特開 2023-30005 養子細胞治療を改善するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023030005

(43)【公開日】2023-03-07

(54)【発明の名称】養子細胞治療を改善するための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/12 20150101AFI20230228BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20230228BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/4188 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/416 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/136 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230228BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/69 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20230228BHJP

   A61K 35/765 20150101ALI20230228BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230228BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230228BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230228BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230228BHJP

   A61K 38/21 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20230228BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20230228BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20230228BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230228BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230228BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20230228BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20230228BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20230228BHJP

【ＦＩ】

A61K35/12 ZNA

A61K45/00

A61K31/282

A61K31/675

A61K35/768

A61K39/395 V

A61K39/395 N

A61K31/4188

A61K31/416

A61K31/704

A61K31/136

A61K38/17

A61K35/76

A61K31/337

A61K31/69

A61K31/407

A61K35/761

A61K35/765

A61K39/395 U

A61K48/00

A61K31/7105

A61K31/7088

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 111

A61P43/00 121

A61K35/17

A61K38/21

A61K38/19

A61K38/20

C12N15/113 Z

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N5/10

C12N5/0783

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022198485

(22)【出願日】2022-12-13

(62)【分割の表示】P 2020513340の分割

【原出願日】2018-09-06

(31)【優先権主張番号】62/555,034

(32)【優先日】2017-09-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】522176001

【氏名又は名称】フレッド ハッチンソン キャンサー センター

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】スタンリー アール． リデル

(72)【発明者】

【氏名】シヴァニ スリヴァスタヴァ

(57)【要約】      （修正有）

【課題】養子細胞治療において改良された戦略を提供する。
【解決手段】本開示は、改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを含むＴ細胞）を、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子と組み合わせて、必要に応じて免疫抑制成分に特異的に結合する、および／またはそれを阻害する作用因子とさらに組み合わせて使用する、疾患を処置するための試薬および方法を提供する。ある特定の実施形態では、併用療法の方法は、改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）を投与することと、化学療法剤をさらに投与することとを含む。化学療法剤は、ＩＣＤの誘導に関連してもしなくてもよく、本明細書に記載のいずれかを含むがこれらに限定されない。
【選択図】図１４ＢＣ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

明細書に記載の発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、本明細書に完全に明記されたものとしてあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる２０１７年９月６日に出願した米国特許出願第６２／５５５，０３４号の優先権の利益を主張する。

【0002】

配列表に関する記述
本願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、３６００５６＿４５７ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。このテキストファイルは１０．９ＫＢであり、２０１８年９月６日に作成されたものであり、ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由で電子的に提出されている。

【0003】

政府の利益についての陳述
この発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）によって授与されたＣＡ１１４５３６による政府の支援によりなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。

【背景技術】

【0004】

背景
遺伝子改変されたＴ細胞の養子移入は、様々な悪性疾患に対する強力な治療法として出現した。最も広く利用されている戦略は、腫瘍関連抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する患者由来Ｔ細胞の注入である。このアプローチには、Ｔ細胞を任意の細胞表面抗原に標的化できること、腫瘍エスケープ機構としての主要組織適合性遺伝子複合体の喪失を回避できること、および、いずれの患者の処置にもヒト白血球抗原ハプロタイプに関係なく単一のベクター構築物を利用できることを含む、非常に多くの理論的利点がある。例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）についてのＣＡＲ臨床試験では、悪性リンパ系細胞上はもちろん正常Ｂ細胞上にも発現するＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２２抗原が、これまでに標的とされたことがある（Brentjens et al., Sci Transl Med 2013;5(177):177ra38; Haso et al.,Blood 2013;121(7):1165-74; James et al., J Immunol 2008;180(10):7028-38; Kalos et al., Sci Transl Med 2011;3(95):95ra73; Kochenderfer et al., J Clin Oncol 2015;33(6):540-9; Lee et al., Lancet 2015;385(9967):517-28; Porter et al., Sci Transl 25 Med 2015;7(303):303ra139; Savoldo et al., J Clin Invest 2011;121(5):1822-6; Till et al., Blood 2008;112(6):2261-71; Till et al., Blood 2012;119(17):3940-50; Coiffier et al., N Engl J Med 2002;346(4):235-42）。
さらに進歩することが養子細胞治療を改善するのに有利となり得る。例えば、抗原保有細胞を標的とし、攻撃する特定の抗原に特異的なＣＡＲまたはＴＣＲを保有する移入細胞の能力は、がんの部位、例えば、腫瘍を拡大し、活性化し、それに向かう移入細胞の数によって制限される場合がある。さらに、腫瘍微小環境によって、養子細胞治療の活性を低減し得るいくつかの忍容性または免疫抑制機構が誘発され得る（例えば、Draghiciu et al.,Clin. Dev. Immunol. 439053 (2011)を参照）。したがって、養子細胞治療において、改良された戦略が必要とされる。今般開示される実施形態は、これらの必要性を対象とし、他の関連する利点をもたらす。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Brentjens et al., Sci Transl Med 2013;5(177):177ra38

【非特許文献2】Haso et al.,Blood 2013;121(7):1165-74

【非特許文献3】James et al., J Immunol 2008;180(10):7028-38

【非特許文献4】Kalos et al., Sci Transl Med 2011;3(95):95ra73

【非特許文献5】Kochenderfer et al., J Clin Oncol 2015;33(6):540-9

【非特許文献6】Lee et al., Lancet 2015;385(9967):517-28

【非特許文献7】Porter et al., Sci Transl 25 Med 2015;7(303):303ra139

【非特許文献8】Savoldo et al., J Clin Invest 2011;121(5):1822-6

【非特許文献9】Till et al., Blood 2008;112(6):2261-71

【非特許文献10】Till et al., Blood 2012;119(17):3940-50

【非特許文献11】Coiffier et al., N Engl J Med 2002;346(4):235-42

【非特許文献12】Draghiciu et al., Clin. Dev. Immunol. 439053 (2011)

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1】図１は、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞治療を研究するために非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のＫＰマウスモデルを適用するための模式図を示す。

【0007】

【図2A】図２Ａは、Ｃｒｅリコンビナーゼ、ホタルルシフェラーゼ、およびヒトＲＯＲ１（「Ｃｒｅ－ｐ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１」）を同時発現するレンチウイルス構築物の設計を示す。

【図2B】図２Ｂは、３ＴＺ Ｇｒｅｅｎ－Ｇｏレポーター細胞（Ｌ－Ｒ）：非形質導入；Ｃｒｅ－Ｐ２Ａ－ｆｆｌｕｃ；Ｃｒｅ－Ｐ２Ａ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１においてレンチウイルス構築物の発現を示すフローサイトメトリーデータを提供する。

【図2C】図２Ｃは、細胞におけるホタルルシフェラーゼ発現のバイオルミネセンスイメージング（ＢＬＩ）を示す。

【0008】

【図3A】図３Ａ～３Ｅは、Ｃｒｅ－ｐ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染したＫＰマウスにおける腫瘍の誘導を示す。（Ａ）マウスが、示されている力価のレンチウイルスを投与されてから１３週間後に得られた代表ＢＬＩ。（Ｂ）マウスが、示されている用量のレンチウイルスを投与された投与実験からの定量ＢＬＩデータ（非感染マウス＝対照）。（Ｃ）ｐ．ｉ．１３週間後の各感染群からのマウスの代表磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）。（Ｄ）各感染群からの平均腫瘍体積。（Ｅ）感染群の平均生存パーセント。

【図3B】図３Ａ～３Ｅは、Ｃｒｅ－ｐ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染したＫＰマウスにおける腫瘍の誘導を示す。（Ａ）マウスが、示されている力価のレンチウイルスを投与されてから１３週間後に得られた代表ＢＬＩ。（Ｂ）マウスが、示されている用量のレンチウイルスを投与された投与実験からの定量ＢＬＩデータ（非感染マウス＝対照）。（Ｃ）ｐ．ｉ．１３週間後の各感染群からのマウスの代表磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）。（Ｄ）各感染群からの平均腫瘍体積。（Ｅ）感染群の平均生存パーセント。

【図3C】図３Ａ～３Ｅは、Ｃｒｅ－ｐ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染したＫＰマウスにおける腫瘍の誘導を示す。（Ａ）マウスが、示されている力価のレンチウイルスを投与されてから１３週間後に得られた代表ＢＬＩ。（Ｂ）マウスが、示されている用量のレンチウイルスを投与された投与実験からの定量ＢＬＩデータ（非感染マウス＝対照）。（Ｃ）ｐ．ｉ．１３週間後の各感染群からのマウスの代表磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）。（Ｄ）各感染群からの平均腫瘍体積。（Ｅ）感染群の平均生存パーセント。

【図3DE】図３Ａ～３Ｅは、Ｃｒｅ－ｐ－ｆｆｌｕｃ－ｔ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染したＫＰマウスにおける腫瘍の誘導を示す。（Ａ）マウスが、示されている力価のレンチウイルスを投与されてから１３週間後に得られた代表ＢＬＩ。（Ｂ）マウスが、示されている用量のレンチウイルスを投与された投与実験からの定量ＢＬＩデータ（非感染マウス＝対照）。（Ｃ）ｐ．ｉ．１３週間後の各感染群からのマウスの代表磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）。（Ｄ）各感染群からの平均腫瘍体積。（Ｅ）感染群の平均生存パーセント。

【0009】

【図4】図４は、ｐ．ｉ．１３週間後のＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスから回収した腫瘍におけるｈＲＯＲ１に関するＩＨＣ染色を示す。左：１×倍率。右：２０×倍率。

【0010】

【図5A】図５Ａ～５Ｅは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料においてＴｒｅｇ細胞を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）Ｆｏｘｐ３およびＰＤ－１に関して染色した、示されている組織におけるＴｒｅｇ細胞計数値を示すフローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞の百分率としてのＣＤ４^＋ Ｆｏｘｐ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞頻度の定量。（Ｃ）増殖マーカーＫｉ－６７の発現によって測定されるＴｒｅｇ細胞の増殖。（Ｄ）タグ付き抗ＰＤ－１結合のＭＦＩによって表されるＴｒｅｇ細胞によるＰＤ－１発現の定量。（Ｅ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞：Ｔｒｅｇ細胞の比。

【図5BC】図５Ａ～５Ｅは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料においてＴｒｅｇ細胞を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）Ｆｏｘｐ３およびＰＤ－１に関して染色した、示されている組織におけるＴｒｅｇ細胞計数値を示すフローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞の百分率としてのＣＤ４^＋ Ｆｏｘｐ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞頻度の定量。（Ｃ）増殖マーカーＫｉ－６７の発現によって測定されるＴｒｅｇ細胞の増殖。（Ｄ）タグ付き抗ＰＤ－１結合のＭＦＩによって表されるＴｒｅｇ細胞によるＰＤ－１発現の定量。（Ｅ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞：Ｔｒｅｇ細胞の比。

【図5DE】図５Ａ～５Ｅは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料においてＴｒｅｇ細胞を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）Ｆｏｘｐ３およびＰＤ－１に関して染色した、示されている組織におけるＴｒｅｇ細胞計数値を示すフローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞の百分率としてのＣＤ４^＋ Ｆｏｘｐ３^＋ Ｔｒｅｇ細胞頻度の定量。（Ｃ）増殖マーカーＫｉ－６７の発現によって測定されるＴｒｅｇ細胞の増殖。（Ｄ）タグ付き抗ＰＤ－１結合のＭＦＩによって表されるＴｒｅｇ細胞によるＰＤ－１発現の定量。（Ｅ）ＣＤ８^＋ Ｔ細胞：Ｔｒｅｇ細胞の比。

【0011】

【図6A】図６Ａ～６Ｆは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料において骨髄腫由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）腫瘍におけるＭＤＳＣ細胞計数値を示す代表フローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞中での中間体（「ｉｎｔ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「単球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｃ）生細胞中での高い（「ｈｉ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「顆粒球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｄ）顆粒球の（破線）および単球の（実線）ＭＤＳＣによるＰＤ－Ｌ１発現を示すヒストグラム。（Ｅ）単球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。（Ｆ）顆粒球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。

【図6BC】図６Ａ～６Ｆは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料において骨髄腫由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）腫瘍におけるＭＤＳＣ細胞計数値を示す代表フローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞中での中間体（「ｉｎｔ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「単球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｃ）生細胞中での高い（「ｈｉ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「顆粒球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｄ）顆粒球の（破線）および単球の（実線）ＭＤＳＣによるＰＤ－Ｌ１発現を示すヒストグラム。（Ｅ）単球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。（Ｆ）顆粒球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。

【図6D】図６Ａ～６Ｆは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料において骨髄腫由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）腫瘍におけるＭＤＳＣ細胞計数値を示す代表フローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞中での中間体（「ｉｎｔ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「単球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｃ）生細胞中での高い（「ｈｉ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「顆粒球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｄ）顆粒球の（破線）および単球の（実線）ＭＤＳＣによるＰＤ－Ｌ１発現を示すヒストグラム。（Ｅ）単球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。（Ｆ）顆粒球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。

【図6EF】図６Ａ～６Ｆは、腫瘍非保有（脾臓のみ）および腫瘍保有ＫＰ（脾臓、腫瘍排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍）マウスからの組織試料において骨髄腫由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を特徴付けるデータを提供する。（Ａ）腫瘍におけるＭＤＳＣ細胞計数値を示す代表フローサイトメトリーデータ。（Ｂ）生細胞中での中間体（「ｉｎｔ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「単球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｃ）生細胞中での高い（「ｈｉ」）Ｇｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（「顆粒球の」ＭＤＳＣ）の頻度。（Ｄ）顆粒球の（破線）および単球の（実線）ＭＤＳＣによるＰＤ－Ｌ１発現を示すヒストグラム。（Ｅ）単球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。（Ｆ）顆粒球のＭＤＳＣにおけるＰＤ－Ｌ１発現の定量。

【0012】

【図7A】図７Ａ～７Ｃは、ヒトＲＯＲ１（ｈＲＯＲ１）に特異的なマウスキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の設計および試験を示す。（Ａ）２Ａ２抗体に由来する抗ｈＲＯＲ１結合ドメインならびにマウス４－１ＢＢおよびＣＤ３ζドメインを有するＣＡＲをコードする構築物の模式図；この構築物は、Ｔ２Ａリボソームスキップエレメントの下流の短縮型ＣＤ１９形質導入マーカー配列も含む。（Ｂ、Ｃ）ヒト（三角）もしくはマウスＲＯＲ１（四角）を発現する、またはＲＯＲ１発現を有さない（丸）４Ｔ１哺乳動物癌細胞を、示されているエフェクター：標的比で、対照のｔＣＤ１９Ｔ細胞（Ｂ）または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞（Ｃ）とインキュベートしたｉｎ ｖｉｔｒｏ殺滅アッセイからのデータ。

【図7BC】図７Ａ～７Ｃは、ヒトＲＯＲ１（ｈＲＯＲ１）に特異的なマウスキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の設計および試験を示す。（Ａ）２Ａ２抗体に由来する抗ｈＲＯＲ１結合ドメインならびにマウス４－１ＢＢおよびＣＤ３ζドメインを有するＣＡＲをコードする構築物の模式図；この構築物は、Ｔ２Ａリボソームスキップエレメントの下流の短縮型ＣＤ１９形質導入マーカー配列も含む。（Ｂ、Ｃ）ヒト（三角）もしくはマウスＲＯＲ１（四角）を発現する、またはＲＯＲ１発現を有さない（丸）４Ｔ１哺乳動物癌細胞を、示されているエフェクター：標的比で、対照のｔＣＤ１９Ｔ細胞（Ｂ）または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞（Ｃ）とインキュベートしたｉｎ ｖｉｔｒｏ殺滅アッセイからのデータ。

【0013】

【図8A】図８Ａは、ＫＰマウスに、Ｃｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスを感染させ、その後、ｐ．ｉ．の１１、１４、および１７週間後に、シクロホスファミドと１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞との組合せによる処置を施された実験処置の図を示す。

【図8B】図８Ｂは、図８Ａに示されるスケジュールによる処置を施されたマウスからの平均腫瘍体積を示す。

【図8C】図８Ｃは、処置前（ｐ．ｉの１０週間後）および処置後（ｐ．ｉの１６週間後）の腫瘍サイズを比較する、ｔＣＤ１９処置および２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ処置マウスからの代表ＭＲＩスキャンを示す。腫瘍を丸で囲む。

【0014】

【図9A】図９Ａ～９Ｅは、図８Ａに示される処置スケジュールにより投与される対照（ｔＣＤ１９）および２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ特徴付けを示す。脾臓および腫瘍試料を、ｐ．ｉ．の２２週間後に回収し、細胞表現型をフローサイトメトリーによって分析した。（Ａ）代表腫瘍試料において投与されたＣＡＲ Ｔ細胞の増殖。（Ｂ）代表腫瘍試料におけるＣＡＲ Ｔ細胞のＰＤ－１発現プロファイル。ＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の（Ｃ）頻度、（Ｄ）増殖、および（Ｅ）ＰＤ－１発現も測定した。

【図9B】図９Ａ～９Ｅは、図８Ａに示される処置スケジュールにより投与される対照（ｔＣＤ１９）および２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ特徴付けを示す。脾臓および腫瘍試料を、ｐ．ｉ．の２２週間後に回収し、細胞表現型をフローサイトメトリーによって分析した。（Ａ）代表腫瘍試料において投与されたＣＡＲ Ｔ細胞の増殖。（Ｂ）代表腫瘍試料におけるＣＡＲ Ｔ細胞のＰＤ－１発現プロファイル。ＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の（Ｃ）頻度、（Ｄ）増殖、および（Ｅ）ＰＤ－１発現も測定した。

【図9CD】図９Ａ～９Ｅは、図８Ａに示される処置スケジュールにより投与される対照（ｔＣＤ１９）および２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ特徴付けを示す。脾臓および腫瘍試料を、ｐ．ｉ．の２２週間後に回収し、細胞表現型をフローサイトメトリーによって分析した。（Ａ）代表腫瘍試料において投与されたＣＡＲ Ｔ細胞の増殖。（Ｂ）代表腫瘍試料におけるＣＡＲ Ｔ細胞のＰＤ－１発現プロファイル。ＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の（Ｃ）頻度、（Ｄ）増殖、および（Ｅ）ＰＤ－１発現も測定した。

【図9E】図９Ａ～９Ｅは、図８Ａに示される処置スケジュールにより投与される対照（ｔＣＤ１９）および２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ特徴付けを示す。脾臓および腫瘍試料を、ｐ．ｉ．の２２週間後に回収し、細胞表現型をフローサイトメトリーによって分析した。（Ａ）代表腫瘍試料において投与されたＣＡＲ Ｔ細胞の増殖。（Ｂ）代表腫瘍試料におけるＣＡＲ Ｔ細胞のＰＤ－１発現プロファイル。ＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の（Ｃ）頻度、（Ｄ）増殖、および（Ｅ）ＰＤ－１発現も測定した。

【0015】

【図10A】図１０Ａは、図の符号に示されているように、未処置（実線）または対照のｔＣＤ１９を発現するＴ細胞もしくは２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を施したＫＰ腫瘍におけるｈＲＯＲ１の発現を示す。

【図10B】図１０Ｂは、４０×倍率において、２つの処置群からのＫＰ腫瘍においてｈＲＯＲ１に関して染色するＩＨＣを示す。

【0016】

【図11A】図１１Ａ～１１Ｄは、ｔＣＤ１９または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を施したＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスの腫瘍微小環境の特徴付けを示す。（Ａ）２つのＣＡＲ Ｔ細胞を施された群からの腫瘍においてＴｒｅｇ集団を示すフローサイトメトリー実験からのデータ。（Ｂ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＴｒｅｇの頻度（生細胞の百分率として）。（Ｃ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＣＤ８^＋ Ｔ細胞の内在性Ｔｒｅｇに対する比。（Ｄ）生細胞の百分率としての単球のおよび顆粒球の腫瘍ＭＤＳＣの頻度。

【図11BC】図１１Ａ～１１Ｄは、ｔＣＤ１９または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を施したＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスの腫瘍微小環境の特徴付けを示す。（Ａ）２つのＣＡＲ Ｔ細胞を施された群からの腫瘍においてＴｒｅｇ集団を示すフローサイトメトリー実験からのデータ。（Ｂ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＴｒｅｇの頻度（生細胞の百分率として）。（Ｃ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＣＤ８^＋ Ｔ細胞の内在性Ｔｒｅｇに対する比。（Ｄ）生細胞の百分率としての単球のおよび顆粒球の腫瘍ＭＤＳＣの頻度。

【図11D】図１１Ａ～１１Ｄは、ｔＣＤ１９または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を施したＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスの腫瘍微小環境の特徴付けを示す。（Ａ）２つのＣＡＲ Ｔ細胞を施された群からの腫瘍においてＴｒｅｇ集団を示すフローサイトメトリー実験からのデータ。（Ｂ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＴｒｅｇの頻度（生細胞の百分率として）。（Ｃ）各群からの脾臓および腫瘍試料におけるＣＤ８^＋ Ｔ細胞の内在性Ｔｒｅｇに対する比。（Ｄ）生細胞の百分率としての単球のおよび顆粒球の腫瘍ＭＤＳＣの頻度。

【0017】

【図12A】図１２Ａ～１２Ｃは、マウスに導入されたＴ細胞の局在化を示す代表ＢＬＩを示す。（Ａ）マウスにおけるガウシアルシフェラーゼ標識Ｔ細胞の局在化を示す例。（左から右へ）：示されている局在化部位に関する蛍光イメージ；マウスを覆うＢＬＩイメージ；ルミネセンスを解釈するための輝度スケール。（Ｂ）ルシフェラーゼで標識したｔＣＤ１９対照細胞を注射したマウスのＢＬＩ。局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。（Ｃ）ルシフェラーゼで標識した２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を注射したマウスのＢＬＩ；局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。

【図12B】図１２Ａ～１２Ｃは、マウスに導入されたＴ細胞の局在化を示す代表ＢＬＩを示す。（Ａ）マウスにおけるガウシアルシフェラーゼ標識Ｔ細胞の局在化を示す例。（左から右へ）：示されている局在化部位に関する蛍光イメージ；マウスを覆うＢＬＩイメージ；ルミネセンスを解釈するための輝度スケール。（Ｂ）ルシフェラーゼで標識したｔＣＤ１９対照細胞を注射したマウスのＢＬＩ。局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。（Ｃ）ルシフェラーゼで標識した２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を注射したマウスのＢＬＩ；局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。

【図12C】図１２Ａ～１２Ｃは、マウスに導入されたＴ細胞の局在化を示す代表ＢＬＩを示す。（Ａ）マウスにおけるガウシアルシフェラーゼ標識Ｔ細胞の局在化を示す例。（左から右へ）：示されている局在化部位に関する蛍光イメージ；マウスを覆うＢＬＩイメージ；ルミネセンスを解釈するための輝度スケール。（Ｂ）ルシフェラーゼで標識したｔＣＤ１９対照細胞を注射したマウスのＢＬＩ。局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。（Ｃ）ルシフェラーゼで標識した２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を注射したマウスのＢＬＩ；局在化の組織部位がイメージの下に記載されている。

【0018】

【図13A】図１３Ａは、ＫＰマウスに、Ｃｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスを感染させ、次に、処置期間中、１週間に２回、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－１を投与しながら、ｐ．ｉ．の１１、１３、および１５週間後にシクロホスファミドと１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞との組合せで処置した、実験処置スキームの図を示す。マウスを示されているようにイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。

【図13BC】図１３Ｂは、図１３Ａに示された処置スキームにより、ｔＣＤ１９ Ｔ細胞、ｔＣＤ１９ Ｔ＋抗ＰＤ－１、２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ、または２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ＋抗－ＰＤ－１を施された（図の符号で示されているように）マウスのＭＲＩ ｚスタックから計算した平均腫瘍体積を示す。図１３Ｃは、示された処置群からのマウスの生細胞における形質導入したＣＤ４５．１^＋ＣＤ８^＋細胞（形質導入マーカーまたはＣＡＲ形質導入マーカーを発現する）の頻度を示す。

【図13DE】図１３Ｄは、形質導入した細胞におけるＰＤ－１発現（ＭＦＩ）を示す。図１３Ｅは、各細胞群内の活性化細胞（ＣＤ６９アッセイ）の百分率を示す。

【0019】

【図14A】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14BC】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14DE】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14F】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14G】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14H】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14I】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14JK】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14LM】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14NO】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14P】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14Q】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14R】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14S】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【図14T】図１４Ａ～１４Ｔは、オキサリプラチン＋シクロホスファミドを抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ ＋ ＰＤ－Ｌ１遮断免疫療法レジメンに加えることの効果を示す。（Ａ）ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、オキサリプラチン＋シクロホスファミドの組合せ（ｐ．ｉ．の１２、１３、および１４週間後に、１週間に１回）、続いて、ｐ．ｉ．の１２および１５週間後に、シクロホスファミドによるリンパ枯渇および１：１のＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋ ２Ａ２－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の移入により前処置した図。Ｔ細胞移入と併用して、マウスの抗体当たり２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１を１週間に２回投与し、研究の経過を通して継続した。示されているように、マウスをイメージングし、モニタリングした（ｐ．ｉ．の９週目に開始する毎週の秤量、ＭＲＩ／ルシフェラーゼイメージング、採血、および組織回収）。処置群および試料サイズは示されている通りであった。（Ｂ）～（Ｆ）および（Ｌ－Ｐ）示されている処置を施されたＫＰマウスの個々の腫瘍結節の体積の変化パーセント。腫瘍結節を計数し、退縮についてスコアリングした。（Ｇ、Ｑ）１１週間後（感染後、処置前）および１７週間後（感染後、処置後）の示されている処置群からの代表ＭＲＩスキャン。（Ｈ、Ｒ、Ｔ）示されているように、Ｔ細胞処置の５週間後のＫＰ肺腫瘍のＣＤ３染色の代表ＩＨＣイメージ。より暗い染色＝ＣＤ３^＋Ｔリンパ球による浸潤の増加。（Ｉ、Ｓ）ＨＡＬＯイメージングソフトウェアによる個々の腫瘍のＣＤ３染色の定量。（Ｊ）各処置群からの個々のマウスにおける腫瘍内ＣＤ３染色を有する腫瘍の百分率。（Ｋ）１５％を超えるＣＤ３^＋浸潤を有する各処置群からの腫瘍の割合。

【0020】

【図15AB】図１５Ａ～１５Ｄは、処置されたマウスからの肺腫瘍のマルチプレックス免疫組織化学（ＩＨＣ）およびその定量を示す。（Ａ、Ｂ）ＣＤ８ａ、Ｆｏｘｐ３、対照またはＣＡＲ Ｔ（ＧＦＰ^＋）細胞を示す処置の５週間後の肺腫瘍の代表マルチプレックスＩＨＣ（示されているように）、およびＤＡＰＩ。（Ｃ）オキサリプラチン＋シクロホスファミド（Ｏｘ／Ｃｙ）および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を有するか（下向きの三角）または有さない（上向きの三角）、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与したマウスからの腫瘍試料（個々の腫瘍）における有核細胞の百分率としてのＧＦＰ染色（ＣＡＲ Ｔ細胞）の定量（ＨＡＬＯイメージングソフトウェア）。（Ｄ）示されている処置群からの腫瘍試料（個々の腫瘍）における有核細胞の百分率としてのＣＤ８^＋ Ｔ細胞の定量。

【図15CD】図１５Ａ～１５Ｄは、処置されたマウスからの肺腫瘍のマルチプレックス免疫組織化学（ＩＨＣ）およびその定量を示す。（Ａ、Ｂ）ＣＤ８ａ、Ｆｏｘｐ３、対照またはＣＡＲ Ｔ（ＧＦＰ^＋）細胞を示す処置の５週間後の肺腫瘍の代表マルチプレックスＩＨＣ（示されているように）、およびＤＡＰＩ。（Ｃ）オキサリプラチン＋シクロホスファミド（Ｏｘ／Ｃｙ）および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を有するか（下向きの三角）または有さない（上向きの三角）、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与したマウスからの腫瘍試料（個々の腫瘍）における有核細胞の百分率としてのＧＦＰ染色（ＣＡＲ Ｔ細胞）の定量（ＨＡＬＯイメージングソフトウェア）。（Ｄ）示されている処置群からの腫瘍試料（個々の腫瘍）における有核細胞の百分率としてのＣＤ８^＋ Ｔ細胞の定量。

【0021】

【図16AB】図１６Ａ～１６Ｅは、Ｔ細胞処置の５週間後の、示されている処置群からの試料におけるＣＤ４５．１^＋ＣＤ８^＋ＧＦＰ^＋対照または抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。（Ａ）示されている処置群からの脾臓または腫瘍試料における全ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の百分率としてのＣＡＲ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）ＰＤ－１の発現。（Ｃ）Ｋｉ－６７の発現。（Ｄ）ＣＤ２５の発現。（Ｅ）１Ｂ１１の発現。

【図16CD】図１６Ａ～１６Ｅは、Ｔ細胞処置の５週間後の、示されている処置群からの試料におけるＣＤ４５．１^＋ＣＤ８^＋ＧＦＰ^＋対照または抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。（Ａ）示されている処置群からの脾臓または腫瘍試料における全ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の百分率としてのＣＡＲ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）ＰＤ－１の発現。（Ｃ）Ｋｉ－６７の発現。（Ｄ）ＣＤ２５の発現。（Ｅ）１Ｂ１１の発現。

【図16E】図１６Ａ～１６Ｅは、Ｔ細胞処置の５週間後の、示されている処置群からの試料におけるＣＤ４５．１^＋ＣＤ８^＋ＧＦＰ^＋対照または抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。（Ａ）示されている処置群からの脾臓または腫瘍試料における全ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の百分率としてのＣＡＲ Ｔ細胞の頻度。（Ｂ）ＰＤ－１の発現。（Ｃ）Ｋｉ－６７の発現。（Ｄ）ＣＤ２５の発現。（Ｅ）１Ｂ１１の発現。

【0022】

【図17AB】図１７Ａ～１７Ｄは、ＫＰ腫瘍におけるオキサリプラチンおよびシクロホスファミドによる処置の際の遺伝子発現分析の結果を示す。（Ａ）未処置のままであったかまたはｉｎ ｖｉｖｏでＯｘ／Ｃｙにより処置されたＫＰマウスから切除された腫瘍間で差示的に発現された遺伝子を示すＶｏｌｃａｎｏプロット。プロットの上方左角は、２倍を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において上方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。プロットの上方右角は、２分の１を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において下方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。（Ｂ）Ｏｘ／Ｃｙ処置ＫＰ腫瘍において上方調節された２５３遺伝子のＳＴＲＩＮＧデータベース経路分析の結果。（Ｃ、Ｄ）（Ｂ）に記載される濃縮経路に含まれる遺伝子のｌｏｇ２カウントパーミリオン（ＣＰＭ）。

【図17C】図１７Ａ～１７Ｄは、ＫＰ腫瘍におけるオキサリプラチンおよびシクロホスファミドによる処置の際の遺伝子発現分析の結果を示す。（Ａ）未処置のままであったかまたはｉｎ ｖｉｖｏでＯｘ／Ｃｙにより処置されたＫＰマウスから切除された腫瘍間で差示的に発現された遺伝子を示すＶｏｌｃａｎｏプロット。プロットの上方左角は、２倍を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において上方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。プロットの上方右角は、２分の１を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において下方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。（Ｂ）Ｏｘ／Ｃｙ処置ＫＰ腫瘍において上方調節された２５３遺伝子のＳＴＲＩＮＧデータベース経路分析の結果。（Ｃ、Ｄ）（Ｂ）に記載される濃縮経路に含まれる遺伝子のｌｏｇ２カウントパーミリオン（ＣＰＭ）。

【図17D】図１７Ａ～１７Ｄは、ＫＰ腫瘍におけるオキサリプラチンおよびシクロホスファミドによる処置の際の遺伝子発現分析の結果を示す。（Ａ）未処置のままであったかまたはｉｎ ｖｉｖｏでＯｘ／Ｃｙにより処置されたＫＰマウスから切除された腫瘍間で差示的に発現された遺伝子を示すＶｏｌｃａｎｏプロット。プロットの上方左角は、２倍を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において上方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。プロットの上方右角は、２分の１を超えてＯｘ／Ｃｙ処置腫瘍において下方調節され、偽発見率が１％未満の遺伝子を表す。（Ｂ）Ｏｘ／Ｃｙ処置ＫＰ腫瘍において上方調節された２５３遺伝子のＳＴＲＩＮＧデータベース経路分析の結果。（Ｃ、Ｄ）（Ｂ）に記載される濃縮経路に含まれる遺伝子のｌｏｇ２カウントパーミリオン（ＣＰＭ）。

【0023】

【図18】図１８は、１０倍でアイソタイプ対照（左）をおよび４０倍で膜のＲＯＲ１発現（右）を示すヒト患者からの処置前の腫瘍生検のヘマトキシリンエオジン染色（Ｈ＆Ｅ）を示す。

【0024】

【図19A】図１９Ａおよび図１９Ｂは、処置前（Ａ）ならびにＯｘ／Ｃｙおよび抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞産物による処置後（Ｂ）のヒトＴＮＢＣ患者の腫瘍生検のマルチプレックス免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す。各図の左は、低倍率の試料である。各図の右の写真は、高倍率の試料である。生検試料を、ＣＤ３、ＣＯＸ２、ＣＤ２０６、ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、およびＣＤ１６３に特異的な一次抗体で染色した（各図の符号を参照されたい）。核染色（ＤＡＰＩ）は、対比染色としての役割を果たした。Ｖｅｃｔｒａ ３．０プラットフォームを使用して、イメージングを実施した。

【図19B】図１９Ａおよび図１９Ｂは、処置前（Ａ）ならびにＯｘ／Ｃｙおよび抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞産物による処置後（Ｂ）のヒトＴＮＢＣ患者の腫瘍生検のマルチプレックス免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す。各図の左は、低倍率の試料である。各図の右の写真は、高倍率の試料である。生検試料を、ＣＤ３、ＣＯＸ２、ＣＤ２０６、ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、およびＣＤ１６３に特異的な一次抗体で染色した（各図の符号を参照されたい）。核染色（ＤＡＰＩ）は、対比染色としての役割を果たした。Ｖｅｃｔｒａ ３．０プラットフォームを使用して、イメージングを実施した。

【図19C】図１９Ｃは、試料全体にわたる細胞密度のｌｏｇ１０倍率変化を示すＨＡＬＯベースの定量を示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

詳細な説明
本開示は、改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲを含むＴ細胞）を、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子と組み合わせて、必要に応じて免疫抑制成分に特異的に結合する、および／またはそれを阻害する作用因子とさらに組み合わせて使用する、疾患を処置するための試薬および方法を提供する。

【0026】

本開示をより詳細に示す前に、本明細書で使用されるある特定の用語の定義を提供することは、本開示の理解の助けになり得る。さらなる定義は、本開示を通して示される。

【0027】

本説明では、任意の濃度範囲、百分率範囲、比の範囲、または整数範囲は、一部の態様では、別段の指示がない限り、列挙されている範囲内の任意の整数の値、および適宜、それらの分数（例えば、整数の十分の一および百分の一）を含むと理解するべきである。また、任意の物理的特徴、例えば、ポリマーサブユニット、サイズまたは厚さに関して本明細書で列挙される任意の数値範囲は、別段の指示がない限り、列挙されている範囲内の任意の整数を含むと理解すべきである。本明細書で使用される用語「約」は、一部の態様では、別段の指示がない限り、示されている範囲、値または構造の±２０％を意味する。用語「１つの（a）」および「１つの（an）」は、一部の態様では、本明細書で使用される場合、列挙されている構成要素のうちの「１または複数」を指すと理解すべきである。選択肢（例えば、「または」）の使用は、それらの選択肢のうち１つ、両方、またはその任意の組合せを意味すると理解すべきである。本明細書で使用される場合、用語「含む（include）」、「有する」および「含む（comprise）」は、同義で使用され、これらの用語およびそれらの異表記は、非限定的と解釈されることを意図したものである。

【0028】

「必要に応じた」または「必要に応じて」は、一部の態様では、その後に記載される要素、成分、事象または状況が、起こることもあり、または起こらないこともあること、およびその記載が、要素、成分、事象または状況が起こる事例とそれらが起こらない事例とを含むことを意味する。

【0029】

さらに、本明細書に記載される構造および置換基の様々な組合せから得られる個々の構築物または構築物の群は、あたかも各構築物または構築物の群が個々に示されたのと同程度に、本願により開示されると理解すべきである。したがって、特定の構造または特定のサブユニットの選択は、本開示の範囲内である。

【0030】

用語「から本質的になる」は、「含む」と同等ではなく、一部の態様では、請求項の明記された材料もしくはステップ、または特許請求された主題の基本的特徴に実質的に影響を与えない材料もしくはステップを指す。例えば、タンパク質のドメイン、領域もしくはモジュール（例えば、結合ドメイン、ヒンジ領域、またはリンカー）またはタンパク質（これは、１もしくは複数のドメイン、領域もしくはモジュールを有し得る）は、ドメイン、領域、モジュールまたはタンパク質のアミノ酸配列が、組み合わせて、ドメイン、領域、モジュールまたはタンパク質の長さの多くても２０％（例えば、多くても１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％または１％）に寄与し、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）またはタンパク質の活性（例えば、結合性タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を与えない（すなわち、活性の低減が、５０％を超えない、例えば、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下または１％以下である）、伸長、欠失、変異またはそれらの組合せ（例えば、アミノ末端もしくはカルボキシ末端にある、またはドメイン間にあるアミノ酸）を含む場合、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。

【0031】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸はもちろん、天然に存在するアミノ酸と同じように機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物も指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによってコードされたもの、ならびに後で修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメートおよびＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基と結合しているα－炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持するが、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じように機能する、化合物を指す。

【0032】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「変異」は、参照または野生型核酸分子またはポリペプチド分子とそれぞれ比較したときの核酸分子またはポリペプチド分子の配列の変化を指す。変異は、ヌクレオチド（複数可）またはアミノ酸（複数可）の置換、挿入または欠失を含む、配列のいくつかの異なるタイプの変化をもたらすことができる。

【0033】

「保存的置換」は、一部の態様では、特定のタンパク質の結合特性に有意な影響を与えない、または特定のタンパク質の結合特性を有意に変化させない、アミノ酸置換を指す。一般に、保存的置換は、置換されるアミノ酸残基が、類似した側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられることである。保存的置換は、次の群のうちの１つの中で見いだされる置換を含む：第１群：アラニン（ＡｌａまたはＡ）、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）；第２群：アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＺ）；第３群：アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）；第４群：アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、リジン（ＬｙｓまたはＫ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）；第５群：イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、バリン（ＶａｌまたはＶ）；および第６群：フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）。加えてまたは代替的に、アミノ酸は、類似した機能、化学構造または組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、もしくは硫黄含有）により、保存的置換群に分類することができる。例えば、脂肪族分類は、置換を目的として、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅを含み得る。他の保存的置換群は、硫黄含有：Ｍｅｔおよびシステイン（ＣｙｓまたはＣ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ；小さい脂肪族、非極性または微極性残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、およびＧｌｙ；極性、負荷電残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、およびＧｌｎ；極性、正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、およびＬｙｓ；大きい脂肪族、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、およびＣｙｓ；ならびに大きい芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐを含む。追加情報は、Creighton (1984) Proteins, W.H.Freeman and Companyにおいて見つけることができる。

【0034】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「タンパク質」または「ポリペプチド」は、アミノ酸残基のポリマーを指す。タンパク質は、天然に存在するアミノ酸ポリマーにはもちろん、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的模倣物である、アミノ酸ポリマー、および天然に存在しないアミノ酸ポリマーにも当てはまる。

【0035】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「融合タンパク質」は、単一鎖内に少なくとも２つの明確に異なるドメインを有するタンパク質であって、自然には前記ドメインが一緒にタンパク質内に見られないタンパク質を指す。融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＰＣＲを使用して構築されること、組換え操作されることなどがあり、またはそのような融合タンパク質を合成することができる。融合タンパク質は、タグ、リンカーまたは形質導入マーカーなどの、他の成分をさらに含有することができる。ある特定の実施形態では、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）により発現または産生される融合タンパク質は、細胞表面に位置し、前記融合タンパク質は、細胞膜に（例えば、膜貫通ドメインによって）繋留されており、細胞外成分（例えば、結合ドメインを含有する）および細胞内成分（例えば、シグナル伝達ドメイン、エフェクタードメイン、共刺激ドメインまたはそれらの組合せを含有する）を含む。

【0036】

「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」は、一部の態様では、天然サブユニット（例えば、プリンもしくはピリミジン塩基）または非天然サブユニット（例えば、モルホリン環）で構成され得る、共有結合的に連結されているヌクレオチドを含むポリマー化合物を指す。プリン塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチンおよびキサンチンを含み、ピリミジン塩基は、ウラシル、チミンおよびシトシンを含む。核酸分子は、ポリリボ核酸（ＲＮＡ）、ポリデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）（これは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡを含む）を含み、これらはいずれも、一本鎖であってもよく、または二本鎖であってもよい。一本鎖の場合、核酸分子は、コード鎖または非コード鎖（アンチセンス鎖）であり得る。アミノ酸配列をコードする核酸分子は、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列の一部のバージョンは、イントロンが同時転写機構または転写後機構によって除去されることになる場合には、イントロンも含むことができる。言い換えると、異なるヌクレオチド配列が、遺伝コードの重複性もしくは縮重の結果として、またはスプライシングにより、同じアミノ酸配列をコードすることもある。

【0037】

本開示の核酸分子のバリアントも企図される。バリアント核酸分子は、一部の態様では、本明細書に記載の被定義もしくは参照ポリヌクレオチドの核酸分子と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％同一、好ましくは、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは９９．９％同一であるか、または約６５～６８℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム、もしくは約４２℃で０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムおよび５０％ホルムアミドというストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でポリヌクレオチドとハイブリダイズするものである。核酸分子バリアントは、標的分子に特異的に結合することなどの本明細書に記載される機能性を有する結合タンパク質またはその結合ドメインをコードする能力を保持する。

【0038】

「配列同一性パーセント」は、一部の態様では、配列を比較することにより決定されるような、２つまたはそれより多くの配列の間の関係を指す。配列同一性を決定する好ましい方法は、比較されることになる配列間のベストマッチをもたらすように設計される。例えば、配列は、最適な比較のためにアラインメントされる（例えば、最適なアラインメントのためにギャップを第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に導入することができる）。さらに、非相同配列は、比較のために無視されることもある。本明細書で言及される配列同一性パーセントは、別段の指示がない限り、参照配列の長さにわたって計算される。配列同一性および類似性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムの中で見つけることができる。配列アラインメントおよび同一性パーセント計算は、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ ２．０、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＢＬＡＳＴＸ）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴプログラムで使用される数学的アルゴリズムは、Altschul et al., Nucleic Acids Res.25:3389-3402, 1997において見つけることができる。本開示に関して、配列分析ソフトウェアが分析に使用される場合、分析結果が、言及されるプログラムの「デフォルト値」に基づくことは、理解されるであろう。「デフォルト値」は、初回開始時にソフトウェアに元々ロードされている値またはパラメーターの任意のセットを意味する。

【0039】

用語「単離された」は、一部の態様では、材料がその元の環境（例えば、その材料が天然に存在する場合には天然環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生存動物に天然に存在する核酸またはポリペプチドは、単離されていないが、天然の系内に共存する材料の一部または全てから分離された同じ核酸またはポリペプチドは、単離されている。そのような核酸は、ベクターの一部であることもあり、および／またはそのような核酸もしくはポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の一部であることもあるが、それでもやはり、そのようなベクターもしくは組成物が核酸もしくはポリペプチドの天然環境の一部でないという点で単離されていることであり得る。用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡのセグメントを意味し、このセグメントには、コード領域の前および後の領域（「リーダーおよびトレーラー」）ならびに個々のコードセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）が含まれる。

【0040】

「機能的バリアント」は、一部の態様では、本開示の親または参照化合物と構造的に同様であるまたは実質的に構造的に同様であるが、わずかに組成が異なる（例えば、１つの塩基、原子または官能基が異なる、付加されている、または除去されている）、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドであって、したがって、ポリペプチドまたはコードされたポリペプチドが、コードされた親ポリペプチドの少なくとも１つの機能を、その親ポリペプチドの活性の少なくとも５０％の効率、好ましくは、少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の活性レベルで行うことができる、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す。言い換えると、本開示のポリペプチドまたはコードされたポリペプチドの機能的バリアントは、結合親和性を測定するためのアッセイ（例えば、平衡会合定数（Ｋ_ａ）または平衡解離定数（Ｋ_ｄ）を測定する、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）またはテトラマー染色）などの、選択されたアッセイにおいて、親または参照ポリペプチドと比較して性能の５０％を超える低下を示さない場合、「同様の結合」、「同様の親和性」または「同様の活性」を有する。

【0041】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「機能的部分」または「機能的断片」は、親または参照化合物のドメイン、部分または断片のみを含む、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指し、このポリペプチドまたはコードされたポリペプチドは、親もしくは参照化合物のドメイン、部分もしくは断片に関連する少なくとも５０％の活性、好ましくは、親ポリペプチドの少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは１００％の活性レベルを保持するか、または生物学的利益（例えば、エフェクター機能）を提供する。本開示のポリペプチドまたはコードされたポリペプチドの「機能的部分」または「機能的断片」は、その機能的部分または断片が、結合親和性を測定するためのアッセイまたはエフェクター機能（例えば、サイトカイン放出）を測定するためのアッセイなどの、選択されたアッセイにおいて、親または参照ペプチドと比較して５０％を超える性能の低下を示さない場合（好ましくは、親和性に関して親または参照物と比較して２０％もしくは１０％以下または対数差分以下）、「同様の結合」または「同様の活性」を有する。

【0042】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、「異種」または「非内在性」または「外因性」は、宿主細胞もしくは対象にとってネイティブでない任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子もしくは活性、または変更された宿主細胞もしくは対象にとってネイティブの任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子もしくは活性を指す。異種、非内在性、または外因性は、構造、活性、または両方が、ネイティブ遺伝子、タンパク質、化合物または核酸分子と変更された遺伝子、タンパク質、化合物または核酸分子との間で異なるように変異または別様に変更された、遺伝子、タンパク質、化合物または核酸分子を含む。ある特定の実施形態では、異種、非内在性または外因性遺伝子、タンパク質、または核酸分子（例えば、受容体、リガンドなど）は、宿主細胞にとっても対象にとっても内在性でないことがあり、その代わり、そのような遺伝子、タンパク質または核酸分子をコードする核酸をコンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどにより宿主細胞に付加することができ、付加された核酸分子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれることがあり、または染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミドもしくは他の自己複製ベクターとして）存在することができる。用語「相同（の）」または「相同体」は、宿主細胞、種もしくは株に見られる、または宿主細胞、種もしくは株から得られる、遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子または活性を指す。例えば、ポリペプチドをコードする異種または外因性ポリヌクレオチドまたは遺伝子は、ネイティブポリヌクレオチドまたは遺伝子と相同であることがあり、相同ポリペプチドまたは相同の活性をコードすることがあるが、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、変更された構造、配列、発現レベル、またはそれらの任意の組合せを有することもある。非内在性ポリヌクレオチドまたは遺伝子はもちろん、コードされたポリペプチドまたは活性も、同じ種からのものであることがあり、異なる種からのものであることがあり、またはそれらの組合せからのものであることがある。

【0043】

本明細書で使用される場合、一部の態様では、用語「内在性」または「ネイティブ」は、宿主細胞中または対象体内に通常存在するポリヌクレオチド、遺伝子、タンパク質、化合物、分子、または活性を指す。

【0044】

用語「発現」は、本明細書で使用される場合、一部の態様では、ポリペプチドが、遺伝子などの核酸分子のコード配列に基づいて産生されるプロセスを指す。このプロセスは、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾、またはそれらの任意の組合せを含み得る。発現された核酸分子は、通常は、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結されている。

【0045】

用語「作動可能に連結された」は、一部の態様では、１つの核酸分子の機能が他の核酸分子による影響を受けるような、単一核酸断片上の２つまたはそれより多くの核酸分子の会合を指す。例えば、プロモーターとコード配列は、プロモーターが、そのコード配列の発現に影響を与えることができる（すなわち、コード配列が、プロモーターの転写制御下にある）場合、作動可能に連結されている。「連結されていない」は、会合している遺伝子エレメントが、互いに密接に会合しておらず、１つの遺伝子エレメントの機能が他の遺伝子エレメントに影響を与えないことを意味する。

【0046】

本明細書で使用される場合、「発現ベクター」は、一部の態様では、好適な宿主において核酸分子の発現を生じさせることができる好適な制御配列に作動可能に連結されている核酸分子を含有するＤＮＡ構築物を指す。そのような制御配列には、転写を生じさせるプロモーター、そのような転写を制御するための必要に応じたオペレーター配列、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列が含まれる。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子、ウイルス、または単に潜在的ゲノム挿入物であり得る。好適な宿主に形質転換されると、ベクターは、宿主ゲノムから独立して複製および機能することができ、または一部の場合には、自体を宿主細胞のゲノムに組み込むことができる。本明細書では、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」および「ベクター」は、同義で使用されることが多い。

【0047】

一部の態様では、核酸分子を細胞に挿入する文脈での用語「導入される／された」は、「トランスフェクション」または「形質転換」または「形質導入」を意味し、核酸分子を細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、プラスチドまたはミトコンドリアＤＮＡ）に組み込むことができる、自律レプリコンに変換することができる、または（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡを）一過性に発現することができる、真核または原核細胞への核酸分子の組込みへの言及を含む。本明細書で使用される場合、用語「操作された」、「組換え（の）」または「非天然（の）」は、少なくとも１つの遺伝子変更を含むかまたは異種もしくは外因性核酸分子の導入により改変された生物、少なくとも１つの遺伝子変更を含むかまたは外因性核酸分子の導入により改変された微生物、少なくとも１つの遺伝子変更を含むかまたは外因性核酸分子の導入により改変された細胞、少なくとも１つの遺伝子変更を含むかまたは外因性核酸分子の導入により修飾された核酸分子、あるいは少なくとも１つの遺伝子変更を含むかまたは外因性核酸分子の導入により修飾されたベクターであって、そのような変更または改変／修飾が、遺伝子操作（すなわち、人間の介入）により導入される、生物、微生物、細胞、核酸分子またはベクターを指す。遺伝子変更は、例えば、タンパク質、結合タンパク質もしくは酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する修飾、または他の核酸分子付加、欠失、置換、または細胞の遺伝物質の他の機能破壊を含む。追加の修飾は、例えば、修飾がポリヌクレオチド、遺伝子またはオペロンの発現を変更する、非コード調節領域を含む。

【0048】

一部の態様では、本明細書に記載されるように、１つより多くの異種核酸分子を、別々の核酸分子として、複数の個々に制御された遺伝子として、ポリシストロニック核酸分子として、結合タンパク質をコードする単一の核酸分子として、またはそれらの任意の組合せとして、宿主細胞に導入することができる。２つまたはそれより多くの異種核酸分子が宿主細胞に導入される場合、これら２つまたはそれより多くの異種核酸分子が、単一の核酸分子として（例えば、単一のベクターで）導入されることもあり、別々のベクターで宿主染色体の単一の部位もしくは複数の部位に組み込まれることもあり、またはそれらの任意の組合せであることもあることは理解される。言及された異種核酸分子またはタンパク質活性の数は、コードする核酸分子の数またはタンパク質活性の数を指し、宿主細胞に導入される別々の核酸分子の数を指さない。

【0049】

用語「構築物」は、一部の態様では、組換え核酸分子を含有する任意のポリヌクレオチドを指す。構築物は、ベクター（例えば、細菌ベクター、ウイルスベクター）中に存在することもあり、またはゲノムに組み込まれていることもある。「ベクター」は、別の核酸分子を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクターであることもあり、または染色体の、非染色体の、半合成のもしくは合成の核酸分子を含み得る線状もしくは環状ＤＮＡもしくはＲＮＡ分子であることもある。本開示のベクターは、トランスポゾン系（例えば、スリーピング・ビューティー、例えば、Geurts et al., Mol.Ther.8:108, 2003: Mates et al., Nat. Genet. 41:753（2009）を参照されたい）も含み得る。例示的なベクターは、自律複製することができるもの（エピソームベクター）、または自体が連結されている核酸分子を発現させることができるもの（発現ベクター）である。

【0050】

ウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えばオルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病および水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹およびセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えばピコルナウイルスおよびアルファウイルス、ならびに二本鎖ＤＮＡウイルスが挙げられ、二本鎖ＤＮＡウイルスには、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型および２型、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス）、およびポックスウイルス（例えば、ワクシニア、鶏痘およびカナリアポックス）が含まれる。他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、および肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血症－肉腫、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996）。

【0051】

「レトロウイルス」は、一部の態様では、ＲＮＡゲノムを有するウイルスであって、このＲＮＡゲノムが、逆転写酵素を使用してＤＮＡに逆転写され、次いで、逆転写されたＤＮＡが宿主細胞ゲノムに組み込まれる、ウイルスである。「ガンマレトロウイルス」は、レトロウイルス科の属を指す。例示的なガンマレトロウイルスとしては、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、およびトリ細網内皮症ウイルスが挙げられる。

【0052】

「レンチウイルスベクター」は、一部の態様では、本明細書で使用される場合、遺伝子送達のためのＨＩＶベースのレンチウイルスベクターであって、組込み型であることもあり、または非組込み型であることもあり、比較的大きいパッケージング容量を有し、様々な異なる細胞型に形質導入することができる、レンチウイルスベクターを意味する。レンチウイルスベクターは、産生細胞内への３つ（パッケージング、エンベロープおよび移入）またはそれより多くのプラスミドの一過性トランスフェクション後に通常は生成される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターは、ウイルス表面糖タンパク質と細胞表面の受容体との相互作用によって標的細胞に侵入する。侵入すると、ウイルスＲＮＡは、ウイルス逆転写酵素複合体により媒介される逆転写を受ける。逆転写の産物は、二本鎖線状ウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡ中へのウイルス組込みの基質である。本開示の実施形態を実践するのに有用な追加のベクターが本明細書に記載されている。

【0053】

本明細書で使用される場合、用語「宿主」は、一部の態様では、目的のポリペプチド（例えば、本開示の結合タンパク質）を産生するために異種核酸分子での遺伝子修飾の標的とされる細胞（例えば、Ｔ細胞）または微生物を指す。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、例えば異種タンパク質の生合成に関係するまたは関係しない所望の特性を付与する他の遺伝子修飾（例えば、検出可能なマーカーの組み入れ；内在性ＴＣＲの欠失、変更もしくは短縮化；または共刺激因子発現の増加）を、必要に応じて、既に有することもあり、または含むように修飾されることもある。

【0054】

本明細書で使用される場合、「造血前駆細胞」は、一部の態様では、造血幹細胞または胎児組織に由来し得る細胞であって、成熟細胞型（例えば、免疫系細胞）へとさらに分化することができる細胞である。例示的な造血前駆細胞としては、ＣＤ２４^ＬｏＬｉｎ^－ＣＤ１１７^＋表現型を有するもの、または胸腺に見られるもの（前駆胸腺細胞と呼ばれる）が挙げられる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「免疫系細胞」または「免疫細胞」は、一部の態様では、２つの主要な系列、骨髄系前駆細胞（これは、骨髄系細胞、例えば、単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球および顆粒球を生じさせる）およびリンパ系前駆細胞（これは、リンパ系細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＮＫ－Ｔ細胞を生じさせる）、を生じさせる、骨髄中の造血幹細胞に由来する免疫系の任意の細胞を意味する。例示的な免疫系細胞としては、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－二重陰性Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＮＫ－Ｔ細胞）、および樹状細胞が挙げられる。マクロファージおよび樹状細胞は、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」と呼ばれることもあり、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、ペプチドと複合体化したＡＰＣの表面の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）受容体がＴ細胞の表面のＴＣＲと相互作用したときＴ細胞を活性化することができる特殊化した細胞である。

【0056】

今般記載される実施形態のいずれにおいても、本開示の免疫細胞を、異種ポリヌクレオチド、染色体遺伝子ノックアウトもしくは変異、またはそれらの組合せを含むように改変することができる。

【0057】

「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」は、胸腺において成熟し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を産生する免疫系細胞である。Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞（例えば、抗原に曝露されていない；Ｔ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７、およびＣＤ４５ＲＡの発現の増大、ならびにＣＤ４５ＲＯの発現の低下）、メモリーＴ細胞（Ｔ_Ｍ）（例えば、抗原を経験したおよび長寿命）、およびエフェクター細胞（抗原を経験した、細胞傷害性）に関連する表現型またはマーカーを示し得る。Ｔ_Ｍは、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ、例えば、ナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ９５の発現の増大、ならびにＣＤ５４ＲＡの発現の低下）およびエフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ、例えばナイーブＴ細胞またはＴ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡの発現の低下、ならびにＣＤ１２７の発現の増大）に関連する表現型またはマーカーを示すサブセットにさらに分けることができる。

【0058】

エフェクターＴ細胞（Ｔ_Ｅ）は、Ｔ_ＣＭと比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８の発現の低下を有し、グランザイムおよびパーフォリンに関して陽性である抗原を経験したＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球を指す。ヘルパーＴ細胞（Ｔ_Ｈ）は、サイトカインを放出することによって他の免疫細胞の活性に影響を及ぼすＣＤ４^＋細胞を含み得る。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、適応免疫応答を活性化することおよび抑制することができ、これら２つの機能のどちらが誘導されるのかは、他の細胞およびシグナルの存在に依存する。公知の技法を使用してＴ細胞を収集することができ、公知の技法により、例えば、抗体への親和性結合、フローサイトメトリーまたは免疫磁気選択により、様々な部分集団またはそれらの組合せを富化することまたは枯渇させることができる。他の例示的なＴ細胞としては、調節性Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋（Ｆｏｘｐ３^＋）調節性Ｔ細胞およびＴｒｅｇ１７細胞、ならびにＴｒ１、Ｔｈ３、ＣＤ８^＋ＣＤ２８^－、およびＱａ－１拘束Ｔ細胞が挙げられる。

【0059】

「Ｔ細胞系列の細胞」は、一部の態様では、それらの細胞を他のリンパ系細胞、および赤血球または骨髄細胞系列と区別する、Ｔ細胞またはその先駆体もしくは前駆体の少なくとも１つの表現型特性を示す細胞を指す。そのような表現型特性としては、Ｔ細胞に特異的な１つもしくは複数のタンパク質（例えば、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋）の発現、またはＴ細胞に特異的な生理的、形態的、機能的もしくは免疫学的特徴を挙げることができる。例えば、Ｔ細胞系列の細胞は、Ｔ細胞系列に運命決定された前駆細胞または先駆細胞；ＣＤ２５^＋未熟および不活性化Ｔ細胞；ＣＤ４もしくはＣＤ８系列に運命決定された細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋二重陽性である胸腺細胞前駆細胞；単一陽性ＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋；ＴＣＲαβもしくはＴＣＲ γδ；または成熟および機能的または活性化Ｔ細胞であり得る。

【0060】

「主要組織適合性遺伝子複合体分子」（ＭＨＣ分子）は、一部の態様では、ペプチド抗原を細胞表面に送達する糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜通過α鎖（３つのαドメインを有する）と非共有結合的に会合しているβ２ミクログロブリンとからなるヘテロダイマーである。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２つの膜貫通糖タンパク質、αおよびβ、で構成されており、これらの両方が膜にまたがっている。各鎖は、２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子は、サイトゾルに由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこでペプチド：ＭＨＣ複合体は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞により認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、小胞系に由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこで、それらは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ分子は、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヤギ、ウマまたは他の哺乳動物を含む、様々な動物種からのものであり得る。

【0061】

「ＣＤ４」は、一部の態様では、ＴＣＲの抗原提示細胞との通信を補助する免疫グロブリン共受容体糖タンパク質を指す（Campbell & Reece, Biology 909 (Benjamin Cummings, Sixth Ed., 2002)；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０１７３０を参照されたい）。ＣＤ４は、免疫細胞、例えば、Ｔヘルパー細胞、単球、マクロファージおよび樹状細胞の表面に見られ、前記細胞表面で発現される４つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ１～Ｄ４）を含む。抗原提示中に、ＣＤ４は、ＴＣＲ複合体とともに動員されて、ＭＨＣＩＩ分子の異なる領域と結合する（ＣＤ４はＭＨＣＩＩ β２に結合し、その一方でＴＣＲ複合体はＭＨＣＩＩ α１／β１に結合する）。理論により拘束されることを望まないが、ＴＣＲ複合体に非常に近接することにより、一部の文脈では、ＣＤ４関連キナーゼ分子が、ＣＤ３の細胞質ドメインに存在する免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をリン酸化することが可能になる。この活性は、様々なタイプのヘルパーＴ細胞を産生するために、活性化ＴＣＲによって生じるシグナルを増幅すると考えられる。

【0062】

本明細書で使用される場合、用語「ＣＤ８共受容体」または「ＣＤ８」は、一部の態様では、アルファ・アルファホモダイマーまたはアルファ・ベータヘテロダイマーのどちらかとしての、細胞表面糖タンパク質ＣＤ８を意味する。ＣＤ８共受容体は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋）の機能を補助し、その細胞質チロシンリン酸化経路経由でのシグナル伝達によって機能する（Gao and Jakobsen, Immunol.Today 21:630-636, 2000; Cole and Gao, Cell. Mol.Immunol.1:81-88, 2004）。ヒトの場合、五（５）つの異なるＣＤ８ベータ鎖（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ１０９６６を参照されたい）および単一のＣＤ８アルファ鎖（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ０１７３２を参照されたい）がある。

【0063】

本明細書で使用される場合、「統計的に有意な」は、一部の態様では、ステューデントｔ検定を使用して計算された場合に、０．０５０またはそれより小さいｐ値を指す場合があり、測定される特定の事象または結果が偶然に生じる可能性が低いことを示す。

【0064】

結合タンパク質、ポリヌクレオチド、および改変された免疫細胞
ある特定の態様では、本開示は、疾患または障害によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質を提供する。

【0065】

「結合タンパク質」は、本明細書では、標的（例えば、疾患に関連する抗原、例えば、過剰増殖性疾患に関連する抗原またはがんに関連する抗原）と特異的かつ共有結合によらずに会合、一体化、または化合する能力を有するタンパク質またはポリペプチドを指す。例示的な結合タンパク質として、抗体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、他の受容体、リガンドなどが挙げられる。

【0066】

ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、疾患または障害によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合ドメインを含む。「結合ドメイン」（「結合領域」または「結合部分構造」とも呼ばれる）は、本明細書で使用される場合、標的（例えば、疾患に関連する抗原、例えば、過剰増殖性疾患に関連する抗原またはがんに関連する抗原）と特異的かつ共有結合によらずに会合、一体化、または化合する能力を有する分子またはその部分（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質（例えば、結合タンパク質））を指す。結合ドメインは、生体分子、分子複合体（すなわち、２つもしくはそれより多くの生体分子を含む複合体）または目的の他の標的に対する、任意の天然に存在する、合成の、半合成の、または組換えにより産生された結合パートナーを含む。例示的な結合ドメインとしては、単鎖免疫グロブリン可変領域（例えば、ｓｃＴＣＲ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＴＣＲ可変領域）、受容体細胞外ドメイン、リガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）、または合成ポリペプチドであって、生体分子、分子複合体もしくは目的の他の標的と結合するそれらの特異的能力のために選択される合成ポリペプチドが挙げられる。

【0067】

「抗原」または「Ａｇ」は、本明細書で使用される場合、免疫応答を惹起する免疫原性分子を指す。免疫応答は、例えば、抗体産生、サイトカインもしくはケモカインの産生およびそれによるシグナル伝達、特定の免疫学的にコンピテントな細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化、抗原の発現もしくは提示部位への細胞の遊走、またはそれらの任意の組合せを伴い得る。抗原（免疫原性分子）は、例えば、ペプチド、グリコペプチド、ポリペプチド、グリコポリペプチド、ポリヌクレオチド、多糖、脂質などであり得る。抗原を合成、組換えにより産生、または生体試料から得ることができる。１つまたは複数の抗原を含有することができる例示的な生体試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、生体液、またはそれらの組合せが挙げられる。抗原は、抗原を発現するように改変されたまたは遺伝子操作された細胞によって産生され得る。

【0068】

用語「エピトープ」または「抗原エピトープ」は、免疫グロブリン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質などの、同族結合分子により認識され、特異的に結合される、任意の分子、構造、アミノ酸配列またはタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的活性表面集団を含有し、特異的三次元構造特性および特異的電荷特性を有することができる。

【0069】

用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、抗原特異性および／または結合親和性を付与するＴＣＲまたは抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことは当技術分野において公知である。一般に、免疫グロブリン結合タンパク質の各可変領域には、３つのＣＤＲが存在し；例えば、抗体では、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、６つのＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３；ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）を含む。一般に、ＴＣＲ（αおよびβ鎖を含む）では、各アルファ鎖可変領域に３つのＣＤＲ（αＣＤＲ１、αＣＤＲ２、αＣＤＲ３）および各ベータ鎖可変領域に３つのＣＤＲ（βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３）が存在する。ＴＣＲの場合には、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原を認識するのに関与する主なＣＤＲであると考えられ、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２は、ＭＨＣと主に相互作用すると考えられる。本明細書で使用される場合、ＣＤＲの「バリアント」は、最大で１～３個のアミノ酸置換、欠失、またはそれらの組合せを有するＣＤＲ配列の機能的バリアントを指す。

【0070】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、結合タンパク質は、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体であり得るかまたはそれを含み得る。「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）とは、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドと特異的に結合することができる免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー（可変結合ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域および短い細胞質側テールを有する；例えば、Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3^rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997を参照されたい）を指す。ＴＣＲは、細胞の表面にまたは可溶性形態で見られることがあり、一般に、α鎖およびβ鎖（それぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても公知）、またはγ鎖およびδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても公知）を有するヘテロダイマーから構成される。各々のＴＣＲ鎖（例えば、α鎖、β鎖）の細胞外部分は、次の２つの免疫グロブリンドメインを含む：Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、α鎖可変ドメインまたはＶ_α、β鎖可変ドメインまたはＶ_β；通常は、Ｋａｂａｔ番号付け（Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5^th ed.）に基づいてアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接した１つの定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメインまたはＣ_α、通常はＫａｂａｔに基づいてアミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣ_β、通常はＫａｂａｔに基づいてアミノ酸１１７～２９５）。また、免疫グロブリンと同様に、可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられた相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（例えば、Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci.U.S.A.87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988を参照されたく、Lefranc et al., Dev.Comp.Immunol.27:55, 2003も参照されたい）。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面に見られ、ＣＤ３複合体と会合している。本開示で使用される場合のＴＣＲの供給源は、様々な動物種、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギまたは他の哺乳動物からのものであり得る。操作されたＴＣＲを産生する方法は、例えば、Bowerman et al., Mol.Immunol., 46(15):3000 (2009)に記載されており、この参考文献の手法は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0071】

ある特定の実施形態では、ＴＣＲの抗原結合断片は、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）を含み、これは、ＴＣＲ ＶαとＶβドメインの両方を含むが、単一のＴＣＲ定常ドメイン（ＣαまたはＣβ）しか含まない。ある特定の実施形態では、ＴＣＲまたはキメラ抗原受容体（本明細書に記載されている）の抗原結合断片は、キメラ（例えば、１より多いドナーまたは種に由来するアミノ酸残基またはモチーフを含む）、ヒト化（例えば、ヒトにおける免疫原性のリスクを低減するために変更または置換される非ヒト生物からの残基を含む）、またはヒトである。

【0072】

「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、天然に存在しないまたは宿主細胞に天然に存在しない方法で互いに連結された２つまたはそれより多くの天然に存在するアミノ酸配列を含有するように操作された、本開示の融合タンパク質であって、細胞の表面に存在するときに受容体として機能することができる融合タンパク質を指す。本開示のＣＡＲは、膜貫通ドメインおよび１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている、抗原結合ドメイン（例えば、免疫グロブリンもしくは免疫グロブリン様分子から得られるもしくは誘導される抗原結合ドメイン、例えば、がん抗原に特異的な抗体もしくはＴＣＲから誘導されるｓｃＦｖ、またはＮＫ細胞からのキラー免疫受容体から誘導されるもしくは得られる抗原結合ドメイン）を含む（必要に応じて共刺激ドメインを含有する）細胞外部分を含む（例えば、Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4):388 (2013)を参照されたく、Harris and Kranz, Trends Pharmacol.Sci., 37(3):220 (2016); Stone et al., Cancer Immunol.Immunother., 63(11):1163(2014)も参照されたい）。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、抗原特異的ＴＣＲ結合ドメインを含むＣＡＲを含む（例えば、Walseng et al., Scientific Reports 7:10713, 2017を参照されたい；この参考文献のＴＣＲ ＣＡＲ構築物および方法は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0073】

ＣＡＲを含む結合タンパク質を作製する方法は、例えば、米国特許第６，４１０，３１９号；米国特許第７，４４６，１９１号；米国特許出願公開第２０１０／０６５８１８号；米国特許第８，８２２，６４７号；ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号；米国特許第７，５１４，５３７号；およびBrentjens etal., 2007, Clin. Cancer Res. 13:5426（その手法は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0074】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」または「に特異的な」は、試料中のいずれの他の分子または成分とも有意に会合も一体化もしない、１０^５Ｍ^－１に等しいかまたはそれより高い（これは、この会合反応についての会合速度［ｋ_ｏｎ］の解離速度［ｋ_ｏｆｆ］に対する比に等しい）親和性またはＫ_Ａ（すなわち、単位が１／Ｍである、特定の結合相互作用の平衡会合定数）での、結合タンパク質（例えば、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体）または結合ドメイン（またはその結合タンパク質）の標的分子（例えば、疾患、例えば、過剰増殖性疾患、例えば、がんと会合する抗原）への会合または一体化を指す。結合タンパク質または結合ドメイン（またはそれらの結合タンパク質）は、「高親和性」結合タンパク質もしくは結合ドメイン（もしくはそれらの結合タンパク質）として分類されることもあり、または「低親和性」結合タンパク質もしくは結合ドメイン（もしくはそれらの結合タンパク質）として分類されることもある。「高親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、少なくとも１０^７Ｍ^－１、少なくとも１０^８Ｍ^－１、少なくとも１０^９Ｍ^－１、少なくとも１０^１０Ｍ^－１、少なくとも１０^１１Ｍ^－１、少なくとも１０^１２Ｍ^－１、または少なくとも１０^１３Ｍ^－１のＫ_Ａを有する、結合タンパク質または結合ドメインを指す。「低親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、最大で１０^７Ｍ^－１、最大で１０^６Ｍ^－１、最大で１０^５Ｍ^－１のＫ_Ａを有する、結合タンパク質または結合ドメインを指す。あるいは、単位がＭである（例えば、１０^－５Ｍ～１０^－１３Ｍまたはそれ未満）、特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）として、親和性を定義することができる。

【0075】

ある特定の実施形態では、受容体または結合ドメインは、「増強された親和性」を有することができ、この「増強された親和性」は、野生型（または親）結合ドメインよりも標的抗原と強く結合する、選択もしくは操作された受容体または結合ドメインを指す。例えば、増強された親和性は、野生型結合ドメインよりも高い標的抗原に対するＫ_Ａ（平衡会合定数）に起因することもあり、野生型結合ドメインのものより低い標的抗原に対するＫ_Ｄ（平衡解離定数）に起因することもあり、野生型結合ドメインのものよりも低い標的抗原に対するオフレート（ｋ_ｏｆｆ）に起因することもあり、またはそれらの組合せであることもある。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞などの特定の宿主細胞における発現を増強するためにコドン最適化され得る（Scholten et al., Clin.Immunol.119:135, 2006）。

【0076】

特定の標的に特異的に結合する本開示の結合ドメインを同定するための、および結合ドメインまたは結合タンパク質親和性を決定するための、様々なアッセイ、例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、分析用超遠心分離、分光法および表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））分析が、公知である（例えば、Scatchard et al., Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res.53:2560, 1993；および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号または対応特許を参照されたい）。親和性または見かけの親和性または相対親和性を評価するアッセイも公知である。ある特定の例では、結合タンパク質の見かけの親和性は、様々な濃度のテトラマーとの結合を評定することにより、例えば、標識されたテトラマーを使用してフローサイトメトリーにより測定される。一部の例では、結合タンパク質の見かけのＫ_Ｄは、ある濃度範囲の標識されたテトラマーの２倍希釈物を使用して測定され、続いて非線形回帰により結合曲線が決定され、半最大結合を生じさせたリガンドの濃度として見かけのＫ_Ｄが決定される。

【0077】

一部の実施形態では、結合タンパク質は、腫瘍関連抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、Ｌｅｗｉｓ Ａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５６、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＡ１２５、ｃ－ＭＥＴ、ＦｃＲＨ５、ＷＴ１、葉酸受容体α、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＳＳＸ－２、ＰＲＡＭＥ、ＨＡ－１^Ｈ、ＰＳＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＦＡＰ、炭酸脱水酵素９、ＥＲＢＢ２、ＢＲＡＦ^{Ｖ６００Ｅ}、およびＣＥＡから選択される。

【0078】

一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＲＯＲ１である。ある特定の実施形態では、結合ドメインは、配列番号６、７、および８によるＨＣＤＲ、ならびに配列番号２、３、および４によるＬＣＤＲを含む。他の実施形態では、結合ドメインは、配列番号１５、１６、および１７によるＨＣＤＲ、ならびに配列番号１１、１２、および１３によるＬＣＤＲを含む。

【0079】

一部の実施形態では、結合ドメインは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。他の実施形態では、結合ドメインは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶ_Ｈ、ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、結合タンパク質は、抗体２Ａ２、抗体Ｒ１２、抗体Ｒ１１、抗体ＵＣ－９６１、抗体Ｄ１０、または抗体Ｈ１０に由来する結合ドメインを含む。ＷＯ２０１４／０３１６８７、ＷＯ２０１２／０７６０６６、ＵＳ２０１５／２３２５６９、ＵＳ２０１２／００５８０５１；ＵＳ９，３１６，６４６；ＵＳ２０１３／０２５１６４２；ＵＳ９，２１７，０４０；Yang etal., PLoS One 6(6):e21018 (2011)；およびChoi et al., Clin.LymphomaMyelomaLeu.(2015) 15(Suppl):S167-S169に開示される全てのＲＯＲ１抗体ならびに関連するタンパク質および核酸構築物および関連する配列は参照により本明細書に組み込まれる。

【0080】

一部の実施形態では、結合ドメインは、短いリンカーペプチドによって接続した重鎖および軽鎖可変領域を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であるかまたはそれを含む。本開示の実施形態のいずれにおいても、リンカーは、配列番号１８～２１のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなってもよい。

【0081】

本開示の任意のｓｃＦｖを、Ｖ_ＬドメインのＣ末端が短いペプチド配列によってＶ_ＨドメインのＮ末端に連結される、または逆に、Ｖ_ＨドメインのＣ末端が、短いペプチド配列によってＶ_ＬドメインのＮ末端に連結される（すなわち、（Ｎ）Ｖ_Ｌ（Ｃ）－リンカー－（Ｎ）Ｖ_Ｈ（Ｃ）または（Ｎ）Ｖ_Ｈ（Ｃ）－リンカー－（Ｎ）Ｖ_Ｌ（Ｃ））ように、操作することができる。ある特定の実施形態では、本開示の結合ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、結合ドメインを含む細胞外成分と、エフェクタードメインを含む細胞内成分との間に配置された膜貫通成分を含む。本明細書で使用される場合、「エフェクタードメイン」は、適切なシグナルを受け取ったときの細胞における生物学的または生理的応答を直接または間接的に促進することができる、結合タンパク質または受容体の細胞内部分またはシグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、エフェクタードメインは、結合されたときに、あるいはタンパク質もしくはその一部分またはタンパク質複合体が、標的分子と直接結合し、エフェクタードメインからのシグナルを誘発したときにシグナルを受け取る、タンパク質もしくはその一部分またはタンパク質複合体からのものである。

【0082】

エフェクタードメインは、それが、１つまたは複数のシグナル伝達ドメインまたはモチーフ、例えば、共刺激分子に見られるような細胞内チロシンベース活性化モチーフ（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｍｏｔｉｆ：ＩＴＡＭ）を含有する場合、細胞応答を直接促進することができる。理論により拘束されることを望まないが、一部の態様では、ＩＴＡＭは、Ｔ細胞受容体によるまたはＴ細胞エフェクタードメインを含む結合タンパク質によるリガンド（例えば、抗原）結合後のＴ細胞刺激または活性化に重要であり得る。ある特定の実施形態では、細胞内成分は、ＩＴＡＭを含む。例示的なエフェクタードメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、Ｌｃｋ、ＬＡＧ３、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、Ｗｎｔ、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、ＳＬＡＭＦ１、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２、またはそれらの任意の組合せからのものを含む。ある特定の実施形態では、エフェクタードメインは、リンパ球受容体シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を含む。

【0083】

さらなる実施形態では、結合タンパク質の細胞内成分は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）またはそれらの組合せから選択される、共刺激ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む。ある特定の実施形態では、細胞内成分は、ＣＤ２８共刺激ドメインもしくはそのシグナル伝達部分（これは、ネイティブＣＤ２８タンパク質の１８６～１８７位にＬＬ→ＧＧ変異を必要に応じて含み得る（Nguyen et al., Blood 102:4320, 2003を参照されたい））、４－１ＢＢ共刺激ドメインもしくはそのシグナル伝達部分、または両方を含む。

【0084】

ある特定の実施形態では、エフェクタードメインは、ＣＤ３ζまたはその機能的部分を含む。ヒト４－１ＢＢからの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２４に提供される。ある特定の実施形態では、共刺激ドメインは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。さらなる実施形態では、エフェクタードメインは、ＣＤ２７からの部分またはシグナル伝達ドメインを含む。さらなる実施形態では、エフェクタードメインは、ＣＤ２８からの部分またはシグナル伝達ドメインを含む。なおさらなる実施形態では、エフェクタードメインは、４－１ＢＢからの部分またはシグナル伝達ドメインを含む。ヒト４－１ＢＢからの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２３に提供される。さらなる実施形態では、エフェクタードメインは、ＯＸ４０からの部分またはシグナル伝達ドメインを含む。

【0085】

本開示の細胞外成分および細胞内成分は、膜貫通ドメインによって接続されている。「膜貫通ドメイン」は、本明細書で使用される場合、細胞膜に挿入することまたは細胞膜を通過することができる、膜貫通タンパク質の一部分である。膜貫通ドメインは、細胞膜内で熱力学的に安定している三次元構造を有し、一般に、長さが約１５アミノ酸～約３０アミノ酸の範囲である。膜貫通ドメインの構造は、アルファヘリックス、ベータバレル、ベータシート、ベータヘリックス、またはそれらの任意の組合せを含み得る。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、公知の膜貫通タンパク質を含むまたは公知の膜貫通タンパク質に由来するもの（すなわち、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２７膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはそれらの任意の組合せ）である。ヒトＣＤ２８からの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２２に提供される。特定の実施形態では、結合タンパク質の膜貫通成分は、ＣＤ２８ならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび必要に応じて共刺激ドメイン、例えば、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む細胞内成分に由来する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質の膜貫通成分は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、共刺激ドメインは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0086】

特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるｓｃＦｖ、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる膜貫通成分、および配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激ドメインを含む。

【0087】

ある特定の実施形態では、結合タンパク質の細胞外成分は、結合ドメインと膜貫通ドメインの間に配置されたリンカーをさらに含む。結合ドメインと膜貫通ドメインを接続する結合タンパク質の成分に言及するときに本明細書で使用される場合、「リンカー」は、リンカーによって接続された２つの領域、ドメイン、モチーフ、断片またはモジュール間に柔軟性および立体構造移動の余地を与えることができる、約２アミノ酸～約５００アミノ酸を有するアミノ酸配列であり得る。例えば、本開示のリンカーは、結合タンパク質を発現する宿主細胞の表面から離れた位置に結合ドメインを置いて、宿主細胞と標的細胞間の適切な接触、抗原結合、および活性化を可能にすることができる（Patel et al., Gene Therapy 6: 412-419, 1999）。選択される標的分子、選択される結合エピトープ、または抗原結合ドメインのサイズ（seize）および親和性に基づいて、抗原認識を最大にするようにリンカー長を変えることができる（例えば、Guest et al., J. Immunother.28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／０３１６８７を参照されたい）。例示的なリンカーとしては、Ｇｌｙ_ｘＳｅｒ_ｙ（ここで、ｘおよびｙは、各々独立して０～１０の整数であり、ただし、ｘおよびｙが両方ともに０ではない）の１～約１０の反復を有するグリシン－セリンアミノ酸鎖を有するもの（例えば、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_２、（Ｇｌｙ_３Ｓｅｒ）_２、Ｇｌｙ_２Ｓｅｒ、またはそれらの組合せ、例えば、（（Ｇｌｙ_３Ｓｅｒ）_２Ｇｌｙ_２Ｓｅｒ）が挙げられる。本開示の実施形態のいずれにおいても、リンカーは、配列番号１８～２１のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり得る。

【0088】

本開示のリンカーは、免疫グロブリン定常領域（すなわち、任意のアイソタイプのＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＬ）およびそれらの部分も含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ２ドメイン、または両方を含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。さらなる実施形態では、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインは、各々、同じアイソタイプである。特定の実施形態では、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプである。他の実施形態では、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインは、各々、異なるアイソタイプである。特定の実施形態では、ＣＨ２は、Ｎ２９７Ｑ変異を含む。理論により拘束されることを望まないが、一部の状況では、Ｎ２９７Ｑ変異を有するＣＨ２ドメインは、ＦｃγＲに結合しないと考えられる（例えば、Sazinsky et al., PNAS 105(51):20167 (2008)を参照されたい）。ある特定の実施形態では、リンカーは、ヒト免疫グロブリン定常領域またはその部分を含む。

【0089】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、リンカーは、ヒンジ領域またはその部分を含み得る。ヒンジ領域は、可変長および配列（通常はプロリンおよびシステインアミノ酸を多く含む）の柔軟なアミノ酸ポリマーであり、免疫グロブリンタンパク質の柔軟性がより高い領域とより低い領域を接続する。例えば、ヒンジ領域は、抗体の重鎖定常および可変領域に接続し、ＴＣＲの定常および膜貫通領域に接続する。

【0090】

ある特定の実施形態では、結合タンパク質の細胞外成分、結合ドメイン、リンカー、膜貫通ドメイン、細胞内成分（例えば、エフェクタードメイン、共刺激ドメインまたは両方）のうちの１つまたは複数は、接合部アミノ酸を含む。「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」は、タンパク質の２つの隣接するドメイン、モチーフ、領域、モジュール、または断片間の、例えば、結合ドメインと隣接リンカーの間、膜貫通ドメインと隣接細胞外もしくは細胞内ドメインの間、または２つのドメイン、モチーフ、領域、モジュール、もしくは断片を連結するリンカーの一方もしくは両方の末端上（例えば、リンカーと隣接結合ドメインの間またはリンカーと隣接ヒンジの間）の、１つまたは複数（例えば、約２～２０）のアミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、結合タンパク質の構築物設計の結果として生じ得る（例えば、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの構築中の制限酵素部位または自己切断ペプチド配列の使用の結果として生じるアミノ酸残基）。例えば、結合タンパク質の膜貫通ドメインは、アミノ末端、カルボキシ末端、または両方に、１つまたは複数の接合部アミノ酸を有し得る。

【0091】

一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、タンパク質タグ（本明細書では、ペプチドタグまたはタグペプチドとも呼ばれる）をさらに含み得る。タンパク質タグは、目的のタンパク質に付けられているかもしくは遺伝子融合されている、または目的のタンパク質の一部分である、特有のペプチド配列であり、例えば、異種または非内在性同族結合分子または基質（例えば、受容体、リガンド、抗体、炭水化物、もしくは金属マトリックス）によって認識されるかまたは結合され得る。タンパク質タグは、目的のタグ付きタンパク質の検出、識別、単離、追跡、精製、濃縮、標的化、または生物学的もしくは化学的修飾に、特に、タグ付きタンパク質が、細胞の異種集団（例えば、末梢血のような生体試料）の一部である場合に有用である。提供された結合タンパク質において、同族結合分子がタグと特異的に結合できることは、結合ドメインが過剰増殖性疾患に関連する抗原に特異的に結合できることとは明確に異なり、結合ドメインが過剰増殖性疾患に関連する抗原に特異的に結合できることに加えてである。ある特定の実施形態では、タンパク質タグは、Ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、Ｆｌａｇタグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、Ａｖｉタグ、カルモジュリンタグ、ポリグルタミン酸タグ、ＨＡタグ、Ｎｕｓタグ、Ｓタグ、ＳＢＰタグ、Ｓｏｆｔａｇ、Ｖ５タグ、ＣＢＰ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＧＦＰ、チオレドキシンタグ、Ｓｔｒｅｐ（登録商標）タグ、またはそれらの任意の組合せである。

【0092】

組換えにより産生された可溶性結合タンパク質を単離および精製するのに有用な方法は、例として、組換え可溶性結合タンパク質を培養培地に分泌する好適な宿主細胞／ベクター系から上清を得るステップ、および次いで市販のフィルターを使用して培地を濃縮するステップを含み得る。濃縮後、濃縮物を単一の好適な精製マトリックスに、または一連の好適なマトリックス、例えば、アフィニティーマトリックスもしくはイオン交換樹脂に、適用することができる。１つまたは複数の逆相ＨＰＬＣステップを利用して、組換えポリペプチドをさらに精製することができる。これらの精製方法は、免疫原をその天然環境から単離するときに利用することもできる。本明細書に記載される単離された／組換え可溶性結合タンパク質の１つまたは複数についての大規模産生方法は、好適な培養条件を維持するためにモニタリングおよび制御される、バッチ細胞培養を含む。本明細書に記載される、当技術分野で公知である、ならびに自国および外国の規制機関の法律およびガイドラインと適合する方法に従って、可溶性結合タンパク質の精製を行うことができる。

【0093】

本明細書に記載の結合タンパク質は、Ｔ細胞結合、刺激、活性化または誘導の決定を含み、抗原特異的であるＴ細胞応答の決定も含む、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）活性をアッセイするための当技術分野において一般に認められている多数の方法論のいずれかに従って機能的に特徴付けることができる。例は、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン放出、抗原特異的Ｔ細胞刺激、ＭＨＣ拘束Ｔ細胞刺激、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）活性（例えば、前もって負荷された標的細胞からの^５１Ｃｒまたはユーロピウムの放出を検出することによる）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化、およびＴ細胞機能の他の尺度の決定を含む。これらおよび類似のアッセイを行うための手順は、例えば、Lefkovits（Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998）において見つけることができる。Current Protocols in Immunology; Weir, Handbook of Experimental Immunology, Blackwell Scientific, Boston, MA (1986); Mishell and Shigii (eds.)Selected Methods in Cellular Immunology, Freeman Publishing, San Francisco, CA (1979); Green and Reed, Science 281:1309 (1998)およびこれらに引用されている参考文献も参照されたい。

【0094】

サイトカインレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色およびフローサイトメトリー、ならびにそれらの組合せ（例えば、細胞内サイトカイン染色とフローサイトメトリー）を含む、本明細書に記載されるおよび当技術分野において実施されている方法に従って、決定することができる。免疫応答の抗原特異的惹起または刺激の結果として生じる免疫細胞増殖およびクローン拡大は、末梢血液細胞またはリンパ節からの細胞の試料中の循環リンパ球などのリンパ球を単離し、前記細胞を抗原で刺激し、サイトカイン産生、細胞増殖および／または細胞生存率を、例えば、トリチウム化チミジンの取り込みまたは非放射性アッセイ、例えばＭＴＴアッセイなどにより、測定することによって、決定することができる。Ｔｈ１免疫応答とＴｈ２免疫応答の間のバランスに対する本明細書に記載される免疫原の効果は、例えば、Ｔｈ１サイトカイン、例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２およびＴＮＦ－β、ならびに２型サイトカイン、例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－９、ＩＬ－１０およびＩＬ－１３、のレベルを決定することによって、検査することができる。

【0095】

別の態様では、本明細書に記載の結合タンパク質のいずれか１つまたは複数をコードする核酸分子またはポリヌクレオチドが提供される。所望の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、それを含むことが公知のベクターから配列を導出することによって、またはそれを含有する細胞もしくは組織から配列もしくはその部分を直接単離することによって、所望の配列またはその部分を発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすることなどの標準的手法を使用して、当技術分野で公知の組換え方法を使用して得るかまたは産生することができる。あるいは、目的の配列は、合成によって生成することができる。このような核酸分子を、目的の宿主細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞）への導入のために適切なベクター（例えば、ウイルスベクターまたは非ウイルスプラスミドベクター）に挿入することができる。

【0096】

ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドおよび形質導入マーカー（例えば、短縮型ヒトＣＤ１９（ｈｕＣＤ１９ｔ）、短縮型ヒトＥＧＦＲ（ｈｕＥＧＦＲｔ；Wang etal., Blood 118:1255 (2011)を参照されたい）、短縮型ヒトＮＧＦＲ（例えば、ｈｕＮＧＦＲｔ）、短縮型ヒトＣＤ３４（例えば、ｈｕＣＤ３４ｔ）、ＧＦＰ、およびヒトＣＤ２の細胞外ドメインなど）をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、コードされたマーカーは、ＥＧＦＲｔ、ＣＤ１９ｔ、ＣＤ３４ｔ、またはＮＧＦＲｔを含む。異種ポリヌクレオチドで形質導入された宿主細胞により異種ポリヌクレオチドの発現を識別またはモニタリングするために、または目的の結合タンパク質を発現する細胞を検出するために、マーカーを使用することができる。

【0097】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含むことができ、自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとマーカーをコードするポリヌクレオチドの間に位置する。結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、それを含む宿主細胞によって発現され、結合タンパク質およびマーカーは、宿主細胞の表面に別々の分子として発現される。

【0098】

ある特定の実施形態では、自己切断ポリペプチドは、ブタテッショウイルス－１（Ｐ２Ａ）、ゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、もしくは口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）またはそれらのバリアント由来の２Ａペプチドを含む。２Ａペプチドのさらなる例示的な核酸およびアミノ酸配列は、例えば、Kimら（PLOSOne6:e18556, 2011、この２Ａ核酸およびアミノ酸配列はそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。一部の実施形態では、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、およびそれらのバリアント、これらは、Kimら（PLOSOne6:e18556,2011）に記載されており、この２Ａペプチドおよびそのアミノ酸および核酸配列はそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる）によって、形質導入マーカーをコードするポリヌクレオチドから分離される。

【0099】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、本開示のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞に対してコドン最適化されていてもよい（例えば、Scholten etal., Clin. Immunol. 119:135-145 (2006)を参照されたい）。

【0100】

さらなる態様では、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結された本開示のポリヌクレオチドを含む発現構築物が、提供される。ある特定の実施形態では、発現構築物は、ベクター内に含まれる。例示的なベクターは、そのポリヌクレオチドが連結されている別のポリヌクレオチドを輸送することができるポリヌクレオチド、または宿主生物において複製することができるポリヌクレオチドを含むことができる。ベクターの一部の例としては、プラスミド、ウイルスベクター、コスミドなどが挙げられる。導入される宿主細胞において自律複製が可能であり得るベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）もあるが、宿主細胞のゲノムに組み込まれ得る、または宿主細胞への導入の際にポリヌクレオチド挿入物の組込みを促進し、それによって宿主ゲノムとともに複製し得るベクター（例えば、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター）もある。加えて、一部のベクターは、それらが作用的に連結されている遺伝子の発現を指示することができる（これらのベクターは、「発現ベクター」と呼ばれることもある）。関連実施形態に従って、１つまたは複数の作用因子（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド）が対象に共投与される場合には、各作用因子が、別々のベクターまたは同じベクターの中に存在することができ、複数のベクター（各々が異なる作用因子または同じ作用因子を含有する）を細胞もしくは細胞集団に導入することができ、または対象に投与することができることは、さらに理解される。

【0101】

ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドを、ベクターのある特定のエレメントに作用的に連結させることができる。例えば、ポリヌクレオチド配列であって、ポリヌクレオチド配列がライゲーションされるコード配列の発現およびプロセシングを生じさせる必要があるポリヌクレオチド配列を、作用的に連結させることができる。発現制御配列としては、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的ＲＮＡプロセシングシグナル、例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を向上させる配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質安定性を向上させる配列；ならびにことによると、タンパク質分泌を増進する配列を挙げることができる。発現制御配列は、発現制御配列が、目的の遺伝子と、および目的の遺伝子を制御するようにトランスでまたは少し離れて作用する発現制御配列と近接している場合、作用的に連結されていてよい。

【0102】

ある特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクターまたはγ－レトロウイルスベクターから選択されるベクター）を含む。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターであり得る。他の実施形態では、ウイルスベクターは、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えば、レンチウイルス由来ベクターであり得る。ＨＩＶ－１由来ベクターは、このカテゴリーに属する。他の例としては、ＨＩＶ－２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶ、およびマエディ・ビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来する、レンチウイルスベクターが挙げられる。レトロウイルスおよびレンチウイルスウイルスベクターの使用方法、およびＣＡＲ導入遺伝子を含有するウイルス粒子で哺乳動物宿主細胞に形質導入するための細胞のパッケージング細胞は、当技術分野において公知であり、以前に、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号；Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011; Zhao et al., J. Immunol.174:4415, 2005; Engels et al., Hum.Gene Ther.14:1155, 2003; Frecha et al., Mol.Ther.18:1748, 2010；およびVerhoeyen et al., Methods Mol.Biol.506:97, 2009に記載されている。レトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物および発現系は、市販もされている。他のウイルスベクターも、ポリヌクレオチド送達に使用することができ、それらには、例えばアデノウイルスベースのベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクターを含む、ＤＮＡウイルスベクター；アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶを含む、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に由来するベクターが含まれる（Krisky et al., Gene Ther.5:1517, 1998）。

【0103】

ウイルスベクターゲノムが、別々の転写物として宿主細胞において発現される複数のポリヌクレオチドを含む場合、そのウイルスベクターは、２つ（またはそれより多くの）転写物間に追加の配列を含むこともでき、それによってバイシストロン性またはマルチシストロン性発現が可能になる。ウイルスベクターに使用されるそのような配列の例としては、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。

【0104】

遺伝子治療に用られる他のベクターも、本開示の組成物および方法とともに使用することができる。そのようなベクターとしては、バキュロウイルスおよびαウイルスに由来するもの（Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40 in Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab）、またはプラスミドベクター（例えば、スリーピング・ビューティーもしくは他のトランスポゾンベクター）が挙げられる。

【0105】

目的の結合タンパク質の遺伝子操作および産生に使用される発現ベクターの構築は、当技術分野において公知の任意の好適な分子生物学操作手法を使用することにより遂行することができる。効率的な転写および翻訳を達成するために、各組換え発現構築物中のポリヌクレオチドは、免疫原をコードするヌクレオチド配列に作動可能に（すなわち、作用的に（operatively））連結された少なくとも１つの適切な発現制御配列（調節配列とも呼ばれる）、例えば、リーダー配列および特にプロモーターを含む。

【0106】

ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、養子移入治療（例えば、がん抗原を標的とする、またはタグペプチドを発現する養子移入された細胞を標的とする）において使用するための宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）へのトランスフェクション／形質導入に使用される。Ｔ細胞に所望の核酸をトランスフェクトする／Ｔ細胞に所望の核酸で形質導入する方法は、記載されており（例えば、米国特許出願公開第２００４／００８７０２５号）、所望の標的特異性のＴ細胞を使用する養子移入手順も記載されており（例えば、Schmitt et al., Hum. Gen. 20:1240, 2009; Dossett et al., Mol. Ther. 17:742, 2009; Till et al., Blood 112:2261, 2008; Wang et al., Hum. Gene Ther.18:712, 2007; Kuball et al., Blood 109:2331, 2007；米国特許出願公開第２０１１／０２４３９７２号；米国特許出願公開第２０１１／０１８９１４１号；Leen et al., Ann. Rev. Immunol. 25:243, 2007）、したがって、今般開示され実施形態へのこれらの方法論の適用が、本開示の融合タンパク質に関するものを含む本明細書における教示に基づいて企図される。したがって、別の態様では、本開示のポリヌクレオチドを含み、コードされた結合タンパク質を発現するよう改変された宿主細胞が提供され、コードされた結合タンパク質は、発現される際に、宿主細胞の細胞表面に位置する。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、造血前駆細胞またはヒト免疫系細胞である。さらなる実施形態では、免疫系細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－二重陰性Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＮＫ－Ｔ細胞）、樹状細胞、またはそれらの任意の組合せである。ある特定の実施形態では、免疫系細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、または両方である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組合せである。実施形態では、改変された免疫細胞は、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子（ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、本明細書でさらに記載されている）に耐性であってもよく、耐性でなくてもよく、またはＩＣＤの誘導に関連する作用因子に耐性であるようにさらに操作もしくは改変することもできる；例えば、その作用因子耐性細胞ならびにそれを作製および使用する方法が参照により本明細書に組みこまれる、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１１／０５３７５０号を参照されたい。

【0107】

宿主細胞は、ベクターをもしくは核酸の組み入れを受け入れることができる、またはタンパク質を発現することができる、任意の個々の細胞または細胞培養物を含むことができる。この用語は、遺伝的にまたは表現型的に同じであるのか異なるのかを問わず、宿主細胞の子孫も包含する。好適な宿主細胞は、ベクターに依存し得、哺乳動物細胞、動物細胞、ヒト細胞、サル細胞、昆虫細胞、酵母細胞および細菌細胞を含み得る。ウイルスベクターの使用、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、マイクロインジェクションによる形質転換、または他の方法によって、ベクターまたは他の材料を組み入れるように、これらの細胞を誘導することができる。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2d ed. (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989)を参照されたい。

【0108】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、宿主細胞は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ分子、ＴＣＲ分子、またはこれらの任意の成分もしくは組合せから選択されるポリペプチド産物をコードする１つまたは複数の内在性遺伝子の発現を阻害するか、低減するかまたは排除するように改変される免疫細胞であり得る。

【0109】

理論により拘束されることを望まないが、ある特定の内在性発現された免疫細胞タンパク質は、改変された免疫宿主細胞の免疫活性を阻害もしくは低減することができ（例えば、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ）、または本開示の結合タンパク質と宿主細胞による発現について競合することができ、または本開示の異種発現された結合タンパク質の結合活性に干渉することおよび標的細胞もしくは抗原への改変された免疫細胞の結合に干渉することができる。さらに、細胞移入治療に使用されることになるドナー免疫細胞（例えば、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞）上に発現される内在性タンパク質（例えば、内在性宿主細胞タンパク質、例えばＨＬＡ）は、同種異系レシピエントにより外来性と認識されることがあり、その結果、同種異系レシピエントによりドナー免疫細胞が排除または抑制されることになるか、または投与されたドナー細胞が同種異系レシピエントにおいて免疫原性になる可能性がある。

【0110】

したがって、このような内在性遺伝子またはタンパク質の発現または活性を低下させるかまたは排除することにより、自己または同種異系のレシピエントにおける投与された宿主細胞の免疫原性の活性、機能、拡大もしくは存続性を改良するか、またはそのリスクを低減することができ、細胞の汎用的な投与が可能となる（例えば、ＨＬＡタイプにかかわらず任意のレシピエントへの）。ある特定の実施形態では、改変された宿主免疫細胞は、同種異系または自己細胞である。ある特定の実施形態では、この開示の改変された宿主免疫細胞は、染色体遺伝子ノックアウトまたは、例えば、遺伝子編集を使用して、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ成分（例えば、α１マクログロブリン、α２マクログロブリン、α３マクログロブリン、β１ミクログロブリン、またはβ２ミクログロブリンをコードする遺伝子）、またはＴＣＲ成分（例えば、ＴＣＲ可変領域またはＴＣＲ定常領域をコードする遺伝子）（例えば、その遺伝子編集方法、手法、組成物、および養子細胞治療がその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Torikai etal., Nature Sci. Rep. 6:21757 (2016)；Torikai et al.,Blood 119(24):5697(2012)；およびTorikai etal., Blood 122(8):1341 (2013)を参照されたい）をコードする遺伝子の１つまたは複数の変異を導入することを含む。

【0111】

一部の実施形態では、用語「染色体遺伝子ノックアウト」は、機能的に活性な内在性ポリペプチド産物の、宿主細胞による産生を防止または阻害する、宿主細胞における遺伝的変更を指す。一部の態様では、改変された宿主免疫細胞は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ成分（例えば、α１マクログロブリン、α２マクログロブリン、α３マクログロブリン、β１ミクログロブリン、またはβ２ミクログロブリンをコードする遺伝子）、またはＴＣＲ成分（例えば、ＴＣＲ可変領域またはＴＣＲ定常領域をコードする遺伝子）をコードする遺伝子のうちの１つまたは複数において、欠失、挿入、置換、ミスセンス変異および／またはナンセンス変異などの変異を導入するように改変されている。染色体遺伝子ノックアウトまたは変異を生じる変更としては、例えば、導入されたナンセンス変異（未成熟停止コドンの形成を含む）、ミスセンス変異、遺伝子欠失、および鎖切断が含まれ得る。一部の態様では、そのような内在性遺伝子またはタンパク質の発現または活性を低下させることまたは排除することは、宿主細胞における内在性遺伝子発現を阻害する阻害性核酸分子の異種発現によって行われ得る。一部の態様では、改変によって、そのようなタンパク質をコードする内在性遺伝子において、内在性核酸配列と異なる核酸配列を、例えば、内在性遺伝子における異なる配列のノックインによって、導入することができる。

【0112】

ある特定の実施形態では、染色体遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックインまたは変異は、例えば、遺伝子編集方法を使用して、宿主細胞の染色体編集によって導入される。染色体編集または遺伝子編集は、例えば、エンドヌクレアーゼ、例えば、標的化エンドヌクレアーゼを使用して実施され得る。一部の態様では、「エンドヌクレアーゼ」は、ポリヌクレオチド鎖内のホスホジエステル結合の切断を触媒することが可能な酵素を指す。ある特定の実施形態では、エンドヌクレアーゼは、標的化遺伝子を切断し、それによって、標的化遺伝子を不活性化するかまたは「ノックアウトする」ことが可能である。エンドヌクレアーゼは、天然に存在する、組換え、遺伝子改変された、または融合エンドヌクレアーゼであってもよい。エンドヌクレアーゼによって引き起こされる核酸の鎖切断は、通常、相同組換えまたは非相同末端結合（ＮＨＥＪ）の別個の機構により修復される。相同組換えの間、ドナー核酸分子は、ドナー遺伝子の「ノックイン」として、標的遺伝子の「ノックアウト」として、および必要に応じてドナー遺伝子のノックインまたは標的遺伝子のノックアウト事象により標的遺伝子を不活性化するために、ならびに／または標的化遺伝子における特定の変異、例えば、欠失、挿入、置換、ミスセンス変異および／もしくはナンセンス変異の導入によって使用されてもよい。ＮＨＥＪは、切断部位のＤＮＡ配列に変化、例えば、少なくとも１つのヌクレオチドの置換、欠失、または付加をもたらすことの多いエラープローン修復プロセスである。ＮＨＥＪは、標的遺伝子を「ノックアウトする」ために使用されてもよい。エンドヌクレアーゼ、例えば、標的化エンドヌクレアーゼの例としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、およびｍｅｇａＴＡＬが挙げられる。

【0113】

一部の実施形態では、「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」（ＺＦＮ）は、Ｆｏｋｌエンドヌクレアーゼなどの、非特異的ＤＮＡ切断ドメインに融合されたジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを含む融合タンパク質を指す。約３０アミノ酸の各ジンクフィンガーモチーフがＤＮＡの約３塩基対と結合し、ある特定の残基におけるアミノ酸を変化させてトリプレット配列特異性を変更することができる（例えば、Desjarlais et al., Proc.Natl.Acad.Sci.90:2256-2260, 1993; Wolfe et al., J. Mol.Biol.285:1917-1934, 1999を参照されたい）。複数のジンクフィンガーモチーフをタンデムに連結させて、所望のＤＮＡ配列、例えば約９～約１８塩基対の範囲の長さを有する領域、に対する結合特異性を生じさせることができる。背景として、ＺＦＮは、ゲノム内での部位特異的ＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）の形成を触媒することによりゲノム編集を媒介し、ＤＳＢの部位にゲノムに相同な隣接配列を含む導入遺伝子の標的組込みが相同組換え修復により容易になる。あるいは、ＺＦＮにより生じたＤＳＢは、切断部位のヌクレオチドの挿入または欠失を生じさせる結果となるエラープローン細胞修復経路である非相同末端結合（ＮＨＥＪ）による修復を介して、標的遺伝子のノックアウトをもたらし得る。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは、ＺＦＮ分子を使用してなされる挿入、欠失、変異またはそれらの組合せを含む。

【0114】

一部の実施形態では、「転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ」（ＴＡＬＥＮ）は、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼなどの、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ切断ドメインとを含む融合タンパク質を指す。「ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメイン」または「ＴＡＬＥ」は、一部の態様では、１２番目および１３番目のアミノ酸が異なる高度に保存された３３～３５アミノ酸配列を各々が一般に有する、１つまたは複数のＴＡＬＥ反復ドメイン／ユニットで構成されている。ＴＡＬＥ反復ドメインは、ＴＡＬＥの標的ＤＮＡ配列への結合に関与する。反復可変二残基（ＲＶＤ）と呼ばれる、異なるアミノ酸残基は、特異的ヌクレオチド認識と相関する。これらのＴＡＬＥのＤＮＡ認識についての天然（標準）コードは、ＴＡＬＥの１２および１３位のＨＤ（ヒスチジン－アスパラギン酸）配列が、シトシン（Ｃ）へのＴＡＬＥ結合をもたらし、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）がＴヌクレオチドと、ＮＩ（アスパラギン－イソロイシン）がＡと結合し、ＮＮ（アスパラギン－アスパラギン）がＧまたはＡヌクレオチドと結合し、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）がＴヌクレオチドと結合するように、決定された。非標準（非定型）ＲＶＤもまた公知である（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０３０１０７３号を参照されたく、この非定型ＲＶＤは、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＴＡＬＥＮを使用して、Ｔ細胞のゲノム内での部位特異的二本鎖切断（ＤＳＢ）を指示することができる。非相同末端結合（ＮＨＥＪ）は、アニーリングのための配列重複がほとんどまたは全くない、二本鎖切断の両側からのＤＮＡをライゲーションし、それによって、遺伝子発現をノックアウトする誤りを導入する。あるいは、相同組換え修復は、相同隣接配列が導入遺伝子に存在することを条件に、その導入遺伝子をＤＳＢの部位に導入することができる。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは、ＴＡＬＥＮ分子を使用してなされる挿入、欠失、変異、またはそれらの組合せを含む。

【0115】

一部の実施形態では、「クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート／Ｃａｓ」（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）ヌクレアーゼシステムは、塩基対合相補性によってゲノム内の標的部位（プロトスペーサーとして公知）を認識するために、そしてその後、短い保存プロトスペーサー関連モチーフ（ＰＡＭ）が相補標的配列の３’の直後に続く場合にはＤＮＡを切断するために、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）誘導型Ｃａｓヌクレアーゼを利用するシステムを指す。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓヌクレアーゼの配列および構造に基づいて３つの型（すなわち、Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型）に分類される。Ｉ型およびＩＩＩ型のｃｒＲＮＡ誘導型監視複合体は、複数のＣａｓサブユニットを必要とする。最もよく研究されているＩＩ型システムは、少なくとも次の３つの成分を含む：ＲＮＡ誘導型Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、ｃｒＲＮＡ、およびトランス作用性ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）。ｔｒａｃｒＲＮＡは、二重鎖形成領域を含む。ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと相互作用することおよびｃｒＲＮＡ上のスペーサーとＰＡＭから上流の標的ＤＮＡ上のプロトスペーサーとの間のワトソン・クリック塩基対合によって標的ＤＮＡ上の特定の部位にＣａｓ９／ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体を誘導することができる、二重鎖を形成する。Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ｃｒＲＮＡスペーサーにより規定される領域内で二本鎖切断を行う。ＮＨＥＪによる修復は、標的遺伝子座の発現を破壊する挿入および／または欠失をもたらす。あるいは、相同隣接配列を伴う導入遺伝子を相同組換え修復によってＤＳＢの部位に導入することができる。ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを操作して一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡまたはｇＲＮＡ）にすることができる（例えば、Jinek et al., Science 337:816-21, 2012を参照されたい）。さらに、標的部位に相補的なガイドＲＮＡの領域を、所望の配列を標的とするように変更またはプログラムすることができる（Xie et al., PLOS One 9:e100448, 2014；米国特許出願公開第２０１４／００６８７９７号、米国特許出願公開第２０１４／０１８６８４３号：米国特許第８，６９７，３５９号、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／０７１４７４；これらの各々は、参照により組み込まれる）。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは挿入、欠失、変異、またはそれらの組合せを含み、それは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムを使用してなされる。

【0116】

例示的なｇＲＮＡ配列、およびそれらを使用して、免疫細胞タンパク質をコードする内在性遺伝子をノックアウトする方法は、Ren et al.（Clin.Cancer Res.23:2255-2266 (2017)に記載されるものを含み、この文献のｇＲＮＡ、Ｃａｓ９ ＤＮＡ、ベクターおよび遺伝子ノックアウト技法は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0117】

一部の実施形態では、「ホーミングエンドヌクレアーゼ」とも呼ばれる「メガヌクレアーゼ」は、大きい認識部位（約１２～約４０塩基対の二本鎖ＤＮＡ配列）を特徴とするエンドデオキシリボヌクレアーゼを指す。メガヌクレアーゼは、配列および構造モチーフに基づいて次の５つのファミリーに分類することができる：ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ、ＧＩＹ－ＹＩＧ、ＨＮＨ、Ｈｉｓ－ＣｙｓボックスおよびＰＤ－（Ｄ／Ｅ）ＸＫ。例示的なメガヌクレアーゼとしては、Ｉ－ＳｃｅＩ、Ｉ－ＣｅｕＩ、ＰＩ－ＰｓｐＩ、ＰＩ－Ｓｃｅ、Ｉ－ＳｃｅＩＶ、Ｉ－ＣｓｍＩ、Ｉ－ＰａｎＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩ、Ｉ－ＰｐｏＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩＩ、Ｉ－ＣｒｅＩ、Ｉ－ＴｅｖＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩおよびＩ－ＴｅｖＩＩＩが挙げられ、これらの認識配列は公知である（例えば、米国特許第５，４２０，０３２号および同第６，８３３，２５２号；Belfort et al., Nucleic Acids Res.25:3379-3388, 1997; Dujon et al., Gene 82:115-118, 1989; Perler et al., Nucleic Acids Res.22:1125-1127, 1994; Jasin, Trends Genet.12:224-228, 1996; Gimble et al., J. Mol.Biol.263:163-180, 1996; Argast et al., J. Mol.Biol.280:345-353, 1998を参照されたい）。

【0118】

ある特定の実施形態では、天然に存在するメガヌクレアーゼを使用して、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡをコードする遺伝子、またはＴＣＲ成分をコードする遺伝子から選択される標的の部位特異的ゲノム修飾を促進することができる。他の実施形態では、標的遺伝子に対する新規結合特異性を有する操作されたメガヌクレアーゼが、部位特異的ゲノム修飾に使用される（例えば、Porteus et al., Nat. Biotechnol.23:967-73, 2005; Sussman et al., J. Mol.Biol.342:31-41, 2004; Epinat et al., Nucleic Acids Res.31:2952-62, 2003; Chevalier et al., Molec.Cell 10:895-905, 2002; Ashworth et al., Nature 441:656-659, 2006; Paques et al., Curr.Gene Ther.7:49-66, 2007；米国特許出願公開第２００７／０１１７１２８号、同第２００６／０２０６９４９号、同第２００６／０１５３８２６号、同第２００６／００７８５５２号、および同第２００４／０００２０９２号を参照されたい）。さらなる実施形態では、染色体遺伝子ノックアウトは、メガＴＡＬとして公知の融合タンパク質を作製するためにＴＡＬＥＮのモジュラーＤＮＡ結合ドメインで修飾されたホーミングエンドヌクレアーゼを使用して生成される。メガＴＡＬを利用して、１つまたは複数の標的遺伝子をノックアウトすることができるばかりでなく、目的のポリペプチドをコードする外因性ドナーテンプレートと組み合わせて使用すると異種または外因性ポリヌクレオチドを導入（ノックイン）することもできる。

【0119】

ある特定の実施形態では、疾患関連抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む宿主細胞（例えば、免疫細胞）は、阻害性核酸分子を細胞内に導入することによって、１つまたは複数の内在性遺伝子の発現を阻害、低減または排除するように改変され得る。一部の態様では、阻害性核酸分子は、標的特異的阻害剤をコードし、コードされた標的特異的阻害剤は、宿主免疫細胞における内在性遺伝子の発現（例えば、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ成分、もしくはＴＣＲ成分、またはそれらの任意の組合せの発現）を阻害する。

【0120】

導入された染色体遺伝子ノックアウトまたは変異の存在は、ノックアウト手順または作用因子の使用後の宿主免疫細胞のＤＮＡシークエンシングによって直接確認することができる。染色体遺伝子ノックアウト、変異、または内在性遺伝子の発現の阻害は、ノックアウト、遺伝子編集、変異の導入または内在性遺伝子の発現の阻害の後に、遺伝子発現がないこと（例えば、ｍＲＮＡまたは遺伝子によってコードされるポリペプチド産物がないこと）からも確認することができる。

【0121】

免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子
他の態様では、本開示は、免疫原性細胞死の誘導に関連する作用因子を提供する。「免疫原性細胞死」または「ＩＣＤ」は、一部の実施形態では、死細胞由来の抗原、例えば、死滅した過剰増殖性（例えば、がん）細胞からの抗原に対する免疫応答を刺激する調節されたまたはプログラムされた細胞死の形態を指す。ＩＣＤは、一部の態様では、機能ベースと分子ベースの両方で、非免疫原性および免疫寛容原性の細胞死モダリティと区別される。

【0122】

機能的見地から、ＩＣＤに屈している細胞は、一部に関して、アジュバントの非存在下で、宿主による特異的Ｔ細胞依存性保護免疫応答（例えば、死滅したばかりの細胞によって発現または放出される抗原に特異的な）を誘引する（抑制するよりはむしろ）するのに必要な場合がある。ＩＣＤの誘導剤によって、免疫コンピテント宿主の疾患細胞（例えば、過剰増殖性細胞）に対する有効性の増加をもたらすことができるが、免疫無防備状態の宿主では、同じ細胞に対する有効性は低減されるかまたは有効性がもたらされない。ＩＣＤに屈している細胞は、同じ型の生きている疾患細胞の次の負荷に対して、同系の免疫コンピテント宿主にワクチン接種することができ、疾患部位にＴ細胞の局所的動員をもたらすことができる。また、一部に関して、ＩＣＤ誘導に関連する作用因子を含む化学療法は、ｉｎ ｖｉｖｏで、抗増殖性作用（すなわち、過剰増殖性疾患に関して）を発揮する必要がある場合がある。例えば、そのＩＣＤ誘導剤、マーカー、およびアッセイが参照により本明細書に組み込まれる、Galluzzi and Kepp,Annu. Rev. Immunol. 31:51 (2012)、およびGarg et al.,Oncoimmunology 6(12):e1386829(2017)を参照されたい。

【0123】

一部の実施形態では、ＩＣＤに屈する細胞は、いくつかの生物物理学的マーカーのうちのいずれかを使用して識別することができる。ＩＣＤのマーカーは、例えば、分泌された損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）、例えば、高移動群ボックス１（ＨＭＧＢ１）タンパク質、分泌された尿酸、カルレティキュリンなどの細胞表面を曝露されたＥＲシャペロン、細胞外ＡＴＰ、細胞外核酸、ヒアルロン酸、分泌されたアネキシン、Ａ１、分泌Ｉ型インターフェロン、および分泌されたかまたは細胞表面で発現されたヒートショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０）を含む。例えば、Garg etal., Oncoimmunology 6(12):e1386829 (2017)を参照されたい。ＩＣＤの間接的指標としては、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）による細胞外ＤＮＡの樹状細胞（ＤＣ）への輸送、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）による細胞外ＲＮＡのＤＣへの輸送、ペントラキシン３の発現増加（ＤＣ細胞とアポトーシス小体の間に形成されたシナプスと相互作用する）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞またはＮＫの増殖および局所的動員、ならびに炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＴＮＦ－α、ＭＣＰ１、ＩＬ－１β、ＩＬ－１５、およびＩＦＮ－γ）の放出が挙げられる。例えば、Tesniere et al.,Cell Death and Differentiation 15:3 (2008)を参照されたい；Woller et al.,Front.Oncol.4:188 (2014)も参照されたい。一部の場合には、「誘導」は、本明細書で使用される場合、結果（例えば、ＩＣＤ）を直接的または間接的に引き起こすことを意味し得る。

【0124】

一部に関して、ＩＣＤは、腫瘍または腫瘍微小環境における細胞によって、ケモカインリガンド、例えば、ＣＸＣＬ９またはＣＸＣＬ１０などの免疫細胞の動員またはトラフィッキングに関与する遺伝子または分子の発現を誘導するかまたは増加させることができる。一部の態様では、そのような発現は、そのような分子、例えば、ＣＸＣＲ３に対する受容体を発現するＴ細胞などの免疫細胞を誘引することができる。一部の態様では、ＩＣＤの誘導に関連するＩＣＤまたは作用因子は、Ｃｃｌ１２；Ｃｃｌ１７；Ｃｃｌ２；Ｃｃｌ７；Ｃｃｌ９；Ｃｃｒ２；Ｃｃｒ８；ＣＤ４０；ＣＤ４０ｌｇ；Ｃｓｆ１；Ｃｓｆ３ｒ；Ｃｘｃｌ１０；Ｃｘｃｒ２；Ｅｄａ２ｒ；Ｆａｓ；ＩＬ２１ｒ；ＩＬ２ｒｂ；ＩＬ１７ｒ；Ｔｎｆｒｓｆ２５；Ｔｎｆｓｒｆ９；Ｔｎｆｓｆ８；Ｘｃｌ１；Ｇｎｇ７；ＣＤ２２６；ＣＤ８０；ＣＤ８α；Ｃｌｄｎ２；Ｈ２－Ｍ２；Ｐｄｃｄ１Ｉｇ２；Ｓｅｌｅ；Ｓｅｌｐ；またはそれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数などの遺伝子または分子の発現の増加をもたらし得る。

【0125】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子としては、化学療法剤またはその活性代謝物、パターン認識受容体（ＰＲＲ）に特異的な作用因子、腫瘍溶解性ウイルス、疾患関連抗原、例えば、過剰増殖性疾患関連抗原（ただし、抗原は、結合タンパク質が結合した抗原ではない）に特異的に結合する抗体、放射線照射、およびそれらの組合せが挙げられる。

【0126】

本明細書で使用される場合、用語「化学療法剤」（本明細書では、「化学治療薬」または「化学療法」とも呼ばれ得る）は、阻害または死滅に関する疾患細胞（例えば、過剰増殖する細胞）を選択的に標的とする化学作用因子、薬物、または他の治療モダリティを指す。本開示の化学療法剤は、異なる構造、形態、および送達系を包含し、疾患細胞（例えば、過剰増殖する細胞）を選択的に阻害または殺滅することに関するそれらの機能性の点で理解されるべきである。ある特定の化学療法剤は、ＩＣＤの誘導に関連する。

【0127】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、アルキル化剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤を含む。理論により拘束されることを望まないが、アルキル化剤は、一部に関して、ＤＮＡの負に荷電した部位に高い親和性で結合し、それによって、ＤＮＡ鎖の正常な機能（例えば、転写および翻訳）を破壊し、一部の態様では、ＩＣＤを誘導することが可能である。本開示のアルキル化剤としては、例えば、テモゾロミド、ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン；シクロホスファミドおよび類似体；メルファラン；クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホネート－ブスルファン、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ）および類似体；ストレプトゾシン）、トリアゼン（trazene）－ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）、およびそれらの組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、アルキル化剤は、シクロホスファミドであるかまたはそれを含む。

【0128】

一部の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、アントラサイクリンを含む。理論により拘束されることを望まないが、アントラサイクリンは、一部に関して、細胞内ＤＮＡに結合することによって遺伝子発現を阻害することができ、がん細胞においてＩＣＤを誘導することが示されている。例えば、Fucikova etal. Cancer Res 71:4821 (2011)を参照されたい。実施形態では、アントラサイクリンは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピリブシン、イダルビシン、ミトキサントロンおよびその誘導体（例えば、ピキサントロン）、サバルビシン、バルルビシン、またはそれらの任意の組合せを含む。ある特定の実施形態では、アルキル化剤は、ドキソルビシン、イダルビシンまたはミトキサントロンであるかまたはそれを含む。

【0129】

さらなる実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、代謝拮抗薬を含む。一部の実施形態では、例示的な代謝拮抗薬は、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン（foxuridine）、シタラビン、カペシタビン、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、クラドリビン、フルダラビン、ペントスタチン、葉酸アンタゴニスト、またはそれらの任意の組合せであるかまたはそれを含む。

【0130】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、カスパーゼ活性化因子を含む。この開示の例示的なカスパーゼ活性化因子は、カスパーゼの第２のミトコンドリア由来活性化因子（ＳＭＡＣ、「ｐｒｏＳＭＡＣ」＝全長；「ｔＳＭＡＣ」＝処理済み）および模倣物、ならびにそれらの組合せを含む。例えば、Umeagi etal., Microenvironment and Immunology (2012)を参照されたい。一部の実施形態では、カスパーゼ阻害剤（例えば、ＳＭＡＣ）は、ウイルス（例えば、レンチウイルス）ベクターを含む、本明細書に記載されているベクターを使用して疾患細胞（例えば、過剰増殖する細胞）に送達され得る。

【0131】

一部の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、微小管阻害剤を含む。理論により拘束されることを望まないが、微小管阻害剤は、一部に関して、有糸分裂、細胞の動き、および細胞内オルガネラ輸送を阻害し得る。この開示の例示的な微小管阻害剤としては、タキサン、例えば、パクリタキセルおよびその類似体（例えば、Golden etal.,OncoImmunol. 3 (2014)を参照されたい）、ドセタキセル、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ロイロシン、ビンデシン、ビノレルビン（vinolrebine））、ノコダゾール、エポチロン、コルヒチン、ナベルビン、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。

【0132】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤を含む。理論により拘束されることを望まないが、プロテアソーム阻害剤は、細胞におけるタンパク質分解作用を阻害し、それによって、毒性レベルのタンパク質を蓄積し、アポトーシス促進因子の分解を妨げる。一部の実施形態では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ（cafilzomib）、イキサゾミブ、マリゾミブ、オプロゾミブ、ＣＥＰ－１８７７０、ＭＬＮ－９７０８、ＯＮＸ－０９１２、またはそれらの任意の組合せを含む。例えば、Kisselev et al.,Chem. Biol. 19(1):99-115 (2013)を参照されたい。特定の実施形態では、本開示のプロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（bortezimib）であるかまたはそれを含む。さらなる実施形態では、本開示のプロテアソーム阻害剤は、マイトマイシンＣとともにボルテゾミブを含むウイルスベクター（例えば、ｈＴｅｒｔ－Ａｄ）を含む（例えば、Boozari et al.,Gut 59:1416 (2010)を参照されたい）。

【0133】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、ＢＫチャネルアゴニストを含む。ＢＫ（「Ｂｉｇ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ」または「Ｂｉｇ Ｋ」）チャネルは、細胞膜を通してカリウムを輸送する。理論により拘束されることを望まないが、ＢＫチャネルのアゴニストは、カリウムイオンが受動的に細胞に侵入することを可能にし、それによって、細胞内のイオンバランスを破壊し、ＩＣＤを誘導する。例えば、Hoa etal., PLoS One 7:831732 (2012)を参照されたい。本開示の例示的なＢＫチャネルアゴニストとしては、フロレチン、ピマリン酸、アラキドン酸、チトクロームＰ４５０の代謝物、エポキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼ、オメガ－３ドコサヘキサエン酸、１７β－エストラジオール、タモキシフェンを含むキセノエストロゲン、ゾニサミドおよびクロルゾキサゾンなどの抗てんかん薬、シロスタゾール（cilotazol）などのホスホジエステラーゼＩＩＩ阻害剤、ヒトβ－デフェンシン２、ＤＨＳ－Ｉ、ＮＳ００４およびＮＳ１６１９を含むベンズイミダゾロン、Ｃｙｍ０４、ＮＳ１１０２１、ＮＳ１９５０４、ＢＭＳ２０４３５２、チオウレア、化合物３６および化合物Ｚなどのテトラヒドロキノリン、テルペン、ベンゾフロインドール、およびＡｎｄｏｌａｓｔ、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。例えば、そのＢＫチャネルアゴニストが参照により本明細書に組み込まれる、Bentzen et al.,Front. Physiol. 5:389 (2014)を参照されたい。

【0134】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、非ＩＣＤ誘導剤とともに強心配糖体（ＣＧ）を含む。強心配糖体は、心臓の出力を増加させ、心臓の収縮率を低下させる有機化合物のクラスである。強心配糖体は、一部に関して、心筋の収縮力に関して作用し、ＣＲＴ曝露、ＡＴＰ放出、およびＨＭＧＢ１放出の誘導をもたらす毒性作用を発揮し得る。シスプラチン、マイトマイシンＣ、またはエトポシド（epotoside）などの非ＩＣＤ誘導剤と組み合わせた場合に（すなわち、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、併用して（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、または逐次的に投与した場合に）、強心配糖体は、ＩＣＤを刺激する。例えば、Menger et al.,Sci. Transl. Med. 4:143ra99 (2012)を参照されたい。

【0135】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、プラチナ系抗腫瘍薬（「プラチン」）とともにＥＲストレッサーを含む。ＥＲストレッサーは、本明細書で定義されるとおり、小胞体の腔にアンフォールドまたはミスフォールドタンパク質の蓄積を誘導するかまたはもたらす任意の組成物または分子を包含する。そのようなタンパク質の蓄積の延長により、アポトーシスが導かれ得る。この開示の例示的なＥＲストレッサーとして、タプシガルジンが挙げられる。理論により拘束されることを望まないが、タプシガルジンは、リソソームの食作用を阻害するＥＲへのカルシウム流入を遮断し、細胞にストレスをもたらす原因となり得る。ＥＲストレッサーをプラチン（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、フェナントリプラチン（phenantrhiplatin）、ピコプラチン、サトラプラチン、トリプラチンテトラニトレート）と組み合わせることによって、ＩＣＤが誘導され得る。例えば、Tesniere et al.,Oncogene 29:482 (2010)を参照されたい。一部の実施形態では、プラチンは、シスプラチンを含む。一部の実施形態では、プラチンは、オキサリプラチンであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、ＥＲストレッサーは、タプシガルジンを含む。

【0136】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、オキサリプラチン（またはその活性代謝物もしくは誘導体）であるかまたはそれを含む。

【0137】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、ブレオマイシンであるかまたはそれを含む。

【0138】

特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する化学療法剤は、シクロホスファミド、オキサリプラチン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、もしくはボルテゾミブ、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0139】

ＩＣＤの誘導に関連する２つまたはそれを超える化学療法剤の任意の組合せが、本開示による方法を実践する際に使用されてもよいことが認識されるであろう。追加の化学療法剤が本明細書に記載されており、今般開示される方法を実践する際に用いられてもよい。

【0140】

免疫原性細胞死の誘導に関連する他の作用因子は、例えば、その作用因子、作用因子の組合せ、および方法が参照により本明細書に組み込まれる、Galluzzi and Klepp,Ann. Rev. Immunol.31:51 (2012)およびGarg et al.,Oncoimmunology 6(12):e1386829(2017)（およびその中で引用された参照文献）に記載されている。

【0141】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）を標的とすることができる作用因子であるかまたはそれを含む。一般に、パターン認識受容体は、５つのファミリー：Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）；ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）；ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）；Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）；およびＤＮＡセンサーに組織化される。ＰＲＲは、例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）；リポタンパク質；フラジェリン；細菌、ウイルス、真菌、および寄生生物からの核酸；ならびにアポトーシス、ネクローシス、または細胞内ストレスにより分泌または放出される損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を含む病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を検出する。ＰＲＲによる認識は、炎症促進性遺伝子の発現および免疫細胞活性化を刺激する。ＰＲＲを標的とすることが可能な例示的な作用因子は、Shekarian etal., Annals of Oncology 28(8):1756 (2017)に記載されており、リポ多糖（ＬＰＳ）；細菌膜成分；フラジェリンならびにその誘導体およびバリアント；Ｒ８４８；表面糖タンパク質；必要に応じてＭＰＬ（ＡＳ１５）と組み合わせたＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（例えば、ＰＦ－３５１２６７６；Ａｇａｔｏｌｉｍｏｄ）；ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）；ＭＫ－４５４；ＢＯ－１１２；Ａｍｐｌｉｖａｎｔ；ＰｏｌｙＩＣＬＣ（必要に応じてＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄおよび／またはＬＰＳと組み合わせて）；Ｒｉｎｔａｔｏｌｉｍｏｄおよびその誘導体；Ｈｉｌｏｎｔｏｌおよびその誘導体；ＧＳＫ１５７２９３２；Ｇ１００；ＣＢＬＢ５０２；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄおよびその誘導体；ＭＥＤＩ９１９７；Ｍｏｔｏｌｉｍｏｄおよびその誘導体；ＣＭＰ－００１；ＭＧＮ１７０３；ＳＤ－１０１；１０１８ ＩＳＳ；ならびに核酸（例えば、ウイルス、細菌、真菌、または寄生生物からのＤＮＡまたはＲＮＡであり、これは、二本鎖および一本鎖ＲＮＡ、メチル化されていないＣｐＧを含む微生物のＤＮＡなどを含む）を含む。

【0142】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、腫瘍溶解性ウイルスであるかまたはそれを含む。腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞を優先的に標的とし、殺滅するウイルスである。例示的な腫瘍溶解性ウイルスとしては、アデノウイルス、レオウイルス、麻疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＣＭＶ）、ニューキャッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、セムリキ森林ウイルス；Ｅｃｈｏ－７ｙウイルス；パラポックスウイルス（paprapoxvirus）；およびセネカウイルスが挙げられ、これらのウイルスは、減弱化されても減弱化されなくてもよく、天然に存在する変異体およびその改変されたバリアント、例えば、Ｈ１０１（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｕｎｗａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｏｎｙｘ－１５、およびＴ－ＶＥＣであってもよい。今般開示される方法において使用することができるウイルスを含む腫瘍溶解性免疫療法としては、Veinalde et al.,Oncoimmunology 6:e1285992 (2017)；Hemminki and Hemminki,Oncoimmunology 5:e1074377(2016)；Clements et al., Oncolimmunology 5:e1057674(2016)、およびBramante et al.,Oncoimmunology 5:e1078057 (2016)に記載されているものが挙げられ、それらの免疫療法および腫瘍溶解性ウイルスは参照により本明細書に組み込まれる。

【0143】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、疾患関連抗原に特異的に結合する抗体であるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、疾患関連抗原は、結合タンパク質が結合するものと異なる抗原である。抗体による疾患関連抗原への結合によって、例えば、抗体依存性細胞内細胞傷害、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によって、または別の機構によって、ＩＣＤが誘発され得る。がん療法において有用な例示的なモノクローナル抗体は、当技術分野で公知であり、例えば、Galluzzi etal., Oncotarget 5(24):12472-12508, 2014に記載されているモノクローナル抗体を含む。

【0144】

他のモダリティは、ＩＣＤを誘導する場合があり、今般開示される方法において用いられてもよい。ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、放射線療法であるかまたはそれを含む。放射線療法としては、例えば、Ｘ線療法、例えば、ガンマ線照射、および放射線医薬療法が挙げられる。ＩＣＤを誘発する放射線療法は、Vanpoiulle-Box etal., Nat. Communi. 8:15618 (2017)；Dewan et al., Clin.Cancer Res. 15:5379(2009)；Bouquet etal., Clin. Cancer Res. 17:6754 (2011)；およびWennerberg et al.,Front. Immunol.8:229 (2017)に開示されているものを含み、その放射線療法および処置レジメンはその全体が本明細書に組み込まれる。

【0145】

光線力学的療法（ＰＤＴ）は、ＩＣＤを誘導することもできる。例示的なＰＤＴとしては、Garg et al. (Sci. Transl.Med.8:328ra27 (2016)；Oncotarget 6:26841(2015); EMBO J. 31:1062 (2012)；Autophagy 9:1292(2013))によって記載されているものが挙げられ、そのＰＤＴはその全体が本明細書に組み込まれる。

【0146】

静水圧が高いことにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏの腫瘍細胞系および初代腫瘍細胞においてＩＣＤが誘導されることが示された（例えば、Fucikova etal.,Tumor Immunology 135(5):2014；Galluzi et al., Nat.Rev. Immunol. 17:97 (2017)；およびGarg etal., Front. Immunol. 6:588 (2015)（これらの参照文献の静水圧手法はその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。ある特定の実施形態では、方法は、静水圧を使用して細胞にＩＣＤを誘導することおよびＩＣＤが、本開示による対象に、またはｉｎ ｖｉｖｏで本開示の改変された免疫細胞に、またはその両方に誘導された細胞を導入することを含む。

【0147】

免疫調節剤
ある特定の態様では、併用療法は、免疫系による抗腫瘍応答などの応答を増強し、最終的には、疾患または障害、例えば、腫瘍または関連するがんを処置するか、改善するか、または低減するために、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）、免疫調節剤（例えば、本明細書に記載される、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤、または刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである作用因子）とともに含む。一部の実施形態では、免疫応答は、抗腫瘍応答を含み、疾患または障害は、腫瘍に関連する過剰増殖性疾患（例えば、がん）を含む。

【0148】

本明細書で使用される場合、用語「免疫抑制成分（ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」または「免疫抑制成分（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」は、一部の態様では、免疫応答を制御または抑制するのを助ける阻害性シグナルを与える、１つまたは複数の細胞、タンパク質、分子、化合物または複合体を指す。例えば、免疫抑制成分は、免疫刺激を部分的もしくは全体的に遮断する；免疫活性化を低下させるか、妨げるかもしくは遅らせる；または免疫抑制を増加させるか、活性化するか、もしくは上方調節する分子を含む。例示的な免疫抑制成分の標的は、本明細書にさらに詳述されており、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－３５）、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、Ｔｒｅｇ細胞、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0149】

免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子は、化合物、抗体、抗体断片もしくは融合ポリペプチド（例えば、Ｆｃ融合体、例えば、ＣＴＬＡ４－ＦｃまたはＬＡＧ３－Ｆｃ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムもしくはＲＮＡｉ分子、アプタマー、または低分子量有機分子であってもよい。本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、組合せは、以下の免疫抑制成分のいずれか１つに特異的に結合する、および／または以下の免疫抑制成分のいずれか１つの阻害剤である１つまたは複数の作用因子を、単独でまたはいずれかの組合せで含む。本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、方法は、改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を、単独でまたはいずれかの組合せで以下の免疫抑制成分のいずれか１つの１つまたは複数の阻害剤とともに投与することを含んでもよい。

【0150】

ある特定の実施形態では、併用療法は、ＰＤ－１阻害剤、例えば、ＰＤ－１に特異的な抗体またはその結合断片、例えば、ピジリズマブ、ニボルマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、以前のＭＤＸ－１１０６）、ペンブロリズマブ（Ｏｐｄｉｖｏ、以前のＭＫ－３４７５）、ＭＥＤＩ０６８０（以前のＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＢＭＳ－９３６５５８、またはそれらの任意の組合せを含む。さらなる実施形態では、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその結合断片、例えば、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、またはそれらの任意の組合せと組み合わせて使用される。

【0151】

ある特定の実施形態では、併用療法は、ＬＡＧ３阻害剤、例えば、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0152】

ある特定の実施形態では、併用療法は、ＣＴＬＡ４の阻害剤を含む。特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、ＣＴＬＡ４に特異的な抗体またはその結合断片、例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（例えば、アバタセプト、ベラタセプト）、またはそれらの任意の組合せと組み合わせて使用される。

【0153】

ある特定の実施形態では、併用療法は、Ｂ７－Ｈ３に特異的な抗体またはその結合断片、例えば、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６、または両方を含む。Ｂ７－Ｈ４抗体結合断片は、例えば、Dangaj etal., Cancer Res. 73:4820, 2013に記載されている通りのｓｃＦｖまたはその融合タンパク質、ならびに米国特許第９，５７４，０００号およびＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ／２０１６４０７２４Ａ１号および同第ＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１号に記載されているものであってもよい。

【0154】

ある特定の実施形態では、併用療法は、ＣＤ２４４の阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＢＬＴＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０、またはそれらの任意の組合せの阻害剤を含む。抗ＣＤ－１６０抗体は、例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１０／０８４１５８号に記載されている。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＴＩＭ３の阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、Ｇａｌ９の阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、アデノシンシグナル伝達の阻害剤、例えば、デコイアデノシン受容体を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、Ａ２ａＲの阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＫＩＲの阻害剤、例えば、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、阻害性サイトカイン（典型的には、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）またはＴｒｅｇ発生もしくは活性の阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＩＤＯ阻害剤、例えば、レボ－１－メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Liu etal., Blood 115:3520-30,2010）、エブセレン（Terentis et al. ,Biochem. 49:591-600,2010）、インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Mautino etal., American Association for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013; Apr6-10, 2013)、１－メチル－トリプトファン（１－ＭＴ）－チラ－パザミン、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0155】

ある特定の実施形態では、併用療法は、アルギナーゼ阻害剤、例えば、Ｎ（オメガ）－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル（Ｌ－ＮＡＭＥ）、Ｎ－オメガ－ヒドロキシ－ノル－ｌ－アルギニン（ノル－ＮＯＨＡ）、Ｌ－ＮＯＨＡ、２（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ－（２－ボロノエチル）－Ｌ－システイン（ＢＥＣ）、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0156】

ある特定の実施形態では、併用療法は、ＶＩＳＴＡの阻害剤、例えば、ＣＡ－１７０（Ｃｕｒｉｓ、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＴＩＧＩＴの阻害剤、例えば、ＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ Ｃａｎａｄａ）など、ＣＤ１５５の阻害剤、例えば、ＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）など、または両方を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＰＶＲＩＧ、ＰＶＲＬ２、または両方の阻害剤を含む。抗ＰＶＲＩＧ抗体は、例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１６／１３４３３３号に記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体は、例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１７／０２１５２６号に記載されている。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＬＡＩＲ１阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、またはそれらの任意の組合せの阻害剤を含む。

【0157】

ある特定の実施形態では、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子は（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増加させる（すなわち、そのアゴニストである）作用因子と組み合わせて使用される。例えば、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブなど）、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、またはＭＥＤＩ０５６２など）、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＤ２７アゴニスト（例えば、ＣＤＸ－１１２７など）、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０、またはＣＤ８６など）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＰ－８７０、８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ、またはＳＧＮ－４０など）、ＣＤ１２２アゴニスト（例えば、ＩＬ－２など） ＧＩＴＲのアゴニスト（例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載のヒト化モノクローナル抗体など）、ＩＣＯＳのアゴニスト（ＣＤ２７８）（例えば、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ １４５－１、Ｉｃｏｓ ３１４－８、またはそれらの任意の組合せなど）と組み合わせて使用され得る。本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、方法は、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を、前述のもののいずれかを、単独でまたはいずれかの順番でまたは組み合わせて含む、刺激性免疫チェックポイント分子の１つまたは複数のアゴニストとともに投与することを含んでもよい。

【0158】

本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、併用療法は、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増加させる（すなわち、アゴニストである）作用因子を含む。ある特定の実施形態では、改変されたヒト免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増加させる（すなわち、アゴニストである）作用因子と組み合わせて使用、例えば、投与される。例えば、改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブなど）、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、またはＭＥＤＩ０５６２など）、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＤ２７アゴニスト（例えば、ＣＤＸ－１１２７など）、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０、またはＣＤ８６など）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＰ－８７０、８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ、またはＳＧＮ－４０など）、ＣＤ１２２アゴニスト（例えば、ＩＬ－２など）、ＧＩＴＲのアゴニスト（例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載のヒト化モノクローナル抗体など）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）のアゴニスト（例えば、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ １４５－１、またはＩｃｏｓ ３１４－８など）、またはそれらの任意の組合せと組み合わせて使用され得る。本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、方法は、改変された免疫細胞、例えば、ヒト免疫細胞、およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を、前述のもののいずれかを単独でまたはいずれかの組合せで含む、刺激性免疫チェックポイント分子の１つまたは複数のアゴニストとともに投与することを含んでもよい。

【0159】

本明細書に記載の作用因子のいずれかは、他の作用因子の１つまたは複数を以前に受けたことがある対象に投与されてもよいが、ただし、対象は、最終的に、この開示の改変された免疫細胞および免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子を、疾患または障害、例えば、腫瘍またはがんを処置するのに有効な量で受ける。

【0160】

二次療法のための作用因子
標的化疾患細胞または組織によって発現された抗原に特異的な抗体または抗原結合断片；化学療法剤；外科手術；放射線療法処置；サイトカイン；ＲＮＡ干渉療法、またはそれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含む二次療法も企図される。一部の実施形態では、方法は、二次療法、例えば、本明細書に記載のいずれかを投与することをさらに含む。

【0161】

がん療法において有用な例示的なモノクローナル抗体は、当技術分野で公知であり、例えば、Galluzzi et al.,Oncotarget5(24):12472-12508, 2014に記載されたモノクローナル抗体を含む。

【0162】

ある特定の実施形態では、二次療法は、放射線処置（例えば、ＩＣＤを誘導することに関連するものであってもなくてもよい放射線処置）または外科手術を含む。ある特定の実施形態では、併用療法による方法は、改変されたヒト免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を投与すること、および放射線処置（例えば、ＩＣＤを誘導することに関連するものであってもなくてもよい放射線処置）または外科手術をさらに投与することを含む。放射線治療は、当技術分野において周知であり、Ｘ線治療、例えばガンマ線照射、および放射性医薬品治療を含む。対象における所与のがんまたは非炎症型固形腫瘍の処置に適切な外科手術および外科的技法は、当業者には周知である。

【0163】

ある特定の実施形態では、二次療法は、化学療法剤（その化学療法剤は、ＩＣＤを誘導することに関連してもしなくてもよい）を含む。ある特定の実施形態では、併用療法による方法は、改変されたヒト免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を投与すること、および化学療法剤（その化学療法剤は、ＩＣＤを誘導することに関連してもしなくてもよい）をさらに投与することを含む。化学療法剤は、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ傷害剤、代謝拮抗薬（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体、および糖修飾類似体）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）、およびＤＮＡ修復阻害剤を含むが、これらに限定されない。実例となる化学療法剤は、これらに限定されないが、以下の群を含む：代謝拮抗薬／抗がん剤、例えば、ピリミジン類似体（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビン）およびプリン類似体、葉酸アンタゴニストおよび関連阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；抗増殖性／抗有糸分裂剤、これには、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）、微小管破壊剤、例えば、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビン、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ傷害剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン（merchlorehtamine）、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾロミド（temozolamide）、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびエトポシド（ＶＰ１６））が含まれる；抗生物質、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）およびマイトマイシン；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身代謝させ、独自のアスパラギンを合成する能力がない細胞を欠乏させる、Ｌ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよび類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホネート－ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）および類似体、ストレプトゾシン）、トリアゼン（trazene）－ダカルバジン（dacarbazinine）（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗薬、例えば、葉酸類似体（メトトレキサート）；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）およびアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固薬（ヘパリン、合成ヘパリン塩および他のトロンビン阻害剤）；線維素溶解剤（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼ）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；分泌抑制剤（ブレフェルジン（breveldin））；免疫抑制薬（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン）および成長因子阻害剤（血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、リツキシマブ）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤および分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、テニポシド（eniposide）、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）およびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン（methylpednisolone）、プレドニゾン、およびプレニゾロン（prenisolone））；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全誘導剤、毒素、例えば、コレラ毒素、リシン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓアデニル酸シクラーゼ毒素、またはジフテリア毒素、およびカスパーゼ活性化因子；ならびにクロマチン破壊剤。

【0164】

サイトカインを用いることができ、一部の状況において、抗がん活性に対する宿主免疫応答を操作するために使用されることが増えている。例えば、Floros & Tarhini, Semin.Oncol.42(4):539-548, 2015を参照されたい。免疫抗がんまたは抗腫瘍応答の促進に有用なサイトカインとしては、例えば、単独での、または本開示の結合タンパク質もしくは結合タンパク質を発現する細胞との任意の組合せでの、ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４、およびＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。

【0165】

別のがん療法（例えば、二次療法）または処置アプローチは、発癌遺伝子およびがん細胞による成長、維持、増殖、および免疫回避に必要な他の遺伝子の発現を低減することに関与する。ＲＮＡ干渉、特に、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）低分子阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の使用により、がん遺伝子の発現をノックダウンするためのアプローチがもたらされる。例えば、Larsson etal., Cancer Treat. Rev. 16(55):128-135, 2017を参照されたい。がん療法または処置のためにＲＮＡを作製および使用するための手法は、当業者に公知である。

【0166】

本明細書において開示された実施形態のいずれにおいても、治療剤（例えば、改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、免疫抑制成分の阻害剤、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、抗腫瘍リンパ球、化学療法剤、放射線療法、外科手術、サイトカイン、または阻害性ＲＮＡ）のいずれかは、処置時間にわたって、１度にまたは１度より多い回数で、対象に投与されてもよく、組み合わせでは、任意の順番で（例えば、同時に、併用して、または任意の順に）または任意の組合せで、対象に投与されてもよい。組成物の適切な用量、適切な持続期間、および投与頻度は、患者の状態；腫瘍またはがんのサイズ、タイプ、広がり、成長、および重症度；有効成分の特定の形態；および投与方法などの因子によって決定されることになる。

【0167】

キット
（ｉ）（ａ）疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；
（ｂ）免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子；（ｃ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；および（ｄ）免疫刺激性分子のアゴニストのうちの１つまたは複数；ならびに（ｉｉ）本開示による方法を実施するための説明書を含むキットも本明細書において提供される。

【0168】

使用
本開示の組成物は、疾患または状態を処置するのに有用である。「処置する」または「処置」または「改善する」は、一部に関して、対象（例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、霊長類、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、マウス、もしくはラット）の疾患、障害、または状態の医学的管理を指す。一般に、本開示の結合タンパク質を発現する宿主細胞、および必要に応じてアジュバントを含む、適切な用量または処置レジメンは、治療的または予防的恩恵を生じさせるのに十分な量で投与される。治療的または予防的／防止的恩恵は、臨床成績の向上；疾患に関連する症状の緩和もしくは軽減；症状の発生率低下；生活の質向上；より長い無病状態；疾患の程度の低下；病状の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；生存期間延長；またはそれらの任意の組合せを含む。

【0169】

今般開示された方法は、部分的に、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子と併用する本開示の改変された免疫細胞の使用に基づき、この方法は、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストの使用、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子の使用、または両方をさらに含み得る。したがって、方法は、１つの作用因子（改変された免疫細胞；ＩＣＤの誘導に関連する作用因子；刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子）の、１つもしくは複数の他の作用因子も受けているかまたはそれを以前に受けたことがある対象への投与に関与し得ることが認識されるが、ただし、対象は、最終的には、改変された免疫細胞とＩＣＤの誘導に関連する作用因子の少なくとも両方を受ける。

【0170】

例えば、方法は、有効量のこの開示の改変された免疫細胞を対象に投与することを含んでもよいが、ただし、対象には、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が以前に投与されている。別の例として、方法は、有効量の、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子を対象に投与することを含んでもよいが、ただし、対象に、この開示の改変された免疫細胞の誘導に関連する作用因子が以前に投与されている。

【0171】

ある特定の態様では、本開示は、対象の疾患または状態を処置するための方法であって、（ａ）疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞；および（ｂ）有効量の、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子を対象に投与することを含み、それによって、疾患または状態を処置する、方法を提供する。

【0172】

他の態様では、対象の疾患または状態を処置するための方法であって、疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞を対象に投与することを含み、対象に、改変された免疫細胞を投与する前に、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子が投与されており、それによって、疾患または状態を処置する、方法が提供される。

【0173】

なお他の態様では、本開示は、対象の疾患または状態を処置するための方法であって、有効量の、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子を前記対象に投与することを含み、前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法を提供する。

【0174】

さらに他の態様では、対象の疾患または障害を処置する方法であって、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子を投与する前に、（ｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が本明細書で提供される。

【0175】

なおさらなる態様では、対象の疾患または障害を処置する方法であって、前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞を対象に投与することを含み、前記対象に、前記改変された免疫細胞を投与する前に、（ｉ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である有効量の作用因子；ならびに／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置し、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が本明細書で提供される。

【0176】

なおさらなる態様では、対象の疾患または障害を処置する方法であって、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、（ｉ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；ならびに／あるいは（ｉｉ）前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が本明細書で提供される。

【0177】

本明細書ではまた、対象の疾患または障害を処置する方法であって、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストの有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニストを投与する前に、（ｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置し、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が提供される。

【0178】

ある特定の態様では、対象の疾患または障害を処置する方法であって、前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、前記改変された免疫細胞を投与する前に、（ｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が本明細書で提供される。

【0179】

ある特定の他の態様では、対象の疾患または障害を処置する方法であって、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、（ｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；および／または（ｉｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置する、方法が提供される。

【0180】

本明細書に記載される処置方法のいずれかに従って（すなわち、（ｉ）前記改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子；（ｉｉ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、ならびに免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子；（ｉｉｉ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、および刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニスト；または（ｉｖ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニスト、ならびに免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子の投与の後に）、前記対象は、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子が投与されていない参照対象によって達成される免疫応答と比較して上昇した前記疾患または障害に対する前記免疫応答を達成し得る。

【0181】

一部の実施形態では、参照対象は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子を除いて、試験対象と同一の治療を投与したコンパレーター対象（すなわち、同じかまたは類似する種、性別、サイズ、年齢、および疾患状態の対象）を意味し得る。

【0182】

ある特定の実施形態では、免疫応答の上昇は：（ｉ）疾患もしくは障害の部位（例えば、腫瘍または感染部位）への免疫細胞の局在化、および／もしくは疾患もしくは障害の部位における免疫細胞活性の量の増加；（ｉｉ）対象における免疫細胞の増殖の増加（例えば、免疫細胞の増殖数、免疫細胞の増殖速度、または両方の増加）；（ｉｉｉ）対象における活性化した免疫細胞の量の増加；（ｉｖ）（ａ）サイトカイン－サイトカイン受容体相互作用、（ｂ）ケモカインシグナル伝達経路、（ｃ）細胞接着分子、もしくは（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組合せに関連する遺伝子の、対象における、必要に応じて対象由来の疾患組織の試料における、発現レベルの増加；（ｖ）疾患細胞および／もしくは組織の量、成長、成長速度、もしくは広がりの低減；または（ｖｉ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せを含む。

【0183】

さらなる実施形態では、免疫応答の上昇は、Ｃｃｌ１２；Ｃｃｌ１７；Ｃｃｌ２；Ｃｃｌ７；Ｃｃｌ９；Ｃｃｒ２；Ｃｃｒ８；ＣＤ４０；ＣＤ４０ｌｇ；Ｃｓｆ１；Ｃｓｆ３ｒ；Ｃｘｃｌ１０；Ｃｘｃｒ２；Ｅｄａ２ｒ；Ｆａｓ；ＩＬ２１ｒ；ＩＬ２ｒｂ；ＩＬ１７ｒ；Ｔｎｆｒｓｆ２５；Ｔｎｆｓｒｆ９；Ｔｎｆｓｆ８；Ｘｃｌ１；Ｇｎｇ７；ＣＤ２２６；ＣＤ８０；ＣＤ８α；Ｃｌｄｎ２；Ｈ２－Ｍ２；Ｐｄｃｄ１Ｉｇ２；Ｓｅｌｅ；Ｓｅｌｐ；またはそれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数の発現レベルの増加を含む。

【0184】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、免疫刺激剤のアゴニスト、またはこの開示の免疫抑制成分に特異的に結合するかおよび／またはこの開示の免疫抑制成分の阻害剤である作用因子の「治療有効量」または「有効量」は、統計的に有意な形での、臨床成績の向上；疾患に関連する症状の緩和もしくは軽減；症状の発生率低下；生活の質向上；より長い無病状態；疾患の程度の低下；病状の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；または生存期間延長を含む、治療効果をもたらすのに十分な、結合タンパク質または宿主細胞の量を指す。単独で投与される個々の活性成分または単一活性成分を発現する細胞に言及する場合、治療有効量は、単独でのその成分のまたはその成分を発現する細胞の効果を指し得る。組合せに言及する場合、治療有効量は、活性成分の合計量、または活性成分を発現する細胞と合わせた補助活性成分の合計量であって、順次投与されるのか並行して投与されるのかを問わず、治療効果を生じさせる結果となる合計量を指す。組合せはまた、標的（例えば、それぞれ同じかまたは異なる疾患に関連する抗原に結合する）にそれぞれ特異的に結合する２つの異なる結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ）などの、１つより多くの活性成分を発現する細胞または改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、および別の関連する治療薬であってもよい。

【0185】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約３．３×１０^５細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約３．３×１０^５細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0186】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約１×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約１×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0187】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約３．３×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約３．３×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0188】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約１×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約１×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0189】

ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約５×１０^４細胞／ｋｇ、５×１０^５細胞／ｋｇ、５×１０^６細胞／ｋｇ、または最大で約５×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約５×１０^４細胞／ｋｇ、５×１０^５細胞／ｋｇ、５×１０^６細胞／ｋｇ、または最大で約５×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0190】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、オキサリプラチンを含む。ある特定の実施形態では、単一用量のオキサリプラチンは、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、または２００ｍｇ／ｍ^２、またはそれより多くを含む。特定の実施形態では、単一用量のオキサリプラチンは、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇ／ｍ^２を含む。さらなる実施形態では、単一用量のオキサリプラチンは、約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、または２００ｍｇ／ｋｇ、またはそれより多くを含む。

【0191】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、シクロホスファミドを含む。一部の実施形態では、単一用量のシクロホスファミドは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド、またはそれより多くを含む。一部の実施形態では、対象は、１日当たり約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミド（またはシクロホスファミドを含む医薬組成物）、またはそれより多くを投与される。特定の実施形態では、

【0192】

ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを含み、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドはそれぞれ、互いに任意の量および／または任意の比で存在する。一部の実施形態では、単一用量のＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、約５０から約１００ｍｇ／ｍ^２のオキサリプラチンおよび約２００から約１０００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを含む。さらなる実施形態では、単一用量は、約３００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを含む。

【0193】

ある特定の実施形態では、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子は、本明細書で開示される実施形態のいずれにおいても、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、またはそれらの任意の組合せであるか、それを含むか、またはそれに由来する、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれを超えるｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ある特定の実施形態では、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、またはそれを含む医薬組成物）の単一用量は、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００ミリグラム、またはそれを超える作用因子（または作用因子を含む組成物）を含む。

【0194】

本明細書に記載の作用因子（例えば、改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子；免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；免疫刺激成分のアゴニストである作用因子）のいずれかの投薬は、任意の送達経路を使用し、任意の期間にわたって実施され得る。ある特定の実施形態では、作用因子の送達は、静脈内に実施される。ある特定の実施形態では、作用因子の単一用量は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、６０、７５、９０、１２０、１８０、２４０分、またはそれより長い時間にわたり、静脈内に送達され得る。用量は、１日当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い回数で送達されてもよい。一部の実施形態では、単一用量は、１日当たり１回投与される。一部の実施形態では、１日１回の投薬は、１週間当たり約１回、２、３、４、５、６、７、８週間毎、またはそれより多い週当たり１回投与される。

【0195】

一部の実施形態では、任意の２つまたはそれより多い作用因子（すなわち、改変された免疫細胞；ＩＣＤの誘導に関連する作用因子；刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；ならびに／または免疫刺激性成分のアゴニストである作用因子の２つまたはそれより多く）は、並行して投与される。一部の実施形態では、任意の２つまたはそれを超える作用因子は、同時期に投与される。一部の実施形態では、任意の２つまたはそれを超える作用因子は、逐次的におよび／または間欠的に、任意の順番でならびに投与間の任意の時間内で投与される。

【0196】

本明細書に記載の作用因子のいずれかの単剤またはいずれか２つもしくはそれより多くの投与は、任意の適切な間隔、例えば、毎日もしくは毎週基準で、または約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれより長い週を隔てて実施されてもよい。ある特定の実施形態では、対象は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞を、複数回（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い回数）投与される。ある特定の実施形態では、対象は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞を、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、または約６週間の間隔で一緒に投与される。さらなる実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞を受けている対象は、その作用因子または改変された免疫細胞を以前に受けたことがない。またさらなる実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い回数（例えば、１週間、２週間、または３週間に２回またはそれより多い投与）投与される。

【0197】

ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子と並行して、対象に投与される。ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、対象にＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与された後に、対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、対象に改変された免疫細胞が投与された後に、対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞は、逐次的に（すなわち、任意の順におよび任意の回数を繰り返して）対象に投与される。本明細書において開示された方法のいずれにおいても、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である作用因子、ならびに／または免疫刺激性分子のアゴニストである作用因子は、改変された免疫細胞の投与とＩＣＤの誘導に関連する作用因子の投与のいずれかまたは両方の前に、後に、またはその間に間欠的に（例えば、その間に１、２、３回、またはそれより多い回数）投与される。

【0198】

ある特定の実施形態では、方法は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子および改変された免疫細胞を、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が、１日当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０回、および／または１週間当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０回投与されるように、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子と併用して投与することを含む。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子の投与の約１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、または９６時間後に投与される。

【0199】

今般開示される実施形態のいずれにおいても、対象は、今般開示される治療レジメンの前に、改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、免疫刺激性分子のアゴニスト、および免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子のいずれも受けていなかった。

【0200】

あるいは、一部の実施形態では、対象は、本開示の治療を開始する前の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、２１、または２８日間、作用因子（改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、免疫刺激性分子のアゴニスト、ならびに免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子）のいずれかを受けたことがある（または受けたことがない）。

【0201】

特定の実施形態では、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子は、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを含み、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。さらなる実施形態では、方法は、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを１週間に約１回、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を１週間に約２回、および改変された免疫細胞を（単独でまたはシクロホスファミドなどのリンパ枯渇化学療法と組み合わせて）約３週間毎に投与することを含む。

【0202】

またさらなる実施形態では、方法は、改変された免疫細胞を、シクロホスファミドとともに３週間毎の間隔で２回またはそれより多い回数、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを、改変された免疫細胞およびシクロホスファミドと同じ週に開始して、１週間に１回、３週間またはそれより長い週数の間、ならびに抗ＰＤ－Ｌ１抗体を、改変された免疫細胞およびシクロホスファミドと同じ週に開始して、１週間に２回、２週間またはそれより長い週数の間投与することを含む。

【0203】

一部の実施形態では、方法は、逐次的に投与されたサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）を対象に投与することをさらに含み、ただし、対象に、サイトカイン投与前に、少なくとも３または４回、改変された免疫細胞が投与された。ある特定の実施形態では、サイトカインは、改変された免疫細胞と併用して投与される。

【0204】

ある特定の実施形態では、処置される対象は、免疫抑制療法、例えば、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量のミコフェノール酸プロドラッグ、またはそれらの任意の組合せを受けたことがあるかまたはそれをさらに受けている。またさらなる実施形態では、処置される対象は、非骨髄破壊的または骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがあり、処置は、非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２から少なくとも３カ月後に投与され得る。

【0205】

本明細書に記載の実施形態のいずれにおいても、疾患または状態は、過剰増殖性疾患であるかまたはそれを含む可能性がある。一部の状況では、本明細書で使用される場合、「過剰増殖性障害」は、正常または非罹患細胞と比較して過剰な成長または増殖を指す。例示的な過剰増殖性障害としては、腫瘍、がん、新生物組織、癌、肉腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、悪性細胞、前悪性細胞、および非新生物性または非悪性過剰増殖性障害（例えば、腺腫、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、血管腫、線維症、再狭窄、ならびに自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、炎症性腸疾患など）が挙げられる。

【0206】

さらに、一部の状況では、「がん」は、固形腫瘍、腹水腫瘍、血液もしくはリンパもしくは他の悪性疾患；結合組織悪性疾患；転移性疾患；器官または幹細胞の移植後の微小残存疾患；多剤耐性がん、原発性または二次性悪性疾患、悪性疾患に関係する血管新生、または他の形態のがんを含む、任意の加速された細胞増殖を指すことができる。

【0207】

ある特定の実施形態では、がんは、頭頚部がん、黒色腫、膵がん、胆管細胞癌、肝細胞がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、食道がん、中皮腫、小細胞肺がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0208】

さらなる実施形態では、がんは、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、ＰＮＥＴ、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、胞状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、未分化多形肉腫、悪性神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、未分化多形肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、形成性胃炎、ビポーマ、胆管細胞癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、腎細胞癌、グラヴィッツ腫瘍、上衣腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、混合膠腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ＣＤ３７^＋樹状細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、粘液関連（ＭＡＬＴ）リンパ組織の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸管症型Ｔ細胞性リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、セザリー症候群、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、またはそれらの任意の組合せを含む。

【0209】

ある特定の実施形態では、がんは、固形腫瘍を含み、これは、実施形態では、肉腫、癌腫、または両方を含む。今般開示される方法によって処置可能な例示的な固形腫瘍として、軟骨肉腫；線維肉腫（線維芽細胞肉腫）；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；骨肉腫；横紋筋肉腫；ユーイング肉腫；消化管間質腫瘍；平滑筋肉腫；血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）（血管の肉腫（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓａｒｃｏｍａ））；カポジ肉腫；脂肪肉腫；多形肉腫；または滑膜肉腫が挙げられる。

【0210】

さらなる実施形態では、固形腫瘍は、肺癌（例えば、腺癌、扁平上皮癌（類表皮癌））；扁平上皮癌；腺癌；腺扁平上皮癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；乳癌（例えば、腺管上皮内癌（非侵襲性）、非浸潤性小葉癌（非侵襲性）、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非侵襲性癌）；肝癌（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌、または胆管がん）；大細胞未分化癌、気管支肺胞上皮癌；卵巣癌（例えば、表面上皮間質腫瘍（腺癌）もしくは卵巣上皮癌（漿液性腫瘍、子宮内膜性腫瘍および粘液性嚢胞腺癌を含む）、類表皮（扁平上皮癌）、胚性癌腫および絨毛癌（胚細胞性腫瘍））；腎癌（例えば、腎腺癌、グラヴィッツ腫瘍、移行上皮癌（腎盂）、扁平上皮癌、ベリーニ管癌、明細胞腺癌、移行上皮癌、腎盂のカルチノイド腫瘍）；副腎癌（例えば、副腎皮質癌）、精巣の癌（例えば、胚細胞癌（精上皮腫、絨毛癌、胚性癌腫、奇形癌腫）、漿液癌）；胃癌（例えば、腺癌）；腸癌（例えば、十二指腸の腺癌）；結腸直腸癌；または皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌）から選択される。

【0211】

ある特定の実施形態では、固形腫瘍は、卵巣癌；卵巣上皮癌；子宮頸部腺癌または小細胞癌；膵臓癌；結腸直腸癌（例えば、腺癌または扁平上皮癌）；肺癌；乳管癌；または前立腺の腺癌である。

【0212】

一部の実施形態では、本開示の疾患関連抗原は、腫瘍関連抗原、例えば、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、Ｌｅｗｉｓ Ａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５６、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＡ１２５、ｃ－ＭＥＴ、ＦｃＲＨ５、ＷＴ１、葉酸受容体α、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＰＳＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＦＡＰ、炭酸脱水酵素９、ＥＲＢＢ２、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＳＳＸ－２、ＰＲＡＭＥ、ＨＡ－１、およびＣＥＡを含む。特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＲＯＲ１である。さらなる実施形態では、疾患または状態は、トリプルネガティブ乳がん、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、非小細胞肺がん、またはそれらの任意の組合せを含む。本発明により処置され得る対象は、一般に、ヒトおよび他の霊長類対象、例えば、獣医学目的でサルおよび類人猿である。上述の実施形態のいずれにおいても、対象は、ヒト対象であり得る。対象は、男性であってもよく、または女性であってもよく、乳幼児、若年、青年、成人および老年対象を含む、いずれの好適な年齢であってもよい。本開示による、例えば、改変された細胞を含む１つまたは複数の組成物、作用因子またはそれらの組合せは、医療の技術分野の当業者によって決定される処置される疾患、状態、または障害に適切な方法で投与されてもよい。上記実施形態のいずれにおいても、本明細書に記載されている結合タンパク質を含む細胞が、アブレーションされるタグ付き細胞またはタグ付き免疫治療細胞に遭遇するために、骨髄中に、リンパ節中に、または脳脊髄液中に、静脈内、腹腔内、腫瘍内投与される。組成物の適切な用量、好適な投与期間および頻度は、患者の状態；疾患、状態または障害のサイズ、タイプおよび重症度；タグ付き免疫治療用細胞の望ましくないタイプまたはレベルまたは活性；活性成分の特定の形態；ならびに投与方法などの因子によって決定されることになる。

【0213】

本明細書で使用される場合、用語「養子免疫療法」または「養子免疫治療」は、一部に関して、天然に存在するかまたは遺伝子操作された、疾患抗原特異的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の投与を指し得る。養子細胞免疫治療は、自己（免疫細胞がレシピエントからのものである）、同種異系（免疫細胞が、同じ種のドナーからのものである）、または同系（免疫細胞が、レシピエントと遺伝的に同一のドナーからのものである）であり得る。

【0214】

上記実施形態のいずれにおいても、本開示の方法は、細胞の染色体へと安定して組み込まれる、本明細書に記載されている所望のポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞（これは、自己、同種異系または同系であってもよく、例えば、本開示の結合タンパク質を発現していてもよい）を投与することを含む。例えば、そのような細胞内組成物は、養子免疫治療として、所望の結合タンパク質発現Ｔ細胞組成物を対象に投与するために、自己、同種異系または同系免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞、抗原提示細胞、ナチュラルキラー細胞）を使用して、ｅｘ ｖｉｖｏで生成されてもよい。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、造血前駆細胞またはヒト免疫細胞である。ある特定の実施形態では、免疫系細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－二重陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはそれらの任意の組合せである。ある特定の実施形態では、免疫系細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組合せである。特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、または両方を含む。

【0215】

組成物中の有効量、例えば、治療有効量の細胞は、少なくとも１つの細胞（例えば、１つの結合タンパク質により改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団；１つの結合タンパク質により改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団）であるかまたは、より典型的には、１０^２より多い細胞、例えば、最大で１０^６、最大で１０^７、最大で１０^８細胞、最大で１０^９細胞、または１０^１０より多い細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、約１０^４から約１０^１０細胞／ｍ^２の範囲で、好ましくは約１０^５から約１０^９細胞／ｍ^２の範囲で投与される。

【0216】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約３．３×１０^５細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約３．３×１０^５細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0217】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約１×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約１×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0218】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約３．３×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約３．３×１０^６細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0219】

一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約１×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。一部の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約１×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0220】

ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、最大で約５×１０^４細胞／ｋｇ、５×１０^５細胞／ｋｇ、５×１０^６細胞／ｋｇ、または最大で約５×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。ある特定の実施形態では、改変された免疫細胞は、少なくとも約５×１０^４細胞／ｋｇ、５×１０^５細胞／ｋｇ、５×１０^６細胞／ｋｇ、または最大で約５×１０^７細胞／ｋｇを含む用量で対象に投与される。

【0221】

細胞の数は、組成物の意図される最終使用に加えて、それに含まれる細胞のタイプにも依存することになる。例えば、特定の抗原に特異的な結合タンパク質を含有するように改変された細胞は、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多くのそのような細胞を含有する細胞集団を含むことになる。本明細書で提供される使用について、細胞は、一般に、１リットルもしくはそれ未満、５００ｍｌもしくはそれ未満、２５０ｍｌもしくはそれ未満、または１００ｍｌもしくはそれ未満の体積である。実施形態では、所望の細胞の密度は、通常は、１０^４細胞／ｍｌより高く、一般に、１０^７細胞／ｍｌより高く、一般に、１０^８細胞／ｍｌであるかまたはそれより高い。細胞を、単回注入として投与してもよく、またはある時間範囲にわたって複数回の注入で投与してもよい。臨床的に意義のある数の免疫細胞を、累積的に１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０もしくは１０^１１細胞であるかまたはそれを超える複数の注入物に分配することができる。

【0222】

治療有効量の宿主細胞（例えば、本開示のポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞）を含む、単位用量も、本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない（すなわち、単位用量に存在するナイーブＴ細胞の集団を、匹敵する数のＰＢＭＣを有する対象試料と比較して約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満または約１％未満有する）。

【0223】

一部の実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約５０％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約５０％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。さらなる実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約６０％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約６０％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。なおさらなる実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約７０％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約７０％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約８０％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約８０％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約８５％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約８５％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。一部の実施形態では、単位用量は、（ｉ）少なくとも約９０％の改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物と、（ｉｉ）少なくとも約９０％の改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む組成物とを約１：１の比で組み合わせて含み、前記単位用量は、低減された量のナイーブＴ細胞を含有するかまたはナイーブＴ細胞を実質的に含有しない。

【0224】

本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、単位用量は、改変されたＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋および改変されたＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ_Ｍ細胞の等しいまたはほぼ等しい数を含む。

【0225】

本明細書において開示されるとおりの改変された細胞および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物も企図される。一部に関して、用語「薬学的に許容される賦形剤または担体」または「生理学的に許容される賦形剤または担体」は、本明細書においてより詳細に記載されており、ヒトまたは他の非ヒト哺乳動物対象への投与に好適であり、一般的に、安全であるかまたは重大な有害事象を引き起こさないと認識される、生体適合性ビヒクル、例えば、生理食塩水を指し得る。好適な賦形剤は、水、食塩水、デキストロース、グリセロールなど、およびそれらの組合せを含む。実施形態では、本明細書において開示されるとおりの結合タンパク質または宿主細胞を含む組成物は、好適な注入媒体をさらに含む。好適な注入媒体は、任意の等張媒体処方物、通常は生理食塩水であり得、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）またはＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）、水中の５％デキストロース、乳酸リンゲル液を利用することができる。注入媒体にヒト血清アルブミンまたは他のヒト血清成分が補充されることもある。

【0226】

一部の状況では、治療組成物または医薬組成物の有効量は、本明細書に記載されるような所望の臨床結果または有益な処置を達成するために、必要な投薬量でかつ必要な期間にわたって、十分な量を指す。有効量を１または複数回の投与で送達することができる。投与が、疾患または病状を有することが既に分かっているまたは確認された対象への投与である場合、用語「治療量」を、処置に関して使用することができ、これに対して「予防有効量」を、疾患もしくは病状（例えば、再発）に罹りやすいまたは疾患もしくは病状を発症するリスクがある対象に有効量を予防的コースとして投与することを記述するために、使用することができる。

【0227】

医薬組成物は、医学技術分野の当業者により決定されるような、処置（または予防）される疾患または状態に適切な方法で、投与することができる。組成物の適切な用量ならびに好適な投与期間および頻度は、患者の健康状態、患者のサイズ（すなわち、体重、量（mass）または体面積）、患者の状態のタイプおよび重症度、タグ化された免疫療法細胞の望ましくないタイプもしくはレベルもしくは活性、活性成分の特定の形態、ならびに投与方法などの因子によって決定される。一般に、適切な用量および処置レジメンは、治療的および／または予防的恩恵（例えば、臨床成績向上、例えば、より高頻度の完全もしくは部分的寛解、またはより長い無病および／もしくは全生存期間、または症状重症度の低下を含む、本明細書に記載されるもの）をもたらすのに十分な量で、組成物（複数可）を提供する。予防的使用のための用量は、疾患もしくは障害を予防する、疾患もしくは障害の発症を遅延させる、または疾患もしくは障害に関連する疾患重症度を低下させるのに、十分なものであるべきである。本明細書に記載される方法に従って投与される免疫原性組成物の予防的恩恵は、前臨床研究（ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの動物研究を含む）および臨床研究の実施、ならびにそこから得られるデータの適切な統計的、生物学的および臨床的方法および技法による分析によって決定することができ、前記方法および技法の全てが当業者によって容易に実施され得る。

【0228】

本明細書で使用される場合、組成物または治療の投与は、一部の態様では、送達経路または方法に関係なく、対象への組成物または治療の送達を指すことができる。投与を持続的にまたは間欠的に、および非経口的に果たすことができる。投与は、認識された状態、疾患または病状を有すると既に確認された対象を処置するためであることもあり、あるいはそのような状態、疾患もしくは病状に罹りやすいまたはそのような状態、疾患もしくは病状を発症するリスクがある対象を処置するためであることもある。補助的治療との共投与は、任意の順序および任意の投薬スケジュールでの、複数の作用因子（例えば、結合タンパク質を発現する組換え（すなわち、操作された）宿主細胞と、１または複数のサイトカイン；免疫抑制治療、例えば、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量のミコフェノール酸プロドラッグ、またはそれらの任意の組合せ）の同時のおよび／または逐次的な送達を含み得る。

【0229】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の組換え宿主細胞の多数の用量が対象に投与され、前記用量は、約２週間～約４週間の投与間隔で投与され得る。

【0230】

なおさらなる実施形態では、処置されている対象は、免疫抑制治療、例えば、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量のミコフェノール酸プロドラッグ、またはそれらの任意の組合せをさらに受けている。なおさらなる実施形態では、処置されている対象は、非骨髄破壊的または骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがあり、この処置は、非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２カ月～少なくとも３カ月後に投与することができる。

【0231】

一部の態様では、ＣＴＬ免疫応答のレベルは、本明細書に記載されるおよび当技術分野において日常的に実施されている非常に多くの免疫学的方法のいずれか１つによって決定することができる。ＣＴＬ免疫応答のレベルは、例えばＴ細胞により発現される本明細書に記載される結合タンパク質のいずれか１つの投与の前および後に、決定することができる。ＣＴＬ活性を決定するための細胞傷害性アッセイは、当技術分野において日常的に実施されているいくつかの技法および方法のいずれか１つを使用して行うことができる（例えば、Henkart et al., "Cytotoxic T-Lymphocytes" in Fundamental Immunology, Paul (ed.) (2003 Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA), pages 1127-50およびそこに引用されている参考文献を参照されたい）。

【0232】

抗原特異的Ｔ細胞応答は、観察されるＴ細胞応答を本明細書に記載されるＴ細胞の機能的パラメーター（例えば、増殖、サイトカイン放出、ＣＴＬ活性、変更された細胞表面マーカー表現型など）のいずれかに従って比較することによって、通常は決定され、この比較は、適切な状況で同族抗原（例えば、免疫適合性抗原提示細胞により提示されたときにＴ細胞をプライミングまたは活性化するために使用される抗原）に曝露されるＴ細胞と、構造的に異なるまたは無関係の対照抗原の代わりに曝露される同じ供給源の集団からのＴ細胞との間で行われ得る。統計的有意性をもって、対照抗原に対する応答より大きい、同族抗原に対する応答は、抗原特異性を示す。

【0233】

一部の態様では、本明細書に記載の細胞または他の作用因子に対する免疫応答の存在およびレベルを決定するために、生体試料を対象から得ることができる。「生体試料」は、本明細書で使用される場合、血液試料（ここから、血清または血漿を調製することができる）、生検材料、体液（例えば、肺洗浄液、腹水、粘膜洗液、滑液）、骨髄、リンパ節、組織外植片、器官培養物、または対象もしくは生物学的供給源からの任意の他の組織もしくは細胞調製物であり得る。生体試料をいずれの免疫原性組成物を受ける前の対象から得ることもでき、この生体試料は、ベースライン（すなわち、免疫処置前）データを確立するための対照として有用である。

【0234】

本明細書に記載される医薬組成物は、単位用量または複数用量用容器、例えば、密封アンプルまたはバイアルに入っている状態で提供することができる。そのような容器を凍結して、製剤の安定性を保つことができる。ある特定の実施形態では、単位用量は、本明細書に記載される組換え宿主細胞を約１０^７細胞／ｍ^２～約１０^１１細胞／ｍ^２の用量で含む。例えば、非経口もしくは静脈内の投与または製剤を含む、様々の処置レジメンにおける、本明細書に記載される特定の組成物の使用に好適な投薬レジメンおよび処置レジメンの開発。

【0235】

対象組成物が非経口投与される場合、その組成物は、滅菌水性または油性溶液または懸濁液も含み得る。好適な非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒としては、水、リンゲル液、等張塩類溶液、水との混合物での１，３－ブタンジオール、エタノール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール（polythethylene glycol）が挙げられる。水溶液または水性懸濁液は、１つまたは複数の緩衝剤、例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムまたは酒石酸ナトリウムをさらに含むことができる。もちろん、いずれの投薬単位製剤の調製に使用されるいずれの材料も、薬学的に純粋でなければならず、利用される量で実質的に非毒性でなければならない。加えて、活性化合物を、徐放性調製物および製剤中に組み込むことができる。投薬単位形態は、本明細書で使用される場合、処置される対象にとって単位投薬量として適している物理的に別個の単位を指し、各単位は、適切な医薬担体と共同で所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の組換え細胞または活性化合物を含有し得る。

【0236】

一般に、適切な投薬量および処置レジメンは、治療的または予防的恩恵をもたらすのに十分な量で、活性分子または細胞を提供する。そのような応答は、処置されていない対象と比較して処置された対象において臨床成績向上（例えば、より高頻度の寛解、完全もしくは部分的、またはより長い無病生存期間）を確立することによって、モニタリングすることができる。腫瘍タンパク質に対する既存の免疫応答の増加は、一般に、臨床成績向上と相関する。そのような免疫応答は、標準的な増殖、細胞傷害性またはサイトカインアッセイを使用して、一般に評価することができ、前記アッセイは、当技術分野において日常的であり、処置前および後に対象から得た試料を使用して行うことができる。

【0237】

この開示による方法は、併用療法（上記に記載したいずれかのような）において疾患または障害を処置するために１つまたは複数の追加の作用因子を投与することをさらに含んでもよい。例えば、ある特定の実施形態では、併用療法は、改変された宿主細胞（例えば、結合タンパク質を発現する）およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）を、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子とともに（併用して、同時に、または逐次的に）投与することを含む；例えば、ただし、対象は、本方法の一部としての免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子を以前に受けたことがない。一部の実施形態では、併用療法は、改変された宿主細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を、刺激性免疫チェックポイント作用因子のアゴニストとともに投与することを含む；例えば、ただし、対象は、本方法の一部としての刺激性免疫チェックポイント作用因子のアゴニストを以前に受けたことがない。さらなる実施形態では、併用療法は、改変された宿主細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子を、二次療法、例えば、化学療法剤、放射線療法、外科手術、抗体、またはそれらの任意の組合せとともに投与することを含む。一部の態様では、併用療法は、改変された宿主細胞、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子、および本明細書に記載の作用因子のいずれかを含み得る。

【0238】

ある特定の実施形態では、併用療法は、本開示の改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）および以下のものの１つまたは複数を含む二次療法を含む：疾患関連抗原（例えば、がんもしくは腫瘍関連抗原または非炎症性固形腫瘍によって発現された抗原）に特異的な抗体またはその抗原結合断片、放射線処置、外科手術、化学療法剤、サイトカイン、ＲＮＡｉ、またはそれらの任意の組合せ。

【0239】

ある特定の実施形態では、併用療法の方法は、改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）を投与することと、放射線処置または外科手術をさらに投与することとを含む。放射線療法は、当技術分野で周知であり、Ｘ線療法、例えば、ガンマ線照射、および放射性医薬品療法を含む。対象の所与の疾患または障害（例えば、がん、腫瘍または非炎症性固形腫瘍）を処置するのに適切な外科手術および外科的手法は、当業者に周知である。

【0240】

ある特定の実施形態では、併用療法の方法は、改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する作用因子（例えば、一緒に、または順番に、またはそれを以前に他のものを受けたことがある対象に投与して）を投与することと、化学療法剤をさらに投与することとを含む。化学療法剤は、ＩＣＤの誘導に関連してもしなくてもよく、本明細書に記載のいずれかを含むがこれらに限定されない。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
対象の疾患または状態を処置するための方法であって、
（ａ）前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞；および
（ｂ）有効量の、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子
を前記対象に投与することを含み、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目２）
対象の疾患または状態を処置するための方法であって、前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞を対象に投与することを含み、
前記対象に、前記改変された免疫細胞を投与する前に、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子が投与されている、方法。
（項目３）
対象の疾患または状態を処置するための方法であって、有効量の、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の誘導に関連する作用因子を前記対象に投与することを含み、
前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目４）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子を投与する前に、（ｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目５）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む、有効量の改変された免疫細胞を対象に投与することを含み、前記対象に、前記改変された免疫細胞を投与する前に、（ｉ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；ならびに／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置し、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目６）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、（ｉ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；ならびに（ｉｉ）前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、前記対象に、必要に応じて、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目７）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストの有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニストを投与する前に、（ｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、それによって、前記疾患または状態を処置し、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目８）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、前記改変された免疫細胞を投与する前に、（ｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；および／または（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する作用因子が投与されており、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目９）
対象の疾患または障害を処置する方法であって、ＩＣＤの誘導に関連する作用因子の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象に、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子を投与する前に、（ｉ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；および／または（ｉｉ）前記疾患もしくは状態によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞が投与されており、前記対象に、必要に応じて、免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子が以前に投与されており、
それによって、前記疾患または状態を処置する、方法。
（項目１０）
（ｉ）前記改変された免疫細胞およびＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子；
（ｉｉ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、ならびに免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子；
（ｉｉｉ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、および刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニスト；または
（ｉｖ）前記改変された免疫細胞、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子、刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニスト、ならびに免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子
の投与の後に、
前記対象が、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子が投与されていない参照対象によって達成される免疫応答と比較して上昇した前記疾患または障害に対する前記免疫応答を達成する、項目１～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫応答の上昇が、
（ｉ）前記疾患もしくは障害の部位への免疫細胞の局在化、および／もしくは前記疾患もしくは障害の部位における免疫細胞活性の量の増加；
（ｉｉ）前記対象における免疫細胞の増殖の増加；
（ｉｉｉ）前記対象における活性化した免疫細胞の量の増加；
（ｉｖ）（ａ）サイトカイン－サイトカイン受容体相互作用、（ｂ）ケモカインシグナル伝達経路、（ｃ）細胞接着分子、もしくは（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組合せに関連する遺伝子の、前記対象における、必要に応じて前記対象由来の疾患組織の試料における、発現レベルの増加；
（ｖ）疾患細胞および／もしくは組織の量、成長、成長速度、もしくは広がりの低減；または
（ｖｉ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ
を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記免疫応答の上昇が、Ｃｃｌ１２；Ｃｃｌ１７；Ｃｃｌ２；Ｃｃｌ７；Ｃｃｌ９；Ｃｃｒ２；Ｃｃｒ８；ＣＤ４０；ＣＤ４０ｌｇ；Ｃｓｆ１；Ｃｓｆ３ｒ；Ｃｘｃｌ１０；Ｃｘｃｒ２；Ｅｄａ２ｒ；Ｆａｓ；ＩＬ２１ｒ；ＩＬ２ｒｂ；ＩＬ１７ｒ；Ｔｎｆｒｓｆ２５；Ｔｎｆｓｒｆ９；Ｔｎｆｓｆ８；Ｘｃｌ１；Ｇｎｇ７；ＣＤ２２６；ＣＤ８０；ＣＤ８α；Ｃｌｄｎ２；Ｈ２－Ｍ２；Ｐｄｃｄ１Ｉｇ２；Ｓｅｌｅ；Ｓｅｌｐ；またはそれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数の発現レベルの増加を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子が、
（ｉ）オキサリプラチン；
（ｉｉ）シクロホスファミド；
（ｉｉｉ）化学療法剤もしくはその活性代謝物；
（ｉｉ）パターン認識受容体（ＰＲＲ）を標的とする作用因子；
（ｉｉ）腫瘍溶解性ウイルス；
（ｉｖ）疾患関連抗原に特異的に結合する抗体、ただし、前記疾患関連抗原は、前記結合タンパク質が結合する前記抗原ではない；
（ｖ）放射線照射；
（ｖｉ）光線力学的療法；または
（ｖｉｉ）前述のもののいずれかの組合せ
を含む、項目１～１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記化学療法剤またはその活性代謝物が、
（ａ）アルキル化剤；
（ｂ）アントラサイクリン；
（ｃ）代謝拮抗薬；
（ｄ）カスパーゼ活性化因子；
（ｅ）微小管阻害剤；
（ｆ）プロテアソーム阻害剤；
（ｇ）ＢＫチャネルアゴニスト；
（ｈ）非ＩＣＤ誘導剤（ＣＧ）と強心配糖体；
（ｉ）プラチンとＥＲストレッサー；
（ｊ）オキサリプラチン；
（ｋ）ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）；
（ｌ）ブレオマイシン：
（ｍ）（ａ）～（ｌ）のいずれか１つの活性代謝物；
（ｎ）その誘導体；または
（ｏ）前述のもののいずれかの組合せ
のうちの１つまたは複数を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子の単一用量が、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇ／ｍ^２のオキサリプラチンを含む、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子の単一用量が、約５０から約４４００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを含む、項目１３または１４に記載の方法。
（項目１７）
ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子の前記単一用量が、約３００ｍｇ／ｍ^２のシクロホスファミドを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記アルキル化剤が、シクロホスファミド、テモゾロミド、またはそれらの組合せを含む、項目１４～１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記アントラサイクリンが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピリブシン、イダルビシン、ミトキサントロンまたはその誘導体、ピキサントロン、サバルビシン、バルルビシン、またはそれらの組合せを含む、項目１４または１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記代謝拮抗薬が、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、カペシタビン、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、クラドリビン、フルダラビン、ペントスタチン、葉酸アゴニスト、またはそれらの組合せを含む、項目１４～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記カスパーゼ活性化因子が、ｔＳＭＡＣを含む、項目１４～２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記ｔＳＭＡＣが、レンチウイルスベクターに含まれる（ＬＶ－ｔＳＭＡＣ）、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記微小管阻害剤が、パクリタキセルまたはドセタキセルを含む、項目１４～２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記プロテアソーム阻害剤が、ボルテゾミブを含む、項目１４～２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記プロテアソーム阻害剤が、マイトマイシンＣまたはマイトマイシンＣとｈＴｅｒｔ－Ａｄをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ＢＫチャネルアゴニストが、フロレチン；ピマリン酸；アラキドン酸；チトクロームＰ４５０の代謝物；エポキシゲナーゼ；リポキシゲナーゼ；オメガ－３ドコサヘキサエン酸；１７β－エストラジオール；キセノエストロゲン、必要に応じてタモキシフェン；必要に応じてゾニサミドおよびクロルゾキサゾンから選択される抗てんかん薬；ホスホジエステラーゼＩＩＩ阻害剤、必要に応じてシロスタゾール；ヒトβ－デフェンシン２；ＤＨＳ－Ｉ；ベンズイミダゾロン、必要に応じてＮＳ００４および／またはＮＳ１６１９；Ｃｙｍ０４；ＮＳ１１０２１；ＮＳ１９５０４；ＢＭＳ２０４３５２；チオウレア；テトラヒドロキノリン、必要に応じて化合物３６および／または化合物Ｚ；テルペン；ベンゾフロインドール；Ａｎｄｏｌａｓｔ；またはそれらの任意の組合せを含む、項目１４～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記非ＩＣＤ誘導剤と強心配糖体が、（ｉ）カルデノリドまたはブファジエノリドならびに（ｉｉ）シスプラチン、マイトマイシンＣ、および／またはエポトシドを含む、項目１４～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記プラチンとＥＲストレッサーが、シスプラチンとタプシガルジンを含む、項目１４～２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
ＰＲＲを標的とする前記作用因子が、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド；二本鎖ＲＮＡ；一本鎖ＲＮＡ；５’－トリホスフェートＲＮＡ；リポタンパク質；リポ多糖（ＬＰＳ）；表面糖タンパク質；細菌膜成分；フラジェリン；Ｒｉｎｔａｔｏｌｉｍｏｄもしくはその誘導体；Ｈｉｌｏｎｔｏｌもしくはその誘導体；ＧＳＫ１５７２９３２；Ｇ１００；ＣＢＬＢ５０２；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄもしくはその誘導体；ＭＥＤＩ９１９７；Ｍｏｔｏｌｉｍｏｄもしくはその誘導体；ＣＭＰ－００１；ＭＧＮ１７０３；ＳＤ－１０１；１０１８
ＩＳＳ；またはそれらの任意の組合せののうちの１つまたは複数を含む病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を含む、項目１３～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記腫瘍溶解性ウイルスが、アデノウイルス；麻疹ウイルス；ＨＳＶ；ＣＭＶ；ニューキャッスル病ウイルス；レオウイルス；セネカウイルス；エンテロウイルス；水疱性口内炎ウイルス；Ｅｃｈｏ－７ウイルス；セムリキ森林ウイルス；パラポックスウイルス；ワクシニアウイルス；それらの腫瘍溶解性改変バリアント；またはそれらの組合せを含む、項目１３～２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子を前記対象に投与することをさらに含む、項目１～３および７～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、ＰＤ－１；ＰＤ－Ｌ１；ＣＴＬＡ４；Ｂ７－Ｈ３；Ｂ７－Ｈ４；ＣＤ２４４／２Ｂ４；ＨＶＥＭ；ＢＴＬＡ；ＣＤ１６０；ＴＩＭ３；ＧＡＬ９；ＫＩＲ；ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）；ＰＶＲＬ２；アデノシン；Ａ２ａＲ；免疫抑制サイトカイン；ＩＤＯ；アルギナーゼ；ＶＩＳＴＡ；ＴＩＧＩＴ；ＬＡＩＲ１；ＣＥＡＣＡＭ－１；ＣＥＡＣＡＭ－３；ＣＥＡＣＡＭ－５；Ｔｒｅｇ細胞；またはそれらの任意の組合せの阻害剤から選択される、項目４～３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する、および／またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、抗体もしくはその抗原結合断片；結合タンパク質；融合ポリペプチド；小分子；ＲＮＡｉ分子；リボザイム；アプタマー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；低分子量分子；またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目３１～３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、ピジリズマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＡＭＰ－２２４、ＢＭＳ－９３６５５８ ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、イピリムマブ、トレメリムマブ、アバタセプト、ベラタセプト、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６、もしくはそれらの抗原結合断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、またはそれらの任意の組合せを含む、項目３１～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、デュルバルマブを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子が、（ｉ）前記改変された免疫細胞；（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子；（ｉｉｉ）刺激性免疫チェックポイント分子の前記アゴニスト；または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せと併用して、同時に、または逐次的に前記対象に投与される、項目３１～３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストの有効量を投与することをさらに含む、項目１～６および１０～３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが、ウレルマブ、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＤＸ－１１２７、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＰ－８７０、８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ、ＳＧＮ－４０、ＩＬ－２、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ １４５－１、Ｉｃｏｓ ３１４－８、またはそれらの任意の組合せから選択される、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストが、（ｉ）前記改変された免疫細胞；（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子；（ｉｉｉ）前記免疫抑制成分に特異的に結合する、および／もしくは前記免疫抑制成分の阻害剤である前記作用因子；または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組合せと併用して、同時に、または逐次的に前記対象に投与される、項目３９または４０に記載の方法。
（項目４２）
ＩＣＤの誘導に関連する２つまたはそれより多い作用因子が、前記対象に投与される、項目１～４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
ＩＣＤの誘導に関連する前記２つまたはそれより多い作用因子が、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを含む、項目３６に記載の方法。
（項目４４）
前記疾患または状態が、過剰増殖性疾患を含む、項目１～４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記疾患または状態が、がんである、項目１～４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記がんが、癌腫、肉腫、神経膠腫、リンパ腫、白血病、骨髄腫、またはそれらの任意の組合せを含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記がんが、頭頚部がん、黒色腫、膵がん、胆管細胞癌、肝細胞がん、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）を含む乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、食道がん、中皮腫、小細胞肺がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、またはそれらの任意の組合せを含む、項目４５または４６に記載の方法。
（項目４８）
前記がんが、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、ＰＮＥＴ、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、胞状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、未分化多形肉腫、悪性神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、未分化多形肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、形成性胃炎、ビポーマ、胆管細胞癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、腎細胞癌、グラヴィッツ腫瘍、上衣腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、脳幹神経膠腫、視神経膠腫、混合膠腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ＣＤ３７^＋樹状細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、粘液関連（ＭＡＬＴ）リンパ組織の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸管症型Ｔ細胞性リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、セザリー症候群、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、またはそれらの任意の組合せを含む、項目４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記がんが、固形腫瘍を含む、項目４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記固形腫瘍が、肉腫または癌腫である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記固形腫瘍が、軟骨肉腫；線維肉腫（線維芽肉腫）；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；骨肉腫；横紋筋肉腫；ユーイング肉腫；消化管間質性腫瘍；平滑筋肉腫；血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）（血管の肉腫（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓａｒｃｏｍａ））；カポジ肉腫；脂肪肉腫；多形肉腫；または滑膜肉腫から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記固形腫瘍が、肺癌（例えば、腺癌、扁平上皮癌（類表皮癌））；扁平上皮癌；腺癌；腺扁平上皮癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；乳癌（例えば、腺管上皮内癌（非侵襲性）、非浸潤性小葉癌（非侵襲性）、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非侵襲性癌）；肝癌（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌、または胆管がん）；大細胞未分化癌、気管支肺胞上皮癌；卵巣癌（例えば、表面上皮間質腫瘍（腺癌）もしくは卵巣上皮癌（漿液性腫瘍、子宮内膜性腫瘍および粘液性嚢胞腺癌を含む）、類表皮（扁平上皮癌）、胚性癌腫および絨毛癌（胚細胞性腫瘍））；腎癌（例えば、腎腺癌、グラヴィッツ腫瘍、移行上皮癌（腎盂）、扁平上皮癌、ベリーニ管癌、明細胞腺癌、移行上皮癌、腎盂のカルチノイド腫瘍）；副腎癌（例えば、副腎皮質癌）、精巣の癌（例えば、胚細胞癌（精上皮腫、絨毛癌、胚性癌腫、奇形癌腫）、漿液癌）；胃癌（例えば、腺癌）；腸癌（例えば、十二指腸の腺癌）；結腸直腸癌；または皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌）から選択される、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５３）
前記固形腫瘍が、卵巣癌、卵巣上皮癌、子宮頸部腺癌または小細胞癌、膵臓癌、結腸直腸癌（例えば、腺癌または扁平上皮癌）、肺癌、乳管癌、または前立腺の腺癌である、項目４９、５０、または５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記疾患または状態が、トリプルネガティブ乳がん、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、非小細胞肺がん、またはそれらの任意の組合せを含む、項目４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記結合タンパク質が、結合ドメインを含む細胞外成分と、エフェクタードメインを含む細胞内成分との間に配置された膜貫通成分を含む、項目１～５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する前記抗原が、腫瘍関連抗原である、項目１～５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記腫瘍関連抗原が、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、Ｈｅｒ２、Ｌ１－ＣＡＭ、Ｌｅｗｉｓ Ａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５６、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＡ１２５、ｃ－ＭＥＴ、ＦｃＲＨ５、ＷＴ１、葉酸受容体α、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＰＳＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ、５Ｔ４、ＢＣＭＡ、ＦＡＰ、炭酸脱水酵素９、ＥＲＢＢ２、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＳＳＸ－２、ＰＲＡＭＥ、ＨＡ－１、またはＣＥＡから選択される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記腫瘍関連抗原が、ＲＯＲ１である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記結合タンパク質が、抗体２Ａ２、抗体Ｒ１２、抗体Ｒ１１、抗体ＵＣ－９６１、抗体Ｄ１０、または抗体Ｈ１０に由来する抗原結合ドメインを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記結合タンパク質の前記膜貫通成分が、ＣＤ２８に由来し、前記細胞内成分のエフェクタードメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζドメインを含む、項目５５～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記結合タンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む、項目１～６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記疾患もしくは障害によって発現されるかもしくはそれに関連する抗原に特異的な抗体もしくは抗原結合断片；化学療法剤；外科手術；放射線療法；抗がんサイトカイン；ＲＮＡ干渉分子；またはそれらの任意の組合せから選択される二次療法を前記対象に投与することをさらに含む、項目１～６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記二次療法が、ＩＦＮ－γ；ＩＦＮ－α；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－１０；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１６；ＩＬ－１７；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２４；ＧＭ－ＣＳＦ；またはそれらの任意の組合せから選択されるサイトカインを含む、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記改変された免疫細胞が、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子に耐性ではない、項目１～６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記改変された免疫細胞が、ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子に耐性である、項目１～６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記改変された免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞を含む、項目１～６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
前記改変された免疫細胞が、Ｔ細胞を含む、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、またはそれらの任意の組合せである、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記改変された免疫細胞が、染色体遺伝子ノックアウトまたはＰＤ－１遺伝子の変異；ＬＡＧ３遺伝子；ＴＩＭ３遺伝子；ＣＴＬＡ４遺伝子；ＨＬＡ成分遺伝子；ＴＣＲ成分遺伝子；またはそれらの任意の組合せを含む、項目１～６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記対象が、改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞および改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞を約１：１の比で含む単位用量を投与される、項目６６～６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
（ｉ）前記改変された免疫細胞が、ＣＡＲをコードする異種ポリヌクレオチドを含むＴ細胞を含み；
（ｉｉ）ＩＣＤの誘導に関連する前記作用因子が、オキサリプラチンおよびシクロホスファミドを含む、項目１～７０のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子を前記対象に投与することをさらに含む、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記ＣＡＲが、抗体２Ａ２、抗体Ｒ１２、抗体Ｒ１１、抗体ＵＣ－９６１、抗体Ｄ１０、または抗体Ｈ１０からの結合ドメインを含む、項目７１または７２に記載の方法。
（項目７４）
前記ＣＡＲが、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインを含む、項目７１～７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記ＣＡＲが、４－１ＢＢ由来のシグナル伝達ドメインを含む、項目７１～７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
前記疾患または状態が、トリプルネガティブ乳がん、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、非小細胞肺がん、またはそれらの任意の組合せを含む、項目５９～７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
（ｉ）
（ａ）前記疾患または状態によって発現されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む改変された免疫細胞；
（ｂ）免疫原性細胞死の誘導に関連する作用因子；
（ｃ）免疫抑制成分に特異的に結合する、および／または免疫抑制成分の阻害剤である作用因子；および
（ｄ）免疫刺激性分子のアゴニスト
のうちの１つまたは複数；ならびに
（ｉｉ）項目１～７６のいずれか一項に記載の方法を実施するための説明書
を含むキット。

【実施例0241】

（実施例１）
ＲＯＲ１を発現するＮＳＣＬＣの動物モデルの作成
腫瘍がＲＯＲ１を発現するｉｎ ｖｉｖｏ異種移植片腫瘍モデルを肺腺癌のＫＰマウスモデル（Jackson et al., CancerRes.65(22):10280 (2005)）を使用して開発した。一般的に言えば、ＫＰマウスは、ｌｏｘ－ｓｔｏｐ－ｌｏｘカセットに先行されるｐ５３のＬｏｘＰが導入されたアレルおよび発癌性Ｋｒａｓ－Ｇ１２Ｄ変異型アレルを保有する。ベースラインでは、これらのマウスは、表現型として正常であり、ｐ５３およびＫｒａｓの野生型レベルを発現する。Ｃｒｅ発現レンチウイルスの気管内送達の際に、ウイルスが肺上皮に無作為に吸収され、ｐ５３の欠失および発癌性Ｋｒａｓ－Ｇ１２Ｄ変異型アレルの活性化が開始され、形質転換が生じる。（図１）。ＥＦ１αプロモーターの制御下で、レンチウイルスを操作し、Ｃｒｅリコンビナーゼ、ホタルルシフェラーゼ（ｆｆｌｕｃ）、ならびにＰ２ＡおよびＴ２Ａリボソームスキップエレメントによって連結されたｈＲＯＲ１を同時発現させた（図２Ａ）。ＧＦＰ遺伝子の上流にＬｏｘＰが導入された「ｓｔｏｐ」エレメントを発現する３ＴＺ ＧｒｅｅｎＧｏレポーター細胞のレンチウイルス感染によるＣｒｅおよびｈＲＯＲ１の同時発現。ＲＯＲ１およびＧＦＰの発現は、感染３ＴＺ細胞の大多数において、フローサイトメトリーによって検出し（図２Ｂ）、ｆｆｌｕｃの発現は、バイオルミネセンスイメージング（ＢＬＩ）によって確認した（図２Ｃ）。

【0242】

レンチウイルスの用量およびＫＰマウスにおいて肺腫瘍を誘導するそれらの能力を評定した。Ｃｒｅ－Ｐ２Ａ－ｆｆｌｕｃ－Ｔ２Ａ－ＲＯＲ１レンチウイルスを２つの用量レベル（１×１０^５ｐｆｕおよび５×１０^４ｐｆｕ）で気管内に投与し、腫瘍の発達をＢＬＩ（図３Ａ；代表的データ）および磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）によってモニタリングした。肺全体に及ぶ連続した１ｍｍのイメージを獲得し、全てのイメージにわたる腫瘍面積を合計することによって腫瘍負荷を定量した。両用量のレンチウイルスは、類似する動態を有する感染マウスの肺のＢＬＩにおいておおまかに２ｌｏｇの増加を生じ、全ての時点で用量が多いほどより高い放射輝度が得られた（図３Ｂ）。

【0243】

感染（ｐ．ｉ．）の１０～１３週後まで、ＭＲＩによって感染マウスの肺における腫瘍結節を検出することができた（図３Ｃ）。より多い用量のレンチウイルスに感染したマウスはわずかにより大きい腫瘍を有し（図３Ｄ）、生存率が低下したが、全てのマウスがｐ．ｉ．後約２０週までの腫瘍進行により死亡した（図３Ｅ）。１×１０^５ｐｆｕ用量のレンチウイルスにより一貫した腫瘍誘導および成長が得られ、その用量を先の実験のために選択した。

【0244】

一般に、ＲＯＲ１を標的とするＣＡＲ Ｔ療法は、その腫瘍または他の標的細胞もしくは組織が標的とされる抗原を発現することに関して適用可能であり得る。このモデルにおいてＲＯＲ１の発現を確認するために、ｐ．ｉ．後１３週のＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスから肺を回収し、免疫組織化学によりｈＲＯＲ１発現について分析した。図４に示されるように、ＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスにおいて発生した腫瘍が、高度かつ均一にＲＯＲ１を発現することが観察された。

【0245】

（実施例２）
ＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスにおける腫瘍微小環境の特徴付け
ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および骨髄腫由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が、誘導されたＫＰとヒトの肺腺癌の両方の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に浸潤し、宿主免疫を抑制することを観察してきた。ＫＰ肺腫瘍におけるｈＲＯＲ１発現誘導の免疫抑制ＴＭＥにおける影響を評定するために、ＫＰ－ｈＲＯＲ１におけるｐ．ｉ．後２２週の様々な免疫細胞について、脾臓、肺排出縦隔リンパ節（ｍＬＮ）、および肺腫瘍からの試料を調査した。Ｔｒｅｇは、脾臓およびｍＬＮ（図５Ａおよび５Ｂ）に対して腫瘍において頻度が選択的に増加することが観察され、腫瘍ではＣＤ８ Ｔ細胞に対するＴｒｅｇの比が最も高かった（図５Ｅ）。腫瘍のＴｒｅｇは、脾臓またはｍＬＮのＴｒｅｇと比較して、Ｋｉ－６７発現でマークされるように、増強された増殖も示した（図５Ｃ）。ＰＤ－１発現も、脾臓またはｍＬＮのＴｒｅｇと比較して、腫瘍のＴｒｅｇにおいて増強された（図５Ｄ）。

【0246】

高いＧｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ^＋Ｇｒ－１^ｈｉＭＤＳＣ；例えば、「単球の」ＭＤＳＣ）も、腫瘍における頻度が選択的に増加し（図６Ａおよび６Ｃ）、ＭＤＳＣは、脾臓に対して肺腫瘍においてより高いレベルのＰＤ－Ｌ１を発現した（図６Ｆ）。中間のＧｒ－１発現を有するＣＤ１１ｂ^＋ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ^＋Ｇｒ－１^ｉｎｔＭＤＳＣ；例えば、「顆粒球の」ＭＤＳＣ）からの結果は、高いＧｒ－１発現を有するＭＤＳＣと異なった（図６Ｂ、６Ｄ、および６Ｅ）。結果は、ＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスのＴＭＥが、ヒト肺がんのものと類似する免疫抑制細胞の表現型および／または特徴を有するという結論と一致した。

【0247】

（実施例３）
マウスの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の開発と試験
例示的なＲＯＲ１特異的ＣＡＲを、ＫＰ－ｈＲＯＲ１マウスモデルにおいて使用するために調製した。手短に述べると、ヒトＣＤ３ζおよび４－１ＢＢシグナル伝達ドメインに連結した２Ａ２抗体に由来する細胞外ｓｃＦｖから構成される、構築され検証されたｈＲＯＲ１特異的ＣＡＲを、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζドメインをマウスの配列で置き換えるよう改変させた。ＣＡＲをコードする構築物は、Ｐ２Ａリボソームスキップエレメントの下流に、短縮型マウスＣＤ１９（ｔＣＤ１９）形質導入マーカーをさらに含み、ｉｎ ｖｉｖｏトラッキングを可能にした（図７Ａ）。マウスのＣＤ８^＋Ｔ細胞を、ＣＡＲを発現するよう形質導入し、形質導入マーカーを発現する細胞をｈＲＯＲ１^＋、ｍＲＯＲ＋、またはＲＯＲ１－陰性４Ｔ１哺乳動物の癌腫細胞とともに、様々なエフェクター：標的比で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでインキュベートした。改変されていないＴ細胞ではなく、ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞は、ｈＲＯＲ１^＋標的細胞を溶解したが、ｍＲＯＲ１^＋またはＲＯＲ１－陰性標的細胞を溶解しなかった。図７Ｂおよび７Ｃを参照されたい。よって、マウスのＣＡＲ Ｔ細胞が、マウスではなくヒトのＲＯＲ１を発現する標的細胞を特異的に認識し、殺滅させることを観察した。

【0248】

抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を、ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、ＭＲＩによって腫瘍成長をモニタリングすることによって、ｉｎ ｖｉｖｏで評定した。全てのマウスで腫瘍結節が１ｍｍ^３以上に到達した際に、マウスに、リンパ枯渇のために１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｃｙ）を投与し、６×１０^６の２Ａ２－４１ＢＢζ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ８：ＣＤ４が１：１）またはｔＣＤ１９マーカーに関してのみ改変された等しい数の対照Ｔ細胞を養子移入した（図８Ａ）。養子移入したＴ細胞は、コンジェニックＢ６．ＳＪＬマウスに由来し、ＣＤ４５．２^＋ＫＰレシピエントマウスの中でＣＤ４５．１^＋として識別することができた。マウスは、Ｃｙを受け続け、対照のｔＣＤ１９または２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞を３週間毎に受けた。注目すべきことに、２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞は、対照のマウスと比較して、腫瘍成長を有意に低下させた（図８Ｂ）。さらに、処置前（感染後１０週）および処置後（感染後１６週）の対照のｔＣＤ１９処置マウスおよび２Ａ２ ＣＡＲ処置マウスからのＭＲＩスキャンにより、全ての腫瘍結節が対照のマウスで一定して成長した一方で、２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したマウスの腫瘍は、Ｔ細胞処置の最初の６週間で退縮したかまたは最小限の成長しか示さなかったことが示された（図８Ｃ）。

【0249】

次いで、感染後２２週（４回の細胞注入）のｔＣＤ１９対照または２Ａ２ ＣＡＲ－Ｔ処置マウスから腫瘍を回収し、ＣＡＲ Ｔ細胞表現型をフローサイトメトリーによって分析した。２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞は、対照Ｔ細胞と比較して、腫瘍において５倍高い頻度で存在し（図９Ｃ）、Ｋｉ６７発現に基づいて強力に増殖し（図９Ａおよび９Ｄ）、ｐ．ｉ．後２２週まで均一なＰＤ－１^ｈｉであった（図９Ｂおよび９Ｅ）。ｔＣＤ１９および２Ａ２ ＣＡＲ処置腫瘍に関するＲＯＲ１発現を、フローサイトメトリー（図１０Ａ）およびＩＨＣ（図１０Ｂ）によって測定した。対照と２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞処置群の両方の腫瘍は、ｈＲＯＲ１発現と同様のレベルを維持し、抗原損失バリアントのいずれの増殖物も存在しないという知見と一致した。

【0250】

２Ａ２ 抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞処置マウスの腫瘍の免疫抑制環境についても分析した。これらの腫瘍は、ＣＡＲ Ｔ細胞未処置マウスと比較して、抑制Ｔｒｅｇ細胞（図１１Ａ～１１Ｃ）およびＭＤＳＣ（図１１Ｄ）において減少を実証した。

【0251】

移入後のＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの局在化を分析するために、ｔＣＤ１９対照および２Ａ２抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞にガウシアルシフェラーゼを形質導入した（図１２Ａに示される例示的なＢＬＩ）。４回目のＴ細胞投与を受けた後の移入後１週目のマウスをイメージングした。ＢＬＩイメージングにより、ドナーＴ細胞の大多数が、肺よりも脾臓およびリンパ節に遊走することが示された（図１２Ｂおよび１２Ｃ）。結果は、移入したＣＡＲ Ｔ細胞の大多数が、標的を認識しないかもしくは有効に認識せず、または肺における腫瘍を低減できず、および／または肺に有効にトラフィッキングすることができないという解釈と一致した。

【0252】

（実施例４）
ＰＤ－１遮断によって、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍有効性は増強されない
抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞はＰＤ－１を上方調節することができ、また、腫瘍微小環境におけるその抑制細胞はＰＤ－Ｌ１を発現するため、ＰＤ－１遮断によって抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性が増強されるかどうかを評定した。手短に述べると、ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、ＭＲＩによって腫瘍成長をモニタリングした。全てのマウスで腫瘍結節が１ｍｍ^３以上に到達した際に、リンパ枯渇のためにシクロホスファミド（Ｃｙ）を投与し（１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド）、マウスは、６×１０^６の２Ａ２－４１ＢＢζ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ８：ＣＤ４が１：１）またはｔＣＤ１９マーカーに関してのみ改変された等しい数の対照Ｔ細胞の移入を受けた（図１３Ａ）。養子移入したＴ細胞は、コンジェニックＢ６．ＳＪＬマウスに由来し、ＣＤ４５．２^＋ＫＰレシピエントマウスの中でＣＤ４５．１^＋として識別することができた。マウスは、Ｃｙを受け続け、対照のｔＣＤ１９または２Ａ２ ＣＡＲ Ｔ細胞を３週間毎に受けた。マウスのサブセットは、Ｔ細胞移入の時点で開始して、２００ｕｇの抗ＰＤ－１遮断抗体を１週間に２回腹腔内より処置され、研究の期間を通して続けた。

【0253】

ＰＤ－１遮断は、ＭＲＩ ｚスタックスキャンによって定量したところ、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によって腫瘍対照を改善しないことが観察された（図１３Ｂ）。さらに、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度は、腫瘍内での改善が観察されなかった（図１３Ｃ）。ＰＤ－１染色は、ＣＡＲ Ｔ細胞に関して、抗ＰＤ－１処置マウスから低減し、抗体がｉｎ ｖｉｖｏで活性であることが示された（図１３Ｄ）。しかし、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗ＰＤ－１処置によるより高い活性化の徴候を示さず、抗ＰＤ－１処置のないＣＡＲ Ｔ細胞と同様の腫瘍における活性化マーカーＣＤ６９のレベルを示した（図１３Ｅ）。

【0254】

（実施例５）
免疫原性化学療法は抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ抗腫瘍活性を増強する
免疫原性細胞死（ＩＣＤ）は、抗原特異的Ｔ細胞の腫瘍へのプライミングおよびトラフィッキングを改善することが報告されている。ＩＣＤを誘導することが公知の化学療法レジメンによりＲＯＲ１^＋肺腫瘍のＣＡＲ Ｔ細胞浸潤が増強され得るかどうかを、組合せ処置実験で評定した（図１４Ａ）。手短に述べると、ＫＰマウスをＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスに感染させ、ＭＲＩによって腫瘍成長をモニタリングした。全てのマウスで腫瘍結節が１ｍｍ^３以上に到達した際に、マウスを、１週間に１回、合計３週間（１２、１３、１４週目）、２．５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチンおよび５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ）で前処置した。１２および１５週目に、マウスに、リンパ枯渇のために１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｃｙ）と、６×１０^６の２Ａ２－４１ＢＢζ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ８：ＣＤ４が１：１）またはｔＣＤ１９マーカーに関してのみ改変された等しい数の対照Ｔ細胞を投与した。また、マウスは、Ｔ細胞移入の時点で開始して、２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１（αＰＤ－Ｌ１）チェックポイント抗体を１週間に２回受け、研究の期間を通して続けた。研究の期間を通して、体重減少、血液試料、およびＩＨＣもモニタリングした。

【0255】

図１４Ｂおよび１４Ｌに示されるように、オキサリプラチン、シクロホスファミド、および抗ＰＤ－Ｌ１による併用療法は、驚くべきことにかつ相乗的に、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によって腫瘍対照を改善する。ＭＲＩによって定量した腫瘍体積を、上のパネルに、各処置群についてまとめる（１群当たりｎ＝３～４）。個々の腫瘍結節の成長パターンを、図１４Ｃ～１４Ｆおよび１４Ｍ～１４Ｐにおいて、各処置群についてまとめる。ｔＣＤ１９対照およびｔＣＤ１９対照＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウスのほぼ全ての腫瘍結節が一定して進行したが（併用処置を受けた群の１／７が退縮）、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したマウスにおいてのみ、わずかな結節（３／１２）が退縮した。比較すると、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のＯｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１との併用療法は、結節退縮の比率を増加させる（６／１０対３／１２）。代表的なＭＲＩスキャンが図１４Ｇおよび１４Ｑに提供され、ｔＣＤ１９対照およびｔＣＤ１９＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウスにおける一定した腫瘍進行、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ処置マウスにおけるより遅いかまたは最小限の成長、および抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウスにおける退縮が示される。

【0256】

ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウスにおけるＣＡＲ Ｔ細胞活性をさらに特徴付けるために、この群由来の腫瘍をｐ．ｉ．の１７週間後に回収し、ＣＤ３に関するＩＨＣ染色を実施した。腫瘍周辺のＴ細胞の局在化に関して、病理学者によって腫瘍を独立してスコアリングした。腫瘍は、主に、間質浸潤、末梢浸潤、または腫瘍内浸潤を有するとしてスコアリングした。代表的なデータを図１４Ｈ、１４Ｒ、および１４Ｔに示す。各腫瘍における細胞総数当たりのＣＤ３^＋細胞の％を定量した。抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のＯｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１との併用療法は、腫瘍内Ｔ細胞浸潤を有する各マウスの腫瘍結節の割合を有意に改善した（図１４Ｉおよび１４Ｓ）。

【0257】

ＩＨＣ腫瘍結節試料を、ＣＤ３発現について定量した。全ての有核細胞のうちのＣＤ３^＋細胞の割合を、各マウスの各腫瘍結節について、ＨＡＬＯイメージングソフトウェアを使用して計算した。様々な処置群のすべての腫瘍結節それぞれに関するＣＤ３浸潤のレベルを図１４Ｊにまとめ、ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウスが最も高いレベルのＴ細胞浸潤を示す。実質的により高い割合の腫瘍が、ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤＬ１処置マウスにおいて少なくとも１５％のＣＤ３^＋Ｔ細胞のレベルを示した（図１４Ｋ）。

【0258】

マルチプレックスＩＨＣも実施し、ＣＤ８ａ、Ｆｏｘｐ３に関して染色し、対照Ｔ細胞またはＣＡＲ Ｔ細胞（ＧＦＰ）、およびＤＡＰＩを示した。図１５Ａ、１５Ｂ、および１５Ｄに示されるように、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウス由来の腫瘍は、対照Ｔ細胞を受けたマウス（いずれかの群）と比較して、ＣＤ８α、Ｆｏｘｐ３、およびＴ細胞全体のレベルを増加させた。ＨＡＬＯ定量により、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１処置マウス由来の腫瘍が、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のみを受けたマウス由来の腫瘍と比較して、より高いレベルのＴ細胞を有することが示された（図１５Ｃ）。

【0259】

（実施例６）
併用療法におけるＣＡＲ Ｔ細胞の機能的特徴付け
抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞に関するＯｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１の効果を調査した。Ｔ細胞処置の５週間後の腫瘍におけるＣＤ４５．１^＋ＣＤ８^＋ＧＦＰ^＋対照または抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を実施した。図１６Ａに示されるように、Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１との組合せによって、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のみによる処置と比較して、腫瘍における抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度の増加がもたらされた。併用療法は、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＰＤ－１の（図１６Ｂ）、Ｋｉ－６７の（対照および抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞による；図１６Ｃ）、およびＣＤ２５の（腫瘍における全てのＴ細胞の；図１６Ｄ）発現の増加ももたらした。１Ｂ１１発現は、腫瘍試料のすべてのＴ細胞に対してより高いことが観察されたが、発現は、Ｏｘ／Ｃｙ／αＰＤ－Ｌ１による影響を受けることが観察されなかった（図１６Ｅ）。

【0260】

（実施例７）
遺伝子発現に関するＩＣＤ療法の効果
ハイスループットＲＮＡシークエンシングを、ＫＰマウス腫瘍試料に関して実施した。図１６Ａのボルケーノプロットは、ｉｎ ｖｉｖｏでＯｘ／Ｃｙを受けたかまたは受けなかったＫＰマウスから切除された腫瘍間で差示的に発現されることが観察された遺伝子を示す。２５３個の遺伝子は、Ｏｘ／Ｃｙ処置ＫＰマウス腫瘍において、２倍を超えて上方調節されることが観察された（図１７Ａの上方左側の角、識別された代表的な遺伝子に関する）。上方調節された遺伝子をＳＴＲＩＮＧデータベースに対して問い合わせ、図１７Ｂにまとめた例示的な機能的経路を識別した。理論により拘束されることを望まないが、これらの経路（サイトカイン－サイトカイン受容体相互作用；ケモカインシグナル伝達経路；および細胞接着分子）は、一部に関して、Ｔ細胞トラフィッキングに関連し得る。３つの例示的な経路内の選択された遺伝子の発現（Ｌｏｇ２カウントパーミリオン）レベルを、未処置ＫＰマウスおよびＯｘ／Ｃｙを受けたマウス由来の腫瘍において比較した。図１７Ｃおよび１７Ｄにおいて示されるように、ほとんど全ての遺伝子が、Ｏｘ／Ｃｙ処置マウス由来の腫瘍において発現を増加させた。

【0261】

結果は、免疫原性細胞死を誘導する作用因子による処置が、腫瘍におけるＴ細胞トラフィッキングに関連し得る遺伝子の発現を誘導し、相乗的にＣＡＲ Ｔ細胞治療を改善することができるという観察と一致した。

【0262】

（実施例８）
ヒトＴＮＢＣ患者におけるＩＣＤ＋ＣＡＲ Ｔ細胞治療
進行性ＲＯＲ１^＋慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を有する患者、およびＲＯＲ１^＋非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）またはトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ；エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、およびＨＥＲ２／Ｎｅｕに関する遺伝子を発現しない）を有する患者において、ＲＯＲ１を標的とする養子移入した自己ＣＡＲ Ｔ細胞の安全性および抗腫瘍活性を評価するために、単施設試験を行った。手短に述べると、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号に記載されている抗体Ｒ１２、スペーサードメイン、ならびに４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインからのｓｃＦｖを含むＲＯＲ１特異的ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入した自己Ｔ細胞（１：１ ＣＤ４^＋：ＣＤ８^＋）による注入のおよそ３６から９６時間前に、選択基準を満たした患者は、細胞減少性化学療法を受けた（フルダラビンとシクロホスファミドまたはオキサリプラチンとシクロホスファミド）。様々な初期用量でＴ細胞を投与し、用量漸増または漸減を、患者の応答および有効性に応じて実施した。血中のＣＡＲ Ｔ細胞の存続性、サイトカインレベル、免疫原性およびマルチパラメトリックフローサイトメトリーの測定値を、複数の時点で評価した。臨床的に示したように、２８～９０日目、次いで、６および１２カ月、および６カ月毎に、ＲＥＣＩＳＴ １．１によるイメージング評定を実施した。

【0263】

７名の患者（４名のＴＮＢＣ、３名のＮＳＣＬＣ）が参加し、処置を受けた。スクリーニングした２９個のＴＮＢＣ腫瘍の全ておよび２０個のＮＳＣＬＣ腫瘍のうちの１１個が、ＩＨＣで決定して、２０％を超えるＲＯＲ１の発現を有した。Ｏｘ／Ｃｙを受けた１名のＴＮＢＣ患者に関する例示的ＲＯＲ１ ＩＨＣを図１８に示す。処置後の腫瘍の生検をこの患者で実施し；図１９Ａ～１９Ｃに示されるように、ＣＤ３^＋Ｔ細胞とマクロファージが、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞による治療後に腫瘍中に存在することが観察された。

【0264】

結果は、ＩＣＤを誘導する化学療法による処置が、ヒト患者の固形腫瘍（ＴＮＢＣ）におけるＣＡＲ Ｔ細胞の存在に関連するという観察と一致した。

【0265】

上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を得ることができる。本明細書および／または米国特許仮出願第６２／５５５，０３４号において言及する、および／または出願データシートに収載する、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許公表文献の全ては、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。様々な特許、出願および公表文献の概念を利用するために必要に応じて実施形態の態様を修飾して、なおさらなる実施形態を得ることができる。

【0266】

上記の詳細な説明に照らして、これらおよび他の変更を実施形態に加えることができる。一般に、下記の特許請求の範囲において使用する用語は、本明細書および本特許請求の範囲において開示する特定の実施形態に、本特許請求の範囲を限定すると解釈すべきでなく、そのような特許請求の範囲に権利がある均等物の全範囲とともに全ての可能な実施形態を含むと解釈すべきである。したがって、本特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3DE】

【図4】

【図5A】

【図5BC】

【図5DE】

【図6A】

【図6BC】

【図6D】

【図6EF】

【図7A】

【図7BC】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図9CD】

【図9E】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11BC】

【図11D】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13BC】

【図13DE】

【図14A】

【図14BC】

【図14DE】

【図14F】

【図14G】

【図14H】

【図14I】

【図14JK】

【図14LM】

【図14NO】

【図14P】

【図14Q】

【図14R】

【図14S】

【図14T】

【図15AB】

【図15CD】

【図16AB】

【図16CD】

【図16E】

【図17AB】

【図17C】

【図17D】

【図18】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【配列表】

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【外国語明細書】