特開 2023-58582 神経芽細胞腫の治療における使用のためのオーロラＡキナーゼ阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023058582

(43)【公開日】2023-04-25

(54)【発明の名称】神経芽細胞腫の治療における使用のためのオーロラＡキナーゼ阻害剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4545 20060101AFI20230418BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230418BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230418BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230418BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4545

A61P35/00

A61P43/00 111

A61P25/00

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023016982

(22)【出願日】2023-02-07

(62)【分割の表示】P 2021529009の分割

【原出願日】2019-11-22

(31)【優先権主張番号】62/773,367

(32)【優先日】2018-11-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(72)【発明者】

【氏名】ダウレス，ミッシェル スザンヌ

(72)【発明者】

【氏名】ゴン，シュエチエン

(72)【発明者】

【氏名】スタンカト，ルイス フランク

(57)【要約】      （修正有）

【課題】治療を必要とする患者の神経芽細胞腫を治療するための方法、および化合物を提供する。
【解決手段】患者における神経芽細胞腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者における神経芽細胞腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記化合物が（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記化合物が（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：２－メチルプロパン－２－アミン（１：１）塩である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記化合物が（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：アミン（１：１）塩である、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

患者における神経芽細胞腫を治療する方法であって、それを必要とする患者に、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項6】

前記組成物が、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記組成物が、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：２－メチルプロパン－２－アミン（１：１）塩である化合物を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項8】

前記組成物が、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：アミン（１：１）塩である化合物を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項9】

神経芽細胞腫の治療における使用のための、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である、請求項９に記載の使用のための化合物。

【請求項11】

（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：２－メチルプロパン－２－アミン（１：１）塩である、請求項９に記載の使用のための化合物。

【請求項12】

（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：アミン（１：１）である、請求項９に記載の化合物。

【請求項13】

神経芽細胞腫の治療のための薬剤の製造のための、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項14】

前記化合物が、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸である、請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

前記化合物が（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸２－メチルプロパン－２－アミン（１：１）塩である、請求項１３に記載の使用。

【請求項16】

前記化合物が（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸アミン（１：１）塩である、請求項１３に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

本発明は、神経芽細胞腫の治療のためのオーロラＡキナーゼ阻害剤およびその塩の使用に関する。

【0002】

神経芽細胞腫は小児で最も一般的な固形腫瘍の１つであり、北米では毎年６５０を超える神経芽細胞腫の症例が診断されている。神経芽細胞腫は、一般に低リスクおよび高リスクと呼ばれる、２つの定義された患者サブセットに細分することができる。低リスクの神経芽細胞腫は通常、１８月齢未満の小児に見られ、疾病負荷が限られているため、予後は良好である。ただし、高リスクの神経芽細胞腫は一般に１８か月以上の子供に発生し、骨組織に転移することが多く、予後不良をもたらす。マルチモーダル治療戦略の進歩により神経芽細胞腫患者の転帰は改善されたが、高リスクカテゴリーの患者の生存率は依然として低く、診断後５年での生存率は５０％未満である。

【0003】

高リスク神経芽細胞腫は、Ｎ－ｍｙｃ癌原遺伝子タンパク質（Ｎ－ＭＹＣ）をコードするＭＹＣＮ遺伝子に関連している。完全には理解されていないが、Ｎ－ＭＹＣおよびオーロラＡキナーゼは相互作用しているようであり、オーロラＡキナーゼの発現および増幅は、Ｎ－ＭＹＣを安定化しおよび／またはその分解を遅らせ、その結果Ｎ－ＭＹＣレベルの上昇を引き起こすと考えられている。Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ、Ｍ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｕｒｏｒａ Ｋｉｎａｓｅｓ ａｓ Ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ－Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ Ｃｅｌｌｓ”，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ，２０１４，９（９）ｅ１０８７５８．

【0004】

オーロラＡキナーゼ阻害剤は当技術分野で知られている（例えば、式Ｉの化合物を開示するＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１６／０７７１９１を参照されたい（下記参照）。オーロラＡ選択的阻害剤であるアリセルチブおよび汎オーロラ阻害剤であるトザセルチブを含む特定のオーロラキナーゼ阻害剤の使用は、容認できないほど高レベルの好中球減少症および他の毒性作用と関連している。

【0005】

神経芽細胞腫、特に高リスク神経芽細胞腫を治療するための新しいアプローチおよび薬物療法の必要性が存在する。さらに、オーロラキナーゼ、特にオーロラＡキナーゼを阻害し、Ｎ－ＭＹＣの発現および／または活性を低下させる方法を提供する必要がある。本発明は、これらの必要性に対処し、神経芽細胞腫を治療する方法を提供する。

【0006】

一形態では、本発明は、治療を必要とする患者の神経芽細胞腫を治療するための方法を提供する。好ましくは、本発明は、治療を必要とする患者の高神経芽細胞腫を治療するための方法を提供する。この方法は、有効量の、（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸（以下に、式Ｉとして示す）である化合物、または式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩を、患者に投与することを含む。一実施形態では、式Ｉの化合物は、遊離酸として提供される。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、塩基付加塩として提供される。１つの好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、（（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：２－メチル－２－プロパンアミン（１：１））である、２－メチルプロパン－２－アンモニウム塩（エルブミン塩またはｔｅｒｔ－ブチルアミン塩としても知られている）として提供される。別の実施形態において、式Ｉの化合物は、アンモニウム塩（（２Ｒ，４Ｒ）－１－［（３－クロロ－２－フルオロ－フェニル）メチル］－４－［［３－フルオロ－６－［（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－２－ピリジル］メチル］－２－メチル－ピペリジン－４－カルボン酸：アミン（１：１）塩）として提供される。

【化1】

【0007】

別の形態において、本発明は、神経芽細胞腫の治療、好ましくは高リスクの神経芽細胞腫の治療に使用するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤のうちの１つ以上とを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、組成物は、遊離酸である式Ｉの化合物を含む。別の実施形態では、組成物は、塩基付加塩、好ましくは、２－メチルプロパン－２－アンモニウム塩またはアンモニウム塩、より好ましくはメチルプロパン－２－アンモニウム塩として式Ｉの化合物を含む。

【0008】

さらに、本発明は、神経芽細胞腫の治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明は、神経芽細胞腫の治療のための薬剤を製造するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。一実施形態では、化合物は遊離酸として提供される。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、塩基付加塩として提供される。１つの好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、２－メチルプロパン－２－アンモニウム塩として提供される。さらに別の実施形態では、式Ｉの化合物は、アンモニウム塩として提供される。

【0009】

式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、神経芽細胞腫の治療を必要とする患者のための標準治療と組み合わせて使用することができる。標準治療には、腫瘍の全部または一部の手術または切除、放射線療法、幹細胞移植、化学療法剤、分化剤の投与、および免疫療法のうちの１つ以上が含まれる。

【0010】

式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と組み合わせて、またはそれと一緒に投与することができる追加の化学療法剤の例には、アルキル化剤（シクロホスファミド、テモゾロミド、および塩酸メルファラン）、白金剤（カルボプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチン）、アントラサイクリン（ドキソルビシン塩酸塩）、トポイソメラーゼＩ阻害剤（イリノテカンおよびトポテカン）、およびビンカアルカロイド（硫酸ビンクリスチン）が含まれる。分化剤にはイソトレチノイン（１３－ｃｉｓ－レチノイン酸）が含まれ、免疫療法剤にはＧＤ２モノクローナル抗体（ジヌツキシマブ）などのモノクローナル抗体が含まれる。式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、ならびに１つ以上の追加の化学療法剤、分化剤および／または免疫療法剤は、神経芽細胞腫を治療するために同時に、別々に、または連続して投与することができる。

【0011】

本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、式Ｉの化合物の塩を指す。薬学的に許容される塩の例およびそれらの調製方法は、Ｓｔａｈｌ．Ｐ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ”，２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、（２０１１）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６（１），１～１９、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１９８６，３３：２０１～２１７、およびＢａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ”，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，４（５）４２７～４３５に見出すことができる。

【0012】

式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、医薬組成物の一部として投与するために配合することができる。好ましい医薬組成物は、経口投与のための錠剤もしくはカプセル剤、経口投与のための溶液、または注射可能な溶液として製剤化され得る。錠剤、カプセル、または溶液は、治療を必要とする患者の神経芽細胞腫を治療するのに有効な量の、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含むことができる。好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。したがって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される添加剤と組み合わせることができる。医薬組成物について本明細書で使用される「薬学的に許容される添加剤（複数可）」という用語は、組成物または配合物の他の添加剤と適合性であり、かつ患者に有害ではない担体、希釈剤、および賦形剤のうちの１つ以上を指す。医薬組成物およびそれらの調製のためのプロセスの例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，Ｌｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．，２２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，（２０１２）に見出され得る。薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤の非限定的な例には、生理食塩水、水、デンプン、糖、マンニトール、およびシリカ誘導体、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、およびポリビニルピロリドンなどの結合剤、カオリンおよびベントナイト、ならびにポリエチルグリコールが含まれる。

【0013】

「有効量」とは、研究者、獣医、医師、または他の臨床家により求められている、組織、システム、動物、哺乳動物、またはヒトの、生物学的もしくは医学的応答、または所望の治療効果を引き出す、式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物の量を意味する。特定の実施形態において、有効量は、投与された場合、神経芽細胞腫の進行を遅らせる、停止する、もしくは逆転させるのに有効である、または患者の神経芽細胞腫細胞の成長もしくは増殖を遅らせるもしくは停止させる、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩の量を指す。

【0014】

実際に投与され、患者の組織、システム、または患者の生物学的もしくは医学的応答引き出すであろう、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される本発明の実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および応答、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連する状況下で医師により決定される。一日当たりの用量は通常０．１～１００ｍｇの範囲内である。いくつかの例において、この範囲の下限を下回る用量レベルで十分過ぎる場合があるが、依然としてより大きな用量が用いられ得る場合もある。好ましい用量は１～８０ｍｇの範囲内であり、より好ましくは１～５０ｍｇ、さらにより好ましくは１～３０ｍｇの間、なおもさらにより好ましくは１から２５ｍｇの間である。用量は、１日１回、２回、３回、またはそれ以上投与できる。一実施形態では、本発明の化合物は、１日２回（ＢＩＤ）経口投与される用量あたり１５ｍｇまたは２５ｍｇの用量で投与することができる。

【0015】

本明細書中で使用される場合、「患者」という用語は、ヒトまたはヒト以外の哺乳動物を指す。より詳細には、「患者」という用語はヒトを指す。

【0016】

「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（または「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療」（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ））という用語は、神経芽細胞腫などの症状、障害、状態または疾患の進行または重症度を緩徐化すること、中断すること、阻止すること、抑制すること、低減すること、または逆転することを含むプロセスを指す。

【0017】

本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下に示された意味を有する。「ＡＴＣＣ」は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を指す。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を指す。「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコの改良イーグル培地を指す。「ＤＮＡ」はデオキシリボ核酸を指す。「ＥＭＥＭ」はイーグル最小必須培地を指す。「Ｆ１２」はハムのＦ１２媒体を指す。「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指す。「ＨＢＳＳ」はハンクの平衡塩類溶液を指す。「ＨＳＲＲＢ」は、Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｂａｎｋを指す。「ＪＣＲＢ」は、Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓを指す。「ＭＥＭ」は最小必須培地を指す。「ＮＢＬ」は神経芽細胞腫を指す。「ＮＥＡＡ」は非必須アミノ酸を指す。「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指す。「ＲＰＭＩ」とは、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを指す。「ＳＣＩＤ」は重症複合免疫不全症マウスを指す。

【0018】

式Ｉの化合物ならびに２－メチルプロパン－２－アンモニウムおよびアンモニア塩を含むその薬学的に許容される塩は、ＵＳ９，６３７，４７４に開示される合成方法に従って調製することができる。

【0019】

生物学的アッセイ
単層抗増殖アッセイ
オーロラＡ阻害剤の効力の尺度の１つは、細胞周期の停止と分裂死による培養中の癌細胞の増殖を阻害する能力である。ＮＢＬ細胞株におけるオーロラＡ阻害剤の抗増殖活性は、オーロラＡ阻害剤に対する臨床反応性を示している可能性がある。ＮＢＬ腫瘍細胞株は凍結ストックから回収され、細胞培養フラスコで１～２継代培養される。ＮＢＬ腫瘍細胞株には、ＣＨＰ－２１２、ＧＯＴＯ、ＩＭＲ－３２、ＮＢ１６、ＮＨ－６、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ、ＳＫ－Ｎ－ＤＺ、ＳＫ－Ｎ－Ｆ１、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＳＫ－Ｎ－ＳＨおよびＴＧＷが含まれ、詳細を表１に示す。

【表1】

【0020】

オーロラＡ阻害剤の抗増殖活性は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）アッセイで測定できる。式Ｉの化合物で処理する前に、細胞を完全増殖培地中で、各細胞株について所定の最適密度で、白い壁の透明な底のマイクロタイタープレートにプレーティングする。プレーティングの１６時間後、式Ｉの化合物を添加する。化合物添加後２回の細胞倍加時間で、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬をメーカーのプロトコルに従って調製し、各ウェルに添加する。プレートを室温で１０分間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイの製造元のプロトコルである、Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７５７１に従って発光プレートリーダーで読み取る。

【0021】

オーロラＡ阻害剤の抗増殖活性は、処理後の細胞数を数えることによっても測定できる。このアッセイでは、完全増殖培地中のＮＢＬ細胞株ＳＫ－Ｎ－ＤＺ、ＳＫ－Ｎ－Ｆ１、およびＫＥＬＬＹを、ウェルあたり５，０００細胞で黒い壁の透明な底のマイクロタイタープレートに播種する。プレーティングの１６時間後、式Ｉの化合物を７２時間添加する。次に、細胞を３．７％ホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ ＃Ｆ－１２６８）で固定し、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（Ｒｏｃｈｅ ＃９２５２２０２０）を含むＰＢＳで１０分間透過処理した後、ＤＮＡをＰＢＳで１：５０００に希釈したＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｍｏｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ＃Ｈ－２１４９２）で染色する。染色されたプレートを、ターゲット活性化バイオアプリケーションを使用してＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＮＸＴ（登録商標）スクリーニングプラットフォーム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）でスキャンし、ウェルあたりの細胞の尺度であるフィールドあたりの核を定量化する。両方のアッセイについて、絶対ＥＣ_５０値は、式Ｉの１０点段階希釈曲線から報告される。

【0022】

表２に示すように、小児ＮＢＬ細胞株は、式Ｉの化合物によるインビトロ治療に非常に敏感である。これは、式Ｉの化合物がさまざまな神経芽細胞腫細胞株の細胞増殖を阻害するのに効果的であることを示している。

【表2】

【0023】

神経芽細胞腫異種移植腫瘍モデルにおける単剤の効力
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の効力は、神経芽細胞腫のインビボマウスモデルにおいて評価することができる。２－メチル－２－プロパンアミン塩（３４．５ｍｇ／ｋｇ）としての式Ｉの化合物は、２８日のＢＩＤ投与スケジュールを使用して、細胞由来異種移植片（ＣＤＸ）を有するヌードまたはＣ．Ｂ－１７ ＳＣＩＤマウスに経口投与することができる。腫瘍体積および体重は、週に２回測定することができる。

【0024】

有効薬学的成分に応答した腫瘍体積の減少を測定するために、以下のプロトコルを使用することができる。培養中のヒトＮＢＬ癌細胞を増殖させ、繰り返し採取し、ＨＢＳＳとＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１溶液２００μＬ中の５×１０^６細胞を、雌マウス（２０～２４ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右後部側腹部に皮下注射する。次の細胞株／マウス系統の組み合わせが使用される：無胸腺ヌードマウスのＳＨ－ＳＹ５Ｙ（ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ－２２２６）、Ｃ．Ｂ．－１７ＳＣＩＤマウスのＫＥＬＬＹ（Ｓｉｇｍａ－＃９２１１０４１１）、およびＣ．Ｂ．－１７ＳＣＩＤマウスのＩＭＲ－３２（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ－１２７）。

【0025】

式Ｉの化合物を、ｐＨ２の２５ｍＭリン酸緩衝液中の２０％の２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン中の２－メチル－２－プロパンアミン塩として配合し、３４．５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで２８日間経口投与する。体重と腫瘍体積を週に２回測定する。

【0026】

２－メチル－２－プロパンアミン塩としての式Ｉの化合物は、表３に提供されるような、回帰値％を有することが見出される。

【表3】

【0027】

これらの結果は、２－メチル－２－プロパンアミン塩としての式Ｉの化合物が、ヒトＮＢＬ異種移植モデルにおいて有意な抗腫瘍活性を示すことを示している。２－メチル－２－プロパンアミン塩としての式Ｉの化合物は、試験された小児ＮＢＬインビボマウスモデルの１００％（３／３）において単剤として有効であり、結果は安定した疾患から完全な応答に渡る。

【手続補正書】

【提出日】2023-03-08

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

明細書に記載の発明。

【外国語明細書】