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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023050158
(43)【公開日】2023-04-10
(54)【発明の名称】ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット
(51)【国際特許分類】
G01N 33/545 20060101AFI20230403BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20230403BHJP
【ＦＩ】
G01N33/545 A
G01N33/531 B
【審査請求】未請求
【請求項の数】22
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022152719
(22)【出願日】2022-09-26
(31)【優先権主張番号】P 2021159287
(32)【優先日】2021-09-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000162478
【氏名又は名称】ミナリスメディカル株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100088155
【弁理士】
【氏名又は名称】長谷川 芳樹
(74)【代理人】
【識別番号】100128381
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 義憲
(74)【代理人】
【識別番号】100126653
【弁理士】
【氏名又は名称】木元 克輔
(72)【発明者】
【氏名】清水 明
(72)【発明者】
【氏名】山口 雄平
(72)【発明者】
【氏名】小野 仁
(57)【要約】
【課題】高感度で、正確な、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットを提供する。
【解決手段】（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【選択図】なし
【解決手段】（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【請求項2】
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【請求項3】
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体を混合する工程；並びに
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【請求項4】
アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである請求項６に記載の方法。
【請求項9】
ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである請求項８に記載の方法。
【請求項10】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定試薬。
【請求項11】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定試薬。
【請求項12】
アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、請求項１０又は１１に記載の試薬。
【請求項13】
アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、請求項１０又は１１に記載の試薬。
【請求項14】
ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１３に記載の試薬。
【請求項15】
ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである請求項１３に記載の試薬。
【請求項16】
ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである請求項１５に記載の試薬。
【請求項17】
水性媒体を含む第１試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２試薬と、を含み、当該第１試薬及び／又は当該第２試薬にアルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定キット。
【請求項18】
アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、請求項１７に記載のキット。
【請求項19】
アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、請求項１７又は１８に記載のキット。
【請求項20】
ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１９に記載のキット。
【請求項21】
ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである請求項１９に記載のキット。
【請求項22】
ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである請求項２１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットに関する。
【背景技術】
【0002】
モノクローナル抗体ＤＵＰＡＮ－２は、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを免疫原として用いて作製されたモノクローナル抗体であり、膵癌細胞から高率に産生されるムチン様タンパク質（抗原）に反応することが報告されている（非特許文献１、２）。この抗原は、ＤＵＰＡＮ－２抗原と呼ばれており、膵癌及び胆道系癌などの癌マーカーとして用いられている。
【0003】
ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法としては、ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（非特許文献１）及びＥｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（特許文献１）が報告されている。
前述の測定方法は、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する抗体と、を抗原抗体反応させ免疫複合体を形成させたのち、免疫複合体中の標識の量を測定することにより、ＤＵＰＡＮ－２抗原を測定することを原理とする標識法が用いられている。しかしながら、これらの標識法は、一般的に、免疫複合体中の標識の量を測定する前に、試料中に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原以外の物質を取り除くために、洗浄液を用いて洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行う必要があり、測定に時間を要する。
前述の測定方法は、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する抗体と、を抗原抗体反応させ免疫複合体を形成させたのち、免疫複合体中の標識の量を測定することにより、ＤＵＰＡＮ－２抗原を測定することを原理とする標識法が用いられている。しかしながら、これらの標識法は、一般的に、免疫複合体中の標識の量を測定する前に、試料中に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原以外の物質を取り除くために、洗浄液を用いて洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行う必要があり、測定に時間を要する。
【0004】
一方、標識を使用しない免疫測定法の１つにラテックス凝集免疫測定方法がある（特許文献２、３）。ラテックス凝集免疫測定方法は、測定対象成分に結合する抗体、又は抗原を結合したラテックス粒子を用いて、試料中の測定対象成分と抗原抗体反応を起こさせ、ラテックス粒子の凝集による濁度変化を吸光度として測定する方法であり、Ｂ／Ｆ分離が不要な方法であるため、生化学検査用の汎用自動分析機での測定にも適用されている。しかしながら、ラテックス凝集免疫測定方法は測定感度が悪いという問題があり、高感度が必要とされる測定対象成分の測定には適用が難しい。また、ラテックス凝集免疫測定方法にはＢ／Ｆ分離工程が含まれないため、試料に含まれる夾雑物に起因する非特異反応の影響を受けやすく、正確な測定が難しいという課題もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開第２０１９／１８９８７４号パンフレット
【特許文献2】特開２００６－０１７７４５号公報
【特許文献3】特開２０１４－１５３１０２号公報
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Metzgarら、“Detection of a pancreatic cancer-associated antigen (DU-PAN-2antigen) in serum and ascites of patients with adenocarcinoma”、Proceedings of the National Academy of Sciences of the United Statesof America、1984年,Vol.81,pp.5242-5246
【非特許文献2】櫻林ら、「膵癌関連糖蛋白抗原，ＤＵ－ＰＡＮ－２に関する研究Ｉ．酵素免疫測定法における基礎的検討および健常人の測定値の分布」、臨床病理、１９８６年，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．７０５－７１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
ＤＵＰＡＮ－２抗原は、膵癌及び胆道系癌などの癌マーカーとして用いられているため、より感度が高く、正確な測定ができる測定試薬及び測定キットが必要とされていた。
本発明の課題は、高感度で、正確な、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットを提供することにある。
本発明の課題は、高感度で、正確な、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させるラテックス凝集免疫測定方法により、高感度で、正確な、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定が可能となる、という知見を見出し、本開示内容の発明を完成するに至った。
【0009】
すなわち、本開示は一態様において以下を提供する。
［１］ 水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
［１］ 水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【0010】
［２］ （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
【0011】
［３］ （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体を混合する工程；並びに
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
［４］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）である、［１］～［３］のいずれか１に記載の方法。
［５］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１］～［３］のいずれか１に記載の方法。
［６］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１］～［５］のいずれか１に記載の方法。
［７］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［６］に記載の方法。
［８］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［６］に記載の方法。
［９］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［８］に記載の方法。
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法。
［４］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）である、［１］～［３］のいずれか１に記載の方法。
［５］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１］～［３］のいずれか１に記載の方法。
［６］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１］～［５］のいずれか１に記載の方法。
［７］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［６］に記載の方法。
［８］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［６］に記載の方法。
［９］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［８］に記載の方法。
【0012】
［１０］ ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定試薬。
【0013】
［１１］ ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定試薬。
［１２］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１０］又は［１１］に記載の試薬。
［１３］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１０］～［１２］のいずれか１に記載の試薬。
［１４］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［１３］に記載の試薬。
［１５］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［１３］に記載の試薬。
［１６］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［１５］に記載の試薬。
［１２］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１０］又は［１１］に記載の試薬。
［１３］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１０］～［１２］のいずれか１に記載の試薬。
［１４］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［１３］に記載の試薬。
［１５］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［１３］に記載の試薬。
［１６］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［１５］に記載の試薬。
【0014】
［１７］ 水性媒体を含む第１試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２試薬と、を含み、当該第１試薬及び／又は当該第２試薬にアルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定キット。
［１８］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１７］に記載のキット。
［１９］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１７］又は［１８］に記載のキット。
［２０］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［１９］に記載のキット。
［２１］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［１９］に記載のキット。
［２２］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［２１］に記載のキット。
［１８］ アルキレンオキシド誘導体の濃度が０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）である、［１７］に記載のキット。
［１９］ アルキレンオキシド誘導体がポリオキシエチレン誘導体又はポリオキシプロピレン誘導体である、［１７］又は［１８］に記載のキット。
［２０］ ポリオキシエチレン誘導体が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレン多環フェニルエーテルからなる群より選択される少なくとも１つである、［１９］に記載のキット。
［２１］ ポリオキシプロピレン誘導体が、ポリプロピレングリコールである［１９］に記載のキット。
［２２］ ポリプロピレングリコールが、ジプロピレングリコールである［２１］に記載のキット。
【0015】
［２３］ 水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法におけるマトリックス効果を抑制する方法。
【0016】
［２４］ （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法におけるマトリックス効果を抑制する方法。
［２５］ マトリックス効果が、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応である、［２３］又は［２４］に記載の方法。
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法におけるマトリックス効果を抑制する方法。
［２５］ マトリックス効果が、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応である、［２３］又は［２４］に記載の方法。
【発明の効果】
【0017】
本開示によれば、高感度で、正確な、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットを提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、本開示を実施するための形態ついて詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本開示の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより開示の範囲が狭く解釈されることはない。
なお、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。また、溶液中の各成分の量は、溶液中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、反応中又は試薬中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
なお、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。また、溶液中の各成分の量は、溶液中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、反応中又は試薬中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
【0019】
本開示において、「％（ｗ／ｖ）」とは、体積（１００ｍＬ）を基準とする質量（ｇ）の百分率を意味する。
【0020】
本開示において、抗体とＤＵＰＡＮ－２抗原とが「結合する」、「反応する」、あるいは抗体がＤＵＰＡＮ－２抗原を「認識する」と表現する場合、本開示の分野で通常使用される意味を含み、いずれも同義で用いる。抗体とＤＵＰＡＮ－２抗原とが「結合する」ことを確認する方法としては、当業者に周知の抗原固相化ＥＬＩＳＡ法、競合ＥＬＩＳＡ法、サンドイッチＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴法、免疫クロマトグラフィー法、水晶振動子マイクロバランス法等の原理を利用した方法などにより行うことができる。
【0021】
「水性媒体」
本開示における水性媒体としては、脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、酢酸緩衝液、グッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝剤は、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
水性媒体には、塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
塩類としては、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等が挙げられる。金属イオンとしては、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン等が挙げられる。糖類としては、マンニトール、ソルビトール等が挙げられる。蛋白質としては、ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記す）等が挙げられる。界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
本開示における水性媒体としては、脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、酢酸緩衝液、グッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝剤は、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
水性媒体には、塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
塩類としては、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等が挙げられる。金属イオンとしては、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン等が挙げられる。糖類としては、マンニトール、ソルビトール等が挙げられる。蛋白質としては、ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記す）等が挙げられる。界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
【0022】
「試料」
本開示における試料としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含有する可能性がある試料であれば特に制限はなく、全血、血漿、血清、尿、腹水、髄液、唾液、羊水、尿、汗及び膵液からなる群から選択されるいずれか１以上の生体試料等が挙げられ、好ましくは全血、血漿、血清、腹水等が挙げられる。また、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの細胞可溶化物（ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを培養した際に得られる培養上清であってもよい。
本開示における試料は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む水性媒体であってもよく、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液、ｐＨ７．２、以下、ＰＢＳと記す）等で希釈されたＤＵＰＡＮ－２抗原が挙げられる。水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原は、上記生体試料、上記細胞可溶化物、又は上記培養上清から精製されたＤＵＰＡＮ－２抗原等を用いることができる。
本開示における試料としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含有する可能性がある試料であれば特に制限はなく、全血、血漿、血清、尿、腹水、髄液、唾液、羊水、尿、汗及び膵液からなる群から選択されるいずれか１以上の生体試料等が挙げられ、好ましくは全血、血漿、血清、腹水等が挙げられる。また、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの細胞可溶化物（ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを培養した際に得られる培養上清であってもよい。
本開示における試料は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む水性媒体であってもよく、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液、ｐＨ７．２、以下、ＰＢＳと記す）等で希釈されたＤＵＰＡＮ－２抗原が挙げられる。水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原は、上記生体試料、上記細胞可溶化物、又は上記培養上清から精製されたＤＵＰＡＮ－２抗原等を用いることができる。
【0023】
「ラテックス凝集免疫測定方法」
本開示において、ラテックス凝集免疫測定方法は、水性媒体中で、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体を形成させ、ラテックス粒子を選択的に凝集させる方法であり得る。当該凝集は、吸光度や散乱光等を測定することにより検出することができる。
本開示において、ラテックス凝集免疫測定方法は、水性媒体中で、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体を形成させ、ラテックス粒子を選択的に凝集させる方法であり得る。当該凝集は、吸光度や散乱光等を測定することにより検出することができる。
【0024】
「ラテックス粒子」
本開示において、ラテックス粒子としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なラテックス粒子であれば特に制限はなく、例えば、有機高分子物質の微粒子、無機酸化物の微粒子、核となる上記微粒子の表面を有機物等で表面処理した微粒子等が挙げられる。具体的には、例えば、ポリスチレン、スチレンを主成分とする共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、（メタ）アクリル樹脂、ポリメチルメタクリレート等の合成樹脂等が挙げられる。上記ラテックス粒子は、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。これらの中でも、特にポリスチレン系の合成高分子、電荷を与える為に成分としてアクリル酸系のモノマー、スルホン酸を有するモノマー等を共重合したポリスチレン系の合成高分子が好ましい。
本開示において、ラテックス粒子としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なラテックス粒子であれば特に制限はなく、例えば、有機高分子物質の微粒子、無機酸化物の微粒子、核となる上記微粒子の表面を有機物等で表面処理した微粒子等が挙げられる。具体的には、例えば、ポリスチレン、スチレンを主成分とする共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、（メタ）アクリル樹脂、ポリメチルメタクリレート等の合成樹脂等が挙げられる。上記ラテックス粒子は、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。これらの中でも、特にポリスチレン系の合成高分子、電荷を与える為に成分としてアクリル酸系のモノマー、スルホン酸を有するモノマー等を共重合したポリスチレン系の合成高分子が好ましい。
【0025】
上記ラテックス粒子は、ポリスチレンラテックス粒子が特に好ましく用いられる。ポリスチレンラテックス粒子等の表面の疎水性が強いラテックスを用いると、タンパク質やペプチドの吸着をスムーズにすることができる。また、乳化剤として界面活性剤を用いないソープフリー重合によって得られるポリスチレンラテックス粒子は、表面の負電荷同士の反発に基づき、界面活性剤なしでも安定に存在できるので特に好ましい。その他、種々の変性ラテックス（例えば、カルボン酸変性ラテックス）、磁性ラテックス（磁性粒子を内包させたラテックス）等を必要に応じて用いることもできる。
【0026】
上記ラテックス粒子の形状としては、特に制限はなく、例えば、球状、楕円上、凹凸形状等が挙げられる。平均粒径（Ｄ５０）としては、例えば、０．０３～０．８μｍ、０．０５～０．４μｍ、０．１～０．３５μｍであってもよい。平均粒径（Ｄ５０）は、例えば、レーザー回折式粒度分布計にて測定することができる。平均粒径（Ｄ５０）は、粒度分布における積算値５０％（体積基準）での粒径を平均粒径とする。
【0027】
「ＤＵＰＡＮ－２抗原」
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２），４２：６０１－６０８）が結合するムチン様タンパク質（糖タンパク質）、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合する糖鎖、又は当該糖鎖を含むペプチドをいう。具体的には、ＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合すると報告されているシアリルルイスＣ糖鎖（Ｋａｗａら、“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｐａｎ－１ ａｎｄ ＤＵＰＡＮ－２ ｕｓｉｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｆｕｃｏｐｅｎｔａｏｓｅ ＩＩ ａｎｄ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｔｅｔｒａｏｓｅ”、Ｐａｎｃｒｅａｓ （１９９４），９（６）：６９２－６９７）、当該糖鎖を有するタンパク質、又は当該糖鎖を有するペプチドをいう。ＤＵＰＡＮ－２抗原は、ヒト膵癌患者の腹水、又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの培養上清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原を使用することができる。ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦは、「ＨＰＡＦ－ＩＩ」という名称でＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手することができる。
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２），４２：６０１－６０８）が結合するムチン様タンパク質（糖タンパク質）、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合する糖鎖、又は当該糖鎖を含むペプチドをいう。具体的には、ＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合すると報告されているシアリルルイスＣ糖鎖（Ｋａｗａら、“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｐａｎ－１ ａｎｄ ＤＵＰＡＮ－２ ｕｓｉｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｆｕｃｏｐｅｎｔａｏｓｅ ＩＩ ａｎｄ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｔｅｔｒａｏｓｅ”、Ｐａｎｃｒｅａｓ （１９９４），９（６）：６９２－６９７）、当該糖鎖を有するタンパク質、又は当該糖鎖を有するペプチドをいう。ＤＵＰＡＮ－２抗原は、ヒト膵癌患者の腹水、又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの培養上清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原を使用することができる。ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦは、「ＨＰＡＦ－ＩＩ」という名称でＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手することができる。
【0028】
「ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片」
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片（ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を含む）とは、ＤＵＰＡＮ－２抗原のシアリルルイスＣを認識し、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合することができる抗体をいう。
一実施形態において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する抗体又はその抗体断片は、国際公開第２０１９／１８９８７４号パンフレットに開示される、
下記糖鎖構造を有するＤＵＰＡＮ－２抗原
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片（ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を含む）とは、ＤＵＰＡＮ－２抗原のシアリルルイスＣを認識し、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合することができる抗体をいう。
一実施形態において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する抗体又はその抗体断片は、国際公開第２０１９／１８９８７４号パンフレットに開示される、
下記糖鎖構造を有するＤＵＰＡＮ－２抗原
【0029】
【化1】
【0030】
と反応し、かつ、
下記糖鎖構造を有するＮＣＣ－ＳＴ－４３９抗原
下記糖鎖構造を有するＮＣＣ－ＳＴ－４３９抗原
【0031】
【化2】
【0032】
と反応しない抗体又はその抗体断片であってよく、上記ＮＣＣ－ＳＴ－４３９抗原に対する反応性が上記ＤＵＰＡＮ－２抗原に対する反応性の１０％未満である抗体又はその抗体断片であってよく、上記ＮＣＣ－ＳＴ－４３９抗原に対する反応性が上記ＤＵＰＡＮ－２抗原に対する反応性の１％未満である抗体又はその抗体断片であってよく、また、これらの抗体はラット抗体であってよい。
【0033】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体であってよく、又は他の種由来抗体であってもよい。また、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）、任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であり得る。
【0034】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体等が挙げられ、均質性及び安定性の観点からはモノクローナル抗体が好ましい。
【0035】
本開示において、抗体断片とは、上記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体の一部であって、抗体の可変ドメインを含むか、少なくとも抗原結合領域を含むものをいう。本開示における抗体断片としては、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ｓｃ（Ｆｖ）２、Ｆａｂ３、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及びミニボディが挙げられる。「Ｆｖ断片」は最小の抗体断片であり、完全な抗原認識領域と抗原結合領域を含む。
【0036】
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片とは、それぞれの抗体が結合するＤＵＰＡＮ－２抗原の部位（エピトープ）は同じであっても、異なっていてもよい。また、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片とは同一の抗体であってもよいし、異なる抗体であってもよい。
【0037】
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片は、ＤＵＰＡＮ－２抗原、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を産生する癌細胞を免疫原として用いて、通常の抗体の作製方法により取得することができる。例えば、上記免疫原を動物に免疫することで得られる抗体産生細胞と、ミエローマ細胞とを融合した細胞（ハイブリドーマ）を作製し、上記ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体を得ることにより取得することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識するモノクローナル抗体としては、前述のモノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２），４２：６０１－６０８）等が挙げられる。なお、本開示において、当該モノクローナル抗体ＤＵＰＡＮ－２を「ＤＵＰＡＮ－２抗体」とも記載する。
【0038】
「ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子」
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とは、ラテックス粒子に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片（後述の、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を含む）が結合しているラテックス粒子をいう。
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とは、ラテックス粒子に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片（後述の、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を含む）が結合しているラテックス粒子をいう。
【0039】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片の、ラテックス粒子への結合方法としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は、本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能な結合方法であれば特に制限はなく、物理吸着による結合、化学結合による結合等が挙げられる。物理吸着としては、静電的結合、水素結合、疎水結合等が挙げられる。化学結合としては、共有結合、配位結合等が挙げられる。
【0040】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、ラテックス粒子に結合させてもよいし、間接的にラテックス粒子に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、ビオチンとアビジン類（アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン等）等の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片をラテックス粒子に結合する方法、リンカーを介した共有結合によりラテックス粒子に結合する方法等が挙げられる。
【0041】
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合したラテックス粒子とを、結合させることにより、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を生成させることができる。
【0042】
Ａ－ａの組み合わせとしては、以下の組み合わせ等が挙げられる。
・ビオチンとアビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）との組み合わせ；
・アビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）とビオチンとの組み合わせ；
・ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体のＦｃ領域と、Ｆｃ領域と結合する抗体との組み合わせ。
・ビオチンとアビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）との組み合わせ；
・アビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）とビオチンとの組み合わせ；
・ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体のＦｃ領域と、Ｆｃ領域と結合する抗体との組み合わせ。
【0043】
リンカーとしては、ラテックス粒子表面の官能基と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が有する官能基との両者を共有結合できる分子等が挙げられ、例えば、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が有する官能基と反応することができる第１の反応活性基と、ラテックス粒子表面の官能基と反応することができる第２の反応活性基とを同時に持つ分子であって、第１の反応活性基と第２の反応活性基とが異なる基である分子が好ましく用いられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が有する官能基、及びラテックス粒子がその表面に保持している官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、グリシジル基、スルフヒドリル基、水酸基、アミド基、イミノ基、Ｎ－ヒドロキシサクシニル基、マレイミド基等が挙げられる。リンカーにおける反応活性基としては、アリルアジド、カルボジイミド、ヒドラジド、アルデヒド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、イソシアネート、マレイミド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ソラレン、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン等の基が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が有する官能基、及びラテックス粒子がその表面に保持している官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、グリシジル基、スルフヒドリル基、水酸基、アミド基、イミノ基、Ｎ－ヒドロキシサクシニル基、マレイミド基等が挙げられる。リンカーにおける反応活性基としては、アリルアジド、カルボジイミド、ヒドラジド、アルデヒド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、イソシアネート、マレイミド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ソラレン、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン等の基が挙げられる。
【0044】
「アルキレンオキシド誘導体」
本開示おいて、アルキレンオキシド誘導体とは、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なアルキレンオキシド誘導体であれば特に制限はなく、例えば、ポリオキシエチレン誘導体、ポリオキシプロピレン誘導体等が挙げられる。
アルキレンオキシド誘導体の存在下でＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を行うと、ＤＵＰＡＮ－２抗原の検出感度が向上する。また、アルキレンオキシド誘導体の存在下でＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を行うと、非特異反応を抑制することができる。
本開示おいて、アルキレンオキシド誘導体とは、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なアルキレンオキシド誘導体であれば特に制限はなく、例えば、ポリオキシエチレン誘導体、ポリオキシプロピレン誘導体等が挙げられる。
アルキレンオキシド誘導体の存在下でＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を行うと、ＤＵＰＡＮ－２抗原の検出感度が向上する。また、アルキレンオキシド誘導体の存在下でＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を行うと、非特異反応を抑制することができる。
【0045】
本開示おいて、ポリオキシエチレン誘導体としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は、本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なポリオキシエチレン誘導体であれば特に制限はなく、例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル等が挙げられる。
【0046】
ポリエチレングリコールとしては、例えば数平均分子量１００～２５，０００のポリエチレングリコール等が挙げられ、数平均分子量２００～２０，０００のポリエチレングリコールが好ましく、数平均分子量６，０００～２０，０００のポリエチレングリコールが特に好ましい。ポリエチレングリコールは、ジオール型であっても、トリオール型であってもよい。
ジオール型のポリエチレングリコールの市販品としては、例えば、ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコール１，０００、ポリエチレングリコール２，０００、ポリエチレングリコール４，０００、ポリエチレングリコール６，０００、ポリエチレングリコール１０，０００、ポリエチレングリコール２０，０００（以上、富士フイルム和光純薬株式会社製）等が挙げられ、トリオール型のポリエチレングリコールの市販品としては、例えば、ユニオックス（登録商標）Ｇ－４５０、ユニオックス（登録商標）Ｇ－７５０（以上、日油株式会社製）等が挙げられる。
なお、本開示において、数平均分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により、標準ポリエチレンオキシドを用いた検量線から換算した値である。標準ポリエチレンオキシドとしては、例えば、ＴＳＫｇｅｌ標準ポリエチレンオキシド（東ソー株式会社製）が挙げられる。
ジオール型のポリエチレングリコールの市販品としては、例えば、ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコール１，０００、ポリエチレングリコール２，０００、ポリエチレングリコール４，０００、ポリエチレングリコール６，０００、ポリエチレングリコール１０，０００、ポリエチレングリコール２０，０００（以上、富士フイルム和光純薬株式会社製）等が挙げられ、トリオール型のポリエチレングリコールの市販品としては、例えば、ユニオックス（登録商標）Ｇ－４５０、ユニオックス（登録商標）Ｇ－７５０（以上、日油株式会社製）等が挙げられる。
なお、本開示において、数平均分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により、標準ポリエチレンオキシドを用いた検量線から換算した値である。標準ポリエチレンオキシドとしては、例えば、ＴＳＫｇｅｌ標準ポリエチレンオキシド（東ソー株式会社製）が挙げられる。
【0047】
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルにおける脂肪酸としては、例えば炭素数８～２４の飽和又は不飽和脂肪酸が挙げられ、炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸が好ましい。炭素数８～２４の飽和又は不飽和脂肪酸としては、例えばオクタン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、エイコサトリエン酸、アラキドン酸、イコサン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラドコサン酸、テトラコサペンタエン酸等が挙げられる。炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等が挙げられる。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとしては、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート等が挙げられる。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの市販品としては、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート）（シグマアルドリッチジャパン合同会社製）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０（ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート）（富士フイルム和光純薬株式会社製）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０（ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート）（シグマアルドリッチジャパン合同会社製）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）（富士フイルム和光純薬株式会社製）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｌ１０６（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｌ１２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｏ１０６Ｖ（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｏ１２０Ｖ（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｐ１２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｓ１０６Ｖ（ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート）、レオドール（登録商標）ＴＷ－Ｓ１２０Ｖ（ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート）（以上、花王株式会社製）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＯＴ－１０６（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＯＴ－２１（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）（以上、青木油脂工業株式会社製）、ニューコール（登録商標）２５（ポリオキシエチレンソルビタンラウレート）、ニューコール（登録商標）６５（ポリオキシエチレンソルビタンステアレート）、ニューコール（登録商標）８５（ポリオキシエチレンソルビタンオレエート）（以上、日本乳化剤株式会社製）等が挙げられる。
【0048】
ポリオキシエチレン脂肪酸エステルにおける脂肪酸としては、例えば炭素数８～２４の飽和又は不飽和脂肪酸が挙げられ、炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸が好ましい。炭素数８～２４の飽和又は不飽和脂肪酸としては、例えばオクタン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、エイコサトリエン酸、アラキドン酸、イコサン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラドコサン酸、テトラコサペンタエン酸等が挙げられる。炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等が挙げられる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルとしては、例えばポリオキシエチレンモノラウレート、ポリオキシエチレンモノステアレート、ポリオキシエチレンモノオレエート、ポリオキシエチレンジステアレート等が挙げられる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルの市販品としては、例えばエマノーン（登録商標）１１１２（ポリオキシエチレンモノラウレート）、エマノーン（登録商標）４１１０（ポリオキシエチレンモノオレエート）、エマノーン（登録商標）３１９９Ｖ（ポリオキシエチレンモノステアレエート）、エマノーン（登録商標）３２９９Ｖ（ポリオキシエチレンジステアレエート）（以上、花王株式会社製）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）Ｌ－４００(ポリオキシエチレンモノラウレート)、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）Ｓ－３００Ａ(ポリオキシエチレンモノステアレート)、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）Ｏ－６００ＳＡ(ポリオキシエチレンモノオレエート)（以上、青木油脂工業株式会社製)等が挙げられる
【0049】
ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８～９のアルキル等が挙げられる。炭素数８～９のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル等が挙げられる。ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルの市販品としては、例えばトリトン（登録商標）Ｘ－１００（ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル）（シグマアルドリッチジャパン合同会社製）、エマルゲン（登録商標）８１０（ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル）、エマルゲン（登録商標）９１０、エマルゲン（登録商標）９３０（以上、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）（以上、花王株式会社製）、ニッコール（登録商標）ＯＰ－１０（ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル）、ニッコール（登録商標）ＮＰ－１０（ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）（以上、日光ケミカルズ株式会社製）、ノニオンＨＳ－２１０、ノニオンＨＳ－２１５、ノニオンＨＳ－２２０（以上、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル）、ノニオンＮＳ－２１０、ノニオンＮＳ－２１５、ノニオンＮＳ－２２０（以上、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）（以上、日油株式会社製）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＮＫ－８１０（青木油脂工業株式会社製）等が挙げられる。
【0050】
ポリオキシエチレンアルキルアミンにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８～２４のアルキルが挙げられ、炭素数１０～２０のアルキルが好ましい。炭素数８～２４のアルキルとしては、例えばオクチル、イソオクチル、ノニル、デシル、イソデシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、オレイル、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル等が挙げられる。炭素数１０～２０のアルキルとしては、例えばデシル、イソデシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、オレイル、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。ポリオキシエチレンアルキルアミンの市販品としては、例えばナイミーン（登録商標）Ｌ－２０１（オキシエチレンドデシルアミン；日油株式会社製）、ナイミーン（登録商標）Ｌ－２０２、ナイミーン（登録商標）Ｌ－２０７、ナイミーン（登録商標）Ｌ－２１５（以上、ポリオキシエチレンドデシルアミン；日油株式会社製）、アミート（登録商標）１０２、アミート（登録商標）１０５（以上、ポリオキシエチレンドデシルアミン；花王株式会社製）、ナイミーン（登録商標）Ｓ－２０２、ナイミーン（登録商標）Ｓ－２０４、ナイミーン（登録商標）Ｓ－２１０、ナイミーン（登録商標）Ｓ－２１５、ナイミーン（登録商標）Ｓ－２２０（以上、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン；日油株式会社製）、ナイミーン（登録商標）Ｔ２－２０２、ナイミーン（登録商標）Ｔ２－２１０、ナイミーン（登録商標）Ｔ２－２３０［以上、ポリオキシエチレンアルキル（牛脂）アミン；日油株式会社製］、ナイミーン（登録商標）Ｆ－２０２、ナイミーン（登録商標）Ｆ－２０３、ナイミーン（登録商標）Ｆ－２０５、ナイミーン（登録商標）Ｆ－２１０、ナイミーン（登録商標）Ｆ－２１５［以上、ポリオキシエチレンアルキル（ヤシ油）アミン；日油株式会社製］、ブラウノン（登録商標）Ｌ－２０２、ブラウノン（登録商標）Ｌ－２０５、ブラウノン（登録商標）Ｌ－２０７、ブラウノン（登録商標）Ｌ－２１０、ブラウノン（登録商標）Ｌ－２３０（以上、ポリオキシエチレンドデシルアミン；青木油脂工業株式会社製）、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２０７、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２１０、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２１５、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２２０、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２３０（以上、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン；青木油脂工業株式会社製）、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２０５Ｔ、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２０８Ｔ、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２１０Ｔ、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２１５Ｔ、ブラウノン（登録商標）Ｓ－２３０Ｔ［以上、ポリオキシエチレンアルキル（牛脂）アミン；青木油脂工業株式会社製］、ニューコール（登録商標）ＯＤ４２０（ポリオキシエチレンオクタデシルアミン；日本乳化剤株式会社製）、パイオニンＤ３１０４（ポリオキシエチレンドデシルアミン；竹本油脂株式会社製）、パイオニンＤ３１１０（ポリオキシエチレンドデシルアミン；竹本油脂株式会社製）、パイオニンＤ３６０５［ポリオキシエチレンアルキル（大豆）アミン；竹本油脂株式会社製］、パイオニンＤ３６１５Ｔ［ポリオキシエチレンアルキル（牛脂）アミン；竹本油脂株式会社製］、ＢＬＡＵＮＯＮ Ｏ２０９（ポリオキシエチレンオレイルアミン；青木油脂工業株式会社製）等が挙げられる。
【0051】
ポリオキシエチレンアルキルエーテルにおけるアルキルとしては、例えば炭素数８～２４のアルキルが挙げられ、これらの中では炭素数１０～２０のアルキルが好ましい。炭素数８～２４のアルキルとしては、例えばオクチル、イソオクチル、ノニル、デシル、イソデシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、オレイル、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル等が挙げられる。炭素数１０～２０のアルキルとしては、例えばデシル、イソデシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、オレイル、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。ポリオキシエチレンアルキルエーテルの市販品としては、例えばＢｒｉｊ（登録商標）３５（ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）９９（ポリオキシエチレンオレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）５６（ポリオキシエチレンセチルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）７８（ポリオキシエチレンステアリルエーテル）（以上、シグマアルドリッチジャパン合同会社製）、ニッコール（登録商標）ＢＣ－２３（ポリオキシエチレンセチルエーテル）（日光ケミカルズ株式会社製）、ノニオンＰ－２１０、ノニオンＰ－２１３（以上、ポリオキシエチレンセチルエーテル）、ノニオンＫ－２２０（ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、ノニオンＥ－２０５、ノニオンＥ－２１５、ノニオンＥ－２３０（以上、ポリオキシエチレンオレイルエーテル）、ノニオンＳ－２１５、ノニオンＳ－２２０（以上、ポリオキシエチレンステアリルエーテル）（以上、日油株式会社製）、エマルゲン（登録商標）１２０（ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、エマルゲン（登録商標）２２０（ポリオキシエチレンセチルエーテル）、エマルゲン（登録商標）３２０Ｐ（ポリオキシエチレンステアリルエーテル）、エマルゲン（登録商標）４２０（ポリオキシエチレンオレイルエーテル）（以上、花王株式会社製）、アデカトールＬＡ－８７５、アデカトールＬＡ－９７５（以上、ポリオキシエチレンラウリルエーテル）（以上、株式会社ＡＤＥＫＡ製）、エマルミンＮＬ－１００、エマルミンＮＬ－１１０、エマルミンＬＳ－８０、エマルミンＬＳ－９０、（以上、ポリオキシエチレンラウリルエーテル）（以上、三洋化成工業株式会社製）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＥＬ－１５０９、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＥＬ－１５１２Ｐ、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＥＬ－１５１５、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＥＬ－１５２１（以上、ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＣＨ－３１０、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＣＨ－３１０Ｌ、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＣＨ－３１３（以上、ポリオキシエチレンセチルエーテル）、ＢＬＡＵＮＯＮ（登録商標）ＳＲ－７１１（ポリオキシエチレンステアリルエーテル）（以上、青木油脂工業株式会社製）、ノイゲンＳＤ－７０、ノイゲンＳＤ－８０、ノイゲンＳＤ－１１０、ノイゲンＳＤ－１５０（以上、ポリオキシエチレンイソデシルエーテル）、ノイゲンＴＤＳ－８０、ノイゲンＴＤＳ－１００、ノイゲンＴＤＳ－２００Ｄ（以上、ポリオキシエチレントリデシルエーテル）（第一工業製薬株式会社製）等が挙げられる。
【0052】
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルにおける多環フェニルとは、基内に１つの芳香環を有する基（置換基）が２つ以上置換したフェニル基、基内に２つ以上の芳香環を有する基（置換基）が１つ又は複数置換したフェニル基等が挙げられる。基内に１つの芳香環を有する基としては、例えばベンジル、１－（フェニル）エチル等が挙げられる。基内に２つ以上の芳香環を有する基としては、例えばナフチル等が挙げられる。ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルの市販品としては、例えばニューコール（登録商標）７０４、ニューコール（登録商標）７０６、ニューコール（登録商標）７０７、ニューコール（登録商標）７０８、ニューコール（登録商標）７０９、ニューコール（登録商標）７１０、ニューコール（登録商標）７１１、ニューコール（登録商標）７１２、ニューコール（登録商標）７１４、ニューコール（登録商標）７４０、ニューコール（登録商標）６１０、ニューコール（登録商標）２６０７、ニューコール（登録商標）２６０９、ニューコール（登録商標）２６１４（以上、日本乳化剤株式会社製）等が挙げられる。
【0053】
本開示おいて、ポリオキシプロピレン誘導体としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能なポリオキシプロピレン誘導体であれば特に制限はなく、例えば、ポリプロピレングリコール、前述のポリオキシエチレン誘導体とポリプロピレングリコールとの重合体等が挙げられる。
【0054】
ポリプロピレングリコールとしては、例えば数平均分子量１００～１０，０００のポリプロピレングリコール等が挙げられ、数平均分子量１１０～５，０００のポリプロピレングリコールが好ましく、数平均分子量１３０～１，０００のポリプロピレングリコールが特に好ましい。ポリプロピレングリコールは、ジオール型であっても、トリオール型であってもよい。
ジオール型のポリプロピレングリコールの市販品としては、例えば、ジプロピレングリコール、トリプロピレングリコール（以上、東京化成工業株式会社製）、ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０、ユニオール（登録商標）Ｄ－１０００、ユニオール（登録商標）Ｄ－２０００、ユニオール（登録商標）Ｄ－４０００（以上、日油株式会社製）等が挙げられ、トリオール型のポリプロピレングリコールの市販品としては、例えば、ユニオール（登録商標）ＴＧ－３３０、ユニオール（登録商標）ＴＧ－１０００Ｒ、ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００、ユニオール（登録商標）ＴＧ－４０００（以上、日油株式会社製）等が挙げられる。
ジオール型のポリプロピレングリコールの市販品としては、例えば、ジプロピレングリコール、トリプロピレングリコール（以上、東京化成工業株式会社製）、ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０、ユニオール（登録商標）Ｄ－１０００、ユニオール（登録商標）Ｄ－２０００、ユニオール（登録商標）Ｄ－４０００（以上、日油株式会社製）等が挙げられ、トリオール型のポリプロピレングリコールの市販品としては、例えば、ユニオール（登録商標）ＴＧ－３３０、ユニオール（登録商標）ＴＧ－１０００Ｒ、ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００、ユニオール（登録商標）ＴＧ－４０００（以上、日油株式会社製）等が挙げられる。
【0055】
「非特異反応」
ラテックス凝集免疫測定方法において、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応が生じ、正確な測定値が得られないことがある。生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応のことをマトリックス効果ともいう。
非特異反応を生じさせる夾雑物としては、脂質、フィブリン、脂溶性の低分子化合物（分子量５００以下）等が挙げられる。
ラテックス凝集免疫測定方法において、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応が生じ、正確な測定値が得られないことがある。生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応のことをマトリックス効果ともいう。
非特異反応を生じさせる夾雑物としては、脂質、フィブリン、脂溶性の低分子化合物（分子量５００以下）等が挙げられる。
【0056】
生体試料から夾雑物は公知の方法により取り除くこと可能である。脂質については、例えばシリカに脂質を吸着させることで除去することができる。フィブリンについては、生体試料を遠心分離することでフィブリンを沈降させて上清のみを回収することができる。遠心分離の前に、生体試料に、フィブリン生成促進剤（例えば、カルシウムイオン及び／又はウシトロンビン）を添加してフィブリンを生成させ、その後、上記遠心分離をすることもできる。脂溶性の低分子については、チャコール（活性炭）に脂溶性の低分子を吸着させることで除去することができる。
上記のように、生体試料を前処理することで夾雑物を除去し非特異反応を低減することは可能であるが、前処理操作は煩雑である。そこで、上記のような前処理操作無しに、非特異反応を低減できるラテックス凝集免疫測定方法が好ましい。
上記のように、生体試料を前処理することで夾雑物を除去し非特異反応を低減することは可能であるが、前処理操作は煩雑である。そこで、上記のような前処理操作無しに、非特異反応を低減できるラテックス凝集免疫測定方法が好ましい。
【0057】
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法」
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法は、水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、方法である。
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法は、水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、方法である。
【0058】
試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片と反応させる時間は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする時間であれば特に制限はなく、例えば、１０秒間以上、２０秒間以上、３０秒間以上、１分間以上、２分間以上、３分間以上、４分間以上、又は５分間以上であってよい。また、上記の反応時間は、例えば、１時間以下、５０分間以下、４０分間以下、３０分間以下、２０分間以下、１０分間以下、９分間以下、７分間以下、又は６分間以下であってよい。
【0059】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記の反応時間は、１０秒間～１時間であってもよく、１分間～１０分間であってもよく、３分間～６分間であってもよい。
【0060】
試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片と反応させる温度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする温度であれば特に制限はなく、０℃以上、４℃以上、１０℃以上、１５℃以上、２０℃以上、２５℃以上、又は３０℃以上であってよく、５０℃以下、４５℃以下又は４０℃以下であってよい。
【0061】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記の反応温度は、４℃～５０℃あってもよく、１０℃～４５℃であってもよく、２５℃～４０℃であってもよい。
【0062】
上記反応におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１２％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０１３％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記反応におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、例えば、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０６％（ｗ／ｖ）以下、０．０５％（ｗ／ｖ）以下、０．０４％（ｗ／ｖ）以下、０．０３％（ｗ／ｖ）以下、０．０２５％（ｗ／ｖ）以下、０．０２％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０１５％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0063】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記反応におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００５％（ｗ／ｖ）～０．０５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0064】
上記反応におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、又は０．６％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記反応におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、１％（ｗ／ｖ）以下、０．９％（ｗ／ｖ）以下、０．８％（ｗ／ｖ）以下、又は０．９％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0065】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記反応におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～１０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．１％（ｗ／ｖ）～２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
なお、上記反応において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
なお、上記反応において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
【0066】
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法の一つの態様は、
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法である。
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法である。
【0067】
本開示における測定方法は、上記工程（２）の後に、以下の工程（３）を含むこともできる。
（３）ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子との結合により生じる、ラテックス粒子の凝集を測定し、測定値を得る工程。
（３）ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子との結合により生じる、ラテックス粒子の凝集を測定し、測定値を得る工程。
【0068】
＜工程（１）＞
工程（１）は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程である。
工程（１）において、水性媒体にＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を添加して混合させてもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に水性媒体を添加して混合させてもよい。
工程（１）における水性媒体としては、特に制限はなく、例えば前述の水性媒体が挙げられる。
工程（１）は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程である。
工程（１）において、水性媒体にＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を添加して混合させてもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に水性媒体を添加して混合させてもよい。
工程（１）における水性媒体としては、特に制限はなく、例えば前述の水性媒体が挙げられる。
【0069】
工程（１）は、アルキレンオキシド誘導体の存在下で行われてもよい。アルキレンオキシド誘導体としては、特に制限はなく、例えば前述のアルキレンオキシド誘導体が挙げられる。
工程（１）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００３％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、０．６％（ｗ／ｖ）以上、０．７％（ｗ／ｖ）以上、０．８％（ｗ／ｖ）以上、又は０．９％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記工程（１）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、又は１％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
工程（１）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００３％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、０．６％（ｗ／ｖ）以上、０．７％（ｗ／ｖ）以上、０．８％（ｗ／ｖ）以上、又は０．９％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記工程（１）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、又は１％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0070】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記工程（１）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～４％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．１％（ｗ／ｖ）～２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
なお、上記工程（１）において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
なお、上記工程（１）において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
【0071】
工程（１）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合した後、一定時間、一定温度で保持してもよい。
上記混合液を保持する時間は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする時間であれば特に制限はなく、例えば、１０秒間以上、２０秒間以上、３０秒間以上、１分間以上、２分間以上、３分間以上、４分間以上、又は５分間以上であってよく、１時間以下、５０分間以下、４０分間以下、３０分間以下、２０分間以下、１０分間以下、９分間以下、７分間以下、又は６分間以下であってよい。
上記混合液を保持する時間は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする時間であれば特に制限はなく、例えば、１０秒間以上、２０秒間以上、３０秒間以上、１分間以上、２分間以上、３分間以上、４分間以上、又は５分間以上であってよく、１時間以下、５０分間以下、４０分間以下、３０分間以下、２０分間以下、１０分間以下、９分間以下、７分間以下、又は６分間以下であってよい。
【0072】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、記混合液を保持する時間は、１０秒間～１時間であってもよく、１分間～１０分間であってもよく、３分間～６分間であってもよい。
【0073】
上記混合液を保持する温度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする温度であれば特に制限はなく、０℃以上、４℃以上、１０℃以上、１５℃以上、２０℃以上、２５度以上、３０℃以上、又は３７℃以上であってよく、５０℃以下、４５℃以下又は４０℃以下であってよい。
【0074】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、記混合液を保持する温度は、４℃～５０℃あってもよく、１０℃～４５℃であってもよく、２５℃～４０℃であってもよい。
【0075】
＜工程（２）＞
工程（２）は、水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程である。工程（２）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が反応し、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体が生じる。
なお、生体試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原は、エピトープを複数有する高分子（多価抗原）であるため、１種類の抗体を使用した場合であっても、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とを含む複合体が生じ得る。
工程（２）は、水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程である。工程（２）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が反応し、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体が生じる。
なお、生体試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原は、エピトープを複数有する高分子（多価抗原）であるため、１種類の抗体を使用した場合であっても、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とを含む複合体が生じ得る。
【0076】
工程（２）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を添加して反応させてもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加して反応させてもよい。
【0077】
工程（２）において、１種類のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片ではなく、２種類以上のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片を使用してもよい。
２種類のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片を用いる場合、工程（２）を以下のように行うことができる。
（２Ａ）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させること。
本開示における測定方法は、工程（２Ａ）の後に、上記工程（３）を含むこともできる。
２種類のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片を用いる場合、工程（２）を以下のように行うことができる。
（２Ａ）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させること。
本開示における測定方法は、工程（２Ａ）の後に、上記工程（３）を含むこともできる。
【0078】
工程（２Ａ）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片とが反応し、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とを含む複合体が生成する。
【0079】
工程（２Ａ）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子におけるラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子におけるラテックス粒子とは、同じであっても異なっていてもよい。
【0080】
工程（２Ａ）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子との反応は、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とを含む複合体が生成する反応であれば特に制限はなく、例えば、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子とを含む複合体を生成させた後に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加して反応させてもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を混合して反応させてもよい。
【0081】
ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を混合して反応させる場合、ＤＵＰＡＮ－２抗原、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加する順番に制限はなく、例えば、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加した後に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を添加してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体若しくはその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を混合した後に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を添加してもよい。
【0082】
工程（２Ａ）は、以下の工程（２Ａ－１）と工程（２Ａ－２）に分けて行ってもよい。
（２Ａ－１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体１を生成させる工程；及び
（２Ａ－２）水性媒体中で、工程（１）で生成した複合体１に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体２を生成させる工程。
本開示における測定方法は、工程（２Ａ－２）の後に、上記工程（３）を含むこともできる。
（２Ａ－１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体１を生成させる工程；及び
（２Ａ－２）水性媒体中で、工程（１）で生成した複合体１に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を反応させ、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と、を含む複合体２を生成させる工程。
本開示における測定方法は、工程（２Ａ－２）の後に、上記工程（３）を含むこともできる。
【0083】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）において、水性媒体中で、ラテックス粒子に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片を結合させてもよい。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片の、ラテックス粒子への結合方法としては、例えば前述の結合方法が挙げられる。
【0084】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）の反応時間は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする時間であれば特に制限はなく、例えば、１０秒間以上、２０秒間以上、３０秒間以上、１分間以上、２分間以上、３分間以上、４分間以上、又は５分間以上であってよく、１時間以下、５０分間以下、４０分間以下、３０分間以下、２０分間以下、１０分間以下、９分間以下、７分間以下、又は６分間以下であってよい。
【0085】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）の反応時間は、１０秒間～１時間であってもよく、１分間～１０分間であってもよく、３分間～６分間であってもよい。
【0086】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）の反応温度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする温度であれば特に制限はなく、０℃以上、４℃以上、１０℃以上、１５℃以上、２０℃以上、２５度以上、３０℃以上又は３７℃以上であってよく、５０℃以下、４５℃以下又は４０℃以下であってよい。
【0087】
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、記混合液を保持する温度は、４℃～５０℃あってもよく、１０℃～４５℃であってもよく、２５℃～４０℃であってもよい。
【0088】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１２％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０１３％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、例えば、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０６％（ｗ／ｖ）以下、０．０５％（ｗ／ｖ）以下、０．０４％（ｗ／ｖ）以下、０．０３％（ｗ／ｖ）以下、０．０２５％（ｗ／ｖ）以下、０．０２％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０１５％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0089】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００５％（ｗ／ｖ）～０．０５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0090】
上記工程（２Ａ）又は工程（２Ａ－２）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒の濃度の合計を意味する。
【0091】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００３％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、又は０．６％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、１％（ｗ／ｖ）以下、０．９％（ｗ／ｖ）以下、又は０．８％（ｗ／ｖ）以下、又は０．７％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0092】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度、０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～１０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．１％（ｗ／ｖ）～２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
なお、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
なお、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
【0093】
上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）は水性媒体中で行うことが好ましい。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。
また、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）には、前述の塩類、糖類、蛋白質等が含有されてもよい。
また、上記工程（２）、工程（２Ａ）、工程（２Ａ－１）又は工程（２Ａ－２）には、前述の塩類、糖類、蛋白質等が含有されてもよい。
【0094】
＜工程（３）＞
工程（３）は、上記工程（２）の複合体、上記工程（２Ａ）の複合体、又は上記工程（２Ａ－２）の複合体２の生成に伴うラテックス粒子の凝集を光学的手段により測定する工程である。凝集を光学的に測定する方法としては、吸光度、散乱光強度又は透過光強度を光学機器で測定する方法等が挙げられる。
工程（３）は、上記工程（２）の複合体、上記工程（２Ａ）の複合体、又は上記工程（２Ａ－２）の複合体２の生成に伴うラテックス粒子の凝集を光学的手段により測定する工程である。凝集を光学的に測定する方法としては、吸光度、散乱光強度又は透過光強度を光学機器で測定する方法等が挙げられる。
【0095】
吸光度の測定波長は、通常は３４０ｎｍ～１０００ｎｍ、好ましくは５００ｎｍ～９００ｎｍで測定すればよい。ラテックス凝集反応を測光する時間は、ラテックス凝集反応が生じている時間を時間当たりの変化速度、あるいは一定時間の変化量によって測光することができる。例えば、吸光度を測定する場合、ラテックス凝集反応が始まってから３０秒後から５分後の時間当たりの吸光度変化速度、あるいは一定時間の吸光度変化量によって測光することができる。反応温度は１０～５０℃であることが好ましく、２０～４０℃であることがより好ましい。反応時間は適宜決定することができ、例えば汎用自動分析機では１０～１５分間の反応時間で測定することができる。
【0096】
上記工程（３）の後に、以下の工程（４）及び工程（５）を行うことにより、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定することもできる。
（４）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、上記工程（１）から（３）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（５）工程（４）で作成された検量線と、工程（３）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
（４）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、上記工程（１）から（３）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（５）工程（４）で作成された検量線と、工程（３）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
【0097】
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原としては、ヒト膵癌患者の腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原（以下、単に「腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原」と記す）又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原をＰＢＳで希釈したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液等が挙げられる。既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原について、複数の濃度を用意してもよい。
【0098】
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、例えば、１Ｕ／ｍＬ以上、２Ｕ／ｍＬ以上、３Ｕ／ｍＬ以上、４Ｕ／ｍＬ以上、５Ｕ／ｍＬ以上、６Ｕ／ｍＬ以上、７Ｕ／ｍＬ以上、８Ｕ／ｍＬ以上、９Ｕ／ｍＬ以上、１０Ｕ／ｍＬ以上、１２Ｕ／ｍＬ以上、１４Ｕ／ｍＬ以上、１６Ｕ／ｍＬ以上、１８Ｕ／ｍＬ以上、２０Ｕ／ｍＬ以上、２２Ｕ／ｍＬ以上、２４Ｕ／ｍＬ以上、２６Ｕ／ｍＬ以上、２８Ｕ／ｍＬ以上、３０Ｕ／ｍＬ以上、３２Ｕ／ｍＬ以上、３４Ｕ／ｍＬ以上、３６Ｕ／ｍＬ以上、３８Ｕ／ｍＬ以上、４０Ｕ／ｍＬ以上、４２Ｕ／ｍＬ以上、４４Ｕ／ｍＬ以上、４６Ｕ／ｍＬ以上、４８Ｕ／ｍＬ以上、５０Ｕ／ｍＬ以上、６０Ｕ／ｍＬ以上、７０Ｕ／ｍＬ以上、８０Ｕ／ｍＬ以上、９０Ｕ／ｍＬ以上、又は１００Ｕ／ｍＬ以上であってよい。また、既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度は、例えば、１５０００Ｕ／ｍＬ以下、１４０００Ｕ／ｍＬ以下、１３０００Ｕ／ｍＬ以下、１２０００Ｕ／ｍＬ以下、１１０００Ｕ／ｍＬ以下、１００００Ｕ／ｍＬ以下、９０００Ｕ／ｍＬ以下、８０００Ｕ／ｍＬ以下、７０００Ｕ／ｍＬ以下、６０００Ｕ／ｍＬ以下、５０００Ｕ／ｍＬ以下、４０００Ｕ／ｍＬ以下、３０００Ｕ／ｍＬ以下、２０００Ｕ／ｍＬ以下、１８００Ｕ／ｍＬ以下、１６００Ｕ／ｍＬ以下、１４００Ｕ／ｍＬ以下、１２００Ｕ／ｍＬ以下、１１００Ｕ／ｍＬ以下、１０００Ｕ／ｍＬ以下、９００Ｕ／ｍＬ以下、８００Ｕ／ｍＬ以下、７００Ｕ／ｍＬ以下、６００Ｕ／ｍＬ以下、５００Ｕ／ｍＬ以下、４００Ｕ／ｍＬ以下、３５０Ｕ／ｍＬ以下、３００Ｕ／ｍＬ以下、又は２００Ｕ／ｍＬ以下であってよい。
なお、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度単位「Ｕ／ｍＬ」について、「特定の膵癌患者の血清を競合ラジオイムノアッセイ法により測定した場合の、当該血清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を１０００Ｕ／ｍＬする」と定義される（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＤＵ－ＰＡＮ－２ ａｎｔｉｇｅｎ） ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１９８４年，Ｖｏｌ．８１，ｐｐ．５２４２－５２４６）。
なお、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度単位「Ｕ／ｍＬ」について、「特定の膵癌患者の血清を競合ラジオイムノアッセイ法により測定した場合の、当該血清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を１０００Ｕ／ｍＬする」と定義される（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＤＵ－ＰＡＮ－２ ａｎｔｉｇｅｎ） ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１９８４年，Ｖｏｌ．８１，ｐｐ．５２４２－５２４６）。
【0099】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、１０Ｕ／ｍＬ～１００００ＵｍＬであってよく、２０Ｕ／ｍＬ～５０００ＵｍＬであってよく、４０Ｕ／ｍＬ～１６００ＵｍＬであってよく、４０Ｕ／ｍＬ～４００ＵｍＬであってよく、４０Ｕ／ｍＬ～３５０ＵｍＬであってよい。
【0100】
「生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応の抑制方法」
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を行うことにより、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制することができる。非特異反応としては、特に制限はないが、例えば前述の非特異反応が挙げられる。
生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応の抑制方法の態様としては、例えば以下の態様が挙げられる。
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を行うことにより、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制することができる。非特異反応としては、特に制限はないが、例えば前述の非特異反応が挙げられる。
生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応の抑制方法の態様としては、例えば以下の態様が挙げられる。
【0101】
（態様１）
水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
水性媒体中で、アルキレンオキシド誘導体の存在下で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
【0102】
（態様２）
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体と混合する工程；及び
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
【0103】
（態様３）
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体を混合する工程；並びに
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を、水性媒体を混合する工程；並びに
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子と反応させる工程、
を含み、工程（１）及び／又は（２）がアルキレンオキシド誘導体の存在下で行われる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原のラテックス凝集免疫測定方法における、生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応を抑制する方法。
【0104】
上記抑制方法において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体は、例えば前述のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体を用いることができる。
【0105】
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬」
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法に用いられる試薬である。当該測定試薬の１つの態様（態様１）としては、ラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片、及びアルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
態様１において、ラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片とは、２つの親和性物質を介して結合することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片の、ラテックス粒子への結合方法としては、例えば前述の結合方法等が挙げられる。
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法に用いられる試薬である。当該測定試薬の１つの態様（態様１）としては、ラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片、及びアルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
態様１において、ラテックス粒子と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片とは、２つの親和性物質を介して結合することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片の、ラテックス粒子への結合方法としては、例えば前述の結合方法等が挙げられる。
【0106】
当該測定試薬の別の態様（態様２）としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
当該測定試薬の別の態様（態様３）としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
当該測定試薬の別の態様（態様３）としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、アルキレンオキシド誘導体を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
【0107】
態様１～３の試薬において、ラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体は、例えば前述のラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体を用いることができる。
【0108】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、ラテックス粒子に結合させてもよいし、間接的にラテックス粒子に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、前述の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片をラテックス粒子に結合する方法、リンカーを介した共有結合によりラテックス粒子に結合する方法等が挙げられる。
【0109】
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、又は、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合したラテックス粒子とを結合させることにより、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片を結合したラテックス粒子、又は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を結合したラテックス粒子を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
【0110】
態様１の試薬におけるラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１５％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上０．０４％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０５％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、態様１の試薬におけるラテックス粒子の濃度は、例えば、１％（ｗ／ｖ）以下、０．８％（ｗ／ｖ）以下、０．５％（ｗ／ｖ）以下、０．３％（ｗ／ｖ）以下、０．２％（ｗ／ｖ）以下、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０９％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０７％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０６％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0111】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、態様１の試薬におけるラテックス粒子の濃度は、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０２％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0112】
態様２又は態様３の試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１５％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上０．０４％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０５％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、態様２又は態様３の試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、例えば、１％（ｗ／ｖ）以下、０．８％（ｗ／ｖ）以下、０．５％（ｗ／ｖ）以下、０．３％（ｗ／ｖ）以下、０．２％（ｗ／ｖ）以下、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０９％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０７％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０６％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0113】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、態様２又は態様３の試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０２％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）であってもよい。
態様３の試薬において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒の濃度の合計を意味する。
態様３の試薬において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒の濃度の合計を意味する。
【0114】
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００３％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、又は０．６％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、１％（ｗ／ｖ）以下、０．９％（ｗ／ｖ）以下、又は０．８％（ｗ／ｖ）以下、又は０．７％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0115】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度、０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～１０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．１％（ｗ／ｖ）～２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
なお、上記測定試薬において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
なお、上記測定試薬において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
【0116】
本開示の測定試薬は、凍結乾燥状態でも液状でもよい。凍結乾燥状態の測定試薬を使用する場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。溶解に用いる水性媒体としては、特に制限はなく、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
液状の測定試薬においては、ラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で混合された状態となっている。水性媒体としては、特に制限はなく、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
液状の測定試薬においては、ラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で混合された状態となっている。水性媒体としては、特に制限はなく、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
【0117】
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット」
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、保存、運搬、流通等の観点からキットの形態を取ることもできる。
以下、本開示の、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットの好適な実施形態を例示する。なお、下記の実施形態において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体は、例えば前述のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体を用いることができる。
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、保存、運搬、流通等の観点からキットの形態を取ることもできる。
以下、本開示の、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットの好適な実施形態を例示する。なお、下記の実施形態において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体は、例えば前述のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及びアルキレンオキシド誘導体を用いることができる。
【0118】
［測定キット（１）］
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ａ試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ａ試薬
を含む、測定キット。
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ａ試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ａ試薬
を含む、測定キット。
【0119】
［測定キット（２）］
水性媒体を含む第１Ｂ試薬；並びに
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｂ試薬
を含む、測定キット。
水性媒体を含む第１Ｂ試薬；並びに
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｂ試薬
を含む、測定キット。
【0120】
［測定キット（３）］
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ｃ試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｃ試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｃ試薬
を含む、測定キット。
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ｃ試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｃ試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｃ試薬
を含む、測定キット。
【0121】
［測定キット（４）］
水性媒体を含む第１Ｄ試薬；
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｄ試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｄ試薬
を含む、測定キット。
水性媒体を含む第１Ｄ試薬；
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｄ試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｄ試薬
を含む、測定キット。
【0122】
［測定キット（５）］
水性媒体を含む第１Ｅ試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｅ試薬；並びに
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｅ試薬
を含む、測定キット。
水性媒体を含む第１Ｅ試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｅ試薬；並びに
アルキレンオキシド誘導体、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第３Ｅ試薬
を含む、測定キット。
【0123】
［測定キット（６）］
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ｆ試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｆ試薬
を含む、測定キット。
アルキレンオキシド誘導体を含む第１Ｆ試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｆ試薬
を含む、測定キット。
【0124】
［測定キット（７）］
水性媒体を含む第１Ｇ試薬；
アルキレンオキシド誘導体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｇ試薬
を含む、測定キット。
水性媒体を含む第１Ｇ試薬；
アルキレンオキシド誘導体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子、及び、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子を含む第２Ｇ試薬
を含む、測定キット。
【0125】
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、ラテックス粒子に結合させてもよいし、間接的にラテックス粒子に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、前述の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片をラテックス粒子に結合する方法、リンカーを介した共有結合によりラテックス粒子に結合する方法等が挙げられる。
【0126】
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、又は、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合したラテックス粒子とを、結合させることにより、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片を結合したラテックス粒子、又は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片を結合したラテックス粒子を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる
【0127】
第２Ａ試薬又は第２Ｂ試薬おけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１５％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上０．０４％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０５％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、第２Ａ試薬又は第２Ｂ試薬おけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、例えば、１％（ｗ／ｖ）以下、０．８％（ｗ／ｖ）以下、０．５％（ｗ／ｖ）以下、０．３％（ｗ／ｖ）以下、０．２％（ｗ／ｖ）以下、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０９％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０７％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０６％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0128】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、第２Ａ試薬又は第２Ｂ試薬おけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０２％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0129】
第２Ｃ試薬、第３Ｃ試薬、第２Ｄ試薬、第３Ｄ試薬、第２Ｅ試薬、第３Ｅ試薬、第２Ｆ試薬、第３Ｆ試薬、第２Ｇ試薬又は第３Ｇ試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、例えば、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０１５％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、又は０．０２５％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、例えば、１％（ｗ／ｖ）以下、０．８％（ｗ／ｖ）以下、０．５％（ｗ／ｖ）以下、０．３％（ｗ／ｖ）以下、０．２％（ｗ／ｖ）以下、０．１％（ｗ／ｖ）以下、０．０９％（ｗ／ｖ）以下、０．０８％（ｗ／ｖ）以下、０．０７％（ｗ／ｖ）以下、０．０６％（ｗ／ｖ）以下、０．０５％（ｗ／ｖ）以下、０．０４％（ｗ／ｖ）以下、又は０．０３％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0130】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、０．０００５％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００２％（ｗ／ｖ）～０．３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００５％（ｗ／ｖ）～０．０５％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０４％（ｗ／ｖ）であってもよい。
第２Ｆ試薬又は第２Ｇ試薬において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒の濃度の合計を意味する。
第２Ｆ試薬又は第２Ｇ試薬において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒子の濃度と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片が結合したラテックス粒の濃度の合計を意味する。
【0131】
第１Ａ試薬、第２Ｂ試薬、第１Ｃ試薬、第２Ｄ試薬、第３Ｅ試薬、第１Ｆ試薬又は第２Ｇ試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０００２％（ｗ／ｖ）以上、０．０００３％（ｗ／ｖ）以上、０．０００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００１％（ｗ／ｖ）以上、０．００２％（ｗ／ｖ）以上、０．００３％（ｗ／ｖ）以上、０．００４％（ｗ／ｖ）以上、０．００５％（ｗ／ｖ）以上、０．００６％（ｗ／ｖ）以上、０．００７％（ｗ／ｖ）以上、０．００８％（ｗ／ｖ）以上、０．００９％（ｗ／ｖ）以上、０．０１％（ｗ／ｖ）以上、０．０２％（ｗ／ｖ）以上、０．０３％（ｗ／ｖ）以上、０．０４％（ｗ／ｖ）以上、０．０５％（ｗ／ｖ）以上、０．０６％（ｗ／ｖ）以上、０．０７％（ｗ／ｖ）以上、０．０８％（ｗ／ｖ）以上、０．０９％（ｗ／ｖ）以上、０．１％（ｗ／ｖ）以上、０．２％（ｗ／ｖ）以上、０．３％（ｗ／ｖ）以上、０．４％（ｗ／ｖ）以上、０．５％（ｗ／ｖ）以上、又は０．６％（ｗ／ｖ）以上であってよい。また、上記試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度は、例えば、２０％（ｗ／ｖ）以下、１０％（ｗ／ｖ）以下、９％（ｗ／ｖ）以下、８％（ｗ／ｖ）以下、７％（ｗ／ｖ）以下、６％（ｗ／ｖ）以下、５％（ｗ／ｖ）以下、４％（ｗ／ｖ）以下、３％（ｗ／ｖ）以下、２％（ｗ／ｖ）以下、１％（ｗ／ｖ）以下、０．９％（ｗ／ｖ）以下、又は０．８％（ｗ／ｖ）以下、又は０．７％（ｗ／ｖ）以下であってよい。
【0132】
上記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、上記試薬におけるアルキレンオキシド誘導体の濃度、０．０００２％（ｗ／ｖ）～２０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．００３％（ｗ／ｖ）～１０％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．０１％（ｗ／ｖ）～３％（ｗ／ｖ）であってもよく、０．１％（ｗ／ｖ）～２％（ｗ／ｖ）であってもよい。
上記試薬において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
上記試薬において、１種類のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよいし、２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在していてもよい。２種類以上のアルキレンオキシド誘導体が存在する場合、上記濃度は、当該２種類以上のアルキレンオキシド誘導体の濃度の合計を意味する。
【0133】
本開示の測定キットの構成試薬は、凍結乾燥状態でも液状でもよい。
測定キットの構成試薬が凍結乾燥状態である場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
測定キットの構成試薬が凍結乾燥状態である場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
【0134】
測定キットの構成試薬が液状である場合には、アルキレンオキシド誘導体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体又はその抗体断片、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体又はその抗体断片からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で溶解又は混合された状態となっている。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
【0135】
上記測定キット（１）～（７）には、試料を希釈するための試薬として、水性媒体を含む試料希釈試薬を含んでいてもよい。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。また、上記測定キット（１）～（７）には、前述の洗浄液、標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を含む標準物質試薬、本開示の測定方法が記載された取扱説明書等が含まれていてもよい。
【0136】
標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原としては、腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原をＰＢＳで希釈したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液等が挙げられる。本開示のキットにおいて、複数の既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を含んでいてもよい。
標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原における、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、例えば前述の濃度等が挙げられる。
標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原における、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、例えば前述の濃度等が挙げられる。
【実施例0137】
以下、本開示を実施例により、更に詳細に説明するが、これらは本開示の範囲を何ら制限するものではない。なお、以下の実施例においては、次のメーカーの試薬類を使用した。
【0138】
カルボキシル基修飾ポリスチレンラテックス（粒径３００ｎｍ、藤倉化成株式会社製）、Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）、ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）、ＰＢＳタブレット（規定量の蒸留水で溶解すると、塩化ナトリウム８ｇ／Ｌ；塩化カリウム０．２ｇ／Ｌ；無水リン酸一水素ナトリウム１．１５ｇ／Ｌ；無水リン酸二水素カリウム０．２ｇ／Ｌ；ｐＨ７．３５～７．６５となる。タカラバイオ社製）、ノニオンＫ－２２０（ポリオキシエチレンラウリルエーテル；日油株式会社製）、ポリエチレングリコール６，０００（富士フイルム和光純薬株式会社製）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート；シグマアルドリッチジャパン合同会社製）、エマノーン（登録商標）１１１２（ポリオキシエチレンモノラウレート；花王株式会社製）、エマルゲン（登録商標）９３０（ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル；花王株式会社製）、ノニオンＨＳ－２１０（ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル；日油株式会社製）、アミート（登録商標）１０５（ポリオキシエチレンドデシルアミン；花王株式会社製）、ニューコール（登録商標）７１４、ニューコール（登録商標）７４０、ニューコール（登録商標）６１０、ニューコール（登録商標）２６１４（以上、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル；日本乳化剤株式会社製）、ジプロピレングリコール（関東化学社製）、ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０（ジオール型のポリプロピレングリコール；日油株式会社製）、ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００（トリオール型のポリプロピレングリコール；日油株式会社製）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｂｏｖｏｇｅｎ社製）、「デタミナー（登録商標）ＤＵＰＡＮ－２ Ｎ」（ミナリスメディカル株式会社製）を使用した。
【0139】
［参考例１］ ＤＵＰＡＮ－２抗体が結合したラテックス粒子の調製
カルボキシル基修飾ポリスチレンラテックス（平均粒径３００ｎｍ）、ＥＤＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ、及びＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、定法に従い、ラテックス粒子にＤＵＰＡＮ－２抗体を結合させた。
カルボキシル基修飾ポリスチレンラテックス（平均粒径３００ｎｍ）、ＥＤＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ、及びＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、定法に従い、ラテックス粒子にＤＵＰＡＮ－２抗体を結合させた。
【0140】
［参考例２］ ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液の調製
「デタミナー（登録商標）ＤＵＰＡＮ－２ Ｎ」（Ｌｏｔ．８１０Ａ）に付属している標準試薬５（１４９６Ｕ／ｍＬ）を、当該キットに付属している検体希釈液で希釈し、２５Ｕ／ｍＬ、５０Ｕ／ｍＬ、１００Ｕ／ｍＬ及び２００Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。また、上記希釈液を０Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原として使用した。
「デタミナー（登録商標）ＤＵＰＡＮ－２ Ｎ」（Ｌｏｔ．８１０Ａ）に付属している標準試薬５（１４９６Ｕ／ｍＬ）を、当該キットに付属している検体希釈液で希釈し、２５Ｕ／ｍＬ、５０Ｕ／ｍＬ、１００Ｕ／ｍＬ及び２００Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。また、上記希釈液を０Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原として使用した。
【0141】
［実施例１］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１を作製した。
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１を作製した。
【0142】
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0143】
［比較例１］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キットＡを作製した。
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キットＡを作製した。
【0144】
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0145】
［実施例２］
自動分析装置３５００（株式会社日立ハイテク製）を使用し、測定キット１（実施例１）及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、参考例２で調製したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した。反応温度３７℃にて、ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液（１３μＬ）と第１試薬（１３７μＬ）とをセルに加えて均一攪拌した後、５分間保持した。その後、３７℃で保持しながら、第２試薬（５０μＬ）を当該反応液に加えて均一攪拌した後、３０秒経過後の反応液の５７０ｎｍでの吸光度と３００秒経過後の反応液の５７０ｎｍでの吸光度との差（ΔＡｂｓ）を測定した。ΔＡｂｓを１００００倍した数値を測定値とし、２５Ｕ／ｍＬ、５０Ｕ／ｍＬ、１００Ｕ／ｍＬ及び２００Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原溶液のそれぞれの測定値から、０Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値を差し引いた数値を表１に示した。
自動分析装置３５００（株式会社日立ハイテク製）を使用し、測定キット１（実施例１）及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、参考例２で調製したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した。反応温度３７℃にて、ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液（１３μＬ）と第１試薬（１３７μＬ）とをセルに加えて均一攪拌した後、５分間保持した。その後、３７℃で保持しながら、第２試薬（５０μＬ）を当該反応液に加えて均一攪拌した後、３０秒経過後の反応液の５７０ｎｍでの吸光度と３００秒経過後の反応液の５７０ｎｍでの吸光度との差（ΔＡｂｓ）を測定した。ΔＡｂｓを１００００倍した数値を測定値とし、２５Ｕ／ｍＬ、５０Ｕ／ｍＬ、１００Ｕ／ｍＬ及び２００Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原溶液のそれぞれの測定値から、０Ｕ／ｍＬのＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値を差し引いた数値を表１に示した。
【0146】
【表1】
【0147】
ＤＵＰＡＮ－２のカットオフ値は１５０Ｕ／ｍＬと言われており、当該カットオフ値付近の数値、及び、当該カットオフ値より小さい数値においては、測定感度が高いことが望まれる。
表１の結果より、２５～２００Ｕ／ｍＬの範囲で、アルキレンオキシド誘導体を含む測定キット１（実施例１）は、測定キットＡ（比較例１）と比べて測定感度が高いことが判明した。
表１の結果より、２５～２００Ｕ／ｍＬの範囲で、アルキレンオキシド誘導体を含む測定キット１（実施例１）は、測定キットＡ（比較例１）と比べて測定感度が高いことが判明した。
【0148】
［比較例２］ 生体試料中の夾雑物に起因する非特異反応（添加回収試験）
添加回収試験とは、試料（血漿等）に既知濃度の抗原（ＤＵＰＡＮ－２抗原）を添加した試料を測定し、実際の添加量と一致するか否かを評価することで、測定方法の正確さを判断する方法である。
具体的には、以下の手順で評価する。
（１）生体試料（血漿等）、及び生体試料を含まない試料（上記の検体希釈液等）に、終濃度が同じになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加して添加検体を調製する。
（２）当該添加検体を実施例２の方法で測定し、吸光度（ΔＡｂｓ）を得る。
（３）生体試料の添加検体のΔＡｂｓを（Ｘ）、生体試料を含まない試料の添加検体のΔＡｂｓを（Ｙ）としたときの、（Ｘ）／（Ｙ）×１００（％）を算出し、この値を回収率（％）とする。
回収率は、生体試料を含まない試料、すなわち生体試料に含まれる夾雑物の影響を生じない試料の測定値を基準とし、生体試料、すなわち生体試料に含まれる夾雑物の影響を生じ得る試料の測定値がどの程度かを表す指標となる。回収率が１００％に近いほど、生体試料に含まれる夾雑物の影響を受けずに正確に測定できていると判断し、１００％より大きな数値になるほど、又は、１００％より小さな数値になるほど、生体試料に含まれる夾雑物の影響を受け、正確に測定できていないと判断する。
添加回収試験とは、試料（血漿等）に既知濃度の抗原（ＤＵＰＡＮ－２抗原）を添加した試料を測定し、実際の添加量と一致するか否かを評価することで、測定方法の正確さを判断する方法である。
具体的には、以下の手順で評価する。
（１）生体試料（血漿等）、及び生体試料を含まない試料（上記の検体希釈液等）に、終濃度が同じになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加して添加検体を調製する。
（２）当該添加検体を実施例２の方法で測定し、吸光度（ΔＡｂｓ）を得る。
（３）生体試料の添加検体のΔＡｂｓを（Ｘ）、生体試料を含まない試料の添加検体のΔＡｂｓを（Ｙ）としたときの、（Ｘ）／（Ｙ）×１００（％）を算出し、この値を回収率（％）とする。
回収率は、生体試料を含まない試料、すなわち生体試料に含まれる夾雑物の影響を生じない試料の測定値を基準とし、生体試料、すなわち生体試料に含まれる夾雑物の影響を生じ得る試料の測定値がどの程度かを表す指標となる。回収率が１００％に近いほど、生体試料に含まれる夾雑物の影響を受けずに正確に測定できていると判断し、１００％より大きな数値になるほど、又は、１００％より小さな数値になるほど、生体試料に含まれる夾雑物の影響を受け、正確に測定できていないと判断する。
【0149】
生体試料として、健常人血漿「血漿１」（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社製）、及びチャコール処理血漿「血漿Ａ」（脱フィブリン処理、脱脂処理及びチャコール処理された健常人血漿）（Ｇｏｌｄｅｎ Ｗｅｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社製）を用意し、生体試料を含まない試料として上記検体希釈液を用意した。
それぞれの試料に、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、３種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、上記方法により回収率を算出した。その結果を表２に示した。
それぞれの試料に、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、３種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、上記方法により回収率を算出した。その結果を表２に示した。
【0150】
【表2】
【0151】
表２の結果より、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合、血漿１では回収率が２８％と低く、生体試料に含まれる夾雑物の影響を受けるが、脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物が除去された血漿Ａでは回収率が１００％に近い値であった。この結果より、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの影響を受けることが判明した。
【0152】
［実施例３］
比較例２に記載の方法と同様に、上記検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社製）それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１（実施例１）、及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表３に示した。
比較例２に記載の方法と同様に、上記検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社製）それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１（実施例１）、及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表３に示した。
【0153】
【表3】
【0154】
表３の結果より、血漿１及び血漿２について、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合の回収率が２５～２８％であったのに対して、測定キット１（実施例１)で測定した場合の回収率は５２～６２％であり、回収率が向上した。この結果より、アルキレンオキシド誘導体を含む測定キットで測定した場合、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応が軽減することが判明した。
【0155】
［実施例４］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット２を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ポリエチレングリコール６，０００ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット２を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ポリエチレングリコール６，０００ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0156】
［実施例５］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット３を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット３を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0157】
［実施例６］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット４を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
エマノーン（登録商標）１１１２ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット４を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
エマノーン（登録商標）１１１２ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0158】
［実施例７］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット５を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
エマルゲン（登録商標）９３０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット５を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
エマルゲン（登録商標）９３０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0159】
［実施例８］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット６を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＨＳ－２１０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット６を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＨＳ－２１０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0160】
［実施例９］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット７を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
アミート（登録商標）１０５ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット７を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
アミート（登録商標）１０５ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0161】
［実施例１０］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット８を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）７１４ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット８を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）７１４ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0162】
［実施例１１］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット９を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）７４０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット９を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）７４０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0163】
［実施例１２］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１０を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）６１０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１０を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）６１０ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0164】
［実施例１３］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１１を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）２６１４ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１１を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ニューコール（登録商標）２６１４ １％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
【0165】
［実施例１４］
表４及び表５に示されたアルキレンオキシド誘導体を含む測定キットを用い、実施例２の方法に従いＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した結果を表４及び表５に示す。なお、対照として、測定キットＡ（比較例１）で測定した結果も示す。
表４及び表５に示されたアルキレンオキシド誘導体を含む測定キットを用い、実施例２の方法に従いＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した結果を表４及び表５に示す。なお、対照として、測定キットＡ（比較例１）で測定した結果も示す。
【0166】
【表4】
【0167】
【表5】
【0168】
表４及び５の結果より、５０～２００Ｕ／ｍＬの範囲で、アルキレンオキシド誘導体を含む測定キットは、測定キットＡ（比較例１）と比べて測定感度が高いことが判明した。
【0169】
［実施例１５］
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
表６及び表７に示されたアルキレンオキシド誘導体を含む測定キット、及び、アルキレンオキシド誘導体を含まない測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表６及び表７に示した。
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
表６及び表７に示されたアルキレンオキシド誘導体を含む測定キット、及び、アルキレンオキシド誘導体を含まない測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表６及び表７に示した。
【0170】
【表6】
【0171】
【表7】
【0172】
表６及び表７の結果より、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合の回収率に比べて、測定キット２～１１で測定した場合の回収率は向上した。この結果より、アルキレンオキシド誘導体を含む測定キットで測定した場合、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応が軽減することが判明した。
【0173】
［実施例１６］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１２を作製した。
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１２を作製した。
【0174】
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．０１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．０１％（ｗ／ｖ）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．０１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．０１％（ｗ／ｖ）
【0175】
［実施例１７］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１３を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．１％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１３を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ジプロピレングリコール ０．１％（ｗ／ｖ）
【0176】
［実施例１８］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１４を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．０１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．０１％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１４を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．０１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．０１％（ｗ／ｖ）
【0177】
［実施例１９］
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１２～１４及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表８に示した。
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１２～１４及び測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表８に示した。
【0178】
【表8】
【0179】
表８の結果より、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合の回収率に比べて、測定キット１２～１４で測定した場合の回収率は向上した。この結果より、ポリオキシプロピレン誘導体を含む測定キットで測定した場合、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応が軽減することが判明した。
【0180】
［実施例２０］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１５を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．１％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１５を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）Ｄ－２５０ ０．１％（ｗ／ｖ）
【0181】
［実施例２１］
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１６を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００ ０．１％（ｗ／ｖ）
以下の組成の第１試薬及び第２試薬を含む測定キット１６を作製した。
（第１試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ノニオンＫ－２２０ １％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００ ０．１％（ｗ／ｖ）
（第２試薬）
ＰＢＳタブレット 規定量の蒸留水で溶解
ＢＳＡ １％（ｗ／ｖ）
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合ラテックス粒子 ０．０５４％（ｗ／ｖ）
ユニオール（登録商標）ＴＧ－３０００ ０．１％（ｗ／ｖ）
【0182】
［実施例２２］
測定キット１５及び１６を用い、実施例２の方法に従いＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した結果を表９に示す。なお、対照として、測定キットＡ（比較例１）で測定した結果も示す。
測定キット１５及び１６を用い、実施例２の方法に従いＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定した結果を表９に示す。なお、対照として、測定キットＡ（比較例１）で測定した結果も示す。
【0183】
【表9】
【0184】
表９の結果より、５０～２００Ｕ／ｍＬの範囲で、ポリオキシエチレン誘導体及びポリオキシプロピレン誘導体を含む測定キットは、測定キットＡ（比較例１）と比べて測定感度が高いことが判明した。
【0185】
［実施例２３］
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１５及び１６並びに測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表１０に示した。
比較例２に記載の方法と同様に、参考例２の検体希釈液、チャコール処理血漿「血漿Ａ」、健常人血漿「血漿１」、健常人血漿「血漿２」それぞれに、終濃度が７５０Ｕ／ｍＬになるようにＤＵＰＡＮ－２抗原を添加し、添加検体を調製した。
測定キット１５及び１６並びに測定キットＡ（比較例１）を用いて、実施例２の方法に従い、４種類の添加検体の吸光度（ΔＡｂｓ）を測定し、比較例２に記載の方法に従い回収率を算出した。その結果を表１０に示した。
【0186】
【表10】
【0187】
表１０の結果より、測定キットＡ（比較例１）を用いて測定した場合の回収率に比べて、測定キット１５及び１６で測定した場合の回収率は向上した。この結果より、ポリオキシエチレン誘導体及びポリオキシプロピレン誘導体を含む測定キットで測定した場合、生体試料に含まれる脂質、フィブリン及び脂溶性の低分子化合物からなる群より選択される少なくとも１つの夾雑物に起因する非特異反応が軽減することが判明した。
【産業上の利用可能性】
【0188】
本開示により、膵癌、胆道系癌などの癌診断に有効であり、高感度で正確な測定ができる、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットが提供される。