特開 2023-162213 がん併用療法における使用のためのＳＵＶ３９Ｈ１ヒストンメチルトランスフェラーゼの阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023162213

(43)【公開日】2023-11-08

(54)【発明の名称】がん併用療法における使用のためのＳＵＶ３９Ｈ１ヒストンメチルトランスフェラーゼの阻害剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20231031BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231031BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20231031BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20231031BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 11/04 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20231031BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20231031BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P43/00 121

A61P35/00

A61K39/395 G

A61K39/395 E

A61K39/395 U

A61K39/395 T

A61K48/00

A61K31/7088

A61K31/7105

A61K31/711

A61P35/02

A61P17/00

A61P1/00

A61P1/16

A61P27/02

A61P15/00

A61P11/00

A61P11/04

A61P19/08

A61P13/10

A61P1/18

A61P35/04

A61P25/00

A61P13/08

A61P5/14

【審査請求】有

【請求項の数】13

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023127173

(22)【出願日】2023-08-03

(62)【分割の表示】P 2019570112の分割

【原出願日】2018-06-20

(31)【優先権主張番号】17305755.5

(32)【優先日】2017-06-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(71)【出願人】

【識別番号】506413937

【氏名又は名称】アンスティテュート キュリー

(71)【出願人】

【識別番号】511074305

【氏名又は名称】インセルム（インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ リシェルシェ メディカル）

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】アミゴレナ， セバスチャン

(72)【発明者】

【氏名】ピアッジョ， エリアーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ニボルスキ， レティシア

(57)【要約】      （修正有）

【課題】有害副作用が限定的な、がん免疫療法の有効性を改善し得る医薬組成物を提供する。
【解決手段】Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤を含む、がんを処置するための医薬組成物であって、前記阻害剤は、がんの処置において、少なくとも１種の阻害性免疫チェックポイント分子と組み合わせて使用され、前記阻害性免疫チェックポイント分子が抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はそれらの抗原結合性断片である、医薬組成物とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

がんの処置における、免疫チェックポイント分子／タンパク質の少なくとも１種のモジュレーターと組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項2】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤が、有機小分子、アプタマー、イントラボディ、ポリペプチド、又はＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤から選択される、請求項１に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項3】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤が、ケトシンである、請求項１又は２に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項4】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤が、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムから選択される、請求項１に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項5】

前記少なくとも１種の免疫チェックポイント分子が、阻害性免疫チェックポイント分子及び／又は刺激性免疫チェックポイントである、請求項１～４のいずれか一項に記載の少なくとも１種の免疫チェックポイント調節因子と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項6】

前記阻害性免疫チェックポイントタンパク質が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３ ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＣＤ２４４（又は２Ｂ４）ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン様転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ－１）（Ｉｇ様Ｒファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ－１（白血球関連免疫グロブリン様受容体１）ＣＤ３０５、ＰＤ－Ｌ２及びＳＩＲＰαから選択される、請求項５に記載の少なくとも１種の免疫チェックポイント調節因子と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項7】

前記刺激性免疫チェックポイントアゴニストが、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２、ＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）及びリガンドＣＤ４８、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）及びＣＤ２８Ｈから選択される、請求項５又は６に記載の少なくとも１種の免疫チェックポイント調節因子と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項8】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤が、少なくとも１種の阻害性免疫チェックポイントモジュレーター及び少なくとも１種の刺激性免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせて使用される、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項9】

前記免疫チェックポイントモジュレーターが、抗体又は融合タンパク質である、請求項１～８のいずれか一項に記載の少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項10】

前記免疫チェックポイントモジュレーターが、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤。

【請求項11】

がんの処置における同時、別々の又は逐次使用のための併用調製物としての、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターを含有する製品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、がんの処置に関し、特に、免疫チェックポイント療法と組み合わせたＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

免疫チェックポイントは、付帯的組織損傷を最小化するための、自己寛容の維持並びに末梢組織における生理的免疫応答の持続時間及び振幅のモジュレートに重大な、免疫系に本来備わっている過多の阻害性及び刺激性経路を指す。実際に、阻害性及び刺激性シグナルの間のバランスは、リンパ球活性化を決定し、結果的に、免疫応答を調節する（Ｐａｒｄｏｌｌ ＤＭ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２０１２年３月２２日；１２（４）：２５２～６４）。

【0003】

現在、腫瘍が、特に、腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対する免疫抵抗性の主要機構としてある特定の免疫チェックポイント経路を取り入れることが明らかである。免疫チェックポイントの多くは、リガンド－受容体相互作用によって惹起されるため、抗体によって容易に遮断され得る、又はリガンド若しくは受容体の組換え型によってモジュレートされ得る。よって、両者共に抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす、共刺激性受容体のアゴニスト又は阻害性シグナルのアンタゴニストは、現在の臨床試験における主要薬剤である。

【0004】

これに関して、がん免疫療法は、腫瘍の標的化から免疫系の標的化へとスイッチする、がん処置の分野におけるブレークスルーとして考慮された（Ｃｏｕｚｉｎ－Ｆｒａｎｋｅｌ Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３年１２月２０日；３４２（６１６５）：１４３２～３）。抗体、抗ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１及びＰＤ－Ｌ１による免疫チェックポイントの遮断は、印象的な臨床結果及び管理可能な安全性プロファイルをもたらした。

【0005】

しかし、ごく少ない割合の患者が、これらの治療法に応答することから、新たなアプローチによって、及び／又は抗チェックポイント抗体を他の処置と組み合わせることにより、がん免疫療法を改善する必要がある。更に、投与される用量及び結果的に有害事象の低減に役立ち得る併用療法の実行が、非常に有益な医学的な助けであり続けるように、抗チェックポイント抗体は、副作用、主に自己免疫を誘導する場合がある。

【0006】

エピジェネティック因子も、がん、炎症性及び自己免疫性疾患に関係付けられており、過去数年間、薬物開発のための有望な標的として認識されてきた。ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ｍｅｔｈｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＤＮＭＴ）又はヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤は、血液学的悪性疾患の処置における臨床使用に対して現在承認されている。ヒストンメチルトランスフェラーゼＥＺＨ２の阻害剤はまた、再発性又は難治性Ｂ細胞リンパ腫患者の処置に提案された（Ｎａｔｕｒｅ．２０１２年１２月６日；４９２（７４２７）：１０８～１２）。ＤＮＭＴ又はＨＤＡＣの阻害剤の使用はまた、免疫療法等、他のがん治療法と組み合わせて近年提案された（国際公開第２０１５０３５１１２号、Ｃｈｉａｐｉｎｅｌｌｉ ＫＢら、Ｃｅｌｌ．２０１５年８月２７日；１６２（５）：９７４～８６；Ｌｉｃｈｔ ＪＤ Ｃｅｌｌ．２０１５年８月２７日；１６２（５）：９３８～９）。しかし、がん免疫学及び免疫療法におけるかかるエピジェネティックモジュレーターの役割は、依然として不明で、理解が不十分である。実際に、脱メチル化剤の効果は多様であり、その再活性化が応答を予測又は媒介する遺伝子の同定は、依然として分かりにくい。典型的に、ＤＮＭＴである５－アザシチジンによる処置の免疫モジュレート効果は複雑で、臨床状況及び患者の種類に依存する（Ｆｒｏｓｉｇ ＴＭ及びＨａｄｒｕｐ ＳＲ、Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ Ｉｎｆｌａｍｍ．２０１５；２０１５：８７１６４１を参照）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

よって、依然として、有害副作用が限定的な、がん免疫療法の有効性を改善し得る併用療法を実行する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、初めて、免疫チェックポイントモジュレーターの抗腫瘍効果が、ＳＵＶ３９Ｈ１の非存在下で大いに増強されることを実証した。特に、本発明者らは、驚いたことに、抗ＰＤ１処置、又はＳＵＶ３９Ｈ１の抑制は、別々では中程度の抗腫瘍効果しかないが、これらの組合せが、大規模且つ持続性な腫瘍成長阻害をもたらすことを示す。

【0009】

更に、Ｓｕｖ３９ｈ１ノックアウトマウスの相対的に軽度な表現型は、この経路の遮断が、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼの阻害剤又はＥＺＨ２の阻害剤等、他のエピジェネティック処置よりも低い付帯的毒性をもたらすであろうことを示唆する。

【0010】

よって、本発明は、患者におけるがんの処置における、免疫チェックポイントタンパク質の少なくとも１種のモジュレーターと組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤に関する。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】Ｓｕｖ３９ｈ１－ＷＴ対Ｓｕｖ３９ｈ１－ＫＯマウスにおける、腫瘍成長における抗ＰＤ－１処置の効果。抗ＰＤ－１処置あり（Ｃ）又はなし（Ａ）の同腹仔ＷＩマウス、及び抗ＰＤ－１処置あり（Ｄ）又はなし（Ｅ）のＳｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスにおける腫瘍成長曲線。

【図2】抗ＰＤ－１免疫療法で処置した又は処置しなかったＷＴ及びＳｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスにおける細胞性免疫応答。

【発明を実施するための形態】

【0012】

〔定義〕
「処置」又は「処置すること」は、本明細書において、がん又はがんのいずれかの症状を治癒する、治す、軽減する、緩和する、変更する、是正する、寛解する、改善する、又は影響を与える目的での、がんを有する患者への治療剤若しくは治療剤の組合せ（例えば、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤及び／又は免疫チェックポイントモジュレーター）の適用若しくは投与、又は患者から単離された組織若しくは細胞株への前記治療剤の適用若しくは投与として定義されている。特に、用語「処置する」又は「処置」は、がんに関連する少なくとも１種の有害臨床症状、例えば、疼痛、腫大、低血球数等を低下又は軽減することを指す。

【0013】

別の実施形態では、用語「処置する」又は「処置」は、新生物的な制御されない細胞の増殖の進行を遅くする又は反転すること、即ち、現存する腫瘍を縮小する及び／又は腫瘍成長を停止することを指す。

【0014】

用語「処置する」又は「処置」はまた、対象におけるがん又は腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘導することを指す。

【0015】

用語「処置」又は「処置すること」はまた、予防的に治療剤を投与する文脈において、本明細書で使用されている。

【0016】

用語「有効用量」又は「有効投薬量」は、所望の効果を達成する、又は少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。用語「治療有効用量」は、疾患を既に患う患者における疾患及びその合併症を治癒する又は少なくとも部分的に抑止するのに十分な量として定義される。用語「患者」は、予防的又は治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。

【0017】

本明細書において、用語「治療有効レジメン」は、がん又はその症状の処置及び／又は管理のための、本発明に係る１種又は複数の治療法（即ち、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤、及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーター）の投与の投薬、タイミング、頻度及び持続時間のためのレジメンを指す。特異的な実施形態では、レジメンは、次の結果のうちの１つ、２つ、３つ以上を達成する：（１）がん細胞集団の安定化、低下又は排除；（２）腫瘍又は新生物の成長の安定化又は低下；（３）腫瘍形成の損傷；（４）原発性、領域性及び／又は転移性がんの根絶、除去又は制御；（５）死亡率の低下；（６）無病、無再発、無進行及び／又は全生存、持続時間又は率の増加；（７）奏効率、応答の耐久性、又は応答する若しくは緩解した患者の数の増加；（８）入院率の減少、（９）入院の長さの減少、（１０）腫瘍のサイズが維持され、増加しないこと、又は１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは４％未満、好ましくは２％未満増加すること、並びに（１１）緩解した患者の数の増加。

【0018】

本明細書において、用語「組み合わせた」又は「併用投与」は、本発明の文脈において、がん治療利益のための、患者へのＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターの投与を指す。用語「組み合わせた」は、投与の文脈において、少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターと共に使用される場合の、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤の予防的使用を指すこともできる。

【0019】

用語「組み合わせた」の使用は、治療法（例えば、ＳＵＶ３９Ｈ１及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーター）が対象に投与される順序を制限しない。治療法は、がんを有していた、がんを有する又はがんに罹り易い患者への第２の治療法の投与に先立ち（例えば、１分間、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間又は１２週間前に）、それに付随して、又はその後に（例えば、１分間、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間又は１２週間後に）投与することができる。治療法が一緒に作用することができるように、治療法は、順次に且つ時間間隔内に患者に投与される。特定の実施形態では、治療法は、他の形で投与された場合よりも増加した利益をもたらすように、順次に且つ時間間隔内に対象に投与される。いずれか追加的な治療法を、他の追加的な治療法と共に、いずれかの順序で投与することができる。

【0020】

本発明のこれらの結果は、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤、及び抗ＰＤ－１抗体等の少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターによる患者の二重処置のための基盤を確立した。これら２種の治療法は、同時発生的に与えられる必要はないが、逐次に与えることもでき、例えば、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤から始め、続いて免疫チェックポイントモジュレーションを与えることができる。従って、本明細書において、表現「がんの処置における少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤」は、表現「がんの処置におけるＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤と組み合わせた使用のための少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターＳＵＶ３９Ｈ１」と互換的に使用することができる。

【0021】

用語「相乗作用」、「相乗的」又は「相乗的効果」は、本明細書において、個々の効果の和よりも大きい規模を有する効果を言う。本発明の一部の実施形態では、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの両方の協調した使用は、患者における新生物状態及び／又は細胞の成長に相乗的治療効果をもたらす。例えば、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤の使用により腫瘍成長が１０％低下し、免疫チェックポイントモジュレーター単独の使用により腫瘍成長が２０％低下する場合、新生物又は腫瘍成長を低下させるための相加的効果は、３０％低下となる。そのため、比較により、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの両方を使用する場合の相乗的効果は、３０％低下を超えるいずれかの程度での、腫瘍又は新生物成長の低下となるであろう。

【0022】

本明細書において、用語「抗体」は、少なくとも１個の免疫グロブリン可変領域、例えば、免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列をもたらすアミノ酸配列を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＨと略される）及び軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＬと略される）を含むことができる。別の例では、抗体は、２個の重（Ｈ）鎖可変領域及び２個の軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。用語「抗体」は、抗体の抗原結合性断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片及びｄＡｂ断片）と共に、完全抗体、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（及びこれらの亜型）型のインタクト及び／又は全長免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ又はラムダ型のものであり得る。一実施形態では、抗体は、グリコシル化されている。抗体は、抗体依存性細胞傷害及び／又は補体媒介性細胞傷害に関して機能的であり得る、或いはこれらの活性のうち一方又は両方に関して非機能的となり得る。

【0023】

ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤
本明細書において、用語「ＳＵＶ３９Ｈ１」又は「Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１」は、当技術分野におけるその通常の意義を有し、基質としてモノメチル化Ｈ３－Ｌｙｓ－９を使用してヒストンＨ３のＬｙｓ－９残基を特異的にトリメチル化する、ヒストンメチルトランスフェラーゼ「多様化サプレッサー（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ）３－９ホモログ１（ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ））」を指す（Ａａｇａａｒｄ Ｌ、Ｌａｉｂｌｅ Ｇ、Ｓｅｌｅｎｋｏ Ｐ、Ｓｃｈｍｉｄ Ｍ、Ｄｏｒｎ Ｒ、Ｓｃｈｏｔｔａ Ｇ、Ｋｕｈｆｉｔｔｉｇ Ｓ、Ｗｏｌｆ Ａ、Ｌｅｂｅｒｓｏｒｇｅｒ Ａ、Ｓｉｎｇｈ ＰＢ、Ｒｅｕｔｅｒ Ｇ、Ｊｅｎｕｗｅｉｎ Ｔ（１９９９年６月）「Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ＰＥＶ－ｍｏｄｉｆｉｅｒ Ｓｕ（ｖａｒ）３－９ ｅｎｃｏｄｅ ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｈｉｃｈ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｍ３ １」ＥＭＢＯ Ｊ １ ８（７）：１９２３～３８も参照されたい）。前記ヒストンメチルトランスフェラーゼは、ＭＧ４４、ＫＭＴ１Ａ、ＳＵＶ３９Ｈ、ヒストン－リシンＮ－メチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１、Ｈ３－Ｋ９－ＨＭＴａｓｅ １、ＯＴＴＨＵＭＰ００００００２４２９８、Ｓｕ（ｖａｒ）３－９ホモログ１、リシンＮ－メチルトランスフェラーゼ１Ａ、ヒストンＨ３－Ｋ９メチルトランスフェラーゼ１、位置効果（ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｅｆｆｅｃｔ ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ）３－９ホモログ、ヒストン－リシンＮ－メチルトランスフェラーゼ又はＨ３リシン－９特異的１としても知られている。ヒトＳＵＶ３９Ｈ１メチルトランスフェラーゼは、ＵＮＩＰＲＯＴにおいてＯ４３４６３と参照されている。用語ＳＵＶ３９Ｈ１は、ＳＵ（ＶＡＲ）３－９等、ＳＵＶ３９Ｈ１の全オルソログも包含する。

【0024】

ＳＵＶ３９Ｈ１は、遺伝子サイレンシングに重大な役割を持つ因子であるが、遺伝子サイレンシングに向かうその経路は、ＥＺＨ２等、他の典型的ヒストンメチルトランスフェラーゼとは完全に別個且つ非依存的である。実際に、ＥＺＨ２－ＫＯマウスは、生存不可能であるが（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ Ｄら、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００１年７月；２１（１３）：４３３０～６）、Ｓｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスは、対照的に、ごく軽度の表現型を呈する。従って、免疫応答におけるＳＵＶ３９Ｈ１及びＥＺＨ２の役割もまた、別個のものである。リンパ球におけるＥＺＨ２のコンディショナルＫＯは、リンパ球発生に深刻な欠損を引き起こす。反対に、Ｓｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスの免疫系は、影響を受けない。従って、ＳＵＶ３９Ｈ１は、免疫操作のための予測可能な関連性のある標的ではなかった。これに関して、本発明の結果は、非常に予想外である。

【0025】

本発明において、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼによるヒストンＨ３のＬｙｓ－９のメチル化を阻害する能力を有する、又はＨ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現を阻害する、いずれかの天然化合物の中から選択することができる。

【0026】

化合物の阻害活性は、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｄ．ら、Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００５年８月；ｌ（３）：１４３～５又はＥｓｋｅｌａｎｄ、Ｒ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３、３７４０～３７４９（２００４）に記載されている様々な方法を使用して決定することができる。

【0027】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、有機小分子、アプタマー、イントラボディ、ポリペプチド、又はＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤から選択することができる。

【0028】

典型的に、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、有機小分子である。用語「有機小分子」は、医薬品において一般に使用される有機分子に匹敵するサイズの分子を指す。この用語は、生物学的高分子（例えば、タンパク質、核酸等）を除外する。好まれる有機小分子は、サイズが、最大約５０００Ｄａ、より好ましくは最大２０００Ｄａ、最も好ましくは最大約１０００Ｄａに及ぶ。

【0029】

特定の実施形態では、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｄ、Ｂｏｎａｌｄｉ Ｔ、Ｅｓｋｅｌａｎｄ Ｒ、Ｒｏｅｍｅｒ Ｅ、Ｉｍｈｏｆ Ａ．「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｎｅ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ＳＵ（ＶＡＲ）３－９」、Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００５年８月；ｌ（３）：１４３～５．；Ｗｅｂｅｒ、Ｈ．Ｐ．ら「Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈａｅｔｏｃｉｎ」、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ、Ｂ２８、２９４５～２９５１（１９７２）；Ｕｄａｇａｗａ、Ｓ．ら「Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈａｅｔｏｇｌｏｂｏｓｉｎｓ，ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｔｉｎ，Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｔｉｎ，ａｎｄ ｃｈａｅｔｏｃｉｎ ｂｙ Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｓｐｐ． ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｆｕｎｇｉ」、Ｃａｎ．Ｊ．ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、２５、１７０～１７７（１９７９）；及びＧａｒｄｉｎｅｒ、Ｄ．Ｍ．ら「Ｔｈｅ ｅｐｉｐｏｌｙｔｈｉｏｄｉｏｘｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ（ＥＴＰ）ｃｌａｓｓ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｔｏｘｉｎｓ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ，ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、１５１、１０２１～１０３２（２００５）に記載されている通り、ケトシン（ｃｈａｅｔｏｃｉｎ）（ＣＡＳ ２８０９７－０３－２）である。例えば、ケトシンは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている。

【0030】

ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、ＥＴＰ６９（Ｒａｃ－（３Ｓ，６Ｓ，７Ｓ，８ａＳ）－６－（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－２，３，７－トリメチル－１，４－ジオキソヘキサヒドロ－６Ｈ－３，８ａ－エピジチオピロロ［１，２－ａ］ピラジン－７－カルボニトリル）、エピジチオジケトピペラジンアルカロイドケトシンＡのラセミアナログ（国際公開第２０１４０６６４３５号を参照、また、Ｂａｕｍａｎｎ Ｍ、Ｄｉｅｓｋａｕ ＡＰ、Ｌｏｅｒｔｓｃｈｅｒ ＢＭら、Ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ Ｅｐｉｄｉｔｈｉｏｄｉｏｘｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ Ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｗｉｔｈ Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：２０１０）．２０１５；６：４４５１～４４５７及びＳｎｉｇｄｈａ Ｓ、Ｐｒｉｅｔｏ ＧＡ、Ｐｅｔｒｏｓｙａｎ Ａら、Ｈ３Ｋ９ｍｅ３ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｍｅｍｏｒｙ， Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｓｐｉｎｅ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ＢＤＮＦ Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｇｅｄ Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２０１６；３６（１２）：３６１１～３６２２も参照されたい）となることもできる。

【0031】

新たな小分子阻害剤の同定は、本分野における古典的技法に従って達成することができる。ヒット化合物を同定するための現在有力なアプローチは、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）の使用によりなされる。

【0032】

別の実施形態では、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、アプタマーである。アプタマーは、分子認識の観点から抗体の代替を表す分子のクラスである。アプタマーは、高い親和性及び特異性で、標的分子の実質的にいかなるクラスも認識する能力を有するオリゴヌクレオチド又はオリゴペプチド配列である。かかるリガンドは、Ｔｕｅｒｋ Ｃ．及びＧｏｌｄ Ｌ．１９９０に記載されている通り、ランダム配列ライブラリーの試験管内進化法（ＳＥＬＥＸ）により単離することができる。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡのコンビナトリアル化学合成によって得ることができる。このライブラリーにおいて、各メンバーは、任意選択で化学修飾されている特有の配列の直鎖状オリゴマーである。分子のこのクラスの可能な修飾、使用及び利点は、Ｊａｙａｓｅｎａ Ｓ．Ｄ．１９９９に概説されている。ペプチドアプタマーは、ツーハイブリッド方法によってコンビナトリアルライブラリーから選択される大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）チオレドキシンＡ等、プラットフォームタンパク質によってディスプレイされる立体構造的に制約された抗体可変領域からなる（Ｃｏｌａｓ Ｐ、Ｃｏｈｅｎ Ｂ、Ｊｅｓｓｅｎ Ｔ、Ｇｒｉｓｈｉｎａ Ｉ、ＭｃＣｏｙ Ｊ、Ｂｒｅｎｔ Ｒ．「Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ２」、Ｎａｔｕｒｅ．１９９６年４月１１日；３８０（６５７４）：５４８～５０）。

【0033】

本発明に従った細胞におけるＳｕｖ３９ｈ１の阻害は、イントラボディにより達成することができる。イントラボディは、同じ細胞において産生された後に、その抗原に細胞内で結合する抗体である（概説については、例えば、Ｍａｒｓｃｈａｌｌ ＡＬ、Ｄｕｂｅｌ Ｓ及びＢｏｌｄｉｃｋｅ Ｔ「Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎ ｖｉｖｏ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ．２０１５；７（６）：１０１０～３５を参照、また、Ｖａｎ Ｉｍｐｅ Ｋ、Ｂｅｔｈｕｙｎｅ Ｊ、Ｃｏｏｌ Ｓ、Ｉｍｐｅｎｓ Ｆ、Ｒｕａｎｏ－Ｇａｌｌｅｇｏ Ｄ、Ｄｅ Ｗｅｖｅｒ Ｏ、Ｖａｎｌｏｏ Ｂ、Ｖａｎ Ｔｒｏｙｓ Ｍ、Ｌａｍｂｅｉｎ Ｋ、Ｂｏｕｃｈｅｒｉｅ Ｃら「Ａ ｎａｎｏｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｆ－ａｃｔｉｎ ｃａｐｐｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＣａｐＧ ｒｅｓｔｒａｉｎｓ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３；１５：Ｒ１１６；Ｈｙｌａｎｄ Ｓ、Ｂｅｅｒｌｉ ＲＲ、Ｂａｒｂａｓ ＣＦ、Ｈｙｎｅｓ ＮＥ、Ｗｅｌｓ Ｗ．「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２００３；２２：１５５７～６７；Ｌｏｂａｔｏ ＭＮ、Ｒａｂｂｉｔｔｓ ＴＨ．「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｆａｃｉｎｇ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ」、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２００３；９：３９０～６、並びにＤｏｎｉｎｉ Ｍ、Ｍｏｒｅａ Ｖ、Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ Ａ、Ｐａｓｈｋｏｕｌｏｖ Ｄ、Ｖｉｌｌａｎｉ ＭＥ、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ、Ｂｅｎｖｅｎｕｔｏ Ｅ．「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｓｔａｂｌｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００３年７月４日；３３０（２）：３２３～３２も参照されたい）。

【0034】

イントラボディは、現存するハイブリドーマクローンからそれぞれのｃＤＮＡをクローニングすることにより作製することができる、又はより簡便には、新たなｓｃＦｖ／Ｆａｂを、始めから抗体をコードする必要な遺伝子をもたらすファージディスプレイ等、ｉｎ ｖｉｔｒｏディスプレイ技法から選択し、抗体の精細な特異性をより詳細に予め設計すること（ｐｒｅｄｅｓｉｇｎ）を可能にすることができる。加えて、細菌、酵母、哺乳動物細胞表面ディスプレイ及びリボソームディスプレイを用いることができる。しかし、特異的抗体の選択のための最も一般的に使用されるｉｎ ｖｉｔｒｏディスプレイ系は、ファージディスプレイである。パニング（親和性選択）と呼ばれる手順において、組換え抗体ファージが、抗原と抗体ファージレパートリーとのインキュベーションによって選択される。このプロセスは、数回反復され、ほぼ全ての可能な標的に対する特異的抗原結合剤を含む濃縮された抗体レパートリーをもたらす。現在まで、ｉｎ ｖｉｔｒｏアセンブルされた組換えヒト抗体ライブラリーは、既に、数千種の新規組換え抗体断片を生じた。細胞質のイントラボディによる特異的タンパク質ノックダウンのための必要条件は、抗原が、抗体結合により中和／不活性化されることであることに留意されたい。適した抗体を作製するための５種の異なるアプローチが出現した：１）酵母等の真核生物及び大腸菌等の原核生物における機能的イントラボディのＩｎ ｖｉｖｏ選択（抗原依存的及び非依存的）；２）サイトゾル安定性を改善するための抗体融合タンパク質の作製；３）サイトゾル安定性を改善するための特殊フレームワークの使用（例えば、安定抗体フレームワークにおけるＣＤＲのグラフト又は合成ＣＤＲの導入による）；４）サイトゾル安定性改善のためのシングルドメイン抗体の使用；並びに５）ジスルフィド結合不含安定イントラボディの選択。これらのアプローチは、上述されているＭａｒｓｃｈａｌｌ、Ａ．Ｌら、ｍＡｂｓ ２０１５にとりわけ詳述されている。

【0035】

イントラボディに最も一般的に使用されるフォーマットは、完全ＩｇＧ又はＦａｂ分子の２本の抗体鎖を別々に発現及びアセンブリする必要を回避するための、短い可動性リンカー配列（しばしば（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３）によって一体に保持されるＨ及びＬ鎖可変抗体ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）からなるｓｃＦｖである。或いは、重鎖のＣ１ドメイン及び軽鎖の定常領域を更に含むＦａｂフォーマットが使用されてきた。近年、イントラボディの新たな可能なフォーマットであるｓｃＦａｂについて記載された。ｓｃＦａｂフォーマットは、細胞内発現ベクターへの利用できるＦａｂ遺伝子のより容易なサブクローニングの見込みがあるが、今後の課題としては、十分に確立されたｓｃＦｖフォーマットを上回る何らかの利点をもたらすものであるかが挙げられる。ｓｃＦｖ及びＦａｂに加えて、イントラボディとして二特異性フォーマットが使用されてきた。ＥＲに標的化された二特異性Ｔｉｅ－２×ＶＥＧＦＲ－２抗体は、単一特異性抗体対応物と比較して延長された半減期を実証した。関連する単一特異性抗体の別個の特色、即ち、自己リン酸化及びリガンド結合の阻害を組み合わせる、上皮増殖因子の細胞内及び細胞外エピトープを同時に認識するための特殊フォーマットとして、二特異性膜貫通イントラボディが開発された。

【0036】

細胞質発現に特に適した別のイントラボディフォーマットは、ラクダに由来する、又は１個のヒトＶＨドメイン又はヒトＶＬドメインからなる、シングルドメイン抗体（ナノボディとも呼ばれる）である。このようなシングルドメイン抗体は多くの場合、有利な特性、例えば、高い安定性；優れた溶解性；ライブラリークローニング及び選択の容易さ；大腸菌及び酵母における高い発現収率を有する。

【0037】

イントラボディ遺伝子は、発現プラスミドによるトランスフェクション又は組換えウイルスによるウイルス形質導入後に、標的細胞の内側で発現され得る。典型的に、選択は、最適なイントラボディトランスフェクション及び産生レベルの達成を目標とする。トランスフェクション及びその後のイントラボディ産生の成功は、産生された抗体のイムノブロット検出によって解析することができるが、正確なイントラボディ／抗原相互作用の評価のため、対応する抗原及びイントラボディ発現プラスミドを一過的にコトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞抽出物の共免疫沈降を使用することができる。

【0038】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムから選択することができる。

【0039】

アンチセンスＲＮＡ分子及びアンチセンスＤＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の翻訳を直接的に遮断するように作用し、よって、タンパク質翻訳を防止し又はｍＲＮＡ分解を増加させ、よって、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１のレベル、よって、細胞におけるその活性を減少させるであろう。例えば、少なくとも約１５塩基の、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１をコードするｍＲＮＡ転写物配列の特有の領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを、例えば、従来ホスホジエステル技法により合成し、例えば、静脈内注射又は注入により投与することができる。その配列が公知である遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するためのアンチセンス技法を使用するための方法は、当技術分野で周知である（例えば、米国特許第６，５６６，１３５号；同第６，５６６，１３１号；同第６，３６５，３５４号；同第６，４１０，３２３号；同第６，１０７，０９１号；同第６，０４６，３２１号；及び同第５，９８１，７３２号を参照）。

【0040】

低分子阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）も、本発明における使用のための発現の阻害剤として機能することができる。Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現が特異的に阻害されるように、低分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）又は低分子二本鎖ＲＮＡの産生を引き起こすベクター若しくは構築物と対象又は細胞を接触させることにより、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現を低下させることができる（即ち、ＲＮＡ干渉又はＲＮＡｉ）。適切なｄｓＲＮＡ又はｄｓＲＮＡコードベクターを選択するための方法は、その配列が公知である遺伝子に関して、当技術分野で周知である（例えば、Ｔｕｓｃｈｌ、Ｔ．ら（１９９９）；Ｅｌｂａｓｈｉｒ、Ｓ．Ｍ．ら（２００１）；Ｈａｎｎｏｎ、ＧＪ．（２００２）；ＭｃＭａｎｕｓ、ＭＴ．ら（２００２）；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ、ＴＲ．ら（２００２）；米国特許第６，５７３，０９９号及び同第６，５０６，５５９号；並びに国際特許公開番号、国際公開第０１／３６６４６号、国際公開第９９／３２６１９号及び国際公開第０１／６８８３６号を参照）。本発明のｓｉＲＮＡのホスホジエステル結合の全体又は部分は、有利に保護される。この保護は一般に、当技術分野で公知の方法を使用した化学的経路により実行される。ホスホジエステル結合は、例えば、チオール若しくはアミン官能基により又はフェニル基により保護され得る。本発明のｓｉＲＮＡの５’及び／又は３’端も、例えば、ホスホジエステル結合を保護するための上述の技法を使用して、有利に保護される。ｓｉＲＮＡ配列は、少なくとも１２個の近接ジヌクレオチド又はその誘導体を有利に含む。

【0041】

本明細書において、本核酸配列に関する用語「ｓｉＲＮＡ誘導体」は、エリスロポエチン又はその断片と少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、例として、少なくとも９８％、より好ましくは、少なくとも９８％の同一性のパーセンテージを有するいずれかの核酸を指す。

【0042】

本明細書において、２種の核酸配列の間の表現「同一性のパーセンテージ」は、前記配列の最良のアライメントにより得られる、比較されるべき２種の配列の間の同一核酸のパーセンテージを意味し、このパーセンテージは、純粋に統計的であり、これら２種の配列の間の差は、核酸配列にわたってランダムに拡散される。本明細書において、「最良のアライメント」又は「最適なアライメント」は、決定される同一性のパーセンテージ（後述を参照）が最高であるアライメントを意味する。２種の核酸配列の間の配列比較は通常、最良のアライメントに従って以前に整列されたこれらの配列を比較することにより実現される；この比較は、類似性の局所的領域を同定及び比較するために、比較のセグメントにおいて実現される。比較を行うための最良の配列アライメントは、手作業の他に、ＳＭＩＴＨ及びＷＡＴＥＲＭＡＮ（Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２巻、４８２頁、１９８１年）によって開発された全般的相同性アルゴリズムを使用することにより、ＮＥＤＤＬＥＭＡＮ及びＷＵＮＳＣＨ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、４８巻、４４３頁、１９７０年）によって開発された局所的相同性アルゴリズムを使用することにより、ＰＥＡＲＳＯＮ及びＬＩＰＭＡＮ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５巻、２４４４頁、１９８８年）によって開発された類似性の方法を使用することにより、かかるアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ ＵＳＡにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ Ｎ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡ）を使用したコンピュータソフトウェアを使用することにより、ＭＵＳＣＬＥ多重アライメントアルゴリズム（Ｅｄｇａｒ、Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３２巻、１７９２頁、２００４年）を使用することにより、実現することができる。最良の局所的アライメントを得るために、ＢＬＡＳＴソフトウェアを使用し得ることが好ましい。核酸の２種の配列の間の同一性パーセンテージは、最適に整列されたこれら２種の配列を比較することにより決定され、これら２種の配列の間の最適なアライメントを得るために、核酸配列は、参照配列に対する付加又は欠失を含むことができる。同一性のパーセンテージは、これら２種の配列の間の同一位置の数を決定し、この数を比較される位置総数で割り、得られた結果に１００を掛けて、これら２種の配列の間の同一性のパーセンテージを得ることにより計算される。

【0043】

ｓｈＲＮＡ（低分子ヘアピン型ＲＮＡ）も、本発明における使用のための発現の阻害剤として機能することができる。

【0044】

リボザイムも、本発明における使用のための発現の阻害剤として機能することができる。リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒することができる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイム作用の機構は、相補的標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションと、それに続くヌクレオチド鎖切断が関与する。Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１ ｍＲＮＡ配列のヌクレオチド鎖切断を特異的に且つ効率的に触媒する、操作されたヘアピン又はハンマーヘッド型モチーフリボザイム分子は、これにより、本発明の範囲内で有用である。いずれかの潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、最初に、次の配列、ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣを典型的に含むリボザイム切断部位に関して標的分子をスキャンすることにより同定される。同定されると、切断部位を含有する標的遺伝子の領域に対応する約１５～２０個のリボヌクレオチドの間の短いＲＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド配列を不適なものとし得る二次構造等の予測される構造的特色に関して評価することができる。

【0045】

発現の阻害剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチド及びリボザイムの両方は、公知方法によって調製することができる。そのようなものは、例えば、固相ホスホラミダイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍａｄｉｔｅ）化学合成による等、化学合成のための技法を含む。或いは、アンチセンスＲＮＡ分子は、ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ転写によって作製することができる。かかるＤＮＡ配列は、Ｔ７又はＳＰ６ポリメラーゼプロモーター等の適したＲＮＡポリメラーゼプロモーターを取り込む多種多様なベクターに取り込むことができる。本発明のオリゴヌクレオチドに対する様々な修飾は、細胞内安定性及び半減期を増加させる手段として導入することができる。可能な修飾として、分子の５’及び／又は３’端へのリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドの隣接配列の付加、又はオリゴヌクレオチド骨格内のホスホジエステラーゼ連結ではなくホスホロチオエート又は２’－０－メチルの使用が挙げられるがこれらに限定されない。

【0046】

本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムは、単独で、又はベクターと関連させてｉｎ ｖｉｖｏで送達することができる。その最も広い意味では、「ベクター」は、細胞、好ましくは、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１を発現する細胞へのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸の移入を容易にすることができるいずれかの媒体である。好ましくは、ベクターは、ベクターの非存在下で生じるであろう分解の程度と比べて低下した分解で、細胞に核酸を輸送する。一般に、本発明において有用なベクターとして、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸配列の挿入又は取り込みによって操作された、プラスミド、ファージミド、ウイルス、ウイルス又は細菌供給源に由来する他の媒体が挙げられるがこれらに限定されない。ウイルスベクターは、好まれる型のベクターであり、そのようなものとして、次のウイルス由来の核酸配列が挙げられるがこれらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス及びラウス肉腫ウイルス等のレトロウイルス；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン・バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；並びにレトロウイルス等のＲＡウイルス。名を挙げられていないが当技術分野で公知の他のベクターを容易に用いることができる。

【0047】

好まれるウイルスベクターは、非必須遺伝子が目的の遺伝子に置き換えられた、非細胞壊死性真核生物ウイルスに基づく。非細胞壊死性ウイルスは、レトロウイルス（例えば、レンチウイルス）を含み、その生活環は、ゲノムウイルスＲＮＡからＤＮＡへの逆転写と、宿主細胞ＤＮＡへのその後のプロウイルス組み込みが関与する。レトロウイルスは、ヒト遺伝子療法治験に承認されている。複製欠損（即ち、所望のタンパク質の合成を方向付けることができるが、感染粒子を製造することができない）であるレトロウイルスが最も有用である。かかる遺伝的に変更されたレトロウイルス発現ベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子の高効率形質導入のための一般用途を有する。複製欠損レトロウイルスを産生するための標準プロトコール（プラスミドへの外因的遺伝的材料の取り込み、プラスミドによるパッケージング細胞株のトランスフェクション、パッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の収集、及びウイルス粒子による標的細胞の感染のステップを含む）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０及びＭｕｒｒｙ、１９９１）に提供されている。

【0048】

ある特定の適用に好まれるウイルスは、遺伝子療法におけるヒト使用に既に承認された二本鎖ＤＮＡウイルスである、アデノウイルス及びアデノ随伴（ＡＡＶ）ウイルスである。現在、それぞれ異なる組織指向性を有する、１２種の異なるＡＡＶ血清型（ＡＡＶ１～１２）が公知である（Ｗｕ、Ｚ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２００６；１４：３１６～２７）。組換えＡＡＶは、依存性パルボウイルスＡＡＶ２に由来する（Ｃｈｏｉ、ＶＷ Ｊ Ｖｉｒｏｌ ２００５；７９：６８０１～０７）。アデノ随伴ウイルス１～１２型は、複製欠損となるように操作することができ、広範囲の細胞型及び種に感染することができる（Ｗｕ、Ｚ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２００６；１４：３１６～２７）。これは、熱及び脂質溶媒安定性；造血細胞を含む多様な系列の細胞における高い形質導入頻度；並びに重感染阻害の欠如、よって、複数系列の形質導入を可能にすること等の利点を更に有する。報告によれば、アデノ随伴ウイルスは、部位特異的方法でヒト細胞ＤＮＡに組み込み、これにより、レトロウイルス感染に特徴的な挿入突然変異誘発の可能性及び挿入遺伝子発現の可変性を最小化することができる。加えて、野生型アデノ随伴ウイルス感染は、選択圧の非存在下で１００を超える継代の間、組織培養において追跡され、アデノ随伴ウイルスゲノム組み込みが、相対的に安定な事象であることを暗示する。アデノ随伴ウイルスは、染色体外方法で機能することもできる。

【0049】

他のベクターは、プラスミドベクターを含む。プラスミドベクターは、当技術分野で広範に記載されており、当業者にとって周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照されたい。ここ数年間、プラスミドベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞に抗原コード遺伝子を送達するためのＤＮＡワクチンとして使用されてきた。プラスミドベクターは、ウイルスベクターの多くの場合と同じ安全性懸念がないため、この用途に特に有利である。しかし、宿主細胞と適合性のプロモーターを有するこのようなプラスミドは、プラスミド内に作動可能にコードされる遺伝子からペプチドを発現することができる。一部の一般的に使用されるプラスミドは、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＲＣ／ＣＭＶ、ＳＶ４０及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔを含む。他のプラスミドは、当業者にとって周知である。その上、プラスミドは、ＤＮＡの特異的断片を除去及び付加するための制限酵素及びライゲーション反応を使用して注文設計することができる。プラスミドは、種々の非経口的、粘膜及び外用経路によって送達することができる。例えば、ＤＮＡプラスミドは、筋肉内、皮内、皮下又は他の経路によって注射することができる。これは、鼻腔内スプレー又は液滴、直腸坐薬及び経口によって投与することもできる。これは、遺伝子銃を使用して上皮又は粘膜表面に投与することもできる。プラスミドは、水溶液中で、乾燥させて金粒子表面に、又はリポソーム、デンドリマー、渦巻形（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）送達媒体及びマイクロカプセル化が挙げられるがこれらに限定されない、別のＤＮＡ送達系と関連させて与えることができる。

【0050】

本発明に係るアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸配列は一般に、異種調節性領域、例えば、異種プロモーターの制御下に置かれる。プロモーターは、ミュラーグリア細胞、マイクログリア細胞、内皮細胞、ペリサイト細胞及びアストロサイトに特異的であり得る。例えば、ミュラーグリア細胞における特異的発現は、適したグルタミンシンテターゼ遺伝子のプロモーターにより得ることができる。プロモーターは、例として、ＣＭＶプロモーター等のウイルスプロモーター、又はいずれかの合成プロモーターとなることもできる。

【0051】

本発明の文脈において、本発明に係るＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、ＥＺＨ２、Ｇ９Ａ又はＳｅｔｄｂ１等、他のヒストンメチルトランスフェラーゼと比較して、Ｈ３Ｋ９－ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１に対して選択的であることが好ましい。ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＳｕｖ３９Ｈ２と比較して、ＳＵＶ３９Ｈ１に対して選択的となることもできる。「選択的」とは、阻害剤の親和性が、他のヒストンメチルトランスフェラーゼに対する親和性よりも少なくとも１０倍、好ましくは２５倍、より好ましくは１００倍、なお好ましくは５００倍高いことを意味するものである。

【0052】

典型的に、本発明のＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、２０μＭ未満、好ましくは１０μＭ未満、より好ましくは５μＭ未満、更により好ましくは１μＭ未満又は０．５μＭ未満のＩＣ_５０を有する。典型的にまた、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、例えば、ＥＺＨ２、Ｇ９Ａ又はＳｅｔｂｄ１等、他のメチルトランスフェラーゼに対する、１０μＭ超、好ましくは２０μＭ超、より好ましくは５０μＭ超のＩＣ_５０を有する。

【0053】

本発明に係るＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤は、トリプトライドではないことが好ましい。

【0054】

ＨＰ１αへのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１の結合の阻害剤は、以前に定義された通り、有機小分子、アプタマー、イントラボディ又はポリペプチドから選択することもできる。

【0055】

免疫チェックポイントモジュレーター
本明細書において、用語「免疫チェックポイントタンパク質」は、当技術分野におけるその一般の意義を有し、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞によって発現され、シグナルを上向きにする（刺激性チェックポイント分子）又はシグナルを下向きにする（阻害性チェックポイント分子）分子を指す。本発明において、免疫チェックポイント分子は、Ｔ細胞によって少なくとも発現されることが最も好ましい。

【0056】

免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１依存性経路と同様の免疫チェックポイント経路を構成すると当技術分野で認識される。本発明に係る免疫チェックポイント分子は、とりわけ、Ｐａｒｄｏｌｌ、２０１２．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２～２６４；Ｍｅｌｌｍａｎら、２０１１．Ｎａｔｕｒｅ ４８０：４８０～４８９；Ｃｈｅｎ Ｌ＆Ｆｌｉｅｓ ＤＢ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３年４月；１３（４）：２２７～２４２、及びＫｅｍａｌ Ｃａｔａｋｏｖｉｃ、Ｅｃｋｈａｒｄ Ｋｌｉｅｓｅｒら「Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ： ｆｒｏｍ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｓｉｃｓ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ２０１７、１５：１）に記載されている。免疫チェックポイント分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２、ＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）及びリガンドＣＤ４８、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２８Ｈ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３ ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＣＤ２４４（又は２Ｂ４）ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン様転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ－１）（Ｉｇ様Ｒファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ－１（白血球関連免疫グロブリン様受容体１）ＣＤ３０５、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２及びＳＩＲＰαをとりわけ包含する。

【0057】

阻害性チェックポイント分子の非限定的な例として、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３ ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン様転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ－１）（Ｉｇ様Ｒファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ－１（白血球関連免疫グロブリン様受容体１）、ＣＤ３０５、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２が挙げられる。

【0058】

Ａ２ａ受容体の活性化をもたらす免疫微小環境におけるアデノシンは、負の免疫フィードバックループであり、腫瘍微小環境は、相対的に高濃度のアデノシンを有するため、そのリガンドがアデノシンであるアデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）は、がん治療法における重要なチェックポイントとして考慮される。Ａ２ａＲは、アデノシン結合を遮断する抗体、又はその一部がＡ２ａＲに極めて特異的なアデノシンアナログによって阻害され得る。これらの薬物は、パーキンソン病の臨床治験において使用された。

【0059】

Ｂ７ファミリーは、共刺激性及び阻害性受容体に結合する膜結合型リガンドの重要なファミリーである。Ｂ７ファミリーメンバー及びその公知リガンドは全て、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。多くの受容体は未だ同定されていない。ＣＤ２７６とも呼ばれるＢ７－Ｈ３は、本来、共刺激性分子であると理解されていたが、現在、共阻害性として考慮されている。ＶＴＣＮ１とも呼ばれるＢ７－Ｈ４は、腫瘍細胞及び腫瘍関連マクロファージによって発現され、腫瘍エスケープにおける役割を果たす。

【0060】

ＣＤ１６０は、ＣＤ５６ｄｉｍ ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ＣＤ２８の発現を欠く細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞の僅かな部分、及び全ての上皮内リンパ球に限定される制限された発現プロファイルを有する、Ｉｇスーパーファミリーのグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型タンパク質メンバーである。古典的及び非古典的ＭＨＣ Ｉの両方へのＣＤ１６０の結合は、ＮＫ及びＣＤ８＋ＣＴＬ機能を増強する。しかし、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４）によるＣＤ１６０の係合は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴＣＲ媒介性シグナル伝達の阻害を媒介することが示された。

【0061】

ＨＶＥＭ（ヘルペスウイルス侵入メディエーター）タンパク質は、共刺激性ＬＴ－α／ＬＩＧＨＴ及び共阻害性受容体ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０の両方に結合する二分子スイッチである。Ｔ細胞表面における共阻害性受容体ＢＴＬＡ及び／又はＣＤ１６０と、ＤＣ又はＴｒｅｇ表面に発現されたＨＶＥＭとのライゲーションは、Ｔ細胞に負のシグナルを伝達し、このシグナルは、ＤＣ又は更には他の活性化Ｔ細胞（Ｔ－Ｔ細胞協力）表面に発現されたＬＩＧＨＴによるＴ細胞表面のＨＶＥＭの直接係合後に送達される共刺激性シグナルによって相殺される。ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ経路を上回るＢＴＬＡ及びＣＤ１６０とＨＶＥＭとの相互作用の優勢（又はその逆もまた同じ）は、リガンド／受容体親和性の差、及び細胞分化の異なるステージにおける細胞型表面におけるこれらの分子の差次的発現パターンの結果となり得る。ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ及びＣＤ１６０は、実質的に異なる結合親和性を有し、ＨＶＥＭ受容体との相互作用後に空間的に別個の部位を占有し、これは、ＨＶＥＭが、分子スイッチとして機能することを可能にする。ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ及びＨＶＥＭ／ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０相互作用の正味の効果は、これらの異なる受容体及びリガンドが同時に存在する場合、応答の成績を決定する（Ｍ．Ｌ．ｄｅｌ Ｒｉｏ．「ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ／ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０ ｃｏｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ａｓ ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０；８７を参照）。

【0062】

ＣＤ２７２とも呼ばれるＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）も、そのリガンドとしてＨＶＥＭを有する。ＢＴＬＡ Ｔ細胞は、そのリガンド、ＨＶＥＭの存在下で阻害される。ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の、ナイーブからエフェクター細胞表現型への分化において徐々に下方調節されるが、腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、高レベルのＢＴＬＡを発現する（Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｍ．Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂａｌａｎｃｉｎｇ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＢＴＬＡ ａｎｄ ＨＶＥＭ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００６、６、６７１～６８１）。

【0063】

ＣＤ１５２とも呼ばれるＣＴＬＡ－４、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４は、臨床的に標的化されるべき最初の免疫チェックポイントであった。これは、Ｔ細胞表面に排他的に発現される。Ｔ細胞の表面におけるその発現が、ＣＤ８０及びＣＤ８６の結合においてＣＤ２８を打ち負かし、Ｔ細胞に阻害性シグナルを活発に送達することにより、Ｔ細胞の活性化を弱めることが提案された。Ｔｒｅｇ細胞表面におけるＣＴＬＡ－４の発現は、Ｔ細胞増殖を制御するように機能する。

【0064】

Ｉｇ様転写物－３及び－４（ＩＬＴ３及びＩＬＴ４）は、両者共に単球、マクロファージ及びＤＣによって発現される阻害性受容体である。対応するＩＬＴ３リガンドは、未だ不明であるが、ＩＬＴ３がＴリンパ球機能を直接的に抑制することができるため、ＩＬＴ３リガンドは、Ｔ細胞表面に発現される可能性がある。いくつかのがんにおいて、ＩＬＴ３は、Ｔ細胞応答を損なうことにより、免疫エスケープ機構を媒介することが判明した。更に、ＩＬＴ４発現ＤＣは、腫瘍によって使用される機構である、効率的なＣＴＬ分化を遮断し、これは、ＩＬＴ４を上方調節して免疫系を逃れる（Ｖａｓａｔｕｒｏ Ａら、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：４１７）。

【0065】

ＣＤ３１としても公知の血小板内皮（ｅｎｄｏｔｈｅｉａｌ）細胞接着分子－１（ＰＥＣＡＭ－１）は、６個の細胞外Ｉｇドメイン及び２個の細胞質免疫受容阻害性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子スーパーファミリーのＩ型膜貫通糖タンパク質メンバーである。ＰＥＣＡＭ－１は、内皮細胞及び造血系の細胞に制限される（Ｎｅｗｍａｎ ＤＫ、Ｆｕ Ｇ、Ａｄａｍｓ Ｔら、Ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＰＥＣＡＭ－１ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ＴＧＦβ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．２０１６；９（４１８）：ｒａ２７を参照）。

【0066】

ＬＡＩＲ－１は、ナイーブＴ細胞において非常に高く相対的に均質なレベルで発現されるが、メモリーＴ細胞においてより低くより不均一なレベルで発現される。ＬＡＩＲ－１は、単一の細胞外Ｃ２型Ｉｇ様ドメイン、及び２個のＩＴＩＭモチーフを有する細胞質ドメインを有する、２８７アミノ酸のＩ型膜貫通糖タンパク質からなる。ＬＡＩＲ－１は、おそらく、Ｃ末端Ｃｓｋと、ホスファターゼＳＨＩＰ、ＳＨＰ－１又はＳＨＰ－２のうちの１種又は複数の動員によりＴＣＲ媒介性シグナルを、並びにある程度まで、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼを介したシグナル伝達及びＥＲＫシグナル伝達を阻害することができる（Ｔｈａｖｅｎｔｈｉｒａｎ Ｔら（２０１２）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｓ１２：００４）。

【0067】

ＩＤＯ１、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ１は、トリプトファン異化酵素である。関連する免疫阻害性酵素である。別の重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯ１は、Ｔ及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇ及び骨髄系由来サプレッサー細胞を作製及び活性化し、腫瘍血管新生を促進することが公知である。

【0068】

ＫＩＲ、キラー細胞免疫グロブリン様受容体は、構造に基づき２クラス：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）及びＣ型レクチン受容体に分けることができる阻害性受容体のブレイズ（ｂｒａｉｄ）カテゴリーであり、これは、ＩＩ型膜貫通受容体である。このような受容体は、ＮＫ細胞の死滅活性（ａｃｉｔｉｖｉｔｙ）の調節因子として本来記載されたが、多くは、Ｔ細胞及びＡＰＣ表面に発現される。ＫＩＲの多くは、サブセットＭＨＣクラスＩ分子に特異的（ｓｏｅｃｕｆｕｃ）であり、アレル特異性を保有する。

【0069】

ＬＡＧ３、リンパ球活性化遺伝子－３は、そのリガンドとして、ＭＨＣクラスＩＩ分子を有し、これは、一部の上皮がんにおいて上方調節されるが、腫瘍浸潤マクロファージ及び樹状細胞においても発現される。この免疫チェックポイントは、Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する作用と共にＣＤ８＋Ｔ細胞における直接効果によって免疫応答を抑制するように機能する。

【0070】

ＰＤ－１、プログラム死１（ＰＤ－１）受容体は、２種のリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２を有する。このチェックポイントは、２０１４年９月にＦＤＡ承認を得たＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．のメラノーマ薬キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）の標的である。ＰＤ－１標的化の利点は、腫瘍微小環境における免疫機能を回復することができることである。

【0071】

Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（Ｂ７Ｈ５とも命名）の省略であるＴＩＭ－３、並びにそのリガンド、ガレクチン（ｇａｌａｃｔｉｎｇ）９は、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞表面に発現され、Ｔｈ１及びＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ－３は、そのリガンド、ガレクチン－９との相互作用後に細胞死の引き金を引くことにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の調節因子として作用する。

【0072】

ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサーの省略である）、ｃ１０ｏｒｆ５４、ＰＤ－１Ｈ、ＤＤ１α、Ｇｉ２４、Ｄｉｅｓ１及びＳＩＳＰ１としても公知のＶＩＳＴＡは、ＮＣＲのＢ７ファミリーのメンバーであり、免疫療法のための新たな標的を表す。マウスＶＩＳＴＡは、そのＢ７類縁体に対して配列相同性を有する単一のＩｇＶドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質であり、保存されたセグメントは、ＩｇＶ安定性に重大な意味を持つと考えられる。ＶＩＳＴＡは、ナイーブＴ細胞上に発現される一方、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４は発現されず、このことは、ＶＩＳＴＡが、Ｔ細胞プライミングにおけるより初期ステージでもＴ細胞活性を制約するように機能することを示唆し得る。ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞及びＡＰＣの両方の表面に発現され、骨髄系細胞上に非常に高い発現がなされる。ＶＩＳＴＡは、造血性に制限され、複数のがんモデルにおいて、ＶＩＳＴＡは、腫瘍浸潤白血球表面でのみ検出され、腫瘍細胞表面では検出されなかった。この特有の表面発現パターンは、ＶＩＳＴＡが、異なるステージでＴ細胞免疫を制限するように機能し得ることを示唆する。ＶＩＳＴＡは、リガンド及び受容体機能の両方を発揮することが実証された。第一に、ＶＩＳＴＡは、リガンドとして機能して、Ｔ細胞活性化を負に調節することができる。第二に、ＶＩＳＴＡは、その活性を負に調節するＴ細胞表面の受容体として機能することが実証された。ＶＩＳＴＡ^－／－ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、ポリクローナル及び抗原特異的刺激の両方に対して、野生型（ＷＴ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞よりも活発に応答し、増殖増加、並びにＩＦＮγ、ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａの産生増加をもたらす。抗ＶＩＳＴＡ単独療法は、複数の前臨床モデル、Ｂ１６ＯＶＡメラノーマ、Ｂ１６－ＢＬ６メラノーマ、ＭＢ４９膀胱癌及びＰＴＥＮ／ＢＲＡＦ誘導性メラノーマにおいて腫瘍成長を低下させた（Ｄｅｎｇ Ｊ、Ｌｅ Ｍｅｒｃｉｅｒ Ｉ、Ｋｕｔａ Ａ、Ｎｏｅｌｌｅ ＲＪ．「Ａ Ｎｅｗ ＶＩＳＴＡ ｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｂｌｏｃｋａｄｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ．２０１６年１２月２０日；４：８６．ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ４０４２５－０１６－０１９０－５．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ２０１６を参照し、概説；Ｋａｔｈｌｅｅｎ Ｍ．Ｍａｈｏｎｅｙら「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｎｅｗ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｔａｒｇｅｔｓ」Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１５；１４：５６１～５８４も参照されたい）。

【0073】

ＣＤ９６、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）及びＴＩＧＩＴは、ネクチン及びネクチン様タンパク質と相互作用する受容体の新興ファミリーに属する。ＣＤ２２６は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介性細胞傷害を活性化する一方、ＴＩＧＩＴは、報告によれば、ＣＤ２２６を相殺する。

【0074】

ＣＤ９６は、ＣＤ１５５結合に関してＣＤ２２６と競合し、直接的阻害によってＮＫ細胞機能を限定する（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｊ Ｃｈａｎら「Ｔｈｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＣＤ９６ ａｎｄ ＣＤ２２６ ｏｐｐｏｓｅ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ」Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１４ １５、４３１～４３８）。

【0075】

ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、又はＶＳＴＭ３とも呼ばれる）；ＴＩＧＩＴ／ＶＳＴＭ３は、活性化Ｔ細胞、調節性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって正常に発現される。ポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５／ＰＶＲ）及びネクチン－２（ＣＤ１１２）並びにＣＤ１１３は、関連性のあるリガンドとして同定された。ＴＩＧＩＴ／ＶＳＴＭ３は、それぞれＣＤ１５５／ＰＶＲ及びＣＤ１１２への結合に関して分子ＣＤ２２６及びＣＤ９６と競合するが、あらゆるそれぞれの受容体－リガンド組合せの中でも、ＴＩＧＩＴ／ＶＳＴＭ３は、ＣＤ１５５／ＰＶＲに対する最も強い親和性を示す。ＴＩＧＩＴは、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞活性化を阻害する（Ｋａｒｓｔｅｎ Ｍａｈｎｋｅら、ＴＩＧＩＴ－ＣＤ１５５ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ： Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｃｏ－Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｐａｔｈｗａｙ ｗｉｔｈ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１６；１３６：９～１１を参照）。

【0076】

そのリガンドがＰＶＲＬ２であるＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）は、Ｔ細胞表面に優先的に発現され、Ｔ細胞受容体媒介性シグナルを阻害する、ポリオウイルス受容体様タンパク質のメンバーである。

【0077】

刺激性チェックポイント分子の非限定的な例として、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２及びＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）及びそのリガンドＣＤ４８、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＣＤ２８Ｈ及びＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられる。

【0078】

ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、２Ｂ４（ＣＤ２４４）及びそのリガンドＣＤ４８、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２８Ｈ及びＴＮＦＳＦ２５は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーである刺激性チェックポイント分子である。ＴＮＦＲＳＦタンパク質は、Ｂ及びＴ細胞発生、生存並びに抗腫瘍免疫応答における重要な役割を果たす。加えて、一部のＴＮＦＲＳＦは、Ｔ_ｒｅｇ細胞の非活性化に関与する。従って、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、腫瘍免疫を活性化し、それと免疫チェックポイント療法との組合せは有望である。ＴＮＦＲＳＦアゴニストとして作用するいくつかの抗体は、臨床治験において評価された（Ｓｈｉｒｏ Ｋｉｍｂａｒａ及びＳｈｕｎｓｕｋｅ Ｋｏｎｄｏ「Ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ」Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１６年９月７日；２２（３３）：７４４０～７４５２、概説については、Ｗａｔｔｓ ＴＨ．ＴＮＦ／ＴＮＦＲ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ｉｎ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；２３：２３～６８も参照されたい）。

【0079】

ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増大化を支持し、Ｔ細胞メモリーの作製に重要である。ＣＤ２７はまた、Ｂ細胞のメモリーマーカーである。ＣＤ２７の活性は、リンパ球及び樹状細胞表面のそのリガンドＣＤ７０の一過的利用能によって決定される。ＣＤ２７共刺激は、Ｔｈ１７エフェクター細胞機能を抑制することが公知である。

【0080】

ＣＤ４０：ＣＤ４０Ｌ経路は、液性及び細胞媒介性免疫の両方に影響を与える共刺激性経路である。ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４としても公知）は、活性化後直ちにヘルパーＴ細胞表面に主に発現される。受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＶ）内のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）サブファミリーに属する。このファミリーの全メンバーは、その細胞質テイルに２個以上の免疫受容体チロシンに基づくスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有し、これは、受容体ＣＤ２２９、ＣＳ１、ＮＴＢ－Ａ及びＣＤ８４［９２］を含む。２Ｂ４は、ＣＤ８＋Ｔ細胞表面における活性化後に、ＮＫ細胞、γδ Ｔ細胞、好塩基球及び単球によって発現され、リンパ系及び骨髄系細胞表面のＣＤ４８に高い親和性で結合する（Ｋｅｍａｌ Ｃａｔａｋｏｖｉｃら、Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ２０１７ １５：１）。

【0081】

ＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８は、誘導性発現を示し、Ｔリンパ球によって発現される受容体であるヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４）に関して単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄと競合し、ヒト及びマウスＴＮＦスーパーファミリーの近年同定されたメンバーである。ＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８は、活性化Ｔ細胞並びに単球及び顆粒球及び未成熟ＤＣによって産生される２９ｋＤのＩＩ型膜貫通タンパク質である。Ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ免疫チェックポイント経路は、強力なＣＤ２８非依存的共刺激性活性を誘導し、ＮＦ－κＢ活性化、ＩＦＮ－γ及び他のサイトカインの産生、並びに同種異系間ＤＣに応答したＴ細胞増殖をもたらす。Ｉｎ ｖｉｖｏ遮断研究は、ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ免疫チェックポイント経路が、腫瘍に対する細胞溶解性Ｔ細胞応答の促進、及びＧＶＨＤの発症に関与することを示し、Ｔ細胞内でのＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８のトランスジェニック過剰発現は、Ｔ細胞増大化をもたらし、様々な重症自己免疫性疾患を引き起こす（Ｑｕｎｒｕｉ Ｙｅら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００２年３月１８日；１９５（６）：７９５～８００）。

【0082】

ＣＤ２８Ｈは、全てのナイーブＴ細胞表面に構成的に発現される。Ｂ７ホモログ５（Ｂ７－Ｈ５）は、ＣＤ２８Ｈの特異的リガンドとして同定された。Ｂ７－Ｈ５は、マクロファージに構成的に見出され、樹状細胞表面に誘導され得る。Ｂ７－Ｈ５／ＣＤ２８Ｈ相互作用は、ＡＫＴ依存性シグナル伝達カスケードを介してヒトＴ細胞成長及びサイトカイン産生を選択的に共刺激する（Ｚｈｕ Ｙら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１３；４：２０４）。

【0083】

ＣＤ１３４とも呼ばれるＯＸ４０は、そのリガンドとしてＯＸ４０Ｌ又はＣＤ２５２を有する。ＣＤ２７と同様に、ＯＸ４０は、エフェクター及びメモリーＴ細胞の増大化を促進するが、調節性Ｔ細胞の分化及び活性を抑制するその能力、また、そのサイトカイン産生調節にも留意されたい。薬物標的としてのＯＸ４０の価値は、主として、Ｔ細胞受容体係合後に一過的に発現されると、炎症性病変内のつい先ほど抗原活性化されたＴ細胞表面でのみ上方調節されるという事実にある。抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、進行型がんにおける臨床有用性を有することが示された（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ＡＤ、Ｍｏｒｒｉｓ ＮＰ、Ｋｏｖａｃｓｏｖｉｃｓ－Ｂａｎｋｏｗｓｋｉ Ｍ、Ｕｒｂａ ＷＪ、Ｃｕｒｔｉ ＢＤ（２０１１年１１月１日）「Ｓｃｉｅｎｃｅ ｇｏｎｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ： ｔｈｅ ＯＸ４０ ａｇｏｎｉｓｔ ｓｔｏｒｙ」Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２４４（１）：２１８～３１）。

【0084】

グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子の省略であるＧＩＴＲは、Ｔｒｅｇ増大化を含むＴ細胞増大化を促す。ＧＩＴＲのリガンド（ＧＩＴＲＬ）は、抗原提示細胞表面に主に発現される。ＧＩＴＲに対する抗体は、Ｔ_ｒｅｇ系列安定性の損失により抗腫瘍応答を促進することが示された（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ Ｇ、Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ Ｓ、Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ Ｓ、Ｒｉｃｃａｒｄｉ Ｃ（２００７年５月１日）「ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ： ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｓｙｓｔｅｍ」Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（５）：１１６５～９を参照）。

【0085】

誘導性Ｔ細胞共刺激因子の省略であり、ＣＤ２７８とも呼ばれるＩＣＯＳは、活性化Ｔ細胞表面に発現される。そのリガンドは、ＩＣＯＳＬであり、Ｂ細胞及び樹状細胞表面に主に発現される。この分子は、Ｔ細胞エフェクター機能において重要であると思われる（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ Ｙ、Ｌｉｓｃｈｋｅ Ｔ、Ｄａｈｌｅｒ ＡＣ、Ｍａｇｅｓ ＨＷ、Ｌａｍ ＫＰ、Ｃｏｙｌｅ ＡＪ、Ｋｒｏｃｚｅｋ ＲＡ、Ｈｕｔｌｏｆｆ Ａ（２００８年１月１５日）「ＩＣＯＳ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｐｏｏｌ ｓｉｚｅ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｏｒ－ｍｅｍｏｒｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ」Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０（２）：７７４～７８２）。

【0086】

Ｂ７－ＣＤ２８スーパーファミリーに属する別の刺激性チェックポイント分子は、とりわけＣＤ２８それ自体及びＴＧＭＩＤ２である。

【0087】

ＣＤ２８は、ほぼ全てのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞、及び全てのＣＤ８ Ｔ細胞の約半分の表面に構成的に発現される。その２種のリガンド（樹状細胞表面に発現されたＣＤ８０及びＣＤ８６）との結合は、Ｔ細胞増大化を促す。

【0088】

ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８ホモログとも呼ばれる）は、そのリガンドＨＨＬＡ２；新たに同定されたＢ７ファミリーメンバーとの相互作用によりＴ細胞機能をモジュレートする。ＴＭＩＧＤ２タンパク質は、全てのナイーブＴ細胞及び大部分のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞表面に構成的に発現されるが、Ｔ調節性細胞又はＢ細胞表面には発現されない（ｓｅｅ Ｙａｎｐｉｎｇ Ｘｉａｏ及びＧｏｒｄｏｎ Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ「Ａ ｎｅｗ Ｂ７：ＣＤ２８ ｆａｍｉｌｙ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ： ＨＨＬＡ２」Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１５年５月１５日；２１（１０）：２２０１～２２０３）。

【0089】

ＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７Ｌ；４－１ＢＢＬ及びＴＮＦＳＦ９としても公知）は、樹状細胞、単球／マクロファージ及びＢ細胞等、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面に主に発現され、その発現は、これらの細胞の活性化において上方調節される。しかし、その発現は、種々の造血細胞及び非造血細胞において実証された。一般に、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、多くの細胞型表面に構成的に発現されるが、その発現レベルは、いくつかの細胞型を除いて低い。興味深いことに、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、様々な細胞型表面にＣＤ１３７（４－１ＢＢ及びＴＮＦＲＳＦ９としても公知）と共発現されるが、ＣＤ１３７／４－１ＢＢの発現は、当該２分子の間のシス相互作用により、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌの発現を強力に下方調節し、４－１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌのエンドサイトーシスをもたらす（Ｂｙｕｎｇｓｕｋ Ｋｗｏｎら、「Ｉｓ ＣＤ１３７ Ｌｉｇａｎｄ （ＣＤ１３７Ｌ） Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａ Ｆｉｎｅ Ｔｕｎｅｒ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ？」Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２０１５年６月；１５（３）：１２１～１２４を参照）。

【0090】

最後に、本発明に係る他の免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２４４（又は２Ｂ４）及びＳＩＲＰαも含む。

【0091】

２Ｂ４／ＣＤ２４４は、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）関連受容体ファミリーのメンバーであり、ＳＬＡＭＦ４及びＣＤ２４４としても公知である。ＳＬＡＭファミリーの全メンバーは、細胞外ドメイン、膜貫通領域及びチロシンリッチ細胞質領域を含む同様の構造を共有する。２Ｂ４＆ＣＤ４８免疫チェックポイント経路は、両方の受容体を介したシグナル伝達をもたらすことができる。Ｂ細胞におけるＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２シグナル伝達は、ホモタイプ接着、増殖及び／又は分化、炎症性エフェクター分子の放出、並びにアイソタイプクラススイッチングをもたらす。その上、これらのプロセスは全て、それらの活性化及び／又は細胞傷害性の促進を加えて、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２ライゲーションを介してＴ細胞においても誘発される。２Ｂ４シグナル伝達は、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）関連タンパク質（ＳＡＰ）又はＥＷＳ活性化転写物２（ＥＡＴ－２；ＳＨ２Ｄ１Ｂとも呼ばれる）を要求する。ＣＤ８ Ｔ細胞及びＮＫ細胞において、２Ｂ４／ＣＤ２４４は、正及び負の調節の両方を発揮すると報告された（Ｓｅｂａｓｔｉａｎ Ｓｔａｒｋ．「２Ｂ４ （ＣＤ２４４）， ＮＴＢ－Ａ ａｎｄ ＣＲＡＣＣ （ＣＳ１） ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｕｔ ｎｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ＮＫ ｃｅｌｌｓ」Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ １８（２）：２４１～２４７も参照されたい）。

【0092】

ＣＤ４７は、マクロファージ及び樹状細胞特異的タンパク質シグナル調節性タンパク質アルファ（ＳＩＲＰアルファ）への結合によるファゴサイトーシスの調節を含む、種々の機能を有する細胞表面糖タンパク質である。ＳＩＲＰアルファ＆ＣＤ４７免疫チェックポイント経路としての、ＣＤ４７へのＳＩＲＰアルファの結合は、ファゴサイトーシスを阻害するためのシグナル伝達を惹起することにより、マクロファージに「私を食べないで」メッセージを基本的に送る。ＣＤ４７の発現増加は、がん細胞が免疫検出及びファゴサイトーシスを逃れる機構であると提案される。抗ＣＤ４７遮断抗体による、がん細胞表面のＣＤ４７の標的化は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでマクロファージによるファゴサイトーシスを促進することができる。更に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでファゴサイトーシスを促進し、非ホジキンリンパ腫のｉｎ ｖｉｖｏ異種移植モデルにおけるがん細胞を排除するための、リツキシマブ処置と協同した抗ＣＤ４７遮断抗体による処置。更なる結果は、ＣＤ４７発現が、種々のヒト固形腫瘍型において増加すること、また、抗ＣＤ４７抗体によるＳＩＲＰアルファ＆ＣＤ４７免疫チェックポイント経路の遮断が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで固形腫瘍細胞のファゴサイトーシスを促進し、ｉｎ ｖｉｖｏで固形腫瘍の成長を低下させることができることを実証する（Ｍａｒｔｉｎａ Ｓｅｉｆｆｅｒｔら「Ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ α （ＳＩＲＰα） ｂｕｔ ｎｏｔ ＳＩＲＰβ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ， ｂｉｎｄｓ ｔｏ ＣＤ４７ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ， ａｎｄ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｉｍｍａｔｕｒｅ ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ」２００１；Ｂｌｏｏｄ：９７（９）を参照）。

【0093】

本明細書において、表現「免疫チェックポイントタンパク質のモジュレーター」又は「
チェックポイント調節因子がん免疫療法剤」（両方の表現は、本発明の意味において互換的に使用することができる）は、当技術分野におけるその一般の意義を有し、免疫阻害性チェックポイントタンパク質の機能を阻害する（以前に記載された阻害性免疫チェックポイント阻害剤又は免疫チェックポイント阻害剤）、又は刺激性チェックポイントタンパク質の機能を刺激する（互換的に使用される刺激性免疫チェックポイントアゴニスト又は免疫チェックポイントアゴニスト）、いずれかの化合物を指す。阻害は、機能の低下及び完全遮断を含む。

【0094】

免疫チェックポイントモジュレーターは、ペプチド、抗体、融合タンパク質、核酸分子及び小分子を含む。ある特定の免疫チェックポイントタンパク質（即ち、免疫経路遺伝子産物）に関して、かかる遺伝子産物の小分子モジュレーターのように、かかる遺伝子産物のアンタゴニスト又はアゴニストのいずれかの使用も考慮される。

【0095】

好まれる免疫チェックポイント阻害剤又はアゴニストは、以前に記載された通り、免疫チェックポイントタンパク質又はそのリガンドを特異的に認識する抗体又は融合タンパク質である。

【0096】

免疫チェックポイントモジュレーターとしての使用のための融合タンパク質は、免疫グロブリンの結晶化可能断片（Ｆｃ）領域と上述のチェックポイント分子との融合によって作製することができる。抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましい。

【0097】

多数の免疫チェックポイント阻害剤及びアゴニストが、当技術分野で公知であり、このような公知免疫チェックポイントタンパク質モジュレーターに類似して、代替免疫チェックポイントモジュレーターを（近い）将来に開発し、本発明に係るＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤と組み合わせて使用することができる。

【0098】

本発明に係る免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫系の活性化を生じ、特に、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。特に、本発明の免疫チェックポイントモジュレーターは、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、遊走、持続及び／又は細胞傷害（ｃｙｔｏｘｉｃ）活性、特に、対象のＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤を増強するために投与される。本明細書において、「ＣＤ８＋Ｔ細胞」は、当技術分野におけるその一般の意義を有し、その表面にＣＤ８を発現するＴ細胞のサブセットを指す。これは、ＭＨＣクラスＩ制限され、細胞傷害性Ｔ細胞として機能する。「ＣＤ８＋Ｔ細胞」は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞とも呼ばれる。ＣＤ８抗原は、免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーであり、主要組織適合複合体クラスＩ制限相互作用における連合性認識エレメントである。Ｔ ＣＤ８細胞死滅活性を増強する免疫チェックポイントモジュレーターの能力は、当技術分野で周知のいずれかのアッセイによって決定することができる。典型的に、前記アッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が標的細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識及び／又は溶解される標的細胞）と接触させられるｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである。

【0099】

例えば、本発明の免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ８＋Ｔ細胞による特異的溶解を、本発明の免疫チェックポイント阻害剤によって接触されるＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ８ Ｔ細胞株による同じエフェクター：標的細胞比で得られる特異的溶解の約２０％超、好ましくは少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％以上増加させる能力のため選択することができる。古典的細胞傷害性アッセイのためのプロトコールの例は、従来のものである。

【0100】

本発明に係る少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターは、阻害性免疫チェックポイント分子及び／又は刺激性免疫チェックポイント分子のモジュレーターであり得る。

【0101】

例えば、チェックポイント調節因子がん免疫療法剤は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及びプログラム細胞死１（ＰＤＣＤ１、ＰＤ－１として最もよく知られる）等、活性化Ｔリンパ球によって若しくはキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリーの様々なメンバーのようにＮＫ細胞によって発現される免疫抑制性受容体（即ち、阻害性免疫チェックポイント）を遮断する（そのアンタゴニスト）薬剤、又はＰＤ－１リガンドＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１又はＢ７－Ｈ１として最もよく知られる）等、これらの受容体の主要リガンドを遮断する薬剤であり得る。

【0102】

一部の実施形態では、チェックポイント遮断がん免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤＬ２抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＩＤＯ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗Ｂ７Ｈ６抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｇａｌ９抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗Ａ２ａＲ抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＫＩＲ（複数可）抗体、Ａ２ａＲ薬物（とりわけアデノシンアナログ）、抗ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ－１）抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２抗体、抗ＧＰ４９ｂ抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＬＡＩＲ－１抗体、抗ＣＤ３０５抗体、及びこれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、チェックポイント遮断がん免疫療法剤は、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0103】

抗ＣＴＬＡ－４抗体の例は、米国特許第５，８１１，０９７号；同第５，８１１，０９７号；同第５，８５５，８８７号；同第６，０５１，２２７号；同第６，２０７，１５７号；同第６，６８２，７３６号；同第６，９８４，７２０号；及び同第７，６０５，２３８号に記載されている。抗ＣＤＬＡ－４抗体の１種は、トレメリムマブ（チシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、ＣＰ－６７５，２０６）である。一部の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体であるイピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－Ｄ０１０としても公知）である。

【0104】

ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１抗体の例は、米国特許第７，４８８，８０２号；同第７，９４３，７４３号；同第８，００８，４４９号；同第８，１６８，７５７号；同第８，２１７，１４９号、並びにＰＣＴ公開特許出願番号、国際公開第０３０４２４０２号、国際公開第２００８１５６７１２号、国際公開第２０１００８９４１１号、国際公開第２０１００３６９５９号、国際公開第２０１１０６６３４２号、国際公開第２０１１１５９８７７号、国際公開第２０１１０８２４００号及び国際公開第２０１１１６１６９９号に記載されている。一部の実施形態では、ＰＤ－１遮断薬は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。ある特定の他の実施形態では、ＰＤ－１遮断薬は、抗ＰＤ－１抗体、並びにＰＤ－１に結合し、そのリガンドＰＤ－Ｌｌ及びＰＤ－Ｌ２によるＰＤ－１の活性化を遮断する完全ヒトＩｇＧ４抗体であるニボルマブ（ＭＤＸ １１０６、ＢＭＳ ９３６５５８、ＯＮＯ ４５３８）；ＰＤ－１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体であるランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５又はＳＣＨ ９００４７５）；ＰＤ－１に結合するヒト化抗体であるＣＴ－０１１；Ｂ７－ＤＣの融合タンパク質であるＡＭＰ－２２４；抗体Ｆｃ部分；ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）遮断のためのＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５－０１）等の同様の結合タンパク質を含む。

【0105】

他の免疫チェックポイント阻害剤は、可溶性Ｉｇ融合タンパク質であるＩＭＰ３２１等、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）阻害剤を含む（Ｂｒｉｇｎｏｎｅら、２００７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：４２０２～４２１１）。

【0106】

他の免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３及びＢ７－Ｈ４阻害剤等、Ｂ７阻害剤、とりわけ、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ＭＧＡ２７１を含む（Ｌｏｏら、２０１２、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７月、１５（１８）３８３４）。

【0107】

ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３）阻害剤も含まれる（Ｆｏｕｒｃａｄｅら、２０１０、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１７５～８６及びＳａｋｕｉｓｈｉら、２０１０、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１８７～９４）。本明細書において、用語「ＴＩＭ－３」は、当技術分野におけるその一般の意義を有し、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有分子３を指す。従って、用語「ＴＩＭ－３阻害剤」は、本明細書において、ＴＩＭ－３の機能を阻害することができる化合物、物質又は組成物を指す。例えば、阻害剤は、ＴＩＭ－３の発現若しくは活性を阻害する、ＴＩＭ－３シグナル伝達経路をモジュレート若しくは遮断する、及び／又はその天然リガンドであるガレクチン－９へのＴＩＭ－３の結合を遮断することができる。ＴＩＭ－３に対する特異性を有する抗体は、当技術分野で周知であり、典型的に、国際公開第２０１１１５５６０７号、国際公開第２０１３００６４９０号及び国際公開第２０１０１１７０５７号に記載されている抗体である。

【0108】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、好ましくは、ＩＤＯ１阻害剤である。ＩＤＯ阻害剤の例は、国際公開第２０１４１５０６７７号に記載されている。ＩＤＯ阻害剤の例は、１－メチル－トリプトファン（ＩＭＴ）、β－（３－ベンゾフラニル）－アラニン、β－（３－ベンゾ（ｂ）チエニル）－アラニン）、６－ニトロ－トリプトファン、６－フルオロ－トリプトファン、４－メチル－トリプトファン、５－メチルトリプトファン、６－メチル－トリプトファン、５－メトキシ－トリプトファン、５－ヒドロキシ－トリプトファン、インドール３－カルビノール、３，３’－ジインドリルメタン、没食子酸エピガロカテキン、５－Ｂｒ－４－Ｃｌ－インドキシル１，３－ジアセテート、９－ビニルカルバゾール、アセメタシン、５－ブロモ－トリプトファン、５－ブロモインドキシルジアセテート、３－アミノ－ナフトエ酸（ｎａｐｈｔｏｉｃ ａｃｉｄ）、ピロリジンジチオカルバメート、４－フェニルイミダゾール、ブラシニン誘導体、チオヒダントイン誘導体、β－カルボリン誘導体又はブラシレキシン（ｂｒａｓｓｉｌｅｘｉｎ）誘導体を限定することなく含む。ＩＤＯ阻害剤は、１－メチル－トリプトファン、β－（３－ベンゾフラニル）－アラニン、６－ニトロ－Ｌ－トリプトファン、３－アミノ－ナフトエ酸及びβ－［３－ベンゾ（ｂ）チエニル］－アラニン、又はこれらの誘導体若しくはプロドラッグから選択されることが好ましい。

【0109】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＴＩＧＩＴ（Ｔ細胞免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）及びＩＴＩＭドメイン）抗体である。

【0110】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体、好ましくは、モノクローナル抗体である（Ｌｉｎｅｓ ＪＬ、Ｓｅｍｐｅｒｅ ＬＦ、Ｗａｎｇ Ｌら、ＶＩＳＴＡ ｉｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；７４（７）：１９２４～１９３２．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８－５４７２．ＣＡＮ－１３－１５０４）。

【0111】

好まれる実施形態では、チェックポイントモジュレーターがん免疫療法剤は、イピリムマブ等のＣＴＬＡ４遮断抗体、ニボルマブ若しくはペムブロリズマブ等のＰＤ－１遮断抗体、ＰＤＬ－１遮断抗体、又はこれらの組合せである。典型的に、チェックポイントモジュレーターがん免疫療法剤は、ニボルマブ若しくはペムブロリズマブ等のＰＤ－１遮断抗体、又はＰＤＬ－１遮断抗体である。

【0112】

チェックポイントモジュレーターがん免疫療法剤は、活性化Ｔリンパ球若しくはＮＫ細胞によって発現される刺激性免疫チェックポイント受容体を活性化する薬剤、又はこれらの受容体の主要リガンドを模倣し、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅を同様にもたらす薬剤となることもできる。

【0113】

よって、チェックポイントモジュレーターがん免疫療法剤は、典型的に、例えば、アゴニスト抗４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０Ｌ、ＴＭＩＧＤ２、ＣＤ２２６、ＴＮＦＳＦ２５、２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ４８、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＣＤ２８Ｈ、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）及びＣＤ２８抗体からなる群から選択される、アゴニスト抗体、とりわけ、上述の刺激性免疫チェックポイント分子に対するモノクローナルアゴニスト抗体であり得る。

【0114】

チェックポイントアゴニストがん免疫療法剤は、融合タンパク質、例えば、４－１ＢＢ－Ｆｃ融合タンパク質、Ｏｘ４０－Ｆｃ融合タンパク質、ＧＩＴＲ－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２７－Ｆｃ融合タンパク質、ＩＣＯＳ－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ４０Ｌ－Ｆｃ融合タンパク質、ＴＭＩＧＤ２－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２２６－Ｆｃ融合タンパク質、ＴＮＦＳＦ２５－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２８－Ｆｃ融合タンパク質、２Ｂ４（ＣＤ２４４）融合タンパク質、ＣＤ４８融合タンパク質、Ｂ７－Ｈ６ Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）融合タンパク質、ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質、及びＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）融合タンパク質となることもできる。

【0115】

４－１ＢＢアゴニストのうちいくつかは、ヒトがんへの適用に対する大きい潜在力を示す。例えば、４－１ＢＢに対する完全ヒト化ｍＡｂであるＢＭＳ－６６６５１３は、メラノーマ、腎細胞癌及び卵巣がん患者におけるその抗がん特性に関する第Ｉ及びＩＩ相治験を完了した（Ｓｚｎｏｌ Ｍ、Ｈｏｄｉ ＦＳ、Ｍａｒｇｏｌｉｎ Ｋ、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ ＤＦ、Ｅｒｎｓｔｏｆｆ ＭＳ、Ｋｉｒｋｗｏｏｄ ＪＭら、Ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＢＭＳ－６６３５１３，ａ ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ１３７ ａｇｏｎｉｓｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ （ｐｔｓ） ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃａｎｃｅｒ（ＣＡ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：２００８（５月２０日追補；要旨３００７）。

【0116】

７種のＯＸ４０アゴニストが現在開発中であり、そのうち６種は、マウス抗体問題に取り組むために完全ヒトモノクローナル抗体の形態を取る。ＯＸ４０Ｌ－Ｆｃ融合タンパク質の１種、ＭＥＤＩ６３８３も、臨床評価を受けている；これは、２個のＯＸ４０Ｌ分子を、免疫グロブリンの結晶化可能断片（Ｆｃ）領域の部分に連結する。前臨床試験において、融合タンパク質は、おそらく、Ｔ細胞に加えて樹状細胞及び血管内皮細胞を活性化することもできるため、ＯＸ４０抗体よりも強い効果を有すると思われる。Ｏｘ４０アゴニストの例として、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０６５２、ＰＦ－０４５１５６００、ＭＯＸＰ０９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＩＮＣＡＧＮＯ１９４９が挙げられる。

【0117】

ヒト化抗ヒトＧＩＴＲ ｍＡｂ等、ＧＩＴＲに対するアゴニスト抗体が開発された（ＴＲＸ５１８．Ｔｏｌｅｒｘ Ｉｎｃ．Ａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔｅｎｔｓ．２００７；１７：５６７～５７５、Ｓｃｈａｅｒ ＤＡ、Ｍｕｒｐｈｙ ＪＴ、Ｗｏｌｃｈｏｋ ＪＤ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＩＴＲ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２年４月；２４（２）：２１７～２４も参照されたい）。

【0118】

ＴＮＦファミリーの別のメンバーであるＣＤ２７に対するアゴニスト抗体の例として、現在、ＣＤＸ－１１２７（バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ））としてＢ細胞悪性腫瘍、メラノーマ及び腎細胞癌において第Ｉ相臨床試験中の、完全ヒト１Ｆ５ ｍＡｂが挙げられる（現在臨床治験中の抗ＣＤ２７モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の特性の解析）（Ｖｉｔａｌｅ ＬＡ、Ｈｅ Ｌ－Ｚ、Ｔｈｏｍａｓ ＬＪら、２０１２、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ＣＤ２７－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１８（１４）３８１２～３８２１）。

【0119】

アゴニストＣＤ４０ ｍＡｂの初期臨床治験は、単剤研究において身体障害性の毒性の非存在下で非常に有望な結果を示した。現在まで、臨床治験において４種のＣＤ４０ ｍＡｂが調査された：ＣＰ－８７０，８９３（Ｐｆｉｚｅｒ及びＶＬＳＴ）、ダセツズマブ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４（サザンプトン大学）及びルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ＲＨ、Ｆｌａｈｅｒｔｙ ＫＴ、Ｋｈａｌｉｌ Ｍ、Ｓｔｕｍａｃｈｅｒ ＭＳ、Ｂａｊｏｒ ＤＬ、Ｈｕｔｎｉｃｋ ＮＡら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣＰ－８７０，８９３，ａ ｎｏｖｅｌ ＣＤ４０ ａｇｏｎｉｓｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２００７；２５：８７６～８３；Ｋｈｕｂｃｈａｎｄａｎｉ Ｓ、Ｃｚｕｃｚｍａｎ ＭＳ、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｉｌｉｚａｌｉｔｕｒｒｉ ＦＪ．Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ， ａ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍＡｂ ａｇａｉｎｓｔ ＣＤ４０ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．２００９；１０：５７９～８７；Ｊｏｈｎｓｏｎ ＰＷ、Ｓｔｅｖｅｎ ＮＭ、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ Ｆ、Ｄｏｂｂｙｎ Ｊ、Ｈａｌｌ Ｅ、Ａｓｈｔｏｎ－Ｋｅｙ Ｍら、Ａ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＵＫ ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｓａｆｅｔｙ，ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉ－ＣＤ４０ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＭＡｂ）， Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１０；２８：２５０７；Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ Ｗ、Ｍａｚｉａｒｚ ＲＴ、Ｊａｇａｎｎａｔｈ Ｓ、Ｓｐｅｎｃｅｒ Ａ、Ｄｕｒｒａｎｔ Ｓ、Ｂｅｃｋｅｒ ＰＳら、Ａ ｐｈａｓｅ １ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ，ａ ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ４０ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ｔｏ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｐｓｅｄ ｏｒ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１２；１５９：５８～６６）。

【0120】

チェックポイントアゴニストがん免疫療法剤は、抗ＩＣＯＳアゴニストモノクローナル抗体（Ｋｕｔｌｕ Ｅｌｐｅｋ、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｈａｒｖｅｙ、Ｅｌｌｅｎ Ｄｕｏｎｇ、Ｔｙｌｅｒ Ｓｉｍｐｓｏｎ、Ｊｅｎｎｙ Ｓｈｕ、Ｌｉｎｄｓｅｙ Ｓｈａｌｌｂｅｒｇ、Ｍａｔｔ Ｗａｌｌａｃｅ、Ｓｒｉｒａｍ Ｓａｔｈｙ、Ｒｏｂｅｒｔ Ｍａｂｒｙ、Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ及びＭｉｃｈａｅｌ Ｂｒｉｓｋｉｎ、要旨Ａ０５９：Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎｔｉ－ＩＣＯＳ ａｇｏｎｉｓｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌｓ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｓ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；要旨：ＣＲＩ－ＣＩＭＴ－ＥＡＴＩ－ＡＡＣＲ Ｉｎａｕｇｕｒａｌ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｉｎｔｏ Ｓｕｒｖｉｖａｌ；２０１５年９月１６～１９日；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）、又は抗ＣＤ２８アゴニスト抗体（とりわけ、抗ＰＤ－１免疫療法と組み合わせた使用のため、Ｔ細胞共刺激性受容体ＣＤ２８は、ＰＤ－１媒介性阻害のための一次標的である）となることもでき、概説については、Ｍｅｌｅｒｏ Ｉ、Ｈｅｒｖａｓ－Ｓｔｕｂｂｓ Ｓ、Ｇｌｅｎｎｉｅ Ｍ、Ｐａｒｄｏｌｌ ＤＭ、Ｃｈｅｎ Ｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２００７年２月；７（２）：９５～１０６も参照されたい。

【0121】

本発明において、免疫チェックポイントタンパク質の２種以上のモジュレーターは、本発明に係るＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤と組み合わせて使用することができる。例えば、阻害性免疫チェックポイント阻害剤の少なくとも１種のモジュレーター（抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１等）は、上述されている少なくとも１種の刺激性免疫チェックポイントアゴニストと組み合わせて使用することができる。共刺激性及び共阻害性免疫チェックポイント分子は、Ｃｈｅｎ Ｌ＆Ｆｌｉｅｓ Ｂの概説（上述されているＮａｔ ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏ．２０１３）にとりわけ記載されている。

【0122】

患者
典型的に、本発明に係る患者は、哺乳動物、好ましくは、ヒトである。

【0123】

典型的に、前記患者は、がんを患う、又は緩解期にある、又はがんのリスクがある。

【0124】

がん処置後の無腫瘍生存の促進は、本分野における大きな懸念の１つを表すため、緩解期の患者（典型的に、例えば、腫瘍の外科的除去後にいかなる検出可能な腫瘍もない患者）の標的化が特に興味深い。

【0125】

がんは、固形がん又は血液に罹患するがん（即ち、白血病）であり得る。白血病は、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）及び慢性リンパ球性白血病（マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫等の様々なリンパ腫、腺腫、扁平上皮癌、喉頭癌、胆嚢及び胆管がん、網膜芽細胞腫等の網膜のがんを含む）を含む。

【0126】

固形がんは、結腸、直腸、皮膚、子宮内膜、肺（非小細胞肺癌を含む）、子宮、骨（骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、巨細胞腫瘍、アダマンチノーマ及び脊索腫等）、肝臓、腎臓、食道、胃、膀胱、膵臓、子宮頸部、脳（髄膜腫、グリオブラストーマ、低悪性度アストロサイトーマ、オリゴデンドロサイトサイトーマ（Ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｏｍａ）、下垂体腫瘍、シュワン腫及び転移性脳がん等）、卵巣、乳房、頭頸部領域、精巣、前立腺及び甲状腺からなる群から選択される臓器のうちの１種に罹患するがんをとりわけ含む。

【0127】

投薬量
ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤及び免疫チェックポイントモジュレーターは、有効用量であることが好ましい。

【0128】

典型的に、本発明の併用処置レジメン（即ち、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤、及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーター）は、治療上有効である。現在利用できる治療法及びその投薬量、投与経路、並びに推奨される用法は、当技術分野で公知であり、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（第６０版、２００６）等の文献に記載されている。投与経路は、非経口的、静脈内、皮下、頭蓋内、肝内、結節内（ｉｎｔｒａｎｏｄａｌｌｙ）、尿管内（ｉｎｔｒａｕｒｅｔｅｒａｌｌｙ）、尿管下（ｓｕｂｕｒｅｔｅｒａｌｌｙ）、皮下及び腹腔内を含む。

【0129】

本発明の１種又は複数の薬剤（例えば、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤及び免疫チェックポイントモジュレーター）の投薬量は、当業者によって決定することができ、いずれかの合併症の場合、個々の医師によって調整することもできる。

【0130】

併用療法
特異的な実施形態では、療法のサイクリングは、ある期間にわたる第１のがん治療薬の投与と、それに続く、ある期間にわたる第２のがん治療薬の投与と、任意選択で、それに続く、ある期間にわたる第３のがん治療薬の投与、等々、並びにこの逐次投与の反復、即ち、がん治療薬のうちの１種に対する抵抗性の発生を低下させるための、がん治療薬のうちの１種の副作用を回避若しくは低下させるための、及び／又はがん治療薬の有効性を改善するためのサイクルが関与する。

【0131】

本発明に係る２種の併用処置が、典型的に治療有効レジメンで同時発生的に患者に投与される場合、用語「同時発生的に」は、正確に同時でのがん治療薬の投与に限定されないが寧ろ、一緒に作用し得るように（例えば、他の形で投与された場合よりも増加した利益をもたらすように相乗的に）、順次に且つ時間間隔内に対象に投与されることを意味するものである。例えば、２種の治療薬は、同時に、又はいずれかの順序で異なる時点にて逐次に投与することができる；しかし、同時に投与されない場合、所望の治療効果をもたらすように十分に近い時間で、好ましくは相乗的方法で投与されるべきである。併用がん治療薬は、いずれか適切な形態で、いずれか適した経路によって、別々に投与することができる。併用がん治療薬の構成成分が、同じ医薬組成物において投与されない場合、それを必要とする対象にいずれかの順序で投与され得ることが理解される。例えば、第１の治療有効レジメンは、それを必要とする患者への本発明に従った第２のがん治療薬の投与に先立ち（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間又は１２週間前に）、それに付随して、又はその後に（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間又は１２週間後に）投与することができる。

【0132】

本発明に係る免疫チェックポイントモジュレーターとＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤の併用投与は、相乗的抗がん効果をもたらすことが好ましい。

【0133】

キットオブパーツ（Ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）調製物
本願は、がん処置における同時、別々の又は逐次使用のための併用調製物として、以前に記載されたＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤、及び同様に上に記載された少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターを含有する調製物も包含する。「キットオブパーツ」の形態でのかかる調製物において、個々の活性化合物（即ち、ＳＵＶ３９Ｈ１の阻害剤、及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーター）は、治療剤を表し、物理的に分離されているが、但し、同時、別々又は逐次のいずれかでのこれらの化合物の使用により、互いに独立した化合物では達成されない、本明細書に記載されている新たな且つ予想外の共同治療効果を生じることを条件とする。実際に、下の結果によって実証される通り、活性成分の請求される組合せは、公知薬剤の単なる集合体を表さず、寧ろ、組み合わせた抗腫瘍がもたらす驚くべき有用な特性との新たな組合せは、これらの活性成分が別々に使用される場合に観察される抗腫瘍効果の単純な付加よりもはるかに重要である。

【0134】

よって、両方の活性成分は、別々の組成物又は唯一（unique）の組成物へと製剤化することができる。

【0135】

本発明に従った治療剤は、適宜製剤化し、かかる送達に認識されるいずれかの手段によって対象又は細胞の環境に導入することができる。

【0136】

かかる組成物は典型的に、薬剤及び薬学的に許容できる担体を含む。本明細書において、言葉「薬学的に許容できる担体」は、医薬品投与と適合性の、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤その他を含む。補足的活性化合物は、組成物に取り込むこともできる。

【0137】

医薬組成物は、その意図される投与経路と適合性となるように製剤化される。投与経路の例として、非経口的、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（外用）、経粘膜及び直腸投与が挙げられる。

【0138】

処置方法
本発明はまた、がんを患う患者を処置するための方法であって、以前に記載された通り、ＳＵＶ３９Ｈ１阻害剤及び少なくとも１種の免疫チェックポイントモジュレーターの併用投与を含む方法に関する。典型的に、前記併用投与は、治療有効レジメンに従って投与される。

【0139】

本発明は、次の実施例を考慮しつつ更に例証されるであろう。

【実施例0140】

材料と方法
Ｓｕｖ３９ｈ１ ＫＯ及び同腹仔ＷＴ雄マウスの外側の側腹部に、０．５×１０^６個のＢ１６－ＯＶＡメラノーマ細胞を皮下注射した。

【0141】

腫瘍が触知できるようになったら、通常１週間以内に、マウスに、２回／週、用量あたり７．５ｍｇ／Ｋｇ体重の用量で投与される抗ＰＤ１（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、ＲＭＰ－１４）を腹腔内注射した。冷ＰＢＳを対照群に注射した。

【0142】

手作業でノギスを使用して、腫瘍成長を１週間に３回測定した。

【0143】

細胞性免疫応答（即ち、抗ＯＶＡ免疫応答）は、腫瘍確立１３日後に抗ＰＤ－１免疫療法で処置した又は処置しなかった、腫瘍を有するマウスの血液中のＩＦＮγに関する酵素免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを使用して試験した。

【0144】

クラスＩ ＭＨＣ ＯＶＡペプチド（２５７～２６４）による一晩のｉｎ ｖｉｔｒｏ再刺激の後に、Ｅｌｉｓｐｏｔを行った。

【0145】

結果
抗ＰＤ－１処置は、Ｓｕｖ３９ｈ１－ＫＯにおいてＳｕｖ３９ｈ１－ＷＴマウスよりも有効である
本発明者らは、同一遺伝子メラノーマ腫瘍細胞株Ｂ１６が、ＳＵＶ３９Ｈ１－野生型（ＷＴ）同腹仔と比較して、ＳＵＶ３９Ｈ１－ノックアウトマウス（ＫＯ）において僅かに少なく成長したことを観察し、この酵素が、腫瘍発生の制御に関与することを示す。ＷＴマウスにおける抗ＰＤ－１処置（図１、左パネル）は、腫瘍成長に僅かな遅延を誘導する。興味深いことに、図１に観察される通り、触知できるＢ１６腫瘍を有するマウスへの抗ＰＤ－１ Ａｂの投与は、Ｓｕｖ３９ｈ１－野生型（ＷＴ）同腹仔と比較して、Ｓｕｖ３９ｈ１－ノックアウトマウス（ＫＯ）における腫瘍成長の制御において印象的に効率的であった。実際に、ＷＴマウスにおける抗ＰＤ１処置は、腫瘍拒絶を誘導しない一方、ＫＯマウスにおいては、僅か１／４の腫瘍成長及び動態遅延を伴った。

【0146】

この結果は、がんの処置のためのＳＵＶ３９Ｈ１遮断剤への抗ＰＤ１遮断の組合せの相乗作用を強調する。

【0147】

抗ＰＤ－１処置は、Ｓｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスにおける増強された抗腫瘍免疫応答を誘導する
代用腫瘍抗原としてＯＶＡを使用して、ＷＴ及びＳｕｖ３９ｈ１ ＫＯマウスにおける抗腫瘍免疫応答を解析した。Ｂ１６－ＯＶＡ腫瘍を有するマウスの血液中のＩＦＮｇ－Ｅｌｉｓｐｏｔを試験した（図２を参照）。

【0148】

本発明者らは、Ｓｕｖ３９ｈ１欠損マウスが、抗ＰＤ－１を使用した免疫療法の後に、より有効な抗腫瘍免疫応答を開始すると結論する。

【図1】

【図2】

【手続補正書】

【提出日】2023-09-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤を含む、がんを処置するための医薬組成物であって、前記阻害剤は、がんの処置において、少なくとも１種の阻害性免疫チェックポイント分子と組み合わせて使用され、前記阻害性免疫チェックポイント分子が抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はそれらの抗原結合性断片である、医薬組成物。

【請求項2】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤が、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物が、アンチセンスＲＮＡ分子又はアンチセンスＤＮＡ分子を含む、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤が、他のヒストンメチルトランスフェラーゼと比較して、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１に対して選択的である、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１に対する前記阻害剤の親和性が、他のヒストンメチルトランスフェラーゼに対する親和性よりも少なくとも１０倍、２５倍、１００倍又は５００倍高い、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記阻害剤が、Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１に対して２０μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、１μＭ未満又は０．５μＭ未満のＩＣ _５０ を有する、請求項４又は５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記阻害剤が、他のメチルトランスフェラーゼに対して１０μＭ超、２０μＭ超、又は５０μＭ超のＩＣ _５０ を有する、請求項４～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤がベクターと関連する、請求項２～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤、及び少なくとも１種の抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はそれらの抗原結合性断片が、がんの処置において同時に、別々に、又は逐次に使用される、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤、及び少なくとも１種の抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はそれらの抗原結合性断片が、唯一の医薬組成物に製剤化される、請求項９に記載の医薬組成物。

【請求項11】

Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＵＶ３９Ｈ１遺伝子発現の阻害剤、及び少なくとも１種の抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はそれらの抗原結合性断片が、任意の順序で投与される別々の医薬組成物に製剤化される、請求項９に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記がんが、固形がん又は血液に罹患するがんである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記がんが、白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、腺腫、扁平上皮癌、喉頭癌、胆嚢及び胆管がん、網膜のがん、網膜芽細胞腫、結腸がん、直腸がん、皮膚がん、子宮内膜がん、肺がん、非小細胞肺がん、子宮がん、骨がん、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、巨細胞腫瘍、アダマンチノーム、脊索腫、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頚がん、脳腫瘍、髄膜腫、グリオブラストーマ、低悪性度アストロサイトーマ、オリゴデンドロサイトサイトーマ、下垂体腫瘍、シュワン腫、転移性脳腫瘍、卵巣がん、乳がん、頭頸部領域がん、精巣がん、前立腺がん及び甲状腺がんからなる群より選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。

【外国語明細書】