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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023071688
(43)【公開日】2023-05-23
(54)【発明の名称】リン酸化タウペプチドの組成物およびその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 38/04 20060101AFI20230516BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20230516BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20230516BHJP
A61K 39/05 20060101ALI20230516BHJP
A61K 39/08 20060101ALI20230516BHJP
A61K 39/095 20060101ALI20230516BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20230516BHJP
A61K 9/127 20060101ALI20230516BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20230516BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20230516BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20230516BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230516BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20230516BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230516BHJP
A61K 31/711 20060101ALI20230516BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20230516BHJP
C12N 15/117 20100101ALN20230516BHJP
【ＦＩ】
A61K38/04 ZNA
A61K38/16
A61K39/00 H
A61K39/05
A61K39/08
A61K39/095
A61K39/39
A61K9/127
A61K47/24
A61K47/64
A61P21/02
A61P25/00
A61P25/28
A61P43/00 121
A61K31/711
C07K14/47
C12N15/117 Z
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023018374
(22)【出願日】2023-02-09
(62)【分割の表示】P 2020523284の分割
【原出願日】2018-10-24
(31)【優先権主張番号】62/577,157
(32)【優先日】2017-10-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．プルロニック
３．ＳＰＡＮ
(71)【出願人】
【識別番号】514010601
【氏名又は名称】ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
(71)【出願人】
【識別番号】513022966
【氏名又は名称】エーシー イミューン エス．エー．
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(72)【発明者】
【氏名】ラムスバーグ，エリザベス アン
(72)【発明者】
【氏名】デ マルコ，ドナタ
(72)【発明者】
【氏名】チャッカムカル，アニッシュ
(72)【発明者】
【氏名】サダカ，シャーロット
(72)【発明者】
【氏名】ゴーズミット，ジャープ
(72)【発明者】
【氏名】ムース，アンドレア
(72)【発明者】
【氏名】ピルグレン ボッシュ，マリア
(72)【発明者】
【氏名】ヴキチェヴィッチ ヴェリル，マリヤ
(72)【発明者】
【氏名】ヒックマン，デヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】ピオット，ニコラス
(72)【発明者】
【氏名】ギミレ，サロージ ラージ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】タウペプチドのリポソームまたはコンジュゲート、ならびにアルツハイマー病などのタウオパチーを防止または処置するためのその使用法を提供する。
【解決手段】タウペプチド、好ましくはリン酸化タウペプチドを含有するリポソーム、および免疫原性担体とコンジュゲートさせた、タウペプチド、好ましくはリン酸化タウペプチドを含有するコンジュゲートによる。
【選択図】なし
【解決手段】タウペプチド、好ましくはリン酸化タウペプチドを含有するリポソーム、および免疫原性担体とコンジュゲートさせた、タウペプチド、好ましくはリン酸化タウペプチドを含有するコンジュゲートによる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、
前記タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、
前記タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
【請求項2】
トール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つを
さらに含む、請求項１に記載のリポソーム。
さらに含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項3】
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
【請求項4】
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－
ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭ
ＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに
含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のリポソーム。
ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭ
ＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに
含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のリポソーム。
【請求項5】
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列
を有し、
前記アミノ酸配列が、前記タウホスホペプチドが前記リポソームの表面上に提示される
ことを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に
記載のリポソーム。
を有し、
前記アミノ酸配列が、前記タウホスホペプチドが前記リポソームの表面上に提示される
ことを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に
記載のリポソーム。
【請求項6】
前記ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択さ
れる少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のリポ
ソーム。
れる少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のリポ
ソーム。
【請求項7】
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する前記
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは１つまたは
複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは
少なくとも１つの親油性基と共有結合している、請求項１から６のいずれか一項に記載の
リポソーム。
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは１つまたは
複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは
少なくとも１つの親油性基と共有結合している、請求項１から６のいずれか一項に記載の
リポソーム。
【請求項8】
前記トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）である、請求項１
から７のいずれかに記載のリポソーム。
から７のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項9】
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウ
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなる前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソーム。
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなる前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソーム。
【請求項10】
請求項１から９のいずれか一項に記載のリポソームと薬学的に許容される担体とを含む
、医薬組成物。
、医薬組成物。
【請求項11】
タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体と
を含むコンジュゲートであって、以下の構造：
（ｉ）式（Ｉ）：
または
（ｉｉ）式（ＩＩ）：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数である］、
を有する、コンジュゲート。
を含むコンジュゲートであって、以下の構造：
（ｉ）式（Ｉ）：
【化1】
（ｉｉ）式（ＩＩ）：
【化2】
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数である］、
を有する、コンジュゲート。
【請求項12】
前記免疫原性担体が、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイ
ド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（
ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される、請求項１１に記載のコンジュゲ
ート。
ド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（
ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される、請求項１１に記載のコンジュゲ
ート。
【請求項13】
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列
を有する、請求項１１または１２に記載のコンジュゲート。
を有する、請求項１１または１２に記載のコンジュゲート。
【請求項14】
式（Ｉ）の構造を有し、前記免疫原性担体がＣＲＭ１９７である、請求項１３に記載の
コンジュゲート。
コンジュゲート。
【請求項15】
以下の構造：
［式中、
ｎは、３～７の整数である］、
を有する、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【化3】
ｎは、３～７の整数である］、
を有する、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【請求項16】
請求項１１から１５のいずれか一項に記載のコンジュゲートと薬学的に許容される担体
とを含む、医薬組成物。
とを含む、医薬組成物。
【請求項17】
神経変性障害を患っている対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に
、請求項１０に記載の医薬組成物または請求項１６に記載の医薬組成物を投与することを
含む、方法。
、請求項１０に記載の医薬組成物または請求項１６に記載の医薬組成物を投与することを
含む、方法。
【請求項18】
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法
であって、前記対象に、請求項１０に記載の医薬組成物または請求項１６に記載の医薬組
成物を投与することを含む、方法。
であって、前記対象に、請求項１０に記載の医薬組成物または請求項１６に記載の医薬組
成物を投与することを含む、方法。
【請求項19】
前記神経変性疾患または障害が、神経原線維病変の形成によって引き起こされる、また
はそれに関連している、請求項１７および１８のいずれか一項に記載の方法。
はそれに関連している、請求項１７および１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェル
ト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャイン
カー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性
側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運
動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性
側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパー
キンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ
病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進
行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、
筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（
ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、請求項１９に記載の方法。
ト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャイン
カー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性
側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運
動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性
側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパー
キンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ
病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進
行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、
筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（
ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、
前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、大脳
皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disp
hasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲ
Ｔ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、請求項１７から２０のいずれか一項に
記載の方法。
前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、大脳
皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disp
hasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲ
Ｔ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、請求項１７から２０のいずれか一項に
記載の方法。
【請求項22】
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害の処置または防止において
使用するための、請求項１０に記載の医薬組成物および請求項１６に記載の医薬組成物の
うちの少なくとも１つを含む、キット。
使用するための、請求項１０に記載の医薬組成物および請求項１６に記載の医薬組成物の
うちの少なくとも１つを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は医学分野のものである。本発明は、特に、タウペプチドのリポソームまたはコ
ンジュゲート、およびアルツハイマー病などのタウオパチーを防止または処置するための
その使用に関する。
ンジュゲート、およびアルツハイマー病などのタウオパチーを防止または処置するための
その使用に関する。
【背景技術】
【0002】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、世界中で推定４４００万人が冒されている進行性衰弱性
神経変性疾患である（Alzheimers.net）。診療所において現在利用可能なＡＤ治療は臨床
症状の進行を遅らせることを目的とするが、疾患の根底にある病原性プロセスを標的とし
ない。残念ながら、これらの治療は最小限にしか有効でなく、したがって、追加の防止的
および治療的手段を開発および試験する緊急の必要性が存在する。
神経変性疾患である（Alzheimers.net）。診療所において現在利用可能なＡＤ治療は臨床
症状の進行を遅らせることを目的とするが、疾患の根底にある病原性プロセスを標的とし
ない。残念ながら、これらの治療は最小限にしか有効でなく、したがって、追加の防止的
および治療的手段を開発および試験する緊急の必要性が存在する。
【0003】
アルツハイマー病の特徴的な病態は、凝集したアミロイドベータタンパク質を含む細胞
外溶菌斑、および高リン酸化タウタンパク質の細胞内「もつれ」または凝集の蓄積である
。これらのタンパク質の蓄積をもたらす分子学的事象の特徴づけは不十分である。アミロ
イドでは、アミロイド前駆体タンパク質の異常切断が、アミノ酸１～４２を含む、凝集す
る傾向のある断片の蓄積をもたらすと仮定されている。タウでは、キナーゼ、ホスファタ
ーゼのどちらか、または両方の調節不全が、タウの異常リン酸化をもたらすと仮定されて
いる。タウは、高リン酸化された後、微小管と有効に結合してそれを安定化する能力を失
い、その代わりに患部ニューロンの細胞質に蓄積される。未結合かつ高リン酸化のタウが
最初のオリゴマー、その後により高次の凝集体を形成すると考えられ、その存在は、おそ
らくは正常な軸索輸送の中断を介して、それが形成されるニューロンの機能に負の影響を
与えると推定される。
外溶菌斑、および高リン酸化タウタンパク質の細胞内「もつれ」または凝集の蓄積である
。これらのタンパク質の蓄積をもたらす分子学的事象の特徴づけは不十分である。アミロ
イドでは、アミロイド前駆体タンパク質の異常切断が、アミノ酸１～４２を含む、凝集す
る傾向のある断片の蓄積をもたらすと仮定されている。タウでは、キナーゼ、ホスファタ
ーゼのどちらか、または両方の調節不全が、タウの異常リン酸化をもたらすと仮定されて
いる。タウは、高リン酸化された後、微小管と有効に結合してそれを安定化する能力を失
い、その代わりに患部ニューロンの細胞質に蓄積される。未結合かつ高リン酸化のタウが
最初のオリゴマー、その後により高次の凝集体を形成すると考えられ、その存在は、おそ
らくは正常な軸索輸送の中断を介して、それが形成されるニューロンの機能に負の影響を
与えると推定される。
【0004】
先進国では、アルツハイマー病又は他の認知症性タウオパチーを診断された個体は、一
般的にコリンエステラーゼ阻害剤（たとえばＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標））またはメマン
チン（たとえばＮａｍｅｎｄａ（商標））を用いて処置する。これらの薬物は、合理的に
良好な耐用性を示すが、有効性が非常に控えめである。たとえば、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録
商標）は、処置した個体の約５０％において症状の悪化を６～１２カ月遅延させる。残り
の処置は非薬理学的であり、患者の認知能力が低下するについて、その日々の日常課題の
管理を可能にすることに焦点を当てている。
般的にコリンエステラーゼ阻害剤（たとえばＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標））またはメマン
チン（たとえばＮａｍｅｎｄａ（商標））を用いて処置する。これらの薬物は、合理的に
良好な耐用性を示すが、有効性が非常に控えめである。たとえば、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録
商標）は、処置した個体の約５０％において症状の悪化を６～１２カ月遅延させる。残り
の処置は非薬理学的であり、患者の認知能力が低下するについて、その日々の日常課題の
管理を可能にすることに焦点を当てている。
【0005】
いくつかの公開された研究（Asuni AA et al,. J Neurosci. 2007 Aug 22;27(34):9115
-29、Theunis C et al., PLoS One. 2013; 8(8): e72301、Kontsekova E et al., Alzhei
mers Res Ther. 2014 Aug 1;6(4):44）は、タウペプチドを含有する活性ワクチンが、マ
ウスまたはラットにおいて抗タウ免疫応答を誘導することができる、げっ歯類の脳におけ
る病理学的タウ凝集体の蓄積を低下させることができる、およびアルツハイマー病の動物
モデルにおいて認知低下の進行速度を低下させることができることを実証している。病理
学的タウタンパク質に対する活性ワクチンは、アルツハイマー病を有するヒト患者におい
て免疫原性であることが示されている（Novak P et al., Lancet Neurology 2017, 16:12
3-134）。国際公開２０１０／１１５８４３号パンフレットは、タンパク質タウの主要な
病理学的ホスホエピトープを模倣する抗原性ホスホペプチド、ならびにアルツハイマー病
を含めたタウオパチーの処置における治療的および診断的使用のための関連組成物を記載
している。しかし、現在、タウ媒介性疾患の発症を防止するために認可された有効なワク
チンは、依然として市場に存在しない。疾患が始まった後にその経過を妨害または遅らせ
るための有効な薬物も、市場に存在しない。したがって、これらの疾患を防止することが
できる新しい防止手段（たとえばワクチン）の同定が差し迫って必要とされている。
-29、Theunis C et al., PLoS One. 2013; 8(8): e72301、Kontsekova E et al., Alzhei
mers Res Ther. 2014 Aug 1;6(4):44）は、タウペプチドを含有する活性ワクチンが、マ
ウスまたはラットにおいて抗タウ免疫応答を誘導することができる、げっ歯類の脳におけ
る病理学的タウ凝集体の蓄積を低下させることができる、およびアルツハイマー病の動物
モデルにおいて認知低下の進行速度を低下させることができることを実証している。病理
学的タウタンパク質に対する活性ワクチンは、アルツハイマー病を有するヒト患者におい
て免疫原性であることが示されている（Novak P et al., Lancet Neurology 2017, 16:12
3-134）。国際公開２０１０／１１５８４３号パンフレットは、タンパク質タウの主要な
病理学的ホスホエピトープを模倣する抗原性ホスホペプチド、ならびにアルツハイマー病
を含めたタウオパチーの処置における治療的および診断的使用のための関連組成物を記載
している。しかし、現在、タウ媒介性疾患の発症を防止するために認可された有効なワク
チンは、依然として市場に存在しない。疾患が始まった後にその経過を妨害または遅らせ
るための有効な薬物も、市場に存在しない。したがって、これらの疾患を防止することが
できる新しい防止手段（たとえばワクチン）の同定が差し迫って必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
一般的な一態様では、本発明は、
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
【0007】
一実施形態では、リポソームは、トール様受容体リガンドを含む少なくとも１つのアジ
ュバントをさらに含む。好ましくは、リポソームは、トール様受容体４リガンドおよびト
ール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つをさらに含む。
ュバントをさらに含む。好ましくは、リポソームは、トール様受容体４リガンドおよびト
ール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つをさらに含む。
【0008】
好ましい実施形態では、本発明は、
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、好ましくは脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチド、
および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド、好ましくはトール様受容体４作用剤
のうちの少なくとも１つと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、好ましくは脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチド、
および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド、好ましくはトール様受容体４作用剤
のうちの少なくとも１つと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
【0009】
さらなる好ましい実施形態では、本発明は、
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
【0010】
別の一般的な態様では、本発明は、タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドと、
それとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、タウペプチドがリンカーを介して担
体とコンジュゲートしている、コンジュゲートに関する。リンカーは、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢ
ＡＰ）、およびｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｍ
ＢＳ）のうちの１つまたは複数を含むことができる。本発明において有用な免疫原性担体
の例には、それだけには限定されないが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）
、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来
の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体が含まれる。
それとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、タウペプチドがリンカーを介して担
体とコンジュゲートしている、コンジュゲートに関する。リンカーは、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢ
ＡＰ）、およびｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｍ
ＢＳ）のうちの１つまたは複数を含むことができる。本発明において有用な免疫原性担体
の例には、それだけには限定されないが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）
、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来
の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体が含まれる。
【0011】
好ましい一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の構造：
【0012】
【化1】
【0013】
【化2】
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、２～１１、好ましくは３～１１の整数である］
を有するコンジュゲートに関する。
【0014】
本発明のさらなる態様は、本発明のリポソームまたはコンジュゲートと薬学的に許容さ
れる担体とを含む医薬組成物、医薬組成物を調製する方法、および、それを必要としてい
る対象における、タウに対する免疫応答の誘導、または神経変性疾患もしくは障害の処置
もしくは防止における、医薬組成物の使用に関する。
れる担体とを含む医薬組成物、医薬組成物を調製する方法、および、それを必要としてい
る対象における、タウに対する免疫応答の誘導、または神経変性疾患もしくは障害の処置
もしくは防止における、医薬組成物の使用に関する。
【0015】
一実施形態では、本発明は、神経変性障害を患っている対象において免疫応答を誘導す
る方法、または、それを必要としている対象において神経変性疾患もしくは障害を処置も
しくは防止することに関する。方法は、対象に、本発明のリポソームと薬学的に許容され
る担体とを含む医薬組成物、または本発明のコンジュゲートと薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物を投与することを含む。好ましくは、方法は、対象に、免疫化をプライ
ミングするための本発明の医薬組成物、および免疫化をブーストするための本発明の医薬
組成物を投与することを含む。
る方法、または、それを必要としている対象において神経変性疾患もしくは障害を処置も
しくは防止することに関する。方法は、対象に、本発明のリポソームと薬学的に許容され
る担体とを含む医薬組成物、または本発明のコンジュゲートと薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物を投与することを含む。好ましくは、方法は、対象に、免疫化をプライ
ミングするための本発明の医薬組成物、および免疫化をブーストするための本発明の医薬
組成物を投与することを含む。
【0016】
本発明のさらなる態様、特長、および利点は、以下の発明を実施するための形態および
特許請求の範囲を読むことによってより良好に理解されるであろう。
特許請求の範囲を読むことによってより良好に理解されるであろう。
【0017】
前述の概要および以下の本出願の好ましい実施形態の詳述は、添付の図面と併せて読ん
だ際により良好に理解されるであろう。しかし、本出願は図面中に示すこれらの詳細な実
施形態に限定されないことを理解されたい。
だ際により良好に理解されるであろう。しかし、本出願は図面中に示すこれらの詳細な実
施形態に限定されないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0018】
【図2】図２は、カプセル封入されたヘルパーＴ細胞エピトープ（たとえば破傷風ポリペプチド（ｔｅｔ））を含有する本発明の一実施形態によるリポソーム（第二世代リポソーム）を含むワクチンが、ヘルパーＴ細胞を活性化させることを例示する図である。
【図4】図４は、本発明の実施形態によるタウワクチンが、アカゲザルマカクにおいて持続的な高力価の抗リン酸化タウ抗体を誘導することを示す図である。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって経時的に測定した１群あたりのエンドポイント力価の幾何平均は、ヘルパーＴ細胞エピトープなしの対照リポソームワクチンよりも、本発明の一実施形態によるリポソーム（リポソームＺ）を含むワクチンまたは本発明の一実施形態によるコンジュゲート（コンジュゲートＡ）を含むワクチンの方が高い。
【図5】図５は、本発明の一実施形態によるリポソーム（リポソームＺ）を用いて免疫化したアカゲザルマカクからの血清は、健康なヒト脳切片（右パネル）と比較して、ヒトＡＤ脳切片（左パネル）において病理学的タウ構造と結合することを示す図である。
【図6】図６は、可溶性ＣｐＧおよびミョウバン水酸化物（alum hydroxide）を含有する組成物中で配合した、本発明の一実施形態によるコンジュゲート（コンジュゲートＡ）を用いて免疫化したアカゲザルマカクからの血清は、健康なヒト脳切片（下段）と比較して、ヒトＡＤ脳切片（上段）において病理学的タウ構造と結合することを示す図である。
【図7】図７は、そのそれぞれがカプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０と１つまたは複数のアジュバントとを含有する、本発明の実施形態によるリポソームワクチン、リポソームＸ、Ｙ、およびＺによって誘導された、アカゲザルマカクにおける抗リン酸化タウ抗体の力価を示す図である。力価はＥＬＩＳＡによって測定し、個々のサルにおける経時的なエンドポイント力価で提示されている。具体的には以下の通りである。図７Ａは、ＴＬＲ４リガンドＭＰＬＡ（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））を単独でアジュバントとして有するリポソームＸによって誘導された抗リン酸化タウ抗体の力価を示す図である。図７Ｂは、ＴＬＲ９リガンド（脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を単独でアジュバントとして有するリポソームＹによって誘導された抗リン酸化タウ抗体の力価を示す図である。図７Ｃは、ＴＬＲ４リガンドＭＰＬＡ（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））とＴＬＲ９リガンド（脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチド）との組合せをアジュバントとして有するリポソームＺによって誘導された抗リン酸化タウ抗体の力価を示す図であり、２つのアジュバントの組合せは、個々のサル間で誘導される抗体価のばらつきがより少ないことも示している。図７Ｄは、上述の免疫化群、およびＴＬＲ４リガンドＭＰＬＡを有するがＴ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチンとの抗体価の幾何平均を表し、本発明の実施形態によるワクチンが、対照リポソームワクチンよりも高い抗リン酸化タウ抗体の抗体価をもたらすことを示す図である。力価はＥＬＩＳＡによって測定し、経時的な１群あたりのエンドポイント力価の幾何平均＋／－９５％の信頼区間で表されている。
【図8】図８は、本発明の一実施形態によるリポソームワクチン（たとえば、リポソームＸ、Ｙ、もしくはＺ）またはコンジュゲートワクチン（コンジュゲートＡ）を使用した免疫化が、アルツハイマー病患者の死後脳から単離した濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体ＩｇＧ力価を誘導することを示す図である。抗体価はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）の技術によって測定し、５０日目での個々のサルの値および最初の免疫化後の幾何平均＋／－９５％のＣＩとして表されている。
【図9】図９は、カプセル封入されたＴ５０およびＴＬＲ４リガンド（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））とＴＬＲ９リガンド（脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチド）との組合せをアジュバントとして含有する、本発明の一実施形態によるリポソームワクチン（リポソームＺ）を用いた免疫化は、ほとんど配列番号２のリン酸化タウペプチドのＮ末端と結合する抗体を誘導する（図９Ａ）一方で、本発明の一実施形態によるコンジュゲートワクチン（コンジュゲートＡ）を用いて免疫化したサルは、リン酸化ペプチド（左）および非リン酸化ペプチド（右）のどちらについても、ほとんどペプチドのＣ末端部分と結合するＩｇＧ抗体を生じる（図９Ｂ）ことを示す図である。
【図10】図１０ＡおよびＢは、カプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０およびＴＬＲ４リガンド（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））をアジュバントとして含有する、本発明の一実施形態によるリポソームワクチン（リポソームＳ）を用いたワクチン接種が、マウスにおいて、対照リポソームワクチン（ＴＬＲ４リガンド、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）を有するがＴ細胞エピトープＴ５０を有さない、リポソームＲ）ならびに表面Ｔ細胞エピトープＴ５７（ジパルミトイル化Ｔ５０）およびＴＬＲ４リガンド（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））を含有する本発明の一実施形態によるリポソームワクチン（リポソームＴ）よりも顕著に高い抗体価を誘導することを示す図である。最初の免疫化後の２１日目（図１０Ａ）および３５日目（図１０Ｂ）での抗体価をＥＬＩＳＡによって測定し、個々の値および１群あたりの幾何平均±９５％のＣＩとして表されている。（＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１）。
【図11】図１１は、Ｔ細胞ペプチドＴ４８またはＴ５２のリポソーム内へのカプセル封入（それぞれリポソームＭまたはＮ）が、マウスにおいてカプセル封入されたペプチドに特異的なＴ細胞応答を誘導することを示す図である。Ｔ細胞応答はＩＦＮ－γ（図１１Ａ）およびＩＬ－４（図１１Ｂ）ＥＬＩＳＰＯＴによって評価した。
【図12】図１２は、カプセル封入されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソームＬ）および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソームＯ）はそれぞれ、Ｔ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチンよりも高いタウホスホペプチド特異的抗体価を誘導したことを示す図である。リポソームＬ、リポソームＯ、および対照リポソームのそれぞれは、ＭＰＬＡをアジュバントとしてさらに含有する。
【図13】図１３は、タウコンジュゲート（ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１またはＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１）が野生型マウスにおいてＴｆＨ細胞およびタウペプチドに対する頑強なＡｂ力価を誘導することを示す図である。具体的には以下の通りである。図１３Ａは、成体雌Ｂａｌｂ／Ｃマウス（ｎ＝１４匹／群）の群を、合計４回、１００ｕｇのアジュバント化ＫＬＨ－タウコンジュゲートワクチン（ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１もしくはＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１）、活性プラセボワクチン（ＫＬＨ＋ミョウバンもしくはＲｉｂｉ）、または不活性のプラセボ（ＰＢＳ）を用いて、示したスケジュールに従って免疫化したことを例示する図である。それぞれの免疫化群から４匹の動物を一次免疫化の７日後に屠殺し、注射部位を排出するリンパ節を採取した。図１３Ｂは、免疫化群（ｎ＝４匹のマウス／群、個々に分析）毎の排出リンパ節中のＴｆＨの幾何平均パーセントを示す図である。活性ワクチンまたはプラセボを受けているすべての群が測定可能なＴｆＨを有していた。さらに、ワクチンＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１、または活性プラセボＫＬＨ＋ミョウバンを受けている動物は、不活性のプラセボを与えた動物よりもＴｆＨを顕著に多く有していた（ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１ではｐ＝０．００４４、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１ではｐ＝０．０４８２、ＫＬＨではｐ＝０．００６３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較用にダネットの調整）。図１３Ｃ～Ｈは、免疫化後の４つの時点（１４、２８、５６、および８４日目）での、ベースライン（０日目）からの血清力価の変化を、群の平均（ｎ＝５～１０匹）について９５％の信頼区間と共に示す図である。アスタリスクは、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ誘導性の抗体応答が、活性プラセボによって誘導されたものよりも顕著に高い時点を示す（ｐ≦０．０５、ＡＮＯＶＡ検定を使用して測定、次いで多重比較用にチューキーの調整）、より詳細には以下の通りである。図１３Ｃは、リン酸化タウペプチドｐ７．１に対する結合力価を示す図である。図１３Ｄは、リン酸化タウペプチドｐ２２．１に対する結合力価を示す図である。図１３Ｅは、非リン酸化タウペプチド７．１に対する結合力価を示す図である。図１３Ｆは、非リン酸化タウペプチド２２．１に対する結合力価を示す図である。図１３ＧおよびＨはそれぞれ、担体タンパク質ＫＬＨに対する結合力価を示す図である。
【図14】図１４は、タウコンジュゲートを用いて免疫化したマウスからの血清が、他のタウオパチーからの病理学的タウ構造とも結合したことを示す図である。一次免疫化の８４日後のそれぞれのワクチン接種群からプールした血清（ｎ＝６匹）を使用して、ＭＡＰＴ突然変異（ＭＡＰＴ Ｐ３０１Ｓ、前頭皮質）を有する前頭側頭認知症症例、ピック病（前頭皮質）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ、尾状核）、および原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ、海馬）を有する症例からの脳組織を染色した。活性ワクチンを受けている動物からの血清では、それぞれのタウオパチーに典型的なタウ関連構造を強調された一方で、活性プラセボ（ＫＬＨ－ミョウバンもしくはＫＬＨ－Ｒｉｂｉ）または不活性のもの（ＰＢＳ）を用いて免疫化した動物からの血清では、これらの構造のどれも染色されなかった。参考として、対応する領域のＡＴ８を用いた免疫染色を示し、スケールバー＝５０ｕｍである。
【図15】図１５は、ワクチン誘導性の抗体が加速タウオパチーモデルにおいて凝集タウを低下させることを示す図である。具体的には以下の通りである。図１５Ａは、３カ月齢のＰ３０１Ｌトランスジェニックマウス（ｎ＝１５匹／群）がＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１＋ＲＩＢＩまたは活性プラセボＫＬＨ＋ＲＩＢＩのどちらかを用いて免疫化したマウスからの精製ＩｇＧと共にプレインキュベートしたヒトｅＰＨＦの定位注射を受けたことを示す図である。注射の２カ月後、すべてのマウスを屠殺し、マウスにおける全画分およびサルコシル不溶性画分中の凝集タウの量を決定した。図１５Ｂおよび１５Ｃは、それぞれの動物の注射した半球から採取した全画分（Ｂ）およびサルコシル不溶性画分（Ｃ）を示す図である。グラフはＭＳＤによって測定されたタウの量を示す。全画分および不溶性画分のどちらにおいても、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１で免疫化したマウスからのＩｇＧと共にプレインキュベートしたｅＰＨＦを受けているマウスの脳は、対照抗体と共にプレインキュベートしたｅＰＨＦを受けているマウスよりも顕著に少ない凝集タウを有していた。（ｐ＜０．０００１、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較用にホルム－ボンフェローニ調整）
【図16】図１６は、本発明の一実施形態によるタウコンジュゲート（コンジュゲートＢ）が、非ヒト霊長類においてリン酸化タウおよびｅＰＨＦに対する高力価の抗体を誘導することを示す図である。アカゲザルマカクを、ミョウバンとＣｐＧアジュバント化ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１（ｎ＝６匹）またはＫＬＨ（ｎ＝２匹）を用いて、１、２９、８５、および１６９日目に免疫化した。血液を１４日毎に採取した。具体的には以下の通りである。図１６Ａは、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１を用いて免疫化した動物からの血清を、免疫化ペプチドｐ７．１に対する反応性について、ＥＬＩＳＡを使用して試験したことを示す図である。図１６Ｂは、一次免疫化の５０日後にすべての動物から採取した血清は、ＭＳＤを使用してヒトｅＰＨＦに対して測定可能な抗体レベルを有しており、６匹の動物のうちの３匹がこの抗原に対して高い反応性を示していたことを示す図である。図１６Ｃは、一次免疫化の５０日後に動物から採取した血清を健康な個体またはＡＤ患者からのヒト脳切片に適用し、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１群からの免疫後血清はＡＤ脳組織中の病理学的タウ構造、すなわち、神経原線維のもつれ、神経絨毛糸、および神経突起老人斑を染色した一方で、ＫＬＨで免疫化したマウスからの血清はいかなる反応性も示さず、対照組織では染色は観察されなかったことを示す図である。図１６Ｄは、タウ免疫枯渇アッセイにて試験した場合に、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１を受けている動物は、タウ種と結合して枯渇させることができる抗体を有していた一方で（５０日目ではｐ＝０．０３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較用にダネットの調整）、ＫＬＨを用いた免疫化はそのような抗体を始動させなかったことを示す図である。図１６Ｅは、免疫化前および後の血清も連続希釈した個々の試料として中和アッセイにおいて試験したことを示す図である。ベースラインからの変化（ＣＦＢ）を、ワクチン接種前の－１４日目（ベースライン）とワクチン接種後５０、１０６、および１９０日目のそれぞれとの間の、読取り値のＦＲＥＴ計数の差異として計算した。その後、特定のワクチン接種後の日での応答（日ｉ）を以下のように計算した。 "応答 ＝ ％FRET_日ｉ － ％FRET_ベースライン" 動物を変量効果として用いた、前述の応答に対する一般的な線形混合モデルを、カテゴリー変数として扱ったワクチン群、日、および血清レベルの変数ならびにすべてのその相互作用を用いて適用した。
【図17】図１７は、本発明の一実施形態によるコンジュゲートワクチン（コンジュゲートＡ）ならびにミョウバン水酸化物（ミョウバン）とオリゴＣｐＧ（ＣｐＧ）アジュバントとの組合せを用いて免疫化したマウスが、ワクチンペプチドに対してより高い力価抗体応答をもたらすことを示す図である。成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５～６匹／群）を、２ｕｇまたは０．２ｕｇのどちらかのコンジュゲートＡワクチンを用いて、筋肉内で免疫化し、コンジュゲートワクチンを、単独で、ミョウバンと共に、ＣｐＧと共に、またはミョウバンとＣｐＧの組合せと共にのいずれかで投与した。すべてのマウスに、研究の０日目に一次免疫化を与え、次いで２８日目に単一のブースター免疫化を与えた。ミョウバンアジュバントの用量は５００ｕｇ／マウス／注射であり、ＣｐＧアジュバントの用量は２０ｕｇ／マウス／注射であった。グラフは、ワクチンペプチドＴ３．５をコーティング抗原として用いた免疫化マウスから採取した血清を使用した結合ＥＬＩＳＡの結果を示し、免疫化前（０日目）ならびに免疫化後の２つの時点（２８および４２日目）に１群あたりのＴ３．５特異的平均エンドポイント力価をプロットし、エラーバーは標準誤差を表す。表は、ノンパラメトリックなクラスカル－ワリス検定を使用して抗体価を比較し、クラスカルワリス検定の事後としてウィルコクソン符号順位検定を使用して対での群の比較を評価した結果の統計分析を示す。具体的には以下の通りである。図１７Ａは、マウスを、２ｕｇのコンジュゲートＡワクチンを用いて免疫化したことを示す図である。図１７Ｂは、マウスを、０．２ｕｇのコンジュゲートＡワクチンを用いて免疫化したことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0019】
様々な刊行物、論文、および特許が背景技術および明細書全体にわたって引用または記
載されており、これらの参考文献のそれぞれが、その全体で本明細書中に参考として組み
込まれている。本明細書中に含められた文書、行為、材料、装置、論文などの議論は、本
発明のコンテクストを提供する目的のものである。そのような議論は、これらの事項の任
意のものまたは全体が、開示または特許請求されている任意の発明に関して従来技術の一
部を形成することを承認するものではない。
載されており、これらの参考文献のそれぞれが、その全体で本明細書中に参考として組み
込まれている。本明細書中に含められた文書、行為、材料、装置、論文などの議論は、本
発明のコンテクストを提供する目的のものである。そのような議論は、これらの事項の任
意のものまたは全体が、開示または特許請求されている任意の発明に関して従来技術の一
部を形成することを承認するものではない。
【0020】
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、
本発明が属する分野の技術者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない
場合は、本明細書中で使用する特定の用語は本明細書中に記載する意味を有する。
本発明が属する分野の技術者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない
場合は、本明細書中で使用する特定の用語は本明細書中に記載する意味を有する。
【0021】
本明細書および添付の特許請求の範囲中で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの
（ａｎ）」、および「その（ｔｈ）」には、コンテクストにより明らかにそうでないと指
示されない限り、複数形の指示対象が含まれることに注意する必要がある。
（ａｎ）」、および「その（ｔｈ）」には、コンテクストにより明らかにそうでないと指
示されない限り、複数形の指示対象が含まれることに注意する必要がある。
【0022】
別段に記述しない限りは、本明細書中に記載の濃度または濃度範囲などの任意の数値は
、すべての場合において用語「約」によって修飾されるとして理解されるものである。し
たがって、数値には、典型的には言及した値の±１０％が含まれる。たとえば、１ｍｇ／
ｍＬの濃度には０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬが含まれる。同様に、１％～１０％
（ｗ／ｖ）の濃度範囲には０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）が含まれる。本明細書
中で使用する数値範囲の使用は、コンテクストにより明らかにそうでないと指示されない
限り、すべての可能な部分範囲、その範囲内にあるすべての個々の数値（そのような範囲
内にある整数が含まれる）、および値の分数が明白に含まれる。
、すべての場合において用語「約」によって修飾されるとして理解されるものである。し
たがって、数値には、典型的には言及した値の±１０％が含まれる。たとえば、１ｍｇ／
ｍＬの濃度には０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬが含まれる。同様に、１％～１０％
（ｗ／ｖ）の濃度範囲には０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）が含まれる。本明細書
中で使用する数値範囲の使用は、コンテクストにより明らかにそうでないと指示されない
限り、すべての可能な部分範囲、その範囲内にあるすべての個々の数値（そのような範囲
内にある整数が含まれる）、および値の分数が明白に含まれる。
【0023】
別段に指定しない限りは、一連の要素に先行する用語「少なくとも」とは、その一連に
あるすべての要素をいうと理解されるものである。当業者は、本明細書中に記載の本発明
の具体的な実施形態の多くの均等物を理解する、または日常的な実験以上のものを使用せ
ずにそれを確認できるであろう。そのような均等物は本発明によって包含されることを意
図する。
あるすべての要素をいうと理解されるものである。当業者は、本明細書中に記載の本発明
の具体的な実施形態の多くの均等物を理解する、または日常的な実験以上のものを使用せ
ずにそれを確認できるであろう。そのような均等物は本発明によって包含されることを意
図する。
【0024】
本明細書中で使用する用語「含むこと」、「含む」、「含まれること」、「含まれる」
、「有すること」、「有する」、「含有すること」、もしくは「含有する」、またはその
任意の他の変形は、記述した整数または整数群の包含を暗示するが、任意の他の整数また
は整数群の排除を暗示せず、また、非排他的または開放型であることを意図すると理解さ
れるものとする。たとえば、要素のリストを含む組成物、混合物、プロセス、方法、論文
、または器具は、必ずしもそれらの要素のみに限定されず、明白に列挙されていない、ま
たはそのような組成物、混合物、プロセス、方法、論文、もしくは器具に固有でない他の
要素も含まれることができる。さらに、反対のことが明白に記述されていない限りは、「
または」とは、排他的なまたはではなく、包括的なまたはをいう。たとえば、条件Ａまた
はＢは、以下のうちの任意の１つによって満たされる：Ａが真である（または存在する）
かつＢが偽である（または存在しない）、Ａが偽である（または存在しない）かつＢが真
である（または存在する）、およびＡおよびＢがどちらも真である（または存在する）。
、「有すること」、「有する」、「含有すること」、もしくは「含有する」、またはその
任意の他の変形は、記述した整数または整数群の包含を暗示するが、任意の他の整数また
は整数群の排除を暗示せず、また、非排他的または開放型であることを意図すると理解さ
れるものとする。たとえば、要素のリストを含む組成物、混合物、プロセス、方法、論文
、または器具は、必ずしもそれらの要素のみに限定されず、明白に列挙されていない、ま
たはそのような組成物、混合物、プロセス、方法、論文、もしくは器具に固有でない他の
要素も含まれることができる。さらに、反対のことが明白に記述されていない限りは、「
または」とは、排他的なまたはではなく、包括的なまたはをいう。たとえば、条件Ａまた
はＢは、以下のうちの任意の１つによって満たされる：Ａが真である（または存在する）
かつＢが偽である（または存在しない）、Ａが偽である（または存在しない）かつＢが真
である（または存在する）、およびＡおよびＢがどちらも真である（または存在する）。
【0025】
当業者には理解されるであろうことに、好ましい発明の構成要素の寸法または特徴に言
及する場合に本明細書中で使用する用語「約」、「約」、「一般に」、「実質的に」、お
よび同様の用語は、記載した寸法／特徴が厳密な境界またはパラメーターではなく、機能
的に同じまたは同様である、それからの軽微な変形を排除しないことを示すことを理解さ
れたい。最小限でも、数値パラメーターが含まれるそのような言及には、当分野において
認められている数学的および工業的原理（たとえば、丸め、測定誤差または他の系統誤差
、製作公差など）を使用して、最小有効数字を変化させない変形が含まれるであろう。
及する場合に本明細書中で使用する用語「約」、「約」、「一般に」、「実質的に」、お
よび同様の用語は、記載した寸法／特徴が厳密な境界またはパラメーターではなく、機能
的に同じまたは同様である、それからの軽微な変形を排除しないことを示すことを理解さ
れたい。最小限でも、数値パラメーターが含まれるそのような言及には、当分野において
認められている数学的および工業的原理（たとえば、丸め、測定誤差または他の系統誤差
、製作公差など）を使用して、最小有効数字を変化させない変形が含まれるであろう。
【0026】
微小管関連タンパク質タウ、ＭＡＰＴ、神経原線維のもつれタンパク質、対らせん状細
線維－タウ、ＰＨＦ－タウ、ＭＡＰＴＬ、ＭＴＢＴ１としても知られる、本明細書中で使
用する用語「タウ」または「タウタンパク質」、複数のアイソフォームを有する、豊富な
中枢および末梢神経系のタンパク質をいう。ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）では、選択的スプ
ライシングが原因で、３５２～４４１個のアミノ酸の長さの大きさの範囲の、６個の主要
なタウアイソフォームが存在する（Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009）
。タウの例には、それだけには限定されないが、４つの反復および２つの挿入を有する、
４４１個のアミノ酸の最も長いタウアイソフォーム（４Ｒ２Ｎ）、ならびに３つの反復を
有し、挿入なしの、３５２個のアミノ酸の長さの最も短い（胎児）アイソフォーム（３Ｒ
０Ｎ）などの、ＣＮＳ中のタウアイソフォームが含まれる。また、タウの例には、３００
個の追加の残基（エクソン４ａ）を含有する、末梢神経中で発現される「ビッグタウ（bi
g tau）」アイソフォームも含まれる。Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Ac
ta 1502 (2000) 122-132。タウの例には、６７６２個のヌクレオチドの長さのｍＲＮＡ転
写物（ＮＭ＿０１６８３５．４）によってコードされている、７５８個のアミノ酸の長さ
のタンパク質であるヒトビッグタウ、またはそのアイソフォームが含まれる。例示したヒ
トビッグタウのアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５８５１９．３に表され
ている。本明細書中で使用する用語「タウ」には、（カニクイ（cynomolgous）ザル（Mac
aca Fascicularis））または（チンパンジー（Pan troglodytes））などのヒト以外の種
からのタウの相同体が含まれる。本明細書中で使用する用語「タウ」には、完全長野生型
タウの突然変異、たとえば、点突然変異、断片、挿入、欠失、およびスプライス変異体を
含むタンパク質が含まれる。また、用語「タウ」には、タウアミノ酸配列の翻訳後修飾も
包含される。翻訳後修飾には、それだけには限定されないがリン酸化が含まれる。
線維－タウ、ＰＨＦ－タウ、ＭＡＰＴＬ、ＭＴＢＴ１としても知られる、本明細書中で使
用する用語「タウ」または「タウタンパク質」、複数のアイソフォームを有する、豊富な
中枢および末梢神経系のタンパク質をいう。ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）では、選択的スプ
ライシングが原因で、３５２～４４１個のアミノ酸の長さの大きさの範囲の、６個の主要
なタウアイソフォームが存在する（Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009）
。タウの例には、それだけには限定されないが、４つの反復および２つの挿入を有する、
４４１個のアミノ酸の最も長いタウアイソフォーム（４Ｒ２Ｎ）、ならびに３つの反復を
有し、挿入なしの、３５２個のアミノ酸の長さの最も短い（胎児）アイソフォーム（３Ｒ
０Ｎ）などの、ＣＮＳ中のタウアイソフォームが含まれる。また、タウの例には、３００
個の追加の残基（エクソン４ａ）を含有する、末梢神経中で発現される「ビッグタウ（bi
g tau）」アイソフォームも含まれる。Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Ac
ta 1502 (2000) 122-132。タウの例には、６７６２個のヌクレオチドの長さのｍＲＮＡ転
写物（ＮＭ＿０１６８３５．４）によってコードされている、７５８個のアミノ酸の長さ
のタンパク質であるヒトビッグタウ、またはそのアイソフォームが含まれる。例示したヒ
トビッグタウのアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５８５１９．３に表され
ている。本明細書中で使用する用語「タウ」には、（カニクイ（cynomolgous）ザル（Mac
aca Fascicularis））または（チンパンジー（Pan troglodytes））などのヒト以外の種
からのタウの相同体が含まれる。本明細書中で使用する用語「タウ」には、完全長野生型
タウの突然変異、たとえば、点突然変異、断片、挿入、欠失、およびスプライス変異体を
含むタンパク質が含まれる。また、用語「タウ」には、タウアミノ酸配列の翻訳後修飾も
包含される。翻訳後修飾には、それだけには限定されないがリン酸化が含まれる。
【0027】
本明細書中で使用する用語「ペプチド」または「ポリペプチド」とは、ペプチド結合に
よって連結された、アミノ酸残基から構成されるポリマー、関連する天然に存在する構造
的変異体、およびその合成の天然に存在しない類似体をいう。この用語は、任意の大きさ
、構造、または機能のペプチドをいう。典型的には、ペプチドは少なくとも３個のアミノ
酸の長さである。ペプチドは、天然に存在する、組換え、もしくは合成のもの、またはそ
の任意の組合せであることができる。合成ペプチドは、たとえば自動ポリペプチド合成機
を使用して合成することができる。タウペプチドの例には、約５～約３０個のアミノ酸の
長さ、好ましくは約１０～約２５個のアミノ酸の長さ、より好ましくは約１６～約２１個
のアミノ酸の長さのタウタンパク質の任意のペプチドが含まれる。本開示では、ペプチド
をＮからＣ末端に標準の３文字または１文字のアミノ酸略記を使用して列挙し、リン酸残
基を「ｐ」で示す。本発明において有用なタウペプチドの例には、それだけには限定され
ないが、配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウペプチド、または配列番
号１～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、も
しくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウペプチドが含まれる。
よって連結された、アミノ酸残基から構成されるポリマー、関連する天然に存在する構造
的変異体、およびその合成の天然に存在しない類似体をいう。この用語は、任意の大きさ
、構造、または機能のペプチドをいう。典型的には、ペプチドは少なくとも３個のアミノ
酸の長さである。ペプチドは、天然に存在する、組換え、もしくは合成のもの、またはそ
の任意の組合せであることができる。合成ペプチドは、たとえば自動ポリペプチド合成機
を使用して合成することができる。タウペプチドの例には、約５～約３０個のアミノ酸の
長さ、好ましくは約１０～約２５個のアミノ酸の長さ、より好ましくは約１６～約２１個
のアミノ酸の長さのタウタンパク質の任意のペプチドが含まれる。本開示では、ペプチド
をＮからＣ末端に標準の３文字または１文字のアミノ酸略記を使用して列挙し、リン酸残
基を「ｐ」で示す。本発明において有用なタウペプチドの例には、それだけには限定され
ないが、配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウペプチド、または配列番
号１～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、も
しくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウペプチドが含まれる。
【0028】
本明細書中で使用する用語「ホスホペプチド」または「ホスホエピトープ」とは、１つ
または複数のアミノ酸残基でリン酸化されたペプチドをいう。タウホスホペプチドの例に
は、１つまたは複数のリン酸化されたアミノ酸残基を含む任意のタウペプチドが含まれる
。本発明において有用なタウホスホペプチドの例には、それだけには限定されないが、配
列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチド、ま
たは配列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８
０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウホスホペプ
チドが含まれる。
または複数のアミノ酸残基でリン酸化されたペプチドをいう。タウホスホペプチドの例に
は、１つまたは複数のリン酸化されたアミノ酸残基を含む任意のタウペプチドが含まれる
。本発明において有用なタウホスホペプチドの例には、それだけには限定されないが、配
列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチド、ま
たは配列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８
０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウホスホペプ
チドが含まれる。
【0029】
本発明のタウペプチドは、固相ペプチド合成または組換え発現系によって合成すること
ができる。自動ペプチド合成機は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォル
ニア州Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ）などの数々の供給業者から販売されている。組換え発現
系には、大腸菌（E. coli）などの細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞などを含
むことができる。組換え発現のための手順は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A
Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989)によって記載されている。
ができる。自動ペプチド合成機は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォル
ニア州Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ）などの数々の供給業者から販売されている。組換え発現
系には、大腸菌（E. coli）などの細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞などを含
むことができる。組換え発現のための手順は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A
Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989)によって記載されている。
【0030】
タウはヒト「自己」タンパク質である。このことは、原則的に、タウに特異的な受容体
を保有するすべてのリンパ球は、発生の間に消失している（中枢性寛容）、または末梢性
寛容機構によって不応性とされているはずであることを意味する。この問題は、自己また
は「変更された自己」タンパク質（たとえば腫瘍抗原）に対するワクチンの開発における
顕著な障害であることが判明している。
を保有するすべてのリンパ球は、発生の間に消失している（中枢性寛容）、または末梢性
寛容機構によって不応性とされているはずであることを意味する。この問題は、自己また
は「変更された自己」タンパク質（たとえば腫瘍抗原）に対するワクチンの開発における
顕著な障害であることが判明している。
【0031】
抗原（自己または感染性）に対する高品質の抗体の生成は、抗体を産生するＢリンパ球
だけでなく、ＣＤ４＋Ｔ「ヘルパー」リンパ球の作用も必要とする。ＣＤ４＋Ｔ細胞は重
大な生存および成熟シグナルをＢリンパ球に提供し、ＣＤ４＋Ｔ細胞欠乏動物は免疫抑制
が深刻である。また、ＣＤ４＋Ｔ細胞は寛容機構の影響を受けやすく、強力な抗自己（た
とえば抗タウ）抗体応答を生じることのさらなる障害は、タウ反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞がヒ
ト／動物レパートリーにおいて希少または存在しない可能性も高いことである。
だけでなく、ＣＤ４＋Ｔ「ヘルパー」リンパ球の作用も必要とする。ＣＤ４＋Ｔ細胞は重
大な生存および成熟シグナルをＢリンパ球に提供し、ＣＤ４＋Ｔ細胞欠乏動物は免疫抑制
が深刻である。また、ＣＤ４＋Ｔ細胞は寛容機構の影響を受けやすく、強力な抗自己（た
とえば抗タウ）抗体応答を生じることのさらなる障害は、タウ反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞がヒ
ト／動物レパートリーにおいて希少または存在しない可能性も高いことである。
【0032】
理論に束縛されることを望まず、いかなる様式でも本発明の範囲を限定しないが、この
問題は本発明のワクチン組成物によって回避されると考えられている。
問題は本発明のワクチン組成物によって回避されると考えられている。
【0033】
一実施形態では、ＨＬＡ ＤＲ（ヒト白血球抗原－抗原Ｄ関連）分子のほとんどまたは
全部と結合することができるＴ細胞エピトープも含む、タウペプチドを含むリポソーム（
一例を図１の上部に示す）を生成する。その後、Ｔ細胞エピトープはＣＤ４＋Ｔ細胞を活
性化させることができ、必須の成熟および生存シグナルをタウ特異的Ｂ細胞に提供する（
図２）。別の実施形態では、タウペプチドと担体タンパク質とのコンジュゲートを生成し
（一例を図１の下部に示す）、これは強力なヘルパーＴ細胞応答（図３）を生じる。本実
施形態では、担体に特異的なＴ細胞が生存および成熟シグナルを自己反応性Ｂ細胞に提供
する、「非連結認識」を使用する。したがって、タウ特異的Ｂ細胞は、親和性成熟、免疫
グロブリンクラススイッチを始動させ、長期的な記憶プールを確立するために重大なシグ
ナルを受け取る。タウリポソームおよびタウコンジュゲートを使用して、同種または異種
の免疫化スキームにおいて、プライムおよび／またはブーストにおいてリポソームまたは
コンジュゲートのいずれかを用いて、タウ抗原に対する高品質な抗体を生成することがで
きる。
全部と結合することができるＴ細胞エピトープも含む、タウペプチドを含むリポソーム（
一例を図１の上部に示す）を生成する。その後、Ｔ細胞エピトープはＣＤ４＋Ｔ細胞を活
性化させることができ、必須の成熟および生存シグナルをタウ特異的Ｂ細胞に提供する（
図２）。別の実施形態では、タウペプチドと担体タンパク質とのコンジュゲートを生成し
（一例を図１の下部に示す）、これは強力なヘルパーＴ細胞応答（図３）を生じる。本実
施形態では、担体に特異的なＴ細胞が生存および成熟シグナルを自己反応性Ｂ細胞に提供
する、「非連結認識」を使用する。したがって、タウ特異的Ｂ細胞は、親和性成熟、免疫
グロブリンクラススイッチを始動させ、長期的な記憶プールを確立するために重大なシグ
ナルを受け取る。タウリポソームおよびタウコンジュゲートを使用して、同種または異種
の免疫化スキームにおいて、プライムおよび／またはブーストにおいてリポソームまたは
コンジュゲートのいずれかを用いて、タウ抗原に対する高品質な抗体を生成することがで
きる。
【0034】
リポソーム
一般的な一態様では、本発明は、
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
一般的な一態様では、本発明は、
ａ．好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームに関する。
【0035】
本発明の実施形態によるリポソームは、本明細書中、「改善リポソーム」、「改善リポ
ソームワクチン」または「本発明の実施形態によるリポソームワクチン」または「タウリ
ポソーム」または「最適化リポソームワクチン」または「第二世代リポソーム」とも呼ば
れる。
ソームワクチン」または「本発明の実施形態によるリポソームワクチン」または「タウリ
ポソーム」または「最適化リポソームワクチン」または「第二世代リポソーム」とも呼ば
れる。
【0036】
本明細書中で使用する用語「リポソーム」とは、一般に、高い脂質含有量を有する材料
、たとえば、リン脂質、コレステロールから作られる脂質小胞をいう。これらの小胞の脂
質は、一般に、脂質二重層の形態で組織化されている。脂質二重層は、一般に、脂質二重
層の複数のタマネギ様の殻の間に散在しており多重膜脂質小胞（ＭＬＶ）を形成している
か、または非晶質中心腔内に含有されている、体積をカプセル封入している。非晶質中心
腔を有する脂質小胞は単層脂質小胞である、すなわち、腔を取り囲む単一の末梢二重層を
有するものである。大型単層膜ベシクル（ＬＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ～数マイクロ
メートル、たとえば１００～２００ｎｍ以上の直径を有する一方で、小型単層脂質小胞（
ＳＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ未満、たとえば２０～１００ｎｍ、典型的には１５～３
０ｍｍの直径を有する。
、たとえば、リン脂質、コレステロールから作られる脂質小胞をいう。これらの小胞の脂
質は、一般に、脂質二重層の形態で組織化されている。脂質二重層は、一般に、脂質二重
層の複数のタマネギ様の殻の間に散在しており多重膜脂質小胞（ＭＬＶ）を形成している
か、または非晶質中心腔内に含有されている、体積をカプセル封入している。非晶質中心
腔を有する脂質小胞は単層脂質小胞である、すなわち、腔を取り囲む単一の末梢二重層を
有するものである。大型単層膜ベシクル（ＬＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ～数マイクロ
メートル、たとえば１００～２００ｎｍ以上の直径を有する一方で、小型単層脂質小胞（
ＳＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ未満、たとえば２０～１００ｎｍ、典型的には１５～３
０ｍｍの直径を有する。
【0037】
特定の実施形態によれば、リポソームは１つまたは複数のタウペプチドを含む。特定の
実施形態によれば、リポソーム中のタウペプチドは同じまたは異なり得る。
実施形態によれば、リポソーム中のタウペプチドは同じまたは異なり得る。
【0038】
当業者に知られている任意の適切なタウペプチドを、本開示に鑑みて本発明において使
用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数は
、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、タウペプチ
ドのうちの１つまたは複数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくと
も７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、こ
こで、アミノ酸残基はどれもリン酸化されていない、または１つもしくは複数のアミノ酸
残基がリン酸化されている。
用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数は
、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、タウペプチ
ドのうちの１つまたは複数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくと
も７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、こ
こで、アミノ酸残基はどれもリン酸化されていない、または１つもしくは複数のアミノ酸
残基がリン酸化されている。
【0039】
特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数はタウホスホペプチド
である。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１
～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～
１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしく
は９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまた
は複数はリン酸化されている。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号１～３のうち
の１つのアミノ酸配列を含む。タウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。
である。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１
～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～
１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしく
は９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまた
は複数はリン酸化されている。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号１～３のうち
の１つのアミノ酸配列を含む。タウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。
【0040】
本出願の実施形態によれば、タウペプチドはリポソームの表面上に提示されている。タ
ウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドは、本開示に鑑みて当分野で知られている方
法を使用して、リポソームの表面上に提示させることができる。たとえば、その内容が本
明細書中に参考として組み込まれている米国特許第８，６４７，６３１号明細書および第
９，６８７，４４７号明細書中の関連開示を参照されたい。特定の実施形態によれば、ホ
スホペプチドを含めた１つまたは複数のタウペプチドは、タウペプチドがリポソームの表
面上に提示されることを可能にする、パルミトイル化またはドデシル修飾などの１つまた
は複数の修飾をさらに含む。修飾を容易にするために、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または場合によ
ってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの追加のアミノ酸残基をタウペプチドに付加することが
できる。脂質アンカーの位置が、ペプチド配列の様々なコンホメーションを誘導すること
が報告されている（Hickman et al., J. Biol. Chem. vol. 286, NO. 16, pp. 13966-139
76, April 22, 2011）。理論に束縛されることを望まないが、両末端に疎水性部分を付加
することが、タウペプチドの病理学的ベータシートコンホメーションを増加させ得ると考
えられている。したがって、１つまたは複数のタウペプチドは、両末端に疎水性部分をさ
らに含む。修飾されたタウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。好ましくは、リポソー
ムの表面上に提示されたタウペプチドは、配列番号２７～配列番号３８のうちの１つアミ
ノ酸配列からなる。
ウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドは、本開示に鑑みて当分野で知られている方
法を使用して、リポソームの表面上に提示させることができる。たとえば、その内容が本
明細書中に参考として組み込まれている米国特許第８，６４７，６３１号明細書および第
９，６８７，４４７号明細書中の関連開示を参照されたい。特定の実施形態によれば、ホ
スホペプチドを含めた１つまたは複数のタウペプチドは、タウペプチドがリポソームの表
面上に提示されることを可能にする、パルミトイル化またはドデシル修飾などの１つまた
は複数の修飾をさらに含む。修飾を容易にするために、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または場合によ
ってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの追加のアミノ酸残基をタウペプチドに付加することが
できる。脂質アンカーの位置が、ペプチド配列の様々なコンホメーションを誘導すること
が報告されている（Hickman et al., J. Biol. Chem. vol. 286, NO. 16, pp. 13966-139
76, April 22, 2011）。理論に束縛されることを望まないが、両末端に疎水性部分を付加
することが、タウペプチドの病理学的ベータシートコンホメーションを増加させ得ると考
えられている。したがって、１つまたは複数のタウペプチドは、両末端に疎水性部分をさ
らに含む。修飾されたタウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。好ましくは、リポソー
ムの表面上に提示されたタウペプチドは、配列番号２７～配列番号３８のうちの１つアミ
ノ酸配列からなる。
【0041】
本明細書中で使用する用語「ヘルパーＴ細胞エピトープ」とは、ヘルパーＴ細胞による
認識が可能なエピトープを含むポリペプチドをいう。ヘルパーＴ細胞エピトープの例には
、それだけには限定されないが、破傷風トキソイド（たとえば、Ｐ２およびＰ３０エピト
ープ、それぞれＴ２およびＴ３０とも呼ばれる）、Ｂ型肝炎表面抗原、コレラ毒素Ｂ、ト
キソイド、ジフテリアトキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、トラコーマクラミジア（
Chlamydia trachomatis）主要外膜タンパク質、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falcip
arum）スポロゾイト周辺（circumsporozite）Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）
ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）トリオースリン酸イソメラーゼ、
百日咳菌（Bordetella pertussis）、破傷風菌（Clostridium tetani）、パーツサリア・
トラキサリナ（Pertusaria trachythallina）、大腸菌（Escherichia coli）ＴｒａＴ、
およびインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）が含まれる。
認識が可能なエピトープを含むポリペプチドをいう。ヘルパーＴ細胞エピトープの例には
、それだけには限定されないが、破傷風トキソイド（たとえば、Ｐ２およびＰ３０エピト
ープ、それぞれＴ２およびＴ３０とも呼ばれる）、Ｂ型肝炎表面抗原、コレラ毒素Ｂ、ト
キソイド、ジフテリアトキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、トラコーマクラミジア（
Chlamydia trachomatis）主要外膜タンパク質、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falcip
arum）スポロゾイト周辺（circumsporozite）Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）
ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）トリオースリン酸イソメラーゼ、
百日咳菌（Bordetella pertussis）、破傷風菌（Clostridium tetani）、パーツサリア・
トラキサリナ（Pertusaria trachythallina）、大腸菌（Escherichia coli）ＴｒａＴ、
およびインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）が含まれる。
【0042】
当業者に知られている任意の適切なヘルパーＴ細胞エピトープを、本開示に鑑みて本発
明において使用することができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープ
は、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配
列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、１つまたは複数のアミノ酸、たと
えば、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙ
ｓ（Ｋ）を含むペプチドリンカーなどのリンカーを介して一緒に融合された、配列番号２
３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの２つ以上を含む。リンカーの長さは変動するこ
とができ、好ましくは１～５個のアミノ酸である。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトー
プは、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、ＲＫからなる群から選択される１つまたは複数のリンカーを
介して一緒に融合された、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの３つ以上
を含む。ヘルパーＴ細胞エピトープはそのＣ末端がアミド化され得る。
明において使用することができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープ
は、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配
列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、１つまたは複数のアミノ酸、たと
えば、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙ
ｓ（Ｋ）を含むペプチドリンカーなどのリンカーを介して一緒に融合された、配列番号２
３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの２つ以上を含む。リンカーの長さは変動するこ
とができ、好ましくは１～５個のアミノ酸である。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトー
プは、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、ＲＫからなる群から選択される１つまたは複数のリンカーを
介して一緒に融合された、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの３つ以上
を含む。ヘルパーＴ細胞エピトープはそのＣ末端がアミド化され得る。
【0043】
本出願の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープは、たとえば共有結合した疎水
性部分によって繋留させて、リポソーム表面上に取り込ませることができ、ここで、前記
疎水性部分は、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフ
ィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にアルキル基または脂肪酸、特に少なくとも３
個の炭素原子、特に少なくとも４個の炭素原子、特に少なくとも６個の炭素原子、特に少
なくとも８個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子、特に少なくとも１６個の炭
素原子の炭素主鎖を有するものである。本発明の一実施形態では、疎水性部分はパルミチ
ン酸である。あるいは、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカプセル封入させる
ことができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカ
プセル封入されている。
性部分によって繋留させて、リポソーム表面上に取り込ませることができ、ここで、前記
疎水性部分は、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフ
ィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にアルキル基または脂肪酸、特に少なくとも３
個の炭素原子、特に少なくとも４個の炭素原子、特に少なくとも６個の炭素原子、特に少
なくとも８個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子、特に少なくとも１６個の炭
素原子の炭素主鎖を有するものである。本発明の一実施形態では、疎水性部分はパルミチ
ン酸である。あるいは、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカプセル封入させる
ことができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカ
プセル封入されている。
【0044】
ヘルパーＴ細胞エピトープは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して、
リポソーム中のその所望の位置を修飾することができる。特定の実施形態によれば、本発
明において有用なヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号３９～配列番号４４のうちの１
つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号１３～配
列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
リポソーム中のその所望の位置を修飾することができる。特定の実施形態によれば、本発
明において有用なヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号３９～配列番号４４のうちの１
つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号１３～配
列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【0045】
特定の実施形態によれば、リポソームは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープと
を１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、または６：１の重量比で含む。
を１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、または６：１の重量比で含む。
【0046】
一実施形態では、リポソームは、トール様受容体リガンドを含む少なくとも１つのアジ
ュバントをさらに含む。したがって、別の一般的な態様では、本発明は、
ａ．タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む、リポソームに関する。
ュバントをさらに含む。したがって、別の一般的な態様では、本発明は、
ａ．タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む、リポソームに関する。
【0047】
本明細書中で使用する用語「トール様受容体」または「ＴＬＲ」とは、自然免疫応答に
おいて主要な役割を果たすパターン認識受容体（ＰＲＲ）タンパク質のクラスをいう。Ｔ
ＬＲは、細菌、真菌、寄生生物、およびウイルスなどの微生物病原体からの病原体関連分
子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、これは宿主分子とは区別することができる。ＴＬＲは
、典型的には二量体として機能する膜貫通タンパク質であり、抗原提示樹状細胞および食
作用マクロファージを含めた自然免疫応答に関与する細胞によって発現される。少なくと
も１０個のヒトＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ１０、ならびに少
なくとも１２個のネズミＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ９および
ＴＬＲ１１～ＴＬＲ１３が存在し、これらは、それが認識する抗原の種類が異なる。たと
えば、ＴＬＲ４は、多くのグラム陰性細菌中に存在する構成要素であるリポ多糖（ＬＰＳ
）、ならびに低密度リポタンパク質、ベータ－デフェンシン、および熱ショックタンパク
質などのウイルスのタンパク質、多糖、および内在性タンパク質を認識し、ＴＬＲ９は、
原核ゲノムでは豊富であるが脊椎動物ゲノムでは希少である、非メチル化シトシン－リン
酸－グアニン（ＣｐＧ）一本鎖または二本鎖ジヌクレオチドによって活性化される、ヌク
レオチド感知ＴＬＲである。ＴＬＲの活性化は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）、炎症
性サイトカイン、およびケモカインの産生、ならびに免疫応答の誘導をもたらす、一連の
シグナル伝達事象をもたらす。最終的に、この炎症は適応免疫系も活性化し、その後、浸
潤病原体および感染細胞の排除をもたらす。
おいて主要な役割を果たすパターン認識受容体（ＰＲＲ）タンパク質のクラスをいう。Ｔ
ＬＲは、細菌、真菌、寄生生物、およびウイルスなどの微生物病原体からの病原体関連分
子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、これは宿主分子とは区別することができる。ＴＬＲは
、典型的には二量体として機能する膜貫通タンパク質であり、抗原提示樹状細胞および食
作用マクロファージを含めた自然免疫応答に関与する細胞によって発現される。少なくと
も１０個のヒトＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ１０、ならびに少
なくとも１２個のネズミＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ９および
ＴＬＲ１１～ＴＬＲ１３が存在し、これらは、それが認識する抗原の種類が異なる。たと
えば、ＴＬＲ４は、多くのグラム陰性細菌中に存在する構成要素であるリポ多糖（ＬＰＳ
）、ならびに低密度リポタンパク質、ベータ－デフェンシン、および熱ショックタンパク
質などのウイルスのタンパク質、多糖、および内在性タンパク質を認識し、ＴＬＲ９は、
原核ゲノムでは豊富であるが脊椎動物ゲノムでは希少である、非メチル化シトシン－リン
酸－グアニン（ＣｐＧ）一本鎖または二本鎖ジヌクレオチドによって活性化される、ヌク
レオチド感知ＴＬＲである。ＴＬＲの活性化は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）、炎症
性サイトカイン、およびケモカインの産生、ならびに免疫応答の誘導をもたらす、一連の
シグナル伝達事象をもたらす。最終的に、この炎症は適応免疫系も活性化し、その後、浸
潤病原体および感染細胞の排除をもたらす。
【0048】
本明細書中で使用する用語「リガンド」とは、生体分子（たとえば受容体）と複合体を
形成して生物学的目的を果たす分子をいう。特定の実施形態によれば、トール様受容体リ
ガンドはトール様受容体作用剤である。
形成して生物学的目的を果たす分子をいう。特定の実施形態によれば、トール様受容体リ
ガンドはトール様受容体作用剤である。
【0049】
本明細書中で使用する用語「作用剤」とは、１つまたは複数のＴＬＲと結合し、受容体
媒介性の応答を誘導する分子をいう。たとえば、作用剤は、受容体の活性を誘導、刺激、
増加、活性化、促進、増強、またはアップレギュレートすることができる。そのような活
性は「作用活性」という。たとえば、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９作用剤は、結合した受容体
を介して細胞シグナル伝達を活性化または増加することができる。作用剤には、それだけ
には限定されないが、核酸、小分子、タンパク質、炭水化物、脂質、または受容体と結合
もしくは相互作用する任意の他の分子が含まれる。作用剤は、天然受容体リガンドの活性
を模倣することができる。作用剤は、受容体によって認識されることができるように、配
列、コンホメーション、電荷、または他の特徴に関してこれら天然受容体リガンドと相同
的であることができる。この認識は、細胞が、天然受容体リガンドが存在していた場合と
同じ様式で作用剤の存在に反応するような、細胞内での生理的および／または生化学的な
変化をもたらすことができる。特定の実施形態によれば、トール様受容体作用剤はトール
様受容体４作用剤およびトール様受容体９作用剤のうちの少なくとも１つである。
媒介性の応答を誘導する分子をいう。たとえば、作用剤は、受容体の活性を誘導、刺激、
増加、活性化、促進、増強、またはアップレギュレートすることができる。そのような活
性は「作用活性」という。たとえば、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９作用剤は、結合した受容体
を介して細胞シグナル伝達を活性化または増加することができる。作用剤には、それだけ
には限定されないが、核酸、小分子、タンパク質、炭水化物、脂質、または受容体と結合
もしくは相互作用する任意の他の分子が含まれる。作用剤は、天然受容体リガンドの活性
を模倣することができる。作用剤は、受容体によって認識されることができるように、配
列、コンホメーション、電荷、または他の特徴に関してこれら天然受容体リガンドと相同
的であることができる。この認識は、細胞が、天然受容体リガンドが存在していた場合と
同じ様式で作用剤の存在に反応するような、細胞内での生理的および／または生化学的な
変化をもたらすことができる。特定の実施形態によれば、トール様受容体作用剤はトール
様受容体４作用剤およびトール様受容体９作用剤のうちの少なくとも１つである。
【0050】
本明細書中で使用する用語「トール様受容体４作用剤」とは、ＴＬＲ４の作用剤として役
割を果たす任意の化合物をいう。当業者に知られている任意の適切なトール様受容体４作
用剤を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。本発明において有用なト
ール様受容体４リガンドの例には、それだけには限定されないがモノホスホリル脂質Ａ（
ＭＰＬＡ）を含めたＴＬＲ４作用剤が含まれる。本明細書中で使用する用語「モノホスホ
リル脂質Ａ」またはＭＰＬＡ」とは、グラム陰性細菌リポ多糖（ＬＰＳ）内毒素の生物活
性部分である、脂質Ａの修飾された形態をいう。ＭＰＬＡは、免疫賦活活性を維持しつつ
も、ＬＰＳより毒性が低い。ワクチンアジュバントとしては、ＭＰＬＡはワクチン抗原に
対する細胞応答および液性応答をどちらも刺激する。ＭＰＬＡの例には、それだけには限
定されないが、３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、モノホスホリルヘキサ
－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、モノホスホリル３－脱アシル脂質Ａ、および構造的に関
連するその変異体が含まれる。本発明において有用なＭＰＬＡは、当分野で知られている
方法を使用して、または、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（米国アラバマ州Ａ
ｌａｂａｓｔｅｒ）の３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標
）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）、もしくは様々な商業
的供給源のＭＰＬ（商標）などの商業的供給源から得ることができる。特定の実施形態に
よれば、トール様受容体４作用剤はＭＰＬＡである。本明細書中で使用する用語「トール
様受容体９作用剤」とは、ＴＬＲ９の作用剤として作用する任意の化合物をいう。当業者
に知られている任意の適切なトール様受容体９作用剤を、本開示に鑑みて本発明において
使用することができる。本発明において有用なトール様受容体９リガンドの例には、それ
だけには限定されないがＣｐＧオリゴヌクレオチドを含めたＴＬＲ９作用剤が含まれる。
割を果たす任意の化合物をいう。当業者に知られている任意の適切なトール様受容体４作
用剤を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。本発明において有用なト
ール様受容体４リガンドの例には、それだけには限定されないがモノホスホリル脂質Ａ（
ＭＰＬＡ）を含めたＴＬＲ４作用剤が含まれる。本明細書中で使用する用語「モノホスホ
リル脂質Ａ」またはＭＰＬＡ」とは、グラム陰性細菌リポ多糖（ＬＰＳ）内毒素の生物活
性部分である、脂質Ａの修飾された形態をいう。ＭＰＬＡは、免疫賦活活性を維持しつつ
も、ＬＰＳより毒性が低い。ワクチンアジュバントとしては、ＭＰＬＡはワクチン抗原に
対する細胞応答および液性応答をどちらも刺激する。ＭＰＬＡの例には、それだけには限
定されないが、３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、モノホスホリルヘキサ
－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、モノホスホリル３－脱アシル脂質Ａ、および構造的に関
連するその変異体が含まれる。本発明において有用なＭＰＬＡは、当分野で知られている
方法を使用して、または、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（米国アラバマ州Ａ
ｌａｂａｓｔｅｒ）の３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標
）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）、もしくは様々な商業
的供給源のＭＰＬ（商標）などの商業的供給源から得ることができる。特定の実施形態に
よれば、トール様受容体４作用剤はＭＰＬＡである。本明細書中で使用する用語「トール
様受容体９作用剤」とは、ＴＬＲ９の作用剤として作用する任意の化合物をいう。当業者
に知られている任意の適切なトール様受容体９作用剤を、本開示に鑑みて本発明において
使用することができる。本発明において有用なトール様受容体９リガンドの例には、それ
だけには限定されないがＣｐＧオリゴヌクレオチドを含めたＴＬＲ９作用剤が含まれる。
【0051】
本明細書中で使用する用語「ＣｐＧオリゴヌクレオチド」、「ＣｐＧオリゴデオキシヌ
クレオチド」、または「ＣｐＧ ＯＤＮ」とは、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含む
オリゴヌクレオチドをいう。本明細書中で使用する「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデ
オキシヌクレオチド」、または「ＯＤＮ」とは、複数の連結したヌクレオチド単位から形
成されたポリヌクレオチドをいう。そのようなオリゴヌクレオチドは、既存の核酸源から
得ることができるか、または合成方法によって生成することができる。本明細書中で使用
する用語「ＣｐＧモチーフ」とは、リン酸結合またはリン酸ジエステル主鎖もしくは他の
ヌクレオチド間結合によって連結された非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ
）ジヌクレオチド（すなわち、シトシン（Ｃ）次いでグアニン（Ｇ））を含有するヌクレ
オチド配列をいう。
クレオチド」、または「ＣｐＧ ＯＤＮ」とは、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含む
オリゴヌクレオチドをいう。本明細書中で使用する「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデ
オキシヌクレオチド」、または「ＯＤＮ」とは、複数の連結したヌクレオチド単位から形
成されたポリヌクレオチドをいう。そのようなオリゴヌクレオチドは、既存の核酸源から
得ることができるか、または合成方法によって生成することができる。本明細書中で使用
する用語「ＣｐＧモチーフ」とは、リン酸結合またはリン酸ジエステル主鎖もしくは他の
ヌクレオチド間結合によって連結された非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ
）ジヌクレオチド（すなわち、シトシン（Ｃ）次いでグアニン（Ｇ））を含有するヌクレ
オチド配列をいう。
【0052】
特定の実施形態によれば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは脂質付加されている、すなわち
脂質部分とコンジュゲートされている（共有結合している）。
脂質部分とコンジュゲートされている（共有結合している）。
【0053】
本明細書中で使用する「脂質部分」とは、親油性構造を含有する部分をいう。アルキル
基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、ま
たはリン脂質、特にコレステロールなどのステロールまたは脂肪酸などの脂質部分は、核
酸などの高親水性分子に付着した場合に、血漿タンパク質の結合、結果的には親水性分子
の循環半減期を実質的に増強させることができる。さらに、リポタンパク質などの特定の
血漿タンパク質との結合は、対応するリポタンパク質受容体（たとえば、ＬＤＬ受容体、
ＨＤＬ受容体、またはスカベンジャー受容体ＳＲ－Ｂ１）を発現する特定の組織中への取
り込みを増加させることが示されている。特に、ホスホペプチドおよび／またはＣｐＧオ
リゴヌクレオチドとコンジュゲートさせた脂質部分は、前記ペプチドおよび／またはオリ
ゴヌクレオチドが疎水性部分を介してリポソームの膜内に繋留されることを可能にする。
基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、ま
たはリン脂質、特にコレステロールなどのステロールまたは脂肪酸などの脂質部分は、核
酸などの高親水性分子に付着した場合に、血漿タンパク質の結合、結果的には親水性分子
の循環半減期を実質的に増強させることができる。さらに、リポタンパク質などの特定の
血漿タンパク質との結合は、対応するリポタンパク質受容体（たとえば、ＬＤＬ受容体、
ＨＤＬ受容体、またはスカベンジャー受容体ＳＲ－Ｂ１）を発現する特定の組織中への取
り込みを増加させることが示されている。特に、ホスホペプチドおよび／またはＣｐＧオ
リゴヌクレオチドとコンジュゲートさせた脂質部分は、前記ペプチドおよび／またはオリ
ゴヌクレオチドが疎水性部分を介してリポソームの膜内に繋留されることを可能にする。
【0054】
特定の実施形態によれば、本開示に鑑みて、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは任意の適切な
ヌクレオチド間結合を含むことができる。
ヌクレオチド間結合を含むことができる。
【0055】
本明細書中で使用する用語「ヌクレオチド間結合」とは、隣接するヌクレオシド間のリ
ン原子と荷電基または中性基からなる、２つのヌクレオチドをその糖を介して結合させる
化学結合をいう。ヌクレオチド間結合の例には、リン酸ジエステル（ｐｏ）、ホスホロチ
オエート（ｐｓ）、ホスホロジチオエート（ｐｓ２）、メチルホスホネート（ｍｐ）、お
よびメチルホスホロチオエート（ｒｐ）が含まれる。ホスホロチオエート、ホスホロジチ
オエート、メチルホスホネート、およびメチルホスホロチオエートは安定化ヌクレオチド
間結合である一方で、リン酸ジエステルは天然に存在するヌクレオチド間結合である。オ
リゴヌクレオチドホスホロチオエートは、典型的にはＲｐおよびＳｐホスホロチオエート
結合のランダムなラセミ混合物として合成される。
ン原子と荷電基または中性基からなる、２つのヌクレオチドをその糖を介して結合させる
化学結合をいう。ヌクレオチド間結合の例には、リン酸ジエステル（ｐｏ）、ホスホロチ
オエート（ｐｓ）、ホスホロジチオエート（ｐｓ２）、メチルホスホネート（ｍｐ）、お
よびメチルホスホロチオエート（ｒｐ）が含まれる。ホスホロチオエート、ホスホロジチ
オエート、メチルホスホネート、およびメチルホスホロチオエートは安定化ヌクレオチド
間結合である一方で、リン酸ジエステルは天然に存在するヌクレオチド間結合である。オ
リゴヌクレオチドホスホロチオエートは、典型的にはＲｐおよびＳｐホスホロチオエート
結合のランダムなラセミ混合物として合成される。
【0056】
当業者に知られている任意の適切なＣｐＧオリゴヌクレオチドを、本開示に鑑みて本発
明において使用することができる。そのようなＣｐＧオリゴヌクレオチドの例には、それ
だけには限定されないが、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ
１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、またはＣｐＧ２３３６が含まれる。
明において使用することができる。そのようなＣｐＧオリゴヌクレオチドの例には、それ
だけには限定されないが、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ
１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、またはＣｐＧ２３３６が含まれる。
【0057】
本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して、ＣｐＧオリゴヌクレオチドに脂
質付加することができる。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端は
、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、リン酸結合を介してコレステロール分子と共有結
合している。また、他の親油性部分もＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端と共有結合す
ることができる。たとえば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、任意選択でＰＥＧリンカーを
介して、リポソームからのリン脂質と同じ長さの脂質アンカー、すなわち、１本のパルミ
チン酸鎖（Ｐａｌ－ＯＨもしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化）または２
本のパルミチン酸（たとえば１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタ
ノールアミン－Ｎ－（スクシニル）もしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化
）と共有結合することができる。たとえば、その内容が本明細書中に参考として組み込ま
れている米国特許第７，７４１，２９７号明細書中の関連開示を参照されたい。ＰＥＧの
長さは、たとえば１～５個のＰＥＧ単位で変動することができる。
質付加することができる。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端は
、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、リン酸結合を介してコレステロール分子と共有結
合している。また、他の親油性部分もＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端と共有結合す
ることができる。たとえば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、任意選択でＰＥＧリンカーを
介して、リポソームからのリン脂質と同じ長さの脂質アンカー、すなわち、１本のパルミ
チン酸鎖（Ｐａｌ－ＯＨもしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化）または２
本のパルミチン酸（たとえば１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタ
ノールアミン－Ｎ－（スクシニル）もしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化
）と共有結合することができる。たとえば、その内容が本明細書中に参考として組み込ま
れている米国特許第７，７４１，２９７号明細書中の関連開示を参照されたい。ＰＥＧの
長さは、たとえば１～５個のＰＥＧ単位で変動することができる。
【0058】
他のリンカーも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを親油性部分（コレステロール分子など）
と共有結合させるために使用することができ、その例には、それだけには限定されないが
３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーが含まれる。オリゴヌクレオチド化学に適
合性のある短いリンカーがアミノジオールとして必要である。一部の実施形態では、共有
結合にリンカーを使用しない。たとえば、その関連開示が本明細書中に参考として組み込
まれているRies et al., “Convenient synthesis and application of versatile nucle
ic acid lipid membrane anchors in the assembly and fusion of liposomes, Org. Bio
mol. Chem., 2015, 13, 9673を参照されたい。
と共有結合させるために使用することができ、その例には、それだけには限定されないが
３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーが含まれる。オリゴヌクレオチド化学に適
合性のある短いリンカーがアミノジオールとして必要である。一部の実施形態では、共有
結合にリンカーを使用しない。たとえば、その関連開示が本明細書中に参考として組み込
まれているRies et al., “Convenient synthesis and application of versatile nucle
ic acid lipid membrane anchors in the assembly and fusion of liposomes, Org. Bio
mol. Chem., 2015, 13, 9673を参照されたい。
【0059】
特定の実施形態によれば、本発明において有用な脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドは
、配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌク
レオチド配列は、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含んでおり
、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している。任意の適切な
リンカーを使用してＣｐＧオリゴヌクレオチドをコレステロール分子と共有結合させるこ
とができる。好ましくは、リンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
、配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌク
レオチド配列は、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含んでおり
、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している。任意の適切な
リンカーを使用してＣｐＧオリゴヌクレオチドをコレステロール分子と共有結合させるこ
とができる。好ましくは、リンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【0060】
特定の実施形態によれば、リポソームは、
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドと
を含み、タウホスホペプチドはリポソームの表面上に提示されており、ヘルパーＴ細胞エ
ピトープはリポソーム内にカプセル封入されている。
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドと
を含み、タウホスホペプチドはリポソームの表面上に提示されており、ヘルパーＴ細胞エ
ピトープはリポソーム内にカプセル封入されている。
【0061】
特定の実施形態によれば、リポソームは、
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウ
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む。
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウ
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む。
【0062】
特定の実施形態によれば、リポソームは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－
３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ
リル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から
選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む。
３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ
リル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から
選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む。
【0063】
特定の実施形態によれば、リポソームは緩衝液をさらに含む。当業者に知られている任
意の適切な緩衝液を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。一実施形態
では、リポソームはリン酸緩衝生理食塩水を含む。特定の実施形態によれば、緩衝液はヒ
スチジンおよびスクロースを含む。
意の適切な緩衝液を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。一実施形態
では、リポソームはリン酸緩衝生理食塩水を含む。特定の実施形態によれば、緩衝液はヒ
スチジンおよびスクロースを含む。
【0064】
特定の実施形態によれば、リポソームは、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、コレステロール、タウ
ホスホペプチド、およびヘルパーＴ細胞エピトープを９：１：７：０．０７：０．０４の
モル比で含む。
ホスホペプチド、およびヘルパーＴ細胞エピトープを９：１：７：０．０７：０．０４の
モル比で含む。
【0065】
本発明のリポソームは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して作製する
ことができる。
ことができる。
【0066】
本出願の例示的なリポソームを図１に例示する。より詳細には、タウテトラパルミトイ
ル化ホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３、配列番号２８）は、タウペプチドのそれぞれ
の末端で２つのパルミチン酸を介してリポソームの表面上に提示されている。脂質付加Ｃ
ｐＧ（アジュバントＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ）を含むＴＬＲ－９リガンドは、共有結合
しているコレステロールを介してリポソーム膜内に取り込まれている。ＴＬＲ－４リガン
ド（アジュバント３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））も膜内に取り込まれてい
る。ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＡＮ－ＤＲ結合剤Ｔ５０）はカプセル封入されている
。
ル化ホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３、配列番号２８）は、タウペプチドのそれぞれ
の末端で２つのパルミチン酸を介してリポソームの表面上に提示されている。脂質付加Ｃ
ｐＧ（アジュバントＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ）を含むＴＬＲ－９リガンドは、共有結合
しているコレステロールを介してリポソーム膜内に取り込まれている。ＴＬＲ－４リガン
ド（アジュバント３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））も膜内に取り込まれてい
る。ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＡＮ－ＤＲ結合剤Ｔ５０）はカプセル封入されている
。
【0067】
コンジュゲート
一般的な一態様では、本発明は、タウペプチドと、それとコンジュゲートさせた免疫原
性担体とを含むコンジュゲートに関する。
一般的な一態様では、本発明は、タウペプチドと、それとコンジュゲートさせた免疫原
性担体とを含むコンジュゲートに関する。
【0068】
特定の態様によれば、コンジュゲートは、以下の構造：
【0069】
【化3】
【0070】
【化4】
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５、好ましくは３～１１の整数である］
を有する。
【0071】
特定の実施形態によれば、ｘは、１～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５
、２～４、または２～３の整数である。特定の実施形態によれば、ｘは３である。
、２～４、または２～３の整数である。特定の実施形態によれば、ｘは３である。
【0072】
特定の実施形態によれば、ｎは、２～１５、３～１１、３～９、３～８、または３～７
である。
である。
【0073】
特定の実施形態によれば、コンジュゲートは１つまたは複数のタウペプチドを含む。特
定の実施形態によれば、コンジュゲートのタウペプチドは同じまたは異なり得る。
定の実施形態によれば、コンジュゲートのタウペプチドは同じまたは異なり得る。
【0074】
特定の実施形態によれば、任意の適切なタウペプチドを、本開示に鑑みて本発明におい
て使用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複
数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～１２のうちの
１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一
であるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸残基のうちの０個、１個、または複数がリ
ン酸化されている。
て使用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複
数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～１２のうちの
１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一
であるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸残基のうちの０個、１個、または複数がリ
ン酸化されている。
【0075】
特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数はタウホスホペプチド
である。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１
～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～
１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしく
は９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまた
は複数はリン酸化されている。
である。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１
～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～
１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしく
は９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまた
は複数はリン酸化されている。
【0076】
特定の実施形態によれば、タウホスホペプチドは配列番号１～３のうちの１つのアミノ
酸配列からなる。
酸配列からなる。
【0077】
本明細書中で使用する用語「免疫原性担体」とは、タウペプチドとカップリングさせる
ことができる免疫原性物質をいう。タウペプチドとカップリングされた免疫原性部分は、
免疫応答を誘導し、タウペプチドと特異的に結合することができる抗体の産生を誘発する
ことができる。免疫原性部分は、外来物として認識され、したがって宿主から免疫応答を
誘発させる、タンパク質、ポリペプチド、糖タンパク質、複合多糖、粒子、核酸、ポリヌ
クレオチドなどを含めた作動可能な部分である。当業者に知られている任意の適切な免疫
原性担体を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によ
れば、免疫原性担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイ
ド、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性形態）、髄膜炎菌（N. meningitidis）由来
の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体である。特定の実施形態によれば
、免疫原性担体はＫＬＨまたはＣＲＭ１９７である。
ことができる免疫原性物質をいう。タウペプチドとカップリングされた免疫原性部分は、
免疫応答を誘導し、タウペプチドと特異的に結合することができる抗体の産生を誘発する
ことができる。免疫原性部分は、外来物として認識され、したがって宿主から免疫応答を
誘発させる、タンパク質、ポリペプチド、糖タンパク質、複合多糖、粒子、核酸、ポリヌ
クレオチドなどを含めた作動可能な部分である。当業者に知られている任意の適切な免疫
原性担体を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によ
れば、免疫原性担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイ
ド、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性形態）、髄膜炎菌（N. meningitidis）由来
の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体である。特定の実施形態によれば
、免疫原性担体はＫＬＨまたはＣＲＭ１９７である。
【0078】
特定の実施形態によれば、タウペプチドはリンカーを介して担体とコンジュゲートして
いる。本明細書中で使用する用語「リンカー」とは、免疫原性担体をタウペプチドと結合
させる化学部分をいう。当業者に知られている任意の適切なリンカーを、本開示に鑑みて
本発明において使用することができる。リンカーは、たとえば、単一共有結合、置換もし
くは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル部分、ポリエチレングリコ
ール（ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖に基づくリンカー、ジスルフィド結合も
しくはプロテアーゼ切断部位などの切断可能なリンカー、アミノ酸、またはその組合せで
あることができる。リンカーの例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミ
ジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ｍ－マレイミドベンゾイ
ル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のうちの１つまたは複数、Ｃｙｓ
、Ｌｙｓ、または場合によってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの１つまたは複数のアミノ酸
、あるいはその組合せを含むことができる。
いる。本明細書中で使用する用語「リンカー」とは、免疫原性担体をタウペプチドと結合
させる化学部分をいう。当業者に知られている任意の適切なリンカーを、本開示に鑑みて
本発明において使用することができる。リンカーは、たとえば、単一共有結合、置換もし
くは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル部分、ポリエチレングリコ
ール（ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖に基づくリンカー、ジスルフィド結合も
しくはプロテアーゼ切断部位などの切断可能なリンカー、アミノ酸、またはその組合せで
あることができる。リンカーの例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミ
ジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ｍ－マレイミドベンゾイ
ル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のうちの１つまたは複数、Ｃｙｓ
、Ｌｙｓ、または場合によってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの１つまたは複数のアミノ酸
、あるいはその組合せを含むことができる。
【0079】
特定の実施形態によれば、リンカーは、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘ－システイン－アセトアミド
プロピオンアミドまたはｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエス
テル－システイン－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘを含む［式中、ｘは、０～１０の整数、たとえば、
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である］。
プロピオンアミドまたはｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエス
テル－システイン－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘを含む［式中、ｘは、０～１０の整数、たとえば、
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である］。
【0080】
特定の実施形態によれば、担体はリンカーを介してタウペプチドのＮ末端と共有結合し
ている。
ている。
【0081】
他の特定の実施形態によれば、担体はリンカーを介してタウペプチドのＣ末端と共有結
合している。
合している。
【0082】
特定の実施形態によれば、コンジュゲートは、以下の構造：
【0083】
【化5】
を有する。
【0084】
本発明のコンジュゲートは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法によって作製す
ることができる。たとえば、上記コンジュゲートは、スクシンイミジル－３－（ブロモア
セトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）：
ることができる。たとえば、上記コンジュゲートは、スクシンイミジル－３－（ブロモア
セトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）：
【0085】
【化6】
ことができる。続いて、このＣＲＭ１９７前駆体を、そのＮ末端またはそのＣ末端で遊離
求核性チオール基を有するＰＥＧ－システインリンカーとコンジュゲートしているタウペ
プチド（たとえば配列番号２のリン酸化タウペプチド）と反応させて、タウホスホペプチ
ドコンジュゲートを形成することができる。
【0086】
【0087】
医薬組成物
一般的な一態様では、本発明は、治療有効量の本発明のリポソームまたはコンジュゲー
トを、薬学的に許容される賦形剤および／または担体と一緒に含む、医薬組成物に関する
。薬学的に許容される賦形剤および／または担体は当分野で周知である（Remington’s P
harmaceutical Science (15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980を参
照）。医薬組成物の好ましい配合は、意図する投与様式および治療的適用に依存する。組
成物には、動物またはヒト投与のための医薬組成物を配合するために一般的に使用される
ビヒクルとして定義される、薬学的に許容される無毒性の担体または希釈剤が含まれるこ
とができる。希釈剤は、組合せの生物活性に影響を与えないように選択する。そのような
希釈剤の例は、蒸留水、生理的リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、お
よびハンクス液である。さらに、医薬組成物または配合物には、他の担体、アジュバント
、または無毒性の非治療的な非免疫原性の安定化剤なども含まれ得る。担体、賦形剤、ま
たは希釈剤の特徴は特定の適用の投与経路に依存することが理解されよう。
一般的な一態様では、本発明は、治療有効量の本発明のリポソームまたはコンジュゲー
トを、薬学的に許容される賦形剤および／または担体と一緒に含む、医薬組成物に関する
。薬学的に許容される賦形剤および／または担体は当分野で周知である（Remington’s P
harmaceutical Science (15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980を参
照）。医薬組成物の好ましい配合は、意図する投与様式および治療的適用に依存する。組
成物には、動物またはヒト投与のための医薬組成物を配合するために一般的に使用される
ビヒクルとして定義される、薬学的に許容される無毒性の担体または希釈剤が含まれるこ
とができる。希釈剤は、組合せの生物活性に影響を与えないように選択する。そのような
希釈剤の例は、蒸留水、生理的リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、お
よびハンクス液である。さらに、医薬組成物または配合物には、他の担体、アジュバント
、または無毒性の非治療的な非免疫原性の安定化剤なども含まれ得る。担体、賦形剤、ま
たは希釈剤の特徴は特定の適用の投与経路に依存することが理解されよう。
【0088】
医薬組成物は、同じ免疫原性タウペプチドの混合物を含有することができる。あるいは
、医薬組成物は、本発明の異なる免疫原性タウペプチドの混合物を含有することができる
。
、医薬組成物は、本発明の異なる免疫原性タウペプチドの混合物を含有することができる
。
【0089】
神経疾患に対するワクチンに関連する別の問題は、有効性を保証するために並外れて高
い抗体価が必要な可能性があることである。これは、ワクチンの標的抗原が脳内に位置し
ているからである。脳は、血液脳関門（ＢＢＢ）と呼ばれる特殊な細胞構造によって循環
から分離されている。ＢＢＢは、循環から脳内への物質の通過を制限する。これにより、
毒素、微生物などが中枢神経系内に入ることが防止される。また、ＢＢＢは、免疫媒介物
質（抗体など）の、脳を取り囲む間質液および脳脊髄液内への効率的な侵入を防止すると
いう、潜在的により望ましくない効果も有する。
い抗体価が必要な可能性があることである。これは、ワクチンの標的抗原が脳内に位置し
ているからである。脳は、血液脳関門（ＢＢＢ）と呼ばれる特殊な細胞構造によって循環
から分離されている。ＢＢＢは、循環から脳内への物質の通過を制限する。これにより、
毒素、微生物などが中枢神経系内に入ることが防止される。また、ＢＢＢは、免疫媒介物
質（抗体など）の、脳を取り囲む間質液および脳脊髄液内への効率的な侵入を防止すると
いう、潜在的により望ましくない効果も有する。
【0090】
全身循環中に存在する抗体の約０．１％がＢＢＢを横断して脳に入る。このことは、Ｃ
ＮＳ抗原を標的とするワクチンによって誘導される全身性力価が、脳内で有効となるため
には、最小有効力価よりも少なくとも１０００倍高くなければならないことを意味する。
ＮＳ抗原を標的とするワクチンによって誘導される全身性力価が、脳内で有効となるため
には、最小有効力価よりも少なくとも１０００倍高くなければならないことを意味する。
【0091】
特定の実施形態によれば、本発明の医薬組成物はしたがって１つまたは複数の適切なア
ジュバントをさらに含む。したがって、リポソームまたはコンジュゲート中に存在する本
発明のタウペプチドは、対象において所望の免疫応答を達成するために適切なアジュバン
トと組み合わせて投与することができる。適切なアジュバントは、本発明のリポソームま
たはコンジュゲートの投与の前、後、またはそれと同時に投与することができる。好まし
いアジュバントは、応答の定性的形態に影響を与える免疫原のコンホメーション変化を引
き起こさずに、本来備わっている免疫原に対する応答を増大させる。アジュバントの例は
、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウ
ム塩（ミョウバン）である。そのようなアジュバントは、ＭＰＬＡクラス（３脱－Ｏ－ア
シル化モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ
３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））、ＰＨＡＤ（商標）、
ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標））脂質Ａ）、ポリグルタミ
ン酸またはポリリシンなどのポリマーまたは単量体のアミノ酸等の、他の特定の免疫賦活
剤を用いてまたは用いずに使用することができる。そのようなアジュバントは、ムラミル
ペプチド（たとえば、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔ
ｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎ
ｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－ア
ラニン－２－（１’－２’ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリル
オキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチル
ムラミル－Ｌ－Ａｌ－Ｄ－イソグル－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴ
Ｐ－ＤＰＰ）Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標））、または他の細菌細胞壁構成要素などの、他
の特定の免疫賦活剤を用いてまたは用いずに使用することができる。水中油乳濁液には、
５％のスクアレン、０．５％のＴｗｅｅｎ８０、および０．５％のＳｐａｎ８５を含有す
る（任意選択で様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含有する）ＭＦ５９（微小流動化装置を使用し
てサブミクロン粒子へと配合）（国際公開第９０／１４８３７号パンフレット参照）、１
０％のスクアレン、０．４％のＴｗｅｅｎ８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ
１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ（サブミクロン乳濁液へと微小流動化ま
たはボルテックスしてより大きな粒径の乳濁液を生成するかのいずれか）、Ｒｉｂｉ（商
標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉ
ｌｔｏｎ）０．２％のＴｗｅｅｎ８０、ならびに、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標
））、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは
ＭＰＬ（商標）＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群から選択される１つまたは複
数の細菌細胞壁構成要素が含まれる。他のアジュバントには、完全フロイントアジュバン
ト（ＣＦＡ）、ならびにインターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびＩＬ－１２）、
マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などの
サイトカインが含まれる。
ジュバントをさらに含む。したがって、リポソームまたはコンジュゲート中に存在する本
発明のタウペプチドは、対象において所望の免疫応答を達成するために適切なアジュバン
トと組み合わせて投与することができる。適切なアジュバントは、本発明のリポソームま
たはコンジュゲートの投与の前、後、またはそれと同時に投与することができる。好まし
いアジュバントは、応答の定性的形態に影響を与える免疫原のコンホメーション変化を引
き起こさずに、本来備わっている免疫原に対する応答を増大させる。アジュバントの例は
、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウ
ム塩（ミョウバン）である。そのようなアジュバントは、ＭＰＬＡクラス（３脱－Ｏ－ア
シル化モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ
３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））、ＰＨＡＤ（商標）、
ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標））脂質Ａ）、ポリグルタミ
ン酸またはポリリシンなどのポリマーまたは単量体のアミノ酸等の、他の特定の免疫賦活
剤を用いてまたは用いずに使用することができる。そのようなアジュバントは、ムラミル
ペプチド（たとえば、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔ
ｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎ
ｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－ア
ラニン－２－（１’－２’ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリル
オキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチル
ムラミル－Ｌ－Ａｌ－Ｄ－イソグル－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴ
Ｐ－ＤＰＰ）Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標））、または他の細菌細胞壁構成要素などの、他
の特定の免疫賦活剤を用いてまたは用いずに使用することができる。水中油乳濁液には、
５％のスクアレン、０．５％のＴｗｅｅｎ８０、および０．５％のＳｐａｎ８５を含有す
る（任意選択で様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含有する）ＭＦ５９（微小流動化装置を使用し
てサブミクロン粒子へと配合）（国際公開第９０／１４８３７号パンフレット参照）、１
０％のスクアレン、０．４％のＴｗｅｅｎ８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ
１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ（サブミクロン乳濁液へと微小流動化ま
たはボルテックスしてより大きな粒径の乳濁液を生成するかのいずれか）、Ｒｉｂｉ（商
標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉ
ｌｔｏｎ）０．２％のＴｗｅｅｎ８０、ならびに、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標
））、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは
ＭＰＬ（商標）＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群から選択される１つまたは複
数の細菌細胞壁構成要素が含まれる。他のアジュバントには、完全フロイントアジュバン
ト（ＣＦＡ）、ならびにインターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびＩＬ－１２）、
マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などの
サイトカインが含まれる。
【0092】
２つ以上の治療を対象に投与するコンテクストにおいて本明細書中で使用する用語「組
み合わせて」とは、複数の治療薬の使用をいう。用語「組み合わせて」の使用は、治療薬
を対象に投与する順序を制限しない。たとえば、第１の治療薬（たとえば本明細書中に記
載の組成物）を、第２の治療薬を対象に投与する前（たとえば、５分、１５分、３０分、
４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、
７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もし
くは１２週間前）、それと同時に、またはそれに続いて（たとえば、５分、１５分、３０
分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時
間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、
もしくは１２週間後）に投与することができる。
み合わせて」とは、複数の治療薬の使用をいう。用語「組み合わせて」の使用は、治療薬
を対象に投与する順序を制限しない。たとえば、第１の治療薬（たとえば本明細書中に記
載の組成物）を、第２の治療薬を対象に投与する前（たとえば、５分、１５分、３０分、
４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、
７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もし
くは１２週間前）、それと同時に、またはそれに続いて（たとえば、５分、１５分、３０
分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時
間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、
もしくは１２週間後）に投与することができる。
【0093】
本発明の医薬組成物は、当分野で周知の方法によって配合することができる。組成物中
のそれぞれの構成要素の最適な比は、本開示に鑑みて当業者に周知の技法によって決定す
ることができる。
のそれぞれの構成要素の最適な比は、本開示に鑑みて当業者に周知の技法によって決定す
ることができる。
【0094】
使用方法
本発明の別の一般的な態様は、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与する
ことを含む、神経変性疾患、障害、または状態を患っている対象においてタウタンパク質
に対する免疫応答を誘導する方法に関する。特定の態様によれば、免疫応答はリン酸化タ
ウタンパク質、好ましくはｅＰＨＦに対して誘導される。
本発明の別の一般的な態様は、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与する
ことを含む、神経変性疾患、障害、または状態を患っている対象においてタウタンパク質
に対する免疫応答を誘導する方法に関する。特定の態様によれば、免疫応答はリン酸化タ
ウタンパク質、好ましくはｅＰＨＦに対して誘導される。
【0095】
本発明の別の一般的な態様は、神経変性疾患、障害、または状態、対象に本発明の一実
施形態による医薬組成物を投与することを含む、処置または防止する方法に関する。
施形態による医薬組成物を投与することを含む、処置または防止する方法に関する。
【0096】
本明細書中で使用する用語「誘導する」および「刺激する」ならびにその変形は、細胞
活性のいかなる量の測定可能な増加をいう。免疫応答の誘導には、たとえば、免疫細胞集
団の活性化、増殖、もしくは成熟、サイトカイン産生の増加、および／または増加した免
疫機能の別の指標が含まれることができる。特定の実施形態では、免疫応答の誘導には、
Ｂ細胞の増殖の増加、抗原特異的抗体の産生、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の増加、樹状細胞
抗原提示の改善、ならびに／または特定のサイトカイン、ケモカイン、および共刺激マー
カーの発現の増加が含まれることができる。
活性のいかなる量の測定可能な増加をいう。免疫応答の誘導には、たとえば、免疫細胞集
団の活性化、増殖、もしくは成熟、サイトカイン産生の増加、および／または増加した免
疫機能の別の指標が含まれることができる。特定の実施形態では、免疫応答の誘導には、
Ｂ細胞の増殖の増加、抗原特異的抗体の産生、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の増加、樹状細胞
抗原提示の改善、ならびに／または特定のサイトカイン、ケモカイン、および共刺激マー
カーの発現の増加が含まれることができる。
【0097】
動物またはヒト生物への投与の際に抗タウ免疫応答を誘導または刺激する能力は、当分
野において標準的である様々なアッセイを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖ
ｏのどちらかで評価することができる。免疫応答の開始および活性化を評価するために利
用可能な技法の一般的な説明には、たとえばColigan et al. (1992 and 1994, Current P
rotocols in Immunology; ed. J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)を
参照されたい。細胞性免疫の測定は、当分野で容易に知られている方法によって、たとえ
ば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含めた活性化されたエフェクター細
胞によって分泌されたサイトカインプロファイルの測定によって（たとえば、ＥＬＩＳＰ
ＯＴによるＩＬ－４またはＩＦＮガンマ産生細胞の定量）、免疫エフェクター細胞の活性
化状態の決定によって（たとえば、古典的な［３Ｈ］チミジン取り込みによるＴ細胞増殖
アッセイ）、感作された対象において抗原特異的Ｔリンパ球をアッセイすることによって
（たとえば、細胞毒性アッセイにおけるペプチド特異的溶解など）、行うことができる。
野において標準的である様々なアッセイを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖ
ｏのどちらかで評価することができる。免疫応答の開始および活性化を評価するために利
用可能な技法の一般的な説明には、たとえばColigan et al. (1992 and 1994, Current P
rotocols in Immunology; ed. J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)を
参照されたい。細胞性免疫の測定は、当分野で容易に知られている方法によって、たとえ
ば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含めた活性化されたエフェクター細
胞によって分泌されたサイトカインプロファイルの測定によって（たとえば、ＥＬＩＳＰ
ＯＴによるＩＬ－４またはＩＦＮガンマ産生細胞の定量）、免疫エフェクター細胞の活性
化状態の決定によって（たとえば、古典的な［３Ｈ］チミジン取り込みによるＴ細胞増殖
アッセイ）、感作された対象において抗原特異的Ｔリンパ球をアッセイすることによって
（たとえば、細胞毒性アッセイにおけるペプチド特異的溶解など）、行うことができる。
【0098】
細胞応答および／または液性応答を刺激する能力は、対象からの生体試料（たとえば、
血液、血漿、血清、ＰＢＭＣ、尿、唾液、糞便、ＣＳＦ、またはリンパ液）を、医薬組成
物中で投与した免疫原性タウペプチドに向けられた抗体の存在について試験することによ
って、決定することができる（たとえばHarlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor
Pressを参照）。たとえば、免疫原を提供する組成物の投与に応答して産生された抗体の
力価は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ドットブロット、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ゲル、ＥＬＩＳＰＯＴ、または抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイによって測定す
ることができる。
血液、血漿、血清、ＰＢＭＣ、尿、唾液、糞便、ＣＳＦ、またはリンパ液）を、医薬組成
物中で投与した免疫原性タウペプチドに向けられた抗体の存在について試験することによ
って、決定することができる（たとえばHarlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor
Pressを参照）。たとえば、免疫原を提供する組成物の投与に応答して産生された抗体の
力価は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ドットブロット、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ゲル、ＥＬＩＳＰＯＴ、または抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイによって測定す
ることができる。
【0099】
本明細書中で使用する用語「対象」とは、動物をいう。特定の実施形態によれば、対象
は、非霊長類（たとえば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、
ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット、もしくはマウス）または霊長類（たとえば、
サル、チンパンジー、もしくはヒト）を含めた哺乳動物である。特定の実施形態によれば
、対象はヒトである。
は、非霊長類（たとえば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、
ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット、もしくはマウス）または霊長類（たとえば、
サル、チンパンジー、もしくはヒト）を含めた哺乳動物である。特定の実施形態によれば
、対象はヒトである。
【0100】
本明細書中で使用する用語「治療有効量」とは、対象において所望の生物学的または医
薬的応答を誘発する、活性成分または構成要素の量をいう。治療有効量は、記述した目的
に関連して、経験的にかつルーチン的な様式で決定することができる。たとえば、最適な
用量範囲の同定を助けるために、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを任意選択で用いることがで
きる。特定の有効用量の選択は、処置または防止する疾患、関与する症状、患者の体重、
患者の免疫状態、および当業者に知られている他の要因を含めたいくつかの要因の考慮に
基づいて、当業者によって（たとえば臨床治験を介して）決定することができる。また、
配合物中で用いる正確な用量も投与経路および疾患の重症度に依存し、従事者の判断およ
びそれぞれの患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
または動物モデル試験系から導き出された用量応答曲線から外挿することができる。
薬的応答を誘発する、活性成分または構成要素の量をいう。治療有効量は、記述した目的
に関連して、経験的にかつルーチン的な様式で決定することができる。たとえば、最適な
用量範囲の同定を助けるために、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを任意選択で用いることがで
きる。特定の有効用量の選択は、処置または防止する疾患、関与する症状、患者の体重、
患者の免疫状態、および当業者に知られている他の要因を含めたいくつかの要因の考慮に
基づいて、当業者によって（たとえば臨床治験を介して）決定することができる。また、
配合物中で用いる正確な用量も投与経路および疾患の重症度に依存し、従事者の判断およ
びそれぞれの患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
または動物モデル試験系から導き出された用量応答曲線から外挿することができる。
【0101】
本明細書中で使用する用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」はすべて
、神経変性疾患、障害、または状態に関連する少なくとも１つの測定可能な物理的パラメ
ーターの寛解または逆転をいうことを意図し、これらは必ずしも対象において識別可能で
ある必要はないが、対象において識別可能であることができる。また、用語「処置する」
、「処置すること」、および「処置」は、疾患、障害、または状態の回帰を引き起こすこ
と、進行を防止すること、または進行を少なくとも遅らせることもいうことができる。特
定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、神経変性疾
患、障害、または状態に関連する１つまたは複数の症状の軽減、発生もしくは発症の防止
、または持続期間の短縮をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」
、および「処置」とは、疾患、障害、または状態の再発の防止をいう。特定の実施形態で
は、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、疾患、障害、または状態を
有する対象の生存の増加をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」
、および「処置」とは、対象における疾患、障害、または状態の排除をいう。
、神経変性疾患、障害、または状態に関連する少なくとも１つの測定可能な物理的パラメ
ーターの寛解または逆転をいうことを意図し、これらは必ずしも対象において識別可能で
ある必要はないが、対象において識別可能であることができる。また、用語「処置する」
、「処置すること」、および「処置」は、疾患、障害、または状態の回帰を引き起こすこ
と、進行を防止すること、または進行を少なくとも遅らせることもいうことができる。特
定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、神経変性疾
患、障害、または状態に関連する１つまたは複数の症状の軽減、発生もしくは発症の防止
、または持続期間の短縮をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」
、および「処置」とは、疾患、障害、または状態の再発の防止をいう。特定の実施形態で
は、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、疾患、障害、または状態を
有する対象の生存の増加をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」
、および「処置」とは、対象における疾患、障害、または状態の排除をいう。
【0102】
特定の実施形態によれば、治療有効量とは、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４
つ、またはそれより多くを達成するために十分な治療薬の量をいう：（ｉ）処置する疾患
、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の重症度の軽減または寛解、（ｉｉ）
処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の持続期間の短縮、（ｉ
ｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の進行の防止、（
ｉｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の回帰を引き起こ
すこと、（ｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の発生ま
たは発症の防止、（ｖｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症
状の再発の防止、（ｖｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する
症状を有する対象の入院の短縮、（ｖｉｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、また
はそれに関連する症状を有する対象の入院の長さの短縮、（ｉｘ）処置する疾患、障害、
もしくは状態、またはそれに関連する症状を有する対象の生存の増加、（ｘ）対象におけ
る処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の阻害または軽減、お
よび／あるいは（ｘｉ）別の治療薬の予防的または治療的効果の増強または改善。
つ、またはそれより多くを達成するために十分な治療薬の量をいう：（ｉ）処置する疾患
、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の重症度の軽減または寛解、（ｉｉ）
処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の持続期間の短縮、（ｉ
ｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の進行の防止、（
ｉｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の回帰を引き起こ
すこと、（ｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の発生ま
たは発症の防止、（ｖｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症
状の再発の防止、（ｖｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する
症状を有する対象の入院の短縮、（ｖｉｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、また
はそれに関連する症状を有する対象の入院の長さの短縮、（ｉｘ）処置する疾患、障害、
もしくは状態、またはそれに関連する症状を有する対象の生存の増加、（ｘ）対象におけ
る処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の阻害または軽減、お
よび／あるいは（ｘｉ）別の治療薬の予防的または治療的効果の増強または改善。
【0103】
本明細書中で使用する「神経変性疾患、障害、または状態」には、本開示に鑑みて当業
者に知られている任意の神経変性疾患、障害、または状態が含まれる。神経変性疾患、障
害、または状態の例には、タウオパチーと呼ばれるタウ関連の疾患、障害、または状態な
どの、神経原線維病変の形成によって引き起こされるまたはそれに関連する神経変性疾患
または障害が含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態には
、それだけには限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト
－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカ
ー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側
索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動
ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側
索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知症、好ましくは
１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、
前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病
Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、
もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳
障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（
ＬＢＤ）を含めた、タウおよびアミロイド病理の共存を示す疾患または障害のうちの任意
のものが含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態はアルツ
ハイマー病または別のタウオパチーである。
者に知られている任意の神経変性疾患、障害、または状態が含まれる。神経変性疾患、障
害、または状態の例には、タウオパチーと呼ばれるタウ関連の疾患、障害、または状態な
どの、神経原線維病変の形成によって引き起こされるまたはそれに関連する神経変性疾患
または障害が含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態には
、それだけには限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト
－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカ
ー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側
索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動
ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側
索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知症、好ましくは
１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、
前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病
Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、
もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳
障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（
ＬＢＤ）を含めた、タウおよびアミロイド病理の共存を示す疾患または障害のうちの任意
のものが含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態はアルツ
ハイマー病または別のタウオパチーである。
【0104】
また、本発明は、対象の脳からのタウ凝集体の排除を促進するために有効な条件下で、
対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む、対象の脳からのタウ
凝集体の排除を促進する方法も提供する。特定の実施形態によれば、タウ凝集体は神経原
線維のもつれまたはその病理学的タウ前駆体である。
対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む、対象の脳からのタウ
凝集体の排除を促進する方法も提供する。特定の実施形態によれば、タウ凝集体は神経原
線維のもつれまたはその病理学的タウ前駆体である。
【0105】
また、本発明は、対象におけるタウ病理に関連する行動性表現型の進行を遅延させるた
めに有効な条件下で、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む
、対象におけるタウ病理に関連する行動性表現型の進行を遅延させる方法も提供する。
めに有効な条件下で、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む
、対象におけるタウ病理に関連する行動性表現型の進行を遅延させる方法も提供する。
【0106】
本発明の好ましい実施形態では、本発明の一実施形態による医薬組成物の投与を介した
タウペプチドの投与は、対象においてタウペプチドおよびタウの病理学的形態に対する活
性免疫応答を誘導し、したがって、関連するタウ凝集体の排除を容易にする、タウ病理に
関連する行動の進行を遅延させる、および／または根底にあるタウオパチーを処置する。
本発明のこの態様によれば、免疫応答は、タウペプチドに対して向けられた液性（抗体媒
介性）応答およびＴ細胞エピトープまたは免疫原性担体に対して向けられた細胞（抗原特
異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介）応答の有益な発生を含む。
タウペプチドの投与は、対象においてタウペプチドおよびタウの病理学的形態に対する活
性免疫応答を誘導し、したがって、関連するタウ凝集体の排除を容易にする、タウ病理に
関連する行動の進行を遅延させる、および／または根底にあるタウオパチーを処置する。
本発明のこの態様によれば、免疫応答は、タウペプチドに対して向けられた液性（抗体媒
介性）応答およびＴ細胞エピトープまたは免疫原性担体に対して向けられた細胞（抗原特
異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介）応答の有益な発生を含む。
【0107】
本明細書中で使用する、タウ病理に関連する行動性表現型には、それだけには限定され
ないが、認知機能障害、早期人格変化および脱抑制、アパシー、無為、無言症、失行症、
固執、常同動作／行動、口愛過度、混乱、連続課題の計画または構築不能、利己的／無感
覚、反社会的特質、共感欠如、口ごもり、頻繁な錯誤的な誤りを伴うが理解は比較的保た
れている失文法的な発話、理解障害および字句発見欠損症、緩徐進行性歩行不安定症、後
方突進、すくみ、頻繁な転倒、レボドパ不応性軸性硬直、核上性中止麻痺、矩形波眼球運
動、ゆっくりとした垂直サッケード、仮性球麻痺、肢失行症、ジストニア、皮質性感覚消
失、および振戦が含まれる。
ないが、認知機能障害、早期人格変化および脱抑制、アパシー、無為、無言症、失行症、
固執、常同動作／行動、口愛過度、混乱、連続課題の計画または構築不能、利己的／無感
覚、反社会的特質、共感欠如、口ごもり、頻繁な錯誤的な誤りを伴うが理解は比較的保た
れている失文法的な発話、理解障害および字句発見欠損症、緩徐進行性歩行不安定症、後
方突進、すくみ、頻繁な転倒、レボドパ不応性軸性硬直、核上性中止麻痺、矩形波眼球運
動、ゆっくりとした垂直サッケード、仮性球麻痺、肢失行症、ジストニア、皮質性感覚消
失、および振戦が含まれる。
【0108】
本発明の方法を実施するにあたって、本発明の免疫原性ペプチドまたは抗体を投与する
前に、アルツハイマー病もしくは他のタウオパチーに罹患しているもしくは罹患する危険
性にある対象、脳内にタウ凝集体を有する対象、またはもつれ関連の行動性表現型を示し
ている対象を選択することが好ましい。処置に従順な対象には、疾患の危険性にあるが症
状を示していない個体、および現在症状を示している患者が含まれる。アルツハイマー病
の場合、事実上誰もがアルツハイマー病を罹患する危険性にある。したがって、本方法は
、対象患者の危険性のいかなる評価も必要とせずに、一般集団に予防的に投与することが
できる。本方法は、既知のアルツハイマー病の遺伝的リスクを有する個体に特に有用であ
る。そのような個体には、疾患を経験した親族を有する者、および遺伝子または生化学的
マーカーの分析によってその危険性が決定されている者が含まれる。
前に、アルツハイマー病もしくは他のタウオパチーに罹患しているもしくは罹患する危険
性にある対象、脳内にタウ凝集体を有する対象、またはもつれ関連の行動性表現型を示し
ている対象を選択することが好ましい。処置に従順な対象には、疾患の危険性にあるが症
状を示していない個体、および現在症状を示している患者が含まれる。アルツハイマー病
の場合、事実上誰もがアルツハイマー病を罹患する危険性にある。したがって、本方法は
、対象患者の危険性のいかなる評価も必要とせずに、一般集団に予防的に投与することが
できる。本方法は、既知のアルツハイマー病の遺伝的リスクを有する個体に特に有用であ
る。そのような個体には、疾患を経験した親族を有する者、および遺伝子または生化学的
マーカーの分析によってその危険性が決定されている者が含まれる。
【0109】
無症候性の患者では、処置を任意の年齢（たとえば、１０、２０、３０歳）で開始する
ことができる。しかし、通常は、患者が４０、５０、６０、または７０歳に達するまで処
置を開始する必要はない。処置は、典型的には、一定期間にわたる複数回の投薬を伴う。
処置は、抗体、または治療剤に対する活性化されたＴ細胞もしくはＢ細胞の応答を、経時
的にアッセイすることによってモニタリングすることができる。応答が減少した場合はブ
ースター用量を指示している。
ことができる。しかし、通常は、患者が４０、５０、６０、または７０歳に達するまで処
置を開始する必要はない。処置は、典型的には、一定期間にわたる複数回の投薬を伴う。
処置は、抗体、または治療剤に対する活性化されたＴ細胞もしくはＢ細胞の応答を、経時
的にアッセイすることによってモニタリングすることができる。応答が減少した場合はブ
ースター用量を指示している。
【0110】
予防的適用では、タウペプチドを含有する医薬組成物を、アルツハイマー病または他の
タウオパチーに罹患しやすい、または他の様式でその危険性がある患者に、疾患の生化学
的、組織学的および／または行動学的症状、疾患の発生中に提示されるその合併症および
中間病理学的表現型を含めた危険性を排除もしくは低下させる、重症度を軽くする、また
は疾患の発症を遅延させるために十分な量で投与する。治療的適用では、タウペプチドを
含有する医薬組成物を、そのような疾患が疑われる、または既にそれに罹患している患者
に、疾患の発生におけるその合併症および中間病理学的表現型を含めた疾患の症状（生化
学的、組織学的、および／または、行動学的）を治癒する、または少なくとも部分的に停
止するために十分な量で、投与する。
タウオパチーに罹患しやすい、または他の様式でその危険性がある患者に、疾患の生化学
的、組織学的および／または行動学的症状、疾患の発生中に提示されるその合併症および
中間病理学的表現型を含めた危険性を排除もしくは低下させる、重症度を軽くする、また
は疾患の発症を遅延させるために十分な量で投与する。治療的適用では、タウペプチドを
含有する医薬組成物を、そのような疾患が疑われる、または既にそれに罹患している患者
に、疾患の発生におけるその合併症および中間病理学的表現型を含めた疾患の症状（生化
学的、組織学的、および／または、行動学的）を治癒する、または少なくとも部分的に停
止するために十分な量で、投与する。
【0111】
神経変性疾患、障害、または状態を防止および／または処置するために有効な用量の本
発明の医薬組成物は、投与様式、標的部位、患者の生理的状態、投与した他の医薬品、お
よび処置が予防的であるか治療的であるかを含めた、多くの様々な要因に応じて変動する
。ペプチドの量はアジュバントも投与するかどうかに依存し、アジュバントの非存在下で
はより高用量が必要となる。注射のタイミングは、１日１回から１年に１回から１０年に
１回まで、顕著に変動する可能性がある。典型的なレジメンは、免疫化、次いで、６週間
間隔などの時間間隔でのブースター注射からなる。別のレジメンは、免疫化、次いで、１
、２、６、９、および１２カ月後のブースター注射からなる。別のレジメンは、一生涯２
カ月ごとの注射を伴う。あるいは、ブースター注射は、免疫応答のモニタリングによって
指示されるように不規則であることができる。
発明の医薬組成物は、投与様式、標的部位、患者の生理的状態、投与した他の医薬品、お
よび処置が予防的であるか治療的であるかを含めた、多くの様々な要因に応じて変動する
。ペプチドの量はアジュバントも投与するかどうかに依存し、アジュバントの非存在下で
はより高用量が必要となる。注射のタイミングは、１日１回から１年に１回から１０年に
１回まで、顕著に変動する可能性がある。典型的なレジメンは、免疫化、次いで、６週間
間隔などの時間間隔でのブースター注射からなる。別のレジメンは、免疫化、次いで、１
、２、６、９、および１２カ月後のブースター注射からなる。別のレジメンは、一生涯２
カ月ごとの注射を伴う。あるいは、ブースター注射は、免疫応答のモニタリングによって
指示されるように不規則であることができる。
【0112】
当業者には、プライムおよびブースト用の投与のレジメンは、投与後の測定した免疫応
答に基づいて調整できることが容易に理解されよう。たとえば、ブースト用組成物は、一
般に、プライム用組成物の投与の数週間または数カ月後、たとえば、プライム用組成物の
投与の約２～３週間後、または４週間後、または８週間後、または１６週間後、または２
０週間後、または２４週間後、または２６週間後、または２８週間後、または３０週間後
、または３２週間後、または３６週間後、または１～２年後に投与する。
答に基づいて調整できることが容易に理解されよう。たとえば、ブースト用組成物は、一
般に、プライム用組成物の投与の数週間または数カ月後、たとえば、プライム用組成物の
投与の約２～３週間後、または４週間後、または８週間後、または１６週間後、または２
０週間後、または２４週間後、または２６週間後、または２８週間後、または３０週間後
、または３２週間後、または３６週間後、または１～２年後に投与する。
【0113】
ペプチドは、予防的および／または治療的処置のために、非経口、局所、静脈内、経口
、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、皮内、鼻腔内、または筋肉内の手段によって投与する
ことができる。免疫原性剤の最も典型的な投与経路は皮下または筋肉内注射である。この
後者の種類の注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉内に行われる。
、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、皮内、鼻腔内、または筋肉内の手段によって投与する
ことができる。免疫原性剤の最も典型的な投与経路は皮下または筋肉内注射である。この
後者の種類の注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉内に行われる。
【0114】
特定の態様によれば、１つまたは複数のブースト免疫化を投与することができる。それ
ぞれのプライム用およびブースト用組成物中の抗原は、いかに多数のブースト用組成物を
用いようとも、同一である必要はないが、抗原決定基を共有するまたは互いに実質的に類
似であるべきである。
ぞれのプライム用およびブースト用組成物中の抗原は、いかに多数のブースト用組成物を
用いようとも、同一である必要はないが、抗原決定基を共有するまたは互いに実質的に類
似であるべきである。
【0115】
組成物は、所望する場合は、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有する
ことができる、キット、パック、またはディスペンサーで提示することができる。キット
は、たとえば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックの箔を含むことができる
。キット、パック、またはディスペンサーには投与の指示書を添付することができる。
ことができる、キット、パック、またはディスペンサーで提示することができる。キット
は、たとえば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックの箔を含むことができる
。キット、パック、またはディスペンサーには投与の指示書を添付することができる。
【0116】
特定の実施形態によれば、キットは、本発明の一実施形態によるリポソームを含む医薬
組成物および本発明の一実施形態によるコンジュゲートを含む医薬組成物のうちの少なく
とも１つを含む。
組成物および本発明の一実施形態によるコンジュゲートを含む医薬組成物のうちの少なく
とも１つを含む。
【0117】
実施形態
また、本発明は、以下の非限定的な実施形態も提供する。
また、本発明は、以下の非限定的な実施形態も提供する。
【0118】
実施形態１は、
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームである。
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームである。
【0119】
実施形態２は、タウペプチドがタウホスホペプチドである、実施形態１に記載のリポソ
ームである。
ームである。
【0120】
実施形態３は、トール様受容体リガンドをさらに含む、実施形態１または２に記載のリ
ポソームである。
ポソームである。
【0121】
実施形態４は、トール様受容体リガンドがトール様受容体４リガンドおよびトール様受
容体９リガンドのうちの少なくとも１つを含む、実施形態３に記載のリポソームである。
容体９リガンドのうちの少なくとも１つを含む、実施形態３に記載のリポソームである。
【0122】
実施形態５は、トール様受容体リガンドがトール様受容体４リガンドである、実施形態
３または４に記載のリポソームである。
３または４に記載のリポソームである。
【0123】
実施形態６は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含む
、実施形態５に記載のリポソームである。
、実施形態５に記載のリポソームである。
【0124】
実施形態７は、トール様受容体リガンドがトール様受容体９リガンドである、実施形態
３または４に記載のリポソームである。
３または４に記載のリポソームである。
【0125】
実施形態８は、トール様受容体９リガンドが脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む
、実施形態７に記載のリポソームである。
、実施形態７に記載のリポソームである。
【0126】
実施形態９は、
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む、実施形態１に記載のリポソームである。
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む、実施形態１に記載のリポソームである。
【0127】
実施形態１０は、タウペプチドがタウホスホペプチドである、実施形態９に記載のリポ
ソームである。
ソームである。
【0128】
実施形態１１は、トール様受容体９リガンドが脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドであ
る、実施形態９または１０に記載のリポソームである。
る、実施形態９または１０に記載のリポソームである。
【0129】
実施形態１２は、トール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドを含む、
実施形態９から１１のいずれかに記載のリポソームである。
実施形態９から１１のいずれかに記載のリポソームである。
【0130】
実施形態１３は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含
む、実施形態１２に記載のリポソームである。
む、実施形態１２に記載のリポソームである。
【0131】
実施形態１４は、
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームである。
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソームである。
【0132】
実施形態１５は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含
む、実施形態１４に記載のリポソームである。
む、実施形態１４に記載のリポソームである。
【0133】
実施形態１６は、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
【0134】
実施形態１６ａは、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソームの膜内に取り込まれている
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
【0135】
実施形態１６ｂは、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソームの表面上に提示されている
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
、実施形態１から１５のいずれかに記載のリポソームである。
【0136】
実施形態１７は、
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されており、
Ｔ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている、
リポソーム組成物である。
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されており、
Ｔ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている、
リポソーム組成物である。
【0137】
実施形態１７ａは、ＭＰＬＡが３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、好ま
しくはＭＰＬ（商標）である、実施形態１７に記載のリポソームである。
しくはＭＰＬ（商標）である、実施形態１７に記載のリポソームである。
【0138】
実施形態１７ｂは、ＭＰＬＡがモノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、
好ましくは３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載のリ
ポソームである。
好ましくは３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載のリ
ポソームである。
【0139】
実施形態１７ｃは、ＭＰＬＡがモノホスホリル３－脱アシル脂質Ａ、好ましくは３Ｄ－
ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載のリポソームである。
ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載のリポソームである。
【0140】
実施形態１８は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭ
ＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グ
リセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複
数の脂質をさらに含む、実施形態１から１７ｃのいずれかに記載のリポソームである。
ＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グ
リセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複
数の脂質をさらに含む、実施形態１から１７ｃのいずれかに記載のリポソームである。
【0141】
実施形態１９は、タウペプチドが、配列番号１～配列番号１２からなる群から選択され
るアミノ酸配列、または配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配
列と少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有する、実施
形態１から１８のいずれかに記載のリポソームである。
るアミノ酸配列、または配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配
列と少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有する、実施
形態１から１８のいずれかに記載のリポソームである。
【0142】
実施形態１９－１は、タウペプチドが、配列番号１～３および５～１２からなる群から
選択されるアミノ酸配列を含むホスホペプチドである、実施形態１９に記載のリポソーム
である。
選択されるアミノ酸配列を含むホスホペプチドである、実施形態１９に記載のリポソーム
である。
【0143】
実施形態１９－２は、タウホスホペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形
態１９－１に記載のリポソームである。
態１９－１に記載のリポソームである。
【0144】
実施形態１９－３は、タウホスホペプチドが配列番号２のアミノ酸配列を含む、実施形
態１９－１に記載のリポソームである。
態１９－１に記載のリポソームである。
【0145】
実施形態１９－４は、タウホスホペプチドが配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形
態１９－１に記載のリポソームである。
態１９－１に記載のリポソームである。
【0146】
実施形態１９ａは、アミノ酸配列が、タウペプチドがリポソームの表面上に提示される
ことを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、実施形態１９、１９－１、１９－
２、１９－３、および１９－４のいずれか一項に記載のリポソームである。
ことを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、実施形態１９、１９－１、１９－
２、１９－３、および１９－４のいずれか一項に記載のリポソームである。
【0147】
実施形態１９ｂは、１つまたは複数の修飾が、パルミトイル化およびドデシル修飾のう
ちの少なくとも１つを含む、実施形態１９ａに記載のリポソームである。
ちの少なくとも１つを含む、実施形態１９ａに記載のリポソームである。
【0148】
実施形態１９ｃは、タウペプチドがそのＮ末端で１つまたは複数の修飾によって修飾さ
れている、実施形態１９ａまたは１９ｂに記載のリポソームである。
れている、実施形態１９ａまたは１９ｂに記載のリポソームである。
【0149】
実施形態１９ｄは、タウペプチドがそのＣ末端で１つまたは複数の修飾によって修飾さ
れている、実施形態１９ａから１９ｃのいずれかに記載のリポソームである。
れている、実施形態１９ａから１９ｃのいずれかに記載のリポソームである。
【0150】
タウペプチドがそのＮ末端およびＣ末端の両方でパルミトイル化されている、実施形態
１９ｅは、実施形態１９ｄに記載のリポソームである。
１９ｅは、実施形態１９ｄに記載のリポソームである。
【0151】
実施形態１９ｆは、タウペプチドが、１つまたは複数の修飾を容易にするための１つま
たは複数の追加のアミノ酸をさらに含む、実施形態１９ａから１９ｅのいずれかに記載の
リポソームである。
たは複数の追加のアミノ酸をさらに含む、実施形態１９ａから１９ｅのいずれかに記載の
リポソームである。
【0152】
実施形態１９ｇは、１つまたは複数の追加のアミノ酸が、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、お
よびＴｈｒからなる群から選択される、実施形態１９ｆに記載のリポソームである。
よびＴｈｒからなる群から選択される、実施形態１９ｆに記載のリポソームである。
【0153】
実施形態１９ｈは、タウペプチドがそのＣ末端でアミド化されている、実施形態１９か
ら１９ｇのいずれかに記載のリポソームである。
ら１９ｇのいずれかに記載のリポソームである。
【0154】
実施形態１９ｉは、タウペプチドが配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｈのいずれかに記載のリポソームであ
る。
れるアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｈのいずれかに記載のリポソームであ
る。
【0155】
実施形態１９ｊは、タウペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列からなる、実施形態１
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0156】
実施形態１９ｋは、タウペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、実施形態１
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0157】
実施形態１９ｌは、タウペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列からなる、実施形態１
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
９から１９ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0158】
実施形態２０は、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる
群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１から１９ｌのいずれ
かに記載のリポソームである。
群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１から１９ｌのいずれ
かに記載のリポソームである。
【0159】
実施形態２０ａは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からな
る群から選択される少なくとも２つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソ
ームである。
る群から選択される少なくとも２つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソ
ームである。
【0160】
実施形態２０ｂは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からな
る群から選択される少なくとも３つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソ
ームである。
る群から選択される少なくとも３つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソ
ームである。
【0161】
実施形態２０ｃは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６の４つ
のアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソームである。
のアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載のリポソームである。
【0162】
実施形態２０ｄは、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される２つ以上の
アミノ酸配列がリンカーによって共有結合されている、実施形態２０ａから２０ｃのいず
れかに記載のリポソームである。
アミノ酸配列がリンカーによって共有結合されている、実施形態２０ａから２０ｃのいず
れかに記載のリポソームである。
【0163】
実施形態２０ｅは、リンカーが、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ
（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙｓ（Ｋ）からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ
酸を含む、実施形態２０ｄに記載のリポソームである。
（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙｓ（Ｋ）からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ
酸を含む、実施形態２０ｄに記載のリポソームである。
【0164】
実施形態２０ｆは、リンカーが、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、およびＲＫからなる群から選択
されるアミノ酸配列を含む、実施形態２０ｅに記載のリポソームである。
されるアミノ酸配列を含む、実施形態２０ｅに記載のリポソームである。
【0165】
実施形態２０ｇは、ヘルパーＴ細胞エピトープがそのＣ末端でアミド化されている、実
施形態２０から２０ｆのいずれかに記載のリポソームである。
施形態２０から２０ｆのいずれかに記載のリポソームである。
【0166】
実施形態２０ｈは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、ヘルパーＴ細胞エピトープの意図す
る位置に応じて、リポソームの膜内への挿入、リポソームの表面上での提示、またはリポ
ソーム内へのカプセル封入のために修飾されている、実施形態２０から２０ｇのいずれか
に記載のリポソームである。
る位置に応じて、リポソームの膜内への挿入、リポソームの表面上での提示、またはリポ
ソーム内へのカプセル封入のために修飾されている、実施形態２０から２０ｇのいずれか
に記載のリポソームである。
【0167】
実施形態２０ｉは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３～配列番号１７からなる
群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態２０から２０ｈのいずれかに記載のリ
ポソームである。
群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態２０から２０ｈのいずれかに記載のリ
ポソームである。
【0168】
実施形態２０ｊは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを６：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0169】
実施形態２０ｋは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを５：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0170】
実施形態２０ｌは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを４：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0171】
実施形態２０ｍは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを３：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0172】
実施形態２０ｎは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを２：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0173】
実施形態２０ｏは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを１：１の重量比で含
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載のリポソームである。
【0174】
実施形態２１は、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８～配列番号２２か
らなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１から２０ｏのいずれかに記
載のリポソームである。
らなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１から２０ｏのいずれかに記
載のリポソームである。
【0175】
実施形態２１ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが１つまたは複数のホスホロチオエート
ヌクレオチド間結合を有する、実施形態２１に記載のリポソームである。
ヌクレオチド間結合を有する、実施形態２１に記載のリポソームである。
【0176】
実施形態２１ｂは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがすべてホスホロチオエートヌクレオチ
ド間結合を有する、実施形態２１ａに記載のリポソームである。
ド間結合を有する、実施形態２１ａに記載のリポソームである。
【0177】
実施形態２１ｃは、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、リンカーを介して少なくと
も１つの親油性基と共有結合しているＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、実施形態２１か
ら２１ｂのいずれかに記載のリポソームである。
も１つの親油性基と共有結合しているＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、実施形態２１か
ら２１ｂのいずれかに記載のリポソームである。
【0178】
実施形態２１ｄは、リンカーが（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎを含む［式中、ｎは０～１０の整数で
ある］、実施形態２１ｃに記載のリポソームである。
ある］、実施形態２１ｃに記載のリポソームである。
【0179】
実施形態２１ｅは、リンカーが３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーを含む、
実施形態２１ｃに記載のリポソームである。
実施形態２１ｃに記載のリポソームである。
【0180】
実施形態２１ｆは、少なくとも１つの親油性基がコレステロールである、実施形態２１
から２１ｅのいずれかに記載のリポソームである。
から２１ｅのいずれかに記載のリポソームである。
【0181】
実施形態２１ｇは、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ［式中、
ｎは３～５の整数である］を含むリンカーを介してコレステロール分子と共有結合してい
る配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列を含む、実施形態２１から２１ｆ
のいずれかに記載のリポソームである。
ｎは３～５の整数である］を含むリンカーを介してコレステロール分子と共有結合してい
る配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列を含む、実施形態２１から２１ｆ
のいずれかに記載のリポソームである。
【0182】
実施形態２２は、
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウ
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソームである。
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウ
ペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘル
パーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、
１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少な
くとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソームである。
【0183】
実施形態２２ａは、
ａ．配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９のアミノ酸配列からなるタウホ
スホペプチドと、
ｂ．配列番号１３のアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ［式中、ｎは３～７の整数である］を含むリンカーを介してコレ
ステロールと共有結合している配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列から
なる脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、実施形態２２に記載のリポソームである。
ａ．配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９のアミノ酸配列からなるタウホ
スホペプチドと、
ｂ．配列番号１３のアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ［式中、ｎは３～７の整数である］を含むリンカーを介してコレ
ステロールと共有結合している配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列から
なる脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、実施形態２２に記載のリポソームである。
【0184】
実施形態２２ｂは、ＭＰＬＡが３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、好ま
しくはＭＰＬ（商標）である、実施形態２２または２２ａに記載のリポソームである。
しくはＭＰＬ（商標）である、実施形態２２または２２ａに記載のリポソームである。
【0185】
実施形態２２ｃは、ＭＰＬＡが好ましくは３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）
である、実施形態２２または２２ａに記載のリポソームである。
である、実施形態２２または２２ａに記載のリポソームである。
【0186】
実施形態２２ｄは、ＭＰＬＡが好ましくは３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形
態２２または２２ａに記載のリポソームである。
態２２または２２ａに記載のリポソームである。
【0187】
実施形態２３は、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている
、実施形態２２から２２ｄのいずれかに記載のリポソームである。
、実施形態２２から２２ｄのいずれかに記載のリポソームである。
【0188】
実施形態２４は、実施形態１から２３のいずれかに記載のリポソームと薬学的に許容さ
れる担体とを含む、医薬組成物である。
れる担体とを含む、医薬組成物である。
【0189】
実施形態２５は、以下の構造：
【0190】
【化7】
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５の整数である］
を有する、タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原
性担体とを含むコンジュゲートである。
【0191】
実施形態２５ａは、式（ＩＩ）の構造：
【0192】
【化8】
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５の整数である］
を有する、タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原
性担体とを含むコンジュゲートである。
【0193】
実施形態２６は、ｘが２～６の整数である、実施形態２５または２５ａのいずれかに記
載のコンジュゲートである。
載のコンジュゲートである。
【0194】
実施形態２７は、ｘが３である、実施形態２５または２５ａのいずれかに記載のコンジ
ュゲートである。
ュゲートである。
【0195】
実施形態２８は、ｎが３～７である、実施形態２５から２５ａのいずれかに記載のコン
ジュゲートである。
ジュゲートである。
【0196】
実施形態２９は、担体が、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキ
ソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合
物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される免疫原性担体である、実施形
態２５から２８のいずれかに記載のコンジュゲートである。
ソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合
物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される免疫原性担体である、実施形
態２５から２８のいずれかに記載のコンジュゲートである。
【0197】
実施形態３０は、タウホスホペプチドが、配列番号１～配列番号１２からなる群から選
択されるアミノ酸配列からなる、実施形態２５から２９のいずれかに記載のコンジュゲー
トである。
択されるアミノ酸配列からなる、実施形態２５から２９のいずれかに記載のコンジュゲー
トである。
【0198】
実施形態３０ａは、タウホスホペプチドが、配列番号１、配列番号２、または配列番号
３のアミノ酸配列からなる、実施形態３０に記載のコンジュゲートである。
３のアミノ酸配列からなる、実施形態３０に記載のコンジュゲートである。
【0199】
実施形態３１は、担体がＣＲＭ１９７である、実施形態２５から３０のいずれかに記載
のコンジュゲートである。
のコンジュゲートである。
【0200】
実施形態３２は、以下の構造：
【0201】
【化9】
を有する、実施形態２５に記載のコンジュゲートである。
【0202】
実施形態３２ａは、
ＫＬＨ－［ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル－シス
テイン－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘ－タウペプチド］ｎ
ＫＬＨ－［ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル－シス
テイン－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘ－タウペプチド］ｎ
【0203】
【化10】
タウペプチドは、配列番号１または配列番号３からなり、
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５の整数である］
である、実施形態２５に記載のコンジュゲートである。
【0204】
実施形態３３は、実施形態２５から３２ａのいずれかに記載のコンジュゲートと薬学的
に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
【0205】
実施形態３３ａは、アジュバントをさらに含む、請求項３３に記載の医薬組成物である
。
。
【0206】
実施形態３３ｂは、アジュバントがＴＬＲ－４リガンドおよびＴＬＲ－９リガンドのう
ちの少なくとも１つを含む、請求項３３ａに記載の医薬組成物である。
ちの少なくとも１つを含む、請求項３３ａに記載の医薬組成物である。
【0207】
実施形態３４は、対象に、実施形態２４および３３から３３ｂの医薬組成物のうちの少
なくとも１つを投与することを含む、神経変性障害を患っている対象において免疫応答を
誘導する方法。
なくとも１つを投与することを含む、神経変性障害を患っている対象において免疫応答を
誘導する方法。
【0208】
実施形態３５は、対象に、免疫化をプライムするための実施形態２４および３３から３
３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投与することと、対象に、免疫化をブースト
するための実施形態２４および３３から３３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投
与することとを含む、実施形態３４に記載の方法である。
３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投与することと、対象に、免疫化をブースト
するための実施形態２４および３３から３３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投
与することとを含む、実施形態３４に記載の方法である。
【0209】
実施形態３６は、対象に、実施形態２４または３３の医薬組成物のうちの少なくとも１
つを投与することを含む、それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を
処置または防止する方法である。
つを投与することを含む、それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を
処置または防止する方法である。
【0210】
実施形態３７は、対象に、免疫化をプライムするための実施形態２４および３３から３
３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投与することと、対象に、免疫化をブースト
するための実施形態２４および３３から３３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投
与することとを含む、実施形態３６に記載の方法である。
３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投与することと、対象に、免疫化をブースト
するための実施形態２４および３３から３３ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを投
与することとを含む、実施形態３６に記載の方法である。
【0211】
実施形態３８は、神経変性疾患または障害が、神経原線維病変の形成によって引き起こ
される、またはそれに関連している、実施形態３４から３７のいずれかに記載の方法であ
る。
される、またはそれに関連している、実施形態３４から３７のいずれかに記載の方法であ
る。
【0212】
実施形態３９は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ク
ロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラ
ー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷
害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う
非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知
症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知
症、好ましくは１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴ
ＤＰ－１７）、前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン（Hallevorden）－スパッツ病、多
系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核
上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張
性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲ
Ｔ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態３４から３８のいずれかに記
載の方法である。
ロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラ
ー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷
害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う
非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知
症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知
症、好ましくは１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴ
ＤＰ－１７）、前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン（Hallevorden）－スパッツ病、多
系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核
上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張
性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲ
Ｔ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態３４から３８のいずれかに記
載の方法である。
【0213】
実施形態４０は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダ
ウン症候群、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖する
パーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症
、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴ
Ｅ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（
ＬＢＤ）である、実施形態３４から３９のいずれかに記載の方法である。
ウン症候群、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖する
パーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症
、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴ
Ｅ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（
ＬＢＤ）である、実施形態３４から３９のいずれかに記載の方法である。
【0214】
実施形態４０ｂは、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺
（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－
１７）、またはピック病、およびＰＡＲＴ（原発性加齢関連タウオパチー）である、実施
形態３４から３９のいずれかに記載の方法である。
（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－
１７）、またはピック病、およびＰＡＲＴ（原発性加齢関連タウオパチー）である、実施
形態３４から３９のいずれかに記載の方法である。
【0215】
実施形態４０ｃは、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、
ダウン症候群、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ
－１７）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジスト
ロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオ
パチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態３４から３９
のいずれかに記載の方法である。
ダウン症候群、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ
－１７）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジスト
ロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオ
パチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態３４から３９
のいずれかに記載の方法である。
【0216】
実施形態４１は、実施形態２４の医薬組成物および実施形態３３、３３ａ、または３３
ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む、キットである。
ｂの医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む、キットである。
【0217】
実施形態４２は、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列
からなるヘルパーＴ細胞エピトープである。
からなるヘルパーＴ細胞エピトープである。
【0218】
実施形態４３は、実施形態４２に記載のヘルパーＴ細胞エピトープを含む医薬組成物で
ある。
ある。
【0219】
実施形態４４は、対象に、抗原を、実施形態４３の医薬組成物と一緒に投与することを
含む、それを必要としている対象において抗原に対する免疫応答を増強させる方法である
。
含む、それを必要としている対象において抗原に対する免疫応答を増強させる方法である
。
【実施例0220】
以下の本発明の実施例は、本発明の性質をさらに例示するためのものである。以下の実
施例は本発明を限定せず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって決定されること
を理解されたい。
施例は本発明を限定せず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって決定されること
を理解されたい。
【0221】
以下の実施例中で使用する実験方法は、別段に指定しない限りは、すべて常法である。
以下の実施形態で使用する試薬は、別段に指定しない限りは、すべて通常の試薬供給業者
から購入したものである。
以下の実施形態で使用する試薬は、別段に指定しない限りは、すべて通常の試薬供給業者
から購入したものである。
【0222】
[実施例１]
リポソームワクチンの調製
対照リポソームワクチンの調製（エタノール注入技法）
対照リポソームワクチンを、エタノール（ＥｔＯＨ）注入技法、次いで押出し成形によ
って生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａ
ｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コ
レステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａ
ｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比で、ＥｔＯＨお
よびｔｅｒｔ－ブタノール（ｔ－ＢｕＯＨ）の２０：１（Ｖ／Ｖ）混合物中に６０℃で可
溶化した。１０％のＥｔＯＨ濃度を維持するために脂質／エタノール溶液をリン酸緩衝液
生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４に６０℃で希釈し、多重膜リポソーム小胞（ＭＬＶ）
の形成がもたらされた。その後、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ
）を使用して、ＭＬＶを０．０８ｕｍの孔径を有する直列の３枚のポリカーボネートフィ
ルター（Ｗｈａｔｍａｎ）を通した、５回の連続した押出し成形に供した。生じたリポソ
ームをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前の
リポソーム溶液が得られた。
リポソームワクチンの調製
対照リポソームワクチンの調製（エタノール注入技法）
対照リポソームワクチンを、エタノール（ＥｔＯＨ）注入技法、次いで押出し成形によ
って生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａ
ｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コ
レステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａ
ｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比で、ＥｔＯＨお
よびｔｅｒｔ－ブタノール（ｔ－ＢｕＯＨ）の２０：１（Ｖ／Ｖ）混合物中に６０℃で可
溶化した。１０％のＥｔＯＨ濃度を維持するために脂質／エタノール溶液をリン酸緩衝液
生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４に６０℃で希釈し、多重膜リポソーム小胞（ＭＬＶ）
の形成がもたらされた。その後、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ
）を使用して、ＭＬＶを０．０８ｕｍの孔径を有する直列の３枚のポリカーボネートフィ
ルター（Ｗｈａｔｍａｎ）を通した、５回の連続した押出し成形に供した。生じたリポソ
ームをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前の
リポソーム溶液が得られた。
【0223】
本明細書中以降、医薬品有効成分（ＡＰＩ）と呼ぶ配列番号２の酢酸テトラパルミトイ
ル化（acetate tetrapalmitoylated）リン酸化タウペプチド（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイ
ス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２．０％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶かし、ペプチド溶液を６０
℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は、標的最
終体積までの限外濾過によって行い、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢ
Ｓ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示さ
れた生じたリポソームを、２枚の直列の０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルタ
ーを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
ル化（acetate tetrapalmitoylated）リン酸化タウペプチド（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイ
ス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２．０％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶かし、ペプチド溶液を６０
℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は、標的最
終体積までの限外濾過によって行い、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢ
Ｓ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示さ
れた生じたリポソームを、２枚の直列の０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルタ
ーを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0224】
リポソームＸ、Ｙ、Ｚ、およびＺ＋ワクチンの調製
リポソームＸおよびＹワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび
押出し成形によって生成した。
リポソームＸおよびＹワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび
押出し成形によって生成した。
【0225】
１２００ｕｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および１２００ｕｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有
するリポソームＺ＋ワクチンは、エタノール注入技法、次いで押出し成形によって生成し
、４００ｕｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および１００ｕｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有する
リポソームＺワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し成形
によって生成した。
するリポソームＺ＋ワクチンは、エタノール注入技法、次いで押出し成形によって生成し
、４００ｕｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および１００ｕｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有する
リポソームＺワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し成形
によって生成した。
【0226】
４００ｕｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および４００ｕｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有する
リポソームＺ＋＋ワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し
成形によって生成した。
リポソームＺ＋＋ワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し
成形によって生成した。
【0227】
１２００ｕｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および３００ｕｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有す
るリポソームＺ＋＋＋ワクチンは、エタノール注入技法、次いで押出し成形によって生成
した。
るリポソームＺ＋＋＋ワクチンは、エタノール注入技法、次いで押出し成形によって生成
した。
【0228】
脂質薄層技法によるリポソームＸ、Ｙ、Ｚ、およびＺ＋＋ワクチンの調製
リポソームＸ、Ｙ、Ｚ、およびＺ＋＋ワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼ
ーションおよび押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ Ｇｍｂ
Ｈ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬ
ｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびモノ
ホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登
録商標））（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：
７：０．０５のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化したが、リポソームＹは例外で、３Ｄ
－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）を含有していなかった。エタノールを真空下のｒ
ｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させて、脂質薄層が得られた。
リポソームＸ、Ｙ、Ｚ、およびＺ＋＋ワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼ
ーションおよび押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ Ｇｍｂ
Ｈ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬ
ｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびモノ
ホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登
録商標））（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：
７：０．０５のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化したが、リポソームＹは例外で、３Ｄ
－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）を含有していなかった。エタノールを真空下のｒ
ｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させて、脂質薄層が得られた。
【0229】
脂質フィルムを、０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ５０ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐ
ｈａｎｔｓ、ドイツ）を含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４、５％のＤＭＳＯ（すべてＳｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて再水和させた。試料を１５分間穏やかに撹拌し、脂質薄層
を溶かすためにさらに激しくボルテックスした。生じた多重膜小胞を１０回の凍結解凍サ
イクル（液体Ｎ２および３７℃での水浴）に供し、ホモジナイゼーション、次いで０．０
８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し
成形に供した。ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉ
Ｆｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。カプセル封入されたＴ５０ペプ
チドを有する押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレー
ションによって緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。生じたリポソームをＰＢＳ、ｐ
Ｈ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドおよびアジュバントを添加する前
のリポソーム溶液が得られた。
ｈａｎｔｓ、ドイツ）を含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４、５％のＤＭＳＯ（すべてＳｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて再水和させた。試料を１５分間穏やかに撹拌し、脂質薄層
を溶かすためにさらに激しくボルテックスした。生じた多重膜小胞を１０回の凍結解凍サ
イクル（液体Ｎ２および３７℃での水浴）に供し、ホモジナイゼーション、次いで０．０
８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し
成形に供した。ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉ
Ｆｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。カプセル封入されたＴ５０ペプ
チドを有する押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレー
ションによって緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。生じたリポソームをＰＢＳ、ｐ
Ｈ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドおよびアジュバントを添加する前
のリポソーム溶液が得られた。
【0230】
ＣｐＧ２００６－コレステロール（ＣｐＧ２００６－Ｃｈｏｌ）（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔ
ｈ、スイス）は、すべてのヌクレオチド間結合をチオホスフェートとして有しており、５
’末端が、ＰＥＧスペーサーによってリン酸結合を介してコレステロール分子で修飾され
ている、ＤＮＡオリゴヌクレオチドである。ＣｐＧ２００６－コレステロール（ＣｐＧ２
００６－Ｃｈｏｌ）（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス）をＰＢＳ、ｐＨ７．４に１ｍｇ／
ｍＬで溶かし、リポソーム溶液内に注入し（リポソームＸは例外で、ＣｐＧ２００６－Ｃ
ｈｏｌを含有していなかった）、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰＩを
挿入した。
ｈ、スイス）は、すべてのヌクレオチド間結合をチオホスフェートとして有しており、５
’末端が、ＰＥＧスペーサーによってリン酸結合を介してコレステロール分子で修飾され
ている、ＤＮＡオリゴヌクレオチドである。ＣｐＧ２００６－コレステロール（ＣｐＧ２
００６－Ｃｈｏｌ）（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス）をＰＢＳ、ｐＨ７．４に１ｍｇ／
ｍＬで溶かし、リポソーム溶液内に注入し（リポソームＸは例外で、ＣｐＧ２００６－Ｃ
ｈｏｌを含有していなかった）、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰＩを
挿入した。
【0231】
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２％のオクチルβ－
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．
４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６
０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（リポソームＸ、Ｙ、Ｚでは４０
０ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１００ｕｇ／ｍｌのＴ５０、リポソームＺ＋＋では４００ｕ
ｇ／ｍｌのＡＰＩおよび４００ｕｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィ
ルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポ
ソームの表面上に提示された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリン
ジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．
４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６
０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（リポソームＸ、Ｙ、Ｚでは４０
０ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１００ｕｇ／ｍｌのＴ５０、リポソームＺ＋＋では４００ｕ
ｇ／ｍｌのＡＰＩおよび４００ｕｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィ
ルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポ
ソームの表面上に提示された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリン
ジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0232】
エタノール注入技法によるリポソームＯの調製
リポソームＯワクチンを、エタノール（ＥｔＯＨ）注入技法、次いで押出し成形によっ
て生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆ
ｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレ
ステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ
Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比で、ＥｔＯＨおよ
びｔｅｒｔ－ブタノール（ｔ－ＢｕＯＨ）の２０：１（Ｖ／Ｖ）混合物中に６０℃で可溶
化した。１０％のＥｔＯＨ濃度を維持するために脂質／エタノール溶液をリン酸緩衝液生
理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４に６０℃で希釈し、多重膜リポソーム小胞（ＭＬＶ）の
形成がもたらされた。その後、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）
を使用して、ＭＬＶを０．０８ｕｍの孔径を有する直列の３枚のポリカーボネートフィル
ター（Ｗｈａｔｍａｎ）を通した、５回の連続した押出し成形に供した。生じたリポソー
ムをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前のリ
ポソーム溶液が得られた。
リポソームＯワクチンを、エタノール（ＥｔＯＨ）注入技法、次いで押出し成形によっ
て生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆ
ｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレ
ステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ
Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比で、ＥｔＯＨおよ
びｔｅｒｔ－ブタノール（ｔ－ＢｕＯＨ）の２０：１（Ｖ／Ｖ）混合物中に６０℃で可溶
化した。１０％のＥｔＯＨ濃度を維持するために脂質／エタノール溶液をリン酸緩衝液生
理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４に６０℃で希釈し、多重膜リポソーム小胞（ＭＬＶ）の
形成がもたらされた。その後、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）
を使用して、ＭＬＶを０．０８ｕｍの孔径を有する直列の３枚のポリカーボネートフィル
ター（Ｗｈａｔｍａｎ）を通した、５回の連続した押出し成形に供した。生じたリポソー
ムをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前のリ
ポソーム溶液が得られた。
【0233】
Ｔ４６ペプチド（Ｐｅｐｓｃａｎ、オランダ）をＰＢＳ、ｐＨ７．４に１ｍｇ／ｍＬで
溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰ
Ｉを挿入した。
溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰ
Ｉを挿入した。
【0234】
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２％のオクチルβ－Ｄ－グ
ルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶
かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で
撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（４００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１０
０ｕｇ／ｍｌのＴ４６）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢＳ、
ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示された
生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すことによ
って滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
ルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶
かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で
撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（４００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１０
０ｕｇ／ｍｌのＴ４６）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢＳ、
ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示された
生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すことによ
って滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0235】
エタノール注入によるリポソームＺ＋およびリポソームＺ＋＋＋ワクチンの調製
リポソームＺ＋およびリポソームＺ＋＋＋ワクチンは、エタノール注入に基づくプロセ
スを使用して生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉ
ｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅ
ｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、および３Ｄ－（６－アシル）ＰＨ
ＡＤ（登録商標）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、約
９：１：７：０．０４のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。Ｔ５０ペプチド（Ｂａ
ｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．８～
６．０）に溶かした。その後、脂質エタノール溶液を、Ｔ５０ペプチドを含有する溶液内
に注入し、１５分間穏やかに撹拌して、多重膜小胞（ＭＬＶ）が生じた。ＭＬＶを、ホモ
ジナイゼーション（リポソームＺ＋では６回、リポソームＺ＋＋＋ではホモジナイゼーシ
ョンなし）、次いで０．０８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、
英国）を通した連続押出し成形（リポソームＺ＋では５回、リポソームＺ＋＋＋では３～
５回）に供した。リポソームＺ＋では、ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップ
はどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。リポソ
ームＺ＋＋＋の押出し成形はＬＩＰＥＸフィルター押出し成形機を使用して行った。押出
し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレーションによって緩
衝液を２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４に交換した。カプセル封入
されたＴ５０ペプチドを有する生じたリポソームを２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａ
ＣＬ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、ＡＰＩおよびアジュバントを添加する
前のリポソーム溶液が得られた。
リポソームＺ＋およびリポソームＺ＋＋＋ワクチンは、エタノール注入に基づくプロセ
スを使用して生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉ
ｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅ
ｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、および３Ｄ－（６－アシル）ＰＨ
ＡＤ（登録商標）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、約
９：１：７：０．０４のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。Ｔ５０ペプチド（Ｂａ
ｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．８～
６．０）に溶かした。その後、脂質エタノール溶液を、Ｔ５０ペプチドを含有する溶液内
に注入し、１５分間穏やかに撹拌して、多重膜小胞（ＭＬＶ）が生じた。ＭＬＶを、ホモ
ジナイゼーション（リポソームＺ＋では６回、リポソームＺ＋＋＋ではホモジナイゼーシ
ョンなし）、次いで０．０８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、
英国）を通した連続押出し成形（リポソームＺ＋では５回、リポソームＺ＋＋＋では３～
５回）に供した。リポソームＺ＋では、ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップ
はどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。リポソ
ームＺ＋＋＋の押出し成形はＬＩＰＥＸフィルター押出し成形機を使用して行った。押出
し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレーションによって緩
衝液を２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４に交換した。カプセル封入
されたＴ５０ペプチドを有する生じたリポソームを２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａ
ＣＬ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、ＡＰＩおよびアジュバントを添加する
前のリポソーム溶液が得られた。
【0236】
ＣｐＧ２００６－Ｃｈｏｌ（リポソームＺ＋ではＭｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス、リポ
ソームＺ＋＋＋ではＡｖｅｃｉａ、米国）を１ｍｇ／ｍＬの２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍ
ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４に溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキ
ュベーションした後に、ＡＰＩを挿入した。
ソームＺ＋＋＋ではＡｖｅｃｉａ、米国）を１ｍｇ／ｍＬの２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍ
ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４に溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキ
ュベーションした後に、ＡＰＩを挿入した。
【0237】
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の１％のオクチルβ－
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）と共に炭酸緩衝液、ｐＨ１
０．２に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソームＺ＋溶液内に注入し、次いで、３０
分間、６０℃で撹拌した。Ｔ－Ｌｉｎｅ Ｍｉｘｉｎｇを使用してペプチド溶液を６０℃
でリポソームＺ＋溶液内に混合し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾
過によって行って標的値（リポソームＺ＋では１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１２０
０ｕｇ／ｍｌのＴ５０、リポソームＺ＋＋＋では１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３０
０ｕｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中に１０ｍＭ
のＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース、ｐＨ６．５を用いて１０回実施した。その後、ＡＰ
Ｉがリポソームの表面上に提示された生じたＺ＋リポソームおよびＡＰＩがリポソームの
表面上に提示された生じたＺ＋＋＋リポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリン
ジ／カプセルフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）と共に炭酸緩衝液、ｐＨ１
０．２に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソームＺ＋溶液内に注入し、次いで、３０
分間、６０℃で撹拌した。Ｔ－Ｌｉｎｅ Ｍｉｘｉｎｇを使用してペプチド溶液を６０℃
でリポソームＺ＋溶液内に混合し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾
過によって行って標的値（リポソームＺ＋では１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１２０
０ｕｇ／ｍｌのＴ５０、リポソームＺ＋＋＋では１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３０
０ｕｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中に１０ｍＭ
のＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース、ｐＨ６．５を用いて１０回実施した。その後、ＡＰ
Ｉがリポソームの表面上に提示された生じたＺ＋リポソームおよびＡＰＩがリポソームの
表面上に提示された生じたＺ＋＋＋リポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリン
ジ／カプセルフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0238】
リポソームＬ、Ｍ、およびＮワクチンの調製
リポソームＬ、Ｍ、およびＮワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーション
および押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイ
ツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉ
ｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａ
ｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５の
モル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。エタノールを真空下のｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸
発させることで、脂質薄層が得られた。
リポソームＬ、Ｍ、およびＮワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーション
および押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイ
ツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉ
ｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａ
ｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５の
モル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。エタノールを真空下のｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸
発させることで、脂質薄層が得られた。
【0239】
脂質フィルムを、以下のうちのいずれかを含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４、５％のＤＭＳ
Ｏ（すべてＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて再水和させた：
リポソームＭでは０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ４８ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐ
ｈａｎｔｓ、ドイツ）、または
リポソームＬ０．１３ｍｇ／ｍＬのＴ５０ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐｈａ
ｎｔｓ、ドイツ）、または
リポソームＮでは０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ５２ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐ
ｈａｎｔｓ、ドイツ）。
Ｏ（すべてＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて再水和させた：
リポソームＭでは０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ４８ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐ
ｈａｎｔｓ、ドイツ）、または
リポソームＬ０．１３ｍｇ／ｍＬのＴ５０ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐｈａ
ｎｔｓ、ドイツ）、または
リポソームＮでは０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ５２ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐ
ｈａｎｔｓ、ドイツ）。
【0240】
試料を１５分間穏やかに撹拌し、脂質薄層を溶かすためにさらに激しくボルテックスし
た。生じた多重膜小胞を１０回の凍結解凍サイクル（液体Ｎ２および３７℃での水浴）に
供し、ホモジナイゼーション、次いで０．０８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（
Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し成形に供した。ホモジナイゼーションおよび
押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）
にて行った。押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレー
ションによって緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。カプセル封入されたＴ４８、Ｔ
５０、またはＴ５２ペプチドを有する生じたリポソームを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し
、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前のリポソーム溶液が得られた。
た。生じた多重膜小胞を１０回の凍結解凍サイクル（液体Ｎ２および３７℃での水浴）に
供し、ホモジナイゼーション、次いで０．０８ｕｍの孔径を有するポリカーボネート膜（
Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し成形に供した。ホモジナイゼーションおよび
押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）
にて行った。押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレー
ションによって緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。カプセル封入されたＴ４８、Ｔ
５０、またはＴ５２ペプチドを有する生じたリポソームを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し
、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前のリポソーム溶液が得られた。
【0241】
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２％のオクチルβ－
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．
４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６
０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（４００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよ
び１００ｕｇ／ｍｌのＴ４８、Ｔ５０、またはＴ５２）を得て、緩衝液交換は、ダイアフ
ィルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリ
ポソームの表面上に提示された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリ
ンジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．
４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６
０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（４００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよ
び１００ｕｇ／ｍｌのＴ４８、Ｔ５０、またはＴ５２）を得て、緩衝液交換は、ダイアフ
ィルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリ
ポソームの表面上に提示された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリ
ンジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0242】
リポソームＲ、Ｓ、およびＴワクチンの調製
リポソームＲ、Ｓ、およびＴワクチンは、エタノール注入に基づくプロセス、次いで押
出し成形を使用して生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕ
ｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈ
ａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、および３Ｄ－（６－アシル
）ＰＨＡＤ（登録商標）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）
を、９：１：７：０．０４のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。リポソームＲおよ
びＴでは、１０％の溶媒（ＥｔＯＨ）に到達するように上記脂質エタノール溶液を２７０
ｍＭのスクロースを補充した１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８に混合し、その後、３０
分間、６０℃でインキュベートした。リポソームＳでは、Ｔ５０ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ
ＡＧ、スイス）を１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．８～６．０）
に溶かした。リポソームＲ、Ｓ、およびＴに関する脂質－緩衝液混合液を１５分間穏やか
に撹拌して、多重膜小胞（ＭＬＶ）が生じた。生じた多重膜小胞を、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅ
ｘ－Ｃ５高圧システム（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）において０．０８ｕｍの孔径を有する
ポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した押出し成形に供した（５回）。
リポソームＲ、Ｓ、およびＴワクチンは、エタノール注入に基づくプロセス、次いで押
出し成形を使用して生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕ
ｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈ
ａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、および３Ｄ－（６－アシル
）ＰＨＡＤ（登録商標）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）
を、９：１：７：０．０４のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。リポソームＲおよ
びＴでは、１０％の溶媒（ＥｔＯＨ）に到達するように上記脂質エタノール溶液を２７０
ｍＭのスクロースを補充した１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８に混合し、その後、３０
分間、６０℃でインキュベートした。リポソームＳでは、Ｔ５０ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ
ＡＧ、スイス）を１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．８～６．０）
に溶かした。リポソームＲ、Ｓ、およびＴに関する脂質－緩衝液混合液を１５分間穏やか
に撹拌して、多重膜小胞（ＭＬＶ）が生じた。生じた多重膜小胞を、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅ
ｘ－Ｃ５高圧システム（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）において０．０８ｕｍの孔径を有する
ポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した押出し成形に供した（５回）。
【0243】
押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレーションによ
って緩衝液を２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４に交換した。カプセ
ル封入されたＴ５０を有する生じたリポソーム（リポソームＳ）、ならびに生じたリポソ
ームＲおよびＴを、２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４でさらに希釈
し、６０℃まで加熱して、ＡＰＩおよびＴ５７（リポソームＴ）を添加する前のリポソー
ム溶液が得られた。
って緩衝液を２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４に交換した。カプセ
ル封入されたＴ５０を有する生じたリポソーム（リポソームＳ）、ならびに生じたリポソ
ームＲおよびＴを、２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４でさらに希釈
し、６０℃まで加熱して、ＡＰＩおよびＴ５７（リポソームＴ）を添加する前のリポソー
ム溶液が得られた。
【0244】
リポソームＴでは、Ｔ５７を脱イオン蒸留水中に１％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノ
シド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）で１ｍｇ／ｍＬに溶かし、リポソーム中に挿
入、次いで１５分間、６０℃でインキュベーションした後に、ＡＰＩ挿入を行った。
シド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）で１ｍｇ／ｍＬに溶かし、リポソーム中に挿
入、次いで１５分間、６０℃でインキュベーションした後に、ＡＰＩ挿入を行った。
【0245】
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の１％のオクチルβ－
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）と共に炭酸緩衝液、ｐＨ１
０．２に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液中に混合し、次いで、３０分間
、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って、以下の標的値が得られた：
－リポソームＲでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩ、
－リポソームＳでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３００ｕｇ／ｍｌのＴ５０、な
らびに
－リポソームＴでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３００ｕｇ／ｍｌのＴ５７。
Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）と共に炭酸緩衝液、ｐＨ１
０．２に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液中に混合し、次いで、３０分間
、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って、以下の標的値が得られた：
－リポソームＲでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩ、
－リポソームＳでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３００ｕｇ／ｍｌのＴ５０、な
らびに
－リポソームＴでは１２００ｕｇ／ｍｌのＡＰＩおよび３００ｕｇ／ｍｌのＴ５７。
【0246】
緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中に１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロ
ース、ｐＨ６．５を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示
された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すこ
とによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
ース、ｐＨ６．５を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示
された生じたリポソームを、０．２ｕｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すこ
とによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
【0247】
[実施例２]
コンジュゲートワクチンの調製
ペプチドおよびアジュバント
２つの多重リン酸化ペプチドエピトープ（それぞれ３つおよび２つのリン酸化されたア
ミノ酸を有するＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１およびＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１）の配列を、Ｂ
細胞の表面免疫グロブリンとより良好に結合し得るように、また、ヒトＨＬＡクラスＩ
Ａ、Ｂ、およびＣ分子と高い親和性で結合すると予測されるエピトープを配列が含有しな
いように、長さを最適化することによって、洗練した。後者の基準は、健著な神経損傷を
引き起こす可能性のある、タウに対する細胞毒性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の誘導を回避するた
めに重要であった。免疫エピトープデータベースおよび分析資源（Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｐｉ
ｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）のＴ細
胞エピトープ予測ツールを使用して、ペプチドＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１は、ヒトＨＬＡク
ラスＩ Ａ、Ｂ、ＣならびにＨＬＡクラスＩＩ ＤＱおよびＤＲ分子と高い親和性で結合
することができる予測されるエピトープを示さなかった一方で、ペプチドＴＡＵＶＡＣ－
ｐ２２．１は、ＨＬＡクラスＩＩ ＤＱおよびＤＲ分子と中程度／高い親和性で結合する
エピトープを含有すると予測された（データ示さず）。
コンジュゲートワクチンの調製
ペプチドおよびアジュバント
２つの多重リン酸化ペプチドエピトープ（それぞれ３つおよび２つのリン酸化されたア
ミノ酸を有するＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１およびＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１）の配列を、Ｂ
細胞の表面免疫グロブリンとより良好に結合し得るように、また、ヒトＨＬＡクラスＩ
Ａ、Ｂ、およびＣ分子と高い親和性で結合すると予測されるエピトープを配列が含有しな
いように、長さを最適化することによって、洗練した。後者の基準は、健著な神経損傷を
引き起こす可能性のある、タウに対する細胞毒性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の誘導を回避するた
めに重要であった。免疫エピトープデータベースおよび分析資源（Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｐｉ
ｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）のＴ細
胞エピトープ予測ツールを使用して、ペプチドＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１は、ヒトＨＬＡク
ラスＩ Ａ、Ｂ、ＣならびにＨＬＡクラスＩＩ ＤＱおよびＤＲ分子と高い親和性で結合
することができる予測されるエピトープを示さなかった一方で、ペプチドＴＡＵＶＡＣ－
ｐ２２．１は、ＨＬＡクラスＩＩ ＤＱおよびＤＲ分子と中程度／高い親和性で結合する
エピトープを含有すると予測された（データ示さず）。
【0248】
この研究において使用したリン酸化タウペプチド（配列番号１、配列番号２、配列番号
３）は合成によって生成し（Ｐｅｐｓｃａｎ、オランダ）、ホスホ残基を合成中に付加し
た。リンカーを介してＫＬＨ担体と共有結合している配列番号１または配列番号３のアミ
ノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドを含むコンジュゲートは、本明細書中でそれぞれ
コンジュゲートＢまたはコンジュゲートＣと呼ばれる。リンカーを介してＣＲＭ担体と共
有結合している配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドを含むコンジュ
ゲートは本明細書中でコンジュゲートＡと呼ばれる。
３）は合成によって生成し（Ｐｅｐｓｃａｎ、オランダ）、ホスホ残基を合成中に付加し
た。リンカーを介してＫＬＨ担体と共有結合している配列番号１または配列番号３のアミ
ノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドを含むコンジュゲートは、本明細書中でそれぞれ
コンジュゲートＢまたはコンジュゲートＣと呼ばれる。リンカーを介してＣＲＭ担体と共
有結合している配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドを含むコンジュ
ゲートは本明細書中でコンジュゲートＡと呼ばれる。
【0249】
コンジュゲートＢおよびＣを製造するために、ワクチンペプチドを、ｍ－マレイミドベ
ンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）リンカーおよびペプチドの
Ｎ末端の余分なシステインを介して、担体タンパク質ＫＬＨとコンジュゲートさせた。Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用して未結合のペプチドを除去した後に、コンジュゲ
ートを濃縮した。コンジュゲートを混合した後、強力な多構成要素アジュバント（Ｓｉｇ
ｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）または単一構成
要素デポーアジュバント（水酸化アルミニウム、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）、Ｉ
ｎｖｉｖｏｇｅｎ）のどちらかに、製造者の指示に従って注入した。
ンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）リンカーおよびペプチドの
Ｎ末端の余分なシステインを介して、担体タンパク質ＫＬＨとコンジュゲートさせた。Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用して未結合のペプチドを除去した後に、コンジュゲ
ートを濃縮した。コンジュゲートを混合した後、強力な多構成要素アジュバント（Ｓｉｇ
ｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）または単一構成
要素デポーアジュバント（水酸化アルミニウム、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）、Ｉ
ｎｖｉｖｏｇｅｎ）のどちらかに、製造者の指示に従って注入した。
【0250】
ワクチンペプチドを、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－システイン－アセトアミド
プロピオンアミドリンカーを介して、担体タンパク質ＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせ
た。配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドは合成によって生成し（Ｐ
ｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＳＡＳ）、ホスホ残基およびＰＥＧ
３スペーサーを合成中に付加した。コンジュゲートＡは、担体タンパク質ＣＲＭ１９７を
、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）リンカーを
介して、ペプチドのＮ末端のシステインとコンジュゲートさせることによって製造した。
ＮＨＳエステル反応化学を介してＳＢＡＰをＣＲＭ１９７タンパク質第一級アミン（－Ｎ
Ｈ２）とライゲーションさせた。過剰なＳＢＡＰリンカーは限外濾過およびダイアフィル
トレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して除去した。ＣＲＭ１９７－ＳＢＡＰ中間体をリン
酸化タウペプチドとコンジュゲートさせ、反応が完了した後、過剰量のＬ－シスチンを加
えて反応をクエンチすることで、コンジュゲーション反応を停止させた。粗ＣＲＭ１９７
－ペプチドコンジュゲート生成物をＣａｐｔｏ Ｑ ＩｍｐＲｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムを使用して精製し、塩均一濃度方法を使用して溶出
させた。その後、ＵＦ／ＤＦを使用して、精製したＣＲＭ１９７－ペプチド生成物を、２
０ｍＭのトリス、２５０ｍＭのスクロース、ｐＨ８．１中で０．５ｍｇ／ｍＬの濃度まで
配合した。１０％のＰＳ８０ストック緩衝液を加えて０．０１％のＰＳ８０の最終濃度に
到達させることによって、ＣＲＭ１９７－タウペプチド原薬（ＤＳ）を生成した。溶液は
濾過の前に十分に混合した。
プロピオンアミドリンカーを介して、担体タンパク質ＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせ
た。配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドは合成によって生成し（Ｐ
ｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＳＡＳ）、ホスホ残基およびＰＥＧ
３スペーサーを合成中に付加した。コンジュゲートＡは、担体タンパク質ＣＲＭ１９７を
、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）リンカーを
介して、ペプチドのＮ末端のシステインとコンジュゲートさせることによって製造した。
ＮＨＳエステル反応化学を介してＳＢＡＰをＣＲＭ１９７タンパク質第一級アミン（－Ｎ
Ｈ２）とライゲーションさせた。過剰なＳＢＡＰリンカーは限外濾過およびダイアフィル
トレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して除去した。ＣＲＭ１９７－ＳＢＡＰ中間体をリン
酸化タウペプチドとコンジュゲートさせ、反応が完了した後、過剰量のＬ－シスチンを加
えて反応をクエンチすることで、コンジュゲーション反応を停止させた。粗ＣＲＭ１９７
－ペプチドコンジュゲート生成物をＣａｐｔｏ Ｑ ＩｍｐＲｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムを使用して精製し、塩均一濃度方法を使用して溶出
させた。その後、ＵＦ／ＤＦを使用して、精製したＣＲＭ１９７－ペプチド生成物を、２
０ｍＭのトリス、２５０ｍＭのスクロース、ｐＨ８．１中で０．５ｍｇ／ｍＬの濃度まで
配合した。１０％のＰＳ８０ストック緩衝液を加えて０．０１％のＰＳ８０の最終濃度に
到達させることによって、ＣＲＭ１９７－タウペプチド原薬（ＤＳ）を生成した。溶液は
濾過の前に十分に混合した。
【0251】
[実施例３]
ワクチンがタウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体を誘導した
すべての動物実験は認可されており、動物実験に関する現地の規制に従って行った。ア
カゲザルマカク（Macaca mulatta）は、Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｂｉｏｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ、中国、Ｙｕｎｎａｎ Ｙｉｎｍｏｒｅ Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈ Ｃｏ
． ＬＴＤ、中国、およびＹｕｎｎａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｉｍａｔｅｓ Ｉ
ｎｃ．、中国から入手した。動物は免疫化の開始時に２～５歳であり、最小体重は２．５
ｋｇであった。処置の開始前、およびそれ以降は週に１回、詳細な臨床検査を行った。さ
らに、マカクを日に２回観察し、臨床的徴候を記録した。
ワクチンがタウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体を誘導した
すべての動物実験は認可されており、動物実験に関する現地の規制に従って行った。ア
カゲザルマカク（Macaca mulatta）は、Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｂｉｏｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ、中国、Ｙｕｎｎａｎ Ｙｉｎｍｏｒｅ Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈ Ｃｏ
． ＬＴＤ、中国、およびＹｕｎｎａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｉｍａｔｅｓ Ｉ
ｎｃ．、中国から入手した。動物は免疫化の開始時に２～５歳であり、最小体重は２．５
ｋｇであった。処置の開始前、およびそれ以降は週に１回、詳細な臨床検査を行った。さ
らに、マカクを日に２回観察し、臨床的徴候を記録した。
【0252】
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１８００μｇの配列
番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量の、対照リポソームワク
チン（配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドおよびＭＰＬＡを有する
リポソーム）もしくは本出願の実施形態によるリポソームワクチン、たとえば、リポソー
ムＺ（配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド、３Ｄ－（６－アシル）
ＰＨＡＤ（登録商標）、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６、およびＴ細
胞ペプチドＴ５０を有するリポソーム）、または１５μｇ／用量の本発明の一実施形態に
よるコンジュゲートワクチン（たとえば、コンジュゲートＡ、ＣＲＭ１９７と連結させた
配列番号２のリン酸化タウペプチド）を用いて、１、２９、および８５日目に、ミョウバ
ンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６と共に同時注射して、皮下で免疫化し
た。出血を、免疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２
０、１３４、および１４８日目に行い、血清を単離した。
番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量の、対照リポソームワク
チン（配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドおよびＭＰＬＡを有する
リポソーム）もしくは本出願の実施形態によるリポソームワクチン、たとえば、リポソー
ムＺ（配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド、３Ｄ－（６－アシル）
ＰＨＡＤ（登録商標）、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６、およびＴ細
胞ペプチドＴ５０を有するリポソーム）、または１５μｇ／用量の本発明の一実施形態に
よるコンジュゲートワクチン（たとえば、コンジュゲートＡ、ＣＲＭ１９７と連結させた
配列番号２のリン酸化タウペプチド）を用いて、１、２９、および８５日目に、ミョウバ
ンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６と共に同時注射して、皮下で免疫化し
た。出血を、免疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２
０、１３４、および１４８日目に行い、血清を単離した。
【0253】
特異的ＩｇＧ抗体価は、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーティング抗原として
使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。個々の免疫化したサルからの血清をアッセイ緩
衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％のＢＳＡ）中で連続希釈し、関連ペプ
チドでコーティングされた９６ウェルプレートに適用した。２時間インキュベーションし
た後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗
浄した。抗体は、ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗サルＩｇＧ（ＫＰＬ）、次いでＡＢＴ
Ｓ基質（Ｒｏｃｈｅ）を使用して検出した。すべての試料は８つの２倍希釈液で実行し、
それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。データは１群あたりのエンド
ポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率）の幾何平均として表した。
使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。個々の免疫化したサルからの血清をアッセイ緩
衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％のＢＳＡ）中で連続希釈し、関連ペプ
チドでコーティングされた９６ウェルプレートに適用した。２時間インキュベーションし
た後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗
浄した。抗体は、ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗サルＩｇＧ（ＫＰＬ）、次いでＡＢＴ
Ｓ基質（Ｒｏｃｈｅ）を使用して検出した。すべての試料は８つの２倍希釈液で実行し、
それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。データは１群あたりのエンド
ポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率）の幾何平均として表した。
【0254】
図４に示すように、リポソームＺワクチンおよびコンジュゲートＡはどちらも対照リポ
ソームワクチンと比較してより高いホスホペプチド特異的ＩｇＧ力価を誘導した。
ソームワクチンと比較してより高いホスホペプチド特異的ＩｇＧ力価を誘導した。
【0255】
[実施例４]
ワクチンがヒト脳において病理学的タウ構造に特異的な抗体を誘導した
すべての脳組織はオランダ脳バンク（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｂｒａｉｎ Ｂａｎｋ
、ＮＢＢ）から入手し、脳剖検ならびに試料およびその臨床情報の研究目的での使用のた
めのインフォームドコンセントの署名後に、ドナーから採取した。認知症でない対照（健
康）、アルツハイマー病（ＡＤ）、タウ病理を伴った前頭側頭認知症（ＦＴＤ－タウ）、
ピック病、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ
）からのパラフィン切片を使用した。脳領域には、頭頂葉皮質、中前頭回、海馬、または
尾状核が含まれていた。
ワクチンがヒト脳において病理学的タウ構造に特異的な抗体を誘導した
すべての脳組織はオランダ脳バンク（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｂｒａｉｎ Ｂａｎｋ
、ＮＢＢ）から入手し、脳剖検ならびに試料およびその臨床情報の研究目的での使用のた
めのインフォームドコンセントの署名後に、ドナーから採取した。認知症でない対照（健
康）、アルツハイマー病（ＡＤ）、タウ病理を伴った前頭側頭認知症（ＦＴＤ－タウ）、
ピック病、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ
）からのパラフィン切片を使用した。脳領域には、頭頂葉皮質、中前頭回、海馬、または
尾状核が含まれていた。
【0256】
具体的には、対照ヒト対象（健康）およびアルツハイマー病を患っているヒト対象（Ａ
ＤブラークＶ／ＶＩ）の頭頂葉皮質からのホルマリン固定しパラフィン包埋した切片を、
通常抗体希釈剤（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ）中で１：１００に希釈した免疫後のマカク血
清を用いて染色した。その後、切片を洗浄し、ヤギ抗サル－ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ）で染色
した。最後に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の存在下で茶色の特異的染色を沈
着させる３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ、Ｄａｋｏ）を使用して、染色を可視化
した。スライドをヘマトキシリンで対比染色し、脱水し、Ｑｕｉｃｋ Ｄ封入剤（Ｋｌｉ
ｎｉｐａｔｈ）を用いて搭載した。写真はＬｅｉｃａ ＤＣ５００顕微鏡を用いて撮影し
た。
ＤブラークＶ／ＶＩ）の頭頂葉皮質からのホルマリン固定しパラフィン包埋した切片を、
通常抗体希釈剤（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ）中で１：１００に希釈した免疫後のマカク血
清を用いて染色した。その後、切片を洗浄し、ヤギ抗サル－ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ）で染色
した。最後に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の存在下で茶色の特異的染色を沈
着させる３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ、Ｄａｋｏ）を使用して、染色を可視化
した。スライドをヘマトキシリンで対比染色し、脱水し、Ｑｕｉｃｋ Ｄ封入剤（Ｋｌｉ
ｎｉｐａｔｈ）を用いて搭載した。写真はＬｅｉｃａ ＤＣ５００顕微鏡を用いて撮影し
た。
【0257】
図５の結果は、リポソームＺ（配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチ
ド、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドＣ
ｐＧ２００６、およびＴ細胞ペプチドＴ５０を有するリポソーム）を用いて免疫化したア
カゲザルマカクからの免疫後血清が、ヒト脳切片中の病理学的タウ構造を染色したことを
示す。改善リポソームを用いた一次免疫化後の１０６日目に、アカゲザルマカクから血清
を採取した。このマカクは、血清採取の０、１、および３カ月前に免疫化を受けていた。
左（ＡＤブラークＶ／ＶＩ）パネルは、ブラークステージＶドナーからの頭頂葉皮質の染
色を示す。矢印はタウのもつれの染色を示す。右（健康）パネルは、ブラークステージ０
ドナーからの頭頂葉皮質の染色を示す。血清を１：１００の希釈率で切片に適用し、次い
でヤギ抗サル抗体を１：１００で適用し、ＤＡＢ発色剤を使用して染色を可視化した。
ド、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドＣ
ｐＧ２００６、およびＴ細胞ペプチドＴ５０を有するリポソーム）を用いて免疫化したア
カゲザルマカクからの免疫後血清が、ヒト脳切片中の病理学的タウ構造を染色したことを
示す。改善リポソームを用いた一次免疫化後の１０６日目に、アカゲザルマカクから血清
を採取した。このマカクは、血清採取の０、１、および３カ月前に免疫化を受けていた。
左（ＡＤブラークＶ／ＶＩ）パネルは、ブラークステージＶドナーからの頭頂葉皮質の染
色を示す。矢印はタウのもつれの染色を示す。右（健康）パネルは、ブラークステージ０
ドナーからの頭頂葉皮質の染色を示す。血清を１：１００の希釈率で切片に適用し、次い
でヤギ抗サル抗体を１：１００で適用し、ＤＡＢ発色剤を使用して染色を可視化した。
【0258】
図６の結果は、配列番号２のリン酸化タウペプチド＋可溶性ＣｐＧおよびミョウバン水
酸化物を含有するコンジュゲートＡを用いて免疫化したアカゲザルマカクからの血清が、
ヒトＡＤ脳切片中の病理学的タウ構造と結合することを示す。ＣＲＭコンジュゲートワク
チンを用いた一次免疫化後の１０６日目に血清を採取した。これらのマカクは、血清採取
の０、１、および３カ月前に免疫化を受けていた。上（ＡＤ）パネルは、ブラークステー
ジＶドナーからのタウのもつれを含めた頭頂葉皮質の染色を示す。下（対照）パネルは、
ブラークステージ０ドナーからの頭頂葉皮質の染色を示す。血清を１：１００の希釈率で
切片に適用し、次いでヤギ抗サル抗体を１：１００で適用し、ＤＡＢ発色剤を使用して染
色を可視化した。
酸化物を含有するコンジュゲートＡを用いて免疫化したアカゲザルマカクからの血清が、
ヒトＡＤ脳切片中の病理学的タウ構造と結合することを示す。ＣＲＭコンジュゲートワク
チンを用いた一次免疫化後の１０６日目に血清を採取した。これらのマカクは、血清採取
の０、１、および３カ月前に免疫化を受けていた。上（ＡＤ）パネルは、ブラークステー
ジＶドナーからのタウのもつれを含めた頭頂葉皮質の染色を示す。下（対照）パネルは、
ブラークステージ０ドナーからの頭頂葉皮質の染色を示す。血清を１：１００の希釈率で
切片に適用し、次いでヤギ抗サル抗体を１：１００で適用し、ＤＡＢ発色剤を使用して染
色を可視化した。
【0259】
[実施例５]
１つまたは２つのアジュバントを用いたリポソームワクチン
改善リポソームワクチンに２つのアジュバントを加えることで、タウホスホペプチド特
異的ＩｇＧ抗体価のレベル、および個体間での抗体応答の一貫性が増加する。
１つまたは２つのアジュバントを用いたリポソームワクチン
改善リポソームワクチンに２つのアジュバントを加えることで、タウホスホペプチド特
異的ＩｇＧ抗体価のレベル、および個体間での抗体応答の一貫性が増加する。
【0260】
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１、２９、８５、お
よび１６９日目に、１８００μｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウ
ペプチド／用量の対照リポソームワクチン、または、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登
録商標）アジュバント単独（リポソームＸ、図７Ａ）、脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌ
クレオチドアジュバント単独（リポソームＹ、図７Ｂ）のどちらか、もしくは３Ｄ－（６
－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレオチドアジ
ュバントの両方（リポソームＺ、図７Ｃ）を含有する、カプセル封入されたＴ５０ Ｔ細
胞エピトープを有する改善リポソームワクチンを用いて、皮下で免疫化した。出血を、免
疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１
４８、１６２、１７６、および１９０日目に行い、抗体を単離した。血清中の特異的Ｉｇ
Ｇ抗体価を、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーティング抗原として、および抗サ
ルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。生じる抗体レベルを、それ
ぞれの個々のサルの経時的なエンドポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率
）として提示する。それぞれの免疫化群を１つのパネルに表す（図７Ａ～Ｃ）。１群あた
りのエンドポイント力価の幾何平均±９５％の信頼区間を図７Ｄに提示する。要約すると
、図７Ａ～Ｄは、カプセル封入されたＴ５０を含有するリポソームワクチンに２つのアジ
ュバントを含めることで、タウホスホペプチドに対する抗体応答のレベルおよび一貫性が
改善され、個々のサル間でより少ない抗体応答のばらつきがもたらされたことを示す。よ
り詳細には、図７Ｄに示すように、配列番号２のリン酸化タウペプチド、Ｔ５０ Ｔ細胞
エピトープ（リポソームＸ、Ｙ、およびＺ）、ならびに１つまたは２つのアジュバントを
有する改善リポソームワクチンは、Ｔ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチン
よりも高い、タウホスホペプチドに対する力価を誘導した。改善リポソームワクチンのそ
れぞれを注射した場合はすべてのサルがレスポンダーであった一方で、対照リポソームワ
クチンの場合は６匹のうち４匹の動物がレスポンダーであった。
よび１６９日目に、１８００μｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウ
ペプチド／用量の対照リポソームワクチン、または、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登
録商標）アジュバント単独（リポソームＸ、図７Ａ）、脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌ
クレオチドアジュバント単独（リポソームＹ、図７Ｂ）のどちらか、もしくは３Ｄ－（６
－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレオチドアジ
ュバントの両方（リポソームＺ、図７Ｃ）を含有する、カプセル封入されたＴ５０ Ｔ細
胞エピトープを有する改善リポソームワクチンを用いて、皮下で免疫化した。出血を、免
疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１
４８、１６２、１７６、および１９０日目に行い、抗体を単離した。血清中の特異的Ｉｇ
Ｇ抗体価を、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーティング抗原として、および抗サ
ルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。生じる抗体レベルを、それ
ぞれの個々のサルの経時的なエンドポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率
）として提示する。それぞれの免疫化群を１つのパネルに表す（図７Ａ～Ｃ）。１群あた
りのエンドポイント力価の幾何平均±９５％の信頼区間を図７Ｄに提示する。要約すると
、図７Ａ～Ｄは、カプセル封入されたＴ５０を含有するリポソームワクチンに２つのアジ
ュバントを含めることで、タウホスホペプチドに対する抗体応答のレベルおよび一貫性が
改善され、個々のサル間でより少ない抗体応答のばらつきがもたらされたことを示す。よ
り詳細には、図７Ｄに示すように、配列番号２のリン酸化タウペプチド、Ｔ５０ Ｔ細胞
エピトープ（リポソームＸ、Ｙ、およびＺ）、ならびに１つまたは２つのアジュバントを
有する改善リポソームワクチンは、Ｔ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチン
よりも高い、タウホスホペプチドに対する力価を誘導した。改善リポソームワクチンのそ
れぞれを注射した場合はすべてのサルがレスポンダーであった一方で、対照リポソームワ
クチンの場合は６匹のうち４匹の動物がレスポンダーであった。
【0261】
[実施例６]
ワクチンが濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体を誘導した
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１日目および２９日目
に、ワクチン接種によって、（ｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープおよび３Ｄ－（６－アシル
）ＰＨＡＤ（登録商標）アジュバント単独（リポソームＸ）を含有する改善リポソームワ
クチン、（ｉｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープおよび脂質付加ＣｐＧ２００６アジュバント
単独（リポソームＹ）を含有する改善リポソームワクチン、（ｉｉｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エ
ピトープならびに２つのアジュバント（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）およ
び脂質付加ＣｐＧ２００６、リポソームＺ）を含有する改善リポソームワクチン、または
（ｉｖ）コンジュゲートワクチン（ＣＲＭ１９７と連結させた配列番号２のリン酸化タウ
ペプチド）を用いて、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６（コン
ジュゲートＡ）と同時注射して、皮下で免疫化した。
ワクチンが濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体を誘導した
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１日目および２９日目
に、ワクチン接種によって、（ｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープおよび３Ｄ－（６－アシル
）ＰＨＡＤ（登録商標）アジュバント単独（リポソームＸ）を含有する改善リポソームワ
クチン、（ｉｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープおよび脂質付加ＣｐＧ２００６アジュバント
単独（リポソームＹ）を含有する改善リポソームワクチン、（ｉｉｉ）Ｔ５０ Ｔ細胞エ
ピトープならびに２つのアジュバント（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）およ
び脂質付加ＣｐＧ２００６、リポソームＺ）を含有する改善リポソームワクチン、または
（ｉｖ）コンジュゲートワクチン（ＣＲＭ１９７と連結させた配列番号２のリン酸化タウ
ペプチド）を用いて、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６（コン
ジュゲートＡ）と同時注射して、皮下で免疫化した。
【0262】
濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）の調製物は、組織学的に確認されたＡＤ対象の死後
脳組織から、不溶性タウのサルコシル抽出によって、ＧｒｅｅｎｂｅｒｇおよびＤａｖｉ
ｅｓの改変方法（Greenberg and Davies, 1991, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(15):582
7-31）を使用して得た。濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体価はＭｅｓｏ
ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームを使用して評価した。ＭＳ
Ｄストレプトアビジンプレートを、ビオチン標識した抗タウ捕捉抗体（ＨＴ７－ビオチン
、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした後、アルツハイマー病患者か
ら単離したｅＰＨＦと共にインキュベーションした一方で、ｅＰＨＦに特異的なＩｇＧ抗
体を、サルＩｇＧ抗体と交叉反応する、スルホタグ標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して
さらに検出した。より詳細には、ｅＰＨＦを、事前に１％のＢＳＡで飽和し、ビオチン標
識したＨＴ－７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした、ＭＳＤ
Ｇｏｌｄ小スポットストレプトアビジン９６ウェルプレート（ＭＳＤ）に加えた。１時間
インキュベーションした後、プレートをＰＢＳＴで洗浄し、血清の段階希釈液を加え、２
時間インキュベートした。スルホタグ標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して結合抗体を検
出し、次いで、１％のＰＦＡ中の固定ステップの後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加え
た。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。結果は、そ
れぞれの個々のサルについて１ミリリットルあたりの任意単位（ＡＵ／ｍＬ）で、１群あ
たりの幾何平均と共に表した。最初の免疫化後の５０日目でのｅＰＨＦ特異的抗体価を表
す。
脳組織から、不溶性タウのサルコシル抽出によって、ＧｒｅｅｎｂｅｒｇおよびＤａｖｉ
ｅｓの改変方法（Greenberg and Davies, 1991, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(15):582
7-31）を使用して得た。濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体価はＭｅｓｏ
ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームを使用して評価した。ＭＳ
Ｄストレプトアビジンプレートを、ビオチン標識した抗タウ捕捉抗体（ＨＴ７－ビオチン
、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした後、アルツハイマー病患者か
ら単離したｅＰＨＦと共にインキュベーションした一方で、ｅＰＨＦに特異的なＩｇＧ抗
体を、サルＩｇＧ抗体と交叉反応する、スルホタグ標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して
さらに検出した。より詳細には、ｅＰＨＦを、事前に１％のＢＳＡで飽和し、ビオチン標
識したＨＴ－７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした、ＭＳＤ
Ｇｏｌｄ小スポットストレプトアビジン９６ウェルプレート（ＭＳＤ）に加えた。１時間
インキュベーションした後、プレートをＰＢＳＴで洗浄し、血清の段階希釈液を加え、２
時間インキュベートした。スルホタグ標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して結合抗体を検
出し、次いで、１％のＰＦＡ中の固定ステップの後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加え
た。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。結果は、そ
れぞれの個々のサルについて１ミリリットルあたりの任意単位（ＡＵ／ｍＬ）で、１群あ
たりの幾何平均と共に表した。最初の免疫化後の５０日目でのｅＰＨＦ特異的抗体価を表
す。
【0263】
図８は、すべてのワクチンが高力価のｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ抗体を誘導したことを示す
。
。
【0264】
また、高力価のｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ抗体の同様の結果が、筋肉内投与を介してアカゲ
ザルマカクに投与したリポソームＺ＋などの他のリポソームでも得られた。
ザルマカクに投与したリポソームＺ＋などの他のリポソームでも得られた。
【0265】
[実施例７]
アカゲザルにおいてリポソームワクチンおよびコンジュゲートワクチンによって誘導され
たタウホスホペプチド特異的抗体の幅
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１および２９日目に、
（ｉ）カプセル封入されたＴ５０ならびに２つのアジュバント：ＴＬＲ４リガンド（３Ｄ
－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレオ
チド（リポソームＺ）を含有する改善リポソームワクチン、（ｉｉ）コンジュゲートワク
チン（ＣＲＭと連結させた配列番号２のリン酸化タウペプチド）（コンジュゲートＡ）を
用いて、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６と共に同時注射して
、皮下で免疫化した。抗体のエピトープ認識プロファイルは、２回目の免疫化（５０日目
）の３時間後に、１つのアミノ酸をシフトしたＮ末端ビオチン標識した８量体ペプチドの
ライブラリー、およびカバーする配列番号２のリン酸化タウペプチドの配列、ならびに配
列番号４の配列（ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ、配列番号２と同じアミノ酸配列を
有する非リン酸化タウペプチド）および対応するビオチン標識した完全長ペプチドを使用
して、エピトープマッピングＥＬＩＳＡによって決定した。
アカゲザルにおいてリポソームワクチンおよびコンジュゲートワクチンによって誘導され
たタウホスホペプチド特異的抗体の幅
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１および２９日目に、
（ｉ）カプセル封入されたＴ５０ならびに２つのアジュバント：ＴＬＲ４リガンド（３Ｄ
－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレオ
チド（リポソームＺ）を含有する改善リポソームワクチン、（ｉｉ）コンジュゲートワク
チン（ＣＲＭと連結させた配列番号２のリン酸化タウペプチド）（コンジュゲートＡ）を
用いて、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６と共に同時注射して
、皮下で免疫化した。抗体のエピトープ認識プロファイルは、２回目の免疫化（５０日目
）の３時間後に、１つのアミノ酸をシフトしたＮ末端ビオチン標識した８量体ペプチドの
ライブラリー、およびカバーする配列番号２のリン酸化タウペプチドの配列、ならびに配
列番号４の配列（ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ、配列番号２と同じアミノ酸配列を
有する非リン酸化タウペプチド）および対応するビオチン標識した完全長ペプチドを使用
して、エピトープマッピングＥＬＩＳＡによって決定した。
【0266】
図９は、リポソームＺを用いて免疫化したサルは、配列番号２のリン酸化ペプチドのＮ
末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた一方で（図９Ａ）、コンジュゲートワク
チン（ＣＲＭと連結させた配列番号２のリン酸化タウペプチド）を用いて免疫化したサル
は、配列番号２のタウペプチドのＣ末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた（図
９Ｂ）ことを示す。
末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた一方で（図９Ａ）、コンジュゲートワク
チン（ＣＲＭと連結させた配列番号２のリン酸化タウペプチド）を用いて免疫化したサル
は、配列番号２のタウペプチドのＣ末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた（図
９Ｂ）ことを示す。
【0267】
[実施例８]
カプセル封入されたＴ細胞エピトープを有するリポソームワクチンによって誘導されたタ
ウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体の増加した力価
３つの群のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０匹／群）を、０および１４日目に、ｉ）
ＴＬＲ４作用剤を含有するリポソームワクチン（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商
標））（リポソームＲ）、ｉｉ）カプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０およびＴＬ
Ｒ４リガンド（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））をアジュバントとして含有
するリポソームワクチン（リポソームＳ）、またはｉｉｉ）リポソーム表面上に繋留され
たＴ細胞エピトープＴ５７（すなわちジパルミトイル化Ｔ５０）およびＴＬＲ４リガンド
（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））をアジュバントとして含有するリポソー
ムワクチン（リポソームＴ）を用いて、皮下で免疫化した。配列番号２のリン酸化タウペ
プチドに特異的なＩｇＧ抗体のレベルを、マウス血漿への最初の注射の２１および３５日
後にＥＬＩＳＡによって測定した。結果は、個々のマウスの値として、任意単位（ＡＵ）
／ｍＬで表した１群あたりの幾何平均±９５％のＣＩと共に、提示した。図１０Ａに示す
ように、カプセル封入されたＴ５０を含有するリポソームワクチン（リポソームＳ）を用
いたワクチン接種は、最初の免疫化の２１日後に、対照リポソームワクチン（リポソーム
Ｒ）および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソームＴ）
よりも有意に高い抗体価を誘導し（クラスカル－ワリス検定：それぞれｐ＝０．００８９
およびｐ＝０００２）、また、最初の免疫化の３５日後に、対照リポソームワクチンより
も高い抗体価、および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチンより有
意に高い抗体価を誘導した（クラスカル－ワリス検定：それぞれｐ＝０．７５９１および
ｐ＝００５３）（図１０Ｂ）。
カプセル封入されたＴ細胞エピトープを有するリポソームワクチンによって誘導されたタ
ウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体の増加した力価
３つの群のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝１０匹／群）を、０および１４日目に、ｉ）
ＴＬＲ４作用剤を含有するリポソームワクチン（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商
標））（リポソームＲ）、ｉｉ）カプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０およびＴＬ
Ｒ４リガンド（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））をアジュバントとして含有
するリポソームワクチン（リポソームＳ）、またはｉｉｉ）リポソーム表面上に繋留され
たＴ細胞エピトープＴ５７（すなわちジパルミトイル化Ｔ５０）およびＴＬＲ４リガンド
（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））をアジュバントとして含有するリポソー
ムワクチン（リポソームＴ）を用いて、皮下で免疫化した。配列番号２のリン酸化タウペ
プチドに特異的なＩｇＧ抗体のレベルを、マウス血漿への最初の注射の２１および３５日
後にＥＬＩＳＡによって測定した。結果は、個々のマウスの値として、任意単位（ＡＵ）
／ｍＬで表した１群あたりの幾何平均±９５％のＣＩと共に、提示した。図１０Ａに示す
ように、カプセル封入されたＴ５０を含有するリポソームワクチン（リポソームＳ）を用
いたワクチン接種は、最初の免疫化の２１日後に、対照リポソームワクチン（リポソーム
Ｒ）および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソームＴ）
よりも有意に高い抗体価を誘導し（クラスカル－ワリス検定：それぞれｐ＝０．００８９
およびｐ＝０００２）、また、最初の免疫化の３５日後に、対照リポソームワクチンより
も高い抗体価、および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチンより有
意に高い抗体価を誘導した（クラスカル－ワリス検定：それぞれｐ＝０．７５９１および
ｐ＝００５３）（図１０Ｂ）。
【0268】
[実施例９]
リポソームワクチンが取り込まれたＴ細胞エピトープに特異的なＴ細胞応答を誘導した
３つの群のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝５匹／群）を、０、１４、および２８日目に
、（ｉ）カプセル封入されたＴ細胞ペプチドＴ４８（ＧＳリンカーによって分離されたＴ
細胞エピトープＰＡＤＲＥ、Ｔ２、Ｔ３０、およびＴ１７を含有）ならびにＴＬＲ４作用
剤をアジュバント（ＭＰＬＡ）として有する改善リポソームワクチン（リポソームＭ）、
（ｉｉ）カプセル封入されたＴ５２（ＲＫリンカーによって分離されたＴ細胞エピトープ
ＰＡＤＲＥ、Ｔ２、およびＴ３０を含有）ならびにＴＬＲ４作用剤（ＭＰＬＡ）をアジュ
バント（リポソームＮ）として有する改善リポソームワクチン、または（ｉｉｉ）ＰＢＳ
を用いて、皮下で免疫化した。ＩＬ－４およびＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによるＴ細胞
応答の分析のために、マウスから脾臓を最初の免疫化の４２日後に収集した。単個細胞懸
濁液を、１０ｕｇ／ｍＬの培地、Ｔ４８、またはＴ５２ペプチドと共に４８時間インキュ
ベートした。プレートを、ビオチン標識した抗マウスＩＬ－４またはＩＦＮ－γモノクロ
ーナル抗体およびストレプトアビジンアルカリホスファターゼ（ＡＰ）と共にインキュベ
ートした。ＡＰ基質を加えることでスポットを発色させた。図１１は、リポソーム内にカ
プセル封入されているものと同じペプチドを用いたマウス脾細胞の再刺激では、ＩＬ－４
（図１１Ｂ）およびＩＦＮ－γスポット形成細胞（図１１Ａ）が誘導された一方で、ＰＢ
Ｓを注射したマウスの脾細胞では誘導されなかったことを示す。これにより、ワクチンに
Ｔ細胞エピトープを加えることで、特定のＴ細胞の活性化が誘導され、タウ特異的Ｂ細胞
に対する抗体産生における支援をさらに提供することが可能になることが確認された。
リポソームワクチンが取り込まれたＴ細胞エピトープに特異的なＴ細胞応答を誘導した
３つの群のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝５匹／群）を、０、１４、および２８日目に
、（ｉ）カプセル封入されたＴ細胞ペプチドＴ４８（ＧＳリンカーによって分離されたＴ
細胞エピトープＰＡＤＲＥ、Ｔ２、Ｔ３０、およびＴ１７を含有）ならびにＴＬＲ４作用
剤をアジュバント（ＭＰＬＡ）として有する改善リポソームワクチン（リポソームＭ）、
（ｉｉ）カプセル封入されたＴ５２（ＲＫリンカーによって分離されたＴ細胞エピトープ
ＰＡＤＲＥ、Ｔ２、およびＴ３０を含有）ならびにＴＬＲ４作用剤（ＭＰＬＡ）をアジュ
バント（リポソームＮ）として有する改善リポソームワクチン、または（ｉｉｉ）ＰＢＳ
を用いて、皮下で免疫化した。ＩＬ－４およびＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによるＴ細胞
応答の分析のために、マウスから脾臓を最初の免疫化の４２日後に収集した。単個細胞懸
濁液を、１０ｕｇ／ｍＬの培地、Ｔ４８、またはＴ５２ペプチドと共に４８時間インキュ
ベートした。プレートを、ビオチン標識した抗マウスＩＬ－４またはＩＦＮ－γモノクロ
ーナル抗体およびストレプトアビジンアルカリホスファターゼ（ＡＰ）と共にインキュベ
ートした。ＡＰ基質を加えることでスポットを発色させた。図１１は、リポソーム内にカ
プセル封入されているものと同じペプチドを用いたマウス脾細胞の再刺激では、ＩＬ－４
（図１１Ｂ）およびＩＦＮ－γスポット形成細胞（図１１Ａ）が誘導された一方で、ＰＢ
Ｓを注射したマウスの脾細胞では誘導されなかったことを示す。これにより、ワクチンに
Ｔ細胞エピトープを加えることで、特定のＴ細胞の活性化が誘導され、タウ特異的Ｂ細胞
に対する抗体産生における支援をさらに提供することが可能になることが確認された。
【0269】
[実施例１０]
カプセル封入されたＴ細胞エピトープおよび繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポ
ソームワクチン
アカゲザルマカクの群（ｎ＝６匹／群）を、１、２９、８５、および１６９日目に、（
ｉ）カプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０およびＴＬＲ４リガンド（ＭＰＬＡ）を
アジュバントとして含有するリポソームワクチン（リポソームＬ）、（ｉｉ）繋留された
Ｔ細胞エピトープＴ４６およびＴＬＲ４リガンド（ＭＰＬＡ）をアジュバントとして含有
するリポソームワクチン（リポソームＯ）、ならびに（ｉｉｉ）ＴＬＲ４リガンド（ＭＰ
ＬＡ）をアジュバントとして含有し、Ｔ細胞エピトープを含有しない対照リポソームワク
チンを用いて、皮下で免疫化した。出血を、免疫化前（－１４日目）ならびに８、２２、
３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、お
よび１９０日目に行い、抗体を単離した。特異的ＩｇＧ抗体価を、配列番号２のリン酸化
タウペプチドをコーティング抗原として、および抗サルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬ
ＩＳＡによって決定した。生じる抗体レベルをエンドポイント力価（肯定応答を誘導する
最後の血清希釈率）として計算し、データを１群あたりの幾何平均として表した。図１２
に示すように、カプセル封入されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リ
ポソームＬ）および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソ
ームＯ）は、それぞれ、Ｔ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチンよりも高い
タウホスホペプチド特異的抗体価を誘導した。
カプセル封入されたＴ細胞エピトープおよび繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポ
ソームワクチン
アカゲザルマカクの群（ｎ＝６匹／群）を、１、２９、８５、および１６９日目に、（
ｉ）カプセル封入されたＴ細胞エピトープＴ５０およびＴＬＲ４リガンド（ＭＰＬＡ）を
アジュバントとして含有するリポソームワクチン（リポソームＬ）、（ｉｉ）繋留された
Ｔ細胞エピトープＴ４６およびＴＬＲ４リガンド（ＭＰＬＡ）をアジュバントとして含有
するリポソームワクチン（リポソームＯ）、ならびに（ｉｉｉ）ＴＬＲ４リガンド（ＭＰ
ＬＡ）をアジュバントとして含有し、Ｔ細胞エピトープを含有しない対照リポソームワク
チンを用いて、皮下で免疫化した。出血を、免疫化前（－１４日目）ならびに８、２２、
３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、お
よび１９０日目に行い、抗体を単離した。特異的ＩｇＧ抗体価を、配列番号２のリン酸化
タウペプチドをコーティング抗原として、および抗サルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬ
ＩＳＡによって決定した。生じる抗体レベルをエンドポイント力価（肯定応答を誘導する
最後の血清希釈率）として計算し、データを１群あたりの幾何平均として表した。図１２
に示すように、カプセル封入されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リ
ポソームＬ）および繋留されたＴ細胞エピトープを含有するリポソームワクチン（リポソ
ームＯ）は、それぞれ、Ｔ細胞エピトープを有さない対照リポソームワクチンよりも高い
タウホスホペプチド特異的抗体価を誘導した。
【0270】
[実施例１１]
コンジュゲートワクチンによって誘導されたマウスにおける抗体応答
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（１４匹のマウス匹／群）を、コンジュゲートＢまたはコンジュ
ゲートＣ（ＫＬＨと共有結合した配列番号１または配列番号３を含有）を用いて、図１３
Ａに示したスケジュールに従って、強力な多構成要素のアジュバント（Ｓｉｇｍａ Ａｄ
ｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、以降Ｒｉｂｉ
と呼ぶ）または単一構成要素のデポーアジュバント（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）
アジュバント２％もしくは水酸化アルミニウムゲル、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、以降ミョウバ
ンと呼ぶ）のどちらかでアジュバント化したワクチン候補を使用して、免疫化した。配列
番号１のアミノ酸配列は、マウスタンパク質のそれと比較して１個のアミノ酸の相違のみ
を含有する一方で、配列番号３の配列は、ヒトとマウスとの間で１００％保存されている
。したがって、選択されたエピトープはマウスの「自己」タンパク質であると合理的にみ
なすことができ、マウスを、免疫寛容が免疫原性に課し得る制限を調査するための関連モ
デルとするべきである。
コンジュゲートワクチンによって誘導されたマウスにおける抗体応答
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（１４匹のマウス匹／群）を、コンジュゲートＢまたはコンジュ
ゲートＣ（ＫＬＨと共有結合した配列番号１または配列番号３を含有）を用いて、図１３
Ａに示したスケジュールに従って、強力な多構成要素のアジュバント（Ｓｉｇｍａ Ａｄ
ｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、以降Ｒｉｂｉ
と呼ぶ）または単一構成要素のデポーアジュバント（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）
アジュバント２％もしくは水酸化アルミニウムゲル、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、以降ミョウバ
ンと呼ぶ）のどちらかでアジュバント化したワクチン候補を使用して、免疫化した。配列
番号１のアミノ酸配列は、マウスタンパク質のそれと比較して１個のアミノ酸の相違のみ
を含有する一方で、配列番号３の配列は、ヒトとマウスとの間で１００％保存されている
。したがって、選択されたエピトープはマウスの「自己」タンパク質であると合理的にみ
なすことができ、マウスを、免疫寛容が免疫原性に課し得る制限を調査するための関連モ
デルとするべきである。
【0271】
ワクチン免疫原性の第１の手段として、フローサイトメトリーを、ワクチン注射部位を
排出させる頸部リンパ節におけるＴ濾胞性ヘルパー細胞（ＴｆＨ）の誘導を測定するため
に使用した（４匹のマウス／群）。ＴｆＨは、他の分子の中でとりわけＣＸＣＲ５、ＰＤ
－１、およびＩＣＯＳの発現によって特徴づけられる、特殊なＣＤ４＋Ｔ細胞集団である
。ＴｆＨは、ワクチンまたは他の免疫刺激に曝された後に拡大し、胚中心でのＢ細胞の親
和性成熟を支援する（Crotty, 2011, Annual Reviews of Immunology. Vol 29:p621-663
）。誘導されたＴｆＨの数は、ヒト（Bentebibel et al., 2013, Sci Transl Med., 5(17
6):176ra32、Spensieri et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A., 110(35):14330-5）
および小動物におけるワクチンの保護効率と正に相関する。図１３Ｂに示すように、両方
のワクチン、およびＫＬＨ＋アジュバントの対照免疫化が、ワクチン接種したマウスにお
いて測定可能なＴｆＨを誘導した。さらに、排出頸部リンパ節を最初の免疫化の７日後に
収集した場合に、活性ワクチン（コンジュゲートＢおよびコンジュゲートＣの群）または
活性プラセボ（ＫＬＨ）＋ミョウバンを受けているすべての動物が、不活性のプラセボ（
ＰＢＳ群）を与えた動物よりも有意に多いＴｆＨを有していた（ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－
ｐ７．１ではＰ＝０．００４４、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１ではＰ＝０．０４８
２、ＫＬＨではＰ＝０．００６３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較用にダネット
の調整）。
排出させる頸部リンパ節におけるＴ濾胞性ヘルパー細胞（ＴｆＨ）の誘導を測定するため
に使用した（４匹のマウス／群）。ＴｆＨは、他の分子の中でとりわけＣＸＣＲ５、ＰＤ
－１、およびＩＣＯＳの発現によって特徴づけられる、特殊なＣＤ４＋Ｔ細胞集団である
。ＴｆＨは、ワクチンまたは他の免疫刺激に曝された後に拡大し、胚中心でのＢ細胞の親
和性成熟を支援する（Crotty, 2011, Annual Reviews of Immunology. Vol 29:p621-663
）。誘導されたＴｆＨの数は、ヒト（Bentebibel et al., 2013, Sci Transl Med., 5(17
6):176ra32、Spensieri et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A., 110(35):14330-5）
および小動物におけるワクチンの保護効率と正に相関する。図１３Ｂに示すように、両方
のワクチン、およびＫＬＨ＋アジュバントの対照免疫化が、ワクチン接種したマウスにお
いて測定可能なＴｆＨを誘導した。さらに、排出頸部リンパ節を最初の免疫化の７日後に
収集した場合に、活性ワクチン（コンジュゲートＢおよびコンジュゲートＣの群）または
活性プラセボ（ＫＬＨ）＋ミョウバンを受けているすべての動物が、不活性のプラセボ（
ＰＢＳ群）を与えた動物よりも有意に多いＴｆＨを有していた（ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－
ｐ７．１ではＰ＝０．００４４、ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ２２．１ではＰ＝０．０４８
２、ＫＬＨではＰ＝０．００６３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較用にダネット
の調整）。
【0272】
０日目ならびに免疫化後の４つの追加の時点（１４、２８、５６、および８４日目、図
１３Ｃ、Ｄ、Ｇ、およびＨを参照）でのタウホスホペプチドおよびＫＬＨと結合する抗体
の血清力価を決定するために、ＥＬＩＳＡを実施した。図１３Ｃに示すように、コンジュ
ゲートＢを用いた免疫化により、対応するワクチンペプチドに対して反応性のある結合腔
外が誘導された。コンジュゲートＢおよびＲｉｂｉアジュバントを用いて免疫化した動物
では、測定したすべての時点において、ワクチンペプチドに対する結合力価は、活性プラ
セボによって誘導された結合力価よりも有意に高かった（コンジュゲートＢ＋Ｒｉｂｉと
ＫＬＨ＋Ｒｉｂｉとを比較）（Ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較
用にチューキーの調整）。ミョウバンアジュバント化群では、差異は５６および８４日目
でのみ有意であった（それぞれＰ＝０．００１および０．０１２）。
１３Ｃ、Ｄ、Ｇ、およびＨを参照）でのタウホスホペプチドおよびＫＬＨと結合する抗体
の血清力価を決定するために、ＥＬＩＳＡを実施した。図１３Ｃに示すように、コンジュ
ゲートＢを用いた免疫化により、対応するワクチンペプチドに対して反応性のある結合腔
外が誘導された。コンジュゲートＢおよびＲｉｂｉアジュバントを用いて免疫化した動物
では、測定したすべての時点において、ワクチンペプチドに対する結合力価は、活性プラ
セボによって誘導された結合力価よりも有意に高かった（コンジュゲートＢ＋Ｒｉｂｉと
ＫＬＨ＋Ｒｉｂｉとを比較）（Ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較
用にチューキーの調整）。ミョウバンアジュバント化群では、差異は５６および８４日目
でのみ有意であった（それぞれＰ＝０．００１および０．０１２）。
【0273】
コンジュゲートＣに対するタウ特異的抗体応答（図１３Ｄ）は、コンジュゲートＢに対
する応答よりも全体的に低い規模のものであったが、アッセイが違う（異なるコーティン
グペプチド）ことで、２つのワクチン間で直接の統計的比較を行うことは除外される。そ
れにもかかわらず、免疫化後の２８および８４日目（それぞれＰ＝０．００１および０．
００８）でのコンジュゲートＣに対する抗体価は、コンジュゲートＣ＋Ｒｉｂｉをワクチ
ン接種したマウスにおいて活性プラセボＫＬＨ Ｒｉｂｉを受けているマウスよりも有意
に高かった。ミョウバンアジュバント化群の力価は、活性プラセボのものと有意な差異は
なかった。
する応答よりも全体的に低い規模のものであったが、アッセイが違う（異なるコーティン
グペプチド）ことで、２つのワクチン間で直接の統計的比較を行うことは除外される。そ
れにもかかわらず、免疫化後の２８および８４日目（それぞれＰ＝０．００１および０．
００８）でのコンジュゲートＣに対する抗体価は、コンジュゲートＣ＋Ｒｉｂｉをワクチ
ン接種したマウスにおいて活性プラセボＫＬＨ Ｒｉｂｉを受けているマウスよりも有意
に高かった。ミョウバンアジュバント化群の力価は、活性プラセボのものと有意な差異は
なかった。
【0274】
担体タンパク質はホスホペプチドをｉｎ ｖｉｖｏでの分解からある程度は保護するが
、ｉｎ ｖｉｖｏでのペプチド抗原のホスファターゼ消化が一部の非リン酸化ペプチドを
免疫系に曝露させるであろう可能性が高かった。その曝露が、コンジュゲートＢおよびコ
ンジュゲートＣ中の非リン酸化ペプチドと結合することができる抗体の精製をもたらした
かどうかを決定するために、非リン酸化ペプチドをコーティング抗原として使用したＥＬ
ＩＳＡを行った。図１３Ｅ～Ｆに示すように、非リン酸化タウペプチドに対する応答は低
く、同じ非リン酸化ペプチドに対する活性プラセボの応答に匹敵していた。さらに、コン
ジュゲートＢおよびＲｉｂｉを用いて免疫化した動物では、測定したすべての時点におい
て、リン酸化ペプチドに対する結合力価は非リン酸化ペプチドに対する結合力価よりも有
意に高かった（１４日目ではＰ＝０．００９、２８、５６、および８４日目ではＰ＜０．
０００１、ＡＮＯＶＡ検定を使用）。ミョウバンアジュバント化群では、差異は５６およ
び８４日目でのみ有意であった（それぞれＰ＝０．０００２および０．００１）。コンジ
ュゲートＣを用いて免疫化した動物、リン酸化ペプチドに対する応答は、Ｒｉｂｉアジュ
バントを使用した場合のみより高かった（２８日目ではＰ＜０．０００１、５６および８
４日目ではＰ＝０．０００１）。
、ｉｎ ｖｉｖｏでのペプチド抗原のホスファターゼ消化が一部の非リン酸化ペプチドを
免疫系に曝露させるであろう可能性が高かった。その曝露が、コンジュゲートＢおよびコ
ンジュゲートＣ中の非リン酸化ペプチドと結合することができる抗体の精製をもたらした
かどうかを決定するために、非リン酸化ペプチドをコーティング抗原として使用したＥＬ
ＩＳＡを行った。図１３Ｅ～Ｆに示すように、非リン酸化タウペプチドに対する応答は低
く、同じ非リン酸化ペプチドに対する活性プラセボの応答に匹敵していた。さらに、コン
ジュゲートＢおよびＲｉｂｉを用いて免疫化した動物では、測定したすべての時点におい
て、リン酸化ペプチドに対する結合力価は非リン酸化ペプチドに対する結合力価よりも有
意に高かった（１４日目ではＰ＝０．００９、２８、５６、および８４日目ではＰ＜０．
０００１、ＡＮＯＶＡ検定を使用）。ミョウバンアジュバント化群では、差異は５６およ
び８４日目でのみ有意であった（それぞれＰ＝０．０００２および０．００１）。コンジ
ュゲートＣを用いて免疫化した動物、リン酸化ペプチドに対する応答は、Ｒｉｂｉアジュ
バントを使用した場合のみより高かった（２８日目ではＰ＜０．０００１、５６および８
４日目ではＰ＝０．０００１）。
【0275】
[実施例１２]
コンジュゲートワクチンによって誘導された抗体は、変更されたタウの生理的に関連する
形態と結合する
ワクチン誘導性の抗体が変更されたタウの生理的に関連する形態と結合できるかどうか
をさらに決定するために、本発明者らは、ワクチン接種したマウスからの免疫後血清を使
用して、アルツハイマー病患者（５件のＡＤ事例）、他のタウオパチーを患っている患者
（３件の事例のＰＡＲＴ、ＦＴＤ、ＰＩＣＫ、およびＰＳＰ）、または年齢が一致した健
康な対照（５件の対照事例、対照）のいずれかから採取した死後ヒト脳切片を染色した。
予想どおり、対照動物（ＰＢＳおよび活性プラセボ群）からの血清は脳切片と結合しなか
った一方で、ネズミクローンから得たｐＴａｕ［ｐＳｅｒ２０２、ｐＴｈｒ２０５］と結
合するモノクローナル抗体であるＡＴ８は、対応する領域の隣接組織切片においてタウ病
理の強力な免疫反応性を示した（図１４）。活性ワクチン、コンジュゲートＢおよびコン
ジュゲートＣを用いて免疫化した動物からの血清は、ＡＤ切片だけでなく（データ示さず
）、他のタウオパチーからのものにおける病理学的タウ構造とも結合した（図１４）。コ
ンジュゲートＢに誘導された抗体は、ＡＤ事例中の（プレ）もつれ、神経絨毛糸、および
神経突起老人斑と反応した。また、これらの免疫後血清は、ＰＡＲＴ脳組織中の神経原線
維のもつれおよび神経絨毛糸、ＦＴＤ－タウ（ＭＡＰＴ Ｐ３０１Ｓ）組織中の神経封入
体および神経絨毛糸、ピック病事例の一部中の封入体および星細胞、ならびにＰＳＰに典
型的な神経封入体、神経絨毛糸、および星細胞とも免疫反応することができた。また、コ
ンジュゲートＣに誘導されたポリクローナル血清は、それぞれのタウオパチーに特長的な
病理学的タウ構造とも反応した。ＡＤ事例では、染色は主に神経原線維のもつれに集中し
ており、より低い程度で神経突起老人斑および神経絨毛糸に集中していた。対応する領域
のより低い拡大率で同様の結果が示された（データ示さず）。
コンジュゲートワクチンによって誘導された抗体は、変更されたタウの生理的に関連する
形態と結合する
ワクチン誘導性の抗体が変更されたタウの生理的に関連する形態と結合できるかどうか
をさらに決定するために、本発明者らは、ワクチン接種したマウスからの免疫後血清を使
用して、アルツハイマー病患者（５件のＡＤ事例）、他のタウオパチーを患っている患者
（３件の事例のＰＡＲＴ、ＦＴＤ、ＰＩＣＫ、およびＰＳＰ）、または年齢が一致した健
康な対照（５件の対照事例、対照）のいずれかから採取した死後ヒト脳切片を染色した。
予想どおり、対照動物（ＰＢＳおよび活性プラセボ群）からの血清は脳切片と結合しなか
った一方で、ネズミクローンから得たｐＴａｕ［ｐＳｅｒ２０２、ｐＴｈｒ２０５］と結
合するモノクローナル抗体であるＡＴ８は、対応する領域の隣接組織切片においてタウ病
理の強力な免疫反応性を示した（図１４）。活性ワクチン、コンジュゲートＢおよびコン
ジュゲートＣを用いて免疫化した動物からの血清は、ＡＤ切片だけでなく（データ示さず
）、他のタウオパチーからのものにおける病理学的タウ構造とも結合した（図１４）。コ
ンジュゲートＢに誘導された抗体は、ＡＤ事例中の（プレ）もつれ、神経絨毛糸、および
神経突起老人斑と反応した。また、これらの免疫後血清は、ＰＡＲＴ脳組織中の神経原線
維のもつれおよび神経絨毛糸、ＦＴＤ－タウ（ＭＡＰＴ Ｐ３０１Ｓ）組織中の神経封入
体および神経絨毛糸、ピック病事例の一部中の封入体および星細胞、ならびにＰＳＰに典
型的な神経封入体、神経絨毛糸、および星細胞とも免疫反応することができた。また、コ
ンジュゲートＣに誘導されたポリクローナル血清は、それぞれのタウオパチーに特長的な
病理学的タウ構造とも反応した。ＡＤ事例では、染色は主に神経原線維のもつれに集中し
ており、より低い程度で神経突起老人斑および神経絨毛糸に集中していた。対応する領域
のより低い拡大率で同様の結果が示された（データ示さず）。
【0276】
[実施例１３]
ワクチン誘導性の抗体はマウスにおいて機能的である
コンジュゲートＢワクチンの保護効率をタウオパチーの注射モデルにて試験した（Peer
aer et al., 2015, Neurobiol Dis., 73:83-95）。このモデルでは、遺伝子突然変異（Ｐ
３０１Ｌ）によってタウオパチーに罹患しやすくしたマウスが、図１５Ａに示したタイム
ラインに従って、ヒトＡＤ脳から単離した濃縮ＰＨＦの脳内注射を受ける。導入遺伝子誘
導性のタウオパチーの発症の前に行うこの注射は、これらの動物においてタウオパチーの
発生を加速させる。逆に、ｅＰＨＦ「種」を、ＡＴ８などのタウ播種活性を抑制すること
ができる抗体と事前に混合した場合、タウオパチーの誘導は低下する（非公開データ、示
さず）。
ワクチン誘導性の抗体はマウスにおいて機能的である
コンジュゲートＢワクチンの保護効率をタウオパチーの注射モデルにて試験した（Peer
aer et al., 2015, Neurobiol Dis., 73:83-95）。このモデルでは、遺伝子突然変異（Ｐ
３０１Ｌ）によってタウオパチーに罹患しやすくしたマウスが、図１５Ａに示したタイム
ラインに従って、ヒトＡＤ脳から単離した濃縮ＰＨＦの脳内注射を受ける。導入遺伝子誘
導性のタウオパチーの発症の前に行うこの注射は、これらの動物においてタウオパチーの
発生を加速させる。逆に、ｅＰＨＦ「種」を、ＡＴ８などのタウ播種活性を抑制すること
ができる抗体と事前に混合した場合、タウオパチーの誘導は低下する（非公開データ、示
さず）。
【0277】
図１５Ａのスキームに従って、本発明者らは、コンジュゲートＢ、Ｒｉｂｉ、または活
性対照ＫＬＨ Ｒｉｂｉを用いて免疫化した動物の血清から精製したＩｇＧと事前に混合
した濃縮ヒトＰＨＦの定位注射後の、タウオパチーの発生を評価した。注射の２カ月後、
これらのマウスの脳を収集し、標準の生化学分析を使用して全画分およびサルコシル不溶
性画分中の凝集タウの量を決定した。得られたデータにより、マウスに、コンジュゲート
Ｂをワクチン接種したマウスからのＩｇＧと事前に混合したｅＰＨＦを注射した場合、全
画分（図１５Ｂ）およびサルコシル不溶性（図１５Ｃ）画分の両方において、対照注射を
受けている動物よりも凝集ホスホタウが有意に低かったことが示された（ｐ＜０．０００
１ ＫＬＨ Ｒｉｂｉ対ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１ Ｒｉｂｉ、ＡＮＯＶＡ検定を
使用、次いで多重比較用にホルム－ボンフェローニ調整）。サルコシル不溶性タウは良好
に受容されてタウオパチーの病理学的特長と相関しており、この結果は、ＫＬＨ－ＴＡＵ
ＶＡＣ－ｐ７．１を用いたワクチン接種によって誘導された抗体がｉｎ ｖｉｖｏで保護
的であることを実証している。
性対照ＫＬＨ Ｒｉｂｉを用いて免疫化した動物の血清から精製したＩｇＧと事前に混合
した濃縮ヒトＰＨＦの定位注射後の、タウオパチーの発生を評価した。注射の２カ月後、
これらのマウスの脳を収集し、標準の生化学分析を使用して全画分およびサルコシル不溶
性画分中の凝集タウの量を決定した。得られたデータにより、マウスに、コンジュゲート
Ｂをワクチン接種したマウスからのＩｇＧと事前に混合したｅＰＨＦを注射した場合、全
画分（図１５Ｂ）およびサルコシル不溶性（図１５Ｃ）画分の両方において、対照注射を
受けている動物よりも凝集ホスホタウが有意に低かったことが示された（ｐ＜０．０００
１ ＫＬＨ Ｒｉｂｉ対ＫＬＨ－ＴＡＵＶＡＣ－ｐ７．１ Ｒｉｂｉ、ＡＮＯＶＡ検定を
使用、次いで多重比較用にホルム－ボンフェローニ調整）。サルコシル不溶性タウは良好
に受容されてタウオパチーの病理学的特長と相関しており、この結果は、ＫＬＨ－ＴＡＵ
ＶＡＣ－ｐ７．１を用いたワクチン接種によって誘導された抗体がｉｎ ｖｉｖｏで保護
的であることを実証している。
【0278】
[実施例１４]
ワクチン誘導性の抗体は非ヒト霊長類において機能的である
アカゲザルマカクを、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドでアジュバント化し
たコンジュゲートＢ（ｎ＝６）またはＫＬＨ（ｎ＝２）を用いて、１、２９、８５、およ
び１６９日目に免疫化した。血液を１４日毎に採取し、コンジュゲートＢを用いて免疫化
した動物からの血清を、ＥＬＩＳＡを使用して免疫化ペプチドに対する反応性について（
図１６Ａ）、およびＭＳＤを使用してヒトｅＰＨＦについて（図１６Ｂ）試験した。コン
ジュゲートＢを用いた免疫化は、ワクチンホスホペプチドに対して持続的かつ一貫した抗
体応答をもたらした。さらに、すべての動物は、ヒトｅＰＨＦに対して測定可能な抗体レ
ベルを有しており、６匹の動物のうちの３匹がこの抗原に対して高い反応性を示していた
。一次免疫化の５０日後に動物から採取した血清を健康な個体またはＡＤ患者からのヒト
脳切片に適用した（図１６Ｃ）。コンジュゲートＢ群からの免疫後血清はＡＤ脳組織中の
病理学的タウ構造、すなわち、神経原線維のもつれ、神経絨毛糸、および神経突起老人斑
を染色した一方で、ＫＬＨで免疫化したマウスからの血清はいかなる反応性も示さなかっ
た。対照組織では染色は観察されなかった。タウ免疫枯渇アッセイにて試験した場合に、
コンジュゲートＢを受けている動物は、タウ種と結合して枯渇させることができる抗体を
有していた一方で（５０日目ではｐ＝０．０３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較
用にダネットの調整）、ＫＬＨを用いた免疫化はそのような抗体を始動させなかった（図
１６Ｄ）。また、免疫化前および後の血清を中和アッセイで連続希釈した個々の試料とし
ても試験した（図１６Ｅ）。ベースラインからの変化（ＣＦＢ）を、ワクチン接種前の－
１４日目（ベースライン）とワクチン接種後５０、１０６、および１９０日目のそれぞれ
との間の、読取り値のＦＲＥＴ計数の差異として計算した。その後、特定のワクチン接種
後の日での応答（日ｉ）を以下のように計算した：
ワクチン誘導性の抗体は非ヒト霊長類において機能的である
アカゲザルマカクを、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドでアジュバント化し
たコンジュゲートＢ（ｎ＝６）またはＫＬＨ（ｎ＝２）を用いて、１、２９、８５、およ
び１６９日目に免疫化した。血液を１４日毎に採取し、コンジュゲートＢを用いて免疫化
した動物からの血清を、ＥＬＩＳＡを使用して免疫化ペプチドに対する反応性について（
図１６Ａ）、およびＭＳＤを使用してヒトｅＰＨＦについて（図１６Ｂ）試験した。コン
ジュゲートＢを用いた免疫化は、ワクチンホスホペプチドに対して持続的かつ一貫した抗
体応答をもたらした。さらに、すべての動物は、ヒトｅＰＨＦに対して測定可能な抗体レ
ベルを有しており、６匹の動物のうちの３匹がこの抗原に対して高い反応性を示していた
。一次免疫化の５０日後に動物から採取した血清を健康な個体またはＡＤ患者からのヒト
脳切片に適用した（図１６Ｃ）。コンジュゲートＢ群からの免疫後血清はＡＤ脳組織中の
病理学的タウ構造、すなわち、神経原線維のもつれ、神経絨毛糸、および神経突起老人斑
を染色した一方で、ＫＬＨで免疫化したマウスからの血清はいかなる反応性も示さなかっ
た。対照組織では染色は観察されなかった。タウ免疫枯渇アッセイにて試験した場合に、
コンジュゲートＢを受けている動物は、タウ種と結合して枯渇させることができる抗体を
有していた一方で（５０日目ではｐ＝０．０３、ＡＮＯＶＡ検定を使用、次いで多重比較
用にダネットの調整）、ＫＬＨを用いた免疫化はそのような抗体を始動させなかった（図
１６Ｄ）。また、免疫化前および後の血清を中和アッセイで連続希釈した個々の試料とし
ても試験した（図１６Ｅ）。ベースラインからの変化（ＣＦＢ）を、ワクチン接種前の－
１４日目（ベースライン）とワクチン接種後５０、１０６、および１９０日目のそれぞれ
との間の、読取り値のＦＲＥＴ計数の差異として計算した。その後、特定のワクチン接種
後の日での応答（日ｉ）を以下のように計算した：
【0279】
【数1】
【0280】
動物を変量効果として用いた、前述の応答に対する一般的な線形混合モデルを、カテゴ
リー変数として扱ったワクチン群、日、および血清レベルの変数ならびにすべてのその相
互作用を用いて適用した。本研究の探索的性質を考慮すると、複数の試験調整は検討しな
かった。仮説の試験を５％の有意性レベルで行った。
リー変数として扱ったワクチン群、日、および血清レベルの変数ならびにすべてのその相
互作用を用いて適用した。本研究の探索的性質を考慮すると、複数の試験調整は検討しな
かった。仮説の試験を５％の有意性レベルで行った。
【0281】
[実施例１５]
ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントと組み合わせたコンジュゲート
ワクチンを用いて免疫化したマウスは、ワクチンペプチドに対してより高い力価抗体応答
をもたらした
成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５～６匹／群）を、２ｕｇ（図１７Ａ）または０．
２ｕｇ（図１７Ｂ）のどちらかのコンジュゲートＡワクチンを用いて、筋肉内で免疫化し
た。コンジュゲートワクチンを、単独で（アジュバントなし）、ミョウバン水酸化物と共
に、ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、またはミョウバンとＣｐＧオリゴヌクレオチドの
組合せと共にのいずれかで投与した。すべてのマウスに、研究の０日目に一次免疫化を与
え、次いで２８日目に単一のブースター免疫化を与えた。ミョウバンアジュバントの用量
は５００ｕｇ／マウス／注射であり、ＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントの用量は２
０ｕｇ／マウス／注射であった。図１７のグラフは、免疫化前（０日目）ならびにワクチ
ンペプチドＴ３．５をコーティング抗原として用いた免疫化の２つの時点（２８および４
２日目）にマウスから採取した血清を使用した、結合ＥＬＩＳＡの結果を示す。１群あた
りのＴ３．５特異的平均エンドポイント力価をプロットし、エラーバーは標準誤差を表す
。表は、ノンパラメトリックなクラスカル－ワリス検定を使用して抗体価を比較し、クラ
スカルワリス検定の事後としてウィルコクソン符号順位検定を使用して対での群の比較を
評価した結果の統計分析を示す。
ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントと組み合わせたコンジュゲート
ワクチンを用いて免疫化したマウスは、ワクチンペプチドに対してより高い力価抗体応答
をもたらした
成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５～６匹／群）を、２ｕｇ（図１７Ａ）または０．
２ｕｇ（図１７Ｂ）のどちらかのコンジュゲートＡワクチンを用いて、筋肉内で免疫化し
た。コンジュゲートワクチンを、単独で（アジュバントなし）、ミョウバン水酸化物と共
に、ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、またはミョウバンとＣｐＧオリゴヌクレオチドの
組合せと共にのいずれかで投与した。すべてのマウスに、研究の０日目に一次免疫化を与
え、次いで２８日目に単一のブースター免疫化を与えた。ミョウバンアジュバントの用量
は５００ｕｇ／マウス／注射であり、ＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントの用量は２
０ｕｇ／マウス／注射であった。図１７のグラフは、免疫化前（０日目）ならびにワクチ
ンペプチドＴ３．５をコーティング抗原として用いた免疫化の２つの時点（２８および４
２日目）にマウスから採取した血清を使用した、結合ＥＬＩＳＡの結果を示す。１群あた
りのＴ３．５特異的平均エンドポイント力価をプロットし、エラーバーは標準誤差を表す
。表は、ノンパラメトリックなクラスカル－ワリス検定を使用して抗体価を比較し、クラ
スカルワリス検定の事後としてウィルコクソン符号順位検定を使用して対での群の比較を
評価した結果の統計分析を示す。
【0282】
図１７に示す結果は、どちらの用量でも、非アジュバント化ワクチンは強力な免疫応答
を誘導できなかったことを例示している。ミョウバンもしくはＣｐＧオリゴヌクレオチド
または両方の組合せの使用は抗体応答の規模を改善した（ｐ≦０．０１５２）。さらに、
２ｕｇのワクチンを用いて免疫化した動物では、アジュバントの組合せは、２８日目に単
一アジュバントよりも有意に高い抗体価を与えた（ｐ＝０．００２８）。また、４２日目
に０．２ｕｇのワクチンを用いて免疫化した動物では、ミョウバン－ＣｐＧオリゴヌクレ
オチドの組合せは、ＣｐＧオリゴヌクレオチド単独よりも良好な性能であった（ｐ＝０．
０４９７）。これらのデータはミョウバンとＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントとの
組合せの使用を支持している。
を誘導できなかったことを例示している。ミョウバンもしくはＣｐＧオリゴヌクレオチド
または両方の組合せの使用は抗体応答の規模を改善した（ｐ≦０．０１５２）。さらに、
２ｕｇのワクチンを用いて免疫化した動物では、アジュバントの組合せは、２８日目に単
一アジュバントよりも有意に高い抗体価を与えた（ｐ＝０．００２８）。また、４２日目
に０．２ｕｇのワクチンを用いて免疫化した動物では、ミョウバン－ＣｐＧオリゴヌクレ
オチドの組合せは、ＣｐＧオリゴヌクレオチド単独よりも良好な性能であった（ｐ＝０．
０４９７）。これらのデータはミョウバンとＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントとの
組合せの使用を支持している。
【0283】
[実施例１６]
様々なタウペプチド：Ｔ細胞エピトープの比を有するリポソームワクチンは、高いかつ持
続的なレベルのタウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体価を誘導する
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝６匹／群）を、１、２９、８５、および１６９日目に、
３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレ
オチドアジュバントをどちらも含有し、ｉ）４００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン酸化タ
ウペプチドおよび１００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ）、ｉｉ）１２００ｕｇ／ｍ
Ｌの配列番号２のリン酸化タウペプチドおよび１２００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソーム
Ｚ＋）、ｉｉｉ）４００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン酸化タウペプチドおよび４００ｕ
ｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ＋＋）、ｉｖ）１２００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン
酸化タウペプチドおよび３００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ＋＋＋）を有する、カ
プセル封入されたＴ５０ Ｔ細胞エピトープを有する改善リポソームワクチン中に１８０
０μｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量を用いて、
皮下で免疫化した。出血を、免疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２
、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、および１９０日目に行い、抗体を
単離した。血清中の特異的ＩｇＧ抗体価を、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーテ
ィング抗原として、および抗サルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定し
た。生じる抗体レベルを、それぞれの個々のサルの経時的なエンドポイント力価（肯定応
答を誘導する最後の血清希釈率）として計算した。１群あたりのエンドポイント力価の幾
何平均±９５％の信頼区間を図１８に提示し、これは、試験した４つすべてのリポソーム
ワクチンが、タウホスホペプチドに対して高いかつ持続的な力価を誘導したことを示して
いる。
様々なタウペプチド：Ｔ細胞エピトープの比を有するリポソームワクチンは、高いかつ持
続的なレベルのタウホスホペプチド特異的ＩｇＧ抗体価を誘導する
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝６匹／群）を、１、２９、８５、および１６９日目に、
３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）および脂質付加ＣｐＧ２００６オリゴヌクレ
オチドアジュバントをどちらも含有し、ｉ）４００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン酸化タ
ウペプチドおよび１００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ）、ｉｉ）１２００ｕｇ／ｍ
Ｌの配列番号２のリン酸化タウペプチドおよび１２００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソーム
Ｚ＋）、ｉｉｉ）４００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン酸化タウペプチドおよび４００ｕ
ｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ＋＋）、ｉｖ）１２００ｕｇ／ｍＬの配列番号２のリン
酸化タウペプチドおよび３００ｕｇ／ｍＬのＴ５０（リポソームＺ＋＋＋）を有する、カ
プセル封入されたＴ５０ Ｔ細胞エピトープを有する改善リポソームワクチン中に１８０
０μｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量を用いて、
皮下で免疫化した。出血を、免疫化前ならびに８、２２、３６、５０、６４、７８、９２
、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、および１９０日目に行い、抗体を
単離した。血清中の特異的ＩｇＧ抗体価を、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーテ
ィング抗原として、および抗サルＩｇＧ二次抗体を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定し
た。生じる抗体レベルを、それぞれの個々のサルの経時的なエンドポイント力価（肯定応
答を誘導する最後の血清希釈率）として計算した。１群あたりのエンドポイント力価の幾
何平均±９５％の信頼区間を図１８に提示し、これは、試験した４つすべてのリポソーム
ワクチンが、タウホスホペプチドに対して高いかつ持続的な力価を誘導したことを示して
いる。
【0284】
配列番号１－ホスホタウペプチド（７．１）
ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＴ
配列番号２－ホスホタウペプチド（Ｔ３．５）
ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号３－ホスホタウペプチド（２２．１）
ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡ
配列番号４－タウペプチド
ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ
配列番号５－ホスホタウペプチド
ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号６－ホスホタウペプチド
ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬ
配列番号７－ホスホタウペプチド
ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲ
配列番号８－ホスホタウペプチド
ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ
配列番号９－ホスホタウペプチド
ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１０－ホスホタウペプチド
ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰ
配列番号１１－ホスホタウペプチド
ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１２－ホスホタウペプチド
ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号１３－Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１４－Ｔ４６ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＫ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
配列番号１５－Ｔ４８ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ－ＮＨ２
配列番号１６－Ｔ５１ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１７－Ｔ５２ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１８－ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を意味する
配列番号１９－ＣｐＧ１０１８
５’－ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔｃｇａｇａｔｇａ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２０－ＣｐＧ２３９５
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２１－ＣｐＧ２２１６
５’－ｇｇＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエ
ステル（ｐｏ）結合を意味する
配列番号２２－ＣｐＧ２３３６
５’－ｇｇｇＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧｇｇｇｇｇｇ －３’、
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエ
ステル結合を意味する
配列番号２３－Ｐａｎ ＤＲエピトープ（ＰＡＤＲＥ）ペプチド
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ
配列番号２４－Ｐ２
ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ
配列番号２５－Ｐ３０
ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号２６－ＴＴ５８６～６０５
ＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号２７－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化７．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳ
ＲＴＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２８－パルミトイル化ホスホタウペプチド（Ｔ３、パルミトイル化Ｔ３．５）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２９－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化２２．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡＫ（ｐａ
ｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３０－パルミトイル化タウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３１－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ
［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３２－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐ
ａｌ）
配列番号３３－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３４－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３５－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａ
ｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３６－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］Ｌ
ＰＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３７－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３８－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３９－Ｃ末端アミドなしのＴ５０
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４０－Ｃ末端の－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－ＮＨ２なしのＴ４６
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４１－Ｃ末端アミドなしのＴ４８
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号４２－Ｃ末端アミドなしのＴ５１
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４３－Ｃ末端アミドなしのＴ５２
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４４－Ｔ５７
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－Ｋ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＴ
配列番号２－ホスホタウペプチド（Ｔ３．５）
ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号３－ホスホタウペプチド（２２．１）
ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡ
配列番号４－タウペプチド
ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ
配列番号５－ホスホタウペプチド
ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号６－ホスホタウペプチド
ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬ
配列番号７－ホスホタウペプチド
ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲ
配列番号８－ホスホタウペプチド
ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ
配列番号９－ホスホタウペプチド
ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１０－ホスホタウペプチド
ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰ
配列番号１１－ホスホタウペプチド
ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１２－ホスホタウペプチド
ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号１３－Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１４－Ｔ４６ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＫ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
配列番号１５－Ｔ４８ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ－ＮＨ２
配列番号１６－Ｔ５１ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１７－Ｔ５２ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１８－ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を意味する
配列番号１９－ＣｐＧ１０１８
５’－ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔｃｇａｇａｔｇａ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２０－ＣｐＧ２３９５
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２１－ＣｐＧ２２１６
５’－ｇｇＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエ
ステル（ｐｏ）結合を意味する
配列番号２２－ＣｐＧ２３３６
５’－ｇｇｇＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧｇｇｇｇｇｇ －３’、
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエ
ステル結合を意味する
配列番号２３－Ｐａｎ ＤＲエピトープ（ＰＡＤＲＥ）ペプチド
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ
配列番号２４－Ｐ２
ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ
配列番号２５－Ｐ３０
ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号２６－ＴＴ５８６～６０５
ＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号２７－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化７．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳ
ＲＴＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２８－パルミトイル化ホスホタウペプチド（Ｔ３、パルミトイル化Ｔ３．５）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２９－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化２２．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡＫ（ｐａ
ｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３０－パルミトイル化タウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３１－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ
［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３２－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐ
ａｌ）
配列番号３３－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３４－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＫ（ｐａｌ）
Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３５－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａ
ｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３６－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］Ｌ
ＰＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３７－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３８－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３９－Ｃ末端アミドなしのＴ５０
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４０－Ｃ末端の－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－ＮＨ２なしのＴ４６
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４１－Ｃ末端アミドなしのＴ４８
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号４２－Ｃ末端アミドなしのＴ５１
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４３－Ｃ末端アミドなしのＴ５２
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦ
ＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４４－Ｔ５７
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶ
ＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－Ｋ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
【0285】
参考文献
【表1】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-03-09
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載の発明。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0285】
参考文献
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を記載する。
［発明１］
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、
前記タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
［発明２］
トール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つをさらに含む、発明１に記載のリポソーム。
［発明３］
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
［発明４］
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む、発明１から３のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明５］
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、
前記アミノ酸配列が、前記タウホスホペプチドが前記リポソームの表面上に提示されることを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、発明１から４のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明６］
前記ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、発明１から５のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明７］
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する前記脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは少なくとも１つの親油性基と共有結合している、発明１から６のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明８］
前記トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）である、発明１から７のいずれかに記載のリポソーム。
［発明９］
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソーム。
［発明１０］
発明１から９のいずれか一つに記載のリポソームと薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［発明１１］
タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含むコンジュゲートであって、以下の構造：
（ｉ）式（Ｉ）：
または
（ｉｉ）式（ＩＩ）：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数である］、
を有する、コンジュゲート。
［発明１２］
前記免疫原性担体が、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される、発明１１に記載のコンジュゲート。
［発明１３］
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、発明１１または１２に記載のコンジュゲート。
［発明１４］
式（Ｉ）の構造を有し、前記免疫原性担体がＣＲＭ１９７である、発明１３に記載のコンジュゲート。
［発明１５］
以下の構造：
［式中、
ｎは、３～７の整数である］、
を有する、発明１４に記載のコンジュゲート。
［発明１６］
発明１１から１５のいずれか一つに記載のコンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［発明１７］
神経変性障害を患っている対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に、発明１０に記載の医薬組成物または発明１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［発明１８］
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法であって、前記対象に、発明１０に記載の医薬組成物または発明１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［発明１９］
前記神経変性疾患または障害が、神経原線維病変の形成によって引き起こされる、またはそれに関連している、発明１７および１８のいずれか一つに記載の方法。
［発明２０］
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、発明１９に記載の方法。
［発明２１］
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、発明１７から２０のいずれか一つに記載の方法。
［発明２２］
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害の処置または防止において使用するための、発明１０に記載の医薬組成物および発明１６に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む、キット。
【表1】
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を記載する。
［発明１］
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、
前記タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
［発明２］
トール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つをさらに含む、発明１に記載のリポソーム。
［発明３］
ａ．タウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、リポソーム。
［発明４］
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む、発明１から３のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明５］
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、
前記アミノ酸配列が、前記タウホスホペプチドが前記リポソームの表面上に提示されることを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、発明１から４のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明６］
前記ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、発明１から５のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明７］
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する前記脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは少なくとも１つの親油性基と共有結合している、発明１から６のいずれか一つに記載のリポソーム。
［発明８］
前記トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）である、発明１から７のいずれかに記載のリポソーム。
［発明９］
ａ．配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、リポソーム。
［発明１０］
発明１から９のいずれか一つに記載のリポソームと薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［発明１１］
タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含むコンジュゲートであって、以下の構造：
（ｉ）式（Ｉ）：
【化1-1】
（ｉｉ）式（ＩＩ）：
【化2-1】
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数である］、
を有する、コンジュゲート。
［発明１２］
前記免疫原性担体が、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される、発明１１に記載のコンジュゲート。
［発明１３］
前記タウペプチドが配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、発明１１または１２に記載のコンジュゲート。
［発明１４］
式（Ｉ）の構造を有し、前記免疫原性担体がＣＲＭ１９７である、発明１３に記載のコンジュゲート。
［発明１５］
以下の構造：
【化3-1】
ｎは、３～７の整数である］、
を有する、発明１４に記載のコンジュゲート。
［発明１６］
発明１１から１５のいずれか一つに記載のコンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［発明１７］
神経変性障害を患っている対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に、発明１０に記載の医薬組成物または発明１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［発明１８］
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法であって、前記対象に、発明１０に記載の医薬組成物または発明１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［発明１９］
前記神経変性疾患または障害が、神経原線維病変の形成によって引き起こされる、またはそれに関連している、発明１７および１８のいずれか一つに記載の方法。
［発明２０］
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、発明１９に記載の方法。
［発明２１］
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、原発性加齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、発明１７から２０のいずれか一つに記載の方法。
［発明２２］
それを必要としている対象において神経変性疾患または障害の処置または防止において使用するための、発明１０に記載の医薬組成物および発明１６に記載の医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む、キット。
【外国語明細書】