知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
特開2023-97737試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法並びに試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023097737
(43)【公開日】2023-07-10
(54)【発明の名称】試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法並びに試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/53 20060101AFI20230703BHJP
G01N 33/543 20060101ALI20230703BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20230703BHJP
【ＦＩ】
G01N33/53 D
G01N33/543 581A
C07K16/18
【審査請求】未請求
【請求項の数】32
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021213989
(22)【出願日】2021-12-28
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】000131474
【氏名又は名称】株式会社シノテスト
(72)【発明者】
【氏名】小野 幸恵
【テーマコード（参考）】
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA60
4H045CA42
4H045DA76
4H045EA52
4H045FA74
(57)【要約】
【課題】抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制し、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制した試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬等を提供する。
【解決手段】試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法等において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
【選択図】なし
【解決手段】試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法等において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項2】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項3】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項4】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項5】
担体が粒子である、請求項１～請求項４のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項6】
担体がラテックス粒子である、請求項１～請求項５のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【請求項7】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、請求項１～請求項６のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【化1】
【請求項8】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、請求項１～請求項６のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【化2】
【請求項9】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有することを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項10】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項９に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項11】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項９又は請求項１０に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項12】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項９に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項13】
担体が粒子である、請求項９～請求項１２のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項14】
担体がラテックス粒子である、請求項９～請求項１３のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【請求項15】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、請求項９～請求項１４のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【化1】
【請求項16】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、請求項９～請求項１４のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数である。）］
【化2】
【請求項17】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項18】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１７に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項19】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１７又は請求項１８に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項20】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項１７に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項21】
担体が粒子である、請求項１７～請求項２０のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項22】
担体がラテックス粒子である、請求項１７～請求項２１のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【請求項23】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、請求項１７～請求項２２のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【化1】
【請求項24】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、請求項１７～請求項２２のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【化2】
【請求項25】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項26】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項２５に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項27】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項２５又は請求項２６に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項28】
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、請求項２５に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項29】
担体が粒子である、請求項２５～請求項２８のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項30】
担体がラテックス粒子である、請求項２５～請求項２９のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【請求項31】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、請求項２５～請求項３０のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【化1】
【請求項32】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、請求項２５～請求項３０のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【化2】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、敗血症等の疾患のマーカーとなりうる試料中のＨＭＧＢ１（ハイモビリティーグループプロテイン－１；ＨＭＧ－１）の測定方法及び測定試薬、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法並びに試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法に関するものである。
本発明は、臨床検査、臨床病理学及び医学などの生命科学分野、並びに分析化学などの化学分野等において有用なものである。
本発明は、臨床検査、臨床病理学及び医学などの生命科学分野、並びに分析化学などの化学分野等において有用なものである。
【背景技術】
【0002】
ハイモビリティーグループプロテイン（Ｈｉｇｈ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ）は、クロマチン構造に含まれる大量の非ヒストンタンパク質として１９６４年に発見され、すべての高等動植物に普遍的に含まれるタンパク質であり、種族間で一次構造の保存性は極めて高い。
また、核内ばかりではなく、細胞質内にも豊富に存在することが分かっている。
生理作用ははっきりとは分かっていないが、ＨＭＧＢ１はＤＮＡと結合する際に二重螺旋構造を緩めることから、転写反応の際にＤＮＡの高次構造を最適構造に変化させて転写活性を高めるという、極めて広範囲の転写促進因子及びヌクレオソーム弛緩因子として機能すると考えられている。
また、核内ばかりではなく、細胞質内にも豊富に存在することが分かっている。
生理作用ははっきりとは分かっていないが、ＨＭＧＢ１はＤＮＡと結合する際に二重螺旋構造を緩めることから、転写反応の際にＤＮＡの高次構造を最適構造に変化させて転写活性を高めるという、極めて広範囲の転写促進因子及びヌクレオソーム弛緩因子として機能すると考えられている。
【0003】
ハイモビリティーグループプロテインには、いくつかの種類が存在する。例えば、ハイモビリティーグループプロテイン－１（ＨＭＧＢ１）、ハイモビリティーグループプロテイン－２（ＨＭＧＢ２）、ハイモビリティーグループプロテイン－３（ＨＭＧＢ３）、ハイモビリティーグループプロテイン－８（ＨＭＧＢ８）、ハイモビリティーグループプロテイン－１７（ＨＭＧＢ１７）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｉ（ＨＭＧＢＩ）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｙ（ＨＭＧＢＹ）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｉ（Ｙ）（ＨＭＧＢＩ（Ｙ））、ハイモビリティーグループプロテイン Ｉ－Ｃ（ＨＭＧＢ Ｉ－Ｃ）等を挙げることができる。
【0004】
ワングらは１９９９年に、ＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体を使用したウエスタンブロット法により、初めて血清中（血液中）のＨＭＧＢ１の定量測定を行った。
その結果、ワングらは、ＨＭＧＢ１が敗血症のマーカーとなりうることを示した。
そして、敗血症の患者において、生き残る患者と、死に至る患者を判別することが、精密に血液中のＨＭＧＢ１を測定することによって可能であることを示した。
その結果、ワングらは、ＨＭＧＢ１が敗血症のマーカーとなりうることを示した。
そして、敗血症の患者において、生き残る患者と、死に至る患者を判別することが、精密に血液中のＨＭＧＢ１を測定することによって可能であることを示した。
【0005】
即ち、ただ単に血液中でのＨＭＧＢ１の存在を確認するだけではなく、精密に定量することの有用性が明らかにされた（非特許文献１参照）。
【0006】
なお、先に、ＨＭＧＢ１の測定に用いる抗体、即ちＨＭＧＢ１に特異的に結合する抗体（抗ＨＭＧＢ１抗体）については、パーキネンらや、レップらによって調製可能なことが示されていた（非特許文献２、非特許文献３参照）。
この抗体を用いてレップらはＨＭＧＢ１に関して固相酵素免疫測定法（Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）が可能であることを述べている。（なお、この固相酵素免疫測定法は、精製したＨＭＧＢ１をマイクロプレート（マイクロタイタープレート）のウェルに固相化し、これに酵素標識したＨＭＧＢ１に結合する抗体を接触させ、作用させて、ＨＭＧＢ１に結合する抗体が精製したＨＭＧＢ１に結合することを確かめたものである。）
また、ルーヒアイネンらは２０００年に、遺伝子工学によって組換えＤＮＡより調製したラットのＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体と、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の一部「Lys Phe Lys Asp Pro Asn Ala Pro Lys Arg Pro Pro Ser Ala」よりなるペプチドを免疫原として調製したポリクローナル抗体を各々使用して、ＥＬＩＳＡ法のサンドイッチ法により、ヒト血液中のＨＭＧＢ１を測定した（非特許文献４参照）。
この抗体を用いてレップらはＨＭＧＢ１に関して固相酵素免疫測定法（Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）が可能であることを述べている。（なお、この固相酵素免疫測定法は、精製したＨＭＧＢ１をマイクロプレート（マイクロタイタープレート）のウェルに固相化し、これに酵素標識したＨＭＧＢ１に結合する抗体を接触させ、作用させて、ＨＭＧＢ１に結合する抗体が精製したＨＭＧＢ１に結合することを確かめたものである。）
また、ルーヒアイネンらは２０００年に、遺伝子工学によって組換えＤＮＡより調製したラットのＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体と、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の一部「Lys Phe Lys Asp Pro Asn Ala Pro Lys Arg Pro Pro Ser Ala」よりなるペプチドを免疫原として調製したポリクローナル抗体を各々使用して、ＥＬＩＳＡ法のサンドイッチ法により、ヒト血液中のＨＭＧＢ１を測定した（非特許文献４参照）。
【0007】
また、山田らは、ＨＭＧＢ１には結合するがＨＭＧＢ２には結合しない抗体、並びにこの抗体を用いるＨＭＧＢ２は測定せずＨＭＧＢ１のみを測定するＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬を開示した（特許文献１）。
【0008】
更に、山田らは、陽イオン及び陰イオンを各々、それぞれのモル濃度にイオンの価数の絶対値を乗じた値が１５０ｍＭ以上となるような濃度で共存させることを特徴とする、試料中に含まれるＨＭＧＢ１及び／又はＨＭＧＢ２の測定方法及び測定試薬を開示した（特許文献２）。
この測定方法及び測定試薬により測定の感度を高めることができるものである。
この測定方法及び測定試薬により測定の感度を高めることができるものである。
【0009】
更に、山田らは、ヒトＨＭＧＢ１の次式（Ｉ）：Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ（Ｉ）で表されるアミノ酸配列に特異的に結合する鳥類由来の抗体よりなる、鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体等を開示した（特許文献３）。
この鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体は、ヒトＨＭＧＢ１との結合能力が高い高力価の抗体を高い確率で取得し得る、その生産性が高いものである。
この鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体は、ヒトＨＭＧＢ１との結合能力が高い高力価の抗体を高い確率で取得し得る、その生産性が高いものである。
【0010】
また、本願発明者らは、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を用いる試料中のＨＭＧＢ１の測定方法において、特定のハイブリドーマより産生される２つのモノクローナル抗体を組み合わせて同じ担体に固定化して用いることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法等を開示した（特許文献４）。
この試料中のＨＭＧＢ１の測定方法等は、高感度に測定を行えるものである。
この試料中のＨＭＧＢ１の測定方法等は、高感度に測定を行えるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0011】
【特許文献1】特開２００３－９６０９９号公報
【特許文献2】特開２００４－１４４７２８号公報
【特許文献3】ＷＯ２００８／０７５７８８号公報
【特許文献4】特開２０２０－１４８５５７号公報
【非特許文献】
【0012】
【非特許文献1】Ｈ．Ｗａｎｇら，ＳＣＩＥＮＣＥ，２８５巻，９号，２４８～２５１頁，１９９９年発行
【非特許文献2】Ｊ．Ｐａｒｋｋｉｎｅｎら，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６８巻，２６号，１９７２６～１９７３８頁，１９９３年発行
【非特許文献3】Ｗ．Ａ．Ｌｅｐｐら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，１０巻，４号，４４９～４６５頁，１９８９年発行
【非特許文献4】Ａ．Ｒｏｕｈｉａｉｎｅｎら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，８４巻，１０８７～１０９４頁，２０００年発行
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0013】
本願発明者は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬において、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集し、それにより当該凝集が原因である試薬ブランク（試薬盲検）が上昇することを見出した。
【0014】
具体的には、本願発明者は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の程度を、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬の吸光度の二波長比を測定することで評価できることを見出した。
より具体的には、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬の５７０ｎｍにおける吸光度と８００ｎｍにおける吸光度をそれぞれ測定し、当該５７０ｎｍにおける吸光度の値を当該８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比の値を求める。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集すると、長波長側の吸光度の値が大きくなるので、前記の当該５７０ｎｍにおける吸光度の値を当該８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比の値は小さくなる。
よって、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬の５７０ｎｍにおける吸光度の値を８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比を求めることで、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的な凝集の程度を評価することができる。
より具体的には、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬の５７０ｎｍにおける吸光度と８００ｎｍにおける吸光度をそれぞれ測定し、当該５７０ｎｍにおける吸光度の値を当該８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比の値を求める。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集すると、長波長側の吸光度の値が大きくなるので、前記の当該５７０ｎｍにおける吸光度の値を当該８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比の値は小さくなる。
よって、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬の５７０ｎｍにおける吸光度の値を８００ｎｍにおける吸光度の値で除した吸光度比を求めることで、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的な凝集の程度を評価することができる。
【0015】
そして、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集することにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の見た目の粒径が大きくなることで試薬ブランクが上昇する。
また、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集することにより、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の抗ＨＭＧＢ１抗体」との抗原抗体反応に用いられる「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の有効数が減るため、試料中のＨＭＧＢ１の測定時の検量線の傾きが低下してしまう。
前記の試薬ブランクの上昇及び検量線の傾きの低下により、振とうを受けた抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬における検量線は、振とうを受けていない抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬における検量線とは、変化してしまう。
また、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的に凝集することにより、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の抗ＨＭＧＢ１抗体」との抗原抗体反応に用いられる「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の有効数が減るため、試料中のＨＭＧＢ１の測定時の検量線の傾きが低下してしまう。
前記の試薬ブランクの上昇及び検量線の傾きの低下により、振とうを受けた抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬における検量線は、振とうを受けていない抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を含む測定試薬における検量線とは、変化してしまう。
【0016】
本発明の課題は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬において、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制し、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制した試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬を提供することである。
また、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができる、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法を提供することである。
更に、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集が生じることを原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができる、試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法を提供することである。
また、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができる、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法を提供することである。
更に、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集が生じることを原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができる、試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0017】
本願発明者らは、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的な凝集の抑制、及び当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇の抑制について検討を重ねたところ、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、特定濃度域のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0018】
すなわち、本発明は、以下の発明よりなる。
（１） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（２） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（３） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）又は前記（２）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（４） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（５） 担体が粒子である、前記（１）～前記（４）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（６） 担体がラテックス粒子である、前記（１）～前記（５）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（７） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（１）～前記（６）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（１） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（２） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（３） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）又は前記（２）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（４） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（５） 担体が粒子である、前記（１）～前記（４）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（６） 担体がラテックス粒子である、前記（１）～前記（５）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
（７） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（１）～前記（６）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【0019】
【化1】
【0020】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0021】
（８） グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、前記（１）～前記（６）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法。
【0022】
【化2】
【0023】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【0024】
（９） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有することを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１０） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１１） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）又は前記（１０）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１２） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１３） 担体が粒子である、前記（９）～前記（１２）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１４） 担体がラテックス粒子である、前記（９）～前記（１３）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１５） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（９）～前記（１４）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１０） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１１） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）又は前記（１０）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１２） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（９）に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１３） 担体が粒子である、前記（９）～前記（１２）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１４） 担体がラテックス粒子である、前記（９）～前記（１３）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
（１５） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（９）～前記（１４）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【0025】
【化1】
【0026】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0027】
（１６） グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、前記（９）～前記（１４）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬。
【0028】
【化2】
【0029】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数である。）］
【0030】
（１７） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（１８） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（１９） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）又は前記（１８）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２０） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２１） 担体が粒子である、前記（１７）～前記（２０）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２２） 担体がラテックス粒子である、前記（１７）～前記（２０）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２３） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（１７）～前記（２２）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（１８） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（１９） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）又は前記（１８）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２０） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（１７）に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２１） 担体が粒子である、前記（１７）～前記（２０）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２２） 担体がラテックス粒子である、前記（１７）～前記（２０）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
（２３） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（１７）～前記（２２）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【0031】
【化1】
【0032】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0033】
（２４） グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、前記（１７）～前記（２２）のいずれか１項に記載の抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法。
【0034】
【化2】
【0035】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【0036】
（２５） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２６） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２７） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）又は前記（２６）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２８） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２９） 担体が粒子である、前記（２５）～前記（２８）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（３０） 担体がラテックス粒子である、前記（２５）～前記（２９）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（３１） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（２５）～前記（３０）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２６） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２７） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度を、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）又は前記（２６）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２８） 試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に共存させるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度を、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）とすることを特徴とする、前記（２５）に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（２９） 担体が粒子である、前記（２５）～前記（２８）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（３０） 担体がラテックス粒子である、前記（２５）～前記（２９）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
（３１） グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物が、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、前記（２５）～前記（３０）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【0037】
【化1】
【0038】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0039】
（３２） グリセリン・プロピレンオキシド付加物が、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物である、前記（２５）～前記（３０）のいずれか１項に記載の試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法。
【0040】
【化2】
【0041】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【発明の効果】
【0042】
試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬において、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制し、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができるものである。
【0043】
また、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができるものである。
【0044】
更に、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集が生じることを原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるものである。
【図面の簡単な説明】
【0045】
【図1】第２試薬として第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0046】
【図2】第２試薬として第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0047】
【図3】第２試薬として第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0048】
【図4】第２試薬として第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0049】
【図5】第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0050】
【図6】第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0051】
【図7】第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）及び第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0052】
【図8】第２試薬として第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0053】
【図9】第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0054】
【図10】第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0055】
【図11】第２試薬として第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0056】
【図12】第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0057】
【図13】第２試薬として第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【0058】
【図14】第２試薬として第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）及び第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合における試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【0059】
以下、本発明を詳細に説明する。
１．抗ＨＭＧＢ１抗体
（１）抗体
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、ＨＭＧＢ１に特異的に結合する抗体である。
１．抗ＨＭＧＢ１抗体
（１）抗体
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、ＨＭＧＢ１に特異的に結合する抗体である。
【0060】
本発明において、抗ＨＭＧＢ１抗体は、ＨＭＧＢ１に特異的に結合することができる抗体であればよく、特に限定はない。
【0061】
この抗ＨＭＧＢ１抗体としては、例えば、ＨＭＧＢ１に結合することができるモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗血清、抗体の断片〔Ｆａｂ及びＦ(ａｂ’)２など〕、又は一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）等を挙げることができる。
【0062】
なお、この抗ＨＭＧＢ１抗体は、遺伝子組み換え技術等により免疫原を免疫する動物とは異なる動物種のアミノ酸配列に変化させた抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体、又は完全ヒト化抗体等）であってもよい。
【0063】
そして、抗ＨＭＧＢ１抗体としては、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【0064】
また、本発明においては、２種以上の、抗ＨＭＧＢ１抗体を用いてもよい。
【0065】
（２）免疫原
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原について、以下説明を行う。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原として、ＨＭＧＢ１の全部又は一部を用いることができる。
すなわち、ヒト又はウシ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス若しくはラットなどの哺乳動物又はニワトリなどの鳥類等由来のＨＭＧＢ１、又は遺伝子組み換え操作により得たＨＭＧＢ１等のＨＭＧＢ１の全部又は一部を用いることができる。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原について、以下説明を行う。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原として、ＨＭＧＢ１の全部又は一部を用いることができる。
すなわち、ヒト又はウシ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス若しくはラットなどの哺乳動物又はニワトリなどの鳥類等由来のＨＭＧＢ１、又は遺伝子組み換え操作により得たＨＭＧＢ１等のＨＭＧＢ１の全部又は一部を用いることができる。
【0066】
前記のＨＭＧＢ１の全部又は一部を免疫原とすることにより、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体を取得することができる。
なお、この抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原は、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部又は一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、又は修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等であってもよい。
なお、この抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原は、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部又は一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、又は修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等であってもよい。
【0067】
また、抗体は、３個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を認識できるとの報告（Ｆ．Ｈｕｄｅｃｚら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４７巻，２０１～２１０頁，１９９２年発行）がある。
よって、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原のアミノ酸配列の最小単位としては、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列、又はこれらのアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列の内、連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列を考えることができるので、これらの連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列からなるトリペプチド、又はこれに他のアミノ酸若しくはペプチドが付加したもの等を、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原の最小単位として考えることができる。
よって、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原のアミノ酸配列の最小単位としては、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列、又はこれらのアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列の内、連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列を考えることができるので、これらの連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列からなるトリペプチド、又はこれに他のアミノ酸若しくはペプチドが付加したもの等を、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原の最小単位として考えることができる。
【0068】
前記の免疫原としての、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等、又はＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等は、ヒト等の体液、細胞、組織もしくは臓器等より、公知の方法等により抽出、精製等して、取得することができる。
【0069】
なお、本発明において、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質を取得する方法としては特に限定はなく、如何なる方法によるものでもよく、例えば、公知の方法により取得することができる。
【0070】
なお、前記の免疫原は、液相法及び固相法等のペプチド合成の方法により合成することができ、更にペプチド自動合成装置を用いてもよく、日本生化学会編「生化学実験講座１ タンパク質の化学ＩＶ」，東京化学同人，１９７５年、泉屋ら「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，１９８５年、日本生化学会編「続生化学実験講座２ タンパク質の化学 下」，東京化学同人，１９８７年等に記載された方法に従い合成することができ、前記のアミノ酸配列に、欠失、置換、挿入又は付加を施した変異体を作製することも容易である。
また、非天然型アミノ酸の導入、各アミノ酸残基の化学修飾やシステイン残基を導入することにより分子内を環化させて構造を安定化させる等の修飾を施してもよい。
また、非天然型アミノ酸の導入、各アミノ酸残基の化学修飾やシステイン残基を導入することにより分子内を環化させて構造を安定化させる等の修飾を施してもよい。
【0071】
更に、前記の免疫原は、対応する核酸塩基配列を持つＤＮＡ又はＲＮＡより遺伝子工学技術を用いて調製してもよく、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法Ｉ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法ＩＩ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法ＩＩＩ」，東京化学同人，１９８７年等を参照して調製すればよい。
【0072】
ところで、免疫原が低分子物質の場合には、免疫原に免疫原結合用担体（キャリア）を結合させたものを動物等に免疫するのが一般的ではあるが、アミノ酸数５のペプチドを免疫原としてこれに対する特異抗体を産生させたとの報告（木山ら，「日本薬学会第１１２回年会講演要旨集３」，１２２頁，１９９２年発行）もあるので、免疫原結合用担体（キャリア）を使用することは必須ではない。
【0073】
なお、抗体を産生させる際に免疫原結合用担体（キャリア）を使用する場合の担体（キャリア）としては、スカシガイのヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ニワトリ血清アルブミン、ポリ－Ｌ－リシン、ポリアラニルリシン、ジパルミチルリシン、破傷風トキソイド又は多糖類等の免疫原結合用担体（キャリア）として公知なものを用いることができる。
【0074】
免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合法は、グルタルアルデヒド法、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド法、マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシサクシニミドエステル法、ビスジアゾ化ベンジジン法又はＮ－サクシミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸法等の公知の結合法を用いることができる。
また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン又はリポソーム等の免疫原結合用担体（キャリア）に免疫原を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン又はリポソーム等の免疫原結合用担体（キャリア）に免疫原を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
【0075】
（３）ポリクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体の調製方法
ＨＭＧＢ１に特異的に結合することができるポリクローナル抗体、すなわち、ポリクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体は、以下の操作により調製することができる。
ＨＭＧＢ１に特異的に結合することができるポリクローナル抗体、すなわち、ポリクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体は、以下の操作により調製することができる。
【0076】
このポリクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体の産生用の免疫原としては、前記の免疫原を用いることができる。
【0077】
前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を、哺乳動物（マウス、モルモット、ハムスター、ウサギ、ラット、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ロバ、若しくはラクダなど）又は鳥類（ニワトリ、アヒル、若しくはダチョウなど）等に免疫する。
【0078】
ところで、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物の免疫量は、免疫原、免疫原結合用担体（キャリア）、免疫動物の種類、免疫注射部位等により決められるものであるが、マウスの場合には一匹当り一回につき０．１μｇ～５ｍｇの前記免疫原、又は前記免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を免疫注射するのが好ましい。
【0079】
なお、この前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物は、アジュバントと添加混合して免疫注射することが好ましい。
アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、化学合成アジュバント又は百日咳菌アジュバント等の公知のものを用いることができる。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、化学合成アジュバント又は百日咳菌アジュバント等の公知のものを用いることができる。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
【0080】
初回免疫後、１～２週間間隔で皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を追加免疫注射する。
この追加免疫注射の回数としては、２～６回が一般的である。
この場合も、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物は、アジュバントを添加混合して追加免疫注射することが好ましい。
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら全採血を行い、血清を分離して抗体を含む抗血清を得る。
この追加免疫注射の回数としては、２～６回が一般的である。
この場合も、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物は、アジュバントを添加混合して追加免疫注射することが好ましい。
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら全採血を行い、血清を分離して抗体を含む抗血清を得る。
【0081】
この抗血清を、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム等による塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過法又はアフィニティークロマトグラフィー等の方法、あるいはこれらの方法を組み合わせて抗体の精製を行い、ポリクローナル抗体を得る。
【0082】
以上の操作により、ＨＭＧＢ１に結合することができるポリクローナル抗体（ポリクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体）を得ることができる。
【0083】
ところで、免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を用いて動物等に免疫した場合には、得られたポリクローナル抗体中に、この免疫原結合用担体（キャリア）に対する抗体が存在するので、このような免疫原結合用担体（キャリア）に対する抗体の除去処理を行うことが好ましい。
【0084】
この除去処理方法としては、免疫原結合用担体（キャリア）を、得られたポリクローナル抗体の溶液中に添加して生成した凝集物を取り除くか、免疫原結合用担体（キャリア）を不溶化固相に固定化してアフィニティークロマトグラフィーにより除去する方法等を用いることができる。
【0085】
（４）モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体の調製方法
ＨＭＧＢ１に特異的に結合することができるモノクローナル抗体、すなわち、モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体の取得方法であるが、ケラーらの細胞融合法（Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６巻，４９５～４９７頁，１９７５年発行）によるハイブリドーマ、又はエプスタン－バーウイルス等のウイルスによる腫瘍化細胞等の抗体産生細胞により得ることができる。
細胞融合法によるモノクローナル抗体の調製は、以下の操作により行うことができる。
ＨＭＧＢ１に特異的に結合することができるモノクローナル抗体、すなわち、モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体の取得方法であるが、ケラーらの細胞融合法（Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６巻，４９５～４９７頁，１９７５年発行）によるハイブリドーマ、又はエプスタン－バーウイルス等のウイルスによる腫瘍化細胞等の抗体産生細胞により得ることができる。
細胞融合法によるモノクローナル抗体の調製は、以下の操作により行うことができる。
【0086】
まず、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を、哺乳動物（マウス、ヌードマウス、ラットなど、例えば近交系マウスのＢＡＬＢ／ｃ）又は鳥類（ニワトリなど）等に免疫する。この前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物の免疫量は、免疫動物の種類、免疫注射部位等により適宜決められるものであるが、例えば、マウスの場合には一匹当り一回につき０．１μｇ～５ｍｇの前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を免疫注射するのが好ましい。
【0087】
なお、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物は、アジュバントを添加混合して免疫注射することが好ましい。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント又は百日咳菌アジュバント等の公知なものを用いることができる。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
【0088】
初回免疫後、１～２週間間隔で皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を追加免疫注射する。この追加免疫注射の回数としては２～６回が一般的である。この場合も前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物は、アジュバントを添加混合して追加免疫注射することが好ましい。
【0089】
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら、前記の免疫原、又は前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物を生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）に溶解したものを静脈内又は腹腔内に注射し、最終免疫とする。この最終免疫の３～５日後に、免疫動物の脾細胞、リンパ節細胞又は末梢リンパ球等の抗体産生能を有する細胞を取得する。
【0090】
この免疫動物より得られた抗体産生能を有する細胞と哺乳動物等（マウス、ヌードマウス、ラットなど）の骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）とを細胞融合させるのであるが、ミエローマ細胞としてはヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシル・トランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）又はチミジンキナーゼ（ＴＫ）等の酵素を欠損した細胞株のものが好ましく、例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス由来のＨＧＰＲＴ欠損細胞株である、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８株（ＡＴＣＣ ＴＩＢ９）、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８－Ｕ１株（癌研究リサーチソースバンク（ＪＣＲＢ）９０８５）、Ｐ３－ＮＳ１－１－Ａｇ４－１株（ＪＣＲＢ ０００９）、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８・６５３株（ＪＣＲＢ ００２８）又はＳＰ２／Ｏ－Ａｇ－１４株（ＪＣＲＢ ００２９）等を用いることができる。
【0091】
細胞融合は、各種分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リポソーム若しくはセンダイウイルス（ＨＶＪ）等の融合促進剤を用いて行うか、又は電気融合法により行うことができる。
ミエローマ細胞がＨＧＰＲＴ欠損株又はＴＫ欠損株のものである場合には、ヒポキサンチン・アミノプテリン・チミジンを含む選別用培地（ＨＡＴ培地）を用いることにより、抗体産生能を有する細胞とミエローマ細胞の融合細胞（ハイブリドーマ）のみを選択的に培養し、増殖させることができる。
ミエローマ細胞がＨＧＰＲＴ欠損株又はＴＫ欠損株のものである場合には、ヒポキサンチン・アミノプテリン・チミジンを含む選別用培地（ＨＡＴ培地）を用いることにより、抗体産生能を有する細胞とミエローマ細胞の融合細胞（ハイブリドーマ）のみを選択的に培養し、増殖させることができる。
【0092】
このようにして得られたハイブリドーマの培養上清を、前記の免疫原、前記の免疫原と免疫原結合用担体（キャリア）の結合物、又はＨＭＧＢ１を用いてＥＬＩＳＡ法やウエスタンブロット法等の免疫学的測定法により測定することにより、ＨＭＧＢ１に結合する抗体を産生するハイブリドーマを選択することができる。
【0093】
このハイブリドーマ選択方法と限界希釈法等の公知のクローニングの方法を組み合わせて行うことにより、ＨＭＧＢ１に結合する抗体の産生細胞株を単離して得ることができる。
【0094】
このモノクローナル抗体産生細胞株を適当な培地で培養して、その培養上清からモノクローナル抗体（モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体）を得ることができるが、培地としては無血清培地又は低濃度血清培地等を用いてもよく、この場合は抗体の精製が容易となる点で好ましく、ＤＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地又はＡＳＦ培地１０３等の培地を用いることができる。
また、モノクローナル抗体産生細胞株を、これに適合性がありプリスタン等であらかじめ刺激した哺乳動物の腹腔内に注入し、一定期間の後、腹腔にたまった腹水よりモノクローナル抗体（モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体）を得ることもできる。
また、モノクローナル抗体産生細胞株を、これに適合性がありプリスタン等であらかじめ刺激した哺乳動物の腹腔内に注入し、一定期間の後、腹腔にたまった腹水よりモノクローナル抗体（モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体）を得ることもできる。
【0095】
このようにして得られたモノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム若しくは硫酸ナトリウムなどによる塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過法又はアフィニティークロマトグラフィーなどの方法、あるいはこれらの方法を組み合わせること等により、精製されたモノクローナル抗体（モノクローナル抗体である抗ＨＭＧＢ１抗体）を得ることができる。
【0096】
２．担体
「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」における「担体」は、例えば、ポリスチレン、スチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体、アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体、塩化ビニル－アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル－アクリル酸共重合体、ポリアクロレイン、スチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－グリシジル（メタ）アクリル酸共重合体、スチレン－ブタジエン共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、ラテックス、ゼラチン、リポソーム、マイクロカプセル、赤血球、シリカ、アルミナ、カーボンブラック、金属化合物、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなる粒子等を使用することができる。
「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」における「担体」は、例えば、ポリスチレン、スチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体、アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体、塩化ビニル－アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル－アクリル酸共重合体、ポリアクロレイン、スチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－グリシジル（メタ）アクリル酸共重合体、スチレン－ブタジエン共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、ラテックス、ゼラチン、リポソーム、マイクロカプセル、赤血球、シリカ、アルミナ、カーボンブラック、金属化合物、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなる粒子等を使用することができる。
【0097】
本発明において、担体としては、粒子が好ましい。
【0098】
本発明において、担体としては、ラテックス粒子がより好ましい。
【0099】
３.固定化
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」は、抗ＨＭＧＢ１抗体と担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させることにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を担体に「固定化」して調製することができる。
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」は、抗ＨＭＧＢ１抗体と担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させることにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を担体に「固定化」して調製することができる。
【0100】
物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と担体を緩衝液等の溶液中で混合し接触させたり、又は緩衝液等に溶解した抗ＨＭＧＢ１抗体と担体を接触させること等により、抗ＨＭＧＢ１抗体の担体への固定化を行うことができる。
【0101】
また、化学的結合法により行う場合は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と担体をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗ＨＭＧＢ１抗体と担体のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させること等により、抗ＨＭＧＢ１抗体の担体への固定化を行うことができる。
【0102】
なお、２種類以上の抗ＨＭＧＢ１抗体を、担体に固定化してもよい。
【0103】
また、更に非特異的反応や担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化させた担体の表面等に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミンもしくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。
【0104】
４.試料
本発明における試料としては、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗、涙、腹水もしくは羊水などの体液；大便；血管もしくは肝臓などの臓器；組織；細胞；又は大便、臓器、組織もしくは細胞などの抽出液等、ＨＭＧＢ１が含まれる可能性のある生体試料であれば対象となる。
本発明における試料としては、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗、涙、腹水もしくは羊水などの体液；大便；血管もしくは肝臓などの臓器；組織；細胞；又は大便、臓器、組織もしくは細胞などの抽出液等、ＨＭＧＢ１が含まれる可能性のある生体試料であれば対象となる。
【0105】
なお、測定に用いる試料の形態は、液体であることが好ましいので、もし試料が液体でない場合には、抽出処理又は可溶化処理等の処理を既知の方法に従って行い、液体試料としてもよい。
【0106】
また、必要に応じて、試料は濃縮処理を行ってもよい。
【0107】
また、試料は、その測定の前に、希釈液を添加することにより希釈処理を行ってもよい。
例えば、試料を抗ＨＭＧＢ１抗体と接触させ、結合させる前に、試料に希釈液を添加することにより希釈処理を行ってもよい。
この希釈液として、各種水系溶媒を用いることができる。
例えば、水、生理食塩水又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液〔Ｔｒｉｓ緩衝液〕、リン酸緩衝液若しくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩衝液等の水系溶媒を用いることができる。
なお、この緩衝液のｐＨについては、ｐＨ５～ｐＨ１０の範囲にあることが好ましい。
例えば、試料を抗ＨＭＧＢ１抗体と接触させ、結合させる前に、試料に希釈液を添加することにより希釈処理を行ってもよい。
この希釈液として、各種水系溶媒を用いることができる。
例えば、水、生理食塩水又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液〔Ｔｒｉｓ緩衝液〕、リン酸緩衝液若しくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩衝液等の水系溶媒を用いることができる。
なお、この緩衝液のｐＨについては、ｐＨ５～ｐＨ１０の範囲にあることが好ましい。
【0108】
５.抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物の測定
本発明における「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物の測定」は、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定するものである。
本発明における「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物の測定」は、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定するものである。
【0109】
すなわち、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測るものである。つまり、「抗原抗体反応による複合体」の凝集物の生成を測るものである。（凝集反応法）
【0110】
なお、本発明においては、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
【0111】
この抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物の測定の方法としては、例えば、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等を挙げることができる。
【0112】
抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物の測定を、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測る測定法により実施する場合には、溶媒としてリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液又はグッド緩衝液等を用いることができる。
【0113】
なお、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、担体として用いるラテックス粒子の粒径については、特に制限はないものの、ラテックス粒子が測定対象物質（ＨＭＧＢ１）を介して結合し、凝集物を生成する程度、及びこの生成した凝集物の測定の容易さ等の理由より、ラテックス粒子の粒径は、その平均粒径が、０．０４～１μｍであることが好ましい。
【0114】
また、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子を含ませる濃度については、試料中のＨＭＧＢ１の濃度、本発明における抗体のラテックス粒子表面上での分布密度、ラテックス粒子の粒径、試料と測定試薬の混合比率等の各種条件により最適な濃度は異なるので一概にいうことはできない。
【0115】
しかし、通常は、試料と測定試薬が混合され、ラテックス粒子に固定化された「抗ＨＭＧＢ１抗体」と試料中に含まれていた「ＨＭＧＢ１」との抗原抗体反応が行われる測定反応時に、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」の濃度が、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」との接触時において０．００５～１％（ｗ／ｖ）となるようにするのが一般的であり、この場合、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」との接触時においてこのような濃度になるような濃度の「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」を試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬に含ませる。
【0116】
また、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合、担体として用いる粒子の粒径については、特に制限はないものの、その平均粒子径が０．０１～１００μｍの範囲内にあることが好ましく、０．３～１０μｍの範囲内にあることがより好ましい。そして、これらの粒子の比重は、１～１０の範囲内にあることが好ましく、１～２の範囲内にあることがより好ましい。
【0117】
なお、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合の測定に使用する容器としては、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリメタクリレートなどからなる、試験管、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）又はトレイ等を挙げることができる。これらの容器の溶液収容部分（マイクロプレートのウェル等）の底面は、Ｕ型、Ｖ型又はＵＶ型等の底面中央から周辺にかけて傾斜を持つ形状であることが好ましい。
【0118】
測定の操作法は公知の方法等により行うことができるが、例えば、光学的方法により測定する場合には、試料と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を反応させ、エンドポイント法又はレート法により、透過光や散乱光を測定する。
また、目視的に測定する場合には、プレートやマイクロプレート等の前記容器中で、試料と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を反応させ、凝集の状態を目視的に判定する。なお、この目視的に測定する代わりにマイクロプレートリーダー等の機器を用いて測定を行ってもよい。
また、目視的に測定する場合には、プレートやマイクロプレート等の前記容器中で、試料と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を反応させ、凝集の状態を目視的に判定する。なお、この目視的に測定する代わりにマイクロプレートリーダー等の機器を用いて測定を行ってもよい。
【0119】
測定の操作例を以下挙げる。
例えば、まず、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を含有する測定試薬、及び『「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体（ラテックス粒子）」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有する緩衝液（水系溶媒）』を含有する測定試薬等を調製し、準備する。
例えば、まず、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を含有する測定試薬、及び『「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体（ラテックス粒子）」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有する緩衝液（水系溶媒）』を含有する測定試薬等を調製し、準備する。
【0120】
次に、例えば、試料と『「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体（ラテックス粒子）」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有する緩衝液（水系溶媒）』を含有する測定試薬を混合し、次にこの混合物と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」を含有する測定試薬とを混合し、これにより、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」とを接触させる。
本発明においては、この「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
本発明においては、この「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
【0121】
「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触により、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の「抗ＨＭＧＢ１抗体」と、試料に含まれていた「ＨＭＧＢ１」との、抗原抗体反応を行わせる。
そして、これより生成した、「ＨＭＧＢ１」を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の凝集物（・・・－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体〕－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体〕－〔ＨＭＧＢ１〕－・・・）を測定する。
そして、これより生成した、「ＨＭＧＢ１」を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」の凝集物（・・・－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体〕－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体〕－〔ＨＭＧＢ１〕－・・・）を測定する。
【0122】
この生成した凝集物の測定は、この凝集物が存在する測定反応時の反応混合液の透過光又は散乱光などの吸光度等の測定を、エンドポイント法又はレート法等により行うことにより、実施する。
【0123】
そして、試料を測定して得た吸光度等の測定値を、標準物質（ＨＭＧＢ１の濃度が既知の試料）を測定して得た吸光度等の測定値と比較して、試料中に含まれていたＨＭＧＢ１の濃度（定量値）を算出する。
【0124】
なお、透過光又は散乱光などの吸光度等の測定は、透過光を測定しても、又は散乱光を測定してもよく、そして、１波長測定であっても、又は２波長測定（２つの波長による差又は比）であってもよい。
【0125】
なお、測定波長は、３４０ｎｍから１，０００ｎｍの中から選ばれるのが一般的である。
【0126】
なお、本発明におけるＨＭＧＢ１の測定は、用手法により行ってもよいし、又は測定装置等の装置を用いて行ってもよい。
【0127】
測定装置は、汎用自動分析装置であっても、専用の測定装置（専用機）であってもよい。
【0128】
また、本発明におけるＨＭＧＢ１の測定は、１ステップ法（１試薬法）により行ってもよいし、又は２ステップ法（２試薬法）等の複数の操作ステップにより行う方法によって実施してもよい。
【0129】
なお、以下、ラテックス比濁法を測定原理とする方法により、試料中のＨＭＧＢ１の測定を行う場合を例にとって、より具体的に説明を行う。
【0130】
〔１〕 まず、ＨＭＧＢ１の測定試薬として、以下のものを調製し、準備する。
第１試薬：
「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体（ラテックス粒子）」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有する緩衝液（水系溶媒）
第２試薬：
「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」を含有する緩衝液
第１試薬：
「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体（ラテックス粒子）」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を含有する緩衝液（水系溶媒）
第２試薬：
「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」を含有する緩衝液
【0131】
〔２〕 血清等の試料の一定量と前記の第１試薬の一定量を混合し、一定温度下で一定時間静置する。
なお、試料と第１試薬の混合比率（量比）は、適宜選択すればよい。
また、前記の静置時の温度は、室温（１℃～３０℃）又は微温（３０℃～４０℃）の範囲内の一定温度であることが好ましい。（例えば、３７℃等）
なお、試料と第１試薬の混合比率（量比）は、適宜選択すればよい。
また、前記の静置時の温度は、室温（１℃～３０℃）又は微温（３０℃～４０℃）の範囲内の一定温度であることが好ましい。（例えば、３７℃等）
【0132】
〔３〕 一定時間後、前記の試料と第１試薬との混合液に、前記の第２試薬の一定量を添加、混合し、反応混合液として、一定温度下で一定時間静置する。
これにより、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」とを接触させる。
なお、本発明においては、この「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
また、第２試薬の添加量は、適宜選択すればよい。
そして、前記の静置時の温度は、室温（１℃～３０℃）又は微温（３０℃～４０℃）の範囲内の一定温度であることが好ましい。（例えば、３７℃等）
更に、前記の静置の時間は、１分以上、かつ１０分以下の一定時間であることが好ましく、３分以上、かつ５分以下の一定時間であることがより好ましい。
これにより、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」とを接触させる。
なお、本発明においては、この「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
また、第２試薬の添加量は、適宜選択すればよい。
そして、前記の静置時の温度は、室温（１℃～３０℃）又は微温（３０℃～４０℃）の範囲内の一定温度であることが好ましい。（例えば、３７℃等）
更に、前記の静置の時間は、１分以上、かつ１０分以下の一定時間であることが好ましく、３分以上、かつ５分以下の一定時間であることがより好ましい。
【0133】
試料と第１試薬との混合液への第２試薬の添加、混合により、「ラテックス粒子に固定化した抗ＨＭＧＢ１抗体」と、「試料に含まれていたＨＭＧＢ１」との抗原抗体反応を行わせる。
【0134】
そして、この抗原抗体反応により、「・・・－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子〕－〔ＨＭＧＢ１〕－〔抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子〕－〔ＨＭＧＢ１〕－・・・」等の架橋が形成され、ＨＭＧＢ１を介して結合した「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化したラテックス粒子」同士の凝集物が生成する。
【0135】
〔４〕 そして、分析装置又は分光光度計等において、反応混合液に光を照射して、生成したラテックス粒子同士の凝集物により生じるシグナルである適当な波長の透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加を測定することにより、生成した前記複合体凝集物の量、すなわち、試料に含まれていたＨＭＧＢ１の量を求める。
【0136】
〔５〕 そして、「試料の測定を行って得た測定値〔透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加の値〕」と、「標準液又は標準血清等の標準物質〔濃度既知のＨＭＧＢ１を含む試料〕の測定を行って得た測定値〔透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加の値〕」とを比較することにより、測定を行った試料に含まれるＨＭＧＢ１の量（濃度）の算出を行う。
【0137】
６．グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物
（１）試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
（１）試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
【0138】
すなわち、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を、「試料中のＨＭＧＢ１」及び「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」と共存させる。
【0139】
ここで、本発明においては、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物については、特に限定はなく、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物であれば使用することができる。
【0140】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時の濃度は、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）であることが好ましく、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）であることがより好ましい。
【0141】
本発明において、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物は、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物であることが好ましい。
【0142】
【化1】
【0143】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0144】
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは５モル～１８モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは７モル～２１モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは２５モル～６５モルであることが好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0145】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは７モル～１６モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１０モル～１９モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３５モル～５５モルであることがより好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0146】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１０モル～１３モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１２モル～１７モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４０モル～５０モルであることが更に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0147】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１１モル～１２モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１４モル～１５モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４４モル～４５モルであることが特に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0148】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４４.１モルであることが特別に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
なお、この一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃが１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆが１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉが４４.１モルである［（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＦＡ－１９５」（分子量：３，３７０、ＣＡＳ Ｎｏ．９０８２－００－２）を挙げることができる。
なお、この一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃが１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆが１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉが４４.１モルである［（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＦＡ－１９５」（分子量：３，３７０、ＣＡＳ Ｎｏ．９０８２－００－２）を挙げることができる。
【0149】
（２）試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
【0150】
すなわち、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を「試料中のＨＭＧＢ１」及び「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」と共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
【0151】
ここで、本発明においては、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物については、特に限定はなく、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物であれば使用することができる。
【0152】
グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時の濃度は、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）であることが好ましく、０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）であることがより好ましい。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、前記の濃度のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬に含有させる。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、前記の濃度のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬に含有させる。
【0153】
本発明において、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物は、下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物であることが好ましい。
【0154】
【化1】
【0155】
［一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～２０モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは３モル～３０モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３モル～９０モルである。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］
【0156】
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは５モル～１８モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは７モル～２１モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは２５モル～６５モルであることが好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0157】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは７モル～１６モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１０モル～１９モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは３５モル～５５モルであることがより好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0158】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１０モル～１３モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１２モル～１７モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４０モル～５０モルであることが更に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0159】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１１モル～１２モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１４モル～１５モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４４モル～４５モルであることが特に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
【0160】
また、前記の効果の面から、一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃは１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆは１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉは４４.１モルであることが特別に好ましい。（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。
なお、この一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃが１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆが１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉが４４.１モルである［（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＦＡ－１９５」（分子量：３，３７０、ＣＡＳ Ｎｏ．９０８２－００－２）を挙げることができる。
なお、この一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃが１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆが１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉが４４.１モルである［（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＦＡ－１９５」（分子量：３，３７０、ＣＡＳ Ｎｏ．９０８２－００－２）を挙げることができる。
【0161】
なお、本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬における、『試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）の、好ましくは０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００５４％（ｗ／ｖ）の、より好ましくは０．００１６％（ｗ／ｖ）～０．００２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる』ことについて、以下説明を行う。
【0162】
試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が１試薬系の場合、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときのグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の重量をｂｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の容量をｃｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この両辺をｃｍＬで除すると、（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬであるので、前記の式より、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
この式を変換すると、ｂｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この両辺をｃｍＬで除すると、（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬであるので、前記の式より、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
【0163】
また、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が２試薬系の場合であって抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬に含まれているとき、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の重量をｂ２ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬の容量をｃ１ｍＬとし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬の容量をｃ２ｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｂ２ｇ（グラム）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷１００となる。
この式のｂ２ｇ（グラム）を先の式のｂ２ｇ（グラム）に代入すると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｂ２ｇ（グラム）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷１００となる。
この式のｂ２ｇ（グラム）を先の式のｂ２ｇ（グラム）に代入すると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃ２ｍＬとなる。
【0164】
そして、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が２試薬系の場合であって抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬に含まれているとき、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の重量をｂ１ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の重量をｂ２ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬の容量をｃ１ｍＬとし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬の容量をｃ２ｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝｛（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００｝÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ１ｍＬで除すると、（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ１％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬであるので、前記の式より、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
この式を変換すると、（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ１ｍＬで除すると、（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ１％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬであるので、前記の式より、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
【0165】
また、前記の式ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）を変換すると、ｂ２ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ２ｍＬで除すると、（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬであるので、前記の式より、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
この両辺をｃ２ｍＬで除すると、（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬであるので、前記の式より、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
【0166】
７．グリセリン・プロピレンオキシド付加物
（１）試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
（１）試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定方法、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法、及び試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させる。
【0167】
すなわち、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を、「試料中のＨＭＧＢ１」及び「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」と共存させる。
【0168】
ここで、本発明においては、グリセリン・プロピレンオキシド付加物については、特に限定はなく、グリセリン・プロピレンオキシド付加物であれば使用することができる。
【0169】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物の「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時の濃度は、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）であることが好ましい。
【0170】
本発明において、グリセリン・プロピレンオキシド付加物は、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物であることが好ましい。
【0171】
【化2】
【0172】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【0173】
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは４モル～１０モルであることが好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
【0174】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは４．５モル～８モルであることがより好ましい。（モル数は均付加モル数。）
【0175】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは５モル～６モルであることが更に好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
【0176】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは５．６モルであることが特に好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
なお、この一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃが５．６モルである（モル数は平均付加モル数）グリセリン・プロピレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＧＰ－４００」（分子量：４２０、ＣＡＳ Ｎｏ．２５７９１－９６－２）を挙げることができる。
なお、この一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃが５．６モルである（モル数は平均付加モル数）グリセリン・プロピレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＧＰ－４００」（分子量：４２０、ＣＡＳ Ｎｏ．２５７９１－９６－２）を挙げることができる。
【0177】
（２）試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
【0178】
すなわち、「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を「試料中のＨＭＧＢ１」及び「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」と共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又はグリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる。
【0179】
ここで、本発明においては、グリセリン・プロピレンオキシド付加物については、特に限定はなく、グリセリン・プロピレンオキシド付加物であれば使用することができる。
【0180】
グリセリン・プロピレンオキシド付加物の「試料中のＨＭＧＢ１」と「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」との接触時の濃度は、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）であることが好ましい。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、前記の濃度のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物を試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬に含有させる。
本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬においては、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、前記の濃度のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物を試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬に含有させる。
【0181】
本発明において、グリセリン・プロピレンオキシド付加物は、下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物であることが好ましい。
【0182】
【化2】
【0183】
［一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは３モル～１２モルである。（モル数は平均付加モル数。）］
【0184】
本発明において、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」がその輸送時に振とうされることやその他の事由により振とうされることにより「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」が非特異的な凝集が生じること抑制し、そして当該凝集を原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるという効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは４モル～１０モルであることが好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
【0185】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは４．５モル～８モルであることがより好ましい。（モル数は均付加モル数。）
【0186】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは５モル～６モルであることが更に好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
【0187】
また、前記の効果の面から、一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃは５．６モルであることが特に好ましい。（モル数は平均付加モル数。）
なお、この一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃが５．６モルである（モル数は平均付加モル数）グリセリン・プロピレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＧＰ－４００」（分子量：４２０、ＣＡＳ Ｎｏ．２５７９１－９６－２）を挙げることができる。
なお、この一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃが５．６モルである（モル数は平均付加モル数）グリセリン・プロピレンオキシド付加物としては、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＧＰ－４００」（分子量：４２０、ＣＡＳ Ｎｏ．２５７９１－９６－２）を挙げることができる。
【0188】
なお、本発明の試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬における、『試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）の、好ましくは０．００７６％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる濃度の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物を当該「試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬」に含有させる』ことについて、以下説明を行う。
【0189】
試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が１試薬系の場合、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときのグリセリン・プロピレンオキシド付加物の重量をｂｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の容量をｃｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この両辺をｃｍＬで除すると、（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬであるので、前記の式より、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
この式を変換すると、ｂｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この両辺をｃｍＬで除すると、（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬであるので、前記の式より、ｅ％（ｗ／ｖ）＝（ｂｇ（グラム）×１００）÷ｃｍＬ＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃｍＬとなる。
【0190】
また、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が２試薬系の場合であって抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬に含まれているとき、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド付加物の重量をｂ２ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬の容量をｃ１ｍＬとし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬の容量をｃ２ｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｂ２ｇ（グラム）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷１００となる。
この式のｂ２ｇ（グラム）を先の式のｂ２ｇ（グラム）に代入すると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｂ２ｇ（グラム）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷１００となる。
この式のｂ２ｇ（グラム）を先の式のｂ２ｇ（グラム）に代入すると、ａ％（ｗ／ｖ）＝（ｅ２％（ｗ／ｖ）×ｃ２ｍＬ）÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝÷ｃ２ｍＬとなる。
【0191】
そして、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬が２試薬系の場合であって抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬に含まれているとき、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時におけるグリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をａ％（ｗ／ｖ）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド付加物の重量をｂ１ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中のグリセリン・プロピレンオキシド付加物の重量をｂ２ｇ（グラム）とし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬の容量をｃ１ｍＬとし、そのときの試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬の容量をｃ２ｍＬとし、そのときの試料の容量をｄｍＬとすると、ａ％（ｗ／ｖ）＝｛（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００｝÷（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ１ｍＬで除すると、（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ１％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬであるので、前記の式より、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
この式を変換すると、（ｂ１ｇ（グラム）＋ｂ２ｇ（グラム））×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）となる。
この式を変換すると、ｂ１ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ１ｍＬで除すると、（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第１試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ１％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬであるので、前記の式より、ｅ１％（ｗ／ｖ）＝（ｂ１ｇ（グラム）×１００）÷ｃ１ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ２ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ１ｍＬとなる。
【0192】
また、前記の式ｂ１ｇ（グラム）×１００＋ｂ２ｇ（グラム）×１００＝ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）を変換すると、ｂ２ｇ（グラム）×１００＝｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）となる。
この両辺をｃ２ｍＬで除すると、（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬであるので、前記の式より、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
この両辺をｃ２ｍＬで除すると、（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
そして、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることができる、試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬の第２試薬中の前記グリセリン・プロピレンオキシド付加物の濃度をｅ２％（ｗ／ｖ）とすると、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬであるので、前記の式より、ｅ２％（ｗ／ｖ）＝（ｂ２ｇ（グラム）×１００）÷ｃ２ｍＬ＝〔｛ａ％（ｗ／ｖ）×（ｃ１ｍＬ＋ｃ２ｍＬ＋ｄｍＬ）｝－（ｂ１ｇ（グラム）×１００）〕÷ｃ２ｍＬとなる。
【0193】
８．抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法
本発明の「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法」は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
本発明の「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法」は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
【0194】
これにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の非特異的凝集を抑制することができるものである。
【0195】
なお、「試料」、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」、「ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することによる試料中のＨＭＧＢ１の濃度の測定」、「グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の共存」及び「グリセリン・プロピレンオキシド付加物の共存」等については、前記のとおりである。
【0196】
９．試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法
本発明の「試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法」は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
本発明の「試料中のＨＭＧＢ１測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法」は、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体とを接触させ、ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することにより、試料中のＨＭＧＢ１の濃度を測定する、試料中のＨＭＧＢ１の測定において、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）～０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物又は０．００５４％（ｗ／ｖ）～０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させることを特徴とするものである。
【0197】
これにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体において非特異的な凝集が生じることを原因とする試薬ブランクの上昇を抑制することができるものである。
【0198】
なお、「試料」、「抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体」、「ＨＭＧＢ１を介して結合した抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体の凝集物を測定することによる試料中のＨＭＧＢ１の濃度の測定」、「グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物の共存」及び「グリセリン・プロピレンオキシド付加物の共存」等については、前記のとおりである。
【実施例0199】
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【0200】
〔実施例１〕（抗体（２Ｈ６）の調製）
（１） ウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を免疫原として用いた。
（１） ウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を免疫原として用いた。
【0201】
なお、このウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）は、ヒトＨＭＧＢ１（全体長のもの）とアミノ酸配列の相同性が９９．５％であり、ヒトＨＭＧＢ１の替りに用いても問題ないものである。
【0202】
この免疫原としてのウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）の１容量に対して、化学合成アジュバントとしてのＦＲＥＵＮＤアジュバント（ＤＩＦＣＯ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社）を１容量の割合で混合した。
【0203】
（２） 次に、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ）の腹腔内に免疫原として、３００～５００μｇ／匹／回の前記のＨＭＧＢ１溶液とＦＲＥＵＮＤ完全アジュバントとの混合物を注射し、２週間後及び４週間後に、マウスの腹腔内に前記のＨＭＧＢ１溶液とＦＲＥＵＮＤ不完全アジュバントとの混合物を注射した。
【0204】
（３） 最終免疫より４週間後に、ウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）の原液を３００μｇ／匹によりブースターを行い、その翌日に、免疫したマウスの脾臓の細胞と、ミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を１対１から１０対１の割合で混合し、一般的な方法でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕を加えて細胞融合させ、生育したハイブリドーマコロニーを選別した。
【0205】
なお、具体的には、細胞融合は次のように行った。
混合した前記脾臓細胞とミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を遠心して上清を除き、室温でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕１ｍＬに１分間かけて懸濁した後、３７℃で１分間撹拌した。
混合した前記脾臓細胞とミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を遠心して上清を除き、室温でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕１ｍＬに１分間かけて懸濁した後、３７℃で１分間撹拌した。
【0206】
血清不含培地１ｍＬを１分間かけて加える作業を２回行い、その後、血清不含培地７ｍＬを２分間かけて加えた。
【0207】
細胞を数回洗浄した後、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン含有培地に懸濁して９６穴マイクロタイタープレートに分注して、３７℃において５％ＣＯ２存在下で培養した。
【0208】
生育したモノクローナル抗体産生細胞株（融合細胞株）の選別の方法としては、細胞融合から７～１４日後、ウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を固相化し、融合細胞培養上清を一次抗体としたＥＬＩＳＡ法の系にて行った。
【0209】
なお、このＥＬＩＳＡ法は具体的には、次のように行った。
（ｉ） 前記の参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１、及びウシＨＭＧＢ２（ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性１００．０％）のそれぞれをリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）により１μｇ／ｍＬの濃度となるように調製したもの、又は対照としてのリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を、各々９６穴マイクロタイタープレート〔Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ社（米国・イリノイ州）〕のウェルに１００μＬ注入し、５℃、１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれを、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化し、更に１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水にて５℃で１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、ブロッキングした。
（ｉ） 前記の参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１、及びウシＨＭＧＢ２（ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性１００．０％）のそれぞれをリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）により１μｇ／ｍＬの濃度となるように調製したもの、又は対照としてのリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を、各々９６穴マイクロタイタープレート〔Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ社（米国・イリノイ州）〕のウェルに１００μＬ注入し、５℃、１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれを、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化し、更に１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水にて５℃で１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、ブロッキングした。
【0210】
（ｉｉ） 次に、前記（ｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを洗浄液〔０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水〕で３回洗浄した。
【0211】
（ｉｉｉ） 次に、前記（ｉｉ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートのウェルに、これらの融合細胞培養上清溶液のそれぞれを試料として１００μＬ注入し、３７℃で２時間静置し、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化された前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれと、前記の各融合細胞培養上清溶液に含まれるモノクローナル抗体とを各々反応させた。
【0212】
（ｉｖ） 次に、前記（ｉｉｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを前記の洗浄液で３回洗浄した。
【0213】
（ｖ） 次に、前記（ｉｖ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートの各ウェルに、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝生理食塩水によって１０００倍希釈したＰＯＤ標識抗マウスＩｇＧ抗体〔ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ社（デンマーク国）〕を１００μＬ注入し、３７℃で２時間静置し、反応を行わせた。
【0214】
（ｖｉ） 次に、前記（ｖ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを前記の洗浄液で３回洗浄した。
【0215】
（ｖｉｉ） 次に、０．２ｍＭのＥＤＴＡ・２ナトリウムを含む０．０４５％の３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン塩酸塩水溶液（ｐＨ２．０）よりなる発色液と、５ｍＭ過酸化水素、４１ｍＭクエン酸、０．２ｍＭのＥＤＴＡ・２ナトリウムを含む６０ｍＭリン酸二ナトリウム水溶液（ｐＨ４．３）よりなる基質液とを、１：１で混合して調製した発色基質液の１００μＬを、前記（ｖｉ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートの各ウェルに注入し、室温にて３０分間静置し、反応を行わせ、発色させた。
【0216】
その後、０．７Ｎ硫酸よりなる反応停止液を各ウェルに１００μＬ分注し、発色反応を停止させた。
【0217】
（ｖｉｉｉ） 次に、前記（ｖｉｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルについて、分光光度計を用いて、主波長４５０ｎｍ及び副波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【0218】
上記の測定により、ＨＭＧＢ１に結合する抗体を産生する融合細胞株を選別し、そして、生育した融合細胞株の中から１つのクローンを確立し、１８１２０８ ２Ｈ６株と命名した。
【0219】
（４） この選別したモノクローナル抗体産生細胞株からＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を次のように精製した。
【0220】
このモノクローナル抗体産生細胞株を、ＰＦＨＭ－ＩＩ（ＧＩＢＣＯ社）を用いてＣＯ２インキュベータ内３７℃で培養した。
【0221】
培養後、上清中のＩｇＧをプロテインＡカラム〔ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社（スウェーデン国）〕に結合させた。
【0222】
結合させたＩｇＧを、１００ｍＭクエン酸水溶液（ｐＨ３．０）で溶出した。
【0223】
溶出液１容量に対して、０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）緩衝液１容量を添加し、精製ＩｇＧとして、ＨＭＧＢ１に結合する抗体をモノクローナル抗体産生細胞株（１８１２０８ ２Ｈ６）より取得した。
【0224】
このモノクローナル抗体を「抗体（２Ｈ６）」と名付けた。
【0225】
抗体（２Ｈ６）のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２０８ ２Ｈ６株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４３」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0226】
〔実施例２〕（抗体（２Ｄ４）の調製）
前記実施例１とは別の時に、前記実施例１の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、再度、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の調製を行った。
前記実施例１とは別の時に、前記実施例１の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、再度、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の調製を行った。
【0227】
その結果、生育した融合細胞株の中から一つのクローンを確立し、１８１２１２ ２Ｄ４株と命名した。
【0228】
そして、１８１２１２ ２Ｄ４株のモノクローナル抗体産生細胞株から抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体を得ることができた。
【0229】
このモノクローナル抗体を「抗体（２Ｄ４）」と名付けた。
【0230】
抗体（２Ｄ４）のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２１２ ２Ｄ４株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４２」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0231】
〔実施例３〕（抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体の調製）
前記実施例１及び実施例２とは別の時に、前記実施例１の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、ＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体の調製を行った。
前記実施例１及び実施例２とは別の時に、前記実施例１の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、ＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体の調製を行った。
【0232】
その結果、生育した融合細胞株の中から一つのクローンを確立し、１８１２１２ ５Ｄ１株と命名した。
【0233】
そして、１８１２１２ ５Ｄ１株のモノクローナル抗体産生細胞株からＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体を得ることができた。
【0234】
このモノクローナル抗体を「抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体」と名付けた。
【0235】
抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２１２ ５Ｄ１株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４４」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0236】
〔実施例４〕（グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物共存時の効果の確認）
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させて、試料中のＨＭＧＢ１を測定し、検量線を作成して、本発明の効果を確認した。
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させて、試料中のＨＭＧＢ１を測定し、検量線を作成して、本発明の効果を確認した。
【0237】
〔１〕試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬
１．第１試薬
２００ｍＭの緩衝液を含む溶液（ｐＨ８．０）を第１試薬とした。
１．第１試薬
２００ｍＭの緩衝液を含む溶液（ｐＨ８．０）を第１試薬とした。
【0238】
２．第２試薬
（１）第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記実施例１で調製した抗体（２Ｈ６）と前記実施例２で調製した抗体（２Ｄ４）を等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物」と名付けた。
（１）第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記実施例１で調製した抗体（２Ｈ６）と前記実施例２で調製した抗体（２Ｄ４）を等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物」と名付けた。
【0239】
（ｂ） 前記（ａ）の抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を、緩衝液で１～２ｍｇ／ｍＬになるよう希釈し、この抗体液１ｍＬとラテックス粒子（藤倉化成社［日本国］）１ｍLを混合して接触させ、２～８℃で１６時間静置し、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物をラテックス粒子に固定化した。
【0240】
（ｃ） 抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子に、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むトリス緩衝液（ｐＨ７．４）の６．０ｍＬを添加混合し、ブロッキング処理を行い、ブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子を得た。
【0241】
（ｄ） 前記実施例３で調製した抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を、緩衝液で１～２ｍｇ／ｍＬになるよう希釈し、この抗体液１ｍＬとラテックス粒子（藤倉化成社［日本国］）１ｍLを混合して接触させ、２～８℃で１６時間静置し、抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体をラテックス粒子に固定化した。
【0242】
（ｅ） 抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子に、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むトリス緩衝液（ｐＨ７．４）の６．０ｍＬを添加混合し、ブロッキング処理を行い、ブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子を得た。
【0243】
（ｆ） 前記（ｃ）で調製したブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子と、前記（ｅ）で調製したブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子とを、それぞれ等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物」と名付けた。
【0244】
（ｇ） 下記一般式（１）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物において、この一般式（１）中、ａ＋ｂ＋ｃが１１.５モルであり、ｄ＋ｅ＋ｆが１４.３モルであり、ｇ＋ｈ＋ｉが４４.１モルである［（モル数はいずれも平均付加モル数。）｛｝内はランダム付加である。］グリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物である、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＦＡ－１９５」（分子量：３，３７０、ＣＡＳ Ｎｏ．９０８２－００－２）を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、前記（ｆ）の抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0245】
【化1】
【0246】
なお、この第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.００２％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.０００４％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0247】
（２）第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0248】
なお、この第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.００５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００１％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0249】
（３）第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００７５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００７５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0250】
なお、この第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.００７５４％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００１６％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0251】
（４）第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0252】
なお、この第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.０１％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００２２％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0253】
（５）第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０２５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０２５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0254】
なお、この第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.０２５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００５４％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0255】
（６）第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0256】
なお、この第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）に含まれる「サンニックス ＦＡ－１９５」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）中の濃度０.０５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.０１％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0257】
（７）第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合せずに、』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、「サンニックス ＦＡ－１９５」を含有しない第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を混合後０.００２％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、』するところを、『「サンニックス ＦＡ－１９５」を抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合せずに、』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、「サンニックス ＦＡ－１９５」を含有しない第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）」と名付けた。
【0258】
〔２〕試料
１．試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）
１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液を、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
１．試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）
１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液を、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0259】
２． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0260】
３． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0261】
４． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0262】
５． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0263】
６． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0264】
〔３〕振とう処理
前記〔１〕の２で調製した、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）及び第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）をそれぞれ半量ずつに分け、容器に入れ、密栓した。
前記〔１〕の２で調製した、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.０００４％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００１％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００１６％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００２２％・ＦＡ－１９５）、第２試薬（０.００５４％・ＦＡ－１９５）及び第２試薬（０.０１％・ＦＡ－１９５）をそれぞれ半量ずつに分け、容器に入れ、密栓した。
【0265】
半量ずつに分けた一方を、冷蔵（２～８℃）にて、１００回／分で３日間以上振とう処理を行い、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうあり）」とした。
また、半量ずつに分けたもう一方を、冷蔵（２～８℃）にて、３日間以上静置し、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうなし）」とした。
また、半量ずつに分けたもう一方を、冷蔵（２～８℃）にて、３日間以上静置し、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうなし）」とした。
【0266】
〔４〕試料中のＨＭＧＢ１の測定
１．第２試薬（振とうあり）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
１．第２試薬（振とうあり）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
【0267】
測定は、日立７１８０形自動分析装置（日立ハイテク社［日本国］）を使用して行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから吸光度変化量の測定を行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから吸光度変化量の測定を行った。
【0268】
２．第２試薬（振とうなし）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
【0269】
測定は、日立７１８０形自動分析装置（日立ハイテク社［日本国］）を使用して行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
【0270】
〔５〕測定結果
１．第２試薬として第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
１．第２試薬として第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0271】
第２試薬として第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１に示した。
【0272】
この図１において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１において、「□」は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１において、「□」は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0273】
この図１より、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、大きくかい離していることが分かる。
また、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線は、その傾きが大きく低下していることが分かる。
また、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線は、その傾きが大きく低下していることが分かる。
【0274】
また、この図１より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０８近辺まで大きくなってしまっているが、第２試薬（０％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0275】
このことより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を振とうすることにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体に非特異的な凝集が生じ、それを原因とする試薬ブランクの上昇が生じることが確かめられた。
【0276】
２．第２試薬として第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0277】
第２試薬として第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図２に示した。
【0278】
この図２において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図２において、「□」は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図２において、「□」は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0279】
この図２より、第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、かい離していることが分かる。
【0280】
また、この図２より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０６近辺まで大きくなってしまっているが、第２試薬（０．０００４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0281】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．０００４％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができず、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができないことが確かめられた。
【0282】
３．第２試薬として第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0283】
第２試薬として第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図３に示した。
【0284】
この図３において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図３において、「□」は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図３において、「□」は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0285】
この図３より、第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、並行していることが分かる。
【0286】
また、この図３より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０２近辺と小さいものであることが分かり、第２試薬（０．００１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0287】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0288】
４．第２試薬として第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0289】
第２試薬として第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図４に示した。
【0290】
この図４において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図４において、「□」は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図４において、「□」は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0291】
この図４より、第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ近接していることが分かる。
【0292】
また、この図４より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．００１６％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0293】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００１６％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0294】
５．第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0295】
第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図５に示した。
【0296】
この図５において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図５において、「□」は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図５において、「□」は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0297】
この図５より、第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0298】
また、この図５より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．００２２％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0299】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0300】
６．第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0301】
第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図６に示した。
【0302】
この図６において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図６において、「□」は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図６において、「□」は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0303】
この図６より、第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0304】
また、この図６より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．００５４％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0305】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0306】
７．第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0307】
第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図７に示した。
【0308】
この図７において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図７において、「□」は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図７において、「□」は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0309】
この図７より、第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0310】
また、この図７より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．０１％・ＦＡ－１９５）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0311】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド・エチレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0312】
〔実施例５〕（グリセリン・プロピレンオキシド付加物共存時の効果の確認）
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、グリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させて、試料中のＨＭＧＢ１を測定し、検量線を作成して、本発明の効果を確認した。
試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、グリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させて、試料中のＨＭＧＢ１を測定し、検量線を作成して、本発明の効果を確認した。
【0313】
〔１〕試料中のＨＭＧＢ１の測定試薬
１．第１試薬
２００ｍＭの緩衝液を含む溶液（ｐＨ８．０）を第１試薬とした。
１．第１試薬
２００ｍＭの緩衝液を含む溶液（ｐＨ８．０）を第１試薬とした。
【0314】
２．第２試薬
（１）第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記実施例１で調製した抗体（２Ｈ６）と前記実施例２で調製した抗体（２Ｄ４）を等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物」と名付けた。
（１）第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記実施例１で調製した抗体（２Ｈ６）と前記実施例２で調製した抗体（２Ｄ４）を等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物」と名付けた。
【0315】
（ｂ） 前記（ａ）の抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を、緩衝液で１～２ｍｇ／ｍＬになるよう希釈し、この抗体液１ｍＬとラテックス粒子（藤倉化成社［日本国］）１ｍLを混合して接触させ、２～８℃で１６時間静置し、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物をラテックス粒子に固定化した。
【0316】
（ｃ） 抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子に、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むトリス緩衝液（ｐＨ７．４）の６．０ｍＬを添加混合し、ブロッキング処理を行い、ブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子を得た。
【0317】
（ｄ） 前記実施例３で調製した抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を、緩衝液で１～２ｍｇ／ｍＬになるよう希釈し、この抗体液１ｍＬとラテックス粒子（藤倉化成社［日本国］）１ｍLを混合して接触させ、２～８℃で１６時間静置し、抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体をラテックス粒子に固定化した。
【0318】
（ｅ） 抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子に、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むトリス緩衝液（ｐＨ７．４）の６．０ｍＬを添加混合し、ブロッキング処理を行い、ブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子を得た。
【0319】
（ｆ） 前記（ｃ）で調製したブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体混合物を固定化したラテックス粒子と、前記（ｅ）で調製したブロッキング処理を行った抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子とを、それぞれ等量混合して、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体を固定化したラテックス粒子の混合物を調製した。これを、「抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物」と名付けた。
【0320】
（ｇ） 下記一般式（２）で示されるグリセリン・プロピレンオキシド付加物において、この一般式（２）中、ａ＋ｂ＋ｃが５.６モルである（モル数は平均付加モル数）グリセリン・プロピレンオキシド付加物である、三洋化成工業株式会社から販売されている「サンニックス ＧＰ－４００」（分子量：４２０、ＣＡＳ Ｎｏ．２５７９１－９６－２）を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、前記（ｆ）の抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0321】
【化2】
【0322】
なお、この第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）中の濃度０.０１％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００２２％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0323】
（２）第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０２５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０２５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0324】
なお、この第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）中の濃度０.０２５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００５４％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0325】
（３）第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０３５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０３５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0326】
なお、この第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）中の濃度０.０３５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.００７６％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0327】
（４）第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0328】
なお、この第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）中の濃度０.０５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.０１％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0329】
（５）第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０７５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０７５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0330】
なお、この第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）中の濃度０.０７５％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.０１６％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0331】
（６）第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.１０％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.１０％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0332】
なお、この第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）に含まれる「サンニックス ＧＰ－４００」は、後述の試料中のＨＭＧＢ１の測定における、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物との接触時に共存する濃度が、第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）中の濃度０.１０％（ｗ／ｖ）を希釈比率４．６で除した値の０.０２２％（ｗ／ｖ）となるものである。
【0333】
（７）第２試薬（０％・ＧＰ－４００）
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合せずに、』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、「サンニックス ＧＰ－４００」を含有しない第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
（ａ） 前記（１）の（ａ）～（ｆ）の記載のとおりに行い、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物を調製した。
（ｂ） 前記（１）の（ｇ）において、『「サンニックス ＧＰ－４００」を混合後０.０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合し、』するところを、『「サンニックス ＧＰ－４００」を抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体固定化ラテックス粒子混合物に混合せずに、』するように変更する他は前記（１）の（ｇ）の記載のとおりに行い、「サンニックス ＧＰ－４００」を含有しない第２試薬を調製した。これを、「第２試薬（０％・ＧＰ－４００）」と名付けた。
【0334】
〔２〕試料
１．試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）
１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液を、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
１．試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）
１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液を、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0335】
２． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が５ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：５ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0336】
３． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が１０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：１０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0337】
４． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が２０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：２０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0338】
５． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が４０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：４０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0339】
６． 試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬになるように１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む緩衝液で希釈して、ＨＭＧＢ１濃度が８０ｎｇ／ｍＬの試料を調製した。
これを、「試料（ＨＭＧＢ１濃度：８０ｎｇ／ｍＬ）」と名付けた。
【0340】
〔３〕振とう処理
前記〔１〕の２で調製した、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）及び第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）をそれぞれ半量ずつに分け、容器に入れ、密栓した。
前記〔１〕の２で調製した、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００２２％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００５４％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.００７６％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.０１％・ＧＰ－４００）、第２試薬（０.０１６％・ＧＰ－４００）及び第２試薬（０.０２２％・ＧＰ－４００）をそれぞれ半量ずつに分け、容器に入れ、密栓した。
【0341】
半量ずつに分けた一方を、冷蔵（２～８℃）にて、１００回／分で３日間以上振とう処理を行い、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうあり）」とした。
また、半量ずつに分けたもう一方を、冷蔵（２～８℃）にて、３日間以上静置し、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうなし）」とした。
また、半量ずつに分けたもう一方を、冷蔵（２～８℃）にて、３日間以上静置し、これらの第２試薬を「第２試薬（振とうなし）」とした。
【0342】
〔４〕試料中のＨＭＧＢ１の測定
１．第２試薬（振とうあり）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
１．第２試薬（振とうあり）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
【0343】
測定は、日立７１８０形自動分析装置（日立ハイテク社［日本国］）を使用して行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうあり）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
【0344】
２．第２試薬（振とうなし）を使用しての測定
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
試料中のＨＭＧＢ１測定試薬の第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬を使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を使用して、前記〔２〕の試料中のＨＭＧＢ１の測定を行った。
【0345】
測定は、日立７１８０形自動分析装置（日立ハイテク社［日本国］）を使用して行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合し、その５分後に前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬を添加混合した。
具体的には、前記〔２〕の試料の２４μＬを使用し、第１試薬として前記〔１〕の１の第１試薬の１２０μＬを使用し、第２試薬として前記〔３〕の第２試薬（振とうなし）のそれぞれの第２試薬の４０μＬを使用し、２ポイント－エンド法にて吸光度変化量の測定を行った。
なお、反応温度は３７℃、反応時間は前記〔２〕の試料に前記〔１〕の１の第１試薬を添加混合してから計１０分間、測定波長８００ｎｍにて吸光度変化量の測定を行った。
【0346】
〔５〕測定結果
１．第２試薬として第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
１．第２試薬として第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0347】
第２試薬として第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図８に示した。
【0348】
この図８において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図８において、「□」は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図８において、「□」は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0349】
この図８より、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、大きくかい離していることが分かる。
また、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線は、その傾きが大きく低下していることが分かる。
また、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線は、その傾きが大きく低下していることが分かる。
【0350】
また、この図８より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０８近辺まで大きくなってしまっているが、第２試薬（０％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0351】
このことより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を振とうすることにより、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体に非特異的な凝集が生じ、それを原因とする試薬ブランクの上昇が生じることが確かめられた。
【0352】
２．第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0353】
第２試薬として第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図９に示した。
【0354】
この図９において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図９において、「□」は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図９において、「□」は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0355】
この図９より、第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、かい離していることが分かる。
【0356】
また、この図９より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０５近辺まで大きくなってしまっているが、第２試薬（０．００２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0357】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができず、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができないことが確かめられた。
【0358】
３．第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0359】
第２試薬として第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１０に示した。
【0360】
この図１０において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１０において、「□」は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１０において、「□」は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0361】
この図１０より、第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、並行していることが分かる。
【0362】
また、この図１０より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときは吸光度変化量が０．０１５近辺と小さいものであることが分かり、第２試薬（０．００５４％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときは吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0363】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００５４％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0364】
４．第２試薬として第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0365】
第２試薬として第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１１に示した。
【0366】
この図１１において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１１において、「□」は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１１において、「□」は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0367】
この図１１より、第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0368】
また、この図１１より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．００７６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0369】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．００７６％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0370】
５．第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0371】
第２試薬として第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１２に示した。
【0372】
この図１２において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１２において、「□」は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１２において、「□」は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0373】
この図１２より、第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0374】
また、この図１２より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．０１％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0375】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．０１％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0376】
６．第２試薬として第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0377】
第２試薬として第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１３に示した。
【0378】
この図１３において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１３において、「□」は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１３において、「□」は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0379】
この図１３より、第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0380】
また、この図１３より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．０１６％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0381】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．０１６％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【0382】
７．第２試薬として第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定結果
【0383】
第２試薬として第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）又は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用した場合の測定結果を、試料中のＨＭＧＢ１を測定したときの検量線のグラフとして図１４に示した。
【0384】
この図１４において、横軸は試料中のＨＭＧＢ１濃度（単位：ｎｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は測定値である測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量（単位：吸光度変化量×１０，０００）を示す。
そして、この図１４において、「□」は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
そして、この図１４において、「□」は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示し、「●」は第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）を示す。
【0385】
この図１４より、第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときの検量線と第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときの検量線は、ほぼ重なっていることが分かる。
【0386】
また、この図１４より、試料中のＨＭＧＢ１濃度が０ｎｇ／ｍＬであるときの測定値（測定波長８００ｎｍにおける吸光度変化量）である試薬ブランクは、第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうあり）を使用したときも、第２試薬（０．０２２％・ＧＰ－４００）（振とうなし）を使用したときも、それぞれ吸光度変化量が０に近いことが分かる。
【0387】
このことより、試料中のＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体との接触時に、０．０２２％（ｗ／ｖ）のグリセリン・プロピレンオキシド付加物を共存させた場合は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が振とうされることにより抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体が非特異的な凝集を生ずることを抑制することができ、それにより当該凝集が原因である試薬ブランクの上昇を抑制することができることが確かめられた。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】