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特開2024-100603液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024100603
(43)【公開日】2024-07-26
(54)【発明の名称】液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20240719BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240719BHJP
A61K 38/02 20060101ALI20240719BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20240719BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240719BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20240719BHJP
C12N 5/0781 20100101ALI20240719BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20240719BHJP
G01N 33/15 20060101ALI20240719BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240719BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00 ZNA
A61P43/00 105
A61P43/00 111
A61K38/02
A61K31/7088
A61K48/00
A61K39/00 H
A61P43/00 121
C12N5/0781
G01N33/50 Z
G01N33/15 Z
C12N15/12
【審査請求】未請求
【請求項の数】42
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023004713
(22)【出願日】2023-01-16
(71)【出願人】
【識別番号】500409219
【氏名又は名称】学校法人関西医科大学
(74)【代理人】
【識別番号】110003557
【氏名又は名称】弁理士法人レクシード・テック
(72)【発明者】
【氏名】松田 達志
【テーマコード（参考）】
2G045
4B065
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
2G045AA40
2G045DA36
2G045DA37
4B065AA94X
4B065AC14
4B065BB40
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA02
4C084AA13
4C084AA17
4C084BA44
4C084DA01
4C084NA14
4C084ZC01
4C084ZC41
4C084ZC42
4C084ZC75
4C085AA03
4C085BB11
4C085EE03
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZC01
4C086ZC41
4C086ZC42
4C086ZC75
(57)【要約】
【課題】 Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減した状態で、かつ、抗原特異的な抗体産生を制御免疫機能の異常を処置しうる液性免疫応答の制御剤を提供する。
【解決手段】 本開示の液性免疫応答の制御剤は、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。
【選択図】 図２
【解決手段】 本開示の液性免疫応答の制御剤は、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。
【選択図】 図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、液性免疫応答の制御剤。
【請求項2】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、請求項１に記載の制御剤。
【請求項3】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項２に記載の制御剤。
【請求項4】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、請求項１から３のいずれか一項に記載の制御剤。
【請求項5】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤。
【請求項6】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、請求項５に記載の制御剤。
【請求項7】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項６に記載の制御剤。
【請求項8】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、請求項５から７のいずれか一項に記載の制御剤。
【請求項9】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤。
【請求項10】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、請求項９に記載の制御剤。
【請求項11】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項１０に記載の制御剤。
【請求項12】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、請求項９から１１のいずれか一項に記載の制御剤。
【請求項13】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物。
【請求項14】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の増強である、請求項１３に記載の組成物。
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の増強である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項16】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の抑制である、請求項１３または１４のいずれかに記載の組成物。
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の抑制である、請求項１３または１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項17】
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、請求項１３または１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項18】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物。
【請求項19】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化促進である、請求項１８に記載の組成物。
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化促進である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制である、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の組成物。
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制である、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項22】
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項23】
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物。
【請求項24】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制である、請求項２３に記載の組成物。
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項25】
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項26】
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進である、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の組成物。
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進である、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項27】
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項28】
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法。
【請求項29】
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項２８に記載のスクリーニング方法。
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項２８に記載のスクリーニング方法。
【請求項30】
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、請求項２９に記載のスクリーニング方法。
【請求項31】
前記検出工程では、前記非ヒト動物における抗体量を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、請求項３０に記載のスクリーニング方法。
【請求項32】
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項２８から３１のいずれか一項に記載のスクリーニング方法。
【請求項33】
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法。
【請求項34】
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項３３に記載のスクリーニング方法。
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項３３に記載のスクリーニング方法。
【請求項35】
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、請求項３４に記載のスクリーニング方法。
【請求項36】
前記検出工程では、前記非ヒト動物における抗体量を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、請求項３５に記載のスクリーニング方法。
【請求項37】
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項３３から３６のいずれか一項に記載のスクリーニング方法。
【請求項38】
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法。
【請求項39】
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項３８に記載のスクリーニング方法。
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、請求項３８に記載のスクリーニング方法。
【請求項40】
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、請求項３９に記載のスクリーニング方法。
【請求項41】
前記検出工程では、前記非ヒト動物における抗体量を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、請求項４０に記載のスクリーニング方法。
【請求項42】
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項３８から４１のいずれか一項に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【0002】
自己免疫疾患は、免疫機能の異常により、免疫系が自己を攻撃することにより生じる。一例として、全身性エリテマトーデス（Systemic lupus erythematosus：ＳＬＥ）等の自己免疫疾患では、自己の組織に発現する自己抗原を異物と認識し、前記自己抗原に対する抗体（自己抗体）の産生が誘導される。そして、前記自己抗体によって、前記自己の組織に炎症が生じ、最悪の場合は死に至る（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】Ding X, Diaz LA, Fairley JA, Giudice GJ, Liu Z. “The anti-desmoglein 1 autoantibodies in pemphigus vulgaris sera are pathogenic.”, J Invest Dermatol., 1999 May;112(5):739-43. doi: 10.1046/j.1523-1747.1999.00585.x. PMID: 10233765.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
自己抗体が関連するＳＬＥ等の自己免疫疾患の治療薬としては、Ｂ細胞除去機能のあるリツキサン（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）等の薬剤が使用され、前記Ｂ細胞を除去することにより、その中に含まれている自己抗体産生性のＢ細胞も除去し、自己抗体の産生を抑制している。しかしながら、リツキサンは、Ｂ細胞全体を除去するため、自然抗体を産生するＢ１Ｂ細胞も除去される。これにより、リツキサンで自然抗体が消失するため、日和見感染等のリスクが生じる。
【0005】
そこで、本開示は、例えば、Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減し、かつ、抗原特異的な抗体産生を制御しうる、液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法等の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
前記目的を達成するため、本開示は、液性免疫応答の制御剤（以下、「制御剤」ともいう）であって、前記液性免疫応答の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。
【0007】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤（以下、「分化制御剤」ともいう）は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。
【0008】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤（以下、「細胞死制御剤」ともいう）は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。
【0009】
本開示の液性免疫応答の制御組成物（以下、「制御組成物」ともいう）は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。
【0010】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物（以下、「分化制御組成物」ともいう）は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。
【0011】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物（以下、「細胞死制御組成物」ともいう）は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。
【0012】
本開示の液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む。
【0013】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程を含む。
【0014】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む。
【発明の効果】
【0015】
本開示によれば、Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減し、かつ、抗原特異的な抗体産生を制御できる。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【発明を実施するための形態】
【0017】
＜定義＞
本明細書において、「ＡＤＰリボシル化因子１」（ADP ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）は、低分子量Ｇタンパク質Ｒａｓスーパーファミリーに属し、かつ、前記ＡＤＰリボシル化因子ファミリー（Ａｒｆファミリー）に属するタンパク質を意味する。前記Ａｒｆファミリーは、６つのアイソフォームが同定されており、Ａｒｆ１、Ａｒｆ２、Ａｒｆ３、Ａｒｆ４、Ａｒｆ５、およびＡｒｆ６が知られている。
本明細書において、「ＡＤＰリボシル化因子１」（ADP ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）は、低分子量Ｇタンパク質Ｒａｓスーパーファミリーに属し、かつ、前記ＡＤＰリボシル化因子ファミリー（Ａｒｆファミリー）に属するタンパク質を意味する。前記Ａｒｆファミリーは、６つのアイソフォームが同定されており、Ａｒｆ１、Ａｒｆ２、Ａｒｆ３、Ａｒｆ４、Ａｒｆ５、およびＡｒｆ６が知られている。
【0018】
前記Ａｒｆ１は、グアノシン三リン酸（Guanosine triphosphate：ＧＴＰ）結合型Ａｒｆ１およびグアノシン二リン酸（Guanosine diphosphate：ＧＤＰ）結合型Ａｒｆ１の２つの型を有する。前記ＧＴＰ結合型Ａｒｆ１は、活性化型であり、前記ＧＤＰ結合型Ａｒｆ１は、不活性化型である。前記ＧＡＰ結合型Ａｒｆ１は、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（GTPase-activating protein：ＧＡＰ）によって加水分解が促進され、不活性型である前記ＧＤＰ結合型Ａｒｆ１に変換される。前記ＧＤＰ結合型Ａｒｆ１は、グアニンヌクレオチド交換因子（Guanine-nucleotide exchange factor：ＧＥＦ）によって、活性型である前記ＧＴＰ結合型Ａｒｆ１に変換される。前記Ａｒｆ１は、２つの型により、例えば、小胞輸送を制御する。前記ＧＴＰ結合型Ａｒｆ１は、小胞の出芽を促進し、前記ＧＴＰ結合型Ａｒｆ１が前記ＧＤＰ結合型Ａｒｆ１に変換されると、前記小胞が輸送される。各種動物由来のＡｒｆ１は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ヒト由来Ａｒｆ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ（http://www.uniprot.org/）のアクセッション番号Ｐ８４０７７で登録されている下記のアミノ酸配列（配列番号１）からなるタンパク質があげられる。また、ヒト由来Ａｒｆ１遺伝子は、例えば、ＮＣＢＩのアクセッション番号NM_001024226で登録されている核酸配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。
【0019】
ヒトＡｒｆ１タンパク質（配列番号１）
MGNIFANLFKGLFGKKEMRILMVGLDAAGKTTILYKLKLGEIVTTIPTIGFNVETVEYKNISFTVWDVGGQDKIRPLWRHYFQNTQGLIFVVDSNDRERVNEAREELMRMLAEDELRDAVLLVFANKQDLPNAMNAAEITDKLGLHSLRHRNWYIQATCATSGDGLYEGLDWLSNQLRNQK
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【0020】
本明細書において、「ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質」（GTPase-activating protein：ＧＡＰ）は、Ｇタンパク質に結合したＧＴＰをＧＤＰに変換することにより、Ｇタンパク質の機能調整を行うタンパク質を意味する。前記ＧＡＰは、例えば、ＡＤＰリボシル化因子GTPアーゼ活性化タンパク質１（ADP ribosylation factor GTPase activating protein：ARFGAP1）、Ran GTPアーゼ活性化タンパク質１(Ran GTPase activating protein 1：RanGAP 1）、およびRho特異的GTPアーゼ活性化タンパク質（Rho specific GTPase activating protein）等があげられる。
【0021】
本明細書において、「グアニンヌクレオチド交換因子」（Guanine-nucleotide exchange factor：ＧＥＦ）は、Ｇタンパク質において、ＧＤＰを放出させることにより、ＧＴＰとの結合を可能にするタンパク質を意味する。前記ＧＥＦは、例えば、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）、Ranグアニンヌクレオチド交換因子（Ran Guanine Nucleotide Exchange Factor：RanGEF）、およびRho特異的グアニンヌクレオチド交換因子（Rho guanine nucleotide exchange factor：RhoGEF）等があげられる。前記ＡｒｆＧＥＦ１は、brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange protein 1とも呼ばれる。前記ＡｒｆＧＥＦ１は、Ａｒｆ１において、ＧＤＰからＧＴＰへの交換を促進する。各種動物由来のＡｒｆＧＥＦ１は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ヒト由来ＡｒｆＧＥＦ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔのアクセッション番号Ｑ９Ｙ６Ｄ６に登録されている下記のアミノ酸配列（配列番号２）からなるタンパク質があげられる。また、ヒト由来ＡｒｆＧＥＦ１遺伝子は、例えば、ＮＣＢＩのアクセッション番号NM_001413184.1で登録されている核酸配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。
【0022】
ヒトＡｒｆＧＥＦ１タンパク質（配列番号２）
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【0023】
本明細書において、「活性化」は、タンパク質の機能が発揮される状態に変化すること、または、変化した状態を意味する。
【0024】
本明細書において、「抑制」は、タンパク質の機能が抑制された状態に変化すること、または、抑制された状態を意味する。
【0025】
本明細書において、「Ａｒｆ１の活性化物質」は、Ａｒｆ１とＧＴＰとの結合を直接または間接的に促進する物質を意味する。
【0026】
本明細書において、「Ａｒｆ１の活性抑制物質」は、Ａｒｆ１とＧＴＰの結合を直接または間接的に阻害する物質を意味する。
【0027】
本明細書において、「免疫」は、生体内に侵入したウイルスや細菌等の異物に対する防御システムを意味する。前記免疫は、例えば、自然免疫および獲得免疫に分類される。前記自然免疫は、典型的には、マクロファージ、好中球、樹状細胞、およびＮＫ細胞等の細胞が、生体内に侵入した異物を排除する免疫反応であり、通常は、抗原非特異的な免疫応答である。前記獲得免疫は、典型的には、抗原特異的な細胞性免疫応答および液性免疫応答である。前記細胞性免疫は、Ｔ細胞が特異的に作用し、生体内に侵入した前記異物を攻撃し、前記異物を排除する免疫応答である。前記液性免疫は、Ｂ細胞の非特異的な活性化またはＢ細胞が特異的抗原を認識し、前記抗原に対する抗体を作ることで、生体内に侵入した前記異物および抗原を排除する免疫反応である。
【0028】
前記Ｔ細胞は、白血球の一種であり、リンパ球に分類される、Ｔ細胞受容体を発現する細胞である。
【0029】
前記Ｂ細胞は、白血球の一種であり、リンパ球に分類される、Ｂ細胞受容体を発現する細胞である。前記Ｂ細胞は、抗体を産生可能な細胞である。前記Ｂ細胞は、主に、Ｂ１Ｂ細胞およびＢ２Ｂ細胞の２つのサブセットを含む。前記Ｂ１Ｂ細胞は、例えば、腹腔、胸腔、および腸管等に存在し、自然抗体の産生に寄与すると考えられている。前記Ｂ２Ｂ細胞は、例えば、末梢血等に存在し、抗原特異的液性免疫応答に寄与すると考えられている。
【0030】
本明細書において、「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片により実質的または部分的にコードされる、１または複数のポリペプチドを含むタンパク質を意味する。免疫グロブリン遺伝子は、例えば、κ、λ、α（α１、α２を含む）、γ（γ１、γ２、γ３、γ４を含む）、δ、εおよびμ等の定常領域をコードする遺伝子と、Ｖ領域、Ｄ領域、Ｊ領域等の無数の免疫グロブリン可変領域をコードしうる遺伝子とを含む。前記抗体は、例えば、重鎖および軽鎖を含む。前記軽鎖は、κおよびλを含み、それぞれ、κ鎖およびλ鎖を構成する。前記重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεを含み、それぞれ、免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを構成する。前記ＩｇＧは複数のサブクラスを有し、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４等があげられる。前記ＩｇＭは、例えば、ＩｇＭ１、およびＩｇＭ２等があげられる。前記抗体は、四量体から構成される典型的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位であってもよい。この場合、前記抗体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対から構成され、各対は、１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）と１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）とから構成される。また、各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸から構成される可変領域を規定する。前記抗体は、全長の免疫グロブリンでもよいし、その抗原結合断片でもよい。前記抗体の種の由来は、特に制限されず、例えば、ヒト、ウサギ、マウス、およびラット等の種々があげられる。
【0031】
本明細書において、「クラススイッチ」は、あるクラスの抗体を産生している細胞が、他のクラスの抗体を産生するように転換することを意味する。前記Ｂ細胞は、抗原に反応すると、ＩｇＭ抗体を産生し、さらにヘルパーＴ細胞等の刺激を受け、前記クラススイッチが起こることが知られている。前記クラススイッチが生じ、ＩｇＧ１抗体を産生または発現するＢ細胞は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞と表すことができる。
【0032】
本明細書において、「抗原抗体反応」は、抗原と抗体の間で特異的な結合が起こる反応を意味する。前記抗原抗体反応によって、ウイルス等の抗原の生物活性は失われる。前記抗原抗体反応を利用した試験方法として、例えば、酵素結合免疫吸着検査法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay：ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロッティング法（Western Blotting：ＷＢ）、および免疫沈降法（ImmunoPrecipitation：ＩＰ）等があげられる。前記酵素結合免疫吸着検査法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay：ＥＬＩＳＡ）は、例えば、抗原と結合する抗体等の結合能力を定量的に測定することができる。
【0033】
本明細書において、「アジュバント」または「免疫賦活化剤」は、製剤または組成物において、特定の免疫原（抗原）と組み合わせて使用されるとき、得られる免疫応答を増強、改変、または修飾する化合物を意味する。前記免疫応答の増強、改変、または修飾は、例えば、抗体応答および細胞性免疫応答の少なくとも一方の特異性の強化、増加、または増強を意味する。前記免疫応答の増強、改変、または修飾は、特定の抗原特異的免疫応答の低下、低減、または抑制を意味してもよい。
【0034】
本明細書において、「胚中心（Germinal centers：ＧＣ）」は、免疫応答において、リンパ節、パイエル板、および脾臓等のリンパ系組織に形成される一過性の微小な構造であり、抗原に反応したＢ細胞が分化・成熟する場所を意味する。前記胚中心を形成するＢ細胞は、胚中心Ｂ細胞（ＧＣ－Ｂ細胞）とも呼ばれる。前記胚中心において、Ｂ細胞の免疫グロブリン遺伝子のクラススイッチが生じることが知られている。
【0035】
本明細書において、「免疫応答の制御」は、免疫応答の増強および／または抑制することを意味する。
【0036】
本明細書において、「抗体産生の誘導」は、所望の抗原に対する抗体が新たに産生されること、または所望の抗原に対する抗体の量が増強されることを意味する。
【0037】
本明細書において、「抗体産生の抑制」は、所望の抗原に対する抗体の量が低減することを意味する。
【0038】
本明細書において、「Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御」は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の促進および／または抑制することを意味する。
【0039】
本明細書において、「ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御」は、ＩｇＧ１抗体を産生または発現するＢ細胞（ＩｇＧ１＋Ｂ細胞）の細胞死を促進および／または抑制することを意味する。
【0040】
本明細書において、「陽性（＋）」は、抗原抗体反応を利用して検出されるフローサイトメトリー等の解析方法により、前記抗原を発現しない陰性対照細胞または前記抗原と反応しない抗体を用いる陰性対照反応と比較して、高いシグナルが検出されることを意味する。また、本明細書において、「陰性（－）」は、前記抗原を発現しない陰性対照細胞または前記抗原と反応しない抗体を用いる陰性対照反応と比較して、同等またはそれ以下のシグナルが検出されることを意味する。
【0041】
本明細書において、「発現系」は、所望のタンパク質または遺伝子を発現できる系を意味する。
【0042】
本明細書において、「低分子化合物」は、分子量の小さい化合物を意味し、典型的には、分子量約１０００以下の化合物を意味する。本明細書において、低分子化合物は、特に言及がある場合を除き、その塩を含む。
【0043】
本明細書において、「ペプチド」は、数個の未修飾アミノ酸（天然のアミノ酸)、修飾アミノ酸、および／または人工アミノ酸から構成されるポリマーを意味する。
【0044】
本明細書において、「タンパク質」または「ポリペプチド」は、未修飾アミノ酸（天然のアミノ酸)、修飾アミノ酸、および／または人工アミノ酸から構成されるポリマーを意味する。前記タンパク質またはポリペプチドは、１０アミノ酸以上の長さを有するペプチドである。
【0045】
本明細書において、「核酸」または「核酸分子」は、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）、および／または改変ヌクレオチドのポリマーを意味する。前記核酸は、例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ等があげられる。前記核酸は、例えば、一本鎖または二本鎖等であってもよい。
【0046】
以下、本開示について例をあげて説明するが、本開示は以下の例等に限定されるものではなく、任意に変更して実施できる。また、本開示における各説明は、特に言及がない限り、互いに援用可能である。なお、本明細書において、「～」という表現を用いた場合、その前後の数値または物理値を含む意味で用いる。また、本明細書において、「Ａおよび／またはＢ」という表現には、「Ａのみ」、「Ｂのみ」、「ＡおよびＢの双方」が含まれる。
【0047】
＜液性免疫応答の制御剤＞
ある態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御剤を提供する。本開示の液性免疫応答の制御剤は、前述のように、液性免疫応答の制御に用いる制御剤であって、前記液性免疫応答の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示の液性免疫応答の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
ある態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御剤を提供する。本開示の液性免疫応答の制御剤は、前述のように、液性免疫応答の制御に用いる制御剤であって、前記液性免疫応答の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示の液性免疫応答の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
【0048】
本発明者らは鋭意研究の結果、Ａｒｆ１の活性を制御することにより、抗原特異的なＢ細胞による抗体の産生誘導を増強または抑制（低減）できることを見出した。また、本発明者らは、Ａｒｆ１は、抗原特異的液性免疫応答における抗体の産生量の影響と比較して、自然抗体の産生量への影響が相対的に小さいこと、すなわち、Ａｒｆ１は、抗原特異的な抗体の産生への寄与と比較して、自然抗体の産生への寄与が相対的低いこと見出し、本開示を確立するに至った。本開示によれば、Ｂ細胞を維持した状態で、抗原特異的な抗体の産生誘導を制御できるため、Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減しつつ、抗原特異的な抗体産生を制御できる。また、本開示の制御剤によれば、例えば、前記制御剤を免疫原（抗原）と組合せることにより、前記抗原特異的な抗体の産生を誘導または抑制できる。さらに、本開示の制御剤によれば、例えば、既に生体内で生じている抗原特異的な抗体の産生を抑制できる。
【0049】
本開示において、前記制御剤は、Ｔ細胞を介した液性免疫応答の制御機能を示すことが好ましい。前記液性免疫応答は、例えば、抗原特異的なＢ細胞による液性免疫応答、すなわち、抗原特異的な抗体の産生応答があげられる。
【0050】
前記液性免疫応答の制御機能は、例えば、Ｂ細胞の抗体産生誘導系において、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を共存させた際に、前記被検物質の非存在下と比較して、抗体の産生量を抑制または増強できるかにより評価できる。具体的には、前記被検物質の液性免疫応答の抑制機能は、活性化したＢ細胞による抗体の産生量の抑制率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記抑制率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、液性免疫応答の抑制機能があると評価できる。他方、前記被検物質の液性免疫応答の増強機能は、前記活性化したＢ細胞による抗体の産生量の増強率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記増強率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、液性免疫応答の増強機能があると評価できる。前記活性化したＢ細胞としては、例えば、ＬＰＳ（リポ多糖）、または抗ＩｇＭ抗体およびＩＬ－４により活性化されたＢ細胞を使用できる。前記抗体の産生量は、例えば、１～７日間である。
【0051】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、例えば、免疫原（抗原）と組合わせることにより、前記抗原特異的な抗体の産生を誘導できる。前記Ａｒｆ１の活性化物質は、例えば、Ａｒｆ１とＧＤＰとの結合を阻害、Ａｒｆ１とＧＴＰとの結合、および／または、Ａｒｆ１と結合したＧＴＰのＧＤＰへの変換の阻害、Ａｒｆ１とＧＴＰとの結合を促進する物質があげられる。前記阻害は、直接的な阻害でもよいし、間接的な阻害でもよい。前記促進は、例えば直接的な促進でもよいし、間接的な促進でもよい。
【0052】
前記Ａｒｆ１の活性化物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。具体例として、前記低分子化合物は、例えば、Ａｒｆ１のアゴニストがあげられる。前記タンパク質は、例えば、抗体またはその抗原結合断片があげられる。前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい。前記ペプチドは、例えば、Ａｒｆ１に結合するペプチドがあげられる。前記ペプチドは、例えば、環状ペプチドまたは特殊環状ペプチドであってもよい。前記核酸は、例えば、Ａｒｆ１に結合する結合核酸分子、Ａｒｆ１の発現を増強する発現増強核酸分子等があげられる。前記結合核酸分子は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡおよびＲＮＡからなるアプタマー等があげられる。前記発現増強核酸分子は、例えば、Ａｒｆ１をコードする核酸分子またはそれを含むベクター等があげられる。前記Ａｒｆ１の活性化物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【0053】
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、例えば、Ａｒｆ１のアゴニスト、ＧＥＦの活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、および恒常活性型Ａｒｆ１等があげられる。前記Ａｒｆ１のアゴニストは、活性化型であるＧＴＰ結合型Ａｒｆ１と、類似の機能を発揮するように、Ａｒｆ１の状態を変化させる物質である。前記Ａｒｆ１のアゴニストは、例えば、ＧＧＡ３（Golgi-localized gamma-ear containing, Arf1-binding protein 3）等があげられる。各種動物由来のＧＧＡ３は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ヒト由来ＧＧＡ３は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔのアクセッション番号Ｑ９ＮＺ５２に登録されているアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる。前記恒常活性型Ａｒｆ１は、例えば、７１番目のアミノ酸が、グルタミンからロイシンに置換されたＡｒｆ１ Ｑ７１Ｌ変異体があげられる。
【0054】
前記Ａｒｆ１の活性抑制物質は、例えば、免疫原（抗原）と組合せることにより、前記抗原特異的な抗体の産生を抑制できる。前記Ａｒｆ１の活性抑制物質は、例えば、Ａｒｆ１とＧＤＰとの結合を促進、Ａｒｆ１と結合したＧＴＰのＧＤＰへの変換の促進、および／または、Ａｒｆ１とＧＤＰとの解離を抑制することにより、Ａｒｆ１とＧＴＰとの結合を阻害する物質である。前記阻害は、直接的な阻害でもよいし、間接的な阻害でもよい。前記促進は、例えば直接的な促進でもよいし、間接的な促進でもよい。
【0055】
前記Ａｒｆ１の活性抑制物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。具体例として、前記低分子化合物は、例えば、前記Ａｒｆ１のアンタゴニストがあげられる。前記タンパク質は、例えば、抗体またはその抗原結合断片があげられる。前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい。前記ペプチドは、例えば、Ａｒｆ１に結合するペプチドがあげられる。前記ペプチドは、例えば、環状ペプチドまたは特殊環状ペプチドであってもよい。前記核酸は、例えば、Ａｒｆ１に結合する結合核酸分子、Ａｒｆ１の発現を抑制する発現抑制核酸分子等があげられる。前記結合核酸分子は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡおよびＲＮＡからなるアプタマー等があげられる。前記発現抑制核酸分子は、例えば、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉剤、アンチセンス、リボザイム等があげられる。前記Ａｒｆ１の活性抑制物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【0056】
前記Ａｒｆ１の活性抑制物質は、例えば、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１発現抑制核酸分子、およびＧＥＦ活性抑制物質等があげられる。前記Ａｒｆ１のアンタゴニストは、不活性化型であるＧＤＰ結合型Ａｒｆ１と、類似の機能を発揮するように、Ａｒｆ１の状態を変化させる物質である。前記Ａｒｆ１のアンタゴニストは、例えば、ＧＧＡ３のＡｒｆ１結合ドメイン（ＧＡＴドメイン）の過剰発現等があげられる。前記ＧＡＴドメインは、具体例として、由来がマウスの場合、例えば、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番号ＡＫ０３１０８６に登録されているアミノ酸配列の１７１～２９９番目のアミノ酸配列からなるタンパク質があげられる（配列番号３）。前記Ａｒｆ１発現抑制核酸分子は、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉剤、アンチセンス、リボザイム等があげられる。前記ＧＥＦ活性抑制物質は、例えば、ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）、およびGolgicide A等があげられる。前記ＧＥＦが、ＡｒｆＧＥＦ１の場合、ＡｒｆＧＥＦ１活性抑制物質は、例えば、ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）、等があげられる。
【0057】
マウスＧＡＴドメイン（配列番号３）
DEEKSKLLARLLKSKNPDDLQEANRLIKSMVKEDEARIQKVTKRLHTLEEVNNNVKLLHEMLLHYSQEYSSDADKELMKELFDRCENKRRTLFKLASETEDNDNSLGDILQASDNLSRVINSYKTIIEG
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【0058】
本開示の制御剤は、単独で用いてもよいし、免疫原と用いてもよい。前記免疫原と用いることにより、本開示の制御剤は、前記免疫原特異的な抗体産生応答を制御できる。前記免疫原は、例えば、ペプチド、タンパク質、脂質、糖鎖、および細胞等があげられる。前記免疫原は、特に制限されず、任意の物質とでき、具体例として、自己抗原、アレルゲン、不活化ウイルスおよび微生物等があげられる。本開示の制御剤は、組成物を構成してもよい。
【0059】
本開示の制御剤は、免疫賦活化剤またはアジュバントと用いてもよい。前記アジュバントは、例えば、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、および水酸化アルミニウム等があげられる。
【0060】
本開示の制御剤の投与対象は、特に制限されない。本開示の制御剤をｉｎ ｖｉｖｏで使用する場合、前記投与対象は、例えば、ヒト、またはヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物としては、例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル、イルカ、アシカ等の哺乳類；鳥類；魚類；等があげられる。前記本開示の制御剤をｉｎ ｖｉｔｒｏで使用する場合、前記投与対象は、例えば、細胞、組織、器官等があげられ、前記細胞は、例えば、生体から採取した細胞、培養細胞等があげられ、前記組織または器官は、例えば、生体から採取した組織（生体組織）または器官等があげられる。本開示の制御剤は、例えば、研究用試薬として使用することもでき、医薬品として使用することもできる。後者の場合、本開示の制御剤は、液性免疫応答に起因する疾患用医薬または医薬組成物ということもできる。
【0061】
本開示の制御剤をｉｎ ｖｉｖｏで使用する場合、前記投与対象は、例えば、液性免疫応答が異常であると診断された対象、液性免疫応答が異常である疑いがある対象等があげられる。前記液性免疫応答の異常は、例えば、原発性免疫不全症、液性免疫不全症等があげられる。
【0062】
本開示の制御剤の使用条件（投与条件）は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類等に応じて、投与形態、投与時期、投与量等を適宜設定できる。
【0063】
本開示の制御剤の投与量は、前記投与対象に前記制御剤を投与した場合に、前記投与対象に投与していない場合と比較して、液性免疫応答の制御機能を得ることができる量（処置有効量）である。である。前記投与量は、例えば、被検者の年齢、体重、症状等によって適宜決定することができる。
【0064】
本開示の制御剤の投与回数は、１または複数回である。前記複数回は、例えば、２回、３回、４回、５回またはそれ以上である。前記投与回数は、対象の処置効果を確認しながら、適宜決定されてもよい。前記複数回投与する場合、投与間隔は、対象の処置効果を確認しながら、適宜決定でき、例えば、１日１回、１週１回、２週１回、１ヶ月１回、３ヶ月１回、６か月１回等があげられる。
【0065】
本開示の制御剤は、例えば、他の液性免疫応答異常に用いられる薬剤および／または方法と併用してもよい。前記液性免疫応答異常に用いられる薬剤としては、例えば、プレドニゾン等のコルチコステロイド；リツキサン等の抗モノクローナル抗体；等があげられる。
【0066】
本開示の制御剤の投与形態は、特に制限されない。本開示の制御剤をｉｎ ｖｉｖｏで投与する場合、経口投与でもよいし、非経口投与でもよい。前記非経口投与は、例えば、静脈注射（静脈内投与）、筋肉注射（筋肉内投与）、経皮投与、皮下投与、皮内投与、経腸投与、直腸投与、経膣投与、経鼻投与、経肺投与、腹腔内投与、局所投与等があげられる。
【0067】
本開示の制御剤の剤型は、特に制限されず、例えば、前記投与形態に応じて適宜決定できる。前記剤型は、例えば、液体状、固体状があげられる。具体例として、前記剤型は、放出調節製剤（腸溶性製剤、徐放性製剤等）、カプセル剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、芳香水剤、リモナーデ剤等）、シロップ剤（シロップ用剤等）、顆粒剤（発泡顆粒剤、細粒等）、散剤、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解剤、被覆錠剤等）、丸剤、経口ゼリー剤等の経口投与用製剤；口腔用錠剤（ガム剤、舌下剤、トローチ剤、ドロップ剤、バッカル錠、付着錠等）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤等の口腔内適用製剤；注射剤（埋め込み注射、持続性注射剤、輸液剤（点滴用製剤等）、凍結乾燥注射剤、粉末注射剤、充填済シリンジ剤、カートリッジ剤等）等の注射投与用製剤；透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）等の透析用製剤；吸入剤（吸入エアゾール剤、吸入液剤、吸入粉末剤等）等の気管支・肺適用製剤；眼軟膏剤、点眼剤等の目投与用製剤；点耳剤等の耳投与製剤；点鼻剤（点鼻液剤、点鼻粉末剤等）等の鼻適用製剤；坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤等の直腸適用製剤；膣用坐剤、膣錠等の膣適用製剤；外用液剤（酒精剤、リニメント剤、ローション剤等）、クリーム剤、ゲル剤、外用固形剤（外用散剤等）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤等）、貼付剤（テープ剤、パップ剤等）、軟膏剤等の皮膚適用剤；等があげられる。本開示の血管拡張剤を経口投与する場合、前記剤型は、例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等があげられる。本開示の液制御剤を非経口投与する場合、前記剤型は、例えば、注射投与用製剤、点滴用製剤等があげられる。本開示の制御剤を経皮投与する場合、前記剤型は、例えば、貼付剤、塗布剤、軟膏、クリーム、ローション等の外用薬があげられる。
【0068】
本開示の制御剤は、例えば、必要に応じて、添加剤を含んでもよく、本開示の制御剤を医薬または医薬組成物として使用する場合、前記添加剤は、薬学的に許容可能な添加剤または薬学的に許容可能な担体を含むことが好ましい。前記添加剤は、特に制限されず、例えば、基剤原料、賦形剤、着色剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、保存剤、香料等の矯味矯臭剤等があげられる。本開示の制御剤において、前記添加剤の配合量は、Ａｒｆ１の活性物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質の機能を妨げるものでなければ、特に制限されない。
【0069】
前記賦形剤は、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、αデンプン、デキストリン等のデンプン誘導体；結晶セルロース等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン等の有機系賦形剤；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等のケイ酸塩誘導体；リン酸水素カルシウム等のリン酸塩；炭酸カルシウム等の炭酸塩；硫酸カルシウム等の硫酸塩等の無機系賦形剤があげられる。前記滑沢剤は、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；タルク；ポリエチレングリコール；シリカ；硬化植物油等があげられる。前記矯味矯臭剤は、例えば、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等の香料、甘味料、酸味料等があげられる。前記結合剤は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等があげられる。前記崩壊剤は、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾デンプンおよび化学修飾セルロース類等があげられる。前記安定剤は、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾール等のフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；ソルビン酸等があげられる。
【0070】
本開示の制御剤が、例えば、前記制御剤が液性免疫応答の増強機能を有する場合、本開示の制御剤は、アジュバントまたは免疫賦活剤として使用できる。他方、本開示の制御剤が、例えば、前記制御剤が液性免疫応答の抑制機能を有する場合、本開示の制御剤は、免疫抑制剤として使用できる。
【0071】
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤＞
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤を提供する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、前述のように、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化に用いる制御剤であって、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤によれば、Ｂ細胞の胚中心形成を制御することができ、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤を提供する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、前述のように、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化に用いる制御剤であって、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤によれば、Ｂ細胞の胚中心形成を制御することができ、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。
【0072】
前記「Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御」は、前記Ｂ細胞の胚中心形成が促進または抑制されることによって、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が促進または抑制されることを意味する。前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、例えば、Ｂ細胞の抗体産生誘導系において、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を共存させた際に、前記被検物質の非存在下と比較して、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を抑制または促進できるかにより評価できる。具体的には、前記被検物質のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制は、胚中心Ｂ細胞数の減少率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記被検物質が共存しない対照群における胚中心Ｂ細胞の数を基準として、前記被検物質存在下での胚中心Ｂ細胞の減少率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制効果があると評価できる。他方、前記被検物質のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の増強は、前記胚中心Ｂ細胞数の増加率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記被検物質が共存しない対照群における胚中心Ｂ細胞の数を基準として、前記被検物質存在下での胚中心Ｂ細胞の増加率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化促進効果があると評価できる。
【0073】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、例えば、投与対象に対して使用することにより、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を制御することができる。これにより、本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤は、例えば、Ｂ細胞の胚中心形成を制御することができ、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤の使用条件（投与条件）は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤の説明を援用できる。
【0074】
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤＞
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を提供する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、前述のように、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死に用いる制御剤であって、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤によれば、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数を制御することができ、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を提供する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、前述のように、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死に用いる制御剤であって、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤によれば、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数を制御することができ、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。
【0075】
前記「ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御」は、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死が促進または抑制されることを意味する。前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、例えば、後述の実施例２（８）のＢ細胞の抗体産生誘導系において、Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を共存させた際に、前記被検物質の非存在下と比較して、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死を抑制または促進できるかにより評価できる。具体的には、前記被検物質のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞数の減少率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記被検物質が共存しない対照群におけるＩｇＧ１＋Ｂ細胞の数を基準として、前記被検物質存在下でのＩｇＧ１＋Ｂ細胞の抑制率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制効果があると評価できる。他方、前記被検物質のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進は、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数の増加率に基づき、評価できる。前記評価では、例えば、前記被検物質が共存しない対照群におけるＩｇＧ１＋Ｂ細胞の数を基準として、前記被検物質存在下でのＩｇＧ１＋Ｂ細胞の増加率が、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の場合、前記被検物質は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進効果があると評価できる。
【0076】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、例えば、投与対象に対して使用することにより、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死を制御することができる。これにより、本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤は、例えば、液性免疫応答制御の効果を得ることができる。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤の使用条件（投与条件）は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤の説明を援用できる。
【0077】
＜標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物は、前述のように、液性免疫応答の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的抗原特異的な液性免疫応答を制御できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物は、前述のように、液性免疫応答の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的抗原特異的な液性免疫応答を制御できる。
【0078】
本開示の制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、前記本開示の制御剤の使用条件（投与条件）の説明を援用できる。
【0079】
＜標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物は、前述のように、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の分化制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的特異的なＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を制御できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物は、前述のように、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の分化制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的特異的なＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を制御できる。
【0080】
本開示の分化制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、前記本開示の制御剤の使用条件（投与条件）の説明を援用できる。
【0081】
＜標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物は、前述のように、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の細胞死制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的特異的なＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死を制御できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を提供する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物は、前述のように、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御に用いる制御組成物であって、前記標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む。本開示の細胞死制御組成物は、Ａｒｆ１の活性化物質、またはＡｒｆ１の活性抑制物質、および標的抗原として免疫原を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本開示によれば、例えば、標的特異的なＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死を制御できる。
【0082】
本開示の細胞死制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、前記本開示の制御剤の使用条件（投与条件）の説明を援用できる。
＜液性免疫応答の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御方法を開示する。本開示の液性免疫応答の制御方法は、液性免疫応答の制御剤を使用する。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
＜液性免疫応答の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御方法を開示する。本開示の液性免疫応答の制御方法は、液性免疫応答の制御剤を使用する。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
【0083】
本開示の液性免疫応答の制御方法は、例えば、前記本開示の液性免疫応答の制御剤を投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記制御剤を投与する投与工程を含む。前記制御剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の制御剤の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0084】
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法を開示する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御剤を使用する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の分化制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法を開示する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御剤を使用する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の分化制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
【0085】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、例えば、前記本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御剤を投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記分化制御剤を投与する投与工程を含む。前記分化制御剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の分化制御剤の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0086】
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法を開示する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を使用する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の細胞死制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法を開示する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を使用する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の細胞死制御剤を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の制御剤および制御組成物の説明を援用できる。
【0087】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、例えば、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤を投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記細胞死制御剤を投与する投与工程を含む。前記細胞死制御剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の細胞死制御剤の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0088】
＜標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御剤、制御組成物、および液性免疫応答の制御方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、前記本開示の制御剤、制御組成物、および液性免疫応答の制御方法の説明を援用できる。
【0089】
本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法は、例えば、前記免疫原と、前記制御組成物とを投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記免疫原と、前記制御組成物とを投与する投与工程を含む。前記制御組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0090】
＜標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の分化制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の制御剤、分化制御剤、制御組成物、分化制御組成物、液性免疫応答の制御方法、およびＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の分化制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、前記本開示の制御剤、分化制御剤、制御組成物、分化制御組成物、液性免疫応答の制御方法、およびＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法の説明を援用できる。
【0091】
本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御方法は、例えば、前記免疫原と、前記分化制御組成物とを投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記免疫原と、前記分化制御組成物とを投与する投与工程を含む。前記分化制御組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0092】
＜標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法＞
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の細胞死制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の制御剤、細胞死制御剤、制御組成物、細胞死制御組成物、液性免疫応答の制御方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法を開示する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を使用する。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物を使用すること、すなわち、前記本開示のＡｒｆ１の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の細胞死制御組成物を使用するため、自然抗体への影響を抑えた状態で、抗原特異的な抗体産生を制御できる。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、前記本開示の制御剤、細胞死制御剤、制御組成物、細胞死制御組成物、液性免疫応答の制御方法、およびＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法の説明を援用できる。
【0093】
本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法は、例えば、前記免疫原と、前記細胞死制御組成物とを投与する投与工程を含み、具体的には、投与対象に、前記免疫原と、前記細胞死制御組成物とを投与する投与工程を含む。前記細胞死制御組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されてもよいし、ｉｎ ｖｉｖｏで投与してもよい。本開示の標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物の投与対象および使用条件（投与条件）は、例えば、本開示の制御剤における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
【0094】
＜液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法＞
別の態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示の液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、液性免疫応答の制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、液性免疫応答の制御方法、および標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示の液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、液性免疫応答の制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、液性免疫応答の制御方法、および標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法の説明を援用できる。
【0095】
前記被検物質は、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。前記低分子化合物は、例えば、公知の低分子化合物のライブラリ等があげられる。前記ペプチドは、例えば、直鎖、分枝、または環状のペプチドである。前記タンパク質は、天然のタンパク質または人工のタンパク質のいずれでもよい。前記タンパク質は、例えば、抗体、成長因子、増殖因子、またはこれらの改変体等があげられる。前記核酸は、例えば、Ａｒｆ１の発現抑制物質があげられ、具体例として、Ａｒｆ１遺伝子からのｍＲＮＡの転写を抑制する物質、転写されたｍＲＮＡを切断する物質およびｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を抑制する物質等があげられる。前記核酸は、例えば、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉剤、アンチセンス、リボザイム等があげられる。
【0096】
本開示のスクリーニング方法は、Ａｒｆ１の活性を指標に被検物質が液性免疫応答の制御しうるかをスクリーニングする。このため、本開示のスクリーニング方法は、例えば、前記選択工程の前に、Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程を含んでもよい。前記共存工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を添加することで実施できる。
【0097】
前記発現系は、Ａｒｆ１を発現可能な系であればよく、例えば、Ａｒｆ１を発現する細胞系、Ａｒｆ１を発現可能な細胞系、無細胞系、または動物があげられる。前記発現系が動物の場合、前記発現系は、例えば、ヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物としては、例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル、イルカ、アシカ等の哺乳類；ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ等の鳥類；魚類；等があげられる。前記細胞系は、例えば、生体から単離されたＢ細胞、Ｂ細胞に由来する培養細胞株等があげられる。
【0098】
本開示のスクリーニング方法は、前記共存工程の後に、Ａｒｆ１の活性を検出する検出工程を含んでもよい。前記Ａｒｆ１の活性の検出は、直接または間接的な検出である。前記直接的な検出は、例えば、プルダウンアッセイ、Split-Venusを用いたモニタリングシステム等により検出できる。前記プルダウンアッセイを用いた場合、前記検出工程では、例えば、ＧＳＴ等のタグを融合したＧＧＡ３と会合する活性型Ａｒｆ１をプルダウンし、ウエスタンブロッティング法等を用いて、活性型Ａｒｆ１を定量してもよい。前記プルダウンアッセイは、例えば、市販のキットを用いて行ってもよく、例えば、活性型Ａｒｆ１定量キット（Cytoskeleton社製）等を用いてもよい。前記Split-Venusを用いたモニタリングシステムを用いる場合、前記検出工程では、細胞内における、蛍光タンパク質等の標識を融合または付加させたＧＧＡ３とＡｒｆ１との会合をモニターすることで、Ａｒｆ１の活性を検出することができる。前記間接的な検出は、前記Ａｒｆ１の発現系におけるＡｒｆ１の活性の変動により生じる抗体の産生量の変動を検出することにより実施できる。具体的には、前記検出工程では、例えば、前記Ａｒｆ１の発現系における抗体量を検出することにより、Ａｒｆ１の活性を検出する。この場合、前記Ａｒｆ１の発現系は、例えば、生体から単離されたＢ細胞およびＢ細胞に由来する培養細胞株を使用できる。前記Ａｒｆ１の発現系の抗体量は、例えば、前記細胞系の培養上清の抗体量があげられる。また、抗体量を検出する場合、前記共存工程では、前記Ａｒｆ１の発現系は、Ｂ細胞の活性化物質を共存させることが好ましい。前記Ｂ細胞の活性化物質は、例えば、ＬＰＳ、Ｂ細胞受容体に対する抗体、ＩＬ－４等のサイトカイン、またはこれらの組合せ等があげられる。前記抗体量は、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）等によって測定できる。
【0099】
本開示のスクリーニング方法は、前記検出工程の検出結果に基づき、被検物質を選択する選択工程を含んでもよい。前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、液性免疫応答の抑制候補物質および液性免疫応答の活性化候補物質等の液性免疫応答の制御候補物質として選択する。また、前記検出工程において、前記抗体量を検出している場合、前記選択工程では、例えば、前記抗体の産生量を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記抗体の産生量が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、液性免疫応答の抑制候補物質および液性免疫応答の活性化候補物質等の液性免疫応答の制御候補物質として選択する。
【0100】
前記発現系が非ヒト動物である場合、前記検出工程では、前記Ａｒｆ１の活性を直接または間接的に検出する。前記直接的な検出は、例えば、前記非ヒト動物から採取したＢ細胞について、ｑＰＣＲ法等により検出できる。前記間接的な検出は、前記Ａｒｆ１の発現系におけるＡｒｆ１の活性の変動により生じる抗体の産生量の変動を検出することにより実施できる。具体的には、前記検出工程では、例えば、前記Ａｒｆ１の発現系における抗体量を検出することにより、Ａｒｆ１の活性を検出する。この場合、前記Ａｒｆ１の発現系は、例えば、生体から単離された生体試料を使用できる。前記生体試料は、例えば、血清、血漿等の血液試料；リンパ液；糞便等があげられ、好ましくは、血清である。また、前記抗体量は、例えば、前記生体試料の抗体量があげられる。前記抗体量は、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）等によって測定できる。そして、前記選択工程では、例えば、前記抗体量が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、液性免疫応答の抑制候補物質および液性免疫応答の活性化候補物質等の液性免疫応答の制御候補物質であるとして選択する。
【0101】
これにより、本開示のスクリーニング方法では、前記本開示の制御剤をスクリーニングできる。
【0102】
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法＞
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、液性免疫応答の制御方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法、および液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、液性免疫応答の制御方法、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御方法、および液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。
【0103】
本開示のＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御候補物質のスクリーニング方法は、前記共存工程の後に、Ａｒｆ１の活性を検出する検出工程を含んでもよい。前記Ａｒｆ１の活性の検出は、直接または間接的な検出である。前記直接的な検出および間接的な検出は、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。前記間接的な検出は、前記Ａｒｆ１の発現系におけるＡｒｆ１の活性の変動により生じる胚中心Ｂ細胞数または割合の変動を検出することにより実施してもよい。具体的には、前記検出工程では、例えば、前記Ａｒｆ１の発現系における胚中心Ｂ細胞数または割合を検出することにより、Ａｒｆ１の活性を検出する。この場合、前記Ａｒｆ１の発現系は、例えば、生体から単離されたＢ細胞およびＢ細胞に由来する培養細胞株を使用できる。前記胚中心Ｂ細胞数または割合の検出は、例えば、フローサイトメトリー法等を用いて実施できる。
【0104】
本開示のスクリーニング方法は、前記検出工程の検出結果に基づき、被検物質を選択する選択工程を含んでもよい。前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記分化制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、分化抑制候補物質および分化促進候補物質等の分化制御候補物質として選択する。また、前記検出工程において、前記胚中心Ｂ細胞数または割合を検出している場合、前記選択工程では、例えば、前記抗体の胚中心Ｂ細胞数または割合を、増強または抑制する被検物質を、前記分化制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記胚中心Ｂ細胞数または割合が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、分化抑制候補物質および分化促進候補物質等の分化制御候補物質として選択する。
【0105】
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法＞
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御方法、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法、および液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。
別の態様において、本明細書は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法を開示する。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む。本開示は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のターゲットがＡｒｆ１であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、前記本開示の液性免疫応答の制御剤、本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物、液性免疫応答の制御方法、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法、標的抗原に対する液性免疫応答の制御方法、標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御方法、および液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。
【0106】
本開示のＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法は、前記共存工程の後に、Ａｒｆ１の活性を検出する検出工程を含んでもよい。前記Ａｒｆ１の活性の検出は、直接または間接的な検出である。前記直接的な検出および間接的な検出は、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法の説明を援用できる。前記間接的な検出は、前記Ａｒｆ１の発現系におけるＡｒｆ１の活性の変動により生じるＩｇＧ１＋Ｂ細胞数の変動を検出することにより実施してもよい。具体的には、前記検出工程では、例えば、前記Ａｒｆ１の発現系におけるＩｇＧ１＋Ｂ細胞数または割合を検出することにより、Ａｒｆ１の活性を検出する。この場合、前記Ａｒｆ１の発現系は、例えば、生体から単離されたＢ細胞およびＢ細胞に由来する培養細胞株を使用できる。前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の検出は、例えば、Ａｎｎｅｘｉｎアッセイ、カスパーゼアッセイ、およびＴＵＮＥＬアッセイ等の細胞死アッセイを用いて実施できる。前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数または割合の検出は、例えば、フローサイトメトリー法等を用いて実施できる。
【0107】
本開示のスクリーニング方法は、前記検出工程の検出結果に基づき、被検物質を選択する選択工程を含んでもよい。前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記細胞死の制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記Ａｒｆ１の活性が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、細胞死の促進候補物質および細胞死の抑制候補物質等の細胞死の制御候補物質として選択する。また、前記検出工程において、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数または割合を検出している場合、前記選択工程では、例えば、前記抗体のＩｇＧ１＋Ｂ細胞数または割合を、増強または抑制する被検物質を、前記細胞死の制御候補物質として選択する。具体的には、前記選択工程は、例えば、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞数または割合が、前記被検物質が非共存下の場合と比較して、前記被検物質が共存下で低い、または、高い場合、前記選択工程では、それぞれ、細胞死の促進候補物質および細胞死の促進候補物質等の細胞死の制御候補物質として選択する。
【0108】
＜使用＞
本開示は、液性免疫応答の制御、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質の使用である。本開示は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御、および／または標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原としての免疫原との使用である。本開示は、液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤の製造のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質の使用である。また、本開示は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物の製造ための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原としての免疫原との使用である。
本開示は、液性免疫応答の制御、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質の使用である。本開示は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御、標的抗原に対するＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御、および／または標的抗原に対するＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原としての免疫原との使用である。本開示は、液性免疫応答の制御剤、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤の製造のための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質の使用である。また、本開示は、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物、および／またはＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物の製造ための、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原としての免疫原との使用である。
【実施例0109】
以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明は実施例に記載された態様に限定されるものではない。なお、特に示さない限り、市販の試薬およびキット等は、そのプロトコルに従い使用した。
【0110】
［実施例１］
本発明のＢ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損が、自然抗体を維持していることを確認した。
本発明のＢ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損が、自然抗体を維持していることを確認した。
【0111】
（１）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウスの作製
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス（Arf1-BKO）は、Ｂ細胞特異的にＣｒｅを発現するmb1-Creマウスと、組織特異的Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウスであるArf1-floxマウスとを、交配することで得た。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス（Arf1-BKO）は、Ｂ細胞特異的にＣｒｅを発現するmb1-Creマウスと、組織特異的Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウスであるArf1-floxマウスとを、交配することで得た。
【0112】
（２）骨髄における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損によるＢ細胞の分化への影響
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｂ細胞の分化が影響を受けるか評価するために、フローサイトメトリーを用いた。具体的には、Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から骨髄細胞を採取した。前記骨髄細胞から赤血球を除去し、前記除去後、ブロッキング抗体（Ｃｌｏｎｅ：２．４Ｇ２、BD社製）でブロッキングした。前記ブロッキング後、前記骨髄細胞は、４℃で３０分の条件下で、異なる蛍光色素で標識した抗Ｂ２２０抗体（Clone：RA3-6B2、Biolegend社製）、抗ＩｇＭ抗体（Clone：RMM-1Biolegend社製）、抗ＣＤ２５抗体（Clone：PC61.5、Biolegend社製）、抗ＣＤ４３抗体（Clone：S7、Biolegend社製）および７－ＡＡＤ（7-amino-Actinomycin D）で染色した。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）解析は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ社製）を用いて行った。７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、B220intIgM-のpro-B細胞/pre-B細胞画分（ＩｇＭ－）、B220 intIgM+の未成熟Ｂ細胞画分（immature）、およびB220 hiIgM+のＢ細胞画分（circulating）に分類し、それぞれの割合を評価した。また、pro-B/pre-B画分（ＩｇＭ－）に占めるpro-B細胞およびpre-B細胞の割合を評価した。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｂ細胞の分化が影響を受けるか評価するために、フローサイトメトリーを用いた。具体的には、Ａｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から骨髄細胞を採取した。前記骨髄細胞から赤血球を除去し、前記除去後、ブロッキング抗体（Ｃｌｏｎｅ：２．４Ｇ２、BD社製）でブロッキングした。前記ブロッキング後、前記骨髄細胞は、４℃で３０分の条件下で、異なる蛍光色素で標識した抗Ｂ２２０抗体（Clone：RA3-6B2、Biolegend社製）、抗ＩｇＭ抗体（Clone：RMM-1Biolegend社製）、抗ＣＤ２５抗体（Clone：PC61.5、Biolegend社製）、抗ＣＤ４３抗体（Clone：S7、Biolegend社製）および７－ＡＡＤ（7-amino-Actinomycin D）で染色した。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）解析は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ社製）を用いて行った。７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、B220intIgM-のpro-B細胞/pre-B細胞画分（ＩｇＭ－）、B220 intIgM+の未成熟Ｂ細胞画分（immature）、およびB220 hiIgM+のＢ細胞画分（circulating）に分類し、それぞれの割合を評価した。また、pro-B/pre-B画分（ＩｇＭ－）に占めるpro-B細胞およびpre-B細胞の割合を評価した。
【0113】
図１は、フローサイトメトリーによる、結果を示したグラフである。図１（Ａ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除いたＢ細胞の分化集団の割合を示したグラフであり、図１（Ｂ）は、図１（Ａ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおける各分化集団の割合をプロットしたグラフである。図１（Ｃ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、B220＋IgM-画分に占めるpro-B細胞およびpre-B細胞の割合を示したグラフである。図１（Ｄ）は、図１（Ｃ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおけるpro-B細胞およびpre-B細胞の割合をプロットしたグラフである。図１（Ｅ）は、図１（Ａ）および図１（Ｂ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおけるpre-B細胞に対するimmatureのＢ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１（Ｆ）は、図１（Ａ）および図１（Ｂ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおけるimmatureのＢ細胞に対するcirculatingのＢ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１（Ａ）において、縦軸は、Ｂ２２０を示し、横軸は、ＩｇＭを示す。図１（Ｂ）において、縦軸は、骨髄（ＢＭ）における細胞数の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１（Ｃ）において、縦軸は、ＣＤ４３を示し、横軸は、ＣＤ２５を示す。図１（Ｄ）において、縦軸は、B220＋IgM-における細胞数の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１（Ｅ）において、縦軸は、pre-B細胞に対するimmatureのＢ細胞の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１（Ｆ）において、縦軸は、immatureのＢ細胞に対するcirculatingのＢ細胞の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１（Ｂ）および（Ｄ）～（Ｆ）において、白丸が、ＷＴを示し、グレーの丸がArf1-BKOを示す（以下、特に言及がない場合、同様）。図１（Ａ）に示すように、ＩｇＭ－およびimmatureのＢ細胞の割合は、ＷＴとArf1-BKOにおいて差が見られなかった。しかしながら、図１（Ｂ）～（Ｄ）に示すように、ＷＴに比べてArf1-BKOでは、骨髄における、pre-B細胞、immatureのＢ細胞、およびcirculatingのＢ細胞の割合は減少していることがわかった。また、図１（Ｅ）および図１（Ｆ）に示すように、Arf1-BKOにおける、pre-B細胞に対するimmatureのＢ細胞の割合およびimmatureのＢ細胞に対するcirculatingのＢ細胞の割合は、ＷＴと比べて差がなかった。以上のことから、Ａｒｆ１の欠損において、骨髄におけるＢ細胞の分化割合は減少するものの、骨髄で分化したＢ細胞は、ＷＴと同様に末梢に排出されていることが示唆された。
【0114】
（３）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損によるＢ細胞の抗体産生能への影響
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、抗体産生能が影響を受けるか評価するために、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay：酵素結合免疫吸着測定法）を用いて、抗原特異的な免疫応答における抗体価を検討した。前記検討は、図２（Ａ）に示すように行った。具体的には、抗原として、１００μｇ 卵白アルブミン（ＯＶＡ、シグマ社製）およびＡｌｕｍアジュバント（Imject Alum、Thermo Fisher Scientific社製）を１：１で混合した混合物を調製した。前記調製後、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内に前記混合物を投与した。さらに、１回目の投与の２週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスの腹腔内に前記混合物を投与した。そして、２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスの全採血を行った。前記全採血で得た血液から血清を調製後、得られた血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、ＯＶＡに対する抗体価を測定した。前記ＯＶＡに対する抗体価の測定は、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体HRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、ＧＥヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図２（Ｂ）に示す。なお、図中におけるアスタリスクは、ｐ値を示し、＊は、ｐ＜０．０５、＊＊は、ｐ＜０．０１を意味する。また、統計的解析は、Student’s t法により実施した（以下、同様）。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、抗体産生能が影響を受けるか評価するために、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay：酵素結合免疫吸着測定法）を用いて、抗原特異的な免疫応答における抗体価を検討した。前記検討は、図２（Ａ）に示すように行った。具体的には、抗原として、１００μｇ 卵白アルブミン（ＯＶＡ、シグマ社製）およびＡｌｕｍアジュバント（Imject Alum、Thermo Fisher Scientific社製）を１：１で混合した混合物を調製した。前記調製後、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内に前記混合物を投与した。さらに、１回目の投与の２週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスの腹腔内に前記混合物を投与した。そして、２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスの全採血を行った。前記全採血で得た血液から血清を調製後、得られた血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、ＯＶＡに対する抗体価を測定した。前記ＯＶＡに対する抗体価の測定は、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体HRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、ＧＥヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図２（Ｂ）に示す。なお、図中におけるアスタリスクは、ｐ値を示し、＊は、ｐ＜０．０５、＊＊は、ｐ＜０．０１を意味する。また、統計的解析は、Student’s t法により実施した（以下、同様）。
【0115】
図２（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡによる、ＯＶＡ特異的な抗体産生の結果を示したグラフである。図２（Ｂ）において、縦軸は、吸光度（ＯＤ）を示し、横軸は、マウスの種類を示す。Arf1-BKOマウスの血清では、ＷＴマウスの血清と比べて、ＯＶＡ特異的な抗体産生は有意に少なく、ほとんど見られなかった。以上のことから、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損マウスでは、外来抗原に対する抗体の産生能が極めて低いことがわかった。
【0116】
（４）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損によるＢ細胞の抗体産生能への影響
一般的に、タンパク質抗原に対する抗体産生は、Ｔ細胞のヘルプが必要である。一方で、Ｔ細胞非依存的抗原に対する抗体産生は、Ｔ細胞のヘルプが不要である。そこで、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｔ細胞非依存的な抗体産生能が影響を受けるか評価するために、ＥＬＩＳＡを用いて検討した。前記検討は、図３（Ａ）に示すように行った。具体的には、Ｔ細胞非依存的抗原として、NP-Ficoll（NP(57)-AECM-Ficoll、Biosearch Technologies社製）を用い、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内に７５μｇのNP-Ficollを投与した。１回目の投与の２週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスの腹腔内にNP-Ficollを投与した。２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスから全採血を行った。前記全採血で得た血液から、血清を調製した。前記血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、NP-Ficollに対する抗体価を測定した。前記NP-Ficollに対する抗体価の測定は、１０μｇ／ｍｌ NP(41)-BSAを固相後、５％スキムミルクでブロッキングした９６ウェルプレートに対して、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体としてHRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、GEヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図３（Ｂ）に示す。
一般的に、タンパク質抗原に対する抗体産生は、Ｔ細胞のヘルプが必要である。一方で、Ｔ細胞非依存的抗原に対する抗体産生は、Ｔ細胞のヘルプが不要である。そこで、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｔ細胞非依存的な抗体産生能が影響を受けるか評価するために、ＥＬＩＳＡを用いて検討した。前記検討は、図３（Ａ）に示すように行った。具体的には、Ｔ細胞非依存的抗原として、NP-Ficoll（NP(57)-AECM-Ficoll、Biosearch Technologies社製）を用い、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内に７５μｇのNP-Ficollを投与した。１回目の投与の２週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスの腹腔内にNP-Ficollを投与した。２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスから全採血を行った。前記全採血で得た血液から、血清を調製した。前記血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、NP-Ficollに対する抗体価を測定した。前記NP-Ficollに対する抗体価の測定は、１０μｇ／ｍｌ NP(41)-BSAを固相後、５％スキムミルクでブロッキングした９６ウェルプレートに対して、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体としてHRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、GEヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図３（Ｂ）に示す。
【0117】
図３（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡによる、NP-Ficoll特異的な抗体産生の結果を示したグラフである。図３（Ｂ）において、縦軸は、吸光度（ＯＤ）を示し、横軸は、マウスの種類（白丸：WT、グレーの丸：Arf1-BKO）を示す。Arf1-BKOマウスの血清では、ＷＴマウスの血清と比べて、NP-Ficoll特異的な抗体産生は有意に少なく、ほとんど見られなかった。以上のことから、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損マウスでは、Ｔ細胞の関与に関わらず、外来抗原に対する抗体の産生能が極めて低いことがわかった。また、抗原に対するＢ細胞による抗体の産生に、Ａｒｆ１が関与していることがわかった。
【0118】
（５）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損による自然抗体産生への影響
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、自然抗体の産生が影響を受けるか評価するために、抗体アイソタイピングをＥＬＩＳＡで行った。具体的には、未免疫のＷＴマウス、Arf1-BKOマウス、およびArf6-BKOマウスから全採血を行った。得られた全採血から得た血液から血清を調製し、血清調製物を得た。また、ＷＴマウス、Arf1-BKOマウス、およびArf6-BKOマウスの糞便から抽出液を調製し、糞便調製物を得た。具体的には、マウスの糞便を－２０℃で凍結した後、２ｍｍｏｌ／ｌ ＰＭＳＦ（Phenylmethylsulfonyl fluoride）および０．２ｍｇ／ｍｌ ベンザミジン含有ＰＢＳを１００ｍｇの糞便に対して５００μｌ添加した。前記添加後、ペッスルを用いてホモジェナイズした。その後、４℃、１５０００ｒｐｍ、１０分間の条件下で、遠心を行った。前記遠心後、上清を回収した。前記回収後、前記上清を、４℃、１５０００ｒｐｍ、２分間の条件で、遠心を行った。前記遠心後、上清を回収し、サンプルを得た。前記サンプルは、使用するまで－２０℃で保存した。前記血清調製物および前記糞便調製物は、SBA Clonotyping System-C57BL/6-HRPキット（Southern Biotech社製）を用いてイムノグロブリンの同定および定量を行った。これらの結果を図４に示す。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、自然抗体の産生が影響を受けるか評価するために、抗体アイソタイピングをＥＬＩＳＡで行った。具体的には、未免疫のＷＴマウス、Arf1-BKOマウス、およびArf6-BKOマウスから全採血を行った。得られた全採血から得た血液から血清を調製し、血清調製物を得た。また、ＷＴマウス、Arf1-BKOマウス、およびArf6-BKOマウスの糞便から抽出液を調製し、糞便調製物を得た。具体的には、マウスの糞便を－２０℃で凍結した後、２ｍｍｏｌ／ｌ ＰＭＳＦ（Phenylmethylsulfonyl fluoride）および０．２ｍｇ／ｍｌ ベンザミジン含有ＰＢＳを１００ｍｇの糞便に対して５００μｌ添加した。前記添加後、ペッスルを用いてホモジェナイズした。その後、４℃、１５０００ｒｐｍ、１０分間の条件下で、遠心を行った。前記遠心後、上清を回収した。前記回収後、前記上清を、４℃、１５０００ｒｐｍ、２分間の条件で、遠心を行った。前記遠心後、上清を回収し、サンプルを得た。前記サンプルは、使用するまで－２０℃で保存した。前記血清調製物および前記糞便調製物は、SBA Clonotyping System-C57BL/6-HRPキット（Southern Biotech社製）を用いてイムノグロブリンの同定および定量を行った。これらの結果を図４に示す。
【0119】
図４は、ＥＬＩＳＡによる、イムノグロブリンを定量した結果を示したグラフである。図４（Ａ）は、血清調製物における各イムノグロブリンを定量した結果を示したグラフであり、図４（Ｂ）は、糞便調製物におけるイムノグロブリンＩｇＡを定量した結果を示したグラフである。図４（Ａ）において、縦軸は、ＷＴの各イムノグロブリンを１００としたときの相対値を示し、横軸は、イムノグロブリンの種類を示す。図４（Ｂ）において、縦軸は、ＷＴのＩｇＡを１００としたときの相対値を示し、横軸はマウスの種類を示す。図４の各イムノグロブリンの種類において、マウスの種類は、左側から、ＷＴ、Arf1-BKO、およびArf6-BKO）の順番である。図４（Ａ）に示すように、ＷＴの血清と比較して、Arf1-BKOの血清（Arf1-BKO）では、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、およびＩｇＧ３の含有量は少なく、ＩｇＧクラスの含有量は顕著に少なかった。他方、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損下でも、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、およびＩｇＧ３は、一定量産生されていることがわかった。また、Arf6-BKOの血清（Arf6-BKO）では、ＩｇＭ、ＩｇＧ３以外のクラスの抗体価はＷＴの血清と差が見られなかった。図４（Ｂ）に示すように、ＷＴの糞便と比較して、Arf1-BKOの糞便（Arf1-BKO）では、ＩｇＡの含有量は少なかった。他方、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損下でも、ＩｇＡが一定量産生されていることがわかった。また、Arf6-BKOの糞便（Arf6-BKO）では、ＩｇＡの含有量は、ＷＴの糞便と差が見られなかった。以上のことから、Ａｒｆ６に比べ、Ａｒｆ１は、抗体産生への寄与が高いことがわかった。また、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損下でも、自然抗体が産生されており、Ａｒｆ１は、抗原特異的な抗体産生の誘導と比較して、自然抗体の産生誘導への寄与が相対的に少ないことがわかった。
【0120】
（６）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損によるＢ１細胞由来抗体産生能への影響
Ｂ細胞は、主に、２つのサブセットから構成され、その１つがＢ１細胞である。前記Ｂ１細胞は、主に腹腔等に常在しているＢ細胞である。Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｂ１細胞由来の抗体産生能が影響を受けるか評価するために、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫＴ細胞を完全に欠損した免疫不全マウスＲａｇ２（recombination activating gene 2）欠損マウスに腹腔内Ｂ細胞を移植し、得られたマウスについて、抗体アイソタイピングをＥＬＩＳＡで行った。具体的には、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内を洗浄し、腹腔内洗浄液を得た。その後、前記腹腔内洗浄液から細胞を回収し、前記細胞をＰＢＳで１０６細胞／ｍｌになるように調整した。前記調整後、前記細胞１００μｌを、Ｒａｇ２欠損マウス（Jax mice stock #008449）の腹腔内に投与した。コントロール（Ｒａｇ２ ＫＯ Ｃｔｒｌ）には、ＰＢＳを腹腔内に投与した。前記投与の３０日後、前記Ｒａｇ２欠損マウスから全採血を行った。その後、前記全採血で得た血液から、血清を調製し血清調製物を得た。前記血清調製物は、SBA Clonotyping System-C57BL/6-HRPキット（Southern Biotech社製）を用いてイムノグロブリンの同定および定量を行った。これらの結果を図５に示す。
Ｂ細胞は、主に、２つのサブセットから構成され、その１つがＢ１細胞である。前記Ｂ１細胞は、主に腹腔等に常在しているＢ細胞である。Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｂ１細胞由来の抗体産生能が影響を受けるか評価するために、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫＴ細胞を完全に欠損した免疫不全マウスＲａｇ２（recombination activating gene 2）欠損マウスに腹腔内Ｂ細胞を移植し、得られたマウスについて、抗体アイソタイピングをＥＬＩＳＡで行った。具体的には、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスの腹腔内を洗浄し、腹腔内洗浄液を得た。その後、前記腹腔内洗浄液から細胞を回収し、前記細胞をＰＢＳで１０６細胞／ｍｌになるように調整した。前記調整後、前記細胞１００μｌを、Ｒａｇ２欠損マウス（Jax mice stock #008449）の腹腔内に投与した。コントロール（Ｒａｇ２ ＫＯ Ｃｔｒｌ）には、ＰＢＳを腹腔内に投与した。前記投与の３０日後、前記Ｒａｇ２欠損マウスから全採血を行った。その後、前記全採血で得た血液から、血清を調製し血清調製物を得た。前記血清調製物は、SBA Clonotyping System-C57BL/6-HRPキット（Southern Biotech社製）を用いてイムノグロブリンの同定および定量を行った。これらの結果を図５に示す。
【0121】
図５は、ＥＬＩＳＡによる、Ｒａｇ２ＫＯマウスの血清調製物におけるイムノグロブリンを定量した結果を示したグラフである。図５において、縦軸は、定量値（μｇ／ｍｌ）を示し、横軸は、イムノグロブリンの種類を示す。コントロール（Ｒａｇ２ ＫＯ ｃｔｒｌ）では、血清中にＩｇＭおよびＩｇＡは存在しなかった。他方、ＷＴを投与した群では、Ｒａｇ２ ＫＯ ｃｔｒｌと比較して、ＩｇＭおよびＩｇＡの含有量が大きく増加した。Arf1-BKOを投与した群では、ＷＴを投与した群と比較して、ＩｇＭおよびＩｇＡの含有量は顕著に少ないものの、一定量のＩｇＭおよびＩｇＡが観察された。このため、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損マウスの腹腔のＢ１Ｂ細胞によって、ＩｇＭおよびＩｇＡが産生されることがわかった。
【0122】
（７）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によるＴ細胞のサイトカイン分泌への影響
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｔ細胞におけるサイトカイン分泌能が影響を受けるかを評価するために、Ｔ細胞刺激時に産生されるＩＬ－２の濃度をＥＬＩＳＡにより評価した。具体的には、Ａｒｆ１／Ａｒｆ６コンディッショナルノックアウトマウス（Arf1/6-KO）およびコントロールマウス（ＷＴ）からＴ細胞を採取した。前記Ｔ細胞を、抗CD3抗体（145-2C11、Biolegend社製）および抗CD28抗体（35.51、Biolegend社製）を用いて刺激後、Ａｒｆ経路阻害剤brefeldin Aで処理し、サイトカインの細胞外への分泌を阻害した。前記brefeldin Aの濃度は、終濃度が、０、０．１、０．３、０．５、および１μｇ／ｍｌとなるように調製した。つぎに、前記処理後のＴ細胞の培養上清を回収し、得られた培養上清について、ELISA Max deluxe set mouse IL-2（Biolegend社製）を用いて、ＩＬ－２濃度を測定した。そして、Arf1-BKOおよびＷＴのＴ細胞について、brefeldin Aの濃度が０μｇ／ｍｌの培養上清におけるＩＬ－２の産生量を１００％として、各brefeldin Aの濃度における培養上清中のＩＬ－２の産生量の相対値を算出した。これらの結果を図６に示す。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、Ｔ細胞におけるサイトカイン分泌能が影響を受けるかを評価するために、Ｔ細胞刺激時に産生されるＩＬ－２の濃度をＥＬＩＳＡにより評価した。具体的には、Ａｒｆ１／Ａｒｆ６コンディッショナルノックアウトマウス（Arf1/6-KO）およびコントロールマウス（ＷＴ）からＴ細胞を採取した。前記Ｔ細胞を、抗CD3抗体（145-2C11、Biolegend社製）および抗CD28抗体（35.51、Biolegend社製）を用いて刺激後、Ａｒｆ経路阻害剤brefeldin Aで処理し、サイトカインの細胞外への分泌を阻害した。前記brefeldin Aの濃度は、終濃度が、０、０．１、０．３、０．５、および１μｇ／ｍｌとなるように調製した。つぎに、前記処理後のＴ細胞の培養上清を回収し、得られた培養上清について、ELISA Max deluxe set mouse IL-2（Biolegend社製）を用いて、ＩＬ－２濃度を測定した。そして、Arf1-BKOおよびＷＴのＴ細胞について、brefeldin Aの濃度が０μｇ／ｍｌの培養上清におけるＩＬ－２の産生量を１００％として、各brefeldin Aの濃度における培養上清中のＩＬ－２の産生量の相対値を算出した。これらの結果を図６に示す。
【0123】
図６は、ＩＬ－２の産生量を示すグラフである。図６において、（Ａ）は、コントロール（ｃｔｒｌ）およびArf1/6-KOにおける、ＩＬ－２の分泌濃度を示したグラフであり、（Ｂ）は、各brefeldin A（ＢＦＡ）濃度における、ｃｔｒｌおよびArf1/6-KOのＩＬ－２の分泌量の相対値を示すグラフである。図６（Ａ）において、縦軸は、濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示し、横軸は、細胞の種類を示している。図６（Ｂ）において、縦軸は、ＩＬ－２の産生量の相対値（％）を示し、横軸は、ＢＦＡ濃度を示している。Arf1/6-KOにおけるＩＬ－２の産生量は、ＢＦＡ濃度に関わらず、ｃｔｒｌと同様の割合を示した。以上のことから、Ａｒｆ１の欠損は、Ｔ細胞におけるサイトカイン分泌に影響を与えないことがわかった。
【0124】
以上の結果から、Ａｒｆ１は、抗原特異的な抗体の産生への寄与と比較して、自然抗体の産生への寄与が相対的に低いことがわかった。また、Ａｒｆ１の有無により、抗原特異的な抗体の産生量を制御できることから、Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減した状態で、かつ、抗原特異的な抗体産生を制御できること、すなわち、液性免疫応答を制御できることがわかった。
［実施例２］
本発明のＢ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損が、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を抑制していることを確認した。
［実施例２］
本発明のＢ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損が、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を抑制していることを確認した。
【0125】
（１）膝窩リンパ節における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の抗体産生能の評価
前記実施例１（４）の結果から、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損では、Ｔ細胞非依存的に抗原産生能が低下していることがわかったため、より詳細な解析を行った。具体的には、footpadに局所的な免疫を行い、リンパ節での抗体産生能について評価するために、ＥＬＩＳＡを用いて検討した。前記検討は、図４（Ａ）に示すように行った。具体的には、抗原として、１００μｇ 卵白アルブミン（ＯＶＡ、シグマ社製）およびSigma Adjuvant System（ＳＡＳ、シグマ社製）を１：１で混合した混合物を調製した。前記調製後、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスのfootpadに前記混合物を投与した。さらに、１回目の投与の３週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスのfootpadに前記混合物を投与した。そして、２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスの全採血を行った。前記全採血で得た血液から血清を調製後、得られた血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、ＯＶＡに対する抗体価を測定した。前記ＯＶＡに対する抗体価の測定は、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体HRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、ＧＥヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図７（Ｂ）に示す。
前記実施例１（４）の結果から、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損では、Ｔ細胞非依存的に抗原産生能が低下していることがわかったため、より詳細な解析を行った。具体的には、footpadに局所的な免疫を行い、リンパ節での抗体産生能について評価するために、ＥＬＩＳＡを用いて検討した。前記検討は、図４（Ａ）に示すように行った。具体的には、抗原として、１００μｇ 卵白アルブミン（ＯＶＡ、シグマ社製）およびSigma Adjuvant System（ＳＡＳ、シグマ社製）を１：１で混合した混合物を調製した。前記調製後、ＷＴマウスおよびArf1-BKOマウスのfootpadに前記混合物を投与した。さらに、１回目の投与の３週間後に、前記ＷＴマウスおよび前記Arf1-BKOマウスのfootpadに前記混合物を投与した。そして、２回目の投与のさらに２週間後に、各マウスの全採血を行った。前記全採血で得た血液から血清を調製後、得られた血清をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で希釈し、ＯＶＡに対する抗体価を測定した。前記ＯＶＡに対する抗体価の測定は、３７℃で２時間の条件下で、血清（５００倍希釈）を反応させ、前記反応後、３７℃で３０分の条件下で、２次抗体HRP標識Anti-マウスIg（３０００倍希釈、ＧＥヘルスケア社製）を反応させた。前記反応後、プレートリーダー（Bio-Rad社製）で吸収波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの結果を図７（Ｂ）に示す。
【0126】
図７（Ｂ）は、ＥＬＩＳＡによる、ＯＶＡ特異的な抗体産生の結果を示したグラフである。図７（Ｂ）において、縦軸は、吸光度（ＯＤ）を示し、横軸は、マウスの種類を示す。Arf1-BKOマウスの血清では、ＷＴマウスの血清と比べて、ＯＶＡ特異的な抗体産生は、見られなかった。
【0127】
（２）膝窩リンパ節における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の分化の検討
前記実施例２（１）の結果を踏まえ、免疫によって肥大した膝窩リンパ節（ｐＬＮ）における、Ｂ細胞の分化を評価するために、フローサイトメトリーを用いた。具体的には、前記実施例２（１）で免疫したＡｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から肥大した膝窩リンパ節を採取した。前記膝窩リンパ節は、７７μｍのナイロンメッシュで挟み、シリンジのゴム部分でホモジナイズを行った。その後、コニカルチューブに細胞を回収した。前記回収後、前記膝窩リンパ節由来の細胞を、ブロッキング抗体（Clone：２．４Ｇ２、BD Biosciences（BD）社製）でブロッキングした。前記ブロッキング後、前記膝窩リンパ節由来の細胞は、４℃で３０分の条件下で、異なる蛍光色素で標識した、抗Ｂ２２０抗体（Clone：RA3-6B2、Biolegend社製）、抗ＧＬ７抗体（Clone：GL7、Biolegend社製）、biotin標識抗CD95抗体（抗Ｆａｓ抗体、Clone：JO2、BD Biosciences社製）、抗ＰＤ－１抗体（Clone：RMP1-30、eBioscience社製）、抗ＣＸＣＲ５抗体（Clon：L138D7、Biolegend社製）、および７－ＡＡＤ（7-amino-Actinomycin D）で染色した。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）解析は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ社製）を用いて行った。７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、B220+GL7+Fas+のＧＣ－Ｂ細胞（胚中心Ｂ細胞）画分、PD-1hiCXCR5+の濾胞ヘルパーＴ細胞画分に分類し、それぞれの割合を評価した。これらの結果を図８に示す。
前記実施例２（１）の結果を踏まえ、免疫によって肥大した膝窩リンパ節（ｐＬＮ）における、Ｂ細胞の分化を評価するために、フローサイトメトリーを用いた。具体的には、前記実施例２（１）で免疫したＡｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から肥大した膝窩リンパ節を採取した。前記膝窩リンパ節は、７７μｍのナイロンメッシュで挟み、シリンジのゴム部分でホモジナイズを行った。その後、コニカルチューブに細胞を回収した。前記回収後、前記膝窩リンパ節由来の細胞を、ブロッキング抗体（Clone：２．４Ｇ２、BD Biosciences（BD）社製）でブロッキングした。前記ブロッキング後、前記膝窩リンパ節由来の細胞は、４℃で３０分の条件下で、異なる蛍光色素で標識した、抗Ｂ２２０抗体（Clone：RA3-6B2、Biolegend社製）、抗ＧＬ７抗体（Clone：GL7、Biolegend社製）、biotin標識抗CD95抗体（抗Ｆａｓ抗体、Clone：JO2、BD Biosciences社製）、抗ＰＤ－１抗体（Clone：RMP1-30、eBioscience社製）、抗ＣＸＣＲ５抗体（Clon：L138D7、Biolegend社製）、および７－ＡＡＤ（7-amino-Actinomycin D）で染色した。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）解析は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ社製）を用いて行った。７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、B220+GL7+Fas+のＧＣ－Ｂ細胞（胚中心Ｂ細胞）画分、PD-1hiCXCR5+の濾胞ヘルパーＴ細胞画分に分類し、それぞれの割合を評価した。これらの結果を図８に示す。
【0128】
図８は、フローサイトメトリーによる、結果を示したグラフである。図８（Ａ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＧＬ７およびＦａｓを発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図８（Ｂ）は、図８（Ａ）のフローサイトメトリーによる結果から、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における、ＷＴおよびArf1-BKOにおける胚中心Ｂ細胞の割合をプロットしたグラフである。図８（Ｃ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＰＤ－１およびＣＸＣＲ５を発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図８（Ｄ）は、図８（Ｃ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおける濾胞ヘルパーＴ細胞の割合をプロットしたグラフである。図８（Ａ）において、縦軸は、ＧＬ７を示し、横軸は、Ｆａｓを示す。図８（Ｂ）において、縦軸は、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞におけるＧＣ－Ｂ細胞数の割合を示し、横軸は、試料の種類を示す。図８（Ｃ）において、縦軸は、ＰＤ－１を示し、横軸は、ＣＸＣＲ５を示す。図８（Ｄ）において、縦軸は、濾胞ヘルパーＴ細胞数の割合を示し、横軸は、試料の種類を示す。図８（Ａ）および図８（Ｂ）に示すように、ＷＴに比べてArf1-BKOでは、免疫後の胚中心Ｂ細胞の割合が増加しないことがわかった。図８（Ｃ）および図８（Ｄ）に示すように、胚中心Ｂ細胞を刺激し分化を誘導する役割を有する濾胞ヘルパーＴ細胞の割合は、ＷＴに比べてArf1-BKOでは少ないものの、維持されていることがわかった。以上の結果から、膝窩リンパ節では、Ａｒｆ１の欠損において、免疫後の胚中心Ｂ細胞の割合が増加しないことがわかった。
【0129】
（３）膝窩リンパ節における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御の検討
前記実施例２（２）の結果を踏まえ、胚中心の構造を解析するために、膝窩リンパ節の免疫染色を行った。具体的には、前記実施例２（１）で免疫したＡｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から肥大した膝窩リンパ節を採取した。前記採取後、前記膝窩リンパ節を、４℃の条件下で、１０、２０、および３０％スクロール溶液に、この順番で置換した。前記置換後、Ｏ．Ｃ．Ｔコンパウンド（Sakura Finetechnical社製）で包埋し、－８０℃の条件下で、凍結した。前記凍結後、クリオスタット（Leica Biosystems社製）を用いて、１０μｍの凍結切片を作成し、風乾した。前記風乾後、冷アセトンを用いて、３分間固定を行った。前記固定後、各抗体を用いて染色した。前記抗体は、biotin標識抗GL7抗体（Clone：GL-7、eBioscience社製）、PE標識抗IgD抗体（Clone：11-26c、eBioscience社製）、抗Desmin rabbit抗体（Clone：Y66、abcam社製）、Alexa Flour 488標識抗B220抗体（Clone：RA3-6B2、eBioscience社製）、PE標識抗CD138抗体（Clone: 281-2、BD Bioscience社製）、biotin標識抗LYVE-1抗体（Cat No：BAF2125、R&D Systems社製）を使用した。前記染色後、Permafluor mountant（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて封入し、試料を得た。その後、前記試料は、蛍光顕微鏡ＢＺ－Ｘ８００（キーエンス社製）で観察し、Adobe Photoshop CS6を用いて解析を行った。これらの結果を、図９に示す。
前記実施例２（２）の結果を踏まえ、胚中心の構造を解析するために、膝窩リンパ節の免疫染色を行った。具体的には、前記実施例２（１）で免疫したＡｒｆ１コンディッショナルノックアウトマウス、およびコントロールマウス（ＷＴ）から肥大した膝窩リンパ節を採取した。前記採取後、前記膝窩リンパ節を、４℃の条件下で、１０、２０、および３０％スクロール溶液に、この順番で置換した。前記置換後、Ｏ．Ｃ．Ｔコンパウンド（Sakura Finetechnical社製）で包埋し、－８０℃の条件下で、凍結した。前記凍結後、クリオスタット（Leica Biosystems社製）を用いて、１０μｍの凍結切片を作成し、風乾した。前記風乾後、冷アセトンを用いて、３分間固定を行った。前記固定後、各抗体を用いて染色した。前記抗体は、biotin標識抗GL7抗体（Clone：GL-7、eBioscience社製）、PE標識抗IgD抗体（Clone：11-26c、eBioscience社製）、抗Desmin rabbit抗体（Clone：Y66、abcam社製）、Alexa Flour 488標識抗B220抗体（Clone：RA3-6B2、eBioscience社製）、PE標識抗CD138抗体（Clone: 281-2、BD Bioscience社製）、biotin標識抗LYVE-1抗体（Cat No：BAF2125、R&D Systems社製）を使用した。前記染色後、Permafluor mountant（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて封入し、試料を得た。その後、前記試料は、蛍光顕微鏡ＢＺ－Ｘ８００（キーエンス社製）で観察し、Adobe Photoshop CS6を用いて解析を行った。これらの結果を、図９に示す。
【0130】
図９は、免疫染色像を示す写真である。図９（Ａ）において、左の写真は、ＷＴの写真を示し、右の写真は、Arf1-BKOの写真を示し、ＧＬ７（胚中心Ｂ細胞マーカー）、ＩｇＤ（Ｂ細胞マーカー）、およびDesminで染色した染色像を示す。図９（Ｂ）において、左側の写真は、ＷＴの写真を示し、右側の写真は、Arf1-BKOの写真を示し、Ｂ２２０（Ｂ細胞マーカー）、ＣＤ１３８（形質細胞マーカー）、およびＬＹＶＥ－１の染色像を示す。図９（Ａ）において、矢印で示す破線で囲った箇所は、ＧＬ７の発現を示す。図９（Ｂ）において、矢印で示す破線で囲った箇所は、ＣＤ１３８の発現を示す。図９において、スケールバーは、５００μｍを示す。図９（Ａ）に示すように、ＷＴでは、胚中心が形成されているのに対して、Arf1-BKOでは、胚中心が形成されていないことがわかった。また、図９（Ｂ）に示すように、ＷＴに対して、Arf1-BKOでは、形質細胞に分化した細胞が著しく少ないことがわかった。これらの結果から、Ａｒｆ１を欠損したＢ細胞は、胚中心Ｂ細胞への分化が制御されており、これにより、形質細胞への分化が起こらないことがわかった。以上の結果から、Ａｒｆ１は、膝窩リンパ節において、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化を制御し、抗原特異的抗体の産生を制御していることが示唆された。
【0131】
（４）パイエル板における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御の検討
リンパ節に胚中心が形成されない場合でも、パイエル板では胚中心が形成されうることが報告されている（参考文献１）。前記実施例２（３）の結果から、Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞では、膝窩リンパ節での胚中心Ｂ細胞への分化が抑制されていることがわかったため、パイエル板でのＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が抑制されているか検討した。具体的には、免疫後のパイエル板における、Ｂ細胞の分化を評価するために、フローサイトメトリーを用いた。前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１０に示す。
参考文献１：Biram, Adi et al. “B Cell Diversification Is Uncoupled from SAP-Mediated Selection Forces in Chronic Germinal Centers within Peyer's Patches.” Cell reports vol. 30,6 (2020): 1910-1922.e5. doi:10.1016/j.celrep.2020.01.032
リンパ節に胚中心が形成されない場合でも、パイエル板では胚中心が形成されうることが報告されている（参考文献１）。前記実施例２（３）の結果から、Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞では、膝窩リンパ節での胚中心Ｂ細胞への分化が抑制されていることがわかったため、パイエル板でのＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が抑制されているか検討した。具体的には、免疫後のパイエル板における、Ｂ細胞の分化を評価するために、フローサイトメトリーを用いた。前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１０に示す。
参考文献１：Biram, Adi et al. “B Cell Diversification Is Uncoupled from SAP-Mediated Selection Forces in Chronic Germinal Centers within Peyer's Patches.” Cell reports vol. 30,6 (2020): 1910-1922.e5. doi:10.1016/j.celrep.2020.01.032
【0132】
図１０は、フローサイトメトリーによる、結果を示したグラフである。図１０において、図１０（Ａ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＧＬ７およびＦａｓを発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１０（Ｂ）は、図１０（Ａ）のフローサイトメトリーによる結果から、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における、ＷＴおよびArf1-BKOにおける胚中心Ｂ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１０（Ｃ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＰＤ－１およびＣＸＣＲ５を発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１０（Ｄ）は、図１０（Ｃ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおける濾胞ヘルパーＴ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１０（Ａ）において、縦軸は、ＧＬ７を示し、横軸は、Ｆａｓを示す。図１０（Ｂ）において、縦軸は、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における胚中心Ｂ細胞数の割合を示し、横軸は、試料の種類を示す。図１０（Ｃ）において、縦軸は、ＰＤ－１を示し、横軸は、ＣＸＣＲ５を示す。図１０（Ｄ）において、縦軸は、濾胞ヘルパーＴ細胞数の割合を示し、横軸は、試料の種類を示す。図１０（Ａ）および図１０（Ｂ）に示すように、ＷＴに比べてArf1-BKOでは、免疫後の胚中心Ｂ細胞の割合が少ないものの、維持されていることがわかった。図１０（Ｃ）および図１０（Ｄ）に示すように、胚中心Ｂ細胞を刺激し分化を誘導する役割を有する濾胞ヘルパーＴ細胞の割合は、ＷＴに比べてArf1-BKOでは少ないものの、維持されていることがわかった。以上の結果から、パイエル板では、Ａｒｆ１の欠損においても、免疫後の胚中心が形成されていることがわかった。
【0133】
（５）パイエル板における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御の検討
前記実施例２（４）の結果を踏まえ、胚中心の構造を解析するために、パイエル板の免疫染色を行った。具体的には、前記実施例２（３）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１１に示す。
前記実施例２（４）の結果を踏まえ、胚中心の構造を解析するために、パイエル板の免疫染色を行った。具体的には、前記実施例２（３）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１１に示す。
【0134】
図１１は、免疫染色像を示す写真である。図１１（Ａ）において、左の写真は、ＷＴの写真を示し、右の写真は、Arf1-BKOの写真を示し、Ｂ２２０（Ｂ細胞マーカー）、ＧＬ７（胚中心Ｂ細胞マーカー）、およびDesminで染色した染色像を示す。図１１（Ｂ）において、左の写真は、ＷＴの写真を示し、右の写真は、Arf1-BKOの写真を示し、ＧＬ７の染色像を示す。図１１（Ａ）および図１１（Ｂ）に示すように、ＷＴおよびArf1-BKOにおいて、胚中心が形成されていることがわかった。これらの結果から、Ａｒｆ１を欠損したＢ細胞では、パイエル板においてはＢ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が抑制されていないことがわかった。
【0135】
（６）パイエル板における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御の検討
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、パイエル板における、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が制御されていないか、さらに検討した。前記検討は、図１２（Ａ）に示すように行った。具体的には、内在性のＢ細胞を欠損した免疫不全マウスｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウスに、Arf1-BKOマウスの骨髄細胞を移植し、移植２か月後のマウスのパイエル板の細胞について、フローサイトメトリーを用いてＢ細胞の分化を評価した。前記フローサイトメトリーには、前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いたこと、抗体に異なる蛍光色素で標識した抗Ｂ２２０抗体、抗Ｈ５７抗体（Cat No:H57-597, BioLegend社製）、抗ＧＬ７抗体、およびbiotin標識抗CD95抗体を用いたこと以外は、同様の方法で行った。また、移植２か月後のマウスの糞便について、ＩｇＡの産生量についてＥＬＩＳＡを用いて測定した。前記ＥＬＩＳＡには、前記実施例１（５）と同様の方法で行った。これらの結果を図１２（Ｂ）～（Ｄ）に示す。
Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損によって、パイエル板における、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化が制御されていないか、さらに検討した。前記検討は、図１２（Ａ）に示すように行った。具体的には、内在性のＢ細胞を欠損した免疫不全マウスｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウスに、Arf1-BKOマウスの骨髄細胞を移植し、移植２か月後のマウスのパイエル板の細胞について、フローサイトメトリーを用いてＢ細胞の分化を評価した。前記フローサイトメトリーには、前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いたこと、抗体に異なる蛍光色素で標識した抗Ｂ２２０抗体、抗Ｈ５７抗体（Cat No:H57-597, BioLegend社製）、抗ＧＬ７抗体、およびbiotin標識抗CD95抗体を用いたこと以外は、同様の方法で行った。また、移植２か月後のマウスの糞便について、ＩｇＡの産生量についてＥＬＩＳＡを用いて測定した。前記ＥＬＩＳＡには、前記実施例１（５）と同様の方法で行った。これらの結果を図１２（Ｂ）～（Ｄ）に示す。
【0136】
図１２（Ｂ）の左のグラフは、Arf1-BKOマウスの骨髄細胞を移植したｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウスのパイエル板における、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、Ｂ２２０およびＨ５７を発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１２（Ｂ）の右のグラフは、図１２（Ｂ）の左のグラフの結果から、Ｂ細胞をソートし、ＧＬ７およびＦａｓを発現するＢ細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１２（Ｃ）は、図１２（Ｂ）のフローサイトメトリーによる結果から、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における、胚中心Ｂ細胞（ＧＬ７＋Ｆａｓ＋）の割合をプロットしたグラフである。図１２（Ｂ）の左のグラフにおいて、縦軸は、Ｂ２２０の蛍光強度を示し、横軸は、Ｈ５７の蛍光強度を示す。図１２（Ｂ）の右のグラフにおいて、縦軸は、ＧＬ７を示し、横軸は、Ｆａｓを示す。図１２（Ｃ）において、縦軸は、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における胚中心Ｂ細胞数の割合を示す。図１２（Ｂ）および図１２（Ｃ）に示すように、Arf1-BKOマウスの骨髄細胞を移植したｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウスにおいて、胚中心Ｂ細胞が検出された。
【0137】
図１２（Ｄ）は、糞便調製物におけるイムノグロブリンＩｇＡを定量した結果を示したグラフである。図１２（Ｄ）において、縦軸は、ＩｇＡの産生量を示し、横軸はマウスの種類を示す。図１２（Ｄ）に示すように、ｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウスでは、ＩｇＡの産生はほぼ見られないのに対し、Arf1-BKOマウスの骨髄細胞を移植したｍｂｌＣｒｅ／Ｃｒｅマウス（Arf1-BKO BMT）では、ＩｇＡの産生が見られた。これらの結果から、Ａｒｆ１を欠損したＢ細胞は、パイエル板において、胚中心が形成され、ＩｇＡを産生できることがわかった。
【0138】
（７）パイエル板における、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞のイムノグロブリンクラスの検討
パイエル板において、胚中心が形成されることがわかったため、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損Ｂ細胞のパイエル板における、Ｂ細胞のイムノグロブリンクラスについて、検討した。具体的には、免疫後のパイエル板における、Ｂ細胞のイムノグロブリンクラスを評価するために、フローサイトメトリーを用いた。前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いたこと、抗体に抗ＧＬ７抗体、蛍光標識ＩｇＡ抗体（Ca No:11-44-2、Southern Biotech社製）、およびＩｇＧ１抗体（Ca No:A85-1、BD Biosciences社製）を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１３に示す。
パイエル板において、胚中心が形成されることがわかったため、Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１の欠損Ｂ細胞のパイエル板における、Ｂ細胞のイムノグロブリンクラスについて、検討した。具体的には、免疫後のパイエル板における、Ｂ細胞のイムノグロブリンクラスを評価するために、フローサイトメトリーを用いた。前記実施例２（２）の方法で、膝窩リンパ節の代わりにパイエル板を用いたこと、抗体に抗ＧＬ７抗体、蛍光標識ＩｇＡ抗体（Ca No:11-44-2、Southern Biotech社製）、およびＩｇＧ１抗体（Ca No:A85-1、BD Biosciences社製）を用いた以外は、同様の方法で行った。これらの結果を、図１３に示す。
【0139】
図１３は、フローサイトメトリーによる、結果を示したグラフである。図１３（Ａ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＧＬ７およびＩｇＡを発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１３（Ｂ）は、図１３（Ａ）のフローサイトメトリーによる結果から、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞における、ＷＴおよびArf1-BKOにおけるＩｇＡ＋胚中心Ｂ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１３（Ｃ）は、ＷＴおよびArf1-BKOにおける、７－ＡＡＤ陽性の死細胞を除き、ＧＬ７およびＩｇＧ１を発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１３（Ｄ）は、図１３（Ｃ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴおよびArf1-BKOにおけるＩｇＧ１＋胚中心Ｂ細胞の割合をプロットしたグラフである。図１３（Ａ）において、縦軸は、ＧＬ７を示し、横軸は、ＩｇＡを示す。図１３（Ｂ）において、縦軸は、Ｂ２２０＋ Ｂ細胞におけるＩｇＡ＋胚中心Ｂ細胞数の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１３（Ｃ）において、縦軸は、ＧＬ７を示し、横軸は、ＩｇＧ１を示す。図１３（Ｄ）において、縦軸は、ＩｇＧ１＋胚中心Ｂ細胞数の割合を示し、横軸は、細胞の種類を示す。図１３（Ａ）および図１３（Ｂ）に示すように、ＷＴおよびArf1-BKOでは、免疫後のＩｇＡ＋胚中心Ｂ細胞の割合は同じぐらいであることがわかった。図１３（Ｃ）および図１３（Ｄ）に示すように、ＷＴに比べてArf1-BKOでは、ＩｇＧ１＋胚中心Ｂ細胞の割合は、顕著に少ないことがわかった。以上の結果から、胚中心Ｂ細胞のＩｇＡへのクラススイッチは、Ａｒｆ１非依存的に行われていることがわかった。また、Ａｒｆ１は、胚中心Ｂ細胞のＩｇＧ１へのクラススイッチを、促進していることが示唆された。
【0140】
（８）Ｂ細胞特異的Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞のＩｇＧ１クラススイッチの制御の検討
Ａｒｆ１は、胚中心Ｂ細胞のＩｇＧ１へのクラススイッチを、促進していることが示唆されたため、Ａｒｆ１によって、胚中心Ｂ細胞のＩｇＧ１へのクラススイッチが制御されているか検討した。具体的には、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、脾臓由来のＢ細胞を、ＩｇＡまたはＩｇＧ１にクラススイッチする系を確立し、前記検討を行った。ＷＴのＢ細胞（ＣＤ４５．１＋）およびＡｒｆ１欠損Ｂ細胞（ＣＤ４５．１－）を、１：１で混合した。前記混合後、ＩｇＡ誘導条件下またはＩｇＧ１誘導条件下で、３日間培養を行った。前記ＩｇＡ誘導条件は、αＣＤ４０（１０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－５（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＧＦβ（１ｎｇ／ｍｌ）、ＢＡＦＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）、およびレチノイン酸（ＲＡ）（１０ｎｍｏｌ／ｌ）を含む培養液の存在下での培養とした。前記ＩｇＧ１誘導条件は、αＣＤ４０（１０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍｌ）を含む培養液の存在下での培養とした。前記培養後、クラススイッチした細胞について、フローサイトメトリーを用いて解析を行った。前記フローサイトメトリーにおいて、抗体は、抗ＩｇＭ抗体（Cat No:RMM-1、Bio Legend社製）、ＩｇＡ抗体、およびＩｇＧ１抗体を用いた。これらの結果を図１４に示す。
Ａｒｆ１は、胚中心Ｂ細胞のＩｇＧ１へのクラススイッチを、促進していることが示唆されたため、Ａｒｆ１によって、胚中心Ｂ細胞のＩｇＧ１へのクラススイッチが制御されているか検討した。具体的には、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、脾臓由来のＢ細胞を、ＩｇＡまたはＩｇＧ１にクラススイッチする系を確立し、前記検討を行った。ＷＴのＢ細胞（ＣＤ４５．１＋）およびＡｒｆ１欠損Ｂ細胞（ＣＤ４５．１－）を、１：１で混合した。前記混合後、ＩｇＡ誘導条件下またはＩｇＧ１誘導条件下で、３日間培養を行った。前記ＩｇＡ誘導条件は、αＣＤ４０（１０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－５（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＧＦβ（１ｎｇ／ｍｌ）、ＢＡＦＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）、およびレチノイン酸（ＲＡ）（１０ｎｍｏｌ／ｌ）を含む培養液の存在下での培養とした。前記ＩｇＧ１誘導条件は、αＣＤ４０（１０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍｌ）を含む培養液の存在下での培養とした。前記培養後、クラススイッチした細胞について、フローサイトメトリーを用いて解析を行った。前記フローサイトメトリーにおいて、抗体は、抗ＩｇＭ抗体（Cat No:RMM-1、Bio Legend社製）、ＩｇＡ抗体、およびＩｇＧ１抗体を用いた。これらの結果を図１４に示す。
【0141】
図１４は、フローサイトメトリーによる、結果を示したグラフである。図１４において、図１４（Ａ）は、ＩｇＧ１またはＩｇＡへのクラススイッチを評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１４（Ａ）において、左列のヒストグラムは、０日目の各細胞の分布を示すグラフであり、真ん中の列のドットプロットは、ＩｇＧ１（上段）またはＩｇＡ（下段）を発現する細胞を評価したフローサイトメトリーの結果を示すグラフであり、右列のヒストグラムは、３日目のＣＤ４５．１陽性または陰性細胞の割合を示すグラフである。図１４（Ｂ）は、図１４（Ａ）のフローサイトメトリーによる結果から、ＷＴに対するＡｒｆ１欠損Ｂ細胞の比（ＫＯ／ＷＴ）を取り、さらに０日目のＫＯ／ＷＴに対する比を１としたときの、ＩｇＧ１およびＩｇＡへのクラススイッチを示したグラフである。図１４（Ａ）の真ん中の列の上段のグラフにおいて、縦軸は、ＩｇＭを示し、横軸は、ＩｇＧ１を示す。図１４（Ａ）の真ん中の列の下段のグラフにおいて、縦軸は、ＩｇＭを示し、横軸は、ＩｇＡを示す。図１４（Ｂ）において、縦軸は、０日目のＫＯ／ＷＴに対する３日目のＫＯ／ＷＴの相対値を示し、横軸は、イムノグロブリンの種類を示す。図１４に示すように、ＷＴおよびＡｒｆ１欠損Ｂ細胞では、ＩｇＡ＋Ｂ細胞の比率は１：１であった。それに対して、Ａｒｆ１欠損Ｂ細胞では、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞はほとんど見られなかった。以上の結果から、Ａｒｆ１を欠損したＢ細胞では、ＩｇＧ１への分化誘導過程において、細胞死が引き起こされることがわかった。
【0142】
以上、実施形態および実施例を参照して本開示を説明したが、本開示は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本開示の構成や詳細には、本開示のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
【0143】
＜付記＞
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
＜液性免疫応答の制御剤＞
（付記１）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、液性免疫応答の制御剤。
（付記２）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記１に記載の制御剤。
（付記３）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記２に記載の制御剤。
（付記４）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記１から３のいずれかに記載の制御剤。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤＞
（付記５）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤。
（付記６）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記５に記載の制御剤。
（付記７）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記６に記載の制御剤。
（付記８）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記５から７のいずれかに記載の制御剤。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤＞
（付記９）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤。
（付記１０）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記９に記載の制御剤
（付記１１）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１０に記載の制御剤。
（付記１２）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記９から１１のいずれかに記載の制御剤。
＜液性免疫応答の制御組成物＞
（付記１３）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物。
（付記１４）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の増強である、付記１３に記載の組成物。
（付記１５）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１４に記載の組成物。
（付記１６）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の抑制である、付記１３から１５のいずれかに記載の組成物。
（付記１７）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記１３から１６のいずれかに記載の組成物。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物＞
（付記１８）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物。
（付記１９）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化促進である、付記１８に記載の組成物。
（付記２０）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１９に記載の組成物。
（付記２１）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制である、付記１８から２０のいずれかに記載の組成物。
（付記２２）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記１８から２１のいずれかに記載の組成物。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物＞
（付記２３）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物。
（付記２４）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制である、付記２３に記載の組成物。
（付記２５）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記２４に記載の組成物。
（付記２６）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進である、付記２３から２５のいずれかに記載の組成物。
（付記２７）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記２３から２６のいずれかに記載の組成物。
＜液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記２８）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記２９）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記２８に記載のスクリーニング方法。
（付記３０）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記２９に記載のスクリーニング方法。
（付記３１）
前記検出工程では、前記非ヒト動物における抗体量を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記３０に記載のスクリーニング方法。
（付記３２）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記２８から３１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記３３）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記３４）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記３３に記載のスクリーニング方法。
（付記３５）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記３４に記載のスクリーニング方法。
（付記３６）
前記検出工程では、前記非ヒト動物における胚中心Ｂ細胞を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記３５に記載のスクリーニング方法。
（付記３７）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記３３から３６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記３８）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記３９）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記３８に記載のスクリーニング方法。
（付記４０）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記３９に記載のスクリーニング方法。
（付記４１）
前記検出工程では、前記非ヒト動物におけるＩｇＧ１＋Ｂ細胞を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記４０に記載のスクリーニング方法。
（付記４２）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記３８から４１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
＜液性免疫応答の制御剤＞
（付記１）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、液性免疫応答の制御剤。
（付記２）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記１に記載の制御剤。
（付記３）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記２に記載の制御剤。
（付記４）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記１から３のいずれかに記載の制御剤。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤＞
（付記５）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御剤。
（付記６）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記５に記載の制御剤。
（付記７）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記６に記載の制御剤。
（付記８）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記５から７のいずれかに記載の制御剤。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤＞
（付記９）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御剤。
（付記１０）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１である、付記９に記載の制御剤
（付記１１）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１０に記載の制御剤。
（付記１２）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質である、付記９から１１のいずれかに記載の制御剤。
＜液性免疫応答の制御組成物＞
（付記１３）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、標的抗原に対する液性免疫応答の制御組成物。
（付記１４）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の増強である、付記１３に記載の組成物。
（付記１５）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１４に記載の組成物。
（付記１６）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記液性免疫応答の制御は、液性免疫応答の抑制である、付記１３から１５のいずれかに記載の組成物。
（付記１７）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記１３から１６のいずれかに記載の組成物。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物＞
（付記１８）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御組成物。
（付記１９）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化促進である、付記１８に記載の組成物。
（付記２０）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記１９に記載の組成物。
（付記２１）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化制御は、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化抑制である、付記１８から２０のいずれかに記載の組成物。
（付記２２）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記１８から２１のいずれかに記載の組成物。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物＞
（付記２３）
ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性化物質またはＡｒｆ１の活性抑制物質と、標的抗原として免疫原とを含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御組成物。
（付記２４）
前記Ａｒｆ１の活性化物質は、Ａｒｆ１のアゴニスト、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性化物質、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性抑制物質、または恒常活性型Ａｒｆ１であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の抑制である、付記２３に記載の組成物。
（付記２５）
前記ＧＥＦは、ＡＤＰリボシル化因子グアニンヌクレオチド交換因子１（ADP Ribosylation Factor Guanine Nucleotide Exchange Factor 1：ＡｒｆＧＥＦ１）である、付記２４に記載の組成物。
（付記２６）
前記活性抑制物質は、Ａｒｆ１のアンタゴニスト、Ａｒｆ１の発現抑制核酸分子、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の活性抑制物質、またはＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の活性化物質であり、
前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御は、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の促進である、付記２３から２５のいずれかに記載の組成物。
（付記２７）
前記標的抗原は、免疫疾患の抗原である、付記２３から２６のいずれかに記載の組成物。
＜液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記２８）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程を含む、液性免疫応答の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記２９）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記液性免疫応答の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記２８に記載のスクリーニング方法。
（付記３０）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記２９に記載のスクリーニング方法。
（付記３１）
前記検出工程では、前記非ヒト動物における抗体量を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記３０に記載のスクリーニング方法。
（付記３２）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記２８から３１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
＜Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記３３）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程を含む、Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記３４）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記Ｂ細胞の胚中心Ｂ細胞への分化の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記３３に記載のスクリーニング方法。
（付記３５）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記３４に記載のスクリーニング方法。
（付記３６）
前記検出工程では、前記非ヒト動物における胚中心Ｂ細胞を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記３５に記載のスクリーニング方法。
（付記３７）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記３３から３６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
＜ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法＞
（付記３８）
被検物質から、ＡＤＰリボシル化因子１（ADP-ribosylation factor 1：Ａｒｆ１）の活性を増強または抑制する被検物質を、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程を含む、ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質のスクリーニング方法。
（付記３９）
前記Ａｒｆ１の発現系に、前記被検物質を共存させる共存工程と、
前記発現系におけるＡｒｆ１の活性を検出する検出工程と、
前記Ａｒｆ１の活性を増強または抑制する被検物質を、前記ＩｇＧ１＋Ｂ細胞の細胞死の制御候補物質として選択する選択工程とを含む、付記３８に記載のスクリーニング方法。
（付記４０）
前記Ａｒｆ１の発現系は、非ヒト動物である、付記３９に記載のスクリーニング方法。
（付記４１）
前記検出工程では、前記非ヒト動物におけるＩｇＧ１＋Ｂ細胞を検出することにより、前記Ａｒｆ１の活性を検出する、付記４０に記載のスクリーニング方法。
（付記４２）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記３８から４１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【産業上の利用可能性】
【0144】
以上のように、本開示によれば、Ｂ細胞全体の除去と比較して、自然抗体への影響を低減し、かつ、抗原特異的な抗体産生を制御できる。このため、本開示は、医薬分野、臨床分野および生化学分野において極めて有用である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【配列表】