特開 2023-29828 毛細血管退行抑制剤、骨格筋萎縮抑制剤、及びそれらの製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023029828

(43)【公開日】2023-03-07

(54)【発明の名称】毛細血管退行抑制剤、骨格筋萎縮抑制剤、及びそれらの製造方法

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/105 20160101AFI20230228BHJP

   A61K 31/7024 20060101ALI20230228BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20230228BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 36/74 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/216 20060101ALI20230228BHJP

   A23L 2/52 20060101ALI20230228BHJP

   A23F 5/02 20060101ALI20230228BHJP

   A23F 5/24 20060101ALI20230228BHJP

【ＦＩ】

A23L33/105

A61K31/7024

A61P19/00

A61P9/14

A61K36/74

A61K31/216

A23L2/52

A23L2/00 F

A23F5/02

A23F5/24

【審査請求】未請求

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022132128

(22)【出願日】2022-08-22

(31)【優先権主張番号】P 2021135256

(32)【優先日】2021-08-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(71)【出願人】

【識別番号】504150450

【氏名又は名称】国立大学法人神戸大学

(71)【出願人】

【識別番号】390006600

【氏名又は名称】ユーシーシー上島珈琲株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000822

【氏名又は名称】特許業務法人グローバル知財

(72)【発明者】

【氏名】藤野 英己

(72)【発明者】

【氏名】岩井 和也

【テーマコード（参考）】

4B018

4B027

4B117

4C086

4C088

4C206

【Ｆターム（参考）】

4B018LB08

4B018LE03

4B018MD08

4B018MD10

4B018MD57

4B018ME14

4B018MF01

4B027FB28

4B027FC06

4B027FE02

4B027FK10

4B027FQ01

4B027FQ06

4B117LC04

4B117LG17

4B117LK08

4B117LP01

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA03

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA43

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA44

4C086ZA96

4C088AB14

4C088AC04

4C088AC14

4C088BA08

4C088BA11

4C088BA13

4C088BA23

4C088CA03

4C088MA43

4C088MA52

4C088NA14

4C088ZA44

4C088ZA96

4C206AA01

4C206AA02

4C206DB20

4C206DB56

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA63

4C206MA72

4C206NA14

4C206ZA44

4C206ZA96

(57)【要約】

【課題】毛細血管退行抑制剤、骨格筋萎縮抑制剤、及びそれらの製造方法を提供する。
【解決手段】毛細血管退行抑制剤と骨格筋萎縮抑制剤は、クロロゲン酸類を有効成分として含有する。クロロゲン酸類はコーヒー豆抽出物に由来することが好ましく、より好ましくは、クロロゲン酸類がコーヒー生豆抽出物に由来する。毛細血管退行抑制剤や骨格筋萎縮抑制剤として用いるコーヒー生豆抽出物は、脱カフェイン、かつ、コーヒーオイルが搾油され、粉末状である。コーヒー生豆抽出物は、カネフォラ種（ロブスタ種）のコーヒー生豆を用いて、クロロゲン酸類の含有割合を３５重量％以上とする。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

クロロゲン酸類を有効成分として含有する毛細血管退行抑制剤。

【請求項2】

クロロゲン酸類を有効成分として含有する骨格筋萎縮抑制剤。

【請求項3】

クロロゲン酸類が、コーヒー豆抽出物に由来する請求項１記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項4】

クロロゲン酸類が、コーヒー生豆抽出物に由来する請求項１記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項5】

コーヒー生豆抽出物が、脱カフェイン、かつ、コーヒーオイルが搾油されたコーヒー生豆の抽出物である請求項４記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項6】

コーヒー豆種が、カネフォラ種である請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項7】

関与成分が、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡの９成分から選択される少なくとも一種の成分である請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項8】

関与成分が、５－ＣＱＡの成分と、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡの８成分から選択される少なくとも一種の成分である請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項9】

粉末状である請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤。

【請求項10】

請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤、又は、請求項２記載の骨格筋萎縮抑制剤を含有する飲料品。

【請求項11】

請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤、又は、請求項２記載の骨格筋萎縮抑制剤を含有する食品。

【請求項12】

請求項１，３～５の何れかに記載の毛細血管退行抑制剤、又は、請求項２記載の骨格筋萎縮抑制剤を含有する医薬組成物。

【請求項13】

コーヒー生豆を粉砕するステップと、
コーヒー生豆を浸水するステップと、
含水アルコールにて抽出するステップと、
濃縮・乾燥するステップと、
上記ステップを経て得られたコーヒー豆抽出物に含まれるクロロゲン酸類を有効成分として含有させるステップ、
を備え、
クロロゲン酸類の含有割合を２５重量％以上とした、毛細血管退行抑制剤または骨格筋萎縮抑制剤の製造方法。

【請求項14】

カネフォラ種のコーヒー生豆を用いて、クロロゲン酸類の含有割合を３５重量％以上とした請求項１３に記載の製造方法。

【請求項15】

クロロゲン酸類において、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡからなる群から選択される特定成分の濃度を高めるステップを更に備えた請求項１３又は１４に記載の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、クロロゲン酸類を有効成分とした毛細血管退行抑制剤、骨格筋萎縮抑制剤、及びそれらの製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

骨格筋における毛細血管網は、骨格筋細胞への酸素供給や、栄養素や代謝産物の輸送手段として重要であり、筋活動が増加すると、骨格筋内の機能的な毛細血管数は増加し、赤血球速度も上昇し、骨格筋の血流量が増加する。このように毛細血管網は、機能的に筋細胞への血流調節を行う。また、慢性的な筋活動量の増加は、構造的に毛細血管数を増加させる。

【0003】

一方で、骨折等の怪我や疾患による長期の臥床により、骨格筋萎縮となり筋組織が減少することが知られている。長期にわたる臥床状態では、筋活動が減少し、代謝が低下し、骨格筋に必要な酸素や糖などのエネルギー源の需要も低下する。臥床状態が継続すると、骨格筋細胞内の収縮タンパクの分解が進行し、骨格筋萎縮（廃用性筋萎縮）を生じ、筋線維の横断面積の減少が生じる。骨格筋の性質にも変化が起こり、遅筋線維の割合の減少、さらに筋細胞単位の毛細血管数を表す毛細血管／筋線維比（Capillary to muscle Fiber ratio；Ｃ／Ｆ比）の減少が生じることになる。

【0004】

骨格筋萎縮による筋組織の退行の回復のためには、長期のリハビリテーションが必要である。骨格筋萎縮においては、筋タンパク質の分解やアポトーシスなどによって筋細組織（細胞）自体と毛細血管の退行が生じている。そのため、骨格筋萎縮を通常の状態に回復させるためには、筋組織中に毛細血管の新生を促進させ、筋組織の増加を生じさせることが必要である。

【0005】

このように、骨格筋萎縮による筋組織の退行の回復には、毛細血管の退行を抑制し、回復を促進することが重要である。
既に、本発明者は、アスタキサンチンを有効成分とする毛細血管退行抑制剤を提案し（特許文献１を参照）、また、廃用性萎縮筋における毛細血管の血管増殖の抑制因子について研究を行ってきた（非特許文献１を参照）。
かかる状況において、安全性が高く、食品に多く含まれ、退行抑制効果が高い毛細血管退行抑制剤、さらには骨格筋萎縮抑制剤が必要とされている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特開２０１２－２４６２４４号公報

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】藤野英己ら，“廃用性萎縮筋における毛細血管リモデリングと血管増殖因子の抑制”，理学療法科学，第23巻2号，pp.203－208，2008．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、毛細血管退行抑制剤、骨格筋萎縮抑制剤、及びそれらの製造方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0009】

上記課題を解決すべく、本発明の毛細血管退行抑制剤は、クロロゲン酸類を有効成分として含有する。クロロゲン酸類を有効成分として含有する剤は、毛細血管の退行を効果的に抑制することができる。
ここで、クロロゲン酸類は、１８３７年にRobiquetらにより初めてコーヒー豆から見つかった物質であり、ポリフェノールと呼ばれる機能性物質群の１つである。クロロゲン酸類は、キナ酸（quinic acid）とカフェー酸（caffeic acid）とが結合した化合物群の総称であり、多くの種類が存在し、特に、コーヒー生豆には、カフェオイルキナ酸（ＣＱＡ）、フェルロイルキナ酸（ＦＱＡ）、ジカフェオイルキナ酸（ｄｉ－ＣＱＡ）が多く含有されている。このうち、キナ酸の５位のヒドロキシ基にカフェー酸がエステル結合した５－カフェオイルキナ酸（５－ＣＱＡ）が、コーヒー生豆に含有されているクロロゲン酸類の中で、最も成分含有率が高く、単に「クロロゲン酸」と呼ばれる。
クロロゲン酸類は、コーヒーの他に、りんご、春菊、さつまいも、じゃがいも、ごぼう、カカオ豆などに多く含まれている。クロロゲン酸類は、脂肪の吸収抑制剤、発癌の予防剤，糖尿病の予防剤などの有効成分として知られている。

【0010】

また、本発明の骨格筋萎縮抑制剤は、クロロゲン酸類を有効成分として含有する。クロロゲン酸類を有効成分として含有する剤は、骨格筋萎縮を効果的に抑制することができる。

【0011】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、クロロゲン酸類が、コーヒー豆抽出物に由来することが好ましく、より好ましくは、クロロゲン酸類が、コーヒー生豆抽出物に由来することである。また、コーヒー豆抽出物について、コーヒー生豆から抽出したもの以外では、コーヒー焙煎豆から抽出したものが含まれる。なお、コーヒー焙煎豆の内、浅焙煎の方が、クロロゲン酸類を多く含有させることができる。
本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。

【0012】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、コーヒー生豆抽出物が、脱カフェイン、かつ、コーヒーオイルが搾油されたコーヒー生豆の抽出物であることでもよい。本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。コーヒー生豆抽出物には、コーヒー豆由来の不快な臭いがあり、またカフェインを多く含有するため、人によっては大量に摂取すると、頭痛や不眠、吐き気などの症状が現れる。そのため、コーヒー生豆抽出物からカフェインとコーヒーオイルを取り除くことにより、飲料や食品としての利用の促進を図ることができる。

【0013】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、コーヒー豆種が、カネフォラ種（ロブスタ種ともいう）であることが好ましい。本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。コーヒー豆種は大別して、アラビカ種とロブスタ種に分けられるが、この内、ロブスタ種の方がアラビカ種よりもクロロゲン酸類が多く含有されている。典型的なコーヒー生豆の場合、ロブスタ種であればコーヒー生豆１００ｇ当たり１０．４ｇ含まれており、アラビカ種であればコーヒー生豆１００ｇ当たり６．６ｇ含まれている。

【0014】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、関与成分が、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡの９成分から選択される少なくとも一種の成分であることが好ましい。本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。

【0015】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、関与成分が、５－ＣＱＡの成分と、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡの８成分から選択される少なくとも一種の成分であることでもよい。或いは、本発明の毛細血管退行抑制剤における関与成分が、５－ＣＱＡの成分と、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＦＱＡの３成分から選択される少なくとも一種の成分である。或いは、本発明の毛細血管退行抑制剤における関与成分が、５－ＣＱＡの成分である。
本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。
後述する実施例で説明するように、クロロゲン酸類を多く含有するコーヒー生豆抽出物を用いた毛細血管の退行抑制効果を検証した。コーヒー生豆抽出物におけるクロロゲン酸類は、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡの９種の成分が含まれており、特に、５－ＣＱＡの含有量が他の成分と比べて極めて多い。また、例えば、ロブスタ種の典型的なコーヒー生豆抽出物におけるクロロゲン酸類では、５－ＣＱＡ、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＦＱＡの４成分が、他の残り５成分と比べても、成分含有量が非常に高いことが知られている（河野洋一らの「コーヒー豆中のクロロゲン酸類と総ポリフェノールの分析」、分析化学（２０１６年）第６５巻６号３３１～３３３頁の図１，表２，表３を参照）。典型的なコーヒー生豆の場合、ロブスタ種であれば５－ＣＱＡが総クロロゲン酸類の約５０％、アラビカ種であれば５－ＣＱＡが総クロロゲン酸類の約６４％含まれている。

【0016】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、粉末状であることでもよい。パウダー（粉末）にすることで、経口投与が容易となる。例えば、クロロゲン酸類を多く含む自然由来の物から抽出した液を、濃縮し、スプレードライ、フリーズドライなどの手法を用いて乾燥させて、粉末にすることでもよい。本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。

【0017】

本発明の飲料品は、上記の何れかの毛細血管退行抑制剤、又は、上記の骨格筋萎縮抑制剤を含有する。本発明の食品は、上記の何れかの毛細血管退行抑制剤、又は、上記の骨格筋萎縮抑制剤を含有する。本発明の医薬組成物は、上記の何れかの毛細血管退行抑制剤、又は、上記の骨格筋萎縮抑制剤を含有する。

【0018】

本発明の毛細血管退行抑制剤または骨格筋萎縮抑制剤の製造方法は、下記１）～５）の各ステップを備え、クロロゲン酸類の含有割合を２５重量％以上としたものである。
１）コーヒー生豆を粉砕するステップ。
２）コーヒー生豆を浸水するステップ。
３）含水アルコールにて抽出するステップ。
４）濃縮・乾燥するステップ。
５）上記ステップを経て得られたコーヒー豆抽出物に含まれるクロロゲン酸類を有効成分として含有させるステップ。
また、上記３）の含水アルコールにて抽出するステップの前に、コーヒー生豆からカフェインを除去するステップを設けても構わない。カフェイン除去の処理は、公知の処理方法を利用することができる。コーヒー生豆を水に浸漬してカフェインを除去することもでき、また、コーヒー生豆を熱水で抽出し、その抽出液に特殊な吸着剤を使用して選択的にカフェインを除去することもできる（例えば、塩野貴史らの「天然吸着剤による飲料からのカフェイン除去技術」（日本食品科学工学会誌、第６５巻第３号、９９－１０３頁、２０１８年３月）を参照）。また、超臨界流体の二酸化炭素を用いて、圧力１０ＭＰａ以上の高圧、６５～８０℃の高温でカフェインを除去し、同時にコーヒーオイルを搾油することもできる。

【0019】

本発明の毛細血管退行抑制剤または骨格筋萎縮抑制剤の製造方法は、カネフォラ種（ロブスタ種）のコーヒー生豆を用いて、クロロゲン酸類の含有割合を３５重量％以上としたことでもよい。

【0020】

本発明の毛細血管退行抑制剤または骨格筋萎縮抑制剤の製造方法は、クロロゲン酸類において、３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３，４－ｄｉＣＱＡ、３，５－ｄｉＣＱＡ、４，５－ｄｉＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ、５－ＦＱＡからなる群から選択される特定成分の濃度を高めるステップを更に備えたことが好ましい。本発明者の一人の岩井は、既に、コーヒー生豆抽出物をクロマトグラフィーにて分画精製する方法を示している（Iwai et al, “In vitro antioxidative effects and tyrosinase
inhibitory activities of seven hydroxycinnamoyl derivatives in green coffee beans.”,
J. Agric. Food Chem., 52(15), pp.4893－4898,2004の図２を参照、すなわち、図２の右縦軸がメタノール濃度を示しており、メタノール濃度を変化させてグラジエント溶出により、クロロゲン酸類を異性体ごとに取り出せることができることを示している。）。また、岩井の論文（Iwai et al, “Study on the Postprandial
Glucose Responses to a Chlorogenic Acid-Rich Extract of Decaffeinated Green
Coffee Beans in Rats and Healthy Human Subjects.”, Food
Sci. Technol. Res., 18 (6), 849－860, 2012）の図２を参照、すなわちメタノールのグラジエント溶出により、クロロゲン酸類を異性体ごとに取り出す方法だけでなく、エタノールのステップワイズによる溶出でも、クロロゲン酸類において、特定成分の濃度を高めることが可能である。

【発明の効果】

【0021】

本発明によれば、毛細血管の退行を抑制でき、また骨格筋萎縮を抑制できるといった効果がある。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ラットヒラメ筋のＡＰ染色の光学顕微鏡像

【図2】ラットヒラメ筋の毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）を示すグラフ

【図3】ラットヒラメ筋のコハク酸脱水素酵素（ＳＤＨ）活性を示すグラフ

【図4】ラットヒラメ筋の筋線維横断面積を示すグラフ

【図5】ラットヒラメ筋のＤＨＥ蛍光強度を示すグラフ

【図6】コーヒー生豆抽出物の成分内訳を示すグラフ

【図7】コーヒー生豆抽出物の作製フロー図

【図8】ラットヒラメ筋のＡＰ染色の光学顕微鏡像（２）

【図9】ラットヒラメ筋のコハク酸脱水素酵素（ＳＤＨ）染色像

【図10】ラットヒラメ筋の毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）を示すグラフ（２）

【図11】ラットヒラメ筋のコハク酸脱水素酵素（ＳＤＨ）活性を示すグラフ（２）

【発明を実施するための形態】

【0023】

本発明は、クロロゲン酸類を有効成分とする毛細血管退行抑制剤である。毛細血管退行とは、高齢や病気などによる運動機能の低下などによる身体組織の退行に伴う毛細血管組織の縮小や消滅である。身体組織の退行として、例えば、手足など固定や寝たきりや無重力状態での生活などによる骨格筋委縮などが挙げられる。

【0024】

毛細血管退行抑制とは、身体組織の退行に伴う毛細血管の退行の抑制である。生体の治癒力によって、減少した身体組織の再生が行われるが、組織再生は、まず各種の栄養分を輸送する毛細血管網が再生され、組織細胞が増加していく。毛細血管の退行を抑制することにより、身体組織の回復期間を短縮可能である。

【0025】

本発明におけるクロロゲン酸類について説明する。クロロゲン酸類には、安全性から、天然物由来が好ましい。天然物由来のクロロゲン酸類には、例えば、コーヒー生豆、りんご、春菊、さつまいも、じゃがいも、ごぼう、カカオ豆などの抽出物（エキス）に含有されるクロロゲン酸類が挙げられる。

【0026】

ここで、コーヒー生豆の抽出物を得る方法の一例としては、コーヒー生豆を有機溶媒に懸濁させて粉砕し同時に抽出する方法や、二酸化炭素などで超臨界抽出する方法が挙げられる。
ここで、二酸化炭素などで超臨界抽出する方法は、圧力１０ＭＰａ以上の高圧、６５～８０℃の高温状態の超臨界流体の二酸化炭素を用いて、コーヒー生豆を抽出するのがよい。コーヒー生豆抽出物中のカフェインを溶出するときは、一般的に、超臨界流体の二酸化炭素の温度、圧力がそれぞれ高ければ高いほど溶出される。二酸化炭素は、約７．３ＭＰａ・３１℃で、気体とも液体ともつかない状態になり（臨界点）、この臨界点を超える状態を超臨界流体の状態というが、本発明の超臨界処理の条件としては、圧力１０ＭＰａ以上、更に好ましくは４５ＭＰａ以上であり、温度は６５～８０℃である。なお、温度が６５℃以下であるとカフェインは除去しにくく、８０℃以上にするとクロロゲン酸がコーヒー生豆から抽出・分解され始める。

【0027】

本発明の毛細血管退行抑制剤におけるクロロゲン酸類の投与量（摂取量）は、成人では１日あたり体重１ｋｇ当たり、５００～１０００ｍｇを経口投与することでよい。１日の摂取量に基づいて、複数回に分けて摂取することでもよい。また、投与量は、投与される患者の年齢、体重、投与形態によって異なるが、１日の摂取量によって適宜配合すればよい。
本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。

【0028】

本発明の毛細血管退行抑制剤は、骨格筋委縮の予防や治療時に投与する。本発明の毛細血管退行抑制剤は、飲料品、食品、医薬品に配合することができる。本発明の血管退行抑制剤には、医薬部外品も含まれる。
本発明の血管退行抑制剤は、健康食品、一般食品、サプリメント、飲料として用いることができる。錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投与形態、シロップ及び懸濁液のような液体投与形態で摂取できる。なお、ヒト以外への動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、犬、猫、豚、牛など）に対して、本発明の血管退行抑制剤を飼料として投与しても構わない。
また、本発明の毛細血管退行抑制剤は、コーヒー生豆、りんご、春菊、さつまいも、じゃがいも、ごぼう、カカオ豆などの抽出物をそのまま直接使用することもできるし、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、副素材、増量剤、安定剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造し、使用することもできる。医薬品として用いる場合、投与形態としては、例えば、粉末剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、乳剤、懸濁液剤、シロップ剤などによる経口投与、粉末飲料、液体飲料（ドリンク剤など）などの食品の形態、注射剤、軟膏剤、坐剤、エアゾール剤などによる非経口投与を挙げることができる。
本発明の骨格筋萎縮抑制剤についても同様である。

【0029】

以下、本発明の実施形態の一例を、図面を参照しながら詳細に説明していく。なお、本発明の範囲は、以下の実施例や図示例に限定されるものではなく、幾多の変更及び変形が可能である。

【実施例0030】

クロロゲン酸類の摂取が、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行に与える効果について検証した。検証に用いたクロロゲン酸類は、自然由来のもの、具体的には、コーヒー生豆抽出物に含有されているものを使用した。
検証実験は、高齢（リタイア）のＷｉｓｔａｒ系雄ラット２４匹を、無作為に６匹ずつ、下記１）～４）の４群に区分し、１４日間の飼育後に行った。
１）対照群（ＣＯＮＴ群；ｎ＝６）
２）クロロゲン酸類摂取群（ＣＧＡ群；ｎ＝６）
３）後肢非荷重群（ＨＵ群；ｎ＝６）
４）後肢非荷重群＋クロロゲン酸類摂取群（ＨＵ＋ＣＧＡ群；ｎ＝６）

【0031】

上記２），４）におけるクロロゲン酸類摂取群とは、１４日間、１日２回、コーヒー生豆抽出物の乾燥粉末を経口投与（１日当たり、ラットの体重１ｋｇに対して粉末８５０ｍｇを投与）したラット群である。また、上記３），４）における後肢非荷重群とは、ラットの尾部を懸垂するＭｏｒｅｙ法により、１４日間、後肢を非荷重状態にしたラット群である。
各群のラットは、室温で、１２時間の明暗周期の環境下で、個別ケージにて１４日間飼育し、食餌及び飲水は自由に与えた。なお、動物実験は、神戸大学の動物実験に関する承認を得たうえで、神戸大学の規則等に加えて、「動物の愛護及び管理に関する法律」（昭和４８年１０月１日法律第１０５号、最終改正令和元年法律第３９号）、「実験動物の飼養および保管等に関する基準」、「実験動物の飼養及び保管並びに苦痛の軽減に関する基準」（環境省）、「動物の愛護及び管理に関する施策を総合的に推進するための基本的な指針」（環境省）、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）による Guidelines for the Care and Use of Laboratory Animals (National
Research Council 1996)等を遵守して実施された。

【0032】

各群について１４日間の飼育後、下肢のヒラメ筋における毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）、コハク酸脱水素酵素（コハク酸デヒドロゲナーゼ；ＳＤＨ）、筋線維横断面積について、組織化学染色を用いて測定を行った。
具体的には、以下の手順で測定を実施した。
まず、ヒラメ筋における組織切片について、クリオスタット（CM3050，Leica Microsystems）を使用して、厚さ１２μｍの切片を作成した。組織切片は毛細血管を観察するためにアルカリフォスファターゼ（Alkaline Phosphatase；ＡＰ）染色、また、酸化系酵素を測定するためにコハク酸脱水素酵素（succinate
dehydrogenase；ＳＤＨ）染色を施した。

【0033】

ＡＰ染色は毛細血管を観察する方法として広く用いられており、主に動脈系毛細血管と動静脈移行毛細血管を染色することができる。毛細血管は、酸素や栄養素を運搬する役割を担っており、細胞における酸素需要が増加すると速やかな変化を示す。また、骨格筋では、収縮や運動で骨格筋細胞の活動が増加すると毛細血管数が増加することが知られている。
ＡＰ染色は、Hansen-Smithらの方法を用いて、切片をフォルマリン・アセトンで前固定後、ホウ酸緩衝液３０ｍＬ中に、5bromo-4-chloro-3-indoxyl
phosphate toluidine salt ６ｍｇと、nitroblue tetrazolium ３０ｍｇを含む反応液で、６０分間、３７℃で反応させた。
ＳＤＨ染色は、5bromo-4-chloro-3-indoxyl phosphate toluidine salt，０．２Ｍのコハク酸ナトリウム、０．２Ｍのリン酸緩衝液を混合した反応液で、４５分間、３７℃で反応させた。

【0034】

ＡＰ染色およびＳＤＨ染色を施したラットヒラメ筋の標本を用いて、１標本当たり４箇所の顕微鏡視野を任意に選択して、光学顕微鏡で観察し、毛細血管の分布、筋線維横断面積、ＳＤＨ活性の測定を行った。
光学顕微鏡観察では、詳しくは、光学顕微鏡に接続した冷却ＣＣＤカメラを介して、顕微鏡の光量、シャッター速度を一定にして、明視野像を取得した。そして、ＡＰ染色の結果から、ヒラメ筋の単位面積当たりの筋線維と毛細血管数の割合である毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）と，筋線維横断面積とを、画像処理で測定した。また、ＳＤＨ染色の結果から、筋線維のタイプ別にＳＤＨ活性を可視密度として画像処理で測定した。

【0035】

ここで、ＳＤＨ活性の測定について説明する。
骨格筋は収縮エネルギーとして、アデノシン３リン酸（ＡＴＰ）を用いる。骨格筋へのＡＴＰの供給は、クレアチンリン酸によるＡＴＰ再合成（ATP-Cr 系）、グリコーゲンの分解による解糖系（無酸素ＡＴＰ合成系）、及び、酸化系酵素活性によるＴＣＡサイクル（有酸素ＡＴＰ合成系）により行われること、その中でも、ミトコンドリアにおける酸化的リン酸化反応は、効率よくＡＴＰを生産する機構であることが知られている。そのため、酸化系酵素のＳＤＨ活性を測定する。

【0036】

測定結果について、図１～図５に示す。図１は、各群におけるラットヒラメ筋の標本におけるＡＰ染色の光学顕微鏡像を示している。図１（Ａ）～（Ｄ）は、それぞれ、ＣＯＮＴ群、ＣＧＡ群、ＨＵ群、ＨＵ＋ＣＧＡ群を示している。図１中、細胞の周りに黒点で観えるのが毛細血管である。
図２のグラフは毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）を示している。また、図３のグラフはヒラメ筋のＳＤＨ活性を示し、図４のグラフはヒラメ筋の筋線維横断面積を示している。さらに、図５のグラフは、ヒラメ筋のＤＨＥ（Dihydroethidium）蛍光強度を示している。なお、図２～図５のグラフにおいて、数値は、平均±標準誤差（ＳＥＭ）（ｎ＝５）を示している。

【0037】

毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）のグラフ（図２）から、ＣＧＡ群（実施例１Ａ）は、ＣＯＮＴ群（比較例Ａ）と比較して、Ｃ／Ｆ比が有意に高値を示す結果であった。また、後肢非荷重をしたＨＵ群（比較例Ｂ）及びＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）では、ＣＯＮＴ群（比較例Ａ）と比較して、Ｃ／Ｆ比は低下したが、ＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）の減少率は低く、ＨＵ群と比較して有意に高値を示す結果であった。なお、各群間の有意差は、non-paired
Student ｔ検定を用い、ｐ＜０．０５をもって有意差ありと判定した。

【0038】

図６に示すように、本実験に使用したカネフォラ種（ロブスタ種）のコーヒー生豆抽出物（脱カフェイン、コーヒーオイル搾油したもの）の成分には、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）が４０％含有されており、本実験結果から、コーヒー生豆抽出物を摂取したＣＧＡ群（実施例１Ａ）及びＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）では、毛細血管の退行が抑制され、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）を投与することによって、毛細血管の退行が抑制・改善されると言える。

【0039】

また、後肢非荷重をしたＨＵ群（比較例Ｂ）及びＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）ではＣＯＮＴ群（比較例Ａ）と比較して、ＳＤＨ活性（Integrated
SDH）は低下したが、ＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）の減少率は低く、ＨＵ群（比較例Ｂ）と比較して有意に高値を示す結果であった。かかる結果から、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）を投与することで、ラットヒラメ筋の細胞のミトコンドリア代謝の減少が減衰したと言える。

【0040】

さらに、筋線維横断面積については、後肢非荷重をしたＨＵ群（比較例Ｂ）及びＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）ではＣＯＮＴ群（比較例Ａ）と比較して、ＳＤＨ活性と筋線維横断面積の何れについても低下したが、ＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）の減少率は低く、ＨＵ群（比較例Ｂ）と比較して有意に高値を示す結果であった。かかる結果から、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）を投与することで、骨格筋萎縮を抑制したものと推察する。
以上の結果から、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）の経口投与によって、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行の進行を減衰することができることが判った。

【0041】

また、ヒラメ筋のＤＨＥ蛍光強度のグラフ（図５）から、後肢非荷重をしたＨＵ群（比較例Ｂ）のＤＨＥ蛍光強度は、ＣＯＮＴ群（比較例Ａ）、ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）、および
ＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）の値と比較して有意に高値を示す結果であった。それどころか、ＨＵ＋ＣＧＡ群（実施例１Ｂ）の値は、ＨＵ群（比較例Ｂ）の値と比較して有意に低い結果であった。酸化ストレス条件下では、活性酸素種（Reactive Oxygen Species；ＲＯＳ）の産生が劇的に増加することが知られているが、図５の結果は、細胞内のＲＯＳ産生が、ＨＵ群（比較例Ｂ）でより高いこと、クロロゲン酸類（ＣＧＡ）を投与することで、ＲＯＳの過剰生産を減らすことができることが明らかになった。

【0042】

（コーヒー生豆抽出物の作製フローについて）
図７に、上記動物実験に使用したコーヒー生豆抽出物の作製フローを示す。以下の作製フローでは、コーヒー生豆からカフェインを除去している。カフェイン除去には、７０℃～８０℃、４５ＭＰａ以上の状態にある超臨界流体の二酸化炭素を用いて行った。カフェインは、代謝を向上する効果があり、ラットに摂取させるとダイエット効果が現れることから、脱カフェインとして、クロロゲン酸類による効果を確認できるようにしたものである。
なお、コーヒー生豆抽出物の作製においては、必ずしも脱カフェインを行わなくともよく、また、カフェイン除去について、超臨界流体の二酸化炭素を用いる方法に限定されるものではないが、超臨界流体処理を施すことにより、コーヒー生豆からカフェインと同時にコーヒーオイルを除去することができる。さらに、コーヒー生豆には、カウェオール、カフェストールをはじめとしたジテルペン類が含まれ、コレステロール値や中性脂肪値を上昇させる因子として知られているが、超臨界流体の二酸化炭素で抽出することにより予めこれらのジテルペン類を除去しておくことができる。

【0043】

（１）コーヒー生豆を粉砕する工程（ステップＳ０１）
カネフォラ種（ロブスタ種）のコーヒー生豆を平均粒子径が略４．０ｍｍになるよう粉砕する。粉砕は、通常の機械的粉砕や凍結粉砕処理などで行うが、この粉砕する手段は特に限定されるものではない。
（２）コーヒー生豆を浸水（調湿）する工程（ステップＳ０２）
コーヒー生豆を粉砕したものに対し、水を添加し調湿を行う。カフェインを除くための条件としてコーヒー生豆の水分量を４３％（増減２％）にしている。なお、あえてカフェインを除く必要がなければ、浸水（調湿）工程は省略することができる。

【0044】

（３）コーヒー生豆を超臨界流体処理する工程（ステップＳ０３）
コーヒー生豆を７０℃～８０℃、４５ＭＰａ以上の状態にある超臨界流体二酸化炭素を用いて、Ｓ／Ｆ５０の条件（ここで、Ｓ／Ｆとは原料のコーヒー生豆に対して流す二酸化炭素の重量比のことである）の超臨界流体処理を施すことにより、所定時間、接触処理を行い、コーヒー生豆からカフェインやその他の物質（コーヒーオイルなど）を除去する。ここで、Ｓ／Ｆとは原料（コーヒー生豆）に対して流す二酸化炭素の重量比のことで、例えば、Ｓ／Ｆ＝５０であれば、コーヒー量が１（重量）に対して、二酸化炭素重量は、５０（重量）となる。

【0045】

（４）含水アルコールにて抽出する工程（ステップＳ０４）
上記の超臨界流体処理する工程により、コーヒー生豆からカフェインやその他の物質を除去した後、除去後のコーヒー生豆から、更に含水アルコールにて抽出、濃縮、乾燥して抽出物を得る。
なお、抽出溶媒としては、極性溶媒を使用できる。極性溶媒としては、水、または、アルコール類（例えば、エタノール、メタノールの低級アルコール、あるいは、プロピレングリコールなどの多価アルコール）などの極性有機溶媒が挙げられる。これらを単独あるいは２種以上を任意に組み合わせて使用することが可能である。好ましくは、水単独または水と極性有機溶媒の混合溶媒である。水と極性有機溶媒との混合溶媒の場合、水と極性有機溶媒の混合比は特に制限されないが、極性有機溶媒の容量比が５０％以上であるのが好ましい。水と混合する極性有機溶媒としては、低級アルコールが好ましく、メタノールまたはエタノールがより好ましい。また、抽出時間は特に制限されない。

【0046】

（５）濃縮・乾燥する工程（ステップＳ０５）
抽出した液は、減圧下で加熱することなどにより溶媒を除去して濃縮した後、スプレードライ、フリーズドライなどの手法を用いて乾燥することにより、コーヒー生豆抽出物の粉末を得る。あるいは、抽出液に賦形剤等を添加して乾燥しても構わない。

【0047】

具体的に、コーヒー生豆抽出物（超臨界流体二酸化炭素処理工程を経て得られるもの）の作製フローについて、以下の（ａ）～（ｆ）に説明する。
（ａ）コーヒー生豆（Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ ＡＰ－１／カフェイン含有量１．９４％）を平均粒子径４．０ｍｍになるよう粉砕する。
（ｂ）コーヒー生豆を粉砕したもの８７．３ｋｇに対し、水４３．２ｋｇを添加し調湿を行う。
（ｃ）その後、このコーヒー生豆を８０℃、４５ＭＰａの状態にある超臨界流体二酸化炭素を用いて、Ｓ／Ｆ５０の条件にて２００分間接触処理を行う。
（ｄ）次に、超臨界二酸化炭素処理後のコーヒー生豆１６０.０ｋｇに対し、５６％（ｗ／ｖ）エタノール１６００Ｌを添加し、バブリングを行いつつ、５０℃で１時間抽出を行う。
（ｅ）抽出物に対して固液分離を行なった後、５６％（ｗ／ｖ）エタノール８００Ｌを添加し、バブリングを行いつつ、再度５０℃で１時間抽出を行う。
（ｆ）上記の２回の抽出で得られた抽出液を濾過、１２５℃、１分間殺菌した後、５０℃で減圧濃縮し、１８０℃でスプレードライを行ない、２７．８ｋｇのコーヒー生豆抽出物が得る。得られるコーヒー生豆抽出物のカフェイン及び総クロロゲン酸類含有量は、それぞれ０．０％、４０.０％である。カフェイン含量（％）及び総クロロゲン酸類含量の測定は、それぞれ試料０．４ｇを秤量し、純水１００ｍＬに溶解・定容してＨＰＬＣ（High Performance Liquid Chromatography）分析することにより行える。

【実施例0048】

本実施例では、後肢非荷重のラット群に対して、コーヒー生豆抽出物におけるクロロゲン酸類（ＣＧＡ）の含有量（重量％）を５％、４０％、５０％に変化させたものを摂取させ、含有量が異なるクロロゲン酸類の摂取が、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行に与える効果について検証した結果を示す。
なお、検証に用いたクロロゲン酸類は、実施例１と同様、自然由来のカネフォラ種（ロブスタ種）のコーヒー生豆抽出物（脱カフェイン、コーヒーオイル搾油したもの）から、カラムクロマトグラフィーにてクロロゲン酸の吸収波長である３２５ｎｍの吸収画分、および非吸収画分の調製を試みた。まず２０．０ｇ（乾燥重量）のコーヒー生豆抽出物を少量の０．０５％（ｖ／ｖ）酢酸に溶解させた。この溶液をＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＬ－４０Ｃカラム（カラム内径４．０ｃｍ、カラム長５０ｃｍ、ゲル体積５０２．４ｃｍ^３）に供し、１７００ｍＬの０．０５％酢酸、１３６０ｍLの５０％ （ｖ／ｖ）メタノール、最後に１３６０ｍＬの９９．５％（ｖ／ｖ）メタノールの順にそれぞれ１．２ｍL／ｍｉｎで溶出し、試験管にて回収した。その後、３２５ｎｍの吸光度を持つフラクションと非吸収フラクションを回収しまとめた。その後、まとめた回収フラクションは、減圧下で濃縮、凍結乾燥し、動物試験使用まで４℃で保管した。この操作を複数回繰り返すことによって検証実験用サンプルを作成した。３２５ｎｍの吸収画分におけるクロロゲン酸類の含有量は５０％、および非吸収画分のクロロゲン酸類含有量は５％であった。

【0049】

検証実験は、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）の雌ラット３０匹を、無作為に６匹ずつ、下記１）～５）の５群に区分し、１４日間の飼育後に行った。
１）対照群（ＣＯＮＴ群；ｎ＝６）
２）後肢非荷重群（ＨＵ群；ｎ＝６）
３）後肢非荷重群＋クロロゲン酸類摂取群（ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群；ｎ＝６）
４）後肢非荷重群＋クロロゲン酸類摂取群（ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群；ｎ＝６）
５）後肢非荷重群＋クロロゲン酸類摂取群（ＨＵ＋５％ＣＧＡ群；ｎ＝６）

【0050】

上記２）～５）における後肢非荷重群とは、ラットの尾部を懸垂するＭｏｒｅｙ法により、１４日間、後肢を非荷重状態にしたラット群である。また、上記３）～５）におけるクロロゲン酸類摂取群とは、１４日間、１日２回、コーヒー生豆抽出物の３種類の乾燥粉末を経口投与（１日当たり、ラットの体重１ｋｇに対して粉末８５０ｍｇを投与）したラット群である。３種類の乾燥粉末は、そのままのものが４０％ＣＧＡ群であり、クロロゲン酸類の含有量を多くしたものが５０％ＣＧＡ群であり、反対に含有量を少なくしたものが５％ＣＧＡ群である。
各群のラットは、実施例１と同様に、室温で、１２時間の明暗周期の環境下で、個別ケージにて１４日間飼育し、食餌及び飲水は自由に与えた。なお、動物実験は、実施例１と同様、神戸大学の動物実験に関する承認を得て、神戸大学の規則等、各種の基準・指針を遵守して実施された。

【0051】

各群について１４日間の飼育後、下肢のヒラメ筋における毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）、コハク酸脱水素酵素（コハク酸デヒドロゲナーゼ；ＳＤＨ）について、組織化学染色を用いて測定を行った。実施例１と同様に、各測定手順は、ヒラメ筋における組織切片について、クリオスタットを使用し厚さ１２μｍの切片を作成し、組織切片は毛細血管を観察するためにＡＰ染色、また、酸化系酵素を測定するためにコハク酸脱水素酵素（ＳＤＨ）染色を施した。
ＡＰ染色およびＳＤＨ染色を施したラットヒラメ筋の標本を用いて、１標本当たり４箇所の顕微鏡視野を任意に選択して、光学顕微鏡で観察し、毛細血管の分布、ＳＤＨ活性の測定を行った。ＡＰ染色の結果から、ヒラメ筋の単位面積当たりの筋線維と毛細血管数の割合である毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）を画像処理で測定した。また、ＳＤＨ染色の結果から、筋線維のタイプ別にＳＤＨ活性を可視密度として画像処理で測定した。

【0052】

測定結果について、図８～図１１及び表１に示す。図８は、各群におけるラットヒラメ筋の標本におけるＡＰ染色の光学顕微鏡像を示し、（１）～（５）は、それぞれ、ＣＯＮＴ群（比較例２Ａ）、ＨＵ群（比較例２Ｂ）、ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群（実施例２Ａ）、ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群（実施例２Ｂ）、ＨＵ＋５％ＣＧＡ群（実施例２Ｃ）を示している。図８中、細胞の周りに黒点で観えるのが毛細血管である。
また、図９は、各群におけるラットヒラメ筋の標本におけるＳＤＨ染色像を示し、（１）～（５）は、それぞれ、ＣＯＮＴ群（比較例２Ａ）、ＨＵ群（比較例２Ｂ）、ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群（実施例２Ａ）、ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群（実施例２Ｂ）、ＨＵ＋５％ＣＧＡ群（実施例２Ｃ）を示している。図９中、筋線維（筋芽細胞）が濃く染色されているほど、コハク酸脱水素酵素活性が高く、ミトコンドリア量の上昇を示している。

【0053】

図１０のグラフは、毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）を示している。また、図１１のグラフはヒラメ筋のＳＤＨ活性を示している。
毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）のグラフ（図１０）から、実施例２Ａ（ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群）及び実施例２Ｂ（ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群）は、比較例２Ａ（ＣＯＮＴ群）と比較して、Ｃ／Ｆ比は低下したが、比較例２Ｂ（ＨＵ群）と比較して有意に高値を示す結果であった。また、実施例２Ｃ（ＨＵ＋５％ＣＧＡ群）は、比較例２Ｂ（ＨＵ群）と比較して殆ど効果が見られなかった。なお、各群間の有意差は、実施例１と同様に、ｐ＜０．０５をもって有意差ありと判定した。
また、ヒラメ筋のＳＤＨ活性のグラフ（図１１）から、実施例２Ａ（ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群）及び実施例２Ｂ（ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群）は、比較例２Ａ（ＣＯＮＴ群）と比較して、Ｃ／Ｆ比は低下したが、比較例２Ｂ（ＨＵ群）と比較して有意に高値を示す結果であった。また、実施例２Ｃ（ＨＵ＋５％ＣＧＡ群）は、比較例２Ｂ（ＨＵ群）と比較して殆ど効果が見られなかった。
また、下記表１は、各群におけるラットの体重（ｇ）、ヒラメ筋の重量（ｍｇ）、脂肪組織の重量（ｇ）を示す。なお、表の比較例２Ｂ、実施例２Ａ～２Ｃの値は、全て、比較例２Ａ（ＣＯＮＴ）に対して有意差ありであった。

【0054】

【表1】

【0055】

以上の結果から、１４日間、後肢を非荷重状態にしたラット群に対し、コーヒー生豆抽出物におけるクロロゲン酸類（ＣＧＡ）の含有量（重量％）を５％、４０％、５０％に変化させたものを、その１４日間、１日２回、経口投与したところ、４０％の含有量のクロロゲン酸類（実施例２Ａ；ＨＵ＋４０％ＣＧＡ群））の場合が、他の含有量（５０％、５％）と比較して、毛細血管／筋線維比（Ｃ／Ｆ比）が増加し、コハク酸が多くミトコンドリア活性が高いことから、最も、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行に与える効果があることが分かった。

【0056】

また、実施例２Ｃ（ＨＵ＋５％ＣＧＡ群）では、比較例２Ｂ（ＨＵ群）と比較して殆ど効果が見られず、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行を抑制できていなかった。このことから、骨格筋萎縮に伴う毛細血管退行の進行を減衰する主たる効果・効能を示す成分としては、クロロゲン酸類であることが明らかとなった。
なお、予想に反し、実施例２Ａよりも、クロロゲン酸類の含有量が多い実施例２Ｂ（ＨＵ＋５０％ＣＧＡ群）が、効果が逆転しているが、この理由としては、クロロゲン酸類は一度に大量に摂取しても細胞内に吸収できる上限があるためと推察している。