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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023084813
(43)【公開日】2023-06-20
(54)【発明の名称】ゴマリグナンの定量方法
(51)【国際特許分類】
G01N 21/3577 20140101AFI20230613BHJP
【ＦＩ】
G01N21/3577
【審査請求】有
【請求項の数】3
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021199134
(22)【出願日】2021-12-08
(11)【特許番号】
(45)【特許公報発行日】2022-04-19
(71)【出願人】
【識別番号】000210654
【氏名又は名称】竹本油脂株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000394
【氏名又は名称】弁理士法人岡田国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】渡辺 しおり
(72)【発明者】
【氏名】仲川 清隆
(72)【発明者】
【氏名】乙木 百合香
(72)【発明者】
【氏名】加藤 俊治
【テーマコード（参考）】
2G059
【Ｆターム（参考）】
2G059AA01
2G059BB04
2G059BB11
2G059CC12
2G059DD20
2G059EE01
2G059EE12
2G059HH01
2G059MM01
2G059MM12
(57)【要約】
【課題】
ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンを短時間で高精度に定量する方法を提供する。
【解決手段】
ゴマリグナンの定量方法は下記の工程１～３を含む。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する
工程２：調整用植物油の近赤外スペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で得られた回帰式と、を用いて測定用植物油中の工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する
【選択図】なし
ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンを短時間で高精度に定量する方法を提供する。
【解決手段】
ゴマリグナンの定量方法は下記の工程１～３を含む。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する
工程２：調整用植物油の近赤外スペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で得られた回帰式と、を用いて測定用植物油中の工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の工程１～３を含むことを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【請求項2】
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域である請求項１に記載のゴマリグナンの定量方法。
【請求項3】
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ－１である請求項２に記載のゴマリグナンの定量方法。
【請求項4】
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化と組合せである請求項１から３のいずれか一項に記載のゴマリグナンの定量方法。
【請求項5】
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独である請求項１から３のいずれか一項に記載のゴマリグナンの定量方法。
【請求項6】
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独である請求項１から３のいずれか一項に記載のゴマリグナンの定量方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、ゴマリグナンの定量方法に関する。
【背景技術】
【0002】
食用油等の油脂は、一般的に空気や光等の影響によって酸化が進み品質が低下する。また、油脂の酸化により生じる過酸化物は、食品の風味や栄養価の低下を引き起こすのみならず、生体内における癌等の疾病の要因の一つと考えられている。そのため、油脂にとって酸化を防止する抗酸化物質の含量は重要な要素である。
【0003】
食用油の中でもごま油は酸化し難いことが広く知られている。ごま油は、セサミンに代表されるゴマリグナンという特有の微量成分を含んでいる。ゴマリグナンは強い抗酸化活性を有し、ごま油の酸化し難いという性質に寄与しているため、ごま油の品質維持に欠かせない成分である。また、ゴマリグナンを摂取すると、その抗酸化作用により生体内の活性酸素を低減させて酸化による細胞の老化や生活習慣病を予防することや、抗炎症作用および抗癌作用を奏することが知られている。
【0004】
このようにゴマリグナンは優れた機能を有しており、ごま油の製造においてゴマリグナンの含量の把握は非常に重要である。しかし、ゴマリグナンはごま油中に総量で約０．１～１重量％しか含まれていない。そのため、ゴマリグナンの定量には高い精度が必要であり、微量成分の定量精度に優れる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析が一般に用いられている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】福田靖子著、「ゴマ種子の抗酸化成分に関する食品化学的研究」日本食品工業学会誌、１９９０年６月、第３７巻第６号、ｐ．４８４～４９２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
しかし、ＨＰＬＣ分析は微量成分の定量精度に優れるものの、一検体当たりの分析時間が長いという欠点を有する。そのため、ゴマリグナンの定量を短時間かつ高精度で可能な定量方法が求められている。
【0007】
そこで本開示は、短時間で試料の近赤外スペクトルの測定が可能なフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である測定用植物油中のゴマリグナンを高精度で定量できる方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
上記課題を解決するため、本開示の技術は以下の手段をとる。
［１］下記の工程１～３を含むことを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［２］前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域である［１］に記載のゴマリグナンの定量方法。
［３］前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ－１である［２］に記載のゴマリグナンの定量方法。
［４］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化と組合せである［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
［５］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独である［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
［６］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独である［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
［１］下記の工程１～３を含むことを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［２］前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域である［１］に記載のゴマリグナンの定量方法。
［３］前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ－１である［２］に記載のゴマリグナンの定量方法。
［４］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化と組合せである［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
［５］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独である［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
［６］前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独である［１］から［３］のいずれかに記載のゴマリグナンの定量方法。
【0009】
なお、本明細書において「Ａ～Ｂ」で示される数値範囲は、特段の記載が無い限り、その上限及び下限を含む。つまり、「Ａ～Ｂ」は「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。
【発明を実施するための形態】
【0010】
≪ゴマリグナンの定量方法≫
本開示のごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法は、下記の工程１～３を含む。なお、ゴマリグナンの定量方法は工程１～３以外の工程を含んでもよい。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、植物油（以下、工程１及び工程２で回帰線を得るために用いる植物油を調整用植物油という）中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
本開示のごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法は、下記の工程１～３を含む。なお、ゴマリグナンの定量方法は工程１～３以外の工程を含んでもよい。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、植物油（以下、工程１及び工程２で回帰線を得るために用いる植物油を調整用植物油という）中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【0011】
＜工程１＞
工程１では、ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析により定量する。植物油はごま油を含んでいればよく、特に限定されない。同様にごま油も、ごまの種類や製法等により特に限定されない。ゴマリグナンは、セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種である。ＨＰＬＣ分析の方法は特に限定されないが、例えば以下の工程１－１～工程１－４を含む方法が挙げられる。
工程１－１：セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種の精製ゴマリグナンを各種濃度で含む複数の標品をＨＰＬＣで溶出し、ＵＶ検出器を用いてＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－２：工程１－１で測定されたＵＶの吸収スペクトルに基づきゴマリグナンの検量線を作成する。
工程１－３：ごま油を含有する複数の調整用植物油を工程１－１と同じ条件のＨＰＬＣで溶出し、ＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－４：工程１－３で測定されたＵＶの吸収スペクトルに工程１－２で作成した検量線を適用して、調整用植物油中のゴマリグナンの量を算出する。
なお、ゴマリグナンの検量線は事前に作成したものを用いることで、工程１－１及び工程１－２を省略してもよい。
工程１では、ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析により定量する。植物油はごま油を含んでいればよく、特に限定されない。同様にごま油も、ごまの種類や製法等により特に限定されない。ゴマリグナンは、セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種である。ＨＰＬＣ分析の方法は特に限定されないが、例えば以下の工程１－１～工程１－４を含む方法が挙げられる。
工程１－１：セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種の精製ゴマリグナンを各種濃度で含む複数の標品をＨＰＬＣで溶出し、ＵＶ検出器を用いてＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－２：工程１－１で測定されたＵＶの吸収スペクトルに基づきゴマリグナンの検量線を作成する。
工程１－３：ごま油を含有する複数の調整用植物油を工程１－１と同じ条件のＨＰＬＣで溶出し、ＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－４：工程１－３で測定されたＵＶの吸収スペクトルに工程１－２で作成した検量線を適用して、調整用植物油中のゴマリグナンの量を算出する。
なお、ゴマリグナンの検量線は事前に作成したものを用いることで、工程１－１及び工程１－２を省略してもよい。
【0012】
ゴマリグナンの定量は、ＵＶの吸収スペクトルのピーク高さ又はピーク面積のいずれに基づいて行ってもよいが、ピーク面積に基づき定量することが好ましい。なお、ＨＰＬＣ分析に関し、カラムの種類、移動相、検出器の種類、測定波長等は適宜変更可能である。
【0013】
＜工程２＞
工程２では、工程１で用いた調整用植物油のスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る。調整用植物油のスペクトルデータは、調整用植物油の近赤外スペクトルをフーリエ変換型近赤外光分析装置で測定し、得られた原スペクトルデータについてスペクトル前処理をして取得する。
工程２では、工程１で用いた調整用植物油のスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る。調整用植物油のスペクトルデータは、調整用植物油の近赤外スペクトルをフーリエ変換型近赤外光分析装置で測定し、得られた原スペクトルデータについてスペクトル前処理をして取得する。
【0014】
調整用植物油の近赤外スペクトルは、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定される。フーリエ変換型近赤外光分析装置は、試料の近赤外光（一般に波数１２５００～４０００ｃｍ－１）の吸収に基づく分光を行う装置であり、試料に近赤外光を照射し、透過光または反射光を干渉計により干渉させ、その信号強度をフーリエ変換することで試料の近赤外スペクトルを測定する。フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いることにより、分散型の近赤外光分析装置を用いた場合と比べて、短時間で調整用植物油の近赤外スペクトルを測定することができる。
【0015】
調整用植物油の近赤外スペクトルを測定して得られた原スペクトルデータは、スペクトル前処理をすることにより、回帰式を得る際に用いるスペクトルデータに変換される。スペクトル前処理は、一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つである。スペクトル前処理は、ゴマリグナンがセサミンの場合は一次微分とベクトル正規化との組み合わせが好ましく、ゴマリグナンがエピセサミンである場合は一次微分単独が好ましく、ゴマリグナンがセサモリンである場合は二次微分単独が好ましい。
【0016】
回帰式を作成する際に用いられるスペクトルデータの波数領域は近赤外光の範囲内で適宜選択可能である。波数領域は、複数の連続する波数領域であってもよいが、１つの連続した波数領域であることが好ましく、具体的には９４００±１０～５９００±１０ｃｍ－１であることが更に好ましい。この範囲の波数領域を用いて回帰式を作成することにより、定量精度をより向上することができる。なお、フーリエ変換型近赤外光分析装置による近赤外スペクトルの測定は、測定対象に応じて波数分解能（以下、分解能という）を適宜選択して測定される。そのため、本開示における「連続した波数領域」とは、当該波数領域全体にわたって所定の分解能で示された領域を意味する。工程２における分解能は特に限定されないが、測定精度と測定時間のバランスの観点から１６ｃｍ－１又は８ｃｍ－１であることが好ましく、８ｃｍ－１であることが更に好ましい。また、回帰式を作成する際に用いられるスペクトルデータの波数領域は、測定した波数領域の全体であってもよいし、その一部であってもよい。
【0017】
回帰式の作成は多変量回帰分析により行われる。多変量回帰分析の方法は特に限定されないが、部分的最小二乗回帰（ＰＬＳ）法が特に好ましい。多変量回帰分析は市販のソフトウェアを使用することができる。例えば、ＯＰＵＳ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）、Ｔｈｅ Ｕｎｓｃｒａｍｂｌｅｒ Ｘ（株式会社エス・ティ・ジャパン社製）、Ｐｉｒｏｕｅｔｔｅ（ジーエルサイエンス株式会社製）等が使用可能である。
【0018】
スペクトル前処理されたスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値とを多変量回帰分析に供することにより、スペクトルデータからゴマリグナンの含量を予測する回帰式を得ることができる。その際に、スペクトルデータを説明変数に設定し、ゴマリグナンの定量値を目的変数に設定することにより、スペクトルデータの中に内在するゴマリグナンの含量の変化と相関の高い因子を決定し、この因子の回帰係数を用いて回帰式を作成する。なお、作成される回帰式の精度を向上し、ゴマリグナンの定量方法の誤差を低減するために、調整用植物油の検体数は多数、例えば１００個以上であることが好ましい。
【0019】
＜工程３＞
工程３では、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である植物油（以下、測定用植物油という）の近赤外スペクトルを測定した後に工程２と同じスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で作成した回帰式と、を用いて測定用植物油中のゴマリグナンを定量する。工程３ではフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定された近赤外スペクトルに基づき測定用植物油中のゴマリグナンを定量するため、測定用植物油を損なうことなく短時間での定量が可能である。
工程３では、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である植物油（以下、測定用植物油という）の近赤外スペクトルを測定した後に工程２と同じスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で作成した回帰式と、を用いて測定用植物油中のゴマリグナンを定量する。工程３ではフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定された近赤外スペクトルに基づき測定用植物油中のゴマリグナンを定量するため、測定用植物油を損なうことなく短時間での定量が可能である。
【0020】
測定用植物油のスペクトルデータは、工程２における調整用植物油のスペクトルデータを取得する場合と同様にして取得することができる。つまり、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油の近赤外スペクトルを測定し、得られた原スペクトルデータに対して工程２と同じスペクトル前処理をしてスペクトルデータを得る。フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いることにより、分散型の近赤外光分析装置を用いた場合と比べて短時間で測定用植物油の近赤外スペクトルを測定することができる。また、工程３におけるスペクトルの測定条件やスペクトルデータの波数領域等は、ゴマリグナンの定量精度を向上するため、工程２における測定条件や波数領域と同一であることが好ましい。
【0021】
測定用植物油中のゴマリグナンを定量は、測定用植物油のスペクトルデータに工程２で作成した回帰式を適用することにより行う。このスペクトルデータと回帰式からゴマリグナンを定量する工程には、市販のソフトウェアを使用することができる。なお、工程３で使用するソフトウェアは、ゴマリグナンの定量精度を向上するため、工程２で用いたソフトウェアと同一であることが好ましい。
【実施例0022】
以下、本開示の具体的な構成及び効果を実施例及び比較例に基づき説明する。
【0023】
＜ゴマリグナンの検量線の作成＞
先ず、各種濃度の精製ゴマリグナン（セサミン、エピセサミン、セサモリン、セサミノール、又はセサモール）を含有する複数の標品を用いて、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。そして、得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積から各ゴマリグナンの検量線を作成した。
カラム：Ｄｅｖｅｌｉｓｉｌ ＯＳＤ－５（４．６×１５０ｍｍ）（野村化学株式会社製）
移動相：水：メタノール＝３０：７０（容積比）
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（ＳＰＤ－２０Ａ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ）（株式会社島津製作所）
測定波長：２９０ｎｍ
先ず、各種濃度の精製ゴマリグナン（セサミン、エピセサミン、セサモリン、セサミノール、又はセサモール）を含有する複数の標品を用いて、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。そして、得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積から各ゴマリグナンの検量線を作成した。
カラム：Ｄｅｖｅｌｉｓｉｌ ＯＳＤ－５（４．６×１５０ｍｍ）（野村化学株式会社製）
移動相：水：メタノール＝３０：７０（容積比）
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（ＳＰＤ－２０Ａ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ）（株式会社島津製作所）
測定波長：２９０ｎｍ
【0024】
実施例１
＜調整用植物油中のゴマリグナンの定量＞
製造日が異なる複数（１００個）の調整用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、標品のＨＰＬＣ分析と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と、予め作成したセサミンの検量線とを対比して、各調整用植物油（Ａ－１）中のセサミンを定量した。
＜調整用植物油中のゴマリグナンの定量＞
製造日が異なる複数（１００個）の調整用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、標品のＨＰＬＣ分析と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と、予め作成したセサミンの検量線とを対比して、各調整用植物油（Ａ－１）中のセサミンを定量した。
【0025】
＜回帰式の作成＞
フーリエ変換型近赤外分光計ＭＰＡ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて、ＨＰＬＣ分析に用いた各調整用植物油（Ａ－１）の近赤外スペクトルを以下の条件で測定し、原スペクトルデータを得た。
測定波数：１２５００～４０００ｃｍ－１
積算回数：１２８回
分解能：８ｃｍ－１
フーリエ変換型近赤外分光計ＭＰＡ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて、ＨＰＬＣ分析に用いた各調整用植物油（Ａ－１）の近赤外スペクトルを以下の条件で測定し、原スペクトルデータを得た。
測定波数：１２５００～４０００ｃｍ－１
積算回数：１２８回
分解能：８ｃｍ－１
【0026】
解析ソフトＯｐｕｓ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて各調整用植物油の原スペクトルデータについてスペクトル前処理（一次微分及びベクトル正規化）を行った後、波数領域を９４００～５９００ｃｍ－１に限定してスペクトルデータを得た。各調整用植物油について、スペクトルデータを説明変数に、ＨＰＬＣ分析で求めたセサミンの定量値を目的変数にそれぞれ設定し、ＰＬＳ法で多変量回帰分析することにより回帰式を作成した。
【0027】
＜測定用植物油中のゴマリグナンの定量＞
調整用植物油とは製造日の異なる測定用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、調整用植物油と同じ条件で近赤外スペクトルの測定及び加工を行い、スペクトルデータを得た。測定用植物油のスペクトルデータに作成した回帰式を適用し、測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＮＩＲ定量値という）を算出した。
調整用植物油とは製造日の異なる測定用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、調整用植物油と同じ条件で近赤外スペクトルの測定及び加工を行い、スペクトルデータを得た。測定用植物油のスペクトルデータに作成した回帰式を適用し、測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＮＩＲ定量値という）を算出した。
【0028】
＜定量精度の検討＞
近赤外スペクトルの測定に用いた測定用植物油（Ａ－１）について上記条件でＨＰＬＣ分析を行い、ＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と予め作成した検量線とを対比して測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＨＰＬＣ定量値という）を算出した。そして、測定用植物油（Ａ－１）のＮＩＲ定量値とＨＰＬＣ定量値との誤差を下記式により算出し、以下の基準で評価した。実施例１の誤差は２％未満であった。
誤差（％）＝｜ＨＰＬＣ定量値－ＮＩＲ定量値｜÷ＨＰＬＣ定量値×１００
◎：２％未満
〇：２～３％
×：３％超
近赤外スペクトルの測定に用いた測定用植物油（Ａ－１）について上記条件でＨＰＬＣ分析を行い、ＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と予め作成した検量線とを対比して測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＨＰＬＣ定量値という）を算出した。そして、測定用植物油（Ａ－１）のＮＩＲ定量値とＨＰＬＣ定量値との誤差を下記式により算出し、以下の基準で評価した。実施例１の誤差は２％未満であった。
誤差（％）＝｜ＨＰＬＣ定量値－ＮＩＲ定量値｜÷ＨＰＬＣ定量値×１００
◎：２％未満
〇：２～３％
×：３％超
【0029】
実施例２～５１、比較例１～２５
実施例１と同様にして、表１～表３に示す実施例２～５１及び比較例１～２５についても同様に測定および評価を行った。
実施例１と同様にして、表１～表３に示す実施例２～５１及び比較例１～２５についても同様に測定および評価を行った。
【0030】
表１～表３中の植物油は以下の通りである。
Ａ－１：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油
Ａ－２：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の１：９の混合油
Ａ－３：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の５：５の混合油
Ａ－４：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の９：１の混合油
Ａ－５：かどや製油株式会社製 純白ごま油
Ａ－６：九鬼産業株式会社製 九鬼太白純正胡麻油
Ａ－７：竹本油脂株式会社製 純正胡麻油
Ａ－８：かどや製油株式会社製 金印純正ごま油
Ａ－１：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油
Ａ－２：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の１：９の混合油
Ａ－３：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の５：５の混合油
Ａ－４：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の９：１の混合油
Ａ－５：かどや製油株式会社製 純白ごま油
Ａ－６：九鬼産業株式会社製 九鬼太白純正胡麻油
Ａ－７：竹本油脂株式会社製 純正胡麻油
Ａ－８：かどや製油株式会社製 金印純正ごま油
【0031】
【表1】
【0032】
【表2】
【0033】
【表3】
【0034】
実施例１から実施例５１は、ＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が小さく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた高精度の定量方法を実現できた。また、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いているため、測定用植物油中のゴマリグナンを短時間で定量できた。一方、比較例１から比較例１８は、ゴマリグナンがセサミノール又はセサモールであるため、一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せのいずれの前処理をしてもＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が大きく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた定量精度が低かった。比較例１９から比較例２５は、前処理が一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せのいずれでもないため、ＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が大きく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた定量精度が低かった。
【手続補正書】
【提出日】2022-02-28
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化との組合せであることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化との組合せであることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【請求項2】
下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【請求項3】
下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、ゴマリグナンの定量方法に関する。
【背景技術】
【0002】
食用油等の油脂は、一般的に空気や光等の影響によって酸化が進み品質が低下する。また、油脂の酸化により生じる過酸化物は、食品の風味や栄養価の低下を引き起こすのみならず、生体内における癌等の疾病の要因の一つと考えられている。そのため、油脂にとって酸化を防止する抗酸化物質の含量は重要な要素である。
【0003】
食用油の中でもごま油は酸化し難いことが広く知られている。ごま油は、セサミンに代表されるゴマリグナンという特有の微量成分を含んでいる。ゴマリグナンは強い抗酸化活性を有し、ごま油の酸化し難いという性質に寄与しているため、ごま油の品質維持に欠かせない成分である。また、ゴマリグナンを摂取すると、その抗酸化作用により生体内の活性酸素を低減させて酸化による細胞の老化や生活習慣病を予防することや、抗炎症作用および抗癌作用を奏することが知られている。
【0004】
このようにゴマリグナンは優れた機能を有しており、ごま油の製造においてゴマリグナンの含量の把握は非常に重要である。しかし、ゴマリグナンはごま油中に総量で約０．１～１重量％しか含まれていない。そのため、ゴマリグナンの定量には高い精度が必要であり、微量成分の定量精度に優れる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析が一般に用いられている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】福田靖子著、「ゴマ種子の抗酸化成分に関する食品化学的研究」日本食品工業学会誌、１９９０年６月、第３７巻第６号、ｐ．４８４～４９２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
しかし、ＨＰＬＣ分析は微量成分の定量精度に優れるものの、一検体当たりの分析時間が長いという欠点を有する。そのため、ゴマリグナンの定量を短時間かつ高精度で可能な定量方法が求められている。
【0007】
そこで本開示は、短時間で試料の近赤外スペクトルの測定が可能なフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である測定用植物油中のゴマリグナンを高精度で定量できる方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
上記課題を解決するため、本開示の技術は以下の手段をとる。
［１］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化との組合せであることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［２］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［３］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［１］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分とベクトル正規化との組合せであることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［２］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがエピセサミンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が一次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
［３］下記の工程１～３を含み、
前記工程２及び前記工程３で用いられるスペクトルデータは１つの連続した波数領域であり、
前記波数領域が、９４００±１０～５９００±１０ｃｍ －１ であり、
前記工程１で選ばれるゴマリグナンがセサモリンであり、且つ前記工程２で選ばれるスペクトル前処理が二次微分単独であることを特徴とするごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、調整用植物油中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【0009】
なお、本明細書において「Ａ～Ｂ」で示される数値範囲は、特段の記載が無い限り、その上限及び下限を含む。つまり、「Ａ～Ｂ」は「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。
【発明を実施するための形態】
【0010】
≪ゴマリグナンの定量方法≫
本開示のごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法は、下記の工程１～３を含む。なお、ゴマリグナンの定量方法は工程１～３以外の工程を含んでもよい。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、植物油（以下、工程１及び工程２で回帰線を得るために用いる植物油を調整用植物油という）中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
本開示のごま油を含有する植物油中のゴマリグナンの定量方法は、下記の工程１～３を含む。なお、ゴマリグナンの定量方法は工程１～３以外の工程を含んでもよい。
工程１：ＨＰＬＣ分析により、植物油（以下、工程１及び工程２で回帰線を得るために用いる植物油を調整用植物油という）中のセサミン、セサモリン及びエピセサミンから選ばれる１種のゴマリグナンを定量する工程
工程２：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて前記調整用植物油のスペクトルを測定した後に一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つのスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る工程
工程３：フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油のスペクトルを測定した後に前記工程２で選ばれたスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、前記工程２で得られた回帰式と、を用いて前記測定用植物油中の前記工程１で選ばれたゴマリグナンを定量する工程
【0011】
＜工程１＞
工程１では、ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析により定量する。植物油はごま油を含んでいればよく、特に限定されない。同様にごま油も、ごまの種類や製法等により特に限定されない。ゴマリグナンは、セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種である。ＨＰＬＣ分析の方法は特に限定されないが、例えば以下の工程１－１～工程１－４を含む方法が挙げられる。
工程１－１：セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種の精製ゴマリグナンを各種濃度で含む複数の標品をＨＰＬＣで溶出し、ＵＶ検出器を用いてＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－２：工程１－１で測定されたＵＶの吸収スペクトルに基づきゴマリグナンの検量線を作成する。
工程１－３：ごま油を含有する複数の調整用植物油を工程１－１と同じ条件のＨＰＬＣで溶出し、ＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－４：工程１－３で測定されたＵＶの吸収スペクトルに工程１－２で作成した検量線を適用して、調整用植物油中のゴマリグナンの量を算出する。
なお、ゴマリグナンの検量線は事前に作成したものを用いることで、工程１－１及び工程１－２を省略してもよい。
工程１では、ごま油を含有する植物油中のゴマリグナンをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析により定量する。植物油はごま油を含んでいればよく、特に限定されない。同様にごま油も、ごまの種類や製法等により特に限定されない。ゴマリグナンは、セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種である。ＨＰＬＣ分析の方法は特に限定されないが、例えば以下の工程１－１～工程１－４を含む方法が挙げられる。
工程１－１：セサミン、セサモリン、及びエピセサミンから選ばれる１種の精製ゴマリグナンを各種濃度で含む複数の標品をＨＰＬＣで溶出し、ＵＶ検出器を用いてＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－２：工程１－１で測定されたＵＶの吸収スペクトルに基づきゴマリグナンの検量線を作成する。
工程１－３：ごま油を含有する複数の調整用植物油を工程１－１と同じ条件のＨＰＬＣで溶出し、ＵＶの吸収スペクトルを測定する。
工程１－４：工程１－３で測定されたＵＶの吸収スペクトルに工程１－２で作成した検量線を適用して、調整用植物油中のゴマリグナンの量を算出する。
なお、ゴマリグナンの検量線は事前に作成したものを用いることで、工程１－１及び工程１－２を省略してもよい。
【0012】
ゴマリグナンの定量は、ＵＶの吸収スペクトルのピーク高さ又はピーク面積のいずれに基づいて行ってもよいが、ピーク面積に基づき定量することが好ましい。なお、ＨＰＬＣ分析に関し、カラムの種類、移動相、検出器の種類、測定波長等は適宜変更可能である。
【0013】
＜工程２＞
工程２では、工程１で用いた調整用植物油のスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る。調整用植物油のスペクトルデータは、調整用植物油の近赤外スペクトルをフーリエ変換型近赤外光分析装置で測定し、得られた原スペクトルデータについてスペクトル前処理をして取得する。
工程２では、工程１で用いた調整用植物油のスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値と、を用いて回帰式を得る。調整用植物油のスペクトルデータは、調整用植物油の近赤外スペクトルをフーリエ変換型近赤外光分析装置で測定し、得られた原スペクトルデータについてスペクトル前処理をして取得する。
【0014】
調整用植物油の近赤外スペクトルは、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定される。フーリエ変換型近赤外光分析装置は、試料の近赤外光（一般に波数１２５００～４０００ｃｍ－１）の吸収に基づく分光を行う装置であり、試料に近赤外光を照射し、透過光または反射光を干渉計により干渉させ、その信号強度をフーリエ変換することで試料の近赤外スペクトルを測定する。フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いることにより、分散型の近赤外光分析装置を用いた場合と比べて、短時間で調整用植物油の近赤外スペクトルを測定することができる。
【0015】
調整用植物油の近赤外スペクトルを測定して得られた原スペクトルデータは、スペクトル前処理をすることにより、回帰式を得る際に用いるスペクトルデータに変換される。スペクトル前処理は、一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せから選ばれる１つを用いることができるが、本発明においては、ゴマリグナンがセサミンの場合は一次微分とベクトル正規化との組み合わせであり、ゴマリグナンがエピセサミンである場合は一次微分単独であり、ゴマリグナンがセサモリンである場合は二次微分単独である。
【0016】
回帰式を作成する際に用いられるスペクトルデータの波数領域は近赤外光の範囲内で適宜選択可能であり、複数の連続する波数領域であってもよいが、本発明では、１つの連続した波数領域であり、具体的には９４００±１０～５９００±１０ｃｍ－１
の波数領域が用いられる。この範囲の波数領域を用いて回帰式を作成することにより、定量精度をより向上することができる。なお、フーリエ変換型近赤外光分析装置による近赤外スペクトルの測定は、測定対象に応じて波数分解能（以下、分解能という）を適宜選択して測定される。そのため、本開示における「連続した波数領域」とは、当該波数領域全体にわたって所定の分解能で示された領域を意味する。工程２における分解能は特に限定されないが、測定精度と測定時間のバランスの観点から１６ｃｍ－１又は８ｃｍ－１であることが好ましく、８ｃｍ－１であることが更に好ましい。また、回帰式を作成する際に用いられるスペクトルデータの波数領域は、測定した波数領域の全体であってもよいし、その一部であってもよい。
【0017】
回帰式の作成は多変量回帰分析により行われる。多変量回帰分析の方法は特に限定されないが、部分的最小二乗回帰（ＰＬＳ）法が特に好ましい。多変量回帰分析は市販のソフトウェアを使用することができる。例えば、ＯＰＵＳ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）、Ｔｈｅ Ｕｎｓｃｒａｍｂｌｅｒ Ｘ（株式会社エス・ティ・ジャパン社製）、Ｐｉｒｏｕｅｔｔｅ（ジーエルサイエンス株式会社製）等が使用可能である。
【0018】
スペクトル前処理されたスペクトルデータと、工程１で得られたゴマリグナンの定量値とを多変量回帰分析に供することにより、スペクトルデータからゴマリグナンの含量を予測する回帰式を得ることができる。その際に、スペクトルデータを説明変数に設定し、ゴマリグナンの定量値を目的変数に設定することにより、スペクトルデータの中に内在するゴマリグナンの含量の変化と相関の高い因子を決定し、この因子の回帰係数を用いて回帰式を作成する。なお、作成される回帰式の精度を向上し、ゴマリグナンの定量方法の誤差を低減するために、調整用植物油の検体数は多数、例えば１００個以上であることが好ましい。
【0019】
＜工程３＞
工程３では、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である植物油（以下、測定用植物油という）の近赤外スペクトルを測定した後に工程２と同じスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で作成した回帰式と、を用いて測定用植物油中のゴマリグナンを定量する。工程３ではフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定された近赤外スペクトルに基づき測定用植物油中のゴマリグナンを定量するため、測定用植物油を損なうことなく短時間での定量が可能である。
工程３では、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定対象である植物油（以下、測定用植物油という）の近赤外スペクトルを測定した後に工程２と同じスペクトル前処理をして得られるスペクトルデータと、工程２で作成した回帰式と、を用いて測定用植物油中のゴマリグナンを定量する。工程３ではフーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定された近赤外スペクトルに基づき測定用植物油中のゴマリグナンを定量するため、測定用植物油を損なうことなく短時間での定量が可能である。
【0020】
測定用植物油のスペクトルデータは、工程２における調整用植物油のスペクトルデータを取得する場合と同様にして取得することができる。つまり、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いて測定用植物油の近赤外スペクトルを測定し、得られた原スペクトルデータに対して工程２と同じスペクトル前処理をしてスペクトルデータを得る。フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いることにより、分散型の近赤外光分析装置を用いた場合と比べて短時間で測定用植物油の近赤外スペクトルを測定することができる。また、工程３におけるスペクトルの測定条件やスペクトルデータの波数領域等は、ゴマリグナンの定量精度を向上するため、工程２における測定条件や波数領域と同一であることが好ましい。
【0021】
測定用植物油中のゴマリグナンを定量は、測定用植物油のスペクトルデータに工程２で作成した回帰式を適用することにより行う。このスペクトルデータと回帰式からゴマリグナンを定量する工程には、市販のソフトウェアを使用することができる。なお、工程３で使用するソフトウェアは、ゴマリグナンの定量精度を向上するため、工程２で用いたソフトウェアと同一であることが好ましい。
【実施例0022】
以下、本開示の具体的な構成及び効果を実施例及び比較例に基づき説明する。
【0023】
＜ゴマリグナンの検量線の作成＞
先ず、各種濃度の精製ゴマリグナン（セサミン、エピセサミン、セサモリン、セサミノール、又はセサモール）を含有する複数の標品を用いて、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。そして、得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積から各ゴマリグナンの検量線を作成した。
カラム：Ｄｅｖｅｌｉｓｉｌ ＯＳＤ－５（４．６×１５０ｍｍ）（野村化学株式会社製）
移動相：水：メタノール＝３０：７０（容積比）
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（ＳＰＤ－２０Ａ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ）（株式会社島津製作所）
測定波長：２９０ｎｍ
先ず、各種濃度の精製ゴマリグナン（セサミン、エピセサミン、セサモリン、セサミノール、又はセサモール）を含有する複数の標品を用いて、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。そして、得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積から各ゴマリグナンの検量線を作成した。
カラム：Ｄｅｖｅｌｉｓｉｌ ＯＳＤ－５（４．６×１５０ｍｍ）（野村化学株式会社製）
移動相：水：メタノール＝３０：７０（容積比）
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（ＳＰＤ－２０Ａ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ）（株式会社島津製作所）
測定波長：２９０ｎｍ
【0024】
実施例１
＜調整用植物油中のゴマリグナンの定量＞
製造日が異なる複数（１００個）の調整用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、標品のＨＰＬＣ分析と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と、予め作成したセサミンの検量線とを対比して、各調整用植物油（Ａ－１）中のセサミンを定量した。
＜調整用植物油中のゴマリグナンの定量＞
製造日が異なる複数（１００個）の調整用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、標品のＨＰＬＣ分析と同じ条件でＨＰＬＣ分析を行った。得られたＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と、予め作成したセサミンの検量線とを対比して、各調整用植物油（Ａ－１）中のセサミンを定量した。
【0025】
＜回帰式の作成＞
フーリエ変換型近赤外分光計ＭＰＡ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて、ＨＰＬＣ分析に用いた各調整用植物油（Ａ－１）の近赤外スペクトルを以下の条件で測定し、原スペクトルデータを得た。
測定波数：１２５００～４０００ｃｍ－１
積算回数：１２８回
分解能：８ｃｍ－１
フーリエ変換型近赤外分光計ＭＰＡ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて、ＨＰＬＣ分析に用いた各調整用植物油（Ａ－１）の近赤外スペクトルを以下の条件で測定し、原スペクトルデータを得た。
測定波数：１２５００～４０００ｃｍ－１
積算回数：１２８回
分解能：８ｃｍ－１
【0026】
解析ソフトＯｐｕｓ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を用いて各調整用植物油の原スペクトルデータについてスペクトル前処理（一次微分及びベクトル正規化）を行った後、波数領域を９４００～５９００ｃｍ－１に限定してスペクトルデータを得た。各調整用植物油について、スペクトルデータを説明変数に、ＨＰＬＣ分析で求めたセサミンの定量値を目的変数にそれぞれ設定し、ＰＬＳ法で多変量回帰分析することにより回帰式を作成した。
【0027】
＜測定用植物油中のゴマリグナンの定量＞
調整用植物油とは製造日の異なる測定用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、調整用植物油と同じ条件で近赤外スペクトルの測定及び加工を行い、スペクトルデータを得た。測定用植物油のスペクトルデータに作成した回帰式を適用し、測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＮＩＲ定量値という）を算出した。
調整用植物油とは製造日の異なる測定用植物油（竹本油脂株式会社製 太白胡麻油（Ａ－１））について、調整用植物油と同じ条件で近赤外スペクトルの測定及び加工を行い、スペクトルデータを得た。測定用植物油のスペクトルデータに作成した回帰式を適用し、測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＮＩＲ定量値という）を算出した。
【0028】
＜定量精度の検討＞
近赤外スペクトルの測定に用いた測定用植物油（Ａ－１）について上記条件でＨＰＬＣ分析を行い、ＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と予め作成した検量線とを対比して測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＨＰＬＣ定量値という）を算出した。そして、測定用植物油（Ａ－１）のＮＩＲ定量値とＨＰＬＣ定量値との誤差を下記式により算出し、以下の基準で評価した。実施例１の誤差は２％未満であった。
誤差（％）＝｜ＨＰＬＣ定量値－ＮＩＲ定量値｜÷ＨＰＬＣ定量値×１００
◎：２％未満
〇：２～３％
×：３％超
近赤外スペクトルの測定に用いた測定用植物油（Ａ－１）について上記条件でＨＰＬＣ分析を行い、ＵＶの吸収スペクトルのピーク面積と予め作成した検量線とを対比して測定用植物油（Ａ－１）中のセサミンの定量値（以下、ＨＰＬＣ定量値という）を算出した。そして、測定用植物油（Ａ－１）のＮＩＲ定量値とＨＰＬＣ定量値との誤差を下記式により算出し、以下の基準で評価した。実施例１の誤差は２％未満であった。
誤差（％）＝｜ＨＰＬＣ定量値－ＮＩＲ定量値｜÷ＨＰＬＣ定量値×１００
◎：２％未満
〇：２～３％
×：３％超
【0029】
実施例２～１５、参考例１６～５１、比較例１～２５
実施例１と同様にして、表１～表３に示す実施例２～１５、参考例１６～５１及び比較例１～２５についても同様に測定および評価を行った。
実施例１と同様にして、表１～表３に示す実施例２～１５、参考例１６～５１及び比較例１～２５についても同様に測定および評価を行った。
【0030】
表１～表３中の植物油は以下の通りである。
Ａ－１：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油
Ａ－２：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の１：９の混合油
Ａ－３：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の５：５の混合油
Ａ－４：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の９：１の混合油
Ａ－５：かどや製油株式会社製 純白ごま油
Ａ－６：九鬼産業株式会社製 九鬼太白純正胡麻油
Ａ－７：竹本油脂株式会社製 純正胡麻油
Ａ－８：かどや製油株式会社製 金印純正ごま油
Ａ－１：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油
Ａ－２：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の１：９の混合油
Ａ－３：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の５：５の混合油
Ａ－４：竹本油脂株式会社製 太白胡麻油と焙煎ごま油の９：１の混合油
Ａ－５：かどや製油株式会社製 純白ごま油
Ａ－６：九鬼産業株式会社製 九鬼太白純正胡麻油
Ａ－７：竹本油脂株式会社製 純正胡麻油
Ａ－８：かどや製油株式会社製 金印純正ごま油
【0031】
【表1】
【0032】
【表2】
【0033】
【表3】
【0034】
実施例１から実施例１５、及び参考例１６から５１は、ＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が小さく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた高精度の定量方法を実現できた。また、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いているため、測定用植物油中のゴマリグナンを短時間で定量できた。一方、比較例１から比較例１８は、ゴマリグナンがセサミノール又はセサモールであるため、一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せのいずれの前処理をしてもＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が大きく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた定量精度が低かった。比較例１９から比較例２５は、前処理が一次微分単独、二次微分単独、及び一次微分とベクトル正規化との組合せのいずれでもないため、ＨＰＬＣ定量値に対するＮＩＲ定量値の誤差が大きく、フーリエ変換型近赤外光分析装置を用いた定量精度が低かった。