特開 2023-97373 シゾフィランの組成物及びその調製方法および応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023097373

(43)【公開日】2023-07-07

(54)【発明の名称】シゾフィランの組成物及びその調製方法および応用

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/73 20060101AFI20230630BHJP

   A61K 8/49 20060101ALI20230630BHJP

   A61K 8/44 20060101ALI20230630BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20230630BHJP

【ＦＩ】

A61K8/73

A61K8/49

A61K8/44

A61Q19/00

【審査請求】有

【請求項の数】10

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022190727

(22)【出願日】2022-11-29

(31)【優先権主張番号】202111615861.7

(32)【優先日】2021-12-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(71)【出願人】

【識別番号】520317240

【氏名又は名称】広東丸美生物技術股▲フン▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ弁理士法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】孫雲起

(72)【発明者】

【氏名】胡露

(72)【発明者】

【氏名】裴運林

(72)【発明者】

【氏名】郭朝万

(72)【発明者】

【氏名】江川霞

(72)【発明者】

【氏名】蒲艶

(72)【発明者】

【氏名】劉涵

【テーマコード（参考）】

4C083

【Ｆターム（参考）】

4C083AC581

4C083AC582

4C083AD211

4C083AD212

4C083EE12

4C083FF05

(57)【要約】      （修正有）

【課題】皮膚組織の抗酸化能力を高め、皮膚組織細胞内のフリーラジカルの含有量を減らし、皮膚の光老化を遅らせる役割を果す、組成物を提供する。
【解決手段】組成物は、シゾフィランとエルゴチオネインを含む。好ましくは、シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（０．１～１０）：（０．５～２）である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

シゾフィランの組成物であって、
前記シゾフィランの組成物は、シゾフィランとエルゴチオネインを含むことを特徴とする、シゾフィランの組成物。

【請求項2】

前記シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（０．１～１０）：（０．５～２）であることを特徴とする、請求項１に記載のシゾフィランの組成物。

【請求項3】

前記シゾフィランは、低重合シゾフィラン、低分子シゾフィラン、中分子シゾフィランまたは高分子シゾフィランのうちいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせを含み、
前記低重合シゾフィランの分子量は、１０ｋＤより低く、
前記低分子シゾフィランの分子量は、１０～１００ｋＤであり、
前記中分子シゾフィランの分子量は、１００～１０００ｋＤであり、
前記高分子シゾフィランの分子量は、１０００～２０００ｋＤであることを特徴とする、請求項１または２に記載のシゾフィランの組成物。

【請求項4】

前記シゾフィランは、低重合シゾフィランであり、前記低重合シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（２～４）：１であり、
前記シゾフィランは、低分子シゾフィランであり、前記低分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（５～１０）：１であり、
前記シゾフィランは、中分子シゾフィランであり、前記中分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（１～２）：１であり、
前記シゾフィランは、高分子シゾフィランであり、前記高分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（０．５～２）：１であることを特徴とする、請求項１～３のうちいずれか一項に記載のシゾフィランの組成物。

【請求項5】

前記シゾフィランの組成物は、さらに溶媒を含み、
前記溶媒は、水を含み、
前記シゾフィランの組成物は、質量百分率でシゾフィラン０．０１～１０％とエルゴチオネイン０．０５～２％、残量は水から構成されることを特徴とする、請求項１～４のうちいずれか一項に記載のシゾフィランの組成物。

【請求項6】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含むことを特徴とする、請求項１～５のうちいずれか一項に記載のシゾフィランの組成物の調製方法：
シゾフィランとエルゴチオネインを混合し、前記シゾフィランの組成物を得る。

【請求項7】

前記混合は溶媒中で行われ、
前記混合温度は５０～９０℃であり、前記混合時間は１０～５０ｍｉｎであることを特徴とする、請求項６に記載のシゾフィランの組成物の調製方法。

【請求項8】

請求項１～５のうちいずれか一項に記載のシゾフィランの組成物の抗酸化製品の調製への応用。

【請求項9】

化粧品であって、
前記化粧品は、請求項１～５のうちいずれか一項に記載のシゾフィランの組成物を含むことを特徴とする、化粧品。

【請求項10】

前記シゾフィランの組成物の添加量は、前記化粧品全質量の０．０１～５０％であり、好ましくは０．０５～２０％であることを特徴とする、請求項９に記載の化粧品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、化粧品分野に属し、具体的には、シゾフィランの組成物及びその調製方法および応用に関する。

【背景技術】

【0002】

人体は、呼吸（酸化反応）、外部汚染、放射線被爆などの要因を含む外部との継続的な接触により、体内でフリーラジカルを継続的に生成する。研究によると、フリーラジカルは人間の老化につながる重要な要因の１つである。人体には、スーパーオキシドアニオンフリーラジカル、ヒドロキシルフリーラジカル、ＤＰＰＨフリーラジカルなど、細胞や組織を分解し、代謝機能に影響を与えるさまざまなフリーラジカルが存在する。通常の代謝に加えて、人体内のフリーラジカル濃度は、太陽光線、汚染、運動レベル、精神状態などの要因によっても影響される。

【0003】

抗酸化物質は、低濃度の存在下でフリーラジカルの酸化反応を効果的に阻害できる物質ですあり、その作用メカニズムは、フリーラジカルに直接作用すること、または、フリーラジカルになりやすい物質を間接的に消費してさらなる反応を防ぐことである。抗酸化物質は、過剰なフリーラジカルを排除し、体の退化を遅らせ、皮膚の老化を遅らせ、フリーラジカルが引き起こす疾患や老化に関連する疾患を予防する効果を有する。

【0004】

人体は、フリーラジカルを生成すると共に、フリーラジカルに抵抗する抗酸化物質も生成するが、人体の老化に伴い、自然保護システム中のスーパーオキシドジスムターゼとカタラーゼ等の量が減少し、除去できないフリーラジカルがコラーゲンの架橋、老化、皮膚の弾力の喪失や明らかなシワ、さらには細胞膜や細胞外脂質の構造や機能を変化させるなど、皮膚に悪影響を与える可能性がある。

【0005】

ＣＮ１１２３５３８００Ａ９は、エルゴチオネインを安定化するためのヒアルロン酸またはその塩および／またはトレハロースの使用、エルゴチオネインを安定化するための添加剤を開示しており、前記添加剤は、ヒアルロン酸またはその塩および／または海藻糖及び組成物を含み、前記組成物は、エルゴチオネイン、ヒアルロン酸またはその塩、およびトレハロースを含む。本発明が提供するヒアルロン酸またはその塩、およびトレハロースは、他の補助材料と比較して、高温によって引き起こされるエルゴチオネインの損傷を明らかに緩和し、エルゴチオネイン粉末製品の収率を改善することができるが、当該組成物はフリーラジカルの除去力と抗酸化力を高める必要がある。

【0006】

ＣＮ１１０３２７２４２Ａは、エルゴチオネインの光分解を阻害する方法およびその応用を開示しており、下記のステップを含む：エルゴチオネインを含む溶液にヒアルロン酸を添加する。エルゴチオネインの含有量は０．０００５～０．０１ｗｔ％である。ヒアルロン酸の含有量は０．１ｗｔ％以上である。この方法では、分子量分布の異なるヒアルロン酸を組み合わせて添加することで、エルゴチオネインの光分解を抑制するという目的を達成しているが、この分子量の組み合わせのヒアルロン酸の抗酸化効果は良いとは言えなく、エルゴチオネインのみで全体的な抗酸化効果をさらに改善することは困難である。

【0007】

ＣＮ１１２５３５６４４Ａは、ポリマー材料の技術分野に属し、エルゴチオネイン脂質複合体ゲルおよびその調製方法を開示している。本発明の複合ゲルは、下記重量部の原材料から調製される：エルゴチオネイン１部、リン脂質８～２０部、ポリオールエステル０．２～１．５部、カルボマー１０～２０部、およびグリセリン６０～１５０部、プロピレングリコール１０～５０部、Ｎ－トリメチルキトサン５～２０部、カッソン０．１～０．２部。本発明は、活性物質であるエルゴチオネインをポリオールエステルとリン脂質で被覆することにより安定なエルゴチオネイン脂質複合体を形成して最終生成物を得る。エルゴチオネインの安定性は改善されますが、組成物のフリーラジカルと抗酸化物質を除去する能力は改善する必要がある。

【0008】

ＣＮ１０７６７４１２９Ａは、シゾフィランのリン酸化誘導体、およびその調製方法、用途を開示しており、これは下記の質量百分率の原料から調製される：シゾフィラン１～１０％、リン酸化試薬１．５～２０％、残りは溶媒である。
シゾフィランのリン酸化誘導体の調製方法：（１）シゾフィランとリン酸化試薬を溶媒に加え、混合攪拌して反応させる；（２）反応液を分離、精製してシゾフィランのリン酸化誘導体を得る。この方法は、シゾフィランをリン酸化することによりその抗酸化活性をさらに改善し、当該調製プロセスは複雑であり、通常５時間以上の反応が必要であり、後処理では沈殿物を繰り返し再溶解および精製する必要がある。また、調製されたシゾフィランのリン酸化誘導体の保湿性は良好であるが、抗酸化効果を改善する必要がある。

【0009】

そのため、スキンケア製品の抗酸化活性成分として使用できる、より包括的な抗酸化効果を有するシゾフィラン組成物の開発が求められている。

【発明の概要】

【0010】

従来技術の欠点を考慮して、本発明の目的は、シゾフィランの組成物及びその調製方法および応用を提供することである。前記シゾフィランの組成物は、皮膚組織の抗酸化能力を高め、皮膚組織細胞内のフリーラジカルの含有量を減らし、皮膚の光老化を遅らせる役割を果す。

【0011】

上記の目的を達成するために、本発明は以下の実施形態を採用する。

【0012】

第１実施形態において、本発明はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、シゾフィランとエルゴチオネインを含む

【0013】

本発明において、前記シゾフィランとエルゴチオネインが互いに協力し合い、相乗効果を発揮し、前記組成物がＤＰＰＨフリーラジカル、ヒドロキシラジカル及びスーパーオキシドアニオンフリーラジカルに対する除去効果を改善し、皮膚組織の抗酸化効果を高め、皮膚組織のフリーラジカルの含有量を減らし、皮膚の光老化を遅らせる役割を果たす。

【0014】

そこで、シゾフィランはスエヒロタケ由来の天然由来のβ－Ｄ－グルカンであり、（１－３）結合したβＤ－グルコピラノース残基の主鎖と（１－６）結合したグルコピラノース残基の側鎖からなり、抗酸化性と耐放射線性を有する。シゾフィランは、オキシダーゼ系を阻害し、酸化を誘発する遷移金属イオンを錯化することにより、フリーラジカルの生成を阻害することができる。しかし、フリーラジカルの除去、遺伝子発現とタンパク質合成の調節等により抗放射線効果を発揮して、放射線で損傷した細胞のアポトーシス時間を延長し、脂質過酸化を阻害することができる。しかし、シゾフィランの水への溶解度は低く、その溶解度は通常化学的または物理的修飾によって改善することができる。本発明は、エルゴチオネインを添加した後、シゾフィランとエルゴチオネインが相乗効果を発揮するだけでなく、組成物の抗酸化能力をさらに改善し、エルゴチオネインはシゾフィランの安定性を大幅に改善し、シゾフィランの粘度も改善し、その溶解度もさらに改善することを偶然見出した。

【0015】

そこで、エルゴチオネインは天然の低分子アミノ酸であり、化学名は２－メルカプト－Ｌ－ヒスチジントリメチル分子内塩またはメルカプトヒスチジントリメチル分子内塩であり、正常な機能または病気の炎症部位の好中球から赤血球を保護する強力な次亜塩素酸捕捉剤（ＨＯＣｌ）である。さらに、ペルオキシニトロソアニオンメディエーターによるアミノ酸酸化も阻害する。活性酸素の生成を最小限に抑え、紫外線やガンマ線による損傷から保護し、放射線による損傷から細胞を保護する。一方、エルゴチオネインは低分子水溶性アミノ酸であり、エルゴチオネインは分解しやすく、光による安定性に劣るという欠点も有する。本発明は、シゾフィランとエルゴチオネインを配合すると、シゾフィランがエルゴチオネインの安定性を顕著に改善し、それが光分解されることを阻害することを偶然見出した。

【0016】

好ましくは、前記シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は、（０．１～１０）：（０．５～２）である。

【0017】

そこで、「０．１～１０」は、例えば０．１、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０等でもよい。

【0018】

そこで、「０．５～２」は、例えば０．５、０．６、０．８、１、１．２、１．４、１．６、２等でもよい。

【0019】

好ましくは、前記シゾフィランは、低重合シゾフィラン、低分子シゾフィラン、中分子シゾフィランまたは高分子シゾフィランのうちいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせを含む。

【0020】

好ましくは、前記低重合シゾフィランの分子量は、１０ｋＤより低く、例えば９．９ｋＤ、９ｋＤ、８ｋＤ、７ｋＤ、６ｋＤ、５ｋＤ、４ｋＤ、３ｋＤ、２ｋＤ、１ｋＤ、０．５ｋＤ、０．１ｋＤ等でもよい。

【0021】

好ましくは、前記低分子シゾフィランの分子量は１０～１００ｋＤであり、例えば１０ｋＤ、２０ｋＤ、３０ｋＤ、４０ｋＤ、５０ｋＤ、６０ｋＤ、７０ｋＤ、８０ｋＤ、９０ｋＤ、９９ｋＤ、９９．９ｋＤ等でもよいが、１００ｋＤを含まない。

【0022】

好ましくは、前記中分子シゾフィランの分子量は１００～１０００ｋＤであり、例えば１００ｋＤ、２００ｋＤ、３００ｋＤ、４００ｋＤ、５００ｋＤ、６００ｋＤ、７００ｋＤ、８００ｋＤ、９００ｋＤ、９９９ｋＤ、９９９．９ｋＤ等でもよいが、１０００ｋＤを含まない。

【0023】

好ましくは、前記高分子シゾフィランの分子量は１０００～２０００ｋＤであり、例えば１０００ｋＤ、１１００ｋＤ、１２００ｋＤ、１３００ｋＤ、１４００ｋＤ、１５００ｋＤ、１６００ｋＤ、１７００ｋＤ、１８００ｋＤ、１９００ｋＤ、２０００ｋＤ等でもよい。

【0024】

好ましくは、前記シゾフィランは低重合シゾフィランであり、前記低重合シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（２～４）：１であり、例えば２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１等でもよい。

【0025】

好ましくは、前記シゾフィランは、低分子シゾフィランであり、前記低分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（５～１０）：１であり、例えば５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１等でもよい。

【0026】

好ましくは、前記シゾフィランは、中分子シゾフィランであり、前記中分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（１～２）：１であり、例えば１：１、１．２：１、１．４：１、１．６：１、１．８：１、２：１等でもよい。

【0027】

好ましくは、前記シゾフィランは、高分子シゾフィランであり、前記高分子シゾフィランとエルゴチオネインの質量比は（０．５～２）：１であり、例えば０．５：１、０．６：１、０．８：１、１：１、１．２：１、１．４：１、１．６：１、１．８：１、２：１等でもよい。

【0028】

好ましくは、前記シゾフィランの組成物は、さらに溶媒を含む。

【0029】

好ましくは、前記溶媒は、水を含む。

【0030】

好ましくは、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率でシゾフィラン０．０１～１０％（例えば、０．０１％、０．０５％、０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％等でもよい）及びエルゴチオネイン０．０５～２％（例えば０．０５％、０．１％、０．５％、１％、１．５％、２％等）、残量は水から構成される。

【0031】

第２実施形態において、本発明は第１実施形態の前記シゾフィランの組成物の調製方法を提供し、前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：シゾフィランとエルゴチオネインを混合し、前記シゾフィランの組成物を得る。

【0032】

好ましくは、前記混合は溶媒中で行われる。

【0033】

好ましくは、前記混合温度は５０～９０℃であり、例えば５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、８２℃、８４℃、８６℃、８８℃、９０℃等でもよく、前記混合時間は１０～５０ｍｉｎであり、例えば１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、２５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、３５ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、４５ｍｉｎ、５０ｍｉｎ等でもよい。

【0034】

第３実施形態において、本発明は第１実施形態の前記シゾフィランの組成物の抗酸化製品の調製への応用を提供する。

【0035】

好ましくは、前記抗酸化製品は抗酸化化粧品である。

【0036】

好ましくは、前記化粧品は、クリーム、化粧水、乳液、美容液、美容オイルまたはマスクのいずれかを含む。

【0037】

第４実施形態において、本発明は第１実施形態の前記化粧品を提供し、前記化粧品は第１実施形態の前記シゾフィランの組成物を含む。

【0038】

好ましくは、前記シゾフィランの組成物の添加量は、前記化粧品全質量の０．０１～５０％であり、例えば０．０１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％等でもよく、好ましくは０．０５～２０％である。

【0039】

従来技術に比べて、本発明は以下のような有利な効果を有する。

【0040】

（１）本発明におけるシゾフィランとエルゴチオネインが互いに協力し合い、相乗効果を発揮し、前記組成物がＤＰＰＨフリーラジカル、ヒドロキシラジカル及びスーパーオキシドアニオンフリーラジカルに対する除去効果を改善し、皮膚組織の抗酸化効果を高め、皮膚組織のフリーラジカルの含有量を減らし、皮膚の光老化を遅らせる役割を果たす。

【0041】

（２）本発明におけるシゾフィランの組成物は、優れた抗酸化作用とＤＰＰＨフリーラジカルの除去能力を有し、スーパーオキシドアニオンのフリーラジカルに対する除去率が５０％以上であり、ヒドロキシルラジカルに対する除去率は５０％以上であり、ＤＰＰＨフリーラジカルに対する阻害率が８０％以上である。

【0042】

（３）本発明におけるシゾフィランの組成物は、優れた抗光老化効果があり、光老化モデルマウスの皮膚組織中のＨｙｐ含有量と血液中のＳＯＤ活性の増加を抑え、ＳＯＤ活性は１０５Ｕ／ｍＬ以上を維持し、ＨＹＰ含有量は８μｇ／ｍｇ以上にすることができる。

【発明を実施するための形態】

【0043】

以下、具体的な実施形態を通じて本発明の技術的解決策をさらに説明する。前記実施形態は、本発明の理解を高めるためのものであり、本発明を限定するものではないことを理解されたい。

【0044】

以下の実施例および比較例において、技術または条件が記載されていないものは、この分野の文献に記載された技術、条件、または製品仕様に従って実施することができる。使用される試薬または機器は、メーカーが記載されていないが、通常の経路で入手できる市販品、従来技術によって調製できるものである。

【0045】

実施例１

【0046】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が８ｋＤである低重合シゾフィラン０．３％及びエルゴチオネイン０．１％、残量は水から構成される。

【0047】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量のシゾフィランとエルゴチオネインを５０℃の水中で１５ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0048】

実施例２

【0049】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が５ｋＤである低重合シゾフィラン０．４％及びエルゴチオネイン０．２％、残量は水から構成される。

【0050】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量のシゾフィランとエルゴチオネインを６０℃の水中で１０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0051】

実施例３

【0052】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が２ｋＤである低重合シゾフィラン０．４％及びエルゴチオネイン０．１％、残量は水から構成される。

【0053】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量のシゾフィランとエルゴチオネインを５５℃の水中で２０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0054】

実施例４

【0055】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が８０ｋＤである低分子シゾフィラン０．５％及びエルゴチオネイン０．０５％、残量は水から構成される。

【0056】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量の低分子シゾフィランとエルゴチオネインを７０℃の水中で１０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0057】

実施例５

【0058】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が６０ｋＤである低分子シゾフィラン０．６％及びエルゴチオネイン０．１％、残量は水から構成される。

【0059】

前記シゾフィランの組成物の調製方法、下記のステップを含む：上記配合量の低分子シゾフィランとエルゴチオネインを６５℃の水中で１２ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0060】

実施例６

【0061】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が３０ｋＤである低分子シゾフィラン０．４％及びエルゴチオネイン０．０８％、残量は水から構成される。

【0062】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量の低分子シゾフィランとエルゴチオネインを７０℃の水中で１０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0063】

実施例７

【0064】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が８００ｋＤである中分子シゾフィラン０．６％及びエルゴチオネイン０．６％、残量は水から構成される。

【0065】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量の中分子シゾフィランとエルゴチオネインを７２℃の水中で１５ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0066】

実施例８

【0067】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が４００ｋＤである中分子シゾフィラン０．８％及びエルゴチオネイン０．４％、残量は水から構成される。

【0068】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量中分子シゾフィランとエルゴチオネインを７５℃の水中で２０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0069】

実施例９

【0070】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が１２００ｋＤである高分子シゾフィラン０．５％及びエルゴチオネイン１％、残量は水から構成される。

【0071】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量高分子シゾフィランとエルゴチオネインを８０℃の水中で２０ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0072】

実施例１０

【0073】

本実施例はシゾフィランの組成物を提供し、前記シゾフィランの組成物は、質量百分率で平均分子量が１０００ｋＤである高分子シゾフィラン１．０％及びエルゴチオネイン０．５％、残量は水から構成される。

【0074】

前記シゾフィランの組成物の調製方法は、下記のステップを含む：上記配合量高分子シゾフィランとエルゴチオネインを８２℃の水中で２５ｍｉｎ間混合して、前記シゾフィランの組成物を得た。

【0075】

比較例１

【0076】

本比較例はエルゴチオネインの水溶液を提供し、前記エルゴチオネインの水溶液におけるエルゴチオネインの質量百分率は０．４％である。

【0077】

比較例２

【0078】

本比較例は低重合シゾフィランの水溶液を提供し、前記低重合シゾフィランの水溶液における低重合シゾフィランの質量百分率は０．４％であり、低重合シゾフィランの平均分子量は８ｋＤである。

【0079】

比較例３

【0080】

本比較例は低分子シゾフィランの水溶液を提供し、前記低分子シゾフィランの水溶液における低分子シゾフィランの質量百分率は０．５５％であり、低分子シゾフィランの平均分子量は８０ｋＤである。

【0081】

比較例４

【0082】

本比較例は中分子シゾフィランの水溶液を提供し、前記中分子シゾフィランの水溶液における中分子シゾフィランの質量百分率は１．２％であり、中分子シゾフィランの平均分子量は８００ｋＤである。

【0083】

比較例５

【0084】

本比較例は高分子シゾフィランの水溶液を提供し、前記高分子シゾフィランの水溶液における高分子シゾフィランの質量百分率は１．５％であり、高分子シゾフィランの平均分子量は１２００ｋＤである。

【0085】

試験例１

【0086】

過敏性テスターの評価方法（皮膚アレルギーパッチテスト）

【0087】

サンプル：実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物と比較例１～５が提供する水溶液

【0088】

測定方法：
１、試験の参加者を３０人選択する。
２、サンプルをパッチテスターのチャンバー内に入れ、１つのチャンバーをブランクコントロールとして選択し、パッチテスターを被験者の前腕の湾曲した側に２４時間テープで貼り付ける。
３、試験片を取り出してから４８時間後に皮膚反応を観察する。閉鎖型パッチテストの皮膚反応の評価基準を表１に示し、具体的な測定結果を表２に示す。

【0089】

【表1】

【0090】

【表2】

【0091】

表２の測定結果から見えるように、皮膚アレルギーパッチ試験において、本発明の実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物を添加したパッチを４８時間貼り付けた後、紅斑、灼熱感またはかゆみ等の症状のような反応および副反応が見えた被験者はいなかった。閉鎖型パッチテストから、本発明のシゾフィラン組成物は、肌に対する刺激がないことがわかる。

【0092】

試験例２

【0093】

フリーラジカルの除去試験

【0094】

サンプル：実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物と比較例１～５が提供する水溶液

【0095】

測定方法：

【0096】

１、スーパーオキシドアニオンフリーラジカルの除去能力に対する評価

【0097】

０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ＝８．２のＴｒｉｓ－ＨＣｌバッファー４．５ｍＬを取り、２５℃のウォーターバスで２０分間予熱した。サンプル１ｍＬと２５ｍｍｏｌ／Ｌのピロガロール溶液０．４ｍＬを加えてよく混合し、２５℃のウォーターバスで５分間反応させた後、８ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを１．０ｍＬ加えて反応を停止させた。Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを基準として、２９９ｎｍで吸光度を測定した。ブランクコントロールは、１ｍＬのサンプルの溶媒をサンプルの代わりに使用した。

【0098】

スーパーオキシドアニオンフリーラジカルの除去率（％）＝［１－（Ａ_２／Ａ_１）］×１００％

【0099】

式において、
Ａ_１：ブランクコントロールの吸光度
Ａ_２：サンプルの吸光度

【0100】

２、ヒドロキシルラジカルの除去能力に対する評価

【0101】

３ｍＬの２ｍｍｏｌ／ＬのＦｅＳＯ_４、３ｍＬの１ｍｍｏｌ／ＬのＨ_２Ｏ_２を２５ｍＬの比色管に順に加え、よく振った後、３ｍＬの６ｍｍｏｌ／Ｌのサリチル酸を加えてよく振った後、３７℃のウォーターバスで１５ 分間加熱し、取り出して吸光度を測定した。一定濃度の被検液を加えてよく振り、ウォーターバスで１５分間加熱を続けた後、取り出して吸光度を測定する。下記の式は、測定する液体のヒドロキシルラジカル（ＯＨ）の除去率である。

【0102】

ヒドロキシルラジカルの除去率（％）＝［Ａ_１－Ａ_２－（Ａ_１－Ａ_３）］／Ａ_１×１００％

【0103】

式において、
Ａ_１：薬物添加前の反応系の吸光度値；
Ａ_２：サンプルからＯＨを除去した後の反応系の吸光度値；
Ａ_３：ブランクコントロールからＯＨを除去した後の反応系の吸光度値

【0104】

３、ＤＰＰＨフリーラジカルの除去能力に対する評価

【0105】

試験はＬａｒｒａｕｒｉ ＪＡで指定された方法に従い、２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液を調製する。
試験サンプル溶液：実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物と比較例１～５が提供する組成物を超純水で希釈し、質量濃度０．１％の溶液を得る。試験管に２．０ｍＬの試験サンプル溶液及び２．０ｍＬの２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液を取り、よく混ぜ合わせて３０ｍｉｎ間反応させ、５１７ｎｍで吸光度を測定する。無水エタノールをブランクコントロールとし、吸光度に基づいてＤＰＰＨ阻害率を算出する。

【0106】

ＤＰＰＨフリーラジカルの阻害率（％）＝［１―（Ａ_１―Ａ_２）／Ａ_３］×１００％；

【0107】

式において、Ａ_１は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの試験サンプル溶液の吸光度であり、Ａ_２は２．０ｍＬの試験サンプル溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、Ａ_３は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、３回測定分の平均値を取る。

【0108】

具体的な測定結果は、表３に示す。

【0109】

【表3】

【0110】

表３の測定データから見えるように、本発明のシゾフィランの組成物は、優れた抗酸化性とＤＰＰＨフリーラジカルの除去能力を有し、スーパーオキシドアニオンフリーラジカルに対する除去率は５０％以上であり、ヒドロキシラジカルに対する除去率は５０％以上であり、ＤＰＰＨフリーラジカルに対する阻害率は８０％以上である。以上より、本発明のシゾフィランとエルゴチオネインが互いに協力し合い、相乗効果を発揮し、前記組成物がＤＰＰＨフリーラジカル、ヒドロキシラジカル及びスーパーオキシドアニオンフリーラジカルに対する除去効果を改善し、皮膚組織の抗酸化効果を高め、皮膚組織のフリーラジカルの含有量を減らし、皮膚の光老化を遅らせる役割を果たすことがわかる。

【0111】

試験例３

【0112】

耐放射線試験

【0113】

サンプル：実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物と比較例１～５が提供する水溶液

【0114】

測定方法：
マウスモデルの確立：６～８週齢のメスのＩＣＲマウスを１週間給餌後、体重に応じてランダムに１７つのグループに分ける（モデル群、通常群、サンプル群１～１５を含み、そこで、サンプル群１～１５は、実施例１～１０が提供するシゾフィラン組成物と比較例１～５が提供する組成物に対応し、モデル群と通常群には同量の蒸留水を与えた）。

【0115】

通常群以外の残りの群は背中を剃毛し、擬似太陽光照射装置（ＵＶＡ、８０～１００Ｗ、波長３２０～４００ｎｍ、長さ１２０ｃｍ；ＵＶＢ、８０～１００Ｗ、波長２９０～３２０ｎｍ、長さ１２０ｃｍ）を使用して光源から１０ｃｍの距離でＵＶＡとＵＶＢを同時に８週間、１日３時間照射し、マウス光老化モデルを作成した。８週間後、動物を殺し、背部脱毛部位の全層皮膚を取り除き、ＳＯＤ活性とＨＹＰ含有量を測定した。

【0116】

具体的な測定結果は、表４に示す。

【0117】

【表4】

【0118】

表３の測定データから見えるように、本発明のシゾフィランの組成物は、光老化モデルマウスの皮膚組織中のＨｙｐ含有量と血液中のＳＯＤ活性を高めることができ、ＳＯＤ活性は１０５Ｕ／ｍＬ以上に維持され、ＨＹＰ 含有量は８μｇ／ｍｇ以上に維持され、マウスの皮膚に保護効果がある。以上より、本発明のシゾフィランとエルゴチオネインが互いに協力し合い、相乗効果を発揮し、光老化による皮膚の日焼けなど、さまざまな皮膚の問題をさらに効果的に予防、緩和、治療することができることがわかる。

【0119】

出願人は、本発明が上記の実施例を通じて、本発明によるシゾフィランの組成物及びその調製方法および応用を説明することを宣言するが、本発明は上記の実施例に限定されるとはいえなく、本発明を実施するために上記の実施例に依存しなければならないことを意味するものではない。当業者は、本発明のいかなる改良、本発明の製品の各原材料の同等の置換、補助成分の追加、特定の方法の選択なども、本発明の保護の範囲内にあることを理解されたい。