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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023183448
(43)【公開日】2023-12-28
(54)【発明の名称】ブリ属養殖魚及びブリ属養殖魚の育成方法
(51)【国際特許分類】
A01K 61/10 20170101AFI20231221BHJP
A23K 50/80 20160101ALI20231221BHJP
A23K 10/22 20160101ALI20231221BHJP
【ＦＩ】
A01K61/10
A23K50/80
A23K10/22
【審査請求】有
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022096967
(22)【出願日】2022-06-16
(71)【出願人】
【識別番号】000003274
【氏名又は名称】マルハニチロ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】藤田 耕太郎
(72)【発明者】
【氏名】佐野 広明
(72)【発明者】
【氏名】田淵 玄洋
(72)【発明者】
【氏名】▲高▼橋 義宣
【テーマコード（参考）】
2B005
2B104
2B150
【Ｆターム（参考）】
2B005GA01
2B005LA02
2B104AA01
2B150AA08
2B150AB05
2B150CA22
2B150CD30
2B150CE01
2B150CJ08
2B150DE01
2B150DH35
(57)【要約】
【課題】エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量の低いブリ属養殖魚を提供する。
【解決手段】ブリ属養殖魚の育成において、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌する工程を加え、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚を得る。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
【選択図】なし
【解決手段】ブリ属養殖魚の育成において、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌する工程を加え、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚を得る。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
【請求項2】
可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、請求項１に記載のブリ属養殖魚。
【請求項3】
可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、請求項２に記載のブリ属養殖魚。
【請求項4】
肥満度が１７以上である、請求項１に記載のブリ属養殖魚。
【請求項5】
前記筋肉組織のうち、普通肉のイミダゾール系化合物の含有量が８２０ｍｇ／１００ｇ以上であり、
前記イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であり、
可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上である、
請求項１に記載のブリ属養殖魚。
前記イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であり、
可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上である、
請求項１に記載のブリ属養殖魚。
【請求項6】
普通肉のヒスチジンの含有量が８００ｍｇ／１００ｇ以上である、請求項５に記載のブリ属養殖魚。
【請求項7】
前記イミダゾールジペプチドにアンセリンが含まれる、請求項５に記載のブリ属養殖魚。
【請求項8】
可食部の筋肉組織のＨＨ比（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｒａｔｉｏ）が２．５以上であり、かつ
可食部の脂質における一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の含有量が、脂肪酸組成比で３４．０％以上である、請求項５に記載のブリ属養殖魚。
可食部の脂質における一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の含有量が、脂肪酸組成比で３４．０％以上である、請求項５に記載のブリ属養殖魚。
【請求項9】
前記可食部の筋肉組織の脂質における炭素数２０以上の一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の合計含有量が、脂肪酸組成比で２．４％以上である、請求項８に記載のブリ属養殖魚。
【請求項10】
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌することを含む、ブリ属養殖魚の育成方法。
【請求項11】
前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項13】
前記餌が配合飼料である、請求項１０又は１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量の低いブリ属養殖魚、及び当該ブリ属養殖魚を得るための育成方法に関する。
【背景技術】
【0002】
エトキシキンは、その抗酸化作用から、主に飼料の油脂や脂溶性ビタミン等の有効成分の酸化防止を目的として使用される、わが国では飼料添加物として指定された化合物である。
【0003】
エトキシキンを含有する食品の安全性（あるいは毒性）について、エトキシキンを高濃度で摂取することで遺伝毒性が生じることが示唆されており（非特許文献１）、国によっては、水産食品、特に魚のエトキシキン含有量が厳しく規制されている。養殖魚のエトキシキン含有量を低減するため、例えば、エトキシキンを含有する魚粉を使用して製造された配合飼料を使用せず、エトキシキンを含まない餌、例えば冷凍魚（「生餌」とも称される）を出荷前に９０日間以上の期間で給餌する手法がとられている。しかしながら、生餌は、製造・輸送等にコストがかかる、養殖に必要な量の餌の確保が困難である、という問題があった。
【0004】
ブリ属の飼料としては、乾燥魚粉を主原料とする配合飼料が主に使用される。乾燥魚粉は、多くは南米等で生産されて、長期間の海上輸送を経て我が国に輸入されるが、海上輸送時の自然発火防止手段を講じることが求められる。この自然発火防止手段として、抗酸化力、コスト面から、エトキシキンが使用されている。そのため、輸入魚粉を使用する限り、完全にエトキシキンを含まない乾燥魚粉を餌とすることは困難である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】食品添加物・農薬評価書 エトキシキン ２０１３年１１月 食品安全委員会
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量（以下、「エトキシキン等含有量」とも称する）の低いブリ属養殖魚を提供することを目的とする。また、本発明は、エトキシキン等含有量の低いブリ属養殖魚の育成方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、鋭意検討の結果、飼料のエトキシキン等含有量を一定以下とし、かつ、該飼料の給餌期間を出荷前の一定期間以上とすることで、所望のエトキシキン等含有量のブリ属養殖魚を取得できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【0008】
すなわち、本発明は以下を提供するものである。
（１）下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
（２）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（３）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、（２）に記載のブリ属養殖魚。
（４）肥満度が１７以上である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（５）前記筋肉組織のうち、普通肉のイミダゾール系化合物の含有量が８２０ｍｇ／１００ｇ以上であり、前記イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であり、可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（６）普通肉のヒスチジンの含有量が８００ｍｇ／１００ｇ以上である、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（７）前記イミダゾールジペプチドにアンセリンが含まれる、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（８）可食部の筋肉組織のＨＨ比（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｒａｔｉｏ）が２．５以上であり、かつ、可食部の脂質における一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の含有量が、脂肪酸組成比で３４．０％以上である、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（９）前記可食部の筋肉組織の脂質における炭素数２０以上の一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の合計含有量が、脂肪酸組成比で２．４％以上である、（８）に記載のブリ属養殖魚。
（１０）エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌することを含む、ブリ属幼少魚の育成方法。
（１１）前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、（１０）に記載の方法。
（１２）前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、（１０）又は（１１）に記載の方法。
（１３）前記餌が配合飼料である、（１０）又は（１１）に記載の方法。
（１）下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
（２）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（３）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、（２）に記載のブリ属養殖魚。
（４）肥満度が１７以上である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（５）前記筋肉組織のうち、普通肉のイミダゾール系化合物の含有量が８２０ｍｇ／１００ｇ以上であり、前記イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であり、可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（６）普通肉のヒスチジンの含有量が８００ｍｇ／１００ｇ以上である、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（７）前記イミダゾールジペプチドにアンセリンが含まれる、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（８）可食部の筋肉組織のＨＨ比（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｒａｔｉｏ）が２．５以上であり、かつ、可食部の脂質における一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の含有量が、脂肪酸組成比で３４．０％以上である、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（９）前記可食部の筋肉組織の脂質における炭素数２０以上の一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の合計含有量が、脂肪酸組成比で２．４％以上である、（８）に記載のブリ属養殖魚。
（１０）エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌することを含む、ブリ属幼少魚の育成方法。
（１１）前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、（１０）に記載の方法。
（１２）前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、（１０）又は（１１）に記載の方法。
（１３）前記餌が配合飼料である、（１０）又は（１１）に記載の方法。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量の低いブリ属養殖魚を提供することが可能である。また、本発明は、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量の低いブリ属養殖魚の育成方法を提供することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【0010】
＜ブリ属養殖魚＞
本発明のブリ属養殖魚は、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ことを特徴とする。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
本発明のブリ属養殖魚は、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ことを特徴とする。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
【0011】
本明細書において、「ブリ属」とは、スズキ目アジ科に分類される魚であり、学名Ｓｅｒｉｏｌａとして知られる魚である。ブリ属の魚としては、ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）、カンパチ（Ｓｅｒｉｏｌａ ｄｕｍｅｒｉｌｉ）、ヒラマサ（Ｓｅｒｉｏｌａ ｌａｌａｎｄｉ）、ヒレナガカンパチ（Ｓｅｒｉｏｌａ ｒｉｖｏｌｉａｎａ）、Ｓｅｒｉｏｌａ ｃａｒｐｅｎｔｅｒｉ、Ｓｅｒｉｏｌａ ｆａｓｃｉａｔａ、Ｓｅｒｉｏｌａ ｈｉｐｐｏｓ、Ｓｅｒｉｏｌａ ｐｅｒｕａｎａ、Ｓｅｒｉｏｌａ ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ、Ｓｅｒｉｏｌａ ｚｏｎａｔａなどが挙げられる。特にブリ又はカンパチが挙げられる。特に、ブリが挙げられる。
【0012】
本明細書において、「養殖魚」とは、期間の長短に関わらず、出荷前に生簀等の飼育管理条件下で給餌、育成された魚を指す。本明細書において、「養殖魚」は天然種苗も人工孵化も含む。これに対して、「天然魚」は、海上で捕獲された後、出荷まで、飼育管理条件下での給餌、育成が行われていない魚を指す。ここでいう「飼育管理条件下」とは、人工的に各種条件を管理した環境下であることを示す。具体的な条件については、「ブリ属養殖魚の育成方法」の項に記載する。
【0013】
本明細書において「可食部」とは、通常、ヒトが摂食する部分全てを指し、主に、筋肉組織であり、そのほか眼球周り、内臓などが挙げられる。ブリ属の可食部の多くは筋肉組織が占めており、筋肉組織は、通常の筋肉組織（本明細書では「普通肉」とも称する）と血合肉に分けられる。本明細書において「血合肉」とは、魚の背と腹の間に存在する赤色線維筋と呼ばれる、周囲の筋肉組織と比較して暗赤色を呈する部分を指す。筋肉組織は、通常、約７５～８５重量％が普通肉、約１５～２５重量％が血合肉で構成される。
【0014】
本明細書において「エトキシキン」とは、下記式（ＩＩ）で示される化合物を指す。
本明細書において「エトキシキンダイマー」とは、下記式（ＩＩＩ）で示される化合物を指す。魚類に取り込まれたエトキシキンの多くは、体内でエトキシキンダイマーへ変換されることが知られている。
【化1】
【化2】
【0015】
ブリ属養殖魚の筋肉組織のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量は、例えば、下記の方法で測定することができる。可食部１０ｇに１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液１００ｍＬを加え、ホモジナイズした後に吸引ろ過により不溶物を除去し、１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液で２００ｍＬに定容する。その内の２ｍＬをＣ１８逆相クロマトグラフィーに吸着させ、水：アセトニトリル（３：２）混液１０ｍＬで洗浄後、５０μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有アセトニトリル溶液溶出画分を分取し、溶出液で１０ｍＬに定容し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析装置にて測定する。
【0016】
本明細書において、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量は、特に限定されないが、例えば、下記の方法で測定することができる。円筒ろ紙に可食部１ｇ～５ｇを量り取り、硫酸ナトリウムを加えて混合した後、脱脂綿を上層に載せ、１０５℃に温めた恒温機内で一晩静置し、水分を除く。デシケーター内で常温になるまで静置した後、ソックスレー抽出器にてジエチルエーテル１００ｍＬを還流させて脂肪を抽出する。抽出された脂肪からジエチルエーテルを完全の蒸発させるために再度１０５℃に温めた恒温機内で１時間～２時間静置した後、デシケーター内で室温になるまで放冷し、抽出脂肪の重量を計測する。
【0017】
本発明のブリ属養殖魚は、上記式（Ｉ）で示される指標Ａの値、すなわち、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）を、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）の値で除した値が、１．０×１０－５以下、好ましくは５．０×１０－６以下である。本発明のブリ属養殖魚は、さらに、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下、特に１ｐｐｍ以下であることが好ましい。
【0018】
エトキシキン等は脂溶性であり、可食部においては脂質中に多く存在する。そのため、ブリ属の脂乗りがよくなる時期においては、エトキシキン含有量の低い餌を与えたとしても、エトキシキン等含有量が下がりにくい傾向にある。本発明者らは、育成時期に関わらず育成条件を最適化するための指標として、上記指標Ａが有用であることを見出した。
【0019】
本発明のブリ属養殖魚は、肥満度が１７以上、特に１８以上、さらに１９以上であることが好ましい。本明細書において「肥満度」とは、体重（ｇ）／尾叉長（ｃｍ）３×１０００で算出される値を指す。ここでいう「尾叉長」とは、上顎の先端から尾ビレが二叉する中央部の凹みの外縁までの長さを指す。
【0020】
本明細書において「イミダゾール系化合物」とは、イミダゾリン基を有する化合物全般を指すが、特にヒスチジン系アミノ酸全般を指す。ヒスチジン系アミノ酸としては、ヒスチジン、π－メチルヒスチジン、τ－メチルヒスチジン、及びイミダゾールジペプチド、並びにこれらの塩が挙げられる。本明細書において「イミダゾールジペプチド」とは、ヒスチジンとβ－アラニンとのジペプチドを指し、具体的にはカルノシン及びアンセリンを指す。また、「イミダゾールジペプチドの含有量」は具体的にはカルノシンとアンセリンの合計含有量を指す。
【0021】
イミダゾール系化合物の中でも、特にイミダゾールジペプチドは、緩衝作用、抗酸化力等を有し、脊椎動物、特に回遊性魚類の筋肉組織に多く含まれることが知られる（日本水産学会「水産学シリーズ［７２］魚介類のエキス成分」恒星者厚生閣（１９８８））。イミダゾールジペプチドは、ヒトが機能性食品として摂取すると、抗疲労効果、運動機能向上効果等が得られることが報告されている（西谷真人他、日本補完代替医療学会誌、第６巻第３号１２３－１２９頁（２００９））。
【0022】
本発明のブリ属養殖魚は、可食部の筋肉組織のうち、普通肉のイミダゾール系化合物の含有量が８２０ｍｇ／１００ｇ以上、特に、１０００～１５００ｍｇ／１００ｇであり、かつ、イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上、特に３．０～８．０重量％であることが好ましい。本発明のブリ属養殖魚は、普通肉にイミダゾールジペプチドとしてアンセリンが含まれることが好ましい。特に、普通肉におけるイミダゾールジペプチドに占めるアンセリンの量が、９５重量％以上であることが好ましい。
【0023】
本明細書において、イミダゾール系化合物（イミダゾールジペプチドを含む）の含有量は、以下の手順で測定した量を指す。適切な量の試料を秤量し、０．０２Ｍ塩酸を添加して破砕した後、９倍容量となるよう０．０２Ｍ塩酸を添加する。試料を十分に攪拌した後、遠心分離により上清液を分離する。上清液に対して等容量の３％スルホサリチル酸水溶液を加え、再度遠心分離を行い、上清部を回収して除タンパク処理を行う。さらにｎ－ヘキサンを加えて攪拌後、遠心分離を行い、下層部を回収して脱脂処理を行う。この溶液又は必要に応じて１０倍希釈した溶液をメンブレンろ過したろ液を、アミノ酸分析計（例えば、日立製作所製ＬＡ８０８０）に供して、イミダゾール系化合物の種類及び含有量を測定する。
【0024】
本発明のブリ属養殖魚において、普通肉に含まれるイミダゾール系化合物のうち、ヒスチジンの含有量が８００ｍｇ／１００ｇ以上、特に９００～１３００ｍｇ／１００ｇであり、かつイミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であることが好ましい。ヒスチジンは必須アミノ酸の１つであり、生体内のタンパク質合成に必要な重要な成分である。ヒスチジンはアレルギー反応に関与するヒスタミンに変換されることから、過剰量の摂取は望ましくないが、一方で、血管拡張作用による血圧低下や虚血性脳障害の予防、透析による貧血の治療効果や、食欲抑制による脂肪燃焼促進作用が知られている。また、ヒスチジンは、神経機能への関与や、赤血球の形成に必要であることから貧血への効果、紫外線による皮膚への刺激軽減作用や抗酸化作用を有することが知られており、適量で摂取する限りでは有用な成分である。
【0025】
本明細書において、ヒスチジンの含有量は、以下の手順で測定した量を指す。適切な量の試料を秤量し、０．０２Ｍ塩酸を添加して破砕した後、９倍容量となるよう０．０２Ｍ塩酸を添加する。試料を十分に攪拌した後、遠心分離により上清液を分離する。上清液に対して等容量の３％スルホサリチル酸水溶液を加え、再度遠心分離を行い、上清部を回収して除タンパク処理を行う。さらにｎ－ヘキサンを加えて攪拌後、遠心分離を行い、下層部を回収して脱脂処理を行う。この溶液又は必要に応じて１０倍希釈した溶液をメンブレンろ過したろ液を、アミノ酸分析計（例えば、日立製作所製ＬＡ８０８０）に供して、ヒスチジンの含有量を測定する。
【0026】
本明細書において「タウリン」とは、２－アミノエタンスルホン酸、アミノエチルスルホン酸とも称される化合物を指す。本発明のブリ属養殖魚は、可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上、特に、３５０～１２００ｍｇ／１００ｇであることが好ましい。
【0027】
タウリンは、２－アミノエタンスルホン酸、アミノエチルスルホン酸とも称される化合物であって、イカ、タコ、貝類、甲殻類及び魚類に多く含まれる成分である。生体内での浸透圧の調整や、生体膜の機能障害や形態異常が生じた際に回復・安定化させる作用を有することが知られる（日本水産学会「水産学シリーズ［７２］魚介類のエキス成分」恒星者厚生閣（１９８８））。高い抗酸化作用を有し、ヒトが機能性食品として摂取すると、血中コレステロール・中性脂肪の低下、肝臓等の機能向上、視力低下抑制、インスリン分泌促進、高血圧予防などの効果が得られることが知られる（一般社団法人大日本水産会発行「お魚便利帳」（２０１９））。
【0028】
本明細書においてタウリンの含有量は、以下の手順で測定した量を指す。適切な量の試料を秤量し、０．０２Ｍ塩酸を添加して破砕した後、９倍容量となるよう０．０２Ｍ塩酸を添加する。試料を十分に攪拌した後、遠心分離により上清液を分離する。上清液に対して等容量の３％スルホサリチル酸水溶液を加え、再度遠心分離を行い、上清部を回収して除タンパク処理を行う。さらにｎ－ヘキサンを加えて攪拌後、遠心分離を行い、下層部を回収して脱脂処理を行う。この溶液又は必要に応じて１０倍希釈した溶液をメンブレンろ過したろ液を、アミノ酸分析計（例えば、日立製作所製ＬＡ８０８０）に供して、ヒスチジンの含有量を測定する。
【0029】
本明細書において、脂肪酸は、「Ｃ１８：１（ｎ－９）」のように表記する。Ｃ１８：１（ｎ－９）は、炭素数１８で、不飽和結合を１つ有し、かつ、炭素鎖のメチル末端から数えて９番目の炭素－炭素結合に二重結合が存在する脂肪酸を示す。すなわち、Ｃ１８：１（ｎ－９）はオレイン酸である。
【0030】
本明細書において「ＨＨ比」（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｒａｔｉｏ）とは、脂質に含まれる脂肪酸に占める多価不飽和脂肪酸、一価不飽和脂肪酸と飽和脂肪酸との重量組成比であり、下記式で求められる値をいう。
ＨＨ比＝（Ｃ１８：１（ｎ－９）＋Ｃ１８：２（ｎ－６）＋Ｃ２０：４（ｎ－６）＋Ｃ１８：３（ｎ－３）＋Ｃ２０：５（ｎ－３）＋Ｃ２２：５（ｎ－３）＋Ｃ２２：６（ｎ－３））
ＨＨ比の高い食品の摂取は、高コレステロール血症のリスク低減効果が期待されている(Haouas, et al., Int. J. Food Sci. Tech., 45, 1478-1485 (2010)、Santos-Silva Livestock Production Science 77 187-194 (2002)）。
ＨＨ比＝（Ｃ１８：１（ｎ－９）＋Ｃ１８：２（ｎ－６）＋Ｃ２０：４（ｎ－６）＋Ｃ１８：３（ｎ－３）＋Ｃ２０：５（ｎ－３）＋Ｃ２２：５（ｎ－３）＋Ｃ２２：６（ｎ－３））
ＨＨ比の高い食品の摂取は、高コレステロール血症のリスク低減効果が期待されている(Haouas, et al., Int. J. Food Sci. Tech., 45, 1478-1485 (2010)、Santos-Silva Livestock Production Science 77 187-194 (2002)）。
【0031】
本発明のブリ属養殖魚は、可食部の脂肪酸におけるＨＨ比が２．５以上、特に２．８以上、さらに３．０以上であることが好ましい。
【0032】
本明細書において「一価不飽和脂肪酸」とは、モノエン酸、ＭＵＦＡとも称される炭素鎖に一つの不飽和結合を有する脂肪酸を指し、多価不飽和脂肪酸（ポリエン酸、Ｐｏｌｙ Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄ：ＰＵＦＡ）、飽和脂肪酸（Ｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄ：ＳＦＡ）と区別される。本明細書において、ＭＵＦＡには、デセン酸（Ｃ１０：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、ペンタデセン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、ヘプタデセン酸（Ｃ１７：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、バクセン酸（Ｃ１８：１）、エイコセン酸（Ｃ２０：１）、ドコセン酸（Ｃ２２：１）、テトラコセン酸（ネルボン酸）（Ｃ２４：１）等が含まれる。特に魚類に含まれる代表的なＭＵＦＡとしては、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エイコセン酸、ドコセン酸及びテトラコセン酸が挙げられる。
【0033】
上記ＭＵＦＡの中でも、本発明のブリ属養殖魚は、特にエイコセン酸（Ｃ２０：１）、ドコセン酸（Ｃ２２：１）、テトラコセン酸（Ｃ２４：１）等の長鎖一価不飽和脂肪酸を含むことが好ましい。本明細書において「長鎖一価不飽和脂肪酸」とは、ＬＣＭＵＦＡとも称され、炭素数２０以上の炭素鎖を含むＭＵＦＡを指す。エイコセン酸としては、例えばｎ－１１、ｎ－９（ガドレイン酸）、ｎ－７（ゴンドイン酸）等が挙げられる。また、ドコセン酸としては、例えば、ｎ－１１（セトレイン酸）、ｎ－９（エルカ酸）等が挙げられる。テトラコセン酸としては、ｎ－９（ネルボン酸）等が挙げられる。ＬＣＭＵＦＡは、アテローム性動脈硬化症（Yang, et al., Mol. Nutr. Food Res., 60(10): 2208-2218 (2016)）、糖尿病（特開２００１－２９４５２５号公報）、メタボリックシンドローム（国際公開２０１２／１２１０８０）などの予防、治療への効果が報告されている。
【0034】
本明細書において脂肪酸の「誘導体」とは、脂肪酸の骨格を保持した状態で、エステル、金属塩等としたものを指す。エステルの例としては、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドといったグリセリルエステルに加えて、メチルエステル、エチルエステル、イソプロピルエステルが挙げられる。
【0035】
本明細書において「脂肪酸組成比」とは、試料に含まれる脂質及び脂質分解物に含まれる各種脂肪酸の量を、総脂肪酸１００ｇあたりの重量比（％）で示したものを指す。測定方法は特に限定されないが、日本油化学会編「基準油脂分析試験法」に従って測定することが好ましい。すなわち、三フッ化ホウ素・メタノール法（ＢＦ３－ＭｅＯＨ法）を用いて、脂質をケン化して不ケン化物を除き、遊離脂肪酸とした後、エステル化し、ガスクロマトグラフィーで測定する方法である。
【0036】
本発明のブリ属養殖魚は、ＭＵＦＡ及びその誘導体を、脂肪酸組成比で３４．０％以上、特に３５．０％以上、さらに３８．０％以上、よりさらに３９．０％以上含むことが好ましい。また、本発明のブリ属養殖魚は、ＬＣＭＵＦＡ及びその誘導体を、脂肪酸組成比で２．４％以上、特に３．０％以上、さらに４．０％以上含むことが好ましい。
【0037】
本発明のブリ属養殖魚における、飽和脂肪酸（ＳＦＡ）及びその誘導体の含有量は、可食部の脂肪酸組成比で、２６．０％以下、特に２４．０％以下、さらに２３．０％以下であることが好ましい。ＳＦＡの組成比が低く抑えられることで、ブリの食感を口どけのよいものとすることができる。また、ＨＨ比を高くすることができる。
【0038】
本発明のブリ属養殖魚における、多価脂肪酸のｎ－３／ｎ－６組成比は１．６以下、かつ０．９以上であることが好ましい。また、本発明のブリ属養殖魚における、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びその誘導体の含有量は、可食部の脂肪酸組成比で１１．０％以下、特に１０．０％以下、さらには９．０％以下であることが好ましい。ＰＵＦＡの組成比、特に二重結合が多く酸化されやすいドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の組成比を一定以下とすることで、ブリの脂質の酸化が抑制され、風味の劣化を生じにくい。
【0039】
本発明のブリ属養殖魚は、一定以上成長した魚であることが好ましい。具体的には、体重が１．０ｋｇ以上、特に２．０ｋｇ以上であることが好ましい。すなわち、本発明のブリ属養殖魚の好適例は、モジャコ等と称される稚魚を含まない。
【0040】
＜ブリ属養殖魚の育成方法＞
本発明のブリ属養殖魚の育成方法（以下、「本発明の方法」とも称する）は、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（以下、「エトキシキン等含有量」とも称する）が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、７０日間以上給餌することを含む、ことを特徴とする。本発明の方法は、上記の条件を満たす餌以外を給餌しないことを含む。
本発明のブリ属養殖魚の育成方法（以下、「本発明の方法」とも称する）は、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（以下、「エトキシキン等含有量」とも称する）が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、７０日間以上給餌することを含む、ことを特徴とする。本発明の方法は、上記の条件を満たす餌以外を給餌しないことを含む。
【0041】
１．養殖対象のブリ属
本発明の育成方法で養殖されるブリ属は、人工孵化由来であっても、天然種苗由来であってもよい。養殖開始時期のブリ属の齢数はその養殖期間によって異なるが、出荷時までにブリ属の魚体重が１ｋｇ以上となるよう育成することが好ましい。
本発明の育成方法で養殖されるブリ属は、人工孵化由来であっても、天然種苗由来であってもよい。養殖開始時期のブリ属の齢数はその養殖期間によって異なるが、出荷時までにブリ属の魚体重が１ｋｇ以上となるよう育成することが好ましい。
【0042】
２．給餌条件
本発明の方法において、餌におけるエトキシキン等含有量は、２０ｐｐｍ以下、好ましくは、１０ｐｐｍ以下とする。餌として輸入の魚粉を含有する配合飼料を使用する場合は、例えば、エトキシキン等含有量の低い魚粉を選択して使用することにより、試料中のエトキシキン等含有量を調整することができる。餌のエトキシキン等含有量は、０ｐｐｍであってもよいが（エトキシキンフリー）、餌の製造コスト、入手容易性等との関係から、０ｐｐｍ超とすることが好ましい。このような餌としては、特に限定されないが、配合飼料を使用することが好ましい。配合飼料は、生餌と比較して、一定の品質のものを安定して給餌することが可能であるが、主原料に魚粉を使用しているため、完全にエトキシキンフリーとすることが困難である。しかし、配合飼料のエトキシキン等含有量を一定以下とし、養殖期間を一定期間以上とすることで、育成されるブリ属養殖魚のエトキシキン等含有量を低減させることができる。配合飼料の原料は、エトキシキン等含有量が上記範囲であれば、特に限定されないが、通常は、魚粉等の動物質性飼料、穀類、植物性油かす類、油脂、各種ビタミン、ミネラル類等を含む。
本発明の方法において、餌におけるエトキシキン等含有量は、２０ｐｐｍ以下、好ましくは、１０ｐｐｍ以下とする。餌として輸入の魚粉を含有する配合飼料を使用する場合は、例えば、エトキシキン等含有量の低い魚粉を選択して使用することにより、試料中のエトキシキン等含有量を調整することができる。餌のエトキシキン等含有量は、０ｐｐｍであってもよいが（エトキシキンフリー）、餌の製造コスト、入手容易性等との関係から、０ｐｐｍ超とすることが好ましい。このような餌としては、特に限定されないが、配合飼料を使用することが好ましい。配合飼料は、生餌と比較して、一定の品質のものを安定して給餌することが可能であるが、主原料に魚粉を使用しているため、完全にエトキシキンフリーとすることが困難である。しかし、配合飼料のエトキシキン等含有量を一定以下とし、養殖期間を一定期間以上とすることで、育成されるブリ属養殖魚のエトキシキン等含有量を低減させることができる。配合飼料の原料は、エトキシキン等含有量が上記範囲であれば、特に限定されないが、通常は、魚粉等の動物質性飼料、穀類、植物性油かす類、油脂、各種ビタミン、ミネラル類等を含む。
【0043】
本発明の方法において、上記餌の給餌頻度は、週３回以上、好ましくは週５回以上、より好ましくは週７回とする。１日の給餌回数は、１回以下とすることが好ましい。本発明の方法において、上記餌を給餌する期間は、出荷前の７０日間以上、好ましくは、出荷前の１５０日間以上とする。上記餌を７０日間以上給餌することで、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織における、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値を１．０×１０－５以下とすることができる。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン等含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
一方、ブリ属養殖魚は、季節によって可食部の脂のり、すなわち可食部における筋肉組織に含まれる脂質量が増加する。一方、エトキシキン等は脂溶性であり、脂質中に蓄積されやすい。そのため、脂のりのよい時期には、上記指標Ａの値を低く抑えることは可能であるが、エトキシキンダイマー等の含有量自体は低減しにくいことがある。しかしながら、上記餌を給餌する期間を１５０日間以上とすることで、育成開始時期に限らず、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織のエトキシキン等含有量を２ｐｐｍ以下、特に１ｐｐｍ以下とすることができる。ここでいう「出荷前」の期間は、出荷直前の期間を指し、例えば、「出荷前の７０日間以上給餌する」という記載は、出荷日を起算日として７０日間以上前から出荷直前まで、上記条件を満たす給餌を行うことを意味する。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン等含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
一方、ブリ属養殖魚は、季節によって可食部の脂のり、すなわち可食部における筋肉組織に含まれる脂質量が増加する。一方、エトキシキン等は脂溶性であり、脂質中に蓄積されやすい。そのため、脂のりのよい時期には、上記指標Ａの値を低く抑えることは可能であるが、エトキシキンダイマー等の含有量自体は低減しにくいことがある。しかしながら、上記餌を給餌する期間を１５０日間以上とすることで、育成開始時期に限らず、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織のエトキシキン等含有量を２ｐｐｍ以下、特に１ｐｐｍ以下とすることができる。ここでいう「出荷前」の期間は、出荷直前の期間を指し、例えば、「出荷前の７０日間以上給餌する」という記載は、出荷日を起算日として７０日間以上前から出荷直前まで、上記条件を満たす給餌を行うことを意味する。
【0044】
また、本発明の方法において、餌の含硫アミノ酸の含有量は、２５０ｍｇ／１００ｇ以上、特に３００ｍｇ／１００ｇとすることが好ましい。イミダゾール系化合物の含有量は、５０ｍｇ／１００ｇ以上、特に、７０ｍｇ／１００ｇ以上とすることが好ましい。前記飼料には、さらに、β－アラニンが、１．０ｍｇ／１００ｇ以上、特に１．２ｍｇ／１００ｇ以上が含まれることが好ましい。本明細書において、「含硫アミノ酸」とは、タウリン、メチオニン、システイン及びホモシステイン、好適にはタウリン及びメチオニンを指す。
【0045】
また、餌は、ＨＨ比が高く、かつＭＵＦＡ、特にＬＣＭＵＦＡを多く含むものを与えることが好ましい。一方で、ＳＦＡ、ＤＨＡ及びｎ－３／ｎ－６比の低い餌を与えることが好ましい。具体的には、餌に含まれる脂肪酸のＨＨ比は、２．４以上、特に３．４以上、さらに３．５以上とすることが好ましい。また、餌に含まれる脂肪酸のＭＵＦＡの組成比は、３０．０％以上、特に３５．０％以上とすることが好ましい。さらに、ＬＣＭＵＦＡの組成比は、０．１％以上、特に１．０％以上とすることが好ましい。餌の脂肪酸のｎ－３／ｎ－６比は、２．５以下、特に２．０以下であることが好ましい。また、餌に含まれる脂肪酸のＤＨＡの組成比は、１２．５％以下、特に１０．０％以下、さらに９．０％以下とすることが好ましい。
【0046】
３．飼育管理条件下での養殖
上記の養殖対象となるブリ属を、専用の生簀や水槽に移して、飼育管理条件下で養殖する。養殖時の条件として、水温、魚の密度などを調整し、管理することを要する。
上記の養殖対象となるブリ属を、専用の生簀や水槽に移して、飼育管理条件下で養殖する。養殖時の条件として、水温、魚の密度などを調整し、管理することを要する。
【0047】
（１）養殖期間
本発明の育成方法において、養殖期間は、７０日間以上、好ましくは１５０日間以上とする。そのうち、出荷直前の１～７日間（２４～１６８時間）、好ましくは１～３日間（２４～７２時間）、より好ましくは１～２日間（２４～４８時間）給餌を中止し、絶食期間を設けることが好ましい。本発明者らは、前記絶食期間を設けることで、ブリ属養殖魚の可食部に含まれるイミダゾールジペプチド及びタウリンが増加し、ヒスチジンが減少することを確認した。また、絶食期間を設けることで、ブリ属養殖魚の可食部に含まれる旨味アミノ酸の含有量が増加し、苦味アミノ酸の含有量が減少することも確認した。絶食期間を経たブリ属養殖魚は、直ちに出荷されることが好ましい。
本発明の育成方法において、養殖期間は、７０日間以上、好ましくは１５０日間以上とする。そのうち、出荷直前の１～７日間（２４～１６８時間）、好ましくは１～３日間（２４～７２時間）、より好ましくは１～２日間（２４～４８時間）給餌を中止し、絶食期間を設けることが好ましい。本発明者らは、前記絶食期間を設けることで、ブリ属養殖魚の可食部に含まれるイミダゾールジペプチド及びタウリンが増加し、ヒスチジンが減少することを確認した。また、絶食期間を設けることで、ブリ属養殖魚の可食部に含まれる旨味アミノ酸の含有量が増加し、苦味アミノ酸の含有量が減少することも確認した。絶食期間を経たブリ属養殖魚は、直ちに出荷されることが好ましい。
【0048】
（２）水温
ブリ属を養殖するための生簀や水槽内の水温は、１５～２８℃、特に、１８～２７℃、さらに２０～２５℃とすることが好ましい。ブリ属養殖魚の生簀は、通常海上に設置されるため、設置後の生簀内の水温を人為的に調節することは困難であるが、例えば、生簀の設置箇所を適切に選択することで、所望の温度条件下での養殖を行うことが可能である。
ブリ属を養殖するための生簀や水槽内の水温は、１５～２８℃、特に、１８～２７℃、さらに２０～２５℃とすることが好ましい。ブリ属養殖魚の生簀は、通常海上に設置されるため、設置後の生簀内の水温を人為的に調節することは困難であるが、例えば、生簀の設置箇所を適切に選択することで、所望の温度条件下での養殖を行うことが可能である。
【0049】
（３）飼育密度
生簀や水槽内のブリ属養殖魚の飼育密度は、３～２０ｋｇ／ｍ３、特に、７～１６ｋｇ／ｍ３とすることが好ましい。生簀や水槽の大きさは、ブリ属養殖魚の各個体が他の個体と接触することなく遊泳可能であれば、特に限定されないが、例えば、縦及び横が８～６０ｍ、深さ８～２５ｍ程度の大きさとすることができる。
生簀や水槽内のブリ属養殖魚の飼育密度は、３～２０ｋｇ／ｍ３、特に、７～１６ｋｇ／ｍ３とすることが好ましい。生簀や水槽の大きさは、ブリ属養殖魚の各個体が他の個体と接触することなく遊泳可能であれば、特に限定されないが、例えば、縦及び横が８～６０ｍ、深さ８～２５ｍ程度の大きさとすることができる。
【0050】
本発明の方法は、上記の給餌条件下及び飼育管理条件下でブリ属を養殖することにより、エトキシキン等含有量の低いブリ属養殖魚を得ることを可能とする。
【実施例0051】
以下、実施例において本発明をさらに詳細に説明するが、以下の実施例は本発明を限定するものではない。
【0052】
＜実施例１．ブリの飼育試験＞
養殖場を試験区及び対照区に分け、ブリの飼育実験を行った。対象ブリは、２年ブリとした。試験区・対照区における、飼育管理条件は、飼料以外はいずれも同様に、水温を１７．８～２６．５℃、飼育密度を平均１６．４ｋｇ／ｍ３とした。また、飼育期間は、１５０日間とし、水揚げ前に１日間の絶食期間を設けた。
養殖場を試験区及び対照区に分け、ブリの飼育実験を行った。対象ブリは、２年ブリとした。試験区・対照区における、飼育管理条件は、飼料以外はいずれも同様に、水温を１７．８～２６．５℃、飼育密度を平均１６．４ｋｇ／ｍ３とした。また、飼育期間は、１５０日間とし、水揚げ前に１日間の絶食期間を設けた。
【0053】
＜実施例２．飼料の成分分析＞
試験区及び対照区は、給餌する餌のみを変更した。給餌頻度は１日１回とした。試験区、対照区の飼料原料を表１に示す。各区に使用する飼料について、エトキシキン、エトキシキンダイマー、イミダゾール系化合物、ヒスチジン、イミダゾールジペプチド、アンセリン、タウリン、メチオニン及びβアラニンの含有量、並びに脂肪酸組成比を測定した。各区の飼料は、時期によって異なるロットが使用されたが、対照区については最初のロットのみ、試験区については、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量は、全てのロット（７ロット）、他の成分等については最初のロットのみ測定した。
試験区及び対照区は、給餌する餌のみを変更した。給餌頻度は１日１回とした。試験区、対照区の飼料原料を表１に示す。各区に使用する飼料について、エトキシキン、エトキシキンダイマー、イミダゾール系化合物、ヒスチジン、イミダゾールジペプチド、アンセリン、タウリン、メチオニン及びβアラニンの含有量、並びに脂肪酸組成比を測定した。各区の飼料は、時期によって異なるロットが使用されたが、対照区については最初のロットのみ、試験区については、エトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量は、全てのロット（７ロット）、他の成分等については最初のロットのみ測定した。
【0054】
【表1】
【0055】
各配合飼料のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量は、以下の手順を用いて測定した。粉砕飼料２ｇに１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液１００ｍＬを加えて混合し、吸引ろ過により不溶物を除去し、１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液で２００ｍＬに定容した。その内の１ｍＬを５０μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有アセトニトリル溶液で２０倍希釈し、以下の条件で液体クロマトグラフィータンデム質量分析装置にて測定した。
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５μｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：５０×５分→９５×７分
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
イオン化法：ＥＳＩ 正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ２１８→１６０（エトキシキン）
ｍ／ｚ ４３３→３７５（エトキシキンダイマー）
各区（各ロット）の餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量を表２に示す。
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５μｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：５０×５分→９５×７分
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
イオン化法：ＥＳＩ 正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ２１８→１６０（エトキシキン）
ｍ／ｚ ４３３→３７５（エトキシキンダイマー）
各区（各ロット）の餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの含有量を表２に示す。
【0056】
【表2】
【0057】
各区の最初のロットのイミダゾール系化合物、ヒスチジン、イミダゾールジペプチド、アンセリン、タウリン、メチオニン及びβアラニンの含有量、並びに脂肪酸組成比を測定した。ミダゾール系化合物、ヒスチジン、イミダゾールジペプチド、アンセリン、タウリン、メチオニン及びβアラニンの含有量は、以下の方法で測定した。所定量の配合飼料に０．０２Ｍ塩酸を加えて破砕し、抽出処理を行った。これを遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分、４℃）した後、上清に３％スルホサリチル酸水溶液を加え、さらに遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分、４℃）を行ってタンパク質を除去した。上清にｎ－ヘキサンを加えて脂質成分を除去した後、アミノ酸分析装置（日立製作所製ＬＡ８０８０）で各種成分の含有量を分析した。各成分の測定結果を表３に示す。
【0058】
脂肪酸組成比は以下の方法で測定した。各飼料１００～２００ｍｇに内部標準として１０ｍｇ／ｍＬ トリコサン酸メチル５０μＬを添加した後、蒸留水１ｍＬを添加し、クロロホルム：メタノール＝１：１溶液を５ｍＬ加えて攪拌した。遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分、１０℃）を行った後、下層部を綿栓ろ過して減圧乾燥して脂質を抽出した。得られた脂質に０．５Ｍ水酸化ナトリウム・メタノール溶液３００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、９分間加熱してけん化した。冷却後、三フッ化ホウ素メタノール溶液（ＡＬＤＲＩＣＨ製）４００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、７分間加熱してメチルエステル化した。冷却後、蒸留水６００μＬ、ヘキサン６００μＬを加えて攪拌した後、遠心分離を行い、上層部を回収して無水硫酸ナトリウムにて脱水後、減圧乾燥して、脂肪酸のメチルエステルを得た。脂肪酸メチルエステルのヘキサン溶液について、以下の条件でガスクロマトグラフィー分析を行った。
カラム（充填剤、サイズ）：ＤＢ－ＷＡＸ（長さ３０ｍ×内径２５０ｍｍ、膜厚０．２５μｍ、アジレント・テクノロジー製）
カラム温度：１７０℃で５分間保持し、１．５℃／分で２４０℃まで昇温後、１０分保持
注入口温度：２５０℃
キャリアガス：ヘリウム
流速：１．０７ｍＬ／分
脂肪酸の同定は、予め脂肪酸標準品の各成分の保持時間を求めることにより行った。また、濃度既知の標準品のピーク面積を基準として、試料の各ピークから各脂肪酸の量を算出した。各飼料の脂肪酸組成比、ｎ－３／ｎ－６比及びＨＨ比を表３に示す。
カラム（充填剤、サイズ）：ＤＢ－ＷＡＸ（長さ３０ｍ×内径２５０ｍｍ、膜厚０．２５μｍ、アジレント・テクノロジー製）
カラム温度：１７０℃で５分間保持し、１．５℃／分で２４０℃まで昇温後、１０分保持
注入口温度：２５０℃
キャリアガス：ヘリウム
流速：１．０７ｍＬ／分
脂肪酸の同定は、予め脂肪酸標準品の各成分の保持時間を求めることにより行った。また、濃度既知の標準品のピーク面積を基準として、試料の各ピークから各脂肪酸の量を算出した。各飼料の脂肪酸組成比、ｎ－３／ｎ－６比及びＨＨ比を表３に示す。
【0059】
【表3】
【0060】
＜実施例３．養殖ブリのエトキシキン等含有量の測定＞
上記条件下での給餌を開始してから０日目、７１日目、１５０日目に水揚げした試験区、対照区の養殖ブリ各２尾について、筋肉組織中の脂肪、エトキシキン、エトキシキンダイマーの含有量及び肥満度を測定した。脂肪含有量は、以下の手順で測定した。円筒ろ紙に可食部１ｇ～５ｇを量り取り、硫酸ナトリウムを加えて混合した後、脱脂綿を上層に載せ、１０５℃に温めた恒温機内で一晩静置し、水分を除いた。デシケーター内で常温になるまで静置した後、ソックスレー抽出器にてジエチルエーテル１００ｍＬを還流させて脂肪を抽出した。抽出された脂肪からジエチルエーテルを完全の蒸発させるために再度１０５℃に温めた恒温機内で１時間～２時間静置した後、デシケーター内で室温になるまで放冷し、抽出脂肪の重量を計測した。
上記条件下での給餌を開始してから０日目、７１日目、１５０日目に水揚げした試験区、対照区の養殖ブリ各２尾について、筋肉組織中の脂肪、エトキシキン、エトキシキンダイマーの含有量及び肥満度を測定した。脂肪含有量は、以下の手順で測定した。円筒ろ紙に可食部１ｇ～５ｇを量り取り、硫酸ナトリウムを加えて混合した後、脱脂綿を上層に載せ、１０５℃に温めた恒温機内で一晩静置し、水分を除いた。デシケーター内で常温になるまで静置した後、ソックスレー抽出器にてジエチルエーテル１００ｍＬを還流させて脂肪を抽出した。抽出された脂肪からジエチルエーテルを完全の蒸発させるために再度１０５℃に温めた恒温機内で１時間～２時間静置した後、デシケーター内で室温になるまで放冷し、抽出脂肪の重量を計測した。
【0061】
筋肉組織中のエトキシキン、エトキシキンダイマーの含有量は、以下の手順で測定した。可食部１０ｇに１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液１００ｍＬを加え、ホモジナイズした後に吸引ろ過により不溶物を除去し、１００μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有メタノール溶液で２００ｍＬに定容した。その内の２ｍＬをＣ１８逆相クロマトグラフィーに吸着させ、水：アセトニトリル（３：２）混液１０ｍＬで洗浄後、５０μｇ／ｍＬ ＢＨＴ含有アセトニトリル溶液溶出画分を分取し、溶出液で１０ｍＬに定容し、以下の条件で液体クロマトグラフィータンデム質量分析装置にて測定した。
＜エトキシキン＞
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５μｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：５０×５分→９５×７分
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
イオン化法：ＥＳＩ正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ２１８→１６０
＜エトキシキンダイマー＞
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５ｕｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：９５
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１μＬ
イオン化法：ＥＳＩ正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ４３３→３７５
＜エトキシキン＞
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５μｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：５０×５分→９５×７分
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
イオン化法：ＥＳＩ正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ２１８→１６０
＜エトキシキンダイマー＞
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ Ｃ１８、φ２．１ｍｍ×１５０ｍｍ、粒形５ｕｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液 ２ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム溶液
Ｂ液 メタノール
Ｂ（％）：９５
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１μＬ
イオン化法：ＥＳＩ正イオンモード
設定質量数：ｍ／ｚ ４３３→３７５
【0062】
肥満度は、各ブリについて、体重と尾叉長を測定し、式：体重（ｇ）／尾叉長（ｃｍ）３×１０００を用いて算出した。試験区、対照区の各測定値の平均値を表４に示す。筋肉組織中のエトキシキン等含有量は、最初の１～２ヶ月で顕著に低下したが、その後、低下速度が鈍化した。これは、ブリに最も脂が乗る時期が重なったためと考えられた。その後、１５０日目まで同条件での育成を継続することで、エトキシキン等含有量を十分低減させることができた。エトキシキン等含有量を脂質含有量で除した値を指標Ａとしたところ、試験区において指標Ａが安定して低減し、７１日目までに１．０×１０－５未満となることが示された。
【0063】
【表4】
【0064】
＜実施例４．養殖ブリの各種アミノ酸含有量の測定＞
上記試験区と同様の条件で１５０日間以上育成してから水揚げした養殖ブリ５尾について、可食部の普通肉と血合肉を切り出し、普通肉中のヒスチジン、イミダゾールジペプチド（アンセリン、カルノシン）の含有量、並びに血合肉中のタウリンの含有量を測定した。また、普通肉における旨味アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン）及び苦味アミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン）の含有量を測定した。
上記試験区と同様の条件で１５０日間以上育成してから水揚げした養殖ブリ５尾について、可食部の普通肉と血合肉を切り出し、普通肉中のヒスチジン、イミダゾールジペプチド（アンセリン、カルノシン）の含有量、並びに血合肉中のタウリンの含有量を測定した。また、普通肉における旨味アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン）及び苦味アミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン）の含有量を測定した。
【0065】
各種アミノ酸、イミダゾールジペプチド及びタウリンの含有量の測定は以下の手順で実施した。水揚げした魚体の血抜き処理を行った後、塩水氷水下で冷却した。その後、冷蔵庫内で普通肉と血合肉を採取した。適切な量の採取した肉を秤量し、０．０２Ｍ塩酸を添加して破砕した後、９倍容量となるよう０．０２Ｍ塩酸を添加した。試料を十分に攪拌した後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分、４℃）により上清液を分離した。上清液に対して等容量の３％スルホサリチル酸水溶液を加え、再度遠心分離（１００００ｒｐｍ、１０分、４℃）を行い、上清部を回収して除タンパク処理を行った。さらに上清液に対して２／３倍量のｎ－ヘキサンを加えて攪拌後、遠心分離（１００００ｒｐｍ、１０分、４℃）を行い、下層部を回収して脱脂処理を行った。この溶液又は必要に応じて１０倍希釈した溶液をメンブレンろ過（０．４５μｍ）したろ液を、アミノ酸分析計（日立製作所製ＬＡ８０８０）に供して、各種アミノ酸の含有量を分析した。各種アミノ酸の測定結果を表５に示す。
【0066】
【表5】
【0067】
＜実施例５．養殖ブリの脂肪酸組成比の測定＞
上記条件下での給餌を開始してから０日目、７１日目、１５０日目に水揚げした試験区の養殖ブリ各３尾について、筋肉組織中の脂質の脂肪酸組成比を測定した。脂肪酸組成比は、以下の手順で測定した。切り出した筋肉組織１００～２００ｍｇに内部標準として１０ｍｇ／ｍＬ トリコサン酸メチル５０μＬを添加した後、蒸留水１ｍＬを添加し、クロロホルム：メタノール＝１：１溶液を５ｍＬ加えて攪拌した。遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分、１０℃）を行った後、下層部を綿栓ろ過して減圧乾燥して脂質を抽出した。得られた脂質に０．５Ｍ水酸化ナトリウム・メタノール溶液３００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、９分間加熱してけん化した。冷却後、三フッ化ホウ素メタノール溶液（ＡＬＤＲＩＣＨ製）４００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、７分間加熱してメチルエステル化した。冷却後、蒸留水６００μＬ、ヘキサン６００μＬを加えて攪拌した後、遠心分離を行い、上層部を回収して無水硫酸ナトリウムにて脱水後、減圧乾燥して、脂肪酸のメチルエステルを得た。脂肪酸メチルエステルのヘキサン溶液について、以下の条件でガスクロマトグラフィー分析を行った。
カラム（充填剤、サイズ）：ＤＢ－ＷＡＸ（長さ３０ｍ×内径２５０ｍｍ、膜厚０．２５μｍ、アジレント・テクノロジー製）
カラム温度：１７０℃で５分間保持し、１．５℃／分で２４０℃まで昇温後、１０分保持
注入口温度：２５０℃
キャリアガス：ヘリウム
流速：１．０７ｍＬ／分
脂肪酸の同定は、予め脂肪酸標準品の各成分の保持時間を求めることにより行った。また、濃度既知の標準品のピーク面積を基準として、試料の各ピークから各脂肪酸の量を算出した。表６に、脂肪酸組成比の測定結果を示す。
上記条件下での給餌を開始してから０日目、７１日目、１５０日目に水揚げした試験区の養殖ブリ各３尾について、筋肉組織中の脂質の脂肪酸組成比を測定した。脂肪酸組成比は、以下の手順で測定した。切り出した筋肉組織１００～２００ｍｇに内部標準として１０ｍｇ／ｍＬ トリコサン酸メチル５０μＬを添加した後、蒸留水１ｍＬを添加し、クロロホルム：メタノール＝１：１溶液を５ｍＬ加えて攪拌した。遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分、１０℃）を行った後、下層部を綿栓ろ過して減圧乾燥して脂質を抽出した。得られた脂質に０．５Ｍ水酸化ナトリウム・メタノール溶液３００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、９分間加熱してけん化した。冷却後、三フッ化ホウ素メタノール溶液（ＡＬＤＲＩＣＨ製）４００μＬを加えて攪拌し、窒素雰囲気下にて１００℃、７分間加熱してメチルエステル化した。冷却後、蒸留水６００μＬ、ヘキサン６００μＬを加えて攪拌した後、遠心分離を行い、上層部を回収して無水硫酸ナトリウムにて脱水後、減圧乾燥して、脂肪酸のメチルエステルを得た。脂肪酸メチルエステルのヘキサン溶液について、以下の条件でガスクロマトグラフィー分析を行った。
カラム（充填剤、サイズ）：ＤＢ－ＷＡＸ（長さ３０ｍ×内径２５０ｍｍ、膜厚０．２５μｍ、アジレント・テクノロジー製）
カラム温度：１７０℃で５分間保持し、１．５℃／分で２４０℃まで昇温後、１０分保持
注入口温度：２５０℃
キャリアガス：ヘリウム
流速：１．０７ｍＬ／分
脂肪酸の同定は、予め脂肪酸標準品の各成分の保持時間を求めることにより行った。また、濃度既知の標準品のピーク面積を基準として、試料の各ピークから各脂肪酸の量を算出した。表６に、脂肪酸組成比の測定結果を示す。
【0068】
【表6】
【手続補正書】
【提出日】2023-03-27
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0005】
【非特許文献1】飼料添加物・農薬評価書 エトキシキン ２０１３年１１月 食品安全委員会 URL https://www.fsc.go.jp/fsciis/evaluationDocument/show/kya20120912002
【手続補正書】
【提出日】2023-05-18
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ブリ属養殖魚の育成方法であって、
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が０ｐｐｍ超２０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が０ｐｐｍ超２０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
【請求項2】
前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記ブリ属養殖魚の肥満度が１７以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が０ｐｐｍ超１０ｐｐｍ以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、請求項１又は５に記載の方法。
【請求項7】
前記餌が配合飼料である、請求項１又は５に記載の方法。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0008】
すなわち、本発明は以下を提供するものである。
（１）ブリ属養殖魚の育成方法であって、
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が０ｐｐｍ超２０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
（２）前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、（１）に記載の方法。
（３）前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、（２）に記載の方法。
（４）前記ブリ属養殖魚の肥満度が１７以上である、（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、（１）～（５）のいずれかに記載の方法。
（７）前記餌が配合飼料である、（１）～（６）のいずれかに記載の方法。
（１）ブリ属養殖魚の育成方法であって、
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が０ｐｐｍ超２０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
（２）前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、（１）に記載の方法。
（３）前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、（２）に記載の方法。
（４）前記ブリ属養殖魚の肥満度が１７以上である、（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、（１）～（５）のいずれかに記載の方法。
（７）前記餌が配合飼料である、（１）～（６）のいずれかに記載の方法。
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0043】
本発明の方法において、上記餌の給餌頻度（給餌期間中の週平均給餌回数）は、週３回以上、好ましくは週５回以上、より好ましくは週７回とする。１日の給餌回数は、１回以下とすることが好ましい。本発明の方法において、上記餌を給餌する期間は、出荷前の７０日間以上、好ましくは、出荷前の１５０日間以上とする。上記餌を７０日間以上給餌することで、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織における、下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値を１．０×１０－５以下とすることができる。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン等含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
一方、ブリ属養殖魚は、季節によって可食部の脂のり、すなわち可食部における筋肉組織に含まれる脂質量が増加する。一方、エトキシキン等は脂溶性であり、脂質中に蓄積されやすい。そのため、脂のりのよい時期には、上記指標Ａの値を低く抑えることは可能であるが、エトキシキンダイマー等の含有量自体は低減しにくいことがある。しかしながら、上記餌を給餌する期間を１５０日間以上とすることで、育成開始時期に限らず、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織のエトキシキン等含有量を２ｐｐｍ以下、特に１ｐｐｍ以下とすることができる。ここでいう「出荷前」の期間は、出荷直前の期間を指し、例えば、「出荷前の７０日間以上給餌する」という記載は、出荷日を起算日として７０日間以上前から出荷直前まで、上記条件を満たす給餌を行うことを意味する。
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン等含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
一方、ブリ属養殖魚は、季節によって可食部の脂のり、すなわち可食部における筋肉組織に含まれる脂質量が増加する。一方、エトキシキン等は脂溶性であり、脂質中に蓄積されやすい。そのため、脂のりのよい時期には、上記指標Ａの値を低く抑えることは可能であるが、エトキシキンダイマー等の含有量自体は低減しにくいことがある。しかしながら、上記餌を給餌する期間を１５０日間以上とすることで、育成開始時期に限らず、育成されるブリ属養殖魚の筋肉組織のエトキシキン等含有量を２ｐｐｍ以下、特に１ｐｐｍ以下とすることができる。ここでいう「出荷前」の期間は、出荷直前の期間を指し、例えば、「出荷前の７０日間以上給餌する」という記載は、出荷日を起算日として７０日間以上前から出荷直前まで、上記条件を満たす給餌を行うことを意味する。
【手続補正4】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0068】
【表6】
本願発明は、以下の実施形態を包含する。
（１）下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０ －５ 以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）。
（２）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、（１）に記載のブリ属養殖魚。
（３）可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、（２）に記載のブリ属養殖魚。
（４）肥満度が１７以上である、（１）～（３）のいずれかに記載のブリ属養殖魚。
（５）前記筋肉組織のうち、普通肉のイミダゾール系化合物の含有量が８２０ｍｇ／１００ｇ以上であり、前記イミダゾール系化合物中のイミダゾールジペプチドの含有率が１．０重量％以上であり、可食部の筋肉組織のうち、血合肉のタウリンの含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上である、（１）～（４）のいずれかに記載のブリ属養殖魚。
（６）普通肉のヒスチジンの含有量が８００ｍｇ／１００ｇ以上である、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（７）前記イミダゾールジペプチドにアンセリンが含まれる、（５）に記載のブリ属養殖魚。
（８）可食部の筋肉組織のＨＨ比（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｒａｔｉｏ）が２．５以上であり、かつ、可食部の脂質における一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の含有量が、脂肪酸組成比で３４．０％以上である、（１）～（７）のいずれかに記載のブリ属養殖魚。
（９）前記可食部の筋肉組織の脂質における炭素数２０以上の一価不飽和脂肪酸及びその誘導体の合計含有量が、脂肪酸組成比で２．４％以上である、（１）～（８）のいずれかに記載のブリ属養殖魚。
（１０）エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２０ｐｐｍ以下の餌を、週３回以上の頻度で、出荷前に７０日間以上給餌することを含む、ブリ属幼少魚の育成方法。
（１１）前記餌のエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１０ｐｐｍ以下である、（１０）に記載の方法。
（１２）前記餌を出荷前に１５０日間以上給餌することを含む、（１０）又は（１１）に記載の方法。
（１３）前記餌が配合飼料である、（１０）～（１２）のいずれかに記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】2023-08-24
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ブリ属養殖魚の育成方法であって、
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以上１０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上１５０日間以下の期間給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
エトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以上１０ｐｐｍ以下の餌を、出荷前に７０日間以上１５０日間以下の期間給餌すること、及び
下記式（Ｉ）で示される指標Ａの値が１．０×１０－５以下である、ブリ属養殖魚：
Ａ＝Ｂ／Ｃ ・・・（Ｉ）
（式中Ｂは、可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量（ｐｐｍ）であり、Ｃは、可食部の筋肉組織に含まれる脂質量（ｐｐｍ）を示す）
を得ることを含む、
方法。
【請求項2】
前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が２ｐｐｍ以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ブリ属養殖魚の可食部の筋肉組織に含まれるエトキシキン及びエトキシキンダイマーの合計含有量が１ｐｐｍ以下である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記ブリ属養殖魚の肥満度が１７以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記餌が配合飼料である、請求項１に記載の方法。