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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023088972
(43)【公開日】2023-06-27
(54)【発明の名称】ループス腎炎を治療する組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20230620BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20230620BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230620BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/135 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/167 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/343 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/52 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20230620BHJP
A61K 31/675 20060101ALI20230620BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20230620BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230620BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230620BHJP
A61P 33/06 20060101ALI20230620BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230620BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230620BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20230620BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230620BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230620BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 D
A61P13/12 ZNA
A61K39/395 N
A61K45/00
A61K45/06
A61K31/135
A61K31/167
A61K31/343
A61K31/52
A61K31/5377
A61K31/573
A61K31/675
A61P9/12
A61P19/02
A61P29/00
A61P29/00 101
A61P33/06
A61P37/02
A61P37/06
A61P37/08
A61P43/00 111
A61P43/00 121
C07K16/28
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023043873
(22)【出願日】2023-03-20
(62)【分割の表示】P 2021125267の分割
【原出願日】2016-05-10
(31)【優先権主張番号】62/300,052
(32)【優先日】2016-02-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/159,876
(32)【優先日】2015-05-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ブルネッタ， ポール
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法を提供する。
【解決手段】少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体をループスを有する個体に投与することを含む方法である。
【選択図】図１
【解決手段】少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体をループスを有する個体に投与することを含む方法である。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されず、
前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖と、を含む、前記方法。
前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖と、を含む、前記方法。
【請求項2】
前記第１の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項３または請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記第２の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項８または請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項８～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記第１の抗体曝露量及び前記第２の抗体曝露量が、静脈内投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、前記方法。
【請求項16】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、静脈内投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項17】
前記個体が、クラスＩＩＩ（Ｃ）またはクラスＩＶ（Ｃ）のループス腎炎を有さない、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記個体が、クラスＶのループス腎炎を有する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
有効量の免疫抑制剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸、その誘導体、またはその塩を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸モフェチルを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを前記個体に投与することをさらに含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロンを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、プレドニゾンを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項25】
有効量の抗ヒスタミン剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記抗ヒスタミン剤が、ジフェンヒドラミンを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
有効量の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記ＮＳＡＩＤが、アセトアミノフェンを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
有効量の降圧剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記降圧剤が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬である、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
標準ケア治療を前記個体に施すことをさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記標準ケア治療が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、及びグルココルチコイドまたはコルチコステロイドのうちの１つ以上を用いた治療を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記方法が、前記個体において完全腎応答（ＣＲＲ）をもたらす、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、アフコシル化されている、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記重鎖が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記軽鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、オビヌツズマブである、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
前記個体が、ヒトである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、前記使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、前記個体に投与され、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、前記添付文書とを含み、前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む、前記キット。
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、前記使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、前記個体に投与され、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、前記添付文書とを含み、前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む、前記キット。
【請求項43】
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明と、を含む容器をさらに含む、請求項４２に記載のキット。
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明と、を含む容器をさらに含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項44】
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、請求項４３に記載のキット。
【請求項45】
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるクラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書と、を含む、前記キット。
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるクラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書と、を含む、前記キット。
【請求項46】
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明とを含む容器をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明とを含む容器をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項47】
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、請求項４６に記載のキット。
【請求項48】
個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量の抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む、前記方法。
【請求項49】
前記抗体が、静脈内投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項50】
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、請求項４７または請求項４８に記載の方法。
【請求項51】
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、請求項４９に記載の方法。
【請求項52】
前記抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、請求項４７～５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
前記抗体が、アフコシル化されている、請求項４７～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
前記重鎖可変領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項４７～５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項55】
前記軽鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項４７～５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項56】
前記抗体が、オビヌツズマブである、請求項４７～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
前記抗体が、修飾されたＦｃ領域を含む、請求項４７～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
前記Ｆｃ領域が、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項59】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である、請求項５６に記載の方法。
【請求項60】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項61】
前記個体が、ヒトである、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年５月１１日に出願された米国仮出願第６２／１５９，８７６号及び２０１６年２月２５日に出願された同第６２／３００，０５２号の優先権の利益を主張し、その各々は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１５年５月１１日に出願された米国仮出願第６２／１５９，８７６号及び２０１６年２月２５日に出願された同第６２／３００，０５２号の優先権の利益を主張し、その各々は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、その全体が参照することにより本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０３２２４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１６年５月５日、サイズ：３７ＫＢ）。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、その全体が参照することにより本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０３２２４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１６年５月５日、サイズ：３７ＫＢ）。
【0003】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することにより、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。抗ＣＤ２０抗体を投与することにより、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法も本明細書で提供される。
【背景技術】
【0004】
ループスは、結合組織を攻撃する抗体に関与する自己免疫疾患である。この疾患は、１００万人近くのアメリカ人、主に２０～４０歳の女性に影響を与えていることが推測される。ループスの主要な形態は、全身性のもの（全身性エリテマトーデス、ＳＬＥ）である。ＳＬＥは、２０～６０歳の女性の約７００人に１人の発症率を有する。ＳＬＥは、任意の臓器系に影響を与え得、重度の組織損傷を引き起こし得る。ループスを治療しない場合、それが皮膚及び関節への攻撃から、肺、心臓、及び腎臓を含む内臓への攻撃にまで進行し、主要な懸念事項であるループス腎炎（ＬＮ）と呼ばれる腎疾患を伴うことに因り、致命的になり得る。ループスは、疾患徴候がほとんどないか、または疾患の徴候が全く出ない合間を伴う一連の再燃として主に現れる。
【0005】
ＬＮは、ＳＬＥの病原性に関連する最も急性の損傷領域のうちの１つであり、この疾患の死亡率及び罹患率の少なくとも５０％の原因となっている。現在、ＳＬＥまたはＬＮと診断されている患者のための根治的治療が存在しない。実用的な観点から、内科医は概して、再燃の期間中与えられるが、頻繁に再燃が起きる人には持続的に与えられてもよい、高用量コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、またはアザチオプリンもしくはシクロホスファミドなどのいくつかの強力な免疫抑制薬を用いる。症状を低減し、寿命を延ばす有効な治療であっても、これらの薬物の多くは、治療されている患者に対して潜在的に有害な副作用を有する。したがって、有害な副作用がより少ない、ＬＮに対するより有効な治療が依然として必要とされている。
【0006】
２つの抗ＣＤ２０抗体が、ループス腎炎の治療における有効性に関して臨床研究で試験されている。Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブは、全体の応答の主要エンドポイントを満たさなかった（完全腎応答、またはＣＲＲに偏重する）が、部分的腎応答（ＰＲＲ）において１５．３％の増加をもたらした（Ｒｏｖｉｎ，Ｂ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６４：１２１５－１２２６）。別のＩ型抗ＣＤ２０抗体であるオクレリズマブは、不均衡な重大な伝染事象に因り（Ｍｙｓｌｅｒ，Ｅ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６５：２３６８－２３７９）、部分的に終結された。
【0007】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であるオビヌツズマブは、リツキシマブと比較して、優れたＢ細胞減損を示した。カニクイザルにおいて著しく多くのＢ細胞減損が、リツキシマブ治療と比較してオビヌツズマブ治療で観察された（Ｍｏｓｓｎｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１５：４３９３－４４０２）。よって、ループスを有する患者におけるＬＮの治療または予防において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の有効性を試験することが依然として必要とされる。
【0008】
特許出願及び刊行物を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、参照することによりそれらの全体が組み込まれる。
【発明の概要】
【0009】
ある特定の態様において、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、個体は、ループスを有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約４．５ヶ月～約６．５ヶ月後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。いくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、本方法は、ループスを有する個体におけるループス腎炎を予防することに関する。いくつかの実施形態において、本方法は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を予防することに関する。いくつかの実施形態において、本方法は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する。
【0010】
いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約２週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約１０日～約１７日後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約１４後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約２週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約１０日～約１７日後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約１４日後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量及び第２の抗体曝露量は、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある。
【0011】
ある特定の態様において、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供され、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、本方法は、ループスを有する個体におけるループス腎炎を予防することに関する。いくつかの実施形態において、本方法は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を予防することに関する。いくつかの実施形態において、本方法は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する。
【0012】
ある特定の態様において、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量を個体に投与することを含む、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供され、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、この用量は、１、１５、１６８、及び１８２日目に１度、個体に投与される。ある特定の態様において、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量を個体に投与することを含む、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供され、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、この用量は、０、２、２４、及び２６週目に１度、個体に投与される。いくつかの実施形態において、０週目は、１日目に対応する。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する。いくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。
【0013】
上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、静脈内投与される。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩ（Ｃ）またはクラスＩＶ（Ｃ）のループス腎炎を有さない。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、個体は、クラスＶのループス腎炎を有する。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、有効量の免疫抑制剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、ミコフェノール酸、その誘導体、またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、ミコフェノール酸モフェチルを含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、グルココルチコイドまたはコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロンを含む。いくつかの実施形態において、グルココルチコイドまたはコルチコステロイドは、プレドニゾンを含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、有効量の抗ヒスタミン剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ヒスタミン剤は、ジフェンヒドラミンを含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、有効量の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、アセトアミノフェンを含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、標準ケア治療を個体に施すことをさらに含む。いくつかの実施形態において、標準ケア治療は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、及びグルココルチコイドまたはコルチコステロイドのうちの１つ以上を用いた治療を含む。いくつかの実施形態において、標準ケア治療は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第１の抗体曝露の後及び／またはＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の抗体曝露の後に施される。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、有効量の降圧剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、降圧剤は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬である。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、個体において完全腎応答（ＣＲＲ）をもたらす。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、本方法は、個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす。いくつかの実施形態において、血流循環末梢Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、フコシル化されていない（例えば、米国特許第８，８８３，９８０号に記載されるような）。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の重鎖は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の軽鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、個体または患者は、ヒトである。
【0014】
ある特定の態様において、（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、容器と、（ｂ）個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、個体に投与され、第２の抗体曝露量が、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、添付文書とを含む、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットまたは製品が本明細書で提供され、ここで、第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。いくつかの実施形態において、本キットまたは本製品は、（ｃ）第２の薬品であって、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が第１の薬品である、第２の薬品と、（ｄ）第２の薬品を対象に投与することに関する添付文書上の使用説明とをさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の薬品は、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである。いくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の重鎖は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の軽鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。いくつかの実施形態において、本キットまたは本製品は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を予防することに関する。いくつかの実施形態において、本キットまたは本製品は、ＳＬＥを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する。
【0015】
ある特定の態様において、有効量の抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供され、ここで、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本方法は、個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす。いくつかの実施形態において、血流循環末梢Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、オビヌツズマブである。いくつかの実施形態において、本抗体は、修飾されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域は、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、個体または患者は、ヒトである。
【0016】
ある特定の態様において、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるのに使用するための組成物が本明細書で提供され、本組成物は、抗ＣＤ２０抗体を含み、ここで、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本組成物を投与することは、個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす。いくつかの実施形態において、血流循環末梢Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、オビヌツズマブである。いくつかの実施形態において、本抗体は、修飾されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域は、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む。
【0017】
ある特定の態様において、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療で使用するための薬品を製造するために抗ＣＤ２０抗体を使用することが本明細書で提供され、ここで、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0018】
ある特定の態様において、（ａ）抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、本抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む、容器と、（ｂ）有効量の抗ＣＤ２０抗体を投与して、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するかまたはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書とを含む、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットまたは製品が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、添付文書は、抗体を静脈内投与することに関する使用説明を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、オビヌツズマブである。いくつかの実施形態において、本抗体は、修飾されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域は、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む。
【0019】
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることを理解されたい。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかであろう。本発明のこれら及び他の実施形態は、以下の発明を実施するための形態によりさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1】オビヌツズマブ＋ミコフェノール酸モフェチル対プラセボ＋ミコフェノール酸モフェチルを調査するフェーズＩＩ研究のための研究デザインを示す。ＥＰ＝エンドポイント、ＭＭＦ＝ミコフェノール酸モフェチル
【図2A】ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中で、オビヌツズマブまたはリツキシマブにより誘発された全血液Ｂ細胞減損、内部移行、及び補体依存性細胞傷害性を示す。ＲＡ（ｎ＝３１）及びＳＬＥ（ｎ＝３４）を有する患者からの全血液試料を示す。試料を、２４時間、抗ＣＤ２０ ｍＡｂ、ＲＴＸ、ＯＢＺＧｌｙ、及びＯＢＺを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーでＢ細胞死を分析した。値は、三連のウェルの平均である。ボックス内の横線は、中央値を表し、ボックスは、四分位数範囲を表し、ウィスカーは、範囲を表す。
【図2B】ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中で、オビヌツズマブまたはリツキシマブにより誘発された全血液Ｂ細胞減損、内部移行、及び補体依存性細胞傷害性を示す。表面の接触可能なｍＡｂの頻度を示す。抗ＦｃγＲＩＩ遮断ｍＡｂ、ＡＴ１０を用いた事前のインキュベーション行って、または行わずに、ＲＡ（ｎ＝５）及びＳＬＥ（ｎ＝８）を有する患者からの単離Ｂ細胞を用いた６時間のインキュベーション後にフローサイトメトリーにより頻度を評価した。横線は、中央値を表す。
【図2C】ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中で、オビヌツズマブまたはリツキシマブにより誘発された全血液Ｂ細胞減損、内部移行、及び補体依存性細胞傷害性を示す。ＲＴＸ及びＯＢＺにより誘導されたＣＤＣを示す。単離Ｂ細胞（健康対照（ＨＣ）、ｎ＝２、ＲＡ、ｎ＝２、及びＳＬＥ、ｎ＝３）を、３０分間、健常血清（ＮＨＳ）または加熱不活性化血清（ＨＩＳ）と共に、ＲＴＸまたはＯＢＺでインキュベートし、その後、溶解ＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋Ｂ細胞の頻度を分析した。
【図2D】ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中で、オビヌツズマブまたはリツキシマブにより誘発された全血液Ｂ細胞減損、内部移行、及び補体依存性細胞傷害性を示す。ｍＡｂによるＣＤＣの効率性を表す、ＮＨＳ対ＨＩＳでインキュベートした試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋細胞における倍増率を示す。ＲＴＸ、リツキシマブ；ＯＢＺ、オビヌツズマブ；ＲＡ、リウマチ性関節炎；ＳＬＥ、全身性エリテマトーデス。ＨＣ、健康対照＊ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；及びｎｓ、有意差なし。
【図3A】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。前方散乱対側方散乱のフローサイトメトリーゲーティングを示す。
【図3B】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。ＣＤ５６対ＣＤ３のフローサイトメトリーゲーティングを示す。
【図3C】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。前方散乱のフローサイトメトリーゲーティング対ＣＤ１０７ａを示す。
【図3D】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。前方散乱のフローサイトメトリーゲーティング対ＣＤ１６を示す。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の３つの分集団を、ＣＤ１６の相対的発現（四角で囲まれた、高、中、及び低）に基づいて特定した。活性化ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の相対的頻度は、階層的な様式であるＣＤ１６＋＋＜ＣＤ１６＋＜ＣＤ１６－のＣＤ１６発現に基づいて、これらの３つの分集団で異なった。
【図3E】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。高のボックスに関する前方散乱のフローサイトメトリーゲーティング対ＣＤ１０７ａを示す。
【図3F】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。中のボックスに関する前方散乱のフローサイトメトリーゲーティング対ＣＤ１０７ａを示す。
【図3G】ＮＫ細胞の脱顆粒化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示し、これは、ＣＤ１０７ａとＣＤ１６との間のＮＫ細胞発現の関係を記載する。全血液試料を、２４時間、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。前方及び側方散乱特性、ならびにＣＤ３の発現ではなくＣＤ５６の発現に基づいて、ＮＫ細胞を特定した。ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度は、活性化／脱顆粒化ＮＫ細胞を表した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。低のボックスに関する前方散乱のフローサイトメトリーゲーティング対ＣＤ１０７ａを示す。
【図4A】ＯＢＺが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞を活性化することにおいてＲＴＸより効率的であることを示す。ＮＫ細胞活性化を、ｍＡｂの存在下または不在下で２４時間インキュベートした、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの全血液試料中で評価した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；ｎｓ、有意差なし、及びｐが少なくとも＜０．０５のとき、スピアマン相関係数、ｒ２を、有意差ありと見なした。総ＮＫ細胞またはＣＤ１９＋細胞のパーセンテージとして、リンパ球ゲートにおけるＣＤ３－ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞、及びＣＤ３－ＣＤ５６－ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の頻度を示す。横線は、中央値を表す。
【図4B】ＯＢＺが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞を活性化することにおいてＲＴＸより効率的であることを示す。ＮＫ細胞活性化を、ｍＡｂの存在下または不在下で２４時間インキュベートした、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの全血液試料中で評価した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；ｎｓ、有意差なし、及びｐが少なくとも＜０．０５のとき、スピアマン相関係数、ｒ２を、有意差ありと見なした。ＲＴＸ及びＯＢＺでインキュベートした、ＲＡ及びＳＬＥを有する患者からの試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度、及びＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度、及びＣＤ３－ＣＤ５６＋１６＋ＮＫ細胞の頻度の倍増率を示す。横線は、中央値を表す。
【図4C】ＯＢＺが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞を活性化することにおいてＲＴＸより効率的であることを示す。ＮＫ細胞活性化を、ｍＡｂの存在下または不在下で２４時間インキュベートした、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの全血液試料中で評価した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；ｎｓ、有意差なし、及びｐが少なくとも＜０．０５のとき、スピアマン相関係数、ｒ２を、有意差ありと見なした。ＲＡ（ｎ＝１８）を有する患者からの試料中でＲＴＸ及びＯＢＺを用いてインキュベートした試料中と、またはそれらを用いることなくインキュベートした試料中との間のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度の関係を示す。
【図4D】ＯＢＺが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞を活性化することにおいてＲＴＸより効率的であることを示す。ＮＫ細胞活性化を、ｍＡｂの存在下または不在下で２４時間インキュベートした、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの全血液試料中で評価した。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；ｎｓ、有意差なし、及びｐが少なくとも＜０．０５のとき、スピアマン相関係数、ｒ２を、有意差ありと見なした。ＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの試料中でＲＴＸ及びＯＢＺを用いてインキュベートした試料中と、またはそれらを用いることなくインキュベートした試料中との間のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度の関係を示す。
【図5A】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を引き起こすことにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの試料中の、ＲＴＸ、ＯＢＺＧｌｙ、及びＯＢＺによるＢ細胞減損パーセンテージを示す全血液Ｂ細胞減損アッセイを示す。ボックス及びウィスカーは、四分位数範囲及び範囲を表し、ボックス内の横線は、中央値を表す。
【図5B】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を引き起こすことにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。フローサイトメトリーにより分析した、ｍＡｂを用いたか、またはそれを用いなかった２４時間のインキュベーション後のＲＡ及びＳＬＥを有する患者からの全血液試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度を示す。
【図5C】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を引き起こすことにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。フローサイトメトリーにより分析した、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした全血液試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度の相対的増加を示す。
【図5D】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中のＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を引き起こすことにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。フローサイトメトリーにより分析した、ｍＡｂを用いたか、またはそれを用いなかった２４時間のインキュベーション後のＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者からの全血液試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の頻度を示す。棒グラフに関して、誤差棒は、中央値及び四分位数範囲を表す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；及びｎｓ、有意差なし。
【図6A】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中の好中球を活性化することにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）を用いて、またはそれを用いることなくインキュベートしたＲＡ（ｎ＝１０）及びＳＬＥ（ｎ＝２２）を有する患者からの全血液試料の２４時間のインキュベーション後のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。中央値及び四分位数範囲は、誤差棒により表される。
【図6B】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中の好中球を活性化することにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。ＲＡ及びＳＬＥ試料中で、ｍＡｂを用いてインキュベートした試料中と、またはそれを用いることなくインキュベートした試料中との間のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂのＭＦＩの関係を示す。
【図6C】ＲＡ及びＳＬＥ試料中で、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ６２ＬのＭＦＩを示す。
【図6D】オビヌツズマブが、ＲＡ及びＳＬＥ患者の試料中の好中球を活性化することにおいてリツキシマブより効率的であることを示す。ＲＡ（ｎ＝１０）及びＳＬＥ（ｎ＝２２）試料中で、ｍＡｂを用いてインキュベートした試料中と、またはそれを用いることなくインキュベートした試料中との間のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ６２ＬのＭＦＩの関係を示す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１。ｐが少なくとも＜０．０５のとき、スピアマン相関係数、ｒ２を、有意差ありと見なした。
【図7A】ＲＡ及びＳＬＥ試料からのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂのＢ細胞分集団中の直接細胞死、内部移行、及び発現の評価を示す。ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートしたＲＡ（ｎ＝５）及びＳＬＥ（ｎ＝４）を有する患者からの試料中の、ＩｇＤ及びＣＤ２７：（ＩｇＤ＋ＣＤ２７－ナイーブ細胞、ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞、及びＩｇＤ－ＣＤ２７－二重陰性細胞）の相対的発現に基づいて、全てのＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＢ細胞分集団の割合として、アネキシンＶ＋細胞の頻度を示す。
【図7B】ＲＡ及びＳＬＥ試料からのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂのＢ細胞分集団中の直接細胞死、内部移行、及び発現の評価を示す。ＳＬＥ（ｎ＝９）を有する患者からの試料中の全てのＣＤ１９＋細胞及びＢ細胞分集団上のＣＤ２０の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。
【図7C】ＲＡ及びＳＬＥ試料からのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂのＢ細胞分集団中の直接細胞死、内部移行、及び発現の評価を示す。表面蛍光消光アッセイを示す。全てのＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＢ細胞分集団における、ＳＬＥ（ｎ＝９）を有する患者からの抗ＦｃγＲＩＩ ｍＡｂ、ＡＴ１０を用いた事前のインキュベーションを行って、または行わずに、単離Ｂ細胞を用いた６時間のインキュベーション後の表面の接触可能なｍＡｂの頻度。
【図7D】ＲＡ及びＳＬＥ試料からのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂのＢ細胞分集団中の直接細胞死、内部移行、及び発現の評価を示す。ＳＬＥ（ｎ＝９）を有する患者からの試料中の全てのＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＢ細胞分集団上のＦｃγＲＩＩｂのＭＦＩを示す。棒グラフに関して、誤差棒は、中央値及び四分位数範囲を表す。ボックス及びウィスカーは、四分位数範囲を表し、ボックス内の横線は、中央値を表す。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．００５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１。
【図8】補体依存性細胞傷害性アッセイに関するゲーティング戦略、ならびにＲＴＸ及びＯＢＺによるＣＤＣを示す。単離Ｂ細胞を室温で３０分間、ＮＨＳまたはＨＩＳと共にｍＡｂでインキュベートし、その後フローサイトメトリーにより分析した。Ａｎ Ｖ＋ＰＩ＋細胞の頻度は、細胞死を表した。ＨＩＳ、加熱不活性化血清；ＮＨＳ、健常血清；ＲＴＸ、リツキシマブ；ＯＢＺ、オビヌツズマブ；Ａｎ Ｖ、アネキシンＶ；及びＰＩ、ヨウ化プロピジウム。
【図9】好中球活性化を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示す。２４時間のインキュベーション後、全血液試料を、フローサイトメトリーにより分析した。好中球を、前方及び側方散乱、ならびにＣＤ１５の陽性により特定した。ＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの平均蛍光強度を、ＣＤ１５に対して陽性であるゲーティングされた好中球で分析した。
【図10】直接細胞死を評価するためのフローサイトメトリーゲーティング戦略を示す。ｍＡｂを用いたか、またはそれを用いなかった、３７℃及び５％のＣＯ２で６時間のインキュベーション後、単離Ｂ細胞をフローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ１９＋Ｂ細胞を、ナイーブ（ＩｇＤ＋ＣＤ２７－）、非スイッチ型記憶細胞（ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋）、スイッチ型記憶細胞（ＩｇＤ－ＣＤ２７＋）、及び二重陰性細胞（ＩｇＤ－ＣＤ２７－）に分類した。アネキシンＶ＋細胞の頻度は、直接細胞死を表した。
【図11】Ｂ細胞分集団における自然細胞死に対する固有感受率を示す。１０％のウシ胎仔血を補ったＲＰＭＩ中で、３７℃及び５％のＣＯ２で６時間インキュベートした単離Ｂ細胞をフローサイトメトリーにより分析した。アネキシンＶ＋細胞の頻度は、ナイーブ（ＩｇＤ＋ＣＤ２７－）、非スイッチ型記憶細胞（ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋）、スイッチ型記憶細胞（ＩｇＤ－ＣＤ２７＋）、及び二重陰性細胞（ＩｇＤ－ＣＤ２７－）に分類したＣＤ１９＋細胞全体及びＢ細胞分集団における直接細胞死を表した。Ａｖ、アネキシンＶ；＊、ｐ＜０．０５；＊＊＊、ｐ＜０．０００１；ｎｓ、有意差なし。
【発明を実施するための形態】
【0021】
一態様において、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、個体は、ループスを有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。
【0022】
別の態様において、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含有する重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含有する軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、個体は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する。
【0023】
別の態様において、有効量の抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0024】
Ｉ．一般的技法
本明細書で記載または参照される技法及び手順は、当業者には概して十分に理解されており、従来の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））、シリーズのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載される幅広く利用される方法論などを使用して、当業者により一般的に用いられる。
本明細書で記載または参照される技法及び手順は、当業者には概して十分に理解されており、従来の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））、シリーズのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載される幅広く利用される方法論などを使用して、当業者により一般的に用いられる。
【0025】
ＩＩ．定義
「ループス腎炎（ＬＮ）」」という用語は、腎臓（複数可）におけるループス（例えば、全身性エリテマトーデス、薬物誘導ループス、新生児ループス、または円板状ループス）の徴候を指す。
「ループス腎炎（ＬＮ）」」という用語は、腎臓（複数可）におけるループス（例えば、全身性エリテマトーデス、薬物誘導ループス、新生児ループス、または円板状ループス）の徴候を指す。
【0026】
「抗体」という用語には、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ（ｐｏｌｙｅｐｉｔｏｐｉｃ）特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び一本鎖分子、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、及びＦｖ）が含まれる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」と互換的に使用される。
【0027】
基本的な４本の鎖の抗体ユニットは、２本の同一な軽鎖（Ｌ）と２本の同一な重鎖（Ｈ）とからなるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットと併せて、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドからなり、１０個の抗原結合部位を含有している一方で、ＩｇＡ抗体は、２～５個の基本的な４本鎖ユニットから構成されており、このユニットは、重合してＪ鎖と組み合わさった多価集合体を形成することができる。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、概して約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によりＨ鎖に連結されている一方で、２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合により互いに連結されている。Ｈ鎖及びＬ鎖は各々、規則的に離間した鎖間ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてα鎖及びγ鎖の各々に関しては３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμ及びεアイソタイプに関しては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いて他方の端部に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとを一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位が形成される。異なるクラスの抗体の構造及び特性に関しては、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ６を参照されたい。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てられ得る。５つのクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと表記される重鎖を有する。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能の比較的わずかな差異に基づいてサブクラスにさらに分割され、例えば、ヒトは、次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を発現する。
【0028】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは概して、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。
【0029】
「可変」という用語は、抗体間で、可変ドメインのある特定のセグメントが、配列において大きく異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を定義する。しかし、可変性は、可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインにおいて、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、ベータシート構造を接続し、かついくつかの場合において、ベータシート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲにより接続されたベータシート構成を大きく採用する４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域により近接して共に保持されており、他方の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与など、様々なエフェクター機能を示す。
【0030】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る想定される自然発生する突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象としている。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養により合成され、他の免疫グロブリンが混入されていないという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－９７（１９７５）、Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３－２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）を参照されたい、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全てを有するヒト抗体またはヒト様抗体を動物において産生するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、ＷＯ１９９１／１０７４１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、及び同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）を参照されたい、を含む、多様な技法により作製され得る。
【0031】
「ネイキッド抗体」という用語は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【0032】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体を指して互換的に使用される。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異形であり得る。一部の場合において、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【0033】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域及び／または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２［１９９５］を参照されたい）；一本鎖抗体分子、ならび抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片、及び残りの「Ｆｃ」断片（容易に結晶化する能力を反映する名称）と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片を産生した。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体と共にＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、ならびに１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらし、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結したＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、いくつかの追加の残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ´－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ´の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ´）２抗体断片は、本来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ´断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【0034】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより共に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列により決定され、この領域はまた、ある特定の細胞型に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される。
【0035】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかし、全結合部位よりも低い親和性であるが、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まないＦｖの半分）でさえも、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【0036】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、接続されて単一のポリペプチド鎖となったＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にするＶＨ及びＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
【0037】
本発明の抗体の「機能性断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、これには、概して、インタクトな抗体の抗原結合もしくは可変領域、または修飾されたＦｃＲ結合能力を保持するかもしくは有する抗体のＦｃ領域が含まれる。抗体断片の例には、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【0038】
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合を達成し、それにより二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を用いてｓＦｖ断片（前の段落を参照されたい）を構築することにより調製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８（１９９３）でより詳細に記載される。
【0039】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、それらが所望の生物活性を示す限り、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における、対応する配列と同一または相同しており、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにかかる抗体の断片における、対応する配列と同一または相同している、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）が具体的に含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、ここで、抗体の抗原結合領域は、例えば、目的の抗原でマカクザルを免疫付与することにより産生された抗体に由来する。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【0040】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（以下に定義される）からの残基が、所望される特異性、親和性、及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（供与体抗体）のＨＶＲからの残基により置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも供与体抗体にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性など、抗体の性能をさらに改良するために行われ得る。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものに対応するものであるが、ＦＲ領域には、結合親和性、異性体化、免疫原性などの抗体の性能を改善する１つ以上の個々のＦＲ残基置換が含まれ得る。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は典型的には、Ｈ鎖では６個以下であり、Ｌ鎖では３個以下である。ヒト化抗体は任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も含むであろう。さらなる詳細に関しては、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）、Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）、Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）、ならびに米国特許 第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照されたい。
【0041】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体、及び／または本明細書に開示されるようなヒト抗体を作製するための技法のうちの任意のものを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、当技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法もヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫付与された異種マウスに抗原を投与することにより調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関しては、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体に関しては、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）も参照されたい。
【0042】
本明細書で使用されるとき、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、かつ／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。天然抗体において、Ｈ３及びＬ３が最も高い多様性の６つのＨＶＲを呈し、特にＨ３は抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００）、Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）を参照されたい。実際には、重鎖のみからなる自然発生するラクダ抗体は、軽鎖の不在下で機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）、Ｓｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照されたい。
【0043】
いくつかのＨＶＲ描写が本明細書で使用され、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。むしろ、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造的ループの位置に言及する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらＨＶＲの各々の残基は、以下に記述される。
【0044】
ＨＶＲは、次のような「拡張型ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ内の２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ内の２６～３５（Ｈ１）、５０～６５もしくは４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４－１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義の各々について、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）に従って番号付けされる。
【0045】
発現「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という表現、及びそれらの変形形態は、Ｋａｂａｔら（上記参照）における抗体の編成において重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのために使用されている番号付け方式を指す。この番号付けシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）を、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列と「標準の」Ｋａｂａｔにより番号付けされた配列との相同領域での整列により、所与の抗体に対して決定され得る。
【0046】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるようなＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【0047】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」または「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。概して、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群由来である。概して、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるような下位群である。例には、ＶＬに関するものが含まれる、下位群は、Ｋａｂａｔら（上記参照）にあるような下位群カッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶであり得る。加えて、ＶＨに関しては、下位群は、Ｋａｂａｔら（上記参照）にあるような下位群Ｉ、下位群ＩＩ、または下位群ＩＩＩであり得る。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、供与体フレームワーク配列を様々なヒトフレームワーク配列の集合と整列させることにより、特定の残基、例えば、ヒトフレームワーク残基が、供与体フレームワークに対するその相同性に基づいて選択される場合など、上記のものに由来し得る。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは既存のアミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、または２個以下である。
【0048】
「ＶＨ下位群ＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら（上記参照）の可変重鎖下位群ＩＩＩにおけるアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態において、ＶＨ下位群ＩＩＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、次の配列の各々の少なくとも一部分または全てを含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（ＨＣ－ＦＲ１）（配列番号３５）、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（ＨＣ－ＦＲ２）、（配列番号３６）、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＨＣ－ＦＲ３、配列番号３７）、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（ＨＣ－ＦＲ４）、（配列番号３８）。
【0049】
「ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら（上記参照）の可変軽鎖カッパ下位群Ｉにおけるアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態において、ＶＨ下位群Ｉコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、次の配列の各々の少なくとも一部分または全てを含む：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＬＣ－ＦＲ１）（配列番号３９）、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＬＣ－ＦＲ２）（配列番号４０）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＬＣ－ＦＲ３）（配列番号４１）、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（ＬＣ－ＦＲ４）（配列番号４２）。
【0050】
例えばＦｃ領域の規定位置における「アミノ酸修飾」は、規定の残基の置換もしくは欠失、または規定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。規定の残基に「隣接する」挿入とは、その１～２つの残基内への挿入を意味する。挿入は、規定の残基のＮ末端側またはＣ末端側であり得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【0051】
「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変を有し、これは、それらの改変（複数可）を保有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。一実施形態において、親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で既知の手順により産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）は、ＶＨ及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載する。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム突然変異生成は、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３８０９－３８１３（１９９４）、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５（１９９５）、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４（１９９５）、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－９（１９９５）、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）により記載される。
【0052】
「ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ（に特異的に結合する）」または「ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ（に対して特異的）」であるという用語は、本明細書で使用される場合、生体分子を含む分子の異種集団の存在下で標的の存在を決定するものである、標的と抗体との間の結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも高い親和性、結合力で、より容易に、及び／またはより長い持続時間でこの標的に結合する抗体である。一実施形態において、抗体が無関係の標的に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体の標的への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されるタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態において、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、それを必要としない。
【0053】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用され、天然配列のＦｃ領域及び変異形Ｆｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け方式によると残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することにより、除去され得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全Ｋ４４７残基が除去された抗体集団、除去されたＫ４４７残基がない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本発明の抗体で使用するための好適な天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が含まれる。
【0054】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が（これらの受容体の対立遺伝子変異形及び代替的にスプライス形態を含む）含まれ、ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれ、これらは、それらの細胞質側ドメインが主に異なる、同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）で概説される。今後特定されるＦｃＲを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語に包含される。
【0055】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語にはまた、胎児への母体ＩｇＧの移入を担う、新生児型受容体であるＦｃＲｎも含まれる。Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）。ＦｃＲｎへの結合の測定方法は知られている（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：（１２）：５９２－８（１９９７）、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５（７）：６３７－４０（１９９７）、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３－６（２００４）、ＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボでのＦｃＲｎへの結合及び血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトヒト細胞株において、または変異形Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合を改善または減少させた抗体変異形を記載している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。
【0056】
「ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ（実質的に低減した）」または「ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（実質的に異なる）」という表現は、本明細書で使用される場合、２つの数値（概して、一方はある分子に関連し、他方は参照／比較用分子に関連する）間の十分に高い度合いの差異を表し、これは、当業者が、２つの値間の差異を、該値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特徴の文脈において統計的有意性があるものと見なすようなものである。かかる２つの値間の差異は、例えば、参照／比較用分子の値の関数として、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／または約５０％超である。
【0057】
「ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｓｉｍｉｌａｒ（実質的に同様の）」または「ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｓａｍｅ（実質的に同じ）」という用語は、本明細書で使用される場合、２つの数値（例えば、一方は本発明の抗体に関連し、他方は参照／比較用抗体に関連する）間の十分に高い度合いの類似性を表し、これは、当業者が、２つの値間の差異を、該値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特徴の文脈において生物学的及び／または統計的有意性がほとんどまたは全くないものと見なすようなものである。かかる２つの値間の差異は、例えば、参照／比較用の値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／または約１０％未満である。
【0058】
「Ｃａｒｒｉｅｒｓ（担体）」には、本明細書で使用される場合、用いられる投与量及び濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物にとって無毒である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。多くの場合、生理的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容される担体の例には、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が含まれる
【0059】
「添付文書」は、適応症、使用法、投与量、投与、禁忌症、パッケージングされた産物と組み合わせられる他の薬品に関する情報、及び／またはかかる薬の使用に関する警告などを含む、薬品の商用パッケージに通例含まれる指示に関する情報を含む、薬品の商用パッケージに通例含まれる使用説明書を指す。
【0060】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床的病理の経過中に治療される個体または細胞の自然経過を改変するように考案された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行速度の減速、疾患状態の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、個体は、血清クレアチニンの上昇、タンパク尿、赤血球円柱、低減した腎機能、ネフローゼ症状群、顆粒円柱、顕微鏡的血尿、肉眼的血尿、高血圧、管形状異常、高カリウム血症、急速進行性糸球体腎炎（ＲＰＧＮ）、及び急性腎不全（ＡＲＦ）が含まれるが、これらに限定されないループス腎炎に関連する１つ以上の症状が、軽減するか、または排除された場合、「治療」に成功する。
【0061】
本明細書で使用される場合、疾患（例えば、ループス腎炎）の「進行の遅延」は、疾患の発症を延期し、妨害し、減速し、遅らせ、安定させ、かつ／または延ばすことを意味する。この遅延は、治療されている病歴及び／または個体に応じて異なる期間であり得る。当業者に明らかであるように、十分または著しい遅延は、個体、例えば、疾患を発症する危険性がある個体が、疾患を発症しないという点で予防を事実上包含し得る。例えば、ＬＮ症状及び／または病理の発生前の個体におけるＳＬＥの進行を、ＬＮの発症を延ばすか、または予防するように遅延させることができる。
【0062】
「完全腎応答（ＣＲＲ）」は、本明細書で使用される場合、血清クレアチニンの正常化、不活性尿沈渣、及び０．５未満の尿タンパク質対クレアチニン比を含む、治療に対する応答を指す。
【0063】
本明細書で使用される場合、「部分的腎応答（ＰＲＲ）」は、ＣＲＲ未満であるが、それでも血清クレアチニンの低減、低減した尿沈渣、及びタンパク尿の低減が含まれるが、これらに限定されない１つ以上の症状の軽減を含む、治療に対する応答を指す。
【0064】
「ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ（有効量）」は、特定の障害の測定可能な改善または予防を実現するのに必要な少なくとも最低限の濃度である。本明細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて異なり得る。有効量は、治療上有益な効果が治療の任意の毒性効果または有害効果を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除もしくは低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延などの結果が含まれる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強（例えば、標的による）、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。ループス腎炎の場合、有効量の薬物は、障害に関連する症状のうちの１つ以上における効果、及び／またはある程度の軽減を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的に関して、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、予防的または治療的治療を直接または間接的に達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成されても、されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の療法剤を投与するという点で考慮され得、単剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると見なされ得る。
【0065】
「ＣＤ２０」は、本明細書で使用される場合、ヒトＢ－リンパ球抗原ＣＤ２０（ＣＤ２０、Ｂ－リンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても既知であり、配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６により特徴付けられる）を指し、Ｂ前及び成熟Ｂリンパ球に位置するおよそ３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である。（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９）（１９８９ １１２８２－１１２８７、Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５（１９８８）２０８－１２、Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７（１９８８）１９７５－８０、Ｅｉｎｆｅｌｄ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．７（１９８８）７１１－７、Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２（１９８９）２５６０－８）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても既知の膜貫通４－ドメイン、亜群Ａ、メンバー１である。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子族のメンバーをコードする。この発生期タンパク質族のメンバーは、一般的な構造特徴及び同様のイントロン／エクソンスプライス境界により特徴付けられ、造血細胞及び非リンパ系組織の中で特有の発現パターンを表示する。この遺伝子は、Ｂ細胞が発達及び分化して、血漿細胞になる上で役割を果たすＢリンパ球表面分子をコードする。この族のメンバーは、族メンバーの群の中で１１ｑ１２に局所化する。この遺伝子の代替的なスプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異形をもたらす。
【0066】
「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」という用語は、本明細書において互換的に使用され、これらには、細胞により自然に発現されるかまたはＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現されるヒトＣＤ２０の任意の変異形、アイソフォーム、及び種ホモログが含まれる。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０を不活性化することにより、ＣＤ２０を発現する細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機構：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及びＣＤＣのうちの１つ以上により生じ得る。
【0067】
当技術分野において認識されるようなＣＤ２０の同義語には、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５が含まれる。
【0068】
本発明による「抗ＣＤ２０抗体」という用語は、ＣＤ２０抗原と特異的に結合する抗体である。２つの型の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、抗ＣＤ２０抗体のＣＤ２０抗原に対する結合特性及び生物活性に応じて、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（２００４）２７３８－２７４３、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１（２００３）１０４５－１０５２に従って区別され得、以下の表１を参照されたい。
【0069】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／０４４８５９に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７に開示されるような）、及びＡＴ８０ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）を有する。
【0070】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／１０３０８１に開示されるような）、２Ｆ２ＩｇＧ１（開示されるような、かつＷＯ２００４／０３５６０７及びＷＯ２００５／１０３０８１）、及び２Ｈ７ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０５６３１２に開示されるような）が含まれる。
【0071】
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は好ましくは、ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、より好ましくはアフコシル化ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。
【0072】
「リツキシマブ」抗体（参照抗体、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原を対象としているモノクローナル抗体を含有する遺伝子操作されたキメラヒトガンマ１マウス定常ドメインである。しかし、この抗体は、糖操作もアフォクシル化もされておらず、したがって、少なくとも８５％の量のフコースを有する。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含有し、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに割り当てられた、１９９８年４月１７日に発行されたＵＳ５，７３６，１３７（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，ｅｔ．ａｌ．）の中の名称「Ｃ２Ｂ８」により特定される。リツキシマブは、再発性または屈折性である低悪性度または濾胞性である、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンスリンパ腫を有する患者の治療に関して承認されている。インビトロ機構の作用研究は、リツキシマブが、ヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を呈することを示している（Ｒｅｆｆ，Ｍ．Ｅ．，ｅｔ．ａｌ，Ｂｌｏｏｄ ８３（２）（１９９４）４３５－４４５）。加えて、それは、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて活性を示す。
【0073】
「ＧＡ１０１抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトＣＤ２０に結合する以下の抗体のうちのいずれか１つを指す：（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体、（２）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体、（４）オビヌツズマブとして既知の抗体、または（５）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施形態において、ＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。
【0074】
「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」という用語は、ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５に開示されるようなヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体を指し、それらは、ＩｇＧ１からのヒト定常ドメインを用いたキメラ化、及び続いてヒト化（ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５を参照されたい）により、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号１２－Ｐｏｐｐｅｍａ，Ｓ．ａｎｄ Ｖｉｓｓｅｒ，Ｌ．，Ｂｉｏｔｅｓｔ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ３（１９８７）１３１－１３９を参照されたい）から得られた。これらの「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」の詳細は、ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５に開示される。
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１重鎖（ＶＨ）（配列番号１１）の可変領域
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１軽鎖（ＶＬ）（配列番号１２）の可変領域
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１重鎖（ＶＨ）（配列番号１１）の可変領域
【0075】
一実施形態において、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号７、８、及び１３～３３の群から選択された重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する（特に、ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５のＢ－ＨＨ２～Ｂ－ＨＨ９及びＢ－ＨＬ８～Ｂ－ＨＬ１７に対応する）。１つの具体的な実施形態において、かかる可変ドメインは、配列番号１４、１５、７、１９、２５、２７、及び２９からなる群から選択される（ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５のＢ－ＨＨ２、ＢＨＨ－３、Ｂ－ＨＨ６、Ｂ－ＨＨ８、Ｂ－ＨＬ８、Ｂ－ＨＬ１１、及びＢ－ＨＬ１３に対応する）。１つの具体的な実施形態において、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号８の軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する（ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５のＢ－ＫＶ１に対応する）。１つの具体的な実施形態において、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号７の重鎖の可変領域（ＶＨ）（ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５のＢ－ＨＨ６に対応する）、及び配列番号８の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（ＷＯ２００５／０４４８５９及びＷＯ２００７／０３１８７５のＢ－ＫＶ１に対応する）を有する。さらに、一実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、ＩｇＧ１抗体である。本発明によると、かかるアフォクシル化されたヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５９、ＷＯ２００４／０６５５４０、ＷＯ２００７／０３１８７５、Ｕｍａｎａ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０、及びＷＯ９９／１５４３４２に記載される手順に従って、Ｆｃ領域において糖操作されている（ＧＥ）。一実施形態において、アフコシル化糖操作ヒト化Ｂ－Ｌｙ１は、Ｂ－ＨＨ６－Ｂ－ＫＶ１ ＧＥである。一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである（推奨されるＩＮＮ、ＷＨＯ医薬品情報、ｖｏｌ．２６、Ｎｏ．４、２０１２、ｐ．４５３）。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１またはＲＯ５０７２７５９と同義である。これは、全ての前バージョン（例えば、Ｖｏｌ．２５、Ｎｏ．１、２０１１、ｐ．７５－７６）を置き換え、以前はアフツズマブ（推奨されるＩＮＮ、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｖｏｌ．２３、Ｎｏ．２、２００９、ｐ．１７６；Ｖｏｌ．２２、Ｎｏ．２、２００８、ｐ．１２４）として知られていた。いくつかの実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの抗原結合断片を含む抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号１０の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。
重鎖（配列番号９）
軽鎖（配列番号１０）
重鎖（配列番号９）
【0076】
いくつかの実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、アフコシル化糖操作ヒト化Ｂ－Ｌｙ１である。かかる糖操作ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域内にグリコシル化の変化パターンを有し、好ましくは、低減したレベルのフコース残基を有する。好ましくは、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖の総量の６０％以下である（一実施形態において、フコースの量は、４０％～６０％であり、別の実施形態において、フコースの量は、５０％以下、及びさらに別の実施形態において、フコースの量は、３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は好ましくは、二等分される。これらの糖操作ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、増加したＡＤＣＣを有する。
【0077】
「リツキシマブと比較した、抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比」は、実施例第２に記載されるようなＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＣＬ－８６）を用いたＦＡＣＳＡｒｒａｙ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）において、Ｃｙ５とコンジュゲートした該抗ＣＤ２０抗体及びＣｙ５とコンジュゲートしたリツキシマブを使用した直接免疫蛍光測定（平均蛍光強度（ＭＦＩ）が測定される）により決定され、以下のように計算される：
Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比＝
Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比＝
【0078】
ＭＦＩは、平均蛍光強度である。「Ｃｙ５標識比」は、本明細書で使用される場合、１分子抗体当たりのＣｙ５標識分子の数を意味する。
【0079】
典型的には、該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した該第２の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する、０．３～０．６、一実施形態において、０．３５～０．５５、及びさらに別の実施形態において、０．４～０．５の結合能力の比を有する。
【0080】
一実施形態において、該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、例えば、ＧＡ１０１抗体は、増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する。
【0081】
「増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する抗体」は、当業者に既知の任意の好適な方法により決定されるような、増加したＡＤＣＣを有する本明細書で定義される用語のような抗体を意味する。インビトロＡＤＣＣアッセイで受け入れられるものは、以下の通りである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域により認識される標的抗原を発現させることで既知である標的細胞を使用し、
２）アッセイは、無作為に選定された健康な供与体の血液から単離されたヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、エフェクター細胞として使用し、
３）アッセイは、以下のプロトコルに従って行われ：
ｉ）ＰＢＭＣを、標準密度遠心分離手順を使用して単離し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で５ｘ１０６細胞／ｍｌで懸濁し、
ｉｉ）標的細胞は、標準組織培養方法により成長し、９０％超の生存性で急成長相から採取し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、５１Ｃｒの１００マイクロ－キュリーで標識化し、細胞培養培地を用いて２回洗浄し、１０５細胞／ｍｌの密度で、細胞培養培地中で再懸濁し、
ｉｉｉ）上記の１００マイクロタイターの最終標的細胞懸濁液を９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに移し、
ｉｖ）抗体を細胞培養培地中で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌに段階的に希釈し、５０マイクロタイターの得られた抗体溶液を９６ウェルのマイクロタイタープレート内の標的細胞に付加し、上記の全ての濃度範囲を網羅する三連の様々な抗体濃度で試験し、
ｖ）最大放出（ＭＲ）対照に関して、標識標的細胞を含有するプレート内の３つの追加のウェルは、抗体溶液（上記の要点ｉｖ）の代わりに、５０マイクロタイターの非イオン性洗剤の２％（ＶＮ）水溶液（Ｎｏｎｉｄｅｔ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を受け、
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）対照に関して、標識標的細胞を含有するプレート内の３つの追加のウェルは、抗体溶液（上記の要点ｉｖ）の代わりに、５０マイクロタイターのＲＰＭＩ細胞培養培地を受け、
ｖｉｉ）次いで、９６ウェルのマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートし、
ｖｉｉｉ）５０マイクロタイターのＰＢＭＣ懸濁液（上記の要点ｉ）を各ウェルに付加し、２５：１の標的細胞比のエフェクターをもたらし、プレートを５％のＣＯ２雰囲気におけるインキュベーター内に、３７℃で４時間配置し、
ｉｘ）各ウェルから細胞不含の上清を採取し、実験的に放出された放射能（ＥＲ）を、ガンマ計数器を使用して定量化し、
ｘ）各抗体濃度に関して、式（ＥＲ－ＭＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）ｘ１００に従って特異的な溶解パーセンテージを計算し、式中、ＥＲは、その抗体濃度に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、ＭＲは、ＭＲ対照（上記の要点Ｖを参照されたい）に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、ＳＲは、ＳＲ対照（上記の要点ｖｉを参照されたい）に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの増加、及び／または上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの半分を達成するのに必要とされる抗体の濃度の低減として定義される。一実施形態において、ＡＤＣＣの増加は、上記のアッセイで測定され、同じ抗体により媒介され、当業者に既知である同じ標準産生、精製、配合、及び保管方法を使用して同じ型の宿主細胞により産生されるＡＤＣＣに対するが、比較用抗体（増加したＡＤＣＣの欠如）が、フコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）遺伝子（例えば、ＦＵＴ８ノックオウトのために操作されたものを含む）から、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現させるために操作された、かつ／または低減した発現を有するように操作された宿主細胞により産生されていないことを除く。
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域により認識される標的抗原を発現させることで既知である標的細胞を使用し、
２）アッセイは、無作為に選定された健康な供与体の血液から単離されたヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、エフェクター細胞として使用し、
３）アッセイは、以下のプロトコルに従って行われ：
ｉ）ＰＢＭＣを、標準密度遠心分離手順を使用して単離し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で５ｘ１０６細胞／ｍｌで懸濁し、
ｉｉ）標的細胞は、標準組織培養方法により成長し、９０％超の生存性で急成長相から採取し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、５１Ｃｒの１００マイクロ－キュリーで標識化し、細胞培養培地を用いて２回洗浄し、１０５細胞／ｍｌの密度で、細胞培養培地中で再懸濁し、
ｉｉｉ）上記の１００マイクロタイターの最終標的細胞懸濁液を９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに移し、
ｉｖ）抗体を細胞培養培地中で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌに段階的に希釈し、５０マイクロタイターの得られた抗体溶液を９６ウェルのマイクロタイタープレート内の標的細胞に付加し、上記の全ての濃度範囲を網羅する三連の様々な抗体濃度で試験し、
ｖ）最大放出（ＭＲ）対照に関して、標識標的細胞を含有するプレート内の３つの追加のウェルは、抗体溶液（上記の要点ｉｖ）の代わりに、５０マイクロタイターの非イオン性洗剤の２％（ＶＮ）水溶液（Ｎｏｎｉｄｅｔ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を受け、
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）対照に関して、標識標的細胞を含有するプレート内の３つの追加のウェルは、抗体溶液（上記の要点ｉｖ）の代わりに、５０マイクロタイターのＲＰＭＩ細胞培養培地を受け、
ｖｉｉ）次いで、９６ウェルのマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートし、
ｖｉｉｉ）５０マイクロタイターのＰＢＭＣ懸濁液（上記の要点ｉ）を各ウェルに付加し、２５：１の標的細胞比のエフェクターをもたらし、プレートを５％のＣＯ２雰囲気におけるインキュベーター内に、３７℃で４時間配置し、
ｉｘ）各ウェルから細胞不含の上清を採取し、実験的に放出された放射能（ＥＲ）を、ガンマ計数器を使用して定量化し、
ｘ）各抗体濃度に関して、式（ＥＲ－ＭＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）ｘ１００に従って特異的な溶解パーセンテージを計算し、式中、ＥＲは、その抗体濃度に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、ＭＲは、ＭＲ対照（上記の要点Ｖを参照されたい）に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、ＳＲは、ＳＲ対照（上記の要点ｖｉを参照されたい）に対して定量化された平均放射能（上記の要点ｉｘを参照されたい）であり、
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの増加、及び／または上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの半分を達成するのに必要とされる抗体の濃度の低減として定義される。一実施形態において、ＡＤＣＣの増加は、上記のアッセイで測定され、同じ抗体により媒介され、当業者に既知である同じ標準産生、精製、配合、及び保管方法を使用して同じ型の宿主細胞により産生されるＡＤＣＣに対するが、比較用抗体（増加したＡＤＣＣの欠如）が、フコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）遺伝子（例えば、ＦＵＴ８ノックオウトのために操作されたものを含む）から、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現させるために操作された、かつ／または低減した発現を有するように操作された宿主細胞により産生されていないことを除く。
【0082】
該「増加したＡＤＣＣ」は、例えば、該抗体の突然変異及び／または糖操作により得ることができる。一実施形態において、本抗体は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．），Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０）のＧｌｃＮＡｃにより二等分される抗体のＦｃ領域に結合する二分岐のオリゴ糖を有するように糖操作される。別の実施形態において、本抗体は、タンパク質のフコシル化が欠損している宿主細胞中の抗体を発現させることにより、Ｆｃ領域に結合する炭水化物上のフコースを欠くように糖操作される（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、または欠失したアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）もしくはノックダウンされたＦＵＴ遺伝子発現を有する細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）。さらに別の実施形態において、抗体配列は、ＡＤＣＣを増強するようにそのＦｃ領域内で操作されている（例えば、一実施形態において、かかる操作された抗体変異形は、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）で１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む）。
【0083】
「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」という用語は、補体の存在下で、本発明による抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を指す。ＣＤＣは、補体の存在下で、本発明による抗ＣＤ２０抗体とのＣＤ２０発現細胞の調製物の処理により測定され得る。本抗体が、４時間後に腫瘍細胞の２０％以上の溶解（細胞死）を１００ｎＭの濃度で誘導する場合にＣＤＣが見られる。一実施形態において、アッセイは、５１ＣｒまたはＥｕ標識腫瘍細胞を用いて行われ、放出された５１ＣｒまたはＥｕを測定する。対照には、補体を用いるが、抗体を用いない腫瘍標的細胞のインキュベーションが含まれる。
【0084】
「ＣＤ２０抗原の発現」という用語は、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞中でＣＤ２０抗原の著しいレベルの発現を示すことを意図する。一実施形態において、本発明の方法に従って治療される患者は、Ｂ細胞上で著しいレベルのＣＤ２０を発現する。Ｂ細胞上のＣＤ２０発現は、当技術分野で既知の標準アッセイにより決定され得、例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳを使用して、または対応するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出により測定される。
【0085】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせを任意に含むといった具合である。
【0086】
「ａｂｏｕｔ（約）」という用語は、本明細書で使用される場合、当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【0087】
本明細書に記載の本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（を含む）」 「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ（からなる）」、及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ（から本質的になる）」を含むことが理解される。
【0088】
ＩＩＩ．方法
一態様において、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することにより、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、個体は、ループス腎炎を有するか、それを発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、ループス腎炎は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎である。いくつかの実施形態において、本方法は、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含み、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されず、ここで、第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。後述されるように、いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体を含む。
一態様において、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することにより、ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、個体は、ループス腎炎を有するか、それを発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、ループス腎炎は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎である。いくつかの実施形態において、本方法は、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含み、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されず、ここで、第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。後述されるように、いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体を含む。
【0089】
抗ＣＤ２０抗体
本開示のある特定の態様は、例えば、ループス腎炎を治療するか、またはその進行を阻止するための方法で使用するための抗ＣＤ２０抗体に関する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ＩＩ型抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１抗体である。
本開示のある特定の態様は、例えば、ループス腎炎を治療するか、またはその進行を阻止するための方法で使用するための抗ＣＤ２０抗体に関する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ＩＩ型抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１抗体である。
【0090】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／０４４８５９に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７に開示されるような）、及びＡＴ８０ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）を有する。
【0091】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／１０３０８１に開示されるような）、２Ｆ２ＩｇＧ１（開示されるような、かつＷＯ２００４／０３５６０７及びＷＯ２００５／１０３０８１）、及び２Ｈ７ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０５６３１２に開示されるような）が含まれる。
【0092】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載されるＧＡ１０１抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０は、ヒトＣＤ２０に結合する以下の抗体のうちのいずれか１つである：（１）ＧＹＡＦＳＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＦＰＧＤＧＤＴＤ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＱＭＳＮＬＶＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及びＡＱＮＬＥＬＰＹＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体、（２）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体、（４）オビヌツズマブとして既知の抗体、または（５）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施形態において、ＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかのＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３、例えば、配列番号７からの３ＨＶＲ及び配列番号８の３ＨＶＲ、配列番号９からの３ＨＶＲ及び配列番号１０からの３ＨＶＲ、または表２に提供されるアミノ酸配列の任意のＨＶＲを含む。
【0093】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【0094】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0095】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号１０の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９の配列を含む重鎖と、配列番号１０の配列を含む軽鎖とを含む。
【0096】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、以下の表２に列挙されるポリペプチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0097】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、アフコシル化糖操作抗体である。かかる糖操作抗体は、Ｆｃ領域内にグリコシル化の変化パターンを有し、好ましくは、低減したレベルのフコース残基を有する。好ましくは、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖の総量の６０％以下である（一実施形態において、フコースの量は、４０％～６０％であり、別の実施形態において、フコースの量は、５０％以下、及びさらに別の実施形態において、フコースの量は、３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は好ましくは、二等分される。これらの糖操作ヒト化抗ＣＤ２０（例えば、Ｂ－Ｌｙ１）抗体は、増加したＡＤＣＣを有する。
【0098】
オリゴ糖構成成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する抵抗性、免疫系との相互作用、薬物動態、及び特異的な生物活性を含む、治療用糖タンパク質の有効性に関係する特性に著しく影響を与え得る。かかる特性は、オリゴ糖の存在または不在だけでなく、特異的構造にも依存し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間にあるいくつかの概括論が確立され得る。例えば、ある特定のオリゴ糖構造は、特異的炭水化物結合タンパク質との相互作用により、血液流からの糖タンパク質の急速なクリアランスを媒介する一方で、他のオリゴ糖構造は、抗体により結合され、所望されない免疫反応を引き起こし得る。（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－８１）。
【0099】
哺乳動物細胞は、それらがタンパク質をヒトへの適用にとって最も高い適合形態でグリコシル化する能力に因り、治療用糖タンパク質の産生に好ましい宿主である。（Ｃｕｍｍｉｎｇ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １（１９９１）１１５－３０、Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－８１）。細菌は、タンパク質を滅多にグリコシル化せず、一般的な宿主の他の型、例えば、酵母、糸状真菌、昆虫、及び植物細胞などは、血液流からの急速なクリアランス、不要な免疫相互作用、及びいくつかの特定な事例において、低減した生物活性に関連するグリコシル化パターンをもたらす。哺乳動物細胞である、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が、過去２０年で最も一般的に使用されている。好適なグリコシル化パターンを供することに加えて、これらの細胞は、遺伝子的に安定した高生産性クローン細胞株の一貫性のある生成を可能にする。それらは、血清不含培地を使用して単純な生物反応器で高密度に培養され得、安全で再現可能な生物プロセスの開発を許可する。他の一般的に使用される動物細胞には、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯマウス骨髄腫細胞、及びＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞が含まれる。最近では、トランスジェニック動物からの産生が、試験されている。（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－９８１）。
【0100】
全ての抗体は、重鎖定常領域内の保存位置で炭水化物構造を含有し、各アイソタイプは、Ｎ連結炭水化物構造の異なるアレイを保有し、それらは、タンパク質構成、分泌、または機能性活性に可変的に影響を与える。（Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５（１９９７）２６－３２）。結合されたＮ連結炭水化物の構造は、プロセスの程度に応じて大きく異なり、これには、高マンノース、多分岐、ならびに二分岐の複合オリゴ糖が含まれ得る。（Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５（１９９７）２６－３２）。典型的には、モノクローナル抗体でさえ複数の糖形態として存在するように、特定のグリコシル化部位で結合するコアオリゴ糖構造の不均一プロセスが存在する。同様に、抗体グリコシル化における主な差異は、細胞株間で生じ、さらにわずかな差異が、異なる培養条件下で成長する所与の細胞株に関して見られることが示されている。（Ｌｉｆｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（８）（１９９５）８１３－２２）。
【0101】
効能の大幅な増加を得ながら、単純な産生プロセスを維持し、著しい不要な副作用をできるだけ回避する１つの方法は、Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０及びＵＳ６，６０２，６８４に記載されるように、モノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を、それらのオリゴ糖構成成分を操作することにより増強することである。癌免疫療法で最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメイン内のＡｓｎ２９７において、保存されたＮ連結グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合する２つの複合二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋まっており、それらは、ポリペプチド骨格との広範囲な接触を形成し、それらの存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を媒介するために必須である（Ｌｉｆｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（１９９５）８１３－８２２、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３（１９９８）５９－７６、Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１９９７）２６－３２）。
【0102】
β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ１１（´´ＧｎＴＩＩ１７ｙ）、つまり二等分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞により産生された抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を著しく増加させることが前に示された。（Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０；及びＷＯ９９／１５４３４２を参照されたく、その全内容が参照することにより本明細書に組み込まれる）。抗体ｃｈＣＥ７は、高腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準工業用細胞株内で産生されたとき、臨床的に有用な効能をほとんど有さない、コンジュゲートされていないモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０）。その研究は、まず、ＡＤＣＣ活性の大幅な増加が、抗体産生細胞を操作して、ＧｎＴＩＩＩを発現することにより得ることが可能かもしれないことを示し、これは、自然発生抗体中で見られるレベル以上で、二等分されたフコシル化されていないオリゴ糖を含む、定常領域（Ｆｃ）に関連した二等分されたオリゴ糖の割合の増加ももたらすことが可能かもしれない。
【0103】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、ヒトＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域）を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、修飾されているＮ連結オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域のＮ連結オリゴ糖は、非修飾のＮ連結オリゴ糖を有する抗体と比較して、低減したフコース残基を有する。いくつかの実施形態において、二等分されたオリゴ糖は、二等分された複合オリゴ糖である。いくつかの実施形態において、Ｎ連結オリゴ糖は、増加した二等分されたフコシル化されていないオリゴ糖を有するように修飾されている。いくつかの実施形態において、二等分されたフコシル化されていないオリゴ糖は、ハイブリッド型である。いくつかの実施形態において、二等分されたフコシル化されていないオリゴ糖は、複合型である。より詳細な説明に関しては、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及び米国特許第８，８８３，９８０号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）を参照されたい。
【0104】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、多重特異性抗体または二重特異性抗体である。
【0105】
抗体の調製
上記の実施形態のうちのいずれかによる抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、以下の項１～７に記載されるような特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせて組み込み得る。
上記の実施形態のうちのいずれかによる抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、以下の項１～７に記載されるような特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせて組み込み得る。
【0106】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【0107】
一実施形態において、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一実施形態において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートと結合した抗原を捕捉することにより測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングされ、続いて、室温（約２３℃）で２～５時間、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで遮断される。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ ＃２６９６２０）内で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］－抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ－１２の評価と一貫性がある）。次いで、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイで使用するために選定する。
【0108】
別の実施形態に従って、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され得る。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で行われる。一実施形態において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示書に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）になるまで希釈した後に、５μＬ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングしたタンパク質を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に２５℃、およそ２５μＬ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることにより計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによるオン速度が１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着スペクトロフォメーター（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される、増加濃度の抗原の存在下で、２５℃でのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗－抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することにより決定することができる。
【0109】
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに後述される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ´）２断片の考察に関しては、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに後述される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ´）２断片の考察に関しては、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【0110】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載される。
【0111】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照されたい）。
【0112】
抗体断片は、本明細書に記載されるようなインタクトな抗体のタンパク質消化ならびに組み換え宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない様々な技法により作製され得る。
【0113】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ型」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ型」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【0114】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は保持するようにヒト化される。概して、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、そのＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）は、非ヒト抗体に由来し、そのＦＲ（またはそれらの部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含むであろう。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【0115】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９－１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」手法を記載する）にさらに記載される。
【0116】
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」方法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位群のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリを選別することに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【0117】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載される。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載される。
【0118】
ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してヒト可変領域を有するインタクトなヒト抗体またはインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製され得る。かかる動物は典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は概して、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説に関しては、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびに ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物により生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによりさらに修飾され得る。
【0119】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体も、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載される。
【0120】
ヒト抗体も、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより生成され得る。次いで、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が後述される。
【0121】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体に関してコンビナトリアルライブラリを選別することにより単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かつ所望の結合特徴を保有する抗体に関してかかるライブラリを選別するための多様な方法が当技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説され、例えば、ｔｈｅ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）にさらに記載される。
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体に関してコンビナトリアルライブラリを選別することにより単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かつ所望の結合特徴を保有する抗体に関してかかるライブラリを選別するための多様な方法が当技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説され、例えば、ｔｈｅ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）にさらに記載される。
【0122】
ある特定のファージディスプレイ方法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）により別個にクローン化され、ファージライブラリ内で無作為に組み換えられ、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージに関して選別される。ファージは典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片として表示する。免疫付与源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）により記載されるように、ナイーブレパートリーは、クローン化され（例えば、ヒトから）、いかなる免疫付与も伴わずに、幅広い非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一の源を提供し得る。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローン化し、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによっても合成的に作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【0123】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【0124】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの１つは、ＣＤ２０に対し、他のものは、任意の他の抗原に対する。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＤ２０の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、ＣＤ２０を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用され得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの１つは、ＣＤ２０に対し、他のものは、任意の他の抗原に対する。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＤ２０の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、ＣＤ２０を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用され得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【0125】
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製するための静電気ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果の操作（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい）、二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されるような三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。
【0126】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【0127】
本明細書における抗体または断片には、ＣＤ２０、ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【0128】
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することにより、またはペプチド合成により調製され得る。かかる修飾には、例えば抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはアミノ酸配列中への残基の挿入、及び／またはアミノ酸配列中の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築を達成するように行われ得るが、但し、最終構築物が、所望の特徴、例えば抗原結合性を保有することを条件とする。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することにより、またはペプチド合成により調製され得る。かかる修飾には、例えば抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはアミノ酸配列中への残基の挿入、及び／またはアミノ酸配列中の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築を達成するように行われ得るが、但し、最終構築物が、所望の特徴、例えば抗原結合性を保有することを条件とする。
【0129】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表Ａにおいて、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表Ａにおいて、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに後述される。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され、生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善について選別され得る。
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表Ａにおいて、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表Ａにおいて、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに後述される。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され、生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善について選別され得る。
【0130】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【0131】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーと別のクラスのメンバーとの交換を伴うことになる。
【0132】
ある型の置換型変異形は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することに関与する。概して、さらなる研究のために選択される得られた変異形（複数可）は、親抗体に対してある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有するであろう。例示的な置換型変異形は、例えば、本明細書に記載されるもののような、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成された親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基は、突然変異され、変異形抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）に関して選別される。
【0133】
改変（例えば、置換）がＨＶＲで行われて、例えば、抗体親和性を改善し得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセスの間、高頻度で突然変異を起こすコドンによりコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原に接触する残基で行われ得、得られた変異形ＶＨまたはＶＬは、結合親和性に関して試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７に記載されている（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）。） 親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性は、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチドを対象とする突然変異生成）のうちのいずれかにより、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、ライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために選別される。多様性を導入するための別の方法は、複数のＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲを対象とする手法に関与する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が標的とされることが多い。
【0134】
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基以外の箇所であってよい。上記で提供される変異形ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲはいずれも、改変されないか、または１つを超える、２つ、もしくは３つのアミノ酸置換を含有しない。
【0135】
突然変異生成のために標的とされ得る、抗体の残基または領域を特定するのに有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異生成」と称され、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５により記載される。この方法において、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けたかを決定する。さらなる置換が最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接残基が置換のための候補として標的とされ得るか、または排除され得る。変異形は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するために選別され得る。
【0136】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異形には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの、抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
【0137】
ｂ）グリコシル化変異形
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。グリコシル化部位の、抗体への追加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるように、アミノ酸配列を改変することにより好都合に達成され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。グリコシル化部位の、抗体への追加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるように、アミノ酸配列を改変することにより好都合に達成され得る。
【0138】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合する炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞により産生された天然抗体は典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ連結により概して結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」にあるＧｌｃＮＡｃに結合するフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の特性が改善された抗体変異形を作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【0139】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析により測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合する全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変異に因り、２９７位の約±３のアミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位～３００位にも位置し得る。かかるフコシル化変異形は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第 ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関する公報の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例には、タンパク質のフコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，特に実施例１１）、及びアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株が含まれる（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）。
【0140】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二等分される、二等分されたオリゴ糖を有する抗体変異形がさらに提供される。かかる抗体変異形は、低減したフコシル化及び／または改善したＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異形も提供される。かかる抗体変異形は、改善したＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
【0141】
ｃ）Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域中に導入され得、それにより、Ｆｃ領域変異形が生成され得る。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域中に導入され得、それにより、Ｆｃ領域変異形が生成され得る。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
【0142】
ある特定の実施形態において、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を保有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途に望ましい候補となる抗体変異形を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／減損を確認するために実行され得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にするために実行され得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９－１５０２（１９８５）、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。あるいは、非放射性アッセイ方法が用いられる（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイも、抗体がＣ１ｑに結合することができず、故にＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行われ得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定は、当技術分野で既知の方法を使用しても行われ得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照されたい）。
【0143】
低減したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有する所謂「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【0144】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるＦｃ変異形は、エフェクター機能（ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣなど）を減衰させるための１つ以上のアミノ酸修飾をさらに含む。例示的な実施形態において、エフェクター機能を減衰させるための修飾は、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを改変しない修飾である。ある特定の実施形態において、エフェクター機能を減衰させるための修飾は、ヒトエフェクター細胞への結合、１つ以上のＦｃ受容体への結合、及び／またはＦｃ受容体を発現する細胞への結合を低減または排除する。例示的な実施形態において、本明細書に記載されるＦｃ変異形は、以下の修飾：ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域内のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、これは、減衰したエフェクター機能をもたらす。置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ三重変異形は、ＬＡＬＡＰＧと称される）は、Ｆｃ受容体及び補体への結合を低減すると従来より示されている（例えば、米国公開第２０１２／０２５１５３１号を参照されたい）。
【0145】
様々な実施形態において、低減したエフェクター機能を有するＦｃ変異形は、野生型Ｆｃ領域（例えば、エフェクター機能を低減するための突然変異を有しないが、他の突然変異体を有し得るＦｃ領域）により達成されたエフェクター機能と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％以上のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、及び／またはＦｃＲへの結合などの活性）を低減するＦｃ変異形を指す。ある特定の実施形態において、低減したエフェクター機能を有するＦｃ変異形は、野生型Ｆｃ領域と比較して、全ての検出可能なエフェクター機能を排除するＦｃ変異形を指す。エフェクター機能を測定するためのアッセイは、当技術分野で既知であり、後述される。
【0146】
インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／減損を確認するために実行され得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）ことを確実にするために実行され得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９－１５０２（１９８５）、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。あるいは、非放射性アッセイ方法が用いられる（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイも、抗体がＣ１ｑに結合することができず、故にＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行われ得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。
【0147】
ＦｃＲへの結合が改善または減少したある特定の抗体変異形が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
【0148】
ある特定の実施形態において、抗体変異形は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【0149】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されるような、改変された（すなわち、改善または減少した）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす改変がＦｃ領域内で行われ得る。
【0150】
母体ＩｇＧｓの胎児への移入を担う、増加した半減期及び新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善した結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載される。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換をそこに有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【0151】
Ｆｃ領域変異形の他の例に関する、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【0152】
ｄ）システイン操作された抗体変異形
ある特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換残基は、抗体の利用可能な部位で生じる。システインを有する残基で置換することにより、反応性チオール基がそれにより抗体の利用可能な部位に位置付けられ、抗体を薬物部分またはリンカー薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載されるような免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。ある特定の実施形態において、以下の残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
ある特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換残基は、抗体の利用可能な部位で生じる。システインを有する残基で置換することにより、反応性チオール基がそれにより抗体の利用可能な部位に位置付けられ、抗体を薬物部分またはリンカー薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載されるような免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。ある特定の実施形態において、以下の残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【0153】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で既知であり、かつ容易に利用可能である追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、及びデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性に因り製造に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に結合するポリマーの数は、異なり得、１つを超えるポリマーが結合している場合、それらは、同じか、または異なる分子であり得る。概して、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／または型は、改善された抗体の特定の特性または機能、抗体の誘導体が所定の条件下での療法において使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で既知であり、かつ容易に利用可能である追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、及びデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性に因り製造に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に結合するポリマーの数は、異なり得、１つを超えるポリマーが結合している場合、それらは、同じか、または異なる分子であり得る。概して、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／または型は、改善された抗体の特定の特性または機能、抗体の誘導体が所定の条件下での療法において使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【0154】
別の実施形態において、放射線に曝露されることにより選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００－１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであり得、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を抗体－非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅する温度に加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【0155】
Ａ．組み換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列をコードし得る（例えば、抗体の軽及び／または重鎖）。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物の、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上記で提供されるような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２０抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列をコードし得る（例えば、抗体の軽及び／または重鎖）。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物の、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上記で提供されるような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【0156】
抗ＣＤ２０抗体の組み換え産生に関して、例えば、上述されるような抗体をコードする核酸は、単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離及び配列決定され得る。
【0157】
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核生物または真核生物細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされないとき、細菌内で産生され得る。細菌内の抗体断片及びポリペプチドの発現に関しては、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．ｃｏｌｉ内の抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。） 発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【0158】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」されている真菌及び酵母菌株を含む、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それらは、部分的または完全にヒトグリコシル化されたパターンを有する抗体の産生をもたらす。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０～２１５（２００６）を参照されたい。
【0159】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）由来でもある。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス菌株が特定されている。
【0160】
植物細胞培養物も宿主として利用され得る。米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載する）を参照されたい。
【0161】
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されるようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞により形質転換されるサル腎臓ＣＶ１株である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説に関しては、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
【0162】
Ｂ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＣＤ２０抗体は、当技術分野で既知の様々なアッセイによりそれらの物理的／化学的特性及び／または生物活性に関して、特定、選別、または特徴付けされ得る。
本明細書で提供される抗ＣＤ２０抗体は、当技術分野で既知の様々なアッセイによりそれらの物理的／化学的特性及び／または生物活性に関して、特定、選別、または特徴付けされ得る。
【0163】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によりその抗原結合活性に関して試験される。ＣＤ２０結合は、当技術分野で既知の方法を使用して決定され得、例示的な方法が本明細書に開示される。一実施形態において、結合は、ラジオイムノアッセイを使用して測定される。例示的なラジオイムノアッセイが以下に提供される。ＣＤ２０抗体はヨウ素化され、固定濃度のヨウ素化抗体及び減少濃度の段階的に希釈された非標識ＣＤ２０抗体を含有する競合反応混合物が調製される。ＣＤ２０を発現する細胞（例えば、ヒトＣＤ２０で安定的にトランスフェクトされたＢＴ４７４細胞）が、反応混合物に付加される。インキュベーションに続いて、細胞は洗浄されて、細胞に結合したＣＤ２０抗体から遊離ヨウ素化ＣＤ２０抗体を分離する。例えば、結合したヨウ素化ＣＤ２０抗体のレベルは、細胞に関連する放射能を計数することにより決定され、結合親和性は、標準方法を使用して決定される。別の実施形態において、ＣＤ２０抗体が表面発現ＣＤ２０に結合する能力（例えば、Ｂ細胞サブセット上で）が、フローサイトメトリーを使用して評価される。末梢白血球が得られ（例えば、ヒト、カニクイザル、ラット、またはマウスから）、細胞は、血清で遮断される。標識ＣＤ２０抗体は、段階希釈液中に付加され、Ｔ細胞サブセット特定する（当技術分野で既知の方法を使用して）ためにＴ細胞も染色される。試料のインキュベーション及び洗浄に続いて、細胞は、フローサイトメーターを使用して分類され、データは、当技術分野で周知の方法を使用して分析される。別の実施形態において、ＣＤ２０結合は、表面プラズモン共鳴を使用して分析され得る。例示的な表面プラズモン共鳴方法は、実施例において例証される。
一態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によりその抗原結合活性に関して試験される。ＣＤ２０結合は、当技術分野で既知の方法を使用して決定され得、例示的な方法が本明細書に開示される。一実施形態において、結合は、ラジオイムノアッセイを使用して測定される。例示的なラジオイムノアッセイが以下に提供される。ＣＤ２０抗体はヨウ素化され、固定濃度のヨウ素化抗体及び減少濃度の段階的に希釈された非標識ＣＤ２０抗体を含有する競合反応混合物が調製される。ＣＤ２０を発現する細胞（例えば、ヒトＣＤ２０で安定的にトランスフェクトされたＢＴ４７４細胞）が、反応混合物に付加される。インキュベーションに続いて、細胞は洗浄されて、細胞に結合したＣＤ２０抗体から遊離ヨウ素化ＣＤ２０抗体を分離する。例えば、結合したヨウ素化ＣＤ２０抗体のレベルは、細胞に関連する放射能を計数することにより決定され、結合親和性は、標準方法を使用して決定される。別の実施形態において、ＣＤ２０抗体が表面発現ＣＤ２０に結合する能力（例えば、Ｂ細胞サブセット上で）が、フローサイトメトリーを使用して評価される。末梢白血球が得られ（例えば、ヒト、カニクイザル、ラット、またはマウスから）、細胞は、血清で遮断される。標識ＣＤ２０抗体は、段階希釈液中に付加され、Ｔ細胞サブセット特定する（当技術分野で既知の方法を使用して）ためにＴ細胞も染色される。試料のインキュベーション及び洗浄に続いて、細胞は、フローサイトメーターを使用して分類され、データは、当技術分野で周知の方法を使用して分析される。別の実施形態において、ＣＤ２０結合は、表面プラズモン共鳴を使用して分析され得る。例示的な表面プラズモン共鳴方法は、実施例において例証される。
【0164】
別の態様において、競合アッセイは、ＣＤ２０への結合に関して本明細書に開示される抗ＣＤ２０抗体のうちのいずれかと競合する抗体を特定するために使用され得る。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、本明細書に開示される抗ＣＤ２０抗体のうちのいずれかにより結合される同じエピトープ（例えば、線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）で提供される。
【0165】
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＣＤ２０は、ＣＤ２０に結合する第１の標識抗体（例えば、リツキシマブ、ＧＡ１０１抗体など）及びＣＤ２０への結合に関して第１の抗体と競合する能力に関して試験されている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化されたＣＤ２０は、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体のＣＤ２０への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化されたＣＤ２０に関連する標識の量が測定される。固定化されたＣＤ２０に関連する標識の量は、対照試料に対して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＣＤ２０への結合について第１の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【0166】
２．活性アッセイ
本開示の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗体）は、当技術分野で既知の１つ以上の活性アッセイにより特定及び／または特徴付けられ得る。例えば、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、本明細書に記載されるように使用され得る。
本開示の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗体）は、当技術分野で既知の１つ以上の活性アッセイにより特定及び／または特徴付けられ得る。例えば、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、本明細書に記載されるように使用され得る。
【0167】
本発明の免疫コンジュゲートを抗ＣＤ２０抗体の代わりにまたはそれに加えて使用して、上記のアッセイのうちのいずれかが行われ得ることが理解される。
【0168】
上記のアッセイのいずれも、抗ＣＤ２０抗体及び追加の療法剤を使用して行われ得ることが理解される。
【0169】
Ｃ．免疫コンジュゲート
本発明は、化学療法剤または化学療法薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞傷害性剤にコンジュゲートされた本明細書における抗ＣＤ２０抗体を含む免疫コンジュゲートも提供する。
本発明は、化学療法剤または化学療法薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞傷害性剤にコンジュゲートされた本明細書における抗ＣＤ２０抗体を含む免疫コンジュゲートも提供する。
【0170】
一実施形態において、免疫コンジュゲートは、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０ ４２５ ２３５ Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦなどのオーリスタチン（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号、ならびに同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６－３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５－２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７－５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７－７２１（２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：８２９－８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６－４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテシン；ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない抗体が１つ以上の薬物にコンジュゲートされる抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
【0171】
別の実施形態において、免疫コンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（シュードモナスエルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない酵素活性毒素またはそれらの断片にコンジュゲートされる本明細書に記載されるような抗体を含む。
【0172】
別の実施形態において、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて、放射性コンジュゲートを形成する本明細書に記載されるような抗体を含む。多様な放射性同位体は、放射性コンジュゲートの産生のために利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性コンジュゲートが検出のために使用されるとき、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍまたはＩ１２３、または再びヨード－１２３、ヨード－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、または鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても既知の）のためのスピン標識を含み得る。
【0173】
抗体及び細胞傷害性のコンジュゲートは、Ｎ－サクシニミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸塩（トルエン２，６－ジイソシアン酸塩など）、及びビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの多様な二機能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素 は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【0174】
本明細書におけるイミュヌノコンジュゲートまたはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、ならびに市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＳＶＳＢ（サクシニミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋試薬を用いて調製されるかかるコンジュゲートを明白に企図するが、これに限定されない。
【0175】
ループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法
本開示のある特定の態様は、ループスを有する個体におけるループス腎炎（ＬＮ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法に関する。いくつかの実施形態において、個体または患者は、ヒトである。
本開示のある特定の態様は、ループスを有する個体におけるループス腎炎（ＬＮ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法に関する。いくつかの実施形態において、個体または患者は、ヒトである。
【0176】
ＬＮは、腎臓（複数可）におけるループス（例えば、全身性エリテマトーデス、薬物誘導ループス、新生児ループス、または円板状ループス）の徴候として当技術分野で知られている。腎臓に徴候として現れるループスの最も一般的な型は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。ＳＬＥ患者の２５～５０％が、疾患の経過の初期において尿及び／または腎機能における異常を有し、成人の最大６０％及び子どもの８０％が、ＬＮを最終的に発症すると考えられる（より詳細に関しては、Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｊ．Ｓ．（１９９９）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０：４１３－４２４を参照されたい）。ＬＮは、ＳＬＥに関連する罹患率及び死亡率の少なくとも５０％の原因であると考えられる。
【0177】
加えて、腎臓の徴候が、円板状（Ｒｏｕｊｅａｕ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ａｃｔａ Ｄｅｒｍ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．６４：１６０－１６３）及び薬物誘導ループス（Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）３８：１０１７－１０１８）などのループスの他の型においても記述されている。いくつかの実施形態において、個体は、ＳＬＥ、円板状ループス、または薬物誘導ループスを有する。
【0178】
ＳＬＥの診断は、現在の米国リウマチ学会（ＡＣＲ）の基準に従い得る。活性疾患は、１つのイギリス諸島ループス活動性グループ（ＢＩＬＡＧ）の「Ａ」基準もしくは２つのＢＩＬＡＧの「Ｂ」基準、ＳＬＥ疾患活性指数（ＳＬＥＤＡＩ）、または以下の実施例に記述され、Ｆｕｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ６１（９）：１１４３－５１（２００９）に記載されるような全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）応答者指数（ＳＲＩ）により定義され得る。Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．“Ｔｈｅ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＬＥ”Ａｒｔｈ Ｒｈｅｕｍ ２５（１９８２）から適合されたＳＬＥを診断するために使用されるいくつかの兆候、症状、または他の指標は、頬全体への発疹、円板状発疹、または赤く隆起した斑などの蝶形発疹；皮膚発疹の発症または増加をもたらす日光への反応などの光線過敏症；鼻または口内の潰瘍などの口腔潰瘍；２つ以上の末梢関節（関節周囲の骨が破壊されない関節炎）に関与する非びらん性関節炎などの通常無痛性である関節炎、漿膜炎、胸膜炎、または心膜炎；尿中の過剰なタンパク質（０．５ｇｍ／日超または試験棒において３＋）及び／または細胞円柱（尿及び／または白血球及び／または腎尿細管細胞に由来する異常素子）などの腎障害；神経学的兆候、症状、または他の指標；発作（痙攣）；及び／または薬物の不在下の精神病もしくはかかる効果を引き起こすことで既知の代謝障害、ならびに溶血性貧血または白血球減少症（１立方ミリメートルあたり４，０００細胞未満の白血球数）またはリンパ球減少症（１立方ミリメートルあたり１，５００リンパ球未満）または血小板減少症（１立方ミリメートルあたり１００，０００血小板未満）などの血液学的兆候、症状、または他の指標であり得る。白血球減少症及びリンパ球減少症は、２つ以上の機会において検出される必要がある。血小板減少症は、それを誘導することで既知の薬物の不在下で検出される必要がある。本発明は、ループスのこれらの兆候、症状、または他の指標に限定されない。
【0179】
自己抗体の存在は、ループスに関する指標として試験され得る。自己抗体には、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗補体抗体、及び抗核抗体（例えば、ＥＮＡパネル）が含まれ得るが、これらに限定されない。ＥＮＡは、抽出可能核抗原、すなわち、ＭｃＮｅｉｌａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．，Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：１－１７（１９８４）、Ｗｈｉｔｔｉｎｇｈａｍ，Ａｎｎ．Ａｃａｄ．Ｍｅｄ．１７（２）：１９５－２００（１９８８）、Ｗａｌｌａｃｅ ａｎｄ Ｈａｈｎ，ＤＵＢＯＩＳ’ ＬＵＰＵＳ ＥＲＹＴＨＥＭＡＴＯＳＵＳ，７ＴＨＥＤ．ＬＩＰＰＩＮＣＯＴＴ（２００７）、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ８９（１）：６２－６７（２０１０）に記載されるような例えば、ＲＮＰ、Ｒｏ／ＳＳ－Ａ、Ｌａ／ＳＳ－Ｂ、Ｓｍ、ＳＣＬ－７０、Ｊｏ－１を含む核抗原の群を指す。ＥＮＡに対する抗体は、ループスと相関性がある。ＭｃＮｅｉｌａｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４、Ｗｈｉｔｔｉｎｇｈａｍ １９８８、Ａｓｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６８（６）：３６６－３７４（１９８９）、及びＴａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０。例えば、Ｃ３レベル、Ｃ４レベル、及び／またはＣＨ５０アッセイにより測定される場合の低減した補体活性もループスに関連する。
【0180】
ＳＬＥの参照において上述されるように、ＬＮは、ループス（例えば、全身性エリテマトーデス、薬物誘導ループス、新生児ループス、または円板状ループス）を有する患者において徐々に徴候として現れる場合が多いことが当技術分野で知られている。つまり、患者は、１つ以上のＬＮ症状の臨床的または病理学的な徴候なしにループスと診断され得る。それにもかかわらず、患者は、ループス患者が最終的にはＬＮを高頻度に発症することに因り、ＬＮを発症する危険性があると依然として見なされ得る。よって、いくつかの実施形態において、本開示の方法が、ループスを有する患者におけるＬＮの進行を遅延、またはＬＮを予防することにおいて、使用されることが見出され得る。いくつかの実施形態において、本開示の方法が、ループス（例えば、腎臓（複数可）において徴候を欠くループスの形態）を有する患者におけるＬＮの発生を遅らせるか、または予防することにおいて使用されることが見出され得る。
【0181】
ＬＮ病理は、以下の表に示されるように、国際腎臓学会／腎病理協会（ＩＳＮ／ＲＰＳ）２００３のクラス分けシステムに従ってクラス分けされ得る（さらなる用語の説明及び定義に関しては、Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ ＧＳ，Ｄ’Ａｇａｔｉ ＶＤ（２００７）Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ７１：４９１－４９５ ａｎｄ Ｗｅｅｎｉｎｇ，ＪＪ（２００４）Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６５：５２１－５３０を参照されたい）。
【0182】
いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＬＮを有する。いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩのＬＮを有する。例えば、いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩ（Ａ）またはクラスＩＩＩ（Ａ／Ｃ）のＬＮを有する。いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＶのＬＮを有する。例えば、いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＶ－Ｓ（Ａ）、ＩＶ－Ｇ（Ａ）、ＩＶ－Ｓ（Ａ／Ｃ）、またはＩＶ－Ｇ（Ａ／Ｃ）のＬＮを有する。上記の表３に示されるように、クラスＶのＬＮは、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＬＮと同時にも生じ得る。いくつかの実施形態において、本開示の方法は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＬＮ、及び随伴性のクラスＶのＬＮを有する患者を治療するために使用される。
【0183】
上記で考察されるように、ループス（例えば、ＳＬＥ）を有する患者は最終的に、ＬＮを高頻度に発症する。いくつかの実施形態において、患者は、ＬＮを発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＬＮを発症する危険性がある。いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのＬＮを、随伴性のクラスＶのＬＮと共に発症する危険性がある。
【0184】
いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＩＩ（Ｃ）のＬＮ（例えば、上記の表３に記載されるような）を有さない。いくつかの実施形態において、患者は、クラスＩＶ（Ｃ）のＬＮ、例えば、クラスＩＶ－Ｓ（Ｃ）またはＩＶ－Ｇ（Ｃ）のＬＮ（例えば、上記の表３に記載されるような）を有さない。
【0185】
当技術分野で既知の複数の研究所試験は、ループス腎炎の存在、進行、及び／またはその治療に対する応答を診断及び／または監視するために使用され得る。いくつかの実施形態において、血清クレアチニンが測定され得る。いくつかの実施形態において、血清クレアチニンの正常範囲は、約０．６～約１．３ｍｇ／ｄＬであり得るが、年齢、男女間、及び研究所によりいくつかの差異が見られる。いくつかの実施形態において、尿沈渣及び／または円柱の存在が、例えば、尿の顕微鏡検査により測定され得る。例えば、尿試料中の赤血球の数は、顕微鏡検査によるアッセイにかけられ得る。いくつかの実施形態において、尿沈渣の正常値は、強拡大視野（ＨＰＦ）あたり約４個以下の赤血球（ＲＢＣ）であり得る。尿円柱には、赤血球円柱、白血球円柱、腎尿細管上皮細胞円柱、蝋様円柱、硝子様円柱、顆粒円柱、及び脂肪円柱が含まれ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、尿タンパク質対クレアチニン比（ＵＰＣＲ）が測定され得る。尿中のタンパク質（タンパク尿）の存在も、尿アルブミン対クレアチニン比（ＵＡＣＲ）及び浸漬棒尿分析が含まれるが、これらに限定されない試験によりアッセイにかけられ得る。腎機能を調査するのに有用であり得る他の試験及び／または測定項目には、腎パネル、クレアチニンクリアランス、ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩、リン、カルシウム、アルブミン、血液尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、グルコース、推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）、ＢＵＮ／クレアチニン比、及びアニオンギャップが含まれるが、これらに限定されず、かつ適切である場合、血液及び／または尿中の上記のパラメータの測定が含まれ得る。より詳細な説明に関しては、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃａｓｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｕｐｕｓ Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓを参照されたい（Ｈａｈｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｃａｒｅ Ｒｅｓ．６４：７９７－８０８）。
【0186】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、本開示の少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む。本明細書に記載されるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のいずれか、例えば、オビヌツズマブなどのＧＡ１０１抗体が使用され得る。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の約１８週間後、第１の抗体曝露量の約１９週間後、第１の抗体曝露量の約２０週間後、第１の抗体曝露量の約２１週間後、第１の抗体曝露量の約２２週間後、第１の抗体曝露量の約２３週間後、第１の抗体曝露量の約２４週間後、第１の抗体曝露量の約２５週間後、または第１の抗体曝露量の約２６週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の、以下の約２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、または１９週間後未満のうちのいずれかまで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、第１の抗体曝露量の、以下の約１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５週間後超のうちのいずれかまで提供されない。つまり、第２の抗体曝露量は、上限２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、または１９週間及び独立して選択される下限１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５週間を有する週の範囲のうちのいずれかまで提供されず、ここで、下限は、上限未満である。
【0187】
本明細書に記載される投薬レジメンは、用量間の時間を観察記録するための一貫性のあるシステムを使用し、それにより、第１の用量を１日目に患者に投与する。本明細書に記載されるように、本開示の抗体曝露量は、１または２回分の用量を含み得る。抗体曝露量が、１回分の用量を含有する事例において、第１の抗体曝露量後、ある期間を経過するまで提供されない第２の抗体曝露量に対する参考（本明細書に記載されるような）は、第１の抗体曝露量（例えば、１日目）の用量と第２の抗体曝露量の用量との間で経過した時間量を指す。第１の抗体曝露量が、２回分の用量を含む場合、第１の抗体曝露量の第１の用量が１日目に提供される。抗体曝露量が、２回分の用量を含有する事例において、第１の抗体曝露量後、ある期間を経過するまで提供されない第２の抗体曝露量に対する参考（本明細書に記載されるような）は、第１の抗体曝露量（例えば、１日目）の２回分の用量のうちの第１の用量と第２の抗体曝露量の２回分の用量の第１の用量との間で経過した時間量を指す。例えば、本開示の方法が、２回分の用量を有する第１の抗体曝露量及び２回分の用量を有する第２の抗体曝露量を含み、第２の抗体曝露量が、第１の抗体曝露量の約２２週間後まで提供されない場合、第１の抗体曝露量の第１の用量と第２の抗体曝露量の第１の用量との間隔は、約２２週間である。
【0188】
いくつかの実施形態において、本開示の第１の抗体曝露量は、１または２回分の用量の本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、または約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。
【0189】
いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、２回分の用量を含む。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量は、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含む。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第１の抗体曝露量の第２の用量は、第１の抗体曝露量の第１の用量の約２週間後まで提供されない。
【0190】
いくつかの実施形態において、本開示の第２の抗体曝露量は、１または２回分の用量の本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、または約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含有する。
【0191】
いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、２回分の用量を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量は、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない。いくつかの実施形態において、第２の抗体曝露量の第２の用量は、第２の抗体曝露量の第１の用量の約２週間後まで提供されない。
【0192】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、静脈内投与される（例えば、ＩＶ点滴による）。
【0193】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量の免疫抑制剤（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。細胞増殖阻害薬（例えば、抗生物質、アルキル化剤（例えば、シトホスファン（ｃｙｔｏｐｈｏｓｐｈａｎｅ）としても既知のシクロホスファミド）などの細胞傷害性剤）、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤などのアンチメタボライト、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体など）、免疫抑制抗体、グルココルチコイド、イムノフィリンを標的とする薬物（例えば、タクロリムス、シロリムス、ラパマイシン、及びそれらの類似体、シクロスポリンなど）、ｍＴＯＲ活性部位阻害剤、ミコフェノール酸及びその誘導体または塩、ＴＮＦ結合タンパク質、インターフェロン、オピオド（ｏｐｉｏｄ）、ならびに他の小分子体（例えば、フィンゴリモド）が含まれるが、これらに限定されない、複数のクラスの免疫抑制剤が当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸の誘導体、またはミコフェノール酸の塩を含む。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、ミコフェノール酸モフェチルを含む。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）を含む。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を含む。本開示の免疫抑制剤の有効量は、当技術分野で既知であり、標準アッセイにより容易に確認可能である。例えば、ミコフェノール酸モフェチルは、図１に例示されるように２．０～２．５ｇ／日で投与され得る。いくつかの実施形態において、ミコフェノール酸モフェチルは、１０００ｍｇ／日の分割用量（２回／日）で開始して、４週目までに最大２．０～２．５ｇ／日の分割用量（２回／日）で滴定して投与され得る。
【0194】
いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、例えば、ループスに対する治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を用いた治療の期間を通して投与され得る。いくつかの実施形態において、ミコフェノール酸モフェチルは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を用いた治療の期間を通して上述されるように投与され得る。
【0195】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイド（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。ベクロメタゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、コルチゾン、及びコルチゾールが含まれるが、これらに限定されない、多様な自然発生及び合成グルココルチコイド／コルチコステロイドが、当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、グルココルチコイド／コルチコステロイドは、メチルプレドニゾロンを含む。いくつかの実施形態において、グルココルチコイド／コルチコステロイドは、プレドニゾンを含む。本開示のグルココルチコイド／コルチコステロイドの有効量は、当技術分野で既知であり、標準アッセイにより容易に確認可能である。例えば、メチルプレドニゾロンは、ＩＶにより１日１回７５０～１０００ｍｇの用量で投与され得る。別の例として、プレドニゾンは、０．５ｍｇ／ｋｇ及び任意に７．５ｍｇ／日に漸減されて経口投与され得る。
【0196】
いくつかの実施形態において、グルココルチコイドは、例えば、ＬＮ臨床活動を治療するために、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。いくつかの実施形態において、グルココルチコイドは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に、例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与され得る。いくつかの実施形態において、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前にＩＶにより投与され得る。いくつかの実施形態において、プレドニゾン（例えば、経口投与される）及び／またはメチルプレドニゾロン（例えば、ＩＶ投与される）は、治療、続いて、維持療法（例えば、ミコフェノール酸モフェチルまたはシクロホスファミド）により投与され得る。
【0197】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量の抗ヒスタミン剤（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。当技術分野で既知であり、かつ現在臨床使用されている抗ヒスタミン剤には、ヒスタミンＨ１－受容体及びヒスタミンＨ２－受容体アンタゴニスト、またはインバースアゴニストが含まれる。いくつかの実施形態において、抗ヒスタミン剤は、ジフェンヒドラミンを含む。本開示の抗ヒスタミン剤の有効量は、当技術分野で既知であり、標準アッセイにより容易に確認可能である。例えば、ジフェンヒドラミンは、５０ｍｇの経口用量で投与され得る。
【0198】
いくつかの実施形態において、抗ヒスタミン剤は、例えば、予防的治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。いくつかの実施形態において、抗ヒスタミン剤は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に、例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与され得る。いくつかの実施形態において、５０ｍｇのジフェンヒドラミンは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前に経口投与され得る。
【0199】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量の非ステロイド性抗炎症薬またはＮＳＡＩＤ（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。当技術分野で既知のＮＳＡＩＤには、酢酸誘導体、プロピオン酸誘導体、サリチル酸塩、エノール酸（ｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）誘導体、アントラニル酸誘導体、選択的ＣＯＸ－２阻害剤、スルホンアニリドなどが含まれる。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、アセトアミノフェンを含む。本開示のＮＳＡＩＤの有効量は、当技術分野で既知であり、標準アッセイにより容易に確認可能である。例えば、アセトアミノフェンは、６５０～１０００ｍｇの経口用量で投与され得る。
【0200】
いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、例えば、予防的治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に、例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与され得る。いくつかの実施形態において、６５０～１０００ｍｇのアセトアミノフェンは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前に経口投与され得る。
【0201】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量の抗マラリア剤（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。使用され得る抗マラリア剤の例には、ヒドロキシクロロキン、クロロキン、及びキナクリンが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、抗マラリア剤は、例えば、ループスの１つ以上の症状のための治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。
【0202】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量のインテグリンアンタゴニスト（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。使用され得るインテグリンアンタゴニストの例には、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているエファリズマブ（ＲＡＰＴΓＶＡ（登録商標））などのＬＦＡ－１抗体もしくはＢｉｏｇｅｎから入手可能なナタリズマブ（ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標））などのアルファ４インテグリン抗体、またはジアザ環式フェニルアラニン誘導体、フェニルアラニン誘導体、フェニルプロピオン酸誘導体、エナミン誘導体、プロパン酸誘導体、アルカノン酸誘導体、置換フェニル誘導体、芳香族アミン誘導体、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド、アルファｖベータ３インテグリンに対する抗体、アザ－架橋二環式アミノ酸誘導体、などが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、インテグリンアンタゴニストは、例えば、ループスの１つ以上の症状のための治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。
【0203】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量のサイトカインアンタゴニスト（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。使用され得るサイトカインアンタゴニストの例には、ＩＬ－１、ＩＬ－ｌα、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５に対するアンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗体）；ＴＮＦ－αまたはＴＮＦ－βなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、サイトカインアンタゴニストは、例えば、ループスの１つ以上の症状のための治療として、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。
【0204】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、有効量のホルモン（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、ホルモン（例えば、ホルモン補充療法のための）は、例えば、ループスを有する女性における医学的治療のために、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。
【0205】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、標準ケア治療（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態において、標準ケア治療は、例えば、ループスの１つ以上の症状を治療するか、または予防するために、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に施され得る。ある特定の実施形態において、標準ケア治療は、本開示の第２の抗体曝露後に施され得る。例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、誘導療法として本明細書に記載されるように患者に投与され得、次いで、患者は、標準の維持療法としてのケアに従って治療され得る。ループスのための標準ケア治療は、当技術分野で周知されており、これには、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル（例えば、本明細書に記載されるような、２．０～２．５ｇ／日などの用量で）、アザチオプリン、及びグルココルチコイドまたはコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン漸減などのプレドニゾン）が含まれるが、これらに限定されない。
【0206】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、降圧剤（例えば、本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて）を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、降圧剤は、例えば、高血圧を治療するか、または予防するために、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中、投与後に投与され得る。いくつかの実施形態において、降圧剤には、ＡＣＥ阻害剤及びアンジオテンシン受容体遮断薬が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、表５に列挙される降圧剤は、例えば、表５に記載される範囲内の用量で投与される。
【0207】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、個体において完全腎応答（ＣＲＲ）をもたらす。いくつかの実施形態において、ＣＲＲは、以下の、血清クレアチニンの正常化、不活性尿沈渣、及び＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比の全てを含む。≦いくつかの実施形態において、血清クレアチニンの正常化は、中央研究所値の正常範囲上限（ＵＬＮ）以下の血清クレアチニン、ならびに／またはベースライン（例えば、１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、ベースラインの≦１５％超及び中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニンにより特徴付けられる。いくつかの実施形態において、不活性尿沈渣は、＜１０のＲＢＣ／強拡大視野（ＨＰＦ）及び／または赤血球円柱の不在により特徴付けられる。ＬＮにおけるＣＲＲ及び部分的腎応答（ＰＲＲ）のより詳細な考察に関しては、例えば、Ｃｈｅｎ，Ｙ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃｌｉｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．３：４６－５３を参照されたい。
【0208】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、個体において完全腎応答（ＣＲＲ）または部分的腎応答（ＰＲＲ）をもたらす。いくつかの実施形態において、ＰＲＲは、以下の、血清クレアチニンの正常化、不活性尿沈渣、及び＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、ＰＲＲは、以下の、血清クレアチニンの低減、低減した尿沈渣、タンパク尿の低減が含まれるが、これらに限定されない１つ以上の症状の軽減、及び腎機能の任意の他の改善のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、ＣＲＲまたはＰＲＲは、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗核抗体／ＥＮＡ、抗補体抗体、補体Ｃ３及び／またはＣ４の低減したレベル、ならびに低減した補体活性（例えば、ＣＨ５０アッセイにより測定される場合）が含まれるが、これらに限定されないループス活性の１つ以上の生物マーカーの低減を含む。
【0209】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす。いくつかの実施形態において、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後（例えば、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに従って）、血流循環末梢Ｂ細胞が、約１０個の細胞／μＬ以下、約９個の細胞／μＬ以下、約８個の細胞／μＬ以下、約７個の細胞／μＬ以下、約６個の細胞／μＬ以下、約５個の細胞／μＬ以下、約４個の細胞／μＬ以下、約３個の細胞／μＬ以下、約２個の細胞／μＬ以下、または約１個の細胞／μＬ以下で末梢血液中に存在する。いくつかの実施形態において、個体における血流循環末梢Ｂ細胞は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％減損する。いくつかの実施形態において、血流循環末梢Ｂ細胞の減損は、例えば、同じ個体における治療前の対応する測定と比較して、または対照個体（例えば、治療を受けていない個体）における対応する測定と比較して、第１の抗体曝露量（例えば、１または２回分の用量の本明細書に記載されるような抗ＣＤ２０抗体を含む）後、第２の抗体曝露量（例えば、１または２回分の用量の本明細書に記載されるような抗ＣＤ２０抗体を含む）後、治療の３ヶ月後（例えば、本明細書に記載されるような第１及び／または第２の抗体曝露量を受容後）、治療の６ヶ月後（例えば、本明細書に記載されるような第１及び／または第２の抗体曝露量を受容後）、治療の９ヶ月後（例えば、本明細書に記載されるような第１及び／または第２の抗体曝露量を受容後）、または治療の１２ヶ月後（例えば、本明細書に記載されるような第１及び／または第２の抗体曝露量を受容後）に採取された血流循環末梢Ｂ細胞の測定を指す。
【0210】
個体における血流循環末梢Ｂ細胞の減損をアッセイするための方法、例えば、Ｂ細胞マーカーを認識する１つ以上の抗体を使用するフローサイトメトリーが、当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、高感受性フローサイトメトリー（ＨＳＦＣ）は、血流循環末梢Ｂ細胞の減損をアッセイするために使用され得る（例えば、Ｖｉｔａｌ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６３：３０３８－３０４７を参照されたい）。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７－Ｂ細胞）、記憶Ｂ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋Ｂ細胞）、または形質芽球（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋ＣＤ３８＋＋Ｂ細胞）である。
【0211】
ＩＶ．製品またはキット
本発明の別の態様において、上述される障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含む製品またはキットが提供される。製品またはキットは、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体により、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。本組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載される抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）である。ラベルまたは添付文書は、本組成物が、例えば、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに従って、選定した病態を治療するために使用されることを示す。あるいは、または加えて、本製品または本キットは、注入用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
本発明の別の態様において、上述される障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含む製品またはキットが提供される。製品またはキットは、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体により、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。本組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載される抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）である。ラベルまたは添付文書は、本組成物が、例えば、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに従って、選定した病態を治療するために使用されることを示す。あるいは、または加えて、本製品または本キットは、注入用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【0212】
いくつかの実施形態において、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む容器と、任意に、個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、例えば、本使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が個体に投与され、第２の抗体曝露量が、第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、添付文書とを含むキットが本明細書で提供され、ここで、第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む容器と、任意に、個体におけるクラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書とを含むキットが本明細書で提供される。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。
【0213】
本製品はなおも、第２の薬品を含む第２または第３の容器をさらに含み得、ここで、抗ＣＤ２０抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、第１の薬品であり、本物品は、第２の薬品を用いて対象を治療することに関する添付文書上の使用説明をさらに含む。例示的な第２の薬品には、化学療法剤、免疫抑制剤、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、ホルモン、及び本明細書に記載されるようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と併せて使用され得る治療薬のうちのいずれかが含まれる。これらの実施形態における製品は、本組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。
【0214】
上記の製品のうちのいずれかは、抗ＣＤ２０抗体の代わりに、またはそれに加えて本発明の免疫コンジュゲートを含み得ることが理解される。
【0215】
本明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分なものであると見なされる。本明細書に示されて説明される修正に加えて、本発明の様々な修正は、前述の記載から当業者に明らかになり、それらは添付の特許請求の範囲内のものである。本明細書で引用される全ての公報、特許、及び特許出願は、全ての目的のために参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例0216】
本発明は、以下の実施例を参照することによってより十分に理解される。しかし、それらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施形態が例示のみを目的とするものであり、それらを考慮に入れた様々な修正または変更が当業者に提案されており、本明細書の趣旨及び範囲、ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【0217】
実施例１：クラスＩＩＩ／ＩＶのループス腎炎を有する患者におけるミコフェノール酸モフェチルと共に投与されるオビヌツズマブの薬理研究
研究デザイン
このフェーズＩＩの研究は、活性ＩＳＮ／ＲＰＳクラスＩＩＩ／ＩＶのループス腎炎（ＬＮ）を有する患者におけるミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）の追加療法として、オビヌツズマブ（すなわち、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）の安全性及び有効性を評価するために考案されている。フェーズＩＩの研究は、増殖性ＬＮを有するクラスＩＩＩ及びＩＶの患者における、オビヌツズマブプラスＭＭＦの有効性及び安全を、プラセボプラスＭＭＦの有効性及び安全性と比較する、並行群で二重盲の無作為化されたプラセボを対照とした研究である（図１）。
研究デザイン
このフェーズＩＩの研究は、活性ＩＳＮ／ＲＰＳクラスＩＩＩ／ＩＶのループス腎炎（ＬＮ）を有する患者におけるミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）の追加療法として、オビヌツズマブ（すなわち、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）の安全性及び有効性を評価するために考案されている。フェーズＩＩの研究は、増殖性ＬＮを有するクラスＩＩＩ及びＩＶの患者における、オビヌツズマブプラスＭＭＦの有効性及び安全を、プラセボプラスＭＭＦの有効性及び安全性と比較する、並行群で二重盲の無作為化されたプラセボを対照とした研究である（図１）。
【0218】
研究は、前向きな多施設研究でもある。現在のＡＣＲ基準（少なくとも４つの基準が存在し、そのうちの１つは陽性抗核抗体である必要がある）に従ったＳＬＥの診断を含むいくつかの実施形態において、ＩＳＮ／ＲＰＳクラスＩＩＩまたはＩＶのＬＮと診断された患者は、世界中の施設に登録されている。研究は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤／アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、ＭＭＦ（２．０～２．５ｇ／日での投薬される）、及びプレドニゾン漸減を用いる標準ケア療法を含む。
【0219】
以下でより詳述されるように、患者は、１８～７５歳であり、選別の６ヶ月前以内に行われた腎生検を根拠としてＩＳＮ／ＲＰＳ２００３のクラスＩＩＩまたはＩＶの増殖性ＬＮを有し（Ｗｅｅｎｉｎｇ，ＪＪ（２００４）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１５：２４１－２５０を参照されたい）、随伴性のクラスＶの疾患（例えば、クラスＩＩＩ／ＶまたはクラスＩＶ／Ｖ）を有し得る。クラスＩＩＩ（Ｃ）またはクラスＩＶ（Ｃ）の疾患を有する患者は、これらの分類において応答のより低い可能性に因り、除外される。
【0220】
研究のための試験対象患者基準には、以下が含まれる。
（ａ）署名されたインフォームドコンセントフォーム
（ｂ）１８～７５歳、
（ｃ）研究プロトコルに遵守する能力、
（ｄ）現在のＡＣＲ基準に従った全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の診断（少なくとも４つの基準が存在し、そのうちの１つは陽性抗核抗体である必要がある）、
（ｅ）選別の６ヶ月前以内に行われた腎生検を根拠とするＩＳＮ／ＲＰＳ２００３のクラスＩＩＩまたはＩＶのＬＮの診断（患者は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶの疾患に加えてクラスＶの疾患も同時に示し得る）、
（ｆ）≧１０ＲＢＣ／ＨＰＦまたは赤血球円柱の存在を根拠とする活性尿沈渣の表示、及び
（ｇ）タンパク尿（２４時間の尿収集に基づく、＞１．０の尿タンパク質対クレアチニン比）。
（ａ）署名されたインフォームドコンセントフォーム
（ｂ）１８～７５歳、
（ｃ）研究プロトコルに遵守する能力、
（ｄ）現在のＡＣＲ基準に従った全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の診断（少なくとも４つの基準が存在し、そのうちの１つは陽性抗核抗体である必要がある）、
（ｅ）選別の６ヶ月前以内に行われた腎生検を根拠とするＩＳＮ／ＲＰＳ２００３のクラスＩＩＩまたはＩＶのＬＮの診断（患者は、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶの疾患に加えてクラスＶの疾患も同時に示し得る）、
（ｆ）≧１０ＲＢＣ／ＨＰＦまたは赤血球円柱の存在を根拠とする活性尿沈渣の表示、及び
（ｇ）タンパク尿（２４時間の尿収集に基づく、＞１．０の尿タンパク質対クレアチニン比）。
【0221】
重要な除外基準には、以下が含まれる。
（ａ）現在活性中であり、ＳＬＥに起因する網膜炎、不完全に制御されている発作障害、急性錯乱状態、脊髄炎、卒中もしくは卒中症状群、小脳失調、または認知症、
（ｂ）急速進行性糸球体腎炎の存在（腎生検で評価される糸球体の≧５０％における半月体形成の存在、または選別の１２週間以内の２倍の血清クレアチニンにより定義される）、
（ｃ）推算ＧＦＲ＜３０ｍＬ／分、または透析もしくは腎移植の必要性により定義される重度の腎機能障害、
（ｄ）腎生検における、糸球体の５０％超に及ぶ硬化症、
（ｅ）無作為化の３ヶ月前以内のシクロホスファミドまたはカルシニューリン阻害剤を用いた治療、及び
（ｆ）血小板減少症を有するか、あるいは血漿交換、または急性輸血もしくは血小板輸血などの治療を必要とする臨床的に著しい出血または臓器不全を発症する危険性がある、不安定な疾患。
（ａ）現在活性中であり、ＳＬＥに起因する網膜炎、不完全に制御されている発作障害、急性錯乱状態、脊髄炎、卒中もしくは卒中症状群、小脳失調、または認知症、
（ｂ）急速進行性糸球体腎炎の存在（腎生検で評価される糸球体の≧５０％における半月体形成の存在、または選別の１２週間以内の２倍の血清クレアチニンにより定義される）、
（ｃ）推算ＧＦＲ＜３０ｍＬ／分、または透析もしくは腎移植の必要性により定義される重度の腎機能障害、
（ｄ）腎生検における、糸球体の５０％超に及ぶ硬化症、
（ｅ）無作為化の３ヶ月前以内のシクロホスファミドまたはカルシニューリン阻害剤を用いた治療、及び
（ｆ）血小板減少症を有するか、あるいは血漿交換、または急性輸血もしくは血小板輸血などの治療を必要とする臨床的に著しい出血または臓器不全を発症する危険性がある、不安定な疾患。
【0222】
患者は、選別前または選別中に、最初の１０００ｍｇのメチルプレドニゾロン静注（ＩＶ）を受け、これらの患者に対する日常ケアの指針に従う重度の臨床活動のための無作為化の前に最大３０００ｍｇのメチルプレドニゾロンＩＶを受け得る。患者は、オビヌツズマブ／プラセボ点滴の日に８０ｍｇのメチルプレドニゾロン（または、メチルプレドニゾロンプラセボ）ＩＶを受けて、点滴関連事象を低減する。経口プレドニゾン漸減は０．５ｍｇ／ｋｇであり、１２週間にわたって低減する。１０ｍｇ／日を超えるプレドニゾン用量が、心血管事象の危険性の増加を含む著しい有害事象に関連することを認識した上で、この修正された漸減を開始する（Ｂｉｃｈｉｌｅ，Ｔ．ａｎｄ Ｐｅｔｒｉ，Ｍ．（２０１４）Ｐｒｅｓｓｅ Ｍｅｄ．４３：ｅ１８７－１９５）。リツキシマブを過去に経験しているということは、経口プレドニゾンの不在下またはプレドニゾン漸減で完全及び部分的腎応答が可能である見込みがあり得ることを呈し、したがって、より低用量のコルチコステロイドの使用を可能にする（Ｃｏｎｄｏｎ，Ｍ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７２：１２８０－１２８６）。
【0223】
患者を主要エンドポイントの査定まで１２ヶ月間観察し、６ヶ月において、ＣＲＲの初期の差異を査定するための中間分析を行う。全ての患者は、腎生検病理組織学の中央リーディングを有し、臨床的状態及び当地の慣行に基づいて利用可能である場合、腎生検を繰り返し受ける。全ての患者を高感受性フローサイトメトリー（ＨＳＦＣ）により査定して、オビヌツズマブが血流循環末梢Ｂ細胞を減損する能力を査定し、かつ中間ＰＤ分析を行って、患者が予想通り末梢ＣＤ１９＋Ｂ細胞を完全に減損していないかどうかを評価する。
【0224】
投薬及び非治験医薬品
研究のための投薬レジメンは、１、１５、１６８、及び１８２日目に１０００ｍｇの用量でＩＶ点滴により投与されるオビヌツズマブ（試験群）；または１、１５、１６８、及び１８２日目にＩＶ点滴により投与されるオビヌツズマブプラセボ（例えば、１０００ｍｇの用量のオビヌツズマブに対応する生理食塩水ＩＶ）である。オビヌツズマブ／プラセボは、完全な蘇生設備が即座に利用可能であり、調査者または指定された者の緻密な管理下にある病院または診療環境において投与される。点滴の終わりに、必要な場合、ＩＶ線を少なくとも１時間所定の位置のままにして、ＩＶ薬物の投与を可能にする。この期間、有害事象が生じない場合、ＩＶ線を取り外してよい。
研究のための投薬レジメンは、１、１５、１６８、及び１８２日目に１０００ｍｇの用量でＩＶ点滴により投与されるオビヌツズマブ（試験群）；または１、１５、１６８、及び１８２日目にＩＶ点滴により投与されるオビヌツズマブプラセボ（例えば、１０００ｍｇの用量のオビヌツズマブに対応する生理食塩水ＩＶ）である。オビヌツズマブ／プラセボは、完全な蘇生設備が即座に利用可能であり、調査者または指定された者の緻密な管理下にある病院または診療環境において投与される。点滴の終わりに、必要な場合、ＩＶ線を少なくとも１時間所定の位置のままにして、ＩＶ薬物の投与を可能にする。この期間、有害事象が生じない場合、ＩＶ線を取り外してよい。
【0225】
選別後、ＭＭＦをまだ受けていない患者は、分割用量（２～３回／日）で１５００ｍｇ／日のＭＭＦを受け、耐えられる場合、全ての患者の用量を４週目まで分割用量（２～３回／日）で最大２．０～２．５ｇ／日の標的用量で滴定する。用量を低減する必要がある場合、２５０～５００ｍｇの減少量で減少してよい。選別中または無作為化において、臨床的に示された場合、患者は、基礎ＬＮ臨床活動を治療するために、最大３日間１日１回７５０～１０００ｍｇのメチルプレドニゾロンＩＶを受け得る。患者は、選別中または無作為化において０．５ｍｇ／ｋｇの経口プレドニゾンを受け、プロトコルに応じてこのプレドニゾン用量の漸減を１６日目に開始し、１２週目までプレドニゾン投与量を７．５ｍｇ／日に低減する。これらの治療は、以下でさらに詳述される。
【0226】
併用療法及び臨床的慣行
ビタミンＤ（４００ＩＵ／日）及びカルシウムサプリメント（１２００ｍｇ／日のクエン酸カルシウムまたは１５００ｍｇ／日の炭酸カルシウム）をまだ服用していない患者は、無作為化においてこれらのサプリメントを服用し始める。全ての患者は、慢性腎疾患のための全米腎臓基金により推奨されるような十分な血圧管理をするために滴定されるアンジオテンシン変換酵素阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を服用する。非ジヒドロピリジンカルシウムアンタゴニスト、ジヒドロピリジンカルシウムアンタゴニスト、アルドステロンアンタゴニスト、及び直接レニンアンタゴニストを含むが、これらに限定されない、タンパク尿に影響を与える他の薬剤は、研究の間、開始されない。
ビタミンＤ（４００ＩＵ／日）及びカルシウムサプリメント（１２００ｍｇ／日のクエン酸カルシウムまたは１５００ｍｇ／日の炭酸カルシウム）をまだ服用していない患者は、無作為化においてこれらのサプリメントを服用し始める。全ての患者は、慢性腎疾患のための全米腎臓基金により推奨されるような十分な血圧管理をするために滴定されるアンジオテンシン変換酵素阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を服用する。非ジヒドロピリジンカルシウムアンタゴニスト、ジヒドロピリジンカルシウムアンタゴニスト、アルドステロンアンタゴニスト、及び直接レニンアンタゴニストを含むが、これらに限定されない、タンパク尿に影響を与える他の薬剤は、研究の間、開始されない。
【0227】
ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）
全ての患者は、選別中または遅くとも１日目にはＭＭＦの使用を継続または開始する。最初の口からの投与量は、１５００ｍｇ／日であり、２分割または３分割用量が与えられ、４週目まで分割用量で２．０～２．５ｇ／日へと上方滴定される。ＭＭＦは、５００ｍｇ／週、耐えられる場合は、最大２．５ｇ／日の投与量まで上方に増加してよい。有害効果に因り、低減は可能である。
全ての患者は、選別中または遅くとも１日目にはＭＭＦの使用を継続または開始する。最初の口からの投与量は、１５００ｍｇ／日であり、２分割または３分割用量が与えられ、４週目まで分割用量で２．０～２．５ｇ／日へと上方滴定される。ＭＭＦは、５００ｍｇ／週、耐えられる場合は、最大２．５ｇ／日の投与量まで上方に増加してよい。有害効果に因り、低減は可能である。
【0228】
過去にＭＭＦに曝露がない、新たにＬＮと診断された患者は、導入剤（ＭＭＦまたはシクロホスファミド）を開始し、次いで、適格性を再評価することが推奨される。最初にＭＭＦまたはシクロホスファミドを用いて治療される患者の一部は、ＣＲＲを達成し、よって、付加される免疫抑制を最小限に必要とする（Ｄａｌｌ’Ｅｒａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｃａｒｅ Ｒｅｓ．６３：３５１－３５７）。
【0229】
研究に登録して１５００ｍｇ／日を超えるＭＭＦの投与量をすでに受けている患者に対して、耐えられる場合、ＭＭＦを４週目まで分割用量で２．５ｇ／日の目標まで上方滴定する。患者の現在のＭＭＦの用量を２分割または３分割用量で与え、耐えられる場合、５００ｍｇ／週を増加する。
【0230】
コルチコステロイド投与
全ての患者は、彼らの最初のＬＮ療法の一部としてＩＶと経口コルチコステロイドとの組み合わせを受ける。メチルプレドニゾロン（例えば、Ｓｏｌｕ－Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））を２つの目的：クラスＩＩＩまたはＩＶの活性ＬＮを有する患者のための通常ケアの一部として、及びオビヌツズマブ／プラセボ点滴の日に点滴関連反応（ＩＲＲ）を低減するために実行する。調査者の判断及び当地の慣行に基づいて、最大３回分の用量のＩＶメチルプレドニゾロン１０００ｍｇを与える。最大３回の１０００ｍｇの点滴を、選別前または選別の合間に開始してよい。
全ての患者は、彼らの最初のＬＮ療法の一部としてＩＶと経口コルチコステロイドとの組み合わせを受ける。メチルプレドニゾロン（例えば、Ｓｏｌｕ－Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））を２つの目的：クラスＩＩＩまたはＩＶの活性ＬＮを有する患者のための通常ケアの一部として、及びオビヌツズマブ／プラセボ点滴の日に点滴関連反応（ＩＲＲ）を低減するために実行する。調査者の判断及び当地の慣行に基づいて、最大３回分の用量のＩＶメチルプレドニゾロン１０００ｍｇを与える。最大３回の１０００ｍｇの点滴を、選別前または選別の合間に開始してよい。
【0231】
１、１５、１６８、及び１８６日目に、患者は、ＩＲＲを予防するために研究薬物点滴の３０～６０分前に８０ｍｇのＩＶメチルプレドニゾロンまたはプラセボを受ける。加えて、選別前または選別の合間に経口プレドニゾンを開始してよく、漸減を２日目に始める。ＩＶメチルプレドニゾロン／プラセボ点滴の日を除く、２日目～１６日目に０．５０ｍｇ／ｋｇ／日の経口プレドニゾンを与え（最大、６０ｍｇの用量）、１６日目まで継続する。１６日目以降、プレドニゾンの漸減を始める。
【0232】
全ての患者は、１６日目に始めた予定通りのコルチコステロイド漸減を受ける。患者は、１２週目までに用量が７．５ｍｇ／日になるまで、１２週にわたって彼らのプレドニゾン用量を少しずつ低減する。１４週間の漸減後、患者は、７．５ｍｇ／日以下でプレドニゾンを継続する。活性尿沈渣、血清クレアチニンの上昇、または中度から重度のさらなる腎臓症状を根拠とするように、患者が彼らのプレドニゾン漸減の第１のステップに進めないほど疾患があまりにも臨床活動中である患者において、これらの患者は、彼らの最初のプレドニゾン用量を最大２８日間追加して受け続けてよい。
【0233】
腎臓発赤の治療における一貫性を維持するために、調査者により臨床的に適切な判断が下された場合、かつ患者が腎臓発赤の基準に合致する場合、より高用量のコルチコステロイドを用いた再治療が許可される。患者は、２週間プレドニゾン（最大０．５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／日を超えない）を用いて治療され得る。次いで、最初のコルチコステロイドの増加後の６週間以内に１０ｍｇ／日を達成するように、プレドニゾンを漸減する。患者は、臨床的に保証される場合、緊急疾病（精神的外傷、重度の喘息）に対してコルチコステロイド、または手術を受けることが可能であり、可能であれば、コルチコステロイドの使用を合計≦７日に限定する。次いで、調査者は、患者の投与量が１０ｍｇ／日に漸減された後の副腎不全またはコルチコステロイド離脱の症状を治療するために、≦２．５ｍｇ／日のプレドニゾン用量を増加してよい。
【0234】
重度のさらなる腎ＳＬＥ発赤を経験している患者は、調査者により臨床的に適切な判断が下された場合、追加の経口コルチコステロイドを用いた治療を受け得る。疾患の重症度及び臓器系の合併症に基づいて、これらの患者を最大２週間プレドニゾン（最大１．０ｍｇ／ｋｇ）を用いて再治療してよく、投与量は、７．５ｍｇ／日に漸減される。低度または中度のさらなる腎臓発赤を経験している患者は、彼らのプレドニゾン用量を、１日あたり最大２０ｍｇまで一時的に増加し、調査者により臨床的に適切な判断が下された場合、この用量を４週間にわたって漸減してよい。胃腸の合併症が経口コルチコステロイドを用いた治療を一時的に妨げる場合、等用量のＩＶコルチコステロイドが可能である。
【0235】
抗マラリア薬剤
研究登録において抗マラリア薬剤を服用する患者は、研究を通して一定の投与量を維持する。過去に抗マラリア薬剤を服用していない患者は研究に登録できるが、コルチコステロイドに対して未反応である疾患発赤を経験している場合、抗マラリア薬剤を開始すべきではない。表４は、研究の間使用されることが予測される抗マラリア薬剤及び用量範囲を列挙する。
研究登録において抗マラリア薬剤を服用する患者は、研究を通して一定の投与量を維持する。過去に抗マラリア薬剤を服用していない患者は研究に登録できるが、コルチコステロイドに対して未反応である疾患発赤を経験している場合、抗マラリア薬剤を開始すべきではない。表４は、研究の間使用されることが予測される抗マラリア薬剤及び用量範囲を列挙する。
【0236】
降圧療法
ＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を現在服用していない全ての患者は、選別の１日目に開始するべきである。患者は、無作為化前の少なくとも１０日間ＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を服用する。この２つの薬剤を用いた併用療法は可能ではない。
ＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を現在服用していない全ての患者は、選別の１日目に開始するべきである。患者は、無作為化前の少なくとも１０日間ＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬を服用する。この２つの薬剤を用いた併用療法は可能ではない。
【0237】
選別中、患者の血圧を十分に管理するようにあらゆる努力をする。ＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬の用量を現在の添付文書において推奨される最大用量まで上方滴定して、Ｅｉｇｈｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ（Ｊａｍｅｓ，Ｐ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＪＡＭＡ ３１１：５０７－５２０）により推奨されるように、十分な血圧管理を達成し得る。十分な血圧管理が達成されない場合、患者は、追加の降圧剤を開始してよいが、タンパク尿に影響を与える薬剤（例えば、非ジヒドロピリジンカルシウムチャネル遮断薬、アルドステロンアンタゴニスト、直接レニンアンタゴニスト）を開始してはならない。研究の間、レニンアンジオテンシン系を特異的に標的とする追加の薬剤を開始しない。特異的ＡＣＥ阻害剤及びアンジオテンシン受容体遮断薬の提示された用量範囲は、表５に列挙される。患者がＡＣＥ阻害剤及びアンジオテンシン受容体遮断薬に耐えられない場合、彼らには、直接レニン阻害剤またはアルドステロンアンタゴニストを使用してよいが、組み合わせて使用してはならない。
【0238】
研究目的及び評価項目
この概念実証研究の主な目的は、オビヌツズマブを投与した５２週目における完全腎応答（ＣＲＲ）を測定することである。オビヌツズマブプラスＭＭＦが５２週目にＣＲＲを達成する能力をプラセボプラスＭＭＦと比較し、腎機能、尿沈渣、及びタンパク尿における改善により評価する。２つめの目的には、この患者集団におけるオビヌツズマブの安全性、オビヌツズマブが５２週目に全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を誘導する能力、オビヌツズマブが５２週間の間における応答までの時間（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を改善する能力、及びオビヌツズマブがＬＮ疾患活性性の生物マーカーを改善する能力（例えば、低減した抗ｄｓＤＮＡ抗体レベル、増加したＣ３及びＣ４レベル、Ｔｅｗ，Ｇ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｌｕｐｕｓ １９：１４６－１５７を参照されたい）を査定することが含まれる。
この概念実証研究の主な目的は、オビヌツズマブを投与した５２週目における完全腎応答（ＣＲＲ）を測定することである。オビヌツズマブプラスＭＭＦが５２週目にＣＲＲを達成する能力をプラセボプラスＭＭＦと比較し、腎機能、尿沈渣、及びタンパク尿における改善により評価する。２つめの目的には、この患者集団におけるオビヌツズマブの安全性、オビヌツズマブが５２週目に全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を誘導する能力、オビヌツズマブが５２週間の間における応答までの時間（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を改善する能力、及びオビヌツズマブがＬＮ疾患活性性の生物マーカーを改善する能力（例えば、低減した抗ｄｓＤＮＡ抗体レベル、増加したＣ３及びＣ４レベル、Ｔｅｗ，Ｇ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｌｕｐｕｓ １９：１４６－１５７を参照されたい）を査定することが含まれる。
【0239】
主な有効性の評価項目は、５２週目に査定されるＣＲＲを達成する対象の割合である。この研究において、ＣＲＲは、以下の全ての到達により定義される：
（ａ）以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化、
（ｉ）ベースライン（１日目）が中央研究所値の正常範囲でない場合、中央研究所値の正常範囲上限（ＵＬＮ）以下の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、ベースラインの１５％以下及び中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｂ）不活性尿沈渣（＜１０のＲＢＣ／強拡大視野（ＨＰＦ）及び／または赤血球円柱の不在を根拠とする）、及び
（ｃ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比。
（ａ）以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化、
（ｉ）ベースライン（１日目）が中央研究所値の正常範囲でない場合、中央研究所値の正常範囲上限（ＵＬＮ）以下の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、ベースラインの１５％以下及び中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｂ）不活性尿沈渣（＜１０のＲＢＣ／強拡大視野（ＨＰＦ）及び／または赤血球円柱の不在を根拠とする）、及び
（ｃ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比。
【0240】
５２週目前に救急薬剤に切り替える任意の患者は、未応答者と見なされる。治療群の中でＣＲＲを達成する患者の割合を、層別因子として、人種（アフロカリビアン／アフリカ系米国人対他の人種）及び領域（米国対非米国）を用いたコクラン－マンテル－ヘンツェル（ＣＭＨ）試験を使用して比較する。試験結果がα＜０．１－レベル（片方）で、オビヌツズマブ群において有利である場合、オビヌツズマブ群に関連したより良好な腎応答に向かっている変化として結論付けられる。
【0241】
二次有効性の評価項目は、以下の通りである：
（ａ）５２週目に全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を達成する患者の割合分析、
（ｂ）５２週間の間の全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）までの時間、
（ｃ）ベースラインからの低減または増加パーセント、ならびにＬＮ疾患活性性の生物マーカーの平均及び中央値評価（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルの低減、増加したＣ３及びＣ４レベル）、
（ｄ）以下の全ての到達により定義される場合の、５２週目にＰＲＲを達成する患者の割合、
（ｉ）ベースラインレベルの≦１５％超の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースラインの≦５０％超のＲＢＣ／ＨＰＦ及び赤血球円柱の不在
（ｉｉｉ）尿タンパク質対クレアチニン比の５０％の改善、及び以下の条件のうちの１つへの合致：
（Ａ）ベースラインの尿タンパク質対クレアチニン比が≦３．０である場合、＜１．０の尿タンパク質対クレアチン比、
（Ｂ）ベースラインのタンパク質対クレアチニン比が＞３．０である場合、＜３．０の尿タンパク質対クレアチニン比、
（ｅ）２４週目にＣＲＲを達成する患者の割合、
（ｆ）５２週間の間のＣＲＲまでの時間、
（ｇ）主な有効性測定の定義を用い、かつ尿沈渣分析基準を除去した、５２週目に修正されたＣＲＲ（ｍＣＲＲ１）を達成した患者の割合、
ｍＣＲＲ１は、以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化の到達を指す：
（ｉ）中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、ベースラインの≦１５％超及び中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｉｉｉ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比
（ｈ）以下の到達により定義される場合の、５２週目に第２のＣＲＲ（ｍＣＲＲ２）を達成する患者の割合、
（ｉ）以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化：
（Ａ）血清クレアチニン≦中央研究所値の範囲のＵＬＮ
（Ｂ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲を超える場合、ベースラインの≦１５％超の血清クレアチニン、またはベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、Ｓ≦中央研究所値の範囲のＵＬＮ、
（ｉｉ）不活性尿沈渣（＜１０のＲＢＣ／ＨＰＦ及び赤血球円柱の不在を根拠とする）、
（ｉｉｉ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比。
（ａ）５２週目に全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）を達成する患者の割合分析、
（ｂ）５２週間の間の全体の応答（ＣＲＲ＋ＰＲＲ）までの時間、
（ｃ）ベースラインからの低減または増加パーセント、ならびにＬＮ疾患活性性の生物マーカーの平均及び中央値評価（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルの低減、増加したＣ３及びＣ４レベル）、
（ｄ）以下の全ての到達により定義される場合の、５２週目にＰＲＲを達成する患者の割合、
（ｉ）ベースラインレベルの≦１５％超の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースラインの≦５０％超のＲＢＣ／ＨＰＦ及び赤血球円柱の不在
（ｉｉｉ）尿タンパク質対クレアチニン比の５０％の改善、及び以下の条件のうちの１つへの合致：
（Ａ）ベースラインの尿タンパク質対クレアチニン比が≦３．０である場合、＜１．０の尿タンパク質対クレアチン比、
（Ｂ）ベースラインのタンパク質対クレアチニン比が＞３．０である場合、＜３．０の尿タンパク質対クレアチニン比、
（ｅ）２４週目にＣＲＲを達成する患者の割合、
（ｆ）５２週間の間のＣＲＲまでの時間、
（ｇ）主な有効性測定の定義を用い、かつ尿沈渣分析基準を除去した、５２週目に修正されたＣＲＲ（ｍＣＲＲ１）を達成した患者の割合、
ｍＣＲＲ１は、以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化の到達を指す：
（ｉ）中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｉｉ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、ベースラインの≦１５％超及び中央研究所値の範囲のＵＬＮ以下の血清クレアチニン
（ｉｉｉ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比
（ｈ）以下の到達により定義される場合の、５２週目に第２のＣＲＲ（ｍＣＲＲ２）を達成する患者の割合、
（ｉ）以下を根拠とする血清クレアチニンの正常化：
（Ａ）血清クレアチニン≦中央研究所値の範囲のＵＬＮ
（Ｂ）ベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲を超える場合、ベースラインの≦１５％超の血清クレアチニン、またはベースライン（１日目）の血清クレアチニンが中央研究所値の正常範囲内である場合、Ｓ≦中央研究所値の範囲のＵＬＮ、
（ｉｉ）不活性尿沈渣（＜１０のＲＢＣ／ＨＰＦ及び赤血球円柱の不在を根拠とする）、
（ｉｉｉ）＜０．５の尿タンパク質対クレアチニン比。
【0242】
薬力学的（ＰＤ）目的は、オビヌツズマブ対プラセボを用いた治療後の末梢血液中のＣＤ１９＋Ｂ細胞の変化を比較することである。血流循環ＣＤ１９＋Ｂ細胞のレベルを、選別時、ならびに１５、２８、８４、１６８、３６４、及び７２８日目に測定する。
【0243】
薬物動態（ＰＫ）目的は、ＬＮ集団におけるオビヌツズマブの薬物動態を特徴付けること、及びオビヌツズマブと、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）を含む併用薬剤との間の潜在的なＰＫ相互作用を評価することである。非線状混合効果モデル（ソフトウェアＮＯＮＭＥＭによる）を使用して、オビヌツズマブの用量－濃度－時間データを分析する。主な共変数（例えば、性別、人種／民族性、重量、ベースラインでの生化学的及び血液学的パラメータ、基礎疾患の程度）の影響を含む、ＰＫプロファイルデータを使用して、ＰＫモデルをメインパラメータ（例えば、クリアランス）においてさらに開発する。曝露量の個体測定項目の誘導、例えば観察された濃度－時間曲線（ＡＵＣ）及び最大濃度（Ｃｍａｘ）下の領域は、使用される最終ＰＫモデルに依存する。血清オビヌツズマブが、要約（平均、最小、最大、ＳＤ、及び幾何平均）及び報告される。
【0244】
研究の診査的目的には、予備用量レベルの診査的生物マーカー（Ｂ細胞サブセット、ならびに血清、血液、及び尿中のタンパク質及び／またはｍＲＮＡのレベルを含むが、これらに限定されない）及び結果との潜在的な関連の査定、オビヌツズマブ対プラセボを投薬された患者における、時間の経過による診査的生物マーカー（Ｂ細胞サブセット、ならびに血清、血液、及び尿中のタンパク質及び／またはｍＲＮＡのレベルを含むが、これらに限定されない）における変化の査定、さらなる腎臓発赤の発生の査定、療法が患者及び内科医により報告された結果に及ぼす影響の査定、ならびに腎生検病理組織学（例えば、選別及び／または後の生検時のＣＤ１９＋Ｂ細胞の存在）の評価が含まれる。診査的評価項目には、以下が含まれる：
（ａ）選別時、ならびに１５、２８、８４、１６８、３６４、及び７２８日目の血流循環Ｂ細胞サブセットのレベル、
（ｂ）選別時、ならびに１、１５、２８、８４、１６８、２５２、３６４、５３２、及び７２８日目の診査的生物マーカー（Ｂ細胞サブセット、ならびに血清、血液、及び尿中のタンパク質及び／またはｍＲＮＡのレベルを含むが、これらに限定されない）のレベル、
（ｃ）全身性エリテマトーデス疾患活性指数（ＳＬＥＤＡＩ）－２Ｋ発赤を経験している患者の割合、
（ｄ）５２週間～１０４週間にわたって腎臓発赤を経験している患者の割合、
（ｅ）追加の時点（１２週目及び３６週目を含む）でＣＲＲ、ｍＣＲＲ１、ｍＣＲＲ２を達成している患者の割合、
（ｆ）内科医の概括評価（選別において、ベースライン訪問において、及び研究実行の間の複数の時点において捉えられる視覚的アナログ尺度）、さらに
（ｇ）腎生検査定。
（ａ）選別時、ならびに１５、２８、８４、１６８、３６４、及び７２８日目の血流循環Ｂ細胞サブセットのレベル、
（ｂ）選別時、ならびに１、１５、２８、８４、１６８、２５２、３６４、５３２、及び７２８日目の診査的生物マーカー（Ｂ細胞サブセット、ならびに血清、血液、及び尿中のタンパク質及び／またはｍＲＮＡのレベルを含むが、これらに限定されない）のレベル、
（ｃ）全身性エリテマトーデス疾患活性指数（ＳＬＥＤＡＩ）－２Ｋ発赤を経験している患者の割合、
（ｄ）５２週間～１０４週間にわたって腎臓発赤を経験している患者の割合、
（ｅ）追加の時点（１２週目及び３６週目を含む）でＣＲＲ、ｍＣＲＲ１、ｍＣＲＲ２を達成している患者の割合、
（ｆ）内科医の概括評価（選別において、ベースライン訪問において、及び研究実行の間の複数の時点において捉えられる視覚的アナログ尺度）、さらに
（ｇ）腎生検査定。
【0245】
研究所、生物マーカー、及び他の生物学的試料
以下の研究所評価は、研究の間記録される：
（ａ）血液学：ヘモグロビン、ヘマトクリット、ＲＢＣ、平均血球体積、平均血球ヘモグロビン、ＷＢＣ（絶対及び微分）、及び定量的血小板の計数、
（ｂ）血液化学：ＡＳＴ／ＳＧＯＴ、ＡＬＴ／ＳＧＰＴ、アルカリホスファターゼ、アミラーゼ、リパーゼ、総タンパク質、アルブミン、コレステロール、総ビリルビン、尿素、尿酸、クレアチニン、ランダムグルコース、カリウム、ナトリウム、塩化物、カルシウム、リン、乳酸デヒドロゲナーゼ、ＣＰＫ、及びトリグリセリド、
（ｃ）尿分析：血液、硝酸塩、タンパク質、及びグルコースに対する浸漬棒、ならびに尿顕微鏡、
（ｄ）無作為化において、ならびに３、６、９、及び１２ヶ月目において行う２４時間の尿収集（総タンパク質、総クレアチニン、及びクレアチニンクリアランスに関する分析）、
（ｅ）フローサイトメトリー：Ｂ細胞（ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ３８、及びＩｇＤを含む）、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）、及びＮＫ細胞（ＣＤ１６、ＣＤ５６）、
（ｆ）自己抗体プロファイル：抗核抗体（ＡＮＡ）、抗ｄｓＤＮＡ、抗Ｓｍ、抗ＲＮＰ、抗Ｒｏ、抗Ｌａ、及び抗Ｃ１ｑ、
（ｇ）抗ｄｓＤＮＡ抗体：ＳＬＥＤＡＩ－２Ｋ評価の一部として、全ての訪問時にＥＬＩＳＡにより測定される、
（ｈ）定量的免疫グロブリン：ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡアイソタイプを含む総Ｉｇレベル、
（ｉ）補体：Ｃ３、Ｃ４、及びＣＨ５０、
（ｊ）抗体価：一般的な抗原（風疹、破傷風、インフルエンザ、肺炎球菌）に対する抗体価、さらに
（ｋ）妊娠試験：選別時及び各研究薬物点滴の前に行われる尿妊娠試験。点滴は、試験が陰性でないと投与されない。全ての他の時点において、尿妊娠試験は、月経歴及び妊娠の危険性に基づいて行われる。
以下の研究所評価は、研究の間記録される：
（ａ）血液学：ヘモグロビン、ヘマトクリット、ＲＢＣ、平均血球体積、平均血球ヘモグロビン、ＷＢＣ（絶対及び微分）、及び定量的血小板の計数、
（ｂ）血液化学：ＡＳＴ／ＳＧＯＴ、ＡＬＴ／ＳＧＰＴ、アルカリホスファターゼ、アミラーゼ、リパーゼ、総タンパク質、アルブミン、コレステロール、総ビリルビン、尿素、尿酸、クレアチニン、ランダムグルコース、カリウム、ナトリウム、塩化物、カルシウム、リン、乳酸デヒドロゲナーゼ、ＣＰＫ、及びトリグリセリド、
（ｃ）尿分析：血液、硝酸塩、タンパク質、及びグルコースに対する浸漬棒、ならびに尿顕微鏡、
（ｄ）無作為化において、ならびに３、６、９、及び１２ヶ月目において行う２４時間の尿収集（総タンパク質、総クレアチニン、及びクレアチニンクリアランスに関する分析）、
（ｅ）フローサイトメトリー：Ｂ細胞（ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ３８、及びＩｇＤを含む）、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）、及びＮＫ細胞（ＣＤ１６、ＣＤ５６）、
（ｆ）自己抗体プロファイル：抗核抗体（ＡＮＡ）、抗ｄｓＤＮＡ、抗Ｓｍ、抗ＲＮＰ、抗Ｒｏ、抗Ｌａ、及び抗Ｃ１ｑ、
（ｇ）抗ｄｓＤＮＡ抗体：ＳＬＥＤＡＩ－２Ｋ評価の一部として、全ての訪問時にＥＬＩＳＡにより測定される、
（ｈ）定量的免疫グロブリン：ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡアイソタイプを含む総Ｉｇレベル、
（ｉ）補体：Ｃ３、Ｃ４、及びＣＨ５０、
（ｊ）抗体価：一般的な抗原（風疹、破傷風、インフルエンザ、肺炎球菌）に対する抗体価、さらに
（ｋ）妊娠試験：選別時及び各研究薬物点滴の前に行われる尿妊娠試験。点滴は、試験が陰性でないと投与されない。全ての他の時点において、尿妊娠試験は、月経歴及び妊娠の危険性に基づいて行われる。
【0246】
以下の試料を分析に送る：Ｂ細胞及びループス関連生物マーカーのための血液及び尿からの細胞（ＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＢ細胞活性に関連するｍＲＮＡを含むが、これらに限定されない）、Ｂ細胞及びループス関連生物マーカーのための血清及び尿（Ｂ細胞活性化因子またはＢＡＦＦを含むが、これらに限定されない）、ならびに免疫病理組織学評価のための腎生検スライド。
【0247】
点滴
研究薬物またはプラセボの各々の点滴の前に、患者は、口からアセトアミノフェン（６５０～１０００ｍｇ）及びジフェンヒドラミン（５０ｍｇ、または同様の薬剤の等用量）を用いた予防的治療を受け、これらは、点滴期間の開始の３０～６０分前に与えられる。オビヌツズマブを受けている患者は、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンＩＶを受け、プラセボを受けている患者は、プラセボ－メチルプレドニゾロンＩＶを受け、これらは、オビヌツズマブ／プラセボ点滴の開始の３０～６０分前に与えられる。患者が、調査者により臨床的に有意であると見なされる低度の点滴関連反応（ＩＲＲ）を経験する場合、点滴速度を、最初の点滴速度の半分に低減するべきである（非ホジキンスリンパ腫プロトコル点滴速度及び予定を遵守する）。反応が消散した後、点滴は、追加の３０分間低減した速度を保つべきである。低減した速度に耐えられる場合、点滴速度を点滴予定の直近の次の速度に増加してよい。重度のＩＲＲを経験する患者は、彼らの点滴を即座に中断するべきであり、積極的対症治療を受けるべきである。症状の全てがなくなるまで点滴を再開するべきではない。点滴の再開において、速度を、反応を誘発した速度の半分にするべきである。オビヌツズマブ点滴の投与に関する説明は、以下の表６で提供される。
研究薬物またはプラセボの各々の点滴の前に、患者は、口からアセトアミノフェン（６５０～１０００ｍｇ）及びジフェンヒドラミン（５０ｍｇ、または同様の薬剤の等用量）を用いた予防的治療を受け、これらは、点滴期間の開始の３０～６０分前に与えられる。オビヌツズマブを受けている患者は、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンＩＶを受け、プラセボを受けている患者は、プラセボ－メチルプレドニゾロンＩＶを受け、これらは、オビヌツズマブ／プラセボ点滴の開始の３０～６０分前に与えられる。患者が、調査者により臨床的に有意であると見なされる低度の点滴関連反応（ＩＲＲ）を経験する場合、点滴速度を、最初の点滴速度の半分に低減するべきである（非ホジキンスリンパ腫プロトコル点滴速度及び予定を遵守する）。反応が消散した後、点滴は、追加の３０分間低減した速度を保つべきである。低減した速度に耐えられる場合、点滴速度を点滴予定の直近の次の速度に増加してよい。重度のＩＲＲを経験する患者は、彼らの点滴を即座に中断するべきであり、積極的対症治療を受けるべきである。症状の全てがなくなるまで点滴を再開するべきではない。点滴の再開において、速度を、反応を誘発した速度の半分にするべきである。オビヌツズマブ点滴の投与に関する説明は、以下の表６で提供される。
【0248】
研究登録の一部として得られた全ての腎生検及び報告を顕微鏡写真にし、当地の腎臓病理組織学者により行われる病理組織学評価の見落としのためにオンライン中央リーディングポータルに送った。専門研究員は、これらの生検を評価し、最終的な判断を決定する。このプロセスを完了するためにあらゆる努力をしながら患者を選別するが、選別活動の完了は必須ではない。選別中または研究の間に得られた全ての新しい生検を、Ｂ細胞の存在に関して、尿細管間質を免疫組織化学的に染色することを可能にする手法で処理する。研究は、ＣＲＲを達成していない患者に関して、腎生検を繰り返して実施することを奨励するが必須ではなく、腎生検を繰り返し行う研究施設の強化を求める。
【0249】
実施例２：オビヌツズマブは、Ｆｃガンマ受容体依存性及び独立性エフェクター機構による、リウマチ性関節炎及び全身性エリテマトーデス患者の試料中のＢ細胞傷害性の誘導においてリツキシマブより優れる。
標準用量のリツキシマブ（ＲＴＸ）を用いて治療されたリウマチ性関節炎（ＲＡ）及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者の一部は、より高用量を送達することにより増大され得る非効率なＢ細胞欠失及び乏しい臨床的応答を表示し、これは、標準用量のＲＴＸが、これらの患者において準最適療法であることを示す。より良好な応答が他の抗ＣＤ２０ｍＡｂを用いて達成され得るかどうかを調査するために、ＳＬＥ及びＲＡ試料中のＢ細胞傷害性を測定する、一連のインビトロアッセイにおいて、ＲＴＸを、次世代の糖操作ＩＩ型抗ＣＤ２０ ｍＡｂであるオビヌツズマブ（ＯＢＺ）と比較した。インビトロの全血液アッセイにおいて、Ｂ細胞傷害性を誘導することにおいて、ＯＢＺがＲＴＸより少なくとも２倍効率的であることが見出された。この差異を詳細に分析することにより、ＲＴＸがＯＢＺより多くの強力な補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発したことが見出された。対照的に、ＯＢＺは、ＮＫ細胞及び好中球の活性化を含む、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）媒介性エフェクター機構を引き起こすことにおいてより有効であった。ＯＢＺは、直接細胞死を誘導することにおいてもより効率的であった。これは、総じて全てのＣＤ１９＋Ｂ細胞に関して及びナイーブ（ＩｇＤ＋ＣＤ２７－）において、ならびに具体的にはスイッチ型（ＩｇＤ－ＣＤ２７＋）記憶Ｂ細胞に関して正確であり、そのより高い頻度は、ＲＴＸ後の乏しい臨床的応答に関連する。
標準用量のリツキシマブ（ＲＴＸ）を用いて治療されたリウマチ性関節炎（ＲＡ）及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者の一部は、より高用量を送達することにより増大され得る非効率なＢ細胞欠失及び乏しい臨床的応答を表示し、これは、標準用量のＲＴＸが、これらの患者において準最適療法であることを示す。より良好な応答が他の抗ＣＤ２０ｍＡｂを用いて達成され得るかどうかを調査するために、ＳＬＥ及びＲＡ試料中のＢ細胞傷害性を測定する、一連のインビトロアッセイにおいて、ＲＴＸを、次世代の糖操作ＩＩ型抗ＣＤ２０ ｍＡｂであるオビヌツズマブ（ＯＢＺ）と比較した。インビトロの全血液アッセイにおいて、Ｂ細胞傷害性を誘導することにおいて、ＯＢＺがＲＴＸより少なくとも２倍効率的であることが見出された。この差異を詳細に分析することにより、ＲＴＸがＯＢＺより多くの強力な補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発したことが見出された。対照的に、ＯＢＺは、ＮＫ細胞及び好中球の活性化を含む、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）媒介性エフェクター機構を引き起こすことにおいてより有効であった。ＯＢＺは、直接細胞死を誘導することにおいてもより効率的であった。これは、総じて全てのＣＤ１９＋Ｂ細胞に関して及びナイーブ（ＩｇＤ＋ＣＤ２７－）において、ならびに具体的にはスイッチ型（ＩｇＤ－ＣＤ２７＋）記憶Ｂ細胞に関して正確であり、そのより高い頻度は、ＲＴＸ後の乏しい臨床的応答に関連する。
【0250】
材料及び方法
患者
この研究の全ての参加者は、当地の研究倫理委員会により承認されるヘルシンキ宣言に従って同意書を提供した。ＲＡを有する全ての患者は、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）／欧州リウマチ学会のクラス分け基準（Ａｌｅｔａｈａ Ｄ．ｅｔ ａｌ．２０１０ Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．２０１０；６９（９）：１５８０－８）を満たし、ＳＬＥを有する全ての患者は、ＡＣＲクラス分け基準（Ｐｅｔｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２０１２；６４（８）：２６７７－８６）に合致した。
患者
この研究の全ての参加者は、当地の研究倫理委員会により承認されるヘルシンキ宣言に従って同意書を提供した。ＲＡを有する全ての患者は、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）／欧州リウマチ学会のクラス分け基準（Ａｌｅｔａｈａ Ｄ．ｅｔ ａｌ．２０１０ Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．２０１０；６９（９）：１５８０－８）を満たし、ＳＬＥを有する全ての患者は、ＡＣＲクラス分け基準（Ｐｅｔｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２０１２；６４（８）：２６７７－８６）に合致した。
【0251】
抗体及び試薬
研究で使用した抗ＣＤ２０ ｍＡｂには、ＲＴＸ、ＯＢＺ、及び糖操作されていない野生型グリコシル化ＯＢＺ（ＯＢＺＧｌｙ）、いくつかの実験において、一切のＦｃ関連エフェクター機能に係合しない突然変異したＦｃ部分（Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ）を有するＯＢＺ（Ｈｅｒｔｅｒ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１５；７５（１５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）：２４６０）である、ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡが含まれた。Ｒｏｃｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄは、ＲＴＸを除く全ての抗ＣＤ２０ ｍＡｂを生成し、これは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｕ．Ｋ．ＡＴ１０の薬剤部からの寄贈品であり、ＦｃγＲＩＩアンタゴニスト（Ｇｒｅｅｎｍａｎ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１；２８（１１）：１２４３－５４）は、内部で産生した。
研究で使用した抗ＣＤ２０ ｍＡｂには、ＲＴＸ、ＯＢＺ、及び糖操作されていない野生型グリコシル化ＯＢＺ（ＯＢＺＧｌｙ）、いくつかの実験において、一切のＦｃ関連エフェクター機能に係合しない突然変異したＦｃ部分（Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ）を有するＯＢＺ（Ｈｅｒｔｅｒ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１５；７５（１５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）：２４６０）である、ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡが含まれた。Ｒｏｃｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄは、ＲＴＸを除く全ての抗ＣＤ２０ ｍＡｂを生成し、これは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｕ．Ｋ．ＡＴ１０の薬剤部からの寄贈品であり、ＦｃγＲＩＩアンタゴニスト（Ｇｒｅｅｎｍａｎ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１；２８（１１）：１２４３－５４）は、内部で産生した。
【0252】
フローサイトメトリー及びＢ細胞単離
蛍光色素でコンジュゲートされたｍＡｂを、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｕ．Ｋ．）から調達した：ＣＤ３（フィコエリトリン［ＰＥ］－Ｃｙ７）、ＣＤ１５（フルオレセインイソチオシアン酸塩、ＦＩＴＣ）：ＣＤ１６（アロフィコヤニン（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｙａｎｉｎ）、ＡＰＣ）、ＣＤ１９（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００）、ＣＤ４５（ＰＥ）、ＣＤ５６（ＰＥ）、ＣＤ１０７ａ（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ４２１）、ＣＤ１１ｂ（ＰＥ）、ＣＤ６２Ｌ（ＡＰＣ）、ヨウ化プロピジウム及びアネキシンＶ（ＦＩＴＣ）。フローサイトメトリーを、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ細胞分析装置を使用して実行した。リンパ球を、前方及び側方散乱特徴に基づいて特定した。Ｂ細胞を、ＣＤ１９＋またはＣＤ２０＋として、Ｔ細胞をＣＤ３＋として、及びＮＫ細胞をＣＤ３－５６＋として特定した。好中球を、前方及び側方散乱特徴、ならびにＣＤ１５の陽性に基づいて特定した。ｍＡｂでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、抗体を用いることなくインキュベートした試料中のＭＦＩと比較した。
蛍光色素でコンジュゲートされたｍＡｂを、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｕ．Ｋ．）から調達した：ＣＤ３（フィコエリトリン［ＰＥ］－Ｃｙ７）、ＣＤ１５（フルオレセインイソチオシアン酸塩、ＦＩＴＣ）：ＣＤ１６（アロフィコヤニン（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｙａｎｉｎ）、ＡＰＣ）、ＣＤ１９（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００）、ＣＤ４５（ＰＥ）、ＣＤ５６（ＰＥ）、ＣＤ１０７ａ（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ４２１）、ＣＤ１１ｂ（ＰＥ）、ＣＤ６２Ｌ（ＡＰＣ）、ヨウ化プロピジウム及びアネキシンＶ（ＦＩＴＣ）。フローサイトメトリーを、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ細胞分析装置を使用して実行した。リンパ球を、前方及び側方散乱特徴に基づいて特定した。Ｂ細胞を、ＣＤ１９＋またはＣＤ２０＋として、Ｔ細胞をＣＤ３＋として、及びＮＫ細胞をＣＤ３－５６＋として特定した。好中球を、前方及び側方散乱特徴、ならびにＣＤ１５の陽性に基づいて特定した。ｍＡｂでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、抗体を用いることなくインキュベートした試料中のＭＦＩと比較した。
【0253】
全ての実験において、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅの密度勾配により、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を全血液試料から分離し、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＢ細胞濃縮キット（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕ．Ｋ．）を使用して、Ｂ細胞をＰＢＭＣから単離した。
【0254】
全血液Ｂ細胞減損アッセイ
簡潔には、ヘパリンで抗凝固剤処置した３００μｌの採血したての全血液を、３７℃及び５％のＣＯ２で２４時間、１μｇ／ｍＬでｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした。次いで、前述されるように、試料を抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９、及び抗ＣＤ４５で染色し、その後、赤血球を溶解し、フローサイトメーターで分析した（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。前述されるように、処理後に残っているＢ細胞のＴ細胞に対する割合からＢ細胞減損％を計算し、細胞傷害性指数（ＣＴＩ）として定義した（Ｍｏｓｓｎｅｒ Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１５（２２）：４３９３－４０２、及びＲｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。
簡潔には、ヘパリンで抗凝固剤処置した３００μｌの採血したての全血液を、３７℃及び５％のＣＯ２で２４時間、１μｇ／ｍＬでｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした。次いで、前述されるように、試料を抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９、及び抗ＣＤ４５で染色し、その後、赤血球を溶解し、フローサイトメーターで分析した（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。前述されるように、処理後に残っているＢ細胞のＴ細胞に対する割合からＢ細胞減損％を計算し、細胞傷害性指数（ＣＴＩ）として定義した（Ｍｏｓｓｎｅｒ Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１５（２２）：４３９３－４０２、及びＲｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。
【0255】
表面蛍光消光アッセイ
前述されるように、表面蛍光消光アッセイを行って（Ｂｅｅｒｓ Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００８；１１２（１０）：４１７０－７、及びＲｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）、Ｂ細胞によるｍＡｂの内部移行を評価した。単離Ｂ細胞を、６時間、Ａｌｅｘａ－４８８でコンジュゲートした５μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂでインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。
前述されるように、表面蛍光消光アッセイを行って（Ｂｅｅｒｓ Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００８；１１２（１０）：４１７０－７、及びＲｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）、Ｂ細胞によるｍＡｂの内部移行を評価した。単離Ｂ細胞を、６時間、Ａｌｅｘａ－４８８でコンジュゲートした５μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂでインキュベートし、その後、フローサイトメトリーにより分析した。
【0256】
補体依存性細胞傷害性アッセイ
前述されるように、ＣＤＣアッセイを行った（Ｃｒａｇｇ Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００４；１０３（７）：２７３８－４３）。単離Ｂ細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２で３０分間、１０μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂでインキュベートした。試料を、蛍光コンジュゲートした抗ＣＤ１９抗体、アネキシンＶ（Ａｖ）、及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色し、ＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋細胞の頻度を、フローサイトメトリーにより評価した。採取したての健常なヒト血清を、補体の源として使用した。補体に関する活性を定義するために、５６℃で３０分間、血清の一部を加熱不活性化（ＨＩＳ）した。ｍＡｂが補体を活性化する能力及び標的細胞を溶解する能力を、健常血清またはＨＩＳでインキュベートした試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋細胞の相対的頻度により評価した。
前述されるように、ＣＤＣアッセイを行った（Ｃｒａｇｇ Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００４；１０３（７）：２７３８－４３）。単離Ｂ細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２で３０分間、１０μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂでインキュベートした。試料を、蛍光コンジュゲートした抗ＣＤ１９抗体、アネキシンＶ（Ａｖ）、及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色し、ＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋細胞の頻度を、フローサイトメトリーにより評価した。採取したての健常なヒト血清を、補体の源として使用した。補体に関する活性を定義するために、５６℃で３０分間、血清の一部を加熱不活性化（ＨＩＳ）した。ｍＡｂが補体を活性化する能力及び標的細胞を溶解する能力を、健常血清またはＨＩＳでインキュベートした試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋細胞の相対的頻度により評価した。
【0257】
直接細胞死
単離Ｂ細胞を、１０％の加熱不活性化ウシ胎仔血清で補ったＲＰＭＩ中で、３７℃及び５％のＣＯ２で６時間、１０μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした。ｍＡｂを用いなかった試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋細胞の頻度と比較したｍＡｂを用いた試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋細胞の頻度は、ｍＡｂが直接細胞死を誘導する能力を表した。
単離Ｂ細胞を、１０％の加熱不活性化ウシ胎仔血清で補ったＲＰＭＩ中で、３７℃及び５％のＣＯ２で６時間、１０μｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした。ｍＡｂを用いなかった試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋細胞の頻度と比較したｍＡｂを用いた試料中のＣＤ１９＋Ａｖ＋細胞の頻度は、ｍＡｂが直接細胞死を誘導する能力を表した。
【0258】
ＮＫ細胞脱顆粒化アッセイ
ＣＤ１０７ａまたはＬＡＭＰ－１（リソソーム関連膜タンパク質１）の発現を測定することにより、全血液Ｂ細胞減損アッセイからの試料を使用してＮＫ細胞の脱顆粒化を評価し、これは、ＮＫ細胞の活性化において上方制御され、ＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣと相関性がある（Ａｌｔｅｒ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００４；２９４（１－２）：１５－２２、及びＡｋｔａｓ Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２５４（２）：１４９－５４）。よって、ｍＡｂを用いた試料中のＣＤ３－５６＋１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度を、ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ３－５６＋１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度と比較した。ＮＫ細胞の活性化は、メタロプロテイナーゼの増加した活性に関連し、これは、ＮＫ細胞活性化においてその発現を低減するＣＤ１６を切断する（Ｒｏｍｅｅ Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２１（１８）：３５９９－６０８）。よって、ＣＤ１６損失の程度も、ＮＫ細胞活性化の間接的測定として使用した（Ｇｒｚｙｗａｃｚ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００７；２１（２）：３５６－９；ａｕｔｈｏｒ ｒｅｐｌｙ９、及びＢｏｗｌｅｓ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８（８）：２６４８－５４）。
ＣＤ１０７ａまたはＬＡＭＰ－１（リソソーム関連膜タンパク質１）の発現を測定することにより、全血液Ｂ細胞減損アッセイからの試料を使用してＮＫ細胞の脱顆粒化を評価し、これは、ＮＫ細胞の活性化において上方制御され、ＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣと相関性がある（Ａｌｔｅｒ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００４；２９４（１－２）：１５－２２、及びＡｋｔａｓ Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２５４（２）：１４９－５４）。よって、ｍＡｂを用いた試料中のＣＤ３－５６＋１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度を、ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ３－５６＋１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度と比較した。ＮＫ細胞の活性化は、メタロプロテイナーゼの増加した活性に関連し、これは、ＮＫ細胞活性化においてその発現を低減するＣＤ１６を切断する（Ｒｏｍｅｅ Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２１（１８）：３５９９－６０８）。よって、ＣＤ１６損失の程度も、ＮＫ細胞活性化の間接的測定として使用した（Ｇｒｚｙｗａｃｚ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００７；２１（２）：３５６－９；ａｕｔｈｏｒ ｒｅｐｌｙ９、及びＢｏｗｌｅｓ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８（８）：２６４８－５４）。
【0259】
好中球活性化アッセイ
好中球活性化を、フローサイトメトリーによりＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂの増加またはＣＤ６２Ｌの減少を測定することにより、全血液アッセイにおいて評価した（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１、及びＷｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）。ｍＡｂが好中球活性化を誘導する能力を、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較することにより評価した。
好中球活性化を、フローサイトメトリーによりＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂの増加またはＣＤ６２Ｌの減少を測定することにより、全血液アッセイにおいて評価した（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１、及びＷｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）。ｍＡｂが好中球活性化を誘導する能力を、ｍＡｂを用いて、またはそれを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ１５＋好中球上のＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較することにより評価した。
【0260】
統計分析
Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン５．０を使用してデータを分析した。マンホイットニー試験またはウィルコクソン対応対符号順位を使用して、必要に応じて群間で比較した。相関性を分析するためにスピアマン相関係数を使用した。
Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン５．０を使用してデータを分析した。マンホイットニー試験またはウィルコクソン対応対符号順位を使用して、必要に応じて群間で比較した。相関性を分析するためにスピアマン相関係数を使用した。
【0261】
結果
ＩＩ型ｍＡｂは、Ｂ細胞傷害性を誘導することにおいてＩ型より効率的である。
ＲＡ及びＳＬＥ試料中のＢ細胞傷害性におけるＩ及びＩＩ型ｍＡｂの効果を評価するために、前述されるように全血液Ｂ細胞減損アッセイを行った（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。ＯＢＺは、ＲＡ（ｎ＝３１）及びＳＬＥ（ｎ＝３４）を有する患者からＢ細胞を欠失することにおいてＲＴＸより＞２倍効率的であり、糖修飾されていないＯＢＺＧｌｙ及びＯＢＺの両方は、試験した全ての試料中でＲＴＸより効率的であった（図２Ａ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ＯＢＺの中央値ＣＴＩは、ＯＢＺＧｌｙ及びＲＴＸのＣＴＩを著しく超えており、ＯＢＺＧｌｙのＣＴＩは、ＲＡ及びＳＬＥの両方においてＲＴＸのＣＴＩより著しく高かった。ＲＡにおいて、ＲＴＸ、ＯＢＺＧｌｙ、及びＯＢＺの中央値（四分位数範囲）ＣＴＩはそれぞれ、２９（１３～５０）、６０（４７～７０）、及び６７（６０～７７）であり、ＳＬＥにおいてはそれぞれ、１９（１１～３９）、４０（３１～５３）、及び５９（５２～７０）であった。したがって、ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂで誘導されたＢ細胞減損の階層が存在した：ＲＴＸ＜ＯＢＺＧｌｙ＜ＯＢＺ。Ｂ細胞減損において、特にＲＴＸを用いた注目すべき試料間の可変性も記述された。ＯＢＺＧｌｙ（ＲＴＸと同様の糖修飾されていないＦｃを有する）の優れた効率性は、そのＩＩ型の本質が、全血液アッセイにおけるＢ細胞減損の効率性におけるｍＡｂの２つの型間の差異の原因である一方で、ＯＢＺＧｌｙと比較してＯＢＺの増加した効率性が、Ｆｃ部分のアフコシル化に帰することを呈する。
ＩＩ型ｍＡｂは、Ｂ細胞傷害性を誘導することにおいてＩ型より効率的である。
ＲＡ及びＳＬＥ試料中のＢ細胞傷害性におけるＩ及びＩＩ型ｍＡｂの効果を評価するために、前述されるように全血液Ｂ細胞減損アッセイを行った（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。ＯＢＺは、ＲＡ（ｎ＝３１）及びＳＬＥ（ｎ＝３４）を有する患者からＢ細胞を欠失することにおいてＲＴＸより＞２倍効率的であり、糖修飾されていないＯＢＺＧｌｙ及びＯＢＺの両方は、試験した全ての試料中でＲＴＸより効率的であった（図２Ａ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ＯＢＺの中央値ＣＴＩは、ＯＢＺＧｌｙ及びＲＴＸのＣＴＩを著しく超えており、ＯＢＺＧｌｙのＣＴＩは、ＲＡ及びＳＬＥの両方においてＲＴＸのＣＴＩより著しく高かった。ＲＡにおいて、ＲＴＸ、ＯＢＺＧｌｙ、及びＯＢＺの中央値（四分位数範囲）ＣＴＩはそれぞれ、２９（１３～５０）、６０（４７～７０）、及び６７（６０～７７）であり、ＳＬＥにおいてはそれぞれ、１９（１１～３９）、４０（３１～５３）、及び５９（５２～７０）であった。したがって、ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂで誘導されたＢ細胞減損の階層が存在した：ＲＴＸ＜ＯＢＺＧｌｙ＜ＯＢＺ。Ｂ細胞減損において、特にＲＴＸを用いた注目すべき試料間の可変性も記述された。ＯＢＺＧｌｙ（ＲＴＸと同様の糖修飾されていないＦｃを有する）の優れた効率性は、そのＩＩ型の本質が、全血液アッセイにおけるＢ細胞減損の効率性におけるｍＡｂの２つの型間の差異の原因である一方で、ＯＢＺＧｌｙと比較してＯＢＺの増加した効率性が、Ｆｃ部分のアフコシル化に帰することを呈する。
【0262】
Ｂ細胞がＯＢＺより急速にＲＴＸを内部移行させる。
次に、Ｂ細胞減損におけるＩＩ型ｍＡｂの優れた効率性が、それらのＩＩ型本質と一貫性があるかどうかを調査し、それにより、ＲＡ及びＳＬＥを有する患者からのＢ細胞がＲＴＸをＯＢＺよりもより大きな程度に内部移行させたかどうかを評価した。表面の接触可能なＲＴＸ対ＯＢＺの中央値（範囲）パーセンテージ、ＲＡ（ｎ＝５）においてそれぞれ、５５（５１～５７）対８３（８１～８４）、及びＳＬＥ（ｎ＝８）においてそれぞれ、６０（４９～７７）対７６（７０～８０）により、６時間のインキュベーション後にＲＴＸがＯＢＺより広範囲に内部移行したことが見出された（図２Ｂ）。この内部移行におけるＦｃγＲＩＩｂの役割を評価するために、ＲＴＸの内部移行を部分的に、及びＯＢＺに対してはよりわずかな程度で阻害し、ＯＢＺの糖修飾されていないＩＩ型抗体変異形を使用した以前の観察と同様にＦｃγＲＩＩ－遮断ｍＡｂ ＡＴ１０の存在下で実験を行った（図２Ｂ）（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。
次に、Ｂ細胞減損におけるＩＩ型ｍＡｂの優れた効率性が、それらのＩＩ型本質と一貫性があるかどうかを調査し、それにより、ＲＡ及びＳＬＥを有する患者からのＢ細胞がＲＴＸをＯＢＺよりもより大きな程度に内部移行させたかどうかを評価した。表面の接触可能なＲＴＸ対ＯＢＺの中央値（範囲）パーセンテージ、ＲＡ（ｎ＝５）においてそれぞれ、５５（５１～５７）対８３（８１～８４）、及びＳＬＥ（ｎ＝８）においてそれぞれ、６０（４９～７７）対７６（７０～８０）により、６時間のインキュベーション後にＲＴＸがＯＢＺより広範囲に内部移行したことが見出された（図２Ｂ）。この内部移行におけるＦｃγＲＩＩｂの役割を評価するために、ＲＴＸの内部移行を部分的に、及びＯＢＺに対してはよりわずかな程度で阻害し、ＯＢＺの糖修飾されていないＩＩ型抗体変異形を使用した以前の観察と同様にＦｃγＲＩＩ－遮断ｍＡｂ ＡＴ１０の存在下で実験を行った（図２Ｂ）（Ｒｅｄｄｙ Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；６７（８）：２０４６－５５）。
【0263】
ＲＴＸは、補体依存性細胞傷害性を誘導することにおいてＯＢＺより効率的である。
これらのｍＡｂがＣＤＣを誘発する能力も調査した。溶解したＢ細胞（ＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋）の頻度は、加熱不活性化血清（ＨＩＳ）と比較して、健常血清（ＮＨＳ）の存在下でＲＴＸでインキュベートした試料中でより著しく大きく、中央値（範囲）差異が１０．９％（８．１～２１）であった一方で、ＯＢＺでインキュベートした試料の差異は、４．８％（０．９～６．５）であったことが見出された（図２Ｃ）。ＮＨＳ対ＨＩＳでインキュベートした試料中の溶解した細胞の平均±ＳＤの倍増率はそれぞれ、ＲＴＸ及びＯＢＺに対して１．９±０．５及び１．２±０．２であった（図２Ｄ）。したがって、データは、ＲＴＸがＣＤＣを引き起こすことにおいてＯＢＺより優れていたことを呈する。
これらのｍＡｂがＣＤＣを誘発する能力も調査した。溶解したＢ細胞（ＣＤ１９＋Ａｖ＋ＰＩ＋）の頻度は、加熱不活性化血清（ＨＩＳ）と比較して、健常血清（ＮＨＳ）の存在下でＲＴＸでインキュベートした試料中でより著しく大きく、中央値（範囲）差異が１０．９％（８．１～２１）であった一方で、ＯＢＺでインキュベートした試料の差異は、４．８％（０．９～６．５）であったことが見出された（図２Ｃ）。ＮＨＳ対ＨＩＳでインキュベートした試料中の溶解した細胞の平均±ＳＤの倍増率はそれぞれ、ＲＴＸ及びＯＢＺに対して１．９±０．５及び１．２±０．２であった（図２Ｄ）。したがって、データは、ＲＴＸがＣＤＣを引き起こすことにおいてＯＢＺより優れていたことを呈する。
【0264】
ＯＢＺは、ＮＫ細胞を活性化することにおいてＲＴＸより効率的である。
これらのＣＤＣの結果は、ｍＡｂのＩ型及びＩＩの本質と一貫性があったが、全血液アッセイにおけるＩＩ型ｍＡｂの優れた効率性と合致しない。次に、ｍＡｂがＦｃγＲ媒介性エフェクター機構を誘発する能力を調査した；まず、全血液Ｂ細胞減損アッセイにおけるＮＫ活性化を評価した。図３Ｅに示されるようなゲート化は、ＣＤ１６の発現に関連するＮＫ脱顆粒化の評価（ＣＤ１０７ａの増加）を可能にした。ＣＤ５６＋ＣＤ１６－画分においてＣＤ１０７ａ＋ＮＫ（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）細胞の最も高い割合が見られ（図３Ａ～３Ｇ）、これは、ＮＫ細胞の脱顆粒化が、前に報告されるように、ＣＤ１６を下方制御したことを呈した（Ｇｒｚｙｗａｃｚ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００７；２１（２）：３５６－９；ａｕｔｈｏｒ ｒｅｐｌｙ９）。
これらのＣＤＣの結果は、ｍＡｂのＩ型及びＩＩの本質と一貫性があったが、全血液アッセイにおけるＩＩ型ｍＡｂの優れた効率性と合致しない。次に、ｍＡｂがＦｃγＲ媒介性エフェクター機構を誘発する能力を調査した；まず、全血液Ｂ細胞減損アッセイにおけるＮＫ活性化を評価した。図３Ｅに示されるようなゲート化は、ＣＤ１６の発現に関連するＮＫ脱顆粒化の評価（ＣＤ１０７ａの増加）を可能にした。ＣＤ５６＋ＣＤ１６－画分においてＣＤ１０７ａ＋ＮＫ（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）細胞の最も高い割合が見られ（図３Ａ～３Ｇ）、これは、ＮＫ細胞の脱顆粒化が、前に報告されるように、ＣＤ１６を下方制御したことを呈した（Ｇｒｚｙｗａｃｚ Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００７；２１（２）：３５６－９；ａｕｔｈｏｒ ｒｅｐｌｙ９）。
【0265】
これらのパラメータを確立することで、ＲＴＸ及びＯＢＺを比較する相当アッセイを行った。ｍＡｂの不在下の２４時間のインキュベーション後、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）を有する患者間のＮＫ細胞、ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、またはＢ細胞の頻度において、著しい差異は存在しなかった（図４Ａ）。しかし、ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋活性化ＮＫ細胞の中央値（範囲）頻度は、ＯＢＺでインキュベートした試料中で、ＲＴＸと比較して著しくより高く、それぞれ５．１％（１．９～２２）対２．８％（０．３～１４）及び５．５％（０．６～１２）対４．３％（１．２～８．９））であったが、ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の著しくより低い中央値（範囲）頻度が存在し、それぞれ、６９（３６～９４）対８９（８３～９７）及び６６（４２～９１）対８４（６１～９５）であった（図４Ｂ）。さらに、ＳＬＥにおいて、ＯＢＺでインキュベートした試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度は、ＲＴＸでインキュベートしたＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度と比較して、著しくより高く倍増した（図４Ｂ）。さらに、ＣＤ１０７ａの取得またはＣＤ１６の損失、またはＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度の倍増率により評価したようなＮＫ細胞活性化が、ＳＬＥと比較してＲＡにおいてより大きかったことが見出された（図４Ｂ）。ＲＴＸ及びＯＢＺによるＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度により評価したようなＮＫ細胞活性化は、ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度と著しく相関性があり、ＲＡにおいてそれぞれ、ｒ２＝０．８９、ｐ＜０．０５；ｒ２＝０．７８、ｐ＜０．０５（図４Ｃ）、及びＳＬＥにおいてそれぞれ、ｒ２＝０．５２、ｐ＜０．０５；ｒ２＝０．３６、ｐ＜０．０５（図４Ｄ）を有した。しかし、ＳＬＥと比較してＲＡにおいてより強い相関性があった。まとめると、これらのデータは、ＳＬＥにおけるＮＫ細胞の活性化における疾患関連欠陥は、全血液減損アッセイに記述される非効率なＢ細胞減損に寄与し得（図２Ａ）、ＮＫ細胞のベースライン活性化状態は、ＲＡ及びＳＬＥの両方においてｍＡｂによる活性化に対する応答に影響を及ぼし得ることを呈する（図４Ｂ及び４Ｃ）。
【0266】
次にＲＴＸ及びＯＢＺによるＮＫ細胞の異なる活性化がＩ型及びＩＩ型の特徴に因るかどうか、ならびに／または野生型グリコシル化（ＯＢＺＧｌｙ）を有するかもしくはＦｃγＲ係合を完全に欠いており、結果的に、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを誘導することにおいて効率性が低下した／非効率であるＯＢＺ（ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡ）を使用したＦｃ操作の効果（Ｈｅｓｓｅｌｌ Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２００７；４４９（７１５８）：１０１－４）に因るかどうかを調査した。ＲＡ（ｎ＝６）及びＳＬＥ（ｎ＝１２）の両方において、ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡでインキュベートした試料と比較して、ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋またはＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の頻度において、著しい差異は見られず、これは、予測通り、ＦｃγＲ係合が必須であることを示す。これらの試料中で、さらにＯＢＺは、ＲＡ（ｎ＝１８）及びＳＬＥ（ｎ＝２３）の両方において、全血液アッセイのＢ細胞を減損することにおいて、ＯＢＺＧｌｙ及びＲＴＸより効率的であったが（図５Ａ）、ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度及び倍増率における増加階層が以下の通り記述された：ｍＡｂなし＝ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡ＜ＲＴＸ＜ＯＢＺ（図５Ｂ及び５Ｃ）。ＯＢＺでインキュベートした試料中のＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の頻度は、他の試料と比較すると著しくより低かった（図５Ｄ）。ＲＡにおけるＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の頻度も、ＲＴＸと比較してＯＢＺＧｌｙでインキュベートした試料中でより低かったが、ＳＬＥにおいてはそうではなかった（図５Ｄ）。
【0267】
したがって、ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料と比較すると、ＲＴＸ、ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡ、ＯＢＺＧｌｙ、及びＯＢＺでインキュベートした試料中の平均倍率の差異が、ＲＡにおいてそれぞれ、１．２、１．５、１．９、及び３．１、かつＳＬＥにおいてそれぞれ、１．５、０．８、１．４、及び１．８であるように、ｍＡｂがＣＤ３－ＣＤ５６＋ＮＫ細胞上でＣＤ１０７ａの発現を上方制御する能力は、ＳＬＥと比較すると、ＲＡでより大きかった（図５Ｃ）。ＲＡ及びＳＬＥにおいてｍＡｂにより達成されたＢ細胞減損のパターン（図５Ａ）は、ｍＡｂによるＮＫ細胞活性化のパターンと同様であり（図５Ｂ及び５Ｄ）、そこには、個体試料中のｍＡｂにより達成されたＢ細胞減損％とＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１０７ａ＋ＮＫ細胞の頻度との間に直接的な相関性はなかった（データは非表示）。
【0268】
ＯＢＺは、好中球を活性化することにおいてＲＴＸより効率的である。
ＮＫ細胞に加えて、好中球も、ｍＡｂエフェクター細胞として提示されている（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１）。よって、次に、ｍＡｂが好中球活性化を誘導する能力を、前述されるように、ＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの発現を測定することにより評価し（Ｗｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）、図９に示した。ＣＤ１１ｂは、βインテグリン（Ｍａｃ－１）複合体の一部を形成し、この複合体の複数の遺伝的変異形は、ループス関連食細胞欠陥に関連している（Ｂｏｌｏｇｎａ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１；１８６（６）：３７６２－９）。好中球活性化において、ＣＤ１１ｂの表面発現が上方制御される一方で、接着分子であるＣＤ６２Ｌの発現は、下方制御される（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１、及びＷｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）。ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料と比較すると、ｍＡｂでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩが、ＲＡ（ｎ＝１０）及びＳＬＥ（ｎ＝２２）の両方においてより著しく高かったことが見出された（図６Ａ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩと、ＲＴＸでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩとの間の著しい相関性（それぞれ、ｒ２＝０．８１、０．８２）が記述された一方で、ＯＢＺに関する著しい相関性は、ＳＬＥで記述された（ｒ２＝０．８１）が、ＲＡでは記述されなかった（図６Ｂ）。ＣＤ１１ｂのＭＦＩが、ＮＫ細胞活性化の事象のように、ＲＴＸ＜ＯＢＺＧｌｙ＜ＯＢＺによりインキュベートされた試料中の順でより低くなるような階層が、ｍＡｂがＣＤ１１ｂを上方制御する能力においても記述された。さらに、ＣＤ６２ＬのＭＦＩは、ＲＴＸ＞ＯＢＺＧｌｙ＞ＯＢＺによりインキュベートされた試料中の順でより大きかった（図６Ｃ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料中のＣＤ６２ＬのＭＦＩと、ＲＴＸ（それぞれ、ｒ２＝０．９３、０．９１）及びＯＢＺ（それぞれ、ｒ２＝０．６４、０．７１）でインキュベートした試料中のＣＤ６２ＬのＭＦＩとの間の著しい相関性が記述された（図６Ｄ）。したがって、好中球を活性化する能力におけるｍＡｂの階層は、ＯＢＺ＞ＯＢＺＧｌｙ＞ＲＴＸであった。まとめると、これらのデータは、ＩＩ型ｍＡｂが、ＲＡ及びＳＬＥ試料の両方に関して、全血液アッセイの好中球を活性化することにおいてＲＴＸより優れていることを呈した。ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡは、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料と比較すると、ＲＡ（ｎ＝７）及びＳＬＥ（ｎ＝１２）の両方におけるマーカーに対して著しい変化を誘発しなかった。
ＮＫ細胞に加えて、好中球も、ｍＡｂエフェクター細胞として提示されている（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１）。よって、次に、ｍＡｂが好中球活性化を誘導する能力を、前述されるように、ＣＤ１１ｂ及びＣＤ６２Ｌの発現を測定することにより評価し（Ｗｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）、図９に示した。ＣＤ１１ｂは、βインテグリン（Ｍａｃ－１）複合体の一部を形成し、この複合体の複数の遺伝的変異形は、ループス関連食細胞欠陥に関連している（Ｂｏｌｏｇｎａ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１；１８６（６）：３７６２－９）。好中球活性化において、ＣＤ１１ｂの表面発現が上方制御される一方で、接着分子であるＣＤ６２Ｌの発現は、下方制御される（Ｇｏｌａｙ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２０）：３４８２－９１、及びＷｉｔｔｍａｎｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ．２００４；５７（１）：５３－６２）。ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料と比較すると、ｍＡｂでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩが、ＲＡ（ｎ＝１０）及びＳＬＥ（ｎ＝２２）の両方においてより著しく高かったことが見出された（図６Ａ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩと、ＲＴＸでインキュベートした試料中のＣＤ１１ｂのＭＦＩとの間の著しい相関性（それぞれ、ｒ２＝０．８１、０．８２）が記述された一方で、ＯＢＺに関する著しい相関性は、ＳＬＥで記述された（ｒ２＝０．８１）が、ＲＡでは記述されなかった（図６Ｂ）。ＣＤ１１ｂのＭＦＩが、ＮＫ細胞活性化の事象のように、ＲＴＸ＜ＯＢＺＧｌｙ＜ＯＢＺによりインキュベートされた試料中の順でより低くなるような階層が、ｍＡｂがＣＤ１１ｂを上方制御する能力においても記述された。さらに、ＣＤ６２ＬのＭＦＩは、ＲＴＸ＞ＯＢＺＧｌｙ＞ＯＢＺによりインキュベートされた試料中の順でより大きかった（図６Ｃ）。ＲＡ及びＳＬＥの両方において、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料中のＣＤ６２ＬのＭＦＩと、ＲＴＸ（それぞれ、ｒ２＝０．９３、０．９１）及びＯＢＺ（それぞれ、ｒ２＝０．６４、０．７１）でインキュベートした試料中のＣＤ６２ＬのＭＦＩとの間の著しい相関性が記述された（図６Ｄ）。したがって、好中球を活性化する能力におけるｍＡｂの階層は、ＯＢＺ＞ＯＢＺＧｌｙ＞ＲＴＸであった。まとめると、これらのデータは、ＩＩ型ｍＡｂが、ＲＡ及びＳＬＥ試料の両方に関して、全血液アッセイの好中球を活性化することにおいてＲＴＸより優れていることを呈した。ＯＢＺ－ＰＧ ＬＡＬＡは、ｍＡｂの不在下でインキュベートした試料と比較すると、ＲＡ（ｎ＝７）及びＳＬＥ（ｎ＝１２）の両方におけるマーカーに対して著しい変化を誘発しなかった。
【0269】
ＯＢＺは、直接細胞死を誘導することにおいてＲＴＸより効率的である。
次に、図１０に示されるようにアネキシンＶアッセイを使用して、直接細胞死（ＤＣＤ）を評価した。ＯＢＺが直接細胞死を誘導する能力は、図７Ａの、ＣＤ１９＋細胞全体及びＢ細胞分集団、つまりＩｇＤ＋ＣＤ２７－ナイーブ細胞及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞の両方に関して、ＲＴＸが直接細胞死を誘導する能力より大きかった（ＲＡ、ｎ＝５及びＳＬＥ、ｎ＝４）。ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中でも、アネキシンＶ＋細胞の割合は、最も高いものからＤＮ細胞＞ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞＞ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞＞ＩｇＤ＋ＣＤ２７－ナイーブ細胞の順であった。それにもかかわらず、ＯＢＺは、ＤＣＤを誘導することにおいてＲＴＸより優れていた。
次に、図１０に示されるようにアネキシンＶアッセイを使用して、直接細胞死（ＤＣＤ）を評価した。ＯＢＺが直接細胞死を誘導する能力は、図７Ａの、ＣＤ１９＋細胞全体及びＢ細胞分集団、つまりＩｇＤ＋ＣＤ２７－ナイーブ細胞及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞の両方に関して、ＲＴＸが直接細胞死を誘導する能力より大きかった（ＲＡ、ｎ＝５及びＳＬＥ、ｎ＝４）。ｍＡｂを用いることなくインキュベートした試料中でも、アネキシンＶ＋細胞の割合は、最も高いものからＤＮ細胞＞ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞＞ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞＞ＩｇＤ＋ＣＤ２７－ナイーブ細胞の順であった。それにもかかわらず、ＯＢＺは、ＤＣＤを誘導することにおいてＲＴＸより優れていた。
【0270】
Ｂ細胞分集団：ＣＤ２０、ＦｃγＲＩＩｂの発現及びｍＡｂの内部移行
次に、ＣＤ２０、ＦｃγＲＩＩｂの発現におけるＢ細胞分集団及び／またはｍＡｂを内部移行するその能力との間の差異が、ｍＡｂ誘導ＤＣＤに対する異なる感受性に関して説明を提供したかどうかを調査した。Ｂ細胞分集団は、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞内部が、他のＢ細胞分集団未満でｍＡｂを移行し、かつＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞が、他のＢ細胞分集団より大きな程度にｍＡｂを内部移行したようなｍＡｂを内部移行する異なる能力を表示した。ＡＴ１０でＦｃγＲＩＩｂの効果をアンタゴナイズすることは、両方の事例において、内部移行を著しく低減させた。ナイーブ及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞と比較すると、ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞は、著しくより大きいＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有し、ｍＡｂを内部移行する著しくより大きい能力を表示した一方で、ナイーブ及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞は、著しくより低いＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有し、著しくより低いレベルの内部移行を表示した。ＤＮ細胞は、注目すべき可変レベルのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有したが、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞より著しく大きな程度にＲＴＸを内部移行した。ＲＡ及びＳＬＥ試料の両方からのＢ細胞は、低レベルのＯＢＺの内部移行を一貫して表示した。これらのデータをまとめると、ｍＡｂ誘導ＤＣＤに対するＢ細胞分集団の感受率と、ｍＡｂを内部移行するか、またはＣＤ２０もしくはＦｃγＲＩＩｂを発現する能力との間に明確な関係は存在しなかった。
次に、ＣＤ２０、ＦｃγＲＩＩｂの発現におけるＢ細胞分集団及び／またはｍＡｂを内部移行するその能力との間の差異が、ｍＡｂ誘導ＤＣＤに対する異なる感受性に関して説明を提供したかどうかを調査した。Ｂ細胞分集団は、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞内部が、他のＢ細胞分集団未満でｍＡｂを移行し、かつＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞が、他のＢ細胞分集団より大きな程度にｍＡｂを内部移行したようなｍＡｂを内部移行する異なる能力を表示した。ＡＴ１０でＦｃγＲＩＩｂの効果をアンタゴナイズすることは、両方の事例において、内部移行を著しく低減させた。ナイーブ及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞と比較すると、ＩｇＤ＋ＣＤ２７＋非スイッチ型記憶細胞は、著しくより大きいＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有し、ｍＡｂを内部移行する著しくより大きい能力を表示した一方で、ナイーブ及びＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞は、著しくより低いＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有し、著しくより低いレベルの内部移行を表示した。ＤＮ細胞は、注目すべき可変レベルのＣＤ２０及びＦｃγＲＩＩｂの発現を有したが、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶細胞より著しく大きな程度にＲＴＸを内部移行した。ＲＡ及びＳＬＥ試料の両方からのＢ細胞は、低レベルのＯＢＺの内部移行を一貫して表示した。これらのデータをまとめると、ｍＡｂ誘導ＤＣＤに対するＢ細胞分集団の感受率と、ｍＡｂを内部移行するか、またはＣＤ２０もしくはＦｃγＲＩＩｂを発現する能力との間に明確な関係は存在しなかった。
【0271】
ここで、オビヌツズマブ、つまり糖修飾されたＦｃを有するＩＩ型抗ＣＤ２０ ｍＡｂが、ＲＴＸと比較して、ＲＡ及びＳＬＥの両方を有する患者の全血液試料からＢ細胞を欠失させることにおいて、少なくとも２倍大きい効能を実証したことが示された。ＯＢＺのこの増加した活性は、主にＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）媒介性エフェクター機構及びＤＣＤにより影響を受けた。対照的に、ＲＴＸは、ＣＤＣに対してより効率的に補体を回復したが、急速に内部移行され、ＡＤＣＣ及びＤＣＤを引き起こすことにおいて著しくより低度に効率的であった。後の分析で、ＣＤ２０標的分子の発現が、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶及びＤＮ細胞においてより低度であったことが明らかになり、恐らく、これがＲＴＸによる除去に対するそれらの相対的抵抗の原因であった。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E-3G】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-04-19
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載の一の発明。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0271】
ここで、オビヌツズマブ、つまり糖修飾されたＦｃを有するＩＩ型抗ＣＤ２０ ｍＡｂが、ＲＴＸと比較して、ＲＡ及びＳＬＥの両方を有する患者の全血液試料からＢ細胞を欠失させることにおいて、少なくとも２倍大きい効能を実証したことが示された。ＯＢＺのこの増加した活性は、主にＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）媒介性エフェクター機構及びＤＣＤにより影響を受けた。対照的に、ＲＴＸは、ＣＤＣに対してより効率的に補体を回復したが、急速に内部移行され、ＡＤＣＣ及びＤＣＤを引き起こすことにおいて著しくより低度に効率的であった。後の分析で、ＣＤ２０標的分子の発現が、ＩｇＤ－ＣＤ２７＋スイッチ型記憶及びＤＮ細胞においてより低度であったことが明らかになり、恐らく、これがＲＴＸによる除去に対するそれらの相対的抵抗の原因であった。
＜本開示の更なる実施態様＞
［実施態様１］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されず、
前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖と、を含む、前記方法。
［実施態様２］
前記第１の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、実施態様１または実施態様２に記載の方法。
［実施態様４］
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、実施態様３に記載の方法。
［実施態様５］
前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様３または実施態様４に記載の方法。
［実施態様６］
前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様３～５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７］
前記第２の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、実施態様１～６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様８］
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、実施態様１～７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９］
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、実施態様８に記載の方法。
［実施態様１０］
前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様８または実施態様９に記載の方法。
［実施態様１１］
前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様８～１０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２］
前記第１の抗体曝露量及び前記第２の抗体曝露量が、静脈内投与される、実施態様１～１１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３］
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、実施態様１～１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４］
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある、実施態様１～１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１５］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、前記方法。
［実施態様１６］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、静脈内投与される、実施態様１４に記載の方法。
［実施態様１７］
前記個体が、クラスＩＩＩ（Ｃ）またはクラスＩＶ（Ｃ）のループス腎炎を有さない、実施態様１～１６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１８］
前記個体が、クラスＶのループス腎炎を有する、実施態様１～１７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１９］
有効量の免疫抑制剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～１８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２０］
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸、その誘導体、またはその塩を含む、実施態様１９に記載の方法。
［実施態様２１］
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸モフェチルを含む、実施態様２０に記載の方法。
［実施態様２２］
有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２３］
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロンを含む、実施態様２２に記載の方法。
［実施態様２４］
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、プレドニゾンを含む、実施態様２２に記載の方法。
［実施態様２５］
有効量の抗ヒスタミン剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６］
前記抗ヒスタミン剤が、ジフェンヒドラミンを含む、実施態様２５に記載の方法。
［実施態様２７］
有効量の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８］
前記ＮＳＡＩＤが、アセトアミノフェンを含む、実施態様２７に記載の方法。
［実施態様２９］
有効量の降圧剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０］
前記降圧剤が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬である、実施態様２９に記載の方法。
［実施態様３１］
標準ケア治療を前記個体に施すことをさらに含む、実施態様１～３０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２］
前記標準ケア治療が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、及びグルココルチコイドまたはコルチコステロイドのうちの１つ以上を用いた治療を含む、実施態様３１に記載の方法。
［実施態様３３］
前記方法が、前記個体において完全腎応答（ＣＲＲ）をもたらす、実施態様１～３２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４］
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、実施態様１～３３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５］
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、実施態様３４に記載の方法。
［実施態様３６］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、実施態様１～３５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、アフコシル化されている、実施態様１～３６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記重鎖が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施態様１～３７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記軽鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様１～３８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４０］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、オビヌツズマブである、実施態様１～３９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４１］
前記個体が、ヒトである、実施態様１～４０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４２］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、前記使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、前記個体に投与され、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、前記添付文書とを含み、前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む、前記キット。
［実施態様４３］
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明と、を含む容器をさらに含む、実施態様４２に記載のキット。
［実施態様４４］
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、実施態様４３に記載のキット。
［実施態様４５］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるクラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書と、を含む、前記キット。
［実施態様４６］
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明とを含む容器をさらに含む、実施態様４５に記載のキット。
［実施態様４７］
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、実施態様４６に記載のキット。
［実施態様４８］
個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量の抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む、前記方法。
［実施態様４９］
前記抗体が、静脈内投与される、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様５０］
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、実施態様４７または実施態様４８に記載の方法。
［実施態様５１］
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、実施態様４９に記載の方法。
［実施態様５２］
前記抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、実施態様４７～５０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５３］
前記抗体が、アフコシル化されている、実施態様４７～５１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５４］
前記重鎖可変領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施態様４７～５２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５５］
前記軽鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施態様４７～５３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５６］
前記抗体が、オビヌツズマブである、実施態様４７～５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５７］
前記抗体が、修飾されたＦｃ領域を含む、実施態様４７～５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５８］
前記Ｆｃ領域が、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む、実施態様５６に記載の方法。
［実施態様５９］
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である、実施態様５６に記載の方法。
［実施態様６０］
前記Ｆｃ領域が、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む、実施態様５８に記載の方法。
［実施態様６１］
前記個体が、ヒトである、実施態様４８～６０のいずれか一に記載の方法。
＜配列表＞
SEQUENCE LISTING
<110> Genentech, Inc.
BRUNETTA, Paul
<120> COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING
LUPUS NEPHRITIS
<130> 146392032240
<140> Not Yet Assigned
<141> Concurrently Herewith
<150> 62/300,052
<151> 2016-02-25
<150> 62/159,876
<151> 2015-05-11
<160> 43
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 6
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<220>
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1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
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1 5
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<220>
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<400> 7
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
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Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
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Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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115
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<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 9
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
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290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
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100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> Mus musculus
<400> 11
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
1 5 10 15
Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu
20 25 30
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp
35 40 45
Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
50 55 60
Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly
85 90 95
Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
100 105 110
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
1 5 10 15
Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu
20 25 30
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn
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Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr
50 55 60
Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
85 90 95
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
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<213> Artificial Sequence
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<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
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<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<223> Synthetic Construct
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 119
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 24
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 119
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<220>
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<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 31
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 33
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser
<210> 35
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 36
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
1 5 10
<210> 37
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 39
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 39
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 40
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 41
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 41
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 43
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Phe Pro Gly Ala Arg Cys
20
＜本開示の更なる実施態様＞
［実施態様１］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されず、
前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖と、を含む、前記方法。
［実施態様２］
前記第１の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、実施態様１または実施態様２に記載の方法。
［実施態様４］
前記第１の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、実施態様３に記載の方法。
［実施態様５］
前記第１の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様３または実施態様４に記載の方法。
［実施態様６］
前記第１の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様３～５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７］
前記第２の抗体曝露量が、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、約９００ｍｇ～約１１００ｍｇの第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、を含む、実施態様１～６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様８］
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約１．５週間～約２．５週間後まで提供されない、実施態様１～７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９］
前記第２の抗体曝露量が、第１の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と第２の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含み、前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量の約２週間後まで提供されない、実施態様８に記載の方法。
［実施態様１０］
前記第２の抗体曝露量の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様８または実施態様９に記載の方法。
［実施態様１１］
前記第２の抗体曝露量の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、実施態様８～１０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２］
前記第１の抗体曝露量及び前記第２の抗体曝露量が、静脈内投与される、実施態様１～１１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３］
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、実施態様１～１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４］
前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を発症する危険性がある、実施態様１～１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１５］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み、前記個体が、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を有する、前記方法。
［実施態様１６］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、静脈内投与される、実施態様１４に記載の方法。
［実施態様１７］
前記個体が、クラスＩＩＩ（Ｃ）またはクラスＩＶ（Ｃ）のループス腎炎を有さない、実施態様１～１６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１８］
前記個体が、クラスＶのループス腎炎を有する、実施態様１～１７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１９］
有効量の免疫抑制剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～１８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２０］
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸、その誘導体、またはその塩を含む、実施態様１９に記載の方法。
［実施態様２１］
前記免疫抑制剤が、ミコフェノール酸モフェチルを含む、実施態様２０に記載の方法。
［実施態様２２］
有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２３］
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロンを含む、実施態様２２に記載の方法。
［実施態様２４］
前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、プレドニゾンを含む、実施態様２２に記載の方法。
［実施態様２５］
有効量の抗ヒスタミン剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６］
前記抗ヒスタミン剤が、ジフェンヒドラミンを含む、実施態様２５に記載の方法。
［実施態様２７］
有効量の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８］
前記ＮＳＡＩＤが、アセトアミノフェンを含む、実施態様２７に記載の方法。
［実施態様２９］
有効量の降圧剤を前記個体に投与することをさらに含む、実施態様１～２８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０］
前記降圧剤が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンジオテンシン受容体遮断薬である、実施態様２９に記載の方法。
［実施態様３１］
標準ケア治療を前記個体に施すことをさらに含む、実施態様１～３０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２］
前記標準ケア治療が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、及びグルココルチコイドまたはコルチコステロイドのうちの１つ以上を用いた治療を含む、実施態様３１に記載の方法。
［実施態様３３］
前記方法が、前記個体において完全腎応答（ＣＲＲ）をもたらす、実施態様１～３２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４］
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、実施態様１～３３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５］
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、実施態様３４に記載の方法。
［実施態様３６］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、実施態様１～３５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、アフコシル化されている、実施態様１～３６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記重鎖が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施態様１～３７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の前記軽鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様１～３８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４０］
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、オビヌツズマブである、実施態様１～３９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４１］
前記個体が、ヒトである、実施態様１～４０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様４２］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書であって、前記使用説明が、少なくとも第１の抗体曝露量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び第２の抗体曝露量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、前記個体に投与され、前記第２の抗体曝露量が、前記第１の抗体曝露量の約１８週間～約２６週間後まで提供されないことを示す、前記添付文書とを含み、前記第１の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第１の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含み、前記第２の抗体曝露量が、１または２回分の用量の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、前記第２の抗体曝露量が、約１８００ｍｇ～約２２００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露量を含む、前記キット。
［実施態様４３］
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明と、を含む容器をさらに含む、実施態様４２に記載のキット。
［実施態様４４］
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、実施態様４３に記載のキット。
［実施態様４５］
ループスを有する個体におけるループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させるためのキットであって、
（ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、前記容器と、
（ｂ）個体におけるクラスＩＩＩまたはクラスＩＶのループス腎炎を治療するか、またはその進行を遅延させることに関する使用説明を含む添付文書と、を含む、前記キット。
［実施態様４６］
（ｃ）第２の薬品であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、第１の薬品である、第２の薬品と、
（ｄ）前記第２の薬品を対象に投与することに関する前記添付文書上の使用説明とを含む容器をさらに含む、実施態様４５に記載のキット。
［実施態様４７］
前記第２の薬品が、免疫抑制剤、グルココルチコイド、コルチコステロイド、抗マラリア剤、細胞傷害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、またはホルモンである、実施態様４６に記載のキット。
［実施態様４８］
個体におけるリウマチ性関節炎（ＲＡ）または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を治療するか、またはその進行を遅延させるための方法であって、有効量の抗ＣＤ２０抗体を前記個体に投与することを含み、前記抗体が、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域とを含む、前記方法。
［実施態様４９］
前記抗体が、静脈内投与される、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様５０］
前記方法が、前記個体において血流循環末梢Ｂ細胞の減損をもたらす、実施態様４７または実施態様４８に記載の方法。
［実施態様５１］
前記血流循環末梢Ｂ細胞が、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である、実施態様４９に記載の方法。
［実施態様５２］
前記抗体が、ヒト化またはヒト抗体である、実施態様４７～５０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５３］
前記抗体が、アフコシル化されている、実施態様４７～５１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５４］
前記重鎖可変領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施態様４７～５２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５５］
前記軽鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施態様４７～５３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５６］
前記抗体が、オビヌツズマブである、実施態様４７～５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５７］
前記抗体が、修飾されたＦｃ領域を含む、実施態様４７～５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５８］
前記Ｆｃ領域が、エフェクター機能を減衰させるための修飾を含む、実施態様５６に記載の方法。
［実施態様５９］
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である、実施態様５６に記載の方法。
［実施態様６０］
前記Ｆｃ領域が、ＥＵ指数による番号付けで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇアミノ酸置換を含む、実施態様５８に記載の方法。
［実施態様６１］
前記個体が、ヒトである、実施態様４８～６０のいずれか一に記載の方法。
＜配列表＞
SEQUENCE LISTING
<110> Genentech, Inc.
BRUNETTA, Paul
<120> COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING
LUPUS NEPHRITIS
<130> 146392032240
<140> Not Yet Assigned
<141> Concurrently Herewith
<150> 62/300,052
<151> 2016-02-25
<150> 62/159,876
<151> 2015-05-11
<160> 43
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<223> Synthetic Construct
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
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35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 9
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 10
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 11
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
1 5 10 15
Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu
20 25 30
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp
35 40 45
Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
50 55 60
Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly
85 90 95
Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
100 105 110
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<211> 103
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
1 5 10 15
Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu
20 25 30
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn
35 40 45
Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr
50 55 60
Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
85 90 95
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<223> Synthetic Construct
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
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35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys
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Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 16
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
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<220>
<223> Synthetic Construct
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Phe Pro Gly Ala Arg Cys
20
【外国語明細書】