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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023169932
(43)【公開日】2023-12-01
(54)【発明の名称】医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20231124BHJP
A61K 31/155 20060101ALI20231124BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20231124BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20231124BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20231124BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231124BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/437 20060101ALI20231124BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61K31/155
A61P25/18
A61P31/14
A61P3/10
A61P25/00
A61P43/00 105
A61K31/506
A61K31/437
【審査請求】未請求
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022081277
(22)【出願日】2022-05-18
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （１） 公開１ ▲１▼発行日： 令和３年（２０２１）年７月２１日 ▲２▼刊行物： Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（２０２１），Ｖｏｌｕｍｅ ２９７，Ｉｓｓｕｅ ２ ▲３▼公開者： 奥田翔平、佐藤真李子、加藤冴穂、長島駿、稲留涼子、柳茂、福田敏史 ▲４▼公開された発明の内容： 奥田翔平、佐藤真李子、加藤冴穂、長島駿、稲留涼子、柳茂及び福田敏史が、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 誌にて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （２） 公開２ ▲１▼ウェブサイトの掲載日： 令和３年（２０２１年）７月２７日 ▲２▼ウェブサイトのアドレス： ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｏｙａｋｕ．ａｃ．ｊｐ／ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ／ｎｅｗｓｔｏｐｉｃｓ／２０２１／０７２７＿４５７８．ｈｔｍｌ ▲３▼公開者： 学校法人東京薬科大学 ▲４▼公開された発明の内容： 学校法人東京薬科大学が、上記アドレスで公開されている東京薬科大学のウェブサイトにて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （３） 公開３ ▲１▼ウェブサイトの掲載日： 令和３年（２０２１年）７月２７日 ▲２▼ウェブサイトのアドレス： ｈｔｔｐｓ：／／ｒｅｓｅａｒｃｈ－ｅｒ．ｊｐ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｖｉｅｗ／１０１６２４ ▲３▼公開者： 株式会社バイオインパクト ▲４▼公開された発明の内容： 株式会社バイオインパクトが、上記アドレスで公開されている日本の研究．ｃｏｍのウェブサイトにて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （４） 公開４ ▲１▼発行日： 令和３年（２０２１）年８月２７日 ▲２▼刊行物： 科学新聞（２０２１年８月２７日）第３８３９号 ▲３▼公開者： 株式会社科学新聞社 ▲４▼公開された発明の内容： 株式会社科学新聞社が、科学新聞にて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （５） 公開５ ▲１▼ウェブサイトの掲載日： 令和３年（２０２１年）８月３０日 ▲２▼ウェブサイトのアドレス： ｈｔｔｐｓ：／／ｎｅｗｓ．ｍｙｎａｖｉ．ｊｐ／ｔｅｃｈｐｌｕｓ／ａｒｔｉｃｌｅ／２０２１０８３０－１９５９９８１／ ▲３▼公開者： 株式会社マイナビ ▲４▼公開された発明の内容： 株式会社マイナビが、上記アドレスで公開されているマイナビニュースのウェブサイトにて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （６） 公開６ ▲１▼ウェブサイトの掲載日： 令和３年（２０２１年）９月１日 ▲２▼ウェブサイトのアドレス： ｈｔｔｐ：／／ｓａｉｔａｍａ－ｋｅｎ．ｃｏｍ／ｍｅｄｉｃａｌ／１３０５３／ ▲３▼公開者： 埼玉ネット ▲４▼公開された発明の内容： 埼玉ネットが、上記アドレスで公開されている埼玉ネットのウェブサイトにて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （７） 公開７ ▲１▼発行日： 令和４年（２０２２年）２月２１日 ▲２▼刊行物： 東京薬科大学大学院 ２０２１年度生命科学研究科生命科学専攻 修士学位論文発表会（開催場所：東京薬科大学内、オンライン（ＺＯＯＭ）開催、開催日時：令和４年２月２５日）の要旨集 ▲３▼公開者： 田邉基 ▲４▼公開された発明の内容： 田邉基が、東京薬科大学大学院 ２０２１年度生命科学研究科生命科学専攻 修士学位論文発表会の要旨集にて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （８） 公開８ ▲１▼開催日： 令和４年（２０２２）年２月２５日 ▲２▼集会名、開催場所： 東京薬科大学大学院 ２０２１年度生命科学研究科生命科学専攻 修士学位論文発表会、東京薬科大学内、オンライン（ＺＯＯＭ）開催 ▲３▼公開者： 田邉基 ▲４▼公開された発明の内容： 田邉基が、東京薬科大学大学院 ２０２１年度生命科学研究科生命科学専攻 修士学位論文発表会にて、福田敏史及び田邉基が発明した、「医薬組成物」に関する研究の一部を公開した。
(71)【出願人】
【識別番号】592068200
【氏名又は名称】学校法人東京薬科大学
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100119253
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 賢教
(74)【代理人】
【識別番号】100124855
【弁理士】
【氏名又は名称】坪倉 道明
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(72)【発明者】
【氏名】福田 敏史
(72)【発明者】
【氏名】田邉 基
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084NA14
4C084ZA18
4C084ZB22
4C084ZB33
4C084ZC20
4C084ZC35
4C084ZC41
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086CB05
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA18
4C086ZB22
4C086ZB33
4C086ZC20
4C086ZC35
4C086ZC41
4C206AA01
4C206AA02
4C206HA31
4C206MA01
4C206MA04
4C206NA14
4C206ZA18
4C206ZB22
4C206ZB33
4C206ZC20
4C206ZC35
4C206ZC41
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物を提供する。
【解決手段】ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む医薬組成物であって、前記化合物が、
（ａ）メトホルミン、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、前記医薬組成物とする。
【選択図】なし
【解決手段】ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む医薬組成物であって、前記化合物が、
（ａ）メトホルミン、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、前記医薬組成物とする。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物であって、
ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む、医薬組成物。
ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む、医薬組成物。
【請求項2】
前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下している、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
（式中、
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
（ａ）下記：
【化1】
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症、新型コロナウィルス感染症の後遺症および糖尿病から選択される疾患の予防および／または治療用の、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記対象の社会性臨界期に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下しているが、前記対象の脳においては低下していない、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象が：
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している、請求項１または２に記載の医薬組成物。
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項8】
脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路を調節する組成物であって、
前記経路は、ＣＡＭＤＩ遺伝子、ＣＡＭＤＩタンパク質、Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃおよびユビキチン付加酵素阻害剤を含み、
前記組成物が、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含み、
前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
（式中、
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、組成物。
前記経路は、ＣＡＭＤＩ遺伝子、ＣＡＭＤＩタンパク質、Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃおよびユビキチン付加酵素阻害剤を含み、
前記組成物が、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含み、
前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
【化2】
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、組成物。
【請求項9】
前記経路が、ＺＯ－１遺伝子、ＺＯ－１タンパク質、Ｃｌｄｎ２遺伝子、Ｃｌｄｎ２タンパク質、ＴＴＲ遺伝子、ＴＴＲタンパク質およびチューブリンから選択される少なくとも１つをさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
（ｉ）対象の脈絡叢における、ＣＡＭＤＩ、ＴＴＲ、ＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２、ＩＣＡＭ１およびＴＮＦＡＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの遺伝子の発現量を測定する工程と、
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む、精神疾患のリスクの評価方法。
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む、精神疾患のリスクの評価方法。
【請求項11】
前記工程（ｉ）が、脳脊髄液中の前記遺伝子の発現を測定することにより行われる、請求項１０に記載の評価方法。
【請求項12】
前記工程（ｉｉ）において、前記対象の前記遺伝子の発現量が、前記健常者の前記遺伝子の発現量よりも多い、請求項１０または１１に記載の評価方法。
【請求項13】
ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための、医薬組成物であって、
ビグアニド系化合物、ユビキチン付加酵素阻害剤およびヒストン脱アセチル化酵素阻害剤から選択される少なくとも１つを含む、医薬組成物。
ビグアニド系化合物、ユビキチン付加酵素阻害剤およびヒストン脱アセチル化酵素阻害剤から選択される少なくとも１つを含む、医薬組成物。
【請求項14】
前記ビグアニド系化合物が、メトホルミンであり、
前記ユビキチン付加酵素阻害剤が、Ａｐｃｉｎであり、
前記ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、ツバスタチンＡである、請求項１３に記載の医薬組成物。
前記ユビキチン付加酵素阻害剤が、Ａｐｃｉｎであり、
前記ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、ツバスタチンＡである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
精神疾患は、脳の機能的または器質的問題によって生じる疾患の総称である。精神疾患発症の要因の１つとして、脳の発達異常、例えば、神経幹細胞からの分裂、細胞移動、シナプス形成、および、興奮／抑制のバランスの異常が考えられている。また、精神疾患以外にも、脳の機能的または器質的問題に起因する症状および疾患を有する患者も存在すると考えられる。
【0003】
精神疾患の治療には、現在のところ、対症療法しか実現されておらず、根本的治療法の確立が喫緊の課題となっている。また、その他の疾患についても、代替の治療手段の需要が存在するものがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明は、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明者らは、スコットランドの精神疾患多発単一家系の遺伝子解析によって同定されている、精神疾患に関連する遺伝子ＤＩＳＣ１（参考文献１）について研究を行い、ＤＩＳＣ１タンパク質に結合するタンパク質ＣＡＭＤＩ（Ｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｙｏｓｉｎ ＩＩａ ａｎｄ ＤＩＳＣ１）が存在することを見出した。ＣＡＭＤＩ遺伝子は、自閉症の原因ゲノム領域の１つとして知られる２ｑ３１．２に存在している。ＣＡＭＤＩは胎児大脳の神経細胞の移動を制御している（参考文献２および３）。本発明者らはこれまでに、ＣＡＭＤＩ遺伝子欠損マウスは社会性の異常を含む自閉症様の行動になり、その行動の一部を胎生期の薬剤投与で改善できること、認知および記憶が異常になることなどを報告している（参考文献４および５）。
【0006】
ＣＡＭＤＩ遺伝子欠損マウスを用いて網羅的な発現解析を行ったところ、脳脊髄液を産生し血液－脳脊髄液関門を形成している脈絡叢で特異的に発現する遺伝子の減少が認められた（図４、図６Ａ、図６Ｂ）。分化および成熟マーカー遺伝子の発現も減少していることから、「脈絡叢の未成熟」が想定された。さらに、臨界期（獲得すべき能力は適切な刺激を適切な時期に受ける必要があるとされる期間）の制御に必要である遺伝子の発現が減少していた。
【0007】
そこで、本発明者らは、脈絡叢でのみＣＡＭＤＩ遺伝子を欠損したマウスを作製したところ、このマウスは社会性の臨界期の異常と社会性の異常とを含む自閉症様の行動を示した（図１～３）。網羅的な遺伝子発現の解析から、脈絡叢の密着結合が破壊されることで炎症を起こしていること、その結果、血液成分が漏出し血液－脳脊髄液関門としての機能が失われていることが明らかとなった（図４～６）。
【0008】
本発明者らはさらに鋭意研究を進め、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、ＣＡＭＤＩ遺伝子欠損マウスにおいて、社会性および社会性認知を改善すること（図７）、脈絡叢成熟を改善すること、および、大脳皮質神経細胞の移動異常を改善することを明らかにした（図８～１１）。これらの結果は、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転の調節を介した、脈絡叢および血液－脳脊髄液関門の改善、ならびに、大脳皮質神経細胞の移動の正常化に基づく、精神疾患の治療および／または予防の根本的治療の可能性を示唆する。本発明は、かかる知見に基づき成されたものである。
【0009】
即ち、本発明は以下のとおりである：
［１］ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物であって、
ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む、医薬組成物。
［２］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下している、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［３］前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
（式中、
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［４］精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症、新型コロナウィルス感染症の後遺症および糖尿病から選択される疾患の予防および／または治療用の、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［５］前記対象の社会性臨界期に投与される、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［６］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下しているが、前記対象の脳においては低下していない、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［７］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象が：
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［８］脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路を調節する組成物であって、
前記経路は、ＣＡＭＤＩ遺伝子、ＣＡＭＤＩタンパク質、Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃおよびユビキチン付加酵素阻害剤を含み、
前記組成物が、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含み、
前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
（式中、
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、組成物；
［９］前記経路が、ＺＯ－１遺伝子、ＺＯ－１タンパク質、Ｃｌｄｎ２遺伝子、Ｃｌｄｎ２タンパク質、ＴＴＲ遺伝子、ＴＴＲタンパク質およびチューブリンから選択される少なくとも１つをさらに含む、［８］に記載の組成物；
［１０］（ｉ）対象の脈絡叢における、ＣＡＭＤＩ、ＴＴＲ、ＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２、ＩＣＡＭ１およびＴＮＦＡＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの遺伝子の発現量を測定する工程と、
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む、精神疾患のリスクの評価方法；
［１１］前記工程（ｉ）が、脳脊髄液中の前記遺伝子の発現を測定することにより行われる、［１０］に記載の評価方法；
［１２］前記工程（ｉｉ）において、前記対象の前記遺伝子の発現量が、前記健常者の前記遺伝子の発現量よりも多い、［１０］または［１１］に記載の評価方法；
［１３］ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための、医薬組成物であって、
ビグアニド系化合物、ユビキチン付加酵素阻害剤およびヒストン脱アセチル化酵素阻害剤から選択される少なくとも１つを含む、医薬組成物；
［１４］前記ビグアニド系化合物が、メトホルミンであり、
前記ユビキチン付加酵素阻害剤が、Ａｐｃｉｎであり、
前記ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、ツバスタチンＡである、［１３］に記載の医薬組成物。
［１］ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物であって、
ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む、医薬組成物。
［２］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下している、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［３］前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
【化1】
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［４］精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症、新型コロナウィルス感染症の後遺症および糖尿病から選択される疾患の予防および／または治療用の、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［５］前記対象の社会性臨界期に投与される、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［６］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が、前記対象の脈絡叢において低下しているが、前記対象の脳においては低下していない、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［７］前記ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象が：
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している、［１］または［２］に記載の医薬組成物；
［８］脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路を調節する組成物であって、
前記経路は、ＣＡＭＤＩ遺伝子、ＣＡＭＤＩタンパク質、Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃおよびユビキチン付加酵素阻害剤を含み、
前記組成物が、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含み、
前記ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物が、
（ａ）下記：
【化2】
基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、
基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
から選択される、組成物；
［９］前記経路が、ＺＯ－１遺伝子、ＺＯ－１タンパク質、Ｃｌｄｎ２遺伝子、Ｃｌｄｎ２タンパク質、ＴＴＲ遺伝子、ＴＴＲタンパク質およびチューブリンから選択される少なくとも１つをさらに含む、［８］に記載の組成物；
［１０］（ｉ）対象の脈絡叢における、ＣＡＭＤＩ、ＴＴＲ、ＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２、ＩＣＡＭ１およびＴＮＦＡＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの遺伝子の発現量を測定する工程と、
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む、精神疾患のリスクの評価方法；
［１１］前記工程（ｉ）が、脳脊髄液中の前記遺伝子の発現を測定することにより行われる、［１０］に記載の評価方法；
［１２］前記工程（ｉｉ）において、前記対象の前記遺伝子の発現量が、前記健常者の前記遺伝子の発現量よりも多い、［１０］または［１１］に記載の評価方法；
［１３］ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための、医薬組成物であって、
ビグアニド系化合物、ユビキチン付加酵素阻害剤およびヒストン脱アセチル化酵素阻害剤から選択される少なくとも１つを含む、医薬組成物；
［１４］前記ビグアニド系化合物が、メトホルミンであり、
前記ユビキチン付加酵素阻害剤が、Ａｐｃｉｎであり、
前記ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、ツバスタチンＡである、［１３］に記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】脈絡叢特異的ＣＡＭＤＩ遺伝子欠損（ｃＫＯ）マウスの脈絡叢でのＣＡＭＤＩ ｍＲＮＡの遺伝子発現量（左図、Ａ）および大脳皮質でのＣＡＭＤＩ ｍＲＮＡの発現量（右図、Ｂ）を示す図である。
【図2】社会性臨界期の試験の概要を示す図である。
【図3】コントロールマウス（左図、Ａ）およびｃＫＯマウス（右図、Ｂ）を用いた社会性臨界期の試験結果を示す図である。
【図4】メトホルミン投与によるＴＴＲ ｍＲＮＡの発現量の変化を示す図である。
【図5】メトホルミン投与による血液－脳脊髄液関門のバリア機能の回復を示す図である。
【図6】メトホルミン投与による各種遺伝子の発現量の変化を示す図である。ＺＯ－１ ｍＲＮＡ（図６Ａ）、Ｃｌｄｎ２ ｍＲＮＡ（図６Ｂ）、ＣＡＭＤＩ ｍＲＮＡ（図６Ｃ）、ＩＣＡＭ１ ｍＲＮＡ（図６Ｄ）、ＴＮＦＡＩＰ３ ｍＲＮＡ（図６Ｅ）。
【図7】メトホルミン投与による社会性および社会的認知の変化を示す図である。
【図8】ＦＬＡＧ－ＣＡＭＤＩおよびＥＧＦＰ－Ｃｄｃ２０をトランスフェクションした、ヒト胎児腎臓由来株ＨＥＫ２９３細胞の共免疫沈降の結果を示す図である。
【図9】ＦＬＡＧ－ＣＡＭＤＩをトランスフェクションしたのち共免疫沈降をしたサンプルを用いた、ウェスタンブロットを示す図である。
【図10】ＦＬＡＧ－ＣＡＭＤＩおよびＥＧＦＰ－Ｃｄｃ２０をトランスフェクションした、ヒト胎児腎臓由来株ＨＥＫ２９３細胞に対し、Ａｐｃｉｎを添加した結果を示す図である。
【図11】ＥＧＦＰ－ＣＡＭＤＩマウス（左図、Ａ）、Ａｐｃｉｎ添加したＥＧＦＰ－ＣＡＭＤＩマウス（中央図、Ｂ）およびＥＧＦＰ－ＣＡＭＤＩ Ａ１２３変異体（右図、Ｃ）を遺伝子導入したマウスにおけるＥＧＦＰの蛍光強度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明を実施するための形態について具体的に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【0013】
本発明の第一の側面は、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための医薬組成物であって、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む、医薬組成物に関する。
【0014】
ここで、「ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現」に関し、「低下」とは、健常対象におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量と比較して低下していることを意味する。ここで、「低下」とは、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量が、健常対象におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量に対して、例えば、１．１倍未満、０．９倍、０．８倍、０．７倍、０．６倍、０．５倍、０．４倍以下に低下していることをいう。ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量は、当業者に公知の方法を利用して測定することができ、例えば、ｍＲＮＡ量については、定量ＰＣＲ法を用いることにより、また、タンパク質量については、ウェスタンブロット法、組織免疫染色法または質量分析法を用いることによって測定することができる。
【0015】
「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転」とは、ＣＡＭＤＩ遺伝子が翻訳されてＣＡＭＤＩタンパク質が生成され、生成されたタンパク質が分解されるまでをいう。具体的には、生成されたＣＡＭＤＩタンパク質が安定化された後、神経細胞が移動する際にその進行方向に形成される「ダイレーション」と称される膨らみ、および、中心体に、ＣＡＭＤＩタンパク質が集積する。ダイレーションに中心体が侵入すると、ＣＡＭＤＩタンパク質の集積が最も高くなり、神経細胞が移動する。神経細胞の移動が完了するとＣＡＭＤＩタンパク質は、Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃにより分解される。ＣＡＭＤＩタンパク質が分解されると、神経細胞は、次の移動サイクルへと進む。よって、「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転」とは、ＣＡＭＤＩ遺伝子が翻訳されてＣＡＭＤＩタンパク質が生成され、生成されたＣＡＭＤＩタンパク質がＣｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃによって分解されるまでをいう。本明細書において、ＣＡＭＤＩタンパク質に関し、「代謝回転」の語は、「ターンオーバー」と互換可能に使用される。
【0016】
「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物」には、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を促進させる化合物、および、当該代謝回転を遅延させる化合物を含む。「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物」は、好ましくは、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を促進させる化合物である。
【0017】
「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物」の語は、最も広い意味で使用され、脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路（以下、単に「経路」とも称する。）に関与する化合物および細胞のいずれか１つ以上の生物学的活性を阻害する化合物が含まれるものとする。ここで、「分化および／または成熟」の語は、未分化な脈絡叢上皮前駆細胞から機能的に成熟した最終分化細胞への過程の少なくとも一部をいい、脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の「分化」、「成熟」ならびに「分化および成熟」を包含する。
【0018】
本明細書において、「脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路」は、ＣＡＭＤＩ遺伝子、ＣＡＭＤＩタンパク質、Ｃｄｃ２０、ＡＰＣ／Ｃおよびユビキチン付加酵素阻害剤を含むものである。好ましい態様において、Ｃｄｃ２０とＡＰＣ／Ｃとは、複合体「Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃ」を形成している。当該経路は、ＺＯ－１遺伝子、ＺＯ－１タンパク質、Ｃｌｄｎ２遺伝子、Ｃｌｄｎ２タンパク質、ＴＴＲ遺伝子、ＴＴＲタンパク質およびチューブリンから選択される少なくとも１つをさらに含む。チューブリンは好ましくは、アセチル化されたチューブリンである。当該「経路」は、好ましくは、神経幹細胞からの非対称分裂、移動およびシナプスとの回路網形成をさらに含む。より具体的には、当該「経路」は、例えば、神経幹細胞、未成熟神経細胞、神経細胞への分化、神経細胞の目的部位までの移動と停止、神経突起の形成、他の細胞とのシナプス形成と不必要なシナプスの除去（臨界期で旺盛に行われる）、成熟した回路網の形成、および行動の制御を含む。
【0019】
「ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物」は、例えば、
（ａ）下記：
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４については後述する。）
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
である。
（ａ）下記：
【化3】
の構造を有する化合物、
（ｂ）ユビキチン付加酵素阻害剤、
（ｃ）ＣＡＭＤＩ分解阻害剤、および、
（ｄ）ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
である。
【0020】
（ａ）の群の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物である。式（Ｉ）中、基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたは芳香族で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、基Ｒ３およびＲ４は、水素またはＣ１～Ｃ６アルキル基である。好ましくは、基Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル基（ここでアルキル基は、ハロゲンまたはベンゼン環で置換されていてもよい）または芳香環（ここで芳香環はハロゲンで置換されていてもよい）であり、基Ｒ３およびＲ４は、水素またはメチル基である。
【0021】
（ａ）の群の化合物としては、例えば、ビグアニド、メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン、プログアニルおよびクロロプログアニルが挙げられる。
【0022】
（ｂ）の群の化合物は、ユビキチン付加酵素阻害剤である。例えば、ＡＰＣ／Ｃ阻害剤、具体的には、ＡｐｃｉｎおよびＴｏｓｙｌ－Ｌ－Ａｒｇｉｎｉｎｅ Ｍｅｔｈｙｌ Ｅｓｔｅｒ（ＴＡＭＥ）が挙げられる。例えば、ＡＰＣ／Ｃは、ＣＡＭＤＩタンパク質の分解に関与する。いかなる理論に拘束されることも意図しないが、ＡｐｃｉｎがＡＰＣ／Ｃを阻害することで、ＣＡＭＤＩタンパク質の分解が阻害され、ＣＡＭＤＩの安定化に伴って脈絡叢の機能が改善すると考えられる。
【0023】
（ｃ）の群の化合物は、ＣＡＭＤＩ分解阻害剤である。（ｃ）の群の化合物には、具体的には、ＣＡＭＤＩの分解に関与する分子または細胞の活性を阻害する化合物が含まれる。例えば、ＣＡＭＤＩを分解する分子に対する中和抗体、当該分子に結合するアプタマー、当該分子の全体もしくはそのサブユニットをコードする遺伝子の翻訳および転写の少なくとも一方を阻害することのできる核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイおよびリボザイム）などが含まれるが、これらに限定されない。
【0024】
（ｄ）の群の化合物は、ヒストン脱アセチル化酵素（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ＨＤＡＣ）阻害剤である。（ｄ）の群の化合物としては、例えば、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤であるツバスタチンＡ、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）およびパノビノスタットが挙げられる。
【0025】
先述のとおり、本発明者らは、ＣＡＭＤＩ遺伝子欠損マウスの網羅的な発現解析により、脳脊髄液を産生し、血液－脳脊髄液関門を形成している脈絡叢で特異的に発現する遺伝子が減少していることを見出した（図１）。さらには、定量ＰＣＲ法により、脳での発現には影響を与えることなく、脈絡叢でのみＣＡＭＤＩ遺伝子の欠損を確認した（図１）。したがって、好ましい一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現は、対象の脈絡叢において低下している。より好ましい一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現は、対象の脈絡叢において低下しているが、脳においては低下していない。脈絡叢における遺伝子の発現は、例えば、脳脊髄液中の遺伝子の発現量を測定することにより行われる。
【0026】
「対象」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物である。本明細書において、「哺乳動物」の語は、哺乳動物に分類されるあらゆる動物を指すために使用され、例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、イヌおよびネコが含まれるが、これらに限定されない。本明細書において、「対象」は、好ましくはヒトである。
【0027】
一態様において、本発明にかかる医薬組成物は、精神疾患の予防および／または治療用の医薬組成物である。精神疾患は、特に、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現の低下を伴う精神疾患である。精神疾患としては、例えば、自閉症および発達障害、ならびに、社会性行動の障害を伴う精神疾患全般が包含される。
【0028】
別の態様において、本発明にかかる医薬組成物は、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症の予防および／または治療用の医薬組成物である。例えば、新型コロナウィルスが脈絡叢に感染して炎症を起こし血液－脳脊髄液を破壊すること、および、新型コロナウィルス感染による遺伝子発現と精神疾患で見られる遺伝的変異との関連性が報告されている（参考文献７、８および９）。
【0029】
さらに別の態様において、本発明にかかる医薬組成物は、新型コロナウィルス感染症の後遺症の予防および／または治療用の医薬組成物である。例えば、新型コロナウィルスに感染した患者の後遺症として、ブレインフォグと呼ばれる、記憶および／または認知の障害など、精神的な症状が報告されている（参考文献１０および１１）。
【0030】
別の態様において、本発明にかかる医薬組成物は、糖尿病、特に２型糖尿病の予防および／または治療用の医薬組成物である。例えば、２型糖尿病患者であって、新型コロナウィルスに感染しており、糖尿病の治療のためにメトホルミン投与を受けている場合、死亡率が低下することが報告されている（参考文献１２）。すなわち、本発明にかかる医薬組成物は、糖尿病および新型コロナウィルス感染症の双方に罹患している患者の治療にも使用できることが期待される。よって、本発明にかかる医薬組成物は、糖尿病および新型コロナウィルス感染症の双方に罹患している患者の治療用の医薬組成物である。
【0031】
一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、精神疾患に罹患している。別の一態様において、脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、精神疾患に罹患している。
【0032】
一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症に罹患している。別の一態様において、脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９,ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症に罹患している。
【0033】
一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患している。別の一態様において、脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患している。
【0034】
一態様において、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、糖尿病および新型コロナウィルス感染症に罹患している。別の一態様において、脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は、糖尿病および新型コロナウィルス感染症の双方に罹患している。ここで、糖尿病は特に２型糖尿病である。
【0035】
すなわち、本発明に関連して、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象は：
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または、新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している。
精神疾患、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症または、新型コロナウィルス感染症の後遺症に罹患しているか、あるいは、
新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症および糖尿病の双方に罹患している。
【0036】
本明細書において、精神疾患に関し、「治療」の語は、症状の改善、回復および進行の防止を含むものとする。精神疾患の「治療」には、例えば、社会性の獲得および社会性の回復、ならびに、組織の炎症の減少、破壊の回復、炎症の減速、破壊の減速、炎症の遅延および破壊の遅延などが含まれるが、これらに限定されない。精神疾患の「治療」は、当該分野で公知の方法に従って評価することができ、例えば、社会性行動の改善および組織の回復等によって評価することができる。社会性行動の改善は、例えば、社会性試験を行うことによって、評価することができる。組織の回復は、例えば、組織染色および画像診断を用いて評価することができる。ここで、組織には、脈絡叢、血液－脳脊髄液関門、神経細胞、特に大脳皮質神経細胞などが挙げられる。組織の回復は、例えば、従来、アルツハイマー病など脳疾患において評価および治療に用いられているように、脳脊髄液に基づいて評価されてもよい。具体的には、脳脊髄液成分の生化学的解析によって評価されてもよい。また、精神疾患の「治療」は、大脳皮質神経細胞の移動の正常化によっても評価することができる。
【0037】
また、本明細書において、精神疾患に関し、「予防」の語は、精神疾患を予防することに加え、抑制すること、遅らせること、および軽減することを包含するものとする。本発明に関連して、精神疾患の「予防」は、組織の炎症の減少、破壊の回復、炎症の減速、破壊の減速、炎症の遅延および破壊の遅延などが含まれるが、これらに限定されない。精神疾患の「予防」は、当該分野で公知の方法に従って評価することができ、例えば、組織の回復等によって評価することができる。具体的には、「予防」は、脳脊髄液成分の生化学的解析によって評価することができる。
【0038】
精神疾患の「治療」および「予防」は、脈絡叢、脳および神経細胞等に高発現する遺伝子を指標として評価することもできる。組織に高発現している遺伝子は、例えば、免疫蛍光染色法、ＥＬＩＳＡ法、質量分析法およびＲＴ－ＰＣＲ法によって確認することができる。
【0039】
本発明者らは、作製したモデルマウスの自閉症様行動が、脈絡叢の未成熟による社会性臨界期の異常に起因することを示した（図２、３および６）。また、メトホルミン（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）を生後７日から２１日目（授乳期に相当、直後から社会性の臨界期が開始する）に仔マウスに投与し、生後５６日目（成体）で確認したところ、炎症の低下に加えて密着結合関連遺伝子の発現や血液－脳脊髄液関門の機能が回復し、さらに社会性の行動が有意に改善されたことを見出した（図５、６および７）。したがって、本発明にかかる医薬組成物は、対象の社会性臨界期前後に投与されることが好ましい。例えば、対象がマウスの場合、本発明にかかる医薬組成物は、対象の生後３５日目の前後、具体的には生後１５日目～５５日目の間、好ましくは生後２１日目～４９日目の間に投与されることが好ましいが、この期間に限定されない。例えば、対象がヒトの場合、自閉症などの発達障害に関しては、３～５歳前後、具体的には１歳～７歳の間、好ましくは１歳～５歳、より好ましくは１．５歳～３歳に投与されることが好ましいが、この期間に限定されない。
【0040】
臨界期とは、獲得すべき能力は適切な刺激を適切な時期に受ける必要があるとされる期間をいう。したがって、社会性臨界期とは、社会性を獲得すべき能力は適切な刺激を適切な時期に受ける必要があるとされる期間である。
【0041】
本発明に係る医薬組成物には、典型的には、製薬上に許容される添加剤、例えば、当該分野で既知の賦形剤、結合剤、滑沢剤、溶剤、希釈剤、安定化剤、等張化剤などを含んでよい。本発明に係る医薬組成物は、例えば、経口、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内により投与することができるが、これらに限定されない。
【0042】
本発明の第二の側面は、脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路を調節する組成物に関する。当該経路は、第一の側面に関して説明した、先述の構成要素を含んでよい。当該組成物は、ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物を含む。ＣＡＭＤＩタンパク質の代謝回転を調節する化合物については、上述したとおりである。
【0043】
本発明の第三の側面は、精神疾患のリスクの評価方法に関し、当該評価方法は、以下の工程：
（ｉ）対象の脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ、ＴＴＲ、ＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２、ＩＣＡＭ１およびＴＮＦＡＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの遺伝子の発現量を測定する工程と、
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む。
（ｉ）対象の脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ、ＴＴＲ、ＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２、ＩＣＡＭ１およびＴＮＦＡＩＰ３からなる群より選択される少なくとも１つの遺伝子の発現量を測定する工程と、
（ｉｉ）測定した前記遺伝子の発現量と、健常者の脈絡叢における前記遺伝子の発現量とを比較する工程と
を含む。
【0044】
本評価方法において、工程（ｉ）は、典型的には、脳脊髄液中の前記遺伝子を測定することによって行われる。測定には、当該分野において公知の方法が用いられ、例えば、免疫蛍光染色法、ＥＬＩＳＡ法、質量分析法および、ＲＴ－ＰＣＲ法を用いることができる。
【0045】
工程（ｉｉ）における比較において、工程（ｉ）で測定したＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量が、健常者の脈絡叢におけるＣＡＭＤＩ遺伝子の発現量よりも増加している場合、精神疾患のリスクが存在すると同定する。
【0046】
工程（ｉｉ）では、例えば、前記対象の前記遺伝子の発現量が、前記健常者の前記遺伝子の発現量よりも多く、典型的には、前記対象の前記遺伝子の発現は検出されるが、健常者の前記遺伝子の発現は、検出されない。
【0047】
上記のリスクの評価方法を実施する時期としては、特に限定されず、疾患によって異なるが、対象がヒトの場合、例えば、１歳～３０歳の間に行われる。自閉症などの発達障害の場合は、例えば、１歳～５歳、好ましくは、１．５歳～３歳の間に行うことが好ましい。また、統合失調症などの場合、思春期から成人早期（２０代）での発症が多いとされており、例えば、１歳～４０歳、好ましくは、１０歳～２５歳の間に行うことが好ましい。
【0048】
本発明の更なる側面は、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象に投与するための、医薬組成物であって、ビグアニド系化合物、ユビキチン付加酵素阻害剤およびビグアニド系化合物から選択される少なくとも１つを含む、医薬組成物に関する。
【0049】
好ましい態様において、前記ビグアニド系化合物はメトホルミンであり、前記ユビキチン付加酵素阻害剤はＡｐｃｉｎであり、前記ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤はツバスタチンＡである。
【0050】
本発明の別のさらなる側面は、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象において、脈絡叢および／または大脳皮質神経細胞の分化および／または成熟経路を調節するための組成物に関する。
【0051】
本発明によれば、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象の治療用の医薬組成物が提供される。作製したモデルマウスへの投与により、社会性の改善、組織の回復および関連遺伝子の発現の回復が示されたことから、本発明にかかる医薬組成物は、従来の対症療法とは異なり、根本的治療法となる可能性が示された。
【0052】
さらに、本発明者らは、自閉症様行動が「脈絡叢の未成熟」による臨界期の異常に起因することをモデルマウスの作製により証明し、自閉症様行動を含む精神疾患を、生後に治療することができる可能性が示された。また、精神疾患の関連遺伝子を特定したことにより疾患発症のリスク評価方法も提供することができた。すなわち、本発明によれば、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象における精神疾患の治療用の医薬組成物が提供される。
【0053】
さらに、本発明によれば、ＣＡＭＤＩ遺伝子の発現が低下した対象における他の疾患の治療用の医薬組成物が提供される。例えば、新型コロナウィルス（ＣＯＶＩＤ－１９，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染症、新型コロナウィルス感染症の後遺症および糖尿病などの治療用の医薬組成物を提供することができる。
【0054】
以上、本発明を実施するための形態を例示したが、上記実施形態はあくまでも例として示されるものであり、発明の範囲を限定することを意図するものではない。上記実施形態は、その他の様々な形態で実施されることが可能であり、発明の要旨を逸脱しない範囲で、種々の省略、置換、変更を行うことができる。
【実施例0055】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。
【0056】
＜１＞脈絡叢上皮細胞でのみＣＡＭＤＩ遺伝子を欠損した（ｃＫＯ）マウスの作製
Ｆｏｘｊ１ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰマウスはＭｕｔｈｕｓａｍｙ等により作製された遺伝子組換えマウスである（Ｍｕｔｈｕｓａｍｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓｉｓ. ２０１４；５２（４）：３５０－８．ｄｏｉ：１０．１００２/ｄｖｇ．２２７５３）。Ｆｏｘｊ１遺伝子は運動繊毛の発生を制御する遺伝子の転写制御因子であり、肺および脈絡叢上皮細胞の多繊毛細胞などで発現している。１１番染色体に存在するＦｏｘｊ１遺伝子のエクソン２にＧＦＰ融合ＣｒｅＥＲＴ２遺伝子が導入されており、時期特異的にＦｏｘｊ１プロモーターにより発現が誘導される。ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰ配列のＣｒｅはタモキシフェンの投与によりＣｒｅ／ｌｏｘＰ部位特異的組換えシステムとして機能するため、時期及び部位特異的に遺伝子破壊をしたマウスの作製を可能にしている。Ｆｏｘｊ１遺伝子の発現は胎生１５．５日目までは脈絡叢に特異的に発現することが明らかにされている。
Ｆｏｘｊ１ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰマウスはＭｕｔｈｕｓａｍｙ等により作製された遺伝子組換えマウスである（Ｍｕｔｈｕｓａｍｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓｉｓ. ２０１４；５２（４）：３５０－８．ｄｏｉ：１０．１００２/ｄｖｇ．２２７５３）。Ｆｏｘｊ１遺伝子は運動繊毛の発生を制御する遺伝子の転写制御因子であり、肺および脈絡叢上皮細胞の多繊毛細胞などで発現している。１１番染色体に存在するＦｏｘｊ１遺伝子のエクソン２にＧＦＰ融合ＣｒｅＥＲＴ２遺伝子が導入されており、時期特異的にＦｏｘｊ１プロモーターにより発現が誘導される。ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰ配列のＣｒｅはタモキシフェンの投与によりＣｒｅ／ｌｏｘＰ部位特異的組換えシステムとして機能するため、時期及び部位特異的に遺伝子破壊をしたマウスの作製を可能にしている。Ｆｏｘｊ１遺伝子の発現は胎生１５．５日目までは脈絡叢に特異的に発現することが明らかにされている。
【0057】
Ｆｏｘｊ１ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰとＣＡＭＤＩ ｆｌｏｘ－ｆｌｏｘマウスを掛け合わせ、胎生１５．５日目にタモキシフェンを投与した。この時点でＦｏｘＪ１遺伝子を発現する脈絡叢上皮細胞でＣＡＭＤＩ遺伝子を欠損したマウスを作製した。脈絡叢上皮細胞はこの後も増殖することが知られている。胎生１５．５日目のみで欠損させているため、脈絡叢上皮細胞の７０％程度の細胞でＣＡＭＤＩを欠損したマウスを作製した。
【0058】
Ｆｏｘｊ１ＣｒｅＥＲＴ２：：ＧＦＰとＣＡＭＤＩ ｆｌｏｘ－ｆｌｏｘマウスを掛け合わせて作製した、脈絡叢上皮細胞特異的にＣＡＭＤＩを欠損したｃＫＯマウスにおいて、定量ＰＣＲ法により、脳での発現には影響を与えることなく、脈絡叢でのみＣＡＭＤＩ遺伝子の欠損を確認した（図１）。
【0059】
＜２＞血液－脳脊髄液関門のバリア機能評価
以下の手順で、血液－脳脊髄液関門のバリア機能の評価を行った。
１．Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ（色素）を４０ｍｇ／ｋｇ［体重]となるように腹腔内投与（その後血液中に吸収される）し、４５分後、生理食塩水を用いて灌流し脳を摘出
２．５００μＬ ＰＢＳ中でホモジナイズ
３．４℃，１，５００ｒｐｍ，１０ｍｉｎで遠心
４．上清３５０μＬをホルムアミド１ｍＬと混和
５．６０℃，２４ｈインキュベート
６．ＯＤ６２０，ＯＤ７４０を測定し、下記の式を用いて漏出量を計算
７．得られた漏出量を各脳重量でノーマライズ。
以下の手順で、血液－脳脊髄液関門のバリア機能の評価を行った。
１．Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ（色素）を４０ｍｇ／ｋｇ［体重]となるように腹腔内投与（その後血液中に吸収される）し、４５分後、生理食塩水を用いて灌流し脳を摘出
２．５００μＬ ＰＢＳ中でホモジナイズ
３．４℃，１，５００ｒｐｍ，１０ｍｉｎで遠心
４．上清３５０μＬをホルムアミド１ｍＬと混和
５．６０℃，２４ｈインキュベート
６．ＯＤ６２０，ＯＤ７４０を測定し、下記の式を用いて漏出量を計算
【数1】
【0060】
Ｃｏｎｔｒｏｌマウスで検出されるＥｖａｎｓ Ｂｌｕｅ（色素）の量と比較して、ｃＫＯマウスでは有意に増加しており、血液－脳脊髄液関門としてのバリア機能が喪失し、血管から脈絡叢上皮細胞間への漏出が明らかとなった（図５、左から１つ目と３つ目の比較）。定量ＰＣＲの結果、血液－脳脊髄液関門の構成遺伝子であるＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２の発現が有意に低下していた（図６ＡおよびＢの各々左から１つ目と３つ目のバーの比較）。
【0061】
また、ＣＡＭＤＩについても、定量ＰＣＲの結果、発現が有意に低下していた（図６Ｃ）。ここで、ＣＡＭＤＩを欠損していない細胞が約３０％存在し、その細胞内でメトホルミンによりＣＡＭＤＩの発現が上昇したことが示された（図６Ｃ、左から３つ目と４つ目のバーの比較）。なお、図６に示す他の遺伝子（図６Ａ、Ｂ、ＤおよびＥ）については、ＣＡＭＤＩとは異なり欠損させてはいないため、全ての細胞において発現が回復した可能性があることを示している。
【0062】
＜３＞ＲＮＡ－ｓｅｑ（網羅的発現遺伝子解析：炎症遺伝子の増加を検出）
ＲＮｅａｓｙ Ｋｉｔを用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。Ｂｃｌ２ｆａｓｔｑ（ｖ２．１７．１．１４）を用いて、予備的な品質分析を行った。有効濃度や必要なシーケンスデータ量に応じてライブラリーを混合した後、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＧＡ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ ｖ１．８を使用してシーケンスを行った。発現差解析には、ＤＥＳｅｑ２ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージ、負の二項分布に基づくモデルを使用し、分散と対数倍変化の推定には、データ駆動型の事前分布を用い、遺伝子のＰａｄｊを＜０．０５に設定し、発現量に差のある遺伝子を検出した。
ＲＮｅａｓｙ Ｋｉｔを用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。Ｂｃｌ２ｆａｓｔｑ（ｖ２．１７．１．１４）を用いて、予備的な品質分析を行った。有効濃度や必要なシーケンスデータ量に応じてライブラリーを混合した後、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＧＡ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ ｖ１．８を使用してシーケンスを行った。発現差解析には、ＤＥＳｅｑ２ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージ、負の二項分布に基づくモデルを使用し、分散と対数倍変化の推定には、データ駆動型の事前分布を用い、遺伝子のＰａｄｊを＜０．０５に設定し、発現量に差のある遺伝子を検出した。
【0063】
ＲＮＡ－ｓｅｑの結果、炎症系の遺伝子の変動が確認された。それらの遺伝子について定量ＰＣＲ法により再確認したところ、変動が確認された炎症系遺伝子の増加が認められ、炎症の亢進が明らかとなった（図６ＤおよびＥの各々左から１つ目と３つ目のバーの比較）。
【0064】
＜４＞社会性臨界期の試験
生後２１日目（Ｐ２１）から生後３５日目（Ｐ３５）まで集団で飼育されなかった野生型マウスは社会性が有意に低下することから、野生型マウスの社会性の臨界期はＰ２１からＰ３５であると報告されている（Ｍａｋｉｎｏｄａｎ ｅｔ ａｌ., Ｓｃｉｅｎｃｅ. ２０１２；３３７（６１００）：１３５７－６０. ｄｏｉ：１０．１１２６/ｓｃｉｅｎｃｅ．１２２０８４５．２０１２）。ｃＫＯマウスにて同様に社会性臨界期の評価を行うため、下記の条件を用いて実験を行った。
生後２１日目（Ｐ２１）から生後３５日目（Ｐ３５）まで集団で飼育されなかった野生型マウスは社会性が有意に低下することから、野生型マウスの社会性の臨界期はＰ２１からＰ３５であると報告されている（Ｍａｋｉｎｏｄａｎ ｅｔ ａｌ., Ｓｃｉｅｎｃｅ. ２０１２；３３７（６１００）：１３５７－６０. ｄｏｉ：１０．１１２６/ｓｃｉｅｎｃｅ．１２２０８４５．２０１２）。ｃＫＯマウスにて同様に社会性臨界期の評価を行うため、下記の条件を用いて実験を行った。
【0065】
［飼育条件］
・集団飼育（ＲＥ）：Ｔｅｓｔマウスを含めた雄マウス３匹以上での飼育
・単独飼育（ＩＳ）：１ケージにつきＴｅｓｔマウス１匹で飼育
・集団飼育（ＲＥ）：Ｔｅｓｔマウスを含めた雄マウス３匹以上での飼育
・単独飼育（ＩＳ）：１ケージにつきＴｅｓｔマウス１匹で飼育
【0066】
飼育条件として、１ケージで複数のマウスを飼育する集団飼育（ｒｅｇｕｌａｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ；ＲＥ）または１ケージで１匹のみマウスを飼育する単独飼育（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ＩＳ）を、各マウスのＰ２１からＰ３５またはＰ３６からＰ６５の期間にどちらかの飼育を実施することで、社会的経験を受けるマウス群と受けないマウス群を作製した（図２）。これらの条件で飼育されたマウスに対し、社会的認知能力を評価する社会性試験（下記）を生後６５日目（Ｐ６５）で実施した。
【0067】
［社会性試験（生後６５日目（Ｐ６５））］
マウスは通常、初見マウスに対して相手の素性を知るために近接して匂いを嗅ぐ行動をとる（ｓｎｉｆｆｉｎｇ）。まず社会性の指標として１回目の試験におけるｓｎｉｆｆｉｎｇ時間を確認する（下記手順５）。この時間の低下は、社会性行動の低下と判断する。２回目、３回目の試験（下記手順７）では同一初見マウスを用いるため、自然なｓｎｉｆｆｉｎｇ時間の低下を認める。４回目の試験において先程と異なる初見マウスを用いることで、異なるマウスと社会的認知ができればｓｎｉｆｆｉｎｇ時間は３回目の試験より増加する。この増加時間の比が小さい場合、社会的認知機能の低下を示す。
マウスは通常、初見マウスに対して相手の素性を知るために近接して匂いを嗅ぐ行動をとる（ｓｎｉｆｆｉｎｇ）。まず社会性の指標として１回目の試験におけるｓｎｉｆｆｉｎｇ時間を確認する（下記手順５）。この時間の低下は、社会性行動の低下と判断する。２回目、３回目の試験（下記手順７）では同一初見マウスを用いるため、自然なｓｎｉｆｆｉｎｇ時間の低下を認める。４回目の試験において先程と異なる初見マウスを用いることで、異なるマウスと社会的認知ができればｓｎｉｆｆｉｎｇ時間は３回目の試験より増加する。この増加時間の比が小さい場合、社会的認知機能の低下を示す。
【0068】
Ｔｅｓｔマウス：試験対象となるマウス
Ｎｏｖｅｌマウス：Ｔｅｓｔマウスと同じ遺伝型、同じ性別かつ週齢の最も近い生後５６日目以降のマウスであり、過去に一度もＴｅｓｔマウスに接触したことのないマウス
ホームケージ：マウスが一日以上生活を行い、十分にマウスの匂いが付いているケージ
Ｎｏｖｅｌマウス：Ｔｅｓｔマウスと同じ遺伝型、同じ性別かつ週齢の最も近い生後５６日目以降のマウスであり、過去に一度もＴｅｓｔマウスに接触したことのないマウス
ホームケージ：マウスが一日以上生活を行い、十分にマウスの匂いが付いているケージ
【0069】
１．Ｔｅｓｔマウスを空のカップを入れたＯｐｅｎ ｆｉｅｌｄに１０分間慣れさせる。
２．Ｔｅｓｔマウスを１０分間ホームケージで休ませる。
３．Ｎｏｖｅｌマウスの１匹目をカップに５分間入れ、慣れさせる。
４．全ての器具を７０％ＥｔＯＨでｃｌｅａｎする。
５．カップに慣らしを行なったＮｏｖｅｌマウスを入れた状態でＴｅｓｔマウスを、Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄの中央に入れ、５分間測定する。
６．Ｔｅｓｔマウスを１０分間ホームケージで休ませる。その間に全ての器具をｃｌｅａｎする。
７．１０分間のホームケージでの休憩を挟み、手順５を計３回行う。
８．Ｔｅｓｔマウスをホームケージで６０分間休ませる。
９．１匹目とは別のＮｏｖｅｌマウスをカップに５分間入れ、慣れさせる。
１０．カップに慣らしを行ったＮｏｖｅｌマウスの２匹目を入れた状態でＴｅｓｔマウスを、Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄの中央に入れ、５分間測定する。
２．Ｔｅｓｔマウスを１０分間ホームケージで休ませる。
３．Ｎｏｖｅｌマウスの１匹目をカップに５分間入れ、慣れさせる。
４．全ての器具を７０％ＥｔＯＨでｃｌｅａｎする。
５．カップに慣らしを行なったＮｏｖｅｌマウスを入れた状態でＴｅｓｔマウスを、Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄの中央に入れ、５分間測定する。
６．Ｔｅｓｔマウスを１０分間ホームケージで休ませる。その間に全ての器具をｃｌｅａｎする。
７．１０分間のホームケージでの休憩を挟み、手順５を計３回行う。
８．Ｔｅｓｔマウスをホームケージで６０分間休ませる。
９．１匹目とは別のＮｏｖｅｌマウスをカップに５分間入れ、慣れさせる。
１０．カップに慣らしを行ったＮｏｖｅｌマウスの２匹目を入れた状態でＴｅｓｔマウスを、Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄの中央に入れ、５分間測定する。
【0070】
［測定項目］
・ｓｎｉｆｆｉｎｇ（匂い嗅ぎ）時間
・ｓｎｉｆｆｉｎｇ（匂い嗅ぎ）時間
【0071】
社会性臨界期の試験（飼育条件を３群（ＲＥ－ＲＥ、ＩＳ－ＲＥおよびＲＥ－ＩＳ）に分けて、その後に社会性認知試験を行って評価）を行った。
【0072】
コントロールマウス：Ｐ２１からＰ３５の期間に単独飼育（ＩＳ）した群で社会性の有意な低下が確認された。既報通り（参考文献６）、社会性臨界期はＰ２１からＰ３５の間にあることが明らかとなった（図３Ａ）。
【0073】
ｃＫＯマウス：Ｐ３５からＰ６５の期間に単独飼育（ＩＳ）した群で社会性の有意な低下が確認された。コントロールマウスとは異なり、社会性臨界期はＰ３５からＰ６５の間にあり遅延していることが明らかとなった（図３Ｂ）。
【0074】
＜５＞メトホルミン投与による脈絡叢の機能および社会性行動の回復
・Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（東京化成 Ｍ２００９）
一回の投与量：０．９％ ＮａＣｌで１００ｍｇ／ｍＬに調整し、１００ｍｇ／ｋｇ［体重］で経口投与。糖尿病の治療薬として用いられているメトホルミン（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）を生後７日から２１日目（授乳期に相当、社会性の臨界期が開始する直前）に仔マウスに経口投与した。生後２１日目（離乳期）で遺伝子発現（脈絡叢分化および成熟マーカー、血液－脳脊髄液関門、炎症関連）およびバリア機能の評価、生後６５日目（成体）で社会性および社会性認知行動の評価を行った。
・Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（東京化成 Ｍ２００９）
一回の投与量：０．９％ ＮａＣｌで１００ｍｇ／ｍＬに調整し、１００ｍｇ／ｋｇ［体重］で経口投与。糖尿病の治療薬として用いられているメトホルミン（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）を生後７日から２１日目（授乳期に相当、社会性の臨界期が開始する直前）に仔マウスに経口投与した。生後２１日目（離乳期）で遺伝子発現（脈絡叢分化および成熟マーカー、血液－脳脊髄液関門、炎症関連）およびバリア機能の評価、生後６５日目（成体）で社会性および社会性認知行動の評価を行った。
【0075】
Ｐ７からＰ２１の期間におけるＭｅｔｆｏｒｍｉｎの経口投与かつ通常飼育を行い、ｃＫＯマウスで発現量の有意な減少、増加が確認されていた遺伝子のｍＲＮＡ発現量の解析を行った。Ｐ２１の脈絡叢において、脈絡叢の分化および成熟マーカーであるＴＴＲ（トランスサイレチン）が有意に発現増加し、コントロールマウスと同程度までの回復が認められた（図４）。血液－脳脊髄液関門のバリア機能評価を行なったところ、ｃＫＯマウスのＶｅｈｉｃｌｅ（溶媒のみ）投与群においては漏出が確認されるのに対し、Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ投与群では漏出が認められず、コントロールマウスと差が認められないことが明らかとなった（図５、左から３つ目と４つ目のバーの比較）。また、血液－脳脊髄液関門の構成遺伝子であるＺＯ－１、Ｃｌｄｎ２の発現は、ｃＫＯマウスのＭｅｔｆｏｒｍｉｎ投与群で有意な増加が確認され、コントロールマウスと同程度に回復していることが確認された（図６ＡおよびＢの各々左から３つ目と４つ目のバーの比較)。
【0076】
ＣＡＭＤＩ発現は、ｃＫＯマウスのＭｅｔｆｏｒｍｉｎ投与群で、ＣＡＭＤＩを欠損していない約３０％の細胞において、有意な増加が確認され、コントロールマウスの半分程度に回復していることが確認された（図６Ｃ、左から３つ目と４つ目のバーの比較）。
【0077】
炎症関連遺伝子ＩＣＡＭ１、ＴＮＦＡＩＰ３は、ｃＫＯマウスのＭｅｔｆｏｒｍｉｎ投与群で有意な減少が確認され、コントロールマウスと同程度に回復していることが確認された（図６ＤおよびＥの各々左から３つ目と４つ目のバーの比較）。さらに、ｃＫＯマウスで確認されていた社会性の低下について検証した結果、Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ投与群では１回目の社会性、並びに、４回目の社会的認知について有意な回復が認められた（図７)。
【0078】
＜６＞ＣＡＭＤＩの安定性と大脳皮質ニューロンの移動
（１）生化学的解析
ＦＬＡＧタグを付加したＣＡＭＤＩ発現プラスミド、ＥＧＦＰタグを付加したＣｄｃ２０発現プラスミド、並びにＨＡタグを付加したＵｂ（ユビキチン）発現プラスミドを作製した。
（１）生化学的解析
ＦＬＡＧタグを付加したＣＡＭＤＩ発現プラスミド、ＥＧＦＰタグを付加したＣｄｃ２０発現プラスミド、並びにＨＡタグを付加したＵｂ（ユビキチン）発現プラスミドを作製した。
【0079】
ヒト胎児腎臓由来株ＨＥＫ２９３細胞にＦＬＡＧ－ＣＡＭＤＩとＥＧＦＰ－Ｃｄｃ２０をトランスフェクションし、共免疫沈降、ウェスタンブロット法による確認を行ったところ、結合ならびにユビキチン化が確認された（図８および図９）。また、Ｃｄｃ２０と複合体を作るユビキチン付加酵素ＡＰＣ／Ｃの阻害剤であるＡｐｃｉｎを添加したところ、ＣＡＭＤＩの分解が抑制された（図１０）。
【0080】
（２）生きた脳組織内での解析
ＥＧＦＰタグを付加したＣＡＭＤＩ、およびＣｄｃ２０が認識するコンセンサス配列（Ｄ－ｂｏｘ，１２３－１２９アミノ酸領域）を破壊したＣＡＭＤＩ発現プラスミドを作製した。
ＥＧＦＰタグを付加したＣＡＭＤＩ、およびＣｄｃ２０が認識するコンセンサス配列（Ｄ－ｂｏｘ，１２３－１２９アミノ酸領域）を破壊したＣＡＭＤＩ発現プラスミドを作製した。
【0081】
子宮内遺伝子導入法を用いてＥＧＦＰ－ＣＡＭＤＩをマウス胎児脳に発現させ、脳を摘出後、スライスを作製しライブイメージングを行なった。ＥＧＦＰの蛍光強度を経時的に測定したところ、ＥＧＦＰ－ＣＡＭＤＩは安定と分解を繰り返して神経細胞の移動を制御していた（図１１Ａ）。そこにＣＡＭＤＩのＣｄｃ２０結合部位を破壊した変異体の強制発現、もしくはＡＰＣ／Ｃ阻害剤であるＡｐｃｉｎを添加したところ、ＣＡＭＤＩの安定と分解を繰り返しが消失した（図１１Ｂ、Ｃ）。
【0082】
以上より、ＣＡＭＤＩは、Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃ複合体と呼ばれる細胞周期の関連装置により分解されること、ＡＰＣ／Ｃの阻害剤であるＡｐｃｉｎ（ヒトへの評価のない試薬）、並びに、Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃによる分解を受けないＣＡＭＤＩの強制発現で神経細胞の移動が異常になること、ＣＡＭＤＩの分解と安定の繰り返しが正常な神経細胞の移動に必要であることが示された。
【0083】
（参考文献）
１） Ｊ Ｋ Ｍｉｌｌａｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ａ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｃｏ－ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ” Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０００ Ｍａｙ ２２；９（９）：１４１５－２３.
２） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“ＣＡＭＤＩ， ａ ｎｏｖｅｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ ｉｎ ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ １ （ＤＩＳＣ１)－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｒａｄｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ”Ｅｐｕｂ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２０１０ Ｄｅｃ ２４；２８５（５２）：４０５５４－６１． ２０１０ Ｏｃｔ １８.
３） Ｓｈｏｈｅｉ Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ＣＡＭＤＩ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２０２１ Ａｕｇ；２９７（２）：１００９８６． Ｅｐｕｂ ２０２１ Ｊｕｌ ２１．
４） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ＣＡＭＤＩ ｄｅｌｅｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅｌａｙｅｄ ｒａｄｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｒｓ ｂｙ ＨＤＡＣ６ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ” ＥＭＢＯ Ｒｅｐ． ２０１６ Ｄｅｃ；１７（１２）：１７８５－１７９８． Ｅｐｕｂ ２０１６ Ｏｃｔ １３．
５） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“ＣＡＭＤＩ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｍｅｍｏｒｙ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＫＩＢＲＡ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＭＰＡＲ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ” ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ． ２０１９ Ｎｏｖ １５；１４（１１）：ｅ０２２４９６７．
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７） Ｌａｕｒａ Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，“ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｉｎｆｅｃｔｓ ｔｈｅ Ｂｒａｉｎ Ｃｈｏｒｏｉｄ Ｐｌｅｘｕｓ ａｎｄ Ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ－ＣＳＦ Ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ” Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． ２０２０ Ｄｅｃ ３；２７（６）：９５１－９６１．ｅ５． Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｏｃｔ １３．
８） Ｆａｄｉ Ｊａｃｏｂ ｅｔ ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｎｅｕｒａｌ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｂｒａｉｎ Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ Ｒｅｖｅａｌ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｉｓｍ Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｔｅｓ ｉｎ Ｃｈｏｒｏｉｄ Ｐｌｅｘｕｓ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ” Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． ２０２０ Ｄｅｃ ３；２７（６）：９３７－９５０．ｅ９． Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｓｅｐ ２１.
９） Ａｎｄｒｅｗ Ｃ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｃｈｏｒｏｉｄ ｐｌｅｘｕｓ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅｓ ｉｎ ｓｅｖｅｒｅ ＣＯＶＩＤ－１９”Ｎａｔｕｒｅ． ２０２１ Ｊｕｌ；５９５（７８６８)：５６５－５７１． Ｅｐｕｂ ２０２１ Ｊｕｎ ２１．
１０） URL: https://www.igakuken.or.jp/r-info/covid-19-info98.html
１１） URL: https://www.bbc.com/japanese/features-and-analysis-60702748
１２） Ｎａｍ Ｎｈａｔ Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅａｄｍｉｓｓｉｏｎ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＯＶＩＤ－１９ ｈａｖｉｎｇ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： Ａ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｅｔａ－Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．” ２０２２ Ｊｕｎ；１３１：１５５１９６． Ｅｐｕｂ ２０２２ Ｍａｒ ３１．
１） Ｊ Ｋ Ｍｉｌｌａｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ａ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｃｏ－ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ” Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０００ Ｍａｙ ２２；９（９）：１４１５－２３.
２） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“ＣＡＭＤＩ， ａ ｎｏｖｅｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ ｉｎ ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ １ （ＤＩＳＣ１)－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｒａｄｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ”Ｅｐｕｂ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２０１０ Ｄｅｃ ２４；２８５（５２）：４０５５４－６１． ２０１０ Ｏｃｔ １８.
３） Ｓｈｏｈｅｉ Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｄｃ２０－ＡＰＣ／Ｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ＣＡＭＤＩ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２０２１ Ａｕｇ；２９７（２）：１００９８６． Ｅｐｕｂ ２０２１ Ｊｕｌ ２１．
４） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ＣＡＭＤＩ ｄｅｌｅｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅｌａｙｅｄ ｒａｄｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｒｓ ｂｙ ＨＤＡＣ６ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ” ＥＭＢＯ Ｒｅｐ． ２０１６ Ｄｅｃ；１７（１２）：１７８５－１７９８． Ｅｐｕｂ ２０１６ Ｏｃｔ １３．
５） Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，“ＣＡＭＤＩ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｍｅｍｏｒｙ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＫＩＢＲＡ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＭＰＡＲ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ” ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ． ２０１９ Ｎｏｖ １５；１４（１１）：ｅ０２２４９６７．
６） Ｍａｎａｂｕ Ｍａｋｉｎｏｄａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｐｅｒｉｏｄ ｆｏｒ ｓｏｃｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ” Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１２ Ｓｅｐ １４；３３７（６１００）：１３５７－６０.
７） Ｌａｕｒａ Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，“ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｉｎｆｅｃｔｓ ｔｈｅ Ｂｒａｉｎ Ｃｈｏｒｏｉｄ Ｐｌｅｘｕｓ ａｎｄ Ｄｉｓｒｕｐｔｓ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ－ＣＳＦ Ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ” Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． ２０２０ Ｄｅｃ ３；２７（６）：９５１－９６１．ｅ５． Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｏｃｔ １３．
８） Ｆａｄｉ Ｊａｃｏｂ ｅｔ ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｎｅｕｒａｌ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｂｒａｉｎ Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ Ｒｅｖｅａｌ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｉｓｍ Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｔｅｓ ｉｎ Ｃｈｏｒｏｉｄ Ｐｌｅｘｕｓ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ” Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ． ２０２０ Ｄｅｃ ３；２７（６）：９３７－９５０．ｅ９． Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｓｅｐ ２１.
９） Ａｎｄｒｅｗ Ｃ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｃｈｏｒｏｉｄ ｐｌｅｘｕｓ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅｓ ｉｎ ｓｅｖｅｒｅ ＣＯＶＩＤ－１９”Ｎａｔｕｒｅ． ２０２１ Ｊｕｌ；５９５（７８６８)：５６５－５７１． Ｅｐｕｂ ２０２１ Ｊｕｎ ２１．
１０） URL: https://www.igakuken.or.jp/r-info/covid-19-info98.html
１１） URL: https://www.bbc.com/japanese/features-and-analysis-60702748
１２） Ｎａｍ Ｎｈａｔ Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅａｄｍｉｓｓｉｏｎ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＯＶＩＤ－１９ ｈａｖｉｎｇ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： Ａ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｅｔａ－Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．” ２０２２ Ｊｕｎ；１３１：１５５１９６． Ｅｐｕｂ ２０２２ Ｍａｒ ３１．
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】