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特開2023-171769胎盤細胞を使用した糖尿病性末梢神経障害の処置

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023171769

(43)【公開日】2023-12-05

(54)【発明の名称】胎盤細胞を使用した糖尿病性末梢神経障害の処置

(51)【国際特許分類】

A61K 35/50 20150101AFI20231128BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20231128BHJP

A61P 25/02 20060101ALI20231128BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20231128BHJP

【ＦＩ】

A61K35/50

A61P3/10

A61P25/02

A61P43/00 105

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023145722

(22)【出願日】2023-09-08

(62)【分割の表示】P 2021133914の分割

【原出願日】2016-09-14

(31)【優先権主張番号】62/218,885

(32)【優先日】2015-09-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ジップロック

(71)【出願人】

【識別番号】520169074

【氏名又は名称】セルラリティインク．

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川徹

(72)【発明者】

【氏名】フィッシュコフ，スティーブン，エー．

(72)【発明者】

【氏名】チットカーラ，デネッシュ

(57)【要約】（修正有）

【課題】糖尿病性末梢神経障害の処置における、組織培養プラスチック接着性胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞を使用する方法を提供する。
【解決手段】糖尿病性末梢神経障害を有する対象を処置する方法であって、ＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

糖尿病性末梢神経障害を有する対象を処置する方法であって、ＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、
ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方
法。

【請求項2】

前記糖尿病性末梢神経障害が、前記対象の手、足、腕または脚のうち一または複数に影
響を与える、請求項１記載の方法。

【請求項3】

前記糖尿病性末梢神経障害が、前記対象の手、足、腕、または脚のそれぞれに影響を与
える、請求項１に記載方法。

【請求項4】

前記胎盤幹細胞を含む組成物が、筋肉内投与される、請求項１～３のうちいずれか１項
に記載の方法。

【請求項5】

前記組成物が、１×１０⁵個から１×１０⁶個、１×１０⁶個から３×１０⁶個、３×１０
⁶個から５×１０⁶個、５×１０⁶個から１×１０⁷個、１×１０⁷個から３×１０⁷個、３×
１０⁷個から５×１０⁷個、５×１０⁷個から１×１０⁸個、１×１０⁸個から３×１０⁸個、
３×１０⁸個から５×１０⁸個、５×１０⁸個から１×１０⁹個、１×１０⁹個から５×１０⁹
個、または５×１０⁹個から１×１０¹⁰個の間の胎盤幹細胞を含む、請求項１～４のうち
いずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記組成物が、約１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×１０⁶
個、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１０⁸個
、５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎盤幹細胞を含む、
請求項１～４のうちいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記組成物が、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞を含む、請求項６記載の方法。

【請求項8】

前記組成物が、約３×１０⁷個の胎盤幹細胞を含む、請求項６記載の方法。

【請求項9】

前記処置が、前記対象における表皮内神経線維密度の増加をもたらす、請求項１～８の
うちいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記対象における前記表皮内神経線維密度の増加が、皮膚生検によって測定される、請
求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記処置が、前記糖尿病性末梢神経障害の一または複数の症状における改善をもたらす
、請求項１～１０のうちいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記一または複数の症状が、痛みもしくは温度変化に対する無感覚またはそれらを感じ
る能力の低下、肢のヒリヒリするまたは焼けるような感覚、鋭い痛みまたは痙攣、接触に
対する感受性の増加、筋力低下、反射の損失または足首における反射の損失、平衡および
協調の損失のうち少なくとも一方、ならびに潰瘍、感染、奇形、ならびに骨および関節の
痛みを含む足の問題のうち少なくとも１つである、請求項１１記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１５年９月１５日付けで出願された米国仮特許出願第６２／２１８，８
８５号の優先権の利益を主張するものであり、その内容は、その全体が本明細書に組み入
れられる。

【0002】

１．分野
糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）の処置における、組織培養プラスチック接着性胎盤細
胞、例えば胎盤幹細胞を使用する方法が本明細書で提供される。

【背景技術】

【0003】

２．背景
胎盤は、特に魅力的な幹細胞源である。哺乳類胎盤は豊富であり、通常は医療廃棄物と
して廃棄されるため、これらは、かけがえのない医学的に有用な幹細胞源の代表である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】米国特許第７，３１１，９０４号

【特許文献2】米国特許第７，３１１，９０５号

【特許文献3】米国特許第７，４６８，２７６号

【特許文献4】米国特許公開公報第２００７／０２７５３６２号

【特許文献5】米国特許公開公報第２００７／０１９００４２号

【特許文献6】米国特許第５，３７２，５８１号

【特許文献7】米国特許第５，４１５，６６５号

【特許文献8】米国特許第７，１４７，６２６号

【特許文献9】米国特許第７，０４５，１４８号

【特許文献10】米国特許第７，２５５，７２９号

【特許文献11】米国特許公開公報第２００４／００４８７９６号

【特許文献12】特許出願第１２／５４６，５５６号

【特許文献13】米国特許出願第１２／６２２，３５２号

【特許文献14】米国特許出願公開第２００４／００４８７９６号

【特許文献15】米国特許公開公報第２００２／００２２６７６号

【特許文献16】米国特許第６，３５５，６９９号

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】ウェア（Ｗａｒｅ）ｅｔａｌ．，ＭｅｄｉｃａｌＣａｒｅ３０（６）：４７３－４８３）

【非特許文献2】バン（Ｂａｎｎ）ｅｔａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，２００３、２１（１７）：１２７７－９０）

【非特許文献3】カンパー（Ｋａｍｐｅｒ）ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍａｎ．Ｍａｎｉｐ．Ｔｈｅｒ．，２００９，１７（３）：１６３－１７０）

【非特許文献4】ボスティアン（Ｂｏｓｔｉａｎ）およびベッツ（Ｂｅｔｔｓ），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７３，７８７，（１９７８）

【非特許文献5】カマーチ（Ｋａｍａｒｃｈ），１９８７，ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ，１５１：１５０－１６５

【非特許文献6】アリカメッツ（Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ）ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５８（２３）：５３３７－９（１９９８）

【非特許文献7】アンセス（Ａｎｓｅｔｈ）ｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｏｎｔｒｏｌＲｅｌｅａｓｅ，７８（１－３）：１９９－２０９（２００２）

【非特許文献8】ワン（Ｗａｎｇ）ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２４（２２）：３９６９－８０（２００３）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

３．概要
それを必要とする対象における糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）を処置する方法であっ
て、治療有効量の、組織培養プラスチック接着性胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞、例えば
、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を対象に投与することを
含む、方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態において、前記胎盤細胞は、医薬
組成物として製剤化される。

【0007】

具体的な実施形態において、本明細書で提供される方法に従って処置されるＤＰＮを有
する対象は、Ｉ型糖尿病を有する。他の具体的な実施形態において、本明細書で提供され
る方法に従って処置されるＤＰＮを有する対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。一実施形態に
おいて、本明細書で提供される方法に従って処置される対象は、腕、手、脚、または足の
一または複数にＤＰＮを有する。一実施形態において、本明細書で提供される方法に従っ
て処置される対象は、腕、手、脚、および足のそれぞれにＤＰＮを有する。

【0008】

一実施形態において、本明細書で提供される方法に従って処置される対象は、ＤＰＮを
有し、さらに対象の末梢血管系における血流の破壊を引き起こす状態も有する。具体的な
実施形態において、対象は、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を有する。具体的な実施形態におい
て、対象は、末梢血管疾患を有する。

【0009】

一実施形態において、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される方法に従っ
て処置される対象においてＤＰＮの一または複数の症状の検出可能な改善をもたらす。Ｄ
ＰＮの例示的な症状としては、これらに限定されないが、痛みもしくは温度変化に対する
無感覚またはそれらを感じる能力の低下、肢のヒリヒリするまたは焼けるような感覚、鋭
い痛みまたは痙攣、接触に対する感受性の増加、筋力低下、反射の損失（例えば、足首に
おける）、平衡および／または協調の損失、足の問題（例えば潰瘍、感染、奇形、ならび
に骨および関節の痛みなど）が挙げられる。

【0010】

一実施形態において、本明細書で提供される方法は、一または複数の改善の兆候におけ
る改善が検出可能になるのに十分な量および時間で、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を
含む医薬組成物）を、ＤＰＮを有する対象に投与することを含む。具体的な実施形態にお
いて、前記改善の兆候は、ベースラインと比較した場合の、処置後の表皮内神経線維密度
における変化である。表皮内神経線維密度は、糖尿病性末梢神経障害の程度を評価するの
に使用される尺度である。表皮内神経線維密度を評価するために、皮膚生検中の神経線維
の数が決定される。神経線維の数／密度の増加は、神経障害の改善を示す。

【0011】

一実施形態において、本明細書で提供される方法は、例えば、（ｉ）３６項目のショー
トフォーム健康調査（ＳＦ－３６；３６－ｉｔｅｍＳｈｏｒｔＦｏｒｍＨｅａｌｔ
ｈＳｕｒｖｅｙ）（例えば、非特許文献１参照）；（ｉｉ）生活の質への糖尿病性末梢
神経障害の影響を測定する糖尿病性末梢神経障害尺度ショートフォーム（ＤＦＳ－ＳＦ；
ＤｉａｂｅｔｉｃｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙＳｃａｌｅＳｈｏ
ｒｔＦｏｒｍ）（例えば、非特許文献２参照）；（ｉｉｉ）経時的な神経障害の変化を
評価するための患者全般印象変化尺度（ＰａｔｉｅｎｔＧｌｏｂａｌＩｍｐｒｅｓｓ
ｉｏｎｏｆＣｈａｎｇｅＳｃａｌｅ）（例えば、非特許文献３参照）；および／ま
たは（ｉｖ）患者の健康状態に関する記述的なプロファイルおよび単一の指標値を得るの
に使用される健康調査票であるＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（ＥＱ－５Ｄ（商標））尺度によって
評価される場合に、対象の生活の質における改善が検出可能になるのに十分な量および時
間で、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）をＤＰＮを有する対象に投与
することを含む。

【0012】

本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の具体的な実施形態において、胎盤細胞（
例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、注射によって投与される。本明細書に記載さ
れるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹
細胞を含む医薬組成物）は、処置される対象に胎盤細胞を含むマトリックスまたは足場を
埋め込むことによって、前記対象に投与される。

【0013】

本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の具体的な実施形態において、胎盤細胞（
例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、筋肉内投与される。他の具体的な実施形態に
おいて、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、ＤＰＮの領域中（例えば
、脚、足、腕、または手のうち１つまたは複数）で筋肉内投与される。他の具体的な実施
形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、ＤＰＮの領域に隣
接して筋肉内投与される。他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細
胞を含む医薬組成物）は、ＤＰＮと診断されている対象のひざの下から足首の上の間に投
与される。本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において
、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、静脈内投与される。本明細書に
記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、
胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、皮下投与される。本明細書に記載されるＤＰＮを処置
する方法の他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組
成物）は、局所投与される。本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な
実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、全身投与され
る。

【0014】

一実施形態において、本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法は、約１×１０³個
、３×１０³個、５×１０³個、１×１０⁴個、３×１０⁴個、５×１０⁴個、１×１０⁵個、
３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×１０⁶個、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３
×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１０⁸個、５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×
１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物の一部
として）の投与を含む。一実施形態において、本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方
法は、約１×１０³個から３×１０³個、３×１０³個から５×１０³個、５×１０³個から
１×１０⁴個、１×１０⁴個から３×１０⁴個、３×１０⁴個から５×１０⁴個、５×１０⁴個
から１×１０⁵個、１×１０⁵個から３×１０⁵個、３×１０⁵個から５×１０⁵個、５×１
０⁵個から１×１０⁶個、１×１０⁶個から３×１０⁶個、３×１０⁶個から５×１０⁶個、５
×１０⁶個から１×１０⁷個、１×１０⁷個から３×１０⁷個、３×１０⁷個から５×１０⁷個
、５×１０⁷個から１×１０⁸個、１×１０⁸個から３×１０⁸個、３×１０⁸個から５×１
０⁸個、５×１０⁸個から１×１０⁹個、１×１０⁹個から５×１０⁹個、または５×１０⁹個
から１×１０¹⁰個の胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物の一部として）の投
与を含む。具体的な実施形態において、本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法は、
約３×１０⁶個の胎盤細胞の投与を含む。他の具体的な実施形態において、本明細書に記
載されるＤＰＮを処置する方法は、約１×１０⁷個の胎盤細胞の投与を含む。他の具体的
な実施形態において、本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法は、約３×１０⁷個の
胎盤細胞の投与を含む。

【0015】

本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の具体的な実施形態において、胎盤幹細胞
（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、投与と投与の間の１週間に１回より多く対
象に筋肉内投与され、例えば、胎盤細胞が、１日目に（投与の初日に）投与され、胎盤幹
細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）の第２の用量が、１週間後に（すなわち８
日目に）投与される。他の具体的な実施形態において、本方法は、それぞれの投与日に（
すなわち１日目および８日目に）約３×１０⁶個の胎盤幹細胞を投与することを含む。他
の具体的な実施形態において、本方法は、それぞれの投与日に（すなわち１日目および８
日目に）約３×１０⁷個の胎盤細胞を投与することを含む。他の具体的な実施形態におい
て、胎盤細胞は、投与と投与の間の約１週間に、少なくとも３つの異なる機会に対象に投
与される。

【0016】

本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において、胎盤幹
細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、投与と投与の間の１カ月に１回より多
く対象に投与され、例えば、胎盤細胞が、１日目に（投与の初日に）投与され、胎盤幹細
胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）の第２の用量が、約１カ月後に（例えば、２
７日目に、２８日目に、２９日目に、３０日目に、３１日目に、３２日目に、または３３
日目に）投与される。具体的な実施形態において、本方法は、それぞれの投与日に約３×
１０⁶個の胎盤幹細胞を投与することを含む（例えば、３×１０⁶個の胎盤幹細胞が１日目
に投与され、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞が、１日目の後の約１カ月に、例えば２７日目
に、２８日目に、２９日目に、３０日目に、３１日目に、３２日目に、または３３日目に
投与される）。他の具体的な実施形態において、本方法は、それぞれの投与日に約３×１
０⁷個の胎盤細胞を投与することを含む（例えば、３×１０⁷個の胎盤幹細胞が１日目に投
与され、約３×１０⁷個の胎盤幹細胞が、１日目の後の約１カ月に、例えば２７日目に、
２８日目に、２９日目に、３０日目に、３１日目に、３２日目に、または３３日目に投与
される）。他の具体的な実施形態において、胎盤細胞は、投与と投与の間の約１カ月に、
少なくとも３つの異なる機会に対象に投与される。

【0017】

一実施形態において、胎盤細胞の用量（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、複
数回の異なる注射を使用して投与され、例えば、胎盤細胞の単回用量（例えば、約３×１
０⁶個の胎盤幹細胞を含む用量または約３×１０⁷個の胎盤幹細胞を含む用量）は、処置さ
れる対象に複数回注射することによって投与される。一実施形態において、胎盤細胞の用
量（例えば、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞を含む用量または約３×１０⁷個の胎盤幹細胞を
含む用量）は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９、または２０回の注射で投与される。一実施形態において、胎
盤細胞の単回用量の投与を構成する個々の注射は、０．１ｍｌの胎盤細胞（またはその医
薬組成物）、０．２ｍｌの胎盤細胞（またはその医薬組成物）、０．３ｍｌの胎盤細胞（
またはその医薬組成物）、０．４ｍｌの胎盤細胞（またはその医薬組成物）、または０．
５ｍｌの胎盤細胞（またはその医薬組成物）を含んでいてもよい。具体的な実施形態にお
いて、合計で胎盤細胞の単回用量（例えば、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞を含む用量また
は約３×１０⁷個の胎盤幹細胞を含む用量）を構成する個々の注射は、０．３ｍｌの胎盤
細胞を含む。

【0018】

具体的な実施形態において、胎盤細胞の用量（例えば、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞を
含む用量または約３×１０⁷個の胎盤幹細胞を含む用量）は、１５回の別々の注射で投与
され、各注射は、０．３ｍｌの胎盤細胞（またはその医薬組成物）を含む溶液を含有する
。具体的な実施形態において、前記投与は、筋肉内である。他の具体的な実施形態におい
て、前記投与は、筋肉内であり、筋肉内注射は、ＤＰＮを有する対象のひざの下から足首
の上の間に投与される。

【0019】

具体的な実施形態において、対象におけるＤＰＮを処置する方法であって、前記方法は
、約３×１０⁶個の胎盤幹細胞の用量を前記対象に投与することを含み、（ｉ）前記胎盤
幹細胞は、少なくとも３カ月にわたり約１月単位で筋肉内投与され（例えば、胎盤幹細胞
は、１日目に投与され；２７日目に、２８日目に、２９日目に、３０日目に、３１日目に
、または３２日目に投与され；さらに５６日目に、５７日目に、５８日目に、５９日目に
、６０日目に、６１日目に、６２日目に、または６３日目に投与される）、（ｉｉ）各用
量は、１５回の別々の注射で投与され、各注射は、０．３ｍｌの胎盤細胞（またはその医
薬組成物）を含む溶液を含有し、（ｉｉｉ）前記筋肉内注射は、ＤＰＮを有する対象のひ
ざの下から足首の上の間に投与される、方法が本明細書で提供される。

【0020】

具体的な実施形態において、対象におけるＤＰＮを処置する方法であって、前記方法は
、約３×１０⁷個の胎盤幹細胞の用量を前記対象に投与することを含み、（ｉ）前記胎盤
幹細胞は、少なくとも３カ月にわたり約１月単位で筋肉内投与され（例えば、胎盤幹細胞
は、１日目に投与され；２７日目に、２８日目に、２９日目に、３０日目に、３１日目に
、または３２日目に投与され；さらに５６日目に、５７日目に、５８日目に、５９日目に
、６０日目に、６１日目に、６２日目に、または６３日目に投与される）、（ｉｉ）各用
量は、１５回の別々の注射で投与され、各注射は、０．３ｍｌの胎盤細胞（またはその医
薬組成物）を含む溶液を含有し、（ｉｉｉ）前記筋肉内注射は、ＤＰＮを有する対象のひ
ざの下から足首の上の間に投与される、方法が本明細書で提供される。

【0021】

本明細書に記載される方法で使用される胎盤細胞は、組織培養プラスチックに接着し、
例えばフローサイトメトリーによって検出可能な、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺
およびＣＤ２００⁺である。本明細書で提供される方法で使用される胎盤細胞のさらなる
特徴は、４．１章に記載されている。本明細書で提供される方法に使用され得る胎盤幹細
胞を含む組成物、例えば医薬組成物は、４．３章に記載されている。

【発明を実施するための形態】

【0022】

３．１定義
本明細書で使用される場合、用語「約」は、述べられた数値に対して言及される場合、
述べられていた数値のプラスまたはマイナス１０％以内の値を示す。

【0023】

本明細書で使用される場合、用語「～由来（の）」は、何かから単離されているかまた
はそれ以外の方法で精製されていることを意味する。例えば、胎盤由来の接着細胞は、胎
盤から単離されている。用語「～由来（の）」は、組織、例えば胎盤から直接的に単離さ
れた細胞から培養される細胞、および初代単離物から培養または拡張された細胞を包含す
る。

【0024】

本明細書で使用される場合、用語「単離された細胞」、例えば、「単離された胎盤細胞
」、「単離された胎盤幹細胞」などは、幹細胞の由来となる組織、例えば胎盤の他の異な
る細胞から実質的に分離されている細胞を意味する。幹細胞に天然に付随する細胞、例え
ば非幹細胞、または異なるマーカープロファイルを提示する幹細胞の少なくとも５０％、
６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または少なくとも９９％が、例えば幹細胞の
収集および／または培養中に幹細胞から除去される場合、細胞は「単離されている」。

【0025】

用語「単離された細胞の集団」は、本明細書で使用される場合、細胞の集団の由来とな
る組織、例えば胎盤の他の細胞から実質的に分離された細胞の集団を意味する。

【0026】

本明細書で使用される場合、用語「胎盤細胞」は、初代単離物か、または初代培養後の
継代回数に関係なく培養細胞のいずれかとしての、例えば以下の４．１章に記載されるよ
うに哺乳類胎盤から単離された、または哺乳類胎盤から単離された細胞から培養された、
幹細胞または前駆細胞を指す。しかしながら、一実施形態において、用語「胎盤細胞」は
、本明細書で使用される場合、栄養膜、栄養膜細胞層、合胞体栄養細胞、血管芽細胞、血
管芽細胞、胚性生殖細胞、胚幹細胞、胚盤胞の内部細胞塊から得られた細胞、または後期
胚の生殖巣堤から得られた細胞、例えば胚性生殖細胞を指さない。

【0027】

本明細書で使用される場合、特定のマーカーがバックグラウンドを超えて検出可能であ
る場合、胎盤細胞はそのマーカーに関して「陽性」である。特定のマーカーの検出は、例
えば、抗体の使用、またはマーカーをコードする遺伝子もしくはｍＲＮＡの配列に基づく
オリゴヌクレオチドプローブまたはプライマーのいずれかによって達成することができる
。例えば、ＣＤ７３は胎盤細胞においてバックグラウンドより多い検出可能な量で（例え
ばアイソタイプ対照と比較して）検出可能であるため、胎盤細胞は、例えばＣＤ７３に関
して陽性である。また、マーカーが、細胞を少なくとも１つの他の細胞型から区別するの
に使用できる場合、または細胞によって提示または発現される場合に細胞を選択したりま
たは単離したりするのに使用できる場合、細胞はそのマーカーに関して陽性でもある。例
えば抗体媒介性検出の文脈において、「陽性」は、特定の細胞表面マーカーが存在するこ
とを示す場合、そのマーカーに特異的な抗体、例えば蛍光標識された抗体を使用してマー
カーを検出できることを意味し、「陽性」はまた、例えば血球計算器において、バックグ
ラウンドを超えて検出可能なシグナルを産生する量でマーカーを表示する細胞も指す。例
えば、細胞がＣＤ２００に特異的な抗体で検出可能に標識されており、抗体からのシグナ
ルが、対照（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）のシグナルより検出可
能に高い場合、細胞は、「ＣＤ２００⁺」である。逆に言えば、同じ文脈における「陰性
」は、対照（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）と比較して、そのマー
カーに特異的な抗体を使用しても細胞表面マーカーが検出可能ではないことを意味する。
例えば、細胞が、対照（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）より大きい
程度に、ＣＤ３４に特異的な抗体で再現性よく検出可能に標識されていない場合、細胞は
、「ＣＤ３４^-」である。抗体を使用して検出されない、または検出不可能なマーカーは
、類似の方式で、適切な対照を使用して、陽性であるかまたは陰性であるかが決定される
。例えばＲＴ－ＰＣＲ、スロットブロットなどのＲＮＡを検出する方法によって決定され
る場合、細胞または細胞の集団からのＲＮＡで検出されるＯＣＴ－４ＲＮＡの量が、バ
ックグラウンドより多く検出可能である場合、その細胞または細胞の集団は、ＯＣＴ－４
⁺であると決定することができる。本明細書において別段の規定がない限り、表面抗原分
類（「ＣＤ」）マーカーは、抗体を使用して検出される。一実施形態において、ＲＴ－Ｐ
ＣＲを使用してＯＣＴ－４が検出可能である場合、ＯＣＴ－４が存在すると決定され、細
胞は「ＯＣＴ－４⁺」である。

【0028】

用語「対象」、「患者」、および「個体」は、本明細書で使用される場合、本明細書に
記載される処置方法で処置される哺乳動物を指すのに同義的に使用することができる。具
体的な実施形態において、処置しようとする対象は、ヒトである。

【0029】

４．詳細な説明
それを必要とする対象における糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）を処置する方法であっ
て、治療有効量の、組織培養プラスチック接着性胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞、例えば
、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を対象に投与することを
含む、方法が本明細書で提供される。具体的な実施形態において、前記胎盤細胞は、医薬
組成物として製剤化される。

【0030】

【0031】

【0032】

【0033】

一実施形態において、本明細書で提供される方法は、一または複数の改善の兆候におけ
る改善が検出可能になるのに十分な量および時間で、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を
含む医薬組成物）をＤＰＮを有する対象に投与することを含む。具体的な実施形態におい
て、前記改善の兆候は、ベースラインと比較した場合の、処置後の表皮内神経線維密度に
おける変化である。表皮内神経線維密度は、糖尿病性末梢神経障害の程度を評価するのに
使用される尺度である。表皮内神経線維密度を評価するために、皮膚生検中の神経線維の
数が決定される。神経線維の数／密度の増加は、神経障害の改善を示す。

【0034】

一実施形態において、本明細書で提供される方法は、例えば、（ｉ）３６項目のショー
トフォーム健康調査（ＳＦ－３６）（例えば、非特許文献１参照）；（ｉｉ）生活の質へ
の糖尿病性末梢神経障害の影響を測定する糖尿病性末梢神経障害尺度ショートフォーム（
ＤＦＳ－ＳＦ）（例えば、非特許文献２参照）；（ｉｉｉ）経時的な神経障害の変化を評
価するための患者全般印象変化尺度（例えば、非特許文献３参照）；および／または（ｉ
ｖ）患者の健康状態に関する記述的なプロファイルおよび単一の指標値を得るのに使用さ
れる健康調査票であるＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（ＥＱ－５Ｄ（商標））尺度によって評価され
る場合に、対象の生活の質における改善が検出可能になるのに十分な量および時間で、胎
盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）をＤＰＮを有する対象に投与すること
を含む。

【0035】

【0036】

本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の具体的な実施形態において、胎盤細胞（
例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、筋肉内投与される。他の具体的な実施形態に
おいて、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、ＤＰＮの領域中（例えば
、脚、足、腕、または手の一または複数中）で筋肉内投与される。他の具体的な実施形態
において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、ＤＰＮの領域に隣接し
て筋肉内投与される。他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を
含む医薬組成物）は、ＤＰＮと診断されている対象のひざの下から足首の上の間に投与さ
れる。本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において、胎
盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、静脈内投与される。本明細書に記載
されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）は、皮下投与される。本明細書に記載されるＤＰＮを処置する
方法の他の具体的な実施形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物
）は、局所投与される。本明細書に記載されるＤＰＮを処置する方法の他の具体的な実施
形態において、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、全身投与される。

【0037】

【0038】

【0039】

【0040】

【0041】

【0042】

【0043】

【0044】

【0045】

４．１単離された胎盤細胞および単離された胎盤細胞集団
単離された胎盤細胞は、本明細書において時にはＰＤＡＣとも称され（さらに時には「
ＰＤＡ－００２」とも表される）、本明細書で提供されるＤＰＮを処置する方法において
有用であり、胎盤またはその部分から入手することができ、組織培養基材に接着し、複能
性細胞または幹細胞の特徴を有するが、栄養膜ではない。一実施形態において、本明細書
で開示された方法において有用な単離された胎盤細胞は、非胎盤細胞型に分化する能力を
有する。

【0046】

本明細書で開示された方法において有用な単離された胎盤細胞は、胎児または母体起源
のいずれでもよい（すなわち、それぞれ胎児または母親のいずれかの遺伝子型を有してい
てもよい）。好ましくは、単離された胎盤細胞および単離された胎盤細胞集団は、胎児起
源である。成句「胎児起源」または「非母体起源」は、本明細書で使用される場合、単離
された胎盤細胞または単離された胎盤細胞集団が、胎児に付随する、すなわち胎児の遺伝
子型を有する臍帯または胎盤構造から得られることを示す。成句「母体起源」は、本明細
書で使用される場合、細胞または細胞集団が、母親に付随する、例えば母体の遺伝子型を
有する胎盤構造から得られることを示す。単離された胎盤細胞、例えばＰＤＡＣ、または
単離された胎盤細胞を含む細胞集団は、胎児起源のみまたは母体起源のみである単離され
た胎盤細胞を含んでいてもよいし、または胎児および母体起源両方の単離された胎盤細胞
の混成集団を含んでいてもよい。単離された胎盤細胞および単離された胎盤細胞を含む細
胞集団は、以下で論じられる形態学的な、マーカーの、および培養の特徴により同定およ
び選択することができる。一実施形態において、胎盤細胞のいずれか、例えば本明細書に
記載される胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞は、レシピエント、例えばＤＰＮを有する個
体にとって自己である。ある特定の他の実施形態において、胎盤細胞のいずれか、例えば
本明細書に記載される胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞は、レシピエント、例えばＤＰＮ
を有する個体にとって異種である。

【0047】

４．１．１物理的および形態学的な特徴
本明細書に記載される単離された胎盤細胞（ＰＤＡＣ）は、初代培養または細胞培養で
培養される場合、組織培養基材、例えば、組織培養容器表面（例えば、組織培養プラスチ
ック）に接着するか、または細胞外マトリックスまたはリガンド、例えばラミニン、コラ
ーゲン（例えば、天然または変性）、ゼラチン、フィブロネクチン、オルニチン、ビトロ
ネクチン、および細胞外膜タンパク質（例えば、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）（ＢＤ
ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＬａｂｗａｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍａｓｓ．））などでコーティ
ングされた組織培養表面に接着する。培養中の単離された胎盤細胞は、全体的に線維芽細
胞様であり、中央の細胞本体から伸長する多数の細胞質内プロセスにより星のような外観
を呈する。しかしながら、単離された胎盤細胞はこのようなプロセスを線維芽細胞より多
く示すため、このような細胞は、同じ条件下で培養された線維芽細胞と形態学的に区別す
ることができる。形態学的には、単離された胎盤細胞はさらに、造血幹細胞とも区別する
ことができるが、これは、造血幹細胞は、培養中、より曲線的であるかまたは丸石のよう
な形態を全体的に呈するためである。

【0048】

一実施形態において、本明細書で開示された方法において有用な単離された胎盤細胞は
、増殖培地で培養される場合、胚様体様体（ｅｍｂｒｙｏｉｄ－ｌｉｋｅｂｏｄｙ）を
発生させる。胚様体様体は、増殖中の単離された胎盤細胞の接着層の上面で成長できる隣
接していない細胞の凝集塊である。用語「胚様体様」は、細胞の凝集塊が、胚様体、すな
わち胚幹細胞の培養物から成長する細胞の凝集塊に似ているために使用される。単離され
た胎盤細胞の増殖培養中に胚様体様体を発生させることができる増殖培地としては、例え
ば、ＤＭＥＭ－ＬＧ（例えば、Ｇｉｂｃｏから）；２％ウシ胎児血清（例えば、Ｈｙｃｌ
ｏｎｅＬａｂｓ．から）；１×インスリン－トランスフェリン－セレニウム（ＩＴＳ）
；１×リノール酸－ウシ血清アルブミン（ＬＡ－ＢＳＡ）；１０^-9Ｍデキサメタゾン（例
えば、Ｓｉｇｍａから）；１０^-4Ｍアスコルビン酸２－ホスフェート（例えば、Ｓｉｇｍ
ａから）；上皮増殖因子１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから）；およ
び血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅ
ｍｓから）を含む培地が挙げられる。

【0049】

４．１．２細胞表面、分子および遺伝子マーカー
本明細書で開示された方法、例えば対象のＤＰＮを処置する方法において有用な、単離
された胎盤細胞、例えば単離された複能性胎盤細胞または単離された胎盤幹細胞、および
このような単離された胎盤細胞の集団は、複能性細胞または幹細胞の特徴を有し、幹細胞
を含む細胞または細胞集団を同定および／または単離するのに使用できる複数のマーカー
を発現する、組織培養プラスチック接着性のヒト胎盤細胞である。一実施形態において、
ＰＤＡＣは、例えばｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏにおいて血管原性である。本
明細書に記載される単離された胎盤細胞および胎盤細胞集団（すなわち、２つまたはそれ
より多くの単離された胎盤細胞）としては、胎盤またはそのあらゆる部分（例えば、柔毛
膜、胎盤絨毛叢など）から直接得られた胎盤細胞および胎盤細胞を含有する細胞集団が挙
げられる。また単離された胎盤細胞集団としては、培養中の（すなわち、２以上の）単離
された胎盤細胞の集団、および容器、例えばバッグ中の集団も挙げられる。本明細書に記
載される単離された胎盤細胞は、骨髄由来間葉細胞、脂肪由来間葉幹細胞、または臍帯血
、胎盤血もしくは末梢血液から得られた間葉細胞ではない。本明細書に記載される方法お
よび組成物において有用な胎盤細胞、例えば、複能性胎盤細胞および胎盤細胞が本明細書
に記載されており、例えば、特許文献１；特許文献２；および特許文献３；ならびに特許
文献４に記載されており、これらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入
れられる。

【0050】

一実施形態において、単離された胎盤細胞は、単離された胎盤幹細胞である。ある特定
の他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、単離された複能性胎盤細胞である。一
実施形態において、単離された胎盤細胞、例えばＰＤＡＣは、フローサイトメトリーによ
って検出されるＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺およびＣＤ１０５⁺である。他の具体的な実施形態
において、単離されたＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺胎盤細胞は、神経系の表現型
を有する細胞、骨形成性の表現型を有する細胞、および／または軟骨形成性の表現型を有
する細胞に分化する能力を有する。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３４
^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺胎盤細胞は、加えて、ＣＤ２００⁺である。他の具体的な実施
形態において、単離されたＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺胎盤細胞は、加えて、Ｃ
Ｄ４５^-またはＣＤ９０⁺である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３４^-
、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺胎盤細胞は、加えて、フローサイトメトリーによって検出され
るＣＤ４５^-およびＣＤ９０⁺である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３
４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤細胞は、加えて、フローサイトメトリー
によって検出されるＣＤ９０⁺またはＣＤ４５^-である。他の具体的な実施形態において、
単離されたＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤細胞は、加えて、フロ
ーサイトメトリーによって検出されるＣＤ９０⁺およびＣＤ４５^-であり、すなわち上記細
胞は、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ４５^-、ＣＤ９０⁺、ＣＤ１０５⁺およびＣＤ２００⁺で
ある。他の具体的な実施形態において、前記ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ４５^-、ＣＤ９
０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺細胞は、加えて、ＣＤ８０^-およびＣＤ８６^-である。

【0051】

一実施形態において、前記胎盤細胞は、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺およびＣ
Ｄ２００⁺であり、フローサイトメトリーによって検出されるＣＤ３８^-、ＣＤ４５^-、Ｃ
Ｄ８０^-、ＣＤ８６^-、ＣＤ１３３^-、ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ^-、ＳＳＥＡ３^-、ＳＳＥ
Ａ４^-、ＣＤ２９⁺、ＣＤ４４⁺、ＣＤ７３⁺、ＣＤ９０⁺、ＣＤ１０５⁺、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，
Ｃ⁺、ＰＤＬ１⁺、ＡＢＣ－ｐ⁺、および／またはＯＣＴ－４⁺の一または複数である。他の
実施形態において、上述されるＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺細胞のいずれかは、
加えて、ＣＤ２９⁺、ＣＤ３８^-、ＣＤ４４⁺、ＣＤ５４⁺、ＳＨ３⁺またはＳＨ４⁺の一また
は複数である。他の具体的な実施形態において、細胞は、加えて、ＣＤ４４⁺である。上
記の単離されたＣＤ３４^-、ＣＤ１０⁺、ＣＤ１０５⁺胎盤細胞のいずれかの他の具体的な
実施形態において、細胞は、加えて、ＣＤ１１７^-、ＣＤ１３３^-、ＫＤＲ^-（ＶＥＧＦＲ
２^-）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ⁺、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ^-、またはプログラム死－１リ
ガンド（ＰＤＬ１）⁺、またはそれらのあらゆる組合せの一または複数である。

【0052】

他の実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞は、加えて、ＣＤ
１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、
ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ
７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０
６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン低（ｃａｄｈｅｒｉｎｌ
ｏｗ）、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳ
ＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ
，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、またはプログラム死－１リガンド
（ＰＤＬ１）＋、またはそれらのあらゆる組合せの一または複数である。他の実施形態に
おいて、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞は、加えて、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９
＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６
２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋
）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／Ｖ
ＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン低、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－
、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－
ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ
－、ＨＬＡ－Ｇ－、およびプログラム死－１リガンド（ＰＤＬ１）＋である。

【0053】

他の具体的な実施形態において、本明細書に記載される胎盤細胞のいずれかは、加えて
、フローサイトメトリーによって検出されるＡＢＣ－ｐ＋であるか、またはＲＴ－ＰＣＲ
により決定されるようなＯＣＴ－４＋（ＰＯＵ５Ｆ１＋）であり、ここでＡＢＣ－ｐは、
胎盤特異的なＡＢＣ輸送タンパク質（また、乳がん耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）およびミ
トキサントロン耐性タンパク質（ＭＸＲ）としても公知である）であり、ＯＣＴ－４は、
オクタマー－４タンパク質（ＰＯＵ５Ｆ１）である。他の具体的な実施形態において、本
明細書に記載される胎盤細胞のいずれかは、加えて、フローサイトメトリーによって決定
されるＳＳＥＡ３－またはＳＳＥＡ４－であり、ＳＳＥＡ３は、ステージ特異的胎児抗原
３であり、ＳＳＥＡ４は、ステージ特異的胎児抗原４である。他の具体的な実施形態にお
いて、本明細書に記載される胎盤細胞のいずれかは、加えて、ＳＳＥＡ３－およびＳＳＥ
Ａ４－である。

【0054】

他の具体的な実施形態において、本明細書に記載される胎盤細胞のいずれかは、加えて
、ＭＨＣ－Ｉ＋（例えば、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋）、ＭＨＣ－ＩＩ－（例えば、ＨＬＡ－
ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－）またはＨＬＡ－Ｇ－の一または複数である。他の具体的な実施形態
において、本明細書に記載される胎盤細胞のいずれかは、加えて、ＭＨＣ－Ｉ＋（例えば
、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋）、ＭＨＣ－ＩＩ－（例えば、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－）お
よびＨＬＡ－Ｇ－の一または複数である。

【0055】

また、単離された胎盤細胞の集団、または本明細書で開示された方法および組成物にお
いて有用な、単離された胎盤細胞を含む、例えば単離された胎盤細胞が濃縮されている、
細胞集団、例えば胎盤細胞集団も本明細書で提供される。好ましくは単離された胎盤細胞
を含む細胞集団であり、ここで細胞集団は、例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％
、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％
、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の単離されたＣＤ１０＋、ＣＤ
１０５＋およびＣＤ３４－胎盤細胞を含み、すなわち、前記集団中の少なくとも１０％、
１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、
６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の細胞が、単離
されたＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋およびＣＤ３４－胎盤細胞である。具体的な実施形態に
おいて、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ２
００＋である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、Ｃ
Ｄ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞は、加えて、フローサイトメトリーによって検出され
るＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ
３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞は、加えて、フローサイトメ
トリーによって検出されるＣＤ９０＋およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態に
おいて、上述される単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞のいずれ
かは、加えて、ＣＤ２９＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＳＨ３＋またはＳＨ
４＋の一または複数である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞、または単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０
５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ４４＋である。上記の単離されたＣＤ３４
－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞を含む細胞集団のいずれかの具体的な実施形態に
おいて、単離された胎盤細胞は、加えて、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３
８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ
－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ
９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４
４／ＶＥ－カドヘリン低、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、Ｏ
ＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）
、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、またはプログラ
ム死－１リガンド（ＰＤＬ１）＋、またはそれらのあらゆる組合せの一または複数である
。他の具体的な実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞は、加え
て、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ
５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋
）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１
０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン低、
ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－
、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、
ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、およびプログラム死－１リガンド（ＰＤＬ
１）＋である。

【0056】

一実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離され
た胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４
５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥ
Ａ４－、ＯＣＴ－４＋、およびＡＢＣ－ｐ＋の１つもしくは複数または全てであり、前記
単離された胎盤細胞は、胎盤組織を物理的におよび／または酵素により破壊することによ
り得られる。具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋およびＡ
ＢＣ－ｐ＋である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４
＋およびＣＤ３４－であり、前記単離された胎盤細胞は、以下の特徴：ＣＤ１０＋、ＣＤ
２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳ
ＥＡ３－、およびＳＳＥＡ４－の少なくとも１つを有する。他の具体的な実施形態におい
て、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ
４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、お
よびＳＳＥＡ４－である。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋
、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、およびＳＳＥＡ４－である。他の具体的な実施形態におい
て、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ３４－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ
３＋のいずれかである。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ
－４＋、ＣＤ３４－、ＳＨ２＋、およびＳＨ３＋である。他の具体的な実施形態において
、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、およびＳＳＥＡ４
－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋のいずれかである。他の具体的な実施形態において、
単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ３４－である、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋
のいずれかであり、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、Ｃ
Ｄ９０＋、ＳＳＥＡ３－、またはＳＳＥＡ４－の少なくとも１つである。他の具体的な実
施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ
２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＳＥＡ３－、およびＳＳ
ＥＡ４－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋のいずれかである。

【0057】

他の実施形態において、本明細書で開示された方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋およびＯＣＴ－４＋である。他の具体的
な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、Ｃ
Ｄ５４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、ＳＳＥＡ３－、またはＳＳＥＡ４－で
ある。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、
ＳＳＥＡ３－およびＳＳＥＡ４－である。他の具体的な実施形態において、単離された胎
盤細胞は、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－およびＳＳＥＡ４－、ＣＤ１０
＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－また
はＣＤ４５－である。

【0058】

他の実施形態において、本明細書で開示された方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ
５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、およびＳＨ４＋であり、前記単離された胎盤
細胞は、加えて、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－またはＳＳＥＡ４－の一または複数である
。

【0059】

一実施形態において、本明細書で開示された方法および組成物において有用な単離され
た胎盤細胞は、ＣＤ２００＋またはＨＬＡ－Ｇ－である。具体的な実施形態において、単
離された胎盤細胞は、ＣＤ２００＋およびＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態に
おいて、単離された胎盤細胞は、加えて、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。他の具
体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－また
はＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、加えて、
ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記
幹細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である
。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋またはＨＬＡ－Ｇ－胎盤
細胞は、胚様体様体の形成を可能にする条件下での、単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞
集団における胚様体様体の形成を容易にする。他の具体的な実施形態において、単離され
た胎盤細胞は、幹細胞または複能性細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な
実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞
から単離される。

【0060】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－幹細胞を含む、例えばそれらが濃縮されている細胞集
団である。具体的な実施形態において、前記集団は、胎盤細胞集団である。様々な実施形
態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少な
くとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％
は、単離されたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。好ましくは、前記細胞集団
中の細胞の少なくとも約７０％は、単離されたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞であ
る。より好ましくは、前記細胞の少なくとも約９０％、９５％、または９９％は、単離さ
れたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。細胞集団の具体的な実施形態において
、前記単離されたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はまた、ＣＤ７３＋およびＣＤ１
０５＋でもある。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＨＬＡ
－Ｇ－胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－でもある。他の具体的
な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はまた、ＣＤ
３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋でもある。他の実施形
態において、前記細胞集団は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される場合、
一または複数の胚様体様体を産生する。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団は
、幹細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単離さ
れたＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞か
ら単離される。

【0061】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、およびＣＤ２００＋である。他の具体的な
実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態
において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。他
の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣ
Ｄ４５－である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ３４－、
ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、およびＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態において、
単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、およびＣＤ２００＋胎盤細胞は、胚様体様体の形
成を可能にする条件下で集団が培養される場合、単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞集団
における一または複数の胚様体様体の形成を容易にする。他の具体的な実施形態において
、単離された胎盤細胞は、単離された胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具
体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、これらのマーカーを提示しない胎盤細
胞から単離される。

【0062】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞を含む、例えばそれ
らが濃縮されている細胞集団である。様々な実施形態において、前記細胞集団中の細胞の
、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％
、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０
５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞である。他の実施形態において、前記細胞集団中の少なくと
も約７０％の前記細胞は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞
である。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約９０％、９５％
または９９％は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞である。
前記集団の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ－である。他
の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－
またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、加え
て、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、
単離された胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、およびＨＬＡ－
Ｇ－である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団は、胚様体様体の形成を可能
にする条件下で培養される場合、一または複数の胚様体様体を産生する。他の具体的な実
施形態において、前記胎盤細胞集団は、幹細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具
体的な実施形態において、前記胎盤細胞集団は、これらの特徴を提示しない胎盤細胞から
単離される。

【0063】

ある特定の他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、
ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋
、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＯＣＴ－４＋、ＨＬＡ－Ｇ－また
はＡＢＣ－ｐ＋の一または複数である。具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞
は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ
５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、お
よびＯＣＴ－４＋である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＣＤ
１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＳＨ２＋、Ｓ
Ｈ３＋、およびＳＨ４＋である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は
、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＳＨ２
＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋およびＯＣＴ－４＋である。他の具体的な実施形態において、単
離された胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、
ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＨＬＡ－Ｇ－、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋で
ある。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋およびＡＢ
Ｃ－ｐ＋である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＳＨ２＋、Ｓ
Ｈ３＋、ＳＨ４＋およびＯＣＴ－４＋である。他の実施形態において、単離された胎盤細
胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、およびＳＳＥＡ４－である。具体的な
実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、およびＳ
ＳＥＡ４－胎盤細胞は、加えて、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４４＋、Ｃ
Ｄ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、およびＳＨ４＋である。他の
実施形態において、単離された胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ３４－であり、ＳＨ
３＋またはＳＨ４＋のいずれかである。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、
ＣＤ３４－であり、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ま
たはＯＣＴ－４＋のいずれかである。

【0064】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ２００＋およびＯＣＴ－４＋である。具体的な実施形態において、
単離された胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。他の具体的な実施形態に
おいて、前記単離された胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態におい
て、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－ま
たはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、
ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的
な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－である。他
の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、胚様
体様体の形成を可能にする条件下で集団が培養される場合、単離された細胞を含む胎盤細
胞集団によって、一または複数の胚様体様体の産生を容易にする。他の具体的な実施形態
において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、幹細胞ではない胎盤
細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、Ｏ
ＣＴ－４＋胎盤細胞は、これらの特徴を提示しない胎盤細胞から単離される。

【0065】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞を含む、例えばそれらが濃縮されている細胞
集団である。様々な実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約１０％、
少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、
または少なくとも約６０％は、単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。
他の実施形態において、前記細胞の少なくとも約７０％は、前記単離されたＣＤ２００＋
、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少な
くとも約８０％、９０％、９５％、または９９％は、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣ
Ｔ－４＋胎盤細胞である。単離された集団の具体的な実施形態において、前記単離された
ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である
。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞
は、加えて、ＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ
２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－
である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎
盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋お
よびＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実施形態において、細胞集団は、胚様体様体の形
成を可能にする条件下で培養される場合、一または複数の胚様体様体を産生する。他の具
体的な実施形態において、前記細胞集団は、単離されたＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤
細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団は
、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞から単離される。

【0066】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－である。他の具体的な実
施形態において、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、
加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態におい
て、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣ
Ｄ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加えて、ＯＣＴ－４＋である。他の
具体的な実施形態において、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細
胞は、加えて、ＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ
４５－、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、単離
されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、胚様体様体の形成を可能に
する条件下で集団が培養される場合、前記細胞を含む胎盤細胞集団における胚様体様体の
形成を容易にする。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１
０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－
胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単離さ
れたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、これらのマーカーを提示しな
い胎盤細胞から単離される。

【0067】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞を含む、例えば
それらが濃縮されている細胞集団である。様々な実施形態において、前記細胞集団中の細
胞の、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４
０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ
１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞
の少なくとも約７０％は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞
である。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約９０％、９５％
または９９％は、単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。
上記の集団の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、Ｈ
ＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。他の
具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎
盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施
形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加
えて、ＯＣＴ－４＋である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋
、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、加えて、ＣＤ２００＋である。他の具体的な
実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は
、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋であ
る。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬ
Ａ－Ｇ－胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前
記細胞集団は、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞から単離される。

【0068】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋であり、胚様体様体の形成を可能にする
条件下で集団が培養される場合、前記ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋細胞を含む単離された胎
盤細胞集団における一または複数の胚様体様体の形成を容易にする。他の具体的な実施形
態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－
、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記単離された
ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５
－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎
盤細胞は、加えて、ＯＣＴ－４＋である。他の具体的な実施形態において、前記単離され
たＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８
－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋
、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、前記細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実
施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、これらの特徴を
提示しない胎盤細胞から単離される。

【0069】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋である単離された胎盤細胞を含む、例えばそれらが濃縮
されている細胞集団であり、胚様体様体の形成を可能にする条件下で集団が培養される場
合、前記細胞を含む単離された胎盤細胞集団における一または複数の胚様体様体の形成を
容易にする。様々な実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約１０％、
少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、
または少なくとも約６０％は、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞である
。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞の少なくとも約７０％は、前記単離され
たＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞である。他の実施形態において、前記細胞集団中の
細胞の、少なくとも約９０％、９５％または９９％は、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ
１０５＋胎盤細胞である。上記の集団の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ
７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－で
ある。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細
胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態
において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＯＣＴ－４＋
である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤
細胞は、加えて、ＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、前記単離された
ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、
ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団
は、前記単離されたＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される
。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団は、これらのマーカーを提示しない胎盤
細胞から単離される。

【0070】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋であり、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養され
る場合、前記細胞を含む単離された胎盤細胞集団において一または複数の胚様体様体の形
成を容易にする。具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、
加えて、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。他の具体的な実施形態において、前記単
離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－
である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加え
て、ＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋
胎盤細胞は、加えて、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８
－、およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－
４＋胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な
実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、これらの特徴を提示しない
胎盤細胞から単離される。

【0071】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、ＯＣＴ－４＋である単離された胎盤細胞を含む、例えばそれらが濃縮されている細
胞集団であり、胚様体様体の形成を可能にする条件下で集団が培養される場合、前記細胞
を含む単離された胎盤細胞集団における一または複数の胚様体様体の形成を容易にする。
様々な実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約１０％、少なくとも約
２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なく
とも約６０％は、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。他の実施形態において、
前記細胞集団中の細胞の少なくとも約７０％は、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞で
ある。他の実施形態において、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約８０％、９０％、
９５％または９９％は、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。上記の集団の具体
的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、
ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＯ
ＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。他の
具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ７３
＋およびＣＤ１０５＋である。他の具体的な実施形態において、前記単離されたＯＣＴ－
４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において、前記単
離されたＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、
ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態において、前
記細胞集団は、前記細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態におい
て、前記細胞集団は、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞から単離される。

【0072】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、単離されたＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－およびＣ
Ｄ３４－胎盤細胞である。他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成
物において有用な細胞集団は、単離された胎盤細胞を含む細胞集団であり、前記単離され
た細胞の集団中の細胞の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％
、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％は、単離されたＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、
ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－およびＣＤ３４－胎盤細胞である。具体的な実施形態において
、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、
ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－およびＣＤ３４－胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。
他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、非母体起源である。他の具
体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞集団は、母体の要素を実質的に含まず
、例えば、前記単離された胎盤細胞集団中の前記細胞の、少なくとも約４０％、４５％、
５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、
９８％または９９％が非母体起源である。

【0073】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、単離されたＣＤ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１
１７－およびＣＤ１３３－胎盤細胞である。他の実施形態において、本明細書に記載され
る方法および組成物において有用な細胞集団は、単離された胎盤細胞を含む細胞集団であ
り、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約
９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％は、単離されたＣＤ１０＋、ＣＤ
１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１１７－およびＣＤ１３３－胎盤細胞である。具
体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、
前記単離された胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態におい
て、前記単離されたＣＤ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１１７－お
よびＣＤ１３３－胎盤細胞は、非母体起源であり、すなわち胎児の遺伝子型を有する。他
の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞集団の前記細胞の、少なくとも約
４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％、
９０％、９５％、９８％または９９％は、非母体起源である。他の具体的な実施形態にお
いて、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、これらの特徴を提示
しない胎盤細胞から単離される。

【0074】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、単離されたＣＤ１０－、ＣＤ３３－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、および
ＣＤ１１７－胎盤細胞である。他の実施形態において、本明細書に記載される方法および
組成物において有用な細胞集団は、単離された胎盤細胞を含む、例えばそれが濃縮されて
いる細胞集団であり、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも約７０％、少なくとも約８０
％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％は、単離された
ＣＤ１０－、ＣＤ３３－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、およびＣＤ１１７－胎盤細胞である
。具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団
は、前記細胞ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単
離された胎盤細胞は、非母体起源である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団
中の前記細胞の、少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０
％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％は、非母体起源であ
る。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞
の集団は、これらのマーカーを提示しない胎盤細胞から単離される。

【0075】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、単離されたＣＤ１０－、ＣＤ１３－、ＣＤ３３－、ＣＤ４５－、および
ＣＤ１１７－胎盤細胞である。他の実施形態において、本明細書に記載される方法および
組成物において有用な細胞集団は、単離されたＣＤ１０－、ＣＤ１３－、ＣＤ３３－、Ｃ
Ｄ４５－、およびＣＤ１１７－胎盤細胞を含む、例えばそれらが濃縮されている細胞集団
であり、前記集団中の細胞の、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約
９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％は、ＣＤ１０－、ＣＤ１３－、Ｃ
Ｄ３３－、ＣＤ４５－、およびＣＤ１１７－胎盤細胞である。具体的な実施形態において
、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、前記細胞ではない胎盤細
胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、非母体
起源である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団中の前記細胞の、少なくとも
約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％
、９０％、９５％、９８％または９９％は、非母体起源である。他の具体的な実施形態に
おいて、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、これらの特徴を提
示しない胎盤細胞から単離される。

【0076】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、およびＣＤ１３３－
であり、加えて、ＣＤ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ
１０５＋、ＣＤ２００＋および／またはＨＬＡ－Ｇ－であり、および／またはＣＤ１１７
陰性である。他の実施形態において、本明細書に記載される方法において有用な細胞集団
は、単離された胎盤細胞を含む細胞集団であり、前記集団中の細胞の、少なくとも約２０
％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または約９９％は、ＨＬＡＡ、
Ｂ、Ｃ－、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１３３－であり、加えて、ＣＤ１０、ＣＤ１３
、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ２００陽性であり、および／または
ＣＤ１１７および／またはＨＬＡ－Ｇ陰性である単離された胎盤細胞である。具体的な実
施形態において、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、前記細胞
ではない胎盤細胞から単離される。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤
細胞は、非母体起源である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団中の前記細胞
の、少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
９０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％は、非母体起源である。他の具体
的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団は、こ
れらのマーカーを提示しない胎盤細胞から単離される。

【0077】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、抗体結合によって決定した場合、ＣＤ２００＋およびＣＤ１０＋であり
、抗体結合とＲＴ－ＰＣＲの両方によって決定した場合、ＣＤ１１７－である、単離され
た胎盤細胞である。他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物にお
いて有用な単離された胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９－、ＣＤ５４＋、ＣＤ２００＋
、ＨＬＡ－Ｇ－、ＭＨＣクラスＩ＋およびβ－２－ミクログロブリン＋である、単離され
た胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞である。他の実施形態において、本
明細書に記載される方法および組成物において有用な単離された胎盤細胞は、少なくとも
１つの細胞マーカーの発現が間充織幹細胞（例えば、骨髄由来間充織幹細胞）の場合より
少なくとも２倍高い胎盤細胞である。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎
盤細胞は、非母体起源である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団中の前記細
胞の、少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％
、９０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％は、非母体起源である。

【0078】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡ
Ｍ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ１０
３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１４４／ＶＥ－カド
ヘリン低、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、β２－ミクログロブリン低（ｍｉｃｒｏｇｌｏｂ
ｕｌｉｎｌｏｗ）、ＭＨＣ－Ｉ低、ＭＨＣ－ＩＩ－、ＨＬＡ－Ｇ低、および／またはＰＤ
Ｌ１低の一または複数である、単離された胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤
細胞である。具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、少なくともＣＤ２９＋
およびＣＤ５４＋である。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、少な
くともＣＤ４４＋およびＣＤ１０６＋である。他の具体的な実施形態において、単離され
た胎盤細胞は、少なくともＣＤ２９＋である。

【0079】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞集
団は、単離された胎盤細胞を含み、前記細胞集団中の細胞の、少なくとも５０％、６０％
、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、
ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２－Ｅ－、ＣＤ６２－Ｌ－、Ｃ
Ｄ６２－Ｐ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ１０３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ１０５＋、
ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン弱（ｃａｄｈｅｒｉｎ弱）、Ｃ
Ｄ１８４／ＣＸＣＲ４－、β２－ミクログロブリン弱（ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ弱）
、ＨＬＡ－Ｉ弱、ＨＬＡ－ＩＩ－、ＨＬＡ－Ｇ弱、および／またはＰＤＬ１弱の一または
複数である単離された胎盤細胞である。他の具体的な実施形態において、前記細胞集団中
の細胞の、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または
９９％は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、
ＣＤ６２－Ｅ－、ＣＤ６２－Ｌ－、ＣＤ６２－Ｐ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ１０
３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１４４／ＶＥ－カド
ヘリン弱、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、β２－ミクログロブリン弱、ＭＨＣ－Ｉ弱、ＭＨ
Ｃ－ＩＩ－、ＨＬＡ－Ｇ弱、およびＰＤＬ１弱である。

【0080】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離さ
れた胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ
４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳ
ＥＡ４－、ＯＣＴ－４＋、およびＡＢＣ－ｐ＋の１つもしくは複数または全てである単離
された胎盤細胞であり、ＡＢＣ－ｐは、胎盤特異的なＡＢＣ輸送タンパク質（また、乳が
ん耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）およびミトキサントロン耐性タンパク質（ＭＸＲ）として
も公知である）であり、前記単離された胎盤細胞は、臍帯血を引き出し、潅流して、残留
した血液を除去した、哺乳類、例えばヒトの胎盤を潅流することにより得られる。

【0081】

上記の特徴のいずれかの他の具体的な実施形態において、細胞マーカー（例えば、表面
抗原分類または免疫原性マーカー）の発現は、フローサイトメトリーによって決定され、
他の具体的な実施形態において、マーカーの発現は、ＲＴ－ＰＣＲによって決定される。

【0082】

遺伝子プロファイリングから、単離された胎盤細胞、および単離された胎盤細胞集団は
、他の細胞、例えば間葉幹細胞、例えば骨髄由来間葉幹細胞と区別できることが確認され
る。本明細書に記載される単離された胎盤細胞は、一または複数の遺伝子の発現に基づき
例えば間葉幹細胞と区別することができ、これらの遺伝子の発現は、単離された胎盤細胞
、またはある特定の単離された臍帯幹細胞において、骨髄由来間葉幹細胞と比較してより
有意に高い。特定には、本明細書で提供される処置の方法において有用な単離された胎盤
細胞は、一または複数の遺伝子の発現に基づき間葉幹細胞からと区別することができ、こ
れらの遺伝子の発現は、単離された胎盤細胞において、等しい数の骨髄由来間葉幹細胞の
場合より有意に高く（すなわち、少なくとも２倍高く）、ここで一または複数の遺伝子は
、等しい条件下で細胞を成長させる場合、ＡＣＴＧ２、ＡＤＡＲＢ１、ＡＭＩＧＯ２、Ａ
ＲＴＳ－１、Ｂ４ＧＡＬＴ６、ＢＣＨＥ、Ｃ１１ｏｒｆ９、ＣＤ２００、ＣＯＬ４Ａ１、
ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＡ４、ＤＭＤ、ＤＳＣ３、ＤＳＧ２、ＥＬＯＶＬ２、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ
ＬＪ１０７８１、ＧＡＴＡ６、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＣＡＭ１、
ＩＥＲ３、ＩＧＦＢＰ７、ＩＬ１Ａ、ＩＬ６、ＩＬ１８、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ８、ＬＩＰ
Ｇ、ＬＲＡＰ、ＭＡＴＮ２、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＮＵＡＫ１、ＰＣＤＨ７、ＰＤＬ
ＩＭ３、ＰＫＰ２、ＲＴＮ１、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＳＴ３ＧＡＬ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ
５、ＳＬＣ１２Ａ８、ＴＣＦ２１、ＴＧＦＢ２、ＶＴＮ、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、または前述の
もののいずれかの組合せである。例えば、その開示は参照によりその全体が本明細書に組
み入れられる特許文献４参照されたい。ある特定の具体的な実施形態において、前記一ま
たは複数の遺伝子の前記発現は、例えばＲＴ－ＰＣＲまたはマイクロアレイ分析により、
例えば、Ｕ１３３－Ａマイクロアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を使用して決定される。
他の具体的な実施形態において、ＤＭＥＭ－ＬＧ（例えば、Ｇｉｂｃｏから）；２％ウシ
胎児血清（例えば、ＨｙｃｌｏｎｅＬａｂｓ．から）；１×インスリン－トランスフェ
リン－セレニウム（ＩＴＳ）；１×リノール酸－ウシ血清アルブミン（ＬＡ－ＢＳＡ）；
１０～９Ｍのデキサメタゾン（例えば、Ｓｉｇｍａから）；１０～４Ｍのアスコルビン酸
２－ホスフェート（例えば、Ｓｉｇｍａから）；１０ｎｇ／ｍＬの上皮増殖因子（例えば
、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから）；および１０ｎｇ／ｍＬの血小板由来増殖因子（ＰＤＧ
Ｆ－ＢＢ）（例えば、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから）を含む培地中で、数回の集団倍加、
例えば約３から約３５回の集団倍加で培養される場合、前記単離された胎盤細胞は、前記
一または複数の遺伝子を発現する。他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞
に特異的な、または単離された臍帯細胞特異的な遺伝子は、ＣＤ２００である。

【0083】

これらの遺伝子に特異的な配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいて、２００８年３月現在、受
託番号ＮＭ＿００１６１５（ＡＣＴＧ２）、ＢＣ０６５５４５（ＡＤＡＲＢ１）、（ＮＭ
＿１８１８４７（ＡＭＩＧＯ２）、ＡＹ３５８５９０（ＡＲＴＳ－１）、ＢＣ０７４８８
４（Ｂ４ＧＡＬＴ６）、ＢＣ００８３９６（ＢＣＨＥ）、ＢＣ０２０１９６（Ｃ１１ｏｒ
ｆ９）、ＢＣ０３１１０３（ＣＤ２００）、ＮＭ＿００１８４５（ＣＯＬ４Ａ１）、ＮＭ
＿００１８４６（ＣＯＬ４Ａ２）、ＢＣ０５２２８９（ＣＰＡ４）、ＢＣ０９４７５８（
ＤＭＤ）、ＡＦ２９３３５９（ＤＳＣ３）、ＮＭ＿００１９４３（ＤＳＧ２）、ＡＦ３３
８２４１（ＥＬＯＶＬ２）、ＡＹ３３６１０５（Ｆ２ＲＬ１）、ＮＭ＿０１８２１５（Ｆ
ＬＪ１０７８１）、ＡＹ４１６７９９（ＧＡＴＡ６）、ＢＣ０７５７９８（ＧＰＲ１２６
）、ＮＭ＿０１６２３５（ＧＰＲＣ５Ｂ）、ＡＦ３４００３８（ＩＣＡＭ１）、ＢＣ００
０８４４（ＩＥＲ３）、ＢＣ０６６３３９（ＩＧＦＢＰ７）、ＢＣ０１３１４２（ＩＬ１
Ａ）、ＢＴ０１９７４９（ＩＬ６）、ＢＣ００７４６１（ＩＬ１８）、（ＢＣ０７２０１
７）ＫＲＴ１８、ＢＣ０７５８３９（ＫＲＴ８）、ＢＣ０６０８２５（ＬＩＰＧ）、Ｂ
Ｃ０６５２４０（ＬＲＡＰ）、ＢＣ０１０４４４（ＭＡＴＮ２）、ＢＣ０１１９０８（Ｍ
ＥＳＴ）、ＢＣ０６８４５５（ＮＦＥ２Ｌ３）、ＮＭ＿０１４８４０（ＮＵＡＫ１）、Ａ
Ｂ００６７５５（ＰＣＤＨ７）、ＮＭ＿０１４４７６（ＰＤＬＩＭ３）、ＢＣ１２６１９
９（ＰＫＰ－２）、ＢＣ０９０８６２（ＲＴＮ１）、ＢＣ００２５３８（ＳＥＲＰＩＮＢ
９）、ＢＣ０２３３１２（ＳＴ３ＧＡＬ６）、ＢＣ００１２０１（ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ５
）、ＢＣ１２６１６０またはＢＣ０６５３２８（ＳＬＣ１２Ａ８）、ＢＣ０２５６９７（
ＴＣＦ２１）、ＢＣ０９６２３５（ＴＧＦＢ２）、ＢＣ００５０４６（ＶＴＮ）、および
ＢＣ００５００１（ＺＣ３Ｈ１２Ａ）で見出すことができる。

【0084】

ある特定の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、ＡＣＴＧ２、ＡＤ
ＡＲＢ１、ＡＭＩＧＯ２、ＡＲＴＳ－１、Ｂ４ＧＡＬＴ６、ＢＣＨＥ、Ｃ１１ｏｒｆ９、
ＣＤ２００、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＡ４、ＤＭＤ、ＤＳＣ３、ＤＳＧ２、Ｅ
ＬＯＶＬ２、Ｆ２ＲＬ１、ＦＬＪ１０７８１、ＧＡＴＡ６、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲＣ５Ｂ
、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＦＢＰ７、ＩＬ１Ａ、ＩＬ６、ＩＬ１８、Ｋ
ＲＴ１８、ＫＲＴ８、ＬＩＰＧ、ＬＲＡＰ、ＭＡＴＮ２、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＮＵ
ＡＫ１、ＰＣＤＨ７、ＰＤＬＩＭ３、ＰＫＰ２、ＲＴＮ１、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＳＴ３Ｇ
ＡＬ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ５、ＳＬＣ１２Ａ８、ＴＣＦ２１、ＴＧＦＢ２、ＶＴＮ、お
よびＺＣ３Ｈ１２Ａのそれぞれを、等しい条件下で細胞を成長させる場合、等しい数の骨
髄由来間葉幹細胞より検出できる程度に高いレベルで発現する。

【0085】

具体的な実施形態において、胎盤細胞は、ＣＤ２００およびＡＲＴＳ１（１型腫瘍壊死
因子のアミノペプチダーゼレギュレーター）；ＡＲＴＳ－１およびＬＲＡＰ（白血球由来
アルギニンアミノペプチダーゼ）；ＩＬ６（インターロイキン－６）およびＴＧＦＢ２（
トランスフォーミング増殖因子、ベータ２）；ＩＬ６およびＫＲＴ１８（ケラチン１８）
；ＩＥＲ３（前初期応答３）、ＭＥＳＴ（中胚葉特異的転写物相同体）およびＴＧＦＢ２
；ＣＤ２００およびＩＥＲ３；ＣＤ２００およびＩＬ６；ＣＤ２００およびＫＲＴ１８；
ＣＤ２００およびＬＲＡＰ；ＣＤ２００およびＭＥＳＴ；ＣＤ２００およびＮＦＥ２Ｌ３
（核内因子（赤血球由来２）様３）；またはＣＤ２００およびＴＧＦＢ２を、等しい数の
骨髄由来間葉幹細胞（ＢＭ－ＭＳＣ）より検出できる程度に高いレベルで発現し、前記骨
髄由来間葉幹細胞は、培養中、前記単離された胎盤細胞が受けた継代回数に等しい継代回
数を受けている。他の具体的な実施形態において、胎盤細胞は、ＡＲＴＳ－１、ＣＤ２０
０、ＩＬ６およびＬＲＡＰ；ＡＲＴＳ－１、ＩＬ６、ＴＧＦＢ２、ＩＥＲ３、ＫＲＴ１８
およびＭＥＳＴ；ＣＤ２００、ＩＥＲ３、ＩＬ６、ＫＲＴ１８、ＬＲＡＰ、ＭＥＳＴ、Ｎ
ＦＥ２Ｌ３、およびＴＧＦＢ２；ＡＲＴＳ－１、ＣＤ２００、ＩＥＲ３、ＩＬ６、ＫＲＴ
１８、ＬＲＡＰ、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、およびＴＧＦＢ２；またはＩＥＲ３、ＭＥＳ
ＴおよびＴＧＦＢ２を、等しい数の骨髄由来間葉幹細胞ＢＭ－ＭＳＣより検出できる程度
に高いレベルで発現し、前記骨髄由来間葉幹細胞は、培養中、前記単離された胎盤細胞が
受けた継代回数に等しい継代回数を受けている。

【0086】

上記で述べた遺伝子の発現は、標準的な技術により評価することができる。例えば、遺
伝子の配列に基づくプローブを、従来の技術によって個々に選択して構築することができ
る。遺伝子の発現は、例えば、遺伝子の一または複数に対するプローブを含むマイクロア
レイ、例えば、ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）ヒトゲノムＵ１３
３Ａ２．０アレイ、またはＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）ヒトゲ
ノムＵ１３３プラス２．０（サンタクララ、カリフォルニア州）で評価することができる
。これらの遺伝子の発現は、特定のＧｅｎＢａｎｋ受託番号の配列が修正されている場合
でも、修正された配列に特異的なプローブは周知の標準的な技術を使用して容易に生成で
きるため、評価することができる。

【0087】

これらの遺伝子の発現レベルは、単離された胎盤細胞集団の同一性を確認するのに使用
すること、細胞集団を、少なくとも複数の単離された胎盤細胞を含むと同定するのに使用
することなどが可能である。同一性が確認されている単離された胎盤細胞の集団は、クロ
ーン性であってもよく、例えば、単一の単離された胎盤細胞から拡張された単離された胎
盤細胞集団、または幹細胞の混成集団、例えば、複数の単離された胎盤細胞から拡張され
た単離された胎盤細胞を単独で含む細胞集団、または本明細書に記載されるような単離さ
れた胎盤細胞と少なくとも１つの他のタイプの細胞とを含む細胞集団であってもよい。

【0088】

これらの遺伝子の発現レベルは、単離された胎盤細胞集団を選択するのに使用すること
ができる。例えば、細胞、例えば、クローン的に拡張した細胞の集団は、上記で列挙した
遺伝子の一または複数の発現が、その細胞集団からのサンプル中で等価な間葉幹細胞集団
より有意に高い場合に選択することができる。このような選択は、複数の単離された胎盤
細胞集団からの集団の選択、その同一性が公知ではない複数の細胞集団からの集団などの
選択であってもよい。

【0089】

単離された胎盤細胞は、例えば間充織幹細胞対照における前記一または複数の遺伝子に
おける発現レベル、例えば、等しい数の骨髄由来間葉幹細胞における前記一または複数の
遺伝子の発現のレベルと比較した場合の、一または複数のこのような遺伝子の発現レベル
に基づき選択することができる。一実施形態において、等しい数の間葉幹細胞を含むサン
プル中の前記一または複数の遺伝子の発現レベルが、対照として使用される。他の実施形
態において、対照は、ある特定の条件下で試験された単離された胎盤細胞の場合、前記条
件下での間葉幹細胞における前記一または複数の遺伝子の発現レベルを表す数値である。

【0090】

一実施形態において、本明細書で提供される方法において有用な胎盤細胞（例えば、Ｐ
ＤＡＣ）は、１から１００ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦに４から２１日曝露した後、免疫学的局
在法により検出した場合、ＣＤ３４を発現しない。具体的な実施形態において、前記胎盤
接着細胞は、組織培養プラスチックに接着性を有する。他の具体的な実施形態において、
前記細胞集団は、例えばＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）などの基材上で、血管新生因子、例え
ば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、上皮性増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（Ｐ
ＤＧＦ）または塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）などの存在下で培養される場合、
内皮細胞の芽または管状構造の形成を誘導する。

【0091】

他の態様において、本明細書で提供されるＰＤＡＣ、細胞集団、例えばＰＤＡＣ集団、
または前記単離された細胞の集団中の細胞の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０
％、９０％、９５％または９８％がＰＤＡＣである細胞の集団は、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、Ｉ
Ｌ－８、ＭＣＰ－３、ＦＧＦ２、フォリスタチン、Ｇ－ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＥＮＡ－７８、
ＧＲＯ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＴＩＭＰ－２、ｕＰＡＲ、またはガレ
クチン－１の１つもしくは複数または全てを、例えば細胞または複数の細胞が成長してい
る培養培地に分泌する。他の実施形態において、ＰＤＡＣは、酸素正常条件下（例えば、
約２０％または約２１％Ｏ２）と比較して低い酸素条件下（例えば、約５％未満のＯ２）
で、高いレベルのＣＤ２０２ｂ、ＩＬ－８および／またはＶＥＧＦを発現する。

【0092】

他の実施形態において、本明細書に記載されるＰＤＡＣまたはＰＤＡＣを含む細胞集団
のいずれかは、前記胎盤由来の接着細胞と接触する内皮細胞の集団において、芽または管
状構造の形成を引き起こすことができる。具体的な実施形態において、ＰＤＡＣはヒト内
皮細胞と共培養され、それにより、例えば、細胞外マトリックスタンパク質、例えばＩお
よびＩＶ型コラーゲンなど、ならびに／または血管新生因子、例えば血管内皮増殖因子（
ＶＥＧＦ）、上皮性増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）もしくは塩基
性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）の存在下で、例えば胎盤のコラーゲンまたはＭＡＴＲ
ＩＧＥＬ（商標）などの基材中またはその上で少なくとも４日培養される場合、芽もしく
は管状構造が形成されるか、または内皮細胞の芽の形成が維持される。他の実施形態にお
いて、本明細書に記載される胎盤由来の接着細胞を含む細胞集団のいずれかは、血管新生
因子、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来増
殖因子（ＰＤＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、またはインターロイキン
－８（ＩＬ－８）を分泌し、それによって、例えばＩおよびＩＶ型コラーゲンなどの細胞
外マトリックスタンパク質の存在下で、例えば胎盤のコラーゲンまたはＭＡＴＲＩＧＥＬ
（商標）などの基材中またはその上で培養される場合、ヒト内皮細胞の芽または管状構造
の形成を誘導することができる。

【0093】

他の実施形態において、上記の胎盤由来の接着細胞を含む細胞集団（ＰＤＡＣ）のいず
れかは、血管新生因子を分泌する。具体的な実施形態において、細胞集団は、血管内皮増
殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、塩
基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、および／またはインターロイキン－８（ＩＬ－８
）を分泌する。他の具体的な実施形態において、ＰＤＡＣを含む細胞集団は、一または複
数の血管新生因子を分泌し、それによってｉｎｖｉｔｒｏでの創傷治癒アッセイにおい
てヒト内皮細胞の移動を誘導する。他の具体的な実施形態において、胎盤由来の接着細胞
を含む細胞集団は、ヒト内皮細胞、内皮前駆細胞、筋細胞または筋原細胞の成熟、分化ま
たは増殖を誘導する。

【0094】

本明細書に記載される単離された胎盤細胞は、初代培養で、または例えばＤＭＥＭ－Ｌ
Ｇ（Ｇｉｂｃｏ）、２％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（ＨｙｃｌｏｎｅＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ）、１×インスリン－トランスフェリン－セレニウム（ＩＴＳ）、１×リノール酸
（ｌｅｎｏｌｅｎｉｃ－ａｃｉｄ）－ウシ－血清－アルブミン（ＬＡ－ＢＳＡ）、１０～
９Ｍのデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）、１０～４Ｍのアスコルビン酸２－ホスフェート（
Ｓｉｇｍａ）、１０ｎｇ／ｍｌの上皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）、
１０ｎｇ／ｍｌの血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）、
および１００Ｕのペニシリン／１０００Ｕのストレプトマイシンを含む培地中での増殖中
に、上記の特徴（例えば、細胞表面マーカーおよび／または遺伝子発現プロファイルの組
合せ）を提示する。

【0095】

本明細書で開示された胎盤細胞のいずれかの一実施形態において、細胞は、ヒトである
。本明細書で開示された胎盤細胞のいずれかの一実施形態において、細胞マーカーの特徴
または遺伝子発現の特徴は、ヒトマーカーまたはヒト遺伝子である。

【0096】

前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞を含む細胞集団の他の具体的な実施
形態において、前記細胞または集団は、拡張されており、例えば、少なくとも、約、また
は最大で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９、もしくは２０回、またはそれより多く継代されているか、ま
たは少なくとも、約、または最大で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、
２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０回
の集団倍加で増殖されている。前記単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞を含む
細胞集団の他の具体的な実施形態において、前記細胞または集団は、初代単離物である。
本明細書で開示される単離された胎盤細胞、または単離された胎盤細胞を含む細胞集団の
他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、胎児起源である（すなわち
胎児の遺伝子型を有する）。

【0097】

一実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、増殖培地中で、すなわち、例えば増
殖培地中で培養される間に増殖を促進するように配合された培地中で培養される間、分化
しない。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、増殖するためにフ
ィーダー層を必要としない。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は
、培養中、フィーダー層の非存在下で、単にフィーダー細胞層の欠如のために分化しない
。

【0098】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物において有用な細胞は
、単離された胎盤細胞であり、複数の前記単離された胎盤細胞は、アルデヒドデヒドロゲ
ナーゼ活性アッセイにより評価された場合、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）陽
性である。このようなアッセイは、当業界において公知である（例えば、非特許文献４参
照）。具体的な実施形態において、前記ＡＬＤＨアッセイは、アルデヒドデヒドロゲナー
ゼ活性のマーカーとしてＡｌｄｅｆｌｕｏｒ（登録商標）（Ａｌｄａｇｅｎ，Ｉｎｃ．、
アシュランド、オレゴン州）を使用する。具体的な実施形態において、前記複数は、前記
細胞集団中の細胞の約３％から約２５％の間である。他の実施形態において、単離された
臍帯細胞、例えば単離された複能性臍帯細胞の集団が本明細書で提供され、複数の前記単
離された臍帯細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性のインジケーターとしてＡｌｄｅ
ｆｌｕｏｒ（登録商標）を使用するアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性アッセイにより評価
された場合、アルデヒドデヒドロゲナーゼ陽性である。具体的な実施形態において、前記
複数は、前記細胞集団中の細胞の約３％から約２５％の間である。他の実施形態において
、前記単離された胎盤細胞または単離された臍帯細胞の集団は、ほぼ同じ数の細胞を有し
、同じ条件下で培養された骨髄由来間葉幹細胞の集団より、少なくとも３倍、または少な
くとも５倍高いＡＬＤＨ活性を示す。

【0099】

本明細書に記載の単離された胎盤細胞を含む細胞の集団のいずれかの一実施形態におい
て、前記細胞の集団中の胎盤細胞は、母体の遺伝子型を有する細胞を実質的に含まず、例
えば、前記集団中の胎盤細胞の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％が、胎児
の遺伝子型を有する。本明細書に記載の単離された胎盤細胞を含む細胞の集団のいずれか
のある特定の他の実施形態において、前記胎盤細胞を含む細胞の集団は、母体の遺伝子型
を有する細胞を実質的に含まず、例えば、前記集団中の細胞の少なくとも４０％、４５％
、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
、９８％または９９％が、胎児の遺伝子型を有する。

【0100】

上記の単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞の細胞集団のいずれかの具体的な
実施形態において、前記集団中の細胞、または少なくとも細胞の約９５％または約９９％
の核型は、正常である。上記の胎盤細胞または細胞集団のいずれかの他の具体的な実施形
態において、細胞、または細胞集団中の細胞は、非母体起源である。

【0101】

上記のマーカーの組合せのいずれかを有する単離された胎盤細胞または単離された胎盤
細胞集団は、あらゆる比率で組み合わせることができる。上記の単離された胎盤細胞集団
のいずれか２つ以上を組み合わせて、単離された胎盤細胞集団を形成することができる。
例えば、単離された胎盤細胞の集団は、上述したマーカーの組合せの１つによって定義さ
れた第１の単離された胎盤細胞集団、および上述したマーカーの組合せの他のものによっ
て定義された第２の単離された胎盤細胞集団を含んでいてもよく、前記第１および第２の
集団は、約１：９９、２：９８、３：９７、４：９６、５：９５、１０：９０、２０：８
０、３０：７０、４０：６０、５０：５０、６０：４０、７０：３０、８０：２０、９０
：１０、９５：５、９６：４、９７：３、９８：２、または約９９：１の比率で組み合わ
される。同様の様式で、上述した単離された胎盤細胞または単離された胎盤細胞集団のい
ずれか３つ、４つ、５つまたはそれより多くを組み合わせることができる。

【0102】

本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離された胎盤細胞は、例えば
胎盤組織の破壊により得ることができ、この破壊は、酵素による消化（４．２．３章参照
）または潅流（４．２．４章参照）を用いてもよいし、または用いなくてもよい。例えば
、単離された胎盤細胞集団は、臍帯血を引き出し、潅流して、残留した血液を除去した哺
乳類胎盤を潅流するステップ；前記胎盤を潅流溶液で潅流するステップ；および前記潅流
溶液を収集するステップであって、潅流後の前記潅流溶液は、単離された胎盤細胞を含む
胎盤細胞集団を含む、ステップ；および前記細胞集団から複数の前記単離された胎盤細胞
を単離するステップを含む方法に従って産生することができる。具体的な実施形態におい
て、潅流溶液は、臍帯静脈と臍帯動脈の両方を通過して、それが胎盤から滲出した後に収
集される。他の具体的な実施形態において、潅流溶液は、臍帯静脈を通過して臍帯動脈か
ら収集されるか、または臍帯動脈を通過して臍帯静脈から収集される。

【0103】

様々な実施形態において、胎盤の潅流から得られた細胞の集団内に含有される単離され
た胎盤細胞は、前記胎盤細胞の集団の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０
％、９５％、９９％または少なくとも９９．５％である。他の具体的な実施形態において
、潅流によって収集された単離された胎盤細胞は、胎児の細胞および母体の細胞を含む。
他の具体的な実施形態において、潅流によって収集された単離された胎盤細胞は、少なく
とも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または少なくとも９９．
５％が胎児細胞である。

【0104】

他の具体的な実施形態において、本明細書に記載されるように、潅流により収集された
単離された胎盤細胞集団を含む組成物であって、前記組成物は、単離された胎盤細胞を収
集するのに使用される潅流溶液の少なくとも一部を含む、組成物が本明細書で提供される
。

【0105】

本明細書に記載される単離された胎盤細胞の単離された集団は、組織を破壊する酵素で
胎盤組織を消化して、細胞を含む胎盤細胞集団を得ること、および前記胎盤細胞の残りか
ら複数の胎盤細胞を単離すること、または実質的に単離することによって産生することが
できる。胎盤の全体またはそのいずれか一部を消化して、本明細書に記載される単離され
た胎盤細胞を得ることができる。具体的な実施形態において、例えば、前記胎盤組織は、
胎盤全体、羊膜、柔毛膜、羊膜と柔毛膜の組合せ、または前述のもののいずれかの組合せ
であってもよい。他の具体的な実施形態において、組織を破壊する酵素は、トリプシンま
たはコラゲナーゼである。様々な実施形態において、胎盤を消化することから得られた細
胞の集団内に含有される単離された胎盤細胞は、前記胎盤細胞集団の少なくとも５０％、
６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または少なくとも９９．５％である。

【0106】

上述した単離された胎盤細胞集団、および単離された胎盤細胞集団は、一般的に、約、
少なくとも、または最大で、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個、１×１０⁴個、３
×１０⁴個、５×１０⁴個、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×
１０⁶個、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１
０⁸個、５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の単離された胎盤
細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物の一部として）を含んでいてもよいし、また
は約１×１０³個から３×１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の間、５×１０³個
から１×１０⁴個の間、１×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個から５×１０⁴個
の間、５×１０⁴個から１×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個の間、３×１０⁵
個から５×１０⁵個の間、５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶個から３×１０⁶
個の間、３×１０⁶個から５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷個の間、１×１０
⁷個から３×１０⁷個の間、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０⁷個から１×１０⁸
個の間、１×１０⁸個から３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸個の間、５×１０
⁸個から１×１０⁹個の間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５×１０⁹個から１
×１０¹⁰個の間の単離された胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物の一部とし
て）を含んでいてもよい。本明細書に記載される処置方法において有用な単離された胎盤
細胞集団は、例えば、例えばトリパンブルー排除によって決定される場合、少なくとも５
０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９
８％、または９９％の生存可能な単離された胎盤細胞を含む。

【0107】

４．２単離された胎盤細胞を得る方法
４．２．１幹細胞収集組成物
さらに、上記の４．１章に記載される胎盤細胞、例えば単離された胎盤細胞を収集およ
び単離する方法が本明細書において提供される。一般的に、このような細胞は、哺乳類胎
盤から、生理的に許容できる溶液、例えば細胞収集組成物を使用して得られる。例示的な
細胞収集組成物は、「ＩｍｐｒｏｖｅｄＭｅｄｉｕｍｆｏｒＣｏｌｌｅｃｔｉｎｇ
ＰｌａｃｅｎｔａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓａｎｄＰｒｅｓｅｒｖｉｎｇＯｒｇ
ａｎｓ」という表題の関連する特許文献５で詳細に記載されており、その開示は、参照に
よりその全体が本明細書に組み入れられる。

【0108】

細胞収集組成物は、細胞、例えば本明細書に記載される単離された胎盤細胞の収集およ
び／または培養に好適なあらゆる生理的に許容できる溶液、例えば、塩類溶液（例えば、
リン酸緩衝塩類溶液、クレブス溶液、改変クレブス溶液、イーグル溶液、０．９％ＮａＣ
ｌなど）、培養培地（例えば、ＤＭＥＭ、Ｈ．ＤＭＥＭなど）、および同種のものを含ん
でいてもよい。

【0109】

細胞収集組成物は、収集時間から培養時間まで、単離された胎盤細胞を保存する傾向が
ある、すなわち、単離された胎盤細胞が乾燥しないようにする、または単離された胎盤細
胞の死を遅延させる、細胞集団中の死亡する単離された胎盤細胞の数を低減する等の一ま
たは複数の要素を含んでいてもよい。このような要素は、例えば、アポトーシス阻害剤（
例えば、カスパーゼ阻害剤またはＪＮＫ阻害剤）；血管拡張剤（例えば、硫酸マグネシウ
ム、抗高血圧薬、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、副腎皮質刺激ホルモン、コ
ルチコトロピン放出ホルモン、ニトロプルシドナトリウム、ヒドララジン、アデノシン三
リン酸、アデノシン、インドメタシンまたは硫酸マグネシウム、ホスホジエステラーゼ阻
害剤など）；壊死阻害剤（例えば、２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－３－ペンチル
アミノ－マレイミド、ピロリジンジチオカルバメート、またはクロナゼパム）；ＴＮＦ－
α阻害剤；および／または酸素運搬ペルフルオロカーボン（例えば、ペルフルオロオクチ
ルブロミド、ペルフルオロデシルブロミドなど）であり得る。

【0110】

細胞収集組成物は、一または複数の組織分解酵素、例えば、メタロプロテアーゼ、セリ
ンプロテアーゼ、中性プロテアーゼ、ＲＮアーゼ、またはＤＮアーゼ、または同種のもの
を含んでいてもよい。このような酵素としては、これらに限定されないが、コラゲナーゼ
（例えば、コラゲナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶ、クロストリジウム・ヒストリチカ
ム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のコラゲナーゼなど）；
ディスパーゼ、サーモリシン、エラスターゼ、トリプシン、ＬＩＢＥＲＡＳＥ、ヒアルロ
ニダーゼ、および同種のものが挙げられる。

【0111】

細胞収集組成物は、殺菌的または静菌的に有効な量の抗生物質を含んでいてもよい。あ
る特定の非限定的な実施形態において、抗生物質は、マクロライド（例えば、トブラマイ
シン）、セファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフ
プロジル、セファクロル、セフィキシムまたはセファドロキシル）、クラリスロマイシン
、エリスロマイシン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン（例えば、オ
フロキサシン、シプロフロキサシンまたはノルフロキサシン）、テトラサイクリン、スト
レプトマイシンなどで一実施形態において、抗生物質は、グラム（＋）および／またはグ
ラム（－）細菌、例えば、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）などに対して活性であ
る。一実施形態において、抗生物質は、ゲンタマイシンであり、例えば、培養培地中約０
．００５％から約０．０１％（ｗ／ｖ）である。

【0112】

細胞収集組成物はまた、以下の化合物の一または複数：アデノシン（約１ｍＭから約５
０ｍＭ）；Ｄ－グルコース（約２０ｍＭから約１００ｍＭ）；マグネシウムイオン（約１
ｍＭから約５０ｍＭ）；２０，０００ダルトンより大きい分子量を有する巨大分子、一実
施形態において、内皮の完全性および細胞の生存能を維持するのに十分な量で存在するも
の（例えば、合成または天然に存在するコロイド、多糖類、例えば約２５ｇ／ｌから約１
００ｇ／ｌ、または約４０ｇ／ｌから約６０ｇ／ｌで存在するデキストランまたはポリエ
チレングリコールなど）；抗酸化剤（例えば、約２５μＭから約１００μＭで存在する、
ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、グルタチオン、ビタミンＣま
たはビタミンＥ）；還元剤（例えば、約０．１ｍＭから約５ｍＭで存在するＮ－アセチル
システイン）；細胞へのカルシウム侵入を予防する薬剤（例えば、約２μＭから約２５μ
Ｍで存在するベラパミル）；ニトログリセリン（例えば、約０．０５ｇ／Ｌから約０．２
ｇ／Ｌ）；抗凝血剤、一実施形態において、残留した血液の凝固の予防を助けるのに十分
な量で存在する抗凝血剤（例えば、約１０００ユニット／ｌから約１００，０００ユニッ
ト／ｌの濃度で存在するヘパリンまたはヒルジン）；またはアミロライド含有化合物（例
えば、約１．０μＭから約５μＭで存在する、アミロライド、エチルイソプロピルアミロ
ライド、ヘキサメチレンアミロライド、ジメチルアミロライドまたはイソブチルアミロラ
イド）を含んでいてもよい。

【0113】

４．２．２胎盤の収集および取り扱い
一般的に、ヒト胎盤は、出産後に排除された直後に回収される。好ましい実施形態にお
いて、胎盤は、インフォームドコンセントの後、および患者の完全な病歴を把握し、胎盤
と関連付けた後に、患者から回収される。好ましくは、病歴は、分娩後も継続する。この
ような病歴は、それに続く胎盤または胎盤から回収された単離された胎盤細胞の使用と連
携させるのに使用することができる。例えば、単離されたヒト胎盤細胞は、病歴を考慮し
て、胎盤に関連する乳児のための、または乳児の親、兄弟もしくは他の親族のための個別
化薬に使用することができる。

【0114】

単離された胎盤細胞の回収の前に、臍帯血および胎盤血は、好ましくは除去される。一
実施形態において、分娩後、胎盤中の臍帯血が回収される。胎盤は、従来の臍帯血回収プ
ロセスに供することができる。典型的には、針またはカニューレを使用して、重力の助け
によって胎盤を放血させる（例えば、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、特許文献６；
ヘッセル（Ｈｅｓｓｅｌ）ら、特許文献７参照）。通常、針またはカニューレを臍帯静脈
中に置き、胎盤を穏やかに揉んで胎盤からの臍帯血の引き出しを助けることができる。こ
のような臍帯血回収は商業的に実行することもでき、例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋＵＳＡ
、ＣｅｄａｒＫｎｏｌｌｓ、Ｎ．Ｊ．である。好ましくは、臍帯血回収中の組織の破壊
が最小化されるように、胎盤は、さらなる操作を用いずに重力により引き出される。

【0115】

典型的には、胎盤は、例えば潅流または組織解離による臍帯血の回収および幹細胞の収
集のために、分娩または出産室から他の場所、例えば実験室に輸送される。胎盤は、好ま
しくは、断熱された滅菌輸送デバイス（胎盤の温度を２０～２８℃の間に維持する）で、
例えば、滅菌ジップロックプラスチックバッグ中に近位の臍帯を固定して胎盤を置き、次
いでこれを断熱容器中に置くことにより輸送される。他の実施形態において、胎盤は、そ
の開示が参照により本明細書に組み入れられる係属中の特許文献８に実質的に記載される
ような臍帯血収集キットで輸送される。好ましくは、胎盤は、分娩後４から２４時間で実
験室に届けられる。一実施形態において、近位の臍帯は、臍帯血回収の前に、盤状胎盤（
ｐｌａｃｅｎｔａｌｄｉｓｃ）への挿入部の、好ましくは４～５ｃｍ（センチメートル
）以内に固定される。他の実施形態において、近位の臍帯は、臍帯血回収の後、ただしさ
らなる胎盤加工の前に固定される。

【0116】

胎盤は、細胞収集の前に、滅菌条件下で、室温または５℃から２５℃の温度のいずれか
で貯蔵することができる。胎盤は、胎盤を潅流して全ての残留した臍帯血を除去する前の
、４から２４時間の期間にわたり、４８時間まで、または４８時間より長く、貯蔵しても
よい。一実施形態において、胎盤は、排除後、約０時間から約２時間の間に収穫される。
胎盤は、好ましくは、抗凝血剤溶液中で、５℃から２５℃の温度で、貯蔵される。好適な
抗凝血剤溶液は当業界において周知である。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリ
ウムの溶液を使用することができる。好ましい実施形態において、抗凝血剤溶液は、ヘパ
リンの溶液（例えば、１：１０００溶液中、１％ｗ／ｗ）を含む。放血された胎盤は、好
ましくは胎盤細胞を収集する前の３６時間以下で貯蔵される。

【0117】

哺乳類胎盤またはその部分は、上述したようにひとたび一般的に収集され調製されたら
、あらゆる当業界公知の方式で処理することができ、例えば、潅流または破壊することに
より、例えば一または複数の組織を破壊する酵素で消化することにより、単離された胎盤
細胞を得ることができる。

【0118】

４．２．３胎盤組織の物理的な破壊および酵素消化
一実施形態において、幹細胞は、臓器の一部または全ての物理的な破壊によって、哺乳
類胎盤から収集される。例えば、胎盤またはその部分を、例えば、粉砕する、剪断する、
細かく刻む、さいの目に切る、切り刻む、ほぐす等することができる。次いで組織を培養
して、単離された胎盤細胞の集団を得ることができる。典型的には、胎盤組織は、例えば
、培養培地、塩類溶液、または幹細胞収集を使用して破壊される。

【0119】

胎盤は、物理的な破壊および／または酵素消化ならびに幹細胞の回収の前に要素に切り
分けることができる。単離された胎盤細胞は、羊膜、柔毛膜、臍帯、胎盤絨毛叢の全てま
たは一部、または胎盤全体を含むそれらのいずれかの組合せから得ることができる。好ま
しくは、単離された胎盤細胞は、羊膜および柔毛膜を含む胎盤組織から得られる。典型的
には、単離された胎盤細胞は、小さいブロックの胎盤組織の破壊、例えば、体積が約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、
９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００また
は約１０００立方ミリメートルの胎盤組織のブロックの破壊により得ることができる。例
えばトリパンブルー排除によって決定される場合、前記臓器中の複数の細胞、より好まし
くは大多数の細胞、より好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％
、９８％、または９９％の細胞を生存可能なままにする破壊方法であれば、どのような物
理的な破壊方法を使用してもよい。

【0120】

単離された接着性胎盤細胞は、一般的に、排除後の最初の３日以内のいつでも、ただし
好ましくは排除後約８時間から約１８時間の間に、胎盤またはその一部から収集すること
ができる。

【0121】

具体的な実施形態において、破壊された組織は、単離された胎盤細胞の増殖に好適な組
織培養培地中で培養される。

【0122】

他の具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、物理的な胎盤組織の破壊によ
って収集され、物理的な破壊としては、一または複数の組織消化酵素の使用によって達成
できる酵素消化が挙げられる。また胎盤またはその部分を物理的に破壊し、一または複数
の酵素で消化してもよく、次いで得られた材料を細胞収集組成物中に浸すか、またはそれ
に混合してもよい。

【0123】

好ましい細胞収集組成物は、一または複数の組織を破壊する酵素を含む。胎盤組織を破
壊するのに使用できる酵素としては、パパイン、デオキシリボヌクレアーゼ、セリンプロ
テアーゼ、例えばトリプシン、キモトリプシン、コラゲナーゼ、ディスパーゼまたはエラ
スターゼなどが挙げられる。セリンプロテアーゼは、血清中のアルファ２ミクログロブリ
ンによって阻害される場合があるため、消化に使用される培地は通常、無血清である。細
胞回収効率を増加させるために、ＥＤＴＡおよびＤＮアーゼが酵素消化手順において一般
的に使用される。粘性の消化物中への細胞の捕獲が回避されるように、消化されるものを
好ましくは希釈する。

【0124】

組織消化酵素のあらゆる組合せを使用することができる。トリプシンを使用する消化の
ための典型的な濃度としては、０．１％から約２％のトリプシン、例えば約０．２５％の
トリプシンが挙げられる。プロテアーゼは、組み合わせて使用してもよく、すなわち２つ
以上のプロテアーゼを同じ消化反応で使用してもよく、または胎盤細胞、例えば胎盤幹細
胞および複能性胎盤細胞を遊離させるために逐次的に使用してもよい。例えば、一実施形
態において、胎盤またはその部分は、最初に、適切な量のコラゲナーゼＩで、約１から約
２ｍｇ／ｍｌで、例えば３０分間消化され、それに続いてトリプシンで、約０．２５％の
濃度で、例えば１０分間、３７℃で消化される。セリンプロテアーゼは、好ましくは、他
の酵素の使用後に連続して使用することができる。

【0125】

他の実施形態において、幹細胞収集組成物を用いて幹細胞を単離する前に、キレート化
剤、例えば、エチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’
－四酢酸（ＥＧＴＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を、幹細胞を含む幹細
胞収集組成物に、またはその中で組織が破壊および／または消化される溶液に添加するこ
とによって、組織をさらに破壊することもできる。

【0126】

消化後、消化されたものを例えば培養培地で３回洗浄し、洗浄した細胞を培養フラスコ
に植え付ける。次いで細胞を示差的な接着により単離し、例えば生存能、細胞表面マーカ
ー、分化、および同種のものに関して特徴付ける。

【0127】

胎盤全体または胎盤の部分が胎児の細胞と母体の細胞の両方を含む（例えば、胎盤の部
分が柔毛膜または絨毛叢を含む場合）単離された胎盤細胞は、胎児源と母体源の両方に由
来する胎盤細胞の混合物を含むことができると理解されると予想される。胎盤の部分が母
体の細胞（例えば、羊膜）を含まないかごく少数しか含まない場合、それから単離された
胎盤細胞は、ほぼ胎児の胎盤細胞（すなわち、胎児の遺伝子型を有する胎盤細胞）のみを
含むと予想される。

【0128】

胎盤細胞、例えば、上記の４．１章に記載される胎盤細胞は、示差的なトリプシン処理
（以下の４．２．５章参照）、それに続く一または複数の新しい培養容器中における新鮮
な増殖培地中での培養、任意選択でそれに続く第２の示差的なトリプシン処理工程によっ
て、破壊された胎盤組織から単離することができる。

【0129】

４．２．４．胎盤の潅流
胎盤細胞、例えば、上記の４．１章に記載される胎盤細胞はまた、哺乳類胎盤の潅流に
よっても得ることができる。胎盤細胞を得るための哺乳類胎盤を潅流する方法は、例えば
、ハリリ（Ｈａｒｉｒｉ）の特許文献９および特許文献１０、特許文献４ならびに特許文
献５で開示されており、これらそれぞれの開示は、この参照によりそれらの全体が開示に
組み入れられる。

【0130】

胎盤細胞は、潅流溶液として例えば細胞収集組成物を使用する、例えば胎盤の血管系を
介した潅流によって収集することができる。一実施形態において、哺乳類胎盤は、臍帯動
脈および臍帯静脈のいずれかまたはその両方に潅流溶液を通過させることによって潅流さ
れる。胎盤を通る潅流溶液の流動は、例えば胎盤への重力流を使用して達成することがで
きる。好ましくは、ポンプ、例えば蠕動ポンプを使用して、潅流溶液を胎盤に押し通す。
臍帯静脈に、例えば、滅菌接続器具、例えば滅菌管材料などに接続された、カニューレ、
例えばＴＥＦＬＯＮ（登録商標）またはプラスチックカニューレを挿入することができる
。滅菌接続器具は、潅流マニホールドに接続される。

【0131】

潅流の準備において、胎盤は、好ましくは、胎盤の最も高い地点に臍帯動脈および臍帯
静脈が配置されるような方式で方向付けられる（例えば、吊り下げられる）。潅流流体を
胎盤の血管系および周囲の組織を通過させることによって、胎盤を潅流することができる
。また、臍帯静脈への潅流流体の通過および臍帯動脈からの収集、または臍帯動脈への潅
流流体の通過および臍帯静脈からの収集によっても、胎盤を潅流することができる。

【0132】

一実施形態において、例えば、臍帯動脈および臍帯静脈は、例えばフレキシブルなコネ
クターを介して潅流溶液のリザーバに接続されているピペットに、同時に接続される。潅
流溶液は、臍帯静脈および動脈に注入される。潅流溶液は、血管壁からおよび／またはそ
れを通過して胎盤の周囲組織に滲出し、妊娠中に母親の子宮に付着していた胎盤の表面か
ら好適な開放血管に収集される。また潅流溶液を、臍帯の開口部を介して導入し、母体の
子宮壁との境界面である胎盤の壁中の開口部から流動または浸透させてもよい。この方法
は、「受け皿（ｐａｎ）」方法と称することができ、それにより収集される胎盤細胞は、
典型的には胎児の細胞と母体の細胞との混合物である。

【0133】

他の実施形態において、潅流溶液は、臍帯静脈を通過し、臍帯動脈からから収集される
か、または臍帯動脈を通過し、臍帯静脈から収集される。この方法は、「閉回路」方法と
称することができ、それにより収集される胎盤細胞は、典型的にはほぼ胎児のみである。

【0134】

受け皿方法、すなわちそれによって潅流液が胎盤の母体側から滲出した後に収集される
方法を使用する潅流は、胎児の細胞と母体の細胞との混合物を生じることが理解されると
予想される。結果として、この方法によって収集された細胞は、胎児起源と母体起源の両
方の、混成の胎盤細胞集団、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞を含み得る。対照的
に、閉回路方法で胎盤の血管系のみを通る潅流、すなわちそれによって潅流流体が１また
は２つの胎盤の血管を通過して残りの血管のみを通って収集される潅流は、ほぼ胎児起源
の胎盤細胞の集団のみの収集がもたらされる。

【0135】

閉回路潅流方法は、一実施形態において、以下のように実行することができる。出産後
約４８時間以内に産後の胎盤を得る。臍帯を固定し、クランプ上で切断する。臍帯は、捨
ててもよいし、または例えば臍帯幹細胞を回収するために加工したり、および／またはバ
イオマテリアル産生のために臍帯膜を加工したりすることもできる。羊膜は、潅流中に保
持されていてもよいし、または例えば指での鈍的剥離を使用して柔毛膜から分離されても
よい。羊膜が潅流の前に柔毛膜から分離される場合、羊膜は、例えば、捨ててもよいし、
または例えば、酵素消化によって幹細胞を得るために、または例えば羊膜バイオマテリア
ル、例えばその開示が参照によりその全体が本明細書に組み入れられる特許文献１１に記
載のバイオマテリアルを産生するために加工されてもよい。全ての目に見える血餅や残留
した血液を例えば滅菌ガーゼを使用して胎盤からクリーニングした後、例えば臍帯膜を部
分的に切断して臍帯の断面を露出させることによって、臍帯血管を露出させる。血管を確
認して、例えば各血管の切断端部末端を通って閉じたワニ口クランプを進めることによっ
て開く。次いで潅流デバイスまたは蠕動ポンプに接続された器具、例えばプラスチック管
材料を、胎盤動脈のそれぞれに挿入する。ポンプは、目的に好適な、例えば蠕動ポンプで
あり得る。次いで、滅菌収集リザーバ、例えば血液バッグ、例えば２５０ｍＬ収集バッグ
などに接続されたプラスチック管材料は、胎盤静脈に挿入される。代替として、ポンプに
接続された管材料が胎盤静脈に挿入され、収集リザーバへの管は、胎盤動脈の一方または
両方に挿入される。次いで胎盤を、所定体積の潅流溶液、例えば、約７５０ｍｌの潅流溶
液で潅流する。次いで潅流液中の細胞を、例えば遠心分離によって収集する。一実施形態
において、胎盤を潅流溶液、例えば１００～３００ｍＬの潅流溶液で潅流して、潅流の前
に残留した血液を除去し、胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞および／または複能性胎盤細胞を
収集する。他の実施形態において、胎盤を潅流溶液で潅流せずに、潅流の前に残留した血
液を除去し、胎盤細胞を収集する。

【0136】

一実施形態において、近位の臍帯は、潅流中固定され、より好ましくは、盤状胎盤（ｐ
ｌａｃｅｎｔａｌｄｉｓｃ）への臍帯の挿入部の４～５ｃｍ（センチメートル）以内に
固定される。

【0137】

放血プロセス中における哺乳類胎盤からの潅流流体の第１の収集物は、一般的に、臍帯
血および／または胎盤の血液の残留した赤血球で着色されている。潅流流体は、潅流が進
むにつれてより無色になり、残留した臍帯血細胞は胎盤から洗い落とされる。一般的に３
０から１００ｍｌ（ミリリットル）の潅流流体が、初期に胎盤を放血させるのに十分であ
るが、観察された結果に応じてそれより多いまたは少ない潅流流体を使用してもよい。

【0138】

胎盤細胞を単離するのに使用される潅流液体の体積は、収集しようとする細胞の数、胎
盤のサイズ、単一の胎盤から作製しようとする収集物の数などに応じて様々であり得る。
様々な実施形態において、潅流液体の体積は、５０ｍＬから５０００ｍＬ、５０ｍＬから
４０００ｍＬ、５０ｍＬから３０００ｍＬ、１００ｍＬから２０００ｍＬ、２５０ｍＬか
ら２０００ｍＬ、５００ｍＬから２０００ｍＬ、または７５０ｍＬから２０００ｍＬであ
り得る。典型的には、胎盤は、放血後、７００～８００ｍＬの潅流液体で潅流される。

【0139】

胎盤は、数時間または数日にわたり複数回潅流することができる。胎盤を複数回潅流し
ようとする場合、無菌条件下において容器または他の好適な入れ物中で維持または培養し
て、抗凝血剤（例えば、ヘパリン、ワルファリンナトリウム、クマリン、ビスヒドロキシ
クマリン）含有または非含有の、および／または抗微生物剤（例えば、β－メルカプトエ
タノール（０．１ｍＭ）；抗生物質、例えばストレプトマイシン（例えば、４０～１００
μｇ／ｍｌで）、ペニシリン（例えば、４０Ｕ／ｍｌで）、アンホテリシンＢ（例えば、
０．５μｇ／ｍｌで）など）含有または非含有の、細胞収集組成物、または標準的な潅流
溶液（例えば、リン酸緩衝塩類溶液（「ＰＢＳ」）などの通常の塩類溶液）で潅流しても
よい。一実施形態において、潅流および潅流液の収集前の１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、もしくは２４時間、または２もしくは３日間またはそれより多くの日数にわ
たり胎盤が維持または培養されるように、単離された胎盤は、所定期間にわたり潅流液を
収集せずに維持または培養される。潅流された胎盤は、１または複数の追加の回、例えば
、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間またはそれより長い時間維持して
、２回目に、例えば７００～８００ｍＬの潅流流体で潅流してもよい。胎盤は、１、２、
３、４、５回またはそれより多く、例えば１、２、３、４、５または６時間毎に１回潅流
することができる。好ましい実施形態において、胎盤の潅流および潅流溶液、例えば細胞
収集組成物の収集は、回収した有核細胞の数が細胞１００個／ｍｌ未満に落ちるまで繰り
返される。異なるタイムポイントでの潅流液はさらに、時間依存的な細胞、例えば幹細胞
の集団を回収するために個々に加工することができる。異なるタイムポイントからの潅流
液はまた、プールすることもできる。好ましい実施形態において、胎盤細胞は、排除後の
約８時間から約１８時間の間の１つの時点または複数の時点で収集される。

【0140】

潅流は、好ましくは、前記溶液で潅流されておらず、胎盤細胞を得るための別段の処置
（例えば、組織の破壊、例えば酵素消化による）がなされていない哺乳類胎盤から入手可
能な数より有意に多くの胎盤細胞の収集をもたらす。この状況において、「より有意に多
く」は、少なくとも１０％より多いことを意味する。潅流は、例えば胎盤またはその一部
を培養した培養培地から分離可能な胎盤細胞の数より有意に多くの胎盤細胞を生じる。

【0141】

胎盤細胞は、一または複数のプロテアーゼまたは他の組織を破壊する酵素を含む溶液で
の潅流によって胎盤から単離することができる。具体的な実施形態において、胎盤または
その部分（例えば、羊膜、羊膜および柔毛膜、胎盤小葉もしくは絨毛叢、臍帯、または前
述のもののいずれかの組合せ）を２５～３７℃にして、２００ｍＬの培養培地中の一また
は複数の組織を破壊する酵素と共に３０分インキュベートする。潅流液からの細胞を収集
し、４℃にして、５ｍＭのＥＤＴＡ、２ｍＭジチオスレイトールおよび２ｍＭベータ－メ
ルカプトエタノールを含む冷たい阻害剤混合物で洗浄する。数分後に冷たい（例えば、４
℃の）幹細胞収集組成物で胎盤細胞を洗浄する。

【0142】

４．２．５胎盤細胞の単離、ソーティング、および特徴付け
単離された胎盤細胞、例えば上記の４．１章に記載される細胞は、潅流により得られた
か、または物理的な破壊、例えば酵素消化により得られたかにかかわらず、最初に、Ｆｉ
ｃｏｌｌ勾配遠心分離によって他の細胞から精製することができる（すなわち、それから
単離することができる）。このような遠心分離は、遠心分離速度などに関してどのような
標準的なプロトコールに従っていてもよい。一実施形態において、例えば、胎盤から収集
された細胞を、５０００×ｇで１５分、室温での遠心分離によって潅流液から回収し、そ
れにより例えば混入している死細胞片および血小板から細胞を分離する。他の実施形態に
おいて、胎盤潅流液を約２００ｍｌに濃縮し、穏やかにＦｉｃｏｌｌ上に層化して、約１
１００×ｇで２０分、２２℃で遠心分離し、さらなる加工のために低密度の細胞の境界層
を収集する。

【0143】

細胞ペレットは、新鮮な幹細胞収集組成物、または細胞の維持、例えば、幹細胞の維持
に好適な培地、例えば、２Ｕ／ｍｌヘパリンおよび２ｍＭのＥＤＴＡ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ
、ＮＹ）を含有するＩＭＤＭ無血清培地に再懸濁することができる。総単核細胞画分は、
例えば、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＮｙｃｏｍｅｄＰｈａｒｍａ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａ
ｙ）を製造元の推奨された手順に従って使用して単離することができる。

【0144】

潅流または消化により得られた胎盤細胞は、例えば、さらに、または最初に、例えば０
．２％ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．ＬｏｕｉｓＭＯ）を含む０．０５％トリプシン溶
液を使用する示差的なトリプシン処理によって単離することができる。単離された胎盤細
胞は、組織培養プラスチック接着性であり、典型的には約５分以内にプラスチック表面か
ら取り外されるため、示差的なトリプシン処理が可能であり、それに対して他の接着性集
団は、典型的には２０～３０分より長いインキュベーションを必要とする。取り外された
胎盤細胞は、例えばトリプシン中和溶液（ＴｒｙｐｓｉｎＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＴＮＳ、Ｃａｍｂｒｅｘ）を使用するトリプシン処理およびトリプシ
ン中和後、収穫することができる。接着細胞単離の一実施形態において、例えば細胞約５
～１０×１０⁶個のアリコートを、数々のＴ－７５フラスコ、好ましくはフィブロネクチ
ンでコーティングしたＴ７５フラスコのそれぞれ中に入れる。このような実施形態におい
て、細胞を市販の間充織幹細胞増殖培地（ＭＳＣＧＭ）（Ｃａｍｂｒｅｘ）で培養して、
組織培養インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）中に入れることができる。１０から１
５日後、ＰＢＳで洗浄することによって非接着細胞をフラスコから除去する。次いでＰＢ
ＳをＭＳＣＧＭで交換する。様々な接着細胞タイプの存在について、特定には線維芽細胞
様細胞のクラスターの同定および拡張について、フラスコを、好ましくは毎日検査するこ
とができる。

【0145】

哺乳類胎盤から収集された細胞の数およびタイプは、例えば、例えばフローサイトメト
リー、セルソーティング、免疫細胞化学（例えば、組織特異的なまたは細胞－マーカー特
異的な抗体での染色）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、磁気活性化セルソー
ティング（ＭＡＣＳ）などの標準的な細胞検出技術を使用して形態および細胞表面マーカ
ーの変化を測定することによって、光学または共焦点顕微鏡法を使用する細胞の形態の検
査によって、および／または例えばＰＣＲおよび遺伝子発現プロファイリングなどの当業
界において周知の技術を使用して遺伝子発現の変化を測定することによってモニターする
ことができる。これらの技術はまた、一または複数の特定のマーカーに関して陽性である
細胞を同定するのにも使用することができる。例えば、ＣＤ３４に対する抗体を使用して
、上記技術を使用して、細胞が検出可能な量のＣＤ３４を含むのかどうかを決定すること
ができ、含む場合、細胞はＣＤ３４＋である。同様に、細胞が、ＲＴ－ＰＣＲによって検
出するのに十分なＯＣＴ－４ＲＮＡを産生するか、または成体細胞より有意に多くのＯ
ＣＴ－４ＲＮＡを産生する場合、その細胞は、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３４な
どのＣＤマーカー）に対するＯＣＴ－４＋抗体であり、幹細胞特異的遺伝子、例えばＯＣ
Ｔ－４などの配列は当業界において周知である。

【0146】

胎盤細胞、特にＦｉｃｏｌｌ分離、示差的な接着、またはそれら両方の組合せによって
単離された細胞は、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）を使用してソートされてもよい
。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）は、細胞などの粒子を、粒子の蛍光特性に基
づいて分離するための周知の方法である（非特許文献５参照）。個々の粒子の蛍光性部分
のレーザー励起は、混合物からの陽性および陰性粒子の電磁気分離を可能にする小さい電
荷を生じる。一実施形態において、細胞表面マーカー特異的な抗体またはリガンドは、別
個の蛍光標識で標識される。細胞をセルソーターを介して処理することにより、使用され
る抗体に結合するそれらの能力に基づいて細胞の分離が可能になる。ＦＡＣＳでソートさ
れた粒子は、分離およびクローニングを容易にするために、９６－ウェルまたは３８４－
ウェルプレートの個々のウェルに直接堆積させることができる。

【0147】

１つのソーティングスキームにおいて、胎盤、例えばＰＤＡＣからの細胞は、マーカー
ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＯＣＴ－４および／
またはＨＬＡ－Ｇの一または複数の発現に基づきソートされる。これは、培養中のそれら
の接着特性に基づきこのような細胞を選択するための手順と共に達成することができる。
例えば、組織培養プラスチックへの接着の選択は、マーカー発現に基づきソーティングの
前または後に達成することができる。一実施形態において、例えば、細胞はまず、それら
のＣＤ３４発現に基づきソートされ、ＣＤ３４－細胞が保持されて、加えてＣＤ２００＋
およびＨＬＡ－Ｇ－であるＣＤ３４－細胞が、全ての他のＣＤ３４－細胞から分離される
。他の実施形態において、胎盤からの細胞は、それらのマーカーＣＤ２００および／また
はＨＬＡ－Ｇの発現に基づきソートされ、例えば、ＣＤ２００を提示しＨＬＡ－Ｇが欠如
した細胞が、さらなる使用のために単離される。具体的な実施形態において、例えばＣＤ
２００を発現し、および／または例えばＨＬＡ－Ｇがない細胞は、それらのＣＤ７３およ
び／もしくはＣＤ１０５、または抗体ＳＨ２、ＳＨ３もしくはＳＨ４によって認識される
エピトープの発現、またはＣＤ３４、ＣＤ３８もしくはＣＤ４５の発現の欠如に基づきさ
らにソートすることができる。例えば、他の実施形態において、胎盤細胞は、ＣＤ２００
、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３４、ＣＤ３８およびＣＤ４５の発現または
それらの欠如によってソートされ、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０
５＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である胎盤細胞が、さらなる使用のため
に他の胎盤細胞から単離される。

【0148】

ソートされた胎盤細胞の上記実施形態のいずれかの具体的な実施形態において、ソーテ
ィング後に残存する細胞集団中の細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９
０％または９５％が、前記単離された胎盤細胞である。胎盤細胞は、上記の４．１章に記
載されるマーカーのいずれかの一または複数によってソートすることができる。

【0149】

具体的な実施形態において、例えば、（１）組織培養プラスチックに接着性であり、（
２）ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－およびＣＤ１０５＋である胎盤細胞が、他の胎盤細胞からソ
ートされる（すなわち、それから単離される）。他の具体的な実施形態において、（１）
組織培養プラスチックに接着性であり、（２）ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋お
よびＣＤ２００＋である胎盤細胞が、他の胎盤細胞からソートされる（すなわち、それか
ら単離される）。他の具体的な実施形態において、（１）組織培養プラスチックに接着性
であり、（２）ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋および
ＣＤ２００＋である胎盤細胞が、他の胎盤細胞からソートされる（すなわち、それから単
離される）。

【0150】

胎盤細胞のヌクレオチド配列ベースの検出に関して、本明細書に列挙したマーカーの配
列は、例えばＧｅｎＢａｎｋまたはＥＭＢＬなどの公開された形で利用可能なデータベー
スで容易に入手可能である。

【0151】

胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞の抗体媒介性検出およびソーティン
グに関して、特定のマーカーに特異的なあらゆる抗体が、細胞の検出およびソーティング
（例えば、蛍光活性化セルソーティング）に好適なあらゆるフルオロフォアまたは他の標
識と組み合わせて使用することができる。特異的なマーカーに対する抗体／フルオロフォ
アの組合せとしては、これらに限定されないが、ＨＬＡ－Ｇに対するフルオレセインイソ
チオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲートモノクローナル抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ、ロー
リー、ノースカロライナ州より入手可能）、ＣＤ１０（ＢＤＩｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅ
ｔｒｙＳｙｓｔｅｍｓ、サンノゼ、カリフォルニア州より入手可能）、ＣＤ４４（ＢＤ
ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ、サンノゼ、カリフォルニア州より入
手可能）、およびＣＤ１０５（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．、ミネアポリス、ミネ
ソタ州より入手可能）；ＣＤ４４、ＣＤ２００、ＣＤ１１７、およびＣＤ１３に対するフ
ィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートモノクローナル抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；ＣＤ３３およびＣＤ１０に対するフィコエリトリン－Ｃ
ｙ７（ＰＥＣｙ７）コンジュゲートモノクローナル抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；ＣＤ３８に対するアロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュ
ゲートストレプトアビジンおよびモノクローナル抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；およびビオチン化ＣＤ９０（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）が挙げられる。使用できる他の抗体としては、これらに限定され
ないが、ＣＤ１３３－ＡＰＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）、ＫＤＲ－ビオチン（ＣＤ３０９、Ａ
ｂｃａｍ）、サイトケラチンＫ－Ｆｉｔｃ（ＳｉｇｍａまたはＤａｋｏ）、ＨＬＡＡＢ
Ｃ－Ｆｉｔｃ（ＢＤ）、ＨＬＡＤＲ、ＤＱ、ＤＰ－ＰＥ（ＢＤ）、β－２－ミクログロ
ブリン－ＰＥ（ＢＤ）、ＣＤ８０－ＰＥ（ＢＤ）およびＣＤ８６－ＡＰＣ（ＢＤ）が挙げ
られる。使用できる他の抗体／標識の組合せとしては、これらに限定されないが、ＣＤ４
５－ＰｅｒＣＰ（ペリジニン（ｐｅｒｉｄｉｎ）クロロフィルタンパク質）；ＣＤ４４－
ＰＥ；ＣＤ１９－ＰＥ；ＣＤ１０－Ｆ（フルオレセイン）；ＨＬＡ－Ｇ－Ｆおよび７－ア
ミノ－アクチノマイシン－Ｄ（７－ＡＡＤ）；ＨＬＡ－ＡＢＣ－Ｆ；および同種のものが
挙げられる。この列挙は全てを網羅したわけではなく、他の供給元からの他の抗体も商業
的に利用可能である。

【0152】

本明細書で提供される単離された胎盤細胞は、ＣＤ１１７またはＣＤ１３３に関して、
例えば、フィコエリトリン－Ｃｙ５（ＰＥＣｙ５）コンジュゲートストレプトアビジン
と、ＣＤ１１７またはＣＤ１３３に対するビオチンコンジュゲートモノクローナル抗体と
を使用してアッセイすることができる。しかしながら、このシステムを使用して、細胞は
、比較的高いバックグラウンドのために、ＣＤ１１７またはＣＤ１３３それぞれに関して
陽性のように見える可能性がある。

【0153】

単離された胎盤細胞は、単一のマーカーに対する抗体で標識して、検出および／ソート
することができる。また胎盤細胞は、異なるマーカーに対する複数の抗体で同時に標識す
ることもできる。

【0154】

他の実施形態において、磁気ビーズを使用して、細胞を分離することができる。細胞は
、磁気ビーズ（直径０．５～１００μｍ）と結合するそれらの能力に基づいて粒子を分離
するための方法である磁気活性化セルソーティング（ＭＡＣＳ）技術を使用してソートす
ることができる。磁気マイクロスフェアに、特定の細胞表面分子またはハプテンを特異的
に認識する抗体の共有結合による付加などの様々な有用な改変を行ってもよい。次いでビ
ーズを細胞と混合して、結合を可能にする。次いで細胞を磁場に通過させて、特異的な細
胞表面マーカーを有する細胞を分離する。一実施形態において、次いでこれらの細胞を単
離して、追加の細胞表面マーカーに対する抗体にカップリングされた磁気ビーズと再混合
することができる。細胞を磁場に再度通過させて、両方の抗体に結合した細胞を単離する
。次いでこのような細胞を希釈して、別々のプレート、例えばクローン単離のためのマイ
クロタイタープレートなどに移すことができる。

【0155】

単離された胎盤細胞はまた、細胞形態学および増殖特徴に基づいて特徴付けおよび／ま
たはソートすることもできる。例えば、単離された胎盤細胞は、培養中、例えば線維芽細
胞様の外観を有するとして特徴付けることができ、および／または線維芽細胞様の外観に
基づき選択することができる。単離された胎盤細胞はまた、胚様体を有するとして特徴付
けることもでき、および／または胚様体を形成するそれらの能力に基づき選択することも
できる。一実施形態において、例えば、培養中、形状が線維芽細胞様であり、ＣＤ７３お
よびＣＤ１０５を発現し、一または複数の胚様体を産生する胎盤細胞が、他の胎盤細胞か
ら単離される。他の実施形態において、培養中一または複数の胚様体を産生するＯＣＴ－
４＋胎盤細胞が、他の胎盤細胞から単離される。

【0156】

他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、コロニー形成単位アッセイによって同
定および特徴付けすることができる。コロニー形成単位アッセイは一般的に当業界で公知
であり、例えばＭｅｓｅｎＣｕｌｔ（商標）培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ）など
である。

【0157】

単離された胎盤細胞は、生存能、増殖可能性、および寿命に関して、例えばトリパンブ
ルー排除アッセイ、フルオレセイン二酢酸取り込みアッセイ、ヨウ化プロピジウム取り込
みアッセイ（生存能を評価するため）；およびチミジン取り込みアッセイ、ＭＴＴ（３－
（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミ
ド）細胞増殖アッセイ（増殖を評価するため）などの当業界において公知の標準的な技術
を使用して評価することができる。寿命は、当業界において周知の方法によって、例えば
長期の培養で集団倍加の最大回数を決定することによって決定することができる。

【0158】

単離された胎盤細胞、例えば上記の４．１章に記載される単離された胎盤細胞はまた、
当業界において公知の他の技術、例えば、所望の細胞の選択的な成長（陽性選択）、不要
な細胞の選択的な破壊（陰性選択）；例えばダイズ凝集素を用いた場合のような混成の集
団中の示差的な細胞の凝集力に基づく分離；凍結融解手順；濾過；従来のおよびゾーン遠
心分離；遠心水簸（対向流遠心分離（ｃｏｕｎｔｅｒ－ｓｔｒｅａｍｉｎｇｃｅｎｔｒ
ｉｆｕｇａｔｉｏｎ））；単位重力分離；向流分配；電気泳動などを使用して、他の胎盤
細胞から分離することもできる。

【0159】

４．２．６単離された胎盤細胞集団
また、本明細書に記載される方法および組成物において有用な、単離された胎盤細胞集
団、例えば上記の４．１章に記載される単離された胎盤細胞集団も本明細書で提供される
。単離された胎盤細胞の集団は、一または複数の胎盤から直接的に単離することができ、
すなわち細胞集団は、単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞集団であってもよく、単離され
た胎盤細胞は、潅流液から得られるかもしくは潅流液中に含有され、または破壊された胎
盤組織、例えば胎盤組織の消化されたもの（すなわち、胎盤またはその部分の酵素消化に
より得られた細胞の収集物）から得られるかもしくはその中に含有される。また本明細書
に記載される単離された胎盤細胞を培養および拡張して、単離された胎盤細胞集団を産生
することもできる。また単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞集団を培養および拡張して、
胎盤細胞集団を産生することもできる。

【0160】

本明細書で提供される処置の方法において有用な胎盤細胞集団は、単離された胎盤細胞
、例えば本明細書の４．１章に記載されたような単離された胎盤細胞を含む。様々な実施
形態において、胎盤細胞集団中の細胞の、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、
５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％は、単離された胎盤細
胞である。すなわち単離された胎盤細胞集団は、例えば、１％、５％、１０％、２０％、
３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もの単離された胎盤細胞では
ない細胞を含んでいてもよい。

【0161】

本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離された胎盤細胞集団は、例
えば、酵素消化から得たのかまたは潅流から得たのかにかかわらず、特定のマーカーおよ
び／または特定の培養のまたは形態学的な特徴を発現する単離された胎盤細胞を選択する
ことによって産生することができる。一実施形態において、例えば、（ａ）基材に接着し
、（ｂ）ＣＤ２００を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発現が欠如している胎盤細胞を選択すること
；および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって細胞集団を
産生する方法が本明細書で提供される。他の実施形態において、細胞集団は、ＣＤ２００
を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発現が欠如している胎盤細胞を選択すること、および前記細胞を
他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態にお
いて、細胞集団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ７３、ＣＤ１０５、およびＣＤ２０
０を発現する胎盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集
団を形成することによって産生される。他の実施形態において、細胞集団は、ＣＤ７３、
ＣＤ１０５、およびＣＤ２００を発現する胎盤細胞を同定すること、および前記細胞を他
の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態におい
て、細胞集団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ２００およびＯＣＴ－４を発現する胎
盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成するこ
とによって産生される。他の実施形態において、細胞集団は、ＣＤ２００およびＯＣＴ－
４を発現する胎盤細胞を選択すること、および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集
団を形成することによって産生される。他の実施形態において、細胞集団は、（ａ）基材
に接着し、（ｂ）ＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、（ｃ）前記集団が胚様体様体の形
成を可能にする条件下で培養される場合、前記幹細胞を含む胎盤細胞集団における一また
は複数の胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の
細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態において
、細胞集団は、ＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、前記集団が胚様体様体の形成を可能
にする条件下で培養される場合、前記幹細胞を含む胎盤細胞集団における一または複数の
胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択すること、および前記細胞を他の細胞から
単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態において、細胞集
団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発
現が欠如している胎盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の細胞から単離して、細
胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態において、細胞集団は、ＣＤ７
３およびＣＤ１０５を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発現が欠如している胎盤細胞を選択すること
、および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される
。他の実施形態において、細胞集団を産生する方法は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＯＣ
Ｔ－４を発現し、（ｃ）前記集団が胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される場
合、前記幹細胞を含む胎盤細胞集団における一または複数の胚様体様体の形成を容易にす
る胎盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成す
ることを含む。他の実施形態において、細胞集団は、ＯＣＴ－４を発現し、前記集団が胚
様体様体の形成を可能にする条件下で培養される場合、前記幹細胞を含む胎盤細胞集団に
おける一または複数の胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択すること、および前
記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。

【0162】

他の実施形態において、細胞集団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ１０およびＣＤ
１０５を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択すること；および前記細胞を他の
細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の実施形態において
、細胞集団は、ＣＤ１０およびＣＤ１０５を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選
択すること、および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって
産生される。他の実施形態において、細胞集団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ１０
、ＣＤ１０５、およびＣＤ２００を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択するこ
と；および前記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生され
る。他の実施形態において、細胞集団は、ＣＤ１０、ＣＤ１０５、およびＣＤ２００を発
現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択すること、および前記細胞を他の細胞から単
離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の具体的な実施形態において、
細胞集団は、（ａ）基材に接着し、（ｂ）ＣＤ１０、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２
００を発現し、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない胎盤細胞を選択すること；および前
記細胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。他の具体
的な実施形態において、細胞集団は、ＣＤ１０、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２００
を発現し、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない胎盤細胞を選択すること、および前記細
胞を他の細胞から単離して、細胞集団を形成することによって産生される。

【0163】

上記の４．１章に記載されるマーカーの組合せのいずれかを有する胎盤細胞を含む細胞
集団の選択物は、類似の様式で単離してもよいし、または入手してもよい。

【0164】

上記実施形態のいずれかにおいて、単離された細胞集団の選択は、加えて、ＡＢＣ－ｐ
（胎盤特異的なＡＢＣ輸送タンパク質；例えば非特許文献６参照）を発現する胎盤細胞を
選択することを含んでいてもよい。本方法はまた、例えば間充織幹細胞に特異的な少なく
とも１つの特徴、例えばＣＤ４４の発現、ＣＤ９０の発現、または前述のものの組合せの
発現を示す細胞を選択することを含んでいてもよい。

【0165】

上記の実施形態において、基材は、その上で細胞、例えば単離された胎盤細胞の培養お
よび／または選択を達成することができるあらゆる表面であり得る。典型的には、基材は
、プラスチック、例えば、組織培養皿またはマルチウェルプレートプラスチックである。
組織培養プラスチックは、生体分子、例えば、ラミニンまたはフィブロネクチンでコーテ
ィングされていてもよい。

【0166】

細胞、例えば単離された胎盤細胞は、細胞選択の分野において公知のあらゆる手段によ
って、胎盤細胞集団に関して選択することができる。例えば、細胞は、一または複数の細
胞表面マーカーに対する抗体または抗体（複数）を使用して、例えば、フローサイトメト
リーまたはＦＡＣＳで選択することができる。選択は、抗体を磁気ビーズと共に使用して
達成することができる。ある特定の幹細胞関連のマーカーに特異的な抗体は、当業界にお
いて公知である。例えば、ＯＣＴ－４（Ａｂｃａｍ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州
）、ＣＤ２００（Ａｂｃａｍ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ａｂｃａｍ）、ＣＤ７３（ＢＤＢｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅｓＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ、サンディエゴ、カリフォルニア州）、ＣＤ１０
５（Ａｂｃａｍ；ＢｉｏＤｅｓｉｇｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、サーコ、メイン州
）に対する抗体など。他のマーカーに対する抗体も商業的に入手可能であり、例えばＣＤ
３４、ＣＤ３８およびＣＤ４５が、例えばＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
またはＢｉｏＤｅｓｉｇｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから入手可能である。

【0167】

単離された胎盤細胞集団は、幹細胞ではない胎盤細胞、または胎盤細胞ではない細胞を
含んでいてもよい。

【0168】

本明細書に記載される胎盤由来の接着細胞を含む単離された細胞集団は、第２の細胞型
、例えば胎盤由来の接着細胞ではない胎盤細胞、または例えば胎盤細胞ではない細胞を含
んでいてもよい。例えば、単離された胎盤由来の接着細胞の集団は、第２のタイプの細胞
の集団を含んでいてもよく、例えば第２のタイプの細胞の集団と組み合わせてもよく、前
記第２のタイプの細胞は、例えば、胚幹細胞、血液細胞（例えば、胎盤血、胎盤血細胞、
臍帯血、臍帯血細胞、末梢血液、末梢血液細胞、胎盤血、臍帯血、または末梢血液由来の
有核細胞など）、血液から単離された幹細胞（例えば、胎盤血、臍帯血または末梢血液か
ら単離された幹細胞）、胎盤の潅流液由来の有核細胞、例えば、胎盤の潅流液由来の総有
核細胞；臍帯幹細胞、血液由来有核細胞の集団、骨髄由来間葉系間質細胞、骨髄由来間葉
幹細胞、骨髄由来造血幹細胞、未加工の骨髄、成体（体性）幹細胞、組織内に含有される
幹細胞の集団、培養細胞、例えば培養された幹細胞、完全に分化した細胞（例えば、軟骨
細胞、線維芽細胞、羊膜細胞、骨芽細胞、筋肉細胞、心細胞など）の集団、周皮細胞など
である。具体的な実施形態において、胎盤由来の接着細胞を含む細胞集団は、臍帯由来の
胎盤幹細胞または幹細胞を含む。第２のタイプの細胞が血液または血液細胞である一実施
形態において、細胞集団から赤血球が除去されている。

【0169】

具体的な実施形態において、第２のタイプの細胞は、造血幹細胞である。このような造
血幹細胞は、例えば、未処理の胎盤血、臍帯血または末梢血液内；胎盤血、臍帯血または
末梢血液由来の総有核細胞中；単離された胎盤血、臍帯血または末梢血液由来のＣＤ３４
＋細胞の集団中；未処理の骨髄中；骨髄由来の総有核細胞中；単離された骨髄由来のＣＤ
３４＋細胞の集団中などに含有されていてもよい。

【0170】

他の実施形態において、単離された胎盤由来の接着細胞の集団は、血管系由来の複数の
成体または前駆細胞と組み合わされる。様々な実施形態において、細胞は、内皮細胞、内
皮前駆細胞、筋細胞、心筋細胞、周皮細胞、血管芽細胞、筋原細胞または心筋芽細胞であ
る。

【0171】

他の実施形態において、第２の細胞型は、胚幹細胞に関連する多能性および機能のマー
カーを発現させるために培養中に操作された、非胚細胞タイプである。

【0172】

上記の単離された胎盤由来の接着細胞の集団の具体的な実施形態において、胎盤由来の
接着細胞および第２のタイプの細胞のいずれかまたは両方は、意図された細胞のレシピエ
ントに対して、自己であるかまたは同種である。

【0173】

他の具体的な実施形態において、組成物は、胎盤由来の接着細胞、および胚幹細胞を含
む。他の具体的な実施形態において、組成物は、胎盤由来の接着細胞および間葉系間質ま
たは幹細胞、例えば、骨髄由来の間葉系間質または幹細胞を含む。他の具体的な実施形態
において、組成物は、骨髄由来造血幹細胞を含む。他の具体的な実施形態において、組成
物は、胎盤由来接着細胞および造血前駆細胞、例えば、骨髄、胎児血、臍帯血、胎盤血、
および／または末梢血液由来の造血前駆細胞を含む。他の具体的な実施形態において、組
成物は、胎盤由来の接着細胞および体性幹細胞を含む。より具体的な実施形態において、
前記体性幹細胞は、神経幹細胞、肝幹細胞、膵臓の幹細胞、内皮の幹細胞、心臓の幹細胞
、または筋肉の幹細胞である。

【0174】

他の具体的な実施形態において、第２のタイプの細胞は、前記集団中の細胞の、約１０
％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、もしくは５０％、少な
くとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、もしくは５
０％、または１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、もし
くは５０％以下を構成する。他の具体的な実施形態において、前記組成物中のＰＤＡＣは
、前記組成物中の細胞の、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％または９０％を構成する。他の具体的な実施形態において、胎盤由来の
接着細胞は、前記集団中の細胞の、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％
、４０％、もしくは４５％、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５
％、４０％、もしくは４５％、または１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％
、４０％、もしくは４５％以下を構成する。

【0175】

単離された胎盤由来の接着細胞の集団中の細胞は、他のタイプの複数の細胞と、例えば
幹細胞集団と、各集団中の総有核細胞の数を比較して、約１００，０００，０００：１、
５０，０００，０００：１、２０，０００，０００：１、１０，０００，０００：１、５
，０００，０００：１、２，０００，０００：１、１，０００，０００：１、５００，０
００：１、２００，０００：１、１００，０００：１、５０，０００：１、２０，０００
：１、１０，０００：１、５，０００：１、２，０００：１、１，０００：１、５００：
１、２００：１、１００：１、５０：１、２０：１、１０：１、５：１、２：１、１：１
、１：２、１：５、１：１０、１：１００、１：２００、１：５００、１：１，０００、
１：２，０００、１：５，０００、１：１０，０００、１：２０，０００、１：５０，０
００、１：１００，０００、１：５００，０００、１：１，０００，０００、１：２，０
００，０００、１：５，０００，０００、１：１０，０００，０００、１：２０，０００
，０００、１：５０，０００，０００、または約１：１００，０００，０００の比率で組
み合わせることができる。単離された胎盤由来の接着細胞の集団中の細胞は同様に、複数
の細胞型の複数の細胞と組み合わせることができる。

【0176】

他の実施形態において、本明細書に記載される胎盤細胞集団、例えば上述したＰＤＡＣ
は、骨形成性の胎盤接着細胞（ＯＰＡＣ）、例えば、「ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＣｏｍ
ｐｏｓｉｔｉｏｎｓｆｏｒＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＢｏｎｅＤｅｆｅｃｔｓ
ＷｉｔｈＰｌａｃｅｎｔａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓ」という表題の２００９年８月２
４日付けで出願された特許文献１２に記載されるＯＰＡＣと組み合わされるか、または羊
膜由来の血管新生細胞（ＡＭＤＡＣ）、例えば、「ＡｍｎｉｏｎＤｅｒｉｖｅｄＡｎ
ｇｉｏｇｅｎｉｃＣｅｌｌｓ」という表題の特許文献１３に記載されるＡＭＤＡＣと組
み合わされ、これらの開示は、その全体が参照により組み入れられる。

【0177】

４．３単離された胎盤細胞を含む組成物
本明細書に、例えば４．１章に記載される胎盤細胞は、本明細書に記載される方法およ
び組成物で使用するための、あらゆる生理的に許容できるまたは医学的に許容できる化合
物、組成物またはデバイスと組み合わせることができる。本明細書で提供される処置の方
法において有用な組成物は、本明細書に記載される胎盤細胞のいずれか一または複数を含
んでいてもよい。一実施形態において、組成物は、医薬的に許容できる担体中の、医薬的
に許容できる組成物、例えば胎盤細胞を含む組成物である。

【0178】

一実施形態において、単離された胎盤細胞を含む組成物は、加えて、マトリックス、例
えば、脱細胞化したマトリックスまたは合成マトリックスを含む。他の具体的な実施形態
において、前記マトリックスは、３次元の足場である。他の具体的な実施形態において、
前記マトリックスは、コラーゲン、ゼラチン、ラミニン、フィブロネクチン、ペクチン、
オルニチン、またはビトロネクチンを含む。他のまたは具体的な実施形態において、マト
リックスは、羊膜または羊膜由来のバイオマテリアルである。他の具体的な実施形態にお
いて、前記マトリックスは、細胞外膜タンパク質を含む。他の具体的な実施形態において
、前記マトリックスは、合成化合物を含む。他の具体的な実施形態において、前記マトリ
ックスは、生物活性化合物を含む。他の具体的な実施形態において、前記生物活性化合物
は、増殖因子、サイトカイン、抗体、または５，０００ダルトン未満の有機分子である。

【0179】

他の実施形態において、本明細書で提供される処置の方法において有用な組成物は、前
述の胎盤細胞のいずれか、または前述の胎盤細胞集団のいずれかによって馴化した培地を
含む。

【0180】

４．３．１低温保存した単離された胎盤細胞
本明細書に記載される方法および組成物において有用な単離された胎盤細胞集団は、そ
の後の使用のために、保存することができ、例えば、低温保存することができる。細胞、
例えば幹細胞などの低温保存方法は当業界において周知である。単離された胎盤細胞集団
は、個体に容易に投与可能な形態で調製することができ、例えば、単離された胎盤細胞集
団は、医学的用途に好適な容器内に含有される。このような容器は、例えば、シリンジ、
滅菌プラスチックバッグ、フラスコ、ジャー、またはそれから単離された胎盤細胞集団を
容易に分配することができる他の容器であり得る。例えば、容器は、血液バッグ、または
レシピエントへの液体の静脈内投与に好適な他のプラスチックの医学的に許容できるバッ
グであり得る。一実施形態において、容器は、組み合わされた細胞集団の低温保存を可能
にするものである。

【0181】

低温保存した単離された胎盤細胞集団は、単一のドナー由来の、または複数のドナー由
来の単離された胎盤細胞を含んでいてもよい。単離された胎盤細胞集団は、意図したレシ
ピエントに対して完全にＨＬＡ適合であってもよいし、または部分的にまたは完全にＨＬ
Ａ不適合であってもよい。

【0182】

したがって、一実施形態において、単離された胎盤細胞は、本明細書に記載される方法
において、容器中の組織培養プラスチック接着性の胎盤細胞集団を含む組成物の形態で使
用することができる。具体的な実施形態において、単離された胎盤細胞は、低温保存され
る。他の具体的な実施形態において、容器は、バッグ、フラスコ、またはジャーである。
他の具体的な実施形態において、前記バッグは、滅菌プラスチックバッグである。他の具
体的な実施形態において、前記バッグは、例えば静脈内注入による前記単離された胎盤細
胞集団の静脈内投与に好適であるか、それを可能にするか、またはそれを容易にする。バ
ッグは、単離された胎盤細胞と一または複数の他の溶液、例えば薬物とが投与の前または
投与中に混合されるように相互連結された、複数の内腔または区画を含んでいてもよい。
他の具体的な実施形態において、組成物は、組み合わされた細胞集団の低温保存を容易に
する一または複数の化合物を含む。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤
細胞集団は、生理的に許容できる水溶液中に含有される。他の具体的な実施形態において
、前記生理的に許容できる水溶液は、０．９％のＮａＣｌ溶液である。他の具体的な実施
形態において、前記単離された胎盤細胞集団は、前記細胞集団のレシピエントに対してＨ
ＬＡ適合の胎盤細胞を含む。他の具体的な実施形態において、前記組み合わされた細胞集
団は、前記細胞集団のレシピエントに対して少なくとも部分的にＨＬＡ不適合の胎盤細胞
を含む。他の具体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、複数のドナー由来
である。

【0183】

一実施形態において、容器中の単離された胎盤細胞は、単離されたＣＤ１０＋、ＣＤ３
４－、ＣＤ１０５＋胎盤細胞であり、前記細胞は、低温保存されており、容器内に含有さ
れる。具体的な実施形態において、前記ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋胎盤細胞
はまた、ＣＤ２００＋でもある。他の具体的な実施形態において、前記ＣＤ１０＋、ＣＤ
３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はまた、ＣＤ４５－またはＣＤ９０＋でも
ある。他の具体的な実施形態において、前記ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、Ｃ
Ｄ２００＋胎盤細胞はまた、ＣＤ４５－およびＣＤ９０＋でもある。他の具体的な実施形
態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ１３＋、
ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ６２
Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）
、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣ
ＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン弱、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、
ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ
＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－
、ＨＬＡ－Ｇ－、またはプログラム死－１リガンド（ＰＤＬ１）＋、またはそれらのあら
ゆる組合せの一または複数である。他の具体的な実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１
０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３
８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、
ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８
６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－
、ＣＤ１４４／ＶＥ－カドヘリン弱、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１
３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧ
ＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、およ
びプログラム死－１リガンド（ＰＤＬ１）＋である。

【0184】

ある特定の他の実施形態において、上記で述べた単離された胎盤細胞は、単離されたＣ
Ｄ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞であり、前記細胞は、低温保存されており、容器内に
含有される。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、低温保存されており、容器
内に含有されるＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋細胞である。他の実施形態にお
いて、単離された胎盤細胞は、低温保存されており、容器内に含有されるＣＤ２００＋、
ＯＣＴ－４＋幹細胞である。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、低温保存さ
れており、容器内に含有されるＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋細胞であり、前記単離された胎
盤細胞は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で胎盤細胞集団と共に培養される場合、
一または複数の胚様体様体の形成を容易にする。他の実施形態において、単離された胎盤
細胞は、低温保存されており、容器内に含有されるＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－
Ｇ－細胞である。他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、低温保存されており、
容器内に含有されるＯＣＴ－４＋胎盤細胞であり、前記細胞は、胚様体様体の形成を可能
にする条件下で胎盤細胞集団と共に培養される場合、一または複数の胚様体様体の形成を
容易にする。

【0185】

他の具体的な実施形態において、上記で述べた単離された胎盤細胞は、フローサイトメ
トリーによって検出されるＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋（例えば、ＰＤＡ
Ｃ）である、胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞である。他の具体的な実施形態において、
単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経系の表現型を有する
細胞、骨形成性の表現型を有する細胞、または軟骨形成性の表現型を有する細胞に分化す
る能力を有する。他の具体的な実施形態において、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、
ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、ＣＤ２００＋である。他の具体的な実施形態において
、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、フローサイト
メトリーによって検出されるＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。他の具体的な実施形態
において、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、加えて、フロ
ーサイトメトリーによって検出されるＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。他の具体的な
実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞は、
加えて、フローサイトメトリーによって検出されるＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。
他の具体的な実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋
細胞は、加えて、フローサイトメトリーによって検出されるＣＤ９０＋およびＣＤ４５－
である。他の具体的な実施形態において、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ
２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－細胞は、加えて、フローサイトメトリーによって検出
されるＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。他の具体的な実施形態において、ＣＤ３４－
、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞は、加えて、ＣＤ２９＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、Ｃ
Ｄ５４＋、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＳＨ３＋またはＳＨ４＋の一または複数である。他
の具体的な実施形態において、細胞は、加えて、ＣＤ４４＋である。上記の単離されたＣ
Ｄ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞のいずれかの具体的な実施形態において、
細胞は、加えて、ＣＤ１１７－、ＣＤ１３３－、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－
Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、および／またはＰＤＬ１＋のうち一または
複数である。

【0186】

前述の低温保存した単離された胎盤細胞のいずれかの具体的な実施形態において、前記
容器は、バッグである。様々な具体的な実施形態において、前記容器は、約、少なくとも
、または最大で、１×１０⁶個の前記単離された胎盤細胞、５×１０⁶個の前記単離された
胎盤細胞、１×１０⁷個の前記単離された胎盤細胞、５×１０⁷個の前記単離された胎盤細
胞、１×１０⁸個の前記単離された胎盤細胞、５×１０⁸個の前記単離された胎盤細胞、１
×１０⁹個の前記単離された胎盤細胞、５×１０⁹個の前記単離された胎盤細胞、１×１０
¹⁰個の前記単離された胎盤細胞、または１×１０¹⁰個の前記単離された胎盤細胞を含む。
前述の低温保存した集団のいずれかの他の具体的な実施形態において、前記単離された胎
盤細胞は、約、少なくとも、または最大で５回、最大で１０回、最大で１５回、または最
大で２０回継代されている。前述の低温保存した単離された胎盤細胞のいずれかの他の具
体的な実施形態において、前記単離された胎盤細胞は、前記容器内で拡張される。

【0187】

一実施形態において、胎盤由来の接着細胞の単回分の単位用量は、様々な実施形態にお
いて、約、少なくとも、または最大で、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個、１×
１０⁴個、３×１０⁴個、５×１０⁴個、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１
０⁶個、３×１０⁶個、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０
⁸個、３×１０⁸個、５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎
盤細胞を含んでいてもよい。一実施形態において、胎盤由来の接着細胞の単回分の単位用
量は、１×１０³個から３×１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の間、５×１０³
個から１×１０⁴個の間、１×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個から５×１０⁴
個の間、５×１０⁴個から１×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個の間、３×１０
⁵個から５×１０⁵個の間、５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶個から３×１０⁶
個の間、３×１０⁶個から５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷個の間、１×１０
⁷個から３×１０⁷個の間、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０⁷個から１×１０⁸
個の間、１×１０⁸個から３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸個の間、５×１０
⁸個から１×１０⁹個の間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５×１０⁹個から１
×１０¹⁰個の間の胎盤細胞を含んでいてもよい。一実施形態において、本明細書で提供さ
れる医薬組成物は、５０％またはそれより多くの生存可能な細胞を含む（すなわち、集団
中の細胞の少なくとも５０％が、機能的であるかまたは生きている）胎盤由来の接着細胞
の集団を含む。好ましくは、集団中の細胞の少なくとも６０％が、生存可能である。より
好ましくは、医薬組成物中の集団中の細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％
、または９９％が、生存可能である。

【0188】

４．３．２医薬組成物
単離された胎盤細胞、例えばＰＤＡＣの集団、または単離された胎盤細胞を含む細胞集
団は、ｉｎｖｉｖｏで、例えば本明細書で提供される処置の方法で使用するための医薬
組成物に製剤化することができる。このような医薬組成物は、薬学的に許容される担体、
例えば塩類溶液、またはｉｎｖｉｖｏでの投与のための他の容認された生理的に許容で
きる溶液中に、単離された胎盤細胞の集団、または単離された胎盤細胞を含む細胞の集団
を含む。本明細書に記載される単離された胎盤細胞を含む医薬組成物は、本明細書の他所
に記載される単離された胎盤細胞集団または単離された胎盤細胞のいずれか、またはそれ
らのいずれかの組合せを含んでいてもよい。医薬組成物は、胎児の、母体の、または胎児
および母体両方の単離された胎盤細胞を含んでいてもよい。本明細書で提供される医薬組
成物は、単一の個体または胎盤から、または複数の個体または胎盤から得られた、単離さ
れた胎盤細胞をさらに含んでいてもよい。

【0189】

本明細書で提供される医薬組成物は、あらゆる数の単離された胎盤細胞を含んでいても
よい。例えば、胎盤由来の接着細胞の単回分の単位用量は、約、少なくとも、または最大
で、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個、１×１０⁴個、３×１０⁴個、５×１０⁴個
、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×１０⁶個、５×１０⁶個、
１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１０⁸個、５×１０⁸個、１
×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎盤細胞、または１×１０³個から３×
１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の間、５×１０³個から１×１０⁴個の間、１
×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個から５×１０⁴個の間、５×１０⁴個から１
×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個の間、３×１０⁵個から５×１０⁵個の間、
５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶個から３×１０⁶個の間、３×１０⁶個から
５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷個の間、１×１０⁷個から３×１０⁷個の間
、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０⁷個から１×１０⁸個の間、１×１０⁸個か
ら３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸個の間、５×１０⁸個から１×１０⁹個の
間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５×１０⁹個から１×１０¹⁰個の間の胎盤
細胞を含んでいてもよい。

【0190】

一実施形態において、本明細書で提供される医薬組成物は、１回で、糖尿病性末梢神経
障害を有する対象に投与される。一実施形態において、本明細書で提供される医薬組成物
は、複数の機会で、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回
、または１０回より多くの回数で、糖尿病性末梢神経障害を有する対象に投与される。投
薬間の間隔は、毎週、隔週、毎月、隔月または毎年であり得る。間隔はまた、不規則であ
ってもよい。このようなレジメンに従って投与される胎盤幹細胞の用量としては、これら
に限定されないが、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個、１×１０⁴個、３×１０⁴
個、５×１０⁴個、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×１０⁶個
、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１０⁸個、
５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎盤細胞、または１×
１０³個から３×１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の間、５×１０³個から１×
１０⁴個の間、１×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個から５×１０⁴個の間、５
×１０⁴個から１×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個の間、３×１０⁵個から５
×１０⁵個の間、５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶個から３×１０⁶個の間、
３×１０⁶個から５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷個の間、１×１０⁷個から
３×１０⁷個の間、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０⁷個から１×１０⁸個の間
、１×１０⁸個から３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸個の間、５×１０⁸個か
ら１×１０⁹個の間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５×１０⁹個から１×１０
¹⁰個の間の胎盤幹細胞が挙げられる。具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹
細胞の用量は、１×１０³個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬
組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０³個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形
態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁴個の胎盤幹細胞である。他
の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁵個の胎盤
幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１
×１０⁶個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹
細胞の用量は、３×１０⁶個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬
組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁷個の胎盤幹細胞である。

【0191】

一実施形態において、胎盤幹細胞を含む医薬組成物（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５
＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）は、単回用量として１回で、糖尿病性末梢神
経障害を有する対象に投与される。一実施形態において、胎盤幹細胞を含む医薬組成物（
例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）は、糖尿病
性末梢神経障害を有する対象に単回用量として投与され、それに続いて約１週間後に第２
の用量が投与される。一実施形態において、胎盤幹細胞を含む医薬組成物（例えば、ＣＤ
１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）は、糖尿病性末梢神経障
害を有する対象に単回用量として投与され、それに続いて約１週間後に第２の用量が投与
され、その約１週間後（すなわち、最初の投与の約２週間後）に第３の用量が投与される
。このようなレジメンに従って投与される胎盤幹細胞の用量としては、これらに限定され
ないが、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個、１×１０⁴個、３×１０⁴個、５×１
０⁴個、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、１×１０⁶個、３×１０⁶個、５×１０
⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１×１０⁸個、３×１０⁸個、５×１０⁸
個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰個の胎盤細胞、または１×１０³個か
ら３×１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の間、５×１０³個から１×１０⁴個の
間、１×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個から５×１０⁴個の間、５×１０⁴個
から１×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個の間、３×１０⁵個から５×１０⁵個
の間、５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶個から３×１０⁶個の間、３×１０⁶
個から５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷個の間、１×１０⁷個から３×１０⁷
個の間、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０⁷個から１×１０⁸個の間、１×１０
⁸個から３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸個の間、５×１０⁸個から１×１０⁹
個の間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５×１０⁹個から１×１０¹⁰個の間の
胎盤幹細胞が挙げられる。具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量
は、１×１０³個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の
胎盤幹細胞の用量は、３×１０³個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において
、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁴個の胎盤幹細胞である。他の具体的な
実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁵個の胎盤幹細胞であ
る。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１×１０⁶個
の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量
は、３×１０⁶個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の
胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁷個の胎盤幹細胞である。

【0192】

一実施形態において、胎盤幹細胞を含む医薬組成物（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５
＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）は、糖尿病性末梢神経障害を有する対象に単
回用量として投与され、それに続いて約１カ月後（例えば、初回用量の約２７、２８、２
９、３０、３１、３２、または３３日後）に第２の用量が投与される。一実施形態におい
て、胎盤幹細胞を含む医薬組成物（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、
ＣＤ３４－胎盤幹細胞）は、糖尿病性末梢神経障害を有する対象に単回用量として投与さ
れ、それに続いて約１カ月後に第２の用量が投与され、第３の用量が、その約１カ月後（
すなわち、最初の投与の約２カ月後、例えば、最初の投与から、５５日目もしくは約５５
日目、５６日目もしくは約５６日目、５７日目もしくは約５７日目、５８日目もしくは約
５８日目、５９日目もしくは約５９日目、６０日目もしくは約６０日目、６１日目もしく
は約６１日目、６２日目もしくは約６２日目、６３日目もしくは約６３日目、または６４
日目もしくは約６４日目）投与される。このようなレジメンに従って投与される胎盤幹細
胞の用量としては、これらに限定されないが、１×１０³個、３×１０³個、５×１０³個
、１×１０⁴個、３×１０⁴個、５×１０⁴個、１×１０⁵個、３×１０⁵個、５×１０⁵個、
１×１０⁶個、３×１０⁶個、５×１０⁶個、１×１０⁷個、３×１０⁷個、５×１０⁷個、１
×１０⁸個、３×１０⁸個、５×１０⁸個、１×１０⁹個、５×１０⁹個、または１×１０¹⁰
個の胎盤細胞、または１×１０³個から３×１０³個の間、３×１０³個から５×１０³個の
間、５×１０³個から１×１０⁴個の間、１×１０⁴個から３×１０⁴個の間、３×１０⁴個
から５×１０⁴個の間、５×１０⁴個から１×１０⁵個の間、１×１０⁵個から３×１０⁵個
の間、３×１０⁵個から５×１０⁵個の間、５×１０⁵個から１×１０⁶個の間、１×１０⁶
個から３×１０⁶個の間、３×１０⁶個から５×１０⁶個の間、５×１０⁶個から１×１０⁷
個の間、１×１０⁷個から３×１０⁷個の間、３×１０⁷個から５×１０⁷個の間、５×１０
⁷個から１×１０⁸個の間、１×１０⁸個から３×１０⁸個の間、３×１０⁸個から５×１０⁸
個の間、５×１０⁸個から１×１０⁹個の間、１×１０⁹個から５×１０⁹個の間、または５
×１０⁹個から１×１０¹⁰個の間の胎盤幹細胞が挙げられる。具体的な実施形態において
、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１×１０³個の胎盤幹細胞である。他の具体的な
実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０³個の胎盤幹細胞であ
る。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁴個
の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量
は、３×１０⁵個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において、医薬組成物中の
胎盤幹細胞の用量は、１×１０⁶個の胎盤幹細胞である。他の具体的な実施形態において
、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁶個の胎盤幹細胞である。他の具体的な
実施形態において、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０⁷個の胎盤幹細胞であ
る。

【0193】

本明細書で提供される医薬組成物は、５０％またはそれより多くの生存可能な細胞を含
む細胞の集団を含む（すなわち、集団中の細胞の少なくとも５０％が、機能的であるかま
たは生きている）。好ましくは、集団中の細胞の少なくとも６０％が、生存可能である。
より好ましくは、医薬組成物中の集団中の細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９
５％、または９９％が、生存可能である。

【0194】

本明細書で提供される医薬組成物は、例えば生着を促進する一または複数の化合物（例
えば、抗Ｔ細胞受容体抗体、免疫抑制剤、または同種のもの）；安定剤、例えばアルブミ
ン、デキストラン４０、ゼラチン、ヒドロキシエチルデンプン、プラズマライト（ｐｌａ
ｓｍａｌｙｔｅ）、および同種のものを含んでいてもよい。

【0195】

注射用溶液として製剤化される場合、一実施形態において、医薬組成物は、約１％から
１．５％のＨＳＡおよび約２．５％デキストランを含む。好ましい実施形態において、医
薬組成物は、５％ＨＳＡおよび１０％デキストランを含み、任意選択で免疫抑制剤、例え
ばサイクロスポリンＡを例えば１０ｍｇ／ｋｇで含む溶液中、１ミリリットル当たり約５
×１０⁶個の細胞から１ミリリットル当たり約２×１０⁷個の細胞を含む。

【0196】

他の実施形態において、医薬組成物、例えば溶液は、複数の細胞、例えば単離された胎
盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞を含み、前記医薬組成物は、１ミリリッ
トル当たり約１．０±０．３×１０⁶個から１ミリリットル当たり約５．０±１．５×１
０⁶個の間の細胞を含む。他の実施形態において、医薬組成物は、１ミリリットル当たり
約１．５×１０⁶個から１ミリリットル当たり約３．７５×１０⁶個の間の細胞を含む。他
の実施形態において、医薬組成物は、１ｍＬ当たり約１×１０⁶個から１ｍＬ当たり約５
０×１０⁶個の間の細胞、１ｍＬ当たり約１×１０⁶個から１ｍＬ当たり約４０×１０⁶個
の間の細胞、１ｍＬ当たり約１×１０⁶個から１ｍＬ当たり約３０×１０⁶個の間の細胞、
１ｍＬ当たり約１×１０⁶個から１ｍＬ当たり約２０×１０⁶個の間の細胞、１ｍＬ当たり
約１×１０⁶個から約１５×１ｍＬ当たり１０⁶個の間の細胞、または１ｍＬ当たり約１×
１０⁶個から１ｍＬ当たり約１０×１０⁶個の間の細胞を含む。一実施形態において、医薬
組成物は、目に見える細胞凝集塊を含まない（すなわち、大きい細胞凝集塊を含まない）
か、またはこのような目に見える凝集塊を実質的に含まない。本明細書で使用される場合
、「大きい細胞凝集塊」は、拡大せずに目に見える、例えば肉眼で見える細胞の集合体を
意味し、一般的に約１５０ミクロンより大きい細胞集合体を指す。一部の実施形態におい
て、医薬組成物は、約２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、
５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、
９．５％または１０％のデキストラン、例えばデキストラン－４０を含む。具体的な実施
形態において、前記組成物は、約７．５％から約９％のデキストラン－４０を含む。具体
的な実施形態において、前記組成物は、約５．５％のデキストラン－４０を含む。一実施
形態において、医薬組成物は、約１％から約１５％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含
む。具体的な実施形態において、医薬組成物は、約１％、２％、３％、４％、５％、６５
、７５、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％のＨＳＡを
含む。具体的な実施形態において、前記細胞は、低温保存および融解されている。他の具
体的な実施形態において、前記細胞は、７０μＭから１００μＭのフィルターに通過させ
て濾過されている。他の具体的な実施形態において、前記組成物は、目に見える細胞凝集
塊を含まない。他の具体的な実施形態において、前記組成物は、細胞１０⁶個当たり約２
００個より少ない細胞凝集塊を含み、前記細胞凝集塊は、顕微鏡、例えば光学顕微鏡下で
のみ目に見える。他の具体的な実施形態において、前記組成物は、細胞１０⁶個当たり約
１５０個より少ない細胞凝集塊を含み、前記細胞凝集塊は、顕微鏡、例えば光学顕微鏡下
でのみ目に見える。他の具体的な実施形態において、前記組成物は、細胞１０⁶個当たり
約１００個より少ない細胞凝集塊を含み、前記細胞凝集塊は、顕微鏡、例えば光学顕微鏡
下でのみ目に見える。

【0197】

具体的な実施形態において、医薬組成物は、１ミリリットル当たり約１．０±０．３×
１０⁶個の細胞、約５．５％デキストラン－４０（ｗ／ｖ）、約１０％ＨＳＡ（ｗ／ｖ）
、および約５％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）を含む。他の具体的な実施形態において、本明細書で
提供される胎盤幹細胞を含む医薬組成物は、約５．７５％デキストラン４０、約１０％ヒ
ト血清アルブミン、および約２．５％ＤＭＳＯを含む。

【0198】

他の実施形態において、医薬組成物は、１０％デキストラン－４０を含む溶液中に、複
数の細胞、例えば複数の単離された胎盤細胞を含み、医薬組成物は、１ミリリットル当た
り約１．０±０．３×１０⁶個から１ミリリットル当たり約５．０±１．５×１０⁶個の間
の細胞を含み、前記組成物は、肉眼で見える細胞凝集塊を含まない（すなわち、大きい細
胞凝集塊を含まない）。一部の実施形態において、医薬組成物は、１ミリリットル当たり
約１．５×１０⁶個から１ミリリットル当たり約３．７５×１０⁶個の間の細胞を含む。具
体的な実施形態において、前記細胞は、低温保存および融解されている。他の具体的な実
施形態において、前記細胞は、７０μＭから１００μＭのフィルターを通過させて濾過さ
れている。他の具体的な実施形態において、前記組成物は、細胞１０⁶個当たり約２００
個より少ない極小の細胞凝集塊（すなわち、拡大しないと目に見えない細胞凝集塊）を含
む。他の具体的な実施形態において、医薬組成物は、細胞１０⁶個当たり約１５０個より
少ない極小の細胞凝集塊を含む。他の具体的な実施形態において、医薬組成物は、細胞１
０⁶個当たり約１００個より少ない極小の細胞凝集塊を含む。他の具体的な実施形態にお
いて、医薬組成物は、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、
７％、６％、５％、４％、３％、もしくは２％未満のＤＭＳＯ、または１％、０．９％、
０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、もしくは０
．１％未満のＤＭＳＯを含む。

【0199】

さらに、細胞を含む組成物であって、前記組成物は、本明細書で開示された方法の１つ
によって産生される、組成物が本明細書において提供される。例えば、一実施形態におい
て、医薬組成物は、細胞を含み、医薬組成物は、胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能
性胎盤細胞を含む溶液を濾過して、濾過された細胞を含有する溶液を形成すること；例え
ば低温保存の前に、濾過された細胞を含有する溶液を第１の溶液で、１ミリリットル当た
り約１から５０×１０⁶、１から４０×１０⁶、１から３０×１０⁶、１から２０×１０⁶、
１から１５×１０⁶、または１から１０×１０⁶個の細胞に希釈すること；および得られた
濾過された細胞を含有する溶液を、デキストランを含むがヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）
を含まない第２の溶液で希釈して、前記組成物を産生することを含む方法によって産生さ
れる。一実施形態において、前記希釈は、１ミリリットル当たり約１５×１０⁶個の細胞
以下への希釈である。一実施形態において、前記希釈は、１ミリリットル当たり約１０±
３×１０⁶個の細胞以下への希釈である。一実施形態において、前記希釈は、１ミリリッ
トル当たり約７．５×１０⁶個の細胞以下への希釈である。他の一実施形態において、濾
過された細胞を含有する溶液が、希釈前に１ミリリットル当たり約１５×１０⁶個未満の
細胞を含む場合、濾過は、任意選択である。他の一実施形態において、濾過された細胞を
含有する溶液が、希釈前に、１ミリリットル当たり約１０±３×１０⁶個未満の細胞を含
む場合、濾過は、任意選択である。他の一実施形態において、濾過された細胞を含有する
溶液が、希釈前に、１ミリリットル当たり約７．５×１０⁶個未満の細胞を含む場合、濾
過は、任意選択である。

【0200】

具体的な実施形態において、細胞は、第１の希釈溶液での前記希釈から前記第２の希釈
溶液での前記希釈の間、低温保存される。他の具体的な実施形態において、第１の希釈溶
液は、デキストランおよびＨＳＡを含む。第１の希釈溶液または第２の希釈溶液中のデキ
ストランは、あらゆる分子量を有するデキストランであってもよく、例えば約１０ｋＤａ
から約１５０ｋＤａの分子量を有するデキストランであってもよい。一部の実施形態にお
いて、前記第１の希釈溶液または前記第２の溶液中の前記デキストランは、約２．５％、
３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、
７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％または１０％デキストラ
ンである。他の具体的な実施形態において、前記第１の希釈溶液または前記第２の希釈溶
液中のデキストランは、デキストラン－４０である。他の具体的な実施形態において、前
記第１の希釈溶液および前記第２の希釈溶液中のデキストランは、デキストラン－４０で
ある。他の具体的な実施形態において、前記第１の希釈溶液中の前記デキストラン－４０
は、５．０％のデキストラン－４０である。他の具体的な実施形態において、前記第１の
希釈溶液中の前記デキストラン－４０は、５．５％のデキストラン－４０である。他の具
体的な実施形態において、前記第２の希釈溶液中の前記デキストラン－４０は、１０％の
デキストラン－４０である。他の具体的な実施形態において、ＨＳＡを含む前記溶液中の
前記ＨＳＡは、１から１５％のＨＳＡである。他の具体的な実施形態において、ＨＳＡを
含む前記溶液中の前記ＨＳＡは、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、
９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％のＨＳＡである。他の具体
的な実施形態において、ＨＳＡを含む前記溶液中の前記ＨＳＡは、１０％のＨＳＡである
。他の具体的な実施形態において、前記第１の希釈溶液は、ＨＳＡを含む。他の具体的な
実施形態において、前記第１の希釈溶液中の前記ＨＳＡは、１０％のＨＳＡである。他の
具体的な実施形態において、前記第１の希釈溶液は、凍結防止剤を含む。他の具体的な実
施形態において、前記凍結防止剤は、ＤＭＳＯである。他の具体的な実施形態において、
前記第２の希釈溶液中の前記デキストラン－４０は、約１０％のデキストラン－４０であ
る。他の具体的な実施形態において、前記細胞を含む組成物は、約７．５％から約９％の
デキストランを含む。他の具体的な実施形態において、医薬組成物は、１ミリリットル当
たり約１．０±０．３×１０⁶個の細胞から１ミリリットル当たり約５．０±１．５×１
０⁶個の細胞を含む。他の具体的な実施形態において、医薬組成物は、１ミリリットル当
たり約１．５×１０⁶個の細胞から１ミリリットル当たり約３．７５×１０⁶個の細胞を含
む。

【0201】

他の実施形態において、医薬組成物は、（ａ）低温保存の前に、胎盤細胞を含む細胞を
含有する溶液、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞を濾過して、濾過された細胞を含
有する溶液を産生すること；（ｂ）濾過された細胞を含有する溶液中の細胞を、１ミリリ
ットル当たり約１から５０×１０⁶個、１から４０×１０⁶個、１から３０×１０⁶個、１
から２０×１０⁶個、１から１５×１０⁶個、または１から１０×１０⁶個の細胞で低温保
存すること；（ｃ）細胞を融解すること；および（ｄ）濾過された細胞を含有する溶液を
、デキストラン－４０溶液で約１：１から約１：１１（ｖ／ｖ）に希釈することを含む方
法によって作製される。一実施形態において、ステップ（ａ）の前に細胞の数が１ミリリ
ットル当たり細胞約１０±３×１０⁶個未満である場合、濾過は、任意選択である。他の
具体的な実施形態において、ステップ（ｂ）における細胞は、１ミリリットル当たり約１
０±３×１０⁶個の細胞で低温保存される。他の具体的な実施形態において、ステップ（
ｂ）における細胞は、約５％から約１０％のデキストラン－４０およびＨＳＡを含む溶液
中で低温保存される。一実施形態において、ステップ（ｂ）における前記希釈は、１ミリ
リットル当たり約１５×１０⁶個の細胞以下への希釈である。

【0202】

他の実施形態において、医薬組成物は、（ａ）１０％ＨＳＡを含む５．５％デキストラ
ン－４０溶液中に、胎盤細胞、例えば胎盤幹細胞または複能性胎盤細胞を懸濁して、細胞
を含有する溶液を形成すること；（ｂ）細胞を含有する溶液を、７０μＭフィルターを介
して濾過すること；（ｃ）細胞を含有する溶液を、５．５％デキストラン－４０、１０％
ＨＳＡ、および５％ＤＭＳＯを含む溶液で、１ミリリットル当たり約１から５０×１０⁶
個、１から４０×１０⁶個、１から３０×１０⁶個、１から２０×１０⁶個、１から１５×
１０⁶個、または１から１０×１０⁶個の細胞に希釈すること；（ｄ）細胞を低温保存する
こと；（ｅ）細胞を融解すること；および（ｆ）細胞を含有する溶液を１０％デキストラ
ン－４０で１：１から１：１１（ｖ／ｖ）に希釈することを含む方法によって作製される
。一実施形態において、ステップ（ｃ）における前記希釈は、１ミリリットル当たり約１
５×１０⁶個の細胞以下への希釈である。一実施形態において、ステップ（ｃ）における
前記希釈は、細胞約１０±３×１０⁶個／ｍＬ以下への希釈である。一実施形態において
、ステップ（ｃ）における前記希釈は、細胞約７．５×１０⁶個／ｍＬ以下への希釈であ
る。

【0203】

他の実施形態において、細胞を含む組成物は、（ａ）複数の細胞を遠心分離して、細胞
を収集するステップ；（ｂ）５．５％デキストラン－４０に細胞を再懸濁するステップ；
（ｃ）細胞を遠心分離して、細胞を収集するステップ；（ｄ）１０％ＨＳＡを含む５．５
％デキストラン－４０溶液に細胞を再懸濁するステップ；（ｅ）細胞を、７０μＭフィル
ターを介して濾過するステップ；（ｆ）細胞を、５．５％デキストラン－４０、１０％Ｈ
ＳＡ、および５％ＤＭＳＯで、細胞１ミリリットル当たり約１から５０×１０⁶、１から
４０×１０⁶、１から３０×１０⁶、１から２０×１０⁶、１から１５×１０⁶、または１か
ら１０×１０⁶個に希釈するステップ；（ｇ）細胞を低温保存するステップ；（ｈ）細胞
を融解するステップ；および（ｉ）細胞を１０％のデキストラン－４０で１：１から１：
１１（ｖ／ｖ）に希釈するステップを含む方法によって作製される。一実施形態において
、ステップ（ｆ）における前記希釈は、１ミリリットル当たり約１５×１０⁶個の細胞以
下への希釈である。一実施形態において、ステップ（ｆ）における前記希釈は、約１０±
３×１０⁶個／ｍＬの細胞以下への希釈である。一実施形態において、ステップ（ｆ）に
おける前記希釈は、約７．５×１０⁶個／ｍＬの細胞以下への希釈である。他の一実施形
態において、細胞の数が１ミリリットル当たり細胞約１０±３×１０⁶個未満である場合
、濾過は、任意選択である。

【0204】

組成物、例えば、本明細書に記載される単離された胎盤細胞を含む医薬組成物は、本明
細書に記載される単離された胎盤細胞のいずれかを含んでいてもよい。

【0205】

細胞生成物の投与に好適な他の注射製剤が使用されてもよい。

【0206】

一実施形態において、医薬組成物は、実質的または完全に非母体起源である、すなわち
胎児の遺伝子型を有する、例えば、少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％または
約１００％が非母体起源である、単離された胎盤細胞を含む。例えば、一実施形態におい
て、医薬組成物は、単離された胎盤細胞の集団を含み、該単離された胎盤細胞の集団は、
ＣＤ２００＋およびＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、およびＣＤ２００＋；Ｃ
Ｄ２００＋およびＯＣＴ－４＋；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７
３＋およびＣＤ１０５＋であり、前記胎盤細胞の集団が胚様体の形成を可能にする条件下
で培養される場合、単離された胎盤細胞の前記集団を含む胎盤細胞の集団において一また
は複数の胚様体の形成を促進するか；またはＯＣＴ－４＋であり、前記胎盤細胞の集団が
胚様体の形成を可能にする条件下で培養される場合、単離された胎盤細胞の前記集団を含
む胎盤細胞の集団において一または複数の胚様体の形成を促進するか；または前述の組合
せであり、前記単離された胎盤細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％または
９９％が、非母体起源である。他の実施形態において、医薬組成物は、単離された胎盤細
胞の集団を含み、該単離された胎盤細胞の集団は、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋およびＣＤ
３４－；ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋およびＣＤ３４－；ＣＤ１０＋、ＣＤ
１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ９０＋またはＣＤ４５－の少なくとも１
つ；ＣＤ１０＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ４５
－；ＣＤ１０＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ４５
－；ＣＤ２００＋およびＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、およびＣＤ２００＋
；ＣＤ２００＋およびＯＣＴ－４＋；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ－；Ｃ
Ｄ７３＋およびＣＤ１０５＋であり、前記胎盤細胞の集団が胚様体の形成を可能にする条
件下で培養される場合、前記単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞の集団において一または
複数の胚様体の形成を促進するか；ＯＣＴ－４＋であり、前記胎盤細胞の集団が胚様体の
形成を可能にする条件下で培養される場合、前記単離された胎盤細胞を含む胎盤細胞の集
団において一または複数の胚様体の形成を促進するか；またはＣＤ１１７－、ＣＤ１３３
－、ＫＤＲ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ、ＤＱ、
ＤＲ－、および／またはＰＤＬ１＋の一または複数であるか；または前述の組合せであり
、前記単離された胎盤細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％または９９％が
、非母体起源である。具体的な実施形態において、医薬組成物は加えて、胎盤から得られ
たものではない幹細胞を含む。

【0207】

本明細書で提供される組成物、例えば医薬組成物中の単離された胎盤細胞は、単一のド
ナー由来、または複数のドナー由来の胎盤細胞を含んでいてもよい。単離された胎盤細胞
は、意図されたレシピエントに対して完全にＨＬＡ適合であってもよいし、または部分的
または完全にＨＬＡ不適合であってもよい。

【0208】

４．３．３単離された胎盤細胞を含むマトリックス
さらに、胎盤細胞または単離された胎盤細胞の集団を含むマトリックス、ヒドロゲル、
足場、および同種のものを含む組成物が本明細書において提供される。このような組成物
は、液体懸濁液中の細胞の代わりに、またはそれに加えて使用することができる。

【0209】

本明細書に記載される単離された胎盤細胞は、天然マトリックス、例えば羊膜材料など
の胎盤のバイオマテリアル上に植え付けることができる。このような羊膜材料は、例えば
、哺乳類胎盤から直接切り出された羊膜；固定または加熱処理された羊膜、実質的に乾燥
した（すなわち、＜２０％Ｈ２Ｏ）羊膜、絨毛膜、実質的に乾燥した絨毛膜、実質的に乾
燥した羊膜および絨毛膜、ならびに同種のものであり得る。その上に単離された胎盤細胞
を植え付けることができる好ましい胎盤のバイオマテリアルは、その開示は参照によりそ
の全体が本明細書に組み入れられるハリリ（Ｈａｒｉｒｉ）、特許文献１４に記載される
。

【0210】

本明細書に記載される単離された胎盤細胞は、例えば注射に好適なヒドロゲル溶液に懸
濁することができる。このような組成物に好適なヒドロゲルとしては、自己集合ペプチド
、例えばＲＡＤ１６などが挙げられる。一実施形態において、細胞を含むヒドロゲル溶液
は、例えばモールド中で硬化させて、埋め込みのための細胞を分散させたマトリックスを
形成することができる。このようなマトリックス中の単離された胎盤細胞はまた、埋め込
み前に細胞が有糸分裂によって拡張されるように培養することもできる。ヒドロゲルは、
例えば、水分子を封じ込めてゲルを形成する３次元の開放格子構造を作り出すために、共
有結合、イオン結合、または水素結合を介して架橋された有機ポリマー（天然または合成
）である。ヒドロゲルを形成する材料としては、例えばアルギネートおよびそれらの塩な
どの多糖類、ペプチド、ポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ）、および
イオン架橋されたポリアクリレート、または例えばそれぞれ温度またはｐＨによって架橋
されたポリエチレンオキシド－ポリプロピレングリコールブロックコポリマーなどのブロ
ックポリマーが挙げられる。一部の実施形態において、ヒドロゲルまたはマトリックスは
、生分解性である。

【0211】

一部の実施形態において、製剤は、ｉｎｓｉｔｕにおいて重合性のゲルを含む（例え
ば、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる特許文献１５；非特許文
献７；非特許文献８参照）。

【0212】

一部の実施形態において、ポリマーは、例えば水、緩衝化された塩溶液、または電荷を
有する側基またはその１価イオン性塩を有する水性アルコール溶液などの水溶液中で、少
なくとも部分的に可溶性である。カチオンと反応できる酸性側基を有するポリマーの例は
、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、アクリル酸とメ
タクリル酸とのコポリマー、ポリ（酢酸ビニル）、およびスルホン化ポリマー、例えばス
ルホン化ポリスチレンなどである。アクリル酸またはメタクリル酸とビニルエーテル単量
体またはポリマーとの反応によって形成された酸性側基を有するコポリマーも、使用する
ことができる。酸性基の例は、カルボン酸基、スルホン酸基、ハロゲン化（好ましくは、
フッ素化）アルコール基、フェノール系ＯＨ基、および酸性ＯＨ基である。

【0213】

具体的な実施形態において、マトリックスは、フェルトであり、これは、生体吸収性材
料、例えばＰＧＡ、ＰＬＡ、ＰＣＬコポリマーもしくはブレンド、またはヒアルロン酸か
ら作製されるマルチフィラメントヤーンで構成することができる。ヤーンは、クリンピン
グ、カッティング、カーディングおよびニードリングからなる標準的な繊維加工技術を使
用してフェルトになる。他の好ましい実施形態において、本発明の細胞は、複合構造であ
り得る発泡体の足場上に植え付けられる。加えて３次元フレームワークを、例えば修復、
置き換え、または増大させようとする体内の具体的な構造などの有用な形状に成形するこ
とができる。使用できる足場の他の例としては、不織布マット、多孔質発泡体、または自
己集合ペプチドが挙げられる。不織布マットは、グリコール酸と乳酸との合成吸収性コポ
リマー（例えば、ＰＧＡ／ＰＬＡ）で構成される繊維（ＶＩＣＲＹＬ、Ｅｔｈｉｃｏｎ，
Ｉｎｃ．、Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ、Ｎ．Ｊ．）を使用して形成することができる。例えば
フリーズドライまたは凍結乾燥などのプロセスによって形成された例えばポリ（ε－カプ
ロラクトン）／ポリ（グリコール酸）（ＰＣＬ／ＰＧＡ）コポリマーで構成される発泡体
（例えば、特許文献１６参照）も、足場として使用することができる。

【0214】

本明細書に記載される単離された胎盤細胞またはそれらの共培養物は、３次元フレーム
ワークまたは足場上に植え付けて、ｉｎｖｉｖｏで埋め込むことができる。このような
フレームワークは、いずれか一または複数の増殖因子、細胞、薬物または例えば組織形成
を刺激する他の要素と組み合わせて埋め込むことができる。

【0215】

使用できる足場の例としては、不織布マット、多孔質発泡体、または自己集合ペプチド
が挙げられる。不織布マットは、グリコール酸と乳酸との合成吸収性コポリマー（例えば
、ＰＧＡ／ＰＬＡ）で構成される繊維（ＶＩＣＲＹＬ、Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．、Ｓｏ
ｍｅｒｖｉｌｌｅ、Ｎ．Ｊ．）を使用して形成することができる。例えばフリーズドライ
または凍結乾燥などのプロセスによって形成された例えばポリ（ε－カプロラクトン）／
ポリ（グリコール酸）（ＰＣＬ／ＰＧＡ）コポリマーで構成される発泡体（例えば、特許
文献１６参照）も、足場として使用することができる。

【0216】

他の実施形態において、単離された胎盤細胞は、フェルト上に植え付けてもよいし、ま
たはフェルトと接触させてもよく、このようなフェルトは、例えばＰＧＡ、ＰＬＡ、ＰＣ
Ｌコポリマーもしくはブレンド、またはヒアルロン酸などの生体吸収性材料から作製され
るマルチフィラメントヤーンで構成することができる。

【0217】

本明細書で提供される単離された胎盤細胞は、他の実施形態において、複合構造であり
得る発泡体の足場上に植え付けることができる。このような発泡体の足場は、有用な形状
、例えば修復、置き換えまたは増大させようとする体内の具体的な構造の部分の形状など
に成形することができる。一部の実施形態において、フレームワークは、例えば０．１Ｍ
酢酸で処理され、続いて細胞の付着を強化するために、細胞の植え付けの前にポリリシン
、ＰＢＳ、および／またはコラーゲン中でインキュベートされる。細胞の付着または増殖
および組織の分化を向上させるために、マトリックスの外部表面を、例えば、マトリック
スを血漿でコーティングすること、または一または複数のタンパク質（例えば、コラーゲ
ン、弾性線維、細網線維）、糖タンパク質、グリコサミノグリカン（例えば、ヘパリン硫
酸、コンドロイチン－４－硫酸、コンドロイチン－６－硫酸、デルマタン硫酸、ケラチン
硫酸など）、細胞マトリックス、ならびに／または例えば、これらに限定されないが、ゼ
ラチン、アルギネート、寒天、アガロース、および植物ゴムなどの他の材料を付加するこ
とによって改変することができる。

【0218】

一部の実施形態において、足場は、それを非血栓形成性にする材料を含むか、またはそ
れで処理される。これらの処理および材料も、内皮増殖、移動、および細胞外マトリック
ス堆積を促進および維持する可能性がある。これらの材料および処理の例としては、これ
らに限定されないが、天然材料、例えばラミニンおよびＩＶ型コラーゲンなどの基底膜タ
ンパク質、例えばＥＰＴＦＥなどの合成材料、ならびにセグメント化ポリウレタン尿素シ
リコーン、例えばＰＵＲＳＰＡＮ（商標）（ＴｈｅＰｏｌｙｍｅｒＴｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙＧｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、Ｃａｌｉｆ．）などが挙げられる。足
場はまた、例えばヘパリンなどの抗血栓剤を含んでいてもよく、足場はまた、単離された
胎盤細胞での植え付けの前に、表面電荷を変更するように処理することもできる（例えば
、血漿でのコーティング）。

【0219】

本明細書で提供される胎盤細胞（例えば、ＰＤＡＣ）はまた、生理的に許容できるセラ
ミック材料上に植え付けてもよいし、またはそれと接触させてもよく、このような材料と
しては、これらに限定されないが、リン酸モノ、ジ、トリ、アルファ－トリ、ベータ－ト
リ、およびテトラカルシウム、ヒドロキシアパタイト、フルオロアパタイト、硫酸カルシ
ウム、フッ化カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウムカルシ
ウム、生物学的に活性なガラス、例えばバイオグラス（登録商標）など、およびそれらの
混合物などが挙げられる。現在市販されている多孔質生体適合性セラミック材料としては
、ＳＵＲＧＩＢＯＮＥ（登録商標）（ＣａｎＭｅｄｉｃａＣｏｒｐ．、Ｃａｎａｄａ）
、ＥＮＤＯＢＯＮ（登録商標）（ＭｅｒｃｋＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌＦｒａｎｃｅ、
Ｆｒａｎｃｅ）、ＣＥＲＯＳ（登録商標）（Ｍａｔｈｙｓ，ＡＧ、Ｂｅｔｔｌａｃｈ、Ｓ
ｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ならびに石灰化コラーゲン骨移植製品、例えばＨＥＡＬＯＳ（
商標）（ＤｅＰｕｙ，Ｉｎｃ．、Ｒａｙｎｈａｍ、ＭＡ）およびＶＩＴＯＳＳ（登録商標
）、ＲＨＡＫＯＳＳ（商標）、およびＣＯＲＴＯＳＳ（登録商標）（Ｏｒｔｈｏｖｉｔａ
、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｐａ．）などが挙げられる。フレームワークは、天然および／または
合成材料の混合物、ブレンドまたは複合材料であってもよい。

【0220】

一実施形態において、単離された胎盤細胞は、細胞約０．５×１０⁶から約８×１０⁶個
／ｍＬで、好適な足場上に植え付けてもよいし、または好適な足場と接触させてもよい。

【0221】

５．実施例
５．１実施例１：処置方法
５．１．１胎盤幹細胞を使用したＤＰＮの処置
Ｉ型糖尿病を有する５２歳の男性が、左脚に無感覚と痛みを呈している。糖尿病性末梢
神経障害の診断がなされる。診断後、対象を、以下のレジメンに従ってＣＤ１０＋、ＣＤ
３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞で処置する：３×１０⁷個のＣＤ１０＋
、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、連続３カ月にわたり月１回、
筋肉内投与する。次の２４カ月にわたり、ＤＰＮのいずれかの症状における改善の徴候に
関して個体をモニターする。皮膚生検中の表皮内神経線維の定量および定性によって測定
された表皮内神経線維密度における改善など、ＤＰＮの症状のいずれかがモニター期間中
に改善する場合、治療有効性が確立される。

【0222】

５．２実施例２：ＤＰＮ処置プロトコール
少なくとも１８歳の糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）を有する対象を、ＣＤ１０⁺、Ｃ
Ｄ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞で処置する。対象グループＩ：３×１０⁶
個のＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を、１日目（処置の初
日）、２９日目、および５７日目に筋肉内投与する。対象グループＩＩ：３×１０⁷個の
ＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞を、１日目（処置の初日）
、２９日目、および５７日目に筋肉内投与する。対象グループＩＩＩ：プラセボを、１日
目（処置の初日）、２９日目、および５７日目に筋肉内投与する。各胎盤幹細胞の用量は
、１５回の０．３０ｍｌの注射として投与され、投与は、対象のひざの下から足首の上の
間である。

【0223】

（臨床エンドポイント）
ＤＰＮを処置するためのＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞
の効能に関する主要臨床エンドポイントは、皮膚生検中の表皮内神経線維の定量および定
性によって測定した場合の表皮内神経線維密度における改善であり得る。神経線維の数／
密度の増加は、神経障害の改善を示す。

【0224】

（対象の選択）
以下の適格基準は、ＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞での
処置が適切であるとみなされる対象を選択するのに使用することができる。この処置プロ
トコールが特定の対象に好適であるかどうかを決定する場合、全ての関連する医学的およ
び非医学的状態が考慮される。

【0225】

対象は、処置プロトコールに適格であるためには、以下の条件を満たすと予想される：
・男性および女性、少なくとも１８歳またはそれを超える。
・米国糖尿病学会（ＡＤＡ）または世界保健機関（ＷＨＯ）基準で定義されるような２
型糖尿病（ＤＭ）。
・以下：（ａ）異常な症状（ＮＴＳＳ－６≧６ポイント（合計スコア）、または一また
は複数の症状につき≧２．０ポイント）、および（ｂ）異常な徴候（２～２４のＵＥＮＳ
スコアおよび／または２～１０のＮＩＳ－ＬＬスコア）を含む、２型糖尿病による糖尿病
性末梢神経障害（ＤＰＮ）の確立された基準を満たす。
・妊娠の可能性がある女性は、スクリーニングで陰性の血清妊娠検査を示し、研究療法
での処置の前に陰性の尿妊娠検査を示していなければならない。加えて、性的に活発な妊
娠可能な女性（ＦＣＢＰ；ＦｅｍａｌｅｓｏｆＣｈｉｌｄＢｅａｒｉｎｇＰｏｔ
ｅｎｔｉａｌ）は、研究期間中、以下の適切な避妊方法の形態、例えば：経口、注射、ま
たは埋め込み型のホルモンによる避妊、卵管結紮、子宮内避妊具（ＩＵＤ）、殺精子薬で
のバリア避妊法または精管切除したパートナーなどのうち２つを同時に使用することに同
意していなければならない。
・男性（精管切除術を受けた男性を包含する）は、研究期間中、ＦＣＢＰとの性行為の
ときにバリア避妊（ラテックスコンドーム）を使用することに同意していなければならな
い。

【0226】

以下の条件のうち一または複数を有する対象は、処置プロトコールから排除することが
できる：
・対象の研究への参加を妨げると予想されるあらゆる重大な病状、検査所見の異常、ま
たは精神病。
・糖尿病の対象における神経障害の他の原因：慢性炎症性脱髄性多発神経障害；ビタミ
ンＢ１２欠乏、甲状腺機能低下症、および尿毒症症候群による神経障害；または閉じ込め
もしくは外傷による神経障害。
・急性有痛性糖尿病性神経障害症候群：迅速な血糖管理の状況で起こる治療誘発性糖尿
病性神経障害の可逆的な経過；糖尿病性神経障害性悪液質；および意図的な体重の減少に
伴いみられる糖尿病による食欲低下、糖尿病性神経障害。
・重症末梢動脈疾患（ＰＡＤ）と診断される前の病歴。
・複数回の筋肉内（ＩＭ）注射による重度の皮下出血または出血を回避するための、血
小板減少症および凝固障害。
・研究に参加しようとすれば対象を許容できないリスクにさらす検査所見の異常が存在
するなどのあらゆる状態。
・研究からデータを解釈する能力を混乱させるあらゆる状態。
・ＤＰＮ処置のためにオピオイドを摂取している対象。
・妊娠中または授乳の女性。
・スクリーニング時に＞４０ｋｇ／ｍ２の肥満指数を有する対象。
・ＤＭ以外の状態および／もしくは重大な共存する神経疾患（例えば、パーキンソン病
、てんかん、多発性硬化症、アルコール性末梢神経障害）、または神経障害の症状を引き
起こす疑いのある薬剤（例えば、これらに限定されないが、メトロニダゾール、抗結核薬
、および重金属など）への曝露により生じる神経障害。
・腓腹感覚神経の活動電位がないこと、またはＵＥＮＳ＞２４および／またはＮＩＳ－
ＬＬ＞１０によって測定した場合の、進行中の神経障害。
・重症虚血肢と診断される前の病歴。
・糖尿病性足潰瘍の病歴（どのような時でも）および／または糖尿病（ＤＭ）による四
肢の血管再建術および／または切断を受けていること。
・１型ＤＭの診断、および／または以下：３５歳より前のＤＭの診断；ＤＭ診断後の１
年以内における、ＤＭの処置に必要なインスリン；糖尿病性ケトアシドーシスの病歴のい
ずれか。
・スクリーニング時において、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアルカリホスファターゼが、≧２
．５×正常値上限（ＵＬＮ）であること。
・スクリーニング時に、腎疾患における食物変更研究（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏ
ｆＤｉｅｔｉｎＲｅｎａｌＤｉｓｅａｓｅＳｔｕｄｙ）の式を使用して計算し
た場合、糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）が＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２と推測されること、
または過去１年の間、６０未満の異常なｅＧＦＲの病歴、および＞１５ｍＬ／分／１．７
３ｍ２が正常値未満に低下すること。
・スクリーニング時に、ビリルビンレベルが＞２ｍｇ／ｄＬであること（対象が公知の
ジルベール病を有していない限り）。
・ＩＰ投与前の４週間以内における、未処置の慢性感染または全身性抗生物質でのあら
ゆる感染の処置。
・制御不能な高血圧（スクリーニング中、対象が少なくとも５分間座って安静にしてい
る間に採られた２回の独立した測定で、拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇまたは収縮期血圧＞
１８０ｍｍＨｇであることと定義される）。
・これらに限定されないが、悪性の心室性不整脈、ＣＣＳ分類ＩＩＩ～ＩＶの狭心症、
インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名する６カ月前の心筋梗塞／経皮的冠
動脈形成術（ＰＣＩ）／冠状動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）、その後の３カ月における保
留中の冠動脈再建術、インフォームドコンセントフォームに署名する６カ月前の一過性虚
血発作／脳血管発作、および／またはニューヨーク心臓協会［ＮＹＨＡ］のステージＩＩ
ＩまたはＩＶのうっ血性心不全などの重大な心臓障害の病歴。注釈：安定なカナダ心臓血
管学会（ＣＣＳ；ＣａｎａｄｉａｎＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＳｏｃｉｅｔｙ）
分類Ｉ～ＩＩの狭心症は許容される。
・スクリーニング時における管理不良のＤＭ（ヘモグロビンＡ１ｃ＞１０％）。
・スクリーニング時における未処置の増殖性網膜症。
・付随する疾患に起因する２年間未満の期待寿命。
・５年以内の悪性腫瘍の病歴、ただし以下の環境を除く：皮膚の基底細胞または扁平上
皮癌、現在治癒したとみなされるがんの既往歴、または陽性Ｐａｐスメアとそれに続く陰
性の経過観察。
・ウシまたはブタ生成物の要素のいずれか、デキストラン４０、およびジメチルスルホ
キシド［ＤＭＳＯ］）に対する過敏症の病歴。
・対象が、研究療法で処置する前の９０日以内（または５倍半減期以内のどちらかより
長いほう）に、治験薬剤、すなわちいずれの適応症においても市販用途に関して米国食品
医薬品局（ＦＤＡ）に承認されていない薬剤またはデバイスを受けていること、またはこ
の研究が終わる前に他の治療研究への参加を計画していること、またはこれまでのいずれ
かの時期に遺伝子または細胞療法を受けたことがあること。

【0227】

（臨床転帰）
一または複数の臨床エンドポイントにおける改善が実証されれば、ＤＰＮの処置におけ
るＣＤ１０⁺、ＣＤ３４^-、ＣＤ１０５⁺、ＣＤ２００⁺胎盤幹細胞の効能が確認される。

【0228】

（均等物）
本発明の開示は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されない
ものとする。実際に、記載されたものに加えて、前述の説明から本明細書で提供される主
題の様々な改変が当業者には明らかになると予想される。このような改変は、添付の特許
請求の範囲内に含まれるものとする。

【0229】

様々な刊行物、特許および特許出願が本明細書に引用されており、これらの開示は、参
照によりそれらの全体が組み入れられる。

【手続補正書】

【提出日】2023-10-05

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

本願明細書に実質的に記載された、新規な物、方法及び製造方法。

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