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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023091784
(43)【公開日】2023-06-30
(54)【発明の名称】肌の弾力の維持又は向上用組成物
(51)【国際特許分類】
A23L 33/125 20160101AFI20230623BHJP
A61K 8/60 20060101ALI20230623BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20230623BHJP
A61K 31/7028 20060101ALI20230623BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20230623BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230623BHJP
【ＦＩ】
A23L33/125
A61K8/60
A61Q19/00
A61K31/7028
A61P17/16
A61P43/00 105
【審査請求】未請求
【請求項の数】8
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023072123
(22)【出願日】2023-04-26
(62)【分割の表示】P 2021205748の分割
【原出願日】2021-12-20
(71)【出願人】
【識別番号】000204686
【氏名又は名称】大関株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】大浦 友紀
(72)【発明者】
【氏名】山田 浩之
(72)【発明者】
【氏名】幸田 明生
(72)【発明者】
【氏名】坊垣 隆之
(72)【発明者】
【氏名】根路銘 伸介
(72)【発明者】
【氏名】東崎 愛生
(72)【発明者】
【氏名】岡崎 悟志
【テーマコード（参考）】
4B018
4C083
4C086
【Ｆターム（参考）】
4B018LE05
4B018MD27
4B018MD93
4B018ME14
4B018MF06
4B018MF13
4C083AA031
4C083AD201
4C083AD202
4C083CC02
4C083DD50
4C083EE07
4C083EE12
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA04
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA63
4C086NA14
4C086ZA89
4C086ZB22
(57)【要約】
【課題】肌の弾力を維持又は向上させることにより、肌に物理的強度を与え、外界に対する抵抗性を保つことに資する組成物及び製剤を提供する。
【解決手段】（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、該（Ａ）成分の含有量が、０．０１～３０質量％である、肌の弾力の維持又は向上用組成物を調製する。また、（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤を調製する。
【選択図】図６
【解決手段】（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、該（Ａ）成分の含有量が、０．０１～３０質量％である、肌の弾力の維持又は向上用組成物を調製する。また、（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤を調製する。
【選択図】図６
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びα－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール類からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、
該α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール類が、（２Ｒ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、（２Ｓ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、及び２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む、
ＰＰＡＲ、トランスグルタミナーゼ、クローディン、スフィンゴミエリナーゼ、ＥＧＦ、及び、フィラグリンからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤。
該α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール類が、（２Ｒ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、（２Ｓ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、及び２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む、
ＰＰＡＲ、トランスグルタミナーゼ、クローディン、スフィンゴミエリナーゼ、ＥＧＦ、及び、フィラグリンからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤。
【請求項2】
少なくとも１日１回、２週間以上適用するものである、請求項１に記載の剤。
【請求項3】
前記（Ａ）成分の１日の適用量が、２０ｍｇ以上である、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項4】
経口用、又は、外用である、請求項１～３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項5】
医薬品、医薬部外品、化粧品、又は、機能性食品である、請求項１～４のいずれか１項に記載の剤。
【請求項6】
前記（Ａ）成分が、米を原料とした発酵物から得られるものである、請求項１～５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項7】
前記（Ａ）成分の含有量が、０．０１～３０質量％である、請求項１～６のいずれか１項に記載の剤。
【請求項8】
肌のバリア機能、又は、肌のターンオーバーの維持又は向上用である、請求項１～７のいずれか１項に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、肌の弾力の維持又は向上をもたらすことに優れた組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
肌は人の体表を覆う皮膚であり、表皮、真皮、及び、皮下組織から構成されている。最外層に位置する表皮の角質層は、角質細胞、細胞間脂質、ＮＭＦ（天然保湿因子）等が存在し、水分と油分とが交互に重なり合い、ラメラ構造を構成することにより、水分を保持し、蒸散抑制を行っている。
【0003】
また、表皮下層に位置する真皮では、コラーゲンやエラスチン等により肌を支え、ヒアルロン酸等の基質が水分を保持している。
【0004】
加齢や外部環境の変化等により、肌の構造に乱れが生じ肌の弾力が失われると、肌の物理的強度が低下し、外界に対する抵抗性が減弱する。また、肌構造の乱れにより、保持されていた水分が蒸散することで肌の乾燥をもたらし、痒みや皮膚損傷等に繋がってしまう。
【0005】
また、肌は全身に拡がる臓器であり、肌の弾力性を保つ構造が失われ、水分蒸散が進むことにより、熱中症等の脱水症状が引き起こされることもある。よって、真皮等の肌構造を保持し、肌の弾力性を維持又は向上させることは、肌の健康を守ることや、体温を適切に管理する上で重要である。
【0006】
肌の弾力性を保つ構造を維持するため、様々な成分による外用組成物が提案されている。例えば、特許文献１では、サチャインチというドウダイグサ科植物のオイルによる肌のたるみ改善、熱中症予防等の効果が報告されている。特許文献２ではシソ科タイム属植物の抽出液とビタミンＥ及び／又はその誘導体の一種又は二種以上とを配合した外用剤による皮膚のたるみ軽減、ハリ感アップの効果が報告されている。非特許文献１ではエーデルワイスのカルス培養エキスによる肌の弾力性改善の効果が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開２０２０－１５８４７８号
【特許文献2】特開２０００－０８６４８６号
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Ｗｏｎ Ｋｙｏｎｇ Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉ－Ａｇｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｌｅｏｎｔｏｐｏｄｉｕｍ ａｌｐｉｎｕｍ（Ｅｄｅｌｗｅｉｓｓ）Ｃａｌｌｕｓ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．Ｇｅｎｅｓ．２０２０，１１，２３０．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
肌の弾力性維持に効果を奏する外用組成物は種々報告されているが、経口によっても効果が確認されている成分は十分な報告がない。特に、経口用である場合は、安全性の観点から、古くから飲食されてきたか等の食経験も必要となる。
【0010】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであり、外用だけでなく経口用においても、肌の弾力の維持又は向上に効果を奏し、摂食歴の長い天然由来の成分を見出すこと、及び、その成分を用いた肌の弾力の維持又は向上用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0011】
前記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、日本酒等に含まれる成分であるエチルα－Ｄ－グルコシドやその類縁化合物を有効量含有させることにより、肌の弾力の維持又は向上に資することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【0012】
すなわち、本発明は、下記に掲げる組成物を提供する。
項１．
（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、該（Ａ）成分の含有量が、０．０１～３０質量％である、肌の弾力の維持又は向上用組成物。
項２．
少なくとも１日１回、２週間以上適用するものである、項１に記載の組成物。
項３．
前記（Ａ）成分の１日の適用量が、２０ｍｇ以上である、項１又は２に記載の組成物。
項４．
経口用、又は、外用である、項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
項５．
医薬品、医薬部外品、化粧品、又は、機能性食品である、項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
項６．
前記（Ａ）成分が、米を原料とした発酵物から得られるものである、項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
項１．
（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、該（Ａ）成分の含有量が、０．０１～３０質量％である、肌の弾力の維持又は向上用組成物。
項２．
少なくとも１日１回、２週間以上適用するものである、項１に記載の組成物。
項３．
前記（Ａ）成分の１日の適用量が、２０ｍｇ以上である、項１又は２に記載の組成物。
項４．
経口用、又は、外用である、項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
項５．
医薬品、医薬部外品、化粧品、又は、機能性食品である、項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
項６．
前記（Ａ）成分が、米を原料とした発酵物から得られるものである、項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
【0013】
また、別の実施形態において、本発明は、下記に掲げるタンパク質の遺伝子発現促進剤を提供する。
項７．
（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤。
項７．
（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤。
【発明の効果】
【0014】
本発明の組成物を用いることで、摂食歴の長い天然由来の成分により、肌の弾力を維持又は向上させることが可能となる。本発明の効果は、外用組成物としてだけでなく、経口用組成物としても得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【発明を実施するための形態】
【0016】
［肌の弾力の維持又は向上用組成物］
本発明の組成物は、摂食歴の長い天然由来の成分であるエチルα－Ｄ－グルコシドやその類縁化合物を有効成分として含有するものであり、肌の弾力を維持又は向上させることが可能となる。
本発明の組成物は、摂食歴の長い天然由来の成分であるエチルα－Ｄ－グルコシドやその類縁化合物を有効成分として含有するものであり、肌の弾力を維持又は向上させることが可能となる。
【0017】
本明細書において、（Ａ）エチルα－Ｄ－グルコシド及びその類縁化合物からなる群より選択される少なくとも１種は、（Ａ）成分とも表記される。
エチルα－Ｄ－グルコシド（以下、α－ＥＧとも言う）は、分子量２０８の化合物であり、調理食品の旨みや濃厚味に関与する呈味成分として知られている。その呈味は、グルコース様の爽やかな甘味と独特の苦味が特徴である。エチルα－Ｄ－グルコシドは、酒類醸造期間中に麹由来のα－グルコシダーゼの糖転移反応により生成することが知られており、清酒やみりん等の酒類中に含まれている。エチルα－Ｄ－グルコシドの構造は次式（１）で表される。
エチルα－Ｄ－グルコシド（以下、α－ＥＧとも言う）は、分子量２０８の化合物であり、調理食品の旨みや濃厚味に関与する呈味成分として知られている。その呈味は、グルコース様の爽やかな甘味と独特の苦味が特徴である。エチルα－Ｄ－グルコシドは、酒類醸造期間中に麹由来のα－グルコシダーゼの糖転移反応により生成することが知られており、清酒やみりん等の酒類中に含まれている。エチルα－Ｄ－グルコシドの構造は次式（１）で表される。
【0018】
【化1】
【0019】
エチルα－Ｄ－グルコシドの製造法としては、特に限定するものではないが、例えば、本出願人は、もち米や麹米を原料とし、酒造用酵素剤（α－グルコシダーゼ剤）を作用させること等により、エチルα－Ｄ－グルコシドを高含有する酒類を製造する方法を開示している（特開２００５－１８５１６９号）。上記酵素剤は、特に限定されないが、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニガー等由来の酵素剤が挙げられ、例えば、四段用ＴＧ－Ｂ（天野エンザイム社製）が使用できる。
【0020】
上記の他、エチルα－Ｄ－グルコシドの製造法としては、例えば、シゾサッカロミセス・ポンベを、糖質を含有するエタノール溶液に作用させる方法（特公平５－５６９５８号）、アスペルギルス・ニガー由来のα－グルコシダーゼを、糖質を含有するエタノール溶液に作用させる方法（特公平６－３０６０８号）、及びアルコール発酵能を有する微生物の共存下で糖類にα－１，６－グルコシル転移活性を有する酵素を作用させる方法（特開平１１－２４３９８７号）が挙げられる。
【0021】
エチルα－Ｄ－グルコシドは、上記の製造法の他、米を原料とした発酵物から得ても良く、合成によって得ても良く、市販品を用いることもできる。
【0022】
エチルα－Ｄ－グルコシドの類縁化合物としては、特に限定されないが、アルコールをアグリコンとする配糖体である化合物が好ましく、米を原料とした発酵物から得られる類縁化合物がより好ましく、α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール類（以下、α－ＧＧとも言う）が更に好ましく、（２Ｒ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、（２Ｓ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、及び２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種が特に好ましい。（２Ｒ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、（２Ｓ）－１－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール、及び２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロールの構造は、それぞれ次式（２）～（４）で表される。
【0023】
【化2】
【0024】
【化3】
【0025】
【化4】
【0026】
エチルα－Ｄ－グルコシドの類縁化合物は、酒類中に存在するため、酒類から必要により精製して得ても良く、米を原料とした発酵物から得ても良く、上記のエチルα－Ｄ－グルコシドの製造法において付随的に生成する化合物として得ても良く、市販品を用いても良い。上記の他、エチルα－Ｄ－グルコシドの類縁化合物の製造方法は特に限定されない。
【0027】
本発明の組成物は、（Ａ）成分を有効量の濃度で含有する酒類を当該組成物として用いても良く、更に（Ａ）成分を有効量の濃度で含有する酒類を精製処理したものでも良く、濃縮処理したものでも良い。このような処理方法は、特に限定されず公知の抽出法、精製方法、濃縮方法、合成方法、乾燥粉末化方法等を用いることができる。
【0028】
（Ａ）成分の総含有量は、本発明の効果を顕著に奏する観点から、組成物全量に対して、０．０１～３０質量％とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．１５質量％以上、０．２質量％以上、０．２５質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．８質量％以上、１．０質量％以上等とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、２８質量％以下、２６質量％以下、２４質量％以下、２２質量％以下、２０質量％以下、１８質量％以下、１６質量％以下、１４質量％以下、１２質量％以下、１０質量％以下等とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、０．０１～３０質量％、０．０１～２８質量％、０．０１～２６質量％、０．０１～２４質量％、０．０１～２２質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１８質量％、０．０１～１６質量％、０．０１～１４質量％、０．０１～１２質量％、０．０１～１０質量％、０．０５～３０質量％、０．０５～２８質量％、０．０５～２６質量％、０．０５～２４質量％、０．０５～２２質量％、０．０５～２０質量％、０．０５～１８質量％、０．０５～１６質量％、０．０５～１４質量％、０．０５～１２質量％、０．０５～１０質量％、０．１～３０質量％、０．１～２８質量％、０．１～２６質量％、０．１～２４質量％、０．１～２２質量％、０．１～２０質量％、０．１～１８質量％、０．１～１６質量％、０．１～１４質量％、０．１～１２質量％、０．１～１０質量％、０．１５～３０質量％、０．１５～２８質量％、０．１５～２６質量％、０．１５～２４質量％、０．１５～２２質量％、０．１５～２０質量％、０．１５～１８質量％、０．１５～１６質量％、０．１５～１４質量％、０．１５～１２質量％、０．１～１０質量％、０．２～３０質量％、０．２～２８質量％、０．２～２６質量％、０．２～２４質量％、０．２～２２質量％、０．２～２０質量％、０．２～１８質量％、０．２～１６質量％、０．２～１４質量％、０．２～１２質量％、０．２～１０質量％、０．２５～３０質量％、０．２５～２８質量％、０．２５～２６質量％、０．２５～２４質量％、０．２５～２２質量％、０．２５～２０質量％、０．２５～１８質量％、０．２５～１６質量％、０．２５～１４質量％、０．２５～１２質量％、０．２５～１０質量％、０．３～３０質量％、０．３～２８質量％、０．３～２６質量％、０．３～２４質量％、０．３～２２質量％、０．３～２０質量％、０．３～１８質量％、０．３～１６質量％、０．３～１４質量％、０．３～１２質量％、０．３～１０質量％、０．４～３０質量％、０．４～２８質量％、０．４～２６質量％、０．４～２４質量％、０．４～２２質量％、０．４～２０質量％、０．４～１８質量％、０．４～１６質量％、０．４～１４質量％、０．４～１２質量％、０．４～１０質量％、０．５～３０質量％、０．５～２８質量％、０．５～２６質量％、０．５～２４質量％、０．５～２２質量％、０．５～２０質量％、０．５～１８質量％、０．５～１６質量％、０．５～１４質量％、０．５～１２質量％、０．５～１０質量％、０．８～３０質量％、０．８～２８質量％、０．８～２６質量％、０．８～２４質量％、０．８～２２質量％、０．８～２０質量％、０．８～１８質量％、０．８～１６質量％、０．８～１４質量％、０．８～１２質量％、０．８～１０質量％、１．０～３０質量％、１．０～２８質量％、１．０～２６質量％、１．０～２４質量％、１．０～２２質量％、１．０～２０質量％、１．０～１８質量％、１．０～１６質量％、１．０～１４質量％、１．０～１２質量％、１．０～１０質量％等とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．１５質量％以上、０．２質量％以上、０．２５質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．８質量％以上、１．０質量％以上等とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、２８質量％以下、２６質量％以下、２４質量％以下、２２質量％以下、２０質量％以下、１８質量％以下、１６質量％以下、１４質量％以下、１２質量％以下、１０質量％以下等とすることができる。
（Ａ）成分の総含有量は、組成物全量に対して、例えば、０．０１～３０質量％、０．０１～２８質量％、０．０１～２６質量％、０．０１～２４質量％、０．０１～２２質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１８質量％、０．０１～１６質量％、０．０１～１４質量％、０．０１～１２質量％、０．０１～１０質量％、０．０５～３０質量％、０．０５～２８質量％、０．０５～２６質量％、０．０５～２４質量％、０．０５～２２質量％、０．０５～２０質量％、０．０５～１８質量％、０．０５～１６質量％、０．０５～１４質量％、０．０５～１２質量％、０．０５～１０質量％、０．１～３０質量％、０．１～２８質量％、０．１～２６質量％、０．１～２４質量％、０．１～２２質量％、０．１～２０質量％、０．１～１８質量％、０．１～１６質量％、０．１～１４質量％、０．１～１２質量％、０．１～１０質量％、０．１５～３０質量％、０．１５～２８質量％、０．１５～２６質量％、０．１５～２４質量％、０．１５～２２質量％、０．１５～２０質量％、０．１５～１８質量％、０．１５～１６質量％、０．１５～１４質量％、０．１５～１２質量％、０．１～１０質量％、０．２～３０質量％、０．２～２８質量％、０．２～２６質量％、０．２～２４質量％、０．２～２２質量％、０．２～２０質量％、０．２～１８質量％、０．２～１６質量％、０．２～１４質量％、０．２～１２質量％、０．２～１０質量％、０．２５～３０質量％、０．２５～２８質量％、０．２５～２６質量％、０．２５～２４質量％、０．２５～２２質量％、０．２５～２０質量％、０．２５～１８質量％、０．２５～１６質量％、０．２５～１４質量％、０．２５～１２質量％、０．２５～１０質量％、０．３～３０質量％、０．３～２８質量％、０．３～２６質量％、０．３～２４質量％、０．３～２２質量％、０．３～２０質量％、０．３～１８質量％、０．３～１６質量％、０．３～１４質量％、０．３～１２質量％、０．３～１０質量％、０．４～３０質量％、０．４～２８質量％、０．４～２６質量％、０．４～２４質量％、０．４～２２質量％、０．４～２０質量％、０．４～１８質量％、０．４～１６質量％、０．４～１４質量％、０．４～１２質量％、０．４～１０質量％、０．５～３０質量％、０．５～２８質量％、０．５～２６質量％、０．５～２４質量％、０．５～２２質量％、０．５～２０質量％、０．５～１８質量％、０．５～１６質量％、０．５～１４質量％、０．５～１２質量％、０．５～１０質量％、０．８～３０質量％、０．８～２８質量％、０．８～２６質量％、０．８～２４質量％、０．８～２２質量％、０．８～２０質量％、０．８～１８質量％、０．８～１６質量％、０．８～１４質量％、０．８～１２質量％、０．８～１０質量％、１．０～３０質量％、１．０～２８質量％、１．０～２６質量％、１．０～２４質量％、１．０～２２質量％、１．０～２０質量％、１．０～１８質量％、１．０～１６質量％、１．０～１４質量％、１．０～１２質量％、１．０～１０質量％等とすることができる。
【0029】
（Ａ）成分中において、エチルα－Ｄ－グルコシドと、その類縁化合物との含有比率は、特に制限されない。エチルα－Ｄ－グルコシドの類縁化合物がα－ＧＧである場合は、エチルα－Ｄ－グルコシドと、α－ＧＧとの含有比率は、エチルα－Ｄ－グルコシドの１質量部に対して、α－ＧＧの含有量が、例えば、０．０１～１質量部であることが好ましく、０．０５～０．５質量部であることがより好ましく、０．０８～０．５質量部であることが更に好ましく、０．１～０．５質量部であることが特に好ましい。
【0030】
［用途］
本発明の組成物は、（Ａ）成分を０．０１～３０質量％の含有量にて含有することにより、肌の弾力を維持し、又は、向上させることが可能となる。
本発明の組成物は、（Ａ）成分を０．０１～３０質量％の含有量にて含有することにより、肌の弾力を維持し、又は、向上させることが可能となる。
【0031】
上述の通り、肌は表皮及び真皮から構成されており、表皮のラメラ構造や真皮のコラーゲン、エラスチン等により肌の弾力性が維持されている。このような肌構造が乱れることにより、肌の弾力性が失われ、肌のハリ・ツヤの低下、痒みや皮膚損傷、水分蒸散による熱中症等の脱水症状を引き起こしてしまう。よって、本発明は、肌の弾力性を維持又は向上することにより、肌のハリ又はツヤの維持又は向上、肌の痒み又は皮膚損傷の改善、熱中症の予防等に用いることも可能である。
【0032】
肌構造の乱れは、加齢、大気汚染、アレルギー、睡眠不足、栄養の偏り等の様々な生活環境、生活要因から生じ、日々肌構造の維持を心掛けることが必要であるが、多くの場合、十分な対策がなされていない状況である。また、一度肌構造が壊れ、不安定化すると、少しの生活環境の変化によっても影響を受けることがあり、例えば、荒れ肌、敏感肌、ゆらぎ肌等と称され、注意を要する肌状態となる。よって、本発明は、肌の弾力性を維持又は向上することにより、荒れ肌（肌荒れ）、敏感肌、ゆらぎ肌等に対して用いることも可能である。
【0033】
（Ａ）成分の１日の適用量は、本発明の効果を奏する限り限定はされないが、例えば、２０ｍｇ以上とすることができ、５０ｍｇ以上であることが好ましく、１００ｍｇ以上であることが更に好ましく、１５０ｍｇ以上であることが特に好ましく、２００ｍｇ以上であることが最も好ましい。
（Ａ）成分の１日の適用量は、例えば、４０００ｍｇ以下とすることができ、３６００ｍｇ以下であることが好ましく、３２００ｍｇ以下であることが更に好ましく、２８００ｍｇ以下であることが特に好ましく、２４００ｍｇ以下であることが最も好ましい。
（Ａ）成分の１日の適用量は、例えば、２０～４０００ｍｇとすることができ、５０～３６００ｍｇであることが好ましく、１００～３２００ｍｇであることが更に好ましく、１５０～２８００ｍｇであることが特に好ましく、２００～２４００ｍｇであることが最も好ましい。
（Ａ）成分の１日の適用量は、例えば、４０００ｍｇ以下とすることができ、３６００ｍｇ以下であることが好ましく、３２００ｍｇ以下であることが更に好ましく、２８００ｍｇ以下であることが特に好ましく、２４００ｍｇ以下であることが最も好ましい。
（Ａ）成分の１日の適用量は、例えば、２０～４０００ｍｇとすることができ、５０～３６００ｍｇであることが好ましく、１００～３２００ｍｇであることが更に好ましく、１５０～２８００ｍｇであることが特に好ましく、２００～２４００ｍｇであることが最も好ましい。
【0034】
また、（Ａ）成分のうち、α－ＥＧ単独での１日の適用量は、例えば、２００～４０００ｍｇとすることができ、２１０～３６００ｍｇであることが好ましく、２２０～３２００ｍｇであることが更に好ましく、２３０～２８００ｍｇであることが特に好ましく、２４０～２４００ｍｇであることが最も好ましい。
【0035】
また、（Ａ）成分のうち、α－ＧＧ単独での１日の適用量は、例えば、２０～１０００ｍｇとすることができ、３０～８００ｍｇであることが好ましく、４０～６００ｍｇであることが更に好ましく、５０～４００ｍｇであることが特に好ましく、６０～１５０ｍｇであることが最も好ましい。
【0036】
また、一度肌構造が壊れ不安定化すると、どのような成分を適用したとしても、即座に（瞬間的に）肌構造を修復することは困難である。よって、日頃から肌構造の維持を心掛けることが重要である。本発明の組成物を適用する場合は、例えば、少なくとも１日１回、２週間以上適用することが好ましい。
【0037】
適用回数としては、１日１回が好ましく、１日２回（朝に１回及び晩に１回、朝食前後に１回及び夕食前後に１回等）、１日３回（朝、昼及び晩に１回ずつ、朝食、昼食、夕食前後に１回ずつ等）であっても良い。
【0038】
適用期間としては、少なくとも２週間以上が好ましく、２０日以上、３週間以上、４週間以上、３０日以上、１ヶ月以上、２ヶ月以上、３ヶ月以上であっても良い。限定はされないが、表皮における細胞のターンオーバーにかかる期間が、約４５日であることから、例えば、少なくとも１ヶ月以上がより好ましく、４５日以上が更に好ましく、２ヶ月以上が特に好ましい。
【0039】
［製剤形態］
本発明の組成物は、飲食品、化粧品、医薬品、医薬部外品等の種々の形態にて用いることができ、公知の方法で製剤化することが可能である。本発明の組成物は、経口剤であっても良く、外用剤であっても良い。経口剤としては、例えば、錠剤（咀嚼錠、嚥下錠、トローチ剤、バッカル錠、舌下錠等）、カプセル剤（ソフトカプセル、ハードカプセル、シームレスカプセル等）、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤（水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等）等が挙げられ、外用剤としては、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤、パウダー剤、スプレー剤、シート剤等が挙げられる。上記の他、本発明の組成物は、注射剤等の公知の他の剤形によっても利用することが可能である。
本発明の組成物は、飲食品、化粧品、医薬品、医薬部外品等の種々の形態にて用いることができ、公知の方法で製剤化することが可能である。本発明の組成物は、経口剤であっても良く、外用剤であっても良い。経口剤としては、例えば、錠剤（咀嚼錠、嚥下錠、トローチ剤、バッカル錠、舌下錠等）、カプセル剤（ソフトカプセル、ハードカプセル、シームレスカプセル等）、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤（水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等）等が挙げられ、外用剤としては、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤、パウダー剤、スプレー剤、シート剤等が挙げられる。上記の他、本発明の組成物は、注射剤等の公知の他の剤形によっても利用することが可能である。
【0040】
飲食品の形態の場合、例えば、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養機能食品等の健康食品として用いられることの他、一般的な飲食品に配合して用いられても良い。一般的な飲食品としては、特に限定はされないが、例えば、菓子類（ゼリー、飴、錠菓及びスナック菓子等）、飲料類（清涼飲料、コーヒー、酒類等）、パン類、肉類の加工食品（ハム、ソーセージ、蒲鉾、竹輪等）、野菜類の加工食品（野菜の煮物等）、果物類の加工食品（果物の砂糖漬け、果物の缶詰等）、調味料（醤油、みりん、味噌、旨味調味料等）及び甘味料等が挙げられる。
【0041】
化粧品の形態の場合、具体的には、化粧水、乳液、ジェル、クリーム、美容液、日焼け止め、パック、美容マスク、ハンドクリーム、オールインワンジェル、オールインワンクリーム等の化粧料として用いることが可能である。
【0042】
上記の各種剤形において、公知の成分や添加剤等を配合することが可能である。必要に応じて、通常使用される賦形剤（デンプン、デキストロース等）、香料、甘味料（甘草、ステビア等）、界面活性剤、増粘剤、酸化防止剤、保存剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、安定化剤、刺激軽減剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、着色剤、分散剤、酸味料等を配合し、公知の方法により適宜の製剤形態に調製することができる。
【0043】
［適用部位］
本発明の組成物が適用される部位は、肌が関与する部位であれば特に制限されず、例えば、顔、頭、首元、胸元、背中、腕、肘、手、腋窩部、腹部、臀部、脚、指、足先及び足裏からなる群より選択される少なくとも１種であり得る。
本発明の組成物が適用される部位は、肌が関与する部位であれば特に制限されず、例えば、顔、頭、首元、胸元、背中、腕、肘、手、腋窩部、腹部、臀部、脚、指、足先及び足裏からなる群より選択される少なくとも１種であり得る。
【0044】
［適用対象者］
本発明の組成物が適用される対象者は、皮膚の弾力性が問題となる、又は、問題となり得る対象者であれば、特に制限されない。適用対象者は、肌が未成熟であったり、おむつ等の外的刺激によるお尻かぶれが生じやすい新生児（生後２８日まで）、乳児（生後２８日以降、１歳未満）、幼児（１歳から就学前まで）であっても良く、肌荒れを生じやすい思春期（１０歳頃から１８歳頃）や青年期（１５歳頃から３０歳頃）であっても良く、顔等の敏感肌が気になる年代（１５歳頃以上）であっても良く、中年齢者（４５歳頃以上５５歳未満）や高年齢者（５５歳以上）であっても良い。また、年齢に限らず、生活環境等によって肌構造の不調や肌構造の乱れが生じやすい方にも適用可能である。
本発明の組成物が適用される対象者は、皮膚の弾力性が問題となる、又は、問題となり得る対象者であれば、特に制限されない。適用対象者は、肌が未成熟であったり、おむつ等の外的刺激によるお尻かぶれが生じやすい新生児（生後２８日まで）、乳児（生後２８日以降、１歳未満）、幼児（１歳から就学前まで）であっても良く、肌荒れを生じやすい思春期（１０歳頃から１８歳頃）や青年期（１５歳頃から３０歳頃）であっても良く、顔等の敏感肌が気になる年代（１５歳頃以上）であっても良く、中年齢者（４５歳頃以上５５歳未満）や高年齢者（５５歳以上）であっても良い。また、年齢に限らず、生活環境等によって肌構造の不調や肌構造の乱れが生じやすい方にも適用可能である。
【0045】
［遺伝子発現促進剤］
別の実施形態において、本発明は、（Ａ）成分を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤を提供することも可能である。
別の実施形態において、本発明は、（Ａ）成分を有効成分として含有する、トランスグルタミナーゼ、フィラグリン、クローディン、ＥＧＦ、スフィンゴミエリナーゼ、及び、ＰＰＡＲからなる群より選択される少なくとも１種のタンパク質の遺伝子発現促進剤を提供することも可能である。
【0046】
トランスグルタミナーゼは、インボルクリンやロリクリン等の複数のタンパク質を架橋する酵素である。この架橋により、角質細胞を包む不溶性の細胞膜様構造体であるコーニファイドエンベロープが形成、成熟し、肌のバリア機能や水分保持能の維持又は向上に繋がる。
【0047】
フィラグリンは、角質層においてケラチンフィラメントの凝集効率を高めることで角質層の内部構造を強くする。また、フィラグリンの分解により生じたアミノ酸は天然保湿因子の主成分となることから、水分の維持にも必要不可欠なタンパク質である。
【0048】
クロ―ディンは、タイトジャンクションの形成に関わる主要なタンパク質である。上皮細胞外でクロ―ディン同士が結合することでタイトジャンクションストランドが形成され、体内と外部環境を隔絶して生体内の恒常性が確保される。
【0049】
ＥＧＦ（上皮成長因子）は、角化細胞の細胞増殖を促すタンパク質であり、新陳代謝を加速させることで肌のターンオーバーを正常化する。
【0050】
スフィンゴミエリナーゼは、セラミドの前駆体の一つであるスフィンゴミエリンからセラミドを産生する酵素である。セラミドは脂肪酸、コレステロール等と細胞間脂質を形成し、角質細胞間の隙間を埋めることでバリア機能を強固にする。
【0051】
ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）は、ステロイドホルモン受容体ファミリーに属し，糖・脂質代謝に関与する核内受容体型転写因子である。ＰＰＡＲはα、γ、β/δの３種類のサブタイプが確認されており、その中でも、ＰＰＡＲβ／δは、ケラチノサイトの増殖や皮膚炎症さらには表皮のバリア機能を制御する。
【0052】
（Ａ）成分は、上記遺伝子の発現を促進することにより、各遺伝子が関与する機能性を向上させることが可能となる。遺伝子発現促進剤として用いる場合の（Ａ）成分の含有量、製剤形態、適用方法、適用部位、適用対象者等は、［肌の弾力の維持又は向上用組成物］の項目にて上述したものと同様である。
【実施例0053】
次に、実施例や試験例により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例や試験例に限定されるものではない。
【0054】
［試験例１．エチルα－Ｄ－グルコシドの塗布試験］
２４歳～５５歳の健常者７名（男性４名、女性３名）を被験者とした。図１の模式図に示すように、腕の先端から順に測定区画１～４を設定し、左１及び２、右３´及び４´に１つ目の試料、左３及び４、右１´及び２´に２つ目の試料をゼロタイム測定日から４週間、毎日朝晩２回塗布した。
２４歳～５５歳の健常者７名（男性４名、女性３名）を被験者とした。図１の模式図に示すように、腕の先端から順に測定区画１～４を設定し、左１及び２、右３´及び４´に１つ目の試料、左３及び４、右１´及び２´に２つ目の試料をゼロタイム測定日から４週間、毎日朝晩２回塗布した。
【0055】
コントロール区には蒸留水を、エチルα－Ｄ－グルコシド塗布区には２質量％のエチルα－Ｄ－グルコシド（富士フィルム和光純薬社製）溶液を０．１ｍｌ／２０ｃｍ２塗布した。
【0056】
測定条件は以下のとおりである。
・測定環境：温度２０±１℃、湿度５０±５％
・測定環境への馴化：測定部を洗浄後、水気を拭き取り、測定環境下で２０分待機
・測定箇所：上記で設定した測定区画１～４及び１´～４´を１箇所につき３点測定
・測定項目：皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）
・測定環境：温度２０±１℃、湿度５０±５％
・測定環境への馴化：測定部を洗浄後、水気を拭き取り、測定環境下で２０分待機
・測定箇所：上記で設定した測定区画１～４及び１´～４´を１箇所につき３点測定
・測定項目：皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）
【0057】
測定機器として使用したＣｕｔｏｍｅｔｅｒ（Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ社製）は、皮膚表面を一定の吸引圧及び時間で陰圧にすることで、プローブ開口部に引き込み、開口部に引き込まれた皮膚長を、プリズムを用いて測定することで皮膚粘弾性を評価するものである。この方法は、肌の弾力性を測定する一般的な評価法として国内外で広く用いられている。
【0058】
Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒによる皮膚の変位量の経時的なチャートの代表例を図２に示す。図２において、Ｕｆは吸引時最大の皮膚の伸び、Ｕｅは即時的な皮膚の伸び、Ｕｒは即時的な収縮、Ｕａは吸引解放時最大の皮膚の戻りを示す。「肌の弾力性」の指標として用いられるパラメータは下記表１に示す３つである。
【0059】
【表1】
【0060】
それぞれＲ２、Ｒ５、Ｒ７の値は、１に近いほど肌の弾力性が高いとされる。
Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７の測定結果を、それぞれ図３、４、５に示す。各図中、有意差検定を行った結果は、以下の様に示す。
＃ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＃＃：ｐ＜０．０１ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７の測定結果を、それぞれ図３、４、５に示す。各図中、有意差検定を行った結果は、以下の様に示す。
＃ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＃＃：ｐ＜０．０１ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
【0061】
図３に示す通り、総弾力性を示す指標であるＲ２では、試験開始後１週間で、エチルα－Ｄ－グルコシド塗布区の値がコントロール区を上回った。また、図３、４、５に示す通り、４週間後にＲ２、Ｒ５、Ｒ７すべての弾力性パラメータでエチルα－Ｄ－グルコシド塗布区の値がコントロール区を上回った。
【0062】
［試験例２．エチルα－Ｄ－グルコシドの飲用試験］
２４歳～５４歳の健常男性１５名を被験者とした。被験者１５名をエチルα－Ｄ－グルコシド摂取群８名（平均年齢３５．１歳）と、コントロール群７名（平均年齢３４．９歳）の２群に分けた。
２４歳～５４歳の健常男性１５名を被験者とした。被験者１５名をエチルα－Ｄ－グルコシド摂取群８名（平均年齢３５．１歳）と、コントロール群７名（平均年齢３４．９歳）の２群に分けた。
【0063】
（エチルα－Ｄ－グルコシド摂取群）
清酒濃縮液を１０倍希釈し、エチルα－Ｄ－グルコシド濃度を０．２５質量％にしたサンプルＡを毎晩１００ｍｌ飲用した。サンプルＡには、エチルα－Ｄ－グルコシドが１日の適用量として、２５０ｍｇ配合されており、α－ＧＧが１日の適用量として、２５ｍｇ配合されている。
清酒濃縮液を１０倍希釈し、エチルα－Ｄ－グルコシド濃度を０．２５質量％にしたサンプルＡを毎晩１００ｍｌ飲用した。サンプルＡには、エチルα－Ｄ－グルコシドが１日の適用量として、２５０ｍｇ配合されており、α－ＧＧが１日の適用量として、２５ｍｇ配合されている。
【0064】
（コントロール群）
清酒濃縮液を１０倍希釈した後、α－グルコシダーゼ「アマノ」ＳＤ（天野エンザイム社製）を用いて処理することによりエチルα－Ｄ－グルコシドやα－ＧＧを分解したサンプルＢを毎晩１００ｍｌ飲用した。
清酒濃縮液を１０倍希釈した後、α－グルコシダーゼ「アマノ」ＳＤ（天野エンザイム社製）を用いて処理することによりエチルα－Ｄ－グルコシドやα－ＧＧを分解したサンプルＢを毎晩１００ｍｌ飲用した。
【0065】
上記のサンプルＡ、及び、サンプルＢの処方は以下のとおりである。
【0066】
【表2】
【0067】
両群とも、試験期間はゼロタイム測定日から８週間であった。各被験者は、サンプル以外からエチルα－Ｄ－グルコシドを摂取しないよう、試験期間中は日本酒を飲まないこと、食事及び、運動量等の生活習慣を変更しないことに留意して試験を行った。
【0068】
測定条件は以下のとおりである。
・測定環境：温度２０±１℃、湿度５０±５％
・測定環境への馴化：測定部を洗浄後、水気を拭き取り、測定環境下で１５分待機
・測定箇所：左頬１区画及び両腕前腕内側各１区画
・測定項目：左頬１区画は皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）のみ、両腕各１区画については皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）及びコラーゲンスコア（ＤｅｒｍａＬａｂ）
・測定値：測定区画内を５箇所測定し、測定値の上下２点を除外した３点の平均値を採用
・測定環境：温度２０±１℃、湿度５０±５％
・測定環境への馴化：測定部を洗浄後、水気を拭き取り、測定環境下で１５分待機
・測定箇所：左頬１区画及び両腕前腕内側各１区画
・測定項目：左頬１区画は皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）のみ、両腕各１区画については皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）及びコラーゲンスコア（ＤｅｒｍａＬａｂ）
・測定値：測定区画内を５箇所測定し、測定値の上下２点を除外した３点の平均値を採用
【0069】
コラーゲンスコアの測定機器として使用したＤｅｒｍａＬａｂ（Ｃｏｒｔｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）は皮膚専用の超音波画像撮影装置で、超音波を皮膚表面に当てることで真皮のコラーゲン密度をコラーゲンスコアとして数値化できる機械である。コラーゲンスコアの値が大きいほど真皮中のコラーゲンが豊富で状態が良いとされる。
【0070】
弾力性の評価指標は、試験例１と同様であり、表１に示した通りである。左頬におけるＲ２、Ｒ５、Ｒ７の測定結果を、それぞれ図６、７、８に示す。また、両腕前腕内側におけるＲ２、Ｒ５、Ｒ７の測定結果を、それぞれ図９、１０、１１に示す。また、コラーゲン量による影響を確認するため、同試験期間中のコラーゲンスコアを測定した結果を図１２に示す。各図中、有意差検定を行った結果は、以下の様に示す。
＃ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＃＃：ｐ＜０．０１ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＊ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．コントロール群
＊＊：ｐ＜０．０１ ｖｓ．コントロール群
＃ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＃＃：ｐ＜０．０１ ｖｓ．０ｗｅｅｋ
＊ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．コントロール群
＊＊：ｐ＜０．０１ ｖｓ．コントロール群
【0071】
図６、７、８に示す通り、飲用開始から２週間後にはＲ２、Ｒ５、Ｒ７すべての弾力性パラメータでエチルα－Ｄ－グルコシド飲用区の値がコントロール区を上回った。試験例１で示した塗布試験だけでなく、飲用試験においても、比較的短期間で肌の弾力性の維持及び向上に顕著な効果を奏したことは予測を超える結果であった。
【0072】
特に顔の肌における弾力性の維持及び向上効果が認められたが、図９～１１に示すように腕においても肌の弾力性の維持及び向上効果が認められたため、エチルα－Ｄ－グルコシドの継続的な飲用によって、全身の肌へ影響することが示唆された。
【0073】
また、図１２に示すように、コラーゲンスコアの平均値が試験開始時より下降を続けたにもかかわらず、弾力性の各指標は増加傾向であったことから、エチルα－Ｄ－グルコシドによる肌の弾力性の維持及び向上効果は、コラーゲン量の増加に起因するものではないことが推測された。なお、試験期間が、季節の変わり目であったことから、コラーゲンスコアの平均値が試験開始時より下降を続けたものと推測され、本発明は、季節の変わり目にトラブルとなりやすい肌、例えば、敏感肌や、ゆらぎ肌に対して効果的であることが示された。
【0074】
［試験例３．肌改善に寄与する因子のｍＲＮＡ発現増強効果］
（細胞へのサンプル供試）
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ（ＮＢ）；クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で継代培養し、３代目の細胞を１２穴プレートに１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／２ｍｌ ｍｅｄｉｕｍ／ｗｅｌｌで播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で一晩インキュベートした。終濃度０．１％になるようにエチルα－Ｄ－グルコシドを添加したＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地（注１；分化試験用に改変）に交換し、４８時間培養した。コントロール区はエチルα－Ｄ－グルコシド溶液の代わりに水を添加した。
注１：正常ヒト表皮角化細胞用基本培地５００ｍｌに対し、ＢＰＥ２ｍｌ、ゲンタマイシン／アンフォテリシンＢ ０．５ｍｌのみ添加し、Ｃａ２＋濃度を１．５ｍＭに調製した。
（細胞へのサンプル供試）
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ（ＮＢ）；クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で継代培養し、３代目の細胞を１２穴プレートに１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／２ｍｌ ｍｅｄｉｕｍ／ｗｅｌｌで播種し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で一晩インキュベートした。終濃度０．１％になるようにエチルα－Ｄ－グルコシドを添加したＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地（注１；分化試験用に改変）に交換し、４８時間培養した。コントロール区はエチルα－Ｄ－グルコシド溶液の代わりに水を添加した。
注１：正常ヒト表皮角化細胞用基本培地５００ｍｌに対し、ＢＰＥ２ｍｌ、ゲンタマイシン／アンフォテリシンＢ ０．５ｍｌのみ添加し、Ｃａ２＋濃度を１．５ｍＭに調製した。
【0075】
（ＲＮＡ抽出）
培養終了後、ＰＢＳ（－）で２回洗浄し、ＦＡＳＴＧＥＮＥ ＲＮＡ ＢＡＳＩＣ ＫＩＴ（日本ジェネティクス社製）のＲＬ ｂｕｆｆｅｒを用いて細胞を回収し、添付マニュアルに従いトータルＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ濃度は ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）を用いて算出した。
培養終了後、ＰＢＳ（－）で２回洗浄し、ＦＡＳＴＧＥＮＥ ＲＮＡ ＢＡＳＩＣ ＫＩＴ（日本ジェネティクス社製）のＲＬ ｂｕｆｆｅｒを用いて細胞を回収し、添付マニュアルに従いトータルＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ濃度は ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）を用いて算出した。
【0076】
（逆転写及びリアルタイムＰＣＲ）
ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ Ｅｒａｓｅｒ（タカラバイオ社製）を用いて、添付マニュアルに従い逆転写反応を行った。リアルタイムＰＣＲはＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ ＩＩ（Ｔｌｉ ＲＮａｓｅＨ Ｐｌｕｓ）（タカラバイオ社製）を用いて、添付マニュアルに従って実施した。ハウスキーピング遺伝子にはＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）を使用し、ΔΔＣＴ法により相対定量を行った。コントロール区の各遺伝子発現を１としたときのエチルα－Ｄ－グルコシド供試区の遺伝子発現結果を表３及び図１３に示す。図中、有意差検定を行った結果は、以下の様に示す。
＊ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．コントロール区
ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ Ｅｒａｓｅｒ（タカラバイオ社製）を用いて、添付マニュアルに従い逆転写反応を行った。リアルタイムＰＣＲはＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ ＩＩ（Ｔｌｉ ＲＮａｓｅＨ Ｐｌｕｓ）（タカラバイオ社製）を用いて、添付マニュアルに従って実施した。ハウスキーピング遺伝子にはＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）を使用し、ΔΔＣＴ法により相対定量を行った。コントロール区の各遺伝子発現を１としたときのエチルα－Ｄ－グルコシド供試区の遺伝子発現結果を表３及び図１３に示す。図中、有意差検定を行った結果は、以下の様に示す。
＊ ：ｐ＜０．０５ ｖｓ．コントロール区
【0077】
【表3】
【0078】
表３及び図１３に示した通り、ヒト表皮角化細胞に対して、終濃度０．１％ エチルα－Ｄ－グルコシドを供することにより、上記６つの遺伝子の発現量が増加した。なお、結果は示していないが、構造上の類似性から、α－Ｄ－グルコピラノシルグリセロール類を用いた場合であっても、上記６つの遺伝子の発現量が高められることが推測される。
【0079】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、トランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の遺伝子発現を増加させることにより、コーニファイドエンベロープの形成や成熟を促進させ、肌のバリア機能や水分保持能の維持又は向上がもたらされる。
【0080】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、フィラグリン（ＦＬＧ）の遺伝子発現を増加させることにより、ケラチンフィラメントの凝集効率が高まり、角質層のバリア機能が強固になる。また、フィラグリンの分解により生じるアミノ酸は天然保湿因子の主成分となることから、皮膚の水分保持能の維持又は向上がもたらされる。
【0081】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、クロ―ディン（ＣＬＤ）の遺伝子発現を増加させることにより、タイトジャンクションストランドが形成され、肌のバリア機能の維持又は向上がもたらされる。
【0082】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、上皮成長因子（ＥＧＦ）の遺伝子発現を増加させることにより、角化細胞の細胞増殖が促され、肌のターンオーバーの正常化又は向上がもたらされる。
【0083】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、スフィンゴミエリナーゼ（ａＳＭａｓｅ）の遺伝子発現を増加させることにより、セラミドの前駆体の一つであるスフィンゴミエリンからセラミドを表皮細胞で産生させ、細胞間脂質の形成を促すことにより肌のバリア機能や水分保持能の維持又は向上がもたらされる。
【0084】
エチルα－Ｄ－グルコシド等の（Ａ）成分が、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体β／δ（ＰＰＡＲβ／δ）の遺伝子発現を増加させることにより、ケラチノサイトの増殖や皮膚炎症の改善、及び、肌のバリア機能の維持又は向上がもたらされる。
【0085】
［製造例１］
公知の方法によって製造したエチルα－Ｄ－グルコシドを約１質量％含む純米酒をロータリーエバポレーターで約１６倍まで濃縮することにより、ブリックス６３度（ＢＸ６３°）、エチルα－Ｄ－グルコシド１５質量％の濃縮液を得た。このように、公知の濃縮方法を用いることにより、エチルα－Ｄ－グルコシドの濃度を高めることが可能であり、上記試験例で示した作用効果を顕著に奏することが可能である。製造例１の濃縮液において、α－ＧＧは約１．５質量％で含有されていた。
公知の方法によって製造したエチルα－Ｄ－グルコシドを約１質量％含む純米酒をロータリーエバポレーターで約１６倍まで濃縮することにより、ブリックス６３度（ＢＸ６３°）、エチルα－Ｄ－グルコシド１５質量％の濃縮液を得た。このように、公知の濃縮方法を用いることにより、エチルα－Ｄ－グルコシドの濃度を高めることが可能であり、上記試験例で示した作用効果を顕著に奏することが可能である。製造例１の濃縮液において、α－ＧＧは約１．５質量％で含有されていた。
【0086】
［製造例２］
製造例１におけるエチルα－Ｄ－グルコシド１５質量％の濃縮液では、Ｇｌｃ（グルコース）は１６．５質量％であり、Ｇｌｃ／αＥＧの比率は、約１．１となる。限定はされないが、グルコースを除去し、更にロータリーエバポレーターで濃縮することにより、エチルα－Ｄ－グルコシドが約３０質量％の濃縮液を製造することが可能である。製造例２の濃縮液において、α－ＧＧは約３質量％で含有されていた。
製造例１におけるエチルα－Ｄ－グルコシド１５質量％の濃縮液では、Ｇｌｃ（グルコース）は１６．５質量％であり、Ｇｌｃ／αＥＧの比率は、約１．１となる。限定はされないが、グルコースを除去し、更にロータリーエバポレーターで濃縮することにより、エチルα－Ｄ－グルコシドが約３０質量％の濃縮液を製造することが可能である。製造例２の濃縮液において、α－ＧＧは約３質量％で含有されていた。
【0087】
［製造例３］
公知の方法によって製造したエチルα－Ｄ－グルコシドを約０．３質量％含む純米酒をロータリーエバポレーターで濃縮することにより、エチルα－Ｄ－グルコシドが約４質量％の濃縮液を製造した。製造例３の濃縮液において、α－ＧＧは約０．４質量％で含有されていた。
公知の方法によって製造したエチルα－Ｄ－グルコシドを約０．３質量％含む純米酒をロータリーエバポレーターで濃縮することにより、エチルα－Ｄ－グルコシドが約４質量％の濃縮液を製造した。製造例３の濃縮液において、α－ＧＧは約０．４質量％で含有されていた。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
