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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023072147
(43)【公開日】2023-05-24
(54)【発明の名称】毛穴開大抑制剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/9789 20170101AFI20230517BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20230517BHJP
【ＦＩ】
A61K8/9789
A61Q19/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】4
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021184503
(22)【出願日】2021-11-12
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 発行年月日 令和 ３年１０月１８日 刊行物名 第８５回日本皮膚科学会東京支部学術大会抄録集，第１７５頁 発行者 公益社団法人日本皮膚科学会
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】593106918
【氏名又は名称】株式会社ファンケル
(71)【出願人】
【識別番号】000253503
【氏名又は名称】キリンホールディングス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100162396
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 泰之
(74)【代理人】
【識別番号】100194803
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 理弘
(72)【発明者】
【氏名】山川 亜利沙
(72)【発明者】
【氏名】森 優子
(72)【発明者】
【氏名】佐藤 暢彦
(72)【発明者】
【氏名】愛原 咲季
(72)【発明者】
【氏名】山城 晶
【テーマコード（参考）】
4C083
【Ｆターム（参考）】
4C083AA082
4C083AA111
4C083AA112
4C083AA122
4C083AB032
4C083AC022
4C083AC072
4C083AC102
4C083AC111
4C083AC112
4C083AC121
4C083AC122
4C083AC171
4C083AC172
4C083AC392
4C083AC421
4C083AC422
4C083AC442
4C083AC712
4C083AD041
4C083AD042
4C083AD092
4C083AD112
4C083AD152
4C083AD201
4C083AD202
4C083AD212
4C083AD332
4C083AD352
4C083AD492
4C083AD572
4C083CC04
4C083CC05
4C083DD12
4C083DD23
4C083DD27
4C083DD31
4C083DD41
4C083EE01
4C083EE12
4C083FF01
(57)【要約】
【課題】ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤を提供すること。
【解決手段】ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤。
【選択図】図１
【解決手段】ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
【請求項2】
ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤。
【請求項3】
ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とするＮＧＡＬ産生抑制剤。
【請求項4】
ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤並びにＮＧＡＬ産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【0002】
ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ、セイヨウカラハナソウ）は、ビールの主原料の一つであり、ビールの苦味、香り、保存性等に関わっている。また、ホップは、古くから民間薬として用いられており、鎮静作用、利尿作用、脱毛予防作用、抗アレルギー作用などの効果を有することが知られている。
ホップは、上記した作用に関わる多様な成分を含有しており、ホップ含有成分に由来する機能性効果の医薬分野、食品分野、化粧品分野等における研究、利用も行われている。例えば、特許文献１（特開２００３－１８３１７４号公報）にはホップを配合した睡眠障害用組成物、特許文献２（特開２００３－２３８３８３号公報）にはホップを配合した細細胞増殖促進剤、特許文献３（特開２０１６－１４７９１７号公報）には、ホップを配合した自律神経調節剤が提案されている。
ホップは、上記した作用に関わる多様な成分を含有しており、ホップ含有成分に由来する機能性効果の医薬分野、食品分野、化粧品分野等における研究、利用も行われている。例えば、特許文献１（特開２００３－１８３１７４号公報）にはホップを配合した睡眠障害用組成物、特許文献２（特開２００３－２３８３８３号公報）にはホップを配合した細細胞増殖促進剤、特許文献３（特開２０１６－１４７９１７号公報）には、ホップを配合した自律神経調節剤が提案されている。
【0003】
ここで、ホップは苦味が非常に強く、そのままで経口医薬品や食品に利用するのは難しい。この苦味を軽減したものとして、特許文献４（特許第５９８０６８７号公報）、非特許文献１には、ホップを酸化（熟成）させることにより、ホップの苦味成分であるイソα酸、α酸、β酸等の苦味酸が酸化物である熟成ホップ由来苦味酸（ｍａｔｕｒｅｄ ｈｏｐ ｂｉｔｔｅｒ ａｃｉｄｓ；ＭＨＢＡ）となること、この熟成ホップ由来苦味酸を含むホップ酸化反応産物が、苦味が低減され、かつ脂質代謝機能改善作用等の健康機能性効果を有していることが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】特開２００３－１８３１７４号公報
【特許文献2】特開２００３－２３８３８３号公報
【特許文献3】特開２０１６－１４７９１７号公報
【特許文献4】特許第５９８０６８７号公報
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Morimoto-Kobayashi, Y., Ohara, K., Ashigai, H. et al. Matured hop extract reduces body fat in healthy overweight humans: a randomized, double-blind, placebo-controlled parallel group study. Nutr J 15, 25 (2015).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明の課題を解決するための主な手段は、次のとおりである。
１．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
２．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤。
３．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とするＮＧＡＬ産生抑制剤。
４．ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
１．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
２．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤。
３．ホップ酸化反応産物の抽出物を含むことを特徴とするＮＧＡＬ産生抑制剤。
４．ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする毛穴開大抑制剤。
【0008】
５．ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤。
６．ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とするＮＧＡＬ産生抑制剤。
以下、毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤をまとめて、本発明の剤ともいう。
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤。
６．ホップ酸化反応産物の抽出物及び、
ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上のポリオールを、水に溶解させたポリオール水溶液を含むことを特徴とするＮＧＡＬ産生抑制剤。
以下、毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤をまとめて、本発明の剤ともいう。
【発明の効果】
【0009】
本発明の毛穴開大抑制剤は、毛穴の体積を小さくすることができ、毛穴を目立たなくすることができる。
本発明の角層タンパク質のカルボニル化抑制剤は、角層タンパク質のカルボニル化を抑制することができる。角層タンパク質のカルボニル化を抑制することで、皮膚のバリア機能の低下や乾燥などを防ぐ効果が期待できる。
本発明のＮＧＡＬ産生抑制剤は、炎症性疾患等の際に上昇することが知られているＮＧＡＬ（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｉｐｏｃａｌｉｎ）の産生を抑制することができる。ＮＧＡＬの産生を抑制することで、皮膚の炎症を抑制することが期待できる。
ホップ酸化反応産物のポリオール水溶液は、安定性に優れ、析出物が生じにくいため、このポリオール水溶液を含む本発明の剤は、長期間に亘って安定して保存することができる。
本発明の角層タンパク質のカルボニル化抑制剤は、角層タンパク質のカルボニル化を抑制することができる。角層タンパク質のカルボニル化を抑制することで、皮膚のバリア機能の低下や乾燥などを防ぐ効果が期待できる。
本発明のＮＧＡＬ産生抑制剤は、炎症性疾患等の際に上昇することが知られているＮＧＡＬ（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｉｐｏｃａｌｉｎ）の産生を抑制することができる。ＮＧＡＬの産生を抑制することで、皮膚の炎症を抑制することが期待できる。
ホップ酸化反応産物のポリオール水溶液は、安定性に優れ、析出物が生じにくいため、このポリオール水溶液を含む本発明の剤は、長期間に亘って安定して保存することができる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【発明を実施するための形態】
【0011】
本発明は、ホップ酸化反応産物の抽出物が、毛穴開大抑制効果、角層タンパク質のカルボニル化抑制効果、ＮＧＡＬ産生抑制効果を有することを見出してなされたものである。
本発明は、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤に関する。
本発明は、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤に関する。
【0012】
・ホップ酸化反応産物
ホップ酸化反応産物とは、ホップまたはその加工物（ホップペレット等）を酸化処理して得られるものをいう。本発明のホップ酸化反応産物は、ホップを空気中の酸素に接触させて酸化することにより得ることができる。本発明における酸化処理方法は、特に限定されるものではないが、ホップを空気中で加熱することが好ましい。
ホップ酸化反応産物とは、ホップまたはその加工物（ホップペレット等）を酸化処理して得られるものをいう。本発明のホップ酸化反応産物は、ホップを空気中の酸素に接触させて酸化することにより得ることができる。本発明における酸化処理方法は、特に限定されるものではないが、ホップを空気中で加熱することが好ましい。
【0013】
本発明の酸化処理方法における加熱温度は、特に限定されないが、好ましい上限は１００℃であり、より好ましい上限は８０℃である。加熱温度を１００℃以下とする場合には異性化よりも酸化を優先的に進行させる上で有利である。また、好ましい加熱温度の下限は４０℃であるが、室温および低温で酸化させてもよい。より好ましい加熱温度の下限は６０℃であり、特に好ましい加熱温度の下限は６５℃である。加熱温度を６０℃以上とする場合には酸化反応を効率的に進行させる上で有利である。また、反応時間も特に限定されるものではなく、ホップの品種や反応温度により適宜決定することができる。酸化処理は、例えば、６０～８０℃、８～１２０時間の条件下で行うことができ、６０℃であれば４８～１２０時間、８０℃であれば８～２４時間が好ましい。さらにホップの形態は空気中の酸素と接触できれば特に限定されるものではないが、好ましくは粉末状にすることにより、反応時間を短縮できる。また、高湿の環境下で保管してもよい。
【0014】
また、本発明においてホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ Ｌ．）は、ルプリン部を含有するものであれば任意の形態のものでよく、収穫して乾燥させる前のもの、収穫して乾燥したもの、圧縮したもの、粉砕したもの、またはペレット状に加工したもの等を用いてもよいが、好ましくはホップペレットの形態である。ホップペレットは、市販品を使用してもよく、例えば、ホップ毬花を圧縮しペレット状にしたもの（Ｔｙｐｅ９０ペレット）、ルプリン部分が選択的に濃縮されたペレット（Ｔｙｐｅ４５ペレット）、または異性化処理したホップペレット（例えば、Ｉｓｏｍｅｒｉｚｅｄ Ｐｅｌｌｅｔｓ （ｈｏｐｓｔｅｉｎｅｒ社））等が挙げられる。
【0015】
ホップの品種は、特に限定されるものではないが、例えば、ギャラクシー（Ｇａｌａｘｙ）、ザーツ（Ｓａａｚ）、カスケード（Ｃａｓｃａｄｅ）、ハラタウトラディッション（Ｈａｌｌｅｒｔａｕ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎ）、ブリオン（Ｂｕｌｌｉｏｎ）、ブリューワーズゴールド（Ｂｒｅｗｅｒｓ Ｇｏｌｄ）、チヌーク（Ｃｈｉｎｏｏｋ）、クラスター（Ｃｌｕｓｔｅｒ）、イーストケントゴールディング（Ｅａｓｔ Ｋｅｎｔ Ｇｏｌｄｉｎｇ）、ファグルス（Ｆｕｇｇｌｅｓ）、ハラタウ（Ｈａｌｌｅｒｔａｕ）、マウントフッド（Ｍｏｕｎｔ Ｈｏｏｄ）、ノーザンブリューワー（Ｎｏｒｔｈａｎ Ｂｒｅｗｅｒ）、ペルレ（Ｐｅｒｌｅ）、スティリアン（Ｓｔｙｒｉａｎ）、ターゲット（Ｔａｒｇｅｔ）、テットナンガー（Ｔｅｔｔｎａｎｇｅｒ）、ウィラメット（Ｗｉｌｌａｍｅｔｔｅ）、ヘルスブルッカー（Ｈｅｒｓｂｒｕｃｋｅｒ）、ブラボー（Ｂｒａｖｏ）、コロンブス（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ）、ヘラクレス（Ｈｅｒｋｕｌｅｓ）、マグナム（Ｍａｇｎｕｍ）、ミレニアム（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ナゲット（Ｎｕｇｇｅｔ）、サミット（Ｓｕｍｍｉｔ）、トマホーク（Ｔｏｍａｈａｗｋ）、ウォリアー（Ｗａｒｒｉｏｒ）、ゼウス（Ｚｅｕｓ）、ハラタウペルレ（Ｈａｌｌｅｒｔａｕ Ｐｅｒｌｅ）等が挙げられ、原料の安定供給の観点からは、比較的安価なビター品種であることが好ましく、具体的な例としては、ブラボー（Ｂｒａｖｏ）、コロンブス（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ）、ヘラクレス（Ｈｅｒｋｕｌｅｓ）、マグナム（Ｍａｇｎｕｍ）、ミレニアム（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ナゲット（Ｎｕｇｇｅｔ）、サミット（Ｓｕｍｍｉｔ）、トマホーク（Ｔｏｍａｈａｗｋ）、ウォリアー（Ｗａｒｒｉｏｒ）、ゼウス（Ｚｅｕｓ）等が挙げられる。
【0016】
ホップには、α酸（フムロン類）、β酸（ルプロン類）、イソα酸（イソフムロン類）等の樹脂由来の苦味成分が含まれている。本発明において「α酸（フムロン類）」は、フムロン、アドフムロン、コフムロン、ポストフムロン、およびプレフムロンを含む意味で用いられる。また、本発明において「β酸（ルプロン類）」はルプロン、アドルプロン、コルプロン、ポストルプロン及びプレルプロンを含む意味で用いられる。さらに、本発明において「イソα酸（イソフムロン類）」は、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、イソポストフムロン、イソプレフムロン、Ｒｈｏ－イソフムロン、Ｒｈｏ－イソアドフムロン、Ｒｈｏ－イソコフムロン、Ｒｈｏ－イソポストフムロン、Ｒｈｏ－イソプレフムロン、テトラハイドロイソフムロン、テトラハイドロイソアドフムロン、テトラハイドロイソコフムロン、テトラハイドロイソプレフムロン、テトラハイドロイソポストフムロン、ヘキサハイドロイソフムロン、ヘキサハイドロイソアドフムロン、ヘキサハイドロイソコフムロン、ヘキサハイドロイソポストフムロン、ヘキサハイドロイソプレフムロンを含む意味で用いられる。なお、イソα酸にはシスおよびトランス立体異性体が存在するが、特に断りがない限りその両者を含む意味で用いられる。
【0017】
ホップまたはその加工物（ホップペレット等）を酸化処理に付すことにより、α酸、β酸、イソα酸の含有量が低減し、これら以外の成分の含有量が増加した「ホップ酸化反応産物」が得られる。
本発明のホップ酸化反応産物は、α酸、β酸、イソα酸等の苦味成分の酸化物である熟成ホップ由来苦味酸（ｍａｔｕｒｅｄ ｈｏｐ ｂｉｔｔｅｒ ａｃｉｄｓ；ＭＨＢＡ）を高レベルで含有することが好ましい。ＭＨＢＡはα酸、β酸、イソα酸等に比較し、非常に苦味が低くかつ健康機能性効果を有しており（特許文献４、Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２０１５；７９：１６８４－１６９４．）、ホップ酸化反応産物に健康機能を付与する上で有利である。かかるＭＨＢＡを構成する成分の好適な例としては、以下の式（１ａ－ｃ）～（８ａ－ｃ）に記載の化合物を挙げることができる。したがって、本発明のホップ酸化反応産物は、以下の式（１ａ－ｃ）～（８ａ－ｃ）から選択される少なくとも一つ以上の化合物を含み、二つ以上または全部の化合物を含むことが好ましい。ＭＨＢＡの定量は、特開２０１８－１９９６３９号公報の試験例１に記載の方法に従い実施することができる。
本発明のホップ酸化反応産物は、α酸、β酸、イソα酸等の苦味成分の酸化物である熟成ホップ由来苦味酸（ｍａｔｕｒｅｄ ｈｏｐ ｂｉｔｔｅｒ ａｃｉｄｓ；ＭＨＢＡ）を高レベルで含有することが好ましい。ＭＨＢＡはα酸、β酸、イソα酸等に比較し、非常に苦味が低くかつ健康機能性効果を有しており（特許文献４、Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２０１５；７９：１６８４－１６９４．）、ホップ酸化反応産物に健康機能を付与する上で有利である。かかるＭＨＢＡを構成する成分の好適な例としては、以下の式（１ａ－ｃ）～（８ａ－ｃ）に記載の化合物を挙げることができる。したがって、本発明のホップ酸化反応産物は、以下の式（１ａ－ｃ）～（８ａ－ｃ）から選択される少なくとも一つ以上の化合物を含み、二つ以上または全部の化合物を含むことが好ましい。ＭＨＢＡの定量は、特開２０１８－１９９６３９号公報の試験例１に記載の方法に従い実施することができる。
【0018】
【化1】
【0019】
ホップ酸化反応産物は、「トリシクロオキシイソフムロン類」を含有することが好ましい。「トリシクロオキシイソフムロン類」とは、トリシクロオキシイソコフムロン Ａ（tricyclooxyisocohumulone A）（ＴＣＯＩｃｏＨ Ａ：式（５ａ）、ＩＵＰＡＣ名：(3aS,5aS,7S,8aS)-3,3a-dihydroxy-7-(1-hydroxy-1-methylethyl)-6,6-dimethyl-2-(2-methylpropanoyl)-5a,6,7,8-tetrahydro-3aH,5H-cyclopenta[c]pentalene-1,4-dione）、トリシクロオキシイソフムロン Ａ（tricyclooxyisohumulone A）（ＴＣＯＩＨ Ａ：式（５ｂ）、ＩＵＰＡＣ名：(3aS,5aS,7S,8aS)-3,3a-dihydroxy-7-(1-hydroxy-1-methylethyl)-6,6-dimethyl-2-(3-methylbutyryl)-5a,6,7,8-tetrahydro-3aH,5H-cyclopenta[c]pentalene-1,4-dione）、トリシクロオキシイソアドフムロン Ａ（tricyclooxyisoadhumulone A）（ＴＣＯＩａｄＨ Ａ：式（５ｃ）、ＩＵＰＡＣ名：(3aS,5aS,7S,8aS)-3,3a-dihydroxy-7-(1-hydroxy-1-methylethyl)-6,6-dimethyl-2-(2-methylbutanoyl)-5a,6,7,8-tetrahydro-3aH,5H-cyclopenta[c]pentalene-1,4-dione）を含む化合物群である。
【0020】
本発明のホップ酸化反応産物におけるＭＨＢＡの含有量について、ホップ酸化反応産物全体の乾燥質量に対して、好適な下限は、０．１質量％、０．５質量％または１質量％とすることができ、好適な上限は、１５質量％、２０質量％、３０質量％、５０質量％、７０質量％、９０質量％、９６質量％または９８質量％とすることができる。また、本発明のホップ酸化反応産物におけるＭＨＢＡの含有量の範囲は、例えば、０．１～９８質量％であり、より好ましくは０．１～９０質量％であり、さらに好ましくは０．１～７０質量％であり、さらに好ましくは０．１～３０質量％であり、さらに好ましくは１～２０質量％である。
【0021】
また、本発明のホップ酸化反応産物においては、ホップを酸化処理に付すことにより、α酸、β酸、イソα酸の含有量が低減される。本発明のホップ酸化反応産物の苦味成分の含有量の範囲は、ホップ全体の乾燥質量に対するα酸、β酸およびイソα酸の合計含有量に換算する場合、好適な下限は、０．０１質量％、０．０２質量％、０．０５質量％、または０．１質量％とすることができ、好適な上限は、０．５質量％、１質量％、５質量％、または１０質量％とすることができる。本発明のホップ酸化反応産物の苦味成分の含有量の範囲は、上記換算値として、例えば、０．０１～５質量％であり、好ましくは０．０５～５質量％であり、より好ましくは０．１～１質量％である。かかる苦味成分の含有量は、例えば、特開２０１８－１９９６３９号公報の試験例１に記載の手法に従い、α酸、β酸およびイソα酸の合計含有量に換算して決定することができる。
【0022】
また、ホップ酸化反応産物におけるＭＨＢＡの含有量は、苦味成分（α酸、β酸およびイソα酸の合計量）に対して、好ましくは等量以上であり、より好ましくは４倍以上であり、さらに好ましくは５０倍以上であり、さらに好ましくは９０倍以上であり、さらに好ましくは１００倍以上である。
【0023】
ホップ酸化反応産物は、水や各種有機溶媒等を含む溶媒による抽出物や、超臨界二酸化炭素等を用いる超臨界抽出に供して得られる抽出物として利用する。溶媒による抽出物は、ホップ酸化反応産物に由来する有用成分が溶解した液体であり、取り扱い性、浸透性等に優れ、また、臭気が低減されるため好ましい。溶媒による抽出温度は特に限定されないが、臭気除去の観点から好ましくは６０℃以下であり、抽出効率を勘案すれば、５０～６０℃がより好ましい。
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、およびブタノール等の炭素数１～４の低級アルコ－ル；酢酸エチルエステル等の低級アルキルエステル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等のグリコール類；その他アセトン、酢酸等の極性溶媒；ベンゼンやヘキサン等の炭化水素；エチルエーテルや石油エーテル等のエーテル類等の非極性溶媒等が挙げられる。本発明の剤は、皮膚へ適用するものであるため、好ましくは水性媒体であり、より好ましくは水を含み、さらに好ましくは水である。すなわち、本発明において、ホップ酸化反応産物の抽出物は、水系抽出物であることが好ましく、水抽出物であることがより好ましい。
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、およびブタノール等の炭素数１～４の低級アルコ－ル；酢酸エチルエステル等の低級アルキルエステル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等のグリコール類；その他アセトン、酢酸等の極性溶媒；ベンゼンやヘキサン等の炭化水素；エチルエーテルや石油エーテル等のエーテル類等の非極性溶媒等が挙げられる。本発明の剤は、皮膚へ適用するものであるため、好ましくは水性媒体であり、より好ましくは水を含み、さらに好ましくは水である。すなわち、本発明において、ホップ酸化反応産物の抽出物は、水系抽出物であることが好ましく、水抽出物であることがより好ましい。
【0024】
・ホップ酸化反応産物の水抽出物
本発明のホップ酸化反応産物の水抽出物は、上記したホップ酸化反応産物を水による抽出に供して得られる抽出物である。抽出方法は特に制限されず、例えば、非特許文献１（Ｎｕｔｒ Ｊ． ２０１５；１５：２５．）に記載の方法を用いることができる。水抽出により、ホップ酸化反応産物の不快臭を低減することができる。抽出温度は特に限定されないが、臭気除去の観点から好ましくは６０℃以下であり、抽出効率を勘案すれば、５０～６０℃がより好ましい。
本発明のホップ酸化反応産物の水抽出物は、上記したホップ酸化反応産物を水による抽出に供して得られる抽出物である。抽出方法は特に制限されず、例えば、非特許文献１（Ｎｕｔｒ Ｊ． ２０１５；１５：２５．）に記載の方法を用いることができる。水抽出により、ホップ酸化反応産物の不快臭を低減することができる。抽出温度は特に限定されないが、臭気除去の観点から好ましくは６０℃以下であり、抽出効率を勘案すれば、５０～６０℃がより好ましい。
【0025】
本発明において、ホップ酸化反応産物の水抽出物は、乾燥させた固形分、濃縮液、または、抽出したままの水抽出液として使用することができるが、抽出したままの水抽出液として用いることが、取り扱い性の点から好ましい。また、上述の乾燥または濃縮のほか、加熱殺菌処理等を行うことができる。具体的には煮沸、減圧脱気、減圧濃縮、噴霧乾燥、凍結乾燥、高温短時間加熱処理、高温短時間殺菌、またはこれらの組み合わせを用いることもできる。
ホップ酸化反応産物の水抽出液は、抽出直後の高温では透明な溶液であるが、低温になると溶解していた成分が析出してしまうため、通常は、懸濁液である。本発明において、ホップ酸化反応産物の水抽出液は、懸濁液のままでもよく、必要に応じて濾過、活性炭もしくはポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）等の吸着剤、濾過助剤、清澄剤または澱下剤等を用いた処理を行うこともできる。ただし、ホップ酸化反応産物の水抽出液にポリオールを加えたポリオール水溶液は、ホップ酸化反応産物の水抽出液中の不溶分の多くを溶解することができるため、この不溶分に含まれる有効成分を利用する観点から、懸濁液のまま使用することが好ましい。
ホップ酸化反応産物の水抽出液は、抽出直後の高温では透明な溶液であるが、低温になると溶解していた成分が析出してしまうため、通常は、懸濁液である。本発明において、ホップ酸化反応産物の水抽出液は、懸濁液のままでもよく、必要に応じて濾過、活性炭もしくはポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）等の吸着剤、濾過助剤、清澄剤または澱下剤等を用いた処理を行うこともできる。ただし、ホップ酸化反応産物の水抽出液にポリオールを加えたポリオール水溶液は、ホップ酸化反応産物の水抽出液中の不溶分の多くを溶解することができるため、この不溶分に含まれる有効成分を利用する観点から、懸濁液のまま使用することが好ましい。
【0026】
ホップ酸化反応産物の水抽出液における、ホップ酸化反応産物の水抽出物の含有量は１～３０質量％であり、ＭＨＢＡの含有量は、機能性効果の観点から０．１～１０質量％が好ましく、０．５～８質量％がより好ましく、１～５質量％が特に好ましい。また、ホップ酸化反応産物の水抽出液のＢｒｉｘ値は、取扱いのしやすさの観点から５～３０°Ｂｘであることが好ましく、１０～２０°Ｂｘであることがより好ましい。
【0027】
・ポリオール
ポリオールは、ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上を利用することができ、本発明の効果を妨げない範囲内において２種以上を混合して使用することもできる。これらの中で、ペンチレングリコールが、固形分の溶解性、取り扱いのしやすさ、においの変化が少ないため好ましい。また、本発明の効果を妨げない範囲内において、上記したポリオール以外の水性溶媒を含むこともできる。
ポリオールは、ペンチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルグルセス－１０、シクロヘキシルグリセリン、（エイコサン二酸／テトラデカン二酸）ポリグリセリル－１０からなる群から選ばれる１種以上を利用することができ、本発明の効果を妨げない範囲内において２種以上を混合して使用することもできる。これらの中で、ペンチレングリコールが、固形分の溶解性、取り扱いのしやすさ、においの変化が少ないため好ましい。また、本発明の効果を妨げない範囲内において、上記したポリオール以外の水性溶媒を含むこともできる。
【0028】
本発明のポリオール水溶液において、ポリオールとしてペンチレングリコールを用いる場合、ペンチレングリコールの配合量は、８質量％以上２２質量％以下であることが好ましく、８質量％以上２０質量％以下であることがより好ましい。ペンチレングリコールの配合量がこの範囲内であると、溶解性に優れており、不溶分を少なくすることができ、場合によっては完全に溶解することもできる。
【0029】
本発明のポリオール水溶液において、ホップ酸化反応産物の水抽出液とポリオールの比率は、本発明の効果を妨げない限り特に制限されないが、ホップ酸化反応産物の水抽出液の配合量が３０質量％以下である場合において、ホップ酸化反応産物の水抽出液の配合量に対するポリオールの配合量の割合は、０．１以上４５以下であることが好ましく、０．２以上３０以下であることがより好ましく、０．３以上２０以下であることがさらに好ましい。
【0030】
・水
本発明のポリオール水溶液において、ポリオールと精製水等の水との比率は、本発明の効果を妨げない限り特に制限されないが、ポリオールと水の重量比（ポリオール：水）が、５：９５～４０：６０の範囲内であることが好ましく、１０：９０～３０：７０の範囲内であることがより好ましく、１０：９０～２５：７５の範囲内であることがさらに好ましい。
本発明のポリオール水溶液において、ポリオールと精製水等の水との比率は、本発明の効果を妨げない限り特に制限されないが、ポリオールと水の重量比（ポリオール：水）が、５：９５～４０：６０の範囲内であることが好ましく、１０：９０～３０：７０の範囲内であることがより好ましく、１０：９０～２５：７５の範囲内であることがさらに好ましい。
【0031】
・ポリオール水溶液
本発明のホップ酸化反応産物のポリオール水溶液は、ポリオールと水の両者を溶媒とする。ホップ酸化反応産物の水抽出液（懸濁液であってもよい）の不溶分は、ポリオールのみ、または水のみには全てが溶解せず、ホップ酸化反応産物の水抽出液（懸濁液であってもよい）に、ポリオールと水とを加え、必要に応じて加熱することにより、室温の水に対する不溶分の多くを溶解して減らすことができ、場合によっては完全に溶解することもできる。加熱を行う場合の温度は、用いるポリオール水溶液の沸点未満であれば特に制限はないが、好ましくは１００℃未満である。ポリオールと水は、ポリオールを加えた後に水を加えることが、溶解性向上の点から好ましい。また、加熱は、ポリオールと水を加えた後に行うことが、溶解性向上の点から好ましい。
本発明のホップ酸化反応産物のポリオール水溶液は、ポリオールと水の両者を溶媒とする。ホップ酸化反応産物の水抽出液（懸濁液であってもよい）の不溶分は、ポリオールのみ、または水のみには全てが溶解せず、ホップ酸化反応産物の水抽出液（懸濁液であってもよい）に、ポリオールと水とを加え、必要に応じて加熱することにより、室温の水に対する不溶分の多くを溶解して減らすことができ、場合によっては完全に溶解することもできる。加熱を行う場合の温度は、用いるポリオール水溶液の沸点未満であれば特に制限はないが、好ましくは１００℃未満である。ポリオールと水は、ポリオールを加えた後に水を加えることが、溶解性向上の点から好ましい。また、加熱は、ポリオールと水を加えた後に行うことが、溶解性向上の点から好ましい。
【0032】
本発明のポリオール水溶液において、ホップ酸化反応産物の水抽出物濃度は、３質量％以下であることが好ましい。このホップ酸化反応産物の水抽出物濃度が３質量％を超えると、不溶分が残りやすく、また、保存安定性が低下して経時で析出物が生じやすくなる場合がある。このホップ酸化反応産物の水抽出物濃度は、２質量％以下であることがより好ましく、１．５質量％以下であることがさらに好ましい。また、このホップ酸化反応産物の水抽出物濃度の下限値は、０．０１質量％以上であることが好ましく、０．０２質量％以上であることがより好ましく、０．０５質量％以上であることがさらに好ましい。
【0033】
本発明のポリオール水溶液において、ＭＨＢＡの含有量は、機能性の点から、０．００１質量％以上であることが好ましく、０．００５質量％以上であることがより好ましく、０．０１質量％以上であることがさらに好ましく、また、３．０質量％以下であることが好ましく、１．０質量％以下であることがより好ましく、０．５質量％以下であることがさらに好ましい。
【0034】
本発明のポリオール水溶液は、不溶分を含んでいてもよく、含まなくてもよい。ポリオール水溶液中の不溶分は、濾過や遠心分離により取り除くことができる。本発明のポリオール水溶液は、凝集の核となる不溶分を取り除くことで、経時での析出を起こりにくくすることができ、保存安定性が向上する。本発明のポリオール水溶液が不溶分を含む場合、不溶分の割合は、ポリオール水溶液に対して０．３質量％以下であることが好ましく、０．２質量％以下であることがより好ましく、０．１５質量％以下であることがさらに好ましい。
【0035】
・毛穴開大抑制剤、角層タンパク質のカルボニル化抑制剤、ＮＧＡＬ産生抑制剤
本発明の剤は、ホップ酸化反応産物の抽出物を含めばよく、その剤形は限定されない。例えば、水溶液、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。
本発明の剤は、本発明の効果を損なわない範囲内において、多価アルコール、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、増粘剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸やアミノ酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
本発明の剤は、ホップ酸化反応産物の抽出物を含めばよく、その剤形は限定されない。例えば、水溶液、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。
本発明の剤は、本発明の効果を損なわない範囲内において、多価アルコール、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、増粘剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸やアミノ酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
【実施例0036】
以下、実施例に基づいて本発明について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
・ホップ酸化反応産物の水抽出液
熟成ホップエキス（キリンホールディングス株式会社製、固形分１１質量％ ＭＨＢＡ２．６５質量％）
・ホップ酸化反応産物の水抽出液
熟成ホップエキス（キリンホールディングス株式会社製、固形分１１質量％ ＭＨＢＡ２．６５質量％）
【0037】
・ホップ酸化反応産物のポリオール水溶液
１．熟成ホップエキス １０．０％
２．ペンチレングリコール ２０．０％
３．精製水 残余
なお、熟成ホップエキスは、ペンチレングリコールおよび精製水を加えて、不溶分を加熱溶解した。
１．熟成ホップエキス １０．０％
２．ペンチレングリコール ２０．０％
３．精製水 残余
なお、熟成ホップエキスは、ペンチレングリコールおよび精製水を加えて、不溶分を加熱溶解した。
【0038】
ホップ酸化反応産物のポリオール水溶液を用いて、下記に示す成分を含有する実施例１と比較例１の乳液を定法により下記に示す最終濃度となるように調製し、以下のヒトの連用試験に用いた。
「実施例１：乳液」
１．精製水 残余
２．グリセリン ４．０％
３．ジプロピレングリコール ２．０％
４．１，３－ブチレングリコール ４．０％
５．ジグリセリン ２．０％
６．ペンチレングリコール ３．０％
７．ベタイン ４．０％
８．スクワラン ３．０％
９．テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ３．０％
１０．ホホバ種子油 ２．０％
１１．ジメチコン ２．０％
１２．（アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー
０．２５％
１３．イソステアリン酸ソルビタン ０．３％
１４．ポリソルベート６０ ０．６５％
１５．水添レシチン ０．４％
１６．ベヘニルアルコール ０．５％
１７．キサンタンガム ０．０５％
１８．カルボキシビニルポリマー ０．１％
１９．水酸化カリウム ０．０１５％
２０．熟成ホップエキス ０．５％
「比較例１：乳液」
実施例１から２０．熟成ホップエキスを抜去した乳液
「実施例１：乳液」
１．精製水 残余
２．グリセリン ４．０％
３．ジプロピレングリコール ２．０％
４．１，３－ブチレングリコール ４．０％
５．ジグリセリン ２．０％
６．ペンチレングリコール ３．０％
７．ベタイン ４．０％
８．スクワラン ３．０％
９．テトラエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル ３．０％
１０．ホホバ種子油 ２．０％
１１．ジメチコン ２．０％
１２．（アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー
０．２５％
１３．イソステアリン酸ソルビタン ０．３％
１４．ポリソルベート６０ ０．６５％
１５．水添レシチン ０．４％
１６．ベヘニルアルコール ０．５％
１７．キサンタンガム ０．０５％
１８．カルボキシビニルポリマー ０．１％
１９．水酸化カリウム ０．０１５％
２０．熟成ホップエキス ０．５％
「比較例１：乳液」
実施例１から２０．熟成ホップエキスを抜去した乳液
【0039】
・ヒト連用試験
１７名の被験者に、朝晩の洗顔後に、各自が使用している化粧水の後に、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む乳液（実施例１）とホップ酸化反応産物の抽出物を含まない乳液（比較例１）を、それぞれ左右の半顔に４週間毎日連用させた。なお、顔の左右に使用する乳液は、ランダムに決定した。
１７名の被験者に、朝晩の洗顔後に、各自が使用している化粧水の後に、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む乳液（実施例１）とホップ酸化反応産物の抽出物を含まない乳液（比較例１）を、それぞれ左右の半顔に４週間毎日連用させた。なお、顔の左右に使用する乳液は、ランダムに決定した。
【0040】
使用の前後で下記項目を評価した。評価結果を図１～３に示す。
・毛穴体積
ＡＮＴＥＲＡ ３Ｄ（Ｍｉｒａｖｅｘ社）を用いて被験者の左右頬部を撮影し、一定範囲における毛穴体積を測定した。連用開始前の値に対して、連用開始４週間後の値が小さいほど毛穴の開大が抑制されたことを示す。
・毛穴体積
ＡＮＴＥＲＡ ３Ｄ（Ｍｉｒａｖｅｘ社）を用いて被験者の左右頬部を撮影し、一定範囲における毛穴体積を測定した。連用開始前の値に対して、連用開始４週間後の値が小さいほど毛穴の開大が抑制されたことを示す。
【0041】
・角層タンパク質のカルボニル化
テープストリッピング法により、顔から角層細胞を採取した。
角層採取テープを８等分に切り、その一片を２４ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに入れた。
カルボニル基用の蛍光ラベル化剤であるＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ（アディポジェン ライフ サイエンシーズ）を２０μＭになるようにＭＥＳ Ｂｕｆｆｅｒ（ＷＡＫＯ）で希釈した溶液で角層採取テープを浸漬し、２５℃１時間遮光で静置し、反応させた。
ＰＢＳ（－）（ＷＡＫＯ）２ｍＬで３回洗浄し、よく水気を切った。
角層採取テープをスライドガラス（松浪硝子工業）に貼付し、Ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｙｔｉｖａ）により蛍光画像を撮影した。画像中の角層部分の単位面積あたりの輝度値について、Ｉｎ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて定量化した。
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅは、カルボニル基に結合するヒドラジノ基を有するため、カルボニル化レベルを蛍光強度で評価することができる。
テープストリッピング法により、顔から角層細胞を採取した。
角層採取テープを８等分に切り、その一片を２４ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに入れた。
カルボニル基用の蛍光ラベル化剤であるＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ（アディポジェン ライフ サイエンシーズ）を２０μＭになるようにＭＥＳ Ｂｕｆｆｅｒ（ＷＡＫＯ）で希釈した溶液で角層採取テープを浸漬し、２５℃１時間遮光で静置し、反応させた。
ＰＢＳ（－）（ＷＡＫＯ）２ｍＬで３回洗浄し、よく水気を切った。
角層採取テープをスライドガラス（松浪硝子工業）に貼付し、Ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｙｔｉｖａ）により蛍光画像を撮影した。画像中の角層部分の単位面積あたりの輝度値について、Ｉｎ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて定量化した。
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅは、カルボニル基に結合するヒドラジノ基を有するため、カルボニル化レベルを蛍光強度で評価することができる。
【0042】
・ＮＧＡＬ発現量
テープストリッピング法により、顔から角層細胞を採取した。
ガラスビーズとＴ－ＰＥＲバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ ＳＣＩＥＴＩＦＩＣ）５００μｌの入ったチューブに角層を採取した角層採取テープを入れ、ビーズ破砕法にて振とうし、角層タンパクを抽出した。
テープストリッピング法により、顔から角層細胞を採取した。
ガラスビーズとＴ－ＰＥＲバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ ＳＣＩＥＴＩＦＩＣ）５００μｌの入ったチューブに角層を採取した角層採取テープを入れ、ビーズ破砕法にて振とうし、角層タンパクを抽出した。
【0043】
９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（ＣＯＳＴＡＲ）に、ＰＢＳ（－）（ＷＡＫＯ）に希釈した固層化抗体を１００μｌ／ｗｅｌｌ分注し、２５℃で一晩インキュベートし固定化した。
Ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有 ＰＢＳ）３００μｌで３回洗浄後、Ｒｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を２００μｌ／ｗｅｌｌを添加し、２５℃で１時間ブロッキング操作を行った。
再度洗浄後、角層抽出サンプル１００μｌ／ｗｅｌｌを添加し、２５℃で約２時間反応させた。また、各バイオマーカーの精製タンパク抗原を濃度勾配をつけて添加して反応させ、検量線とした。
Ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有 ＰＢＳ）３００μｌで３回洗浄後、Ｒｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を２００μｌ／ｗｅｌｌを添加し、２５℃で１時間ブロッキング操作を行った。
再度洗浄後、角層抽出サンプル１００μｌ／ｗｅｌｌを添加し、２５℃で約２時間反応させた。また、各バイオマーカーの精製タンパク抗原を濃度勾配をつけて添加して反応させ、検量線とした。
【0044】
次いで洗浄後、検出用抗体を２５ｎｇ／ｍｌになるようにＲｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔで希釈した溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、２５℃で２時間反応させた。
反応終了後ｗｅｌｌを洗浄し、次いで、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＲｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔで２００倍に希釈し、これを１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、２５℃で２０分反応させた。
固層化抗体、精製タンパク抗原、検出用抗体は、Ｒ＆Ｄ社のＤＹ１７５７を用いた。
反応終了後ｗｅｌｌを洗浄し、次いで、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＲｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔで２００倍に希釈し、これを１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、２５℃で２０分反応させた。
固層化抗体、精製タンパク抗原、検出用抗体は、Ｒ＆Ｄ社のＤＹ１７５７を用いた。
【0045】
反応終了後ｗｅｌｌを洗浄し、ＴＭＢ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）１００μｌ／ｗｅｌｌにて発色させ（２５℃、７分３０秒）、１Ｎ硫酸により反応を停止させた後、ＳＰＥＣＴＲＡ ＭＡＸ １９０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。
前記の作成済み検量線から、ＮＧＡＬ発現量を算出した。なお発現量は、角層抽出液中の総タンパク量で補正し、単位タンパク量あたりの量で表した。なお、総タンパク量は、ＢＣＡタンパク質アッセイ（ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）により測定した。
前記の作成済み検量線から、ＮＧＡＬ発現量を算出した。なお発現量は、角層抽出液中の総タンパク量で補正し、単位タンパク量あたりの量で表した。なお、総タンパク量は、ＢＣＡタンパク質アッセイ（ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）により測定した。
【0046】
試験結果を評価するために、ｔ検定によって各評価項目の有意差を検定した。有意水準は、Ｐ＜０．０１：＊＊、Ｐ＜０．０５：＊とした。
その結果、いずれの評価項目についても有意差が認められ、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む乳液を連用することにより、毛穴の開大を抑制すること（図１）、角層タンパク質のカルボニル化を抑制すること（図２）、ＮＧＡＬ発現量を抑制すること（図３）が明らかとなった。
その結果、いずれの評価項目についても有意差が認められ、ホップ酸化反応産物の抽出物を含む乳液を連用することにより、毛穴の開大を抑制すること（図１）、角層タンパク質のカルボニル化を抑制すること（図２）、ＮＧＡＬ発現量を抑制すること（図３）が明らかとなった。
【0047】
以下に処方例を示す。
処方例１：化粧水
１．精製水 残余
２．グリセリン ５．０％
３．ジグリセリン ７．０％
４．１，３－ブチレングリコール ５．０％
５．メチルグルセス－１０ １．０％
６．ペンチレングリコール ２．２％
７．熟成ホップエキス ０．０５％
処方例１：化粧水
１．精製水 残余
２．グリセリン ５．０％
３．ジグリセリン ７．０％
４．１，３－ブチレングリコール ５．０％
５．メチルグルセス－１０ １．０％
６．ペンチレングリコール ２．２％
７．熟成ホップエキス ０．０５％
【0048】
処方例２：美容ジェル
１．精製水 残余
２．ジプロピレングリコール ６．０％
３．ＰＥＧ－７５ ０．５％
４．ラフィノース ２．０％
５．ペンチレングリコール １．１％
６．キサンタンガム ０．１％
７．スクワラン ３．０％
８．ＳＩＭＵＬＧＥＬ ＮＳ※ ２．５％
９．熟成ホップエキス ０．１％
１０．エタノール ２．０％
※ＳＩＭＵＬＧＥＬ ＮＳ（ＳＥＰＰＩＣ社製；（アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー、スクワラン、ポリソルベート６０、水、イソステアリン酸ソルビタンの混合物）
１．精製水 残余
２．ジプロピレングリコール ６．０％
３．ＰＥＧ－７５ ０．５％
４．ラフィノース ２．０％
５．ペンチレングリコール １．１％
６．キサンタンガム ０．１％
７．スクワラン ３．０％
８．ＳＩＭＵＬＧＥＬ ＮＳ※ ２．５％
９．熟成ホップエキス ０．１％
１０．エタノール ２．０％
※ＳＩＭＵＬＧＥＬ ＮＳ（ＳＥＰＰＩＣ社製；（アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー、スクワラン、ポリソルベート６０、水、イソステアリン酸ソルビタンの混合物）
【0049】
処方例３：シート状美容液
１．精製水 残余
２．１，３－ブチレングリコール ５．０％
３．グリセリン ３．０％
４．ベタイン １．５％
５．ペンチレングリコール １．１％
６．フェノキシエタノール ０．１％
７．カルボキシビニルポリマー ０．１％
８．水酸化カリウム ０．０２％
９．ヒアルロン酸Ｎａ ０．００１％
１０．熟成ホップエキス ０．３％
１．精製水 残余
２．１，３－ブチレングリコール ５．０％
３．グリセリン ３．０％
４．ベタイン １．５％
５．ペンチレングリコール １．１％
６．フェノキシエタノール ０．１％
７．カルボキシビニルポリマー ０．１％
８．水酸化カリウム ０．０２％
９．ヒアルロン酸Ｎａ ０．００１％
１０．熟成ホップエキス ０．３％
【0050】
処方例４：クリーム
１．精製水 残余
２．スクワラン ７．０％
３．オリーブ油 ５．０％
４．ベヘニルアルコール １．５％
５．ミツロウ １．０％
６．ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル／オクチルドデシル）
１．０％
７．ステアリン酸ポリグリセリル－１０ ２．０％
８．グリセリン ６．０％
９．ジプロピレングリコール ６．０％
１０．１，３－ブチレングリコール ３．０％
１１．ペンチレングリコール ２．０％
１２．キサンタンガム ０．０５％
１３．カルボキシビニルポリマー ０．２％
１４．水酸化カリウム ０．０３％
１５．熟成ホップエキス ０．０１％
１．精製水 残余
２．スクワラン ７．０％
３．オリーブ油 ５．０％
４．ベヘニルアルコール １．５％
５．ミツロウ １．０％
６．ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル／オクチルドデシル）
１．０％
７．ステアリン酸ポリグリセリル－１０ ２．０％
８．グリセリン ６．０％
９．ジプロピレングリコール ６．０％
１０．１，３－ブチレングリコール ３．０％
１１．ペンチレングリコール ２．０％
１２．キサンタンガム ０．０５％
１３．カルボキシビニルポリマー ０．２％
１４．水酸化カリウム ０．０３％
１５．熟成ホップエキス ０．０１％
【図1】
【図2】
【図3】
