特開 2023-73470 ｍＲＮＡによってコードされる抗体を送達するための方法及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023073470

(43)【公開日】2023-05-25

(54)【発明の名称】ｍＲＮＡによってコードされる抗体を送達するための方法及び組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 48/00 20060101AFI20230518BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230518BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20230518BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20230518BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20230518BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20230518BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230518BHJP

   C12N 15/88 20060101ALN20230518BHJP

【ＦＩ】

A61K48/00

A61K39/395 N

A61P43/00 105

A61K9/127

A61K47/10

A61K47/28

A61K47/18

A61K47/24

C12N15/13 ZNA

C12N15/88 Z

【審査請求】有

【請求項の数】17

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023057800

(22)【出願日】2023-03-31

(62)【分割の表示】P 2021005561の分割

【原出願日】2014-03-14

(31)【優先権主張番号】61/784,903

(32)【優先日】2013-03-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/920,165

(32)【優先日】2013-12-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】507159304

【氏名又は名称】シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】マイケル ハートレイン

(72)【発明者】

【氏名】フランク デローサ

(72)【発明者】

【氏名】ブレイドン チャールズ ギルド

(72)【発明者】

【氏名】アヌシャ ディアス

(57)【要約】

【課題】生体内で抗体をより安全により効果的に送達するより良い方法を提供する。
【解決手段】一態様では、本発明は、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする１つまたは複数の
ｍＲＮＡをその抗体を必要とする対象に投与することによる生体内抗体送達方法であって
、抗体が対象において全身的に発現されるものである方法を提供する。いくつかの実施形
態では、上記１つまたは複数のｍＲＮＡは抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽
鎖をコードする第２のｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、上記１つまたは複数の
ｍＲＮＡは抗体の重鎖と軽鎖の両方をコードする単一のｍＲＮＡを含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

必要とする対象への生体内における抗体の送達のための組成物であって、
前記組成物は、前記抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと、前記抗体の軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドとを含み、
前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドおよび前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドは別々であり、それぞれシグナルペプチド配列をコードする配列番号９を含み、
前記第１のｍＲＮＡ及び前記第２のｍＲＮＡは、リポソームに被包され、各リポソームは、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含み、
前記抗体が前記対象の血清中で投与後７２時間より長く検出可能である、組成物。

【請求項2】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドとが約１０：１～１：１０の範囲の比で存在する、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドとが約４：１の比で存在する、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドとが約１：１の比で存在する、請求項２に記載の組成物。

【請求項5】

前記各リポソームは、カチオン性脂質、中性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記リポソームは約１５０ｎｍ以下、１００ｎｍ以下、または７５ｎｍ以下の平均の大きさを有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチド及び前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドを含むように修飾されている、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチド及び前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチドは、無修飾である、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

静脈内投与または腹腔内投与されるものである、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記抗体が前記対象の血清中で投与後約９６時間または１２０時間より長く検出可能である、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

前記抗体が無傷免疫グロブリンである、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチとが同じリポソームに被包される、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記第１のｍＲＮＡポリヌクレオチドと前記第２のｍＲＮＡポリヌクレオチとが別々のリポソームに被包される、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

前記カチオン性脂質は、前記リポソーム中の全脂質の５％～５０％を構成する、請求項１に記載の組成物。

【請求項15】

前記カチオン性脂質は、前記リポソーム中の全脂質の１０％～４０％を構成する、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＰＥＧ修飾脂質は、前記リポソーム中の全脂質の０．５％～２０％を構成する、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

前記ＰＥＧ修飾脂質は、前記リポソーム中の全脂質の４％～１０％を構成する、請求項１に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本願は、２０１３年３月１４日出願の米国仮特許出願第６１／７８４，９０３号及び２
０１３年１２月２３日出願の米国仮特許出願第６１／９２０，１６５号の優先権を主張し
、それらの内容は全体が参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

抗体は、強力な治療効果を有することが知られており、がん、自己免疫疾患、循環器疾
患、及び移植拒絶反応等、一連の疾患の治療に現在用いられている。伝統的に、治療用抗
体は組換え技術によって産生され、製剤化され、それから抗体治療の必要な患者に投与さ
れる。しかしながら、抗体産生と製剤化は費用が高くつく。加えて、多くの抗体は生体内
で非常に短い半減期しか有さず、したがって、その標的抗原または標的組織に到達したと
きには分解されていることがある。所望の有効性を達成するには、抗体治療はしばしば高
用量と高頻度投与を必要とする。
遺伝子治療及びＤＮＡワクチン接種とも言われる遺伝子ワクチン接種は、生体内で大量
の抗体を送達するための代替的方法を提供する。しかしながら、遺伝子治療における薬剤
としてのＤＮＡの使用及び遺伝的ワクチン接種は、安全上の懸念事項をいくつか生じさせ
ることがある。例えば、ＤＮＡは血流でゆっくりと分解される。抗ＤＮＡ抗体の形成が起
こることがある（Ｇｉｌｋｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９
９５，９５：１３９８－１４０２）。生体において（外来性）ＤＮＡが残存する可能性が
あり、そうして、免疫系の活性化過剰につながる可能性があり、これはマウスに脾腫を生
じさせることが知られていた（Ｍｏｎｔｈｅｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅ
ｒ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１９９７，１２（５）：４２１－４３２）。さらに、ＤＮＡの組
込みは、無傷遺伝子に妨害を行うことによって宿主ゲノムに突然変異を生じさせる可能性
がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】Ｇｉｌｋｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，９５：１３９８－１４０２

【非特許文献2】Ｍｏｎｔｈｅｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１９９７，１２（５）：４２１－４３２

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

本発明は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）送達技術に基づいて、生体内で抗体をよ
り安全により効果的に送達するより良い方法を提供する。本発明は、抗体の重鎖及び軽鎖
をコードする外来性ｍＲＮＡを送達することにより、その重鎖及び軽鎖が別々のｍＲＮＡ
によって送達される場合でも、完全に構築された多連鎖抗体の産生が生体内で達成され得
るという驚くべき発見に部分的に基づいている。実施例の項に後述する非限定的な例によ
って示すように、重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ構築物をリポソームに被包してマウ
スに静脈内注射すると、ｍＲＮＡにコードされた所望の抗体が注射後６時間以内にマウス
血清中に相当量検出でき、７２時間後または９６時間後にピークを示す。抗体の全身的発
現は、注射３週間後でも持続していた。このようにして、本発明者らは、多連鎖治療抗体
がｍＲＮＡによって送達でき、患者の身体自体によって産生でき、それにより、費用の高
い組換抗体製造工程が省略できるということを実証することに成功した。加えて、ｍＲＮ
Ａの一過性的で脆弱な性質とは反対に、ｍＲＮＡから産生される抗体は驚くほど長もちし
、全身への分布を効率的に達成することができる。ｍＲＮＡの一過性的性質はまた、外来
性核酸に通常伴う安全上の懸念を極力少なくすることができる。このようにして、本発明
は、より安全で、より低費用で、より効果的な抗体送達方法を治療的使用に提供する。

【0005】

一態様では、本発明は、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを
その抗体を必要とする対象に投与することによる生体内抗体送達方法であって、抗体が対
象において全身的に発現されるものである方法を提供する。いくつかの実施形態では、上
記１つまたは複数のｍＲＮＡは抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコード
する第２のｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、上記１つまたは複数のｍＲＮＡは
抗体の重鎖と軽鎖の両方をコードする単一のｍＲＮＡを含む。

【0006】

いくつかの実施形態では、重鎖または軽鎖をコードするｍＲＮＡは、シグナルペプチド
をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖または軽鎖をコードするｍＲＮ
Ａは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）シグナルペプチドをコードする配列（例えば、配列番
号９または配列番号１０）を含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチド配列をコ
ードする配列（例えば、配列番号９または配列番号１０）は、重鎖または軽鎖をコードす
るｍＲＮＡ配列にＮ末端で直接的または間接的に結合する。

【0007】

いくつかの実施形態では、重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第２
のｍＲＮＡは、約１０：１～１：１０（例えば、約９：１～１：９、８：１～１：８、７
：１～１：７、６：１～１：６、５：１～１：５、４：１～１：４、３：１～１：３、ま
たは２：１～１：２）の範囲の比で存在する。いくつかの実施形態では、重鎖をコードす
る第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡは、約４：１～１：４の範囲の比
で存在する。いくつかの実施形態では、重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコー
ドする第２のｍＲＮＡは、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：
１、３：１、２：１、または１：１の比で存在する。いくつかの実施形態では、重鎖をコ
ードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡは、約４：１の比で存在す
る。いくつかの実施形態では、重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第
２のｍＲＮＡは、約１：１の比で存在する。いくつかの実施形態では、重鎖をコードする
第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡは、１より大きい（例えば、約１０
：１～１：１、９：１～１：１、８：１～１：１、７：１～１：１、６：１～１：１、５
：１～１：１、４：１～１：１、３：１～１：１、または２：１～１：１の範囲の）比で
存在する。

【0008】

いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡ
は、ポリマー系及び／または脂質系送達賦形剤によって送達される。いくつかの実施形態
では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡは、１つまたは複数の
リポソーム内に被包される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ
及び軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡは、別々のリポソームに被包される。いくつかの実
施形態では、重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡは、
同じリポソームに被包される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリポソームは
、カチオン性脂質、中性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質の１つまたは
複数を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリポソームは、カチオン性脂質
、中性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリポソームは、約２５０ｎｍ以下（例えば
、約２２５ｎｍ、２００ｎｍ、１７５ｎｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１００ｎｍ、７５
ｎｍ、または５０ｎｍ以下）の大きさを有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複
数のリポソームは、約１５０ｎｍ以下の大きさを有する。いくつかの実施形態では、１つ
または複数のリポソームは、約１００ｎｍ以下の大きさを有する。いくつかの実施形態で
は、１つまたは複数のリポソームは、約７５ｎｍ以下の大きさを有する。いくつかの実施
形態では、１つまたは複数のリポソームは、約５０ｎｍ以下の大きさを有する。

【0010】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリポソームは、約２５０～１０ｎｍの範囲
（例えば、約２２５～１０ｎｍ、２００～１０ｎｍ、１７５～１０ｎｍ、１５０～１０ｎ
ｍ、１２５～１０ｎｍ、１００～１０ｎｍ、７５～１０ｎｍ、または５０～１０ｎｍの範
囲）の大きさを有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のリポソームは、約２
５０～１００ｎｍの範囲（例えば、約２２５～１００ｎｍ、２００～１００ｎｍ、１７５
～１００ｎｍ、１５０～１００ｎｍの範囲）の大きさを有する。いくつかの実施形態では
、１つまたは複数のリポソームは、約１００～１０ｎｍの範囲（例えば、約９０～１０ｎ
ｍ、８０～１０ｎｍ、７０～１０ｎｍ、６０～１０ｎｍ、または５０～１０ｎｍの範囲）
の大きさを有する。

【0011】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数のｍＲＮＡは安定性を向上させるよう修飾さ
れる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のｍＲＮＡは、修飾されたヌクレオチド
、修飾された糖主鎖、キャップ構造、ポリＡ尾部、５’及び／または３’非翻訳領域を含
むよう修飾される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のｍＲＮＡは無修飾である
。

【0012】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数のｍＲＮＡは静脈内投与される。いくつかの
実施形態では、１つまたは複数のｍＲＮＡは腹腔内投与される。いくつかの実施形態では
、１つまたは複数のｍＲＮＡは皮下投与される。いくつかの実施形態では、１つまたは複
数のｍＲＮＡは経肺投与によって投与される。

【0013】

いくつかの実施形態では、抗体の全身的発現は、投与後（例えば、単回投与後）少なく
とも約６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、９６時
間、１２０時間、１４４時間、１５６時間、１６８時間、または１８０時間で検出可能で
ある。いくつかの実施形態では、抗体の全身的発現は、投与後（例えば、単回投与後）少
なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、
１２日、１３日、１４日、１５日、２０日、２２日、２５日、または３０日で検出可能で
ある。いくつかの実施形態では、抗体の全身的発現は、投与後（例えば、単回投与後）少
なくとも約０．５週間、１週間、１．５週間、２週間、２．５週間、３週間、３．５週間
、４週間、４．５週間、５週間、５．５週間、６週間、６．５週間、７週間、７．５週間
、または８週間で検出可能である。いくつかの実施形態では、抗体の全身的発現は、投与
後（例えば、単回投与後）少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、または４ヶ月で検出可
能である。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗体は無傷免疫グロブリン、（Ｆａｂ）_２、（Ｆａｂ’）_２
、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧで
ある。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＣＣＬ２、抗リシルオキシダーゼ様－２（Ｌ
ＯＸＬ２）、抗Ｆｌｔ－１、抗ＴＮＦ－α、抗インターロイキン－２Ｒα受容体（ＣＤ２
５）、抗ＴＧＦ_β、抗Ｂ細胞活性化因子、抗アルファ－４インテグリン、抗ＢＡＧＥ、抗
β－カテニン／ｍ、抗Ｂｃｒ－ａｂｌ、抗Ｃ５、抗ＣＡ１２５、抗ＣＡＭＥＬ、抗ＣＡＰ
－１、抗ＣＡＳＰ－８、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２５、
抗ＣＤＣ２７／ｍ、抗ＣＤ３０、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ８０、抗
ＣＤＫ４／ｍ、抗ＣＥＡ、抗ＣＴ、抗ＣＴＬ４、抗Ｃｙｐ－Ｂ、抗ＤＡＭ、抗ＥＧＦＲ、
抗ＥｒｂＢ３、抗ＥＬＦ２Ｍ、抗ＥＭＭＰＲＩＮ、抗ＥｐＣａｍ、抗ＥＴＶ６－ＡＭＬ１
、抗ＨＥＲ２、抗Ｇ２５０、抗ＧＡＧＥ、抗ＧｎＴ－Ｖ、抗Ｇｐ１００、抗ＨＡＧＥ、抗
ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、抗ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、抗ＩＧＦ－１Ｒ、抗ＩＬ－
２Ｒ、抗ＩＬ－５、抗ＭＣ１Ｒ、抗ミオシン／ｍ、抗ＭＵＣ１、抗ＭＵＭ－１、－２、－
３、抗プロテイナーゼ－３、抗ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、抗Ｐｍｌ／ＲＡＲα、
抗ＰＲＡＭＳ、抗ＰＳＡ、抗ＰＳＭ、抗ＰＳＭＡ、抗ＲＡＧＥ、抗ＲＡＮＫＬ、抗ＲＵ１
またはＲＵ２、抗ＳＡＧＥ、抗ＳＡＲＴ－１または抗ＳＡＲＴ－３、抗サバイビン、抗Ｔ
ＥＬ／ＡＭＬ１、抗ＴＰＩ／ｍ、抗ＴＲＰ－１、抗ＴＲＰ－２、抗ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２
、及び抗ＶＥＧＦまたは抗ＶＥＧＦ受容体からなる群より選択される。

【0015】

他の態様では、本発明は、抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコードす
る第２のｍＲＮＡを細胞に投与することによる抗体産生方法であって、抗体は細胞によっ
て産生されるものである方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞
である。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細
胞は培養細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は生体内細胞である。いくつかの実
施形態では、抗体は細胞内で発現される。いくつかの実施形態では、抗体は細胞によって
分泌される。

【0016】

なおも他の態様では、本発明は、抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡ及び軽鎖をコ
ードする第２のｍＲＮＡを含む組成物であって、第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡは１
つまたは複数のリポソームに被包されるものである組成物を提供する。

【0017】

とりわけ、本発明はまた、例えば、抗ＣＣＬ２抗体及びそれを含有する組成物等、特定
の抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡの例を提供する。所定の実施形態では、本発
明は、本明細書に記載の配列番号１または配列番号２と少なくとも５０％、５５％、６０
％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、または９９％同一の配列を有する、抗ＣＣＬ２抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡを提
供する。所定の特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の配列番号１または配列
番号２の配列を有する、抗ＣＣＬ２抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡを提供する。所定の
実施形態では、本発明は、本明細書に記載の配列番号３または配列番号４と少なくとも５
０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９
６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を有する、抗ＣＣＬ２抗体の軽鎖をコー
ドするｍＲＮＡを提供する。所定の特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の配
列番号３または配列番号４の配列を有する、抗ＣＣＬ２抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡ
を提供する。

【0018】

本願で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ
ｌｙ）」は同等語句として使用される。本願で約（ａｂｏｕｔ）／約（ａｐｐｒｏｘｉｍ
ａｔｅｌｙ）の付いた数字または付いていない数字は、当業者に理解されるどのような通
常の変動をも包含するものとする。

【0019】

本発明の他の特徴、目的、及び利点は、この後に続く詳細な説明で明らかである。しか
しながら、本詳細な説明は本発明の実施形態を示す一方で、制限するものとしてではなく
例示するものとしてのみ与えられていることを理解されたい。本発明の範囲内での種々の
変更及び修正が、本詳細な説明から当業者に明らかとなる。

【0020】

以下の図は例示を目的としているに過ぎず、制限をするものではない。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】提供される方法を用いてｍＲＮＡでＨＣＬ１細胞を処理した後に観察されたＩｇＧタンパク質レベルをＥＬＩＳＡで測定したものの例示的棒グラフを示す。

【図2】提供される方法を用いてｍＲＮＡで細胞を処理した後に観察されたＩｇＧタンパク質レベルをＥＬＩＳＡで測定したものの例示的棒グラフを示す。

【図3】提供される方法によるＨＣＬ１細胞へのｍＲＮＡの導入から生じるタンパク質レベルを２４時間及び４８時間後にウエスタンブロットで調べた結果を示す。

【図4】提供される方法に従いｍＲＮＡを受けて６、２４、４８、または７２時間後のマウスの血清中のＣＣＬ２抗体レベルをＥＬＩＳＡ法によって測定したものの例示的棒グラフを示す。

【図5】α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡの単回投与後のマウス血清中α－ＶＥＧＦ抗体レベルをＥＬＩＳＡによって測定したものの例示的棒グラフを示す。

【図6】α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡの単回投与後のマウスを個別に識別してその血清中α－ＶＥＧＦ抗体レベルをＥＬＩＳＡによって測定したものの例示的棒グラフを示す。

【図7】α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡを充填したｃＫＫ－Ｅ１２脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を投与して２４時間後の、野生型マウスにおける抗ヒトＶＥＧＦ抗体の生体内産生の例示的棒グラフを示す。マウスには、尾部静脈注射または皮下（ＳＣ）注射のいずれかによって投与した。

【発明を実施するための形態】

【0022】

定義
本発明がより容易に理解されるように、まず所定の用語を下に定義する。次の用語及び
他の用語に対する追加的定義も本明細書全体を通じて明記する。

【0023】

アミノ酸：本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」とは、その最も広い意味にお
いて使用され、ポリペプチド鎖の中に組み込むことができるいずれの化合物及び／または
物質をも指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は一般構造Ｈ_２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－
ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は天然のアミノ酸である。いくつ
かの実施形態では、アミノ酸は合成アミノ酸であり；いくつかの実施形態では、アミノ酸
はｄ－アミノ酸であり；いくつかの実施形態では、アミノ酸はＬ－アミノ酸である。「標
準アミノ酸」とは、天然ペプチドに共通に見られる２０の標準Ｌ－アミノ酸のいずれをも
指す。「非標準アミノ酸」とは、それが合成によって調製されるか天然源から得られるか
に係わらず、標準アミノ酸以外のいずれのアミノ酸をも指す。本明細書で使用される場合
、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミド等）、及び／または置換のなされた
物を含み、但しそれに限定されない化学的に修飾されたアミノ酸を包含する。アミノ酸、
例えば、ペプチドのカルボキシ末端及び／またはアミノ末端アミノ酸は、メチル化、アミ
ド化、アセチル化、保護基による修飾を受けることができ、かつ／または、他の化学基の
活性に悪影響を与えることなくペプチドの循環半減期を変えることのできるそのような他
の化学基との置換による修飾を受けることができる。アミノ酸はジスルフィド結合に関与
してもよい。アミノ酸は、１つまたは複数の化学成分（例えば、メチル基、酢酸基、アセ
チル基、リン酸基、ホルミル成分、イソプレノイド基、スルフェート基、ポリエチレング
リコール成分、脂質成分、炭水化物成分、ビオチン成分等）との結合等、ひとつまたは翻
訳後の修飾を含んでいてもよい。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と互換的に使用
され、遊離アミノ酸、及び／またはペプチドのアミノ酸残基を指す場合がある。それが遊
離アミノ酸を指すのかペプチドの残基を指すのかは、用語が使用される文脈から明らかで
ある。

【0024】

動物：本明細書で使用される場合、用語「動物」とは動物界のいずれの動物をも指す。
いくつかの実施形態では、「動物」とは、発達のいずれの段階かにあるヒトを指す。いく
つかの実施形態では、「動物」とは、発達のいずれの段階かにある非ヒト動物を指す。所
定の実施形態では、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ
、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／またはブタ）である。いくつかの実
施形態では、動物としては、以下に限定されないが、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚
類、昆虫類、及び／または蠕虫類が挙げられる。いくつかの実施形態では、動物は、遺伝
子導入動物、遺伝子操作動物、及び／またはクローンであってもよい。

【0025】

抗体：本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、無傷抗体及び抗体断片の両方を包
含する。典型的には、無傷「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリンで
ある。抗体は、いずれの免疫グロブリンクラスの中のひとつであってもよく、例えば、ヒ
トクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤのいずれもが挙げられる。当技
術分野で理解される典型的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含むことが知ら
れている。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「
軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０ｋＤ～約７０ｋＤ）を有する。各鎖の
Ｎ末端は、抗原認識を主に担う、約１００～１１０またはそれより多くのアミノ酸からな
る可変領域を特徴づける。用語「可変軽鎖」（ＶＬ）及び「可変重鎖」（ＶＨ）とは、そ
れぞれ、それらの軽鎖及び重鎖を指す。各可変領域はさらに、超可変（ＨＶ）領域及びフ
レームワーク（ＦＲ）領域に下位区分される。超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と呼ばれる３つの超可変配列領域を含み、これは、４つのフ
レームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ２、及びＦＲ４）によって分けられ、フレーム
ワーク領域は、βシート構造を形成し、ＨＶ領域を所定の位置に保持する足場材料として
働く。各重鎖及び軽鎖のＣ末端は、軽鎖としての１つの領域（ＣＬ）と重鎖としての３つ
の領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とからなる定常領域を特徴づける。いくつかの実
施形態では、用語「無傷抗体」または「完全に構築された抗体」は、抗体を指して使用さ
れ、それは、天然に産生される抗体に起こるようにジスルフィド結合によってつながって
もよい２つの重鎖と２つの軽鎖を含有することを意味する。いくつかの実施形態では、本
発明による抗体は抗体断片である。本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、例えば
、抗体の抗原結合領域または可変領域等、無傷抗体の一部を包含する。抗体断片の例とし
ては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；トリアボディ（ｔｒｉａｂｏ
ｄｉｅｓ）；テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）；直鎖抗体；一本鎖抗体分子；及
び、抗体断片から形成される多特異的抗体が挙げられる。例えば、抗体断片としては、単
離された断片、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、軽鎖及び重鎖の可変領域
がペプチドリンカーによって接続されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ＳｃＦｖ
タンパク質」）、並びに、アミノ酸残基からなり超可変領域に似た最少認識単位が挙げら
れる。多くの実施形態では、抗体断片は、その断片の親抗体の配列を充分に含有している
ために、親抗体が結合するのと同じ抗原に結合し；いくつかの実施形態では、断片は、親
抗体の親和性に匹敵する親和性をもって抗原に結合するか、若しくは、抗原に結合しよう
と親抗体と競合するか、または両方である。抗体の抗原結合断片の例としては、以下に限
定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断
片、ｄｓＦｖディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ｄＡｂ断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、及
び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）領域が挙げられる。

【0026】

約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）または約（ａｂｏｕｔ）：本明細書で使用される場
合、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」とは、関心
の１つまたは複数の値に適用されるとき、述べられている参照値に類似した値のことを指
す。所定の実施形態では、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂ
ｏｕｔ）」は、他に記載がないか他に文脈から明らかでなければ、述べられた参考値から
いずれかのほう（大きいほうか小さいほう）に２５％、２０％、１９％、１８％、１７％
、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％
、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下以内に入る値の範囲を指す（但し、か
かる数字が、あり得る値の１００％を超えると考えられる場合は除く）。

【0027】

生物学的利用能：本明細書で使用される場合、用語「生物学的利用能」とは一般的に、
投与用量のうち、対象の血流に達するパーセンテージを指す。

【0028】

生物活性のある：本明細書で使用される場合、語句「生物活性のある」とは、生物額的
系、特に生体に活性を有する剤の特性を指す。例えば、生体に投与されたときにその生体
に生物学的効果を有する剤は生物活性があると考えられる。

【0029】

発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」とは、ｍＲＮＡをポリペプチド
（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）に翻訳すること、多重ポリペプチド（例えば、抗体の
重鎖または軽鎖）を無傷タンパク質（例えば、抗体）へと構築すること、及び／または、
翻訳後にポリペプチドまたは完全に構築されたタンパク質（例えば、抗体）を修飾するこ
とを指す。この適用において、用語「発現」及び「産生」、並びに文法的相当語句は互換
的に使用される。

【0030】

官能的：本明細書で使用される場合、「官能的」生物分子とは、生物分子を特徴づける
特性及び／または活性を示す形式における生物分子である。

【0031】

ＧＣ含量：本明細書で使用される場合、「ＧＣ含量」とは、グアニン残基、シトシン残
基、またはその類似体である核酸塩基残基の合計の、核酸配列における画分またはパーセ
ンテージである。例えば、正確に３０のシトシン、正確に３０のグアニン、正確にひとつ
のシトシン類似体、及び正確にひとつのグアニン類似体を含有する１００ｎｔ配列は６２
％のＧＣ濃度を有する。

【0032】

半減期：本明細書で使用される場合、用語「半減期」とは、タンパク質の濃度または活
性等の量が或る期間の最初に測定したその値の半分にまで落ちるのに要する時間である。

【0033】

改善、増加または低減：本明細書で使用される場合、用語「改善」、「増加」、若しく
は「低減」、または文法的相当語句は、ベースライン測定値、例えば、本明細書に記載の
処理を開始する前の同じ個体における測定値、または本明細書に記載の処理をしていない
１つの対照対象（または複数の対照対象）における測定値等と比較した場合の値を指す。
「対照対象」とは、治療されている対象と同じ形式の疾患を罹患しており、治療されてい
る対象とほぼ同じ年齢である対象である。

【0034】

生体外：本明細書で使用される場合、用語「生体外」とは、例えば、多細胞生体内では
なく、試験管内または反応槽内、細胞培養液内等、人工的な環境内で起こる事象を指す。

【0035】

生体内：本明細書で使用される場合、用語「生体内」とは、ヒト及び非ヒト動物等、多
細胞性生体内で起こる事象を指す。細胞に基づく系に関する文脈においては、この用語は
、（例えば、生体外系とは対照的なものとして）生細胞内で起こる事象を指すのに使用さ
れる場合がある。

【0036】

単離された：本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、（１）（自然及び
／または実験的設定において）最初に産生されたときにつながっていた成分の少なくとも
いくつかから分離され、かつ／または、（２）人の手によって産生、調製、及び／または
製造された、物質及び／または実在物を指す。単離された物質及び／または実在物は、そ
れが最初につながっていた他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０
％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４
％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％より多くから
分離されていてもよい。いくつかの実施形態では、単離された剤は、約８０％、約８５％
、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％
、約９８％、約９９％、または約９９％より多くの純度であってもよい。物質は、実質的
に他の成分がない場合に「純」であると、この語は本明細書で使用される。本明細書で使
用される場合、単離された物質及び／または実在物のパーセント純度の計算は賦形剤（例
えば、緩衝液、溶媒、水等）を含むものではない。

【0037】

リンカー：本明細書で使用される場合、用語「リンカー」とは、天然タンパク質におけ
る特定の位置に現れるものとは別の、融合タンパク質におけるアミノ酸配列を指し、一般
に、柔軟性を有するように、または２つのタンパク質成分間にα－へリックス等の構造を
挿入するように設計される。リンカーはまたスペーサーとも言われる。典型的にリンカー
即ちスペーサーはそれ自体では生物学的機能を有さない。

【0038】

局所的分布または送達：本明細書で使用される場合、用語「局所的分布」、「局所的送
達」、または文法的相当語句は、組織特異的な送達または分布を指す。典型的には、局所
的分布または局所的送達は、ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質（例えば、抗体）
が、細胞内で翻訳され発現されるか、または患者の循環系に入ることを避ける限定的分泌
によって翻訳され発現されることを必要とする。

【0039】

メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）：本明細書で使用される場合、用語「メッセンジャ
ーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）」とは、少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドを指す。ｍＲＮＡは、本明細書で使用される場合、修飾ＲＮＡと無修飾ＲＮＡの両方
を包含する。ｍＲＮＡは１つまたは複数のコード領域及び非コード領域を含有していても
よい。

【0040】

核酸：本明細書で使用される場合、用語「核酸」とは、その最も広い意味において、ポ
リヌクレオチド鎖に組み込まれているか組み込むことが可能ないずれの化合物及び／また
は物質をも指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合によってポリ
ヌクレオチド鎖に組み込まれているかまたは組み込むことが可能な化合物及び／または物
質である。いくつかの実施形態では、「核酸」とは、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオ
チド及び／またはヌクレオシド）を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」とは、個々
の核酸残基を含むポリヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、Ｒ
ＮＡ、並びに一本鎖及び／または二本鎖ＤＮＡ、及び／またはｃＤＮＡを包含する。さら
に、用語「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」、及び／または類似の用語は、核酸類似体、
即ち、ホスホジエステル主鎖とは別のものを有する類似体を含む。例えば、いわゆる「ペ
プチド核酸」は、当技術分野で既知であり、主鎖内にホスホジエステル結合の代わりにペ
プチド結合を有し、本発明の範囲内であると考えられる。用語「アミノ酸配列をコードす
るヌクレオチド配列」は、お互いの縮重版であり、かつ／または同じアミノ酸配列をコー
ドする全てのヌクレオチド配列を包含する。タンパク質をコードするヌクレオチド配列及
び／またはＲＮＡはイントロンを含んでもよい。核酸は、天然源から精製したり、組換え
発現系を用いて産生して任意で精製したり、化学的に合成したり等、できる。適切である
場合には、例えば、化学的に合成した分子の場合、核酸は、化学的に修飾された塩基また
は糖、主鎖修飾等を有する類似体等のヌクレオシド類似体を含むことができる。核酸配列
は、他に断りがなければ、５’から３’への方向で表される。いくつかの実施形態では、
核酸は、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウ
リジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシ
チジン）；ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イ
ノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロ
ピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモ
ウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジ
ン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－
デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシ
ン、Ｏ（６）－メチルグアニン、及び２－チオシチジン）；化学的に修飾された塩基；生
物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）；介在塩基；修飾された糖（例えば、
２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及び六炭
糖）；及び／若しくは修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエート及び５’－Ｎ－
ホスホラミダイト結合）であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態では、本発明は
、送達を促進または達成するために化学的に修飾されなかった核酸（例えば、ヌクレオチ
ド及び／またはヌクレオシド等も含めた、ポリヌクレオチド及び残基等）を意味する「無
修飾核酸」を特に対象とする。

【0041】

患者：本明細書で使用される場合、用語「患者」または「対象」とは、提供される組成
物が、例えば、実験上、診断上、予防上、美容上、及び／または治療上の目的のために投
与されてもよいいずれの生体をも指す。典型的な患者としては、動物（例えば、マウス、
ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及び／またはヒト等の哺乳動物）が挙げられる。いくつ
かの実施形態では、患者はヒトである。ヒトは、出生前及び出生後の形式を含む。

【0042】

薬剤的に許容できる：用語「薬剤的に許容できる」とは、本明細書で使用される場合、
健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答、若しくは他の問
題または合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触させて、妥当なリスク・ベネフィット
比と釣り合う使用をするのに適切な物質を指す。

【0043】

全身的分布または送達：本明細書で使用される場合、用語「全身的分布」、「全身的送
達」、または文法的相当語句は、全身若しくは生体全体に影響を及ぼす送達または分布の
機構または方法を指す。典型的には、全身的分布または送達は、身体の循環系、例えば、
血流を介して達成される。「局所的分布または送達」の定義と比較されたい。

【0044】

対象：本明細書で使用される場合、用語「対象」とは、ヒトまたはいずれの非ヒト動物
（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、若しくは
霊長類）をも指す。ヒトには、出生前及び出生後の形式を含む。多くの実施形態では、対
象はヒトである。対象は患者である場合があり、これは、疾患の診断または治療を行う医
療提供者にかかるヒトを指す。用語「対象」は、本明細書において「個体」または「患者
」と互換的に用いられる。対象は、疾患または障害を罹患する可能性があるか罹患しやす
いが、その疾患または障害の症状を顕している場合もあればない場合もある。

【0045】

実質的に：本明細書で使用される場合、用語「実質的に」とは、関心の特徴または特性
の全体的またはほぼ全体的な範囲若しくは程度を表す質的状態を指す。生物学分野の当業
者であれば、生物学的及び化学的現象は、完了に至ること、及び／若しくは完全状態に進
むこと、または、絶対的な結果を達成したり回避したりすることが、仮にあったとしても
まれにしかないことを理解するものである。したがって、用語「実質的に」は、本明細書
では、多くの生物学的及び化学的現象に特有の、完全性の潜在的欠如を捉えるために使用
される。

【0046】

標的組織：本明細書で使用される場合、用語「標的組織」とは、治療すべき疾患に冒さ
れているどのような組織をも指す。いくつかの実施形態では、標的組織としては、疾患に
関連した病状、症状、または特徴を示す組織も含まれる。

【0047】

治療的有効量：本明細書で使用される場合、治療剤の「治療的有効量」という用語は、
疾患、障害、及び／または異常に罹っているか罹りやすい対象に投与された場合にその疾
患、障害、及び／または異常の症状の治療、診断、予防、及び／または発症遅延処置を行
うのに充分な量のことを意味する。治療的有効量は典型的に、少なくとも１つの単位用量
を含む投与計画によって投与されることが当業者には理解されるものである。

【0048】

治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）：本明細書で使用される場合、用語「治療する（ｔｒｅａｔ
）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、特
定の疾患、障害、及び／または異常の１つまたは複数の症状または特徴に対して部分的ま
たは完全な緩和、改善、軽減、阻害、予防、発症遅延処置、重症度低減、及び／または発
生率低減を行うために用いられるどのような方法をも指す。治療は、疾患の兆候を示さな
い対象及び／または疾患の初期兆候しか示さない対象に、疾患に関連する病状を生じさせ
るリスクを減らす目的で施されてもよい。

【0049】

（発明を実施するための形態）
本発明は、ｍＲＮＡ送達技術に基づいて、生体内で抗体を送達するための方法と組成物
をとりわけ、提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、抗体の重鎖及び軽鎖をコー
ドする１つまたは複数のｍＲＮＡを、抗体の送達を必要とする対象に投与することによっ
て抗体を送達する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖は別々
のｍＲＮＡによって送達される。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖は同じｍ
ＲＮＡによって送達される。ｍＲＮＡは、包装された粒子（例えば、リポソーム若しくは
ポリマー系賦形剤に被包）または包装されていない（即ち、裸の）粒子として、送達して
もよい。ｍＲＮＡがコードする抗体は、対象内で局所的（例えば、組織特異的方法で）ま
たは系統的に発現させてもよい。

【0050】

本発明の種々の態様が以下の項で詳細に説明される。項分けの使用は本発明を限定する
ことを意図しない。各項は本発明のいずれの態様にも適用することができる。この出願に
おいては、「または（ｏｒ）」の使用は、他に記載がなければ、「及び／または（ａｎｄ
／ｏｒ）」を意味する。

【0051】

ｍＲＮＡがコードする抗体
本発明は、いずれの種類の抗体を送達するように用いてもよい。本明細書で使用される
場合、用語「抗体」とは、無傷抗体及び抗体断片の両方を包含する。典型的に、無傷「抗
体」は、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリンである。抗体は、いずれの免疫グ
ロブリン・クラスの中のひとつであってもよく、例えば、ヒト・クラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ
、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤのいずれもが挙げられる。典型的には、無傷抗体は四量体
である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「軽
」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０ｋＤ～約７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ
末端は、抗原認識を主に担う、約１００～１１０またはそれより多くのアミノ酸からなる
可変領域を特徴づける。用語「可変軽鎖」（ＶＬ）及び「可変重鎖」（ＶＨ）とは、それ
ぞれ、軽鎖及び重鎖上でそれらの対応する領域を指す。各可変領域はさらに、超可変（Ｈ
Ｖ）領域及びフレームワーク（ＦＲ）領域に下位区分されることができる。超可変領域は
、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と呼ばれる３つの超可変配列領
域を含み、これは、４つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ２、及びＦＲ４）
によって分けられ、フレームワーク領域は、βシート構造を形成し、ＨＶ領域を所定の位
置に保持する足場材料として働く。各重鎖及び軽鎖のＣ末端は、軽鎖（ＣＬ）としての１
つの領域と重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）としての３つの領域とからなる定常領域
を特徴づける。免疫グロブリンの軽鎖はさらに、カッパ及びラムダのアイソタイプに区別
できる。

【0052】

いくつかの実施形態では、用語「無傷抗体」または「完全に構築された抗体」は、天然
に産生される抗体に起こるようにジスルフィド結合によってつながってもよい２つの重鎖
と２つの軽鎖を含有する抗体を指して使用される。いくつかの実施形態では、本発明によ
る抗体は抗体断片である。

【0053】

いくつかの実施形態では、本発明は、「抗体断片」を送達するために用いることができ
る。本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、例えば、抗体の抗原結合領域または可
変領域等、無傷抗体の一部を包含する。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（
ａｂ’）_２、及びＦｖ断片；トリアボディ；テトラボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体分子；
及び、抗体断片から形成される多特異的抗体が挙げられる。例えば、抗体断片としては、
単離された断片、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、軽鎖及び重鎖の可変領
域がペプチドリンカーによって接続されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ＳｃＦ
ｖタンパク質」）、並びに、超可変領域に似たアミノ酸残基からなる最少認識単位が挙げ
られる。多くの実施形態では、抗体断片は、その断片の親抗体の配列を充分に含有してい
るために、親抗体が結合するのと同じ抗原に結合し；いくつかの実施形態では、断片は、
親抗体の親和性に匹敵する親和性をもって抗原に結合するか、若しくは、抗原に結合しよ
うと親抗体と競合するか、または両方である。抗体の抗原結合断片の例としては、以下に
限定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ
断片、ｄｓＦｖディアボディ、ｄＡｂ断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、及び単離された相補
性決定領域（ＣＤＲ）領域が挙げられる。

【0054】

本発明は、当技術分野で既知の抗体、及び標準的な方法を用いて所望の抗原に対して産
生させることができる抗体を送達するために用いてもよい。本発明は、モノクローナル抗
体、ポリクローナル抗体、抗体混合物またはカクテル、ヒトまたはヒト化抗体、キメラ抗
体、または二重特異性抗体を送達するために用いてもよい。

【0055】

抗体の例としては、以下に限定されないが、抗ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド
２（ＣＣＬ２）、抗リシルオキシダーゼ様－２（ＬＯＸＬ２）、抗Ｆｌｔ－１、抗ＴＮＦ
－α、抗インターロイキン－２Ｒα受容体（ＣＤ２５）、抗ＴＧＦ_β、抗Ｂ細胞活性化因
子、抗アルファ－４インテグリン、抗ＢＡＧＥ、抗β－カテニン／ｍ、抗Ｂｃｒ－ａｂｌ
、抗Ｃ５、抗ＣＡ１２５、抗ＣＡＭＥＬ、抗ＣＡＰ－１、抗ＣＡＳＰ－８、抗ＣＤ４、抗
ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２５、抗ＣＤＣ２７／ｍ、抗ＣＤ３０、抗Ｃ
Ｄ３３、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ８０、抗ＣＤＫ４／ｍ、抗ＣＥＡ、抗ＣＴ、抗
ＣＴＬ４、抗Ｃｙｐ－Ｂ、抗ＤＡＭ、抗ＥＧＦＲ、抗ＥｒｂＢ３、抗ＥＬＦ２Ｍ、抗ＥＭ
ＭＰＲＩＮ、抗ＥｐＣａｍ、抗ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、抗ＨＥＲ２、抗Ｇ２５０、抗ＧＡＧ
Ｅ、抗ＧｎＴ－Ｖ、抗Ｇｐ１００、抗ＨＡＧＥ、抗ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、抗ＨＬＡ－Ａ^＊
０２０１－Ｒ１７０Ｉ、抗ＩＧＦ－１Ｒ、抗ＩＬ－２Ｒ、抗ＩＬ－５、抗ＭＣ１Ｒ、抗ミ
オシン／ｍ、抗ＭＵＣ１、抗ＭＵＭ－１、－２、－３、抗プロテイナーゼ－３、抗ｐ１９
０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、抗Ｐｍｌ／ＲＡＲα、抗ＰＲＡＭＳ、抗ＰＳＡ、抗ＰＳＭ、
抗ＰＳＭＡ、抗ＲＡＧＥ、抗ＲＡＮＫＬ、抗ＲＵ１またはＲＵ２、抗ＳＡＧＥ、抗ＳＡＲ
Ｔ－１または抗ＳＡＲＴ－３、抗サバイビン、抗ＴＥＬ／ＡＭＬ１、抗ＴＰＩ／ｍ、抗Ｔ
ＲＰ－１、抗ＴＲＰ－２、抗ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、及び抗ＶＥＧＦまたは抗ＶＥＧＦ受
容体が挙げられる。

【0056】

重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ
本発明によれば、抗体（例えば、無傷抗体及び抗体断片）は、細胞及び生体内での外因
性ｍＲＮＡ翻訳を通して細胞または生体内で産生させてもよい。特に、本発明によれば、
完全に構築された多連鎖抗体の産生は、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする外因性ｍＲＮＡ
を送達することによって、細胞または生体内で達成することができる。いくつかの実施形
態では、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する四量体が産生される。

【0057】

本明細書で使用される場合、用語「重鎖」は、異なるクラスの免疫グロブリンの全種類
の天然重鎖を包含し、例えば、ＩｇＭ（μ）、ＩｇＤ（δ）、ＩｇＧ（γ）、ＩｇＡ（α
）、及びＩｇＥ（ε）、並びにその生物活性変種が挙げられ、但しそれに限定されない。
典型的には、本発明の重鎖は、抗原認識を担うＮ末端可変領域を含有し、典型的には、４
つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ２、及びＦＲ４）によって分けられた、
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。典型的には、Ｎ－末端可変領域は約１００～
１１０またはそれ以上のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態では、本発明の重鎖は
定常領域（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及び／またはＣ_Ｈ３）の１つまたは複数を含有する
。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡは、長さが０．３ｋｂ、０
．５ｋｂ、０．７５ｋｂ、１．０ｋｂ、１．２５ｋｂ、１．５ｋｂ、１．７５ｋｂ、２．
０ｋｂ、２．５ｋｂ、３．０ｋｂ、３．５ｋｂ、４．０ｋｂ、またはそれ以上である。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「軽鎖」は、異なるクラスの免疫グロブリンの全種類
の天然軽鎖を包含し、例えば、カッパまたはラムダのアイソタイプ、及びその生物活性変
種が挙げられ、但しそれに限定されない。典型的には、本発明の軽鎖はＮ末端可変領域（
Ｖ_Ｌ）を含む。いくつかの実施形態では、本発明の軽鎖はＣ末端定常領域（Ｃ_Ｌ）を含有
する。いくつかの実施形態では、抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡは、長さが０．１ｋｂ
、０．２ｋｂ、０．３ｋｂ、０．４ｋｂ、０．５ｋｂ、０．６ｋｂ、０．７ｋｂ、０．８
ｋｂ、０．９ｋｂ、１．０ｋｂ、１．２５ｋｂ、１．５ｋｂ、１．７５ｋｂ、２．０ｋｂ
、２．５ｋｂ、若しくは３．０ｋｂ、またはそれ以上である。

【0059】

典型的には、ｍＲＮＡによってコードされる２つの重鎖と２つの軽鎖がそれぞれジスル
フィド架橋によってともに結合されたものを含有する四量体抗体。

【0060】

本発明によれば、抗体の重鎖及び軽鎖は、単一のｍＲＮＡまたは複数の別々のｍＲＮＡ
によってコードし送達してもよい。完全に構築された官能的抗体の産生を最適化するため
に、重鎖をコードするｍＲＮＡと軽鎖をコードするｍＲＮＡとを種々の比で送達すること
が有益であり得ると考えられる。このようにして、いくつかの実施形態では、重鎖をコー
ドするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードするｍＲＮＡ（第２のｍＲＮ
Ａとも称す）とは、約１０：１～１：１０（例えば、約９：１～１：９、８：１～１：８
、７：１～１：７、６：１～１：６、５：１～１：５、４：１～１：４、３：１～１：３
、または２：１～１：２）の範囲内の比で送達される。いくつかの実施形態では、重鎖を
コードするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードするｍＲＮＡ（第２のｍ
ＲＮＡとも称す）とは、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１
、３：１、２：１、または１：１以上の比で送達される。いくつかの実施形態では、重鎖
をコードするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードするｍＲＮＡ（第２の
ｍＲＮＡとも称す）とは、約１：１（即ち、等モル比）の比で送達される。いくつかの実
施形態では、重鎖をコードするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードする
ｍＲＮＡ（第２のｍＲＮＡとも称す）とは、１：１（等モル比）とは別の比で送達される
。例えば、重鎖をコードするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードするｍ
ＲＮＡ（第２のｍＲＮＡとも称す）とは、１より大きい（例えば、約１０：１～１：１、
９：１～１：１、８：１～１：１、７：１～１：１、６：１～１：１、５：１～１：１、
４：１～１：１、３：１～１：１、または２：１～１：１の範囲内の）比で送達される。
あるいは、重鎖をコードするｍＲＮＡ（第１のｍＲＮＡとも称す）と軽鎖をコードするｍ
ＲＮＡ（第２のｍＲＮＡとも称す）とは、１より小さい（例えば、約１：１～１：１０、
１：１～１：９、１：１～１：８、１：１～１：７、１：１～１：６、１：１～１：５、
１：１～１：４、１：１～１：３、または１：１～１：２の範囲内の）比で送達される。

【0061】

シグナルペプチド
いくつかの実施形態では、重鎖及び／または軽鎖をコードするｍＲＮＡはシグナルペプ
チドをコードするヌクレオチド配列を組み込む。本明細書で使用される場合、用語「シグ
ナルペプチド」とは、新しく合成されたタンパク質に存在し、そのタンパク質を分泌経路
に向かわせることができるペプチドを指す。典型的には、シグナルペプチドは、ｍＲＮＡ
の翻訳に続いて、小胞体へ移行した後、切断される。シグナルペプチドは、シグナル配列
、リーダー配列、またはリーダーペプチドとも称される。典型的には、シグナルペプチド
は、短い（例えば、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、または５～１０アミノ酸
長）ペプチドである。シグナルペプチドは、新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在
していてもよい。いずれの特定の理論によっても拘束されることを望むのもではないが、
重鎖及び／または軽鎖をコードするｍＲＮＡ上に、シグナルペプチドをコードする配列を
組み込むことにより、生体内でｍＲＮＡから産生される抗体の分泌及び／または産生が促
進されることがある。

【0062】

本発明で適切なシグナルペプチドは、真核生物及び原核生物の種々のタンパク質、特に
分泌タンパク質から誘導される異種性配列であり得る。いくつかの実施形態では、適切な
シグナルペプチドはロイシンに富む配列である。参照により本明細書に援用されるＹａｍ
ａｍｏｔｏ Ｙ ｅｔ ａｌ．（１９８９），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８：２７２
８－２７３２を参照されたい。適切なシグナルペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）
、血清アルブミンプレプロ蛋白、Ｉｇκ軽鎖前駆体、アズロシジンプレプロ蛋白、シスタ
チンＳ前駆体、トリプシノーゲン２前駆体、カリウムチャネル阻害薬、α－コノトキシン
ｌｐ１．３、α－コノトキシン、α－ガラクトシダーゼ、セルロース、アスパラギン酸プ
ロテイナーゼネペンテシン－１、酸キチナーゼ、Ｋ２８プレプロ毒素、キラー毒素ジゴシ
ン（ｚｙｇｏｃｉｎ）前駆体、及びコレラ毒素から誘導してもよい。例示的なシグナルペ
プチド配列がＫｏｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１１
０：１１６４－７３，２０１２に記載されており、この文献は参照により本明細書に援用
される。

【0063】

いくつかの実施形態では、重鎖及び／または軽鎖をコードするｍＲＮＡは、ヒト成長ホ
ルモン（ｈＧＨ）から誘導されるシグナルペプチドをコードする配列、またはその断片を
組み込んでもよい。ｈＧＨシグナルペプチドをコードする非限定的なヌクレオチド配列を
下に示す。
５’ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）配列（配列番号９）：
AUGGCCACUGGAUCAAGAACCUCACUGCUGCUCGCUUUUGGACUGCUUUGCCUGCCCUGGUUGCAAGAAGGAUCGGCUUU
CCCGACCAUCCCACUCUCC
代替的５’ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）配列（配列番号１０）：
AUGGCAACUGGAUCAAGAACCUCCCUCCUGCUCGCAUUCGGCCUGCUCUGUCUCCCAUGGCUCCAAGAAGGAAGCGCGUU
CCCCACUAUCCCCCUCUCG

【0064】

いくつかの実施形態では、本発明によるｍＲＮＡは、配列番号９または配列番号１０と
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性を有する、シグナ
ルペプチドをコードする配列を組み込んでいてもよい。

【0065】

ｍＲＮＡの合成
本発明によるｍＲＮＡは、種々の既知の方法のいずれによって合成してもよい。例えば
、本発明によるｍＲＮＡは、生体外転写（ＩＶＴ）によって合成してもよい。手短に言え
ば、ＩＶＴは典型的に、プロモーターを含有する線状または環状のＤＮＡ鋳型、リボヌク
レオチド三リン酸のプール、ＤＴＴ及びマグネシウムイオンを含んでいてもよい緩衝系と
、適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７、またはＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ）
、デオキシリボヌクレアーゼＩ、ピロホスファターゼ、及び／またはリボヌクレアーゼ阻
害剤とで実行する。正確な条件は具体的な用途によって異なる。

【0066】

いくつかの実施形態では、抗体をコードする本発明のｍＲＮＡの調製のために、ＤＮＡ
鋳型は生体外で転写される。適切なＤＮＡ鋳型は典型的に、生体外転写のためのプロモー
ター、例えば、Ｔ３、Ｔ７、またはＳＰ６プロモーターと、それに続いて、所望の抗体を
コードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲＮＡのための所望のヌクレオチ
ド配列と、終結シグナルとを有する。

【0067】

本発明による、所望の抗体をコードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲ
ＮＡ配列は、標準的な方法を用いて決定し、ＤＮＡ鋳型の中に組み込んでもよい。例えば
、所望のアミノ酸配列（例えば、所望の重鎖または軽鎖の配列）を起点とし、縮重遺伝暗
号に基づいて仮想逆翻訳を実行する。次いで、最適化アルゴリズムを適切なコドンの選択
に用いてもよい。典型的には、Ｇ／Ｃ含量は、一方では、できるだけ高いＧ／Ｃ含量を達
成するために最適化し、他方では、コドン利用に従ってｔＲＮＡの頻度をできるだけよく
考慮に入れることができる。最適化されたＲＮＡ配列は、確定して、例えば、適切な表示
装置を利用して表示し、最初の（野生型の）配列と比較することができる。また、二次構
造を分析して、ＲＮＡの安定化及び不安定化の特性またはそれぞれの領域を計算すること
もできる。

【0068】

本発明のｍＲＮＡは無修飾または修飾ｍＲＮＡとして合成してもよい。典型的には、ｍ
ＲＮＡは、安定性を向上させるように修飾される。ｍＲＮＡの修飾といった場合、例えば
、ＲＮＡのヌクレオチドの修飾を含むことができる。こうして、本発明の修飾ｍＲＮＡは
、例えば、主鎖修飾、糖修飾、または塩基修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、抗
体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、例えば、以
下に限定されないが、プリン（アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ））またはピリミジン（チ
ミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ））、並びに、修飾ヌクレオチド類似体また
はプリン及びピリミジンの誘導体としては、例えば、１－メチル－アデニン、２－メチル
－アデニン、２－メチルチオ－Ｎ－６－イソペンテニル－アデニン、Ｎ６－メチル－アデ
ニン、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン、２－チオ－シトシン、３－メチル－シトシン、
４－アセチル－シトシン、５－メチル－シトシン、２，６－ジアミノプリン、１－メチル
－グアニン、２－メチル－グアニン、２，２－ジメチル－グアニン、７－メチル－グアニ
ン、イノシン、１－メチル－イノシン、プソイドウラシル（５－ウラシル）、ジヒドロ－
ウラシル、２－チオ－ウラシル、４－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチ
ル－２－チオ－ウラシル、５－（カルボキシヒドロキシメチル）－ウラシル、５－フルオ
ロ－ウラシル、５－ブロモ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル、
５－メチル－２－チオ－ウラシル、５－メチル－ウラシル、Ｎ－ウラシル－５－オキシ酢
酸メチルエステル、５－メチルアミノメチル－ウラシル、５－メトキシアミノメチル－２
－チオ－ウラシル、５’－メトキシカルボニルメチル－ウラシル、５－メトキシ－ウラシ
ル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、１－
メチル－プソイドウラシル、ケウオシン、β－Ｄ－マンノシル－ケウオシン（ｑｕｅｏｓ
ｉｎｅ）、ウィブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、及びホスホルアミデート（
ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド、メチ
ルホスホネート、７－デアザグアノシン、５－メチルシトシン、及びイノシン等、天然の
ヌクレオチド及び／またはヌクレオチド類似体（修飾ヌクレオチド）から合成してもよい
。かかる類似体の調製は、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号、米国特許第４，４
０１，７９６号、米国特許第４，４１５，７３２号、米国特許第４，４５８，０６６号、
米国特許第４，５００，７０７号、米国特許第４，６６８，７７７号、米国特許第４，９
７３，６７９号、米国特許第５，０４７，５２４号、米国特許第５，１３２，４１８号、
米国特許第５，１５３，３１９号、米国特許第５，２６２，５３０号、及び第５，７００
，６４２号から、当業者に既知であり、これらの開示は参照によりその全範囲が本明細書
に援用される。

【0069】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）はＲＮＡ主鎖修飾を含有していてもよい。典型的には、主鎖修飾は、ＲＮ
Ａに含有されるヌクレオチドの主鎖のリン酸が化学的に修飾される修飾である。典型的に
は、例示的な主鎖修飾としては、以下に限定されないが、メチルホスホネート、メチルホ
スホルアミデート、ホスホルアミデート、ホスホロチオエート（例えば、シチジン５’－
Ｏ－（１－チオリン酸））、ボラノリン酸、正電荷グアニジウム基等からなる群の修飾が
挙げられ、このことは、ホスホジエステル結合を他のアニオン性、カチオン性または中性
基によって置換することによるということを意味する。

【0070】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）は糖修飾を含有してもよい。典型的な糖修飾は、それが含有するヌクレオ
チドの糖の化学修飾であり、以下に限定されないが、２’－デオキシ－２’－フルオロ－
オリゴリボヌクレオチド（２’－フルオロ－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２
’－フルオロ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－デオキシ－２’－デア
ミン（ｄｅａｍｉｎｅ）－オリゴリボヌクレオチド（２’－アミノ－２’－デオキシシチ
ジン５’－三リン酸、２’－アミノ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－
Ｏ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－Ｃ－アルキルオリゴリボ
ヌクレオチド（２’－Ｏ－メチルシチジン５’－三リン酸、２’－メチルウリジン５’－
三リン酸）、２’－Ｃ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、及びそのイソマー（２’－ア
ラシチジン５’－三リン酸、２’－アラウリジン５’－三リン酸）、またはアジド三リン
酸（２’－アジド－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－アジド－２’－デオ
キシウリジン５’－三リン酸）からなる群より選択される糖修飾が挙げられる。

【0071】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）は、ヌクレオチドの塩基の修飾（塩基修飾）を含有してもよい。塩基修飾
を含有する修飾ヌクレオチドは、塩基修飾ヌクレオチドとも呼ばれる。かかる塩基修飾ヌ
クレオチドの例としては、以下に限定されないが、２－アミノ－６－クロロプリンリボシ
ド５’－三リン酸、２－アミノアデノシン５’－三リン酸、２－チオシチジン５’－三リ
ン酸、２－チオウリジン５’－三リン酸、４－チオウリジン５’－三リン酸、５－アミノ
アリルシチジン５’－三リン酸、５－アミノアリルウリジン５’－三リン酸、５－ブロモ
シチジン５’－三リン酸、５－ブロモウリジン５’－三リン酸、５－ヨードシチジン５’
－三リン酸、５－ヨードウリジン５’－三リン酸、５－メチルシチジン５’－三リン酸、
５－メチルウリジン５’－三リン酸、６－アザシチジン５’－三リン酸、６－アザウリジ
ン５’－三リン酸、６－クロロプリンリボシド５’－三リン酸、７－デアザアデノシン５
’－三リン酸、７－デアザグアノシン５’－三リン酸、８－アザアデノシン５’－三リン
酸、８－アジドアデノシン５’－三リン酸、ベンズイミダゾールリボシド５’－三リン酸
、Ｎ１－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｎ１－メチルグアノシン５’－三リン酸、Ｎ
６－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｏ６－メチルグアノシン５’－三リン酸、プソイ
ドウリジン５’－三リン酸、ピューロマイシン５’－三リン酸、またはキサントシン５’
－三リン酸が挙げられる。

【0072】

典型的には、ｍＲＮＡ合成は、Ｎ末端（５’）末端への「キャップ」の付加及びＣ末端
（３’）末端への「尾部」の付加を含む。キャップの存在は、殆どの真核生物細胞に見ら
れるヌクレアーゼに抵抗性を得させる上で重要である。「尾部」の存在は、ｍＲＮＡをエ
キソヌクレアーゼ分解から保護するように働く。

【0073】

このようにして、いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖
及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は５’キャップ構造を含む。５’キャップは、典型的に
は、次の通り付加される：まず、ＲＮＡ末端ホスファターゼが末端リン酸基の１つを５’
ヌクレオチドから取り除き、末端リン酸を２つ残し；次いで、グアノシン三リン酸（ＧＴ
Ｐ）がグアニリルトランスフェラーゼによって末端リン酸に付加され、５’５’５三リン
酸結合を生じさせ：次いで、グアニンの７－窒素がメチルトランスフェラーゼによってメ
チル化される。キャップ構造の例としては、以下に限定されないが、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐ
ｐ（５’（Ａ、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ及びＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇが挙げられ
る。

【0074】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）は３’ポリ（Ａ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端のポリＡ尾部は、
典型的には、約１０～３００アデノシンヌクレオチド（例えば、約１０～２００アデノシ
ンヌクレオチド、約１０～１７５アデノシンヌクレオチド、約１０～１５０アデノシンヌ
クレオチド、約１０～１２５アデノシンヌクレオチド、１０～１００アデノシンヌクレオ
チド、約１０～７５アデノシンヌクレオチド、約２０～７０アデノシンヌクレオチド、ま
たは約２０～６０アデノシンヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態では、抗体をコ
ードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は３’ポリ（Ｃ）尾部
構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端上適切なポリＣ尾部は、典型的に、約１０～２００シト
シンヌクレオチド（例えば、約１０～１５０シトシンヌクレオチド、約１０～１００シト
シンヌクレオチド、約２０～７０シトシンヌクレオチド、約２０～６０シトシンヌクレオ
チド、または約１０～４０シトシンヌクレオチド）を含む。ポリＣ尾部は、ポリＡ尾部に
付加してもよく、ポリＡ尾部と置換してもよい。

【0075】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）は５’及び／または３’非翻訳領域を含む。いくつかの実施形態では、５
’非翻訳領域は、ｍＲＮＡの安定性または翻訳に影響を与える１つまたは複数の要素、例
えば、鉄応答配列を含む。いくつかの実施形態では、５’非翻訳領域は、約５０～５００
ヌクレオチドの長さ（例えば、約５０～４００ヌクレオチドの長さ、約５０～３００ヌク
レオチドの長さ、約５０～２００ヌクレオチドの長さ、または約５０～１００ヌクレオチ
ドの長さ）であってもよい。

【0076】

いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）の５’領域は、シグナルペプチドをコードする配列、例えば、本明細書に
記載のものを含む。特定の実施形態では、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）（例えば、配列番
号９）から誘導されるシグナルペプチドは５’領域に組み込まれる。典型的には、シグナ
ルペプチドをコードする配列（例えば、配列番号９等、ｈＧＨシグナルペプチドをコード
する配列）は、重鎖または軽鎖をコードする配列にＮ末端で直接的または間接的に結合さ
れる。

【0077】

抗ＣＣＬ２の重鎖及び軽鎖をコードする例示的ｍＲＮＡ
非限定的な例として、抗ＣＣＬ２抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡが実施例１
で説明される。重鎖をコードするｍＲＮＡの配列を、５’及び３’ＵＴＲのない場合とあ
る場合とで、それぞれ配列番号１及び配列番号２として下に示す。軽鎖をコードするｍＲ
ＮＡの配列を、５’及び３’ＵＴＲのない場合とある場合とで、それぞれ配列番号３及び
配列番号４として下に示す。
５’及び３’ＵＴＲのない抗ＣＣＬ２重鎖（ＨＣ－αＣＣＬ２）ｍＲＮＡ（配列番号１）
：
AUGGAAUUCGGCCUGAGCUGGCUGUUCCUGGUGGCCAUCCUGAAGGGCGUGCAGUGCCAGGUCCAGCUGGUGCAGUCUGG
CGCCGAAGUGAAGAAACCCGGCUCCUCCGUGAAGGUGUCCUGCAAGGCCUCCGGCGGCACCUUCUCCAGCUACGGCAUCU
CCUGGGUCCGACAGGCCCCAGGCCAGGGCCUGGAAUGGAUGGGCGGCAUCAUCCCCAUCUUCGGCACCGCCAACUACGCC
CAGAAAUUCCAGGGCAGAGUGACCAUCACCGCCGACGAGUCCACCUCCACCGCCUACAUGGAACUGUCCUCCCUGCGGAG
CGAGGACACCGCCGUGUACUACUGCGCCAGAUACGACGGCAUCUACGGCGAGCUGGACUUCUGGGGCCAGGGCACCCUGG
UCACCGUGUCCUCUGCCAAGACCACCCCCCCCUCCGUGUACCCUCUGGCCCCUGGCUCUGCCGCCCAGACCAACUCUAUG
GUCACCCUGGGCUGCCUGGUCAAGGGCUACUUCCCCGAGCCCGUGACCGUGACCUGGAACUCCGGCUCCCUGUCCUCCGG
CGUGCACACCUUCCCUGCCGUGCUGCAGUCCGACCUCUACACCCUGUCCAGCAGCGUGACCGUGCCCUCCUCCACCUGGC
CCUCCGAGACAGUGACCUGCAACGUGGCCCACCCCGCCUCCAGCACCAAGGUGGACAAGAAAAUCGUGCCCCGGGACUGC
GGCUGCAAGCCCUGCAUCUGUACCGUGCCCGAGGUGUCCUCCGUGUUCAUCUUCCCACCCAAGCCCAAGGACGUGCUGAC
CAUCACACUGACCCCCAAAGUGACCUGCGUGGUGGUGGACAUCUCCAAGGACGACCCCGAGGUGCAGUUCAGUUGGUUCG
UGGACGACGUGGAAGUGCACACCGCUCAGACCCAGCCCAGAGAGGAACAGUUCAACUCCACCUUCAGAUCCGUGUCCGAG
CUGCCCAUCAUGCACCAGGACUGGCUGAACGGCAAAGAAUUCAAGUGCAGAGUGAACUCCGCCGCCUUCCCAGCCCCCAU
CGAAAAGACCAUCUCCAAGACCAAGGGCAGACCCAAGGCCCCCCAGGUCUACACCAUCCCCCCACCCAAAGAACAGAUGG
CCAAGGACAAGGUGUCCCUGACCUGCAUGAUCACCGAUUUCUUCCCAGAGGACAUCACCGUGGAAUGGCAGUGGAACGGC
CAGCCCGCCGAGAACUACAAGAACACCCAGCCCAUCAUGGACACCGACGGCUCCUACUUCGUGUACUCCAAGCUGAACGU
GCAGAAGUCCAACUGGGAGGCCGGCAACACCUUCACCUGUAGCGUGCUGCACGAGGGCCUGCACAACCACCACACCGAGA
AGUCCCUGUCCCACUCCCCCGGCAAGUGA
５’及び３’ＵＴＲのある抗ＣＣＬ２重鎖（ＨＣ－αＣＣＬ２）ｍＲＮＡ（配列番号２）
：
（５’及び３’ＵＴＲの配列には下線あり）
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCG
GGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGGAAUUCGGCCUGAGCUG
GCUGUUCCUGGUGGCCAUCCUGAAGGGCGUGCAGUGCCAGGUCCAGCUGGUGCAGUCUGGCGCCGAAGUGAAGAAACCCG
GCUCCUCCGUGAAGGUGUCCUGCAAGGCCUCCGGCGGCACCUUCUCCAGCUACGGCAUCUCCUGGGUCCGACAGGCCCCA
GGCCAGGGCCUGGAAUGGAUGGGCGGCAUCAUCCCCAUCUUCGGCACCGCCAACUACGCCCAGAAAUUCCAGGGCAGAGU
GACCAUCACCGCCGACGAGUCCACCUCCACCGCCUACAUGGAACUGUCCUCCCUGCGGAGCGAGGACACCGCCGUGUACU
ACUGCGCCAGAUACGACGGCAUCUACGGCGAGCUGGACUUCUGGGGCCAGGGCACCCUGGUCACCGUGUCCUCUGCCAAG
ACCACCCCCCCCUCCGUGUACCCUCUGGCCCCUGGCUCUGCCGCCCAGACCAACUCUAUGGUCACCCUGGGCUGCCUGGU
CAAGGGCUACUUCCCCGAGCCCGUGACCGUGACCUGGAACUCCGGCUCCCUGUCCUCCGGCGUGCACACCUUCCCUGCCG
UGCUGCAGUCCGACCUCUACACCCUGUCCAGCAGCGUGACCGUGCCCUCCUCCACCUGGCCCUCCGAGACAGUGACCUGC
AACGUGGCCCACCCCGCCUCCAGCACCAAGGUGGACAAGAAAAUCGUGCCCCGGGACUGCGGCUGCAAGCCCUGCAUCUG
UACCGUGCCCGAGGUGUCCUCCGUGUUCAUCUUCCCACCCAAGCCCAAGGACGUGCUGACCAUCACACUGACCCCCAAAG
UGACCUGCGUGGUGGUGGACAUCUCCAAGGACGACCCCGAGGUGCAGUUCAGUUGGUUCGUGGACGACGUGGAAGUGCAC
ACCGCUCAGACCCAGCCCAGAGAGGAACAGUUCAACUCCACCUUCAGAUCCGUGUCCGAGCUGCCCAUCAUGCACCAGGA
CUGGCUGAACGGCAAAGAAUUCAAGUGCAGAGUGAACUCCGCCGCCUUCCCAGCCCCCAUCGAAAAGACCAUCUCCAAGA
CCAAGGGCAGACCCAAGGCCCCCCAGGUCUACACCAUCCCCCCACCCAAAGAACAGAUGGCCAAGGACAAGGUGUCCCUG
ACCUGCAUGAUCACCGAUUUCUUCCCAGAGGACAUCACCGUGGAAUGGCAGUGGAACGGCCAGCCCGCCGAGAACUACAA
GAACACCCAGCCCAUCAUGGACACCGACGGCUCCUACUUCGUGUACUCCAAGCUGAACGUGCAGAAGUCCAACUGGGAGG
CCGGCAACACCUUCACCUGUAGCGUGCUGCACGAGGGCCUGCACAACCACCACACCGAGAAGUCCCUGUCCCACUCCCCC
GGCAAGUGACGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCA
GCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU
５’及び３’ＵＴＲのない抗ＣＣＬ２軽鎖（ＬＣ－αＣＣＬ２）ｍＲＮＡ（配列番号３）
：
AUGGAAACCCCUGCCCAGCUGCUGUUCCUGCUGCUGCUGUGGCUGCCUGAUACCACCGGCGAAAUCGUGCUGACCCAGUC
CCCCGCCACCCUGUCUCUGAGCCCUGGCGAGAGAGCCACCCUGAGCUGCAGAGCCUCCCAGUCCGUGUCCGACGCCUACC
UGGCCUGGUAUCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCUCGGCUGCUGAUCUACGACGCCUCCUCUAGAGCCACCGGCGUGCCC
GCCAGAUUCUCCGGCUCUGGCUCUGGCACCGACUUCACCCUGACCAUCUCCAGCCUGGAACCCGAGGACUUCGCCGUGUA
CUACUGCCACCAGUACAUCCAGCUGCACAGCUUCACCUUCGGCCAGGGCACCAAGGUGGAAAUCAAGGCCGAUGCCGCCC
CUACCGUGUCCAUCUUCCCACCCUCCAGCGAGCAGCUGACCUCUGGCGGCGCUUCCGUCGUGUGCUUCCUGAACAACUUC
UACCCCAAGGACAUCAACGUGAAGUGGAAGAUCGACGGCUCCGAGCGGCAGAACGGCGUGCUGAACUCCUGGACCGACCA
GGACUCCAAGGACAGCACCUACUCCAUGUCCUCCACCCUGACCCUGACCAAGGACGAGUACGAGCGGCACAACUCCUAUA
CCUGCGAGGCCACCCACAAGACCUCCACCUCCCCCAUCGUGAAGUCCUUCAACCGGAACGAGUGCUGA
５’及び３’ＵＴＲのある抗ＣＣＬ２軽鎖（ＬＣ－αＣＣＬ２）ｍＲＮＡ（配列番号４）
：
（５’及び３’ＵＴＲの配列には下線あり）
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCG
GGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACGAUGGAAACCCCUGCCCAGCU
GCUGUUCCUGCUGCUGCUGUGGCUGCCUGAUACCACCGGCGAAAUCGUGCUGACCCAGUCCCCCGCCACCCUGUCUCUGA
GCCCUGGCGAGAGAGCCACCCUGAGCUGCAGAGCCUCCCAGUCCGUGUCCGACGCCUACCUGGCCUGGUAUCAGCAGAAG
CCCGGCCAGGCCCCUCGGCUGCUGAUCUACGACGCCUCCUCUAGAGCCACCGGCGUGCCCGCCAGAUUCUCCGGCUCUGG
CUCUGGCACCGACUUCACCCUGACCAUCUCCAGCCUGGAACCCGAGGACUUCGCCGUGUACUACUGCCACCAGUACAUCC
AGCUGCACAGCUUCACCUUCGGCCAGGGCACCAAGGUGGAAAUCAAGGCCGAUGCCGCCCCUACCGUGUCCAUCUUCCCA
CCCUCCAGCGAGCAGCUGACCUCUGGCGGCGCUUCCGUCGUGUGCUUCCUGAACAACUUCUACCCCAAGGACAUCAACGU
GAAGUGGAAGAUCGACGGCUCCGAGCGGCAGAACGGCGUGCUGAACUCCUGGACCGACCAGGACUCCAAGGACAGCACCU
ACUCCAUGUCCUCCACCCUGACCCUGACCAAGGACGAGUACGAGCGGCACAACUCCUAUACCUGCGAGGCCACCCACAAG
ACCUCCACCUCCCCCAUCGUGAAGUCCUUCAACCGGAACGAGUGCUGACGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGC
CUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU

【0078】

とりわけ、本発明はまた、本明細書に記載の配列と実質的に同一または類似の、抗ＣＣ
Ｌ２抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、抗
ＣＣＬ２抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号１または配列番
号２と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
、またはそれ以上同一であるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ
ＣＬ２抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号１と、少なくとも
５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同
一または相同であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実
施形態では、抗ＣＣＬ２抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号
３または配列番号４と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、またはそれ以上同一であるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施
形態では、抗ＣＣＬ２抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号３
と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ま
たはそれ以上同一または相同であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する
。

【0079】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるｍＲＮＡは、１つまたは複数の修飾ヌ
クレオチド、例えば、本明細書に記載のものを含有する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ
ＣＬ２抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡは、配列の全修飾可能ヌクレオチドのう
ち、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少な
くとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８
０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の修飾ヌクレオチ
ドを含有してもよい。
抗ＶＥＧＦの重鎖及び軽鎖をコードする例示的なｍＲＮＡ
５’及び３’ＵＴＲのない抗ＶＥＧＦ重鎖（ＨＣ－αＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ（配列番号５）
：
AUGGCAACUGGAUCAAGAACCUCCCUCCUGCUCGCAUUCGGCCUGCUCUGUCUCCCAUGGCUCCAAGAAGGAAGCGCGUU
CCCCACUAUCCCCCUCUCGGAGGUUCAGCUGGUCGAAAGCGGGGGCGGCCUCGUCCAGCCAGGUGGAUCCCUCCGCCUGA
GCUGCGCCGCGUCCGGAUACACUUUCACCAACUACGGCAUGAACUGGGUCCGCCAGGCGCCGGGAAAGGGACUGGAAUGG
GUCGGCUGGAUCAAUACCUACACUGGAGAGCCUACCUACGCCGCUGACUUUAAGAGGCGGUUCACUUUCUCACUGGAUAC
UUCCAAGUCAACCGCUUACCUUCAGAUGAAUUCCCUGCGCGCCGAGGAUACCGCAGUGUAUUACUGCGCCAAAUACCCGC
AUUACUACGGCUCCAGCCACUGGUACUUUGACGUGUGGGGUCAAGGAACCCUGGUGACUGUGUCGUCCGCUUCCACCAAG
GGACCAAGCGUGUUUCCACUCGCCCCGAGCUCAAAAUCGACGUCGGGAGGUACUGCCGCACUGGGGUGCUUGGUCAAGGA
CUACUUUCCAGAGCCGGUGACUGUUUCCUGGAACAGCGGAGCGCUCACCUCGGGCGUGCACACCUUCCCUGCGGUGUUGC
AGUCAUCUGGACUGUACUCGCUGUCCAGCGUGGUCACGGUCCCGAGCUCGUCGCUCGGGACCCAAACCUACAUUUGCAAU
GUCAACCACAAGCCAUCGAACACCAAAGUCGACAAGAAGGUGGAACCGAAGUCGUGCGACAAGACUCAUACGUGCCCACC
GUGUCCGGCUCCGGAACUGUUGGGGGGCCCCUCCGUGUUCCUUUUCCCGCCAAAGCCUAAGGACACUCUCAUGAUCUCAC
GGACGCCAGAAGUGACCUGUGUGGUCGUGGAUGUGUCACAUGAGGAUCCGGAAGUCAAAUUCAACUGGUAUGUGGACGGG
GUGGAAGUGCAUAAUGCCAAAACCAAACCUCGCGAGGAGCAGUACAACUCAACCUACCGGGUGGUGUCCGUGCUGACUGU
GCUGCACCAGGACUGGCUGAAUGGAAAGGAGUACAAAUGCAAGGUCAGCAACAAGGCCCUUCCCGCCCCAAUCGAAAAGA
CGAUCUCGAAGGCCAAAGGUCAGCCGCGAGAGCCUCAAGUGUACACUCUGCCGCCGUCAAGAGAAGAAAUGACUAAGAAC
CAAGUUUCCCUCACUUGCCUGGUGAAGGGCUUCUACCCCAGCGACAUCGCAGUGGAAUGGGAGAGCAACGGACAGCCGGA
AAACAACUAUAAGACCACCCCUCCUGUGUUGGACUCGGAUGGUUCCUUCUUCCUUUACAGCAAGCUGACCGUGGAUAAAU
CGCGGUGGCAGCAAGGAAAUGUGUUUUCAUGCUCAGUCAUGCACGAGGCGCUGCACAAUCACUACACUCAGAAGUCCCUG
UCGCUGUCGCCAGGAAAAUAA
５’及び３’ＵＴＲのある抗ＶＥＧＦ重鎖（ＨＣ－αＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ（配列番号６）
：
（５’及び３’ＵＴＲ配列には下線があり、シグナルペプチド配列はイタリック体、太字
である。）

【化1】

５’及び３’ＵＴＲのない抗ＶＥＧＦ軽鎖（ＨＣ－αＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ（配列番号７）
：
AUGGCCACUGGAUCAAGAACCUCACUGCUGCUCGCUUUUGGACUGCUUUGCCUGCCCUGGUUGCAAGAAGGAUCGGCUUU
CCCGACCAUCCCACUCUCCGACAUUCAAAUGACGCAGUCCCCAUCGAGCCUCUCAGCAUCAGUGGGGGAUCGCGUGACUA
UCACUUGCUCGGCGAGCCAGGAUAUCAGCAAUUACCUGAACUGGUAUCAGCAAAAGCCUGGAAAGGCACCGAAGGUGCUG
AUCUACUUCACCUCAAGCCUCCAUUCGGGUGUCCCGUCCCGCUUCAGCGGCUCCGGCUCAGGCACUGACUUCACCCUGAC
UAUCUCCUCGCUGCAACCGGAAGAUUUCGCCACUUACUACUGUCAGCAGUACUCCACCGUGCCUUGGACGUUCGGACAGG
GAACCAAAGUUGAGAUUAAGCGGACGGUCGCGGCCCCCUCCGUGUUUAUCUUUCCGCCUUCGGACGAGCAGCUGAAGUCG
GGAACCGCCUCUGUCGUGUGCCUCCUGAACAACUUCUACCCGCGGGAAGCCAAGGUGCAGUGGAAAGUGGAUAACGCGCU
UCAGAGCGGCAAUUCGCAAGAGUCCGUGACCGAAGAGGACUCGAAGGACUCAACCUACUCCCUCAGCUCAACCCUCACUU
UGUCGAAGGCCGACUACGAGAAGCACAAAGUCUACGCAUGCGAAGUCACCCACCAGGGUCUGUCGAGCCCAGUGACUAAA
UCCUUCAAUAGGGGGGAAUGUUAA
５’及び３’ＵＴＲのある抗ＶＥＧＦ軽鎖（ＨＣ－αＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ（配列番号８）
：
（５’及び３’ＵＴＲ配列には下線があり、シグナルペプチド配列はイタリック体、太字
である。）

【化2】

【0080】

本発明はまた、とりわけ、本明細書に記載の配列と実質的に同一または類似の、抗ＶＥ
ＧＦ抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、抗
ＶＥＧＦ抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号５または配列番
号６と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
、またはそれ以上同一であるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、抗Ｖ
ＥＧＦ抗体の重鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号５と、少なくとも
５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同
一または相同であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実
施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号
７または配列番号８と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、またはそれ以上同一であるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施
形態では、抗ＶＥＧＦ抗体の軽鎖をコードするｍＲＮＡは、本明細書に記載の配列番号７
と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ま
たはそれ以上同一または相同であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する
。

【0081】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるｍＲＮＡは、１つまたは複数の修飾ヌ
クレオチド、例えば、本明細書に記載のものを含有する。いくつかの実施形態では、抗Ｖ
ＥＧＦ抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡは、配列の全修飾可能ヌクレオチドのう
ち、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少な
くとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８
０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の修飾ヌクレオチ
ドを含有してもよい。

【0082】

本明細書で使用される場合、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子間
（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）、及び／またはポリペプチド分子間の全
体的関連性を指す。２つの核酸配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適比較のた
めに２つの配列をアラインメントすることによって実行できる（例えば、最適アラインメ
ントのために第１及び第２の核酸配列の１つまたは両方にギャップを導入したり、比較目
的のために同一でない配列を無視したりすることがある）。所定の実施形態では、比較目
的のためにアラインメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少
なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも
８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。次いで
、対応するヌクレオチド位置のそのヌクレオチドを比較する。第１の配列の或る位置が第
２の配列の対応する位置と同じヌクレオチドで占められている場合、その分子はその位置
で同一である。２つの配列の同一性パーセントは、それら配列が共有する同一性位置の数
の関数であり、２つの配列の最適アラインメントのために導入する必要があるギャップの
数と各ギャップの長さを考慮に入れている。２つの配列間の配列の比較と同一性パーセン
トの決定は数学アルゴリズムを用いて実行することができる。例えば、２つのヌクレオチ
ド配列の間の同一性パーセントは、Ｍｅｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡ
ＢＩＯＳ，１９８９，４：１１－１７）を用いて決定することができ、これは、ＰＡＭ１
２０加重残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナ
ルティー（ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ）、及び４のギャップペナルティー（
ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）を用いたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込
まれている。あるいは、２つのヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａ
ｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いたＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログ
ラムを用いて決定することができる。

【0083】

送達賦形剤
本発明によれば、本明細書に記載の抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖
をコードするｍＲＮＡ）は、裸のＲＮＡとして（包装せず）または送達賦形剤によって送
達してもよい。本明細書で使用される場合、用語「送達賦形剤」、「転移賦形剤」、また
は文法的相当語句は、互換的に使用される。

【0084】

いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡは、単一の送達賦
形剤によって送達してもよい。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードす
るｍＲＮＡは、別々の送達賦形剤によって送達してもよい。例えば、抗体の重鎖及び軽鎖
をコードするｍＲＮＡは、別々に包装して同時に送達してもよい。あるいは、抗体の重鎖
及び軽鎖をコードするｍＲＮＡは、別々に包装して逐次的に送達してもよい。

【0085】

種々の実施形態によれば、適切な送達賦形剤としては、以下に限定されないが、ポリエ
チレンイミン（ＰＥＩ）等のポリマー系担体、脂質ナノ粒子及びリポソーム、ナノリポソ
ーム、セラミド含有ナノリポソーム、プロテオリポソーム、天然及び合成誘導の両エキソ
ソーム、天然・合成・半合成の層状体、ナノ粒子、ケイ酸カルシウム蛍光体ナノ粒子、リ
ン酸カルシウムナノ粒子、二酸化ケイ素ナノ粒子、ナノ結晶粒子、半導体ナノ粒子、ポリ
（Ｄ－アルギニン）、ゾルゲル、ナノデンドリマー、デンプン系送達系、ミセル、乳剤、
ニオソーム、多領域ブロックポリマー（ビニルポリマー、ポリプロピルアクリル酸ポリマ
ー、動的ポリ抱合体）、乾燥粉末製剤、プラスミド、ウイルス、リン酸カルシウムヌクレ
オチド、アプタマー、ペプチド、及びその他ベクタータグが挙げられる。

【0086】

リポソーム性送達賦形剤
いくつかの実施形態では、適切な送達賦形剤はリポソーム性送達賦形剤、例えば、脂質
ナノ粒子である。本明細書で使用される場合、リポソーム性送達賦形剤、例えば、脂質ナ
ノ粒子は通常、外側の媒体から１つまたは複数の二重層の膜によって隔離された内部水分
空間を有する微小な小胞とみなされる。リポソームの二重層膜は典型的に、空間的に隔て
られた親水性領域と疎水性領域を含む合成または天然由来の脂質等、両親媒性分子によっ
て形成される（Ｌａｓｉｃ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：３０７－３
２１，１９９８）。リポソームの二重層膜は、両染性ポリマー及び界面活性剤（例えば、
ポリマーソーム（ｐｏｌｙｍｅｒｏｓｏｍｅ）、ニオソーム等）によって形成することも
できる。本発明との関連においては、リポソーム性送達賦形剤は典型的に、所望のｍＲＮ
Ａを標的細胞または組織に輸送するよう働く。所望のｍＲＮＡをリポソームに組み込む過
程はしばしば「挿入」と称される。例示的な方法がＬａｓｉｃ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．，３１２：２５５－２５８，１９９２に記載されており、これは参照により
本明細書に援用される。リポソームに組み込んだ核酸は、リポソームの内部空間内に位置
していても、リポソームの二重層膜内に完全または部分的に位置していても、リポソーム
膜の外側表面に会合していてもよい。リポソームの中への核酸の組込みは、本明細書では
「被包」とも称され、それは、核酸が全体的にリポソームの内部空間内に含有されること
をいう。ｍＲＮＡを転移賦形剤、例えば、リポソームに組み込む目的はしばしば、核酸を
分解させる酵素若しくは化学薬品、及び／または核酸の迅速な排出を引き起こす系若しく
は受容体を含有することがある環境から核酸を保護することである。したがって、いくつ
かの実施形態では、適切な送達賦形剤は、そこに含有されるｍＲＮＡの安定性を高め、標
的細胞または組織へのｍＲＮＡの送達を促進することができる。

【0087】

いくつかの実施形態では、適切な送達賦形剤は脂質ナノ粒子として製剤化される。本明
細書で使用される場合、語句「脂質ナノ粒子」とは、１つまたは複数の脂質（例えば、カ
チオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系の脂質、及びＰＥＧ修飾脂質）を含
む送達賦形剤を指す。意図する脂質ナノ粒子は、１つまたは複数のカチオン性脂質、非カ
チオン性脂質、コレステロール系の脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を使った種々の比の多成分
の脂質混合物を含むことによって調製してもよい。適切な脂質の例としては、例えば、ホ
スファチジル化合物（例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホ
スファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド
、及びガングリオシド）が挙げられる。

【0088】

本発明の所定の実施形態では、担体は、ポリマーを担体として単独または他の担体と組
み合わせて用いて製剤化する。適切なポリマーとしては、例えば、ポリアクリレート、ポ
リアルキシアノアクリレート（ｐｏｌｙａｌｋｙｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリ乳
酸、ポリ乳酸ポリグリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、デキストラン、アルブミ
ン、ゼラチン、アルジネート、コラーゲン、キトサン、シクロデキストリン、プロタミン
、ペグ化プロタミン、ＰＬＬ、ペグ化ＰＬＬ、及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が挙げ
られる。ＰＥＩが存在する場合、それは、１０～４０ｋＤＡの範囲にある分子量の分岐Ｐ
ＥＩ、例えば、２５ｋＤａ分岐ＰＥＩ（Ｓｉｇｍａ ＃４０８７２７）であってもよい。

【0089】

いくつかの実施形態では、適切な送達賦形剤はカチオン性脂質を含有する。本明細書で
使用される場合、語句「カチオン性脂質」とは、生理的ｐＨ等、選ばれたｐＨで正味の正
電荷を有する或る数の脂質種のいずれかを指す。いくつかのカチオン性脂質は、文献に記
載されており、その多くは市販されている。本発明の組成物及び方法での使用に特に適切
なカチオン性脂質としては、国際特許公報ＷＯ２０１０／０５３５７２（そして特に、段
落［００２２５］に記載されるＣＩ２－２００）及びＷＯ２０１２／１７０９３０に記載
されるものが挙げられ、その両方は参照により本明細書に援用される。所定の実施形態で
は、本発明の組成物及び方法は、例えば、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－
（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テトラコサ－１５，１８
－ジエン－１－アミン（ＨＧＴ５０００）、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６
－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テトラコサ－４，１
５，１８－トリエン－ｌ－アミン（ＨＧＴ５００１）、及び（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ
－ジメチル－６－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）テト
ラコサ－５，１５，１８－トリエン－１－アミン（ＨＧＴ５００２）等、２０１２年３月
２９日出願の米国仮特許出願第６１／６１７，４６８号（参照により本明細書に援用され
る）に記載のイオン化可能カチオン性脂質を含む脂質ナノ粒子を用いる。

【0090】

いくつかの実施形態では、カチオン性脂質Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プ
ロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－塩化トリメチルアンモニウムまたは「ＤＯＴＭＡ」が用いられる
（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４，７
４１３（１９８７）；米国特許第４，８９７，３５５号）。ＤＯＴＭＡは、単独で製剤化
するか、中性脂質、ジオレオイルホスファチジル－エタノールアミン即ち「ＤＯＰＥ」、
または他のカチオン性若しくは非カチオン性脂質と組み合わせて、リポソーム性転移賦形
剤または脂質ナノ粒子にすることができ、かかるリポソームを用いて標的細胞への核酸の
送達を向上させることができる。他の適切なカチオン性脂質としては、例えば、５－カル
ボキシスペルミルグリシンジオクタデシルアミド即ち「ＤＯＧＳ」、２，３－ジオレイル
オキシ－Ｎ－［２（スペルミン－カルボキシアミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－
プロパナミニウム即ち「ＤＯＳＰＡ」（Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．’ｌ
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，６９８２（１９８９）；米国特許第５，１７１，６７８号；
米国特許第５，３３４，７６１号）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム
－プロパン即ち「ＤＯＤＡＰ」、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－
プロパン即ち「ＤＯＴＡＰ」が挙げられる。意図するカチオン性脂質としてはまた、１，
２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン即ち「ＤＳＤＭＡ」、
１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン即ち「ＤＯＤＭＡ」
、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン即ち「ＤＬｉｎ
ＤＭＡ」、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン即ち「
ＤＬｅｎＤＭＡ」、塩化Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウム即ち「ＤＯＤＡ
Ｃ」、臭化Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウム即ち「ＤＤＡＢ」、臭
化Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒド
ロキシエチルアンモニウム即ち「ＤＭＲＩＥ」、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－
５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（シス，シス－９，１２－オ
クタデカジエンオキシ）プロパン即ち「ＣＬｉｎＤＭＡ」、２－［５’－（コレスト－５
－エン－３－ベータ－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－１－（
シス，シス－９’，１－２’－オクタデカジエンオキシ）プロパン即ち「ＣｐＬｉｎＤＭ
Ａ」、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン即ち「ＤＭＯＢＡ」
、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン即ち「ＤＯｃ
ａｒｂＤＡＰ」、２，３－ジリノレオイルオキシ－Ν，Ν－ジメチルプロピルアミン即ち
「ＤＬｉｎＤＡＰ」、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノ
プロパン即ち「ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ」、１，２－ジリノレオイルカルバミル－３－ジ
メチルアミノプロパン即ち「ＤＬｉｎＣＤＡＰ」、２，２－ジリノレイル－４－ジメチル
アミノメチル－［１，３］－ジオキソラン即ち「ＤＬｉｎ－－ＤＭＡ」、２，２－ジリノ
レイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン即ち「ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｘ
ＴＣ２－ＤＭＡ」、及び２－（２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－
ジエン－１－イル）－１，３－ジオキソラン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタンアミ
ン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ））（ＷＯ２０１０／０４２８７７；Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８：１７２－１７６（２０１０）を参照の
こと）、またはその混合物が挙げられる。（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏ
ｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０７：２７６－２８７（２００５）；Ｍｏｒｒｉ
ｓｓｅｙ，ＤＶ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（８）：１００
３－１００７（２００５）；ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／１２１３４８Ａ１）。

【0091】

いくつかの実施形態では、かかる組成物に存在する１つまたは複数のカチオン性脂質は
、イミダゾール、ジアルキルアミノ、またはグアニジウム成分の少なくとも１つを含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、かかる組成物に存在する１つまたは複数のカチオン性脂質は
、ＸＴＣ（２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラ
ン）、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８
，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート），ＡＬＮＹ－１
００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－
オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３
］ジオキソｌ－５－アミン））、ＮＣ９８－５（４，７，１３－トリス（３－オキソ－３
－（ウンデシルアミノ）プロピル）－Ｎ１，Ｎ１６－ジウンデシル－４，７，１０，１３
－テトラアザヘキサデカン－１，１６－ジアミド）、ＤＯＤＡＰ（１，２－ジオレイル－
３－ジメチルアンモニウムプロパン）、ＨＧＴ４００３（ＷＯ２０１２／１７０８８９、
この文献の教示はその全体が参照により本明細書に援用される）、ＩＣＥ（ＷＯ２０１１
／０６８８１０、この文献の教示はその全体が参照により本明細書に援用される）、ＨＧ
Ｔ５０００（米国仮特許出願第６１／６１７，４６８号、この文献の教示はその全体が参
照により本明細書に援用される）、またはＨＧＴ５００１（シスまたはトランス）（仮特
許出願第６１／６１７，４６８号）、ＷＯ２０１０／０５３５７２に開示されるもの等の
アミノアルコールリピドイド、ＤＯＴＡＰ（１，２－ジオレイル－３－トリメチルアンモ
ニウムプロパン）、ＤＯＴＭＡ（１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアン
モニウムプロパン）、ＤＬｉｎＤＭＡ（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ．；Ｐａｌｍｅｒ，Ｌ．；Ｂｒｅ
ｍｎｅｒ，Ｋ．；ＭａｃＬａｃｈｌａｎ，Ｉ．“Ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｉｄ ｓａｔ
ｕｒａｔｉｏｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ”Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．
Ｒｅｌ．２００５，１０７，２７６－２８７）、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ（Ｓｅｍｐｌ
ｅ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．“Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｃａｔｉｏｎｉｃ
Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｓｉＲＮＡ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ．２０１０，２８，１７２－１７６）、Ｃ１２－２００（Ｌｏｖｅ，Ｋ．Ｔ．ｅｔ ａ
ｌ．“Ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｉｎ
ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ”ＰＮＡＳ ２０１０，１０７，１８６４－１
８６９）から選択される。

【0093】

いくつかの実施形態では、かかる組成物に存在する１つまたは複数のカチオン性脂質は
、ＷＯ２０１３０６３４６８、及び２０１３年１０月２２日出願の米国仮出願第６１／８
９４，２９９号『Ｌｉｐｉｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｏｆ Ｍｅｓｓｅｒｎｇｅｒ ＲＮＡ』に記載のカチオン性脂質であり、両方の文献は参
照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、式Ｉ－ｃ
１－ａ：

【化3】

の化合物またはその薬剤的に許容できる塩を含み、
式中、各Ｒ^２は独立して水素またはＣ_１～３アルキルであり；
各ｑは独立して２～６であり；
各Ｒ’は独立して水素またはＣ_１～３アルキルであり；
各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２アルキルである。

【0094】

いくつかの実施形態では、各Ｒ^２は独立して水素、メチル、またはエチルである。いく
つかの実施形態では、各Ｒ^２は独立して水素またはメチルである。いくつかの実施形態で
は、各Ｒ^２は水素である。

【0095】

いくつかの実施形態では、各ｑは独立して３～６である。いくつかの実施形態では、各
ｑは独立して３～５である。いくつかの実施形態では、各ｑは４である。

【0096】

いくつかの実施形態では、各Ｒ’は独立して水素、メチル、またはエチルである。いく
つかの実施形態では、各Ｒ’は独立して水素またはメチルである。いくつかの実施形態で
は、各Ｒ’は独立して水素である。

【0097】

いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２アルキルである。いくつかの実
施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してｎ－Ｃ_８～１２アルキルである。いくつかの実施形態では
、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_９～１１アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立
してｎ－Ｃ_９～１１アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_１０
アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してｎ－Ｃ_１０アルキルである
。

【0098】

いくつかの実施形態では、各Ｒ^２は独立して水素またはメチルであり；各ｑは独立して
３～５であり；Ｒ’は独立して水素またはメチルであり；各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２ア
ルキルである。

【0099】

いくつかの実施形態では、各Ｒ^２は水素であり；各ｑは独立して３～５であり；各Ｒ’
は水素であり；各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２アルキルである。

【0100】

いくつかの実施形態では、各Ｒ^２は水素であり、各ｑは４であり；各Ｒ’は水素であり
、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２アルキルである。

【0101】

いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は式Ｉ－ｇ：

【化4】

の化合物またはその薬剤的に許容できる塩を含み、式中、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_８～１２ア
ルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してｎ－Ｃ_８～１２アルキルであ
る。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_９～１１アルキルである。いくつかの
実施形態では、各Ｒ^Ｌは独立してｎ－Ｃ_９～１１アルキルである。いくつかの実施形態で
は、各Ｒ^Ｌは独立してＣ_１０アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^Ｌはｎ－Ｃ
_１０アルキルである。

【0102】

特定の実施形態では、提供される組成物としては、カチオン性脂質ｃＫＫ－Ｅ１２、ま
たは（３，６－ビス（４－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジ
ン－２，５－ジオン）が挙げられる。ｃＫＫ－Ｅ１２の構造を下に示す。

【0103】

いくつかの実施形態では、適切な送達賦形剤は、１つまたは複数の非カチオン性脂質を
含有する。いくつかの実施形態では、非カチオン性脂質は中性脂質、即ち、組成物が製剤
化及び／または投与される条件において正味電荷を帯びない脂質である。例示的なかかる
非カチオン性または中性脂質は、ＤＳＰＣ（１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－
３－ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ
コリン）、ＤＯＰＥ（１，２－ジオレイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミ
ン）、ＤＰＰＥ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミ
ン）、ＤＭＰＥ（１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミ
ン）、ＤＯＰＧ（１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ
－グリセロール））、及びコレステロールから選択することができる。

【0104】

コレステロール系のカチオン性脂質の使用もまた、本発明は意図する。かかるコレステ
ロール系のカチオン性脂質は、単独ででも、または他のカチオン性若しくは非カチオン性
脂質と組み合わせても、用いることができる。適切なコレステロール系のカチオン性脂質
としては、例えば、ＤＣ－Ｃｈｏｉ（Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－エチルカルボキシアミドコ
レステロール）、１，４－ビス（３－Ｎ－オレイルアミノ－プロピル）ピペラジン（Ｇａ
ｏ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９，２８０
（１９９１）；Ｗｏｌｆ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２３，１３９（１９
９７）；米国特許第５，７４４，３３５号）、またはＩＣＥが挙げられる。

【0105】

他の実施形態では、適切な脂質ナノ粒子は、米国仮出願第６１／４９４，７４５号にさ
らに記載される通り、切断可能なジスルフィド（Ｓ－Ｓ）官能基を含む、１つまたは複数
のカチオン性脂質若しくは化合物（例えば、ＨＧＴ４００１、ＨＧＴ４００２、ＨＧＴ４
００３、ＨＧＴ４００４、及びＨＧＴ４００５）等、１つまたは複数の切断可能な脂質を
含み、この文献の教示はその全体が参照により本明細書に援用される。

【0106】

加えて、トランスフェクション有効性を向上させることができるいくつかの試薬が市販
されている。適切な例としては、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（ＤＯＴＭＡ：ＤＯＰＥ）（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡ ＩＮＥ（
ＤＯＳＰＡ：ＤＯＰＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２００
０．（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＦＵＧＥＮＥ、ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（ＤＯＧＳ）、
及びＥＦＦＥＣＴＥＮＥが挙げられる。

【0107】

いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、モル比で、転移賦形剤に存在する全脂質
の約１％～約９０％、約２％～約７０％、約５％～約５０％、約１０％～約４０％、また
は好ましくは、転移賦形剤に存在する全脂質の約２０％～約７０％を含んでいてもよい。

【0108】

ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾されたホスホ脂質の使用や、例えば、Ｎ－オク
タノイル－スフィンゴシン－１－［サクシニル（メトキシポリエチレングリコール）－２
０００］（Ｃ８ＰＥＧ－２０００セラミド）等の誘導体化セラミド（ＰＥＧ－ＣＥＲ）等
の誘導体化脂質の使用も本発明は意図し、それは単独で、または好ましくは転移賦形剤（
例えば、脂質ナノ粒子）を含む他の脂質と組み合わせて用いる。意図するＰＥＧ修飾され
た脂質としては、以下に限定されないが、長さがＣ_６～２０のアルキル鎖で脂質に共有結
合する長さが５ｋＤａまでのポリエチレングリコール鎖が挙げられる。かかる成分の添加
は、複雑な凝集を防ぐことがあり、また、循環寿命を伸ばし、標的細胞への脂質核酸組成
物の送達を増加させる手段も提供することがあり（Ｋｌｉｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．（１
９９０）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２６８（１）：２３５－２３７）、あるいはそれら
は、生体内で製剤から外れて急速に交換されるように選択してもよい（米国特許第５，８
８５，６１３号参照）。

【0109】

特に有用な交換可能脂質は、より短いアシル鎖（例えば、Ｃ１４またはＣ１８）を有す
るＰＥＧ－セラミドである。本発明のＰＥＧ修飾されたホスホ脂質及び誘導体化脂質は、
リポソーム性転移賦形剤に存在する全脂質のモル比で約０％～約２０％、約０．５％～約
２０％、約１％～約１５％、約４％～約１０％、または約２％を含んでいてもよい。

【0110】

本発明はまた非カチオン性脂質の使用を意図する。本明細書で使用される場合、語句「
非カチオン性脂質」は、いずれの中性、両性イオン性、またはアニオン性脂質をも指す。
本明細書で使用される場合、語句「アニオン性脂質」は、生理的ｐＨ等、選ばれたＨで正
味負電荷を帯びるいくつかの脂質種のいずれをも指す。非カチオン性脂質としては、以下
に限定されないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホ
スファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、
ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジル
グリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）
、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル
－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノ
ールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（Ｄ
ＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミ
リストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エ
タノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１
８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールア
ミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（ＳＯＰＥ）、コレステロー
ル、またはその混合物が挙げられる。かかる非カチオン性脂質は単独で用いてもよいが、
好ましくは、他の賦形剤、例えば、カチオン性脂質と組み合わせて用いる。カチオン性脂
質と組み合わせて用いる場合、非カチオン性脂質は、モル比で、転移賦形剤に存在する全
脂質の５％～約９０％、または好ましくは約１０％～約７０％を含む。

【0111】

特定の実施形態では、適切な転移賦形剤（例えば、脂質ナノ粒子）は、多層脂質及び／
またはポリマー成分によって調製する。例えば、転移賦形剤は、Ｃ１２－２００、ＤＯＰ
Ｅ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋを４０：３０：２５：５のモル比で、またはＤ
ＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋを１８：５６：２０：６のモ
ル比で、またはＨＧＴ５０００、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋを４０
：２０：３５：５のモル比で、またはＨＧＴ５００１、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭ
Ｇ－ＰＥＧ２Ｋを４０：２０：３５：５のモル比で用いて調製してもよい。それぞれ脂質
ナノ粒子を含むカチオン性脂質、非カチオン性脂質、及び／またはＰＥＧ修飾脂質の選択
、及びかかる脂質の相互に対する相対モル比は、選択される脂質の特性、意図する標的細
胞の性質、送達するｍＲＮＡの特性に基づく。追加的検討事項としては、例えば、アルキ
ル鎖の飽和、及び選択される脂質の大きさ、荷電、ｐＨ、ｐＫａ、膜融合性（ｆｕｓｏｇ
ｅｎｉｃｉｔｙ）、及び毒性が挙げられる。このようにして、モル比はそれに応じて調整
してもよい。例えば、実施形態では、脂質ナノ粒子中のカチオン性脂質のパーセンテージ
は、１０％より多く、２０％より多く、３０％より多く、４０％より多く、５０％より多
く、６０％より多く、または７０％より多くてもよい。脂質ナノ粒子中の非カチオン性脂
質のパーセンテージは５％より多く、１０％より多く、２０％より多く、３０％より多く
、または４０％より多くてもよい。脂質ナノ粒子中のコレステロールのパーセンテージは
１０％より多く、２０％より多く、３０％より多く、または４０％より多くてもよい。脂
質ナノ粒子中のＰＥＧ修飾された脂質のパーセンテージは１％より多く、２％より多く、
５％より多く、１０％より多く、または２０％より多くてもよい。

【0112】

所定の実施形態では、本発明の適切な脂質ナノ粒子は次のカチオン性脂質の少なくとも
１つを含む：Ｃ１２－２００、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ、ＤＯＤＡＰ、ＨＧＴ４００３
、ＩＣＥ、ＨＧＴ５０００、またはＨＧＴ５００１。いくつかの実施形態では、適切な転
移賦形剤はコレステロール及び／またはＰＥＧ修飾された脂質を含む。いくつかの実施形
態では、適切な転移賦形剤はＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋを含む。いくつかの実施形態では、適切
な転移賦形剤は次の脂質の組合せの１つを含む：Ｃ１２－２００、ＤＯＰＥ、コレステロ
ール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＤＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２
Ｋ；ＨＧＴ５０００、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＨＧＴ５００１
、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ；ＸＴＣ、ＤＳＰＣ、コレステロール
、ＰＥＧ－ＤＭＧ；ＭＣ３、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＰＥＧ－ＤＭＧ；及びＡＬＮＹ
－１００、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＰＥＧ－ＤＳＧ。

【0113】

本発明の組成物に用いるリポソーム性転移賦形剤は、当技術分野で現在既知の種々の技
術によって調製できる。多層状小胞（ＭＬＶ）は、従来の技術、例えば、適切な溶媒に脂
質を溶解させ、次いで容器の内側で溶媒を蒸発させて薄膜を残留させることによって、ま
たはスプレー乾燥によって、選択した脂質を適切な容器の内壁に堆積させることで、調製
してもよい。次いで、ＭＬＶの形成を生じさせる渦運動をさせながら水相を容器に加えて
もよい。次いで、単層の小胞（ＵＬＶ）を、多層状の小胞の均質化、超音波処理、または
押出しによって形成することができる。加えて、単層の小胞を洗浄剤除去技術によって形
成することができる。

【0114】

本発明の所定の実施形態では、本発明の組成物は転移賦形剤を含み、ｍＲＮＡが転移賦
形剤の表面にも会合し、同じ転移賦形剤内にも被包される。例えば、本発明の組成物の調
製中、カチオン性リポソーム性転移賦形剤は、静電相互作用を通してｍＲＮＡに会合して
もよい。例えば、本発明の組成物の調製中、カチオン性リポソーム性転移賦形剤は、静電
相互作用を通してｍＲＮＡに会合してもよい。

【0115】

本発明による適切なリポソーム性送達賦形剤は種々の大きさで作製してもよい。適切な
大きさの選択は、標的細胞または組織の部位と、ある程度までは作製しているリポソーム
の用途とを考慮に入れてもよい。いくつかの実施形態では、リポソーム性送達賦形剤の適
切な大きさを、ｍＲＮＡによってコードされる抗体の全身的分布を促進するように選択す
る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのトランスフェクションを所定の細胞または組織
に限定することが望ましい場合がある。例えば、リポソーム性転移賦形剤の寸法が、肝臓
の肝類洞を覆う内皮層の開窓よりも小さくなるように、リポソーム性転移賦形剤の大きさ
を標的肝細胞に合わせてもよく；それに従って、リポソーム性転移賦形剤はかかる内皮の
開窓を容易に透過して標的肝細胞に達することができる。あるいは、リポソーム性転移賦
形剤は、リポソームの寸法が充分な直径をもって所定の細胞または組織への分布を制限す
るか特に避けるように、大きさを合わせてもよい。例えば、リポソーム性転移賦形剤は、
その寸法が、肝類洞を覆う内皮の層の開窓より大きく、それによって肝細胞へのリポソー
ム性転移賦形剤の分布を制限するように、大きさを合わせてもよい。

【0116】

いくつかの実施形態では、適切なリポソーム性送達賦形剤は約２５０ｎｍ（例えば、約
２２５ｎｍ、２００ｎｍ、１７５ｎｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１００ｎｍ、７５ｎｍ
、または５０ｎｍの範囲）以下の大きさを有する。いくつかの実施形態では、適切なリポ
ソーム性送達賦形剤は、約２５０～１０ｎｍの範囲（例えば、約２２５～１０ｎｍ、２０
０～１０ｎｍ、１７５～１０ｎｍ、１５０～１０ｎｍ、１２５～１０ｎｍ、１００～１０
ｎｍ、７５～１０ｎｍ、または５０～１０ｎｍの範囲）の大きさを有する。いくつかの実
施形態では、適切なリポソーム性送達賦形剤は、約２５０～１００ｎｍの範囲（例えば、
約２２５～１００ｎｍ、２００～１００ｎｍ、１７５～１００ｎｍ、１５０～１００ｎｍ
の範囲）の大きさを有する。いくつかの実施形態では、適切なリポソーム性送達賦形剤は
約１００～１０ｎｍの範囲（例えば、約９０～１０ｎｍ、８０～１０ｎｍ、７０～１０ｎ
ｍ、６０～１０ｎｍ、または５０～１０ｎｍの範囲）の大きさを有する。

【0117】

リポソーム性転移賦形剤の集団の大きさを調整するには、当技術分野で既知の種々の代
替的方法が利用できる。１つのかかる大きさ調整方法が米国特許第４，７３７，３２３号
に記載され、それは参照により本明細書に援用される。バス（ｂａｔｈ）またはプローブ
（ｐｒｏｂｅ）超音波処理によってリポソーム懸濁液を超音波処理することで、直径約０
．０５ミクロンよりも小さい小ＵＬＶにまで大きさの漸減が生じる。均質化は、大きいリ
ポソームをより小さいものへと分解するのに剪断エネルギーに依存する他の方法である。
典型的な均質化の手順では、典型的に約０．１～０．５ミクロンの選ばれたリポソームの
大きさが観察されるまで標準的な乳剤ホモジナイザーを通してＭＬＶを再循環する。リポ
ソーム性小胞の大きさは、参照により本明細書に援用されるＢｌｏｏｍｆｉｅｌｄ，Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１０：４２１－１５０（１９８１）に記
載されるように、準電気光散乱（ｑｕａｓｉ－ｅｌｅｃｔｒｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔ
ｔｅｒｉｎｇ）（ＱＥＬＳ）によって決定してもよい。平均リポソーム直径は、形成され
たリポソームの超音波処理によって減らしてもよい。効率的なリポソーム合成を進めるよ
うに、間欠的な超音波処理サイクルをＱＥＬＳ評価と交互に行ってもよい。

【0118】

ＲＮＡにコードされる抗体の生体内での発現
本発明によれば、本明細書に記載される、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及
び軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、完全に構築された所望の抗体が生体内で発現されるよ
うに、送達を必要とする対象に、送達賦形剤を用いても用いなくても、送達してよい。

【0119】

いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡによってコードされる所望の抗体は、対象内で全身
的に発現される。このことは、最初に抗体を発現して対象の循環系中に入る細胞または組
織から、完全に構築された抗体を分泌することによって達成できる。例えば、抗体をコー
ドするｍＲＮＡとリポソーム性賦形剤を含有する本発明の組成物は、肝臓の細胞中に分布
し、組成物に含まれるｍＲＮＡを肝臓の細胞（例えば、肝細胞）によって送達することと
、続いて発現させることとを促進する。標的肝細胞は、完全に構築された所望の抗体を産
生し分泌して、抗体の全身性分布を生じさせることができる生物学的「貯留所」または「
貯蔵所」として機能することがある。他の実施形態では、肝細胞以外の細胞（例えば、肺
、脾臓、心臓、眼球、または中枢神経系の細胞）は、タンパク質産生のための貯蔵所とし
て働き得る。典型的には、貯留所または貯蔵所細胞からの完全に構築された抗体の持続的
産生及び分泌によって、効率的な全身的分布が起こる。

【0120】

いくつかの実施形態では、所望の抗体をコードするｍＲＮＡが全身的に患者の血清（即
ち、血液）中で発現していることが、投与後、１時間より長く、４時間より長く、６時間
より長く、１２時間より長く、１８時間より長く、２４時間より長く、３０時間より長く
、３６時間より長く、４２時間より長く、４８時間より長く、５４時間より長く、６０時
間より長く、６６時間より長く、７２時間より長く、９６時間より長く、１２０時間より
長く、１４４時間より長く、１６８時間より長く、２週間より長く、３週間より長く、１
ヶ月より長く、または２ヶ月より長く検出できる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡに
よってコードされる抗体の血清濃度は、投与後、約６時間、１２時間、１８時間、２４時
間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、５４時間、６０時間、６６時間、７２時
間、７８時間、８４時間、９０時間、または９６時間でピークレベルに達する。いくつか
の実施形態では、ｍＲＮＡによってコードされる所望の抗体の持続的循環が観察される。
例えば、ｍＲＮＡによってコードされる抗体が全身的に患者の血清（即ち、血液）中で発
現していることが、投与後、１日、２日、３日、４日、５日、１週間、２週間、３週間、
１ヶ月、２ヶ月、またはそれ以上より長く検出されることがある。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡは、抗体の細胞内
発現または局所的分布のために標的細胞または組織に送達してもよい。典型的には、完全
に構築された抗体が、血流等、循環系に入ることなく標的細胞から回りの細胞外液へと産
生され分泌されるときに局所的分布が起こる。本明細書で使用される場合、用語「標的細
胞」または「標的組織」は、抗体をコードするｍＲＮＡが向かい目指すことになる細胞ま
たは組織を指す。例えば、ｍＲＮＡを肝細胞へ送達することが望まれる場合は、肝細胞が
標的細胞となる。本明細書に記載の、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖
をコードするｍＲＮＡ）は、種々の標的細胞または組織、例えば、以下に限定されないが
、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉系
細胞、神経細胞（例えば、髄膜、星状細胞、運動ニューロン、後根神経節及び前角運動ニ
ューロンの細胞）、光受容体細胞（例えば、杆体錐体）、網膜色素性上皮細胞、分泌性細
胞、心臓細胞、脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、β細胞、下垂体細胞
、滑膜表層細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血
球、顆粒球、及び腫瘍細胞に送達してもよい。

【0122】

標的細胞または組織へのｍＲＮＡの送達は、受動的と能動的の両方のターゲティング手
段によって達成してもよい。受動的ターゲティングの現象は、標的細胞による転移賦形剤
の認識を向上させる追加的賦形剤または手段の使用に頼ることなく生体内における転移賦
形剤の自然な分布パターンを活用する。例えば、細網内皮系の細胞による食作用を受ける
転移賦形剤は、肝臓または脾臓に蓄積しやすく、したがって、かかる標的細胞への組成物
の送達を受動的に導く手段を提供することがある。

【0123】

あるいは、標的細胞または組織へのｍＲＮＡの送達は、能動的ターゲティングによって
達成してもよく、これは、転移賦形剤に（共有結合か非共有結合のいずれかで）結合して
所定の標的細胞または標的組織でかかる転移賦形剤の局在化を促進し得る、「ターゲティ
ングリガンド」と本明細書では称される追加的賦形剤の使用を伴う。例えば、ターゲティ
ングは、転移賦形剤中または転移賦形剤上に１つまたは複数の内在ターゲティングリガン
ド（例えば、アポリポタンパク質Ｅ）を包接することを介して、標的細胞または組織への
分布を促進してもよい。標的組織によるターゲティングリガンドの認識は、標的細胞及び
組織中における転移賦形剤及び／またはその含有物の組織分布と細胞取り込みとを積極的
に促進する（例えば、転移賦形剤中または転移賦形剤上にアポリポタンパク質Ｅターゲテ
ィングリガンドを包接することは、肝細胞によって発現する内在性低密度リポタンパク質
受容体に転移賦形剤が認識され結合することを促進する）。本明細書に記載される通り、
本組成物は、標的細胞への組成物の親和性を高めることができるリガンドを含むことがで
きる。ターゲティングリガンドは、製剤化中または製剤化後に脂質粒子の外側二重層に結
合してもよい。これらの方法は、当技術分野で周知である。加えて、いくつかの脂質粒子
製剤は、膜融合ポリマー、例えば、ＰＥＡＡ、赤血球凝集素、他のリポペプチド（米国特
許出願第０８／８３５，２８１号及び第６０／０８３，２９４号を参照のこと、これらの
文献は参照により本明細書に援用される）、並びに生体内及び／または細胞内送達に有用
な特徴をもった別のものを用いてもよい。他のいくつかの実施形態では、本発明の組成物
は、トランスフェクション有効性の改善、及び／または関心の標的細胞または組織に対す
る選択性の向上を実証する。したがって、標的細胞または組織に対する組成物及びその含
有核酸の親和性を向上させることができる１つまたは複数のリガンド（例えば、ペプチド
、アプタマー、オリゴヌクレオチド、ビタミン、または他の分子）を含む組成物が意図さ
れる。適切なリガンドは、任意で、転移賦形剤の表面に結合または連結してもよい。いく
つかの実施形態では、ターゲティングリガンドは、転移賦形剤の表面を覆っても、転移賦
形剤の中に被包してもよい。適切なリガンドは、そして、その物理的、化学的、または生
物学的特性（例えば、標的細胞表面標識または特徴の選択的親和性及び／または認識）に
基づいて選択される。細胞特異的標的部位及びその対応するターゲティングリガンドは幅
広く種々にわたる。適切なターゲティングリガンドは、標的細胞に特有の特徴を利用して
、そうして組成物が標的細胞と非標的細胞を区別することができるように選択される。例
えば、本発明の組成物としては、肝細胞の認識または肝細胞に対する親和性を選択的に向
上させる表面標識（例えば、アポリポタンパク質Ｂまたはアポリポタンパク質Ｅ）（その
向上は、例えば、かかる表面標識の認識及びかかる表面標識への結合を受容体を介して行
うことによる）が挙げられる。加えて、ガラクトースをターゲティングリガンドとして用
いると、本発明の組成物を肝実質細胞へ向かわせると考えられ、あるいは、糖残基を含有
するマンノースをターゲティングリガンドとして用いると、本発明の組成物を肝臓内皮の
細胞へ向かわせると考えられる（例えば、肝細胞に存在するアシアロ糖タンパク質受容体
またはマンノース受容体に優先的に結合し得る、糖残基を含有するマンノース）。（Ｈｉ
ｌｌｅｒｙ ＡＭ， ｅｔ ａｌ．“Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｔａｒｇｅ
ｔｉｎｇ： Ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔｓ”（２００２）Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｉｎｃ．を
参照のこと）。転移賦形剤（例えば、脂質ナノ粒子）に存在する成分に接合されたかかる
ターゲティングリガンドの提示は、したがって、標的細胞及び組織における本発明の組成
物の認識及び取り込みを促進する。適切なターゲティングリガンドの例としては、１つま
たは複数のペプチド、タンパク質、アプタマー、ビタミン、及びオリゴヌクレオチドが挙
げられる。

【0124】

本明細書で使用される場合、用語「対象」とは、いずれの動物（例えば、哺乳動物）を
も指し、以下に限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、及びその類似動物が挙
げられ、それに本発明のｍＲＮＡ及び組成物が投与される。典型的には、用語「対象」及
び「患者」は、本明細書ではヒト対象に関連して互換的に用いられる。

【0125】

医薬組成物及び投与
生体内で抗体の発現を促進するために、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び
軽鎖をコードするｍＲＮＡ）及び送達賦形剤は、１つまたは複数の追加的核酸、担体、タ
ーゲティングリガンド、若しくは安定化試薬と組み合わせて、または薬理学的組成物中で
適切な賦形剤と混合して、製剤化することができる。薬物の製剤化及び投与の技術は、“
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃ
ｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，最新版、に見ることができ
る。

【0126】

抗体をコードするｍＲＮＡ及びそれを含有する組成物は、対象の臨床症状、投与の部位
と方法、投与の日程計画、対象の年齢、性別、体重、及び臨床家の当業者にとって妥当な
他の要素を考慮に入れて、現行の医療慣行に従って投与及び服用してもよい。本明細書に
記載の目的のための「有効量」は、実験的臨床研究、薬理学的、臨床的、及び医学的な技
術分野の当業者に既知となっているような妥当な検討事項によって決定してもよい。いく
つかの実施形態では、投与される量は、疾患の進行、後退、または改善の適切な尺度とし
て当業者によって選択される症状及び他の指標の、少なくともいくらかの安定化、改善、
または解消を達成するのに有効である。例えば、適切な量と投与計画は、少なくとも一過
性的抗体産生を起こすものである。

【0127】

適切な投与経路としては、例えば、経口投与、直腸内投与、膣内投与、経粘膜投与、気
管内投与若しくは吸入投与等の経肺投与、または腸内投与；非経口的送達、例えば、筋肉
内注射、皮下注射、髄内注射、及び、髄腔内注射、直接脳室内注射、静脈内注射、腹腔内
注射、鼻腔内注射、または眼内注射が挙げられる。

【0128】

あるいは、本発明のｍＲＮＡ及び組成物は、全身的な方法よりはむしろ局所的な方法で
、例えば、標的とする組織の中へ直接医薬組成物を注射することにより、好ましくは持続
的放出製剤形態で、投与してもよい。局所的送達は、どの組織を標的とするかによって、
様々な影響の受け方をすることがあり得る。例えば、本発明の組成物を含有するエアロゾ
ルは、（鼻、気管、または気管支からの送達のために）吸入することができ；本発明の組
成物は、例えば、傷害、疾患発現、または疼痛の部位に注射することができ；組成物は、
口、気管、または食道からの適用のために菓子錠剤で提供することができ；胃または腸へ
の投与のために液体、錠剤、またはカプセルの形式で供給することができ；直腸内または
膣内の適用のために坐薬形式で供給することができ；または、クリーム、ドロップ、また
は注射の使用によって目に送達することさえできる。本発明の組成物を治療分子またはリ
ガンドとともに複合体にして含有する製剤は、例えば、組成物が移入部位から周囲の細胞
に拡散することを可能にできるポリマーや他の構造物または物質に付随させて、外科的に
投与することさえできる。あるいは、それらはポリマーも支持体も使用なしで外科的に適
用することができる。

【0129】

一実施形態では、本発明の組成物は、そこに含有されるｍＲＮＡの持続放出に適切とな
るように製剤化される。かかる持続放出組成物は、投与間隔を伸ばして対象に投与しても
よく便利である。例えば、一実施形態では、本発明の組成物は、１日に２回、１日に１回
、または隔日に、対象に投与する。一好適実施形態では、本発明の組成物は、１週間に２
回、１週間に１回、１０日ごと、２週間ごと、３週間ごと、またはより好ましくは４週間
ごと、１ヶ月に１回、６週間ごと、８週間ごと、隔月、３ヶ月ごと、４ヶ月ごと、６ヶ月
ごと、８ヶ月ごと、９ヶ月ごと、または１年ごとに、対象に投与される。また、長期間に
わたってｍＲＮＡが送達または放出できるよう、貯蔵所投与（例えば、筋肉内、皮下、硝
子体内）を目的として製剤化される組成物及びリポソーム性賦形剤も意図する。好ましく
は、用いられる持続放出手段は、ｍＲＮＡに行われる修飾と組み合わせて、安定性を高め
る。

【0130】

また、本明細書では意図するのは、本明細書に開示のリポソーム性ナノ粒子の１つまた
は複数を含む凍結乾燥した医薬組成物と、例えば、２０１１年６月８日出願の米国仮出願
第６１／４９４，８８２号に開示の、かかる凍結乾燥した組成物の使用のための関連方法
とであり、その文献の教示はその全体が参照により本明細書に援用される。例えば、本発
明による凍結乾燥した医薬組成物は、投与前に再構成してもよく、生体内で再構成するこ
とができる。例えば、凍結乾燥した医薬組成物は、適切な剤形（例えば、ディスク、棒、
または膜等の皮内投与剤形）に製剤化することができ、剤形が個体の体液によって生体内
で時間とともに再水和されるように投与することができる。

【0131】

ＲＮＡによってコードされる抗体の生体外での発現
いくつかの実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコード
するｍＲＮＡ）は、生体外で抗体を産生するために用いてもよい。例えば、細胞を、抗体
をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｍＲＮＡ）によってトランス
フェクトし、細胞による抗体の産生を可能とする細胞培養条件下で培養してもよい。いく
つかの実施形態では、抗体は細胞内で発現される。他の実施形態では、抗体は、それが上
清から採取されるように、細胞によって分泌される。

【0132】

いくつかの実施形態では、哺乳動物の細胞が本発明に従って用いられる。哺乳類細胞の
非限定的な例としては、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／１，ＥＣＡＣＣ Ｎｏ：
８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，オランダ，ライ
デン）；ＳＶ４０（ＣＯＳ－７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）によって形質転換された
サル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎生腎株（ＨＥＫ２９３、または懸濁培養液中で成長するようサ
ブクローニングされた２９３細胞，Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏ
ｌ．，３６：５９，１９７７）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビー
ハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ２１，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター
卵巣細胞＋／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６，１９８０）；マウスセルトリ細胞
（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３－２５１，１９８０
）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（
ＶＥＲＯ－７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１ ５８７）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨｅＬａ，Ａ
ＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファ
ローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１
３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２，ＨＢ ８０６５）；マウ
ス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４－６８
，１９８２）；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝細胞腫株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げ
られる。

【0133】

標準的な細胞培地及び条件を用いて、トランスフェクト細胞を培養し、ｍＲＮＡがコー
ドする所望の抗体を産生させることができる。

【実施例0134】

実施例１ ｍＲＮＡの産生
抗ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２の重鎖（ＨＣ－αＣＣＬ２、配列番号１）
及び抗ＣＣＬ２の軽鎖（ＬＣ－αＣＣＬ２、配列番号２）を、遺伝子をコードするプラス
ミドＤＮＡ鋳型から生体外転写することによって合成し、続いて、既知の方法（Ｆｅｃｈ
ｔｅｒ，Ｐ．；Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，Ｇ．Ｇ．“Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ
ｃａｐ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｂｙ ｖｉｒａｌ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ”Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２００５，８６，１２３９－１２４９を
参照のこと）に従って５’キャップ構造（Ｃａｐ１）を付加し、さらに、長さがゲル電気
泳動で測定して約２００ヌクレオチドの３’ポリ（Ａ）尾部を付加した。ＨＣ－αＣＣＬ
２及びＬＣ－αＣＣＬ２に対する配列は下に示す通りであり、各ｍＲＮＡ産生物に存在す
る５’及び３’非翻訳領域は、それぞれＸ及びＹとして表し、下に定義する：
抗ＣＣＬ２（ＨＣ－αＣＣＬ２）重鎖ｍＲＮＡ：

【化5】

抗ＣＣＬ２（ＬＣ－αＣＣＬ２）軽鎖ｍＲＮＡ：

【化6】

５’及び３’ＵＴＲ配列：
Ｘ_１＝
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCG
GGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG
Ｙ_１＝
CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCC
UAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU

【0135】

実施例２ 生体外ｍＲＮＡトランスフェクション材料及び条件
Ａ．例示的脂質材料
本明細書の実施例においてトランスフェクションに用いられる脂質製剤は、１つ若しく
は複数の脂質からか、または、種々の核酸系材料を被包するよう設計された１つ若しくは
複数のカチオン性脂質、ヘルパー脂質、及びペグ化脂質を種々の比で用いた多成分脂質混
合物からなるものであった。カチオン性脂質としては（他を排除しないが）、ＤＯＴＡＰ
（１，２－ジオレイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン）、ＤＯＤＡＰ（１，２－
ジオレイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン）、ＤＯＴＭＡ（１，２－ジ－Ｏ－オク
タデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン）、ＤＬｉｎＤＭＡ（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ
．；Ｐａｌｍｅｒ，Ｌ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｋ．；ＭａｃＬａｃｈｌａｎ，Ｉ．“Ｃａｔ
ｉｏｎｉｃ ｌｉｐｉｄ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ
ａｃｉｄｓ”Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．２００５，１０７，２７６－２８７を参照のこ
と）、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ（Ｓｅｍｐｌｅ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．“Ｒａｔｉｏｎ
ａｌ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｃａｔｉｏｎｉｃ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｓｉＲＮＡ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ”Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０，２８，１７２－１７６を参
照のこと）、Ｃ１２－２００（Ｌｏｖｅ，Ｋ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．“Ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｓｉｌ
ｅｎｃｉｎｇ”ＰＮＡＳ ２０１０，１０７，１８６４－１８６９）、ＨＧＴ４００３、
ＩＣＥ、ジアルキルアミノ－系、イミダゾール系、グアニジウム系等が挙げられる。ヘル
パー脂質としては（他を排除しないが）、ＤＳＰＣ（１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グ
リセロ－３－ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３
－ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２－ジオレイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノ
ールアミン）、ＤＰＰＥ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノ
ールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノ
ールアミン）、ＤＯＰＧ（２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒ
ａｃ－グリセロール））、コレステロール等が挙げられる。ペグ化脂質は（他を排除しな
いが）、Ｃ_６～Ｃ_２０の長さのアルキル鎖をもった脂質に共有結合した、長さが最大５ｋ
Ｄａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含むことができる。

【0136】

Ｂ．実験的製剤
これらの実験において、Ｃ１２－２００、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ－Ｐ
ＥＧ２Ｋの５０ｍｇ／ｍＬエタノール溶液のアリコートを混合させ、エタノールで希釈し
て最終体積３ｍＬとした。別途、ＨＣ－αＣＣＬ２のｍＲＮＡ及びＬＣ－αＣＣＬ２のｍ
ＲＮＡ（重量：重量で１：１）ｍＲＮＡの水性緩衝液（１０ｍＭのクエン酸／１５０ｍＭ
のＮａＣｌ、ｐＨ４．５）を、５００マイクログラムの各構築物を１ｍｇ／ｍＬの原液か
ら添加することによって調製した。脂質溶液を水性ｍＲＮＡ溶液に素早く注入して振盪す
ると、２０％エタノール中最終懸濁液が得られた。得られたナノ粒子懸濁液をろ過し、１
×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）でダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｅ）し、濃
縮し、２～８℃で保管した。最終濃度＝１．３５ｍｇ／ｍＬ αＣＣＬ２ ｍＲＮＡ（被
包）。Ｚ_ａｖｅ＝８９．２ｎｍ（Ｄｖ_（５０）＝６４．０ｎｍ；Ｄｖ_（９０）＝１１５ｎ
ｍ）。

【0137】

実施例３ 生体外ｍＲＮＡトランスフェクション後の抗体の検出
Ａ．ＥＬＩＳＡによる
この実施例では、Ｆ９６ ＭａｘｉＳｏｒｐ Ｎｕｎｃ－Ｉｍｍｕｎｏ Ｐｌａｔｅｓ
に、ｐＨ９．６の炭酸ナトリウム緩衝液中１μｇ／ｍｌのヤギ抗マウスＩｇＧ１（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ Ａ１０５３８）１００μｌをコーティングし、３７℃で１時間インキュ
ベートした。洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％トウィーン２０）で３回洗浄した後、
３７℃で１時間、ウェルをブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％トウィーン２０
、２％ＢＳＡ）３２０μｌでブロッキングした。モノクローナルＩｇＧ標準物質の系列希
釈物を、２５０～０ｎｇ／ｍｌの範囲でブロッキング緩衝液中に調製した。試料の系列希
釈物を、標準曲線（１：１００～１：１０，０００）の範囲に入るようブロッキング緩衝
液中に調製した。試料と標準の両方を３７℃で１時間インキュベートした。洗浄緩衝液で
３回洗浄した後、ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ ＨＲＰ接合２次抗体（Ｐｉｅｒｃｅ ３１
４３９）を１：４０，０００の希釈で用い、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄緩
衝液で３回洗浄した後、ＴＭＢ ＥＩＡ基質試薬を、製造者の指示に従って調製した。３
７℃で１５分間インキュベーションした後、２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を加えて反応を停止し、プ
レートを４５０ｎｍで読み取った。

【0138】

Ｂ．ウエスタンブロットによる
この実施例では、トランスフェクト２９３Ｔ細胞または電気穿孔ＨＣＬ２細胞からの馴
化培地をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分画し、製造者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の指示に従
い転写装置を用いてポリフッ化ビニリデン膜に転写した。ＴＢＳＴ（１０ｍＭトリス、ｐ
Ｈ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５％トウィーン２０）中５％脱脂粉乳で１時間イ
ンキュベーションした後、膜をＰＢＳＴで３回洗浄し、室温で１時間、ヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａ１０５３８）でインキュベートした。膜をＰＢＳＴ中３
回洗浄し、西洋わさびペルオキシダーゼ接合抗マウス二次抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｗ４０
２１）の１：５０００の希釈物で、室温で１時間インキュベートした。ブロットをＰＢＳ
Ｔでさらに３回洗浄し、製造者の指示に従ってＥＣＬシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅ）で現像した。

【0139】

実施例４ ＨＣ－αＣＣＬ２及びＬＣ－αＣＣＬ２のトランスフェクションから産生さ
れたαＣＣＬ２抗体の生体外分析
ＨＣ－αＣＣＬ２とＬＣ－αＣＣＬ２の両方のｍＲＮＡを実施例１に上述した通り産生
させた。続いて、実施例２Ａ及びＢに従って、ＨＣ－αＣＣＬ２及びＬＣ－αＣＣＬ２の
ｍＲＮＡを、既知の方法に従って、種々の比（重量：重量）でＨＣＬ１（即ち、ヒト細胞
株１）細胞またはＨＣＬ２細胞にトランスフェクトした。

【0140】

ＨＣＬ１細胞及びＨＣＬ２細胞に対するこれらの試験の結果を図１及び２にそれぞれ示
す。α－ＣＣＬ２（ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２）重鎖及び軽鎖のｍＲＮＡ
構築物の種々の混合物を混合し（重量：重量）、ＨＣＬ１細胞（図１）またはＨＣＬ２細
胞（図２）にトランスフェクトした。細胞上清をトランスフェクション後の選択した時点
で採取し、実施例３Ａに上述した通り、ＥＬＩＳＡに基づく方法を用いて抗マウスＩｇＧ
があるかどうか分析した。

【0141】

図１及び２に示す通り、軽鎖に対する重鎖の比（重量：重量）を変えると、ＥＬＩＳＡ
によって測定したタンパク質産生に有意差が生じた。α－ＣＣＬ２のｍＲＮＡにおける重
鎖：軽鎖が１：１（重量：重量）の混合物はＨＣＬ２細胞に強いシグナルをもたらし、４
：１（重量：重量）の比はＨＣＬ１細胞にタンパク質産生の向上をもたらした。比の違い
によって差はあったが、試験した全ての比で強力なタンパク質産生を観察した。さらに、
両方の場合とも、トランスフェクション後４８時間（２日目（Ｄａｙ２）、または２日目
（Ｄ２））で、所望のタンパク質にこの実施例中最も強力なシグナルが得られた。

【0142】

外因性ｍＲＮＡ由来抗体の存在をさらに確認するために、免疫ブロット（ウエスタン）
手法を用いて、ＨＣＬ１由来試料の追加的特性決定を行った（図３参照）。実施例３Ｂに
記載のウエスタンブロット法を用いて、重鎖及び軽鎖の断片を、ｍＲＮＡトランスフェク
トＨＣＬ１細胞の上清中に検出することに成功した。α－ＣＣＬ２重鎖ｍＲＮＡ構築物及
び軽鎖ｍＲＮＡ構築物（重量：重量）の種々の混合物のトランスフェクションの２４時間
後及び４８時間後に試料を分析した。観察した吸収帯強度は各実施例で用いられたｍＲＮ
Ａ比を反映した。

【0143】

実施例５ 静脈内投与したｍＲＮＡ挿入ナノ粒子から産生されたαＣＣＬ２抗体の生体
内分析
この実施例では、完全に処理された抗体の産生を外因性メッセンジャーＲＮＡの送達に
よって生体内で達成し、詳しくは、α－ＣＣＬ２重鎖及び軽鎖それぞれのｍＲＮＡ構築物
（ＨＣ－αＣＣＬ２のｍＲＮＡ：ＬＣ－αＣＣＬ２のｍＲＮＡが１：１（重量：重量））
を実施例２Ａに記載の通りにカチオン性脂質ナノ粒子に被包して、単回ボーラス静脈内注
射としてマウスに送達した。

【0144】

手短に言えば、各実験の開始時に約６～８週齢であったＣＤ－１雄マウスを用いた。被
包したＨＣ－αＣＣＬ２のｍＲＮＡ及びＬＣ－αＣＣＬ２のｍＲＮＡ（重量：重量で１：
１）の試料を、３０マイクログラムの等価全用量を単回ボーラス尾静脈注射することによ
って導入した。マウスを屠殺し、複数の所定の時点で食塩水で灌流した。

【0145】

各マウスの肝臓及び脾臓を採取し、３分割し、１０％中性緩衝液ホルマリンに保管する
かまたは瞬間凍結し（ｓｎａｐ－ｆｒｏｚｅｎ）、分析用として－８０℃で保管した。

【0146】

全ての動物を、用量投与後複数の所定の時点でＣＯ_２による窒息で安楽死させ、続いて
、開胸と終末部心血液収集（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｃａｒｄｉａｃ ｂｌｏｏｄ ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ）を行った。安楽死させた動物に心穿刺をして全血を（得られるだけ最大の
量で）血清分離管中に収集し、常温で少なくとも３０分間凝血させ、９３００ｇ、２２℃
±５℃で１０分間遠心分離し、血清を抽出した。暫定的血液収集として、約４０～５０μ
Ｌの全血を顔面静脈穿刺または尾部切断によって収集した。未処理動物から収集した試料
を、試験動物との比較のため、ベースラインレベルとして用いた。

【0147】

αＣＣＬ２抗体の産生のＥＬＩＳＡ分析のため、Ｆ９６ ＭａｘｉＳｏｒｐ Ｎｕｎｃ
－Ｉｍｍｕｎｏ Ｐｌａｔｅに、ｐＨ９．６の炭酸緩衝液中、１ｍｇ／ｍｌのＭＣＰ－１
組換えウサギ精製モノクローナル抗体１００ｍｌをコーティングし、３７℃で１時間イン
キュベートした。洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％トウィーン２０）で３回洗浄した
後、３７℃で１時間、ウェルをブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％トウィーン
２０、２％ＢＳＡ）３２０ｍｌでブロッキングした。約１００ｎｇ／ｍｌのＭＣＰ－１ヒ
トまたはマウス組換えタンパク質を各ウェルに加えて、３７℃で１時間インキュベートし
た。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、試料の系列希釈物（１：５～１：２００）を加えて、
３７℃で１時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３回洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆ
ｃ ＨＲＰ接合二次抗体を１：４０，０００の希釈で使用し、３７℃で１時間インキュベ
ートした。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、製造者の指示に従ってＴＭＢ ＥＩＡ基質試薬
を調製した。３７℃で１５分間インキュベートした後、２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を加えて反応を
停止し、プレートを４５０ｎｍで読み取った。

【0148】

処理したマウスの血清レベルを投与後の選ばれた時点（６時間後、２４時間後、４８時
間後、７２時間後）で監視した。マウス血清に存在する完全に形成されたα－ヒトＣＣＬ
２抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡに基づく方法を用いて定量化した（図４参照）。所望の外
因性α－ＣＣＬ２ ｍＲＮＡ由来抗体に、投与後６時間以内に顕著な増加が、２４時間後
にピークが観察できる。

【0149】

実施例６ 生体内α－ＶＥＧＦ抗体産生
この実施例では、完全に処理されたα－ＶＥＧＦ抗体の産生を、外因性メッセンジャー
ＲＮＡの送達によって生体内で達成した。

【0150】

ＨＣ－αＶＥＧＦ及びＬＣ－αＶＥＧＦの配列は下に示す通りであり、各ｍＲＮＡ産生
物に存在する５’及び３’非翻訳領域は、それぞれＸ及びＹとして表し、下に定義する：
抗ＶＥＧＦ（ＨＣ－αＶＥＧＦ）重鎖ｍＲＮＡ：

【化7】

抗ＶＥＧＦ（ＬＣ－αＶＥＧＦ）軽鎖ｍＲＮＡ：

【化8】

５’及び３’ＵＴＲ配列：
Ｘ_１（５’ＵＴＲ配列）＝
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCG
GGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG
Ｙ_１（３’ＵＴＲ配列）＝
CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCC
UAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAGCU

【0151】

α－ＶＥＧＦ重鎖及び軽鎖のｍＲＮＡ構築物（ＨＣ－αＶＥＧＦのｍＲＮＡ：ＬＣ－α
ＶＥＧＦのｍＲＮＡが１：１（重量：重量））を下に記載の通りにカチオン性脂質ナノ粒
子に被包した。

【0152】

これらの実験において、ｃＫＫ－Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ－Ｐ
ＥＧ２Ｋの５０ｍｇ／ｍＬエタノール溶液のアリコートを混合させ、エタノールで希釈し
て最終体積３ｍＬとした。別途、ＨＣ－αＣＶＥＧＦのｍＲＮＡ及びＬＣ－αＶＥＧＦの
ｍＲＮＡ（重量：重量で１：１）ｍＲＮＡの水性緩衝液（１０ｍＭのクエン酸／１５０ｍ
ＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．５）を、１ｍｇ／ｍＬの原液から各構築物を５００マイクログラ
ム添加して調製した。脂質溶液を水性ｍＲＮＡ溶液に素早く注入して振ると、２０％エタ
ノール中最終懸濁液が得られた。得られたナノ粒子懸濁液をろ過し、１×ＰＢＳ（ｐＨ７
．４）でダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｅ）し、濃縮し、２～８℃で
保管した。最終濃度＝０．２０ｍｇ／ｍＬ αＶＥＧＦ ｍＲＮＡ（被包）。Ｚ_ａｖｅ＝
８１．０ｎｍ（ＰＤＩ＝０．１６）。

【0153】

ＨＣ－α－ＶＥＧＦ及びＬＣ－α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡを挿入した脂質ナノ粒子を、１
．０ｍｇ／ｋｇの用量で単回静脈内尾静脈注射または皮下注射によって野生型マウスに送
達し、血清中の抗ＶＥＧＦ抗体の産生をＥＬＩＳＡによって時間の経過に対して監視した
。

【0154】

手短に言えば、各実験の開始時に約６～８週齢であったＣＤ－１雄マウスを用いた。被
包したＨＣ－α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡ及びＬＣ－α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡ（重量：重量で
１：１）の試料を、１．０ｍｇ／ｋｇ（約３０マイクログラム）の等価全用量を単回ボー
ラス尾静脈注射することによって導入した。マウスを屠殺し、複数の所定の時点（投与後
０．５０時間、３時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、
１週間、２週間、３週間）で、食塩水で灌流した。

【0155】

全ての動物を、用量投与後複数の所定の時点でＣＯ_２による窒息で安楽死させ、続いて
、開胸と終末部心血液収集（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｃａｒｄｉａｃ ｂｌｏｏｄ ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ）を行った。安楽死させた動物に心穿刺をして全血を（得られるだけ最大の
量で）血清分離管中に収集し、常温で少なくとも３０分間凝血させ、９３００ｇで、２２
℃±５℃で１０分間遠心分離し、血清を抽出した。暫定的血液収集として、約４０～５０
μＬの全血を顔面静脈穿刺または尾部切断によって収集した。未処理動物から収集した試
料を、試験動物との比較のため、ベースラインレベルとして用いた。

【0156】

α－ＶＥＧＦ抗体産生のＥＬＩＳＡ分析のため、Ｆ９６ ＭａｘｉＳｏｒｐ Ｎｕｎｃ
－Ｉｍｍｕｎｏ Ｐｌａｔｅに、コーティング緩衝液（５０ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、ｐＨ９
．６）中０．５０マイクログラム／ｍＬ／ウェルの組換えヒトＶＥＧＦタンパク質（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃ＰＨＣ９３９１）１００マイクロリットルをコーティングした。洗
浄緩衝液で３回洗浄した後、ウェルを、ブロッキング緩衝液（１×ＤＰＢＳ、２％ＢＳＡ
、０．０５％トウィーン－２０）を用いて３７℃で１時間ブロッキングした。上述同様さ
らに洗浄した後、注射されたマウスから収集したマウス血清を各ウェルに加え、ウサギ抗
ヒトＩｇＧ Ｆｃ ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ ＃ＰＡ－２８５８７）接合二次抗体を１：１
０，０００の希釈で使用し、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３回洗浄
し、ＴＭＢ ＥＩＡ基質試薬を製造者の指示に従って調製した。３７℃で１０分間インキ
ュベートした後、２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を加えて反応を停止し、プレートを４５０ｎｍで読み
取った。処理したマウスの血清レベルを投与後の選ばれた時点（例えば、０．５時間、３
時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、８日、及び１５日
）で監視した。図５は、ＨＣ－α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡ及びＬＣ－α－ＶＥＧＦのｍＲＮ
Ａを挿入したナノ粒子の単回投与の後に野生型マウスの血清中に検出したα－ＶＥＧＦ抗
体を表す例示的結果を示す。外因性α－ＶＥＧＦのｍＲＮＡに由来する所望の抗体に、投
与後６時間以内に顕著な増加が、２４時間後にピークが観察でき、α－ＶＥＧＦのｍＲＮ
Ａの単回投与の２週間後にまで継続した。図６は、図５と同じ例示的結果であるが、特定
のマウス番号によってプロットしたものを示す。図７は、静脈内または皮下注射したマウ
スの血清中にその２４時間後に存在するα－ＶＥＧＦ抗体のレベルの比較を示す。

【0157】

この実施例は、ｍＲＮＡに基づく治療が効果的な生体内抗体産生に使用できることのさ
らなる確認を提供する。

【0158】

同等事物及び範囲
当業者は、本明細書に記載する発明の具体的な実施形態の多くの同等事物を認識し、単
に日常的実験を用いてそれを確認することができるものである。本発明の範囲は、上記明
細書に限定されることを意図されておらず、より正確には次の特許請求の範囲に明記する
通りである。
例えば、本発明の特定の実施形態では、以下の項目が提供される。
（項目１）
生体内における抗体の送達方法であって、前記方法は抗体の重鎖及び軽鎖をコードする
１つまたは複数のｍＲＮＡを、送達を必要とする対象に投与することを含み、前記抗体が
前記対象内に全身的に発現される、前記方法。
（項目２）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが、前記抗体の前記重鎖をコードする第１のｍＲＮＡと
前記抗体の前記軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡとを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１０：１～１：１０の範囲の比で存在する、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１～１：４の範囲の比で存在する、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１の比で存在する、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが１より大きい比で存在する、項目２～５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１：１の比で存在する、項目４に記載の方法。
（項目８）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが、前記抗体の前記重鎖及び前記軽鎖の両方をコードす
る単一のｍＲＮＡを含む、項目１または２に記載の方法。
（項目９）
前記抗体の前記重鎖及び前記軽鎖をコードする前記１つまたは複数のｍＲＮＡが１つま
たは複数のリポソームに被包される、項目１～８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが別々のリポソームに被包される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが同じリポソームに被包される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記１つまたは複数のリポソームは、カチオン性脂質、中性脂質、コレステロール系脂
質、及びＰＥＧ修飾された脂質の１つまたは複数を含む、項目９～１１のいずれか一項に
記載の方法。
（項目１３）
前記１つまたは複数のリポソームは約１５０ｎｍ以下の大きさを有する、項目９～１２
のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記１つまたは複数のリポソームは約１００ｎｍ以下の大きさを有する、項目９～１３
のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記１つまたは複数のリポソームは約７５ｎｍ以下の大きさを有する、項目９～１３の
いずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが、安定性を高めるように修飾されている、項目１～１
５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが、修飾ヌクレオチド、キャップ構造、ポリＡ尾部、５
’非翻訳領域、及び／または３’非翻訳領域を含むように修飾されている、項目１６に記
載の方法。
（項目１８）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが無修飾である、項目１～１５のいずれか一項に記載の
方法。
（項目１９）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが静脈内投与される、項目１～１８のいずれか一項に記
載の方法。
（項目２０）
前記１つまたは複数のｍＲＮＡが腹腔内投与される、項目１～１８のいずれか一項に記
載の方法。
（項目２１）
前記抗体の前記全身的発現が、投与後少なくとも約６時間、１２時間、２４時間、３６
時間、４８時間、７２時間、９６時間、または１２０時間で検出可能である、項目１～２
０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記抗体が無傷免疫グロブリン、（Ｆａｂ）_２、（Ｆａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、
またはｓｃＦｖである、項目１～２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記抗体がＩｇＧである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記抗体が抗ＣＣＬ２、抗リシルオキシダーゼ様－２（ＬＯＸＬ２）、抗Ｆｌｔ－１、
抗ＴＮＦ－α、抗インターロイキン－２Ｒα受容体（ＣＤ２５）、抗ＴＧＦ_β、抗Ｂ－細
胞活性化因子、抗アルファ－４インテグリン、抗ＢＡＧＥ、抗β－カテニン／ｍ、抗Ｂｃ
ｒ－ａｂｌ、抗Ｃ５、抗ＣＡ１２５、抗ＣＡＭＥＬ、抗ＣＡＰ－１、抗ＣＡＳＰ－８、抗
ＣＤ４、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２５、抗ＣＤＣ２７／ｍ、抗ＣＤ
３０、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ８０、抗ＣＤＫ４／ｍ、抗ＣＥＡ、
抗ＣＴ、抗ＣＴＬ４、抗Ｃｙｐ－Ｂ、抗ＤＡＭ、抗ＥＧＦＲ、抗ＥｒｂＢ３、抗ＥＬＦ２
Ｍ、抗ＥＭＭＰＲＩＮ、抗ＥｐＣａｍ、抗ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、抗ＨＥＲ２、抗Ｇ２５０
、抗ＧＡＧＥ、抗ＧｎＴ－Ｖ、抗Ｇｐ１００、抗ＨＡＧＥ、抗ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、抗Ｈ
ＬＡ－Ａ^＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、抗ＩＧＦ－１Ｒ、抗ＩＬ－２Ｒ、抗ＩＬ－５、抗ＭＣ
１Ｒ、抗ミオシン／ｍ、抗ＭＵＣ１、抗ＭＵＭ－１、－２、－３、抗プロテイナーゼ－３
、抗ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、抗Ｐｍｌ／ＲＡＲα、抗ＰＲＡＭＳ、抗ＰＳＡ、
抗ＰＳＭ、抗ＰＳＭＡ、抗ＲＡＧＥ、抗ＲＡＮＫＬ、抗ＲＵ１またはＲＵ２、抗ＳＡＧＥ
、抗ＳＡＲＴ－１または抗ＳＡＲＴ－３、抗サバイビン、抗ＴＥＬ／ＡＭＬ１、抗ＴＰＩ
／ｍ、抗ＴＲＰ－１、抗ＴＲＰ－２、抗ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、抗ＶＥＧＦ、及び抗ＶＥ
ＧＦ受容体からなる群より選択される、項目１～２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
抗体の産生方法であって、前記方法は抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡと抗体の
軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡとを細胞に投与することを含み、前記抗体が前記細胞に
よって産生される、前記方法。
（項目２６）
前記細胞が哺乳動物細胞である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記細胞がヒト細胞である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記細胞が培養細胞である、項目２５～２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記細胞が生体内の細胞である、項目２５～２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記抗体が細胞内に発現される、項目２５～２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記抗体が前記細胞によって分泌される、項目２５～３０のいずれか一項に記載の方法
。
（項目３２）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１０：１～１：１０の範囲の比で存在する、項目２５～３１のいずれか一項に記載
の方法。
（項目３３）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１～１：４の範囲の比で存在する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１の比で存在する、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが１より大きい比で存在する、項目２５～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１：１の比で存在する、項目２５～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが１つまたは複数のリポソームに被包される、項目２５～３６のいずれか一項に記載の
方法。
（項目３８）
前記第１のｍＲＮＡと前記第２のｍＲＮＡとが別々のリポソームに被包される、項目３
７に記載の方法。
（項目３９）
前記第１のｍＲＮＡと前記第２のｍＲＮＡとが同じリポソームに被包される、項目３７
に記載の方法。
（項目４０）
前記１つまたは複数のリポソームは、カチオン性脂質、中性脂質、コレステロール系脂
質、及びＰＥＧ修飾脂質の１つまたは複数を含む、項目３７～３９のいずれか一項に記載
の方法。
（項目４１）
抗体の重鎖をコードする第１のｍＲＮＡと軽鎖をコードする第２のｍＲＮＡとを含み、
前記第１のｍＲＮＡと前記第２のｍＲＮＡとが１つまたは複数のリポソームに被包される
、組成物。
（項目４２）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１０：１～１：１０の範囲の比で存在する、項目４１に記載の組成物。
（項目４３）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１～１：４の範囲の比で存在する、項目４２に記載の組成物。
（項目４４）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約４：１の比で存在する、項目４３に記載の組成物。
（項目４５）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが１より大きい比で存在する、項目４１～４４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４６）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが約１：１の比で存在する、項目４１～４４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４７）
前記重鎖をコードする前記第１のｍＲＮＡと前記軽鎖をコードする前記第２のｍＲＮＡ
とが１つまたは複数のリポソームに被包される、項目４１～４６のいずれか一項に記載の
組成物。
（項目４８）
前記第１のｍＲＮＡと前記第２のｍＲＮＡとが別々のリポソームに被包される、項目４
７に記載の組成物。
（項目４９）
前記第１のｍＲＮＡと前記第２のｍＲＮＡとが同じリポソームに被包される、項目４７
に記載の組成物。
（項目５０）
前記１つまたは複数のリポソームは、カチオン性脂質、中性脂質、コレステロール系脂
質、及びＰＥＧ修飾脂質の１つまたは複数を含む、項目４１～４９のいずれか一項に記載
の組成物。
（項目５１）
前記１つまたは複数のリポソームが約２５０ｎｍ、２２５ｎｍ、２００ｎｍ、１７５ｎ
ｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１００ｎｍ、７５ｎｍ、または５０ｎｍ以下の大きさを有
する、項目４１～５０のいずれか一項に記載の組成物。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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