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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023033957
(43)【公開日】2023-03-13
(54)【発明の名称】Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法
(51)【国際特許分類】
C07F 5/02 20060101AFI20230306BHJP
B01J 31/02 20060101ALI20230306BHJP
B01J 31/24 20060101ALI20230306BHJP
C07B 61/00 20060101ALN20230306BHJP
A61P 35/00 20060101ALN20230306BHJP
A61K 31/69 20060101ALN20230306BHJP
A61P 43/00 20060101ALN20230306BHJP
【ＦＩ】
C07F5/02 C
B01J31/02 102Z
B01J31/24 Z
C07B61/00 300
A61P35/00
A61K31/69
A61P43/00 121
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021139957
(22)【出願日】2021-08-30
(71)【出願人】
【識別番号】300032112
【氏名又は名称】森田薬品工業株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】亀川 展幸
(72)【発明者】
【氏名】杉原 多公通
(72)【発明者】
【氏名】本澤 忍
(72)【発明者】
【氏名】白川 真
【テーマコード（参考）】
4C086
4G169
4H039
4H048
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086DA43
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB26
4C086ZC75
4G169AA06
4G169BA21A
4G169BA21B
4G169BA27B
4G169BC72B
4G169BD01A
4G169BD01B
4G169BD04A
4G169BD04B
4G169BD06A
4G169BD06B
4G169BD07B
4G169BE14A
4G169BE14B
4G169BE27B
4G169BE46B
4G169CB25
4G169CB61
4G169CB79
4G169DA02
4H039CA91
4H039CD40
4H039CD90
4H048AA02
4H048AB20
4H048AB84
4H048AC61
4H048AC80
4H048BA25
4H048BA37
4H048BA48
4H048BB18
4H048BB25
4H048VA20
4H048VA30
(57)【要約】
【課題】本発明は、ＢＮＣＴ療法に好適なＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法を提供することを目的とする。
【解決手段】Ｌ－チロシンから二度のホウ素化工程を経て製造するＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】Ｌ－チロシンから二度のホウ素化工程を経て製造するＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
次の４工程を含むＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
第一工程：Ｌ－チロシンを、第一の溶媒中，一般式（１）で表されるホウ素誘導体と反応させて、一般式（２）で表されるホウ素エステルを製造する工程、
第二工程：第一工程で得られたホウ素エステルを、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンの存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、一般式（３）で表されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを製造する工程、
第三工程：第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルを、第三の溶媒に溶解させ、触媒の存在下、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物と反応させて、一般式（６）で表されるアリールボロン酸エステルを製造する工程、および
第四工程：第三工程で得られたアリールボロン酸エステルを第四の溶媒中、酸性条件下で加熱することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する工程
（式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって炭素数１～６のアルキル、アリールもしくはアルコキシ、アリールオキシを表すか、またはＲ３が水素、ヨウ素、メトキシもしくはトリフルオロメタンスルホナートを表し、Ｒ１およびＲ２は合同で環状のカテコール、ピナコール、ビシクロノナンを形成することを表し、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって炭素数１～６のアルキルまたはアルコキシ、アリールオキシを表す。）。
第一工程：Ｌ－チロシンを、第一の溶媒中，一般式（１）で表されるホウ素誘導体と反応させて、一般式（２）で表されるホウ素エステルを製造する工程、
第二工程：第一工程で得られたホウ素エステルを、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンの存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、一般式（３）で表されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを製造する工程、
第三工程：第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルを、第三の溶媒に溶解させ、触媒の存在下、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物と反応させて、一般式（６）で表されるアリールボロン酸エステルを製造する工程、および
第四工程：第三工程で得られたアリールボロン酸エステルを第四の溶媒中、酸性条件下で加熱することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する工程
【化1】
【請求項2】
前記一般式（４）で表されるホウ素化合物がビスピナコラートジボロンであることを特徴とする請求項１記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項3】
前記一般式（５）で表されるホウ素化合物がピナコールボランであることを特徴とする請求項１記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項4】
前記一般式（１）で表されるホウ素誘導体がアルキルボランであることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか１項に記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項5】
アルキルボランが、トリエチルボランまたはトリブチルボランであることを特徴とする請求項４記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項6】
第二工程で使用するトリアルキルアミンがトリメチルアミンまたはトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンであることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項7】
第三工程で使用する触媒がパラジウム触媒であり、助触媒が酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、ジイソプロピルアミンまたはトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンのいずれか１種、または複数の組み合わせであることを特徴とする請求項１から請求項６のいずれか１項に記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項8】
パラジウム触媒として、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｅ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｐ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＣＨ２Ｃｌ２、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）2、ＰｄＣｌ２（ｏ－ｔｏｌｙｌ）２およびＰｄ（ＰＰｈ３）４のいずれか１種以上を用いることを特徴とする請求項７記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法。
【請求項9】
請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の方法により製造されたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とすることを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤の製造方法。
【請求項10】
放射線治療が、中性子捕捉療法であることを特徴とする請求項９記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、Ｌ－チロシンを原料とするＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法および同製法で得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とする医薬品の製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
がんのホウ素中性子捕捉療法（以下「ＢＮＣＴ」ともいう。）は、あらかじめ腫瘍組織に取り込ませた１０Ｂ核と生体にほぼ影響を及ばさない熱中性子線の捕捉反応によって生じるα粒子および７Ｌｉ粒子によって腫瘍細胞を障害する放射線療法である。ＢＮＣＴに用いる薬剤としてＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンが知られており、既に臨床でも用いられている。
【0003】
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法としては、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンのＤＬ体を製造し、光学分割によりＬ体を採取する方法（非特許文献１）、アミノ基をカルバミン酸エステルとして、またカルボキシ基をアルキルエステルとして保護したチロシン誘導体の原料からトリフラート誘導体を合成し、トリフラート誘導体をテトラアルコキシジボロンと反応させることによって得られた化合物を脱保護することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する方法（特許文献１）、芳香族アミノ酸誘導体へ、ボラン、またはジボロン化合物を用いてホウ素を導入し、ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する方法（非特許文献２）およびその誘導体の製造方法（特許文献２）が知られている。しかしながら、製造方法によりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンのホウ素中性子捕捉療法の増感効果が異なることは知られていない。一方、現在中性子捕捉療法に用いるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンは高濃度の１０Ｂホウ素を必要とするため、通常濃縮ホウ素を用いた高価な化合物が必要とされていた(特許文献３)。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｈ．Ｒ．ＳｙｎＤｅｒ（エイチ、アール、シンダー）、ＪｏｕｒｎａＬ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ ＣｈｅｍｉｃａＬ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ジャーナル オブ アメリカン ケミカル ソサエティー）、１９５８年、８０巻、８３５頁
【非特許文献2】山本嘉則ら、ＪｏｕｒｎａＬ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ジャーナル オブ オルガニック ケミストリー）、１９９８年、６３巻、７５２９－７５３０頁
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特許第２９７９１３９号
【特許文献2】特開２０００－２１２１８５号
【特許文献3】特許第５１５００８４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、ＢＮＣＴ療法に好適なＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの簡便な製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明は、
〔１〕 次の４工程を含むＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
第一工程：Ｌ－チロシンを、第一の溶媒中，一般式（１）で表されるホウ素誘導体と反応させて、一般式（２）で表されるホウ素エステルを製造する工程、
第二工程：第一工程で得られたホウ素エステルを、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンの存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、一般式（３）で表されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを製造する工程、
第三工程：第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルを、第三の溶媒に溶解させ、触媒の存在下、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物と反応させて、一般式（６）で表されるアリールボロン酸エステルを製造する工程、および
第四工程：第三工程で得られたアリールボロン酸エステルを第四の溶媒中、酸性条件下で加熱することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する工程
（式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって炭素数１～６のアルキル、アリールもしくはアルコキシ、アリールオキシを表すか、またはＲ３が水素、ヨウ素、メトキシもしくはトリフルオロメタンスルホナートを表し、Ｒ１およびＲ２は合同で環状のカテコール、ピナコール、ビシクロノナンを形成することを表し、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって炭素数１～６のアルキルまたはアルコキシ、アリールオキシを表す。）、
〔２〕 前記一般式（４）で表されるホウ素化合物がビスピナコラートジボロンであることを特徴とする〔１〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔３〕 前記一般式（５）で表されるホウ素化合物がピナコールボランであることを特徴とする〔１〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔４〕 前記一般式（１）で表されるホウ素誘導体がアルキルボランであることを特徴とする〔１〕から〔３〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔５〕アルキルボランが、トリエチルボランまたはトリブチルボランであることを特徴とする〔４〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔６〕第二工程で使用するトリアルキルアミンがトリメチルアミンまたはトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンであることを特徴とする〔１〕から〔５〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔７〕第三工程で使用する触媒がパラジウム触媒であり、助触媒が酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、ジイソプロピルアミンまたはトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンのいずれか１種、または複数の組み合わせであることを特徴とする〔１〕から〔６〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔８〕パラジウム触媒として、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｅ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｐ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＣＨ２Ｃｌ２、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）2、ＰｄＣｌ２（ｏ－ｔｏｌｙｌ）２およびＰｄ（ＰＰｈ３）４のいずれか１種以上を用いることを特徴とする〔７〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔９〕〔１〕から〔８〕のいずれかひとつに記載の方法により製造されたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とすることを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤の製造方法、および
〔１０〕放射線治療が、中性子捕捉療法であることを特徴とする〔９〕記載の製造方法に関する。
〔１〕 次の４工程を含むＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
第一工程：Ｌ－チロシンを、第一の溶媒中，一般式（１）で表されるホウ素誘導体と反応させて、一般式（２）で表されるホウ素エステルを製造する工程、
第二工程：第一工程で得られたホウ素エステルを、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンの存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、一般式（３）で表されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを製造する工程、
第三工程：第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルを、第三の溶媒に溶解させ、触媒の存在下、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物と反応させて、一般式（６）で表されるアリールボロン酸エステルを製造する工程、および
第四工程：第三工程で得られたアリールボロン酸エステルを第四の溶媒中、酸性条件下で加熱することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを製造する工程
【化1】
〔２〕 前記一般式（４）で表されるホウ素化合物がビスピナコラートジボロンであることを特徴とする〔１〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔３〕 前記一般式（５）で表されるホウ素化合物がピナコールボランであることを特徴とする〔１〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔４〕 前記一般式（１）で表されるホウ素誘導体がアルキルボランであることを特徴とする〔１〕から〔３〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔５〕アルキルボランが、トリエチルボランまたはトリブチルボランであることを特徴とする〔４〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔６〕第二工程で使用するトリアルキルアミンがトリメチルアミンまたはトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンであることを特徴とする〔１〕から〔５〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔７〕第三工程で使用する触媒がパラジウム触媒であり、助触媒が酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、ジイソプロピルアミンまたはトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンのいずれか１種、または複数の組み合わせであることを特徴とする〔１〕から〔６〕のいずれかひとつに記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔８〕パラジウム触媒として、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｅ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｐ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＣＨ２Ｃｌ２、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）2、ＰｄＣｌ２（ｏ－ｔｏｌｙｌ）２およびＰｄ（ＰＰｈ３）４のいずれか１種以上を用いることを特徴とする〔７〕記載のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造方法、
〔９〕〔１〕から〔８〕のいずれかひとつに記載の方法により製造されたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とすることを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤の製造方法、および
〔１０〕放射線治療が、中性子捕捉療法であることを特徴とする〔９〕記載の製造方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【発明を実施するための形態】
【0009】
本発明における第一の工程：Ｌ－チロシンを、第一の溶媒中、前記一般式（１）で表されるホウ素誘導体と反応させて、前記一般式（２）で表されるホウ素エステルを製造する工程とは、以下に示すＬ－チロシンのホウ素エステル化工程を表す。
【0010】
【化2】
【0011】
具体的には、チロシンを第一の溶媒中に溶解させた後、必要によりアルゴン雰囲気下とし、第一の溶媒に溶解させた一般式（１）で表されるトリアルキルボランを加え加熱還流を行う。
【0012】
一般式（１）で表されるホウ素誘導体の定義のうち、炭素数１～６のアルキルとは、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル等を表し、アリールとはフェニル、ナフチルを表し、アルコキシとはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等を表し、アリールオキシとはフェニルオキシ等を表す。
【0013】
例えば、炭素数１～６のアルキルをＲ１、Ｒ２およびＲ３に持つトリアルキルボランとしては、炭素数１～６のアルキル基を持つボランであればどのようなものでも良く、トリメチルボラン、トリエチルボラン、トリブチルボラン、トリプロピルボラン、トリペンチルボラン、トリヘキシルボラン等が挙げられるが、トリエチルボランまたはトリブチルボラン等を用いることが好ましく、とりわけトリエチルボランを用いることが好ましい。
【0014】
また、Ｒ３が水素、ヨウ素、メトキシもしくはトリフルオロメタンスルホナートを表し、Ｒ１およびＲ２は合同で環状のカテコール、ピナコール、ビシクロノナンを形成することを表すとは、例えば、Ｒ３が水素でＲ１およびＲ２は合同でビシクロノナンを示す９－ボラビシクロ［３．３．１］ノナン、Ｒ３が水素でＲ１およびＲ２は合同で環状のカテコールを示すカテコールボラン、Ｒ３が水素でＲ１およびＲ２は合同で環状のピコナールを示すピコナールボラン、Ｒ３がヨウ素でＲ１およびＲ２は合同で環状のビシクロボランを示す９－ヨード－９－ボラビシクロ［３．３．１］ノナン、Ｒ３がフルオロメタンスルホナートを表し、Ｒ１およびＲ２は合同で環状のビシクロノナンを表す９－ボラビシクロ［３．３．１］ノニルトリフルオロメタンスルホナートを表し、Ｒ３がメトキシを表し、Ｒ１およびＲ２は合同で環状のビシクロボランを示す９－メトキシ－９－ボラビシクロ［３．３．１］ノナン等が挙げられる。
【0015】
本工程に用いる第一の溶媒としては、エーテル系溶媒を示し、テトラヒドロフランや１，４－ジオキサンを用いることが好ましい。
【0016】
加熱温度は、溶媒により異なるが、沸点以上の温度で還流させることが望ましい。反応時間は、１２～９６時間、好ましくは２４～７２時間、とりわけ好ましくは３６～４８時間である。
【0017】
本発明における第二の工程：第一工程で得られたホウ素エステルを、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンの存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、一般式（３）で表されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを製造する工程とは、以下に示すホウ素エステルのトリフルオロメタンスルホン酸エステル化工程を表す。
【0018】
【化3】
【0019】
具体的には、前記一般式（２）で表されるホウ素エステルを必要によりアルゴン雰囲気下、第二の溶媒に溶解させ、トリアルキルアミンを加え冷却した後、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、生成物であるトリフルオロメタンスルホン酸エステルが確認された段階で、副生したトリフルオロメタンスルホン酸塩によるホウ素エステルの分解を抑制するために、炭酸水素ナトリウム等塩基性水溶液を加える。
【0020】
本工程における第二の溶媒としては、アセトニトリル、１，４－ジオキサン、シクロペンチルメチルエーテルが挙げられ、とりわけアセトニトリルを使用することが好ましい。本工程に用いるトリアルキルアミンとしては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンを用いることが好ましい。
【0021】
トリアルキルアミン添加後の冷却温度としては、－２０℃～－６０℃、好ましくは－３５℃～－４５℃である。また、トリフルオロメタンスルホン酸無水物との反応時間は、１５～６０分、好ましくは２０～４０分である。
【0022】
本発明における第三工程：第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルを、第三の溶媒に溶解させ、触媒の存在下、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物と反応させて、一般式（６）で表されるアリールボロン酸エステルを製造する工程を示す。
【0023】
【化4】
【0024】
具体的には、前記一般式（３）で示されるトリフルオロメタンスルホン酸エステル、一般式（４）で表されるホウ素化合物または一般式（５）で表されるホウ素化合物、パラジウム触媒に第三の溶媒を加え加熱還流を行う。生成物である一般式（６）で示されるアリールボロン酸エステルの生成が確認された後、室温まで放冷し、酢酸エチル等の溶媒や蒸留水を加え、生成物を抽出する。
【0025】
本工程において、前記一般式（４）で示されるホウ素化合物としてはビスピナコラートジボロン、テトラアルコキシジボロン等が挙げられ、前記一般式（５）で示される化合物としてはピコナールボラン等が挙げられる。
【0026】
本工程における、触媒としてはパラジウム触媒を用いるが、パラジウム触媒としてはＰｄＣｌ２（ｄｐｐｅ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｐ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＣＨ２Ｃｌ２、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）2、ＰｄＣｌ２（ｏ－ｔｏｌｙｌ）2、Ｐｄ（ＰＰｈ３）4が挙げられる。これらのパラジウム触媒は単独または組み合わせて使用することができる。助触媒としては酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、ジイソプロピルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミンおよびトリブチルアミンが挙げられる。これらの助触媒は選択されたいずれか１種、または複数の助触媒を組み合わせて用いることができる。
【0027】
本工程に用いる第三の溶媒としては、アセトニトリル、１，４－ジオキサン、ジメチルスルホキシドを用いることができ、加熱還流の温度は６０℃～１２０℃、好ましくは８０℃～１００℃、反応時間は６時間～２４時間、好ましくは１０～１４時間である。
【0028】
本発明における第四工程：第三工程で得られたアリールボロン酸エステルを第四の溶媒中、酸性条件下で加熱することによりＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを合成する工程とは、以下に示すようにアリールボロン酸エステルから保護基であるジエチルホウ素基、ピナコール基を外し、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを生成させる工程を示す。
【0029】
【化5】
【0030】
具体的には、一般式（６）で示されるアリールボロン酸エステルを、必要によりアルゴン雰囲気下、第四の溶媒に塩酸等を加えて酸性条件下にして加熱する。加熱温度は３０℃～７０℃、好ましくは４０℃～６０℃で、５時間～２０時間、好ましくは１０時間～１４時間加温する。
【0031】
反応によって得られた混合物を常法によりイオン交換樹脂や、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を用いて、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを単離精製する。
【0032】
本発明における前記製造工程により製造されるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とすることを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤とは、中性子捕捉療法に増強剤として用いられるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とする医薬組成物を示す。
【0033】
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とする医薬組成物は、要事溶解タイプの固形状組成物であっても要事希釈タイプの液状組成物であっても良いが、液状組成物の方が好ましい。
【0034】
液状組成物としては有効成分であるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの他、注射剤に用いる製剤基剤を用いれば良い。溶解に有用なイオン液体や溶解補助剤としてのフルクトース、ソルビトール、メグルミンを用いることも好ましい。
【0035】
錯体として用いた液状医薬組成物中のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの濃度は、液状組成物中のｗ／ｖ濃度として、１～３０％、好ましくは２～２０％、更に好ましくは２～１５％、とりわけ好ましくは２～１０％である。当該ホウ素濃度をｐｐｍとして換算すると４００ｐｐｍ～１５０００ｐｐｍ、好ましくは９００ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、更に好ましくは９００ｐｐｍ～７５００ｐｐｍ、とりわけ好ましくは９００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍである。
【0036】
また溶解度の高いイオン液体を用いた場合の液状医薬組成物中のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの濃度は、液状組成物中のｗ／ｖ濃度として、１５～５０％、好ましくは２０～５０％、更に好ましくは３０～５０％、とりわけ好ましくは３０～４５％である。当該ホウ素濃度をｐｐｍとして換算すると７２００ｐｐｍ～２４０００ｐｐｍ、好ましくは９６００ｐｐｍ～２４０００ｐｐｍ、更に好ましくは１４０００ｐｐｍ～２１０００ｐｐｍ、とりわけ好ましくは１６０００ｐｐｍ～２１０００ｐｐｍである。
【0037】
本発明で溶解補助剤としてメグルミンを用いる場合のＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンに対する割合は、モル比で１以下、好ましくは１～０．７、とりわけ好ましくは０．８未満であって０．７以上である。
【0038】
本発明の液状組成物のｐＨは、生体への投与を考慮して、中性付近のｐＨであることが好ましい。より具体的には、６．５から７．５の範囲であり、特に好ましくは７．４付近である。ｐＨの調節には必要に応じて、当該技術分野で用いられる適当なｐＨ調整剤（塩酸、炭酸水素ナトリウムなど）、緩衝剤などを使用してもよい。
【0039】
本発明の液状組成物の浸透圧比は特に限定されないが、生理食塩水対比で、１から２までの範囲内にあることが好ましい。より好ましくは、１．１から１．４の範囲である。この範囲にある場合には、注射剤の場合、痛みの軽減や投与時間の短縮が可能になる。
【0040】
液状組成物中には、その生体内外での安定性を高めるため、必要により生体に含まれるナトリウム、マグネシウム等各種金属イオンが含まれていてもよい。ナトリウムイオンの場合その濃度は、細胞内液と細胞外液の電解質バランスが大きく崩れないように体液のナトリウムイオン濃度範囲に近い数値範囲であることが好ましい。
【0041】
液状組成物には、必要に応じて、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝剤を加えてもよい。これらの緩衝剤は、製剤の安定化や刺激性の低下に有用な場合がある。
【0042】
液状組成物の添加物として医薬品医療機器等法で許容される添加物を、必要に応じて含有させることができる。そのような添加物として、通常、液体、特に水性の組成物に用いられる添加剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ソルビン酸カリウム、塩酸クロロヘキシジン等の保存剤、エデト酸Ｎａ等の安定化剤、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の増粘剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、ショ糖、ブドウ糖等の等張化剤、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン等の等張化剤、塩酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤が挙げられる。
【0043】
液状組成物が中性子捕捉療法に用いられる医薬品である場合、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物の投与方法は、腫瘍の近傍にＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを送達させる方法であればどのような物でも良いが、好ましくは静脈投与、腹腔内投与、経皮投与を用いる。
【0044】
静脈投与、腹腔内投与等体内に直接注入する投与方法の場合は、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンからなるイオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物に対して、必要により例えば、ポリソルベート８０，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０，ポリエチレングリコール，カルボキシメチルセルロース，アルギン酸ナトリウム等の分散剤、メチルパラベン，プロピルパラベン，ベンジルアルコール，クロロブタノール，フェノール等の保存剤、例えば、塩化ナトリウム，グリセリン，Ｄ－マンニトール、グルコース等の等張化剤を加え、例えば、注射用蒸留水，生理的食塩水，リンゲル液等の水溶剤で希釈化し、ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする静脈投与、腹腔内投与に用いる液状医薬組成物を製造する。
【0045】
また、経皮投与により腫瘍の近傍にＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを送達する場合は、必要により例えば、ポリソルベート８０，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０，ポリエチレングリコール，カルボキシメチルセルロース，アルギン酸ナトリウム等の分散剤、メチルパラベン，プロピルパラベン，ベンジルアルコール，クロロブタノール，フェノール等の保存剤、例えば、塩化ナトリウム，グリセリン，Ｄ－マンニトール、グルコース等の等張化剤を加え、例えば、オリーブ油，ゴマ油，綿実油，トウモロコシ油等の植物油、プロピレングリコール等の油性溶剤に溶解、懸濁あるいは乳化することにより、経皮投与に用いるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を製造する。
【0046】
なお、上記医薬組成物の製造工程においては、所望により例えば、サリチル酸ナトリウム，酢酸ナトリウム等の溶解補助剤、例えば、ヒト血清アルブミン等の安定剤、例えば、ベンジルアルコール等の無痛化剤等の添加物、更に医薬品医療機器等法において認められているものであれば必要に応じて抗酸化剤、着色剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、防腐剤、ゲル化剤を用いても良い。
【0047】
また、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物は、必要により治療の際に例えば、注射用蒸留水，生理的食塩水，リンゲル液等の水溶剤または医薬品用のローション、クリームで希釈しても良い。
【0048】
本発明の製造法により得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物は、以下の製造方法で製造することができる。
【0049】
１．Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、メグルミンおよびイオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物の製造法
室温において、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンに対して、モル比で２以下、好ましくは１以下、とりわけ好ましくは０．２以上０．８未満であるメグルミンを純水に溶解させ濃度を０.００２ｍｏＬ/Ｌ～０.０２ｍｏＬ/Ｌとする。これに対してｐ－ボロノフェニルアラニンを前記のようにメグルミンに対して規定した量で加え、更に純水を溶解する。ｐ－ボロノフェニルアラニンの終濃度は、１５～５０ｖ／ｗ％，好ましくは２０～５０ｖ／ｗ％、更に好ましくは３０～５０ｖ／ｗ％、とりわけ好ましくは３５～４５ｖ／ｗ％に調整する。必要により、前記医薬品製剤添加物を加え、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を製造する。
添加する純水としては、例えば市販のＭｉＬＬｉ－Ｑ Ｗａｔｅｒ（商品名：メルクミリポア社製）等市販の純水を用いても良い。
室温において、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンに対して、モル比で２以下、好ましくは１以下、とりわけ好ましくは０．２以上０．８未満であるメグルミンを純水に溶解させ濃度を０.００２ｍｏＬ/Ｌ～０.０２ｍｏＬ/Ｌとする。これに対してｐ－ボロノフェニルアラニンを前記のようにメグルミンに対して規定した量で加え、更に純水を溶解する。ｐ－ボロノフェニルアラニンの終濃度は、１５～５０ｖ／ｗ％，好ましくは２０～５０ｖ／ｗ％、更に好ましくは３０～５０ｖ／ｗ％、とりわけ好ましくは３５～４５ｖ／ｗ％に調整する。必要により、前記医薬品製剤添加物を加え、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を製造する。
添加する純水としては、例えば市販のＭｉＬＬｉ－Ｑ Ｗａｔｅｒ（商品名：メルクミリポア社製）等市販の純水を用いても良い。
【0050】
２．Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを構成成分とする液状医薬組成物の処方例
処方例１
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体６５．４５ｍＬにＴｗｅｅｎ８０（界面活性剤、富士フィルム和光純薬株式会社製）１６．３６ｍＬ、エタノール６５．４５ｍＬを加え、ｐＨ調整剤としての塩酸を適量加えながら、リン酸生理食塩水緩衝液（ｐＨ７．４）を加え全量を６５４ｍＬに調整した
処方例１
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体６５．４５ｍＬにＴｗｅｅｎ８０（界面活性剤、富士フィルム和光純薬株式会社製）１６．３６ｍＬ、エタノール６５．４５ｍＬを加え、ｐＨ調整剤としての塩酸を適量加えながら、リン酸生理食塩水緩衝液（ｐＨ７．４）を加え全量を６５４ｍＬに調整した
【0051】
処方例２
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体１００μＬにｐＨ調整剤としての塩酸１０μＬを加えながら、リン酸生理食塩水緩衝液（ｐＨ７．４）８９０μＬを加え全量を１ｍＬに調整し、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体を含む液状医薬組成物を製造した。
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体１００μＬにｐＨ調整剤としての塩酸１０μＬを加えながら、リン酸生理食塩水緩衝液（ｐＨ７．４）８９０μＬを加え全量を１ｍＬに調整し、Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンとメグルミンから構成されるイオン液体を含む液状医薬組成物を製造した。
【実施例0052】
実施例１
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造
第一工程
で示されるＬ－チロシン（４５１．６ｍｇ、２．５０ｍｍｏＬ：富士フィルム和光純薬工業株式会社製）をフラスコにはかりとる。フラスコに磁気撹拌子とテトラヒドロフラン（１７．５ｍＬ：関東化学株式会社製）を加えた後に、フラスコ内をアルゴンで置換し、アルゴンを流しながら、トリエチルボラン溶液（ｃａ．１ｍｏＬ／Ｌ ｉｎ テトラヒドロフラン，７．５ｍＬ，７．５０ｍｍｏＬ（３．０１ｅｑ）：関東化成工業株式会社製）を加えた。およそ１００℃の油浴にフラスコを付け、４１時間加熱還流し、反応溶液を室温まで放冷した。反応溶液を減圧濃縮すると、無色の液体を得た。シロップ状の粗生成物にヘキサン（約５０ｍＬ）を加えて、得られた固体を吸引ろ過し、ヘキサンで洗浄することによって
で示されるホウ素エステルを得た（５７６．１ｍｇ、２．３１ｍｍｏＬ、９２％）。
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの製造
第一工程
【化6】
【化7】
【0053】
得られたホウ素エステルは、ＴＬＣで単一物質を同定し、その構造は１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲで確認した。
【0054】
ＴＬＣの測定値
Rf : 0.20〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕
ＮＭＲの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.10-0.23 (m, 4H), 0.62 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 0.66 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.81 (dd, J = 9.0, 14.5 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 4.0, 14.5 Hz, 1H), 3.69 (dddd, J = 4.0, 9.0, 9.0, 9.0 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 9.0, 11.2 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 6.4, 11.2 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 9.24 (s, 1H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 8.87, 9.06, 11.92, 12.55, 35.18, 56.12, 115.35, 127.20, 130.37, 156.25, 173.73
Rf : 0.20〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕
ＮＭＲの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.10-0.23 (m, 4H), 0.62 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 0.66 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.81 (dd, J = 9.0, 14.5 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 4.0, 14.5 Hz, 1H), 3.69 (dddd, J = 4.0, 9.0, 9.0, 9.0 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 9.0, 11.2 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 6.4, 11.2 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 9.24 (s, 1H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 8.87, 9.06, 11.92, 12.55, 35.18, 56.12, 115.35, 127.20, 130.37, 156.25, 173.73
【0055】
第二工程
第一工程で得られたホウ素エステル（３．４ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）と磁気撹拌子をフラスコに入れ、フラスコ内部をアルゴンで置換した後に無水アセトニトリル（１３５ｍＬ：シグマーアルドリッチ社製）をフラスコに加えた。トリエチルアミン（４．３ｍＬ、３０．８５ｍｍｏＬ（２．２８ｅｑ）：富士フィルム和光純薬株式会社製）をフラスコに加え、フラスコを－４０℃に冷却した。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２．４ｍＬ、１４．２７ｍｍｏＬ（１．０６ｅｑ）：シグマ－アルドリッチ社製）を滴下し、同温度で３０分間反応させた。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２０ｍＬ）を加えて、反応混合物が室温に温まるまで放置した後、酢酸エチル（約５０ｍＬ）を加えたのち、内容物を分液ロートに移して、酢酸エチル溶液を分取した。得られた酢酸エチル溶液を１０%リン酸水溶液、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を自然ろ過にて除き、エバポレーターを用いて溶媒を減圧留去することにより、淡黄色油状物質を得た。この粗生成物をテトラヒドロフラン（約２０ｍＬ）に溶解し、ヘキサン（約２００ｍＬ）加えると白色の沈殿が発生した。この沈殿を吸引ろ過で集め、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥することによって、
で示されるトリフルオロメタンスルホン酸エステルを白色綿状結晶または無色針状結晶として得た（３．７ｇ、９．６８ｍｍｏＬ、７２％）。
第一工程で得られたホウ素エステル（３．４ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）と磁気撹拌子をフラスコに入れ、フラスコ内部をアルゴンで置換した後に無水アセトニトリル（１３５ｍＬ：シグマーアルドリッチ社製）をフラスコに加えた。トリエチルアミン（４．３ｍＬ、３０．８５ｍｍｏＬ（２．２８ｅｑ）：富士フィルム和光純薬株式会社製）をフラスコに加え、フラスコを－４０℃に冷却した。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２．４ｍＬ、１４．２７ｍｍｏＬ（１．０６ｅｑ）：シグマ－アルドリッチ社製）を滴下し、同温度で３０分間反応させた。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（約２０ｍＬ）を加えて、反応混合物が室温に温まるまで放置した後、酢酸エチル（約５０ｍＬ）を加えたのち、内容物を分液ロートに移して、酢酸エチル溶液を分取した。得られた酢酸エチル溶液を１０%リン酸水溶液、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を自然ろ過にて除き、エバポレーターを用いて溶媒を減圧留去することにより、淡黄色油状物質を得た。この粗生成物をテトラヒドロフラン（約２０ｍＬ）に溶解し、ヘキサン（約２００ｍＬ）加えると白色の沈殿が発生した。この沈殿を吸引ろ過で集め、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥することによって、
【化8】
【0056】
得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステルは、ＴＬＣで単一物質を同定し、その構造は１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲで確認した。
【0057】
ＴＬＣの測定値
Rf : 0.34〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕)
NMRの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.11-0.30 (m, 4H), 0.670 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.674 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.93 (dd, J = 10.0, 15.0 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 4.0, 15.0 Hz, 1H), 3.86 (m, 1H), 5.61 (dd, J = 9.5, 11.0 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 7.5, 11.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 8.84, 8.97, 11.64, 12.45, 35.32, 55.37, 118.26 (q, JC-F = 68.8 Hz), 121.21, 131.55, 138.68, 148.09, 173.23.
Rf : 0.34〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕)
NMRの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.11-0.30 (m, 4H), 0.670 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.674 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.93 (dd, J = 10.0, 15.0 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 4.0, 15.0 Hz, 1H), 3.86 (m, 1H), 5.61 (dd, J = 9.5, 11.0 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 7.5, 11.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 8.84, 8.97, 11.64, 12.45, 35.32, 55.37, 118.26 (q, JC-F = 68.8 Hz), 121.21, 131.55, 138.68, 148.09, 173.23.
【0058】
第三工程
第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステル（３８０．０ｍｇ、１．００ｍｍｏＬ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２（４１．０ｍｇ，０．０５ｍｍｏＬ（５ｍｏＬ％）：シグマ－アルドリッチ社製），ビスピナコラートジボロン（３８３．２ｍｇ、１．５１ｍｍｏＬ（１．５１ｅｑ）：シグマ－アルドリッチ社製）、酢酸カリウム（３９５．７ｍｇ、４．００ｍｍｏＬ（４．０４ｅｑ）：関東化学株式会社製）をフラスコにはかりとり、フラスコ内をアルゴンで置換した後、無水アセトニトリル（３．３ｍＬ：シグマ－アルドリッチ社製）を加えた。あらかじめ１００℃に加熱した油浴にフラスコを付け、１２時間加熱還流し、反応混合物を室温まで放冷する。およそ１０ｍＬの酢酸エチルで反応混合物を希釈した後、分液ロートに内容物を移して蒸留水を加え、酢酸エチル溶液を分取した。酢酸エチル溶液を５０ｍＬ三角フラスコに移し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を自然ろ過にて除いた。エバポレーターを用いて溶媒を減圧留去することにより、黒色油状物質を得た。この粗生成物を少量（約１０ｍＬ）の酢酸エチルに溶解し、ほぼ同量のヘキサンを加えた後、シリカゲルのパッド（シリカゲル１５ｇ）を通過させて、
で示される構造を持つアリールボロン酸エステル（３５１．１ｍｇ、０．９８ｍｍｏＬ、９８％）を得た〔シリカゲルはヘキサン、酢酸エチル（２：１）の混合溶液で溶出させ、ＴＬＣにて生成物の含まれた留分を確認し、集めて濃縮した〕。
第二工程で得られたトリフルオロメタンスルホン酸エステル（３８０．０ｍｇ、１．００ｍｍｏＬ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２（４１．０ｍｇ，０．０５ｍｍｏＬ（５ｍｏＬ％）：シグマ－アルドリッチ社製），ビスピナコラートジボロン（３８３．２ｍｇ、１．５１ｍｍｏＬ（１．５１ｅｑ）：シグマ－アルドリッチ社製）、酢酸カリウム（３９５．７ｍｇ、４．００ｍｍｏＬ（４．０４ｅｑ）：関東化学株式会社製）をフラスコにはかりとり、フラスコ内をアルゴンで置換した後、無水アセトニトリル（３．３ｍＬ：シグマ－アルドリッチ社製）を加えた。あらかじめ１００℃に加熱した油浴にフラスコを付け、１２時間加熱還流し、反応混合物を室温まで放冷する。およそ１０ｍＬの酢酸エチルで反応混合物を希釈した後、分液ロートに内容物を移して蒸留水を加え、酢酸エチル溶液を分取した。酢酸エチル溶液を５０ｍＬ三角フラスコに移し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を自然ろ過にて除いた。エバポレーターを用いて溶媒を減圧留去することにより、黒色油状物質を得た。この粗生成物を少量（約１０ｍＬ）の酢酸エチルに溶解し、ほぼ同量のヘキサンを加えた後、シリカゲルのパッド（シリカゲル１５ｇ）を通過させて、
【化9】
【0059】
得られたアリールボロン酸エステルは、ＴＬＣで単一物質を同定し、その構造は１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲで確認した。
【0060】
ＴＬＣの測定値
Rf : 0.60 〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕
NMRの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.11-0.26 (m, 4H), 0.647 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 0.653 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.91 (dd, J = 9.3, 14.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J = 4.0, 14.6 Hz, 1H), 3.77 (dddd, J = 4.0, 8.5, 8.5, 8.5 Hz, 1H), 5.52 (dd, J = 9.5, 11.2 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 7.8, 11.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 9.00, 9.10, 11.72, 12.57, 24.67, 36.28, 55.78, 83.77, 126.71 (br), 128.94, 134.73, 141.15, 173.62
Rf : 0.60 〔ヘキサン：酢酸エチル (1 : 1)〕
NMRの分析値
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 0.11-0.26 (m, 4H), 0.647 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 0.653 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 2.91 (dd, J = 9.3, 14.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J = 4.0, 14.6 Hz, 1H), 3.77 (dddd, J = 4.0, 8.5, 8.5, 8.5 Hz, 1H), 5.52 (dd, J = 9.5, 11.2 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 7.8, 11.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 9.00, 9.10, 11.72, 12.57, 24.67, 36.28, 55.78, 83.77, 126.71 (br), 128.94, 134.73, 141.15, 173.62
【0061】
第四工程
第三工程で得られたアリールボロン酸エステル（４１３．８ｍｇ、１．１５ｍｍｏＬ）をフラスコにはかりとり、１，４－ジオキサン（２．３ｍＬ：関東化学株式会社製）、２ｍｏＬ／Ｌ塩酸（３．０ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ（５，２１ｅｑ）：富士フィルム和光純薬株式会社製）をフラスコに加えた。フラスコ内をアルゴンで置換した後に、５０℃に温めておいた油浴にフラスコを浸け、１４時間加熱した。室温まで放冷した後に、反応混合物を陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０，Ｈ＋型、樹脂体積５０ｍＬ）に通した。蒸留水で樹脂を洗浄した後に２％アンモニア水溶液でＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを溶出した。Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを含む留分を集めてエバポレーターで減圧濃縮し、減圧乾燥することによって、
で示されるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニン（２０５．８ｍｇ、０．９８ｍｍｏＬ、９８％）を得た。
第三工程で得られたアリールボロン酸エステル（４１３．８ｍｇ、１．１５ｍｍｏＬ）をフラスコにはかりとり、１，４－ジオキサン（２．３ｍＬ：関東化学株式会社製）、２ｍｏＬ／Ｌ塩酸（３．０ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ（５，２１ｅｑ）：富士フィルム和光純薬株式会社製）をフラスコに加えた。フラスコ内をアルゴンで置換した後に、５０℃に温めておいた油浴にフラスコを浸け、１４時間加熱した。室温まで放冷した後に、反応混合物を陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０，Ｈ＋型、樹脂体積５０ｍＬ）に通した。蒸留水で樹脂を洗浄した後に２％アンモニア水溶液でＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを溶出した。Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンを含む留分を集めてエバポレーターで減圧濃縮し、減圧乾燥することによって、
【化10】
【0062】
得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの構造は、１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲで確認した。
【0063】
ＮＭＲの分析値
1H NMR (500 MHz, D2O + DCl) δ: 3.02 (dd, J = 7.5, 14.4 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 5.8, 14.4 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 5.8, 7.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, D2O + DCl) δ: 35.75, 54.08, 129.23, 131.86 (br), 134.60, 136.86, 171.26
1H NMR (500 MHz, D2O + DCl) δ: 3.02 (dd, J = 7.5, 14.4 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 5.8, 14.4 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 5.8, 7.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 2H).
13C NMR (125 MHz, D2O + DCl) δ: 35.75, 54.08, 129.23, 131.86 (br), 134.60, 136.86, 171.26
【0064】
Ｌ－ｐ－ボロノフェニルアラニンのＬ－チロシンからの収量は６３．６％と高収率であった。
【0065】
実施例２
本件発明により得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの中性子捕捉療法増強効果
実施例１で得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニン８４．４ｍｇにフルクトース１８７．７ｍｇ、１ｍｏＬ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液６００μＬを加え溶解させた後に、１ｍｏＬ／Ｌ塩酸でｐＨ７．２に調製した。得られた溶液のホウ素濃度は蒸留水を加えて１０００ｐｐｍになるように調整し、試験用化合物（以下、Ｌ－ｎＢＰＡと言う）とした。
本件発明により得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンの中性子捕捉療法増強効果
実施例１で得られたＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニン８４．４ｍｇにフルクトース１８７．７ｍｇ、１ｍｏＬ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液６００μＬを加え溶解させた後に、１ｍｏＬ／Ｌ塩酸でｐＨ７．２に調製した。得られた溶液のホウ素濃度は蒸留水を加えて１０００ｐｐｍになるように調整し、試験用化合物（以下、Ｌ－ｎＢＰＡと言う）とした。
【0066】
担がんマウスとして、ＢＡＬＢ／ｃＡマウス（メス、４週齢、体重１６～２０ｇ）にマウス大腸がん細胞（ＣＴ２６．５Ｘ１０６ｃｅｌｌｓ）を右大腿部に移植した後、１２日間飼育し、腫瘍直径６～８ｍｍ（平均腫瘍体積２３０ｍｍ３）となるように作製した。作製した担がんマウスを試験中何も処理を行わない未処理群、試験中に中性子線照射のみを行う放射線照射群（コントロール群）、Ｌ－ｎＢＰＡをあらかじめ投与した後、中性子線照射を行うＬ－ｎＢＰＡ投与群、の３群（１群ｎ＝４～６）に分けた。以下のように試験化合物を、担がんマウスに投与し、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）実施時の治療増強効果および抗腫瘍効果を検討した。
【0067】
前記試験化合物をホウ素換算量として１０ｍｇＢ／Ｋｇの濃度で尾部の静脈を通して投与した。また、中性子線のみ照射した群（コントロール）や未処理群は前投与を行わなかった。
【0068】
前期試験化合物を投与した２時間後に中性子線照射を京都大学研究用原子炉（ＫＵＲＮＳ）で行なった。中性子線量は１．３～３．６Ｘ１０１２ｎｅｕｔｒｏｎ／ｃｍ２とし、照射時間は５０分とした。腫瘍抑制効果は照射後の腫瘍径を経時的に２８日目までに測定し、コントロール群と比較した。結果を表１および図１に示した。
【0069】
【表1】
【0070】
なお、上記試験において腫瘍サイズの測定は下記計算式により行なった。
〔長径（ｍｍ）〕Ｘ〔短径（ｍｍ）〕２／２＝腫瘍サイズ（ｍｍ３）
その結果、Ｌ－ｎＢＰＡ投与群は特に中性子捕捉療法用に１０Ｂを高濃度に濃縮していないにもかかわらずコントロール群と対比して有為に腫瘍を抑制した。
〔長径（ｍｍ）〕Ｘ〔短径（ｍｍ）〕２／２＝腫瘍サイズ（ｍｍ３）
その結果、Ｌ－ｎＢＰＡ投与群は特に中性子捕捉療法用に１０Ｂを高濃度に濃縮していないにもかかわらずコントロール群と対比して有為に腫瘍を抑制した。
【産業上の利用可能性】
【0071】
本発明により、高濃度濃縮をせずに中性子捕捉療法に使用されるＬ－ｐ－ボロノフェニルアラニンが提供される。
【図1】