特開 2023-42098 ＰＣＲ用マイクロ流体チップおよびＰＣＲ分析装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023042098

(43)【公開日】2023-03-27

(54)【発明の名称】ＰＣＲ用マイクロ流体チップおよびＰＣＲ分析装置

(51)【国際特許分類】

   C12M 1/00 20060101AFI20230317BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20230317BHJP

   C12Q 1/686 20180101ALN20230317BHJP

【ＦＩ】

C12M1/00 A

C12N15/09 Z

C12Q1/686 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021149204

(22)【出願日】2021-09-14

(71)【出願人】

【識別番号】000004385

【氏名又は名称】ＮＯＫ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100109380

【弁理士】

【氏名又は名称】小西 恵

(74)【代理人】

【識別番号】100109036

【弁理士】

【氏名又は名称】永岡 重幸

(74)【代理人】

【識別番号】100125335

【弁理士】

【氏名又は名称】矢代 仁

(72)【発明者】

【氏名】千原 悠雅

(72)【発明者】

【氏名】宇田 徹

(72)【発明者】

【氏名】上田 敬祐

【テーマコード（参考）】

4B029

4B063

【Ｆターム（参考）】

4B029AA07

4B029AA08

4B029AA23

4B029BB16

4B029BB20

4B029FA12

4B029GA08

4B029GB01

4B063QA13

4B063QQ28

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR08

4B063QR32

4B063QR35

4B063QR62

4B063QS02

4B063QS25

4B063QS34

4B063QS39

4B063QX01

4B063QX02

(57)【要約】

【課題】液体サンプルを流路内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化する技術を提供する。
【解決手段】ＰＣＲ用マイクロ流体チップは、ＰＣＲに使用される液体サンプルが流動する流路と、流路に液体サンプルを導入する導入口と、流路の両端にそれぞれ接続された弾性的に伸縮可能な２つの空気室と、流路と空気室を気密に包囲し、少なくとも片面に透明部分が設けられた包囲部材とを有する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＰＣＲに使用される液体サンプルが流動する流路と、
前記流路に前記液体サンプルを導入する導入口と、
前記流路の両端にそれぞれ接続された弾性的に伸縮可能な２つの空気室と、
前記流路と前記空気室を気密に包囲し、少なくとも片面に透明部分が設けられた包囲部材とを
有するＰＣＲ用マイクロ流体チップ。

【請求項2】

請求項１に記載のＰＣＲ用マイクロ流体チップと、
前記２つの空気室を交互に圧縮する２つのアクチュエータと、
前記流路を加熱する加熱装置とを
有するＰＣＲ分析装置。

【請求項3】

請求項１に記載のＰＣＲ用マイクロ流体チップと、
前記２つの空気室のうち第１の空気室を間欠的に圧縮するアクチュエータと、
前記流路を加熱する加熱装置とを
有するＰＣＲ分析装置。

【請求項4】

前記流路は、前記アクチュエータで圧縮される前記第１の空気室に連通する第１の曲線流路部と、前記２つの空気室のうち前記アクチュエータで圧縮されない第２の空気室に連通する第２の曲線流路部と、前記第１の曲線流路部と前記第２の曲線流路部を接続する直線流路部を有し、
前記加熱装置は、前記第１の曲線流路部を加熱する第１の加熱部と、前記第２の曲線流路部を加熱する第２の加熱部を有し、
前記第１の加熱部は、前記第１の曲線流路部の内部の前記液体サンプルを伸長・アニーリング温度に加熱し、前記第２の加熱部は、前記第２の曲線流路部の内部の前記液体サンプルを、前記伸長・アニーリング温度より高い変性温度に加熱する
ことを特徴とする請求項３に記載のＰＣＲ分析装置。

【請求項5】

前記ＰＣＲ用マイクロ流体チップの前記透明部分を通じて前記流路内の前記液体サンプルを観察分析する観察分析装置をさらに有する
ことを特徴とする請求項２から４のいずれか１項に記載のＰＣＲ分析装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＰＣＲ用マイクロ流体チップおよびＰＣＲ分析装置に関する。

【背景技術】

【0002】

ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）は、使用される液体サンプルをＰＣＲチューブまたは複数の穴が形成されたマイクロプレート（マイクロウェル）などの反応容器に所定量入れて行うことが一般的であるが、近年、基板に形成された微細な流路を備える反応容器（チップとも呼ばれる）を用いて行うことが実用化されてきている。流路を備えるチップ（マイクロ流路チップ）を用いたＰＣＲを行う場合、流路に高温領域や低温領域などの温度領域を設定し、液体サンプルを流路内で往復式に移動させることにより、液体サンプルにサーマルサイクルを与える。

【0003】

従来のマイクロ流路チップにおける送液方法としては、特許文献１に開示されたように、２つのマイクロブロアもしくはファンを流路の両端部に接続し、送風により加圧することで送液する方法がある。また、特許文献２に開示されたように、単一のポンプと２つの切替弁を用いることで送液する方法が提案されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０１９－４７８１２号公報

【特許文献2】国際公開第２０１９／１３９１３５号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ＰＣＲにおいては、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化または完全に防止することが重要である。特に液体サンプルを流路内で流動させる際には、液体サンプルが不要な物質に接触しないことが望ましい。

【0006】

そこで、本発明は、液体サンプルを流路内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化する技術を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明のある態様によれば、ＰＣＲ用マイクロ流体チップが提供される。このＰＣＲ用マイクロ流体チップは、ＰＣＲに使用される液体サンプルが流動する流路と、前記流路に前記液体サンプルを導入する導入口と、前記流路の両端にそれぞれ接続された弾性的に伸縮可能な２つの空気室と、前記流路と前記空気室を気密に包囲し、少なくとも片面に透明部分が設けられた包囲部材とを有する

【0008】

この態様においては、導入口を閉塞すると、流路と２つの空気室を有する完全に閉鎖された流路系が形成される。流路の両端に接続された伸縮可能な２つの空気室の少なくとも一方を圧縮すれば、液体サンプルは圧縮された空気室から他方の空気室に向けて流れ、下流の空気室が弾性的に膨張する。圧縮力を除去すれば、膨張させられた空気室が弾性的に収縮し、圧縮されていた空気室に向けて逆方向に液体サンプルが流れ、圧縮されていた空気室が弾性的に膨張する。このようにして、液体サンプルは流路を往復移動することができる。両方の空気室を交互に圧縮してもよい。流路と２つの空気室は、完全に閉鎖されるので、液体サンプルを流路内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化することができる。包囲部材の少なくとも片面は透明であるので、流路内の液体サンプルを観察することができる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】本発明の実施形態に係るＰＣＲ用マイクロ流体チップの平面図である。

【図2】図１のＰＣＲ用マイクロ流体チップの分解斜視図である。

【図3】第１実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図であり、ＰＣＲ用マイクロ流体チップの断面を示す。

【図4】液体サンプルの導入時の第１実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図5】液体サンプルの右方向移動時の第１実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図6】液体サンプルの左方向移動時の第１実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図7】第２実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図であり、ＰＣＲ用マイクロ流体チップの断面を示す。

【図8】液体サンプルの導入時の第２実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図9】液体サンプルの右方向移動時の第２実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図10】液体サンプルの左方向移動時の第２実施形態に係るＰＣＲ分析装置の正面図である。

【図11】ＰＣＲ分析装置の加熱装置の温度設定と液体サンプルの状態を調べた結果を示す表である。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、添付の図面を参照しながら本発明に係る複数の実施形態を説明する。図面の縮尺は必ずしも正確ではなく、一部の特徴は誇張または省略されることもある。

【0011】

図１に示すように、実施形態に係るＰＣＲ用マイクロ流体チップ１は、線対称な形状を有しており、流路２、ポート４，６、第１の空気室１０、および第２の空気室１２を有する。

【0012】

ＰＣＲに使用される液体サンプルは流路２を流動する。流路２は、曲折された第１の曲線流路部７と、曲折された第２の曲線流路部８と、第１の曲線流路部７と第２の曲線流路部８を接続する直線流路部９を有する。流路２の幅は、０．５～１．０ｍｍであるのが好ましい。曲線流路部７，８の各々の長さは、例えば８０ｍｍであり、直線流路部９の長さは、例えば１５ｍｍである。

【0013】

２つの空気室１０，１２は、流路２の両端にそれぞれ接続され、弾性的に伸縮可能である。第１の空気室１０は第１の曲線流路部７に連通し、第２の空気室１２は第２の曲線流路部８に連通する。

【0014】

ポート４は第１の曲線流路部７と第１の空気室１０の間の部分に接続され、ポート６は第２の曲線流路部８と第２の空気室１２の間の部分に接続されている。ポート４，６の一方は、流路２に液体サンプルを導入する導入口として使用され、他方は、流路２に液体サンプルを導入する時、流路２から液体サンプルに押された空気が排出される空気排出口として使用される。以下の説明では、ポート４を導入口と想定し、ポート６を空気排出口と想定する。

【0015】

図２に示すように、マイクロ流体チップ１は、樹脂製の下基板２０、樹脂製の流路基板２１、樹脂製の上基板２２、ゴム製の弾性基板２３，２５、およびゴム製の弾性膜２４，２６を有する。基板２０，２１，２２、弾性基板２３，２５および弾性膜２４，２６は、流路２と空気室１０，１２を気密に包囲する包囲部材を構成する。

【0016】

基板２０，２１，２２は、例えばアクリル、ポリプロピレンといった透明樹脂から形成されている。弾性基板２３，２５と弾性膜２４，２６は、例えばシリコンゴムから形成されている。

【0017】

下基板２０は、溝または孔が形成されていない矩形の平板であり、例えばその厚さは０．２ｍｍである。

【0018】

流路基板２１は、貫通溝２１ａ，２１ｂ，２１ｃ、および貫通孔２１ｄ，２１ｅが形成された矩形の基板であり、例えばその厚さは０．５ｍｍである。流路基板２１を下基板２０と上基板２２に接合すると、貫通溝２１ａは流路２を形成する。したがって、流路２の高さは例えば０．５ｍｍである。貫通溝２１ｂは、貫通溝２１ａに接続されており、ポート４の下部になる。貫通溝２１ｃは、貫通溝２１ａに接続されており、ポート６の下部になる。貫通孔２１ｄは第１の空気室１０の下部になる。貫通孔２１ｅは第２の空気室１２の下部になる。貫通溝２１ａ，２１ｂ，２１ｃ、および貫通孔２１ｄ，２１ｅは、例えばレーザー加工によって形成することができる。

【0019】

上基板２２は、貫通孔２２ｂ，２２ｃ，２２ｄ，２２ｅが形成された矩形の基板であり、例えばその厚さは１．０ｍｍである。貫通孔２２ｂはポート４の上部になり、貫通孔２２ｃはポート６の上部になる。貫通孔２２ｄは第１の空気室１０の一部になる。貫通孔２１ｅは第２の空気室１２の一部になる。貫通孔２２ｂ，２２ｃ，２２ｄ，２２ｅは、例えばレーザー加工によって形成することができる。

【0020】

基板２０，２１，２２は、例えば１８０℃に加熱し、熱溶着により貼り合わせることができる。

【0021】

弾性基板２３，２５は、正方形の平板であり、例えばその厚さは１．０ｍｍである。弾性基板２３の中央には、貫通孔２３ｄが形成されており、貫通孔２３ｄは第１の空気室１０の一部になる。弾性基板２５の中央には、貫通孔２５ｅが形成されており、貫通孔２５ｅは第２の空気室１２の一部になる。貫通孔２３ｄと貫通孔２５ｅは、例えばレーザー加工によって形成することができる。

【0022】

弾性膜２４，２６は、溝または孔が形成されていない正方形の平板であり、例えばその厚さは０．３ｍｍである。

【0023】

弾性基板２３と弾性膜２４は、真空紫外線または酸素プラズマ照射を用いて接合することができる。弾性基板２５と弾性膜２６も、真空紫外線または酸素プラズマ照射を用いて接合することができる。但し、弾性基板２３と弾性膜２４の接合、および弾性基板２５と弾性膜２６の接合に両面接着テープが使用されてもよい。

【0024】

ゴム製の弾性基板２３，２５は、図３に示すように、両面接着テープ２７によって、樹脂製の上基板２２に接合することができる。但し、流路２および空気室１０，１２への有機物の望ましくない流入を防止または低減するため、真空紫外線または酸素プラズマ照射を用いて、弾性基板２３，２５を上基板２２に接合することが好ましい。

【0025】

以上のように、基板２０，２１，２２、弾性基板２３，２５および弾性膜２４，２６を接合することによって、流路２、ポート４，６、および空気室１０，１２を有するマイクロ流体チップ１が完成する。流路２は流路基板２１の貫通溝２１ａによって形成される。ポート４は、上基板２２の貫通孔２２ｂと流路基板２１の貫通溝２１ｂによって形成される。ポート６は、上基板２２の貫通孔２２ｃと流路基板２１の貫通溝２１ｃによって形成される。

【0026】

第１の空気室１０は、流路基板２１の貫通孔２１ｄ、上基板２２の貫通孔２２ｄおよび弾性基板２３の貫通孔２３ｄによって形成される。弾性基板２３が高弾性のゴムで大きい厚さを持つよう形成され、弾性膜２４が高弾性のゴムで形成されているため、第１の空気室１０は、弾性的に伸縮可能であり、ダイアフラムポンプまたは伸縮可能なアキュムレータとして使用することができる。

【0027】

第２の空気室１２は、流路基板２１の貫通孔２１ｅ、上基板２２の貫通孔２２ｅおよび弾性基板２５の貫通孔２５ｅによって形成される。弾性基板２５が高弾性のゴムで大きい厚さを持つよう形成され、弾性膜２６が高弾性のゴムで形成されているため、第２の空気室１２も、弾性的に伸縮可能であり、ダイアフラムポンプまたは伸縮可能なアキュムレータとして使用することができる。

【0028】

マイクロ流体チップ１において、ポート４，６を閉塞すると、流路２と２つの空気室１０，１２を有する完全に閉鎖された流路系が形成される。流路２の両端に接続された伸縮可能な２つの空気室１０，１２の少なくとも一方を圧縮すれば、液体サンプルは圧縮された空気室から他方の空気室に向けて流れ、下流の空気室が弾性的に膨張する。圧縮力を除去すれば、膨張させられた空気室が弾性的に収縮し、圧縮されていた空気室に向けて逆方向に液体サンプルが流れ、圧縮されていた空気室が弾性的に膨張する。このようにして、液体サンプルは流路２を往復移動することができる。両方の空気室１０，１２を交互に圧縮してもよい。流路２と２つの空気室１０，１２は、完全に閉鎖されるので、液体サンプルを流路２内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化することができる。包囲部材、特に最も薄い下基板２０は透明であるので、流路２内の液体サンプルを下から観察することができる。上基板２２も透明であるので、流路２内の液体サンプルを上から観察することができる。

【0029】

図３は、第１実施形態に係るＰＣＲ分析装置３０の正面図である。図３～図１０においては、ＰＣＲ用マイクロ流体チップ１の断面を示す。

【0030】

図３に示すように、ＰＣＲ分析装置３０は、ＰＣＲ用マイクロ流体チップ１、２つのアクチュエータ３１，３２、加熱装置３３、観察分析装置３４および制御装置３５を有する。

【0031】

アクチュエータ３１，３２は、それぞれピストン３１ａ，３２ａを有するリニアアクチュエータであり、それぞれ駆動回路３１ｂ，３２ｂによって駆動される。駆動回路３１ｂ，３２ｂは、制御装置３５によって制御される。

【0032】

アクチュエータ３１は第１の空気室１０の上方に配置され、図３に示すように、アクチュエータ３１の非駆動時には、ピストン３１ａは第１の空気室１０を画定する弾性膜２４とは間隔をおいて配置されている。アクチュエータ３１を駆動すると、ピストン３１ａは下降して弾性膜２４を押し下げ、第１の空気室１０を圧縮することができる。

【0033】

アクチュエータ３２は第２の空気室１２の上方に配置され、図３に示すように、アクチュエータ３２の非駆動時には、ピストン３２ａは第２の空気室１２を画定する弾性膜２６とは間隔をおいて配置されている。アクチュエータ３２を駆動すると、ピストン３２ａは下降して弾性膜２６を押し下げ、第２の空気室１２を圧縮することができる。制御装置３５の制御の下、アクチュエータ３１，３２は２つの空気室１０，１２を交互に圧縮する。

【0034】

アクチュエータ３１，３２は電動リニアアクチュエータであるが、空気室１０，１２を圧縮することができる他のアクチュエータ、例えば、モータの回転を直進運動に変換する機構を有するアクチュエータであってもよいし、油圧リニアアクチュエータであってもよい。

【0035】

加熱装置３３は、第１の曲線流路部７を加熱する第１の加熱部３７と、第２の曲線流路部８を加熱する第２の加熱部３８を有する。第１の加熱部３７は、加熱素子としてのペルチェ素子３７ａと、伝熱素子としての金属板３７ｂを有する。第２の加熱部３８は、加熱素子としてのペルチェ素子３８ａと、伝熱素子としての金属板３８ｂを有する。

【0036】

金属板３７ｂは、マイクロ流体チップ１の下基板２０における第１の曲線流路部７の直下の位置に接合されており、金属板３７ｂにはペルチェ素子３７ａが接合されている。金属板３８ｂは、マイクロ流体チップ１の下基板２０における第２の曲線流路部８の直下の位置に接合されており、金属板３８ｂにはペルチェ素子３８ａが接合されている。

【0037】

ペルチェ素子３７ａ，３７ｂは、それぞれ加熱回路３７ｃ，３８ｃによって駆動される。加熱回路３７ｃ，３８ｃは、制御装置３５によって制御される。この実施形態では、局所的な加熱を行うため、ペルチェ素子３７ａ，３７ｂが使用されるが、他の加熱要素が使用されてもよい。

【0038】

観察分析装置３４は、マイクロ流体チップ１の透明な下基板２０を通じて流路２の直線流路部９内の液体サンプルを観察する。観察分析装置３４の光学ヘッド３４ａは、下基板２０における直線流路部９の真下に配置されている。観察分析装置３４は、励起光（紫外線）の照射に応答して、液体サンプル中の増幅産物が発する蛍光を計測する蛍光プローブであってよい。あるいは、観察分析装置３４は、液体サンプル中の増幅副産物であるピロリン酸マグネシウムによる白濁を検知する光学プローブであってよい。観察分析装置３４は制御装置３５に接続されているが、制御装置３５に接続されていなくてもよい。

【0039】

制御装置３５は、例えばＰＬＣ（Programmable Logic Controller）であり、アクチュエータ３１，３２の駆動回路３１ｂ，３２ｂ、加熱部３７，３８の加熱回路３７ｃ，３８ｃを制御する。但し、制御装置３５は、アクチュエータ３１，３２の駆動回路３１ｂ，３２ｂを制御するＰＬＣと、ペルチェ素子３７ａ，３７ｂの温度を一定に維持する温度調整器を有していてよい。

【0040】

制御装置３５は、少なくとも１つのＣＰＵ（Central Processing Unit）と、動作プログラムおよび観察プログラムを格納した記憶装置を有してもよい。この場合、ＣＰＵは、記憶装置から動作プログラムを読み出して、動作プログラムに従って、アクチュエータ３１，３２の駆動回路３１ｂ，３２ｂ、加熱部３７，３８の加熱回路３７ｃ，３８ｃを制御してもよい。また、ＣＰＵは記憶装置から観察プログラムを読み出して、観察分析装置３４の観察結果を観察プログラムに従って分析してもよい。観察プログラムは人工知能プログラムであってもよい。

【0041】

次に、ＰＣＲ分析装置３０の使用方法を説明する。まず、図４に示すように、導入装置３９によって液体サンプル４０をポート４を通じて流路２に導入すなわち注入する。導入装置３９は、マイクロピペットまたはシリンジであってよい。流路２および空気室１０，１２を液体サンプル４０で満たす必要はなく、液体サンプル４０の量は、わずかであってよく、例えば、１５～２０μｌでよい。流路２の幅と高さは小さく、液体サンプル４０は界面張力によって棒状に凝集し、流路２の断面を閉塞する。流路２が、幅０．５ｍｍ、高さ０．５ｍｍの矩形断面であり、液体サンプル４０の量を１５μｌであると仮定すると、流路２内の液体サンプル４０の長さは６０ｍｍである。したがって、液体サンプル４０は流路２と空気室１０，１２内の空間を左側空間と右側空間に分断する。左側空間は第１の空気室１０の内部空間を含み、右側空間は第２の空気室１２の内部空間を含む。図示しないが、ポート６を通じて空気をわずかに排出して、流路２内での液体サンプル４０の位置を調整してもよい。

【0042】

この後、液体サンプル４０からの気泡の抜けを待ち、ポート４，６を接着テープ４１で閉塞して封止する。接着テープ４１はセロハンテープでもよいしポリイミドテープでもよい。接着テープ４１の代わりに、樹脂またはゴム製の栓をポート４，６に挿入して、ポート４，６を閉塞して封止してもよい。こうして、流路２と２つの空気室１０，１２を有する完全に閉鎖された流路系が形成される。

【0043】

次に、制御装置３５は駆動回路３１ｂを起動してアクチュエータ３１を駆動する。すると、図５に示すように、アクチュエータ３１のピストン３１ａが下降して弾性膜２４を押し下げ、第１の空気室１０を圧縮する。したがって、矢印に示すように、液体サンプル４０は流路２内を右方に向けて移動する。但し、ピストン３１ａは、図示より大きい下端を有して、弾性膜２４とともに弾性基板２３を押し下げるようにしてもよい。液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７と直線流路部９を通過し、さらに第２の曲線流路部８を通過する。液体サンプル４０に押されて、右側空間の圧力が高まり、第２の空気室１２は弾性的に膨張する。

【0044】

次に、制御装置３５は、駆動回路３１ｂを非駆動にしてアクチュエータ３１のピストン３１ａを初期位置に上昇させるとともに、駆動回路３２ｂを起動してアクチュエータ３２を駆動する。すると、図６に示すように、アクチュエータ３２のピストン３２ａが下降して弾性膜２６を押し下げ、第２の空気室１２を圧縮する。したがって、矢印に示すように、液体サンプル４０は流路２内を左方に向けて移動する。但し、ピストン３２ａは、図示より大きい下端を有して、弾性膜２６とともに弾性基板２５を押し下げるようにしてもよい。液体サンプル４０は、第２の曲線流路部８と直線流路部９を通過し、さらに第１の曲線流路部７を通過する。液体サンプル４０に押されて、左側空間の圧力が高まり、第１の空気室１０は弾性的に膨張する。

【0045】

制御装置３５がアクチュエータ３２を非駆動にしてアクチュエータ３１を駆動すると、液体サンプル４０は流路２内を右方に向けて移動する。再度、制御装置３５がアクチュエータ３１を非駆動にしてアクチュエータ３２を駆動すると、液体サンプル４０は流路２内を左方に向けて移動する。

【0046】

このようにして、制御装置３５は、左右のアクチュエータ３１，３２を交互に駆動して、左右のダイアフラムポンプ、すなわち空気室１０，１２を交互に圧縮する。第１の空気室１０が収縮して左側空間の圧力が上昇する時、右側空間の圧力も上昇するが、第２の空気室１２が膨張するので、右側空間の圧力は急激には上昇しない。逆に第２の空気室１２が収縮して右側空間の圧力が上昇する時、左側空間の圧力も上昇するが、第１の空気室１０が膨張するので、左側空間の圧力は急激には上昇しない。このように、流路２内の圧力が急変しないため、液体サンプル４０内の気泡の発生が低減され、棒状の液体サンプル４０が大きな気泡の発生のために分断することも抑制される。

【0047】

加熱装置３３は、流路２内の液体サンプル４０の往復移動の間にサーマルサイクルを行うことが可能である。ある例では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡ（デオキシリボ核酸）の変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に固定してもよい。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間にプライマーのアニーリング温度になる。アニーリング温度でもＤＮＡの伸長は進行しうる。この場合には、アニーリング温度を「伸長・アニーリング温度」と呼ぶことができる。直線流路部９は加熱されていないが、直線流路部９は短いので、そこを通過する間の液体サンプル４０の温度降下は少ない。他方、アクチュエータ３２が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。この例では、液体サンプル４０の流路２内での１往復が１サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、左右のアクチュエータ３１，３２を交互に駆動する。

【0048】

他の例では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に固定してもよい。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。直線流路部９は短いので、そこを通過する間の液体サンプル４０の温度降下は少ない。他方、アクチュエータ３２が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。この例でも、液体サンプル４０の流路２内での１往復が１サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、左右のアクチュエータ３１，３２を交互に駆動する。

【0049】

他の例では、制御装置３５が左右の加熱部３７，３８の温度を交互に変更してもよい。例えば、アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、制御装置３５は、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に設定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に設定してもよい。液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。

【0050】

この例では、逆にアクチュエータ３２が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、制御装置３５は、右側の第２の加熱部３８を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に設定し、左側の第１の加熱部３７をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に設定してもよい。液体サンプル４０は、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になり、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。この例では、液体サンプル４０の流路２内での１往復が２サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、左右のアクチュエータ３１，３２を交互に駆動する。

【0051】

アクチュエータ３１，３２の両方の駆動を停止した後、左側空間と右側空間の圧力（２つの空気室１０，１２の圧力）が平衡すると、液体サンプル４０は移動を停止する。液体サンプル４０の停止位置は、アクチュエータ３１，３２の駆動回数にかかわらず一定である。

【0052】

移動を停止した液体サンプル４０は、透明な下基板２０を通じて観察分析装置３４によって観察される。移動中であっても液体サンプル４０は観察分析装置３４によって観察可能である。

【0053】

出願人は、アクチュエータ３１，３２の交互駆動を繰り返し、流路２内で液体サンプル４０を５０回往復させた。液体サンプル４０内の気泡の発生は観察されず、棒状の液体サンプル４０の分断も観察されなかった。

【0054】

この実施形態では、流路２と２つの空気室１０，１２は、樹脂製の基板２０，２１，２２、ゴム製の弾性基板２３，２５、およびゴム製の弾性膜２４，２６で完全に閉鎖されるので、液体サンプルを流路２内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化することができる。マイクロ流体チップ１は、ゴムと樹脂から構成されており、金属やセラミックスさらに電子部品等を含まないため、安価であり気軽に廃棄することができる。

【0055】

左右のアクチュエータ３１，３２と左右のダイアフラムポンプを有する液体サンプル４０の輸送機構は、単純であるにも関わらず、安定して連続した送液が可能である。

【0056】

図７は、第２実施形態に係るＰＣＲ分析装置５０の正面図である。図７に示すように、ＰＣＲ分析装置５０は、ＰＣＲ用マイクロ流体チップ１、１つのアクチュエータ３１、加熱装置３３、観察分析装置３４および制御装置３５を有する。

【0057】

マイクロ流体チップ１は第１実施形態で使用されたマイクロ流体チップ１とまったく同じでよい。この実施形態では、アクチュエータ３１で圧縮される第１の空気室１０をダイアフラムポンプとして使用し、アクチュエータで圧縮されない第２の空気室１２を伸縮可能なアキュムレータとして使用する。

【0058】

アクチュエータ３１、加熱装置３３、観察分析装置３４および制御装置３５は、第１実施形態のそれらと同じであり、詳細には説明しない。

【0059】

ＰＣＲ分析装置５０の使用方法を説明する。まず、図８に示すように、導入装置３９（例えば、マイクロピペットまたはシリンジ）によって液体サンプル４０をポート４を通じて流路２に導入すなわち注入する。流路２および空気室１０，１２を液体サンプル４０で満たす必要はなく、液体サンプル４０の量は、わずかであってよく、例えば、１５～２０μｌでよい。液体サンプル４０は流路２と空気室１０，１２内の空間を左側空間と右側空間に分断する。左側空間は第１の空気室１０の内部空間を含み、右側空間は第２の空気室１２の内部空間を含む。図示しないが、ポート６を通じて空気をわずかに排出して、流路２内での液体サンプル４０の位置を調整してもよい。

【0060】

この後、液体サンプル４０からの気泡の抜けを待ち、ポート４，６を接着テープ４１で閉塞して封止する。接着テープ４１はセロハンテープでもよいしポリイミドテープでもよい。接着テープ４１の代わりに、樹脂またはゴム製の栓をポート４，６に挿入して、ポート４，６を閉塞して封止してもよい。

【0061】

次に、制御装置３５は駆動回路３１ｂを起動してアクチュエータ３１を駆動する。すると、図９に示すように、アクチュエータ３１のピストン３１ａが下降して弾性膜２４を押し下げ、第１の空気室１０を圧縮する。したがって、矢印に示すように、液体サンプル４０は流路２内を右方に向けて移動する。但し、ピストン３１ａは、図示より大きい下端を有して、弾性膜２４とともに弾性基板２３を押し下げるようにしてもよい。液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７と直線流路部９を通過し、さらに第２の曲線流路部８を通過する。液体サンプル４０に押されて、右側空間の圧力が高まり、第２の空気室１２は弾性的に膨張する。

【0062】

次に、図１０に示すように、制御装置３５は、駆動回路３１ｂを非駆動にしてアクチュエータ３１のピストン３１ａを初期位置に上昇させる。第１の空気室１０への圧縮力の除去により、膨張させられた第２の空気室１２が弾性的に収縮する。したがって、矢印に示すように、液体サンプル４０は流路２内を左方、すなわち圧縮されていた第１の空気室１０に向けて移動する。液体サンプル４０は、第２の曲線流路部８と直線流路部９を通過し、さらに第１の曲線流路部７を通過する。液体サンプル４０に押されて、左側空間の圧力が高まり、第１の空気室１０は弾性的に膨張する。

【0063】

再度、制御装置３５がアクチュエータ３１を駆動すると、液体サンプル４０は流路２内を右方に向けて移動する。再度、制御装置３５がアクチュエータ３１を非駆動にすると、液体サンプル４０は流路２内を左方に向けて移動する。

【0064】

このようにして、制御装置３５は、左右のアクチュエータ３１を間欠的に駆動して、ダイアフラムポンプ、すなわち第１の空気室１０を間欠的に圧縮する。第１の空気室１０が収縮して左側空間の圧力が上昇する時、右側空間の圧力も上昇するが、第２の空気室１２が膨張するので、右側空間の圧力は急激には上昇しない。逆に第２の空気室１２が収縮して右側空間の圧力が上昇する時、左側空間の圧力も上昇するが、第１の空気室１０が膨張するので、左側空間の圧力は急激には上昇しない。このように、流路２内の圧力が急変しないため、液体サンプル４０内の気泡の発生が低減され、棒状の液体サンプル４０が大きな気泡の発生のために分断することも抑制される。

【0065】

加熱装置３３は、流路２内の液体サンプル４０の往復移動の間にサーマルサイクルを行うことが可能である。ある例では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に固定してもよい。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。直線流路部９は加熱されていないが、直線流路部９は短いので、そこを通過する間の液体サンプル４０の温度降下は少ない。他方、アクチュエータ３１が非駆動にされて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。この例では、液体サンプル４０の流路２内での１往復が１サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、アクチュエータ３１を間欠的に駆動する。

【0066】

他の例では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に固定してもよい。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。他方、アクチュエータ３１が非駆動にされて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。この例でも、液体サンプル４０の流路２内での１往復が１サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、アクチュエータ３１を間欠的に駆動する。

【0067】

他の例では、制御装置３５が左右の加熱部３７，３８の温度を交互に変更してもよい。例えば、アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、制御装置３５は、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に設定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に設定してもよい。液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。

【0068】

この例では、逆にアクチュエータ３１が非駆動にされて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、制御装置３５は、右側の第２の加熱部３８を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い温度（例えば９４℃）に設定し、左側の第１の加熱部３７をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い温度（例えば６０℃）に設定してもよい。液体サンプル４０は、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になり、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。この例では、液体サンプル４０の流路２内での１往復が２サイクルに相当する。制御装置３５は、サイクル時間に適合するように、アクチュエータ３１を間欠的に駆動する。

【0069】

アクチュエータ３１の駆動を停止した後、左側空間と右側空間の圧力（２つの空気室１０，１２の圧力）が平衡すると、液体サンプル４０は移動を停止する。液体サンプル４０の停止位置は、アクチュエータ３１の駆動回数にかかわらず一定である。

【0070】

移動を停止した液体サンプル４０は、透明な下基板２０を通じて観察分析装置３４によって観察される。移動中であっても液体サンプル４０は観察分析装置３４によって観察可能である。

【0071】

出願人は、アクチュエータ３１の間欠的駆動を繰り返し、流路２内で液体サンプル４０を５０回往復させた。液体サンプル４０内の気泡の発生は観察されず、棒状の液体サンプル４０の分断も観察されなかった。

【0072】

この実施形態では、流路２と２つの空気室１０，１２は、樹脂製の基板２０，２１，２２、ゴム製の弾性基板２３，２５、およびゴム製の弾性膜２４，２６で完全に閉鎖されるので、液体サンプルを流路２内で流動させる際に、液体サンプルへのコンタミネーションを最小限化することができる。マイクロ流体チップ１は、ゴムと樹脂から構成されており、金属やセラミックスさらに電子部品等を含まないため、安価であり気軽に廃棄することができる。

【0073】

アクチュエータ３１と左右のダイアフラムポンプを有する液体サンプル４０の輸送機構は、単純であるにも関わらず、安定して連続した送液が可能である。しかも、この実施形態では、第１実施形態のアクチュエータ３２が不要であり、部品数を削減することができる。

【0074】

出願人は、さらに好適なサーマルサイクルを行うための加熱部３７，３８の温度設定に関する実験を行った。

【0075】

第１の実験では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの変性のためかなり高い変性温度（１０４℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い伸長・アニーリング温度（６０℃）に固定した。変性温度は、液体サンプル４０の沸騰（ひいては液体サンプル４０の気泡の発生）を起こしやすいように、通常の変性温度より高い１０４℃に設定した。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。アクチュエータ３１が非駆動にされて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に変性温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。

【0076】

第２の実験では、液体サンプル４０が流路２内で往復移動する間、左側の第１の加熱部３７を液体サンプル４０内のＤＮＡの伸長とプライマーのアニーリングのため高い伸長・アニーリング温度（６０℃）に固定し、右側の第２の加熱部３８をＤＮＡの変性のためかなり高い変性温度（１０４℃）に固定した。アクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。アクチュエータ３１が非駆動にされて液体サンプル４０が流路２内を左方に向けて移動する間、液体サンプル４０は第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度のままであり、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度になる。次にアクチュエータ３１が駆動されて液体サンプル４０が流路２内を右方に向けて移動する間、液体サンプル４０は、第１の曲線流路部７を通過する間に伸長・アニーリング温度のままであり、第２の曲線流路部８を通過する間に変性温度になる。

【0077】

実験においては、液体サンプル４０を変性温度帯（第１の実験では第１の曲線流路部７、第２の実験では第２の曲線流路部８）に停止させて、停止から１５秒後、３０秒後、６０秒後の液体サンプル４０の状態（気泡が発生したか否か、大きな気泡の発生による液体サンプル４０の分断があったか否か）を調べた。結果を図１１に示す。第１の実験では、第１の曲線流路部７での液体サンプル４０の停止後、３０秒で液体サンプル４０の分断が発生した。一方、第２の実験では、第２の曲線流路部８での液体サンプル４０の停止後、気泡は発生したものの、６０秒経過しても液体サンプル４０の分断は発生しなかった。

【0078】

したがって、アクチュエータで圧縮される第１の空気室１０に連通する第１の曲線流路部７よりもアクチュエータで圧縮されない第２の空気室１２に連通する第２の曲線流路部８を変性温度に制御する方が、液体サンプル４０は沸騰しにくい。この理由は、第２の曲線流路部８は、第１の曲線流路部７よりも液体サンプル４０がアクチュエータで圧縮される第１の空気室１０から遠いためであると考えられる。すなわち、液体サンプル４０の移動の向きにかかわらず、第２の曲線流路部８に液体サンプル４０が位置する状態では、第１の曲線流路部７に液体サンプル４０が位置する状態よりも、液体サンプル４０に高い圧力がかかっていると考えられる。高圧下の方が沸点は高い。

【0079】

ＰＣＲのサーマルサイクルでは、ＤＮＡの変性時間は３０秒以下であることが多い。したがって、第１の曲線流路部７よりも第２の曲線流路部８を高温にする方が好ましい。すなわち、第１の加熱部３７は、第１の曲線流路部７の内部の液体サンプルを伸長温度に加熱し、第２の加熱部３８は、第２の曲線流路部８の内部の液体サンプルを、伸長温度より高い変性温度に加熱することが好ましい。

【0080】

以上、本発明の好ましい実施形態を参照しながら本発明を図示して説明したが、当業者にとって特許請求の範囲に記載された発明の範囲から逸脱することなく、形式および詳細の変更が可能であることが理解されるであろう。このような変更、改変および修正は本発明の範囲に包含されるはずである。

【0081】

例えば、上記の実施形態においては、空気室１０，１２を画定する弾性基板２３，２５が設けられている。しかし、弾性基板２３，２５の代わりに、蛇腹を用いてもよい。この場合、蛇腹は、弾性膜２４と上基板２２を気密に連結し、弾性膜２６と上基板２２を気密に連結する。

【0082】

第１実施形態において、第１の空気室１０を画定する部材の材料と構造は、第２の空気室１２を画定する部材の材料と構造と同じであることが好ましい。しかし、第２実施形態において、第１の空気室１０を画定する部材の材料と構造は、第２の空気室１２を画定する部材の材料と構造と同じでもよいが、異なっていてもよい。

【0083】

上記の実施形態においては、ＰＣＲ分析装置３０またはＰＣＲ分析装置５０が観察分析装置３４を有する。しかし、サーマルサイクルが終了した後、液体サンプル４０をマイクロ流体チップ１からマイクロピペットまたはシリンジによって取り出し、取り出した液体サンプル４０を電気泳動でフィルタリングし、液体サンプル４０中の増幅産物のサイズを計測してもよい。したがって、観察分析装置３４は不可欠ではない。

【0084】

本発明の態様は、下記の番号付けされた条項にも記載される。

【0085】

条項１． ＰＣＲに使用される液体サンプルが流動する流路と、
前記流路に前記液体サンプルを導入する導入口と、
前記流路の両端にそれぞれ接続された弾性的に伸縮可能な２つの空気室と、
前記流路と前記空気室を気密に包囲し、少なくとも片面に透明部分が設けられた包囲部材とを
有するＰＣＲ用マイクロ流体チップ。

【0086】

条項２． 条項１に記載のＰＣＲ用マイクロ流体チップと、
前記２つの空気室を交互に圧縮する２つのアクチュエータと、
前記流路を加熱する加熱装置とを
有するＰＣＲ分析装置。

【0087】

この条項によれば、２つのアクチュエータが流路の両端に接続された２つの空気室を交互に圧縮するので、液体サンプルの往復移動を促進することができる。往復移動の間に流路を加熱する加熱装置によって、液体サンプルはサーマルサイクルの対象となる。アクチュエータを停止した後、２つの空気室の圧力が平衡すると、液体サンプルは移動を停止する。

【0088】

条項３． 条項１に記載のＰＣＲ用マイクロ流体チップと、
前記２つの空気室のうち第１の空気室を間欠的に圧縮するアクチュエータと、
前記流路を加熱する加熱装置とを
有するＰＣＲ分析装置。

【0089】

この条項によれば、アクチュエータで第１の空気室を圧縮すれば、液体サンプルは圧縮された第１の空気室から他方の空気室に向けて流れ、下流の空気室が弾性的に膨張する。圧縮力を除去すれば、膨張させられた空気室が弾性的に収縮し、圧縮されていた第１の空気室に向けて逆方向に液体サンプルが流れ、圧縮されていた第１の空気室が弾性的に膨張する。このようにして、液体サンプルは流路を往復移動することができる。往復移動の間に流路を加熱する加熱装置によって、液体サンプルはサーマルサイクルの対象となる。アクチュエータを停止した後、２つの空気室の圧力が平衡すると、液体サンプルは移動を停止する。

【0090】

条項４． 前記流路は、前記アクチュエータで圧縮される前記第１の空気室に連通する第１の曲線流路部と、前記２つの空気室のうち前記アクチュエータで圧縮されない第２の空気室に連通する第２の曲線流路部と、前記第１の曲線流路部と前記第２の曲線流路部を接続する直線流路部を有し、
前記加熱装置は、前記第１の曲線流路部を加熱する第１の加熱部と、前記第２の曲線流路部を加熱する第２の加熱部を有し、
前記第１の加熱部は、前記第１の曲線流路部の内部の前記液体サンプルを伸長・アニーリング温度に加熱し、前記第２の加熱部は、前記第２の曲線流路部の内部の前記液体サンプルを、前記伸長・アニーリング温度より高い変性温度に加熱する
ことを特徴とする条項３に記載のＰＣＲ分析装置。

【0091】

この条項によれば、液体サンプル中の気泡の発生または液体サンプルの分断が抑制される。

【0092】

条項５． 前記ＰＣＲ用マイクロ流体チップの前記透明部分を通じて前記流路内の前記液体サンプルを観察分析する観察分析装置をさらに有する
ことを特徴とする条項２から４のいずれか１項に記載のＰＣＲ分析装置。

【0093】

この条項によれば、移動中または移動停止後の液体サンプルを簡単に観察分析することができる。

【符号の説明】

【0094】

１ ＰＣＲ用マイクロ流体チップ
２ 流路
４ ポート（導入口）
６ ポート
１０ 第１の空気室
１２ 第２の空気室
７ 第１の曲線流路部
８ 第２の曲線流路部
９ 直線流路部
２０ 下基板（包囲部材）
２１ 流路基板（包囲部材）
２２ 上基板（包囲部材）
２３，２５ 弾性基板（包囲部材）
２４，２６ 弾性膜（包囲部材）
３０，５０ ＰＣＲ分析装置
３１，３２ アクチュエータ
３３ 加熱装置
３４ 観察分析装置
３５ 制御装置
３７ 第１の加熱部
３８ 第２の加熱部
３７ａ，３８ａ ペルチェ素子
３７ｂ，３８ｂ 金属板
４０ 液体サンプル

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】