特開 2023-180635 胆道がんの検出キット、胆道がんの予後予測キットおよびその利用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023180635

(43)【公開日】2023-12-21

(54)【発明の名称】胆道がんの検出キット、胆道がんの予後予測キットおよびその利用

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/6886 20180101AFI20231214BHJP

   C12Q 1/6874 20180101ALI20231214BHJP

   C12Q 1/686 20180101ALI20231214BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20231214BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20231214BHJP

【ＦＩ】

C12Q1/6886 Z ZNA

C12Q1/6874 Z

C12Q1/686 Z

G01N33/50 P

C12N15/11 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】8

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022094095

(22)【出願日】2022-06-10

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 掲載者名：日本消化器病学会、掲載物名：第１０８回日本消化器病学会総会抄録 ウェブサイト （ｈｔｔｐｓ：／／ｋｃｏｎ．ｅｘｐｃｐ．ｊｐ／１０８ｊｓｇｅ／）、（ｈｔｔｐｓ：／／ｋｃｏｎ．ｅｘｐｃｐ．ｊｐ／１０８ｊｓｇｅ／ｓｐ／）、掲載年月日：令和４年３月３０日 〔刊行物等〕掲載者名：日本消化器病学会、掲載物名：日本消化器病学会雑誌 第１１９巻 臨時増刊号 第１０８回総会抄録集、発送年月日：令和４年４月１日 〔刊行物等〕学会名：第１０８回日本消化器病学会総会、開催年月日：令和４年４月２３日（学会開催期間：令和４年４月２１日～４月２３日）、開催場所：京王プラザホテル（東京都新宿区西新宿２－２－１）、オンライン 〔刊行物等〕学会名：第１０８回日本消化器病学会総会、オンデマンド配信年月日：令和４年４月２８日～５月３１日（学会開催期間：令和４年４月２１日～４月２３日）、開催場所：オンライン

(71)【出願人】

【識別番号】506218664

【氏名又は名称】公立大学法人名古屋市立大学

(71)【出願人】

【識別番号】504139662

【氏名又は名称】国立大学法人東海国立大学機構

(74)【代理人】

【識別番号】100179578

【弁理士】

【氏名又は名称】野村 和弘

(74)【代理人】

【識別番号】100195062

【弁理士】

【氏名又は名称】野村 涼子

(72)【発明者】

【氏名】吉田 道弘

(72)【発明者】

【氏名】田中 靖人

(72)【発明者】

【氏名】湯川 博

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

【Ｆターム（参考）】

2G045AA26

2G045CB30

2G045DA14

2G045FB02

4B063QA01

4B063QA18

4B063QA19

4B063QQ08

4B063QQ52

4B063QR08

4B063QR55

4B063QR62

4B063QS25

4B063QS34

4B063QX02

(57)【要約】

【課題】胆道がんの検出精度を向上させることができる技術を提供する。
【解決手段】胆道がんの検出キットは、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、胆汁を用いて胆道がんを検出する。
【選択図】図４

【特許請求の範囲】

【請求項1】

胆道がんの検出キットであって、
胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、
胆汁を用いて胆道がんを検出する、
胆道がんの検出キット。

【請求項2】

請求項１に記載の胆道がんの検出キットにおいて、
前記ポリヌクレオチドは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとのうちの少なくとも１つを含む、
胆道がんの検出キット。

【請求項3】

請求項２に記載の胆道がんの検出キットにおいて、
前記ポリヌクレオチドは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとの両方を含む、
胆道がんの検出キット。

【請求項4】

胆道がんの予後予測キットであって、
胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、
胆汁を用いて胆道がんの予後を予測する、
胆道がんの予後予測キット。

【請求項5】

胆道がんを検出するための胆道がん検出バイオマーカーであって、
胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つであり、
発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことを示す、
胆道がんを検出するための胆道がん検出バイオマーカー。

【請求項6】

胆道がんの予後を予測するための胆道がん予後予測バイオマーカーであって、
胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐであり、
発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることを示す、
胆道がんの予後を予測するための胆道がん予後予測バイオマーカー。

【請求項7】

胆道がんの検出を補助するための方法であって、
対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を検出することを含み、
前記発現量が多い場合に、前記発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことが示される、方法。

【請求項8】

胆道がんの予後を予測するための方法であって、
対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を検出することを含み、
前記発現量が多い場合に、前記発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることが示される、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、胆道がんの検出キットおよび胆道がんの予後予測キットに関する。

【背景技術】

【0002】

従来から、胆道内の病変に対する診断の難しさは、臨床上深刻な問題となっている。胆道は太さ１０ｍｍにも満たず、内視鏡的逆行性胆管膵管造影（ＥＲＣＰ）における生検やブラシ擦過によって得られる胆道病変の検体は微小であり、病変を正しく採取できていない場合も多い。例えば、非特許文献１の記載によれば、胆管がんでは、病変の内視鏡的ブラシ擦過細胞診の感度は３０％～５０％であり、胆管生検の感度も６０％に過ぎない。このように、胆道がんの診断は、病理学的診断が不確実であることから、現状ではＥＲＣＰを中心とした画像診断に頼らざるを得ず、確定診断に至らないことも多い。ここで、近年、リキッドバイオプシー研究として、血清に注目した研究や臨床応用が進められつつある。例えば、特許文献１には、血液中のマイクロＲＮＡを用いて、胆道がんを検出する技術が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特許第６９２７７０１号公報

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Navaneethan U. et al., Gastrointest Endosc. 2015; 81(1): 168‐176.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

胆道がんにおいて、血液中エクソソーム内のマイクロＲＮＡを用いたリキッドバイオプシーは、他がん種と比べて十分ではない。このことについて、胆道がんが胆汁に暴露された環境で育つため、他がん種とは異なる微小環境が形成され得ることが一因であると、本願発明者らは考えた。そして、特許文献１の技術によれば、大循環血液中に移行するエクソソーム成分を解析するため、胆汁に暴露された環境で育つ胆道がんのバイオマーカーとして十分ではない可能性があることを、本願発明者らは見出した。このため、胆道がんの検出精度を向上できる技術が求められる。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、以下の形態として実現することが可能である。

【0007】

（１）胆道がんの検出キットであって、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、胆汁を用いて胆道がんを検出する、胆道がんの検出キット。この形態の胆道がんの検出キットによれば、胆汁を用いて胆道がんを検出できるので、胆道がんの検出精度を向上させることができる。

【0008】

（２）上記（１）に記載の胆道がんの検出キットにおいて、前記ポリヌクレオチドは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとのうちの少なくとも１つを含む、胆道がんの検出キット。この形態の胆道がんの検出キットによれば、胆道がんの検出精度をより向上させることができる。

【0009】

（３）上記（１）または（２）に記載の胆道がんの検出キットにおいて、前記ポリヌクレオチドは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとの両方を含む、胆道がんの検出キット。この形態の胆道がんの検出キットによれば、胆道がんの検出精度をさらに向上させることができる。

【0010】

（４）胆道がんの予後予測キットであって、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、胆汁を用いて胆道がんの予後を予測する、胆道がんの予後予測キット。この形態の胆道がんの予後予測キットによれば、胆汁を用いて胆道がんの予後を予測できるので、胆道がんの予後予測精度を向上させることができる。

【0011】

（５）胆道がんを検出するための胆道がん検出バイオマーカーであって、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つであり、発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことを示す、胆道がんを検出するための胆道がん検出バイオマーカー。

【0012】

（６）胆道がんの予後を予測するための胆道がん予後予測バイオマーカーであって、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐであり、発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることを示す、胆道がんの予後を予測するための胆道がん予後予測バイオマーカー。

【0013】

（７）胆道がんの検出を補助するための方法であって、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を検出することを含み、前記発現量が多い場合に、前記発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことが示される、方法。

【0014】

（８）胆道がんの予後を予測するための方法であって、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を検出することを含み、前記発現量が多い場合に、前記発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることが示される、方法。

【0015】

なお、本発明は、種々の形態で実現することが可能である。例えば、胆汁を用いて胆道がんを検出するデバイス、胆汁を用いて胆道がんの予後を予測するデバイス、胆道がんの診断を補助するための方法、胆道がんの診断方法、胆道がんの治療方法、胆道がんの治療効果判定バイオマーカー等の形態で実現することができる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】胆汁と血清とにおいて回収されたＲＮＡ量を比較して示す説明図。

【図2】ｍｉＲ－４５１ａの発現に関するＲＯＣ曲線を示す図。

【図3】ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現に関するＲＯＣ曲線を示す図。

【図4】ｍｉＲ－４５１ａとｍｉＲ－３６１９－３ｐとの発現に関するＲＯＣ曲線を示す図。

【図5】ＣＥＡの発現に関するＲＯＣ曲線を示す図。

【図6】ＣＡ１９－９の発現に関するＲＯＣ曲線を示す図。

【図7】ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現に関する生存曲線解析の結果を示す説明図。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本開示の一実施形態によれば、胆道がんの検出キットが提供される。この胆道がんの検出キットは、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、胆汁を用いて胆道がんを検出することを特徴とする。

【0018】

本願発明者は、後述の実施例に示されるように、胆汁のエクソソームに含まれる上記マイクロＲＮＡの発現量が、胆道がん患者と非がん患者とにおいて差があることを見出し、本発明を確立するに至った。

【0019】

胆汁は、対象から採取される。本明細書における「対象」には、哺乳動物が含まれる。この哺乳動物としては、特に限定されないが、例えば、ヒトやサル、チンパンジー等の霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、ウシ、ウマ等が挙げられる。

【0020】

本明細書において、「胆道がん（Biliary tract cancer：ＢＴＣ）」とは、胆道において形成される全ての悪性腫瘍を意味し、細胞の制御不能な増殖を特徴とする。より具体的には、例えば、肝門部胆管がん、胆嚢がん、遠位胆管がん、肝外胆管がん、乳頭部がん、十二指腸乳頭部がんおよび肝内胆管がん等が含まれる。

【0021】

マイクロＲＮＡ（以下、「ｍｉＲＮＡ」とも呼ぶ）は、約１８～２５塩基程度のノンコーディングＲＮＡであり、例えば、標的となるｍＲＮＡに結合することで、そのタンパク質への翻訳を阻害する。

【0022】

ｍｉＲ－３６１９－３ｐには、配列番号１で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－３６１９－３ｐが含まれる。ｍｉＲ－４５１ａには、配列番号２で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－４５１ａが含まれる。ｍｉＲ－１６－５ｐには、配列番号３で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－１６－５ｐが含まれる。ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐには、配列番号４で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐが含まれる。ｍｉＲ－２３ａ－３ｐには、配列番号５で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－２３ａ－３ｐが含まれる。ｍｉＲ－４３０６には、配列番号６で示されるｈｓａ－ｍｉＲ－４３０６が含まれる。

【0023】

標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドには、そのマイクロＲＮＡの塩基配列の相補配列を含むポリヌクレオチド、そのマイクロＲＮＡの塩基配列の相補配列との同一性が９０％以上である塩基配列を含むポリヌクレオチド、そのマイクロＲＮＡの塩基配列の相補配列において１～数個の塩基が欠失、置換または付加されている塩基配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。また、標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドには、そのマイクロＲＮＡにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが含まれる。

【0024】

「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成される一方で、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。ストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーションの条件とその後の洗浄の条件とによって規定される。ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、３～１０×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成：０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）および０．１～１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を含有する溶液中３０～６０℃にて１～２４時間の条件等が該当する。ハイブリダイゼーション後の洗浄条件としては、例えば、０．５×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳとを含む３０℃の溶液、０．２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳとを含む３０℃の溶液、および０．０５×ＳＳＣを含む３０℃の溶液による連続した洗浄等の条件が該当する。

【0025】

標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドは、化学修飾を有していてもよい。また、標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびＲＮＡ／ＤＮＡ（キメラ）のいずれの形態であってもよい。ＲＮＡの形態としては、例えば、天然由来のＲＮＡや合成ＲＮＡ等の形態が挙げられる。ＤＮＡの形態としては、例えば、ｃＤＮＡ等の形態が挙げられる。また、標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドは、プローブやプライマーであってもよい。また、標的とするマイクロＲＮＡに特異的に結合可能なポリヌクレオチドは、任意の固相に固定化された態様であってもよい。例えば、プローブを固定したＲＮＡチップ、ＤＮＡチップ、ｃＤＮＡマイクロアレイ、オリゴＤＮＡアレイ、メンブレンフィルター等の態様によって実現されてもよい。

【0026】

標的とするマイクロＲＮＡには、ｍｉＲ－３６１９－３ｐとｍｉＲ－４５１ａとのうちの少なくとも１つが含まれることが好ましい。このため、胆道がんの検出キットは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとのうちの少なくとも一方を含むことが好ましい。また、標的とするマイクロＲＮＡには、ｍｉＲ－３６１９－３ｐとｍｉＲ－４５１ａとの両方が含まれることがより好ましい。このため、胆道がんの検出キットは、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドと、ｍｉＲ－４５１ａに対して特異的に結合可能なポリヌクレオチドとの両方を含むことがさらに好ましい。このような構成により、胆道がんの検出精度をより向上させることができる。

【0027】

胆道がんの検出キットには、胆汁からエクソソームを分離するための試薬やデバイス、エクソソームからマイクロＲＮＡを抽出するための試薬やデバイス等が含まれていてもよい。また、胆道がんの検出キットには、標識用蛍光物質、核酸増幅用酵素、緩衝液、使用説明書等が含まれていてもよい。

【0028】

本開示における胆道がんの検出キットを用いることにより、胆汁に含まれるバイオマーカーとしてのマイクロＲＮＡの発現量を指標として、胆道がんを検出することができる。このため、例えば、胆道がんに関する診断を補助することができ、胆道がんの診断精度を高めることができる。したがって、例えば、画像上において胆道狭窄が認められて胆道がんが疑われる対象者や、胆石、慢性胆嚢炎、原発性硬化性胆管炎、膵胆管合流異常症等、胆道がんのリスクがある対象者等への胆道がんのスクリーニングに用いることができる。

【0029】

後述する実施例に示されるように、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つは、胆道がんを検出するための胆道がん検出バイオマーカーとして利用できる。これらのバイオマーカーは、発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことを示す。発現量は、所定のカットオフ値等の基準値との比較であってもよく、同じ対象において互いに異なる時期に採取した胆汁における値との比較であってもよい。カットオフ値は、例えば、感度、特異度等に基づいて適宜設定してもよく、ＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎインデックスを用いて決定してもよい。カットオフ値は、例えば、胆道がん症例群における上記マイクロＲＮＡ発現量の平均値や中央値、第１四分位値、最小値等であってもよく、非胆道がん症例群における上記マイクロＲＮＡ発現量の第３四分位値、最大値等であってもよい。より具体的には、例えば、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれる上記マイクロＲＮＡの発現量がカットオフ値以上である場合に、胆道がんである可能性が高いことを示してもよい。また、例えば、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれる上記マイクロＲＮＡの発現量の相対値が、非胆道がん症例群における上記マイクロＲＮＡ発現量の平均値や中央値等を基準として１とした場合に、２以上、３以上、４以上、５以上、１０以上等である場合に、胆道がんである可能性が高いことを示してもよい。

【0030】

胆汁のエクソソームに含まれる上記マイクロＲＮＡを胆道がん検出バイオマーカーとして利用することにより、胆道がんの検出能を高めることができる。ここで、がんのマーカーとして一般に知られている血清中ＣＥＡは、感度が低いため、陰性の場合であっても、がんの可能性を除外できないという問題がある。また、がんのマーカーとして一般に知られている血清中ＣＡ１９－９は、がんに限らず結石の場合においても発現量が上昇するため、鑑別診断が困難であるという問題がある。これに対し、本開示によれば、胆汁のエクソソームに含まれる上記マイクロＲＮＡを胆道がん検出バイオマーカーとして利用することにより、胆道がんの検出能を高めることができる。この結果として、胆道がんに関する診断を補助することができ、また、胆道がんに関する診断精度を高めることができる。

【0031】

本開示の他の実施形態によれば、胆道がんの検出を補助するための方法が提供される。この方法は、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を検出することを含む。そして、そのマイクロＲＮＡの発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことが示される。本明細書において、「マイクロＲＮＡの発現量を検出する」とは、マイクロＲＮＡを定量することに限らず、マイクロＲＮＡの発現レベルを検出することも含む。

【0032】

この方法は、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を検出する工程（検出工程）と、マイクロＲＮＡの発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いと判定する工程（判定工程）と、を含んでいてもよい。ただし、判定工程は、ヒトに対する医療行為を除くものであり、胆道がんの検出を補助するためのものである。

【0033】

また、この方法は、上記検出工程の前に、対象から採取された胆汁を準備する工程（準備工程）を含んでいてもよい。準備工程は、例えば、内視鏡的逆行性胆管膵管造影（ＥＲＣＰ）を実施する際に、カテーテルを用いて胆管内から胆汁を吸引採取する工程であってもよい。また、上記検出工程の前に、胆汁からエクソソームを分離する工程（分離工程）を含んでいてもよい。分離工程では、例えば、ナノ多孔質ガラスデバイス等のエクソソーム分離キットを用いてもよく、超遠心法、密度勾配遠心法、アフィニティーカラム法等の任意の分離方法を用いてもよい。また、上記検出工程の前に、エクソソームからマイクロＲＮＡを抽出する工程（抽出工程）を含んでいてもよい。抽出工程は、例えば、ｍｉＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｓｅｒｕｍ／Ｐｌａｓｍａ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）等のキットを用いて行ってもよく、酸性フェノール法（Acid Guanidinium-Phenol-Chloroform（ＡＧＰＣ）法）等を用いて行ってもよい。

【0034】

検出工程は、上述の胆道がん検出キットを用いて行うことができる。検出工程では、例えば、ハイブリダイゼーション技術、定量増幅技術、シークエンサー等を利用して行われてもよい。ハイブリダイゼーション技術としては、例えば、ＤＮＡチップ解析、ノーザンブロット法、サザンブロット法、ｉｎ ｓｉｔｕ ハイブリダイゼーション法、ノーザンハイブリダイゼーション法、サザンハイブリダイゼーション法等が挙げられる。定量増幅技術としては、例えば、定量ＲＴ－ＰＣＲ法等が挙げられる。シークエンサーとしては、例えば、サンガー法に基づく第１世代シークエンサーや、次世代シークエンサー等が挙げられる。

【0035】

判定工程における発現量の比較は、所定のカットオフ値等の基準値との比較であってもよく、同じ対象において互いに異なる時期に採取した胆汁における値との比較であってもよい。カットオフ値は、例えば、感度、特異度等に基づいて適宜設定してもよく、ＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎインデックスを用いて決定してもよい。基準値は、例えば、胆道がん症例群における上記マイクロＲＮＡ発現量の平均値や中央値、第１四分位値、最小値等であってもよく、非胆道がん症例群における上記マイクロＲＮＡ発現量の第３四分位値、最大値等であってもよい。判定工程では、例えば、マイクロＲＮＡの発現量が所定のカットオフ値以上である場合に、胆道がんである可能性が高いと判定してもよい。また、例えば、マイクロＲＮＡの発現量が所定のカットオフ値未満である場合に、胆道がんである可能性が低いと判定してもよい。

【0036】

判定工程において胆道がんである可能性が高いと判定された場合、医師は、その対象が胆道がんに罹患していると診断して、対象に対して胆道がんの治療薬を有効量投与する等、化学療法等の治療を行うこととしてもよい。このため、本開示の他の実施形態によれば、胆道がんを診断および治療する方法が提供される。この方法は、対象から採取された胆汁を準備する工程（準備工程）と、前記胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６からなる群より選ばれる少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を検出する工程（検出工程）と、前記マイクロＲＮＡの発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いと判定する工程（判定工程）と、前記可能性が高いと判定された場合に、前記対象が胆道がんであると診断する工程（診断工程）と、前記診断された患者に対して胆道がんの治療薬投与を決定する工程（決定工程）と、を含む。

【0037】

決定工程では、例えば、ＧＥＭ（ゲムシタビン）を単独で投与することとしてもよく、ＧＥＭとＣＤＤＰ（シスプラチン）とを併用して投与することとしてもよく、ＧＥＭとＳ－１（テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤）とを併用して投与することとしてもよく、Ｓ－１を単独で投与することとしてもよい。ＧＥＭを単独で投与する場合、例えば、投与量１０００ｍｇ／ｍ^２、投与時間３０分間、４週間１コースとしてＤａｙ１、８、１５に点滴静注してもよい。ＧＥＭとＣＤＤＰとを併用して投与する場合、例えば、ＧＥＭ投与量１０００ｍｇ／ｍ^２、ＧＥＭ投与時間３０分間、ＣＤＤＰ投与量２５ｍｇ／ｍ^２、ＣＤＤＰ投与時間９０分間、３週間１コースとしてＤａｙ１、８に点滴静注してもよい。ＧＥＭとＳ－１とを併用して投与する場合、例えば、ＧＥＭを、投与量１０００ｍｇ／ｍ^２、投与時間３０分間で、３週間１コースとしてＤａｙ１、８に点滴静注し、Ｓ－１を、投与量６０ｍｇ／ｍ^２／日を朝夕２回に分けて、３週間１コースとしてＤａｙ１～１４に経口投与してもよい。Ｓ－１を単独で投与する場合、例えば、投与量６０ｍｇ／ｍ^２／日を朝夕２回に分けて、６週間１コースとしてＤａｙ１～２８に経口投与してもよい。

【0038】

本開示の他の実施形態によれば、胆道がんの予後予測キットが提供される。この胆道がんの予後予測キットは、胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐに対して、特異的に結合可能なポリヌクレオチドを含み、胆汁を用いて胆道がんの予後を予測することを特徴とする。

【0039】

本願発明者は、後述の実施例に示されるように、胆道がん患者の胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐについて、発現量が高い群では、発現量が低い群と比較して予後が悪い傾向があることを見出し、本発明を確立するに至った。本明細書において「予後」とは、がんの再発率、がんの再発までの期間、または生存率を意味し得る。再発には、原発巣での再発と転移後の再発とが挙げられる。再発率は、治療一定期間後の再発率であり得る。本明細書において「予後が悪い」とは、がんの悪性度が高く、病状が悪化する傾向にあることを意味する。

【0040】

ｍｉＲ－３６１９－３ｐに特異的に結合可能なポリヌクレオチドには、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの塩基配列の相補配列を含むポリヌクレオチド、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの塩基配列の相補配列との同一性が９０％以上である塩基配列を含むポリヌクレオチド、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの塩基配列の相補配列において１～数個の塩基が欠失、置換または付加されている塩基配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。また、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに特異的に結合可能なポリヌクレオチドには、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに、上述のようなストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが含まれる。また、ｍｉＲ－３６１９－３ｐに特異的に結合可能なポリヌクレオチドは、上述のように、化学修飾を有していてもよく、ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびＲＮＡ／ＤＮＡ（キメラ）のいずれの形態であってもよく、プローブやプライマーであってもよく、任意の固相に固定化された態様であってもよい。

【0041】

胆道がんの予後予測キットには、胆汁からエクソソームを分離するための試薬やデバイス、エクソソームからマイクロＲＮＡを抽出するための試薬やデバイス等が含まれていてもよく、標識用蛍光物質、核酸増幅用酵素、緩衝液、使用説明書等が含まれていてもよい。

【0042】

本開示における胆道がんの予後予測キットを用いることにより、胆汁に含まれるバイオマーカーとしてのｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を指標として、胆道がんにおける予後を予測することができる。このため、例えば、胆道がんの治療方針の決定を補助することができる。

【0043】

後述する実施例に示されるように、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐは、胆道がんの予後を予測するための胆道がん予後予測バイオマーカーとして利用できる。このバイオマーカーは、発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることを示す。発現量は、例えば、所定の基準値との比較であってもよい。基準値は、例えば、感度、特異度等に基づいて適宜設定してもよく、ＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎインデックスを用いて決定してもよい。また、基準値は、例えば、胆道がん症例群におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の平均値や中央値、第１四分位値、最小値等であってもよく、非胆道がん症例群におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の第３四分位値、最大値等であってもよい。より具体的には、例えば、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が基準値以上である場合に、胆道がんの予後が悪い可能性があることを示してもよい。また、例えば、胆道がん症例群におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の平均値や中央値等を基準として１とした場合に、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量の相対値が、２以上、３以上、４以上、５以上等である場合に、胆道がんの予後が悪い可能性があることを示してもよい。

【0044】

また、基準値は、例えば、胆道がん症例群のうち予後の悪い患者におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の平均値や中央値、第１四分位値、最小値等であってもよく、胆道がん症例群のうち予後の良い患者におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の平均値や中央値、第３四分位値、最大値等であってもよい。ここで、基準値の選択に際して胆道がん患者の予後が良いか悪いかに関しては、医師により予め決定することができる。予後が良いか悪いかに関しては、例えば、無再発生存期間の長さや生存期間の長さ等により決定することができる。例えば、その期間の長さが、２００日以上、４００日以上、６００日以上、８００日以上、１０００日以上である患者を予後の良い患者と決定することができ、それ未満の患者を予後が悪い患者と決定することができる。

【0045】

胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐを胆道がん予後予測バイオマーカーとして利用することにより、胆道がんの予後を予測することができる。この結果として、胆道がんの治療方針の決定を補助することができる。

【0046】

本開示の他の実施形態によれば、胆道がんの予後を予測するための方法が提供される。この方法は、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を検出することを含む。そして、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があることが示される。

【0047】

この方法は、対象から採取された胆汁のエクソソームに含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を検出する工程（検出工程）と、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんの予後が悪い可能性があると判定する工程（判定工程）と、を含んでいてもよい。ただし、判定工程は、ヒトに対する医療行為を除くものであり、胆道がんの予後を予測するためのものである。

【0048】

また、この方法は、上記検出工程の前に、上述のような、対象から採取された胆汁を準備する工程（準備工程）を含んでいてもよい。また、上記検出工程の前に、上述のような、胆汁からエクソソームを分離する工程（分離工程）を含んでいてもよく、エクソソームからマイクロＲＮＡを抽出する工程（抽出工程）を含んでいてもよい。検出工程は、上述の胆道がん予後予測キットを用いて行うことができる。検出工程では、上述のような、ハイブリダイゼーション技術、定量増幅技術、シークエンサー等を利用してｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を検出してもよい。

【0049】

判定工程における発現量の比較は、例えば、所定の基準値との比較であってもよい。基準値は、例えば、感度、特異度等に基づいて適宜設定してもよく、ＲＯＣ曲線のＹｏｕｄｅｎインデックスを用いて決定してもよい。また、基準値は、例えば、胆道がん症例群におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の平均値や中央値、第１四分位値、最小値等であってもよく、非胆道がん症例群におけるｍｉＲ－３６１９－３ｐ発現量の第３四分位値、最大値等であってもよい。判定工程では、例えば、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が所定の基準値以上である場合に、予後が悪い可能性が高いと判定してもよい。また、例えば、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が所定の基準値未満である場合に、予後が悪い可能性が低いと判定してもよい。

【実施例0050】

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【0051】

１．検体および方法
胆道がん患者および非胆道がん患者から、それぞれ回収された胆汁および血清を検体として用いた。胆道がん患者の症例（以下、「がん症例（ＢＴＣ）」とも呼ぶ）には、肝門部胆管がん（ｐＣＣＡ：perihilar cholangiocarcinoma）、胆嚢がん（ＧＢＣ：gallbladder cancer）および遠位胆管がん（ｄＣＣＡ：distal cholangiocarcinoma）が含まれていた。非胆道がん患者の症例（以下、「非がん症例（Ｃｏｎｔｒｏｌ：ＣＴＲＬ）」とも呼ぶ）には、総胆管結石（ＣＢＤ ｓｔｏｎｅ：common bile duct stone）および乳頭括約筋機能異常症（ＳＯＤ：sphincter of Oddi dysfunction）が含まれていた。ＢＴＣは、４５例であり、ＣＴＲＬは、４３例であった。胆汁は、ＥＲＣＰにおいて、胆管内にカテーテルを挿入して、胆汁を１～５ｍｌ吸引回収した。回収した胆汁を、２，０００×ｇ、１０分間、室温で遠心処理した。その後、胆泥を除去した後、分注して－８０℃で保存した。各症例について、ＥＲＣＰ実施同日に採血を行い、１，５００×ｇ、５分間、室温で遠心処理することによって、血清を分離回収した。その後、分注して－８０℃で保存した。

【0052】

エクソソームの抽出には、ＡＧＣ株式会社製のナノ多孔質ガラスデバイスを用いた。まず、５００μＬの液体検体を０．２２μｍのフィルターで処理した後、そのうちの２００μＬを、ガラスフィルターを用いて６，０００×ｇで５分間、室温で遠心処理した。ガラスフィルターに捕捉されたエクソソーム中に含まれるＴｏｔａｌ ＲＮＡを、ｍｉＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｓｅｒｕｍ／Ｐｌａｓｍａ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて回収した。抽出したＲＮＡをバイオアナライザー（２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）で測定後、３Ｄ－Ｇｅｎｅ（登録商標）Ｈｕｍａｎ ｍｉＲＮＡ Ｏｌｉｇｏ Ｃｈｉｐ（東レ株式会社製）を用いて、２，６３２種類のｍｉＲＮＡを網羅的に解析した。

【0053】

Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙセットとして、がん症例１１例および非がん症例９例について、胆汁検体におけるマイクロＲＮＡの解析を行い、がん症例１０例および非がん症例８例について、血清検体におけるマイクロＲＮＡの解析を行った。また、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎセットとして、がん症例３４例および非がん症例３４例について、胆汁検体におけるマイクロＲＮＡの解析を行った。Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙセットにおける症例の内訳を、表１に示し、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎセットにおける症例の内訳を、表２に示す。なお、表中における「ＷＢＣ」は白血球数を示し、「ＣＲＰ」はＣ反応性タンパク値を示し、「Ｔ－Ｂｉｌ」は総ビリルビン値を示す。また、「ＣＥＡ」および「ＣＡ１９－９」は、それぞれ腫瘍マーカーの値を示し、「Ｓｔａｇｅ」は、ＵＩＣＣ 第８版に準拠した進行度の分類を示す。

【0054】

【表1】

【0055】

【表2】

【0056】

２．胆汁および血清から回収されたＲＮＡ量の確認
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙセットにおける胆汁検体（ｎ＝１８）と血清検体（ｎ＝１８）とについて、上記方法によって回収されたＲＮＡを定量した。

【0057】

図１は、胆汁と血清とにおいて回収されたＲＮＡ量を比較して示す説明図である。図１において、縦軸は、Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ濃度（ｎｇ／μＬ）を示している。この結果、胆汁検体からは、血清検体と比較して極めて高濃度のＲＮＡを回収でき、マン・ホイットニーのＵ検定において、Ｐ＜０．００１で有意差が認められた。したがって、胆汁のエクソソームに含まれるマイクロＲＮＡの解析は、血清のエクソソームに含まれるマイクロＲＮＡの解析と比較して、得られる情報量が多い可能性が示唆された。

【0058】

３．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙセットにおける抽出ｍｉＲＮＡ
がん症例および非がん症例の両群間において、発現量がｌｏｇ２換算で１以上の差を示すｍｉＲＮＡを抽出した。なお、ｌｏｇ２換算は、相対発現レベルを示しており、非がん症例よりもがん症例において発現量が大きい場合に正の値を示し、非がん症例よりもがん症例において発現量が小さい場合には負の値を示す。

【0059】

胆汁検体の解析では、以下の表３に示すように、２２種類のｍｉＲＮＡが抽出された。これに対し、血清検体の解析では、発現量がｌｏｇ２換算で１以上の差を示すｍｉＲＮＡは一つも抽出されなかった。例えば、以下の表４に示すように、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５１ａおよびｈｓａ－ｍｉＲ－３６１９－３ｐについて、血清検体では、がん症例と非がん症例とにおいて差が認められなかった。以上の結果から、胆汁由来のｍｉＲＮＡには、血清由来のｍｉＲＮＡと比較して、胆道がんに関して有用なバイオマーカーが含まれることが示唆された。

【0060】

【表3】

【0061】

【表4】

【0062】

４．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎセットにおける抽出ｍｉＲＮＡ
がん症例および非がん症例の両群間において、発現量がｌｏｇ２換算で１以上の差を示すｍｉＲＮＡを抽出した。Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎセットにおける胆汁検体の解析では、表５に示すように、２７種類のｍｉＲＮＡが抽出された。

【0063】

【表5】

【0064】

表５では、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙセットにおいても抽出されたｍｉＲＮＡを、太字で示している。これらのｍｉＲＮＡは、再現性の高いｍｉＲＮＡであるといえる。より具体的には、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５１ａ、ｈａｓ－ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｈａｓ－ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｈａｓ－ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｈａｓ－ｍｉＲ－４３０６の７種類のｍｉＲＮＡが、再現性の高いｍｉＲＮＡとして抽出された。このうち、ｍｉＲ－２１－５ｐは、他の固形がんにおいてｏｎｃｏｍｉＲ（oncogenic micro RNA）として知られているものである。このため、胆汁に含まれるｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６の６種類のｍｉＲＮＡは、胆道がんを検出するための新規のバイオマーカーとして有用であることが明らかとなった。すなわち、胆汁に含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４３０６は、発現量が多い場合に、発現量が少ない場合と比較して、胆道がんである可能性が高いことを示す、胆道がん検出バイオマーカーとして利用できることがわかった。

【0065】

ＤｉｓｃｏｖｅｒｙセットおよびＶａｌｉｄａｔｉｏｎセットにおいて抽出された４２種類のｍｉＲＮＡを、表６に示す。なお、「Accession No.」は、ｍｉＲＢａｓｅのアクセッション番号を示している。

【0066】

【表6】

【0067】

５．ＲＯＣ解析
Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎセットにおいて、胆道がんのＲＯＣ解析を行った。より具体的には、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａ＋ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現に関して、ＲＯＣ解析を行った。比較例として、血清検体における代表的な腫瘍マーカーとして知られるＣＥＡおよびＣＡ１９－９の発現に関して、ＲＯＣ解析を行った。これらの結果を、図２～図６にそれぞれ示す。なお、図２～図６において、縦軸は感度（陽性率）を示し、横軸は偽陽性率（１－特異度）を示している。また、ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ：area under the curve）、９５％信頼区間（ＣＩ）、感度（Sensitivity）および特異度（Specificity）を、表７に示す。

【0068】

【表7】

【0069】

図２～図６および表７に示す結果から、胆汁由来のｍｉＲ－４５１ａやｍｉＲ－３６１９－３ｐは、胆道がんを検出するためのバイオマーカーとして優れていることが示された。このため、胆汁に含まれるｍｉＲ－４５１ａやｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が高い場合には、ｍｉＲ－４５１ａやｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が低い場合と比較して、胆道がんに罹患している可能性が高いことが示された。

【0070】

また、胆汁におけるｍｉＲ－４５１ａとｍｉＲ－３６１９－３ｐとの両方の発現量を指標とした場合におけるＡＵＣは、０．８１９（９５％ＣＩ：０．６９２－０．９０２）であり、特に高い予測能を有することが認められた。このため、胆汁に含まれるｍｉＲ－４５１ａとｍｉＲ－３６１９－３ｐとの両方の発現量を指標とすることにより、胆道がんの検出能をより向上できることがわかった。

【0071】

６．生存曲線解析
胆道がんの４５症例について、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現値に関し、発現量の中央値を境として、発現量が高い群（Ｈｉｇｈ、n＝２２）と発現量が低い群（Ｌｏｗ、n＝２３）との２群に分け、生存曲線解析（ＯＳ解析）を行った。

【0072】

図７は、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現に関する生存曲線解析の結果を示す説明図である。図７では、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が高い群と低い群とについて、それぞれの群の生存率に関するカプランマイヤー曲線が示されている。図７では、発現量高値群を黒色の線で示し、発現量低値群を灰色の線で示している。図７において、縦軸は生存割合を示し、横軸は生存期間（日）を示し、ＨＲはハザード比（hazard ratio）を示し、ＭＳＴは生存期間の中央値（Median survival time）を示し、Ｐ値（P value）はログランク検定値を示している。

【0073】

図７に示すように、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が高い群の方が、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が低い群よりも、生存率が低い、すなわち予後が良くないことが示された（ＨＲ＝２．８９、９５％ＣＩ:１．２５－６．８６）。このため、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が高い場合には、ｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量が低い場合と比較して、予後が悪い可能性があることが示された。したがって、胆汁に含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐは、胆道がんを検出するためのバイオマーカーに加えて、胆道がんの予後を予測するためのバイオマーカーとしても有効であることがわかった。このため、胆汁に含まれるｍｉＲ－３６１９－３ｐの発現量を指標とすることにより、胆道がんの予後を予測できることがわかった。

【産業上の利用可能性】

【0074】

本開示によれば、胆汁のエクソソームに含まれるマイクロＲＮＡをバイオマーカーとして利用することにより、胆道がんを検出でき、また、胆道がんの予後を予測することができる。このため、胆道がんに関する診断を補助することができるので、胆道がんの診断精度を向上させることができる。したがって、例えば、画像上において胆道狭窄が認められて胆道がんが疑われる対象者や、胆石、慢性胆嚢炎、原発性硬化性胆管炎、膵胆管合流異常症等、胆道がんのリスクがある対象者への胆道がんのスクリーニングに用いることができる。また、例えば、手術胆道がん患者や切除不能胆道がん患者、抗がん剤治療中の胆道がん患者等に対して、胆道がんの予後を予測するために用いることができる。また、胆管ステント交換時に胆汁を採取して解析することにより、例えば、抗がん剤治療等の効果判定マーカーとして用いることが期待される。

【0075】

この発明は、上記発明の実施の形態および実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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