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特開2023-171766ナチュラルキラー細胞およびＩＬＣ３細胞ならびにそれらの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023171766
(43)【公開日】2023-12-05
(54)【発明の名称】ナチュラルキラー細胞およびＩＬＣ３細胞ならびにそれらの使用
(51)【国際特許分類】
C12N 5/0783 20100101AFI20231128BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20231128BHJP
【ＦＩ】
C12N5/0783
C12N5/078
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023145605
(22)【出願日】2023-09-07
(62)【分割の表示】P 2021171231の分割
【原出願日】2016-10-14
(31)【優先権主張番号】62/242,246
(32)【優先日】2015-10-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/403,571
(32)【優先日】2016-10-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/272,984
(32)【優先日】2015-12-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ジップロック
(71)【出願人】
【識別番号】520169074
【氏名又は名称】セルラリティ インク．
(74)【代理人】
【識別番号】100097456
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 徹
(72)【発明者】
【氏名】チャン，シャオクイ
(72)【発明者】
【氏名】ジュレティック，イヴァナ
(72)【発明者】
【氏名】カン，リン
(72)【発明者】
【氏名】ヴォスキナリアン－バーセ，ヴァネッサ
(72)【発明者】
【氏名】スタウト，ババニ
(72)【発明者】
【氏名】ハリリ，ロバート ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】ホフガートナー，ウォルフガング
(72)【発明者】
【氏名】エディンガー，ジェームズ
(72)【発明者】
【氏名】ロウ，エリック
(72)【発明者】
【氏名】ヤンコビッチ，ウラジーミル
(57)【要約】 （修正有）
【課題】殺腫瘍機能を保持するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を製造し、増幅する効率的な方法を提供する。
【解決手段】幹細胞動員因子を含む培地を用い、３段階増幅および分化法を使用してＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で開示される。また本明細書で述べた３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を使用して腫瘍細胞の増殖を抑制する方法、ならびにがんもしくはウイルス感染を有する個体に本明細書で述べた３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を投与することを含む、がんもしくはウイルス感染を有する個体を治療する方法が本明細書で開示される。
【選択図】なし
【解決手段】幹細胞動員因子を含む培地を用い、３段階増幅および分化法を使用してＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で開示される。また本明細書で述べた３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を使用して腫瘍細胞の増殖を抑制する方法、ならびにがんもしくはウイルス感染を有する個体に本明細書で述べた３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を投与することを含む、がんもしくはウイルス感染を有する個体を治療する方法が本明細書で開示される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ナチュラルキラー細胞を含む細胞集団を製造する方法であって、
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤および低分子量ヘパリン（ＬＭ
ＷＨ）のそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３
の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、
ナチュラルキラー細胞の少なくとも８０％が生存している、方法。
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤および低分子量ヘパリン（ＬＭ
ＷＨ）のそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３
の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、
ナチュラルキラー細胞の少なくとも８０％が生存している、方法。
【請求項2】
細胞の前記第３の集団が、
（１）ＣＤ９４＋もしくはＣＤ１６＋、
（２）ＣＤ９４－もしくはＣＤ１６－、
（３）ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋、または
（４）ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１記載の
方法。
（１）ＣＤ９４＋もしくはＣＤ１６＋、
（２）ＣＤ９４－もしくはＣＤ１６－、
（３）ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋、または
（４）ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１記載の
方法。
【請求項3】
ナチュラルキラー細胞を含む細胞集団を製造する方法であって、
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の
第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であり、
第３の培地が幹細胞因子（ＳＣＦ）を欠いている、請求項１記載の方法。
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の
第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であり、
第３の培地が幹細胞因子（ＳＣＦ）を欠いている、請求項１記載の方法。
【請求項4】
（ｄ）細胞の第３の集団～ＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、細胞の第４の集団を製造する
ステップをさらに含み、
細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細
胞を含む、請求項１～３のうちいずれか１項に記載の方法。
ステップをさらに含み、
細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細
胞を含む、請求項１～３のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記ナチュラルキラー細胞が、
（１）パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する、または
（２）ＲＯＲγｔもＩＬ１Ｒ１も発現しない、請求項１～４のうちいずれか１項に記載の
方法。
（１）パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する、または
（２）ＲＯＲγｔもＩＬ１Ｒ１も発現しない、請求項１～４のうちいずれか１項に記載の
方法。
【請求項6】
ＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法であって、
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の
第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細
胞を含む、方法。
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；ならびに
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の
第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
を含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細
胞を含む、方法。
【請求項7】
第３の培地が、
（１）幹細胞動員剤、
（２）ＳＣＦ、または
（３）幹細胞動員剤およびＳＣＦを含む、請求項１～６のうちいずれか１項に記載の方法
。
（１）幹細胞動員剤、
（２）ＳＣＦ、または
（３）幹細胞動員剤およびＳＣＦを含む、請求項１～６のうちいずれか１項に記載の方法
。
【請求項8】
ＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法であって、
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠
いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップ；ならびに
（ｄ）細胞の第３の集団～ＣＤ１１ａ－細胞を単離して、細胞の第４の集団を製造する
ステップを含み、
細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む
、方法。
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠
いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップ；ならびに
（ｄ）細胞の第３の集団～ＣＤ１１ａ－細胞を単離して、細胞の第４の集団を製造する
ステップを含み、
細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む
、方法。
【請求項9】
前記ＩＬＣ３細胞が、
（１）ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現する、または
（２）パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現しない、請求項８記載の方法。
（１）ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現する、または
（２）パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現しない、請求項８記載の方法。
【請求項10】
前記造血幹細胞または前駆細胞が哺乳類細胞であり、または前記造血幹細胞または前駆
細胞がヒト細胞である、請求項１～９のうちいずれか１項に記載の方法。
細胞がヒト細胞である、請求項１～９のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記造血幹細胞または前駆細胞が、
（１）ＣＤ３４＋造血幹細胞である、
（２）胎盤細胞である、
（３）前記胎盤細胞が、ヒト胎盤潅流液から得られる、または得ることができ、
（４）前記胎盤細胞が、ヒト胎盤潅流液から単離された有核細胞から得られる、または得
ることができ、
（５）臍帯血から得られる、または得ることができ、
（６）胎児肝臓細胞であり、
（７）動員末梢血細胞であり、あるいは
（８）骨髄細胞である、請求項１～１０のうちいずれか１項に記載の方法。
（１）ＣＤ３４＋造血幹細胞である、
（２）胎盤細胞である、
（３）前記胎盤細胞が、ヒト胎盤潅流液から得られる、または得ることができ、
（４）前記胎盤細胞が、ヒト胎盤潅流液から単離された有核細胞から得られる、または得
ることができ、
（５）臍帯血から得られる、または得ることができ、
（６）胎児肝臓細胞であり、
（７）動員末梢血細胞であり、あるいは
（８）骨髄細胞である、請求項１～１０のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５が第１の培地、第２の培地または第３の培地の
組成不明の成分中に含まれていない、または、
前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５が血清中に含まれていない、請求項１～１１の
うちいずれか１項に記載の方法。
組成不明の成分中に含まれていない、または、
前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５が血清中に含まれていない、請求項１～１１の
うちいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
（１）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤である、
（２）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤がレスベラトロールである、
（３）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤が以下の式
の化合物
（式中、
Ｇ１は、ＮおよびＣＲ３～選択され、
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、ＣＨおよびＮ～独立に選択され、ただし、Ｇ３およびＧ４の
うちの少なくとも１つは、Ｎであることを条件とし、ただし、Ｇ１およびＧ２は、両方が
Ｎであるわけではないことを条件とし、
Ｌは、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）０－３－－、－－ＮＲ５ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３）Ｃ
Ｈ２－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２ＮＲ５ｂ－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２Ｓ－－、
－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－、－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）－－お
よび－－ＮＲ５ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－～選択され、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素お
よびＣ１－４アルキル～独立に選択され、
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェニル、フラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソ
キノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピ
ラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル
、１Ｈ－ピロリルおよびチアゾリル～選択され、Ｒ１の前記フェニル、チオフェニル、フ
ラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベン
ゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル、
ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ－ピロリルまたはチアゾリルは、シアノ
、ヒドロキシ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１－４アルキ
ル、ハロ置換Ｃ１－４アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、－－Ｃ（Ｏ）Ｒ８ａ、－－Ｓ（
Ｏ）０－２Ｒ８ａ 、－－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８ａ および－－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂ～独立に
選択される１～３個の基により任意選択で置換することができ、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、
水素およびＣ１－４アルキル～独立に選択され、ただし、Ｒ１およびＲ３は、両方が水素
であるわけではないことを条件とし、
Ｒ２は、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ６ａＲ６ｂ、－－ＮＲ９ａＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、－－ＮＲ６ａ
Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３－イル、１Ｈ－インドリ
ル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル、２－オキソイミダゾ
リジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾリ
ルおよび１Ｈ－インダゾリル～選択され、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ
１－４アルキル～独立に選択され、Ｒ２の前記フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３－イ
ル、１Ｈ－インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル、
２－オキソイミダゾリジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ
－ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ－インダゾリルは、ヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキ
シ、アミノ、－－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ７ａＲ７ｂ、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂ、－－
ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび－－ＮＲ７ａＳ（Ｏ）２Ｒ７ｂ～独立に選択される１
～３個の基で任意選択で置換され、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１－４アルキル
～独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１－４アルキルおよびビフェニル～選択され、
Ｒ４は、Ｃ１－１０アルキル、プロパ－１－エン－２－イル、シクロヘキシル、シクロ
プロピル、２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、ベ
ンズヒドリル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－
４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニ
ル）（フェニル）メチルおよび１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３
－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチ
ル～選択され、前記アルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、２－（２－オキソピロ
リジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、オキセタン－２－イル、ベンズヒド
リル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル
、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、
テトラヒドロフラン－２－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニル）（フェニル）メチ
ルまたは１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３－アザテトラデカン－
１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチルは、ヒドロキシ、Ｃ
１－４アルキルおよびハロ置換Ｃ１－４アルキル～独立に選択される１～３個の基で置換
することができる）またはその塩である、
（４）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤がＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）（４－（２－（２－（ベ
ンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ
）エチル）フェノール）である、
（５）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤が化合物ＣＨ２２３１９１（１－メチル－Ｎ－［２－メチル－４－［
２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル］フェニル－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボキサ
ミド］である、
（６）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体である、
（７）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が
のうちの１つもしくは複数
またはその塩もしくはプロドラッグであり、式中、
Ｚは、
１）－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
３）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
５）－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
６）－ＣＮ、
７）－ＳＲ、
８）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
９）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１２）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１３）－Ｌ、
１４）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換され
ている－ベンジル、
１５）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール
、
１６）Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル
、
１７）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、
窒素原子と一緒になって、１つまたは複数のＲ＜１＞またはＲ＜Ａ＞で任意選択で置換さ
れている、Ｎ、ＯおよびＳ～選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意選択で
含む３～７員環を形成しており、
Ｗは、
１）－Ｈ、
２）－ハロゲン、
３）－ＯＲ＜１＞、
４）－Ｌ－ＯＨ、
５）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
６）－ＳＲ＜１＞、
７）－ＣＮ、
８）－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
９）－ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｌ－ＮＨ２、
１２）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１３）－Ｌ－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１４）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１５）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１６）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１７）－Ｌ－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞
１８）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
１９）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２０）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２２）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２３）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、－ＮＨＣ（０）０Ｒ＜１＞、
－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）ＮＨ２、
－０Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２ＮＨ２、
－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
－０Ｓ（０）２Ｒ１、
－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ベンジル、
Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
－Ｌ－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－Ｌ－）２ＮＲ＜１＞、
－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれ
かもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選
択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ
）ｎ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－
アリール、
－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－アリール、
－Ｏ－Ｌ）２－ＮＲ＜１＞、
－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基いずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）
ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）
－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－
Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－アリール、
－Ｓ－Ｌ）２ＮＲ１、
－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）’’－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１
＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換さ
れている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリー
ル、
－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
－Ｎ（Ｒ１）Ｌ）２－ＮＲ１、７６）－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）’’－Ｎ（Ｒ１）ＲＡ、
７７）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
７８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
７９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
８０）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－ヘテロアリール
、または
８１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、２つのＲ＜１＞置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ＜１＞置換基は、後に
述べるＲ＜１＞の値のリスト～独立に選択され、
ｎは、０、１、２、３、４または５に等しい整数であり、
（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、窒素
原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳ～選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任
意選択で含む３～７員環を形成しており、任意選択で環は、１つまたは複数のＲ＜１＞ま
たはＲ＜Ａ＞で置換されており、
Ｌは、
１）－Ｃｉ～６アルキル、
２）－Ｃ２～６アルケニル、
３）－Ｃ２～６アルキニル、
４）－Ｃ３～７シクロアルキル、
５）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
６）ヘテロシクリル、
７）－Ｃｉ～６アルキル－Ｃ３～７シクロアルキル、
８）－Ｃｉ～６アルキル－ヘテロシクリル、
９）アリール、または
１０）ヘテロアリール
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテ
ロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは２つのＲ＜Ａ＞置換基でそ
れぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒｉは、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－Ｃ２～６アルケニル、
４）－Ｃ２～６アルキニル、５）－Ｃ３～７シクロアルキル、
６）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
７）－Ｃ１～５過フッ化、
８）－ヘテロシジル、
９）－アリール、
１０）－ヘテロアリール、
１１）－ベンジル、または
１２）５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，
４－ｄ］イミダゾール－４－イル］ペンタノイル
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキ
ル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、１つ、２つまたは
３つのＲ＜Ａ＞またはＲ＜１＞置換基でそれぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒ２は、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－ＳＲ、
４）－Ｃ（０）Ｒ１、
５）－Ｓ（０）Ｒ１、
６）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
７）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されて
いる－ベンジル、
８）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは
複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリー
ル、
９）Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは
複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリ
ル、
１０）Ｌおよびアリール基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは複数
のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１２）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合にはＬ基に任意選択で結合されてお
り、
Ｒ＜Ａ＞は、
１）－ハロゲン、
２）－ＣＦｓ、３）－ＯＨ、
４）－ＯＲ＜１＞、
５）－Ｌ－ＯＨ、
６）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
７）－ＯＣＦｓ、
８）－ＳＨ、
９）－ＳＲ１、
１０）－ＣＮ、
１１）－ＮＯ２、
１２）－ＮＨ２、
１３）－ＮＨＲ＜１＞、
１４）－ＮＲ＜１＞Ｒ＜１＞、
１５）－Ｌ－ＮＨ２、
１６）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１７）－Ｌ－ＮＲ＜４＞Ｒ＜１＞、
１８）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１９）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
２０）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）ＯＨ、
２２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
２３）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２４）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２５）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２６）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２７）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
２８）－ＮＨＣ（０）ＯＲ＜１＞、
２９）－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
３０）－ＯＣ（０）ＮＨ２、
３１）－ＯＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
３２）－ＯＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３３）－ＯＣ（０）Ｒ＜１＞、
３４）－Ｃ（０）Ｒ１、３５）－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
３６）－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ１、
３７）－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３８）－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
３９）－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４０）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
４１）－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４２）－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４３）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
４４）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
４５）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
４６）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
４７）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４８）－０Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４９）－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
５０）－ベンジル、
５１）－Ｎ３、または
５２）－Ｃ（－Ｎ＝Ｎ－）（ＣＦ３）
であり、ベンジル基は、１つ、２つまたは３つのＲ＜Ａ＞またはＲ＜１＞置換基で任意選
択で置換されている、
（８）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が以下の化学構造
を有する、または
（９）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が以下の化学構造
を有する、請求項１～１２のうちいずれか１項に記載の方法。
（２）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤がレスベラトロールである、
（３）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤が以下の式
【化1】
（式中、
Ｇ１は、ＮおよびＣＲ３～選択され、
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、ＣＨおよびＮ～独立に選択され、ただし、Ｇ３およびＧ４の
うちの少なくとも１つは、Ｎであることを条件とし、ただし、Ｇ１およびＧ２は、両方が
Ｎであるわけではないことを条件とし、
Ｌは、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）０－３－－、－－ＮＲ５ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３）Ｃ
Ｈ２－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２ＮＲ５ｂ－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２Ｓ－－、
－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－、－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）－－お
よび－－ＮＲ５ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－～選択され、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素お
よびＣ１－４アルキル～独立に選択され、
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェニル、フラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソ
キノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピ
ラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル
、１Ｈ－ピロリルおよびチアゾリル～選択され、Ｒ１の前記フェニル、チオフェニル、フ
ラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベン
ゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル、
ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ－ピロリルまたはチアゾリルは、シアノ
、ヒドロキシ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１－４アルキ
ル、ハロ置換Ｃ１－４アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、－－Ｃ（Ｏ）Ｒ８ａ、－－Ｓ（
Ｏ）０－２Ｒ８ａ 、－－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８ａ および－－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂ～独立に
選択される１～３個の基により任意選択で置換することができ、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、
水素およびＣ１－４アルキル～独立に選択され、ただし、Ｒ１およびＲ３は、両方が水素
であるわけではないことを条件とし、
Ｒ２は、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ６ａＲ６ｂ、－－ＮＲ９ａＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、－－ＮＲ６ａ
Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３－イル、１Ｈ－インドリ
ル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル、２－オキソイミダゾ
リジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾリ
ルおよび１Ｈ－インダゾリル～選択され、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ
１－４アルキル～独立に選択され、Ｒ２の前記フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３－イ
ル、１Ｈ－インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル、
２－オキソイミダゾリジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ
－ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ－インダゾリルは、ヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキ
シ、アミノ、－－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ７ａＲ７ｂ、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂ、－－
ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび－－ＮＲ７ａＳ（Ｏ）２Ｒ７ｂ～独立に選択される１
～３個の基で任意選択で置換され、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１－４アルキル
～独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１－４アルキルおよびビフェニル～選択され、
Ｒ４は、Ｃ１－１０アルキル、プロパ－１－エン－２－イル、シクロヘキシル、シクロ
プロピル、２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、ベ
ンズヒドリル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－
４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニ
ル）（フェニル）メチルおよび１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３
－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチ
ル～選択され、前記アルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、２－（２－オキソピロ
リジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、オキセタン－２－イル、ベンズヒド
リル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル
、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、
テトラヒドロフラン－２－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニル）（フェニル）メチ
ルまたは１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３－アザテトラデカン－
１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチルは、ヒドロキシ、Ｃ
１－４アルキルおよびハロ置換Ｃ１－４アルキル～独立に選択される１～３個の基で置換
することができる）またはその塩である、
（４）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤がＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）（４－（２－（２－（ベ
ンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ
）エチル）フェノール）である、
（５）前記幹細胞動員剤がアリール炭化水素受容体阻害剤であり、かつ、前記アリール炭
化水素受容体阻害剤が化合物ＣＨ２２３１９１（１－メチル－Ｎ－［２－メチル－４－［
２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル］フェニル－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボキサ
ミド］である、
（６）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体である、
（７）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が
【化2】
またはその塩もしくはプロドラッグであり、式中、
Ｚは、
１）－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
３）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
５）－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
６）－ＣＮ、
７）－ＳＲ、
８）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
９）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１２）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１３）－Ｌ、
１４）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換され
ている－ベンジル、
１５）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール
、
１６）Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル
、
１７）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複
数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、
窒素原子と一緒になって、１つまたは複数のＲ＜１＞またはＲ＜Ａ＞で任意選択で置換さ
れている、Ｎ、ＯおよびＳ～選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意選択で
含む３～７員環を形成しており、
Ｗは、
１）－Ｈ、
２）－ハロゲン、
３）－ＯＲ＜１＞、
４）－Ｌ－ＯＨ、
５）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
６）－ＳＲ＜１＞、
７）－ＣＮ、
８）－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
９）－ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｌ－ＮＨ２、
１２）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１３）－Ｌ－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１４）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１５）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１６）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１７）－Ｌ－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞
１８）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
１９）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２０）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２２）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２３）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、－ＮＨＣ（０）０Ｒ＜１＞、
－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）ＮＨ２、
－０Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２ＮＨ２、
－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
－０Ｓ（０）２Ｒ１、
－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ベンジル、
Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
－Ｌ－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－Ｌ－）２ＮＲ＜１＞、
－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれ
かもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選
択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ
）ｎ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－
アリール、
－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－アリール、
－Ｏ－Ｌ）２－ＮＲ＜１＞、
－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基いずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）
ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）
－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－
Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のうちいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－アリール、
－Ｓ－Ｌ）２ＮＲ１、
－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）’’－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１
＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換さ
れている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリー
ル、
－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
－Ｎ（Ｒ１）Ｌ）２－ＮＲ１、７６）－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）’’－Ｎ（Ｒ１）ＲＡ、
７７）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
７８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
７９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
８０）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－ヘテロアリール
、または
８１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、２つのＲ＜１＞置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ＜１＞置換基は、後に
述べるＲ＜１＞の値のリスト～独立に選択され、
ｎは、０、１、２、３、４または５に等しい整数であり、
（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、窒素
原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳ～選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任
意選択で含む３～７員環を形成しており、任意選択で環は、１つまたは複数のＲ＜１＞ま
たはＲ＜Ａ＞で置換されており、
Ｌは、
１）－Ｃｉ～６アルキル、
２）－Ｃ２～６アルケニル、
３）－Ｃ２～６アルキニル、
４）－Ｃ３～７シクロアルキル、
５）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
６）ヘテロシクリル、
７）－Ｃｉ～６アルキル－Ｃ３～７シクロアルキル、
８）－Ｃｉ～６アルキル－ヘテロシクリル、
９）アリール、または
１０）ヘテロアリール
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテ
ロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、１つまたは２つのＲ＜Ａ＞置換基でそ
れぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒｉは、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－Ｃ２～６アルケニル、
４）－Ｃ２～６アルキニル、５）－Ｃ３～７シクロアルキル、
６）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
７）－Ｃ１～５過フッ化、
８）－ヘテロシジル、
９）－アリール、
１０）－ヘテロアリール、
１１）－ベンジル、または
１２）５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，
４－ｄ］イミダゾール－４－イル］ペンタノイル
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキ
ル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、１つ、２つまたは
３つのＲ＜Ａ＞またはＲ＜１＞置換基でそれぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒ２は、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－ＳＲ、
４）－Ｃ（０）Ｒ１、
５）－Ｓ（０）Ｒ１、
６）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
７）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されて
いる－ベンジル、
８）Ｌおよびヘテロアリール基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは
複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリー
ル、
９）Ｌおよびヘテロシクリル基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは
複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリ
ル、
１０）Ｌおよびアリール基のうちいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは複数
のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１２）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合にはＬ基に任意選択で結合されてお
り、
Ｒ＜Ａ＞は、
１）－ハロゲン、
２）－ＣＦｓ、３）－ＯＨ、
４）－ＯＲ＜１＞、
５）－Ｌ－ＯＨ、
６）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
７）－ＯＣＦｓ、
８）－ＳＨ、
９）－ＳＲ１、
１０）－ＣＮ、
１１）－ＮＯ２、
１２）－ＮＨ２、
１３）－ＮＨＲ＜１＞、
１４）－ＮＲ＜１＞Ｒ＜１＞、
１５）－Ｌ－ＮＨ２、
１６）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１７）－Ｌ－ＮＲ＜４＞Ｒ＜１＞、
１８）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１９）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
２０）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）ＯＨ、
２２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
２３）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２４）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２５）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２６）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２７）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
２８）－ＮＨＣ（０）ＯＲ＜１＞、
２９）－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
３０）－ＯＣ（０）ＮＨ２、
３１）－ＯＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
３２）－ＯＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３３）－ＯＣ（０）Ｒ＜１＞、
３４）－Ｃ（０）Ｒ１、３５）－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
３６）－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ１、
３７）－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３８）－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
３９）－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４０）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
４１）－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４２）－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４３）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
４４）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
４５）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
４６）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
４７）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４８）－０Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４９）－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
５０）－ベンジル、
５１）－Ｎ３、または
５２）－Ｃ（－Ｎ＝Ｎ－）（ＣＦ３）
であり、ベンジル基は、１つ、２つまたは３つのＲ＜Ａ＞またはＲ＜１＞置換基で任意選
択で置換されている、
（８）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が以下の化学構造
【化3】
（９）前記幹細胞動員剤がピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体であり、かつ、前記
ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体が以下の化学構造
【化4】
【請求項14】
前記第１または第２の培地がＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞
因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆
粒球・マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの１つまたは複数をさらに含む、
請求項１～１３のうちいずれか１項に記載の方法。
因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆
粒球・マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの１つまたは複数をさらに含む、
請求項１～１３のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記第１または第２の培地がＬＭＷＨを含まない、または、
前記第１または第２の培地が脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない、請求項１～１
４のうちいずれか１項に記載の方法。
前記第１または第２の培地が脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない、請求項１～１
４のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
前記第３の培地がＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つま
たは複数をさらに含む、請求項１～１５のうちいずれか１項に記載の方法。
たは複数をさらに含む、請求項１～１５のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
（１）造血幹細胞を第１の培地中で７～１３日間培養するステップ、
（２）造血幹細胞を第１の培地中で８～１２日間培養するステップ、
（３）造血幹細胞を第１の培地中で約１０日間培養するステップ、
（４）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を２～６日間培養するステップ、
（５）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を３～５日間培養するステップ、
（６）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を約４日間培養するステップ、
（７）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を１０～３０日間培養するステップ、
（８）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を１５～２５日間培養するステップ、ま
たは、
（９）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を約２１日間培養するステップを含み、
かつ、
（１）前記造血細胞を１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接
種する、
（２）前記造血細胞を約３×１０４細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接種する、
（３）細胞の前記第１の集団を５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に
最初に接種する、
（４）細胞の前記第１の集団を約１×１０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種
する、
（５）細胞の前記第２の集団を１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に
最初に接種する、請求項１～１１１のうちいずれか１項に記載の方法。
（６）細胞の前記第２の集団を１×１０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に
最初に接種する、
（７）細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種
する、または、
（８）細胞の前記第２の集団を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種
する、請求項１～１６のうちいずれか１項に記載の方法。
（２）造血幹細胞を第１の培地中で８～１２日間培養するステップ、
（３）造血幹細胞を第１の培地中で約１０日間培養するステップ、
（４）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を２～６日間培養するステップ、
（５）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を３～５日間培養するステップ、
（６）前記第２の培地中で細胞の前記第１の集団を約４日間培養するステップ、
（７）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を１０～３０日間培養するステップ、
（８）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を１５～２５日間培養するステップ、ま
たは、
（９）前記第３の培地中で細胞の前記第２の集団を約２１日間培養するステップを含み、
かつ、
（１）前記造血細胞を１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接
種する、
（２）前記造血細胞を約３×１０４細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接種する、
（３）細胞の前記第１の集団を５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に
最初に接種する、
（４）細胞の前記第１の集団を約１×１０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種
する、
（５）細胞の前記第２の集団を１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に
最初に接種する、請求項１～１１１のうちいずれか１項に記載の方法。
（６）細胞の前記第２の集団を１×１０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に
最初に接種する、
（７）細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種
する、または、
（８）細胞の前記第２の集団を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種
する、請求項１～１６のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項18】
腫瘍細胞を、請求項１～１７のうちいずれか１項に記載の方法により製造される複数の
ナチュラルキラー細胞と接触させるステップを含む、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法。
ナチュラルキラー細胞と接触させるステップを含む、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法。
【請求項19】
（１）前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる、
（２）前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる、
（３）前記接触させるステップがヒト個体において行われる、
（４）前記ナチュラルキラー細胞を前記個体に投与するステップを含む、
（５）前記腫瘍細胞が多発性骨髄腫細胞である、
（６）前記腫瘍細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、
（７）前記個体が再発性／難治性ＡＭＬを有する、
（８）前記個体がＡＭＬに対する少なくとも１回の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功
しなかったＡＭＬを有する、
（９）前記個体が６５歳以上であり、第１寛解期にある、
（１０）前記ナチュラルキラー細胞を投与する前に、前記個体がフルダラビン、シタラビ
ンまたは両方でコンディショニングされている、
（１１）前記腫瘍細胞が乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である、
（１２）前記腫瘍細胞が原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨
髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細
胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞であ
る、
（１３）前記腫瘍細胞が充実性腫瘍細胞である、
（１４）前記腫瘍細胞が肝臓腫瘍細胞である、
（１５）前記腫瘍細胞が肺腫瘍細胞である、
（１６）前記腫瘍細胞が膵臓腫瘍細胞である、
（１７）前記腫瘍細胞が腎臓腫瘍細胞である、
（１８）前記腫瘍細胞が多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である、
（１９）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する、
（２０）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する、
（２１）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する、
（２２）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する、
（２３）前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラ
ー細胞が凍結保存されている、または、
（２４）前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラ
ー細胞が凍結保存されていない、請求項１８のうちいずれか１項に記載の方法。
（２）前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる、
（３）前記接触させるステップがヒト個体において行われる、
（４）前記ナチュラルキラー細胞を前記個体に投与するステップを含む、
（５）前記腫瘍細胞が多発性骨髄腫細胞である、
（６）前記腫瘍細胞が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、
（７）前記個体が再発性／難治性ＡＭＬを有する、
（８）前記個体がＡＭＬに対する少なくとも１回の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功
しなかったＡＭＬを有する、
（９）前記個体が６５歳以上であり、第１寛解期にある、
（１０）前記ナチュラルキラー細胞を投与する前に、前記個体がフルダラビン、シタラビ
ンまたは両方でコンディショニングされている、
（１１）前記腫瘍細胞が乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である、
（１２）前記腫瘍細胞が原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨
髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細
胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞であ
る、
（１３）前記腫瘍細胞が充実性腫瘍細胞である、
（１４）前記腫瘍細胞が肝臓腫瘍細胞である、
（１５）前記腫瘍細胞が肺腫瘍細胞である、
（１６）前記腫瘍細胞が膵臓腫瘍細胞である、
（１７）前記腫瘍細胞が腎臓腫瘍細胞である、
（１８）前記腫瘍細胞が多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である、
（１９）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する、
（２０）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する、
（２１）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する、
（２２）前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する、
（２３）前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラ
ー細胞が凍結保存されている、または、
（２４）前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラ
ー細胞が凍結保存されていない、請求項１８のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
ナチュラルキラー細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法であって、
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠
いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップ；ならびに
（ｄ）細胞の第３の集団～ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を分離するステッ
プ；ならびに
（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０：１、４０：１、３０：１、２０：
１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１
：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０または１：５０の比で合わせて、細胞の
第４の集団を製造するステップを含み、
（１）前記第１の培地および／または前記第２の培地がＬＩＦおよび／またはＭＩＰ－１
αを欠いている、
（２）前記第３の培地がＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ－３Ｌを欠いている、
（３）前記第１の培地および前記第２の培地がＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、前記第
３の培地がＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている、
（４）第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれも脱硫酸化グリコサミノグリカン
を含まない、
（５）第１の培地、第２の培地または第３の培地がヘパリンを含む、
（６）前記ヘパリンが低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）である、
（７）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている、
（８）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の比で合わせられている、
（９）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている、
（１０）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合わせられている、
（１１）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている、
（１２）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられている、
（１３）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている、
（１４）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられている、
または、
（１５）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５０の比で合わせられている、
方法。
（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細
胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；
（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠い
ている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステッ
プ；
（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠
いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップ；ならびに
（ｄ）細胞の第３の集団～ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を分離するステッ
プ；ならびに
（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０：１、４０：１、３０：１、２０：
１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１
：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０または１：５０の比で合わせて、細胞の
第４の集団を製造するステップを含み、
（１）前記第１の培地および／または前記第２の培地がＬＩＦおよび／またはＭＩＰ－１
αを欠いている、
（２）前記第３の培地がＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ－３Ｌを欠いている、
（３）前記第１の培地および前記第２の培地がＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、前記第
３の培地がＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている、
（４）第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれも脱硫酸化グリコサミノグリカン
を含まない、
（５）第１の培地、第２の培地または第３の培地がヘパリンを含む、
（６）前記ヘパリンが低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）である、
（７）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている、
（８）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の比で合わせられている、
（９）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている、
（１０）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合わせられている、
（１１）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている、
（１２）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられている、
（１３）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている、
（１４）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられている、
または、
（１５）ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５０の比で合わせられている、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、それぞれの開示がその全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０
１５年１０月１５日に出願した（特許文献１）、２０１５年１２月３０日に出願した（特
許文献２）および２０１６年１０月３日に出願した（特許文献３）の利益を主張するもの
である。
１５年１０月１５日に出願した（特許文献１）、２０１５年１２月３０日に出願した（特
許文献２）および２０１６年１０月３日に出願した（特許文献３）の利益を主張するもの
である。
【0002】
１． 分野
幹細胞動員因子を含む培地中の造血幹細胞または前駆細胞の集団からナチュラルキラー
（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞の集団を製造する方法、例えば、胎盤の細胞か
らの、例えば、胎盤潅流液（例えば、ヒト胎盤潅流液）または他の組織、例えば、臍帯血
もしくは末梢血からの造血幹細胞または前駆細胞から出発する幹細胞動員因子を含む培地
中でＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する３段階法が本明細書で提供される。
例えば、腫瘍細胞の増殖を抑制するために、または病原体感染、例えば、ウイルス感染を
妨げるために本明細書で述べる胎盤潅流液、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞および
／またはＮＫ前駆細胞を使用する方法が本明細書でさらに提供される。ある特定の実施形
態では、本明細書で述べる３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞および／またはＮＫ前駆細胞を１つもしくは複数の免疫調節化合物と組み合わせて使用
し、および／またはそれにより処理する。
幹細胞動員因子を含む培地中の造血幹細胞または前駆細胞の集団からナチュラルキラー
（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞の集団を製造する方法、例えば、胎盤の細胞か
らの、例えば、胎盤潅流液（例えば、ヒト胎盤潅流液）または他の組織、例えば、臍帯血
もしくは末梢血からの造血幹細胞または前駆細胞から出発する幹細胞動員因子を含む培地
中でＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する３段階法が本明細書で提供される。
例えば、腫瘍細胞の増殖を抑制するために、または病原体感染、例えば、ウイルス感染を
妨げるために本明細書で述べる胎盤潅流液、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞および
／またはＮＫ前駆細胞を使用する方法が本明細書でさらに提供される。ある特定の実施形
態では、本明細書で述べる３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞および／またはＮＫ前駆細胞を１つもしくは複数の免疫調節化合物と組み合わせて使用
し、および／またはそれにより処理する。
【背景技術】
【0003】
２． 背景
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の主要な構成要素を構成する細胞傷害性
リンパ球である。
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の主要な構成要素を構成する細胞傷害性
リンパ球である。
【0004】
ＮＫ細胞は、インターフェロンまたはマクロファージ由来のサイトカインに反応して活
性化される。一部の受容体、例えば、ＣＤ９４および２Ｂ４（ＣＤ２４４）は、リガンド
相互作用によっていずれの方向にも機能し得るが、ＮＫ細胞の細胞傷害活性は、「活性化
受容体」または「抑制性受容体」と見なされ得る、２種類の表面受容体により主として調
節される。
性化される。一部の受容体、例えば、ＣＤ９４および２Ｂ４（ＣＤ２４４）は、リガンド
相互作用によっていずれの方向にも機能し得るが、ＮＫ細胞の細胞傷害活性は、「活性化
受容体」または「抑制性受容体」と見なされ得る、２種類の表面受容体により主として調
節される。
【0005】
ＮＫ細胞は、他の活性もあるが特に、腫瘍の宿主拒絶に役割を果たし、ウイルス感染細
胞を殺滅することができることが示された。ナチュラルキラー細胞は、主要組織適合遺伝
子複合体（ＭＨＣ）タンパク質を欠くか、またはそのレベルの低下を示す細胞によって活
性化された状態になり得る。自己クラスＩ ＭＨＣ発現のレベルの変化または低下を有す
るがん細胞は、ＮＫ細胞感受性の誘導をもたらす。活性化および増幅ＮＫ細胞ならびに場
合によって末梢血からのＬＡＫ細胞は、進行がんを有する患者のｅｘ ｖｉｖｏ療法およ
びｉｎ ｖｉｖｏ治療の両方に用いられ、白血病のような骨髄関連疾患；乳がん；および
ある特定の種類のリンパ腫に対してある程度の成功を収めた。
胞を殺滅することができることが示された。ナチュラルキラー細胞は、主要組織適合遺伝
子複合体（ＭＨＣ）タンパク質を欠くか、またはそのレベルの低下を示す細胞によって活
性化された状態になり得る。自己クラスＩ ＭＨＣ発現のレベルの変化または低下を有す
るがん細胞は、ＮＫ細胞感受性の誘導をもたらす。活性化および増幅ＮＫ細胞ならびに場
合によって末梢血からのＬＡＫ細胞は、進行がんを有する患者のｅｘ ｖｉｖｏ療法およ
びｉｎ ｖｉｖｏ治療の両方に用いられ、白血病のような骨髄関連疾患；乳がん；および
ある特定の種類のリンパ腫に対してある程度の成功を収めた。
【0006】
腫瘍細胞およびウイルス感染細胞を殺滅するというＮＫ細胞の有益な特性にもかかわら
ず、殺腫瘍機能を保持するナチュラルキラー細胞を製造し、増幅する効率的な方法を開発
することが当技術分野で依然として必要である。
ず、殺腫瘍機能を保持するナチュラルキラー細胞を製造し、増幅する効率的な方法を開発
することが当技術分野で依然として必要である。
【0007】
ＮＫ細胞は、自然リンパ球（ＩＬＣｓ）である。自然リンパ球は、その発生が転写因子
ＩＤ２に依存する点において互いに関連している。ＩＬＣ３細胞として公知である、ＩＬ
Ｃの１つの型は、ＲＯＲγｔを発現し、ＩＬ－２２を産生し、ならびにパーフォリン、グ
ランザイムおよび細胞死受容体のような細胞傷害性エフェクターを示すことなく、成体の
免疫反応に役割を果たすと文献に記載されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許
文献３）。
ＩＤ２に依存する点において互いに関連している。ＩＬＣ３細胞として公知である、ＩＬ
Ｃの１つの型は、ＲＯＲγｔを発現し、ＩＬ－２２を産生し、ならびにパーフォリン、グ
ランザイムおよび細胞死受容体のような細胞傷害性エフェクターを示すことなく、成体の
免疫反応に役割を果たすと文献に記載されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許
文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】米国仮特許出願第６２／２４２，２４６号
【特許文献2】米国仮特許出願第６２／２７２，９８４号
【特許文献3】米国仮特許出願第６２／４０３，５７１号
【特許文献4】米国特許出願公開第２０１０／０１８３５６４号
【特許文献5】米国特許出願公開第２０１４／００２３６２６号
【特許文献6】米国特許出願公開第２０１４／０１１４０７０号
【特許文献7】米国特許第７，０４５，１４８号
【特許文献8】米国特許第７，４６８，２７６号
【特許文献9】米国特許出願公開第２００９／０１０４１６４号
【特許文献10】米国出願公開第２００７／０１９００４２号
【特許文献11】米国特許第５，３７２，５８１号
【特許文献12】米国特許第５，４１５，６６５号
【特許文献13】米国特許第７，１４７，６２６号
【特許文献14】米国特許第７，２５５，８７９号
【特許文献15】米国特許出願公開第２００７０２７５３６２号（米国特許第８，０５７，７８８号として発行）
【特許文献16】米国特許出願公開第２００４／００４８７９６号
【特許文献17】米国特許第４，７９８，８２４号
【特許文献18】米国特許第５，５５２，２６７号
【特許文献19】米国特許第７，４９８，１７１号
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】モンタルド（Ｍｏｎｔａｌｄｏ）ら、２０１４、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４１：９８８－１０００
【非特許文献2】キリグ（Ｋｉｌｌｉｇ）ら、２０１４、Ｆｒｏｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５：１４２
【非特許文献3】ウィザーズ（Ｗｉｔｈｅｒｓら）、２０１２、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８９（５）：２０９４－２０９８
【非特許文献4】キム（Ｋｉｍ）ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２００６、６９、１８７１－１８７８
【非特許文献5】アリクメッツ（Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ）ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（２３）：５３３７－９（１９９８）
【非特許文献6】サウサード（Ｓｏｕｔｈａｒｄ）ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４９（２）：２５１－２５７（１９９０）
【非特許文献7】ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）ら、２００５、Ｂｌｏｏｄ １０５：３０５１－３０５７
【非特許文献8】ラブニッツ（Ｒｕｂｎｉｔｚ）ら、２０１０、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２８：９５５－９５９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
３． 概要
細胞、例えば、造血幹細胞、例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞のような、造血細胞を増幅
し、分化させて、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する
方法が本明細書で提供される。
細胞、例えば、造血幹細胞、例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞のような、造血細胞を増幅
し、分化させて、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞を製造する
方法が本明細書で提供される。
【課題を解決するための手段】
【0011】
一態様では、本明細書で述べる３つの段階を含むＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３
細胞集団を製造する方法（本明細書で「３段階法」と呼ぶ）が本明細書で提供される。本
明細書で提供する３段階法により製造されたナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ
３細胞は、「３段階法により製造されたＮＫ細胞」、「３段階法により製造されたＩＬＣ
３細胞」または「３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞」と本
明細書で呼ぶ。ある特定の実施形態では、前記方法は、１つもしくは複数のさらなるまた
は中間のステップを含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、細胞を接触させる（ま
たは培養する）第４のまたは中間のステップを含まない。
細胞集団を製造する方法（本明細書で「３段階法」と呼ぶ）が本明細書で提供される。本
明細書で提供する３段階法により製造されたナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ
３細胞は、「３段階法により製造されたＮＫ細胞」、「３段階法により製造されたＩＬＣ
３細胞」または「３段階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞」と本
明細書で呼ぶ。ある特定の実施形態では、前記方法は、１つもしくは複数のさらなるまた
は中間のステップを含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、細胞を接触させる（ま
たは培養する）第４のまたは中間のステップを含まない。
【0012】
一態様では、造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を
幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で培養して、細胞の
第１の集団を製造するステップ、その後、細胞の前記第１の集団を幹細胞動員剤およびイ
ンターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前
記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ、その後、ＩＬ－２およ
びＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）を欠いている第
３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを
含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、ナ
チュラルキラー細胞の少なくとも７０％、例えば、８０％が生存している、ＮＫ細胞を製
造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／
または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症
性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前
記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆ
ｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培
地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地ま
たは第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。ある特定の実
施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細
胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋で
あるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラ
ー細胞は、ＣＤ９４＋またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の
実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－である
ナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細
胞は、ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施
形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチ
ュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地、第２の培地および
第３の培地の少なくとも１つ、２つまたは３つすべては、ＧＢＧＭ（登録商標）培地でな
い。ある特定の実施形態では、第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカン
を欠いている。ある特定の実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカン
を欠いている。
幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で培養して、細胞の
第１の集団を製造するステップ、その後、細胞の前記第１の集団を幹細胞動員剤およびイ
ンターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前
記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ、その後、ＩＬ－２およ
びＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）を欠いている第
３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを
含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、ナ
チュラルキラー細胞の少なくとも７０％、例えば、８０％が生存している、ＮＫ細胞を製
造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／
または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症
性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前
記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆ
ｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培
地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地ま
たは第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。ある特定の実
施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細
胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋で
あるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラ
ー細胞は、ＣＤ９４＋またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の
実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－である
ナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細
胞は、ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施
形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチ
ュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地、第２の培地および
第３の培地の少なくとも１つ、２つまたは３つすべては、ＧＢＧＭ（登録商標）培地でな
い。ある特定の実施形態では、第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカン
を欠いている。ある特定の実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカン
を欠いている。
【0013】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、Ｎ
Ｋ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培
地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロフ
ァージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形
態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リ
ガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前
記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第
２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、Ｎ
Ｋ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培
地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロフ
ァージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形
態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リ
ガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前
記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第
２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0014】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0015】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａで
あるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠い
ており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａで
あるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠い
ており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0016】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
＋であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、
例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
＋であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、
例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0017】
ある特定の実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびエオメソ
デルミン（ＥＯＭＥＳ）を発現する。ある特定の実施形態では、前記ナチュラルキラー細
胞は、ＲＡＲ関連オーファン受容体ガンマ（ＲＯＲγｔ）またはインターロイキン１受容
体１（ＩＬ１Ｒ１）を発現しない。
デルミン（ＥＯＭＥＳ）を発現する。ある特定の実施形態では、前記ナチュラルキラー細
胞は、ＲＡＲ関連オーファン受容体ガンマ（ＲＯＲγｔ）またはインターロイキン１受容
体１（ＩＬ１Ｒ１）を発現しない。
【0018】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細
胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地お
よび／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファー
ジ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態で
は、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガン
ド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第
２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の
培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細
胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地お
よび／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファー
ジ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態で
は、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガン
ド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第
２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の
培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0019】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第
３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み
、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含
む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１
の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含
まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第
３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み
、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含
む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１
の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含
まない。
【0020】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培
地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞
の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、Ｉ
ＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１
の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマク
ロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実
施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ
３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地およ
び前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩ
Ｆ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地
、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない
。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培
地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞
の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、Ｉ
ＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１
の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマク
ロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実
施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ
３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地およ
び前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩ
Ｆ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地
、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない
。
【0021】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３
細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態
では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）およ
び／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている
。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チ
ロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記
第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態で
は、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパ
リンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３
細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態
では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）およ
び／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている
。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チ
ロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記
第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態で
は、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパ
リンを含まない。
【0022】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ－細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠い
ており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ－細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠い
ており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0023】
ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現す
る。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現し
ない。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグ
リカンを欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、脱硫酸化グリコサミ
ノグリカンを欠いている。
る。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現し
ない。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグ
リカンを欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、脱硫酸化グリコサミ
ノグリカンを欠いている。
【0024】
ある特定の実施形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、哺乳類細胞である。具体
的な実施形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。具体的な実施形
態では、前記造血幹脂肪または前駆細胞は、霊長類細胞である。具体的な実施形態では、
前記造血幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹
細胞または前駆細胞は、げっ歯類細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹細胞ま
たは前駆細胞は、ヒト、霊長類、イヌまたはげっ歯類以外の哺乳動物由来の細胞である。
的な実施形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。具体的な実施形
態では、前記造血幹脂肪または前駆細胞は、霊長類細胞である。具体的な実施形態では、
前記造血幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹
細胞または前駆細胞は、げっ歯類細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹細胞ま
たは前駆細胞は、ヒト、霊長類、イヌまたはげっ歯類以外の哺乳動物由来の細胞である。
【0025】
ある特定の態様では、第１の培地中で培養される造血幹細胞または前駆細胞は、ＣＤ３
４＋幹細胞または前駆細胞である。ある特定の態様では、造血幹細胞または前駆細胞は、
胎盤造血幹細胞または前駆細胞である。ある特定の態様では、胎盤造血幹細胞または前駆
細胞は、胎盤潅流液から得られる、または得ることができる（例えば、胎盤潅流液から単
離された有核細胞から得られる、または得ることができる）。ある特定の態様では、前記
造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られる、または得ることができる。ある特定
の態様では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、胎児肝臓細胞である。ある特定の態様で
は、前記造血幹細胞または前駆細胞は、動員末梢血細胞である。ある特定の態様では、前
記造血幹細胞または前駆細胞は、骨髄細胞である。
４＋幹細胞または前駆細胞である。ある特定の態様では、造血幹細胞または前駆細胞は、
胎盤造血幹細胞または前駆細胞である。ある特定の態様では、胎盤造血幹細胞または前駆
細胞は、胎盤潅流液から得られる、または得ることができる（例えば、胎盤潅流液から単
離された有核細胞から得られる、または得ることができる）。ある特定の態様では、前記
造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られる、または得ることができる。ある特定
の態様では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、胎児肝臓細胞である。ある特定の態様で
は、前記造血幹細胞または前駆細胞は、動員末梢血細胞である。ある特定の態様では、前
記造血幹細胞または前駆細胞は、骨髄細胞である。
【0026】
ある特定の態様では、３段階法に使用される前記第１の培地は、幹細胞動員剤およびト
ロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第１の培
地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３
リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニ
ー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球・マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のう
ちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地は、添加されるＬＭＷ
Ｈを含まない。ある特定の態様では、前記第１の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミ
ノグリカンを含まない。ある特定の態様では、前記第１の培地は、ＬＭＷＨを含まない。
ある特定の態様では、前記第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。あ
る特定の態様では、３段階法に使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加
えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－
ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第１の培地は、幹
細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－Ｃ
ＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前記Ｔｐｏは、１ｎｇ
／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ
／ｍＬまたは約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で第１の培地中に存在する。ある特定の態様では、
第１の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌ
は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．
０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ
／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆ
ｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ
～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳ
Ｆは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．
００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培
地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２
０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／
ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌ
ｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ
－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは
、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第
１の培地中に、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、
約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は
、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、ＧＢＧＭ（登
録商標）でない。
ロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第１の培
地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３
リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニ
ー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球・マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のう
ちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地は、添加されるＬＭＷ
Ｈを含まない。ある特定の態様では、前記第１の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミ
ノグリカンを含まない。ある特定の態様では、前記第１の培地は、ＬＭＷＨを含まない。
ある特定の態様では、前記第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。あ
る特定の態様では、３段階法に使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加
えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－
ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第１の培地は、幹
細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－Ｃ
ＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前記Ｔｐｏは、１ｎｇ
／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ
／ｍＬまたは約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で第１の培地中に存在する。ある特定の態様では、
第１の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌ
は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．
０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ
／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆ
ｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ
～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳ
Ｆは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．
００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培
地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２
０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／
ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌ
ｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ
－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは
、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第
１の培地中に、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、
約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は
、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、ＧＢＧＭ（登
録商標）でない。
【0027】
ある特定の態様では、３段階法に使用される前記第２の培地は、幹細胞動員剤およびイ
ンターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の態様では、
３段階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ
、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１
つまたは複数を含む。ある特定の態様では、第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを含まな
い。ある特定の態様では、第２の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを含
まない。ある特定の態様では、第２の培地は、ＬＭＷＨを含まない。ある特定の態様では
、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。ある特定の態様では、３段
階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆ
ｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含
む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ
－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－Ｃ
ＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の
培地中に存在する。ある特定の態様では、前記第２の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ
～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．
０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在す
る。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度
で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０
４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２
０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０
．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍ
Ｌ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、
２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～
０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２
０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０
．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎ
ｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、
ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、
約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は
、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第２の培地は、ＧＢＧＭ（登
録商標）でない。
ンターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の態様では、
３段階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ
、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１
つまたは複数を含む。ある特定の態様では、第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを含まな
い。ある特定の態様では、第２の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを含
まない。ある特定の態様では、第２の培地は、ＬＭＷＨを含まない。ある特定の態様では
、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。ある特定の態様では、３段
階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆ
ｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含
む。ある特定の態様では、３段階法に使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ
－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－Ｃ
ＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の
培地中に存在する。ある特定の態様では、前記第２の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ
～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．
０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在す
る。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度
で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０
４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２
０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０
．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍ
Ｌ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、
２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～
０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２
０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０
．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎ
ｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、
ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、
約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は
、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第２の培地は、ＧＢＧＭ（登
録商標）でない。
【0028】
ある特定の態様では、前記第１の培地、前記第２の培地または前記第１および第２の培
地に存在する幹細胞動員因子は、アリール炭化水素受容体阻害剤、例えば、アリール炭化
水素受容体アンタゴニストである。ある特定の態様では、前記アリール炭化水素受容体阻
害剤は、デスベラトロールである。ある特定の態様では、前記アリール炭化水素受容体阻
害剤は、以下の式
地に存在する幹細胞動員因子は、アリール炭化水素受容体阻害剤、例えば、アリール炭化
水素受容体アンタゴニストである。ある特定の態様では、前記アリール炭化水素受容体阻
害剤は、デスベラトロールである。ある特定の態様では、前記アリール炭化水素受容体阻
害剤は、以下の式
【0029】
【化1】
（式中、
Ｇ１は、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、ＣＨおよびＮから独立に選択され、ただし、Ｇ３およびＧ４
のうちの少なくとも１つは、Ｎであることを条件とし、ただし、Ｇ１およびＧ２は、両方
がＮであるわけではないことを条件とし、
Ｌは、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）０－３－－、－－ＮＲ５ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３）Ｃ
Ｈ２－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２ＮＲ５ｂ－－、－－ＮＲ５ａ（ＣＨ２）２Ｓ－－、
－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－、－－ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）－－お
よび－－ＮＲ５ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－－から選択され、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素
およびＣ１－４アルキルから独立に選択され、
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェニル、フラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソ
キノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピ
ラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル
、１Ｈ－ピロリルおよびチアゾリルから選択され、Ｒ１の前記フェニル、チオフェニル、
フラニル、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ－イミダゾピリジニル、ベ
ンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ－ピラゾリル、ピリジニル、１Ｈ－イミダゾリル
、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ－ピロリルまたはチアゾリルは、シア
ノ、ヒドロキシ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１－４アル
キル、ハロ置換Ｃ１－４アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、－－Ｃ（Ｏ）Ｒ８ａ、－－Ｓ
（Ｏ）０－２Ｒ８ａ、－－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８ａ および－－Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂから独
立に選択される１～３個の基により任意選択で置換することができ、Ｒ８ａおよびＲ８ｂ
は、水素およびＣ１－４アルキルから独立に選択され、ただし、Ｒ１およびＲ３は、両方
が水素であるわけではないことを条件とし、
Ｒ２は、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ６ａＲ６ｂ、－－ＮＲ９ａＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、－－ＮＲ６ａ
Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３－イル、１Ｈ－インドリ
ル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル、２－オキソイミダゾ
リジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾリ
ルおよび１Ｈ－インダゾリルから選択され、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素および
Ｃ１－４アルキルから独立に選択され、Ｒ２の前記フェニル、１Ｈ－ピロロピリジン－３
－イル、１Ｈ－インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ－１，２，４－トリアゾリ
ル、２－オキソイミダゾリジニル、１Ｈ－ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－
１Ｈ－ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ－インダゾリルは、ヒドロキシ、ハロ、メチル、メ
トキシ、アミノ、－－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ７ａＲ７ｂ、－－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂ、
－－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび－－ＮＲ７ａＳ（Ｏ）２Ｒ７ｂから独立に選択さ
れる１～３個の基で任意選択で置換され、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１－４ア
ルキルから独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１－４アルキルおよびビフェニルから選択され、
Ｒ４は、Ｃ１－１０アルキル、プロパ－１－エン－２－イル、シクロヘキシル、シクロ
プロピル、２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、ベ
ンズヒドリル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－
４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニ
ル）（フェニル）メチルおよび１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３
－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチ
ルから選択され、前記アルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、２－（２－オキソピ
ロリジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、オキセタン－２－イル、ベンズヒ
ドリル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イ
ル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル
、テトラヒドロフラン－２－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニル）（フェニル）メ
チルまたは１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３－アザテトラデカン
－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エチルは、ヒドロキシ、
Ｃ１－４アルキルおよびハロ置換Ｃ１－４アルキルから独立に選択される１～３個の基で
任意選択で置換することができる）またはその塩である。
【0030】
ある特定の態様では、前記アリール炭化水素受容体阻害剤は、ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ
－１（ＳＲ－１）（４－（２－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソ
プロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル）フェノール）である。ある特定の態
様では、前記アリール炭化水素受容体阻害剤は、化合物ＣＨ２２３１９１（１－メチル－
Ｎ－［２－メチル－４－［２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル］フェニル－１Ｈ－ピ
ラゾール－５－カルボキサミド］である。
－１（ＳＲ－１）（４－（２－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソ
プロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル）フェノール）である。ある特定の態
様では、前記アリール炭化水素受容体阻害剤は、化合物ＣＨ２２３１９１（１－メチル－
Ｎ－［２－メチル－４－［２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル］フェニル－１Ｈ－ピ
ラゾール－５－カルボキサミド］である。
【0031】
ある特定の態様では、前記第１の培地、前記第２の培地または前記第１および第２の培
地に存在する幹細胞動員因子は、ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体である。ある
特定の態様では、前記ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体は、
地に存在する幹細胞動員因子は、ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体である。ある
特定の態様では、前記ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体は、
【0032】
【化2】
またはその塩もしくはプロドラッグであり、式中、
Ｚは、
１）－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
３）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
５）－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
６）－ＣＮ、
７）－ＳＲ、
８）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
９）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１２）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１３）－Ｌ、
１４）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換され
ている－ベンジル、
１５）Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数の
Ｒ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール、
１６）Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数の
Ｒ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル、
１７）Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数の
Ｒ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、
窒素原子と一緒になって、１つまたは複数のＲ＜１＞またはＲ＜Ａ＞で任意選択で置換さ
れている、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意選択
で含む３～７員環を形成しており、
Ｗは、
１）－Ｈ、
２）－ハロゲン、
３）－ＯＲ＜１＞、
４）－Ｌ－ＯＨ、
５）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
６）－ＳＲ＜１＞、
７）－ＣＮ、
８）－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞）、
９）－ＮＨＲ＜１＞、
１０）－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１１）－Ｌ－ＮＨ２、
１２）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１３）－Ｌ－Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
１４）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１５）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
１６）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
１７）－Ｌ－Ｐ（０）（ＯＲ＜１＞）（ＯＲ＜１＞
１８）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
１９）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２０）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２２）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２３）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、－ＮＨＣ（０）０Ｒ＜１＞、
－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）ＮＨ２、
－０Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－０Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
－ＮＲＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２ＮＨ２、
－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
－０Ｓ（０）２Ｒ１、
－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ベンジル、
Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もし
くはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
－Ｌ－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－Ｌ－）２ＮＲ＜１＞、
－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかも
しくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で
置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ
－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もし
くはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリ
ール、
－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もし
くはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－アリール、
－Ｏ－Ｌ）２－ＮＲ＜１＞、
－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ ）Ｒ＜１＞、
Ｌおよびヘテロアリール基いずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞
もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）
ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ
＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ
）ｎ－ヘテロシクリル、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｏ－
Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－
Ｌ－ヘテロシクリル、
Ｌおよびアリール基のいずれかもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もし
くはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－アリール、
－Ｓ－Ｌ）２ＮＲ１、
－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）’’－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１
＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換さ
れている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリー
ル、
－ＮＲ＜１＞（Ｒ＜１＞）、
－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
－Ｎ（Ｒ１）Ｌ）２－ＮＲ１、７６）－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）”－Ｎ（Ｒ１）ＲＡ、
７７）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
７８）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
７９）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－（Ｎ（Ｒ＜１＞）－Ｌ）ｎ－アリール、
８０）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－ヘテロアリール
、または
８１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞置換基で任意選択で置換されている－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合には、Ｌ基に任意選択で結合してお
り、２つのＲ＜１＞置換基が同じ窒素原子上に存在する場合、各Ｒ＜１＞置換基は、後に
述べるＲ＜１＞の値のリストから独立に選択され、
ｎは、０、１、２、３、４または５に等しい整数であり、
（Ｒ＜１＞）およびＲ＜１＞が窒素原子に結合している場合、任意選択でそれらは、窒素
原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を
任意選択で含む３～７員環を形成しており、任意選択で環は、１つまたは複数のＲ＜１＞
またはＲ＜Ａ＞で置換されており、
Ｌは、
１）－Ｃｉ～６アルキル、
２）－Ｃ２～６アルケニル、
３）－Ｃ２～６アルキニル、
４）－Ｃ３～７シクロアルキル、
５）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
６）ヘテロシクリル、
７）－Ｃｉ～６アルキル－Ｃ３～７シクロアルキル、
８）－Ｃｉ～６アルキル－ヘテロシクリル、
９）アリール、または
１０）ヘテロアリール
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテ
ロシクリル、アリールおよびヘテロアリール基は、１つもしくは２つのＲ＜Ａ＞置換基で
それぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒｉは、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－Ｃ２～６アルケニル、
４）－Ｃ２～６アルキニル、５）－Ｃ３～７シクロアルキル、
６）－Ｃ３～７シクロアルケニル、
７）－Ｃ１～５過フッ化、
８）－ヘテロシジル、
９）－アリール、
１０）－ヘテロアリール、
１１）－ベンジル、または
１２）５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，
４－ｄ］イミダゾール－４－イル］ペンタノイル
であり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキ
ル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、１つ、２つまたは
３つのＲ＜Ａ＞またはＲ＜１＞置換基でそれぞれ独立に任意選択で置換されており、
Ｒ２は、
１）－Ｈ、
２）－Ｃ１～６アルキル、
３）－ＳＲ、
４）－Ｃ（０）Ｒ１、
５）－Ｓ（０）Ｒ１、
６）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
７）１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されて
いる－ベンジル、
８）Ｌおよびヘテロアリール基のいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは複数
のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリール、
９）Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは複数
のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリル、
１０）Ｌおよびアリール基のいずれか１つもしくは両方に結合する１つもしくは複数のＲ
＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている－Ｌ－アリール、
１１）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－ヘテロアリール、または
１２）１つもしくは複数のＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任意選択で置換されている
－アリール
であり、各置換基は、それが既に存在していない場合にはＬ基に任意選択で結合されてお
り、
Ｒ＜Ａ＞は、
１）－ハロゲン、
２）－ＣＦｓ、３）－ＯＨ、
４）－ＯＲ＜１＞、
５）－Ｌ－ＯＨ、
６）－Ｌ－ＯＲ＜１＞、
７）－ＯＣＦｓ、
８）－ＳＨ、
９）－ＳＲ１、
１０）－ＣＮ、
１１）－ＮＯ２、
１２）－ＮＨ２、
１３）－ＮＨＲ＜１＞、
１４）－ＮＲ＜１＞Ｒ＜１＞、
１５）－Ｌ－ＮＨ２、
１６）－Ｌ－ＮＨＲ＜１＞、
１７）－Ｌ－ＮＲ＜４＞Ｒ＜１＞、
１８）－Ｌ－ＳＲ＜１＞、
１９）－Ｌ－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
２０）－Ｌ－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
２１）－Ｃ（０）ＯＨ、
２２）－Ｃ（０）ＯＲ＜１＞、
２３）－Ｃ（０）ＮＨ２、
２４）－Ｃ（０）ＮＨＲ＜１＞、
２５）－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ＜１＞）Ｒ＜１＞、
２６）－ＮＨＣ（０）Ｒ＜１＞、
２７）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｒ＜１＞、
２８）－ＮＨＣ（０）ＯＲ＜１＞、
２９）－ＮＲ１Ｃ（０）０Ｒ＜１＞、
３０）－ＯＣ（０）ＮＨ２、
３１）－ＯＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
３２）－ＯＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３３）－ＯＣ（０）Ｒ＜１＞、
３４）－Ｃ（０）Ｒ１、３５）－ＮＨＣ（０）ＮＨ２、
３６）－ＮＨＣ（０）ＮＨＲ１、
３７）－ＮＨＣ（０）Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
３８）－ＮＲＣ（０）ＮＨ２、
３９）－ＮＲＣ（０）ＮＨＲ＜１＞、
４０）－ＮＲ１Ｃ（０）Ｎ（Ｒ１）Ｒ１、
４１）－ＮＨＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４２）－ＮＲＳ（０）２Ｒ＜１＞、
４３）－Ｓ（０）２ＮＨ２、
４４）－Ｓ（０）２ＮＨＲ＜１＞、
４５）－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）Ｒ＜１＞、
４６）－Ｓ（０）Ｒ＜１＞、
４７）－Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４８）－０Ｓ（０）２Ｒ＜１＞、
４９）－Ｓ（０）２０Ｒ＜１＞、
５０）－ベンジル、
５１）－Ｎ３、または
５２）－Ｃ（－Ｎ＝Ｎ－）（ＣＦ３）
であり、ベンジル基は、１つ、２つもしくは３つのＲ＜Ａ＞もしくはＲ＜１＞置換基で任
意選択で置換されている。
【0033】
ある特定の態様では、前記ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体は、以下の化学構
造
造
【0034】
【化3】
【0035】
ある特定の態様では、前記ピリミド（４，５－ｂ）インドール誘導体は、以下の化学構
造
造
【0036】
【化4】
【0037】
ある特定の態様では、３段階法に使用される前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－
１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法
に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、Ｉ
Ｌ－７、Ｇ－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様
では、３段階法に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ
、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態
様では、前記ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地
中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地
中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ
／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、３
００Ｕ／ｍＬ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５
は、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の
態様では、前記ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、
前記ＩＬ－１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の
態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、
１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０
．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、２０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－Ｃ
ＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様で
は、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約
０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ
－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍ
Ｌの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標
）でない。
１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法
に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、Ｉ
Ｌ－７、Ｇ－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様
では、３段階法に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ
、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態
様では、前記ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地
中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地
中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ
／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、３
００Ｕ／ｍＬ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５
は、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の
態様では、前記ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、
前記ＩＬ－１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の
態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、
１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０
．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、２０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－Ｃ
ＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様で
は、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約
０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ
－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍ
Ｌの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標
）でない。
【0038】
ある特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１０００ｎｇ／ｍ
Ｌ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠
いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１０００ｎ
ｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣ
Ｆを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２０
ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠いている。ある特定
の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１
０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いて
いる。ある特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍ
Ｌ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いている。ある特定
の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１０
００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いてい
る。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ
ＳＣＦおよび１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を含み、ＳＲ１を欠いている。
Ｌ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠
いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１０００ｎ
ｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣ
Ｆを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２０
ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠いている。ある特定
の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１
０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いて
いる。ある特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍ
Ｌ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いている。ある特定
の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１０
００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いてい
る。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ
ＳＣＦおよび１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を含み、ＳＲ１を欠いている。
【0039】
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠き、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特
定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば
、低分子量ヘパリンを含まない。
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠き、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特
定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば
、低分子量ヘパリンを含まない。
【0040】
一般的に、特定する形で列挙する培地成分は、前記培地の組成不明の成分中の、例えば
、血清中の可能な成分を指すものでない。例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１
５は、第１の培地、第２の培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例え
ば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５は、血清中に含まれない。さらに、前記ＬＭ
ＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳ
Ｆは、第１の培地、第２の培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例え
ば、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／また
はＧＭ－ＣＳＦは、血清中に含まれない。
、血清中の可能な成分を指すものでない。例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１
５は、第１の培地、第２の培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例え
ば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５は、血清中に含まれない。さらに、前記ＬＭ
ＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳ
Ｆは、第１の培地、第２の培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例え
ば、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／また
はＧＭ－ＣＳＦは、血清中に含まれない。
【0041】
ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地は、ヒト血清ＡＢ
を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のいずれも
、１％～２０％のヒト血清ＡＢ、５％～１５％のヒト血清ＡＢまたは約２、５もしくは１
０％のヒト血清ＡＢを含む。
を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のいずれも
、１％～２０％のヒト血清ＡＢ、５％～１５％のヒト血清ＡＢまたは約２、５もしくは１
０％のヒト血清ＡＢを含む。
【0042】
ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のいずれも、２－
メルカプトエタノールを含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または
第３の培地のいずれも、ゲンタマイシンを含む。
メルカプトエタノールを含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または
第３の培地のいずれも、ゲンタマイシンを含む。
【0043】
本明細書で述べる３段階法における、ある特定の実施形態では、前記造血幹細胞または
前駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２
０日間にわたり前記第１の培地中で培養する。ある特定の実施形態では、細胞を、前記第
３の培地中で前記培養するステップの前に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間にわたり前記
第２の培地中で培養する。ある特定の実施形態では、細胞を、１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２
１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０日間または３０日を
超える期間にわたり前記第３の培地中で培養する。
前駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２
０日間にわたり前記第１の培地中で培養する。ある特定の実施形態では、細胞を、前記第
３の培地中で前記培養するステップの前に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間にわたり前記
第２の培地中で培養する。ある特定の実施形態では、細胞を、１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２
１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０日間または３０日を
超える期間にわたり前記第３の培地中で培養する。
【0044】
本明細書で述べる３段階法における、一実施形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞
を前記第１の培地中で７～１３日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記第
１の集団を前記第２の培地中で２～６日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の
前記第２の集団を前記第３の培地中で１０～３０日間培養する、すなわち、細胞を合計１
９～４９日間培養する。
を前記第１の培地中で７～１３日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記第
１の集団を前記第２の培地中で２～６日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の
前記第２の集団を前記第３の培地中で１０～３０日間培養する、すなわち、細胞を合計１
９～４９日間培養する。
【0045】
本明細書で述べる３段階法における、一実施形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞
を前記第１の培地中で８～１２日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記第
１の集団を前記第２の培地中で３～５日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の
前記第２の集団を前記第３の培地中で１５～２５日間培養する、すなわち、細胞を合計２
６～４２日間培養する。
を前記第１の培地中で８～１２日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記第
１の集団を前記第２の培地中で３～５日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の
前記第２の集団を前記第３の培地中で１５～２５日間培養する、すなわち、細胞を合計２
６～４２日間培養する。
【0046】
本明細書で述べる３段階法における、具体的な実施形態では、前記造血幹細胞または前
駆細胞を前記第１の培地中で１０日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記
第１の集団を前記第２の培地中で４日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の前
記第２の集団を前記第３の培地中で２１日間培養する、すなわち、細胞を合計３５日間培
養する。
駆細胞を前記第１の培地中で１０日間培養して、細胞の第１の集団を製造し、細胞の前記
第１の集団を前記第２の培地中で４日間培養して、細胞の第２の集団を製造し、細胞の前
記第２の集団を前記第３の培地中で２１日間培養する、すなわち、細胞を合計３５日間培
養する。
【0047】
ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地および第３の培地中で前記培養する
ステップは、すべて静的培養条件下で、例えば、培養皿または培養フラスコ中で行われる
。特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のうちの少なくとも１
つで前記培養するステップは、スピナーフラスコ中で行われる。ある特定の態様では、前
記第１の培地および前記第２の培地中で前記培養するステップは、静的培養条件下で行わ
れ、前記第３の培地中で前記培養するステップは、スピナーフラスコ中で行われる。
ステップは、すべて静的培養条件下で、例えば、培養皿または培養フラスコ中で行われる
。特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のうちの少なくとも１
つで前記培養するステップは、スピナーフラスコ中で行われる。ある特定の態様では、前
記第１の培地および前記第２の培地中で前記培養するステップは、静的培養条件下で行わ
れ、前記第３の培地中で前記培養するステップは、スピナーフラスコ中で行われる。
【0048】
ある特定の態様では、前記培養するステップは、スピナーフラスコ中で行われる。他の
態様では、前記培養するステップは、Ｇ－Ｒｅｘデバイスで行われる。さらに他の態様で
は、前記培養するステップは、ＷＡＶＥバイオリアクター中で行われる。
態様では、前記培養するステップは、Ｇ－Ｒｅｘデバイスで行われる。さらに他の態様で
は、前記培養するステップは、ＷＡＶＥバイオリアクター中で行われる。
【0049】
ある特定の態様では、前記造血幹細胞または前駆細を１×１０４～１×１０５細胞／ｍ
Ｌで前記第１の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、前記造血幹細胞または前駆
細を３×１０４細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接種する。
Ｌで前記第１の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、前記造血幹細胞または前駆
細を３×１０４細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接種する。
【0050】
ある特定の態様では、細胞の前記第１の集団を５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで前
記第２の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第１の集団を１×１０
５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種する。
記第２の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第１の集団を１×１０
５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種する。
【0051】
ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで前
記第３の培地中に最初に接種する。ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１
０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、
細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。
より具体的な態様では、細胞の前記第２の集団をスピナーフラスコ中で約５×１０５細胞
／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第２の集団
を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。より具体的な態様では
、細胞の前記第２の集団を静的培養で約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初
に接種する。
記第３の培地中に最初に接種する。ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１
０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、
細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。
より具体的な態様では、細胞の前記第２の集団をスピナーフラスコ中で約５×１０５細胞
／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第２の集団
を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。より具体的な態様では
、細胞の前記第２の集団を静的培養で約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初
に接種する。
【0052】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造
する。ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血
幹細胞の数と比較して少なくとも１０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。
ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞
の数と比較して少なくとも５０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と
比較して少なくとも７５，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態
様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ
）染色により決定する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率をアネ
キシンＶ染色により決定する。具体的な態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を
７ＡＡＤ染色およびアネキシンＶ染色の両方により決定する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞の生存率をトリパンブルー染色により決定する。
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造
する。ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血
幹細胞の数と比較して少なくとも１０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。
ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞
の数と比較して少なくとも５０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と
比較して少なくとも７５，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態
様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ
）染色により決定する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率をアネ
キシンＶ染色により決定する。具体的な態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を
７ＡＡＤ染色およびアネキシンＶ染色の両方により決定する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞の生存率をトリパンブルー染色により決定する。
【0053】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。あ
る特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の
数と比較して少なくとも１０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様で
は、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少
なくとも５０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、前記３段階
法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少なくとも７５，
０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。あ
る特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の
数と比較して少なくとも１０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様で
は、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少
なくとも５０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、前記３段階
法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少なくとも７５，
０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。
【0054】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋
ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様
では、３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む
ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも６０％
のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、３段階法は、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少な
くとも７５％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナ
チュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様
では、３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む
ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも６０％
のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、３段階法は、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少な
くとも７５％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナ
チュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
【0055】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ
３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－
ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ
３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－
ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
【0056】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では
、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－
ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する
３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩ
ＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくと
も８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では
、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－
ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する
３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩ
ＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくと
も８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。
【0057】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞およ
びＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞
に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の
比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の
細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、
前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培
養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示すナチュラル
キラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞お
よびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細
胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある
特定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１
の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％
の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。
びＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞
に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の
比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の
細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、
前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培
養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示すナチュラル
キラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞お
よびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細
胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。ある
特定の態様では、３段階法は、前記ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１
の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％
の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を製造する。
【0058】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６
２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して
少なくとも２０％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３
段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共
培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３
細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細
胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少な
くとも４５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階
法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養
した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞
を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を
１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくと
も７５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。
２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して
少なくとも２０％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３
段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共
培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３
細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細
胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少な
くとも４５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階
法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養
した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞
を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、前記ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を
１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した場合に前記Ｋ５６２細胞に対して少なくと
も７５％の細胞傷害性を示すＩＬＣ３細胞を製造する。
【0059】
ある特定の態様では、前記第３の培養するステップの後に、細胞の前記第３の集団、例
えば、ナチュラルキラー細胞の前記集団を凍結保存する。ある特定の態様では、前記第４
の培養するステップの後に、細胞の前記第４の集団、例えば、ナチュラルキラー細胞の前
記集団を凍結保存する。
えば、ナチュラルキラー細胞の前記集団を凍結保存する。ある特定の態様では、前記第４
の培養するステップの後に、細胞の前記第４の集団、例えば、ナチュラルキラー細胞の前
記集団を凍結保存する。
【0060】
ある特定の態様では、ナチュラルキラー細胞、すなわち、本明細書で述べた３段階法に
より製造されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。したが
って、本明細書で述べた３段階法により製造された単離ナチュラルキラー細胞集団が本明
細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくと
も２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前
記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６
０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナ
チュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細
胞を含む。具体的な実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用
に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
より製造されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。したが
って、本明細書で述べた３段階法により製造された単離ナチュラルキラー細胞集団が本明
細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくと
も２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前
記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６
０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナ
チュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細
胞を含む。具体的な実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用
に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
【0061】
ある特定の態様では、ＩＬＣ３細胞、すなわち、本明細書で述べた３段階法により製造
されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。具体的な実施形
態では、ＩＬＣ３細胞を含む細胞の集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉ
ｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。具体的な実施形
態では、ＩＬＣ３細胞を含む細胞の集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉ
ｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
【0062】
一実施形態では、単離ＮＫ前駆細胞集団が本明細書で提供され、前記ＮＫ前駆細胞は、
本明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、ＮＫ前駆細胞集団
をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬
組成物に製剤化する。
本明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、ＮＫ前駆細胞集団
をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬
組成物に製剤化する。
【0063】
別の実施形態では、単離成熟ＮＫ細胞集団が本明細書で提供され、前記成熟ＮＫ細胞は
、本明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、成熟ＮＫ細胞集
団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医
薬組成物に製剤化する。
、本明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、成熟ＮＫ細胞集
団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医
薬組成物に製剤化する。
【0064】
別の実施形態では、単離ＩＬＣ３集団が本明細書で提供され、前記ＩＬＣ３細胞は、本
明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、単離ＩＬＣ３集団を
ｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組
成物に製剤化する。
明細書で述べた３段階法により製造される。具体的な実施形態では、単離ＩＬＣ３集団を
ｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組
成物に製剤化する。
【0065】
別の実施形態では、細胞集団が本明細書で提供され、前記細胞集団は、本明細書で述べ
た方法により製造される細胞の第３の集団である。別の実施形態では、細胞集団が本明細
書で提供され、前記細胞集団は、本明細書で述べた方法により製造される細胞の第４の集
団である。
た方法により製造される細胞の第３の集団である。別の実施形態では、細胞集団が本明細
書で提供され、前記細胞集団は、本明細書で述べた方法により製造される細胞の第４の集
団である。
【0066】
別の実施形態では、単離ＮＫ細胞集団が本明細書で提供され、前記ＮＫ細胞は、活性化
されており、前記活性化ＮＫ細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される。具体
的な実施形態では、単離ＮＫ集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖ
ｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
されており、前記活性化ＮＫ細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される。具体
的な実施形態では、単離ＮＫ集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用に適する、例えば、ｉｎ ｖ
ｉｖｏでのヒト使用に適する医薬組成物に製剤化する。
【0067】
したがって、別の態様では、腫瘍細胞の増殖を抑制するための、ウイルス感染を治療す
るための、またはがん、例えば、血液がんおよび充実性腫瘍を治療するための本明細書で
述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団の使用が本明細書で提供される。ある
特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調
節化合物またはサリドマイドと接触させるか、または組み合わせて使用する。ある特定の
実施形態では、ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調節化合
物またはサリドマイドで処理するか、またはそれと組み合わせて使用する。
るための、またはがん、例えば、血液がんおよび充実性腫瘍を治療するための本明細書で
述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団の使用が本明細書で提供される。ある
特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調
節化合物またはサリドマイドと接触させるか、または組み合わせて使用する。ある特定の
実施形態では、ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調節化合
物またはサリドマイドで処理するか、またはそれと組み合わせて使用する。
【0068】
具体的な実施形態では、前記がんは、充実性腫瘍である。別の実施形態では、前記がん
は、血液がんである。具体的な実施形態では、がんは、膠芽腫、原発性乳管癌、白血病、
急性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性
骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肺癌、結腸腺癌、組織球性リンパ腫、結腸直腸癌、結腸直腸腺
癌、前立腺がん、多発性骨髄腫または網膜芽腫である。より具体的な実施形態では、がん
は、ＡＭＬである。より具体的な実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
は、血液がんである。具体的な実施形態では、がんは、膠芽腫、原発性乳管癌、白血病、
急性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性
骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肺癌、結腸腺癌、組織球性リンパ腫、結腸直腸癌、結腸直腸腺
癌、前立腺がん、多発性骨髄腫または網膜芽腫である。より具体的な実施形態では、がん
は、ＡＭＬである。より具体的な実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
【0069】
別の具体的な実施形態では、ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例えば、造血幹細
胞または前駆細胞は、胎盤潅流液、臍帯血または末梢血から得られる。一実施形態では、
ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤から
、例えば、胎盤潅流液から得られる。一実施形態では、ＮＫ細胞集団が製造される、造血
細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、
ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、末梢血か
ら得られない。別の具体的な実施形態では、ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例え
ば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤潅流液および臍帯血、例えば、潅流液と同じ胎盤
由来の臍帯血に由来する混合細胞である。別の具体的な実施形態では、前記臍帯血は、前
記胎盤潅流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離する。ある特定の実施形態では、混合細
胞は、臍帯血および胎盤潅流液をプールすることまたは合わせることにより得ることがで
きる。ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１００：１、９５：５、９０
：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、
５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７
５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１
、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１
、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１
、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：
３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：
７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の容量比で合
わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～
１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の比で合わせる。別の具体的な実施形態
では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５ま
たは１：１０の比で合わせる。より具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を８
．５：１．５（８５％：１５％）の比で合わせる。
胞または前駆細胞は、胎盤潅流液、臍帯血または末梢血から得られる。一実施形態では、
ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤から
、例えば、胎盤潅流液から得られる。一実施形態では、ＮＫ細胞集団が製造される、造血
細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、
ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、末梢血か
ら得られない。別の具体的な実施形態では、ＮＫ細胞集団が製造される、造血細胞、例え
ば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤潅流液および臍帯血、例えば、潅流液と同じ胎盤
由来の臍帯血に由来する混合細胞である。別の具体的な実施形態では、前記臍帯血は、前
記胎盤潅流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離する。ある特定の実施形態では、混合細
胞は、臍帯血および胎盤潅流液をプールすることまたは合わせることにより得ることがで
きる。ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１００：１、９５：５、９０
：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、
５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７
５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１
、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１
、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１
、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：
３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：
７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の容量比で合
わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～
１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の比で合わせる。別の具体的な実施形態
では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５ま
たは１：１０の比で合わせる。より具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を８
．５：１．５（８５％：１５％）の比で合わせる。
【0070】
ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を、総有核細胞（ＴＮＣ）含量によ
り決定される、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２
５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０
：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、
５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１
、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１
、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：
１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：
５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：
９５、１：１００、または同様の比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では
、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３
の比で合わせる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：
１、３：１、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。
り決定される、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２
５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０
：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、
５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１
、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１
、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：
１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：
５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：
９５、１：１００、または同様の比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では
、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３
の比で合わせる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：
１、３：１、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。
【0071】
一実施形態では、したがって、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ
細胞集団の有効量の細胞を個体に投与するステップを含む、がんまたはウイルス感染を有
する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、がんは
、充実性腫瘍である。ある特定の実施形態では、がんは、血液がんである。具体的な実施
形態では、血液がんは、白血病である。別の具体的な実施形態では、血液がんは、リンパ
腫である。別の具体的な実施形態では、血液がんは、急性骨髄性白血病である。別の具体
的な実施形態では、血液がんは、慢性リンパ球性白血病である。別の具体的な実施形態で
は、血液がんは、慢性骨髄性白血病である。ある特定の態様では、前記接触させるステッ
プまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラー細胞が凍結保存されている。
他の態様では、前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラ
ルキラー細胞が凍結保存されていない。
細胞集団の有効量の細胞を個体に投与するステップを含む、がんまたはウイルス感染を有
する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、がんは
、充実性腫瘍である。ある特定の実施形態では、がんは、血液がんである。具体的な実施
形態では、血液がんは、白血病である。別の具体的な実施形態では、血液がんは、リンパ
腫である。別の具体的な実施形態では、血液がんは、急性骨髄性白血病である。別の具体
的な実施形態では、血液がんは、慢性リンパ球性白血病である。別の具体的な実施形態で
は、血液がんは、慢性骨髄性白血病である。ある特定の態様では、前記接触させるステッ
プまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラルキラー細胞が凍結保存されている。
他の態様では、前記接触させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ナチュラ
ルキラー細胞が凍結保存されていない。
【0072】
具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞集団は
、前記投与するステップの前に、免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調節化
合物またはサリドマイドで処理した。具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法
を使用して製造したＮＫ細胞集団は、前記投与するステップの前に、ＩＬ２およびＩＬ１
２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩ
Ｌ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８で処
理した。別の具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離
ＮＫ細胞集団は、前記投与するステップの前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１
５のうちの１つまたは複数で前処理した。別の具体的な実施形態では、方法は、（１）本
明細書で述べた３段階法を使用して製造した、有効量の単離ＮＫ細胞集団；および（２）
有効量の免疫調節化合物またはサリドマイドを個体に投与するステップを含む。この文脈
における「有効量」は、ＮＫ細胞集団および、任意選択で、免疫調節化合物またはサリド
マイドを投与しなかった前記がんまたは前記感染を有する個体と比較して、前記がんまた
は前記感染の１つもしくは複数の症状の検出可能な改善をもたらす、前記ＮＫ細胞集団に
おける細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドの量を意味する。具体
的な実施形態では、前記免疫調節化合物は、レナリドミドまたはポマリドミドである。別
の実施形態では、方法は、抗がん化合物、例えば、下記の抗がん化合物のうちの１つまた
は複数を個体に投与するステップをさらに含む。
、前記投与するステップの前に、免疫調節化合物、例えば、本明細書で述べる免疫調節化
合物またはサリドマイドで処理した。具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法
を使用して製造したＮＫ細胞集団は、前記投与するステップの前に、ＩＬ２およびＩＬ１
２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩ
Ｌ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８で処
理した。別の具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離
ＮＫ細胞集団は、前記投与するステップの前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１
５のうちの１つまたは複数で前処理した。別の具体的な実施形態では、方法は、（１）本
明細書で述べた３段階法を使用して製造した、有効量の単離ＮＫ細胞集団；および（２）
有効量の免疫調節化合物またはサリドマイドを個体に投与するステップを含む。この文脈
における「有効量」は、ＮＫ細胞集団および、任意選択で、免疫調節化合物またはサリド
マイドを投与しなかった前記がんまたは前記感染を有する個体と比較して、前記がんまた
は前記感染の１つもしくは複数の症状の検出可能な改善をもたらす、前記ＮＫ細胞集団に
おける細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドの量を意味する。具体
的な実施形態では、前記免疫調節化合物は、レナリドミドまたはポマリドミドである。別
の実施形態では、方法は、抗がん化合物、例えば、下記の抗がん化合物のうちの１つまた
は複数を個体に投与するステップをさらに含む。
【0073】
別の実施形態では、治療有効量のＮＫ細胞集団を腫瘍細胞と近接させるステップ、例え
ば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞の増殖を
抑制する方法が本明細書で提供される。以後、特に示さない限り、「近接」という用語は
、所望の結果を生じさせるのに十分に近いことを意味するものであり、例えば、ある特定
の実施形態では、近接という用語は、接触を意味する。ある特定の実施形態では、前記接
触させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ある特定の実施形態では、前記接触さ
せるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。他の実施形態では、前記接触させるステップ
がｉｎ ｖｉｖｏで行われる。治療有効量のＮＫ細胞集団を腫瘍細胞と近接させるステッ
プ、例えば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞
の増殖を抑制する方法に複数のＮＫ細胞を使用することができる。ある特定の実施形態で
は、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実
施形態では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、
慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸
腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細
胞である。
ば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞の増殖を
抑制する方法が本明細書で提供される。以後、特に示さない限り、「近接」という用語は
、所望の結果を生じさせるのに十分に近いことを意味するものであり、例えば、ある特定
の実施形態では、近接という用語は、接触を意味する。ある特定の実施形態では、前記接
触させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ある特定の実施形態では、前記接触さ
せるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。他の実施形態では、前記接触させるステップ
がｉｎ ｖｉｖｏで行われる。治療有効量のＮＫ細胞集団を腫瘍細胞と近接させるステッ
プ、例えば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞
の増殖を抑制する方法に複数のＮＫ細胞を使用することができる。ある特定の実施形態で
は、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実
施形態では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、
慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸
腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細
胞である。
【0074】
一実施形態では、腫瘍細胞を複数のナチュラルキラー細胞と接触させるステップを含み
、ナチュラルキラー細胞が本明細書で述べた方法により製造される、腫瘍細胞の増殖を抑
制する方法に使用する複数のナチュラルキラー細胞が本明細書で提供される。ある特定の
実施形態では、前記接触させるステップがヒト個体において行われる。ある特定の実施形
態では、前記方法は、前記ナチュラルキラー細胞を前記個体に投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞である。ある特定の実施形
態では、前記腫瘍細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。ある特定の実施形態
では、前記個体は、再発性／難治性ＡＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体
は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功しなかったＡ
ＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期に
ある。ある特定の実施形態では、前記個体は、前記ＮＫ細胞を投与する前にフルダラビン
、シタラビンまたは両方でコンディショニングされている。ある特定の実施形態では、前
記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実施形態
では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨
髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細
胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞であ
る。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍
細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞または多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。ある特定
の実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ
１３８抗体または抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。ある特定の実施形態では、前記接触
させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ＮＫ細胞が凍結保存されているか
、または凍結保存されていない。
、ナチュラルキラー細胞が本明細書で述べた方法により製造される、腫瘍細胞の増殖を抑
制する方法に使用する複数のナチュラルキラー細胞が本明細書で提供される。ある特定の
実施形態では、前記接触させるステップがヒト個体において行われる。ある特定の実施形
態では、前記方法は、前記ナチュラルキラー細胞を前記個体に投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞である。ある特定の実施形
態では、前記腫瘍細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。ある特定の実施形態
では、前記個体は、再発性／難治性ＡＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体
は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功しなかったＡ
ＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期に
ある。ある特定の実施形態では、前記個体は、前記ＮＫ細胞を投与する前にフルダラビン
、シタラビンまたは両方でコンディショニングされている。ある特定の実施形態では、前
記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実施形態
では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨
髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細
胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞であ
る。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍
細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞または多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。ある特定
の実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ
１３８抗体または抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。ある特定の実施形態では、前記接触
させるステップまたは前記投与するステップの前に前記ＮＫ細胞が凍結保存されているか
、または凍結保存されていない。
【0075】
ＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。具体
的な実施形態では、投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投
与または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団または
その医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いて実施する。具体的
な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射によ
る。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は
、カテーテルによる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞の注射は、局所注射である。より
具体的な実施形態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射であ
る。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は
、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団または
その医薬組成物の投与は、誘導送達による。具体的な実施形態では、注射による対象への
ＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、
コンピュータ断層撮影、磁気共鳴または放射線学により補助される。
的な実施形態では、投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投
与または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団または
その医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いて実施する。具体的
な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射によ
る。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は
、カテーテルによる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞の注射は、局所注射である。より
具体的な実施形態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射であ
る。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は
、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞の単離集団または
その医薬組成物の投与は、誘導送達による。具体的な実施形態では、注射による対象への
ＮＫ細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、
コンピュータ断層撮影、磁気共鳴または放射線学により補助される。
【0076】
具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるステップの前に、本
明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば
、本明細書で、以下で述べる免疫調節化合物もしくはサリドマイド、ならびに／またはＩ
Ｌ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８
、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８もしくはＩＬ２およびＩＬ１５お
よびＩＬ１８で処理した。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近
接させるステップの前に、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集
団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で処理した。別
の具体的な実施形態では、有効量の免疫調節化合物、例えば、本明細書で、以下で述べる
免疫調節化合物もしくはサリドマイドを腫瘍細胞と近接させる、例えば、腫瘍細胞を免疫
調節化合物もしくはサリドマイドと接触させる。この文脈における「有効量」は、ＮＫ細
胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドと接触も近接
もさせていない同等の数の腫瘍細胞と比較して前記腫瘍細胞の検出可能な抑制をもたらす
ＮＫ細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドの量を
意味する。別の具体的な実施形態では、方法は、有効量の抗がん化合物、例えば、以下で
述べる抗がん化合物を腫瘍細胞と近接させるステップ、例えば、腫瘍細胞を抗がん化合物
と接触させるステップをさらに含む。
明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集団を免疫調節化合物、例えば
、本明細書で、以下で述べる免疫調節化合物もしくはサリドマイド、ならびに／またはＩ
Ｌ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８
、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８もしくはＩＬ２およびＩＬ１５お
よびＩＬ１８で処理した。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近
接させるステップの前に、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集
団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で処理した。別
の具体的な実施形態では、有効量の免疫調節化合物、例えば、本明細書で、以下で述べる
免疫調節化合物もしくはサリドマイドを腫瘍細胞と近接させる、例えば、腫瘍細胞を免疫
調節化合物もしくはサリドマイドと接触させる。この文脈における「有効量」は、ＮＫ細
胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドと接触も近接
もさせていない同等の数の腫瘍細胞と比較して前記腫瘍細胞の検出可能な抑制をもたらす
ＮＫ細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイドの量を
意味する。別の具体的な実施形態では、方法は、有効量の抗がん化合物、例えば、以下で
述べる抗がん化合物を腫瘍細胞と近接させるステップ、例えば、腫瘍細胞を抗がん化合物
と接触させるステップをさらに含む。
【0077】
この方法の具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、血液がん細胞である。別の具体的な実
施形態では、腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、急性骨髄性白血病細胞（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、膠芽腫細胞、肺
癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、結腸
直腸癌細胞、前立腺がん細胞または結腸直腸腺癌細胞である。より具体的な実施形態では
、腫瘍細胞は、ＡＭＬ細胞である。より具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄
腫細胞である。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるス
テップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステ
ップまたは近接させるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。別の具体的な実施形態では
、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる。より
具体的な実施形態では、前記ｉｎ ｖｉｖｏで接触させるステップまたは近接させるステ
ップがヒトにおいて行われる。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞
である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞である。具体的な実施形
態では、前記腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、
膵臓腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、腎臓腫瘍細胞である。具
体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。具体的な実
施形態では、前記ナチュラルキラー細胞を抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する。具体的な実施形態で
は、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。
施形態では、腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、急性骨髄性白血病細胞（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、膠芽腫細胞、肺
癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、結腸
直腸癌細胞、前立腺がん細胞または結腸直腸腺癌細胞である。より具体的な実施形態では
、腫瘍細胞は、ＡＭＬ細胞である。より具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄
腫細胞である。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるス
テップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステ
ップまたは近接させるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。別の具体的な実施形態では
、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる。より
具体的な実施形態では、前記ｉｎ ｖｉｖｏで接触させるステップまたは近接させるステ
ップがヒトにおいて行われる。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞
である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞である。具体的な実施形
態では、前記腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、
膵臓腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、腎臓腫瘍細胞である。具
体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。具体的な実
施形態では、前記ナチュラルキラー細胞を抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する。具体的な実施形態では
、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する。具体的な実施形態で
は、前記ナチュラルキラー細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。
【0078】
別の態様では、（１）レナリドミド；（２）メルファラン；および（３）個体における
多発性骨髄腫を治療するのに有効である、ＮＫ細胞を個体に投与するステップを含む、多
発性骨髄腫を有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるかまたは臍帯血造血細胞、例えば、造血幹
細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製
造するための、例えば、３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造するための本明細書で述
べた方法のいずれかにより製造された。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、前記投与す
るステップの前に増幅させた。別の実施形態では、前記レナリドミド、メルファランおよ
び／またはＮＫ細胞を互いに別個に投与する。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法
のある特定の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法
により製造される。
多発性骨髄腫を治療するのに有効である、ＮＫ細胞を個体に投与するステップを含む、多
発性骨髄腫を有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるかまたは臍帯血造血細胞、例えば、造血幹
細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製
造するための、例えば、３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造するための本明細書で述
べた方法のいずれかにより製造された。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、前記投与す
るステップの前に増幅させた。別の実施形態では、前記レナリドミド、メルファランおよ
び／またはＮＫ細胞を互いに別個に投与する。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法
のある特定の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法
により製造される。
【0079】
別の態様では、個体における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するのに有効である、
ＮＫ細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２お
よびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８またはＩＬ２および
ＩＬ１５およびＩＬ１８による前処理によって任意選択で活性化させた）を個体に投与す
るステップを含む、ＡＭＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具
体的な実施形態では、前記投与するステップの前に本明細書で述べた３段階法を使用して
製造した単離ＮＫ細胞集団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つま
たは複数により前処理した。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞で
あるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別
の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための、例えば、本明細書で示し
た３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造するための本明細書で述べた方法のいずれかに
より製造された。ＡＭＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では
、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法により製造される。特定の実施形態
では、前述の方法により治療されるべきＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬまたは
小児ＡＭＬを含む。ある特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１
回の非ナチュラルキラー細胞または非生得リンパ球療法が奏功しなかったＡＭＬを有する
。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にある。具体的な
実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細胞を投与する前にフルダラビン、シ
タラビンまたは両方でコンディショニングされている。別の態様では、治療有効量の（１
）レナリドミド；（２）メルファラン；（３）フルダラビン；および（４）個体における
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を治療するのに有効である、ＮＫ細胞、例えば、本明細
書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞集団を個体に投与するステップを含む、
前記ＣＬＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血
幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を
製造するための、例えば、本明細書で述べた３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造する
ための本明細書で述べた方法のいずれかにより製造された。上記の方法のいずれかの具体
的な実施形態では、前記レナリドミド、メルファラン、フルダラビンおよび増幅ＮＫ細胞
を前記個体に別個に投与する。ＣＬＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な
実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた３段階法により製造される。
ＮＫ細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２お
よびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８またはＩＬ２および
ＩＬ１５およびＩＬ１８による前処理によって任意選択で活性化させた）を個体に投与す
るステップを含む、ＡＭＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具
体的な実施形態では、前記投与するステップの前に本明細書で述べた３段階法を使用して
製造した単離ＮＫ細胞集団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つま
たは複数により前処理した。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞で
あるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別
の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための、例えば、本明細書で示し
た３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造するための本明細書で述べた方法のいずれかに
より製造された。ＡＭＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では
、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法により製造される。特定の実施形態
では、前述の方法により治療されるべきＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬまたは
小児ＡＭＬを含む。ある特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１
回の非ナチュラルキラー細胞または非生得リンパ球療法が奏功しなかったＡＭＬを有する
。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にある。具体的な
実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細胞を投与する前にフルダラビン、シ
タラビンまたは両方でコンディショニングされている。別の態様では、治療有効量の（１
）レナリドミド；（２）メルファラン；（３）フルダラビン；および（４）個体における
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を治療するのに有効である、ＮＫ細胞、例えば、本明細
書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞集団を個体に投与するステップを含む、
前記ＣＬＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血
幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を
製造するための、例えば、本明細書で述べた３段階法を使用してＮＫ細胞集団を製造する
ための本明細書で述べた方法のいずれかにより製造された。上記の方法のいずれかの具体
的な実施形態では、前記レナリドミド、メルファラン、フルダラビンおよび増幅ＮＫ細胞
を前記個体に別個に投与する。ＣＬＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な
実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、本明細書で述べた３段階法により製造される。
【0080】
別の実施形態では、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を腫瘍細胞と近接させるステップ、
例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞
の増殖を抑制する方法が本明細書で提供される。以後、特に示さない限り、「近接」とい
う用語は、所望の結果を生じさせるのに十分に近いことを意味するものであり、例えば、
ある特定の実施形態では、近接という用語は、接触を意味する。ある特定の実施形態では
、前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ある特定の実施形態では、前
記接触させるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。他の実施形態では、前記接触させる
ステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる。治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を腫瘍細胞と近接
させるステップ、例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団における細胞と接触させるステッ
プを含む腫瘍細胞の増殖を抑制する方法に複数のＩＬＣ３細胞を使用することができる。
ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞
である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急
性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）
細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌
細胞または網膜芽腫細胞である。
例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団における細胞と接触させるステップを含む腫瘍細胞
の増殖を抑制する方法が本明細書で提供される。以後、特に示さない限り、「近接」とい
う用語は、所望の結果を生じさせるのに十分に近いことを意味するものであり、例えば、
ある特定の実施形態では、近接という用語は、接触を意味する。ある特定の実施形態では
、前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ある特定の実施形態では、前
記接触させるステップがｅｘ ｖｉｖｏで行われる。他の実施形態では、前記接触させる
ステップがｉｎ ｖｉｖｏで行われる。治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を腫瘍細胞と近接
させるステップ、例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団における細胞と接触させるステッ
プを含む腫瘍細胞の増殖を抑制する方法に複数のＩＬＣ３細胞を使用することができる。
ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、頭頸部がん細胞または肉腫細胞
である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、原発性乳管癌細胞、白血病細胞、急
性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）
細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌
細胞または網膜芽腫細胞である。
【0081】
一実施形態では、腫瘍細胞を複数のＩＬＣ３細胞と接触させるステップを含み、ＩＬＣ
３細胞が本明細書で述べた方法により製造される、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法に使用
する複数のＩＬＣ３細胞が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記接触さ
せるステップがヒト個体において行われる。ある特定の実施形態では、前記方法は、前記
ＩＬＣ３細胞を前記個体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記腫瘍
細胞は、多発性骨髄腫細胞である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、急性骨髄
性白血病（ＡＭＬ）細胞である。ある特定の実施形態では、前記個体は、再発性／難治性
ＡＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回
の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功しなかったＡＭＬを有する。ある特定の実施形態
では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にある。ある特定の実施形態では、前
記個体は、前記ＩＬＣ３Ｋ細胞を投与する前にフルダラビン、シタラビンまたは両方でコ
ンディショニングされている。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、
頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、
結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞である。ある特定の実施形態では
、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫
瘍細胞または多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞を抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３８抗体または抗ＣＤ３２抗体とと
もに投与する。ある特定の実施形態では、前記接触させるステップまたは前記投与するス
テップの前に前記ＩＬＣ３細胞が凍結保存されているか、また凍結保存されていない。
３細胞が本明細書で述べた方法により製造される、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法に使用
する複数のＩＬＣ３細胞が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記接触さ
せるステップがヒト個体において行われる。ある特定の実施形態では、前記方法は、前記
ＩＬＣ３細胞を前記個体に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記腫瘍
細胞は、多発性骨髄腫細胞である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、急性骨髄
性白血病（ＡＭＬ）細胞である。ある特定の実施形態では、前記個体は、再発性／難治性
ＡＭＬを有する。ある特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回
の非生得リンパ球（ＩＬＣ）療法が奏功しなかったＡＭＬを有する。ある特定の実施形態
では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にある。ある特定の実施形態では、前
記個体は、前記ＩＬＣ３Ｋ細胞を投与する前にフルダラビン、シタラビンまたは両方でコ
ンディショニングされている。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、乳がん細胞、
頭頸部がん細胞または肉腫細胞である。ある特定の実施形態では、前記腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、
結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞または網膜芽腫細胞である。ある特定の実施形態では
、前記腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫
瘍細胞または多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞を抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３８抗体または抗ＣＤ３２抗体とと
もに投与する。ある特定の実施形態では、前記接触させるステップまたは前記投与するス
テップの前に前記ＩＬＣ３細胞が凍結保存されているか、また凍結保存されていない。
【0082】
ＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。
具体的な実施形態では、投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＩＬ
Ｃ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、
大腿内投与または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単
離集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いて実施
する。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の
投与は、注射による。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはそ
の医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では、ＩＬＣ３細胞の注射
は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉
腫）中への直接的注射である。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団
またはその医薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象
へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、誘導送達による。具体的な
実施形態では、注射による対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与
は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴または放射線学
により補助される。
具体的な実施形態では、投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＩＬ
Ｃ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、
大腿内投与または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単
離集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いて実施
する。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の
投与は、注射による。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはそ
の医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では、ＩＬＣ３細胞の注射
は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉
腫）中への直接的注射である。具体的な実施形態では、対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団
またはその医薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象
へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与は、誘導送達による。具体的な
実施形態では、注射による対象へのＩＬＣ３細胞の単離集団またはその医薬組成物の投与
は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴または放射線学
により補助される。
【0083】
具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるステップの前に、本
明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＩＬＣ３細胞集団を免疫調節化合物、例
えば、本明細書で、以下で述べる免疫調節化合物もしくはサリドマイド、ならびに／また
はＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ
１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８もしくはＩＬ２およびＩＬ１
５およびＩＬ１８で処理した。具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近
接させるステップの前に、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集
団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で処理した。別
の具体的な実施形態では、有効量の免疫調節化合物、例えば、本明細書で、以下で述べる
免疫調節化合物もしくはサリドマイドを、さらに、腫瘍細胞と近接させる、例えば、腫瘍
細胞を免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触させる。この文脈における「有効量」
は、ＩＬＣ３細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイ
ドと接触も近接もさせていない同等の数の腫瘍細胞と比較して前記腫瘍細胞の検出可能な
抑制をもたらすＩＬＣ３細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物または
サリドマイドの量を意味する。別の具体的な実施形態では、方法は、有効量の抗がん化合
物、例えば、以下で述べる抗がん化合物を腫瘍細胞と近接させるステップ、例えば、腫瘍
細胞を抗がん化合物と接触させるステップをさらに含む。
明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＩＬＣ３細胞集団を免疫調節化合物、例
えば、本明細書で、以下で述べる免疫調節化合物もしくはサリドマイド、ならびに／また
はＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ
１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８もしくはＩＬ２およびＩＬ１
５およびＩＬ１８で処理した。具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近
接させるステップの前に、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した単離ＮＫ細胞集
団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で処理した。別
の具体的な実施形態では、有効量の免疫調節化合物、例えば、本明細書で、以下で述べる
免疫調節化合物もしくはサリドマイドを、さらに、腫瘍細胞と近接させる、例えば、腫瘍
細胞を免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触させる。この文脈における「有効量」
は、ＩＬＣ３細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物またはサリドマイ
ドと接触も近接もさせていない同等の数の腫瘍細胞と比較して前記腫瘍細胞の検出可能な
抑制をもたらすＩＬＣ３細胞集団における細胞、および任意選択で免疫調節化合物または
サリドマイドの量を意味する。別の具体的な実施形態では、方法は、有効量の抗がん化合
物、例えば、以下で述べる抗がん化合物を腫瘍細胞と近接させるステップ、例えば、腫瘍
細胞を抗がん化合物と接触させるステップをさらに含む。
【0084】
この方法の具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、血液がん細胞である。別の具体的な実
施形態では、腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、急性骨髄性白血病細胞（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、膠芽腫細胞、肺
癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、結腸
直腸癌細胞、前立腺がん細胞または結腸直腸腺癌細胞である。別の具体的な実施形態では
、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。別
の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｅｘ ｖ
ｉｖｏで行われる。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｖ
ｏで行われる。より具体的な実施形態では、前記ｉｎ ｖｉｖｏで接触させるステップま
たは近接させるステップがヒトにおいて行われる。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞
は、充実性腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞であ
る。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。具体的な実施形態では
、前記腫瘍細胞は、膵臓腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、腎臓
腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞
である。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞を抗体とともに投与する。具体的な実
施形態では、前記ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する。具体的な実施形態で
は、前記ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する。具体的な実施形態では、前記
ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。
施形態では、腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発
性乳管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞
、急性骨髄性白血病細胞（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、膠芽腫細胞、肺
癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、結腸
直腸癌細胞、前立腺がん細胞または結腸直腸腺癌細胞である。別の具体的な実施形態では
、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。別
の具体的な実施形態では、前記接触させるステップまたは近接させるステップがｅｘ ｖ
ｉｖｏで行われる。別の具体的な実施形態では、前記接触させるステップがｉｎ ｖｉｖ
ｏで行われる。より具体的な実施形態では、前記ｉｎ ｖｉｖｏで接触させるステップま
たは近接させるステップがヒトにおいて行われる。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞
は、充実性腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞であ
る。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。具体的な実施形態では
、前記腫瘍細胞は、膵臓腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、腎臓
腫瘍細胞である。具体的な実施形態では、前記腫瘍細胞は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞
である。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞を抗体とともに投与する。具体的な実
施形態では、前記ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ３３抗体とともに投与する。具体的な実施形態で
は、前記ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ２０抗体とともに投与する。具体的な実施形態では、前記
ＩＬＣ３細胞を抗ＣＤ１３８抗体とともに投与する。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞を抗ＣＤ３２抗体とともに投与する。
【0085】
別の態様では、（１）レナリドミド；（２）メルファラン；および（３）個体における
多発性骨髄腫を治療するのに有効である、ＩＬＣ３細胞を個体に投与するステップを含む
、多発性骨髄腫を有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施
形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるかまたは臍帯血造血細胞、例
えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３
細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための、例えば、３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団
を製造するための本明細書で述べた方法のいずれかにより製造された。別の実施形態では
、前記ＩＬＣ３細胞は、前記投与するステップの前に増幅させた。別の実施形態では、前
記レナリドミド、メルファランおよび／またはＩＬＣ３細胞を互いに別個に投与する。多
発性骨髄腫を有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法により製造される。
多発性骨髄腫を治療するのに有効である、ＩＬＣ３細胞を個体に投与するステップを含む
、多発性骨髄腫を有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施
形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるかまたは臍帯血造血細胞、例
えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３
細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための、例えば、３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団
を製造するための本明細書で述べた方法のいずれかにより製造された。別の実施形態では
、前記ＩＬＣ３細胞は、前記投与するステップの前に増幅させた。別の実施形態では、前
記レナリドミド、メルファランおよび／またはＩＬＣ３細胞を互いに別個に投与する。多
発性骨髄腫を有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法により製造される。
【0086】
別の態様では、個体における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するのに有効である、
ＩＬＣ３細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１
２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８またはＩＬ２お
よびＩＬ１５およびＩＬ１８による前処理によって任意選択で活性化させた）を個体に投
与するステップを含む、ＡＭＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される
。具体的な実施形態では、前記投与するステップの前に本明細書で述べた３段階法を使用
して製造した単離ＮＫ細胞集団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１
つまたは複数により前処理した。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血Ｉ
ＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ
３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための
、例えば、本明細書で示した３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を製造するための本明
細書で述べた方法のいずれかにより製造された。ＡＭＬを有する個体を治療する方法のあ
る特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法
により製造される。特定の実施形態では、前述の方法により治療されるべきＡＭＬは、難
治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬまたは小児ＡＭＬを含む。ある特定の実施形態では、前記個
体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非ＩＬＣ３細胞または非生得リンパ球療法が奏功
しなかったＡＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第
１寛解期にある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ＩＬＣ３細胞を投与する前に
フルダラビン、シタラビンまたは両方でコンディショニングされている。別の態様では、
治療有効量の（１）レナリドミド；（２）メルファラン；（３）フルダラビン；および（
４）個体における慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を治療するのに有効である、ＩＬＣ３
細胞、例えば、本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＩＬＣ３細胞集団を個体に
投与するステップを含む、前記ＣＬＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供
される。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、ま
たは臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施
形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための、例えば、本明細書で述
べた３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を製造するための本明細書で述べた方法のいず
れかにより製造された。上記の方法のいずれかの具体的な実施形態では、前記レナリドミ
ド、メルファラン、フルダラビンおよび増幅ＩＬＣ３細胞を前記個体に別個に投与する。
ＣＬＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細
胞集団は、本明細書で述べた３段階法により製造される。
ＩＬＣ３細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１
２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８またはＩＬ２お
よびＩＬ１５およびＩＬ１８による前処理によって任意選択で活性化させた）を個体に投
与するステップを含む、ＡＭＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供される
。具体的な実施形態では、前記投与するステップの前に本明細書で述べた３段階法を使用
して製造した単離ＮＫ細胞集団をＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８またはＩＬ１５のうちの１
つまたは複数により前処理した。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血Ｉ
ＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ
３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための
、例えば、本明細書で示した３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を製造するための本明
細書で述べた方法のいずれかにより製造された。ＡＭＬを有する個体を治療する方法のあ
る特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書で述べた、３段階法
により製造される。特定の実施形態では、前述の方法により治療されるべきＡＭＬは、難
治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬまたは小児ＡＭＬを含む。ある特定の実施形態では、前記個
体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非ＩＬＣ３細胞または非生得リンパ球療法が奏功
しなかったＡＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第
１寛解期にある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ＩＬＣ３細胞を投与する前に
フルダラビン、シタラビンまたは両方でコンディショニングされている。別の態様では、
治療有効量の（１）レナリドミド；（２）メルファラン；（３）フルダラビン；および（
４）個体における慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を治療するのに有効である、ＩＬＣ３
細胞、例えば、本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＩＬＣ３細胞集団を個体に
投与するステップを含む、前記ＣＬＬを有する前記個体を治療する方法が本明細書で提供
される。具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、ま
たは臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施
形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための、例えば、本明細書で述
べた３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を製造するための本明細書で述べた方法のいず
れかにより製造された。上記の方法のいずれかの具体的な実施形態では、前記レナリドミ
ド、メルファラン、フルダラビンおよび増幅ＩＬＣ３細胞を前記個体に別個に投与する。
ＣＬＬを有する個体を治療する方法のある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細
胞集団は、本明細書で述べた３段階法により製造される。
【0087】
ある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集
団は、凍結保存する、例えば、本明細書で述べる方法を使用して凍結保存する。ある特定
の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団は、凍結
保存媒体中、例えば、本明細書で述べる凍結保存媒体中で凍結保存する。具体的な実施形
態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ前駆細胞集団および／また
はＮＫ細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮ
Ｋ前駆細胞集団および／またはＮＫ細胞集団を含む細胞懸濁溶液を調製するステップ；（
２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に加えて、凍結保存細胞懸濁液を
得るステップ；（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試
料を得るステップ；および（４）凍結保存試料を－８０℃以下で保管するステップを含む
。
団は、凍結保存する、例えば、本明細書で述べる方法を使用して凍結保存する。ある特定
の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団は、凍結
保存媒体中、例えば、本明細書で述べる凍結保存媒体中で凍結保存する。具体的な実施形
態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮＫ前駆細胞集団および／また
はＮＫ細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＮ
Ｋ前駆細胞集団および／またはＮＫ細胞集団を含む細胞懸濁溶液を調製するステップ；（
２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に加えて、凍結保存細胞懸濁液を
得るステップ；（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試
料を得るステップ；および（４）凍結保存試料を－８０℃以下で保管するステップを含む
。
【0088】
上記の治療または腫瘍抑制の方法のある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階
法により製造されたＮＫ細胞集団を、他のナチュラルキラー細胞、例えば、胎盤潅流液、
臍帯血もしくは末梢血から単離された、または異なる方法により造血細胞から製造された
ナチュラルキラー細胞と合わせる。具体的な実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団を
、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：
３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３
５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、
１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１
、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１
、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：
２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：
６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：
１００、または同様の比で別の供給源からの、または異なる方法により製造されたナチュ
ラルキラー細胞と合わせる。
法により製造されたＮＫ細胞集団を、他のナチュラルキラー細胞、例えば、胎盤潅流液、
臍帯血もしくは末梢血から単離された、または異なる方法により造血細胞から製造された
ナチュラルキラー細胞と合わせる。具体的な実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団を
、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：
３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３
５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、
１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１
、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１
、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：
２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：
６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：
１００、または同様の比で別の供給源からの、または異なる方法により製造されたナチュ
ラルキラー細胞と合わせる。
【0089】
ある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細
胞集団は、凍結保存する、例えば、本明細書で述べる方法を使用して凍結保存する。ある
特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団
は、凍結保存媒体中、例えば、本明細書で述べる凍結保存媒体中で凍結保存する。具体的
な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団
および／またはＩＬＣ３細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書で述べた３段階法を使用
して製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む細胞懸濁溶
液を調製するステップ；（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に加え
て、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ；（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁
液を冷却して、凍結保存試料を得るステップ；および（４）凍結保存試料を－８０℃以下
で保管するステップを含む。
胞集団は、凍結保存する、例えば、本明細書で述べる方法を使用して凍結保存する。ある
特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団
は、凍結保存媒体中、例えば、本明細書で述べる凍結保存媒体中で凍結保存する。具体的
な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団
および／またはＩＬＣ３細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書で述べた３段階法を使用
して製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む細胞懸濁溶
液を調製するステップ；（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に加え
て、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ；（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁
液を冷却して、凍結保存試料を得るステップ；および（４）凍結保存試料を－８０℃以下
で保管するステップを含む。
【0090】
上記の治療または腫瘍抑制の方法のある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階
法により製造されたＩＬＣ３細胞集団を、他のＩＬＣ３細胞、例えば、胎盤潅流液、臍帯
血もしくは末梢血から単離された、または異なる方法により造血細胞から製造されたＩＬ
Ｃ３細胞と合わせる。具体的な実施形態では、ＩＬＣ３細胞集団を、約１００：１、９５
：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６
０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０
、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１
、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１
、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１
、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：
３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：
７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の
比で別の供給源からの、または異なる方法により製造されたＩＬＣ３細胞と合わせる。
法により製造されたＩＬＣ３細胞集団を、他のＩＬＣ３細胞、例えば、胎盤潅流液、臍帯
血もしくは末梢血から単離された、または異なる方法により造血細胞から製造されたＩＬ
Ｃ３細胞と合わせる。具体的な実施形態では、ＩＬＣ３細胞集団を、約１００：１、９５
：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６
０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０
、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１
、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１
、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１
、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：
３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：
７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の
比で別の供給源からの、または異なる方法により製造されたＩＬＣ３細胞と合わせる。
【0091】
別の態様では、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞を個
体に投与するステップを含む化学療法後の消化管を修復する方法が本明細書で提供される
。複数のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３
細胞を個体に投与するステップを含む化学療法後の消化管を修復する方法に使用すること
ができる。
体に投与するステップを含む化学療法後の消化管を修復する方法が本明細書で提供される
。複数のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３
細胞を個体に投与するステップを含む化学療法後の消化管を修復する方法に使用すること
ができる。
【0092】
別の態様では、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞を個
体に投与するステップを含む放射線から個体を保護する方法が本明細書で提供される。複
数のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞
を個体に投与するステップを含む放射線から個体を保護する方法に使用することができる
。方法のある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞を、骨髄移植の補助として使用する。
体に投与するステップを含む放射線から個体を保護する方法が本明細書で提供される。複
数のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞
を個体に投与するステップを含む放射線から個体を保護する方法に使用することができる
。方法のある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞を、骨髄移植の補助として使用する。
【0093】
別の態様では、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞を個
体に投与するステップを含む個体の胸腺を再構成する方法が本明細書で提供される。複数
のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞を
個体に投与するステップを含む個体の胸腺を再構成する方法に使用することができる。
体に投与するステップを含む個体の胸腺を再構成する方法が本明細書で提供される。複数
のＩＬＣ３細胞は、本明細書で述べた３段階法により製造される、複数のＩＬＣ３細胞を
個体に投与するステップを含む個体の胸腺を再構成する方法に使用することができる。
【0094】
別の態様では、本明細書で述べた３段階法により製造される単離ＮＫ細胞を含む組成物
が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、造血細胞、例えば、
胎盤潅流液、臍帯血および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞から
製造される。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも
７０％を構成する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少な
くとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を構成する。ある特定の実
施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８２％、８４％、８６％、８
８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。ある特定の実施形態では、前記
組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８
６％、８８％または９０％は、ＣＤ１６－である。ある特定の実施形態では、前記組成物
中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４
０％、４５％、５０％、５５％または６０％は、ＣＤ９４＋である。
が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、造血細胞、例えば、
胎盤潅流液、臍帯血および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞から
製造される。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも
７０％を構成する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少な
くとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を構成する。ある特定の実
施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８２％、８４％、８６％、８
８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。ある特定の実施形態では、前記
組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８
６％、８８％または９０％は、ＣＤ１６－である。ある特定の実施形態では、前記組成物
中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４
０％、４５％、５０％、５５％または６０％は、ＣＤ９４＋である。
【0095】
ある特定の態様では、パーフォリンおよび／またはＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、
アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つまたは複数を発現しない、ＣＤ５
６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞の集団が本明細書で
提供される。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびＥ
ＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体またはＩＬ１Ｒ１のいずれも発
現しない。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＺＭＢ、
ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキ
ラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つまたは複数を発現しない、ＣＤ５
６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞の集団が本明細書で
提供される。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびＥ
ＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体またはＩＬ１Ｒ１のいずれも発
現しない。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＺＭＢ、
ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキ
ラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
【0096】
ある特定の態様では、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１のうちの
１つまたは複数を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳのうちの１つまたは
複数を発現しない、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－である、ＩＬＣ３細胞
の集団が本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ
、アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンまたはＥ
ＯＭＥＳのいずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６
および／または２Ｂ４をさらに発現する。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、Ｉ
Ｌ－２２、ＴＮＦαおよびＤＮＡＭ－１のうちの１つまたは複数をさらに発現する。ある
特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦαおよ
びＤＮＡＭ－１を発現する。
１つまたは複数を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳのうちの１つまたは
複数を発現しない、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－である、ＩＬＣ３細胞
の集団が本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ
、アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンまたはＥ
ＯＭＥＳのいずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６
および／または２Ｂ４をさらに発現する。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、Ｉ
Ｌ－２２、ＴＮＦαおよびＤＮＡＭ－１のうちの１つまたは複数をさらに発現する。ある
特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦαおよ
びＤＮＡＭ－１を発現する。
【0097】
ある特定の態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第
１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステッ
プ；（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠
いている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステ
ップ；（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれ
を欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造する
ステップ；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細
胞を分離するステップ；ならびに（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０：１
、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１
、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０または１
：５０の比で合わせて、細胞の第４の集団を製造するステップを含む、ナチュラルキラー
細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法が本明細書で提供される。ある特
定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（
ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）
を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよ
びＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形
態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、前
記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施
形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子
量ヘパリンを含まない。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、
細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の比で
合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞
およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞
の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合わせ
られている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞および
ＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の
集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられてい
る。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団に
おいて、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられている。
ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－
細胞が１：５０の比で合わせられている。
１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステッ
プ；（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠
いている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステ
ップ；（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれ
を欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造する
ステップ；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細
胞を分離するステップ；ならびに（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０：１
、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１
、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０または１
：５０の比で合わせて、細胞の第４の集団を製造するステップを含む、ナチュラルキラー
細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法が本明細書で提供される。ある特
定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（
ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）
を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよ
びＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形
態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、前
記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施
形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子
量ヘパリンを含まない。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、
細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の比で
合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞
およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞
の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合わせ
られている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞および
ＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の
集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられてい
る。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団に
おいて、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられている。
ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－
細胞が１：５０の比で合わせられている。
【0098】
ある特定の態様では、前記集団における複数のＮＫ細胞は、末梢血ナチュラルキラー細
胞のように検出可能により高いレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ ｄｍｅ－ｍｉＲ－７、ｈｓ
ａ－ｌｅｔ－７ａ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｃ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７
ｇ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ｂ、ｈ
ｓａ－ｍｉＲ－１１８３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４７、ｈｓａ
－ｍｉＲ－１２４８、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５５Ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６、ｈｓａ－
ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５１－３ｐ、ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－１５５、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１６、ｈｓａ－ｍｉＲ
－１７、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８１ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８２、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９２
、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２００ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０
ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２１４、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２１、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ、ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－２９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｃ、ｈｓａ－ｍｉ
Ｒ－３１、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３５、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７４ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５
４、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８４、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１３Ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１６－３
ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ｈ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｋ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｐ
、ｈｓａ－ｍｉＲ－６００、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４１、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４３、ｈｓａ
－ｍｉＲ－８７４、ｈｓａ－ｍｉＲ－８７５－５ｐおよびｈｓａ－ｍｉＲ－９２ａ－２の
うちの１つまたは複数を発現する。ある特定の態様では、前記集団における複数のＮＫ細
胞は、末梢血ナチュラルキラー細胞より検出可能により低いレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ
ｍｉＲ１８８－５ｐ、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉ
Ｒ－１８ａ、ｍｉＲ－５００、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２２２、ｍｉＲ－７ａ、ｍｉＲ－
５３２－３ｐ、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－１９１、ｍ
ｉＲ－１８１ｄ、ｍｉＲ－３２２およびｍｉＲ３４２－３ｐのうちの１つまたは複数を発
現する。ある特定の態様では、前記集団における複数のＮＫ細胞は、末梢血ナチュラルキ
ラー細胞と同等のレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－３０ｂおよ
びｍｉＲ３０ｃのうちの１つまたは複数を発現する。
胞のように検出可能により高いレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ ｄｍｅ－ｍｉＲ－７、ｈｓ
ａ－ｌｅｔ－７ａ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｃ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７
ｇ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ｂ、ｈ
ｓａ－ｍｉＲ－１１８３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４７、ｈｓａ
－ｍｉＲ－１２４８、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５５Ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６、ｈｓａ－
ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５１－３ｐ、ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－１５５、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１６、ｈｓａ－ｍｉＲ
－１７、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８１ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８２、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９２
、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２００ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０
ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２１４、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２１、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ、ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－２９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｃ、ｈｓａ－ｍｉ
Ｒ－３１、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３５、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７４ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５
４、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８４、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１３Ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１６－３
ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ｈ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｋ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｐ
、ｈｓａ－ｍｉＲ－６００、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４１、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４３、ｈｓａ
－ｍｉＲ－８７４、ｈｓａ－ｍｉＲ－８７５－５ｐおよびｈｓａ－ｍｉＲ－９２ａ－２の
うちの１つまたは複数を発現する。ある特定の態様では、前記集団における複数のＮＫ細
胞は、末梢血ナチュラルキラー細胞より検出可能により低いレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ
ｍｉＲ１８８－５ｐ、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉ
Ｒ－１８ａ、ｍｉＲ－５００、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２２２、ｍｉＲ－７ａ、ｍｉＲ－
５３２－３ｐ、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－１９１、ｍ
ｉＲ－１８１ｄ、ｍｉＲ－３２２およびｍｉＲ３４２－３ｐのうちの１つまたは複数を発
現する。ある特定の態様では、前記集団における複数のＮＫ細胞は、末梢血ナチュラルキ
ラー細胞と同等のレベルでｍｉｃｒｏＲＮＡＳ ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－３０ｂおよ
びｍｉＲ３０ｃのうちの１つまたは複数を発現する。
【0099】
具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、単一個体に由来する。すなわち、前記造血幹
細胞および前駆細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞
は、異なる少なくとも２個体に由来するナチュラルキラー細胞を含む。すなわち、前記造
血幹細胞および前駆細胞は、異なる少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体と異なる個体に由来する。
すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体と異
なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、免疫調節化合物もしくはサリドマイド
と接触も近接もさせていない同等の数のナチュラルキラー細胞、すなわち、ＮＫ細胞より
も検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリンを前記ＮＫ細胞が発現するのに十
分な量で、かつ時間にわたり前記ＮＫ細胞を前記免疫調節化合物もしくはサリドマイドと
接触または近接させた。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞を含む組成物は、免疫
調節化合物もしくはサリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態では、免疫調節化合
物は、以下で述べる化合物、例えば、アミノ置換イソインドリン化合物である。ある特定
の実施形態では、免疫調節化合物は、レナリドミドである。ある特定の実施形態では、免
疫調節化合物は、ポマリドミドである。
細胞および前駆細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞
は、異なる少なくとも２個体に由来するナチュラルキラー細胞を含む。すなわち、前記造
血幹細胞および前駆細胞は、異なる少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態
では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体と異なる個体に由来する。
すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体と異
なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、免疫調節化合物もしくはサリドマイド
と接触も近接もさせていない同等の数のナチュラルキラー細胞、すなわち、ＮＫ細胞より
も検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリンを前記ＮＫ細胞が発現するのに十
分な量で、かつ時間にわたり前記ＮＫ細胞を前記免疫調節化合物もしくはサリドマイドと
接触または近接させた。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞を含む組成物は、免疫
調節化合物もしくはサリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態では、免疫調節化合
物は、以下で述べる化合物、例えば、アミノ置換イソインドリン化合物である。ある特定
の実施形態では、免疫調節化合物は、レナリドミドである。ある特定の実施形態では、免
疫調節化合物は、ポマリドミドである。
【0100】
別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞を含む組成物は、１つまたは複数の抗がん化
合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
【0101】
より具体的な実施形態では、組成物は、本明細書で述べた３段階法により製造されたＮ
Ｋ細胞および別の供給源からの、または別の方法により製造されたナチュラルキラー細胞
を含む。具体的な実施形態では、前記他の供給源は、胎盤血および／または臍帯血である
。別の具体的な実施形態では、前記他の供給源は、末梢血である。より具体的な実施形態
では、ＮＫ細胞を別の供給源からの、または別の方法により製造されたナチュラルキラー
細胞と約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７
０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０
、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９
５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５
：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５
：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、
１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、
１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、
１：１００、または同様の比で合わせる。
Ｋ細胞および別の供給源からの、または別の方法により製造されたナチュラルキラー細胞
を含む。具体的な実施形態では、前記他の供給源は、胎盤血および／または臍帯血である
。別の具体的な実施形態では、前記他の供給源は、末梢血である。より具体的な実施形態
では、ＮＫ細胞を別の供給源からの、または別の方法により製造されたナチュラルキラー
細胞と約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７
０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０
、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９
５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５
：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５
：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、
１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、
１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、
１：１００、または同様の比で合わせる。
【0102】
別の具体的な実施形態では、組成物は、本明細書で述べた３段階法を使用して製造され
たＮＫ細胞および単離胎盤潅流液または単離胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形
態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施
形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞と異なる個体に由来する胎盤潅流液を含む。
別の具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の細胞のすべてまたは実質的にすべて（例
えば、９０％、９５％、９８％または９９％を超える）は、胎児細胞である。別の具体的
な実施形態では、胎盤潅流液または胎盤潅流液細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。
より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の胎児細胞は、前記潅流液中の細胞の約９
０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満を構成する。別の具体的な実施形態では
、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ ＮａＣｌ溶液の通過によって得られる。別の
具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地を含む。別の具体的な実施形態では、前
記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免
疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化合物、例えば、アミノ置換イソインドリ
ン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
たＮＫ細胞および単離胎盤潅流液または単離胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形
態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施
形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞と異なる個体に由来する胎盤潅流液を含む。
別の具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の細胞のすべてまたは実質的にすべて（例
えば、９０％、９５％、９８％または９９％を超える）は、胎児細胞である。別の具体的
な実施形態では、胎盤潅流液または胎盤潅流液細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。
より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の胎児細胞は、前記潅流液中の細胞の約９
０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満を構成する。別の具体的な実施形態では
、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ ＮａＣｌ溶液の通過によって得られる。別の
具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地を含む。別の具体的な実施形態では、前
記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免
疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化合物、例えば、アミノ置換イソインドリ
ン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
【0103】
別の具体的な実施形態では、組成物は、本明細書で述べた３段階法を使用して製造した
ＮＫ細胞および胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞
は、前記ＮＫ細胞と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流
液細胞は、前記ＮＫ細胞と異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は
、単離胎盤潅流液および単離胎盤潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離
胎盤潅流液細胞は、異なる個体に由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれか
の別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤
潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施
形態では、前記単離胎盤潅流液細胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施
形態では、前記組成物は、免疫調節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は
、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物
をさらに含む。
ＮＫ細胞および胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞
は、前記ＮＫ細胞と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流
液細胞は、前記ＮＫ細胞と異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は
、単離胎盤潅流液および単離胎盤潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離
胎盤潅流液細胞は、異なる個体に由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれか
の別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤
潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施
形態では、前記単離胎盤潅流液細胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施
形態では、前記組成物は、免疫調節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は
、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物
をさらに含む。
【0104】
別の態様では、例えば、本明細書で述べた３段階法のいずれかの実施形態により製造さ
れた、単離ＮＫ細胞集団を含む、組成物、例えば、医薬組成物が本明細書で提供される。
具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、造血細胞、例えば、胎盤から、例えば
、胎盤潅流液、臍帯血および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞か
ら製造される。別の具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、組成物中の細胞の
少なくとも７０％を構成する。別の具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、組
成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を構成
する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも７０％
を構成する。ある特定の実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８
２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。ある
特定の実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８
０％、８２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ１６－である。ある特定の
実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％は、ＣＤ９４＋で
ある。
れた、単離ＮＫ細胞集団を含む、組成物、例えば、医薬組成物が本明細書で提供される。
具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、造血細胞、例えば、胎盤から、例えば
、胎盤潅流液、臍帯血および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞か
ら製造される。別の具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、組成物中の細胞の
少なくとも７０％を構成する。別の具体的な実施形態では、前記単離ＮＫ細胞集団は、組
成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を構成
する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも７０％
を構成する。ある特定の実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８
２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。ある
特定の実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８
０％、８２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ１６－である。ある特定の
実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％は、ＣＤ９４＋で
ある。
【0105】
別の具体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離ＮＫ細胞は、単一個体に由来する
。すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施
形態では、前記単離ＮＫ細胞は、異なる少なくとも２個体に由来するＮＫ細胞を含む。す
なわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、異なる少なくとも２個体に由来する。別の具
体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図さ
れる個体と異なる個体に由来する。すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細
胞による治療が意図される個体と異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、免
疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触も近接もさせていない同等の数のナチュラルキ
ラー細胞、すなわち、ＮＫ細胞よりも検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリ
ンを前記ＮＫ細胞が発現するのに十分な量で、かつ時間にわたり前記ＮＫ細胞を前記免疫
調節化合物もしくはサリドマイドと接触または近接させた。別の具体的な実施形態では、
前記組成物は、免疫調節化合物またはサリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態で
は、免疫調節化合物は、以下で述べる化合物である。
。すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施
形態では、前記単離ＮＫ細胞は、異なる少なくとも２個体に由来するＮＫ細胞を含む。す
なわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、異なる少なくとも２個体に由来する。別の具
体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図さ
れる個体と異なる個体に由来する。すなわち、前記造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細
胞による治療が意図される個体と異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、免
疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触も近接もさせていない同等の数のナチュラルキ
ラー細胞、すなわち、ＮＫ細胞よりも検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリ
ンを前記ＮＫ細胞が発現するのに十分な量で、かつ時間にわたり前記ＮＫ細胞を前記免疫
調節化合物もしくはサリドマイドと接触または近接させた。別の具体的な実施形態では、
前記組成物は、免疫調節化合物またはサリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態で
は、免疫調節化合物は、以下で述べる化合物である。
【0106】
別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下
で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
【0107】
より具体的な実施形態では、組成物は、別の供給源からの、または別の方法により製造
されたＮＫ細胞を含む。具体的な実施形態では、前記他の供給源は、胎盤血および／また
は臍帯血である。別の具体的な実施形態では、前記他の供給源は、末梢血である。より具
体的な実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞集団を、別の供給源からの、または別の方
法により製造されたＮＫ細胞と約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０
：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、
４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８
５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７
５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３
５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５
、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５
、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５
、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の比で合わせる。
されたＮＫ細胞を含む。具体的な実施形態では、前記他の供給源は、胎盤血および／また
は臍帯血である。別の具体的な実施形態では、前記他の供給源は、末梢血である。より具
体的な実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞集団を、別の供給源からの、または別の方
法により製造されたＮＫ細胞と約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０
：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、
４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８
５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７
５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３
５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５
、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５
、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５
、１：９０、１：９５、１：１００、または同様の比で合わせる。
【0108】
別の具体的な実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞集団および単離胎盤潅流液または単離
胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞集
団と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ
細胞集団と異なる個体に由来する胎盤潅流液を含む。別の具体的な実施形態では、前記胎
盤潅流液中の細胞のすべてまたは実質的にすべて（例えば、９０％、９５％、９８％また
は９９％を超える）は、胎児細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤潅流液または
胎盤潅流液細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、胎児細
胞は、前記潅流液中の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満を構成
する。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ ＮａＣｌ溶
液の通過によって得られる。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地を含む
。別の具体的な実施形態では、前記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具体的な
実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化合物、
例えば、アミノ置換イソインドリン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は
、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物
をさらに含む。
胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞集
団と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ
細胞集団と異なる個体に由来する胎盤潅流液を含む。別の具体的な実施形態では、前記胎
盤潅流液中の細胞のすべてまたは実質的にすべて（例えば、９０％、９５％、９８％また
は９９％を超える）は、胎児細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤潅流液または
胎盤潅流液細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、胎児細
胞は、前記潅流液中の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満を構成
する。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ ＮａＣｌ溶
液の通過によって得られる。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地を含む
。別の具体的な実施形態では、前記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具体的な
実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化合物、
例えば、アミノ置換イソインドリン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は
、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物
をさらに含む。
【0109】
別の具体的な実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞集団および胎盤潅流液細胞を含む。よ
り具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞集団と同じ個体に由来す
る。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞集団と異なる
個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は、単離胎盤潅流液および単離胎盤
潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離胎盤潅流液細胞は、異なる個体に
由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では
、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を
含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、前記単離胎盤潅流液細
胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調
節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
り具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞集団と同じ個体に由来す
る。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞集団と異なる
個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は、単離胎盤潅流液および単離胎盤
潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離胎盤潅流液細胞は、異なる個体に
由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では
、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を
含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、前記単離胎盤潅流液細
胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調
節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
【0110】
３．１． 用語
本明細書で使用される「免疫調節化合物」および「ＩＭｉＤ（商標）」という用語は、
サリドマイドを包含しない。
本明細書で使用される「免疫調節化合物」および「ＩＭｉＤ（商標）」という用語は、
サリドマイドを包含しない。
【0111】
本明細書で使用される「レナリドミド」は、３－（４’アミノイソインドリン－１’－
オン）－１－ピペリジン－２，６－ジオン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓ
ｅｒｖｉｃｅ名）または２，６－ピペリジンジオン，３－（４－アミノ－１，３－ジヒド
ロ－１－オキソ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）－（国際純正応用化学連合（ＩＵＰ
ＡＣ）名）を意味する。本明細書で使用される「ポマリドミド」は、４－アミノ－２－（
２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドール－１，３－ジオンを意味する。
オン）－１－ピペリジン－２，６－ジオン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓ
ｅｒｖｉｃｅ名）または２，６－ピペリジンジオン，３－（４－アミノ－１，３－ジヒド
ロ－１－オキソ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）－（国際純正応用化学連合（ＩＵＰ
ＡＣ）名）を意味する。本明細書で使用される「ポマリドミド」は、４－アミノ－２－（
２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドール－１，３－ジオンを意味する。
【0112】
本明細書で使用される「多能性」（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）は、細胞について述べる
場合、細胞が別の細胞型の細胞に分化する能力を有することを意味する。ある特定の実施
形態では、「多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）」は、哺乳類の身体の約
２６０の細胞型のサブセットに発達する能力を有する細胞である。多能性細胞（ｐｌｕｒ
ｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）と異なり、多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ
）は、細胞型のすべてを形成する能力を有するわけではない。
場合、細胞が別の細胞型の細胞に分化する能力を有することを意味する。ある特定の実施
形態では、「多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）」は、哺乳類の身体の約
２６０の細胞型のサブセットに発達する能力を有する細胞である。多能性細胞（ｐｌｕｒ
ｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）と異なり、多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ
）は、細胞型のすべてを形成する能力を有するわけではない。
【0113】
本明細書で使用される「フィーダー細胞」は、第２の型の細胞を維持し、多分増殖させ
ることができる環境を与えるために、第２の型の細胞と共培養される１つの型の細胞を意
味する。いかなる理論にも拘束されるものでないが、フィーダー細胞は、例えば、ペプチ
ド、ポリペプチド、電気シグナル、有機分子（例えば、ステロイド）、核酸分子、増殖因
子（例えば、ｂＦＧＦ）、他の因子（例えば、サイトカイン）および代謝栄養素を標的細
胞に供給する。ある特定の実施形態では、フィーダー細胞は、単層に成長する。
ることができる環境を与えるために、第２の型の細胞と共培養される１つの型の細胞を意
味する。いかなる理論にも拘束されるものでないが、フィーダー細胞は、例えば、ペプチ
ド、ポリペプチド、電気シグナル、有機分子（例えば、ステロイド）、核酸分子、増殖因
子（例えば、ｂＦＧＦ）、他の因子（例えば、サイトカイン）および代謝栄養素を標的細
胞に供給する。ある特定の実施形態では、フィーダー細胞は、単層に成長する。
【0114】
本明細書で使用される、さらなる修正なしに、本明細書で述べた方法を使用して製造し
た「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ細胞」は、あらゆる組織供給源に由来するナチ
ュラルキラー細胞を含む。
た「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ細胞」は、あらゆる組織供給源に由来するナチ
ュラルキラー細胞を含む。
【0115】
本明細書で使用される、さらなる修正なしに、本明細書で述べた方法を使用して製造し
た「ＩＬＣ３細胞」は、あらゆる組織供給源に由来するＩＬＣ３細胞を含む。
た「ＩＬＣ３細胞」は、あらゆる組織供給源に由来するＩＬＣ３細胞を含む。
【0116】
本明細書で使用される「胎盤潅流液」は、胎盤、例えば、ヒト胎盤の少なくとも一部を
、例えば、胎盤血管系内を通過させた潅流溶液を意味し、胎盤内の通過中に潅流溶液によ
り収集された複数の細胞を含む。
、例えば、胎盤血管系内を通過させた潅流溶液を意味し、胎盤内の通過中に潅流溶液によ
り収集された複数の細胞を含む。
【0117】
本明細書で使用される「胎盤潅流液細胞」は、胎盤潅流液から単離された、または単離
可能な有核細胞、例えば、総有核細胞を意味する。
可能な有核細胞、例えば、総有核細胞を意味する。
【0118】
本明細書で使用される「腫瘍細胞の抑制」、「腫瘍細胞の増殖の抑制」などは、例えば
、本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団を例えば、
腫瘍細胞の集団と接触させるステップまたは近接させるステップにより、例えば、腫瘍細
胞の集団を本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団と
接触させるステップにより、例えば、腫瘍細胞の前記集団における１つまたは複数の腫瘍
細胞を殺滅するステップにより、腫瘍細胞の集団の増殖を遅くすることを含む。ある特定
の実施形態では、前記接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで
行われる。他の実施形態では、前記接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｖｏで行われる。
、本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団を例えば、
腫瘍細胞の集団と接触させるステップまたは近接させるステップにより、例えば、腫瘍細
胞の集団を本明細書で述べた３段階法を使用して製造したＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団と
接触させるステップにより、例えば、腫瘍細胞の前記集団における１つまたは複数の腫瘍
細胞を殺滅するステップにより、腫瘍細胞の集団の増殖を遅くすることを含む。ある特定
の実施形態では、前記接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで
行われる。他の実施形態では、前記接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｖｏで行われる。
【0119】
本明細書で使用される「造血細胞」という用語は、造血幹細胞および造血前駆細胞を含
む。
む。
【0120】
本明細書で使用される「組成不明の成分」は、その構成物質が一般的に示されていない
または定量化されていない成分を指す培養培地の分野における専門用語である。「組成不
明の成分」の例としては、制限なしに、血清、例えば、ヒト血清（例えば、ヒト血清ＡＢ
）および胎児血清（例えば、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）ま
たはウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）などがある。
または定量化されていない成分を指す培養培地の分野における専門用語である。「組成不
明の成分」の例としては、制限なしに、血清、例えば、ヒト血清（例えば、ヒト血清ＡＢ
）および胎児血清（例えば、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）ま
たはウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）などがある。
【0121】
本明細書で使用される「＋」は、特定の細胞マーカーの存在を示すために使用される場
合、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照を上回って検出可能
に存在すること；または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいて、バックグラウン
ドを超える形で検出可能であることを意味する。
合、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照を上回って検出可能
に存在すること；または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいて、バックグラウン
ドを超える形で検出可能であることを意味する。
【0122】
本明細書で使用される「－」は、特定の細胞マーカーの存在を示すために使用される場
合、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照を上回って検出可能
に存在しないこと；または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいて、バックグラウ
ンドを超える形で検出可能ではないことを意味する。
合、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照を上回って検出可能
に存在しないこと；または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいて、バックグラウ
ンドを超える形で検出可能ではないことを意味する。
【図面の簡単な説明】
【0123】
【図1】以前のＮＫ細胞増幅培地（「ＮＫ細胞ｅｘｐ」）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）と比較した、Ｋ５６２細胞に対するＮＫ細胞の（Ａ）増幅倍率、（Ｂ）細胞純度（ＣＤ５６＋ＣＤ３－）、および（Ｃ）１０：１（Ｅ：Ｔ）比での細胞傷害性についての、ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）またはＣＨ２２３１９１を１μＭ、１０μＭおよび３０μＭで使用する３段階法の効果を示す図である。
【図2】ＣＤ１１ａおよび天然細胞傷害性受容体ＮＫｐ３０、ｃ－レクチン受容体ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ－１、２Ｂ４、細胞溶解性メディエーターパーフォリンおよびグランザイムＢ、ならびにＮＫ細胞成熟および細胞溶解機能の調節因子、ＥＯＭＥＳの発現を示す、３段階法により産生されたＣＤ３－ＣＤ５６＋のゲートをかけた細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図3】腫瘍細胞株Ｋ５６２（ＣＭＬ）、ＨＬ－６０（ＡＭＬ）およびＲＰＭＩ８２２６（多発性骨髄腫）に対する３５日間の３段階ＮＫ細胞（ｎ＝１０）の細胞傷害性を示す図である。溶解は、１０：１のエフェクター対標的比で測定した。
【図4】パーフォリン（上）、細胞溶解性メディエーター、および脱顆粒のマーカーＣＤ１０７（下）の発現におけるＦＩＴＣアイソタイプ対照細胞と３段階ＮＫ細胞を比較する多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図5】Ｋ５６２（ＣＭＬ）細胞と１：１の比で２４時間共培養した場合の３段階ＮＫ細胞（ｎ＝１１）によるサイトカイン産生を示す図である。
【図6】１：１のエフェクター対標的、インキュベーション後１５分、６３×の倍率での３段階ＮＫ細胞およびＫ５６２（ＣＭＬ）（Ａ）およびＲＰＭＩ８２２６（多発性骨髄腫）（Ｂ）細胞の共焦点画像化によってキャプチャーされたパーフォリンの分極を伴うＦアクチン免疫学的シナプスの形成を示す図である。細胞をホルムアルデヒドで固定し、ＦアクチンをＡｌｅｘａ－４８８コンジュゲートファロイジンで染色し、パーフォリン抗体に続いてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５色素コンジュゲートヤギ抗ウサギ二次抗体で共染色を行った。腫瘍標的細胞もまた、細胞トラッカーバイオレット色素で染色した。矢印は、ＮＫ細胞、パーフォリン、および標的細胞を示す。
【図7】腫瘍細胞株Ｋ５６２（ＣＭＬ）、ＨＬ－６０（ＡＭＬ）およびＲＰＭＩ８２２６（多発性骨髄腫）に対する３段階ＮＫ細胞（ｎ＝３）の細胞傷害性を示す図である。溶解は、様々なエフェクター対標的比で測定した。
【図8】腫瘍細胞（Ｋ５６２またはＨＬ－６０）またはホルボール（ｐｈｏｒｂｏｌ）１２－ミリステート１３－アセテート＋イオノマイシン（ＰＭＡ）で刺激時の３段階ＮＫ細胞（ｎ＝４）におけるＣＤ１０７ａ発現を示す図である。ＣＤ１０７ａ発現は脱顆粒のマーカーである。４人のドナーからの結果が示される。
【図9】腫瘍細胞（Ｋ５６２、ＨＬ－６０、またはＲＰＭＩ８２２６）またはホルボール１２－ミリステート１３－アセテート＋イオノマイシン（ＰＭＡ）で刺激時の３段階ＮＫ細胞におけるＩＦＮγ分泌（ｎ＝３）を示す図である。３人のドナーからの結果が示される。
【図10】初代ＡＭＬ標的細胞（Ａ１、Ａ２、およびＫＧ１ａ）に対する３段階ＮＫ細胞（ｎ＝２）のエフェクター対標的比３：１での細胞溶解活性を示す図である。２４時間のインキュベーションの結果を示す。２人のドナーからの結果が示される。
【図11】ＨＬ－６０（ＡＭＬ）腫瘍細胞株による刺激と比較した、初代ＡＭＬ標的細胞（ＡＭＬ１～４およびＫＧ１ａ）で刺激時の３段階ＮＫ細胞（ｎ＝５）におけるＩＦＮγ分泌を示す図である。５人のドナーからの結果が示される。容易に比較するためにボックスが加えられている。
【図12】ＣＤ１１ａおよびＣＤ１１７の発現を示す、３段階法によって産生されたＣＤ３－ＣＤ５６＋のゲートをかけた細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。細胞の２つのサブセット、ＣＤ１１ａ＋およびＣＤ１１ａ－がボックス内に示されている。
【図14】各々のサブセットについて、パーフォリン、ＥＯＭＥＳ、ＲＯＲγｔ、およびＩＬ１Ｒ１の発現レベルを示す、図１２からのＣＤ１１ａ＋（上）およびＣＤ１１ａ－（下）細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図15】フローサイトメトリーによって決定される、パーフォリン、グランザイムＢ、ＥＯＭＥＳ、Ｔ－ｂｅｔ、ＩＬ１Ｒ１、ＲＯＲγｔおよびＡＨＲを発現するＣＤ１１ａ＋およびＣＤ１１ａ－の３段階細胞のパーセンテージの定量化を示す図である。結果は４人のドナーにわたって示される。
【図16】フローサイトメトリーによって決定される、サイトカインでの刺激に際して、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２２、ＩＬ－８およびＴＮＦαを発現するＣＤ１１ａ＋およびＣＤ１１ａ－の３段階細胞のパーセンテージの定量化を示す図である。結果は４人のドナーにわたって示される。グラフ上の棒グラフは、左から右に：ｉ）刺激なし、ｉｉ）ＰＭＡおよびイオノマイシン（ＰＭＡｉ）での刺激、（ｉｉｉ）ＰＭＡｉおよびＩＬ２３での刺激、（ｉｖ）ＩＬ１２およびＩＬ１８での刺激、および（ｖ）ＩＬ１ｂおよびＩＬ２３での刺激を示す。
【図17】ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、およびＮＫＧ２Ｄと比較したＣＤ１１ａの発現を示す、３段階法によって産生されたＣＤ３－ＣＤ５６＋のゲートをかけた細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図18】ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）およびＣＤ２４４（２Ｂ４）と比較したＣＤ１１ａの発現を示す、３段階法によって産生されたＣＤ３－ＣＤ５６＋のゲートをかけた細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図19】ＣＤ１６、ＮＫＧ２ＡおよびＫＩＲと比較したＣＤ１１ａの発現を示す、３段階法によって産生されたＣＤ３－ＣＤ５６＋のゲートをかけた細胞の多色フローサイトメトリーを示す図である。
【図20】フローサイトメトリーによって測定される、表６から示された第３の培地条件を使用した、（Ａ）ＣＤ５６および（Ｂ）ＣＤ１４／１５を発現する３段階細胞のパーセンテージならびに（Ｃ）ＲＯＲγｔおよび（Ｄ）パーフォリンを発現するＣＤ５６＋の３段階細胞のパーセンテージを示す図である。各々の条件について隣接するバーとして、２人のドナーからの結果が示される。
【図21】Ｋ５６２細胞の存在下の（Ａ）ＣＤ１１ａ＋および（Ｂ）ＣＤ１１ａ－細胞亜集団におけるＦＡＣＳを使用したＣＤ１０７ａ発現を示す図である。（Ｃ）のグラフは、ＣＤ５６＋ＣＤ３－の３段階ＮＫ細胞の４集団についての結果を示す。
【図22】Ｋ５６２細胞に対する３段階ＮＫ細胞のＣＤ５６＋ＣＤ３－集団のＣＤ１１ａ＋（陽性）およびＣＤ１１ａ－（陰性）亜集団の細胞傷害性を示す図である。エフェクター対標的細胞比が、ｘ軸上に示される。
【図23】Ｋ５６２標的細胞ならびにＣＤ１１ａ陽性および陰性エフェクター細胞（１：１のエフェクター：標的比率）の共培養の存在下および非存在下で行ったサイトカイン分泌分析を示す図である。陽性および陰性細胞亜集団の左手の棒グラフは、Ｋ５６２細胞非存在下での分泌を示し、一方、陽性および陰性細胞亜集団の右手の棒グラフは、Ｋ５６２細胞の存在下での分泌を示す。
【発明を実施するための形態】
【0124】
５． 詳細な説明
造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞からＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞を製造し、増幅する新規方法が本明細書で提供される。また造血細胞、例えば、造血幹
細胞または前駆細胞からＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する方法、
例えば、３段階法が本明細書で提供される。ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならび
にＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するために使用する造血細胞（例
えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）は、あらゆる供給源、例えば、制限なしに、胎盤、臍帯血
、胎盤血、末梢血、脾臓または肝臓から得ることができる。ある特定の実施形態では、Ｎ
Ｋ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞またはＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞
集団は、増幅造血細胞、例えば、造血幹細胞および／または造血前駆細胞から製造される
。一実施形態では、造血細胞は、そのような細胞の供給源、例えば、胎盤、例えば、胎盤
潅流液、臍帯血、胎盤血、末梢血、脾臓、肝臓（例えば、胎児肝臓）および／または骨髄
から収集する。
造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞からＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞を製造し、増幅する新規方法が本明細書で提供される。また造血細胞、例えば、造血幹
細胞または前駆細胞からＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する方法、
例えば、３段階法が本明細書で提供される。ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならび
にＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するために使用する造血細胞（例
えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）は、あらゆる供給源、例えば、制限なしに、胎盤、臍帯血
、胎盤血、末梢血、脾臓または肝臓から得ることができる。ある特定の実施形態では、Ｎ
Ｋ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞またはＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞
集団は、増幅造血細胞、例えば、造血幹細胞および／または造血前駆細胞から製造される
。一実施形態では、造血細胞は、そのような細胞の供給源、例えば、胎盤、例えば、胎盤
潅流液、臍帯血、胎盤血、末梢血、脾臓、肝臓（例えば、胎児肝臓）および／または骨髄
から収集する。
【0125】
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細
胞集団を製造するために使用する造血細胞は、あらゆる動物種から得ることができる。あ
る特定の実施形態では、造血幹細胞または前駆細胞は、哺乳類細胞である。具体的な実施
形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。具体的な実施形態では、
前記造血幹細胞または前駆細胞は、霊長類細胞である。具体的な実施形態では、前記造血
幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹細胞また
は前駆細胞は、げっ歯類細胞である。
胞集団を製造するために使用する造血細胞は、あらゆる動物種から得ることができる。あ
る特定の実施形態では、造血幹細胞または前駆細胞は、哺乳類細胞である。具体的な実施
形態では、前記造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。具体的な実施形態では、
前記造血幹細胞または前駆細胞は、霊長類細胞である。具体的な実施形態では、前記造血
幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。具体的な実施形態では、前記造血幹細胞また
は前駆細胞は、げっ歯類細胞である。
【0126】
５．１ 造血細胞
本明細書で開示した方法において有用な造血細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３
細胞に分化することができる任意の造血細胞、例えば、前駆細胞、造血前駆細胞、造血幹
細胞などであり得る。造血細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢血、肝臓など、
またはそれらの組合せのような組織供給源から得ることができる。造血細胞は、胎盤から
得ることができる。具体的な実施形態では、造血細胞は、胎盤潅流液から得られる。一実
施形態では、造血細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、造血細胞は、末梢血
から得られない。胎盤潅流液に由来する造血細胞は、胎児および母体造血細胞の混合物、
例えば、母体細胞が造血細胞の総数の５％以上を構成する混合物を含み得る。ある特定の
実施形態では、胎盤潅流液に由来する造血細胞は、少なくとも約９０％、９５％、９８％
、９９％または９９．５％の胎児細胞を含む。
本明細書で開示した方法において有用な造血細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３
細胞に分化することができる任意の造血細胞、例えば、前駆細胞、造血前駆細胞、造血幹
細胞などであり得る。造血細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢血、肝臓など、
またはそれらの組合せのような組織供給源から得ることができる。造血細胞は、胎盤から
得ることができる。具体的な実施形態では、造血細胞は、胎盤潅流液から得られる。一実
施形態では、造血細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、造血細胞は、末梢血
から得られない。胎盤潅流液に由来する造血細胞は、胎児および母体造血細胞の混合物、
例えば、母体細胞が造血細胞の総数の５％以上を構成する混合物を含み得る。ある特定の
実施形態では、胎盤潅流液に由来する造血細胞は、少なくとも約９０％、９５％、９８％
、９９％または９９．５％の胎児細胞を含む。
【0127】
別の具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用してＮＫ細胞集団および
／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は
、胎盤潅流液、臍帯血、胎児肝臓、動員末梢血または骨髄から得られる。別の具体的な実
施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用してＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３
細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤潅流液およ
び臍帯血、例えば、潅流液と同じ胎盤由来の臍帯血に由来する混合細胞である。別の具体
的な実施形態では、前記臍帯血は、前記胎盤潅流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離す
る。ある特定の実施形態では、混合細胞は、臍帯血および胎盤潅流液をプールすることま
たは合わせることにより得ることができる。ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤
潅流液を１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７
０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０
、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９
５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５
：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５
：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、
１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、
１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、
１：１００、または同様の容量比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、
臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の
比で合わせる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１
、３：１、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。より具体的な実施形
態では、臍帯血および胎盤潅流液を８．５：１．５（８５％：１５％）の比で合わせる。
／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は
、胎盤潅流液、臍帯血、胎児肝臓、動員末梢血または骨髄から得られる。別の具体的な実
施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用してＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３
細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤潅流液およ
び臍帯血、例えば、潅流液と同じ胎盤由来の臍帯血に由来する混合細胞である。別の具体
的な実施形態では、前記臍帯血は、前記胎盤潅流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離す
る。ある特定の実施形態では、混合細胞は、臍帯血および胎盤潅流液をプールすることま
たは合わせることにより得ることができる。ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤
潅流液を１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７
０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０
、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９
５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５
：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５
：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、
１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、
１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、
１：１００、または同様の容量比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、
臍帯血および胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の
比で合わせる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１
、３：１、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。より具体的な実施形
態では、臍帯血および胎盤潅流液を８．５：１．５（８５％：１５％）の比で合わせる。
【0128】
ある特定の実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を、総有核細胞（ＴＮＣ）含量によ
る、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：
３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３
５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、
１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１
、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１
、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：
２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：
６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：
１００、または同様の比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、臍帯血お
よび胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の比で合わ
せる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１、３：１
、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。
る、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：
３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、４０：６０、３
５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、
１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１
、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１
、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：
２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：
６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：
１００、または同様の比で合わせて、混合細胞を得る。具体的な実施形態では、臍帯血お
よび胎盤潅流液を１０：１～１：１０、５：１～１：５または３：１～１：３の比で合わ
せる。別の具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤潅流液を１０：１、５：１、３：１
、１：１、１：３、１：５または１：１０の比で合わせる。
【0129】
別の具体的な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して前記ＮＫ細胞集団お
よび／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細
胞は、臍帯血および胎盤潅流液の両方に由来するが、前記臍帯血は、前記胎盤潅流液が得
られる胎盤以外の胎盤から単離される。
よび／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する、造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細
胞は、臍帯血および胎盤潅流液の両方に由来するが、前記臍帯血は、前記胎盤潅流液が得
られる胎盤以外の胎盤から単離される。
【0130】
ある特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。具体的な実施形態では
、本明細書で開示した方法において有用な造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋またはＣＤ
３４＋ＣＤ３８－である。より具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８
－Ｌｉｎ－である。別の具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ
１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６
－、ＣＤ６６ｂ－および／またはグリコホリンＡ－でのうちの１つまたは複数である。別
の具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ
－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６－、ＣＤ６６ｂ－およ
びグリコホリンＡ－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｃ
Ｄ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、
ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－ＣＤ２３５－ＣＤ３６－である。
、本明細書で開示した方法において有用な造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋またはＣＤ
３４＋ＣＤ３８－である。より具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８
－Ｌｉｎ－である。別の具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ
１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６
－、ＣＤ６６ｂ－および／またはグリコホリンＡ－でのうちの１つまたは複数である。別
の具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ
－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６－、ＣＤ６６ｂ－およ
びグリコホリンＡ－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｃ
Ｄ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、
ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－ＣＤ２３５－ＣＤ３６－である。
【0131】
別の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ４５＋である。別の具体的な実施形態では、造血
細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。別の実施形態では、造血細胞は、Ｔｈｙ－１＋で
ある。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋である。別の実施形
態では、造血細胞は、ＣＤ１３３＋である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３
４＋ＣＤ１３３＋またはＣＤ１３３＋Ｔｈｙ－１＋である。別の具体的な実施形態では、
ＣＤ３４＋造血細胞は、ＣＸＣＲ４＋である。別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４＋造
血細胞は、ＣＸＣＲ４－である。別の実施形態では、造血細胞は、ＫＤＲ（血管増殖因子
受容体２）について陽性である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＫＤＲ
＋、ＣＤ１３３＋ＫＤＲ＋またはＴｈｙ－１＋ＫＤＲ＋である。ある特定の他の実施形態
では、造血細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼについて陽性である（ＡＬＤＨ＋）。例
えば、細胞は、ＣＤ３４＋ＡＬＤＨ＋である。
細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。別の実施形態では、造血細胞は、Ｔｈｙ－１＋で
ある。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋である。別の実施形
態では、造血細胞は、ＣＤ１３３＋である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３
４＋ＣＤ１３３＋またはＣＤ１３３＋Ｔｈｙ－１＋である。別の具体的な実施形態では、
ＣＤ３４＋造血細胞は、ＣＸＣＲ４＋である。別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４＋造
血細胞は、ＣＸＣＲ４－である。別の実施形態では、造血細胞は、ＫＤＲ（血管増殖因子
受容体２）について陽性である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＫＤＲ
＋、ＣＤ１３３＋ＫＤＲ＋またはＴｈｙ－１＋ＫＤＲ＋である。ある特定の他の実施形態
では、造血細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼについて陽性である（ＡＬＤＨ＋）。例
えば、細胞は、ＣＤ３４＋ＡＬＤＨ＋である。
【0132】
ある特定の他の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ４５－である。具体的な実施形
態では、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５－細胞は、ｍｉＲＮＡｓ ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－３８０、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１２、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１７、ｈｓａ－ｍｉ
Ｒ－５１８ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ
－３３７、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２２ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４９および／またはｈｓａ－
ｍｉＲ－６１８の１つもしくは複数、またはすべてを発現する。
態では、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５－細胞は、ｍｉＲＮＡｓ ｈｓ
ａ－ｍｉＲ－３８０、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１２、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１７、ｈｓａ－ｍｉ
Ｒ－５１８ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ
－３３７、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２２ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４９および／またはｈｓａ－
ｍｉＲ－６１８の１つもしくは複数、またはすべてを発現する。
【0133】
ある特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４－である。
【0134】
造血細胞は、分化系列決定、または発達の自由さ（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｎａ
ｉｖｅｔｅ）の欠乏を示すある特定のマーカーも欠き得る。例えば、別の実施形態では、
造血細胞は、ＨＬＡ－ＤＲ－である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｈ
ＬＡ－ＤＲ－、ＣＤ１３３＋ＨＬＡ－ＤＲ－、Ｔｈｙ－１＋ＨＬＡ－ＤＲ－またはＡＬＤ
Ｈ＋ＨＬＡ－ＤＲ－である。別の実施形態では、造血細胞は、細胞系列マーカーＣＤ２、
ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ５６
、ＣＤ６６ｂおよびグリコホリンＡの１つもしくは複数、またはすべてについて陰性であ
る。
ｉｖｅｔｅ）の欠乏を示すある特定のマーカーも欠き得る。例えば、別の実施形態では、
造血細胞は、ＨＬＡ－ＤＲ－である。具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｈ
ＬＡ－ＤＲ－、ＣＤ１３３＋ＨＬＡ－ＤＲ－、Ｔｈｙ－１＋ＨＬＡ－ＤＲ－またはＡＬＤ
Ｈ＋ＨＬＡ－ＤＲ－である。別の実施形態では、造血細胞は、細胞系列マーカーＣＤ２、
ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ５６
、ＣＤ６６ｂおよびグリコホリンＡの１つもしくは複数、またはすべてについて陰性であ
る。
【0135】
したがって、造血細胞は、未分化状態を示すマーカーの存在に基づいて、または少なく
とも一部の系列分化が起こったことを示す細胞系列マーカーの非存在に基づいて、本明細
書で開示した方法に使用するために選択することができる。固有のマーカーの有無に基づ
いて、造血細胞を含む、細胞を単離する方法は、以下で詳細に述べる。
とも一部の系列分化が起こったことを示す細胞系列マーカーの非存在に基づいて、本明細
書で開示した方法に使用するために選択することができる。固有のマーカーの有無に基づ
いて、造血細胞を含む、細胞を単離する方法は、以下で詳細に述べる。
【0136】
本明細書で提供する方法に使用する造血細胞は、実質的に均一な集団、例えば、単一組
織供給源に由来する少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９
％の造血細胞を含む集団、または同じ造血細胞関連細胞マーカーを示す造血細胞を含む集
団であり得る。例えば、様々な実施形態では、造血細胞は、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢
血または胎盤、例えば、胎盤潅流液に由来する少なくとも約９５％、９８％または９９％
の造血細胞を含み得る。
織供給源に由来する少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９
％の造血細胞を含む集団、または同じ造血細胞関連細胞マーカーを示す造血細胞を含む集
団であり得る。例えば、様々な実施形態では、造血細胞は、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢
血または胎盤、例えば、胎盤潅流液に由来する少なくとも約９５％、９８％または９９％
の造血細胞を含み得る。
【0137】
本明細書で提供する方法に使用する造血細胞は、単一個体から、例えば、単一胎盤から
、または複数の個体から得ることができ、例えば、プールすることができる。造血細胞を
複数の個体から得て、プールする場合、造血細胞は、同じ組織供給源から得ることができ
る。したがって、様々な実施形態では、プールされた造血細胞は、すべて胎盤、例えば、
胎盤潅流液に、すべて胎盤血に、すべて臍帯血に、すべて末梢血などに由来する。
、または複数の個体から得ることができ、例えば、プールすることができる。造血細胞を
複数の個体から得て、プールする場合、造血細胞は、同じ組織供給源から得ることができ
る。したがって、様々な実施形態では、プールされた造血細胞は、すべて胎盤、例えば、
胎盤潅流液に、すべて胎盤血に、すべて臍帯血に、すべて末梢血などに由来する。
【0138】
本明細書で開示した方法に使用する造血細胞は、ある特定の実施形態では、２つまたは
それ以上の組織供給源に由来する造血細胞を含む。例えば、ある特定の実施形態では、２
つまたはそれ以上の供給源に由来する造血細胞を、本明細書における方法に使用するため
に合わせる場合、本明細書で述べた３段階法を使用してナチュラルキラー細胞を製造する
ために使用する複数の造血細胞は、胎盤、例えば、胎盤潅流液に由来する造血細胞を含む
。様々な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されるＮＫ細胞集団お
よび／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するために使用する造血細胞は、胎盤に由来するお
よび臍帯血に由来する；胎盤および末梢血に由来する；胎盤および胎盤血または胎盤およ
び骨髄に由来する造血細胞を含む。一実施形態では、造血細胞は、臍帯血に由来する造血
細胞と組み合わされた胎盤潅流液に由来する造血細胞を含み、臍帯血および胎盤は、同じ
個体に由来する。すなわち、潅流液および臍帯血が一致している。造血細胞が２つの組織
供給源に由来する造血細胞を含む実施形態では、供給源に由来する造血細胞は、例えば、
１：１０、２：９、３：８、４：７、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１：１
０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：
１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１または９：１の比で合わせること
ができる。
それ以上の組織供給源に由来する造血細胞を含む。例えば、ある特定の実施形態では、２
つまたはそれ以上の供給源に由来する造血細胞を、本明細書における方法に使用するため
に合わせる場合、本明細書で述べた３段階法を使用してナチュラルキラー細胞を製造する
ために使用する複数の造血細胞は、胎盤、例えば、胎盤潅流液に由来する造血細胞を含む
。様々な実施形態では、本明細書で述べた３段階法を使用して製造されるＮＫ細胞集団お
よび／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するために使用する造血細胞は、胎盤に由来するお
よび臍帯血に由来する；胎盤および末梢血に由来する；胎盤および胎盤血または胎盤およ
び骨髄に由来する造血細胞を含む。一実施形態では、造血細胞は、臍帯血に由来する造血
細胞と組み合わされた胎盤潅流液に由来する造血細胞を含み、臍帯血および胎盤は、同じ
個体に由来する。すなわち、潅流液および臍帯血が一致している。造血細胞が２つの組織
供給源に由来する造血細胞を含む実施形態では、供給源に由来する造血細胞は、例えば、
１：１０、２：９、３：８、４：７、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１：１
０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：
１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１または９：１の比で合わせること
ができる。
【0139】
５．１．１ 胎盤造血幹細胞
ある特定の実施形態では、本明細書で提供する方法に使用する造血細胞は、胎盤造血細
胞である。一実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ３４＋である。具体的な実施形態では
、胎盤造血細胞は、主として（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、
７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－
細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤造血細胞は、主として（例えば、少なくと
も約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％または９８％）ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞である。胎盤造血細胞は、分娩後哺乳類（例
えば、ヒト）胎盤から当業者に公知の手段、例えば、潅流により得ることができる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供する方法に使用する造血細胞は、胎盤造血細
胞である。一実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ３４＋である。具体的な実施形態では
、胎盤造血細胞は、主として（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、
７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－
細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤造血細胞は、主として（例えば、少なくと
も約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％または９８％）ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞である。胎盤造血細胞は、分娩後哺乳類（例
えば、ヒト）胎盤から当業者に公知の手段、例えば、潅流により得ることができる。
【0140】
別の実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ４５－である。具体的な実施形態では、胎盤
造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、胎盤造血細胞は
、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。
造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、胎盤造血細胞は
、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。
【0141】
５．２ ナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにナチュラルキラー細
胞および／またはＩＬＣ３細胞集団の製造
本方法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞集団の製造は、造血細胞の集団を増幅することを含む。細胞増幅中、造血細胞
集団内の複数の造血細胞がＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に分化する。一態様では
、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞また
は前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を
製造し、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐ
ｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製
造し、その後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いて
いる第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含
み、ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％、例えば、少なくも８０％が生存している
、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、そのよう
なナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の
実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋であるナチュラルキラー
細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋
またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのよ
うなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞
を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋およ
びＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのような
ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含
む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病
抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩ
Ｐ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ
－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体
的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１α
を欠き、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
胞および／またはＩＬＣ３細胞集団の製造
本方法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびにＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞集団の製造は、造血細胞の集団を増幅することを含む。細胞増幅中、造血細胞
集団内の複数の造血細胞がＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に分化する。一態様では
、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞また
は前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を
製造し、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐ
ｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製
造し、その後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いて
いる第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステ
ップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含
み、ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％、例えば、少なくも８０％が生存している
、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、そのよう
なナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の
実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋であるナチュラルキラー
細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋
またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのよ
うなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞
を含む。ある特定の実施形態では、そのようなナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋およ
びＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。ある特定の実施形態では、そのような
ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含
む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病
抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩ
Ｐ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ
－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体
的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１α
を欠き、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例え
ば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0142】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、Ｎ
Ｋ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培
地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロフ
ァージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形
態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リ
ガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前
記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第
２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、Ｎ
Ｋ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培
地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロフ
ァージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形
態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リ
ガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前
記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第
２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0143】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0144】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの
それぞれを欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を
製造するステップを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋
であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制
因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－
１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１
αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。あ
る特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例
えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0145】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
＋であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、
例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、細胞の第４の集団
を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ
＋であるナチュラルキラー細胞を含む、ＮＫ細胞を製造する方法が本明細書で提供される
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ
－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－
１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的
な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを
欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、
例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0146】
上記の実施形態のいずれかの、ある特定の実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞は
、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する。ある特定の実施形態では、前記ナチュラル
キラー細胞は、ＲＯＲγｔもＩＬ１Ｒ１も発現しない。
、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する。ある特定の実施形態では、前記ナチュラル
キラー細胞は、ＲＯＲγｔもＩＬ１Ｒ１も発現しない。
【0147】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細
胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地お
よび／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファー
ジ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態で
は、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガン
ド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第
２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の
培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細
胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の第３の
集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細
胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地お
よび／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファー
ジ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態で
は、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガン
ド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第
２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の
培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0148】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第
３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み
、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含
む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１
の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含
まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第
３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み
、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含
む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１
の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含
まない。
【0149】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培
地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞
の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、Ｉ
ＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１
の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマク
ロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実
施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ
３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地およ
び前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩ
Ｆ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地
、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない
。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培
地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞
の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、Ｉ
ＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１
の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマク
ロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実
施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ
３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地およ
び前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩ
Ｆ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地
、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない
。
【0150】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３
細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態
では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）およ
び／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている
。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チ
ロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記
第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態で
は、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパ
リンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；な
らびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３
細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態
では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）およ
び／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている
。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チ
ロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記
第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態で
は、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパ
リンを含まない。
【0151】
一態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ－細胞を単離して、またはＣＤ１１ａ
＋細胞を除去して、細胞の第４の集団を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣ
Ｄ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造
する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／ま
たは第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タン
パク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－
３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、
ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第
３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ；（ｂ
）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている
第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ；（
ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いて
いる第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステップ
；ならびに（ｄ）細胞の第３の集団からＣＤ１１ａ－細胞を単離して、またはＣＤ１１ａ
＋細胞を除去して、細胞の第４の集団を製造するステップを含み、細胞の第４の集団がＣ
Ｄ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、ＩＬＣ３細胞を製造
する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／ま
たは第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タン
パク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３
の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－
３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、
ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地または第
３の培地のどれもヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
【0152】
ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現す
る。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現し
ない。
る。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンもＥＯＭＥＳも発現し
ない。
【0153】
５．２．１ ３段階法を使用したＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団の製造
一実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する３段階法が本明
細書で提供される。ある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法によりＮＫ細胞
および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するための、本明細書で述べた、造血細胞の増幅
および分化の方法は、１ミリリットル当たり約２×１０４から約６×１０６細胞の前記造
血細胞を含む細胞集団を維持することステップを含む。ある特定の態様では、前記造血幹
細胞または前駆細胞を１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接
種する。具体的な態様では、前記造血幹細胞または前駆細胞を約３×１０４細胞／ｍＬで
前記第１の培地中に最初に接種する。
一実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造する３段階法が本明
細書で提供される。ある特定の実施形態では、本明細書で述べた３段階法によりＮＫ細胞
および／またはＩＬＣ３細胞集団を製造するための、本明細書で述べた、造血細胞の増幅
および分化の方法は、１ミリリットル当たり約２×１０４から約６×１０６細胞の前記造
血細胞を含む細胞集団を維持することステップを含む。ある特定の態様では、前記造血幹
細胞または前駆細胞を１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで前記第１の培地中に最初に接
種する。具体的な態様では、前記造血幹細胞または前駆細胞を約３×１０４細胞／ｍＬで
前記第１の培地中に最初に接種する。
【0154】
ある特定の態様では、細胞の前記第１の集団を５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで前
記第２の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第１の集団を約１×１
０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種する。
記第２の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第１の集団を約１×１
０５細胞／ｍＬで前記第２の培地中に最初に接種する。
【0155】
ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで前
記第３の培地中に最初に接種する。ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１
０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、
細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。
より具体的な態様では、細胞の前記第２の集団をスピナーフラスコ中で約５×１０５細胞
／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第２の集団
を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。より具体的な態様では
、細胞の前記第２の集団を静的培養で約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初
に接種する。
記第３の培地中に最初に接種する。ある特定の態様では、細胞の前記第２の集団を１×１
０５～１×１０６細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、
細胞の前記第２の集団を約５×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。
より具体的な態様では、細胞の前記第２の集団をスピナーフラスコ中で約５×１０５細胞
／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。具体的な態様では、細胞の前記第２の集団
を約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初に接種する。より具体的な態様では
、細胞の前記第２の集団を静的培養で約３×１０５細胞／ｍＬで前記第３の培地中に最初
に接種する。
【0156】
ある特定の実施形態では、３段階法は、例えば、本明細書で述べたように、第１の培地
中で規定の時間にわたり造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前
駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造することを含む第１の段階（「段階１」）を
含む。ある特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（
Ｔｐｏ）を含む。ある特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに
加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ
－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。具体的な実施形態では、第１の培地のそれぞれ
は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、
ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第
１の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地は、
添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な実施形態では、第１の
培地は、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地は、脱硫酸化グリコ
サミノグリカンを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地のそれぞれは、幹細胞
動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ
およびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第１の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）また
は両方を欠いている。
中で規定の時間にわたり造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前
駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造することを含む第１の段階（「段階１」）を
含む。ある特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（
Ｔｐｏ）を含む。ある特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに
加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ
－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。具体的な実施形態では、第１の培地のそれぞれ
は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、
ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第
１の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地は、
添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な実施形態では、第１の
培地は、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地は、脱硫酸化グリコ
サミノグリカンを欠いている。具体的な実施形態では、第１の培地のそれぞれは、幹細胞
動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ
およびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第１の培地は、白血病抑
制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）また
は両方を欠いている。
【0157】
ある特定の実施形態では、その後、「段階２」において、例えば、本明細書で述べたよ
うに、第２の培地中で規定の時間にわたり前記細胞を培養して、細胞の第２の集団を製造
する。ある特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびインターロイキン１
５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の実施形態では、第２の培地は
、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、
ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実
施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ
－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。
具体的な実施形態では、第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施
形態では、第２の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体
的な実施形態では、第２の培地は、ヘパリン、例えば、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な
実施形態では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。ある特定の
実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、Ｓ
ＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な
実施形態では、第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパ
ク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）または両方を欠いている。
うに、第２の培地中で規定の時間にわたり前記細胞を培養して、細胞の第２の集団を製造
する。ある特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびインターロイキン１
５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の実施形態では、第２の培地は
、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、
ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実
施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ
－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。
具体的な実施形態では、第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な実施
形態では、第２の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体
的な実施形態では、第２の培地は、ヘパリン、例えば、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な
実施形態では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。ある特定の
実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、Ｓ
ＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な
実施形態では、第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパ
ク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）または両方を欠いている。
【0158】
ある特定の実施形態では、その後、「段階３」において、例えば、本明細書で述べたよ
うに、第３の培地中で規定の時間にわたり前記細胞を培養して、細胞の第３の集団、例え
ば、ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の実施形態では、第３の培地は、ＩＬ－
２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の実施
形態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ
－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形
態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－
７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第１の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌのうちの１つ、２つまたは３つすべてを欠
いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリ
カンを欠いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカ
ンを欠いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、ヘパリン、例えば、ＬＭＷＨを
欠いている。
うに、第３の培地中で規定の時間にわたり前記細胞を培養して、細胞の第３の集団、例え
ば、ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の実施形態では、第３の培地は、ＩＬ－
２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の実施
形態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ
－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形
態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－
７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な実施形態では、第１の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌのうちの１つ、２つまたは３つすべてを欠
いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、添加される脱硫酸化グリコサミノグリ
カンを欠いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカ
ンを欠いている。具体的な実施形態では、第３の培地は、ヘパリン、例えば、ＬＭＷＨを
欠いている。
【0159】
具体的な実施形態では、３段階法を使用して、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集
団を製造する。ある特定の実施形態では、３段階法は、間質フィーダー細胞支持の非存在
下で行われる。ある特定の実施形態では、３段階法は、外から添加されるステロイド（例
えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾンまたはその誘導体）の非存在下で行われる。
団を製造する。ある特定の実施形態では、３段階法は、間質フィーダー細胞支持の非存在
下で行われる。ある特定の実施形態では、３段階法は、外から添加されるステロイド（例
えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾンまたはその誘導体）の非存在下で行われる。
【0160】
ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロ
ンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用する第１の培地は
、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３リガ
ンド （Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー
刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの
１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用する第１の培地は、幹細胞
動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、
Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用
する第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－
６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な態様では、第
１の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、添加
される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、
ＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカ
ンを欠いている。ある特定の態様では、前記Ｔｐｏは、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ
、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２５ｎｇ／
ｍＬの濃度で第１の培地中に存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨ
は、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ
／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７
は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ
～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ
／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６
は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ
－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ
／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～
０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨは
、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。
ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、以下、ゲンタマイシンのような抗生物質
；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベータ－メルカプトエタノールのような
抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン酸；エタノールアミン；ならびにグル
タチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。ある特定の実施形態では、第１の培地の
主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、
ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩ
ＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（
登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ
’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしくは低グルコ
ースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙ
ｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のよ
うな市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）
、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭ
ＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥ
Ｍ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしく
は低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１
Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１
６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれている
成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、ＧＢＧＭ（登録商
標）でない。上記の実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ
、ＭＩＰ－１αまたは両方を欠いている。
ンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用する第１の培地は
、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３リガ
ンド （Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー
刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの
１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、３段階法に使用する第１の培地は、幹細胞
動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、
Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用
する第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－
６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な態様では、第
１の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、添加
される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、
ＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカ
ンを欠いている。ある特定の態様では、前記Ｔｐｏは、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ
、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２５ｎｇ／
ｍＬの濃度で第１の培地中に存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨ
は、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ
／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７
は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ
～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ
／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６
は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ
－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ
／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～
０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第１の培地中に、ＬＭＷＨは
、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し
、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５
ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。
ある特定の態様では、第１の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在
し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２
５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する
。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、以下、ゲンタマイシンのような抗生物質
；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベータ－メルカプトエタノールのような
抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン酸；エタノールアミン；ならびにグル
タチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。ある特定の実施形態では、第１の培地の
主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、
ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩ
ＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（
登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ
’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしくは低グルコ
ースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙ
ｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のよ
うな市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）
、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭ
ＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥ
Ｍ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしく
は低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１
Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１
６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれている
成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、前記第１の培地は、ＧＢＧＭ（登録商
標）でない。上記の実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ
、ＭＩＰ－１αまたは両方を欠いている。
【0161】
ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第２の培地は、幹細胞動員剤およびイン
ターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の態様では、３
段階法に使用する第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆ
ｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つま
たは複数を含む。ある特定の実施形態では、３段階法に使用する第２の培地は、幹細胞動
員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、
Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用
する第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ
－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な態様では、
第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は、添
加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は
、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリ
カンを欠いている。ある特定の態様では、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の培地
中に存在する。ある特定の態様では、前記第２の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１
０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１
ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。
ある特定の態様では、前記第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－
６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／
ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６
は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ
－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ
／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～
０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは
、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎ
ｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ
～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－
３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～
３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－Ｃ
ＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０
．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の
培地中に、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌ
は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０
．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３
Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約
０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第２の培地は、以
下、ゲンタマイシンのような抗生物質；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベ
ータ－メルカプトエタノールのような抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン
酸；エタノールアミン；ならびにグルタチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。あ
る特定の実施形態では、第２の培地の主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培
養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）
、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、Ｏ
ＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰ
ＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、
または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇ
ｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよ
び／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のような市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（
登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標
）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ
ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、
２：１比、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄ
ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、Ｉ
ＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／
組織培養培地に一般的に含まれている成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、
前記第２の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）でない。上記の実施形態のいずれかの具体的な
実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αまたは両方を欠いている。
ターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている。ある特定の態様では、３
段階法に使用する第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆ
ｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つま
たは複数を含む。ある特定の実施形態では、３段階法に使用する第２の培地は、幹細胞動
員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、
Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、３段階法に使用
する第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ
－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。具体的な態様では、
第２の培地は、添加されるＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は、添
加される脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は
、ＬＭＷＨを欠いている。具体的な態様では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリ
カンを欠いている。ある特定の態様では、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬまたは約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の培地
中に存在する。ある特定の態様では、前記第２の培地中に、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１
０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存
在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１
ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。
ある特定の態様では、前記第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／
ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－
６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／
ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６
は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの
濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍ
Ｌ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ
－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ
／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～
０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、ＬＭＷＨは
、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／
ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎ
ｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ
～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－
３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～
３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－Ｃ
ＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０
．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の
培地中に、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地中に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌ
は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｉ
Ｌ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度
で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０
．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、第２の培地中に、Ｆｌｔ－３
Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、
ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約
０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、前記第２の培地は、以
下、ゲンタマイシンのような抗生物質；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベ
ータ－メルカプトエタノールのような抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン
酸；エタノールアミン；ならびにグルタチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。あ
る特定の実施形態では、第２の培地の主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培
養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）
、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、Ｏ
ＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰ
ＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、
または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇ
ｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよ
び／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のような市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（
登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標
）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ
ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、
２：１比、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄ
ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、Ｉ
ＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／
組織培養培地に一般的に含まれている成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、
前記第２の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）でない。上記の実施形態のいずれかの具体的な
実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αまたは両方を欠いている。
【0162】
ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１
５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に
使用する前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。
ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５
を含み、ＳＣＦおよびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する
前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、幹細胞
動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では
、３段階法に使用する前記第３の培地は、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、Ｌ
ＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、幹細
胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。ある特定
の態様では、３段階法に使用される前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み
、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用され
る第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ
－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、３段
階法に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６
、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前
記ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し
、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在す
る。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃
度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃
度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、３００Ｕ／ｍ
Ｌ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、
前記ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－
１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、
前記第３の培地中に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－
６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在する。ある特定の態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～
３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－Ｃ
ＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０
．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、前記第
３の培地中に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは
、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在する。ある特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１０００
ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、Ｓ
ＣＦを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１
０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含
み、ＳＣＦを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－
７， ２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠いている
。ある特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ
ＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ
１を欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１００
０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いている
。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ Ｓ
ＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１
を欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎ
ｇ／ｍＬ ＳＣＦおよび１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を含み、ＳＲ１を欠いている。上
記の実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、Ｆｌｔ－３Ｌのうちの１つ、２つまたは３つすべてを欠いている。
５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に
使用する前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。
ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５
を含み、ＳＣＦおよびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する
前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、幹細胞
動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では
、３段階法に使用する前記第３の培地は、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、Ｌ
ＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用する前記第３の培地は、幹細
胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠いている。ある特定
の態様では、３段階法に使用される前記第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み
、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている。ある特定の態様では、３段階法に使用され
る第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ
－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、３段
階法に使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６
、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦのそれぞれを含む。ある特定の態様では、前
記ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し
、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在す
る。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃
度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃
度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、前記ＩＬ－２は、３００Ｕ／ｍ
Ｌ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－１５は、１０ｎ
ｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、
前記ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在し、前記ＩＬ－
１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地中に存在する。ある特定の態様では、
前記第３の培地中に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－
６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍ
Ｌ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ
／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃
度で存在する。ある特定の態様では、前記第３の培地中に、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～
３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬ
の濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－Ｃ
ＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０
．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。ある特定の態様では、前記第
３の培地中に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎ
ｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは
、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で
存在する。ある特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１０００
ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、Ｓ
ＣＦを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、１
０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含
み、ＳＣＦを欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－
７， ２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５および１０μＭ ＳＲ１を含み、ＳＣＦを欠いている
。ある特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ
ＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ
１を欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬ ＳＣＦ、１００
０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１を欠いている
。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬ Ｓ
ＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２および２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１５を含み、ＳＲ１
を欠いている。ある特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－７、２２ｎ
ｇ／ｍＬ ＳＣＦおよび１０００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を含み、ＳＲ１を欠いている。上
記の実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、Ｆｌｔ－３Ｌのうちの１つ、２つまたは３つすべてを欠いている。
【0163】
ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、以下、ゲンタマイシンのような抗生物質
；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベータ－メルカプトエタノールのような
抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン酸；エタノールアミン；ならびにグル
タチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。ある特定の実施形態では、第３の培地の
主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、
ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩ
ＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（
登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ
’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしくは低グルコ
ースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙ
ｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のよ
うな市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）
、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭ
ＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥ
Ｍ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしく
は低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１
Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１
６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれている
成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商
標）でない。
；トランスフェリン、インスリンおよび／またはベータ－メルカプトエタノールのような
抗酸化物質；亜セレン酸ナトリウム；アスコルビン酸；エタノールアミン；ならびにグル
タチオンのうちの１つまたは複数をさらに含む。ある特定の実施形態では、第３の培地の
主成分となる培地は、当業者に公知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、
ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩ
ＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（
登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：Ｈａｍ
’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしくは低グルコ
ースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙ
ｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１６４０のよ
うな市販の細胞／組織培養培地；またはＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）
、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭ
ＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥ
Ｍ：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１比、または高グルコースもしく
は低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１
Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／もしくはＲＰＭＩ－１
６４０に含まれている成分のような、公知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれている
成分を含む培地である。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商
標）でない。
【0164】
一般的に、個別に列挙する培地成分は、前記培地の組成不明の成分中の可能な成分を指
すものでない。例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５は、第１の培地、第２の
培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２
およびＩＬ－１５は、血清中に含まれない。さらに、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ
、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦは、第１の培地、第２の
培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例えば、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ
－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦは、血清中
に含まれない。
すものでない。例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５は、第１の培地、第２の
培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例えば、前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２
およびＩＬ－１５は、血清中に含まれない。さらに、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ
、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦは、第１の培地、第２の
培地または第３の培地の組成不明の成分中に含まれない、例えば、前記ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ
－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦは、血清中
に含まれない。
【0165】
ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地は、ヒト血清ＡＢ
を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のいずれも
、１％～２０％のヒト血清ＡＢ、５％～１５％のヒト血清ＡＢまたは約２、５もしくは１
０％のヒト血清ＡＢを含む。
を含む。ある特定の態様では、前記第１の培地、第２の培地または第３の培地のいずれも
、１％～２０％のヒト血清ＡＢ、５％～１５％のヒト血清ＡＢまたは約２、５もしくは１
０％のヒト血清ＡＢを含む。
【0166】
本明細書で述べた３段階法における、ある特定の実施形態では、前記造血幹細胞または
前駆細胞を前記第１の培地中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０日間培養する。本明細書で述べ
た３段階法における、ある特定の実施形態では、細胞を前記第２の培地中で１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９または２０日間培養する。本明細書で述べた３段階法における、ある特定の実施形態で
は、細胞を前記第３の培地中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、
２６、２７、２８、２９もしくは３０日間または３０日を超える期間にわたり培養する。
前駆細胞を前記第１の培地中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０日間培養する。本明細書で述べ
た３段階法における、ある特定の実施形態では、細胞を前記第２の培地中で１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９または２０日間培養する。本明細書で述べた３段階法における、ある特定の実施形態で
は、細胞を前記第３の培地中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、
２６、２７、２８、２９もしくは３０日間または３０日を超える期間にわたり培養する。
【0167】
本明細書で述べた３段階法における、具体的な実施形態では、前記造血幹細胞または前
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で７～１
３日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地
中で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で２～６日間培養して、細胞の第２の
集団を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で１０～３０日間培養する、す
なわち、細胞を合計１９～４９日間培養する。
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で７～１
３日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地
中で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で２～６日間培養して、細胞の第２の
集団を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で１０～３０日間培養する、す
なわち、細胞を合計１９～４９日間培養する。
【0168】
本明細書で述べた３段階法における、具体的な実施形態では、前記造血幹細胞または前
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で８～１
２日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地
中で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で３～５日間培養して、細胞の第２の
集団を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で１５～２５日間培養する、す
なわち、細胞を合計２６～４２日間培養する。
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で８～１
２日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地
中で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で３～５日間培養して、細胞の第２の
集団を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で１５～２５日間培養する、す
なわち、細胞を合計２６～４２日間培養する。
【0169】
本明細書で述べた３段階法における、具体的な実施形態では、前記造血幹細胞または前
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で約１０
日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地中
で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で約４日間培養して、細胞の第２の集団
を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で約２１日間培養する、すなわち、
細胞を合計約３５日間培養する。
駆細胞を、前記第２の培地中で前記培養するステップの前に、前記第１の培地中で約１０
日間培養して、細胞の第１の集団を製造し；細胞の前記第１の集団を、前記第３の培地中
で前記培養するステップの前に前記第２の培地中で約４日間培養して、細胞の第２の集団
を製造し；細胞の前記第２の集団を前記第３の培地中で約２１日間培養する、すなわち、
細胞を合計約３５日間培養する。
【0170】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造
する。ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血
幹細胞の数と比較して少なくとも１０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。
ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞
の数と比較して少なくとも５０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と
比較して少なくとも７５，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態
様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ
）染色により決定する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率をアネ
キシンＶ染色により決定する。具体的な態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を
７ＡＡＤ染色およびアネキシンＶ染色の両方により決定する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞の生存率をトリパンブルー染色により決定する。
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造
する。ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血
幹細胞の数と比較して少なくとも１０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。
ある特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞
の数と比較して少なくとも５０，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と
比較して少なくとも７５，０００倍多いナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態
様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ
）染色により決定する。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率をアネ
キシンＶ染色により決定する。具体的な態様では、前記ナチュラルキラー細胞の生存率を
７ＡＡＤ染色およびアネキシンＶ染色の両方により決定する。ある特定の態様では、前記
ナチュラルキラー細胞の生存率をトリパンブルー染色により決定する。
【0171】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。あ
る特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の
数と比較して少なくとも１０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様で
は、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少
なくとも５０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、前記３段階
法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少なくとも７５，
０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。
された造血幹細胞の数と比較して少なくとも５０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。あ
る特定の態様では、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の
数と比較して少なくとも１０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様で
は、前記３段階法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少
なくとも５０，０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、前記３段階
法は、前記第１の培地中に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して少なくとも７５，
０００倍多いＩＬＣ３細胞を製造する。
【0172】
ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラル
キラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、
少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細
胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３
－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、
３段階法は、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュ
ラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ
５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
キラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、
少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細
胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３
－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、
３段階法は、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュ
ラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ
５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
【0173】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ
３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－
ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。あ
る特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ
３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特
定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－
ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含むナチュラルキラー細胞を製造する。
【0174】
ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では
、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－
ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する
３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩ
ＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくと
も８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。
ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では
、本明細書で開示する３段階法は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－
ＩＬＣ３細胞を含むＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する
３段階法は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むＩ
ＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、本明細書で開示する３段階法は、少なくと
も８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含むナチュラルキラー細胞を
製造する。
【0175】
ある特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：
１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に
対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある
特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比
でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して
少なくとも３５％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ
ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なく
とも４５％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様で
は、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉ
ｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６
０％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３
段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏ
またはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の
細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。
１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に
対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある
特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比
でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して
少なくとも３５％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の
態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ
ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なく
とも４５％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様で
は、３段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉ
ｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６
０％の細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。ある特定の態様では、３
段階法は、ナチュラルキラー細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏ
またはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の
細胞傷害性を示す前記ナチュラルキラー細胞を製造する。
【0176】
ある特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比で
ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少
なくとも２０％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、
３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたは
ｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷
害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細
胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養
した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３
細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を
１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２
細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特
定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖ
ｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも
７５％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少
なくとも２０％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、
３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたは
ｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷
害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細
胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養
した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３
細胞を製造する。ある特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を
１０：１の比でｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２
細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。ある特
定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞およびＫ５６２細胞を１０：１の比でｉｎ ｖ
ｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで共培養した場合、前記Ｋ５６２細胞に対して少なくとも
７５％の細胞傷害性を示す前記ＩＬＣ３細胞を製造する。
【0177】
ある特定の態様では、前記第３の培養するステップの後、細胞の前記第３の集団、例え
ば、ナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞の前記集団を凍結保存する。ある
特定の態様では、前記第４の培養するステップの後、細胞の前記第４の集団、例えば、ナ
チュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞の前記集団を凍結保存する。
ば、ナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞の前記集団を凍結保存する。ある
特定の態様では、前記第４の培養するステップの後、細胞の前記第４の集団、例えば、ナ
チュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞の前記集団を凍結保存する。
【0178】
ある特定の態様では、ナチュラルキラー細胞、すなわち、本明細書で述べた３段階法に
より製造されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。したが
って、本明細書で述べた３段階法により製造された単離ナチュラルキラー細胞集団が本明
細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくと
も２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前
記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６
０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナ
チュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細
胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくも６０％の
ＣＤ１６－細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少な
くも８０％のＣＤ１６－細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞
集団は、少なくも２０％のＣＤ９４＋細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラ
ルキラー細胞集団は、少なくも４０％のＣＤ９４＋細胞を含む。
より製造されたナチュラルキラー細胞を含む細胞の集団が本明細書で提供される。したが
って、本明細書で述べた３段階法により製造された単離ナチュラルキラー細胞集団が本明
細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくと
も２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前
記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラ
ー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６
０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナ
チュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細
胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少なくも６０％の
ＣＤ１６－細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞集団は、少な
くも８０％のＣＤ１６－細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラルキラー細胞
集団は、少なくも２０％のＣＤ９４＋細胞を含む。具体的な実施形態では、前記ナチュラ
ルキラー細胞集団は、少なくも４０％のＣＤ９４＋細胞を含む。
【0179】
ある特定の態様では、パーフォリンおよび／またはＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、
アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つまたは複数を発現しな
い、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞の集団が
本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、パーフォリ
ンおよびＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体またはＩＬ１Ｒ１の
いずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、
ＧＺＭＢ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。ある特定の態様
では、前記ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。ある特定の態様では、前記ナ
チュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つまたは複数を発現しな
い、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞の集団が
本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、パーフォリ
ンおよびＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体またはＩＬ１Ｒ１の
いずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、
ＧＺＭＢ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。ある特定の態様
では、前記ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。ある特定の態様では、前記ナ
チュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
【0180】
ある特定の態様では、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１のうちの
１つまたは複数を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳのうちの１つまたは
複数を発現しない、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞の
集団が本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、
アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンまたはＥＯ
ＭＥＳのいずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６お
よび／または２Ｂ４をさらに発現する。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬ
－２２、ＴＮＦαおよびＤＮＡＭ－１のうちの１つまたは複数をさらに発現する。ある特
定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦαおよび
ＤＮＡＭ－１を発現する。
１つまたは複数を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳのうちの１つまたは
複数を発現しない、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞の
集団が本明細書で提供される。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、
アリール炭化水素受容体およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリンまたはＥＯ
ＭＥＳのいずれも発現しない。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６お
よび／または２Ｂ４をさらに発現する。ある特定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬ
－２２、ＴＮＦαおよびＤＮＡＭ－１のうちの１つまたは複数をさらに発現する。ある特
定の態様では、前記ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦαおよび
ＤＮＡＭ－１を発現する。
【0181】
ある特定の態様では、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第
１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステッ
プ；（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠
いている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステ
ップ；（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれ
を欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造する
ステップ；ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ
－細胞を分離するステップ；ならびに（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０
：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１
：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０また
は１：５０の比で合わせて、細胞の第４の集団を製造するステップを含む、ナチュラルキ
ラー細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き
、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の
実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低
分子量ヘパリンを含まない。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１
ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている。ある特定の態様で
は、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の
比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、
細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合
わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第
４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられ
ている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ
１１ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集
団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられてい
る。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞が１：５０の比で合わせられている。
１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステッ
プ；（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠
いている第２の培地中で細胞の第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステ
ップ；（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれ
を欠いている第３の培地中で細胞の第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造する
ステップ；ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ
－細胞を分離するステップ；ならびに（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞をＣＤ１１ａ－細胞と５０
：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１
：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０また
は１：５０の比で合わせて、細胞の第４の集団を製造するステップを含む、ナチュラルキ
ラー細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を製造する方法が本明細書で提供される。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実
施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き
、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１αおよびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の
実施形態では、第１の培地、第２の培地または第３の培地のどれもヘパリン、例えば、低
分子量ヘパリンを含まない。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１
ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５０：１の比で合わせられている。ある特定の態様で
は、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が２０：１の
比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１０：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、
細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が５：１の比で合
わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞が１：１の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第
４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：５の比で合わせられ
ている。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ
１１ａ－細胞が１：１０の比で合わせられている。ある特定の態様では、細胞の第４の集
団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞が１：２０の比で合わせられてい
る。ある特定の態様では、細胞の第４の集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞が１：５０の比で合わせられている。
【0182】
５．３． 幹細胞動員因子
５．３．１．化学定義
本明細書に記載の幹細胞動員因子についての開示の理解を補助するために、多数の用語
が下段にて定義される。
５．３．１．化学定義
本明細書に記載の幹細胞動員因子についての開示の理解を補助するために、多数の用語
が下段にて定義される。
【0183】
一般に、本明細書で使用される命名法、ならびに本明細書に記載の生物学、細胞生物学
、生化学、有機化学、医化学および薬理学に関する実験手順は、当技術分野において周知
の、一般に用いられているものである。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるす
べての専門および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解され
ているのと同じ意味を一般に有する。
、生化学、有機化学、医化学および薬理学に関する実験手順は、当技術分野において周知
の、一般に用いられているものである。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるす
べての専門および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解され
ているのと同じ意味を一般に有する。
【0184】
用語「約」または「おおよそ」は、当業者によって決定される特定の値について許容さ
れる誤差を意味し、前記誤差は、前記値が測定または決定される方法に一部依存する。あ
る特定の実施形態では、用語「約」または「おおよそ」は、１、２、３または４標準偏差
内を意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「おおよそ」は、所定の値ま
たは範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３
％、２％、１％、０．５％または０．０５％以内を意味する。
れる誤差を意味し、前記誤差は、前記値が測定または決定される方法に一部依存する。あ
る特定の実施形態では、用語「約」または「おおよそ」は、１、２、３または４標準偏差
内を意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「おおよそ」は、所定の値ま
たは範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３
％、２％、１％、０．５％または０．０５％以内を意味する。
【0185】
用語「アリール炭化水素受容体」または「ＡＨＲ」は、ヒトにおけるＡＨＲ遺伝子によ
りコードされているタンパク質、またはその変異体（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ
３５８６９．２およびＡＡＨ７００８０．１を参照されたい）を意味する。
りコードされているタンパク質、またはその変異体（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ
３５８６９．２およびＡＡＨ７００８０．１を参照されたい）を意味する。
【0186】
用語「アリール炭化水素受容体アンタゴニスト」、「ＡＨＲアンタゴニスト」、「アリ
ール炭化水素受容体阻害剤」、または「ＡＨＲ阻害剤」は、アリール炭化水素受容体の活
性をダウンレギュレートするまたは低下させる化合物を意味する。
ール炭化水素受容体阻害剤」、または「ＡＨＲ阻害剤」は、アリール炭化水素受容体の活
性をダウンレギュレートするまたは低下させる化合物を意味する。
【0187】
用語「アルキル」は、直鎖状のまたは分岐した飽和一価炭化水素ラジカルを意味し、こ
こでのアルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れている。用語「アルキル」はまた、別段の規定がない限り、直鎖状アルキルと分岐アル
キルの両方を包含する。ある特定の実施形態では、アルキルは、炭素原子１～２０個（Ｃ
１～２０）、１～１５個（Ｃ１～１５）、１～１０個（Ｃ１～１０）、もしくは１～６個
（Ｃ１～６）を有する直鎖状の飽和一価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～
２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしく
は３～６個（Ｃ３～６）の分岐した飽和一価炭化水素ラジカルである。本明細書で使用さ
れる直鎖状Ｃ１～６および分岐Ｃ３－６アルキル基は、「低級アルキル」とも呼ばれる。
アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル（すべての異性体型を含む）、ｎ－
プロピル、イソプロピル、ブチル（すべての異性体型を含む）、ｎ－ブチル、イソブチル
、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、ペンチル（すべての異性体型を含む）、およびヘキシル
（すべての異性体型を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃ１～６
アルキルは、炭素原子１～６個の直鎖状の飽和一価炭化水素ラジカル、または炭素原子３
～６個の分岐した飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。
こでのアルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れている。用語「アルキル」はまた、別段の規定がない限り、直鎖状アルキルと分岐アル
キルの両方を包含する。ある特定の実施形態では、アルキルは、炭素原子１～２０個（Ｃ
１～２０）、１～１５個（Ｃ１～１５）、１～１０個（Ｃ１～１０）、もしくは１～６個
（Ｃ１～６）を有する直鎖状の飽和一価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～
２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしく
は３～６個（Ｃ３～６）の分岐した飽和一価炭化水素ラジカルである。本明細書で使用さ
れる直鎖状Ｃ１～６および分岐Ｃ３－６アルキル基は、「低級アルキル」とも呼ばれる。
アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル（すべての異性体型を含む）、ｎ－
プロピル、イソプロピル、ブチル（すべての異性体型を含む）、ｎ－ブチル、イソブチル
、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、ペンチル（すべての異性体型を含む）、およびヘキシル
（すべての異性体型を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃ１～６
アルキルは、炭素原子１～６個の直鎖状の飽和一価炭化水素ラジカル、または炭素原子３
～６個の分岐した飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。
【0188】
用語「アルキレン」は、直鎖状のまたは分岐した飽和二価炭化水素ラジカルを意味し、
ここでのアルキレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置
換されている。例えば、Ｃ１～６アルキレンは、炭素原子１～６個の直鎖状の飽和二価炭
化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した飽和二価炭化水素ラジカルを意味す
る。ある特定の実施形態では、アルキレンは、炭素原子１～２０個（Ｃ１～２０）、１～
１５個（Ｃ１～１５）、１～１０個（Ｃ１～１０）、もしくは１～６個（Ｃ１～６）を有
する直鎖状の飽和二価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２
０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３
～６）の分岐した飽和二価炭化水素ラジカルである。本明細書で使用される直鎖状Ｃ１～
６および分岐Ｃ３～６アルキレン基は、「低級アルキレン」とも呼ばれる。アルキレン基
の例としては、メチレン、エチレン、プロピレン（すべての異性体型を含む）、ｎ－プロ
ピレン、イソプロピレン、ブチレン（すべての異性体型を含む）、ｎ－ブチレン、イソブ
チレン、ｔ－ブチレン、ペンチレン（すべての異性体型を含む）、およびヘキシレン（す
べての異性体型を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
ここでのアルキレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置
換されている。例えば、Ｃ１～６アルキレンは、炭素原子１～６個の直鎖状の飽和二価炭
化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した飽和二価炭化水素ラジカルを意味す
る。ある特定の実施形態では、アルキレンは、炭素原子１～２０個（Ｃ１～２０）、１～
１５個（Ｃ１～１５）、１～１０個（Ｃ１～１０）、もしくは１～６個（Ｃ１～６）を有
する直鎖状の飽和二価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２
０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３
～６）の分岐した飽和二価炭化水素ラジカルである。本明細書で使用される直鎖状Ｃ１～
６および分岐Ｃ３～６アルキレン基は、「低級アルキレン」とも呼ばれる。アルキレン基
の例としては、メチレン、エチレン、プロピレン（すべての異性体型を含む）、ｎ－プロ
ピレン、イソプロピレン、ブチレン（すべての異性体型を含む）、ｎ－ブチレン、イソブ
チレン、ｔ－ブチレン、ペンチレン（すべての異性体型を含む）、およびヘキシレン（す
べての異性体型を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0189】
用語「アルケニル」は、１つまたは複数、一実施形態では１、２、３、４または５つ、
別の実施形態では１つの炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した一価炭
化水素ラジカルを意味する。アルケニルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている。用語「アルケニル」は、当業者により認識されている
ように、「シス」および「トランス」立体配置、または代替的に、「Ｚ」および「Ｅ」立
体配置を有すラジカルも包含する。本明細書で使用される用語「アルケニル」はまた、別
段の規定がない限り、直鎖状アルケニルと分岐アルケニルの両方を包含する。例えば、Ｃ
２～６アルケニルは、炭素原子２～６個の直鎖状の不飽和一価炭化水素ラジカル、または
炭素原子３～６個の分岐した不飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。ある特定の実施形
態では、アルケニルは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）
、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の一価炭化水素ラ
ジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）
、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した一価炭化水素ラ
ジカルである。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペン－１－イル、プロペン－
２－イル、アリル、ブテニル、および４－メチルブテニルが挙げられるが、これらに限定
されない。
別の実施形態では１つの炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した一価炭
化水素ラジカルを意味する。アルケニルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている。用語「アルケニル」は、当業者により認識されている
ように、「シス」および「トランス」立体配置、または代替的に、「Ｚ」および「Ｅ」立
体配置を有すラジカルも包含する。本明細書で使用される用語「アルケニル」はまた、別
段の規定がない限り、直鎖状アルケニルと分岐アルケニルの両方を包含する。例えば、Ｃ
２～６アルケニルは、炭素原子２～６個の直鎖状の不飽和一価炭化水素ラジカル、または
炭素原子３～６個の分岐した不飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。ある特定の実施形
態では、アルケニルは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）
、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の一価炭化水素ラ
ジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）
、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した一価炭化水素ラ
ジカルである。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペン－１－イル、プロペン－
２－イル、アリル、ブテニル、および４－メチルブテニルが挙げられるが、これらに限定
されない。
【0190】
用語「アルケニレン」は、１つまたは複数、一実施形態では１～５つ、別の実施形態で
は１つの炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した二価炭化水素ラジカル
を意味する。アルケニレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選
択で置換されている。用語「アルケニレン」は、当業者により認識されているように、「
シス」もしくは「トランス」立体配置もしくはこれらの混合配置、または代替的に、「Ｚ
」もしくは「Ｅ」立体配置もしくはこれらの混合配置を有すラジカルを包含する。例えば
、Ｃ２～６アルケニレンは、炭素原子２～６個の直鎖状の不飽和二価炭化水素ラジカル、
または炭素原子３～６個の分岐した不飽和二価炭化水素ラジカルを意味する。ある特定の
実施形態では、アルケニレンは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２
～１５）、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の二価炭
化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３
～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した二価炭
化水素ラジカルである。アルケニレン基の例としては、エテニレン、アリレン、プロペニ
レン、ブテニレン、および４－メチルブテニレンが挙げられるが、これらに限定されない
。
は１つの炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した二価炭化水素ラジカル
を意味する。アルケニレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選
択で置換されている。用語「アルケニレン」は、当業者により認識されているように、「
シス」もしくは「トランス」立体配置もしくはこれらの混合配置、または代替的に、「Ｚ
」もしくは「Ｅ」立体配置もしくはこれらの混合配置を有すラジカルを包含する。例えば
、Ｃ２～６アルケニレンは、炭素原子２～６個の直鎖状の不飽和二価炭化水素ラジカル、
または炭素原子３～６個の分岐した不飽和二価炭化水素ラジカルを意味する。ある特定の
実施形態では、アルケニレンは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２
～１５）、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の二価炭
化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３
～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した二価炭
化水素ラジカルである。アルケニレン基の例としては、エテニレン、アリレン、プロペニ
レン、ブテニレン、および４－メチルブテニレンが挙げられるが、これらに限定されない
。
【0191】
用語「アルキニル」は、１つまたは複数、一実施形態では１、２、３、４または５つ、
別の実施形態では１つの炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した一価炭
化水素ラジカルを意味する。アルキニルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている。用語「アルキニル」はまた、別段の規定がない限り、
直鎖状アルキニルと分岐アルキニルの両方を包含する。ある特定の実施形態では、アルキ
ニルは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）、２～１０個（
Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の一価炭化水素ラジカルであるか
、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～５）、３～１０個（Ｃ
３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した一価炭化水素ラジカルである。ア
ルキニル基の例としては、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（－ＣＨ２Ｃ≡Ｃ
Ｈ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃ２～６アルキニルは、炭素原子
２～６個の直鎖状の不飽和一価炭化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した不
飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。
別の実施形態では１つの炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した一価炭
化水素ラジカルを意味する。アルキニルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている。用語「アルキニル」はまた、別段の規定がない限り、
直鎖状アルキニルと分岐アルキニルの両方を包含する。ある特定の実施形態では、アルキ
ニルは、炭素原子２～２０個（Ｃ２～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）、２～１０個（
Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（Ｃ２～６）の直鎖状の一価炭化水素ラジカルであるか
、または炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～５）、３～１０個（Ｃ
３～１０）、もしくは３～６個（Ｃ３～６）の分岐した一価炭化水素ラジカルである。ア
ルキニル基の例としては、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（－ＣＨ２Ｃ≡Ｃ
Ｈ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃ２～６アルキニルは、炭素原子
２～６個の直鎖状の不飽和一価炭化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した不
飽和一価炭化水素ラジカルを意味する。
【0192】
用語「アルキニレン」は、１つまたは複数、一実施形態では１～５つ、別の実施形態で
は１つの炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した二価炭化水素ラジカル
を意味する。アルキニレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選
択で置換されている。例えば、Ｃ２～６アルキニレンは、炭素原子２～６個の直鎖状の不
飽和二価炭化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した不飽和二価炭化水素ラジ
カルを意味する。ある特定の実施形態では、アルキニレンは、炭素原子２～２０個（Ｃ２
～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（
Ｃ２～６）の直鎖状の二価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３
～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（
Ｃ３～６）の分岐した二価炭化水素ラジカルである。アルキニレン基の例としては、エチ
ニレン、プロピニレン（すべての異性体型、例えば、１－プロピニレンおよびプロパルギ
レンを含む）、ブチニレン（すべての異性体型、例えば、１－ブチン－１－イレンおよび
２－ブチン－１－イレンを含む）、ペンチニレン（すべての異性体型、例えば、１－ペン
チン－１－イレンおよび１－メチル－２－ブチン－１－イレンを含む）、およびヘキシニ
レン（すべての異性体型、例えば、１－ヘキシン－１－イレンを含む）が挙げられるが、
これらに限定されない。
は１つの炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状のまたは分岐した二価炭化水素ラジカル
を意味する。アルキニレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選
択で置換されている。例えば、Ｃ２～６アルキニレンは、炭素原子２～６個の直鎖状の不
飽和二価炭化水素ラジカル、または炭素原子３～６個の分岐した不飽和二価炭化水素ラジ
カルを意味する。ある特定の実施形態では、アルキニレンは、炭素原子２～２０個（Ｃ２
～２０）、２～１５個（Ｃ２～１５）、２～１０個（Ｃ２～１０）、もしくは２～６個（
Ｃ２～６）の直鎖状の二価炭化水素ラジカルであるか、または炭素原子３～２０個（Ｃ３
～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、もしくは３～６個（
Ｃ３～６）の分岐した二価炭化水素ラジカルである。アルキニレン基の例としては、エチ
ニレン、プロピニレン（すべての異性体型、例えば、１－プロピニレンおよびプロパルギ
レンを含む）、ブチニレン（すべての異性体型、例えば、１－ブチン－１－イレンおよび
２－ブチン－１－イレンを含む）、ペンチニレン（すべての異性体型、例えば、１－ペン
チン－１－イレンおよび１－メチル－２－ブチン－１－イレンを含む）、およびヘキシニ
レン（すべての異性体型、例えば、１－ヘキシン－１－イレンを含む）が挙げられるが、
これらに限定されない。
【0193】
用語「シクロアルキル」は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選
択で置換されている、環式飽和または非芳香族不飽和、架橋または非架橋一価炭化水素ラ
ジカルを意味する。ある特定の実施形態では、シクロアルキルは、環式不飽和架橋または
非架橋一価炭化水素ラジカルである。ある特定の実施形態では、シクロアルキルは、炭素
原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）
、または３～７個（Ｃ３～７）を有する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピ
ル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２．
１．１］ヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、デカリニル、およびアダマンチル
が挙げられるが、これらに限定されない。
択で置換されている、環式飽和または非芳香族不飽和、架橋または非架橋一価炭化水素ラ
ジカルを意味する。ある特定の実施形態では、シクロアルキルは、環式不飽和架橋または
非架橋一価炭化水素ラジカルである。ある特定の実施形態では、シクロアルキルは、炭素
原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）
、または３～７個（Ｃ３～７）を有する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピ
ル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２．
１．１］ヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、デカリニル、およびアダマンチル
が挙げられるが、これらに限定されない。
【0194】
用語「シクロアルキレン」は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されている、環式二価炭化水素ラジカルを意味する。一実施形態では、シクロ
アルキル基は、飽和している、もしくは不飽和だが非芳香族の、および／または架橋して
いる、および／もしくは非架橋の、および／または縮合している二環式の基である。ある
特定の実施形態では、シクロアルキレンは、炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１
５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、または３～７個（Ｃ３～７）を有する
。シクロアルキレン基の例としては、シクロプロピレン（例えば、１，１－シクロプロピ
レンおよび１，２－シクロプロピレン）、シクロブチレン（例えば、１，１－シクロブチ
レン、１，２－シクロブチレン、または１，３－シクロブチレン）、シクロペンチレン（
例えば、１，１－シクロペンチレン、１，２－シクロペンチレン、または１，３－シクロ
ペンチレン）、シクロヘキシレン（例えば、１，１－シクロヘキシレン、１，２－シクロ
ヘキシレン、１，３－シクロヘキシレン、または１，４－シクロヘキシレン）、シクロヘ
プチレン（例えば、１，１－シクロヘプチレン、１，２－シクロヘプチレン、１，３－シ
クロヘプチレン、または１，４－シクロヘプチレン）、デカリニレン、およびアダマンチ
レンが挙げられるが、これらに限定されない。
選択で置換されている、環式二価炭化水素ラジカルを意味する。一実施形態では、シクロ
アルキル基は、飽和している、もしくは不飽和だが非芳香族の、および／または架橋して
いる、および／もしくは非架橋の、および／または縮合している二環式の基である。ある
特定の実施形態では、シクロアルキレンは、炭素原子３～２０個（Ｃ３～２０）、３～１
５個（Ｃ３～１５）、３～１０個（Ｃ３～１０）、または３～７個（Ｃ３～７）を有する
。シクロアルキレン基の例としては、シクロプロピレン（例えば、１，１－シクロプロピ
レンおよび１，２－シクロプロピレン）、シクロブチレン（例えば、１，１－シクロブチ
レン、１，２－シクロブチレン、または１，３－シクロブチレン）、シクロペンチレン（
例えば、１，１－シクロペンチレン、１，２－シクロペンチレン、または１，３－シクロ
ペンチレン）、シクロヘキシレン（例えば、１，１－シクロヘキシレン、１，２－シクロ
ヘキシレン、１，３－シクロヘキシレン、または１，４－シクロヘキシレン）、シクロヘ
プチレン（例えば、１，１－シクロヘプチレン、１，２－シクロヘプチレン、１，３－シ
クロヘプチレン、または１，４－シクロヘプチレン）、デカリニレン、およびアダマンチ
レンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0195】
用語「アリール」は、少なくとも１つの芳香族炭化水素環を含有する、単環式芳香族炭
素環基および／または多環式一価芳香族炭素環基を意味する。ある特定の実施形態では、
アリールは、環原子６～２０個（Ｃ６～２０）、６～１５個（Ｃ６～１５）、または６～
１０個（Ｃ６～１０）を有する。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、フルオ
レニル、アズレニル、アントリル、フェナントリル、ピレニル、ビフェニル、およびテル
フェニルが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、用語「アリ
ール」は、環の１つが芳香族であり、その他が、飽和されていてもよく、部分不飽和であ
ってもよく、または芳香族であってよい、二環式または三環式炭素環、例えば、ジヒドロ
ナフチル、インデニル、インダニル、またはテトラヒドロナフチル（テトラリニル）を意
味する。アリールは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換
されている。
素環基および／または多環式一価芳香族炭素環基を意味する。ある特定の実施形態では、
アリールは、環原子６～２０個（Ｃ６～２０）、６～１５個（Ｃ６～１５）、または６～
１０個（Ｃ６～１０）を有する。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、フルオ
レニル、アズレニル、アントリル、フェナントリル、ピレニル、ビフェニル、およびテル
フェニルが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、用語「アリ
ール」は、環の１つが芳香族であり、その他が、飽和されていてもよく、部分不飽和であ
ってもよく、または芳香族であってよい、二環式または三環式炭素環、例えば、ジヒドロ
ナフチル、インデニル、インダニル、またはテトラヒドロナフチル（テトラリニル）を意
味する。アリールは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換
されている。
【0196】
用語「アリーレン」は、少なくとも１つの芳香族炭素環を含有する、二価単環式芳香族
基および／または二価多環式芳香族基を意味する。ある特定の実施形態では、アリーレン
は、環原子６～２０個（Ｃ６～２０）、６～１５個（Ｃ６～１５）、または６～１０個（
Ｃ６～１０）を有する。アリーレン基の例としては、フェニレン、ナフチレン、フルオレ
ニレン、アズレニレン、アントリレン、フェナントリレン、ピレニレン、ビフェニレン、
およびテルフェニレンが挙げられるが、これらに限定されない。アリーレンはまた、環の
１つが芳香族であり、その他が、飽和されていてもよく、部分不飽和であってもよく、ま
たは芳香族であってよい、二環式または三環式炭素環、例えば、ジヒドロナフチレン、イ
ンデニレン、インダニレン、またはテトラヒドロナフチレン（テトラリニレン）を意味す
る。アリーレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れている。
基および／または二価多環式芳香族基を意味する。ある特定の実施形態では、アリーレン
は、環原子６～２０個（Ｃ６～２０）、６～１５個（Ｃ６～１５）、または６～１０個（
Ｃ６～１０）を有する。アリーレン基の例としては、フェニレン、ナフチレン、フルオレ
ニレン、アズレニレン、アントリレン、フェナントリレン、ピレニレン、ビフェニレン、
およびテルフェニレンが挙げられるが、これらに限定されない。アリーレンはまた、環の
１つが芳香族であり、その他が、飽和されていてもよく、部分不飽和であってもよく、ま
たは芳香族であってよい、二環式または三環式炭素環、例えば、ジヒドロナフチレン、イ
ンデニレン、インダニレン、またはテトラヒドロナフチレン（テトラリニレン）を意味す
る。アリーレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れている。
【0197】
用語「アラルキル」または「アリールアルキル」は、１つまたは複数のアリール基で置
換されている一価アルキル基を意味する。ある特定の実施形態では、アラルキルは、炭素
原子７～３０個（Ｃ７～３０）、７～２０個（Ｃ７～２０）、または７～１６個（Ｃ７～
１６）を有する。アラルキル基の例としては、ベンジル、１－フェニルエチル、２－フェ
ニルエチル、および３－フェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。アラ
ルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている
。
換されている一価アルキル基を意味する。ある特定の実施形態では、アラルキルは、炭素
原子７～３０個（Ｃ７～３０）、７～２０個（Ｃ７～２０）、または７～１６個（Ｃ７～
１６）を有する。アラルキル基の例としては、ベンジル、１－フェニルエチル、２－フェ
ニルエチル、および３－フェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。アラ
ルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている
。
【0198】
用語「ヘテロアリール」は、各々がＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立に選択される１個また
は複数のヘテロ原子を環内に含有する少なくとも１つの芳香族環を含有する一価単環式芳
香族基または一価多環式芳香族基を意味する。明確にするために、本明細書で使用される
用語「アリール」および「ヘテロアリール」は相互排他的である、すなわち、「アリール
」基は「ヘテロアリール」基を含まず、逆もまた同様である。ヘテロアリール基は、その
芳香族環によって分子の残部に結合している。ヘテロアリール基の各環は、１もしくは２
個のＯ原子、１もしくは２個のＳ原子、１～４個のＮ原子、および／または１もしくは２
個のＰ原子を含有することができるが、ただし、各環内のヘテロ原子の総数が４以下であ
ること、および各環が少なくとも１個の炭素原子を含有することを条件とする。ある特定
の実施形態では、ヘテロアリールは、５～２０個、５～１５個、または５～１０個の環原
子を有する。単環式ヘテロアリール基の例としては、フラニル、イミダゾリル、イソチア
ゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラ
ジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、チアジアゾリ
ル、チアゾリル、チエニル、テトラゾリル、トリアジニル、およびトリアゾリルが挙げら
れるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリール基の例としては、ベンゾフラニル
、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアジアゾリ
ル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フ
ロピリジル、イミダゾピリジニル、イミダゾチアゾリル、インドリジニル、インドリル、
インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソベンゾチエニル、イソインドリル、イソキノリ
ニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサゾロピリジニル、フタラジニル、プテリ
ジニル、プリニル、ピリドピリジル、ピロロピリジル、キノリニル、キノキサリニル、キ
ナゾリニル、チアジアゾロピリミジル、およびチエノピリジルが挙げられるが、これらに
限定されない。三環式ヘテロアリール基の例としては、アクリジニル、ベンゾインドリル
、カルバゾリル、ジベンゾフラニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナントリ
ジニル、フェナルサジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、およ
びキサンテニルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールは、本明細書に
記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている。
は複数のヘテロ原子を環内に含有する少なくとも１つの芳香族環を含有する一価単環式芳
香族基または一価多環式芳香族基を意味する。明確にするために、本明細書で使用される
用語「アリール」および「ヘテロアリール」は相互排他的である、すなわち、「アリール
」基は「ヘテロアリール」基を含まず、逆もまた同様である。ヘテロアリール基は、その
芳香族環によって分子の残部に結合している。ヘテロアリール基の各環は、１もしくは２
個のＯ原子、１もしくは２個のＳ原子、１～４個のＮ原子、および／または１もしくは２
個のＰ原子を含有することができるが、ただし、各環内のヘテロ原子の総数が４以下であ
ること、および各環が少なくとも１個の炭素原子を含有することを条件とする。ある特定
の実施形態では、ヘテロアリールは、５～２０個、５～１５個、または５～１０個の環原
子を有する。単環式ヘテロアリール基の例としては、フラニル、イミダゾリル、イソチア
ゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラ
ジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、チアジアゾリ
ル、チアゾリル、チエニル、テトラゾリル、トリアジニル、およびトリアゾリルが挙げら
れるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリール基の例としては、ベンゾフラニル
、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアジアゾリ
ル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フ
ロピリジル、イミダゾピリジニル、イミダゾチアゾリル、インドリジニル、インドリル、
インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソベンゾチエニル、イソインドリル、イソキノリ
ニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサゾロピリジニル、フタラジニル、プテリ
ジニル、プリニル、ピリドピリジル、ピロロピリジル、キノリニル、キノキサリニル、キ
ナゾリニル、チアジアゾロピリミジル、およびチエノピリジルが挙げられるが、これらに
限定されない。三環式ヘテロアリール基の例としては、アクリジニル、ベンゾインドリル
、カルバゾリル、ジベンゾフラニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナントリ
ジニル、フェナルサジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、およ
びキサンテニルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールは、本明細書に
記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている。
【0199】
用語「ヘテロアリーレン」は、Ｏ、ＳおよびＮから独立に選択される１個または複数の
ヘテロ原子を環内に含有する少なくとも１つの芳香族環を含有する二価単環式芳香族基ま
たは二価多環式芳香族基を意味する。明確にするために、本明細書で使用される用語「ア
リーレン」および「ヘテロアリーレン」は相互排他的である、すなわち、「アリーレン」
基は「ヘテロアリーレン」基を含まず、逆もまた同様である。ヘテロアリーレン基は、そ
の芳香族環によって分子の残部に結合している。ヘテロアリーレン基の各環は、１もしく
は２個のＯ原子、１もしくは２個のＳ原子、および／または１～４個のＮ原子を含有する
ことができるが、ただし、各環内のヘテロ原子の総数が４以下であること、および各環が
少なくとも１個の炭素原子を含有することを条件とする。ある特定の実施形態では、ヘテ
ロアリーレンは、５～２０個、５～１５個、または５～１０個の環原子を有する。単環式
ヘテロアリーレン基の例としては、フラニレン、イミダゾリレン、イソチアゾリレン、イ
ソオキサゾリレン、オキサジアゾリレン、オキサジアゾリレン、オキサゾリレン、ピラジ
ニレン、ピラゾリレン、ピリダジニレン、ピリジレン、ピリミジニレン、ピロリレン、チ
アジアゾリレン、チアゾリレン、チエニレン、テトラゾリレン、トリアジニレン、および
トリアゾリレンが挙げられるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリーレン基の例
としては、ベンゾフラニレン、ベンゾイミダゾリレン、ベンゾイソオキサゾリレン、ベン
ゾピラニレン、ベンゾチアジアゾリレン、ベンゾチアゾリレン、ベンゾチエニレン、ベン
ゾトリアゾリレン、ベンゾオキサゾリレン、フロピリジレン、イミダゾピリジニレン、イ
ミダゾチアゾリレン、インドリジニレン、インドリレン、インダゾリレン、イソベンゾフ
ラニレン、イソベンゾチエニレン、イソインドリレン、イソキノリニレン、イソチアゾリ
レン、ナフチリジニレン、オキサゾロピリジニレン、フタラジニレン、プテリヂニレン、
プリニレン、ピリドピリジレン、ピロロピリジレン、キノリニレン、キノキサリニレン、
キナゾリニレン、チアジアゾロピリミジレン、およびチエノピリジレンが挙げられるが、
これらに限定されない。三環式ヘテロアリーレン基の例としては、アクリジニレン、ベン
ゾインドリレン、カルバゾリレン、ジベンゾフラニレン、ペリミジニレン、フェナントロ
リニレン、フェナントリジニレン、フェナルサジニレン、フェナジニレン、フェノチアジ
ニレン、フェノキサジニレン、およびキサンテニレンが挙げられるが、これらに限定され
ない。ヘテロアリーレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択
で置換されている。
ヘテロ原子を環内に含有する少なくとも１つの芳香族環を含有する二価単環式芳香族基ま
たは二価多環式芳香族基を意味する。明確にするために、本明細書で使用される用語「ア
リーレン」および「ヘテロアリーレン」は相互排他的である、すなわち、「アリーレン」
基は「ヘテロアリーレン」基を含まず、逆もまた同様である。ヘテロアリーレン基は、そ
の芳香族環によって分子の残部に結合している。ヘテロアリーレン基の各環は、１もしく
は２個のＯ原子、１もしくは２個のＳ原子、および／または１～４個のＮ原子を含有する
ことができるが、ただし、各環内のヘテロ原子の総数が４以下であること、および各環が
少なくとも１個の炭素原子を含有することを条件とする。ある特定の実施形態では、ヘテ
ロアリーレンは、５～２０個、５～１５個、または５～１０個の環原子を有する。単環式
ヘテロアリーレン基の例としては、フラニレン、イミダゾリレン、イソチアゾリレン、イ
ソオキサゾリレン、オキサジアゾリレン、オキサジアゾリレン、オキサゾリレン、ピラジ
ニレン、ピラゾリレン、ピリダジニレン、ピリジレン、ピリミジニレン、ピロリレン、チ
アジアゾリレン、チアゾリレン、チエニレン、テトラゾリレン、トリアジニレン、および
トリアゾリレンが挙げられるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリーレン基の例
としては、ベンゾフラニレン、ベンゾイミダゾリレン、ベンゾイソオキサゾリレン、ベン
ゾピラニレン、ベンゾチアジアゾリレン、ベンゾチアゾリレン、ベンゾチエニレン、ベン
ゾトリアゾリレン、ベンゾオキサゾリレン、フロピリジレン、イミダゾピリジニレン、イ
ミダゾチアゾリレン、インドリジニレン、インドリレン、インダゾリレン、イソベンゾフ
ラニレン、イソベンゾチエニレン、イソインドリレン、イソキノリニレン、イソチアゾリ
レン、ナフチリジニレン、オキサゾロピリジニレン、フタラジニレン、プテリヂニレン、
プリニレン、ピリドピリジレン、ピロロピリジレン、キノリニレン、キノキサリニレン、
キナゾリニレン、チアジアゾロピリミジレン、およびチエノピリジレンが挙げられるが、
これらに限定されない。三環式ヘテロアリーレン基の例としては、アクリジニレン、ベン
ゾインドリレン、カルバゾリレン、ジベンゾフラニレン、ペリミジニレン、フェナントロ
リニレン、フェナントリジニレン、フェナルサジニレン、フェナジニレン、フェノチアジ
ニレン、フェノキサジニレン、およびキサンテニレンが挙げられるが、これらに限定され
ない。ヘテロアリーレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択
で置換されている。
【0200】
用語「ヘテロシクリル」または「複素環式」は、非芳香族環原子の１個または複数がヘ
テロ原子であり、これらのヘテロ原子の各々が、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立に選択され
、残りの環原子が炭素原子である少なくとも１つの非芳香族環を含有する一価単環式非芳
香族環系または一価多環式環系を意味する。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリルま
たは複素環式基は、３～２０個、３～１５個、３～１０個、３～８個、４～７個、または
５～６個の環原子を有する。ヘテロシクリル基は、その非芳香族環によって分子の残部に
結合している。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリルは、スピロであってもよく、縮
合していてもよく、または架橋していてもよい、単環式、二環式、三環式、または四環式
環系であり、ここで、窒素または硫黄原子が任意選択で酸化されていてもよく、窒素原子
が任意選択で四級化されていてもよく、一部の環が部分的にもしくは完全に飽和していて
もよく、または芳香族であってもよい。ヘテロシクリルは、安定した化合物を生じさせる
結果となるいずれのヘテロ原子または炭素原子で主構造に結合していてもよい。複素環式
基の例としては、アゼピニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラノ
ニル、ベンゾピラノニル、ベンゾピラニル、ベンゾテトラヒドロフラニル、ベンゾテトラ
ヒドロチエニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾオキサジニル、β－カルボリニル、クロマ
ニル、クロモニル、シンノリニル、クマリニル、デカヒドロイソキノリニル、ジヒドロベ
ンゾイソチアジニル、ジヒドロベンゾイソオキサジニル、ジヒドロフリル、ジヒドロイソ
インドリル、ジヒドロピラニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピ
リジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジオキソラニル、１，４－ジチア
ニル、フラノニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、インドリニル、イソベンゾテト
ラヒドロフラニル、イソベンゾテトラヒドロチエニル、イソクロマニル、イソクマリニル
、イソインドリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オク
タヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、オキサゾリジノニル、オキサゾリジ
ニル、オキシラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、４－ピペリドニル、ピラゾリジニル
、ピラゾリニル、ピロロリジニル、ピロロリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフリル
、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル、チアモ
ルホリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロキノリニル、および１，３，５－トリチアニ
ルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリルは、本明細書に記載の通り１
つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている。
テロ原子であり、これらのヘテロ原子の各々が、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立に選択され
、残りの環原子が炭素原子である少なくとも１つの非芳香族環を含有する一価単環式非芳
香族環系または一価多環式環系を意味する。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリルま
たは複素環式基は、３～２０個、３～１５個、３～１０個、３～８個、４～７個、または
５～６個の環原子を有する。ヘテロシクリル基は、その非芳香族環によって分子の残部に
結合している。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリルは、スピロであってもよく、縮
合していてもよく、または架橋していてもよい、単環式、二環式、三環式、または四環式
環系であり、ここで、窒素または硫黄原子が任意選択で酸化されていてもよく、窒素原子
が任意選択で四級化されていてもよく、一部の環が部分的にもしくは完全に飽和していて
もよく、または芳香族であってもよい。ヘテロシクリルは、安定した化合物を生じさせる
結果となるいずれのヘテロ原子または炭素原子で主構造に結合していてもよい。複素環式
基の例としては、アゼピニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラノ
ニル、ベンゾピラノニル、ベンゾピラニル、ベンゾテトラヒドロフラニル、ベンゾテトラ
ヒドロチエニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾオキサジニル、β－カルボリニル、クロマ
ニル、クロモニル、シンノリニル、クマリニル、デカヒドロイソキノリニル、ジヒドロベ
ンゾイソチアジニル、ジヒドロベンゾイソオキサジニル、ジヒドロフリル、ジヒドロイソ
インドリル、ジヒドロピラニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピ
リジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジオキソラニル、１，４－ジチア
ニル、フラノニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、インドリニル、イソベンゾテト
ラヒドロフラニル、イソベンゾテトラヒドロチエニル、イソクロマニル、イソクマリニル
、イソインドリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オク
タヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、オキサゾリジノニル、オキサゾリジ
ニル、オキシラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、４－ピペリドニル、ピラゾリジニル
、ピラゾリニル、ピロロリジニル、ピロロリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフリル
、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル、チアモ
ルホリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロキノリニル、および１，３，５－トリチアニ
ルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリルは、本明細書に記載の通り１
つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている。
【0201】
用語「ヘテロシクリレン」は、非芳香族環原子の１個または複数が、Ｏ、ＳおよびＮか
ら独立に選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子が炭素原子である少なくとも１つの
非芳香族環を含有する二価単環式非芳香族環系または二価多環式環系を意味する。ある特
定の実施形態では、ヘテロシクリレン基は、３～２０個、３～１５個、３～１０個、３～
８個、４～７個、または５～６個の環原子を有する。ある特定の実施形態では、ヘテロシ
クリレンは、縮合または架橋していてもよい、単環式、二環式、三環式、または四環式環
系であり、ここで、窒素または硫黄原子が任意選択で酸化されていてもよく、窒素原子が
任意選択で四級化されていてもよく、一部の環が部分的にもしくは完全に飽和されていて
もよく、または芳香族であってもよい。ヘテロシクリレンは、安定した化合物を生じさせ
る結果となるいずれのヘテロ原子または炭素原子で主構造に結合していてもよい。そのよ
うなヘテロシクリレン基の例としては、アゼピニレン、ベンゾジオキサニレン、ベンゾジ
オキソリレン、ベンゾフラノニレン、ベンゾピラノニレン、ベンゾピラニレン、ベンゾテ
トラヒドロフラニレン、ベンゾテトラヒドロチエニレン、ベンゾチオピラニレン、ベンゾ
キサジニレン、β－カルボニレン、クロマニレン、クロモニレン、シンノリニレン、クマ
リニレン、デカヒドロイソキノリニレン、ジヒドロベンゾイソチアジニレン、ジヒドロベ
ンゾイソオキサジニレン、ジヒドロフリレン、ジヒドロイソインドリレン、ジヒドロピラ
ニレン、ジヒドロピラゾリレン、ジヒドロピラジニレン、ジヒドロピリジニレン、ジヒド
ロピリミジニレン、ジヒドロピロリレン、ジオキソラニリレン、１，４－ジチアニレン、
フラノニレン、イミダゾリジニレン、イミダゾリニレン、インドリニレン、イソベンゾテ
トラヒドロフラニレン、イソベンゾテトラヒドロチエニレン、イソクロマニレン、イソク
マリニレン、イソインドリニレン、イソチアゾリジニレン、イソオキサゾリジニレン、モ
ルホリニレン、オクタヒドロインドリレン、オクタヒドロイソインドリレン、オキサゾリ
ジノニレン、オキサゾリジニレン、オキシラニレン、ピペラジニレン、ピペリジニレン、
４－ピペリドニレン、ピラゾリジニレン、ピラゾリニレン、ピロリジニレン、ピロリニレ
ン、キヌクリジニレン、テトラヒドロフリレン、テトラヒドロイソキノリニレン、テトラ
ヒドロピラニレン、テトラヒドロチエニレン、チアモルホリニレン、チアゾリジニレン、
テトラヒドロキノリニレン、および１，３，５－トリチアニレンが挙げられるが、これら
に限定されない。ヘテロシクリレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている。
ら独立に選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子が炭素原子である少なくとも１つの
非芳香族環を含有する二価単環式非芳香族環系または二価多環式環系を意味する。ある特
定の実施形態では、ヘテロシクリレン基は、３～２０個、３～１５個、３～１０個、３～
８個、４～７個、または５～６個の環原子を有する。ある特定の実施形態では、ヘテロシ
クリレンは、縮合または架橋していてもよい、単環式、二環式、三環式、または四環式環
系であり、ここで、窒素または硫黄原子が任意選択で酸化されていてもよく、窒素原子が
任意選択で四級化されていてもよく、一部の環が部分的にもしくは完全に飽和されていて
もよく、または芳香族であってもよい。ヘテロシクリレンは、安定した化合物を生じさせ
る結果となるいずれのヘテロ原子または炭素原子で主構造に結合していてもよい。そのよ
うなヘテロシクリレン基の例としては、アゼピニレン、ベンゾジオキサニレン、ベンゾジ
オキソリレン、ベンゾフラノニレン、ベンゾピラノニレン、ベンゾピラニレン、ベンゾテ
トラヒドロフラニレン、ベンゾテトラヒドロチエニレン、ベンゾチオピラニレン、ベンゾ
キサジニレン、β－カルボニレン、クロマニレン、クロモニレン、シンノリニレン、クマ
リニレン、デカヒドロイソキノリニレン、ジヒドロベンゾイソチアジニレン、ジヒドロベ
ンゾイソオキサジニレン、ジヒドロフリレン、ジヒドロイソインドリレン、ジヒドロピラ
ニレン、ジヒドロピラゾリレン、ジヒドロピラジニレン、ジヒドロピリジニレン、ジヒド
ロピリミジニレン、ジヒドロピロリレン、ジオキソラニリレン、１，４－ジチアニレン、
フラノニレン、イミダゾリジニレン、イミダゾリニレン、インドリニレン、イソベンゾテ
トラヒドロフラニレン、イソベンゾテトラヒドロチエニレン、イソクロマニレン、イソク
マリニレン、イソインドリニレン、イソチアゾリジニレン、イソオキサゾリジニレン、モ
ルホリニレン、オクタヒドロインドリレン、オクタヒドロイソインドリレン、オキサゾリ
ジノニレン、オキサゾリジニレン、オキシラニレン、ピペラジニレン、ピペリジニレン、
４－ピペリドニレン、ピラゾリジニレン、ピラゾリニレン、ピロリジニレン、ピロリニレ
ン、キヌクリジニレン、テトラヒドロフリレン、テトラヒドロイソキノリニレン、テトラ
ヒドロピラニレン、テトラヒドロチエニレン、チアモルホリニレン、チアゾリジニレン、
テトラヒドロキノリニレン、および１，３，５－トリチアニレンが挙げられるが、これら
に限定されない。ヘテロシクリレンは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている。
【0202】
用語「ハロゲン」、「ハロゲン化物」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素および／
またはヨウ素を意味する。
またはヨウ素を意味する。
【0203】
用語「ハロアルキル」は、１つまたは複数、一実施形態では１、２または３つのハロ基
で置換されているアルキル基を意味し、この場合のアルキルは、本明細書で定義される通
りである。ハロアルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択
で置換されている。
で置換されているアルキル基を意味し、この場合のアルキルは、本明細書で定義される通
りである。ハロアルキルは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択
で置換されている。
【0204】
用語「アルコキシ」は、－Ｏ－アルキルを意味し、この場合のアルキルは、本明細書で
定義される通りである。
定義される通りである。
【0205】
用語「ハロアルコキシ」は、－Ｏ－ハロアルキルを意味し、この場合のハロアルキルは
、本明細書で定義される通りである。
、本明細書で定義される通りである。
【0206】
用語「任意選択で置換されている」は、基または置換基、例えば、アルキル、アルキレ
ン、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、シクロアルキル、シクロア
ルキレン、アリール、アリーレン、アラルキル（例えば、ベンジル）、ヘテロアリール、
ヘテロアリーレン、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリレン基が、１つまたは複数の置
換基Ｑで置換されていてもよいことを意味することを意図したものであり、前記１つまた
は複数の置換基Ｑの各々は、例えば、（ａ）オキソ（＝Ｏ）、シアノ（－ＣＮ）、ハロ、
およびニトロ（－ＮＯ２）、（ｂ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６ア
ルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ヘ
テロアリール、およびヘテロシクリル［これらの各々は、１つまたは複数の、一実施形態
では１、２、３、４もしくは５つの置換基Ｑａで、さらに任意選択で置換されている］、
ならびに（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－Ｃ（ＮＲ
ａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ
ｂＲｃ、－ＯＣ（＝ＮＲａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒａ、－Ｏ
Ｓ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｄ
、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲｄ、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（＝ＮＲｄ）ＮＲ
ｂＲｃ、－ＮＲａＳ（Ｏ）Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）２Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ
、－ＮＲａＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－Ｐ（Ｏ）ＲａＲｄ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）Ｒｄ、－
Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｄ）、－ＳＲａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒａ、－Ｓ（
Ｏ）ＮＲｂＲｃ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ［これらの式中の各Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、
およびＲｄは、独立に、（ｉ）水素であるか、（ｉｉ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アル
ケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～
１５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリル（これらの各々は、１つまた
は複数、一実施形態では１、２、３もしくは４つの置換基Ｑａで任意選択で置換されてい
る）であり、または（ｉｉｉ）ＲｂおよびＲｃは、それらが結合しているＮ原子と一緒に
、ヘテロアリールもしくはヘテロシクリルを形成し、前記ヘテロアリールもしくはヘテロ
シクリルの各々は、１つまたは複数の、一実施形態では１、２、３もしくは４つの置換基
Ｑａで、任意選択で置換されている］から独立に選択される。本明細書で使用される、置
換されていてもよい本明細書に記載のすべての基は、別段の規定がない限り、「任意選択
で置換されている」。
ン、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、シクロアルキル、シクロア
ルキレン、アリール、アリーレン、アラルキル（例えば、ベンジル）、ヘテロアリール、
ヘテロアリーレン、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリレン基が、１つまたは複数の置
換基Ｑで置換されていてもよいことを意味することを意図したものであり、前記１つまた
は複数の置換基Ｑの各々は、例えば、（ａ）オキソ（＝Ｏ）、シアノ（－ＣＮ）、ハロ、
およびニトロ（－ＮＯ２）、（ｂ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６ア
ルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ヘ
テロアリール、およびヘテロシクリル［これらの各々は、１つまたは複数の、一実施形態
では１、２、３、４もしくは５つの置換基Ｑａで、さらに任意選択で置換されている］、
ならびに（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－Ｃ（ＮＲ
ａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ
ｂＲｃ、－ＯＣ（＝ＮＲａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒａ、－Ｏ
Ｓ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｄ
、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲｄ、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（＝ＮＲｄ）ＮＲ
ｂＲｃ、－ＮＲａＳ（Ｏ）Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）２Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ
、－ＮＲａＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－Ｐ（Ｏ）ＲａＲｄ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）Ｒｄ、－
Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｄ）、－ＳＲａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒａ、－Ｓ（
Ｏ）ＮＲｂＲｃ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ［これらの式中の各Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、
およびＲｄは、独立に、（ｉ）水素であるか、（ｉｉ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アル
ケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～
１５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリル（これらの各々は、１つまた
は複数、一実施形態では１、２、３もしくは４つの置換基Ｑａで任意選択で置換されてい
る）であり、または（ｉｉｉ）ＲｂおよびＲｃは、それらが結合しているＮ原子と一緒に
、ヘテロアリールもしくはヘテロシクリルを形成し、前記ヘテロアリールもしくはヘテロ
シクリルの各々は、１つまたは複数の、一実施形態では１、２、３もしくは４つの置換基
Ｑａで、任意選択で置換されている］から独立に選択される。本明細書で使用される、置
換されていてもよい本明細書に記載のすべての基は、別段の規定がない限り、「任意選択
で置換されている」。
【0207】
一実施形態では、各置換基Ｑａは、（ａ）オキソ、シアノ、ハロ、およびニトロ；なら
びに（ｂ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シ
クロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ヘテロアリール、およびヘ
テロシクリル；ならびに（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲｅ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＲ
ｇ、－Ｃ（ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＲｅ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲｅ、－
ＯＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＣ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ
）２Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｆＲｇ、－ＮＲ
ｅＣ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）ＯＲｈ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＣ（
＝ＮＲｈ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）２Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（
Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－Ｐ（Ｏ）ＲｅＲｈ、－Ｐ（Ｏ）（Ｏ
Ｒｅ）Ｒｈ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｅ）（ＯＲｈ）、－ＳＲｅ、－Ｓ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）
２Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ［これらの式中の各Ｒｅ
、Ｒｆ、Ｒｇ、およびＲｈは、独立に、（ｉ）水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケ
ニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１
５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであるか、または（ｉｉ）Ｒｆ
およびＲｇは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ヘテロアリールもしくはヘテロシ
クリルを形成する］からなる群から独立に選択される。
びに（ｂ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シ
クロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ヘテロアリール、およびヘ
テロシクリル；ならびに（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲｅ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＲ
ｇ、－Ｃ（ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＲｅ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲｅ、－
ＯＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＣ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ
）２Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｆＲｇ、－ＮＲ
ｅＣ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）ＯＲｈ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＣ（
＝ＮＲｈ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）２Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（
Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－Ｐ（Ｏ）ＲｅＲｈ、－Ｐ（Ｏ）（Ｏ
Ｒｅ）Ｒｈ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｅ）（ＯＲｈ）、－ＳＲｅ、－Ｓ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）
２Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ［これらの式中の各Ｒｅ
、Ｒｆ、Ｒｇ、およびＲｈは、独立に、（ｉ）水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケ
ニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１
５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであるか、または（ｉｉ）Ｒｆ
およびＲｇは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ヘテロアリールもしくはヘテロシ
クリルを形成する］からなる群から独立に選択される。
【0208】
ある特定の実施形態では、「光学活性の」および「鏡像異性的に活性の」は、約５０％
以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９
３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、
約９９％以上、約９９．５％以上、または約９９．８％以上の鏡像体過剰率を有する分子
の一群を意味する。ある特定の実施形態では、化合物は、問題の２つの鏡像異性体の総重
量に基づいて約９５％以上の望ましい鏡像異性体と約５％以下の然程好ましくない鏡像異
性体とを含む。
以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９
３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、
約９９％以上、約９９．５％以上、または約９９．８％以上の鏡像体過剰率を有する分子
の一群を意味する。ある特定の実施形態では、化合物は、問題の２つの鏡像異性体の総重
量に基づいて約９５％以上の望ましい鏡像異性体と約５％以下の然程好ましくない鏡像異
性体とを含む。
【0209】
光学活性化合物を記載する際、光学活性化合物のそのキラル中心の周りの絶対配置を示
すために、接頭語ＲおよびＳが使用される。（＋）および（－）は、光学活性化合物の旋
光性、すなわち、偏光面が光学活性化合物により回転される方向を示すために使用される
。（－）という接頭語は、光学活性化合物が左旋性であること、すなわち、前記化合物が
偏光面を左にまたは反時計回りに回転させることを示す。（＋）という接頭語は、光学活
性化合物が右旋性であること、すなわち、前記化合物が偏光面を右にまたは時計回りに回
転させることを示す。しかし、旋光性の符号、（＋）および（－）は、化合物の絶対配置
、ＲおよびＳとは無関係である。
すために、接頭語ＲおよびＳが使用される。（＋）および（－）は、光学活性化合物の旋
光性、すなわち、偏光面が光学活性化合物により回転される方向を示すために使用される
。（－）という接頭語は、光学活性化合物が左旋性であること、すなわち、前記化合物が
偏光面を左にまたは反時計回りに回転させることを示す。（＋）という接頭語は、光学活
性化合物が右旋性であること、すなわち、前記化合物が偏光面を右にまたは時計回りに回
転させることを示す。しかし、旋光性の符号、（＋）および（－）は、化合物の絶対配置
、ＲおよびＳとは無関係である。
【0210】
用語「同位体異型」は、化合物を構成する原子のうちの１個または複数に関して非天然
の同位体比率を有する当該化合物を意味する。ある特定の実施形態では、化合物の「同位
体異型」は、水素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、三重水素（３Ｈ）、炭素１１（１１Ｃ）、
炭素１２（１２Ｃ）、炭素１３（１３Ｃ）、炭素１４（１４Ｃ）、窒素１３（１３Ｎ）、
窒素１４（１４Ｎ）、窒素１５（１５Ｎ）、酸素１４（１４Ｏ）、酸素１５（１５Ｏ）、
酸素１６（１６Ｏ）、酸素１７（１７Ｏ）、酸素１８（１８Ｏ）、フッ素１７（１７Ｆ）
、フッ素１８（１８Ｆ）、リン３１（３１Ｐ）、リン３２（３２Ｐ）、リン３３（３３Ｐ
）、硫黄３２（３２Ｓ）、硫黄３３（３３Ｓ）、硫黄３４（３４Ｓ）、硫黄３５（３５Ｓ
）、硫黄３６（３６Ｓ）、塩素３５（３５Ｃｌ）、塩素３６（３６Ｃｌ）、塩素３７（３
７Ｃｌ）、臭素７９（７９Ｂｒ）、臭素８１（８１Ｂｒ）、ヨウ素１２３（１２３Ｉ）、
ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素１２７（１２７Ｉ）、ヨウ素１２９（１２９Ｉ）およ
びヨウ素１３１（１３１Ｉ）を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の同位体の非
天然比率を有する。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、安定した形態
、すなわち、非放射性である。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、水
素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、炭素１２（１２Ｃ）、炭素１３（１３Ｃ）、窒素１４（１
４Ｎ）、窒素１５（１５Ｎ）、酸素１６（１６Ｏ）、酸素１７（１７Ｏ）、酸素１８（１
８Ｏ）、フッ素１７（１７Ｆ）、リン３１（３１Ｐ）、硫黄３２（３２Ｓ）、硫黄３３（
３３Ｓ）、硫黄３４（３４Ｓ）、硫黄３６（３６Ｓ）、塩素３５（３５Ｃｌ）、塩素３７
（３７Ｃｌ）、臭素７９（７９Ｂｒ）、臭素８１（８１Ｂｒ）およびヨウ素１２７（１２
７Ｉ）を含むがこれらに限定されない、１つまたは複数の同位体の非天然比率を有する。
ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、不安定な形態、すなわち、放射性
である。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、三重水素（３Ｈ）、炭素
１１（１１Ｃ）、炭素１４（１４Ｃ）、窒素１３（１３Ｎ）、酸素１４（１４Ｏ）、酸素
１５（１５Ｏ）、フッ素１８（１８Ｆ）、リン３２（３２Ｐ）、リン３３（３３Ｐ）、硫
黄３５（３５Ｓ）、塩素３６（３６Ｃｌ）、ヨウ素１２３（１２３Ｉ）、ヨウ素１２５（
１２５Ｉ）、ヨウ素１２９（１２９Ｉ）およびヨウ素１３１（１３１Ｉ）を含むがこれら
に限定されない、１つまたは複数の同位体の非天然比率を有する。当業者の判断に従って
実行可能な場合、本明細書で提供されるような化合物中の、いずれの水素が例えば２Ｈで
あってもよく、またはいずれの炭素が例えば１３Ｃであってもよく、またはいずれの窒素
が例えば１５Ｎであってもよく、またはいずれの酸素が例えば１８Ｏであってもよいこと
は、理解されるであろう。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、重水素
（Ｄ）の非天然比率を有する。
の同位体比率を有する当該化合物を意味する。ある特定の実施形態では、化合物の「同位
体異型」は、水素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、三重水素（３Ｈ）、炭素１１（１１Ｃ）、
炭素１２（１２Ｃ）、炭素１３（１３Ｃ）、炭素１４（１４Ｃ）、窒素１３（１３Ｎ）、
窒素１４（１４Ｎ）、窒素１５（１５Ｎ）、酸素１４（１４Ｏ）、酸素１５（１５Ｏ）、
酸素１６（１６Ｏ）、酸素１７（１７Ｏ）、酸素１８（１８Ｏ）、フッ素１７（１７Ｆ）
、フッ素１８（１８Ｆ）、リン３１（３１Ｐ）、リン３２（３２Ｐ）、リン３３（３３Ｐ
）、硫黄３２（３２Ｓ）、硫黄３３（３３Ｓ）、硫黄３４（３４Ｓ）、硫黄３５（３５Ｓ
）、硫黄３６（３６Ｓ）、塩素３５（３５Ｃｌ）、塩素３６（３６Ｃｌ）、塩素３７（３
７Ｃｌ）、臭素７９（７９Ｂｒ）、臭素８１（８１Ｂｒ）、ヨウ素１２３（１２３Ｉ）、
ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素１２７（１２７Ｉ）、ヨウ素１２９（１２９Ｉ）およ
びヨウ素１３１（１３１Ｉ）を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の同位体の非
天然比率を有する。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、安定した形態
、すなわち、非放射性である。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、水
素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、炭素１２（１２Ｃ）、炭素１３（１３Ｃ）、窒素１４（１
４Ｎ）、窒素１５（１５Ｎ）、酸素１６（１６Ｏ）、酸素１７（１７Ｏ）、酸素１８（１
８Ｏ）、フッ素１７（１７Ｆ）、リン３１（３１Ｐ）、硫黄３２（３２Ｓ）、硫黄３３（
３３Ｓ）、硫黄３４（３４Ｓ）、硫黄３６（３６Ｓ）、塩素３５（３５Ｃｌ）、塩素３７
（３７Ｃｌ）、臭素７９（７９Ｂｒ）、臭素８１（８１Ｂｒ）およびヨウ素１２７（１２
７Ｉ）を含むがこれらに限定されない、１つまたは複数の同位体の非天然比率を有する。
ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、不安定な形態、すなわち、放射性
である。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、三重水素（３Ｈ）、炭素
１１（１１Ｃ）、炭素１４（１４Ｃ）、窒素１３（１３Ｎ）、酸素１４（１４Ｏ）、酸素
１５（１５Ｏ）、フッ素１８（１８Ｆ）、リン３２（３２Ｐ）、リン３３（３３Ｐ）、硫
黄３５（３５Ｓ）、塩素３６（３６Ｃｌ）、ヨウ素１２３（１２３Ｉ）、ヨウ素１２５（
１２５Ｉ）、ヨウ素１２９（１２９Ｉ）およびヨウ素１３１（１３１Ｉ）を含むがこれら
に限定されない、１つまたは複数の同位体の非天然比率を有する。当業者の判断に従って
実行可能な場合、本明細書で提供されるような化合物中の、いずれの水素が例えば２Ｈで
あってもよく、またはいずれの炭素が例えば１３Ｃであってもよく、またはいずれの窒素
が例えば１５Ｎであってもよく、またはいずれの酸素が例えば１８Ｏであってもよいこと
は、理解されるであろう。ある特定の実施形態では、化合物の「同位体異型」は、重水素
（Ｄ）の非天然比率を有する。
【0211】
用語「溶媒和物」は、溶質、例えば本明細書で提供される化合物、の１つまたは複数の
分子と溶媒の１つまたは複数の分子とで形成された、化学量論量もしくは非化学量論量で
存在する、複合体または凝集体を意味する。好適な溶媒としては、水、メタノール、エタ
ノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノールおよび酢酸が挙げられるが、これらに限定
されない。ある特定の実施形態では、溶媒は、薬学的に許容されるものである。一実施形
態では、複合体または凝集体は、結晶形態である。別の実施形態では、複合体または凝集
体は、非結晶形態である。溶媒が水である場合、溶媒和物は、水和物である。水和物の例
としては、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、および五水和物が挙げ
られるが、これらに限定されない。
分子と溶媒の１つまたは複数の分子とで形成された、化学量論量もしくは非化学量論量で
存在する、複合体または凝集体を意味する。好適な溶媒としては、水、メタノール、エタ
ノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノールおよび酢酸が挙げられるが、これらに限定
されない。ある特定の実施形態では、溶媒は、薬学的に許容されるものである。一実施形
態では、複合体または凝集体は、結晶形態である。別の実施形態では、複合体または凝集
体は、非結晶形態である。溶媒が水である場合、溶媒和物は、水和物である。水和物の例
としては、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、および五水和物が挙げ
られるが、これらに限定されない。
【0212】
句「その鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグ」は、句「（ｉ）その中で言及されている化合物の鏡像異性体、鏡像異性体の混
合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、もしく同位体異型、（ｉｉ）その中で言及
されている化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ、
または（ｉｉｉ）その中で言及されている化合物の鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２
つ以上のジアステレオマーの混合物、もしくは同位体異型の、薬学的に許容される塩、溶
媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ」と同じ意味を有する。
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグ」は、句「（ｉ）その中で言及されている化合物の鏡像異性体、鏡像異性体の混
合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、もしく同位体異型、（ｉｉ）その中で言及
されている化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ、
または（ｉｉｉ）その中で言及されている化合物の鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２
つ以上のジアステレオマーの混合物、もしくは同位体異型の、薬学的に許容される塩、溶
媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ」と同じ意味を有する。
【0213】
５．３．２．幹細胞動員化合物
一実施形態では、幹細胞動員化合物は、アリール炭化水素受容体阻害剤、例えば、アリ
ール炭化水素受容体アンタゴニストである。
一実施形態では、幹細胞動員化合物は、アリール炭化水素受容体阻害剤、例えば、アリ
ール炭化水素受容体アンタゴニストである。
【0214】
別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、（特許文献４）、（特許文献５）および（特
許文献６）に記載されているものを含むがこれらに限定されない、５，６－縮合ヘテロア
リール化合物であり、前記特許文献の各々についての開示はその全体が参照により本明細
書に組み入れられている。
許文献６）に記載されているものを含むがこれらに限定されない、５，６－縮合ヘテロア
リール化合物であり、前記特許文献の各々についての開示はその全体が参照により本明細
書に組み入れられている。
【0215】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式Ｉの化合物：
【0216】
【化5】
Ｇ１は、ＮおよびＣＲ３であり、
Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４は、各々独立に、ＣＨおよびＮであり、ただし、Ｇ３およびＧ
４の少なくとも一方がＮであり、Ｇ１およびＧ２の少なくとも一方がＮでないことを条件
とし、
Ｌ１は、－ＮＲ１ａ－、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）１～３－、－ＮＲ１ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）Ｏ
ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２ＮＲ１ｃ－、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２Ｓ－、
－ＮＲ１ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＮＲ１ａＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）－、または－
ＮＲ１ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－であり、
Ｒ１は、（ｉ）水素であるか、または（ｉｉ）フェニル、フラニル、ピロリル、イミダ
ゾリル、ピラゾリル、チエニル、チアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリジニル
、ピラジニル、ピリダジニル、ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、イミダゾピリジニ
ルもしくはベンゾチエニル（これらの各々は、１、２もしくは３つの置換基により任意選
択で置換されており、この場合の各置換基は、独立に、シアノ、ハロ、Ｃ１～４アルキル
、Ｃ１～４アルコキシ、Ｃ１～４ハロアルキル、Ｃ１～４ハロアルコキシ、ヒドロキシル
、アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＳＲ
１ａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａ、もしくは－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａである）であり、
Ｒ２は、（ｉ）－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）Ｒ１ｃ、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、もし
くは－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂであるか、または（ｉｉ）フェニル、ピロロピリジン－
３－イル、インドリル、チエニル、ピリジニル、１，２，４－トリアゾリル、２－オキソ
イミダゾリジニル、ピラゾリル、２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾ
リル、もしくはインダゾリル（これらの各々は、１、２または３つの置換基で任意選択で
置換されており、この場合の各置換基は、独立に、ヒドロキシル、ハロ、メチル、メトキ
シ、アミノ、－Ｏ（ＣＨ２）１～３ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂ、－
ＮＲ１ａＳ（Ｏ）２Ｒ１ｂ、もしくは－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂである）であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１～４アルキル、またはビフェニルであり、ただし、Ｒ１およびＲ３
の少なくとも一方が水素でないことを条件とし、
Ｒ４は、Ｃ１～１０アルキル、プロパ－１－エン－２－イル、シクロヘキシル、シクロ
プロピル、２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチル、オキセタン－３－イル、ベ
ンズヒドリル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－
４－イル、フェニル、テトラヒドロフラン－３－イル、ベンジル、（４－ペンチルフェニ
ル）（フェニル）メチル、または１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－
３－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）エ
チルであり、これらの各々は、１、２もしくは３つの置換基で任意選択で置換されており
、この場合の各置換基は、独立に、ヒドロキシル、Ｃ１～４アルキル、またはＣ１～４ハ
ロアルキルであり、ならびに
各Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、独立に、水素もしくはＣ１～４アルキルであるか、
またはＲ１ａおよびＲ１ｂは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ヘテロシクリルを
形成する）
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0217】
一実施形態では、式Ｉ中、Ｇ１は、ＣＲ３、一実施形態ではＣＨであり、Ｇ２、Ｇ３お
よびＧ４は、各々Ｎであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＬ１は、各々、本明
細書で定義される通りである。
よびＧ４は、各々Ｎであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＬ１は、各々、本明
細書で定義される通りである。
【0218】
別の実施形態では、式Ｉ中、Ｇ１、Ｇ３およびＧ４は、各々Ｎであり、Ｇ２は、ＣＨで
あり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである
。
あり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである
。
【0219】
さらに別の実施形態では、式Ｉ中、Ｇ１は、ＣＲ３、一実施形態ではＣＨであり、Ｇ２
およびＧ３は、各々Ｎであり、Ｇ４は、ＣＨであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
およびＧ３は、各々Ｎであり、Ｇ４は、ＣＨであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
【0220】
さらに別の実施形態では、式Ｉ中、Ｇ１は、ＣＲ３、一実施形態ではＣＨであり、Ｇ２
およびＧ４は、各々Ｎであり、Ｇ３は、ＣＨであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
およびＧ４は、各々Ｎであり、Ｇ３は、ＣＨであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
【0221】
さらに別の実施形態では、式Ｉ中、Ｇ１は、ＣＲ３、一実施形態ではＣＨであり、Ｇ２
は、ＣＨであり、Ｇ３およびＧ４は、各々Ｎであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
は、ＣＨであり、Ｇ３およびＧ４は、各々Ｎであり、ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４お
よびＬ１は、各々、本明細書で定義される通りである。
【0222】
さらに実施形態では、式Ｉ中、
Ｇ１は、ＣＨであり、
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、各々Ｎであり、
Ｒ１は、１、２または３つの置換基により任意選択で置換されているベンゾチエニルで
あり、これらの置換基の各々は、独立に、シアノ、ハロ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ア
ルコキシ、Ｃ１～４ハロアルキル、Ｃ１～４ハロアルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、－
Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＳＲ１ａ、－Ｓ（
Ｏ）Ｒ１ａ、または－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、
Ｒ２は、１、２または３つの置換基で任意選択で置換されているフェニルであり、これ
らの置換基の各々は、独立に、ヒドロキシル、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、－Ｏ（
ＣＨ２）１～３ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＮＲ１ａＳ（Ｏ）２
Ｒ１ｂ、または－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂであり、
Ｒ４は、１、２または３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１～１０アルキルで
あり、これらの置換基の各々は、独立に、ヒドロキシル、Ｃ１～４アルキルまたはＣ１～
４ハロアルキルであり、
Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２－であり、ならびに
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通りである。
Ｇ１は、ＣＨであり、
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、各々Ｎであり、
Ｒ１は、１、２または３つの置換基により任意選択で置換されているベンゾチエニルで
あり、これらの置換基の各々は、独立に、シアノ、ハロ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ア
ルコキシ、Ｃ１～４ハロアルキル、Ｃ１～４ハロアルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、－
Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＳＲ１ａ、－Ｓ（
Ｏ）Ｒ１ａ、または－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、
Ｒ２は、１、２または３つの置換基で任意選択で置換されているフェニルであり、これ
らの置換基の各々は、独立に、ヒドロキシル、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、－Ｏ（
ＣＨ２）１～３ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂ、－ＮＲ１ａＳ（Ｏ）２
Ｒ１ｂ、または－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂであり、
Ｒ４は、１、２または３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１～１０アルキルで
あり、これらの置換基の各々は、独立に、ヒドロキシル、Ｃ１～４アルキルまたはＣ１～
４ハロアルキルであり、
Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２－であり、ならびに
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通りである。
【0223】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式ＩＩの化合物：
【0224】
【化6】
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0225】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式ＩＩＩの化合物：
【0226】
【化7】
Ｒ５ｂおよびＲ５ｃは、各々独立に、水素、シアノ、メチル、ハロ、トリフルオロメチル
、または－ＳＯ２ＣＨ３である）
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0227】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、４－（２－（２－ベンゾ［ｂ］チエン
－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル）フェノール
である。ある特定の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する、Ｓｔｅｍ
Ｒｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）である：
－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル）フェノール
である。ある特定の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する、Ｓｔｅｍ
Ｒｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）である：
【0228】
【化8】
【0229】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、１－メチル－Ｎ－（２－メチル－（４
－（２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）－１Ｈ－ピラゾール－５－カル
ボキサミドである。ある特定の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する
、ＣＨ２２３１９１である：
－（２－（２－メチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）－１Ｈ－ピラゾール－５－カル
ボキサミドである。ある特定の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する
、ＣＨ２２３１９１である：
【0230】
【化9】
【0231】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、ピリミド（４，５－ｂ）インドールで
ある。
ある。
【0232】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式ＩＶの化合物：
【0233】
【化10】
Ｚは、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～
１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ベンジル、ヘテロア
リール、ヘテロシクリル、－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、－Ｌ－ヘテロアリール、－Ｌ－ヘ
テロシクリル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ、－Ｃ（
Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）、－ＳＲ１ａ、－Ｓ（Ｏ
）Ｒ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１ａ、または
－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、
Ｗは、水素、ハロ、シアノ、Ｃ６～１４アリール、ベンジル、ヘテロアリール、ヘテロ
シクリル、－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、－Ｌ－ヘテロアリール、－Ｌ－ヘテロシクリル、
－Ｌ－ＯＨ、－Ｌ－ＯＲ１ａ、－Ｌ－ＮＨ２、－Ｌ－ＮＨＲ１ａ、－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ
１ｂ、－Ｌ－ＳＲ１ａ、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－Ｌ－Ｐ（Ｏ
）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）、－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－
Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリール、－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘ
テロアリール、－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ
）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリール、－Ｏ－Ｌ－ヘテ
ロシクリル、－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－（Ｎ
（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリール、－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロ
アリール、－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、－Ｓ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ
）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、－Ｓ－Ｌ－ヘテロアリール、－Ｓ－Ｌ－ヘテ
ロシクリル、－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ－（Ｎ
（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリール、－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロ
アリール、－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ
）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリール、－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、－Ｃ
（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ、－Ｃ（
Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－ＮＨＲ１ａ、－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１ａ
、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）Ｒ１ｃ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＯＲ１ｃ、
－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ
、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）Ｎ（
Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－ＮＲ１ｃＳ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－ＯＲ１ａ、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１ａ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ
１ａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ
）（ＯＲ１ｃ）、－ＳＲ１ａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ
Ｈ２、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、または－Ｓ（Ｏ）２
ＯＲ１ａであり、
各Ｌは、独立に、Ｃ１～６アルキレン、Ｃ２～６アルケニレン、Ｃ２～６アルキニレン
、Ｃ３～７シクロアルキレン、Ｃ６～１４アリーレン、ヘテロアリーレン、ヘテロシクリ
レン、Ｃ１～６アルキレン－Ｃ３～７シクロアルキレン、またはＣ１～６アルキレン－ヘ
テロシクリレンであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ６～１４アリール、ベンジル、ヘテロアリール、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－ＳＲ１ａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａ、－Ｌ－Ｃ６～
１４アリール、－Ｌ－ヘテロアリール、または－Ｌ－ヘテロシクリルであり、
各ｎは、独立に、１、２、３、４または５の整数であり、ならびに
各Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、独立に、（ｉ）水素であるか、（ｉｉ）Ｃ１～６ア
ルキル、Ｃ２－～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６
～１４アリール、Ｃ７～１５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであ
り、または（ｉｉｉ）Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ヘ
テロシクリルを形成し、
各アルキル、アルキレン、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、シ
クロアルキル、シクロアルキレン、アリール、ベンジル、アリーレン、ヘテロアリール、
ヘテロアリーレン、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリレンは、１つまたは複数、一実
施形態では１、２、３または４つの置換基Ｑで任意選択で置換されており、各置換基Ｑは
、（ａ）オキソ、シアノ、ハロ、およびニトロ、（ｂ）Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アル
ケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～１０シクロアルキル、Ｃ６～１４アリール、Ｃ７～
１５アラルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクリル［これらの各々は、１つ複数の
、一実施形態では１、２、３または４つの置換基Ｑａで、さらに任意選択で置換されてい
る］、ならびに（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－Ｃ
（ＮＲａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲａ、－ＯＣ（Ｏ
）ＮＲｂＲｃ、－ＯＣ（＝ＮＲａ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒａ、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒａ
、－ＯＳ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（Ｏ
）Ｒｄ、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲｄ、－ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（＝ＮＲｄ
）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＳ（Ｏ）Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）２Ｒｄ、－ＮＲａＳ（Ｏ）ＮＲ
ｂＲｃ、－ＮＲａＳ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ、－ＳＲａ、－Ｓ（Ｏ）Ｒａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒａ
、－Ｓ（Ｏ）ＮＲｂＲｃ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｂＲｃ［これらの式中、各Ｒａ、Ｒｂ
、Ｒｃ、およびＲｄは、独立に（ｉ）水素であるか、（ｉｉ）Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－
６アルケニル、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ３－１０シクロアルキル、Ｃ６－１４アリール、
Ｃ７－１５アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリル（これらの各々は、１
つまたは複数、一実施形態では１、２、３もしくは４つの置換基Ｑａでさらに任意選択で
置換されている）であり、または（ｉｉｉ）ＲｂおよびＲｃは、それらが結合しているＮ
原子と一緒に、ヘテロシクリルを形成し、前記ヘテロシクリルは、１つまたは複数、一実
施形態では１、２、３もしくは４つの置換基Ｑａでさらに任意選択で置換されている］か
ら独立に選択され、
各Ｑａは、（ａ）オキソ、シアノ、ハロ、およびニトロ、ならびに（ｂ）Ｃ１－６アル
キル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ３－１０シクロアルキル、Ｃ６－１
４アリール、Ｃ７－１５アラルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクリル、ならびに
（ｃ）－Ｃ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲｅ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－Ｃ（ＮＲｅ）ＮＲ
ｆＲｇ、－ＯＲｅ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲｅ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、
－ＯＣ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒｅ、－ＯＳ（Ｏ）
ＮＲｆＲｇ、－ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲ
ｅＣ（Ｏ）ＯＲｈ、－ＮＲｅＣ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲｅＣ（＝ＮＲｈ）ＮＲｆＲｇ、
－ＮＲｅＳ（Ｏ）Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）２Ｒｈ、－ＮＲｅＳ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、－ＮＲ
ｅＳ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ、－ＳＲｅ、－Ｓ（Ｏ）Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒｅ、－Ｓ（Ｏ）Ｎ
ＲｆＲｇ、および－Ｓ（Ｏ）２ＮＲｆＲｇ［これらの式中、各Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ、および
Ｒｈは、独立して、（ｉ）水素であるか、（ｉｉ）Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニ
ル、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ３－１０シクロアルキル、Ｃ６－１４アリール、Ｃ７－１５
アラルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであり、または（ｉｉ）Ｒｆおよ
びＲｇは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ヘテロシクリルを形成する］からなる
群から独立して選択される｝
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0234】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式Ｖの化合物：
【0235】
【化11】
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0236】
一実施形態では、式ＩＶまたはＶ中、
Ｚは、シアノ、ヘテロアリール、または－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであり、
Ｗは、ヘテロシクリル、－Ｌ－ヘテロシクリル、－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
－ＮＨＲ１ａ、または－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、
各Ｌは、独立に、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ３～７シクロアルキレンであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１～６アルキル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｌ－Ｃ６～１４ア
リール、または－Ｌ－ヘテロアリールであり、
各ｎは、独立に、１の整数であり、ならびに
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りであり、
各アルキル、アルキレン、シクロアルキレン、アリール、ベンジル、ヘテロアリール、
およびヘテロシクリルは、本明細書で定義される通りの１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されている。
Ｚは、シアノ、ヘテロアリール、または－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであり、
Ｗは、ヘテロシクリル、－Ｌ－ヘテロシクリル、－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
－ＮＨＲ１ａ、または－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、
各Ｌは、独立に、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ３～７シクロアルキレンであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１～６アルキル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、－Ｌ－Ｃ６～１４ア
リール、または－Ｌ－ヘテロアリールであり、
各ｎは、独立に、１の整数であり、ならびに
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りであり、
各アルキル、アルキレン、シクロアルキレン、アリール、ベンジル、ヘテロアリール、
およびヘテロシクリルは、本明細書で定義される通りの１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されている。
【0237】
別の実施形態では、式ＩＶまたはＶ中、
Ｚは、シアノ、５員ヘテロアリール、または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ１－～６アルキルであり
、
Ｗは、ヘテロシクリル、－Ｌ－ヘテロシクリル、－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
－ＮＨＲ１ａ、または－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、
各Ｌは、独立に、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ３～７シクロアルキレンであり、
Ｒ６は、水素、メチル、ベンジル、－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、または－Ｌ－ヘテロア
リールであり、
各ｎは、独立に、１の整数であり、ならびに
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りであり、
各アルキレン、シクロアルキレン、アリール、ベンジル、ヘテロアリール、およびヘテ
ロシクリルは、本明細書で定義される通りの１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換
されている。
Ｚは、シアノ、５員ヘテロアリール、または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ１－～６アルキルであり
、
Ｗは、ヘテロシクリル、－Ｌ－ヘテロシクリル、－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリル、－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
－ＮＨＲ１ａ、または－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、
各Ｌは、独立に、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ３～７シクロアルキレンであり、
Ｒ６は、水素、メチル、ベンジル、－Ｌ－Ｃ６～１４アリール、または－Ｌ－ヘテロア
リールであり、
各ｎは、独立に、１の整数であり、ならびに
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りであり、
各アルキレン、シクロアルキレン、アリール、ベンジル、ヘテロアリール、およびヘテ
ロシクリルは、本明細書で定義される通りの１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換
されている。
【0238】
一実施形態では、式ＩＶまたはＶ中、Ｗは、－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｌ－（Ｎ（
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－（
Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ
－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、または－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ
（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、Ｒ６、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、ＬおよびＺは、各々、本明細
書で定義される通りである。
Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｏ－Ｌ－（
Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、－Ｓ－Ｌ
－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ、または－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ
（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、Ｒ６、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、ＬおよびＺは、各々、本明細
書で定義される通りである。
【0239】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式ＶＩの化合物：
【0240】
【化12】
Ｚは、各々、本明細書で定義される通りである）
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0241】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、式ＶＩＩの化合物：
【0242】
【化13】
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、も
しくは同位体異型、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロ
ドラッグである。
【0243】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する化合物である：
【0244】
【化14】
【0245】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、下記の構造を有する化合物である：
【0246】
【化15】
【0247】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、レスベラトロール、テトラエチレンペ
ンタミン（ＴＥＰＡ）、アルファナフトフラボン、３’－メトキシ－４’－ニトロフラボ
ン、３，４－ジメトキシフラボン、４’，５，７－トリヒドロキシフラボン（アピゲニン
）、６－メチル－１，３，８－トリクロロジベンゾフラン、エピガロカテキン、または没
食子酸エピガロカテキンである。
ンタミン（ＴＥＰＡ）、アルファナフトフラボン、３’－メトキシ－４’－ニトロフラボ
ン、３，４－ジメトキシフラボン、４’，５，７－トリヒドロキシフラボン（アピゲニン
）、６－メチル－１，３，８－トリクロロジベンゾフラン、エピガロカテキン、または没
食子酸エピガロカテキンである。
【0248】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、レスベラトロールである。ある特定の
実施形態では、幹細胞動員化合物は、（Ｚ）－レスベラトロールである。ある特定の実施
形態では、幹細胞動員化合物は、（Ｅ）－レスベラトロールである。
実施形態では、幹細胞動員化合物は、（Ｚ）－レスベラトロールである。ある特定の実施
形態では、幹細胞動員化合物は、（Ｅ）－レスベラトロールである。
【0249】
さらに別の実施形態では、幹細胞動員化合物は、テトラエチレンペンタミン（ＴＥＰＡ
）である。
）である。
【0250】
本明細書に記載の化合物のすべては、市販されているか、または本明細書で開示される
特許または特許公報に記載されている方法に従って調製することができる。さらに、公知
の分割剤もしくはキラルカラムおよび他の標準的な合成有機化学技術を使用して、光学的
に純粋な化合物を不斉合成または分割することができる。幹細胞動員化合物、それらの調
製法および使用に関する追加情報は、例えば、（特許文献４）、（特許文献５）および（
特許文献６）、ならびに（非特許文献４）において見つけることができ、これらの参考文
献の各々についての開示はその全体が参照により本明細書に組み入れられている。
特許または特許公報に記載されている方法に従って調製することができる。さらに、公知
の分割剤もしくはキラルカラムおよび他の標準的な合成有機化学技術を使用して、光学的
に純粋な化合物を不斉合成または分割することができる。幹細胞動員化合物、それらの調
製法および使用に関する追加情報は、例えば、（特許文献４）、（特許文献５）および（
特許文献６）、ならびに（非特許文献４）において見つけることができ、これらの参考文
献の各々についての開示はその全体が参照により本明細書に組み入れられている。
【0251】
本明細書で提供される式、例えば、式Ｉ～ＶＩＩ中の基または可変要素、Ｇ１、Ｇ２、
Ｇ３、Ｇ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ、Ｒ６、Ｘ、Ｌ、Ｌ１、
Ｘ、Ｗ、Ｚおよびｎは、本明細書に記載の実施形態の中でさらに定義される。そのような
基および／または可変要素について本明細書で提供される実施形態のすべての組合せは、
本開示の範囲内である。
Ｇ３、Ｇ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ、Ｒ６、Ｘ、Ｌ、Ｌ１、
Ｘ、Ｗ、Ｚおよびｎは、本明細書に記載の実施形態の中でさらに定義される。そのような
基および／または可変要素について本明細書で提供される実施形態のすべての組合せは、
本開示の範囲内である。
【0252】
ある特定の実施形態では、Ｇ１は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｇ１は、ＣＲ
３であり、この式中のＲ３は、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｇ１は、ＣＨである。
３であり、この式中のＲ３は、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｇ１は、ＣＨである。
【0253】
ある特定の実施形態では、Ｇ２は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｇ２は、ＣＨ
である。
である。
【0254】
ある特定の実施形態では、Ｇ３は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｇ３は、ＣＨ
である。
である。
【0255】
ある特定の実施形態では、Ｇ４は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｇ４は、ＣＨ
である。
である。
【0256】
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本
明細書に記載の通り任意選択で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているフラニルである。ある特定の
実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピロリルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているイ
ミダゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で
置換されているピラゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の
通り任意選択で置換されているチエニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明
細書に記載の通り任意選択で置換されているチアゾリルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピリジニルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピリミジニル
である。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されて
いるピロリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意
選択で置換されているピラジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に
記載の通り任意選択で置換されているピリダジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベンゾイミダゾリルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているイソキノ
リニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換
されているイミダゾピリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記
載の通り任意選択で置換されているベンゾチエニルである。
明細書に記載の通り任意選択で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているフラニルである。ある特定の
実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピロリルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているイ
ミダゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で
置換されているピラゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の
通り任意選択で置換されているチエニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明
細書に記載の通り任意選択で置換されているチアゾリルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピリジニルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピリミジニル
である。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されて
いるピロリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意
選択で置換されているピラジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に
記載の通り任意選択で置換されているピリダジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベンゾイミダゾリルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているイソキノ
リニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記載の通り任意選択で置換
されているイミダゾピリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、本明細書に記
載の通り任意選択で置換されているベンゾチエニルである。
【0257】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）Ｒ１ｃであり、この式中のＲ１
ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｒ２は、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ
１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、－
Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選
択で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載
の通り任意選択で置換されているピロロピリジン－３－イルである。ある特定の実施形態
では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているインドリルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているチエニル
である。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されて
いるピリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選
択で置換されている１，２，４－トリアゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は
、本明細書に記載の通り任意選択で置換されている２－オキソイミダゾリジニルである。
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピラ
ゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換
されている２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾリルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているインダゾリル
である。
ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｒ２は、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ
１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、－
Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選
択で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載
の通り任意選択で置換されているピロロピリジン－３－イルである。ある特定の実施形態
では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているインドリルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているチエニル
である。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されて
いるピリジニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選
択で置換されている１，２，４－トリアゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は
、本明細書に記載の通り任意選択で置換されている２－オキソイミダゾリジニルである。
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているピラ
ゾリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換
されている２－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾイミダゾリルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ２は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているインダゾリル
である。
【0258】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、本
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～４アル
キルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているビフェニルである。
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～４アル
キルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているビフェニルである。
【0259】
ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているＣ
１～１０アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意
選択で置換されているプロパ－１－エン－２－イルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているシクロヘキシルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているシクロプロピ
ルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換され
ている２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているオキセタン－３－イルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベ
ンズヒドリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択
で置換されているテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルである。ある特定の実施形態で
は、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているテトラヒドロ－２Ｈ－ピラ
ン－４－イルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択
で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の
通り任意選択で置換されているテトラヒドロフラン－３－イルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベンジルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されている（４－ペ
ンチルフェニル）（フェニル）メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細
書に記載の通り任意選択で置換されている１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリ
オキサ－３－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－
イル）エチルである。
１～１０アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意
選択で置換されているプロパ－１－エン－２－イルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているシクロヘキシルである。ある特定
の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているシクロプロピ
ルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換され
ている２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチルである。ある特定の実施形態では
、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているオキセタン－３－イルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベ
ンズヒドリルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択
で置換されているテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イルである。ある特定の実施形態で
は、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているテトラヒドロ－２Ｈ－ピラ
ン－４－イルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択
で置換されているフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の
通り任意選択で置換されているテトラヒドロフラン－３－イルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されているベンジルである。ある
特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細書に記載の通り任意選択で置換されている（４－ペ
ンチルフェニル）（フェニル）メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、本明細
書に記載の通り任意選択で置換されている１－（１－（２－オキソ－６，９，１２－トリ
オキサ－３－アザテトラデカン－１４－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－
イル）エチルである。
【0260】
ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａ－であり、この式中のＲ１ａは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）１
～３－であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施
形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１
ａ（ＣＨ２）２ＮＲ１ｃ－であり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２Ｓ－
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ１ａは、本
明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ２Ｃ
Ｈ（ＯＨ）－であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定
の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ１ａ
は、本明細書で定義される通りである。
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）１
～３－であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施
形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１
ａ（ＣＨ２）２ＮＲ１ｃ－であり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａ（ＣＨ２）２Ｓ－
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ１ａは、本
明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ２Ｃ
Ｈ（ＯＨ）－であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定
の実施形態では、Ｌ１は、－ＮＲ１ａＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－であり、この式中のＲ１ａ
は、本明細書で定義される通りである。
【0261】
ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ａは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ａは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ａは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
【0262】
ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ｂは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ｂは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｂは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
【0263】
ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ｃは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、メチルである。ある特定の実施形
態では、Ｒ５ｃは、ハロである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、フルオロ、クロロ
、またはブロモである。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、トリフルオロメチルである
。ある特定の実施形態では、Ｒ５ｃは、－ＳＯ２ＣＨ３である。
【0264】
ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任
意選択で置換されているＣ１～６アルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで各々任意選択で置換されている、エチレ
ン、プロピレンまたはブチレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ２～６アルケニレンであ
る。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで
任意選択で置換されているＣ２～６アルキニレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ３～７
シクロアルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つま
たは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているシクロヘキシレンである。ある特定の実
施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れているＣ６～１４アリーレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロアリーレンである。
ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されているヘテロシクリレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細
書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキレ
ン－Ｃ３～７シクロアルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキレン－ヘテ
ロシクリレンである。
意選択で置換されているＣ１～６アルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで各々任意選択で置換されている、エチレ
ン、プロピレンまたはブチレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ２～６アルケニレンであ
る。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで
任意選択で置換されているＣ２～６アルキニレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ３～７
シクロアルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つま
たは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているシクロヘキシレンである。ある特定の実
施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れているＣ６～１４アリーレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロアリーレンである。
ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されているヘテロシクリレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細
書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキレ
ン－Ｃ３～７シクロアルキレンである。ある特定の実施形態では、Ｌは、本明細書に記載
の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキレン－ヘテ
ロシクリレンである。
【0265】
ある特定の実施形態では、Ｒ６は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、本
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アル
キルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているメチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ６～１４
アリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
６は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテ
ロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－
ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実
施形態では、Ｒ６は、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義さ
れる通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－
Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。あ
る特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｌ－ヘテロシクリルで
あり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アル
キルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているメチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ６～１４
アリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｒ
６は、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテ
ロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－
ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実
施形態では、Ｒ６は、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義さ
れる通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－
Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。あ
る特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、－Ｌ－ヘテロシクリルで
あり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
【0266】
ある特定の実施形態では、Ｗは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ハロで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ６～１４
アリールである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数
の置換基Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｗは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロア
リールである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロシクリレンである。
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ６～１４
アリールである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数
の置換基Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｗは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロア
リールである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロシクリレンである。
【0267】
ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任
意選択で置換されている－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまた
は複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中の
Ｌは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記
載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリルで
あり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗ
は、－Ｌ－ＯＨであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の
実施形態では、Ｗは、－Ｌ－ＯＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－ＮＨ２であり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ
－ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、－Ｌ－ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬ、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この
式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１
ａ）（ＯＲ１ｃ）であり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｃおよびＬは、各々、本明細書で定義
される通りである。
意選択で置換されている－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で
定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまた
は複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中の
Ｌは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記
載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテロシクリルで
あり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗ
は、－Ｌ－ＯＨであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の
実施形態では、Ｗは、－Ｌ－ＯＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－ＮＨ２であり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ
－ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、－Ｌ－ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬ、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この
式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、－Ｌ－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＬは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１
ａ）（ＯＲ１ｃ）であり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｃおよびＬは、各々、本明細書で定義
される通りである。
【0268】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂ
であり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義され
る通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリー
ルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであり、この式中
のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよび
ｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
であり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義され
る通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の
置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリー
ルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意
選択で置換されている－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであり、この式中
のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよび
ｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
【0269】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｏ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｏ－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つ
または複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリルであり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｏ－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つ
または複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－ヘテロシクリルであり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
【0270】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ
１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１
４アリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通り
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであ
り、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特
定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中の
Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１
４アリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通り
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであ
り、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特
定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されている－Ｏ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中の
Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
【0271】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｓ－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つ
または複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－ヘテロシクリルであり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
１ａ、Ｒ１ｂおよびＬは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態
では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されてい
る－Ｓ－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りで
ある。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－ヘテロアリールであり、この式中のＬは、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つ
または複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－ヘテロシクリルであり、こ
の式中のＬは、本明細書で定義される通りである。
【0272】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ
１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１
４アリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通り
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであ
り、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特
定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中の
Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複
数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１
４アリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通り
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであ
り、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特
定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されている－Ｓ－Ｌ－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中の
Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。
【0273】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであ
り、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通
りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリールであり
、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定
の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置
換されている－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌ
およびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－（Ｎ（Ｒ
１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明
細書で定義される通りである。
り、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通
りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されている－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－Ｃ６～１４アリールであり
、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定
の実施形態では、Ｗは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置
換されている－（Ｎ（Ｒ１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロアリールであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌ
およびｎは、各々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－（Ｎ（Ｒ
１ｃ）－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリルであり、この式中のＲ１ｃ、Ｌおよびｎは、各々、本明
細書で定義される通りである。
【0274】
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各
々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＲ１ａで
あり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では
、Ｗは、－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）Ｒ１ｃであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＯＲ１ｃであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々
、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ
Ｈ２である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ
ＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＮＨ２
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各
々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＲ１ｃＣ（
Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ｃＳ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々
、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＲ１ａであり
、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗ
は、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである
。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、
本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ
）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この
式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－
Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）であり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本
明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＳＲ１ａであり、こ
の式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある
特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書
で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２である。
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、
本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ
１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通
りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１ａであり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各
々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＲ１ａで
あり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では
、Ｗは、－Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）Ｒ１ｃであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＯＲ１ｃであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々
、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ
Ｈ２である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式
中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ
ＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細
書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＲ１ａＣ（Ｏ）ＮＨ２
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ｃＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各
々、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＲ１ｃＣ（
Ｏ）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、各々、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ１ａ
であり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態で
は、Ｗは、－ＮＲ１ｃＳ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々
、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＲ１ａであり
、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗ
は、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである
。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、
本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２
である。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＣ（Ｏ
）Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義
される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この
式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－
Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）であり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本
明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－ＳＲ１ａであり、こ
の式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、
－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある
特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書
で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２である。
ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、
本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ
１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通
りである。ある特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１ａであり、この式中のＲ
１ａは、本明細書で定義される通りである。
【0275】
ある特定の実施形態では、Ｚは、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明
細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキ
ルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されているＣ２～６アルケニルである。ある特定の実施形態では、
Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ２
～６アルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまた
は複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ３～１０シクロアルキルである。ある特
定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されているＣ６～１４アリールである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に
記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ７～１５アラルキル
である。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細
書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロアリールで
ある。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている５員ヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｚは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているテトラゾ
イルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置
換基Ｑで任意選択で置換されている１，２，４－オキサジアゾリルである。ある特定の実
施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れているヘテロシクリルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り
１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり
、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテ
ロアリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施
形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換され
ている－Ｌ－ヘテロシクリルであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである
。
細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ１～６アルキ
ルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換
基Ｑで任意選択で置換されているＣ２～６アルケニルである。ある特定の実施形態では、
Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ２
～６アルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまた
は複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ３～１０シクロアルキルである。ある特
定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で
置換されているＣ６～１４アリールである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に
記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているＣ７～１５アラルキル
である。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基
Ｑで任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細
書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているヘテロアリールで
ある。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑ
で任意選択で置換されている５員ヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｚは
、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されているテトラゾ
イルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置
換基Ｑで任意選択で置換されている１，２，４－オキサジアゾリルである。ある特定の実
施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換さ
れているヘテロシクリルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り
１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－Ｃ６～１４アリールであり
、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、
本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｌ－ヘテ
ロアリールであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施
形態では、Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換され
ている－Ｌ－ヘテロシクリルであり、この式中のＬは、本明細書で定義される通りである
。
【0276】
ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｃ
（Ｏ）ＯＣ１～６アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３
である。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１
ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）Ｎ
（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義され
る通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）で
あり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある
特定の実施形態では、Ｚは、－ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義さ
れる通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中の
Ｒ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ
）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の
実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２である。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ
（Ｏ）２ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。あ
る特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１
ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通りである。
細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであ
り、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、
Ｚは、本明細書に記載の通り１つまたは複数の置換基Ｑで任意選択で置換されている－Ｃ
（Ｏ）ＯＣ１～６アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３
である。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１
ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）Ｎ
（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義され
る通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）（ＯＲ１ｃ）で
あり、この式中のＲ１ａおよびＲ１ｃは、各々、本明細書で定義される通りである。ある
特定の実施形態では、Ｚは、－ＳＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義さ
れる通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）Ｒ１ａであり、この式中の
Ｒ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ
）２Ｒ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。ある特定の
実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２である。ある特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ
（Ｏ）２ＮＨＲ１ａであり、この式中のＲ１ａは、本明細書で定義される通りである。あ
る特定の実施形態では、Ｚは、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１ａ）Ｒ１ｂであり、この式中のＲ１
ａおよびＲ１ｂは、各々、本明細書で定義される通りである。
【0277】
ある特定の実施形態では、Ｘは、結合である。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｏであ
る。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｘは、ＮＲ１
ｃであり、この式中のＲ１ｃは、本明細書で定義される通りである。
る。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｘは、ＮＲ１
ｃであり、この式中のＲ１ｃは、本明細書で定義される通りである。
【0278】
ある特定の実施形態では、ｎは、１である。ある特定の実施形態では、ｎは、２である
。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、４である
。ある特定の実施形態では、ｎは、５である。
。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、４である
。ある特定の実施形態では、ｎは、５である。
【0279】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ＡＨＲのアンタゴニストと
しての活性を示す。
しての活性を示す。
【0280】
本明細書で提供される化合物は、鏡像異性的に純粋であり、例えば、単一の鏡像異性体
もしくは単一のジアステレオマーであってもよく、または立体異性体混合物、例えば、鏡
像異性体の混合物、例えば、２つの鏡像異性体のラセミ混合物、もしくは２つ以上のジア
ステレオマーの混合物であってもよい。したがって、化合物のその（Ｒ）形態での投与は
、ｉｎ ｖｉｖｏでエピマー化される化合物については、前記化合物のその（Ｓ）形態で
の投与と等価であることが当業者に認識されよう。個々の鏡像異性体の従来の調製／単離
技術としては、好適な光学的に純粋な前駆体からの合成、アキラル出発物質からの不斉合
成、または鏡像異性体混合物の分割、例えば、キラルクロマトグラフィー、再結晶、分割
、ジアステレオマー塩形成、もしくはジアステレオマー付加体への誘導体化、その後の分
離が挙げられる。
もしくは単一のジアステレオマーであってもよく、または立体異性体混合物、例えば、鏡
像異性体の混合物、例えば、２つの鏡像異性体のラセミ混合物、もしくは２つ以上のジア
ステレオマーの混合物であってもよい。したがって、化合物のその（Ｒ）形態での投与は
、ｉｎ ｖｉｖｏでエピマー化される化合物については、前記化合物のその（Ｓ）形態で
の投与と等価であることが当業者に認識されよう。個々の鏡像異性体の従来の調製／単離
技術としては、好適な光学的に純粋な前駆体からの合成、アキラル出発物質からの不斉合
成、または鏡像異性体混合物の分割、例えば、キラルクロマトグラフィー、再結晶、分割
、ジアステレオマー塩形成、もしくはジアステレオマー付加体への誘導体化、その後の分
離が挙げられる。
【0281】
５．４．ＮＫ細胞の単離
ナチュラルキラー細胞を単離する方法は当技術分野において公知であり、そのような方
法を使用して、ナチュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製
造されたＮＫ細胞を単離することができる。例えば、ＮＫ細胞は、例えば、一実施形態で
はＣＤ５６およびＣＤ３に対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋ＣＤ３
－細胞について選択することにより、単離または富化することができる。ある特定の実施
形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較し
て、ＣＤ５６＋ＣＤ３－細胞について富化される。ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の
３段階法を使用して製造された細胞は、市販のキット、例えば、ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、単離することが
できる。ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、Ｎ
Ｋ細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団内
のＮＫ細胞以外の細胞の除去により、単離または富化することもできる。例えば、ＮＫ細
胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞を、例えばＣＤ３、Ｃ
Ｄ４、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、ＨＬＡ Ｄ
Ｒおよび／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）のうちの１つまたは複数に対する抗体
を使用して、非ＮＫ細胞マーカーを提示する細胞を枯渇させることにより、単離または富
化してもよい。市販のキット、例えば、ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｉｓｏｌａ
ｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して、ネガティブアイソレーシ
ョンを行うことができる。これらの方法により単離された細胞を、例えば、ＣＤ１１ａ＋
細胞とＣＤ１１ａ－細胞、および／またはＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞、および
／またはＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞、および／またはＣＤ９４＋とＣＤ９４－を分
離するために、さらに選別してもよい。ある特定の実施形態では、細胞、例えば、本明細
書に記載の３段階法により製造された細胞は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を分
離するために選別される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１ａ＋細胞が単離される。ある
特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と
比較して、ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１ａ－
細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用
して製造された全細胞と比較して、ＣＤ１１ａ－細胞について富化される。ある特定の実
施形態では、細胞は、ＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するために選別される
。具体的な実施形態では、ＣＤ１１７＋細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細
胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ
１１７＋細胞について富化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１７－細胞が単離され
る。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して産
生された全細胞と比較して、ＣＤ１１７－細胞について富化される。ある特定の実施形態
では、細胞は、ＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞を分離するために選別される。具体的な
実施形態では、ＣＤ１６＋細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細
書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ１６＋細胞について富
化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１６－細胞が単離される。ある特定の実施形態で
は、細胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して産生された全細胞と比較して
、ＣＤ１６－細胞について富化される。ある特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ９４＋細
胞とＣＤ９４－細胞を分離するために選別される。具体的な実施形態では、ＣＤ９４＋細
胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用し
て製造された全細胞と比較して、ＣＤ９４＋細胞について富化される。具体的な実施形態
では、ＣＤ９４－細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載
されている３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ９４－細胞について富
化される。ある特定の実施形態では、単離は、磁気分離を使用して行われる。ある特定の
実施形態では、単離は、フローサイトメトリーを使用して行われる。
ナチュラルキラー細胞を単離する方法は当技術分野において公知であり、そのような方
法を使用して、ナチュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製
造されたＮＫ細胞を単離することができる。例えば、ＮＫ細胞は、例えば、一実施形態で
はＣＤ５６およびＣＤ３に対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋ＣＤ３
－細胞について選択することにより、単離または富化することができる。ある特定の実施
形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較し
て、ＣＤ５６＋ＣＤ３－細胞について富化される。ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の
３段階法を使用して製造された細胞は、市販のキット、例えば、ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、単離することが
できる。ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、Ｎ
Ｋ細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団内
のＮＫ細胞以外の細胞の除去により、単離または富化することもできる。例えば、ＮＫ細
胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞を、例えばＣＤ３、Ｃ
Ｄ４、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、ＨＬＡ Ｄ
Ｒおよび／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）のうちの１つまたは複数に対する抗体
を使用して、非ＮＫ細胞マーカーを提示する細胞を枯渇させることにより、単離または富
化してもよい。市販のキット、例えば、ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｉｓｏｌａ
ｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して、ネガティブアイソレーシ
ョンを行うことができる。これらの方法により単離された細胞を、例えば、ＣＤ１１ａ＋
細胞とＣＤ１１ａ－細胞、および／またはＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞、および
／またはＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞、および／またはＣＤ９４＋とＣＤ９４－を分
離するために、さらに選別してもよい。ある特定の実施形態では、細胞、例えば、本明細
書に記載の３段階法により製造された細胞は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を分
離するために選別される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１ａ＋細胞が単離される。ある
特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と
比較して、ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１ａ－
細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用
して製造された全細胞と比較して、ＣＤ１１ａ－細胞について富化される。ある特定の実
施形態では、細胞は、ＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するために選別される
。具体的な実施形態では、ＣＤ１１７＋細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細
胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ
１１７＋細胞について富化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１１７－細胞が単離され
る。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して産
生された全細胞と比較して、ＣＤ１１７－細胞について富化される。ある特定の実施形態
では、細胞は、ＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞を分離するために選別される。具体的な
実施形態では、ＣＤ１６＋細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細
書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ１６＋細胞について富
化される。具体的な実施形態では、ＣＤ１６－細胞が単離される。ある特定の実施形態で
は、細胞は、本明細書に記載されている３段階法を使用して産生された全細胞と比較して
、ＣＤ１６－細胞について富化される。ある特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ９４＋細
胞とＣＤ９４－細胞を分離するために選別される。具体的な実施形態では、ＣＤ９４＋細
胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用し
て製造された全細胞と比較して、ＣＤ９４＋細胞について富化される。具体的な実施形態
では、ＣＤ９４－細胞が単離される。ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載
されている３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ９４－細胞について富
化される。ある特定の実施形態では、単離は、磁気分離を使用して行われる。ある特定の
実施形態では、単離は、フローサイトメトリーを使用して行われる。
【0282】
ＩＬＣ３細胞を単離する方法は当技術分野において公知であり、そのような方法を使用
して、ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３
細胞を単離することができる。例えば、ＩＬＣ３細胞は、例えば、一実施形態ではＣＤ５
６、ＣＤ３およびＣＤ１１ａに対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋Ｃ
Ｄ３－ＣＤ１１ａ－細胞について選択することにより、単離または富化することができる
。ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、ＩＬ
Ｃ３細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団
内のＩＬＣ３細胞以外の細胞の除去により、単離または富化することもできる。例えば、
ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞を、例えば
ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、
ＣＤ９４、ＣＤ１２３、ＨＬＡ ＤＲおよび／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）の
うちの１つまたは複数に対する抗体を使用して、非ＩＬＣ３細胞マーカーを提示する細胞
を枯渇させることにより、単離または富化してもよい。これらの方法により単離された細
胞を、例えばＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するために、さらに選別しても
よい。ＮＫ細胞は、例えば、一実施形態ではＣＤ５６、ＣＤ３、ＣＤ９４およびＣＤ１１
ａに対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１
ａ＋細胞について選択することにより、単離または富化することができる。ＮＫ細胞、例
えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、ＮＫ細胞、例えば本明細
書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団内のＮＫ細胞以外の細胞
の除去により、単離または富化することもできる。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は
、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３
－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。
して、ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３
細胞を単離することができる。例えば、ＩＬＣ３細胞は、例えば、一実施形態ではＣＤ５
６、ＣＤ３およびＣＤ１１ａに対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋Ｃ
Ｄ３－ＣＤ１１ａ－細胞について選択することにより、単離または富化することができる
。ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、ＩＬ
Ｃ３細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団
内のＩＬＣ３細胞以外の細胞の除去により、単離または富化することもできる。例えば、
ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞を、例えば
ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、
ＣＤ９４、ＣＤ１２３、ＨＬＡ ＤＲおよび／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）の
うちの１つまたは複数に対する抗体を使用して、非ＩＬＣ３細胞マーカーを提示する細胞
を枯渇させることにより、単離または富化してもよい。これらの方法により単離された細
胞を、例えばＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するために、さらに選別しても
よい。ＮＫ細胞は、例えば、一実施形態ではＣＤ５６、ＣＤ３、ＣＤ９４およびＣＤ１１
ａに対する抗体で、細胞を染色すること、およびＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１
ａ＋細胞について選択することにより、単離または富化することができる。ＮＫ細胞、例
えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された細胞は、ＮＫ細胞、例えば本明細
書に記載の３段階法を使用して製造された細胞、を含む細胞集団内のＮＫ細胞以外の細胞
の除去により、単離または富化することもできる。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は
、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３
－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。
【0283】
一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－細胞について選択
することにより単離または富化される。ある特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明
細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ－細胞について富化される。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３
－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について選択することにより単離または富化される。あ
る特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造され
た全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について富化さ
れる。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋
ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について選択することにより単離または富化される。ある特定の実
施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と
比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について
富化される。
することにより単離または富化される。ある特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明
細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ
１１ａ－細胞について富化される。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３
－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について選択することにより単離または富化される。あ
る特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造され
た全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について富化さ
れる。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋
ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について選択することにより単離または富化される。ある特定の実
施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と
比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について
富化される。
【0284】
一実施形態では、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞につい
て選択することにより単離または富化される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本
明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－Ｃ
Ｄ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。一実施形態では、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６
＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１１７－細胞について選択することにより単離ま
たは富化される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１
１７－細胞について富化される。
て選択することにより単離または富化される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本
明細書に記載の３段階法を使用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－Ｃ
Ｄ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について富化される。一実施形態では、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６
＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１１７－細胞について選択することにより単離ま
たは富化される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１
１７－細胞について富化される。
【0285】
細胞分離は、例えば、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または
、一実施形態では、特異的抗体とコンジュゲートしたマイクロビーズを使用する磁気細胞
選別により、遂行することができる。例えば、１つまたは複数の特異的抗体、例えば抗Ｃ
Ｄ５６抗体、を含む磁気ビーズ（例えば、直径約０．５～１００μｍ）に結合する粒子の
能力に基づいて粒子を分離する方法である、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）技術を使用
して、細胞を単離してもよい。磁気細胞分離は、例えば、ＡＵＴＯＭＡＣＳ（商標）セパ
レーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、行うことおよび自動化することができる。特
定の細胞表面分子またはハプテンを特異的に認識する抗体の共有結合性付加を含む、様々
な有用な修飾を、磁気マイクロスフェアに対して行うことができる。次いで、ビーズを細
胞と混合して、結合させる。次いで、細胞を磁場に通して、特異的細胞表面マーカーを有
する細胞を取り出す。一実施形態では、次いでこれらの細胞を単離し、さらなる細胞表面
マーカーに対する抗体に結合した磁気ビーズと再混合する。細胞を再び磁場に通し、両方
の抗体に結合している細胞を単離する。次いで、そのような細胞をクローン単離のために
別々のディッシュ、例えばマイクロターターディッシュに入れて希釈することができる。
、一実施形態では、特異的抗体とコンジュゲートしたマイクロビーズを使用する磁気細胞
選別により、遂行することができる。例えば、１つまたは複数の特異的抗体、例えば抗Ｃ
Ｄ５６抗体、を含む磁気ビーズ（例えば、直径約０．５～１００μｍ）に結合する粒子の
能力に基づいて粒子を分離する方法である、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）技術を使用
して、細胞を単離してもよい。磁気細胞分離は、例えば、ＡＵＴＯＭＡＣＳ（商標）セパ
レーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、行うことおよび自動化することができる。特
定の細胞表面分子またはハプテンを特異的に認識する抗体の共有結合性付加を含む、様々
な有用な修飾を、磁気マイクロスフェアに対して行うことができる。次いで、ビーズを細
胞と混合して、結合させる。次いで、細胞を磁場に通して、特異的細胞表面マーカーを有
する細胞を取り出す。一実施形態では、次いでこれらの細胞を単離し、さらなる細胞表面
マーカーに対する抗体に結合した磁気ビーズと再混合する。細胞を再び磁場に通し、両方
の抗体に結合している細胞を単離する。次いで、そのような細胞をクローン単離のために
別々のディッシュ、例えばマイクロターターディッシュに入れて希釈することができる。
【0286】
５．５．胎盤潅流液
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製
造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、任意の源、例えば、胎盤組織、胎
盤潅流液、臍帯血、胎盤血、抹消血、脾臓、肝臓などからの、造血細胞、例えば造血幹ま
たは前駆細胞から製造することができる。ある特定の実施形態では、造血幹細胞は、胎盤
潅流液からの造血幹細胞と、前記胎盤潅流液を生じさせるために使用されたのと同じ胎盤
からの臍帯血からの造血幹細胞とを合わせたものである。例えば、（特許文献７）および
（特許文献８）、ならびに（特許文献９）に開示されている方法により得ることができる
、胎盤潅流液細胞を含む胎盤潅流液。前記特許文献の開示は、それら全体が本明細書に組
み入れられている。
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製
造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、任意の源、例えば、胎盤組織、胎
盤潅流液、臍帯血、胎盤血、抹消血、脾臓、肝臓などからの、造血細胞、例えば造血幹ま
たは前駆細胞から製造することができる。ある特定の実施形態では、造血幹細胞は、胎盤
潅流液からの造血幹細胞と、前記胎盤潅流液を生じさせるために使用されたのと同じ胎盤
からの臍帯血からの造血幹細胞とを合わせたものである。例えば、（特許文献７）および
（特許文献８）、ならびに（特許文献９）に開示されている方法により得ることができる
、胎盤潅流液細胞を含む胎盤潅流液。前記特許文献の開示は、それら全体が本明細書に組
み入れられている。
【0287】
５．５．１．細胞収集組成物
造血幹または前駆細胞を単離することができる胎盤潅流液および潅流液細胞、あるいは
腫瘍抑制に有用な、または腫瘍細胞、がんもしくはウイルス感染症を有する個体の処置に
有用な胎盤潅流液および潅流液細胞、例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例
えば、本明細書で提供される３段階法に従って製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞集団との組合せでの前記胎盤潅流液および潅流液細胞は、胎盤細胞収集組成物を使
用する哺乳動物分娩後胎盤、例えばヒト分娩後胎盤の潅流により、収集することができる
。潅流液は、任意の生理学的に許容される溶液、例えば、生理食塩水、培養培地、または
より複雑な細胞収集組成物を用いる胎盤の潅流により、胎盤から収集することができる。
胎盤の潅流にならびに潅流液細胞の収集および保存に好適な細胞収集組成物は、関連する
（特許文献１０）に詳細に記載されており、前記特許文献はその全体が参照により本明細
書に組み入れられている。
造血幹または前駆細胞を単離することができる胎盤潅流液および潅流液細胞、あるいは
腫瘍抑制に有用な、または腫瘍細胞、がんもしくはウイルス感染症を有する個体の処置に
有用な胎盤潅流液および潅流液細胞、例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例
えば、本明細書で提供される３段階法に従って製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞集団との組合せでの前記胎盤潅流液および潅流液細胞は、胎盤細胞収集組成物を使
用する哺乳動物分娩後胎盤、例えばヒト分娩後胎盤の潅流により、収集することができる
。潅流液は、任意の生理学的に許容される溶液、例えば、生理食塩水、培養培地、または
より複雑な細胞収集組成物を用いる胎盤の潅流により、胎盤から収集することができる。
胎盤の潅流にならびに潅流液細胞の収集および保存に好適な細胞収集組成物は、関連する
（特許文献１０）に詳細に記載されており、前記特許文献はその全体が参照により本明細
書に組み入れられている。
【0288】
細胞収集組成物は、幹細胞の収集および／または培養に好適な任意の生理学的に許容さ
れる溶液、例えば、生理食塩水（例えば、リン酸緩衝食塩水、クレブス溶液、変性クレブ
ス溶液、イーグル溶液、０．９％ＮａＣｌなど）、培養培地（例えば、ＤＭＥＭ、Ｈ．Ｄ
ＭＥＭなど）などを含むことができる。
れる溶液、例えば、生理食塩水（例えば、リン酸緩衝食塩水、クレブス溶液、変性クレブ
ス溶液、イーグル溶液、０．９％ＮａＣｌなど）、培養培地（例えば、ＤＭＥＭ、Ｈ．Ｄ
ＭＥＭなど）などを含むことができる。
【0289】
細胞収集組成物は、収集時から培養時までの胎盤細胞の保存、すなわち胎盤細胞の死滅
の防止、または胎盤細胞の死滅の遅延、死滅する細胞集団内の胎盤細胞の数の低減などに
役立つ、１つまたは複数の成分を含むことができる。そのような成分は、例えば、アポト
ーシス阻害剤（例えば、カスパーゼ阻害剤もしくはＪＮＫ阻害剤）、血管拡張薬（例えば
、硫酸マグネシウム、降圧薬、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、副腎皮質刺激
ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ニトロプルシドナトリウム、ヒドララジ
ン、アデノシン三リン酸、アデノシン、インドメタシンもしくは硫酸マグネシウム、ホス
ホジエステラーゼ阻害剤など）、壊死阻害剤（例えば、２－（１Ｈ－インドール－３－イ
ル）－３－ペンチルアミノ－マレイミド、ピロリジンジチオカルバミン酸、もしくはクロ
ナゼパム）、ＴＮＦ－α阻害剤、および／または酸素担持ペルフルオロカーボン（例えば
、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデシルブロミドなど）であり得る。
の防止、または胎盤細胞の死滅の遅延、死滅する細胞集団内の胎盤細胞の数の低減などに
役立つ、１つまたは複数の成分を含むことができる。そのような成分は、例えば、アポト
ーシス阻害剤（例えば、カスパーゼ阻害剤もしくはＪＮＫ阻害剤）、血管拡張薬（例えば
、硫酸マグネシウム、降圧薬、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、副腎皮質刺激
ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ニトロプルシドナトリウム、ヒドララジ
ン、アデノシン三リン酸、アデノシン、インドメタシンもしくは硫酸マグネシウム、ホス
ホジエステラーゼ阻害剤など）、壊死阻害剤（例えば、２－（１Ｈ－インドール－３－イ
ル）－３－ペンチルアミノ－マレイミド、ピロリジンジチオカルバミン酸、もしくはクロ
ナゼパム）、ＴＮＦ－α阻害剤、および／または酸素担持ペルフルオロカーボン（例えば
、ペルフルオロオクチルブロミド、ペルフルオロデシルブロミドなど）であり得る。
【0290】
細胞収集組成物は、１つまたは複数の組織分解酵素、例えば、メタロプロテアーゼ、セ
リンプロテアーゼ、神経プロテアーゼ、ヒアルロニダーゼ、リボヌクレアーゼ、またはデ
オキシリボヌクレアーゼなどを含むことができる。そのような酵素には、コラゲナーゼ（
例えば、コラゲナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶ、クロストリジウム・ヒストリチクム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）からのコラゲナーゼなど）、デ
ィスパーゼ、サーモリシン、エラスターゼ、トリプシン、ＬＩＢＥＲＡＳＥ、ヒアルロニ
ダーゼなどが含まれるが、これらに限定されない。
リンプロテアーゼ、神経プロテアーゼ、ヒアルロニダーゼ、リボヌクレアーゼ、またはデ
オキシリボヌクレアーゼなどを含むことができる。そのような酵素には、コラゲナーゼ（
例えば、コラゲナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶ、クロストリジウム・ヒストリチクム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）からのコラゲナーゼなど）、デ
ィスパーゼ、サーモリシン、エラスターゼ、トリプシン、ＬＩＢＥＲＡＳＥ、ヒアルロニ
ダーゼなどが含まれるが、これらに限定されない。
【0291】
細胞収集組成物は、殺菌または静菌有効量の抗生物質を含むことができる。ある特定の
非限定的実施形態では、抗生物質は、マクロライド（例えば、トブラマイシン）、セファ
ロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、セフ
ァクロル、セフィキシムもしくはセファドロキシル）、クラリスロマイシン、エリスロマ
イシン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン（例えば、オフロキサシン
、シプロフロキサシンもしくはノルフロキサシン）、テトラサイクリン、ストレプトマイ
シンなどである。特定の実施形態では、抗生物質は、グラム（＋）および／またはグラム
（－）菌、例えば、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブ
ドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，）などに対して活性である。
非限定的実施形態では、抗生物質は、マクロライド（例えば、トブラマイシン）、セファ
ロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、セフ
ァクロル、セフィキシムもしくはセファドロキシル）、クラリスロマイシン、エリスロマ
イシン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン（例えば、オフロキサシン
、シプロフロキサシンもしくはノルフロキサシン）、テトラサイクリン、ストレプトマイ
シンなどである。特定の実施形態では、抗生物質は、グラム（＋）および／またはグラム
（－）菌、例えば、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブ
ドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，）などに対して活性である。
【0292】
細胞収集組成物はまた、次の化合物のうちの１つまたは複数を含むことができる：アデ
ノシン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、Ｄ－グルコース（約２０ｍＭ～約１００ｍＭ）、マグ
ネシウムイオン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、２０，０００ダルトンより高い分子量の高分
子、一実施形態では、内皮完全性および細胞生存率を維持するのに十分な量で存在する前
記高分子（例えば、約２５ｇ／ｌ～約１００ｇ／ｌ、もしくは約４０ｇ／ｌ～約６０ｇ／
ｌで存在する、合成もしくは天然に存在するコロイド、多糖類、例えばデキストラン、も
しくはポリエチレングリコール）、酸化防止剤（例えば、約２５μＭ～約１００μＭで存
在する、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、グルタチオン、
ビタミンＣもしくはビタミンＥ）、還元剤（例えば、約０．１ｍＭ～約５ｍＭで存在する
Ｎ－アセチルシステイン）、細胞へのカルシウム侵入を防止する薬剤（例えば、約２μＭ
～約２５μＭで存在するベラパミル）、ニトログリセリン（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ～
約０．２ｇ／Ｌ）、抗凝固薬、一実施形態では残留血の凝固の防止を補助するのに十分な
量で存在する前記抗凝固薬（例えば、約１０００単位／ｌ～約１００，０００単位／ｌの
濃度で存在するヘパリンもしくはヒルジン）、またはアミロライド含有化合物（例えば、
約１．０μＭ～約５μＭで存在する、アミロライド、エチルイソプロピルアミロライド、
ヘキサメチレンアミロライド、ジメチルアミロライドもしくはイソブチルアミロライド）
。
ノシン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、Ｄ－グルコース（約２０ｍＭ～約１００ｍＭ）、マグ
ネシウムイオン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、２０，０００ダルトンより高い分子量の高分
子、一実施形態では、内皮完全性および細胞生存率を維持するのに十分な量で存在する前
記高分子（例えば、約２５ｇ／ｌ～約１００ｇ／ｌ、もしくは約４０ｇ／ｌ～約６０ｇ／
ｌで存在する、合成もしくは天然に存在するコロイド、多糖類、例えばデキストラン、も
しくはポリエチレングリコール）、酸化防止剤（例えば、約２５μＭ～約１００μＭで存
在する、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、グルタチオン、
ビタミンＣもしくはビタミンＥ）、還元剤（例えば、約０．１ｍＭ～約５ｍＭで存在する
Ｎ－アセチルシステイン）、細胞へのカルシウム侵入を防止する薬剤（例えば、約２μＭ
～約２５μＭで存在するベラパミル）、ニトログリセリン（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ～
約０．２ｇ／Ｌ）、抗凝固薬、一実施形態では残留血の凝固の防止を補助するのに十分な
量で存在する前記抗凝固薬（例えば、約１０００単位／ｌ～約１００，０００単位／ｌの
濃度で存在するヘパリンもしくはヒルジン）、またはアミロライド含有化合物（例えば、
約１．０μＭ～約５μＭで存在する、アミロライド、エチルイソプロピルアミロライド、
ヘキサメチレンアミロライド、ジメチルアミロライドもしくはイソブチルアミロライド）
。
【0293】
５．５．２．胎盤の収集および処理
一般に、ヒト胎盤は、産後、その娩出直後に回収される。一実施形態では、胎盤は、イ
ンフォームドコンセント後かつ患者の全病歴を聴取し、胎盤と関連付けた後に、患者から
回収される。一実施形態では、前記病歴は、分娩後も継続する。
一般に、ヒト胎盤は、産後、その娩出直後に回収される。一実施形態では、胎盤は、イ
ンフォームドコンセント後かつ患者の全病歴を聴取し、胎盤と関連付けた後に、患者から
回収される。一実施形態では、前記病歴は、分娩後も継続する。
【0294】
潅流液の回収前に、臍帯血および胎盤血は除去される。ある特定の実施形態では、分娩
後に胎盤内の臍帯血が回収される。胎盤を従来の臍帯血回収プロセスに付してもよい。概
して、針またはカニューレを使用して、重量を活用して、胎盤を瀉血する（例えば、アン
ダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、（特許文献１１）；ヘッセル（Ｈｅｓｓｅｌ）ら、（特
許文献１２）を参照されたい）。針およびカニューレを通常は臍帯静脈内に留置し、胎盤
を穏やかに揉んで胎盤からの臍帯血の排出を補助することができる。そのような臍帯血回
収は、商業的に行われることもある、例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋ Ｉｎｃ．、Ｃｅｄａｒ
Ｋｎｏｌｌｓ、Ｎ．Ｊ．、ＶｉａＣｏｒｄ、Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ
およびＣｒｙｏＣｅｌｌ。一実施形態では、臍帯血回収中の組織破壊を最小にするための
さらなる操作がない、胎盤の落差脱血が行われる。
後に胎盤内の臍帯血が回収される。胎盤を従来の臍帯血回収プロセスに付してもよい。概
して、針またはカニューレを使用して、重量を活用して、胎盤を瀉血する（例えば、アン
ダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、（特許文献１１）；ヘッセル（Ｈｅｓｓｅｌ）ら、（特
許文献１２）を参照されたい）。針およびカニューレを通常は臍帯静脈内に留置し、胎盤
を穏やかに揉んで胎盤からの臍帯血の排出を補助することができる。そのような臍帯血回
収は、商業的に行われることもある、例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋ Ｉｎｃ．、Ｃｅｄａｒ
Ｋｎｏｌｌｓ、Ｎ．Ｊ．、ＶｉａＣｏｒｄ、Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ
およびＣｒｙｏＣｅｌｌ。一実施形態では、臍帯血回収中の組織破壊を最小にするための
さらなる操作がない、胎盤の落差脱血が行われる。
【0295】
概して、胎盤は、臍帯血の回収および潅流液の収集のために分娩または出産室から別の
場所、例えば研究室に輸送される。胎盤を滅菌断熱輸送デバイス（胎盤の温度を２０～２
８℃で維持する）で、例えば、臍帯近位部をクランプした胎盤を滅菌ジップロックプラス
チックバッグの中に入れ、次いでそれを断熱コンテナに入れることにより、輸送すること
ができる。別の実施形態では、胎盤は、実質的に（特許文献１３）に記載されている通り
の臍帯血採取キットで輸送される。一実施形態では、胎盤は、分娩の４～２４時間後に研
究室に配達される。ある特定の実施形態では、臍帯血回収前に臍帯近位部、例えば、胎盤
円盤体（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｄｉｓｃ）への挿入４～５ｃｍ（センチメートル）以内で
クランプされる。他の実施形態では、臍帯近位部は、臍帯血回収後だが胎盤のさらなる処
理前にクランプされる。
場所、例えば研究室に輸送される。胎盤を滅菌断熱輸送デバイス（胎盤の温度を２０～２
８℃で維持する）で、例えば、臍帯近位部をクランプした胎盤を滅菌ジップロックプラス
チックバッグの中に入れ、次いでそれを断熱コンテナに入れることにより、輸送すること
ができる。別の実施形態では、胎盤は、実質的に（特許文献１３）に記載されている通り
の臍帯血採取キットで輸送される。一実施形態では、胎盤は、分娩の４～２４時間後に研
究室に配達される。ある特定の実施形態では、臍帯血回収前に臍帯近位部、例えば、胎盤
円盤体（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｄｉｓｃ）への挿入４～５ｃｍ（センチメートル）以内で
クランプされる。他の実施形態では、臍帯近位部は、臍帯血回収後だが胎盤のさらなる処
理前にクランプされる。
【0296】
潅流液収集前の胎盤を無菌条件下、室温で、または５～２５℃（摂氏）の温度で保管す
ることができる。胎盤を４８時間より長い間保管してもよく、または一切の残留臍帯血を
除去するための胎盤の潅流前に４～２４時間の間保管してもよい。胎盤を抗凝固溶液中、
５℃～２５℃（摂氏）の温度で保管することができる。好適な抗凝固溶液は、当技術分野
において周知である。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリウムの溶液を使用する
ことができる。一実施形態では、抗凝固溶液は、ヘパリンの溶液（例えば、１：１０００
溶液で１％ ｗ／ｗ）を含む。一部の実施形態では、瀉血された胎盤は、胎盤潅流液を収
集する前３６時間以下、保管される。
ることができる。胎盤を４８時間より長い間保管してもよく、または一切の残留臍帯血を
除去するための胎盤の潅流前に４～２４時間の間保管してもよい。胎盤を抗凝固溶液中、
５℃～２５℃（摂氏）の温度で保管することができる。好適な抗凝固溶液は、当技術分野
において周知である。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリウムの溶液を使用する
ことができる。一実施形態では、抗凝固溶液は、ヘパリンの溶液（例えば、１：１０００
溶液で１％ ｗ／ｗ）を含む。一部の実施形態では、瀉血された胎盤は、胎盤潅流液を収
集する前３６時間以下、保管される。
【0297】
５．５．３．胎盤潅流液
哺乳動物胎盤を潅流する方法および胎盤潅流液を得る方法は、例えば、ハリリ（Ｈａｒ
ｉｒｉ）、（特許文献７）および（特許文献１４）に、ならびに（特許文献９）、（特許
文献１０）および（特許文献１５）に開示されており、前記特許文献の開示はそれら全体
が本明細書における参照により本明細書に組み入れられている。
哺乳動物胎盤を潅流する方法および胎盤潅流液を得る方法は、例えば、ハリリ（Ｈａｒ
ｉｒｉ）、（特許文献７）および（特許文献１４）に、ならびに（特許文献９）、（特許
文献１０）および（特許文献１５）に開示されており、前記特許文献の開示はそれら全体
が本明細書における参照により本明細書に組み入れられている。
【0298】
潅流液は、胎盤血管系に潅流溶液、例えば、生理食塩水、培養培地または上記の細胞収
集組成物を通すことにより得ることができる。一実施形態では、哺乳動物胎盤は、臍帯動
脈および臍帯静脈のどちらかまたは両方に潅流溶液を通すことにより潅流される。例えば
胎盤への重力流を使用して、胎盤を通る潅流溶液の流れを達成してもよい。例えば、潅流
溶液は、ポンプ、例えば蠕動ポンプを使用して、胎盤を通って強制的に送られる。臍帯静
脈に、例えば、滅菌チューブなどの滅菌接続器具に接続されているカニューレ、例えば、
ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）またはプラスチックカニューレを挿入することができる。前記
滅菌接続器具は、潅流マニホールドに接続されている。
集組成物を通すことにより得ることができる。一実施形態では、哺乳動物胎盤は、臍帯動
脈および臍帯静脈のどちらかまたは両方に潅流溶液を通すことにより潅流される。例えば
胎盤への重力流を使用して、胎盤を通る潅流溶液の流れを達成してもよい。例えば、潅流
溶液は、ポンプ、例えば蠕動ポンプを使用して、胎盤を通って強制的に送られる。臍帯静
脈に、例えば、滅菌チューブなどの滅菌接続器具に接続されているカニューレ、例えば、
ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）またはプラスチックカニューレを挿入することができる。前記
滅菌接続器具は、潅流マニホールドに接続されている。
【0299】
潅流の準備の際、臍帯動脈および臍帯静脈が胎盤の最高点に位置するように胎盤を配向
させることがきる。潅流溶液を胎盤血管系にまたは胎盤血管系および周囲組織に通すこと
によって、胎盤を潅流することができる。一実施形態では、臍帯動脈および臍帯静脈は、
潅流溶液のリザーバに可撓性コネクタにより接続されているピペットに、同時に接続され
る。潅流溶液は、臍帯静脈および動脈に送られる。潅流溶液は、血管壁から胎盤の周囲組
織に滲出し、および／または血管壁を通過して胎盤の周囲組織に入り、妊娠中に母親の子
宮に付着していた胎盤の表面から好適な開放容器に収集される。潅流溶液を、臍帯開口部
を通して導入し、母体の子宮壁と接合していた胎盤壁の開口部から流出または浸出させて
もよい。別の実施形態では、潅流溶液は、臍帯静脈に通され、臍帯動脈から収集されるか
、または臍帯動脈に通され、臍帯静脈から回収され、すなわち、胎盤血管系（胎児組織）
のみに通される。
させることがきる。潅流溶液を胎盤血管系にまたは胎盤血管系および周囲組織に通すこと
によって、胎盤を潅流することができる。一実施形態では、臍帯動脈および臍帯静脈は、
潅流溶液のリザーバに可撓性コネクタにより接続されているピペットに、同時に接続され
る。潅流溶液は、臍帯静脈および動脈に送られる。潅流溶液は、血管壁から胎盤の周囲組
織に滲出し、および／または血管壁を通過して胎盤の周囲組織に入り、妊娠中に母親の子
宮に付着していた胎盤の表面から好適な開放容器に収集される。潅流溶液を、臍帯開口部
を通して導入し、母体の子宮壁と接合していた胎盤壁の開口部から流出または浸出させて
もよい。別の実施形態では、潅流溶液は、臍帯静脈に通され、臍帯動脈から収集されるか
、または臍帯動脈に通され、臍帯静脈から回収され、すなわち、胎盤血管系（胎児組織）
のみに通される。
【0300】
一実施形態では、例えば、臍帯動脈および臍帯静脈は、例えば、潅流溶液のリザーバに
可撓性コネクタにより接続されているピペットに、同時に接続される。潅流溶液は、臍帯
静脈および動脈に送られる。潅流溶液は、血管壁から胎盤の周囲組織に滲出し、および／
または血管壁を通過して胎盤の周囲組織に入り、妊娠中に母親の子宮に付着していた胎盤
の表面から好適な開放容器に収集される。潅流溶液を、臍帯開口部を通して導入し、母体
の子宮壁と接合していた胎盤壁の開口部から流出または浸出させてもよい。「パン」法と
呼ばれることもある、この方法により収集される胎盤細胞は、概して、胎児細胞と母体細
胞の混合物である。
可撓性コネクタにより接続されているピペットに、同時に接続される。潅流溶液は、臍帯
静脈および動脈に送られる。潅流溶液は、血管壁から胎盤の周囲組織に滲出し、および／
または血管壁を通過して胎盤の周囲組織に入り、妊娠中に母親の子宮に付着していた胎盤
の表面から好適な開放容器に収集される。潅流溶液を、臍帯開口部を通して導入し、母体
の子宮壁と接合していた胎盤壁の開口部から流出または浸出させてもよい。「パン」法と
呼ばれることもある、この方法により収集される胎盤細胞は、概して、胎児細胞と母体細
胞の混合物である。
【0301】
別の実施形態では、潅流溶液は、臍帯静脈に通され、臍帯動脈から収集されるか、また
は臍帯動脈に通され、臍帯静脈から収集される。「閉回路」法と呼ばれることもある、こ
の方法により収集される胎盤細胞は、概して、ほぼ排他的に胎児のものである。
は臍帯動脈に通され、臍帯静脈から収集される。「閉回路」法と呼ばれることもある、こ
の方法により収集される胎盤細胞は、概して、ほぼ排他的に胎児のものである。
【0302】
閉回路潅流法は、一実施形態では、次のように行うことができる。分娩後の胎盤を産後
約４８時間以内に得る。臍帯をクランプし、クランプの上で切断する。臍帯を廃棄するこ
とができ、または処理して、例えば臍帯幹細胞を回収することおよび／もしくは生体材料
の製造用に臍帯膜を加工することができる。潅流中、羊膜を保持することができ、または
例えば指での鈍的切開を使用して、絨毛膜から分離することができる。羊膜を潅流前に絨
毛膜から分離する場合、羊膜を、例えば、廃棄することができ、または処理して、例えば
、酵素的消化により幹細胞を得ること、もしくは例えば羊膜生体材料、例えば、（特許文
献１６）に記載されている生体材料を製造することができる。例えば滅菌ガーゼを使用し
て、胎盤から目に見える血餅および残留血をすべて取り除いた後、臍帯血管を、例えば、
臍帯膜を部分的に切断して臍帯の断面を露出させることにより、露出させる。血管を特定
し、例えば、閉じたアリゲータークランプを各血管の切断端に通して前進させることによ
り、血管を開く。次いで、器具、例えば、潅流デバイスまたは蠕動ポンプに接続されたプ
ラスチックチューブを、胎盤動脈の各々に挿入する。ポンプは、目的に適するいずれのポ
ンプであってもよく、例えば、蠕動ポンプであってもよい。次いで、滅菌収集リザーバ、
例えば、血液バッグ、例えば２５０ｍＬ採血バッグに接続されたプラスチックチューブを
臍帯静脈に挿入する。あるいは、ポンプに接続されたチューブを胎盤静脈に挿入し、収集
リザーバへのチューブを胎盤動脈の一方または両方に挿入する。次いで、ある容量の潅流
溶液、例えば、約７５０ｍｌの潅流溶液で胎盤を潅流する。次いで、潅流液中の細胞を、
例えば遠心分離により、収集する。
約４８時間以内に得る。臍帯をクランプし、クランプの上で切断する。臍帯を廃棄するこ
とができ、または処理して、例えば臍帯幹細胞を回収することおよび／もしくは生体材料
の製造用に臍帯膜を加工することができる。潅流中、羊膜を保持することができ、または
例えば指での鈍的切開を使用して、絨毛膜から分離することができる。羊膜を潅流前に絨
毛膜から分離する場合、羊膜を、例えば、廃棄することができ、または処理して、例えば
、酵素的消化により幹細胞を得ること、もしくは例えば羊膜生体材料、例えば、（特許文
献１６）に記載されている生体材料を製造することができる。例えば滅菌ガーゼを使用し
て、胎盤から目に見える血餅および残留血をすべて取り除いた後、臍帯血管を、例えば、
臍帯膜を部分的に切断して臍帯の断面を露出させることにより、露出させる。血管を特定
し、例えば、閉じたアリゲータークランプを各血管の切断端に通して前進させることによ
り、血管を開く。次いで、器具、例えば、潅流デバイスまたは蠕動ポンプに接続されたプ
ラスチックチューブを、胎盤動脈の各々に挿入する。ポンプは、目的に適するいずれのポ
ンプであってもよく、例えば、蠕動ポンプであってもよい。次いで、滅菌収集リザーバ、
例えば、血液バッグ、例えば２５０ｍＬ採血バッグに接続されたプラスチックチューブを
臍帯静脈に挿入する。あるいは、ポンプに接続されたチューブを胎盤静脈に挿入し、収集
リザーバへのチューブを胎盤動脈の一方または両方に挿入する。次いで、ある容量の潅流
溶液、例えば、約７５０ｍｌの潅流溶液で胎盤を潅流する。次いで、潅流液中の細胞を、
例えば遠心分離により、収集する。
【0303】
一実施形態では、潅流中、臍帯近位部をクランプし、より具体的には、胎盤円盤体への
臍帯の挿入４～５ｃｍ（センチメートル）以内でクランプすることができる。
臍帯の挿入４～５ｃｍ（センチメートル）以内でクランプすることができる。
【0304】
瀉血プロセス中の哺乳動物胎盤からの潅流液の初回収集物は、臍帯血および／または胎
盤血の残留赤血球で一般に着色されている。潅流液は、潅流が進むにつれてより無色にな
り、残留臍帯血球は、胎盤から洗い流される。一般に、３０～１００ｍＬの潅流液が胎盤
からの血液の初回フラッシュに適当であるが、観察結果次第でより多いまたはより少ない
潅流液を使用してもよい。
盤血の残留赤血球で一般に着色されている。潅流液は、潅流が進むにつれてより無色にな
り、残留臍帯血球は、胎盤から洗い流される。一般に、３０～１００ｍＬの潅流液が胎盤
からの血液の初回フラッシュに適当であるが、観察結果次第でより多いまたはより少ない
潅流液を使用してもよい。
【0305】
ある特定の実施形態では、臍帯血は、潅流前に胎盤から（例えば、落差脱血により）除
去されるが、胎盤は、残留血を除去するために溶液でフラッシュ（例えば、潅流）されな
い。ある特定の実施形態では、臍帯血は、潅流前に胎盤から（例えば、落差脱血により）
除去され、胎盤は、残留血を除去するために溶液でフラッシュ（例えば、潅流）される。
去されるが、胎盤は、残留血を除去するために溶液でフラッシュ（例えば、潅流）されな
い。ある特定の実施形態では、臍帯血は、潅流前に胎盤から（例えば、落差脱血により）
除去され、胎盤は、残留血を除去するために溶液でフラッシュ（例えば、潅流）される。
【0306】
胎盤を潅流するために使用される潅流液の容量は、収集されることになる胎盤細胞の数
、胎盤のサイズ、単一の胎盤で行われることになる収集の回数などに依存して変わること
がある。様々な実施形態では、潅流液の容量は、５０ｍＬ～５０００ｍＬ、５０ｍＬ～４
０００ｍＬ、５０ｍＬ～３０００ｍＬ、１００ｍＬ～２０００ｍＬ、２５０ｍＬ～２００
０ｍＬ、５００ｍＬ～２０００ｍＬ、または７５０ｍＬ～２０００ｍＬであり得る。概し
て、胎盤は、瀉血後に７００～８００ｍＬの潅流液で潅流される。
、胎盤のサイズ、単一の胎盤で行われることになる収集の回数などに依存して変わること
がある。様々な実施形態では、潅流液の容量は、５０ｍＬ～５０００ｍＬ、５０ｍＬ～４
０００ｍＬ、５０ｍＬ～３０００ｍＬ、１００ｍＬ～２０００ｍＬ、２５０ｍＬ～２００
０ｍＬ、５００ｍＬ～２０００ｍＬ、または７５０ｍＬ～２０００ｍＬであり得る。概し
て、胎盤は、瀉血後に７００～８００ｍＬの潅流液で潅流される。
【0307】
胎盤を数時間から数日にわたって複数回潅流することができる。胎盤を複数回潅流する
ことになる場合、胎盤をコンテナまたは他の好適な容器内で無菌条件下で維持または培養
し、細胞収集組成物、または標準的な潅流溶液（例えば、抗凝固薬（例えば、ヘパリン、
ワルファリンナトリウム、クマリン、ビスヒドロキシクマリン）を伴うもしくは伴わない
、および／または抗菌剤（例えば、β－メルカプトエタノール（０．１ｍＭ））、抗生物
質、例えば、ストレプトマイシン（例えば、４０～１００μｇ／ｍｌで）、ペニシリン（
例えば、４０Ｕ／ｍｌで）、アンホテリシンＢ（例えば、０．５μｇ／ｍｌで）を伴うも
しくは伴わない、通常の生理食塩水、例えばリン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」））で、潅流
することができる。一実施形態では、単離された胎盤は、潅流液を収集せずに、ある期間
、維持または培養され、例えば、前記胎盤は、潅流および潅流液収集前に１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、２０、２１、２２、２３もしくは２４時間、または２もしくは３日以上の日数、維持ま
たは培養される。潅流された胎盤を、さらに１または複数回、例えば１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４時間以上維持し、例えば７００～８００ｍＬの潅流液で再び
潅流することができる。胎盤を１、２、３、４、５回以上、例えば、１、２、３、４、５
または６時間ごとに１回、潅流することができる。一実施形態では、胎盤の潅流、および
潅流溶液、例えば胎盤細胞収集組成物の回収は、回収される有核細胞の数が細胞１００個
／ｍｌを下回るまで繰り返される。異なる時点での潅流液をさらに個々に処理して、細胞
、例えば全有核細胞、の経時的集団を回収することができる。異なる時点からの潅流液を
プールすることもできる。
ことになる場合、胎盤をコンテナまたは他の好適な容器内で無菌条件下で維持または培養
し、細胞収集組成物、または標準的な潅流溶液（例えば、抗凝固薬（例えば、ヘパリン、
ワルファリンナトリウム、クマリン、ビスヒドロキシクマリン）を伴うもしくは伴わない
、および／または抗菌剤（例えば、β－メルカプトエタノール（０．１ｍＭ））、抗生物
質、例えば、ストレプトマイシン（例えば、４０～１００μｇ／ｍｌで）、ペニシリン（
例えば、４０Ｕ／ｍｌで）、アンホテリシンＢ（例えば、０．５μｇ／ｍｌで）を伴うも
しくは伴わない、通常の生理食塩水、例えばリン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」））で、潅流
することができる。一実施形態では、単離された胎盤は、潅流液を収集せずに、ある期間
、維持または培養され、例えば、前記胎盤は、潅流および潅流液収集前に１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、２０、２１、２２、２３もしくは２４時間、または２もしくは３日以上の日数、維持ま
たは培養される。潅流された胎盤を、さらに１または複数回、例えば１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４時間以上維持し、例えば７００～８００ｍＬの潅流液で再び
潅流することができる。胎盤を１、２、３、４、５回以上、例えば、１、２、３、４、５
または６時間ごとに１回、潅流することができる。一実施形態では、胎盤の潅流、および
潅流溶液、例えば胎盤細胞収集組成物の回収は、回収される有核細胞の数が細胞１００個
／ｍｌを下回るまで繰り返される。異なる時点での潅流液をさらに個々に処理して、細胞
、例えば全有核細胞、の経時的集団を回収することができる。異なる時点からの潅流液を
プールすることもできる。
【0308】
５．５．４．胎盤潅流液および胎盤潅流液細胞
概して、単一の胎盤灌からの胎盤潅流液は、造血細胞を含む、約１億～約５億個の有核
細胞を含み、それらの造血細胞から、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本
明細書に記載の３段階法に従って製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、本
明細書で開示される方法により製造することができる。ある特定の実施形態では、胎盤潅
流液または潅流液細胞は、ＣＤ３４＋細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞を含む。
そのような細胞は、より特異的な実施形態では、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－幹細胞または前駆
細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋幹細胞または前駆細胞などを含むことができる。ある特定の
実施形態では、潅流液または潅流液細胞は、それらからの造血細胞の単離前に凍結保存さ
れる。ある特定の他の実施形態では、胎盤潅流液は、または潅流液細胞は、胎児細胞のみ
を含むか、または胎児細胞と母体細胞の組合せを含む。
概して、単一の胎盤灌からの胎盤潅流液は、造血細胞を含む、約１億～約５億個の有核
細胞を含み、それらの造血細胞から、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本
明細書に記載の３段階法に従って製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、本
明細書で開示される方法により製造することができる。ある特定の実施形態では、胎盤潅
流液または潅流液細胞は、ＣＤ３４＋細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞を含む。
そのような細胞は、より特異的な実施形態では、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－幹細胞または前駆
細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋幹細胞または前駆細胞などを含むことができる。ある特定の
実施形態では、潅流液または潅流液細胞は、それらからの造血細胞の単離前に凍結保存さ
れる。ある特定の他の実施形態では、胎盤潅流液は、または潅流液細胞は、胎児細胞のみ
を含むか、または胎児細胞と母体細胞の組合せを含む。
【0309】
５．６．ＮＫ細胞
５．６．１．３段階法により製造されるＮＫ細胞
別の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団であって、前記ＮＫ細胞が上記の３段階法
に従って製造される、ＮＫ細胞集団が本明細書で提供される。
５．６．１．３段階法により製造されるＮＫ細胞
別の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団であって、前記ＮＫ細胞が上記の３段階法
に従って製造される、ＮＫ細胞集団が本明細書で提供される。
【0310】
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造される、単離されたＮＫ細胞集
団であって、本明細書に記載の３段階法により製造されたＮＫ前駆細胞集団、例えば、Ｎ
Ｋ前駆細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップがＮＫ細胞集団を製造す
るために使用される第３の培養ステップより短い期間のものであったことを除いて同じ３
段階法により製造されたＮＫ前駆細胞集団より、高いパーセンテージのＣＤ３－ＣＤ５６
＋細胞を含む、ＮＫ細胞集団が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ
細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９８％または９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前
記ＮＫ細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％以上ＣＤ３－
ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、７０％～７５
％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、または９５％
～９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
団であって、本明細書に記載の３段階法により製造されたＮＫ前駆細胞集団、例えば、Ｎ
Ｋ前駆細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップがＮＫ細胞集団を製造す
るために使用される第３の培養ステップより短い期間のものであったことを除いて同じ３
段階法により製造されたＮＫ前駆細胞集団より、高いパーセンテージのＣＤ３－ＣＤ５６
＋細胞を含む、ＮＫ細胞集団が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ
細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９８％または９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前
記ＮＫ細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％以上ＣＤ３－
ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞集団は、７０％～７５
％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、または９５％
～９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
【0311】
ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さら
にＮＫｐ４６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記Ｎ
Ｋ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１６－であるＣＤ３－ＣＤ５
６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６
＋細胞は、さらにＣＤ１６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態
では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ９４－であるＣ
Ｄ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ９４＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特
定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１
１ａ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集
団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＮＫｐ３０＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細
胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞
は、さらにＣＤ１６１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では
、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＤＮＡＭ－１＋であるＣ
Ｄ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＴ－ｂｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
にＮＫｐ４６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記Ｎ
Ｋ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１６－であるＣＤ３－ＣＤ５
６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６
＋細胞は、さらにＣＤ１６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態
では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ９４－であるＣ
Ｄ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ９４＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特
定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１
１ａ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集
団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＮＫｐ３０＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細
胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞
は、さらにＣＤ１６１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では
、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＤＮＡＭ－１＋であるＣ
Ｄ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＮＫ細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＴ－ｂｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
【0312】
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、ＣＤ１
１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造される
ＮＫ細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３
段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、ＮＫｐ４４＋である細胞を含む。一実施形態で
は、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、ＣＤ２４４＋である細
胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は
、パーフォリンを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によ
り製造されるＮＫ細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明
細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、グランザイムＢを発現する細胞
を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、
ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦおよび／またはＴＮＦαを分泌する細胞を含む。
１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造される
ＮＫ細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３
段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、ＮＫｐ４４＋である細胞を含む。一実施形態で
は、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、ＣＤ２４４＋である細
胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は
、パーフォリンを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によ
り製造されるＮＫ細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明
細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、グランザイムＢを発現する細胞
を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＮＫ細胞集団は、
ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦおよび／またはＴＮＦαを分泌する細胞を含む。
【0313】
５．７．ＩＬＣ３細胞
５．７．１．３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞
別の実施形態では、単離されたＩＬＣ３細胞集団であって、上記の３段階法に従って製
造されるＩＬＣ３細胞集団が本明細書で提供される。
５．７．１．３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞
別の実施形態では、単離されたＩＬＣ３細胞集団であって、上記の３段階法に従って製
造されるＩＬＣ３細胞集団が本明細書で提供される。
【0314】
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造される、単離されたＩＬＣ３細
胞集団であって、本明細書に記載の３段階法により製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団、例
えば、ＩＬＣ３前駆細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップがＩＬＣ３
細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップより短い期間のものであったこ
とを除いて同じ３段階法により製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団より、高いパーセンテー
ジのＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含むＩＬＣ３細胞集団が本明細書で提供される。具体的な
実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別
の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、
９８％または９９％以上ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞集団は、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９
０％、９０％～９５％、または９５％～９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
胞集団であって、本明細書に記載の３段階法により製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団、例
えば、ＩＬＣ３前駆細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップがＩＬＣ３
細胞集団を製造するために使用される第３の培養ステップより短い期間のものであったこ
とを除いて同じ３段階法により製造されたＩＬＣ３前駆細胞集団より、高いパーセンテー
ジのＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含むＩＬＣ３細胞集団が本明細書で提供される。具体的な
実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別
の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、
９８％または９９％以上ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞集団は、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９
０％、９０％～９５％、または９５％～９９％ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
【0315】
ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、
さらにＮＫｐ４６－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１６－であるＣＤ３
－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＩＬ１Ｒ１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある
特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに
ＣＤ９４－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＲＯＲγｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ
５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－Ｃ
Ｄ５６＋細胞は、さらにＣＤ１１ａ－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の
実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＴ－ｂ
ｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
さらにＮＫｐ４６－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＣＤ１６－であるＣＤ３
－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ
３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＩＬ１Ｒ１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある
特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに
ＣＤ９４－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ
３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＲＯＲγｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ
５６＋細胞を含む。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－Ｃ
Ｄ５６＋細胞は、さらにＣＤ１１ａ－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。ある特定の
実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞集団内の前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらにＴ－ｂ
ｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
【0316】
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、Ｃ
Ｄ１１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造さ
れるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ－である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に
記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫｐ３０－である細胞を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＣＤ
２４４＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造され
るＩＬＣ３細胞集団は、ＤＮＡＭ－１＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に
記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＡＨＲを発現する細胞を含む。一
実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、パーフ
ォリンを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造
されるＩＬＣ３細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明
細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、グランザイムＢを発現しな
い細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細
胞集団は、ＩＬ－２２および／またはＩＬ－８を分泌する細胞を含む。
Ｄ１１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造さ
れるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ－である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に
記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫｐ３０－である細胞を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＣＤ
２４４＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造され
るＩＬＣ３細胞集団は、ＤＮＡＭ－１＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に
記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、ＡＨＲを発現する細胞を含む。一
実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、パーフ
ォリンを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造
されるＩＬＣ３細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明
細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細胞集団は、グランザイムＢを発現しな
い細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法により製造されるＩＬＣ３細
胞集団は、ＩＬ－２２および／またはＩＬ－８を分泌する細胞を含む。
【0317】
ある特定の態様では、本明細書に記載の３段階法により製造される細胞集団は、ＣＤ１
１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０
：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１
：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の比で含む。ある特定の態様で
は、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を５０：１
の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およ
びＣＤ１１ａ－細胞を２０：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞
集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１０：１の比で含む。ある特定の態
様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を５：
１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞を１：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞
集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：５の比で含む。ある特定の態様
では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：１
０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞を１：２０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細
胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：５０の比で含む。
１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０
：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１
：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の比で含む。ある特定の態様で
は、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を５０：１
の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およ
びＣＤ１１ａ－細胞を２０：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞
集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１０：１の比で含む。ある特定の態
様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を５：
１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞を１：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞
集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：５の比で含む。ある特定の態様
では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：１
０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞お
よびＣＤ１１ａ－細胞を１：２０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細
胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を１：５０の比で含む。
【0318】
ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－
細胞を５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、
２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１
：４０、または１：５０の比で合わせて細胞の混合集団を製造することにより、製造され
る。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５０：１の比で合わせら
れたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に
記載の細胞の混合集団は、２０：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１０：１の
比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では
、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およ
びＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、
１：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の
態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合
集団は、１：１０の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。
ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：２０の比で合わせられた
ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞の混合集団は、１：５０の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－
細胞を含む。
細胞を５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、
２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１
：４０、または１：５０の比で合わせて細胞の混合集団を製造することにより、製造され
る。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５０：１の比で合わせら
れたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に
記載の細胞の混合集団は、２０：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１
ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１０：１の
比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では
、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およ
びＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、
１：１の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の
態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋
細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合
集団は、１：１０の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。
ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：２０の比で合わせられた
ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞の混合集団は、１：５０の比で合わせられたＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－
細胞を含む。
【0319】
ある特定の態様では、本明細書に記載の３段階法により製造される細胞集団は、ＮＫ細
胞およびＩＬＣ３細胞を５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、
４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２
０、１：３０、１：４０、または１：５０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に
記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を５０：１の比で含む。ある特定の態様
では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を２０：１の比で含む
。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１
０：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞および
ＩＬＣ３細胞を５：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、
ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：５の比で含む。ある特定の態様では、
本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：１０の比で含む。ある
特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：２０
の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ
３細胞を１：５０の比で含む。
胞およびＩＬＣ３細胞を５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、
４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２
０、１：３０、１：４０、または１：５０の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に
記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を５０：１の比で含む。ある特定の態様
では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を２０：１の比で含む
。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１
０：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞および
ＩＬＣ３細胞を５：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、
ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：１の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：５の比で含む。ある特定の態様では、
本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：１０の比で含む。ある
特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を１：２０
の比で含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞およびＩＬＣ
３細胞を１：５０の比で含む。
【0320】
ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を５０：
１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：
１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、また
は１：５０の比で合わせて細胞の混合集団を製造することにより、製造される。ある特定
の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５０：１の比で合わせられたＮＫ細胞
およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、
２０：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、
本明細書に記載の細胞の混合集団は、１０：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ
３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５：１の比で
合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞の混合集団は、１：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。あ
る特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５の比で合わせられたＮＫ
細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団
は、１：１０の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様で
は、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：２０の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩ
ＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５０
の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。
１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：
１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、また
は１：５０の比で合わせて細胞の混合集団を製造することにより、製造される。ある特定
の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５０：１の比で合わせられたＮＫ細胞
およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、
２０：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、
本明細書に記載の細胞の混合集団は、１０：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ
３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、５：１の比で
合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載
の細胞の混合集団は、１：１の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。あ
る特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５の比で合わせられたＮＫ
細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団
は、１：１０の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様で
は、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：２０の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩ
ＬＣ３細胞を含む。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞の混合集団は、１：５０
の比で合わせられたＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を含む。
【0321】
５．８．胎盤潅流液との組合せでのＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
本明細書に記載の３段階法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を胎盤潅流液、
胎盤潅流液細胞および／または接着胎盤細胞との組合せで含む組成物であって、例えば、
１個の腫瘍細胞または複数の腫瘍細胞の増殖の抑制に使用するための組成物が本明細書で
さらに提供される。
本明細書に記載の３段階法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を胎盤潅流液、
胎盤潅流液細胞および／または接着胎盤細胞との組合せで含む組成物であって、例えば、
１個の腫瘍細胞または複数の腫瘍細胞の増殖の抑制に使用するための組成物が本明細書で
さらに提供される。
【0322】
５．８．１．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と潅流液または潅流液細胞との組合せ
本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集
団と胎盤潅流液および／または胎盤潅流液細胞との組合せを含む組成物が本明細書でさら
に提供される。一実施形態では、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充された、ある容量の胎盤潅流液が本明細書で提
供される。ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充された、ある容量の胎盤潅流液に
ついての特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されてい
るような比で存在する。具体的な実施形態では、例えば、胎盤潅流液各１ミリリットルに
、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞約１
×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７
、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上が補充される。別の実施形態では、胎盤潅
流液細胞に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞が補充される。ある特定の実施形態では、胎盤潅流液細胞が、本明細書に記載の方
法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と合わせられた場合、胎盤
潅流液細胞は、一般に、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５
％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、約前記％超、また
は約前記％未満を構成する。ある特定の他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用
して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、複数の胎盤潅流液細胞および／
または混合ナチュラルキラー細胞と合わせられた場合、ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞、またはＮＫ細胞集団は、一般に、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５
％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、
約前記％超、または約前記％未満を構成する。ある特定の他の実施形態では、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、胎盤潅流液へ
の補充に使用される場合、細胞が懸濁される溶液（例えば、生理食塩水、培養培地など）
の容量は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充前に１ミリリットル当たり約１×
１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、
５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上の細胞に懸濁された場合、細胞を加えた潅流
液の総容量の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１
０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、約前記％超、または約前記％未満を構成す
る。
本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集
団と胎盤潅流液および／または胎盤潅流液細胞との組合せを含む組成物が本明細書でさら
に提供される。一実施形態では、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充された、ある容量の胎盤潅流液が本明細書で提
供される。ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充された、ある容量の胎盤潅流液に
ついての特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されてい
るような比で存在する。具体的な実施形態では、例えば、胎盤潅流液各１ミリリットルに
、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞約１
×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７
、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上が補充される。別の実施形態では、胎盤潅
流液細胞に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞が補充される。ある特定の実施形態では、胎盤潅流液細胞が、本明細書に記載の方
法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と合わせられた場合、胎盤
潅流液細胞は、一般に、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５
％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、約前記％超、また
は約前記％未満を構成する。ある特定の他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用
して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、複数の胎盤潅流液細胞および／
または混合ナチュラルキラー細胞と合わせられた場合、ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞、またはＮＫ細胞集団は、一般に、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５
％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、
約前記％超、または約前記％未満を構成する。ある特定の他の実施形態では、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、胎盤潅流液へ
の補充に使用される場合、細胞が懸濁される溶液（例えば、生理食塩水、培養培地など）
の容量は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充前に１ミリリットル当たり約１×
１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、
５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上の細胞に懸濁された場合、細胞を加えた潅流
液の総容量の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１
０％、８％、６％、４％、２％もしくは１％、約前記％超、または約前記％未満を構成す
る。
【0323】
他の実施形態では、細胞の任意の上記組合せが、今後は臍帯血、または臍帯血からの有
核細胞と合わせられる。
核細胞と合わせられる。
【0324】
２つ以上の源、例えば２つ以上の胎盤から得られ、合わせられる、例えばプールされる
、プール胎盤潅流液が本明細書でさらに提供される。そのようなプール潅流液は、各源か
らの潅流液のほぼ同容量を含んでいてもよく、または各源からの異なる容量を含んでいて
もよい。各源からの相対容量は、無作為に選択されることもあり、または例えば、１つも
しくは複数の細胞因子、例えばサイトカイン、増殖因子、ホルモンなどの濃度もしくは量
、各源からの潅流液中の胎盤細胞の数、または各源からの潅流液の他の特性に基づくこと
もある。同じ胎盤の複数回の潅流からの潅流液を同様にプールしてもよい。
、プール胎盤潅流液が本明細書でさらに提供される。そのようなプール潅流液は、各源か
らの潅流液のほぼ同容量を含んでいてもよく、または各源からの異なる容量を含んでいて
もよい。各源からの相対容量は、無作為に選択されることもあり、または例えば、１つも
しくは複数の細胞因子、例えばサイトカイン、増殖因子、ホルモンなどの濃度もしくは量
、各源からの潅流液中の胎盤細胞の数、または各源からの潅流液の他の特性に基づくこと
もある。同じ胎盤の複数回の潅流からの潅流液を同様にプールしてもよい。
【0325】
同様に、２つ以上の源、例えば２つ以上の胎盤から得られ、プールされる、胎盤潅流液
細胞、および胎盤由来の中間ナチュラルキラー細胞が本明細書で提供される。そのような
プール細胞は、２つ以上の源からのほぼ同数の細胞を含んでいてもよく、またはプール源
の１つもしくは複数からの異なる数の細胞を含んでいてもよい。各源からの細胞の相対数
は、例えば、プールされることになる細胞中の１つまたは複数の特異的細胞型の数、例え
ば、ＣＤ３４＋細胞などの数に基づいて、選択することができる。
細胞、および胎盤由来の中間ナチュラルキラー細胞が本明細書で提供される。そのような
プール細胞は、２つ以上の源からのほぼ同数の細胞を含んでいてもよく、またはプール源
の１つもしくは複数からの異なる数の細胞を含んでいてもよい。各源からの細胞の相対数
は、例えば、プールされることになる細胞中の１つまたは複数の特異的細胞型の数、例え
ば、ＣＤ３４＋細胞などの数に基づいて、選択することができる。
【0326】
例えば、ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞またはＮＫ細胞および／もしくはＩＬ
Ｃ３細胞集団の所定数あるいは潅流液の所定容量から予想される腫瘍抑制（すなわち能力
）の程度または量を決定するためにアッセイされた、本明細書に記載の方法を使用して製
造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにそのような細胞と胎盤潅流液お
よび／または胎盤潅流液細胞の組合せが本明細書でさらに提供される。例えば、あるアリ
コートまたは試料番号の細胞を、別の方法では腫瘍細胞が増殖することになる条件下で、
既知数の腫瘍細胞と接触または近接させ、ある期間（例えば、１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０週間以上）にわたって、胎盤潅流液、潅流液細胞、胎盤ナチュラル
キラー細胞、またはそれらの組合せの存在下での腫瘍細胞の増殖速度を、潅流液、潅流液
細胞、胎盤ナチュラルキラー細胞、またはそれらの組合せの非存在下での同数の腫瘍細胞
の増殖と比較する。細胞の能力は、例えば、腫瘍細胞成長を、例えば約１０％、１５％、
２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％など、抑制するために必要と
される細胞数または溶液の容量として表すことができる。
Ｃ３細胞集団の所定数あるいは潅流液の所定容量から予想される腫瘍抑制（すなわち能力
）の程度または量を決定するためにアッセイされた、本明細書に記載の方法を使用して製
造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにそのような細胞と胎盤潅流液お
よび／または胎盤潅流液細胞の組合せが本明細書でさらに提供される。例えば、あるアリ
コートまたは試料番号の細胞を、別の方法では腫瘍細胞が増殖することになる条件下で、
既知数の腫瘍細胞と接触または近接させ、ある期間（例えば、１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０週間以上）にわたって、胎盤潅流液、潅流液細胞、胎盤ナチュラル
キラー細胞、またはそれらの組合せの存在下での腫瘍細胞の増殖速度を、潅流液、潅流液
細胞、胎盤ナチュラルキラー細胞、またはそれらの組合せの非存在下での同数の腫瘍細胞
の増殖と比較する。細胞の能力は、例えば、腫瘍細胞成長を、例えば約１０％、１５％、
２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％など、抑制するために必要と
される細胞数または溶液の容量として表すことができる。
【0327】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞は、医薬品グレードの投与可能な単位として提供される。そのよう
な単位を個別の容量、例えば、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４
０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８
０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０
ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどで提供するこ
とができる。そのような単位を、指定数の細胞、例えば、他のＮＫ細胞および／もしくは
ＩＬＣ３細胞または潅流液細胞との組合せでＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞また
はＮＫ細胞および／またＩＬＣ３細胞集団、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４、
５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０
７、１×１０８、５×１０８個以上の細胞、または１単位当たり１×１０４、５×１０４
、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１
０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１
１個以上の細胞を含有するように、提供することができる。具体的な実施形態では、単位
は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、
１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個以上のＮＫ細胞、または１単位当た
り１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１
０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、
５×１０１０、１×１０１１個以上の細胞を含むことができる。そのような単位を、指定
数のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、またはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞集団、ならびに／または他の任意の細胞を含有するように提供することができる。
／またはＩＬＣ３細胞は、医薬品グレードの投与可能な単位として提供される。そのよう
な単位を個別の容量、例えば、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４
０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８
０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０
ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどで提供するこ
とができる。そのような単位を、指定数の細胞、例えば、他のＮＫ細胞および／もしくは
ＩＬＣ３細胞または潅流液細胞との組合せでＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞また
はＮＫ細胞および／またＩＬＣ３細胞集団、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４、
５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０
７、１×１０８、５×１０８個以上の細胞、または１単位当たり１×１０４、５×１０４
、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１
０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１
１個以上の細胞を含有するように、提供することができる。具体的な実施形態では、単位
は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、
１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個以上のＮＫ細胞、または１単位当た
り１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１
０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、
５×１０１０、１×１０１１個以上の細胞を含むことができる。そのような単位を、指定
数のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、またはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞集団、ならびに／または他の任意の細胞を含有するように提供することができる。
【0328】
上記実施形態では、ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、またはＮＫ細胞および／
もしくはＩＬＣ３細胞集団、あるいはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞と、または
ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞集団と、他のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞、潅流液細胞または潅流液との組合せは、レシピエントにとって自家である（すなわ
ち、レシピエントから得られる）こともあり、またはレシピエントにとって同種異形であ
る（すなわち、前記レシピエントとは別の少なくとも１個体から得られる）こともある。
もしくはＩＬＣ３細胞集団、あるいはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞と、または
ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞集団と、他のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞、潅流液細胞または潅流液との組合せは、レシピエントにとって自家である（すなわ
ち、レシピエントから得られる）こともあり、またはレシピエントにとって同種異形であ
る（すなわち、前記レシピエントとは別の少なくとも１個体から得られる）こともある。
【0329】
ある特定の実施形態では、細胞の各単位は、容量、細胞数、細胞型、その単位が特定の
細胞型について富化されているかどうか、および／または単位内の所定の細胞数もしくは
単位の所定のミリリットル数についての能力、すなわち、その単位内の細胞が、腫瘍細胞
の特定の型（単数もしくは複数）の増殖の測定可能な抑制を引き起こすかどうか、のうち
の１つまたは複数を特定するために、標識される。
細胞型について富化されているかどうか、および／または単位内の所定の細胞数もしくは
単位の所定のミリリットル数についての能力、すなわち、その単位内の細胞が、腫瘍細胞
の特定の型（単数もしくは複数）の増殖の測定可能な抑制を引き起こすかどうか、のうち
の１つまたは複数を特定するために、標識される。
【0330】
５．８．２．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と接着胎盤幹細胞との組合せ
他の実施形態では、単独での、または胎盤潅流液もしくは胎盤潅流液細胞との組合せで
の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、
例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞集団に、単離された接着胎盤細胞、例えば、ハリリ（Ｈａｒｉｒｉ）、（特許文献
７）および（特許文献１４）に、ならびに（特許文献１５）に例えば記載されているよう
な胎盤幹細胞および胎盤複能性細胞が補充され、前記特許文献の開示はそれら全体が参照
により本明細書に組み入れられている。ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞である具体的な実施
形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されているような比で存在す
る。「接着胎盤細胞」は、細胞が組織培養面、例えば、組織培養プラスチックに接着して
いることを意味する。本明細書で開示される組成物および方法において有用な接着胎盤細
胞は、一般に、栄養芽細胞でも、胚性生殖細胞でも、胚性幹細胞でもない。
他の実施形態では、単独での、または胎盤潅流液もしくは胎盤潅流液細胞との組合せで
の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、
例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞集団に、単離された接着胎盤細胞、例えば、ハリリ（Ｈａｒｉｒｉ）、（特許文献
７）および（特許文献１４）に、ならびに（特許文献１５）に例えば記載されているよう
な胎盤幹細胞および胎盤複能性細胞が補充され、前記特許文献の開示はそれら全体が参照
により本明細書に組み入れられている。ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞である具体的な実施
形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されているような比で存在す
る。「接着胎盤細胞」は、細胞が組織培養面、例えば、組織培養プラスチックに接着して
いることを意味する。本明細書で開示される組成物および方法において有用な接着胎盤細
胞は、一般に、栄養芽細胞でも、胚性生殖細胞でも、胚性幹細胞でもない。
【0331】
単独での、または胎盤潅流液もしくは胎盤潅流液細胞との組合せでの、本明細書に記載
の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、ＮＫ細胞お
よび／またはＩＬＣ３細胞集団に、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４、５×１０
４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×
１０８、５×１０８個以上の接着胎盤細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５
、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１
０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個以上の接
着胎盤細胞を補充することができる。組合せでの接着胎盤細胞は、例えば、培養された接
着胎盤細胞であって、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、
１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８または４０
集団倍加の間、またはそれ以上、培養された接着胎盤細胞であり得る。
の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、ＮＫ細胞お
よび／またはＩＬＣ３細胞集団に、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４、５×１０
４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×
１０８、５×１０８個以上の接着胎盤細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５
、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１
０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個以上の接
着胎盤細胞を補充することができる。組合せでの接着胎盤細胞は、例えば、培養された接
着胎盤細胞であって、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、
１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８または４０
集団倍加の間、またはそれ以上、培養された接着胎盤細胞であり得る。
【0332】
単離された接着胎盤細胞は、一次培養で培養されたとき、または細胞培養で増幅された
とき、組織培養基材、例えば、組織培養コンテナ表面（例えば、組織培養プラスチック）
に接着する。培養液中の接着胎盤細胞は、中心細胞体から延びる多数の細胞質突起を有す
る、おおむね線維芽細胞様の星状の外観と考えられている。しかし、接着胎盤細胞は、同
じ条件下で培養された線維芽細胞と形態学的に区別可能である。接着胎盤細胞は、線維芽
細胞より多数のそのような突起を示すからである。形態学的に、接着胎盤細胞は、培養液
中でより丸みを帯びている、または玉石の形態を一般とる造血幹細胞とも区別可能である
。
とき、組織培養基材、例えば、組織培養コンテナ表面（例えば、組織培養プラスチック）
に接着する。培養液中の接着胎盤細胞は、中心細胞体から延びる多数の細胞質突起を有す
る、おおむね線維芽細胞様の星状の外観と考えられている。しかし、接着胎盤細胞は、同
じ条件下で培養された線維芽細胞と形態学的に区別可能である。接着胎盤細胞は、線維芽
細胞より多数のそのような突起を示すからである。形態学的に、接着胎盤細胞は、培養液
中でより丸みを帯びている、または玉石の形態を一般とる造血幹細胞とも区別可能である
。
【0333】
本明細書で提供される組成物および方法において有用な、単離された接着胎盤細胞、お
よび接着胎盤細胞集団は、接着胎盤細胞を含む細胞または細胞集団を同定および／または
単離するために使用することができる複数のマーカーを発現する。本明細書で提供される
組成物および方法において有用な接着胎盤細胞および接着胎盤細胞集団は、胎盤から直接
得られる接着胎盤細胞および接着胎盤細胞含有細胞集団、またはそれらの任意の部分（例
えば、羊膜、絨毛膜、羊膜・絨毛膜板、胎盤絨毛叢、臍帯など）を含む。接着胎盤幹細胞
集団は、一実施形態では、培養液中の接着胎盤幹細胞集団（すなわち、２つ以上の前記細
胞）、例えば、コンテナ、例えばバッグ内の集団である。
よび接着胎盤細胞集団は、接着胎盤細胞を含む細胞または細胞集団を同定および／または
単離するために使用することができる複数のマーカーを発現する。本明細書で提供される
組成物および方法において有用な接着胎盤細胞および接着胎盤細胞集団は、胎盤から直接
得られる接着胎盤細胞および接着胎盤細胞含有細胞集団、またはそれらの任意の部分（例
えば、羊膜、絨毛膜、羊膜・絨毛膜板、胎盤絨毛叢、臍帯など）を含む。接着胎盤幹細胞
集団は、一実施形態では、培養液中の接着胎盤幹細胞集団（すなわち、２つ以上の前記細
胞）、例えば、コンテナ、例えばバッグ内の集団である。
【0334】
接着胎盤細胞は、一般に、マーカーＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＣＤ２００、および／
またはＯＣＴ－４を発現し、ＣＤ３４も、ＣＤ３８も、ＣＤ４５も発現しない。接着胎盤
幹細胞は、ＨＬＡ－ＡＢＣ（ＭＨＣ－１）およびＨＬＡ－ＤＲも発現することができる。
これらのマーカーは、接着胎盤細胞を同定するために、および接着胎盤細胞を他の細胞型
と区別するために、使用することができる。接着胎盤細胞は、ＣＤ７３およびＣＤ１０５
を発現することができるので、間葉系幹細胞様特性を有することができる。ＣＤ３４、Ｃ
Ｄ３８および／またはＣＤ４５の発現の欠如により、接着胎盤幹細胞は非造血幹細胞とし
て同定される。
またはＯＣＴ－４を発現し、ＣＤ３４も、ＣＤ３８も、ＣＤ４５も発現しない。接着胎盤
幹細胞は、ＨＬＡ－ＡＢＣ（ＭＨＣ－１）およびＨＬＡ－ＤＲも発現することができる。
これらのマーカーは、接着胎盤細胞を同定するために、および接着胎盤細胞を他の細胞型
と区別するために、使用することができる。接着胎盤細胞は、ＣＤ７３およびＣＤ１０５
を発現することができるので、間葉系幹細胞様特性を有することができる。ＣＤ３４、Ｃ
Ｄ３８および／またはＣＤ４５の発現の欠如により、接着胎盤幹細胞は非造血幹細胞とし
て同定される。
【0335】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の単離された接着胎盤細胞は、がん細胞増殖
または腫瘍成長を検出可能に抑制する。
または腫瘍成長を検出可能に抑制する。
【0336】
ある特定の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、単離された胎盤幹細胞である。
ある特定の他の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、単離された胎盤複能性細胞で
ある。具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより
検出されるようにＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である。より具体的な実施
形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、胎盤幹細
胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１
０５＋胎盤細胞は、複能性接着胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、単離され
たＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型
の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性を有する。より具体的な実施形態
では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、さらにＣＤ２
００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、Ｃ
Ｄ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ
９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－
、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるよ
うに、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、ＣＤ３４
－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーに
より検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実
施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は、フ
ローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋およびＣＤ４５－である
。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００
＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるよ
うに、さらにＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
ある特定の他の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、単離された胎盤複能性細胞で
ある。具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより
検出されるようにＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である。より具体的な実施
形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、胎盤幹細
胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１
０５＋胎盤細胞は、複能性接着胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、単離され
たＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型
の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性を有する。より具体的な実施形態
では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、さらにＣＤ２
００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、Ｃ
Ｄ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ
９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－
、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるよ
うに、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、ＣＤ３４
－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーに
より検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実
施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は、フ
ローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋およびＣＤ４５－である
。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００
＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるよ
うに、さらにＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
【0337】
一実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ＋である。具
体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋で
もある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ
３８－またはＣＤ４５－でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤
細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋でもある
。別の実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、胚様体様体の形成を可能ならしめ
る条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様体を産生する。
体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋で
もある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ
３８－またはＣＤ４５－でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤
細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋でもある
。別の実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、胚様体様体の形成を可能ならしめ
る条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様体を産生する。
【0338】
別の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２０
０＋である。前記集団の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＨＬＡ
－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された
接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。より具体的な実施
形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、およ
びＨＬＡ－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、
胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様
体を産生する。
０＋である。前記集団の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＨＬＡ
－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された
接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。より具体的な実施
形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、およ
びＨＬＡ－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、
胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様
体を産生する。
【0339】
別の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋である。
具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋
でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ＋で
もある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ
３８－およびＣＤ４５－でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤
細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ
－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、胚様体様体の
形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様体も産生する
。
具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋
でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ＋で
もある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ
３８－およびＣＤ４５－でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤
細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ
－Ｇ＋でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、胚様体様体の
形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、１つまたは複数の胚様体様体も産生する
。
【0340】
別の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬ
Ａ－Ｇ＋である。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された
接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施
形態では、前記接着幹細胞は、ＯＣＴ－４＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記
接着幹細胞は、ＣＤ２００＋でもある。より具体的な実施形態では、前記接着幹細胞は、
ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋でもある。
Ａ－Ｇ＋である。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された
接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施
形態では、前記接着幹細胞は、ＯＣＴ－４＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記
接着幹細胞は、ＣＤ２００＋でもある。より具体的な実施形態では、前記接着幹細胞は、
ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋でもある。
【0341】
別の実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、胚様体様体の形成を可能ならしめる条
件下で１つまたは複数の胚様体様体を産生する、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋幹細胞である
。具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－また
はＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３
４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接
着胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着
胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－でもある。
件下で１つまたは複数の胚様体様体を産生する、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋幹細胞である
。具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－また
はＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、ＣＤ３
４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、単離された接
着胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋でもある。より具体的な実施形態では、前記単離された接着
胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－でもある。
【0342】
別の実施形態では、接着胎盤幹細胞は、ＯＣＴ－４＋幹細胞であり、前記接着胎盤幹細
胞は、胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたときに１つまたは複数の胚
様体様体を産生し、前記幹細胞は、がん細胞増殖または腫瘍成長を検出可能に抑制するも
のとして同定されたものである。
胞は、胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたときに１つまたは複数の胚
様体様体を産生し、前記幹細胞は、がん細胞増殖または腫瘍成長を検出可能に抑制するも
のとして同定されたものである。
【0343】
様々な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞の少なくとも１０％、少なくとも２
０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少
なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、Ｏ
ＣＴ－４＋である。上記集団の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、
ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接
着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形
態では、前記幹細胞は、ＣＤ２００＋である。より具体的な実施形態では、前記単離され
た接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－
およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は
、増幅された、例えば、少なくとも１回、少なくとも３回、少なくとも５回、少なくとも
１０回、少なくとも１５回、または少なくとも２０回継代されたものである。
０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少
なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、Ｏ
ＣＴ－４＋である。上記集団の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は、
ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接
着胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形
態では、前記幹細胞は、ＣＤ２００＋である。より具体的な実施形態では、前記単離され
た接着胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－
およびＣＤ４５－でもある。別の具体的な実施形態では、前記単離された接着胎盤細胞は
、増幅された、例えば、少なくとも１回、少なくとも３回、少なくとも５回、少なくとも
１０回、少なくとも１５回、または少なくとも２０回継代されたものである。
【0344】
上記実施形態のいずれかについてのより具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細
胞は、ＡＢＣ－ｐ（胎盤特異的ＡＢＣトランスポータータンパク質；例えば、（非特許文
献５）を参照されたい）を発現する。
胞は、ＡＢＣ－ｐ（胎盤特異的ＡＢＣトランスポータータンパク質；例えば、（非特許文
献５）を参照されたい）を発現する。
【0345】
別の実施形態では、単離された接着胎盤細胞ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ７３＋、Ｃ
Ｄ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ１３３－。別の実施形態
では、単離された接着胎盤細胞は、ＩＬ－６、ＩＬ－８および単球走化性タンパク質（Ｍ
ＣＰ－１）を構成的に分泌する。
Ｄ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ１３３－。別の実施形態
では、単離された接着胎盤細胞は、ＩＬ－６、ＩＬ－８および単球走化性タンパク質（Ｍ
ＣＰ－１）を構成的に分泌する。
【0346】
上述の単離された接着胎盤細胞の各々は、哺乳動物胎盤から直接得られたおよび単離さ
れた細胞、または培養され、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
２、１４、１６、１８、２０、２５、３０回以上継代された細胞、またはこれらの組合せ
を含むことができる。上記の単離された接着胎盤細胞の腫瘍細胞抑制性の大部分のものは
、約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×
１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０
１１個以上、少なくとも前記個数、または前記個数以下の、単離された接着胎盤細胞を含
むことができる。
れた細胞、または培養され、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
２、１４、１６、１８、２０、２５、３０回以上継代された細胞、またはこれらの組合せ
を含むことができる。上記の単離された接着胎盤細胞の腫瘍細胞抑制性の大部分のものは
、約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×
１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０
１１個以上、少なくとも前記個数、または前記個数以下の、単離された接着胎盤細胞を含
むことができる。
【0347】
５．８．３．接着胎盤細胞条件培地を含む組成物
また、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞集団を含み、さらに条件培地を含む組成物であって、腫瘍抑制性であるか、ま
たはがんもしくはウイルス感染症の処置に有効である組成物の使用が本明細書で提供され
る。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されている
ような比で存在する。本明細書に記載されているような接着胎盤細胞は、腫瘍細胞抑制性
、抗がん性、または抗ウイルス性である条件培地、すなわち、検出可能な腫瘍細胞抑制効
果、抗がん効果または抗ウイルス効果を有する細胞により分泌または排出された１つまた
は複数の生体分子を含む培地を製造するために使用することができる。様々な実施形態で
は、条件培地は、細胞が少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、
１２、１３、１４日以上増殖された（すなわち、培養された）、培地を含む。他の実施形
態では、条件培地は、そのような細胞が集密度少なくとも３０％、４０％、５０％、６０
％、７０％、８０％、９０％にまたは集密度１００％まで成長した、培地を含む。そのよ
うな条件培地は、細胞の、例えば、胎盤細胞または別の種類の細胞の、別々の集団の培養
を支持するために使用することができる。別の実施形態では、本明細書で提供される条件
培地は、単離された接着胎盤細胞、例えば、単離された接着胎盤幹細胞または単離された
接着胎盤複能性細胞、および単離された接着胎盤細胞以外の細胞、例えば、非胎盤幹細胞
または複能性細胞が培養された培地を含む。
また、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞集団を含み、さらに条件培地を含む組成物であって、腫瘍抑制性であるか、ま
たはがんもしくはウイルス感染症の処置に有効である組成物の使用が本明細書で提供され
る。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載されている
ような比で存在する。本明細書に記載されているような接着胎盤細胞は、腫瘍細胞抑制性
、抗がん性、または抗ウイルス性である条件培地、すなわち、検出可能な腫瘍細胞抑制効
果、抗がん効果または抗ウイルス効果を有する細胞により分泌または排出された１つまた
は複数の生体分子を含む培地を製造するために使用することができる。様々な実施形態で
は、条件培地は、細胞が少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、
１２、１３、１４日以上増殖された（すなわち、培養された）、培地を含む。他の実施形
態では、条件培地は、そのような細胞が集密度少なくとも３０％、４０％、５０％、６０
％、７０％、８０％、９０％にまたは集密度１００％まで成長した、培地を含む。そのよ
うな条件培地は、細胞の、例えば、胎盤細胞または別の種類の細胞の、別々の集団の培養
を支持するために使用することができる。別の実施形態では、本明細書で提供される条件
培地は、単離された接着胎盤細胞、例えば、単離された接着胎盤幹細胞または単離された
接着胎盤複能性細胞、および単離された接着胎盤細胞以外の細胞、例えば、非胎盤幹細胞
または複能性細胞が培養された培地を含む。
【0348】
そのような条件培地を、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／
もしくはＩＬＣ３細胞のいずれかもしくは任意の組合せ、胎盤潅流液、または胎盤潅流液
細胞と合わせて、腫瘍細胞抑制性、抗がん性または抗ウイルス性である組成物を形成する
ことができる。ある特定の実施形態では、組成物は、容量で半分未満、例えば、容量で約
５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４
％、３％、２％もしくは１％、または約前記％値未満の条件培地を含む。
もしくはＩＬＣ３細胞のいずれかもしくは任意の組合せ、胎盤潅流液、または胎盤潅流液
細胞と合わせて、腫瘍細胞抑制性、抗がん性または抗ウイルス性である組成物を形成する
ことができる。ある特定の実施形態では、組成物は、容量で半分未満、例えば、容量で約
５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４
％、３％、２％もしくは１％、または約前記％値未満の条件培地を含む。
【0349】
したがって、一実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞お
よび／またはＩＬＣ３細胞と、単離された接着胎盤細胞の培養物からの培養培地とを含む
組成物であって、前記単離された接着胎盤細胞が、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ３４
－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である、組成物が、腫瘍細胞の成長もしくは増殖を検
出可能に抑制するか、または抗がん性もしくは抗ウイルス性である、組成物が本明細書で
提供される。具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、フローサイトメトリー
により検出されるようにＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である。より具体的
な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、胎
盤幹細胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋お
よびＣＤ１０５＋胎盤細胞は、複能性接着胎盤細胞である。別の具体的な実施形態では、
単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、
骨形成表現型の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性を有する。より具体
的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞
は、さらにＣＤ２００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－
、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出され
るように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、
単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメ
トリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的
な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は
、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－で
ある。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２
００＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０
＋およびＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－接着胎盤細胞は、フロ
ーサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
よび／またはＩＬＣ３細胞と、単離された接着胎盤細胞の培養物からの培養培地とを含む
組成物であって、前記単離された接着胎盤細胞が、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ３４
－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である、組成物が、腫瘍細胞の成長もしくは増殖を検
出可能に抑制するか、または抗がん性もしくは抗ウイルス性である、組成物が本明細書で
提供される。具体的な実施形態では、単離された接着胎盤細胞は、フローサイトメトリー
により検出されるようにＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋である。より具体的
な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、胎
盤幹細胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋お
よびＣＤ１０５＋胎盤細胞は、複能性接着胎盤細胞である。別の具体的な実施形態では、
単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、
骨形成表現型の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性を有する。より具体
的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞
は、さらにＣＤ２００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－
、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出され
るように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、
単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋接着胎盤細胞は、フローサイトメ
トリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的
な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋接着胎盤細胞は
、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０＋またはＣＤ４５－で
ある。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２
００＋接着胎盤細胞は、フローサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ９０
＋およびＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－接着胎盤細胞は、フロ
ーサイトメトリーにより検出されるように、さらにＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
【0350】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／また
はＩＬＣ３細胞と、単離された接着胎盤細胞の培養物からの培養培地とを含む組成物であ
って、前記単離された接着胎盤細胞が、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ２００およびＨ
ＬＡ－Ｇを発現するか、またはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＣＤ２００を発現するか、ま
たはＣＤ２００およびＯＣＴ－４を発現するか、またはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＨＬ
Ａ－Ｇを発現するか、またはＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、胎盤幹細胞を含む胎盤
細胞集団における１つもしくは複数の胚様体様体の形成を、前記集団が胚様体様体の形成
を可能ならしめる条件下で培養されたとき、補助する、またはＯＣＴ－４を発現し、胎盤
幹細胞を含む胎盤細胞集団における１つもしくは複数の胚様体様体の形成を、前記集団が
胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、補助する、組成物であり、
腫瘍細胞の成長もしくは増殖を検出可能に抑制するか、または抗がん性もしくは抗ウイル
ス性である、組成物が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、組成物は、複数の
前記単離された胎盤接着細胞をさらに含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、複数
の非胎盤細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記非胎盤細胞は、ＣＤ３４＋細胞、
例えば造血前駆細胞、例えば、抹消血造血前駆細胞、臍帯血造血前駆細胞または胎盤血造
血前駆細胞を含む。非胎盤細胞は、幹細胞、例えば間葉系幹細胞、例えば、骨髄由来の間
葉系幹細胞も含むことができる。非胎盤細胞は、成熟細胞または細胞株の１つまたは複数
の型であることもできる。別の具体的な実施形態では、組成物は、抗増殖剤、例えば、抗
ＭＩＰ－１αまたは抗ＭＩＰ－１β抗体を含む。
はＩＬＣ３細胞と、単離された接着胎盤細胞の培養物からの培養培地とを含む組成物であ
って、前記単離された接着胎盤細胞が、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ２００およびＨ
ＬＡ－Ｇを発現するか、またはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＣＤ２００を発現するか、ま
たはＣＤ２００およびＯＣＴ－４を発現するか、またはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＨＬ
Ａ－Ｇを発現するか、またはＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、胎盤幹細胞を含む胎盤
細胞集団における１つもしくは複数の胚様体様体の形成を、前記集団が胚様体様体の形成
を可能ならしめる条件下で培養されたとき、補助する、またはＯＣＴ－４を発現し、胎盤
幹細胞を含む胎盤細胞集団における１つもしくは複数の胚様体様体の形成を、前記集団が
胚様体様体の形成を可能ならしめる条件下で培養されたとき、補助する、組成物であり、
腫瘍細胞の成長もしくは増殖を検出可能に抑制するか、または抗がん性もしくは抗ウイル
ス性である、組成物が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、組成物は、複数の
前記単離された胎盤接着細胞をさらに含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、複数
の非胎盤細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記非胎盤細胞は、ＣＤ３４＋細胞、
例えば造血前駆細胞、例えば、抹消血造血前駆細胞、臍帯血造血前駆細胞または胎盤血造
血前駆細胞を含む。非胎盤細胞は、幹細胞、例えば間葉系幹細胞、例えば、骨髄由来の間
葉系幹細胞も含むことができる。非胎盤細胞は、成熟細胞または細胞株の１つまたは複数
の型であることもできる。別の具体的な実施形態では、組成物は、抗増殖剤、例えば、抗
ＭＩＰ－１αまたは抗ＭＩＰ－１β抗体を含む。
【0351】
具体的な実施形態では、上記の細胞または細胞の組合せのうちの１つにより条件付けら
れた培養培地は、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、または約５：１の単離され
た接着胎盤細胞対腫瘍細胞比で複数の腫瘍細胞と共培養された複数の単離された接着胎盤
細胞から得られる。例えば、条件培養培地または上清は、約１×１０５個の単離された接
着胎盤細胞、約１×１０６個の単離された接着胎盤細胞、約１×１０７個の単離された接
着胎盤細胞、もしくは約１×１０８個の単離された接着胎盤細胞、またはそれ以上を含む
培養物から得ることができる。別の具体的な実施形態では、条件培養培地または上清は、
約１×１０５～約５×１０５個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０５個の腫瘍細
胞、約１×１０６～約５×１０６個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０６個の腫
瘍細胞、約１×１０７～約５×１０７個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０７個
の腫瘍細胞、または約１×１０８～約５×１０８個の単離された接着胎盤細胞および約１
×１０８個の腫瘍細胞を含む、共培養物から得られる。
れた培養培地は、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、または約５：１の単離され
た接着胎盤細胞対腫瘍細胞比で複数の腫瘍細胞と共培養された複数の単離された接着胎盤
細胞から得られる。例えば、条件培養培地または上清は、約１×１０５個の単離された接
着胎盤細胞、約１×１０６個の単離された接着胎盤細胞、約１×１０７個の単離された接
着胎盤細胞、もしくは約１×１０８個の単離された接着胎盤細胞、またはそれ以上を含む
培養物から得ることができる。別の具体的な実施形態では、条件培養培地または上清は、
約１×１０５～約５×１０５個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０５個の腫瘍細
胞、約１×１０６～約５×１０６個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０６個の腫
瘍細胞、約１×１０７～約５×１０７個の単離された接着胎盤細胞および約１×１０７個
の腫瘍細胞、または約１×１０８～約５×１０８個の単離された接着胎盤細胞および約１
×１０８個の腫瘍細胞を含む、共培養物から得られる。
【0352】
５．９．細胞の保存
細胞、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくは
ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／もしくはＩＬＣ３細胞集団、または造血幹細胞もしくは前駆細胞を含む胎盤潅流液細胞
を、保存することができる、すなわち、長期保管を可能ならしめる条件下、または例えば
アポトーシスもしくは壊死による、細胞死を阻害する条件下に置くことができる。
細胞、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくは
ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／もしくはＩＬＣ３細胞集団、または造血幹細胞もしくは前駆細胞を含む胎盤潅流液細胞
を、保存することができる、すなわち、長期保管を可能ならしめる条件下、または例えば
アポトーシスもしくは壊死による、細胞死を阻害する条件下に置くことができる。
【0353】
胎盤潅流液は、細胞収集組成物を胎盤の少なくとも一部に、例えば胎盤血管系に、通す
ことによって製造することができる。細胞収集組成物は、潅流液中に含有されている細胞
を保存するように作用する１つまたは複数の化合物を含む。そのような胎盤細胞収集組成
物は、関連する（特許文献１０）に記載されているような、アポトーシス阻害剤、壊死阻
害剤および／または酸素担持ペルフルオロカーボンを含むことができ、前記特許文献の開
示はその全体が参照により本明細書に組み入れられている。
ことによって製造することができる。細胞収集組成物は、潅流液中に含有されている細胞
を保存するように作用する１つまたは複数の化合物を含む。そのような胎盤細胞収集組成
物は、関連する（特許文献１０）に記載されているような、アポトーシス阻害剤、壊死阻
害剤および／または酸素担持ペルフルオロカーボンを含むことができ、前記特許文献の開
示はその全体が参照により本明細書に組み入れられている。
【0354】
一実施形態では、潅流液、または胎盤細胞集団は、前記潅流液または細胞集団を、アポ
トーシス阻害剤と酸素担持ペルフルオロカーボンとを含む細胞収集組成物と近接させるこ
とにより、哺乳動物の、例えばヒトの、分娩後の胎盤から収集され、その際、前記アポト
ーシス阻害剤は、前記アポトーシス阻害剤と接触も近接もさせていない細胞集団と比較し
て胎盤細胞集団、例えば、接着胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤複能性細胞、の
集団におけるアポトーシスを低減させるまたは防止するのに十分な量でおよび十分な時間
、存在する。例えば、胎盤を細胞収集組成物で潅流することができ、胎盤細胞、例えば、
全有核胎盤細胞が胎盤から単離される。具体的な実施形態では、アポトーシス阻害剤は、
カスパーゼ阻害剤である。別の具体的な実施形態では、前記アポトーシス阻害剤は、ＪＮ
Ｋ阻害剤である。より具体的な実施形態では、前記ＪＮＫ阻害剤は、接着胎盤細胞、例え
ば、接着胎盤幹細胞または接着胎盤複能性細胞の分化も増殖も調節しない。別の実施形態
では、細胞収集組成物は、前記アポトーシス阻害剤および前記酸素担持ペルフルオロカー
ボンを別々の相に含む。別の実施形態では、細胞収集組成物は、エマルジョン中の前記ア
ポトーシス阻害剤と前記酸素担持ペルフルオロカーボンとを含む。別の実施形態では、細
胞収集組成物は、乳化剤、例えばレシチンをさらに含む。別の実施形態では、前記アポト
ーシス阻害剤および前記ペルフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞収集組成物と近接させ
る時点で約０℃～約２５℃である。別のより具体的な実施形態では、前記アポトーシス阻
害剤および前記ペルフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞収集組成物と近接させる時点で
約２℃～１０℃、または約２℃～５℃である。別のより具体的な実施形態では、前記近接
させることは、前記細胞の集団の輸送中に行われる。別のより具体的な実施形態では、前
記近接させることは、細胞の前記集団の凍結および融解中に行われる。
トーシス阻害剤と酸素担持ペルフルオロカーボンとを含む細胞収集組成物と近接させるこ
とにより、哺乳動物の、例えばヒトの、分娩後の胎盤から収集され、その際、前記アポト
ーシス阻害剤は、前記アポトーシス阻害剤と接触も近接もさせていない細胞集団と比較し
て胎盤細胞集団、例えば、接着胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤複能性細胞、の
集団におけるアポトーシスを低減させるまたは防止するのに十分な量でおよび十分な時間
、存在する。例えば、胎盤を細胞収集組成物で潅流することができ、胎盤細胞、例えば、
全有核胎盤細胞が胎盤から単離される。具体的な実施形態では、アポトーシス阻害剤は、
カスパーゼ阻害剤である。別の具体的な実施形態では、前記アポトーシス阻害剤は、ＪＮ
Ｋ阻害剤である。より具体的な実施形態では、前記ＪＮＫ阻害剤は、接着胎盤細胞、例え
ば、接着胎盤幹細胞または接着胎盤複能性細胞の分化も増殖も調節しない。別の実施形態
では、細胞収集組成物は、前記アポトーシス阻害剤および前記酸素担持ペルフルオロカー
ボンを別々の相に含む。別の実施形態では、細胞収集組成物は、エマルジョン中の前記ア
ポトーシス阻害剤と前記酸素担持ペルフルオロカーボンとを含む。別の実施形態では、細
胞収集組成物は、乳化剤、例えばレシチンをさらに含む。別の実施形態では、前記アポト
ーシス阻害剤および前記ペルフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞収集組成物と近接させ
る時点で約０℃～約２５℃である。別のより具体的な実施形態では、前記アポトーシス阻
害剤および前記ペルフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞収集組成物と近接させる時点で
約２℃～１０℃、または約２℃～５℃である。別のより具体的な実施形態では、前記近接
させることは、前記細胞の集団の輸送中に行われる。別のより具体的な実施形態では、前
記近接させることは、細胞の前記集団の凍結および融解中に行われる。
【0355】
別の実施形態では、胎盤潅流液および／または胎盤細胞を収集し、前記潅流液および／
または細胞をアポトーシス阻害剤および臓器保存用化合物と近接させることにより、保存
することができ、その際、前記アポトーシス阻害剤は、前記アポトーシス阻害剤と接触も
近接もさせていない潅流液または胎盤細胞と比較して、細胞のアポトーシスを低減させる
または防止するのに十分な量でおよび十分な時間、存在する。具体的な実施形態では、臓
器保存用化合物は、ＵＷ溶液（（特許文献１７）に記載されており、ＶＩＡＳＰＡＮ（商
標）としても公知である；（非特許文献６）も参照されたい）、またはシュテルン（Ｓｔ
ｅｒｎ）ら、（特許文献１８）に記載されている溶液であり、前記参考文献の開示はそれ
ら全体が参照により本明細書に組み入れられている。別の実施形態では、前記臓器保存用
組成物は、ヒドロキシエチルデンプン、ラクトビオン酸、ラフィノース、またはそれらの
組合せである。別の実施形態では、胎盤細胞収集組成物は、酸素担持ペルフルオロカーボ
ンを２相でまたはエマルジョンとしてさらに含む。
または細胞をアポトーシス阻害剤および臓器保存用化合物と近接させることにより、保存
することができ、その際、前記アポトーシス阻害剤は、前記アポトーシス阻害剤と接触も
近接もさせていない潅流液または胎盤細胞と比較して、細胞のアポトーシスを低減させる
または防止するのに十分な量でおよび十分な時間、存在する。具体的な実施形態では、臓
器保存用化合物は、ＵＷ溶液（（特許文献１７）に記載されており、ＶＩＡＳＰＡＮ（商
標）としても公知である；（非特許文献６）も参照されたい）、またはシュテルン（Ｓｔ
ｅｒｎ）ら、（特許文献１８）に記載されている溶液であり、前記参考文献の開示はそれ
ら全体が参照により本明細書に組み入れられている。別の実施形態では、前記臓器保存用
組成物は、ヒドロキシエチルデンプン、ラクトビオン酸、ラフィノース、またはそれらの
組合せである。別の実施形態では、胎盤細胞収集組成物は、酸素担持ペルフルオロカーボ
ンを２相でまたはエマルジョンとしてさらに含む。
【0356】
方法の別の実施形態では、胎盤細胞は、アポトーシス阻害剤および酸素担持ペルフルオ
ロカーボン、臓器保存用化合部またはそれらの組合せを含む細胞収集組成物と、潅流中に
近接される。別の実施形態では、胎盤細胞は、潅流による収集後に前記細胞収集化合物と
近接される。
ロカーボン、臓器保存用化合部またはそれらの組合せを含む細胞収集組成物と、潅流中に
近接される。別の実施形態では、胎盤細胞は、潅流による収集後に前記細胞収集化合物と
近接される。
【0357】
概して、胎盤細胞収集、富化および単離中の、低酸素に起因する細胞ストレスおよび機
械的ストレスを最小にすることまたは無くすことが好ましい。したがって、方法の別の実
施形態では、胎盤潅流液、または胎盤細胞集団は、正常血中酸素濃度未満である酸素濃度
である低酸素条件に、収集、富化または単離中、前記保存中は６時間未満曝露される。よ
り具体的な実施形態では、前記潅流液、または胎盤細胞集団は、前記保存中に２時間未満
、前記低酸素条件に曝露される。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤細胞集団は、
収集、富化もしくは単離中、１時間未満、もしくは３０分未満、前記低酸素条件に曝露さ
れるか、または低酸素条件に曝露されない。別の具体的な実施形態では、前記胎盤細胞の
集団は、収集、富化または単離中、剪断ストレスに曝露されない。
械的ストレスを最小にすることまたは無くすことが好ましい。したがって、方法の別の実
施形態では、胎盤潅流液、または胎盤細胞集団は、正常血中酸素濃度未満である酸素濃度
である低酸素条件に、収集、富化または単離中、前記保存中は６時間未満曝露される。よ
り具体的な実施形態では、前記潅流液、または胎盤細胞集団は、前記保存中に２時間未満
、前記低酸素条件に曝露される。別のより具体的な実施形態では、前記胎盤細胞集団は、
収集、富化もしくは単離中、１時間未満、もしくは３０分未満、前記低酸素条件に曝露さ
れるか、または低酸素条件に曝露されない。別の具体的な実施形態では、前記胎盤細胞の
集団は、収集、富化または単離中、剪断ストレスに曝露されない。
【0358】
細胞、例えば、胎盤潅流液細胞、造血細胞、例えばＣＤ３４＋造血幹細胞、本明細書に
記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、本明細書で提供
される単離された接着胎盤細胞を、例えば、小型コンテナ、例えばアンプルまたはセプタ
ムバイアル、内の凍結保存媒体中で、凍結保存することができる。ある特定の実施形態で
は、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり細胞約１×１０４～５×１０８個の濃度
で凍結保存される。具体的な実施形態では、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり
細胞約１×１０６～１．５×１０７個の濃度で凍結保存される。より具体的な実施形態で
は、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり細胞約１×１０４、５×１０４、１×１
０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７個の濃度で凍結保
存される。
記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、本明細書で提供
される単離された接着胎盤細胞を、例えば、小型コンテナ、例えばアンプルまたはセプタ
ムバイアル、内の凍結保存媒体中で、凍結保存することができる。ある特定の実施形態で
は、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり細胞約１×１０４～５×１０８個の濃度
で凍結保存される。具体的な実施形態では、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり
細胞約１×１０６～１．５×１０７個の濃度で凍結保存される。より具体的な実施形態で
は、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり細胞約１×１０４、５×１０４、１×１
０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７個の濃度で凍結保
存される。
【0359】
好適な凍結保存媒体としては、生理食塩水、培養培地（例えば、成長培地を含む）、ま
たは細胞凍結培地、例えば、市販の細胞凍結培地、例えば、Ｃ２６９５、Ｃ２６３９もし
くはＣ６０３９（Ｓｉｇｍａ）；ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、ＣｒｙｏＳｔｏ
ｒ（登録商標）ＣＳ５またはＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０（ＢｉｏＬｉｆｅ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、凍結保
存媒体は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を、例えば、約１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０％（ｖ／ｖ）の濃度で含む。凍結保存媒体は、さらなる薬剤、例え
ば、メチルセルロース、デキストラン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、ト
レハロースおよび／またはグリセロールを含むこともある。ある特定の実施形態では、凍
結保存媒体は、約１％～１０％ＤＭＳＯ、約２５％～７５％デキストランおよび／または
約２０～６０％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む。ある特定の実施形態では、凍結保
存媒体は、約１％～１０％ＤＭＳＯ、約２５％～７５％トレハロースおよび／または約２
０～６０％ヒトＨＳＡを含む。具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％ＤＭＳＯ、
５５％デキストランおよび４０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存媒
体は、５％ＤＭＳＯ、５５％デキストラン（生理食塩水中１０％ ｗ／ｖ）および４０％
ＨＳＡを含む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％ＤＭＳＯ、５５％トレ
ハロースおよび４０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％
ＤＭＳＯ、５５％トレハロース（生理食塩水中１０％ ｗ／ｖ）および４０％ＨＳＡを含
む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５
を含む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）Ｃ
Ｓ１０を含む。
たは細胞凍結培地、例えば、市販の細胞凍結培地、例えば、Ｃ２６９５、Ｃ２６３９もし
くはＣ６０３９（Ｓｉｇｍａ）；ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、ＣｒｙｏＳｔｏ
ｒ（登録商標）ＣＳ５またはＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０（ＢｉｏＬｉｆｅ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、凍結保
存媒体は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を、例えば、約１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０％（ｖ／ｖ）の濃度で含む。凍結保存媒体は、さらなる薬剤、例え
ば、メチルセルロース、デキストラン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、ト
レハロースおよび／またはグリセロールを含むこともある。ある特定の実施形態では、凍
結保存媒体は、約１％～１０％ＤＭＳＯ、約２５％～７５％デキストランおよび／または
約２０～６０％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む。ある特定の実施形態では、凍結保
存媒体は、約１％～１０％ＤＭＳＯ、約２５％～７５％トレハロースおよび／または約２
０～６０％ヒトＨＳＡを含む。具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％ＤＭＳＯ、
５５％デキストランおよび４０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存媒
体は、５％ＤＭＳＯ、５５％デキストラン（生理食塩水中１０％ ｗ／ｖ）および４０％
ＨＳＡを含む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％ＤＭＳＯ、５５％トレ
ハロースおよび４０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、５％
ＤＭＳＯ、５５％トレハロース（生理食塩水中１０％ ｗ／ｖ）および４０％ＨＳＡを含
む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５
を含む。別の具体的な実施形態では、凍結保存媒体は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）Ｃ
Ｓ１０を含む。
【0360】
本明細書で提供される細胞を、様々な方法のいずれによって、および細胞培養、増幅ま
たは分化のいずれの段階で、凍結保存してもよい。例えば、本明細書で提供される細胞を
、起源組織もしくは臓器、例えば胎盤潅流液もしくは臍帯血、からの単離直後に凍結保存
してもよく、または上で概要を述べた方法の第１、第２もしくは第３ステップ中もしくは
後に凍結保存してもよい。ある特定の実施形態では、造血細胞、例えば、造血幹細胞また
は前駆細胞は、起源組織または臓器からの単離後、約１、５、１０、１５、２０、３０、
４５分以内または約１、２、４、６、１０、１２、１８、２０または２４時間以内に凍結
保存される。ある特定の実施形態では、前記細胞は、起源組織または臓器からの単離後、
１、２または３日以内に凍結保存される。ある特定の実施形態では、前記細胞は、約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８日間、上記の
第１の培地中で培養された後、凍結保存される。一部の実施形態では、前記細胞は、約１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８日間、上記
の第１の培地中で、および約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７または２８日間、第２の培地中で上記の通り培養された後、凍結保存される。一
部の実施形態では、ＮＫ細胞が、本明細書に記載の３段階法を使用して製造される場合、
前記細胞は、第１の培地中で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは
２５日間培養された後、および／または第２の培地中で約１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４もしくは２５日間培養された後、および／または第３の培地中で約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５日間培養された後、凍結保存さ
れる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載
の３段階法を使用して製造され、前記細胞は、第１の培地中で１０日間培養された後、第
２の培地中で４日間培養された後、および第３の培地中で２１日間培養された後、凍結保
存される。
たは分化のいずれの段階で、凍結保存してもよい。例えば、本明細書で提供される細胞を
、起源組織もしくは臓器、例えば胎盤潅流液もしくは臍帯血、からの単離直後に凍結保存
してもよく、または上で概要を述べた方法の第１、第２もしくは第３ステップ中もしくは
後に凍結保存してもよい。ある特定の実施形態では、造血細胞、例えば、造血幹細胞また
は前駆細胞は、起源組織または臓器からの単離後、約１、５、１０、１５、２０、３０、
４５分以内または約１、２、４、６、１０、１２、１８、２０または２４時間以内に凍結
保存される。ある特定の実施形態では、前記細胞は、起源組織または臓器からの単離後、
１、２または３日以内に凍結保存される。ある特定の実施形態では、前記細胞は、約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８日間、上記の
第１の培地中で培養された後、凍結保存される。一部の実施形態では、前記細胞は、約１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８日間、上記
の第１の培地中で、および約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７または２８日間、第２の培地中で上記の通り培養された後、凍結保存される。一
部の実施形態では、ＮＫ細胞が、本明細書に記載の３段階法を使用して製造される場合、
前記細胞は、第１の培地中で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは
２５日間培養された後、および／または第２の培地中で約１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４もしくは２５日間培養された後、および／または第３の培地中で約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５日間培養された後、凍結保存さ
れる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載
の３段階法を使用して製造され、前記細胞は、第１の培地中で１０日間培養された後、第
２の培地中で４日間培養された後、および第３の培地中で２１日間培養された後、凍結保
存される。
【0361】
一態様では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団、例えば本明細書に記載の３段
階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、の集団を凍結保存する方法
が本明細書で提供される。一実施形態では、前記方法は、幹細胞動員剤およびトロンボポ
エチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋
造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ、その後、
幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第
２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ
、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するス
テップであって、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ
１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、前記ナ
チュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存している、ステッ
プ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特
定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（
ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）
を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、お
よびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施
形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いて
おり、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低
分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細
胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶
液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保
存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を
－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、
中間ステップを一切含まない。
階法により製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、の集団を凍結保存する方法
が本明細書で提供される。一実施形態では、前記方法は、幹細胞動員剤およびトロンボポ
エチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋
造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ、その後、
幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第
２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ
、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するス
テップであって、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ
１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、前記ナ
チュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存している、ステッ
プ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特
定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（
ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）
を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、お
よびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施
形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いて
おり、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある
特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低
分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細
胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶
液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保
存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を
－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、
中間ステップを一切含まない。
【0362】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣ
Ｄ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そ
して次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実
施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ
）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠い
ている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦ
ＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態で
は、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、
前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の
実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量
ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁
溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添
加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞
懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０
℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ス
テップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣ
Ｄ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そ
して次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実
施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ
）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠い
ている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦ
ＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態で
は、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、
前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の
実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量
ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁
溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添
加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞
懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０
℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ス
テップを一切含まない。
【0363】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（Ｓ
ＣＦ）およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培
養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細
胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結
保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記
第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク
質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３
Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、Ｌ
ＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第
３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前
記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体を
ステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（
３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、
および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特
定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞因子（Ｓ
ＣＦ）およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培
養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細
胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結
保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記
第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク
質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３
Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、Ｌ
ＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第
３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前
記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体を
ステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（
３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、
および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特
定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
【0364】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞
動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培
養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細
胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結
保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記
第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク
質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３
Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、Ｌ
ＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第
３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前
記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体を
ステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（
３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、
および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特
定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞
動員剤およびＬＭＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培
養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む細
胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中で凍結
保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記
第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク
質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培
地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３
Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、Ｌ
ＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第
３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前
記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体を
ステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（
３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、
および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特
定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
【0365】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第
３の集団を製造するステップ、ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ＋細
胞を単離して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を
含む細胞の第４の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中
で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／また
は前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タ
ンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第
３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌ
ｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地
は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地
も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態で
は、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存
媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステッ
プ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステ
ップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。
ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第
３の集団を製造するステップ、ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ＋細
胞を単離して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を
含む細胞の第４の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＮＫ細胞を凍結保存媒体中
で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／また
は前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タ
ンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第
３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌ
ｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地
は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地
も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態で
は、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存
媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステッ
プ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステ
ップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。
ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含まない。
【0366】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣ
Ｄ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に
、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形
態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）お
よび／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いてい
る。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ
様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、
前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記
第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施
形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパ
リンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液
を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加し
て、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁
液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未
満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステッ
プを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠い
ている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣ
Ｄ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そして次に
、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形
態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）お
よび／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いてい
る。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ
様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、
前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記
第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施
形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパ
リンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液
を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加し
て、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁
液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未
満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステッ
プを一切含まない。
【0367】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、
ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、Ｃ
Ｄ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステッ
プ、そして次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例え
ば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１
）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸
濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍
結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試
料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法
は、中間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、
ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、Ｃ
Ｄ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステッ
プ、そして次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。あ
る特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因
子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１
α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な
実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠
いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。
ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例え
ば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１
）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸
濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍
結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試
料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法
は、中間ステップを一切含まない。
【0368】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷ
Ｈを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－
およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そ
して次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定
の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（Ｌ
ＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を
欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形
態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いてお
り、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特
定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分
子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞
懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液
に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存
細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－
８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中
間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷ
Ｈを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－
およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造するステップ、そ
して次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定
の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（Ｌ
ＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を
欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およ
びＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形
態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いてお
り、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特
定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分
子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞
懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液
に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存
細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－
８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中
間ステップを一切含まない。
【0369】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５
を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５
６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造す
るステップ、そして次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを
含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血
病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（Ｍ
ＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。
具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－
１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠い
ている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリ
ン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップ
は、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）から
の細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）
からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍
結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、
前記方法は、中間ステップを一切含まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、ならびに（ｃ）幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５
を含み、ＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、ＣＤ５
６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第３の集団を製造す
るステップ、そして次に、前記ＩＬＣ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを
含む。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血
病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（Ｍ
ＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩ
Ｐ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。
具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－
１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠い
ている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリ
ン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップ
は、（１）細胞懸濁溶液を調製するステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）から
の細胞懸濁溶液に添加して、凍結保存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）
からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍
結保存試料を－８０℃未満で保管するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、
前記方法は、中間ステップを一切含まない。
【0370】
一実施形態では、前記方法は、（ａ）幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第
３の集団を製造するステップ、ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ－細
胞を単離およびＣＤ１１ａ－細胞を単離して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－
であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第４の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＩＬ
Ｃ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシン
キナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の
培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地
は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、
第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含ま
ない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製する
ステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保
存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却し
て凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管す
るステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含
まない。
を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造す
るステップ、（ｂ）幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団
を製造するステップ、（ｃ）ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭ
ＷＨのそれぞれを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第
３の集団を製造するステップ、ならびに（ｄ）細胞の前記第３の集団からＣＤ１１ａ－細
胞を単離およびＣＤ１１ａ－細胞を単離して、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－およびＣＤ１１ａ－
であるＩＬＣ３細胞を含む細胞の第４の集団を製造するステップ、そして次に、前記ＩＬ
Ｃ３細胞を凍結保存媒体中で凍結保存するステップを含む。ある特定の実施形態では、前
記第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／また
はマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特
定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシン
キナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の
培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地
は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、
第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含ま
ない。具体的な実施形態では、前記凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁溶液を調製する
ステップ、（２）凍結保存媒体をステップ（１）からの細胞懸濁溶液に添加して、凍結保
存細胞懸濁液を得るステップ、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却し
て凍結保存試料を得るステップ、および（４）前記凍結保存試料を－８０℃未満で保管す
るステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、前記方法は、中間ステップを一切含
まない。
【0371】
本明細書で提供される細胞を速度制御フリーザーで、例えば、凍結保存中に約０．１、
０．３、０．５、１または２℃／分で、冷却することができる。一実施形態では、凍結保
存温度は、約－８０℃～約－１８０℃、または約－１２５℃～約－１４０℃である。凍結
保存細胞を、使用のために融解する前に、液体窒素に移すことができる。一部の実施形態
では、例えば、アンプルが約－９０℃に達したら、それらは、液体窒素保管場所に移され
る。凍結保存細胞を約２５℃～約４０℃の温度で融解することができ、より具体的には約
３７℃の温度で融解することができる。ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１
、２、４、６、１０、１２、１８、２０もしくは２４時間、または約１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７もしくは２８日間凍結保存された後、融
解される。ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８カ月間凍結保存された後、融解される。
ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０年間凍結保存された後、融解される。
０．３、０．５、１または２℃／分で、冷却することができる。一実施形態では、凍結保
存温度は、約－８０℃～約－１８０℃、または約－１２５℃～約－１４０℃である。凍結
保存細胞を、使用のために融解する前に、液体窒素に移すことができる。一部の実施形態
では、例えば、アンプルが約－９０℃に達したら、それらは、液体窒素保管場所に移され
る。凍結保存細胞を約２５℃～約４０℃の温度で融解することができ、より具体的には約
３７℃の温度で融解することができる。ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１
、２、４、６、１０、１２、１８、２０もしくは２４時間、または約１、２、３、４、５
、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７もしくは２８日間凍結保存された後、融
解される。ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８カ月間凍結保存された後、融解される。
ある特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０年間凍結保存された後、融解される。
【0372】
好適な融解媒体としては、生理食塩水、プラズマライト、培養培地（例えば、成長培地
、例えばＲＰＭＩ培地を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施
形態では、融解媒体は、媒体補充物（ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（例えば、
栄養素、サイトカインおよび／または因子）のうちの１つまたは複数を含む。本明細書で
提供される細胞の融解に好適な媒体補充物としては、例えば、限定ではないが、血清、例
えば、ヒト血清ＡＢ、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）（ＦＢＳ
）もしくはウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）（ＦＣＳ）、ビタミン類
、ヒト血清アルブミン（ＨＢＳ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、アミノ酸類（例えば
、Ｌ－グルタミン）、脂肪酸類（例えば、オレイン酸、リノール酸もしくはパルミチン酸
）、インスリン（例えば、組換えヒトインスリン）、トランスフェリン（鉄飽和型ヒトト
ランスフェリン）、β－メルカプトエタノール、幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ様チロシ
ンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３－Ｌ）、サイトカイン類、例えば、インターロイキン２
（ＩＬ－２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）
、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）またはヘパリンが挙げられる。具体的な実施形態では、本
明細書で提供される方法において有用な融解媒体は、ＲＰＭＩを含む。別の具体的な実施
形態では、前記融解媒体は、プラズマライトを含む。別の具体的な実施形態では、前記融
解媒体は、約０．５～２０％ＦＢＳを含む。別の具体的な実施形態では、前記融解媒体は
、約１、２、５、１０、１５または２０％ＦＢＳを含む。別の具体的な実施形態では、前
記融解媒体は、約０．５％～２０％ＨＳＡを含む。別の具体的な実施形態では、前記融解
媒体は、約１、２．５、５、１０、１５または２０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形
態では、前記融解媒体は、ＲＰＭＩおよび約１０％ＦＢＳを含む。別のより具体的な実施
形態では、前記融解媒体は、プラズマライトおよび約５％ＨＳＡを含む。
、例えばＲＰＭＩ培地を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施
形態では、融解媒体は、媒体補充物（ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（例えば、
栄養素、サイトカインおよび／または因子）のうちの１つまたは複数を含む。本明細書で
提供される細胞の融解に好適な媒体補充物としては、例えば、限定ではないが、血清、例
えば、ヒト血清ＡＢ、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）（ＦＢＳ
）もしくはウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）（ＦＣＳ）、ビタミン類
、ヒト血清アルブミン（ＨＢＳ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、アミノ酸類（例えば
、Ｌ－グルタミン）、脂肪酸類（例えば、オレイン酸、リノール酸もしくはパルミチン酸
）、インスリン（例えば、組換えヒトインスリン）、トランスフェリン（鉄飽和型ヒトト
ランスフェリン）、β－メルカプトエタノール、幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ様チロシ
ンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３－Ｌ）、サイトカイン類、例えば、インターロイキン２
（ＩＬ－２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）
、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）またはヘパリンが挙げられる。具体的な実施形態では、本
明細書で提供される方法において有用な融解媒体は、ＲＰＭＩを含む。別の具体的な実施
形態では、前記融解媒体は、プラズマライトを含む。別の具体的な実施形態では、前記融
解媒体は、約０．５～２０％ＦＢＳを含む。別の具体的な実施形態では、前記融解媒体は
、約１、２、５、１０、１５または２０％ＦＢＳを含む。別の具体的な実施形態では、前
記融解媒体は、約０．５％～２０％ＨＳＡを含む。別の具体的な実施形態では、前記融解
媒体は、約１、２．５、５、１０、１５または２０％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形
態では、前記融解媒体は、ＲＰＭＩおよび約１０％ＦＢＳを含む。別のより具体的な実施
形態では、前記融解媒体は、プラズマライトおよび約５％ＨＳＡを含む。
【0373】
本明細書で提供される凍結保存方法を、長期保管を可能ならしめるように、または例え
ばアポトーシスまたは壊死による、細胞死を阻害する条件下で、最適化することができる
。一実施形態では、融解後の細胞は、例えば自動細胞計数器またはトリパンブルー法によ
り判定して、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または
９８％超の生存細胞を含む。別の実施形態では、融解後の細胞は、約０．５、１、５、１
０、１５、２０または２５％の死細胞を含む。別の実施形態では、融解後の細胞は、約０
．５、１、５、１０、１５、２０または２５％の早期アポトーシス細胞を含む。別の実施
形態では、融解後の細胞の約０．５、１、５、１０、１５または２０％は、例えばアポト
ーシスアッセイ（例えば、ＴＯ－ＰＲＯ３またはＡｎｎＶ／ＰＩ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓア
ッセイキット）により判定して、融解された後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、２７もしくは２８日後にアポトーシスを受ける。ある特定の実施
形態では、融解後の細胞は、本明細書で提供される方法を使用して培養、増幅または分化
された後、再び凍結保存される。
ばアポトーシスまたは壊死による、細胞死を阻害する条件下で、最適化することができる
。一実施形態では、融解後の細胞は、例えば自動細胞計数器またはトリパンブルー法によ
り判定して、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または
９８％超の生存細胞を含む。別の実施形態では、融解後の細胞は、約０．５、１、５、１
０、１５、２０または２５％の死細胞を含む。別の実施形態では、融解後の細胞は、約０
．５、１、５、１０、１５、２０または２５％の早期アポトーシス細胞を含む。別の実施
形態では、融解後の細胞の約０．５、１、５、１０、１５または２０％は、例えばアポト
ーシスアッセイ（例えば、ＴＯ－ＰＲＯ３またはＡｎｎＶ／ＰＩ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓア
ッセイキット）により判定して、融解された後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、２７もしくは２８日後にアポトーシスを受ける。ある特定の実施
形態では、融解後の細胞は、本明細書で提供される方法を使用して培養、増幅または分化
された後、再び凍結保存される。
【0374】
５．１０．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む組成物
５．１０．１．３段階法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
一部の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して製造される単離されたＮＫ
細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む組成物、例えば、医薬組成物が本明細書で提
供される。具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
集団は、造血細胞、例えば、胎盤潅流液、臍帯血および／または抹消血から単離された造
血幹細胞または前駆細胞から製造される。別の具体的な実施形態では、前記単離されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、組成物中の細胞の少なくとも５０％を構成す
る。別の具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集
団、例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、組成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９８％または９９％を構成する。ある特定の実施形態では、前記単離さ
れたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団内の細胞の５％、１０％、１５％、２０％
、２５％、３０％、３５％または４０％以下は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞である。ある特
定の実施形態では、前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、ＣＤ１６－である。
５．１０．１．３段階法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
一部の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して製造される単離されたＮＫ
細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む組成物、例えば、医薬組成物が本明細書で提
供される。具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
集団は、造血細胞、例えば、胎盤潅流液、臍帯血および／または抹消血から単離された造
血幹細胞または前駆細胞から製造される。別の具体的な実施形態では、前記単離されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、組成物中の細胞の少なくとも５０％を構成す
る。別の具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集
団、例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、組成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９８％または９９％を構成する。ある特定の実施形態では、前記単離さ
れたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団内の細胞の５％、１０％、１５％、２０％
、２５％、３０％、３５％または４０％以下は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞である。ある特
定の実施形態では、前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、ＣＤ１６－である。
【0375】
本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用のために製剤化して医薬組成物にすることができる。その
ような医薬組成物は、薬学的に許容される担体、例えば、生理食塩水またはｉｎ ｖｉｖ
ｏ投与用の他の認知されている生理学的に許容される溶液中の、ＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞集団を含む。本発明の医薬組成物は、本明細書の他の箇所に記載の任意のＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含むことができる。
集団をｉｎ ｖｉｖｏでの使用のために製剤化して医薬組成物にすることができる。その
ような医薬組成物は、薬学的に許容される担体、例えば、生理食塩水またはｉｎ ｖｉｖ
ｏ投与用の他の認知されている生理学的に許容される溶液中の、ＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞集団を含む。本発明の医薬組成物は、本明細書の他の箇所に記載の任意のＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含むことができる。
【0376】
本発明の医薬組成物は、５０％以上生存細胞を含む細胞集団（すなわち、集団内の細胞
の少なくとも５０％が機能性であるか、または生存している）を含む。好ましくは、集団
内の細胞の少なくとも６０％は、生存している。より具体的には、医薬組成物中の集団内
の細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％または９９％は、生存している。
の少なくとも５０％が機能性であるか、または生存している）を含む。好ましくは、集団
内の細胞の少なくとも６０％は、生存している。より具体的には、医薬組成物中の集団内
の細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％または９９％は、生存している。
【0377】
本発明の医薬組成物は、例えば生着を補助する、１つまたは複数の化合物；安定剤、例
えば、アルブミン、デキストラン４０、ゼラチン、ヒドロキシエチルデンプンなどを含む
ことができる。
えば、アルブミン、デキストラン４０、ゼラチン、ヒドロキシエチルデンプンなどを含む
ことができる。
【0378】
注射用溶液として製剤化される場合、一実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１．
２５％ＨＳＡおよび約２．５％デキストランを含む。細胞製品の投与に好適な他の注射用
製剤を使用してもよい。
２５％ＨＳＡおよび約２．５％デキストランを含む。細胞製品の投与に好適な他の注射用
製剤を使用してもよい。
【0379】
一実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、全身または局所
投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組
成物は、非経口投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物
、例えば医薬組成物は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投
与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成
物は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いた投与に好適である。具体的な実施形態
では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、注射に好適である。具体的な
実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、カテーテルによる投
与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成
物は、局所注射に好適である。より具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物
、例えば医薬組成物は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）への直接局所注射に好適である。具
体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、注射器による
注射に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組
成物は、誘導送達による投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供され
る組成物、例えば医薬組成物は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮
影、磁気共鳴、または放射線学により補助される注射に好適である。
投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組
成物は、非経口投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物
、例えば医薬組成物は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投
与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成
物は、デバイス、マトリックスまたは足場を用いた投与に好適である。具体的な実施形態
では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、注射に好適である。具体的な
実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、カテーテルによる投
与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成
物は、局所注射に好適である。より具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物
、例えば医薬組成物は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）への直接局所注射に好適である。具
体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、注射器による
注射に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組
成物は、誘導送達による投与に好適である。具体的な実施形態では、本明細書で提供され
る組成物、例えば医薬組成物は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮
影、磁気共鳴、または放射線学により補助される注射に好適である。
【0380】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞を含む、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、医薬
品グレードの投与可能な単位として提供される。そのような単位を個別の容量、例えば、
１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、
５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、
９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ
、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどで提供することができる。そのような単位を
、指定数の細胞、例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、１ミリリット
ル当たり細胞１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０
６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上、または１単位当たり細胞
１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０
７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５
×１０１０、１×１０１１個以上を含有するように、提供することができる。具体的な実
施形態では、単位は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０
４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個以上のＮＫ細胞お
よび／もしくはＩＬＣ３細胞、または１単位当たり１×１０４、５×１０４、１×１０５
、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１
０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個以上の細
胞を含むことができる。そのような単位を、指定数のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞、またはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、ならびに／または他の任意の
細胞を含有するように提供することができる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞およびＩ
ＬＣ３細胞は、本明細書で提供される比で存在する。
／またはＩＬＣ３細胞を含む、本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物は、医薬
品グレードの投与可能な単位として提供される。そのような単位を個別の容量、例えば、
１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、
５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、
９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ
、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどで提供することができる。そのような単位を
、指定数の細胞、例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、１ミリリット
ル当たり細胞１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０
６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上、または１単位当たり細胞
１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０
７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５
×１０１０、１×１０１１個以上を含有するように、提供することができる。具体的な実
施形態では、単位は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０
４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個以上のＮＫ細胞お
よび／もしくはＩＬＣ３細胞、または１単位当たり１×１０４、５×１０４、１×１０５
、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１
０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個以上の細
胞を含むことができる。そのような単位を、指定数のＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３
細胞、またはＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、ならびに／または他の任意の
細胞を含有するように提供することができる。具体的な実施形態では、ＮＫ細胞およびＩ
ＬＣ３細胞は、本明細書で提供される比で存在する。
【0381】
別の具体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離されたＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞は、異なる少なくとも２個体に由来するＮＫ細胞および／
またはＩＬＣ３細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離された
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞での処置
が予定されている個体とは異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ
細胞は、同数のナチュラルキラー細胞、すなわち、前記免疫調節化合物またはサリドマイ
ドと接触も近接もさせていないＮＫ細胞、より多くのグランザイムＢまたはパーフォリン
を検出可能に発現するのに十分な量および時間、免疫調節化合物またはサリドマイドと接
触または近接させた。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物または
サリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態では、免疫調節化合物は、下記の化合物
である。例えば、（特許文献１９）を参照されたく、この特許文献の開示はその全体が参
照により本明細書に組み入れられている。ある特定の実施形態では、免疫調節化合物は、
アミノ置換イソインドリンである。一実施形態では、免疫調節化合物は、３－（４－アミ
ノ－１－オキソ－１，３－ジヒドロイソインドール－２－イル）－ピペリジン－２，６－
ジオン、３－（４’アミノイソインドリン－１’－オン）－１－ピペリジン－２，６－ジ
オン、４－（アミノ）－２－（２，６－ジオキソ（３－ピペリジル））－イソインドリン
－１，３－ジオン、または４－アミノ－２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）
イソインドール－１，３－ジオンである。別の実施形態では、免疫調節化合物は、ポマリ
ドミドまたはレナリドミドである。別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、下記の構
造を有する化合物：
ＬＣ３細胞は、単一個体に由来する。より具体的な実施形態では、前記単離されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞は、異なる少なくとも２個体に由来するＮＫ細胞および／
またはＩＬＣ３細胞を含む。別の具体的な実施形態では、前記組成物中の前記単離された
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞での処置
が予定されている個体とは異なる個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記ＮＫ
細胞は、同数のナチュラルキラー細胞、すなわち、前記免疫調節化合物またはサリドマイ
ドと接触も近接もさせていないＮＫ細胞、より多くのグランザイムＢまたはパーフォリン
を検出可能に発現するのに十分な量および時間、免疫調節化合物またはサリドマイドと接
触または近接させた。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物または
サリドマイドをさらに含む。ある特定の実施形態では、免疫調節化合物は、下記の化合物
である。例えば、（特許文献１９）を参照されたく、この特許文献の開示はその全体が参
照により本明細書に組み入れられている。ある特定の実施形態では、免疫調節化合物は、
アミノ置換イソインドリンである。一実施形態では、免疫調節化合物は、３－（４－アミ
ノ－１－オキソ－１，３－ジヒドロイソインドール－２－イル）－ピペリジン－２，６－
ジオン、３－（４’アミノイソインドリン－１’－オン）－１－ピペリジン－２，６－ジ
オン、４－（アミノ）－２－（２，６－ジオキソ（３－ピペリジル））－イソインドリン
－１，３－ジオン、または４－アミノ－２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）
イソインドール－１，３－ジオンである。別の実施形態では、免疫調節化合物は、ポマリ
ドミドまたはレナリドミドである。別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、下記の構
造を有する化合物：
【0382】
【化16】
であり、ならびにＲ２は、水素または低級アルキルである）
またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジア
ステレオマー、ラセミ体、もしくは立体異性体の混合物である。別の実施形態では、前記
免疫調節化合物は、下記の構造を有する化合物：
【0383】
【化17】
ＸおよびＹの一方は、Ｃ＝Ｏであり、他方は、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ３－Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ２－Ｃ８
）アルケニル、（Ｃ２－Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ０－Ｃ４）アルキ
ル－（Ｃ１－Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ０－Ｃ４）アルキル－（Ｃ２－Ｃ５）ヘ
テロアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ３、Ｃ（Ｓ）Ｒ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル
－Ｎ（Ｒ６）２、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル－ＯＲ５、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）
ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３、Ｃ（Ｓ）ＮＨＲ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ３’、Ｃ（Ｓ）ＮＲ３
Ｒ３’または（Ｃ１－Ｃ８）アルキル－Ｏ（ＣＯ）Ｒ５であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、ベンジル、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニル、ま
たは（Ｃ２－Ｃ８）アルキニルであり、
Ｒ３およびＲ３’は、独立に、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ３－Ｃ７）シクロアルキ
ル、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２－Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ
０－Ｃ４）アルキル－（Ｃ１－Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ０－Ｃ４）アルキル－
（Ｃ２－Ｃ５）ヘテロアリール、（Ｃ０－Ｃ８）アルキル－Ｎ（Ｒ６）２、（Ｃ１－Ｃ８
）アルキル－ＯＲ５、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、（Ｃ１－Ｃ８）アルキ
ル－Ｏ（ＣＯ）Ｒ５、またはＣ（Ｏ）ＯＲ５であり、
Ｒ４は、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２－Ｃ８）アルキ
ニル、（Ｃ１－Ｃ４）アルキル－ＯＲ５、ベンジル、アリール、（Ｃ０－Ｃ４）アルキル
－（Ｃ１－Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、または（Ｃ０－Ｃ４）アルキル－（Ｃ２－Ｃ５
）ヘテロアリールであり、
Ｒ５は、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２－Ｃ８）アルキ
ニル、ベンジル、アリール、または（Ｃ２－Ｃ５）ヘテロアリールであり、
Ｒ６の各出現は、独立して、Ｈ、（Ｃ１－Ｃ８）アルキル、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニル
、（Ｃ２－Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ２－Ｃ５）ヘテロアリール、も
しくは（Ｃ０－Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｒ５であるか、またはＲ６基は、ヘテロシ
クロアルキル基を形成するように連結していてもよく、
ｎは、０または１であり、ならびに
＊は、キラル炭素中心を表す）
またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジア
ステレオマー、ラセミ体、もしくは立体異性体の混合物である。別の実施形態では、前記
免疫調節化合物は、下記の構造を有する化合物：
【0384】
【化18】
ＸおよびＹの一方は、Ｃ＝Ｏであり、他方は、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｒは、ＨまたはＣＨ２ＯＣＯＲ’であり、
（ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３もしくはＲ４の各々は、他のものとは無関係に、ハロ、炭素原
子１～４個のアルキル、もしくは炭素原子１～４個のアルコキシであるか、または（ｉｉ
）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３もしくはＲ４のうちの１つは、ニトロもしくは－ＮＨＲ５であり、Ｒ
１、Ｒ２、Ｒ３、もしくはＲ４の残りは、水素であり、
Ｒ５は、水素、または炭素１～８個のアルキルであり、
Ｒ６は、水素、炭素原子１～８個のアルキル、ベンゾ、クロロ、またはフルオロであり
、
Ｒ’は、Ｒ７－ＣＨＲ１０－Ｎ（Ｒ８Ｒ９）であり、
Ｒ７は、ｍ－フェニレンもしくはｐ－フェニレン、または－（ＣｎＨ２ｎ）－（この式
中のｎは、０～４の値である）であり、
Ｒ８およびＲ９の各々は、他方とは無関係に見て、水素、もしくは炭素原子１～８個の
アルキルであるか、またはＲ８およびＲ９は、一緒に見て、テトラメチレン、ペンタメチ
レン、ヘキサメチレン、もしくは－ＣＨ２ＣＨ２Ｘ１ＣＨ２ＣＨ２－（この式中のＸ１は
、－Ｏ－、－Ｓ－、もしくは－ＮＨ－である）であり、
Ｒ１０は、水素、炭素原子８個までのアルキル、またはフェニルであり、ならびに
＊は、キラル炭素中心を表す）
またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジア
ステレオマー、ラセミ体、もしくは立体異性体の混合物である。
【0385】
別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、下記
の抗がん化合物の１つまたは複数をさらに含む。
の抗がん化合物の１つまたは複数をさらに含む。
【0386】
より具体的な実施形態では、組成物は、別の源からの、または別の方法により製造され
た、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む。具体的な実施形態では、前記他の源は
、胎盤血および／または臍帯血である。別の具体的な実施形態では、前記他の源は、抹消
血である。より具体的な実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３
細胞集団は、別の源からの、または別の方法により製造された、ＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞と、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５
：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、
４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９
０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０
：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０
：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、
１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、
１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、
１：９５、１：１００などの比で合わせられる。
た、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む。具体的な実施形態では、前記他の源は
、胎盤血および／または臍帯血である。別の具体的な実施形態では、前記他の源は、抹消
血である。より具体的な実施形態では、前記組成物中のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３
細胞集団は、別の源からの、または別の方法により製造された、ＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞と、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５
：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５：５０：５０、４５：５５、
４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９
０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０
：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０
：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、
１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、
１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、
１：９５、１：１００などの比で合わせられる。
【0387】
別の具体的な実施形態では、組成物は、本明細書に記載の３段階法を使用して製造され
たＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団、ならびに単離された胎盤潅流液または単離
された胎盤潅流液細胞のいずれかを含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は
、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体に由来する。別のより具体的
な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団とは
異な個体に由来する胎盤潅流液を含む。別の具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の
細胞のすべてまたは実質的にすべて（例えば、９０％、９５％、９８％または９９％を超
える）は、胎児細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤潅流液または胎盤潅流液細
胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の
胎児細胞は、前記潅流液中の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満
を構成する。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ Ｎａ
Ｃｌ溶液の通過によって得られる。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地
を含む。別の具体的な実施形態では、前記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具
体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化
合物、例えば、アミノ置換イソインドリン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組
成物は、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん
化合物をさらに含む。
たＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団、ならびに単離された胎盤潅流液または単離
された胎盤潅流液細胞のいずれかを含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液は
、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体に由来する。別のより具体的
な実施形態では、前記胎盤潅流液は、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団とは
異な個体に由来する胎盤潅流液を含む。別の具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の
細胞のすべてまたは実質的にすべて（例えば、９０％、９５％、９８％または９９％を超
える）は、胎児細胞である。別の具体的な実施形態では、胎盤潅流液または胎盤潅流液細
胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液中の
胎児細胞は、前記潅流液中の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満
を構成する。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、胎盤血管系内の０．９％ Ｎａ
Ｃｌ溶液の通過によって得られる。別の具体的な実施形態では、前記潅流液は、培養培地
を含む。別の具体的な実施形態では、前記潅流液を処理して、赤血球を除去した。別の具
体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下で述べる免疫調節化
合物、例えば、アミノ置換イソインドリン化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組
成物は、１つまたは複数の抗がん化合物、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん
化合物をさらに含む。
【0388】
別の具体的な実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団なら
びに胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記Ｎ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形
態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団とは異な
個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は、単離胎盤潅流液および単離胎盤
潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離胎盤潅流液細胞は、異なる個体に
由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では
、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を
含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、前記単離胎盤潅流液細
胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調
節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
びに胎盤潅流液細胞を含む。より具体的な実施形態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記Ｎ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体に由来する。別のより具体的な実施形
態では、前記胎盤潅流液細胞は、前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団とは異な
個体に由来する。別の具体的な実施形態では、組成物は、単離胎盤潅流液および単離胎盤
潅流液細胞を含み、前記単離胎盤潅流液および前記単離胎盤潅流液細胞は、異なる個体に
由来する。胎盤潅流液を含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では
、前記胎盤潅流液は、少なくとも２個体に由来する胎盤潅流液を含む。胎盤潅流液細胞を
含む上記の実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、前記単離胎盤潅流液細
胞は、少なくとも２個体に由来する。別の具体的な実施形態では、前記組成物は、免疫調
節化合物を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、１つまたは複数の抗がん化合物
、例えば、以下で述べる１つまたは複数の抗がん化合物をさらに含む。
【0389】
５．１１．３段階法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の使用
本明細書で提供される、本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／
またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されるＮＫ細胞お
よび／またはＩＬＣ３細胞は、がんを有する個体、例えば、充実性腫瘍細胞および／もし
くは血液がん細胞を有する個体、またはウイルス感染症を有する人を処置する方法におい
て使用することができる。一部のそのような実施形態では、本明細書に記載の方法を使用
して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の有効投薬量は、体重１キログラム
当たり細胞１×１０４～５×１０４、５×１０４～１×１０５、１×１０５～５×１０５
、５×１０５～１×１０６、１×１０６～５×１０６、５×１０６～１×１０７個以上の
範囲である。本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞は、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法においても使用することができる。
本明細書で提供される、本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／
またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されるＮＫ細胞お
よび／またはＩＬＣ３細胞は、がんを有する個体、例えば、充実性腫瘍細胞および／もし
くは血液がん細胞を有する個体、またはウイルス感染症を有する人を処置する方法におい
て使用することができる。一部のそのような実施形態では、本明細書に記載の方法を使用
して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の有効投薬量は、体重１キログラム
当たり細胞１×１０４～５×１０４、５×１０４～１×１０５、１×１０５～５×１０５
、５×１０５～１×１０６、１×１０６～５×１０６、５×１０６～１×１０７個以上の
範囲である。本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ
３細胞は、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法においても使用することができる。
【0390】
５．１１．１．がんを有する個体の処置
一実施形態では、がん、例えば、血液がんまたは充実性腫瘍を有する個体を処置する方
法であって、治療有効量の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例え
ば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を、前記個体に投与す
ることを含む方法が本明細書で提供される。一実施形態では、がん、例えば、血液がんま
たは充実性腫瘍を有する個体を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の
方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載する３段階法を使用し
て製造されたＩＬＣ３細胞集団を、前記個体に投与することを含む方法が本明細書で提供
される。ある特定の実施形態では、個体は、ナチュラルキラー細胞の欠乏、例えば、個体
のがんに対して活性のＮＫ細胞の欠乏を有する。具体的な実施形態では、方法は、前記個
体に、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞、例えば、治療有効量の胎
盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を投与することをさらに含む。別の具体的な実
施形態では、方法は、前記個体に、有効量の免疫調節化合物、例えば、上記の免疫調節化
合物、またはサリドマイドを投与することをさらに含む。本明細書で使用される「有効量
」は、例えば、個体が罹患しているがんの１つもしくは複数の症状の、検出可能な改善、
進行の緩和、または除去をもたらす量である。
一実施形態では、がん、例えば、血液がんまたは充実性腫瘍を有する個体を処置する方
法であって、治療有効量の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例え
ば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を、前記個体に投与す
ることを含む方法が本明細書で提供される。一実施形態では、がん、例えば、血液がんま
たは充実性腫瘍を有する個体を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の
方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載する３段階法を使用し
て製造されたＩＬＣ３細胞集団を、前記個体に投与することを含む方法が本明細書で提供
される。ある特定の実施形態では、個体は、ナチュラルキラー細胞の欠乏、例えば、個体
のがんに対して活性のＮＫ細胞の欠乏を有する。具体的な実施形態では、方法は、前記個
体に、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞、例えば、治療有効量の胎
盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を投与することをさらに含む。別の具体的な実
施形態では、方法は、前記個体に、有効量の免疫調節化合物、例えば、上記の免疫調節化
合物、またはサリドマイドを投与することをさらに含む。本明細書で使用される「有効量
」は、例えば、個体が罹患しているがんの１つもしくは複数の症状の、検出可能な改善、
進行の緩和、または除去をもたらす量である。
【0391】
ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはそれらの医薬組成物の
投与は、全身的であってもよく、または局所的であってもよい。具体的な実施形態では、
投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩ
ＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ
）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細
胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、デバ
イス、マトリックスまたは足場を用いて行われる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ
細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注
射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単
離された集団またはその医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では
、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形
態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射である。具体的な実
施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはそ
の医薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ
細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、誘
導送達による。具体的な実施形態では、注射による対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩ
ＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、
超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線学により補助される。
投与は、全身的であってもよく、または局所的であってもよい。具体的な実施形態では、
投与は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩ
ＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ
）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細
胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、デバ
イス、マトリックスまたは足場を用いて行われる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ
細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注
射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単
離された集団またはその医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では
、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形
態では、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射である。具体的な実
施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはそ
の医薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ
細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、誘
導送達による。具体的な実施形態では、注射による対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩ
ＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、
超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線学により補助される。
【0392】
具体的な実施形態では、がんは、血液のがん、例えば、白血病またはリンパ腫である。
より具体的な実施形態では、がんは、急性白血病、例えば、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄
性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白
血病、前駆Ｂ急性リンパ芽球性白血病、前駆体Ｔ急性リンパ芽球性白血病、バーキット白
血病（バーキットリンパ腫）、もしくは急性混合型白血病；慢性白血病、例えば、慢性骨
髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性単球性白血病、慢性リンパ球性白血病
（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病；ヘアリー細
胞リンパ腫；Ｔ細胞性前リンパ球性白血病；またはリンパ腫、例えば、組織球性リンパ腫
、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン血症）、脾
辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫瘍（例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性
免疫グロブリン沈着症、もしくは重鎖病）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリン
パ腫）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ
腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、血管
内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、
アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ
腫、鼻型、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌
状息肉症（セザリー症候群）、皮膚原発性ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性障害（例えば
、皮膚原発性未分化大細胞リンパ腫もしくはリンパ腫様丘疹症）、血管免疫芽球性Ｔ細胞
リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫
または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫である。別の具体的な実施形態では、がん
は、多発性骨髄腫または骨髄異形成症候群である。
より具体的な実施形態では、がんは、急性白血病、例えば、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄
性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白
血病、前駆Ｂ急性リンパ芽球性白血病、前駆体Ｔ急性リンパ芽球性白血病、バーキット白
血病（バーキットリンパ腫）、もしくは急性混合型白血病；慢性白血病、例えば、慢性骨
髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性単球性白血病、慢性リンパ球性白血病
（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病；ヘアリー細
胞リンパ腫；Ｔ細胞性前リンパ球性白血病；またはリンパ腫、例えば、組織球性リンパ腫
、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン血症）、脾
辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫瘍（例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性
免疫グロブリン沈着症、もしくは重鎖病）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリン
パ腫）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ
腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、血管
内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、
アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ
腫、鼻型、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌
状息肉症（セザリー症候群）、皮膚原発性ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性障害（例えば
、皮膚原発性未分化大細胞リンパ腫もしくはリンパ腫様丘疹症）、血管免疫芽球性Ｔ細胞
リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫
または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫である。別の具体的な実施形態では、がん
は、多発性骨髄腫または骨髄異形成症候群である。
【0393】
ある特定の実施形態では、がんは、充実性腫瘍、例えば癌腫、例えば、腺癌、副腎皮質
癌、結腸腺癌、結腸直腸腺癌、結腸直腸癌、乳管細胞癌、肺癌、甲状腺癌、上咽頭癌、黒
色腫（例えば、悪性黒色腫）、非黒色腫皮膚癌、もしくは詳細不明の癌腫；類腺腫；線維
形成性小円形細胞腫瘍；内分泌腫瘍；ユーイング肉腫；生殖細胞腫瘍（例えば、精巣がん
、卵巣がん、絨毛癌、内胚葉洞腫瘍、胚細胞腫など）；肝芽腫；肝細胞癌；神経芽腫；非
横紋筋肉腫性軟部肉腫；骨肉腫；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；またはウィルムス腫瘍であ
る。別の実施形態では、充実性腫瘍は、膵がんまたは乳がんである。他の実施形態では、
充実性腫瘍は、聴神経腫瘍；星細胞腫（例えば、グレードＩ毛様細胞性星細胞腫、グレー
ドＩＩ低グレード星細胞腫、グレードＩＩＩ未分化星細胞腫、もしくはグレードＩＶ多形
性膠芽腫）；脊索腫；頭蓋咽頭腫；神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、脳室上衣腫、混合
型神経膠腫、視神経膠腫、もしくは上衣下腫）；膠芽腫；髄芽腫；髄膜腫；転移性脳腫瘍
；乏突起神経膠腫；松果体芽腫；下垂体腫瘍；原始神経外胚葉性腫瘍；またはシュワン腫
である。別の実施形態では、がんは、前立腺がんである。別の実施形態では、がんは、肝
がんである。別の実施形態では、がんは、肺がんである。別の実施形態では、がんは、腎
がんである。
癌、結腸腺癌、結腸直腸腺癌、結腸直腸癌、乳管細胞癌、肺癌、甲状腺癌、上咽頭癌、黒
色腫（例えば、悪性黒色腫）、非黒色腫皮膚癌、もしくは詳細不明の癌腫；類腺腫；線維
形成性小円形細胞腫瘍；内分泌腫瘍；ユーイング肉腫；生殖細胞腫瘍（例えば、精巣がん
、卵巣がん、絨毛癌、内胚葉洞腫瘍、胚細胞腫など）；肝芽腫；肝細胞癌；神経芽腫；非
横紋筋肉腫性軟部肉腫；骨肉腫；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；またはウィルムス腫瘍であ
る。別の実施形態では、充実性腫瘍は、膵がんまたは乳がんである。他の実施形態では、
充実性腫瘍は、聴神経腫瘍；星細胞腫（例えば、グレードＩ毛様細胞性星細胞腫、グレー
ドＩＩ低グレード星細胞腫、グレードＩＩＩ未分化星細胞腫、もしくはグレードＩＶ多形
性膠芽腫）；脊索腫；頭蓋咽頭腫；神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、脳室上衣腫、混合
型神経膠腫、視神経膠腫、もしくは上衣下腫）；膠芽腫；髄芽腫；髄膜腫；転移性脳腫瘍
；乏突起神経膠腫；松果体芽腫；下垂体腫瘍；原始神経外胚葉性腫瘍；またはシュワン腫
である。別の実施形態では、がんは、前立腺がんである。別の実施形態では、がんは、肝
がんである。別の実施形態では、がんは、肺がんである。別の実施形態では、がんは、腎
がんである。
【0394】
ある特定の実施形態では、がん、例えば、血液がんまたは充実性腫瘍を有する個体、例
えば、ナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体は、前記投与の前に骨髄移植を受けた個
体である。ある特定の実施形態では、骨髄移植は、前記がんの処置におけるものであった
。ある特定の他の実施形態では、骨髄移植は、前記がん以外の状態の処置におけるもので
あった。ある特定の実施形態では、個体は、前記骨髄移植に加えて免疫抑制剤を受けた。
ある特定の実施形態では、骨髄移植を受けたことがある個体は、前記投与のときに移植片
対宿主病（ＧＶＨＤ）の１つまたは複数の症状を示す。ある特定の実施形態では、骨髄移
植を受けたことがある個体は、ＧＶＨＤの症状が発現してしまう前に前記細胞の投与を受
ける。
えば、ナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体は、前記投与の前に骨髄移植を受けた個
体である。ある特定の実施形態では、骨髄移植は、前記がんの処置におけるものであった
。ある特定の他の実施形態では、骨髄移植は、前記がん以外の状態の処置におけるもので
あった。ある特定の実施形態では、個体は、前記骨髄移植に加えて免疫抑制剤を受けた。
ある特定の実施形態では、骨髄移植を受けたことがある個体は、前記投与のときに移植片
対宿主病（ＧＶＨＤ）の１つまたは複数の症状を示す。ある特定の実施形態では、骨髄移
植を受けたことがある個体は、ＧＶＨＤの症状が発現してしまう前に前記細胞の投与を受
ける。
【0395】
ある特定の具体的な実施形態では、がん、例えば、血液がんを有する個体は、前記投与
の前に、少なくとも１用量のＴＮＦα阻害剤、例えばＥＴＡＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標）
（Ｅｎｂｒｅｌ）を受けたことがある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記がんの
診断の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２カ月以内に前記用量
のＴＮＦα阻害剤を受けた。具体的な実施形態では、ある用量のＴＮＦα阻害剤を受けた
ことがある個体は、急性骨髄性白血病を示す。より具体的な実施形態では、ある用量のＴ
ＮＦα阻害剤を受けたことがあり、急性骨髄性白血病を示す個体は、血球の５番染色体長
腕の欠失をさらに示す。別の実施形態では、がん、例えば、血液がんを有する個体は、フ
ィラデルフィア染色体を示す。
の前に、少なくとも１用量のＴＮＦα阻害剤、例えばＥＴＡＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標）
（Ｅｎｂｒｅｌ）を受けたことがある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記がんの
診断の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２カ月以内に前記用量
のＴＮＦα阻害剤を受けた。具体的な実施形態では、ある用量のＴＮＦα阻害剤を受けた
ことがある個体は、急性骨髄性白血病を示す。より具体的な実施形態では、ある用量のＴ
ＮＦα阻害剤を受けたことがあり、急性骨髄性白血病を示す個体は、血球の５番染色体長
腕の欠失をさらに示す。別の実施形態では、がん、例えば、血液がんを有する個体は、フ
ィラデルフィア染色体を示す。
【0396】
ある特定の他の実施形態では、前記個体におけるがん、例えば、血液がんまたは充実性
腫瘍には、１つまたは複数の抗がん薬が効かない。具体的な実施形態では、がんにはＧＬ
ＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）が効かない。
腫瘍には、１つまたは複数の抗がん薬が効かない。具体的な実施形態では、がんにはＧＬ
ＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）が効かない。
【0397】
ある特定の実施形態では、前記個体におけるがん、例えば、血液がんは、少なくとも１
つの抗がん薬に応答し、この実施形態では、胎盤潅流液、単離された胎盤潅流液細胞、単
離されたナチュラルキラー細胞、例えば胎盤ナチュラルキラー細胞、例えば、胎盤由来の
中間ナチュラルキラー細胞、単離された混合ナチュラルキラー細胞、もしくは本明細書に
記載のＮＫ細胞、および／またはそれらの組合せ、ならびに任意選択で免疫調節化合物は
、補助的処置として、または前記抗がん薬との併用治療として加えられる。ある特定の他
の実施形態では、がん、例えば、血液がんを有する個体は、前記投与の前に、少なくとも
１つの抗がん薬での処置を受け、再発している。ある特定の実施形態では、処置されるこ
とになる個体は、難治性がんを有する。一実施形態では、本明細書に記載の細胞でのがん
処置方法は、がんの再発を防ぐ（例えば、予防するまたは遅延させる）。一実施形態では
、本明細書に記載のがん処置方法は、１カ月以上、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１もしくは１２カ月以上、１年以上、２年以上、３年以上、または４年以上のがん
の寛解をもたらす。
つの抗がん薬に応答し、この実施形態では、胎盤潅流液、単離された胎盤潅流液細胞、単
離されたナチュラルキラー細胞、例えば胎盤ナチュラルキラー細胞、例えば、胎盤由来の
中間ナチュラルキラー細胞、単離された混合ナチュラルキラー細胞、もしくは本明細書に
記載のＮＫ細胞、および／またはそれらの組合せ、ならびに任意選択で免疫調節化合物は
、補助的処置として、または前記抗がん薬との併用治療として加えられる。ある特定の他
の実施形態では、がん、例えば、血液がんを有する個体は、前記投与の前に、少なくとも
１つの抗がん薬での処置を受け、再発している。ある特定の実施形態では、処置されるこ
とになる個体は、難治性がんを有する。一実施形態では、本明細書に記載の細胞でのがん
処置方法は、がんの再発を防ぐ（例えば、予防するまたは遅延させる）。一実施形態では
、本明細書に記載のがん処置方法は、１カ月以上、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１もしくは１２カ月以上、１年以上、２年以上、３年以上、または４年以上のがん
の寛解をもたらす。
【0398】
一実施形態では、多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法であって、前記個体に、（
１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）前記個体における多発性骨髄腫の
処置に有効であるＮＫ細胞を投与することを含む方法が本明細書で提供される。具体的な
実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞、例えば造血幹
細胞、から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を
製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたものである。別の実施形態で
は、前記レナリドミド、メルファランおよび／またはＮＫ細胞は、互いに別々に投与され
る。多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施形態では、前
記ＮＫ細胞は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造
血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の
第１の集団を製造するステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（Ｉ
Ｌ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養し
て、細胞の第２の集団を製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を
含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を
培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５
６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であ
るナチュラルキラー細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少
なくとも８０％が生存している、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記
第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／または
マクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定
の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第
１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まな
い。
１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）前記個体における多発性骨髄腫の
処置に有効であるＮＫ細胞を投与することを含む方法が本明細書で提供される。具体的な
実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞、例えば造血幹
細胞、から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を
製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたものである。別の実施形態で
は、前記レナリドミド、メルファランおよび／またはＮＫ細胞は、互いに別々に投与され
る。多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施形態では、前
記ＮＫ細胞は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造
血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の
第１の集団を製造するステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（Ｉ
Ｌ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で、細胞の前記第１の集団を培養し
て、細胞の第２の集団を製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を
含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を
培養して、細胞の第３の集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５
６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であ
るナチュラルキラー細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少
なくとも８０％が生存している、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記
第１の培地および／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／または
マクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定
の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキ
ナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培
地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は
、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第
１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まな
い。
【0399】
別の実施形態では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を処置する方法であって
、前記個体にＮＫ細胞（単独のＩＬ２、または単独のＩＬ－１５、ＩＬ２およびＩＬ１２
およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ
１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８での前
処置により任意選択で活性化されたもの）を投与することを含み、前記ＮＫ細胞が、前記
個体におけるＡＭＬの処置に有効である方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された単離されたＮＫ細胞集団は、前記
投与の前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で前処
置されたものである。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるか
、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施
形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により
製造されたものである。ＡＭＬを有する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施
形態では、前記ＮＫ細胞は、本明細書に記載の通り、３段階法により製造される。特定の
実施形態では、前述の方法により処置されることになるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不
良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬ
の処置のためにＮＫ細胞を投与するための当技術分野において公知の方法をこの目的に適
応させることができる。例えば、（非特許文献７）；（非特許文献８）を参照されたく、
これらの参考文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられている。ある
特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非ナチュラルキラー
細胞治療に失敗したＡＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上で
あり、第１寛解期にある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細
胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、または両方でコンディショニングされて
いる。
、前記個体にＮＫ細胞（単独のＩＬ２、または単独のＩＬ－１５、ＩＬ２およびＩＬ１２
およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ
１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８での前
処置により任意選択で活性化されたもの）を投与することを含み、前記ＮＫ細胞が、前記
個体におけるＡＭＬの処置に有効である方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態
では、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された単離されたＮＫ細胞集団は、前記
投与の前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で前処
置されたものである。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞であるか
、または臍帯血造血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施
形態では、前記ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により
製造されたものである。ＡＭＬを有する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施
形態では、前記ＮＫ細胞は、本明細書に記載の通り、３段階法により製造される。特定の
実施形態では、前述の方法により処置されることになるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不
良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬ
の処置のためにＮＫ細胞を投与するための当技術分野において公知の方法をこの目的に適
応させることができる。例えば、（非特許文献７）；（非特許文献８）を参照されたく、
これらの参考文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられている。ある
特定の実施形態では、前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１回の非ナチュラルキラー
細胞治療に失敗したＡＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上で
あり、第１寛解期にある。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細
胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、または両方でコンディショニングされて
いる。
【0400】
一実施形態では、多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法であって、前記個体に、（
１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）前記個体における多発性骨髄腫の
処置に有効であるＩＬＣ３細胞を投与することを含む方法が本明細書で提供される。具体
的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造
血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造
されたものである。別の実施形態では、前記レナリドミド、メルファランおよび／または
ＩＬＣ３細胞は、互いに別々に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法の
、ある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、幹細胞動員剤およびトロンボ
ポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４
＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ、その後、幹
細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２
の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ、お
よびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いてい
る第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋
、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、前記ナチュラ
ルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存している、方法により製
造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、
白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ
（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いてい
る。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩ
Ｐ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを
欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘ
パリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）前記個体における多発性骨髄腫の
処置に有効であるＩＬＣ３細胞を投与することを含む方法が本明細書で提供される。具体
的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造
血細胞、例えば、造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前
記ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造
されたものである。別の実施形態では、前記レナリドミド、メルファランおよび／または
ＩＬＣ３細胞は、互いに別々に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を処置する方法の
、ある特定の具体的な実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は、幹細胞動員剤およびトロンボ
ポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細胞、例えば、ＣＤ３４
＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造するステップ、その後、幹
細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠いている第２
の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を製造するステップ、お
よびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠いてい
る第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の集団を製造するステッ
プを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋
、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、前記ナチュラ
ルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存している、方法により製
造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／または前記第２の培地は、
白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１アルファ
（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第３の培地は、ＬＩＦ、
ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いてい
る。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩ
Ｐ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを
欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地も、第３の培地も、ヘ
パリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
【0401】
別の実施形態では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を処置する方法であって
、前記個体にＩＬＣ３細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ
１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、
またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８での前処置により任意選択で活性化させたも
の）を投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が、前記個体のＡＭＬの処置に有効である
、方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造されたＩＬＣ３細胞集団は、前記投与の前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ま
たはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で前処置されたものである。具体的な実施形態では
、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、
造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、ＩＬＣ３細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたものである
。ＡＭＬを有する個体を処置する方法の、ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、本明細書に記載の通り、３段階法により製造される。特定の実施形態では、前述の方法
により処置されることになるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭ
Ｌを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬの処置のためにＩＬＣ３細
胞を投与するための当技術分野において公知の方法をこの目的に適応させることができる
。例えば、（非特許文献７）；（非特許文献８）を参照されたく、これらの参考文献の各
々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられている。ある特定の実施形態では、
前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ナチュラルキラー細胞治療に失敗したＡ
ＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にあ
る。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細胞を投与する前に、フ
ルダラビン、シタラビン、または両方でコンディショニングされている。
、前記個体にＩＬＣ３細胞（ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ１２およびＩＬ
１５、ＩＬ１２およびＩＬ１８、ＩＬ２およびＩＬ１２およびＩＬ１５およびＩＬ１８、
またはＩＬ２およびＩＬ１５およびＩＬ１８での前処置により任意選択で活性化させたも
の）を投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が、前記個体のＡＭＬの処置に有効である
、方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造されたＩＬＣ３細胞集団は、前記投与の前にＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ま
たはＩＬ１５のうちの１つまたは複数で前処置されたものである。具体的な実施形態では
、前記ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞であるか、または臍帯血造血細胞、例えば、
造血幹細胞から製造されたＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、ＩＬＣ３細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたものである
。ＡＭＬを有する個体を処置する方法の、ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、本明細書に記載の通り、３段階法により製造される。特定の実施形態では、前述の方法
により処置されることになるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭ
Ｌを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬの処置のためにＩＬＣ３細
胞を投与するための当技術分野において公知の方法をこの目的に適応させることができる
。例えば、（非特許文献７）；（非特許文献８）を参照されたく、これらの参考文献の各
々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられている。ある特定の実施形態では、
前記個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ナチュラルキラー細胞治療に失敗したＡ
ＭＬを有する。具体的な実施形態では、前記個体は、６５歳以上であり、第１寛解期にあ
る。具体的な実施形態では、前記個体は、前記ナチュラルキラー細胞を投与する前に、フ
ルダラビン、シタラビン、または両方でコンディショニングされている。
【0402】
ＡＭＬを有する個体を処置する方法の、他の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、
幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または
前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製
造するステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含
み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の
集団を製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員
剤およびＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の
第３の集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、
ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラ
ー細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が
生存している、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および
／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎
症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、
前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド
（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２
の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ
－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２
の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または
前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製
造するステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含
み、Ｔｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の
集団を製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員
剤およびＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の
第３の集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、
ＣＤ１６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラ
ー細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が
生存している、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および
／または前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎
症性タンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、
前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド
（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２
の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ
－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２
の培地も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
【0403】
別の実施形態では、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を有する個体を処置する方法であ
って、前記個体に、治療有効用量の（１）レナリドミド、（２）メルファラン、（３）フ
ルダラビン、および（４）前記個体における前記ＣＬＬの処置に有効であるＮＫ細胞、例
えば、本明細書に記載の３段階法により製造されたＮＫ細胞を投与することを含む方法が
本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞である
か、または臍帯血造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記Ｎ
Ｋ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたもので
ある。上記方法のいずれかについての具体的な実施形態では、前記レナリドミド、メルフ
ァラン、フルダラビンおよび増殖ＮＫ細胞は、前記個体に別々に投与される。ＣＬＬを有
する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、幹細胞
動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細
胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造する
ステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を
製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およ
びＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の
集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１
６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞
を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存し
ている、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／また
は前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タ
ンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第
３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌ
ｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地
は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地
も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
って、前記個体に、治療有効用量の（１）レナリドミド、（２）メルファラン、（３）フ
ルダラビン、および（４）前記個体における前記ＣＬＬの処置に有効であるＮＫ細胞、例
えば、本明細書に記載の３段階法により製造されたＮＫ細胞を投与することを含む方法が
本明細書で提供される。具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞である
か、または臍帯血造血幹細胞から製造されたＮＫ細胞である。別の実施形態では、前記Ｎ
Ｋ細胞は、ＮＫ細胞を製造するための本明細書に記載の３段階法により製造されたもので
ある。上記方法のいずれかについての具体的な実施形態では、前記レナリドミド、メルフ
ァラン、フルダラビンおよび増殖ＮＫ細胞は、前記個体に別々に投与される。ＣＬＬを有
する個体を処置する方法の、ある特定の具体的な実施形態では、前記ＮＫ細胞は、幹細胞
動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地中で造血幹細胞または前駆細
胞、例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞を培養して、細胞の第１の集団を製造する
ステップ、その後、幹細胞動員剤およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔ
ｐｏを欠いている第２の培地中で細胞の前記第１の集団を培養して、細胞の第２の集団を
製造するステップ、およびその後、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およ
びＬＭＷＨを欠いている第３の培地中で細胞の前記第２の集団を培養して、細胞の第３の
集団を製造するステップを含み、細胞の前記第３の集団がＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１
６－またはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋またはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞
を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも７０％または少なくとも８０％が生存し
ている、方法により製造される。ある特定の実施形態では、前記第１の培地および／また
は前記第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タ
ンパク質－１アルファ（ＭＩＰ－１α）を欠いている。ある特定の実施形態では、前記第
３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌ
ｔ－３Ｌ）を欠いている。具体的な実施形態では、前記第１の培地および前記第２の培地
は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠いており、前記第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α
、およびＦｌｔ３Ｌを欠いている。ある特定の実施形態では、第１の培地も、第２の培地
も、第３の培地も、ヘパリン、例えば低分子量ヘパリンを含まない。
【0404】
５．１１．２．腫瘍細胞増殖の抑制
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、本明細書に記載の方法を使用して製造された
ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を、前
記腫瘍細胞と近接させる、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞
と前記腫瘍細胞を接触させることを含む方法が本明細書でさらに提供される。したがって
、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、治療有効量のＮＫ細胞集団を前記腫瘍細胞と
近接させる、例えば、前記腫瘍細胞を前記ＮＫ細胞集団の細胞と接触させることを含む方
法において、複数のＮＫ細胞を使用することができる。任意選択で、単離された胎盤潅流
液または単離された胎盤潅流液細胞を、腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を
使用して製造されたＮＫ細胞と近接させる。別の具体的な実施形態では、免疫調節化合物
、例えば上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを、腫瘍細胞および／または本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と近接させ、その結果、腫瘍細胞の増殖は
、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と近接させていない同じ型の腫瘍
細胞と比較して検出可能に低減される。任意選択で、単離された胎盤潅流液または単離さ
れた胎盤潅流液細胞を、免疫調節化合物と接触または近接させた腫瘍細胞および／または
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と、近接させる。
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、本明細書に記載の方法を使用して製造された
ＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を、前
記腫瘍細胞と近接させる、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞
と前記腫瘍細胞を接触させることを含む方法が本明細書でさらに提供される。したがって
、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、治療有効量のＮＫ細胞集団を前記腫瘍細胞と
近接させる、例えば、前記腫瘍細胞を前記ＮＫ細胞集団の細胞と接触させることを含む方
法において、複数のＮＫ細胞を使用することができる。任意選択で、単離された胎盤潅流
液または単離された胎盤潅流液細胞を、腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を
使用して製造されたＮＫ細胞と近接させる。別の具体的な実施形態では、免疫調節化合物
、例えば上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを、腫瘍細胞および／または本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と近接させ、その結果、腫瘍細胞の増殖は
、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と近接させていない同じ型の腫瘍
細胞と比較して検出可能に低減される。任意選択で、単離された胎盤潅流液または単離さ
れた胎盤潅流液細胞を、免疫調節化合物と接触または近接させた腫瘍細胞および／または
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞と、近接させる。
【0405】
また、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、本明細書に記載の方法を使用して製造
されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３
細胞集団を、前記腫瘍細胞と近接させる、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造
されたＩＬＣ３細胞と前記腫瘍細胞を接触させることを含む方法が本明細書で提供される
。したがって、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団
を前記腫瘍細胞と近接させる、例えば、前記腫瘍細胞を前記ＩＬＣ３細胞集団の細胞と接
触させることを含む方法において、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができる。任意選
択で、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を、腫瘍細胞および／また
は本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞と近接させる。別の具体的な
実施形態では、免疫調節化合物、例えば上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを、
腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞と近接
させ、その結果、腫瘍細胞の増殖は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ
３細胞と近接させていない同じ型の腫瘍細胞と比較して検出可能に低減される。任意選択
で、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を、免疫調節化合物と接触ま
たは近接させた腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬ
Ｃ３細胞と、近接させる。
されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３
細胞集団を、前記腫瘍細胞と近接させる、例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造
されたＩＬＣ３細胞と前記腫瘍細胞を接触させることを含む方法が本明細書で提供される
。したがって、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団
を前記腫瘍細胞と近接させる、例えば、前記腫瘍細胞を前記ＩＬＣ３細胞集団の細胞と接
触させることを含む方法において、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができる。任意選
択で、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を、腫瘍細胞および／また
は本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞と近接させる。別の具体的な
実施形態では、免疫調節化合物、例えば上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを、
腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞と近接
させ、その結果、腫瘍細胞の増殖は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ
３細胞と近接させていない同じ型の腫瘍細胞と比較して検出可能に低減される。任意選択
で、単離された胎盤潅流液または単離された胎盤潅流液細胞を、免疫調節化合物と接触ま
たは近接させた腫瘍細胞および／または本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬ
Ｃ３細胞と、近接させる。
【0406】
細胞に関して、本明細書において、ある特定の実施形態で使用される、「接触させるこ
と」または「近接させること」は、一実施形態では、胎盤潅流液、胎盤潅流液細胞、ナチ
ュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞集団
、ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ３細胞集
団、および／または単離された混合ナチュラルキラー細胞と腫瘍細胞との直接的な物理的
、例えば細胞－細胞、接触を包含する。別の実施形態では、「接触させること」は、同じ
物理的空間内に存在することを包含し、例えば、胎盤潅流液、胎盤潅流液細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、例えば、胎盤中間ナチュラルキラー細胞、本明細書に記載のナチュラルキ
ラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞集団、本明細
書に記載のＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ
３細胞集団、および／または単離された混合ナチュラルキラー細胞は、腫瘍細胞と同じコ
ンテナ（例えば、培養皿、マルチウェルプレート）内に置かれる。別の実施形態では、胎
盤潅流液、胎盤潅流液細胞、混合ナチュラルキラー細胞、胎盤中間ナチュラルキラー細胞
、または本明細書に記載のナチュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に
従って製造されたＮＫ細胞集団、または本明細書に記載のＩＬＣ３細胞、例えば、本明細
書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ３細胞集団と、腫瘍細胞とを「接触させる
こと」は、例えば、胎盤潅流液または細胞、例えば胎盤潅流液細胞、混合ナチュラルキラ
ー細胞、ナチュラルキラー細胞、例えば胎盤中間ナチュラルキラー細胞、またはＩＬＣ３
細胞を、個体、例えば、腫瘍細胞を有するヒト、例えばがん患者に注射または注入するこ
とにより果される。免疫調節化合物および／またはサリドマイドに関して「接触させるこ
と」は、例えば、細胞と免疫調節化合物および／またはサリドマイドを互いに直接物理的
に接触させること、または同じ物理的体積（例えば、細胞培養コンテナまたは個体）の中
に置くことを意味する。
と」または「近接させること」は、一実施形態では、胎盤潅流液、胎盤潅流液細胞、ナチ
ュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞集団
、ＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ３細胞集
団、および／または単離された混合ナチュラルキラー細胞と腫瘍細胞との直接的な物理的
、例えば細胞－細胞、接触を包含する。別の実施形態では、「接触させること」は、同じ
物理的空間内に存在することを包含し、例えば、胎盤潅流液、胎盤潅流液細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、例えば、胎盤中間ナチュラルキラー細胞、本明細書に記載のナチュラルキ
ラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＮＫ細胞集団、本明細
書に記載のＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ
３細胞集団、および／または単離された混合ナチュラルキラー細胞は、腫瘍細胞と同じコ
ンテナ（例えば、培養皿、マルチウェルプレート）内に置かれる。別の実施形態では、胎
盤潅流液、胎盤潅流液細胞、混合ナチュラルキラー細胞、胎盤中間ナチュラルキラー細胞
、または本明細書に記載のナチュラルキラー細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法に
従って製造されたＮＫ細胞集団、または本明細書に記載のＩＬＣ３細胞、例えば、本明細
書に記載の３段階法に従って製造されたＩＬＣ３細胞集団と、腫瘍細胞とを「接触させる
こと」は、例えば、胎盤潅流液または細胞、例えば胎盤潅流液細胞、混合ナチュラルキラ
ー細胞、ナチュラルキラー細胞、例えば胎盤中間ナチュラルキラー細胞、またはＩＬＣ３
細胞を、個体、例えば、腫瘍細胞を有するヒト、例えばがん患者に注射または注入するこ
とにより果される。免疫調節化合物および／またはサリドマイドに関して「接触させるこ
と」は、例えば、細胞と免疫調節化合物および／またはサリドマイドを互いに直接物理的
に接触させること、または同じ物理的体積（例えば、細胞培養コンテナまたは個体）の中
に置くことを意味する。
【0407】
具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、血液がん細胞、例えば、白血病細胞またはリンパ
腫細胞である。より具体的な実施形態では、がんは、急性白血病、例えば、急性Ｔ細胞白
血病細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性骨髄芽球
性白血病細胞、急性巨核芽球性白血病細胞、前駆Ｂ急性リンパ芽球性白血病細胞、前駆体
Ｔ急性リンパ芽球性白血病細胞、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）細胞、もしく
は急性混合型白血病細胞；慢性白血病細胞、例えば、慢性骨髄性リンパ腫細胞、慢性骨髄
性白血病（ＣＭＬ）細胞、慢性単球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小
リンパ球性リンパ腫細胞、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病細胞；ヘアリー細胞リン
パ腫；Ｔ細胞性前リンパ球性白血病細胞；またはリンパ腫細胞、例えば、組織球性リンパ
腫細胞、リンパ形質細胞性リンパ腫細胞（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン
血症細胞）、脾辺縁帯リンパ腫細胞、形質細胞腫瘍細胞（例えば、形質細胞性骨髄腫細胞
、形質細胞腫細胞、単クローン性免疫グロブリン沈着症、もしくは重鎖病）、節外性辺縁
帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）細胞、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）細
胞、濾胞性リンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ
腫細胞、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫細胞、血管内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫
細胞、原発性滲出性リンパ腫細胞、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病細胞、アグレッシブＮ
Ｋ細胞白血病細胞、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫細胞、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻
型細胞、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫細胞、肝脾Ｔ細胞リンパ腫細胞、芽球性ＮＫ細胞リンパ
腫細胞、菌状息肉症（セザリー症候群）、皮膚原発性ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性障
害（例えば、皮膚原発性未分化大細胞リンパ腫もしくはリンパ腫様丘疹症）細胞、血管免
疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫細胞、末梢性Ｔ細胞リンパ腫－非特定型－細胞、未分化大細胞リ
ンパ腫細胞、ホジキンリンパ腫細胞または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫細胞で
ある。別の具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞または骨髄異形成症候
群細胞である。
腫細胞である。より具体的な実施形態では、がんは、急性白血病、例えば、急性Ｔ細胞白
血病細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性骨髄芽球
性白血病細胞、急性巨核芽球性白血病細胞、前駆Ｂ急性リンパ芽球性白血病細胞、前駆体
Ｔ急性リンパ芽球性白血病細胞、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）細胞、もしく
は急性混合型白血病細胞；慢性白血病細胞、例えば、慢性骨髄性リンパ腫細胞、慢性骨髄
性白血病（ＣＭＬ）細胞、慢性単球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小
リンパ球性リンパ腫細胞、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病細胞；ヘアリー細胞リン
パ腫；Ｔ細胞性前リンパ球性白血病細胞；またはリンパ腫細胞、例えば、組織球性リンパ
腫細胞、リンパ形質細胞性リンパ腫細胞（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン
血症細胞）、脾辺縁帯リンパ腫細胞、形質細胞腫瘍細胞（例えば、形質細胞性骨髄腫細胞
、形質細胞腫細胞、単クローン性免疫グロブリン沈着症、もしくは重鎖病）、節外性辺縁
帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）細胞、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）細
胞、濾胞性リンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ
腫細胞、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫細胞、血管内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫
細胞、原発性滲出性リンパ腫細胞、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病細胞、アグレッシブＮ
Ｋ細胞白血病細胞、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫細胞、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻
型細胞、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫細胞、肝脾Ｔ細胞リンパ腫細胞、芽球性ＮＫ細胞リンパ
腫細胞、菌状息肉症（セザリー症候群）、皮膚原発性ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性障
害（例えば、皮膚原発性未分化大細胞リンパ腫もしくはリンパ腫様丘疹症）細胞、血管免
疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫細胞、末梢性Ｔ細胞リンパ腫－非特定型－細胞、未分化大細胞リ
ンパ腫細胞、ホジキンリンパ腫細胞または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫細胞で
ある。別の具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞または骨髄異形成症候
群細胞である。
【0408】
具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、充実性腫瘍細胞、例えば癌細胞、例えば、腺癌細
胞、副腎皮質癌細胞、結腸腺癌細胞、結腸直腸腺癌細胞、結腸直腸癌細胞、乳管細胞癌細
胞、肺癌細胞、甲状腺癌細胞、上咽頭癌細胞、黒色腫細胞（例えば、悪性黒色腫細胞）、
非黒色腫皮膚癌細胞、もしくは詳細不明の癌細胞；類腺腫細胞；線維形成性小円形細胞腫
瘍細胞；内分泌腫瘍細胞；ユーイング肉腫細胞；生殖細胞腫瘍細胞（例えば、精巣がん細
胞、卵巣がん細胞、絨毛癌細胞、内胚葉洞腫瘍細胞、胚細胞腫細胞など）；肝芽腫細胞；
肝細胞癌細胞；神経芽腫細胞；非横紋筋肉腫性軟部肉腫細胞；骨肉腫細胞；網膜芽細胞腫
細胞；横紋筋肉腫細胞；またはウィルムス腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞
は、膵がん細胞または乳がん細胞である。他の実施形態では、充実性腫瘍細胞は、聴神経
腫瘍細胞；星細胞腫細胞（例えば、グレードＩ毛様細胞性星細胞腫細胞、グレードＩＩ低
グレード星細胞腫細胞、グレードＩＩＩ未分化星細胞腫細胞、もしくはグレードＩＶ多形
性膠芽腫細胞）；脊索腫細胞；頭蓋咽頭腫細胞；神経膠腫細胞（例えば、脳幹神経膠腫細
胞、脳室上衣腫細胞、混合型神経膠腫細胞、視神経膠腫細胞、もしくは上衣下腫細胞）；
膠芽腫細胞；髄芽腫細胞；髄膜腫細胞；転移性脳腫瘍細胞；乏突起神経膠腫細胞；松果体
芽腫細胞；下垂体腫瘍細胞；原始神経外胚葉性腫瘍細胞；またはシュワン腫細胞である。
別の実施形態では、腫瘍細胞は、前立腺がん細胞である。
胞、副腎皮質癌細胞、結腸腺癌細胞、結腸直腸腺癌細胞、結腸直腸癌細胞、乳管細胞癌細
胞、肺癌細胞、甲状腺癌細胞、上咽頭癌細胞、黒色腫細胞（例えば、悪性黒色腫細胞）、
非黒色腫皮膚癌細胞、もしくは詳細不明の癌細胞；類腺腫細胞；線維形成性小円形細胞腫
瘍細胞；内分泌腫瘍細胞；ユーイング肉腫細胞；生殖細胞腫瘍細胞（例えば、精巣がん細
胞、卵巣がん細胞、絨毛癌細胞、内胚葉洞腫瘍細胞、胚細胞腫細胞など）；肝芽腫細胞；
肝細胞癌細胞；神経芽腫細胞；非横紋筋肉腫性軟部肉腫細胞；骨肉腫細胞；網膜芽細胞腫
細胞；横紋筋肉腫細胞；またはウィルムス腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞
は、膵がん細胞または乳がん細胞である。他の実施形態では、充実性腫瘍細胞は、聴神経
腫瘍細胞；星細胞腫細胞（例えば、グレードＩ毛様細胞性星細胞腫細胞、グレードＩＩ低
グレード星細胞腫細胞、グレードＩＩＩ未分化星細胞腫細胞、もしくはグレードＩＶ多形
性膠芽腫細胞）；脊索腫細胞；頭蓋咽頭腫細胞；神経膠腫細胞（例えば、脳幹神経膠腫細
胞、脳室上衣腫細胞、混合型神経膠腫細胞、視神経膠腫細胞、もしくは上衣下腫細胞）；
膠芽腫細胞；髄芽腫細胞；髄膜腫細胞；転移性脳腫瘍細胞；乏突起神経膠腫細胞；松果体
芽腫細胞；下垂体腫瘍細胞；原始神経外胚葉性腫瘍細胞；またはシュワン腫細胞である。
別の実施形態では、腫瘍細胞は、前立腺がん細胞である。
【0409】
本明細書で使用される「治療に有益な」および「治療上の利点」には、例えば、腫瘍サ
イズの低下、腫瘍増殖の緩和または停止、転位性疾患の低減または予防、組織試料、例え
ば血液試料中の単位体積当たりのがん細胞数の低減、前記個体が有する特定のがんまたは
腫瘍の任意の症状の臨床的改善、個体が有する特定のがんの任意の症状の悪化の緩和また
は停止などが含まれるが、これらに限定されない。
イズの低下、腫瘍増殖の緩和または停止、転位性疾患の低減または予防、組織試料、例え
ば血液試料中の単位体積当たりのがん細胞数の低減、前記個体が有する特定のがんまたは
腫瘍の任意の症状の臨床的改善、個体が有する特定のがんの任意の症状の悪化の緩和また
は停止などが含まれるが、これらに限定されない。
【0410】
５．１１．３．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびに他の抗がん剤を使用するが
んの処置
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段
階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、１つま
たは複数の他の抗がん剤を含む抗がん治療レジメンの一部になることができる。同様に、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３
段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、
１つまたは複数の他の抗がん剤を含む抗がん治療レジメンの一部になることができる。加
えて、または代替的に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／ま
たはＩＬＣ３細胞を使用する、がんを有する個体の処置は、１つまたは複数の他の抗がん
剤を含む抗がん治療を補うために使用することができる。そのような抗がん剤は、当技術
分野において周知であり、抗炎症剤、免疫調節剤、細胞傷害性薬剤、がんワクチン、化学
療法薬、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＨＤＡＣ６ｉ（ＡＣＹ－２４１））、およびｓｉＲＮ
Ａを含む。本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および任意選択で潅流液
、潅流液細胞、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞以外のナチュラルキ
ラー細胞に加えて、がんを有する個体、例えば、腫瘍細胞を有する個体に投与することが
できる、具体的な抗がん剤には、これらに限定されるものではないが、以下のものが含ま
れる：アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；
アドリアマイシン；アドルシル；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；
酢酸アメタントロン；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギ
ナーゼ（例えば；エルウィニア・クリサン（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎ）からのも
の；Ｅｒｗｉｎａｚｅ）；アスペルリン；アバスチン（ベバシズマブ）；アザシチジン；
アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン
塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ビゼレシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブレキナルナトリ
ウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カ
ルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフ
ィンゴール；セレコキシブ（ＣＯＸ－２阻害剤）；セルビジン；クロラムブシル；シロレ
マイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド
；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；
デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセ
ル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエ
ン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；ジュアゾマイシン；エダトレキサート；エフロ
ルニチン（ｅｆｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）塩酸塩；エルサミトルシン；Ｅｌｓｐａｒ；エンロ
プラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エ
ソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸エステルナトリウム；エ
タニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ；エトプリン；ファ
ドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンリ
ン酸エステル；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリ
ウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；Ｉｄａｍｙｃｉｎ；イダル
ビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；イプロプラチン；イリノテカン；イリノ
テカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；リュープロリド酢酸塩；リアロゾー
ル塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプ
ロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；メゲストロール酢酸エステル；メレン
ゲストロール酢酸エステル；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキ
サート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカ
ルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミト
タン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オ
ルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパルガーゼ；ペリオマイシン；
ペンタムスチン；ペプロマイシ硫酸塩；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファ
ン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム
；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ
；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；
Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ；リボプリン；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチ
ン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム
塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；ス
ロフェヌル；Ｔａｂｌｏｉｄ；タリソマイシン；テコガランナトリウム；タキソテール；
テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テ
ストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；
Ｔｏｐｏｓａｒ；トレミフェンクエン酸塩；酢酸トレストロン；Ｔｒｅｘａｌｌ；リン酸
トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン
；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィ
ン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビ
ネピジン硫酸塩；硫酸ビングリシナート；硫酸ビンロイロシン；ビノレルビン酒石酸塩；
硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；およ
びゾルビシン塩酸塩。
んの処置
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段
階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、１つま
たは複数の他の抗がん剤を含む抗がん治療レジメンの一部になることができる。同様に、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３
段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、
１つまたは複数の他の抗がん剤を含む抗がん治療レジメンの一部になることができる。加
えて、または代替的に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／ま
たはＩＬＣ３細胞を使用する、がんを有する個体の処置は、１つまたは複数の他の抗がん
剤を含む抗がん治療を補うために使用することができる。そのような抗がん剤は、当技術
分野において周知であり、抗炎症剤、免疫調節剤、細胞傷害性薬剤、がんワクチン、化学
療法薬、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＨＤＡＣ６ｉ（ＡＣＹ－２４１））、およびｓｉＲＮ
Ａを含む。本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および任意選択で潅流液
、潅流液細胞、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞以外のナチュラルキ
ラー細胞に加えて、がんを有する個体、例えば、腫瘍細胞を有する個体に投与することが
できる、具体的な抗がん剤には、これらに限定されるものではないが、以下のものが含ま
れる：アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；
アドリアマイシン；アドルシル；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；
酢酸アメタントロン；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギ
ナーゼ（例えば；エルウィニア・クリサン（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎ）からのも
の；Ｅｒｗｉｎａｚｅ）；アスペルリン；アバスチン（ベバシズマブ）；アザシチジン；
アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン
塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ビゼレシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブレキナルナトリ
ウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カ
ルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフ
ィンゴール；セレコキシブ（ＣＯＸ－２阻害剤）；セルビジン；クロラムブシル；シロレ
マイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド
；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；
デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセ
ル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエ
ン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；ジュアゾマイシン；エダトレキサート；エフロ
ルニチン（ｅｆｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）塩酸塩；エルサミトルシン；Ｅｌｓｐａｒ；エンロ
プラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エ
ソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸エステルナトリウム；エ
タニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ；エトプリン；ファ
ドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンリ
ン酸エステル；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリ
ウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；Ｉｄａｍｙｃｉｎ；イダル
ビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；イプロプラチン；イリノテカン；イリノ
テカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；リュープロリド酢酸塩；リアロゾー
ル塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプ
ロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；メゲストロール酢酸エステル；メレン
ゲストロール酢酸エステル；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキ
サート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカ
ルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミト
タン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オ
ルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパルガーゼ；ペリオマイシン；
ペンタムスチン；ペプロマイシ硫酸塩；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファ
ン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム
；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ
；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；
Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ；リボプリン；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチ
ン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム
塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；ス
ロフェヌル；Ｔａｂｌｏｉｄ；タリソマイシン；テコガランナトリウム；タキソテール；
テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テ
ストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；
Ｔｏｐｏｓａｒ；トレミフェンクエン酸塩；酢酸トレストロン；Ｔｒｅｘａｌｌ；リン酸
トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン
；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィ
ン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビ
ネピジン硫酸塩；硫酸ビングリシナート；硫酸ビンロイロシン；ビノレルビン酒石酸塩；
硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；およ
びゾルビシン塩酸塩。
【0411】
他の抗がん薬には、これらに限定されるものではないが、以下のものが含まれる：２０
－ｅｐｉ－１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５－アザシチジン；５－エチニルウラシ
ル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；
アルデスロイキン；ＡＬＬ－ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；ア
ミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレ
リド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；ア
ンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側化形態形成タンパク質－１；抗アンドロゲン
剤；前立腺癌；抗エストロゲン剤；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオ
チド；グリシン酸アフィディコリン；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス
調節因子；アプリン酸；ａｒａ－ＣＤＰ－ＤＬ－ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；ア
スラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２
；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ
誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン
；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ－アレチン；ベタクラマ
イシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニ
ルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミ
ン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カ
ンプトサール（Ｃａｍｐｔｏとも呼ばれる；イリノテカン）カンプトテシン誘導体；カペ
シタビン；カルボキサミド－アミノ－トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；Ｃ
ａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナー
ゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；ＣＣ－１２２；ＣＣ－２２０；ＣＣ－４８
６；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン（ｃｈｌｏｒｌｎｓ）；クロロキノキサリ
ンスルホンアミド；シカプロスト；シス－ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類
似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ
４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クランベスシジン８１６；クリスナトール
；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラ
キノン；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン；シタラビンオクホ
スファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）
；デシタビン；デヒドロジデムニン（ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｎｍｉｎ）Ｂ；デスロレリ
ン；デキサメタゾン；デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デクスラゾ
キサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルス
ペルミン；ジヒドロ－５－アザシチジン；ジヒドロタキソール，９－；ジオキサマイシン
；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフル
リジン；ドキソルビシン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ
；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメ
ン；エミテフル；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲ
ンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキ
セメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィ
ナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン（例え
ば、Ｆｌｕｄａｒａ）；フルオロダウノルビシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉ
ｎ）塩酸塩；ホルフェニメクス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリ
ニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害
剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレン
ビスアセトアミド；ホモハリントニン（ＨＨＴ、オマセタキシンメペスクシナート）；ヒ
ペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホ
シン；イロマスタット；イマチニブ（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；イミキモ
ド；免疫賦活ペプチド；インスリン様増殖因子－１受容体阻害剤；インターフェロンアゴ
ニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン
；イポメアノール，４－；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；イルソグラジン；イソベ
ンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリ
ドＦ；ラメラリンＮ三酢酸塩；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レ
ンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病抑制因子；白血球アルファインター
フェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾ
ール；リアロゾール；直鎖状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物
；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；
ロソキサントロン；ロキソリビン；ルートテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィ
リン；細胞溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプ
ロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤
；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻
害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミトグアゾン；ミトラクトール
；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子－サポリン
；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、Ｅｒ
ｂｉｔｕｘ（セツキシマブ））；抗ＣＤ１９抗体；抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマ
ブ）；抗ＣＳ－１抗体（例えば、エロツズマブ（ＢＭＳ／ＡｂｂＶｉｅ））；抗ＣＤ３８
抗体（例えば、ダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）；抗Ｃ
Ｄ１３８抗体（例えば、インダツキシマブ（Ｂｉｏｔｅｓｔ ＡＧ Ｄｒｅｉｅｉｃｈ）
）；抗ＰＤ－１抗体；抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅ
ｃａ））；抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ（ＩＰＨ２２０１；Ｉｎｎａｔｅ
Ｐｈａｒｍａ））；抗ＤＬＬ４抗体（例えば、デミシズマブ（Ｏｎｃｏｍｅｄ／Ｃｅｌｇ
ｅｎｅ））；抗ＤＬＬ４・抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体；抗ＲＳＰＯ３抗体；抗ＴＩＧＩＴ
抗体；ＩＣＯＳアゴニスト抗体；抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例えば、モ
ノクローナル抗体３Ｆ８またはｃｈ１４．１８）；抗ＥｒｂＢ２抗体（例えば、ハーセプ
チン）；ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋マイコバクテリウム細胞
壁ｓｋ；モピダモール；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細
胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ－アセチルジナリン；Ｎ－置換ベンズアミド；ナファレリ
ン；ナグレスティップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（
ｎａｐａｖｉｎ）；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネ
リドロン酸；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；窒素酸化物抗酸化
剤；ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；オブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商
標））；Ｏ６－ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；
オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘
導剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン（例えば、Ｆｌｏｘａｔｉｎ）；
オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；
パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフ
ェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ
硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；パーフル
ブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸；
ホスファターゼ阻害剤；ピシバニル；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシ
ム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体；白金
化合物；白金－トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレド
ニゾン；プロピルビスアクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プ
ロテインＡ系免疫調節物質；プロテインキナーゼＣ阻害剤；微細藻類の、プロテインキナ
ーゼＣ阻害剤；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリ
ラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキ
シエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；
ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ－ＧＡ
Ｐ阻害剤；脱メチル化されたレテリプチン；レニウムＲｅ １８６エチドロネート；リゾ
キシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビ
キノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィト
ールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ １模倣物；セムスチン；老化由来阻害剤１；センス
オリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプテイ
トナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメ
ジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；
スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スクアラミン；スチピアミド；ストロメリシン
阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作動性腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ（
ｓｕｒａｄｉｓｔａ）；スラミン；スワインソニン；タリムスチン；タモキシフェンメチ
オジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリ
リウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テニポシド；テトラクロロデカオキシド
；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン
模倣物；チマルファシン；チモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホ
ルモン；エチルエチオプルプリンすず；チラパザミン；チタノセンビクロリド（ｂｉｃｈ
ｌｏｒｉｄｅ）；トプセンチン；トレミフェン；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチ
ルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツ
ロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チロホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；泌
尿生殖器洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリ
オリンＢ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）ベラレゾール；ベラミン；ベルジン；ベル
テポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）；ビタキシン；
ボロゾール；Ｗｅｌｃｏｖｏｒｉｎ（ロイコボリン）；Ｘｅｌｏｄａ（カペシタビン）；
ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマー。
－ｅｐｉ－１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５－アザシチジン；５－エチニルウラシ
ル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；
アルデスロイキン；ＡＬＬ－ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；ア
ミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレ
リド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；ア
ンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側化形態形成タンパク質－１；抗アンドロゲン
剤；前立腺癌；抗エストロゲン剤；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオ
チド；グリシン酸アフィディコリン；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス
調節因子；アプリン酸；ａｒａ－ＣＤＰ－ＤＬ－ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；ア
スラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２
；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ
誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン
；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ－アレチン；ベタクラマ
イシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニ
ルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミ
ン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カ
ンプトサール（Ｃａｍｐｔｏとも呼ばれる；イリノテカン）カンプトテシン誘導体；カペ
シタビン；カルボキサミド－アミノ－トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；Ｃ
ａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナー
ゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；ＣＣ－１２２；ＣＣ－２２０；ＣＣ－４８
６；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン（ｃｈｌｏｒｌｎｓ）；クロロキノキサリ
ンスルホンアミド；シカプロスト；シス－ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類
似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ
４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クランベスシジン８１６；クリスナトール
；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラ
キノン；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン；シタラビンオクホ
スファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）
；デシタビン；デヒドロジデムニン（ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｎｍｉｎ）Ｂ；デスロレリ
ン；デキサメタゾン；デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デクスラゾ
キサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルス
ペルミン；ジヒドロ－５－アザシチジン；ジヒドロタキソール，９－；ジオキサマイシン
；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフル
リジン；ドキソルビシン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ
；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメ
ン；エミテフル；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲ
ンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキ
セメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィ
ナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン（例え
ば、Ｆｌｕｄａｒａ）；フルオロダウノルビシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉ
ｎ）塩酸塩；ホルフェニメクス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリ
ニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害
剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレン
ビスアセトアミド；ホモハリントニン（ＨＨＴ、オマセタキシンメペスクシナート）；ヒ
ペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホ
シン；イロマスタット；イマチニブ（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；イミキモ
ド；免疫賦活ペプチド；インスリン様増殖因子－１受容体阻害剤；インターフェロンアゴ
ニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン
；イポメアノール，４－；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；イルソグラジン；イソベ
ンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリ
ドＦ；ラメラリンＮ三酢酸塩；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レ
ンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病抑制因子；白血球アルファインター
フェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾ
ール；リアロゾール；直鎖状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物
；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；
ロソキサントロン；ロキソリビン；ルートテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィ
リン；細胞溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプ
ロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤
；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻
害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミトグアゾン；ミトラクトール
；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子－サポリン
；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、Ｅｒ
ｂｉｔｕｘ（セツキシマブ））；抗ＣＤ１９抗体；抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマ
ブ）；抗ＣＳ－１抗体（例えば、エロツズマブ（ＢＭＳ／ＡｂｂＶｉｅ））；抗ＣＤ３８
抗体（例えば、ダラツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ／Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）；抗Ｃ
Ｄ１３８抗体（例えば、インダツキシマブ（Ｂｉｏｔｅｓｔ ＡＧ Ｄｒｅｉｅｉｃｈ）
）；抗ＰＤ－１抗体；抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅ
ｃａ））；抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例えば、モナリズマブ（ＩＰＨ２２０１；Ｉｎｎａｔｅ
Ｐｈａｒｍａ））；抗ＤＬＬ４抗体（例えば、デミシズマブ（Ｏｎｃｏｍｅｄ／Ｃｅｌｇ
ｅｎｅ））；抗ＤＬＬ４・抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体；抗ＲＳＰＯ３抗体；抗ＴＩＧＩＴ
抗体；ＩＣＯＳアゴニスト抗体；抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例えば、モ
ノクローナル抗体３Ｆ８またはｃｈ１４．１８）；抗ＥｒｂＢ２抗体（例えば、ハーセプ
チン）；ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋マイコバクテリウム細胞
壁ｓｋ；モピダモール；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細
胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ－アセチルジナリン；Ｎ－置換ベンズアミド；ナファレリ
ン；ナグレスティップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（
ｎａｐａｖｉｎ）；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネ
リドロン酸；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；窒素酸化物抗酸化
剤；ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；オブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商
標））；Ｏ６－ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；
オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘
導剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン（例えば、Ｆｌｏｘａｔｉｎ）；
オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；
パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフ
ェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ
硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；パーフル
ブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸；
ホスファターゼ阻害剤；ピシバニル；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシ
ム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体；白金
化合物；白金－トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレド
ニゾン；プロピルビスアクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プ
ロテインＡ系免疫調節物質；プロテインキナーゼＣ阻害剤；微細藻類の、プロテインキナ
ーゼＣ阻害剤；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリ
ラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキ
シエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；
ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ－ＧＡ
Ｐ阻害剤；脱メチル化されたレテリプチン；レニウムＲｅ １８６エチドロネート；リゾ
キシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビ
キノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィト
ールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ １模倣物；セムスチン；老化由来阻害剤１；センス
オリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプテイ
トナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメ
ジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；
スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スクアラミン；スチピアミド；ストロメリシン
阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作動性腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ（
ｓｕｒａｄｉｓｔａ）；スラミン；スワインソニン；タリムスチン；タモキシフェンメチ
オジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリ
リウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テニポシド；テトラクロロデカオキシド
；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン
模倣物；チマルファシン；チモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホ
ルモン；エチルエチオプルプリンすず；チラパザミン；チタノセンビクロリド（ｂｉｃｈ
ｌｏｒｉｄｅ）；トプセンチン；トレミフェン；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチ
ルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツ
ロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チロホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；泌
尿生殖器洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリ
オリンＢ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）ベラレゾール；ベラミン；ベルジン；ベル
テポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）；ビタキシン；
ボロゾール；Ｗｅｌｃｏｖｏｒｉｎ（ロイコボリン）；Ｘｅｌｏｄａ（カペシタビン）；
ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマー。
【0412】
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段
階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、１つま
たは複数の免疫チェックポイントモジュレーターを含む抗がん治療レジメンの一部になる
ことができる。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫
チェックポイント分子、例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊
死因子受容体関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ヘル
ペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメ
イン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリ
ンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレ
ッサー（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、
ならびに／またはＰＤ－Ｌ１を調節する。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイン
ト分子は、抗体またはその抗原結合断片である。
階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、１つま
たは複数の免疫チェックポイントモジュレーターを含む抗がん治療レジメンの一部になる
ことができる。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫
チェックポイント分子、例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊
死因子受容体関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ヘル
ペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメ
イン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリ
ンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレ
ッサー（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、
ならびに／またはＰＤ－Ｌ１を調節する。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイン
ト分子は、抗体またはその抗原結合断片である。
【0413】
ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイ
ント分子のアゴニストである。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、
ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質（Ｇ
ＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）；誘導性Ｔ細
胞共刺激分子）および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）である
。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗
原結合断片である。
ント分子のアゴニストである。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、
ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質（Ｇ
ＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）；誘導性Ｔ細
胞共刺激分子）および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）である
。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗
原結合断片である。
【0414】
ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイ
ント分子のアンタゴニストである。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子
は、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性
化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細
胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球
アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、ならびに／またはＰＤ－Ｌ１である。ある特
定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗原結合断
片である。
ント分子のアンタゴニストである。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子
は、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性
化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細
胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球
アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、ならびに／またはＰＤ－Ｌ１である。ある特
定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗原結合断
片である。
【0415】
ある特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗
原結合断片である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＰＤ－１
に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体結合断片
は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６
、ＯＮＯ－４５３８；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、小野薬品工業株式会
社）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ランブロリズマブ、ＭＫ－３
４７５；Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１；Ｃｕｒｅｔｅｃｈ、Ｍｅｄｉｖ
ａｔｉｏｎ）；ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺ
ｅｎｅｃａ）；ＰＤＲ－００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＨＲ１２１０、またはＩＮＣＳ
ＨＲ１２１０；Ｉｎｃｙｔｅ、Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ）である。ある特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。ある特定の実施形
態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤ
Ｉ４７３６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＭＳ－９３６５５９（
ＭＤＸ－１１０５；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、アベルマブ（ＭＳＢ
００１０７１８Ｃ；Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）、またはアテゾリズマブ
（ＭＰＤＬ－３２８０Ａ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｒｏｃｈｅ）である。ある特定の実施形
態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＬＡＧ－３に結合する。ある特定の実施形態で
は、ＬＡＧ－３に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒ
ｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＧＳＫ２８３１７８１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔ
ｈＫｌｉｎｅ）、またはＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。ある特定の実施形態
では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＴＬＡ－４に結合する。ある特定の実施形態で
は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体またはその抗体結合断片は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯ
Ｙ（商標）、ＢＭＳ－７３４０１６、ＭＤＸ０１０、ＭＤＸ－１０１；Ｂｒｉｓｔｏｌ－
Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、またはトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩ
ｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。ある特定の実施形態では、抗体またはそ
の抗体結合断片は、ＯＸ４０に結合する。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０に結合する
抗体またはその抗体結合断片は、ＭＥＤＩ６４６９（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺ
ｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ０５６２（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ま
たはＫＨＫ４０８３（協和発酵キリン株式会社）である。ある特定の実施形態では、抗体
またはその抗体結合断片は、ＧＩＴＲに結合する。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲに
結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃｓ）またはＭＥＤＩ１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）であ
る。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ
）に結合する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に結合する抗体また
はその抗体結合断片は、ＰＦ－２５６６（ＰＦ－０５０８２５６６；Ｐｆｉｚｅｒ）、ま
たはウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）
である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ２７に結合する
。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７に結合する抗体またはその抗体結合断片は、バルリ
ルマブ（ｖａｒｉｌｕｍａｂ）（ＣＤＸ－１１２７；Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｉｅ
ｓ）である。
原結合断片である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＰＤ－１
に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体結合断片
は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６
、ＯＮＯ－４５３８；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、小野薬品工業株式会
社）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ランブロリズマブ、ＭＫ－３
４７５；Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１；Ｃｕｒｅｔｅｃｈ、Ｍｅｄｉｖ
ａｔｉｏｎ）；ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺ
ｅｎｅｃａ）；ＰＤＲ－００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＨＲ１２１０、またはＩＮＣＳ
ＨＲ１２１０；Ｉｎｃｙｔｅ、Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ）である。ある特定の実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。ある特定の実施形
態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤ
Ｉ４７３６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＭＳ－９３６５５９（
ＭＤＸ－１１０５；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、アベルマブ（ＭＳＢ
００１０７１８Ｃ；Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）、またはアテゾリズマブ
（ＭＰＤＬ－３２８０Ａ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｒｏｃｈｅ）である。ある特定の実施形
態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＬＡＧ－３に結合する。ある特定の実施形態で
は、ＬＡＧ－３に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒ
ｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＧＳＫ２８３１７８１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔ
ｈＫｌｉｎｅ）、またはＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。ある特定の実施形態
では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＴＬＡ－４に結合する。ある特定の実施形態で
は、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体またはその抗体結合断片は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯ
Ｙ（商標）、ＢＭＳ－７３４０１６、ＭＤＸ０１０、ＭＤＸ－１０１；Ｂｒｉｓｔｏｌ－
Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、またはトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩ
ｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。ある特定の実施形態では、抗体またはそ
の抗体結合断片は、ＯＸ４０に結合する。ある特定の実施形態では、ＯＸ４０に結合する
抗体またはその抗体結合断片は、ＭＥＤＩ６４６９（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺ
ｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ０５６２（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ま
たはＫＨＫ４０８３（協和発酵キリン株式会社）である。ある特定の実施形態では、抗体
またはその抗体結合断片は、ＧＩＴＲに結合する。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲに
結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃｓ）またはＭＥＤＩ１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）であ
る。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ
）に結合する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に結合する抗体また
はその抗体結合断片は、ＰＦ－２５６６（ＰＦ－０５０８２５６６；Ｐｆｉｚｅｒ）、ま
たはウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）
である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ２７に結合する
。ある特定の実施形態では、ＣＤ２７に結合する抗体またはその抗体結合断片は、バルリ
ルマブ（ｖａｒｉｌｕｍａｂ）（ＣＤＸ－１１２７；Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｉｅ
ｓ）である。
【0416】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例え
ば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有
する個体の処置は、レナリドミドまたはポマリドミドを含む抗がん治療レジメンの一部で
ある。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、
例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がん
を有する個体の処置は、ＨＤＡＣ阻害剤を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特
定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明
細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体
の処置は、抗ＣＳ－１抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態
では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の
３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗
ＣＤ３８抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＣＤ１３８抗
体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の
方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造
されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＰＤ－１抗体を含む抗が
ん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用し
て製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細
胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む抗がん治療レジ
メンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造され
たＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使
用する、がんを有する個体の処置は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を含む抗がん治療レジメンの一部
である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞
、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、が
んを有する個体の処置は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、ＲＩＴＵＸＡＮ（登
録商標））を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用
して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＣＣ－１２２を含
む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を
使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された
ＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＣＣ－２２０を含む抗がん治療レ
ジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造さ
れたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を
使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＤＬＬ４抗体（例えば、デミシズマブ）を含む
抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＤＬＬ４抗体・抗ＶＥＧＦ二重特
異性抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用し
て製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＲＳＰＯ３抗体を
含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法
を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造され
たＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む抗がん
治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して
製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞
集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＩＣＯＳアゴニスト抗体を含む抗がん治療
レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造
されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団
を使用する、がんを有する個体の処置は、ホモハリントニン（例えば、オマセタキシンメ
ペスクシナート）を含む抗がん治療レジメンの一部である。
ば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有
する個体の処置は、レナリドミドまたはポマリドミドを含む抗がん治療レジメンの一部で
ある。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、
例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がん
を有する個体の処置は、ＨＤＡＣ阻害剤を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特
定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明
細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体
の処置は、抗ＣＳ－１抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態
では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の
３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗
ＣＤ３８抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使
用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＣＤ１３８抗
体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の
方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造
されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＰＤ－１抗体を含む抗が
ん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用し
て製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細
胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む抗がん治療レジ
メンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造され
たＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使
用する、がんを有する個体の処置は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を含む抗がん治療レジメンの一部
である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞
、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、が
んを有する個体の処置は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、ＲＩＴＵＸＡＮ（登
録商標））を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用
して製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＣＣ－１２２を含
む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を
使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造された
ＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＣＣ－２２０を含む抗がん治療レ
ジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造さ
れたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を
使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＤＬＬ４抗体（例えば、デミシズマブ）を含む
抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＤＬＬ４抗体・抗ＶＥＧＦ二重特
異性抗体を含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用し
て製造されたＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＲＳＰＯ３抗体を
含む抗がん治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法
を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造され
たＮＫ細胞集団を使用する、がんを有する個体の処置は、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む抗がん
治療レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して
製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞
集団を使用する、がんを有する個体の処置は、ＩＣＯＳアゴニスト抗体を含む抗がん治療
レジメンの一部である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造
されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団
を使用する、がんを有する個体の処置は、ホモハリントニン（例えば、オマセタキシンメ
ペスクシナート）を含む抗がん治療レジメンの一部である。
【0417】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞を使用する
、がんを有する個体の処置は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）についての抗
がん治療レジメンの一部である。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して
製造されたＩＬＣ３細胞を使用する、がんを有する個体の処置は、抗体依存性細胞介在性
細胞傷害（ＡＤＣＣ）についての抗がん治療レジメンの一部である。一実施形態では、Ａ
ＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞と併用での１つまたは複数の抗体（例えば、上段に記載の抗体）の投与を含む
。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または他のＢ細胞悪性腫瘍（リンパ腫および白血病
）、神経芽腫、黒色腫、乳がんおよび頭頸部がんを含むがこれらに限定されない、いくつ
かの型のがんを、そのようなＡＤＣＣ法を使用して処置することができる。具体的な実施
形態では、ＡＤＣＣ療法は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞と併用での、次の抗体のうちの１つまたは複数の投与を含む：抗Ｅ
ＧＦＲ抗体（例えば、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ））、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０
抗体（例えば、リツキシマブ）、抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例えば、モ
ノクローナル抗体３Ｆ８もしくはｃｈ１４．１８）、または抗ＥｒＢ２抗体（例えば、ハ
ーセプチン）。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製
造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ３３抗体の投与を含む。
一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ２０抗体の投与を含む。一実施形態では
、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／また
はＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ１３８抗体の投与を含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレ
ジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞と併用での抗ＣＤ３２抗体の投与を含む。
、がんを有する個体の処置は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）についての抗
がん治療レジメンの一部である。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して
製造されたＩＬＣ３細胞を使用する、がんを有する個体の処置は、抗体依存性細胞介在性
細胞傷害（ＡＤＣＣ）についての抗がん治療レジメンの一部である。一実施形態では、Ａ
ＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／またはＩ
ＬＣ３細胞と併用での１つまたは複数の抗体（例えば、上段に記載の抗体）の投与を含む
。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または他のＢ細胞悪性腫瘍（リンパ腫および白血病
）、神経芽腫、黒色腫、乳がんおよび頭頸部がんを含むがこれらに限定されない、いくつ
かの型のがんを、そのようなＡＤＣＣ法を使用して処置することができる。具体的な実施
形態では、ＡＤＣＣ療法は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞と併用での、次の抗体のうちの１つまたは複数の投与を含む：抗Ｅ
ＧＦＲ抗体（例えば、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ））、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０
抗体（例えば、リツキシマブ）、抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例えば、モ
ノクローナル抗体３Ｆ８もしくはｃｈ１４．１８）、または抗ＥｒＢ２抗体（例えば、ハ
ーセプチン）。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製
造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ３３抗体の投与を含む。
一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ２０抗体の投与を含む。一実施形態では
、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／また
はＩＬＣ３細胞と併用での抗ＣＤ１３８抗体の投与を含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレ
ジメンは、本明細書に記載の方法を使用し製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞と併用での抗ＣＤ３２抗体の投与を含む。
【0418】
５．１１．４．ウイルス感染症の処置
別の実施形態では、ウイルス感染症を有する個体を処置する方法であって、治療有効量
の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載する
３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を前記個体に投与することを含む方法が本明
細書で提供される。別の実施形態では、ウイルス感染症を有する個体を処置する方法であ
って、治療有効量の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば
、本明細書に記載する３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団を前記個体に投与
することを含む方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、個体は、ナチュ
ラルキラー細胞の欠乏、例えば、個体のウイルス感染症に対して活性のＮＫ細胞または他
の自然リンパ球系細胞の欠乏を有する。ある特定の具体的な実施形態では、前記投与は、
単離された胎盤潅流液、単離された胎盤潅流液細胞、単離されたナチュラルキラー細胞、
例えば胎盤ナチュラルキラー細胞、例えば胎盤由来の中間ナチュラルキラー細胞、単離さ
れた混合ナチュラルキラー細胞、および／またはこれらの組合せのうちの１つまたは複数
を個体に投与することをさらに含む。ある特定の具体的な実施形態では、本明細書に記載
の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、前記投与の前に、
免疫調節化合物、例えば、上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドと接触または近接
させる。ある特定の他の具体的な実施形態では、前記投与は、本明細書に記載の方法を使
用して製造された前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に加えて、免疫調節化合物、
例えば、上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを前記個体に投与することを含み、
前記量は、例えば、前記ウイルス感染症の１つもしくは複数の症状の検出可能な改善、そ
のような症状の進行の緩和、またはそのような症状の除去をもたらす量である。具体的な
実施形態では、ウイルス感染症は、アデノウイルス科、ピコルナウイルス科、ヘルペスウ
イルス科、ヘパドナウイルス科、フラビウイルス科、レトロウイルス科、オルトミクソウ
イルス科、パラミクソウイルス科、パピローマウイルス科（Ｐａｐｉｌｏｍｍａｖｉｒｉ
ｄａｅ）、ラブドウイルス科、またはトガウイルス科のウイルスによる感染症である。よ
り具体的な実施形態では、前記ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、コクサッ
キーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、ポリオウイルス、エプスタイン・バーウイ
ルス（ＥＢＶ）、単純ヘルペス１型（ＨＳＶ１）、単純ヘルペス２型（ＨＳＶ２）、ヒト
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ８）、帯状疱疹（
ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ）ウイルス（水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）
もしくは帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ）ウイルス）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型
肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、
インフルエンザウイルス（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウ
イルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、もしくはソゴトウイルス）、麻疹ウイルス、ムン
プスウイルス、パラインフルエンザウイルス、パピローマウイルス、狂犬病ウイルス、ま
たは風疹ウイルスである。
別の実施形態では、ウイルス感染症を有する個体を処置する方法であって、治療有効量
の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、例えば、本明細書に記載する
３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団を前記個体に投与することを含む方法が本明
細書で提供される。別の実施形態では、ウイルス感染症を有する個体を処置する方法であ
って、治療有効量の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞、例えば
、本明細書に記載する３段階法を使用して製造されたＩＬＣ３細胞集団を前記個体に投与
することを含む方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、個体は、ナチュ
ラルキラー細胞の欠乏、例えば、個体のウイルス感染症に対して活性のＮＫ細胞または他
の自然リンパ球系細胞の欠乏を有する。ある特定の具体的な実施形態では、前記投与は、
単離された胎盤潅流液、単離された胎盤潅流液細胞、単離されたナチュラルキラー細胞、
例えば胎盤ナチュラルキラー細胞、例えば胎盤由来の中間ナチュラルキラー細胞、単離さ
れた混合ナチュラルキラー細胞、および／またはこれらの組合せのうちの１つまたは複数
を個体に投与することをさらに含む。ある特定の具体的な実施形態では、本明細書に記載
の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、前記投与の前に、
免疫調節化合物、例えば、上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドと接触または近接
させる。ある特定の他の具体的な実施形態では、前記投与は、本明細書に記載の方法を使
用して製造された前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に加えて、免疫調節化合物、
例えば、上記の免疫調節化合物、またはサリドマイドを前記個体に投与することを含み、
前記量は、例えば、前記ウイルス感染症の１つもしくは複数の症状の検出可能な改善、そ
のような症状の進行の緩和、またはそのような症状の除去をもたらす量である。具体的な
実施形態では、ウイルス感染症は、アデノウイルス科、ピコルナウイルス科、ヘルペスウ
イルス科、ヘパドナウイルス科、フラビウイルス科、レトロウイルス科、オルトミクソウ
イルス科、パラミクソウイルス科、パピローマウイルス科（Ｐａｐｉｌｏｍｍａｖｉｒｉ
ｄａｅ）、ラブドウイルス科、またはトガウイルス科のウイルスによる感染症である。よ
り具体的な実施形態では、前記ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、コクサッ
キーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、ポリオウイルス、エプスタイン・バーウイ
ルス（ＥＢＶ）、単純ヘルペス１型（ＨＳＶ１）、単純ヘルペス２型（ＨＳＶ２）、ヒト
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ８）、帯状疱疹（
ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ）ウイルス（水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）
もしくは帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ）ウイルス）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型
肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、
インフルエンザウイルス（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウ
イルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、もしくはソゴトウイルス）、麻疹ウイルス、ムン
プスウイルス、パラインフルエンザウイルス、パピローマウイルス、狂犬病ウイルス、ま
たは風疹ウイルスである。
【0419】
他のより具体的な実施形態では、前記ウイルスは、アデノウイルスＡ種、血清型１２、
１８もしくは３１；アデノウイルスＢ種、血清型３、７、１１、１４、１６、３４、３５
もしくは５０；アデノウイルスＣ種、血清型１、２、５もしくは６；Ｄ種、血清型８、９
、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、
２９、３０、３２、３３、３６、３７、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４
７、４８、４９もしくは５１；Ｅ種、血清型４；またはＦ種、血清型４０もしくは４１で
ある。
１８もしくは３１；アデノウイルスＢ種、血清型３、７、１１、１４、１６、３４、３５
もしくは５０；アデノウイルスＣ種、血清型１、２、５もしくは６；Ｄ種、血清型８、９
、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、
２９、３０、３２、３３、３６、３７、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４
７、４８、４９もしくは５１；Ｅ種、血清型４；またはＦ種、血清型４０もしくは４１で
ある。
【0420】
ある特定の他のより具体的な実施形態では、ウイルスは、アポイウイルス（ＡＰＯＩＶ
）、アロア（Ａｒｏａ）ウイルス（ＡＲＯＡＶ）、バガザ（ｂａｇａｚａ）ウイルス（Ｂ
ＡＧＶ）、バンジウイルス（ＢＡＮＶ）、ボウボイ（Ｂｏｕｂｏｕｉ）ウイルス（ＢＯＵ
Ｖ）、カシパコア（Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅ）ウイルス（ＣＰＣＶ）、カレー島ウイルス（
ＣＩＶ）、カウボーンリッジウイルス（ＣＲＶ）、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、エッジ
ヒルウイルス（ＥＨＶ）、ガジェッツガリー（Ｇａｄｇｅｔｓ Ｇｕｌｌｙ）ウイルス（
ＧＧＹＶ）、イリェウスウイルス（ＩＬＨＶ）、イスラエルシチメンチョウ髄膜脳脊髄炎
ウイルス（ＩＴＶ）、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）、ジュグラウイルス（ＪＵＧＶ）、フ
ティアパウイルス（ＪＵＴＶ）、カダムウイルス（ＫＡＤＶ）、ケドウゴウウイルス（Ｋ
ＥＤＶ）、ココベラウイルス（ＫＯＫＶ）、クタンゴウイルス（ＫＯＵＶ）、キャサヌー
ル森林病ウイルス（ＫＦＤＶ）、ランガットウイルス（ＬＧＴＶ）、メアバンウイルス（
ＭＥＡＶ）、モドックウイルス（ＭＯＤＶ）、モンタナ筋炎白質脳炎ウイルス（ＭＭＬＶ
）、マレー渓谷脳炎ウイルス（ＭＶＥＶ）、ウンタヤウイルス（ＮＴＡＶ）、オムスク出
血熱ウイルス（ＯＨＦＶ）、ポワサンウイルス（ＰＯＷＶ）、リオブラボーウイルス（Ｒ
ＢＶ）、ロイヤルファームウイルス（ＲＦＶ）、サボヤウイルス（ＳＡＢＶ）、セントル
イス脳炎ウイルス（ＳＬＥＶ）、サル・ヴィエジャウイルス（ＳＶＶ）、サン・パーリー
タウイルス（ＳＰＶ）、ソマレズリーフ（Ｓａｕｍａｒｅｚ Ｒｅｅｆ）ウイルス（ＳＲ
ＥＶ）、セピック（Ｓｅｐｉｋ）ウイルス（ＳＥＰＶ）、テンブスウイルス（ＴＭＵＶ）
、マダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、チューレーニーウイルス（ＴＹＵＶ）、ウガン
ダＳウイルス（ＵＧＳＶ）、ウスツウイルス（ＵＳＵＶ）、ウェッセルスブロンウイルス
（ＷＥＳＳＶ）、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、ヤウンデウイルス（ＹＡＯＶ）、
黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）、ヨコセウイルス（ＹＯＫＶ）、またはジカウイルス（ＺＩＫ
Ｖ）である。
）、アロア（Ａｒｏａ）ウイルス（ＡＲＯＡＶ）、バガザ（ｂａｇａｚａ）ウイルス（Ｂ
ＡＧＶ）、バンジウイルス（ＢＡＮＶ）、ボウボイ（Ｂｏｕｂｏｕｉ）ウイルス（ＢＯＵ
Ｖ）、カシパコア（Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅ）ウイルス（ＣＰＣＶ）、カレー島ウイルス（
ＣＩＶ）、カウボーンリッジウイルス（ＣＲＶ）、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、エッジ
ヒルウイルス（ＥＨＶ）、ガジェッツガリー（Ｇａｄｇｅｔｓ Ｇｕｌｌｙ）ウイルス（
ＧＧＹＶ）、イリェウスウイルス（ＩＬＨＶ）、イスラエルシチメンチョウ髄膜脳脊髄炎
ウイルス（ＩＴＶ）、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）、ジュグラウイルス（ＪＵＧＶ）、フ
ティアパウイルス（ＪＵＴＶ）、カダムウイルス（ＫＡＤＶ）、ケドウゴウウイルス（Ｋ
ＥＤＶ）、ココベラウイルス（ＫＯＫＶ）、クタンゴウイルス（ＫＯＵＶ）、キャサヌー
ル森林病ウイルス（ＫＦＤＶ）、ランガットウイルス（ＬＧＴＶ）、メアバンウイルス（
ＭＥＡＶ）、モドックウイルス（ＭＯＤＶ）、モンタナ筋炎白質脳炎ウイルス（ＭＭＬＶ
）、マレー渓谷脳炎ウイルス（ＭＶＥＶ）、ウンタヤウイルス（ＮＴＡＶ）、オムスク出
血熱ウイルス（ＯＨＦＶ）、ポワサンウイルス（ＰＯＷＶ）、リオブラボーウイルス（Ｒ
ＢＶ）、ロイヤルファームウイルス（ＲＦＶ）、サボヤウイルス（ＳＡＢＶ）、セントル
イス脳炎ウイルス（ＳＬＥＶ）、サル・ヴィエジャウイルス（ＳＶＶ）、サン・パーリー
タウイルス（ＳＰＶ）、ソマレズリーフ（Ｓａｕｍａｒｅｚ Ｒｅｅｆ）ウイルス（ＳＲ
ＥＶ）、セピック（Ｓｅｐｉｋ）ウイルス（ＳＥＰＶ）、テンブスウイルス（ＴＭＵＶ）
、マダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、チューレーニーウイルス（ＴＹＵＶ）、ウガン
ダＳウイルス（ＵＧＳＶ）、ウスツウイルス（ＵＳＵＶ）、ウェッセルスブロンウイルス
（ＷＥＳＳＶ）、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、ヤウンデウイルス（ＹＡＯＶ）、
黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）、ヨコセウイルス（ＹＯＫＶ）、またはジカウイルス（ＺＩＫ
Ｖ）である。
【0421】
他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞、ならびに任
意選択で胎盤潅流液および／または潅流液細胞は、１つまたは複数の他の抗ウイルス剤を
含む抗ウイルス治療レジメンの一部として、ウイルス感染症を有する個体に投与される。
ウイルス感染症を有する個体に投与することができる具体的な抗ウイルス剤としては、イ
ミキモド、ポドフィロックス、ポドフィリン、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、
レチコロス（ｒｅｔｉｃｏｌｏｓ）、ノノキシノール－９、アシクロビル、ファムシクロ
ビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドホビル；アマンタジン、リマンタジン；リ
バビリン；ザナマビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ）およびオセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｕｍ
ａｖｉｒ）；プロテアーゼ阻害剤類、例えば、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビ
ルもしくはサキナビル；ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤類、例えば、ジダノシン、ラミブ
ジン、スタブジン、ザルシタビンもしくはジドブジン；および非ヌクレオシド逆転写酵素
阻害剤類、例えば、ネビラピンもしくはエファビレンツが挙げられるが、これらに限定さ
れない。
意選択で胎盤潅流液および／または潅流液細胞は、１つまたは複数の他の抗ウイルス剤を
含む抗ウイルス治療レジメンの一部として、ウイルス感染症を有する個体に投与される。
ウイルス感染症を有する個体に投与することができる具体的な抗ウイルス剤としては、イ
ミキモド、ポドフィロックス、ポドフィリン、インターフェロンアルファ（ＩＦＮα）、
レチコロス（ｒｅｔｉｃｏｌｏｓ）、ノノキシノール－９、アシクロビル、ファムシクロ
ビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドホビル；アマンタジン、リマンタジン；リ
バビリン；ザナマビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ）およびオセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｕｍ
ａｖｉｒ）；プロテアーゼ阻害剤類、例えば、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビ
ルもしくはサキナビル；ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤類、例えば、ジダノシン、ラミブ
ジン、スタブジン、ザルシタビンもしくはジドブジン；および非ヌクレオシド逆転写酵素
阻害剤類、例えば、ネビラピンもしくはエファビレンツが挙げられるが、これらに限定さ
れない。
【0422】
５．１１．５．ＩＬＣ３細胞についての他の処置使用
本明細書で提供されるすべての方法において使用することができるＩＬＣ３細胞が本明
細書で提供される。ＩＬＣ３細胞を使用することができる例示的方法は、下記の態様で開
示される。
本明細書で提供されるすべての方法において使用することができるＩＬＣ３細胞が本明
細書で提供される。ＩＬＣ３細胞を使用することができる例示的方法は、下記の態様で開
示される。
【0423】
別の態様では、化学療法後に消化管を修復する方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個
体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法によるものであ
る、方法が本明細書で提供される。
体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法によるものであ
る、方法が本明細書で提供される。
【0424】
別の態様では、放射線から個体を保護する方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個体に
投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたも
のである、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、骨髄移植の補助剤として使用される。
投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたも
のである、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前記ＩＬＣ３細胞は
、骨髄移植の補助剤として使用される。
【0425】
別の態様では、個体の胸腺を再構成する方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個体に投
与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたもの
である、方法が本明細書で提供される。
与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたもの
である、方法が本明細書で提供される。
【0426】
別の態様では、個体における病原体に対する防御免疫を促進する方法であって、複数の
ＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階
法により製造されたものである、方法が本明細書で提供される。ある特定の態様では、病
原体に対する防御免疫の促進は、腸管感染症を処置するために行われる。ある特定の態様
では、病原体に対する防御免疫の促進は、腸管感染症を予防するために行われる。ある特
定の態様では、腸管感染症は、シトロバクター・ローデンチウム（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ）である。
ＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階
法により製造されたものである、方法が本明細書で提供される。ある特定の態様では、病
原体に対する防御免疫の促進は、腸管感染症を処置するために行われる。ある特定の態様
では、病原体に対する防御免疫の促進は、腸管感染症を予防するために行われる。ある特
定の態様では、腸管感染症は、シトロバクター・ローデンチウム（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ）である。
【0427】
別の態様では、腫瘍拒絶方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
【0428】
別の態様では、臓器形成中に組織の完全性を維持する方法であって、複数のＩＬＣ３細
胞を個体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製
造されたものである、方法が本明細書で提供される。
胞を個体に投与することを含み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製
造されたものである、方法が本明細書で提供される。
【0429】
別の態様では、組織修復方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
【0430】
別の態様では、炎症調節方法であって、複数のＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
み、前記ＩＬＣ３細胞が本明細書に記載の３段階法により製造されたものである、方法が
本明細書で提供される。
【0431】
５．１１．６．投与
細胞、例えば、胎盤潅流液細胞、例えば、胎盤潅流液からの有核細胞、混合ナチュラル
キラー細胞、ＩＬＣ３細胞および／または単離されたナチュラルキラー細胞、例えば本明
細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団の数の決定と、免疫調節化合物
、例えば免疫調節化合物、またはサリドマイドの量の決定とを、互いに独立に行うことが
できる。
細胞、例えば、胎盤潅流液細胞、例えば、胎盤潅流液からの有核細胞、混合ナチュラル
キラー細胞、ＩＬＣ３細胞および／または単離されたナチュラルキラー細胞、例えば本明
細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細胞集団の数の決定と、免疫調節化合物
、例えば免疫調節化合物、またはサリドマイドの量の決定とを、互いに独立に行うことが
できる。
【0432】
ＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与
は、全身的であってもよく、または局所的であってもよい。具体的な実施形態では、投与
は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投
与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞お
よび／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス
、マトリックスまたは足場を用いて行われる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射に
よる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離さ
れた集団またはその医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では、Ｎ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態で
は、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射である。具体的な実施形
態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医
薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、誘導送
達による。具体的な実施形態では、注射による対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音
波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線学により補助される。
は、全身的であってもよく、または局所的であってもよい。具体的な実施形態では、投与
は、非経口的である。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投
与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞お
よび／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス
、マトリックスまたは足場を用いて行われる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、注射に
よる。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離さ
れた集団またはその医薬組成物の投与は、カテーテルによる。具体的な実施形態では、Ｎ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態で
は、局所注射は、充実性腫瘍（例えば、肉腫）中への直接的注射である。具体的な実施形
態では、対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医
薬組成物の投与は、注射器による注射による。具体的な実施形態では、対象へのＮＫ細胞
および／もしくはＩＬＣ３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、誘導送
達による。具体的な実施形態では、注射による対象へのＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ
３細胞の単離された集団またはその医薬組成物の投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音
波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線学により補助される。
【0433】
５．１１．６．１．細胞の投与
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、ウイルス感染症、がん、または腫瘍細胞を有する
個体、例えば、腫瘍細胞、充実性腫瘍または血液がんを有する個体、例えばがん患者、に
対する検出可能な治療上の利点をもたらす任意の量または数、例えば有効量で、前記個体
に使用、例えば投与される。そのような細胞をそのような個体に細胞の絶対数により投与
することができ、例えば、前記個体に、約、少なくとも約、または最大で約１×１０５、
５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０
８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、または１×１０１１個の、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を投与
することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ
細胞および／またはＩＬＣ３細胞をそのような個体に細胞の相対数により投与することが
でき、例えば、前記個体に、前記個体の１キログラム当たり、約、少なくとも約、または
最大で約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、
１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、また
は１×１０１１個の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／また
はＩＬＣ３細胞を投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞をそのような個体に細胞の相対数
により投与することができ、例えば、前記個体に、前記個体の１キログラム当たり、約、
少なくとも約、または最大で約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×
１０７、５×１０７、１×１０８、または５×１０８個の、本明細書に記載の方法を使用
して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を投与することができる。本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、そのような
個体に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞ならびに任意選択で胎盤潅流液細胞および／またはナチュラルキラー細胞（本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外のもの）の数
と、前記個体における腫瘍細胞の数（例えば、推定数）との近似比に従って投与すること
ができる。例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞を、前記個体における腫瘍細胞の数に対して約、少なくとも約、または最大
で約１：１、１：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０
：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０
：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０
：１、９５：１または１００：１の比で、前記個体に投与することができる。そのような
個体における腫瘍細胞の数は、例えば、個体に由来する組織の試料、例えば、血液試料、
生検試料などにおける腫瘍細胞の数を計数することにより、推定することができる。例え
ば充実性腫瘍についての、具体的な実施形態では、前記計数は、近似腫瘍量を得るために
腫瘍（単数または複数）の撮像と組み合わせて行われる。具体的な実施形態では、免疫調
節化合物またはサリドマイド、例えば、有効量の免疫調節化合物またはサリドマイドが、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、任意
選択で胎盤潅流液細胞および／またはナチュラルキラー細胞（本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外のもの）に加えて、個体に投
与される。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞集団は、ウイルス感染症、がん、または腫瘍細胞を有する
個体、例えば、腫瘍細胞、充実性腫瘍または血液がんを有する個体、例えばがん患者、に
対する検出可能な治療上の利点をもたらす任意の量または数、例えば有効量で、前記個体
に使用、例えば投与される。そのような細胞をそのような個体に細胞の絶対数により投与
することができ、例えば、前記個体に、約、少なくとも約、または最大で約１×１０５、
５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０
８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、または１×１０１１個の、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を投与
することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ
細胞および／またはＩＬＣ３細胞をそのような個体に細胞の相対数により投与することが
でき、例えば、前記個体に、前記個体の１キログラム当たり、約、少なくとも約、または
最大で約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、
１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、また
は１×１０１１個の、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／また
はＩＬＣ３細胞を投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞をそのような個体に細胞の相対数
により投与することができ、例えば、前記個体に、前記個体の１キログラム当たり、約、
少なくとも約、または最大で約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×
１０７、５×１０７、１×１０８、または５×１０８個の、本明細書に記載の方法を使用
して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を投与することができる。本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、そのような
個体に、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細
胞ならびに任意選択で胎盤潅流液細胞および／またはナチュラルキラー細胞（本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外のもの）の数
と、前記個体における腫瘍細胞の数（例えば、推定数）との近似比に従って投与すること
ができる。例えば、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／または
ＩＬＣ３細胞を、前記個体における腫瘍細胞の数に対して約、少なくとも約、または最大
で約１：１、１：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０
：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０
：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０
：１、９５：１または１００：１の比で、前記個体に投与することができる。そのような
個体における腫瘍細胞の数は、例えば、個体に由来する組織の試料、例えば、血液試料、
生検試料などにおける腫瘍細胞の数を計数することにより、推定することができる。例え
ば充実性腫瘍についての、具体的な実施形態では、前記計数は、近似腫瘍量を得るために
腫瘍（単数または複数）の撮像と組み合わせて行われる。具体的な実施形態では、免疫調
節化合物またはサリドマイド、例えば、有効量の免疫調節化合物またはサリドマイドが、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、任意
選択で胎盤潅流液細胞および／またはナチュラルキラー細胞（本明細書に記載の方法を使
用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外のもの）に加えて、個体に投
与される。
【0434】
ある特定の実施形態では、腫瘍細胞の増殖を例えば個体において抑制する方法；自身の
ナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置の方法；またはウイルス感染症を有する
個体の処置の方法；またはがんを有する個体、例えば、腫瘍細胞、血液がんもしくは充実
性腫瘍を有する個体の処置の方法は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞と胎盤潅流液および／または胎盤潅流液細胞の１つまたは
複数との組合せと、腫瘍細胞を近接させること、またはそのような組合せを前記個体に投
与することを含む。具体的な実施形態では、方法は、腫瘍細胞を免疫調節化合物もしくは
サリドマイドと近接させること、または前記個体に免疫調節化合物もしくはサリドマイド
を投与することをさらに含む。
ナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置の方法；またはウイルス感染症を有する
個体の処置の方法；またはがんを有する個体、例えば、腫瘍細胞、血液がんもしくは充実
性腫瘍を有する個体の処置の方法は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細
胞および／またはＩＬＣ３細胞と胎盤潅流液および／または胎盤潅流液細胞の１つまたは
複数との組合せと、腫瘍細胞を近接させること、またはそのような組合せを前記個体に投
与することを含む。具体的な実施形態では、方法は、腫瘍細胞を免疫調節化合物もしくは
サリドマイドと近接させること、または前記個体に免疫調節化合物もしくはサリドマイド
を投与することをさらに含む。
【0435】
具体的な実施形態では、例えば、自身のナチュラルキラー細胞の欠乏（例えば、ＮＫ細
胞数の欠乏、またはがん、腫瘍もしくはウイルス感染細胞に対するＮＫ細胞の反応性の欠
乏）を有する個体の処置、またはがんもしくはウイルス感染症を有する個体の処置、また
は腫瘍細胞増殖の抑制は、単離された胎盤潅流液細胞もしくは胎盤潅流液が補充された、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞を、
前記腫瘍細胞と近接させること、またはそのようなＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞を前記個体に投与することを含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造された、１ミリリットル当たり約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×
１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個
以上のＮＫ細胞、または本明細書に記載の方法を使用して製造された１×１０４、５×１
０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１
×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１
０１１個以上のＮＫ細胞に、１ミリリットル当たり約、もしくは少なくとも約１×１０４
、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１
０７、１×１０８、５×１０８個以上の単離された胎盤潅流液細胞、または１×１０４、
５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０
７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、
１×１０１１個以上の単離された胎盤潅流液細胞が補充される。他のより具体的な実施形
態では、本明細書に記載の方法を使用して製造された約１×１０４、５×１０４、１×１
０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５
×１０８個以上のＮＫ細胞、または本明細書に記載の方法を使用して製造された１×１０
４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×
１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１
０、１×１０１１個以上のＮＫ細胞に、約、もしくは少なくとも約１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０
、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３０
０、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８０
０、８５０、９００、９５０または１０００ｍＬの潅流液、または約１単位の潅流液が補
充される。
胞数の欠乏、またはがん、腫瘍もしくはウイルス感染細胞に対するＮＫ細胞の反応性の欠
乏）を有する個体の処置、またはがんもしくはウイルス感染症を有する個体の処置、また
は腫瘍細胞増殖の抑制は、単離された胎盤潅流液細胞もしくは胎盤潅流液が補充された、
本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞を、
前記腫瘍細胞と近接させること、またはそのようなＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞を前記個体に投与することを含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法を使
用して製造された、１ミリリットル当たり約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×
１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個
以上のＮＫ細胞、または本明細書に記載の方法を使用して製造された１×１０４、５×１
０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１
×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１
０１１個以上のＮＫ細胞に、１ミリリットル当たり約、もしくは少なくとも約１×１０４
、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１
０７、１×１０８、５×１０８個以上の単離された胎盤潅流液細胞、または１×１０４、
５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０
７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、
１×１０１１個以上の単離された胎盤潅流液細胞が補充される。他のより具体的な実施形
態では、本明細書に記載の方法を使用して製造された約１×１０４、５×１０４、１×１
０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５
×１０８個以上のＮＫ細胞、または本明細書に記載の方法を使用して製造された１×１０
４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×
１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１
０、１×１０１１個以上のＮＫ細胞に、約、もしくは少なくとも約１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０
、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３０
０、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８０
０、８５０、９００、９５０または１０００ｍＬの潅流液、または約１単位の潅流液が補
充される。
【0436】
別の具体的な実施形態では、自身のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置；
がんを有する個体の処置；ウイルス感染症を有する個体の処置；または腫瘍細胞増殖の抑
制は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞と腫瘍細胞を近接させること、またはそのようなＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞を個体に投与することを含み、この場合、前記細胞に、接着胎盤細胞、例えば、接着胎
盤幹細胞または複能性細胞、例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２０
０＋組織培養プラスチック接着胎盤細胞が補充される。具体的な実施形態では、本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に、１ミリリッ
トル当たり約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０
６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上の接着胎盤幹細胞、または
１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０
７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５
×１０１０、１×１０１１個以上の接着胎盤細胞、例えば、接着胎盤幹細胞もしくは複能
性細胞が補充される。
がんを有する個体の処置；ウイルス感染症を有する個体の処置；または腫瘍細胞増殖の抑
制は、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞と腫瘍細胞を近接させること、またはそのようなＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細
胞を個体に投与することを含み、この場合、前記細胞に、接着胎盤細胞、例えば、接着胎
盤幹細胞または複能性細胞、例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２０
０＋組織培養プラスチック接着胎盤細胞が補充される。具体的な実施形態では、本明細書
に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に、１ミリリッ
トル当たり約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０
６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個以上の接着胎盤幹細胞、または
１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０
７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５
×１０１０、１×１０１１個以上の接着胎盤細胞、例えば、接着胎盤幹細胞もしくは複能
性細胞が補充される。
【0437】
別の具体的な態様では、自身のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置；がん
を有する個体の処置；ウイルス感染症を有する個体の処置；または腫瘍細胞増殖の抑制は
、免疫調節化合物またはサリドマイドと、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞とを併用して行われ、この場合、前記細胞に、条件培
地、例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋組織培養プラスチッ
ク接着胎盤細胞により条件付けられた培地、例えば、潅流液１単位当たり、または本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞１０４、１
０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、もしくは１０１１個当たり、０．１
、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．１、０．８、０．９、１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０ｍＬの幹細胞条件培養培地が補充される。ある特定の実施形
態では、組織培養プラスチック接着胎盤細胞は、（特許文献８）および（特許文献１５）
に記載されている複能性接着胎盤細胞であり、前記特許文献の開示は、それら全体が参照
により本明細書に組み入れられている。別の具体的な実施形態では、方法は、腫瘍細胞を
免疫調節化合物もしくはサリドマイドと近接させること、または個体に免疫調節化合物も
しくはサリドマイドを投与することをさらに含む。
を有する個体の処置；ウイルス感染症を有する個体の処置；または腫瘍細胞増殖の抑制は
、免疫調節化合物またはサリドマイドと、本明細書に記載の方法を使用して製造されたＮ
Ｋ細胞および／またはＩＬＣ３細胞とを併用して行われ、この場合、前記細胞に、条件培
地、例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋組織培養プラスチッ
ク接着胎盤細胞により条件付けられた培地、例えば、潅流液１単位当たり、または本明細
書に記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞１０４、１
０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、もしくは１０１１個当たり、０．１
、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．１、０．８、０．９、１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０ｍＬの幹細胞条件培養培地が補充される。ある特定の実施形
態では、組織培養プラスチック接着胎盤細胞は、（特許文献８）および（特許文献１５）
に記載されている複能性接着胎盤細胞であり、前記特許文献の開示は、それら全体が参照
により本明細書に組み入れられている。別の具体的な実施形態では、方法は、腫瘍細胞を
免疫調節化合物もしくはサリドマイドと近接させること、または個体に免疫調節化合物も
しくはサリドマイドを投与することをさらに含む。
【0438】
本明細書に記載の方法を使用して製造された前記ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
に胎盤潅流液細胞が補充される、自身のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置
、がんを有する個体の処置、ウイルス感染症を有する個体の処置、または腫瘍細胞増殖の
抑制である、別の具体的な実施形態では、潅流液細胞は、前記近接が行われる前に、ある
期間、インターロイキン２（ＩＬ－２）と近接される。ある特定の実施形態では、前記期
間は、前記近接を行う前約、少なくとも、または最大で、１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、
３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６または４８時間である。
に胎盤潅流液細胞が補充される、自身のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の処置
、がんを有する個体の処置、ウイルス感染症を有する個体の処置、または腫瘍細胞増殖の
抑制である、別の具体的な実施形態では、潅流液細胞は、前記近接が行われる前に、ある
期間、インターロイキン２（ＩＬ－２）と近接される。ある特定の実施形態では、前記期
間は、前記近接を行う前約、少なくとも、または最大で、１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、
３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６または４８時間である。
【0439】
本明細書に記載の方法を使用して製造されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、な
らびに任意選択で潅流液または潅流液細胞は、ウイルス感染症を有する個体、がんを有す
る個体、または腫瘍細胞を有する個体に、抗がん治療の過程で１回投与することができ、
あるいは、治療中に複数回、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２もしくは２３時
間に１回、または１、２、３、４、５、６もしくは７日に１回、または１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、２４、３６週間以上に１回投与することができる。細胞およ
び免疫調節化合物またはサリドマイドが使用される実施形態では、免疫調節化合物または
サリドマイド、および細胞または潅流液を個体に、一緒に、例えば、同じ製剤で投与する
ことができ、別々に、例えば、別々の製剤で、ほぼ同時に投与することができ、または別
々に、例えば、異なる投薬スケジュールで、もしくはその日の異なる時点で投与すること
ができる。同様に、細胞および抗ウイルス化合物または抗がん化合物が使用される実施形
態では、抗ウイルス化合物または抗がん化合物、および細胞または潅流液を個体に、一緒
に、例えば、同じ製剤で投与することができ、別々に、例えば、別々の製剤で、ほぼ同時
に投与することができ、または別々に、例えば、異なる投薬スケジュールで、もしくはそ
の日の異なる時点で投与することができる。本明細書に記載の方法を使用して製造された
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびに潅流液または潅流液細胞を、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、潅流液、また
は潅流液細胞が、過去に個体に投与されたことがあるかどうかに関係なく、投与すること
ができる。
らびに任意選択で潅流液または潅流液細胞は、ウイルス感染症を有する個体、がんを有す
る個体、または腫瘍細胞を有する個体に、抗がん治療の過程で１回投与することができ、
あるいは、治療中に複数回、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２もしくは２３時
間に１回、または１、２、３、４、５、６もしくは７日に１回、または１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、２４、３６週間以上に１回投与することができる。細胞およ
び免疫調節化合物またはサリドマイドが使用される実施形態では、免疫調節化合物または
サリドマイド、および細胞または潅流液を個体に、一緒に、例えば、同じ製剤で投与する
ことができ、別々に、例えば、別々の製剤で、ほぼ同時に投与することができ、または別
々に、例えば、異なる投薬スケジュールで、もしくはその日の異なる時点で投与すること
ができる。同様に、細胞および抗ウイルス化合物または抗がん化合物が使用される実施形
態では、抗ウイルス化合物または抗がん化合物、および細胞または潅流液を個体に、一緒
に、例えば、同じ製剤で投与することができ、別々に、例えば、別々の製剤で、ほぼ同時
に投与することができ、または別々に、例えば、異なる投薬スケジュールで、もしくはそ
の日の異なる時点で投与することができる。本明細書に記載の方法を使用して製造された
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびに潅流液または潅流液細胞を、本明細書に
記載の方法を使用して製造されたＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、潅流液、また
は潅流液細胞が、過去に個体に投与されたことがあるかどうかに関係なく、投与すること
ができる。
【0440】
６．キット
本明細書では、例えば、本明細書に記載の方法によって産生されるＮＫ細胞および／ま
たはＩＬＣ３細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して産生したＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞集団を含む組成物のような、本明細書に記載の組成物の１つまたは
複数で満たされた１つまたは複数のコンテナを含む医薬パックまたはキットが提供される
。そのようなコンテナに任意選択で付随するのは、医薬品または生物学的製品の製造、使
用または販売を規制する政府機関によって規定された書式の通知であり、その通知は、機
関によるヒトへの投与のための製造、使用または販売の承認を反映するものである。
本明細書では、例えば、本明細書に記載の方法によって産生されるＮＫ細胞および／ま
たはＩＬＣ３細胞、例えば本明細書に記載の３段階法を使用して産生したＮＫ細胞および
／またはＩＬＣ３細胞集団を含む組成物のような、本明細書に記載の組成物の１つまたは
複数で満たされた１つまたは複数のコンテナを含む医薬パックまたはキットが提供される
。そのようなコンテナに任意選択で付随するのは、医薬品または生物学的製品の製造、使
用または販売を規制する政府機関によって規定された書式の通知であり、その通知は、機
関によるヒトへの投与のための製造、使用または販売の承認を反映するものである。
【0441】
本明細書に包含されるキットは、本明細書に記載の方法、例えば、腫瘍細胞の増殖を抑
制する方法および／または、例えば、血液癌のようながんを治療する方法、および／また
はウイルス感染を治療する方法に従って使用することができる。一実施形態では、キット
は、１つまたは複数のコンテナの中に、本明細書に記載の方法またはその組成物によって
産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む。具体的な実施形態では、本明細
書に記載の３段階方法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団、ま
たはその組成物を含むキットが本明細書において提供される。
制する方法および／または、例えば、血液癌のようながんを治療する方法、および／また
はウイルス感染を治療する方法に従って使用することができる。一実施形態では、キット
は、１つまたは複数のコンテナの中に、本明細書に記載の方法またはその組成物によって
産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む。具体的な実施形態では、本明細
書に記載の３段階方法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団、ま
たはその組成物を含むキットが本明細書において提供される。
【実施例0442】
７．実施例
【実施例0443】
７．１．実施例１：造血幹細胞または前駆細胞からナチュラルキラー細胞を産生する３
段階法
ＣＤ３４＋細胞は、示された日数間、以下の培地処方で培養され、細胞数、細胞生存率
、ナチュラルキラー細胞分化の特徴付けおよび機能評価のアセスメントのために、細胞の
一定分量が採取される。
段階法
ＣＤ３４＋細胞は、示された日数間、以下の培地処方で培養され、細胞数、細胞生存率
、ナチュラルキラー細胞分化の特徴付けおよび機能評価のアセスメントのために、細胞の
一定分量が採取される。
【0444】
段階１培地：４．５Ｕ／ｍＬの低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、２５ｎｇ／ｍＬの組換
えヒトトロンボポエチン（ＴＰＯ）、２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／
ｍＬ組換えヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）、２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－７、０．０５ｎ
ｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒト顆粒球コロニ
ー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組換えヒト顆粒球マクロファ
ージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）（５００倍）、０．１０％ゲンタマイシン、およ
び１から１０μｍ ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）を補充した９０％幹細胞増
殖培地（ＳＣＧＭ）（ＣｅｌｌＧｒｏ（登録商標））、１０％ヒト血清－ＡＢ。
えヒトトロンボポエチン（ＴＰＯ）、２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／
ｍＬ組換えヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）、２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－７、０．０５ｎ
ｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒト顆粒球コロニ
ー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組換えヒト顆粒球マクロファ
ージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）（５００倍）、０．１０％ゲンタマイシン、およ
び１から１０μｍ ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）を補充した９０％幹細胞増
殖培地（ＳＣＧＭ）（ＣｅｌｌＧｒｏ（登録商標））、１０％ヒト血清－ＡＢ。
【0445】
段階２培地：４．５Ｕ／ｍＬの低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、２５ｎｇ／ｍＬ組換え
ヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＳＣＦ、２５ｎｇ／ｍＬ組換え体ヒトＩＬ－
７、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－１５、０．０５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５
００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧ－ＣＳＦ（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組
換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（５００倍）、０．１０％ゲンタマイシン、および１から１０μｍ
ＳＲ１を補充した９０％ＳＣＧＭ、１０％ヒト血清－ＡＢ。
ヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＳＣＦ、２５ｎｇ／ｍＬ組換え体ヒトＩＬ－
７、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－１５、０．０５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５
００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧ－ＣＳＦ（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組
換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（５００倍）、０．１０％ゲンタマイシン、および１から１０μｍ
ＳＲ１を補充した９０％ＳＣＧＭ、１０％ヒト血清－ＡＢ。
【0446】
段階３培地：２２ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＳＣＦ、１０００Ｕ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－
２、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－１５、０．
０５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧ－Ｃ
ＳＦ（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（５００倍）、および０．
１０％ゲンタマイシンを補充した９０％ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、１０％ヒト血清－Ａ
Ｂ、０．０２５ｍＭ ２－メルカプトエタノール（５５ｍＭ）。
２、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－１５、０．
０５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－６（５００倍）、０．２５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧ－Ｃ
ＳＦ（５０倍）、０．０１ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（５００倍）、および０．
１０％ゲンタマイシンを補充した９０％ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、１０％ヒト血清－Ａ
Ｂ、０．０２５ｍＭ ２－メルカプトエタノール（５５ｍＭ）。
【0447】
０日目に、段階１培地内に３×１０４細胞／ｍＬで細胞を播種し、細胞をＣＤ３４＋お
よびＣＤ４５＋計数による純度ならびに７ＡＡＤ染色による生存率について試験する。５
日目に、細胞を計数し、段階１培地を用いて、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
７日目に、細胞を計数し、段階１培地を用いて、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する
。
よびＣＤ４５＋計数による純度ならびに７ＡＡＤ染色による生存率について試験する。５
日目に、細胞を計数し、段階１培地を用いて、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
７日目に、細胞を計数し、段階１培地を用いて、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する
。
【0448】
１０日目に、細胞を計数し、段階２培地中で１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
１２日目に、細胞を計数し、段階２培地中で３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
１２日目に、細胞を計数し、段階２培地中で３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
【0449】
あるいは、１４日目まで以下のプロトコールを使用する：０日目に細胞を段階１培地中
７．５×１０３細胞／ｍＬで播種し、細胞をＣＤ３４＋およびＣＤ４５＋計数による純度
および７ＡＡＤ染色による生存率について試験する。７日目に、細胞を計数し、段階１培
地で３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。９日目に、細胞を計数し、段階２培地で３
×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１２日目に、細胞を計数し、段階２培地中で３×
１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
７．５×１０３細胞／ｍＬで播種し、細胞をＣＤ３４＋およびＣＤ４５＋計数による純度
および７ＡＡＤ染色による生存率について試験する。７日目に、細胞を計数し、段階１培
地で３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。９日目に、細胞を計数し、段階２培地で３
×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１２日目に、細胞を計数し、段階２培地中で３×
１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
【0450】
スピナーフラスコ内での動的分化のために、１４日目に細胞を遠心分離して濃縮し、計
数し、段階３培地中で５×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１７日目に、細胞を遠心
分離し、計数し、段階３培地中で７．５×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。２１日目
に、細胞を遠心分離し、計数し、ＣＤ５６、ＣＤ３、ＣＤ１６およびＣＤ９４について表
現型分析し、７ＡＡＤ染色により生存率についてアッセイし、段階３培地中に１×１０６
細胞／ｍＬの濃度に播種する。２４日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細
胞／ｍＬの濃度に播種する。２５日目から２７日目まで、１日当たり５ｍＬの段階３培地
ずつ、容量を追加する。２８日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍ
Ｌの濃度に播種する。３１日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬ
の濃度に播種する。３２日目から３４日目まで、１日当たり５ｍＬの段階３培地ずつ、容
量を追加する。３５日目に、細胞を収穫し、計数し、表現型分析し、細胞傷害性について
アッセイする。
数し、段階３培地中で５×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１７日目に、細胞を遠心
分離し、計数し、段階３培地中で７．５×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。２１日目
に、細胞を遠心分離し、計数し、ＣＤ５６、ＣＤ３、ＣＤ１６およびＣＤ９４について表
現型分析し、７ＡＡＤ染色により生存率についてアッセイし、段階３培地中に１×１０６
細胞／ｍＬの濃度に播種する。２４日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細
胞／ｍＬの濃度に播種する。２５日目から２７日目まで、１日当たり５ｍＬの段階３培地
ずつ、容量を追加する。２８日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍ
Ｌの濃度に播種する。３１日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬ
の濃度に播種する。３２日目から３４日目まで、１日当たり５ｍＬの段階３培地ずつ、容
量を追加する。３５日目に、細胞を収穫し、計数し、表現型分析し、細胞傷害性について
アッセイする。
【0451】
静的分化のために、１４日目に、細胞を遠心分離して濃縮し、計数し、段階３培地中で
３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１７日目に、細胞を計数し、段階３培地中で３
×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１９日目に、細胞を計数し、段階３培地中で３×
１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。２１日目に、細胞を遠心分離し、計数し、ＣＤ５６
、ＣＤ３、ＣＤ１６、およびＣＤ９４について表現型分析し、７ＡＡＤ染色により生存率
についてアッセイし、段階３培地中で５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種する。２４日目
に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で７．５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種
する。２６日目に、細胞を計数し、段階３培地中で７．５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播
種する。２８日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種
する。３１日目に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬの
濃度に播種する。３３日目に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で１×１０６細
胞／ｍＬの濃度に播種する。３５日目に、細胞を収穫し、計数し、表現型分析し、細胞傷
害性についてアッセイする。
３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１７日目に、細胞を計数し、段階３培地中で３
×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１９日目に、細胞を計数し、段階３培地中で３×
１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。２１日目に、細胞を遠心分離し、計数し、ＣＤ５６
、ＣＤ３、ＣＤ１６、およびＣＤ９４について表現型分析し、７ＡＡＤ染色により生存率
についてアッセイし、段階３培地中で５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種する。２４日目
に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で７．５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種
する。２６日目に、細胞を計数し、段階３培地中で７．５×１０６細胞／ｍＬの濃度に播
種する。２８日目に、細胞を計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬの濃度に播種
する。３１日目に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で１×１０６細胞／ｍＬの
濃度に播種する。３３日目に、細胞を遠心分離し、計数し、段階３培地中で１×１０６細
胞／ｍＬの濃度に播種する。３５日目に、細胞を収穫し、計数し、表現型分析し、細胞傷
害性についてアッセイする。
【0452】
収穫のために、細胞を４００×ｇで７分間スピンさせ、その後、等しい容量のＰｌａｓ
ｍａｌｙｔｅ Ａ中にペレットを懸濁する。懸濁液を４００×ｇで７分間スピンさせ、得
られたペレットを１０％ＨＳＡ（ｗ／ｖ）、６０％ Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ Ａ（ｖ／ｖ
）中に標的細胞濃度で懸濁させる。次いで、細胞を７０μｍのメッシュに通し、最終コン
テナに充填し、細胞のアリコートを生存率、細胞傷害性、純度および細胞数について試験
し、残りをパッケージする。
ｍａｌｙｔｅ Ａ中にペレットを懸濁する。懸濁液を４００×ｇで７分間スピンさせ、得
られたペレットを１０％ＨＳＡ（ｗ／ｖ）、６０％ Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ Ａ（ｖ／ｖ
）中に標的細胞濃度で懸濁させる。次いで、細胞を７０μｍのメッシュに通し、最終コン
テナに充填し、細胞のアリコートを生存率、細胞傷害性、純度および細胞数について試験
し、残りをパッケージする。
【実施例0453】
７．２．実施例２：３段階法におけるＳＲ－１およびＣＨ２２３１９１の濃度の評価
Ｓｔｅｍｒｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）は、１μＭ、１０μＭおよび３０μＭの濃度
で、上の実施例１に概要を述べた３段階法を使用して、段階１および段階２培地の成分と
して評価した。３段階法における同じ濃度のＣＨ２２３１９１もまた評価した。１０μＭ
でのＳＲ－１は、試験した他の２つの濃度よりも高い細胞傷害性をもたらした。１０μＭ
および１μＭ濃度の両方でＳＲ－１およびＣＨ２２３１９１について、増幅倍率、細胞純
度（ＣＤ５６＋ＣＤ３－）、および１０：１（Ｅ：Ｔ）比でのＫ５６２細胞の細胞傷害性
に匹敵する効果が観察された（図１Ａ～Ｃ）。ＳＲ－１およびＣＨ２２３１９１の両方も
また、７日目および１４日目のＣＤ３４の発現に関して同様の効果および傾向を示した。
Ｓｔｅｍｒｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）は、１μＭ、１０μＭおよび３０μＭの濃度
で、上の実施例１に概要を述べた３段階法を使用して、段階１および段階２培地の成分と
して評価した。３段階法における同じ濃度のＣＨ２２３１９１もまた評価した。１０μＭ
でのＳＲ－１は、試験した他の２つの濃度よりも高い細胞傷害性をもたらした。１０μＭ
および１μＭ濃度の両方でＳＲ－１およびＣＨ２２３１９１について、増幅倍率、細胞純
度（ＣＤ５６＋ＣＤ３－）、および１０：１（Ｅ：Ｔ）比でのＫ５６２細胞の細胞傷害性
に匹敵する効果が観察された（図１Ａ～Ｃ）。ＳＲ－１およびＣＨ２２３１９１の両方も
また、７日目および１４日目のＣＤ３４の発現に関して同様の効果および傾向を示した。
