剰の水を、抽出された絹フィブロイン繊維から除去する（例えば、手動によるか、機械を使用してフィブロイン抽出物をリングアウトする）。或いは、圧力、温度若しくは他の試薬又はその組合せなどの当業者に公知の方法を、セリシン抽出のために使用することができる。或いは、絹糸腺（１００％セリシンフリーの絹タンパク質）を、カイコ（ｗｏｒｍ）から直接除去することができる。これは、タンパク質構造の変更なしで、セリシンを含まない液体絹タンパク質をもたらすことになる。
【0172】
次いで、抽出されたフィブロイン繊維を完全に乾燥させる。乾燥したら、抽出された絹フィブロインを、周囲～沸騰温度で、絹フィブロインに加えられた溶媒を使用して溶解させる（工程Ｃ１ｂ）。一実施形態では、溶媒は、臭化リチウム（ＬｉＢｒ）の溶液である（ＬｉＢｒについての沸点（ｂｏｉｌｉｎｇ）は１４０℃である）。或いは、抽出されたフィブロイン繊維を乾燥させず、湿った状態で溶媒に入れる；次いで溶媒濃度を変動させて、乾燥した絹を溶媒に加えたのと同じような濃度を達成することができる。ＬｉＢｒ溶媒の最終濃度は、０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲であってよい。図８は、異なる濃度の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）並びに異なる抽出及び溶解のサイズから溶解させた、絹の分子量をまとめた表である。抽出されたフィブロイン繊維の完全な溶解は、溶解させる溶媒の濃度と一緒に、処理時間及び温度を変動させることによって達成することができる。これらに限定されないが、ホスフェートリン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、硝酸カルシウム、塩化カルシウム溶液又は他の無機塩の濃厚水溶液を含む他の溶媒を使用することができる。完全な溶解を確実にするために、絹繊維を、予め加熱されている溶媒溶液中に十分浸漬させ、次いで、約６０℃～約１４０℃の範囲の温度で１～１６８ｈｒ維持すべきである。一実施形態では、絹繊維を、溶媒溶液中に十分浸漬させ、次いで、約１００℃の温度で約１時間、乾燥オーブン中に入れるべきである。
【0173】
絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に加える（又はその逆の）温度は、フィブロインを完全に溶解させるのに必要な時間、並びに得られる最終ＳＰＦ混合物溶液の分子量及び多分散性に影響を及ぼす。一実施形態では、絹溶媒溶液濃度は２０％ｗ／ｖ以下である。更に、様々な温度及び濃度で溶解を容易にするために、導入又は溶解の間に撹拌を用いることができる。ＬｉＢｒ溶液の温度は、作製される絹タンパク質断片混合物の分子量及び多分散性の制御を提供することになる。一実施形態では、より高い温度は、絹をより迅速に溶解させ、絹溶液の高いプロセススケールアップ可能性及び大量生産をもたらすことになる。一実施形態では、８０℃～１４０℃の温度に加熱されたＬｉＢｒ溶液を使用すると、完全な溶解を達成するためにオーブン中で必要とされる時間が減少する。６０℃又はそれ以上で溶解溶媒の時間及び温度を変動させると、元の分子量の天然絹フィブロインタンパク質から形成されるＳＰＦ混合物溶液のＭＷ及び多分散性を変化させ、制御することになる。
【0174】
或いは、抽出をバイパスして、繭全体を、ＬｉＢｒなどの溶媒中に直接入れることができる（工程Ｂ２）。これは、カラム分離及び／又はクロマトグラフィー、イオン交換、塩及び／又はｐＨでの化学沈殿、及び／又は酵素消化及び濾過又は抽出などの、疎水性及び親水性のタンパク質を分離するために当業界で公知の方法（全ての方法は、標準的なタンパク質分離法のための一般的な例であり、これらに限定されない）を使用する、絹及び溶媒溶液からのカイコ粒子の後続する濾過及びセリシン除去を必要とする（工程Ｃ２）。カイコが除去されている非熱処理繭を、代替的に、抽出をバイパスして、ＬｉＢｒなどの溶媒中に直接入れることができる。上記の方法は、セリシン分離のために使用することができ、これは、非熱処理繭が、大幅に少ないカイコの残骸を含有するという利点を有する。
【0175】
透析は、その溶液を、ある体積の水に対して透析させることによって、得られる溶解したフィブロインタンパク質断片溶液から、溶解溶媒を除去する（工程Ｅ１）ために使用することができる。透析の前の予備濾過は、絹及びＬｉＢｒ溶液から、残骸（即ち、カイコの残り）を除去する（工程Ｄ）助けとなる。一例では、透析及び望むなら可能性のある濃縮の前に、０．１％～１．０％絹－ＬｉＢｒ溶液を濾過するために、３μｍ又は５μｍのフィルターを２００～３００ｍＬ／ｍｉｎの流量で使用する。上述したような、本明細書で開示する方法は、特に、スケールアップ可能なプロセス法をもたらすことを考慮した場合、濾過及び下流での透析が容易になるように、濃度を、９．３Ｍ ＬｉＢｒから、０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲に低下させるために時間及び／又は温度を使用することである。或いは、追加的な時間又は温度を用いることなく、９．３Ｍ ＬｉＢｒ－絹タンパク質断片溶液を、水で希釈して残骸濾過及び透析を容易にすることができる。所望の時間及び温度の濾過での溶解の結果は、公知のＭＷ及び多分散性の半透明粒子フリーの室温での保管安定性のある（ｓｈｅｌｆ－ｓｔａｂｌｅ）絹タンパク質断片ＬｉＢｒ溶液である。溶媒が除去されるまで、透析水を定期的に変える（例えば、１時間、４時間後に水を変え、次いで１２時間毎に合計６回水を変える）ことが有利である。水体積変更の総数は、絹タンパク質溶解及び断片化のために使用される溶媒の得られる濃度をもとにして、変動させることができる。透析後、最終絹溶液を更に濾過して、残留する残骸（即ち、カイコの残り）を除去することができる。
【0176】
或いは、生体分子の分離及び精製のための迅速で効率的な方法である接線流濾過（ＴＦＦ）を、得られる溶解フィブロイン溶液から溶媒を除去する（工程Ｅ２）のに使用することができる。ＴＦＦは、非常に純粋な絹タンパク質断片水溶液を提供し、制御された繰り返し可能な仕方で、大容積の溶液をもたらすためのプロセスのスケールアップ可能性を可能にする。ＴＦＦの前に、絹及びＬｉＢｒの溶液を希釈することができる（水か又はＬｉＢｒの中で２０％～０．１％絹へ）。ＴＦＦ処理の前での上述したような予備濾過は、フィルター効率を維持することができ、残骸粒子の存在の結果としての、フィルターの表面上での絹ゲル境界層の発生を潜在的に回避させる。ＴＦＦの前の予備濾過はまた、得られる水だけの溶液の自然発生的又は長期的なゲル化を引き起こす可能性のある、絹及びＬｉＢｒ溶液から残留する残骸（即ち、カイコの残り）を除去する（工程Ｄ）助けにもなる。再循環させるか又はワンパス（ｓｉｎｇｌｅ ｐａｓｓ）のＴＦＦは、０．１％絹～３０．０％絹（より好ましくは０．１％～６．０％絹）の範囲の水－絹タンパク質断片溶液を作製するために使用することができる。溶液中での絹タンパク質断片混合物の所望の濃度、分子量及び多分散性に基づいて、異なるカットオフサイズのＴＦＦ膜を必要とする可能性がある。１～１００ｋＤａの範囲の膜は、例えば、抽出煮沸時間の長さ、又は溶解溶媒（例えば、ＬｉＢｒ）中での時間及び温度を変動させることによって作製される分子量絹溶液を変動させるのに必要である可能性がある。一実施形態では、ＴＦＦ５又は１０ｋＤａの膜は、絹タンパク質断片混合溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比をもたらすために使用される。その上に、ＴＦＦワンパス、ＴＦＦ、及び流下膜式蒸発器などの当業界で公知の他の方法を、溶解溶媒（例えば、ＬｉＢｒ）の除去に続いて、溶液を濃縮するために使用することができる（０．１％～３０％絹の範囲の所望濃度が得られる）。これは、水ベースの溶液を作製するために当業界で公知の標準的なＨＦＩＰ濃度法の代替法として使用することができる。より大きい細孔膜を、小さい絹タンパク質断片を濾別し、よりタイトな多分散性の値をもつ及び／又はもたないより高分子量の絹の溶液を作製するために利用することもできる。図５は、本開示の絹タンパク質溶液のいくつかの実施形態について分子量をまとめた表である。絹タンパク質溶液プロセシング条件は以下の通りであった：１００℃抽出を２０ｍｉｎ、室温濯ぎ、６０℃オーブン中ＬｉＢｒで４～６時間。水溶性フィルムのプロセシング条件は以下の通りであった：１００℃抽出を６０ｍｉｎ、６０℃濯ぎ、１００℃オーブン中１００℃ＬｉＢｒで６０ｍｉｎ。図１２～図２３は、抽出時間、ＬｉＢｒ溶解条件及びＴＦＦプロセシングの操作、並びに得られた例示の分子量及び多分散性を更に示す。これらの例は、限定するものではなく、特定の分子量絹断片溶液についてのパラメータを指定する可能性を実証しようとするものである。
【0177】
ＬｉＢｒ及びＮａ２ＣＯ３検出のためのアッセイは、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備えたＨＰＬＣシステムを使用して実施した。計算は、濃度に対してプロットされた被分析物についての得られたピーク面積の線形回帰によって実施した。本開示のいくつかの処方物のうちの２つ以上のサンプルを、サンプル調製及び分析のために使用した。一般に、異なる処方物の４つのサンプルを、１０ｍＬ容量フラスコ中に直接量り込んだ。サンプルを５ｍＬの２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）に懸濁し、時々振とうしながら２～８℃で２時間維持して、フィルムから検体を抽出した。２時間後、溶液を２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）で希釈した。メスフラスコのサンプル溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、炭酸ナトリウムと臭化リチウムの推定のためＨＰＬＣ－ＥＬＳＤシステムに注入した。
【0178】
絹タンパク質処方物中のＮａ２ＣＯ３及びＬｉＢｒを定量化するために開発された分析手法は、１０～１６５μｇ／ｍＬの範囲で線形であることが分かった。注入精度のＲＳＤは、それぞれ炭酸ナトリウム及び臭化リチウムについて、面積では２％及び１％であり、保持時間では０．３８％及び０．１９％であった。この分析手法は、絹タンパク質処方物中の炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの定量的決定に適用することができる。
【0179】
最終絹タンパク質断片溶液は、ＬｉＢｒ及びＮａ２ＣＯ３を含む、ＰＰＭから検出不可能なレベルの、粒子状の残骸及び／又はプロセス汚染物質を含む、純粋な絹タンパク質断片及び水である。図３及び図４は、本開示の溶液中のＬｉＢｒ及びＮａ２ＣＯ３濃度をまとめた表である。図３において、プロセシング条件は、１００℃抽出６０ｍｉｎ、６０℃濯ぎ、１００℃オーブン中の１００℃ＬｉＢｒで６０ｍｉｎを含む。圧力差及びダイアフィルトレーションの体積数を含むＴＦＦ条件は変動させた。図４において、プロセシング条件は１００℃煮沸６０ｍｉｎ、６０℃濯ぎ、６０℃オーブン中ＬｉＢｒで４～６時間を含んだ。
【0180】
絹断片水溶液、凍結乾燥絹タンパク質断片混合物、又はＳＰＦを含む任意の他の組成物は、濾過、加熱、放射線又は電子ビームなどの当業界で標準的な方法にしたがって殺菌することができる。より短いそのタンパク質ポリマー長のため、絹タンパク質断片混合物は、当業界で記されている無変化の絹タンパク質溶液よりよく殺菌に耐えられると期待される。更に、本明細書で説明するＳＰＦ混合物から作製された絹物品を、用途に応じて殺菌することができる。例えば、開放創／切開を伴う医療用途で使用される分子が充填されたＳＰＦ皮膚フィラーは、放射線又は電子ビームなどの標準的な方法で滅菌することができる。
【0181】
図２は、抽出及び溶解工程の際に、本開示の絹タンパク質断片溶液を作製するプロセスの間に改変することができる種々のパラメータを示すフローチャートである。選択方法のパラメータは、目的とする用途、例えば分子量及び多分散性に応じて明確な最終溶液の特徴を達成するように変更することができる。例示した工程の全てが、必ずしも、本開示の全ての絹溶液を加工するために必要とされるわけではないことを理解すべきである。
【0182】
一実施形態では、本開示の絹タンパク質断片溶液を作製するためのプロセスは、カイコから絹繭のピースを形成させる工程と、水及びＮａ２ＣＯ３の溶液中、約１００℃で約６０分間、そのピースを抽出する工程と（ここで、水の体積は約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ２ＣＯ３の量は約０．８４８×絹フィブロイン抽出物を形成させるためのピース量である）；濯ぎ水の体積で、１濯ぎ当たり約６０℃で約２０分間、絹フィブロイン抽出物を３回濯ぐ工程と（各サイクルについての濯ぎ水は約０．２Ｌ×ピース重量に等しい）；過剰の水を、絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程と、乾燥絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に溶解する工程と（ＬｉＢｒ溶液を最初に約１００℃に加熱して絹及びＬｉＢｒ溶液を作製し、これを維持する）；絹及びＬｉＢｒ溶液を、乾燥オーブン中に約１００℃で約６０分間置いて完全な溶解、並びに所望の分子量及び多分散性を有する混合物への天然の絹タンパク質構造のさらなる断片化を達成する工程と、その溶液を濾過してカイコから残留する残骸を除去する工程と、その溶液を水で希釈して１％絹溶液を得る工程と、接線流濾過（ＴＦＦ）を使用してその溶液から溶媒を除去する工程とを含む。一実施形態では、絹溶液を精製するために１０ｋＤａの膜を利用し、最終的な所望の絹と水の比をもたらす。次いで、ＴＦＦを使用して、純粋な絹溶液を、水に対して２％の濃度の絹に更に濃縮することができる。
【0183】
未加工の繭から透析までの各プロセス工程は、製造における効率を高めるために、スケールアップ可能である。全部の繭が、現在、原料として購入されているが、予め清浄化された繭又は熱処理されていない繭も使用されている（カイコ除去によって微量の残骸が後に残る）。繭の切断及び清浄化はマニュアルのプロセスであるが、スケールアップ可能性のために、例えば、自動機械を、圧縮空気と組み合わせて使用してカイコ及び任意の微粒子を除去することによって、或いは、その繭をより小さいピースに切断するための切断ミルを使用することによって、このプロセスをより非労働集約的にすることができる。現在小さなバッチで実行されている抽出工程は、そこで６０℃～１００℃の温度が維持される、より大きな容器、例えば工業用洗浄機械中で遂行することができる。濯ぎ工程を、マニュアルでの濯ぎサイクルを排除する工業用洗浄機械において遂行することもできる。ＬｉＢｒ溶液中への絹の溶解は、対流式オーブン以外の容器、例えば撹拌槽型反応器中で行うことができる。一連の水の変更によって絹を透析する工程はマニュアルであり、時間集中的なプロセスである。これは、特定のパラメータを変更すること、例えば透析前に絹溶液を希釈することによって加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば接線流濾過システムを使用することによって、製造のためにスケールアップすることができる。
【0184】
抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に加える又はその逆の場合のＬｉＢｒ溶液の温度）及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性及び色を有する溶媒及び絹溶液がもたらされる。抽出のための温度を増大させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合、出現時及び長期にわたって、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること、（例えば、ここで示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を増大させることは、すべて、粘性がより低く、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらす。ほとんどすべてのパラメータは実行可能な絹溶液をもたらすが、４～６時間より短い時間で完全な溶解を達成させるような方法が、プロセススケールアップ可能性のために好ましい。
【0185】
絹タンパク質断片の分子量は、抽出時間及び温度を含む抽出工程の際に使用される特定のパラメータ；臭化リチウム中への絹の浸漬の時点でのＬｉＢｒ温度、及びその溶液を特定の温度で維持する時間を含む溶解工程の際に使用される特定のパラメータ；並びに濾過工程の際に使用される特定のパラメータに基づいて制御することができる。開示する方法を用いてプロセスパラメータを制御することによって、１ｋＤａ～２５０ｋＤａ、５ｋＤａ～２００ｋＤａ、５ｋＤａ～１５０ｋＤａ、１０ｋＤａ～１５０ｋＤａ、又は１０ｋＤａ～８０ｋＤａの範囲の様々な異なる分子量で２．５以下の多分散性を有するＳＰＦ混合物溶液を作製することができる。異なる分子量を有する絹溶液を達成するためにプロセスパラメータを変更することによって、２．５以下の所望の多分散性を有するある範囲の断片混合物最終製品を、所望の性能要件に基づいて、目的とすることができる。例えば、薬剤を含む低分子量の絹フィルムは、高分子量のＳＰＦ製剤に比べて放出速度がより速いことがある。更に、２．５超の多分散性を有するＳＰＦ混合物溶液を達成することができる。更に、異なる平均分子量及び多分散性を有する２つの溶液を混合して、組合せ溶液を作製することができる。或いは、カイコから直接取り出された液体絹糸腺（１００％セリシンフリーの絹タンパク質）を、本開示のＳＰＦ混合物溶液のいずれかと併用することができる。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物の分子量は、屈折率検出器（ＲＩＤ）を備えた高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して決定した。多分散性は、Ｃｉｒｒｕｓ ＧＰＣオンラインＧＰＣ／ＳＥＣソフトウェアバージョン３．３（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して計算した。
【0186】
未加工の絹繭を処理して絹溶液にする際にパラメータを変動させた。これらのパラメータを変動させると、得られる絹溶液のＭＷに影響を及ぼした。操作したパラメータには、（ｉ）抽出の時間及び温度、（ｉｉ）ＬｉＢｒの温度、（ｉｉｉ）溶解オーブンの温度及び（ｉｖ）溶解時間が含まれる。分子量は、図９～図２５に示したように、質量分析計（ｓｐｅｃ）で決定した。
【0187】
抽出時間を変動させた効果を判定するために実験を実施した。図９～図１５はこれらの結果を示すグラフであり、表２～表８にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ ３０分間のセリシン抽出時間は、６０分間のセリシン抽出時間より大きいＭＷをもたらした
－ ＭＷは、オーブン中での時間とともに減少する
－ １４０℃ＬｉＢｒ及びオーブンは、９５００ＤａのＭＷより低い信頼区間のローエンドをもたらした
－ １時間及び４時間の時点での３０ｍｉｎ抽出は絹を未消化であった
－ １時間時点での３０ｍｉｎ抽出は、３５，０００Ｄａという信頼区間のローエンドを有する有意に高い分子量をもたらした
－ 信頼区間のハイエンドに達したＭＷの範囲は１８０００～２１６０００Ｄａ（特定の上限値を有する溶液を提供するために重要である）であった
－ ３０分間のセリシン抽出時間は、６０分間のセリシン抽出時間より大きいＭＷをもたらした
－ ＭＷは、オーブン中での時間とともに減少する
－ １４０℃ＬｉＢｒ及びオーブンは、９５００ＤａのＭＷより低い信頼区間のローエンドをもたらした
－ １時間及び４時間の時点での３０ｍｉｎ抽出は絹を未消化であった
－ １時間時点での３０ｍｉｎ抽出は、３５，０００Ｄａという信頼区間のローエンドを有する有意に高い分子量をもたらした
－ 信頼区間のハイエンドに達したＭＷの範囲は１８０００～２１６０００Ｄａ（特定の上限値を有する溶液を提供するために重要である）であった
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【表6】
【表7】
【表8】
【0188】
抽出温度を変動させた効果を判定するために実験を実施した。図１６はこれらの結果を示すグラフであり、表９にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ ９０℃でのセリシン抽出は、１００℃でのセリシン抽出より高いＭＷをもたらした
－ ９０℃と１００℃はどちらも、オーブン中で経時的にＭＷを低下させることを示している
－ ９０℃でのセリシン抽出は、１００℃でのセリシン抽出より高いＭＷをもたらした
－ ９０℃と１００℃はどちらも、オーブン中で経時的にＭＷを低下させることを示している
【表9】
【0189】
絹に添加する場合の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）温度を変動させた効果を判定するために実験を実施した。図１７～図１８はこれらの結果を示すグラフであり、表１０～表１１にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ ＭＷ又は信頼区間に対する影響はなし（全て、ＣＩ～１０５００～６５００Ｄａ）
－ 試験は、ＬｉＢｒが添加され、溶解し始めると、室温でその質量の大部分が絹であるため、ＬｉＢｒ－絹溶解の温度は元のＬｉＢｒ温度を下まわって急激に低下することを例示している
－ ＭＷ又は信頼区間に対する影響はなし（全て、ＣＩ～１０５００～６５００Ｄａ）
－ 試験は、ＬｉＢｒが添加され、溶解し始めると、室温でその質量の大部分が絹であるため、ＬｉＢｒ－絹溶解の温度は元のＬｉＢｒ温度を下まわって急激に低下することを例示している
【表10】
【表11】
【0190】
オーブン／溶解温度を変更する効果を判定するために実験を実施した。図１９～図２３はこれらの結果を示すグラフであり、表１２～表１６にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ オーブン温度は、３０ｍｉｎ抽出した絹より、６０ｍｉｎ抽出した絹について、より効果が小さい。理論に拘泥するわけではないが、３０ｍｉｎ絹は、抽出の際の分解がより小さく、したがってオーブン温度は、より大きいＭＷに対してより大きい効果を有しており、絹の分解部分がより少ないと考えられる。
－ ６０℃対１４０℃オーブンについて、３０ｍｉｎ抽出した絹は、より高いオーブン温度で、より低いＭＷの非常に有意の効果を示し、６０ｍｉｎ抽出した絹は、効果はあったがそれはずっと小さいものであった
－ １４０℃オーブンは、～６０００Ｄａで信頼区間におけるローエンドをもたらした
－ オーブン温度は、３０ｍｉｎ抽出した絹より、６０ｍｉｎ抽出した絹について、より効果が小さい。理論に拘泥するわけではないが、３０ｍｉｎ絹は、抽出の際の分解がより小さく、したがってオーブン温度は、より大きいＭＷに対してより大きい効果を有しており、絹の分解部分がより少ないと考えられる。
－ ６０℃対１４０℃オーブンについて、３０ｍｉｎ抽出した絹は、より高いオーブン温度で、より低いＭＷの非常に有意の効果を示し、６０ｍｉｎ抽出した絹は、効果はあったがそれはずっと小さいものであった
－ １４０℃オーブンは、～６０００Ｄａで信頼区間におけるローエンドをもたらした
【表12】
【表13】
【表14】
【表15】
【表16】
【0191】
実施形態では、本明細書で開示する方法は、これらに限定されないが、ＭＷ（抽出及び／又は溶解の時間及び温度（例えば、ＬｉＢｒ温度）、圧力及び濾過（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー）を変えることによって変動させることができる）；構造（フィブロインタンパク質ポリマーの重鎖又は軽鎖の除去又は切断）；純度（セリシン除去の改善のための熱水濯ぎ温度、又は、絹断片タンパク質混合溶液の保管安定性に悪影響を及ぼす微粒子除去の改善のためのフィルター能力）；色（溶液の色は、例えばＬｉＢｒ温度及び時間で制御することができる）；粘度；清澄度；並びに溶液の安定性を含む、製造の際に制御できる特徴を有する溶液をもたらす。得られる溶液のｐＨは、一般に約７であり、貯蔵条件に応じて酸又は塩基を用いて変化させることができる。
【0192】
前記ＳＰＦ混合溶液を使用して、本明細書に記載されるＳＰＦ含有組織フィラーを製造することができる。
【0193】
約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、絹供給源を、約３０分間～約６０分間の処理時間の間、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加することによって、絹供給源を脱ガムする工程と、その溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を作製する工程と、その絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる工程と、その絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を入れたときの出発温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解する工程と、その絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約１４０℃の温度を有するオーブン中で少なくとも１時間維持する工程と、臭化リチウムをその絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、絹タンパク質断片の水溶液を作製する工程とを含み、その水溶液は、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する断片を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は約１．５～約３．０の範囲の多分散性を含む。本方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程を更に含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、治療剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、酸化防止剤又は酵素の１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。そのビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、αヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。αヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸及びクエン酸からなる群から選択することができる。この方法は、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含んでもよい。この方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくともいずれかを添加することを更に含んでもよい。フィルムを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このフィルムは、ビタミンＣ又はその誘導体を約１．０重量％～約５０．０重量％含んでよい。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有していてもよい。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％含んでよい。ゲルを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このゲルは、ビタミンＣ又はその誘導体を約０．５重量％～約２０．０重量％含んでよい。ゲルは、少なくとも２％の絹含量と少なくとも２０％のビタミン含有量を有してもよい。
【0194】
約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、絹供給源を、約３０分間～約６０分間の処理時間の間、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加することによって、絹供給源を脱ガムする工程と、その溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を作製する工程と、その絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる工程と、その絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を入れたときの出発温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解する工程と、その絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約１４０℃の温度を有するオーブン中で少なくとも１時間維持する工程と、臭化リチウムをその絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、絹タンパク質断片の水溶液を作製する工程とを含み、その水溶液は、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する断片を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は約１．５～約３．０の範囲の多分散性を含む。本方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程を更に含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、治療剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、酸化防止剤又は酵素の１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。そのビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、αヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。αヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸及びクエン酸からなる群から選択することができる。この方法は、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含んでもよい。この方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくともいずれかを添加することを更に含んでもよい。フィルムを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このフィルムは、ビタミンＣ又はその誘導体を約１．０重量％～約５０．０重量％含んでよい。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有していてもよい。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％含んでよい。ゲルを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このゲルは、ビタミンＣ又はその誘導体を約０．５重量％～約２０．０重量％含んでよい。ゲルは、少なくとも２％の絹含量と少なくとも２０％のビタミン含有量を有してもよい。
【0195】
約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、絹供給源を、約３０分間～約６０分間の処理時間の間、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加することによって、絹供給源を脱ガムする工程と、その溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を作製する工程と、その絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる工程と、その絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を入れたときの出発温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解する工程と、その絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約１４０℃の温度を有するオーブン中で少なくとも１時間維持する工程と、臭化リチウムをその絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、絹タンパク質断片の水溶液を作製する工程とを含み、その水溶液は、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する断片を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は約１．５～約３．０の範囲の多分散性を含む。本方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程を更に含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、治療剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、酸化防止剤又は酵素の１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。そのビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、αヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。αヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸及びクエン酸からなる群から選択することができる。この方法は、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含んでもよい。この方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくともいずれかを添加することを更に含んでもよい。フィルムを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このフィルムは、ビタミンＣ又はその誘導体を約１．０重量％～約５０．０重量％含んでよい。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有していてもよい。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％含んでよい。ゲルを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このゲルは、ビタミンＣ又はその誘導体を約０．５重量％～約２０．０重量％含んでよい。ゲルは、少なくとも２％の絹含量と少なくとも２０％のビタミン含有量を有してもよい。
【0196】
約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、絹供給源を、約３０分間～約６０分間の処理時間の間、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加して、脱ガムされるようにする工程と、絹供給源をその溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を作製する工程と、その絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる工程と、その絹フィブロイン抽出物を、約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を入れたときの出発温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解する工程と、その絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約６０℃～約１００℃の温度を有する乾燥オーブン中で少なくとも１時間維持する工程と、臭化リチウムをその絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を作製する工程とを含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残渣を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残渣を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する断片を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は約１．５～約３．０の範囲の多分散性を含む。本方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程を更に含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、治療剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、酸化防止剤又は酵素の１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。そのビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、αヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。αヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸及びクエン酸からなる群から選択することができる。この方法は、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含んでもよい。この方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくともいずれかを添加することを更に含んでもよい。
【0197】
ゲルを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このゲルは、ビタミンＣ又はその誘導体を約０．５重量％～約２０．０重量％含んでよい。ゲルは、少なくとも２％の絹含量と少なくとも２０％のビタミン含有量を有してもよい。
【0198】
本明細書に記載される態様によれば、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法が開示され、前記方法は、絹供給源を、約３０分間の処理時間の間、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加して、脱ガムされるようにする工程と、絹供給源をその溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を作製する工程と、その絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる工程と、その絹フィブロイン抽出物を、約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を入れたときの出発温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解する工程と、その絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約６０℃～約１００℃の温度を有する乾燥オーブン中で少なくとも１時間維持する工程と、臭化リチウムをその絹フィブロイン抽出物から除去する工程と、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を作製する工程とを含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残渣、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残渣、約４０ｋＤａ～約６５ｋＤａの範囲の平均の重量平均分子量を有する断片を含み、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は約１．５～約３．０の範囲の多分散性を含む。本方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程を更に含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、治療剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、酸化防止剤又は酵素の１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。本方法は、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。そのビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、αヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加する工程を更に含み得る。αヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸及びクエン酸からなる群から選択することができる。この方法は、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含んでもよい。この方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくともいずれかを添加することを更に含んでもよい。
【0199】
ゲルを、この方法により製造される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。このゲルは、ビタミンＣ又はその誘導体を約０．５重量％～約２０．０重量％含んでよい。ゲルは、少なくとも２％の絹含量と少なくとも２０％のビタミン含有量を有してもよい。
【0200】
ヒアルロン酸とヒアルロン酸ゲル
本発明の生分解性ポリマー成分は、ヒアルロン酸（ＨＡ）としても知られる、ヒアルロネートである。ＨＡは、Ｄ－グルクロン酸及びＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンの残基が交互になって構成されている。この水溶性ポリマーは、ほぼ全ての組織中に天然に存在し、特に、細胞外マトリックス、眼球、及び関節の滑液中に存在する。ＨＡは、純粋な形態で市販されている。ゲル小粒子ＨＡフィラーを使用して天然のコラーゲン産生を刺激することができ、これは、真皮の機械的延伸及び真皮線維芽細胞の活性化によって誘導されると推定される。
本発明の生分解性ポリマー成分は、ヒアルロン酸（ＨＡ）としても知られる、ヒアルロネートである。ＨＡは、Ｄ－グルクロン酸及びＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンの残基が交互になって構成されている。この水溶性ポリマーは、ほぼ全ての組織中に天然に存在し、特に、細胞外マトリックス、眼球、及び関節の滑液中に存在する。ＨＡは、純粋な形態で市販されている。ゲル小粒子ＨＡフィラーを使用して天然のコラーゲン産生を刺激することができ、これは、真皮の機械的延伸及び真皮線維芽細胞の活性化によって誘導されると推定される。
【0201】
本発明の得られる皮膚フィラー中のＨＡ濃度は、皮膚フィラーの剛性と寿命に寄与する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の得られる皮膚フィラー中のＨＡ濃度の高いと、ＨＡ濃度が比較的低い皮膚フィラーに比べて、得られる皮膚フィラーの剛性及び／又は寿命が増大し得る。
【0202】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーに含有されるＨＡは、１００，０００ダルトン以上、１５０，０００ダルトン以上、１００万ダルトン以上、又は２００万ダルトン以上の分子量を有する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーに含有されるＨＡは、１００，０００ダルトン以下、１５０，０００ダルトン以下、１００万ダルトン以下、又は２００万ダルトン以下の分子量を有する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーに含有されるＨＡは、高分子量（例えば、約１ＭＤａ～約４ＭＤａのＨＡ分子量）を有する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーに含有されるＨＡは、低分子量（例えば、約１ＭＤａ未満のＨＡ分子量）を有する。
【0203】
幾つかの実施形態において、ＨＡ源は、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムなどのヒアルロン酸塩であってもよい。幾つかの実施形態において、ＨＡは、架橋されている。架橋ＨＡは、膜、ゲル、半ゲル、スポンジ、又はミクロスフェアなどの各種形状に製することができる。幾つかの実施形態では、架橋ＨＡは、流体ゲル形態であり、即ち、その容器の形状を呈する。ＨＡゲル又は半ゲルの粘度は、非共役ＨＡ及び／又はヒアルロネートの添加によって変化させることができる。粘度はまた、本明細書に記載されるように、ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又はＨＡ－ＨＡ架橋の程度を変化させることによって調節することができる。幾つかの実施形態では、ＨＡの約４％～約１２％が架橋されたＨＡ－ＨＡ又はＨＡ－ＳＰＦであることができる。
【0204】
実施形態では、本明細書に記載のＳＰＦ組成物は、ＨＡと組み合わせて組織フィラー組成物を形成することができる。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１０％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．９％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．８％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．７％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．６％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．５％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．４％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．３％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．２％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．１％未満である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、０．９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１８％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、１９％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、２５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、３５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、４５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、５５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、６５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、７５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、８５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９０％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９１％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９２％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９３％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９４％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９５％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９６％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９７％超である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、９８％超である。
【0205】
実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．１％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．２％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１６％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１７％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１８％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１９％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約７０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約７５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９０％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９１％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９２％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９３％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９４％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９５％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９６％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９７％である。組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９８％である。
【0206】
実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．１％～約１％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．５％～約１．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％～約５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１．５％～約５．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２％～約６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２．５％～約６．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３％～約７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３．５％～約７．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４％～約８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４．５％～約８．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５％～約９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５．５％～約９．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６％～約１０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６．５％～約１０．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約７％～約１１％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約７．５％～約１１．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８％～約１２％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８．５％～約１２．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９％～約１３％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約９．５％～約１３．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０％～約１４％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０．５％、約１４．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１％～約１５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１．５％～約１５．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２％～約１６％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２．５％～約１６．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３％～約１７％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３．５％～約１７．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４％～約１８％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４．５％～約１８．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５％～約１９％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５．５％～約１９．５％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１６％～約２０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約２０％～約３０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約３０％～約４０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約４０％～約５０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約５０％～約６０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約６０％～約７０％である。実施形態では、組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約８０％～約９０％である。
【0207】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の組織フィラー組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％～約２％、又は約１％～約３％、又は約１％～約４％、又は約１％～約５％、又は約１％～約６％、又は約１％～約７％、又は約１％～約８％、又は約１％～約９％、又は約１％～約１０％、又は約１％～約１１％、又は約１％～約１２％、又は約１％～約１３％、又は約１％～約１４％、又は約１％～約１５％、又は約１％～約１６％、又は約１％～約１７％、又は約１％～約１８％、又は約１％～約１９％、又は約１％～約２０％、又は約１％～約２１％、又は約１％～約２２％、又は約１％～約２３％、又は約１％～約２４％、又は約１％～約２５％、又は約１％～約３０％、又は約１％～約４０％、又は約１％～約５０％、又は約１％～約６０％、又は約１％～約７０％、又は約１％～約８０％、又は約１％～約９５％；又は約１０％～約２０％、又は約１０％～約２５％、又は約１０％～約３０％、又は約１０％～約３５％、又は約１０％～約４０％、又は約１０％～約４５％、又は約１０％～約５０％、又は約１０％～約５５％、又は約１０％～約６０％、又は約１０％～約６５％、又は約１０％～約７０％、又は約１０％～約７５％、又は約１０％～約８０％、又は約１０％～約８５％、又は約１０％～約９０％、又は約１０％～約９５％である。
【0208】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるＨＡは、商業的供給源から取得することもできるし、ストレプトコッカス・エクイ菌に産生させることもできる。
【0209】
ＨＡを含む、本明細書に記載の組織フィラーは、そのインビトロ生物活性及びインビボ生物活性によって特徴付けることができる。例えば、インビトロアッセイを、細胞毒性、酵素分解に対する抵抗性、シリンジ通過性（例えば、溶液粘度、注入流速、シリンジ／針の直径）、及び／又は粒子形態分析について、本明細書に記載の組織フィラーの一部に行ってもよい。例えば、Ｐａｒｋら、Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｏｌ．（２０１４）２８：５６５－５６８を参照。インビボアッセイを行って、初期の形態学的パターン、合計フィラー残量、組織学的評価を決定してもよく、これは、肉芽腫形成又は皮膚副作用の検査を含んでもよい。例えば、Ｐａｒｋら、Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｏｌ．（２０１４）２８：５６５－５６８；及びＲａｍｏｔら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１５）４３：２６７－２７１を参照。
【0210】
ゲル化
実施形態では、絹ゲルに、ゲル化助剤を与えてもよい。幾つかの実施形態では、ゲル化助剤は、酸、電気、混合、及び／又は超音波処理であることができる。
実施形態では、絹ゲルに、ゲル化助剤を与えてもよい。幾つかの実施形態では、ゲル化助剤は、酸、電気、混合、及び／又は超音波処理であることができる。
【0211】
実施形態では、絹ゲルを作製する場合、本明細書に記載の絹溶液に酸を添加し、ゲル化を容易にするのを助けることができる。実施形態では、中性又は塩基性の分子及び／又は治療剤を含む絹ゲルを作製する場合、酸を、ゲル化を容易にするために加えることができる。実施形態では、絹ゲルを作製する場合、ｐＨを増大させる（ゲルをより塩基性にする）と、ゲルの保管安定性が増大する。実施形態では、絹ゲルを作製する場合、ｐＨを増大させる（ゲルをより塩基性にする）と、より多量の酸性分子をゲル中にロードできるようになる。
【0212】
実施形態では、絹ゲルを作製する場合、本明細書に記載の絹溶液に電気を通して、ゲル化を容易にするのを助けることができる。
【0213】
実施形態では、絹ゲルを作製する場合、本明細書に記載の絹溶液を混合して、ゲル化を容易にするのを助けることができる。
【0214】
実施形態では、絹ゲルを作製する場合、本明細書に記載の絹溶液を超音波処理して、ゲル化を容易にするのを助けることができる。
【0215】
実施形態では、添加剤を更に安定化させるために、天然添加物を絹ゲルに添加することができる。例えば、セレン若しくはマグネシウムなどの微量元素又はＬ－メチオニンを使用することができる。更に、安定性を更に高めるために遮光性容器を加えることができる。
【0216】
幾つかの実施形態では、ゲル化促進剤を用いてＳＰＦのゲル化を加速することができる。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ溶液を、様々な体積比で純粋なアルコール又はアルコール水溶液と、混合、攪拌、振とう、又は任意の他の攪拌形態を伴って混合することができる。幾つかの実施形態では、このアルコール溶液促進剤は、最終ゲル結果物の更なる促進剤として添加した両親媒性ペプチドを有してもよい。加速の程度は、より多い又はより少ない促進剤成分を系に添加することにより、適宜、増大させる又は低減させることができる。
【0217】
幾つかの実施形態では、ゲル化速度は、ゲルの作製に使用する溶液中のＳＰＦの濃度を上昇させることによって高めることができる。様々な方法をその目的のために使用でき、限定するものではないが、例えば、ポリエチレングリコールなどの吸湿性の種を含有するバッファに対する中間体ＳＰＦ溶液の透析、凍結乾燥工程、及び／又は蒸発工程を挙げることができる。温度を上昇させることも、ゲル化プロセスの促進剤として使用することができる。更に、限定するものではないが直接滴定及びガス交換などの方法による中間体絹溶液のｐＨの操作を、ゲル化プロセスを促進するために使用することができる。特にカルシウム及びカリウムなどの選択イオン種の導入も、ゲル化速度を加速するために使用することができる。
【0218】
幾つかの実施形態では、ゲル化を、核剤の使用によって促進することができ、前記核剤としては、ＳＰＦ中間体において可溶性及び不溶性の両方の、有機及び無機の種が挙げられる。核剤は、限定するものではないが、絹分子を結合するペプチド配列、予めゲル化された絹、及び難溶性のβ－シートリッチな構造を挙げることができる。幾つかの実施形態では、ゲル化プロセスを加速する更なる手段は、剪断装置、超音波装置、又は機械的ミキサを介して付与することができる機械的励起の導入による。
【0219】
完全な絹溶液のゲル化に要する時間は、上述のパラメータの値、及びＳＰＦ溶液中の凝集及び組織化の初期状態に応じて、数秒から数時間又は数日にまで変化することがある。添加された促進剤の体積分率は、系全体の体積の約０％～約９９％（即ち、いずれかの成分を、大過剰の他の成分に添加する、又は間隔内の任意の相対濃度で添加することができる）。使用されるＳＰＦ溶液の濃度は、約１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）の範囲、及び任意の他の適切な範囲とすることができる。促進剤をＳＰＦ溶液に添加することができる、又はＳＰＦ溶液を促進剤に添加することができる。形成されたＳＰＦヒドロゲルは、更に、化学的又は物理的に架橋して、変性された機械的特性を得ることができる。
【0220】
幾つかの実施形態において、促進剤溶液がＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆方向に添加され、ＳＰＦ溶液は、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１２％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約１８％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、又は約３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。幾つかの実施形態において、促進剤溶液がＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆方向に添加され、ＳＰＦ溶液は、少なくとも１％（ｗ／ｖ）、少なくとも２％（ｗ／ｖ）、少なくとも３％（ｗ／ｖ）、少なくとも４％（ｗ／ｖ）、少なくとも５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６％（ｗ／ｖ）、少なくとも７％（ｗ／ｖ）、少なくとも８％（ｗ／ｖ）、少なくとも９％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１２％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１８％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、又は少なくとも３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。幾つかの実施形態において、促進剤溶液がＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆方向に添加され、ＳＰＦ溶液は、約１％（ｗ／ｖ）～約５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。
【0221】
ゲル及びヒドロゲル－変性及び架橋
幾つかの実施形態において、本発明は、１以上の架橋されたマトリックスポリマーを含む１以上のヒドロゲルを含む組成物を提供する。本明細書で使用するとき、「架橋（された）」という用語は、ゲルのようなより安定な構造に、個々のポリマー分子、高分子、及び／又はモノマー鎖を結合する分子間結合を意味する。このように、架橋されたマトリックスポリマーは、少なくとも１つの個々のポリマー分子を他のものに結合する少なくとも１つの分子間結合を有し、第１の個々のポリマー分子は、化学的性質が他のものと類似していても異なっていてもよい。本明細書に開示されるマトリックスポリマーは、限定するものではないが、多官能性ＰＥＧ系架橋剤、ジビニルスルホン、ジグリシジルエーテル、及びビス－エポキシドを含むジアルデヒド及びジスルフィド架橋剤を用いて架橋することができる。ＳＰＦ及び／又はＨＡ架橋剤の非限定的な例としては、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１、２，７、８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、又はそれらの組合せが挙げられる。幾つかの実施形態において、ＨＡ架橋剤は、ＢＤＤＥ又はＤＶＳを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＨＡ及び／又はＳＰＦ架橋剤は、本明細書に記載されるように、ＢＤＤＥ、ＤＶＳ、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、又はカルボジイミドであることができる。
幾つかの実施形態において、本発明は、１以上の架橋されたマトリックスポリマーを含む１以上のヒドロゲルを含む組成物を提供する。本明細書で使用するとき、「架橋（された）」という用語は、ゲルのようなより安定な構造に、個々のポリマー分子、高分子、及び／又はモノマー鎖を結合する分子間結合を意味する。このように、架橋されたマトリックスポリマーは、少なくとも１つの個々のポリマー分子を他のものに結合する少なくとも１つの分子間結合を有し、第１の個々のポリマー分子は、化学的性質が他のものと類似していても異なっていてもよい。本明細書に開示されるマトリックスポリマーは、限定するものではないが、多官能性ＰＥＧ系架橋剤、ジビニルスルホン、ジグリシジルエーテル、及びビス－エポキシドを含むジアルデヒド及びジスルフィド架橋剤を用いて架橋することができる。ＳＰＦ及び／又はＨＡ架橋剤の非限定的な例としては、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１、２，７、８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、又はそれらの組合せが挙げられる。幾つかの実施形態において、ＨＡ架橋剤は、ＢＤＤＥ又はＤＶＳを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＨＡ及び／又はＳＰＦ架橋剤は、本明細書に記載されるように、ＢＤＤＥ、ＤＶＳ、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、又はカルボジイミドであることができる。
【0222】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、残留架橋剤を含んでもよい。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、ごく微量の架橋剤を含んでもよく、例えば、約２ｐｐｍ以下、又は約１．９ｐｐｍ以下、又は約１．８ｐｐｍ以下、又は約１．７ｐｐｍ以下、又は約１．６ｐｐｍ以下、又は約１．５ｐｐｍ以下、又は約１．４ｐｐｍ以下、又は約１．３ｐｐｍ以下、又は約１．２ｐｐｍ以下、又は約１．１ｐｐｍ以下、又は約１．０ｐｐｍ以下、又は約０．９ｐｐｍ以下、又は約０．８ｐｐｍ以下、又は約０．７ｐｐｍ以下、又は約０．６ｐｐｍ以下、又は約０．５ｐｐｍ、又は約０．４ｐｐｍ以下、又は約０．３ｐｐｍ以下、又は約０．２ｐｐｍ以下、又は約０．１ｐｐｍ以下含んでもよい。幾つかの実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは微量のＢＤＤＥを含んでもよいが、その濃度は、約２ｐｐｍ以下、又は約１．９ｐｐｍ以下、又は約１．８ｐｐｍ以下、又は約１．７ｐｐｍ以下、又は約１．６ｐｐｍ以下、又は約１．５ｐｐｍ以下、又は約１．４ｐｐｍ以下、又は約１．３ｐｐｍ以下、又は約１．２ｐｐｍ以下、又は約１．１ｐｐｍ以下、又は約１．０ｐｐｍ以下、又は約０．９ｐｐｍ以下、又は約０．８ｐｐｍ以下、又は約０．７ｐｐｍ以下、又は約０．６ｐｐｍ以下、又は約０．５ｐｐｍ、又は約０．４ｐｐｍ以下、又は約０．３ｐｐｍ以下、又は約０．２ｐｐｍ以下、又は約０．１ｐｐｍ以下である。当業者に理解されるように、特定の組織フィラー試料中に存在する残留架橋剤の量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析法によって決定することができる。
【0223】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、ＳＰＦマトリクス部分とＨＡマトリックス部分とを含むマトリックスであって、前記ＳＰＦマトリックス部分が架橋及び非架橋ＳＰＦの混合物を含み、前記ＨＡマトリクス部分が架橋及び非架橋ＨＡの混合物を含むマトリックスを含むことができる。
幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、リンカー変性ＨＡを含む。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、リンカー変性ＳＰＦを含む。二官能性架橋剤は、両端で反応して、２つの異なるＨＡ分子同士、２つの異なるＳＰＦ分子同士、又はＨＡ分子をＳＰＦ分子に結合することができる。幾つかの実施形態では、架橋剤は、一端でのみＨＡ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。幾つかの実施形態では、架橋剤は、一端でのみＳＰＦ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。
幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、リンカー変性ＨＡを含む。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、リンカー変性ＳＰＦを含む。二官能性架橋剤は、両端で反応して、２つの異なるＨＡ分子同士、２つの異なるＳＰＦ分子同士、又はＨＡ分子をＳＰＦ分子に結合することができる。幾つかの実施形態では、架橋剤は、一端でのみＨＡ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。幾つかの実施形態では、架橋剤は、一端でのみＳＰＦ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。
【0224】
本明細書で使用するとき、変性度（ＭｏＤ）を以下のように定義できる（例えば、Ｊ．Ｋａｂｌｉｋら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｕｒｇ、２００９（３５）：３０２－３１２参照）。
合計％変性度＝％架橋＋％ペンダント
合計％変性度＝％架橋＋％ペンダント
【0225】
ＭｏＤを決定するために、それを以下のように定義できる（例えば、Ｌ．Ｋｅｎｎｅら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、２０１３（９１）：４１０－４１８参照）。
式中、ｎ結合架橋剤は、結合された架橋剤分子の数であり、ｎＨＡ二糖は、ＨＡ中の二糖の数であり、ｎＳＰＦ繰り返し単位は、ＳＰＦ中の繰り返し単位の数である。これらの数字は、架橋剤、ＨＡ、及びＳＰＦの特徴的な化学シフトを用いてＮＭＲによって決定することができる。
【数3】
【0226】
幾つかの実施形態では、ＭｏＤは、約１％～２５％、約２％～約２０％、又は約３．５％～約１７．５％である。幾つかの実施形態では、ＭｏＤは、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３．０％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４．０％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、約５．０％、約５．１％、約５．２％、約５．３％、約５．４％、約５．５％、約５．６％、約５．７％、約５．８％、約５．９％、約６．０％、約６．１％、約６．２％、約６．３％、約６．４％、約６．５％、約６．６％、約６．７％、約６．８％、約６．９％、約７．０％、約７．１％、約７．２％、約７．３％、約７．４％、約７．５％、約７．６％、約７．７％、約７．８％、約７．９％、約８．０％、約８．１％、約８．２％、約８．３％、約８．４％、約８．５％、約８．６％、約８．７％、約８．８％、約８．９％、約９．０％、約９．１％、約９．２％、約９．３％、約９．４％、約９．５％、約９．６％、約９．７％、約９．８％、約９．９％、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％は約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０％、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％である。
【0227】
幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、架橋ＳＰＦを含む。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、架橋ＨＡを含む。ＳＰＦ断片は、別のＳＰＦ断片又はＨＡに架橋することができる。ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及びＨＡ－ＨＡ架橋種は、ゼロ長を含む、様々な長さの架橋剤を使用することによって得ることができる。
【0228】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、架橋ＨＡ及び／又は架橋ＳＰＦを有するヒドロゲルの形態で提供することができる。架橋ＨＡ及び／又は架橋ＳＰＦ（又はＳＰＦ－ＨＡ架橋種）は、測定可能な架橋度を有することができる。本明細書で使用するとき、「架橋度」という用語は、架橋されたポリマー高分子中のモノマー単位の数に対する架橋単位（又は分子又は残基）の数を意味する。幾つかの実施形態において、モノマー単位は、ＳＰＦ中におけるアミノ酸である。幾つかの実施形態において、モノマー単位は、ＨＡの二糖モノマー単位である。したがって、４％の架橋度を有する架橋マトリックスポリマーを有する組成物は、１００個のモノマー単位当たり４個の架橋分子が平均して存在することを意味する。他の全てのパラメータが等しい場合、架橋度が大きいほど、より硬いゲルとなる。本発明のいずれか１つの理論に拘束されるものではないが、ＨＡ及び／又はＳＰＦにおける架橋度によって、それから調製される材料又は組成物をより強固にすることができる。例えば、架橋度が高いほど、そのような材料は、体内でより長く持続する可能性がある。確かに、いずれの理論にも拘束されるものではないが、架橋材料を含む生体適合性材料は、架橋度に応じて異なる速度の生体再吸収性、生体吸収性、及び／又は生分解性を有し、架橋度は、生体再吸収、生体吸収、及び／又は生分解の速度に反比例する。更に、本明細書に記載の組織フィラーの架橋度がより大きいと、そのような組織フィラーの親水性及び引き上げ能力（ｌｉｆｔｉｎｇ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ）を低減することがある。
【0229】
非限定的な例では、約５％の架橋度を有する架橋ＳＰＦは、架橋ＳＰＦ内で、１００個のモノマー単位、例えば、アミノ酸当たり、約５個の架橋部分を有する。
【0230】
架橋度の非限定的な例としては、約１％～約１５％、又は約２％～約１４％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％又は約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％又は約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％が挙げられる。
【0231】
幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも２％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも３％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも４％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも５％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも６％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも７％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも８％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも９％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１０％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１１％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１２％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１３％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１４％である。幾つかの実施形態では、架橋度は、少なくとも１５％である。
【0232】
幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＳＰＦを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。幾つかの実施形態では、組成物は、架橋ＳＰＦを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。幾つかの実施形態において、組成物は、架橋ＳＰＦを含み、その架橋度は、約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％、又は約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％、又は約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。
【0233】
幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＨＡを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。幾つかの実施形態では、組成物は、架橋ＨＡを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。幾つかの実施形態において、組成物は、架橋ＨＡを含み、その架橋度は、約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％、又は約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％、又は約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。
【0234】
幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。幾つかの実施形態では、組成物は、架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。幾つかの実施形態において、組成物は、架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％、又は約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％、又は約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。
【0235】
例えば、ＨＡの１モルに対してＳＰＦの１モルが架橋することができ、このモルのＨＡは、約１ｋＤａ～約２ＭｋＤａの分子量を有することができる。幾つかの実施形態において、ＨＡの１００万モルに対してＳＰＦの１モル（又はその逆）が架橋することができ、ここでＳＰＦは、１００Ｄａ～３５０ｋＤａであることができ、各モルの割合を架橋又は遊離させることができる。他のＳＰＦにＳＰＦを架橋する方法は、１以上の工程を含むことができる。第１の工程では、ＢＤＤＥなどのエポキシドを、過剰のＳＰＦ溶液に添加し、反応を進行させる。エポキシドは、カルボキシル、アミン、アルコール、チオールなどのＳＰＦ高分子上の様々な基と反応して、エステル、第二級又は第三級アミン、エーテル、チオエーテルなどの結合をもたらすことができる。ＢＤＤＥの両方のエポキシドが１以上のＳＰＦ高分子中の官能基と反応すると、ＳＰＦは架橋される。実施形態では、Ｓｃｈａｎｔｅら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（２０１１）８５：４６９－４８９に記載されるように、ＨＡの架橋は、アルカリ性条件下でＢＤＤＥとの反応を介して行われ、ＨＡと架橋剤との間に共有結合を生成する。変性度又は架橋度は、当技術分野で知られた方法にしたがってＮＭＲにより決定することができる（例えば、Ｅｄｓｍａｎら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｕｒｇ．（２０１２）３８：１１７０－１１７９）。
【0236】
ペプチドを結合させる方法は、当技術分野で知られている。個々の単離ＳＰＦを、本明細書に記載されるオリゴマー及び／又は架橋ＳＰＦペプチドに結合させることは、当技術分野において周知の化学的コンジュゲーション手順によって行うことができ、例えば、ペプチド結合を形成することによって、縮合剤の使用、及びよく知られた二官能性架橋試薬を用いることによって行うことができる。コンジュゲーションは、いかなる介在基も含まない結合を含む直接的（例えば、直接のペプチド結合）であることができる、又は結合が介在基、例えば、タンパク質又はペプチド（例えば、血漿アルブミン又は他のスペーサー分子）を含む間接的であることができる。例えば、結合は、ヘテロ二官能性又はホモ二官能性架橋剤を介することができ、例えば、カルボジイミド、グルタルアルデヒド、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びその誘導体、ビス－マレイミド、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、などを介することができる。
【0237】
架橋はまた、コンジュゲートされる分子上の反応性基を利用することにより、外因性架橋剤なしで達成することができる。ペプチド分子を化学架橋のための方法は、当技術分野で一般に知られており、多数のヘテロ及びホモ二官能性剤が、例えば、米国特許第４，３５５，０２３号明細書、同第４，６５７，８５３号明細書、同第４，６７６，９８０号明細書、同第４，９２５，９２１号明細書、及び同第４，９７０，１５６号明細書、並びにＩｍｍｕｎｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（１９８９）（これらのそれぞれを参照により本明細書に援用する）に記載される。架橋を含むそのようなコンジュゲーションは、ペプチドオリゴマー又はそれにコンジュゲートされるエンティティ、例えば、治療剤、及び関心のある物質を結合することができる部分などの所望の機能に実質的に影響を与えないように行われるべきである。
【0238】
当業者であれば、ＳＰＦペプチドを結合するために、別のリンカー（化学的なタンパク質架橋剤の使用）を用いることができることを理解するであろう。例えば、ジスクシンイミジル－スベリミデート－二塩酸塩などのホモ二官能性架橋剤；ジメチル－アジピミデート－二塩酸塩；Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル ２，３－ジブロモプロピオネートなどの１，５，－２，４－ジニトロベンゼン又はヘテロ二官能性架橋剤；１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩；及びスクシンイミジル－４－［ｎ－マレイミドメチル］－シクロヘキサン－１－カルボキシレートが挙げられる。
【0239】
本発明はまた、ＨＡに架橋されたＳＰＦを含む組成物も提供する。ＨＡへのＳＰＦの架橋は、エポキシド法、過ヨウ素酸法、及び／又はトレシルクロリド法などの各種方法によって達成することができる。幾つかの実施形態では、ＳＰＦは、エポキシド、例えば、多官能性エポキシドを使用してＨＡに架橋される。例えば、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）などの二官能性エポキシドを用いることができる。他の多官能エポキシドとしては、限定するものではないが、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＧＰＧＥ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ＰＥＰＧＥ）、及びジグリセロールポリグリシジルエーテル（ＤＧＰＧＥ）を挙げることができる。ＳＰＦとＨＡとの間のゼロ長架橋はまた、活性化剤を使用して提供される。
【0240】
ＳＰＦを他の高分子、例えば、ＨＡに架橋する方法、１以上の工程を含むことができる。第１の工程では、ＢＤＤＥなどのエポキシドを、過剰のＳＰＦ溶液に添加し、反応を進行させる。エポキシドは、カルボキシル、アミン、アルコール、チオールなどのＳＰＦ高分子上の様々な基と反応して、エステル、第二級又は第三級アミン、エーテル、チオエーテルなどの結合をもたらすことができる。１つだけのエポキシドがＳＰＦと反応した場合、別のＳＰＦ、又は異なる高分子（例えば、ＨＡ）などのために利用可能な、ＳＰＦに結合する遊離のエポキシドが依然として存在する。試薬の添加順序は変えることができる。例えば、ＢＤＤＥを、まずＨＡに添加することができ、その後、ＳＰＦを添加して、架橋ＳＰＦ－ＨＡを形成する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦとＨＡを最初に混合することができ、その後、ＢＤＤＥを混合物に添加する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦとＨＡの混合物にＢＤＤＥを添加して、ＳＰＦに架橋されたＳＰＦ、ＨＡに架橋されたＨＡ、及びＨＡに架橋されたＳＰＦを含む組成物が得られる。
【0241】
幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦ－ＨＡは、１以上の工程を含むトレシルクロリド法を用いて調製することができる。１工程で、架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＨＡは、トレシルクロリド、即ち、２，２，２－トリフルオロエタンスルフォニルクロリド、又は任意の他の適切な酸塩化物を用いて活性化することができる。トレシルクロリドは、例えば、架橋及び／又は非架橋ＨＡを含有する塩基／溶媒溶液、例えば、ピリジン／アセトン溶液に滴下される。幾つかの実施形態では、トレシルクロリドは、架橋及び／又は非架橋ＨＡの糖環上のヒドロキシル基の４つ全てと反応性である。任意の工程において、得られたＨＡ－トレシレートを洗浄する。工程において、ＨＡ－トレシレートと反応するＳＰＦ断片を添加する。
【0242】
幾つかの実施形態では、トレシルクロリド法は、架橋及び／又は非架橋ＨＡにＳＰＦを直接結合するために使用することができる。他の実施形態では、トレシルクロリド法は、例えば、６－アミノ－１－ヘキサノールなどのスペーサーを介して架橋及び／又は非架橋ＨＡにＳＰＦを結合させるために使用することができる。幾つかの実施形態では、スペーサーを、トレシル活性化及びカップリングを介して架橋又は非架橋ＨＡにまず結合させることができる。スペーサーにＳＰＦを結合させるために、その後、トレシル活性化及びカップリングを繰り返す。任意の好適なスペーサーは、即ち、６－アミノ－１－ヘキサノールに類似する少なくとも幾つかの特性を有するスペーサー、即ち、ＨＡ－トレシレートに結合するための第一級アミン、及びＳＰＦの活性化及びカップリングのための反応性基、例えば、ヒドロキシル基を有するスペーサーを使用することができる。
【0243】
幾つかの実施形態では、トレシルクロリドは、ＨＡを架橋しない。しかし、トレシルクロリド法で使用されるＨＡマトリックスは、更なる安定性のために架橋されてもよい。前記したように、架橋は、例えば、ＢＤＤＥなどの多官能性エポキシドを使用することにより行うことができる。架橋は、ペプチドカップリングの前又は後に行うことができる。
【0244】
トレシルクロリド法は、他の固定化法に対して利点を有し、例えば、非常に穏やかな条件下でカップリングが効率的であり、活性化及びカップリング中に副反応がなく、ＲＧＤペプチドを、ＨＡサポートの炭素原子に直接結合することができる。
【0245】
様々な実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、ＨＡベースのゲル及びヒドロゲルを含むことができる。本明細書で使用されるＨＡベースは、架橋ＨＡを含む組成物又は材料、及び架橋ＨＡと１以上の他の架橋ポリマーとを含む組成物を意味する。また、ＨＡは、ヒアルロン酸及びそのヒアルロン酸塩のいずれかを意味することができ、限定するものではないが、ヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム、及びこれらの組合せが挙げられる。１超の生体適合性ポリマーの使用は、特に、本明細書から除外されない。ゲル及びヒドロゲルの形態であることができる本明細書に記載の組織フィラーは、ＨＡ及び／又はＳＰＦに加えて、１超の生体適合性ポリマー、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の生体適合性ポリマーを含むことができる。適切な生体適合性ポリマーとしては、多糖（例えば、ＨＡ、キトサン、コンドロイチン硫酸、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（乳酸）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ＳＰＦ以外のタンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）が挙げれれる。
【0246】
本明細書に記載のＨＡは、分子間架橋されていてもよい。幾つかの実施形態では、架橋は、ＨＡの物理的性質を安定化させる。幾つかの実施形態において、本発明は、多官能性エポキシドを用いて安定した架橋ＨＡの形成を提供する。本明細書で使用するとき、「多官能性」エポキシドという用語は、低級脂肪族エポキシド又はそれらの対応するエピハロヒドリンなどの、２以上のエポキシドが存在する化学試薬を意味する。多官能エポキシドの例としては、限定するものではないが、ジエポキシド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＧＰＧＥ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ＰＥＰＧＥ）、及びジグリセロールポリグリシジルエーテル（ＤＧＰＧＥ）が挙げられる。好ましい実施形態において、ジエポキシドＢＤＤＥは、架橋剤として使用される。ＨＡの糖部分は、ＢＤＤＥの２つのエポキシドを介して架橋する。他の実施形態では、架橋剤は、１，３－ブタジエンジエポキシド、１，２，７，８－ジエポキシオクタン、１，５－ヘキサジエンジエポキシドなどのアルキルジエポキシ体、エチレングリコールジグリシジルエーテル、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、ビスフェノールＡジグリシジルエーテルなどのジグリシジルエーテル体、ジビニルスルホン、及びエピクロロヒドリンを含む。これらの中でも、特に、ジビニルスルホン、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、及びエチレングリコールジグリシジルエーテルを好適に用いることができる。本発明においては、架橋剤の２種以上を、適宜それらを組み合わせて使用することができる。
【0247】
幾つかの実施形態において、ＨＡは、ＨＡに架橋されている。ＨＡをＨＡに架橋する方法は、１以上の工程を含むことができる。第１の工程では、ＢＤＤＥなどのエポキシドを、過剰のＨＡ溶液に添加し、反応を進行させる。エポキシドは、ＨＡの糖環上の１～４個のヒドロキシル基と反応して、１～４個のエーテル結合を形成することができる。ヒドロキシル基と反応させることに代えて又はこれに加えて、エポキシドは、多糖のカルボン酸と反応し、エステル結合を形成することができる。ＢＤＤＥの両方のエポキシドが、１以上のＨＡ高分子の糖環中の官能基と反応すると、ＨＡは架橋される。
【0248】
幾つかの実施形態では、架橋剤は、ゼロ長架橋であることができ、これは、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）又はＢＣＤＩなど活性化剤を用いることにより得られる化学結合である。幾つかの実施形態では、ゼロ長架橋活性化剤は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホ－ＮＨＳ（又はスルホニル－ＮＨＳ）又は４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で、ＨＡと反応させる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載のゲル及びヒドロゲルは、ＨＡ及び／又はタンパク質（例えば、ＳＰＦタンパク質）又は任意の他の更なるタンパク質などの少なくとも１つの架橋性生体適合性ポリマーを、少なくとも１つの架橋活性化剤と反応させることによって形成される。
【0249】
幾つかの実施形態では、架橋ＳＰＦ－ＳＰＦ、架橋ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又は架橋ＨＡ－ＨＡは、塗布後、例えば、皮内、皮下、又は一般に皮膚フィラーとして注入された後、様々な滞留時間を有することができる。幾つかの実施形態において、滞留時間は、別のＳＰＦ高分子、又はＨＡへの結合に利用可能なＳＰＦ中の反応性基の数による過ヨウ素酸ナトリウム法において影響され得る。ＨＡに結合できるＳＰＦ中の反応性基の例は、第一級アミンである。２つの反応性基、例えば２つの第一級アミンを含有するＳＰＦは、それ自体で、過ヨウ素酸法においてＨＡを架橋して、より安定なコンジュゲートを形成することができる。他の実施形態では、例えば、アミノ末端にＳＰＦ中に反応基が１つだけ存在する場合、例えば、第一級アミンが１つだけ存在する場合、ＳＰＦ－ＨＡ架橋が低減され、より生分解性のマトリックスを生じる。
【0250】
幾つかの実施形態では、ＢＤＤＥ架橋ＨＡは、塗布後、例えば、皮内、皮下、又は一般に皮膚フィラーとして注入された後、様々な滞留時間を有することができる。幾つかの実施形態では、ＢＤＤＥ架橋ＨＡは、架橋の量によって、１日間～少なくとも３０日間、皮膚組織中に残留することができる。架橋ＨＡの様々な滞留時間は、エポキシド架橋中に加水分解性結合を導入することによって調節することができる。幾つかの実施形態では、より低いｐＨでエポキシドと架橋した材料は、エステル結合形成量がより大きく、したがってより迅速に加水分解される。
【0251】
一実施形態において、架橋剤は、ゼロ長架橋活性化剤である。一般に、ゼロ長架橋活性化剤は、追加のスペーサーアーム原子を加えることなく、ポリマーをカップリングさせるので、ゼロ長架橋活性化剤は、架橋ポリマーマトリックス中に含有されない。好適なゼロ長架橋剤は、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＢＣＤなどのカルボジイミドが挙げられる。非水溶性カルボジイミドとして、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）が挙げられ、これらも好適であり得る。
【0252】
カルボキシレートとアルコール又はアミン官能基との間のカルボジイミド媒介カップリングは、周囲温度、中性ｐＨ、及び水性条件下で容易に進行する。中性ｐＨは、例えば、約６．０～約８．０、例えば、約６．５～約７．５、例えば、約７．０であることができる。典型的には、水中で、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を用いて、カルボキシレートとアルコールとの間のエステル化、又はカルボキシレートとアミンとの間のアミド化を媒介することができる。したがって、架橋ＨＡは、ＨＡ上に存在する反応性基を（例えば、カルボキシレート及びアルコール）を利用することによって形成される。また、タンパク質（例えば、ＳＰＦタンパク質）上のアミン基の高い反応性を利用して、ＨＡのカルボキシレート基を有するタンパク質のリジン側鎖間のアミド化が行われ、ＨＡタンパク質架橋ヒドロゲルを形成する。架橋剤及び未反応ポリマーは、透析によって除去することができる。
【0253】
幾つかの実施形態では、ＥＤＣが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はスルホニル－ＮＨＳ（スルホ－ＮＨＳ）（本明細書では、これらをまとめて「ＮＨＳ」と称する）と組み合わせて使用される。ＮＨＳは、ＥＤＣによって形成される反応中間体を安定化させるので、ＮＨＳの添加は、ＥＤＣカップリング効率を高めることができる。或いは、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いて、カップリング反応を触媒することができる。
【0254】
幾つかの実施形態では、本発明のＨＡベース組織フィラーは、架橋ＨＡベース組成物と、少なくとも部分的に架橋されたＨＡベース組成物とを含む。本明細書における非架橋ＨＡは、真の非架橋（例えば、「遊離」）ＨＡ鎖、及び通常、可溶性液体の形態である軽度に架橋された鎖及びその断片を意味する。
【0255】
幾つかの実施形態では、本発明のヒドロゲル組成物は、ＨＡとＳＰＦの間に少なくともいくらかの架橋を含む。
【0256】
非限定的な例示的実施形態
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0257】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0258】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0259】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0260】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0261】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0262】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0263】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、約１．５～約３．０の多分散性を有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％であり、前記低分子量ＳＰＦと前記中分子量ＳＰＦとの間の比（ｗ／ｗ）は約３：１である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0264】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する高分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、エポキシ由来の架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを用いた結果として生じ、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0265】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0266】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0267】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0268】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0269】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性と約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの平均重量平均分子量を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0270】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0271】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0272】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、約１．５～約３．０の多分散性を有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％であり、前記低分子量ＳＰＦと前記中分子量ＳＰＦとの間の比（ｗ／ｗ）は約３：１である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0273】
一実施形態において、本発明は、約１．５～約３．０の多分散性を有する高分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）と、ヒアルロン酸（ＨＡ）と、水と、約０．０５％～約０．５％のリドカイン（例えば、約０．３％のリドカイン）と含み、ＳＰＦの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、ＨＡの最大１００％ｗ／ｗの一部が架橋されており、前記架橋は、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、及びＨＡとＨＡの１以上の間で生じ、前記架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを用いた結果として生じるゼロ長架橋を含み、架橋度は最大１５％である生体適合性の皮膚フィラーに関する。
【0274】
更なる剤
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、薬剤などの活性剤を含む。幾つかの実施形態において、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、血管拡張剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤（例えば、入れ墨用染料、インク、又は顔料）、反射剤、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せが挙げられる。本明細書に記載の組織フィラーは、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒（例えば、ボツリヌス毒素及びクロストリジウム毒素）、酸化防止剤、抗感染剤（例えば、抗生物質）、血管拡張剤、染料（例えば、入れ墨用インク又は顔料、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せからなる群から選択される活性剤であることができる。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、薬剤などの活性剤を含む。幾つかの実施形態において、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、血管拡張剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤（例えば、入れ墨用染料、インク、又は顔料）、反射剤、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せが挙げられる。本明細書に記載の組織フィラーは、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒（例えば、ボツリヌス毒素及びクロストリジウム毒素）、酸化防止剤、抗感染剤（例えば、抗生物質）、血管拡張剤、染料（例えば、入れ墨用インク又は顔料、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せからなる群から選択される活性剤であることができる。
【0275】
幾つかの実施形態では、免疫抑制剤は、ラパマイシン、又はラパマイシン様化合物である。
【0276】
幾つかの実施形態において、活性剤は、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ、アモキシシリン）、エリスロマイシン（例えば、エリスロマイシンステアレート）、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン）、及びセファロスポリン（例えば、セファレキシン）、及びこれらの組合せからなる群から選択される抗生物質であることができる。
【0277】
幾つかの実施形態において、活性剤は、ニトログリセリン、ラベタロール、チアジド（ｔｈｒａｚｉｄｅ）、二硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリスリトール、ジギタリス、ヒドララジン、ジアゾキシド、アムリノン、Ｌ－アルギニン、硫酸バメタン、フマル酸ベンシクラン、ヘミコハク酸ベンフロジル、ニコチン酸ベンジル、塩酸ブフロメジル、塩酸ブフェニン、塩酸ブチルアミン（ｂｕｔａｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、クエン酸セチエジル、シクロニカート、マレイン酸シネパジド、シクランデラート、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアンモニウム、ニコチン酸エチル、ヘプロニカート、ニコチン酸ヘキシル、酒石酸イフェンプロジル、ニコチン酸イノシトール、塩酸イソクスプリン、カリジノゲナーゼ、ニコチン酸メチル、シュウ酸ナフチドフリル、クエン酸ニカメタート、ニセリトロール、ニコボキシル、ニコフラノース、ニコチニルアルコール、酒石酸ニコチニルアルコール、一酸化窒素、ノニバミド、オキシペンチフィリン、パパベリン、パパベロリン、ペンチフィリン、過酸化亜硝酸、ピナシジル、ピプラテコール、プロペントフィルチン、ラウバシン、スルオクチジル、テアスプリン、塩酸チモキサミン、ニコチン酸トコフェロール、トラゾリン、ニコチン酸キサンチノール、ジアゾキシド、ヒドララジン、ミノキシジル、ニトロプルシドナトリウム、及びこれらの組合せからなる群から選択される血管拡張剤であることができる。
【0278】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．０２％、又は少なくとも０．０３％、又は少なくとも０．０４％、又は少なくとも０．０５％、又は少なくとも０．０６％、又は少なくとも０．０７％、又は少なくとも０．０８％、又は少なくとも０．０９％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１．０％、又は少なくとも１．５％、又は少なくとも２．０％、又は少なくとも２．５％、又は少なくとも３．０％、又は少なくとも３．５％、又は少なくとも４．０％、又は少なくとも４．５％、又は少なくとも５．０％、又は少なくとも５．５％、又は少なくとも６．０％、又は少なくとも６．５％、又は少なくとも７．０％、又は少なくとも７．５％、又は少なくとも８．０％、又は少なくとも８．５％、或いは少なくとも９．０％、或いは少なくとも９．５％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％の活性剤を含むことができる。
【0279】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、最大０．０１％、又は最大０．０２％、又は最大０．０３％、又は最大０．０４％、又は最大０．０５％、又は最大０．０６％、又は最大０．０７％、又は最大０．０８％、又は最大０．０９％、又は最大０．１％、又は最大０．２％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１．０％、又は最大１．５％、又は最大２．０％、又は最大２．５％、又は最大３．０％、又は最大３．５％、又は最大４．０％、又は最大４．５％、又は最大５．０％、又は最大５．５％、又は最大６．０％、又は最大６．５％、又は最大７．０％、又は最大７．５％、又は最大８．０％、又は最大８．５％、又は最大９．０％、又は最大９．５％、又は最大１０％、又は最大１５％、又は最大２０％、又は最大２５％、又は最大３０％、又は最大３５％、又は最大４０％、又は最大４５％、又は最大５０％の活性剤を含むことができる。
【0280】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、約０．０１％～約０．１％、又は約０．０５％～約０．１５％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．１５％～約０．２５％、又は約０．２％～約０．３％、又は約０．２５％～約０．３５％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．３５％～約０．４５％、又は約０．４％～約０．５％、又は約０．４５％～約０．５５％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．５５％～約０．６５％、又は約０．６％～約０．７％、又は約０．６５％～約０．７５％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．７５％～約０．８５％、又は約０．８％～約０．９％、又は約０．８５％～約０．９５％、又は約１％～約２％、又は約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％～約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％～約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約１０％～約１５％、又は約１５％～約２０％、又は約２０％～約２５％、又は約２５％～約３０％、又は約３０％～約３５％、又は約３５％～約４０％、又は約４０％～約４５％、又は約４５％～約５０％の活性剤を含むことができる。
【0281】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、約０．０１％、又は約０．０２％、又は約０．０３％、又は約０．０４％、又は約０．０５％、又は約０．０６％、又は約０．０７％、又は約０．０８％、又は約０．０９％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１．０％、又は約１．５％、又は約２．０％、又は約２．５％、又は約３．０％、又は約３．５％、又は約４．０％、又は約４．５％、又は約５．０％、又は約５．５％、又は約６．０％、又は約６．５％、又は約７．０％、又は約７．５％、又は約８．０％、又は約８．５％、又は約９．０％、又は約９．５％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％の活性剤を含むことができる。
【0282】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、線維症阻害剤を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、治療部位内又はその周囲の病理学的プロセスに対する阻害効果を発揮するように作用する化合物を更に含むことができる。特定の態様では、活性剤は、次の化合物のクラスのいずれかから選択することができる：抗炎症剤（例えば、デキサメタゾン、コルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、６α－メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、及びアスピリン）。
【0283】
幾つかの実施形態では、活性剤は、限定するものではないが、酸化防止剤及び酵素であることができる。実施形態では、活性剤は、限定するものではないが、セレン、ユビキノン誘導体、チオール系酸化防止剤、糖含有酸化防止剤、ポリフェノール類、植物抽出物、コーヒー酸、アピゲニン、ピクノジェノール、レスベラトロール、葉酸、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ３、ビタミンＥ、ビタミンＣ及びその誘導体、ビタミンＤ、ビタミンＡ、アスタキサンチン、ルテイン、リコピン、必須脂肪酸（オメガ３及び６）、鉄、亜鉛、マグネシウム、フラボノイド（大豆、クルクミン、シリマリン、ピクノジェノール）、成長因子、アロエ、ヒアルロン酸、細胞外マトリックスタンパク質、細胞、核酸、バイオマーカー、生物学的試薬、酸化亜鉛、過酸化ベンゾイル、レチノイド、チタン、既知用量のアレルゲン（感作治療のため）、エッセンシャルオイル（限定するものではないが、レモングラス又はローズマリー油が挙げられる）、及び香料が挙げられる。活性剤をより広く考慮すると、活性剤は、低分子、薬剤、タンパク質、ペプチド、及び核酸などの治療剤を含むことができる。
【0284】
特定の実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、組織フィラー注入部位の痛みや不快感を緩和又は軽減するのに有効な量の１以上の麻酔剤を含むことができる。局部麻酔剤は、アンブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジサイクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータ－ユーカイン、ユープロシン、フェナルコミン、フォルモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチル－ｐ－アミノベンゾエート、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ネパイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、シュードカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、及びその塩からなる群から選択することができる。
【0285】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．０２％、又は少なくとも０．０３％、又は少なくとも０．０４％、又は少なくとも０．０５％、又は少なくとも０．０６％、又は少なくとも０．０７％、又は少なくとも０．０８％、又は少なくとも０．０９％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１．０％、又は少なくとも１．５％、又は少なくとも２．０％、又は少なくとも２．５％、又は少なくとも３．０％、又は少なくとも３．５％、又は少なくとも４．０％、又は少なくとも４．５％、又は少なくとも５．０％、又は少なくとも５．５％、又は少なくとも６．０％、又は少なくとも６．５％、又は少なくとも７．０％、又は少なくとも７．５％、又は少なくとも８．０％、又は少なくとも８．５％、又は少なくとも９．０％、又は少なくとも９．５％、又は少なくとも１０％のリドカイン又は上に記載した他の麻酔剤を含むことができる。
【0286】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、最大０．０１％、又は最大０．０２％、又は最大０．０３％、又は最大０．０４％、又は最大０．０５％、又は最大０．０６％、又は最大０．０７％、又は最大０．０８％、又は最大０．０９％、又は最大０．１重量％、又は最大０．２重量％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１．０％、又は最大１．５％、又は最大２．０％、又は最大２．５％、又は最大３．０％、又は最大３．５％、又は最大４．０％、又は最大４．５％、又は最大５．０％、又は最大５．５％、又は最大６．０％、又は最大６．５％、又は最大７．０％、又は最大７．５％、又は最大８．０％、又は最大８．５％、又は最大９．０％、又は最大９．５％、又は最大１０％のリドカイン又は上に記載した他の麻酔剤を含むことができる。
【0287】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、約０．０１％、又は約０．０２％、又は約０．０３％、又は約０．０４％、又は約０．０５％、又は約０．０６％、又は約０．０７％、又は約０．０８％、又は約０．０９％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１．０％、又は約１．５％、又は約２．０％、又は約２．５％、又は約３．０％、又は約３．５％、又は約４．０％、又は約４．５％、又は約５．０％、又は約５．５％、又は約６．０％、又は約６．５％、又は約７．０％、又は約７．５％、又は約８．０％、又は約８．５％、又は約９．０％、又は約９．５％、又は約１０％のリドカイン又は又は上に記載した他の麻酔剤を含むことができる。
【0288】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、重量濃度で、約０．０１％～約０．０２％、又は約０．０３％～約０．０４％、又は約０．０５％～約０．０６％～約０．０７％、又は約０．０８％～約０．０９％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．９％～約１．０％、又は約１％～約１．５％、又は約１．５％～約２．０％、又は約２．０％～約２．５％、又は約２．５％～約３．０％、又は約３．０％～約３．５％、又は約３．５％～約４．０％、又は約４．０％～約４．５％、又は約４．５％～約５．０％、又は約５．０％～約５．５％、又は約５．５％～約６．０％、又は約６．０％～約６．５％、又は約６．５％～約７．０％、又は約７．５％～約８．０％、又は約８．０％～約８．５％、又は約８．５％～約９．０％、又は約９．５％～約１０％のリドカイン又は又は上に記載した他の麻酔剤を含むことができる。
【0289】
一実施形態において、麻酔剤は、リドカインＨＣｌの形態などのリドカインである。本明細書に記載の組織フィラーは、組成物の約０．１重量％～約５重量％の濃度、例えば、組織フィラーの約０．２重量％～約１．０重量％の濃度でリドカイン又は他の麻酔剤を有していてもよい。一実施形態では、組織フィラーは、組織フィラーの約０．３重量％（ｗ／ｗ％）のリドカイン濃度を有する。本明細書に記載の組織フィラー中のリドカインの濃度は、治療上有効であることができ、これは、濃度が、例えば、組織フィラー注入部位の痛みや不快感を緩和又は軽減するなどの治療上の利益を提供するのに適切であることを意味する。
【0290】
光学特性
光が材料に遭遇すると、光は、幾つかの方法で材料と相互作用し得る。これらの相互作用は、光の性質、即ち、その波長、周波数、エネルギー、などと、材料の性質に依存する。光は、反射、及び屈折を伴う透過の組合せによって物体と相互作用する。光学的に透明な材料は、それに当たる光の大部分を透過し、反射される光は殆どない。光を透過させない材料は、光学的に不透明又は単に不透明と呼ばれる。
光が材料に遭遇すると、光は、幾つかの方法で材料と相互作用し得る。これらの相互作用は、光の性質、即ち、その波長、周波数、エネルギー、などと、材料の性質に依存する。光は、反射、及び屈折を伴う透過の組合せによって物体と相互作用する。光学的に透明な材料は、それに当たる光の大部分を透過し、反射される光は殆どない。光を透過させない材料は、光学的に不透明又は単に不透明と呼ばれる。
【0291】
幾つかの実施形態において、本発明は、透明性及び／又は半透明性を有する本明細書に記載の組織フィラーを提供する。透明性（透明性（ｐｅｌｌｕｃｉｄｉｔｙ）又は透明性（ｄｉａｐｈａｎｅｉｔｙ）とも呼ばれる）は、光が材料を通過することを可能にする物理的特性であり、一方、半透明性（半透明性（ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｅ）又は半透明性（ｔｒａｎｓｌｕｃｉｄｉｔｙ）とも呼ばれる）は、光が散乱して通過することを可能にするのみである。反対の性質が不透明性である。透明な材料がクリアである一方、半透明のものは、はっきりと透けて見えることはできない。本明細書に開示の組織フィラーは、このような透明性及び／又は半透明性などの光学特性を示しても、示さなくてもよい。表層線充填のための方法を含む幾つかの実施形態では、不透明ヒドロゲルを有することが有利であろう。組織フィラーの光学的特性を制御するために使用される因子は、限定するものではないが、ＳＰＦ濃度、結晶化度、及び／又はヒドロゲルの均質性が挙げられる。
【0292】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは不透明である。
【0293】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、光学的に透明である。この実施形態の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の少なくとも７５％、光の少なくとも８０％、光の少なくとも８５％、光の少なくとも９０％、又は光の少なくとも９５％である。この実施形態の更に他の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、光の約７５％～約１００％、光の約８０％～約１００％、光の約８５％～約１００％、光の約９０％～約１００％、又は光の約９５％～約１００％を透過する。
【0294】
別の実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、光学的に不透明である。この実施形態の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の約０．１％、光の約１％、光の約１０％、光の約１５％、光の約２０％、光の約２５％、光の約３０％、光の約３５％、光の約４０％、光の約４５％、光の約５０％、光の約５５％、光の約６０％、光の約６５％、光の約７０％、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の最大０．１％、光の最大１％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、又は光の最大７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の少なくとも０．１％、光の少なくとも１％、光の少なくとも１０％、光の少なくとも１５％、光の少なくとも２０％、光の少なくとも２５％、光の少なくとも３０％、光の少なくとも３５％、光の少なくとも４０％、光の少なくとも４５％、光の少なくとも５０％、光の少なくとも５５％、光の少なくとも６０％、光の少なくとも６５％、光の少なくとも７０％、又は光の少なくとも７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、組織フィラーは、光の約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約２５％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約３５％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約４５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約５５％、約０．１％～約６０％、約０．１％～約６５％、約０．１％～約７０％、約０．１％～約７５％、約１％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約２５％、約１％～約３０％、約１％～約３５％、約１％～約４０％、約１％～約４５％、約１％～約５０％、約１％～約５５％、約１％～約６０％、約１％～約６５％、約１％～約７０％、約１％～約７５％、約１０％～約２０％、約１０％～約２５％、約１０％～約３０％、約１０％～約３５％、約１０％～約４０％、約１０％～約４５％、約１０％～約５０％、約１０％～約５５％、約１０％～約６０％、約１０％～約６５％、約１０％～約７０％、約１０％～約７５％、約２５％～約３５％、約２５％～約４０％、約２５％～約４５％、約２５％～約５０％、約２５％～約５５％、約２５％～約６０％、約２５％～約６５％、約２５％～約７０％、又は約２５％～約７５％を透過する。
【0295】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、光学的に半透明である。この実施形態の態様では、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を散乱透過する。これらの実施形態の他の態様では、組織フィラーは、例えば、光の少なくとも０．１％、光の少なくとも１％、光の少なくとも５％、光の少なくとも１０％、光の少なくとも１５％、光の少なくとも２０％、光の少なくとも２５％、光の少なくとも３０％、光の少なくとも３５％、光の少なくとも４０％、光の少なくとも４５％、光の少なくとも５０％、光の少なくとも５５％、光の少なくとも６０％、光の少なくとも６５％、光の少なくとも７０％、光の少なくとも７５％、光の少なくとも８０％、光の少なくとも８５％、光の少なくとも９０％、又は光の少なくとも９５％を散乱透過する。これらの実施形態の他の態様では、組織フィラーは、例えば、光の最大０．１％、光の最大１％、光の最大５％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、光の最大７５％、光の最大８０％、光の最大８５％、光の最大９０％、光の最大９５％、又は光の最大１００％を散乱透過する。これらの実施形態の更に他の態様では、組織フィラーは、例えば、光の約０．１％～約１００％、光の約１％～約１００％、光の約５％～約１００％、光の約１０％～約１００％、光の約１５％～約１００％、光の約２０％～約１００％、光の約２５％～約１００％、光の約３０％～約１００％、光の約３５％～約１００％、光の約４５％～約１００％、光の約５０％～約１００％、光の約５５％～約１００％、光の約６０％～約１００％、光の約６５％～約１００％、光の約７０％～約１００％、光の約７５％～約１００％、光の約８０％～約１００％、光の約８５％～約１００％、光の約９０％～約１００％、又は光の約９５％～約１００％を散乱透過する。
【0296】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、光を散乱又は吸収する材料の能力の記述として定義される、その減衰係数によって記述することができる。
【0297】
組織フィラー及び皮膚特性は、当技術分野で知られた特定の組織フィラーの送達後の皮膚における有害なチンダル現象イベントの発現に影響を与え得る。高い剛性及び弾性を有するフィラーを用いて、この材料を中間及び深層真皮領域に注入して、顔の変色の恐れなしに鼻唇溝、頬、及び顎のような面上の領域を修正することができる。しかし、フィラーはより表面の用途、例えば、細かい皺の線を修正するために使用すると、又は真皮の上部領域において誤って極端に表面に適用されると、皮膚の青みがかった変色がしばしば観察される。この現象は、チンダル現象の結果であると考えられ、適用部位に半永久的な変色が残る。幾つかの実施形態では、フィラー材料を分解するために、酵素、例えば、ヒアルロニダーゼを投与すると効果が消失する。結果として、チンダル現象は、表面の細線皺の治療を受けた患者においてより一般的である。一般的に、フィラーが皮膚に残存する期間におけるチンダル現象の長期発現は、望ましくない副作用や患者の懸念の原因である。
【0298】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、その均質性及び得られる不透明性により、チンダル現象を緩和する。
【0299】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、チンダル現象を生じない、又はチンダル現象に起因する視覚的に知覚可能な青色変色を生じない。幾つかの実施形態において、本発明は、組織フィラーと、美的外観を向上させるため方法であって、患者の真皮領域に、チンダル現象を示さない又は著しくは示さない実質的に光学的に透明な皮膚フィラー組成物を投与することを含む方法とに関する。組織フィラーが注入された皮膚部位の青色変色の外観（チンダル現象）は、皮膚フィラー患者によって経験される重大な有害事象である。チンダル現象は、表面の細線皺の治療を受けた患者では、より一般的である。本発明の実施形態は、チンダル現象に起因する青色変色を伴わずに、比較的薄い皮膚の領域においても、表面に注入して細線及び皺を治療できる長期に亘り続く半透明のフィラーを提供する。細線又は表在皺は、一般に、皮膚が最も薄い、即ち、皮膚が１ｍｍ未満の真皮厚みを有する顔の領域（前額部、外眼角、赤唇縁／口周囲線）に典型的に見られる皮膚の皺又は折り目であると理解される。前額部において、平均皮膚厚み（ｄｅｒｍａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）は、正常な皮膚では約０．９５ｍｍであり、皺の皮膚では約０．８１ｍｍである。外眼角の周りの真皮は更に薄い（例えば、正常な皮膚では約０．６１ｍｍであり、皺の皮膚では約０．４１ｍｍ）。３０又は３２ゲージ針（典型的には、細線ゲル適用のために使用される針）の平均外径は、約０．３０～約０．２４ｍｍである。
【0300】
実施形態では、本明細書に開示の組織フィラーは、光学的に不透明である。この実施形態の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、光の約５％、又は光の約１０％、又は光の約１５％、又は光の約２０％、又は光の約２５％、又は光の約３０％、又は光の約３５％、又は光の約４０％、又は光の約４５％、又は光の約５０％、又は光の約５５％、又は光の約６０％、又は光の約６５％、又は光の約７０％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、光の最大５％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、又は光の最大７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、光の約５％～約１５％、約５％～約２０％、約５％～約２５％、約５％～約３０％、約５％～約３５％、約５％～約４０％、約５％～約４５％、約５％～約５０％、約５％～約５５％、約５％～約６０％、約５％～約６５％、約５％～約７０％、約５％～約７５％、約１５％～約２０％、約１５％～約２５％、約１５％～約３０％、約１５％～約３５％、約１５％～約４０％、約１５％～約４５％、約１５％～約５０％、約１５％～約５５％、約１５％～約６０％、約１５％～約６５％、約１５％～約７０％、約１５％～約７５％、約２５％～約３５％、約２５％～約４０％、約２５％～約４５％、約２５％～約５０％、約２５％～約５５％、約２５％～約６０％、約２５％～約６５％、約２５％～約７０％、又は約２５％～約７５％を透過する。
【0301】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％のチンダリングの低下を示す。これらの実施形態の他の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％のチンダリングの低下を示す。これらの実施形態の他の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、約２０％～約１００％、約５０％～約１００％、約７０％～約１００％、約１５％～約３５％、約２０％～約４０％、約２５％～約４５％、約３０％～約５０％、約３５％～約５５％、約４０％～約６０％、約４５％～約６５％、約５０％～約７０％、約５５％～約７５％、約６０％～約８０％、約６５％～約８５％、約７０％～約９０％、約７５％～約９５％、又は約８０％～約１００％のチンダリングの低下を示す。
【0302】
含水量
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、水を含むことができる。例えば、本明細書に記載の幾つかの組織フィラーは、ヒドロゲルなどのゲルであることができ、吸収、捕捉、又は別の態様で水を内部に含有することができる。
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、水を含むことができる。例えば、本明細書に記載の幾つかの組織フィラーは、ヒドロゲルなどのゲルであることができ、吸収、捕捉、又は別の態様で水を内部に含有することができる。
【0303】
実施形態では、本開示の組織フィラーにおける含水率（重量％）は、１％～９５％である。実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーにおける含水率（重量％）は、少なくとも１％、又は少なくとも２％、又は少なくとも３％、又は少なくとも４％、又は少なくとも５％、又は少なくとも６％、又は少なくとも７％、又は少なくとも８％、又は少なくとも９％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１１％、又は少なくとも１２％、又は少なくとも１３％、又は少なくとも１４％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも１６％、又は少なくとも１７％、又は少なくとも１８％、又は少なくとも１９％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２１％、又は少なくとも２２％、又は少なくとも２３％、又は少なくとも２４％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３１％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３３％、又は少なくとも３４％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３６％、又は少なくとも３７％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも３９％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４１％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４３％、又は少なくとも４４％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４６％、又は少なくとも４７％、又は少なくとも４８％、又は少なくとも４９％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５１％、又は少なくとも５２％、又は少なくとも５３％、又は少なくとも５４％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５６％、又は少なくとも５７％、又は少なくとも５８％、又は少なくとも５９％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６１％、又は少なくとも６２％、又は少なくとも６３％、又は少なくとも６４％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６６％、又は少なくとも６７％、又は少なくとも６８％、又は少なくとも６９％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７１％、又は少なくとも７２％、又は少なくとも７３％、又は少なくとも７４％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７６％、又は少なくとも７７％、又は少なくとも７８％、又は少なくとも７９％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８１％、又は少なくとも８２％、又は少なくとも８３％、又は少なくとも８４％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８６％、又は少なくとも８７％、又は少なくとも８８％、又は少なくとも８９％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９１％、又は少なくとも９２％、又は少なくとも９３％、又は少なくとも９４％、又は少なくとも９５％である。
【0304】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーにおける含水率（重量％）は、最大１％、又は最大２％、又は最大３％、又は最大４％、又は最大５％、又は最大６％、又は最大７％、又は最大８％、又は最大９％、又は最大１０％、又は最大１１％、又は最大１２％、又は最大１３％、又は最大１４％、又は最大１５％、又は最大１６％、又は最大１７％、又は最大１８％、又は最大１９％、又は最大２０％、又は最大２１％、又は最大２２％、又は最大２３％、又は最大２４％、又は最大２５％、又は最大２６％、又は最大２７％、又は最大２８％、又は最大２９％、又は最大３０％、又は最大３１％、又は最大３２％、又は最大３３％、又は最大３４％、又は最大３５％、又は最大３６％、又は最大３７％、又は最大３８％、又は最大３９％、又は最大４０％、又は最大４１％、又は最大４２％、又は最大４３％、又は最大４４％、又は最大４５％、又は最大４６％、又は最大４７％、又は最大４８％、又は最大４９％、又は最大５０％、又は最大５１％、又は最大５２％、又は最大５３％、又は最大５４％、又は最大５５％、又は最大５６％、又は最大５７％、又は最大５８％、又は最大５９％、又は最大６０％、又は最大６１％、又は最大６２％、又は最大６３％、又は最大６４％、又は最大６５％、又は最大６６％、又は最大６７％、又は最大６８％、又は最大６９％、又は最大７０％、又は最大７１％、又は最大７２％、又は最大７３％、又は最大７４％、又は最大７５％、又は最大７６％、又は最大７７％、又は最大７８％、又は最大７９％、又は最大８０％、又は最大８１％、又は最大８２％、又は最大８３％、又は最大８４％、又は最大８５％、又は最大８６％、又は最大８７％、又は最大８８％、又は最大８９％、又は最大９０％、又は最大９１％、又は最大９２％、又は最大９３％、又は最大９４％、又は最大９５％である。
【0305】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーにおける含水率（重量％）は、１％～２％、又は２％～３％、又は３％～４％、又は４％～５％、又は５％～６％、又は６％～７％、又は７％～８％、又は８％～９％、又は９％～１０％、又は１０％～１１％、又は１１％～１２％、又は１２％～１３％、又は１３％～１４％、又は１４％～１５％、又は１５％～１６％、又は１６％、又は１７％、又は１７％～１８％、又は１８％～１９％、又は１９％～２０％、又は２０％～２１％、又は２１％～２２％、又は２２％～２３％、又は２３％～２４％、又は２４％～２５％、又は２５％～２６％、又は２６％～２７％、又は２７％～２８％、又は２８％～２９％、又は３０％～３１％、又は３１％～３２％、又は３２％～３３％、又は３３％～３４％、又は３４％～３５％、又は３５％～３６％、又は３６％～３７％、又は３７％～３８％、又は３８％～３９％、又は３９％～４０％、又は４０％～４１％、又は４１％～４２％、又は４２％～４３％、又は４３％～４４％、又は４４％～４５％、又は４５％～４６％、又は４６％～４７％、又は４７％～４８％、又は４８％～４９％、又は４９％～５０％、又は５０％～５１％、又は５１％～５２％、又は５２％～５３％、又は５３％～５４％、又は５４％～５５％、又は５５％～５６％、又は５６％～５７％、又は５７％～５８％、又は５８％～５９％、又は５９％～６０％、又は６０％～６１％、又は６１％～６２％、又は６２％～６３％、又は６３％～６４％、又は６４％～６５％、又は６５％～６６％、又は６６％～６７％、又は６７％～６８％、又は６８％～６９％、又は６９％～７０％、又は７０％～７１％、又は７１％～７２％、又は７２％～７３％、又は７３％～７４％、又は７４％～７５％、又は７５％～７６％、又は７６％～７７％、又は７７％～７８％、又は７８％～７９％、又は７９％～８０％、又は８０％～８１％、又は８１％～８２％、又は８２％～８３％、又は８３％～８４％、又は８４％～８５％、又は８５％～８６％、又は８６％～８７％、又は８７％～８８％、又は８８％～８９％、又は８９％～９０％、又は９０％～９１％、又は９１％～９２％、又は９２％～９３％、又は９３％～９４％、又は９４％～９５％、又は９５％～９６％、又は９６％～９７％、又は９７％～９８％である。
【0306】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーにおける含水率（重量％）は、約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％である。
【0307】
機械的性質
本明細書に記載される組織フィラー又はその成分は、選択された治療及び送達の様式に応じて多数の物理的状態で提供されることができる。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、例えば液体などの流体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、粘性流体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、固体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、弾性固体である。
本明細書に記載される組織フィラー又はその成分は、選択された治療及び送達の様式に応じて多数の物理的状態で提供されることができる。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、例えば液体などの流体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、粘性流体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、固体である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、弾性固体である。
【0308】
本明細書に記載の組織フィラーを検証するとき、表１７に示すような多数のレオロジー特性を評価することができる。
【表17】
【0309】
幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、弾性材料と粘性材料の両方の機械的性質を示す粘弾性材料である。幾つかの実施形態では、本発明の組織フィラーは、ゲルとして記載することができる。材料の機械的特性又はレオロジー特性（例えば、粘弾性特性）を評価するための方法は、当技術分野で知られており、例えば、参照によりその全体を本明細書に援用する米国特許出願公開第２００６／０１０５０２２号明細書及びＳｔｏｃｋｓら、Ｊ．Ｄｒｕｇｓ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２０１１）１０：９７４－９８０に記載されている。材料の粘弾性は、動的機械分析を使用して、例えば、試料に振動応力を印加し、得られたひずみを測定することによって特徴付けることができる。弾性材料は、典型的には、同相応力とひずみを示す、即ち、応力印加により即時ひずみが生じる。粘性材料において、ひずみは、応力印加から９０度位相がずれる。粘弾性材料では、ひずみと応力との間の位相差が０より大きいが、９０度未満である。幾つかの実施形態では、本発明のＳＰＦ材料の粘弾性は、貯蔵弾性率Ｇ’（弾性率とも呼ばれる）、及び損失弾性率Ｇ”（粘性率とも呼ばれる）を含む、下記複素動的弾性率Ｇによって特徴付けることができる。
【数4】
【0310】
貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”は、回転式又は剪断レオメータにて、ＳＰＦゲル試料を振動応力に付すことによって測定される。試料は、２枚のプレート間に配置され、一方が固定され、一方が回転可能、又は所定周波数で振動可能となっている。貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”の値は、周波数依存性である。貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”の測定時に使用される周波数の範囲は、典型的には、０．１～１０Ｈｚであるがこれに限定されない。幾つかの実施形態では、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”は、１Ｈｚの振動周波数で測定される。
【0311】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーのレオロジー特性、例えば、Ｇ’及びＧ”は、振動平行板レオメータを用いて測定することができる。様々の直径（例えば、２５ｍｍ）のプレートを、様々な距離（例えば、１ｍｍ）のプレート間のギャップ高さで使用することができる。測定は、様々な温度で行うことができる。幾つかの実施形態では、測定は、２５℃の一定温度で行われる。幾つかの実施形態では、測定は、特定のひずみ値（例えば、２％の一定のひずみ）で、例えば、１～１０Ｈｚの２つの周波数値間の周波数掃引を含む。幾つかの実施形態では、測定は、周波数の対数増加と、それに続くひずみ掃引を含み、これは、一定の周波数（例えば、５Ｈｚ）において、ひずみの対数増加で１～３００％であり得る。幾つかの実施形態では、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”は、特定のパーセントひずみ値（例えば、１％ひずみ）におけるひずみ掃引から得ることができる。
【0312】
幾つかの実施形態では、複素弾性率（即ち、Ｇ’とｉＧ”との和）は、本明細書に記載の特定の組織フィラーの変形に対して全抵抗の包括的尺度を与える。複素弾性率は、レオメーターを用いて試験することができ、特定の組織フィラー（例えば、ゲル）を２枚の平行円形プレート間で圧搾でき、様々な周波数で一方のプレートを回転させることによって、可変の回転ひずみが提供される。
【0313】
幾つかの実施形態では、特定の組織フィラーの特性は、組織フィラーの弾性（％）によって調べることができ、弾性（％）は、１００×Ｇ’／（Ｇ’＋Ｇ”）に等しい。
【0314】
幾つかの実施形態では、特定の組織フィラーの特性は、組織フィラーの回復係数によって調べることができる。
ここで、約１の回復係数は、特定の組織フィラー（例えば、ゲル）が印加された力にもかかわらず、その構造を保持したことを意味し、１より大きい回復係数は、特定の組織フィラー（例えば、ゲル）が、構造破壊を経験したことを意味し、１未満の回復係数は、ゲルが構造性能の上昇を経験したことを意味する。
【数5】
【0315】
本発明のいずれかの理論に拘束されることを望むものではないが、Ｇ’の増加は、形状の変化に対して、より良好に抵抗する材料の能力の相対的増加となり、材料は、Ｇ’がより低い材料（例えば、ゲル組織フィラー）よりも、堅い、硬い、又は弾性であると記述されることができる。したがって、Ｇ’の増加は、材料の能力の対応する増加となり、構造的支持及び／又はボリューム化をもたらすことができる。
【0316】
本発明のいずれかの理論に拘束されることを望むものではないが、Ｇ”の増加は、より低いＧ”を有する材料と比較して、より粘性の高い材料（例えば、ゲル）となる。また、より高いＧ”を有する材料の放散熱としてより大きなエネルギー損失がある。幾つかの実施形態において、架橋度の増加に伴ってＧ’が増加する。幾つかの実施形態において、架橋度の増加に伴ってＧ”が増加する。幾つかの実施形態において、架橋度の増加に伴ってＧ’とＧ”の両方が増加する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５０Ｐａ未満から約１５０００Ｐａ超のＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５０Ｐａ～約５００，０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００Ｐａ～約５００，０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５Ｐａ～約１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００Ｐａ～約２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５０Ｐａ～約２７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５０Ｐａ～約５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２５０Ｐａ～約７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３７５Ｐａ～約６７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４２５Ｐａ～約８５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５００Ｐａ～約１０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６５０Ｐａ～約１０５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５０Ｐａ～約１２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９５０Ｐａ～約１５００ＰａのＧ’を有する。
【0317】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５００ＰａのＧ’を有する。
【0318】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約少なくともＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１０００ＰａのＧ’を有する。
【0319】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１０５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５００ＰａのＧ’を有する。
【0320】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４７０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５００ＰａのＧ’を有する。
【0321】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１０００ＰａのＧ’を有する。
【0322】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１０５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５００ＰａのＧ’を有する。
【0323】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５００ＰａのＧ’を有する。
【0324】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９２５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９７５ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０００ＰａのＧ’を有する。
【0325】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５００ＰａのＧ’を有する。
【0326】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５０００ＰａのＧ’を有する。
【0327】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１００００ＰａのＧ’を有する。
【0328】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１０５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５０００ＰａのＧ’を有する。
【0329】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５０００ＰａのＧ’を有する。
【0330】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１００００ＰａのＧ’を有する。
【0331】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１０５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５０００ＰａのＧ’を有する。
【0332】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５０００ＰａのＧ’を有する。
【0333】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９０００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９５００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９７５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００００ＰａのＧ’を有する。
【0334】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４００ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４５０ＰａのＧ’を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５００ＰａのＧ’を有する。
【0335】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５Ｐａ未満から約２００Ｐａ超のＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５Ｐａ～約２００ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５Ｐａ～約２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５Ｐａ～約３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０Ｐａ～約５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５Ｐａ～約７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２０Ｐａ～約８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２５Ｐａ～約１００ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３５Ｐａ～約１２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４５Ｐａ～約１１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５Ｐａ～約１５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００Ｐａ～約１７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１５Ｐａ～約２００ＰａのＧ”を有する。
【0336】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１００ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１０５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも１９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、少なくとも２００ＰａのＧ”を有する。
【0337】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１００ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１０５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大１９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、最大２００ＰａのＧ”を有する。
【0338】
幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１００ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１０５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１１５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１２５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１３５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１４５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１５５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１６０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１６５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１７０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１７５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１８０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１８５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１９０ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約１９５ＰａのＧ”を有する。幾つかの実施形態において、本発明の組織フィラーは、約２００ＰａのＧ”を有する。
【0339】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは粘性係数を示す。粘度は、剪断に対する、又は剪断応力若しくは引張応力のいずれかによって引き起こされる流れに対する流体の抵抗である。粘度は、流体の層が互いにずれようとするときに発揮される分子間摩擦によって引き起こされる流れに対する流体の内部抵抗を記述し、流体摩擦の尺度と考えられる。流体の粘性が低いほど、その運動性（流動性）の容易さが大きくなる。
【0340】
粘度は、２つの方法で定義することができる。即ち、粘性係数（μ；ηが使用されることがある）又は動粘性係数（Ｖ）である。粘性係数は、絶対又は複素粘度としても知られ、流体によって離間される単位距離を維持したときに、単位速度で他方に対して一方の水平平面を移動させるのに必要な単位面積当たりの接線力である。粘性係数のＳＩ物理単位は、パスカル－秒（Ｐａｓ）であり、これは、Ｎｍ－２ｓと同一である。粘性係数は、τ＝μｄｖｘ／ｄｚで表すことができ、式中、τ＝剪断応力、μ＝粘性係数、ｄｖｘ／ｄｚが経時速度勾配である。例えば、１Ｐａ・ｓの粘度を有する流体が２つのプレート間に配され、且つ一方のプレートを１パスカルの剪断応力で横方向に押すとき、それは１秒間でプレート間の層の厚みに等しい距離を移動させる。動粘性係数（Ｖ）は、密度に対する粘性係数の比であり、力が関与しない量であり、次のように定義される：ν＝μ／ρ、式中、μは粘性係数であり、ρは密度（ｋｇ／ｍ３）である。動粘性係数は、通常、ガラスキャピラリー粘度計によって測定され、ｍ２／ｓのＳＩ単位を有する。流体の粘度は温度依存性であるので、粘性係数及び動粘性係数は、温度に共に報告される。
【0341】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、少なくとも１０Ｐａ・ｓ、少なくとも２０Ｐａ・ｓ、少なくとも３０Ｐａ・ｓ、少なくとも４０Ｐａ・ｓ、少なくとも５０Ｐａ・ｓ、少なくとも６０Ｐａ・ｓ、少なくとも７０Ｐａ・ｓ、少なくとも８０Ｐａ・ｓ、少なくとも９０Ｐａ・ｓ、少なくとも１００Ｐａ・ｓ、少なくとも１２５Ｐａ・ｓ、少なくとも１５０Ｐａ・ｓ、少なくとも１７５Ｐａ・ｓ、少なくとも２００Ｐａ・ｓ、少なくとも２２５Ｐａ・ｓ、少なくとも２５０Ｐａ・ｓ、少なくとも２７５Ｐａ・ｓ、少なくとも３００Ｐａ・ｓ、少なくとも４００Ｐａ・ｓ、少なくとも５００Ｐａ・ｓ、少なくとも６００Ｐａ・ｓ、少なくとも７００Ｐａ・ｓ、少なくとも７５０Ｐａ・ｓ、少なくとも８００Ｐａ・ｓ、少なくとも９００Ｐａ・ｓ、少なくとも１，０００Ｐａ・ｓ、少なくとも１，１００Ｐａ・ｓ、又は少なくとも１，２００Ｐａ・ｓの動的粘度を示す。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、最大１０Ｐａ・ｓ、最大２０Ｐａ・ｓ、最大３０Ｐａ・ｓ、最大４０Ｐａ・ｓ、最大５０Ｐａ・ｓ、最大６０Ｐａ・ｓ、最大７０Ｐａ・ｓ、最大８０Ｐａ・ｓ、最大９０Ｐａ・ｓ、最大１００Ｐａ・ｓ、最大１２５Ｐａ・ｓ、最大１５０Ｐａ・ｓ、最大１７５Ｐａ・ｓ、最大２００Ｐａ・ｓ、最大２２５Ｐａ・ｓ、最大２５０Ｐａ・ｓ、最大２７５Ｐａ・ｓ、最大３００Ｐａ・ｓ、最大４００Ｐａ・ｓ、最大５００Ｐａ・ｓ、最大６００Ｐａ・ｓ、最大７００Ｐａ、最大７５０Ｐａ・ｓ、最大８００Ｐａ・ｓ、最大９００Ｐａ・ｓ、又は最大１０００Ｐａ・ｓの動的粘度を示す。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、約１０Ｐａ・ｓ～約１００Ｐａ・ｓ、約１０Ｐａ・ｓ～約１５０Ｐａ・ｓ、約１０Ｐａ・ｓ～約２５０Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約１００Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約１５０Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約２５０Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約５００Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約７５０Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約１，０００Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約１，２００Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約５００Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約７５０Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約１，０００Ｐａ・ｓ、又は約３００Ｐａ・ｓ～約１，２００Ｐａ・ｓである。
【0342】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるそのＧ’及び／又はＧ”を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間、実質的に維持することができる。
【0343】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるそのＧ’及び／又はＧ”を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間、実質的に維持することができる。
【0344】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるそのＧ’及び／又はＧ”を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間、実質的に維持することができる。
【0345】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその弾性を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間、実質的に維持することができる。
【0346】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその弾性を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間、実質的に維持することができる。
【0347】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその弾性を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間、実質的に維持することができる。
【0348】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその粘性を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間、実質的に維持することができる。
【0349】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその粘性を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間、実質的に維持することができる。
【0350】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその粘性を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間、実質的に維持することができる。
【0351】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその体積を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間、実質的に維持することができる。
【0352】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその体積を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間、実質的に維持することができる。
【0353】
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、インビボにおけるその体積を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間、実質的に維持することができる。
【0354】
製造方法
本明細書に提供される組織フィラーは、更なる剤を伴って又は伴わずに、ＳＰＦベースの成分をＨＡベース成分に組み合わせることによって調製することができる。特定の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの一方又は両方を、組み合わせる前に架橋してもよい。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを組み合わせた後、本明細書に記載される架橋剤で架橋する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦを架橋剤で架橋した後、架橋してもしていなくてもよいＨＡに添加し、次いでそれらの組合せを更なる架橋に付してもよい。幾つかの実施形態において、ＨＡを架橋剤で架橋した後、架橋してもしていなくてもよいＳＰＦに添加し、次いでそれらの組合せを更なる架橋に付してもよい。
本明細書に提供される組織フィラーは、更なる剤を伴って又は伴わずに、ＳＰＦベースの成分をＨＡベース成分に組み合わせることによって調製することができる。特定の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの一方又は両方を、組み合わせる前に架橋してもよい。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを組み合わせた後、本明細書に記載される架橋剤で架橋する。幾つかの実施形態では、ＳＰＦを架橋剤で架橋した後、架橋してもしていなくてもよいＨＡに添加し、次いでそれらの組合せを更なる架橋に付してもよい。幾つかの実施形態において、ＨＡを架橋剤で架橋した後、架橋してもしていなくてもよいＳＰＦに添加し、次いでそれらの組合せを更なる架橋に付してもよい。
【0355】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、上述したように、ＳＰＦベース成分と、ＨＡベースの成分と、更なる剤とを組み合わせることによって調製することができる。そのような実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの一方又は両方を、組み合わせる前に架橋してもよい。幾つかの実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを更なる剤と組み合わせた後、本明細書に記載される架橋剤で架橋してもよい。幾つかの実施形態では、更なる剤は、ＳＰＦ及びＨＡを組み合わせた後に添加してもよい。
【0356】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、ＳＰＦとＨＡを、０．１：１～０．１：１０、又は０．１：１～０．１：１００、又は０．１：１０００；１：１～１：１０、又は１：１～１：１００、又は１：１～１：１０００の重量比（ＳＰＦ：ＨＡ）で含むことができる。
【0357】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、ＳＰＦとＨＡを、０．１：１～０．１：１０、又は０．１：１～０．１：１００、又は０．１：１０００；１：１～１：１０、又は１：１～１：１００、又は１：１～１：１０００の重量比（ＨＡ：ＳＰＦ）で含むことができる。
【0358】
幾つかの実施形態では、得られたＨＡ／ＳＰＦの組合せ（架橋又は非架橋を問わず）を、最初に架橋されたＨＡ及び／又はＳＰＦの機械的ブレンドなどによって均質化することができる。
【0359】
幾つかの実施形態では、ＳＰＦの溶液を準備し、架橋剤で架橋して架橋ＳＰＦを生成し、これに、ＨＡを、その架橋形態、非架橋形態、又はその混合物のいずれかで添加することができる。次いで、得られた混合物を均質化することができ、任意の更なる剤（例えば、リドカインを添加することができる）。
【0360】
幾つかの実施形態では、ＳＰＦの溶液を準備し、ＨＡ存在下にて架橋剤で架橋して架橋ＳＰＦ－ＨＡ組成物を生成し、これに、ＨＡを、その非架橋形態で添加することができるし、しなくてもよい。次いで、得られた混合物を均質化することができ、任意の更なる剤（例えば、リドカインを添加することができる）。
【0361】
幾つかの実施形態において、本明細書に提供される特定のＳＰＦ製剤は、参照によりその全体を本明細書に援用する米国特許第８，２８８，３４７号明細書又は同第８，４５０，４７５号明細書、又は米国特許出願公開第２００６／０１０５０２２号明細書、同第２０１６／０３７６３８２号明細書、又は同第２０１７／０３１５８２８号明細書に記載された調製を用いて、ＨＡと組み合わせることができる、又は架橋の手順を利用することができる。
【0362】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、組織フィラー又はその一部を、例えば、１２０℃～約１３０℃の温度、及び平方インチ当たり約１２～約２０ポンドの圧力に約１～約１５分間曝露する滅菌工程を含むことができる。
【0363】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、組織フィラーの調製に使用される本明細書に記載のＳＰＦ、ＨＡ、又はＳＰＦ／ＨＡ溶液が脱ガスされる脱ガス工程を含むことができる。
【0364】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、実施例５～２０に記載される一般的方法にしたがって調製することができる。記載された方法において、絹を水溶液、水性／アルコール溶液（アルコールは、例えば、エタノール又はメタノールであることができる）中で調製することができる。記載された方法において、本明細書に記載される架橋剤のいずれかを、当業者に理解されるように、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、又はＨＡとＨＡの架橋に適用して用いることができる。
【0365】
治療方法
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、それを必要とする患者における１以上の状態を治療する方法において提供することができる。幾つかの実施形態では、組織フィラーの治療有効量は、状態又は他の組織欠損を治療するためにそれを必要とする患者の組織内に送達することができる。
実施形態では、本明細書に記載の組織フィラーは、それを必要とする患者における１以上の状態を治療する方法において提供することができる。幾つかの実施形態では、組織フィラーの治療有効量は、状態又は他の組織欠損を治療するためにそれを必要とする患者の組織内に送達することができる。
【0366】
本明細書で使用するとき、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔ）」、又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、患者における軟組織の状態などの状態の美容的又は臨床的症状を低減又は排除する、又は個体における状態の美容的又は臨床的症状の発症を遅延又は予防することを意味する。
【0367】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーによって治療される状態は、軟組織の状態を含むことができる。軟組織の状態としては、限定するものではないが、身体の一部、部分、又は領域のオーグメンテーション、再建、疾患、障害、欠陥、又は不完全性が挙げられる。一態様では、開示の組織フィラーによって治療される軟組織の状態は、限定するものではないが、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患、顔面の障害、顔面の欠陥、又は顔面の不完全性を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーによって治療される軟組織の状態は、限定するものではないが、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン又はマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、尿道の欠陥、皮膚の欠陥、乳房の欠陥、後眼窩欠陥、顔面の折り目、又は皺を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーによって治療される軟組織の状態としては、限定するものではないが、乳房の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害、例えば、豊胸、乳房再建、乳房固定、小乳房症、胸部発育不全、ポーランド症候群、莢膜収縮及び／又は破裂などのインプラント合併症に起因する欠陥；顔面の不完全性、欠陥、疾患、又は障害、例えば、顔面のオーグメンテーション、顔面再建、パリー・ロムベルグ症候群、深在性エリテマトーデス、皮膚ディボット、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、鼻部の不完全性又は欠陥、後眼窩不完全性又は欠陥、顔面の折り目、ライン、又は皺、例えば、眉間ライン、鼻唇ライン、口周囲ライン、及び／又はマリオネットラインなど、及び／又は顔面の他の輪郭変形又は不完全性；頸部の不完全性、欠陥、疾患、又は障害；皮膚の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害；他の軟組織の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害、例えば、上腕、下腕、手部、肩部、背部、腹部、臀部、上腿、ふくらはぎを含む下腿、足底脂肪体を含む足部、眼球、生殖器、又は他の身体の一部、部分、又は領域を含む胴体のオーグメンテーション又は再建、又はこれらの身体の一部、部分、又は領域に影響をおよぼす疾患又は障害；尿失禁、便失禁、他の失禁形態；及び胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）が挙げられる。
【0368】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、限定するものではないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管、動脈、神経、及び滑膜（皮内）組織を含む軟組織に送達することができる。
【0369】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、細胞接着、遊走、及び増殖シグナルと共に人工生分解性マトリックスを提供することによって、創傷内に直接配置して治癒を助けることができる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、生分解性メッシュ又は他の移植材料上にコーティングすることができる、又はそれ自体をシート又は他の構造に形成することができる、又は水和形態で維持することができる。
【0370】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示される方法のいずれかで使用される組成物の量は、所望の変化及び／又は改善、所望の状態症状の低減及び／又は排除、個人及び／又は医師によって所望される臨床的及び／又は美容的効果、及び治療される身体部分又は領域に基づいて決定される。組成物投与の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の１以上によって表すことができる：軟組織形状の変化及び／又は改善、軟組織サイズの変化及び／又は改善、軟組織輪郭の変化及び／又は改善、組織機能の変化及び／又は改善、組織内部成長サポート、及び／又は新たなコラーゲン沈着、組織フィラーの持続移植、患者の満足度及び／又は生活の質の改善、及び移植可能異物の使用の低減。例えば、豊胸の手順について、組成物及び方法の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の１以上によって表すことができる：乳房サイズの増大、乳房形状の変化、乳房輪郭の変化、持続生着、莢膜収縮のリスク低減、リポネクローシスによる嚢胞形成速度を低下、患者の満足度及び／又は生活の質を改善、及び乳房インプラントの使用の低減。
【0371】
幾つかの実施形態では、顔面の軟組織を治療における組織フィラー及び方法の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の１以上によって表すことができる：顔の特徴部分のサイズ、形状、及び／又は輪郭の増大、例えば、唇、頬、こめかみ、又は目領域のサイズ、形状、及び／又は輪郭の増大など；顔の特徴部分のサイズ、形状、及び／又は輪郭の変化、例えば、唇、頬、こめかみ、又は目領域のサイズ、形状、及び／又は輪郭の変化など；皮膚の皺、折り目、又はラインに対する低減又は排除；皮膚の皺、折り目、又はラインに対する抵抗性；皮膚の水分補給；皮膚に弾力性の上昇；肌荒れの低減又は排除；肌の張りの向上及び／又は改善；ストレッチライン又はマークの低減又は排除；皮膚の色調、輝き、明るさ、及び／又は輝きの上昇及び／又は改善、皮膚の色の向上及び／又は改善、皮膚蒼白の低減又は排除；組成物の持続的移植；副作用の低減；患者の満足度及び／又は生活の質の改善。
【0372】
幾つかの実施形態において、本発明は、組織フィラーと、真皮領域に関する治療方法とを提供する。本明細書で使用するとき、「真皮領域」という用語は、表皮真皮接合部と真皮（表在真皮（乳頭層）と深部真皮（網状層）を含む）を含む皮膚の領域を意味する。皮膚は３つの主要な層、即ち、表皮（防水性を提供し、感染に対するバリアとして機能する）、真皮（皮膚の付属器のための場所として機能する）、及び皮下組織（皮下脂肪層）から構成されている。表皮は血管を含まず、真皮からの拡散によって栄養素が供給される。表皮を構成する細胞の主な種類は、ケラチノサイト、メラノサイト、ランゲルハンス細胞、及びメルケル細胞である。
【0373】
真皮は結合組織からなり、応力とひずみに対する身体のクッションとなる、表皮の下の皮膚の層である。真皮は、基底膜によって表皮にしっかりと結合されている。また、触感と熱感を提供する多くの機械受容体／神経終末を有する。これは、毛包、汗腺、皮脂腺、アポクリン腺、リンパ管、及び血管を含む。真皮内の血管は、自身の細胞及び表皮の基底層から栄養分供給と廃棄物除去を提供する。真皮は、構造的に２つの領域に分割される。即ち、表皮に隣接する表在領域（乳頭領域と呼ばれる）及び深部のより厚い領域（網状領域として知られる）に分割される。
【0374】
乳頭領域は、疎性の乳頭状（ａｒｅｏｌａｒ）結合組織から構成されている。これは、表皮に向かって延びる乳頭と呼ばれるその指状突出部にちなんで命名されている。乳頭は、皮膚の２つの層の間の接続を強化する、表皮と互いに組み合わせられる「でこぼこ」表面を真皮に与える。網状領域は、乳頭領域の深くに位置し、通常、遥かに厚い。これは、密な不規則な結合組織から構成され、その全体を通して織られているコラーゲン、弾性、及び網状繊維が高密度であることからその名が付いている。これらのタンパク質繊維は、強度、拡張性、及び弾力性というその性質を真皮に与える。また、毛根、皮脂腺、汗腺、受容体、爪、及び血管は、網状領域内に位置する。妊娠によるストレッチマークは、例えば、真皮に位置する。
【0375】
皮下組織は、真皮の下に存在する。その目的は、皮膚の真皮領域をその下部に存在する骨と筋肉に結合させると共に、それに血管と神経を供給することである。それは、疎性結合組織とエラスチンから構成される。主な細胞種は、線維芽細胞、マクロファージ、及び脂肪細胞（皮下組織は、体脂肪の５０％を含む）である。脂肪は、身体のためのパディング及び絶縁体として機能する。
【0376】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、真皮領域又は真皮下領域（ｈｙｐｏｄｅｒｍａｌ ｒｅｇｉｏｎ）への注入によって個体の皮膚領域に投与される。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、表皮真皮接合領域、乳頭領域、網状領域、又はそれらの任意の組合せへの注入によって個体の真皮領域に投与される。
【0377】
幾つかの実施形態において、本発明は、個体の軟組織状態を治療する方法であって、本明細書に開示の１以上の組織フィラーを、前記個体の前記軟組織状態の部位に投与することを含み、組成物の投与が、前記軟組織状態を改善することにより、前記軟組織状態を治療する方法を提供する。幾つかの実施形態では、軟組織状態は、乳房組織の状態、顔面組織の状態、頸部の状態、皮膚の状態、上腕の状態、下腕の状態、手部の状態、肩部の状態、背部の状態、胴部の状態（腹部の状態を含む）、臀部の状態、大腿の状態、下腿の状態（ふくらはぎの状態を含む）、足部の状態（足底脂肪パッドの状態を含む）、眼の状態、生殖器の状態、又は他の身体の一部、部分、又は領域に影響を及ぼす状態を改善する。
【0378】
幾つかの実施形態において、本発明は、皮膚状態を治療する方法であって、本明細書に開示の１以上の組織フィラーを、皮膚状態を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、前記皮膚状態を改善することにより、前記皮膚状態を治療する方法を提供する。幾つかの実施形態において、皮膚状態としては、皮膚脱水が挙げられ、前記治療方法は、本明細書に開示の１以上の組織フィラーを、皮膚脱水を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚に水分を補給することにより、皮膚脱水を治療する。これらの実施形態の別の態様では、皮膚弾力の欠如を治療する方法は、本明細書に開示の組織フィラーを、皮膚弾力の欠如を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚の弾力を向上させることにより、皮膚弾力を治療する。これらの実施形態の更に別の態様では、肌荒れを治療する方法は、本明細書に開示の組成物を、肌荒れを罹患した個体に投与することを含み、前記組成物の投与が、肌荒れを低減することにより、肌荒れを治療する。これらの実施形態の別の態様では、皮膚の張りの欠如を治療する方法は、本明細書に開示の組織フィラーを、皮膚の張りの欠如を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚の張りを向上させることにより、皮膚の張りの欠如を治療する。
【0379】
幾つかの実施形態において、本発明は、皮膚のストレッチライン又はマークを治療する方法であって、本明細書に開示の１以上の組織フィラーを、皮膚のストレッチライン又はマークを罹患した個体に投与することを含み、前記１以上の組織フィラーの投与が、皮膚のストレッチライン又はマークを低減又は排除することにより、皮膚のストレッチライン又はマークを治療する方法を提供する。幾つかの実施形態では、皮膚蒼白を治療する方法は、本明細書に開示の組織フィラーを、皮膚蒼白を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚の色調又は輝きを向上させることにより、皮膚蒼白を治療する。幾つかの実施形態では、皮膚の皺を治療する方法は、本明細書に開示の組織フィラーを、皮膚の皺を罹患した個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚の皺を低減又は排除することにより、皮膚の皺を治療する。これらの実施形態の更に別の態様では、皮膚の皺を治療する方法は、本明細書に開示の組織フィラーを個体に投与することを含み、前記組織フィラーの投与が、皮膚の皺に対して皮膚を耐性にすることにより、皮膚の皺を治療する。
【0380】
幾つかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示の組成物の投与を提供し、そのような投与は、新たなコラーゲン沈着又は形成を促進する。本明細書に記載の組織フィラーは、組織の内部成長と、コラーゲンの新たな沈着又は生成をサポートすることができる。
【0381】
本発明のいずれかの理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載の組織フィラーの調製に使用されるＳＰＦの分子量は、得られる組織の増殖と、初期の炎症反応に続く成熟化応答によってコラーゲンの沈着又は形成を引き起こすために、選択された組織において軽度の炎症応答を提供するように調整することができる。実際に、より高分子量のＳＰＦが高い炎症応答をもたらすことができ、一方で、より低分子量のＳＰＦは、殆ど又は全く炎症応答をもたらさないことがある。
【0382】
本発明のいずれかの理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載の組織フィラーは、得られる炎症応答、及び増殖及び成熟化組織応答によるコラーゲン形成を調節できるという予想外の属性を提供する。これは、本明細書で使用されるＳＰＦ溶液が、広いというよりはむしろ狭い多分散性を有するからである。実施形態では、本明細書に開示の組織フィラーの投与は、新たなコラーゲン沈着を増加させる。
【0383】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織の投与は、新たなコラーゲン沈着又は形成を、ＨＡを含むがＳＰＦを含まない同一又は類似の組織フィラーに対して、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％上昇させる。
【0384】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーの投与は、新たなコラーゲン沈着又は形成を、ＨＡを含むがＳＰＦを含まない同一又は類似の組織フィラーに対して、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２２５％、少なくとも２５０％、少なくとも２７５％、又は少なくとも３００％上昇させる。
【0385】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーの投与は、新たなコラーゲン沈着又は形成を、ＨＡを含むがＳＰＦを含まない同一又は類似の組織フィラーに対して、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、最大１５％、最大１６％、最大１７％、最大１８％、最大１９％、最大２０％、最大２１％、最大２２％、最大２３％、最大２４％、最大２５％、最大２６％、最大２７％、最大２８％、最大２９％、最大３０％、最大３１％、最大３２％、最大３３％、最大３４％、最大３５％、最大３６％、最大３７％、最大３８％、最大３９％、最大４０％、最大４１％、最大４２％、最大４３％、最大４４％、最大４５％、最大４６％、最大４７％、最大４８％、最大４９％、最大５０％、最大５１％、最大５２％、最大５３％、最大５４％、最大５５％、最大５６％、最大５７％、最大５８％、最大５９％、最大６０％、最大６１％、最大６２％、最大６３％、最大６４％、最大６５％、最大６６％、最大６７％、最大６８％、最大６９％、最大７０％、最大７１％、最大７２％、最大７３％、最大７４％、最大７５％、最大７６％、最大７７％、最大７８％、最大７９％、最大８０％、最大８１％、最大８２％、最大８３％、最大８４％、最大８５％、最大８６％、最大８７％、最大８８％、最大８９％、最大９０％、最大９１％、最大９２％、最大９３％、最大９４％、最大９５％、最大９６％、最大９７％、最大９８％、最大９９％、最大１００％、最大１２５％、最大１５０％、最大１７５％、最大２００％、最大２２５％、最大２５０％、最大２７５％、又は最大３００％上昇させる。
【0386】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーの投与は、新たなコラーゲン沈着又は形成を、ＨＡを含むがＳＰＦを含まない同一又は類似の組織フィラーに対して、約１％～約１０％、約１０％～約５０％、約１０％～約１００％、約５０％～約１５０％、約１００％～約２００％、約１５０％～約２５０％、約２００％～約３００％、約３５０％～約４５０％、約４００％～約５００％、約５５０％～約６５０％、約６００％～約７００％上昇させる。
【0387】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の方法のいずれかと共に使用される組織フィラーの量は、典型的には、治療的に有効な量である。本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、「有効量」「治療有効用量」、及び／又は「有効用量」と同義であり、それを必要とする患者において、想定される生物学的、美容的、又は臨床的応答をもたらす組織フィラーの量を意味する。非限定的な例として、有効量は、本明細書に開示された臨床的及び／又は美容的対策の１以上を達成するのに十分な量である。開示の方法の特定の用途のために投与されるべき適切な有効量は、本明細書に提供される指針を用いて、当業者によって決定することができる。例えば、有効量は、本明細書に記載されるあらゆるインビトロ及びインビボアッセイから推定することができる。当業者は、個体の状態を治療経過全体に亘って追跡でき、投与される本明細書に開示の組成物の有効量を適宜調節することができることを認識する。
【0388】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの量は、少なくとも０．００１ｇ、又は少なくとも０．００２ｇ、又は少なくとも０．００３ｇ、又は少なくとも０．００４ｇ、又は少なくとも０．００５ｇ、又は少なくとも０．００６ｇ、又は少なくとも０．００７ｇ、又は少なくとも０．００８ｇ、又は少なくとも０．００９ｇ、又は少なくとも０．０１ｇ、又は少なくとも０．０２ｇ、又は少なくとも０．０３ｇ、又は少なくとも０．０４ｇ、又は少なくとも０．０５ｇ、又は少なくとも０．０６ｇ、又は少なくとも０．０７ｇ、又は少なくとも０．０８ｇ、又は少なくとも０．０９ｇ、又は少なくとも０．１ｇ、又は少なくとも０．２ｇ、又は少なくとも０．３ｇ、又は少なくとも０．４ｇ、又は少なくとも０．５ｇ、又は少なくとも０．６ｇ、又は少なくとも０．７ｇ、又は少なくとも０．８ｇ、又は少なくとも０．９ｇ、又は少なくとも１ｇ、又は少なくとも２ｇ、又は少なくとも３ｇ、又は少なくとも４ｇ、又は少なくとも５ｇ、又は少なくとも６ｇ、又は少なくとも７ｇ、又は少なくとも８ｇ、又は少なくとも９ｇ、又は少なくとも１０ｇ、又は少なくとも１１ｇ、又は少なくとも１２ｇ、又は少なくとも１３ｇ、又は少なくとも１４ｇ、又は少なくとも１５ｇ、又は少なくとも２０ｇ、又は少なくとも２５ｇ、又は少なくとも３０ｇ、又は少なくとも３５ｇ、又は少なくとも４０ｇ、又は少なくとも４５ｇ、又は少なくとも５０ｇ、又は少なくとも５５ｇ、又は少なくとも６０ｇ、又は少なくとも６５ｇ、又は少なくとも７０ｇ、又は少なくとも７５ｇ、又は少なくとも８０ｇ、又は少なくとも８５ｇ、又は少なくとも９０ｇ、又は少なくとも９５ｇ、又は少なくとも１００ｇである。
【0389】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの量は、最大０．００１ｇ、又は最大０．００２ｇ、又は最大０．００３ｇ、又は最大０．００４ｇ、又は最大０．００５ｇ、又は最大０．００６ｇ、又は最大０．００７ｇ、又は最大０．００８ｇ、又は最大０．００９ｇ、又は最大０．０１ｇ、又は最大０．０２ｇ、又は最大０．０３ｇ、又は最大０．０４ｇ、又は最大０．０５ｇ、又は最大０．０６ｇ、又は最大０．０７ｇ、又は最大０．０８ｇ、又は最大０．０９ｇ、又は最大０．１ｇ、又は最大０．２ｇ、又は最大０．３ｇ、又は最大０．４ｇ、又は最大０．５ｇ、又は最大０．６ｇ、又は最大０．７ｇ、又は最大０．８ｇ、又は最大０．９ｇ、又は最大１ｇ、又は最大２ｇ、又は最大３ｇ、又は最大４ｇ、又は最大５ｇ、又は最大６ｇ、又は最大７ｇ、又は最大８ｇ、又は最大９ｇ、又は最大１０ｇ、又は最大１１ｇ、又は最大１２ｇ、又は最大１３ｇ、又は最大１４ｇ、又は最大１５ｇ、又は最大２０ｇ、又は最大２５ｇ、又は最大３０ｇ、又は最大３５ｇ、又は最大４０ｇ、又は最大４５ｇ、又は最大５０ｇ、又は最大５５ｇ、又は最大６０ｇ、又は最大６５ｇ、又は最大７０ｇ、又は最大７５ｇ、又は最大８０ｇ、又は最大８５ｇ、又は最大９０ｇ、又は最大９５ｇ、又は最大１００ｇである。
【0390】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの量は、約０．００１ｇ、又は約０．００２ｇ、又は約０．００３ｇ、又は約０．００４ｇ、又は約０．００５ｇ、又は約０．００６ｇ、又は約０．００７ｇ、又は約０．００８ｇ、又は約０．００９ｇ、又は約０．０１ｇ、又は約０．０２ｇ、又は約０．０３ｇ、又は約０．０４ｇ、又は約０．０５ｇ、又は約０．０６ｇ、又は約０．０７ｇ、又は約０．０８ｇ、又は約０．０９ｇ、又は約０．１ｇ、又は約０．２ｇ、又は約０．３ｇ、又は約０．４ｇ、又は約０．５ｇ、又は約０．６ｇ、又は約０．７ｇ、又は約０．８ｇ、又は約０．９ｇ、又は約１ｇ、又は約２ｇ、又は約３ｇ、又は約４ｇ、又は約５ｇ、又は約６ｇ、又は約７ｇ、又は約８ｇ、又は約９ｇ、又は約１０ｇ、又は約１１ｇ、又は約１２ｇ、又は約１３ｇ、又は約１４ｇ、又は約１５ｇ、又は約２０ｇ、又は約２５ｇ、又は約３０ｇ、又は約３５ｇ、又は約４０ｇ、又は約４５ｇ、又は約５０ｇ、又は約５５ｇ、又は約６０ｇ、又は約６５ｇ、又は約７０ｇ、又は約７５ｇ、又は約８０ｇ、又は約８５ｇ、又は約９０ｇ、又は約９５ｇ、又は約１００ｇである。
【0391】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの量は、０．００１ｇ～０．０１ｇ、又は０．０１ｇ～０．１ｇ、又は０．１ｇ～１ｇ、又は１ｇ～１０ｇ、又は１０ｇ～２０ｇ、又は２０ｇ～３０ｇ、又は３０ｇ～４０ｇ、又は４０ｇ～５０ｇ、又は５０ｇ～６０ｇ、又は６０ｇ～７０ｇ、又は７０ｇ～８０ｇ、又は８０ｇ～９０ｇ、又は９０ｇ～１００ｇである。
【0392】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの体積は、少なくとも０．０１ｍＬ、又は少なくとも０．０２ｍＬ、又は少なくとも０．０３ｍＬ、又は少なくとも０．０４ｍＬ、又は少なくとも０．０５ｍＬ、又は少なくとも０．０６ｍＬ、又は少なくとも０．０７ｍＬ、又は少なくとも０．０８ｍＬ、又は少なくとも０．０９ｍＬ、又は少なくとも０．１０ｍＬ、又は少なくとも０．１５ｍＬ、又は少なくとも０．２０ｍＬ、又は少なくとも０．２５ｍＬ、又は少なくとも０．３０ｍＬ、又は少なくとも０．３５ｍＬ、又は少なくとも０．４０ｍＬ、又は少なくとも０．４５ｍＬ、又は少なくとも０．５０ｍＬ、又は少なくとも０．５５ｍＬ、又は少なくとも０．６０ｍＬ、又は少なくとも０．６５ｍＬ、又は少なくとも０．７０ｍＬ、又は少なくとも０．７５ｍＬ、又は少なくとも０．８０ｍＬ、又は少なくとも０．８５ｍＬ、又は少なくとも０．９０ｍＬ、又は少なくとも０．９５ｍＬ、又は少なくとも１ｍＬ、又は少なくとも２ｍＬ、又は少なくとも３ｍＬ、又は少なくとも４ｍＬ、又は少なくとも５ｍＬ、又は少なくとも６ｍＬ、又は少なくとも７ｍＬ、又は少なくとも８ｍＬ、又は少なくとも９ｍＬ、又は少なくとも１０ｍＬ、又は少なくとも１５ｍＬ、又は少なくとも２０ｍＬ、又は少なくとも２５ｍＬ、又は少なくとも３０ｍＬ、又は少なくとも３５ｍＬ、又は少なくとも４０ｍＬ、又は少なくとも４５ｍＬ、又は少なくとも５０ｍＬ、又は少なくとも５５ｍＬ、又は少なくとも６０ｍＬ、又は少なくとも６５ｍＬ、又は少なくとも７０ｍＬ、又は少なくとも７５ｍＬ、又は少なくとも８０ｍＬ、又は少なくとも８５ｍＬ、又は少なくとも９０ｍＬ、又は少なくとも９５ｍＬ、又は少なくとも１００ｍＬ、又は少なくとも１１０ｍＬ、又は少なくとも１２０ｍＬ、又は少なくとも１３０ｍＬ、又は少なくとも１４０ｍＬ、又は少なくとも１５０ｍＬ、又は少なくとも１６０ｍＬ、又は少なくとも１７０ｍＬ、又は少なくとも１８０ｍＬ、又は少なくとも１９０ｍＬ、又は少なくとも２００ｍＬ、又は少なくとも２１０ｍＬ、又は少なくとも２２０ｍＬ、又は少なくとも２３０ｍＬ、又は少なくとも２４０ｍＬ、又は少なくとも２５０ｍＬ、又は少なくとも２６０ｍＬ、又は少なくとも２７０ｍＬ、又は少なくとも２８０ｍＬ、又は少なくとも２９０ｍＬ、又は少なくとも３００ｍＬ、又は少なくとも３２５、３５０ｍＬ、又は少なくとも３７５ｍＬ、又は少なくとも４００ｍＬ、又は少なくとも４２５ｍＬ、又は少なくとも４５０ｍＬ、又は少なくとも４７５ｍＬ、又は少なくとも５００ｍＬ、又は少なくとも５２５ｍＬ、又は少なくとも５５０ｍＬ、又は少なくとも５７５ｍＬ、又は少なくとも６００ｍＬ、又は少なくとも６２５ｍＬ、又は少なくとも６５０ｍＬ、又は少なくとも６７５ｍＬ、又は少なくとも７００ｍＬ、又は少なくとも７２５ｍＬ、又は少なくとも７５０ｍＬ、又は少なくとも７７５ｍＬ、又は少なくとも８００ｍＬ、又は少なくとも８２５ｍＬ、又は少なくとも８５０ｍＬ、又は少なくとも８７５ｍＬ、又は少なくとも９００ｍＬ、又は少なくとも９２５ｍＬ、又は少なくとも９５０ｍＬ、又は少なくとも９７５ｍＬ、又は少なくとも１０００ｍＬである。
【0393】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの体積は、最大０．０１ｍＬ、又は最大０．０２ｍＬ、又は最大０．０３ｍＬ、又は最大０．０４ｍＬ、又は最大０．０５ｍＬ、又は最大０．０６ｍＬ、又は最大０．０７ｍＬ、又は最大０．０８ｍＬ、又は最大０．０９ｍＬ、又は最大０．１０ｍＬ、又は最大０．１５ｍＬ、又は最大０．２０ｍＬ、又は最大０．２５ｍＬ、又は最大０．３０ｍＬ、又は最大０．３５ｍＬ、又は最大０．４０ｍＬ、又は最大０．４５ｍＬ、又は最大０．５０ｍＬ、又は最大０．５５ｍＬ、又は最大０．６０ｍＬ、又は最大０．６５ｍＬ、又は最大０．７０ｍＬ、又は最大０．７５ｍＬ、又は最大０．８０ｍＬ、又は最大０．８５ｍＬ、又は最大０．９０ｍＬ、又は最大０．９５ｍＬ、又は最大１ｍＬ、又は最大２ｍＬ、又は最大３ｍＬ、又は最大４ｍＬ、又は最大５ｍＬ、又は最大６ｍＬ、又は最大７ｍＬ、又は最大８ｍＬ、又は最大９ｍＬ、又は最大１０ｍＬ、又は最大１５ｍＬ、又は最大２０ｍＬ、又は最大２５ｍＬ、又は最大３０ｍＬ、又は最大３５ｍＬ、又は最大４０ｍＬ、又は最大４５ｍＬ、又は最大５０ｍＬ、又は最大５５ｍＬ、又は最大６０ｍＬ、又は最大６５ｍＬ、又は最大７０ｍＬ、又は最大７５ｍＬ、又は最大８０ｍＬ、又は最大８５ｍＬ、又は最大９０ｍＬ、又は最大９５ｍＬ、又は最大１００ｍＬ、又は最大１１０ｍＬ、又は最大１２０ｍＬ、又は最大１３０ｍＬ、又は最大１４０ｍＬ、又は最大１５０ｍＬ、又は最大１６０ｍＬ、又は最大１７０ｍＬ、又は最大１８０ｍＬ、又は最大１９０ｍＬ、又は最大２００ｍＬ、又は最大２１０ｍＬ、又は最大２２０ｍＬ、又は最大２３０ｍＬ、又は最大２４０ｍＬ、又は最大２５０ｍＬ、又は最大２６０ｍＬ、又は最大２７０ｍＬ、又は最大２８０ｍＬ、又は最大２９０ｍＬ、又は最大３００ｍＬ、又は最大３２５、３５０ｍＬ、又は最大３７５ｍＬ、又は最大４００ｍＬ、又は最大４２５ｍＬ、又は最大４５０ｍＬ、又は最大４７５ｍＬ、又は最大５００ｍＬ、又は最大５２５ｍＬ、又は最大５５０ｍＬ、又は最大５７５ｍＬ、又は最大６００ｍＬ、又は最大６２５ｍＬ、又は最大６５０ｍＬ、又は最大６７５ｍＬ、又は最大７００ｍＬ、又は最大７２５ｍＬ、又は最大７５０ｍＬ、又は最大７７５ｍＬ、又は最大８００ｍＬ、又は最大８２５ｍＬ、又は最大８５０ｍＬ、又は最大８７５ｍＬ、又は最大９００ｍＬ、又は最大９２５ｍＬ、又は最大９５０ｍＬ、又は最大９７５ｍＬ、又は最大１０００ｍＬである。
【0394】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの体積は、約０．０１ｍＬ、又は約０．０２ｍＬ、又は約０．０３ｍＬ、又は約０．０４ｍＬ、又は約０．０５ｍＬ、又は約０．０６ｍＬ、又は約０．０７ｍＬ、又は約０．０８ｍＬ、又は約０．０９ｍＬ、又は約０．１０ｍＬ、又は約０．１５ｍＬ、又は約０．２０ｍＬ、又は約０．２５ｍＬ、又は約０．３０ｍＬ、又は約０．３５ｍＬ、又は約０．４０ｍＬ、又は約０．４５ｍＬ、又は約０．５０ｍＬ、又は約０．５５ｍＬ、又は約０．６０ｍＬ、又は約０．６５ｍＬ、又は約０．７０ｍＬ、又は約０．７５ｍＬ、又は約０．８０ｍＬ、又は約０．８５ｍＬ、又は約０．９０ｍＬ、又は約０．９５ｍＬ、又は約１ｍＬ、又は約２ｍＬ、又は約３ｍＬ、又は約４ｍＬ、又は約５ｍＬ、又は約６ｍＬ、又は約７ｍＬ、又は約８ｍＬ、又は約９ｍＬ、又は約１０ｍＬ、又は約１１ｍＬ、又は約１２ｍＬ、又は約１３ｍＬ、又は約１４ｍＬ、又は約１５ｍＬ、又は約１６ｍＬ、又は約１７ｍＬ、又は約１８ｍＬ、又は約１９ｍＬ、又は約２０ｍＬ、又は約２１ｍＬ、又は約２２ｍＬ、又は約２３ｍＬ、又は約２４ｍＬ、又は約２５ｍＬ、又は約２６ｍＬ、又は約２７ｍＬ、又は約２８ｍＬ、又は約３０ｍＬ、又は約３５ｍＬ、又は約３６ｍＬ、又は約３７ｍＬ、又は約３８ｍＬ、又は約３９ｍＬ、又は約４０ｍＬ、又は約４１ｍＬ、又は約４２ｍＬ、又は約４３ｍＬ、又は約４４ｍＬ、又は約４５ｍＬ、又は約４６ｍＬ、又は約４７ｍＬ、又は約４８ｍＬ、又は約４９ｍＬ、又は約５０ｍＬ、又は約５１ｍＬ、又は約５２ｍＬ、又は約５３ｍＬ、又は約５４ｍＬ、又は約５５ｍＬ、又は約５６ｍＬ、又は約５７ｍＬ、又は約５８ｍＬ、又は約５９ｍＬ、又は約６０ｍＬ、又は約６１ｍＬ、又は約６２ｍＬ、又は約６３ｍＬ、又は約６４ｍＬ、又は約６５ｍＬ、又は約６６ｍＬ、又は約６７ｍＬ、又は約６８ｍＬ、又は約６９ｍＬ、又は約７０ｍＬ、又は約７１ｍＬ、又は約７２ｍＬ、又は約７３ｍＬ、又は約７４ｍＬ、又は約７５ｍＬ、又は約７６ｍＬ、又は約７７ｍＬ、又は約７８ｍＬ、又は約７９ｍＬ、又は約８０ｍＬ、又は約８１ｍＬ、又は約８２ｍＬ、又は約８３ｍＬ、又は約８４ｍＬ、又は約８５ｍＬ、又は約８６ｍＬ、又は約８７ｍＬ、又は約８８ｍＬ、又は約８９ｍＬ、又は約９０ｍＬ、又は約９１ｍＬ、又は約９２ｍＬ、又は約９３ｍＬ、又は約９４ｍＬ、又は約９５ｍＬ、又は約９６ｍＬ、又は約９７ｍＬ、又は約９８ｍＬ、又は約９９ｍＬ、又は約１００ｍＬ、又は約１１０ｍＬ、又は約１２０ｍＬ、又は約１３０ｍＬ、又は約１４０ｍＬ、又は約１５０ｍＬ、又は約１６０ｍＬ、又は約１７０ｍＬ、又は約１８０ｍＬ、又は約１９０ｍＬ、又は約２００ｍＬ、又は約２１０ｍＬ、又は約２２０ｍＬ、又は約２３０ｍＬ、又は約２４０ｍＬ、又は約２５０ｍＬ、又は約２６０ｍＬ、又は約２７０ｍＬ、又は約２８０ｍＬ、又は約２９０ｍＬ、又は約３００ｍＬ、又は約３１０ｍＬ、又は約３２０ｍＬ、又は約３３０ｍＬ、又は約３４０ｍＬ、又は約３５０ｍＬ、又は約３６０ｍＬ、又は約３７０ｍＬ、又は約３８０ｍＬ、又は約３９０ｍＬ、又は約４００ｍＬ、又は約４１０ｍＬ、又は約４２０ｍＬ、又は約４３０ｍＬ、又は約４４０ｍＬ、又は約４５０ｍＬ、又は約４６０ｍＬ、又は約４７０ｍＬ、又は約４８０ｍＬ、又は約４９０ｍＬ、又は約５００ｍＬ、又は約５１０ｍＬ、又は約５２０ｍＬ、又は約５３０ｍＬ、又は約５４０ｍＬ、又は約５５０ｍＬ、又は約５６０ｍＬ、又は約５７０ｍＬ、又は約５８０ｍＬ、又は約５９０ｍＬ、又は約６００ｍＬ、又は約６１０ｍＬ、又は約６２０ｍＬ、又は約６３０ｍＬ、又は約６４０ｍＬ、又は約６５０ｍＬ、又は約６６０ｍＬ、又は約６７０ｍＬ、又は約６８０ｍＬ、又は約６９０ｍＬ、又は約７００ｍＬ、又は約７１０ｍＬ、又は約７２０ｍＬ、又は約７３０ｍＬ、又は約７４０ｍＬ、又は約７５０ｍＬ、又は約７６０ｍＬ、又は約７７０ｍＬ、又は約７８０ｍＬ、又は約７９０ｍＬ、又は約８００ｍＬ、又は約８１０ｍＬ、又は約８２０ｍＬ、又は約８３０ｍＬ、又は約８４０ｍＬ、又は約８５０ｍＬ、又は約８６０ｍＬ、又は約８７０ｍＬ、又は約８８０ｍＬ、又は約８９０ｍＬ、又は約９００ｍＬ、又は約９１０ｍＬ、又は約９２０ｍＬ、又は約９３０ｍＬ、又は約９４０ｍＬ、又は約９５０ｍＬ、又は約９６０ｍＬ、又は約９７０ｍＬ、又は約９８０ｍＬ、又は約９９０ｍＬ、又は約１０００ｍＬである。
【0395】
幾つかの実施形態において、投与される組織フィラーの体積は、０．０１ｍＬ～０．１０ｍＬ、又は０．１０ｍＬ～１ｍＬ、又は１ｍＬ～１０ｍＬ、又は１０ｍＬ～１００ｍＬ、又は５０ｍＬ～１００ｍＬ、又は１００ｍＬ～１５０ｍＬ、又は１５０ｍＬ～２００ｍＬ、又は２００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は２５０ｍＬ～３００ｍＬ、又は３００ｍＬ～３５０ｍＬ、又は３５０ｍＬ～４００ｍＬ、又は４００ｍＬ～４５０ｍＬ、又は４５０ｍＬ～５００ｍＬ、又は５００ｍＬ～５５０ｍＬ、又は５５０ｍＬ～６００ｍＬ、又は６００ｍＬ～６５０ｍＬ、又は６５０ｍＬ～７００ｍＬ、又は７００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は７５０ｍＬ～８００ｍＬ、又は８００ｍＬ～８５０ｍＬ、又は８５０ｍＬ～９００ｍＬ、又は９００ｍＬ～９５０ｍＬ、又は９５０ｍＬ～１０００ｍＬ、又は１ｍＬ～２５ｍＬ、又は１ｍＬ～５０ｍＬ、又は１ｍＬ～７５ｍＬ、又は１ｍＬ～１００ｍＬ、又は１０ｍＬ～２５ｍＬ、又は１０ｍＬ～５０ｍＬ、又は１０ｍＬ～７５ｍＬ、又は１００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～５００ｍＬ、又は１００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～１０００ｍＬである。
【0396】
幾つかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示の組織フィラーを投与することを提供する。本明細書で使用するとき、「投与」という用語は、臨床的、治療的、又は実験的に有益な結果をもたらし得る本明細書に開示の組織フィラーを個体に提供する任意の送達機構を意味する。組織フィラーの個体への投与に用られる実際の送達機構は、各種要因、例えば、限定するものではないが、状態の種類、状態の位置、状態の原因、状態の重症度、所望の緩和の程度、所望の緩和期間、使用される具体的な組織フィラー、使用される具体的な組織フィラー生分解性、生体吸収性、生体再吸収性などの速度、使用される具体的な組織フィラーに含有される成分の性質、具体的な投与経路、患者の具体的な特徴、病歴、及び危険因子（例えば、年齢、体重、一般的健康状態など）又はそれらの任意の組合せなどを考慮することにより当業者によって決定することができる。この実施形態の態様では、本明細書に開示の組織フィラーは、注入により患者の部分に投与され、前記部分は、皮膚、真皮組織、真皮下組織、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管及び動脈、神経、又は滑膜（真皮内）組織にあることができる。
【0397】
幾つかの実施形態において、患者に投与される組織フィラーの投与経路は、患者及び／又は医師によって所望される美容的及び／又は臨床的効果、及び治療される身体の一部又は領域に基づき決定される。本明細書に開示の組織フィラーは、当業者に知られた任意の手段によって投与することができ、例えば、限定するものではないが、針付き注入器、カテーテル、局所的、又は直接的外科移植によって投与することができる。本明細書に開示の組織フィラーは、真皮領域又は真皮下領域などの皮膚領域に投与することができる。更に、本明細書に開示の組織フィラーは、具体的な治療に応じて、１回、２回、３回、又は複数回投与することができる。
【0398】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、注入可能である。本明細書で使用するとき、「注入可能」という用語は、微細針などの針を備えた注入装置を用いて個体の皮膚領域に組織フィラーを投与するのに必要な特性を有する組織材料を意味する。本明細書で使用するとき、「微細針」という用語は、２７ゲージ以下の針を意味する。幾つかの実施形態では、微細針は、２７ゲージ～３０ゲージの針であることができる。本明細書に開示の組織フィラーの注入性は、例えば、本明細書に開示の組織フィラーの特定のパラメータを変化させることによって達成でき、例えば、架橋度の調整、Ｇ’及び／又はＧ”の変更、非架橋ポリマー（例えば、ＳＰＦ又はＨＡ）の添加などによって達成できる。
【0399】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、微細針を通して注入可能である。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、例えば、２０ゲージ、又は２１ゲージ、又は２２ゲージ、又は２３ゲージ、又は２４ゲージ、又は２５ゲージ、又は２６ゲージ、又は２７ゲージ、又は２８ゲージ、又は２９ゲージ、又は３０ゲージ、又は３１ゲージ、又は３２ゲージ、又は３３ゲージ、又は３４ゲージの針を通して注入可能である。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、２０ゲージ、又は２１ゲージ、又は２２ゲージ、又は２３ゲージ、又は２４ゲージ、又は２５ゲージ、又は２６ゲージ、又は２７ゲージ、又は２８ゲージ、又は２９ゲージ、又は３０ゲージの針を通して注入可能である。
【0400】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の組織フィラーは、約０．８～約１．０ｍＬの容積を有するシリンジを用いて注入可能である。
【0401】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、例えば、組織のオーグメンテーション（例えば、乳房又は臀部のオーグメンテーション）の目的のために軟組織内又は軟組織周囲の空隙に送達することができる。本明細書に記載の組織フィラーをそのような空隙に送達する場合、より大きなシリンジと針（２７ゲージ以上の針）を用いることができる。
【0402】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、創傷を被覆するために針を使用することなく創傷に適用できる、又は創傷の近傍の医療デバイスに適用することができる。
【0403】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組織フィラーは、医療デバイスの表面に適用することができる。
【0404】
以下の例を、説明される実施形態をいかに作製し使用するかということの完全な開示及び説明を当業者に提供するために示すが、これらは、本発明者らがそれらの発明と見なすものの範囲を限定しようとするものではなく、また、それらは、以下の実験が実行されたすべての又は唯一の実験であると示そうとするものでもない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関して、精度を確保するように努めてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差を算入すべきである。別段の指定のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧又はその近傍である。
【実施例0405】
実施例１：ゲルのチンダル評価
視覚的観察を更に支持し、皮膚フィラーの比較性能分析を行うために、チンダル現象の定量分析を行う。光散乱及び光と皮膚との相互作用に関する既存の科学的理解に基づき、（ａ）比色分析、及び（ｂ）分光分析に基づく２つの異なるアプローチを用いて、皮膚におけるチンダル現象を定量化する。これらの技術に基づき、３つの異なる定量的パラメータ（以下に概説）を、インビボでのチンダル現象を測定するために定義する。
視覚的観察を更に支持し、皮膚フィラーの比較性能分析を行うために、チンダル現象の定量分析を行う。光散乱及び光と皮膚との相互作用に関する既存の科学的理解に基づき、（ａ）比色分析、及び（ｂ）分光分析に基づく２つの異なるアプローチを用いて、皮膚におけるチンダル現象を定量化する。これらの技術に基づき、３つの異なる定量的パラメータ（以下に概説）を、インビボでのチンダル現象を測定するために定義する。
【0406】
チンダル現象視覚スコア：
スケールは、増分０．５で１～５の範囲を有する。１のスコアは、正常な皮膚色調で青色変色がない注入部位に与えられる。最大スコア５は、濃い顕著な青色変色に与えられる。３名の独立した観測者がスケールに関し訓練された後、試験サンプルを盲検的にスコア化する。
スケールは、増分０．５で１～５の範囲を有する。１のスコアは、正常な皮膚色調で青色変色がない注入部位に与えられる。最大スコア５は、濃い顕著な青色変色に与えられる。３名の独立した観測者がスケールに関し訓練された後、試験サンプルを盲検的にスコア化する。
【0407】
皮膚色の青色成分－「ｂ」：色彩色差計を用いて、種々のフィラーを注入した皮膚部位からの放出光の青色成分を定量化する。これは、Ｌａｂカラースケールの「ｂ」成分を使用することによって達成される。
【0408】
皮膚から放出される「％青色光」：ポータブル分光光度計を用いて、全可視光領域における皮膚から放出される％青色光を定量化する。これは、４００～４９０ｎｍの可視光スペクトル下の面積を積分し、それをスペクトル（４００～７００ｎｍ）下の総面積で正規化することによって達成される。
【0409】
本開示のゲル及び市販のゲルは、２ヶ月齢の無毛ラットの大腿部に線形スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）技術を用いて適切な針を通して皮内注入される。ゲルを表面に移植し、臨床細線手続（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｉｎｅ ｌｉｎｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）を模倣する。チンダル試験は、ゲル移植の４８ｈ後に行う。チンダル試験を行う前に、動物を人道的に安楽死させ、チンダル現象のコントラストを向上させる。
【0410】
増分０．５の１～５の視覚スコアを用いて、注入部位をスコア化する。スコアが１の注入部位は皮膚変色を示さず、スコアが５の注入部位は皮膚の青色変色が顕著である。色彩色差計を利用して、注入部位に対して分光分析も行う。皮膚の色の青色成分「ｂ」、及び皮膚から放出される％青色光（４００～７００ｎｍ）は、独立して測定される。
【0411】
実施例２：インビボ組織フィラー試験
前述の説明にしたがって調製した組織フィラーを、皮内移植、筋肉移植、皮下注入後に試験することができた。
前述の説明にしたがって調製した組織フィラーを、皮内移植、筋肉移植、皮下注入後に試験することができた。
【0412】
例えば、組織フィラーの用量をシリンジに充填し、組織フィラーが針を通って注入部位に流入することを可能にする適切なサイズのシリンジを使用して、皮内、筋肉内、又は皮下のいずれかで注入することができた。
【0413】
対照（例えば、水及び／又はＪｕｖｅｄｅｒｍなどの市販ＨＡベースの組織フィラー）に対する最初の注入の後、注入部位を１週間又は２週間の間隔でモニターすることができ、ここで患者は、細胞毒性、発熱性、エンドトキシン形成、急性システム毒性、亜慢性毒性、皮内反応性、遺伝毒性、及び皮膚感作などの生体適合性の懸念について観察される。
【0414】
更に、組織フィラーの物理的属性は、チンダリングの有無又は注入部位での体積、弾性、又は堅牢性の喪失を調べることによってモニターできる。
【0415】
実施例３：組織フィラーレオロジーの検討
振動式平行板レオメータ（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ Ｐｈｙｓｉｃａ ＭＣＲ ３０１）を用いて、本明細書に記載の組織フィラーのレオロジー特性を測定することができた。板径２５ｍｍを１ｍｍのギャップ高さで使用することができた。測定は、２５℃の一定温度で行うことができた。各測定は、２％の一定ひずみと周波数の対数増加での１～１０Ｈｚの周波数掃引、それに続く、ひずみの対数増加での５Ｈｚの一定周波数での１～３００％のひずみ掃引からなる。この分析の結果は、各被試験組織フィラーの貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”を提供する。
振動式平行板レオメータ（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ Ｐｈｙｓｉｃａ ＭＣＲ ３０１）を用いて、本明細書に記載の組織フィラーのレオロジー特性を測定することができた。板径２５ｍｍを１ｍｍのギャップ高さで使用することができた。測定は、２５℃の一定温度で行うことができた。各測定は、２％の一定ひずみと周波数の対数増加での１～１０Ｈｚの周波数掃引、それに続く、ひずみの対数増加での５Ｈｚの一定周波数での１～３００％のひずみ掃引からなる。この分析の結果は、各被試験組織フィラーの貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ”を提供する。
【0416】
実施例４：絹／ＨＡ溶液の不透明性の検討
表１８にしたがって、ＨＡ及び絹の溶液を水又はリン酸緩衝生理食塩水で調製した。
表１８にしたがって、ＨＡ及び絹の溶液を水又はリン酸緩衝生理食塩水で調製した。
【表18-1】
【表18-2】
【0417】
前記表に記載の溶液の結果を図２６及び図２７に示す。図２６及び図２７における対照（図２６におけるラベルされていないフラスコ、図２７における対照シリンジ）は、ＨＡの水溶液（２２ｍｇ／ｍＬ）とした。図２６及び図２７に示されるように、ＨＡ単独と比較して、絹／ＨＡ溶液は均質であり且つ視覚的に不透明であった。
【0418】
実施例５：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるように、ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解し、絹の溶液に添加することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるように、ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解し、絹の溶液に添加することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
【0419】
実施例６：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：絹のＮａＯＨ溶液を絹溶液に添加した後、ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：絹のＮａＯＨ溶液を絹溶液に添加した後、ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
【0420】
実施例７：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：絹溶液を工程ｂの溶液に添加し、加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：絹溶液を工程ｂの溶液に添加し、加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
【0421】
実施例８：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：絹溶液を架橋されたＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加し、金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：絹溶液を架橋されたＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加し、金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
【0422】
実施例９：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：絹溶液を工程ｆで調製した材料に添加し、加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液に溶解することができる。
工程ｂ：ＮａＯＨに溶解させたＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する。
工程ｃ：加熱混合して架橋させる。
工程ｄ：金属メッシュに通し、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる。
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する。
工程ｇ：絹溶液を工程ｆで調製した材料に添加し、加熱しながら（５０℃）約２時間、エタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる。
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する。
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる。
工程ｊ：得られた乾燥粉末を緩衝０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲル状に膨潤させる。
工程ｋ：ゲルをシリンジに充填し、オートクレーブし、組織フィラーを得る。
【0423】
実施例１０：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムを、本明細書に記載されるようにＮａＯＨ溶液と絹溶液に混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムを、本明細書に記載されるようにＮａＯＨ溶液と絹溶液に混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
【0424】
実施例１１：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：絹溶液を工程ａの溶液に添加することができ、ＢＤＤＥを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：絹溶液を工程ａの溶液に添加することができ、ＢＤＤＥを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
【0425】
実施例１２：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を絹溶液に添加し、反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を絹溶液に添加し、反応させる。
工程ｄ：工程ｃの透析混合物にアンモニアを添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
【0426】
実施例１３：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの生成物を絹溶液に添加した後、アンモニアをその透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合することができる。
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる。
工程ｄ：工程ｃの生成物を絹溶液に添加した後、アンモニアをその透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿に注ぐ。
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜状に乾燥させる。
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子状に分割し、生理食塩水中で膨潤させる。
工程ｇ：工程ｆの生成物をシリンジに添加し、オートクレーブする。
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥ溶液又は本明細書に記載の他の架橋剤を用いる第２の最終的な架橋手続に付し、洗浄することができる。
【0427】
実施例１４：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるよう絹溶液を調製することができ、これに、ＢＤＤＥ水溶液を添加することができる。
工程ｂ：ＨＡを工程ａの溶液に添加することができる
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるよう絹溶液を調製することができ、これに、ＢＤＤＥ水溶液を添加することができる。
工程ｂ：ＨＡを工程ａの溶液に添加することができる
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
【0428】
実施例１５：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液に絹溶液を添加することができ、次いで、これにＨＡを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液に絹溶液を添加することができ、次いで、これにＨＡを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
【0429】
実施例１６：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液にＨＡを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの混合物に絹溶液を添加することができ、得られる混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液にＨＡを添加することができる。
工程ｃ：工程ｂの混合物に絹溶液を添加することができ、得られる混合物を撹拌（例えば、５分間）し、約１日間放置することができる。
工程ｄ：工程ｃから得られたゲルを、１週間、生理食塩水中に放置し、組織フィラーを得ることができる。
【0430】
実施例１７：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるように絹溶液に、ＮａＯＨ溶液に溶解させたＨＡ（４００ｒｐｍで約１２時間混合）を添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：本明細書に記載されるように絹溶液に、ＮａＯＨ溶液に溶解させたＨＡ（４００ｒｐｍで約１２時間混合）を添加することができる。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
【0431】
実施例１８：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液に絹溶液を添加することができ、得られた混合物を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液に絹溶液を添加することができ、得られた混合物を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
【0432】
実施例１９：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：絹溶液を工程ｂの溶液に添加することができ、得られた混合物を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：絹溶液を工程ｂの溶液に添加することができ、得られた混合物を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
【0433】
実施例２０：提案される組織フィラー調製方法
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：絹溶液を工程ｃの生成物に添加することができ、混合物をリドカインＨＣｌと混合することができる。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
本明細書に記載の絹／ＨＡ組織フィラーは、以下の一般的方法にしたがって調製することができた。
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液に溶解させることができる（４００ｒｐｍで約１２時間混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスすることができる。
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間、本明細書に記載の架橋剤（例えば、ＢＤＤＥ）と混合することができる。
工程ｄ：絹溶液を工程ｃの生成物に添加することができ、混合物をリドカインＨＣｌと混合することができる。
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間行うことができる、次いでＰＢＳで２日間、次いで水で１日間行う。
工程ｆ：濾過した生成物は、次いで、凍結乾燥し固体を得る。
工程ｇ：固体をＰＢＳに溶解し、次いでインキュベートする。
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを工程ｇの生成物に添加することができる。
工程ｉ：工程ｇ又はｈの得られた生成物を、蒸気オートクレーブで滅菌することができる。
【0434】
実施例２１：ＢＤＤＥで架橋された絹とヒアルロン酸からなる皮膚フィラー製剤
材料：１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ；Ｌｉｆｅｃｏｒｅ）；絹、６％溶液（Ｓｉｌｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液（ＢＤＨ）；塩酸、５Ｎ（Ｒｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。
材料：１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ；Ｌｉｆｅｃｏｒｅ）；絹、６％溶液（Ｓｉｌｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液（ＢＤＨ）；塩酸、５Ｎ（Ｒｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。
【0435】
製剤変数：絹分子量：中及び低ＭＷ絹溶液（６％）；ＨＡ分子量：１．５ＭＤａと２．２ＭＤａ；絹濃度：１％Ｖ／Ｖ（０．６ｍｇ／ｍＬ）、２％Ｖ／Ｖ（６ｍｇ／ｍＬ）５％Ｖ／Ｖ（３ｍｇ／ｍＬ）、及び２０％Ｖ／Ｖ（１２ｍｇ／ｍＬ）。
【0436】
ヒドロゲル架橋：（ａ）０．１Ｎ水酸化ナトリウムに６％絹溶液を添加する；（ｂ）絹含量に応じて、２００～４００ｒｐｍの速度でオーバーヘッド攪拌下にて、上で調製した溶液にＨＡ粉末を徐々に添加する；気泡の過剰発生を避けるために軽く攪拌する；ＨＡが完全に溶解するまで撹拌を続ける；（ｃ）上の溶液にＢＤＤＥ１％Ｖ／Ｖを添加する；（ｄ）５０℃に加熱し、３０分間１００～２００ｒｐｍで撹拌を続ける；（ｅ）架橋されたゲルを３０℃未満まで冷却させる；（ｆ）５Ｎ塩酸を添加し、ｐＨを７．０～７．４に調整する。
【0437】
ヒドロゲル透析：（ａ）透析カセットを２分間水和する；過剰な水を拭き取り、空のカセットの総質量を測定する；（ｂ）透析カセットにヒドロゲル製剤約１８ｇを添加する；ゲル充填後にカセットの総質量を測定する；（ｃ）透析カセットを１×ＰＢＳ緩衝液２Ｌ中に懸濁し、２００ｒｐｍでマグネティックスターラを設定する；透析開始時点を記録し、透析４時間、２４時間、４８時間後にＰＢＳバッファを変える；７２時間後にゲルを回収する。
【0438】
特性評価：剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）及び粘度；酵素分解；残留ＢＤＤＥ；架橋密度；３０日目の動物研究；細胞毒性；細菌内毒素；濁度。
【0439】
粘弾性：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＨＲ－１ハイブリッドレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて、皮膚フィラー製剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）及び複素粘度（η）を測定した。サンプルは、ディケード間隔当たり１０個のデータ点で０．１Ｈｚから１０Ｈｚに振動周波数を掃引して試験した。データを記録し、５Ｈｚの剪断速度で比較した。一定のＨＡ濃度及び可変絹濃度を有するヒドロゲル製剤（透析後）のＧ’及びγデータを表１９に示す。このバッチでは、１．５ＭＤａの分子量のＨＡを用いた。
【表19】
【0440】
ＨＡと絹の一定総濃度３０ｍｇ／ｍＬを有するヒドロゲル製剤（透析後）のＧ’及びγデータを表２０にまとめる。
【表20】
【0441】
ヒドロゲルの可逆性：絹タンパク質含有又は不含ヒドロゲルを調製し、透析した。最終組成は、絹－ＨＡヒドロゲルで３３．３ｍｇ／ｍＬのＨＡ＋８ｍｇ／ｍＬの絹であり、ＨＡヒドロゲルで３３．３ｍｇ／ｍＬのＨＡであった。上で調製したヒドロゲル１ｇ±１００ｇを、２０ｍＬガラスバイアルに添加した後、１×ＰＢＳ中ヒアルロニダーゼ（１６Ｕ／ｍＬ）を３ｍＬ添加した。サンプルを３日間３７℃でインキュベートした。また、対照サンプルを、ヒアルロニダーゼを添加せずにＨＡヒドロゲルを用いて調製した。分解プロファイルを図２８に示す。ヒアルロニダーゼ不含の対照サンプルは、３日間のインキュベーション過程で分解されなかった。インキュベーションの最初の６時間以内に、ヒドロゲルはバッファを吸収し膨潤して、パーセンテージ質量の上昇をもたらした。絹－ＨＡヒドロゲルとＨＡヒドロゲルは、３日間のインキュベーション後に完全に分解された。絹が存在すると、ヒドロゲルは、純粋なＨＡヒドロゲルよりも速く消化された。インキュベーションの１２時間後、絹－ＨＡヒドロゲルの約９０％が酵素により消化された。
【0442】
架橋剤（ＢＤＤＥ）残渣：表１９に列挙したサンプルは、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ＭＲＬ）のＧＣ－ＦＩＤを用いＢＤＤＥ残渣について試験した。ＭＲＬテストレポートＭＲＬ１８ＪＡＮ０６は、全ての試料中において検出可能なＢＤＤＥ残渣がなく、２ｐｐｍ以下という許容基準を満たすことを示した。
【0443】
架橋密度：表１９に列挙したサンプルを、ヒアルロニダーゼで更に完全に消化し、ＮＭＲを用いて分析し、架橋密度をパーセンテージ変性の観点で測定した。試験結果を表２１（ＭＲＬテストレポートＭＲＬ１８ＪＡＮ０７）に示す。
【表21】
【0444】
動物研究：モルモットモデルを用いた３０日間の動物実験を、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ施設で行い、製品安全性の問題に対処した。組織応答を評価するために、本研究では２つの終了時点、７日目と３０日目を設けた。研究は、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃレポートＤ２８１９５（プロジェクトＣ１９８７９）にまとめた。２つの対照サンプル（Ｊｕｖｅｄｅｒｍ Ｕｌｔｒａ Ｐｌｕｓ及び表１９のサンプルＣ２）及び６つの製剤（表１９のサンプルＡ～Ｆ）は、皮内注入に使用しました。サンプルＡ～Ｆ及び対照サンプルＣ２は、注入前にＮｅｌｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＬＬＣで蒸気滅菌した（プロトコル２０１７０７２８９）。研究手続は簡潔には、２４頭の動物（１期間当たり１２頭）を本研究に用いた。各動物は、スレッディング技術（ボーラスではなくラインを注入する）を用いて６箇所の背側の皮内注入を施された。即ち、脊椎の片側に１つの対照部位、その反対側の第２の対照部位（側は、動物ごとに交互に割り当てる）、及び所定の試験物質の１以上の注入を行う４箇所の試験部位（右側と左側は、は動物間で交互に割り当てる）。動物は、一般的な健康状態を評価するための研究を通して毎日観察した。動物を終了予定日に人道的に安楽死させた。全ての動物から移植部位及び周囲組織を切除し、ホルマリンに入れ、パラフィンブロックに加工した後、組織病理学的評価を行った。代表的な組織学画像と病理学的所見を表２２にまとめた。全体として、移植部位のいずれにおいても敗血症又は免疫応答を示唆するものはなかった。
【表22】
【0445】
細菌内毒素：３つの滅菌後サンプル（サンプルＡ、サンプルＥ、及びサンプルＣ２）を、（表１９に列挙された）動物実験で使用される７種の製剤から細菌エンドトキシン試験のために選択した。動的比濁法を用いてエンドトキシンレベルを測定した。試験結果を表２３に示すが、許容基準である２０ＥＵ／ｍｌ（Ｎｅｌｓｏｎ Ｌａｂｓ研究レポート１００６７７５－Ｓ０１）を下回っている。
【表23】
【0446】
生体適合性－４つの滅菌後サンプル（サンプルＡ、サンプルＢ、サンプルＤ、及びサンプルＥ）を、（表１９に列挙された）動物実験で使用される７種の製剤からＩＳＯ－１０９９３－５細胞毒性試験（Ｌ－９２９マウス線維芽細胞を用いるＩＳＯ ＭＥＭ溶出）のために選択した。これらのサンプルは、試験した皮膚フィラー製剤において中分子量絹及び低分子量絹の最大含量及び最低含量を示した。テストレポートは、全ての試験サンプルが、非細胞傷害性を意味するグレード０のスコアでありことを示した（Ｗｕｘｉ ＡｐｐＴｅｃ Ｄ２８２８７－１、Ｄ２８２８７－２、Ｄ２８２８７－３、Ｄ２８２８７－４）。
【0447】
濁度：純粋なＨＡヒドロゲルは、自然光の下で透明である。ＨＡは、絹タンパク質と架橋されると、ヒドロゲルが僅かに濁り（曇り）、その濁度は、製剤中の総絹濃度に依存する。濁度は、標準透過光に加えて前方散乱光も集める能力を有する、ＩｎＧａＡｓ積分球を備えたＬａｍｂｄａ Ｘ５０Ｓ紫外可視分光光度計（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により測定した。絹－ＨＡヒドロゲルの濁度測定を図３５に示す。黒色曲線は、標準透過率であり、赤色曲線は、顕著な前方散乱を示す球によって集められた。絹を含まない純粋なＨＡヒドロゲルを対照サンプルとして使用した。図３６の各曲線は、ほぼ同一であり、純粋なＨＡゲルの散乱を殆ど示さない。濁度測定は、絹－ＨＡヒドロゲルが、皮膚フィラーとして用いたときにチンダル現象を排除することができる光散乱能力を有することを示唆した。
【0448】
結論：皮膚フィラー製剤は、一定のＨＡ濃度、各種絹含量、及び一定の総濃度を有するように作製した。これらの製剤は、各種用途につながり得る、広範囲の貯蔵弾性率、粘度、及び架橋密度を示した。絹－ＨＡヒドロゲルは酵素的に可逆的であった。ヒドロゲル製剤の透析後の架橋剤残渣は、許容基準を満たした。細胞毒性試験は、０．４８ｍｇ／ｍＬ～９．６ｍｇ／ｍＬの範囲の絹含量を有する絹－ＨＡヒドロゲルが、細胞傷害性がなく及び生体適合性であることを示した。３０日間の動物研究により、絹含量が最大９．６ｍｇ／ｍＬの全ての製剤が敗血症を引き起こさず、免疫応答がなかったことを示した。
【0449】
実施例２２：ＰＥＧＤＥ（ＰＥＧＤＧＥ）で架橋された絹とヒアルロン酸からなる皮膚フィラー製剤
架橋剤：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、平均分子量Ｍｎ＝５００。反応条件：ＢＤＤＥ架橋と同じ（実施例２１）。ＰＥＧＤＥの合計量はモル数でＢＤＤＥと同等であった。
架橋剤：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、平均分子量Ｍｎ＝５００。反応条件：ＢＤＤＥ架橋と同じ（実施例２１）。ＰＥＧＤＥの合計量はモル数でＢＤＤＥと同等であった。
【表24】
【0450】
実施例２３：動物研究Ｃ２０４１９
製剤及び動物研究Ｃ２０４１９のためのサンプルの製剤及び特徴評価は、表２５に示す通りである。
製剤及び動物研究Ｃ２０４１９のためのサンプルの製剤及び特徴評価は、表２５に示す通りである。
【表25】
【0451】
図３７～図４６は、研究の結果を示す。図３７は、対照皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である。図３８は、本発明のＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２４ｍｇ／ｍＬのＨＡ、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＣ４－表２５）。図３９は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＬ－表２５）。図４０は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２３．７６ｍｇ／ｍＬのＨＡ、０．２４ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＭ－表２５）。図４１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＮ－表２５）。図４２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚フィラーを注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍＬのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍＬの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＯ－表２５）。
【0452】
図４３～図４６は、移植後７日間目の表２５の製剤（スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；４－重度）の組織学的結果のグラフ表示である。図４３は、ゲル分解についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフであり、ＢＤＤＥ架橋製剤は大部分が分解される。図４４は、ゲル移動についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである。図４５は、炎症についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフであり、組織の壊死が観察されず、血液凝固が観察されず、観察されたコラーゲン沈着は、対照製剤と試験製剤の一部で最小限であった。図４６は、マクロファージについての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである。
【0453】
実施例２４：ＰＥＧＤＥ架橋絹－ＨＡヒドロゲルの性質：１）剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び２）透析中の膨潤率
皮膚フィラー調製、材料：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、Ｍｎ＝５００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ）、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ；絹、６％溶液、Ｓｉｌｋ Ｉｎｃ．；水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液、ＢＤＨ；塩酸、５Ｎ、Ｒｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ。
皮膚フィラー調製、材料：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、Ｍｎ＝５００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ）、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ；絹、６％溶液、Ｓｉｌｋ Ｉｎｃ．；水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液、ＢＤＨ；塩酸、５Ｎ、Ｒｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ。
【0454】
皮膚フィラー製剤の変数：絹分子量：中及び低ＭＷ絹溶液（６％）；ＨＡ分子量：７００ＫＤａ及び１．５ＭＤａ；絹濃度（初期）：０～１５ｍｇ／ｍＬ。
【0455】
高濃度のヒドロゲル架橋：０．１Ｎ水酸化ナトリウムに６％絹溶液を添加する；１００ｍｇ／ｍＬの混合分子量ＨＡ（７００ＫＤａ／１．５ＭＤａ＝９０／１０）を、上で調製した溶液に穏やかに攪拌しながらＨＡが完全に溶解するまで徐々に添加する；ＰＥＧＤＥを前記溶液に添加する；水浴を４０℃に加熱し、４５分間、水浴中で架橋を維持する；架橋されたゲルを３０℃未満に冷却する；５Ｎ塩酸を１×ＰＢＳに添加し、ゲルを４０ｍｇ／ｍＬに希釈し、最終ｐＨを７．０～７．４に調整する。
【0456】
低濃度のヒドロゲル架橋：０．１Ｎ水酸化ナトリウムに６％絹溶液を添加する；２５ｍｇ／ｍＬの１．５ＭＤａのＨＡを、上で調製した溶液に穏やかに攪拌しながらＨＡが完全に溶解するまで徐々に添加する；ＰＥＧＤＥを前記溶液に添加する；水浴を４０℃に加熱し、４５分間、水浴中で架橋を維持する；架橋されたゲルを３０℃未満に冷却する；５Ｎ塩酸を架橋されたゲルに添加し、最終ｐＨを７．０～７．４に調整する。
【0457】
ヒドロゲル透析：透析カセット（２０ｋＤａのＭＷＣＯ）を２分間水和する；過剰な水を拭き取り、空のカセットの総質量を測定する；透析カセットにヒドロゲル約１８ｇを添加する；ゲル充填後にカセットの総質量を測定する；透析カセットを１×ＰＢＳ緩衝液２Ｌ中に懸濁し、２００ｒｐｍでマグネティックスターラを設定する；透析７２時間後にゲルを回収する。
【0458】
粘弾性
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＨＲ－１ハイブリッドレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて、ヒドロゲル製剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）を測定した。サンプルは、ディケード間隔当たり１０個のデータ点で０．１Ｈｚから１０Ｈｚに振動周波数を掃引して試験した。データを記録し、５Ｈｚの剪断速度で比較した。一定のＨＡ濃度及び可変絹濃度の透析前後のヒドロゲル製剤のＧ’を、図４７Ａ及び図４７Ｂに示す。高初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルの場合、Ｇ’に対する絹濃度の影響は、ＨＡの合計に対する絹の比率が比較的低いので最小である。それはまた、絹濃度の変化による影響が小さい低分子量（７００ｋＤａ）を９０％含む混合ＨＡにも起因する場合がある。低初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルの場合、製剤に添加した絹の量がより多いので、Ｇ’が上昇した。初期ＨＡ濃度が低く、また、高分子量ＨＡ（１．５ＭＤａ）に対して与える影響がより大きいとき、絹濃度の変化がＧ’に与える影響がより大きい。Ｇ’に対する絹分子量の実質的な影響は、いずれの架橋手続について観察されなかった。
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＨＲ－１ハイブリッドレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて、ヒドロゲル製剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）を測定した。サンプルは、ディケード間隔当たり１０個のデータ点で０．１Ｈｚから１０Ｈｚに振動周波数を掃引して試験した。データを記録し、５Ｈｚの剪断速度で比較した。一定のＨＡ濃度及び可変絹濃度の透析前後のヒドロゲル製剤のＧ’を、図４７Ａ及び図４７Ｂに示す。高初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルの場合、Ｇ’に対する絹濃度の影響は、ＨＡの合計に対する絹の比率が比較的低いので最小である。それはまた、絹濃度の変化による影響が小さい低分子量（７００ｋＤａ）を９０％含む混合ＨＡにも起因する場合がある。低初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルの場合、製剤に添加した絹の量がより多いので、Ｇ’が上昇した。初期ＨＡ濃度が低く、また、高分子量ＨＡ（１．５ＭＤａ）に対して与える影響がより大きいとき、絹濃度の変化がＧ’に与える影響がより大きい。Ｇ’に対する絹分子量の実質的な影響は、いずれの架橋手続について観察されなかった。
【0459】
透析中の膨潤率：ヒドロゲル製剤に添加される絹の量が、いずれの架橋手続における透析中のゲル膨潤に対しても影響を及ぼすことを示す明確な傾向はなく、中分子量絹と低分子量絹との間で実質的な差がなかった（図４８Ａ及び図４８Ｂ）。
【0460】
ヒドロゲル製剤中の絹濃度のＧ’に対する影響は、混合ＨＡが高初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されると、最小であるが、単一の高ＭＷＨＡが低初期ＨＡ濃度で架橋されると、Ｇ’に比例した。ＨＡがＰＥＧＤＥにより架橋されたときのＧ’への寄与と膨潤を比較すると、ゲル製剤における絹の分子量は、実質的な差がなかった。
【0461】
実施例２５：絹－ＨＡ皮膚フィラー製剤中の絹濃度
材料：絹、６％溶液、Ｓｉｌｋ，Ｉｎｃ．；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル。
設備：水分計ＨＥ５３、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ；Ｃａｒｙ １００ 紫外／可視分光光度計。
材料：絹、６％溶液、Ｓｉｌｋ，Ｉｎｃ．；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル。
設備：水分計ＨＥ５３、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ；Ｃａｒｙ １００ 紫外／可視分光光度計。
【0462】
較正標準曲線：中分子量及び低分子量の両方の６％絹溶液の乾燥含有量を測定し、絹溶液の実際の乾燥含有量（ｍｇ／ｍＬ）を決定する；１Ｘ ＰＢＳ（例えば、１ｍｇ／ｍＬの絹、０．７５ｍｇ／ｍＬの絹、０．５ｍｇ／ｍＬの絹、０．２５ｍｇ／ｍＬの絹、及び０ｍｇ／ｍＬの絹）を用いて６％絹溶液を希釈し、標準絹溶液の系列を作製する；石英キュベット中２７５ｎｍでの各標準溶液の吸光度を測定する－吸光度測定は、２００～８００ｎｍのスキャン、５ｎｍのデータ間隔、及び０．１秒の平均コレクションで行うことができる；絹濃度（ｍｇ／ｍＬ）に対する２７５ｎｍでの吸光度をプロットして、標準曲線を作成する。
【0463】
絹濃度の測定：２７５ｎｍでの吸光度が０～１．０の範囲となるように、ＨＡゲルサンプルを１Ｘ ＰＢＳで希釈する（例えば、サンプルを、ゲル対１Ｘ ＰＢＳの比が１：１２（即ち、１２００％希釈）で希釈することができる）；絹－ＨＡゲルサンプルの吸光度についてのスキャンを、２００ｎｍ～８００ｎｍの範囲で１Ｘ ＰＢＳに対して行い、各ゲルサンプルの２７５ｎｍでの吸光度ピークを測定する；ゲルサンプルの吸収信号を、絹を含有しないサンプルの吸収信号と、検量線の切片（絹を含有しないサンプルの絹濃度を０ｍｇ／ｍＬに設定する）との間の差で補正することができる；絹－ＨＡゲルサンプル中の絹濃度を較正曲線と希釈係数から計算することができる。
【0464】
較正曲線は、０ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬの絹の各種濃度を有する一連の標準試料の２７５ｎｍでの吸収を測定することによって作成した。中分子量絹及び低分子量絹溶液の較正曲線は、図４９Ａ及び図４９Ｂに示される。中分子量絹の０．９９９４７と低分子量絹の０．９９９４９のＲ２値は、較正曲線が、絹濃度０～１ｍｇ／ｍＬの動作範囲内で線形であることを示す。これらの曲線を用いて、ゲルサンプル中の絹濃度を決定することができる。
【0465】
ＨＡ－絹ヒドロゲルの絹濃度の決定：図５０Ａ及び図５０Ｂに示されるように、各サンプルについて、希釈した絹－ＨＡヒドロゲルの２７５ｎｍにおける吸収を測定した。各サンプルの絹濃度を較正曲線と希釈倍率で算出し、表２６にまとめた。
【表26】
【0466】
実施例２６：絹－ＨＡ皮膚フィラー製剤：ゲル不透明度
材料：架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ。
設備：Ｃａｒｙ １００ 紫外／可視分光光度計。
サンプル調製：サンプル内の気泡が最小量となるように、清浄な石英キュベットに約２ｍＬのＨＡゲルを注入する；１８Ｇ針を用いる注入は、試料中の気泡量を低減することができる；１Ｘ ＰＢＳのブランク参照サンプルは、第２の清浄な石英キュベットに添加することができる（注：不透明度測定のために、プラスチックキュベットを使用することができる。これは、プラスチックキュベットは、可視領域、４００ｎｍ～８００ｎｍでの吸収を有さないからである）。
材料：架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０倍、ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ。
設備：Ｃａｒｙ １００ 紫外／可視分光光度計。
サンプル調製：サンプル内の気泡が最小量となるように、清浄な石英キュベットに約２ｍＬのＨＡゲルを注入する；１８Ｇ針を用いる注入は、試料中の気泡量を低減することができる；１Ｘ ＰＢＳのブランク参照サンプルは、第２の清浄な石英キュベットに添加することができる（注：不透明度測定のために、プラスチックキュベットを使用することができる。これは、プラスチックキュベットは、可視領域、４００ｎｍ～８００ｎｍでの吸収を有さないからである）。
【0467】
ゲル不透明度の測定：データ間隔５ｎｍ及び平均時間０．１秒間で２００ｎｍ～８００ｎｍのＸ－スキャニングレンジを設定する；透過光の測定のために％ＴであるようにＹ－モードを選択する（注：吸収も測定することができ、％Ｔは吸収値から計算することができる）；１Ｘ ＰＢＳ参照標準に対するゲルサンプルにスキャンを行う；データは、ｃｓｖファイルとして保存することができ、スペクトルをプロットすることができる。
【0468】
ゲル不透明度は、標準的な透過光用の紫外／可視分光光度計を用いて測定することができる。光学的に透明な試料は光を１００％透過するのに対して、僅かに濁った又は曇ったサンプルは、その光の一部分のみを透過することができる。図５１は、絹含有及び絹不含ＨＡヒドロゲルの濁度測定を示す。青色曲線は、３ｍｇ／ｍＬの絹と２６ｍｇ／ｍＬのＨＡを含有する絹－ＨＡゲルサンプルの透過光の％透過率を示す。赤色曲線は、絹を含有せず２０ｍｇ／ｍＬのＨＡを含有するサンプルの透過光を示し、絹含有サンプルよりも光の透過が高いことを示す。濁度測定は、絹－ＨＡゲルが、絹不含ＨＡゲルよりも可視光を散乱させる能力を有することを示唆する。
【0469】
実施例２７：ＮＭＲによって決定されるＨＡヒドロゲルの変性度（ＭｏＤ）
変性度（ＭｏＤ）は、ＨＡの繰り返し単位のモル数に対する全ての架橋された架橋剤分子の化学量論比として定義される。架橋されたリンカー及びモノリンク（ｍｏｎｏ－ｌｉｎｋｅｄ）されたリンカーの両方がＭｏＤに含まれる。ＭｏＤは、２．１ｐｐｍにおけるＨＡ中のＮ－アセチル基、及び１．７ｐｐｍにおけるＢＤＤＥ架橋剤又は３．０～４．５ｐｐｍのＰＥＧＤＥ架橋剤由来の信号を積分することにより１Ｈ ＮＭＲスペクトルから決定される。
変性度（ＭｏＤ）は、ＨＡの繰り返し単位のモル数に対する全ての架橋された架橋剤分子の化学量論比として定義される。架橋されたリンカー及びモノリンク（ｍｏｎｏ－ｌｉｎｋｅｄ）されたリンカーの両方がＭｏＤに含まれる。ＭｏＤは、２．１ｐｐｍにおけるＨＡ中のＮ－アセチル基、及び１．７ｐｐｍにおけるＢＤＤＥ架橋剤又は３．０～４．５ｐｐｍのＰＥＧＤＥ架橋剤由来の信号を積分することにより１Ｈ ＮＭＲスペクトルから決定される。
【0470】
酵素分解の前に、ＨＡヒドロゲルを、まずＰＢＳ（１Ｘ、２Ｌ×５）溶液に対して透析し、遊離の架橋剤を除去した。Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＭＷＣＯ ３．５ Ｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用し、ＰＢＳ溶液を７２時間ＲＴで攪拌した。透析後、ＨＡヒドロゲル溶液１ｍＬを取り出し、Ｌａｂｃｏｎｃｏ ＦｒｅｅＺｏｎｅ凍結乾燥機（２．５Ｌ）で凍結乾燥して、乾燥粉末を得た。
【0471】
ＮＭＲサンプルを調製するために、乾燥粉末１０ｍｇをＮＭＲチューブ（５ｍｍ、Ｗｉｌｍａｄ－ＬａｂＧｌａｓｓ）に入れ、ヒアルロニダーゼ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）の重水（Ｄ２Ｏ、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ，Ｗａｒｄ Ｈｉｌｌ，ＭＡ）溶液０．６ｍＬを添加した。ヒアルロニダーゼの量は、ＨＡ１ｍｇ当たり５Ｕとした。ＮＭＲチューブを３７℃で一晩インキュベートし、全てのＨＡを分解させた。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ ＭＲ ４００ ＭＨｚの自動ＮＭＲシステムで記録した。緩和遅延時間は１秒間であり、スキャン数は２５６である。データを全て、ＭｅｓｔＲｅＮｏｖａソフトウェア（１２．０．２版）を使用して処理した。
【0472】
実施例２８：絹－ＨＡ ２工程架橋プロセス
絹－ＨＡヒドロゲルは、２工程架橋プロセスで形成し、ＨＡに対する絹の結合効率を改善することができる。所定の製剤の場合、第１の工程で、全ての絹タンパク質と低分子量ＨＡの少量を、ｐＨ１０のＮａＯＨ溶液に添加し、次いで、架橋剤の一部と反応させる。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、この工程の間に、できるだけ多くの絹が架橋剤と反応すると考えられる。第２の工程で、ＮａＯＨ溶液を添加し、工程１の生成物を希釈し、ｐＨを１３に上げる。次いで、残りの低分子量ＨＡ、全ての高分子量ＨＡ、及び残りの架橋剤を溶液に添加し、架橋反応を完了させる。
絹－ＨＡヒドロゲルは、２工程架橋プロセスで形成し、ＨＡに対する絹の結合効率を改善することができる。所定の製剤の場合、第１の工程で、全ての絹タンパク質と低分子量ＨＡの少量を、ｐＨ１０のＮａＯＨ溶液に添加し、次いで、架橋剤の一部と反応させる。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、この工程の間に、できるだけ多くの絹が架橋剤と反応すると考えられる。第２の工程で、ＮａＯＨ溶液を添加し、工程１の生成物を希釈し、ｐＨを１３に上げる。次いで、残りの低分子量ＨＡ、全ての高分子量ＨＡ、及び残りの架橋剤を溶液に添加し、架橋反応を完了させる。
【0473】
実施例２９：ＨＡヒドロゲルの合成
各種ＨＡ分子量、架橋剤、反応時間、反応温度、ＨＡ濃度、架橋剤比、混合プロセス、撹拌方法を用いてＨＡヒドロゲルを合成した。表２７及び表２８は、使用される種々の反応条件及び得られた種々のヒドロゲルを示す。
各種ＨＡ分子量、架橋剤、反応時間、反応温度、ＨＡ濃度、架橋剤比、混合プロセス、撹拌方法を用いてＨＡヒドロゲルを合成した。表２７及び表２８は、使用される種々の反応条件及び得られた種々のヒドロゲルを示す。
【表27】
【表28-1】
【表28-2】
【表28-3】
【0474】
本明細書で引用したすべての特許、特許出願及び公開されている文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本開示の方法をその特定の実施形態に関連して説明してきたが、さらなる改変が可能であることを理解されよう。更に、本出願は、本開示の方法が関係する当業界の公知又は慣用的な実務内にあるような本開示からの逸脱を含む、本開示の方法の任意の変形、使用又は適応を包含するものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【図47A】
【図47B】
【図48A】
【図48B】
【図49A】
【図49B】
【図50A】
【図50B】
【図51】
