▶ イミューンオンコ バイオファーマシューティカルズ （シャンハイ） カンパニー リミテッドの特許一覧
特開2023-58410ＣＤ４７およびＣＤ２４を標的とする組換え融合タンパク質、調製物、ならびにそれの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023058410
(43)【公開日】2023-04-25
(54)【発明の名称】ＣＤ４７およびＣＤ２４を標的とする組換え融合タンパク質、調製物、ならびにそれの使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20230418BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20230418BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230418BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230418BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230418BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230418BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230418BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20230418BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230418BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230418BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230418BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20230418BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20230418BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20230418BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230418BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C07K19/00 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K47/68
A61K39/395 N
A61P35/00
A61P35/02
A61K38/17
C07K16/28
C12N15/12
C12N15/13
【審査請求】有
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2021195587
(22)【出願日】2021-12-01
(31)【優先権主張番号】202111195248.4
(32)【優先日】2021-10-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(71)【出願人】
【識別番号】517342693
【氏名又は名称】イミューンオンコ バイオファーマシューティカルズ （シャンハイ） インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000877
【氏名又は名称】弁理士法人ＲＹＵＫＡ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ウェンジ ティアン
(72)【発明者】
【氏名】ソン リ
(72)【発明者】
【氏名】ディアンゼ チェン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA41
4C084DA40
4C084NA05
4C084ZB26
4C084ZB27
4C085AA14
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＣＤ４７、ＣＤ２４、および／またはＦｃＲを標的とする組換え融合タンパク質、ならびにその調製物およびそれの使用を提供する。
【解決手段】本願は、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片を含み、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の少なくとも１つのパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端でシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結された、組換え融合タンパク質であって、ＣＤ４７、ＣＤ２４、およびＦｃＲに同時に結合し得る、組換え融合タンパク質を提供する。本願はまた、組換え融合タンパク質をエンコードする核酸分子、核酸分子を含む発現ベクタ、組換え融合タンパク質を生成するための方法、ならびに組換え融合タンパク質を使用してＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患を処置するための方法を提供する。
【選択図】図１
【解決手段】本願は、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片を含み、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の少なくとも１つのパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端でシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結された、組換え融合タンパク質であって、ＣＤ４７、ＣＤ２４、およびＦｃＲに同時に結合し得る、組換え融合タンパク質を提供する。本願はまた、組換え融合タンパク質をエンコードする核酸分子、核酸分子を含む発現ベクタ、組換え融合タンパク質を生成するための方法、ならびに組換え融合タンパク質を使用してＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患を処置するための方法を提供する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片と、ＣＤ４７結合ペプチドとを備え、
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、重鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖可変領域を有し、前記重鎖可変領域は、配列識別番号７、８、および９に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変ＣＤＲ１（ＨＶ－ＣＤＲ１）、ＨＶ－ＣＤＲ２、およびＨＶ－ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列識別番号１０、１１、および１２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変ＣＤＲ１（ＬＶ－ＣＤＲ１）、ＬＶ－ＣＤＲ２、およびＬＶ－ＣＤＲ３を含み、前記重鎖定常領域は、ＦｃＲ結合親和性を有し、前記重鎖可変領域のＣ末端に連結され、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、配列識別番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）細胞外ドメインを有し、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片に連結された、
組換え融合タンパク質。
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、重鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖可変領域を有し、前記重鎖可変領域は、配列識別番号７、８、および９に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変ＣＤＲ１（ＨＶ－ＣＤＲ１）、ＨＶ－ＣＤＲ２、およびＨＶ－ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列識別番号１０、１１、および１２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変ＣＤＲ１（ＬＶ－ＣＤＲ１）、ＬＶ－ＣＤＲ２、およびＬＶ－ＣＤＲ３を含み、前記重鎖定常領域は、ＦｃＲ結合親和性を有し、前記重鎖可変領域のＣ末端に連結され、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、配列識別番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）細胞外ドメインを有し、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片に連結された、
組換え融合タンパク質。
【請求項2】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の少なくとも１つのパラトープは、前記パラトープを構成する前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端にて前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項１に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項3】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、前記パラトープを構成する前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端にて前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項２に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項4】
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、ｉ）それぞれ配列識別番号２および３、ｉｉ）それぞれ配列識別番号２および４、またはｉｉｉ）それぞれ配列識別番号５および６に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項5】
前記重鎖定常領域は、配列識別番号１３の前記アミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項6】
前記軽鎖可変領域の前記Ｃ末端に連結された、配列識別番号１４の前記アミノ酸配列を有する軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項7】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、リンカを介して前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項１～６のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項8】
前記リンカは、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３－（配列識別番号１５）、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）２－（配列識別番号１６）、または－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）４－（配列識別番号１７）である、請求項７に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項9】
ｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２０の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２２の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉｉ）配列識別番号２４の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２６の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、または
ｉｖ）配列識別番号２８の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号３０の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片
を備える、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
ｉｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２２の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉｉ）配列識別番号２４の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２６の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、または
ｉｖ）配列識別番号２８の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号３０の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片
を備える、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質をエンコードする核酸分子。
【請求項11】
請求項１０に記載の核酸分子を含む発現ベクタ。
【請求項12】
請求項１１に記載の発現ベクタを含む宿主細胞。
【請求項13】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項14】
それを必要とする対象の、ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患の処置における使用のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記疾患は、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、胆管癌、胃腺癌、および神経膠芽腫からなる群より選択される、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願および参照による引用］
本願は、２０２１年１０月１３日に出願された中国特許出願第２０２１１１１９５２４８．４号の優先権を主張する。
本願は、２０２１年１０月１３日に出願された中国特許出願第２０２１１１１９５２４８．４号の優先権を主張する。
【0002】
前述の出願、およびそれにおいてまたはその出願手続き中に引用されるすべての文献（「出願で引用される文献」）、ならびに本明細書において引用される、または参照されるすべての文献（限定することなく、本明細書において引用されるすべての論文文献、特許、公開特許出願を含む）（「本明細書において引用される文献」）、ならびに本明細書において引用される文献において引用されるまたは参照されるすべての文献は、本明細書において、または本明細書において参照により引用される任意の文献において言及される、任意の製造業者の取扱説明書、説明、製品仕様書、および任意の製品のための製品書と共に、ここで、参照により本明細書に引用され、本発明の実施において採用されることがある。より具体的には、すべての参照される文献は、各個別の文献が具体的にかつ個別に参照により引用されることを示された場合と同じ程度に、参照により引用される。本開示において言及される任意のジェンバンク配列は、本開示の最も早い有効出願日のものであるジェンバンク配列と共に、参照により引用される。
【0003】
本願は、ＣＤ４７、ＣＤ２４、および／またはＦｃＲを標的とする組換え融合タンパク質、ならびにその調製物およびそれの使用、特に腫瘍治療におけるそれの使用に関する。
【背景技術】
【0004】
がん細胞は、１）マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による免疫監視を回避するために、Ｓｉｇｌｅｃ－１０受容体を免疫細胞上に結合させる膜ＣＤ２４タンパク質を高度に発現して免疫活性化を阻害すること、２）マクロファージ表面上のシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に結合するＣＤ４７を高いレベルで発現し、マクロファージによるがん細胞の貪食作用を阻害する阻害シグナルを誘導することを含む、宿主の免疫監視を回避するためのいくつかの機構を発達させてきた。がん細胞は極めて「スマート」であり、その発達した回避機構に依存して迅速に再生することがわかる。したがって、がん細胞を殺傷するための有効な抗がん剤の開発は、これらの機構を標的とすることに焦点を当てることがある。
【0005】
ＳＩＲＰおよびＣＤ４７
シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）は、３つのファミリメンバ、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）、およびＳＩＲＰγ（ＣＤ１７２ｇ）を有する膜貫通型の糖タンパク質である。３つのタンパク質は、同様の細胞外領域を含むが、異なる細胞内ドメインを含む。細胞外領域は、３つの免疫グロブリン様ドメイン、１つのＩｇＶの組みおよび２つのＩｇＣの組みのドメインを含む。ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）の細胞内ドメインは、シグナル伝達および対応する細胞機能を阻害することができる２つの阻害シグナル伝達領域を含む。ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）およびＳＩＲＰγ（ＣＤ１７２ｇ）は、いかなるシグナル伝達ドメインも有しない大変短い細胞内領域を有する。しかしながら、ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）は、アダプタタンパク質、例えばＤＡＰ１２を介して、シグナル伝達のために機能することがある。ＳＩＲＰは、マクロファージ（Ｍφ）、樹状細胞（ＤＣ）、およびニューロン上に主に発現される。
シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）は、３つのファミリメンバ、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）、およびＳＩＲＰγ（ＣＤ１７２ｇ）を有する膜貫通型の糖タンパク質である。３つのタンパク質は、同様の細胞外領域を含むが、異なる細胞内ドメインを含む。細胞外領域は、３つの免疫グロブリン様ドメイン、１つのＩｇＶの組みおよび２つのＩｇＣの組みのドメインを含む。ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）の細胞内ドメインは、シグナル伝達および対応する細胞機能を阻害することができる２つの阻害シグナル伝達領域を含む。ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）およびＳＩＲＰγ（ＣＤ１７２ｇ）は、いかなるシグナル伝達ドメインも有しない大変短い細胞内領域を有する。しかしながら、ＳＩＲＰβ（ＣＤ１７２ｂ）は、アダプタタンパク質、例えばＤＡＰ１２を介して、シグナル伝達のために機能することがある。ＳＩＲＰは、マクロファージ（Ｍφ）、樹状細胞（ＤＣ）、およびニューロン上に主に発現される。
【0006】
ＣＤ４７は、免疫グロブリンスーパーファミリに属する膜貫通糖タンパク質であり、赤血球を含むすべての細胞型の表面上に発現される。ＣＤ４７のためのリガンドは、インテグリン、トロンボスポンジン－１、およびＳＩＲＰを含む。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰαと相互作用して「自分を食べるな」というシグナルを発することによって、マクロファージによる貪食作用を阻害することができ、したがって、血液細胞などの細胞を、マクロファージによって攻撃されることから防護する。
【0007】
研究により、多くの腫瘍またはがん細胞がＣＤ４７を過剰発現し、このことによってマクロファージによるそれらへの貪食作用を阻止することが示されている。そのようながん細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、および膵臓癌の細胞を含む。ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合をブロックするＣＤ４７特異的抗体の注入により、担腫瘍のマウスにおける腫瘍成長を著しく阻害することができると報告されている。ヒト白血病細胞を持つマウスに同じ抗体を注入した場合、腫瘍またはがん細胞は、完全に取り除かれた（Ｔｈｅｏｃｈａｒｉｄｅｓ ＡＰＡら、２０１２年）。
【0008】
ＣＤ２４およびＳｉｇｌｅｃ－１０
シアル酸結合免疫グロブリン（Ｉｇ）様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）は、免疫グロブリン様Ｉ型膜貫通タンパク質である。Ｓｉｇｌｅｃファミリメンバおよび阻害受容体であるＳｉｇｌｅｃ－１０は、マクロファージ、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および活性化Ｔ細胞などの免疫細胞上で広範にわたって発現される。Ｓｉｇｌｅｃ－１０は、５つの細胞外Ｉｇ様ドメイン、膜貫通領域、および細胞質尾部を有する。Ｓｉｇｌｅｃ－１０のＩｇＶ構造ドメインは、シアル酸の認識と関係する、重要なアルギニン残基を含む（Ｙｉｎら、２０２０年）。Ｔ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０の発現は、Ｔ細胞主要組織適合性複合体クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）ペプチド複合体の形成、ならびにＴ細胞受容体関連キナーゼ、ＬｃｋおよびＺＡＰ－７０のリン酸化を阻害することによってＴ細胞の活性化に干渉することが公知である（Ｙｉｎら、２０２０年）。Ｂ細胞およびＮＫ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０の発現はそれぞれ、ＢＣＲ媒介およびＮＫ細胞受容体媒介シグナル伝達を阻害する（Ｙｉｎら、２０２０年）。
シアル酸結合免疫グロブリン（Ｉｇ）様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）は、免疫グロブリン様Ｉ型膜貫通タンパク質である。Ｓｉｇｌｅｃファミリメンバおよび阻害受容体であるＳｉｇｌｅｃ－１０は、マクロファージ、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および活性化Ｔ細胞などの免疫細胞上で広範にわたって発現される。Ｓｉｇｌｅｃ－１０は、５つの細胞外Ｉｇ様ドメイン、膜貫通領域、および細胞質尾部を有する。Ｓｉｇｌｅｃ－１０のＩｇＶ構造ドメインは、シアル酸の認識と関係する、重要なアルギニン残基を含む（Ｙｉｎら、２０２０年）。Ｔ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０の発現は、Ｔ細胞主要組織適合性複合体クラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）ペプチド複合体の形成、ならびにＴ細胞受容体関連キナーゼ、ＬｃｋおよびＺＡＰ－７０のリン酸化を阻害することによってＴ細胞の活性化に干渉することが公知である（Ｙｉｎら、２０２０年）。Ｂ細胞およびＮＫ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０の発現はそれぞれ、ＢＣＲ媒介およびＮＫ細胞受容体媒介シグナル伝達を阻害する（Ｙｉｎら、２０２０年）。
【0009】
ＣＤ２４は、発達中のＴリンパ球およびほとんどのＢリンパ球の表面上に見出されるグリコシル－ホスファチジルイノシトールアンカ型タンパク質である（Ｙｉｎら、２０２０年）。卵巣癌、乳癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、胆管癌、膀胱癌、膵臓癌、胃腺癌、および神経膠芽腫を含む様々ながん細胞において高度に発現される（Ｂａｒｋａｌら、２０１９年、Ｌｉｕら、２０１３年）。腫瘍細胞上のＣＤ２４は、免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０と相互作用して、免疫を回避し腫瘍細胞を免疫攻撃から保護するために「私を食べるな」というシグナルを生成する。
【0010】
ＣＤ２４の発現は、膀胱腫瘍の再発と著しく関連付けられる（Ｌｉｕら、２０１３年）。卵巣癌を有する患者においては、ＣＤ２４の発現はまた、全生存期間の独立予測因子であり、腫瘍病期分類ならびに腹膜およびリンパ節転移と相関関係にあることが見出されたのであり、ＣＤ２４陽性細胞は、増強した増殖、極めて浸潤性の表現型を有し、卵巣癌細胞におけるシスプラチン耐性と関連付けられる（Ｎａｋａｍｕｒａら２０１７年）。
【0011】
抗ＣＤ２４モノクローナル抗体は、肺転移を低減し、膀胱癌および三種陰性乳癌のマウスモデルにおいて全生存期間を延長することが報告されている。論文では、抗体によるＣＤ２４－Ｓｉｇｌｅｃ－１０相互作用のブロックは、マクロファージ依存の腫瘍成長低減、および担腫瘍マウスの生存期間の延長をもらしたことも明らかにされた（Ｂａｒｋａｌら、２０１９年、Ｃｈａｎら、２０１９年、Ｏｖｅｒｄｅｖｅｓｔら、２０１１年）。
【0012】
加えて、先の研究では、抗ＣＤ４７／ＣＤ２４二重抗体処置により、脳における骨髄性免疫が有効に活性化されたことが実証された（Ｗｕ Ｈら、２０２１年）。そして、そのような二重処置は、ヒト卵巣癌細胞に対する貪食作用を増すことが明らかとなっている（Ｂａｒｋａｌら、２０１９年）。Ｂａｒａｋａｌらは、いずれかの処置単独と比較して、ＣＤ２４抗体とセツキシマブとの併用処置が、膵臓腺癌細胞の貪食作用をさらに増強することも見出した。これらすべては、ＣＤ２４中和を伴う併用療法が相乗的な抗腫瘍効果を生むことができることを示す。
【0013】
ＦｃおよびＦｃＲ
断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）は、抗体の尾領域であり、抗体のエフェクタ機能、すなわち、どのように抗体が特定の細胞受容体または他の防御タンパク質と結合するかを決定するドメインである。
断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）は、抗体の尾領域であり、抗体のエフェクタ機能、すなわち、どのように抗体が特定の細胞受容体または他の防御タンパク質と結合するかを決定するドメインである。
【0014】
Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）は、Ｂリンパ球、濾胞性樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞を含む、ある特定の細胞の表面上に見られるタンパク質である。これらの細胞は、免疫系の防護機能に寄与する。
【0015】
Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体、および補体系のいくつかのタンパク質と相互作用し、免疫系を活性化し得る。
【0016】
治療用の二重特異性または多特異性融合タンパク質／抗体
単一の腫瘍関連抗原を標的とする抗体は、治療効率を限定することが見出されている。例えば、承認されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ）の全奏効率はわずか３３％である。近年、二重または三重特異性融合タンパク質は、開発されており、事前臨床および臨床試験において期待がもてる効果を示している。
単一の腫瘍関連抗原を標的とする抗体は、治療効率を限定することが見出されている。例えば、承認されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ）の全奏効率はわずか３３％である。近年、二重または三重特異性融合タンパク質は、開発されており、事前臨床および臨床試験において期待がもてる効果を示している。
【0017】
従来の抗体に追加の結合部分を付着させることは概念的に簡単明瞭であるように思われるが、そのような改変は、抗体の構造を著しく変更させ、互いの親和性および／または有効性を損なうおそれがある（Ｗａｎｇ Ｓら、２０２１年）。ｉｎ ｖｉｖｏ有効性および薬学的特性を最適化するために、綿密な設計および工学が、主要および付加の結合部分（配列）、標的への平均のとれた親和性、付着の部位（Ｎ－またはＣ－末端、重鎖または軽鎖）、構造的安定性、リンカの長さおよび／または配列の選択に与えられるべきである（Ｓｈｉｍ Ｈ。２０２０年）。
【0018】
ＵＳ１０，８００，８２１Ｂ２は、ＣＤ４７およびＦｃＲの両方を標的とする、約９０ｋＤａの組換え二機能性融合タンパク質を開示しており、当該タンパク質が、ＨＬ細胞を持つＢａｌｂ／ｃヌードマウスを処置するために使用され、抗腫瘍効果の増強が観察された。
【0019】
本願におけるいかなる文献の引用または特定は、そのような文献が、本開示に対する先行技術として利用可能であることを認めるものではない。
【発明の概要】
【0020】
本願は、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片と、ＣＤ４７に特異的に結合するペプチドとを含む組換え融合タンパク質を開示する。そのような組換え融合タンパク質は、ＣＤ４７結合ペプチドと抗ＣＤ２４抗体の併用より良好なｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。
【0021】
具体的には、本願は、抗ＣＤ２４抗体、またはＣＤ２４を特異的に結合するそれの抗体断片と、ＣＤ４７に特異的に結合するＣＤ４７結合ペプチドとを含み、ＣＤ４７結合ペプチドは抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片に連結される、組換え融合タンパク質を開示する。抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、重鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列識別番号７、８、および９に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変ＣＤＲ１（ＨＶ－ＣＤＲ１）、重鎖可変ＣＤＲ２（ＨＶ－ＣＤＲ２）、および重鎖可変ＣＤＲ３（ＨＶ－ＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、配列識別番号１０、１１、および１２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変ＣＤＲ１（ＬＶ－ＣＤＲ１）、軽鎖可変ＣＤＲ２（ＬＶ－ＣＤＲ２）、および軽鎖可変ＣＤＲ３（ＬＶ－ＣＤＲ３）を含み、重鎖定常領域は、ＦｃＲ結合親和性を有し、重鎖可変領域のＣ末端に連結される。ＣＤ４７結合ペプチドは、配列識別番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、突然変異されたシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）細胞外ドメインを含む。ＣＤ４７結合ペプチドは、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端に連結されてもよい。本開示の組換え融合タンパク質は、ＣＤ４７、ＣＤ２４、およびＦｃＲを同時に結合することができる。
【0022】
本開示の抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の重鎖可変領域は、配列識別番号２または５に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号２または５のアミノ酸配列を含んでもよい。抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の軽鎖可変領域は、配列識別番号３、４または６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、軽鎖可変領域は、配列識別番号３、４または６のアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ｉ）それぞれ配列識別番号２および３、ｉｉ）それぞれ配列識別番号２および４、またはｉｉｉ）それぞれ配列識別番号５および６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ｉ）それぞれ配列識別番号２および３、ｉｉ）それぞれ配列識別番号２および４、またはｉｉｉ）それぞれ配列識別番号５および６に記載されるアミノ酸配列を含んでもよい。
【0023】
ＦｃＲ結合親和性を有する重鎖定常領域は、天然に存在する、もしくは人工的に操作されたヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４重鎖定常領域、またはそれの機能性断片であってもよい。特定の実施形態において、ＦｃＲ結合親和性を有する重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、またはそれの機能性断片であってもよい。特定の実施形態において、ＦｃＲ結合親和性を有する重鎖定常領域は、配列識別番号１３のアミノ酸配列を含む。
【0024】
抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、軽鎖可変領域のＣ末端に連結された、ヒトカッパ軽鎖定常領域、またはそれの機能性断片などの軽鎖定常領域を含んでもよい。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、配列識別番号１４のアミノ酸配列を含んでもよい。
【0025】
特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の少なくとも１つのパラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端にてＣＤ４７結合ペプチドに連結される。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端にてＣＤ４７結合ペプチドに連結される。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域のＮ末端にてＣＤ４７結合ペプチドに連結される。特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する軽鎖可変領域のＮ末端にてＣＤ４７結合ペプチドに連結される。
【0026】
抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、リンカを介してＣＤ４７結合ペプチドに連結されてもよい。リンカは、５～３０、１０～３０、１０～２０、または１５アミノ酸でできているペプチドリンカであってもよい。リンカは、例えば、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）２－（配列識別番号１６）、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３－（配列識別番号１５）、または－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）４－（配列識別番号１７）であってもよい。特定の実施形態において、リンカは、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３－（配列識別番号１５）である。
【0027】
本開示の組換え融合タンパク質は、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖断片および抗ＣＤ２４軽鎖を含んでもよく、ここで、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖断片は、配列識別番号１８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、抗ＣＤ２４軽鎖は、配列識別番号２０または２２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、本開示の組換え融合タンパク質は、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖断片および抗ＣＤ２４軽鎖を含んでもよく、ここで、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖断片は、配列識別番号１８のアミノ酸配列を含んでもよく、抗ＣＤ２４軽鎖は、配列識別番号２０または２２のアミノ酸配列を含んでもよい。配列識別番号１８、２０、および２２のアミノ酸配列は、それぞれ、配列識別番号１９、２１、および２３のヌクレオチド配列によってエンコードされてもよい。
【0028】
本開示の組換え融合タンパク質は、抗ＣＤ２４重鎖およびＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４重鎖は、配列識別番号２４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片は、配列識別番号２６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、本開示の組換え融合タンパク質は、抗ＣＤ２４重鎖およびＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４重鎖は、配列識別番号２４のアミノ酸配列を含んでもよく、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片は、配列識別番号２６のアミノ酸配列を含んでもよい。本開示の組換え融合タンパク質は、抗ＣＤ２４重鎖およびＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４重鎖は、配列識別番号２８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片は、配列識別番号３０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。特定の実施形態において、本開示の組換え融合タンパク質は、抗ＣＤ２４重鎖およびＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４重鎖は、配列識別番号２８のアミノ酸配列を含んでもよく、ＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖断片は、配列識別番号３０のアミノ酸配列を含んでもよい。配列識別番号２４、２６、２８、および３０のアミノ酸配列は、それぞれ、配列識別番号２５、２７、２９、および３１のヌクレオチド配列によってエンコードされてもよい。
【0029】
本願はまた、本開示の組換え融合タンパク質をエンコードする核酸分子、ならびにそのような核酸分子を含む発現ベクタ、およびそのような発現ベクタを含む宿主細胞を提供する。本開示の宿主細胞を使用して組換え融合タンパク質を調製するための方法が提供され、当該方法は、（ｉ）宿主細胞において組換え融合タンパク質を発現させるステップ、および（ｉｉ）宿主細胞またはその細胞培養物から組換え融合タンパク質を単離するステップを含む。
【0030】
本願は、本開示の組換え融合タンパク質、核酸分子、発現ベクタ、または宿主細胞、および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態において、医薬組成物は少なくとも１種の薬学的に許容されるアジュバントを含む。
【0031】
本開示の組換え融合タンパク質または医薬組成物は、ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患の処置において、または当該疾患を処置するための薬剤の調製において、使用されてもよい。
【0032】
一態様において、本願は、それを必要とする対象の、ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患を処置する、または軽減するための方法を提供し、当該方法は、本開示の医薬組成物を治療有効量で対象に投与することを含む。
【0033】
ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患は、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、胆管癌、胃腺癌、および神経膠芽腫であってもよい。
【0034】
本開示の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および例から明らかとなり、これらの詳細な説明および例は限定するものと解釈されるべきではない。本願にわたって引用されるすべての参考文献、ジェンバンクのデータ、特許および公開特許出願の内容は、参照により本明細書において明確に引用される。
【0035】
したがって、出願人が、権利を保有し、あらゆる従来から公知の製造物、プロセス、または方法の放棄をここに開示するような、あらゆる従来から公知の製造物、製造物を作製するプロセス、または製造物を使用する方法を本願内に包含しないことは本願の目的である。本願は、本願の範囲内に、出願人が、権利を保有し、あらゆる先に説明された製造物、製造物を作製するプロセス、または製造物を使用する方法の放棄をここに開示するような、ＵＳＰＴＯ（米国特許法§１１２、第１パラグラフ）またはＥＰＯ（ＥＰＣ第８３条）の明細書記載要件および実施可能性要件に適合しない、あらゆる製造物、製造物を作製するプロセス、または製造物を使用する方法を包含することを意図しないことがさらに留意される。ＥＰＣ第５３条（ｃ）およびＥＰＣ規則第２８条（ｂ）および（ｃ）に準拠することが、本願の実施において有利であり得る。本願の系統において、または任意の他の系統において、または任意の第三者の任意の先に出願された出願において、出願人の任意の登録特許の主題であるいかなる実施形態も明示的に放棄するすべての権利が明示的に保有される。本明細書におけるなにものも、誓約として解釈されるべきではない。
【0036】
本開示において、特に特許請求の範囲および／または段落において、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ（含まれる）」および「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰される意味を有し得る、例えば、それらは、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｅｄ（含まれる）」、および「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」などを意味し得ること、ならびに「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ（本質的に、からなる）」および「ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ（本質的に、からなる）」などの用語は、米国特許法においてそれに帰される意味を有する、例えば、それらは、明示的に詳述されない要素を可能にするが、先行技術に見出される、または本願の基本的なまたは新規の特徴に影響を及ぼす、要素を除外することが留意される。
【図面の簡単な説明】
【0037】
以下の詳細な説明は、例として与えられるが、説明される特定の実施形態のみに本願を限定することは意図されておらず、添付の図面と併せると最も良好に理解することができる。
【0038】
【図1】本願の組換え融合タンパク質、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈの構造の概略図である。円形の「ＳＩＲＰαＤ１」ドメインは、ＳＩＲＰアルファタンパク質の突然変異された細胞外ドメイン１（ＳＩＲＰαＤ１）を表し、配列識別番号１に記載されるアミノ酸配列を有する。ＩＭＭ４７０１Ｃにおいて、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１は、リンカペプチドを介して抗ＣＤ２４抗体ＩＭＭ４７Ｃの重鎖のＮ末端に連結されており、ここで、ＩＭＭ４７Ｃは、マウス重鎖可変領域およびマウス軽鎖可変領域を有するＩｇＧ抗体である。リンカは、配列識別番号１５のアミノ酸配列を有する。ＩＭＭ４７Ｃは、配列識別番号２の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号４の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含む。ＩＭＭ４７０１において、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１は、リンカペプチドを介して抗ＣＤ２４抗体ＩＭＭ４７の重鎖のＮ末端に連結されており、ここで、ＩＭＭ４７は、マウス重鎖可変領域およびヒト化軽鎖可変領域を有するＩｇＧ抗体である。ＩＭＭ４７は、配列識別番号２の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号３の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含む。ＩＭＭ４７０２Ｃにおいて、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１は、リンカペプチドを介してＩＭＭ４７Ｃの軽鎖のＮ末端に連結される。ＩＭＭ４７０２Ｈにおいて、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１は、リンカペプチドを介してＩＭＭ４７Ｈの軽鎖のＮ末端に連結されており、ここで、ＩＭＭ４７Ｈは、ヒト化重鎖可変領域およびヒト化軽鎖可変領域を有するＩｇＧ抗体である。ＩＭＭ４７Ｈは、配列識別番号５の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号６の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含む。
【0039】
【図2A】ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ（Ａ）、およびＩＭＭ４７０２Ｈの、ジャーカットヒトＴ細胞白血病細胞上のＣＤ４７への結合活性を示す。
【図2B】ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７０１の、ジャーカットヒトＴ細胞白血病細胞上のＣＤ４７への結合活性を示す。陽性対照として使用されるＩＭＭ０１は、ＵＳ２０２１／００２４５９８Ａ１に記載されたのであり、Ｆｃ二量体断片に連結された２つの突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含み、その単量体はそれぞれ、配列識別番号３３の核酸配列および配列識別番号３２のアミノ酸配列を有する。抗ＣＤ２４抗体ＩＭＭ４７を陰性対照として使用した。
【0040】
【図3A】ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈの、ＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞への結合活性を示す。
【図3B】ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７０１の、ＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞への結合活性を示す。ＩＭＭ０１およびＩＭＭ４７Ｈを陽性対照として使用し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。
【0041】
【図4】ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈの、ＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ ＲＥＨヒト急性リンパ球性白血病細胞への結合活性を示す。ＩＭＭ０１およびＩＭＭ４７Ｈを陽性対照として使用し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。
【0042】
【図5】ＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈが、ＳＩＲＰα－ＦｃとＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞上のＣＤ４７との結合をブロックする能力を示す。ＩＭＭ０１を陽性対照として使用し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。
【0043】
【図6】ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７０１が、ＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する能力を示す。ＡＤＣＣ活性を有するＩＭＭ４７Ｃを陽性対照として使用し、ｈＩｇＧ１－Ｆｃを陰性対照として使用した。
【0044】
【図7】ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈが、ＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＲＥＨヒト急性リンパ球性白血病細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する能力を示す。ＡＤＣＣ活性を有するＩＭＭ４７Ｃを陽性対照として使用し、ＡＤＣＣ活性をほとんど有しないｈＩｇＧ１－ＦｃおよびＩＭＭ０１を陰性対照として使用した。
【0045】
【図8】ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７０１が、ヒトＣＤ２４を発現するように操作されたＭＣ３８－ｈＣＤ２４マウスの大腸腺癌細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する能力を示す。ＡＤＣＣ活性を有するＩＭＭ４７を陽性対照として使用し、ｈＩｇＧ１－Ｆｃを陰性対照として使用した。
【0046】
【図9】ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞由来異種移植片を担持するＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおけるＩＭＭ４７０１Ｃのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＤＰＢＳをビヒクル対照として使用し、ＩＭＭ４７ＣおよびＩＭＭ０１を陽性対照として使用した。
【発明を実施するための形態】
【0047】
主に、腫瘍成長の２つ以上の薬理学的標的を標的とすることへの異なるアプローチは３つある。最も一般的には、患者は２つ以上の薬剤の異なるカクテルを与えられ得る。この選択肢では、可能な薬剤の組み合わせ、および異なる投与量に関して最大限の柔軟性が可能になるものの、（ａ）服薬錠数の増加、および個別の薬剤のための異なる投薬スケジュールを理由とする、患者の処置に対する不良なアドヒアランスの可能性、（ｂ）薬剤間相互作用を理由とする不適合性の可能性、ならびに（ｃ）薬剤の副作用のリスクの増大が問題である。これらの課題により、治療の有効性が低減し、処置目標の達成を、特にがんなどの慢性疾患の管理において妨げるおそれがある。
【0048】
第２のアプローチは、単回投与形態における薬剤の固定用量併用薬の使用に依拠する。このアプローチは服薬錠数を低減し、患者コンプライアンスの向上をもたらす。固定用量併用薬の不利点は主として、活性成分間の可能な投与量比の選択肢が限定されることであり、このことにより、最小の副作用で最大の効力を得るように個々の患者について適切に調整することがより困難になる。加えて、併用薬における成分の異なる薬物動態学的特性は、薬力学的効果における複雑な時間的ミスマッチを個別の標的においてもたらす可能性があり、それによって全体的な有効性が損なわれる。
【0049】
第３のアプローチは、２つ以上の薬効を単一の化合物において混ぜ合わせる多機能性薬剤の使用である。そのような多機能性分子の設計および妥当性確認はより複雑であり、分子における標的活性の最適比について多くの調査を必要とするが、統合薬物動態学は、分子標的での整合された薬力学的活性をもたらし得る。多機能性分子はまた、他の薬物との固定用量併用薬に適し、それによって３つまたはさらには４つの薬効を単一の錠剤において混ぜ合わせて、有効性のさらなる増大をもたらし得る。
【0050】
本発明者は入念な実験作業を通じて、３つの作用機構、１つは、ＣＤ２４－Ｓｉｇｌｅｃ－１０媒介免疫抑制作用を解除すること、１つは、ＳＩＲＰ媒介阻害シグナルによるマクロファージに対するブレーキを解除すること、３つ目としてＮＫ細胞および／またはマクロファージによるがん細胞殺傷を刺激することによって、腫瘍を攻撃することができる、新規の組換え多機能性融合タンパク質を発明した。
【0051】
本願の組換え融合タンパク質は、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片を含み、抗体または抗体断片の少なくとも１つのパラトープが、パラトープを構成する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端でシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結される。組換えタンパク質は、ＣＤ４７、ＣＤ２４、およびＦｃＲに同時に結合でき、ｉ）がん細胞上のＣＤ２４と免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０との相互作用をブロックし、これにより、ＣＤ２４－Ｓｉｇｌｅｃ－１０媒介免疫抑制作用を解除し、ｉｉ）がん細胞上のＣＤ４７とマクロファージ上のＳＩＲＰとの相互作用をブロックし、これにより、ＳＩＲＰ媒介阻害シグナルによるマクロファージに対するブレーキを解除し、（ｉｉｉ）ＮＫ細胞および／またはマクロファージ上のＦｃＲに抗体のＦｃ部を結合させて、ＮＫ細胞および／またはマクロファージによるがん細胞殺傷を刺激する。一実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の１つのパラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端にて、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結される。別の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端にて、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結される。一実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する重鎖可変領域のＮ末端にて、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結される。一実施形態において、抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、パラトープを構成する軽鎖可変領域のＮ末端にて、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインにリンカを介して連結される。本願の組換え融合タンパク質は、サイズが小さく（１５０～１８０ｋＤａ）、５～１０日の長い半減期を有する。
【0052】
本願の組換え融合タンパク質に含まれる３つの主成分は、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメイン、リンカ、および抗ＣＤ２４抗体である。当業者であれば、上の３つの成分を選択するための設計の選択肢が多くあることを認識するであろう。非ヒト動物由来のタンパク質またはペプチドの強い免疫原性はアレルギおよびその他の副作用を引き起こすことがあるため、好ましくは、ヒト由来配列がヒトのがん療法において使用される。しかしながら、異なる応用の目的に基づいて、他の動物タンパク質またはペプチドも、必要に応じてヒト化されて本願において使用されてもよい。
【0053】
ＣＤ４７と結合可能な任意のＳＩＰＲ（ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、およびＳＩＲＰγ）の任意の細胞外Ｉｇ様ドメインが組換え融合タンパク質の構築のために選択されてもよい。一実施形態において、組換え融合タンパク質におけるシグナル調節タンパク質はＳＩＲＰαであり、シグナル調節タンパク質の細胞外Ｉｇ様ドメインはＳＩＲＰαの第１の細胞外Ｉｇ様ドメインである（ＳＩＲＰαＤ１）。特定の実施形態において、ＳＩＲＰαＤ１は、配列識別番号１の位置８０に、グリコシル化部位を除去するためのＮ→Ａ突然変異を含むＳＩＲＰαＤ１変異体である。
【0054】
一実施形態において、組換え融合タンパク質は、配列識別番号１において記載されるアミノ酸配列を有するＳＩＲＰαＤ１を含んでもよい。別の実施形態において、ＳＩＲＰαＤ１は、配列識別番号１に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ここで、ＳＩＲＰαＤ１は、がん／腫瘍細胞の細胞表面上のＣＤ４７に結合して、ＣＤ４７とマクロファージの細胞表面上のＳＩＲＰとの相互作用をブロックすることができる。
【0055】
リンカは主に、ＳＩＲＰの細胞外Ｉｇ様ドメインと、抗ＣＤ２４抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端との間のスペーサとして機能する。リンカは、ペプチド結合によって連結された、好ましくは５～３０アミノ酸の、１０～３０アミノ酸の、１０～２０アミノ酸の、または１５アミノ酸のペプチド結合によって共に連結されたアミノ酸から作られていてもよく、ここで、アミノ酸は、天然に存在する２０アミノ酸から選択される。当業者であれば理解できるように、これらのアミノ酸のうちの１つまたは複数は、グリコシル化または脱グリコシルされてもよい。一実施形態において、５～３０アミノ酸は、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、セリン、およびリシンから選択されてもよい。一実施形態において、リンカの大部分は、グリシンおよびアラニンなどの、立体障害のないアミノ酸から作られる。例示的なリンカは、ポリグリシン、特にＧｌｙｓ、ｐｏｌｙ（Ｇｌｙ－Ａｌａ）、およびポリアラニンである。下の実施例に示されるように好適なリンカの一例は、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３－（配列識別番号１５）などの、－（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ－である。
【0056】
リンカは非ペプチドリンカでもよい。例えば、‐ＮＨ‐、－（ＣＨ２）ｓ－Ｃ（Ｏ）－などのアルキルリンカ（式中、ｓ＝２～２０）を使用することができる。これらのアルキルリンカはさらに、例えば、低級アルキル（例えばＣ１～４）、低級アシル、ハロゲン（例えばＣＩ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ２、フェニルなどの、任意の非立体障害基によって置換されてもよい。
【0057】
特定の実施形態において、抗ＣＤ２４抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む、単離されたモノクローナルＩｇＧ抗体であってもよく、ここで、各重鎖は、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含んでもよく、各軽鎖は、軽鎖可変領域および任意選択で軽鎖定常領域を含んでもよい。抗ＣＤ２４抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ｉ）それぞれ配列識別番号２および３、ｉｉ）それぞれ配列識別番号２および４、またはｉｉｉ）それぞれ配列識別番号５および６に記載されるアミノ酸配列を含んでもよい。重鎖定常領域は、配列識別番号１３のアミノ酸配列を含んでもよい。軽鎖定常領域は、配列識別番号１４のアミノ酸配列を含んでもよい。抗ＣＤ２４抗体のＦａｂ部分（またはパラトープ）は、がん／腫瘍細胞の細胞表面上のＣＤ２４に結合して、ＣＤ２４と、Ｔ細胞などの免疫細胞の細胞表面上のＳｉｇｌｅｃ－１０との相互作用をブロックすることができ、これにより、ＣＤ２４－Ｓｉｇｌｅｃ－１０免疫抑制作用を解除し、その一方で、抗ＣＤ２４抗体のＦｃ部は、ＮＫ細胞またはマクロファージの細胞表面上のＦｃＲに結合して、ＮＫ細胞またはマクロファージによるがん細胞殺傷を刺激し得る。特定の実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号２または５に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、重鎖定常領域は、配列識別番号１３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４抗体は、がん／腫瘍細胞上のＣＤ２４に結合し、ＣＤ２４と、Ｔ細胞などの免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０との相互作用をブロックすることができ、また、ＮＫ細胞またはマクロファージ上のＦｃＲに結合し、これにより、ＮＫ細胞またはマクロファージを活性化してがん細胞を殺傷することができる。特定の実施形態において、軽鎖可変領域は、配列識別番号３、４、または６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ここで、抗ＣＤ２４抗体は、がん／腫瘍細胞上のＣＤ２４に結合し、ＣＤ２４と、Ｔ細胞などの免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ－１０との相互作用をブロックすることができる。
【0058】
本明細書において言及される「抗体」という用語は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭの全抗体、およびそれらの任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）または単鎖を含む。全抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分することができ、その領域にはフレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存的な領域が点在する。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで、以下の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクタ細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または宿主因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【0059】
本明細書における「抗体断片」という用語は、ＣＤ２４に特異的に結合する能力、および任意選択でＦｃ受容体を結合する能力を保持する、本開示の抗ＣＤ２４抗体の断片の部分を指す。
【0060】
本開示の抗体またはそれの抗体断片における重鎖可変領域ＣＤＲおよび軽鎖可変領域ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムによって定義されている。しかしながら、当技術分野で周知であるように、ＣＤＲ領域は、重鎖／軽鎖可変領域配列に基づいた、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、またはＣｏｎｔａｃｔナンバリングシステム／法などの他のシステムによって決定することもできる。
【0061】
本明細書で用いられる「マウス抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がマウス生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図されている。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もマウス生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本開示のマウス抗体は、マウス生殖系列免疫グロブリン配列によってエンコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはｉｎ ｖｉｖｏの体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含むことができる。しかしながら、本明細書で用いられる「マウス抗体」という用語は、別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がマウスフレームワーク配列に移植された抗体を含むことは意図されていない。
【0062】
本明細書で用いられる「ヒト化抗体」という用語は、ヒトにおいて天然に産生される抗体バリアントとの類似性を高めるようにそのタンパク質配列が改変されている非ヒト種由来の抗体を指す。
【0063】
「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」、または「ＡＤＣＣ」という用語は、細胞媒介性の免疫防御機構を指し、これにより、抗ＣＤ２４抗体などの抗体およびＳＩＲＰα含有分子によって結合されている標的細胞を免疫系のエフェクタ細胞が活発に溶解する。
【0064】
「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、および爬虫類などの、哺乳類および非哺乳類を含むが、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマなどの哺乳類が好ましい。
【0065】
本明細書で用いられる「配列同一性」は、配列間で最大パーセント配列同一性を達成するために、配列をアラインメントさせ、必要であればギャップを導入した後、参照配列におけるヌクレオチド／アミノ酸残基と同一である、主題の配列におけるヌクレオチド／アミノ酸残基のパーセントを指す。２つ以上のアミノ酸または核酸配列間のパーセント配列同一性を決定することを目的とした、ペアワイズおよび多重配列アラインメントは、当業者に公知の様々なやり方で、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ、Ｔ－ｃｏｆｆｅｅ、Ｋａｌｉｇｎ、およびＭＡＦＦＴなどの公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。そのようなソフトウェアを使用する際は、例えばギャップペナルティおよび拡張ペナルティに関する、デフォルトのパラメータが使用されることが好ましい。
【0066】
また、本願は、組換え融合タンパク質をエンコードするポリヌクレオチド分子、および組換え二機能性融合タンパク質を発現する発現ベクタを提供する。ベクタの例としては、プラスミド、ウイルスベクタ、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、形質転換可能人工染色体（ＴＡＣ）、哺乳類人工染色体（ＭＡＣ）、およびヒト人工エピソーム染色体（ＨＡＥＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0067】
本願は、上の発現ベクタを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞は、発現ベクタを用いて形質転換またはトランスフェクトされてもよい。好適な宿主細胞は、大腸菌、酵母および他の真核生物を含む。好ましくは、大腸菌、酵母、または哺乳類の細胞株（ＣＯＳまたはＣＨＯなど）が使用される。
【0068】
別の態様において、本開示は、薬学的に許容される賦形剤または薬学的に許容されるアジュバントと一緒に製剤化された本願の組換え融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。組成物は、別の抗体または薬剤などの、１つまたは複数の追加の薬学的に活性な成分を任意選択で含有してもよい。本願の医薬組成物はまた、例えば、別の免疫刺激剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、またはワクチンとの併用療法において投与することができる。
【0069】
医薬組成物は任意の数の賦形剤を含むことができる。使用できる賦形剤は、担体、界面活性剤、増粘または乳化剤、固形結合剤、分散または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、保存料、等張剤、およびそれらの組み合わせを含む。好適な賦形剤の選択および使用は、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ ２００３年）において教示されており、その開示は参照により本明細書に引用される。
【0070】
医薬組成物における主要なビヒクルまたは担体は、本質的に水性でも非水性でもよい。例えば、好適なビヒクルまたは担体は、注射において一般的な他の物質が場合によっては添加されている、注射、生理食塩水、または人工脳脊髄液のための水であってもよい。例えば、ビヒクルまたは担体は、中性緩衝生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水であってもよい。他の例示的な医薬組成物は、ソルビトールまたはそれの好適な置換をさらに含み得るＴｒｉｓ緩衝液、または酢酸塩緩衝液を含む。本願の一実施形態において、組成物は、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で、所望の純度を有する選択された組成物を任意選択の製剤化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｓｕｐｒａ）と混合することによって、保管のために調製されてもよい。さらに、治療用組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して、凍結乾燥物として製剤化されてもよい。
【0071】
好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または上皮投与（例えば、注射または点滴によって）に好適である。投与の経路に応じて、活性分子は、活性成分を失活させる場合がある酸の作用および他の天然条件から保護するための材料でコーティングすることができる。本明細書で用いられる「非経口投与」という語句は、経腸および局所投与以外の通常注射による投与様式を意味し、限定することなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内の注射ならびに点滴を含む。代替的には、本願の抗体は、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、直腸に、舌下で、または局所的に、局所、上皮、または粘膜投与経路などの、非経口ではない経路を介して投与することができる。
【0072】
医薬組成物は、滅菌水溶液または分散液の形態であってもよい。医薬組成物はまた、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の規則構造において製剤化され得る。
【0073】
単回投与形態を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分量は、処置される対象および特定の投与様式に依存して異なることになり、一般に、治療効果を生む組成物量となる。一般に、この量は、１００パーセント中、薬学的に許容される担体と組み合わせて約０．０１％から約９９％までの活性成分の範囲となる。
【0074】
投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が得られるように調整される。例えば、分割用量を経時的に数回投与することができる、または治療状況の切迫した要件に従って用量を低減させるか、または増加させることができる。投与を容易にし、投与量を統一するために、投与単位形態で非経口組成物を製剤化することは特に有利である。本明細書で用いられる投与単位形態は、処置される対象に対する単位投与量として好適な、物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬品担体と共同して、所望の治療効果を生むように計算された活性化合物の所定の量を含有する。代替的には、融合タンパク質は、徐放性製剤として投与することができ、その場合、必要とされる投与頻度はより少ない。
【0075】
融合タンパク質の投与に関して、投与量は、宿主の体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲である。例示的な処置体制は、週２回の投与を必要とする。
【0076】
本願の組換え融合タンパク質の「治療効果のある投与量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状がない期間の頻度および長さの増大、または疾患の苦痛による機能障害または能力障害の予防をもたらす。例えば、担腫瘍の対象の処置に関して、「治療効果のある投与量」は、好ましくは、無処置の対象と比べて、少なくとも約４０％、より好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％、なおより好ましくは少なくとも約９９％、腫瘍成長を阻害する。本願の組換え融合タンパク質の治療効果のある量は、典型的にはヒトであるか、もしくは別の哺乳類であり得る対象の、腫瘍サイズを低減することができるか、そうでない場合は症状を寛解することができる。
【0077】
医薬組成物は、植込錠、経皮パッチ、マイクロカプセル化送達システムを含む、放出制御製剤であり得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生分解性、生体適合性ポリマを使用することができる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照されたい。
【0078】
治療用組成物は、（１）無針皮下注射装置（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号明細書、同第５，３８３，８５１号明細書、同第５，３１２，３３５号明細書、同第５，０６４，４１３号明細書、同第４，９４１，８８０号明細書、同第４，７９０，８２４号明細書、および同第４，５９６，５５６号明細書）、（２）マイクロ注入ポンプ（米国特許第４，４８７，６０３号明細書）、（３）経皮性装置（米国特許第４，４８６，１９４号明細書）、（４）注入機器（米国特許第４，４４７，２３３号明細書および同第４，４４７，２２４号明細書）ならびに（５）浸透圧装置（米国特許第４，４３９，１９６号明細書および同第４，４７５，１９６号明細書）などの医療用装置を介して投与することができ、これらの開示は、参照により本明細書に引用される。
【0079】
特定の実施形態において、本願の融合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏでの適切な分布を確実にするように製剤化することができる。例えば、本願の治療用融合タンパク質が確実に血液脳関門を超えるために、治療用融合タンパク質をリポソームに入れて製剤化することができ、リポソームは、特定の細胞または器官への選択的輸送を増強するための標的化部分をさらに含んでもよい。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書、同第５，３７４，５４８号明細書、同第５，４１６，０１６号明細書、および同第５，３９９，３３１号明細書を参照されたい。
【0080】
本願の組換え融合タンパク質エンコードする核酸分子またはそれの誘導体が対象に直接導入されるｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子療法も考えられる。例えば、本願の組換え融合タンパク質をエンコードする核酸配列が、アデノ随伴ウイルスベクタなどの適切な送達ベクタを用いて、または用いず、核酸コンストラクトの局所注射によって標的細胞に導入される。代替的なウイルスベクタは、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、乳頭腫ウイルスベクタを含むが、これらに限定されない。ウイルスベクタの物理的移入は、所望の核酸コンストラクト、または所望の核酸配列を含む他の適切な送達ベクタの局所注射、リポソーム媒介移入、直接注射（ネイキッドＤＮＡ）、または微粒子ボンバードメント（遺伝子ガン）によってｉｎ ｖｉｖｏで達成されてもよい。
【0081】
本開示の組成物は、単独で、または、その治療効果を強化するために、もしくは潜在的な副作用を低減するために、他の治療剤と組み合わせて使用されてもよい。
【0082】
本願の別の目的は、上の組換え融合タンパク質、および、それを含む医薬組成物を調製するための方法を提供することである。一実施形態において、方法は、（１）ポリヌクレオチド分子をエンコードするタンパク質を提供すること、（２）（１）のポリヌクレオチド分子を含む発現ベクタを構築すること、（３）（２）の発現ベクタで好適な宿主細胞をトランスフェクトまたは形質転換し、宿主細胞を培養してタンパク質を発現させること、（４）タンパク質を精製することを含む。調製は、当業者によって、周知の技術を用いて実行されてもよい。
【0083】
本願の別の目的は、前述の医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者または対象に投与することを含む、本願の医薬組成物を使用してがんを処置する方法を提供することである。一実施形態において、医薬組成物を使用して、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、胆管癌、胃腺癌、および神経膠芽腫を含むが、これらに限定されないＣＤ４７および／またはＣＤ２４過剰発現腫瘍またはがんを処置する。
【0084】
一実施形態において、ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現に関連する疾患は、クローン病、アレルギ性喘息、関節リウマチを含むが、これらに限定されない。
【0085】
以下では非限定的な例を用いて、本願をさらに説明する。
【実施例0086】
構造が図１に示される本開示の例示的な組換えタンパク質および抗ＣＤ２４抗体を、さらに詳細に以下に説明する。
【0087】
ＩＭＭ４７Ｃは、配列識別番号２の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号４の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含むＩｇＧ抗体である。
【0088】
ＩＭＭ４７は、配列識別番号２の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号３の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含むＩｇＧ抗体である。
【0089】
ＩＭＭ４７Ｈは、配列識別番号５の重鎖可変領域、配列識別番号１３の重鎖定常領域、配列識別番号６の軽鎖可変領域、および配列識別番号１４の軽鎖定常領域を含むＩｇＧ抗体である。
【0090】
ＩＭＭ４７０１Ｃは、リンカ（配列識別番号１５）を介してＩＭＭ４７Ｃの各重鎖のＮ末端に連結された、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含む。
【0091】
ＩＭＭ４７０１は、リンカ（配列識別番号１５）を介してＩＭＭ４７の各重鎖のＮ末端に連結された、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含む。
【0092】
ＩＭＭ４７０２Ｃは、リンカ（配列識別番号１５）を介してＩＭＭ４７Ｃの各軽鎖のＮ末端に連結された、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含む。
【0093】
ＩＭＭ４７０２Ｈは、リンカ（配列識別番号１５）を介してＩＭＭ４７Ｈの各軽鎖のＮ末端に連結された、突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含む。
【0094】
ＵＳ２０２１／００２４５９８Ａ１に記載されるようなＩＭＭ０１は、Ｆｃ二量体に連結された２つの突然変異されたＳＩＲＰαＤ１（配列識別番号１）を含み、その単量体は、配列識別番号３３に記載される核酸配列および配列識別番号３２に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0095】
実施例１
ベクタ構築およびタンパク質発現
ＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ４７、ＩＭＭ４７Ｃ、およびＩＭＭ４７Ｈの構造を図１に示し、組換え融合タンパク質の完全長コード配列を人工的に設計した。
ベクタ構築およびタンパク質発現
ＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ４７、ＩＭＭ４７Ｃ、およびＩＭＭ４７Ｈの構造を図１に示し、組換え融合タンパク質の完全長コード配列を人工的に設計した。
【0096】
具体的には、ＩＭＭ４７０１Ｃの長鎖に関して、マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチドをエンコードする５７ヌクレオチド（配列識別番号３４）を、ＳＩＲＰαＤ１－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖のコード配列（配列識別番号１９）の５'末端に加え、コザック配列（配列識別番号３５）を、シグナルペプチド配列の５'末端に加えた。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｈｅＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。ＩＭＭ４７０１Ｃの短鎖に関して、同じシグナル配列、およびコザック配列を、抗ＣＤ２４軽鎖コード配列（配列識別番号２１）の５'末端に加え、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂａＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。配列はＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成され、それぞれｐＭａｃ－ＨおよびｐＭａｃ－Ｌにクローニングされた。
【0097】
ＩＭＭ４７０１の長鎖に関して、マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチドをエンコードする５７ヌクレオチド（配列識別番号３４）を、ＳＩＲＰαＤ１－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖のコード配列（配列識別番号１９）の５'末端に加え、コザック配列（配列識別番号３５）を、シグナルペプチド配列の５'末端に加えた。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｈｅＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。ＩＭＭ４７０１の短鎖に関して、同じシグナル配列、およびコザック配列を、抗ＣＤ２４軽鎖コード配列（配列識別番号２３）の５'末端に加え、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂａＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。配列はＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成され、それぞれｐＭａｃ－ＨおよびｐＭａｃ－Ｌにクローニングされた。
【0098】
ＩＭＭ４７０２Ｃの長鎖に関して、マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチドをエンコードする５７ヌクレオチド（配列識別番号３４）を、抗ＣＤ２４重鎖のコード配列（配列識別番号２５）の５'末端に加え、コザック配列（配列識別番号３５）を、シグナルペプチド配列の５'末端に加えた。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｈｅＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。ＩＭＭ４７０２Ｃの短鎖に関して、同じシグナル配列、およびコザック配列を、ＳＩＲＰαＤ１－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖コード配列（配列識別番号２７）の５'末端に加え、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂａＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。配列はＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成され、それぞれｐＭａｃ－ＨおよびｐＭａｃ－Ｌにクローニングされた。
【0099】
ＩＭＭ４７０２Ｈの長鎖に関して、マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチドをエンコードする５７ヌクレオチド（配列識別番号３４）を、抗ＣＤ２４重鎖のコード配列（配列識別番号２９）の５'末端に加え、コザック配列（配列識別番号３５）を、シグナルペプチド配列の５'末端に加えた。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｈｅＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。ＩＭＭ４７０２Ｈの短鎖に関して、同じシグナル配列、およびコザック配列を、ＳＩＲＰαＤ１－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖コード配列（配列識別番号３１）の５'末端に加え、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂａＩ制限部位をそれぞれ、得られた配列の５'および３'末端に加えた。配列はＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成され、それぞれｐＭａｃ－ＨおよびｐＭａｃ－Ｌにクローニングされた。
【0100】
本開示のこれらの組換え融合タンパク質、および抗ＣＤ２４抗体を、ＣＨＯ－Ｓ細胞を使用して発現させた。簡潔には、一過性トランスフェクションの１日前に、６ｍＭグルタミンを含有するＴｒａｎｓＦｘ－ＣＴＭＣＨＯ一過性トランスフェクション培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ）に、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度でＣＨＯ－Ｓ細胞を播種した。１：１の質量比および１μｇ／ｍｌの全ＤＮＡ量の重／長鎖および軽／短鎖発現ベクタを、使用されたＴｒａｎｓＦｘ－ＣＴＭＣＨＯ一過性トランスフェクション培地の体積の１／２０の体積を有するＯＰＴＩ－ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）に加えた。１ｍｇ／ｍｌのＰＥＩ（ポリエチレンイミン、ＭＷ４０，０００、ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、使用されたＴｒａｎｓＦｘ－ＣＴＭＣＨＯ一過性トランスフェクション培地の体積の１／２０の体積を有するＯＰＴＩ－ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）に加えた。ＰＥＩ希釈液をゆっくりと加えて混合し、希釈したＤＮＡと共に４：１のＰＥＩ：ＤＮＡ質量比で、室温にて２０分間インキュベートした。次いで、ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物を細胞培養物に加え、１１０ｒｐｍで振盪させながら、３７℃で５％ＣＯ２の細胞培養インキュベータ中で細胞をインキュベートした。２日後、トランスフェクションエンハンサ（１ｍＭ酪酸ナトリウム、０．２５％Ｖ／Ｖ ＤＭＳＯ）を加え、温度を３３℃に低下させた。細胞生存率がおよそ５０％に減少した際、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離することによってバイオリアクタから細胞培養物上清を回収し、プロテインＡクロマトグラフィを用いたタンパク質精製に供した。
【0101】
実施例２
ジャーカット細胞上のＣＤ４７に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのジャーカット細胞（ＣＤ４７を天然に発現している）を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートした。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
ジャーカット細胞上のＣＤ４７に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのジャーカット細胞（ＣＤ４７を天然に発現している）を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートした。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
【0102】
図２Ａおよび図２Ｂに示すように、ジャーカット細胞上のＣＤ４７に結合されたＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈは、単一特異性のＣＤ４７結合分子ＩＭＭ０１よりわずかに劣る活性を有する。
【0103】
実施例３
ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７Ｈ（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートし、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７Ｈ（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートし、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
【0104】
図３Ａおよび図３Ｂに示すように、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に対するＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈの結合能力は、抗ＣＤ２４抗体ＩＭＭ４７Ｈの結合能力と同等であり、ＩＭＭ０１の結合能力よりわずかに高い。
【0105】
実施例４
ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７Ｈ（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートし、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に結合された例示的な組換え融合タンパク質
１×１０６／ｍｌの細胞密度で１００μｌのＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞を、１００μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、ＩＭＭ０１、およびＩＭＭ４７Ｈ（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、４℃で１時間インキュベートし、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。細胞を、冷たいＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃Ｆ９５１２、Ｓｉｇｍａ）に対する１００μｌのＦＩＴＣ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。次いで、細胞を、フローサイトメータ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｇｕａｖａ（登録商標）ｅａｓｙＣｙｔｅ ５ＨＴ）を用いてＦＡＣＳ分析に供した。
【0106】
図４に示すように、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に対するＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈの結合能力は、ＩＭＭ４７Ｈの結合能力と同等であり、ＩＭＭ０１の結合能力よりわずかにより良好である。
【0107】
実施例５
例示的な組換え融合タンパク質により阻害されるＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用
３μｇ／ｍｌで５０μｌのＳＩＲＰα－ｍＦｃ（マウスＩｇＧ１ Ｆｃと結合された野性型ヒトＳＩＲＰα、配列識別番号３６）を、５０μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、およびＩＭＭ０１（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に混合し、ｈＩｇＧ１－Ｆｃを陰性対照として使用した。得られた混合物を、９６ウェルプレートの、それぞれ１×１０６／ｍｌのＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＭＣＦ－７細胞を５０μｌ含有するウェルに加え、プレートを４℃で４５分間インキュベートした。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、マウスＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃４０５３０７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する１００μｌのＰＥ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させ、ＦＡＣＳ分析に供した。
例示的な組換え融合タンパク質により阻害されるＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用
３μｇ／ｍｌで５０μｌのＳＩＲＰα－ｍＦｃ（マウスＩｇＧ１ Ｆｃと結合された野性型ヒトＳＩＲＰα、配列識別番号３６）を、５０μｌの連続希釈したＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｈ、およびＩＭＭ０１（３倍希釈、３０μｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に混合し、ｈＩｇＧ１－Ｆｃを陰性対照として使用した。得られた混合物を、９６ウェルプレートの、それぞれ１×１０６／ｍｌのＣＤ４７＋ＣＤ２４＋ＭＣＦ－７細胞を５０μｌ含有するウェルに加え、プレートを４℃で４５分間インキュベートした。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、マウスＩｇＧ－Ｆｃ（Ｃａｔ＃４０５３０７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する１００μｌのＰＥ結合二次抗体と共に４５分間インキュベートした。細胞を、２回洗浄し、２００μｌのＰＢＳに再懸濁させ、ＦＡＣＳ分析に供した。
【0108】
図５に示すように、ＣＤ２４およびＣＤ４７の両方に対する二重特異性分子、すなわちＩＭＭ４７０１、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈは、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋細胞と共にインキュベートされた場合、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用に対してＩＭＭ０１より高い阻害効果を示した。
【0109】
実施例６
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＭＣＦ－７細胞を標識するために使用した。
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＭＣＦ－７細胞を標識するために使用した。
【0110】
標的細胞として、６×１０５／ｍｌで５０μｌのＣＦＳＥ標識ＭＣＦ－７細胞と、エフェクタ細胞として、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）を安定的に発現する、６×１０５／ｍｌで１００μｌのＮＫ９２ＭＩ細胞とを、２：１のエフェクタ：標的比で混合した。混合細胞を、５０μｌの連続希釈したＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１、およびＩＭＭ４７０１Ｃ（３倍希釈、１０００ｎｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間培養し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。次いで、細胞培養物を、５μｇ／ｍｌの濃度のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ｃａｔ＃Ｐ４１７０、Ｓｉｇｍａ）に加え、次いでＰＩシグナルのためにＦＡＣＳ分析に供した。以下の式、
％溶解＝（％ＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１、またはＩＭＭ４７０１Ｃで処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
％溶解＝（％ＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１、またはＩＭＭ４７０１Ｃで処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
【0111】
図６によれば、ＩＭＭ４７０１およびＩＭＭ４７０１Ｃは、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＭＣＦ－７細胞に対して、ＩＭＭ４７Ｃより高いＡＤＣＣを誘導した。
【0112】
実施例７
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＲＥＨ細胞を標識するために使用した。
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＲＥＨ細胞を標識するために使用した。
【0113】
標的細胞として、６×１０５／ｍｌで５０μｌのＣＦＳＥ標識ＲＥＨ細胞と、エフェクタ細胞として、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）を安定的に発現する、６×１０５／ｍｌで１００μｌのＮＫ９２ＭＩ細胞とを、２：１のエフェクタ：標的比で混合した。混合細胞を、５０μｌの連続希釈したＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、およびＩＭＭ４７０２Ｈ（３倍希釈、１０００ｎｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間培養し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。次いで、細胞培養物を、５μｇ／ｍｌの濃度のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ｃａｔ＃Ｐ４１７０、Ｓｉｇｍａ）に加え、次いでＰＩシグナルのためにＦＡＣＳ分析に供した。以下の式、
％溶解＝（％ＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、またはＩＭＭ４７０２Ｈで処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
％溶解＝（％ＩＭＭ４７Ｃ、ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０２Ｃ、またはＩＭＭ４７０２Ｈで処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
【0114】
図７によれば、ＩＭＭ４７０１Ｃは、ＣＤ２４＋ＣＤ４７＋ＲＥＨ細胞に対して、ＩＭＭ４７Ｃより高いＡＤＣＣを誘導した。
【0115】
実施例８。
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞を標識するために使用した。
例示的組換え融合タンパク質により誘導される、ＣＤ２４＋ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞に対する高い抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）
１ｍＭのＣＦＳＥ（Ｃａｔ＃２１８８８－２５ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）を１：５００で希釈し、ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞を標識するために使用した。
【0116】
標的細胞として、６×１０５／ｍｌで５０μｌのＣＦＳＥ標識ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞と、エフェクタ細胞として、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）を安定的に発現する、６×１０５／ｍｌで１００μｌのＮＫ９２ＭＩ細胞とを、２：１のエフェクタ：標的比で混合した。混合細胞を、５０μｌの連続希釈したＩＭＭ４７、ＩＭＭ４７０１Ｃ、およびＩＭＭ４７０１（３倍希釈、１０００ｎｇ／ｍｌで開始する）それぞれと共に、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間培養し、ｈＩｇＧ－Ｆｃを陰性対照として使用した。次いで、細胞培養物を、５μｇ／ｍｌの濃度のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ｃａｔ＃Ｐ４１７０、Ｓｉｇｍａ）に加え、次いでＰＩシグナルのためにＦＡＣＳ分析に供した。以下の式、
％溶解＝（％ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０１で処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
％溶解＝（％ＩＭＭ４７０１Ｃ、ＩＭＭ４７０１で処置したＰＩ陽性標的細胞－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）／（１００－％陰性対照で処置したＰＩ陽性標的細胞）×１００
に基づいて、ＡＤＣＣによって引き起こされた細胞溶解の百分率を算出した。
【0117】
図８によれば、ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７０１は、ヒトＣＤ２４発現ＭＣ３８－ｈＣＤ２４細胞に対して、抗ＣＤ２４抗体ＩＭＭ４７より高いＡＤＣＣを誘導した。
【0118】
実施例９。
例示的な組換え融合タンパク質により示される強力な抗腫瘍活性
４０匹の６～８週令のＳＣＩＤマウスそれぞれの左背中に、０．３６ｍｇのベータ－エストラジオール遅延放出錠を埋め込み、３日後にマウス１匹当たり１×１０７ｃｅｌｌのＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞を右の側腹部に皮下注射した。腫瘍体積が１００～１５０ｍｍ３に達した際、マウスを1つの群に8匹ずつ、5つの群にランダムに分け、この日を０日目とした。その日から、マウスそれぞれに、ＰＢＳ、ＩＭＭ４７Ｃ（２．５ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ０１（２．５ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ４７０１Ｃ（３ｍｇ／ｋｇ）、およびＩＭＭ０１＋ＩＭＭ４７Ｃ（２．５ｍｇ／ｋｇ＋２．５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を週２回、４週間与えた。４週目の終わりに投与を停止し、ＰＢＳ群における平均腫瘍体積が３０００ｍｍ３に達して実験を終了するまでマウスを観察した。
腫瘍サイズおよび体重を３～４日毎に測定した。
例示的な組換え融合タンパク質により示される強力な抗腫瘍活性
４０匹の６～８週令のＳＣＩＤマウスそれぞれの左背中に、０．３６ｍｇのベータ－エストラジオール遅延放出錠を埋め込み、３日後にマウス１匹当たり１×１０７ｃｅｌｌのＭＣＦ－７ヒト乳癌細胞を右の側腹部に皮下注射した。腫瘍体積が１００～１５０ｍｍ３に達した際、マウスを1つの群に8匹ずつ、5つの群にランダムに分け、この日を０日目とした。その日から、マウスそれぞれに、ＰＢＳ、ＩＭＭ４７Ｃ（２．５ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ０１（２．５ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ４７０１Ｃ（３ｍｇ／ｋｇ）、およびＩＭＭ０１＋ＩＭＭ４７Ｃ（２．５ｍｇ／ｋｇ＋２．５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を週２回、４週間与えた。４週目の終わりに投与を停止し、ＰＢＳ群における平均腫瘍体積が３０００ｍｍ３に達して実験を終了するまでマウスを観察した。
腫瘍サイズおよび体重を３～４日毎に測定した。
【0119】
腫瘍体積（Ｖ）を（長さ×幅２）／２として算出した。式：ＴＧＩ（％）＝（１－投与群における腫瘍体積変化分／ビヒクル対照群における腫瘍体積変化分）×１００％によって腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）を算出した。
【0120】
試験体制および結果を表１に要約する。
【表1】
【0121】
２８日目に、群１（ＰＢＳ）におけるマウスの平均腫瘍体積は６４６．８７ｍｍ３であった。ビヒクル対照群と比較して、ＩＭＭ４７ＣおよびＩＭＭ０１処置の両方は、腫瘍成長率を減速したが、有意な腫瘍抑制効果は示さなかった。２８日目に、これらの２つの群はそれぞれ、４６３．２６ｍｍ３（Ｔ／Ｃ＝７１．６０％、ＴＧＩ＝３７．３０％、ｐ＝０．００９）、および５６２．２４ ｍｍ３（Ｔ／Ｃ＝８６．９２％、ＴＧＩ＝１７．１９％、ｐ＝０．３７５）の平均腫瘍サイズを有した。ＩＭＭ４７０１ＣおよびＩＭＭ４７Ｃ＋ＩＭＭ０１の投与は、有意な腫瘍抑制効果を示し、２８日目に、２つの群におけるマウスはそれぞれ、４４．６１ｍｍ３（Ｔ／Ｃ＝６．８９％、ＴＧＩ＝１２２．３２％、ｐ＝０．００１）、および１９２．６３ｍｍ３（Ｔ／Ｃ＝２９．８１％、ＴＧＩ＝９２．２２％、ｐ＝０．００１）の腫瘍サイズをそれぞれ有した。
【0122】
表１および図９から、ＩＭＭ４７０１Ｃは効率的かつ効果的なやり方で機能し、より大きいｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を生じ、全体的な腫瘍阻害効果は、ＩＭＭ４７ＣとＩＭＭ０１との併用処置よりさらに良好であったことを見ることができる。
【表2】
【0123】
本願では、１つまたは複数の実施形態に関連して上に説明してきたが、本願はそれらの実施形態に限定されるものではないことが理解されるべきであり、説明はすべての代替、改変、および均等物を包含することを意図するものであり、それらは添付した請求項の趣旨および範囲内に含まれる場合がある。本明細書において言及されるすべての参考文献は、その全体が参照によりさらに引用される。
参考文献１．Ｂａｒｋａｌ，Ａ．Ａ．、Ｂｒｅｗｅｒ，Ｒ．Ｅ．、Ｍａｒｋｏｖｉｃ，Ｍ．、Ｋｏｗａｒｓｋｙ，Ｍ．、Ｂａｒｋａｌ，Ｓ．Ａ．、Ｚａｒｏ，Ｂ．Ｗ．、Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｖ．、Ｈａｔａｋｅｙａｍａ，Ｊ．、Ｄｏｒｉｇｏ，Ｏ．、Ｂａｒｋａｌ，Ｌ．Ｊ．、ら（２０１９年）。ＣＤ２４ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｓｉｇｌｅｃ－１０ ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ ５７２（７７６９）、３９２－３９６２．Ｃｈａｎ，Ｓ．Ｈ．、Ｔｓａｉ，Ｋ．Ｗ．、Ｃｈｉｕ，Ｓ．Ｙ．、Ｋｕｏ，Ｗ．Ｈ．、Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｙ．、Ｊｉａｎｇ，Ｓ．Ｓ．、Ｃｈａｎｇ，Ｋ．Ｊ．、Ｈｕｎｇ，Ｗ．Ｃ．、およびＷａｎｇ，Ｌ．Ｈ．（２０１９年）。Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖｅｌ Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ２４ ａｓ ａｎ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ｔｒｉｐｌｅ－Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １８（１）、１４７－１６１３．Ｗａｎｇ Ｓ、Ｃｈｅｎ Ｋ、Ｌｅｉ Ｑ、Ｍａ Ｐ、Ｙｕａｎ ＡＱ、Ｚｈａｏ Ｙ、Ｊｉａｎｇ Ｙ、Ｆａｎｇ Ｈ、Ｘｉｎｇ Ｓ、Ｆａｎｇ Ｙ、Ｊｉａｎｇ Ｎ、Ｍｉａｏ Ｈ、Ｚｈａｎｇ Ｍ、Ｓｕｎ Ｓ、Ｙｕ Ｚ、Ｔａｏ Ｗ、Ｚｈｕ Ｑ、Ｎｉｅ Ｙ、Ｌｉ Ｎ。Ｔｈｅ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｔ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０２１年Ａｕｇ２４：ｅ１４２９１．ｄｏｉ：１０．１５２５２／ｅｍｍｍ．２０２１１４２９１４．Ｙｉｎ，Ｓ．Ｓ．、およびＧａｏ，Ｆ．Ｈ．（２０２０年）。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｓｃａｐｅ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ２４／Ｓｉｇｌｅｃ－１０．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１、１３２４５．Ｇａｒｄａｉ ＳＪ、ＭｃＰｈｉｌｌｉｐｓ ＫＡ、Ｆｒａｓｃｈ ＳＣ、Ｊａｎｓｓｅｎ ＷＪ、Ｓｔａｒｅｆｅｌｄｔ Ａ、Ｍｕｒｐｈｙ－Ｕｌｌｒｉｃｈ ＪＥ、Ｂｒａｔｔｏｎ ＤＬ、Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡ、Ｍｉｃｈａｌａｋ Ｍ、Ｈｅｎｓｏｎ ＰＭ。Ｃｅｌｌ－ｓｕｒｆａｃｅ ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｉｎｉｔｉａｔｅｓ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｖｉａｂｌｅ ｏｒ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＲＰ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｅ．Ｃｅｌｌ．２００５年；１２３：３２１－３３４６．Ｇｅｎｎａｒｏ、ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ Ｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ ２００３年７．Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、ｅｄ．、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年８．Ｌｅｅ ＷＹ、Ｗｅｂｅｒ ＤＡ、Ｌａｕｒ Ｏ、Ｓｅｖｅｒｓｏｎ ＥＡ、ＭｃＣａｌｌ Ｉ、Ｊｅｎ ＲＰ、Ｃｈｉｎ ＡＣ、Ｗｕ Ｔ、Ｇｅｒｎｅｒｔ ＫＭ、Ｐａｒｋｏｓ ＣＡ．．Ｎｏｖｅｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｎ ＳＩＲＰａ ｔｈａｔ Ｍｅｄｉａｔｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ＣＤ４７．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７年、１７９：７７４１－７７５０９．Ｌｉｕ，Ｃ．、Ｚｈｅｎｇ，Ｓ．、Ｓｈｅｎ，Ｈ．、Ｘｕ，Ｋ．、Ｃｈｅｎ，Ｊ．、Ｌｉ，Ｈ．、Ｘｕ，Ｙ．、Ｘｕ，Ａ．、Ｃｈｅｎ，Ｂ．、Ｋａｋｕ，Ｈ．、ら（２０１３年）。Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ＣＤ２４ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ．Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ ６（１）、９６－１００１０．
Ｎａｋａｍｕｒａら。ＣＤ２４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ｖｉａ ｂｏｔｈ ｔｈｅ Ａｋｔ ａｎｄ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ．２０１７年Ｊｕｎ；３７（６）：３１８９－３２００１１．
Ｏｂｅｉｄ Ｍ、Ｐａｎａｒｅｔａｋｉｓ Ｔ、Ｊｏｚａ Ｎ、Ｔｕｆｉ Ｒ、Ｔｅｓｎｉｅｒｅ Ａ、ｖａｎ Ｅｎｄｅｒｔ Ｐ、Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ、Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ。Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇａｍｍａ－ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ＵＶＣ ｌｉｇｈｔｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２００７年、１４：１８４８－１８５０１２．
Ｏｒｒ ＡＷ、Ｐｅｄｒａｚａ ＣＥ、Ｐａｌｌｅｒｏ ＭＡ、Ｅｌｚｉｅ ＣＡ、Ｇｏｉｃｏｅｃｈｅａ Ｓ、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄ ＤＫ、Ｍｕｒｐｈｙ－Ｕｌｌｒｉｃｈ ＪＥ。Ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ａ ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｈａｔ ｓｉｇｎａｌｓ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００３年、１６１：１１７９－１１８９１３．
Ｏｖｅｒｄｅｖｅｓｔ，Ｊ．Ｂ．、Ｔｈｏｍａｓ，Ｓ．、Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ，Ｇ．、Ｈａｎｓｅｌ，Ｄ．Ｅ．、Ｓｍｉｔｈ，Ｓ．Ｃ．、およびＴｈｅｏｄｏｒｅｓｃｕ，Ｄ．（２０１１年）。ＣＤ２４ ｏｆｆｅｒｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｌｕｎｇ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７１（１１）、３８０２－１１１４．
Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ、Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ、Ｈｏｎｇ Ｋ、Ｍｅｎｇ ＹＧ、Ｒａｅ Ｊ、Ｂｒｉｇｇｓ Ｊ、Ｘｉｅ Ｄ、Ｌａｉ Ｊ、Ｓｔａｄｌｅｎ Ａ、Ｌｉ Ｂ、Ｆｏｘ ＪＡ、Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ。Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ ＦｃγＲＩ， ＦｃγＲＩＩ， ＦｃγＲＩＩＩ， ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧ１ Ｖａｒｉａｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＦｃｇＲ．ＪＢＣ．２００１年、２７６：６５９１－６６０４１５．Ｓｈｉｍ Ｈ．Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０２０年Ｆｅｂ２６；１０（３）：３６０１６．
Ｔｈｅｏｃｈａｒｉｄｅｓ，Ａ．Ｐ．Ａ．、Ｊｉｎ，Ｌ．Ｑ．、Ｃｈｅｎｇ，Ｐ．Ｙ．、Ｐｒａｓｏｌａｖａ，Ｔ．Ｋ．、Ｍａｌｋｏ，Ａ．Ｖ．、Ｈｏ，Ｊ．Ｍ．、Ｐｏｅｐｐｌ，Ａ．Ｇ．、Ｒｏｏｉｊｅｎ，Ｎ．ｖａｎ、Ｍｉｎｄｅｎ，Ｍ．Ｄ．、Ｄａｎｓｋａ，Ｊ．Ｓ．、Ｄｉｃｋ，Ｊ．、Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｃ．Ｙ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１２年、Ｖｏｌ．２０９ Ｎｏ．１０ １８８３－１８９９１７．
Ｔｓｅｎｇ Ｄ、Ｖｏｌｋｍｅｒ ＪＰ、Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢ、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ－Ｔｒｕｊｉｌｌｏ Ｈ、Ｆａｔｈｍａｎ ＪＷ、Ｆｅｒｎｈｏｆｆ ＮＢ、Ｓｅｉｔａ Ｊ、Ｉｎｌａｙ ＭＡ、Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋ、Ｍｉｙａｎｉｓｈｉ Ｍ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ。Ａｎｔｉ－ＣＤ４７ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｐｒｉｍｅｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＰＮＡＳ．２０１３年、１１０：１１１０３－１１１０８１８．
Ｗｕ Ｈ、Ｌｉｕ Ｊ、Ｗａｎｇ Ｚ、Ｙｕａｎ Ｗ、Ｃｈｅｎ Ｌ。Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＤ４７ ｏｒ ＣＤ２４ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．ＣＮＳ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｔｈｅｒ．２０２１年Ｏｃｔ；２７（１０）：１１０５－１１１７．ｄｏｉ： １０．１１１１／ｃｎｓ．１３７１４．Ｅｐｕｂ ２０２１年Ａｕｇ６。ＰＭＩＤ：３４３６３３１９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ８４４６２１２
参考文献１．Ｂａｒｋａｌ，Ａ．Ａ．、Ｂｒｅｗｅｒ，Ｒ．Ｅ．、Ｍａｒｋｏｖｉｃ，Ｍ．、Ｋｏｗａｒｓｋｙ，Ｍ．、Ｂａｒｋａｌ，Ｓ．Ａ．、Ｚａｒｏ，Ｂ．Ｗ．、Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｖ．、Ｈａｔａｋｅｙａｍａ，Ｊ．、Ｄｏｒｉｇｏ，Ｏ．、Ｂａｒｋａｌ，Ｌ．Ｊ．、ら（２０１９年）。ＣＤ２４ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｓｉｇｌｅｃ－１０ ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ ５７２（７７６９）、３９２－３９６２．Ｃｈａｎ，Ｓ．Ｈ．、Ｔｓａｉ，Ｋ．Ｗ．、Ｃｈｉｕ，Ｓ．Ｙ．、Ｋｕｏ，Ｗ．Ｈ．、Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｙ．、Ｊｉａｎｇ，Ｓ．Ｓ．、Ｃｈａｎｇ，Ｋ．Ｊ．、Ｈｕｎｇ，Ｗ．Ｃ．、およびＷａｎｇ，Ｌ．Ｈ．（２０１９年）。Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖｅｌ Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ２４ ａｓ ａｎ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ｔｒｉｐｌｅ－Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １８（１）、１４７－１６１３．Ｗａｎｇ Ｓ、Ｃｈｅｎ Ｋ、Ｌｅｉ Ｑ、Ｍａ Ｐ、Ｙｕａｎ ＡＱ、Ｚｈａｏ Ｙ、Ｊｉａｎｇ Ｙ、Ｆａｎｇ Ｈ、Ｘｉｎｇ Ｓ、Ｆａｎｇ Ｙ、Ｊｉａｎｇ Ｎ、Ｍｉａｏ Ｈ、Ｚｈａｎｇ Ｍ、Ｓｕｎ Ｓ、Ｙｕ Ｚ、Ｔａｏ Ｗ、Ｚｈｕ Ｑ、Ｎｉｅ Ｙ、Ｌｉ Ｎ。Ｔｈｅ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｔ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０２１年Ａｕｇ２４：ｅ１４２９１．ｄｏｉ：１０．１５２５２／ｅｍｍｍ．２０２１１４２９１４．Ｙｉｎ，Ｓ．Ｓ．、およびＧａｏ，Ｆ．Ｈ．（２０２０年）。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｓｃａｐｅ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ２４／Ｓｉｇｌｅｃ－１０．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１、１３２４５．Ｇａｒｄａｉ ＳＪ、ＭｃＰｈｉｌｌｉｐｓ ＫＡ、Ｆｒａｓｃｈ ＳＣ、Ｊａｎｓｓｅｎ ＷＪ、Ｓｔａｒｅｆｅｌｄｔ Ａ、Ｍｕｒｐｈｙ－Ｕｌｌｒｉｃｈ ＪＥ、Ｂｒａｔｔｏｎ ＤＬ、Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡ、Ｍｉｃｈａｌａｋ Ｍ、Ｈｅｎｓｏｎ ＰＭ。Ｃｅｌｌ－ｓｕｒｆａｃｅ ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｉｎｉｔｉａｔｅｓ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｖｉａｂｌｅ ｏｒ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＲＰ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｅ．Ｃｅｌｌ．２００５年；１２３：３２１－３３４６．Ｇｅｎｎａｒｏ、ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ Ｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ ２００３年７．Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、ｅｄ．、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年８．Ｌｅｅ ＷＹ、Ｗｅｂｅｒ ＤＡ、Ｌａｕｒ Ｏ、Ｓｅｖｅｒｓｏｎ ＥＡ、ＭｃＣａｌｌ Ｉ、Ｊｅｎ ＲＰ、Ｃｈｉｎ ＡＣ、Ｗｕ Ｔ、Ｇｅｒｎｅｒｔ ＫＭ、Ｐａｒｋｏｓ ＣＡ．．Ｎｏｖｅｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｎ ＳＩＲＰａ ｔｈａｔ Ｍｅｄｉａｔｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ＣＤ４７．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７年、１７９：７７４１－７７５０９．Ｌｉｕ，Ｃ．、Ｚｈｅｎｇ，Ｓ．、Ｓｈｅｎ，Ｈ．、Ｘｕ，Ｋ．、Ｃｈｅｎ，Ｊ．、Ｌｉ，Ｈ．、Ｘｕ，Ｙ．、Ｘｕ，Ａ．、Ｃｈｅｎ，Ｂ．、Ｋａｋｕ，Ｈ．、ら（２０１３年）。Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ＣＤ２４ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ．Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ ６（１）、９６－１００１０．
Ｎａｋａｍｕｒａら。ＣＤ２４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ｖｉａ ｂｏｔｈ ｔｈｅ Ａｋｔ ａｎｄ ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ．２０１７年Ｊｕｎ；３７（６）：３１８９－３２００１１．
Ｏｂｅｉｄ Ｍ、Ｐａｎａｒｅｔａｋｉｓ Ｔ、Ｊｏｚａ Ｎ、Ｔｕｆｉ Ｒ、Ｔｅｓｎｉｅｒｅ Ａ、ｖａｎ Ｅｎｄｅｒｔ Ｐ、Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ、Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ。Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇａｍｍａ－ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ＵＶＣ ｌｉｇｈｔｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２００７年、１４：１８４８－１８５０１２．
Ｏｒｒ ＡＷ、Ｐｅｄｒａｚａ ＣＥ、Ｐａｌｌｅｒｏ ＭＡ、Ｅｌｚｉｅ ＣＡ、Ｇｏｉｃｏｅｃｈｅａ Ｓ、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄ ＤＫ、Ｍｕｒｐｈｙ－Ｕｌｌｒｉｃｈ ＪＥ。Ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ａ ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｈａｔ ｓｉｇｎａｌｓ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００３年、１６１：１１７９－１１８９１３．
Ｏｖｅｒｄｅｖｅｓｔ，Ｊ．Ｂ．、Ｔｈｏｍａｓ，Ｓ．、Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ，Ｇ．、Ｈａｎｓｅｌ，Ｄ．Ｅ．、Ｓｍｉｔｈ，Ｓ．Ｃ．、およびＴｈｅｏｄｏｒｅｓｃｕ，Ｄ．（２０１１年）。ＣＤ２４ ｏｆｆｅｒｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｌｕｎｇ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７１（１１）、３８０２－１１１４．
Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ、Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ、Ｈｏｎｇ Ｋ、Ｍｅｎｇ ＹＧ、Ｒａｅ Ｊ、Ｂｒｉｇｇｓ Ｊ、Ｘｉｅ Ｄ、Ｌａｉ Ｊ、Ｓｔａｄｌｅｎ Ａ、Ｌｉ Ｂ、Ｆｏｘ ＪＡ、Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ。Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ ＦｃγＲＩ， ＦｃγＲＩＩ， ＦｃγＲＩＩＩ， ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧ１ Ｖａｒｉａｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＦｃｇＲ．ＪＢＣ．２００１年、２７６：６５９１－６６０４１５．Ｓｈｉｍ Ｈ．Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０２０年Ｆｅｂ２６；１０（３）：３６０１６．
Ｔｈｅｏｃｈａｒｉｄｅｓ，Ａ．Ｐ．Ａ．、Ｊｉｎ，Ｌ．Ｑ．、Ｃｈｅｎｇ，Ｐ．Ｙ．、Ｐｒａｓｏｌａｖａ，Ｔ．Ｋ．、Ｍａｌｋｏ，Ａ．Ｖ．、Ｈｏ，Ｊ．Ｍ．、Ｐｏｅｐｐｌ，Ａ．Ｇ．、Ｒｏｏｉｊｅｎ，Ｎ．ｖａｎ、Ｍｉｎｄｅｎ，Ｍ．Ｄ．、Ｄａｎｓｋａ，Ｊ．Ｓ．、Ｄｉｃｋ，Ｊ．、Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｃ．Ｙ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１２年、Ｖｏｌ．２０９ Ｎｏ．１０ １８８３－１８９９１７．
Ｔｓｅｎｇ Ｄ、Ｖｏｌｋｍｅｒ ＪＰ、Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢ、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ－Ｔｒｕｊｉｌｌｏ Ｈ、Ｆａｔｈｍａｎ ＪＷ、Ｆｅｒｎｈｏｆｆ ＮＢ、Ｓｅｉｔａ Ｊ、Ｉｎｌａｙ ＭＡ、Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋ、Ｍｉｙａｎｉｓｈｉ Ｍ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ。Ａｎｔｉ－ＣＤ４７ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｐｒｉｍｅｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＰＮＡＳ．２０１３年、１１０：１１１０３－１１１０８１８．
Ｗｕ Ｈ、Ｌｉｕ Ｊ、Ｗａｎｇ Ｚ、Ｙｕａｎ Ｗ、Ｃｈｅｎ Ｌ。Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＤ４７ ｏｒ ＣＤ２４ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．ＣＮＳ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｔｈｅｒ．２０２１年Ｏｃｔ；２７（１０）：１１０５－１１１７．ｄｏｉ： １０．１１１１／ｃｎｓ．１３７１４．Ｅｐｕｂ ２０２１年Ａｕｇ６。ＰＭＩＤ：３４３６３３１９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ８４４６２１２
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-02-09
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片と、ＣＤ４７結合ペプチドとを備え、
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、重鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖可変領域を有し、前記重鎖可変領域は、配列識別番号７、８、および９に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変ＣＤＲ１（ＨＶ－ＣＤＲ１）、ＨＶ－ＣＤＲ２、およびＨＶ－ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列識別番号１０、１１、および１２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変ＣＤＲ１（ＬＶ－ＣＤＲ１）、ＬＶ－ＣＤＲ２、およびＬＶ－ＣＤＲ３を含み、前記重鎖定常領域は、ＦｃＲ結合親和性を有し、前記重鎖可変領域のＣ末端に連結され、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、配列識別番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）細胞外ドメインを有し、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端に連結された、
組換え融合タンパク質。
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、重鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖可変領域を有し、前記重鎖可変領域は、配列識別番号７、８、および９に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変ＣＤＲ１（ＨＶ－ＣＤＲ１）、ＨＶ－ＣＤＲ２、およびＨＶ－ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列識別番号１０、１１、および１２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変ＣＤＲ１（ＬＶ－ＣＤＲ１）、ＬＶ－ＣＤＲ２、およびＬＶ－ＣＤＲ３を含み、前記重鎖定常領域は、ＦｃＲ結合親和性を有し、前記重鎖可変領域のＣ末端に連結され、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、配列識別番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）細胞外ドメインを有し、
前記ＣＤ４７結合ペプチドは、前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端に連結された、
組換え融合タンパク質。
【請求項2】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の少なくとも１つのパラトープは、前記パラトープを構成する前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端にて前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項１に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項3】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片の各パラトープは、前記パラトープを構成する前記重鎖可変領域または前記軽鎖可変領域のＮ末端にて前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項２に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項4】
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、ｉ）それぞれ配列識別番号２および３、ｉｉ）それぞれ配列識別番号２および４、またはｉｉｉ）それぞれ配列識別番号５および６に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項5】
前記重鎖定常領域は、配列識別番号１３の前記アミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項6】
前記軽鎖可変領域の前記Ｃ末端に連結された、配列識別番号１４の前記アミノ酸配列を有する軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項7】
前記抗ＣＤ２４抗体またはそれの抗体断片は、リンカを介して前記ＣＤ４７結合ペプチドに連結された、請求項１～６のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項8】
前記リンカは、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３－（配列識別番号１５）、－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）２－（配列識別番号１６）、または－（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）４－（配列識別番号１７）である、請求項７に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項9】
ｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２０の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２２の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉｉ）配列識別番号２４の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２６の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、または
ｉｖ）配列識別番号２８の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号３０の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片
を備える、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
ｉｉ）配列識別番号１８の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２２の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、
ｉｉｉ）配列識別番号２４の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号２６の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片、または
ｉｖ）配列識別番号２８の前記アミノ酸配列を有する抗ＣＤ２４重鎖可変領域－重鎖定常領域断片、および配列識別番号３０の前記アミノ酸配列を有するＣＤ４７結合ペプチド－リンカ－抗ＣＤ２４軽鎖可変領域－軽鎖定常領域断片
を備える、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質をエンコードする核酸分子。
【請求項11】
請求項１０に記載の核酸分子を含む発現ベクタ。
【請求項12】
請求項１１に記載の発現ベクタを含む宿主細胞。
【請求項13】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項14】
それを必要とする対象の、ＣＤ４７および／またはＣＤ２４の過剰発現と関連付けられる疾患の処置における使用のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記疾患は、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、胆管癌、胃腺癌、および神経膠芽腫からなる群より選択される、請求項１４に記載の使用のための医薬組成物。
【外国語明細書】