特開 2023-36914 インビトロ及びインビボで操作された細胞において発現された化学誘導シグナル伝達複合体の外因性薬物活性化の方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023036914

(43)【公開日】2023-03-14

(54)【発明の名称】インビトロ及びインビボで操作された細胞において発現された化学誘導シグナル伝達複合体の外因性薬物活性化の方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230307BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20230307BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20230307BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230307BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20230307BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20230307BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230307BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230307BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20230307BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20230307BHJP

   C12N 5/0789 20100101ALN20230307BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20230307BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/12 ZNA

C07K14/47

C07K19/00

C12N15/864 100Z

C12N15/867 Z

C12N5/10

C12P21/02 C

C12Q1/02

C12N5/0783

C12N5/0789

C07K16/00

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023000038

(22)【出願日】2023-01-04

(62)【分割の表示】P 2019551916の分割

【原出願日】2017-12-12

(31)【優先権主張番号】62/433,540

(32)【優先日】2016-12-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】515045617

【氏名又は名称】シアトル チルドレンズ ホスピタル （ディービーエイ シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート）

(74)【代理人】

【識別番号】100077012

【弁理士】

【氏名又は名称】岩谷 龍

(72)【発明者】

【氏名】シャーレンバーグ，アンドリュー，エム

(57)【要約】      （修正有）

【課題】融合タンパク質及びそのタンパク質を発現する細胞を含む組成物を提供する。
【解決手段】二量体化活性化可能化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）の構成要素をコードするタンパク質配列であって：第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする、第１の配列と；第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする、第２の配列と；を含み、ここで、前記第１のＣＩＳＣ構成要素及び前記第２のＣＩＳＣ構成要素は、発現されると、それらが好ましくは同時に、リガンドの存在下で二量体化してシグナル伝達コンピテントＣＩＳＣを作り出すように配置されている、前記タンパク質配列を提供する。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

本明細書中に記載の発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先出願への参照による組み込み
本出願は、２０１６年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／４３３，５４０号に対する優先権の利益を主張する。上記出願の全開示は、その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。

【0002】

配列表の参照
本出願は、電子フォーマットの配列表と共に提出されている。この配列表は、２０１７年１２月８日に作成された、サイズが８０ｋｂのＳＣＲＩ．１３０ＷＯ．ＴＸＴという名前のファイルとして提供されている。この情報は、配列表の電子フォーマットであり、その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれている。

【0003】

本開示は、合成化学誘導シグナル伝達のための組成物及び方法に関する。特に、この組成物は、生理学的に機能的な合成化学誘導シグナル伝達複合体、ならびに機能的化学誘導シグナル伝達複合体を生成するための一般的な構造を含む。いくつかの実施形態は、通常モノマーとして存在する２つの構成要素がリガンドの存在下で一緒にされて、細胞の細胞質でシグナル伝達経路を活性化する、活性シグナル伝達複合体を生成する多成分タンパク質を含む、化学誘導シグナル伝達複合体を提供する。細胞内の細胞シグナル伝達経路を活性化するためにそのような組成物を使用する方法がさらに提供される。細胞集団を選択的に増幅するための組成物の使用方法もまた提供される。

【背景技術】

【0004】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、養子細胞免疫療法に使用するためにＴ細胞を遺伝子操作するために使用される遺伝子操作された受容体である（Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｈｅｒ．５：３，２００３；Ｒｅｓｔｉｆｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：２６９，２０１２を参照のこと）。抗原結合は、ＣＡＲの細胞内セグメント上のシグナル伝達ドメインを刺激し、それによってシグナル伝達経路を活性化する。ＣＡＲベースの養子細胞免疫療法は、従来の標準治療法に抵抗性の腫瘍を有するがん患者を処置するために使用されてきた（Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６８：１５０９，２０１３；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３：９５ｒａ７３，２０１１を参照のこと）。

【0005】

細胞は、細胞間連絡を含む細胞外シグナルに応答するためにそれらの表面上に様々な受容体を有する。受容体のシグナル伝達は、広く研究されており、そして受容体は多数のシグナル伝達経路に関与している。正常な生理学的経路では活性化することができない合成複合体を通して所望のシグナルを伝達することを可能にし、これによって所望のそして特別に操作された細胞集団においてのみシグナル伝達を活性化するための機構を提供する、新しい組成物及び方法が依然として必要である。

【発明の概要】

【0006】

二量体化活性化受容体開始複合体（ＤＡＲＩＣ）が開発されており、それはそれぞれ別々の融合タンパク質として発現されるが、細胞表面上の２つの機能的構成要素の再結合のための細胞外多量体化機構（架橋因子）を含む、結合構成要素及びシグナル伝達構成要素を提供する（その全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる、米国特許出願第２０１６／０３１１９０１号を参照のこと）。重要なことに、ＤＡＲＩＣシステムの架橋因子は、ヘテロ二量体受容体複合体を形成し、それはそれ自体では有意なシグナル伝達を生じない。記載されたＤＡＲＩＣ複合体は、他のＤＡＲＩＣ複合体とのさらなる共局在化後に生理学的に関連のあるシグナルを開始するだけである。したがって、それらは、ＤＡＲＩＣ複合体のさらなる多量体化のための機構なしでは（例えば、ＤＡＲＩＣ構成要素の１つに組み込まれた結合ドメインによって結合されたリガンドを発現する腫瘍細胞との接触によるなど）、所望の細胞型の選択的増幅を可能にしない。

【0007】

したがって、本明細書に記載のいくつかの態様は、化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）を含む組成物及び方法に関する。いくつかの態様では、この組成物及び方法は、所望の細胞集団の選択的増幅のために使用され得る。

【0008】

本明細書に記載のいくつかの実施形態は、化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）をコードするタンパク質配列に関する。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、第１の配列を含み、ここでこの第１の配列は第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第１のＣＩＳＣ構成要素は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第２の配列は第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第２のＣＩＳＣ構成要素は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、この第１のＣＩＳＣ構成要素及び第２のＣＩＳＣ構成要素は、発現されたときにそれらがリガンドの存在下で二量体化するように配置される。いくつかの実施形態では、この第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素は二量体化してヘテロ二量体またはホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、二量体ＣＩＳＣは合成ＣＩＳＣである。いくつかの実施形態では、この第１及び第２の細胞外ドメインは膜貫通ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、この第１の細胞外結合ドメインまたはその一部は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部は、ＦＫＢＰラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインまたはその一部を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の膜貫通ドメインは天然の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、この第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の膜貫通ドメインは、ＩＬ－２受容体膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、この第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素のシグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、この第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素のシグナル伝達ドメインまたはその一部は、サイトカインシグナル伝達ドメインまたは抗原受容体シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、この第１のＣＩＳＣ構成要素のシグナル伝達ドメインは、インターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素のシグナル伝達ドメインは、インターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）ドメインを含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインの一方は、ＦＫＢＰドメインを含み、他方の細胞外結合ドメインはＦＲＢドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、同時にリガンドに結合するように構成される。

【0011】

いくつかの実施形態では、一方の細胞外結合ドメインは、セレブロンサリドマイド結合ドメインを含み、他方の細胞外結合ドメインは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えばサリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）に結合するとセレブロンサリドマイド結合ドメインと相互作用するドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、同時にＩＭＩＤリガンドに結合するように構成されている。

【0012】

いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインの一方は、ヘテロ二量体化タンパク質ドメイン対の一方のメンバーを含み、他方の細胞外結合ドメインは、ヘテロ二量体化ドメイン対の他方の構成要素を含み、このドメインは、例えば、同時結合によってリガンドに結合するように構成されている。

【0013】

いくつかの実施形態では、リガンドは、抗体またはその一部、例えば結合断片、タンパク質、小分子、または薬物である。いくつかの実施形態では、リガンドはラパマイシンまたはラパログ、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ２３５７３、ＡＰ１９０３、またはその代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。いくつかの実施形態では、このリガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。いくつかの実施形態では、リガンドは、０．０５ｎＭ～１００ｎＭ、例えば０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１．０ｎＭ、５．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、１５．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、２５．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、３５．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、４５．０ｎＭ、５０．０ｎＭ、５５．０ｎＭ、６０．０ｎＭ、６５．０ｎＭ、７０．０ｎＭ、７５．０ｎＭ、８０．０ｎＭ、９０．０ｎＭ、９５．０ｎＭ、もしくは１００ｎＭなどの量で、または前述の量のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の量で、存在するか、または提供される。

【0014】

いくつかの実施形態では、第１の配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の配列は、配列番号３、５、または７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の配列は、配列番号４、６、８、または９に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８及び９のアミノ酸配列をコードする核酸に関する。

【0015】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は発現ベクターに関する。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、二量体化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここでこの第１のタンパク質配列は第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第１の配列をコードする核酸は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第２のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここで第２のタンパク質配列は第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列をコードする核酸は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列または第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１の配列及び第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、配列番号６、配列番号７、または配列番号８に示される核酸配列である。

【0016】

いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、プロモーターをさらに含む核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、このプロモーターは誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである。

【0017】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、化学誘導シグナル伝達複合体発現のための、哺乳動物細胞などの細胞に関する。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、本明細書に記載のタンパク質配列または本明細書に記載の発現ベクターを含む。したがって、いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）の構成要素をコードするタンパク質配列を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、第１の配列を含み、ここでこの第１の配列はＣＩＳＣの第１の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このＣＩＳＣの第１の構成要素は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第２の配列はＣＩＳＣの第２の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第２のＣＩＳＣ構成要素は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、ＣＩＳＣの構成要素をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここでこの第１のタンパク質配列はＣＩＳＣの第１の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第１の配列をコードする核酸は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第２のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここでこの第２のタンパク質配列は、ＣＩＳＣの第２の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列をコードする核酸は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列または第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１の配列及び第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0018】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞はＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。

【0019】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法に関する。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載の哺乳動物細胞などの細胞を提供すること、本明細書に記載の合成ＣＩＳＣの構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または細胞内で本明細書に記載の発現ベクターを発現させること、ならびに細胞をリガンドと接触させ、それによって第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素を二量体化させ、それによってシグナルを細胞の内部に伝達することを包含する。

【0020】

したがって、いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法は、ＣＩＳＣの構成要素をコードする１つ以上のタンパク質配列を含む哺乳動物細胞などの細胞を提供することを包含する。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、第１の配列を含み、ここでこの第１の配列はＣＩＳＣの第１の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣの第１の構成要素は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第２の配列はＣＩＳＣの第２の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣの第２の構成要素は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法は、二量体ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクターを含む、哺乳動物細胞などの細胞を提供することを包含する。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここで第１のタンパク質配列は、ＣＩＳＣの第１の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第１の配列をコードする核酸は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第２のタンパク質配列を含むタンパク質配列をコードする核酸を含み、ここでこの第２のタンパク質配列はＣＩＳＣの第２の構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第２の配列をコードする核酸は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１のタンパク質配列または第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１の配列及び第２のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞がタンパク質配列を含むか、または発現ベクターを含むかにかかわらず、この方法は、ヘテロ二量体ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列を発現すること、または発現ベクターを発現すること、ならびに細胞をリガンドと接触させ、それによって、ＣＩＳＣの第１及び第２の構成要素を二量体化させ、それがシグナルを細胞の内部に伝達することをさらに包含する。

【0021】

いくつかの実施形態では、リガンドは、抗体またはその結合部分、タンパク質、小分子、または薬物を含む。いくつかの実施形態では、このリガンドは、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ２３５７３、もしくはＡＰ１９０３、またはその代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。いくつかの実施形態では、このリガンドは、免疫調節イミド薬（ＩＭＩＤ）クラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。いくつかの実施形態では、このリガンドは、０．０５ｎＭ～１００ｎＭ、例えば０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１．０ｎＭ、５．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、１５．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、２５．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、３５．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、４５．０ｎＭ、５０．０ｎＭ、５５．０ｎＭ、６０．０ｎＭ、６５．０ｎＭ、７０．０ｎＭ、７５．０ｎＭ、８０．０ｎＭ、９０．０ｎＭ、９５．０ｎＭ、もしくは１００ｎＭなどの量で、または前述の量のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の量で存在するか、または提供される。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達はサイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、インターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達を表現型模写するシグナルをもたらす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、サイトカイン受容体の下流標的のリン酸化に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、リガンドとの接触に続いて、化学誘導シグナル伝達複合体を発現する哺乳動物細胞などの細胞は、異種細胞集団から選択的に増幅される。いくつかの実施形態では、このリガンドはラパマイシンを含み、化学誘導シグナル伝達複合体を発現する哺乳動物細胞などの細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体発現細胞において増殖を選択的に誘導することによってインビトロまたはインビボで選択的に増幅されるが、ラパマイシンは、好ましくは同時に、哺乳動物細胞などの非化学誘導シグナル伝達複合体発現細胞において抗増殖効果を引き起こす。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの選択的に増幅する細胞は、２つの異なる遺伝子標的化事象を経験している。いくつかの実施形態では、各遺伝子標的化事象は、哺乳動物細胞などの細胞に化学誘導シグナル伝達複合体の対の一方の構成要素を与え、両方の遺伝子標的化事象を受けた細胞のみがリガンドとの接触後に増幅できるようにする。

【0022】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、ホモ二量体化のための化学誘導シグナル伝達複合体構成要素の構成要素をコードするタンパク質配列に関する。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、第１の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、それらが２５％の第１の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、２５％の第２の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、及び５０％の第１／第２の化学誘導シグナル伝達複合体ヘテロ二量体という集団を、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下で形成するように配置される。

【0023】

いくつかの実施形態では、第１の配列は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の配列は、配列番号１０または１２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態は、配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列をコードする核酸に関する。

【0024】

いくつかの実施形態では、第１及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素のシグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時に、例えばＡＰ１９０３または関連のラパログ、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、もしくはＡＰ２３５７３、またはその代謝産物、誘導体及び／または組み合わせなどのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはその変異体またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、このリガンドはＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。

【0025】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、本明細書で提供されるようなタンパク質配列の第１及び／または第２の配列をコードする核酸を含む、ホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素発現用の発現ベクターに関する。したがって、いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、配列番号１０、１１、及び１２に示される化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、第１の配列をコードする。いくつかの実施形態では、この第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは第２の配列をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、ベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターは、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、プロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、このプロモーターは誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである。

【0026】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現のための、哺乳動物細胞などの細胞に関する。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、ホモ二量体化構成要素発現について本明細書に記載のタンパク質配列、またはホモ二量体化構成要素発現について本明細書に記載の発現ベクターを含む。したがって、いくつかの実施形態では、ホモ二量体化のための化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列を含む、哺乳動物細胞などの細胞が提供される。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は第１の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体をコードする。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、それらが約２５％の第１の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、２５％の第２の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、及び５０％の第１／第２の化学誘導シグナル伝達複合体ヘテロ二量体という集団を、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下で形成するように配置される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるようなタンパク質配列の第１及び／または第２の配列をコードする核酸を含む、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現用の発現ベクターを含む、哺乳動物細胞などの細胞が提供される。したがって、いくつかの実施形態では、発現ベクターは、化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、第１の配列をコードする。いくつかの実施形態では、第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、第２の配列をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0027】

いくつかの実施形態では、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体のタンパク質配列は、配列番号１３または配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態は、配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列をコードする核酸に関する。

【0028】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの化学誘導シグナル伝達複合体細胞は、前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。

【0029】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、ホモ二量体化化学誘導シグナル伝達複合体を用いる、哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法に関する。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に提供されるような哺乳動物細胞などの細胞を提供すること、本明細書に提供されるようなホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に提供されるようなホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体の発現ベクター発現すること、ならびにこの細胞を二量体化剤と接触させ、それにより第１及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体を二量体化させ、これが細胞の内部にシグナルを伝達することを包含する。したがって、いくつかの実施形態では、この方法は、ホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素発現のための本明細書に記載のタンパク質配列、またはホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素発現のための本明細書に記載の発現ベクターを含む、哺乳動物細胞などの細胞を提供することを包含する。したがって、いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞が提供され、ここでこの細胞はホモ二量体化のための化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は第１の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、それらが約２５％の第１の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、２５％の第２の化学誘導シグナル伝達複合体ホモ二量体、及び５０％の第１／第２の化学誘導シグナル伝達複合体ヘテロ二量体という集団を、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下で形成するように配置される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞が提供され、ここでこの細胞は、本明細書で提供されるタンパク質配列の第１及び／または第２の配列をコードする核酸を含むホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素発現用の発現ベクターを含む。したがって、いくつかの実施形態では、発現ベクターは、化学誘導シグナル伝達複合体またはその構成要素をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、第１の配列をコードする。いくつかの実施形態では、第１の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、第２の配列をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの上記細胞を提供した後、この方法は、本明細書で提供されるようなホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に提供されるようなホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素の発現ベクターを発現すること、ならびにこの細胞を二量体化剤と接触させ、それにより第１及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素を二量体化させ、それがシグナルを細胞の内部に伝達することを包含する。

【0030】

いくつかの実施形態では、使用される二量体化剤は、リガンド、例えば、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、もしくはＡＰ２３５７３、ＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。いくつかの実施形態では、このリガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、サイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、インターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達を表現型模写する。いくつかの実施形態では、二量体化剤との接触に続いて、化学誘導シグナル伝達複合体を発現する哺乳動物細胞などの細胞が、異種細胞集団から選択的に増幅される。いくつかの実施形態では、ラパマイシンは二量体化剤であり、かつ化学誘導シグナル伝達複合体発現細胞における増殖を選択的に誘導することによって哺乳動物細胞などの、細胞母集団をインビトロまたはインビボで選択的に増幅させ、一方で非化学誘導シグナル伝達複合体発現細胞においては、抗増殖効果を生じるように使用される。

【0031】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列に関する。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体ＣＩＳＣの集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時にラパマイシンなどのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。

【0032】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、本明細書で提供されるように、タンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクターに関する。したがって、いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下で、ホモ二量体の集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時に、ＡＰ１９０３などのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターはプロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、このプロモーターは、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0033】

本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現のための、哺乳動物細胞などの細胞に関する。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、本明細書に記載のホモ二量体化ＣＩＳＣ構成要素タンパク質配列、または本明細書に記載のホモ二量体タンパク質配列の核酸配列をコードする発現ベクターを含む。したがって、いくつかの実施形態では、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現のための哺乳動物細胞などの細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体をコードするタンパク質配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体は、発現されたときにホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体の集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時にＡＰ１９０３などのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現のための哺乳動物細胞などの細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体の集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時にＡＰ１９０３などのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターはプロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、このプロモーターは誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、このベクターはレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0034】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞はＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。

【0035】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法に関する。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載のホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素のための哺乳動物細胞などの細胞を提供すること、本明細書に提供のホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に記載のホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素発現のための核酸をコードする発現ベクターを発現すること、ならびにこの細胞を二量体化剤と接触させ、それによって第１及び第２の化学誘導シグナル伝達複合体構成要素を二量体化させ、これがシグナルを細胞の内部に伝達することを包含する。したがって、いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載のホモ二量体化ＣＩＳＣ構成要素タンパク質配列、または本明細書に記載のホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素タンパク質配列の核酸配列をコードする発現ベクターを含む哺乳動物細胞のような細胞を提供することを包含する。したがって、いくつかの実施形態では、ホモ二量体化学誘導シグナル伝達複合体構成要素発現用の細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体の集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時にＡＰ１９０３などのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列はさらに第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体構成要素発現用の哺乳動物細胞などの細胞は、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードするタンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む化学誘導シグナル伝達複合体構成要素をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素は、発現されると、ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体の集団を形成するように配置される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインまたはその一部は、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化ドメインは、好ましくは同時にＡＰ１９０３などのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターはプロモーターをコードする。いくつかの実施形態では、このプロモーターは誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、このベクターは、ＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞を提供した後、この方法は、本明細書に記載のホモ二量体ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に記載のホモ二量体ＣＩＳＣ発現用の核酸をコードする発現ベクターを発現すること、ならびにこの細胞を二量体化剤と接触させて、それにより、第１及び第２のＣＩＳＣを二量体化させ、それがシグナルを細胞の内部に伝達することをさらに包含する。

【0036】

いくつかの実施形態では、使用される二量体化剤は、リガンド、例えば、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ２３５７３、もしくはＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。いくつかの実施形態では、このリガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、サイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、インターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、二量体化剤との接触後、ＣＩＳＣを発現する細胞は、哺乳動物細胞などの異種細胞集団から選択的に増幅される。

【0037】

本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、本明細書で説明される構成要素を含むキットまたはシステムに関する。したがって、いくつかの実施形態では、以下：本明細書に記載のタンパク質配列；本明細書に記載の発現ベクター；及び／または本明細書に記載の細胞、のうちの１つ以上を含むキットが提供される。いくつかの実施形態は、以下：本明細書に記載の細胞であって、本明細書に記載のタンパク質配列をコードする核酸を含む、本明細書に記載の発現ベクターをその細胞が含む、細胞の内部へのシグナルを選択的に活性化するためのシステムを包含する。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】Ｔ細胞増幅におけるＩＬ－２シグナル伝達を説明する概略図である。この図は、下流シグナル伝達経路をもたらす、ＦＲＢ－ＣＤ２５β（膜貫通（ＴＭ）ドメイン及び細胞質ドメイン）（ＩＬ２Ｒβ）及びＦＫＢＰ－ＣＤ２５γ（ＴＭ及び細胞質ドメイン）（ＩＬ２Ｒγ）を含むＩＬ－２鎖のキメラ二量体化を示す。重要なことに、細胞外ドメインの大部分または全部の除去は、これらの化学誘導シグナル伝達複合体構成要素へのＩＬ２の結合を妨げ、したがってそれらは内因性ＩＬ２に反応性ではない。

【図2】化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）による細胞増幅戦略を概略的に示す。この戦略では、ラパマイシンが２つの異なるタンパク質モチーフ（ＦＫＢＰ及びＦＲＢ）を同時に結合して、適切にデザインされたＣＩＳＣ構成要素の対でタンパク質の二量体化及び活性な下流のシグナル伝達事象を誘導する能力を利用する。このようにしてＣＩＳＣを使用すると、選択的細胞増幅が可能になる。

【図3】ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ構造の様々な実施形態を示す。図３に示す実施形態は、ＦＲＢ－ＩＬ２Ｒβ及びＦＫＢＰ－ＩＬ２Ｒγの両方の構造を示しており、最大の可塑性（１２１０－本実施形態は、短いリンカー配列を組み込み、その全体は最初がＩＬ２Ｒの細胞外免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインならびにそのＴＭ及び細胞質テール領域である）、中程度の可塑性（１２１１－この実施形態は全体でＩＬ２Ｒの最初の細胞外ＩｇＳＦドメインならびにそのＴＭ及び細胞質テール領域を組み込む）、そして最も可塑性が低い（１２３３－この実施形態は、ＩＬ２Ｒ ＴＭ及び細胞質テール領域のみを組み込む）ものを含む、様々な程度の可塑性についての概略図を示している。

【図4】図４Ａ及び図４Ｂは、ウエスタンブロットの画像を示す。ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、形質導入の２日後に回収し、そして細胞質画分及び膜画分を単離した。上部パネルは、この方法が、サイトゾル及び膜を効率的に分画するために用いられたことを実証するための対照である：上部ゲルはＩＬ２Ｒβを示し；中央のゲルはＩＬ２Ｒγを示し；そして下部の２つのゲルはＣＤ３及びＥＲＫを示す対照ゲルである。図４Ｂは、１２１０、１２１１、及び１２３３を含む、それぞれのＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣについてのウエスタンブロットを示す。矢印は、ＣＩＳＣ構成要素発現の検出を示す。重要なことに、１２３３構造は最高レベルで表現されているように見える。

【図5】ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣについてのウエスタンブロットの画像を示す。ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、１ｎＭでの１５日間のラパマイシン処理後に、続いて４８時間のサイトカイン飢餓によって分析した。ＩＬ－２（５０ｎｇ）またはラパマイシン（１００ｎＭ）で２０分間刺激した後、その細胞をウエスタンブロット用に回収した。ウエスタンブロットはＡｋｔ活性化を示しており、これは化学誘導シグナル伝達複合体が細胞増幅を促進する能力を示している。

【図6】細胞集団を選択的に増幅するためのＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣの使用を実証する実験を概説する。ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣの各構造（すなわち、１２１０、１２１１、及び１２３３）を、２Ａ配列を用いてＧＦＰと一緒にシス連結させ、レンチウイルス発現カセット中のＭＮＤプロモーターの制御下に置いた（図５、下段に図式化されているとおり）。各ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ構造からのレンチウイルス粒子を作製し、これを用いて初代ヒトＴ細胞を形質導入した。形質導入後、その細胞をＩＬ２中で２日間成長させ、次いで半分に分け、示されているように、半分をＩＬ２単独で、及び半分をラパマイシン単独で成長させた。

【図7】図７Ａは、ＧＦＰ単独の発現を駆動するレンチウイルスベクターを用いたＴ細胞の効率的な形質導入を示す。図７Ｂは、ニセの及びＭＮＤ－ＧＦＰレトロウイルスベクターと比較した、図３の下部に概説されるベクター（ＭＮＤ－ＩＬ２Ｒｂ－ＣＩＳＣ－２Ａ－ＩＬ２Ｒｇ－ＣＩＳＣ－２Ａ－ＧＦＰ）を用いて発現された１２１０、１２１１、及び１２３３の発現を示す。Ｔ細胞を、４８時間活性化し、次いで２８時間インキュベートした。Ｔ細胞を、ＩＬ－２／７／１５と共にプレートした。レンチウイルス形質導入は、硫酸プロタミンを用いたＭＮＤ－ＧＦＰ対照のＩＬ２－ＣＩＳＣを含んだ。形質導入細胞を、サイトカイン（ＩＬ－２、５０ｎｇ／ｍＬ；ＩＬ－５、５ｎｇ／ｍＬ；ＩＬ－１７、５ｎｇ／ｍＬ）と共に３７℃で２４時間インキュベートした。ＩＬ２－ＣＩＳＣ発現は、フローサイトメトリーを使用してＧＦＰ発現によって決定した。

【図8】細胞のフロー分析を示す。上のフローパネルは、２日目（細胞をＩＬ２またはラパマイシン培養物に入れる直前）のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現（ＩＬ２Ｒｇ－ＣＩＳＣ構成要素の細胞外ドメイン、Ｙ軸）についての細胞のフロー分析を示す。下の２つのフローパネルは、形質導入の４日後、ＩＬ２単独（上のパネル）、またはラパマイシン（下のパネル）中で培養物に分割した２日後のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現についての細胞のフロー分析を示す。特に１２３３（右下のフローパネル）については、ラパマイシン単独で培養した細胞は、シス連結のＧＦＰマーカーによって読み出されるとおり、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現について富化し始めていることに留意されたい。

【図9】細胞のフロー分析を示す。上の２つのフローパネルは、形質導入の６日後、ＩＬ２単独（上のパネル）、またはラパマイシン（下のパネル）中での培養物への分割の４日後のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現についての細胞のフロー分析を示す。１２３３についてのＧＦＰマーカーのさらなる富化に留意されたい。下の２つのフローパネルは、形質導入の９日後、ＩＬ２単独（上のパネル）またはラパマイシン（下のパネル）での培養物への分割の７日後のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現についての細胞のフロー分析を示す。１２３３ ＧＦＰ＋細胞のさらなる富化に留意のこと。

【図10】細胞のフロー分析を示す。上の２つのフローパネルは、形質導入の１２日後、ＩＬ２単独（上のパネル）、またはラパマイシン（下のパネル）中での培養物の分割の１０日後のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現についての細胞のフロー分析を示す。下の２つのフローパネルは、形質導入の１７日後、ＩＬ２単独（上のパネル）、またはラパマイシン（下のパネル）中の培養物に分割した１５日後のＧＦＰ発現（Ｘ軸）及びＦＲＢ発現についての細胞のフロー分析を示す。１２３３ ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣを発現する細胞は、今や細胞集団の９７％まで富化されている（フローパネルの最も下の右側）。

【図11】図６に概説されているが２５日間実施された実験の１５日間の経過にわたるＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞の富化を示す。一番左の単一パネルは、ラパマイシン処理開始時の細胞を表す。パネルの各段は、異なる処理を表す。下の段に見られるように、１５日までに、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３細胞は、ラパマイシン中で培養した場合に、６４％ｍＣｈｅｒｒｙ陽性～＞９３％ｍＣｈｅｒｒｙ陽性の出発形質導入集団から富化されていた。対照的に、ニセのＩＬ－２処理は、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞の漸進的な減少をもたらした。

【図12】図６に概説したものと同じ実験パラダイムを使用して、ただし２５日間実施した、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞数の増幅を示す。細胞型は、各パネルの左上隅に太字で示されている。異なる記号によって示される各曲線は、２５日間維持された異なる処理／培養条件を描写する。図１２によって、実験の２５日間の経過にわたって、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３を発現する細胞のみが有意なラパマイシン誘導性増幅を示したことが示される。

【図13】図６に概説したものと同じ実験パラダイムを使用するが、３０日間実施し、そして１ｎＭ及び１０ｎＭの２つの異なるラパマイシン用量を利用している、ニセの、ＧＦＰ、またはＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞の増幅を示す。細胞型は、各パネルの左上隅に太字で示されている。異なる記号によって示される各曲線は、実験の過程にわたって維持された、異なる処理／培養条件を描写する。図１３は、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３を発現する細胞が、実験の過程にわたって有意なラパマイシン誘導性増幅を示すこと、及び１ｎＭラパマイシンが最も堅調な細胞増幅を誘発したことを示す。

【図14】各段に示された細胞型（示された条件で２０日間培養した後）について、各列の上部に示された処理に応答したリン酸化ＳＴＡＴ５シグナル伝達の分析を示す。見られるように、「ニセ（ｍｏｃｋ）」処理を受けた細胞（第１段）は、２０日後に本質的に細胞が生存していないので、もはや応答性ではない。対照的に、他の全ての細胞はＩＬ－２処理に強く反応するが、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現細胞のみが、ＳＴＡＴ５のリン酸化を伴うラパマイシンに反応し、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞は、最も強く反応し、Ｖ３構造が最も効率的にシグナル伝達することが確認される。

【図15】ＡＰ２１９６７がＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ活性化リガンドとして使用されたことを除いて、図１１と同一の実験の１５日の経過にわたるＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞の富化を示す。一番左の単一パネルは、ＡＰ２１９６７処理の開始時の細胞を表す。パネルの各列は異なる処理を表す。最下段に見られるように、１５日までに、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３細胞は、ＡＰ２１９６７中で培養した場合、６４％ｍＣｈｅｒｒｙ陽性～＞９３％ｍＣｈｅｒｒｙ陽性の出発形質導入集団から富化された。対照的に、ニセのＩＬ－２処理は、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞の漸進的な減少をもたらした。

【図16】図６に概説したものと同じ実験パラダイムを使用するが、３０日間実施し、そして１０ｎＭ及び１００ｎＭの２つの異なるＡＰ２１９６７用量を使用する、ニセの、ＧＦＰ、またはＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞の増幅を示す。この細胞型は、各パネルの左上隅に太字で示されている。異なる記号によって示される各曲線は、実験の過程にわたって維持された異なる処理／培養条件を描写する。図１６によって、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３を発現する細胞が実験の過程にわたって有意なＡＰ２１９６７誘導性増幅を示すこと、そして１００ｎＭのＡＰ２１９６７が最も強い細胞増幅を誘導したことが実証される。

【図17】図６の実験設定を使用して、指示された条件下で１５日間、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現細胞を増幅させた後の細胞溶解活性を示し、細胞をＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３レンチウイルスで形質導入し、そして１５日間増幅させた。次いで細胞を、抗ＣＤ３を発現するＫ５６２細胞と共にインキュベートした。標的Ｋ５６２細胞による抗ＣＤ３の発現は、Ｋ５６２細胞との接触時にＴ細胞上のＣＤ３のクラスター化を引き起こし、その結果、Ｋ５６２細胞の細胞溶解性の死滅をもたらす。示された条件で増幅させたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３発現Ｔ細胞を、異なる標的対キラー比でインキュベートし、そして細胞溶解を、Ｋ５６２標的化細胞の生存率によって評価した。ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣを介して増幅した細胞は、ＩＬ－２において増幅した細胞と統計的に区別がつかない細胞溶解活性を示した。

【図18】５００ｎｇ／ｍＬの抗ＩＬ－２中和抗体がＩＬ－２中のＴ細胞の増幅を無効にすることを示す。この実験では、末梢血Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて活性化し、ＩＬ－２またはＩＬ－２＋抗ＩＬ２抗体中で増幅させた。抗ＩＬ－２抗体の使用は、Ｔ細胞の増幅を著しく阻害する。

【図19】５００ｎｇ／ｍＬの抗ＩＬ２中和抗体が、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリガンド（ラパマイシンまたはＡＰ２１９６７のいずれか）中で培養されたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現Ｔ細胞の増幅を阻止することができないことを示す。末梢血Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて活性化し、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３レンチウイルスで形質導入し、そして示されたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリガンド＋抗ＩＬ２抗体中で増幅させた。抗ＩＬ－２抗体の使用は、Ｔ細胞の増幅を阻害せず、これは、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣが細胞を自律的に作用させて増幅シグナルを提供することを実証している。

【図20】ＣＩＳＣ Ｖ３増幅細胞についてのＴ細胞マーカー分析であるＦＡＣＳアッセイを示す。末梢血Ｔ細胞を、ＩＬ－２または示されたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリガンドで１５日間増幅させた、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３レンチウイルスで形質導入した抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて活性化した。ＩＬ－２で増幅させた細胞は、ＩＬ－２に応答したＩＬ２Ｒ代謝回転を反映して、一般にＣＤ２５、ＩＬ２Ｒアルファサブユニットの発現が低い。対照的に、低培地のＩＬ－２は天然のＩＬ２Ｒの最小の代謝回転を促進するので、それらのＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ受容体を介して増幅した細胞は高いＣＤ２５発現を有する。

【図21】ＩＬ２Ｒ構成要素と化学的二量体化ドメイン（ＦＲＢ、ＦＫＢＰ）との間のより長いセグメントを有するさらなるＣＩＳＣ構造の試験の概略図を示す。

【図22】より長いＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリンカー構造Ｖ４～Ｖ７を用いてレンチウイルスストックによって形質導入された細胞を処理するためのタイムライン及び実験デザインを示す。

【図23】図２２のより長いＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリンカー構造Ｖ４～Ｖ７を有するレンチウイルスストックの形質導入効率を示す。

【図24】ラパマイシン誘導性増幅が、ＴＭリンカーに対する増幅されたＥＣドメインを有する全てのＣＩＳＣ構造について同様であることを示す。末梢血Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて活性化し、それぞれＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３－Ｖ７レンチウイルスで形質導入し、そして示されたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリガンド中で増幅させた。Ｖ３－Ｖ７ ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ構造は全て、同等の規模のＴ細胞増幅を誘導できた。

【図25】遺伝子標的化Ｔ細胞を富化／増幅するためのＭＮＤプロモーター及びＣＩＳＣの標的化ノックインの概略図を示す。記載された標的化アプローチは、天然ＦＯＸＰ３遺伝子へのＧＦＰ融合により、プロモーター及びＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３の両方の構成要素をインラインでＦＯＸＰ３遺伝子座に組み込む。この構造は、正確な遺伝子標的化事象を受けた細胞のリガンド誘導選択を可能にすることを意図している。

【図26】ＭＮＤプロモーター及びＣＩＳＣの標的化ノックインの実験デザインを示す概略図を示す。これは、図２５からのカセットのＦＯＸＰ３遺伝子座への標的組み込み、続いて示されたＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣリガンド中の遺伝子標的化細胞の増幅を誘導するために、ＣＲＩＳＰ／Ｃａｓ９ヌクレアーゼがどのように使用されるかという実験概略図を表す。

【図27】遺伝子標的化細胞の富化をもたらす、１５日間のラパマイシン接触によるＭＮＤプロモーター及びＣＩＳＣの標的化ノックインの結果を示す。指示されたアプローチ（標的化なし、または図２５に記載のＲＮＰ＋各カセット）を利用してＦＯＸＰ３遺伝子座への標的組み込み後、細胞を指示された条件下で１５日間培養し、次いでフローサイトメトリーによってＧＦＰ－ＦＯＸＰ３発現について分析した。ラパマイシンまたはＡＰ２１９６７での増幅は、ＦＯＸＰ３発現細胞の実質的な富化をもたらし、これは、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣが、ＦＯＸＰ３が過剰発現されるものを含む、遺伝子標的化細胞集団のリガンド誘導富化を促進し得ることを示す。フローパネルは、ラパマイシン中で培養した細胞によるＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ ＧＦＰ－ＦＯＸＰ３発現を表す。

【図28】ラパマイシン＋ＩＬ－２を１５日間接触させた場合の、ＭＮＤプロモーター及びＣＩＳＣの標的化ノックインについての結果を示しており、遺伝子標的化細胞の富化は生じなかった。示されたアプローチを利用したＦＯＸＰ３遺伝子座への標的組み込み後、細胞を、示された条件下で１５日間培養し、次いでＧＦＰ－ＦＯＸＰ３発現についてフローサイトメトリーによって分析した。ラパマイシン＋ＩＬ２の増幅は、未処理細胞に対してＦＯＸＰ３発現細胞の検出可能な富化も、損失も生じず、これは、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣがＦＯＸＰ３過剰発現細胞の機能に有害な影響を及ぼさないことを示している。フローパネルは、ＩＬ－２＋ラパマイシン中で培養した細胞によるＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ ＧＦＰ－ＦＯＸＰ３発現を代表するものである。

【発明を実施するための形態】

【0039】

本明細書に記載されているのは、化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）の組成物、ならびにそれを製造及び使用する方法である。ＣＩＳＣは、細胞内のシグナル伝達経路を介してシグナルを活性化するため、及び細胞を選択的に増幅するために使用され得る。

【0040】

定義
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で引用された全ての特許、出願、公開された出願及び他の刊行物は、特記しない限り、その全体が参照により明示的に組み込まれる。本明細書中の用語について複数の定義がある場合には、特記しない限り、このセクションのものが優先する。

【0041】

本明細書で使用される場合、「１つの、ある（ａまたはａｎ：不定冠詞）」とは、１つまたは２つ以上を意味し得る。

【0042】

「約」とは、本明細書に照らして読まれるとき、その明白かつ通常の意味を有し、例えば測定可能な値を指すときに使用され得、そして規定値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらに好ましくは±１％、さらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味し得る。

【0043】

本明細書中で使用される場合、「タンパク質配列」とは、タンパク質の一次構造であるアミノ酸のポリペプチド配列を指す。本明細書中で使用される場合、「上流」とは、ポリヌクレオチド上の位置の５’位、及びポリペプチド上の位置のＮ末端側の位置を指す。本明細書中で使用される場合、「下流」とは、ヌクレオチド上の位置の３’位、及びポリペプチド上の位置のＣ末端側の位置を指す。したがって、「Ｎ末端」という用語は、ポリペプチド上の位置のＮ末端に向かう、ポリヌクレオチド上のエレメントまたは位置の位置を指す。

【0044】

「核酸」または「核酸分子」とは、ポリヌクレオチド、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成された断片、ならびに連結、切断、エンドヌクレアーゼ作用、及びエキソヌクレアーゼ作用のうちのいずれかによって生成された断片を指す。核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド（ＤＮＡ及びＲＮＡなど）、または天然に存在するヌクレオチドの類似体（例えば、天然に存在するヌクレオチドのエナンチオマー形態）、またはその両方の組み合わせであるモノマーから構成してもよい。修飾ヌクレオチドは糖部分及び／またはピリミジンもしくはプリン塩基部分に変化を有してもよい。糖修飾としては、例えば、ハロゲン、アルキル基、アミン、及びアジド基による１つ以上のヒドロキシル基の置換が挙げられ、または糖をエーテルもしくはエステルとして官能化してもよい。さらに、糖部分全体を、アザ糖及び炭素環式糖類似体などの、立体的及び電子的に類似の構造で置き換えてもよい。塩基部分の修飾の例としては、アルキル化プリン及びピリミジン、アシル化プリンもしくはピリミジン、または他の周知の複素環式置換基が挙げられる。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合またはそのような結合の類似体によって結合されてもよい。ホスホジエステル結合の類似体としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニリデート、ホスホルアミデートなどが挙げられる。「核酸分子」という用語はまた、ポリアミド骨格に結合した天然に存在するかまたは修飾された核酸塩基を含む、いわゆる「ペプチド核酸」も含む。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよい。いくつかの実施形態では、融合タンパク質をコードする核酸配列が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはＤＮＡである。

【0045】

「をコードする」または「コードする」は、本明細書で使用されており、アミノ酸の定義された配列など、他の高分子の合成のための鋳型として役立つ、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡのようなポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の特性を指す。したがって、ある遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞または他の生物学的な系においてタンパク質を産生する場合、そのタンパク質をコードしている。

【0046】

「ポリペプチドをコードする核酸配列」は、互いの縮重型であり、そして同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸が提供され、ここでこの核酸は融合タンパク質をコードする。

【0047】

「ベクター」、「発現ベクター」、または「構築物」とは、細胞内で異種核酸を発現させるための調節エレメントを有する、異種核酸を細胞に導入するために使用される核酸である。ベクターとしては、限定するものではないが、プラスミド、ミニサークル、酵母、及びウイルスゲノムが挙げられる。いくつかの実施形態では、このベクターはプラスミド、ミニサークル、酵母、またはウイルスゲノムである。いくつかの実施形態では、このベクターはウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスである。いくつかの実施形態では、このベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態では、このベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌系におけるタンパク質発現用である。本明細書中で使用される場合、「発現」または「タンパク質発現」という用語は、転写されたＲＮＡ分子のタンパク質分子への翻訳を指す。タンパク質発現は、その一時的、空間的、発生的、または形態学的性質によって、ならびに定量的または定性的指標によって特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、タンパク質（複数可）は、リガンドの存在下でタンパク質が二量体化のために配置されるように発現される。

【0048】

本明細書中で使用される場合、「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」とは、もともと別々のタンパク質またはタンパク質の一部をコードしていた２つ以上の遺伝子の連結を通して生成されたタンパク質である。融合タンパク質はまた、２つ以上の別々のタンパク質由来の特定のタンパク質ドメインから構成され得る。この融合遺伝子の翻訳は、もとのタンパク質の各々に由来する機能的特性を有する単一または複数のポリペプチドをもたらし得る。組換え融合タンパク質は、生物学的研究または治療に使用するための組換えＤＮＡ技術によって人工的に作製され得る。融合タンパク質を作製するためのそのような方法は、当業者に公知である。いくつかの融合タンパク質は、全ペプチドを組み合わせており、したがって元のタンパク質の全てのドメイン、特に機能的ドメインを含み得る。しかしながら、他の融合タンパク質、特に天然に存在しないタンパク質は、コード配列の一部のみを組み合わせ、したがって、それらを形成した親遺伝子の本来の機能を維持しない。いくつかの実施形態では、融合タンパク質が提供され、ここでこの融合タンパク質はインターフェロン及びＰＤ－１タンパク質を含む。

【0049】

本明細書中で使用される場合、「調節エレメント」という用語は、遺伝子調節活性を有するＤＮＡ分子、例えば作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ分子の転写及び／または翻訳に影響を及ぼす能力を有するものを指す。プロモーター、リーダー、イントロン、及び転写終結領域などの調節エレメントは、遺伝子調節活性を有し、生細胞における遺伝子の全体的発現において不可欠な役割を果たすＤＮＡ分子である。したがって、植物において機能するプロモーターなどの単離された調節エレメントは、遺伝子工学の方法を通して植物の表現型を改変するのに有用である。

【0050】

本明細書中で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、第２の分子に結合した第１の分子であって、ここでこの分子は、第１の分子が第２の分子の機能に影響を及ぼすように配置されている分子を指す。２つの分子は、単一の隣接分子の一部であってもよく、そして隣接されてもよい。例えば、プロモーターが細胞内の目的の転写可能なＤＮＡ分子の転写を調節する場合、そのプロモーターは転写可能なＤＮＡ分子に作動可能に連結されている。

【0051】

「プロモーター」とは、特定の遺伝子の転写を開始するＤＮＡの領域である。プロモーターは、遺伝子の転写開始部位の近く、同じ鎖上、及びＤＮＡの上流（センス鎖の５’領域）に配置されてもよい。プロモーターは、条件付きプロモーター、誘導性プロモーター、または構成的プロモーターであってもよい。プロモーターは、細菌、哺乳動物または昆虫細胞タンパク質発現に特異的であり得る。融合タンパク質をコードする核酸が提供されるいくつかの実施形態では、核酸はさらにプロモーター配列を含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは細菌、哺乳動物または昆虫細胞タンパク質発現に特異的である。いくつかの実施形態では、このプロモーターは、条件付きプロモーター、誘導性プロモーター、または構成的プロモーターである。

【0052】

本明細書で使用される「条件付き」または「誘導性」とは、インデューサーの存在下で遺伝子発現を提供し、インデューサーの非存在下で遺伝子発現を実質的に提供しないプロモーターを含む核酸構築物を指す。

【0053】

本明細書で使用される「構成的」とは、構成的であり、したがって連続的に産生されるポリペプチドの発現をもたらすプロモーターを含む核酸構築物を指す。

【0054】

いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、低レベルの基礎活性を有する。レンチウイルスベクターが使用されるいくつかの実施形態では、非誘導細胞における基礎活性のレベルは、細胞が遺伝子を発現するように誘導されるときと比較して、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％以下（しかしゼロではない）であるか、または前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲内にある。基礎活性のレベルは、フローサイトメトリーを用いてインデューサー（例えば薬物）の非存在下で導入遺伝子（例えばマーカー遺伝子）の発現量を測定することによって決定され得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、Ａｋｔなどのマーカータンパク質が、発現の決定に使用される。

【0055】

いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、非誘導または基礎活性と比較して、高レベルの誘導活性を提供する。いくつかの実施形態では、誘導状態における活性のレベルは、非誘導状態における活性のレベルの２、４、６、８、９もしくは１０倍以上であるか、または前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲内である。いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターの制御下での導入遺伝子発現は、トランスアクチベーターの非存在下で、１０、８、６、４、２、もしくは１日未満（０日を除く）または前述の期間のうちいずれか２つによって定義される範囲内で停止される。

【0056】

いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、低レベルの基礎活性、高レベルの誘導性、及び／または短時間（可逆性のため）を提供するようにデザイン及び／または改変される。

【0057】

「二量体化学誘導シグナル伝達複合体」、「二量体ＣＩＳＣ」、または「二量体」とは、本明細書で使用される場合、互いに結合する融合タンパク質複合体であってもなくてもよい、ＣＩＳＣの２つの構成要素を指す。「二量体化」とは、２つの別々の実体を単一の実体に結合するプロセスを指す。いくつかの実施形態では、リガンドまたは因子は、二量体化を刺激する。いくつかの実施形態では、二量体化は、ホモ二量体化、または２つの同一の実体、例えば２つの同一のＣＩＳＣ構成要素の結合を指す。いくつかの実施形態では、二量体化とは、２つの異なりかつ別個のＣＩＳＣ構成要素などの２つの異なる実体の結合というヘテロ二量体化を指す。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣ構成要素の二量体化は、細胞シグナル伝達経路をもたらす。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣ構成要素の二量体化は、細胞または細胞集団の選択的増幅を可能にする。追加のＣＩＳＣシステムは、ＣＩＳＣジベレリンＣＩＳＣ二量体化システム、またはＳＬＦ－ＴＭＰ ＣＩＳＣ二量体化システムを含み得る。他の化学的に誘導可能な二量体化（ＣＩＤ）システム及び構成要素パーツを使用してもよい。

【0058】

本明細書中で使用される場合、「化学誘導シグナル伝達複合体」または「ＣＩＳＣ」とは、リガンド誘導二量体化の直接の結果として細胞の内部へのシグナルを開始する操作された複合体を指す。ＣＩＳＣとは、ホモ二量体（２つの同一構成要素の二量体化）であっても、またはヘテロ二量体（２つの異なる構成要素の二量体化）であってもよい。したがって、本明細書中で使用される場合、「ホモ二量体」という用語は、同一のアミノ酸配列を有する本明細書中に記載される２つのタンパク質構成要素の二量体を指す。「ヘテロ二量体」という用語は、同一ではないアミノ酸配列を有する本明細書に記載の２つのタンパク質構成要素の二量体を指す。

【0059】

ＣＩＳＣは、本明細書にさらに詳細に記載されているような合成複合体であってもよい。本明細書で使用される「合成の」とは、天然ではないか、または天然には見られない、本明細書に記載の複合体、タンパク質、二量体、または組成物を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣとは、インターロイキン－２受容体構成要素を含むシグナル伝達複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ２／１５－ＣＩＳＣは、インターロイキン－２及びインターロイキン－１５によって共有されている受容体シグナル伝達サブユニットを含むシグナル伝達複合体を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ７－ＣＩＳＣは、インターロイキン－７受容体構成要素を含むシグナル伝達複合体を指す。したがって、ＣＩＳＣは、所与のＣＩＳＣの構成要素を構成する構成要素部分に従って呼ばれてもよい。当業者は、化学誘導シグナル伝達複合体の構成要素部分が、ＣＩＳＣへの組み込みに有用な天然または合成の構成要素から構成され得ることを認識するであろう。したがって、本明細書に提供される実施例は限定的であることを意図しない。

【0060】

本明細書中で使用される場合、「サイトカイン受容体」とは、サイトカインを認識してそれに結合する受容体分子を指す。いくつかの実施形態では、サイトカイン受容体は、サイトカイン受容体アミノ酸及び／または核酸配列への置換、欠失、及び／または付加を有するものを含む、修飾サイトカイン受容体分子（例えば「バリアントサイトカイン受容体」）を包含する。したがって、サイトカイン受容体とは、野生型ならびに組換え型、合成的に産生された、及びバリアントサイトカイン受容体を包含することが意図されている。いくつかの実施形態では、サイトカイン受容体は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、受容体の構成要素（すなわち、受容体のドメイン）は、天然または合成のものである。いくつかの実施形態では、ドメインは、ヒト由来ドメインである。

【0061】

本明細書で使用される「ＦＫＢＰ」とは、ＦＫ５０６結合タンパク質ドメインである。ＦＫＢＰとは、アミノ酸配列ではないが、プロリルイソメラーゼ活性を有し、そして機能においてシクロフィリンに関連するタンパク質のファミリーを指す。ＦＫＢＰは酵母からヒトまでの多くの真核生物において同定されており、そしてプロリン残基を含有するタンパク質のためのタンパク質フォールディングシャペロンとして機能する。シクロフィリンと共に、ＦＫＢＰは、イムノフィリンファミリーに属する。用語ＦＫＢＰは、例えば、ＦＫＢＰ１２ならびに、遺伝子ＡＩＰ；ＡＩＰＬ１；ＦＫＢＰ１Ａ；ＦＫＢＰ１Ｂ；ＦＫＢＰ２；ＦＫＢＰ３；ＦＫＢＰ５；ＦＫＢＰ６；ＦＫＢＰ７；ＦＫＢＰ８；ＦＫＢＰ９；ＦＫＢＰ９Ｌ；ＦＫＢＰ１０；ＦＫＢＰ１１；ＦＫＢＰ１４；ＦＫＢＰ１５；ＦＫＢＰ５２；及び／またはＬＯＣ５４１４７３によってコードされるタンパク質（それらの同族体及びそれらの機能的タンパク質断片を含む）を包含する。

【0062】

本明細書で使用される「ＦＲＢ」とは、ＦＫＢＰラパマイシン結合ドメインである。ＦＲＢドメインは、ＦＫＢＰタンパク質及びラパマイシンまたはそのラパログとの三者複合体を形成するように構成されているポリペプチド領域（タンパク質「ドメイン」）である。ＦＲＢドメインは、ヒト及び他の種由来のｍＴＯＲタンパク質（文献中でＦＲＡＰ、ＲＡＰＴ１、またはＲＡＦＴとも呼ばれる）；Ｔｏｒ１及び／またはＴｏｒ２を含む酵母タンパク質；ならびにＣａｎｄｉｄａ ＦＲＡＰ相同体を含む、多数の天然に存在するタンパク質に存在する。ＦＫＢＰ及びＦＲＢは両方とも、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）シグナル伝達の哺乳動物標的における主要構成要素である。

【0063】

セレブロンは、損傷したＤＮＡ結合タンパク質１と相互作用し、Ｃｕｌｌｉｎ４とＥ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成し、そこでセレブロンによって認識されるタンパク質がユビキチン化され、プロテアソームによって分解され得る基質受容体として機能する。不要なまたは損傷したタンパク質のプロテアソーム媒介分解は、細胞の生存、増殖及び／または成長などの細胞の調節機能を維持するのに極めて重要な役割を果たす。セレブロンに対する、免疫調節イミド薬（ＩＭＩＤ）、例えば、サリドマイドの結合は、催奇形性、さらにレナリドマイドを含むＩＭＩＤの細胞毒性とも関連している。セレブロンは、骨髄腫細胞の機能維持に関与する因子の結合、ユビキチン化、及び分解において重要な役割がある。

【0064】

「セレブロンサリドマイド結合ドメイン」とは、例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイド、アプレミラスト、または関連類似体を含む、ＩＭＩＤと相互作用する細胞外結合ドメインである結合ドメインを指す。本明細書に提供されるいくつかの実施形態は、セレブロンサリドマイド結合ドメイン類似体またはそれらの変異体を利用する。いくつかの実施形態では、これらの細胞外結合ドメインは、同時にＩＭＩＤリガンドに結合するように構成される。

【0065】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のアプローチで使用される免疫調節イミド薬は、以下を含んでもよい：

【0066】

サリドマイド（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。サリドマイドは、イムノプリン（Ｉｍｍｕｎｏｐｒｉｎ）、タロミド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ）、タリデックス（Ｔａｌｉｄｅｘ）、タライザー（Ｔａｌｉｚｅｒ）、ニューロセジン（Ｎｅｕｒｏｓｅｄｙｎ）、α－（Ｎ－フタルイミド）グルタルイミド、２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１，３－ジオンを含み得る）；

【0067】

ポマリドマイド（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ポマリドマイドは、ポマリスト（Ｐｏｍａｌｙｓｔ）、イムノビド（Ｉｍｎｏｖｉｄ）、（ＲＳ）－４－アミノ－２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドール－１，３－ジオンを含み得る）；

【0068】

レナリドマイド（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。レナリドマイドは、レブリミド、（ＲＳ）－３－（４－アミノ－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオンを含み得る）；または

【0069】

アプレミラスト（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。アプレミラスト（Ａｐｒｅｍｉｌａｓｔ）は、オテラ（Ｏｔｅｚｌａ）、ＣＣ－１０００４、Ｎ－｛２－［（１Ｓ）－１－（３－エトキシ－４－メトキシフェニル）－２－メチルスルホニル）エチル］－１，３－ジオキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－４－イル｝アセトアミドを含み得る）；

【0070】

またはその任意の組み合わせ。

【0071】

本明細書中で使用される場合、「細胞外結合ドメイン」という用語は、細胞の外側にあり、そして特定の原子または分子に結合するように構成されている複合体のドメインを指す。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣの細胞外結合ドメインは、ＦＫＢＰドメインまたはその一部である。いくつかの実施形態では、この細胞外結合ドメインはＦＲＢドメインまたはその一部である。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、リガンドまたは因子を結合し、それによって２つのＣＩＳＣ構成要素の二量体化を刺激するように構成される。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、サイトカイン受容体モジュレーターに結合するように構成されている。

【0072】

本明細書で使用される場合、「サイトカイン受容体モジュレーター」という用語は、サイトカイン受容体の下流標的のリン酸化、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、及び／またはサイトカインなどの特定のタンパク質の発現を調節する因子を指す。そのような因子は、サイトカイン受容体の下流標的のリン酸化、サイトカイン受容体に関連するシグナル伝達経路の活性化、及び／またはサイトカインなどの特定のタンパク質の発現を直接的または間接的に調節し得る。したがって、サイトカイン受容体モジュレーターの例としては、限定するものではないが、サイトカイン、サイトカインの断片、融合タンパク質及び／またはサイトカイン受容体もしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体もしくはその結合部分が挙げられる。さらに、サイトカイン受容体モジュレーターの例としては、限定するものではないが、サイトカイン、またはその断片に免疫特異的に結合するペプチド、ポリペプチド（例えば可溶性サイトカイン受容体）、融合タンパク質及び／または抗体もしくはそれらの結合部分が挙げられる。

【0073】

本明細書中で使用される場合、「活性化する」という用語は、目的のタンパク質の少なくとも１つの生物学的活性の増大を指す。同様に、「活性化」という用語は、活性が増大した状態にある目的のタンパク質の状態を指す。「活性化可能」という用語は、シグナル、因子、リガンド、化合物、または刺激の存在下で目的のタンパク質が活性化される能力を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二量体は、シグナル、因子、リガンド、化合物、または刺激の存在下で活性化され、シグナル伝達コンピテント二量体になる。本明細書中で使用される場合、「シグナル伝達コンピテント」という用語は、下流のシグナル伝達経路を開始または持続させることができるようにするための二量体の能力または立体配置を指す。

【0074】

本明細書で使用される場合、「ヒンジドメイン」という用語は、細胞外結合ドメインを膜貫通ドメインに連結し、そして細胞外結合ドメインに可塑性を付与し得るドメインを指す。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、細胞外ドメインを原形質膜の近くに配置して、抗体またはその結合断片による認識の可能性を最小限にする。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒンジドメインのＮ末端に位置する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは天然のものであっても合成のものであってもよい。

【0075】

本明細書中で使用される場合、「膜貫通ドメイン」または「ＴＭドメイン」という用語は、細胞膜内などの膜内で安定であるドメインを指す。「膜貫通スパン」、「内在性タンパク質」、及び「内在性ドメイン」という用語もまた本明細書で使用される。いくつかの実施形態では、ヒンジドメイン及び細胞外ドメインは、膜貫通ドメインのＮ末端に位置する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、天然または合成ドメインである。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＬ－２膜貫通ドメインである。

【0076】

本明細書で使用される場合、「シグナル伝達ドメイン」という用語は、哺乳動物細胞などの細胞内のシグナル伝達カスケードに関与する融合タンパク質またはＣＩＳＣ構成要素のドメインを指す。シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞などの細胞に、例えばＴＣＲ／ＣＤ３複合体のＣＤ３ゼータ鎖によって提供される一次シグナルに加えて、Ｔ細胞応答のような細胞応答（活性化、増殖、分化、及び／またはサイトカイン分泌を含むがこれらに限定されない）を媒介するシグナルを提供するシグナル伝達部分を指す。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン、及び細胞外ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、合成ドメインまたは天然ドメインである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、連結細胞質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、サイトカインシグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、抗原シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、インターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２ＲγまたはＩＬ２Ｒｇ）ドメインである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、インターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２ＲβまたはＩＬ２Ｒｂ）ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインへの因子またはリガンドの結合は、ＣＩＳＣ構成要素の二量体化の結果として、シグナル伝達経路の活性化によってシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達を引き起こす。本明細書中で使用される場合、「シグナル伝達」という用語は、細胞外ドメインに結合するリガンドまたは因子によるシグナル伝達経路の活性化を指す。シグナルの活性化は、細胞外ドメインのリガンドまたは因子への結合の結果であり、ＣＩＳＣ二量体化をもたらす。

【0077】

本明細書で使用される場合、「ＩＬ２Ｒｂ」または「ＩＬ２Ｒβ」という用語は、インターロイキン－２受容体サブユニットベータを指す。同様に、「ＩＬ２Ｒｇ」または「ＩＬ２Ｒγ」という用語はインターロイキン－２受容体サブユニットガンマを指し、そして「ＩＬ２Ｒａ」または「ＩＬ２Ｒα」という用語はインターロイキン－２受容体サブユニットアルファを指す。ＩＬ－２受容体は、３つの形態、または鎖、アルファ、ベータ、及びガンマを有し、これらはまた、他のサイトカインに対する受容体のサブユニットでもある。ＩＬ２Ｒβ及びＩＬ２Ｒγは、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーのメンバーである。本明細書で使用される「ＩＬ２Ｒ」とは、Ｔ細胞媒介免疫応答に関与しているインターロイキン－２受容体を指す。ＩＬ２Ｒは、インターロイキン２からの分裂促進シグナルの受容体媒介エンドサイトーシス及び伝達に関与している。同様に、「ＩＬ－２／１５Ｒ」という用語は、ＩＬ－２及びＩＬ－１５によって共有される受容体シグナル伝達サブユニットを指し、サブユニットアルファ（ＩＬ２／１５ＲａまたはＩＬ２／１５Ｒα）、ベータ（ＩＬ２／１５ＲｂまたはＩＬ２／１５Ｒβ）、またはガンマ（ＩＬ２／１５ＲｇまたはＩＬ２／１５Ｒγ）を含み得る。

【0078】

いくつかの実施形態では、化学誘導シグナル伝達複合体とは、２つの構成要素を含むヘテロ二量体化活性化シグナル伝達複合体である。いくつかの実施形態では、第１の構成要素は、ヘテロ二量体化対の一部である細胞外結合ドメイン、任意のヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第２の構成要素は、ヘテロ二量体化対の他の部分である細胞外結合ドメイン、任意のヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む。したがって、いくつかの実施形態では、２つの異なる修正事象がある。いくつかの実施形態では、２つのＣＩＳＣ構成要素は、哺乳動物細胞などの細胞内で発現される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞、または哺乳動物細胞集団などの細胞集団を、ヘテロ二量体化を引き起こすリガンドまたは因子と接触させ、それによってシグナルを開始する。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化対が二量体化し、それによって単一のＣＩＳＣ構成要素が哺乳動物細胞などの細胞中で発現され、そしてＣＩＳＣ構成要素がホモ二量体化してシグナルを開始する。

【0079】

本明細書中で使用される場合、「リガンド」または「因子（ａｇｅｎｔ）」という用語は、所望の生物学的効果を有する分子を指す。いくつかの実施形態では、リガンドは、細胞外結合ドメインによって認識され、それによって結合され、リガンドと２つの結合ＣＩＳＣ構成要素とを含む三部複合体を形成する。リガンドとしては、限定するものではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、翻訳後修飾タンパク質、抗体、それらの結合部分を含むタンパク質性分子；小分子（１０００ダルトン未満）、無機化合物または有機化合物；ならびに二本鎖もしくは一本鎖ＤＮＡ、または二本鎖もしくは一本鎖ＲＮＡ（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉなど）、アプタマー、ならびに三重らせん核酸分子を含むがこれらに限定されない核酸分子が挙げられる。リガンドは、任意の公知の生物（動物（例えば、哺乳動物（ヒト及び非ヒト哺乳動物））、植物、細菌、真菌、及び原生生物、またはウイルスを含むがこれらに限定されない）または合成分子のライブラリーに由来してもよいし、またはそれから得られてもよい。いくつかの実施形態では、リガンドは、タンパク質、抗体またはその一部、小分子、または薬物である。いくつかの実施形態では、リガンドはラパマイシンまたはラパマイシン類似体（ラパログ）である。いくつかの実施形態では、ラパログは、ラパマイシンに対して以下の修飾のうちの１つ以上を有するラパマイシンのバリアントを含む：Ｃ７、Ｃ４２及び／またはＣ２９でのメトキシの脱メチル化、除去または置換；Ｃ１３、Ｃ４３及び／またはＣ２８でのヒドロキシの除去、誘導体化または置換；Ｃ１４、Ｃ２４及び／またはＣ３０でのケトンの還元、除去または誘導体化；５員のプロリル環による６員のピペコレート環の置換；ならびにシクロヘキシル環上の別の置換または置換シクロペンチル環によるシクロヘキシル環の置換。したがって、いくつかの実施形態では、ラパログは、エベロリムス、メリリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、ゾタロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ２３５７３、もしくはＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。

【0080】

したがって、いくつかの実施形態では、シグナル伝達複合体の化学的誘導のために本明細書に記載のアプローチで使用されるリガンドまたは因子は、以下を含み得る：

【0081】

ラパマイシン（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ラパマイシンは、シロリムス、ラパムネ（Ｒａｐａｍｕｎｅ）（３Ｓ，６Ｒ，７Ｅ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１４Ｓ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ，２１Ｓ，２３Ｓ，２６Ｒ，２７Ｒ，３４ａＳ）－９，１０，１２，１３，１４，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ－ヘキサデカヒドロ－９，２７－ジヒドロキシ－３－［（１Ｒ）－２－［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－３－メトキシシクロヘキシル］－１－メチルエチル］－１０，２１－ジメトキシ－６，８，１２，１４，２０，２６－ヘキサメチル－２３，２７－エポキシ－３Ｈ－ピリド［２，１－ｃ］［１，４］オキサアザシクロヘントリアコンチン－１，５，１１，２８，２９（４Ｈ，６Ｈ，３１Ｈ）－ペントンを含み得る）；

【0082】

エベロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。エベロリムスは、ＲＡＤ００１、ゾートレス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ）、セルチカン（Ｃｅｒｔｉｃａｎ）、アフィニトール（Ａｆｉｎｉｔｏｒ）、Ｖｏｔｕｂｉａ、４２－Ｏ－（２－ヒドロキシエチル）ラパマイシン、（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｅ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１２－［（２Ｒ）－１－［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－（２－ヒドロキシエトキシ）－３－メトキシシクロヘキシル］プロパン－２－イル］－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０^４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－２，３，１０，１４，２０－ペントンを含み得る）；

【0083】

メリリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。メリリムスは、ＳＡＲ９４３、４２－Ｏ－（テトラヒドロフラン－３－イル）ラパマイシン（メリリムス－１）；４２－Ｏ－（オキセタン－３－イル）ラパマイシン（メリリムス－２）、４２－Ｏ－（テトラヒドロピラン－３－イル）ラパマイシン（メリリムス－３）、４２－Ｏ－（４－メチル、テトラヒドロフラン－３－イル）ラパマイシン、４２－Ｏ－（２，５，５－トリメチル、テトラヒドロフラン－３－イル）ラパマイシン、４２－Ｏ－（２，５－ジエチル－２－メチル、テトラヒドロフラン－３－イル）ラパマイシン、４２－Ｏ－（２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－６－メトキシ－２－メチル）ラパマイシン、または４２－Ｏ－（２Ｈ－ピラン－３－イル、テトラヒドロ－２，２－ジメチル－６－フェニル）ラパマイシンを含み得る）；

【0084】

ノボリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ノボリムスは、１６－Ｏ－デメチルラパマイシンを含み得る）；

【0085】

ピメクロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ピメクロリムスは、エリデル（Ｅｌｉｄｅｌ）、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｅ，１２Ｓ，１４Ｓ，１５Ｒ，１６Ｓ，１８Ｒ，１９Ｒ，２６ａＳ）－３－（（Ｅ）－２－（（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）－４－クロロ－３－メトキシシクロヘキシル）－１－メチルビニル）－８－エチル５，６，８，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２４，２６，２６ａヘキサデカヒドロ－５，１９－エポキシ－３Ｈ－ピリド（２，１－ｃ）（１，４）オキサアザシクロトリコシン－１，１７，２０，２１（４Ｈ，２３Ｈ）－テトロン３３－エピ－クロロ－３３－デスオキシアスコマイシンを含み得る）；

【0086】

リダフォロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。リダフォロリムスは、ＡＰ２３５７３、ＭＫ－８６６９、デフォロリムス、（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｅ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１２－（（１Ｒ）－２－（（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－（（ジメチルホスフィノイル）オキシ）－３－メトキシシクロヘキシル）－１－メチルエチル）－１，１８）－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ（３０．３．１．０４，９）ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－２，３，１０，１４，２０－ペントンを含み得る）；

【0087】

タクロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。タクロリムスは、ＦＫ－５０６、フジマイシン、プログラフ（Ｐｒｏｇｒａｆ）、アドバグラフ（Ａｄｖａｇｒａｆ）、プロトピック（ｐｒｏｔｏｐｉｃ）、３Ｓ－［３Ｒ＊［Ｅ（１Ｓ＊，３Ｓ＊，４Ｓ＊）］，４Ｓ＊，５Ｒ＊，８Ｓ＊，９Ｅ，１２Ｒ＊，１４Ｒ＊，１５Ｓ＊，１６Ｒ＊，１８Ｓ＊，１９Ｓ＊，２６ａＲ＊，５，６，８，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２４，２５，２６，２６ａ－ヘキサデカヒドロ－５，１９－ジヒドロキシ－３－［２－（４－ヒドロキシ－３－メトキシシクロヘキシル）－１－メチルエテニル］－１４，１６－ジメトキシ－４，１０，１２，１８－テトラメチル－８－（２－プロペニル）－１５，１９－エポキシ－３Ｈ－ピリド［２，１－ｃ］［１，４］オキサアザシクロトリコシン－１，７，２０，２１（４Ｈ，２３Ｈ）－テトロン、一水和物を含み得る）；

【0088】

テムシロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。テムシロリムスは、ＣＣＩ－７７９、ＣＣＬ－７７９、トリセル（Ｔｏｒｉｓｅｌ）、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－｛（２Ｒ）－２－［（３Ｓ，６Ｒ，７Ｅ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１４Ｓ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ，２１Ｓ，２３Ｓ，２６Ｒ，２７Ｒ，３４ａＳ）－９，２７－ジヒドロキシ－１０，２１－ジメトキシ－６，８，１２，１４，２０，２６－ヘキサメチル－１，５，１１，２８，２９－ペンタオキソ－１，４，５，６，９，１０，１１，１２，１３，１４，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３１，３２，３３，３４，３４ａ－テトラコサヒドロ－３Ｈ－２３，２７－エポキシピリド［２，１－ｃ］［１，４］オキサアザシクロヘントリアコンチン－３－イル］プロピル｝－２－メトキシシクロヘキシル３－ヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）－２－メチルプロパノエートを含み得る）；

【0089】

ウミロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ウミロリムスは、ビオリムス（Ｂｉｏｌｉｍｕｓ）、ビオリムスＡ９、ＢＡ９、ＴＲＭ－９８６、４２－Ｏ－（２－エトキシエチル）ラパマイシンを含み得る）；

【0090】

ゾタロリムス（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ゾタロリムスは、ＡＢＴ－５７８、（４２Ｓ）－４２－デオキシ－４２－（１Ｈ－テトラゾール－１－イル）－ラパマイシンを含み得る）；

【0091】

Ｃ２０－メタリルラパマイシン（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。Ｃ２０－メタリルラパマイシンは、Ｃ２０－Ｍａｒａｐを含み得る）；

【0092】

Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン（類似体、誘導体を含み五、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン）は、Ｃ１６－ｉＲａｐを含み得る）；

【0093】

ＡＰ２１９６７（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ＡＰ２１９６７は、Ｃ－１６－（Ｓ）－７－メチルインドールラパマイシンを含み得る）；

【0094】

ミコフェノール酸ナトリウム（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ミコフェノール酸ナトリウムは、セルセプト（ＣｅｌｌＣｅｐｔ、）Ｍｙｆｏｒｔｉｃ、（４Ｅ）－６－（４－ヒドロキシ－６－メトキシ－７－メチル－３－オキソ）－１，３－ジヒドロ－２－ベンゾフラン－５－イル）－４－メチルヘキサ－４－エン酸を含み得る）；

【0095】

塩酸ベニジピン（その類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。塩酸ベニジピンは、ベニジピナム（Ｂｅｎｉｄｉｐｉｎｕｍ）、コニエル（Ｃｏｎｉｅｌ）を含み得る）；または

【0096】

ＡＰ１９０３（類似体、誘導体を含み、及びそれらの薬学的に許容される塩を含む。ＡＰ１９０３は、リミドシド（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）、［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）－１－［３－［２－［２－［［２－［３－［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）－１－［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブタノイル］ピペリジン－２－カルボニル］オキシプロピル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］フェニル］プロピル］（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブタノイル］ピペリジン－２－カルボキシレートを含み得る）；

【0097】

またはその任意の組み合わせ。

【0098】

本明細書で使用される場合、「ジベレリン」という用語は、プラスチド中のテルペノイド経路によって合成され、次いでそれらがそれらの生物学的に活性な形態に達するまで小胞体及びサイトゾル中で修飾される、合成または天然に存在するジテルペノイド酸を指す。ジベレリンは、天然ジベレリンまたはその類似体、例えばｅｎｔ－ジベレラ骨格に由来するジベレリン、またはｅｎｔ－ｋａｕｒｅｎを介して合成されたジベレリンであってもよく、これには、ジベレリン１（ＧＡ１）、ＧＡ２、ＧＡ３．．．ＧＡ１３６、ならびにその類似体及び誘導体を含む。いくつかの実施形態では、ジベレリンまたはその類似体もしくは誘導体は、ＣＩＳＣ二量体化に利用される。

【0099】

本明細書中で使用される場合、「ＳＬＦ－ＴＭＰ」または「トリメトプリムに結合したＦＫＢＰの合成リガンド」とは、ＣＩＳＣ二量体化のための二量体化剤を指す。いくつかの実施形態では、ＳＬＦ部分は、第１のＣＩＳＣ構成要素に結合し、ＴＭＰ部分は第２のＣＩＳＣ構成要素に結合し、ＣＩＳＣ二量体化を引き起こす。いくつかの実施形態では、ＳＬＦは、例えばＦＫＢＰに結合し得、ＴＭＰは、Ｅ．ｃｏｌｉジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｅＤＨＦＲ）に結合し得る。

【0100】

本明細書で使用される場合、「同時結合」という用語は、同時にまたは場合によっては実質的に同時に２つ以上のＣＩＳＣ構成要素によるリガンドの結合を指し、ＣＩＳＣ構成要素及びリガンド構成要素を含む多構成要素複合体を形成し、その後のシグナル活性化をもたらす。同時結合は、ＣＩＳＣ構成要素が単一のリガンドに結合するように空間的に構成されること、そして両方のＣＩＳＣ構成要素が同じリガンド上の異なる部分を含む同じリガンドに結合するように構成されることを必要とする。

【0101】

本明細書中で使用される場合、「選択的増幅」という用語は、哺乳動物細胞のような所望の細胞、または哺乳動物細胞集団のような所望の細胞集団が増幅する能力を指す。いくつかの実施形態では、選択的増幅は、哺乳動物細胞などの２つの遺伝子改変事象を受けた純粋な細胞集団の生成または増幅を指す。二量体化ＣＩＳＣの一方の構成要素は、一方の修飾の一部であり、他方の構成要素は、他方の修飾である。したがって、ヘテロ二量体化ＣＩＳＣの一構成要素は、各遺伝子改変と関連している。細胞のリガンドへの曝露によって、両方の所望の修飾を有する哺乳動物細胞などの細胞のみの選択的増幅が可能になる。したがって、いくつかの実施形態では、リガンドとの接触に応答することができる唯一の細胞、例えば哺乳動物細胞は、ヘテロ二量体化ＣＩＳＣの両方の構成要素を発現する細胞である。

【0102】

本明細書中で使用される場合、「宿主細胞」は、核酸構築物またはベクターによる形質転換、トランスフェクション、または形質導入を受けやすい任意の細胞型、例えば哺乳動物細胞を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの宿主細胞は、Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの宿主細胞は、造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。本明細書中で使用される場合、「細胞集団」という用語は、複数の細胞を含む、哺乳動物細胞などの細胞の群を指す。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞が製造され、その細胞は本明細書に記載のタンパク質配列または本明細書に記載のタンパク質配列をコードする発現ベクターを含む。

【0103】

本明細書中で使用される場合、「形質転換された」または「トランスフェクトされた」という用語は、構築物などの外来ポリヌクレオチド分子が導入された哺乳動物細胞などの細胞、組織、器官または生物を指す。導入されたポリヌクレオチド分子は、導入されたポリヌクレオチド分子がその後の子孫によって受け継がれるように、哺乳動物細胞などのレシピエント細胞、組織、器官、または生物のゲノムＤＮＡに組み込まれてもよい。哺乳動物細胞などの「トランスジェニック」または「トランスフェクトされた」細胞、または生物体とはまた、その細胞または生物の子孫、及びそのようなトランスジェニック生物を親として交配で用い、及び外来ポリヌクレオチド分子の存在から生じる改変表現型を示す、育種プログラムから産生される子孫も含む。「トランスジェニック」という用語は、１つ以上の異種ポリ核酸分子を含む細菌、真菌、または植物を指す。「形質導入」とは、哺乳動物細胞などの細胞へのウイルス媒介遺伝子導入を指す。

【0104】

本明細書中で使用される場合、「対象」とは、処置、観察または実験の対象である動物を指す。「動物」は、冷血及び温血の脊椎動物ならびに無脊椎動物、例えば、魚、貝、爬虫類、特に哺乳動物を含む。「哺乳動物」は、限定するものではないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、霊長類、例えば、サル、チンパンジー、及び類人猿、特にヒトを含む。いくつかの代替例において、対象はヒトである。

【0105】

いくつかの実施形態では、二量体化を誘導するために使用されるリガンドの有効量は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｎＭの量、または上述の値のいずれか２つによって定義される範囲内の濃度である。

【0106】

本明細書に記載の「マーカー配列」は、目的のタンパク質を有するタンパク質または細胞、例えば、哺乳動物細胞を選択または追跡するために使用されるタンパク質をコードする。本明細書中に記載される実施形態では、提供される融合タンパク質は、フローサイトメトリーなどの実験において選択され得るマーカー配列を含んでもよい。

【0107】

本明細書で使用される「キメラ受容体」または「キメラ抗原受容体」とは、疾患または障害に関連する分子に結合し、Ｔ細胞の１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインまたは共刺激ドメインのような他の受容体に対してスペーサードメインを介して結合される、抗体のリガンド結合ドメインまたは他のタンパク質配列を含む、合成的にデザインされた受容体を指す。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞が製造され、その細胞は、融合タンパク質をコードする核酸を含み、その細胞はキメラ抗原受容体を含む。

【0108】

本明細書で使用される「細胞傷害性Ｔリンパ球」（ＣＴＬ）は、その表面にＣＤ８を発現するＴリンパ球（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を指す。いくつかの実施形態では、そのような細胞は、抗原を経験している「メモリー」Ｔ細胞（Ｔ_Ｍ細胞）であることが好ましい。いくつかの実施形態では、融合タンパク質分泌用の細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球である。本明細書で使用される「セントラルメモリー」Ｔ細胞（または「Ｔ_ＣＭ」）とは、その表面にＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ－７及び／またはＣＤ４５ＲＯを発現し、ナイーブ細胞と比較して、ＣＤ４５ＲＡを発現しないかまたはその発現が減少した抗原経験ＣＴＬを指す。いくつかの実施形態では、融合タンパク質分泌用の細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）である。いくつかの実施形態では、セントラルメモリー細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ、及び／またはＣＤ９５の発現について陽性であり、ナイーブ細胞と比較して、ＣＤ５４ＲＡの発現が減少している場合がある。本明細書で使用される「エフェクターメモリー」Ｔ細胞（または「Ｔ_ＥＭ」）とは、セントラルメモリー細胞と比較して、その表面上にＣＤ６２Ｌを発現しないかまたは発現が減少し、そしてナイーブ細胞と比較して、ＣＤ４５ＲＡを発現しないか、または発現が減少している抗原経験Ｔ細胞を指す。いくつかの実施形態では、融合タンパク質分泌用の細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクターメモリー細胞は、ナイーブ細胞またはセントラルメモリー細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ及び／またはＣＣＲ７の発現について陰性であり、そしてＣＤ２８及び／またはＣＤ４５ＲＡの可変発現を有し得る。

【0109】

本明細書で使用される「ナイーブＴ細胞」とは、セントラルメモリー細胞またはエフェクターメモリー細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ及び／またはＣＤ４５ＲＡを発現し、ＣＤ４５ＲＯ－を発現しない、抗原非経験Ｔリンパ球を指す。いくつかの実施形態では、融合タンパク質分泌用の哺乳動物細胞などの細胞が提供される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞はナイーブＴ細胞である。いくつかの実施形態では、ナイーブＣＤ８＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、及び／またはＣＤ４５ＲＡを含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現によって特徴付けられる。

【0110】

本明細書で使用される「エフェクター」Ｔ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、及び／またはＣＤ２８を発現しないかまたは発現が減少し、そしてセントラルメモリーまたはナイーブＴ細胞と比較して、グランザイムＢ及び／またはパーフォリンについて陽性である抗原経験細胞傷害性Ｔリンパ球細胞を指す。いくつかの実施形態では、融合タンパク質分泌用の哺乳動物細胞などの細胞が提供される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、エフェクターＴ細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、セントラルメモリーまたはナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、及び／またはＣＤ２８を発現しないかまたは発現が減少しており、グランザイムＢ及び／またはパーフォリンについて陽性である。

【0111】

本明細書で使用される「エピトープ」とは、抗体、Ｔ細胞、及び／またはＢ細胞を含む免疫系によって認識される抗原または分子の一部を指す。エピトープは、通常少なくとも７個のアミノ酸を有し、直鎖状エピトープであっても、または立体配座エピトープであってもよい。いくつかの実施形態では、融合タンパク質を発現する哺乳動物細胞などの細胞が提供され、ここでこの細胞はキメラ抗原受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、がん細胞上のエピトープを認識し得るｓｃＦｖを含む。本明細書中に開示される様々なポリペプチドまたは核酸を記載するために使用されるときの「単離する」または「精製する」とは、その自然環境の構成要素から同定及び分離及び／または回収されたポリペプチドまたは核酸を指す。好ましくは、単離されたポリペプチドまたは核酸は、それが天然に会合している全ての構成要素と会合していない。その自然環境の汚染成分は、典型的にはポリペプチドまたは核酸の診断的または治療的使用を妨害する物質であり、そして酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様または非タンパク質様溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つの核酸または本明細書に記載の実施形態のいずれか１つの発現ベクターを、細菌細胞、哺乳動物細胞または昆虫細胞に送達すること、この細胞を培養物中で成長させること、融合タンパク質の発現を誘導すること、及びこの融合タンパク質を処理のために精製することを包含する方法が提供される。

【0112】

本明細書で同定されたＣＩＳＣ配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」とは、必要に応じて、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列同一性の一部として保存的置換を考慮せずに、配列を整列させ、ギャップを導入した後、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインの各配列について、参照配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを用いて、当該分野の技術の範囲内である種々の方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定し得る。例えば、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２コンピュータープログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０（１９９６））を使用して生成されたアミノ酸配列同一性値の％は、そのほとんどがデフォルト値に設定されている、いくつかの検索パラメータを使用する。デフォルト値に設定されていないもの（例えば、調整可能なパラメータ）は、以下の値に設定される：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１及びスコアリングマトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２。ＣＩＳＣのいくつかの実施形態では、ＣＩＳＣは細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含み、ここで各ドメインは天然型、合成型、または変異型もしくは切断型の天然ドメインを含む。いくつかの実施形態では、任意の所与のドメインの変異型または切断型は、１００％、９５％、９０％、８５％の配列同一性、または本明細書中に提供される配列に示される配列に示される配列に対する前述のいずれか２つの割合によって定義される範囲内の配列同一性パーセントを有するアミノ酸配列を含む。

【0113】

本明細書で使用される「ＣＩＳＣバリアントポリペプチド配列」または「ＣＩＳＣバリアントアミノ酸配列」とは、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン及び／またはシグナル伝達ドメインのタンパク質配列などの、本明細書で提供されるタンパク質配列またはその具体的に誘導された断片と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性（または上記の割合のうちのいずれか２つによって定義される範囲内のアミノ酸配列同一性の割合）を有する下記に定義するタンパク質配列を指す。通常、ＣＩＳＣバリアントポリペプチドまたはその断片は、アミノ酸配列またはその誘導された断片と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。バリアントは天然タンパク質配列を包含しない。

【0114】

本明細書で使用される「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」とは、サル、イヌ、及びヒトを含む、任意の哺乳動物、好ましくは霊長類の種に由来し得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、レシピエント対象と同種異系（同種だがドナーが異なる）である；いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は自己由来である（ドナーとレシピエントは同じ）；いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は同質遺伝子的である（ドナーとレシピエントは異なるが同一の双子である）。

【0115】

本明細書で使用される場合、過渡的な句であろうと、または請求項の本文であろうと、「含む」及び「含んでいる」という用語は、無制限の意味を有すると解釈されるべきである。すなわち、この用語は、「少なくとも有する」または「少なくとも含む」という句と同義的に解釈されるべきである。プロセスの文脈で使用される場合、「含む」という用語は、プロセスが少なくとも列挙されたステップを含むが、追加のステップも含んでもよいことを意味する。化合物、組成物またはデバイスの文脈で使用されるとき、「含む」という用語は、その化合物、組成物またはデバイスが少なくとも列挙された特徴または構成要素を含むが、追加の特徴または構成要素も含んでもよいことを意味する。

【0116】

タンパク質配列
本明細書中に記載されるように、二量体ＣＩＳＣ構成要素をコードする１つ以上のタンパク質配列が提供される。１つ以上のタンパク質配列は、第１及び第２の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、第１の配列は、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含み得る第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第２の配列は、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含み得る第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素は、発現されたときに、それらが好ましくは同時に、リガンドの存在下で二量体化するように配置されてもよい。化学誘導シグナル伝達複合体の実施形態は、図１～２に概略的に描かれており、これはまた、例えばＲＡＳ／ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路、Ａｋｔ／ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路、ｍＴＯＲＣ１シグナル伝達経路、またはＦＯＸＰ３シグナル伝達経路を含み得る、ＣＩＳＣの活性化の結果としての下流シグナル伝達経路も表す。さらに、図２は、本明細書に記載のラパマイシンまたはその類似体などのリガンドの存在下での、ＦＲＢ－ＦＫＢＰ二量体化ＩＬ２ＲｂｇによるＩＬ２Ｒシグナル伝達を概略的に示す。

【0117】

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体二構成要素ＣＩＳＣのタンパク質配列（複数可）が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＣＩＳＣ構成要素は、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣ複合体である。図３は、膜貫通スパンから延びる様々なアミノ酸配列長を有するＣＩＳＣを含む、ＣＩＳＣ構築物デザインを概略的に示す。本明細書に記載され、図３に概略的に示されるように、アミノ酸配列の長さが変化することにより、様々な程度の可塑性が付与され得る。図３に示される概略図は、例として模式的な構築物の詳細を示しており、範囲を限定することを意図しない以下の配列に包含され得る。

【0118】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣは、配列番号１（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号１）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１のタンパク質配列をコードする核酸配列を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣは、配列番号３（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＧＧＳＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号３）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号３のタンパク質配列をコードする核酸配列を含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣは、配列番号５（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号５）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号５のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0121】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣは、配列番号７（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号７）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号７のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、第１のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態はまた、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第１のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、配列番号１、３、５、もしくは７に示される配列に対して１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の割合のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素は、ＩＬ２Ｒβ複合体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ－ＣＩＳＣは、配列番号２（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号２のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ－ＣＩＳＣは、配列番号４（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＧＳＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号４のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ－ＣＩＳＣは、配列番号６（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号６）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号６のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0126】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ－ＣＩＳＣは、配列番号８（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号８）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号８のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0127】

いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素は、ＩＬ７Ｒα複合体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ７Ｒα－ＣＩＳＣは、配列番号９（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＥＩＮＮＳＳＧＥＭＤＰＩＬＬＴＩＳＩＬＳＦＦＳＶＡＬＬＶＩＬＡＣＶＬＷＫＫＲＩＫＰＩＶＷＰＳＬＰＤＨＫＫＴＬＥＨＬＣＫＫＰＲＫＮＬＮＶＳＦＮＰＥＳＦＬＤＣＱＩＨＲＶＤＤＩＱＡＲＤＥＶＥＧＦＬＱＤＴＦＰＱＱＬＥＥＳＥＫＱＲＬＧＧＤＶＱＳＰＮＣＰＳＥＤＶＶＩＴＰＥＳＦＧＲＤＳＳＬＴＣＬＡＧＮＶＳＡＣＤＡＰＩＬＳＳＳＲＳＬＤＣＲＥＳＧＫＮＧＰＨＶＹＱＤＬＬＬＳＬＧＴＴＮＳＴＬＰＰＰＦＳＬＱＳＧＩＬＴＬＮＰＶＡＱＧＱＰＩＬＴＳＬＧＳＮＱＥＥＡＹＶＴＭＳＳＦＹＱＮＱ；配列番号９）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号９のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態はまた、第２のＣＩＳＣ構成要素の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第２のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、配列番号２、４、６、８もしくは９に示される配列に対して１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の割合のうちいずれか２つによって定義される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、タンパク質配列はリンカーを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシンなどの１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸、またはグリシンなどの多数のアミノ酸を、上記の数字のうちのいずれか２つによって定義される範囲内で含む。いくつかの実施形態では、グリシンスペーサーは、少なくとも３つのグリシンを含む。いくつかの実施形態では、グリシンスペーサーは、配列番号１５（ＧＧＧＳ；配列番号１５）、配列番号１６（ＧＧＧＳＧＧＧ；配列番号１６）または配列番号１７（ＧＧＧ；配列番号１７）に示される配列を含む。実施形態はまた、配列番号１５～１７をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメインのＮ末端に位置しており、ヒンジドメインは、膜貫通ドメインのＮ末端に位置しており、リンカーは、ヒンジドメインのＮ末端に位置し、そして細胞外結合ドメインは、リンカーのＮ末端に位置する。

【0130】

いくつかの実施形態では、ホモ二量体の二構成要素ＣＩＳＣのタンパク質配列（複数可）が提供される。いくつかの実施形態では、第１のＣＩＳＣ構成要素は、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ－ＣＩＳＣは、配列番号１１（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号１１）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１１のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、第１のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態はまた、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第１のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、配列番号１１に示される配列に対して１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を有するか、または上述の割合のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素は、ＩＬ２Ｒβ複合体またはＩＬ２Ｒα複合体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ－ＣＩＳＣは、配列番号１０（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号１０）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１０のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、ＩＬ２Ｒα－ＣＩＳＣは、配列番号１２（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＥＩＮＮＳＳＧＥＭＤＰＩＬＬＴＩＳＩＬＳＦＦＳＶＡＬＬＶＩＬＡＣＶＬＷＫＫＲＩＫＰＩＶＷＰＳＬＰＤＨＫＫＴＬＥＨＬＣＫＫＰＲＫＮＬＮＶＳＦＮＰＥＳＦＬＤＣＱＩＨＲＶＤＤＩＱＡＲＤＥＶＥＧＦＬＱＤＴＦＰＱＱＬＥＥＳＥＫＱＲＬＧＧＤＶＱＳＰＮＣＰＳＥＤＶＶＩＴＰＥＳＦＧＲＤＳＳＬＴＣＬＡＧＮＶＳＡＣＤＡＰＩＬＳＳＳＲＳＬＤＣＲＥＳＧＫＮＧＰＨＶＹＱＤＬＬＬＳＬＧＴＴＮＳＴＬＰＰＰＦＳＬＱＳＧＩＬＴＬＮＰＶＡＱＧＱＰＩＬＴＳＬＧＳＮＱＥＥＡＹＶＴＭＳＳＦＹＱＮＱ；配列番号１２）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１２のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、第２のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態はまた、第２のＣＩＳＣ構成要素の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第２のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、配列番号１０もしくは配列番号１２に示される配列に対して１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または前述の割合のいずれか２つにより定義される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、タンパク質配列はリンカーを含んでもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシンなどの１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸、またはグリシンなどの多数のアミノ酸を、上述の数のうちいずれか２つによって定義される範囲内で含む。いくつかの実施形態では、グリシンスペーサーは少なくとも３つのグリシンを含む。いくつかの実施形態では、グリシンスペーサーは、配列番号１５（ＧＧＧＳ；配列番号１５）、配列番号１６（ＧＧＧＳＧＧＧ；配列番号１６）または配列番号１７（ＧＧＧ；配列番号１７）に示される配列を含む。実施形態はまた、配列番号１５～１７をコードする核酸配列も含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメインのＮ末端に位置し、ヒンジドメインは、膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、リンカーは、ヒンジドメインのＮ末端に位置し、そして細胞外結合ドメインは、リンカーのＮ末端に位置する。

【0136】

いくつかの実施形態では、ホモ二量体化二構成要素ＣＩＳＣの配列は、リガンドＡＰ１９０３とのホモ二量体化のためのＦＫＢＰ Ｆ３６Ｖドメインを組み込んでいる。

【0137】

いくつかの実施形態では、単一構成要素ホモ二量体化ＣＩＳＣのためのタンパク質配列（複数可）が提供される。いくつかの実施形態では、単一構成要素ＣＩＳＣは、ＩＬ７Ｒα－ＣＩＳＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ７Ｒα－ＣＩＳＣは、配列番号１３（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＥＩＮＮＳＳＧＥＭＤＰＩＬＬＴＩＳＩＬＳＦＦＳＶＡＬＬＶＩＬＡＣＶＬＷＫＫＲＩＫＰＩＶＷＰＳＬＰＤＨＫＫＴＬＥＨＬＣＫＫＰＲＫＮＬＮＶＳＦＮＰＥＳＦＬＤＣＱＩＨＲＶＤＤＩＱＡＲＤＥＶＥＧＦＬＱＤＴＦＰＱＱＬＥＥＳＥＫＱＲＬＧＧＤＶＱＳＰＮＣＰＳＥＤＶＶＩＴＰＥＳＦＧＲＤＳＳＬＴＣＬＡＧＮＶＳＡＣＤＡＰＩＬＳＳＳＲＳＬＤＣＲＥＳＧＫＮＧＰＨＶＹＱＤＬＬＬＳＬＧＴＴＮＳＴＬＰＰＰＦＳＬＱＳＧＩＬＴＬＮＰＶＡＱＧＱＰＩＬＴＳＬＧＳＮＱＥＥＡＹＶＴＭＳＳＦＹＱＮＱ；配列番号１３）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１３のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、単一構成要素ＣＩＳＣは、ＭＰＬ－ＣＩＳＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ＭＰＬ－ＣＩＳＣは、配列番号１４（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＥＴＡＷＩＳＬＶＴＡＬＨＬＶＬＧＬＳＡＶＬＧＬＬＬＬＲＷＱＦＰＡＨＹＲＲＬＲＨＡＬＷＰＳＬＰＤＬＨＲＶＬＧＱＹＬＲＤＴＡＡＬＳＰＰＫＡＴＶＳＤＴＣＥＥＶＥＰＳＬＬＥＩＬＰＫＳＳＥＲＴＰＬＰＬＣＳＳＱＡＱＭＤＹＲＲＬＱＰＳＣＬＧＴＭＰＬＳＶＣＰＰＭＡＥＳＧＳＣＣＴＴＨＩＡＮＨＳＹＬＰＬＳＹＷＱＱＰ；配列番号１４）に示されるアミノ酸配列を含む。実施形態はまた、配列番号１４のタンパク質配列をコードする核酸配列も含む。

【0139】

いくつかの実施形態では、単一構成要素ＣＩＳＣのタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態はまた、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第１のＣＩＳＣ構成要素のタンパク質配列は、配列番号１３もしくは１４に示される配列に対して１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または前述の割合のうちいずれか２つによって定義される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、タンパク質配列は、リンカーを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシンなどの１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸、またはグリシンなどの多数のアミノ酸を、上述の数のいずれか２つによって定義される範囲内で含む。いくつかの実施形態では、グリシンスペーサーは少なくとも３つのグリシンを含む。いくつかの実施形態では、このグリシンスペーサーは、配列番号１５（ＧＧＧＳ；配列番号１５）、配列番号１６（ＧＧＧＳＧＧＧ；配列番号１６）または配列番号１７（ＧＧＧ；配列番号１７）に示される配列を含む。実施形態はまた、配列番号１５～１７をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメインのＮ末端に位置し、ヒンジドメインは、膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、リンカーは、ヒンジドメインのＮ末端に位置し、そして細胞外結合ドメインはリンカーのＮ末端に位置する。

【0141】

いくつかの実施形態では、ホモ二量体化単一構成要素ＣＩＳＣの配列は、リガンドＡＰ１９０３とのホモ二量体化のためのＦＫＢＰ Ｆ３６Ｖドメインを組み込んでいる。

【0142】

二量体ＣＩＳＣ構成要素を発現するためのベクター
効率的な形質導入及び導入遺伝子の発現を提供するために様々なベクターの組み合わせを構築してもよい。いくつかの実施形態では、このベクターはウイルスベクターである。他の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターとプラスミドベクターの組み合わせを含んでもよい。他のウイルスベクターには、フォーミーウイルス、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、及び／またはレンチウイルスベクターが挙げられる。いくつかの実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、フォーミーウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌系におけるタンパク質発現用である。他の実施形態では、第１のベクターは、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１のＣＩＳＣ構成要素をコードし得るが、第２のベクターは、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第２のＣＩＳＣ構成要素をコードし得る。

【0143】

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、または９のタンパク質配列をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、配列番号２０：（ＡＧＣＴＴＡＡＴＧＴＡＧＴＣＴＴＡＴＧＣＡＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＡＧＴＣＴＴＧＣＡＡＣＡＴＧＧＴＡＡＣＧＡＴＧＡＧＴＴＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＣＴＴＡＣＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＡＴＧＣＣＧＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＡＡＧＧＴＧＧＴＡＣＧＡＴＣＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＴＧＡＣＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＡＡＣＣＡＣＴＧＡＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＴＧＣＡＧＡＧＡＴＡＴＴＧＴＡＴＴＴＡＡＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＧＡＴＡＣＡＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＣＧＡＣＧＣＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＣＡＧＴＡＴＴＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＧＴＡＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＧＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡＧＧＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＴＡＧＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＧＴＧＴＧＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＡＧＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＡＧＣＴＴＴＡＧＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＡＴＡＴＡＡＡＧＴＡＧＴＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＡＴＴＡＧＧＡＧＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＡＴＧＣＴＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＣＴＣＣＴＴＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＧＡＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＡＡＣＡＴＡＡＣＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＧＧＴＴＴＡＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＡＣＴＴＴＣＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＧＣＡＧＧＧＡＴＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＣＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＧＧＧＧＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＴＴＣＧＡＴＴＡＧＴＧＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＧＡＣＧＧＴＡＴＣＧＧＴＴＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＴＴＧＧＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＧＴＡＧＡＣＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＴＡＴＣＧＡＴＣＡＣＧＡＧＡＣＴＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＴＧＡＴＡＴＣＧＡＡＴＴＣＣＣＡＣＧＧＧＧＴＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＧＧＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＧＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＡＡＧＣＧＧＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＡＧＴＴＴＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＡＴＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＴＣＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＴＣＣＡＡＣＡＣＡＴＣＡＡＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＴＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＡＴＴＧＧＡＧＧＣＣＧＴＡＧＴＣＡＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＣＴＣＣＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＧＡＣＴＡＴＧＣＣＣＡＧＧＡＴＣＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＣＡＣＡＧＡＡＴＡＣＣＡＴＧＧＴＡＡＴＴＴＣＡＧＣＧＣＣＴＧＧＡＧＣＧＧＡＧＴＣＴＣＴＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＣＣＧＡＡＴＣＣＣＴＣＣＡＡＣＣＣＧＡＴＴＡＴＴＣＴＧＡＡＣＧＧＴＴＧＴＧＣＣＴＣＧＴＡＴＣＣＧＡＡＡＴＡＣＣＡＣＣＡＡＡＡＧＧＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＣＡＡＴＣＡＡＣＡＣＡＧＣＣＣＧＴＡＴＴＧＧＧＣＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＴＡＴＡＣＧＴＴＧＡＡＧＣＣＣＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＴＡＴＣＣＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＧＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＣＡＴＣＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＡＴＧＧＡＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＡＡＧＴＡＣＡＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＣＡＣＧＴＧＴＴＴＣＧＧＡＧＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＡＣＡＣＧＡＴＴＣＣＧＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＴＣＴＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＧＧＴＧＣＧＴＴＴＧＧＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＧＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＴＣＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＡＴＡＣＡＧＧＣＣＣＴＴＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＴＡＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＴＴＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＴＣＴＴＧＡＧＧＴＡＣＴＴＧＡＡＣＧＡＧＡＣＡＡＧＧＴＴＡＣＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＡＡＧＧＴＡＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＴＴＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＡＣＴＣＴＣＴＴＡＣＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＡＧＧＧＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＡＴＧＣＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＡＡＧＣＴＴＧＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＴＴＴＡＣＣＴＡＴＧＡＴＣＣＡＴＡＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＣＣＧＡＣＧＡＡＧＧＡＧＴＣＧＣＣＧＧＴＧＣＧＣＣＣＡＣＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＣＴＴＡＴＴＧＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＡＧＡＣＧＡＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＴＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＡＧＴＡＣＣＡＣＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴＴＧＧＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＧＣＧＴＡＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧＴＣＧＡＴＴＴＴＣＡＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＣＣＧＧＡＣＧＣＴＧＧＧＣＣＧＡＧＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＧＡＧＴＡＧＧＣＣＴＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＴＴＡＧＧＧＣＴＣＴＣＡＡＣＧＣＧＣＧＧＣＴＧＣＣＧＴＴＧＡＡＴＡＣＡＧＡＣＧＣＴＴＡＴＣＴＣＴＣＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡＧＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＡＴＣＴＴＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＣＴＡＣＴＡＡＴＴＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡ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【0144】

いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、配列番号１８（ＡＧＣＴＴＡＡＴＧＴＡＧＴＣＴＴＡＴＧＣＡＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＡＧＴＣＴＴＧＣＡＡＣＡＴＧＧＴＡＡＣＧＡＴＧＡＧＴＴＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＣＴＴＡＣＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＡＴＧＣＣＧＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＡＡＧＧＴＧＧＴＡＣＧＡＴＣＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＴＧＡＣＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＡＡＣＣＡＣＴＧＡＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＴＧＣＡＧＡＧＡＴＡＴＴＧＴＡＴＴＴＡＡＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＧＡＴＡＣＡＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＣＧＡＣＧＣＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＣＡＧＴＡＴＴＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＧＴＡＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＧＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡＧＧＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＴＡＧＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＧＴＧＴＧＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＡＧＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＡＧＣＴＴＴＡＧＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＡＴＡＴＡＡＡＧＴＡＧＴＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＡＴＴＡＧＧＡＧＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＡＴＧＣＴＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＣＴＣＣＴＴＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＧＡＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＡＡＣＡＴＡＡＣＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＧＧＴＴＴＡＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＡＣＴＴＴＣＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＧＣＡＧＧＧＡＴＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＣＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＧＧＧＧＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＴＴＣＧＡＴＴＡＧＴＧＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＧＡＣＧＧＴＡＴＣＧＧＴＴＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＴＴＧＧＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＧＴＡＧＡＣＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＴＡＴＣＧＡＴＣＡＣＧＡＧＡＣＴＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＴＧＡＴＡＴＣＧＡＡＴＴＣＣＣＡＣＧＧＧＧＴＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＧＧＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＧＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＡＡＧＣＧＧＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＡＧＴＴＴＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＡＴＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＴＣＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＧＴＡＧＴＣＡＧＡＡＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＣＣＡＧＡＡＡＡＴＣＴＣＡＣＡＣＴＴＣＡＴＡＡＡＣＴＴＴＣＣＧＡＡＴＣＡＣＡＡＣＴＣＧＡＡＣＴＣＡＡＣＴＧＧＡＡＴＡＡＣＣＧＧＴＴＣＣＴＧＡＡＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＧＡＡＣＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＡＴＡＴＣＧＧＡＣＣＧＡＣＴＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＣＴＧＴＧＧＡＣＴＡＴＡＧＧＣＡＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＣＣＣＡＡＧＣＧＴＡＧＡＣＧＧＣＣＡＡＡＡＡＡＧＡＴＡＣＡＣＴＴＴＴＣＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＧＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＴＧＡＡＴＧＧＴＣＣＣＡＴＣＣＣＡＴＴＣＡＴＴＧＧＧＧＡＴＣＣＡＡＣＡＣＡＴＣＡＡＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＴＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＡＴＴＧＧＡＧＧＣＣＧＴＡＧＴＣＡＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＣＴＣＣＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＧＡＣＴＡＴＧＣＣＣＡＧＧＡＴＣＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＣＡＣＡＧＡＡＴＡＣＣＡＴＧＧＴＡＡＴＴＴＣＡＧＣＧＣＣＴＧＧＡＧＣＧＧＡＧＴＣＴＣＴＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＣＣＧＡＡＴＣＣＣＴＣＣＡＡＣＣＣＧＡＴＴＡＴＴＣＴＧＡＡＣＧＧＴＴＧＴＧＣＣＴＣＧＴＡＴＣＣＧＡＡＡＴＡＣＣＡＣＣＡＡＡＡＧＧＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＣＡＡＴＣＡＡＣＡＣＡＧＣＣＣＧＴＡＴＴＧＧＧＣＣＣＣＴＣＣＴＴＧＴＴＡＴＡＣＧＴＴＧＡＡＧＣＣＣＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＴＡＴＣＣＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＧＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＣＡＴＣＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＡＴＧＧＡＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＡＡＧＴＡＣＡＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＣＡＣＧＴＧＴＴＴＣＧＧＡＧＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＴＴＧＡＧＡＡＣＣＴＴＡＧＡＣＴＧＡＴＧＧＣＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＧＴＡＧＴＴＣＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＣＣＡＴＡＧＡＴＧＣＡＡＴＡＴＡＡＧＣＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＧＣＣＡＴＴＡＣＴＴＴＧＡＡＣＧＧＣＡＴＴＴＧＧＡＡＴＴＣＧＡＧＧＣＣＣＧＡＡＣＡＣＴＴＴＣＣＣＣＣＧＧＴＣＡＴＡＣＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＴＣＴＣＴＴＧＡＣＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＴＧＴＣＴＧＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＴＡＣＴＣＡＧＴＡＴＧＡＧＴＴＣＣＡＡＧＴＴＣＧＧＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＴＣＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＣＣＧＴＧＧＡＧＴＣＡＡＣＣＧＴＴＧＧＣＧＴＴＣＣＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＧＣＴＧＣＣＣＴＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣＡＣＧＡＴＴＣＣＧＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＴＣＴＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＧＧＴＧＣＧＴＴＴＧＧＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＧＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＴＣＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＡＴＡＣＡＧＧＣＣＣＴＴＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＴＡＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＴＴＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＴＣＴＴＧＡＧＧＴＡＣＴＴＧＡＡＣＧＡＧＡＣＡＡＧＧＴＴＡＣＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＡＡＧＧＴＡＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＴＴＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＡＣＴＣＴＣＴＴＡＣＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＡＧＧＧＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＡＴＧＣＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＡＡＧＣＴＴＧＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＴＴＴＡＣＣＴＡＴＧＡＴＣＣＡＴＡＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＣＣＧＡＣＧＡＡＧＧＡＧＴＣＧＣＣＧＧＴＧＣＧＣＣＣＡＣＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＣＴＴＡＴＴＧＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＡＧＡＣＧＡＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＴＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＡＧＴＡＣＣＡＣＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴＴＧＧＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＧＣＧＴＡＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧＴＣＧＡＴＴＴＴＣＡＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＣＣＧＧＡＣＧＣＴＧＧＧＣ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列番号３及び４に示されるタンパク質配列をコードする。

【0145】

いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、配列番号１９（ＡＧＣＴＴＡＡＴＧＴＡＧＴＣＴＴＡＴＧＣＡＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＡＧＴＣＴＴＧＣＡＡＣＡＴＧＧＴＡＡＣＧＡＴＧＡＧＴＴＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＣＴＴＡＣＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＡＴＧＣＣＧＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＡＡＧＧＴＧＧＴＡＣＧＡＴＣＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＴＧＡＣＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＧＡＡＣＣＡＣＴＧＡＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＴＧＣＡＧＡＧＡＴＡＴＴＧＴＡＴＴＴＡＡＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＧＡＴＡＣＡＡＴＡＡＡＣＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＣＧＡＣＧＣＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＣＡＧＴＡＴＴＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＧＴＡＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＧＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡＧＧＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＴＡＧＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＧＴＧＴＧＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＡＧＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＡＧＣＴＴＴＡＧＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＡＴＡＴＡＡＡＧＴＡＧＴＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＡＴＴＡＧＧＡＧＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＡＴＧＣＴＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＣＴＣＣＴＴＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＧＡＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＡＡＣＡＴＡＡＣＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＧＧＴＴＴＡＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＡＣＴＴＴＣＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＧＣＡＧＧＧＡＴＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＣＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＧＧＧＧＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＴＴＣＧＡＴＴＡＧＴＧＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＧＡＣＧＧＴＡＴＣＧＧＴＴＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＴＴＧＧＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＧＴＡＧＡＣＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＴＡＴＣＧＡＴＣＡＣＧＡＧＡＣＴＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＴＧＡＴＡＴＣＧＡＡＴＴＣＣＣＡＣＧＧＧＧＴＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＧＧＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＣＡＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＧＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＡＡＧＣＧＧＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＡＡＧＴＴＴＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＡＴＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＴＣＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＧＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＣＣＴＴＧＧＧＣＣＣＣＡＧＡＡＡＡＴＣＴＣＡＣＧＣＴＴＣＡＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣＧＡＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＧＡＧＣＴＣＡＡＣＴＧＧＡＡＴＡＡＴＡＧＡＴＴＴＣＴＴＡＡＴＣＡＴＴＧＴＴＴＧＧＡＡＣＡＣＣＴＧＧＴＴＣＡＡＴＡＴＡＧＡＡＣＧＧＡＴＴＧＧＧＡＣＣＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＴＣＡＧＴＴＧＡＣＴＡＣＣＧＣＣＡＣＡＡＡＴＴＴＴＣＡＣＴＴＣＣＣＡＧＣＧＴＡＧＡＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＧＧＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＧＧＧＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＧＧＴＴＣＴＧＣＴＣＡＡＣＡＣＴＧＧＴＣＴＧＡＧＴＧＧＡＧＣＣＡＴＣＣＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＧＣＴＣＡＡＡＴＡＣＣＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＧＣＧＣＴＣＧＡＡＧＣＣＧＴＴＧＴＴＡＴＣＡＧＣＧＴＣＧＧＡＡＧＣＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＴＣＡＴＴＴＣＣＣＴＴＣＴＣＴＧＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＧＧＡＣＧＡＴＧＣＣＧＣＧＧＡＴＴＣＣＧＡＣＧＣＴＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＣＣＴＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＧＧＴＡＡＴＴＴＣＴＣＣＧＣＴＴＧＧＡＧＴＧＧＣＧＴＡＴＣＡＡＡＧＧＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＧＴＣＣＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＡＴＴＡＣＴＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＣＣＧＡＧＡＴＡＣＣＴＣＣＣＡＡＡＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＴＴＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＣＡＧＧＣＧＣＧＴＣＣＣＣＴＴＧＣＡＡＴＣＡＧＣＡＴＡＧＴＣＣＧＴＡＴＴＧＧＧＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＴＴＡＴＡＣＣＣＴＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＡＣＧＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＴＡＴＣＣＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＧＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＣＡＴＣＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＡＴＧＧＡＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＡＡＧＴＡＣＡＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＣＡＣＧＴＧＴＴＴＣＧＧＡＧＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＣＣＴＴＴＴＧＡＧＡＡＣＣＴＴＡＧＡＣＴＧＡＴＧＧＣＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＧＴＡＧＴＴＣＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＣＣＡＴＡＧＡＴＧＣＡＡＴＡＴＡＡＧＣＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＧＣＣＡＴＴＡＣＴＴＴＧＡＡＣＧＧＣＡＴＴＴＧＧＡＡＴＴＣＧＡＧＧＣＣＣＧＡＡＣＡＣＴＴＴＣＣＣＣＣＧＧＴＣＡＴＡＣＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＴＣＴＣＴＴＧＡＣＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＴＧＴＣＴＧＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＴＡＣＴＣＡＧＴＡＴＧＡＧＴＴＣＣＡＡＧＴＴＣＧＧＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＴＣＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＣＣＧＴＧＧＡＧＴＣＡＡＣＣＧＴＴＧＧＣＧＴＴＣＣＧＣＡＣＧＡＡＧＣＣＣＧＣＴＧＣＣＣＴＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣＡＣＧＡＴＴＣＣＧＴＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＴＣＴＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＧＧＴＧＣＧＴＴＴＧＧＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＧＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＴＣＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＡＴＡＣＡＧＧＣＣＣＴＴＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＴＡＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＴＴＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＴＣＴＴＧＡＧＧＴＡＣＴＴＧＡＡＣＧＡＧＡＣＡＡＧＧＴＴＡＣＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＡＡＧＧＴＡＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＴＴＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＡＣＴＣＴＣＴＴＡＣＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＡＧＧＧＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＡＴＧＣＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＡＡＧＣＴＴＧＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＴＴＴＡＣＣＴＡＴＧＡＴＣＣＡＴＡＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＣＣＧＡＣＧＡＡＧＧＡＧＴＣＧＣＣＧＧＴＧＣＧＣＣＣＡＣＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＣＣＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＣＴＴＡＴＴＧＣＡＣＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＡＧＡＣＧＡＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＣＴＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＡＧＴＡＣＣＡＣＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴＴＧＧＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＧＣＧＴＡＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧＴＣＧＡＴＴＴＴＣＡＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＣＣＧＧＡＣＧＣＴＧＧＧＣＣＧＡＧＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＣＴ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列をコードする。

【0146】

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、本明細書で提供されるヌクレオチド配列またはその具体的に誘導された断片と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の核酸配列同一性（または上述の割合のうちいずれか２つによって定義される範囲内の核酸配列同一性の割合）を有する核酸を含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、この発現ベクターは、融合タンパク質をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、このベクターはＲＮＡまたはＤＮＡである。

【0147】

細胞及び組成物：Ｔリンパ球集団
本明細書に記載の組成物は、本明細書に示され記載されている、タンパク質配列または発現ベクターを含む、哺乳動物細胞などの遺伝子改変細胞を提供する。したがって、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つのタンパク質配列、または本明細書に記載の実施形態のいずれか１つの発現ベクターを細胞が含む、二量体ＣＩＳＣ分泌用の哺乳動物細胞などの細胞が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、この細胞は、細菌細胞または哺乳動物細胞、例えばリンパ球である。いくつかの実施形態では、細胞はＥ．ｃｏｌｉ．である。いくつかの実施形態では、細胞は、タンパク質発現を可能にする昆虫細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はリンパ球である。

【0148】

いくつかの実施形態では、この細胞は、前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞は造血幹細胞などの幹細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞はＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔリンパ球である。いくつかの実施形態では、この細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態では、この細胞は神経幹細胞である。

【0149】

いくつかの実施形態では、この細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、またはバルクＣＤ８＋Ｔ細胞を含み得るＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞であり、これにはナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、またはバルクＣＤ４＋Ｔ細胞が含まれ得る。

【0150】

リンパ球（Ｔリンパ球）は、公知の技術に従って収集され得、そしてフローサイトメトリー及び／または免疫磁気選択のような、抗体への親和性結合のような公知の技術によって富化または枯渇され得る。富化及び／または枯渇ステップの後、所望のＴリンパ球のインビトロでの増幅は、当業者には明らかであろう公知の技術またはその変形に従って実施され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、患者から得られた自己由来Ｔ細胞である。

【0151】

例えば、所望のＴ細胞集団または亜集団は、インビトロで最初のＴリンパ球集団を培養培地に添加すること、次いで非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などの培養培地フィーダー細胞に添加すること（例えば、結果として生じる細胞集団が、増幅されるべき最初の集団中の各Ｔリンパ球について少なくとも５、１０、２０、または４０以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含むように）；及び培養物をインキュベートすること（例えば、Ｔ細胞の数を増幅するのに十分な時間）によって増幅され得る。非分裂フィーダー細胞は、ガンマ線照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞分裂を防ぐために、ＰＢＭＣに３０００から３６００ラドの範囲のガンマ線を照射する。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を防ぐために、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００もしくは３６００ラドのガンマ線、または列挙された値のいずれかのいずれか２つの終点の間の任意の値のラドで照射される。培養培地へのＴ細胞及びフィーダー細胞の添加の順序は、所望ならば逆にしてもよい。培養物は、典型的には、Ｔリンパ球の成長に適した温度などの条件下でインキュベートしてもよい。例えば、ヒトＴリンパ球の成長のためには、温度は、一般に少なくとも２５℃、好ましくは少なくとも３０℃、より好ましくは３７℃であろう。いくつかの実施形態では、ヒトＴリンパ球の成長のための温度は、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３７℃、または列挙された任意の値のうちのいずれか２つの終点の間の任意の他の温度である。

【0152】

Ｔリンパ球を単離した後、細胞傷害性及びヘルパーＴリンパ球の両方を、増幅の前または後のいずれかに、ナイーブ、メモリー及びエフェクターＴ細胞亜集団に分類してもよい。

【0153】

ＣＤ８＋細胞は、標準的な方法を使用することによって得てもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、細胞表面抗原（それらの種類のＣＤ８＋細胞のそれぞれに関連する）を同定することによって、ナイーブ、セントラルメモリー、及びエフェクターメモリー細胞にさらに分類される。いくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋及びＣＤ６２Ｌ－サブセットの両方に存在する。抗ＣＤ８抗体及び抗ＣＤ６２Ｌ抗体で染色した後、ＰＢＭＣを、ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋及びＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分に分類する。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ_ＣＭの表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、及び／またはＣＤ１２７を含み、グランザイムＢについて陰性であるかまたは低い。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクターＴ_Ｅは、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、及び／またはＣＤ１２７について陰性であり、そしてグランザイムＢ及び／またはパーフォリンについて陽性である。いくつかの実施形態では、ナイーブＣＤ８＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７、及び／またはＣＤ４５ＲＡを含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現によって特徴付けられる。

【0154】

ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞に分類される。ＣＤ４＋リンパ球は、標準的方法により得てもよい。いくつかの実施形態では、ナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋及び／またはＣＤ４５ＲＯ＋である。いくつかの実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ－及び／またはＣＤ４５ＲＯ－である。

【0155】

哺乳動物細胞のような細胞、または哺乳動物細胞集団のような細胞集団が増幅のために選択されるか否かは、その細胞または細胞集団が２つの異なる遺伝子改変事象を受けたか否かに依存する。哺乳動物細胞のような細胞、または哺乳動物細胞集団のような細胞集団が、１つ以下の遺伝子改変事象を経験したならば、リガンドの添加は二量体化をもたらさないであろう。しかしながら、哺乳動物細胞のような細胞、または哺乳動物細胞集団のような細胞集団が、２つの遺伝子改変事象を経験したならば、リガンドの添加は、ＣＩＳＣ構成要素の二量体化、及びその後のシグナル伝達カスケードにつながる。したがって、哺乳動物細胞などの細胞、または哺乳動物細胞集団などの細胞集団は、リガンドとの接触に対するその応答に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態では、リガンドは、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｎＭの量で、または上記の値のいずれか２つによって定義される範囲内の濃度で添加され得る。

【0156】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞、または哺乳動物細胞集団などの細胞集団は、シグナル伝達経路の結果としてのマーカーの発現に基づいて二量体ＣＩＳＣについて陽性であり得る。したがって、二量体ＣＩＳＣについて陽性の細胞集団は、表面マーカーに対する特異的抗体及びアイソタイプが一致した対照抗体での染色を使用するフローサイトメトリーによって決定され得る。

【0157】

組成物
本開示に示される調製物である、哺乳動物細胞などの遺伝子改変細胞を含む組成物が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞は、本明細書の実施形態に記載のタンパク質配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含むＣＩＳＣを有するＣＤ４＋Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣはＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣである。他の実施形態では、この組成物はさらに、哺乳動物細胞などの細胞、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含むＣＩＳＣを有するＣＤ８＋Ｔ細胞を含む調製物を含む。いくつかの実施形態では、ＣＩＳＣ構成要素はリガンドの存在下で、好ましくは同時に二量体化する。いくつかの実施形態では、これらの集団のそれぞれは、組成物を提供するために互いに組み合わされてもまたは他の細胞型と組み合わされてもよい。

【0158】

いくつかの実施形態では、組成物の細胞はＣＤ４＋細胞である。ＣＤ４＋細胞は、Ｔヘルパーリンパ球細胞、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、またはバルクＣＤ４＋Ｔ細胞であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋ヘルパーリンパ球細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞であり、ここでナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ４５ＲＡ＋を含むか、及び／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞である。

【0159】

いくつかの実施形態では、組成物の細胞はＣＤ８＋細胞である。ＣＤ８＋細胞は、Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞及び／またはバルクＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞は、セントラルメモリーＴ細胞であり、ここでこのセントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。さらに他の実施形態では、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞は、セントラルメモリーＴ細胞であり、ＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球細胞は、ナイーブまたはセントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞である。

【0160】

いくつかの実施形態では、上記組成物はＴ細胞前駆体を含む。いくつかの実施形態では、この組成物は造血幹細胞を含む。いくつかの実施形態では、この組成物は、宿主細胞であって、この宿主細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞であるか、またはナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である宿主細胞、ならびに前駆体Ｔ細胞である第２の宿主細胞を含む。いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は造血幹細胞である。

【0161】

いくつかの組成物において、細胞はＮＫ細胞である。

【0162】

いくつかの実施形態では、細胞はＣＤ８＋またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、前駆体Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は造血幹細胞またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は神経幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はキメラ抗原受容体をさらに含む。

【0163】

本明細書で提供及び記載される細胞、発現ベクター、及びタンパク質配列を含むキット及びシステムも本明細書で提供される。したがって、例えば、本明細書に記載のタンパク質配列；本明細書に記載の発現ベクター；及び／または本明細書に記載の細胞：のうちの１つ以上を備えるキットが本明細書に提供される。細胞の内部へのシグナルを選択的に活性化するためのシステムも提供され、このシステムは、本明細書に記載の細胞を含んでおり、この細胞は、本明細書に記載のタンパク質配列をコードする核酸を含む、本明細書に記載の発現ベクターを含む。

【0164】

二量体ＣＩＳＣ構成要素を発現する細胞を作製する方法
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、薬物調節サイトカインシグナル伝達のために、及び／または二量体ＣＩＳＣ構成要素を発現する細胞の選択的増幅のために使用される、哺乳動物細胞、例えばリンパ球などの宿主細胞に、タンパク質配列または発現ベクターを導入することが望ましい場合がある。例えば、二量体ＣＩＳＣは、リガンドとの接触時に、哺乳動物細胞などの細胞の内部にシグナルを伝達するための、導入ＣＩＳＣ構成要素を有する細胞における、サイトカインシグナル伝達を可能にし得る。さらに、哺乳動物細胞などの細胞の選択的増幅は、本明細書に記載されるように、２つの特定の遺伝子改変事象を受けた細胞のみを選択するように制御され得る。これらの細胞の調製は、本開示に基づいて当業者に明らかとなるだろう公知の技術に従って実施され得る。

【0165】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などのＣＩＳＣ保有細胞を作製する方法が提供され、ここでこの細胞は、二量体ＣＩＳＣを発現する。この方法は、哺乳動物細胞などの細胞に対して、本明細書に記載の実施形態もしくは実施形態のいずれか１つのタンパク質配列、または本明細書に記載の実施形態もしくは実施形態の発現ベクターの送達、及び哺乳動物細胞などの細胞への送達を包含し得る。いくつかの実施形態では、このタンパク質配列は、第１及び第２の配列を含む。いくつかの実施形態では、この第１の配列は、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、特定の長さ（好ましくは長さが最適化されている）のリンカー、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、この第２の配列は、第２の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、特定の長さ（好ましくは長さが最適化されている）のリンカー、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする。いくつかの実施形態では、このスペーサーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸長、または前述の長さのいずれか２つによって定義される範囲内の長さである。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＩＬ２ＲｂまたはＩＬ２Ｒｇドメインなどのインターロイキン－２シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＦＫＢＰまたはＦＲＢまたはそれらの一部を含む、ラパマイシンまたはラパログに結合する結合ドメインである。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は前駆体Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は神経幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＮＫ細胞である。

【0166】

細胞の内部のシグナルを活性化する方法
いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞の内部でシグナルを活性化する方法が提供される。この方法は、本明細書に記載の哺乳動物細胞などの細胞を提供することを包含し得、この細胞は本明細書に示されるタンパク質配列または本明細書に示される発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載の二量体ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に記載のベクターを発現することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、哺乳動物細胞などの細胞をリガンドと接触させ、それが第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素を二量体化させ、それがシグナルを細胞の内部に伝達することを包含する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ラパマイシンまたはラパログである。いくつかの実施形態では、このリガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。いくつかの実施形態では、二量体化を誘導するためのリガンドの有効量は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｎＭの量で、または上記の値のいずれか２つによって定義される範囲内の濃度で提供される。

【0167】

いくつかの実施形態では、これらのアプローチで使用されるリガンドは、ラパマイシンまたはラパログであり、これには、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ２３５７３もしくはＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせを含む。さらなる有用なラパログとしては、例えば、ラパマイシンに対して以下の修飾のうちの１つ以上を有するラパマイシンのバリアントが挙げられる：Ｃ７、Ｃ４２及び／またはＣ２９のメトキシでの脱メチル化、除去または置換；Ｃ１３、Ｃ４３及び／またはＣ２８でのヒドロキシの除去、誘導体化または置換；Ｃ１４、Ｃ２４及び／またはＣ３０でのケトンの還元、除去または誘導体化；５員のプロリル環による６員のピペコレート環の置換；及び／またはシクロヘキシル環上の別の置換もしくはシクロヘキシル環の置換シクロペンチル環での置換。さらなる有用なラパログとしては、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、もしくはゾタロリムス、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。

【0168】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞の内部のシグナルを検出することは、シグナル伝達経路の結果であるマーカーを検出する方法によって達成され得る。したがって、例えば、シグナルは、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、または他のタンパク質検出及び定量方法のプロセスを通して、哺乳動物細胞などの細胞中のＡｋｔまたは他のシグナル伝達マーカーのレベルを決定することによって検出され得る。検出のためのマーカーとしては、例えば、ＪＡＫ、Ａｋｔ、ＳＴＡＴ、ＮＦ－κ、ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、ＪＮＫ、ＥＲＫ、もしくはＲａｓ、または細胞シグナル伝達事象を示す他の細胞シグナル伝達マーカーが挙げられる。

【0169】

いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、サイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、ＩＬ２Ｒシグナル伝達に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルの伝達は、サイトカイン受容体の下流標的のリン酸化に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、シグナルを活性化する方法は、哺乳動物細胞などのＣＩＳＣ発現細胞における増殖、及び非ＣＩＳＣ発現細胞における付随する抗増殖を誘導する。

【0170】

細胞シグナル伝達が起こるためには、サイトカイン受容体が二量体化またはヘテロ二量体化しなければならないだけでなく、それらは立体配座変化が起こるための適切な立体配置になければならない（Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．ＮＭＲ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓｍａｌｌ，Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｙｌ Ｔｐｏ Ｍｉｍｉｃ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｊｕｘｔａｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８２，２００７）。したがって、受容体二量体化またはヘテロ二量体化のみでは受容体活性化を促進するには不十分であるため、シグナル伝達ドメインの正しい立体配座配置と組み合わせた二量体化は、適切なシグナル伝達のための望ましいプロセスである。本明細書に記載の化学誘導シグナル伝達複合体は、好ましくは下流のシグナル伝達事象が起こるために正しい向きにある。図４Ａ～４Ｂ及び５のウエスタンブロットに示すように、本明細書に記載されるシグナル伝達複合体の首尾よい配向及び二量体化を示す特徴である両方のＡｋｔ活性化（細胞増殖を促進するために必要）を含む、複数の下流シグナル伝達事象がリガンドの存在下で起こる。

【0171】

細胞集団の選択的増幅方法
いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞集団を選択的に増幅する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載の哺乳動物細胞などの細胞を提供することを包含し、この細胞は、本明細書に示されるタンパク質配列または本明細書に示される発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、この方法はさらに、本明細書に記載の二量体ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列を発現すること、または本明細書に記載のベクターの発現をさらに包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、哺乳動物細胞などの細胞をリガンドと接触させ、それが第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素を二量体化させ、それがシグナルを細胞の内部に伝達することを包含する。いくつかの実施形態では、リガンドはラパマイシンまたはラパログである。いくつかの実施形態では、二量体化を誘導するために提供されるリガンドの有効量は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｎＭの量、または上記の値のいずれか２つによって定義される範囲内の濃度である。

【0172】

いくつかの実施形態では、使用されるリガンドは、ラパマイシンまたはラパログであり、これには、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピンもしくはＡＰ２３５７３、ＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせを含む。さらなる有用なラパログには、例えば、ラパマイシンに対して以下の修飾のうちの１つ以上を有するラパマイシンのバリアントが含まれ得る：Ｃ７、Ｃ４２及び／またはＣ２９でのメトキシの脱メチル化、除去または置換；Ｃ１３、Ｃ４３及び／またはＣ２８でのヒドロキシの除去、誘導体化または置換；Ｃ１４、Ｃ２４及び／またはＣ３０でのケトンの還元、除去または誘導体化；５員のプロリル環による６員のピペコレート環の置換；及び／またはシクロヘキシル環上の別の置換、またはシクロヘキシル環の置換シクロペンチル環での置換。さらなる有用なラパログとしては、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、もしくはゾタロリムス、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である。

【0173】

いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞などの細胞集団の選択的増幅は、２つの異なる遺伝子改変事象が起こったときにだけ起こる。一方の遺伝子改変事象は、二量体化学誘導シグナル伝達複合体の一構成要素であり、他方の遺伝子改変事象は、二量体化学誘導シグナル伝達複合体の他方の構成要素である。両方の事象が哺乳動物細胞集団のような細胞集団内で起こる場合、化学誘導シグナル伝達複合体構成要素はリガンドの存在下で二量体化し、活性な化学誘導シグナル伝達複合体及び細胞の内部へのシグナルの生成をもたらす。図５のウエスタンブロットに示されるように、Ａｋｔの活性化及びリン酸化は、両方の遺伝子改変事象を発現する細胞集団の有意な選択的増幅を達成するのに望ましい、完全増殖シグナルの達成の成功を示す。他のシグナル伝達マーカーもまた検出され得るが、Ａｋｔ活性化と組み合わせたこれらの事象の達成のみが、両方の遺伝子改変事象が哺乳動物細胞集団などの所定の細胞集団において生じた改変細胞集団の選択的増幅を可能にするのに十分な細胞増幅を達成し得る。

【0174】

図６は、哺乳動物細胞集団などの細胞集団の選択的増幅のための例示的な方法を示す。図６に示すように、ＩＬ２Ｒを含むＣＩＳＣを調製した。ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣの各構造（すなわち１２１０、１２１１、及び１２３３）を、２Ａ配列を用いてＧＦＰと一緒にシス連結させ、そしてレンチウイルス発現カセット中のＭＮＤプロモーターの制御下に置いた。

【0175】

各ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ構造からのレンチウイルス粒子を作製し、初代ヒトＴ細胞を形質導入するために使用した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を６０時間活性化した。次いで、その細胞を、ＩＬ２／７／１５を含む１ｍＬの培地中に１ウェルあたり１００万個の細胞をプレートすることによって２４ウェルディッシュにプレートした。レンチウイルスを、ビーズの有無にかかわらず、２４ウェルディッシュ中に４μｇ／ｍＬの硫酸プロタミンを含む１５μＬのＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ及び３μＬのＭＮＤ－ＧＦＰ対照（０．５ｍＬ培地）を用いて形質導入した。次にこの細胞を３３℃で、３０分間８００ｇで回転接種し、続いて４時間のインキュベーション後に１．５ｍＬの培地を添加した。形質導入したＴ細胞を、５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ２、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ５、及び５ｎｇ／ｍＬのＩＬ１７を含むサイトカインと共に３７℃で４８時間インキュベートした。ＧＦＰシグナルを決定し、そして形質導入されたＴ細胞のＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣレベルを決定した。形質導入効率は、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣについては１０～３０％、そしてＭＮＤ－ＧＦＰについては約８０％であった。

【0176】

形質導入後、細胞をＩＬ２中で２日間成長させ、次いで半分に分け、示されているように、半分をＩＬ２単独で及び半分をラパマイシン単独で成長させた。Ｔ細胞を、ラパマイシン（１ｎＭ）またはＩＬ２で２日間処理し、細胞を２ｍＬの培地を含む２４ウェルディッシュ中に１００万細胞／ウェルでプレートした。Ｔ細胞生存率を決定し、そしてＧＦＰ＋集団の発現及びＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現を、抗ＦＲＢ抗体及び二次ＡＰＣ抗体を使用することによって決定した。図７Ａ～７Ｂ、及び図８～１１は、それぞれの集団におけるＧＦＰ及びＦＲＢの発現のフローサイトメトリー結果を示す。図８に示されるように、１２３３構造に関して、ラパマイシン単独で培養された細胞を、シス連結ＧＦＰマーカーによって読み出されるように、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現について富化する。

【0177】

図１２は、図３に示すＣＩＳＣ構築物についてのラパマイシンの存在下での細胞増殖の増大をグラフで示す。Ｖ３は、増殖にとって最も効率的な構造である。図１３は、ラパマイシン処理に応答してＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３がヒトＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を支持することをグラフで示す。

【0178】

上記の方法を使用して、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ発現Ｔ細胞はラパマイシンの存在下でＳＴＡＴ５経路を誘導することも示した。図１４のフローセルデータによって示されるように、Ｖ３構築物はＳＴＡＴ５経路シグナル伝達のための最も効率的な構造である。

【0179】

本明細書に記載されているのと同様の方法は、追加のラパマイシン類似体を用いて実施してもよい。例えば、本明細書に記載の方法は、ＡＰ２１９６７を用いて実施した。図１５のフローセルデータに示すように、ＡＰ２１９６７に応答して、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ Ｖ３構築物はヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の生存を促進する。さらに、ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣは、図１６にグラフで示すように、ＡＰ２１９６７処理に応答してＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を促進する。図１７は、ラパマイシン及びその類似体を含む様々な処理によるＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣで増幅させたＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞毒性を示しており、長期増幅後の正常な毒性を示している。

【0180】

ＩＬ２Ｒ－ＣＩＳＣ細胞を、細胞の成長及び増殖を中和したＩＬ－２中和抗体に曝した（図１８及び１９）。これは、ＣＩＳＣ誘導性増幅が自己分泌またはパラ分泌刺激によるものではないことを示している。

【0181】

ＩＬ２－ＣＩＳＣ誘導シグナル伝達経路を分析して、シグナル伝達経路の規模が臨床的に関連のある活性を生じるのに十分であるか否かを決定した。図２０のフローセルデータに示すように、ＣＩＳＣ Ｖ３増幅細胞についてのＴ細胞マーカー分析を行った。

【0182】

本明細書に記載の構造及び／または構築物は限定的ではないと意図していることが当業者によって理解されるべきである。したがって、本明細書に記載のＶ１、Ｖ２、及びＶ３構築物、ならびに本明細書に記載の他の構造及び／または構築物に加えて、追加の構造を使用してもよい。例えば、図２１に示されるように、ＦＫＢＰ及び／またはＦＲＢならびにＩＬ２Ｒｇ及びＩＬ２Ｒｂサブユニット配列に配置された種々のスペーサー及びリンカーを含む、Ｖ４、Ｖ５、Ｖ６及びＶ７と呼ばれるさらなる構築物を使用した。これらの比較の構造を用いるための実験的なプロトコール及びデザインを図２２にまとめる。要するに、この方法はＰＢＭＣ３フィーダー細胞を解凍することを包含し、そしてＣＤ４＋細胞は抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの存在下で単離された。このビーズを除去し、５００μＬ中８００×ｇでＶ４、Ｖ５、Ｖ６、またはＶ７の１つを用いて回転接種した。回転接種後、１．５ｍＬのＴＣＭ＋サイトカインを添加した。次いで、各構築物を、無処理、１００ｎＭのＡＰ２１９６７、１ｎＭのラパマイシン、または５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む様々な条件で処理した。次いで、各構築物を有する細胞の増幅を測定した。細胞の増幅は、図２３に示すフローセルデータに示されている。図２４は、様々な構築物を有する細胞の増幅をグラフで示し、ラパマイシン誘導性増幅が、ＴＭリンカーに対して、増幅ＥＣドメインで試験された全てのＣＩＳＣ構造について同様であることを示す。

【0183】

さらに、ＭＮＤプロモーター及びＣＩＳＣの標的化ノックインを試験して、遺伝子標的化Ｔ細胞を富化及び／または増幅させた。図２５は、ＭＮＤプロモーターの標的化ノックインのための遺伝子構築物を示しており、そして図２６は、標的化ノックインのために使用される方法プロトコールの一実施形態をグラフで示す。要するに、ＰＢＭＣフィーダー細胞を解凍し、ＣＤ４＋細胞を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの存在下で単離した。そのビーズを除去し、Ｃａｓ９／ｇＲＮＡリボ核タンパク質（ＲＮＰ）を添加した。次いで、その構築物を、無処理、１０ｎＭのＡＰ２１９６７、１０ｎＭのラパマイシン、または１０ｎＭのラパマイシン＋５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む様々な条件で処理した。図２７及び２８に示されるように、ラパマイシンとの接触は、遺伝子標的化細胞の富化をもたらしたが、ラパマイシン及びＩＬ－２との接触は、富化を示さなかった。

【0184】

本開示は、特定の代替例を参照して上記で説明されてきた。しかしながら、本開示の範囲内で、上記以外の他の代替例も同様に可能である。上記のものとは異なる方法ステップが、本開示の範囲内で提供され得る。本明細書に記載の異なる特徴及びステップは、記載したもの以外の他の組み合わせで組み合わせてもよい。

【0185】

本明細書における複数及び／または単数形の用語の使用に関して、当業者は、文脈及び／または用途に適切であるように、複数形から単数形に、及び／または単数形から複数形に翻訳し得る。明確にするために、様々な単数形／複数形の置換を本明細書に明示的に表してもよい。

【0186】

一般に、本明細書、特に添付の特許請求の範囲（例えば、添付の特許請求の範囲の本文）で使用される用語は、一般に「公開」の用語として意図されることが当業者には理解されよう（例えば、「含んでいる」という用語は、「含むがこれらに限定されない」と解釈されるべきであり、「有する」という用語は、「少なくとも有する」と解釈されるべきであり、この「含む」という用語は、「含むがこれらに限定されない」などと解釈されるべきである）。

【0187】

さらに、本開示の特徴または態様がマーカッシュ（Ｍａｒｋｕｓｈ）グループに関して説明されている場合、当業者は、本開示がマーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても説明されていることを認識するであろう。

【0188】

第１から第１１の態様の代替例の特徴のいずれも、本明細書で識別されている全ての態様及び代替例に適用可能である。さらに、第１から第１１の態様の代替例の任意の特徴は独立して、本明細書に記載の他の代替例と、部分的または全体的に組み合わせ可能であり、例えば１つ、２つ、または３つ以上の代替例は、全体的または部分的に組み合せ可能である。さらに、第１から第１１の態様の代替例の特徴のいずれも、他の態様または代替例に対して必要に応じて作製され得る。様々な代替例及び実装に関して上述したが、１つ以上の個々の代替例に記載されている様々な特徴、態様、及び機能性は、それらが記載されている特定の代替例への適用性に限定されず、その代わりに、そのような代替例が記載されているか否か、及びそのような特徴が記載されている代替例の一部として提示されているか否かにかかわらず、単独でまたは様々な組み合わせで、本出願の他の代替例の１つ以上に適用され得ることが理解されるべきである。したがって、本出願の広さ及び範囲は、上述の代替例のいずれによっても限定されるべきではない。

【0189】

本明細書に引用された全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる刊行物及び特許または特許出願が本明細書に含まれる開示と矛盾する場合、本明細書は、そのような矛盾するいかなる資料よりも優先されるか及び／または優位であることを意図している。参照により本明細書に組み込まれる刊行物及び特許または特許出願が本明細書に含まれる開示と矛盾する場合、本明細書はそのような矛盾するいかなる資料よりも優先されるか及び／または優位であることを意図している。

【0190】

本発明は、以下の発明を含む。
［１］二量体化活性化可能化学誘導シグナル伝達複合体（ＣＩＳＣ）の構成要素をコードするタンパク質配列であって：第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする、第１の配列と；第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含む、第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする、第２の配列と；を含み、ここで、前記第１のＣＩＳＣ構成要素及び前記第２のＣＩＳＣ構成要素は、発現されると、それらが好ましくは同時に、リガンドの存在下で二量体化してシグナル伝達コンピテントＣＩＳＣを作り出すように配置されている、前記タンパク質配列。
［２］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素が二量体化してヘテロ二量体またはホモ二量体を形成する、［１］に記載のタンパク質配列。
［３］前記二量体ＣＩＳＣが合成ＣＩＳＣである、［１］～［２］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［４］前記第１及び第２の細胞外ドメインが膜貫通ドメインのＮ末端にある、［１］～［３］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［５］前記第１の細胞外結合ドメインまたはその一部が、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ドメインまたはその一部を含む、［１］～［４］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［６］前記第２の細胞外結合ドメインまたはその一部が、ＦＫＢＰラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインまたはその一部を含む、［１］～［５］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［７］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の前記膜貫通ドメインが天然の膜貫通ドメインを含む、［１］～［６］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［８］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の前記膜貫通ドメインがＩＬ－２受容体膜貫通ドメインを含む、［１］～［７］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［９］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の前記シグナル伝達ドメインまたはその一部が、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む、［１］～［８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１０］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の前記シグナル伝達ドメインまたはその一部が、サイトカインシグナル伝達ドメインまたは抗原シグナル伝達ドメインを含む、［１］～［９］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１１］前記第１のＣＩＳＣ構成要素の前記シグナル伝達ドメインが、インターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）ドメインを含む、［１］～［１０］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１２］前記第２のＣＩＳＣ構成要素の前記シグナル伝達ドメインが、インターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）ドメインを含む、［１］～［１１］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１３］一方の細胞外結合ドメインが、ＦＫＢＰドメインまたはその一部を含み、他方の細胞外結合ドメインが、ＦＲＢドメインまたはその一部を含み、前記細胞外結合ドメインが、リガンドに、好ましくは同時に結合されるように構成されている、［１］に記載のタンパク質配列。
［１４］一方の細胞外結合ドメインが、セレブロンサリドマイド結合ドメインを含み、他方の細胞外結合ドメインが、免疫調節イミド薬（ＩＭＩＤ）クラス薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）に結合したときにセレブロンサリドマイド結合ドメインと相互作用するドメインを含み、ここで、前記細胞外結合ドメインは、同時にＩＭＩＤリガンドに結合するように構成されている、［１］に記載のタンパク質配列。
［１５］一方の細胞外結合ドメインが、ヘテロ二量体化タンパク質ドメイン対の一方のメンバーを含み、他方の細胞外結合ドメインがヘテロ二量体化ドメイン対の他方の構成要素を含み、前記ドメインがリガンドに、好ましくは同時に結合するように構成されている、［１］のタンパク質配列。
［１６］前記リガンドが抗体、タンパク質、小分子、または薬物である、［１］～［１５］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１７］前記リガンドがラパマイシンまたはラパログ、例えば、エベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ１９０３、もしくはＡＰ２３５７３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせであるか、あるいは前記リガンドがＩＭＩＤクラスの薬物（例えばサリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である、［１］～［１６］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１８］前記リガンドが、０．０５ｎＭ～１００ｎＭ、例えば、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１．０ｎＭ、５．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、１５．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、２５．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、３５．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、４５．０ｎＭ、５０．０ｎＭ、５５．０ｎＭ、６０．０ｎＭ、６５．０ｎＭ、７０．０ｎＭ、７５．０ｎＭ、８０．０ｎＭ、９０．０ｎＭ、９５．０ｎＭ、もしくは１００ｎＭなどの量で、または前述の量のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の量で存在するか、または提供される、［１］～［１７］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［１９］前記第１の配列が、配列番号７に示されるアミノ酸配列または前記タンパク質配列をコードする核酸を含む、［１］～［１８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［２０］前記第２の配列が、配列番号８に示されるアミノ酸配列または前記タンパク質配列をコードする核酸を含む、［１］～［１９］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［２１］［１］～［２０］のいずれか１項に記載のタンパク質配列の第１及び／または第２の配列をコードする核酸を含む発現ベクター。
［２２］前記ベクターがＲＮＡまたはＤＮＡである、［２１］に記載の発現ベクター。
［２３］前記ベクターがレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、［２１］～［２２］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［２４］プロモーターをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、［２２］～［２３］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［２５］前記プロモーターが誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである、［２４］に記載の発現ベクター。
［２６］前記ヌクレオチド配列が配列番号２０に示される核酸配列を含む、［２４］～［２５］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［２７］ヘテロ二量体化学誘導シグナル伝達複合体発現のための哺乳動物細胞などの細胞であって、［１］～［２０］のいずれか１項に記載のタンパク質配列または［２０］～［２５］のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む前記細胞。
［２８］前記細胞が前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である、［２７］に記載の細胞。
［２９］前記細胞が造血幹細胞である、［２７］～［２８］のいずれか１項に記載の細胞。
［３０］前記細胞がＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である、［２７］記載の細胞。
［３１］前記細胞が、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である、［３０］に記載の細胞。
［３２］前記細胞が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である、［３０］に記載の細胞。
［３３］哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法であって：［２７］～［３２］のいずれか１項に記載の細胞を提供すること；［１］～［２０］のいずれか１項に記載のＣＩＳＣ構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または［２１］～［２６］のいずれか１項に記載の発現ベクターを前記細胞内で発現すること；ならびに前記細胞をリガンドと接触させ、それによって前記第１及び第２のＣＩＳＣを二量体化させ、これが前記細胞の前記内部にシグナルを伝達すること；を包含する、前記方法。
［３４］前記リガンドが抗体もしくはその一部、タンパク質、小分子、または薬物を含む、［３３］に記載の方法。
［３５］前記リガンドが、ラパマイシンまたはラパログ、例えばエベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、ＡＰ１９０３、もしくはＡＰ２３５７３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせであるか、あるいは前記リガンドが、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である、［３３］～［３４］のいずれか１項に記載の方法。
［３６］前記リガンドが、０．０５ｎＭ～１０ｎＭ、例えば０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１．０ｎＭ、５．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、１５．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、２５．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、３５．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、４５．０ｎＭ、５０．０ｎＭ、５５．０ｎＭ、６０．０ｎＭ、６５．０ｎＭ、７０．０ｎＭ、７５．０ｎＭ、８０．０ｎＭ、９０．０ｎＭ、９５．０ｎＭ、もしくは１００ｎＭなどの量で、または前述の量のうちのいずれか２つによって定義される範囲内の量で存在するか、または提供される、［３３］～［３５］のいずれか１項に記載の方法。
［３７］前記シグナルの伝達がサイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす、［３３］～［３６］のいずれか１項に記載の方法。
［３８］前記シグナルの伝達がインターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達に影響を及ぼす、［３３］～［３７］のいずれか１項に記載の方法。
［３９］前記シグナルの伝達がサイトカイン受容体の下流標的のリン酸化に影響を及ぼす、［３３］～［３８］のいずれか１項に記載の方法。
［４０］前記リガンドとの接触に続いて、前記ＣＩＳＣ構成要素を発現する細胞が異種細胞集団から選択的に増幅される、［３３］～［３９］のいずれか１項に記載の方法。
［４１］前記リガンドがラパマイシンを含み、前記ＣＩＳＣ構成要素を発現する前記細胞が、ＣＩＳＣ発現細胞における増殖を選択的に誘導することによってインビトロまたはインビボで選択的に増幅される一方で、非ＣＩＳＣ発現細胞において抗増殖効果を引き起こす、［３３］に記載の方法。
［４２］前記選択的に増幅する細胞が、２つの異なる遺伝子標的化事象を受け、両方の遺伝子標的化事象を受けた細胞のみが前記リガンドとの接触後に増幅することができるように、各遺伝子標的化事象が前記細胞にＣＩＳＣ対の一方の構成要素を与える、［４０］～［４１］のいずれか１項に記載の方法。
［４３］ＣＩＳＣの構成要素をコードするタンパク質配列であって：ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットガンマ（ＩＬ２Ｒｇ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第１のＣＩＳＣ構成要素をコードする第１の配列；ならびにホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びインターロイキン－２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２Ｒｂ）シグナル伝達ドメインまたはその一部を含む第２のＣＩＳＣ構成要素をコードする第２の配列；を含みここで前記第１のＣＩＳＣ構成要素及び前記第２のＣＩＳＣ構成要素は、発現されると、２つのホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下で、約２５％の第１のＣＩＳＣ構成要素ホモ二量体、２５％の第２のＣＩＳＣ構成要素ホモ二量体、及び５０％の第１／第２のＣＩＳＣ構成要素ヘテロ二量体という集団を形成するように、配置される、前記タンパク質配列。
［４４］前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素の前記シグナル伝達ドメインまたはその一部が、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む、［４３］に記載のタンパク質配列。
［４５］前記ホモ二量体化ドメインが、リガンド、例えばＡＰ１９０３または関連のラパログ、例えば、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、もしくはＡＰ２３５７３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせに対して、好ましくは同時に結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはその変異体またはその一部を含む、［４３］に記載のタンパク質配列。
［４６］前記第１の配列が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列または前記タンパク質配列をコードする核酸を含む、［４３］～［４５］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［４７］前記第２の配列が、配列番号１０もしくは配列番号１２に示されるアミノ酸配列または前記タンパク質配列をコードする核酸を含む、［４３］～［４６］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［４８］［４３］～［４７］のいずれか１項に記載のタンパク質配列の前記第１及び／または第２の配列をコードする核酸を含む発現ベクター。
［４９］前記ベクターがＲＮＡまたはＤＮＡである、［４８］に記載の発現ベクター。
［５０］前記ベクターがレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、［４８］～［４９］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［５１］プロモーターをコードする核酸配列をさらに含む、［４８］～［５０］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［５２］前記プロモーターが誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである、［５１］に記載の発現ベクター。
［５３］ＣＩＳＣ発現用の哺乳動物細胞などの細胞であって、［４３］～［４７］のいずれか１項に記載のタンパク質配列または［４８］～［５２］のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む前記細胞。
［５４］前記細胞が前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である、［５３］に記載の細胞。
［５５］前記細胞が造血幹細胞である、［５３］～［５４］のいずれか１項に記載の細胞。
［５６］前記細胞がＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である、［５４］記載の細胞。
［５７］前記細胞が、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である、［５６］記載の細胞。
［５８］前記細胞が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である、［５６］に記載の細胞。
［５９］哺乳動物細胞などの細胞の内部へシグナルを活性化する方法であって：［５３］～［５８］のいずれか１項に記載の細胞を提供すること；［４３］～［４７］のいずれか１項に記載のホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または［４８］～［５２］のいずれか１項に記載の発現ベクターを前記細胞内で発現すること；ならびに前記細胞を二量体化剤と接触させ、それによって前記第１及び第２のＣＩＳＣ構成要素を二量体化させ、それがシグナルを前記細胞の前記内部に伝達すること、を包含する、前記方法。
［６０］前記二量体化剤が、リガンド、例えば、ＡＰ１９０３または関連分子、ラパマイシン、またはラパログ、例えばエベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、もしくはＡＰ２３５７３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである、［５９］に記載の方法。
［６１］前記シグナルの伝達がサイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす、［５９］～［６０］のいずれか１項に記載の方法。
［６２］前記シグナルの伝達がインターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達に影響を及ぼす、［５９］～［６０］のいずれか１項に記載の方法。
［６３］前記二量体化剤との接触に続いて、前記ＣＩＳＣ構成要素を発現する細胞が、異種細胞集団から選択的に増幅される、［５９］～［６２］のいずれか１項に記載の方法。
［６４］ラパマイシンが前記二量体化剤であり、ＣＩＳＣ発現細胞における増殖を選択的に誘導することによってインビトロまたはインビボで細胞集団を選択的に増幅させ、一方で、非ＣＩＳＣ発現細胞において抗増殖効果を引き起こすために使用される、［５９］～［６３］のいずれか１項に記載の方法。
［６５］ＣＩＳＣをコードするタンパク質配列であって、ホモ二量体化ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含むＣＩＳＣ構成要素をコードする配列；を含み、ここで、前記ＣＩＳＣ構成要素は、発現されると、前記ホモ二量体化ドメインを架橋するように構成されたリガンドの存在下でホモ二量体の集団を形成するように配置されている、前記タンパク質配列。
［６６］前記シグナル伝達ドメインまたはその一部が、１つ以上の連結細胞質シグナル伝達ドメインを含む、［６５］記載のタンパク質配列。
［６７］前記ホモ二量体化ドメインが、好ましくは同時に、ラパマイシンなどのリガンドに結合するように構成された、ＦＫＢＰドメインまたはＦＲＢまたはその一部を含む、［６５］に記載のタンパク質配列。
［６８］前記配列が、配列番号１３もしくは１４に示されるアミノ酸配列、または前記タンパク質配列をコードする核酸を含む、［６５］～［６７］のいずれか１項に記載のタンパク質配列。
［６９］［６５］～［６８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列をコードする核酸を含む発現ベクター。
［７０］前記ベクターがＲＮＡまたはＤＮＡである、［６９］に記載の発現ベクター。
［７１］前記ベクターがレンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、［６９］～［７０］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［７２］プロモーターをコードする核酸配列をさらに含む、［６９］～［７１］のいずれか１項に記載の発現ベクター。
［７３］前記プロモーターが誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターである、［７２］に記載の発現ベクター。
［７４］ＣＩＳＣ発現のための、哺乳動物細胞などの細胞であって、［６５］～［６８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列または［６９］～［７３］のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む、前記細胞。
［７５］前記細胞が前駆体Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞である、［７４］に記載の細胞。
［７６］前記細胞が造血幹細胞である、［７４］～［７５］のいずれか１項に記載の細胞。
［７７］前記細胞がＣＤ３４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋細胞である、［７６］に記載の細胞。
［７８］前記細胞が、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性リンパ球細胞である、［７７］に記載の細胞。
［７９］前記細胞が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群より選択されるＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球細胞である、［７７］に記載の細胞。
［８０］哺乳動物細胞などの細胞の内部へのシグナルを活性化する方法であって：［７４］～［７９］のいずれか１項に記載の細胞を提供すること；［６５］～［６８］のいずれか１項に記載のホモ二量体ＣＩＳＣ構成要素をコードするタンパク質配列を発現すること、または［６９］～［７３］のいずれか１項に記載の発現ベクターを前記細胞内で発現すること；ならびに前記細胞を二量体化剤と接触させ、それによって前記ＣＩＳＣ構成要素を二量体化させ、それがシグナルを前記細胞の前記内部に伝達すること、を包含する、前記方法。
［８１］前記二量体化剤が、リガンド、例えば、ＡＰ１９０３または類似の分子、ラパマイシン、またはラパログ、例えばエベロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、塩酸ベニジピン、もしくはＡＰ２３５７３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせであるか、あるいは前記リガンドが、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイドまたは関連類似体）である、［８０］に記載の方法。
［８２］前記シグナルの伝達がサイトカインシグナル伝達に影響を及ぼす、［８０］～［８１］のいずれか１項に記載の方法。
［８３］前記シグナルの伝達がインターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）シグナル伝達に影響を及ぼす、［８０］～［８２］のいずれか１項に記載の方法。
［８４］前記二量体化剤との接触に続いて、前記ＣＩＳＣを発現する細胞が、異種細胞集団から選択的に増幅される、［８０］～［８３］のいずれか１項に記載の方法。
［８５］キットであって、以下：（ａ）［１］～［２０］、［４３］～［４７］、もしくは［６５］～［６８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列；（ｂ）［２１］～［２６］、［４８］～［５２］、もしくは［６９］～［７３］のいずれか１項に記載の発現ベクター；及び／または（ｃ）［２７］～［３２］、［５３］～［５８］、もしくは［７４］～［７９］のいずれか１項に記載の細胞、のうちの１つ以上を含む前記キット。
［８６］細胞の内部へのシグナルを選択的に活性化するためのシステムであって：［１］～［２０］、［４３］～［４７］、または［６５］～［６８］のいずれか１項に記載のタンパク質配列をコードする核酸を含む、［２１］～［２６］、［４８］～［５２］、または［６９］～［７３］のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む、［２７］～［３２］、［５３］～［５８］、または［７４］～［７９］のいずれか１項に記載の細胞、を含む、前記システム。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【配列表】

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