特開 2023-81799 酵素を用いた遺伝子治療薬の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023081799

(43)【公開日】2023-06-13

(54)【発明の名称】酵素を用いた遺伝子治療薬の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/10 20060101AFI20230606BHJP

   C12N 15/52 20060101ALI20230606BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20230606BHJP

   C12N 9/00 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 38/43 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230606BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230606BHJP

【ＦＩ】

C12N15/10 Z

C12N15/52 Z

C12N15/85 Z

C12N9/00

A61K38/43

A61K31/711

A61K48/00

A61K35/76

【審査請求】有

【請求項の数】3

【出願形態】書面

(21)【出願番号】P 2021209942

(22)【出願日】2021-12-01

(71)【出願人】

【識別番号】317001677

【氏名又は名称】陌間 委子

(72)【発明者】

【氏名】陌間 委子

【テーマコード（参考）】

4B050

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B050CC03

4B050DD20

4B050LL01

4C084AA01

4C084AA13

4C084DC01

4C084NA20

4C084ZC80

4C086AA01

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA20

4C086ZC80

4C087AA01

4C087BC83

4C087NA20

4C087ZC80

(57)【要約】

【課題】効果的な核輸送の方法を用いた遺伝子治療薬の製造
【解決手段】目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを取り出して増殖させ、得られたＤＮＡテンプレートを転写・翻訳によって、人為的にタンパク質合成・増幅させる。さらに、得られた酵素を細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）または膜透過ペプチド（ＰＴＤ）、さらに、核内にてその効果を発揮させる場合には、核輸送の機構に則った、インポーチンが結合する核局在化シグナル（ＮＬＳ）とエクスポーチンの核外搬出シグナル（ＮＥＳ）を用いて合成し、身体に適した状態で適用する。または、目的とする治療に適した酵素のプライマーＤＮＡと核輸送の塩基配列を合成し、身体に適した状態で適用する。あるいは、目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを頭部と尾部の形成機能を消去し、感染力を喪失したウイルスのプロモーターの下流に挿入し、身体に適した状態で適用する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（イ）目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを取り出して増殖させ、得られたＤＮＡテンプレートを転写・翻訳によって、人為的にタンパク質合成・増幅させる。
（ロ）（イ）の工程にて得られた酵素を細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）または膜透過ペプチド（ＰＴＤ）、さらに、核内にてその効果を発揮させる場合には、核輸送の機構に則った、インポーチンが結合する核局在化シグナル（ＮＬＳ）とエクスポーチンの核外搬出シグナル（ＮＥＳ）を用いて合成し、身体に適した状態で適用する。

【請求項2】

目的とする治療に適した酵素のプライマーＤＮＡと膜透過、並びに核輸送の塩基配列を合成し、身体に適した状態で適用する。

【請求項3】

目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを頭部と尾部の形成機能を消去し、感染力を喪失したウイルスのプロモーターの下流に挿入し、身体に適した状態で適用する。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、酵素を用いた遺伝子治療薬の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

従来、核酸医薬に関する研究は進歩してきたが、酵素を用いた遺伝子治療薬の統合的、画一的な製造方法は、未だ考案されていない。この発明は、遺伝子治療薬の製造方法に関するものである。

【0003】

【非特許文献1】フリー百科事典『ウィキペディア（Ｗｉｋｉｐｅｄｉａ）』出典、「遺伝子治療薬」、最終更新２０２１年９月５日、［ｏｎｌｉｎｅ］、［令和３年１１月３０日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｊａ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／％Ｅ９％８１％ＢＡ％Ｅ４％ＢＣ％９Ｄ％Ｅ５％ＡＤ％９０％Ｅ６％Ｂ２％ＢＢ％Ｅ７％９９％８２

【非特許文献2】伏原大地（Ｄａｉｃｈｉ Ｆｕｋｕｈａｒａ）著、「ヒトの設計図を基に薬を―核酸を使った病気の治療―」（‘Ｃｒｅａｔｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ―Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ―’）、２０１８年、［ｏｎｌｉｎｅ］、［令和３年１１月３０日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｌａｂｏｒｉｆｙ．ｎｅｔ／２０１８／１２／１４／ｆｕｓｈｉｈａｒａ－ｎｕｃｌｅｉｃ－ａｃｉｄ－ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ／＞

【非特許文献3】松浦能行著、「核―細胞質間高分子輸送の構造生物学」、２０１１年、［ｏｎｌｉｎｅ］、［令和３年８月１３ 日 検 索 ］ 、 イ ン タ ー ネ ッ ト ＜ ＵＲＬ ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｊｓｔａｇｅ．ｊｓｔ．ｇｏ．ｊｐ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｂｉｏｐｈｙｓ／５１／５／５１＿５＿２０８／＿ｐｄｆ＞

【非特許文献4】ジュリアン・ルイス、マーティン・ラフ、キース・ロバーツ、ピーター・ウォルター、デビッド・モルガン他（Ｊｕｌｉａｎ Ｌｅｗｉｓ，Ｍａｒｔｉｎ Ｒａｆｆ，Ｋｅｉｔｈ Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｐｅｔｅｒ Ｗａｌｔｅｒ，Ｄａｖｉｄ Ｍｏｒｇａｎ ｅｔｃ．）著、「細胞の分子生物学」（第６版）Ｗ・Ｗ・ノートン出版 ２０１４／１２／２（‘Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ’ｔｈｅ ６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｗ．Ｎｏｒｔｏｎ，２０１４／１２／２）

【非特許文献5】村山洋（Ｏｈｏｓｈｉ Ｍｕｒａｙａｍａ）他著、「遺伝子工学」（第２版）、講談社出版、２０１３年１１月１日、（‘Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ’，ｔｈｅ ▲２ｎｄ▼ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｋｏｄａｎｓｈａ，２０１３／１１／１）

【非特許文献6】フリー百科事典『ウィキペディア（Ｗｉｋｉｐｅｄｉａ）』出典、「細胞膜透過ペプチド」、最終更新 ２０２１年１１月２１日、［ｏｎｌｉｎｅ］、［令和３年１２月１日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｊａ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／細胞膜透過ペプチド＞

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

酵素を用いた効果的な遺伝子治療薬の製造方法

【課題を解決するための手段】

【0005】

目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを取り出して増殖させ、得られたＤＮＡテンプレートを転写・翻訳によって、人為的にタンパク質合成・増幅させる。さらに、得られた酵素を細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）または膜透過ペプチド（ＰＴＤ）、さらに、核内にてその効果を発揮させる場合には、核輸送の機構に則った、インポーチンが結合する核局在化シグナル（ＮＬＳ）とエクスポーチンの核外搬出シグナル（ＮＥＳ）を用いて合成し、身体に適した状態で適用する。または、目的とする治療に適した酵素のプライマーＤＮＡと膜透過、並びに核輸送の塩基配列を合成し、身体に適した状態で適用する。あるいは、目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを頭部と尾部のたんぱく質形成機能を消去し、感染力を喪失したウイルスのプロモーターの下流に挿入し、身体に適した状態で適用する。

【発明の効果】

【0006】

酵素を用いた遺伝子治療薬による効果的な遺伝子治療が実現する。

【発明を実施するための最良の形態】

【0007】

目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを取り出して増殖させ、得られたＤＮＡテンプレートを転写・翻訳によって、人為的にタンパク質合成・増幅させる。さらに、得られた酵素を細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）または膜透過ペプチド（ＰＴＤ）、さらに、核内にてその効果を発揮させる場合には、核輸送の機構に則った、インポーチンが結合する核局在化シグナル（ＮＬＳ）とエクスポーチンの核外搬出シグナル（ＮＥＳ）を用いて合成し、身体に適した状態で適用する。または、目的とする治療に適した酵素のプライマーＤＮＡと膜透過、並びに核輸送の塩基配列を合成し、身体に適した状態で適用する。あるいは、目的とする治療に適した酵素のＤＮＡを頭部と尾部の形成機能を消去し、感染力を喪失したウイルスのプロモーターの下流に挿入し、身体に適した状態で適用する。

【実施例0008】

上記の通り実施される。

【産業上の利用可能性】

【0009】

本明細書に記した、一連の手法の組み合わせによる、酵素を用いた効果的な遺伝子治療の方法に、産業上の利用可能性がある。