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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023085555
(43)【公開日】2023-06-20
(54)【発明の名称】抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20230613BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230613BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20230613BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20230613BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230613BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230613BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230613BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20230613BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230613BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230613BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68 ZNA
A61K47/26
A61K47/18
A61K47/10
A61K9/08
A61P35/00
A61K39/395 L
A61K9/19
C07K16/28
C12N15/13
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023065779
(22)【出願日】2023-04-13
(62)【分割の表示】P 2021500575の分割
【原出願日】2020-03-25
(31)【優先権主張番号】201910231203.4
(32)【優先日】2019-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520087262
【氏名又は名称】レメゲン シーオー．，エルティーディー．
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＭＥＧＥＮ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．５８ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｄｄｌｅ Ｒｏａｄ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｉｎａ（Ｓｈａｎｄｏｎｇ）Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４００６ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】李 壮林
(72)【発明者】
【氏名】徐 巧玉
(72)【発明者】
【氏名】姚 雪静
(72)【発明者】
【氏名】鮑 倩ジン
(72)【発明者】
【氏名】房 健民
(57)【要約】
【課題】抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤の提供。
【解決手段】本発明は、非還元糖と、組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体と、界面活性剤との混合物を含む医薬製剤に関する。前記医薬製剤は、粒子状物質の減少、凝集体形成の低減、コンジュゲートの安定性の改善、凍結乾燥粉末の外観の改善などの特徴を有する。本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの水含有液体医薬製剤であって、抗体－薬物コンジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニトール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、非還元糖と、組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体と、界面活性剤との混合物を含む医薬製剤に関する。前記医薬製剤は、粒子状物質の減少、凝集体形成の低減、コンジュゲートの安定性の改善、凍結乾燥粉末の外観の改善などの特徴を有する。本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの水含有液体医薬製剤であって、抗体－薬物コンジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニトール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤に関し、抗腫瘍薬の分野に属する
。
。
【背景技術】
【0002】
腫瘍を標的とした生物学的療法は、がん治療の研究においてますます注目を集めている
。その中で、モノクローナル抗体は標的特異性が高く、副作用が少ないが、単独で使用し
た場合、その有効性は比較的限られている。現在、最も成功している抗腫瘍モノクローナ
ル抗体薬は、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性腫瘍（ＣＬＬ）な
どを標的とする。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕとしても知られるＥｒｂＢ２は、ＥＧＦＲファミリーの第２のメンバ
ーであり、ＥｒｂＢ２は、ＥＧＦＲファミリーの他の３つのメンバーとヘテロダイマーを
形成して、生物学的役割を果たす。ＥｒｂＢ２をコードするｎｅｕ遺伝子は、ラット神経
芽細胞腫から最初に単離されたものである。ヒト体細胞のｎｅｕ遺伝子の相同遺伝子は、
Ｈｅｒ２と称され、１７番染色体の長腕（１７ｑ２１．１）にあり、コードされた生成物
ＥｒｂＢ２は、１２５５個のアミノ酸からなり、分子量が約１８５ｋＤａであり、そのう
ち、７２０～９８７番目がチロシンキナーゼ活性領域に属する。ＥｒｂＢ２は、ＰＩ３Ｋ
及びＭＡＰＫシグナル伝達経路を介して作用することに加えて、サイクリン（ｃｙｃｌｉ
ｎ）Ｄ及びｃ－ｍｙｃの発現を低下させ、さらに、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｙｃｌ
ｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ、ｃｄｋ）阻害剤ｐ２７ｋｉｐｌの発現を低減さ
せ、ｃｄｋ２の活性が阻害されて細胞増殖を引き起こす。研究の拡大及び深まりにつれて
、ＨＥＲ２がさまざまな腫瘍で発現及び過剰発現することを発見しているため、悪性腫瘍
を治療するためにＨＥＲ２を標的とする有効な医薬品が臨床的に必要とされ、現在、市販
されているＨｅｒ２を標的とするモノクローナル抗体は、３つの種類がある（表１を参照
）。
。その中で、モノクローナル抗体は標的特異性が高く、副作用が少ないが、単独で使用し
た場合、その有効性は比較的限られている。現在、最も成功している抗腫瘍モノクローナ
ル抗体薬は、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性腫瘍（ＣＬＬ）な
どを標的とする。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕとしても知られるＥｒｂＢ２は、ＥＧＦＲファミリーの第２のメンバ
ーであり、ＥｒｂＢ２は、ＥＧＦＲファミリーの他の３つのメンバーとヘテロダイマーを
形成して、生物学的役割を果たす。ＥｒｂＢ２をコードするｎｅｕ遺伝子は、ラット神経
芽細胞腫から最初に単離されたものである。ヒト体細胞のｎｅｕ遺伝子の相同遺伝子は、
Ｈｅｒ２と称され、１７番染色体の長腕（１７ｑ２１．１）にあり、コードされた生成物
ＥｒｂＢ２は、１２５５個のアミノ酸からなり、分子量が約１８５ｋＤａであり、そのう
ち、７２０～９８７番目がチロシンキナーゼ活性領域に属する。ＥｒｂＢ２は、ＰＩ３Ｋ
及びＭＡＰＫシグナル伝達経路を介して作用することに加えて、サイクリン（ｃｙｃｌｉ
ｎ）Ｄ及びｃ－ｍｙｃの発現を低下させ、さらに、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｙｃｌ
ｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ、ｃｄｋ）阻害剤ｐ２７ｋｉｐｌの発現を低減さ
せ、ｃｄｋ２の活性が阻害されて細胞増殖を引き起こす。研究の拡大及び深まりにつれて
、ＨＥＲ２がさまざまな腫瘍で発現及び過剰発現することを発見しているため、悪性腫瘍
を治療するためにＨＥＲ２を標的とする有効な医薬品が臨床的に必要とされ、現在、市販
されているＨｅｒ２を標的とするモノクローナル抗体は、３つの種類がある（表１を参照
）。
【0003】
【表1】
【0004】
抗体標的化の特徴に基づいて、新世代の生物学的標的化薬物：抗体－薬物コンジュゲー
ト（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｔｅ、ＡＤＣ）が出現し、ＡＤＣは、抗
体、細胞毒素、及び両方を連結するリンカーの３つの部分からなる。モノクローナル抗体
を細胞毒素とカップリングした後、抗体－薬物コンジュゲートは、モノクローナル抗体の
標的性を使用して、がん細胞の表面の受容体を特異的に認識し、受容体に結合してから、
細胞に入り、細胞内プロテアーゼを使用して細胞毒性物質を放出し、がん細胞が増殖する
のを防ぎ、がん細胞を殺す。従来技術において、一般に、哺乳動物細胞培養を使用して発
現抗体を生成し、高度に精製された抗体は、リンカーを介して細胞毒素ＭＭＡＥにカップ
リングされ、抗体－薬物コンジュゲート（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｔ
ｅ、ＡＤＣ）を取得する。抗体薬物カップリング技術は、小分子毒素薬物と生物学的タン
パク質を統合し、両方の利点を備え、新世代の治療製品になり、薬物の有効性を大幅に高
めるとともに、毒性の副作用を軽減する。現在、米国ＦＤＡで承認された４つのＡＤＣ薬
がある（表２を参照）。
ト（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｔｅ、ＡＤＣ）が出現し、ＡＤＣは、抗
体、細胞毒素、及び両方を連結するリンカーの３つの部分からなる。モノクローナル抗体
を細胞毒素とカップリングした後、抗体－薬物コンジュゲートは、モノクローナル抗体の
標的性を使用して、がん細胞の表面の受容体を特異的に認識し、受容体に結合してから、
細胞に入り、細胞内プロテアーゼを使用して細胞毒性物質を放出し、がん細胞が増殖する
のを防ぎ、がん細胞を殺す。従来技術において、一般に、哺乳動物細胞培養を使用して発
現抗体を生成し、高度に精製された抗体は、リンカーを介して細胞毒素ＭＭＡＥにカップ
リングされ、抗体－薬物コンジュゲート（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｔ
ｅ、ＡＤＣ）を取得する。抗体薬物カップリング技術は、小分子毒素薬物と生物学的タン
パク質を統合し、両方の利点を備え、新世代の治療製品になり、薬物の有効性を大幅に高
めるとともに、毒性の副作用を軽減する。現在、米国ＦＤＡで承認された４つのＡＤＣ薬
がある（表２を参照）。
【0005】
【表2】
【0006】
他の生体高分子薬と同様に、ＡＤＣ薬は、分解、例えば、酸化、脱アミド化及び断片化
、ならびに微粒子及び凝集体の形成を受けやすい。さらに、薬物カップリング自体が安定
性を低下させ、抗体の物理化学的特性を変化させる可能性がある。例えば、ＤＭ１を抗－
ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブにカップリングさせると、抗体のＣＨ２ドメインの安
定性が失われる（非特許文献１：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｒａｓｔｕｚｕ
ｍａｂ－ＤＭ１： Ｃｈａｎｇｅｓ ｄｕｅ ｔｏ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ． Ａｄｉｔｙａ Ａ． Ｗａｋａｎｋ
ａｒら、 Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０： ２１ （９）
、 １５８８－１５９５）。ＡＤＣ薬は、一般に疎水性であり、全体として、カップリン
グされていない抗体よりも不溶性である可能性があるため、凝集、微粒子の形成及び表面
吸着を起こしやすくなる。輸送及び保管中に安定したＡＤＣ薬を提供するため、製剤中の
各添加剤を注意深く選択する必要がある。現在、市販されているＡＤＣ薬の添加剤の成分
を表３に示す。現在市販されているＡＤＣ製剤に使用される添加剤成分の種類は、依然と
しても非常に限られており、関連する製剤成分の選択肢が多いため、輸送及び保管中に安
定性を提供するＡＤＣ添加剤製剤の組み合わせを開発し、これは、大量の添加剤製剤組成
へのスクリーニング及び好適な濃度の特定に関し、多大な労力及び長い時間を必要とする
。
、ならびに微粒子及び凝集体の形成を受けやすい。さらに、薬物カップリング自体が安定
性を低下させ、抗体の物理化学的特性を変化させる可能性がある。例えば、ＤＭ１を抗－
ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブにカップリングさせると、抗体のＣＨ２ドメインの安
定性が失われる（非特許文献１：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｒａｓｔｕｚｕ
ｍａｂ－ＤＭ１： Ｃｈａｎｇｅｓ ｄｕｅ ｔｏ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ． Ａｄｉｔｙａ Ａ． Ｗａｋａｎｋ
ａｒら、 Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０： ２１ （９）
、 １５８８－１５９５）。ＡＤＣ薬は、一般に疎水性であり、全体として、カップリン
グされていない抗体よりも不溶性である可能性があるため、凝集、微粒子の形成及び表面
吸着を起こしやすくなる。輸送及び保管中に安定したＡＤＣ薬を提供するため、製剤中の
各添加剤を注意深く選択する必要がある。現在、市販されているＡＤＣ薬の添加剤の成分
を表３に示す。現在市販されているＡＤＣ製剤に使用される添加剤成分の種類は、依然と
しても非常に限られており、関連する製剤成分の選択肢が多いため、輸送及び保管中に安
定性を提供するＡＤＣ添加剤製剤の組み合わせを開発し、これは、大量の添加剤製剤組成
へのスクリーニング及び好適な濃度の特定に関し、多大な労力及び長い時間を必要とする
。
【0007】
【表3】
【0008】
上記の４つのＡＤＣ製剤添加剤成分は、各製剤のいずれにも独立した特性を持つ。モノ
クローナル抗体薬の壊れやすい安定性と構造の複雑さのために、そのような薬を製造して
保管することは非常に困難になる。抗体の異質性構造、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）及
びＦｃグリコシル化により、異なるモノクローナル抗体の製剤開発のそれぞれをケースバ
イケースで実施する必要がある（非特許文献２：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ： ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍａｒｋｅｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａ
ｎｄ ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｎｏｖｅｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓ
ｔｅｍ 、Ｙａｎａｎ Ｃｕｉ等、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄ
ｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第４３卷、第４期、第５１９～５３０頁、２０１７
年）。しかも、ＡＤＣ薬は、さらにカップリング及び毒素分子に関するため、その製剤開
発に独自性がより高くなる。
クローナル抗体薬の壊れやすい安定性と構造の複雑さのために、そのような薬を製造して
保管することは非常に困難になる。抗体の異質性構造、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）及
びＦｃグリコシル化により、異なるモノクローナル抗体の製剤開発のそれぞれをケースバ
イケースで実施する必要がある（非特許文献２：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ： ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍａｒｋｅｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａ
ｎｄ ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｎｏｖｅｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓ
ｔｅｍ 、Ｙａｎａｎ Ｃｕｉ等、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄ
ｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第４３卷、第４期、第５１９～５３０頁、２０１７
年）。しかも、ＡＤＣ薬は、さらにカップリング及び毒素分子に関するため、その製剤開
発に独自性がより高くなる。
【0009】
特許出願（特許文献１：ＣＮ１０５００８３９８Ａ又は特許文献２：ＷＯ２０１５０７
４５２８Ａ１）は、ヒト化ＲＣ４８抗体薬物コンジュゲートを開示しており、ここで、ヒ
ト化ＲＣ４８抗体は、Ｈｅｒ２を標的とするモノクローナル抗体（受託番号Ｃ２０１３１
７０ 中国典型培養物保蔵センターに寄託されたハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）によ
って分泌される抗体、又はそれに由来する抗体）であり、毒物は、Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ
ＡｕｒｉｓｔａｔｉｎＥ（ＭＭＡＥ）から選択され、該毒物は、アプリシアトキシンの
誘導体に属する。リンカーは、Ｍａｌｅｉｍｉｄｏ－Ｃａｐｒｏｙｌ－Ｖａｌｉｎｅ－Ｃ
ｉｔｒｕｌｌｉｎｅ－ｐ－ＡｍｉｎｏＢｅｎｚｙｌｏｘｙ （ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ）から
選択され、組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体のうち、モノク
ローナル抗体とＭＭＡＥは、システインを介してリンカーに連結してなる。該薬物は、Ｈ
ｅｒ２陽性腫瘍に対して優れた治療効果を達成する。
４５２８Ａ１）は、ヒト化ＲＣ４８抗体薬物コンジュゲートを開示しており、ここで、ヒ
ト化ＲＣ４８抗体は、Ｈｅｒ２を標的とするモノクローナル抗体（受託番号Ｃ２０１３１
７０ 中国典型培養物保蔵センターに寄託されたハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）によ
って分泌される抗体、又はそれに由来する抗体）であり、毒物は、Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ
ＡｕｒｉｓｔａｔｉｎＥ（ＭＭＡＥ）から選択され、該毒物は、アプリシアトキシンの
誘導体に属する。リンカーは、Ｍａｌｅｉｍｉｄｏ－Ｃａｐｒｏｙｌ－Ｖａｌｉｎｅ－Ｃ
ｉｔｒｕｌｌｉｎｅ－ｐ－ＡｍｉｎｏＢｅｎｚｙｌｏｘｙ （ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ）から
選択され、組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体のうち、モノク
ローナル抗体とＭＭＡＥは、システインを介してリンカーに連結してなる。該薬物は、Ｈ
ｅｒ２陽性腫瘍に対して優れた治療効果を達成する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0010】
【特許文献1】ＣＮ１０５００８３９８Ａ
【特許文献2】ＷＯ２０１５０７４５２８Ａ１
【特許文献3】ＣＮ２０１８１０９９８０５５．４
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ－ＤＭ１： Ｃｈａｎｇｅｓ ｄｕｅ ｔｏ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ． Ａｄｉｔｙａ Ａ． Ｗａｋａｎｋａｒら、 Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０： ２１ （９）、 １５８８－１５９５
【非特許文献2】Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍａｒｋｅｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｎｏｖｅｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ 、Ｙａｎａｎ Ｃｕｉ等、Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第４３卷、第４期、第５１９～５３０頁、２０１７年
【非特許文献3】Ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ （ＨＥＲ２） ｉｎ Ｃａｎｃｅｒｓ：Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｉｄａ Ｉｑｂａｌ ａｎｄ Ｎａｖｅｅｄ Ｉｑｂａｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｖｏｌｕｍｅ ２０１４、 Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８５２７４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
前記試験に示すように、カップリングによる組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗
体－ＭＭＡＥ複合体は、精製された後、通常のバッファーへの溶解度が低く、裸眼で見え
る不溶性粒子が現れ、注射液の基準を満たさないことが分かるが、有効な治療用量を達成
するように、タンパク質濃度が５ｍｇ／ｍｌ以上に達する必要があるため、如何に一定の
保証濃度の確保を前提として不溶性粒子の問題を解決するかという方法は、さらなる研究
が必要である。さらに、タンパク質溶液を真空凍結乾燥する場合は、凍結乾燥粉末の外観
を良くしつつ、凍結乾燥プロセス中にタンパク質が損傷するのを防ぐために、凍結乾燥保
護剤を添加する必要がある。長期保存中でタンパク質凍結乾燥粉末がゆっくりと分解する
のを避けるために、適切なタンパク質安定剤を加える必要がある。如何に適切なタンパク
質安定剤を特定するかという方法は、大量の試験を通じて開発及び決定する必要もある。
体－ＭＭＡＥ複合体は、精製された後、通常のバッファーへの溶解度が低く、裸眼で見え
る不溶性粒子が現れ、注射液の基準を満たさないことが分かるが、有効な治療用量を達成
するように、タンパク質濃度が５ｍｇ／ｍｌ以上に達する必要があるため、如何に一定の
保証濃度の確保を前提として不溶性粒子の問題を解決するかという方法は、さらなる研究
が必要である。さらに、タンパク質溶液を真空凍結乾燥する場合は、凍結乾燥粉末の外観
を良くしつつ、凍結乾燥プロセス中にタンパク質が損傷するのを防ぐために、凍結乾燥保
護剤を添加する必要がある。長期保存中でタンパク質凍結乾燥粉末がゆっくりと分解する
のを避けるために、適切なタンパク質安定剤を加える必要がある。如何に適切なタンパク
質安定剤を特定するかという方法は、大量の試験を通じて開発及び決定する必要もある。
【0013】
従って、本発明は、生物学的製剤に利用可能な添加剤に対して広範なスクリーニング及
び濃度範囲の研究を行うことにより、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体の
添加剤の組み合わせを得、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体は凍結乾燥の
前後で十分に溶解でき、不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液の基準を満たすと
ともに、凍結乾燥及び保存過程で長期間にわたって安定して維持し、再構成後でも重合ま
たは分解しにくく、良好な生物学的活性を維持するという技術的効果を達成することを、
目的とする。
び濃度範囲の研究を行うことにより、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体の
添加剤の組み合わせを得、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体は凍結乾燥の
前後で十分に溶解でき、不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液の基準を満たすと
ともに、凍結乾燥及び保存過程で長期間にわたって安定して維持し、再構成後でも重合ま
たは分解しにくく、良好な生物学的活性を維持するという技術的効果を達成することを、
目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0014】
本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの水含有液体医薬製剤であって、抗体－薬物コン
ジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニト
ール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒ
スチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、又はそれらの組み合わせか
ら選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合
わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤を提供する。
ジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニト
ール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒ
スチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、又はそれらの組み合わせか
ら選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合
わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤を提供する。
【0015】
幾つかの実施形態において、前記マンニトールの濃度は、１００～３００ｍｍｏｌ／Ｌ
であり、好ましくは、１９０～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、２００～２
６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記シ
ョ糖の濃度は、０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、４０～１００ｍｍｏｌ／Ｌ
であり、より好ましくは、６０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、４０～６
０ｍｍｏｌ／Ｌである。
幾つかの実施形態において、前記ヒスチジンは、ヒスチジン塩酸塩であり、濃度が０～
１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、５～５０ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは
、５～２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、１０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記アルギ
ニンは、アルギニン塩酸塩であり、濃度が０～１６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、
２０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、３０～９０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最
も好ましくは、約３５ｍｍｏｌ／Ｌである。
幾つかの実施形態において、前記グリセリンの含有量が０～１％であり、好ましくは、
０．２～０．５％（ｗ／ｖ）であり、前記Ｔｗｅｅｎ８０が質量％で、０～０．０２％（
ｗ／ｖ）である。
であり、好ましくは、１９０～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、２００～２
６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記シ
ョ糖の濃度は、０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、４０～１００ｍｍｏｌ／Ｌ
であり、より好ましくは、６０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、４０～６
０ｍｍｏｌ／Ｌである。
幾つかの実施形態において、前記ヒスチジンは、ヒスチジン塩酸塩であり、濃度が０～
１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、５～５０ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは
、５～２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、１０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記アルギ
ニンは、アルギニン塩酸塩であり、濃度が０～１６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、
２０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、３０～９０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最
も好ましくは、約３５ｍｍｏｌ／Ｌである。
幾つかの実施形態において、前記グリセリンの含有量が０～１％であり、好ましくは、
０．２～０．５％（ｗ／ｖ）であり、前記Ｔｗｅｅｎ８０が質量％で、０～０．０２％（
ｗ／ｖ）である。
【0016】
さらに、前記抗体－薬物コンジュゲートの前記抗体は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体
であり、抗体がカップリングした薬物は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及びその誘導体、或いは
ＤＭ１、ＤＭ４及びその誘導体である。
さらに、前記抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲートは、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体
－ｖｃ－ＭＭＡＥであり、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体とＭＭＡＥは、リンカーｖ
ｃにより連結され、ここで、前記リンカーとＭＭＡＥを連結した構造は、以下の通りであ
る。
であり、抗体がカップリングした薬物は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及びその誘導体、或いは
ＤＭ１、ＤＭ４及びその誘導体である。
さらに、前記抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲートは、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体
－ｖｃ－ＭＭＡＥであり、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体とＭＭＡＥは、リンカーｖ
ｃにより連結され、ここで、前記リンカーとＭＭＡＥを連結した構造は、以下の通りであ
る。
【0017】
【化1】
【0018】
さらに、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２及び３で表されるアミノ酸配
列を有するＣＤＲ１－３を含み、及び／又は
（ｉｉ）前記軽鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５及び６で表されるアミノ酸
配列を有するＣＤＲ１－３を含む。
（ｉ）前記重鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２及び３で表されるアミノ酸配
列を有するＣＤＲ１－３を含み、及び／又は
（ｉｉ）前記軽鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５及び６で表されるアミノ酸
配列を有するＣＤＲ１－３を含む。
【0019】
さらに、前記モノクローナル抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体であることが好ましい
。
幾つかの実施形態において、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥの濃
度は、５～３０ｍｇ／ｍｌである。
幾つかの実施形態において、前記非還元糖は、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニト
ール及び／又は４０ｍｍｏｌ／Ｌ～６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、
８～１２ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記カオトロピック剤は、０～０．０
２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
幾つかの実施形態において、前記非還元糖は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及
び約４０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン
塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記
カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
。
幾つかの実施形態において、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥの濃
度は、５～３０ｍｇ／ｍｌである。
幾つかの実施形態において、前記非還元糖は、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニト
ール及び／又は４０ｍｍｏｌ／Ｌ～６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、
８～１２ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記カオトロピック剤は、０～０．０
２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
幾つかの実施形態において、前記非還元糖は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及
び約４０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン
塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記
カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
【0020】
幾つかの実施形態において、前記非還元糖は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及
び約６０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン
塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記
カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
さらに、前記製剤のｐＨは、４．５～７であり、好ましくは、５．６～６．８であり、
より好ましくは、５．６～６．５、５．６～６．４、５．６～６．３、６．１～６．４、
６．１～６．３である。
前記製剤のｐＨは、ＮａＯＨ又は塩酸で調整される。
幾つかの実施形態において、前記凍結乾燥医薬製剤は、上記水含有液体医薬製剤を凍結
乾燥することにより得られる。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニト
ール、約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０
２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体
－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である。
び約６０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン
塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記
カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である。
さらに、前記製剤のｐＨは、４．５～７であり、好ましくは、５．６～６．８であり、
より好ましくは、５．６～６．５、５．６～６．４、５．６～６．３、６．１～６．４、
６．１～６．３である。
前記製剤のｐＨは、ＮａＯＨ又は塩酸で調整される。
幾つかの実施形態において、前記凍結乾燥医薬製剤は、上記水含有液体医薬製剤を凍結
乾燥することにより得られる。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニト
ール、約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０
２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体
－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である。
【0021】
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニト
ール、約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、０．０２
％のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭ
ＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニト
ール及びショ糖であり、それらの濃度は、それぞれ約４７．３６ｍｇ／ｍｌ及び約１３．
６９ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度は、約２．
１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量
は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニト
ール及びショ糖であり、それらの濃度は、それぞれ約４３．７２ｍｇ／ｍｌ及び約２０．
５４ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度は、約２．
１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量
が約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
ール、約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、０．０２
％のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭ
ＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニト
ール及びショ糖であり、それらの濃度は、それぞれ約４７．３６ｍｇ／ｍｌ及び約１３．
６９ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度は、約２．
１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量
は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
さらに、薬物の凍結乾燥前の水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニト
ール及びショ糖であり、それらの濃度は、それぞれ約４３．７２ｍｇ／ｍｌ及び約２０．
５４ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度は、約２．
１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量
が約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【0022】
本発明は、さらに、Ｈｅｒ２の異常発現による疾患を治療する薬物の調製における上記
医薬製剤の用途を提供し、前記異常発現による疾患は、がんであることがさらに好ましく
、前記がん症は、Ｈｅｒ２陽性がんであることがさらに好ましく、前記Ｈｅｒ２陽性がん
は、乳がん、卵巣がん、胃がん、尿路上皮がん、胃食道接合部がん、食道がん、子宮内膜
がん、肺がん又は膀胱がんであることがさらに好ましい（非特許文献３ Ｈｕｍａｎ Ｅ
ｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ （ＨＥＲ２）
ｉｎ Ｃａｎｃｅｒｓ：Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｉｄａ Ｉｑｂａｌ ａｎｄ Ｎａｖｅｅｄ Ｉｑ
ｂａｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｖｏｌｕ
ｍｅ ２０１４、 Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８５２７４８；特許文献３：ＣＮ２０１８１
０９９８０５５．４を参照）。
医薬製剤の用途を提供し、前記異常発現による疾患は、がんであることがさらに好ましく
、前記がん症は、Ｈｅｒ２陽性がんであることがさらに好ましく、前記Ｈｅｒ２陽性がん
は、乳がん、卵巣がん、胃がん、尿路上皮がん、胃食道接合部がん、食道がん、子宮内膜
がん、肺がん又は膀胱がんであることがさらに好ましい（非特許文献３ Ｈｕｍａｎ Ｅ
ｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ （ＨＥＲ２）
ｉｎ Ｃａｎｃｅｒｓ：Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｉｄａ Ｉｑｂａｌ ａｎｄ Ｎａｖｅｅｄ Ｉｑ
ｂａｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｖｏｌｕ
ｍｅ ２０１４、 Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８５２７４８；特許文献３：ＣＮ２０１８１
０９９８０５５．４を参照）。
【0023】
本発明は、さらに、抗体－薬物コンジュゲート医薬製剤を調製するための方法を提供す
る。前記方法は、
（１）上記のいずれかの製剤を調製すること、及び
（２）該製剤中の抗体－薬物コンジュゲートの安定性を評価することを含む。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
抗体－薬物コンジュゲートの水含有液体医薬製剤であって、抗体－薬物コンジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニトール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、及び上記アミノ酸の塩酸塩、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤。
（項目２）
前記マンニトールの濃度は、１００～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、１９０～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、２００～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記ショ糖の濃度は、０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、４０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、６０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、４０～６０ｍｍｏｌ／Ｌである、項目１に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目３）
前記ヒスチジンは、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、５～５０ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、５～２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、１０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記アルギニンは、アルギニン塩酸塩であり、その濃度は、０～１６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、２０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、３０～９０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、３５ｍｍｏｌ／Ｌである、項目１又は２に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目４）
前記グリセリンの含有量は、０～１％であり、好ましくは、０．２～０．５％（ｗ／ｖ）であり、前記Ｔｗｅｅｎ８０は、質量％で０～０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１～３のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目５）
前記抗体－薬物コンジュゲートの前記抗体は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であり、抗体がカップリングした薬物は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及びその誘導体、或いはＤＭ１、ＤＭ４及びその誘導体である、項目１～４のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目６）
前記抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲートは、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥであり、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体とＭＭＡＥは、リンカーｖｃにより連結され、ここで、前記リンカーとＭＭＡＥを連結した構造は、
である、項目５に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目７）
前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２及び３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１－３を含み、及び／又は
（ｉｉ）前記軽鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５及び６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１－３を含み、
前記モノクローナル抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体であることが好ましい、項目５又は６に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目８）
前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥの濃度は、５～３０ｍｇ／ｍｌである、項目１～７のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目９）
前記非還元糖は、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び／又は４０ｍｍｏｌ／Ｌ～６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、８～１２ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記カオトロピック剤は、０～０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０である、項目８に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１０）
前記非還元糖は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である、項目９に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１１）
前記非還元糖は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である、項目１０に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１２）
前記製剤のｐＨは、４．５～７であり、好ましくは、５．６～６．８であり、より好ましくは、５．６～６．５、５．６～６．４、５．６～６．３、６．１～６．４、６．１～６．３である、項目１～１１のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１３）
項目１～１２のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤を凍結乾燥させることにより得られる、抗体－薬物コンジュゲートの凍結乾燥医薬製剤。
（項目１４）
前記水含有液体医薬製剤は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール、約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１５）
前記水含有液体医薬製剤は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール、約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０２％のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１６）
前記水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニトール及びショ糖であり、それらの濃度がそれぞれ約４７．３６ｍｇ／ｍｌ及び約１３．６９ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が約２．１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量が約０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１７）
前記水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニトール及びショ糖であり、それらの濃度がそれぞれ約４３．７２ｍｇ／ｍｌ及び約２０．５４ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が約２．１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量が約０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１８）
項目１～１７のいずれか１項に記載の医薬製剤のＨｅｒ２の異常発現による疾患を治療する薬物の調製における用途であって、前記異常発現による疾患は、さらに好ましくは、がん症であり、前記がん症は、さらに好ましくは、Ｈｅｒ２陽性がんであり、前記Ｈｅｒ２陽性がんは、さらに好ましくは、乳がん、卵巣がん、胃がん、尿路上皮がん、胃食道接合部がん、食道がん、子宮内膜がん、肺がん又は膀胱がんである、用途。
（項目１９）
（１）項目１～１７のいずれかの製剤を調製すること、及び
（２）該製剤中の抗体－薬物コンジュゲートの安定性を評価すること、を含む抗体－薬物コンジュゲート医薬製剤を調製するための方法。
る。前記方法は、
（１）上記のいずれかの製剤を調製すること、及び
（２）該製剤中の抗体－薬物コンジュゲートの安定性を評価することを含む。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
抗体－薬物コンジュゲートの水含有液体医薬製剤であって、抗体－薬物コンジュゲート、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤を含み、前記非還元糖は、マンニトール、ショ糖、トレハロース、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記アミノ酸は、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、及び上記アミノ酸の塩酸塩、又はそれらの組み合わせから選ばれ、前記カオトロピック剤は、グリセリン、Ｔｗｅｅｎ８０、又はそれらの組み合わせから選ばれる、水含有液体医薬製剤。
（項目２）
前記マンニトールの濃度は、１００～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、１９０～３００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、２００～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記ショ糖の濃度は、０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、４０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、６０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、４０～６０ｍｍｏｌ／Ｌである、項目１に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目３）
前記ヒスチジンは、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、５～５０ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、５～２０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、１０ｍｍｏｌ／Ｌであり、前記アルギニンは、アルギニン塩酸塩であり、その濃度は、０～１６０ｍｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、２０～１００ｍｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、３０～９０ｍｍｏｌ／Ｌであり、最も好ましくは、３５ｍｍｏｌ／Ｌである、項目１又は２に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目４）
前記グリセリンの含有量は、０～１％であり、好ましくは、０．２～０．５％（ｗ／ｖ）であり、前記Ｔｗｅｅｎ８０は、質量％で０～０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１～３のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目５）
前記抗体－薬物コンジュゲートの前記抗体は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であり、抗体がカップリングした薬物は、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及びその誘導体、或いはＤＭ１、ＤＭ４及びその誘導体である、項目１～４のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目６）
前記抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲートは、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥであり、前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体とＭＭＡＥは、リンカーｖｃにより連結され、ここで、前記リンカーとＭＭＡＥを連結した構造は、
【化1A】
（項目７）
前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２及び３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１－３を含み、及び／又は
（ｉｉ）前記軽鎖は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５及び６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１－３を含み、
前記モノクローナル抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体であることが好ましい、項目５又は６に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目８）
前記抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥの濃度は、５～３０ｍｇ／ｍｌである、項目１～７のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目９）
前記非還元糖は、２４０～２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び／又は４０ｍｍｏｌ／Ｌ～６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、８～１２ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記カオトロピック剤は、０～０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０である、項目８に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１０）
前記非還元糖は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である、項目９に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１１）
前記非還元糖は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール及び約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖であり、前記アミノ酸は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩であり、前記抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０である、項目１０に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１２）
前記製剤のｐＨは、４．５～７であり、好ましくは、５．６～６．８であり、より好ましくは、５．６～６．５、５．６～６．４、５．６～６．３、６．１～６．４、６．１～６．３である、項目１～１１のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤。
（項目１３）
項目１～１２のいずれか１項に記載の水含有液体医薬製剤を凍結乾燥させることにより得られる、抗体－薬物コンジュゲートの凍結乾燥医薬製剤。
（項目１４）
前記水含有液体医薬製剤は、約２６０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール、約４０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０２％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１５）
前記水含有液体医薬製剤は、約２４０ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール、約６０ｍｍｏｌ／Ｌのショ糖、約１０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン塩酸塩、約０．０２％のＴｗｅｅｎ ８０、約１０ｍｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体－ｖｃ－ＭＭＡＥを含み、ｐＨが５．６～６．８である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１６）
前記水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニトール及びショ糖であり、それらの濃度がそれぞれ約４７．３６ｍｇ／ｍｌ及び約１３．６９ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が約２．１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量が約０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１７）
前記水含有液体医薬製剤に含まれる前記非還元糖は、マンニトール及びショ糖であり、それらの濃度がそれぞれ約４３．７２ｍｇ／ｍｌ及び約２０．５４ｍｇ／ｍｌであり、前記アミノ酸は、ヒスチジン塩酸塩であり、その濃度が約２．１０ｍｇ／ｍｌであり、前記カオトロピック剤は、Ｔｗｅｅｎ ８０であり、その含有量が約０．０２％（ｗ／ｖ）である、項目１３に記載の凍結乾燥医薬製剤。
（項目１８）
項目１～１７のいずれか１項に記載の医薬製剤のＨｅｒ２の異常発現による疾患を治療する薬物の調製における用途であって、前記異常発現による疾患は、さらに好ましくは、がん症であり、前記がん症は、さらに好ましくは、Ｈｅｒ２陽性がんであり、前記Ｈｅｒ２陽性がんは、さらに好ましくは、乳がん、卵巣がん、胃がん、尿路上皮がん、胃食道接合部がん、食道がん、子宮内膜がん、肺がん又は膀胱がんである、用途。
（項目１９）
（１）項目１～１７のいずれかの製剤を調製すること、及び
（２）該製剤中の抗体－薬物コンジュゲートの安定性を評価すること、を含む抗体－薬物コンジュゲート医薬製剤を調製するための方法。
【発明の効果】
【0024】
本発明の抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体は凍結乾燥の前後で十分に溶
解でき、不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液の基準を満たすとともに、凍結乾
燥及び保存過程で長期間にわたって安定して維持し、再構成後でも重合または分解しにく
く、良好な生物学的活性を維持するという技術的効果を達成する。
解でき、不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液の基準を満たすとともに、凍結乾
燥及び保存過程で長期間にわたって安定して維持し、再構成後でも重合または分解しにく
く、良好な生物学的活性を維持するという技術的効果を達成する。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【発明を実施するための形態】
【0026】
実施例１：抗体の精製
マウスモノクローナル抗体ｍＲＣ４８及び関連するヒト化抗体ＲＣ４８は、特許出願（
ＣＮ１０５００８３９８Ａ又はＷＯ２０１５０７４５２８Ａ１）の実施例に開示された関
連方法に基づいて得られ、ヒトＩｇＧ１κ重鎖定常領域及び重鎖可変領域ＲＣ４８－ＶＨ
、並びにヒトＩｇＧ１κ軽鎖定常領域及び軽鎖可変領域ＲＣ４８－ＶＬを含み、上記の増
幅された各フラグメントをそれぞれ発現ベクターｐｃＤＮＡ３．０にサブクローニングし
た。構築された異なるプラスミドを懸濁ＣＨＯ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にトランス
フェクションした。標準的な条件下で培養し、培地中の栄養物質がなくなり、細胞がさら
に成長しなくなったら、タンクに入れ、遠心分離またはろ過によって細胞を分離し、上清
を採取する。抗体タンパク質は上清に存在し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマ
トグラフィーカラムにロードして第１ステップの精製を行い、溶出された目的とするタン
パク質をカチオン充填剤のグクロマトグラフィーカラムにロードして第２ステップの精製
を行い、目的とするタンパク質のピークを収集する。その後、第３のステップのカラムに
ロードして目的のタンパク質透過モードで第３ステップの精製を行い、精製されたタンパ
ク質は、各指標の検査に合格した後、限外ろ過により濃縮する。タンパク質の濃度が約２
０～３０ｍｇ／ｍｌに達し、これは、抗体タンパク質ストック溶液であり、－８０℃で長
期間保存できる。
ここで、ＲＣ４８抗体のＣＤＲ配列は、以下の通りである。
マウスモノクローナル抗体ｍＲＣ４８及び関連するヒト化抗体ＲＣ４８は、特許出願（
ＣＮ１０５００８３９８Ａ又はＷＯ２０１５０７４５２８Ａ１）の実施例に開示された関
連方法に基づいて得られ、ヒトＩｇＧ１κ重鎖定常領域及び重鎖可変領域ＲＣ４８－ＶＨ
、並びにヒトＩｇＧ１κ軽鎖定常領域及び軽鎖可変領域ＲＣ４８－ＶＬを含み、上記の増
幅された各フラグメントをそれぞれ発現ベクターｐｃＤＮＡ３．０にサブクローニングし
た。構築された異なるプラスミドを懸濁ＣＨＯ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にトランス
フェクションした。標準的な条件下で培養し、培地中の栄養物質がなくなり、細胞がさら
に成長しなくなったら、タンクに入れ、遠心分離またはろ過によって細胞を分離し、上清
を採取する。抗体タンパク質は上清に存在し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマ
トグラフィーカラムにロードして第１ステップの精製を行い、溶出された目的とするタン
パク質をカチオン充填剤のグクロマトグラフィーカラムにロードして第２ステップの精製
を行い、目的とするタンパク質のピークを収集する。その後、第３のステップのカラムに
ロードして目的のタンパク質透過モードで第３ステップの精製を行い、精製されたタンパ
ク質は、各指標の検査に合格した後、限外ろ過により濃縮する。タンパク質の濃度が約２
０～３０ｍｇ／ｍｌに達し、これは、抗体タンパク質ストック溶液であり、－８０℃で長
期間保存できる。
ここで、ＲＣ４８抗体のＣＤＲ配列は、以下の通りである。
【0027】
【表4】
【0028】
実施例２：抗体とＭＭＡＥのカップリング
ヒト化抗体ＲＣ４８と薬物分子のカップリング
ＴＣＥＰ（Ｔｒｉｓ－２－ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ－ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）、ＤＴＰ
Ａ（Ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｒｉａｍｉｎｅ ｐｅｎｔａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ）の
母液をそれぞれカップリングバッファーに溶解させ、まず、カップリングバッファーで希
釈され、体積比１：１（ｖ：ｖ＝１：１）でモノクローナル抗体と混合した。ＴＣＥＰと
抗体の最終濃度モル比は、１．９：１であり、ＤＴＰＡの最終濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌで
ある。２５℃で２．５ｈｒ撹拌して反応させた。ＴＣＥＰ還元の再現性は良好であり、還
元後の遊離チオール基の数は、３．５～４．５に達する可能性がある。
ＴＣＥＰ還元後、抗体は次のカップリングを直接に行うことができる。１０ｍｍｏｌ／
Ｌの薬物（ｖｃ－ＭＭＡＥ、ｖｃ－ＭＭＡＦ、ｍｃ－ＭＭＡＦ）を調製してＤＭＳＯ（ｄ
ｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、ジメチルスルホキシド）に溶解させ、薬物とチオ
ール基のモル比で１．１：１でゆっくりと加え、２５℃で２ｈｒ撹拌して反応させた。Ｄ
ＴＮＢ法により４１２ｎｍにおける遊離チオール基の濃度（０に近い）を検出し、精製し
て残留未反応薬物及びＤＭＳＯなどの遊離小分子を除去し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動法
、ＳＥＣ、ＨＰＬＣ法によりカップリング状況を検出した。カップリング反応の再現性は
、良好であり、放出された遊離チオール基は完全にカップリングされることができ、結合
度が３．５～４．５である。
ヒト化抗体ＲＣ４８と薬物分子のカップリング
ＴＣＥＰ（Ｔｒｉｓ－２－ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ－ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）、ＤＴＰ
Ａ（Ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｒｉａｍｉｎｅ ｐｅｎｔａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ）の
母液をそれぞれカップリングバッファーに溶解させ、まず、カップリングバッファーで希
釈され、体積比１：１（ｖ：ｖ＝１：１）でモノクローナル抗体と混合した。ＴＣＥＰと
抗体の最終濃度モル比は、１．９：１であり、ＤＴＰＡの最終濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌで
ある。２５℃で２．５ｈｒ撹拌して反応させた。ＴＣＥＰ還元の再現性は良好であり、還
元後の遊離チオール基の数は、３．５～４．５に達する可能性がある。
ＴＣＥＰ還元後、抗体は次のカップリングを直接に行うことができる。１０ｍｍｏｌ／
Ｌの薬物（ｖｃ－ＭＭＡＥ、ｖｃ－ＭＭＡＦ、ｍｃ－ＭＭＡＦ）を調製してＤＭＳＯ（ｄ
ｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、ジメチルスルホキシド）に溶解させ、薬物とチオ
ール基のモル比で１．１：１でゆっくりと加え、２５℃で２ｈｒ撹拌して反応させた。Ｄ
ＴＮＢ法により４１２ｎｍにおける遊離チオール基の濃度（０に近い）を検出し、精製し
て残留未反応薬物及びＤＭＳＯなどの遊離小分子を除去し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動法
、ＳＥＣ、ＨＰＬＣ法によりカップリング状況を検出した。カップリング反応の再現性は
、良好であり、放出された遊離チオール基は完全にカップリングされることができ、結合
度が３．５～４．５である。
【0029】
実施例３：組換えヒト化抗Ｈｅｒ－２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体（ＲＣ４８
－ｖｃ－ＭＭＡＥ）溶解及び純度に対するｐＨの影響に関する研究
実験条件：注射用組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体タンパ
ク質２ｇ
０．１ｍｏｌ／Ｌのクエン酸、０．０２ｍｏｌ／Ｌのトリス(ヒドロキシメチル)アミノ
メタン、０．０２ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素ナトリウム、０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナト
リウムの緩衝液に限外ろ過し、希釈倍数は、１０4倍以上であり、１３部に均等に分割し
、各部分を孔径３０ｋＤの遠心式限外ろ過チューブでタンパク質濃度１０ｍｇ／ｍｌに濃
縮し、それぞれ塩酸又は水酸化ナトリウム溶液でｐＨ値が４．２、４．６、５．０、５．
４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．４になる
まで調整し、清澄度を観察し、濃度変化を検出し（結果を表５に示す）、サンプルをクリ
ーンベンチ内でそれぞれ滅菌された膜孔径０．２２μｍのシリンジフィルターで滅菌され
た２０ｍｌ バイアル瓶にろ過し、各ｐＨ値あたり３本であり、ボトル口部を滅菌済みの
ゴム栓で密封し、アルミキャップを締めた。２５℃で保管し、０時間、１日目、３日目、
７日目に滅菌シリンジで採取し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ純度の検査を行った（結果を表６に示
す）。
研究によると、実験条件下でタンパク質のｐＨを変更すると、タンパク質の溶解に大き
な影響を与え、ｐＨ５．４以下では、タンパク質は沈澱し、ｐＨ５．６以上では、タンパ
ク質の溶解性は良好であり、ｐＨ６．８以下では、３日間保存した場合にタンパク質凝集
体は、増加していないが、７日間保存した場合にわずかに増加し、ｐＨ７．０以上では、
凝集体は時間とともに増加し、ｐＨが高いほど、凝集体が増加した（具体的な結果を表５
、表６に示す）。
－ｖｃ－ＭＭＡＥ）溶解及び純度に対するｐＨの影響に関する研究
実験条件：注射用組換えヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体タンパ
ク質２ｇ
０．１ｍｏｌ／Ｌのクエン酸、０．０２ｍｏｌ／Ｌのトリス(ヒドロキシメチル)アミノ
メタン、０．０２ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素ナトリウム、０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナト
リウムの緩衝液に限外ろ過し、希釈倍数は、１０4倍以上であり、１３部に均等に分割し
、各部分を孔径３０ｋＤの遠心式限外ろ過チューブでタンパク質濃度１０ｍｇ／ｍｌに濃
縮し、それぞれ塩酸又は水酸化ナトリウム溶液でｐＨ値が４．２、４．６、５．０、５．
４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．４になる
まで調整し、清澄度を観察し、濃度変化を検出し（結果を表５に示す）、サンプルをクリ
ーンベンチ内でそれぞれ滅菌された膜孔径０．２２μｍのシリンジフィルターで滅菌され
た２０ｍｌ バイアル瓶にろ過し、各ｐＨ値あたり３本であり、ボトル口部を滅菌済みの
ゴム栓で密封し、アルミキャップを締めた。２５℃で保管し、０時間、１日目、３日目、
７日目に滅菌シリンジで採取し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ純度の検査を行った（結果を表６に示
す）。
研究によると、実験条件下でタンパク質のｐＨを変更すると、タンパク質の溶解に大き
な影響を与え、ｐＨ５．４以下では、タンパク質は沈澱し、ｐＨ５．６以上では、タンパ
ク質の溶解性は良好であり、ｐＨ６．８以下では、３日間保存した場合にタンパク質凝集
体は、増加していないが、７日間保存した場合にわずかに増加し、ｐＨ７．０以上では、
凝集体は時間とともに増加し、ｐＨが高いほど、凝集体が増加した（具体的な結果を表５
、表６に示す）。
【0030】
【表5】
【0031】
【表6】
【0032】
実施例４：添加剤のスクリーニング
初期段階での大量の情報分析及び試験スクリーニングを通じて、最初に、添加剤として
ショ糖、マンニトール、グリセリン、ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート８０（即
ち、Ｔｗｅｅｎ ８０）などを特定し、さらに候補添加剤をスクリーニングしながら、さ
らに以下の試験を実施した。
初期段階での大量の情報分析及び試験スクリーニングを通じて、最初に、添加剤として
ショ糖、マンニトール、グリセリン、ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート８０（即
ち、Ｔｗｅｅｎ ８０）などを特定し、さらに候補添加剤をスクリーニングしながら、さ
らに以下の試験を実施した。
【0033】
【表7】
【0034】
【表8】
【0035】
説明：「－」は、白点の数が３個未満であることを意味し、「＋」は、白点の数が３～
５個であることを意味し、「＋＋」は、白点の数が５個を超えることを意味する。
５個であることを意味し、「＋＋」は、白点の数が５個を超えることを意味する。
【0036】
【表9】
【0037】
以上の結果から、アルギニンの添加は、タンパク質の目に見える異物の改善に明らかな
影響を及ぼさないことが分かった。ショ糖、グリセリン及びポリソルベート８０を加える
と、いずれもタンパク質の状態を改善できる。従って、タンパク質を保護するために適量
なショ糖を製剤処方に添加し、タンパク質の溶解を促進するためにグリセリン及びポリソ
ルベート８０を添加した。
影響を及ぼさないことが分かった。ショ糖、グリセリン及びポリソルベート８０を加える
と、いずれもタンパク質の状態を改善できる。従って、タンパク質を保護するために適量
なショ糖を製剤処方に添加し、タンパク質の溶解を促進するためにグリセリン及びポリソ
ルベート８０を添加した。
【0038】
実施例５：真空凍結乾燥
－８０℃の冷蔵庫からタンパク質ストック溶液を取り出して溶かし、「１×製剤バッフ
ァー」でタンパク質の濃度が１０ｍｇ／ｍｌになるまで正確に希釈し、無菌、発熱性物質
なしの標準的な２０ｍｌの凍結乾燥用バイアル瓶で分取り、１本あたり６ｍｌであり、真
空凍結乾燥を行った。
凍結乾燥の条件：
予備凍結：温度－４５℃、５時間；
１回乾燥：温度－２６℃、４０時間、真空度１０～１５Ｐａ；
２回乾燥：温度２５℃、１０時間、真空度１０～１５Ｐａ。
凍結乾燥後、ゴム栓を真空下で押し、凍結乾燥機から取り外し、アルミキャップを締め
た。
－８０℃の冷蔵庫からタンパク質ストック溶液を取り出して溶かし、「１×製剤バッフ
ァー」でタンパク質の濃度が１０ｍｇ／ｍｌになるまで正確に希釈し、無菌、発熱性物質
なしの標準的な２０ｍｌの凍結乾燥用バイアル瓶で分取り、１本あたり６ｍｌであり、真
空凍結乾燥を行った。
凍結乾燥の条件：
予備凍結：温度－４５℃、５時間；
１回乾燥：温度－２６℃、４０時間、真空度１０～１５Ｐａ；
２回乾燥：温度２５℃、１０時間、真空度１０～１５Ｐａ。
凍結乾燥後、ゴム栓を真空下で押し、凍結乾燥機から取り外し、アルミキャップを締め
た。
【0039】
実施例６：処方のスクリーニング
表１０に設計された処方に従って、処方製剤凍結乾燥粉末の外観及び成形安定性を調査
した。凍結乾燥されたサンプルを４℃、３７℃で保存し、それぞれ外観を０、１、３、７
日目に観察し、外観の良い製剤処方をスクリーニングし、結果を表１１に示した。
表１０に設計された処方に従って、処方製剤凍結乾燥粉末の外観及び成形安定性を調査
した。凍結乾燥されたサンプルを４℃、３７℃で保存し、それぞれ外観を０、１、３、７
日目に観察し、外観の良い製剤処方をスクリーニングし、結果を表１１に示した。
【0040】
【表10】
【0041】
【表11】
【0042】
説明：１）「－ －」は、集塊体が凍結乾燥前の体積の半分以下に収縮することを意味
し、「－」は、収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意味し
、「＋」は、辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じである
ことを意味し、「＋＋」は、全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じで
あることを意味する。
し、「－」は、収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意味し
、「＋」は、辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じである
ことを意味し、「＋＋」は、全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じで
あることを意味する。
【0043】
凍結乾燥粉末外観の合格基準は、色が均一であり、細孔が緻密であり、保持凍結乾燥前
の体積、形状を基本的に変化せずに維持し、塊状又はスポンジ状の集塊構造を示すことで
ある。表１１から、グリセリンを含む製剤処方が３７℃で１日置いた後に僅かに収縮し、
７日置いた後に外観が収縮し、著しく窪んでいることを認めるため、ＡＤＣ製剤の添加剤
としてグリセリンを除外したことが分かった。
の体積、形状を基本的に変化せずに維持し、塊状又はスポンジ状の集塊構造を示すことで
ある。表１１から、グリセリンを含む製剤処方が３７℃で１日置いた後に僅かに収縮し、
７日置いた後に外観が収縮し、著しく窪んでいることを認めるため、ＡＤＣ製剤の添加剤
としてグリセリンを除外したことが分かった。
【0044】
実施例７：凍結乾燥粉末処方の決定及び安定性の検査
凍結乾燥粉末の外観検査により、処方Ｂ７－Ｂ１２が排除され、水分の含有量検査、目
に見える異物及び不溶性粒子検査、保存サンプルの安定性調査によりさらなる添加剤のス
クリーニングを行った（処方Ｂ１～Ｂ６）。
各処方の凍結乾燥粉末をそれぞれ３７、２５及び４℃で保存し、異なる時点でサンプリ
ングし、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、逆相ＨＰＬＣ、リガンド結合法による生物活性、水分の含有
量、外観、ｐＨ値、目に見える異物及び不溶性粒子などの検査を行った。
凍結乾燥粉末の外観検査により、処方Ｂ７－Ｂ１２が排除され、水分の含有量検査、目
に見える異物及び不溶性粒子検査、保存サンプルの安定性調査によりさらなる添加剤のス
クリーニングを行った（処方Ｂ１～Ｂ６）。
各処方の凍結乾燥粉末をそれぞれ３７、２５及び４℃で保存し、異なる時点でサンプリ
ングし、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、逆相ＨＰＬＣ、リガンド結合法による生物活性、水分の含有
量、外観、ｐＨ値、目に見える異物及び不溶性粒子などの検査を行った。
【0045】
【表12】
【0046】
説明：「－ －」は、集塊体が凍結乾燥前の体積の半分以下に収縮することを意味し、
「－」は、収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意味し、「
＋」は、辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じであること
を意味し、「＋＋」は、全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じである
ことを意味する。
「－」は、収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意味し、「
＋」は、辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じであること
を意味し、「＋＋」は、全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じである
ことを意味する。
【0047】
表１２から、処方Ｂ１～Ｂ６の凍結乾燥粉外観はいずれも要件を満たすことが分かった
。
。
【0048】
各処方あたり３本のサンプルを採取し、規定の方法に従って水分含有量を測定し、平均
値を取り、結果を表１３に示した。
値を取り、結果を表１３に示した。
【0049】
【表13】
【0050】
処方Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６の水分含有量は、いずれも３％未満であり、
合格した。
各処方からランダムに５本のサンプルを採取し、規定の方法に従って再溶解した後に目
に見える異物を検査し、中でも、３本のサンプルを採取し、規定の方法に従って不溶性粒
子を測定し、結果を表１４に示した。
合格した。
各処方からランダムに５本のサンプルを採取し、規定の方法に従って再溶解した後に目
に見える異物を検査し、中でも、３本のサンプルを採取し、規定の方法に従って不溶性粒
子を測定し、結果を表１４に示した。
【0051】
【表14】
【0052】
以上の結果から、目に見える異物及び不溶性粒子の検査では、処方Ｂ１、Ｂ３、Ｂ５が
規定を満たしていないため、排除されていることが分かった。
規定を満たしていないため、排除されていることが分かった。
【0053】
【表15】
【0054】
【表16】
【0055】
【表17】
【0056】
説明：外観標準として、「－ －」集塊体が凍結乾燥前の体積の半分以下に収縮するこ
とを意味し；「－」収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意
味し；「＋」辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じである
ことを意味し；「＋＋」全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じである
ことを意味する。
とを意味し；「－」収縮しているが、集塊体の体積が凍結乾燥前の半分を超えることを意
味し；「＋」辺縁部のみがわずかに収縮し、集塊体の体積が凍結乾燥前とほぼ同じである
ことを意味し；「＋＋」全く収縮していないが、集塊体の体積が凍結乾燥前と同じである
ことを意味する。
【0057】
以上の結果によると、処方Ｂ２及び処方Ｂ４の異なる温度（４℃、２５℃、３７℃）に
おける安定性が良いが、処方Ｂ６の不溶性粒子が多すぎるため、排除されていることが分
かった。以上の試験により、処方Ｂ２及びＢ４は、凍結乾燥粉末の外観検査、凍結乾燥粉
末の水分含有量の測定、凍結乾燥粉末の再溶解後の目に見える異物及び不溶性粒子の検査
、安定性の点でいずれも優れたレベルに達した。
おける安定性が良いが、処方Ｂ６の不溶性粒子が多すぎるため、排除されていることが分
かった。以上の試験により、処方Ｂ２及びＢ４は、凍結乾燥粉末の外観検査、凍結乾燥粉
末の水分含有量の測定、凍結乾燥粉末の再溶解後の目に見える異物及び不溶性粒子の検査
、安定性の点でいずれも優れたレベルに達した。
【0058】
上記の実験的証拠より分かるように、非還元糖、アミノ酸、カオトロピック剤という物
質のうち、具体的な添加剤の選択は、最終製剤に予測できない影響を与えることを示し、
本発明のＨｅｒ２モノクローナル抗体－薬物コンジュゲートは、良好な製剤の組み合わせ
を得るために、大量の試験を通じて各性能を検査する必要がある。例えば、アルギニンを
添加すると、タンパク質の目に見える異物の改善に明らかな影響を与えない。ショ糖、グ
リセリン及びポリソルベート８０を添加すると、いずれもタンパク質の凝集を改善できる
が、グリセリンを添加すると、凍結乾燥製品は、再構成後に、再構成された水溶液の外観
が収縮し、著しく窪みやすい。さらに、ショ糖の濃度が高すぎたり、マンニトールの濃度
が低すぎたりすると、再構成後の不溶性物質は増加してしまう。
これらの結果は、いずれも関連する試験を実施する前に予測しにくく、しかも、ＡＤＣ
製剤は、複数の添加剤の併用に関連し、さらに、長期安定性試験などの要因に関連するた
め、ＡＤＣ製剤の開発は非常に困難である。
大量の試験を通じて、各性能に優れたＨｅｒ２ ＡＤＣ製剤の組み合わせを特定し、抗
Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体は、は凍結乾燥の前後で十分に溶解され、
不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液基準を満たすとともに、凍結乾燥及び保存
過程で長期間にわたって安定して維持し、特に、２５℃又は３７℃の高温条件下で長時間
置かれた場合に、依然としても良好な安定性を維持し、前記ＡＤＣ製剤は、再構成後でも
重合または分解しにくく、良好な生物学的活性を維持する。
質のうち、具体的な添加剤の選択は、最終製剤に予測できない影響を与えることを示し、
本発明のＨｅｒ２モノクローナル抗体－薬物コンジュゲートは、良好な製剤の組み合わせ
を得るために、大量の試験を通じて各性能を検査する必要がある。例えば、アルギニンを
添加すると、タンパク質の目に見える異物の改善に明らかな影響を与えない。ショ糖、グ
リセリン及びポリソルベート８０を添加すると、いずれもタンパク質の凝集を改善できる
が、グリセリンを添加すると、凍結乾燥製品は、再構成後に、再構成された水溶液の外観
が収縮し、著しく窪みやすい。さらに、ショ糖の濃度が高すぎたり、マンニトールの濃度
が低すぎたりすると、再構成後の不溶性物質は増加してしまう。
これらの結果は、いずれも関連する試験を実施する前に予測しにくく、しかも、ＡＤＣ
製剤は、複数の添加剤の併用に関連し、さらに、長期安定性試験などの要因に関連するた
め、ＡＤＣ製剤の開発は非常に困難である。
大量の試験を通じて、各性能に優れたＨｅｒ２ ＡＤＣ製剤の組み合わせを特定し、抗
Ｈｅｒ２モノクローナル抗体－ＭＭＡＥ複合体は、は凍結乾燥の前後で十分に溶解され、
不溶性粒子及び目に見える異物がヒト用注射液基準を満たすとともに、凍結乾燥及び保存
過程で長期間にわたって安定して維持し、特に、２５℃又は３７℃の高温条件下で長時間
置かれた場合に、依然としても良好な安定性を維持し、前記ＡＤＣ製剤は、再構成後でも
重合または分解しにくく、良好な生物学的活性を維持する。
【図1】
【図2】
【配列表】