特開 2023-182639 移植用肝臓の機能評価方法、移植用肝臓の機能評価プログラムおよび移植用肝臓の機能評価装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023182639

(43)【公開日】2023-12-26

(54)【発明の名称】移植用肝臓の機能評価方法、移植用肝臓の機能評価プログラムおよび移植用肝臓の機能評価装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20231219BHJP

   G01N 27/62 20210101ALI20231219BHJP

   A61L 27/36 20060101ALN20231219BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

G01N27/62 D

A61L27/36 300

A61L27/36 100

A61L27/36 400

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023160143

(22)【出願日】2023-09-25

(62)【分割の表示】P 2021530638の分割

【原出願日】2020-07-01

(31)【優先権主張番号】P 2019126886

(32)【優先日】2019-07-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成３０年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、医療分野研究成果展開事業 先端計測分析技術・機器開発プログラム「移植用臓器の体外治療を可能にする潅流保存装置の開発と、メタボロミクスを用いた臓器潜在機能の客観的評価基軸の構築」委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願

(71)【出願人】

【識別番号】000001993

【氏名又は名称】株式会社島津製作所

(71)【出願人】

【識別番号】504132272

【氏名又は名称】国立大学法人京都大学

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】秦 浩一郎

(72)【発明者】

【氏名】宮内 英孝

(72)【発明者】

【氏名】藤分 秀司

(72)【発明者】

【氏名】樫原 稔

(72)【発明者】

【氏名】國光 健

(57)【要約】

【課題】移植用肝臓の移植の可否を客観的に評価する指標を提供する。
【解決手段】移植用肝臓の機能評価方法は、移植用肝臓の再灌流における第１のタイミングにおいて、移植用肝臓から第１サンプルを採取するステップと、再灌流における第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて、移植用肝臓から第２サンプルを採取するステップと、第１サンプルにおける複数の代謝物の含有量を測定するステップと、第２サンプルにおける複数の代謝物の含有量を測定するステップと、複数の代謝物の各々について、第１のタイミングに対する第２のタイミングでの含有量の変化を求めるステップと、灌流中の肝臓から採取されたサンプル中に含まれる複数の代謝物について灌流による含有量の時間変化を示す参照データと、変化を求めるステップにて求めた複数の代謝物の含有量の変化とを用いて、移植用肝臓の機能評価に関する指標を求めるステップとを備える。
【選択図】図１１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

生体内から摘出された移植用肝臓の機能評価方法であって、
前記移植用肝臓の再灌流における第１のタイミングにおいて、前記移植用肝臓から第１サンプルを採取するステップと、
前記再灌流における前記第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて、前記移植用肝臓から第２サンプルを採取するステップと、
前記第１サンプルにおける複数の代謝物の含有量を測定するステップと、
前記第２サンプルにおける前記複数の代謝物の含有量を測定するステップと、
前記複数の代謝物の各々について、前記第１のタイミングに対する前記第２のタイミングでの含有量の変化を求めるステップと、
灌流中の肝臓から採取されたサンプル中に含まれる前記複数の代謝物について灌流による含有量の時間変化を示す参照データと、前記変化を求めるステップにて求めた前記複数の代謝物の含有量の変化とを用いて、前記移植用肝臓の機能評価に関する指標を求めるステップとを備え、
前記複数の代謝物は、セドヘプツロース７－リン酸（Sedoheptulose 7-phosphate）、アデノシン３リン酸（Adenosine triphosphate）、グルコース－６－リン酸（Glucose-6-phosphate）、スクシニルＣｏＡ（Succinyl coenzyme A）、ジメチルグリシン（Dimethylglycine）、コリン（Choline）、２－アミノ酪酸（2-Aminobutyric acid）、尿酸（Uric acid）、ピルビン酸（Pyruvic acid）および、イノシン（Inosine）の少なくとも２つを含む、移植用肝臓の機能評価方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、移植用肝臓の機能評価方法、移植用肝臓の機能評価プログラムおよび移植用肝臓の機能評価装置に関する。

【背景技術】

【0002】

移植医療における慢性的な臓器不足を解消するための技術として、特開２０１８－１５４６１７号公報（特許文献１）には、移植のための臓器を、その機能を維持したまま長期間保存するための維持方法が開示される。特許文献１では、心停止後の臓器に、酸素運搬体および血液凝固阻害剤を含む灌流液を灌流させることによって、温虚血による組織障害を抑制し、心停止前の臓器に近い状態にまで回復させることを可能としている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特開２０１８－１５４６１７号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

従来の臓器移植では、移植のための臓器が移植可能な状態であるか否かの判断は、専ら移植外科医の経験（暗黙知）と迅速病理組織診断とに基づいている。移植外科医の暗黙知により移植可能と判断されながらも、本当は機能しない臓器を移植すれば、グラフト機能不全（Primary Non-Function：ＰＮＦ）に陥るおそれがある。特に、バイタルオーガン（Vital Organ）と称される心臓、肺および肝臓の移植後には、早急に再移植を行なわないと患者の死亡に繋がるおそれがある。

【0005】

このように従来法では、臓器の潜在的機能または不可逆的傷害度を判断するための客観的な判断基準が存在しないため、移植前に臓器適性を正確に判断することができず、その判断が経験豊富な移植外科医に任されていた。そのため、上記特許文献１に記載される技術によって機能を回復させた心停止後摘出臓器についても、ＰＮＦを考慮して最終的には移植不能と判断される場合があり、ドナー不足の解消に歯止めがかかることが懸念される。また移植されたとしても、ＰＮＦに起因してグラフトロス（Graft Loss）となり、患者を失うリスクは常に存在する。

【0006】

この発明はこのような課題を解決するためになされたものであって、その目的は、移植用肝臓の移植の可否を客観的に評価する指標を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明の第１の態様に係る移植用臓器の機能評価方法は、灌流による複数のマーカ物質の含有量の時間変化を示すデータを準備するステップと、移植用臓器の再灌流における第１のタイミングにおいて、移植用臓器から第１の組織サンプルを採取するステップと、再灌流における第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて、移植用臓器から第２の組織サンプルを採取するステップと、第１の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第２の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、複数のマーカ物質の各々について、第１のタイミングに対する第２のタイミングでの含有量の変化を求めるステップと、求めた含有量の変化とデータとを用いて、移植用臓器の機能評価に関する指標を求めるステップとを備える。

【発明の効果】

【0008】

本発明によれば、移植用臓器の移植の可否を客観的に評価する指標を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】肝臓の摘出から再灌流までの処理手順および、組織サンプルの取得タイミングを説明するための図である。

【図2】灌流回路の構成例を模式的に示す図である。

【図3】質量分析装置および評価装置の概略構成図である。

【図4】第１評価における評価基準を説明するための図である。

【図5】第２評価における評価基準を説明するための図である。

【図6】第２評価における評価基準を説明するための図である。

【図7】本実施の形態に係る肝臓グラフトの機能評価方法を説明するためのフローチャートである。

【図8】図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の手順を説明するためのフローチャートである。

【図9】図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の第１の変更例を説明するためのフローチャートである。

【図10】図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の第２の変更例を説明するためのフローチャートである。

【図11】図７のステップＳ２００に示す第２評価処理の手順を説明するためのフローチャートである。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、本発明の実施の形態について図面を参照して詳細に説明する。なお、以下では、図中の同一または相当部分について同一符号を付して、その説明が原則的に繰返さないものとする。

【0011】

［移植用臓器の機能評価方法の概要］
本実施の形態に係る移植用臓器の機能評価方法は、要約すると、移植用の臓器を質量分析することによって、予め指定されたマーカ物質についての定量的データを取得し、その取得した定量的データを、予め設定された評価基準に従って評価することにより、移植用の臓器が移植可能な状態であるか否かを判定するものである。

【0012】

以下では、最初に、本実施の形態に係る機能評価方法に用いる評価基準について説明する。続いて、当該評価基準を用いた機能評価方法について説明する。

【0013】

なお、本願明細書では、臓器の提供者（ドナー）となる哺乳動物として、ラットを用いる。また、移植用の臓器を肝臓とする。ただし、哺乳動物は、臓器を移植する対象であるレシピエントに応じて適宜選択することができ、ラット以外に、例えば、ヒト、ブタ、ウシ、サル、イヌ、ネコ等を適用することができる。これは、当該マーカ物質の定量的データを取得するために、メタボロミクス解析を用いているためである。オミックス解析のうち、メタボロミクス解析は低分子代謝物を解析対象とするが、低分子代謝物には種差がなく、また解糖系等の代謝経路の中にはほぼ全ての生物で共通である経路も存在しており、ラット等の動物実験の結果をヒト等の他種の研究に外挿しやすいことがすでに知られている（例えば、Aono, R., et al. A pentose bisphosphate pathway for nucleoside degradation in Archaea. Nature Chemical Biology, 11(5), 355-360 (2015)および、吉田他、「メタボローム解析による消化器がんの診断－メタボロミクスによる膵がんバイオマーカー探索－」、日本臨床検査医学会誌、63(4)：450-456を参照）。また、臓器には、肝臓以外に、例えば、心臓、腎臓、肺、膵臓、胃、小腸、大腸、精巣、卵巣、眼球などを適用することができる。

【0014】

（１）肝機能評価基準について
本願発明者らは、移植用の肝臓（以下、肝臓グラフトとも称する）の機能の評価基準を作成するために、肝機能の状態が異なる３種類の肝臓に対して共通の条件で灌流を行ない、各肝臓に含まれる代謝物の含有量を、質量分析を用いて測定した。測定では、肝臓の摘出後から再灌流までの過程において代謝物の含有量がどのように変化するのかを知るために、複数のタイミングで組織サンプルを採取し、質量分析を行なった。

【0015】

図１は、肝臓の摘出から再灌流までの処理手順および、組織サンプルの取得タイミングを説明するための図である。

【0016】

（１－１）組織サンプルの採取
試料には、Ｗｉｓｔａｒラットから摘出した肝臓を用いた。図１の例では、試料Ａは、Ｗｉｓｔａｒラットの生体内から摘出した正常肝（Normal liver）である。

【0017】

試料Ｂは、心停止肝（ＤＣＤ：Donor after circulatory death）である。試料Ｂは、Ｗｉｓｔａｒラットを心停止させた後１０分間静置して温虚血モデルを作成し、作成した温虚血モデルから摘出した肝臓である。

【0018】

試料Ｃは、心停止肝（ＤＣＤ）である。試料Ｃは、Ｗｉｓｔａｒラットを心停止させた後３０分間静置して温虚血モデルラットを作成し、作成した温虚血モデルラットから摘出した肝臓である。なお、試料Ａ、試料Ｂおよび試料Ｃを各々５個ずつ用意した。

【0019】

肝臓の摘出においては、肝臓の門脈に灌流液流入用カニューレを差し込み、肝臓の静脈に灌流液流出用カニューレを差し込み、胆管に胆汁流出用カニューレを差し込んだ。これらのカニューレを肝臓に固定した状態で、Ｗｉｓｔａｒラットから肝臓を摘出し、摘出した肝臓を保存容器内に収容した。

【0020】

ここで、試料Ｂと試料Ｃとは、心停止後から肝臓摘出までの時間が異なっている。この時間は、肝臓への血流が停止する「温虚血」の時間となる。温虚血状態の肝臓にはＡＴＰ（アデノシン３リン酸）の枯渇による細胞の膨化障害や老廃物の蓄積が生じる。そのため、移植が完了して肝臓に血流を再開させると、酸素化された灌流液によって老廃物が急速に代謝されることによって大量の活性酸素が生じ、結果的に肝臓障害を引き起こす場合がある。したがって、従来の肝移植では、温虚血状態が数分間続くと、移植不可能であると判断されている。この移植可否の判断は、専ら移植外科医の経験と病理組織学的知見とに基づいており、通常、温虚血状態が１０分間続いた肝臓は移植可能であると判断される。一方で、温虚血状態が３０分間続いた肝臓は移植不可能であると判断される。

【0021】

以下の説明では、温虚血状態が１０分間続いた心停止後肝を「軽度心停止後肝（Mild DCD）」とも称する。温虚血状態が３０分間続いた心停止後肝を「重度心停止後肝（Severe DCD）」とも称する。本実施の形態では、試料Ａ（正常肝）および試料Ｂ（軽度心停止後肝）は、機能が正常である肝臓に該当する。一方、試料Ｃ（重度心停止後肝）は機能が不良である肝臓に該当する。

【0022】

次に、試料Ａ～試料Ｃの各々について、肝臓の血管内の洗浄（フラッシュ）を行なった。洗浄には、生理食塩水を用いた。灌流液流入用カニューレを通じて生理食塩水を流入し、灌流液流出用カニューレを通じて生理食塩水を流出させた。流出した生理食塩水は灌流液流入用カニューレに循環させず、回収した。

【0023】

次に、洗浄後の肝臓にＵＷ液（University of Wisconsin solution）を流して血液をＵＷ液で置換させた後、ＵＷ液中に肝臓を浸漬させた状態で４時間冷保存した。この冷保存は、実際の医療現場において、ドナーから摘出した肝臓グラフトをレシピエントの元へ運搬する工程を想定したものである。冷保存の時間は、運搬に要する時間を最大限に見積もって４時間に設定した。この４時間は、遠隔地に発生した肝臓グラフトを使用する場合を考慮したものである。

【0024】

冷保存の終了後、肝臓を再加温することにより、肝臓の温度をＷｉｓｔａｒラットの体温程度（約３７℃）にまで戻した。再加温は１０分間行なった。

【0025】

次に、肝臓の温度を３７℃の状態に維持しながら、肝臓の再灌流を行なった。灌流液には、クレブスバッファー液を用いた。図２は、灌流回路の構成例を模式的に示す図である。図２を参照して、灌流回路は、保存容器１０と、灌流液リザーバ５０，６０と、灌流液流入経路２０と、灌流液流出経路３０と、ガス交換機構７０と、ポンプ２２とを有する。

【0026】

保存容器１０には、試料である肝臓１が収容されている。灌流液リザーバ５０，６０は、灌流液が貯留される容器である。灌流液リザーバ５０，６０には図示しない温度機構が接続される。温度機構は、灌流液リザーバ５０，６０内に貯留される灌流液を一定温度（約３７℃）に保つように構成される。

【0027】

灌流液流入経路２０は、保存容器１０内に設けられた灌流液流入用カニューレ１２に接続される。灌流液流入経路２０にはポンプ２２が介挿される。灌流液流出経路３０は、容器１０内に設けられた灌流液流出用カニューレ１４に接続される。

【0028】

灌流液流入経路２０は、ポンプ２２を用いて、灌流液リザーバ５０から灌流液流入用カニューレ１２を経由して、肝臓１に灌流液を供給する。このとき、灌流液の圧力が３～８ｍｍＨｇとなるように、図示しない制御部によってポンプ２２を制御する。

【0029】

肝臓１から流出した灌流液は、灌流液流出用カニューレ１４および灌流液流出経路３０を経由して、灌流液リザーバ６０に回収される。ガス交換機構７０は、灌流液リザーバ６０に貯留される灌流液に酸素等の気体を供給することによって気体を溶解させた後、灌流液を灌流液リザーバ５０に戻すように構成される。

【0030】

なお、図２では、灌流液を循環させる循環式の灌流回路の構成例を示したが、使用後の灌流液を循環させずに回収する構成としてもよい。再灌流の実行中に肝臓１の胆管から出力される胆汁は、胆汁流出用カニューレ４０を経由して、容器８０に回収される。

【0031】

以上説明した一連の工程の実行中において、試料ごとに、肝臓１から組織片を切り取ることにより、組織サンプルＳを採取した。図１には、組織サンプルを採取するタイミングＴ１～Ｔ４が示される。

【0032】

タイミングＴ１は、肝臓の洗浄後であって冷保存前のタイミングに設定される。タイミングＴ２は冷保存直後のタイミングに設定される。すなわち、タイミングＴ１，Ｔ２は、冷保存前後にそれぞれ設定されている。

【0033】

タイミングＴ３は、再灌流初期に設定される。再灌流初期とは、肝機能が回復しつつある期間である。図１の例では、タイミングＴ３は、再灌流開始から１５分後となるタイミングに設定されている。

【0034】

タイミングＴ４は、再灌流後期に設定される。再灌流後期とは、肝機能の回復がピークとなる期間である。図１の例では、タイミングＴ４は、再灌流開始から６０分後となるタイミングに設定されている。すなわち、タイミングＴ３，Ｔ４は、再灌流中であって、肝機能の状態が互いに異なるタイミングに設定されている。

【0035】

（１－２）組織サンプルの質量分析
次に、上述したタイミングＴ１～Ｔ４の各々で採取された試料Ａ～Ｃの組織サンプルを、質量分析を利用してスクリーニングを行なった。質量分析には、液体クロマトグラフ質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）を用いた。

【0036】

具体的には、組織サンプル（約５０ｍｇ）に内部標準液５００μＬを加え、バイオマッシャー（株式会社ニッピ）を用いてホモジャナイズした。次に、ホモジネートに水２５０μＬを加えて撹拌し、さらにクロロホルム５００μＬを加えて撹拌した。遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、４℃、５分）を行なった後、上層５００μＬを抽出した。さらに、抽出液を、遠心エバポレーターを用いて乾燥し、残渣を水５０μＬで再溶解し、測定用試料とした。

【0037】

ＬＣ／ＭＳ分析は、ＬＣＭＳ－８０６０（島津製作所）を用いて行なった。ＬＣ／ＭＳ分析の測定モードとして、多重反応モニタリング（multiple reaction monitoring：ＭＲＭ）およびスキャン分析を用いた。

【0038】

図３は、質量分析装置１００および評価装置１２０の概略構成図である。図３を参照して、質量分析装置１００は、液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ／ＭＳ）部１０２と、データ処理部１０４と、制御部１０６とを有する。

【0039】

ＬＣ／ＭＳ部１０２は、カラム（図示せず）を備えた液体クロマトグラフと、質量分析部とを有する。カラムに供給された試料は、カラムを通過する過程で試料成分毎に分離され、真空状態の質量分析部に順次導かれて質量分析が行なわれる。これにより、リテンションタイムに応じて異なるスペクトルが得られる。

【0040】

質量分析部は、例えば、イオン化室、イオントラップおよびＴＯＦＭＳ（飛行時間型質量分析計）を有する。イオン化室は、液体クロマトグラフにより分離された試料成分を、ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）などのイオン化法を用いてイオン化する。試料成分のイオン化法は、ＥＳＩに限らず、ＡＰＣＩ（大気圧化学イオン化）などの各種方法を用いることができる。

【0041】

イオントラップは、例えば三次元四重極型であり、イオン化室で得られたイオンを捕捉するとともに、捕捉したイオンの一部を選択的にイオントラップ内に残し、ＣＩＤ（衝突誘起解離）により開裂させることができる。開裂されたイオンは、イオントラップからＴＯＦＭＳに供給される。

【0042】

ＴＯＦＭＳでは、飛行空間に形成された電場により加速されたイオンが、飛行空間を飛行する間に質量電荷比に応じて時間的に分離され、イオン検出器により順次検出される。イオン検出器による検出信号はデータ処理部１０４に入力され、デジタルデータに変換された後、マススペクトル、マスクロマトグラム、トータルクロマトグラムの作成などの各種のデータ処理が実行される。

【0043】

制御部１０６は、ＬＣ／ＭＳ部１０２の動作を制御する。なお、データ処理部１０４および制御部１０６の機能は、所定の制御・処理ソフトウェアを搭載したパーソナルコンピュータにより具現化することができる。

【0044】

なお、本実施の形態では、質量分析装置１００として液体クロマトグラフ質量分析装置を用いる構成について説明したが、探針エレクトロスプレーイオン化（ＰＥＳＩ）法によるＰＥＳＩイオン源を利用した質量分析装置（ＰＥＳＩイオン化質量分析装置を用いることも可能である。

【0045】

制御部１０６は、データ処理部１０４で作成されたデータを評価装置１２０へ転送する。評価装置１２０は、質量分析装置１００と通信接続されている。質量分析装置１００および評価装置１２０の間の通信は、無線通信で実現されてもよいし、有線通信で実現されてもよい。

【0046】

評価装置１２０は、主な構成要素として、演算部であるＣＰＵ（Central Processing Unit）１２２と、記憶部１２４と、表示部１２６と、入力部１２８とを有する。評価装置１２０には、例えばパーソナルコンピュータなどを利用することができる。

【0047】

ＣＰＵ１２２は、記憶部１２４に記憶されたプログラムを読み出して実行することで、評価装置１２０の各部の動作を制御する。具体的には、ＣＰＵ１２２は、当該プログラムを実行することによって、後述する移植用肝臓の機能評価を実現する。なお、図３の例では、ＣＰＵ１２２が単数である構成を例示しているが、評価装置１２０は複数のＣＰＵを有する構成としてもよい。

【0048】

記憶部１２４は、ＲＡＭ（Random Access Memory）、ＲＯＭ（Read Only Memory）およびフラッシュメモリなどの不揮発性メモリによって実現される。記憶部１２４は、ＣＰＵ１２２によって実行されるプログラム、またはＣＰＵ１２２によって用いられるデータなどを記憶する。当該プログラムは、非一時的なコンピュータ可読媒体に記憶されていてもよい。

【0049】

ＣＰＵ１２２には、表示部１２６および入力部１２８が接続される。表示部１２６は、画像を表示可能な液晶パネルなどで構成される。入力部１２８は、評価装置１２０に対するユーザの操作入力を受け付ける。入力部１２８は、典型的には、タッチパネル、キーボード、マウスなどで構成される。

【0050】

評価装置１２０は、試料Ａ～Ｃの各々について、タイミングＴ１～Ｔ４の各々における組織サンプルのマススペクトルデータを取得すると、取得したマススペクトルデータに基づいて、試料に含まれる代謝物の定量分析を実行する。このとき取得される定量的データを用いて、肝臓グラフトの機能評価に用いる評価基準が設定される。

【0051】

（１－３）評価基準の設定
本実施の形態に係る肝機能の評価方法は、２段階の評価から構成される。第１評価は、再灌流前に取得された定量的データを用いて実行され、肝臓グラフトの機能の良否を評価するものである。第２評価は、再灌流中に取得される定量的データを用いて実行され、再灌流によって機能を維持または機能を回復させた肝臓グラフトについて、移植の可否を評価するものである。なお、第１評価は、最終的な第２評価に対する予備的な評価であるため、省略することも可能である。

【0052】

（ｉ）第１評価における評価基準
第１評価では、評価基準として、肝機能の評価するためのマーカ物質と、肝機能の良否を判定するための閾値とを用いる。そこで、上述した３種類の試料Ａ～Ｃの定量的データに基づいて、マーカ物質を同定するとともに、マーカ物質ごとに閾値を設定した。

【0053】

具体的には、タイミングＴ１，Ｔ２の各々で採取された試料Ａ～Ｃの定量的データに基づいて、機能が正常である肝臓グラフトでは高い数値を示し、機能が不良である肝臓グラフトでは低い数値を示すという観点から、マーカ物質候補を同定した。

【0054】

冷保存前であるタイミングＴ１の定量的データにおいては、試料Ａ（正常肝）および試料Ｂ（軽度心停止後肝）で高い数値を示し、試料Ｃ（重度心停止後肝）で低い数値を示す代謝物として、２個の代謝物がマーカ物質候補として同定された。この２個の代謝物は、ウリジン（Uridine）およびアデニロコハク酸（Adenylosuccinic Acid）である。

【0055】

一方、冷保存後であるタイミングＴ２の定量的データにおいては、試料Ａ（正常肝）および試料Ｂ（軽度心停止後肝）で高い数値を示し、試料Ｃ（重度心停止後肝）で低い数値を示す代謝物として、１個の代謝物がマーカ物質候補として同定された。この１個の代謝物は、ウリジンである。

【0056】

図４には、タイミングＴ１の定量的データにおけるマーカ物質の含有量、およびタイミングＴ２の定量的データにおけるマーカ物質の含有量が示される。図４（Ａ）は、試料Ａ～Ｃの各々のタイミングＴ１におけるウリジンの含有量を示すグラフであり、図４（Ｂ）は、試料Ａ～Ｃの各々のタイミングＴ１におけるアデニロコハク酸の含有量を示すグラフである。各グラフの縦軸は、マススペクトルのピーク面積比をタンパク量で除した値（マススペクトルのピーク面積比／タンパク量）に相当する。マススペクトルのピーク面積比とは、内部標準物質のピーク面積に対する目的成分のピーク面積の比である。タンパク量は、組織サンプルごとのタンパク量を定量分析によって測定したものである。

【0057】

図４（Ａ）のグラフによると、タイミングＴ１では、正常肝、軽度心停止後肝、重度心停止後肝の順にウリジンの含有量が減少している。そこで、正常肝および軽度心停止後肝と、重度心停止後肝との間に、肝機能の良否を判定するための閾値Ｕ１を設定した。具体的には、正常肝および軽度心停止後肝のウリジンの含有量の平均値と、重度心停止後肝のウリジンの含有量の平均値との平均値を、閾値Ｕ１に設定した。

【0058】

また、図４（Ｂ）のグラフに示すように、タイミングＴ１では、正常肝、軽度心停止後肝、重度心停止後肝の順にアデニロコハク酸の含有量が減少している。そこで、正常肝および軽度心停止後肝と、重度心停止後肝との間に、肝機能の良否を判定するための閾値Ａ１を設定した。具体的には、正常肝および軽度心停止後肝のアデニロコハク酸の含有量の平均値と、重度心停止後肝のアデニロコハク酸の含有量の平均値との平均値を、閾値Ａ１に設定した。

【0059】

一方、図４（Ｃ）のグラフに示すように、タイミングＴ２では、正常肝、軽度心停止後肝、重度心停止後肝の順にウリジンの含有量が減少している。そこで、正常肝および軽度心停止後肝と、重度心停止後肝との間に、肝機能の良否を判定するための閾値Ｕ２を設定した。具体的には、正常肝および軽度心停止後肝のウリジンの含有量の平均値と、重度心停止後肝のウリジンの含有量の平均値との平均値を、閾値Ｕ２に設定した。

【0060】

（ｉｉ）第２評価における評価基準
第２評価では、評価基準として、再灌流による肝機能の維持および回復を評価するためのマーカ物質と、移植の可否を判定するための閾値とを用いる。そこで、上述した３種類の試料Ａ～Ｃの定量的データに基づいて、マーカ物質を同定するとともに、マーカ物質ごとに閾値を設定した。

【0061】

具体的には、タイミングＴ３，Ｔ４の各々で採取された試料Ａ～Ｃの定量的データに基づいて、再灌流中での含有量の変化という観点から、マーカ物質候補を同定した。タイミングＴ３とタイミングＴ４との間で含有量が変化した代謝物として、１０個の代謝物がマーカ物質候補として同定された。この１０個の代謝物は、セドヘプツロース７－リン酸（Sedoheptulose 7-phosphate）、アデノシン３リン酸（Adenosine triphosphate）、グルコース－６－リン酸（Glucose-6-phosphate）、スクシニルＣｏＡ（Succinyl coenzyme A）、ジメチルグリシン（Dimethylglycine）、コリン（Choline）、２－アミノ酪酸（2-Aminobutyric acid）、尿酸（Uric acid）、ピルビン酸（Pyruvic acid）、イノシン（Inosine）である。

【0062】

図５には、タイミングＴ３の定量的データにおけるマーカ物質の含有量、およびタイミングＴ４の定量的データにおけるマーカ物質の含有量が示される。図５（Ａ）～図５（Ｊ）は、試料Ａ～Ｃの各々のタイミングＴ３，Ｔ４におけるマーカ物質の含有量を示すグラフである。

【0063】

各図において、Ａ（Ｔ３）は、試料Ａ（正常肝）のタイミングＴ３におけるマーカ物質の含有量であり、Ａ（Ｔ４）は、試料Ａ（正常肝）のタイミングＴ４におけるマーカ物質の含有量である。Ｂ（Ｔ３）は、試料Ｂ（軽度心停止後肝）のタイミングＴ３におけるマーカ物質の含有量であり、Ｂ（Ｔ４）は、試料Ｂ（軽度心停止後肝）のタイミングＴ４におけるマーカ物質の含有量である。Ｃ（Ｔ３）は、試料Ｃ（重度心停止後肝）のタイミングＴ３におけるマーカ物質の含有量であり、Ｃ（Ｔ４）は、試料Ｃ（重度心停止後肝）のタイミングＴ４におけるマーカ物質の含有量である。各グラフの縦軸は、マススペクトルのピーク面積比をタンパク量で除した値（マススペクトルのピーク面積比／タンパク量）に相当する。

【0064】

図５（Ａ）に示すように、セドヘプツロース７－リン酸の含有量は、正常肝および軽度心停止後肝では増加し、重度心停止後肝では減少している。図５（Ｅ）、図５（Ｆ）、図５（Ｇ）、図５（Ｈ）、図５（Ｉ）および図５（Ｊ）に示すように、ジメチルグリシン、コリン、２－アミノ酪酸、尿酸、ピルビン酸およびイノシンの含有量においても、セドヘプツロース７－リン酸と同様の傾向が見られた。

【0065】

これに対して、図５（Ｂ）に示すように、アデノシン３リン酸の含有量は、正常肝では減少し、軽度心停止後肝では増加し、重度心停止後肝では減少している。また、図５（Ｃ）および図５（Ｄ）に示すように、グルコース－６－リン酸およびスクシニルＣｏＡの含有量は、正常肝、軽度心停止後肝および重度心停止後肝のいずれも増加している。

【0066】

図６に、図５に示した１０個のマーカ物質について、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けた含有量の変化の傾向をまとめて示す。図６は、試料Ａ～Ｃの各々につき合計５個の試料における含有量の変化の傾向をスコアで表わしたテーブルである。同テーブルでは、各マーカ物質において、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けて含有量が増加した場合のスコアを「１」とし、含有量が減少した場合のスコアを「０」とした。

【0067】

なお、含有量の増加／減少は、タイミングＴ３およびＴ４間の含有量の大小に基づいて判定してもよい。この場合、タイミングＴ３の含有量に比べてタイミングＴ４の含有量が大きいときにはスコアを「１」とし、タイミングＴ３の含有量に比べてタイミングＴ４の含有量が小さいときにはスコアを「０」とする。

【0068】

あるいは、含有量の増加／減少を、タイミングＴ３およびＴ４間の含有率の変化率に基づいて判定してもよい。この場合、タイミングＴ３の含有量に対するタイミングＴ４の含有量の比率を算出する。タイミングＴ３，Ｔ４の含有量が等しいとき、比率＝１となる。タイミングＴ４の含有量がタイミングＴ３の含有量よりも大きければ、比率＞１となり、タイミングＴ３の含有量よりも小さければ、比率＜１となる。

【0069】

上記比率に対して、１より大きい第１の閾値と、１より小さい第２の閾値とが予め設定しておき、算出した比率と第１および第２の閾値とを比較する。算出した比率が第１の閾値よりも大きいときには、含有量が増加したと判定してスコアを「１」とする。算出した比率が第２の閾値よりも小さいときには、含有量が減少したと判定してスコアを「０」とする。

【0070】

図６を参照して、例えば、セドヘプツロース７－リン酸の場合、試料Ａ（正常肝）では、５個の試料Ａ１～Ａ５のうち２個の試料Ａ１，Ａ３のスコアが「１」を示し、残りの３個の試料Ａ２，Ａ４，Ａ５のスコアが「０」を示した。これに対して、試料Ｂ（軽度心停止後肝）では、５個の試料Ｂ１～Ｂ５全てのスコアが「１」を示し、試料Ｃ（重度心停止後肝）では、５個の試料Ｃ１～Ｃ５全てのスコアが「０」を示した。

【0071】

グルコース－６－リン酸、ジメチルグリシン、コリン、２－アミノ酪酸および尿酸の場合、試料Ａ（正常肝）および試料Ｂ（軽度心停止後肝）では、５個の試料全てのスコアが「１」を示し、試料Ｃ（重度心停止後肝）では、５個の試料Ｃ１～Ｃ５全てのスコアが「０」を示した。

【0072】

各マーカ物質についてスコアが算出されると、試料ごとに、１０個のスコアの合計値を算出した。すなわち、合計スコアの最高値は「１０」となり、最低値は「０」となる。

【0073】

図６に示すように、試料Ａ（正常肝）および試料Ｂ（軽度心停止後肝）の合計スコアは、最高値「１０」に近い値に分布している。これに対し、試料Ｃ（重度心停止後肝）の合計スコアは、最低値「０」に近い値に分布している。

【0074】

図６のテーブルによると、１０個のマーカ物質のうちの９個のマーカ物質において、試料Ａ（正常肝）と、試料Ｂ（軽度心停止後肝）とは、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けたマーカ物質の含有量の変化の傾向が一致している。その結果、正常肝と軽度心停止後肝とは、合計スコアが近似している。

【0075】

これに対して、１０個のマーカ物質のうちの９個のマーカ物質において、試料Ａ（正常肝）と、試料Ｃ（重度心停止後肝）とは、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けたマーカ物質の含有量の変化の傾向が異なっている。その結果、正常肝と重度心停止後肝とは、合計スコアが近似せず、かけ離れた値となっている。図６のテーブルでは、重度心停止後肝は、正常肝に比べて、合計スコアが著しく低くなっている。

【0076】

図６のテーブルに基づいて、本願発明者らは、合計スコアに対して、正常肝および軽度心停止後肝と、重度心停止後肝とを切り分けるための閾値を設定し、この閾値を、再灌流により機能が回復した肝臓グラフトか、機能が回復していない肝臓グラフトかを判定するための基準値とした。

【0077】

具体的には、正常肝および軽度心停止後肝の合計スコアが「６」から「１０」までの範囲を示す一方で、重度心停止後肝の合計スコアが「０」または「１」を示すことから、基準値を「２」に設定した。

【0078】

これによると、合計スコアを用いて、再灌流後の肝臓グラフトが移植可能な状態であるか否かを判定することができる。具体的には、肝臓グラフトの合計スコアが基準値「２」よりも高い場合には、肝臓グラフトが移植可能であると判定される。この場合、肝臓グラフトは、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けたマーカ物質の含有量の変化の傾向が、正常肝と一致していると判断することができる。したがって、再灌流によって肝臓グラフトの機能が移植可能なレベルまで回復したと判断することができる。

【0079】

一方、肝臓グラフトの合計スコアが閾値「２」以下である場合には、肝臓グラフトが移植不可能であると判定される。この場合、肝臓グラフトは、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向けたマーカ物質の含有量の変化の傾向が、正常肝と異なっていると判断することができる。したがって、再灌流によっても肝臓グラフトの機能が移植可能なレベルまで回復していないと判断することができる。

【0080】

なお、第２評価では、１０個のマーカ物質のスコアの合計スコアを用いて移植の可否を判定する構成としたことにより、マーカ物質ごとのスコアのばらつきを吸収することができる。言い換えれば、正常肝であっても、複数の試料の間で含有量の増加／減少の傾向にばらつきが生じるため、マーカ物質単位で、正常肝と含有量の変化の傾向が一致しているか否かを判断した場合には、判断を誤る可能性がある。全マーカ物質の合計スコアを用いて、マーカ物質全体で含有量の変化の傾向が一致しているか否かを総合的に判断することによって、このような誤った判断を防ぐことができる。

【0081】

（２）肝機能評価方法について
次に、上述した評価基準を用いた肝臓グラフトの機能評価方法について説明する。

【0082】

図７は、本実施の形態に係る肝臓グラフトの機能評価方法を説明するためのフローチャートである。図７には、肝臓グラフトの摘出から再灌流までの処理手順を説明するフローチャート（図７左図）、質量分析装置における処理手順を説明するフローチャート（図７中央図）、および評価装置における処理手順を説明するフローチャート（図７右図）が示されている。

【0083】

図７を参照して、ステップＳ１０では、ドナーから肝臓グラフトが摘出される。ステップＳ２０では、摘出した肝臓グラフト内の血管を洗浄するフラッシュ処理が実行される。洗浄には、例えば生理食塩水を用いることができる。洗浄後の肝臓グラフトをＵＷ液中に浸漬させる。

【0084】

ステップＳ３０では、肝臓グラフトから組織サンプルが採取される。ステップＳ３０による組織サンプルの採取は、図１におけるタイミングＴ１に相当する。

【0085】

ステップＳ４０では、肝臓グラフトの冷保存処理を実行する。冷保存を行なう時間は、特に限定されず、ドナーからレシピエントまでの肝臓グラフトの運搬時間などを考慮してユーザが適宜設定することができる。また、保存液は、ＵＷ液に限定されず、ユーザが適宜選択することができる。

【0086】

冷保存処理（ステップＳ４０）が終了した時点で、ステップＳ５０では、肝臓グラフトから組織サンプルが採取される。ステップＳ５０による組織サンプルの採取は、図１におけるタイミングＴ２に相当する。

【0087】

ステップＳ６０では、肝臓グラフトの再加温処理は行なわれる。再加温処理によって、肝臓グラフトの温度を約３７℃に戻す。

【0088】

ステップＳ７０では、肝臓グラフトの温度を約３７℃を維持した状態で、肝臓グラフトの再灌流処理が行なわれる。再灌流処理は、例えば、図２に示した灌流回路を用いて行なうことができる。ただし、灌流液は、クレブスバッファー液に限定されず、ユーザが適宜選択することができる。

【0089】

再灌流が開始されると、ステップＳ８０により、再灌流初期の所定のタイミング（例えば、再灌流開始１５分後）において、肝臓グラフトから組織サンプルが採取される。ステップＳ８０による組織サンプルの採取は、図１におけるタイミングＴ３に相当する。さらに、ステップＳ９０により、再灌流終期の所定のタイミング（例えば、再灌流開始３０分後）において、肝臓グラフトから組織サンプルが採取される。ステップＳ９０による組織サンプルの採取は、図１におけるタイミングＴ４に相当する。

【0090】

質量分析装置１００では、ステップＳ３１により、ステップＳ３０において採取された組織サンプルに対する質量分析が行なわれる。質量分析にて取得されたマススペクトルデータは、評価装置１２０へ転送される。

【0091】

その後、質量分析装置１００では、ステップＳ５１，Ｓ８１，Ｓ９１により、ステップＳ５０，Ｓ８０，Ｓ９０において採取された組織サンプルについて、それぞれ質量分析が行なわれる。各質量分析処理にて取得されたマススペクトルデータは、評価装置１２０へ転送される。

【0092】

評価装置１２０においては、質量分析装置１００から転送されたマススペクトルデータに基づいて、肝臓グラフトが移植可能な状態であるか否かについての評価が行なわれる。

【0093】

具体的には、最初に、評価装置１２０は、ステップＳ３２により、冷保存（Ｓ４０）前のタイミングＴ１で採取した組織サンプルのマススペクトルデータを取得し、続いて、ステップＳ５２により、冷保存（Ｓ４０）後のタイミングＴ２で採取した組織サンプルのマススペクトルデータを取得する。評価装置１２０は、ステップＳ１００により、これら２つのマススペクトルデータを用いて、第１評価処理を実行する。

【0094】

図８は、図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の手順を説明するためのフローチャートである。図８のフローチャートは、評価装置１２０のＣＰＵ１２２により実行することができる。

【0095】

図８を参照して、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０１により、タイミングＴ１におけるマススペクトルデータからマーカ物質であるウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）を検出する。続いて、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０２により、タイミングＴ２におけるマススペクトルデータからウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）を検出する。ステップＳ１０１，Ｓ１０２では、ＣＰＵ１２２は、マススペクトルのピーク面積比をタンパク量で除算することより、ウリジンの含有量Ｍ１を検出する。

【0096】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０３により、ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）と閾値Ｕ１とを比較する。閾値Ｕ１は、図４（Ａ）において、タイミングＴ１における正常肝、軽度心停止肝および重度心停止肝のウリジン含有量に基づいて設定したものである。

【0097】

ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）が閾値Ｕ１以下である場合（Ｓ１０３にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０６により、肝臓グラフトが機能不良であると判定する。

【0098】

一方、含有量Ｍ１（Ｔ１）が閾値Ｕ１より大きい場合（Ｓ１０３にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は続いて、ステップＳ１０４により、ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）と閾値Ｕ２とを比較する。閾値Ｕ２は、図４（Ｃ）において、タイミングＴ２における正常肝、軽度心停止肝および重度心停止肝のウリジン含有量に基づいて設定したものである。

【0099】

ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）が閾値Ｕ２以下である場合（Ｓ１０４にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０６により、肝臓グラフトが機能不良であると判定する。一方、ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）が閾値Ｕ２より大きい場合（Ｓ１０４にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０５により、肝臓グラフトが機能正常であると判定する。

【0100】

なお、図８に示すフローチャートでは、タイミングＴ１およびＴ２におけるウリジンの含有量に基づいて、肝臓グラフトの機能を判定したが、図９に示すように、タイミングＴ１におけるウリジンおよびアデニロコハク酸の含有量に基づいて肝臓グラフトの機能を判定することもできる。あるいは、図１０に示すように、タイミングＴ２におけるウリジンの含有量に基づいて肝臓グラフトの機能を判定することもできる。

【0101】

図９は、図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の第１の変更例を説明するためのフローチャートである。

【0102】

図９を参照して、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０１により、タイミングＴ１におけるマススペクトルデータからマーカ物質であるウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）を検出する。続いて、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０７により、タイミングＴ１におけるマススペクトルデータからアデニロコハク酸の含有量Ｍ２（Ｔ１）を検出する。

【0103】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０３により、ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）と閾値Ｕ１とを比較する。ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ１）が閾値Ｕ１以下である場合（Ｓ１０３にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０６により、肝臓グラフトが機能不良であると判定する。

【0104】

一方、含有量Ｍ１（Ｔ１）が閾値Ｕ１より大きい場合（Ｓ１０３にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は続いて、ステップＳ１０８により、アデニロコハク酸の含有量Ｍ２（Ｔ１）と閾値Ａ１とを比較する。閾値Ａ１は、図４（Ｂ）において、タイミングＴ１における正常肝、経度心停止肝および重度心停止肝のアデニロコハク酸の含有量に基づいて設定したものである。

【0105】

アデニロコハク酸の含有量Ｍ２（Ｔ１）が閾値Ａ１以下である場合（Ｓ１０８にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０６により、肝臓グラフトが機能不良であると判定する。一方、アデニロコハク酸の含有量Ｍ２（Ｔ１）が閾値Ａ１より大きい場合（Ｓ１０８にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０５により、肝臓グラフトが機能正常であると判定する。

【0106】

図１０は、図７のステップＳ１００に示す第１評価処理の第２の変更例を説明するためのフローチャートである。

【0107】

図１０を参照して、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０２により、タイミングＴ２におけるマススペクトルデータからマーカ物質であるウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）を検出する。

【0108】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０４により、ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）と閾値Ｕ２とを比較する。ウリジンの含有量Ｍ１（Ｔ２）が閾値Ｕ２以下である場合（Ｓ１０４にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０６により、肝臓グラフトが機能不良であると判定する。一方、含有量Ｍ１（Ｔ２）が閾値Ｕ２より大きい場合（Ｓ１０４にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ１０５により、肝臓グラフトが機能正常であると判定する。

【0109】

図７に戻って、評価装置１２０は、ステップＳ８２により、再灌流初期のタイミングＴ３で採取した組織サンプルのマススペクトルデータを取得し、続いて、ステップＳ９２により、再灌流後期のタイミングＴ４で採取した組織サンプルのマススペクトルデータを取得する。評価装置１２０は、ステップＳ２００により、これら２つのマススペクトルデータを用いて、第２評価処理を実行する。

【0110】

図１１は、図７のステップＳ２００に示す第２評価処理の手順を説明するためのフローチャートである。図１１のフローチャートは、評価装置１２０のＣＰＵ１２２により実行することができる。

【0111】

図１１を参照して、ステップＳ２０１により、ＣＰＵ１２２は、１０個のマーカ物質の中から対象マーカ物質Ｍｉ（ｉは１以上１０以下の整数）を選択する。次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０２により、タイミングＴ３におけるマススペクトルデータから対象マーカ物質Ｍｉである代謝物の含有量Ｘｉ（Ｔ３）を検出する。ＣＰＵ１２２はさらに、ステップＳ２０３により、タイミングＴ４におけるマススペクトルデータから対象マーカ物質Ｍｉの含有量Ｘｉ（Ｔ４）を検出する。ステップＳ２０２，Ｓ２０３では、ＣＰＵ１２２は、マススペクトルのピーク面積比をタンパク量で除算することより、対象マーカ物質の含有量Ｘｉを検出する。

【0112】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０４により、タイミングＴ３からタイミングＴ４に向かう含有量Ｘｉの変化の傾向を算出する。ステップＳ２０４では、例えば、ＣＰＵ１２２は、Ｘｉ（Ｔ３）およびＸｉ（Ｔ）の大小に基づいて、含有量Ｘｉの変化の傾向（増加／減少）を判定する。この場合、ＣＰＵ１２２は、Ｘｉ（Ｔ３）＜Ｘｉ（Ｔ４）であれば、含有量Ｘｉが増加したと判定し、Ｘｉ（Ｔ３）＞Ｘｉ（Ｔ４）であれば含有量Ｘｉが減少したと判定する。

【0113】

あるいは、ＣＰＵ１２２は、Ｘｉ（Ｔ３）およびＸｉ（Ｔ４）の変化率（＝Ｘｉ（Ｔ４）／Ｘｉ（Ｔ３））に基づいて、含有量Ｘｉの増加／減少を判定することができる。ＣＰＵ１２２は、含有量Ｘｉ（Ｔ３）に対する含有量Ｘｉ（Ｔ４）の比率を算出する。Ｘｉ（Ｔ３）＝Ｘｉ（Ｔ４）のとき、比率＝１となる。一方、Ｘｉ（Ｔ４）＞Ｘｉ（Ｔ３）のときには、比率＞１となり、Ｘｉ（Ｔ４）＜Ｘｉ（Ｔ３）のときには、比率＜１となる。

【0114】

ＣＰＵ１２２は、算出した変化率と第１の閾値（第１の閾値＞１）とを比較し、変化率が第１の閾値より大きいときには、含有量Ｘｉが増加したと判定する。また、ＣＰＵ１２２は、変化率と第２の閾値（第２の閾値＜１）とを比較し、変化率が第２の閾値より小さいときには、含有量Ｘｉが減少したと判定する。

【0115】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０５に進み、ステップＳ２０４で求めた含有量Ｘｉの変化の傾向が、正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向と一致しているか否かを判定する。正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向は、図５に示した、正常肝（試料Ａ）のタイミングＴ３，Ｔ４におけるマーカ物質の含有量に基づいている。ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０４で説明した方法と同様の方法を用いて、正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向を算出することができる。

【0116】

ステップＳ２０５において、肝臓グラフトにおけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向が、正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向と一致している場合（Ｓ２０５にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０６により、マーカ物質Ｍｉに対するスコアを「１」とする。一方、肝臓グラフトにおけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向が、正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向と一致していない場合（Ｓ２０５にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０７により、マーカ物質Ｍｉに対するスコアを「０」とする。

【0117】

なお、肝臓グラフトにおけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向が正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向と一致度が大きい場合のスコアが、一致度が小さい場合のスコアと異なる場合であれば、スコアの値は「１」，「０」に限定されない。変化の絶対値を求め、一致度が大きい場合にはスコアを「１」とし、一致度が小さい場合にはスコアを「０」とし、その間の場合にはスコアを「０．５」としてもよい。

【0118】

次に、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０８により、１０個のマーカ物質の全てを対象マーカ物質に選択したか否かを判定する。全てのマーカ物質を選択していない場合（Ｓ２０８にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、処理をステップＳ２０１に戻し、次のマーカ物質Ｍ（ｉ＋１）を対象マーカ物質に選択し、ステップＳ２０２～Ｓ２０７の処理を再び実行する。

【0119】

一方、１０個のマーカ物質の全てを対象マーカ物質に選択した場合（Ｓ２０８にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２０９に進み、全てのマーカ物質のスコアを足し合わせることにより、合計スコアを算出する。

【0120】

ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２１０により、ステップＳ２０９で算出した合計スコアと基準値（＝２）とを比較する。この基準値は、図６に示した正常肝、軽度心停止後肝および重度心停止後肝の合計スコアに基づいて設定したものである。

【0121】

合計スコアが基準値よりも高い場合（Ｓ２１０にてＹＥＳ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２１１により、肝臓グラフトが移植可能な状態であると判定する。一方、合計スコアが基準値以下である場合（Ｓ２１０にてＮＯ）、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ２１２により、肝臓グラフトが移植不可能な状態であると判定する。

【0122】

つまり、各マーカ物質についてのスコアまたは合計スコアは、肝臓グラフトの機能評価に関する指標として機能する。

【0123】

図７に戻って、ＣＰＵ１２２は、ステップＳ３００により、第１評価処理（Ｓ１００）および第２評価処理（Ｓ２００）における評価結果を表示部１２６に表示する。移植外科医などのユーザは、表示部１２６に表示された評価結果に基づいて、肝臓グラフトをレシピエントに移植するか否かを判断することができる。

【0124】

以上説明したように、本実施の形態に係る移植用臓器の機能評価方法は、移植用臓器を質量分析することによって予め指定されたマーカ物質についての定量的データを取得し、その取得した定量的データを、予め設定された評価基準に従って評価することにより、移植用の臓器が移植可能な状態であるか否かを判定するものである。これによると、従来、移植外科医の経験および病理組織学的知見に基づいて行なわれていた移植用臓器の移植可否の判定を、客観的に行なうことが可能となる。また、臓器移植が行なわれる前に移植の可否を判定することができるため、移植に利用できる臓器を増やすことができる。

【0125】

さらに、本実施の形態に係る移植用臓器の機能評価方法によれば、脳死肝だけでなく、再灌流によって機能が回復した心停止後肝も移植に利用できる可能性が高められるため、ドナー臓器数の不足の解消に寄与することができる。

【0126】

［他の実施形態］
上記実施形態では、肝臓グラフトにおけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向と正常肝におけるマーカ物質Ｍｉの含有量の変化の傾向との一致度をスコア化し、各マーカ物質のスコアの合計を求めることにより、移植用臓器の機能評価を行なった。他の実施形態では、スコア化を行なわず、回帰分析により移植用臓器の機能評価を行なってもよい。例えば、マーカ物質Ｍｉの含有量の変化量を説明変数とし、移植用臓器の機能の正常度を目的変数として、回帰式を作成してもよい。

【0127】

［態様］
上述した複数の例示的な実施形態は、以下の態様の具体例であることが当業者により理解される。

【0128】

（第１項）一態様に係る移植用臓器の機能評価方法は、生体内から摘出された移植用臓器の機能評価方法であって、灌流による複数のマーカ物質の含有量の時間変化を示すデータを準備するステップと、移植用臓器の再灌流における第１のタイミングにおいて、移植用臓器から第１の組織サンプルを採取するステップと、再灌流における第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて、移植用臓器から第２の組織サンプルを採取するステップと、第１の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第２の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、複数のマーカ物質の各々について、第１のタイミングに対する第２のタイミングでの含有量の変化を求めるステップと、求めた含有量の変化とデータとを用いて、移植用臓器の機能評価に関する指標を求めるステップとを備える。

【0129】

第１項に記載の機能評価方法によれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を指標化することにより、この指標に基づいて移植用臓器の移植可否を判定することができる。これによると、移植を行なう前に、移植用臓器が移植可能な状態であるか否かを客観的に判断することが可能となる。また、再灌流によって機能が回復した心停止後臓器も移植に利用できる可能性が高められるため、ドナー臓器数の不足の解消に寄与することができる。

【0130】

（第２項）第１項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、変化を求めるステップは、含有量の変化の傾向を求めるステップを含む。指標を求めるステップは、含有量の変化の傾向をスコア化するステップを含む。スコア化するステップは、移植用臓器における含有量の変化の傾向が、機能が正常な臓器における含有量の変化の傾向と一致する場合のスコアを、一致しない場合のスコアよりも大きくするステップを含む。

【0131】

第２項に記載の機能評価方法によれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化の傾向を、機能が正常な臓器における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化の傾向に基づいてスコア化することにより、このスコアに基づいて移植可否を客観的に判定することができる。

【0132】

（第３項）第１項または第２項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、第１の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップ、および第２の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップの各々は、質量分析を用いて複数のマーカ物質の含有量を測定するステップを含む。

【0133】

第３項に記載の機能評価方法によれば、第１および第２の組織サンプルの質量分析を行なうことにより、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を指標化することができる。

【0134】

（第４項）第１項から第３項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、変化を求めるステップは、第１のタイミングにおける含有量に対する第２のタイミングにおける含有量の変化率が、１より大きい第１の閾値よりも大きい場合に、含有量の増加と判定し、変化率が、１より小さい第２の閾値よりも小さい場合に、含有量の減少と判定するステップをさらに含む。

【0135】

第４項に記載の機能評価方法によれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を、組織サンプルのばらつきによらず、適切にスコア化することができる。これにより、高い精度で移植の可否を判定することができる。

【0136】

（第５項）第１項から第４項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、移植用臓器は、肝臓である。複数のマーカ物質は、セドヘプツロース７－リン酸（Sedoheptulose 7-phosphate）、アデノシン３リン酸（Adenosine triphosphate）、グルコース－６－リン酸（Glucose-6-phosphate）、スクシニルＣｏＡ（Succinyl coenzyme A）、ジメチルグリシン（Dimethylglycine）、コリン（Choline）、２－アミノ酪酸（2-Aminobutyric acid）、尿酸（Uric acid）、ピルビン酸（Pyruvic acid）および、イノシン（Inosine）の少なくとも２つを含む。

【0137】

第５項に記載の機能評価方法によれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を指標化することにより、この指標に基づいて肝臓グラフトの移植可否を判定することができる。これによると、移植を行なう前に、肝臓グラフトが移植可能な状態であるか否かを客観的に判断することが可能となる。また、再灌流によって機能が回復した心停止後肝も移植に利用できる可能性が高められるため、ドナー臓器数の不足の解消に寄与することができる。

【0138】

（第６項）第１項から第５項に記載の移植用臓器の機能評価方法は、ドナーからの摘出後、再灌流までの間に、移植用臓器を冷保存するステップと、冷保存の開始前の第３のタイミングにおいて、移植用臓器から第３の組織サンプルを採取するステップと、冷保存の終了後かつ再灌流の開始前の第４のタイミングにおいて、移植用臓器から第４の組織サンプルを採取するステップと、第３の組織サンプルにおける第１のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第４の組織サンプルにおける第１のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第３のタイミングおよび第４のタイミングにおける第１のマーカ物質の含有量に基づいて、移植用臓器の機能が正常であるか否かを判定するステップとをさらに備える。

【0139】

第６項に記載の機能評価方法によれば、再灌流前の移植用臓器について、機能の良否を判定することができる。

【0140】

（第７項）第１項から第５項に記載の移植用臓器の機能評価方法は、ドナーからの摘出後、再灌流までの間に、移植用臓器を冷保存するステップと、冷保存の終了後かつ再灌流の開始前の第４のタイミングにおいて、移植用臓器から第４の組織サンプルを採取するステップと、第４の組織サンプルにおける第１のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第４のタイミングにおける第１のマーカ物質の含有量に基づいて、移植用臓器の機能が正常であるか否かを判定するステップとをさらに備える。

【0141】

第７項に記載の機能評価方法によれば、再灌流前の移植用臓器について、機能の良否を判定することができる。

【0142】

（第８項）第１項から第５項に記載の移植用臓器の機能評価方法は、ドナーからの摘出後、再灌流までの間に、移植用臓器を冷保存するステップと、冷保存の開始前の第３のタイミングにおいて、移植用臓器から第３の組織サンプルを採取するステップと、第３の組織サンプルにおける第１および第２のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第３のタイミングにおける第１および第２のマーカ物質の含有量に基づいて、移植用臓器の機能が正常であるか否かを判定するステップとをさらに備える。

【0143】

第８項に記載の機能評価方法によれば、再灌流前の移植用臓器について、機能の良否を判定することができる。

【0144】

（第９項）第６項または第７項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、移植用臓器は、肝臓であり、第１のマーカ物質は、ウリジン（Uridine）である。

【0145】

第９項に記載の機能評価方法によれば、再灌流前の肝臓グラフトについて、機能の良否を判定することができる。

【0146】

（第１０項）第８項に記載の移植用臓器の機能評価方法において、移植用臓器は、肝臓である。第１のマーカ物質は、ウリジン（Uridine）であり、第２のマーカ物質は、アデニロコハク酸（Adenylosuccinic Acid）である。

【0147】

第１０項に記載の機能評価方法によれば、再灌流前の肝臓グラフトについて、機能の良否を判定することができる。

【0148】

（第１１項）第１１項に記載の移植用臓器の機能を評価するためのプログラムは、演算部を有するコンピュータを用いて、生体内から摘出された移植用臓器の機能を評価する。プログラムは、灌流による複数のマーカ物質の含有量の時間変化を示すデータを準備するステップと、移植用臓器の再灌流における第１のタイミングにおいて、移植用臓器から第１の組織サンプルを採取するステップと、再灌流における第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて、移植用臓器から第２の組織サンプルを採取するステップと、第１の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、第２の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定するステップと、複数のマーカ物質の各々について、第１のタイミングに対する第２のタイミングでの含有量の変化を求めるステップと、求めた含有量の変化とデータとを用いて、移植用臓器の機能評価に関する指標を求めるステップとを演算部に実行させる。

【0149】

第１１項に記載のプログラムによれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を指標化することにより、この指標に基づいて移植用臓器の移植可否を判定することができる。これによると、移植を行なう前に、移植用臓器が移植可能な状態であるか否かを客観的に判断することが可能となる。また、再灌流によって機能が回復した心停止後臓器も移植に利用できる可能性が高められるため、ドナー臓器数の不足の解消に寄与することができる。

【0150】

（第１２項）第１２項に記載の移植用臓器の機能評価装置は、演算部を含む。機能評価装置は、灌流による複数のマーカ物質の含有量の時間変化を示すデータを準備する。演算部は、移植用臓器の再灌流における第１のタイミングにおいて移植用臓器から採取された第１の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定する。演算部は、再灌流における第１のタイミングより後の第２のタイミングにおいて移植用臓器から採取された第２の組織サンプルにおける複数のマーカ物質の含有量を測定する。演算部は、複数のマーカ物質の各々について、第１のタイミングに対する第２のタイミングでの含有量の変化を求め、かつ、求めた含有量の変化とデータとを用いて、移植用臓器の機能評価に関する指標を求める。

【0151】

第１２項に記載の機能評価装置によれば、再灌流中における複数のマーカ物質の各々の含有量の変化を指標化することにより、この指標に基づいて移植用臓器の移植可否を判定することができる。これによると、移植を行なう前に、移植用臓器が移植可能な状態であるか否かを客観的に判断することが可能となる。また、再灌流によって機能が回復した心停止後臓器も移植に利用できる可能性が高められるため、ドナー臓器数の不足の解消に寄与することができる。

【0152】

今回開示された実施の形態はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて請求の範囲によって示され、請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

【符号の説明】

【0153】

１ 肝臓、１０ 保存容器、１２ 灌流液流入用カニューレ、１４ 灌流液流出用カニューレ、２０ 灌流液流入用経路、２２ ポンプ、３０ 灌流液流出用経路、４０ 胆汁流出用カニューレ、５０，６０ 灌流液リザーバ、７０ ガス交換機構、８０ 容器、１００ 質量分析装置、１０２ ＬＣ／ＭＳ部、１０４ データ処理部、１０６ 制御部、１２０ 評価装置、１２２ ＣＰＵ、１２４ 記憶部、１２６ 表示部、１２８ 入力部。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】