特開 2023-18049 アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩＢ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023018049

(43)【公開日】2023-02-07

(54)【発明の名称】アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩＢ抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20230131BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230131BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230131BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230131BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230131BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/513 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 33/24 20190101ALI20230131BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230131BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230131BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230131BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C12N5/10

C12N1/19

C12N1/15

C12N1/21

C12P21/08

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K31/337

A61K31/7068

A61K31/4745

A61K31/704

A61K31/519

A61K31/513

A61K31/282

A61K31/407

A61K33/24

A61P35/00

A61P43/00 121

C12N15/13 ZNA

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022185432

(22)【出願日】2022-11-21

(62)【分割の表示】P 2019194319の分割

【原出願日】2014-07-31

(31)【優先権主張番号】61/861,198

(32)【優先日】2013-08-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/901,732

(32)【優先日】2013-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/933,632

(32)【優先日】2014-01-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】515302853

【氏名又は名称】ファイヴ プライム セラピューティクス インク

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ハーディング，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ピアース，クリステン

(72)【発明者】

【氏名】パティル，ナムラタ

(72)【発明者】

【氏名】ブレナン，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ハンブルトン，ジュリー

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する抗体であって、アフコシル化された抗体を提供する。
【解決手段】ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する抗体を含む組成物であって、組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化された、組成物を提供する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を投与することを含む、がんを処置する方法が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

複数の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物であって、
各抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、
重鎖可変領域が
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ
軽鎖可変領域が
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、
組成物中の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されている、
組成物。

【請求項2】

重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

重鎖が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１～４の何れか一項に記載の組成物。

【請求項6】

軽鎖が配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１～５の何れか一項に記載の組成物。

【請求項7】

重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖が配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物であって、
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合する、組成物。

【請求項9】

抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～８何れか一項に記載の組成物。

【請求項10】

抗体が、キメラ抗体である、請求項１～９の何れか一項に記載の組成物。

【請求項11】

抗体が、ヒト化抗体である、請求項１～１０の何れか一項に記載の組成物。

【請求項12】

抗体が、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いている、請求項１～１１の何れか一項に記載の組成物。

【請求項13】

抗体が、κ軽鎖定常領域を含む、請求項１～１２の何れか一項に記載の組成物。

【請求項14】

抗体が、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１～１３の何れか一項に記載の組成物。

【請求項15】

アフコシル化抗体が、同一のアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体と比較して、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する、請求項１～１４の何れか一項に記載の組成物。

【請求項16】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体による特異的溶解よりも、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少なくとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

ＡＤＣＣ活性が、標的細胞としてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現するＢａ／Ｆ３細胞、及びエフェクター細胞として単離されたヒトＰＢＭＣを使用して決定される、請求項１５又は１６に記載の組成物。

【請求項18】

アフコシル化抗体が、同一のアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する、請求項１～１７の何れか一項に記載の組成物。

【請求項19】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、又は少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合する、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が、表面プラズモン共鳴により決定される、請求項１８及び１９に記載の組成物。

【請求項21】

ＦｃガンマＲＩＩＩＡが、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される、請求項１８～２０の何れか一項に記載の組成物。

【請求項22】

ＦｃガンマＲＩＩＩＡが、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）である、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合するが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しない、請求項１～２２の何れか一項に記載の組成物。

【請求項24】

請求項１～２３の何れか一項に記載の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体をコードする核酸を含む宿主細胞であって、機能的アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子を欠いている、宿主細胞。

【請求項25】

ＣＨＯ細胞である、請求項２４に記載の宿主細胞。

【請求項26】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を作製するための方法であって、請求項２４又は２５に記載の宿主細胞を、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体をコードする核酸を発現するために適した条件下で培養することを含む、方法。

【請求項27】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を作製するための方法であって、請求項２４又は２５に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を産生するために適した条件下で培養することを含む、方法。

【請求項28】

宿主細胞によって産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を回収することを更に含む、請求項２６又は２７に記載の方法。

【請求項29】

宿主細胞により産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも９５％が、アフコシル化されている、請求項２６～２８の何れか一項に記載の方法。

【請求項30】

宿主細胞によって産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体において、フコースが検出されない、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

ＨＰＬＣ、キャピラリー電気泳動、又はＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析を含む方法によってフコースが検出される、請求項２９又は３０に記載の方法。

【請求項32】

請求項１～２３の何れか一項に記載の組成物、及び薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物。

【請求項33】

請求項３２に記載の薬学的組成物の有効量を、がんを有する個体に投与することを含む、個体におけるがんを処置する方法。

【請求項34】

がんが、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食道がんから選択される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

がんが、胃がんである、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

がんが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する、請求項３３～３５の何れか一項に記載の方法。

【請求項37】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）により決定される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項39】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む、請求項３３～３７の何れか一項に記載の方法。

【請求項40】

白金剤、パクリタキセル、アブラキサン（登録商標）、ドセタキセル、ゲムシタビン、カペシタビン、イリノテカン、エピルビシン、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ、ロイコボリン、フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、及びドキソルビシン塩酸塩から選択される少なくとも１の追加の治療剤を投与することを更に含む、請求項３３～３９の何れか一項に記載の方法。

【請求項41】

白金剤が、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンから選択される、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

追加の治療剤が、パクリタキセルである、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

追加の治療剤が、シスプラチン及び／又は５－ＦＵである、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

処置を必要とする個体においてがんを処置するための、請求項３２に記載の薬学的組成物の使用。

【請求項45】

がんが、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、又は食道がんから選択される、請求項４４に記載の使用。

【請求項46】

がんが、胃がんである、請求項４５に記載の使用。

【請求項47】

がんが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する、請求項４４～４６の何れか一項に記載の使用。

【請求項48】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）により決定される、請求項４７に記載の使用。

【請求項49】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない、請求項４７又は４８に記載の使用。

【請求項50】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む、請求項４２～４８の何れか一項に記載の使用。

【請求項51】

請求項１～２３の何れか一項に記載の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の有効量、及び薬学的に許容可能な担体を含む、個体においてがんを処置するための薬学的組成物。

【請求項52】

がんが、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食道がんから選択される、請求項５１に記載の薬学的組成物。

【請求項53】

がんが、胃がんである、請求項５２に記載の薬学的組成物。

【請求項54】

がんが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する、請求項５１～５３の何れか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項55】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）により決定される、請求項５４に記載の薬学的組成物。

【請求項56】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない、請求項５４又は５５に記載の薬学的組成物。

【請求項57】

がんが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む、請求項５１～５４の何れか一項に記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供される。

【背景技術】

【0002】

線維芽細胞増殖因子（ＥＧＦ）ファミリーメンバーは、様々な程度で異なるＦＧＦＲに
結合する異なるＦＧＦにより、４種のチロシンキナーゼ受容体である線維芽細胞増殖因子
受容体１～４（ＦＧＦＲ１～４）、及びそれらのアイソフォームに結合する（Zhang et a
l., J. Biol. Chem. 281:15694, 2006）。ヒトＦＧＦＲ２のタンパク質配列は、例えば、
ＧｅｎＢａｎｋ ローカス ＡＦ４８７５５３に提供されている。各ＥＧＦＲは、３種の免
疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ
）、一回膜貫通へリックス、及び細胞内触媒キナーゼドメインからなる（Mohammadi et a
l., Cytokine Growth Factor Revs, 16:107, 2005）。Ｄ１及びＤ２の間のリンカーには
、「アシッド・ボックス（ａｃｉｄ ｂｏｘ）」（ＡＢ）と呼ばれる隣接するアミノ酸の
範囲がある。Ｄ１及びＡＢを含む領域は、リガンドへの結合により緩和される、受容体の
自己制御に関与すると考えられている。ＦＧＦは、主に受容体のＤ２及びＤ３における領
域を介して受容体に結合する。ＦＧＦＲは、様々なアイソフォームをもたらす、そのｍＲ
ＮＡの複数の選択的スプライシングにより特徴づけられる（Ornitz et al., J. Biol. Ch
em. 271:15292, 1996; ＦＧＦＲ２及びそのアイソフォームについてＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏ
ｔ Ｐ２１８０２及びアイソフォームＰ２１８０２－１からＰ２１８０２－２０も参照の
こと）。とりわけ、３種全てのＩｇドメインを含むフォーム（αアイソフォーム）、又は
Ｄ１を含まず、Ｄ２及びＤ３ドメインの２種のＩｇドメインのみを含むフォーム（βアイ
ソフォーム）がある。ＦＧＦＲ１～ＦＧＦＲ３において、全てのフォームが、ＩＩＩａと
示されるＤ３の前半部分を含むが、２つの代替的エクソンがＤ３の後半部分に使用される
ことができ、これにより、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃフォームが得られる。ＦＧＦＲ２につい
て、これらは、それぞれＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ（又は、単にＦＧＦ
Ｒ２ｂ及びＦＧＦＲ２ｃ）と示され；対応するベータフォームは、ＦＧＦＲ２（ｂｅｔａ
）ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２（ｂｅｔａ）ＩＩＩｃと示される。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ（Ｋ－
ｓａｍ－Ｉとも示される）は、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の両方によく結合するもののＫＧＦ
ファミリーメンバーには結合しないが、ＦＧＦＲ２（Ｋ－ｓａｍ－ＩＩとも示される）の
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂフォームは、ＦＧＦ１及びＫＧＦファミリーメンバー（ＦＧＦ７、Ｆ
ＧＦ１０、及びＦＧＦ２２）の両方に対し高親和性受容体である(Miki et al., Proc. Na
tl. Acad. Sci. USA 89:246, 1992)。実に、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂが、ＫＧＦファミリーメ
ンバーに対する唯一の受容体であり(Ornitz et al., 1996, op. cit.)、そのため、ＫＧ
ＦＲと示されている。

【0003】

ＦＧＦＲ及びそのアイソフォームは、様々な組織において、異なる発現をする。ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ（及び、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ３のＩＩＩｂフォーム）は、上皮組織に発
現するが、ＦＧＦＲＩＩＩｃは、間葉組織に発現する(Duan et al., J. Biol. Chem. 267
:16076, 1992; Ornitz et al., 1996, op. cit.)。これらの受容体の特定のＦＧＦリガン
ドは、反対の発現パターンを有する。従って、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ１０、及びＦ
ＧＦ２２を含むＫＧＦサブファミリーメンバーはＦＧＦＲＩＩＩｂのみに結合し(Zhang e
t al., op. cit.)、かつ、間葉組織に発現し、よって、上皮細胞のパラクラインエフェク
ターであってもよい。一方、ＦＧＦ４サブファミリーメンバーＦＧＦ４～６は、ＦＧＦＲ
２ＩＩＩｃに結合し、かつ、上皮及び間葉系の両方において発現し、よって、オートクラ
イン又はパラクライン機能の何れかを有していてもよい。ＦＧＦＲ２のアイソフォーム及
びそのリガンドの発現パターンのために、ＦＧＦＲ２は、上皮－間葉相互作用における役
割を果たし(Finch et al., Dev. Dyn. 203:223, 1995)、そのため、マウスにおけるＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂのノックアウトが、胚性の欠陥及び死亡を引き起こす(De Moerlooze et a
l., Development 127:483, 2000)。

【0004】

ＫＧＦ（ＦＧＦ７）及びＫＧＦＲ（ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ）は、多くの膵臓がんにおいて
、過剰発現しており(Ishiwata et al., Am. J. Pathol. 153: 213, 1998)、それらの共発
現は、予後の悪さと相関している(Cho et al., Am. J. Pathol. 170:1964, 2007)。ＦＧ
ＦＲ２遺伝子の体細胞変異は、子宮内膜（子宮）癌の大規模パネルの１２％に見いだされ
、様々な試験ケースにおいて、腫瘍細胞生存のために必須あった。２種の腫瘍において、
ＦＧＦＲ２変異は、アペール症候群に関連する、同じＳ２５２Ｗ置換であることが見出さ
れた。ＦＧＦＲ２の増幅と過剰発現は、予後が著しく悪い、未分化型びまん性胃がんと関
連し、低分子化合物によるＦＧＦＲ２活性の阻害は、そのようながん細胞の増殖を強く阻
害した (Kunii et al., Cancer Res. 68:2340, 2008; Nakamura et al., Gastroenterol.
131:1530, 2006)。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Zhang et al., J. Biol. Chem. 281:15694, 2006

【非特許文献2】Mohammadi et al., Cytokine Growth Factor Revs, 16:107, 2005

【非特許文献3】Ornitz et al., J. Biol. Chem. 271:15292, 1996

【非特許文献4】Miki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:246, 1992

【非特許文献5】Ornitz et al., 1996, op. cit.

【非特許文献6】Duan et al., J. Biol. Chem. 267:16076, 1992

【非特許文献7】Zhang et al., op. cit.

【非特許文献8】Finch et al., Dev. Dyn. 203:223, 1995

【非特許文献9】De Moerlooze et al., Development 127:483, 2000

【非特許文献10】Ishiwata et al., Am. J. Pathol. 153: 213, 1998

【非特許文献11】Cho et al., Am. J. Pathol. 170:1964, 2007

【非特許文献12】Kunii et al., Cancer Res. 68:2340, 2008

【非特許文献13】Nakamura et al., Gastroenterol. 131:1530, 2006

【発明の概要】

【0006】

いくつかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供され、重鎖可変領域は
：（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含み；かつ軽鎖可変領域は：（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のア
ミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み；抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実
施態様において、抗体はＡｓｎ２９７でのフコースを欠いている。いくつかの実施態様に
おいて、複数の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物が提供され、組成物中の各抗ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変領域は：（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号
８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ組成物中の各抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体の軽鎖可変領域は：（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｖ）配
列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配
列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み；組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されて
いる。いくつかの実施態様において、組成物は、抗体産生細胞株の上清であってもよい。
いくつかの実施態様において、組成物は、緩衝化された組成物である。いくつかの実施態
様において、重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実
施態様において、軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつか
の実施態様において、重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、かつ
軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、
重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、軽鎖が、配列
番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、重鎖が、配列番号２のアミ
ノ酸配列を含み、かつ軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様に
おいて、複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物が提供され、抗体は
、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５のアミノ酸配列を含
む軽鎖可変ドメインを含む抗体と、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合する。

【0007】

いくつかの実施態様において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様
において、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体で
ある。本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、κ軽鎖定常領域を含んでもよ
い。本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含んで
もよい。

【0008】

いくつかの実施態様において、抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつ
かの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、フコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体による特異的溶解よりも、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくと
も２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくと
も４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少な
くとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす。いくつかの実施態様におい
て、ＡＤＣＣ活性が、標的細胞としてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現するＢａ／Ｆ３細胞、及
びエフェクター細胞として単離されたヒトＰＢＭＣを使用して決定される。

【0009】

いくつかの実施態様において、抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する
。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、
少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１
５倍、少なくとも１７倍、又は少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結
合する。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、表面プラズモン共鳴を
使用して決定される。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、Ｆｃガン
マＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いく
つかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）
である。

【0010】

本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合しても
よいが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合なくてもよい。

【0011】

本明細書に記載の任意の実施態様において、複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
抗体を含む組成物は、少なくとも９５％のアフコシル化抗体を含む。本明細書に記載の任
意の実施態様において、複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物は、
フコシル化が非検出であってもよい。いくつかの実施態様において、フコースの存在は、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、又はＭＡＬＤＩ－Ｔ
ＯＦ質量分析を含む方法により決定されてもよい。

【0012】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体をコードす
る核酸を含む宿主細胞が提供され、宿主細胞は、機能的アルファ－１，６－フコシルトラ
ンスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子を欠く。別の実施態様において、宿主細胞は、ＣＨＯ
細胞である。

【0013】

いくつかの実施態様において、アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を作製す
るための方法が提供される。いくつかの実施態様において、方法は、宿主細胞を、抗ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂ抗体をコードする核酸を発現するために適した条件下で培養することを含
み、宿主細胞は、機能的アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺
伝子を欠く。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を作
製するための方法は、宿主細胞を、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を産生するた
めに適した条件下で培養することを含む。いくつかの実施態様において、方法は、宿主細
胞によって産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を回収することを更に含む。いくつかの
実施態様において、宿主細胞によって産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも
５％がフコースを含む。いくつかの実施態様において、宿主細胞によって産生される抗Ｆ
ＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも９５％がフコースを欠く（例えば、アフコシル化され
ている）。いくつかの実施態様において、宿主細胞によって産生される抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体において、フコース検出されない。いくつかの実施態様において、フコースの存
在は、ＨＰＬＣ、キャピラリー電気泳動、又はＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析を含む方法に
より検出される。

【0014】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体、及び薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物が提供される。

【0015】

いくつかの実施態様において、がんを処置する方法が提供される。いくつかの実施態様
において、方法は、本明細書に記載のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体、及び薬学
的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実
施態様において、がんは、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食
道がんから選択される。いくつかの実施態様において、がんは胃がんである。いくつかの
実施態様において、がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施態様において、
ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）比が＞３である
。いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの
実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含むがん
は、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベルよりも、２倍、３倍、５倍、又は１０倍
高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施態様において
、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化されている。いくつかの実施態様において、がん
は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつか
の実施態様において、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの発現又は過剰発現は、ＩＨＣによって決定さ
れる。いくつかの実施態様において、ＩＨＣによる、腫瘍細胞の１＋、２＋又は３＋の染
色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施態様において、ＩＨＣによ
る、腫瘍細胞の２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつか
の実施態様において、ＩＨＣ染色は、実施例６に記載されるように、スコア付けされる。

【0016】

いくつかの実施態様において、がんを処置する方法は、白金剤、パクリタキセル、アブ
ラキサン（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）（登録商標）、ドセタキセル、ゲムシタビン、カペシタビ
ン、イリノテカン、エピルビシン、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ、ロイコボリン、フル
オロウラシル、マイトマイシンＣ、及びドキソルビシン塩酸塩から選択される少なくとも
１の追加の治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施態様において、白金剤は、
シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンから選択される。いくつかの実施
態様において、がんの処置は、パクリタキセルを投与することを更に含む。いくつかの実
施態様において、がんの処置は、シスプラチン、及び／又は５－ＦＵを投与することを更
に含む。

【0017】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体、及び薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物の使用が提供される。いくつかの
実施態様において、そのような使用は、がんを有する個体におけるがんを処置するための
使用である。いくつかの実施態様において、がんは、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内
膜がん、膵臓がん、及び食道がんから選択される。いくつかの実施態様において、がんは
胃がんである。いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いく
つかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セン
トロメア）比が＞３である。いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを
過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を有するがんは、ＦＧＦＲ
２ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態様において
、ＦＧＦＲ２増幅を有するがんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベルよりも、
２倍、３倍、５倍、又は１０倍高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する
。いくつかの実施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化されている。いく
つかの実施態様において、がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺
伝子増幅を含まない。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの発現又は過剰
発現は、ＩＨＣによって決定される。いくつかの実施態様において、ＩＨＣによる、腫瘍
細胞の１＋、２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの
実施態様において、ＩＨＣによる、腫瘍細胞の２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂの過剰発現を示す。いくつかの実施態様において、ＩＨＣ染色は、実施例６に記載され
るように、スコア付けされる。

【0018】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体、及び薬学的に許容可能な担体を含む、がんを処置するための薬学的組成物が提供され
る。いくつかの実施態様において、がんは、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、
膵臓がん、及び食道がんから選択される。いくつかの実施態様において、がんは胃がんで
ある。いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実
施態様において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア
）比が＞３である。いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現
する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を有するがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｃよりもＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦ
Ｒ２増幅を有するがんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベルよりも、２倍、３
倍、５倍、又は１０倍高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつ
かの実施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化されている。いくつかの実
施態様において、がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅
を含まない。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの発現又は過剰発現は、
ＩＨＣによって決定される。いくつかの実施態様において、ＩＨＣによる、腫瘍細胞の１
＋、２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施態様
において、ＩＨＣによる、腫瘍細胞の２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰
発現を示す。いくつかの実施態様において、ＩＨＣ染色は、実施例６に記載されるように
、スコア付けされる。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】図１Ａから１Ｃは、実施例３に記載された、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３細胞に対する、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ及びフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦのＡＤＣＣ活性を示す。凡例において、「αＦＧＦＲ２ｂＦ／ＦＧＦＲ２ｂ」は、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦ抗体がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３標的細胞に対して試験されたことを示す。

【図2】図２Ａから２Ｄは、実施例４に記載されるように、１０ｍｇ／ｋｇ（Ａ及びＢ）、及び３ｍｇ／ｋｇ（Ｃ及びＤ）での、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ及びフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦの有効性を示す。

【図3】図３Ａ及び３Ｂは、実施例４に記載されるように、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡの用量依存的有効性を示す。

【図4】図４Ａ及び４Ｂは、実施例４に記載されるように、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ及びパクリタキセルの組合せ療法の有効性を示す。

【図5】図５Ａ及び５Ｂは、実施例４に記載されるように、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ及び５－ＦＵ／シスプラチンの組合せ療法の有効性を示す。

【図6】図６Ａ及び６Ｂは、実施例４に記載されるように、ＭＦＭ－２２３乳がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡの有効性を示す。

【図7】図７は、実施例１に記載されるように、（Ａ）ポテリジェント（Potelligent）（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞及び（Ｂ）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞において産生されるαＦＧＦＲ２ｂ抗体のグリカンプロフィールを示す。

【図8】図８は、抗体に典型的に見出されるＮ－結合グリカンのスキーム図を示す。

【図9】図９は、αＦＧＦＲ２ｂＡ又はαＦＧＦＲ２ｂＦの濃度増加に伴うＢａ／Ｆ３ ＦＧＦ２ｂ細胞のＡＤＣＣを示す。アッセイは、実施例５に記載されるように、Ｅ：Ｔ比２５：１で正常ヒトＰＢＭＣを用いて実施された。データは、ＬＤＨ放出としてプロットされる。

【図10】図１０は、αＦＧＦＲ２ｂＡ又はαＦＧＦＲ２ｂＦの濃度増加に伴うＯＣＵＭ－２Ｍ細胞のＡＤＣＣを示す。アッセイは、Ｅ：Ｔ比２５：１で正常ヒトＰＢＭＣを用いて実施された。実施例５に記載されている。データは特異的溶解パーセントでプロットされる。

【図11】図１１Ａから１１Ｆは、実施例６に記載されるように、免疫組織化学を使用した腫瘍組織試料におけるＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの検出を示す。

【発明を実施するための形態】

【0020】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合するアフコシル化抗体が提供される。いくつかの実施態様に
おいて、また、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する抗体を形成することができるアフコシル化
抗体の重鎖及び軽鎖が提供される。いくつかの実施態様において、１以上の特定の超可変
領域（ＨＶＲ）を含む、アフコシル化抗体、重鎖、及び軽鎖が提供される。いくつかの実
施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２Ｉ
ＩＩｂ抗体に比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において
、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体に比
較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する。いくつかの実施態様
において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
抗体に比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する増強された親和性を有する
。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強
された親和性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しない。

【0021】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。抗体
重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドも、また、提供される。アフコシル化抗ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を発現する宿主細胞が提供される。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対するアフ
コシル化抗体を使用した処置の方法が提供される。そのような方法は、胃がん、乳がん、
卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食道がん等のがんを処置する方法を含むが、こ
れらに限定されない。

【0022】

本明細書において使用される章（section headings）は、体系化の目的のみのためであ
り、記載される主題を限定すると解釈されるものではない。

【0023】

本明細書において引用される、特許出願、特許公開公報、及びＧｅｎｂａｎｋアクセッ
ション番号を含む全ての引用文献は、各引用文献のその全体が、具体的に及び個々に本明
細書に援用されることが示されるように、引用により本明細書に援用される。

【0024】

本明細書に記載、又は引用される技術及び手順は、通常よく理解され、一般的に当業者
によって、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. e
dition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURR
ENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al.eds., (2003)); the seri
es METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M.
J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds.
(1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney
, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Mol
ecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis,
ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); In
troduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Ple
num Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffi
ths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental
Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Ma
mmalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Ch
ain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E
. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and S
ons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. F
inch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1
989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds.
, Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harl
ow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Z
anetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 及び Cancer: P
rinciples and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott C
ompany, 1993); 及びこれらの改訂版に記載される、広く利用される従来法を使用して用
いられる。

【0025】

Ｉ．定義
本明細書に別途定義されていない限り、本願発明に関連して使用される科学的及び技術
的用語は、当該技術分野の当業者に一般的に理解される意味を持つものとする。更に、文
脈的に必須でない又は明記されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、そして
、複数形の用語は、単数形を含むものとする。

【0026】

本明細書に記載の本願発明の態様及び実施態様は、「からなる」及び／又は「基本的に
からなる」態様及び実施態様を含む。本明細書で使用されるように、単数形の「ａ」、「
ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への参照が含まれる。

【0027】

別途定義されていない限り、又は当業者にそのように理解されない限り、本出願におい
て、「又は」の使用は「及び／又は」を意味する。複数従属請求項に関連し、「又は」の
使用は、１以上の前出の独立又は従属請求項の引用を意味する。

【0028】

当業者により理解されるように、本明細書中の「およそ（約、ａｂｏｕｔ）」の値又は
パラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に対する実施態様を含む(記載す
る)。例えば、「約Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。

【0029】

用語「核酸分子」、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、区別なく用いられてもよく
、かつ、核酸のポリマーを意味してもよい。そのような核酸のポリマーは、天然及び／又
は非天然核酸を含んでもよく、かつ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含んでもよいが、こ
れらに限定されない。「核酸配列」は核酸分子又はポリヌクレオチドを含む核酸の直鎖状
配列を指す。

【0030】

用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すのに区別
なく用いられ、最短の長さに限定されない。そのような、アミノ酸残基のポリマーは、天
然又は非天然アミノ酸残基を含んでもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、
ダイマー、トリマー（ｔｒｉｍｅｒ）、及び多量体を含んでもよいが、これらに限定され
ない。完全長タンパク質及びその断片の両方が、定義により含まれる。その用語は、例え
ば、グリコシル化、シアル酸付加、アセチル化、リン酸化、等のポリペプチドの発現後修
飾も含む。更に、本願発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活
性を維持する範囲で、天然型の配列に対する欠失、付加、置換（天然では通常保存的）等
の修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異形成による意図的
なものであってもよく、又は、タンパク質を産生する宿主の突然変異又はＰＣＲ増幅時の
エラーによる偶発的なものであってもよい。

【0031】

「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ」又は「ＦＧＦＲ２ｂ」は、区別なく用いられ、線維芽細胞増殖
因子受容体２ＩＩＩｂスプライシングフォームを指す。例示的なヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
は、２０１３年７月７日付ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０７５２５９．４に
示される。非限定的な例示的成熟ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｂアミノ酸配列は、配列番号１で
示される。

【0032】

「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ」又は「ＦＧＦＲ２ｃ」は、区別なく用いられ、線維芽細胞増殖
因子受容体２ＩＩＩｃスプライシングフォームを指す。例示的なヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ
は、２０１３年７月７日付ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０００１３２．３に
示される。非限定的な例示的成熟ヒトＦＧＦＲ２ＩＩＩｃアミノ酸配列は、配列番号１２
で示される。

【0033】

用語「エピトープ」は、抗原結合分子（例えば、抗体の結合領域を含む、抗体、抗体断
片、又はスキャフォールドタンパク質）が結合する、標的分子（例えば、タンパク質、核
酸、炭水化物、又は脂質等の抗原）における部位を指す。エピトープは、しばしば、アミ
ノ酸、ポリペプチド、又は糖側鎖等の化学的に活性な表層の分子グループからなり、特定
の三次元構造的特徴、並びに特定の電荷的特徴を有する。エピトープは、標的分子の、近
接する残基又は並置された非近接の残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部
分）の両方から形成され得る。三次構造的折りたたみにより形成されるエピトープは、典
型的には、還元溶媒による処置で喪失するが、近接する残基（例えば、アミノ酸、ヌクレ
オチド、糖、脂質部分）から形成されるエピトープは、典型的に、還元溶媒に対する曝露
により得られる。エピトープは、少なくとも３、少なくとも５、又は８～１０残基（例え
ば、アミノ酸、又はヌクレオチド）を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施例
において、エピトープは、２０残基長未満（例えば、アミノ酸又はヌクレオチド）、１５
残基長未満、又は１２残基長未満である。２つの抗体が抗原に対する競合的結合を示す場
合、それらは、ある抗原内の同一のエピトープに結合してもよい。

【0034】

「非直鎖状エピトープ」又は「立体構造エピトープ」は、そのエピトープに特異的な抗
体が結合する、抗原性タンパク質内の、非近接のポリペプチド、アミノ酸、及び／又は糖
を含む。

【0035】

「直鎖状エピトープ」は、そのエピトープに特異的な抗体が結合する、抗原性タンパク
質内の、近接のポリペプチド、アミノ酸、及び／又は糖を含む。

【0036】

本明細書における用語「抗体」は最も広義に用いられ、様々な抗体構造を包含し、モノ
クローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、及び
、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含むが、これらに限定されない。

【0037】

抗体との用語は、抗原に結合することが可能な断片である、例えばＦｖ、単鎖Ｆｖ（ｓ
ｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２等を含むが、これらに限定されない。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片を生成し、
その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映して「Ｆｃ」
断片と命名される。パパイン処理は、２つの抗原結合部位を有し、なお抗原を架橋するこ
とが可能なＦ（ａｂ’）_２断片を産生する。抗体との用語は、また、キメラ抗体、ヒト化
抗体、及び、マウス、ヒト、カニクイザル等の様々な種の抗体を含むが、これらに限定さ
れない。

【0038】

用語「重鎖可変領域」は、重鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ
３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様において、重鎖可変領域は、ま
た、少なくとも、ＦＲ１及び／又は少なくともＦＲ４の一部を含む。

【0039】

用語「重鎖定常領域」は、少なくとも３つのＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３の重鎖定常ド
メインを含む領域を指す。非限定的例示的重鎖定常領域は、γ、δ、及びαを含む。非限
定的例示的重鎖定常領域は、ε及びμを含む。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対
応する。例えば、γ定常領域を含む抗体がＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体がＩ
ｇＤ抗体であり、そして、α定常領域を含む抗体がＩｇＡ抗体である。更に、μ定常領域
を含む抗体が、ＩｇＭ抗体であり、そして、ε定常領域を含む抗体が、ＩｇＥ抗体である
。特定のアイソタイプは、サブクラスに更に分類され得る。例えば、ＩｇＧ抗体は、Ｉｇ
Ｇ１（γ_１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ_２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ_３定常領
域を含む）、及びＩｇＧ４（γ_４定常領域を含む）抗体を含むがこれらに限定されず；Ｉ
ｇＡ抗体は、ＩｇＡ１（α_１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α_２定常領域を含む）抗体
を含むがこれらに限定されず；かつ、ＩｇＭ抗体は、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むがこれ
に限定されない。

【0040】

用語「重鎖」は、リーダー配列を有する又は有さない、少なくとも重鎖可変領域を含む
ポリペプチドを指す。いくつかの実施態様において、重鎖は、少なくとも重鎖定常領域の
一部を含む。用語「完全長重鎖」は、リーダー配列を有する又は有さない、重鎖可変領域
、及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0041】

用語「軽鎖可変領域」は、軽鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ
３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様において、軽鎖可変領域は、ま
た、少なくとも、ＦＲ１及び／又はＦＲ４を含む。

【0042】

用語「軽鎖定常領域」は、軽鎖定常ドメインＣ_Ｌを含む領域を指す。非限定的例示的軽
鎖定常領域は、λ及びκを含む。

【0043】

用語「軽鎖」は、リーダー配列を有する又は有さない、少なくとも軽鎖可変領域を含む
、ポリペプチドを指す。いくつかの実施態様において、軽鎖は、少なくとも軽鎖定常領域
の一部を含む。用語「完全長軽鎖」は、リーダー配列を有する又は有さない、軽鎖可変領
域、及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0044】

用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定
義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般
的に、天然型４鎖抗体は、Ｖ_Ｈに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶ_Ｌに３つ（Ｌ１、Ｌ
２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相
補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最高であり
、及び／又は抗原認識に関与している。典型的な超可変ループはアミノ酸残基２６～３２
（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５
（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol.196:9
01-917 (1987)。典型的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ
－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４～３４、Ｌ２の
５０～５６、Ｌ３の８９～９７、Ｈ１の３１～３５Ｂ、Ｈ２の５０～６５、及びＨ３の９
５～１０２に生じる(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest
, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (19
91))。超可変領域（ＨＶＲ）、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）との用語は、本明細書にお
いて区別なく用いられ、抗原結合領域を形成する可変領域の部分を指すのに使用される。

【0045】

本明細書に記載の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義
されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク
に由来する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）フレ
ームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワ
ーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来するアクセプターヒトフレームワークは
、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。
いくつかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下
、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施態様において、
Ｖ_Ｌアクセプターヒトフレームワークは、Ｖ_Ｌヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列
又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列が同一である。

【0046】

「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば
、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。いくつかの実施態様において
、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を
反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、
一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含
む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。

【0047】

「親和性成熟」抗体は、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体
の親和性に改良をもたらす、その１以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１以上の改変を
持つ抗体、及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を指す。

【0048】

「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、残り
の重鎖及び／又は軽鎖は異なる起源又は種から由来する抗体を指す。いくつかの実施態様
において、キメラ抗体は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザル等）に由来
する少なくとも１の可変領域、及び第２の種（例えば、ヒト、カニクイザル等）に由来す
る少なくとも１の定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施態様において、キメラ抗体
は、少なくとも１のマウス可変領域、及び少なくとも１のヒト定常領域を含む。いくつか
の実施態様において、キメラ抗体は、少なくとも１のカニクイザル可変領域、及び少なく
とも１のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様において、キメラ抗体の全ての可変領
域は、第１の種に由来し、かつキメラ抗体の全ての定常領域は第２の種に由来する。

【0049】

「ヒト抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域における少なくとも１のアミノ
酸が、ヒト可変領域に由来する対応するアミノ酸と置換された、抗体を指す。いくつかの
実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも１のヒト定常領域、又はその断片を含む。
いくつかの実施態様において、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２等であ
る。

【0050】

「ＨＶＲグラフト化抗体（ＨＶＲ－ｇｒａｆｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、第１の
種（非ヒト）の１以上の超可変領域（ＨＶＲ）が、第２の種（ヒト）のフレームワーク領
域（ＦＲ）にグラフトされたヒト化抗体を指す。

【0051】

「機能的Ｆｃ領域」は、天然型配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を有している。
例示的な「エフェクター機能」は、Ｆｃ受容体結合；Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；ＡＤＣＣ；食
作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御等を含む。そのよう
なエフェクター機能は、通常、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合するた
めのＦｃ領域を必要とし、様々なアッセイを用いて評価され得る。

【0052】

「天然型配列のＦｃ領域」は、自然界に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のア
ミノ酸配列を含む。天然型配列のヒトＦｃ領域は、天然型配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域
（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然型配列のヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然型配列のヒトＩ
ｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然型配列のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、並びにその自然発生的な変
異体を含む。

【0053】

「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも１のアミノ酸変異による、天然型配列のＦｃ領域のア
ミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。

【0054】

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を示す。いくつか
の実施態様において、ＦｃγＲは、天然型ヒトＦｃＲである。更に、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗
体（ガンマ受容体）と結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩ
ＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び代替的にスプラ
イシングされたフォームも含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化型受
容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制型受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ド
メインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化型受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受
容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をその細胞質ドメインに含み、抑制型受容体Ｆ
ｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシン抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（例えば、Daeron
, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲは、例えば、Ravetch and K
inet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1
994); 及び de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)に概説されている
。将来的に同定されることになるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書においては用語「
ＦｃＲ」に包含される。

【0055】

用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、また、母親のＩｇＧの胎児への輸送に関与する
新生児受容体であるＦｃＲｎを含む（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及び
Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) and regulation of homeostasis of immunogl
obulins）。ＦｃＲｎへの結合の測定方法は、知られている（例えば、Ghetie and Ward.,
Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7
):637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004); 国際公
開第２００４／９２２１９号(Hinton et al.)を参照）。

【0056】

「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因
する生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例は以下のものを含む：Ｃ１ｑ結合
及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（
ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞の
活性化。

【0057】

「ヒトエフェクター細胞」とは、１以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実行す
る白血球である。特定の実施態様において、その細胞が少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現
し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例は、末梢
血液単核細胞(ＰＢＭＣ)、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、単球、マクロファージ、細胞障
害性Ｔ細胞及び好中球を含む。エフェクター細胞は、例えば血液などの天然のソースから
単離されてもよい。

【0058】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例え
ば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲｓ）に結
合した、分泌されたＩｇが、細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に
結合し、続いてサイトトキシンによる標的細胞の殺傷することを可能にする、細胞障害の
形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現
するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞にお
けるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４
６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許
第５５００３６２号又は同第５８２１３３７号又は米国特許第６７３７０５６（Presta）
に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。そのようなアッ
セイのための、有効なエフェクター細胞は、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞を含む。代替的又は追
加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes et al. Proc. Natl. Acad. Sci.
(USA) 95:652-656 (1998)において開示されているような動物モデルにおいて、インビボ
で評価され得る。Ｆｃ領域アミノ酸が改変された追加的抗体、及び増強された又は低下し
たＡＤＣＣ活性は、例えば、米国特許第７９２３５３８及び米国特許第７９９４２９０に
記載されている。

【0059】

アッセイで使用されるそのような抗体及び親抗体の量が同一の場合、「増強されたＡＤ
ＣＣ活性」を有する抗体は、親抗体と比較して、インビトロ又はインビボでＡＤＣＣの媒
介に関してより有効な抗体を指し、ここで、抗体及び親抗体は、少なくとも１の構造的態
様において異なる。いくつかの実施態様において、抗体及び親抗体は、同一のアミノ酸配
列を有するが、親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体はアフコシル化されている
。いくつかの実施態様において、ＡＤＣＣ活性は、本明細書に記載のインビトロのＡＤＣ
Ｃアッセイを使用して決定されるが、例えば、動物モデル等の、他のアッセイ又はＡＤＣ
Ｃ活性を決定するための方法が企図される。いくつかの実施態様において、増強されたＡ
ＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する、増強された親和性を有する
。いくつかの実施態様において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲ
ＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する、増強された親和性を有する。いくつかの実施態様におい
て、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対す
る、増強された親和性を有する。

【0060】

「改変された」ＦｃＲ結合親和性又はＡＤＣＣ活性を有する抗体は、親抗体に比較して
、増強された又は低減されたＦｃＲ結合活性及び／又はＡＤＣＣ活性を有し、ここで、抗
体及び親抗体は、少なくとも１の構造的態様において異なる。ＦｃＲに対し「増加した結
合を示す」抗体は、少なくとも１のＦｃＲに、親抗体よりも高い親和性で結合する。Ｆｃ
Ｒに対し「低下した結合を示す」抗体は、少なくとも１のＦｃＲに、親抗体よりも低い親
和性で結合する。ＦｃＲに対し低下した結合を示す抗体は、ＦｃＲに対し、ほとんど検出
できない、又は検出できない結合、例えば、天然型配列のＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して０
～２０％の結合を有してもよい。

【0061】

「ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性」は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対す
る、親抗体より高い親和性を有する抗体を指し（いくつかの例で、また、Ｃｄ１６ａを指
す）、ここで、抗体及び親抗体は、少なくとも１の構造的態様において異なる。いくつか
の実施態様において、抗体及び親抗体は、同一のアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコ
シル化されているのに対し、抗体はアフコシル化されている。ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対
する親和性を決定するための、任意の好適な方法が、使用されてもよい。いくつかの実施
態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、本明細書に記載の方法により決
定される。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和
性を有する抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において、Ｆ
ｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（
Ｖ１５８）に対する、増強された親和性を有する。いくつかの実施態様において、Ｆｃガ
ンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１
５８）に対する、増強された親和性を有する。

【0062】

アフコシル化された抗体又は「フコースを欠く」抗体は、定常領域のグリコシル化にお
いてフコースを欠いている、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ抗体を指す。最大２Ｇａ
ｌ残基により終了される主要なフコシル化二分岐複合オリゴ糖グリコシル化のように、Ｉ
ｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化はＡｓｎ２９７で生じる。いくつかの実施態様におい
て、抗体はＡｓｎ２９７におけるフコースを欠いている。これらの構造は、末端Gal残基
の量によって、Ｇ０、Ｇ１（α１，６又はα１，３）又はＧ２グリカン残基と規定される
。例えば、Raju, T. S., BioProcess Int. 1: 44-53 (2003)を参照のこと。抗体ＦｃのＣ
ＨＯ型グリコシル化は、例えば、Routier, F. H., Glycoconjugate J. 14: 201-207 (199
7)に記載されている。いくつかの実施態様において、非糖改変ＣＨＯ宿主細胞において、
組換えに技術により発現された抗体バッチの少なくとも８５％がＡｓｎ２９７においてフ
コシル化される。複数の抗体を含む組成物を参照する場合、Ａｓｎ２９７におけるフコー
スを含む、組成物中の抗体の＜５％がアフコシル化されている場合に、抗体はアフコシル
化されていると考えられる。フコースを測定する方法は、本明細書に記載の方法を含む、
当該分野で周知の任意の方法を含む。いくつかの実施態様において、フコースは、実施例
１に記載の方法により検出される。いくつかの実施態様において、フコースは、複数のア
フコシル化抗体を含む組成物において不検出である。いくつかの実施態様において、アフ
コシル化抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において、アフ
コシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する。いくつかの
実施態様において、アフコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する増
強された親和性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗体は、Ｆｃガン
マＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強された親和性を有する。

【0063】

「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。
標準的な補体の活性化経路は、補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）の、同起源の抗原に結合する
抗体（適切なサブクラス）への結合により開始される。補体活性化を評価するために、例
えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されるＣＤ
Ｃアッセイが実施されてもよい。改変Ｆｃ領域アミノ酸配列、及び増強又は低下したＣ１
ｑ結合能を有する抗体は、米国特許第６１９４５５１号、米国特許第７９２３５３８号、
米国特許第７９９４２９０号及び国際公開第１９９９／５１６４２号に記載される。また
、例えば、Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照のこと。

【0064】

本明細書で使用される用語「実質的に類似」又は「実質的に同じ」は、当業者が、２以
上の数値の間の差異が、前記値によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、ほと
んど又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考えるであろうほどの、２以上
の数値の間の十分に高い類似性を意味する。いくつかの実施態様において、２以上の実質
的に類似する値は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、又は５０％の何れか未満
で異なる。

【0065】

本明細書で使用される用語「実質的に低下した」又は「実質的に異なる」は、当業者が
、２つの数値の間の差異が、前記値によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、
統計学的有意性を認めるほどの、２つの数値の間の十分に高い相違を意味する。いくつか
の実施態様において、２つの実質的に異なる値は、約１０％、２０％、２５％、３０％、
３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の何
れかより高く異なる。

【0066】

用語「リーダー配列」及び「シグナル配列」は、区別なく用いられ、哺乳動物細胞由来
のポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を
指す。リーダー配列は、成熟タンパク質を形成するとき、哺乳動物細胞由来のポリペプチ
ドの移行に際し切断されてもよい。リーダー配列は、天然又は合成であってもよく、付着
する相手のタンパク質に対し、異種性であっても同種性であってもよい。

【0067】

「天然型の配列」のポリペプチドは、自然界に見出されるポリペプチドと同じアミノ酸
配列を有するポリペプチドを含む。従って、天然型の配列のポリペプチドは、任意の動物
に由来する、天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有し得る。そのような天然型
の配列のポリペプチドは、自然界から単離され得、又は、組換え技術又は合成手段によっ
て製造され得る。用語「天然型の配列」のポリペプチドは、特に、天然に存在する、短鎖
化型又は分泌型のポリペプチド（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異体
フォーム（例えば、代替的にスプライシングされたフォーム）、及び天然に存在するポリ
ペプチドの対立遺伝子変異体を包含する。

【0068】

ポリペプチドの「変異体」は、必要に応じ、配列をアライメントし、ギャップを挿入し
て、最大パーセントの配列同一性を達成した後、かつ、配列同一性の一部として任意の保
存的置換を考慮しない状態で、天然型の配列のポリペプチドと少なくとも約８０％のアミ
ノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのような変異体は
、例えば、ポリペプチドのＮ又はＣ末端で１以上のアミノ酸残基が付加され又は欠失して
いるポリペプチドを含む。いくつかの実施態様において、変異体は、少なくとも８０％の
アミノ酸配列同一性を有する。いくつかの実施態様において、変異体は、少なくとも９０
％のアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの実施態様において、変異体は、少なくとも
９５％のアミノ酸配列同一性を有する。

【0069】

本明細書において、ペプチド、ポリペプチド、又は抗体配列に関し、「アミノ酸配列同
一性のパーセンテージ（％）」及び「相同性」は、必要に応じ、配列をアライメントし、
ギャップを挿入して、最大パーセントの配列同一性を達成した後、かつ、配列同一性の一
部として任意の保存的置換を考慮しない状態で、特定のペプチド又はポリペプチドにおけ
るアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義
される。アミノ酸配列同一性のパーセンテージを決定する目的のためのアラインメントは
、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧ
Ｎ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（DNASTAR）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピ
ュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される
配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズム
を含む、アライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。

【0070】

アミノ酸置換は、ポリペプチドにおける１アミノ酸の、他のアミノ酸との置換を含んで
もよいが、これに限定されない。保存的置換は、表１の「好ましい置換」の見出しの下に
示されている。より実質的な変更が、表１の「例示的置換」の見出しの下に与えられ、ア
ミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導
入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性
の低下、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされた。

【0071】

アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
（２）中性の親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
（３）酸性：Asp、Glu;
（４）塩基性：His、Lys、Arg;
（５）鎖配向に影響する残基：Gly、Pro;
（６）芳香族:Trp、Tyr、Phe.

【0072】

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを他のクラスに交換することを必要
とするであろう。

【0073】

用語「ベクター」は、宿主細胞中で増幅され得るクローン化ポリヌクレオチド又はポリ
ヌクレオチド（複数）を含むように操作されてもよいポリヌクレオチドを説明するために
用いられる。ベクターは、以下の１以上の要素を含んでもよい：複製起点、目的のポリペ
プチドの発現を調節する、１以上の調節配列（例えば、プロモーター及び／又はエンハン
サー）、及び／又は１以上の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子、
及び例えばβガラクトシダーゼのような、比色アッセイにおいて使用されてもよい遺伝子
）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞において、目的のポリペプチドを発現させるため
に使用されるベクターを指す。

【0074】

「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントになっても
よい、又はレシピエントになった、細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であ
ってもよい。例示的な真核細胞は、霊長類又は非霊長類細胞等の哺乳動物細胞；酵母等の
菌類細胞；植物細胞；及び昆虫細胞等を含む。非限定的例示的哺乳動物細胞は、ＮＳＯ細
胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Crucell）、及び２９３及びＣＨＯ細胞、及び、そ
れらの改変細胞である、例えば、それぞれ２９３－６Ｅ及びＤＧ４４等の細胞を含むが、
これらに限定されない。

【0075】

用語「単離された」は、典型的に共に自然界で見出される又は産生される少なくとも一
部の成分から、分離された分子を指す。例えば、細胞が産生された細胞の、少なくとも一
部の成分から分離された場合、ポリペプチドは「単離された」といえる。発現後に細胞に
より分泌されたポリペプチドの場合、ポリペプチドを産生する細胞からポリペプチドを含
む上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」ことと考えられる。同様
に、ポリヌクレオチドは、自然界に典型的に見出される、より大きなポリヌクレオチド（
例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ）の一
部でない場合、又は、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドである場合、ポリヌクレオチドを
産生する細胞の少なくとも一部の成分から分離された場合、「単離された」という。従っ
て、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」といっ
てもよい。

【0076】

用語「個体」又は「対象」は、本明細書において区別なく用いられ、例えば、哺乳動物
等の動物を指す。いくつかの実施態様において、哺乳動物の処置の方法を提供し、哺乳動
物は、ヒト、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、実験哺乳
動物、家畜哺乳動物、競技用哺乳動物、及び愛玩哺乳動物を含むが、これらに限定されな
い。いくつかの実施例において、「個体」又は「対象」は、疾患又は障害の処置を必要と
する個体又は対象を指す。

【0077】

「疾患」又は「障害」は、処置が必要とされる健康状態を指す。

【0078】

用語「がん」は、制御不能な細胞増殖、抑制不能な細胞成長、及びアポトーシスによる
減少した細胞死に関連する悪性増殖性疾患を指す。いくつかの非限定的例示的がんは、胃
がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食道がんから選択される。いく
つかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施態様にお
いて、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）比が＞３
である。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を有するがんは
、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態
様において、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベル
よりも、２倍、３倍、５倍、又は１０倍より高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂを発現する。いくつかの実施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化され
ている。いくつかの実施態様において、がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、
ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施態様において、胃がんはＦＧＦＲ２遺
伝子増幅を含む。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃がんは、
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含
む胃がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつ
かの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃がんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｃ発現レベルよりも、２倍、３倍、５倍、又は１０倍より高い標準化されたレベルでＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対
し標準化されている。いくつかの実施態様において、胃がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過
剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施態様において、過剰発
現は、ｍＲＮＡ過剰発現である。いくつかの実施態様において、過剰発現は、タンパク質
過剰発現である。

【0079】

用語「腫瘍」は、本明細書において、異常に高いレベルの増殖及び成長を示す細胞群を
指すために用いられる。腫瘍は、良性、前悪性、又は悪性であってもよく；悪性腫瘍細胞
は、がん性である。腫瘍細胞は、固形腫瘍又はリンパ性腫瘍（ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｔｕｍ
ｏｒ）細胞であってもよい。用語「腫瘍成長」は、本明細書において、それに伴う腫瘍サ
イズの増加をもたらす腫瘍を含む１以上細胞による増殖又は成長を指すために使用される
。

【0080】

本明細書において、「処置」は、有益な又は所望の臨床的結果を得るための手法である
。本明細書において、「処置」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患のための治療法の、
任意の投与又は適用を包含する。本願発明の目的のために、有益な又は所望の臨床的結果
は：１以上の症状の緩和、疾患の程度の低減、疾患の拡張の阻止又は遅延（例えば、肺又
はリンパ節への転移等の、転移）、疾患の再発の阻止又は遅延、疾患の進行の遅延又は減
速、病状の改善、疾患又は疾患の進行の阻止、疾患又はその進行の阻止又は減速、疾患進
行の停止、及び寛解（部分寛解又は完全寛解に関わらず）、の任意の１以上を含むが、こ
れらに限定されない。「処置」には、増殖関連疾患の病理学的帰結の低減も包含される。
本願発明の方法は、処置の１以上の任意の態様を企図する。

【0081】

がんに関連し、用語「処置する」は、腫瘍細胞又はがん細胞の成長を阻害すること、腫
瘍細胞またはがん細胞の複製を阻害すること、腫瘍の全体量を減少させること、及び、疾
患に関連する１以上の症状を改善させること、の任意の１又は全てを含む。

【0082】

用語「阻害」又は「阻害する」は、任意の表現型特性の低下又は停止、又はその特性の
発生率、程度、又は見込みの低下又は停止を指す。「低下する」又は「阻害する」ことは
、活性、機能、及び／又は量を、参照と比較して、減少、低下、又は停止させることを指
す。特定の実施態様において、「低下する」又は「阻害する」により、20%以上の全体的
な低下をもたらす能力を意味する。別の実施態様において、「低下する」又は「阻害する
」により、５０％以上の全体的な低下をもたらす能力を意味する。更に別の実施態様にお
いて、「低下する」又は「阻害する」により、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ
以上の全体的な低下をもたらす能力を意味する。

【0083】

本明細書において、「参照」は、比較のために使用される、任意の試料、標準、又はレ
ベルを指す。参照は、健常及び／又は非疾患性試料から取得されてもよい。いくつかの実
施例において、参照は、非処置試料から取得されてもよい。いくつかの実施例において、
参照は、対象個体の非処置又は非疾患性試料から取得されてもよい。いくつかの実施例に
おいて、参照は、対象又は患者でない、１以上の健常個体から取得される。

【0084】

本明細書において、「疾患進行の遅延」は、その疾患（がん等の）の進行を妨げること
、減速させること、遅らせること、抑制すること、及び／又は延期することを意味する。
遅延は、疾患歴及び／又は処置される個体によって、異なる長さの時間であり得る。当業
者に明白なように、十分な又は顕著な遅延は、事実上、個体が疾患を進行させない、阻止
を含む。例えば、進行がん又は転移がん等の後期がんが、遅延されてもよい。

【0085】

本明細書において、「阻止すること」は、疾患に罹患しやすいが、その疾患と診断され
たことのない、対象における疾患の発生又は再発に関し、予防を提供することを含む。

【0086】

本明細書において、機能又は活性を「抑制する」ことは、目的の条件又はパラメーター
以外が同じ条件の場合と比較した場合、又は、別の条件と比較した場合、機能又は活性を
低下させることである。例えば、腫瘍成長を低下させる抗体は、抗体が存在しない条件下
の腫瘍の成長速度と比較して、腫瘍の成長速度を低下させる。

【0087】

薬剤の「有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な用量及び
期間での、有効な量を指す。

【0088】

本願発明の物質／分子、アゴニスト、又はアンタゴニストの「治療的有効量」は、個体
の病状、年齢、性別及び体重、また、個体における所望の反応を引き出すための本発明の
物質／分子、アゴニスト、又はアンタゴニストの能力等の要因によって変わり得る。また
、治療的有効量とは、物質／分子、アゴニスト、又はアンタゴニストの毒性又は有害作用
よりも治療的に有益な作用が上回る量である。治療的有効量は、１以上の投与により送達
されてもよい。

【0089】

「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、
有効な量を指す。必ずではないが、通常、予防的用量は、疾病の前又は初期の段階に対象
に使用されるので、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない。

【0090】

用語「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」は、有効な活性成分の生物学的活性を許容す
るような形態であって、製剤を投与する対象にとって許容できない毒性である他の成分を
含まない調製物を指す。そのような製剤は、滅菌されていてもよい。

【0091】

「薬学的に許容可能な担体」は、対象への投与のために、薬学的組成物を共に含む治療
剤と共に使用するために、当該技術分野で従来から使用される、非毒固体、半固体、又は
液体の賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、処方助剤、又は担体を指す。薬学的に許容可能
な担体は、レシピエントに対し、その使用される用量及び濃度において非毒性であり、か
つ、製剤の他の成分と適合性を有する。薬学的に許容可能な担体は、使用される製剤のた
めに好適である。

【0092】

「滅菌された」製剤は、無菌であり、又は基本的に生きた微生物及びその胞子を含まな
い。

【0093】

１以上の更なる治療剤「との組合せ」投与は、任意の順序での、同時の（並行した）、
及び連続した、又は順次的な投与を含む。

【0094】

用語「同時の」は、本明細書において、２以上の治療剤を投与することを指すために使
用され、ここで、少なくとも投与の一部は時間的に重複し、又は１の治療剤の投与は他の
治療剤の投与に比較して短い時間で行われる。例えば、２以上の治療剤は、例えば、約３
０、１５、１０、５、又は１分の何れか未満である、約６０分未満の分離時間で投与され
る。

【0095】

用語「順次的な」は、本明細書において、２以上の治療剤の投与を指すために使用され
、１以上の薬剤の投与は、１以上の他の薬剤の投与の中断後に継続する。例えば、２以上
の治療剤は、約２０、３０、４０、５０、又は６０分、１日、２日、３日、１週間、２週
間、又は１ヶ月、又はそれ以上の何れか等の、約１５分より長い分離時間で投与される。

【0096】

本明細書において、「併用して」は、他の処置手段に加え、ある処置手段を投与するこ
とを指す。そのように、「併用して」は、対象に対し、他の処置手段の投与前、投与中、
投与後に、ある処置手段を投与することを指す。

【0097】

用語「添付文書」は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに使用され、
このような治療製品の使用に関する指示、使用法、用量、投与、組合せ療法、禁忌及び／
又は注意事項についての情報を含む。

【0098】

「製品」は、任意の製品（例えば、包装品又は容器）、又は、疾患又は障害（例えば、が
ん）を処置するための医薬等の少なくとも１の薬品、又は本明細書に記載のバイオマーカ
ーを特異的に検出するためのプローブを含むキットである。特定の実施態様において、製
品又はキットは、本明細書に記載の方法を実施するための単位で、販売促進され、流通さ
れ、又は販売される。

【0099】

ＩＩ．抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体
いくつかの実施態様において、本願発明は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対するように指向さ
れたアフコシル化抗体を提供する。アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明細書
に記載の、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、及び重鎖及び／又は軽鎖ＨＶＲ（例え
ばＣＤＲ）を含む抗体を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、本発明
は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する単離されたアフコシル化抗体を提供する。特定の実施
態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ活性を調
節する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、増強
されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂ抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する。いくつかの
実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（
Ｖ１５８）に対する増強された親和性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシ
ル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強され
た親和性を有する。

【0100】

抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明細書の実施例に記載の「αＦＧＦＲ２ｂ」を指し、
かつ、配列リストは、２０１２年１月２４日発行の米国特許第８１０１７２３号のＨｕＧ
ＡＬ－ＦＲ２１抗体と同一のアミノ酸配列を有する。米国特許第８１０１７２３号は、特
に、任意の目的のために引用により本明細書に援用され、かつ、ＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１の
可変領域及び完全長の成熟抗体鎖のアミノ酸配列を示す、米国特許第８１０１７２３号の
図１３及び１４は、特に、任意の目的のために引用により本明細書に援用される。加えて
、米国特許第８１０１７２３号の図１３において下線で示されるＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１抗
体のＨＶＲ配列は、特に、任意の目的のために、本明細書に援用される。

【0101】

ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ
）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、又は６つのＨＶ
Ｒ（例えばＣＤＲ）を含むアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを提供する。

【0102】

いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領
域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２Ｉ
ＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域を含む少なくとも１の重鎖及び重鎖定常領域の少なくとも一
部、及び軽鎖可変領域を含む少なくとも１の軽鎖及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含
む。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、各重鎖が
重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの重鎖、及び、各軽鎖が軽
鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの軽鎖を含む。いくつかの実
施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列
を含む重鎖可変領域、及び、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いく
つかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミ
ノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0103】

ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ
）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、６つのＨＶＲを含むアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
抗体を提供する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体
は、上記６つのＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する。いくつかの実施態様にお
いて、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、上記６つのＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂに結合し、かつ、増強されたＡＤＣＣ活性、及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（例えば
ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及び／又はＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））に対
する増強された親和性から選択される少なくとも１の活性を有する。いくつかの実施態様
において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しない
。

【0104】

ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ
）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸
配列を含む、６つのＨＶＲを含む抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体と競合する、アフコシル化抗
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を提供する。

【0105】

ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のア
ミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は３つ
全てのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含むアフコシル化抗体を提供する。

【0106】

別の実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は
３つ全てのＶ_Ｌ ＨＶＲ配列を含むアフコシル化抗体を提供する。

【0107】

別の実施態様において、本願発明のアフコシル化抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２
、及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なく
とも１、少なくとも２、又は３つ全てのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含むＶ_Ｈ ドメイン；及び（ｂ
）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
から選択される少なくとも１、少なくとも２、又は３つ全てのＶ_ＬＨＶＲ配列を含むＶ_Ｌ
ドメイン、を含む。

【0108】

別の実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ
_Ｈ）配列を含む。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％
、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、
参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂへ結合する能力を保持する。特定の実
施態様において、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せ
ずに、選択的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様において
、配列番号４において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失してい
る。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の
）領域で生じる。任意選択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列の翻訳
後修飾を含む、配列番号５のＶ_Ｈ配列を含む。特定の実施態様において、Ｖ_Ｈは、以下か
ら選択される１、２、又は３つのＨＶＲを含む：（Ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番
号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３。

【0109】

別の実施態様において、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％
の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体が提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶ_Ｌ配
列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列
を含む抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特
定の実施態様において、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに
結合せずに、選択的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様に
おいて、配列番号５において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失
している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦ
Ｒ内の）領域で生じる。任意選択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列
の翻訳後修飾を含む、配列番号４のＶ_Ｌ配列を含む。特定の実施態様において、Ｖ_Ｌは、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配
列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から
選択される、１、２、又は３つのＨＶＲ配列を含む。

【0110】

別の実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ
_Ｈ）配列、及び配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一
性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。特定の実施態様において、少なくとも９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は
１００％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、参照配列に対し、置換（例えば、保存的置換）、
挿入、又は欠失を含み、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するＶ_Ｌ配列は、参照配列
に対し、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様
において、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せずに、
選択的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、配列
番号４において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特
定の実施態様において、配列番号５において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入
及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外
の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂ抗体は、一方又は両方の配列の翻訳後修飾を含む、配列番号４のＶ_Ｈ配列及び配列番号
５Ｖ_Ｌ配列を含む。特定の実施態様において、Ｖ_Ｈは、以下から選択される１、２、又は
３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列
番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ－Ｈ３；及びＶ_Ｌは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ
）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１、２、又は３つのＨＶＲ配列を含む。

【0111】

別の実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供され、その抗体
は、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶ_Ｈ、及び上記に与えられた実施態様の何
れかにあるＶ_Ｌを含む。別の実施態様において、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含
む、それぞれ配列番号４及び配列番号５であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む。

【0112】

別の実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖配列を含む。特定
の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列に対して置換
（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むアフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様に
おいて、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せずに、選
択的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、配列番
号２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定
の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で
生じる。任意選択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体重鎖は、その配列の翻訳
後修飾を含む、配列番号２におけるＶ_Ｈ配列を含む。特定の実施態様において、重鎖は、
以下から選択される１、２、又は３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号６のアミノ酸配列
を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）
配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３。

【0113】

別の実施態様において、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％
の配列同一性を有する軽鎖を含む、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供される
。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列に対して
置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ結合する能力を保持する。特定の実施態様において、そ
のような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せずに、選択的にＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、配列番号３におい
て、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様
において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任
意選択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の軽鎖は、配列の翻訳後修飾を含む
、配列番号３のＶ_Ｌ配列を含む。特定の実施態様において、軽鎖は、（ａ）配列番号９の
アミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ
２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１、２
、又は３つのＨＶＲ配列を含む。

【0114】

別の実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖配列、及び配列番
号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９
５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖配列を
含む。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列に
対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ
２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様にお
いて、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せずに、選択
的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、少なくと
も９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９
９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、
又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに
結合する能力を保持する。特定の実施態様において、そのような抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合せずに、選択的にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する能力を
保持する。特定の実施態様において、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が
、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様において、配列番号３において、
合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様にお
いて、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意選
択的に、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体重鎖は、その配列の翻訳後修飾を含む、
配列番号２におけるＶ_Ｈ配列を含み、かつアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体軽鎖は
、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３におけるＶ_Ｌ配列を含む。特定の実施態様に
おいて、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号
７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ－Ｈ３から選択される１、２、又は３つのＨＶＲを含み；かつ軽鎖は、（ａ）配列番号
９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ
－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１、
２、又は３つのＨＶＲ配列を含む。

【0115】

例示的キメラ抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供されるアフコシル化抗体等の抗体は、キメラ
抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第 4,816,567号；及び Morrison e
t al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984))に記載される。一
例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウ
サギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例に
おいて、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラス
スイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0116】

非限定的例示的アフコシル化キメラ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２
、及びＨＶＲ３及び／又は軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含むキメラ抗体
を含む。いくつかの実施態様において、アフコシル化キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は
、上記可変領域を含み、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合する。いくつかの実施態様において、
アフコシル化キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、上記可変領域を含み、ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂに結合し、かつ、増強されたＡＤＣＣ活性、及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（例えばＦｃ
ガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及び／又はＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））に対する
増強された親和性から選択される少なくとも１の活性を有する。いくつかの実施態様にお
いて、アフコシル化キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しな
い。

【0117】

いくつかの実施態様において、アフコシル化キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号４に対し少なくとも９０％、少なくとも９１％、少な
くとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９
６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である可変領域
配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様において、アフコシ化キメラ抗ＦＧＦＲ２Ｉ
ＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号５に対し少なくとも９０％、少な
くとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９
５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％
同一である可変領域配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、アフコシル化
キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号４に対し少
なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも
９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、
又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５に対し少なく
とも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４
％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は
少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含む。

【0118】

例示的アフコシル化キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、また、本明細書に記載の抗体
又はその断片とＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合するキメラ抗体を含む。従
って、いくつかの実施態様において、キメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４の
アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を
含む抗体と、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合するように提供される。いく
つかの実施態様において、抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂへの結合について競合するが、Ｆ
ＧＦＲ２ＩＩＩには結合しない。

【0119】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のキメラ抗体は、１以上のヒト定常領域
を含む。いくつかの実施態様において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇ
Ｄから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様において、ヒト軽鎖定
常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様にお
いて、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様
において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつか
の実施態様において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ
軽鎖を含む。

【0120】

上記のように、エフェクター機能が所望であるか否かに関わらず、特定の抗体を対象に
した特定の処置方法に依存してもよい。従って、いくつかの実施態様において、エフェク
ター機能が所望である場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域
を含むキメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が選択される。従って、いくつかの実施態様にお
いて、エフェクター機能が所望でない場合、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含
むキメラ抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が選択される。

【0121】

例示的ヒト化抗体
いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合するアフコシル化ヒト化抗体
が提供される。ヒト化抗体は、治療用抗体に対する免疫応答をもたらし、かつ治療の効果
を低下させる、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ
）応答）を、低下させ又は除去するので、ヒト化抗体は、治療用分子として有効である。

【0122】

特定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体
は、ヒトに対する免疫原性を低下させるために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持
したまま、ヒト化される。通常、ヒト化抗体は、例えばＣＤＲ等のＨＶＲ（又はその一部
）が非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１以
上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部を
も含む。いくつかの実施態様において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例え
ば、抗体の特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残
基が由来する抗体）における、対応する残基により置換されている。

【0123】

ヒト化抗体、及びヒト化抗体を作製する方法は、例えば、Almagro and Fransson, (200
8) Front. Biosci. 13: 1619-1633に概説され、また、例えば、Riechmann et al., (1988
) Nature 332:323-329; Queen et al., (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA 86: 10029-1
0033;米国特許第５８２１３３７号、７５２７７９１号、６９８２３２１号、及び７０８
７４０９号； Kashmiri et al., (2005) Methods 36:25-34 （ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラ
フティングを記載）; Padlan, (1991) Mol. Immunol. 28:489-498 (「表面再構成」を記
載); Dall’Acqua et al., (2005) Methods 36:43-60（「ＦＲ シャフリング」を記載）
;及びOsbourn et al., (2005) Methods 36:61-68 and Klimka et al., (2000) Br. J. Ca
ncer, 83:252-260 （ＦＲシャフリングに対する「ガイデッド・セレクション（guided se
lection）」法を記載）に更に記載されている。

【0124】

ヒト化に使用されてもよいヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット（best-fit）
」法（例えば、Sims et al. (1993) J. Immunol. 151:2296 (2296)参照)を使用して選択
されるフレームワーク領域； 軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体の
コンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter et al. (1992) Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285；及びPresta et al. (1993) J. Immunol., 151:2623
参照)；ヒト成熟 (体細胞変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワ
ーク領域（例えば、Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13:1619-1633 参照
）；及びFRライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Baca e
t al., (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684及びRosok et al., (1996) J. Biol.
Chem. 271:22611-22618参照）を含むが、これらに限定されない。

【0125】

非限定的例示的ヒト化抗体は、本明細書に記載のαＦＧＦＲ２ｂを含む。非限定的例示
的アフコシル化ヒト化抗体は、フコースを含むαＦＧＦＲ２ｂと同一のアミノ酸配列を有
する、本明細書に記載のαＦＧＦＲ２ｂＡを含む。非限定的例示的アフコシル化ヒト化抗
体は、また、αＦＧＦＲ２ｂの重鎖可変領域、及び／又はαＦＧＦＲ２ｂの軽鎖可変領域
を含む抗体を含む。非限定的例示的アフコシル化ヒト化抗体は、配列番号４の重鎖可変領
域及び／又は配列番号５の軽鎖可変領域を含む抗体を含む。例示的なヒト化抗体は、また
、αＦＧＦＲ２ｂの重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３、及び／又は軽鎖ＨＶＲ１、
ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３を含むヒト化抗体を含むが、これらに限定されない。ある実施態
様において、ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、上記ＨＶＲを含み（すなわち、（ａ）
配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３）、ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂに結合する。いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、上記
ＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、かつ、増強されたＡＤＣＣ活性、及びＦｃ
ガンマＲＩＩＩＡ（例えばＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及び／又はＦｃガンマＲＩ
ＩＩＡ（Ｆ１５８））に対する増強された親和性から選択される少なくとも１の活性を有
する。いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しない。

【0126】

いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗体は、また、αＦＧＦＲ２ｂの重
鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３、及び／又は軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ
３を含む。非限定的例示的アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号６
、７、及び８に記載の重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３のセットを含む抗体を含む
。非限定的例示的アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、配列番号９、１０、
及び１１に記載の軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３のセットを含む抗体を含む。

【0127】

いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号４に対し少なくとも９０％、少なくとも９１％、少な
くとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９
６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である可変領域
配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号５に対し少なくとも９０％、少
なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも ９３％、少なくとも９４％、少なくと
も９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９
９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、アフコシ
ル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合し、配列番号４に対
し少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なく
とも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８
％、又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５に対し少
なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも
９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、
又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含む。

【0128】

いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明
細書に記載の、少なくとも１つのＨＶＲを含む。つまり、いくつかの実施態様において、
アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＨＶＲ１、本明
細書に記載の重鎖ＨＶＲ２、本明細書に記載の重鎖ＨＶＲ３、本明細書に記載の軽鎖ＨＶ
Ｒ１、本明細書に記載のＨＶＲ２、本明細書に記載のＨＶＲ３を含む。更に、いくつかの
実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明細書に記載の
ＨＶＲに基づく少なくとも１つの変異ＨＶＲを含み、変異ＨＶＲは本明細書に記載のＨＶ
Ｒに対し１、２、３、又は４アミノ酸置換を有する。いくつかの実施態様において、１以
上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＨＶＲ配列に対し１
以上の好適な保存的アミノ酸を選択することができ、ここで、好適な保存的アミノ酸置換
は、変異ＨＶＲを含む抗体の結合特性を特異的に変化させることは予測されない。

【0129】

例示的アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、また、本明細書に記載の抗体
又はその断片とＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合する抗体を含む。従って、
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
に対する結合についてαＦＧＦＲ２ｂと競合するように提供される。いくつかの実施態様
において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対す
る結合についてαＦＧＦＲ２ｂと競合するように提供され、かつ、増強されたＡＤＣＣ活
性、及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（例えばＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及び／又はＦ
ｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））に対する増強された親和性から選択される少なくとも
１の活性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合しない。

【0130】

いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、本明
細書に記載の、少なくとも１のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ヒト
重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである
。いくつかの実施態様において、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタ
イプのものである。

【0131】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化ヒト化抗体は、ヒトＩｇ
Ｇ定常領域を含む。従って、いくつかの実施態様において、エフェクター機能が所望であ
る場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むアフコシル化ヒ
ト化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が選択される。いくつかの実施態様において、本明細書に
記載のアフコシル化ヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施態様に
おいて、本明細書に記載のアフコシル化ヒト化抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていな
い、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフ
コシル化ヒト抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0132】

いくつかの実施態様において、アフコシル化ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸配列
を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様にお
いて、アフコシル化ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸配列及び任意の翻訳後修飾から
なる重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列及び任意の翻訳後修飾からなる軽鎖を含むアフ
コシル化抗体を含む。

【0133】

例示的抗体定常領域
いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗体は、１以上のヒト定
常領域を含む。いくつかの実施態様において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及
びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様において、ヒト
軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。

【0134】

いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗体は、ヒトＩｇＧ定常
領域を含む。いくつかの実施態様において、エフェクター機能が所望である場合、ヒトＩ
ｇＧ１重鎖定常領域又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体が選択される。いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗
体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施態様において、本明細書に記載のア
フコシル化抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていない、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。
いくつかの実施態様において、本明細書に記載のアフコシル化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常
領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0135】

本明細書及び特許請求の範囲において、明示され又は当業者に周知ない限り、免疫グロ
ブリン重鎖の残基の番号付けは、明示的に引用により本明細書に援用される、Kabat et a
l., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Servic
e, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991. に示されるＥＵインデックス
の番号付けである。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基
番号を指す。

【0136】

特定の実施態様において、本願発明の抗体は、野生型ＩｇＧ又は野生型抗体に対し少な
くとも１のアミノ酸置換を有する変異Ｆｃ領域を含む。特定の実施態様において、変異Ｆ
ｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において、２以上のアミノ酸置換を有する。特定の実施
態様において、変異Ｆｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において、３以上のアミノ酸置換
を有する。特定の実施態様において、変異Ｆｃ領域は、本明細書に記載の、少なくとも１
、２、又は３のＦｃ領域アミノ酸置換を有する。特定の実施態様において、本明細書にお
ける変異Ｆｃ領域は、天然型の配列のＦｃ領域と、及び／又は親抗体のＦｃ領域と、少な
くとも約８０％の相同性を有するであろう。特定の実施態様において、本明細書における
変異Ｆｃ領域は、天然型の配列のＦｃ領域と、及び／又は親抗体のＦｃ領域と、少なくと
も約９０％の相同性を有するであろう。特定の実施態様において、本明細書における変異
Ｆｃ領域は、天然型の配列のＦｃ領域と、及び／又は親抗体のＦｃ領域と、少なくとも約
９５％の相同性を有するであろう。

【0137】

特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体がグリコシル化される程度
を増加または低下させるように改変される。抗体に対するグリコシル化部位の追加又は除
去は、１以上のグリコシル化部位が作成又は除去されたアミノ酸配列を変更することによ
り、簡便に行われてもよい。

【0138】

抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する炭水化物が変更されてもよい。哺乳動
物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓ
ｎ２９７にＮ－結合により一般的に付着した、分岐した、二分岐オリゴ糖を含んでいる。
例えばWright et al.TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例
えば、二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ－アセチルグ
ルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。い
くつかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特
性を有する抗体変異体を作成するために行われてもよい。

【0139】

ある実施態様において、抗体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着したフコース
を欠いた炭水化物構造（すなわち、アフコシル化抗体）を有するよう提供される。例えば
、複数のそのような抗体を含む組成物におけるフコースの量は、０％から約５％であって
もよい。いくつかの実施態様において、複数のそのような抗体は、少なくとも９５％のア
フコシル化抗体を含む。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に付着する全糖構造体の総量に対
するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量（例えば、複合体、ハイブリッド及
び高マンノース構造）を計算することにより決定される。抗体におけるフコースを検出す
る非限定的例示的方法は、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析（例えば、国際公開第２００８／
０７７５４６号参照）、蛍光標識された遊離オリゴ糖のＨＰＬＣ法（例えば、Schneider
et al., “N-Glycan analysis of monoclonal antibodies and other glycoproteins usi
ng UHPLC with fluorescence detection,” Agilent Technologies, Inc. (2012); Lines
, J. Pharm. Biomed. Analysis, 14: 601-608 (1996); Takahasi, J. Chrom., 720: 217-
225 (1996)参照）、蛍光標識された遊離オリゴ糖のキャピラリー電気泳動法 （例えば、M
a et al., Anal. Chem., 71: 5185-5192 (1999)参照）、及び単糖組成物測定のための、
パルスドアンペロメトリ検出を伴うＨＰＬＣ（例えば、Hardy, et al., Analytical Bioc
hem., 170: 54-62 (1988)参照）を含む。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥ
Ｕ番号付け）でおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、
２９７位の±３残基上流又は下流のアミノ酸に位置してもよく、すなわち抗体の軽微な配
列変異に起因して、２９４位と３００位の間に位置してもよい。本明細書に記載の抗体α
ＦＧＦＲ２ｂにおいて、Ａｓｎ２９７は、配列ＱＹＮＳＴに見出され、かつ、下記配列の
表で、配列番号２に太字及び下線で示される。フコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善さ
せていてもよい。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Presta, L.
）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd）を
参照のこと。「アフコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例と
しては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７
３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６
１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４
／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公
開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米
国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第００３／０８５１１９号、国
際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第
２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２
／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnu
ki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。アフコシル化抗体を産生する
能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ Ｃ
ＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 米国特許出願
公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Presta, L；及び国際公開第２００４／０５６
３１２ Ａ１号、Adams et al., 特に実施例１１）、及びノックアウトＣＨＯ細胞等の、
機能的アルファ－１、６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８を欠くノックア
ウト細胞株(例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda,
Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006);及び国際公開第２００３／０
８５１０７号を参照)が含まれる。

【0140】

抗体は、例えば、抗体のFc領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分
された、二分岐オリゴ糖とともに更に提供される。このような抗体はフコシル化を減少さ
せ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善していてもよい。そのような抗体の例は、例えば、国
際公開第２００３／０１１８７８号 (Jean-Mairet et al.);米国特許第６６０６８４号(U
mana et al.);及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Umana et al.）に
記載されている。Fc領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも1つのガラクトース残基を持
つ抗体も提供される。このような抗体はＣＤＣ機能が改善されていてもよい。このような
抗体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Patel et al.）;国際公開第１９
９８／５８９６４号 (Raju, S.); 及び国際公開第１９９９／２２７６４号(Raju, S.)に
記載されている。

【0141】

抗体は、また、アミノ末端リーダー伸長と共に提供される。例えば、アミノ末端リーダ
ー配列の１以上のアミノ酸残基は、抗体の重鎖又は軽鎖の１以上の任意の末端に存在する
。例示的なアミノ末端リーダー伸長は、抗体の１又は両方の軽鎖に存在する、３つのアミ
ノ酸残基、ＶＨＳ、を含む、又はからなる。

【0142】

ヒトＦｃＲｎ抗親和性結合ポリペプチドのインビボ又は血清半減期は、例えば、変異Ｆ
ｃ領域を伴うポリペプチドが投与される、遺伝子組換えマウスにおいて、ヒトにおいて、
又は非ヒト霊長類において、分析される。例えば、Petkova et al. International Immun
ology 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと。

【0143】

いくつかの実施態様において、アフコシル化抗体は、フコースを含む親抗体よりも効果
的に、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣを媒介し、通常ＡＤＣＣ活性は、本明細
書に記載のように、インビトロのＡＤＣＣ活性を使用して決定されてもよいが、例えば、
動物モデル等のＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイ又は方法が企図される。

【0144】

特定の実施態様において、抗体の「Ｋ_Ｄ」、「Ｋ_ｄ」、「Ｋｄ」、又は「Ｋｄ値」は、
約１０反応単位(ＲＵ)で固定した抗原ＣＭ５チップを用い、２５℃で、ＢＩＡＣＯＲＥ(
登録商標)-２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ(登録商標)-３０００(BIAcore, Inc., Piscatawa
y, NJ)を用いた表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡潔に言うと、カル
ボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ(CM5, BIACORE Inc.)を、供給業者の
指示書に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩
酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍ
Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（０．２μＭ）に希釈し、結合したタン
パク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μＬ／分の流速で注入する。抗原
の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。反応速度
論的な測定のために、完全長抗体などのポリペプチドの段階希釈液が、２５℃、およそ２
５μＬ／分の流速で、０．０５％ＴＷＥＥＮ－２０(商標）界面活性剤(ＰＢＳＴ)を含む
ＰＢＳに注入される。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせ
ることによる単純１対１ラングミュア結合モデル(BIACORE（登録商標）Evaluation Softw
are version 3.2)を用いて、会合速度(ｋ_ｏｎ)と解離速度(ｋ_ｏｆｆ)を算出する。平衡解
離定数(Ｋｄ)をｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Bio
l. 293:865-881 (1999)を参照のこと。表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１
０^６Ｍ^－１ｓ^－１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度
計(Aviv Instruments)又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣ
Ｏ（商標）分光光度計(ThermoSpectronic)で測定される漸増濃度の抗原の存在下で、２５
℃、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗－抗原抗体の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ
；吸収＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用
いて測定することができる。

【0145】

上記「会合速度（「on-rate」、「rate of association」、「association rate」、又
は「k_on」）」は、また、上記ＢＩＡＣＯＲＥ （登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲ
Ｅ（登録商標）－３０００システム（BlAcore, Inc., Piscataway, NJ）を使用して決定
され得る。

【0146】

特定の実施態様において、前記２つの値の間の差異（例えば、Ｋｄ値）は、実質的に同
一であり、例えば、参照／比較値の関数は、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満
、約２０％未満、及び／又は約１０％未満である。

【0147】

特定の実施態様において、前記２つの値の間の差異（例えば、Ｋｄ値）は、実質的に相
違し、例えば、参照／比較分子の関数は、約１０％より高い、約２０％より高い、約３０
％より高い、約４０％より高い、及び／又は約５０％より高い。

【0148】

例示的リーダー配列
一部の分泌タンパク質が大量に発現し、かつ分泌されるために、異種タンパク質由来の
リーダー配列が望ましい。いくつかの実施態様において、リーダー配列が分泌プロセスで
ＥＲ内で除去されるときに、得られる成熟ポリペプチドが改変されないままであり得ると
いう点で、異種リーダー配列は、有利であるかもしれない。追加の異種リーダー配列は、
いくつかのタンパク質を発現し、かつ分泌するために必要とされるかもしれない。

【0149】

特定の例示的リーダー配列の配列は、例えば、Department of Biochemistry, National
University of Singaporeにより維持されるオンラインのリーダー配列データベースに示
されている。Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005);及び国際公開第２００
６／０８１４３０号を参照のこと。

【0150】

ＩＩＩ．アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の特性
いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、インビトロ
及び／又はインビボでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施態様において
、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を
有する。いくつかの実施態様において、インビトロでのＡＤＣＣ活性は、本明細書の、例
えば実施例３に記載の方法により決定される。簡潔に言うと、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現細
胞は、エフェクター（ＰＢＭＣ）対標的細胞が２５：１の比で、フコシル化抗体又はアフ
コシル化抗体の存在下で、単離されたばかりのヒトＰＢＭＣと接触せしめられる。いくつ
かの実施態様において、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３細胞が、標的細胞として使用
される。いくつかの実施態様において、細胞傷害性は、ＣｙｔｏＴｏｘ非放射性細胞傷害
性アッセイ（Promega, Madison, WI）を使用して、ＬＤＨ放出を定量することで決定され
る。いくつかの実施態様において、最大溶解は、５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を用いて決
定され、自然放出は、抗体の非存在下で決定された。いくつかの実施態様において、特異
的溶解のパーセンテージは、以下の式により決定されてもよい：（実験値-自然放出）／
（最大値－自然放出）×１００＝特異的溶解（％）。いくつかの実施態様において、増強
されたＡＤＣＣを有するアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、試験された少なくと
も１の濃度において、同量のフコシル化抗体による特異的溶解よりも、少なくとも１０、
少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、
少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、
少なくとも７０、又は少なくとも７５パーセントポイント高い特異的溶解をもたらす。い
くつかの実施態様において、増強されたＡＤＣＣを有するアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体は、試験された少なくとも１の濃度において、同量のフコシル化抗体による特異
的溶解よりも、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少
なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少
なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少なくとも７５パーセントポイン
ト高い特異的溶解をもたらし、ここで、各抗体の濃度は０．０１から１μｇ／ｍｌであり
、かつ標的細胞は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３細胞である。いくつかの実施態様
において、抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、又は１μｇ／ｍｌで
ある。

【0151】

いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、Ｆｃガンマ
ＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシ
ル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する増強され
た親和性を有する。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強された親和性を有する。いくつか
の実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する抗体親和性は、例えば、本明細書の
実施例２、及び／又は以下に記載される表面プラズモン共鳴アッセイを使用して決定され
る。以下の記載はＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）についてあるが、ＦｃガンマＲＩＩ
ＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性の決定のためにも好適である。簡潔に言うと、いくつか
の実施態様において、フコシル化又はアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、プロテ
インＡコーティングされたデキストランチップに捕捉される。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ
１５８）（例えばR&D Systemsから入手可能）は、様々な濃度で注入される。フコシル化
及びアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）の
結合定数、解離定数、及び親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴システム（例えば、Bi
acore T200 Evaluation Software 1:1 binding model)を提供するソフトウェアを用い、
決定されてもよい。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（例えばＦｃガ
ンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）又はＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））に対する増強され
た親和性を有するアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２Ｉ
ＩＩｂ抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍
、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくと
も１７倍、又は少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合する。例えば
、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、９．２ｎＭの親和性（Ｋ_Ｄ）でＦｃガンマ
ＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に結合し、かつ、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、２０
７ｎＭの親和性（Ｋ_Ｄ）でＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に結合し、そして、アフコ
シル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体よりも２０７
／９．２＝２２．５倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に結合する。

【0152】

ＩＶ．抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体発現及び産生
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体をコードする核酸分子
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の１以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子
が提供される。いくつかの実施態様において、核酸分子は、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の
重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、核酸
分子は、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の、重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコ
ードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施態様において、第１核酸分子は
重鎖をコードする第１ポリヌクレオチドを含み、かつ第２核酸分子は軽鎖をコードする第
２ポリヌクレオチドを含む。

【0153】

いくつかのそのような実施態様において、重鎖及び軽鎖は、２つの別々のポリペプチド
として、１つの核酸分子から、又は、２つの別々の核酸分子から、発現される。いくつか
の実施態様において、抗体がｓｃＦｖであるような場合、単一のポリヌクレオチドが互い
に結合する重鎖及び軽鎖を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0154】

いくつかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の重鎖又は軽鎖をコードする
ポリヌクレオチドは、翻訳されるとき重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置する、リーダー配列を
コードするヌクレオチド配列を含む。上記のように、リーダー配列は、天然型の重鎖又は
軽鎖リーダー配列であってもよく、又は、別の異種リーダー配列であってもよい。

【0155】

核酸分子は、当該技術分野での従来法である組換えＤＮＡ技術を使用して構築されても
よい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現のた
めに好適な発現ベクターである。

【0156】

ベクター
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ重鎖及び／又は抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ軽鎖をコードするポリヌク
レオチドを含むベクターが提供される。また、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ重鎖及び／又は抗Ｆ
ＧＦＲ２ＩＩＩｂ軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。その
ようなベクターは、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイ
ルスベクター等を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、ベクタ
ーは、重鎖をコードする第１ポリヌクレオチド配列、及び軽鎖をコードする第２ポリヌク
レオチド配列を含む。いくつかの実施態様において、重鎖及び軽鎖は、２つの別々のポリ
ペプチドとして、ベクターから発現する。いくつかの実施態様において、重鎖及び軽鎖は
、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合等に、単一のポリペプチドの一部として発現される
。

【0157】

いくつかの実施態様において、第１ベクターは重鎖をコードするポリヌクレオチドを含
み、かつ第２ベクターは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様
において、第１ベクター及び第２ベクターは、同量（近いモル量又は近い質量）で、宿主
細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施態様において、５：１から１：５のモル
又は質量比の第１ベクター及び第２ベクターが宿主細胞にトランスフェクトされる。いく
つかの実施態様において、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターについ
て、１：１から１：５の質量比が使用される。いくつかの実施態様において、重鎖をコー
ドするベクターと軽鎖をコードするベクターについて、１：２の質量比が使用される。

【0158】

いくつかの実施態様において、ベクターは、ＣＨＯ、又はＣＨＯ由来細胞、又はＮＳＯ
細胞において、ポリペプチドの発現のために最適化されるように、選択される。例示的な
、そのようなベクターは、例えば、Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-88
9 (2004)に記載されている。

【0159】

宿主細胞
様々な実施態様において、抗FGFR2IIIb重鎖及び／又は抗FGFR2IIIb軽鎖は、細菌細胞等
の原核細胞、菌細胞等の真核細胞（例えば、酵母）、植物細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞
において発現されてもよい。そのような発現は、例えば、当該技術分野で周知の手順に従
って実施される。ポリペプチドを発現するために使用されてもよい例示的な真核細胞は、
ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ、ＤＧ
４４．Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、及びＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ
６（登録商標）細胞(Crucell)；及びＮＳＯ細胞を含むが、これらに限定されない。いく
つかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ重鎖及び／又は抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ軽
鎖は、酵母において発現されてもよい。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７０
０４ Ａ１号を参照のこと。いくつかの実施態様において、特定の真核宿主細胞は、所望
の翻訳後修飾を、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ重鎖及び／又は抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ軽鎖に付加
できる能力に基づき、選択される。例えば、いくつかの実施態様において、ＣＨＯ細胞は
、２９３細胞において産生された同一ポリペプチドよりも、高レベルのシアル酸付加を有
するポリペプチドを産生する。

【0160】

１以上の核酸の所望の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション法
、ＤＥＡＥ－デキストラン仲介トランスフェクション法、陰イオン脂質仲介トランスフェ
クション法、エレクトロポーテーション法、トランスダクション法、インフェクション等
を含むが、これらに限定されない、任意の方法により実施されてもよい。非限定的例示的
方法は、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3^rd ed.
Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、任意の好適
な方法に従い、一過的に又は安定的に所望の宿主細胞にトランスフェクトされてもよい。

【0161】

いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、例えば、タ
ンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Bi
ophys. 249:533-545 (1986);米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Pre
sta, L;及び国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号、Adams et al., 特に実施例１１
）、及びノックアウトＣＨＯ細胞等の、機能的アルファ－１,６－フコシルトランスフェ
ラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８を欠くノックアウト細胞株（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Bio
tech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-6
88 (2006);及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照)等のアフコシル化抗体を産
生することが可能な細胞において、産生される。いくつかの実施態様において、アフコシ
ル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、機能的ＦＵＴ８遺伝子を欠くＣＨＯ細胞において産生
される。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、Ｐｏ
ｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（BioWa/Lonza, Allendale, NJ）に
おいて産生される。

【0162】

抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の精製
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、任意の好適な方法により精製されてもよい。そのような
方法は、親和性マトリクス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用を含むが、これ
らに限定されない。好適な親和性リガンドは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂＥＣＤ、及び抗体定常
領域に結合するリガンドを含む。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／
Ｇ、又は抗体アフィニティカラムが定常領域を結合するために、かつ、抗ＦＧＦＲ２ＩＩ
Ｉｂ抗体を精製するために用いられてもよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例え
ば、ブチル又はフェニルカラムも、また、いくつかのポリペプチドを精製するために好適
である。ポリペプチドを精製する数多くの方法が、当該技術分野で周知である。

【0163】

抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の無細胞産生
いくつかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、無細胞系で産生される。
非限定的例示的無細胞系は、例えば、Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-
44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol
. Adv. 21: 695-713 (2003)に記載されている。

【0164】

Ｖ．治療用組成物及び方法
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を使用した疾患治療方法
本願発明の抗体、及び本願発明の抗体を含む組成物は、ヒト又は動物のための処置方法
における使用のために提供される。アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を投与
することを含む、疾患を処置する方法が、また、提供される。アフコシル化抗ＦＧＦＲ２
ＩＩＩｂ抗体を用いて処置され得る非限定的例示的疾患は、がんを含むが、これに限定さ
れない。いくつかの実施態様において、アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を
投与することを含む、がんを処置する方法が提供される。いくつかの実施態様において、
がんは、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び食道がんから選択さ
れる。いくつかの実施態様において、アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を投
与することを含む、胃がんを処置する方法が提供される。

【0165】

いくつかの実施態様において、がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施態
様において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。
いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりも
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅
を含むがんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベルよりも、２倍、３倍、５倍、
又は１０倍より高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実
施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化されている。いくつかの実施態様
において、がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含ま
ない。いくつかの実施態様において、胃がんはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの
実施態様において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発
現する。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩ
ＩｃよりもＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを多く過剰発現する。いくつかの実施態様において、ＦＧ
ＦＲ２増幅を含む胃がんは、標準化されたＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現レベルよりも、２倍、
３倍、５倍、又は１０倍より高い標準化されたレベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。
いくつかの実施態様において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対し標準化されている。いくつ
かの実施態様において、胃がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺
伝子増幅を含まない。いくつかの実施態様において、過剰発現は、ｍＲＮＡ過剰発現であ
る。いくつかの実施態様において、過剰発現は、タンパク質過剰発現である。

【0166】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子増幅は、インサイツ ハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）を
含むがこれに限定されない、当該技術分野での任意の好適な方法により決定されてもよい
。いくつかの実施態様において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１
０セントロメア）比が＞３である。

【0167】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡ過剰発現は、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を含む方法を含む
がこれに限定されない、当該技術分野での任意の好適な方法により決定されてもよい。用
語「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡ過剰発現」は、増加したＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡ
レベルの原因にかかわらず（すなわち、転写の増加により及び／又はｍＲＮＡの分解の低
下により、他の機構により、又は機構の組合せにより、レベルの増加がもたらされるか否
かにかかわらず）増加したレベルが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡの増加したレベルを
意味する。

【0168】

ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）等の抗体ベースの
方法を含むが、これらに限定されない、当該技術分野での任意の好適な方法により決定さ
れてもよい。いくつかの実施態様において、ＩＨＣ染色は、当該技術分野での方法に従っ
て、スコア付けされる。用語「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質過剰発現」は、増加したＦ
ＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質レベルの原因にかかわらず（すなわち、翻訳の増加により及
び／又はタンパク質の分解の低下により、他の機構により、又は機構の組合せにより、レ
ベルの増加がもたらされるか否かにかかわらず）増加したレベルが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ
タンパク質の増加したレベルを意味する。いくつかの実施態様において、ＩＨＣによる、
腫瘍細胞の１＋、２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつ
かの実施態様において、ＩＨＣによる、腫瘍細胞の２＋又は３＋の染色は、ＦＧＦＲ２Ｉ
ＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施態様において、ＩＨＣ染色は、実施例６に記載
されるように、スコア付けされる。

【0169】

薬学的組成物
様々な実施態様において、アフコシル化抗体を含む組成物は、幅広い種類の薬学的に許
容可能な担体と共に製剤中に提供される（例えば、Gennaro, Remington: The Science an
d Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (200
3); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th ed.
, Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutic
al Excipients, 3^rd ed., Pharmaceutical Press (2000)参照）。ビヒクル、アジュバン
ト、及び希釈剤を含む、様々な薬学的に許容可能な担体が入手可能である。更に、例えば
、pH調節及び緩衝剤、等張化剤、安定化剤、湿潤剤、等の様々な薬学的に許容可能な補助
的物質が入手可能である。非限定的例示的担体は、生理食塩水、ブドウ糖、水、グリセロ
ール、エタノール、及びこれらの組合せを含む。

【0170】

様々な実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物は、例
えば、植物油又はその他の油分、合成脂肪族グリセリド、高級脂肪酸、又はプロピレング
リコール等の水性又は非水性溶媒にそれらを溶解、懸濁、乳化することにより；かつ、所
望の場合、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤、及び保存料等の従来使用され
る添加物と共に、皮下投与を含む注射のために製剤化されてもよい。様々な実施態様にお
いて、例えば、ジクロロフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容可能な推進
剤を使用して、吸入のために製剤化されてもよい。組成物は、様々な実施態様において、
生分解性又は非生分解性ポリマー等と共に、徐放マイクロカプセルに製剤化されてもよい
。非限定的例示的生分解性製剤は、ポリ乳酸－グリコール酸ポリマーを含む。非限定的例
示的非生分解性製剤は、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。そのような製剤を製造す
るための特定の方法は、例えば、欧州特許出願公開公報１１２５５８４ Ａ１号に記載さ
れている。

【0171】

投与ルート
様々な実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、経口、動脈内、
非経口、鼻腔内、筋肉内、心内、脳室内、気管内、口腔、直腸、腹腔内、皮内、局所、経
皮、及び髄腔内、又は移植又は吸入による、様々なルートにより、インビボで投与されて
もよい。対象の組成物は、固体、半固体、液体、又は気体の形態に製剤化されてもよく；
形態は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、かん腸、注射、吸入、エアロ
ゾルを含むが、これらに限定されない。好適な製剤及び投与ルートは、目的の適用に従っ
て、選択されてもよい。

【0172】

薬学的組成物は、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、又は食道がん
等のがんの処置又は予防のための有効量が投与される。治療的有効量は、典型的には、処
置される対象の体重、彼又は彼女の身体状態又は健康状態、処置される健康状態の深刻性
、又は処置される対象の年齢によるものである。通常、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂ抗体は、用量あたり、約１０μｇ／ｋｇ体重から約１００ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与さ
れてもよい。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、
用量あたり、約５０μｇ／ｋｇ体重から約５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与されてもよい。い
くつかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、用量あたり、約１００μｇ／
ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与されてもよい。いくつかの実施態様におい
て、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、用量あたり、約１００μｇ／ｋｇ体重か
ら約２０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与されてもよい。いくつかの実施態様において、アフコ
シル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、用量あたり、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍ
ｇ／ｋｇ体重の量で投与されてもよい。

【0173】

アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の組成物は、対象の必要に応じて、投与されて
もよい。投与頻度は、処置される健康状態、処置される対象の年齢、処置される健康状態
の深刻さ、処置される対象の一般的健康状態等を考慮して、主治医等の当業者により決定
されてもよい。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の
有効用量が、１又は複数回、対象に投与される。様々な実施態様において、アフコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の有効用量が、１か月に１回、１か月に２回以上、例えば２か
月に１回又は３か月に１回、対象に投与される。別の実施態様において、アフコシル化抗
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の有効用量が、例えば、１か月に１回未満、例えば２週間に１回
又は毎週、対象に投与される。アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の有効用量が、少
なくとも１回、対象に投与される。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体の有効用量は、少なくとも１か月、少なくとも６か月、又は少なくとも
１年の期間に、複数回投与されてもよい。

【0174】

組合せ療法
アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、単独で、又は他の処置方法を伴って、投与
されてもよい。それは、例えば、手術、化学療法、又は放射線療法等の他の処置方法の前
に、実質的に同時に、又は後に提供されてもよい。いくつかの実施態様において、アフコ
シル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、他の抗がん剤と併用して投与される。アフコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体と共に投与されてもよい非限定的限定的抗がん剤は、白金剤（
例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン）、パクリタキセル（Ｔ
ＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡ
ＮＥ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ゲムシタビン（
ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、イリノテカ
ン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、エピルビシン（ＥＬＬＥＮＣＥ（登録商標）、
ＰＨＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（登録商標））、ＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵと組合わされたオ
キサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、５－ＦＵ、及びイリノテカンの組合
せ）、ロイコボリン、フルオロウラシル（５－ＦＵ、ＥＦＵＤＥＸ（登録商標））、マイ
トマイシンＣ（ＭＩＴＯＺＹＴＲＥＸ（商標）、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、及び
ドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシンＰＦＳ、アドリアマイシンＲＤＦ、ＲＵＢＥＸ
（登録商標））を含む。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩ
ｂ抗体は、パクリタキセルと併用して投与される。いくつかの実施態様において、アフコ
シル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、シスプラチン及び／又は５－ＦＵと併用して投与さ
れる。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、シスプ
ラチン及び５－ＦＵと併用して投与される。いくつかの実施態様において、アフコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン、５－ＦＵ、及びロイコ
ボリン）と併用して投与される。

【0175】

キット／製品
本願発明は、キット、医薬、組成物、及び、本明細書に記載の任意の方法のための単位
用量形態を含む。

【0176】

本発明のキットは、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体（又は単位用量形態、及び
／又は製品）を含む１以上の容器を含む。いくつかの実施態様において、１以上の追加の
薬剤を伴い、又は伴わずに、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む、既定量の組
成物を含む、単位用量が提供される。いくつかの実施態様において、そのような単位用量
は、注射のための、使い捨ての充填済みシリンジで提供される。様々な実施態様において
、単位用量に含まれる組成物は、生理食塩水、ショ糖等；リン酸等のバッファーを含んで
もよく；かつ／又は安定かつ有効なｐＨ範囲内に製剤化されてもよい。一方、いくつかの
実施態様において、組成物は、例えば滅菌水等の好適な液体の添加によって再構成され得
る、凍結乾燥粉末として提供されてもよい。いくつかの実施態様において、組成物は、シ
ョ糖及びアルギニンを含むがこれに限定されない、タンパク質凝集を阻害する１以上の物
質を含む。いくつかの実施態様において、本願発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロ
テオグリカンを含む。

【0177】

いくつかの実施態様において、本願発明のキットは、本明細書に記載の任意の方法に従
って、例えば、がん（例えば、胃がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膵臓がん、又
は食道がん）の処置における使用説明書を更に含む。キットは、好適な個体又は処置を選
択する説明を更に含む。本願発明のキットに添付される説明書は、典型的には、ラベル又
はパッケージ挿入物に記載された説明（例えば、キットに含まれる紙）であるが、機械可
読説明（例えば、磁気又は光学ディスクに保存された説明）もまた許容される。いくつか
の実施態様において、キットは、他の治療剤を更に含む。

【0178】

本発明のキットは、適切に包装されている。適切な包装には、バイアル、ボトル、ジャ
ー、フレキシブル包装（例えば、密封マイラー又はビニール袋）等があるが、これらに限
定されない。キットは、例えばバッファー及び解説等の追加の成分を、任意選択的に提供
する。本願は、従って、バイアル（例えば密封バイアル）、ボトル、ジャー、フレキシブ
ル包装等を含む製品も提供する。

【実施例0179】

以下に記載の実施例は、単に本発明の例示であると意図されており、決して本発明を限
定するものと考えられるべきではない。実施例は、以下の実施例が、全ての実施例、又は
実行された実施例のみであることを説明することを意図するものではない。使用された数
（例えば、量、温度等）に関する正確性を確認するために、注意が払われてきているが、
一部の実験的誤差及び偏差は、説明されるべきである。別途指示がない限り、部（parts
）は重量部（parts by weight）、分子量は重量平均の分子量、温度は摂氏温度での温度
、及び圧力は大気圧での又は大気圧付近での圧力である。

【0180】

実施例1：アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の産生
発現ベクターの構築モノクローナル抗体αＦＧＦＲ２ｂの重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ
）をコードするヌクレオチド配列は、製造業者の説明書に従って、ＧＳ Ｇｅｎｅ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Lonza, Basel, Switzerland）にクローニングされた。
システムにより、軽鎖及び重鎖の両方のための発現カセットを含むダブル遺伝子ベクター
（ＤＧＶ）が作製された。

【0181】

宿主細胞株の選択アフコシル化モノクローナル抗体αＦＧＦＲ２ｂＡ（αＦＧＦＲ２ｂ
の後の「Ａ」は、「アフコシル化」を示す）を生成するために、宿主細胞として、Ｐｏｔ
ｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（BioWa/Lonza, Allendale, NJ）が選
択された。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞は、ＦＵＴ８遺伝子
（α１，６－フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、そして、そのために、フコース非含
有抗体（アフコシル化抗体）を産生する。

【0182】

アフコシル化αＦＧＲ２ｂＡ抗体の産生のための安定細胞株の構築：上記αＦＧＦＲ２
ｂ抗体重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、製造業者の説
明書に従って、エレクトロポーテーション法によりＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）
ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞にトランスフェクトされた。エレクトロポーテーションされた細胞は
、約１００００細胞／５０μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに、Ｌ－グルタミン非含有
ＣＤ ＣＨＯ培地に播種された。次の日に、６７、μＭＬ－メチオニン スルホキシミン（
MSX, SIGMA cat#M5379, St. Louis, MO）含有ＣＨ ＣＨＯ選択培地が、１５０、μｌ／ウ
ェルで添加された。細胞成長及びクローンの形成は、ＩＮ細胞アナライザー２０００ (IN
Cell Analyzer 2000) (GE Healthcare, Piscataway, NJ)でモニターされた。

【0183】

４～６週間後、生存しているコロニーは、ＸＬ６６５コンジュゲートプロテインＡ及び
クリプテートコンジュゲートポリクローナルウサギＩｇＧ（Cisbio, Bedford, MA）を用
いて精製されたαＦＧＦＲ２ｂ抗体について生成された標準カーブに対し、ホモジニアス
時間分解蛍光（Homogenous Time Resolved Fluorescence,HTRF）ベースのアッセイにより
、αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体の発現についてスクリーニングした。２４ウェルプレート、遠心
管、フラスコ振盪、ベンチスケールのバイオリアクター、及びプラットフォームプロダク
ション工程（platform production process）を含む一連の増加スケールの産生工程を通
し、最も発現の高いクローンを増殖させた。各工程で、最も発現の高いクローンを含むサ
ブセットのみに、次の工程を実施した。最終的な産生クローンは、タンパク質産生タイタ
ー、細胞成長特性、産物の質、安定性、及びバイオリアクターにおける拡張性、の評価に
基づいて選択された。最終的な産生株は、αＦＧＦＲ２ｂＡについて約３．５ｇ／Ｌの発
現レベルを有していた。最終的産生細胞株におけるαＦＧＦＲ２ｂＡにおけるフコシル化
の欠如は、順相ＨＬＰＣ（Ｎ－ＨＰＬＣ）クロマトグラフィーを使用して確認された。

【0184】

αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体は、カラムクロマトグラフィーにより精製され、限外濾過により
精製物質が濃縮され、そして、透析濾過により精製バッファー（２０ｍＭヒスチジン、１
５０ｍＭＬ－アルギニン、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ６．０）と交換された。
抗体は、－７０oＣより低い温度で保管された。

【0185】

αＦＧＦＲ２ｂＡのグリカン分析は、タンパク質からのグリカンの放出、アントラニル
酸（２－ＡＡ）によるグリカンの標識、及び標識されたグリカンの精製により実施される
。蛍光検出を伴う順相ＨＰＬＣは、グリカンを分離し、抗体における各グリカンの相対量
を測定するために、使用される。図７は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ
１ＳＶ細胞株に由来するαＦＧＦＲ２ｂ、及びＣＨＯＫ１ＳＶから産生されるαＦＧＦＲ
２ｂが、２つの異なるグリカン分布を有することを示す。（Ａ）Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ
（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株に由来するαＦＧＦＲ２ｂのグリカン分布は、抗体が
フコースを欠く（「Ｇ０」）ことを示す。（Ｂ）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株に由来するαＦＧ
ＦＲ２ｂのグリカン分布は、抗体がフコースを含む（「Ｇ０Ｆ」）ことを示す。

【0186】

順相ＨＰＬＣ分離で得られるグリカンのピークは、２つの直交法を使用して検出した。
第１に、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶにより産生されたαＦＧＦ
Ｒ２ｂは、標識され、かつ、順相ＨＰＬＣ法により分離された。蛍光検出の後、グリカン
を、ＱＴｒａｐ質量分析計を通過させた。各ピークの質量が検出され、その質量は各グリ
カンを確実に検出するために使用され、表２に示された。

【0187】

グリカンの各フコシル化形態（G0F、 G1F、及び G2F）の質量は、また、Ｐｏｔｅｌｌ
ｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶにより産生されたαＦＧＦＲ２ｂにおいて探索さ
れ、観察されなかった。図８は、抗体において典型的に観察される、Ｇ０、Ｇ１、Ｇ２、
Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、及びマンノース－５（又はＭａｎ－５）グリカン構造のスキー
ム図を示す。

【0188】

ＨＰＬＣアッセイにより示されたピークは、また、Ｐｒｏｚｙｍｅより購入したグリカ
ン標準を使用し、標準と、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株及
びＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株の両方から取得したαＦＧＦＲ２のプロフィールとの間の保持時
間をマッチングさせて、確認した。これらの標準は、Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｍａｎ５、Ｇ１、Ｇ
１Ｆ、及びＧ２Ｆを検出することができた。

【0189】

ＨＰＬＣアッセイにより得られた結果、並びに特性データにより、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅ
ｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株に由来するαＦＧＦＲ２における、フコシル化の
欠如が確認された。

【0190】

実施例２：アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体の結合親和性
ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対するαＦＧＦＲ２ｂＡ及びαＦＧＦＲ２ｂＦの
結合親和性（αＦＧＦＲ２ｂの後の「Ｆ」は、「フコシル化」を示す）は、表面プラズモ
ン共鳴アッセイにより決定された。簡潔に言うと、プロテインＡを、アミンカップリング
キット（GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ）及びブロッキング剤として１
００ｍＭエチレンジアミン（Sigma）含有１００ｍＭホウ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ
８．０）（Sigma, St. Louis, MO）を使用して、デキストランチップに共有結合させた。
約６００－８００ＲＵのαＦＧＦＲ２ｂＡ及びαＦＧＦＲ２ｂＦは、分離フローセル、及
び対照コントロールとして機能する、プロテインＡ（Pierce）で誘導体化されたフローセ
ルに捕捉された。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）（R&D Systems, Minneapolis, MN）
は、ＨＢＳ－Ｐ＋ランニングバッファー（Biacore, GE Healthcare, Piscataway, NJ）で
希釈され、５つの濃度（０ｎＭ、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、及
び１０００ｎＭ）で、２重試験（デュープリケート）で注入された。αＦＧＦＲ２ｂＡに
対する結合定数、解離定数、及び親和性は、Biacore T200 Evaluation Software 1:1結合
モデルを使用して、算出された。αＦＧＦＲ２ｂＦ結合に対する親和性定数は、Biacore
T200 Evaluation Software steady state親和性モデルを使用して決定された。結果を表
３に示す。

【0191】

表３に示されるように、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）は、αＦＧＦＲ２ｂＦに対
する結合よりも、２０倍より高い親和性で、αＦＧＦＲ２ｂＡに結合した。

【0192】

実施例３：アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体のＡＤＣＣ活性
αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体対αＦＧＦＲ２ｂＦ抗体のＡＤＣＣ活性を決定するために、イン
ビトロアッセイが実施された。Ｂａ／Ｆ３ ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現標的細胞は以下のよ
うに産生された。Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und
Zellkulturen GmbHから取得したＢａ／Ｆ３細胞（DSMZ, cat# ACC300, Braunschweig, Ge
rmany）は、１０％ウシ胎仔血清（Mediatech, cat# 35-010-CV）、１ｎｇ／ｍＬマウスＩ
Ｌ－３（Peprotech, cat# 213-13, Rocky Hill, NJ)、１×ＢＭＥ(Invitrogen, cat# 104
7574, Grand Island, NY)、及び１×ペニシリン－ストレプトマイシン（Mediatech cat#
30-002-Cl）添加ＲＰＭＩ（Mediatech, cat# 10-041-CV, Manassas, VA）で維持された。
Ｂａ／Ｆ３細胞は、Cell Line Nucleofector（登録商標） Kit V（Lonza, cat# VCA-1003
）を用い、製造業者のプロトコルに従って、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ、ｐＢＮｅｗ－ｈＦＧＦ
Ｒ２ｂを発現する発現ベクターによりトランスフェクトされた。ｐＢＮｅｗベクターは、
ニワトリβアクチンのイントロン、及び、アンピシリン及びピューロマイシン成長選択遺
伝子を伴い、ＣＡＧプロモーターを含む。トランスフェクトされた細胞は、３日間完全増
殖培地（full growth media）でインキュベートされ、そして、２μｇ／ｍＬのピューロ
マイシン（InVivoGen, cat # ant-pr-1, San Diego, CA）で処置された。ピューロマイシ
ン選択は、培養中にわたり維持された。個々の安定なクローンを生成するために、細胞は
、３ウェルあたり１細胞の密度で播種された。抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を用いた蛍光活
性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）が、最も高いＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現レベルのクロー
ンを選択するために使用された。

【0193】

ＭＦＭ－２２３細胞はＨｅａｌｔｈ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｇｅｎｃｙ（英国）から
取得され；ＯＣＵＭ－２Ｍ細胞は大阪市立大学（大阪、日本）から取得され、ＫＡＴＯ
ＩＩＩ細胞は、ＡＴＣＣ（Rockville, MD）から得られた。全ての細胞は、一般的な方法
を使用して培養された。健常ドナーから単離されたばかりのＰＭＢＣは、ＡｌｌＣｅｌｌ
ｓ（Emeryville, CA）から取得された。

【0194】

ＡＤＣＣアッセイは、３人の独立したドナーから３日別々の日に取得したエフェクター
細胞を使用して実施された。ＡＤＣＣアッセイ試験は、単離されたばかりのヒトＰＢＭＣ
をエフェクター細胞として使用し、エフェクター対標的（Ｅ／Ｔ）細胞比２５：１で、実
施された。標的細胞は、エフェクター存在下かつ抗体濃度が増加していく条件下で、１６
時間インキュベートされた。ＡＤＣＣアッセイは、ＳＫＯＶ－３標的細胞に対しＨＥＲＣ
ＥＰＴＩＮ（登録商標）、及びＲａｊｉ標的細胞に対するＲＩＴＵＸＩＮ（登録商標）と
いう、２のポジティブコントロール抗体を使用して評価された。完全ヒトＩｇＧ１ネガテ
ィブコントロール抗体（Eureka Therapeutics, Catalog ET901, Emeryville, CA）が、非
特異的細胞障害性のために使用された。細胞傷害性は、製造業者の説明書（CytoTox Non
Radioactive Cytotoxicity Assay, Promega, Madison, WI）に従って、ＬＤＨ放出の定量
により、決定された。

【0195】

最大溶解は、５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００の存在下で決定され、自然放出は、抗体の非
存在下で決定された。特異的溶解のパーセンテージは、自然放出を差し引いた最大溶解の
パーセンテージとして、以下のように算出された：
（実験値－自然放出）／（最大値－自然放出）×１００＝特異的溶解（％）

【0196】

Ｂａ／Ｆ３細胞についての結果を図１に示す。アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体は、
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３細胞において、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦ抗体より
高い特異的溶解を誘導した。ＯＣＵＭ－２Ｍ、ＭＦＭ２２３、及びＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞
において、抗体の最大特異的溶解は、ＯＣＵＭ－２Ｍ及びＭＦＭ ２２３細胞において同
等であった（データは示さない）が、αＦＧＦＲ２ｂＡは、αＦＧＦＲ２ｂＦよりも低い
濃度でより高いＡＤＣＣ活性を示した。更に、αＦＧＦＲ２ｂは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発
現Ｂａ／Ｆ３細胞において、ＡＤＣＣ活性をほとんど示さない、又はＡＤＣＣ活性を示さ
なかった。図１Ａを参照のこと。

【0197】

実施例４：胃がん及び乳がん異種移植モデルにおけるアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体
活性
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Wilmington, MA）から、６週
齢のメスＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスを購入し、マウスを、研究開始前1週間順化させた。ヒ
ト胃癌細胞株ＯＣＵＭ－２Ｍ又は乳癌細胞株が、腫瘍モデルとして使用された。ＯＣＵＭ
－２Ｍは、公立大学法人大阪市立大学（OCU、大阪、日本）から購入し、ＭＦＭ－２２３
はＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ（Public Health England）（98050130, HPA
Culture Collections, Salisbury, UK）から購入した。細胞は、最長３回まで完全増殖培
地で継代され、移植のために増殖させた。ＯＣＵＭ－２Ｍ及びＭＦＭ－２２３細胞は、そ
れぞれ、ダルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）及び最小必須培地（ＭＥＭ）で培養された
。全ての培地には、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭＬ－グルタミン、
及びペニシリン－ストレプトマイシン溶液が添加されていた。細胞は、５％ＣＯ_２の湿潤
環境下で、３７℃で培養された。

【0198】

培養細胞が８５～９０％コンフルエントに達したとき、細胞は、回収され、５０％マト
リゲル（BD BioSciences, San Jose, CA）を含む冷却Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋非含有リン酸
緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁された。ＯＣＵＭ－２Ｍ細胞は、５ｘ１０^５細胞／１
００μｌ／マウスで、マウスの右脇から皮下に移植された。ＭＦＭ－２２３細胞は、５ｘ
１０^５細胞／１００μｌ／マウスで、マウスの右脇から皮下に移植され、かつ、０．７２
ｍｇ９０日放出１７－βエストラジオールペレット（Innovative Research of America,
Sarasota, FL）は、右脇へ皮下に接種された。マウスは、細胞移植後に週２回、腫瘍成長
をモニターされた。腫瘍サイズは、式：腫瘍サイズ（ｍｍ^３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍ
ｍ）^２）／２により測定された。ＭＦＭ－２２３腫瘍が８０ｍｍ^３に達したとき、マウス
はグループ分けされ、ランダム化（ｎ＝１０）され、処置が開始された。ＯＣＵＭ－２Ｍ
腫瘍について、腫瘍が平均サイズ１００ｍｍ^３に達した場合に抗ＦＧＦＲ２ｂを使用した
単一療法が開始され、腫瘍が平均サイズ２５０ｍｍ^３に達した場合に組合せ療法が開始さ
れた。

【0199】

抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂヒト化抗体（アフコシル化、αＦＧＦＲ２ｂＡ；フコシル化、α
ＦＧＦＲ２ｂＦ）又はネガティブコントロールとしてのアルブミンが、図の説明に示すよ
うに、週２回、１から１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与された。化学療法剤は、パクリ
タキセルについて１２ｍｇ／ｋｇで、フルオロウラシル（５－ＦＵ）について２．３ｍｇ
／ｋｇで、及びシスプラチンについて３３ｍｇ／ｋｇで、週２回腹腔内投与された。治療
の開始後、腫瘍サイズは、各マウスにおいて週２回測定された。各腫瘍の長さ及び幅は、
ノギスを使用して測定され、腫瘍サイズは、上記式に従って算出された。皮下の腫瘍体積
が２０００ｍｍ^３を超えたとき、又は腫瘍が過度に壊死性になったとき、マウスを安楽死
させた。

【0200】

結果としての腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５の場合、統計的に有意であると決定した
。Ｐ値は、腫瘍が測定された最終日における算出された腫瘍体積の独立した、両側ｔ検定
を使用して算出した。

【0201】

図２は、ＦＧＦＲ２増幅を有するＯＣＵＭ－２Ｍヒト胃がん異種移植モデルにおける、
１０ｍｇ／ｋｇ（Ａ及びＢ）及び３ｍｇ／ｋｇでの（Ｃ及びＤ）、αＦＧＦＲ２ｂＡ及び
αＦＧＦＲ２ｂＦの有効性を示す。（Ａ）１０ｍｇ／ｋｇでは、フコシル化及びアフコシ
ル化抗体の両方が、直接的な腫瘍退行を誘導した。しかしながら、アフコシル化αＦＧＦ
Ｒ２ｂＡは、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦよりも、更に継続的な応答を誘導した。（Ｂ）
アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡは、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦに比較して、最終的なＯ
ＣＵＭ－２Ｍ腫瘍サイズを有意に低下させた。統計的有意性は、両側独立ｔ検定により決
定した。（Ｃ）３ｍｇ／ｋｇの用量の場合、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡは、フコシル
化αＦＧＦＲ２ｂＦに比較して腫瘍成長を低下させた。実際に、アフコシル化αＦＧＦＲ
２ｂＡは、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦと比較して、より高い腫瘍退行及び継続的応答を
誘導した（注：１匹の動物は、約４２日時点でαＦＧＦＲ２ｂＦグループから除去され、
これによりカーブのシフトが生じた）。（Ｄ）フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦと比較された
、３ｍｇ／ｋｇでのアフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡは、最終的ＯＣＵＭ－２Ｍ腫瘍サイズ
を顕著に低下させた。統計的有意性は、両側独立ｔ検定により決定した。

【0202】

図３は、αＦＧＦＲ２ｂＡによる、用量依存的腫瘍阻害を示す。（Ａ）平均腫瘍サイズ
が約１００ｍｍ^３に達したとき、皮下ＯＣＵＭ－２Ｍ異種移植片を有するＳＣＩＤマウス
は、１、１．５、２、３、又は５ｍｇ／ｋｇのアフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡで処置され
た。アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡの全ての用量が腫瘍成長を阻害したが、最も高い抑制
及び継続的応答は、３及び５ｍｇ／ｋｇで観察され、２、１．５、及び１ｍｇ／ｋｇαＦ
ＧＦＲ２ｂＡでは成長抑制が低下した。（Ｂ）アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡは、最終的
ＯＣＵＭ－２Ｍ腫瘍サイズを減少させ、より高い用量は、より強力な成長抑制を示した。
腫瘍成長抑制は、全ての用量について、統計的に有意であった（５ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．
０００１；３ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０００１；２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０００１；１．５
ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．０００３；１ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．００１３）。統計的有意性は、
両側独立ｔ検定により決定した。

【0203】

図４は、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂ
Ａの投与による、パクリタキセルの抗腫瘍活性の増強を示す。（Ａ）平均腫瘍サイズが約
２８５ｍｍ^３に達したとき、皮下ＯＣＵＭ－２Ｍ異種移植片を有するＳＣＩＤマウスは、
アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ（５ｍｇ／ｋｇ）、パクリタキセル（１２ｍｇ／ｋｇ）、
又はこれら２つの組合せで処置された。パクリタキセルとアフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ
とを組合せることにより、αＦＧＦＲ２ｂＡ又はパクリタキセル単独の何れかと比較して
、腫瘍サイズが低下した。（Ｂ）αＦＧＦＲ２ｂＡ／パクリタキセルの組合せ療法は、パ
クリタキセル（ｐ＝０．０００５）又はαＦＧＦＲ２ｂＡ（ｐ＝０．０００９）単独の何
れかと比較して、最終的なＯＣＵＭ－２Ｍ腫瘍サイズを有意に低下させた。統計的有意性
は、両側独立ｔ検定により決定した。

【0204】

図５は、ＯＣＵＭ－２Ｍ胃がん異種移植モデルにおける、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂ
Ａの投与による、シスプラチン／５－ＦＵの抗腫瘍活性の増強を示す。（Ａ）平均腫瘍サ
イズが約２６０ｍｍ^３に達したとき、皮下ＯＣＵＭ－２Ｍ異種移植片を有するＳＣＩＤマ
ウスは、アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ（５ｍｇ／ｋｇ）、フルオロウラシル（５－ＦＵ
）並びにシスプラチン（それぞれ、２．３及び３３ｍｇ／ｋｇ）、又はこれら３つの組合
せで処置された。５－ＦＵ／シスプラチンとアフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡとを組合せる
ことにより、αＦＧＦＲ２ｂＡ又は５－ＦＵ／シスプラチン単独の何れかと比較して、腫
瘍サイズが低下した。（Ｂ）αＦＧＦＲ２ｂＡ／５－ＦＵ／シスプラチン組合せ療法は、
５－ＦＵ／シスプラチンと比較して、最終的なＯＣＵＭ－２Ｍ 腫瘍サイズを有意に低下
させた（ｐ＝０．０００３）。αＦＧＦＲ２ｂＡ／５－ＦＵ／シスプラチン組合せ療法に
よる、αＦＧＦＲ２ｂＡ単独に比較した、腫瘍サイズの更なる低下は、顕著であったが、
統計的に有意ではなかった。統計的有意性は、両側独立ｔ検定により決定した。

【0205】

図６は、ＭＦＭ－２２３ヒト乳がん異種移植モデルにおける、αＦＧＦＲ２ｂＡの有効
性を示す。（Ａ）ＦＧＦＲ２増幅を有するＭＦＭ－２２３ヒト乳癌細胞株は、ＳＣＩＤマ
ウスの皮下に移植され、平均腫瘍サイズが約８０ｍｍ^３に達したとき、アフコシル化αＦ
ＧＦＲ２ｂＡ療法が開始された。アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ（５ｍｇ／ｋｇ）は、ア
ルブミンコントロール（５ｍｇ／ｋｇ）と比較して、ＭＦＭ－２２３腫瘍の成長を著しく
に低下させた。（Ｂ）アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡは、アルブミンコントロールと比較
して、最終的なＭＦＭ－２２３腫瘍サイズを有意に低下させた（ｐ＝０．０００８）。統
計的有意性は、両側独立ｔ検定により決定した。

【0206】

実施例５：アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体は、フコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体より高
いＡＤＣＣを媒介する。
αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体対αＦＧＦＲ２ｂＦ抗体のＡＤＣＣ活性を決定するために、イン
ビトロアッセイが実施された。Ｂａ／Ｆ３ ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現標的細胞は上記のよ
うに生成された。ＯＣＵＭ－２Ｍ細胞は、大阪市立大学（大阪、日本）より取得した。全
ての細胞は、一般的な方法を使用して培養された。健常ドナーから単離されたばかりのＰ
ＭＢＣは、ＡｌｌＣｅｌｌｓ（Emeryville, CA）から取得された。

【0207】

ＡＤＣＣアッセイは、単離されたばかりのヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用
し、エフェクター対標的（Ｅ／Ｔ）細胞比２５：１で、実施された。標的細胞は、エフェ
クター存在下かつ抗体濃度が増加していく条件下で、１６時間インキュベートされた。全
ての条件は、三重試験（トリプリケート）で実施された。細胞傷害性は、製造業者の推奨
（Promega’s CytoTox Non-Radioactive Cytotoxicity Assay）に従って、ＬＤＨ放出の
定量により、決定された。ＯＣＵＭ－２Ｍ細胞について、最大溶解は、５％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ－１００の存在下で決定され、自然放出は、抗体の非存在下で決定された。特異的溶解
のパーセンテージは、自然放出を差し引いた最大溶解のパーセンテージとして、以下のよ
うに算出された：（実験値－自然放出）／（最大値－自然放出）×１００＝特異的溶解（
％）GraphPad software curve-fitting analysisを使用し、ＥＣ５０値を取得した。

【0208】

Ｂａ／Ｆ３細胞についての結果を図９に示す。アフコシル化αＦＧＦＲ２ｂＡ抗体は、
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現Ｂａ／Ｆ３細胞において、フコシル化αＦＧＦＲ２ｂＦ抗体より
高い力価（低い濃度での、より高いＡＤＣＣ活性）を示した。ＯＣＵＭ－２Ｍ細胞につい
ての同様の結果は、図１０に示される。表４は、図９及び１０に示される、異なる２つの
細胞株における、フコシル化ＦＧＦＲ２ｂ抗体と比較した、アフコシル化抗ＦＧＦＲｂ抗
体の力価の増加倍数を示す。

【0209】

実施例６：腫瘍組織における、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質の免疫組織化学的検出
ＧＡＬ－ＦＲ２１のマウス可変領域（米国特許第８１０１７２３号を参照）及びマウス
ＩｇＧ２ａ定常領域を含む、マウスαＦＧＦＲ２ｂ抗体が、ホルマリン固定パラフィン包
埋（ＦＦＰＥ）胃ガン組織においてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質を検出するために用い
られた。ＦＦＰＥ腫瘍組織は、一連のキシレン洗浄、及び、濃度を段階的に下げた一連の
エタノール洗浄によりパラフィンを除去し、水で５分間再水和した。スライドにマウント
された組織切片は、０．１ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）に浸漬され、１５分間
、９５o～９９oＣに加熱された。組織切片は、冷却され、室温で５分間３％Ｈ_２Ｏ_２と接
触せしめられ、そして、ＴＢＳＴ（０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０
５％Ｔｗｅｅｎ２０）で２回洗浄され、室温で３０分間ブロッキングバッファー（２．５
％正常ウマ血清含有ＴＢＳＴ）でブロックされた。組織切片は、そして、ブロッキングバ
ッファー中の５μｇ／ｍｌ αＦＧＦＲ２ｂ抗体と、室温で３０分間インキュベートされ
た。３０分から２時間のインキュベーション時間により同様の染色強度が得られた。ＴＢ
ＳＴバッファーでの３回の洗浄に続き、組織切片は、ブロッキングバッファー(Vector La
boratories, Burlingame, CA; Cat. No. PK-7200)に希釈した調製済み（ＲＴＵ）ビオチ
ン価ウマ二次抗体（１０μｇ／ｍｌ）と、室温で３０分インキュベートされた。組織切片
は、ＴＢＳＴバッファーで２回洗浄され、そして、ストレプロアビジン－西洋ワサビパー
オキシダーゼ（HRP; Vector Laboratories, Cat. No. PK-7200）と室温で３０分インキュ
ベートされた。検出は、３’，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）基質（Vector Labor
atories, Cat. No. PK-4105）を使用して、製造業者の説明書に従って、室温で１０分間
、実施された。組織切片は、その後、ヘマトキシリンを使用し、製造業者の説明書に従っ
て、対比染色された。組織切片は、段階的に濃度を段階的に上げたエタノール及びキシレ
ンの洗浄により脱水され、そして、カバーグラスでカバーされた。

【0210】

０．１から５ｍｇ／ｍｌのαＦＧＦＲ２ｂ抗体の染色濃度が、タンパク質検出のために
特に効果的であった。

【0211】

染色は、以下のようにスコア付けされた：
０ αＦＧＦＲ２ｂ抗体による染色は観察されない。
１＋ 試料において、αＦＧＦＲ２ｂ抗体による弱い染色が観察される。ネガティブ
コントロール抗体で染色された対応切片においては、染色は観察されない。
２＋ αＦＧＦＲ２ｂ抗体に特異的な膜－細胞質染色が、切片においてより広範囲に
観察される。
３＋ 染色された腫瘍細胞の少なくとも１のサブセットにおいて、明白な膜分布を伴
う、αＦＧＦＲ２ｂ抗体での強く特異的な染色が観察される。

【0212】

図１１は、腫瘍組織の例示的な０（Ａ）、１＋（Ｂ、Ｃ）、２＋（Ｄ）、及び３＋（Ｅ
、Ｆ）の染色を示す。図１１Ａにおいて、管細胞及び散在腫瘍細胞は、αＦＧＦＲ２ｂ抗
体を使用した染色がないことを示す。間質性胃腫瘍試料を示す図１１Ｂにおいて、腫瘍細
胞（矢印）は、αＦＧＦＲ２ｂ抗体を使用したいくつかの染色を示すが、周辺の管細胞は
染色を示さない。びまん性胃腫瘍試料を示す図１１Ｃにおいて、腫瘍細胞（矢印）は、α
ＦＧＦＲ２ｂ抗体を使用したいくらかの染色を示すが、周辺の間質細胞（矢じり）は染色
を示さない。図１１Ｄにおいて、腫瘍細胞（矢印）は、αＦＧＦＲ２ｂ抗体を使用した中
程度の染色を示すが、周辺の間質細胞（矢じり）は染色を示さない。図１１Ｅにおいて、
腫瘍細胞（矢印）は、αＦＧＦＲ２ｂ抗体を使用した高い膜分布染色を示すが、周辺の間
質細胞（矢じり）は染色を示さない。図１１Ｆにおいて、腫瘍細胞（矢印）は、αＦＧＦ
Ｒ２ｂ抗体を使用した高い膜／細胞質染色を示すが、周辺の間質細胞（矢じり）は染色を
示さない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

2023018049000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2022-12-08

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

複数の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物であって、
各抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、
重鎖可変領域が
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ
軽鎖可変領域が
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、
組成物中の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されている、
組成物。