▶ ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニアの特許一覧
特開2023-153423単純ヘルペスウイルス糖タンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡワクチン及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023153423
(43)【公開日】2023-10-17
(54)【発明の名称】単純ヘルペスウイルス糖タンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡワクチン及びその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 39/245 20060101AFI20231005BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20231005BHJP
A61K 31/7115 20060101ALI20231005BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20231005BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20231005BHJP
C12N 15/38 20060101ALN20231005BHJP
【ＦＩ】
A61K39/245
A61K31/7105
A61K31/7115
A61P31/22
A61P37/04
C12N15/38 ZNA
【審査請求】有
【請求項の数】21
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023138084
(22)【出願日】2023-08-28
(62)【分割の表示】P 2020509054の分割
【原出願日】2018-08-17
(31)【優先権主張番号】62/546,648
(32)【優先日】2017-08-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/701,019
(32)【優先日】2018-07-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】500429103
【氏名又は名称】ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(72)【発明者】
【氏名】ハーベイ フリードマン
(72)【発明者】
【氏名】ドリュー ワイスマン
(72)【発明者】
【氏名】シタ アワスティ
(72)【発明者】
【氏名】ゲイリー コーエン
(57)【要約】
【課題】単純ヘルペスウイルス糖タンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡワクチン及びその使用の提供。
【解決手段】本発明は、ウイルス進入と免疫回避とに関与するものを含めて単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、性器ヘルペスの予防及び治療のための組成物及びその使用方法を提供する。一実施形態においては、本発明は、１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、ウイルス進入と免疫回避とに関与するものを含めて単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、性器ヘルペスの予防及び治療のための組成物及びその使用方法を提供する。一実施形態においては、本発明は、１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する又はＨＳＶ感染の発生を抑制、阻害若しくは低減するための、あるいは（ｉｉ）免疫反応を誘発するための組成物であって、
ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）のエクトドメインをコードするＲＮＡを含み、前記ＲＮＡが、ヌクレオシド修飾ＲＮＡであり、
ここで、前記組成物は、（ａ）配列番号５と少なくとも９８％同一である配列を含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）のエクトドメインをコードするＲＮＡ、及び（ｂ）配列番号１１と少なくとも９８％同一である配列を含むＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）のエクトドメインをコードするＲＮＡを含む組成物を除く、組成物。
ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）のエクトドメインをコードするＲＮＡを含み、前記ＲＮＡが、ヌクレオシド修飾ＲＮＡであり、
ここで、前記組成物は、（ａ）配列番号５と少なくとも９８％同一である配列を含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）のエクトドメインをコードするＲＮＡ、及び（ｂ）配列番号１１と少なくとも９８％同一である配列を含むＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）のエクトドメインをコードするＲＮＡを含む組成物を除く、組成物。
【請求項2】
前記ヌクレオシド修飾ＲＮＡが、１又は複数のプソイドウリジン残基を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記１又は複数のプソイドウリジン残基は、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
ＨＳＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）をコードするヌクレオシド修飾ＲＮＡをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）若しくはその免疫原性断片、又はｄ）これらの任意の組合せをコードする１又は複数のＲＮＡをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記糖タンパク質のうちの１又は複数が、ＨＳＶ－１由来である、請求項４に記載の組成物。
【請求項7】
前記糖タンパク質のうちの１又は複数が、ＨＳＶ－２由来である、請求項４に記載の組成物。
【請求項8】
前記ＲＮＡは、
ｉ）ポリＡ尾部、
ｉｉ）ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－Ｏ－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、若しくはアンチリバースキャップアナログ、
ｉｉｉ）キャップ非依存性翻訳エンハンサー、
ｉｖ）翻訳を促進する５’及び３’の非翻訳領域、
ｖ）又はこれらの組合せ
をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
ｉ）ポリＡ尾部、
ｉｉ）ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－Ｏ－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、若しくはアンチリバースキャップアナログ、
ｉｉｉ）キャップ非依存性翻訳エンハンサー、
ｉｖ）翻訳を促進する５’及び３’の非翻訳領域、
ｖ）又はこれらの組合せ
をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
前記ＲＮＡが、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール、又は細胞透過性ペプチドの中にカプセル化される、請求項１に記載の組成物。
【請求項10】
前記ナノ粒子が、リポソームナノ粒子である、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記エクトドメインが、配列番号１７と少なくとも９８％同一である配列からなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項12】
前記ＨＳＶ ｇＥの前記エクトドメインをコードする前記ＲＮＡが、配列番号１６のヌクレオチド２００～１３４８に対して少なくとも７５％の同一性を有するヌクレオチド配列からなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項13】
前記ヌクレオシド修飾ＲＮＡのうちの１又は複数が、シグナル配列をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項14】
前記シグナル配列が、
ａ．AUGACCCGCCUGACCGUGCUGGCCCUGCUGGCCGGCCUGCUGGCCUCCUCCCGCGCC（配列番号１９）、
ｂ．AUGCGCAUGCAGCUGCUGCUGCUGAUCGCCCUGUCCCUGGCCCUGGUGACCAACUCC（配列番号２０）、又は
ｃ．AUGGCCAUCUCCGGCGUGCCCGUGCUGGGCUUCUUCAUCAUCGCCGUGCUGAUGUCCGCCCAGGAGUCCUGGGCC（配列番号２１）
を含む、請求項１３に記載の組成物。
ａ．AUGACCCGCCUGACCGUGCUGGCCCUGCUGGCCGGCCUGCUGGCCUCCUCCCGCGCC（配列番号１９）、
ｂ．AUGCGCAUGCAGCUGCUGCUGCUGAUCGCCCUGUCCCUGGCCCUGGUGACCAACUCC（配列番号２０）、又は
ｃ．AUGGCCAUCUCCGGCGUGCCCGUGCUGGGCUUCUUCAUCAUCGCCGUGCUGAUGUCCGCCCAGGAGUCCUGGGCC（配列番号２１）
を含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する又はＨＳＶ感染の発生を抑制、阻害若しくは低減するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ－１感染又はＨＳＶ－２感染を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
前記ＨＳＶ感染が、一次ＨＳＶ感染；一次ＨＳＶ感染に続く、炎症、再発、又は口唇ＨＳＶ；潜伏ＨＳＶ感染の再活性化；あるいは、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染、又は経口ＨＳＶ感染を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項18】
前記組成物が、筋肉内、皮下、皮内、鼻腔内、膣内、直腸内、又は局所の投与用に製剤される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項19】
免疫応答を誘発するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項20】
前記免疫応答が、ＣＤ４免疫応答；ＣＤ８免疫応答；濾胞性ヘルパーＴ細胞免疫応答；胚中心Ｂ細胞免疫応答；ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２若しくはこれらの組合せに対するＩｇＧ抗体応答；又はこれらの組合せを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
前記組成物が、筋肉内、皮下、皮内、鼻腔内、膣内、直腸内、又は局所の投与用に製剤される、請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ウイルス進入と免疫回避とに関与するものを含めて単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、性器ヘルペスの予防及び治療のための組成物並びにその使用方法を提供する。
【背景技術】
【0002】
性器ヘルペスワクチンは、痛み及び苦痛を予防し、新生児ヘルペスの発生を低減し、かつ、ＨＩＶ獲得及び性器感染を伴って起こる伝染のリスクを低下させることが至急要望されている。世界中でおよそ５億人が、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ－２）、性器ヘルペスを惹起するウイルスに感染している。一部の個体では、感染により痛みのある再発性の性器潰瘍を結果として生じる一方で、他の個体では、感染は静穏なままである。どちらの環境においても、感染した個体は、彼らの親密なパートナーに対してウイルス感染させ得る。性器ヘルペスにより、感染者が性交時に曝露すればＨＩＶを獲得することとなるリスクが増大する。性器ヘルペスのワクチンは至急要望されており、いまだ利用可能なものはない。
【0003】
キロン社（Chiron Corp.）は、アジュバントとしてのＭＦ５９と共に与えられる、ウイルス進入に関与する２つのＨＳＶ－２糖タンパク質である、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ２）及びＤ（ｇＤ２）を含有する予防ワクチンを調査した。このワクチンは、免疫化後はじめの５ヶ月にわたって、感染の発症を遅延させたが、血清陰性のパートナーはＨＳＶ－２感染から保護されなかった。グラクソスミスクライン社（GlaxoSmithKline）（ＧＳＫ）は、アジュバントとしてモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）及びミョウバンを含むｇＤ２抗原を用いた予防ワクチンを評価した。全体的に、ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２に二重に血清陰性の女性のサブグループにおいて有意な保護が認められたが、生殖器病変に対する保護は検出されなかった。性器ヘルペスに対する全体的な保護が見られなかった二重に血清陰性の女性に、追跡試験を実行した；しかしながら、ワクチンは、ＨＳＶ－１に対して有効であった。ＨＳＶ－１は対照群において性器ヘルペス感染の６０％を占めていたことを理由に、この結果は注目に値した。これら研究は、ＨＳＶ－２侵入を遮断するワクチンを狙うには十分でなかったことを示す。
【0004】
ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２のｇＣは、補体カスケードの制御因子として機能する免疫回避分子である。補体活性化の間に、最も豊富である補体タンパク質Ｃ３がＣ３ｂに切断されて、ウイルス中和と感染細胞の溶解とを導く膜傷害性複合体を活性化する。Ｃ３ｂは、Ｂ－細胞応答及びＴ－細胞応答を刺激して、自然免疫と獲得免疫とのつながりとしての機能を果たす。ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２のｇＣは、Ｃ３ｂを結合してＣ３ｂが介する活性を阻害する。ｇＣ１及びｇＣ２を用いた免疫化により、糖タンパク質に結合してその免疫回避機能を遮断する抗体を産生する。
【0005】
ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２の糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）は、ＩｇＧ分子であってそれの標的にそのＦ（ａｂ’）２ドメインによって結合するＩｇＧ分子のＦｃドメインを結合することによって免疫回避分子として機能する。ｇＥ２サブユニット抗原を含有するワクチンは、ｇＥ２に結合してその免疫回避機能を遮断する抗体を産生する。ＨＳＶ－２のｇＣ２及びｇＥ２は、哺乳類の補体及びＩｇＧのＦｃ制御タンパク質に類似の活性を果たすが、哺乳類受容体と配列相同性を共有せず、これは免疫化が自己免疫を誘導することとなる危険性がないことを事実上示唆する。
【0006】
我々の実験室よりのこれまでの研究で、ｇＣ、ｇＤ及びｇＥを含有するワクチンを試験し、こうしたワクチンがＨＳＶ感染に対する保護を提供することを見出した。しかしながら、ＨＳＶのｇＣ、ｇＤ及びｇＥをコードするｍＲＮＡワクチンが、ＨＳＶ感染に対する保護に有効となるかどうかはわかっていない。
【0007】
ワクチンとして核酸を用いることには、複数の利点がある。核酸ワクチンは、液性免疫応答及び細胞性免疫応答の両方を誘導可能であり；低有効投与量であり；取り扱いが簡単で；急速な検査に役立ち；大規模な製造及び単離の点で費用対効果が高く再現可能であり；高頻度で産生可能で単離しやすく；従来のワクチンよりも温度安定性であり；貯蔵期間が長く；保存及び輸送がし易く；コールドチェーンを必要とすることはないようである（Shedlock & Weiner, J Leukocyte Biol. Vol 68, 2000）。
【0008】
原則として、外来性のＤＮＡやＲＮＡはいずれも哺乳類の身体においてタンパク質を発現可能である。ＤＮＡ及びｍＲＮＡ発現による両タンパク質を用いて同様の免疫活性を生じることが可能であるか否かは、不明である。ＤＮＡは、その安定性及び使い易さのために、ワクチンの作製及び遺伝子療法より優れているというのが定説である。
【0009】
ＤＮＡは、ワクチンにおいてうまく用いられてきた。ＤＮＡは、かなり安定かつ非反応性であり、長期間保存可能である。しかしながら、ＤＮＡは、自己複製し、紫外線照射によって容易に損傷し得る。ＤＮＡに基づくワクチンはまた、ゲノムへのＤＮＡの起こり得る挿入、遺伝子の起こり得る中断及び抗ＤＮＡ抗体の形成が原因で、安全性に対する懸念を引き起こすものでもあり得る。
【0010】
ＲＮＡワクチンは、重要な安全上の特徴を呈する。ＲＮＡは、ＤＮＡよりも反応性が高く、不安定であるが、紫外線照射に耐性がある。ｍＲＮＡは宿主の染色体内に組み込まれない。ｍＲＮＡの送達により、関心の抗原のより速い発現を結果として生じ、発現のために必要であるコピー数はより少ない。ｍＲＮＡ発現は一過性であり、これはその安全性を大きくする。ｍＲＮＡは、ＤＮＡが核メンバー及び形質膜を介したトランスロケーションを必要とする一方でｍＲＮＡは形質膜のみを介したトランスロケーションを必要とすることを理由に、有糸核分裂後で非分裂性の細胞内でのタンパク質産生に関して、ＤＮＡより有効である。ｍＲＮＡは翻訳のための鋳型であるだけでなくＴｏｌｌ様受容体のリガンドとしても作用し、またヌクレアーゼ感受性であり；そのため、水平伝染に関する懸念はあまりない。
さらに、ＲＮＡワクチンは、アジュバント活性及び抗原発現をエレガントに組み込み、それによってウイルス感染の関連性のある様相を模倣する。このことが、アジュバントの使用を必要とする不活性化ワクチンと比較してＲＮＡワクチンの効能を増大させ、取り扱いと産生とが簡単化する。ＲＮＡは、Ｔｏｌｌ様受容体３、７、及び８、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５、ＰＫＲ、並びに相乗的に作用し抗原特異性の適応Ｂ細胞応答及びＴ細胞応答の誘発を高める働きをし得る他の受容体を含む、ある範囲の特化された免疫性パターン認識受容体に対処可能である。重要なことには、トランスフェクト宿主細胞における抗原合成によって、ｍＲＮＡワクチンが細胞抗原のプロセシング及び提示経路に抗原を直接導入し、ＭＨＣ分子への接近を確立して、宿主ＭＨＣハプロタイプに関係なくＴ細胞応答を誘発する。これにより、Ｂ細胞を含めて、他の免疫応答と共に相乗的に作用し得るポリクローナルＴ細胞応答の誘発が可能になる。また、内因性の抗原産生が、免疫原性に積極的に影響し得る、忠実な翻訳後修飾（例えば、タンパク質プロセシング、グリコシレーション等）を確実にする。
さらに、ＲＮＡワクチンは、アジュバント活性及び抗原発現をエレガントに組み込み、それによってウイルス感染の関連性のある様相を模倣する。このことが、アジュバントの使用を必要とする不活性化ワクチンと比較してＲＮＡワクチンの効能を増大させ、取り扱いと産生とが簡単化する。ＲＮＡは、Ｔｏｌｌ様受容体３、７、及び８、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５、ＰＫＲ、並びに相乗的に作用し抗原特異性の適応Ｂ細胞応答及びＴ細胞応答の誘発を高める働きをし得る他の受容体を含む、ある範囲の特化された免疫性パターン認識受容体に対処可能である。重要なことには、トランスフェクト宿主細胞における抗原合成によって、ｍＲＮＡワクチンが細胞抗原のプロセシング及び提示経路に抗原を直接導入し、ＭＨＣ分子への接近を確立して、宿主ＭＨＣハプロタイプに関係なくＴ細胞応答を誘発する。これにより、Ｂ細胞を含めて、他の免疫応答と共に相乗的に作用し得るポリクローナルＴ細胞応答の誘発が可能になる。また、内因性の抗原産生が、免疫原性に積極的に影響し得る、忠実な翻訳後修飾（例えば、タンパク質プロセシング、グリコシレーション等）を確実にする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Shedlock & Weiner, J Leukocyte Biol. Vol 68, 2000
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0012】
一実施形態においては、本発明は、１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を提供する。
【0013】
別の実施形態においては、本発明は、１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは１－メチルプソイドウリジンを含むものである、組成物を提供するものであって、当該プソイドウリジン残基は、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、又はこれらの任意の組合せを含む。
【0014】
別の実施形態においては、本発明は、１又は複数のプソイドウリジン残基を含む修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードするものである、組成物を提供する。
【0015】
別の実施形態においては、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する方法であって、前記対象に、１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記修飾ｍＲＮＡはプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【0016】
別の実施形態においては、本発明は、対象における免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に、１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記修飾ｍＲＮＡはプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0017】
さらなる実施形態においては、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の発生を抑制、阻害、又は低減する方法であって、前記対象に、１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれがＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記修飾ｍＲＮＡはプソイドウリジン残基を含むものである、組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0018】
さらに別の実施形態においては、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する方法であって、前記対象に、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードする１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【0019】
またさらなる実施形態においては、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の発生を抑制、阻害、又は低減する方法であって、前記対象に、１から３の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードするものである、組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【0020】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明の詳細な説明の実施例及び図面から明らかになることとなる。しかしながら、当業者にとっては、この発明の詳細な説明から、発明の趣旨及び範囲内における種々の変更及び変形が明らかになることとなるため、発明の詳細な説明及び具体的な実施例は、発明の好ましい実施形態を示しつつ、説明のみとして与えられるものであることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0021】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示の特定の態様をさらに実証するために含まれて、その発明は、本明細書に示す特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれら図面のうちの１又は複数を参照することによってより良好に理解することができる。特許又は出願のファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を含む本特許又は本願の公報の写しは、申請して必要な手数料を納付すれば、特許庁により提供されることとなる。
【0022】
【0023】
図１Ａは、修飾ｍＲＮＡによるｇＣ２の発現を示すウエスタンブロットである。
【0024】
図１Ｂは、修飾ｍＲＮＡによるｇＤ２の発現を示すウエスタンブロットである。
【0025】
図１Ｃは、修飾ｍＲＮＡによるｇＥ２の発現を示すウエスタンブロットである。
【0026】
【0027】
図２Ｂは、ｇＤ２ ｍＲＮＡ；又は異なる皮内部位においてそれぞれ与えられる、ｇＣ２ ｍＲＮＡ、ｇＤ２ ｍＲＮＡ及びｇＥ２ ｍＲＮＡ（三価－Ｉ）；又は組合せで与えられる、ｇＣ２ ｍＲＮＡ、ｇＤ２ ｍＲＮＡ及びｇＥ２ ｍＲＮＡ（三価－Ｃ）、で免疫化したマウスにおける、抗原特異性ＥＬＩＳＡにより決定したｇＤ２ Ａｂ応答である。Ｉは第一の免疫化を示し；ＩＩは第二の免疫化を示す。
【0028】
図２Ｃは、ｇＤ２ ｍＲＮＡ；又は異なる皮内部位においてそれぞれ与えられる、ｇＣ２ ｍＲＮＡ、ｇＤ２ ｍＲＮＡ及びｇＥ２ ｍＲＮＡ（三価－Ｉ）；又は組合せで与えられる、ｇＣ２ ｍＲＮＡ、ｇＤ２ ｍＲＮＡ及びｇＥ２ ｍＲＮＡ（三価－Ｃ）、で免疫化したマウスにおける、抗原特異性ＥＬＩＳＡにより決定したｇＥ２ Ａｂ応答である。Ｉは第一の免疫化を示し；ＩＩは第二の免疫化を示す。
【0029】
【0030】
図３Ｂは、ｍＲＮＡワクチン接種されたマウスにおける抗原特異性ＩｇＧ２ａ応答である。ＩｇＧ２ａ応答に関して、第一及び第二の免疫化後に抗体を評価した。Ｉは第一の免疫化を示し；ＩＩは第二の免疫化を示す。
【0031】
【0032】
【0033】
【0034】
【0035】
図７Ｂは、２８日の間隔で２回ｍＲＮＡにより免疫化してＨＳＶ－２で膣内にチャレンジしたＢＡＬＢ／ｃマウスの、体重減少（－）又は増加（＋）及び神経学的徴候である。三価－Ｉは異なる皮内部位においてそれぞれ与えられる、ｇＣ２／ＬＮＰ、ｇＤ２／ＬＮＰ、及びｇＥ２／ＬＮＰで免疫化した動物を表す。三価－Ｃは、免疫化のために単一のＬＮＰに合わせたｇＣ２、ｇＤ２及びｇＥ２で免疫化した動物を表す。
【0036】
【0037】
【0038】
【0039】
【図11】図１１Ａでは、三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンが、マウスにおける強力な濾胞性ヘルパーＴ細胞応答を誘導する。ＢＡＬＢ／ｃメスマウスを、ナイーブ対照動物として免疫化しないままにし、又は多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、又は三価修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰで、２８日の間隔で２回皮内に免疫化した。多価Ｃ ｍＲＮＡ対照は、４アリコートに分割し４つの別個の部位において投与される１０μｇの多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。三価修飾ｍＲＮＡ群は、それぞれ２アリコートに分けてそれぞれ２つの部位において与えられる１０μｇのｇＣ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ及び１０μｇのｇＥ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。第二の免疫化後２週間で、群あたり５匹の動物から脾臓を採取し、フローサイトメトリーを実行して濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞応答を検出した（＊ｐ＜０．０５）。
【0040】
図１１Ｂでは、三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンが、マウスにおける強力な胚中心Ｂ細胞応答を誘導する。ＢＡＬＢ／ｃメスマウスを、ナイーブ対照動物として免疫化しないままにし、又は多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、又は三価修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰで、２８日の間隔で２回皮内に免疫化した。多価Ｃ ｍＲＮＡ対照は、４アリコートに分割し４つの別個の部位において投与される１０μｇの多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。三価修飾ｍＲＮＡ群は、それぞれ２アリコートに分けてそれぞれ２つの部位において与えられる１０μｇのｇＣ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ及び１０μｇのｇＥ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。第二の免疫化後２週間で、群あたり５匹の動物から脾臓を採取し、フローサイトメトリーを実行して胚中心Ｂ細胞応答を検出した（＊ｐ＜０．０５）。
【0041】
【図12】図１２ＡからＣは、生殖器粘膜ＩｇＧ抗体応答である。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１０μｇの多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、又はそれぞれ１０μｇのｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥの三価修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰで、２８日の間隔で２回皮内に免疫化した。三価ｍＲＮＡは、ＬＮＰに合わせて、４アリコートに分けて４つの部位において与えられる、１０μｇのｇＣ２ ｍＲＮＡ及び１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ及び１０μｇのｇＥ２ ｍＲＮＡとして、組み合わせて投与した。第二の免疫化後１ヶ月で、６０μｌの培地を膣腔内に導入して回収した。ＩｇＧの力価を、膣洗浄液の１：５０希釈で、ｇＣ２（図１２Ａ）、ｇＤ２（図１２Ｂ）、及びｇＥ２（図１２Ｃ）に対してＥＬＩＳＡにより決定した（多価Ｃ群でｎ＝１０マウス、ｇＤ２ ｍＲＮＡ群でｎ＝１０、及び三価ｍＲＮＡ群でｎ＝２５；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊ｐ＜０．０１）。
【0042】
【図13】図１３では、三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンが、ｇＣ２が補体成分Ｃ３ｂに結合するのをブロックする抗体を産生する。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、非免疫ＩｇＧソースとして免疫化しないままにし、又は多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ若しくは三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰで皮内に免疫化した。多価Ｃ ｍＲＮＡ対照は、４アリコートに分けて４つの別個の部位において投与される１０μｇの多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。ｇＤ２ ｍＲＮＡ群は、多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰについて説明したとおり投与される１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。三価修飾ｍＲＮＡ群は、ＬＮＰに合わせて、４アリコートに分けて４つの部位において与えられる１０μｇのｇＣ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、１０μｇのｇＤ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ、及び１０μｇのｇＥ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを受けた。各群は、１０匹のマウスであった。１０匹のマウスよりの血清を貯留し、ＩｇＧを精製した。このＩｇＧを、補体成分Ｃ３ｂのｇＣ２への結合をブロックするその能力に関して１２μｇ／２００μｌで評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【0043】
【図14-1】図１４Ａから１４Ｆでは、三価ｍＲＮＡワクチンは、当該ワクチンが筋肉内に投与されたときにマウスにおいて目立った保護を提供する。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、対照（１５／群）として多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰで、又はそれぞれ１０μｇのｇＣ２、ｇＤ２及びｇＥ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを含有する三価ｍＲＮＡで（２０／群）、筋肉内に免疫化した。図１４Ａは、マウス生存率のデータを表し、；図１４Ｂは体重減少のデータを表し；図１４Ｃは生殖器疾患のデータを表す。ＤＲＧを、９匹の多価Ｃ動物より、感染後７日目から１２日目の間の安楽死時に採取し、又は三価ｍＲＮＡ群において２８日目の実験終了時に採取した。図１４Ｄは、ＤＲＧのＨＳＶ－２ ＤＮＡデータを表す。図１４Ｅは、２日目の膣ウイルス培養物のデータを表し、図１４Ｆは、４日目の膣ウイルス培養物のデータを表す。多価Ｃ群と三価群との相違は有意であり、図１４Ａ～１４Ｆではｐ＜０．００１であった。
【図14-2】図１４Ａから１４Ｆでは、三価ｍＲＮＡワクチンは、当該ワクチンが筋肉内に投与されたときにマウスにおいて目立った保護を提供する。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、対照（１５／群）として多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰで、又はそれぞれ１０μｇのｇＣ２、ｇＤ２及びｇＥ２ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを含有する三価ｍＲＮＡで（２０／群）、筋肉内に免疫化した。図１４Ａは、マウス生存率のデータを表し、；図１４Ｂは体重減少のデータを表し；図１４Ｃは生殖器疾患のデータを表す。ＤＲＧを、９匹の多価Ｃ動物より、感染後７日目から１２日目の間の安楽死時に採取し、又は三価ｍＲＮＡ群において２８日目の実験終了時に採取した。図１４Ｄは、ＤＲＧのＨＳＶ－２ ＤＮＡデータを表す。図１４Ｅは、２日目の膣ウイルス培養物のデータを表し、図１４Ｆは、４日目の膣ウイルス培養物のデータを表す。多価Ｃ群と三価群との相違は有意であり、図１４Ａ～１４Ｆではｐ＜０．００１であった。
【0044】
【図15】図１５Ａから１５Ｃでは、三価ｍＲＮＡワクチンが、モルモット生殖器感染モデルにおいて高度に有効である。Ｈａｒｔｌｅｙ株メスモルモットを、免疫化せず感染させないままとし（ナイーブ群、ｎ＝１０）、２０μｇの多価Ｃ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ｎ＝１０）で又はそれぞれ２０μｇのｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ｎ＝１０）で、１ヶ月間隔で３回皮内に免疫化した。最終免疫化後１ヶ月に、多価Ｃ群及び三価ｍＲＮＡ群の動物を５×１０５ＰＦＵのＨＳＶ－２株ＭＳで膣内に感染させた（５０ＬＤ５０）。死亡、感染の急性期（１～１４日目）における生殖器病変、及び感染の再発期（１５～６０日目）における生殖器病変について、動物を観察した。図１５Ａは、生存率のデータを表し、；図１５Ｂは膣疾患（急性期）のデータを提供し；また図１５Ｃは膣疾患（再発期）のデータを提供する。
【発明を実施するための形態】
【0045】
組成物
一実施形態においては、本発明は、１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードするものである、組成物を提供する。
一実施形態においては、本発明は、１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードするものである、組成物を提供する。
【0046】
一実施形態においては、本発明は、１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、当該修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン若しくはプソイドウリジンファミリー残基を含むものである、組成物を提供する。
【0047】
一実施形態においては、ＨＳＶ糖タンパク質は、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）、糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）、糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）、糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）、糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）、又はこれらの組合せを含む。
【0048】
すなわち、一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＤ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＩ、若しくはその免疫原性断片をコードする１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。一実施形態においては、修飾ｍＲＮＡはプソイドウリジン修飾ｍＲＮＡを含む。
【0049】
一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＢ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＨ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＬ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＩ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。
【0050】
一実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶのｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶのｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0051】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶのｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶのｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0052】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶのｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶのｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0053】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶのｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、（ｂ）ＨＳＶのｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｃ）ＨＳＶのｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0054】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶのｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、（ｂ）ＨＳＶのｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、（ｃ）ＨＳＶのｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｄ）ＨＳＶのｇＢ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0055】
一実施形態においては、ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－２糖タンパク質である。別の実施形態においては、ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－１糖タンパク質である。一実施形態においては、ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－２糖タンパク質及びＨＳＶ－１糖タンパク質の両方を含む。別の実施形態においては、ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－２糖タンパク質及びＨＳＶ－１糖タンパク質の混合物を含む。
【0056】
一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＢ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＨ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＬ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－２のｇＩ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。
【0057】
一実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－２のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－２のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0058】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－２のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0059】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－２のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0060】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－２のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、（ｂ）ＨＳＶ－２のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｃ）ＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0061】
一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＢ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＨ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＬ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ－１のｇＩ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。
【0062】
一実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－１のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－１のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0063】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－１のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－１のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0064】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－１のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｂ）ＨＳＶ－１のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0065】
別の実施形態においては、本発明は、（ａ）ＨＳＶ－１のｇＤ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、（ｂ）ＨＳＶ－１のｇＣ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び（ｃ）ＨＳＶ－１のｇＥ又はその断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。
【0066】
一実施形態においては、本明細書に記載の組成物のいずれかは、本質的に１又は複数の修飾ｍＲＮＡからなるものであって、前記修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードする。別の実施形態においては、本明細書に記載の組成物のいずれかは、１又は複数の修飾ｍＲＮＡからなるものであって、前記修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードする。
【0067】
別の実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＤタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡ、ＨＳＶのｇＣタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡ、ＨＳＶのｇＥタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡ、及び１又は複数のさらなるＨＳＶ糖タンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡ、を含む組成物を提供する。一実施形態においては、前記さらなるＨＳＶ糖タンパク質は、ｇＢ若しくはその免疫原性断片、ｇＨ若しくはその免疫原性断片、ｇＬ若しくはその免疫原性断片、ｇＩ若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せを含む。一実施形態においては、前記さらなるＨＳＶ糖タンパク質は、糖タンパク質Ｍ（ｇＭ）、糖タンパク質Ｎ（ｇＮ）、糖タンパク質Ｋ（ｇＫ）、糖タンパク質Ｇ（ｇＧ）、糖タンパク質Ｊ（ｇＪ）、又はその免疫原性断片を含む。
【0068】
一実施形態においては、本発明の及び本発明の方法において使用する組成物は、ＨＳＶ－２糖タンパク質又は糖タンパク質断片とＨＳＶ－１糖タンパク質又は糖タンパク質断片との両方を含む。別の実施形態においては、本発明の及び本発明の方法において使用する組成物は、ＨＳＶ－２の糖タンパク質又は糖タンパク質断片とＨＳＶ－１の糖タンパク質又は糖タンパク質断片との混合物を含む。例えば、一実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－２のｇＣ、ＨＳＶ－１のｇＤ、及びＨＳＶ－２のｇＥ、またはその断片を含む。別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＣ、ＨＳＶ－２のｇＤ、及びＨＳＶ－２のｇＥ又はその断片を含む。別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－２のｇＣ、ＨＳＶ－２のｇＤ、及びＨＳＶ－１のｇＥ、又はその断片を含む。別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＣ、ＨＳＶ－１のｇＤ、及びＨＳＶ－２のｇＥ、又はその断片を含む。別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＣ、ＨＳＶ－２のｇＤ、及びＨＳＶ－１のｇＥ、又はその断片を含む。別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－２のｇＣ、ＨＳＶ－１のｇＤ、及びＨＳＶ－１のｇＥ、又はその断片を含む。
【0069】
別の実施形態においては、本発明の組成物は、本明細書に記載するように、１又は複数のさらなるＨＳＶ－１糖タンパク質若しくはＨＳＶ－２糖タンパク質又はＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２の糖タンパク質の両方を含む。例えば、一実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＣ、ＨＳＶ－１のｇＤ、及びＨＳＶ－２のｇＥを含む本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＩをさらに含んでもよい。別の実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＣ、ＨＳＶ－２のｇＤ、及びＨＳＶ－２のｇＥを含む本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＢをさらに含んでもよい。ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２の糖タンパク質のあり得る組合せのそれぞれが、本発明の個々の実施形態を表す。
【0070】
一実施形態において、「コードすること」は、関心のタンパク質をコードする遺伝子を含有するＲＮＡ分子を指す。別の実施形態においては、ＲＮＡ分子は、関心のタンパク質をコードするタンパク質コード配列を含む。別の実施形態においては、１又は複数の他のタンパク質もコードされる。別の実施形態においては、関心のタンパク質が、コードされる唯一のタンパク質である。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0071】
別の実施形態において、「免疫原性断片」は、免疫原性であり、かつ、対象に投与されたときに防御免疫応答を誘発するタンパク質の一部分を指す。
【0072】
一実施形態においては、「免疫原性」又は「免疫原性の」は、本明細書において、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体が動物に投与される場合に、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体がもつ動物における免疫応答を誘発する生得の能力を指す。ゆえに、一実施形態において「免疫原性を促進すること」は、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体が動物に投与される場合に、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体がもつ動物における免疫応答を誘発する能力を増大することを指す。タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体がもつ免疫応答を誘発する能力の増大は、一実施形態においては、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体に対する抗体数の増大、抗原又は有機体に対する抗体の多様性の増大、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体に特異なＴ細胞数の増大、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原又は有機体に対する細胞傷害性又はヘルパーＴ細胞応答の増大等によって測定可能である。
【0073】
一実施形態においては、免疫原性ポリペプチドはまた抗原性である。「抗原性」は、別の実施形態において、例えば免疫グロブリン（抗体）又はＴ細胞抗原受容体である、免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用することが可能なペプチドを指す。抗原ペプチドは、別の実施形態において、少なくとも約８個のアミノ酸（ＡＡ）のエピトープを含有する。本明細書で一実施形態においてはエピトープとも呼ばれるポリペプチドの抗原性部分は、抗体若しくはＴ細胞受容体認識のために免疫優勢であるその部分とすることが可能であり、又は、抗原性部分を免疫化のためにキャリアポリペプチドに接合することによって、分子に対する抗体を生成するために用いられる部分とすることが可能である。抗原性である分子は、それ自体が免疫原性、すなわちキャリアなしで免疫応答を誘発することが可能、である必要はない。
【0074】
一実施形態においては、この発明の意味の範囲内の「機能」は、タンパク質、ペプチド、核酸、その断片又は変異体がもつ生物学的活性又は機能を呈する生得の能力を指す。一実施形態においては、こうした生物学的機能は、例えば膜結合性受容体である、相互作用の相手に対するその結合特性であり、別の実施形態においては、その三量体形成特性である。この発明の機能断片及び機能変異体の場合では、これら生物学的機能は、例えばそれらの特異性又は選択性に応じて実際には変化してもよいが、基本的な生物学的機能は保持した状態である。
【0075】
一実施形態においては、「断片」の語は、本明細書においては、完全長のタンパク質若しくはポリペプチドよりも短いものである又は少ないアミノ酸を含む、タンパク質又はポリペプチドを指すために用いられる。別の実施形態においては、断片は、完全長の核酸よりも短いものである又は少ないヌクレオチドを含むタンパク質断片をコードする核酸を指す。別の実施形態においては、断片は、Ｎ末端断片である。別の実施形態においては、断片は、Ｃ末端断片である。一実施形態においては、断片は、タンパク質、ペプチド、又は核酸の配列内セクションである。別の実施形態においては、断片は、タンパク質、ペプチド、又は核酸の免疫原性の配列内セクションである。別の実施形態においては、断片は、タンパク質、ペプチド、又は核酸の範囲内の機能性の配列内セクションである。別の実施形態においては、断片はＮ末端の免疫原性断片である。一実施形態においては、断片はＣ末端の免疫原性断片である。別の実施形態においては、断片はＮ末端の機能断片である。別の実施形態においては、断片はＣ末端の機能断片である。別の実施形態においては、断片は、共に結合するタンパク質の片又は共に結合する複数のタンパク質の片を含有する。
【0076】
ゆえに、一実施形態においては、本発明に記載されるタンパク質の「免疫原性断片」は、免疫原性であり、一部の実施形態において及び別の実施形態においては、対象に投与された場合に防御免疫応答を誘発する、タンパク質の一部分を指す。
【0077】
別の態様においては、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供し、前記修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードする。
【0078】
一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶのｇＤ又はその免疫原性断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、ＨＳＶのｇＣ又はその免疫原性断片をコードする修飾ｍＲＮＡ、及びＨＳＶのｇＥ又はその免疫原性断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む組成物を提供する。
【0079】
一実施形態においては、ｇＤ－１をコードする修飾ｍＲＮＡの組成物は、ＨＳＶ－１感染に対して防御的である。また、ｇＣ－１／ｇＤ－１／ｇＥ－１をコードする修飾ｍＲＮＡの組み合わせ組成物は、ｇＣ－１を単独で、ｇＤ－１を単独で、又はｇＥ－１を単独でコードする修飾ｍＲＮＡを含有する組成物と比較して、優れた防御を与える。また、本明細書において提供するように、ｇＤ－２をコードする修飾ｍＲＮＡの組成物は、ＨＳＶ－２感染に対して防御的である（図７から１０）。また、ｇＣ－２／ｇＤ－２／ｇＥ－２をコードする修飾ｍＲＮＡの組み合わせ組成物は、ｇＣ－２を単独で、ｇＤ－２を単独で、又はｇＥ－２を単独でコードする修飾ｍＲＮＡを含有する組成物と比較して、優れた防御を与える。
【0080】
別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、当該組成物によって誘発される抗－ｇＤ抗体の効果が増大する。別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、ｇＤが細胞受容体に結合するのを阻害する抗体を誘発するのに必要とされる、ｇＤをコードする修飾ｍＲＮＡの用量が増える。別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、ｇＤをコードする修飾ｍＲＮＡが、ｇＣタンパク質又はｇＥタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡとは別に投与される場合に、ｇＤが細胞受容体に結合するのを阻害する抗体を誘発するのに必要とされる、ｇＤをコードする修飾ｍＲＮＡの用量が減る。
【0081】
別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、自然免疫応答の効果を高める。別の実施形態においては、自然免疫応答は抗体媒介性の免疫応答である。別の実施形態においては、自然免疫応答は非抗体媒介性の免疫応答である。別の実施形態においては、自然免疫応答はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞応答である。別の実施形態においては、自然免疫応答は、当技術分野で公知のその他の自然免疫応答である。
【0082】
別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、上記の糖タンパク質のうちの１つに対する、組成物によって誘発される抗体の効果が増大する。別の実施形態においては、本発明の組成物にｇＣをコードする修飾ｍＲＮＡ及び／又はｇＥをコードする修飾ｍＲＮＡを含むことで、糖タンパク質のうちの１つが他の糖タンパク質のうちの１つとは別に投与される場合に、糖タンパク質がその細胞受容体に結合するのを阻害する抗体を誘発するのに必要とされる、上記の糖タンパク質のうちの１つの用量が減る。
糖タンパク質Ｄ
糖タンパク質Ｄ
【0083】
一実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＤタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－１のｇＤタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0084】
一実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＤの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、以下を含む：
【化1】
【化2】
【化3】
【0085】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＤ１断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0086】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＤの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを欠いている。
【0087】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＤの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－１のＰａｔｔｏｎ株よりのｇＤのアミノ酸２６～３３１を含む：ＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹ（配列番号２）
【0088】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長のＨＳＶ－１のｇＤは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＧＧＡＡＡＲＬＧＡＶＩＬＦＶＶＩＶＧＬＨＧＶＲＧＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＬＡＤＰＮＲＦＲＲＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＡＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡＴＰＮＮＭＧＬＩＡＧＡＶＧＧＳＬＬＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＲＲＲＴＱＫＡＰＫＲＩＲＬＰＨＩＲＥＤＤＱＰＳＳＨＱＰＬＦＹ（配列番号３）
【0089】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＤは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれか１つに明記するアミノ酸配列を含む：ＡＡＬ９０８８４．１（ＫＨＳ２株）、ＡＡＬ９０８８３．１（ＫＨＳ１株）、ＡＡＫ９３９５０．１（Ｆ株）、ＡＡＢ５９７５４．１（Ｆ株）、ＡＡＡ１９６３１．１（同定されていない変異体株）、ＡＡＡ１９６３０．１（同定されていない変異体株）、又はＡＡＡ１９６２９．１（同定されていない株）。
【0090】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＤは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれかに明記するアミノ酸配列を含む：Ａ１Ｚ０Ｑ５．２、ＡＡＡ４５７８０．１、ＡＡＡ４５７８５．１、ＡＡＡ４５７８６．１、ＡＡＡ９６６８２．１、ＡＡＫ１９５９７．１、ＡＡＮ７４６４２．１、ＡＢＩ６３５２４．１、ＡＢＭ５２９７８．１、ＡＢＭ５２９７９．１、ＡＢＭ５２９８０．１、ＡＢＭ５２９８１．１、ＡＢＭ６６８４７．１、ＡＢＭ６６８４８．１、ＡＣＭ６２２９５．１、ＡＤＤ６００５３．１、ＡＤＤ６０１３０．１、ＡＤＭ２２３８９．１、ＡＤＭ２２４６６．１、ＡＤＭ２２５４２．１、ＡＤＭ２２６１９．１、ＡＤＭ２２６９６．１、ＡＤＭ２２７７３．１、ＡＤＭ２２８４９．１、ＡＤＭ２２９２６．１、ＡＤＭ２３００３．１、ＡＤＭ２３０７９．１、ＡＤＭ２３１５５．１、ＡＤＭ２３２３１．１、ＡＤＭ２３３０９．１、ＡＤＭ２３３８３．１、ＡＤＭ２３４５７．１、ＡＤＭ２３５３１．１、ＡＤＭ２３６０５．１、ＡＤＭ２３６８０．１、ＡＤＭ２３７５５．１、ＡＤＭ２３８３１．１、ＡＥＱ７７０９７．１、ＡＥＲ３７６４７．１、ＡＥＲ３７７１５．１、ＡＥＲ３７７８６．１、ＡＥＲ３７８５７．１、ＡＥＲ３７９２９．１、ＡＥＲ３８０００．１、ＡＥＲ３８０７０．１、ＡＦＥ６２８９４．１、ＡＦＨ４１１８０．１、ＡＦＩ２３６５７．１、ＡＦＫ５０４１５．１、ＡＦＰ８６４３０．１、ＡＧＺ０１９２８．１、ＡＩＲ９５８５８．１、ＡＪＥ６０００９．１、ＡＪＥ６００８０．１、ＡＪＥ６０１５１．１、ＡＪＥ６０２２２．１、ＡＪＥ６０２９３．１、ＡＪＥ６０４３９．１、ＡＫＥ４８６４５．１、ＡＫＧ５９２４６．１、ＡＫＧ５９３１８．１、ＡＫＧ５９３９１．１、ＡＫＧ５９４６２．１、ＡＫＧ５９５３６．１、ＡＫＧ５９６０９．１、ＡＫＧ５９６８２．１、ＡＫＧ５９７５５．１、ＡＫＧ５９８２６．１、ＡＫＧ５９８９８．１、ＡＫＧ５９９７２．１、ＡＫＧ６００４６．１、ＡＫＧ６０１１８．１、ＡＫＧ６０１８９．１、ＡＫＧ６０２６１．１、ＡＫＧ６０３３４．１、ＡＫＧ６０４０４．１、ＡＫＧ６０４７４．１、ＡＫＧ６０５４６．１、ＡＫＧ６０６２０．１、ＡＫＧ６０６９２．１、ＡＫＧ６０７６３．１、ＡＫＧ６０８３５．１、ＡＫＧ６０９０６．１、ＡＫＧ６０９７８．１、ＡＫＧ６１０５０．１、ＡＫＧ６１１２３．１、ＡＫＧ６１１９４．１、ＡＫＧ６１２６７．１、ＡＫＧ６１３３９．１、ＡＫＧ６１４１１．１、ＡＫＧ６１４８４．１、ＡＫＧ６１５５６．１、ＡＫＧ６１６２９．１、ＡＫＧ６１７０３．１、ＡＫＧ６１７７４．１、ＡＫＧ６１８４７．１、ＡＫＧ６１９２０．１、ＡＫＧ６１９９３．１、ＡＫＨ８０４６３．１、ＡＫＨ８０５３６．１、ＡＬＭ２２６３５．１、ＡＬＭ２２７０９．１、ＡＬＭ２２７８３．１、ＡＬＭ２２８５７．１、ＡＬＯ１８６６２．１、ＡＬＯ１８７３８．１、ＡＭＢ６５６６２．１、ＡＭＢ６５７３５．１、ＡＭＢ６５８０９．１、ＡＭＢ６５８８５．１、ＡＭＢ６５９５６．１、ＡＭＮ０９８３２．１、ＡＮＮ８３９６４．１、ＡＮＮ８４０４１．１、ＡＮＮ８４１１７．１、ＡＮＮ８４１９４．１、ＡＮＮ８４２７１．１、ＡＮＮ８４３４８．１、ＡＮＮ８４４２４．１、ＡＮＮ８４５００．１、ＡＮＮ８４５７７．１、ＡＮＮ８４６５３．１、ＡＮＮ８４７３０．１、ＡＮＮ８４８０６．１、ＡＮＮ８４８８３．１、ＡＮＮ８４９５９．１、ＡＮＮ８５０３６．１、ＡＮＮ８５１１２．１、ＡＮＮ８５１８７．１、ＡＮＮ８５２６４．１、ＡＮＮ８５３４１．１、ＡＮＮ８５４１６．１、ＡＮＮ８５４９４．１、ＡＮＮ８５５７１．１、ＡＮＮ８５６４８．１、ＡＮＮ８５７２４．１、ＡＮＮ８５８０１．１、ＡＯＹ３４０９３．１、ＡＯＹ３４１４１．１、ＡＯＹ３４２４３．１、ＡＯＹ３４２７１．１、ＡＯＹ３４３３７．１、ＡＯＹ３６６８５．１、ＡＲＢ０８９５７．１、ＡＲ０３７９６１．１、ＡＲＯ３７９６２．１、ＡＲＯ３７９６３．１、ＡＲＯ３７９６４．１、ＡＲＯ３７９６５．１、ＡＲＯ３７９６６．１、ＡＲＯ３７９６７．１、ＡＲＯ３７９６８．１、ＡＲＯ３７９６９．１、ＡＲＯ３７９７０．１、ＡＲＯ３７９７１．１、ＡＲＯ３７９７２．１、ＡＲＯ３７９７３．１、ＡＲＯ３７９７４．１、ＡＲＯ３７９７５．１、ＡＲＯ３７９７６．１、ＡＲＯ３７９７７．１、ＡＲＯ３７９７８．１、ＡＲＯ３７９７９．１、ＡＲＯ３７９８０．１、ＡＲＯ３７９８１．１、ＡＲＯ３７９８２．１、ＡＲＯ３７９８３．１、ＡＲＯ３７９８４．１、ＡＲＯ３７９８５．１、ＡＲＯ３７９８６．１、ＡＲＯ３７９８７．１、ＡＲＯ３７９８８．１、ＡＲＯ３７９８９．１、ＡＲＯ３７９９０．１、ＡＲＯ３７９９１．１、ＡＲＯ３７９９２．１、ＡＲＯ３７９９３．１、ＡＲＯ３７９９４．１、ＡＲＯ３７９９５．１、ＡＲＯ３７９９６．１、ＡＲＯ３７９９７．１、ＡＲＯ３７９９８．１、ＡＲＯ３７９９９．１、ＡＳＭ４７６６４．１、ＡＳＭ４７７４１．１、ＡＳＭ４７８１８．１、ＡＳＭ４７８９３．１、ＢＡＭ７３４１９．１、ＣＡＡ２６０６０．１、ＣＡＡ３２２８３．１、ＣＡＡ３２２８４．１、ＣＡＡ３２２８９．１、ＣＡＡ３８２４５．１、ＣＡＴ０５４３１．１、Ｐ０６４７６．１、Ｐ３６３１８．１、Ｐ５７０８３．１、Ｐ６８３３１．１、Ｑ０５０５９．１、Ｑ６９０９１．１、ＳＢＯ０７７９２．１、ＳＢＯ０７８１９．１、ＳＢＯ０７８５５．１、ＳＢＯ０７８６９．１、ＳＢＯ０７８８７．１、ＳＢＯ０７９０８．１、ＳＢＳ６９５５３．１、ＳＢＳ６９５６１．１、ＳＢＳ６９５７９．１、ＳＢＳ６９６２５．１、ＳＢＳ６９６８８．１、ＳＢＳ６９６９４．１、ＳＢＳ６９７１７．１、ＳＢＳ６９７２７．１、ＳＢＳ６９８１１．１、ＳＢＴ６９３９５．１、ＳＣＬ７６９０２．１、ＶＧＢＥＤＺ、又はＹＰ＿００９１３７１４１．１。
【0091】
別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＤタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＤタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0092】
一実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＤの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は以下を含む：
【化4】
【化5】
【0093】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＤ２断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0094】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＤの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを欠いている。
【0095】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＤの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－２
３３３株よりのｇＤのアミノ酸２６～３３１を含む：ＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨ（配列番号５）。
３３３株よりのｇＤのアミノ酸２６～３３１を含む：ＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨ（配列番号５）。
【0096】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長のＨＳＶ－２のｇＤは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＧＲＬＴＳＧＶＧＴＡＡＬＬＶＶＡＶＧＬＲＶＶＣＡＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨＡＰＡＡＰＳＮＰＧＬＩＩＧＡＬＡＧＳＴＬＡＶＬＶＩＧＧＩＡＦＷＶＲＲＲＡＱＭＡＰＫＲＬＲＬＰＨＩＲＤＤＤＡＰＰＳＨＱＰＬＦＹ（配列番号６）。
【0097】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＤは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号に明記するアミノ酸配列を含む：１００３２０４Ａ、ＡＡＡ４５８４１．１、ＡＡＡ４５８４２．１、ＡＡＢ６０５５２．１、ＡＡＢ６０５５３．１、ＡＡＢ６０５５４．１、ＡＡＢ６０５５５．１、ＡＡＢ７２１０２．１、ＡＡＳ０１７３０．１、ＡＡＷ２３１３０．１、ＡＡＷ２３１３１．１、ＡＡＷ２３１３２．１、ＡＡＷ２３１３３．１、ＡＡＷ２３１３４．１、ＡＢＳ８４８９９．１、ＡＢＵ４５４３３．１、ＡＢＵ４５４３４．１、ＡＢＵ４５４３５．１、ＡＢＵ４５４６１．１、ＡＢＵ４５４６２．１、ＡＣＡ２８８３１．１、ＡＥＶ９１４０５．１、ＡＦＭ９３８７６．１、ＡＦＳ１８１９８．１、ＡＦＳ１８１９９．１、ＡＦＳ１８２００．１、ＡＦＳ１８２０１．１、ＡＦＳ１８２０２．１、ＡＦＳ１８２０３．１、ＡＦＳ１８２０４．１、ＡＦＳ１８２０５．１、ＡＦＳ１８２０６．１、ＡＦＳ１８２０７．１、ＡＦＳ１８２０８．１、ＡＦＳ１８２０９．１、ＡＦＳ１８２１０．１、ＡＦＳ１８２１１．１、ＡＦＳ１８２１２．１、ＡＦＳ１８２１３．１、ＡＦＳ１８２１４．１、ＡＦＳ１８２１５．１、ＡＦＳ１８２１６．１、ＡＦＳ１８２１７．１、ＡＦＳ１８２１８．１、ＡＦＳ１８２１９．１、ＡＦＳ１８２２０．１、ＡＦＳ１８２２１．１、ＡＨＧ５４７３０．１、ＡＩＬ２７７２０．１、ＡＩＬ２７７２１．１、ＡＩＬ２７７２２．１、ＡＩＬ２７７２３．１、ＡＩＬ２７７２４．１、ＡＩＬ２７７２５．１、ＡＩＬ２７７２６．１、ＡＩＬ２７７２７．１、ＡＩＬ２７７２８．１、ＡＩＬ２７７２９．１、ＡＩＬ２７７３０．１、ＡＩＬ２７７３１．１、ＡＩＬ２８０６９．１、ＡＩＬ２８０７０．１、ＡＫＣ４２８２８．１、ＡＫＣ５９３０５．１、ＡＫＣ５９３７６．１、ＡＫＣ５９４４７．１、ＡＫＣ５９５１８．１、ＡＫＣ５９５８９．１、ＡＭＢ６６１０２．１、ＡＭＢ６６１７１．１、ＡＭＢ６６２４４．１、ＡＭＢ６６３２１．１、ＡＭＢ６６３９４．１、ＡＭＢ６６４６３．１、ＡＱＺ５５７５４．１、ＡＱＺ５５８２５．１、ＡＱＺ５５８９６．１、ＡＱＺ５５９６７．１、ＡＱＺ５６０３８．１、ＡＱＺ５６１０９．１、ＡＱＺ５６１８０．１、ＡＱＺ５６２５１．１、ＡＱＺ５６３２２．１、ＡＱＺ５６３９３．１、ＡＱＺ５６４６４．１、ＡＱＺ５６５３５．１、ＡＱＺ５６６０６．１、ＡＱＺ５６６７７．１、ＡＱＺ５６７４８．１、ＡＱＺ５６８１９．１、ＡＱＺ５６８９０．１、ＡＱＺ５６９６１．１、ＡＱＺ５７０３２．１、ＡＱＺ５７１０３．１、ＡＱＺ５７１７４．１、ＡＱＺ５７２４５．１、ＡＱＺ５７３１６．１、ＡＱＺ５７３８７．１、ＡＱＺ５７４５８．１、ＡＱＺ５７５２９．１、ＡＱＺ５７６００．１、ＡＱＺ５７６７１．１、ＡＱＺ５７７４２．１、ＡＱＺ５７８１３．１、ＡＱＺ５７８８４．１、ＡＱＺ５７９５５．１、ＡＱＺ５８０２６．１、ＡＱＺ５８０９７．１、ＡＱＺ５８１６８．１、ＡＱＺ５８２３９．１、ＡＱＺ５８３１０．１、ＡＱＺ５８３８１．１、ＡＱＺ５８４５２．１、ＡＱＺ５８５２３．１、ＡＱＺ５８５９４．１、ＡＱＺ５８６６５．１、ＡＱＺ５８７３６．１、ＡＱＺ５８８０７．１、ＡＱＺ５８８７８．１、ＡＱＺ５８９４９．１、ＡＱＺ５９０２０．１、ＡＱＺ５９０９１．１、ＡＱＺ５９１６２．１、ＡＲＯ３８０００．１、ＡＲＯ３８００１．１、ＡＲＯ３８００２．１、ＡＲＯ３８００３．１、ＡＲＯ３８００４．１、ＡＲＯ３８００５．１、ＡＲＯ３８００６．１、ＡＲＯ３８００７．１、ＡＲＯ３８００８．１、ＡＲＯ３８００９．１、ＡＲＯ３８０１０．１、ＡＲＯ３８０１１．１、ＡＲＯ３８０１２．１、ＡＲＯ３８０１３．１、ＡＲＯ３８０１４．１、ＡＲＯ３８０１５．１、ＡＲＯ３８０１６．１、ＡＲＯ３８０１７．１、ＡＲＯ３８０１８．１、ＡＲＯ３８０１９．１、ＡＲ０３８０２０．１、ＡＲＯ３８０２１．１、ＡＲＯ３８０２２．１、ＡＲＯ３８０２３．１、ＡＲＯ３８０２４．１、ＡＲＯ３８０２５．１、ＡＲＯ３８０２６．１、ＡＲＯ３８０２７．１、ＡＲＯ３８０２８．１、ＡＲＯ３８０２９．１、ＡＲＯ３８０３０．１、ＡＲＯ３８０３１．１、ＡＲＯ３８０３２．１、ＡＲＯ３８０３３．１、ＡＲＯ３８０３４．１、ＡＲＯ３８０３５．１、ＡＲＯ３８０３６．１、ＡＲＯ３８０３７．１、ＡＲＯ３８０３８．１、ＡＲＯ３８０３９．１、ＡＲＯ３８０４０．１、ＡＲＯ３８０４１．１、ＡＲＯ３８０４２．１、ＡＲＯ３８０４３．１、ＡＲＯ３８０４４．１、ＣＡＡ２６０２５．１、ＣＡＢ０６７１３．１、ＣＡＣ３３５７３．１、ＣＡＴ０５４３２．１、Ｐ０３１７２．２、Ｑ６９４６７．１、又はＹＰ＿００９１３７２１８．１。
【0098】
別の実施形態においては、ｇＤタンパク質又は断片はＹ６３を含む。別の実施形態においては、ｇＤタンパク質又は断片はＲ１５９を含む。別の実施形態においては、ｇＤタンパク質又は断片はＤ２４０を含む。別の実施形態においては、ｇＤタンパク質又は断片はＰ２４６を含む。別の実施形態においては、ｇＤタンパク質又は断片はＹ６３、Ｒ１５９、Ｄ２４０、及びＰ２４６から選択される残基を含む。別の実施形態においては、これら残基のうちの１つを含むことで、ネクチン－１への結合を阻害する抗体を誘発する。
【0099】
ｇＤアミノ酸残基に関して本明細書において用いる名称は、シグナル配列の残基を含む。ゆえに、成熟タンパク質の残基のものは「２６」と称する。
【0100】
ｇＤ－１及びｇＤ－２のタンパク質又はその断片をコードする各修飾ｍＲＮＡが、本発明の個々の実施形態を表す。
【0101】
別の実施形態においては、本明細書に開示される修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶのｇＤ、ｇＣ、及びｇＥタンパク質並びにその断片は、米国特許公開公報第２０１３－００２８９２５－Ａ１号に記載されており、これはその全体が参照により本明細書で援用される。
【0102】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＤタンパク質の断片は、免疫原性断片である。別の実施形態においては、ｇＤ免疫防御抗原はタンパク質全体である必要はない。別の実施形態において、防御免疫応答は概して、抗体応答を伴う。別の実施形態においては、ｇＤの変異体、配列保存変異体、及び機能保存変異体が、本発明の方法及び組成物において有用であるが、ただしこうした変異体の全ては、必要な免疫防御効果を保持する。別の実施形態においては、免疫原性断片は、ＨＳＶの任意の株よりの免疫防御ｇＤ抗原を含むことが可能である。別の実施形態においては、免疫原性断片は、感染個体で見られるような、ＨＳＶの配列変異体を含むことが可能である。
糖タンパク質Ｃ
糖タンパク質Ｃ
【0103】
別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＣタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－１のｇＣタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0104】
一実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＣの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、以下を含む：
【化6】
【化7】
【化8】
【0105】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＣ１断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0106】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＣの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを含まない。
【0107】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＣの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－１
ＫＯＳ株よりのｇＣのアミノ酸２７～４５７を含む：ＥＴＡＳＴＧＰＴＩＴＡＧＡＶＴＮＡＳＥＡＰＴＳＧＳＰＧＳＡＡＳＰＥＶＴＰＴＳＴＰＮＰＮＮＶＴＱＮＫＴＴＰＴＥＰＡＳＰＰＴＴＰＫＰＴＳＴＰＫＳＰＰＴＳＴＰＤＰＫＰＫＮＮＴＴＰＡＫＳＧＲＰＴＫＰＰＧＰＶＷＣＤＲＲＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＲＮＳＴＲＭＥＦＲＬＱＩＷＲＹＳＭＧＰＳＰＰＩＡＰＡＰＤＬＥＥＶＬＴＮＩＴＡＰＰＧＧＬＬＶＹＤＳＡＰＮＬＴＤＰＨＶＬＷＡＥＧＡＧＰＧＡＤＰＰＬＹＳＶＴＧＰＬＰＴＱＲＬＩＩＧＥＶＴＰＡＴＱＧＭＹＹＬＡＷＧＲＭＤＳＰＨＥＹＧＴＷＶＲＶＲＭＦＲＰＰＳＬＴＬＱＰＨＡＶＭＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＡＹＹＰＲＮＰＶＥＦＤＷＦＥＤＤＲＱＶＦＮＰＧＱＩＤＴＱＴＨＥＨＰＤＧＦＴＴＶＳＴＶＴＳＥＡＶＧＧＱＶＰＰＲＴＦＴＣＱＭＴＷＨＲＤＳＶＴＦＳＲＲＮＡＴＧＬＡＬＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＧＶＲＨＶＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＰＳＰＡＡＫＳＡＶＴＡＱＥＳＣＤＨＰＧＬＡＴＶＲＳＴＬＰＩＳＹＤＹＳＥＹＩＣＲＬＴＧＹＰＡＧＩＰＶＬＥＨＨ（配列番号８）。
ＫＯＳ株よりのｇＣのアミノ酸２７～４５７を含む：ＥＴＡＳＴＧＰＴＩＴＡＧＡＶＴＮＡＳＥＡＰＴＳＧＳＰＧＳＡＡＳＰＥＶＴＰＴＳＴＰＮＰＮＮＶＴＱＮＫＴＴＰＴＥＰＡＳＰＰＴＴＰＫＰＴＳＴＰＫＳＰＰＴＳＴＰＤＰＫＰＫＮＮＴＴＰＡＫＳＧＲＰＴＫＰＰＧＰＶＷＣＤＲＲＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＲＮＳＴＲＭＥＦＲＬＱＩＷＲＹＳＭＧＰＳＰＰＩＡＰＡＰＤＬＥＥＶＬＴＮＩＴＡＰＰＧＧＬＬＶＹＤＳＡＰＮＬＴＤＰＨＶＬＷＡＥＧＡＧＰＧＡＤＰＰＬＹＳＶＴＧＰＬＰＴＱＲＬＩＩＧＥＶＴＰＡＴＱＧＭＹＹＬＡＷＧＲＭＤＳＰＨＥＹＧＴＷＶＲＶＲＭＦＲＰＰＳＬＴＬＱＰＨＡＶＭＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＡＹＹＰＲＮＰＶＥＦＤＷＦＥＤＤＲＱＶＦＮＰＧＱＩＤＴＱＴＨＥＨＰＤＧＦＴＴＶＳＴＶＴＳＥＡＶＧＧＱＶＰＰＲＴＦＴＣＱＭＴＷＨＲＤＳＶＴＦＳＲＲＮＡＴＧＬＡＬＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＧＶＲＨＶＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＰＳＰＡＡＫＳＡＶＴＡＱＥＳＣＤＨＰＧＬＡＴＶＲＳＴＬＰＩＳＹＤＹＳＥＹＩＣＲＬＴＧＹＰＡＧＩＰＶＬＥＨＨ（配列番号８）。
【0108】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＣの断片は、ＨＳＶ－１株よりのｇＣのアミノ酸２７～４５７を含む。
【0109】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長のＨＳＶ－１のｇＣは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＡＰＧＲＶＧＬＡＶＶＬＷＧＬＬＷＬＧＡＧＶＡＧＧＳＥＴＡＳＴＧＰＴＩＴＡＧＡＶＴＮＡＳＥＡＰＴＳＧＳＰＧＳＡＡＳＰＥＶＴＰＴＳＴＰＮＰＮＮＶＴＱＮＫＴＴＰＴＥＰＡＳＰＰＴＴＰＫＰＴＳＴＰＫＳＰＰＴＳＴＰＤＰＫＰＫＮＮＴＴＰＡＫＳＧＲＰＴＫＰＰＧＰＶＷＣＤＲＲＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＲＮＳＴＲＭＥＦＲＬＱＩＷＲＹＳＭＧＰＳＰＰＩＡＰＡＰＤＬＥＥＶＬＴＮＩＴＡＰＰＧＧＬＬＶＹＤＳＡＰＮＬＴＤＰＨＶＬＷＡＥＧＡＧＰＧＡＤＰＰＬＹＳＶＴＧＰＬＰＴＱＲＬＩＩＧＥＶＴＰＡＴＱＧＭＹＹＬＡＷＧＲＭＤＳＰＨＥＹＧＴＷＶＲＶＲＭＦＲＰＰＳＬＴＬＱＰＨＡＶＭＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＡＹＹＰＲＮＰＶＥＦＤＷＦＥＤＤＲＱＶＦＮＰＧＱＩＤＴＱＴＨＥＨＰＤＧＦＴＴＶＳＴＶＴＳＥＡＶＧＧＱＶＰＰＲＴＦＴＣＱＭＴＷＨＲＤＳＶＴＦＳＲＲＮＡＴＧＬＡＬＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＧＶＲＨＶＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＰＳＰＡＡＫＳＡＶＴＡＱＥＳＣＤＨＰＧＬＡＴＶＲＳＴＬＰＩＳＹＤＹＳＥＹＩＣＲＬＴＧＹＰＡＧＩＰＶＬＥＨＨＧＳＨＱＰＰＰＲＤＰＴＥＲＱＶＩＥＡＩＥＷＶＧＩＧＩＧＶＬＡＡＧＶＬＶＶＴＡＩＶＹＶＶＲＴＳＱＳＲＱＲＨＲＲ（配列番号９）。
【0110】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＣは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれかに明記するアミノ酸配列を含む：ＡＡＡ４５７７９．１、ＡＡＡ９６６８０．１、ＡＢＩ６３５０５．１、ＡＢＭ５２９７３．１、ＡＢＭ５２９７６．１、ＡＢＭ５２９７７．１、ＡＣＭ６２２６７．１、ＡＤＤ６００４２．１、ＡＤＤ６０１１９．１、ＡＤＭ２２３６７．１、ＡＤＭ２２４４４．１、ＡＤＭ２２５２０．１、ＡＤＭ２２５９７．１、ＡＤＭ２２６７４．１、ＡＤＭ２２７５１．１、ＡＤＭ２２８２７．１、ＡＤＭ２２９０４．１、ＡＤＭ２２９８１．１、ＡＤＭ２３０５７．１、ＡＤＭ２３１３３．１、ＡＤＭ２３２１０．１、ＡＤＭ２３２８７．１、ＡＤＭ２３３６１．１、ＡＤＭ２３４３５．１、ＡＤＭ２３５０９．１、ＡＤＭ２３５８３．１、ＡＤＭ２３６５８．１、ＡＤＭ２３７３３．１、ＡＤＭ２３８０９．１、ＡＥＱ７７０７５．１、ＡＥＱ７７０９９．１、ＡＥＲ３７６２８．１、ＡＥＲ３７６９７．１、ＡＥＲ３７７６７．１、ＡＥＲ３７８３８．１、ＡＥＲ３７９１０．１、ＡＥＲ３７９８１．１、ＡＥＲ３８０５１．２、ＡＦＡ３６１７９．１、ＡＦＡ３６１８０．１、ＡＦＡ３６１８１．１、ＡＦＡ３６１８２．１、ＡＦＡ３６１８３．１、ＡＦＡ３６１８４．１、ＡＦＡ３６１８５．１、ＡＦＡ３６１８６．１、ＡＦＡ３６１８７．１、ＡＦＡ３６１８８．１、ＡＦＡ３６１８９．１、ＡＦＡ３６１９０．１、ＡＦＡ３６１９１．１、ＡＦＡ３６１９２．１、ＡＦＡ３６１９３．１、ＡＦＡ３６１９４．１、ＡＦＡ３６１９５．１、ＡＦＡ３６１９６．１、ＡＦＡ３６１９７．１、ＡＦＡ３６１９８．１、ＡＦＡ３６１９９．１、ＡＦＡ３６２００．１、ＡＦＡ３６２０１．１、ＡＦＡ３６２０２．１、ＡＦＡ３６２０３．１、ＡＦＥ６２８７２．１、ＡＦＨ７８１０４．１、ＡＦＩ２３６３５．１、ＡＦＫ５０３９１．１、ＡＦＰ８６４０８．１、ＡＧＺ０１９０６．１、ＡＩＲ９５８４０．１、ＡＪＥ５９９８９．１、ＡＪＥ６００６０．１、ＡＪＥ６０１３１．１、ＡＪＥ６０２０２．１、ＡＫＥ４８６２３．１、ＡＫＥ９８４１５．１、ＡＫＥ９８４１６．１、ＡＫＥ９８４１７．１、ＡＫＥ９８４１８．１、ＡＫＥ９８４１９．１、ＡＫＥ９８４２０．１、ＡＫＥ９８４２１．１、ＡＫＥ９８４２２．１、ＡＫＥ９８４２３．１、ＡＫＥ９８４２４．１、ＡＫＥ９８４２５．１、ＡＫＥ９８４２６．１、ＡＫＥ９８４２７．１、ＡＫＥ９８４２８．１、ＡＫＥ９８４２９．１、ＡＫＥ９８４３０．１、ＡＫＥ９８４３１．１、ＡＫＥ９８４３２．１、ＡＫＥ９８４３３．１、ＡＫＥ９８４３４．１、ＡＫＥ９８４３５．１、ＡＫＧ５９２２７．１、ＡＫＧ５９２９９．１、ＡＫＧ５９３７２．１、ＡＫＧ５９４４４．１、ＡＫＧ５９５１６．１、ＡＫＧ５９５９１．１、ＡＫＧ５９６６３．１、ＡＫＧ５９７３６．１、ＡＫＧ５９８０７．１、ＡＫＧ５９８７９．１、ＡＫＧ５９９５３．１、ＡＫＧ６００２７．１、ＡＫＧ６００９９．１、ＡＫＧ６０１７０．１、ＡＫＧ６０２４３．１、ＡＫＧ６０３１６．１、ＡＫＧ６０３８６．１、ＡＫＧ６０４５６．１、ＡＫＧ６０５２８．１、ＡＫＧ６０６０１．１、ＡＫＧ６０６７４．１、ＡＫＧ６０７４５．１、ＡＫＧ６０８１７．１、ＡＫＧ６０８８７．１、ＡＫＧ６０９５９．１、ＡＫＧ６１０３２．１、ＡＫＧ６１１０４．１、ＡＫＧ６１１７５．１、ＡＫＧ６１２４８．１、ＡＫＧ６１３２１．１、ＡＫＧ６１３９２．１、ＡＫＧ６１４６４．１、ＡＫＧ６１５３７．１、ＡＫＧ６１６１１．１、ＡＫＧ６１６８４．１、ＡＫＧ６１７５６．１、ＡＫＧ６１８２８．１、ＡＫＧ６１９０２．１、ＡＫＧ６１９７４．１、ＡＫＨ８０４４４．１、ＡＫＨ８０５１７．１、ＡＫＭ７６３６８．１、ＡＬＭ２２６１３．１、ＡＬＭ２２６８７．１、ＡＬＭ２２７６１．１、ＡＬＭ２２８３５．１、ＡＬＯ１８６４１．１、ＡＬＯ１８７１７．１、ＡＭＢ６５６４２．１、ＡＭＢ６５７１５．１、ＡＭＢ６５８６２．１、ＡＭＮ０９８１３．１、ＡＮＮ８３９４２．１、ＡＮＮ８４０１９．１、ＡＮＮ８４０９５．１、ＡＮＮ８４１７２．１、ＡＮＮ８４２４９．１、ＡＮＮ８４３２６．１、ＡＮＮ８４４０３．１、ＡＮＮ８４４７８．１、ＡＮＮ８４５５５．１、ＡＮＮ８４６３２．１、ＡＮＮ８４７０８．１、ＡＮＮ８４７８５．１、ＡＮＮ８４８６１．１、ＡＮＮ８４９３８．１、ＡＮＮ８５０１４．１、ＡＮＮ８５０９１．１、ＡＮＮ８５１６７．１、ＡＮＮ８５２４２．１、ＡＮＮ８５３１９．１、ＡＮＮ８５３９６．１、ＡＮＮ８５４７２．１、ＡＮＮ８５５４９．１、ＡＮＮ８５６２６．１、ＡＮＮ８５７０３．１、ＡＮＮ８５７７９．１、ＡＯＹ３４３０８．１、ＡＯＹ３６６６３．１、ＡＯＹ３６６８７．１、ＡＲＢ０８９３５．１、ＡＲＯ３８０５９．１、ＡＲＯ３８０６０．１、ＡＲＯ３８０６１．１、ＡＲＯ３８０６２．１、ＡＲＯ３８０６３．１、ＡＲＯ３８０６４．１、ＡＲＯ３８０６５．１、ＡＲＯ３８０６６．１、ＡＳＭ４７６４２．１、ＡＳＭ４７７１９．１、ＡＳＭ４７７９６．１、ＡＳＭ４７８７１．１、ＢＡＭ７３３９４．１、ＣＡＡ３２２９４．１、ＣＡＢ４００８３．１、ＣＡＤ１３３５６．１、ＣＡＤ１３３５７．１、ＣＡＤ１３３５８．１、ＣＡＤ１３３５９．１、ＣＡＤ１３３６０．１、ＣＡＤ１３３６１．１、ＣＡＤ１３３６２．１、ＣＡＤ１３３６３．１、ＣＡＤ１３３６４．１、ＣＡＤ１３３６５．１、ＣＡＤ１３３６６．１、ＣＡＤ１３３６７．１、ＣＡＤ１３３６８．１、ＣＡＤ１３３６９．１、ＣＡＤ１３３７０．１、ＣＡＤ１３３７１．１、ＣＡＤ１３３７２．１、ＣＡＤ１３３７３．１、ＣＡＤ１３３７４．１、ＣＡＤ１３３７５．１、ＣＡＤ１３３７６．１、ＣＡＤ１３３７７．１、ＣＡＤ１３３７８．１、Ｐ０４２９０．１、Ｐ０４４８８．１、Ｐ０９８５５．１、Ｐ１０２２８．１、Ｐ２８９８６．１、ＳＢＯ０７７２９．１、ＳＢＯ０７７９３．１、ＳＢＯ０７７９８．１、ＳＢＯ０７８１２．１、ＳＢＯ０７８８０．１、ＳＢＳ６９３７５．１、ＳＢＳ６９３７９．１、ＳＢＳ６９４４０．１、ＳＢＳ６９４４８．１、ＳＢＳ６９５６０．１、ＳＢＳ６９５９９．１、ＳＢＳ６９６０２．１、ＳＢＳ６９６３７．１、ＳＢＳ６９７９０．１、ＳＢＴ６９３７４．１、ＳＣＬ７６８８７．１、ＹＰ＿００９１３７１１９．１、又はＹＰ＿００９１３７１４３．１。
【0111】
別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＣタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＣタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0112】
一実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＣの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、以下を含む：
【化9】
【化10】
【化11】
【0113】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＣ２断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0114】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＣの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを欠いている。
【0115】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＣの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－２
３３３株よりのｇＣのアミノ酸２７～４２６を含む：ＡＳＰＧＲＴＩＴＶＧＰＲＧＮＡＳＮＡＡＰＳＡＳＰＲＮＡＳＡＰＲＴＴＰＴＰＰＱＰＲＫＡＴＫＳＫＡＳＴＡＫＰＡＰＰＰＫＴＧＰＰＫＴＳＳＥＰＶＲＣＮＲＨＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＰＮＳＴＲＴＥＳＲＬＱＩＷＲＹＡＴＡＴＤＡＥＩＧＴＡＰＳＬＥＥＶＭＶＮＶＳＡＰＰＧＧＱＬＶＹＤＳＡＰＮＲＴＤＰＨＶＩＷＡＥＧＡＧＰＧＡＳＰＲＬＹＳＶＶＧＰＬＧＲＱＲＬＩＩＥＥＬＴＬＥＴＱＧＭＹＹＷＶＷＧＲＴＤＲＰＳＡＹＧＴＷＶＲＶＲＶＦＲＰＰＳＬＴＩＨＰＨＡＶＬＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＴＹＹＰＧＮＲＡＥＦＶＷＦＥＤＧＲＲＶＦＤＰＡＱＩＨＴＱＴＱＥＮＰＤＧＦＳＴＶＳＴＶＴＳＡＡＶＧＧＱＧＰＰＲＴＦＴＣＱＬＴＷＨＲＤＳＶＳＦＳＲＲＮＡＳＧＴＡＳＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＴＧＤＨＡＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＳＳＰＡＥＫＶＡＶＡＳＱＴＳＣＧＲＰＧＴＡＴＩＲＳＴＬＰＶＳＹＥＱＴＥＹＩＣＲＬＡＧＹＰＤＧＩＰＶＬＥＨＨ（配列番号１１）。
３３３株よりのｇＣのアミノ酸２７～４２６を含む：ＡＳＰＧＲＴＩＴＶＧＰＲＧＮＡＳＮＡＡＰＳＡＳＰＲＮＡＳＡＰＲＴＴＰＴＰＰＱＰＲＫＡＴＫＳＫＡＳＴＡＫＰＡＰＰＰＫＴＧＰＰＫＴＳＳＥＰＶＲＣＮＲＨＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＰＮＳＴＲＴＥＳＲＬＱＩＷＲＹＡＴＡＴＤＡＥＩＧＴＡＰＳＬＥＥＶＭＶＮＶＳＡＰＰＧＧＱＬＶＹＤＳＡＰＮＲＴＤＰＨＶＩＷＡＥＧＡＧＰＧＡＳＰＲＬＹＳＶＶＧＰＬＧＲＱＲＬＩＩＥＥＬＴＬＥＴＱＧＭＹＹＷＶＷＧＲＴＤＲＰＳＡＹＧＴＷＶＲＶＲＶＦＲＰＰＳＬＴＩＨＰＨＡＶＬＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＴＹＹＰＧＮＲＡＥＦＶＷＦＥＤＧＲＲＶＦＤＰＡＱＩＨＴＱＴＱＥＮＰＤＧＦＳＴＶＳＴＶＴＳＡＡＶＧＧＱＧＰＰＲＴＦＴＣＱＬＴＷＨＲＤＳＶＳＦＳＲＲＮＡＳＧＴＡＳＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＴＧＤＨＡＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＳＳＰＡＥＫＶＡＶＡＳＱＴＳＣＧＲＰＧＴＡＴＩＲＳＴＬＰＶＳＹＥＱＴＥＹＩＣＲＬＡＧＹＰＤＧＩＰＶＬＥＨＨ（配列番号１１）。
【0116】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長のＨＳＶ－２のｇＣは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＡＬＧＲＶＧＬＡＶＧＬＷＧＬＬＷＶＧＶＶＶＶＬＡＮＡＳＰＧＲＴＩＴＶＧＰＲＧＮＡＳＮＡＡＰＳＡＳＰＲＮＡＳＡＰＲＴＴＰＴＰＰＱＰＲＫＡＴＫＳＫＡＳＴＡＫＰＡＰＰＰＫＴＧＰＰＫＴＳＳＥＰＶＲＣＮＲＨＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＰＮＳＴＲＴＥＦＲＬＱＩＷＲＹＡＴＡＴＤＡＥＩＧＴＡＰＳＬＥＥＶＭＶＮＶＳＡＰＰＧＧＱＬＶＹＤＳＡＰＮＲＴＤＰＨＶＩＷＡＥＧＡＧＰＧＡＳＰＲＬＹＳＶＶＧＰＬＧＲＱＲＬＩＩＥＥＬＴＬＥＴＱＧＭＹＹＷＶＷＧＲＴＤＲＰＳＡＹＧＴＷＶＲＶＲＶＦＲＰＰＳＬＴＩＨＰＨＡＶＬＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＴＹＹＰＧＮＲＡＥＦＶＷＦＥＤＧＲＲＶＦＤＰＡＱＩＨＴＱＴＱＥＮＰＤＧＦＳＴＶＳＴＶＴＳＡＡＶＧＧＱＧＰＰＲＴＦＴＣＱＬＴＷＨＲＤＳＶＳＦＳＲＲＮＡＳＧＴＡＳＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＴＧＤＨＡＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＳＳＰＡＥＫＶＡＶＡＳＱＴＳＣＧＲＰＧＴＡＴＩＲＳＴＬＰＶＳＹＥＱＴＥＹＩＣＲＬＡＧＹＰＤＧＩＰＶＬＥＨＨＧＳＨＱＰＰＰＲＤＰＴＥＲＱＶＩＲＡＶＥＧＡＧＩＧＶＡＶＬＶＡＶＶＬＡＧＴＡＶＶＹＬＴＨＡＳＳＶＲＹＲＲＬＲ（配列番号１２）。
【0117】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＣは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれかに明記するアミノ酸配列を含む：ＡＡＡ２０５３２．１、ＡＡＡ６６４４２．１、ＡＡＢ６０５４９．１、ＡＡＢ６０５５０．１、ＡＡＢ６０５５１．１、ＡＡＢ７２１０１．１、ＡＢＵ４５４２９．１、ＡＢＵ４５４３０．１、ＡＢＵ４５４３１．１、ＡＢＵ４５４３２．１、ＡＢＵ４５４５９．１、ＡＢＵ４５４６０．１、ＡＥＶ９１３４８．１、ＡＥＶ９１３８３．１、ＡＥＶ９１４０７．１、ＡＦＭ９３８６４．１、ＡＨＧ５４７０８．１、ＡＫＣ４２８０８．１、ＡＫＣ５９２８５．１、ＡＫＣ５９３５７．１、ＡＫＣ５９４２８．１、ＡＫＣ５９４９９．１、ＡＫＣ５９５７０．１、ＡＭＢ６６００８．１、ＡＭＢ６６０７９．１、ＡＭＢ６６１５１．１、ＡＭＢ６６２２４．１、ＡＭＢ６６２５２．１、ＡＭＢ６６２５３．１、ＡＭＢ６６３６８．１、ＡＭＢ６６４４１．１、ＡＱＺ５５７３５．２、ＡＱＺ５５８０６．１、ＡＱＺ５５８７７．１、ＡＱＺ５５９４８．１、ＡＱＺ５６０１９．１、ＡＱＺ５６０９０．１、ＡＱＺ５６１６１．２、ＡＱＺ５６２３２．２、ＡＱＺ５６３０３．２、ＡＱＺ５６３７４．２、ＡＱＺ５６４４５．１、ＡＱＺ５６５１６．１、ＡＱＺ５６５８７．１、ＡＱＺ５６６５８．１、ＡＱＺ５６７２９．２、ＡＱＺ５６８００．１、ＡＱＺ５６８７１．１、ＡＱＺ５６９４２．２、ＡＱＺ５７０１３．１、ＡＱＺ５７０８４．２、ＡＱＺ５７１５５．１、ＡＱＺ５７２２６．１、ＡＱＺ５７２９７．１、ＡＱＺ５７３６８．１、ＡＱＺ５７４３９．１、ＡＱＺ５７５１０．１、ＡＱＺ５７５８１．１、ＡＱＺ５７６５２．１、ＡＱＺ５７７２３．１、ＡＱＺ５７７９４．２、ＡＱＺ５７８６５．２、ＡＱＺ５７９３６．１、ＡＱＺ５８００７．２、ＡＱＺ５８０７８．１、ＡＱＺ５８１４９．２、ＡＱＺ５８２２０．１、ＡＱＺ５８２９１．１、ＡＱＺ５８３６２．１、ＡＱＺ５８４３３．１、ＡＱＺ５８５０４．１、ＡＱＺ５８５７５．１、ＡＱＺ５８６４６．１、ＡＱＺ５８７１７．２、ＡＱＺ５８７８８．２、ＡＱＺ５８８５９．２、ＡＱＺ５８９３０．１、ＡＱＺ５９００１．２、ＡＱＺ５９０７２．１、ＡＱＺ５９１４３．１、ＡＲＯ３８０６７．１、ＡＲＯ３８０６８．１、ＡＲＯ３８０６９．１、ＡＲＯ３８０７０．１、ＡＲＯ３８０７１．１、ＡＲＯ３８０７２．１、ＣＡＡ２５６８７．１、ＣＡＡ２６０２５．１、ＣＡＢ０６７３０．１、ＣＡＢ０６７３４．１、ＣＡＢ９６５４４．１、Ｐ０３１７３．１、Ｐ０６４７５．１、Ｐ８９４７５．１、Ｑ８９７３０．１、ＹＰ＿００９１３７１６１．１、ＹＰ＿００９１３７１９６．１、又はＹＰ＿００９１３７２２０．１。
【0118】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＣタンパク質の断片は、一実施形態においては、宿主Ｃ３ｂ分子が宿主プロパージン分子と結合するのをブロック又は阻害するドメインを指すあるプロパージン干渉ドメイン「プロパージン干渉ドメイン（properdin-interfering domain）」を
含む。別の実施形態においては、この語は、宿主プロパージン分子との宿主Ｃ３ｂ分子の相互作用をブロック又は阻害するドメインを指す。
含む。別の実施形態においては、この語は、宿主プロパージン分子との宿主Ｃ３ｂ分子の相互作用をブロック又は阻害するドメインを指す。
【0119】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＣタンパク質の断片は、Ｃ５干渉ドメインである。別の実施形態においては、ｇＣタンパク質の断片は、Ｃ５干渉ドメインの一部分である。別の実施形態において、「Ｃ５干渉ドメイン」は、宿主Ｃ３ｂ分子が宿主Ｃ５分子と結合するのを干渉するドメインを指す。別の実施形態においては、この語は、宿主Ｃ５分子との宿主Ｃ３ｂ分子の相互作用を干渉するドメインを指す。
【0120】
ｇＣ－１若しくはｇＣ－２のタンパク質又はその断片をコードする各修飾ｍＲＮＡが、本発明の個々の実施形態を表す。
【0121】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＣタンパク質の断片は、免疫原性断片である。別の実施形態においては、ｇＣ免疫防御抗原はタンパク質全体である必要はない。別の実施形態において、防御免疫応答は概して、抗体応答を伴う。別の実施形態においては、ｇＣの変異体、配列保存変異体、及び機能保存変異体が、本発明の方法及び組成物において有用であるが、ただしこうした変異体の全ては、必要な免疫防御効果を保持する。別の実施形態においては、免疫原性断片は、ＨＳＶの任意の株よりの免疫防御ｇＣ抗原を含むことが可能である。別の実施形態においては、免疫原性断片は、感染個体で見られるような、ＨＳＶの配列変異体を含むことが可能である。
糖タンパク質Ｅ
糖タンパク質Ｅ
【0122】
別の実施形態においては、本発明の組成物は、ＨＳＶ－１のｇＥタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－１のｇＥタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0123】
一実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＤの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、以下を含む：
【化12】
【化13】
【化14】
【0124】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＥ１断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0125】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－１のｇＥの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを欠いている。
【0126】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＥの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－１
ＮＳ株よりのｇＥのアミノ酸２４～４０９を含む：ＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＩＹＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＳＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＡＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＴＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＦＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＮＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡ（配列番号１４）。
ＮＳ株よりのｇＥのアミノ酸２４～４０９を含む：ＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＩＹＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＳＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＡＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＴＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＦＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＮＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡ（配列番号１４）。
【0127】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＥの断片は、ＨＳＶ－１株よりのｇＥのアミノ酸２４～４０９を含む。
【0128】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長のＨＳＶ－１のｇＥは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＤＲＧＡＶＶＧＦＬＬＧＶＣＶＶＳＣＬＡＧＴＰＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＩＹＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＳＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＡＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＴＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＦＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＮＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡＰＰＨＡＰＰＴＨＧＡＬＲＬＧＡＶＭＧＡＡＬＬＬＳＡＬＧＬＳＶＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＡＷＲＡＶＫＳＲＡＳＧＫＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＱＶＰＷＬＡＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＲＳＤＧＨＱＳＲＲＱＬＴＴＦＧＳＧＲＰＤＲＲＹＳＱＡＳＤＳＳＶＦＷ（配列番号１５）。
【0129】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－１のｇＥは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれかに明記するアミノ酸配列を含む：ＡＡＡ４５７７９．１、ＡＡＡ９６６８０．１、ＡＢＩ６３５２６．１、ＡＣＭ６２２９７．１、ＡＤＤ６００５５．１、ＡＤＤ６０１３２．１、ＡＤＭ２２３９１．１、ＡＤＭ２２４６８．１、ＡＤＭ２２５４４．１、ＡＤＭ２２６２１．１、ＡＤＭ２２６９８．１、ＡＤＭ２２７７５．１、ＡＤＭ２２８５１．１、ＡＤＭ２２９２８．１、ＡＤＭ２３００５．１、ＡＤＭ２３０８１．１、ＡＤＭ２３１５７．１、ＡＤＭ２３２３３．１、ＡＤＭ２３３１１．１、ＡＤＭ２３３８５．１、ＡＤＭ２３４５９．１、ＡＤＭ２３５３３．１、ＡＤＭ２３６０７．１、ＡＤＭ２３６８２．１、ＡＤＭ２３７５７．１、ＡＤＭ２３８３３．１、ＡＤＮ３４６８９．１、ＡＤＮ３４６９２．１、ＡＤＮ３４６９５．１、ＡＥＱ７７０９９．１、ＡＥＲ３７６４９．１、ＡＥＲ３７７１７．１、ＡＥＲ３７７８８．１、ＡＥＲ３７８５９．１、ＡＥＲ３７９３１．１、ＡＥＲ３８００２．１、ＡＥＲ３８０７２．１、ＡＦＡ３６１７９．１、ＡＦＡ３６１８０．１、ＡＦＡ３６１８１．１、ＡＦＡ３６１８２．１、ＡＦＡ３６１８３．１、ＡＦＡ３６１８４．１、ＡＦＡ３６１８５．１、ＡＦＡ３６１８６．１、ＡＦＡ３６１８７．１、ＡＦＡ３６１８８．１、ＡＦＡ３６１８９．１、ＡＦＡ３６１９０．１、ＡＦＡ３６１９１．１、ＡＦＡ３６１９２．１、ＡＦＡ３６１９３．１、ＡＦＡ３６１９４．１、ＡＦＡ３６１９５．１、ＡＦＡ３６１９６．１、ＡＦＡ３６１９７．１、ＡＦＡ３６１９８．１、ＡＦＡ３６１９９．１、ＡＦＡ３６２００．１、ＡＦＡ３６２０１．１、ＡＦＡ３６２０２．１、ＡＦＡ３６２０３．１、ＡＦＥ６２８９６．１、ＡＦＩ２３６５９．１、ＡＦＫ５０４１７．１、ＡＦＰ８６４３２．１、ＡＧＺ０１９３０．１、ＡＩＲ９５８５９．１、ＡＪＥ６００１１．１、ＡＪＥ６００８２．１、ＡＪＥ６０１５３．１、ＡＪＥ６０２２４．１、ＡＪＥ６０２９５．１、ＡＫＥ４８６４７．１、ＡＫＥ９８３７３．１、ＡＫＥ９８３７４．１、ＡＫＥ９８３７５．１、ＡＫＥ９８３７６．１、ＡＫＥ９８３７７．１、ＡＫＥ９８３７８．１、ＡＫＥ９８３７９．１、ＡＫＥ９８３８０．１、ＡＫＥ９８３８１．１、ＡＫＥ９８３８２．１、ＡＫＥ９８３８３．１、ＡＫＥ９８３８４．１、ＡＫＥ９８３８５．１、ＡＫＥ９８３８６．１、ＡＫＥ９８３８７．１、ＡＫＥ９８３８８．１、ＡＫＥ９８３８９．１、ＡＫＥ９８３９０．１、ＡＫＥ９８３９１．１、ＡＫＥ９８３９２．１、ＡＫＥ９８３９３．１、ＡＫＧ５９２４８．１、ＡＫＧ５９３２０．１、ＡＫＧ５９３９３．１、ＡＫＧ５９４６４．１、ＡＫＧ５９５３８．１、ＡＫＧ５９６１１．１、ＡＫＧ５９６８４．１、ＡＫＧ５９７５７．１、ＡＫＧ５９８２８．１、ＡＫＧ５９９００．１、ＡＫＧ５９９７４．１、ＡＫＧ６００４８．１、ＡＫＧ６０１２０．１、ＡＫＧ６０１９１．１、ＡＫＧ６０２６３．１、ＡＫＧ６０３３６．１、ＡＫＧ６０４０６．１、ＡＫＧ６０４７６．１、ＡＫＧ６０５４８．１、ＡＫＧ６０６２２．１、ＡＫＧ６０６９４．１、ＡＫＧ６０７６５．１、ＡＫＧ６０８３７．１、ＡＫＧ６０９０８．１、ＡＫＧ６０９８０．１、ＡＫＧ６１０５２．１、ＡＫＧ６１１２５．１、ＡＫＧ６１１９６．１、ＡＫＧ６１２６９．１、ＡＫＧ６１３４１．１、ＡＫＧ６１４１３．１、ＡＫＧ６１４８６．１、ＡＫＧ６１５５８．１、ＡＫＧ６１６３１．１、ＡＫＧ６１７０５．１、ＡＫＧ６１７７６．１、ＡＫＧ６１８４９．１、ＡＫＧ６１９２２．１、ＡＫＧ６１９９５．１、ＡＫＨ８０４６５．１、ＡＫＨ８０５３８．１、ＡＬＭ２２６３７．１、ＡＬＭ２２７１１．１、ＡＬＭ２２７８５．１、ＡＬＭ２２８５９．１、ＡＬＯ１８６６４．１、ＡＬＯ１８７４０．１、ＡＭＢ６５６６４．１、ＡＭＢ６５７３７．１、ＡＭＢ６５８１１．１、ＡＭＢ６５８８７．１、ＡＭＢ６５９５８．１、ＡＭＮ０９８３４．１、ＡＮＮ８３９６６．１、ＡＮＮ８４０４３．１、ＡＮＮ８４１１９．１、ＡＮＮ８４１９６．１、ＡＮＮ８４２７３．１、ＡＮＮ８４３５０．１、ＡＮＮ８４４２６．１、ＡＮＮ８４５０２．１、ＡＮＮ８４５７９．１、ＡＮＮ８４６５５．１、ＡＮＮ８４７３２．１、ＡＮＮ８４８０８．１、ＡＮＮ８４８８５．１、ＡＮＮ８４９６１．１、ＡＮＮ８５０３８．１、ＡＮＮ８５１１４．１、ＡＮＮ８５１８９．１、ＡＮＮ８５２６６．１、ＡＮＮ８５３４３．１、ＡＮＮ８５４１８．１、ＡＮＮ８５４９６．１、ＡＮＮ８５５７３．１、ＡＮＮ８５６５０．１、ＡＮＮ８５７２６．１、ＡＮＮ８５８０３．１、ＡＯＹ３４０８５．１、ＡＯＹ３６６８７．１、ＡＲＢ０８９５９．１、ＡＲＯ３８０７３．１、ＡＲＯ３８０７４．１、ＡＲＯ３８０７５．１、ＡＲＯ３８０７６．１、ＡＲＯ３８０７７．１、ＡＲＯ３８０７８．１、ＡＲＯ３８０７９．１、ＡＲＯ３８０８０．１、ＡＳＭ４７６４２．１、ＡＳＭ４７６６６．１、ＡＳＭ４７７４３．１、ＡＳＭ４７８２０．１、ＡＳＭ４７８９５．１、ＢＡＭ７３４２１．１、ＣＡＡ２６０６２．１、ＣＡＡ３２２７２．１、ＣＡＦ２４７５６．１、ＣＡＦ２４７５７．１、ＣＡＦ２４７５８．１、ＣＡＦ２４７５９．１、ＣＡＦ２４７６０．１、ＣＡＦ２４７６１．１、ＣＡＦ２４７６２．１、ＣＡＦ２４７６３．１、ＣＡＦ２４７６４．１、ＣＡＦ２４７６５．１、ＣＡＦ２４７６６．１、ＣＡＦ２４７６７．１、ＣＡＦ２４７６８．１、ＣＡＦ２４７６９．１、ＣＡＦ２４７７０．１、ＣＡＦ２４７７１．１、ＣＡＦ２４７７２．１、ＣＡＦ２４７７３．１、ＣＡＦ２４７７４．１、ＣＡＦ２４７７５．１、ＣＡＦ２４７７６．１、ＣＡＦ２４７７７．１、ＣＡＦ２４７７８．１、ＣＡＦ２４７７９．１、ＣＡＦ２４７８０．１、ＣＡＦ２４７８１．１、ＣＡＦ２４７８２．１、ＣＡＦ２４７８３．１、ＣＡＦ２４７８４．１、ＣＡＦ２４７８５．１、Ｐ０４２９０．１、Ｐ０４４８８．１、Ｐ２８９８６．１、Ｑ７０３Ｆ０．１、ＳＢＯ０７９１０．１、ＳＢＳ６９５７１．１、ＳＢＳ６９５７６．１、ＳＢＳ６９５９５．１、ＳＢＳ６９６３６．１、ＳＢＳ６９６９３．１、ＳＢＳ６９７０１．１、ＳＢＳ６９７２２．１、ＳＢＳ６９７３２．１、ＳＢＳ６９８１３．１、ＳＢＴ６９３９７．１、又はＹＰ＿００９１３７１４３．１。
【0130】
別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＥタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。別の実施形態においては、組成物は、ＨＳＶ－２のｇＥタンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。
【0131】
一実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＥの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、以下を含む：
【化15】
【化16】
【化17】
【0132】
一実施形態においては、全てのウリジン残基が１－メチル－プソイドウリジンである。一実施形態においては、下線の残基は５’非翻訳配列を表す。一実施形態においては、太字の残基はｇＥ２断片の発現を補助するシグナル配列（リーダー配列）を表す。一実施形態においては、斜体の残基は３’非翻訳配列及びポリアデニル化尾部を表す。
【0133】
別の実施形態においては、ＨＳＶ－２のｇＥの断片をコードする修飾ｍＲＮＡのヌクレオチド配列は、５’非翻訳配列、シグナル配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化尾部、又はこれらの組合せを欠いている。
【0134】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＥの断片は、以下のアミノ酸配列に明記するＨＳＶ－２株２．１２よりのｇＥのアミノ酸２４～４０５を含む：ＲＴＳＷＫＲＶＴＳＧＥＤＶＶＬＬＰＡＰＡＧＰＥＥＲＴＲＡＨＫＬＬＷＡＡＥＰＬＤＡＣＧＰＬＲＰＳＷＶＡＬＷＰＰＲＲＶＬＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＥＰＬＡＩＡＹＳＰＰＦＰＡＧＤＥＧＬＹＳＥＬＡＷＲＤＲＶＡＶＶＮＥＳＬＶＩＹＧＡＬＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＶＧＬＳＤＥＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＥＰＡＰＶＰＴＰＴＰＤＤＹＤＥＥＤＤＡＧＶＳＥＲＴＰＶＳＶＰＰＰＴＰＰＲＲＰＰＶＡＰＰＴＨＰＲＶＩＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＨＭＥＴＰＥＡＩＬＦＡＰＧＥＴＦＧＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＧＰＹＡＭＤＶＶＷＭＲＦＤＶＰＳＳＣＡＥＭＲＩＹＥＡＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＶＳＳＷＡＹＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＴＰＰＰＲＣＦＡＥＡＲＭＥＰＶＰＧＬＡＷＬＡＳＴＶＮＬＥＦＱＨＡＳＰＱＨＡＧＬＹＬＣＶＶＹＶＤＤＨＩＨＡＷＧＨＭＴＩＳＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＨＬＰＱＲＱＰＥＰＶＥＰＴＲＰＨＶＲＡ（配列番号１７）。
【0135】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされる完全長ＨＳＶ－２のｇＥは、以下のアミノ酸配列を含む：ＭＡＲＧＡＧＬＶＦＦＶＧＶＷＶＶＳＣＬＡＡＡＰＲＴＳＷＫＲＶＴＳＧＥＤＶＶＬＬＰＡＰＡＥＲＴＲＡＨＫＬＬＷＡＡＥＰＬＤＡＣＧＰＬＲＰＳＷＶＡＬＷＰＰＲＲＶＬＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＥＰＬＡＩＡＹＳＰＰＦＰＡＧＤＥＧＬＹＳＥＬＡＷＲＤＲＶＡＶＶＮＥＳＬＶＩＹＧＡＬＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＶＧＬＳＤＥＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＥＰＡＰＶＰＴＰＴＰＤＤＹＤＥＥＤＤＡＧＶＴＮＡＲＲＳＡＦＰＰＱＰＰＰＲＲＰＰＶＡＰＰＴＨＰＲＶＩＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＨＭＥＴＬＥＡＩＬＦＡＰＧＥＴＦＧＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＧＰＹＡＭＤＶＶＷＭＲＦＤＶＰＳＳＣＡＤＭＲＩＹＥＡＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＶＳＳＷＡＹＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＴＰＰＰＲＣＦＡＥＡＲＭＥＰＶＰＧＬＡＷＬＡＳＴＶＮＬＥＦＱＨＡＳＰＱＨＡＧＬＹＬＣＶＶＹＶＤＤＨＩＨＡＷＧＨＭＴＩＳＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＨＬＰＱＲＱＰＥＰＶＥＰＴＲＰＨＶＲＡＰＨＰＡＰＳＡＲＧＰＬＲＬＧＡＶＬＧＡＡＬＬＬＡＡＬＧＬＳＡＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＳＷＲＡＶＫＳＲＡＳＡＴＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＧＳＬＷＱＤＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＨＳＥＧＲＫＳＲＲＰＬＴＴＦＧＳＧＳＰＧＲＲＨＳＱＡＳＹＰＳＶＬＷ（配列番号１８）。
【0136】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ－２のｇＥは、以下のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号のうちのいずれかに明記するアミノ酸配列を含む：ＡＢＵ４５４３６．１、ＡＢＵ４５４３７．１、ＡＢＵ４５４３８．１、ＡＢＵ４５４３９．１、ＡＢＷ８３３０６．１、ＡＢＷ８３３０８．１、ＡＢＷ８３３１０．１、ＡＢＷ８３３１２．１、ＡＢＷ８３３１４．１、ＡＢＷ８３３１６．１、ＡＢＷ８３３１８．１、ＡＢＷ８３３２０．１、ＡＢＷ８３３２２．１、ＡＢＷ８３３２４．１、ＡＢＷ８３３２６．１、ＡＢＷ８３３２８．１、ＡＢＷ８３３３０．１、ＡＢＷ８３３３２．１、ＡＢＷ８３３３４．１、ＡＢＷ８３３３６．１、ＡＢＷ８３３３８．１、ＡＢＷ８３３４０．１、ＡＢＷ８３３４２．１、ＡＢＷ８３３４４．１、ＡＢＷ８３３４６．１、ＡＢＷ８３３４８．１、ＡＢＷ８３３５０．１、ＡＢＷ８３３５２．１、ＡＢＷ８３３５４．１、ＡＢＷ８３３５６．１、ＡＢＷ８３３５８．１、ＡＢＷ８３３６０．１、ＡＢＷ８３３６２．１、ＡＢＷ８３３６４．１、ＡＢＷ８３３６６．１、ＡＢＷ８３３６８．１、ＡＢＷ８３３７０．１、ＡＢＷ８３３７２．１、ＡＢＷ８３３７４．１、ＡＢＷ８３３７６．１、ＡＢＷ８３３７８．１、ＡＢＷ８３３８０．１、ＡＢＷ８３３８２．１、ＡＢＷ８３３８４．１、ＡＢＷ８３３８６．１、ＡＢＷ８３３８８．１、ＡＢＷ８３３９０．１、ＡＢＷ８３３９２．１、ＡＢＷ８３３９４．１、ＡＢＷ８３３９６．１、ＡＢＷ８３３９８．１、ＡＢＷ８３４００．１、ＡＢＺ０４０６９．１、ＡＥＶ９１４０７．１、ＡＨＧ５４７３２．１、ＡＫＣ４２８３０．１、ＡＫＣ５９３０７．１、ＡＫＣ５９３７８．１、ＡＫＣ５９４４９．１、ＡＫＣ５９５２０．１、ＡＫＣ５９５９１．１、ＡＭＢ６６１０４．１、ＡＭＢ６６１７３．１、ＡＭＢ６６２４６．１、ＡＭＢ６６４６５．１、ＡＱＺ５５７５６．１、、ＡＱＺ５５８２７．１、ＡＱＺ５５８９８．１、ＡＱＺ５５９６９．２、ＡＱＺ５６０４０．２、ＡＱＺ５６１１１．２、ＡＱＺ５６１８２．１、ＡＱＺ５６２５３．２、ＡＱＺ５６３２４．１、ＡＱＺ５６３９５．１、ＡＱＺ５６４６６．２、ＡＱＺ５６５３７．１、ＡＱＺ５６６０８．１、ＡＱＺ５６６７９．１、ＡＱＺ５６７５０．１、ＡＱＺ５６８２１．２、ＡＱＺ５６８９２．１、ＡＱＺ５６９６３．２、ＡＱＺ５７０３４．２、ＡＱＺ５７１０５．１、ＡＱＺ５７１７６．１、ＡＱＺ５７２４７．２、ＡＱＺ５７３１８．２、ＡＱＺ５７３８９．２、ＡＱＺ５７４６０．２、ＡＱＺ５７５３１．２、ＡＱＺ５７６０２．２、ＡＱＺ５７６７３．１、ＡＱＺ５７７４４．２、ＡＱＺ５７８１５．１、ＡＱＺ５７８８６．１、、ＡＱＺ５７９５７．２、ＡＱＺ５８０２８．２、ＡＱＺ５８０９９．１、ＡＱＺ５８１７０．２、ＡＱＺ５８２４１．２、ＡＱＺ５８３１２．２、ＡＱＺ５８３８３．２、、ＡＱＺ５８４５４．２、ＡＱＺ５８５２５．２、ＡＱＺ５８５９６．１、ＡＱＺ５８６６７．１、ＡＱＺ５８７３８．２、ＡＱＺ５８８０９．２、ＡＱＺ５８８８０．２、ＡＱＺ５８９５１．２、ＡＱＺ５９０２２．２、ＡＱＺ５９０９３．１、ＡＱＺ５９１６４．１、ＡＲＯ３８０８１．１、ＡＲＯ３８０８２．１、、ＡＲＯ３８０８３．１、ＡＲＯ３８０８４．１、ＡＲＯ３８０８５．１、ＡＲＯ３８０８６．１、、ＣＡＢ０６７１５．１、Ｐ８９４３６．１、Ｐ８９４７５．１、又はＹＰ＿００９１３７２２０．１。
【0137】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＥの断片は、ｇＥタンパク質のＩｇＧのＦｃ結合ドメインを含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＥドメインは、ＩｇＧのＦｃへの結合を媒介する、当技術分野において公知のその他のｇＥドメインである。
【0138】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＥタンパク質は、細胞間伝播に関与するｇＥドメインを含む。
【0139】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡ断片によってコードされるｇＥ断片は、免疫回避ドメインを含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡ断片によってコードされるｇＥ断片は、免疫回避ドメインの一部分を含む。
【0140】
ｇＥ－１若しくはｇＥ－２のタンパク質又はその断片をコードする各修飾ｍＲＮＡが、本発明の個々の実施形態を表す。
【0141】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるｇＥタンパク質の断片は、免疫原性断片である。別の実施形態においては、ｇＥ免疫防御抗原はタンパク質全体である必要はない。別の実施形態において、防御免疫応答は概して、抗体応答を伴う。別の実施形態においては、ｇＥの変異体、配列保存変異体、及び機能保存変異体が、本発明の方法及び組成物において有用であるが、ただしこうした変異体の全ては、必要な免疫防御効果を保持する。別の実施形態においては、免疫原性断片は、ＨＳＶの任意の株よりの免疫防御ｇＥ抗原を含むことが可能である。別の実施形態においては、免疫原性断片は、感染個体で見られるような、ＨＳＶの配列変異体を含むことが可能である。
【0142】
一実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、本明細書で提供される配列の相同体である。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、本明細書で提供される配列のアイソフォームである。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、本明細書で提供される配列の変異体である。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、本明細書で提供される配列の断片である。
【0143】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡによってコードされる糖タンパク質の断片は、糖タンパク質のエクトドメインを含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡによってコードされる糖タンパク質の断片は、糖タンパク質のエクトドメインからなる。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡによってコードされる糖タンパク質の断片は、糖タンパク質のエクトドメインの断片を含む。別の実施形態においては、糖タンパク質の断片は、当技術分野で公知の任意の糖タンパク質の断片であってもよい。
【0144】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡ断片によってコードされる糖タンパク質又は免疫原性断片は、ＨＳＶの任意の株からであり得る。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物において用いられる修飾ｍＲＮＡ断片によってコードされる免疫原性断片は、感染個体で見られるような、ＨＳＶの配列変異体を含み得る。
【0145】
一実施形態においては、「変異体」は、母集団の大多数とは異なるが、それでもそれらのうちの１つとしてみなされる一般的な形態と十分に類似するような、例えばスプライスバリアントである、アミノ酸又は核酸配列（又は他の実施形態においては、有機体又は組織）を指す。一実施形態においては、変異体は、配列保存変異体であり得る一方で、別の実施形態においては、変異体は、機能保存変異体であり得る。一実施形態においては、変異体は、１又は複数のアミノ酸の付加、欠失又は置換を含み得る。
【0146】
一実施形態において、「免疫回避ドメイン」は、抗ＨＳＶ抗体（例えば、抗ｇＤ抗体）のインビボでの抗ＨＳＶ有効性を干渉する又は低減するドメインを指す。別の実施形態においては、このドメインは、抗ＨＳＶ免疫応答のインビボでの抗ＨＳＶ有効性を干渉する又は低減する。別の実施形態においては、このドメインは、後に続く感染の間、ＨＳＶタンパク質（例えば、ｇＤ）の免疫原性を低減する。別の実施形態においては、このドメインは、後に続くチャレンジの間、ＨＳＶタンパク質の免疫原性を低減する。別の実施形態においては、このドメインは、後に続くチャレンジの間、ＨＳＶの免疫原性を低減する。別の実施形態においては、このドメインは、発症中のＨＳＶ感染の文脈で、ＨＳＶタンパク質の免疫原性を低減する。別の実施形態においては、このドメインは、発症中のＨＳＶ感染の文脈で、ＨＳＶの免疫原性を低減する。別の実施形態においては、このドメインは、ＩｇＧのＦｃ受容体として機能する。別の実施形態においては、このドメインは、抗体の二極（bipolar）の架橋を促進するものであり、これは一実施形態においては、そのＦ
ａｂドメインによってＨＳＶ抗原に結合し、かつ、そのＦｃドメインによって例えば一実施形態においてはｇＥである離れたＨＳＶ抗原に結合し、それによってＦｃドメインがもつ補体を活性化する能力を遮断する、抗体分子を指す語である。
ａｂドメインによってＨＳＶ抗原に結合し、かつ、そのＦｃドメインによって例えば一実施形態においてはｇＥである離れたＨＳＶ抗原に結合し、それによってＦｃドメインがもつ補体を活性化する能力を遮断する、抗体分子を指す語である。
【0147】
本発明はまた、ＨＳＶのタンパク質若しくはポリペプチド又はその断片のアナログをコードする修飾ｍＲＮＡを提供する。アナログは、保存アミノ酸配列の置換によって又は配列に影響を及ぼさない修飾によって又は両方によって自然に発生するタンパク質又はペプチドと異なり得る。
【0148】
別の実施形態においては、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、明文で又はＧｅｎＢａｎｋのエントリーへの言及によって上記に明記した配列に対する相同体である。任意のタンパク質又はペプチドに言及する場合の「相同」、「相同体」等の語は、一実施形態においては、配列をアラインしてギャップを導入し、必要であれば最大のパーセント相同性を達成した後で、対応する天然ポリペプチドの残基と一致する候補配列におけるアミノ酸残基の割合を指し、またいずれの保存的置換も配列同一性の一部とみなさない。アラインメントの方法及びコンピュータプログラムは、当技術分野で周知である。
【0149】
別の実施形態においては、「相同性」は、本明細書で開示される配列に対する、７０％を超える、修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質配列の同一性を指す。別の実施形態においては、同一性は、７２％を超える。別の実施形態においては、同一性は、７５％を超える。別の実施形態においては、同一性は、７８％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８０％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８２％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８３％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８５％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８７％を超える。別の実施形態においては、同一性は、８８％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９０％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９２％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９３％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９５％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９６％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９７％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９８％を超える。別の実施形態においては、同一性は、９９％を超える。別の実施形態においては、同一性は、１００％である。
【0150】
一実施形態においては、「アイソフォーム」は、例えばタンパク質である、分子の変型であって、同一のタンパク質の別のアイソフォームとほんのわずかな差異による、分子の変型を指す。一実施形態においては、アイソフォームは、異なるが関連する遺伝子から産生され得、又は別の実施形態においては、選択的スプライシングによって同じ遺伝子から発生し得る。別の実施形態においては、アイソフォームは、単一のヌクレオチドの多型によって生じる。
【0151】
別の実施形態においては、本明細書において記載される糖タンパク質又は糖タンパク質の断片をコードする修飾ｍＲＮＡは、抗原性のタグをさらにコードする。一実施形態においては、このタグは、ヒスチジン（「Ｈｉｓ」）タグである。一実施形態においては、Ｈｉｓタグは５個のヒスチジン残基を含む。別の実施形態においては、Ｈｉｓタグは６個のヒスチジン残基を含む。
【0152】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物は、キメラ分子を利用するものであって、これは抗タグ抗体が選択的に結合可能であるエピトープを提供するタグポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡとの、ＨＳＶタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡの融合物を含む。他の実施形態において、エピトープタグは、タンパク質のアミノ末端若しくはカルボキシ末端に、又はその中の内部の場所に配置される。組換え型ＨＳＶタンパク質のこうしたエピトープ標識形態の存在は、別の実施形態においては、タグポリペプチドに対する抗体によって、検出される。別の実施形態においては、エピトープタグを含むことで、抗タグ抗体を用いた又はエピトープタグに結合する別の種類の親和性マトリックスを用いた親和性精製によって、組換え型ＨＳＶタンパク質を容易に精製することが可能になる。種々のタグポリペプチド及びそれらそれぞれの抗体が、当技術分野で公知である。
【0153】
一実施形態においては、本発明の組成物は、アジュバントを含む一方で、別の実施形態においては、組成物はアジュバントを含まない。「アジュバント」は、別の実施形態において、個体に投与される又はインビトロで試験するときに、抗原が投与される個体又は試験系において抗原に対する免疫応答を増加させる化合物を指す。別の実施形態においては、免疫アジュバントは、単独で投与されるときに弱免疫原性である抗原に対する免疫応答を促進する、すなわち、抗体価を誘発しない若しくは弱い抗体価を誘発する又は、細胞媒介性の免疫応答を誘発する。別の実施形態においては、アジュバントは、抗原に対する抗体価を増大する。別の実施形態においては、アジュバントは、個体における免疫応答を達成するのに有効な抗原の用量を減らす。複数の種類のアジュバントが、当技術分野で公知であり、また米国特許公開公報第２０１３／００２８９２５号に詳細に記載されており、これは本明細書において参照することによりここに援用される。
修飾ｍＲＮＡ
修飾ｍＲＮＡ
【0154】
一実施形態においては、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む組成物及びその使用方法を提供する。一実施形態においては、修飾ｍＲＮＡは、１又は複数の修飾ヌクレオシド残基を含む。
【0155】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ヌクレオシドは、ｍ５Ｃ（５－メチルシチジン）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、ｍ５Ｕ（５－メチルウリジン）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、ｍ６Ａ（Ｎ６－メチルアデノシン）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、ｓ２Ｕ（２－チオウリジン）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、Ψ（プソイドウリジン）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、Ｕｍ（２’－Ｏ－メチルウリジン）である。
【0156】
他の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、ｍ１Ａ（１－メチルアデノシン）、ｍ２Ａ（２－メチルアデノシン）、ｍ６Ａ（Ｎ６－メチルアデノシン）、Ａｍ（２’－Ｏ－メチルアデノシン）、ｍｓ２ｍ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－メチルアデノシン）、ｉ６Ａ（Ｎ６－イソペンテニルアデノシン）、ｍｓ２ｉ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン）、ｉｏ６Ａ（Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）、ｍｓ２ｉｏ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）、ｇ６Ａ（Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン）、ｔ６Ａ（Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）、ｍｓ２ｔ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）、ｍ６ｔ６Ａ（Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）、ｈｎ６Ａ（Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン）、ｍｓ２ｈｎ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン）、Ａｒ（ｐ）（２’－Ｏ－リボシルアデノシン（ホスフェート））、Ｉ（イノシン）、ｍ１Ｉ（１－メチルイノシン）、ｍ１Ｉｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン）、ｍ３Ｃ（３－メチルシチジン）、ｍ５Ｃ（５－メチルシチジン）、Ｃｍ（２’－Ｏ－メチルシチジン）、ｓ２Ｃ（２－チオシチジン）、ａｃ４Ｃ（Ｎ４－アセチルシチジン）、ｆ５Ｃ（５－ホルミルシチジン）、ｍ５Ｃｍ（５，２’－Ｏ－ジメチルシチジン）、ａｃ４Ｃｍ（Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチルシチジン）、ｋ２Ｃ（リシジン）、ｍ１Ｇ（１－メチルグアノシン）、ｍ２Ｇ（Ｎ２－メチルグアノシン）、ｍ７Ｇ（７－メチルグアノシン）、Ｇｍ（２’－Ｏ－メチルグアノシン）、ｍ２
２Ｇ（Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン）、ｍ２Ｇｍ（Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン）、ｍ２
２Ｇｍ（Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン）、Ｇｒ（ｐ）（２’－Ｏ－リボシルグアノシン（ホスフェート））、ｙＷ（ワイブトシン）、ｏ２ｙＷ（ペロキシワイブトシン）、ＯＨｙＷ（ヒドロキシワイブトシン）、ＯＨｙＷ＊（修飾したヒドロキシワイブトシン）、ｉｍＧ（ワイオシン）、ｍｉｍＧ（メチルワイオシン）、Ｑ（クエオシン）、ｏＱ（エポキシクエオシン）、ｇａｌＱ（ガラクトシル－クエオシン）、ｍａｎＱ（マンノシル－クエオシン）、ｐｒｅＱ０（７－シアノ－７－デアザグアノシン）、ｐｒｅＱ１（７－アミノメチル－７－デアザグアノシン）、Ｇ＋（アルカエオシン（archaeosine））、Ψ（プソイドウリジン）
、Ｄ（ジヒドロウリジン）、ｍ５Ｕ（５－メチルウリジン）、Ｕｍ（２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍ５Ｕｍ（５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン）、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン）、ｓ２Ｕ（２－チオウリジン）、ｓ４Ｕ（４－チオウリジン）、ｍ５ｓ２Ｕ（５－メチル－２－チオウリジン）、ｓ２Ｕｍ（２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ａｃｐ３Ｕ（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン）、ｈｏ５Ｕ（５－ヒドロキシウリジン）、ｍｏ５Ｕ（５－メトキシウリジン）、ｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸）、ｍｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル）、ｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン）、ｍｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル）、ｍｃｍ５Ｕ（５－メトキシカルボニルメチルウリジン）、ｍｃｍ５Ｕｍ（５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍｃｍ５ｓ２Ｕ（５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン）、ｎｍ５ｓ２Ｕ（５－アミノメチル－２－チオウリジン）、ｍｎｍ５Ｕ（５－メチルアミノメチルウリジン）、ｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン）、ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン）、ｎｃｍ５Ｕ（５－カルバモイルメチルウリジン）、ｎｃｍ５Ｕｍ（５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｃｍｎｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン）、ｃｍｎｍ５Ｕｍ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン）、ｍ６ ２Ａ（Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン）、Ｉｍ（２’－Ｏ－メチルイノシン）、ｍ４Ｃ（Ｎ４－メチルシチジン）、ｍ４Ｃｍ（Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン）、ｈｍ５Ｃ（５－ヒドロキシメチルシチジン）、ｍ３Ｕ（３－メチルウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン）、ｃｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルウリジン）、ｍ６Ａｍ（Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン）、ｍ６ ２Ａｍ（Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン）、ｍ２，７Ｇ（Ｎ２，７－ジメチルグアノシン）、ｍ２，２，７Ｇ（Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン）、ｍ３Ｕｍ（３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン）、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、ｆ５Ｃｍ（５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン）、ｍ１Ｇｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン）、ｍ１Ａｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン）、τｍ５Ｕ（５－タウリノメチルウリジン）、τｍ５ｓ２Ｕ（５－タウリノメチル－２－チオウリジン）、ｉｍＧ－１４（４－脱メチルワイオシン（4-demethylwyosine））、ｉｍＧ２（イソワイオシン）、ａｃ６Ａ（Ｎ
６－アセチルアデノシン）、ｉｎｍ５Ｕ（５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン）、ｉｎｍ５ｓ２Ｕ（５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジン）、ｉｎｍ５Ｕｍ（５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍ２，７Ｇｍ（Ｎ２，７，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン）、ｍ４ ２Ｃｍ（Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチルシチジン）、Ｃ＋（アグマチジン（agmatidine））、ｍ８Ａ（８－メチルアデノシン）、ｇｍｎｍ５ｓ２Ｕ（ゲラニル化５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン（geranylated 5-methylaminomethyl-2-thiouridine））、ｇｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ（ゲラニル化５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン）、又はｃｎｍ５Ｕ（５－シアノメチル－ウリジン）である。
、Ｄ（ジヒドロウリジン）、ｍ５Ｕ（５－メチルウリジン）、Ｕｍ（２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍ５Ｕｍ（５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン）、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン）、ｓ２Ｕ（２－チオウリジン）、ｓ４Ｕ（４－チオウリジン）、ｍ５ｓ２Ｕ（５－メチル－２－チオウリジン）、ｓ２Ｕｍ（２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ａｃｐ３Ｕ（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン）、ｈｏ５Ｕ（５－ヒドロキシウリジン）、ｍｏ５Ｕ（５－メトキシウリジン）、ｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸）、ｍｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル）、ｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン）、ｍｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル）、ｍｃｍ５Ｕ（５－メトキシカルボニルメチルウリジン）、ｍｃｍ５Ｕｍ（５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍｃｍ５ｓ２Ｕ（５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン）、ｎｍ５ｓ２Ｕ（５－アミノメチル－２－チオウリジン）、ｍｎｍ５Ｕ（５－メチルアミノメチルウリジン）、ｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン）、ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン）、ｎｃｍ５Ｕ（５－カルバモイルメチルウリジン）、ｎｃｍ５Ｕｍ（５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｃｍｎｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン）、ｃｍｎｍ５Ｕｍ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン）、ｍ６ ２Ａ（Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン）、Ｉｍ（２’－Ｏ－メチルイノシン）、ｍ４Ｃ（Ｎ４－メチルシチジン）、ｍ４Ｃｍ（Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン）、ｈｍ５Ｃ（５－ヒドロキシメチルシチジン）、ｍ３Ｕ（３－メチルウリジン）、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン）、ｃｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルウリジン）、ｍ６Ａｍ（Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン）、ｍ６ ２Ａｍ（Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン）、ｍ２，７Ｇ（Ｎ２，７－ジメチルグアノシン）、ｍ２，２，７Ｇ（Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン）、ｍ３Ｕｍ（３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン）、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、ｆ５Ｃｍ（５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン）、ｍ１Ｇｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン）、ｍ１Ａｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン）、τｍ５Ｕ（５－タウリノメチルウリジン）、τｍ５ｓ２Ｕ（５－タウリノメチル－２－チオウリジン）、ｉｍＧ－１４（４－脱メチルワイオシン（4-demethylwyosine））、ｉｍＧ２（イソワイオシン）、ａｃ６Ａ（Ｎ
６－アセチルアデノシン）、ｉｎｍ５Ｕ（５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン）、ｉｎｍ５ｓ２Ｕ（５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジン）、ｉｎｍ５Ｕｍ（５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍ２，７Ｇｍ（Ｎ２，７，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン）、ｍ４ ２Ｃｍ（Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチルシチジン）、Ｃ＋（アグマチジン（agmatidine））、ｍ８Ａ（８－メチルアデノシン）、ｇｍｎｍ５ｓ２Ｕ（ゲラニル化５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン（geranylated 5-methylaminomethyl-2-thiouridine））、ｇｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ（ゲラニル化５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン）、又はｃｎｍ５Ｕ（５－シアノメチル－ウリジン）である。
【0157】
一実施形態においては、修飾ヌクレオシド残基は、プソイドウリジン又はプソイドウリジンファミリー残基である。
【0158】
一実施形態においては、修飾ｍＲＮＡは、プソイドウリジン残基を含む。一実施形態においては、プソイドウリジンは、ヌクレオシドウリジンのＣ－グリコシドアイソマーを指す。一実施形態においては、プソイドウリジン残基は、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、又はこれらの組合せを含む。一実施形態においては、前記プソイドウリジン残基は、ウリジンの代わりに１－メチルプソイドウリジン残基を含む。
【0159】
一実施形態においては、修飾ヌクレオシド残基は、プソイドウリジンアナログである。一実施形態においては、「プソイドウリジンアナログ」は、プソイドウリジンの任意の修飾、変異体、アイソフォーム、又は誘導体である。例えば、プソイドウリジンアナログは、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、１－メチルプソイドウリジン（ｍ１Ψ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３Ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３Ψ）、及び２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（Ψｍ）を含むが、これに限定されない。
【0160】
一部の実施形態においては、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドは、プソイドウリジン（Ψ）、ピリジン－４－オン リボヌクレオシド（pyridin-4-one ribonucleoside）、５－アザ－ウリジン、６－
アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン又は５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｃｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｒｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチルプソイドウリジン（ｍ１Ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３Ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（１－メチルプソイドウリジン（ｍ１Ψ）としても知られる、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３Ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（Ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－β－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－β－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－ａｒａ－ウリジン（2'-F-ara-uridine）、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－ａｒａ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジンを含む。
アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン又は５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｃｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｒｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチルプソイドウリジン（ｍ１Ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３Ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（１－メチルプソイドウリジン（ｍ１Ψ）としても知られる、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３Ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（Ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－β－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－β－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－ａｒａ－ウリジン（2'-F-ara-uridine）、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－ａｒａ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジンを含む。
【0161】
一部の実施形態においては、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドは、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、プソイドイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、ピロール－シチジン、ピロール－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－プソイドイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４
２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－ａｒａ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－ａｒａ－シチジンを含む。
【0162】
一部の実施形態においては、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドは、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６
２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６
２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－β－リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－ａｒａ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－ａｒａ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンを含む。
【0163】
一部の実施形態においては、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドは、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－脱メチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペロキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ）、修飾したヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、クエオシン（Ｑ）、エポキシクエオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－クエオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－クエオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ），Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２
２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ），８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２
２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２’７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、及び２’－Ｏ－リボシルグアノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））を含む。
【0164】
ヌクレオチドの核酸塩基は、プリン、ピリミジン、プリン又はピリミジンアナログから独立に選択することが可能である。例えば核酸塩基は、それぞれ、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル又はヒポキサンチンから独立に選択することが可能である。別の実施形態においては、核酸塩基はまた、例えば、ピラゾール［３，４－ｄ］ピリミジン、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ（例えば、８－ブロモ）、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシ及び他の８－置換のアデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、デアザグアニン、７－デアザグアニン、３－デアザグアニン、デアザアデニン、７－デアザアデニン、３－デアザアデニン、ピラゾール［３，４－ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５－ａ］１，３，５トリアジノン、９－デアザプリン、イミダゾ［４，５－ｄ］ピラジン、チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン、ピラジン－２－オン、１，２，４－トリアジン、ピリダジン；並びに１，３，５トリアジンを含む、塩基の、自然に発生する誘導体及び合成誘導体を含むことが可能である。ヌクレオチドが短縮形Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ又はＵを用いて示される場合、各文字は、代表的な塩基及び／又はその誘導体を指すものであり、例えばＡはアデニン又はアデニンアナログ、例えば７－デアザアデニン）を含む。
ヌクレオシド間結合における修飾
ヌクレオシド間結合における修飾
【0165】
修飾ヌクレオチドは、ポリヌクレオチド、一次コンストラクト、又はｍＲＮＡ分子に組み込まれ得、ヌクレオシド間結合（例えば、リン酸骨格）において修飾することが可能である。本明細書においては、ポリヌクレオチド骨格の文脈で、「リン酸塩（ホスフェート）」及び「リン酸ジエステル（ホスホジエステル）」という句を区別なく用いる。骨格のリン酸基は、酸素原子のうちの１つ又は複数を異なる置換基で置換することによって修飾することが可能である。また、修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、修飾していないリン酸部分の、本明細書において記載するような別のヌクレオシド間結合との大規模な置換を含むことが可能である。修飾リン酸基の例として、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ホスホン酸水素（hydrogen
phosphonate）、ホスホロアミダート、ホスホロジアミダート、アルキル又はアリール
ホスホネート、及びホスホトリエステルが挙げられるがこれに限定されない。ホスホロジチオエートは、結合していない酸素の両方が硫黄で置換されている。リン酸リンカーはまた、結合している酸素を、窒素（架橋ホスホロアミダート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、及び炭素（架橋メチレン－ホスホネート）で置換することによって修飾することも可能である。
phosphonate）、ホスホロアミダート、ホスホロジアミダート、アルキル又はアリール
ホスホネート、及びホスホトリエステルが挙げられるがこれに限定されない。ホスホロジチオエートは、結合していない酸素の両方が硫黄で置換されている。リン酸リンカーはまた、結合している酸素を、窒素（架橋ホスホロアミダート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、及び炭素（架橋メチレン－ホスホネート）で置換することによって修飾することも可能である。
【0166】
α－チオ置換したリン酸部分は、非天然のホスホロチオエート骨格結合を介してＲＮＡ及びＤＮＡポリマーに安定性を与えるために提供される。ホスホロチオエートＤＮＡ及びＲＮＡは、ヌクレアーゼ耐性が増し、次いで細胞環境においてより長い半減期となる。ホスホロチオエート結合したポリヌクレオチド、一次コンストラクト、又はｍｍＲＮＡ分子は、細胞の自然免疫分子のより弱い結合／活性化により自然免疫応答が低減することも予期される。
【0167】
特定の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、アルファ－チオ－ヌクレオシド（例えば、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－アデノシン、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－シチジン（α－チオ－シチジン）、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－グアノシン、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－ウリジン、又は５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－プソイドウリジン）を含む。
【0168】
リン原子を含有しないヌクレオシド間結合を含む、本発明により採用され得る他のヌクレオシド間結合は、本明細書において以下に記載する。
修飾した糖、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合の組合せ
修飾した糖、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合の組合せ
【0169】
この発明のポリヌクレオチド、一次コンストラクト、及びｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／又はヌクレオシド間結合に対する修飾の組合せを含むことが可能である。
【0170】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物のＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド、又はポリリボヌクレオチドの精製された製剤は、上記した修飾のうちの２つ以上の組合せを含む。別の実施形態においては、ＲＮＡ又はオリゴリボヌクレオチドの精製された製剤は、上記した修飾のうちの３つ以上の組合せを含む。別の実施形態においては、ＲＮＡ又はオリゴリボヌクレオチドの精製された製剤は、上記した修飾のうちの３つより多い組合せを含む。
【0171】
一実施形態においては、修飾ｍＲＮＡは、インビトロで合成された修飾ｍＲＮＡを含む。
【0172】
一実施形態においては、本発明は、ＨＳＶ糖タンパク質をコードする１又は複数の修飾ｍＲＮＡを含む。一実施形態においては、修飾ＲＮＡは、プソイドウリジン又はプソイドウリジンファミリー残基を含む。別の実施形態においては、本発明の修飾ｍＲＮＡは、それにコードされたＨＳＶ糖タンパク質のタンパク質発現を支配することが可能である。
【0173】
別の実施形態においては、本発明は、プソイドウリジンを含む、ＨＳＶ糖タンパク質をコードするインビトロで転写されたｍＲＮＡ分子を提供する。別の実施形態においては、本発明は、プソイドウリジンを含む、ＨＳＶ糖タンパク質をコードする合成ｍＲＮＡ分子を提供する。
【0174】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物のインビトロで転写されたｍＲＮＡ分子は、Ｔ７ファージＲＮＡポリメラーゼにより合成する。別の実施形態においては、分子は、ＳＰ６ファージＲＮＡポリメラーゼにより合成する。別の実施形態においては、分子は、Ｔ３ファージＲＮＡポリメラーゼにより合成する。別の実施形態においては、分子は、上記したポリメラーゼから選択されるポリメラーゼにより合成する。別の実施形態においては、ｍＲＮＡは、ＤＮＡに類似の円柱上で化学的に合成する。
【0175】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物のＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド、又はポリリボヌクレオチドにおいて修飾されるヌクレオシドは、ウリジン（Ｕ）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、シチジン（Ｃ）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、アデニン（Ａ）である。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、グアニン（Ｇ）である。
【0176】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、ポリ－Ａ尾部をさらに含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、ポリ－Ａ尾部を含まない。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0177】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップを含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップを含まない。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、３’－Ｏ－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧを含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、リバーシブルでないキャップアナログを含み、これは一実施形態においてはｍＲＮＡの転写中に付加される。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、アンチリバースキャップアナログを含む。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0178】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、キャップ非依存性翻訳エンハンサーをさらに含む。別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、キャップ非依存性翻訳エンハンサーを含まない。別の実施形態においては、キャップ非依存性翻訳エンハンサーは、タバコエッチ病ウイルス（tobacco etch virus）（ＴＥＶ）のキャップ非依存性翻訳エンハンサーである。別の実施形態においては、キャップ非依存性翻訳エンハンサーは、当技術分野で公知のその他のキャップ非依存性翻訳エンハンサーである。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0179】
一実施形態においては、「プソイドウリジン」は、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジンを指す。別の実施形態においては、この語は、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）を指す。別の実施形態においては、この語は、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジンを指す。別の実施形態においては、この語は、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）を指す。別の実施形態においては、この語は、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）を指す。別の実施形態においては、修飾ヌクレオシドは、４’（プソイドウリジン）である。別の実施形態においては、この語は、さらに修飾されていないプソイドウリジン部分を指す。別の実施形態においては、この語は、上記したプソイドウリジンのうちのいずれかの一リン酸塩、二リン酸塩、又は三リン酸塩を指す。別の実施形態においては、この語は、当技術分野で公知のその他のプソイドウリジンを指す。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0180】
別の実施形態においては、修飾ＲＮＡは修飾ヌクレオシドを含み、これは一実施形態においては、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、２’－Ｏ－メチル－Ｕ、２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、又はこれらの組合せを含む。
【0181】
別の実施形態においては、本発明は、組換え型タンパク質を対象に送達する方法であって、対象を本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡと接触させてそれによって組換え型タンパク質を対象に送達する工程を含む方法、を提供する。
【0182】
別の実施形態においては、本発明の方法は、ＲＮＡ分子における、修飾ウリジンヌクレオシドの数、割合又は頻度を増加して、免疫原性を低下又は翻訳の効率を増すことを含む。一実施形態においては、ＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド又はポリリボヌクレオチド分子における修飾ウリジン残基の数が、本発明において観察される効果の規模を決定する。
【0183】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡにおけるウリジン残基のうちの０．１％～１００％が、修飾される（例えば、プソイドウリジンの存在によって）。別の実施形態においては、当該残基の０．１％が修飾される。別の実施形態においては、０．２％である。別の実施形態においては、割合は０．３％である。別の実施形態においては、割合は０．４％である。別の実施形態においては、割合は０．５％である。別の実施形態においては、割合は０．６％である。別の実施形態においては、割合は０．８％である。別の実施形態においては、割合は１％である。別の実施形態においては、割合は１．５％である。別の実施形態においては、割合は２％である。別の実施形態においては、割合は２．５％である。別の実施形態においては、割合は３％である。別の実施形態においては、割合は４％である。別の実施形態においては、割合は５％である。別の実施形態においては、割合は６％である。別の実施形態においては、割合は８％である。別の実施形態においては、割合は１０％である。別の実施形態においては、割合は１２％である。別の実施形態においては、割合は１４％である。別の実施形態においては、割合は１６％である。別の実施形態においては、割合は１８％である。別の実施形態においては、割合は２０％である。別の実施形態においては、割合は２５％である。別の実施形態においては、割合は３０％である。別の実施形態においては、割合は３５％である。別の実施形態においては、割合は４０％である。別の実施形態においては、割合は４５％である。別の実施形態においては、割合は５０％である。別の実施形態においては、割合は６０％である。別の実施形態においては、割合は７０％である。別の実施形態においては、割合は８０％である。別の実施形態においては、割合は９０％である。別の実施形態においては、割合は１００％である。
【0184】
別の実施形態においては、割合は５％未満である。別の実施形態においては、割合は３％未満である。別の実施形態においては、割合は１％未満である。別の実施形態においては、割合は２％未満である。別の実施形態においては、割合は４％未満である。別の実施形態においては、割合は６％未満である。別の実施形態においては、割合は８％未満である。別の実施形態においては、割合は１０％未満である。別の実施形態においては、割合は１２％未満である。別の実施形態においては、割合は１５％未満である。別の実施形態においては、割合は２０％未満である。別の実施形態においては、割合は３０％未満である。別の実施形態においては、割合は４０％未満である。別の実施形態においては、割合は５０％未満である。別の実施形態においては、割合は６０％未満である。別の実施形態においては、割合は７０％未満である。
【0185】
別の実施形態においては、所与のウリジンヌクレオチドの残基の０．１％が修飾される。別の実施形態においては、ヌクレオチドの割合は０．２％である。別の実施形態においては、割合は０．３％である。別の実施形態においては、割合は０．４％である。別の実施形態においては、割合は０．５％である。別の実施形態においては、割合は０．６％である。別の実施形態においては、割合は０．８％である。別の実施形態においては、割合は１％である。別の実施形態においては、割合は１．５％である。別の実施形態においては、割合は２％である。別の実施形態においては、割合は２．５％である。別の実施形態においては、割合は３％である。別の実施形態においては、割合は４％である。別の実施形態においては、割合は５％である。別の実施形態においては、割合は６％である。別の実施形態においては、割合は８％である。別の実施形態においては、割合は１０％である。別の実施形態においては、割合は１２％である。別の実施形態においては、割合は１４％である。別の実施形態においては、割合は１６％である。別の実施形態においては、割合は１８％である。別の実施形態においては、割合は２０％である。別の実施形態においては、割合は２５％である。別の実施形態においては、割合は３０％である。別の実施形態においては、割合は３５％である。別の実施形態においては、割合は４０％である。別の実施形態においては、割合は４５％である。別の実施形態においては、割合は５０％である。別の実施形態においては、割合は６０％である。別の実施形態においては、割合は７０％である。別の実施形態においては、割合は８０％である。別の実施形態においては、割合は９０％である。別の実施形態においては、割合は１００％である。
【0186】
別の実施形態においては、所与のウリジンヌクレオチドの割合は、８％未満である。別の実施形態においては、割合は１０％未満である。別の実施形態においては、割合は５％未満である。別の実施形態においては、割合は３％未満である。別の実施形態においては、割合は１％未満である。別の実施形態においては、割合は２％未満である。別の実施形態においては、割合は４％未満である。別の実施形態においては、割合は６％未満である。別の実施形態においては、割合は１２％未満である。別の実施形態においては、割合は１５％未満である。別の実施形態においては、割合は２０％未満である。別の実施形態においては、割合は３０％未満である。別の実施形態においては、割合は４０％未満である。別の実施形態においては、割合は５０％未満である。別の実施形態においては、割合は６０％未満である。別の実施形態においては、割合は７０％未満である。
【0187】
別の実施形態においては、「リボヌクレオチド」、「オリゴリボヌクレオチド」及びポリリボヌクレオチドの語は、一実施形態において、糖部分がリボースであるヌクレオチドを含む化合物を指す。別の実施形態においては、この語は、骨格が修飾されているＲＮＡ及びＲＮＡ誘導体の両方を含む。様々なＲＮＡ骨格修飾が、当技術分野で公知であるので、本発明で検討される。一実施形態においては、修飾ＲＮＡは、ＰＮＡ（ペプチド核酸）である。ペプチド骨格及びヌクレオチド塩基を含有するＰＮＡは、別の実施形態においてＤＮＡ及びＲＮＡの両分子と結合することができる。別の実施形態においては、ヌクレオチドは、１又は複数のリン酸ジエステル結合のホスホロチオエート結合との置換によって修飾される。別の実施形態においては、人工核酸は、当技術分野で公知の天然核酸のリン酸骨格のその他の変異体を含有する。それぞれの核酸の誘導体が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0188】
修飾骨格を有する核酸の産生方法は、当技術分野で周知であり、また例えば、Ｈｕｔｃｈｅｒｓｏｎらに対して発行された米国特許第５，７２３，３３５号及び第５，６６３，１５３号と、関連のＰＣＴ公報である国際公開第９５／２６２０４号に記載されている。各方法が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0189】
関心の核酸は、核酸の製剤から夾雑物を除去して、それによって実質的に核酸製剤の免疫原性性能を低減する方法であれば、当技術分野で公知の任意の方法、又は開発されようとする任意の方法によって精製することができる。一実施形態においては、関心の核酸は、高速液体クロマトグライフィー（ＨＰＬＣ）により精製する。別の実施形態においては、関心の核酸は、関心の核酸を細菌酵素ＲＮアーゼＩＩＩと接触させることによって精製する。別の種々の実施形態においては、核酸製剤の免疫原性を実質的に低減する任意の核酸精製方法を、用いることが可能である。本発明の組成物及び方法と共に用いることが可能である精製方法の非限定的な例は、液体クロマトグラフィーによる分離及び酵素消化であり、それぞれを単独で又は、任意の組合せで同時に若しくは任意の順で、用いられる。液体クロマトグラフィーによる分離の非限定的な例は、ＨＰＬＣ及び高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を含む。本発明のＨＰＬＣ及びＦＰＬＣ法で有用な材料は、架橋ポリスチレン／ジビニルベンゼン（ＰＳ／ＤＶＢ）、ＰＳ／ＤＶＢ－Ｃ１８、ＰＳ／ＤＶＢ－アルキル化、Ｈｅｌｉｘ ＤＮＡカラム（バリアン社（Varian））、Ｅｃｌｉｐｓｅ ｄｓＤＮＡ Ａｎａｌｙｓｉｓカラム（アジレントテクノロジー社（Agilent
Technologies））、逆相５（ＲＰＣ－５）交換材料、ＤＮＡＰａｃ、ＰｒｏＳｗｉｆｔ、及びｂｉｏ－ｉｎｅｒｔ ＵｌｔｉＭａｔｅ（登録商標）３０００チタニウムカラム（ダイオネクス社（Dionex））を含むがこれに限定されない。本発明の酵素消化法で有用な酵素は、この発明の核酸製剤における、例えばｄｓＲＮＡ夾雑物等である任意の夾雑物を消化できる任意の酵素を含み、またＲＮアーゼＩＩＩ、ＲＮアーゼＶＩ、Ｄｉｃｅｒ、及びＣｈｉｐｐｅｒ（Fruscoloni et al., 2002, PNAS 100:1639を参照のこと）を含
むがこれに限定されない。関心の核酸の純度を評価するアッセイの非限定的な例は、本明細書の他の場所に記載する、ドットブロットアッセイ、ノーザンブロットアッセイ、及び樹状細胞活性化アッセイを含む。
Technologies））、逆相５（ＲＰＣ－５）交換材料、ＤＮＡＰａｃ、ＰｒｏＳｗｉｆｔ、及びｂｉｏ－ｉｎｅｒｔ ＵｌｔｉＭａｔｅ（登録商標）３０００チタニウムカラム（ダイオネクス社（Dionex））を含むがこれに限定されない。本発明の酵素消化法で有用な酵素は、この発明の核酸製剤における、例えばｄｓＲＮＡ夾雑物等である任意の夾雑物を消化できる任意の酵素を含み、またＲＮアーゼＩＩＩ、ＲＮアーゼＶＩ、Ｄｉｃｅｒ、及びＣｈｉｐｐｅｒ（Fruscoloni et al., 2002, PNAS 100:1639を参照のこと）を含
むがこれに限定されない。関心の核酸の純度を評価するアッセイの非限定的な例は、本明細書の他の場所に記載する、ドットブロットアッセイ、ノーザンブロットアッセイ、及び樹状細胞活性化アッセイを含む。
【0190】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、同一の配列をもつ非修飾のインビトロ合成ｍＲＮＡ分子よりも免疫原性が有意に低い。別の実施形態においては、修飾ｍＲＮＡ分子は、その非修飾の同等物よりも免疫原性が２倍低い。別の実施形態においては、免疫原性は３倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は５倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は７倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は１０倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は１５倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性はある倍率で低減する。別の実施形態においては、免疫原性は５０倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は１００倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は２００倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は５００倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は１０００倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は２０００倍低減する。別の実施形態においては、免疫原性は別の倍率の差だけ低減する。
【0191】
別の実施形態においては、「有意に低い免疫原性」は、免疫原性における検出可能な低下を指す。別の実施形態においては、この語は、免疫原性のある倍率での低下することを指す（例えば、上記に列挙した倍率での低下のうちの１つ）。別の実施形態においては、この語は、検出可能な免疫応答を誘発せずに修飾ｍＲＮＡの有効量を投与することが可能であるような低下を指す。別の実施形態においては、この語は、組換え型タンパク質の発現を検出可能に低減させるのに十分な免疫応答を誘発せずに修飾ｍＲＮＡを繰り返し投与することが可能であるような低下を指す。別の実施形態においては、組換え型タンパク質の検出可能な発現を誘発するのに十分な免疫応答を誘発せずに修飾ｍＲＮＡを繰り返し投与することが可能であるような低下である。
【0192】
免疫原性を決定する方法は、当技術分野で周知であり、また米国特許第８，２７８，０３６号に詳細に記載されており、これは本明細書において参照によりここに援用される。
【0193】
別の実施形態においては、本発明の方法及び組成物の修飾ｍＲＮＡは、同一の配列をもつ非修飾ｍＲＮＡ分子よりも効率的に細胞内で翻訳される。別の実施形態においては、修飾ｍＲＮＡは、標的細胞によって翻訳される能力の促進を呈する。別の実施形態においては、翻訳は、その非修飾同等物と比較して２倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、３倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、５倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、７倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、１０倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、１５倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、２０倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、５０倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、１００倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、２００倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、５００倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、１０００倍促進される。別の実施形態においては、翻訳は、２０００倍促進される。別の実施形態においては、その率は１０～１０００倍である。別の実施形態においては、その率は１０～１００倍である。別の実施形態においては、その率は１０～２００倍である。別の実施形態においては、その率は１０～３００倍である。別の実施形態においては、その率は１０～５００倍である。別の実施形態においては、その率は２０～１０００倍である。別の実施形態においては、その率は３０～１０００倍である。別の実施形態においては、その率は５０～１０００倍である。別の実施形態においては、その率は１００～１０００倍である。別の実施形態においては、その率は２００～１０００倍である。別の実施形態においては、翻訳は、その他の有意な量又は量の範囲だけ促進される。各可能性が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0194】
翻訳効率の決定方法は、当技術分野で周知であり、また例えばコードされたレポータータンパク質の活性を測定すること（例えば、ルシフェラーゼ又はウミシイタケ又は緑色蛍光のタンパク質［Wall A A, Phillips A M et al, Effective translation of
the second cistron in two Drosophila dicistronic transcripts is determined by the absence of in-frame AUG codons in the first cistron. J
Biol Chem 2005; 280(30): 27670-8］）、又は翻訳されたタンパク質に組み込まれる放射性標識を測定すること（Ngosuwan J, Wang N M et al, Roles of cytosolic Hsp70 and Hsp40 molecular chaperones in post-translational translocation of pre-secretory proteins into the endoplasmic reticulum. J Biol Chem 2003; 278(9): 7034-42）を含む。各方法が、本発明の個々の実施形態を表す。
the second cistron in two Drosophila dicistronic transcripts is determined by the absence of in-frame AUG codons in the first cistron. J
Biol Chem 2005; 280(30): 27670-8］）、又は翻訳されたタンパク質に組み込まれる放射性標識を測定すること（Ngosuwan J, Wang N M et al, Roles of cytosolic Hsp70 and Hsp40 molecular chaperones in post-translational translocation of pre-secretory proteins into the endoplasmic reticulum. J Biol Chem 2003; 278(9): 7034-42）を含む。各方法が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0195】
別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、樹状細胞である。別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、マクロファージである。別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、Ｂ細胞である。別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、別の抗原提示細胞である。別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、粘膜細胞である。別の実施形態においては、本発明の方法の標識細胞は、上皮細胞である。別の実施形態においては、細胞は、皮膚細胞である。別の実施形態においては、細胞は、上皮細胞である。別の実施形態においては、細胞は、角化細胞である。別の実施形態においては、細胞は、メルケル細胞、メラニン形成細胞又はランゲルハンス細胞である。各方法が、本発明の個々の実施形態を表す。
【0196】
治療方法及び組成物の使用方法
本発明はまた、本発明の組成物を投与する工程を含む、ＨＳＶに対して対象をワクチン接種し、ＨＳＶ感染またはその症状もしくは徴候を治療する、妨害する、阻害する、その発生低減する、または抑制する方法を提供する。
本発明はまた、本発明の組成物を投与する工程を含む、ＨＳＶに対して対象をワクチン接種し、ＨＳＶ感染またはその症状もしくは徴候を治療する、妨害する、阻害する、その発生低減する、または抑制する方法を提供する。
【0197】
１つの実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を治療する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0198】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を抑制する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0199】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を阻害する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0200】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0201】
１つの実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－１感染である。別の実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－２感染である。
【0202】
１つの実施形態において、対象は、ＨＳＶ－１感染を治療する方法、阻害する方法、抑制する方法などのためＨＳＶ－１糖タンパク質が投与される。別の実施形態において、対象は、ＨＳＶ－２感染を治療する方法、阻害する方法、抑制する方法などのためＨＳＶ－２糖タンパク質が投与される。別の実施形態において、対象は、ＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染、またはその組み合わせを治療する方法、阻害する方法、抑制する方法などのためＨＳＶ－１糖タンパク質が投与される。別の実施形態において、対象は、ＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染、またはその組み合わせを治療する方法、阻害する方法、抑制する方法などのためＨＳＶ－２糖タンパク質が投与される。１つの実施形態において、ＨＳＶ－１糖タンパク質（例えば、ｇＣ１、ｇＤ１、ｇＥ１、またはその組み合わせ）の投与は、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２感染を治療するか、または予防する。別の実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質（例えば、ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２、またはその組み合わせ）の投与は、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２感染を治療するか、または予防する。
【0203】
この態様により、１つの実施形態において、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ－１糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0204】
１つの実施形態において、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象を１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む組成物と接触させる工程を含み、当該改変されたｍＲＮＡのそれぞれが、ＨＳＶ－２糖タンパク質またはその免疫原性断片をコードする、方法を提供する。
【0205】
１つの実施形態において、当該接触させる工程は、当該対象への投与を介してである。
【0206】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0207】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ－２ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ－２ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ－２ ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0208】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ－１ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ－１ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ－１ ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0209】
別の実施形態において、本発明は、対象における抗ＨＳＶ免疫応答を誘導する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ
ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0210】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ－２ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ－２ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ－２ ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0211】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ－１ ｇＤもしくはその免疫原性断片；（ｂ）本明細書において記載されるＨＳＶ－１ ｇＣもしくはその断片；（ｃ）本明細書において記載されるＨＳＶ－１ ｇＥもしくはその断片、またはその組み合わせをコードする改変されたｍＲＮＡを含む免疫原性組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0212】
別の実施形態において、本発明は、対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、対象における初発のＨＳＶ感染を阻害する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を治療する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における初発のＨＳＶ感染後の炎症を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0213】
１つの実施形態において、本発明は、初発のＨＳＶ感染および／または二次的なＨＳＶ感染を治療および／または抑制する方法を提供する。１つの実施形態において、「初発の」感染は、１回目の感染を指す。１つの実施形態において、「二次的な」感染は、ＨＳＶ感染の再発を指す。
【0214】
１つの実施形態において、「炎症」または「再発」は、潜伏した神経細胞のＨＳＶ感染後の皮膚組織の再感染を指す。別の実施形態において、用語は、潜伏期間後のＨＳＶの再活性化を指す。別の実施形態において、用語は、非症候性潜伏期間後の症候性ＨＳＶ病変を指す。
【0215】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶの伝播を阻害する方法を提供する。１つの実施形態において、ＤＲＧから皮膚への伝播は、阻害される。１つの実施形態において、ＨＳＶの細胞から細胞への伝播は、阻害される。１つの実施形態において、順行性伝播は、阻害される。１つの実施形態において、逆行性伝播は、阻害される。「ＤＲＧ」は、１つの実施形態において、神経細胞体を指し、別の実施形態において、神経線維の神経細胞体を含有する。別の実施形態において、用語は、当該技術分野において使用される「ＤＲＧ」の任意の他の定義を指す。別の実施形態において、ＨＳＶの神経組織への伝播は、阻害される。
【0216】
別の実施形態において、本発明は、対象における初発のＨＳＶ感染後の再発を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における初発のＨＳＶ感染後の再発を予防する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0217】
別の実施形態において、本発明は、対象における初発のＨＳＶ感染後のＨＳＶ口唇を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0218】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染の再発を予防する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染の再発の重症度を投与する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染の再発の頻度を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染した対象において記載される方法のいずれかを提供する。
【0219】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ脳炎を治療する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ脳炎の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。「ＨＳＶ脳炎」は、１つの実施形態において、単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ）により引き起こされる脳炎を指す。別の実施形態において、用語は、ＨＳＶと関連する脳炎を指す。別の実施形態において、用語は、任意の他のタイプの当該技術分野において公知のＨＳＶにより仲介される脳炎を指す。
【0220】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ新生児感染を治療または低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0221】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ糖タンパク質を対象の細胞に導入する方法であって、当該細胞を組換えタンパク質をコードするｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡ分子と接触させる工程を含み、当該ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡ分子が、改変されたヌクレオシドをさらに含み、これにより、当該ＨＳＶ糖タンパク質を当該対象の当該細胞に導入する、方法を提供する。
【0222】
別の実施形態において、本発明は、哺乳類細胞を導入して、ＨＳＶ糖タンパク質を産生する方法であって、当該哺乳類細胞をＨＳＶ糖タンパク質をコードするｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたｍＲＮＡ分子を接触させる工程を含み、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたｍＲＮＡ分子が、プソイドウリジンを含み、これにより、当該哺乳類細胞を誘導して、当該ＨＳＶ糖タンパク質を産生させる、方法を提供する。
【0223】
本明細書におけるＨＳＶへの言及は、１つの実施形態において、ＨＳＶ－１を指し、一方、別の実施形態において、ＨＳＶ－２を指し、一方、別の実施形態において、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２を指す。
【0224】
「ＨＳＶ－１」は、別の実施形態において、単純ヘルペスウイルス－１を指す。別の実施形態において、用語は、ＫＯＳ株を指す。別の実施形態において、用語は、Ｆ株を指す。別の実施形態において、用語は、ＮＳ株を指す。別の実施形態において、用語は、ＣＬ１０１株を指す。別の実施形態において、用語は、「１７」株を指す。別の実施形態において、用語は、「１７＋ｓｙｎ」株を指す。別の実施形態において、用語は、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株を指す。別の実施形態において、用語は、ＭＰ株を指す。別の実施形態において、用語は、ＨＦ株を指す。別の実施形態において、用語は、当該技術分野において公知の任意の他のＨＳＶ－１株を指す。
【0225】
「ＨＳＶ－２」は、別の実施形態において、単純ヘルペスウイルス－２を指す。別の実施形態において、用語は、ＨＳＶ－２ ３３３株を指す。別の実施形態において、用語は、２．１２株を指す。別の実施形態において、用語は、ＨＧ５２株を指す。別の実施形態において、用語は、ＭＳ株を指す。別の実施形態において、用語は、Ｇ株を指す。別の実施形態において、用語は、１８６株を指す。別の実施形態において、用語は、当該技術分野において公知の任意の他のＨＳＶ－２株を指す。
【0226】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染に対して対象をワクチン接種する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を抑制する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を妨害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における初発のＨＳＶ感染を妨害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における神経細胞のＨＳＶ伝播を妨害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0227】
用語、「ＨＳＶ感染を妨害する」および「初発のＨＳＶ感染を妨害する」は、別の実施形態において、感染性ウイルスのタイターを低減することを指す。別の実施形態において、用語は、ウイルスの複製の程度を減少することを指す。
【0228】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ介在性ヘルペス性眼疾患の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ－１角膜感染またはヘルペス性角膜炎を治療する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ－１角膜感染またはヘルペス性角膜炎の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0229】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ性器感染を治療するか、抑制するか、または阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、再発ＨＳＶ感染の任意の徴候を治療するか、抑制するか、または阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0230】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ介在性生殖器潰瘍性疾患の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における潜伏ＨＳＶ感染の確立を妨害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0231】
１つの実施形態において、本発明は、対象における性器ヘルペス感染を治療するか、抑制するか、またはを阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における口腔ヘルペス感染を治療するか、抑制するか、またはを阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0232】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ介在性脳炎の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0233】
別の実施形態において、本発明の方法により治療されるか、または予防されるヘルペス性脳炎は、局所性ヘルペス脳炎である。別の実施形態において、ヘルペス性脳炎は、新生児ヘルペス脳炎である。別の実施形態において、ヘルペス性脳炎は、当該技術分野において公知の任意の他のタイプのヘルペス性脳炎である。
【0234】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ性脳炎に関連するまたは二次的に関連する疾患、障害、または症状の発生を治療するか、または低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0235】
別の実施形態において、本発明は、対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、対象におけるＨＳＶ感染を治療するか、ＨＳＶ感染の病原性を低減するか、ＨＳＶ感染の症状を回復させるか、ＨＳＶ感染の二次的な症状を回復させるか、ＨＳＶ感染の発生を低減するか、ＨＳＶ感染の再発までの潜伏を延長する方法を提供する。
【0236】
別の実施形態において、本発明は、ヒト対象における帯状疱疹病変または類似の大流行の形成に対して対象を保護する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒト対象におけるＨＳＶ帯状疱疹病変または類似の大流行の形成を阻害する方法を提供する。
【0237】
「帯状疱疹」は、１つの実施形態において、特に、再活性化感染中のＨＳＶ感染の皮膚病変特徴を指し、１つの実施形態において、発疹として始まり、続いてデルマトーム付近で分布し、条片またはベルト様パターンで一般に生じる。１つの実施形態において、発疹は、小胞または漿液で満たされた小さい水疱に発展する。１つの実施形態において、帯状疱疹病変は、マウスにおいて、ＨＳＶとの接触の結果として形成する。別の実施形態において、帯状疱疹病変は、ヒトにおいて、ＨＳＶとの接触の結果として形成する。「帯状疱疹伝播」は、１つの実施形態において、結節腫からデルマトーム内の二次的皮膚部位内に伝播するＨＳＶ感染を指す。別の実施形態において、用語は、感染の開始部位と同じデルマトーム内での伝播を指す。別の実施形態において、用語は、当該技術分野において公知の「帯状疱疹伝播」の任意の他の定義を指す。「大流行」は、別の実施形態において、疾患の症状における、または疾患の伝播もしくは蔓延における突然の増大を指し、１つの実施形態において、帯状疱疹病変における突然の増大を指し、一方、別の実施形態において、「大流行」は、帯状疱疹病変の突然の噴出を指す。
【0238】
１つの実施形態において、本発明は、対象におけるデルマトーム病変または類似の状態の形成を妨害する方法を提供する。１つの実施形態において、デルマトーム病変は、ＨＳＶとの接触の結果として形成する。別の実施形態において、デルマトーム病変は、ウイルスが、結節腫において潜伏から再活性化するとき、最も頻繁に発生し、１つの実施形態において、伝播は、神経を下り、１つの実施形態において、再発感染を引き起こす。
【0239】
本発明の方法を使用して、対象のＨＳＶへの曝露後のＨＳＶ感染またはかかる感染と関連する初発もしくは二次的な症状を治療し、阻害し、抑制などし得ることは、理解されるべきである。別の実施形態において、対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。別の実施形態において、対象は、ＨＳＶ感染のリスクがある。別の実施形態において、対象が、ワクチン接種時にＨＳＶに感染しているかどうかに関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、ＨＳＶ感染またはかかる感染と関連する初発もしくは二次的な症状を治療し、阻害し、抑制などするのに有効である。
【0240】
１つの実施形態において、「治療すること」は、治療処置または予防的もしくは予防処置を指し、目的は、本明細書において上で記載される標的にされる病的な状態または障害を予防するか、または和らげることである。従って、１つの実施形態において、治療することは、直接的に、疾患、障害もしくは状態、またはその組み合わせと関連する症状に影響するかもしくは治癒する、抑制する、阻害する、予防する、重症度を低減する、開始を遅延させる、低減し得る。従って、１つの実施形態において、「治療すること」は、とりわけ、進行を遅延させること、寛解を促進すること、寛解を誘導すること、寛解を増大させること、回復を加速すること、代替治療の有効性を増大させること、または代替治療に対する抵抗性を減少すること、またはその組み合わせを指す。１つの実施形態において、「予防すること」は、とりわけ、症状の開始を遅延させること、疾患への再発を予防すること、再発エピソードの回数もしくは頻度を減少すること、症候性エピソード間の潜伏を増大させること、またはその組み合わせを指す。１つの実施形態において、「抑制すること」または「阻害すること」は、とりわけ、症状の重症度を低減すること、急性エピソードの重症度を低減すること、症状の回数を低減すること、疾患に関連する症状の発生を低減すること、症状の潜伏を低減すること、症状を回復させること、二次的な症状を低減すること、二次的な感染を低減すること、患者生存を延長すること、またはその組み合わせを指す。
【0241】
１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、ＨＳＶ獲得の割合、ＨＳＶ感染の持続時間、ＨＳＶ再活性化の頻度、またはその組み合わせを下げるのに有効である。別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、生殖器潰瘍性疾患を治療するか、または阻害するのに有効であり、１つの実施形態において、ＨＳＶ生殖器潰瘍性疾患の重症度または頻度を減少することを必要とする。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、補体からの免疫回避をブロックする。１つの実施形態において、ｍＲＮＡによりコードされるＨＳＶサブユニットを用いたワクチン接種は、高いタイターの中和抗体または強力なＴ細胞応答を生じ得るが、続く感染の際、ＨＳＶ免疫回避分子が、抗体またはＴ細胞の活性をブロックし、これにより、組成物の有効性を低減するかもしれない。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、１つの実施形態において、補体からの免疫回避を予防するためにｇＣ－１を使用して、例えば、ｇＤ－１サブユニット組成物の有効性を増強することにより、ウイルス仲介性免疫回避をブロックするストラテジーを取り込む。
【0242】
１つの実施形態において、モルモットおよびマウスにおける研究は、結節腫におけるウイルス量が、再発ＨＳＶ感染の頻度と相関することを示唆する。従って、１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、再発ＨＳＶ感染を予防または阻害するのに有用である。１つの実施形態において、例えば、ｇＣ－１に対する抗体は、免疫回避に関与するドメインをブロックし、補体活性を増強し、抗ｇＤ－１の中和活性を改善し、抗体および補体依存性細胞傷害活性を増大させ、補体介在性中和および感染した細胞の溶解を増大する。
【0243】
１つの実施形態において、症状は初発であり、一方、別の実施形態において、症状は二次的である。１つの実施形態において、「初発の」は、対象のウイルス感染の直接的な結果である症状を指し、一方、１つの実施形態において、「二次的な」は、初発の原因からもたらされるか、または結果である症状を指す。１つの実施形態において、本発明における使用のための組成物および株は、ＨＳＶ感染と関連する初発もしくは二次的な症状または二次的な合併症を治療する。
【0244】
別の実施形態において、「症状」は、女性における尿道、子宮頸部、大腿上部、および／もしくは肛門または男性における陰茎、尿道、陰嚢、大腿上部、および肛門の水疱、潰瘍、または病変、舌、口または口唇の炎症、膨潤、発熱、インフルエンザ様症状、口内炎、咽喉炎、咽頭炎、疼痛、水膨れ、潰瘍、口唇ヘルペス、頸部痛、肥大したリンパ節、発赤、出血、そう痒、排尿障害、頭痛、筋痛など、あるいはその組み合わせを含む、ＨＳＶ感染の任意の徴候であってもよい。
【0245】
別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発熱である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、頭痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、肩こりである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発作である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、半身不随である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、昏迷である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、昏睡である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス性脳炎と関連するか、または二次的である、当該技術分野において公知の任意の他の疾患、障害、または症状である。
【0246】
ヘルペス性脳炎の存在および重症度を決定する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｂｏｎｋｏｗｓｋｙ ＪＬら、（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｒｅｌａｐｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｓｐａｓｍｓ ｗｉｔｈ ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、２００６年５月；１１７（５）：ｅ１０４５～８頁）およびＫｈａｎ ＯＡら、（Ｈｅｒｐｅｓ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ａｓ ｍｉｌｄ ａｐｈａｓｉａ： ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ、ＢＭＣ
ＦａｍＰｒａｃｔ、２００６年３月２４日；７：２２頁）において記載される。それぞれの方法は、本発明の別々の実施形態を表す。
ＦａｍＰｒａｃｔ、２００６年３月２４日；７：２２頁）において記載される。それぞれの方法は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0247】
別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染と関連する疾患、障害、または症状の発生を治療するか、または低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0248】
別の実施形態において、ＨＳＶ感染の二次的な疾患、障害、または症状は、口腔病変である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、生殖器病変である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、口腔の潰瘍である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、生殖器潰瘍である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発熱である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、頭痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、筋痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、鼠径部における肥大した腺である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、痛みを伴う尿排せつである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、おりものである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、水疱形成である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、インフルエンザ様倦怠感である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、角膜炎である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、疱疹性ひょう疽である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ベルまひである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス性多形性紅斑である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、腰の症状（例えば、無感覚、臀部または肛門周辺範囲の刺痛、尿閉、便秘、および不能）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、局所性ヘルペス性湿疹である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、播種性ヘルペス性湿疹である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、闘技ヘルペスである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス性毛瘡である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、食道の症状（例えば、困難な嚥下または灼熱、嚥下中の圧迫する喉の疼痛、体重減少、嚥下中の上胸部中または裏の疼痛）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、当該技術分野において公知である任意の他の疾患、障害、または症状である。それぞれの疾患、障害、および症状は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0249】
従って、１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染自体の発生を治療するか、抑制するか、阻害するか、または低減し、一方、別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染の初発の症状の発生を治療するか、抑制するか、阻害するか、または低減し、一方、別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染の二次的な症状の発生を治療するか、抑制するか、阻害するか、または低減する。本発明の組成物および方法が、感染、感染により引き起こされる初発の症状、および感染に関連する二次的な症状の任意の組み合わせに影響し得ることは、理解されるべきである。
【0250】
本発明の方法および組成物により治療されるか、または改善されるＨＳＶ感染は、別の実施形態において、生殖器ＨＳＶ感染である。別の実施形態において、ＨＳＶ感染は、口腔ＨＳＶ感染である。別の実施形態において、ＨＳＶ感染は、眼のＨＳＶ感染である。別の実施形態において、ＨＳＶ感染は、皮膚科のＨＳＶ感染ＨＳＶ感染である。
【0251】
別の実施形態において、本発明は、対象における播種性ＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0252】
別の実施形態において、本発明は、対象の子孫における新生児ＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0253】
別の実施形態において、本発明は、対象からその子孫へのＨＳＶ感染の伝染を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0254】
別の実施形態において、子孫は、乳児である。別の実施形態において、低減されるか、または阻害される伝染は、出生中の伝染である。別の実施形態において、母乳栄養中の伝染は、低減されるか、または阻害される。別の実施形態において、低減されるか、または阻害される伝染は、当該技術分野において公知の、任意の他のタイプの親から子孫への伝染である。
【0255】
別の実施形態において、本発明は、対象の子孫における新生児ＨＳＶ感染の重症度を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0256】
１つの実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ ｇＣタンパク質またはその断片をコードする改変されたｍＲＮＡ；（ｂ）ＨＳＶ ｇＥタンパク質またはその断片をコードする改変されたｍＲＮＡ；および（ｃ）アジュバントを含む組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染の発生を治療する、抑制する、阻害する、または低減する方法であって、当該対象に（ａ）ＨＳＶ ｇＣタンパク質またはその断片をコードする改変されたｍＲＮＡ、当該断片は、そのＣ３ｂ結合ドメイン、そのプロパージン干渉ドメイン、そのＣ５干渉ドメイン、または当該Ｃ３ｂ結合ドメイン、プロパージン干渉ドメイン、もしくはＣ５干渉ドメインの断片のいずれかを含む；（ｂ）ＨＳＶ ｇＥタンパク質またはその断片をコードする改変されたｍＲＮＡ、当該断片は、ＡＡ ２４－４０９またはその断片を含む；および（ｃ）アジュバントを含む組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0257】
別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染を治療する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染を抑制する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染を予防する方法であって、当該対象に本発明のＨＳＶ組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。１つの実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＩＶ感染のリスクを増大させ、ＨＳＶ感染に対する防御は、ＨＩＶ感染のリスクを減少する。従って、１つの実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染のリスクを減少する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【0258】
１つの実施形態において、本発明の方法における使用のための組成物は、ＨＳＶに対する免疫応答を誘発する。別の実施形態において、本発明の方法における使用のための組成物は、ＨＳＶ－１に対する免疫応答を誘発する。別の実施形態において、本発明の方法における使用のための組成物は、ＨＳＶ－２に対する免疫応答を誘発する。別の実施形態において、組成物は、ｇＤおよびｇＣタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、組成物は、ｇＥおよびｇＤタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、組成物は、ｇＣおよびｇＥタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、組成物は、ｇＥ、ｇＤ、およびｇＣタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、組成物は、ｇＥ、ｇＤ、またはｇＣタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡを含む。別の実施形態において、改変されたｍＲＮＡによりコードされるタンパク質は、ＨＳＶ－１タンパク質である。別の実施形態において、改変されたｍＲＮＡによりコードされるタンパク質は、ＨＳＶ－２タンパク質である。別の実施形態において、改変されたｍＲＮＡによりコードされるタンパク質は、ＨＳＶ－１とＨＳＶ－２タンパク質の両方を含む。
【0259】
１つの実施形態において、本明細書において記載される実施形態のいずれかによる対象は、ＨＳＶに感染した対象であってもよく、または別の実施形態において、ＨＳＶの感染が疑われる対象であってもよいことは、理解されるべきである。１つの実施形態において、対象は、少なくとも１つの他の病原体に感染していてもよく、または別の実施形態において、少なくとも１つの他の病原体の感染が疑われてもよい。１つの実施形態において、対象は、易感染性であってもよい。１つの実施形態において、対象は、ＨＳＶに感染し、一方、別の実施形態において、対象は、ＨＳＶによる感染のリスクがあり、１つの実施形態において、新生児である対象であり、別の実施形態において、易感染性であり、別の実施形態において、高齢者であり、別の実施形態において、易感染性の新生児または易感染性の高齢者対象である。
【0260】
別の実施形態において、本発明の組成物およびそれらの関連する使用は、対象におけるＨＩＶ感染を抑制するか、阻害するか、予防するか、または治療し得る。１つの実施形態において、本発明の組成物およびそれらの関連する使用は、１つの実施形態において、日和見感染、新生物、神経学的異常、または進行性免疫低下である、ＨＩＶ感染の二次的な合併症を治療し得る。別の実施形態において、方法は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を治療する工程を含む。別の実施形態において、方法は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球の数における減少を治療する工程を含む。
【0261】
別の実施形態において、本発明は、子孫へのＨＩＶ－１伝染を低減する方法であって、対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。当該技術分野において公知の通り、ＨＳＶ－２感染は、生殖器の分泌物におけるＨＩＶ－１ウイルス排出を増大させる（Ｎａｇｏｔ Ｎら、Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＩＶ－１ ＲＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．、２００７年２月２２日；３５６（８）：７９０～９頁）。従って、ＨＳＶ－２感染を阻害する本発明の方法はまた、子孫へのＨＩＶ－１伝染を低減するのに有効である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－１株である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－２株である。
【0262】
別の実施形態において、本発明は、性的パートナーへのＨＩＶ－１伝染を低減する方法であって、対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。当該技術分野において公知の通り、ＨＳＶ－２感染は、生殖器の分泌物におけるＨＩＶ－１ウイルス排出を増大させる。従って、ＨＳＶ－２感染を阻害する本発明の方法はまた、性的パートナーへのＨＩＶ－１伝染を低減するのに有効である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－１株である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－２株である。
【0263】
別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ－１に対する感受性を低減する方法であって、対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。当該技術分野において公知の通り、ＨＳＶ－２感染は、ＨＩＶ－１複製を増大させる（Ｏｕｅｄｒａｏｇｏ Ａら、Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｇｅｎｉｔａｌ ＨＩＶ－１ ＲＮＡ ａｍｏｎｇ ｗｏｍｅｎ ｔａｋｉｎｇ ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｔｈｅｒａｐｙ： ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ、ＡＩＤＳ、２００６年１１月２８日；２０（１８）：２３０５～１３頁）。従って、ＨＳＶ－２感染を阻害する本発明の方法はまた、ＨＩＶ－１に対する感受性を低減するのに有効である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－１株である。別の実施形態において、変異体ＨＳＶ株は、ＨＳＶ－２株である。
【0264】
従って、１つの実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染した対象における初発のＨＳＶ感染を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染した対象におけるＨＳＶ感染の発生を低減する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染した対象における初発のＨＳＶ感染後の炎症、再発、またはＨＳＶ口唇を阻害する方法であって、当該対象に本発明の組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。１つの実施形態において、本発明の組成物の投与は、抗ＨＳＶ免疫応答を誘導する。
【0265】
別の実施形態において、本発明は、対象における免疫応答を誘導する方法であって、当該対象に本発明のヌクレオシドが改変されたｍＲＮＡ組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、免疫応答は、ＣＤ４免疫応答を含む。別の実施形態において、免疫応答は、ＣＤ８免疫応答を含む。別の実施形態において、免疫応答は、濾胞性ヘルパーＴ細胞免疫応答を含む。別の実施形態において、免疫応答は、胚中心Ｂ細胞免疫応答を含む。別の実施形態において、免疫応答は、ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２またはその組み合わせに対するＩｇＧ抗体応答を含む。
【0266】
別の実施形態において、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する方法であって、当該対象に本発明のヌクレオシドが改変されたｍＲＮＡ組成物を筋肉内投与する工程を含む、方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の発生を抑制するか、阻害するか、または低減する方法であって、当該対象に本発明のヌクレオシドが改変されたｍＲＮＡ組成物を筋肉内投与する工程を含む、方法を提供する。
【0267】
投与および医薬レジメン
本発明の組成物は、別の実施形態において、非経口、癌細胞近く（ｐａｒａｃａｎｃｅｒａｌｌｙ）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、心室内、頭蓋内、膣内、鼻腔内、腫瘍内、または局所のような、当業者に公知の任意の方法により対象に投与され得る。
本発明の組成物は、別の実施形態において、非経口、癌細胞近く（ｐａｒａｃａｎｃｅｒａｌｌｙ）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、心室内、頭蓋内、膣内、鼻腔内、腫瘍内、または局所のような、当業者に公知の任意の方法により対象に投与され得る。
【0268】
「投与すること」は、別の実施形態において、本発明の組成物の注射または他の手段による対象に直接導入することを指す。別の実施形態において、「投与すること」は、対象の免疫系の細胞を組成物もしくはＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡまたはその混合物と接触させることを指す。
【0269】
本発明の方法および組成物の別の実施形態において、組成物は、経口投与され、従って、経口投与に適当な形態、すなわち、固体または液体調製物に製剤される。適当な固体経口製剤は、錠剤、カプセル剤、ピル、顆粒剤、ペレットなどを含む。適当な液体経口製剤は、液剤、懸濁剤、分散剤、エマルジョン、オイルなどを含む。本発明の別の実施形態において、有効成分は、カプセル内に製剤される。この実施形態に従い、本発明の組成物は、有効な化合物、不活性な担体または希釈剤に加えて、硬ゼラチンカプセルを含む。
【0270】
他の実施形態において、医薬組成物は、液体調製物の静脈内、動脈内、または筋内注射により投与される。適当な液体製剤は、液剤、懸濁剤、分散剤、エマルジョン、オイルなどを含む。別の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与され、従って、静脈内投与に適当な形態で製剤される。別の実施形態において、医薬組成物は、動脈内投与され、従って、動脈内投与に適当な形態で製剤される。別の実施形態において、医薬組成物は、筋肉内投与され、従って、筋肉内投与に適当な形態で製剤される。
【0271】
別の実施形態において、医薬組成物は、身体表面に局所投与され、従って、局所投与に適当な形態で製剤される。適当な局所製剤は、ジェル剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤、点眼剤などを含む。局所投与のため、組成物またはそれらの生理的に許容される誘導体は、医薬担体を含む、または含まない、生理的に許容される希釈剤における液剤、懸濁剤、またはエマルジョンとして調製され、適用される。
【0272】
別の実施形態において、組成物は、座剤、例えば、直腸の座剤または尿道の座剤として投与される。別の実施形態において、医薬組成物は、ペレットの皮下移植により投与される。別の実施形態において、ペレットは、長期間の薬剤の制御放出をもたらす。
【0273】
好ましい実施形態において、医薬組成物は、筋肉内、皮下または皮内投与される。
【0274】
改変されたｍＲＮＡの「有効な投薬量」は、別の実施形態において、治療効果を発揮するのに十分な量を指す。別の実施形態において、用語は、コードされるタンパク質の検出可能な量の発現を誘発するのに十分な量を指す。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0275】
ＨＳＶ糖タンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの用量を測定する方法（例えば、ヒト対象における）は、当該技術分野において周知であり、例えば、用量増量試験を含む。それぞれの方法は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0276】
いくつかの実施形態において、本発明のＨＳＶ組成物および本発明の方法における使用のためのＨＳＶ組成物のいずれかは、本明細書において記載される任意の形態または実施形態において、本発明のＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡまたはＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、組成物および本発明の方法における使用のための組成物のいずれかは、本明細書において記載される任意の形態または実施形態において、本発明のＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡまたはＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書において記載される任意の形態または実施形態において、本発明のＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡまたはＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの組み合わせから本質的になる。いくつかの実施形態において、用語「含む」は、他のＨＳＶタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの包含、ならびに当該技術分野において公知であり得る他のタンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡの包含を指す。いくつかの実施形態において、用語「本質的になること」は、特定のＨＳＶタンパク質またはその断片をコードする改変されたｍＲＮＡを有する、組成物を指す。しかしながら、ＨＳＶタンパク質（複数を含む）をコードする改変されたｍＲＮＡ（複数を含む）の有用性に直接関与しない他の成分が、含まれてもよい。いくつかの実施形態において、用語「からなる」は、本明細書において記載される任意の形態または実施形態において、特定のＨＳＶタンパク質もしくは断片をコードする改変されたｍＲＮＡ、または本発明のＨＳＶタンパク質もしくは断片をコードする改変されたｍＲＮＡの組み合わせを有する組成物を指す。
【0277】
別の実施形態において、本発明は、本発明の改変されたｍＲＮＡを含む、ＨＳＶ－１またはその症状もしくは徴候を治療するための組成物を提供する。
【0278】
別の実施形態において、本発明は、本発明の改変されたｍＲＮＡを含む、ＨＳＶ－２またはその症状もしくは徴候を治療するための組成物を提供する。
【0279】
本発明の組成物、および方法は、１つの実施形態において、ＨＳＶ－１のｇＤ、ｇＥ、またはｇＣタンパク質、または別の実施形態において、ＨＳＶ－２のＨＳＶ－１のｇＤ、ｇＥ、またはｇＣタンパク質である、１つの実施形態において、ＨＳＶ－１のｇＤ、ｇＥ、またはｇＣタンパク質、または別の実施形態において、ＨＳＶ－２のＨＳＶ－１のｇＤ、ｇＥ、またはｇＣタンパク質に対して、７０％相同、別の実施形態において、８０％相同、別の実施形態において、８５％相同、別の実施形態において、９０％相同、別の実施形態において、９５％相同、別の実施形態において、９８％相同、および別の実施形態において、１００％相同である、非ＨＳＶヘルペスウイルスにおいて同様に使用され得ることは、理解されるべきである。１つの実施形態において、かかる組成物は、癌、または別の実施形態において、腫瘍を抑制するか、阻害するか、予防するか、または治療するのに有用であり得る。１つの実施形態において、非ＨＳＶヘルペスウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ＥＢＮＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、およびヒトヘルペスウイルス－６（ＨＨＶ－６）を含む。
【0280】
本発明の方法の別の実施形態において、本発明の組成物は、１回投与される。別の実施形態において、組成物は、２回投与される。別の実施形態において、組成物は、３回投与される。別の実施形態において、組成物は、４回投与される。別の実施形態において、組成物は、少なくとも４回投与される。別の実施形態において、組成物は、４回より多く投与される。
【0281】
別の実施形態において、投薬量は、１日用量である。別の実施形態において、投薬量は、週１回の用量である。別の実施形態において、投薬量は、月１回の用量である。別の実施形態において、投薬量は、年１回の用量である。別の実施形態において、用量は、一連の定義された数の用量であるものである。別の実施形態において、用量は、１回用量である。
【0282】
１つの実施形態において、本明細書において上で記載されたブースター投与のいずれかは、ＨＳＶ－１タンパク質またはその免疫原性断片をコードする１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む初回刺激投与後に投与される。別の実施形態において、本明細書において上で記載されたブースター投与のいずれかは、ＨＳＶ－２タンパク質またはその免疫原性断片をコードする１つまたは複数の改変されたｍＲＮＡを含む初回刺激ワクチン接種後に投与される。
【0283】
１つの実施形態において、対象は、組成物の１回投与で免疫される。別の実施形態において、対象は、１回投与で免疫される。別の実施形態において、対象は、２回投与で免疫される。別の実施形態において、対象は、３回投与で免疫される。別の実施形態において、対象は、４回投与で免疫される。別の実施形態において、対象は、５回投与で免疫される。
【0284】
１つの実施形態において、組成物の全ての成分は、等しい濃度で提供される。この態様により、１つの実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、１：１：１の比で提供される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、５：２：５の比で提供される。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＤをコードする改変されたｍＲＮＡは、１：１の比で提供される。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、１：１の比で提供される。別の実施形態において、ｇＤおよびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、１：１の比で提供される。
【0285】
１つの実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ、もしくはその組み合わせ、または他のＨＳＶ糖タンパク質と組み合わされた改変されたｍＲＮＡは、単一の組成物において、同じ部位で、同じ経路により投与され、一方、別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、別々の組成物において、別々の部位だが、同じ投与経路により投与され、または別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、別々の組成物において、別々の部位で、異なる投与経路により投与され、または別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、別々の組成物において、同じ部位で、異なる投与経路（例えば、注射および局所）により投与される。
【0286】
１つの実施形態において、本発明の方法は、本発明の１つまたは複数のヌクレオシド改変されたｍＲＮＡを含む組成物の１回または単回投与を含む。別の実施形態において、本発明の方法は、初回およびブースターアプローチにおける１つまたは複数のヌクレオシド改変されたｍＲＮＡを含む組成物の投与を含む。１つの実施形態において、本発明の方法は、当該対象に、１回目の投与に続く、当該ヌクレオシド改変されたｍＲＮＡ組成物の１回または複数回の追加投与を投与する工程をさらに含む。
【0287】
別の実施形態において、本発明の方法は、１回目の投与として１つまたは複数のＨＳＶ糖タンパク質をコードする１つまたは複数のヌクレオシド改変されたｍＲＮＡを含む組成物および２回目または連続投与として１つまたは複数のＨＳＶ糖タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む。１つの実施形態において、１回目（または初回）投与におけるｍＲＮＡによりコードされるＨＳＶ糖タンパク質は、２回目または連続（もしくはブースト）投与において同じ糖タンパク質である。別の実施形態において、１つまたは複数のＨＳＶ糖タンパク質を含む組成物は、１回目の投与として投与され、１つまたは複数のＨＳＶ糖タンパク質をコードする１つまたは複数のヌクレオシド改変されたｍＲＮＡを含む組成物は、２回目または連続投与として投与される。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0288】
別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＣまたはｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＤをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＤまたはｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＣをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＤまたはｇＣをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＣおよびｇＤをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＤをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＣおよびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡは、ｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡを含まない、ｇＤおよびｇＥをコードする改変されたｍＲＮＡのブースター投与に続き、同時に投与される。１つの実施形態において、ブースター投与は、初回刺激投与と、同じ部位で、同じ投与様式により行われる。別の実施形態において、ブースター投与は、初回刺激投与と異なる部位だが、初回刺激投与と同じ投与様式により行われる。１つの実施形態において、ブースター投与は、初回刺激投与と、同じ部位だが、異なる投与様式により行われる。別の実施形態において、ブースター投与は、初回刺激投与と、異なる部位で、異なる投与様式により行われる。
【0289】
１つの実施形態において、改変されたｍＲＮＡは、同じ量の同じ配列を有する改変されていないＲＮＡより検出可能に低い先天性免疫応答を誘導する。
【0290】
１つの実施形態において、本発明の組成物および方法の有効性は、補体の存在に依存し、一方、別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、補体の存在に依存しない。１つの実施形態において、本発明の方法における使用のための組成物の一部の有効性は、補体の存在に依存し、一方、他のものは、依存しない。１つの実施形態において、抗ｇＣ抗体は、ＨＳＶに対するその有効性について補体に依存する。
【0291】
１つの実施形態において、補体は、自然および獲得免疫にとって重要な関与因子である。１つの実施形態において、補体活性化は、粒子食作用および溶解によるウイルス中和を促進し、好中球およびマクロファージの化学誘引物質として機能し、ＢおよびＴ細胞応答を増強する。１つの実施形態において、ＨＳＶ－１ ｇＣは、補体Ｃ３ｂに結合し、Ｃ５、およびＣ３ｂとのプロパージン相互作用をブロックし、補体活性化および補体介在性ウイルス中和を阻害する。１つの実施形態において、補体と相互作用するｇＣ－１ドメインは、アミノ酸３３～１３３内に位置し、Ｃ５、およびＣ３ｂへのプロパージン結合をブロックし、１つの実施形態において、補体と相互作用するｇＣ－１ドメインは、アミノ酸１２４～３６６から伸長し、Ｃ３ｂに直接結合する。１つの実施形態において、Ｃ３ｂ結合ドメインが欠損したＨＳＶ－１ ｇＣ変異体ウイルスは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで補体仲介性ウイルス中和により感受性であり、マウス側腹モデルにおいて野生型（ＷＴ）ウイルスより病原性が低い。それ故、１つの実施形態において、ｇＣ－１とＣ３ｂの間の相互作用は、ＨＳＶ－１病原性を増強し、１つの実施形態において、ｇＣ－１ドメインのブロッキングは、ＨＳＶ－１感染の予防または治療において有効である。
【0292】
１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、ヒト対象における使用のためである、一方、別の実施形態において、それらは、動物対象における使用のためである。別の実施形態において、対象は、哺乳類である。別の実施形態において、対象は、ＨＳＶによる感染が疑われる任意の生物である。１つの実施形態において、対象は、マウス、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ブタなどである。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、オス対象において有効である。別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、メス対象において有効である。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法は、血清陰性対象において有効である。別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、血清陽性対象において有効である。
【0293】
医薬製剤
１つの実施形態において、本発明の方法は、接触工程に先立ち、改変されたｍＲＮＡをトランスフェクション試薬と混合する工程をさらに含む。別の実施形態において、本発明の方法は、トランスフェクション試薬と一緒に改変されたｍＲＮＡを投与する工程をさらに含む。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、陽イオン性脂質試薬である。
１つの実施形態において、本発明の方法は、接触工程に先立ち、改変されたｍＲＮＡをトランスフェクション試薬と混合する工程をさらに含む。別の実施形態において、本発明の方法は、トランスフェクション試薬と一緒に改変されたｍＲＮＡを投与する工程をさらに含む。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、陽イオン性脂質試薬である。
【0294】
別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、脂質ベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、タンパク質ベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、ポリエチレンイミンベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、リン酸カルシウムである。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）またはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、当該技術分野において公知の任意の他のトランスフェクション試薬である。
【0295】
別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、リポソームを形成する。リポソームは、別の実施形態において、細胞内安定性を増大させ、取り込み効率を増大させ、生物学的活性を改善する。
【0296】
別の実施形態において、リポソームは、細胞膜を成すこれらの脂質と同じ様式で配置された脂質を含む中空球状小胞である。これらは、別の実施形態において、水溶性化合物を封入するための内部の水性空間を有し、直径が０．０５～数ミクロンのサイズの範囲にある。別の実施形態において、リポソームは、ＲＮＡを細胞に生物学的に活性な形態でデリバリーし得る（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７～１５３３頁（１９９０年）；Ｔｒｅａｔら、ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（編）、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、３５３～３６５頁（１９８９年）；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書、３１７～３２７頁を参照；同書を一般的に参照）。
【0297】
それぞれのタイプのトランスフェクション試薬は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0298】
別の実施形態において、本発明の改変されたｍＲＮＡは、ナノ粒子において封入される。ナノ粒子パッケージング方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｂｏｓｅ
Ｓら、（Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ３ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ、７８：８１４６頁、２００４年）；Ｄｏｎｇ Ｙら、Ｐｏｌｙ（ｄ，ｌ－ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）／ｍｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２６：６０６８頁、２００５年）；Ｌｏｂｅｎｂｅｒｇ Ｒら（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｏｄｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ １４Ｃ－ｌａｂｅｌｌｅｄ ＡＺＴ
ｂｏｕｎｄ ｔｏ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏ ｌｕｍｉｎｏｇｒａｐｈｙ、Ｊ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔ、５：１７１頁、１９９８年）；Ｓａｋｕｍａ Ｓ Ｒら（Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ
ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｃｈａｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ、Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ、１７７：１６１頁、１９９９年）；Ｖｉｒｏｖｉｃ Ｌら（Ｎｏｖｅｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ、２：７０７頁、２００５年）；およびＺｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｅら、（Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ－ ａｎｄ ｐＨ－ｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｉｄ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ （ＳＬＮ） ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ ｉｎ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｅｄｉａ、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ、５２：２０３頁、２００１年）において記載される。それぞれの方法は、本発明の別々の実施形態を表す。
Ｓら、（Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ３ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ、７８：８１４６頁、２００４年）；Ｄｏｎｇ Ｙら、Ｐｏｌｙ（ｄ，ｌ－ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）／ｍｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２６：６０６８頁、２００５年）；Ｌｏｂｅｎｂｅｒｇ Ｒら（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｏｄｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ １４Ｃ－ｌａｂｅｌｌｅｄ ＡＺＴ
ｂｏｕｎｄ ｔｏ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏ ｌｕｍｉｎｏｇｒａｐｈｙ、Ｊ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔ、５：１７１頁、１９９８年）；Ｓａｋｕｍａ Ｓ Ｒら（Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ
ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｃｈａｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ、Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ、１７７：１６１頁、１９９９年）；Ｖｉｒｏｖｉｃ Ｌら（Ｎｏｖｅｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ、２：７０７頁、２００５年）；およびＺｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｅら、（Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ－ ａｎｄ ｐＨ－ｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｉｄ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ （ＳＬＮ） ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ ｉｎ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｅｄｉａ、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ、５２：２０３頁、２００１年）において記載される。それぞれの方法は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0299】
１つの実施形態において、ψｍＲＮＡをナノ粒子において封入して、デリバリーの効率およびψｍＲＮＡの発現を改善する。ナノ粒子パッケージングは、ＲＮＡを濃縮し、ポリ－Ｌ－リジンおよびポリエチレングリコールを含む化学物質を使用して、核膜の孔より小さい粒子に封入することを含む。１つの実施形態において、ＲＮＡは、４種のナノ粒子製剤（ＰＥＩ、ＰＬＬ、ＰＡＥ、およびＣＫ３０ＰＥＧ１０ｋ）の１種にパッケージングされる。
【0300】
脂質ナノ粒子
１つの実施形態において、本発明の組成物および方法において使用されるナノ粒子は、Ｃｕｌｌｉｓ， Ｐ．、およびＨｏｐｅ， Ｍ、（日付なし）、Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｅｎａｂｌｉｎｇ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ．、２５（７）において記載される脂質ナノ粒子を含み、その全体が、本明細書において参照により取り込まれる。
１つの実施形態において、本発明の組成物および方法において使用されるナノ粒子は、Ｃｕｌｌｉｓ， Ｐ．、およびＨｏｐｅ， Ｍ、（日付なし）、Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｅｎａｂｌｉｎｇ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ．、２５（７）において記載される脂質ナノ粒子を含み、その全体が、本明細書において参照により取り込まれる。
【0301】
１つの実施形態において、ヌクレオシドが改変されたＲＮＡのデリバリーは、本明細書において他で記載される典型的なＲＮＡトランスフェクション方法を含む、任意の適当なデリバリー方法を含む。ある種の実施形態において、ヌクレオシドが改変されたＲＮＡの対象へのデリバリーは、接触工程に先立ち、ヌクレオシドが改変されたＲＮＡをトランスフェクション試薬と混合することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、トランスフェクション試薬と一緒にヌクレオシドが改変されたＲＮＡを投与する工程をさらに含む。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、陽イオン性脂質試薬である。
【0302】
別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、脂質ベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、タンパク質ベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、ポリエチレンイミンベースのトランスフェクション試薬である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、リン酸カルシウムである。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）、またはＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）である。別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、当該技術分野において公知の任意の他のトランスフェクション試薬である。
【0303】
別の実施形態において、トランスフェクション試薬は、リポソームを形成する。
【0304】
リポソームは、別の実施形態において、細胞内安定性を増大させ、取り込み効率を増大させ、生物学的活性を改善する。別の実施形態において、リポソームは、細胞膜を成すこれらの脂質と同じ様式で配置された脂質を含む中空球状小胞である。これらは、別の実施形態において、水溶性化合物を封入するための内部の水性空間を有し、直径が０．０５～数ミクロンのサイズの範囲にある。別の実施形態において、リポソームは、ＲＮＡを細胞に生物学的に活性な形態でデリバリーすることができる。
【0305】
１つの実施形態において、組成物は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）および本明細書において記載される１つまたは複数の核酸分子を含む。例えば、１つの実施形態において、組成物は、ＬＮＰおよび１つもしくは複数の抗原をコードする１つもしくは複数のヌクレオシドが改変されたＲＮＡ分子、アジュバント、またはその組み合わせを含む。
【0306】
用語「脂質ナノ粒子」は、１つまたは複数の脂質、例えば、全体が本明細書において参照により取り込まれる、国際公開第２０１６１７６３３０Ａ１号において記載される、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の脂質を含む、ナノメーターのオーダー（例えば、１～１，０００ｎｍ）の少なくとも１次元を有する粒子を指す。
【0307】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、本明細書において記載されるヌクレオシドが改変されたＲＮＡを含む製剤において含まれる。いくつかの実施形態において、かかる脂質ナノ粒子は、陽イオン性脂質ならびに中性脂質、荷電脂質、ステロイドおよびポリマー結合脂質（例えば、化合物ＩＶａのような、構造（ＩＶ）のペグ化脂質のペグ化脂質）から選択される１つまたは複数の賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオシドが改変されたＲＮＡは、脂質ナノ粒子の脂質部分または脂質ナノ粒子の脂質部分の一部もしくは全てにより覆われる水性空間において封入され、これにより、これにより、これを、宿主生物または細胞の機序により誘導される酵素切断または他の不所望な作用、例えば、有害な免疫応答から保護する。
【0308】
様々な実施形態において、脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、もしくは１５０ｎｍの平均直径を有し、実質的に無毒性である。ある種の実施形態において、ヌクレオシドが改変されたＲＮＡは、脂質ナノ粒子に存在するとき、ヌクレアーゼを用いた分解に対して、水溶液において抵抗性である。
【0309】
ＬＮＰは、１つまたは複数の核酸分子が結合するか、１つまたは複数の核酸分子が封入される、粒子を形成する能力がある任意の脂質を含んでもよい。用語「脂質」は、脂肪酸の誘導体（例えば、エステル）であり、水において不溶解性であるが、多くの有機溶媒において溶解性であることにより一般に特徴付けられる、有機化合物の群を指す。脂質は、通常、少なくとも３種のクラス：（１）脂肪および油ならびにワックスを含む「単純脂質」；（２）リン脂質および糖脂質を含む「化合物脂質」；ならびに（３）ステロイドのような「誘導体脂質」に分けられる。
【0310】
１つの実施形態において、ＬＮＰは、１つまたは複数の陽イオン性脂質、および１つまたは複数の安定化脂質を含む。安定化脂質は、中性脂質およびペグ化脂質を含む。
【0311】
１つの実施形態において、ＬＮＰは、陽イオン性脂質を含む。本明細書において使用される、用語「陽イオン性脂質」は、ｐＨが、脂質のイオン性基のｐＫより低いので、陽イオンであるか、または陽イオン性（プロトン化）になるが、より高いｐＨ値において徐々により中性である脂質を指す。ｐＫ未満のｐＨ値において、次に、脂質は、負に荷電した核酸と結合することができる。ある種の実施形態において、陽イオン性脂質は、ｐＨが減少するにつれ、正に荷電とみなす、両性イオン脂質を含む。
【0312】
ある種の実施形態において、陽イオン性脂質は、生理学的ｐＨのような、選択ｐＨにおいて正味の正電荷を有する多数の脂質空間のいずれかを含む。かかる脂質は、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；Ｎ－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；Ｎ－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）；３－（Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｉ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ－２－（スペルミンカルボキサミド）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、オクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、およびＮ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）を含むが、これらに限定されない。加えて、本発明において使用され得る、陽イオン性脂質の多数の市販の調製物は、入手可能である。これらは、例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、Ｎ．Ｙ．から市販されている、ＤＯＴＭＡおよび１，２－ジオレオイル－ｓｎ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む陽イオン性リポソーム）；ＬＩＰＯＦＥＣＴアミン（登録商標）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから市販されている、Ｎ－（ｌ－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ－（２－（スペルミンカルボキサミド）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）および（ＤＯＰＥ）を含む陽イオン性リポソーム）；およびＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．から市販されている、エタノール中でジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）を含む陽イオン性脂質）を含む。次の脂質は、陽イオン性であり、生理学的ｐＨ未満において正の荷電を有する。
【0313】
ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、ＤＭＤＭＡ、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノールエニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）。
【0314】
１つの実施形態において、陽イオン性脂質は、アミノ脂質である。本発明において有用な適当なアミノ脂質は、全体が参照により本明細書において取り込まれる、国際公開第２０１２／０１６１８４号において記載されるものを含む。代表的なアミノ脂質は、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロライド塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃ１）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパンクロライド塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃ１）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、および２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）を含むが、これらに限定されない。
【0315】
ある種の実施形態において、陽イオン性脂質は、約３０～約９５モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、陽イオン性脂質は、約３０～約７０モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、陽イオン性脂質は、約４０～約６０モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、陽イオン性脂質は、約５０モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、ＬＮＰは、陽イオン性脂質のみを含む。ある種の実施形態において、Ｌ Ｐは、粒子の形成をそれらの形成中に安定化する１つまたは複数の追加の脂質を含む。
【0316】
適当な安定化脂質は、中性脂質および陰イオン性脂質を含む。
【0317】
用語「中性脂質」は、生理学的ｐＨにて、荷電していないまたは中性両性イオン形態のいずれかで存在する多数の脂質種のいずれか１つを指す。
【0318】
代表的な中性脂質は、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、ケファリン、およびセレブロシドを含む。
【0319】
典型的な中性脂質は、例えば、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジパルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジパルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）およびジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアリオイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、ならびに１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ｔｒａｎｓＤＯＰＥ）を含む。１つの実施形態において、中性脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である。
【0320】
いくつかの実施形態において、ＬＮＰは、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥおよびＳＭから選択される中性脂質を含む。様々な実施形態において、陽イオン性脂質（例えば、式（Ｉ）の脂質）の中性脂質に対するモル比は、約２：１～約８：１の範囲である。
【0321】
様々な実施形態において、ＬＮＰは、ステロイドまたはステロイド類似体をさらに含む。
【0322】
ある種の実施形態において、ステロイドまたはステロイド類似体は、コレステロールである。これらの実施形態のいくつかにおいて、陽イオン性脂質（例えば、式（Ｉ）の脂質）のコレステロールに対するモル比は、約２：１～１：１の範囲である。
【0323】
用語「陰イオン性脂質」は、生理学的ｐＨにて負に荷電している任意の脂質を指す。これらの脂質は、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ－ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リジルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオールホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、および中性脂質に結合した他の陰イオン性修飾基を含む。
【0324】
ある種の実施形態において、ＬＮＰは、糖脂質（例えば、モノシアロガングリオシドＧｍｉ）を含む。ある種の実施形態において、ＬＮＰは、コレステロールのような、ステロールを含む。
【0325】
いくつかの実施形態において、ＬＮＰは、ポリマー結合脂質を含む。用語「ポリマー結合脂質」は、脂質部分とポリマー部分の両方を含む分子を指す。ポリマー結合脂質の例は、ペグ化脂質である。用語「ペグ化脂質」は、脂質部分とポリエチレングリコール部分の両方を含む分子を指す。ペグ化脂質は、当該技術分野において公知であり、１－（モノメチルメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ｓ－ＤＭＧ）などを含む。
【0326】
ある種の実施形態において、ＬＮＰは、ポリエチレングリコール－脂質（ペグ化脂質）である、追加の安定化脂質を含む。適当なポリエチレングリコール脂質は、ＰＥＧ改変ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ改変ホスファチジン酸、ＰＥＧ改変セラミド（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ改変ジアルキルアミン、ＰＥＧ改変ジアシルグリセロール、ＰＥＧ改変ジアルキルグリセロールを含む。
【0327】
代表的なポリエチレングリコール脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ、およびＰＥＧ－ｓ－ＤＭＧを含む。１つの実施形態において、ポリエチレングリコール脂質は、Ｎ－［（メトキシポリ（エチレングリコール）２ＯＯＯ）カルバミル］－１，２－ジミリスチルオキシルプロピル－３－アミン（ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ）である。１つの実施形態において、ポリエチレングリコール脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧである。他の実施形態において、ＬＮＰは、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）のようなペグ化ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ペグ化ホスファチジルエタノロアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、４－Ｏ－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－Ｏ－（コ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタネジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ）のようなＰＥＧスクシネートジアシルグリセロール（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＡＧ）、ペグ化セラミド（ＰＥＧ－ｃｅｒ）、またはＱ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル－Ｎ－（２，３－ジ（テトラデカノキシ）プロピル）カルバメートもしくは２，３－ジ（テトラデカノキシ）プロピル－Ｎ－（コ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）カルバメートのようなＰＥＧジアルコキシプロピルカルバメートを含む。様々な実施形態において、陽イオン性脂質のペグ化脂質に対するモル比は、約１００：１～約２５：１の範囲である。
【0328】
ある種の実施形態において、追加の脂質は、約１～約１０モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、追加の脂質は、約１～約５モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。１つの実施形態において、追加の脂質は、約１モルパーセントまたは約１．５モルパーセントの量でＬＮＰに存在する。
【0329】
ある種の実施形態において、ＬＮＰは、ＬＮＰを細胞または細胞集団に標的化する能力がある１つまたは複数の標的部位を含む。例えば、１つの実施形態において、標的部分は、細胞表面において見られる受容体にＬＮＰを向けるリガンドである。
【0330】
ある種の実施形態において、ＬＮＰは、１つまたは複数の内部移行ドメインを含む。例えば、１つの実施形態において、ＬＮＰは、細胞に結合して、ＬＮＰの内部移行を誘導する１つまたは複数のドメインを含む。例えば、１つの実施形態において、１つまたは複数の内部移行ドメインは、脂肪表面に見られる受容体に結合して、ＬＮＰの受容体介在性取り込みを誘導する。ある種の実施形態において、ＬＮＰは、ｉｎ ｖｉｖｏで分子に結合する能力があり、ここで、次に、ＬＮＰ結合分子を、細胞表面受容体が認識して、内部有効を誘導し得る。例えば、１つの実施形態において、ＬＮＰは、全身性ＡｐｏＥに結合し、ＬＮＰおよび付随するカーゴの取り込みを誘導する。
【0331】
他の例となるＬＮＰおよびそれらの製造は、例えば、国際公開第２０１６１７６３３０Ａ１号、米国特許公開第ＵＳ２０１２０２７６２０９号、Ｓｅｍｐｌｅら、２０１０年、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２８（２）：１７２～１７６頁；Ａｋｉｎｃら、２０１０年、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．、１８（７）：１３５７～１３６４頁；Ｂａｓｈａら、２０１１年、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、１９（１２）：２１８６～２２００頁；Ｌｅｕｎｇら、２０１２年、Ｊ Ｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ Ｃ Ｎａｎｏｍａｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ、１１６（３４）：１８４４０～１８４５０頁；Ｌｅｅら、２０１２年、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．、１３１（５）：Ｅ７８１～９０頁；Ｂｅｌｌｉｖｅａｕら、２０１２年、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、１：ｅ３７；Ｊａｙａｒａｍａｎら、２０１２年、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ．、５１（３４）：８５２９～８５３３頁；Ｍｕｉら、２０１３年、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．、２、ｅ１３９；Ｍａｉｅｒら、２０１３年、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．、２１（８）：１５７０～１５７８頁；およびＴａｒｎら、２０１３年、Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、９（５）：６６５～７４頁において当該技術分野において記載され、これらのそれぞれが、これらの全体が参照により取り込まれる。
【0332】
別の実施形態において、本発明の方法は、ＨＳＶ糖タンパク質をコードする改変されたｍＲＮＡおよび医薬的に許容される担体または希釈剤を投与する工程を含む。他の実施形態において、液体製剤のための医薬的に許容される担体は、水性もしくは非水性溶液、懸濁液、エマルジョンまたは油であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。水性担体は、食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液を含む。油の例は、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、および魚肝油である。
【0333】
本明細書において使用される、「医薬的に許容される担体または希釈剤」は、当業者に周知である。
【0334】
別の実施形態において、本明細書において提供される医薬組成物は、制御放出組成物、すなわち、化合物が、投与後長期間に渡り放出される、組成物である。放出制御または持続放出組成物は、脂溶性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油）中の製剤を含む。別の実施形態において、組成物は、即効放出組成物、すなわち、化合物全体が、投与直後に放出される組成物である。
【0335】
添加剤、賦形剤、製剤および投与方法のそれぞれは、本発明の別々の実施形態を表す。
【0336】
別の実施形態において、本発明は、本発明の方法の実施において利用される試薬を含むキットを提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の組成物、ツール、または指示書を含むキットを提供する。
【0337】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより完全に説明するために提示される。これらは、しかしながら、本発明の広い範囲を制限すると決して解釈されるべきではない。
【実施例0338】
実施例１：材料および実験方法
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｃ、ＤおよびＥ（ｇＣ２／ｇＤ２／ｇＥ２）外部ドメインを発現する改変したｍＲＮＡ。改変したｍＲＮＡ（ｇＣ２（配列番号１０）をコードする、ｇＤ２（配列番号４）をコードする、およびｇＥ２（配列番号１６）をコードする）を、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｃ（ｇＣ２）アミノ酸２７～４２６（配列番号１１）、ＨＳＶ－２ ３３３株由来の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ２）アミノ酸２６～３３１（配列番号５）、およびＨＳＶ－２株２．１２由来の糖タンパク質Ｅ（ｇＥ２）アミノ酸２４～４０５（配列番号１７）をコードするＤＮＡコード配列に基づき調製した。
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｃ、ＤおよびＥ（ｇＣ２／ｇＤ２／ｇＥ２）外部ドメインを発現する改変したｍＲＮＡ。改変したｍＲＮＡ（ｇＣ２（配列番号１０）をコードする、ｇＤ２（配列番号４）をコードする、およびｇＥ２（配列番号１６）をコードする）を、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｃ（ｇＣ２）アミノ酸２７～４２６（配列番号１１）、ＨＳＶ－２ ３３３株由来の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ２）アミノ酸２６～３３１（配列番号５）、およびＨＳＶ－２株２．１２由来の糖タンパク質Ｅ（ｇＥ２）アミノ酸２４～４０５（配列番号１７）をコードするＤＮＡコード配列に基づき調製した。
【0339】
改変したｍＲＮＡを、Ａｃｕｉｔａｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによりリポソームナノ粒子（ＬＮＰ）に取り込み、次の免疫原：（ａ）ＬＮＰ中の多価ＣｍＲＮＡ；（ｂ）ＬＮＰ中のｇＣ２改変したｍＲＮＡ；（ｃ）ＬＮＰ中のｇＤ２改変したｍＲＮＡ；（ｄ）ＬＮＰ中のｇＥ２改変したｍＲＮＡ；（ｅ）ＬＮＰ中のｇＣ２およびｇＤ２およびｇＥ２改変したｍＲＮＡを調製した。
【0340】
免疫群は、次の通りであった：
ａ）対照（多価Ｃ群）：４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ／ＬＮＰ。
ｂ）ｇＤ２単独（ｇＤ２群）：４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ。
ｃ）個々の三価（三価－Ｉ群）：それぞれ２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ。
ｄ）組み合わせた三価（三価－Ｃ群）：ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇ。
ａ）対照（多価Ｃ群）：４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ／ＬＮＰ。
ｂ）ｇＤ２単独（ｇＤ２群）：４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ。
ｃ）個々の三価（三価－Ｉ群）：それぞれ２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ。
ｄ）組み合わせた三価（三価－Ｃ群）：ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇ。
【0341】
実験手法。電気レーザーおよびナイルを使用して、６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスの背から毛を除去した。１回目および２回目の免疫に先立ち、および膣内負荷に先立ち、マウスを出血させた。２回の免疫を、２８日の間隔で皮内で行った。皮内免疫を、露出した背中にて行った。個々の部位にて三価のワクチン接種を受けた５匹のマウス（上の群ｃ）を、２回目の免疫の１４日後に屠殺した。ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２サブユニット抗原に対する、またはそれぞれ１１個の重複するアミノ酸を含む１５種のアミノ酸ペプチドに対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答のため、脾臓を回収した。２回目の免疫の２８日後、マウスを、Ｄｅｐｏ－Ｐｒｏｖｅｒａ２ｍｇで皮下処理し、５日後、５×１０３ＰＦＵＨＳＶ－２株ＭＳ（約４００ＬＤ５０）で膣内感染させた。負荷後２および４日目において、膣スワブをウイルス培養のために得た。負荷後４日目において、それぞれのワクチン接種群における数匹のマウスを屠殺し、後根神経節（ＤＲＧ）を、ＨＳＶ－２ＤＮＡｑＰＣＲのため切除した。残る動物を、１０日間の体重減少および後肢衰弱について評価し、一方、生存および生殖器疾患を、２８日間モニターした。
【0342】
実施例２：ｇＣ２、ｇＰ２、およびｇＥ２改変したＭＲＮＡが産生した翻訳産物の特徴
哺乳類細胞に遺伝子導入したとき、予想分子量のタンパク質を発現する改変したｍＲＮＡの能力を検証した。ｇＣ２、ｇＤ２、またはｇＥ２改変したｍＲＮＡ０．１μｇを、遺伝子導入のためのＴｒａｎｓＩＴ－ｍＲＮＡ（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ ＬＬＣ）を使用して、２９３Ｔ細胞に遺伝子導入した。１８時間後、細胞を回収し、ウエスタンブロットのため抽出物を調製した。ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２の外部ドメイン（標識ｍＲＮＡ－ｅｃｔｏ）を発現するよう、ｍＲＮＡを設計した。予想分子量についての対照として、ｍＲＮＡコンストラクト（標識Ｂａｃ－ｅｃｔｏ）と同じアミノ酸を発現する精製バキュロウイルスタンパク質ｇＣ２、ｇＤ２、およびｇＥ２を使用した（図１Ａ～Ｃ）。
哺乳類細胞に遺伝子導入したとき、予想分子量のタンパク質を発現する改変したｍＲＮＡの能力を検証した。ｇＣ２、ｇＤ２、またはｇＥ２改変したｍＲＮＡ０．１μｇを、遺伝子導入のためのＴｒａｎｓＩＴ－ｍＲＮＡ（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ ＬＬＣ）を使用して、２９３Ｔ細胞に遺伝子導入した。１８時間後、細胞を回収し、ウエスタンブロットのため抽出物を調製した。ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２の外部ドメイン（標識ｍＲＮＡ－ｅｃｔｏ）を発現するよう、ｍＲＮＡを設計した。予想分子量についての対照として、ｍＲＮＡコンストラクト（標識Ｂａｃ－ｅｃｔｏ）と同じアミノ酸を発現する精製バキュロウイルスタンパク質ｇＣ２、ｇＤ２、およびｇＥ２を使用した（図１Ａ～Ｃ）。
【0343】
結論：哺乳類細胞に遺伝子導入したとき、ＨＳＶ－２ ｇＣ２（図１Ａ）、ｇＤ２（図１Ｂ）およびｇＥ２（図１Ｃ）の外部ドメインをコードする改変したｍＲＮＡは、ウエスタンブロットにおいて糖タンパク質に対する抗体と反応した適当な分子のタンパク質を産生した。
【0344】
実施例３：ｇＤ２または三価改変したＭＲＮＡワクチン接種で免疫した対象におけるＥＬＩＳＡ抗体応答
ＥＬＩＳＡエンドポイントタイターを、１回目および２回目の免疫の２８日後に採取した血清において評価した。免疫群は、次の通りであった： 多価Ｃ（４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）（対照）；ｇＤ２（４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）；三価－Ｉ（それぞれ２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）；および三価－Ｃ（ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＣ２ｂｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇ）。
ＥＬＩＳＡエンドポイントタイターを、１回目および２回目の免疫の２８日後に採取した血清において評価した。免疫群は、次の通りであった： 多価Ｃ（４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）（対照）；ｇＤ２（４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）；三価－Ｉ（それぞれ２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ／ＬＮＰ１０μｇ）；および三価－Ｃ（ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与したｇＣ２ｂｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇ）。
【0345】
４匹の動物を、それぞれの群において評価した。１回目の免疫（ローマ数字Ｉとして印をつけた；図２Ａ～Ｃ）後に、それぞれの免疫原に対して高いＥＬＩＳＡタイターを得て、２回目の免疫（ローマ数字ＩＩとして印をつけた；図２Ａ～Ｃ）後に、タイターはより高くブーストした。ｇＤ２改変したｍＲＮＡワクチン接種を用いた免疫は、非常に高いタイターのｇＤ２に対するＥＬＩＳＡ抗体を選択的に誘導し（図２Ｂ）、一方、三価改変したｍＲＮＡワクチン接種を用いた免疫は、非常に高いタイターのｇＣ２に対するＥＬＩＳＡ抗体（図２Ａ）およびｇＤ２に対するＥＬＩＳＡ抗体（図２Ｂ）、ならびに高いタイターのｇＥ２に対するＥＬＩＳＡ抗体（図２Ｃ）を産生した。全ての非対照群において、２回目の免疫は、１回目と比較してＥＬＩＳＡタイターを有意にブーストした。２回目の免疫におけるタイターと１回目の免疫におけるタイターの間の差は、有意であった、ｐ＜０．０５（ｔ検定、１回目および２回目の免疫後の抗体タイターを比較する）。
【0346】
結論：ｇＤ２ｍＲＮＡならびにｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡ免疫原は、１回目の免疫後に非常に高いタイターのＥＬＩＳＡ抗体を誘導し、それを２回目の免疫後に有意にブーストした。
【0347】
実施例４：改変したＭＲＮＡ免疫により産生したバランスのとれたＴＨ１およびＴＨ２ ＩｇＧアイソタイプ
ＴＨ１またはＴＨ２免疫応答を主に刺激するｍＲＮＡ免疫の能力を、ＩｇＧ１（ＴＨ２）またはＩｇＧ２ａ（ＴＨ１）抗体を産生するかどうかを決定することにより試験した。全３種の抗原ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２を用いてコーティングしたプレートにおいて、ＥＬＩＳＡを行った。１回目または２回目の免疫後に得た血清を、抗原でコーティングしたプレートに加え、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａを、ＨＲＰ抗マウスＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａを使用して検出した。ＩｇＧ１（図３Ａ）およびＩｇＧ２ａ（図３Ｂ）タイターは、ｇＤ２および三価改変したｍＲＮＡワクチン接種を用いた免疫後に、有意に上昇した。さらに、ＩｇＧ１（図３Ａ）またはＩｇＧ２ａ（図３Ｂ）タイターは、１回目と比較して、２回目の改変したｍＲＮＡ免疫後に有意に高かった、ｐ＜０．０５（ｔ検定）。
ＴＨ１またはＴＨ２免疫応答を主に刺激するｍＲＮＡ免疫の能力を、ＩｇＧ１（ＴＨ２）またはＩｇＧ２ａ（ＴＨ１）抗体を産生するかどうかを決定することにより試験した。全３種の抗原ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２を用いてコーティングしたプレートにおいて、ＥＬＩＳＡを行った。１回目または２回目の免疫後に得た血清を、抗原でコーティングしたプレートに加え、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａを、ＨＲＰ抗マウスＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａを使用して検出した。ＩｇＧ１（図３Ａ）およびＩｇＧ２ａ（図３Ｂ）タイターは、ｇＤ２および三価改変したｍＲＮＡワクチン接種を用いた免疫後に、有意に上昇した。さらに、ＩｇＧ１（図３Ａ）またはＩｇＧ２ａ（図３Ｂ）タイターは、１回目と比較して、２回目の改変したｍＲＮＡ免疫後に有意に高かった、ｐ＜０．０５（ｔ検定）。
【0348】
結論：結果は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２ａアイソタイプの両方に対する抗体のタイターを生じることを示し、これは、改変したｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡを用いた免疫に対するバランスのとれたＴＨ１およびＴＨ２応答を示している。
【0349】
実施例５：改変したＭＲＮＡ免疫後の高い中和抗体タイター
２回目の免疫の２８日後に、血清を得て、１：２５希釈から開始する、連続２倍希釈の血清、および補体の供給源としての１０％ヒト血清を使用して、中和抗体タイターを決定した。ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２についての個々の血清陰性から、ヒト血清を得た。改変したｍＲＮＡ群は、それぞれ、多価Ｃ対照と有意に異なった（ｐ＜０．００１；図４）。ｍＲＮＡ群のそれぞれは、互いに有意に異ならない一方、組み合わせた免疫原として投与した三価ワクチン接種（三価－Ｃ）を、３種のｍＲＮＡ群のベストとして行った（図４）。
２回目の免疫の２８日後に、血清を得て、１：２５希釈から開始する、連続２倍希釈の血清、および補体の供給源としての１０％ヒト血清を使用して、中和抗体タイターを決定した。ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２についての個々の血清陰性から、ヒト血清を得た。改変したｍＲＮＡ群は、それぞれ、多価Ｃ対照と有意に異なった（ｐ＜０．００１；図４）。ｍＲＮＡ群のそれぞれは、互いに有意に異ならない一方、組み合わせた免疫原として投与した三価ワクチン接種（三価－Ｃ）を、３種のｍＲＮＡ群のベストとして行った（図４）。
【0350】
結論：改変したｍＲＮＡ群のそれぞれは、１０％ヒト補体の存在下で非常に高いタイターの中和抗体を産生した。
【0351】
実施例６：改変したＭＲＮＡ免疫後の脾細胞におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答
別々の部位にてそれぞれの糖タンパク質ｍＲＮＡを用いて免疫した三価改変したｍＲＮＡ群（三価－Ｉ群）の５匹の動物を、２回目の免疫の１４日後に安楽死させた。Ｔ細胞アッセイのため、脾細胞を調製した。脾細胞を、バキュロウイルスにおいて調製した糖タンパク質サブユニット抗原または１１個の重複するアミノ酸を含有する１５種のアミノ酸ペプチドを用いて刺激した。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答を、それぞれ、図５および６において示す。
別々の部位にてそれぞれの糖タンパク質ｍＲＮＡを用いて免疫した三価改変したｍＲＮＡ群（三価－Ｉ群）の５匹の動物を、２回目の免疫の１４日後に安楽死させた。Ｔ細胞アッセイのため、脾細胞を調製した。脾細胞を、バキュロウイルスにおいて調製した糖タンパク質サブユニット抗原または１１個の重複するアミノ酸を含有する１５種のアミノ酸ペプチドを用いて刺激した。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答を、それぞれ、図５および６において示す。
【0352】
ＣＤ４＋Ｔ細胞：改変したｍＲＮＡ発現ｇＣ２、ｇＤ２、およびｇＥ２サブユニット抗原は、それぞれ、多機能ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を刺激した（図５Ａ～５Ｂ）。免疫した対象から回収し、次に、サブユニット抗原糖タンパク質を用いて刺激した脾細胞は、多機能ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を増大した（図５Ａ）。免疫した対象から回収し、次に、１５種のアミノ酸重複ペプチドを用いて刺激した脾細胞は、多機能ＣＤ４＋Ｔ細胞応答およびＩＦＮγ応答を増大した（図５Ｂ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞：ｇＥペプチドプール２のみが、有意なＩＦＮγＣＤ８＋Ｔ細胞応答を刺激した（図６Ｂ）。
【0353】
実施例７：改変したＭＲＮＡ免疫および膣内負荷後の生存、体重減少および神経学的徴候
２回目の免疫の３３日後、動物に、５×１０３ＰＦＵのＨＳＶ－２株ＭＳ（約４００ＬＤ５０）を膣内接種した。生存、後肢脆弱または麻痺および猫背の歩調からなる神経学的徴候、ならびに体重減少または増加について、動物を毎日観察した。多価Ｃ対照群における全ての動物は死亡し、一方、ｇＤ２単独、個別に投与した三価（標識三価－Ｉ）または組み合わせて投与した三価（標識三価－Ｃ）における全ての動物は生存した（図７Ａ；多価Ｃ対照を用いた３つのｍＲＮＡ／ＬＮＰ群と比較するＬｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）によりｐ＝０．００２）。図７Ｂは、２８日の間隔で２回の改変したｍＲＮＡワクチンの投与およびＨＳＶ－２の膣内負荷は、神経学的徴候または体重減少をもたらさないことを示す。ワクチンを投与し、ＨＳＶ－２を膣内負荷した対照対象は、体重減少および神経学的徴候を示した。
２回目の免疫の３３日後、動物に、５×１０３ＰＦＵのＨＳＶ－２株ＭＳ（約４００ＬＤ５０）を膣内接種した。生存、後肢脆弱または麻痺および猫背の歩調からなる神経学的徴候、ならびに体重減少または増加について、動物を毎日観察した。多価Ｃ対照群における全ての動物は死亡し、一方、ｇＤ２単独、個別に投与した三価（標識三価－Ｉ）または組み合わせて投与した三価（標識三価－Ｃ）における全ての動物は生存した（図７Ａ；多価Ｃ対照を用いた３つのｍＲＮＡ／ＬＮＰ群と比較するＬｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）によりｐ＝０．００２）。図７Ｂは、２８日の間隔で２回の改変したｍＲＮＡワクチンの投与およびＨＳＶ－２の膣内負荷は、神経学的徴候または体重減少をもたらさないことを示す。ワクチンを投与し、ＨＳＶ－２を膣内負荷した対照対象は、体重減少および神経学的徴候を示した。
【0354】
ｍＲＮＡ／ＬＮＰ群のそれぞれは、対照群より有意に優れた。改変したｍＲＮＡで免疫した全てのマウスは、ＨＳＶ－２の約４００ＬＤ５０の膣内負荷後に、生存し、体重減少、神経学的疾患または生殖器病変の証拠を示さなかった。
【0355】
実施例８：改変したＭＲＮＡ免疫および膣内負荷後のＨＳＶ－２膣タイター
負荷後２および４日目に、１群当たり１０匹の動物から、膣スワブを得て、複製コンピテントＨＳＶ－２ウイルスについて培養した。図８に、結果を示す。多価Ｃ群における１０匹中９匹の動物は、ｇＤ２群における１０匹中３匹、および三価－Ｉまたは三価－Ｃ群における１０匹中０匹と比較して、２日目（図８Ａ）および４日目（図８Ｂ）にて陽性の培養物を有した（Ｆｉｓｈｅｒ Ｅｘａｃｔ試験によるＰ値は、三価群をｇＤ２単独と比較して有意ではなかった；三価－Ｉまたは三価－Ｃを多価Ｃと比較して、ｐ＜０．００１；ｇＤ２単独を多価Ｃと比較して、ｐ＝０．０２）。
負荷後２および４日目に、１群当たり１０匹の動物から、膣スワブを得て、複製コンピテントＨＳＶ－２ウイルスについて培養した。図８に、結果を示す。多価Ｃ群における１０匹中９匹の動物は、ｇＤ２群における１０匹中３匹、および三価－Ｉまたは三価－Ｃ群における１０匹中０匹と比較して、２日目（図８Ａ）および４日目（図８Ｂ）にて陽性の培養物を有した（Ｆｉｓｈｅｒ Ｅｘａｃｔ試験によるＰ値は、三価群をｇＤ２単独と比較して有意ではなかった；三価－Ｉまたは三価－Ｃを多価Ｃと比較して、ｐ＜０．００１；ｇＤ２単独を多価Ｃと比較して、ｐ＝０．０２）。
【0356】
ｍＲＮＡ／ＬＮＰ群のそれぞれは、多価Ｃ対照群より有意に優れた。顕著には、負荷後の２日目および４日目の膣タイターは、別々の部位においてまたは組み合わせた免疫として投与したかどうかに関わらず、三価ｍＲＮＡで免疫したマウスにおいて陰性であった。いずれかの三価群をｇＤ２単独と比較して、有意差を検出しないが、ｇＤ２群における１０匹のうち３匹のマウスは、膣スワブから単離したウイルスを有していたので、両方の三価群は、ｇＤ２単独群より優れていた。
【0357】
実施例９：改変したＭＲＮＡ免疫および膣内負荷後の生殖器疾患
負荷後２８日間、生殖器疾患について動物を毎日モニターした。スコア０を、疾患なしと指定し、１ポイントそれぞれを、肛門または生殖口周囲の毛の喪失、生殖紅斑、生殖器浸出液、および生殖組織の壊死と指定した（図９）。
負荷後２８日間、生殖器疾患について動物を毎日モニターした。スコア０を、疾患なしと指定し、１ポイントそれぞれを、肛門または生殖口周囲の毛の喪失、生殖紅斑、生殖器浸出液、および生殖組織の壊死と指定した（図９）。
【0358】
ｇＤ２または三価ｍＲＮＡ／ＬＮＰ群における動物は、生殖器疾患を発症せず、多価Ｃ対照より有意に異なった（ｐ＜０．００１、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定による一元配置分散分析、続いて有意性についてダンの多重比較）。
【0359】
実施例１０：改変したＭＲＮＡ免疫および膣内負荷後の後根神経節におけるＨＳＶ－２ＤＮＡ
４匹の動物を安楽死させた三価の組み合わせた群を除き、１群当たり５匹の動物を、負荷の４日後に安楽死させた。Ｕｓ９遺伝子を検出するためのｑＰＣＲによるＨＳＶ－２ＤＮＡ定量のため、後根神経節（ＤＲＧ）を回収した。多価Ｃ群における全５匹の動物は、ＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有し、一方、ｇＤｍＲＮＡにおける５匹中２匹の動物、個々の部位での三価ｍＲＮＡにおける５匹中１匹の動物、および同じ部位にて投与した４匹中１匹の三価ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ＤＮＡについて陽性であった（図１０；マン・ホイットニー検定：多価Ｃと比較したｇＤ２、ｐ＝０．０３；多価Ｃと比較した、異なる部位での三価、ｐ＜０．０１；多価Ｃと比較した、同じ部位での三価、ｐ＝０．１４）。改変したｍＲＮＡで免疫した群の間の差は、有意でなかった。
４匹の動物を安楽死させた三価の組み合わせた群を除き、１群当たり５匹の動物を、負荷の４日後に安楽死させた。Ｕｓ９遺伝子を検出するためのｑＰＣＲによるＨＳＶ－２ＤＮＡ定量のため、後根神経節（ＤＲＧ）を回収した。多価Ｃ群における全５匹の動物は、ＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有し、一方、ｇＤｍＲＮＡにおける５匹中２匹の動物、個々の部位での三価ｍＲＮＡにおける５匹中１匹の動物、および同じ部位にて投与した４匹中１匹の三価ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ＤＮＡについて陽性であった（図１０；マン・ホイットニー検定：多価Ｃと比較したｇＤ２、ｐ＝０．０３；多価Ｃと比較した、異なる部位での三価、ｐ＜０．０１；多価Ｃと比較した、同じ部位での三価、ｐ＝０．１４）。改変したｍＲＮＡで免疫した群の間の差は、有意でなかった。
【0360】
結論：ｇＤ２単独または三価ワクチンで免疫した動物の７５％～８０％において感染後４日目において、後根神経節は、ＨＳＶ－２ＤＮＡについて陽性であった。異なる部位での三価ｍＲＮＡ群およびｇＤ２ｍＲＮＡ群は、多価ＣｍＲＮＡ対照群より有意に優れており、一方、一緒に投与した全ての糖タンパク質を含む三価ｍＲＮＡ群は、恐らく三価組み合わせた群におけるより小さい試料サイズのため、多価Ｃ群と有意に異ならなかった。
【0361】
概要
ｇＤ２単独またはｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２を発現する改変したｍＲＮＡワクチンは、ＨＳＶ－２生殖器負荷に対する傑出した保護をもたらした。３種のタンパク質の発現は、負荷後２日目および４日目のタイターに基づき、ｇＤ２より有意に優れており、ＨＳＶ－２ＤＮＡを用いた動物のより少ない数を、４日目のＤＲＧにおいて検出した。
ｇＤ２単独またはｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２を発現する改変したｍＲＮＡワクチンは、ＨＳＶ－２生殖器負荷に対する傑出した保護をもたらした。３種のタンパク質の発現は、負荷後２日目および４日目のタイターに基づき、ｇＤ２より有意に優れており、ＨＳＶ－２ＤＮＡを用いた動物のより少ない数を、４日目のＤＲＧにおいて検出した。
【0362】
実施例１１：免疫したマウスにおける濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞および胚中心Ｂ細胞応答
ＢＡＬＢ／ｃメスマウスを、負の対照の動物として免疫しないままにするか、または２８日間の間隔にて多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰまたは価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰで皮内免疫した。多価ＣｍＲＮＡ対照は、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。三価改変したｍＲＮＡ群は、それぞれ、２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。２回目の免疫の２週間後、１つの群当たり５匹の動物から、脾臓を回収し、フローサイトメトリーを行って、濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞（図１１Ａ；＊ｐ＜０．０５）および胚中心Ｂ細胞応答（図１１Ｂ；＊ｐ＜０．０５）を検出した。
ＢＡＬＢ／ｃメスマウスを、負の対照の動物として免疫しないままにするか、または２８日間の間隔にて多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰまたは価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰで皮内免疫した。多価ＣｍＲＮＡ対照は、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。三価改変したｍＲＮＡ群は、それぞれ、２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。２回目の免疫の２週間後、１つの群当たり５匹の動物から、脾臓を回収し、フローサイトメトリーを行って、濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞（図１１Ａ；＊ｐ＜０．０５）および胚中心Ｂ細胞応答（図１１Ｂ；＊ｐ＜０．０５）を検出した。
【0363】
結論：三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンは、強力なＴｆｈおよび胚中心Ｂ細胞応答を誘導し、Ｔｆｈと胚中心Ｂ細胞応答の両方について多価Ｃ対照免疫（ｐ＜０．０５）および負の群（ｐ＜０．０５）より有意に優れていた。これらの免疫応答は、三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンは、永続性のある抗体応答を恐らく誘導することを示唆する。
【0364】
実施例１２：マウスにおける改変したＭＲＮＡ免疫に対する膣ＩｇＧ応答
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、２８日間の間隔にて、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇまたはｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰそれぞれ１０μｇで２回皮内免疫した。三価ｍＲＮＡを組み合わせ、ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇを投与した。２回目の免疫の１ヶ月後、膣腔において、培地６０μｌを導入し、回復させた。ｇＣ２（図１２Ａ）、ｇＤ２（図１２Ｂ）、およびｇＥ２（図１２Ｃ）に対するＩｇＧタイターを、ＥＬＩＳＡにより、１：５０希釈の膣洗浄液にて決定した（図１２Ａ～Ｃ、多価Ｃ群においてｎ＝１０マウス、ｇＤ２ｍＲＮＡ群においてｎ＝１０および三価ｍＲＮＡ群においてｎ＝２５；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊ｐ＜０．０１）。
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、２８日間の間隔にて、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇまたはｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰそれぞれ１０μｇで２回皮内免疫した。三価ｍＲＮＡを組み合わせ、ＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＤ２ｍＲＮＡ１０μｇおよびｇＥ２ｍＲＮＡ１０μｇを投与した。２回目の免疫の１ヶ月後、膣腔において、培地６０μｌを導入し、回復させた。ｇＣ２（図１２Ａ）、ｇＤ２（図１２Ｂ）、およびｇＥ２（図１２Ｃ）に対するＩｇＧタイターを、ＥＬＩＳＡにより、１：５０希釈の膣洗浄液にて決定した（図１２Ａ～Ｃ、多価Ｃ群においてｎ＝１０マウス、ｇＤ２ｍＲＮＡ群においてｎ＝１０および三価ｍＲＮＡ群においてｎ＝２５；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊ｐ＜０．０１）。
【0365】
結論：三価ｍＲＮＡは、ｇＣ２（図１２Ａ）およびｇＤ２（図１２Ｂ）に対して強い膣ＩｇＧ応答を生じ、ｇＥ２に対してより中程度の応答を生じた（図１２Ｃ）。ｇＤ２ＥＬＩＳＡタイターは、改変したｇＤ２ｍＲＮＡワクチンを用いて免疫したマウスと比較して、改変した三価ｍＲＮＡワクチンを用いて免疫したマウスにおいてより高かった（図１２Ｂ）。
【0366】
実施例１３：マウスの三価ＭＲＮＡ免疫により産生されたｇＣ２に対する抗体はｇＣ２上の免疫回避ドメインをブロックする
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、非免疫ＩｇＧの供給源として免疫しないままにするか、または多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰまたは三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて皮内免疫した。多価ＣｍＲＮＡ対照は、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。ｇＤ２ｍＲＮＡ群は、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰについて記載した通り投与したｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。三価改変したｍＲＮＡ群は、１つのＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。それぞれの群において１０匹のマウスが存在した。１０匹のマウス由来の血清をプールし、ＩｇＧを精製した。ＩｇＧを、１２μｇ／２００μｌにて、ｇＣ２に結合している補体成分Ｃ３ｂをブロックするその能力について評価した。このブロッキングアッセイを使用して、免疫により産生された抗体が、ｇＣ２の免疫回避特性をブロックするかどうかを評価する。非免疫マウスＩｇＧ、多価ＣｍＲＮＡ群由来のＩｇＧ、およびｇＤ２ｍＲＮＡ群由来のＩｇＧは、それぞれ、Ｃ３ｂに結合しているｇＣ２をブロックしなかった。対照的に、三価ｍＲＮＡで免疫したマウス由来のＩｇＧは、ｇＣ２とＣ３ｂの間の相互作用を全体的にブロックした（図１３、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、非免疫ＩｇＧの供給源として免疫しないままにするか、または多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰまたは三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて皮内免疫した。多価ＣｍＲＮＡ対照は、４つのアリコートに分け、４ヶ所の別々の部位にて投与した多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。ｇＤ２ｍＲＮＡ群は、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰについて記載した通り投与したｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。三価改変したｍＲＮＡ群は、１つのＬＮＰに組み合わせ、４つのアリコートに分け、４ヶ所の部位にて投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを受け取った。それぞれの群において１０匹のマウスが存在した。１０匹のマウス由来の血清をプールし、ＩｇＧを精製した。ＩｇＧを、１２μｇ／２００μｌにて、ｇＣ２に結合している補体成分Ｃ３ｂをブロックするその能力について評価した。このブロッキングアッセイを使用して、免疫により産生された抗体が、ｇＣ２の免疫回避特性をブロックするかどうかを評価する。非免疫マウスＩｇＧ、多価ＣｍＲＮＡ群由来のＩｇＧ、およびｇＤ２ｍＲＮＡ群由来のＩｇＧは、それぞれ、Ｃ３ｂに結合しているｇＣ２をブロックしなかった。対照的に、三価ｍＲＮＡで免疫したマウス由来のＩｇＧは、ｇＣ２とＣ３ｂの間の相互作用を全体的にブロックした（図１３、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【0367】
結論：三価ｍＲＮＡワクチンは、ｇＣ２とＣ３ｂの間の相互作用をブロックすることにより決定した、ｇＣ２上の免疫回避ドメインをブロックする抗体を産生する。
【0368】
実施例１４：改変したＭＲＮＡワクチン接種後のより高いタイターのＨＳＶ－２でのマウスの膣内感染
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５）を、それぞれ、２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて個々に投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを使用して、三価改変したｍＲＮＡで免疫した。２回目の免疫の１ヶ月後、マウスを、メドロキシプロゲステロンを用いて処理し、５日後に、５×１０４ＰＦＵ ＨＳＶ－２株ＭＳ（２，０００ＬＤ５０）を膣内感染させた。動物を２８日間続け、感染の２および４日後に、死亡、生殖器疾患、膣ウイルスタイターについて評価し、感染の２８日後に、後根神経節（ＤＲＧ）ＨＳＶ－２ＤＮＡコピー数を評価した。三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンを用いて免疫したマウスは、死亡せず、生殖器疾患を有さず、感染後２または４日目に検出したウイルスを有さないか、またはＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有さなかった（表１）。
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５）を、それぞれ、２つのアリコートに分け、それぞれ２ヶ所の部位にて個々に投与したｇＣ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＤ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇ、ｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰ１０μｇを使用して、三価改変したｍＲＮＡで免疫した。２回目の免疫の１ヶ月後、マウスを、メドロキシプロゲステロンを用いて処理し、５日後に、５×１０４ＰＦＵ ＨＳＶ－２株ＭＳ（２，０００ＬＤ５０）を膣内感染させた。動物を２８日間続け、感染の２および４日後に、死亡、生殖器疾患、膣ウイルスタイターについて評価し、感染の２８日後に、後根神経節（ＤＲＧ）ＨＳＶ－２ＤＮＡコピー数を評価した。三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンを用いて免疫したマウスは、死亡せず、生殖器疾患を有さず、感染後２または４日目に検出したウイルスを有さないか、またはＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有さなかった（表１）。
【表1】
【0369】
結論：マウスを、本明細書において記載した前の実験において使用したものより１０倍高い用量のＨＳＶ－２を感染させた（図７～１０）。マウスの保護は、このより高いタイターの負荷においてさえ傑出したままであった。本発明者らは、感染後２および４日後における死亡なし、生殖器疾患なし、負の膣ウイルスタイター、および２８日目において腰仙部のＤＲＧにおけるＨＳＶ－２ＤＮＡなしにより決定した通り、全５匹のマウスにおいて安定化免疫を達成した（表１）。
【0370】
実施例１５：マウスにおける改変したＭＲＮＡ免疫の筋肉内経路の評価
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、対照として多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて（１５／群）またはｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ１０μｇを含有する三価ｍＲＮＡを用いて（２０／群）筋肉内免疫した。全多価Ｃ対照動物は、１２日目までに死亡し、一方、三価ｍＲＮＡ群における全動物が生存した（図１４Ａ）。三価ｍＲＮＡ群において体重減少は生じず、一方、多価Ｃ対照動物は、体重の＞１５％を失った（図１４Ｂ）。多価Ｃ群は、広大な生殖器疾患を発症し、一方、三価ｍＲＮＡの動物は、生殖器疾患を有さなかった（図１４Ｃ）。感染後７～１２日目の安楽死の時に、９匹の多価Ｃ動物から、または三価ｍＲＮＡ群において２８日目の実験の終わりに、ＤＲＧを回収した。多価Ｃ群における全動物は、ＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有し、一方、三価ｍＲＮＡ群においてＨＳＶ－２ＤＮＡについて陽性のものはいなかった（図１４Ｄ）。２日目（図１４Ｅ）および４日目（図１４Ｆ）の膣ウイルス培養物は、多価Ｃ群において全１５匹の動物において陽性であり、一方、培養物は、三価ｍＲＮＡ群における全２０匹の動物において陰性であった。多価Ｃと三価群の間の差は、有意であり、それぞれの図についてｐ＜０．００１であった（図１４Ａ～１４Ｆ）。
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、対照として多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて（１５／群）またはｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ１０μｇを含有する三価ｍＲＮＡを用いて（２０／群）筋肉内免疫した。全多価Ｃ対照動物は、１２日目までに死亡し、一方、三価ｍＲＮＡ群における全動物が生存した（図１４Ａ）。三価ｍＲＮＡ群において体重減少は生じず、一方、多価Ｃ対照動物は、体重の＞１５％を失った（図１４Ｂ）。多価Ｃ群は、広大な生殖器疾患を発症し、一方、三価ｍＲＮＡの動物は、生殖器疾患を有さなかった（図１４Ｃ）。感染後７～１２日目の安楽死の時に、９匹の多価Ｃ動物から、または三価ｍＲＮＡ群において２８日目の実験の終わりに、ＤＲＧを回収した。多価Ｃ群における全動物は、ＤＲＧにおいて検出したＨＳＶ－２ＤＮＡを有し、一方、三価ｍＲＮＡ群においてＨＳＶ－２ＤＮＡについて陽性のものはいなかった（図１４Ｄ）。２日目（図１４Ｅ）および４日目（図１４Ｆ）の膣ウイルス培養物は、多価Ｃ群において全１５匹の動物において陽性であり、一方、培養物は、三価ｍＲＮＡ群における全２０匹の動物において陰性であった。多価Ｃと三価群の間の差は、有意であり、それぞれの図についてｐ＜０．００１であった（図１４Ａ～１４Ｆ）。
【0371】
結論：三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰは、筋肉内投与したとき、マウスにおいて傑出した保護をもたらす。本発明者らは、マウスを皮内免疫したとき、上で比較可能な知見を報告した。全体として、本発明者らは、ここで、皮内（図７～１０）または筋肉内（図１４）のいずれかで投与したそれぞれの免疫原１０μｇの三価ｍＲＮＡで免疫した６４匹のマウスを評価した。本発明者らは、死亡なし、生殖器疾患なし、体重減少なし、負の２および４日目の膣タイターならびにＤＲＧにおける負のＨＳＶ－２ＤＮＡに基づき、６３／６４（９８％）匹のマウスにおける安定化免疫を達成した。
【0372】
実施例１６：ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰおよび三価サブユニット抗原ＣＰＧ／ミョウバンを用いた免疫の比較の概要
本明細書において以下の表２において提示する結果は、ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ１０μｇを含有する三価ｍＲＮＡを用いて皮内または筋肉内のいずれかで免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスにおける全ての結果の概要を表す（計６４匹のマウスを研究した）。本発明者らは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のｇＣ２アミノ酸２７～４２６を含有するｂａｃ－ｇＣ２（２７－４２６ｔ）、ＨＳＶ－１ ３３３株由来のｇＤ２アミノ酸２６～３３１を含有するｂａｃ－ｇＤ２（３０６ｔ）、およびＨＳＶ－２株２．１２由来のｇＥ２アミノ酸２４～４０５を含有するｂａｃ－ｇＥ２（２４－４０５ｔ）のそれぞれ５μｇをもちいて免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて得た結果との比較を示す。ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２サブユニット抗原を、アジュバントとしてタンパク質１μｇ当たりＣｐＧ１５０μｇおよびミョウバン２５μｇと混合し、筋肉内投与した。本発明者らが、先の実験で行った通り、マウスを、２８日間の間隔で２回、三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて免疫し、１４日間の間隔で３回、サブユニット抗原を用いて免疫した。ｍＲＮＡおよびサブユニット抗原実験を、同時に行った。表２において概説する結果は、多くの免疫応答パラメーターにおいて、および最も重要なことには、ワクチン有効性において三価サブユニット抗原ワクチンより三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンの有意な優位性を示す。三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンは、サブユニット抗原群における１５／２０（７５％）と比較して、６３／６４（９８％）匹のマウスにおいて安定化免疫を達成した。
本明細書において以下の表２において提示する結果は、ｇＣ２、ｇＤ２およびｇＥ２ｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ１０μｇを含有する三価ｍＲＮＡを用いて皮内または筋肉内のいずれかで免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスにおける全ての結果の概要を表す（計６４匹のマウスを研究した）。本発明者らは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のｇＣ２アミノ酸２７～４２６を含有するｂａｃ－ｇＣ２（２７－４２６ｔ）、ＨＳＶ－１ ３３３株由来のｇＤ２アミノ酸２６～３３１を含有するｂａｃ－ｇＤ２（３０６ｔ）、およびＨＳＶ－２株２．１２由来のｇＥ２アミノ酸２４～４０５を含有するｂａｃ－ｇＥ２（２４－４０５ｔ）のそれぞれ５μｇをもちいて免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて得た結果との比較を示す。ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２サブユニット抗原を、アジュバントとしてタンパク質１μｇ当たりＣｐＧ１５０μｇおよびミョウバン２５μｇと混合し、筋肉内投与した。本発明者らが、先の実験で行った通り、マウスを、２８日間の間隔で２回、三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて免疫し、１４日間の間隔で３回、サブユニット抗原を用いて免疫した。ｍＲＮＡおよびサブユニット抗原実験を、同時に行った。表２において概説する結果は、多くの免疫応答パラメーターにおいて、および最も重要なことには、ワクチン有効性において三価サブユニット抗原ワクチンより三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンの有意な優位性を示す。三価ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチンは、サブユニット抗原群における１５／２０（７５％）と比較して、６３／６４（９８％）匹のマウスにおいて安定化免疫を達成した。
【表2-1】
【表2-2】
【0373】
実施例１７：モルモットにおける三価ＭＲＮＡ－ＬＮＰワクチンの評価
ハートレイ系メスモルモットを、免疫せず、感染させないままにし（負の群、ｎ＝１０）、１ヶ月の間隔で３回、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ２０μｇ（ｎ＝１０）またはｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ２０μｇ（ｎ＝１０）を用いて皮内免疫した。最終免疫の１ヶ月後、多価Ｃおよび三価ｍＲＮＡ群における動物に、５×１０５ＰＦＵのＨＳＶ－２株ＭＳ（５０ＬＤ５０）を膣内感染させた。死亡、感染の急性期（１～１４日目）中の生殖器病変、および感染の再発期（１５～６０日目）中の生殖器病変について、動物を観察した。多価Ｃ対照群において、１０匹中７匹の動物が死亡ししたか、または感染の７～２０日後に人間的に安楽死させ、一方、三価群における動物および未処理（感染させていない）の動物のいずれも死亡しなかった（図１５Ａ）。多価Ｃ群は、急性生殖器疾患を発症している１０匹中９匹の動物を含む、感染の急性期中の中央値６．４日目に生殖器病変を有し、一方、三価群または未処理（感染させていない）群における動物はいずれも、急性生殖器疾患を発症しなかった（図１５Ｂ）。多価Ｃ動物は、再発生殖器病変を発症している３匹中２匹の動物を含む、感染の再発期中の中央値３．７日目に生殖器病変を有していた（図１５Ｃ）。対照的に、三価で免疫したモルモットおよび未処理（感染させていない）の動物は、再発生殖器病変を有さなかった（図１５Ｃ）。
結論：三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰは、モルモットにおいて急性および再発生殖器病変に対する傑出した保護をもたらした。
ハートレイ系メスモルモットを、免疫せず、感染させないままにし（負の群、ｎ＝１０）、１ヶ月の間隔で３回、多価ＣｍＲＮＡ－ＬＮＰ２０μｇ（ｎ＝１０）またはｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰのそれぞれ２０μｇ（ｎ＝１０）を用いて皮内免疫した。最終免疫の１ヶ月後、多価Ｃおよび三価ｍＲＮＡ群における動物に、５×１０５ＰＦＵのＨＳＶ－２株ＭＳ（５０ＬＤ５０）を膣内感染させた。死亡、感染の急性期（１～１４日目）中の生殖器病変、および感染の再発期（１５～６０日目）中の生殖器病変について、動物を観察した。多価Ｃ対照群において、１０匹中７匹の動物が死亡ししたか、または感染の７～２０日後に人間的に安楽死させ、一方、三価群における動物および未処理（感染させていない）の動物のいずれも死亡しなかった（図１５Ａ）。多価Ｃ群は、急性生殖器疾患を発症している１０匹中９匹の動物を含む、感染の急性期中の中央値６．４日目に生殖器病変を有し、一方、三価群または未処理（感染させていない）群における動物はいずれも、急性生殖器疾患を発症しなかった（図１５Ｂ）。多価Ｃ動物は、再発生殖器病変を発症している３匹中２匹の動物を含む、感染の再発期中の中央値３．７日目に生殖器病変を有していた（図１５Ｃ）。対照的に、三価で免疫したモルモットおよび未処理（感染させていない）の動物は、再発生殖器病変を有さなかった（図１５Ｃ）。
結論：三価改変したｍＲＮＡ－ＬＮＰは、モルモットにおいて急性および再発生殖器病変に対する傑出した保護をもたらした。
【0374】
添付の図面を参照して本発明の好ましい実施形態を記載し、本発明が、正確な実施形態に制限されないこと、および様々な変更および改変が、添付の請求の範囲において定義される本発明の範囲または精神から逸脱することなく、当業者によりそこで達成され得ることは、理解されるべきである。
【0375】
本明細書において引用される全ての特許文書および参考文献は、完全に記載されるように、参照により組み込まれる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン残基を含む、組成物。
(項目２)
前記１又は複数のプソイドウリジン残基は、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）を含む、項目１記載の組成物。
(項目３)
前記１又は複数のプソイドウリジン残基は、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、又はこれらの任意の組合せを含む、項目１記載の組成物。
(項目４)
１又は複数の前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードする、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
(項目５)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－１糖タンパク質を含む、項目４記載の組成物。
(項目６)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－２糖タンパク質を含む、項目４記載の組成物。
(項目７)
ＨＳＶのｇＤ免疫原性断片の前記免疫原性断片をコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のアミノ酸２６～３３１又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６記載の組成物。
(項目８)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号４に明記するとおりである、項目７記載の組成物。
(項目９)
ＨＳＶ ｇＣの前記免疫原性断片は、そのＣ３ｂ結合ドメイン、そのプロパージン干渉ドメイン、そのＣ５干渉ドメイン、又は前記Ｃ３ｂ結合ドメイン、プロパージン干渉ドメイン、若しくはＣ５干渉ドメインの断片のいずれかを含む、項目４から８のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１０)
ＨＳＶ ｇＣの前記免疫原性断片をコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のアミノ酸２７～４２６又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６から９のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１１)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号１０に明記するとおりである、項目１０記載の組成物。
(項目１２)
ＨＳＶ ｇＥの前記免疫原性断片は、ＨＳＶ－２ ２．１２株由来のアミノ酸２４～４０５又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６から１１のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１３)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号１６に明記するとおりである、項目１２記載の組成物。
(項目１４)
１又は複数の前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）若しくはその免疫原性断片、ｄ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）若しくはその免疫原性断片、又はｅ）これらの任意の組合せをコードする、項目１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１５)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ポリＡ尾部をさらに含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１６)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－Ｏ－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、又はアンチリバースキャップアナログをさらに含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１７)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、キャップ非依存性翻訳エンハンサーをさらに含む、項目１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１８)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、翻訳を促進する５’及び３’の非翻訳領域をさらに含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１９)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール、又は細胞透過性ペプチドの中にカプセル化される、項目１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
(項目２０)
前記ナノ粒子は、リポソームナノ粒子である、項目１９記載の組成物。
(項目２１)
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目２２)
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の発生を抑制、阻害、又は低減する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目２３)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－１感染を含む、項目２１から２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目２４)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－２感染を含む、項目２１から２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目２５)
前記ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染を含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２６)
前記ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染に続く、炎症、再発、又は口唇ＨＳＶを含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２７)
前記ＨＳＶ感染は、潜伏ＨＳＶ感染の再活性化を含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２８)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染、又は経口ＨＳＶ感染を含む、項目２１から２７のいずれか一項に記載の方法。
(項目２９)
対象における免疫応答を誘発する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目３０)
投与工程は、筋肉内投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３１)
投与工程は、皮下投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３２)
投与工程は、皮内投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３３)
投与工程は、鼻腔内、膣内、又は直腸内の投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３４)
投与工程は、局所投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３５)
投与工程は、ａ）第一のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第一の組成物を投与すること、ｂ）第二のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第二の組成物を投与すること、及びｃ）第三のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第三の組成物を投与することを含む、項目２１から３４のいずれか一項に記載の方法。
(項目３６)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、単一の投与部位において前記対象に投与される、項目３５記載の方法。
(項目３７)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、異なる投与部位において前記対象に投与される、項目３５記載の方法。
(項目３８)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、同時に投与される、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
(項目３９)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、連続して投与される、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
(項目４０)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、同一の投与経路で投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
(項目４１)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、異なる投与経路で投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
(項目４２)
第一の投与の後で、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の１又は複数の追加投与を前記対象に対して投与する工程をさらに含む、項目２１から４１のいずれか一項に記載の方法。
(項目４３)
前記ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片を含む組成物を前記対象に対して投与する工程をさらに含む、項目２１から４１のいずれか一項に記載の方法。
(項目４４)
前記ＨＳＶ糖タンパク質を含む前記組成物は、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の投与の後で投与される、項目４３記載の方法。
(項目４５)
前記ＨＳＶ糖タンパク質を含む前記組成物は、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の投与の前に投与される、項目４３記載の方法。
(項目４６)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ｇＤ、ｇＣ、ｇＥ又はこれらの組合せを含む、項目４３から４５のいずれか一項に記載の方法。
(項目４７)
前記免疫応答は、ＣＤ４免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目４８)
前記免疫応答は、ＣＤ８免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目４９)
前記免疫応答は、濾胞性ヘルパーＴ細胞免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５０)
前記免疫応答は、胚中心Ｂ細胞免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５１)
前記免疫応答は、ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２又はこれらの組合せに対するＩｇＧ抗体応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
１又は複数のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのそれぞれが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質又はその免疫原性断片をコードし、また前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、１又は複数のプソイドウリジン残基を含む、組成物。
(項目２)
前記１又は複数のプソイドウリジン残基は、ｍ１Ψ（１－メチルプソイドウリジン）を含む、項目１記載の組成物。
(項目３)
前記１又は複数のプソイドウリジン残基は、ｍ１ａｃｐ３Ψ（１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン、Ψｍ（２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン、ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）、ｍ３Ψ（３－メチルプソイドウリジン）、又はこれらの任意の組合せを含む、項目１記載の組成物。
(項目４)
１又は複数の前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）若しくはその免疫原性断片、及びｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）若しくはその免疫原性断片、又はこれらの任意の組合せをコードする、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
(項目５)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－１糖タンパク質を含む、項目４記載の組成物。
(項目６)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ－２糖タンパク質を含む、項目４記載の組成物。
(項目７)
ＨＳＶのｇＤ免疫原性断片の前記免疫原性断片をコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のアミノ酸２６～３３１又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６記載の組成物。
(項目８)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号４に明記するとおりである、項目７記載の組成物。
(項目９)
ＨＳＶ ｇＣの前記免疫原性断片は、そのＣ３ｂ結合ドメイン、そのプロパージン干渉ドメイン、そのＣ５干渉ドメイン、又は前記Ｃ３ｂ結合ドメイン、プロパージン干渉ドメイン、若しくはＣ５干渉ドメインの断片のいずれかを含む、項目４から８のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１０)
ＨＳＶ ｇＣの前記免疫原性断片をコードする前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡは、ＨＳＶ－２ ３３３株由来のアミノ酸２７～４２６又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６から９のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１１)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号１０に明記するとおりである、項目１０記載の組成物。
(項目１２)
ＨＳＶ ｇＥの前記免疫原性断片は、ＨＳＶ－２ ２．１２株由来のアミノ酸２４～４０５又は別のＨＳＶ株由来の相同配列を含む、項目６から１１のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１３)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの核酸配列は、配列番号１６に明記するとおりである、項目１２記載の組成物。
(項目１４)
１又は複数の前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡが、ａ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）若しくはその免疫原性断片、ｂ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）若しくはその免疫原性断片、ｃ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）若しくはその免疫原性断片、ｄ）ＨＳＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）若しくはその免疫原性断片、又はｅ）これらの任意の組合せをコードする、項目１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１５)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ポリＡ尾部をさらに含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１６)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、３’－Ｏ－メチル－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ、又はアンチリバースキャップアナログをさらに含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１７)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、キャップ非依存性翻訳エンハンサーをさらに含む、項目１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１８)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、翻訳を促進する５’及び３’の非翻訳領域をさらに含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１９)
前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡのうちの１又は複数は、ナノ粒子、脂質、ポリマー、コレステロール、又は細胞透過性ペプチドの中にカプセル化される、項目１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
(項目２０)
前記ナノ粒子は、リポソームナノ粒子である、項目１９記載の組成物。
(項目２１)
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治療する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目２２)
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の発生を抑制、阻害、又は低減する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目２３)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－１感染を含む、項目２１から２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目２４)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ－２感染を含む、項目２１から２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目２５)
前記ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染を含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２６)
前記ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染に続く、炎症、再発、又は口唇ＨＳＶを含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２７)
前記ＨＳＶ感染は、潜伏ＨＳＶ感染の再活性化を含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２８)
前記ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ脳炎、ＨＳＶ新生児感染、性器ＨＳＶ感染、又は経口ＨＳＶ感染を含む、項目２１から２７のいずれか一項に記載の方法。
(項目２９)
対象における免疫応答を誘発する方法であって、前記対象に、項目１から２０のいずれか一項に記載のヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物を投与する工程を含む、方法。
(項目３０)
投与工程は、筋肉内投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３１)
投与工程は、皮下投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３２)
投与工程は、皮内投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３３)
投与工程は、鼻腔内、膣内、又は直腸内の投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３４)
投与工程は、局所投与を含む、項目２１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３５)
投与工程は、ａ）第一のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第一の組成物を投与すること、ｂ）第二のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第二の組成物を投与すること、及びｃ）第三のＨＳＶ糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む第三の組成物を投与することを含む、項目２１から３４のいずれか一項に記載の方法。
(項目３６)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、単一の投与部位において前記対象に投与される、項目３５記載の方法。
(項目３７)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、異なる投与部位において前記対象に投与される、項目３５記載の方法。
(項目３８)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、同時に投与される、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
(項目３９)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、連続して投与される、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
(項目４０)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、同一の投与経路で投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
(項目４１)
前記第一の組成物、前記第二の組成物、及び前記第三の組成物は、異なる投与経路で投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
(項目４２)
第一の投与の後で、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の１又は複数の追加投与を前記対象に対して投与する工程をさらに含む、項目２１から４１のいずれか一項に記載の方法。
(項目４３)
前記ＨＳＶ糖タンパク質又はその免疫原性断片を含む組成物を前記対象に対して投与する工程をさらに含む、項目２１から４１のいずれか一項に記載の方法。
(項目４４)
前記ＨＳＶ糖タンパク質を含む前記組成物は、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の投与の後で投与される、項目４３記載の方法。
(項目４５)
前記ＨＳＶ糖タンパク質を含む前記組成物は、前記ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡの組成物の投与の前に投与される、項目４３記載の方法。
(項目４６)
前記ＨＳＶ糖タンパク質は、ｇＤ、ｇＣ、ｇＥ又はこれらの組合せを含む、項目４３から４５のいずれか一項に記載の方法。
(項目４７)
前記免疫応答は、ＣＤ４免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目４８)
前記免疫応答は、ＣＤ８免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目４９)
前記免疫応答は、濾胞性ヘルパーＴ細胞免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５０)
前記免疫応答は、胚中心Ｂ細胞免疫応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５１)
前記免疫応答は、ｇＣ２、ｇＤ２、ｇＥ２又はこれらの組合せに対するＩｇＧ抗体応答を含む、項目２９から４６のいずれか一項に記載の方法。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14-1】
【図14-2】
【図15】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-09-28
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【外国語明細書】