(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023170690
(43)【公開日】2023-12-01
(54)【発明の名称】経口組成物
(51)【国際特許分類】
A23L 33/10 20160101AFI20231124BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20231124BHJP
A61K 36/8945 20060101ALI20231124BHJP
A61P 21/06 20060101ALI20231124BHJP
【ＦＩ】
A23L33/10
A23L33/105
A61K36/8945
A61P21/06
【審査請求】未請求
【請求項の数】2
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022082607
(22)【出願日】2022-05-19
(71)【出願人】
【識別番号】398028503
【氏名又は名称】株式会社東洋新薬
(72)【発明者】
【氏名】山下 繭香
(72)【発明者】
【氏名】高島 麻都花
(72)【発明者】
【氏名】尾上 貴俊
(72)【発明者】
【氏名】糸数 創太
(72)【発明者】
【氏名】本岡 香奈
(72)【発明者】
【氏名】高野 晃
【テーマコード（参考）】
4B018
4C088
【Ｆターム（参考）】
4B018LB10
4B018LE01
4B018LE02
4B018LE03
4B018MD05
4B018MD10
4B018MD15
4B018MD19
4B018MD20
4B018MD23
4B018MD25
4B018MD29
4B018MD33
4B018MD34
4B018MD36
4B018MD61
4B018MD76
4B018MD86
4B018ME14
4B018MF01
4B018MF06
4C088AB84
4C088AC11
4C088BA10
4C088CA08
4C088MA52
4C088NA14
4C088ZA94
4C088ZB22
(57)【要約】
【課題】本発明は、筋肉を増強するための組成物の提供を目的とするものである。また、本発明は、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上するための組成物の提供を目的とするものである。
【解決手段】本発明者らは、筋肉を増強する組成物を探索する中で、ワイルドヤムが筋肉を増強させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。本発明者らは、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上する組成物を探索する中で、ワイルドヤムが運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【選択図】図１
【解決手段】本発明者らは、筋肉を増強する組成物を探索する中で、ワイルドヤムが筋肉を増強させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。本発明者らは、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上する組成物を探索する中で、ワイルドヤムが運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ワイルドヤムを含有することを特徴とする筋肉の増強用組成物。
【請求項2】
ワイルドヤムを含有することを特徴とする運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ワイルドヤムを含有する筋肉増強用組成物に関する。また、本発明は、ワイルドヤムを含有することを特徴とする運動パフォーマンス向上用組成物。
【背景技術】
【0002】
日常生活を有意義に、健康的に過ごすためには、運動機能は極めて重要であるといえる。しかし、近年、日常生活の活動性の低下や加齢、運動不足、運動の不能などから、筋肉量の減少、筋肉の分解、筋肉の疲労といった筋機能の低下が起こったり、運動パフォーマンスが低下し、有意義に、健康的に日常生活を過ごせないことが問題となっている。
【0003】
筋肉量の減少、筋肉の分解、筋肉の疲労といった筋機能の低下を予防、改善又は緩和するものとして、筋肉増強作用を有する成分や該成分を含有する組成物が望まれている。例えば筋肉増強作用を有する化合物としてはステロイド剤や成長ホルモンが知られている。しかしステロイド剤や成長ホルモンは、摂取することにより循環器疾患、肝障害等の重篤な副作用や、血圧、コレステロール値が上昇することが知られている。また、筋肉増強作用を有し経口摂取されるものとして、ホエー蛋白質を特定条件で加水分解した組成物（特許文献１）やトゲドコロ（Dioscorea esculenta）（特許文献２）が報告されている。しかし、特許文献１で確認できているホエー蛋白質による筋肉増強作用は、萎縮した筋肉を回復させることだけであり、正常な筋肉を増強させる作用は確認されていない。また、ドゲドコロの筋肉増強作用は十分なものではないため、筋肉増強作用を有する成分の更なる検討が必要であった。
【0004】
運動における強度や速度、持久力等の能力の低下を抑止し、運動能力を維持、向上するものとして、運動パフォーマンスの維持、向上作用を有する成分や外成分を含有する組成物が望まれている。例えば運動パフォーマンスの維持、向上作用を有し経口摂取されるものとして、ホエー蛋白質を特定条件で加水分解した組成物（特許文献１）やナガイモ（Dioscorea batatas）の抽出物（非特許文献１）が報告されている。しかし、特許文献１で確認できているホエー蛋白質による運動パフォーマンスの維持、向上作用は、萎縮した筋肉の回復による場合だけであり、正常な筋肉の増強による運動パフォーマンスの維持、向上作用は確認されていない。また、ナガイモ抽出物の運動パフォーマンスの維持、向上作用は十分なものではないため、運動パフォーマンスの維持、向上作用を有する成分の更なる検討が必要であった。
【0005】
また、日常生活を有意義に、健康的に過ごすために、近年、健康志向の高まりを背景に種々の健康食品の開発が行われており、健康食品に用いられる様々な素材の研究が行われている。さらに、健康志向と同様に安全志向の高い昨今、安全な素材を用いることが好まれており、日常的に食されていたり、食すことが可能な植物素材が有する有用な機能を活用することが望まれている。例えばワイルドヤムやその抽出物は、健康食品の素材として使用されており、白髪の予防効果（特許文献３）等の機能性について広く研究されており、更なる有用な機能の研究が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】特開２０１０－１５０１６０号公報
【特許文献2】国際公開第２００８／１２３４１７号公報
【特許文献3】特開２０１０－１９５７３０号公報
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】「Molecules」、MDPI、２０１８年，２３,２０２３、「Effects of Rhizome Extract of Dioscorea batatas and Its Active Compound, Allantoin, on the Regulation of Myoblast Differentiation and Mitochondrial Biogenesis in C2C12 Myotubes」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は、上述の背景を鑑みてなされたものであり、筋肉を増強させたり、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させるための組成物の提供を目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、筋肉を増強させる組成物を探索する中で、ワイルドヤムが筋肉を増強させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。また、本発明者らは、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させる組成物を探索する中で、ワイルドヤムが運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させる効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【0010】
すなわち、本発明は、以下のとおりのものである。
［１］ワイルドヤムを含有することを特徴とする筋肉増強用組成物。
［２］ワイルドヤムがワイルドヤム抽出物であることを特徴とする、［１］に記載の筋肉増強用組成物。
［３］運動パフォーマンスを高めるために使用される、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］ワイルドヤムを含有することを特徴とする運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物。
［５］ワイルドヤムがワイルドヤム抽出物であることを特徴とする、［４］に記載の筋肉増強用組成物。
［１］ワイルドヤムを含有することを特徴とする筋肉増強用組成物。
［２］ワイルドヤムがワイルドヤム抽出物であることを特徴とする、［１］に記載の筋肉増強用組成物。
［３］運動パフォーマンスを高めるために使用される、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］ワイルドヤムを含有することを特徴とする運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物。
［５］ワイルドヤムがワイルドヤム抽出物であることを特徴とする、［４］に記載の筋肉増強用組成物。
【発明の効果】
【0011】
本発明の組成物は、筋肉を増強させる効果を奏する。また、本発明の組成物は運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させる効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】実施例１及び比較例１の筋芽細胞の細胞賦活活性評価における生細胞数の測定結果を示す図である。
【図2】実施例１及び比較例２のＰＧＣ－１α遺伝子のｍＲＮＡ発現量の測定結果を示す図である。
【図3】実施例２及び比較例３の筋肉増強、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上に関する経口摂取による実感評価のアンケート結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0013】
［ワイルドヤム］
本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することを特徴とする。ワイルドヤムは、ヤマノイモとも呼ばれ、ヤマノイモ科の植物の総称であるが、本発明の組成物に含有されるワイルドヤムとしては、学名がDioscorea oppositifolia又はDioscorea oppositaの植物である。
本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することを特徴とする。ワイルドヤムは、ヤマノイモとも呼ばれ、ヤマノイモ科の植物の総称であるが、本発明の組成物に含有されるワイルドヤムとしては、学名がDioscorea oppositifolia又はDioscorea oppositaの植物である。
【0014】
ワイルドヤムは、葉、茎、花、根などを使用することができるが、本発明の組成物に含有されるワイルドヤムの使用部位は、筋肉増強や、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上の観点から根であることが好ましい。なお、ワイルドヤムの根を使用する場合、根とともに葉、茎、花の部位を含んでもよい。
【0015】
本発明の組成物に含有されるワイルドヤムは、収穫されたワイルドヤムをそのまま用いてもよいし、加工されたワイルドヤムを用いてもよい。加工されたワルイドヤムを用いる場合、例えば粉末、顆粒などの粉砕物や、搾汁物や抽出物を用いることができる。搾汁物や抽出物は、液状やスラリー状であってもよいが、乾燥粉末を用いることが好ましい。これらの中でも、筋肉増強作用や、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上作用の観点から粉砕物、抽出物が好ましく、抽出物が特に好ましい。なお、本発明において抽出物とは、抽出物の乾燥粉末（抽出物を乾燥して粉末化したもの）を包含する概念である。ワイルドヤムの加工物は、当業者により通常知られている方法によって製造されたものでもよいし、市場に流通しているものでもよい。
【0016】
本発明の組成物に含有されるワイルドヤム抽出物は、抽出液や、その希釈液もしくは濃縮液、又はそれらの乾燥粉末などを挙げることができる。抽出に使用される溶媒は、例えば、水；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノールなどの低級アルコール；酢酸エチル、酢酸メチルなどの低級エステル；アセトン；これらと水との混合溶媒などが挙げられる。これらの中でも、筋肉増強作用や運動パフォーマンス向上作用の観点から水、エタノール又は含水エタノールが好ましく、含水エタノールが特に好ましい。含水エタノールの場合、エタノールを８５容量％未満含有するものが好ましく、１０～８０容量％含有するものがより好ましく、３０～７５容量％含有するものがさらに好ましく、筋肉増強作用や、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上作用の観点から７０容量％含有するものが特に好ましい。また、得られた抽出物を必要に応じてスプレードライ、フリーズドライなどによって粉末化してもよく、粉末化を行う際に賦形剤を添加してもよい。
【0017】
ワイルドヤム抽出物を得る際の抽出方法は特に限定されず、通常用いられる方法（例えば、浸漬抽出、還流抽出、超臨界流体抽出など）によって抽出することができる。また、ワイルドヤム抽出物を得る際の抽出温度は、室温～溶媒の沸点の間で任意に設定でき、例えば室温～抽出溶媒の沸点の温度で、振盪下、非振盪下又は還流下にて抽出することができる。抽出温度が沸点付近の場合には必要に応じて還流してもよい。
【0018】
本発明の組成物におけるワイルドヤムの配合量は、その効果の奏する範囲で適宜含有されればよい。例えば本発明の組成物中に、乾燥質量換算で０．１～１００質量％含有させることができ、０．７５～９５質量％含有させることが好ましく、１．５～８０質量％含有させることがより好ましく、筋肉増強作用や、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上作用の観点から３～６０質量％含有させることが特に好ましい。
【0019】
本発明におけるワイルドヤムの摂取量としては特に制限はないが、その効果をより効果的に享受できる点からワイルドヤムの摂取量が、成人の１日当たり１０ｍｇ以上となるように摂取することが好ましく、５０ｍｇ以上となるように摂取することがより好ましく、１００ｍｇ以上となるように摂取することがさらに好ましい。
【0020】
［筋肉増強用組成物］
本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた筋芽細胞賦活作用を有する。筋芽細胞を賦活することで筋芽細胞の増殖が促進され、筋力の増加を助けるとともに、怪我や病気等により使用せずに低下した筋力の回復を助けることができ、筋肉量を維持したり増加することで筋肉を増強することができる。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた筋肉増強効果を奏する。また、筋肉量の増加や、筋力の増加、回復により運動量を維持することができ、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上効果を奏するため、本発明の組成物は、ワイルドヤムによる優れた筋肉増強効果により、運動パフォーマンスの維持及び／又向上効果や体力増進（向上）効果を奏する。
本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた筋芽細胞賦活作用を有する。筋芽細胞を賦活することで筋芽細胞の増殖が促進され、筋力の増加を助けるとともに、怪我や病気等により使用せずに低下した筋力の回復を助けることができ、筋肉量を維持したり増加することで筋肉を増強することができる。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた筋肉増強効果を奏する。また、筋肉量の増加や、筋力の増加、回復により運動量を維持することができ、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上効果を奏するため、本発明の組成物は、ワイルドヤムによる優れた筋肉増強効果により、運動パフォーマンスの維持及び／又向上効果や体力増進（向上）効果を奏する。
【0021】
［運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物］
本発明において運動パフォーマンスの維持及び／又は向上とは、運動で発揮される能力を維持したり向上することを意味し、より具体的には、運動において強度や速度、持久力、精度等に関して所望の結果を達することができる能力を維持したり向上することを意味する。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れたＰＧＣ－１αの遺伝子発現促進作用を有する。ＰＧＣ－１αの遺伝子発現を促進することで、褐色脂肪細胞におけるミトコンドリアが増加されて、エネルギー代謝を促進することで運動パフォーマンスを維持したり、向上したりすることができる。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果を奏する。
本発明において運動パフォーマンスの維持及び／又は向上とは、運動で発揮される能力を維持したり向上することを意味し、より具体的には、運動において強度や速度、持久力、精度等に関して所望の結果を達することができる能力を維持したり向上することを意味する。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れたＰＧＣ－１αの遺伝子発現促進作用を有する。ＰＧＣ－１αの遺伝子発現を促進することで、褐色脂肪細胞におけるミトコンドリアが増加されて、エネルギー代謝を促進することで運動パフォーマンスを維持したり、向上したりすることができる。本発明の組成物は、ワイルドヤムを含有することで、優れた運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果を奏する。
【0022】
本発明の組成物は、筋肉増強用経口組成物として用いることができ、かかる経口組成物としては、ワイルドヤムが含有され、筋肉を増強させる点において、製品として他の製品と区別することができるものであれば特に制限されるものではなく、例えば本発明に係る製品の本体、包装、説明書、宣伝物（広告媒体）のいずれかに、筋肉増強、筋合成の亢進、筋分解の抑制、筋肉量（筋肉重量、筋断面積、筋肉密度）の低下抑制・維持・増加、筋肉の質の低下抑制・維持・向上、筋力（パワー、持久力）の低下抑制・維持・増加、運動能力の低下抑制・維持・向上、代謝（基礎代謝、安静時及び運動時代謝）の低下抑制・維持・向上、除脂肪体重の低下抑制・維持・増加、筋肉疲労の予防・改善、筋肉増強による代謝向上効果、ロコモティブシンドロームの予防・改善効果、サルコペニアの予防・改善効果の機能がある旨を表示したものが本発明の範囲に含まれる。本発明の筋肉増強用経口組成物は、ワイルドヤムを有効成分として表示するものであってもよいが、製品の包装等に、ワイルドヤムが有効成分として表示されているものに限られない。例えば有効成分を特定していないものであってもよい。また、一般的な食品であっても、用途を示唆して製造販売されるものは本発明の範囲に含まれる。例えば摂取した人の個人的感想として筋肉向上に言及する体験談をホームページ等に記載して販売される食品等についても、本発明の範囲に含まれる。また、筋肉増強を示す論文等を機能性の科学的根拠とし、ワイルドヤムを機能性関与成分とする機能性表示食品であって筋肉を増強する機能を届出表示とする機能性表示食品についても、実質的に当該届出表示は筋肉増強のことを意味しているため、本発明の範囲に含まれる。
【0023】
具体的に、本発明の筋肉増強用組成物としては、医薬品（医薬部外品を含む）やいわゆる健康食品が挙げられ、いわゆる健康食品においては、「筋肉をつくる力をサポートする」、「筋肉の分解を抑える」、「筋力を増強する」、「歩行能力の低下抑制・維持・改善・向上」、「筋肉増強による代謝向上を図る」、「代謝の衰えを抑える」、「筋肉疲労の予防・回復」、「バランス能力の低下抑制・維持」、「シェイプアップ」、「マッチョ」、「細マッチョ」、「美ボディ」、「寝たきり予防」、「寝たきり防止」、「転倒予防」、「筋肉増強による代謝向上を図る」、「筋肉量や筋力を維持する」等を表示したものを例示することができる。本発明の経口組成物を摂取する対象としては、筋肉の増強を必要とする人であれば特に限定されないが、シェイプアップを目的とする人や、スポーツ選手や、足腰の弱った高齢者等を好ましく例示することができる。
【0024】
本発明の組成物は、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用経口組成物として用いることができ、かかる経口組成物としては、ワイルドヤムが含有され、運動パフォーマンスを維持させたり向上させる点において、製品として他の製品と区別することができるものであれば特に制限されるものではなく、例えば本発明に係る製品の本体、包装、説明書、宣伝物（広告媒体）のいずれかに、運動パフォーマンスの維持、運動パフォーマンスの向上、運動における持久力の向上、エネルギー代謝促進の機能がある旨を表示したものが本発明の範囲に含まれる。本発明の運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物は、ワイルドヤムを有効成分として表示するものであってもよいが、製品の包装等に、ワイルドヤムが有効成分として表示されているものに限られない。例えば有効成分を特定していないものであってもよい。また、一般的な食品であっても、用途を示唆して製造販売されるものは本発明の範囲に含まれる。例えば摂取した人の個人的感想として運動パフォーマンスの維持や向上に言及する体験談をホームページ等に記載して販売される食品等についても、本発明の範囲に含まれる。また、運動パフォーマンスの維持や向上を示す論文等を機能性の科学的根拠とし、ワイルドヤムを機能性関与成分とする機能性表示食品であって運動パフォーマンスを維持及び／又は向上する機能を届出表示とする機能性表示食品についても、実質的に当該届出表示は運動パフォーマンスの維持及び／又は向上のことを意味しているため、本発明の範囲に含まれる。
【0025】
具体的に、本発明の運動パフォーマンスの維持及び／又は向上用組成物としては、医薬品（医薬部外品を含む）やいわゆる健康食品が挙げられ、いわゆる健康食品においては、「高い運動パフォーマンスを維持・向上」、「高い身体レベルを維持・向上」、「運動能力を向上」、「持久力を高める」、「持久力アップ」等を表示したものを例示することができる。本発明の経口組成物を摂取する対象としては、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上を必要とする人であれば特に限定されないが、シェイプアップを目的とする人や、スポーツ選手や、足腰の弱った高齢者等を好ましく例示することができる。
【0026】
本発明の組成物は、例えば、医薬品（医薬部外品を含む）や、機能性表示食品、特定保健用食品、栄養機能食品等の所定機関より効能の表示が認められた機能性食品等のいわゆる健康食品等として用いることができる。
【0027】
本発明の組成物の形態は、例えばカプセル状、ソフトカプセル状、錠状、粉末状、顆粒状、液状、粒状、棒状、板状、ブロック状、固形状、丸状、ペースト状、クリーム状、カプレット状、ゲル状、チュアブル錠状、スティック状等を挙げることができる。アイス、ゼリー、クッキー、ケーキ、チョコレート、ペットボトル飲料等の形態であってもよい。これらの中でも、カプセル状、ソフトカプセル状、錠状、粉末状、顆粒状、丸状、チュアブル錠状の形態が好ましく、カプセル状、ソフトカプセル状、錠状、粉末状、顆粒状が特に好ましい。
【0028】
本発明の組成物は、必要に応じて、ワイルドヤム以外の他の成分を添加して、公知の方法によって製造することができる。ワイルドヤム以外の他の成分としては、例えば水溶性ビタミン（ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１３、ビタミンＢ１５、ビタミンＢ１７、ビオチン、葉酸、ビタミンＣ、ビタミンＰ）、油溶性ビタミン（ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ）等のビタミン類；カルシウム、マグネシウム、リン、鉄等のミネラル類；ヘスペリジン、ケルセチン等のフラバノイドあるいはフラボノイド類；コラーゲン等のタンパク質；ペプチド；アミノ酸；動物性油脂；植物性油脂；動物・植物の粉砕物又は抽出物；賦形剤、滑沢剤、流動化剤等を挙げることができる。
【実施例0029】
以下、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【0030】
［試験１：筋芽細胞賦活試験］
実施例１ ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（白色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
比較例１ トゲドコロ（Dioscorea esculenta）の根の含水エタノール抽出物（淡褐色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
実施例１ ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（白色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
比較例１ トゲドコロ（Dioscorea esculenta）の根の含水エタノール抽出物（淡褐色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
【0031】
（１）マウス骨格筋由来筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２、理化学研究所）を３７℃、５容量％ＣＯ２インキュベーター内で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培地を入れた７５ｃｍ２フラスコを用いて、培養した。
（２）培養した細胞をトリプシン処理により浮遊させて回収し、コラーゲンコートした９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに、８．０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（３）各ｗｅｌｌより培地を除去後、各ｗｅｌｌをＤＭＥＭ ２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄し、２％ウマ血清（ＨＳ）含有ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で６日間培養し、筋管への分化を誘導した。
（４）培地を除去し、所定濃度に調製した被験物質含有分化誘導培地を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。被験物質の培地中の合計濃度は１０μｇ／ｍＬとした。
（５）培地を除去し、ＰＢＳ ２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄し、無血清ＤＭＥＭで３０容量倍に希釈したＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学製） １５０μＬ／ｗｅｌｌを添加した。
（６）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置して適度に発色させた後、各ｗｅｌｌの４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。得られたデータを元に、コントロールに対する生細胞数の割合（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）を下記式に基づいて算出し、筋芽細胞賦活活性を評価した。
% of control= ( Data sample - Data blank ) / ( Data control - Data blank ) × 100
Data sample : 実施例１及び比較例１の吸光度
Data control : controlの吸光度
Data blank:細胞がないときのブランク
（２）培養した細胞をトリプシン処理により浮遊させて回収し、コラーゲンコートした９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに、８．０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（３）各ｗｅｌｌより培地を除去後、各ｗｅｌｌをＤＭＥＭ ２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄し、２％ウマ血清（ＨＳ）含有ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で６日間培養し、筋管への分化を誘導した。
（４）培地を除去し、所定濃度に調製した被験物質含有分化誘導培地を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。被験物質の培地中の合計濃度は１０μｇ／ｍＬとした。
（５）培地を除去し、ＰＢＳ ２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄し、無血清ＤＭＥＭで３０容量倍に希釈したＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（同仁化学製） １５０μＬ／ｗｅｌｌを添加した。
（６）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置して適度に発色させた後、各ｗｅｌｌの４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。得られたデータを元に、コントロールに対する生細胞数の割合（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）を下記式に基づいて算出し、筋芽細胞賦活活性を評価した。
% of control= ( Data sample - Data blank ) / ( Data control - Data blank ) × 100
Data sample : 実施例１及び比較例１の吸光度
Data control : controlの吸光度
Data blank:細胞がないときのブランク
【0032】
コントロールを１００％として、実施例１、比較例１の生細胞数の割合の算出結果をまとめたものを図１に示す。
【0033】
図１に示すように、ワイルドヤム抽出物を含有する実施例１では、比較例１に比して、大幅に筋芽細胞の賦活活性が高かった。したがって、本発明に係るワイルドヤムを含有する経口組成物は、筋肉増強において有用である。
【0034】
［試験２：ＰＧＣ－１α遺伝子発現試験］
実施例１ ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（白色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
比較例２ ナガイモ（Dioscorea batatas）の根の粉砕物（茶色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
実施例１ ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（白色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
比較例２ ナガイモ（Dioscorea batatas）の根の粉砕物（茶色粉末状） １０μｇ／ｍＬ
【0035】
（１）マウス骨格筋由来筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２、理化学研究所）を３７℃、５容量％ＣＯ２インキュベーター内で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培地を入れた７５ｃｍ２フラスコを用いて、培養した。
（２）培養した細胞をトリプシン処理により浮遊させて回収し、コラーゲンコートした２４ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに、５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（３）各ｗｅｌｌより培地を除去後、各ｗｅｌｌをＤＭＥＭで２回洗浄し、２％ウマ血清（ＨＳ）含有ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で６日間培養し、筋管への分化を誘導した。
（４）培地を除去し、所定濃度に調製した被験物質含有分化誘導培地を５００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。被験物質の培地中の合計濃度は１０μｇ／ｍＬとした。
（５）培地を除去し、ＰＢＳで２回洗浄し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いてＲＮＡを回収し、ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ（登録商標） ｑＰＣＲ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ Ｒｅｍｏｖｅｒ（東洋紡製）を用いてｃＤＮＡを合成した。
（６）得られたｃＤＮＡを鋳型として、ＰＧＣ－１αのプライマー（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いて、ＱｕａｎｔｉＮｏｖａ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＱＩＡＧＥＮ製）により定量リアルタイムＰＣＲを行い、ＰＧＣ－１α遺伝子発現量を測定した。内在性コントロールとして、ＧＡＰＤＨのプライマー（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いて、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量を測定し、コントロールの遺伝子発現量を1とした相対値を算出した。
（２）培養した細胞をトリプシン処理により浮遊させて回収し、コラーゲンコートした２４ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに、５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（３）各ｗｅｌｌより培地を除去後、各ｗｅｌｌをＤＭＥＭで２回洗浄し、２％ウマ血清（ＨＳ）含有ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で６日間培養し、筋管への分化を誘導した。
（４）培地を除去し、所定濃度に調製した被験物質含有分化誘導培地を５００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。被験物質の培地中の合計濃度は１０μｇ／ｍＬとした。
（５）培地を除去し、ＰＢＳで２回洗浄し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いてＲＮＡを回収し、ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ（登録商標） ｑＰＣＲ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ Ｒｅｍｏｖｅｒ（東洋紡製）を用いてｃＤＮＡを合成した。
（６）得られたｃＤＮＡを鋳型として、ＰＧＣ－１αのプライマー（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いて、ＱｕａｎｔｉＮｏｖａ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＱＩＡＧＥＮ製）により定量リアルタイムＰＣＲを行い、ＰＧＣ－１α遺伝子発現量を測定した。内在性コントロールとして、ＧＡＰＤＨのプライマー（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いて、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量を測定し、コントロールの遺伝子発現量を1とした相対値を算出した。
【0036】
コントロールを１として、実施例１、比較例２の遺伝子発現量の結果をまとめたものを図２に示す。
【0037】
図２に示すように、ワイルドヤム抽出物を含有する実施例１では、比較例２に比して、大幅にＰＧＣ－１α遺伝子発現量が多かった。したがって、本発明に係るワイルドヤムを含有する経口組成物は、運動パフォーマンスの維持及び／向上において有用である。
【0038】
［試験３：経口摂取による実感評価］
以下に記載の方法により、ワイルドヤムの経口摂取が筋肉の増強、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上に及ぼす影響を評価することを目的とし、健常な成人男性３名を対象とする二重盲検プラセボ対照クロスオーバー比較試験を実施した。
以下に記載の方法により、ワイルドヤムの経口摂取が筋肉の増強、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上に及ぼす影響を評価することを目的とし、健常な成人男性３名を対象とする二重盲検プラセボ対照クロスオーバー比較試験を実施した。
【0039】
（１）試験食品
ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物を、白色で中が見えないカプセルに封入して試験食品Ａ（実施例２）のカプセル剤を製造した。なお、試験食品Ｂ（比較例３）は、外観で実施例のカプセルとの区別がつかないように、試験食品Ａで使用したカプセルと同様に、白色で中が見えないカプセルを使ってカプセル剤を製造した。
試験食品Ａ（実施例２） ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（粉末状） ３００ｍｇ／１カプセル
試験食品Ｂ（比較例３） ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（粉末状） ０ｍｇ／１カプセル
ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を７０％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を乾燥した後、粉砕して得た、ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物を、白色で中が見えないカプセルに封入して試験食品Ａ（実施例２）のカプセル剤を製造した。なお、試験食品Ｂ（比較例３）は、外観で実施例のカプセルとの区別がつかないように、試験食品Ａで使用したカプセルと同様に、白色で中が見えないカプセルを使ってカプセル剤を製造した。
試験食品Ａ（実施例２） ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（粉末状） ３００ｍｇ／１カプセル
試験食品Ｂ（比較例３） ワイルドヤムの根の含水エタノール抽出物（粉末状） ０ｍｇ／１カプセル
【0040】
（２）試験方法
健常な成人男性３名に、試験食品Ａ、Ｂのいずれか１種類を夕食時に２カプセルずつ、各観察期で３日間摂取させ、試験食品の摂取前と３日間摂取後の筋力の低下を感じるかについて以下のアンケートの内容及び評価基準で評価させた。各観察期の間には２日間のウォッシュアウト期間を設けた。
健常な成人男性３名に、試験食品Ａ、Ｂのいずれか１種類を夕食時に２カプセルずつ、各観察期で３日間摂取させ、試験食品の摂取前と３日間摂取後の筋力の低下を感じるかについて以下のアンケートの内容及び評価基準で評価させた。各観察期の間には２日間のウォッシュアウト期間を設けた。
【0041】
アンケートの内容
（評価項目）筋力が低下してきた、弱くなってきた。
（評価項目）筋力が低下してきた、弱くなってきた。
【0042】
アンケートの評価基準
感じない：１点
軽度に感じる（わずかに感じる）：２点
中程度感じる：３点
重度に感じる（強く感じる）：４点
極めて重度に感じる（感じずにはいられない）：５点
感じない：１点
軽度に感じる（わずかに感じる）：２点
中程度感じる：３点
重度に感じる（強く感じる）：４点
極めて重度に感じる（感じずにはいられない）：５点
【0043】
得られた点数の合計点を算出し、摂取前の合計点を１とした３日間摂取後の合計点の相対値（摂取後／摂取前）を算出した。すなわち、数値が小さいほど、試験食品の摂取前に比べて、３日間摂取後に筋力の低下を感じる割合が減っており、試験食品の摂取により筋力の低下の抑制や、筋力の維持、向上の効果が高いことを意味する。得られた結果を図３に示す。
【0044】
図３に示されるように、本発明の実施例２に係る、ワイルドヤム抽出物を含有する組成物は、ワイルドヤムを含有しない比較例３に比べて筋力の低下に関するアンケートの評価の点数が低く、すなわち、筋力が低下してきた、弱くなってきたと感じることが少なかった。筋力の増加や回復により筋肉量を維持したり増加することで筋肉を増強することができる。また、筋力の増加、回復や、これらに基づく筋肉量の増加により、運動パフォーマンスを維持及び／又は向上させることができる。したがって、本発明に係るワイルドヤムを含有する経口組成物は、筋肉増強、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／向上において有用である。
【0045】
以下に本発明の種々の態様の例を挙げる。ただし、本発明の技術的範囲はこれらに限定されない。
【0046】
[処方例１～３]（カプセル）
表１に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物を混合した後、ゼラチンを含む被膜に充填しカプセルを製造した（１粒あたり内容物２００ｍｇ、皮膜８０ｍｇ）。得られたカプセルを摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表１に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物を混合した後、ゼラチンを含む被膜に充填しカプセルを製造した（１粒あたり内容物２００ｍｇ、皮膜８０ｍｇ）。得られたカプセルを摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0047】
【表1】
【0048】
[処方例４～６]（ソフトカプセル）
表２に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合してソフトカプセルの内容物を製造した（１カプセルあたり３００ｍｇ）。続いて、ソフトカプセルの内容物を、常法に従って、ゼラチン製のカプセル被膜（１カプセルあたり１５０ｍｇ）で被包しソフトカプセルを製造した。得られたソフトカプセルを摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表２に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合してソフトカプセルの内容物を製造した（１カプセルあたり３００ｍｇ）。続いて、ソフトカプセルの内容物を、常法に従って、ゼラチン製のカプセル被膜（１カプセルあたり１５０ｍｇ）で被包しソフトカプセルを製造した。得られたソフトカプセルを摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0049】
【表2】
【0050】
[処方例７～９]（錠剤）
表３に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合した後、打錠装置を用いて成形し、錠剤を製造した（１粒あたり２５０ｍｇ）。得られた錠剤を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表３に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合した後、打錠装置を用いて成形し、錠剤を製造した（１粒あたり２５０ｍｇ）。得られた錠剤を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0051】
【表3】
【0052】
［製造例１０～１２］（粉末飲料）
表４に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合して粉末（飲料用）を製造した。得られた粉末（飲料用）３ｇを水１００ｍＬと混合し摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表４に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合して粉末（飲料用）を製造した。得られた粉末（飲料用）３ｇを水１００ｍＬと混合し摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0053】
【表4】
【0054】
［製造例１３～１５］（顆粒）
表５に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合した後、流動層造粒機に投入し、気流で数分間混合し、これに水３００ｍＬを１分間に３０ｍＬ噴霧して造粒を行った。得られた造粒物を３０メッシュの篩いで選別し、顆粒を製造した。得られた顆粒を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表５に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根を含水エタノールで抽出して得たワイルドヤム抽出物と他の原料を混合した後、流動層造粒機に投入し、気流で数分間混合し、これに水３００ｍＬを１分間に３０ｍＬ噴霧して造粒を行った。得られた造粒物を３０メッシュの篩いで選別し、顆粒を製造した。得られた顆粒を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0055】
【表5】
【0056】
［製造例１６～１８］（飲料）
表６に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根の含水エタノール抽出物（ワイルドヤム抽出物）と他の原料を混合して飲料を製造し、５００ｍＬの容器に充填した。得られた飲料を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
表６に示すように、ワイルドヤム（Dioscorea oppositifolia）の根の含水エタノール抽出物（ワイルドヤム抽出物）と他の原料を混合して飲料を製造し、５００ｍＬの容器に充填した。得られた飲料を摂取したところ、筋肉増強効果、並びに、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果に優れるものであった。
【0057】
【表6】
【産業上の利用可能性】
【0058】
本発明の経口組成物は、筋肉増強効果を有する食品として用いることができるため、産業上の有用性は高い。また、本発明の経口組成物は、運動パフォーマンスの維持及び／又は向上効果を有する食品として用いることができるため、産業上の有用性は高い。
【図1】
【図2】
【図3】
