ホーム > 特許ランキング > 葡萄王生技股▲フン▼有限公司
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023063198
(43)【公開日】2023-05-09
(54)【発明の名称】タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 35/747 20150101AFI20230427BHJP
A61P 25/34 20060101ALI20230427BHJP
【ＦＩ】
A61K35/747
A61P25/34
【審査請求】有
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021202524
(22)【出願日】2021-12-14
(31)【優先権主張番号】110139393
(32)【優先日】2021-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW
(71)【出願人】
【識別番号】519298765
【氏名又は名称】葡萄王生技股▲フン▼有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】陳 勁初
(72)【発明者】
【氏名】陳 炎▲錬▼
(72)【発明者】
【氏名】林 詩偉
(72)【発明者】
【氏名】陳 ▲彦▼博
(72)【発明者】
【氏名】王 ▲啓▼憲
(72)【発明者】
【氏名】侯 毓欣
(72)【発明者】
【氏名】石 仰慈
(72)【発明者】
【氏名】林 ▲静▼▲ウェン▼
(72)【発明者】
【氏名】陳 雅君
(72)【発明者】
【氏名】江 佳琳
(72)【発明者】
【氏名】蔡 侑珊
(72)【発明者】
【氏名】▲呉▼ 姿和
【テーマコード（参考）】
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC56
4C087MA52
4C087NA14
4C087ZA02
(57)【要約】
【課題】タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物に関する。
【解決手段】発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含み、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるためのタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【選択図】図３
【解決手段】発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含み、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるためのタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
有効用量の発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３を有効成分として含み、前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、２０１８年１月１２日に中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ）に寄託され、受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３である、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるためのタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項2】
前記経口組成物を投与されていない前記喫煙被験者に比べると、前記経口組成物を投与された前記喫煙被験者の前記尿の前記ニコチン代謝物質の前記含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項3】
前記ニコチン代謝物質は、コチニン及び/又はトランス３-ヒドロキシコチニンを含む請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項4】
前記有効用量は、７００ｍｇ/６０ｋｇ・体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ；ｂｗ）/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間である請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項5】
前記経口組成物は、前記喫煙被験者に、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される請求項４に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項6】
有効用量の前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含み、且つ前記有効用量が毎日７００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であるタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項7】
前記経口組成物は、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させる請求項６に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項8】
前記経口組成物を投与されていない前記喫煙被験者に比べると、前記経口組成物を投与された前記喫煙被験者の前記尿の前記ニコチン代謝物質の前記含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する請求項６に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項9】
有効用量の前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含み、且つ前記有効用量が１０１０コロニー形成単位（ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ；ＣＦＵ）/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～１０１２ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であるタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項10】
前記経口組成物は、喫煙被験者に、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される請求項９に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物に関し、特に、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を含むタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
タバコは、燃焼されると、９０種類以上の既知の発癌物質を含む、７０００種類以上の化学物質を釈放することができ、且つこれらの化学物質が喫煙者の身体を損害するだけではなく、他人の健康にも危害を及ぼす。しかしながら、タバコにおけるニコチンが嗜癖性を持つので、喫煙者は、タバコ嗜癖性から脱離しにくい。喫煙者がタバコを吸う場合、ニコチンは、数秒以内に肺から血液を介して脳に伝達されて、喫煙者に興奮及び/又は快適を感じさせることができる。一旦、血液におけるニコチン含有量が低下すると、喫煙者には、不安、過敏、集中力低下、鬱病、不眠症、咳及び頭痛等を含むニコチンの離脱症状が発生しやすい。次に、脳のニコチンに対する耐性が発生することで、喫煙者は、喫煙量を増加させなければ、ニコチンの離脱症状を軽減させることはできない。
【0003】
市販の禁煙用薬は、ニコチンの離脱症状を緩及びすることで、喫煙者の禁煙を援助し、ニコチン代替薬物及び非ニコチン代替薬物に分けられる。ニコチン代替薬物は、異なる剤形（トローチ、吸入剤、鼻噴霧及び/又はパッチ）で喫煙者に低用量のニコチンを提供して、用量を段階的に調整することで、喫煙者のニコチンに対する依存性を次第に低下させる。非ニコチン代替薬物は、喫煙量の低下時に発生したニコチンの離脱症状を軽減させる以外、喫煙による興奮感及び/又は快適感を低下させることもできる。しかしながら、上記禁煙用薬には、多くの副作用を有する。
【0004】
これに鑑みて、上記問題を解決するために、副作用が少なく且つタバコ嗜癖性を低下可能な経口組成物が至急に望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
そのため、本発明の一態様では、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるための、タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提供する。
【0006】
本発明のもう一つの態様では、有効用量の発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３を有効成分として含む、タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明の上記態様によると、有効用量の発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を有効成分として含んでよいが、それらに限定されなく、前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、例えば、２０１８年１月１２日に中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ）に寄託され、受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３であるものであってよい、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるためのタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提出する。
【0008】
本発明の上記の実施例によると、経口組成物を投与されていない喫煙被験者に比べると、経口組成物を投与された喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する。
【0009】
本発明の上記の実施例によると、ニコチン代謝物質は、コチニン及び/又はトランス３-ヒドロキシコチニンを含んでよいが、それらに限定されない。
【0010】
本発明の上記の実施例によると、有効用量は、例えば、７００ｍｇ/６０ｋｇ・体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ；ｂｗ）/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であってよい。
【0011】
本発明の上記の実施例によると、経口組成物は、喫煙被験者に、例えば、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される。
【0012】
本発明の別の態様によると、有効用量の発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含んでよいが、それらに限定されなく、且つ有効用量が例えば毎日７００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であってよいタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提出する。
【0013】
本発明の上記の実施例によると、経口組成物は、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させる。
【0014】
本発明の上記の実施例によると、経口組成物は、喫煙被験者に投与された後で、経口組成物を投与されていないものに比べると、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する。
【0015】
本発明のもう一つの態様によると、有効用量の発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）を有効成分として含んでよいが、それらに限定されなく、且つ有効用量が例えば、１０１０コロニー形成単位（ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ；ＣＦＵ）/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～１０１２ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であってよいタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提出する。
【0016】
本発明の上記の実施例によると、経口組成物は、喫煙被験者に、例えば、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される。
【発明の効果】
【0017】
本発明のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を喫煙被験者に適用すると、喫煙被験者の喫煙量が低下し、且つニコチンの離脱症状が発生しなく、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３がタバコ嗜癖性を低下させる効果を有することが判明される。
下記の添付図面についての詳細な説明は、本発明の上記及び他の目的、特徴、メリットと実施例をより分かりやすくするためのものである。
下記の添付図面についての詳細な説明は、本発明の上記及び他の目的、特徴、メリットと実施例をより分かりやすくするためのものである。
【図面の簡単な説明】
【0018】
【図1】本発明の一実施例による第１群の実験フローを示す図である。
【図2】本発明の一実施例による第２群の実験フローを示す図である。
【図3】本発明の一実施例による異なる処理群別のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率を示す。
【図4】本発明の一実施例による被験者の異なる時間でのＣＥＳ-Ｄ合計点を示す。
【発明を実施するための形態】
【0019】
文脈に明らかに示されない限り、本発明で言及された単数形の「一」、「一つ」及び「前記」は、複数の引用を含む。特に特定的な記載がない限り、数値範囲（例えば、１０％～１１％のＡ）は、何れも上、下限値（つまり、１０％≦Ａ≦１１％）を含む。数値範囲として、下限値（例えば、０．２％よりも低いＢ、又は０．２％以下のＢ）が規定されていないとは、その下限値が０である可能性がある（つまり、０％≦Ｂ≦０．２％）。上記用語は、本発明を限制するためのものではなく、本発明を説明及び理解するためのものである。
【0020】
前記のように、本発明は、有効用量の発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３を有効成分として含んでよいが、それに限定されないタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を提供する。
【0021】
一実施例において、この発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（菌株ＧＫＦ３とも呼ばれる）は、２０１８年１月１２日に中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ、アドレス：中国北京市朝陽区北辰西路１号院３号、中国科学院微生物研究所、郵便番号：１００１０１）に寄託され、受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３である。この発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、また、２０１８年２月１２日に、台湾食品工業発展研究所バイオリソース保存及び研究センター（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ、ＢＣＲＣ、アドレス：台湾新竹市東区食品路３３１号、郵便番号：３００６２）に寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１０８２４である。
【0022】
ここで、説明すべきなのは、発酵乳酸桿菌は、乳酸杆菌属におけるグラム陽性菌種であり、例えば、サワードウ又はキムチのような、動物及び/又は植物の発酵物でよく見られる。次に、例えば、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のような、いくつかの特定の発酵乳酸桿菌は、動物のプロバイオティクスとされることができ、安全用量で投予（例えば、経口）すれば、副作用がほとんどない。
【0023】
一実施例において、上記の経口組成物の有効用量は、例えば、毎日７００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であってよく、１０１０ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～１０１２ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間に相当する。有効用量が７００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間及び/又は１０１０ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間よりも低くなると、タバコ嗜癖性の低下効果は、不良である。有効用量が８００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間及び/又は１０１２ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間よりも高くなると、製造コストが上昇する場合にも、タバコ嗜癖性の低下効果は、更に著しく向上しない。一実施例において、経口組成物を喫煙被験者に所定の投与時間投与させると、喫煙被験者のタバコ嗜癖性を効果的に低下させることができ、前述の投与時間は、例えば、２５日間～３０日間である。
【0024】
前述の「喫煙被験者」とは、今まで１００本（５パック）を超えるタバコを吸い、且つ直近３０日間内で喫煙品を使用したことのあるものという、国際的に現在の喫煙者（ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｍｏｋｅｒ）に対する定義を参照してよい。
【0025】
本発明の技術特徴の一つは、客観的な生理学的検出数値及び主観的な認知尺度を併用して、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性に対する低下効果を評価することでる。具体的にいうと、客観的には、前述の「タバコ嗜癖性の低下」とは、喫煙量が下がる（例えば、喫煙の頻度及び/又は数量が低下する）ことである。主観的には、前述の「タバコ嗜癖性の低下」とは、喫煙量の低下により血液におけるニコチン含有量が下がる場合、ニコチンの離脱症状が発生しないことである。
【0026】
詳しくいうと、喫煙被験者は、タバコを７日間～１０日間吸った後で、尿からニコチン代謝物質が検出されることができ、且つニコチン代謝物質の含有量と喫煙量とは正の相関を有する。そのため、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量が所定の濃度まで下がると、喫煙被験者の喫煙量が低下すると判断され、前記所定の濃度は１０ｎｇ/ｍＬである。上記ニコチン代謝物質は、コチニン（ｃｏｔｉｎｉｎｅ）及び/又はトランス３-ヒドロキシコチニン（ｔｒａｎｓ-３-ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｔｉｎｉｎｅ）を含んでよいが、それらに限定されない。
【0027】
これにより、タバコ嗜癖性の低下効果は、喫煙被験者に経口組成物を投与された後の尿のニコチン代謝物質の含有量の低下幅によって評価されることができることが判明される。次に、タバコ嗜癖性の低下効果は、更に、タバコ嗜癖性の低下した人数の百分率によって評価されることができ、タバコ嗜癖性の低下した人数の百分率とは、全ての喫煙被験者の人数において、経口組成物を投与されていないものに比べると、経口組成物を投与された後の尿のニコチン代謝物質の含有量が１０ｎｇ/ｍＬ以上低下した喫煙被験者の人数の百分率である。
【0028】
一実施例において、上記ニコチンの離脱症状は、例えば、米国国立精神衛生研究院疫学研究センターの鬱病尺度（ｔｈｅ ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｃａｌｅ；ＣＥＳ-Ｄ）によって評価されることができる。ＣＥＳ-Ｄは、疫学でよく用いられる鬱病尺度であり、ＣＥＳ-Ｄの合計点で喫煙被験者を定量化して抑鬱気分の発生頻度を主観的に評価する。喫煙被験者の喫煙量が下がる時に、ＣＥＳ-Ｄ合計点が向上すると、ニコチンの離脱症状が発生すると判断する。それに対して、ＣＥＳ-Ｄ合計点が低下すると、ニコチンの離脱症状が発生していないと判断する。
【0029】
人体実験によると、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与していない喫煙被験者に比べると、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を４週間投与した喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下することが証明される。次に、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与していない喫煙被験者に比べると、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与した喫煙被験者のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率は高く、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は客観的にタバコ嗜癖性を低下させることができることが証明される。
【0030】
次に、ＣＥＳ-Ｄ評価によると、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与していないものに比べると、喫煙被験者は、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与された後で、ＣＥＳ-Ｄ点数が低く、抑鬱気分の発生頻度が下がる、ニコチンの離脱症状が発生しないことを示し、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３が主観的にタバコ嗜癖性を低下させることができることが証明される。つまり、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、ニコチンの離脱症状が発生せずに、喫煙被験者の喫煙量を低下させることができ、タバコ嗜癖性の低下効果を持つ。
【0031】
以下、複数の実施例によって、本発明の適用を説明するが、これは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神や範囲から逸脱せずに、多様の変更や修正を加えることができる。
実施例１、菌株由来及び調製
実施例１、菌株由来及び調製
【0032】
台湾新竹の北埔の市販の発酵キムチを１０倍の体積の水で希釈し均質化して、均質液を取得した。次に、１ｍＬの均質液を０．１％ブロモクレゾールグリーン（ｂｒｏｍｏｃｒｅｓｏｌ ｇｒｅｅｎ）含有のＭＲＳ培養液に接種して、弱酸（ｐＨ６．５±０．２）環境での生長を好む菌種（乳酸菌を含む）を選んで、３７℃で１６時間培養した後で、培養液を取得した。培養液配列を希釈した後で、それぞれ５つの固形培地[Ｒｏｇｏｓａ寒天培地、ビフィズス菌選別培地（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｏｄｏａｃｅｔａｔｅ ｍｅｄｉｕｍ ２５、ＢＩＭ-２５）、ジャガイモ澱粉及び酵母抽出物を含む寒天培地、ブロモクレゾールグリーンＭＲＳ寒天培地及びブロモクレゾールパープルＭＲＳ寒天培地を含む]に塗布して、また３７℃で４０時間培養した後で、各種の固形培地から１５～２０個の単一のコロニーを選択して、第１の選別菌株を取得した。
【0033】
次に、リポ多糖で処理されたＲＡＷ２６４．７マクロファージ細胞（以下、モデル細胞と呼ばれる）を細胞炎症反応モデルとして、抗炎症効果を持つ菌株を選んだ。菌株を投与されたモデル細胞の一酸化窒素、腫瘍壊死因子-α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ-α；ＴＮＦ-α）の分泌量が菌株を投与されていないモデル細胞よりも８０％下がると、この菌株が抗炎症効果を持つと判断した。その後、これらの抗炎症効果を持つ菌株から、トリプトファンデカルボキシラーゼ活性を持つ菌株ＧＫＦ３を篩分けした。
【0034】
菌株ＧＫＦ３の染色体ＤＮＡ（ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ；ｇＤＮＡ）を精製した後で、例えば、配列識別子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のような核酸配列に示すフォワードプライマー及びリバースプライマーでポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＰＣＲ）を行って、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のような核酸配列に示すｒｅｃＮ遺伝子のＤＮＡフラグメントを取得することができた。配列を整列させた後、菌株ＧＫＦ３が発酵乳酸桿菌であると同定した。
【0035】
発酵乳酸桿菌菌株ＧＫＦ３は、２０１８年１月１２日に中国一般微生物株保存管理センター（アドレス：中国北京市朝陽区北辰西路１号院３号、郵便番号：１００１０１）に寄託され、且つ受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３であった。発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、また、２０１８年２月１２日に台湾財団法人食品工業発展研究所の生物資源保存研究センター（アドレス：台湾新竹市東区食品路３３１号、郵便番号：３００６２）に寄託され、且つ受託番号がＢＣＲＣ ９１０８２４であった。
【0036】
発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３をＭＲＳ寒天培地に接種して固形培養工程を行って、単一のコロニーを取得した。次に、単一のコロニーを発酵基質に接種して発酵工程を１８時間行って、発酵物を取得した。固形培養工程は、温度３７℃の条件で行われた。発酵工程は、温度３７℃、通気量０．５通気気体体積/発酵容器体積/分間（ａｉｒ ｖｏｌｕｍｅ/ｃｕｌｔｕｒｅ ｖｏｌｕｍｅ/ｍｉｎ；ｖｖｍ）の二酸化炭素、振盪速率５００ｒｐｍの条件で行われた。上記発酵基質のレジピを、表１に示した。
【表1】
【0037】
上記発酵物を１００００ｒｐｍの回転速度で遠心を行って、菌泥を取得した。その後、菌泥及び２０重量百分率（ｗｔ％）の脱脂粉乳を混合させてから、凍結乾燥を行って、ＧＫＦ３凍結乾燥粉末を取得した。凍結乾燥は、習知の工程であり、且つ後の評価に影響を与えないので、繰り返して説明しない。
実施例２、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性に対する低下効果を、生理学的検出数値で評価する
実施例２、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性に対する低下効果を、生理学的検出数値で評価する
【0038】
ＧＫＦ３凍結乾燥粉末をカプセルに埋め込んで、各カプセルに４００ｍｇのＧＫＦ３凍結乾燥粉末を含有させ、５×１０９個のＣＦＵの発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３の生菌に相当するようにして、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３の実験菌粉カプセルを取得した。次に、カプセルに微結晶状のα-セルロース（ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ α-ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）を埋め込めて、プラセボカプセルにした。
【0039】
２０歳～５０歳の喫煙被験者であり、且つ重大な病患がない健康な若い男性である被験者を募集した。注意すべきなのは、被験者としては、下記何れに合致するものは除外される。
（１）重大な精神疾患を有するもの、
（２）抗生物質服用者、
（３）高度なアルコール嗜癖又は本試験結果に影響を与える他の行為を持つもの、
（４）精神薬物を服用しているもの（例えば、抗鬱薬）、
（５）ニコチン関連の補充療法を受けたことがある又は受けているもの、
（６）３ヶ月前又はプロバイオティクスを使用しているもの。
（１）重大な精神疾患を有するもの、
（２）抗生物質服用者、
（３）高度なアルコール嗜癖又は本試験結果に影響を与える他の行為を持つもの、
（４）精神薬物を服用しているもの（例えば、抗鬱薬）、
（５）ニコチン関連の補充療法を受けたことがある又は受けているもの、
（６）３ヶ月前又はプロバイオティクスを使用しているもの。
【0040】
次に、被験者が試験の評価期間中に、試薬（ここで、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３菌粉カプセル及び/又はプラセボカプセルをいう）に不快適になり、試薬を規定通りに使用しなく、生活が本計画通りに拘束しないことで、試薬の効果を判断できなく、又はデータの不完全等で効果又は安全性の判断に影響を与え、試験の評価期間中に病気にかかったり本試験結果に影響を十分に与える薬物又は保健食品を服用し、及び/又は尿を協力して採取しなく、及び/又はＣＥＳ-Ｄを完成できなかったものであれば、試験から脱退すべきである。
【0041】
被験者（ｎ=４５）を第１の群（ｎ=２３）及び第２の群（ｎ=２２）に無作為に分け、第１の群と第２群との群間の血液生化学値における各パラメータは、何れも統計的有意差はなかった。図１及び図２を参照すると、図１は本発明の一実施例による第１群の実験フローを示す図であり、且つ図２は本発明の一実施例による第２群の実験フローを示す図である。下記フロー１００及びフロー２００において、尿検出とは、被験者尿におけるニコチン代謝物質の含有量を検出し、ニコチン代謝物質はコチニン及びトランス３-ヒドロキシコチニンを含む。コチニン及びトランス３-ヒドロキシコチニンの検出は、本発明が属する技術分野の一般知識であり、且つ効果に影響を与えないので、繰り返して説明しない。対照処理としては、毎日、朝ごはんの後でプラセボカプセルを２錠投与した。実験処理としては、毎日、朝ごはんの後で発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３菌粉カプセルを２錠投与した。特に説明すべきなのは、上記フロー１００及びフロー２００の期間中に、被験者は、自分の意識及び/又は要求に応じてタバコを吸ってよかった。
【0042】
図１のフロー１００を参照すると、工程１１０に示すように、尿を検出した。次に、工程１１５及び工程１２０に示すように、対照処理を４週間も行い、再び尿を検出した。その後、工程１３０によって、対照処理を２週間も停止した。続いて、工程１４０に示すように、尿を検出した。次に、工程１４５及び工程１５０に示すように、実験処理を４週間も行い、再び尿を検出し、試験は合計で１０週間であった。
【0043】
図２のフロー２００を参照すると、工程２１０に示すように、尿を検出した。次に、工程２１５及び工程２２０に示すように、実験処理を４週間も行い、再び尿を検出した。その後、工程２３０によって、実験処理を２週間も停止した。続いて、工程２４０に示すように、尿を検出した。次に、工程２４５及び工程２５０に示すように、対照処理を４週間も行い、再び尿を検出し、試験は合計で１０週間であった。
【0044】
フロー１００及びフロー２００では、交差試験（ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ ｔｒｉａｌ）の設計を採用し、各被験者の対照処理（対照処理群）及び実験処理（実験処理群）の評価結果を取得することができるため、所望の被験者の人数を低減することができるというメリットを有する。異なる処理前後の尿のニコチン代謝物質の含有量の平均を表２に記録した。
【表2】
【0045】
表２に示すように、実験処理された後で、被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量の平均は実験処理前よりも１０４７．７ｎｇ/ｍＬ低いが、対照処理された液のニコチン代謝物質の含有量の平均は対照処理前よりも高くなった。上記から分かるように、被験者に発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を投与した後で、尿のニコチン代謝物質の含有量が低下し、被験者の喫煙量が低減することを表し、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を服用することでタバコ嗜癖性を低下させることができることが証明される。
【0046】
実験処理された後で、尿のニコチン代謝物質の含有量が実験処理される前よりも１０ｎｇ/ｍＬ以上下がる被験者の人数の被験者の人数に対する百分率を計算することで、実験処理群のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率を取得することができる。同様に、対照処理された後で、尿のニコチン代謝物質の含有量が対照処理される前よりも１０ｎｇ/ｍＬ以上下がる被験者の人数の被験者の人数に対する百分率を計算することで、対照処理群のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率を取得することができる。
【0047】
図３は、本発明の一実施例による異なる処理群別のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率（％）を示し、横軸は左から右へそれぞれ対照処理群及び実験処理群であり、縦軸はタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率（単位：％）である。例えば、図３に示すように、実験処理群のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率は６７％（３０/４５人）であり、対照処理群のタバコ嗜癖性の低下した人数の百分率（３６％、１６/４５人）よりも３１％高く、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を服用するとタバコ嗜癖性を低下させる効果を有することが証明される。
実施例３、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性に対する低下効果を、認知尺度によって評価する
実施例３、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性に対する低下効果を、認知尺度によって評価する
【0048】
認知尺度ＣＥＳ-Ｄによって、被験者に１週間内で鬱病症状が現れる頻度を主観的に評価させ、頻度が「なし」、「僅かに」（１週間に１日以下）、「時々」（１週間に１～２日）及び「しばしば」（１週間に３～７日）である場合、それぞれ０点、１点、２点及び３点を与えた。上記鬱病症状は、憂うつ感（ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｍｏｏｄ）、罪悪感と無価値観（ｇｕｉｌｔ ａｎｄ ｗｏｒｔｈｌｅｓｓｎｅｓｓ）、絶望感と無力感（ｆｅｅｌｉｎｇｓ ｏｆ ｈｅｌｐｌｅｓｓｎｅｓｓ ａｎｄ ｈｏｐｅｌｅｓｓｎｅｓｓ）、精神や動作の遅れ（ｐｓｙｃｈｏｍｏｔｏｒ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ）、食欲低下（ｌｏｓｓ ｏｆ ａｐｐｅｔｉｔｅ）と睡眠障害（ｓｌｅｅｐ ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）等の合計で２０個を含むので、ＣＥＳ-Ｄ合計点は０点～６０点である。喫煙量が低下すると、ＣＥＳ-Ｄ合計点は著しく向上し、ニコチンの離脱症状が現れる。
【0049】
第１の群の被験者のＣＥＳ-Ｄを完成した時間点は、フロー１００における工程１１５の前（試験の０週間目）、工程１１５（試験の４週間目）の後及び工程１４５の後（試験の１０週間目）であり、且つ第２の群の被験者のＣＥＳ-Ｄを完成した時間点は、フロー２００における工程２１５の前（試験の０週間目）、工程２１５（試験の４週間目）の後及び工程２４５の後（試験の１０週間目）であった。第１の群の被験者及び第２の群の被験者のＣＥＳ-Ｄ合計点を、本発明の一実施例による被験者の異なる時間でのＣＥＳ-Ｄ合計点を示す図４に統計し、横軸は週数を示し、縦軸はＣＥＳ-Ｄ合計点を示し、縦棒４０１は対照処理群を示し、且つ縦棒４０３は実験処理群を示す。ここで、説明すべきなのは、縦棒４０１は、０週間目及び４週間目に第１の群の被験者を表すが、１０週間目に第２の群の被験者を表す。それに対して、縦棒４０３は、０週間目及び４週間目に第２の群の被験者を表すが、１０週間目に第１の群の被験者を表す。
【0050】
例えば、図４に示すように、第１群の被験者の０週間目でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は１２．４±３（縦棒４０１）であり、４週間目（対照処理された後）でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は１０．２±４．６（縦棒４０１）であり、且つ１０週間目（実験処理された後）でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は９．４±６（縦棒４０３）であった。次に、第２群の被験者の０週間目でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は１２．４±３（縦棒４０３）であり、４週間目（実験処理された後）でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は１０．２±４．６（縦棒４０３）であり、且つ１０週間目（対照処理された後）でのＣＥＳ-Ｄ合計点平均±標準偏差は１１．６±４．９（縦棒４０１）であった。
【0051】
図４から分かるように、実験処理を行っていない（４週間目の縦棒４０１）ものに比べると、第１群の被験者は、実験処理された後で（１０週間目の縦棒４０３）、ＣＥＳ-Ｄ合計点が低下した。次に、実験処理を行っていない（４週間目の縦棒４０３）ものに比べると、第２群の被験者は、実験処理された後で（１０週間目の縦棒４０３）、ＣＥＳ-Ｄ合計点が低下した。次に、図３及び図４の結果を同時に参照すると、実験処理された後で、被験者の喫煙量が低下することが判明され、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３を服用すると、被験者の喫煙量を低下させると共に、被験者にニコチンの離脱症状を発生させないだけではなく、鬱病症状が現れる頻度を低下させる傾向もあることが判明され、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３がタバコ嗜癖性を低下させる効果を有することが証明される。
【0052】
つまり、上記特定のプロセス、特定の投与形態、特定の被験者及び特定の評価方法は、本発明のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を例示して説明することのみに用いられる。しかしながら、当業者であれば、本発明の精神や範囲から逸脱せずに、他のプロセス、他の投与形態、他の被験者及び他の評価方法もタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物を説明することに用いられてもよいが、上記に限定されないことは理解すべきである。例としては、発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３のタバコ嗜癖性の低下効果に影響を与えずに、他のプロセス、他の投与形態、他の被験者及び他の評価方法を使用してもよい。
【0053】
上記実施例から分かるように、本発明のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物は、プロバイオティクスを使用すると、ニコチンを提供しなく且つ副作用がほとんど発生せずに、タバコ嗜癖性を低下させることができ、禁煙を補助する食品及び/又は薬品に適用されることができるというメリットを有する。
【0054】
本開示内容は複数の実施例を前述の通りに開示したが、これは前記開示内容に多様の変更や修飾を加えることができ、且つ理解すべきなのは、本発明の精神や範囲から逸脱しない限り、ある場合に本発明の実施例のある特徴を採用するが、他の特徴を対応的に使用しない。従って、本発明の精神や特許請求の範囲は、以上で例示した実施例の記載に限定されない。
【0055】
［生物材料の寄託］
発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ、アドレス：北京市朝陽区北辰西路１号院３号、中国科学院微生物研究所、郵便番号：１００１０１）に寄託され、寄託日期が２０１８年１月１２日であり、且つ受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３である。
発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ、アドレス：北京市朝陽区北辰西路１号院３号、中国科学院微生物研究所、郵便番号：１００１０１）に寄託され、寄託日期が２０１８年１月１２日であり、且つ受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３である。
【符号の説明】
【0056】
１００、２００:フロー
１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、１４５、１５０、２１０、２１５、２２０、２３０、２４０、２４５、２５０:工程
４０１、４０３:縦棒
１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、１４５、１５０、２１０、２１５、２２０、２３０、２４０、２４５、２５０:工程
４０１、４０３:縦棒
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-03-29
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ニコチン関連の補充療法を受けたことがある又は受けているものを除く喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させるためのタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物であって、前記経口組成物の有効成分が、有効用量の発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＧＫＦ３からなり、前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３は、２０１８年１月１２日に中国一般微生物株保存管理センター（Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ；ＣＧＭＣＣ）に寄託され、受託番号がＣＧＭＣＣ １５２０３である、タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項2】
前記経口組成物を投与されていない前記喫煙被験者に比べると、前記経口組成物を投与された前記喫煙被験者の前記尿の前記ニコチン代謝物質の前記含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項3】
前記ニコチン代謝物質は、コチニン及び/又はトランス３-ヒドロキシコチニンを含む請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項4】
前記有効用量は、７００ｍｇ/６０ｋｇ・体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ；ｂｗ）/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間である請求項１に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項5】
前記経口組成物は、前記喫煙被験者に、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される請求項４に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項6】
タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物であって、前記経口組成物の有効成分が、有効用量の前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）からなり、且つニコチン関連の補充療法を受けたことがある又は受けているものを除く喫煙被験者に対する前記有効用量が毎日７００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～９００ｍｇ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であるタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項7】
前記経口組成物は、喫煙被験者の尿のニコチン代謝物質の含有量を低下させる請求項６に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項8】
前記経口組成物を投与されていない前記喫煙被験者に比べると、前記経口組成物を投与された前記喫煙被験者の前記尿の前記ニコチン代謝物質の前記含有量は、１０ｎｇ/ｍＬ～１１００ｎｇ/ｍＬ低下する請求項７に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項9】
タバコ嗜癖性の低下用の経口組成物であって、前記経口組成物の有効成分が、有効用量の前記発酵乳酸桿菌ＧＫＦ３（受託番号：ＣＧＭＣＣ １５２０３）からなり、且つニコチン関連の補充療法を受けたことがある又は受けているものを除く喫煙被験者に対する前記有効用量が１０１０コロニー形成単位（ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ；ＣＦＵ）/６０ｋｇ・ｂｗ/日間～１０１２ＣＦＵ/６０ｋｇ・ｂｗ/日間であるタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。
【請求項10】
前記経口組成物は、喫煙被験者に、２５日間～３０日間である投与時間をかけて投与される請求項９に記載のタバコ嗜癖性の低下用の経口組成物。