(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023095428
(43)【公開日】2023-07-06
(54)【発明の名称】エストラジオール定量用のイムノクロマト測定キット
(51)【国際特許分類】
G01N 33/543 20060101AFI20230629BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20230629BHJP
【ＦＩ】
G01N33/543 521
G01N33/53 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021211307
(22)【出願日】2021-12-24
(71)【出願人】
【識別番号】000003160
【氏名又は名称】東洋紡株式会社
(72)【発明者】
【氏名】山口 達哉
(57)【要約】
【課題】 本発明は、馬の生産現場において生体試料中のエストラジオール濃度を高感度かつ、迅速、簡便に測定可能なイムノクロマト測定キットを提供する。
【解決手段】 本発明は、生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キットである。
【選択図】なし
【解決手段】 本発明は、生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キットである。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、
前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、
前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、
前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キット。
前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、
前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、
前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キット。
【請求項2】
前記競合試薬は、エストラジオールとビオチンとの複合体であることを特徴とする請求項１に記載の測定キット。
【請求項3】
前記ランタノイドは、ユウロピウム、テルビウム、サマリウム、またはジスプロシウム、あるいはそれらの組み合わせである、請求項１または２に記載の測定キット。
【請求項4】
前記抗ＩｇＧ抗体は、抗マウスＩｇＧ抗体、抗ウサギＩｇＧ抗体および抗モルモットＩｇＧ抗体からなる群から選ばれる１以上であることを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の測定キット。
【請求項5】
前記生体試料は、唾液、鼻汁、全血、血漿または血清であることを特徴とする請求項１～４のいずれかに記載の測定キット。
【請求項6】
馬の妊娠状態を判定するために用いられる、請求項１～５のいずれかに記載の測定キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットに関する。より詳しくは、生体試料（検体）を希釈するための検体希釈液、競合試薬およびイムノクロマトストリップからなる、生体試料中のエストラジオールを定量するための測定キットに関する。
【背景技術】
【0002】
日本は世界第５位のサラブレッド（競走馬）生産国である（２００８年）。サラブレッド生産においては、先ず、健康で丈夫な子馬を生産することが非常に重要である。馬の妊娠期間は１１か月であり、生産者は１年に１産を目指すこととなるが、交配しても不受胎に終わることも多く、また、受胎しても妊娠中に胚や胎子の死滅が５～１５％の発生率で起こることが大きな問題となっている（非特許文献１、非特許文献２）。万一、早期胚死滅があった場合でも、プロスタグランジンＦ２α投与による黄体退行処置をとることが出来れば、再発情を誘発し、同一シーズン内に再交配を行うことが可能となる。従って、交配後、早期に妊娠状態を把握することは、サラブレッド生産において極めて重要である。
【0003】
馬の妊娠診断法としては超音波診断が最も一般的であるが、熟練した獣医師が行う必要があり、また、高価な超音波診断装置が必要である。一方で、妊娠馬の血液中エストラジオール濃度を調べることにより、馬の妊娠状態（胎児の成長）を評価することが知られている。しかし、エストラジオールの測定法は、ガスクロマトグラフィーや、化学発光免疫測定法などであり、煩雑な操作や多大な時間がかかる問題がある。
【0004】
また、特許文献１、２には、尿中のエストラジオールをイムノクロマトストリップを用いて測定する技術が開示されている。
【0005】
しかし、血中などのエストラジオール濃度は変動が大きく、一回の検査値で妊娠状態を予測することは難しい。頻回検査を行うことが好ましいが、頻回の採血は馬や獣医師に負担がかかることとなる。そのため、侵襲性の低い方法、即ち、簡便に採取可能な唾液などの生体試料中のエストラジオール濃度を簡便に測定できることが好ましいが、唾液のように夾雑物が多く、粘性が高い試料は高倍率に希釈する必要がある。このため、極めて低濃度のエストラジオールを高感度かつ簡便に定量できる技術が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】日本獣医師会雑誌、２００８、６２：６３０－６３５
【非特許文献2】Ｈｉｐｐｏｐｈｉｌｅ、２０１２、４９：３４－４１
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開平１０－１１５６１４号公報
【特許文献2】特表平０８－５００６７０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は、上記問題点を解決するために案出されたもので、唾液中などに存在するエストラジオール濃度を高感度かつ迅速に測定し、馬の妊娠や胎児の成長の有無を容易に判定することができる妊娠診断キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者は、前記課題を解決するために鋭意検討した結果、以下に示す手段により前記課題を解決できることを見出し、本発明に到達した。
【0010】
すなわち、本発明は、以下の構成からなる。
（１） 生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、
前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、
前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、
前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キット。
（２） 前記競合試薬は、エストラジオールとビオチンとの複合体であることを特徴とする（１）に記載の測定キット。
（３） 前記ランタノイドは、ユウロピウム、テルビウム、サマリウム、またはジスプロシウム、あるいはそれらの組み合わせである、（１）または（２）に記載の測定キット。
（４） 前記抗ＩｇＧ抗体は、抗マウスＩｇＧ抗体、抗ウサギＩｇＧ抗体および抗モルモットＩｇＧ抗体からなる群から選ばれる１以上であることを特徴とする（１）～（３）のいずれかに記載の測定キット。
（５） 前記生体試料は、唾液、鼻汁、全血、血漿または血清であることを特徴とする（１）～（４）のいずれかに記載の測定キット。
（６） ウマの妊娠状態を判定するために用いられる、（１）～（５）のいずれかに記載の測定キット。
（１） 生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、
前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、
前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、
前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キット。
（２） 前記競合試薬は、エストラジオールとビオチンとの複合体であることを特徴とする（１）に記載の測定キット。
（３） 前記ランタノイドは、ユウロピウム、テルビウム、サマリウム、またはジスプロシウム、あるいはそれらの組み合わせである、（１）または（２）に記載の測定キット。
（４） 前記抗ＩｇＧ抗体は、抗マウスＩｇＧ抗体、抗ウサギＩｇＧ抗体および抗モルモットＩｇＧ抗体からなる群から選ばれる１以上であることを特徴とする（１）～（３）のいずれかに記載の測定キット。
（５） 前記生体試料は、唾液、鼻汁、全血、血漿または血清であることを特徴とする（１）～（４）のいずれかに記載の測定キット。
（６） ウマの妊娠状態を判定するために用いられる、（１）～（５）のいずれかに記載の測定キット。
【発明の効果】
【0011】
本発明により、馬の生産現場において生体試料（唾液など）中のエストラジオール濃度を高感度かつ迅速、簡便に測定することが可能なエストラジオール定量用のイムノクロマト測定キットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】本発明の測定キットに含まれるイムノクロマトストリップの一例を示す模式図（上面図）である。
【図2】本発明の測定キットに含まれるイムノクロマトストリップの一例を示す模式図（側面図）である。
【図3】本発明の測定キットに含まれるイムノクロマトストリップをハウジングケースに収容した一例を示す模式図である。
【図4】本発明のイムノクロマト測定キットを用いて得られたエストラジオールの測定結果の一例を示す図である。
【図5】本発明のイムノクロマト測定キットおよび電気化学発光免疫測定法による測定値の関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下、本発明を詳細に説明する。
【0014】
本発明は、生体試料中のエストラジオールを定量するためのイムノクロマト測定キットであって、前記生体試料を希釈するための検体希釈液、競合試薬、およびイムノクロマトストリップを含み、前記イムノクロマトストリップは、試料添加部材、含浸部材、膜担体、吸収部材が順に連接配置されてなり、前記含浸部材には、ランタノイド錯体で標識された抗ビオチン抗体またはアビジンまたはストレプトアビジンが含浸されており、前記膜担体は、抗ＩｇＧ抗体が固定化されたテストラインを備えることを特徴とする測定キットである。
【0015】
（生体試料）
本発明において、生体試料は、特に限定されるものではないが、唾液、鼻汁、血液（全血でも血清でも血漿でもよい）、尿等が適している。動物種も、ウマの他、ヒト、ウシ、イヌ、ネコなどの血液を測定対象とすることが出来る。
本発明において、生体試料は、特に限定されるものではないが、唾液、鼻汁、血液（全血でも血清でも血漿でもよい）、尿等が適している。動物種も、ウマの他、ヒト、ウシ、イヌ、ネコなどの血液を測定対象とすることが出来る。
【0016】
（エストラジオール）
エストロゲンは、代表的な女性性ステロイドホルモンであり、標的臓器の細胞質内レセプターと結合して作用する。エストロゲンは多種確認されているが、エストロン、エストラジオール、エストリオールの３つが主となっている。このうち、エストラジオールは、生理活性が最も高く、特に重要なホルモンである。エストラジオールは、主として卵巣から産生される。また、妊娠中は胎子・胎盤から大量に分泌されるとされ、妊娠の維持や胎子の発育に重要な作用を持つと考えられている。
エストロゲンは、代表的な女性性ステロイドホルモンであり、標的臓器の細胞質内レセプターと結合して作用する。エストロゲンは多種確認されているが、エストロン、エストラジオール、エストリオールの３つが主となっている。このうち、エストラジオールは、生理活性が最も高く、特に重要なホルモンである。エストラジオールは、主として卵巣から産生される。また、妊娠中は胎子・胎盤から大量に分泌されるとされ、妊娠の維持や胎子の発育に重要な作用を持つと考えられている。
【0017】
（ランタノイド）
ランタノイド（Ｌｎ）とは、周期表で第６周期第３族に位置する１５個の金属元素の総称である。これらの金属は他の分子との複合体（錯体）を形成したときに強い蛍光を発するが、その蛍光は、通常の有機化合物の蛍光に比べて、水中で約１万倍から１０万倍という長い蛍光寿命を持つことが大きな特徴である。ランタノイド錯体の蛍光プローブを用いれば、励起光を照射した後に一定の時間を置いて（余分な蛍光が減衰してから）測定を開始することにより、高いＳ／Ｎ比で測定することが出来る。これは時間分解測定と呼ばれる。
ランタノイド（Ｌｎ）とは、周期表で第６周期第３族に位置する１５個の金属元素の総称である。これらの金属は他の分子との複合体（錯体）を形成したときに強い蛍光を発するが、その蛍光は、通常の有機化合物の蛍光に比べて、水中で約１万倍から１０万倍という長い蛍光寿命を持つことが大きな特徴である。ランタノイド錯体の蛍光プローブを用いれば、励起光を照射した後に一定の時間を置いて（余分な蛍光が減衰してから）測定を開始することにより、高いＳ／Ｎ比で測定することが出来る。これは時間分解測定と呼ばれる。
【0018】
（ランタノイド標識）
ランタノイド錯体は、蛍光標識物質として抗体などのタンパク質に結合させることが出来る。例えば、市販の標識体作成のためのキット（ＱｕｉｃｋＡＬＬＡｓｓａｙＴＭユーロピウムキレートラベリングキット、ＢＮｐａｎｄｓ、Ｗ１０２４）などを利用することが出来る。キットを利用して、例えば、ユウロピウム錯体標識した抗ビオチン抗体を作製することが出来る。
ランタノイド錯体は、蛍光標識物質として抗体などのタンパク質に結合させることが出来る。例えば、市販の標識体作成のためのキット（ＱｕｉｃｋＡＬＬＡｓｓａｙＴＭユーロピウムキレートラベリングキット、ＢＮｐａｎｄｓ、Ｗ１０２４）などを利用することが出来る。キットを利用して、例えば、ユウロピウム錯体標識した抗ビオチン抗体を作製することが出来る。
【0019】
（蛍光強度測定）
前述のように、ランタノイドは、通常の蛍光物質と比較して蛍光寿命が非常に長いという特徴がある。この特徴を利用した時間分解測定では、通常の蛍光が消光した後に測定を開始し、一定時間内の蛍光強度の測定を行う。更に、ランタノイドはストークスシフト（ユウロピウムの場合は、励起波長３４０ｎｍ，蛍光波長６１５ｎｍ）が非常に広いという特徴も持ち合わせているため、バックグラウンドの影響を最小限に抑えることができる。本発明の測定キットの蛍光強度測定には、ユウロピウムの時間分解測定に対応したイムノクロマトリーダーなどが好適に利用出来る。
前述のように、ランタノイドは、通常の蛍光物質と比較して蛍光寿命が非常に長いという特徴がある。この特徴を利用した時間分解測定では、通常の蛍光が消光した後に測定を開始し、一定時間内の蛍光強度の測定を行う。更に、ランタノイドはストークスシフト（ユウロピウムの場合は、励起波長３４０ｎｍ，蛍光波長６１５ｎｍ）が非常に広いという特徴も持ち合わせているため、バックグラウンドの影響を最小限に抑えることができる。本発明の測定キットの蛍光強度測定には、ユウロピウムの時間分解測定に対応したイムノクロマトリーダーなどが好適に利用出来る。
【0020】
（検体希釈液）
本発明において、検体希釈液は、所定のｐＨ範囲において充分な緩衝能力を有していれば、いかなる種類の緩衝剤を用いてもよく、例えば、トリス、リン酸、フタル酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、ホウ酸、酒石酸、酢酸、炭酸、グッドバッファー（ＭＥＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、コラミン塩酸、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、アセトアミドグリシン、トリシン、グリシンアミド、ビシン）等が挙げられる。
本発明において、検体希釈液は、所定のｐＨ範囲において充分な緩衝能力を有していれば、いかなる種類の緩衝剤を用いてもよく、例えば、トリス、リン酸、フタル酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、ホウ酸、酒石酸、酢酸、炭酸、グッドバッファー（ＭＥＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、コラミン塩酸、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、アセトアミドグリシン、トリシン、グリシンアミド、ビシン）等が挙げられる。
【0021】
本発明において、検体希釈液は、イムノクロマトストリップ上での生体試料の展開性を向上させ、かつ免疫反応に影響しない非イオン性界面活性剤を含むことが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アルキルグルコシド、ショ糖脂肪酸エステル等が挙げられる。また、前記界面活性剤は単独で用いても二種以上を組み合わせて用いてもよい。また、検体希釈液中の界面活性剤の濃度は、生体試料の希釈倍率にもよるが０．０１質量％以上０．２質量％以下が好ましく、０．０５質量％以上０．２質量％以下がより好ましく、０．０５質量％以上０．１５質量％以下がさらに好ましい。濃度が低すぎると、生体試料希釈液が展開しにくくなることがあり、濃度が高すぎると、テストラインのシグナルが低くなることがある。
【0022】
また、検体希釈液は、競合反応の効率化、促進、特異性向上のために、ポリエチレングリコールおよび／または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。検体希釈液へのポリエチレングリコール、塩化ナトリウムの添加濃度は、生体試料希釈液中の終濃度がそれぞれ、１質量％以上４質量％以下、１質量％以上３質量％以下となるように添加するのが好ましい。なお、使用するポリエチレングリコールの数平均分子量は、好ましくは２０００以上１６０００以下であり、より好ましくは５０００以上１００００以下である。数平均分子量が小さい場合、本発明に適した充分な抗原抗体反応の促進作用が得られないことがある。また、数平均分子量が大きい場合、同様に、抗原抗体反応の促進作用が得られないとか、検体希釈液の粘性が高くなり、イムノクロマトストリップ上の展開性が低下することがある。
【0023】
（競合試薬）
本発明において、競合試薬は、生体試料中の遊離またはタンパク質に結合した状態のエストラジオールと競合することが出来、かつ標識体（物質）により検出が可能であるものが良く、競合試薬としては、エストラジオールとビオチンとの複合体を用いるのが好ましい。複合体とすることによりエストラジオールが安定し、また性能の良い抗体が入手し易いことから好ましい。詳細な理由は不明だが、エストラジオールと低分子量であるビオチンとの複合体は、エストラジオールとアルブミン等の高分子量物質との複合体よりも、生体試料中のエストラジオールに対して競合原理が働きやすいと推測している。また、エストラジオールと低分子量物質との複合体は、エストラジオールと牛血清アルブミンなどのタンパク質（高分子量物質）との複合体よりも製造コストを低く抑えられるメリットもある。
本発明において、競合試薬は、生体試料中の遊離またはタンパク質に結合した状態のエストラジオールと競合することが出来、かつ標識体（物質）により検出が可能であるものが良く、競合試薬としては、エストラジオールとビオチンとの複合体を用いるのが好ましい。複合体とすることによりエストラジオールが安定し、また性能の良い抗体が入手し易いことから好ましい。詳細な理由は不明だが、エストラジオールと低分子量であるビオチンとの複合体は、エストラジオールとアルブミン等の高分子量物質との複合体よりも、生体試料中のエストラジオールに対して競合原理が働きやすいと推測している。また、エストラジオールと低分子量物質との複合体は、エストラジオールと牛血清アルブミンなどのタンパク質（高分子量物質）との複合体よりも製造コストを低く抑えられるメリットもある。
【0024】
なお、ビオチンと複合体を形成したエストラジオールは不安定な化合物であり、光や熱によって二重結合の異性化が起こりやすく、また酸や空気、金属イオンとも反応しやすいため容易に分解してしまう畏れがある。そのため、競合試薬は低温、暗所にて使用時まで保存するのが好ましい。保存温度としては４℃以下が好ましく、－２０℃以下がより好ましく、－８０℃以下がさらに好ましい。
【0025】
本発明において、生体試料１ｍＬに対して競合試薬を０．１ｐｇ以上１０ｎｇ以下添加するのが好ましい。生体試料中のエストラジオール濃度と競合試薬の添加量の差が大きすぎると競合が上手くいかず定量性が低下することがある。なお、競合試薬は凍結乾燥等されたものを用いてもよいし、溶液の状態であってもよい。
【0026】
（標識抗体）
本発明において、標識抗体は、競合試薬中の化合物に対する抗体、および／または高親和性物質に標識物質を結合させて得ることが出来る。抗体は、競合試薬中の化合物に対する抗体であればよく、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよいが、反応特異性の観点からモノクローナル抗体であることが好ましい。例えば、抗ビオチン抗体が挙げられる。また、高親和性物質としては、例えば化合物がビオチンの場合、アビジンやストレプトアビジンが好適に用いられる。
本発明において、標識抗体は、競合試薬中の化合物に対する抗体、および／または高親和性物質に標識物質を結合させて得ることが出来る。抗体は、競合試薬中の化合物に対する抗体であればよく、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよいが、反応特異性の観点からモノクローナル抗体であることが好ましい。例えば、抗ビオチン抗体が挙げられる。また、高親和性物質としては、例えば化合物がビオチンの場合、アビジンやストレプトアビジンが好適に用いられる。
【0027】
（希釈倍率）
本発明において、生体試料の希釈倍率は、５０倍～１０００倍とするのが適当である。希釈倍率が低すぎると、生体試料中の夾雑物質が定量値に影響を与えることがある。また、希釈倍率が高すぎると、生体試料中のエストラジオール量が少なくなるため、測定の精度が低くなることがある。
本発明において、生体試料の希釈倍率は、５０倍～１０００倍とするのが適当である。希釈倍率が低すぎると、生体試料中の夾雑物質が定量値に影響を与えることがある。また、希釈倍率が高すぎると、生体試料中のエストラジオール量が少なくなるため、測定の精度が低くなることがある。
【0028】
（イムノクロマトストリップ）
イムノクロマトストリップの具体例としては、図１、２に示すようなイムノクロマトストリップ８が挙げられる。図１、２において、１は粘着シート、２は含浸部材、３は膜担体、４はテストライン、５はコントロールライン、６は試料添加部材、７は吸収部材を示している。膜担体３は、幅５ｍｍ、長さ２５ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース製メンブレンからなり、同じく幅５ｍｍの粘着シート１の中ほどに貼り付けられている。膜担体３には、クロマト展開の始点側、すなわち図１、２の左側（上流側）の末端から右側（下流側）に向かって３ｍｍ以上１５ｍｍ以下の位置に、抗エストラジオール抗体を捕捉するためのテストライン４が形成（抗マウスＩｇＧ抗体または抗ウサギＩｇＧ抗体または抗モルモットＩｇＧ抗体が線状に固定）されている。さらに、膜担体３の上流側の末端から下流側に向かって８ｍｍ以上２５ｍｍ以下の位置にコントロールライン５が形成（ランタノイド）標識抗体を特異的に結合する抗体が線状に固定）されている。なお、テストラインはコントロールラインよりも上流側に位置し配置され、テストラインとコントロールラインとの距離は３ｍｍ以上１０ｍｍ未満とするのが好ましい。コントロールライン５は、分析対象物質であるエストラジオールの存否に係わらずイムノクロマト展開が行われたことを確認するためのものである。
イムノクロマトストリップの具体例としては、図１、２に示すようなイムノクロマトストリップ８が挙げられる。図１、２において、１は粘着シート、２は含浸部材、３は膜担体、４はテストライン、５はコントロールライン、６は試料添加部材、７は吸収部材を示している。膜担体３は、幅５ｍｍ、長さ２５ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース製メンブレンからなり、同じく幅５ｍｍの粘着シート１の中ほどに貼り付けられている。膜担体３には、クロマト展開の始点側、すなわち図１、２の左側（上流側）の末端から右側（下流側）に向かって３ｍｍ以上１５ｍｍ以下の位置に、抗エストラジオール抗体を捕捉するためのテストライン４が形成（抗マウスＩｇＧ抗体または抗ウサギＩｇＧ抗体または抗モルモットＩｇＧ抗体が線状に固定）されている。さらに、膜担体３の上流側の末端から下流側に向かって８ｍｍ以上２５ｍｍ以下の位置にコントロールライン５が形成（ランタノイド）標識抗体を特異的に結合する抗体が線状に固定）されている。なお、テストラインはコントロールラインよりも上流側に位置し配置され、テストラインとコントロールラインとの距離は３ｍｍ以上１０ｍｍ未満とするのが好ましい。コントロールライン５は、分析対象物質であるエストラジオールの存否に係わらずイムノクロマト展開が行われたことを確認するためのものである。
【0029】
（試料添加部材）
本発明において、試料添加部材６は、例えば、多孔質ポリエチレンおよび多孔質ポリプロピレンなどのような多孔質合成樹脂のシートまたはフィルム、あるいは、濾紙および綿布などのようなセルロース製の紙または不織布などを用いることができる。
本発明において、試料添加部材６は、例えば、多孔質ポリエチレンおよび多孔質ポリプロピレンなどのような多孔質合成樹脂のシートまたはフィルム、あるいは、濾紙および綿布などのようなセルロース製の紙または不織布などを用いることができる。
【0030】
（含浸部材）
本発明において、含浸部材２は、５ｍｍ×１５ｍｍの帯状のガラス繊維を用いるが、これに限定されるものではなく、例えば、濾紙、ニトロセルロース膜、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラスチック不織布なども使用できる。含浸部材２は、ランタノイド錯体で標識された抗体またはアビジン／ストレプトアビジンを含む溶液を前記ガラス繊維等の部材に含浸せしめ、これを乾燥させることなどによって作製できる。
本発明において、含浸部材２は、５ｍｍ×１５ｍｍの帯状のガラス繊維を用いるが、これに限定されるものではなく、例えば、濾紙、ニトロセルロース膜、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラスチック不織布なども使用できる。含浸部材２は、ランタノイド錯体で標識された抗体またはアビジン／ストレプトアビジンを含む溶液を前記ガラス繊維等の部材に含浸せしめ、これを乾燥させることなどによって作製できる。
【0031】
（膜担体）
本発明において、膜担体３は、ニトロセルロース製メンブレンフィルターを用いるが、生体試料に含まれるエストラジオールをクロマト展開可能で、かつ、テストライン４を形成する抗体等の物質を固定可能なものであれば、いかなるものであってもよく、他のセルロース類膜、ナイロン膜、ガラス繊維膜なども使用できる。
本発明において、膜担体３は、ニトロセルロース製メンブレンフィルターを用いるが、生体試料に含まれるエストラジオールをクロマト展開可能で、かつ、テストライン４を形成する抗体等の物質を固定可能なものであれば、いかなるものであってもよく、他のセルロース類膜、ナイロン膜、ガラス繊維膜なども使用できる。
【0032】
（テストライン）
本発明において、テストライン４に固定化する抗体は、マウスＩｇＧまたはウサギＩｇＧまたはモルモットＩｇＧに特異的に結合することが出来る抗体、即ち、抗マウスＩｇＧ抗体または抗ウサギＩｇＧ抗体または抗モルモットＩｇＧ抗体であればよく、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、反応特異性の観点から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
本発明において、テストライン４に固定化する抗体は、マウスＩｇＧまたはウサギＩｇＧまたはモルモットＩｇＧに特異的に結合することが出来る抗体、即ち、抗マウスＩｇＧ抗体または抗ウサギＩｇＧ抗体または抗モルモットＩｇＧ抗体であればよく、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、反応特異性の観点から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【0033】
（抗エストラジオール抗体）
エストラジオール（分子量２７２）は低分子化合物であり十分な複雑性を備えていないため、通常では免疫応答を誘発できない。このため、免疫した動物に抗体を産出させるには、卵白アルブミンなどのキャリアタンパク質にエストラジオールを化学結合したものを免疫原として用いる必要がある。また、アジュバントを混合して免疫原を注入すると、免疫応答強度が上がり、よい抗体を得られる可能性が高まる。ポリクローナル抗体は、ウサギやマウスなどに免疫して得られた抗血清から精製して得ることが出来る。モノクローナル抗体の産生細胞は、例えば、エストラジオールと卵白アルブミンの結合物を適当なアジュバントとともにマウスのような動物に免疫したのち、免疫された動物の脾細胞とミエローマ細胞とを融合し、融合細胞のみが増殖出来る選択培地で培養し、増殖した細胞を前記エストラジオールとの結合物などを使用して、たとえば酵素標識免疫法などを利用して選別することにより取得することができる。
エストラジオール（分子量２７２）は低分子化合物であり十分な複雑性を備えていないため、通常では免疫応答を誘発できない。このため、免疫した動物に抗体を産出させるには、卵白アルブミンなどのキャリアタンパク質にエストラジオールを化学結合したものを免疫原として用いる必要がある。また、アジュバントを混合して免疫原を注入すると、免疫応答強度が上がり、よい抗体を得られる可能性が高まる。ポリクローナル抗体は、ウサギやマウスなどに免疫して得られた抗血清から精製して得ることが出来る。モノクローナル抗体の産生細胞は、例えば、エストラジオールと卵白アルブミンの結合物を適当なアジュバントとともにマウスのような動物に免疫したのち、免疫された動物の脾細胞とミエローマ細胞とを融合し、融合細胞のみが増殖出来る選択培地で培養し、増殖した細胞を前記エストラジオールとの結合物などを使用して、たとえば酵素標識免疫法などを利用して選別することにより取得することができる。
【0034】
（コントロールライン）
本発明において、コントロールライン５には、標識抗体中の抗体を特異的に結合する抗体が固定化されているのが好ましい。前記抗体としては、抗ＩｇＧ抗体を用いることができ、具体的には、例えば抗ビオチン抗体がヤギ由来であれば、抗ヤギＩｇＧ抗体を膜担体に固定化することによって形成することができる。コントロールラインを用いることにより、標識抗体が膜担体の最下流部まで移動したこと、即ち、イムノクロマト展開が（正常に）行われたことを確認することができる。
本発明において、コントロールライン５には、標識抗体中の抗体を特異的に結合する抗体が固定化されているのが好ましい。前記抗体としては、抗ＩｇＧ抗体を用いることができ、具体的には、例えば抗ビオチン抗体がヤギ由来であれば、抗ヤギＩｇＧ抗体を膜担体に固定化することによって形成することができる。コントロールラインを用いることにより、標識抗体が膜担体の最下流部まで移動したこと、即ち、イムノクロマト展開が（正常に）行われたことを確認することができる。
【0035】
（吸収部材）
本発明において、吸収部材７は、液体をすみやかに吸収、保持できる材質のものであればよく、綿布、濾紙、およびポリエチレン、ポリプロピレン等からなる多孔質プラスチック不織布等を挙げることができるが、特に濾紙が最適である。
本発明において、吸収部材７は、液体をすみやかに吸収、保持できる材質のものであればよく、綿布、濾紙、およびポリエチレン、ポリプロピレン等からなる多孔質プラスチック不織布等を挙げることができるが、特に濾紙が最適である。
【0036】
イムノクロマトストリップは、これを保護するため、また、取り扱いがし易いように、プラスチック製のハウジングケース９などに収容されるのが好ましい（図３）。このケースは、例えば、イムノクロマトストリップの試料添加部材６の上部に試料滴下部１０が開口され、テストライン４およびコントロールライン５の上部に判定部（判定窓）１１が開口されていることが好ましい。
【0037】
（イムノクロマト展開）
本発明のエストラジオールの定量方法について説明する。まず、生体試料、競合試薬、および検体希釈液を混合して生体試料希釈液を調製する。得られた生体試料希釈液をイムノクロマトストリップの試料滴下部に滴下して毛細管現象を利用してイムノクロマトストリップ上を展開させる。展開した生体試料希釈液は、含浸部材を通過する際に、標識された抗体（または標識されたアビジン／ストレプトアビジン）を溶出させる。生体試料希釈液中のエストラジオールは、展開中に競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）と競合的に抗エストラジオール抗体に捕捉される。標識された抗体は、抗エストラジオール抗体に捕捉された競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）に結合し、更に、この結合体はテストラインの抗マウスＩｇＧ抗体によって捕捉される。こうして得られたテストラインのシグナル（蛍光強度）を測定することにより定量することが出来る。なお、展開開始後、５～１２分の間にテストラインの呈色を測定することが望ましい。この間に測定を行えば、エストラジオールと、競合試薬（エストラジオールと化合物の複合体）との競合反応が最も効果的に起き、エストラジオールの濃度変化に応じた測定値の変化がテストラインにおいて得られ、エストラジオール濃度の違いが測定値に的確に反映されるため好ましい。即ち、生体試料中のエストラジオール濃度を正確に測定することが出来る。５分未満では、抗エストラジオール抗体と生体試料中のエストラジオールまたは競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）との反応が充分でないため測定値が低くなるとか、生体試料中のエストラジオール濃度の違いを正確に反映した測定値を得ることが出来ないことがある。また、１２分を超えると、抗エストラジオール抗体に対する非特異的な反応が増加するため、生体試料中のエストラジオール濃度に応じた正確な測定値変化が得られなくなることがある。
本発明のエストラジオールの定量方法について説明する。まず、生体試料、競合試薬、および検体希釈液を混合して生体試料希釈液を調製する。得られた生体試料希釈液をイムノクロマトストリップの試料滴下部に滴下して毛細管現象を利用してイムノクロマトストリップ上を展開させる。展開した生体試料希釈液は、含浸部材を通過する際に、標識された抗体（または標識されたアビジン／ストレプトアビジン）を溶出させる。生体試料希釈液中のエストラジオールは、展開中に競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）と競合的に抗エストラジオール抗体に捕捉される。標識された抗体は、抗エストラジオール抗体に捕捉された競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）に結合し、更に、この結合体はテストラインの抗マウスＩｇＧ抗体によって捕捉される。こうして得られたテストラインのシグナル（蛍光強度）を測定することにより定量することが出来る。なお、展開開始後、５～１２分の間にテストラインの呈色を測定することが望ましい。この間に測定を行えば、エストラジオールと、競合試薬（エストラジオールと化合物の複合体）との競合反応が最も効果的に起き、エストラジオールの濃度変化に応じた測定値の変化がテストラインにおいて得られ、エストラジオール濃度の違いが測定値に的確に反映されるため好ましい。即ち、生体試料中のエストラジオール濃度を正確に測定することが出来る。５分未満では、抗エストラジオール抗体と生体試料中のエストラジオールまたは競合試薬（エストラジオールとビオチンとの複合体）との反応が充分でないため測定値が低くなるとか、生体試料中のエストラジオール濃度の違いを正確に反映した測定値を得ることが出来ないことがある。また、１２分を超えると、抗エストラジオール抗体に対する非特異的な反応が増加するため、生体試料中のエストラジオール濃度に応じた正確な測定値変化が得られなくなることがある。
【0038】
（競合法）
本発明において、生体試料中のエストラジオールは競合法により定量するのが好ましい。エストラジオールのような低分子化合物は、２種類の抗体でサンドイッチすることが難しいため、競合法をとることが好ましい。
本発明において、生体試料中のエストラジオールは競合法により定量するのが好ましい。エストラジオールのような低分子化合物は、２種類の抗体でサンドイッチすることが難しいため、競合法をとることが好ましい。
【0039】
（イムノクロマト測定キット）
本発明のイムノクロマト測定キットは、上記のイムノクロマトストリップに加えて、検体を希釈するための検体希釈液、競合試薬を少なくとも含み、更に必要に応じて、検量線を作成するためのエストラジオール標準液や、生体試料希釈液を調製するための容器などを含む。また、イムノクロマト結果を測定するための測定装置（クロマトリーダー等）も含む場合がある。
本発明のイムノクロマト測定キットは、上記のイムノクロマトストリップに加えて、検体を希釈するための検体希釈液、競合試薬を少なくとも含み、更に必要に応じて、検量線を作成するためのエストラジオール標準液や、生体試料希釈液を調製するための容器などを含む。また、イムノクロマト結果を測定するための測定装置（クロマトリーダー等）も含む場合がある。
【実施例0040】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例で測定された特性値の測定は、以下の方法に従った。
【0041】
（競合試薬の調製）
エストラジオール（ナカライテスク、１４５４１－６１）を、Ｂｉｏｔｉｎ－ｈｙｄｒａｚｉｄｅ（同仁化学、Ｂ３０３）を用いて、ビオチン化することにより、競合試薬（エストラジオール－ビオチン複合体）を調製した。調製後、使用時まで－３０℃にて保存した。
エストラジオール（ナカライテスク、１４５４１－６１）を、Ｂｉｏｔｉｎ－ｈｙｄｒａｚｉｄｅ（同仁化学、Ｂ３０３）を用いて、ビオチン化することにより、競合試薬（エストラジオール－ビオチン複合体）を調製した。調製後、使用時まで－３０℃にて保存した。
【0042】
（ランタノイド錯体標識抗ビオチン抗体の作製）
蛍光標識試薬であるユウロピウム錯体（ＡＴＢＴＡ－Ｅｕ３＋、東京化成工業、Ａ２０８３）を用いた。即ち、タンパク質のアミノ基にジクロロトリアジニル基を導入し、ＤＴＢＴＡ―Ｅｕ３＋に変換することにより、抗ビオチン抗体のアミノ基をユウロピウム錯体標識して作製した。抗ビオチン抗体として、Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、シグマアルドリッチ、Ｂ３６４０を用いた。
蛍光標識試薬であるユウロピウム錯体（ＡＴＢＴＡ－Ｅｕ３＋、東京化成工業、Ａ２０８３）を用いた。即ち、タンパク質のアミノ基にジクロロトリアジニル基を導入し、ＤＴＢＴＡ―Ｅｕ３＋に変換することにより、抗ビオチン抗体のアミノ基をユウロピウム錯体標識して作製した。抗ビオチン抗体として、Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、シグマアルドリッチ、Ｂ３６４０を用いた。
【0043】
（検体希釈液の調製）
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４、ナカライテスク社、２７５７６－２１）に、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（シグマアルドリッチ社、１０７８９７０４００１）、ポリエチレングリコール、およびＮａＣｌの終濃度がそれぞれ、０．１５質量％、２質量％、１．５質量％になるように加えて溶解させ、検体希釈液を調製した。
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４、ナカライテスク社、２７５７６－２１）に、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（シグマアルドリッチ社、１０７８９７０４００１）、ポリエチレングリコール、およびＮａＣｌの終濃度がそれぞれ、０．１５質量％、２質量％、１．５質量％になるように加えて溶解させ、検体希釈液を調製した。
【0044】
（抗エストラジオール抗体の作製）
エストラジオールとＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の結合物をマウスに免疫して得られた血清から、アフィニティクロマトグラフィーによりＩｇＧを精製して得られたものを、抗エストラジオール抗体とした。
エストラジオールとＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の結合物をマウスに免疫して得られた血清から、アフィニティクロマトグラフィーによりＩｇＧを精製して得られたものを、抗エストラジオール抗体とした。
【0045】
（含浸部材の作製）
８ｍｍ×１５０ｍｍの帯状のガラス繊維不織布に、上記で得られたユウロピウム錯体標識した抗ビオチン抗体および抗エストラジオール抗体が、いずれも０．５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように混合調製した抗体液を含浸させた。室温で乾燥させた後に、８ｍｍ×５ｍｍの大きさに切断し、含浸部材とした。
８ｍｍ×１５０ｍｍの帯状のガラス繊維不織布に、上記で得られたユウロピウム錯体標識した抗ビオチン抗体および抗エストラジオール抗体が、いずれも０．５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように混合調製した抗体液を含浸させた。室温で乾燥させた後に、８ｍｍ×５ｍｍの大きさに切断し、含浸部材とした。
【0046】
（抗マウスＩｇＧ抗体の作製）
抗マウスＩｇＧ抗体（Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、アブカム、ａｂ６７０８）を、抗マウスＩｇＧ抗体として用いた。
抗マウスＩｇＧ抗体（Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、アブカム、ａｂ６７０８）を、抗マウスＩｇＧ抗体として用いた。
【0047】
（膜担体の作製）
前記調製した抗マウスＩｇＧ抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度に調整した後、これを２５ｍｍ×３００ｍｍのニトロセルロース製メンブレンフィルターに１．０μＬ／ｃｍの量で線状に塗布してテストラインを作製した。
次に、抗ヤギＩｇＧ抗体（Ｄｏｎｋｅｙ Ａｎｔｉ－Ｇｏａｔ ＩｇＧ、アブカム、ａｂ１８２０２１）を１ｍｇ／ｍＬの濃度に調製した後、上記ニトロセルロース製メンブレンフィルターに１．０μＬ／ｃｍの量で線状に塗布してコントロールラインを作製した。
テストラインおよびコントロールラインを作製後、５０℃で３０分間乾燥させ、２５ｍｍ×５ｍｍの大きさに切断し、膜担体とした。
前記調製した抗マウスＩｇＧ抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度に調整した後、これを２５ｍｍ×３００ｍｍのニトロセルロース製メンブレンフィルターに１．０μＬ／ｃｍの量で線状に塗布してテストラインを作製した。
次に、抗ヤギＩｇＧ抗体（Ｄｏｎｋｅｙ Ａｎｔｉ－Ｇｏａｔ ＩｇＧ、アブカム、ａｂ１８２０２１）を１ｍｇ／ｍＬの濃度に調製した後、上記ニトロセルロース製メンブレンフィルターに１．０μＬ／ｃｍの量で線状に塗布してコントロールラインを作製した。
テストラインおよびコントロールラインを作製後、５０℃で３０分間乾燥させ、２５ｍｍ×５ｍｍの大きさに切断し、膜担体とした。
【0048】
（イムノクロマトストリップの作製）
粘着シート上に、調製した膜担体、含浸部材に加えて試料添加部材、吸収部材を配置し、イムノクロマトストリップを作製した。
粘着シート上に、調製した膜担体、含浸部材に加えて試料添加部材、吸収部材を配置し、イムノクロマトストリップを作製した。
【0049】
（エストラジオール標準液の調製）
妊娠馬から採血して得られた血清中のエストラジオール濃度を化学発光免疫測定法にて測定し、値付けしたものをエストラジオール標準液とした。化学発光免疫測定法による測定は、臨床検査センター（株式会社近畿予防医学研究所）にて測定した。
妊娠馬から採血して得られた血清中のエストラジオール濃度を化学発光免疫測定法にて測定し、値付けしたものをエストラジオール標準液とした。化学発光免疫測定法による測定は、臨床検査センター（株式会社近畿予防医学研究所）にて測定した。
【0050】
（測定キットを用いた定量）
上記標準液に検体希釈液を加えて表１に示す各濃度のエストラジオール（生体試料）希釈液を調製した。エストラジオール希釈液１００μＬあたり３ｐｇの競合試薬を加えた後、イムノクロマトストリップの試料滴下部に１００μＬ滴下し、展開させた。滴下より１０分後に、イムノクロマトリーダー（浜松ホトニクス社製、Ｃ１００６６－５０）を用いてテストラインの蛍光強度を測定した。結果を表１および図４に示す。本発明の測定キットを用いることにより、エストラジオール濃度が０ｐｇ／ｍＬ～２０ｐｇ／ｍＬの範囲において、精度よくエストラジオールを定量できることが確認された。
上記標準液に検体希釈液を加えて表１に示す各濃度のエストラジオール（生体試料）希釈液を調製した。エストラジオール希釈液１００μＬあたり３ｐｇの競合試薬を加えた後、イムノクロマトストリップの試料滴下部に１００μＬ滴下し、展開させた。滴下より１０分後に、イムノクロマトリーダー（浜松ホトニクス社製、Ｃ１００６６－５０）を用いてテストラインの蛍光強度を測定した。結果を表１および図４に示す。本発明の測定キットを用いることにより、エストラジオール濃度が０ｐｇ／ｍＬ～２０ｐｇ／ｍＬの範囲において、精度よくエストラジオールを定量できることが確認された。
【0051】
【表1】
【0052】
（化学発光免疫測定法測定との対比実験）
１２頭のめす馬から得られた血清中のエストラジオール濃度を、それぞれ化学発光免疫測定法および本発明のイムノクロマト測定キットを用いて測定した。化学発光免疫測定法による測定は、臨床検査センター（株式会社近畿予防医学研究所）にて測定した。イムノクロマト法では、標準液を同時に測定して得られた標準曲線を用いて、各血清のエストラジオール濃度を算出し測定結果を表２および図５に示した。イムノクロマト法の測定値と化学発光免疫測定法による測定値の相関係数は０．９７であり、良好な相関関係を示した。
本発明の測定キットを用いることにより、精度よくエストラジオールを定量できることが確認された。
１２頭のめす馬から得られた血清中のエストラジオール濃度を、それぞれ化学発光免疫測定法および本発明のイムノクロマト測定キットを用いて測定した。化学発光免疫測定法による測定は、臨床検査センター（株式会社近畿予防医学研究所）にて測定した。イムノクロマト法では、標準液を同時に測定して得られた標準曲線を用いて、各血清のエストラジオール濃度を算出し測定結果を表２および図５に示した。イムノクロマト法の測定値と化学発光免疫測定法による測定値の相関係数は０．９７であり、良好な相関関係を示した。
本発明の測定キットを用いることにより、精度よくエストラジオールを定量できることが確認された。
【0053】
【表2】
【産業上の利用可能性】
【0054】
本発明により、馬の生産現場において生体試料中のエストラジオール濃度を高感度かつ迅速、簡便に測定することができるので、妊娠状態を把握することが出来、効率の良い馬の生産を行うことが可能となる。
【符号の説明】
【0055】
１ 粘着シート
２ 含浸部材
３ 膜担体
４ テストライン
５ コントロールライン
６ 試料添加部材
７ 吸収部材
８ イムノクロマトストリップ
９ ハウジングケース
１０ 試料滴下部
１１ 判定部（判定窓）
２ 含浸部材
３ 膜担体
４ テストライン
５ コントロールライン
６ 試料添加部材
７ 吸収部材
８ イムノクロマトストリップ
９ ハウジングケース
１０ 試料滴下部
１１ 判定部（判定窓）
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
