特開 2023-37453 １８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023037453

(43)【公開日】2023-03-15

(54)【発明の名称】１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07J 63/00 20060101AFI20230308BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20230308BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230308BHJP

【ＦＩ】

C07J63/00

A61K31/704

A61P35/00

【審査請求】未請求

【請求項の数】2

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021144224

(22)【出願日】2021-09-03

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和３年８月３１日 日本生薬学会第６７回年会［東京］講演要旨集（第２５０頁） １

(71)【出願人】

【識別番号】595132360

【氏名又は名称】株式会社常磐植物化学研究所

(74)【代理人】

【識別番号】100121658

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 昌義

(72)【発明者】

【氏名】立崎 仁

(72)【発明者】

【氏名】石川 勉

【テーマコード（参考）】

4C086

4C091

【Ｆターム（参考）】

4C086AA04

4C086EA10

4C086NA20

4C086ZB26

4C091AA06

4C091BB20

4C091CC01

4C091DD01

4C091EE06

4C091FF02

4C091FF06

4C091FF17

4C091GG03

4C091GG05

4C091HH01

4C091JJ03

4C091KK12

4C091LL03

4C091LL06

4C091MM03

4C091NN01

4C091PA02

4C091PA05

4C091PB01

4C091QQ05

4C091QQ15

4C091RR08

4C091RR11

(57)【要約】

【課題】より高い純度で１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類を分離・製造する方法を提供する。
【解決手段】本発明の一観点に係る１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法は、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合及び加熱して前記オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させて１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩沈殿物として得るステップと、平衡混合物を非プロトン性極性溶媒中においてアルキル化剤と処理し、１８α－トリアルキルエステル体に誘導し分離精製するステップと、分離精製した前記１８α－トリエステル異性体をアルコール性水酸化アルカリ水溶液により加水分解するステップを有する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合及び加熱して前記オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させて１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩沈殿物として得るステップ、
前記平衡混合物を非プロトン性極性溶媒中においてアルキル化剤と処理し、１８α－トリアルキルエステル体に誘導し分離精製するステップ、
分離精製した前記１８α－トリエステル異性体をアルコール性水酸化アルカリ水溶液により加水分解するステップ、を有する１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法。

【請求項2】

前記オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドは、下記式で示される請求項１記載の１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法。

【化1】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

カンゾウ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｓｐ．）は、抗潰瘍活性を初め多くの有用な薬理活性を有し、多くの漢方製剤に配合される極めて重用な薬用植物である。

【0003】

そのカンゾウの主成分は、甘味性サポニンのグリチルリチン酸であって、化学構造的にはＣ環部に特徴的な官能基としてα，β－不飽和ケトンを含み、１８位がβ－配置であるオレアナン型トリテルペンジグルクロナイドに属する。

【0004】

一方、カンゾウにはグリチルリチン酸関連構造類似体も少量成分として含まれている。例えば、２３位がヒドロキシメチル基に置換された化合物や、２０位置換基の立体化学が異なる化合物などが知られている。

【0005】

ところで、１８位水素が反転した１８α－グリチルリチン酸は、１８β－グリチルリチン酸を水酸化アルカリ（カリウム又はナトリウム）水溶液中で加熱還することで、両異性体からなる熱力学的平衡混合物中の主要生成物として製造される旨が報告されている（例えば下記特許文献１参照）。

【0006】

また、下記特許文献２には、精製した１８位異性化グリチルリチンメチルエステルをエタノール中希水酸化アルカリ水溶液と加熱した後、酸性水溶液中に加え、異性化グリチルリチンを沈殿物として得る旨が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特公平２－２２０８０号公報

【特許文献2】中国特許出願公開第１０４８６１０３１号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

発明者らは高純度の１８α－グリチルリチン酸を分離・製造することを目的として、上記特許文献１に記載の技術を参考に水酸化アルカリ水溶液を用いて異性化反応を追試し、得られた反応混合物から１８α－グリチルリチン酸の精製を試みたが、目的とする１８α－グリチルリチン酸は、原料の１８β－グリチルリチン酸とほぼ同一の物理化学的挙動を示すため、高い純度で分離することには成功しなかった。また上記特許文献２に記載の技術を用いても高い純度で分離するには十分ではなかった。

【0009】

そこで、本発明は上記課題に鑑み、より高い純度で１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類を分離・製造する方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

発明者らは、上記課題について検討を行ったところ、反応混合物の分離精製が困難な原因の一つとして、構造が極めて類似し同等な物性が予想されることに加え、対象とする化合物が二つのグルクロン酸残基を含むトリテルペンカルボン酸構造を持つことにより極めて極性が高く、クロマトグラフィー等を利用した精製で使用可能な溶媒等が限定されるためではないかと考えた。

【0011】

そこで、異性化反応後に得られるグリチルリチン酸アルカリ塩の混合物を、ジメチルスルホキシド（またはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）中のジメチル硫酸（またはヨウ化メチル）で処理することによってメチルエステル誘導体にした結果、１８β－グリチルリチン酸トリメチルエステルと１８α－グリチルリチン酸トリメチルエステルのクロマトグラフィー的挙動には変化は認められなかったものの、メタノールに対する溶解性が大きく異なることとなり、分別再結晶により後者が難溶性化合物として単離精製が可能なことが判明した。

【0012】

すなわち、本発明の一観点に係る１８α－オレアナン型トリテルペンジグルクロナイド類の製造方法は、（１）オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合及び加熱して前記オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させて１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を、酢酸を含むアルコール溶液に滴下して、使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩の沈殿物として得るステップ、（２）平衡混合物を非プロトン性極性溶媒中においてアルキル化剤と処理し、１８α－トリアルキルエステル体に誘導し分離精製するステップ、（３）分離精製した前記１８α－トリエステル異性体をアルコール性水酸化アルカリ水溶液により加水分解し、酢酸を含むアルコール溶液に滴下して、使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩の沈殿物として得るステップ、を有するものである。

【0013】

また、本観点において、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドは、下記式で示されるものであることが好ましい。

【化1】

【発明の効果】

【0014】

以上、本発明によって、より高い純度で１８α－オレアナン型トリテルペンジグルクロナイド類を分離・製造する方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】 ^１Ｈ ＮＭＲのチャートを示す。

【図2】 ^１３Ｃ ＮＭＲのチャートを示す。

【発明を実施するための最良の形態】

【0016】

以下、本発明の実施形態について図面を用いて詳細に説明する。ただし、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態、実施例において示す具体的な例示にのみ限定されるわけではない。

【0017】

本実施形態に係る１８α－オレアナン型トリテルペンジグルクロナイド類の製造方法（以下「本方法」という。）は、（１）オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合及び加熱してオレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させた１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を、酢酸を含むアルコール溶液に滴下して使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩沈殿物として得るステップ、（２）アルカリ塩混合物を非プロトン性極性溶媒中においてアルキル化剤と処理し、１８α－トリアルキルエステル体に誘導し分離精製するステップ、（３）分離精製した前記１８α－トリエステル異性体をアルコール性水酸化アルカリ水溶液により加水分解し、酢酸を含むアルコール溶液に滴下して、使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩の沈殿物として得るステップ、を有するものである。

【0018】

本方法では、上記の通り、まず、（１）オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合及び加熱して前記オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させて１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩の沈殿物として得るステップを有する。

【0019】

本方法において、「オレアナン型トリテルペンジグルクロナイド」は、オレアナントリテルペンアグリコンと２つのグルクロン酸単位をその構造内に有する化合物である。オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの具体的な構造については限定されるわけではないが、例えば下記式で示されるものであることが好ましい。

【化1】

【0020】

また、本ステップにおける水酸化アルカリ水溶液において用いられる水酸化アルカリとしては、本ステップによる目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、例えば水酸化カリウムや水酸化ナトリウムを例示することができる。

【0021】

また、本ステップにおいて、水酸化アルカリ水溶液の濃度についても特に限定されるわけではないが、１０重量％以上５０重量％以下であることが好ましく、より好ましくは１５重量％以上２５重量％以下である。

【0022】

また、本ステップにおいて、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドに対する水酸化アルカリの量としては、本ステップの目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドを１ｍｏｌとした場合、５ｍｏｌ以上４０ｍｏｌ以下とすることが好ましく、より好ましくは２０ｍｏｌ以上３０ｍｏｌ以下である。

【0023】

また、本ステップでは、上記の通り、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液を混合した後加熱する。この加熱は反応を促進する観点から行われるものであり限定されるわけではないが、８０℃以上１５０℃以下であることが好ましく、より好ましくは１００℃以上１２０℃以下の範囲である。

【0024】

また、本ステップにおけるオレアナン型トリテルペンジグルクロナイドと水酸化アルカリ水溶液の反応時間としては、反応温度や濃度によって大きく異なり、十分に反応を進行させることができる限りにおいて限定されるわけではないが、例えば５時間以上１５時間以下であることが好ましく、より好ましくは８時間以上１０時間以下である。

【0025】

また、本ステップでは、上記反応させた後、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８α－異性体および１８β－異性体の平衡混合物を、酢酸を含むアルコール溶液に滴下することで、直接使用した水酸化アルカリのアルカリ塩として得ることができる。

【0026】

本ステップにおいて、酢酸を含むアルコール溶液は沈殿物を効率よく得るためのものであり限定されるわけではないが、アルコールとしてメタノール、エタノール及びプロパノールの少なくともいずれかであることが好ましい。また、最終的に調整されるアルコール水溶液中のアルコール濃度が８０％以上であることが好ましく、より好ましくは９０％以上である。なお、ここで酢酸はギ酸やプロピオン酸等の有機酸であってもよい。すなわち、有機酸を含むアルコール溶液とすることが可能である。

【0027】

なお本ステップにおいて、酢酸を含むアルコール溶液は沈殿物を効率よく得るためのものであり限定されるわけではないが、酢酸は使用する水酸化アルカリの中和量以上が好ましく、より好ましくは３倍から５倍等量である。

【0028】

以上本ステップでは、上記の反応により、オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドの１８位水素を異性化させて１８α－異性体及び１８β－異性体の平衡混合物を使用した水酸化アルカリ由来のアルカリ塩沈殿物として直接得ることができる。

【0029】

また、本方法では、上記ステップに続き、上記の通り、（２）平衡混合物を非プロトン性極性溶媒中においてアルキル化剤と処理し、１８α－トリアルキルエステル体に誘導し分離精製するステップを有する。

【0030】

本ステップにおいて、「非プロトン性極性溶媒」は、イオン化するプロトンが無い溶媒をいい、本ステップの目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、ジメチルスルホキシドやジメチルホルムアミド等を例示することができる。

【0031】

本ステップにおいて、「アルキル化剤」とは、アルキル化するために用いられる化合物であって、限定されるわけではないが、例えばジメチル硫酸、ヨウ化メチル、ジエチル硫酸及びヨウ化エチルの少なくともいずれかを例示することができる。

【0032】

また、本ステップにおける平衡混合物に対するアルキル化剤の量は、十分に反応が進行する限りにおいて限定されるわけではないが、平衡混合物を１ｍｏｌとした場合に、アルキル化剤を３ｍｏｌ以上８ｍｏｌ以下とすることが好ましく、より好ましくは４．５ｍｏｌ以上６ｍｏｌ以下の範囲である。

【0033】

また、本ステップにおける平衡混合物とアルキル化剤の反応の温度は、十分に反応が進行する限りにおいて限定されるわけではないが、１５℃以上４０℃以下であることが好ましく、２０℃以上３０℃以下であることがより好ましいが、室温程度でも十分に反応する。

【0034】

また、本ステップにおける平衡混合物とアルキル化剤の反応時間は、十分に反応が進行する限りにおいて限定されるわけではないが、２時間以上２４時間以下であることが好ましく、４時間以上６時間以下であることがより好ましい。

【0035】

また、本ステップでは、反応を完結させるため、塩基を添加しておくことが好ましい。この具体的な例としては限定されるわけではないが、例えば炭酸カリウムや炭酸ナトリウムを用いることができる。

【0036】

本ステップによると、上記平衡混合物はアルキル化され、対応するトリアルキルエステル混合物に誘導される。

【0037】

また本ステップでは、上記１８α－トリアルキルエステル体を分離精製することが必要である。具体的には析出する沈殿物をろ過、水洗するとともに、クロマトグラフィー等の精製方法を用いることが好ましい。クロマトグラフィーとしては限定されるわけではないが、シリカゲルクロマトグラフィーを用いることができる。

【0038】

本ステップでは、異性化されたオレアナン型トリテルペンジグルクロナイドのトリメチルエステル混合物がメタノールに対して溶解性の差を生ずる。そのためこの溶解性の差を利用することで、難溶性の１８位異性化トリメチルエステルを高い純度の結晶として得ることができるようになる。

【0039】

また、本方法では、上記の通り、（３）分離精製した１８α－トリエステル異性体をアルコール性水酸化アルカリ水溶液により加水分解し、酢酸を含むアルコール溶液に滴下して、使用する水酸化アルカリ由来のアルカリ塩の沈殿物として得るステップ、を有するものである。

【0040】

本ステップにおいて「アルコール性水酸化アルカリ水溶液」とは、アルコールを含む水酸化アルカリ水溶液をいう。

【0041】

ここで水酸化アルカリとしては、本ステップの目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、例えば水酸化カリウムや水酸化ナトリウムを例示することができる。

【0042】

ここでアルコールとしては、本ステップの目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、例えばメタノール、エタノール及びプロパノールのいずれかを例示することができる。

【0043】

また、本ステップにおいて、水酸化アルカリ水溶液の濃度としては、本ステップの目的を達成することができる限りにおいて限定されるわけではないが、水溶液中５重量％以上２５重量％以下であることが好ましく、より好ましくは１０重量％以上１５重量％以下である。

【0044】

さらに、本ステップにおける１８α－トリエステル異性体に対する水酸化アルカリの量は、十分に反応が進行する限りにおいて限定されるわけではないが、トリエステル異性体を１ｍｏｌとした場合に、水酸化アルカリを５ｍｏｌ以上２０ｍｏｌ以下とすることが好ましく、より好ましくは８ｍｏｌ以上１２ｍｏｌ以下の範囲である。

【0045】

また、本ステップにおいて、上記水酸化アルカリ水溶液に添加されるアルコールの量としては、１８α－トリエステル異性体が溶解する限りにおいて限定されず、使用する水酸化アルカリに対し容積比１であることが好ましい。

【0046】

また、本ステップでは、上記反応させた後、１８α－オレアナン型トリテルペンジグルクロナイドを、酢酸を含むアルコール溶液に滴下することで直接使用した水酸化アルカリのアルカリ塩として得ることができる。このアルカリ塩は再度溶液によって溶解し再結晶化させることによって、より純度を高めることが可能となる。

【0047】

本ステップにおいて、酢酸を含むアルコール溶液は沈殿物を効率よく得るためのものであり限定されるわけではないが、アルコールとしてはメタノール、エタノール及びプロパノールの少なくともいずれかであることが好ましい。また、最終的に調整されるアルコール水溶液中のアルコール濃度が８０％以上であることが好ましく、より好ましくは９０％以上である。なお、ここで酢酸はギ酸やプロピオン酸等の有機酸であってもよい。すなわち、有機酸を含むアルコール溶液とすることが可能である。

【0048】

本ステップにおいて、酢酸を含むアルコール溶液は沈殿物を効率よく得るためのものであり限定されるわけではないが、酢酸は使用する水酸化アルカリの中和量以上が好ましく、より好ましくは３倍から５倍等量である。

【0049】

本ステップにおいて、得られた１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイドのアルカリ塩は、酸性にすることで１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイドに、そしてその１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイドはアンモニア水溶液で処理することにより、１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイドのアンモニウム塩に誘導できる。

【0050】

以上、本方法によって、より高い純度で１８α－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイド類を分離・製造する方法を提供することができる。なお、本方法によって得られる化合物は異性化前の１８β－オレアナン型トリペルテンジグルクロナイドに比べ高い薬理活性が期待される。

【実施例0051】

ここで、上記実施形態に係る製造方法を実際に実行しその効果を確認した。以下具体的に説明する。

【0052】

（ア）異性化反応
まず、１８β－グリチルリチン酸アンモニウム塩（５ｇ，５．９５×１０^－３Ｍ）を、水酸化カリウム（８ｇ，１４３×１０^－３Ｍ）を水（３２ｍＬ）に溶解した水溶液とともに８時間加熱還流後、酢酸（１０ｍＬ，１７５×１０^－３Ｍ）を９９．５％エタノール（３００ｍＬ）に溶解した溶液に室温にて撹拌して滴下し、析出する結晶を吸引ろ過することで、粗異性化混合物のカリウム塩（４．６ｇ）を得た。

【0053】

（イ）メチル化反応
次いで、上記粗異性化混合物のカリウム塩（６．２６ｇ，７．２７４×１０^－３Ｍ） を、ジメチル硫酸（３．５ｍＬ，３６．４×１０^－３Ｍ）および炭酸カリウム（５ｇ，３６．４×１０^－３Ｍ）を含むジメチルスルホキシド（１８ｍＬ）に加え、室温にて一晩撹拌後、２％塩酸水溶液（７５ｍＬ）中に注加し、析出する沈殿を濾過、水洗することで、反応生成物（６．０３ｇ）を得た。このうち、３．２９ｇについて溶出溶媒としてクロロホルム：メタノール（１０：１）混液を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて１８α－および１８β－トリメチルエステル混合物に相当する結晶性フラクション（１．０ｇ，２９％）を、メタノールを用いて繰り返し洗浄することで、１８α－グリチルリチン酸トリメチルエステル（０．７ｇ，２０％）を無色微細針状晶、ｍｐ，２８５－２８８℃、として得た。なお、得たトリメチルエステルの ＨＲＭＳ、比旋光度（[α]_Ｄ）、^１Ｈ ＮＭＲ、^１３Ｃ ＮＭＲのデータは下記のとおりである。

【0054】

ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ ８６５．４５７４（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ［Ｃ_４５Ｈ_６９Ｏ_１６］^＋：８６５．４５８０），８９９．４２２３（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ［Ｃ_４５Ｈ_６８Ｏ_１６Ｃｌ］^－：８９９．４２０１）

【0055】

比旋光度[α]_Ｄ ^２７＋４７（ｃ ０．４，ＥｔＯＨ）

【0056】

^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ_５）δ：０．６６（３Ｈ，ｓ，２８－Ｍｅ），０．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，５－Ｈ），１．０６（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１－Ｈ），１．１１（３Ｈ，ｓ，２６－Ｍｅ），１．１４（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１５－Ｈ），１．１９（３Ｈ，ｓ，２４－Ｍｅ），１．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３，７Ｈｚ，１６－Ｈ），１．３０（６Ｈ，ｓ，２７－Ｍｅ，３０－Ｍｅ），１．３１（１Ｈ，ｓ，２２－Ｈ），１．３５（３Ｈ，ｓ，２３－Ｍｅ）， １．３６（３Ｈ，ｓ，２５－Ｍｅ），１．３６－１．４２（１Ｈ，ｍ，６－Ｈ），１．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，７－Ｈ），１．４５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，４Ｈｚ，１６－Ｈ），１．５２－１．６０（４Ｈ，ｍ，６－Ｈ，７－Ｈ，２１－Ｈ，２２－Ｈ）， １．６３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１９－Ｈ），１．７６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１９－Ｈ），１．８４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，５Ｈｚ，１５－Ｈ），２．０１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，４Ｈｚ，２１－Ｈ），２．０５－２．１３（１Ｈ，ｍ，２－Ｈ），２．２０－２．２４（１Ｈ，ｍ，２－Ｈ），２．２７（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１８－Ｈ），２．３５（１Ｈ，ｓ，９－Ｈ），２．９８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１３，３Ｈｚ，１－Ｈ），３．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１，４Ｈｚ，３－Ｈ）， ３．７１（６Ｈ，ｓ，３１－Ｍｅ，７’－Ｍｅ），３．８６（３Ｈ，ｓ，７’’－Ｍｅ），４．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，２’－Ｈ），４．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，２’’－Ｈ），４．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，３’’－Ｈ），４．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，３’－Ｈ），４．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，４’－Ｈ），４．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，５’－Ｈ），４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，５’’－Ｈ），４．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，４’’－Ｈ），５．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１’－Ｈ），５．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１’’－Ｈ），５．７０（１Ｈ，ｓ，１２－Ｈ）

【0057】

^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ_５）δ：１６．３（Ｃ_２８）， １６．９（Ｃ_２４），１７．３（Ｃ_２５），１８．０（Ｃ_６），１９．０（Ｃ_２６），２０．９（Ｃ_３０），２１．１（Ｃ_２７），２７．０（Ｃ_２），２７．２（Ｃ_１５），２８．２（Ｃ_２３），２９．３（Ｃ_２１），３２．４（Ｃ_１９），３４．３（Ｃ_７），３５．９（Ｃ_１７）， ３６．３（Ｃ_１６），３７．４（Ｃ_１０），３７．９（Ｃ_２２），３９．８（Ｃ_１），４０．２（Ｃ_４），４０．７（Ｃ_１８），４３．２（Ｃ_２０），４４．３（Ｃ_８），４５．４（Ｃ_１４），５２．２（Ｃ_７’’），５２．３（Ｃ_３１），５２．４（Ｃ_７’），５５．８（Ｃ_５），６１．３（Ｃ_９），７３．０（Ｃ_４’），７３．３（Ｃ_４’’），７６．９（Ｃ_２’’），７７．１（Ｃ_５’），７７．８（Ｃ_３’’），７７．９（Ｃ_３’），７８．０（Ｃ_５’’），８４．８（Ｃ_２’），８９．７（Ｃ_３），１０５．４（Ｃ_１’），１０７．２（Ｃ_１’’），１２４．６（Ｃ_１２），１６５．８（Ｃ_１３），１７０．７（Ｃ_６’），１７０．8（Ｃ_６’’）１７９（Ｃ_２９），１９９．５（Ｃ_１１）

【0058】

（ウ）加水分解反応
１８α－グリチルリチン酸トリメチルエステル（０．３０２ｇ、０．３５×１０^－３Ｍ）を９５％エタノール（２ｍＬ）に溶解し、１０％ＫＯＨ（２ｍＬ、３．５×１０^－３Ｍ）を加え３時間加熱還流後、酢酸（０．３ｍＬ、１７．５×１０^－３Ｍ）を含む９９．５％エタノール（１６ｍＬ）溶液に室温にて撹拌して滴下した。析出する沈殿をろ過し、１８α－グリチルリチン酸カリウムを粗結晶として定量的に得た。これを６０％プロピオン酸水溶液から２回再結晶することで、１８α－グリチルリチン酸カリウム（０．２７３ｇ、９１％）、無色微細針状晶、ｍｐ ２１８－２２２℃（ｄｅｃ）、に誘導した。このカリウムは１０％塩酸で処理することにより、１８α－グリチルリチン酸、無色粉末、ｍｐ ２０３－２０６℃、に、そしてその１８α－グリチルリチン酸はアンモニアで処理することで１８α－グリチルリチン酸アンモニウム、無色、微細針状晶、ｍｐ ２０４－２０８℃（ｄｅｃ）、に導いた。ＨＲＭＳ、比旋光度（[α]_Ｄ）、^１Ｈ ＮＭＲ、^１３Ｃ ＮＭＲのデータは下記のとおりである。また、図１、図２に、１８β－グリチルリチン酸と１８α－グリチルリチン酸の^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲチャートを記載する。なお、図１は^１Ｈ ＮＭＲのチャートであって、図中、上は１８β－グリチルリチン酸、下は１８α－グリチルリチン酸をそれぞれ示す。また図２は^１３Ｃ ＮＭＲのチャートであって、上は１８β－グリチルリチン酸を、下は１８α－グリチルリチン酸をそれぞれ示す。

【0059】

ＨＲＭＳ（１８α－グリチルリチン酸アンモニウム）： ｍ／ｚ ８２１．３９８４（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ［Ｃ_４２Ｈ_６１Ｏ_１６Ｎ－ＮＨ_３－Ｈ］^―：８２１．３９６５）， ８４５．３９３１（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ［Ｃ_４２Ｈ_６２Ｏ_１６Ｎ－ＮＨ_３＋Ｎａ］^＋：８４５．３９３０）。

【0060】

比旋光度（１８α－グリチルリチン酸）[α]_Ｄ ^２８＋２３（ｃ ０．５，ＥｔＯＨ）

【0061】

^１Ｈ ＮＭＲ（１８α－グリチルリチン酸：６００ ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ_５）δ：０．７０（３Ｈ，ｓ，２８－Ｍｅ），０．７４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，５－Ｈ），１．０２－１．０６（１Ｈ，ｍ，１Ｈ），１．０５（３Ｈ，ｓ，２６－Ｍｅ），１．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，５Ｈｚ，１５－Ｈ），１．２０－１．３５（４Ｈ，ｍ，６－Ｈ，７－Ｈ，１６－Ｈ，２２－Ｈ），１．２７（３Ｈ，ｓ，２５－Ｍｅ），１．２８（３Ｈ，ｓ，２４－Ｍｅ），１．３１（３Ｈ，ｓ，２７－Ｍｅ）， １．４２（３Ｈ，ｓ，２３－Ｍｅ），１．４６（３Ｈ，ｓ，３０－Ｍｅ），１．４６－１．６０（４Ｈ，ｍ，６－Ｈ，７－Ｈ，１６－Ｈ，２２－Ｈ），１．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，２１－Ｈ），１．７６－１．８５（２Ｈ，ｍ，１５－Ｈ，１９－Ｈ）， １．９７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１９－Ｈ），２．１３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，１４ Ｈｚ，２－Ｈ），２．２３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，４Ｈｚ，２１－Ｈ），２．３２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２－Ｈ，１８－Ｈ），２．３３（１Ｈ，ｓ，１２－Ｈ），２．９４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４，３Ｈｚ，１－Ｈ），３．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，５Ｈｚ，３－Ｈ），４．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２’’－Ｈ），４．３２（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８，７Ｈｚ，２’－Ｈ），４．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，３’’－Ｈ），４．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，３’－Ｈ），４．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，４’－Ｈ），４．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，５’－Ｈ），４．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，５’’－Ｈ），４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，４’’－Ｈ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１’－Ｈ），５．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１’’－Ｈ），５．７８（１Ｈ，ｓ，１２－Ｈ）。

【0062】

^１３Ｃ ＮＭＲ（１８α－グリチルリチン酸：１５０ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ_５）δ：１６．４（Ｃ_２８），１７．２７（Ｃ_２４），１７．２８（Ｃ_２５），１８．０（Ｃ_６），１８．９（Ｃ_２６），２１．０（Ｃ_２７），２１．５（Ｃ_３０），２７．０（Ｃ_２），２７．３（Ｃ_１５），２８．４（Ｃ_２３），２９．７（Ｃ_２１），３２．８（Ｃ_１９）， ３４．３（Ｃ_７），３６．０（Ｃ_１７），３６．７（Ｃ_１６），３７．３（Ｃ_１０），３８．０（Ｃ_２２），３９．８（Ｃ_１），４０．２（Ｃ_４），４０．９（Ｃ_１８），４３．１（Ｃ_２０），４４．３（Ｃ_８），４５．４（Ｃ_１４），５５．８（Ｃ_５），６１．２（Ｃ_９），７３．４（Ｃ_４’），７３．６（Ｃ_４’’），７７．２（Ｃ_２’’），７７．８（Ｃ_５’），７８．０（Ｃ_３’’），７８．１（Ｃ_３’），７８．８（Ｃ_５’’），８４．９（Ｃ_２’），８９．５（Ｃ_３），１０５．５（Ｃ_１’），１０７．３（Ｃ_１’’），１２４．７（Ｃ_１２），１６６．１（Ｃ_１３），１７２．５（Ｃ_６’’），１７２．７（Ｃ_６’），１８１．３（Ｃ_２９），１９９．５（Ｃ_１１）。

【0063】

以上、本実施例によって、より高い純度で１８α－オレアナン型トリテルペンジグルクロナイド類を分離・製造する方法を提供することができることを確認した。

【産業上の利用可能性】

【0064】

本発明は、１８β－グリチルリチン酸及びその類縁体から立体異性体である１８α－グリチルリチン酸及びその類縁体の製造方法として産業上の利用可能性がある。

【図1】

【図2】