特開 2024-102190 ヌクレアーゼ融合タンパク質によるシェーグレン病の処置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024102190

(43)【公開日】2024-07-30

(54)【発明の名称】ヌクレアーゼ融合タンパク質によるシェーグレン病の処置

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/16 20060101AFI20240723BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240723BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240723BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20240723BHJP

   C12N 9/22 20060101ALN20240723BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALN20240723BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20240723BHJP

【ＦＩ】

A61K38/16

A61P37/06 ZNA

G01N33/53 M

C07K16/00

C12N9/22

C12Q1/68

C07K19/00

【審査請求】有

【請求項の数】8

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024073573

(22)【出願日】2024-04-30

(62)【分割の表示】P 2021538992の分割

【原出願日】2020-01-03

(31)【優先権主張番号】62/788,730

(32)【優先日】2019-01-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】519000951

【氏名又は名称】リゾルブ セラピューティクス， エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ジェイムズ アーサー ポサダ

(72)【発明者】

【氏名】ダニエル バージ

(57)【要約】      （修正有）

【課題】シェーグレン病を処置するための医薬組成物を提供する。
【解決手段】ヒトＦｃドメインバリアントのＮ末端にリンカーを用いて、または用いずに作動可能に連結したヒトＲＮａｓｅ １からなるポリペプチドを含む医薬組成物とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

２つのポリペプチドを含むホモ二量体を含む医薬組成物であって、各ポリペプチドが、ヒトＦｃドメインバリアントのＮ末端にリンカーを用いて、または用いずに作動可能に連結したヒトＲＮａｓｅ １からなり、前記医薬組成物が、前記ホモ二量体による処置の候補としてシェーグレン症候群を有する患者を同定する方法において候補と同定された患者を処置するためのものであり、前記方法が、
（ａ）前記患者から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定する工程であって、前記プロファイル中の前記炎症関連遺伝子が、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７、および／またはＺＮＦ６０６を含む、工程と、
（ｂ）工程（ａ）において決定された前記炎症関連遺伝子発現プロファイルを、前記ホモ二量体で処置されたが臨床的応答を示さなかった対照の被験体から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較する工程と
を含み、ａ）前記試料中のＺＮＦ６０６の発現レベルが前記対照の被験体と比較して増加していること；ｂ）前記試料中のＡＣＫＲ３の発現レベルが前記対照の被験体と比較して増加していること；ｃ）前記試料中のＳＴＡＴ１の発現レベルが前記対照の被験体と比較して減少していること；ｄ）前記試料中のＳＴＡＴ２の発現レベルが前記対照の被験体と比較して減少していること；ｅ）前記試料中のＴＲＩＭ３７の発現レベルが前記対照の被験体と比較して減少していること；ｆ）前記試料中のＭＡＰ３Ｋ８の発現レベルが前記対照の被験体と比較して減少していること；またはｇ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）の任意の組み合わせが、前記患者が前記ホモ二量体による処置の候補であることを指し示す、医薬組成物。

【請求項2】

シェーグレン症候群を処置する方法における使用のための医薬組成物であって、２つのポリペプチドを含むホモ二量体を含み、各ポリペプチドが、ヒトＦｃドメインバリアントのＮ末端にリンカーを用いて、または用いずに作動可能に連結したヒトＲＮａｓｅ １からなり、前記医薬組成物は前記患者に投与されることを特徴とし、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす、医薬組成物。

【請求項3】

前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項5】

シェーグレン症候群を処置する方法における使用のための医薬組成物であって、２つのポリペプチドを含むホモ二量体を含み、各ポリペプチドが、ヒトＦｃドメインバリアントのＮ末端にリンカーを用いて、または用いずに作動可能に連結したヒトＲＮａｓｅ １からなり、前記医薬組成物は前記患者に投与されることを特徴とし、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす、医薬組成物。

【請求項6】

前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

シェーグレン症候群を処置する方法における使用のための医薬組成物であって、２つのポリペプチドを含むホモ二量体を含み、各ポリペプチドが、ヒトＦｃドメインバリアントのＮ末端にリンカーを用いて、または用いずに作動可能に連結したヒトＲＮａｓｅ １からなり、前記医薬組成物は前記患者に投与されることを特徴とし、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす、医薬組成物。

【請求項8】

前記サイトカインが、ＣＸＣＬ１０である、請求項７に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１９年１月４日に出願された米国特許仮出願第６２／７８８，７３０号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）は、母集団の０．５％～１％の間が罹患すると推定される自己免疫障害であり、その患者１０名のうち９名が女性である（Ｒａｍｏｓ－Ｃａｓａｌｓ， ２００５， Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ． ６４， ３４７－３５４；Ｓｋｏｐｏｕｌｉ， ２０００， Ｓｅｍｉｎ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ． ２９：２９６－３０４）。ｐＳＳの女性の大多数は、疲労、関節痛ならびに眼球および／または口腔乾燥として顕在化する軽度～中等度の疾患によって特徴付けされる。疾患は、唾液腺および涙腺のリンパ球浸潤と、その後の、ドライアイおよび口渇を引き起こす腺の炎症、損傷および機能喪失によって特徴付けされる。肺、腎臓および肝臓を含む主要な臓器系の関与は、ｐＳＳの共通の全身性顕在化である（Ｍａｌｌａｄｉ， ２０１２， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｃａｒｅ Ｒｅｓ． ６４：９１１－９１８）。生化学的レベルでは、ｐＳＳは、増加した免疫グロブリンレベル、ならびにＳＳＡ／ＲｏおよびＳＳＢ／Ｌａ等のリボヌクレオタンパク質複合体に対する抗核内（ｎｕｃｌｅａｒ）抗体の産生を伴う（Ｂａｖｅ， ２００５， Ａｒｔｈ． ＆ Ｒｈｅｕｍ． ５２：１１８５－１１９５；Ｈａｌｌ ２０１５， Ａｒｔｈ． ＆ Ｒｈｅｕｍ． ６７， ２４３７－２４４６）。

【0003】

形成されると、ＲＮＡ含有免疫複合体は、樹状細胞等の免疫系細胞へと直ちに内部移行され、そこで、免疫複合体に結合されたＲＮＡは、ＲＮＡセンサー、ＴＬＲ７等のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）と相互作用することができる。ＴＬＲは、病原体関連分子構成成分を認識することにより、自然免疫系の鍵となるエレメントとして作動すると考えられるが、現在、宿主核酸も、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９を含む特異的なファミリーメンバーを活性化することができることが明らかである（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ， ２０１０， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｒｈｅｕｍ．， ６：１４６－１５６）。これらの受容体を発現する細胞は、受容体を細胞表面に分布させることなく発現を行う；それどころか、ＴＬＲ７／８／９は、エンドソーム内に隔絶される（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ， ２０１０， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｒｈｅｕｍ．， ６：１４６－１５６）。この位置決めは、宿主核酸との相互作用を最小化すると仮定される。しかし、免疫複合体内に存在する場合、核酸抗原は、受容体媒介性エンドサイトーシスを介して細胞に能動的に内部移行される。エフェクターＦｃ、補体およびＢ細胞受容体は全て、エンドソームへの核酸含有ＩＣの進入を容易にすることができる（Ｍｅａｎｓ， ２００５， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １１５：４０７－４１７；Ｌａｕ， ２００５， Ｊ． Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ． ２０２：１１７１－１１７７；Ｂｒｋｉｃ ２０１３， Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ． ７２（５）：７２８－７３５）。内部移行されると、核酸は、内在するエンドソームＴＬＲに結合し、これを活性化するように位置決めされる。次いで、活性化されたＴＬＲは、ｐＤＣからの１型ＩＦＮ産生を促進し、ＰＭＮを活性化し、Ｂ細胞増殖および自己抗体産生を促進する。よって、核酸含有抗原は、ｐＳＳ疾患の病態生理学の複数の側面に寄与する。
疲労は、シェーグレン症候群の最も一般的な腺外症状の１つであり、永続的な全般性の疲れによって定義される。ｐＳＳ患者の推定７０％は、クオリティ・オブ・ライフにマイナスの影響を有すると報告される著明な疲労を患う。血清学的には、これらの患者のおよそ８０％は、小型の非コードＲＮＡ分子を含有する自己抗原に結合する抗Ｒｏ／ＳＳＡ自己抗体を有する。疲労は、強度、持続時間および日常の機能における効果の観点から特徴付けることができる。注目すべきことに、プライマリケア設定において、疲労は、抑うつ状態に強く関連する（Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｍ． ２００８ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １５； ５９（１２）： １７８０－１７７８）。よって、シェーグレン症候群等の自己免疫疾患の患者における疲労を改善する手段の必要がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Ｒａｍｏｓ－Ｃａｓａｌｓ， ２００５， Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ． ６４， ３４７－３５４

【非特許文献2】Ｓｋｏｐｏｕｌｉ， ２０００， Ｓｅｍｉｎ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ． ２９：２９６－３０４

【非特許文献3】Ｍａｌｌａｄｉ， ２０１２， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｃａｒｅ Ｒｅｓ． ６４：９１１－９１８

【非特許文献4】Ｂａｖｅ， ２００５， Ａｒｔｈ． ＆ Ｒｈｅｕｍ． ５２：１１８５－１１９５

【非特許文献5】Ｈａｌｌ ２０１５， Ａｒｔｈ． ＆ Ｒｈｅｕｍ． ６７， ２４３７－２４４６

【非特許文献6】Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ， ２０１０， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｒｈｅｕｍ．， ６：１４６－１５６

【非特許文献7】Ｍｅａｎｓ， ２００５， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １１５：４０７－４１７

【非特許文献8】Ｌａｕ， ２００５， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． ２０２：１１７１－１１７７

【非特許文献9】Ｂｒｋｉｃ ２０１３， Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ． ７２（５）：７２８－７３５

【非特許文献10】Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｍ． ２００８ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １５； ５９（１２）： １７８０－１７７８

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

本開示は、少なくとも一部には、シェーグレン症候群の処置を必要とするヒト患者におけるシェーグレン症候群の処置に有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質に関する。一部の態様では、本開示は、シェーグレン症候群患者における疲労の処置、低下または寛解に有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質に関する。一部の態様では、本開示は、シェーグレン症候群患者における認知能力の改善、増強もしくは増加に、または失認の低下、減少もしくは寛解に有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質に関する。一部の態様では、本開示は、疲労に関連する抑うつ状態を含む、シェーグレン症候群患者における抑うつ状態の低下、減少または寛解に有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質に関する。一部の態様では、本開示は、シェーグレン症候群を処置または予防するための方法、シェーグレン症候群患者における疲労を処置、予防または低下するための方法、およびシェーグレン症候群患者における認知能力を改善するための方法において有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と、１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤とを含む組成物に関する。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約３～６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、注射（例えば、静脈内注射）によってヒト患者に投与される。

【0006】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＳＬＶ－１３２である。ＲＳＬＶ－１３２は、配列番号５０として示されるアミノ酸配列をそれぞれ有する２個のポリペプチドのホモ二量体を含むヌクレアーゼ融合タンパク質である。ホモ二量体の各ポリペプチドは、ＲＮａｓｅ－ＦｃのＮ末端からＣ末端へと図１に示す構成を有し、野生型ヒトＲＮａｓｅ １ドメイン（配列番号２）が、リンカーなしで、３個のヒンジ領域システイン残基のうち１個におけるセリンへの変異（残基２２０またはＣ２２０Ｓ、本明細書で、「ＳＣＣヒンジ」とも称される）ならびにＣＨ２ドメインにおける２個の変異Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＮ末端に作動可能に連結されている。これらの変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインの配列は、配列番号２２に示される。

【0007】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質、例えばＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２を患者に投与するステップを含み、これにより、患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法を提供する。

【0008】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質、例えばＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２の用量を患者に投与するステップを含み、これにより、患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法を提供する。

【0009】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質、例えばＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２を患者に投与するステップを含み、これにより、患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置する方法を提供する。一部の態様では、患者における認知効果は、ＰｒｏＦの精神的構成成分において、処置前のＰｒｏＦの精神的構成成分と比べて少なくとも１ポイント改善される。一部の態様では、患者における認知効果は、処置前のＰｒｏＦの精神的構成成分と比べて、ＰｒｏＦの精神的構成成分において１ポイントを超えて、２ポイントを超えてまたは３ポイントを超えて改善される。

【0010】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を患者に投与するステップを含み、これにより、患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法を提供する。一部の態様では、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量である。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、薬学的に許容される担体を含有する組成物の形態で投与される。一部の態様では、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物は、静脈内注射（例えば、溶液における）のために製剤化される。

【0011】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量の医薬組成物を患者に投与するステップを含み、組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含み、これにより、患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法を提供する。一部の態様では、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物は、静脈内注射（例えば、溶液における）のために製剤化される。

【0012】

本開示の方法の前述の実施形態または関連する実施形態のいずれかでは、本明細書における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １を含む。一部の態様では、ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたは１つもしくは複数の変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、ヒト細胞上のＦｃγ受容体への結合を減少させる１つまたは複数の変異を含む。一部の態様では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、オプソニン化、ファゴサイトーシス、補体依存性細胞傷害および抗体依存性細胞性細胞傷害からなる群から必要に応じて選択されるエフェクター機能の低下を有する。

【0013】

一部の態様では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、３個のヒンジ領域システイン残基のうち１つまたは複数のセリンによる置換を含む。一部の態様では、Ｆｃドメインは、ＥＵインデックスに従ってナンバリングしてＳＣＣ変異（残基２２０、２２６および２２９）を含む。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。

【0014】

本開示の方法の前述の実施形態または関連する実施形態のいずれかでは、本明細書における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーありまたはなしで、ＥＵナンバリングに従って、Ｃ２２０Ｓ変異、Ｐ２３８Ｓ変異およびＰ３３１Ｓ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結されたヒト膵臓ＲＮａｓｅ １を含む。

【0015】

本開示の方法の前述の実施形態または関連する実施形態のいずれかでは、本明細書における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む。

【0016】

本開示の方法の前述の実施形態または関連する実施形態のいずれかでは、本明細書における使用のための、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、静脈内注射により患者に投与される。一部の態様では、患者は、有効用量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を２週間毎に投与される。

【0017】

一部の態様では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、３ヶ月間にわたり２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、３ヶ月間に及ぶ６回の隔週注入において患者に投与される。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物は、３週間にわたり毎週患者に投与され、次いで２週間毎に１回投与されて、治療効果を達成または維持する。

【0018】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン症候群の処置を必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物の少なくとも３用量の投薬レジメンを投与するステップを含み、各用量が、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約３～６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される（例えば、注射、例えば、静脈内注射により）、方法を提供する。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の少なくとも４用量を投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の少なくとも５用量を投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の少なくとも６用量を投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の少なくとも７用量を投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の少なくとも８用量を投与される。

【0019】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン症候群の処置を必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物の用量の投薬レジメンを、少なくとも２週間にわたり週１回投与するステップを含み、各用量が、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約３～６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される（例えば、注射、例えば、静脈内注射により）、方法を提供する。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも３週間にわたり毎週投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも４週間にわたり毎週投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも５週間にわたり毎週投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも６週間にわたり毎週投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも７週間にわたり毎週投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも８週間にわたり毎週投与される。

【0020】

一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも２週間にわたり２週間毎に投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも４週間にわたり２週間毎に投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも６週間にわたり２週間毎に投与される。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、少なくとも８週間にわたり２週間毎に投与される。

【0021】

一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、３週間にわたり毎週投与され、次いで、２週間毎に１回の投与が少なくとも１ヶ月間なされる。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、３週間にわたり毎週投与され、次いで、２週間毎に１回の投与が少なくとも２ヶ月間なされる。一部の態様では、患者は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を、３週間にわたり毎週投与され、次いで、２週間毎に１回の投与が少なくとも３ヶ月間なされる。

【0022】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含み、処置が、ＥＵＬＡＲ
ＳＳ患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）スコアにおいて、処置前のＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、方法を提供する。一部の態様では、処置は、処置前のＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、ＥＳＳＰＲＩスコアを少なくとも１ポイント低下させる。一部の態様では、疲労は、１～１０のＥＳＳＰＲＩ尺度で４．５～５．５の間のスコアへと低下する。

【0023】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含み、処置が、慢性疾患治療の機能評価（ＦＡＣＩＴ）疲労尺度において、処置前のＦＡＣＩＴスコアと比べて、患者における疲労を少なくとも１ポイント改善する、方法を提供する。一部の態様では、処置は、ＦＡＣＩＴ疲労尺度において、患者における疲労を少なくとも２ポイント改善する。一部の態様では、処置は、処置前のＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも１ポイント増加させる。一部の態様では、処置は、処置前のＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも２ポイント増加させる。

【0024】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含み、処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアにおいて、処置前のＰｒｏＦスコアと比べて、患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、方法を提供する。一部の態様では、処置は、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの精神的構成成分において、処置前の精神的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる。一部の態様では、処置は、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの身体的構成成分において、処置前の身体的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる。

【0025】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を患者に投与するステップを含み、処置が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査によって測定される患者における認知機能を、処置前のＤＳＳＴ検査スコアと比べて改善する、方法を提供する。一部の態様では、処置は、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査において患者による９０秒間で完了するマッチ数を増加させる。一部の態様では、処置は、患者によるＤＳＳＴ検査を完了するまでの時間を低下させる。

【0026】

他の態様では、本開示は、有効量の本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＲＳＬＶ－１３２、または配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／もしくは希釈剤を含む医薬組成物を含む注射用溶液を含む容器と、それを必要とするヒト患者における疲労を低下させることによるシェーグレン病の処置における使用のための使用説明書とを含むキットであって、注射用溶液が、静脈内投与のために製剤化される、キットを提供する。

【0027】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記処置が、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む。

【0028】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。

【0029】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記処置が、静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を前記患者に投与するステップを含む。

【0030】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記使用が静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を前記患者に投与するステップを含む。

【0031】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記処置が、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む。

【0032】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記使用が有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む。

【0033】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記処置が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む。

【0034】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記使用が配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む。

【0035】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記処置が、有効量の医薬組成物を前記患者に投与するステップを含み、前記組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。

【0036】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＳＬＶ－１３２、またはＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を提供し、前記使用が、有効量の医薬組成物を前記患者に投与するステップを含み、前記組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。

【0037】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす方法を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂを含む群から選択される。

【0038】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす方法を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される。

【0039】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす使用を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される。

【0040】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす使用を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される。

【0041】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される。

【0042】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される。

【0043】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす方法を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される。

【0044】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす使用を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される。

【0045】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤を提供する。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される。

【0046】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす方法を提供する。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０である。

【0047】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす使用を提供する。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０である。

【0048】

一部の態様では、本開示は、シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤を提供する。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０である。

【0049】

一部の態様では、本開示は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の患者を同定する方法であって、（ａ）前記患者から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）において決定された前記炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較するステップとを含み、前記炎症関連遺伝子発現プロファイルが、前記患者がＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補であることを指し示す方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子が、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７およびＺＮＦ６０６からなる群から選択される。

【0050】

特許または出願ファイルは、カラーで実行された少なくとも１枚の図面を含有する。カラー図面（複数可）入りのこの特許または特許出願公開の複写は、依頼し必要料金を支払うことにより、当該省庁によって提供される。

【0051】

本発明のこれらのおよび他の特徴、態様、および利点は以下の説明および添付図に関してよりよく理解されよう。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含み、これにより、前記患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法。
（項目２）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １が、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたは１つもしくは複数の変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、項目１に記載の方法。（項目５）
１つまたは複数の変異を含む前記Ｆｃドメインが、ヒト細胞上のＦｃγ受容体への結合の減少を有する、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、オプソニン化、ファゴサイトーシス、補体依存性細胞傷害および抗体依存性細胞性細胞傷害からなる群から必要に応じて選択されるエフェクター機能の低下を有する、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、ＥＵナンバリングに従って、Ｐ２３８Ｓ変異およびＰ３３１Ｓ変異を含む、項目４に記載の方法。
（項目８）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む、項目４に記載の方法。
（項目９）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、３個のヒンジ領域システイン残基のうち１つまたは複数のセリンによる置換を含む、項目４に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆｃドメインが、ＥＵインデックスに従ってナンバリングしてＳＣＣ変異（残基２２０、２２６および２２９）を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約５ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、静脈内注射により前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３ヶ月間にわたり２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３ヶ月間に及ぶ６回の隔週注入において前記患者に投与される、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３週間にわたり毎週前記患者に投与され、次いで２週間毎に１回投与されて、治療効果を達成または維持する、項目１に記載の方法。（項目２１）
処置が、ＥＵＬＡＲ ＳＳ患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）スコアにおいて、処置前のＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目１に記載の方法。
（項目２２）
処置が、処置前の前記ＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、前記ＥＳＳＰＲＩスコアを少なくとも１ポイント低下させる、項目１に記載の方法。
（項目２３）
疲労が、１～１０のＥＳＳＰＲＩ尺度で４．５～５．５の間のスコアへと低下する、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記患者が、２週間毎に有効用量の前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃを投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
処置が、慢性疾患治療の機能評価（ＦＡＣＩＴ）疲労尺度において、処置前のＦＡＣＩＴスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント改善する、項目１に記載の方法。
（項目２６）
処置が、ＦＡＣＩＴ疲労尺度において、前記患者における疲労を少なくとも２ポイント改善する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
処置が、処置前の前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも１ポイント増加させる、項目１に記載の方法。
（項目２８）
処置が、処置前の前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも２ポイント増加させる、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアにおいて、処置前のＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目１に記載の方法。
（項目３０）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの精神的構成成分において、処置前の精神的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目１に記載の方法。
（項目３１）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの身体的構成成分において、処置前の身体的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目１に記載の方法。
（項目３２）
処置が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査によって測定される前記患者における認知機能を、処置前のＤＳＳＴ検査スコアと比べて改善する、項目１に記載の方法。
（項目３３）
処置が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査において前記患者による９０秒間で完了するマッチ数を増加させる、項目１に記載の方法。
（項目３４）
処置が、前記患者による前記ＤＳＳＴ検査を完了するまでの時間を低下させる、項目１に記載の方法。
（項目３５）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を前記患者に投与するステップを含み、これにより、前記患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法。
（項目３６）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含み、これにより、前記患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置する方法。
（項目３７）
前記患者における認知効果が、ＰｒｏＦの精神的構成成分において、処置前のＰｒｏＦの精神的構成成分と比べて少なくとも１ポイント改善される、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含み、これにより、前記患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法。
（項目３９）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量の医薬組成物を前記患者に投与するステップを含み、前記組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含み、これにより、前記患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置する方法。
（項目４０）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １を含む、項目３５または３６に記載の方法。
（項目４１）
前記ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １が、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたは１つもしくは複数の変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、項目３５から４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
１つまたは複数の変異を含む前記Ｆｃドメインが、ヒト細胞上のＦｃγ受容体への結合の減少を有する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、オプソニン化、ファゴサイトーシス、補体依存性細胞傷害および抗体依存性細胞性細胞傷害からなる群から必要に応じて選択されるエフェクター機能の低下を有する、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、ＥＵナンバリングに従って、Ｐ２３８Ｓ変異およびＰ３３１Ｓ変異を含む、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む、項目４２に記載の方法。
（項目４７）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、３個のヒンジ領域システイン残基のうち１つまたは複数のセリンによる置換を含む、項目４２に記載の方法。
（項目４８）
前記Ｆｃドメインが、ＥＵインデックスに従ってナンバリングしてＳＣＣ変異（残基２２０、２２６および２２９）を含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、項目３５または３６に記載の方法。
（項目５０）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む、項目３５または３６に記載の方法。
（項目５１）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、約５ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、静脈内注射により前記患者に投与される、項目３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３ヶ月間にわたり２週間毎に約５～１０ｍｇ／ｋｇの用量で前記患者に投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。（項目５７）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３ヶ月間に及ぶ６回の隔週注入において前記患者に投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、３週間にわたり毎週前記患者に投与され、次いで２週間毎に１回投与される、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
処置が、ＥＵＬＡＲ ＳＳ患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）スコアにおいて、処置前のＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
処置が、処置前の前記ＥＳＳＰＲＩスコアと比べて、前記ＥＳＳＰＲＩスコアを少なくとも１ポイント低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
疲労が、１～１０のＥＳＳＰＲＩ尺度で４．５～５．５の間のスコアへと低下する、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記患者が、２週間毎に有効用量の前記ＲＮａｓｅ－Ｆｃを投与される、項目５９に記載の方法。
（項目６３）
処置が、慢性疾患治療の機能評価（ＦＡＣＩＴ）疲労尺度において、処置前のＦＡＣＩＴスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント改善する、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
処置が、ＦＡＣＩＴ疲労尺度において、前記患者における疲労を少なくとも２ポイント改善する、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
処置が、処置前の前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも１ポイント増加させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
処置が、処置前の前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアと比べて、前記ＦＡＣＩＴ疲労スコアを少なくとも２ポイント増加させる、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアにおいて、処置前のＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６８）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの精神的構成成分において、処置前の精神的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
処置が、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）スコアの身体的構成成分において、処置前の身体的構成成分ＰｒｏＦスコアと比べて、前記患者における疲労を少なくとも１ポイント低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
処置が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査によって測定される前記患者における認知機能を、処置前のＤＳＳＴ検査スコアと比べて改善する、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
処置が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）検査において前記患者による９０秒間で完了するマッチ数を増加させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
処置が、前記患者による前記ＤＳＳＴ検査を完了するまでの時間を低下させる、項目３５から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
注射用溶液を含む容器と、使用説明書とを含む、シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによるシェーグレン病の処置における使用のためのキットであって、
配列番号５０に示される有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに
１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤
を含み、前記注射用溶液が、静脈内投与のために製剤化されている、キット。
（項目７４）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記処置が、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目７５）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のための、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の使用。
（項目７６）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記処置が、静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を前記患者に投与するステップを含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目７７）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のための、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の使用であって、前記使用が静脈内注射により、約５～１０ｍｇ／ｋｇのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の用量を前記患者に投与するステップを含む使用。
（項目７８）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記処置が、有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目７９）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において認知効果を改善することによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のための、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の使用であって、前記使用が有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む使用。
（項目８０）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記処置が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目８１）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のための、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の使用であって、前記使用が配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む有効量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を前記患者に投与するステップを含む使用。（項目８２）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための方法における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記処置が、有効量の医薬組成物を前記患者に投与するステップを含み、前記組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目８３）
シェーグレン病を処置することを必要とするヒト患者において疲労を低下させることによりシェーグレン病を処置するための医薬の製造における使用のためのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であって、前記使用が、有効量の医薬組成物を前記患者に投与するステップを含み、前記組成物が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質；ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質。
（項目８４）
シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす方法。
（項目８５）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目８４に記載の方法。
（項目８７）
シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす方法。
（項目８８）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される、項目８６に記載の方法。
（項目８９）
シェーグレン病を処置することを必要とする患者においてシェーグレン病を処置する方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす方法。
（項目９０）
前記サイトカインが、ＣＸＣＬ１０である、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の患者を同定する方法であって、
（ａ）前記患者から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）において決定された前記炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較するステップと
を含み、前記炎症関連遺伝子発現プロファイルが、前記患者がＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補であることを指し示す方法。
（項目９２）
前記炎症関連遺伝子が、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７およびＺＮＦ６０６からなる群から選択される、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす使用。
（項目９４）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目９３に記載の使用。
（項目９５）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目９３に記載の使用。
（項目９６）
シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目９７）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目９６に記載のＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目９８）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４ＲおよびＳＴＡＴ５Ｂからなる群から選択される、項目９６に記載のＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目９９）
シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす使用。
（項目１００）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される、項目９９に記載の使用。
（項目１０１）
シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目１０２）
前記１種または複数種の炎症関連遺伝子が、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２からなる群から選択される、項目１０１に記載のＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目１０３）
シェーグレン病の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡヌクレアーゼ剤の使用であって、前記使用が有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす使用。
（項目１０４）
前記サイトカインが、ＣＸＣＬ１０である、項目１０３に記載の使用。
（項目１０５）
シェーグレン病を処置する方法における使用のためのＲＮＡヌクレアーゼ剤であって、前記使用が、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤を前記患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす、ＲＮＡヌクレアーゼ剤。
（項目１０６）
前記サイトカインが、ＣＸＣＬ１０である、項目１０５に記載のＲＮＡヌクレアーゼ剤。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】図１は、２個のポリペプチドを含むホモ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であるＲＳＬＶ－１３２の構成を示す図である。ホモ二量体の各ポリペプチドは、構成ＲＮａｓｅ－Ｆｃを有し、野生型ヒトＲＮａｓｅ １ドメインは、リンカーなしで、ＳＣＣヒンジならびにＣＨ２変異Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＮ末端に作動可能に連結される。

【0053】

【図2】図２は、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置したｐＳＳ患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの改善を示すグラフである。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置したｐＳＳ患者において評価した。少なくとも１ポイントのＥＳＳＰＲＩスコアの減少は、臨床的に有意義である。

【図3】図３は、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの改善を示すグラフである。ベースラインからの経時的なＥＳＳＰＲＩスコアの変化をｙ軸に示す。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。少なくとも１ポイントのＥＳＳＰＲＩスコアの減少は、臨床的に有意義である。

【0054】

【図4】図４は、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボ群に関する、ＥＳＳＰＲＩの疲労構成成分のベースラインからの平均変化を示すグラフである（ｐ＝０．１３６）。プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの疲労構成成分の改善を示す。ベースラインからの経時的なＥＳＳＰＲＩスコアの疲労構成成分の変化をｙ軸に示す。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。処置群間の真の平均差がゼロであったという帰無仮説（Ｈ_０）をそれぞれ検査する、来診（ｖｉｓｉｔ）毎の別々の一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを使用して、結果を解析した。未調整アルファ＝０．０５。全標準誤差バーは、９９日目の標準誤差を使用する。

【0055】

【図5A】図５Ａは、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの疲労構成成分の改善を示すグラフである。ＥＳＳＰＲＩスコアの疲労構成成分をｙ軸に示す。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）および９９日目に、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。

【0056】

【図5B】図５Ｂは、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの疼痛構成成分を示すグラフである。ＥＳＳＰＲＩスコアの疼痛構成成分をｙ軸に示す。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）および９９日目に、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。

【0057】

【図5C】図５Ｃは、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＥＳＳＰＲＩスコアの乾燥構成成分を示すグラフである。ＥＳＳＰＲＩスコアの乾燥構成成分をｙ軸に示す。ＥＳＳＰＲＩスコアは、試験１（ベースライン）および９９日目に、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。

【0058】

【図6】図６は、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボ群に関する、ＦＡＣＩＴのベースラインからの平均変化を示すグラフである（ｐ＝０．９２）。プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＦＡＣＩＴ疲労スコアの改善を示す。ＦＡＣＩＴ疲労スコアは、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。ＦＡＣＩＴ疲労スコアの増加は、疲労の改善を指し示す。処置群間の真の平均差がゼロであったという帰無仮説（Ｈ_０）をそれぞれ検査する、来診毎の別々の一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを使用して、結果を解析した。未調整アルファ＝０．０５。全標準誤差バーは、９９日目の標準誤差を使用する。

【0059】

【図7】図７は、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＰｒｏＦの改善を示すグラフである。ベースラインからの経時的なＰｒｏＦスコアの変化をｙ軸に示す。ＰｒｏＦスコアは、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。ＰｒｏＦスコアの低下は、疲労の改善を指し示す。

【0060】

【図8】図８は、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボ群に関する、ＰｒｏＦの精神的疲労構成成分の平均変化を示すグラフである（ｐ＝０．０４６）。プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＰｒｏＦの精神的構成成分の改善を示す。ベースラインからの経時的なＰｒｏＦスコアの精神的構成成分の変化をｙ軸に示す。ＰｒｏＦスコアの精神的構成成分は、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。ＰｒｏＦスコアの低下は、疲労の改善を指し示す。処置群間の真の平均差がゼロであったという帰無仮説（Ｈ_０）をそれぞれ検査する、来診毎の別々の一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを使用して、結果を解析した。未調整アルファ＝０．０５。全標準誤差バーは、９９日目の標準誤差を使用する。

【0061】

【図9】図９は、プラセボで処置した患者と比較した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者におけるＰｒｏＦの身体的構成成分の改善を示すグラフである。ベースラインからの経時的なＰｒｏＦスコアの身体的構成成分の変化をｙ軸に示す。ＰｒｏＦスコアの身体的構成成分は、試験１（ベースライン）、２９、５７、８５および９９日目／処置の終わりに、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者において評価した。ＰｒｏＦスコアの低下は、疲労の改善を指し示す。

【0062】

【図10】図１０Ａおよび図１０Ｂは、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボで処置した患者における数字符号置換検査（Ｄｉｇｉｔ Ｓｙｍｂｏｌ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）（ＤＳＳＴ）の結果を示す。試験のベースライン（１日目）および９９日目に、患者にＤＳＳＴ検査を施行した。図１０Ａに示す通り、「９０秒間の総計」は、９０秒間で数字とマッチした符号の総数を指す。「完了」は、秒単位で表す検査を完了するまでの時間を指す。初期ベースライン検査（１日目）から経過観察（９９日目）にかけて、ＤＳＳＴ検査を完了するまでの時間の統計的に有意な改善が、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者において観察された。図１０Ｂは、プラセボ処置患者に関する完了するまでの時間の増加、およびＲＳＬＶ－１３２処置患者に関する完了までの時間の減少を示すグラフである。

【0063】

【図11】図１１は、臨床応答を達成したまたは達成しなかったＲＳＬＶ－１３２対象に関する、１日目（ベースライン）と比較した９９日目における遺伝子発現の変化を示す図である。ヒートマップに示す遺伝子は、ＦＡＣＩＴ計測手段（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）成績と高い程度の相関があった遺伝子である（Ｒ^２＞０．６）。

【0064】

【図12A】図１２Ａ～図１２Ｃは、その後９９日目にＭＣＩＩを経験するＲＳＬＶ－１３２処置対象の、それを経験しなかった対象と比較したベースライン（試験薬投与前の）遺伝子発現パターンを示す図である。所与の計測手段と最高の相関がある遺伝子を示す。図１２Ａは、ＦＡＣＩＴと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｂは、ＰｒｏＦと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｃは、ＥＳＳＰＲＩと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。

【図12B】図１２Ａ～図１２Ｃは、その後９９日目にＭＣＩＩを経験するＲＳＬＶ－１３２処置対象の、それを経験しなかった対象と比較したベースライン（試験薬投与前の）遺伝子発現パターンを示す図である。所与の計測手段と最高の相関がある遺伝子を示す。図１２Ａは、ＦＡＣＩＴと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｂは、ＰｒｏＦと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｃは、ＥＳＳＰＲＩと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。

【図12C】図１２Ａ～図１２Ｃは、その後９９日目にＭＣＩＩを経験するＲＳＬＶ－１３２処置対象の、それを経験しなかった対象と比較したベースライン（試験薬投与前の）遺伝子発現パターンを示す図である。所与の計測手段と最高の相関がある遺伝子を示す。図１２Ａは、ＦＡＣＩＴと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｂは、ＰｒｏＦと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。図１２Ｃは、ＥＳＳＰＲＩと相関がある遺伝子を示す図である（Ｒ^２＞０．６）。

【発明を実施するための形態】

【0065】

本開示は、循環するＲＮＡ、ならびに自己抗体および免疫複合体と複合体形成したＲＮＡを消化し、これにより、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）の患者を処置する、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質を提供する。本開示は、また、シェーグレン症候群等、循環するＲＮＡおよび／またはＲＮＡ含有自己抗体の上昇したレベルによって特徴付けられる疾患を処置するための方法、ならびにそれを必要とするヒト患者におけるシェーグレン症候群関連の疲労等、循環するＲＮＡおよびＲＮＡ含有自己抗体の上昇したレベルによって特徴付けられる疾患の症状を処置するための方法を提供する。本開示は、また、それを必要とするｐＳＳの患者を含むシェーグレン症候群のヒト患者へのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の投与に有効な処置および投薬レジメンを提供する。

【0066】

本開示は、少なくとも一部には、ＲＳＬＶ－１３２等のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の投与によるｐＳＳ患者の処置が、患者におけるｐＳＳに関連する疲労を低下させるという驚くべき発見に基づく。理論に制約されることなく、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質が、自己免疫疾患の患者における循環するＲＮＡ、ならびに自己抗体および免疫複合体と複合体形成したＲＮＡを消化して、これにより、シェーグレン症候群関連の疲労等、自己免疫疾患の症状を低下させることができると考えられる。

【0067】

理論に制約されることなく、ＲＳＬＶ－１３２等のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の投与によるシェーグレン症候群患者の処置が、循環するＲＮＡを、それが循環中で自己抗体と会合しているのであれ遊離しているのであれ、低下させ、これにより、ＴＬＲの活性化およびいくつかの下流炎症経路の活性化を低下させるとも考えられる。したがって、ＲＳＬＶ－１３２等のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の投与によるｐＳＳ患者を含むシェーグレン症候群患者の処置は、炎症促進性カスケードの活性化を低下、減少または阻害し、これにより、患者におけるシェーグレン症候群の全体的な炎症特徴を低下または減少させ、これにより、疲労、疼痛、乾燥、抑うつ状態および／または認知機能障害を含むシェーグレン症候群に関連する症状を低下または減少させることができる。

【0068】

予想外なことに、ＲＳＬＶ－１３２等のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の投与によるｐＳＳ患者の処置は、処置後の疲労の改善を一貫して示した３種の別々の検査によって、患者における疲労の改善をもたらしたことが発見された。特に、ｐＳＳ患者に、ＲＳＬＶ－１３２による処置後にＥＵＬＡＲシェーグレン症候群患者報告指標（ＥＵＬＡＲ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｐａｔｉｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ｉｎｄｅｘ）（ＥＳＳＰＲＩ）を施行した場合、患者は、ＥＳＳＰＲＩスコアの疲労構成成分において１ポイントまたはそれよりも大きいＥＳＳＰＲＩスコアの臨床的に有意義な減少を経験した。ＥＳＳＰＲＩスコアの減少は、疲労改善に関連する。ＲＳＬＶ－１３２による処置後のこれらの患者に対する慢性疾患検査の機能評価（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｉｌｌｎｅｓｓ Ｔｅｓｔ）（ＦＡＣＩＴ）の施行は、疲労低下に関連するＦＡＣＩＴ疲労スコアの増加をもたらした。同様に、ＲＳＬＶ－１３２による処置後の疲労のプロファイル（Ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ Ｆａｔｉｇｕｅ）（ＰｒｏＦ）検査の施行は、疲労低下に関連するＰｒｏＦスコアの減少をもたらした。

【0069】

さらに、驚くべきことに、ＲＬＳＶ－１３２によるｐＳＳ患者の処置後に、患者が、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）によって測定される、認知能力改善を実証したことが発見された。したがって、本開示は、シェーグレン症候群を処置する方法、シェーグレン症候群関連の疲労を低下させる方法、およびシェーグレン症候群患者の認知能力を改善する方法において有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質を提供する。本開示は、また、シェーグレン症候群を処置する方法、シェーグレン症候群関連の疲労を低下させる方法、およびシェーグレン症候群患者の認知能力を改善する方法において有用である、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と、１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤とを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＳＬＶ－１３２である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約３～６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、ヒト患者に投与される。

【0070】

さらに、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）の患者の処置後に、臨床応答を達成する患者が、炎症関連遺伝子の発現の減少を呈したことが発見された。例えば、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂの発現は、臨床応答を経験した、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置した患者において低下した。ＲＳＬＶ－１３２による処置後に、臨床応答を達成する患者が、炎症関連遺伝子の発現の増加を呈したことも発見された。例えば、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２の発現は、臨床応答を経験した、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置した患者において増加した。

【0071】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）に対して陽性臨床応答をその後に有した自己免疫疾患（例えば、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ））の患者において、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）の投与前に、別個の遺伝子発現プロファイルが存在することがさらに発見された。例えば、ベースライン遺伝子発現が、ＦＡＣＩＴ、ＰｒｏＦまたはＥＳＳＰＲＩのいずれかと相関した場合、ＲＳＬＶ－１３２応答者の間で特異的なプロファイルが明らかになった。ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２の発現の減少は、ＦＡＣＩＴ検査と相関し、ＺＮＦ６０６の発現の増加およびＴＲＩＭ３７の発現の減少は、ＰｒｏＦ検査と相関し、ＡＣＫＲ３の発現の増加およびＭＡＰＫ３Ｋ８の発現の減少は、ＥＳＳＰＲＩ検査と相関した。

【0072】

理論に制約されることなく、一部の患者の循環中には、これらの患者における炎症経路の慢性活性化を促進する特異的なＲＮＡ分子が存在し得るため、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による特異的な循環する非コードＲＮＡの除去と、炎症促進性ＲＮＡの除去は一般に、自己免疫疾患（例えば、ｐＳＳ）の患者の処置に寄与すると考えられる。したがって、「遺伝子発現フィンガープリント」を使用して、ＲＳＬＶ－１３２等のＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置から最も利益を得るであろう患者を同定することが可能となり得る。

【0073】

定義
特許請求の範囲および明細書で使用されている用語は、他に指定がなければ、下に表記されている通りに定義される。

【0074】

「アミノ酸」は、天然に存在するおよび合成のアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸ミメティックを指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸と共に、後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメートおよびＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素に結合された炭素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのようなアナログは、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。アミノ酸ミメティックは、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化学的な化合物を指す。

【0075】

アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される、その一般的に公知の３文字記号または１文字記号のいずれかによって本明細書において参照することができる。ヌクレオチドは、同様に、その一般的に許容される一文字コードによって参照することができる。

【0076】

「アミノ酸置換」は、所定のアミノ酸配列（出発ポリペプチドのアミノ酸配列）における少なくとも１つの現存するアミノ酸残基の、第２の異なる「置き換え」アミノ酸残基による置き換えを指す。「アミノ酸挿入」は、所定のアミノ酸配列への少なくとも１つの追加的なアミノ酸の取り込みを指す。挿入は通常、１または２個のアミノ酸残基の挿入からなるであろうが、より大きい「ペプチド挿入」、例えば、約３～約５個またはさらには最大で約１０、１５もしくは２０個のアミノ酸残基の挿入を行うことができる。挿入される残基（単数または複数）は、上に開示される通り、天然に存在するまたは天然に存在しない残基であり得る。「アミノ酸欠失」は、所定のアミノ酸配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基の除去を指す。

【0077】

「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すように本明細書で互換的に使用されている。これらの用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的ミメティックであるアミノ酸ポリマーと共に、天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。

【0078】

「核酸」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、および一本または二本鎖のいずれかの形態でのこれらのポリマーを指す。特に制約がなければ、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの公知アナログを含有する核酸を包含する。他に断りがなければ、特定の核酸配列は、明確に示される配列のみならず、その保存的に修飾されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）および相補配列も暗に包含する。特に、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が、混合塩基および／またはデオキシイノシン残基に置換された配列を生成することにより達成することができる（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９９１；１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．， ＪＢＣ １９８５；２６０：２６０５－８）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ １９９４；８：９１－８）。アルギニンおよびロイシンに関して、第２の塩基における修飾が保存的となることもできる。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、および遺伝子によってコードされるｍＲＮＡと互換的に使用される。

【0079】

本発明のポリヌクレオチドは、未修飾ＲＮＡもしくはＤＮＡまたは修飾ＲＮＡもしくはＤＮＡとなり得る、いずれかのポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド（ｐｏｌｙｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）で構成され得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本および二本鎖ＤＮＡ、一本および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖、またはより典型的には二本鎖、または一本および二本鎖領域の混合物となり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子で構成され得る。加えて、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ、またはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域で構成され得る。ポリヌクレオチドは、安定性または他の理由のために修飾された、１つまたは複数の修飾された塩基またはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含有することもできる。「修飾された」塩基は、例えば、イノシン等、トリチル化塩基および珍しい塩基を含む。ＤＮＡおよびＲＮＡに種々の修飾をなすことができる；よって、「ポリヌクレオチド」は、化学的に、酵素的にまたは代謝的に修飾された形態を包括する。

【0080】

本明細書で使用される場合、用語「作動可能に連結される」または「作動可能に連結される」は、記載されている構成成分が、その意図される様式で機能することを可能にする関係性にある並置を指す。

【0081】

本明細書で使用される場合、用語「グリコシル化」または「グリコシル化された」は、分子への糖部分の付加の過程または結果を指す。

【0082】

本明細書で使用される場合、用語「変更されたグリコシル化」は、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）、脱グリコシル化（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）または不十分グリコシル化（ｕｎｄｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）された分子を指す。

【0083】

本明細書で使用される場合、「グリコシル化部位（単数または複数）」は、炭水化物部分を潜在的に受容し得る部位と、炭水化物部分が実際に付着したタンパク質内の部位の両方を指し、オリゴ糖および／または炭水化物のアクセプターとして作用し得るいずれかのアミノ酸配列を含む。

【0084】

本明細書で使用される場合、用語「非グリコシル化」または「非グリコシル化された」は、グリコシル化されていない（ｕｎｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）形態での分子の産生を指す（例えば、グリコシル化のアクセプターとして機能するアミノ酸残基を欠くようにタンパク質またはポリペプチドを操作することにより）。あるいは、タンパク質またはポリペプチドは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させて、非グリコシル化されたタンパク質またはポリペプチドを産生することができる。

【0085】

本明細書で使用される場合、用語「脱グリコシル化」または「脱グリコシル化された」は、分子における糖部分の酵素による除去の過程または結果を指す。

【0086】

本明細書で使用される場合、用語「不十分グリコシル化」または「不十分グリコシル化された」は、哺乳動物細胞において産生された場合に正常に存在する筈の１つまたは複数の炭水化物構造が、省略、除去、修飾または遮蔽された分子を指す。

【0087】

本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」および「Ｆｃドメイン」は、抗原に結合する可変領域なしで、その２本の重鎖のそれぞれのＦｃドメイン（またはＦｃ部分）によって形成された天然の免疫グロブリンの部分である。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域において始まり、抗体のＣ末端で終わる。したがって、完全Ｆｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、次のうち少なくとも１つを含む：ヒンジ（例えば、上部、中央および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはこれらのバリアント、部分もしくは断片。他の実施形態では、Ｆｃドメインは、完全Ｆｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含む。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたヒンジドメイン（またはその部分）を含む。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその部分）に融合されたＣＨ２ドメイン（またはその部分）を含む。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその部分からなる。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその部分）およびＣＨ３ドメイン（またはその部分）からなる。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメイン（またはその部分）およびＣＨ３ドメインからなる。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその部分）およびＣＨ２ドメイン（またはその部分）からなる。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメインの少なくとも部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全体または一部）を欠く。一実施形態では、本発明のＦｃドメインは、ＦｃＲｎ結合に要求されることが当技術分野で公知のＦｃ分子の少なくとも部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃドメインは、プロテインＡ結合に要求されることが当技術分野で公知のＦｃ分子の少なくとも部分を含む。一実施形態では、本発明のＦｃドメインは、プロテインＧ結合に要求されることが当技術分野で公知のＦｃ分子の少なくとも部分を含む。本明細書におけるＦｃドメインは、一般に、免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインの全体または一部を含むポリペプチドを指す。そのようなものとして、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン全体を含むポリペプチドと共に、例えば、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインのみを含むそのようなペプチドの断片が挙げられるがこれらに限定されない。Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体が挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの種および／またはいずれかのサブタイプの免疫グロブリンに由来することができる。Ｆｃドメインは、天然のＦｃおよびＦｃバリアント分子を包含する。Ｆｃバリアントおよび天然のＦｃと同様に、Ｆｃドメインという用語は、抗体全体から消化されたか、他の手段によって産生されたかにかかわらず、単量体または多量体形態の分子を含む。

【0088】

本明細書に表記される通り、当業者であれば、天然に存在する免疫グロブリン分子の天然のＦｃドメインからアミノ酸配列が変動するように、いずれかのＦｃドメインを改変することができることが理解されるであろう。

【0089】

本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＦｃドメインは、異なる免疫グロブリン分子に由来することができる。例えば、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＦｃドメインは、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン、ならびにＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子に部分的に由来し、ＩｇＧ３分子に部分的に由来するキメラヒンジ領域を含むことができる。別の例では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子に部分的に由来し、ＩｇＧ４分子に部分的に由来するキメラヒンジを含むことができる。野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する。

【0090】

本明細書で使用される場合、用語「血清半減期」は、ｉｎ ｖｉｖｏ血清ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質濃度が、５０％減退するのに要求される時間を指す。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期が短いほど、これが治療効果を発揮するのにかかる時間が短くなる。

【0091】

本明細書で使用される場合、用語「ＲＮＡヌクレアーゼ剤」は、ＲＮａｓｅドメインを含む薬剤を指す。一部の実施形態では、ＲＮＡヌクレアーゼ剤は、ＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＲＮＡヌクレアーゼ剤は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＲＮＡヌクレアーゼ剤のＲＮａｓｅドメインは、ヒト膵臓ＲＮａｓｅ １である。一部の実施形態では、ＲＮＡヌクレアーゼ剤は、ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＲＮＡヌクレアーゼ剤は、ＲＳＬＶ－１３２である。

【0092】

本明細書で使用される場合、用語「ＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質」は、リンカーありまたはなしで、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片等のＰＫ部分（薬物動態部分）に作動可能に連結されている少なくとも１個のヌクレアーゼドメインを含むポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードする核酸を指す。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、「ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質」であり、これは、リンカーありまたはなしで、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に作動可能に連結されている少なくとも１個のヌクレアーゼドメインを含むポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードする核酸を指す。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーありまたはなしで、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に作動可能に連結されている少なくとも２個のヌクレアーゼドメインを含むポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードする核酸である。一部の実施形態では、ヌクレアーゼドメインは、ヒトＲＮａｓｅ １である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたは複数のＲＮａｓｅドメイン、および１つまたは複数のＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたは複数のＲＮａｓｅ－ドメイン、１つまたは複数のＦｃドメイン、および１つまたは複数のＤＮａｓｅドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されるＲＮａｓｅ １ドメイン、およびＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されるＤＮａｓｅドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、タンデムＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であり、例えば、１つもしくは複数のＲＮａｓｅ １ドメインおよび／または１つもしくは複数のＤＮａｓｅドメインが１つまたは複数のＦｃドメインのＮまたはＣ末端のいずれかにタンデムに連結されている。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（２個の同じポリペプチド）である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（２個の異なるポリペプチド）である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のドメインは、リンカードメインありで作動可能に連結される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のドメインは、リンカードメインなしで作動可能に連結される。

【0093】

本明細書で使用される場合、用語「タンデムＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質」は、（Ｎ末端からＣ末端へと）タンデムに連結されている少なくとも２個のヌクレアーゼドメイン、およびＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含むポリペプチド、ならびにそのようなポリペプチドをコードする核酸を指す。一部の実施形態では、タンデムＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも１個のＦｃドメインにタンデムに作動可能に連結されている少なくとも２個のＲＮａｓｅ １ドメインを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、タンデムＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも１個のＦｃドメインにタンデムに作動可能に連結されている、少なくとも１個のＤＮａｓｅ１ドメインおよび少なくとも１個のＲＮａｓｅ１ドメインを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、タンデムＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＤＮａｓｅ１ドメイン、第１のリンカー、ＲＮａｓｅ１ドメイン、第２のリンカー、およびＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含む。

【0094】

本明細書で使用される場合、用語「ヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質」は、少なくとも２個のヌクレアーゼドメイン、および２個のＦｃドメイン、そのバリアントまたは断片を一緒になって含む、第１および第２のポリペプチドを含むヘテロ二量体、ならびにそのようなポリペプチドをコードする核酸を指す。一部の実施形態では、ヘテロ二量体は、第１のＲＮａｓｅ １および第２のＲＮａｓｅ １ドメインが、ヘテロ二量体の同じ末端（ＮまたはＣ末端）に位置付けられるように、リンカーありまたはなしで第１のＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されている第１のＲＮａｓｅ １ドメイン、およびリンカーありまたはなしで第２のＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されている第２のＲＮａｓｅ １ドメインを含む。一部の実施形態では、ヘテロ二量体は、リンカーありまたはなしで第１のＦｃドメインのＮ末端に作動可能に連結されている第１のＲＮａｓｅ １ドメイン、およびリンカーありまたはなしで第２のＦｃドメインのＣ末端に作動可能に連結されている第２のＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、第１のＲＮａｓｅ １ドメインは、リンカーありまたはなしで第１のＦｃドメインのＣ末端に作動可能に連結され、第２のＲＮａｓｅ １ドメインは、リンカーありまたはなしで第２のＦｃドメインのＮ末端に作動可能に連結される。一部の実施形態では、ヘテロ二量体の第１および第２のＲＮａｓｅ １ドメインは異なる。一部の実施形態では、ヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも１個のＦｃドメインに作動可能に連結されている、少なくとも１個のＤＮａｓｅ１ドメインおよび少なくとも１個のＲＮａｓｅ１ドメインを含むヘテロ二量体であり、ここで、ＤＮａｓｅ １ドメインは、リンカーありまたはなしで第１のＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結され、ＲＮａｓｅ １ドメインは、リンカーありまたはなしで、同じ（第１のＦｃドメイン）または異なるＦｃドメイン（第２のＦｃドメイン）のＮまたはＣ末端に作動可能に連結され、そうすることでＤＮａｓｅ １ドメインおよびＲＮａｓｅ １ドメインは、同じ（第１のＦｃドメイン）または異なるＦｃドメイン（第２のＦｃドメイン）のいずれかの反対の末端（ＮまたはＣ末端）に位置付けられる。一部の実施形態では、ヘテロ二量体は、ＤＮａｓｅを含む。

【0095】

本明細書で使用される場合、用語「ホモ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質」は、少なくとも２個の同じヌクレアーゼドメイン、および２個のＦｃドメイン、そのバリアントまたは断片を一緒になって含む、第１および第２のポリペプチドを含むホモ二量体、ならびにそのようなポリペプチドをコードする核酸を指す。一部の実施形態では、ホモ二量体は、リンカーありまたはなしで第１のＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されている第１のＲＮａｓｅ １ドメイン、およびリンカーありまたはなしで第２のＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されている第２のＲＮａｓｅ １ドメインを含み、そうすることで第１のＲＮａｓｅ １および第２のＲＮａｓｅ １ドメインは、ホモ二量体の同じ末端（ＮまたはＣ末端）に位置付けられる。一部の実施形態では、ホモ二量体の第１および第２のＲＮａｓｅ １ドメインは同一である。一部の実施形態では、ホモ二量体は、リンカーありまたはなしでＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されているＲＮａｓｅ １ドメイン、およびリンカーありまたはなしでＦｃドメインのＮまたはＣ末端に作動可能に連結されているＤＮａｓｅドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ １およびＤＮａｓｅドメインは、Ｆｃドメインの同じ末端（ＮまたはＣ末端）に位置付けられる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ １およびＤＮａｓｅドメインは、Ｆｃドメインの反対の末端に位置付けられる。

【0096】

本明細書で使用される場合、用語「二量体」は、２個の巨大分子（例えば、ポリペプチド）によって形成された巨大分子複合体を指す。「ホモ二量体」は、２個の同一巨大分子（例えば、ポリペプチド）によって形成された二量体を指す。「ヘテロ二量体」は、２個の異なる巨大分子（例えば、ポリペプチド）によって形成された二量体を指す。

【0097】

本明細書で使用される場合、用語「バリアント」は、野生型ヌクレアーゼ（例えば、ＲＮａｓｅ）またはＦｃドメインに由来し、１つまたは複数の位置における１つまたは複数の変更（単数または複数）、すなわち、置換、挿入および／または欠失が野生型とは異なるポリペプチドを指す。置換は、ある位置を占有するアミノ酸の、異なるアミノ酸による置き換えを意味する。欠失は、ある位置を占有するアミノ酸の除去を意味する。挿入は、ある位置を占有するアミノ酸に直接隣接する１～３個等、１つまたは複数のアミノ酸付加を意味する。バリアントポリペプチドは、必然的に、野生型ポリペプチドと１００％未満の配列同一性または類似性を有する。一部の実施形態では、バリアントポリペプチドは、例えば、バリアントポリペプチドの長さにわたり、野生型ポリペプチドのアミノ酸配列と約７５％～１００％未満のアミノ酸配列同一性もしくは類似性、または約８０％～１００％未満もしくは約８５％～１００％未満もしくは約９０％～１００％未満（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）もしくは約９５％～１００％未満のアミノ酸配列同一性もしくは類似性を有するアミノ酸配列を有するであろう。

【0098】

ある特定の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ポリペプチドリンカー等、１つまたは複数の「リンカードメイン」を用いる。本明細書で使用される場合、用語「リンカードメイン」は、線状ポリペプチド配列において２つまたはそれよりも多いペプチドドメインを接続する１つまたは複数のアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチドリンカー」は、タンパク質の線状アミノ酸配列において２つまたはそれよりも多いポリペプチドドメインを接続するペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）を指す。例えば、ポリペプチドリンカーを使用して、ヌクレアーゼドメイン（例えば、ＲＮａｓｅ）をＦｃドメインに作動可能に連結することができる。そのようなポリペプチドリンカーは、一部の実施形態では、ポリペプチド分子に柔軟性をもたらす。一部の実施形態では、ポリペプチドリンカーを使用して、ＲＮａｓｅドメインをＦｃドメインに接続（例えば、遺伝学的に融合）する。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、１より多いリンカードメインまたはペプチドリンカーを含むことができる。様々なペプチドリンカーは、当技術分野で公知である。

【0099】

本明細書で使用される場合、用語「ｇｌｙ－ｓｅｒポリペプチドリンカー」は、グリシンおよびセリン残基からなるペプチドを指す。例示的なｇｌｙ／ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）ｎを含む。一部の実施形態では、ｎは、２もしくはそれよりも多い、３もしくはそれよりも多い、４もしくはそれよりも多い、５もしくはそれよりも多い、６もしくはそれよりも多い、７もしくはそれよりも多い、８もしくはそれよりも多い、９もしくはそれよりも多いまたは１０もしくはそれよりも多い（例えば、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）１０）等、１または複数である。別の例示的なｇｌｙ／ｓｅｒポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列Ｓｅｒ（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）ｎを含む。一部の実施形態では、ｎは、２もしくはそれよりも多い、３もしくはそれよりも多い、４もしくはそれよりも多い、５もしくはそれよりも多い、６もしくはそれよりも多い、７もしくはそれよりも多い、８もしくはそれよりも多い、９もしくはそれよりも多いまたは１０もしくはそれよりも多い（例えば、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）１０）等、１または複数である。

【0100】

本明細書で使用される場合、用語「連結される（ｃｏｕｐｌｅｄ）」、「コンジュゲートされた」、「連結される（ｌｉｎｋｅｄ）」、「融合された」または「融合」は、互換的に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むいずれの手段によるものであれ、２つまたはそれよりも多い（ｔｗｏ ｍｏｒｅ）エレメントまたは構成成分またはドメインを一体に連接することを指す。化学的コンジュゲーションの方法（例えば、ヘテロ二官能性架橋剤を使用した）は、当技術分野で公知である。

【0101】

指名されたポリペプチドまたはタンパク質「に由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。好ましくは、特定の配列に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、当該配列またはその部分と本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、この部分は、少なくとも１０～２０アミノ酸、好ましくは少なくとも２０～３０アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０～５０アミノ酸からなる、またはこれは、当業者であれば、当該配列にその起源を有すると他の仕方で同定可能である。別のポリペプチドに由来するポリペプチドは、出発ポリペプチドと比べて１つまたは複数の変異、例えば、別のアミノ酸残基に置換された、または１つもしくは複数のアミノ酸残基挿入もしくは欠失を有する、１つまたは複数のアミノ酸残基を有することができる。

【0102】

一実施形態では、出発ポリペプチド配列およびそれに由来する配列の間には、１個のアミノ酸の差が存在する。この配列に関する同一性または類似性は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して、最大パーセント配列同一性を達成した後に、出発アミノ酸残基と同一（すなわち、同じ残基）である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書で定義される。

【0103】

一実施形態では、本開示のポリペプチドは、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されているアミノ酸配列、およびその機能的に活性なバリアントからなる、これから本質的になるまたはこれを含む。ある実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されているアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されている近接アミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である近接アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されているアミノ酸配列の少なくとも１０、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００（またはこれらの数以内のいずれかの整数）個の近接アミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。

【0104】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヌクレオチド配列によってコードされる。本開示のヌクレオチド配列は、クローニング、遺伝子療法、タンパク質発現および精製、変異導入、それを必要とする宿主のＤＮＡワクチン接種、例えば、受動免疫化のための抗体生成、ＰＣＲ、プライマーおよびプローブ生成、ｓｉＲＮＡ設計および生成（例えば、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ ｓｉＤｅｓｉｇｎウェブサイトを参照）その他を含む多数の適用に有用となり得る。一部の実施形態では、本開示のヌクレオチド配列は、配列表または配列リストから選択されるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、これからなるまたはこれから本質的になる。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されているアミノ酸配列をコードする近接ヌクレオチド配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である近接ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示されている配列リストまたは配列表に表記されているアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも１０、例えば、少なくとも１５、例えば、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００（またはこれらの数以内のいずれかの整数）個の近接ヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含む。

【0105】

当業者であれば、天然の配列の望ましい活性を保持しつつ、その構成成分（例えば、ヌクレアーゼドメイン、リンカードメインおよびＦｃドメイン）が由来する天然に存在するまたは天然の配列から配列が変動するように、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を変更することができることも理解するであろう。例えば、「非必須」アミノ酸残基に保存的置換または変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸置換をなすことができる。非天然バリアントをコードする単離された核酸分子は、コードされるタンパク質に１つまたは複数のアミノ酸置換、付加または欠失が導入されるように、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のヌクレオチド配列に１つまたは複数のヌクレオチド置換、付加または欠失を導入することにより作製することができる。変異は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発等、標準技法によって導入することができる。

【0106】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸残基、例えば、必須または非必須アミノ酸残基に保存的アミノ酸置換を含むことができる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられた置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分枝状側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。よって、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質における非必須アミノ酸残基が、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基に好ましくは置き換えられる。別の実施形態では、アミノ酸の連なりを、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に同様の連なりに置き換えることができる。あるいは、別の実施形態では、変異を、飽和変異誘発等によりコード配列の全体または一部に沿ってランダムに導入し、結果としての変異体を、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質に取り込み、所望の標的に結合するその能力に関してスクリーニングすることができる。

【0107】

本明細書で使用される場合、用語「自然免疫系の制御因子」は、サイトカインおよびケモカイン発現および分泌；樹状細胞活性化；ならびに補体カスケードを含む、自然免疫応答の発現または制御に関連する任意の遺伝子、タンパク質、核酸またはマイクロＲＮＡを指す。一部の実施形態では、自然免疫系の制御因子は、炎症関連分子を含む。一部の実施形態では、自然免疫系の制御因子は、炎症関連遺伝子を含む。一部の実施形態では、自然免疫系の制御因子は、炎症関連タンパク質を含む。

【0108】

一部の実施形態では、自然免疫系の制御因子は、シグナル伝達、インターフェロンファミリーメンバー、補体、抗原プロセシング、シグナル伝達、ユビキチン化、走化性、細胞接着およびポリメラーゼ活性の制御に関連する遺伝子またはタンパク質を含む。

【0109】

用語「自然免疫系」は、抗原に対する非特異的な防御機構を指す。自然免疫応答は、特定の抗原に対する特異性によって駆動されないが、抗原の存在によって駆動される。自然免疫系の機能は、感染病原体に対する物理的および化学的障壁として作用すること、白血球細胞による異物の識別および除去、樹状細胞活性化、サイトカインおよびケモカイン分泌、ならびに補体カスケードの活性化、ならびに適応免疫系の活性化を含む。

【0110】

本明細書で使用される場合、用語「炎症関連分子」は、炎症または炎症応答において機能する分子を指す。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症促進性分子である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、抗炎症性分子である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連遺伝子である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連タンパク質である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連サイトカインである。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症メディエーターである。

【0111】

本明細書で使用される場合、用語「炎症関連遺伝子」は、炎症または炎症応答において機能する遺伝子を指す。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、炎症促進性遺伝子である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、抗炎症性遺伝子である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、炎症関連タンパク質をコードする。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、サイトカインをコードする。

【0112】

本明細書で使用される場合、用語「炎症関連タンパク質」は、炎症または炎症応答において機能するタンパク質を指す。一部の実施形態では、炎症関連タンパク質は、炎症促進性タンパク質である。一部の実施形態では、炎症関連タンパク質は、抗炎症性タンパク質である。一部の実施形態では、炎症関連タンパク質は、サイトカインである。

【0113】

本明細書で使用される場合、用語「炎症促進性分子」は、炎症応答を増強または刺激する分子を指す。一部の実施形態では、炎症促進性分子は、「炎症促進性遺伝子」である。一部の実施形態では、炎症促進性分子は、「炎症促進性タンパク質」である。一部の実施形態では、炎症促進性遺伝子は、炎症促進性タンパク質をコードする。一部の実施形態では、炎症促進性分子は、「炎症性サイトカイン」である。

【0114】

一部の実施形態では、用語「炎症応答を刺激すること」は、炎症性サイトカインの産生を刺激することを指す。

【0115】

本明細書で使用される場合、用語「炎症性サイトカイン」は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞およびマクロファージ）から分泌され、炎症応答における役割を果たす、シグナル伝達分子（サイトカイン）を指す。

【0116】

本明細書で使用される場合、用語「遺伝子発現プロファイル」は、試料において発現されている遺伝子を同定する、および／または指定の時間におけるその発現の程度を決定する技法を指す。用語「炎症関連遺伝子発現プロファイル」は、発現されている炎症関連遺伝子を同定する、および／または指定の時間におけるその発現の程度を決定する遺伝子発現プロファイルを指す。

【0117】

用語「寛解すること」は、その予防法、重症度もしくは進行の低減、軽快または治癒を含む、疾患状態、例えば、自己免疫性疾患状態（例えば、ＳＬＥ、シェーグレン症候群）の処置におけるいずれかの治療上有益な結果を指す。

【0118】

本明細書で使用される場合、用語「原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）」、「シェーグレン症候群」、「シェーグレン病」および「シェーグレン」は、互換的に使用することができる。

【0119】

用語「ｉｎ ｓｉｔｕ」は、生体から分離して成長する、例えば、組織培養において成長する生細胞において起こる過程を指す。

【0120】

用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」は、生体において起こる過程を指す。

【0121】

用語「哺乳動物」または「対象」または「患者」は、本明細書で使用される場合、ヒトおよび非ヒトの両方を含み、そのようなものとして、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマおよびブタが挙げられるがこれらに限定されない。

【0122】

２種またはそれよりも多い核酸またはポリペプチド配列の文脈におけるパーセント「同一性」という用語は、後述する配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＮまたは当業者に利用できる他のアルゴリズム）の１種を使用してまたは目視点検によって測定した場合、比較および整列すると、最大一致に関して、同じである指定のパーセンテージのヌクレオチドまたはアミノ酸残基を有する２種またはそれよりも多い配列または部分配列を指す。適用に応じて、パーセント「同一性」は、比較されている配列の領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在することができる、あるいは、比較しようとする２種の配列の全長にわたって存在することができる。

【0123】

配列比較のため、典型的には、１種の配列が、被験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、被験および参照配列が、コンピュータに入力され、必要であれば部分配列座標が指名され、配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指名される。次いで、配列比較アルゴリズムが、指名されたプログラムパラメーターに基づき、参照配列と比べて被験配列（単数または複数）のパーセント配列同一性を計算する。

【0124】

例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍａｔｈ １９８１；２：４８２の局所的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ， Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９７０；４８：４４３の相同性整列アルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ， ＰＮＡＳ １９８８；８５：２４４４の類似性方法の検索により、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理されたインプリメンテーションにより（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ内、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、または目視点検により（全般的に、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ、下記を参照）、比較のための配列の最適整列を行うことができる。

【0125】

パーセント配列同一性および配列類似性の決定に適したアルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９０；２１５：４０３－１０に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎウェブサイトを介して公開されている。

【0126】

用語「十分な量」は、所望の効果の産生に十分な量を意味する。

【0127】

用語「治療有効量」は、疾患の症状の寛解に有効な量である。予防法は治療法と考慮することができるため、治療有効量は、「予防有効量」であり得る。

【0128】

用語「約」は、当業者であれば、これが使用される文脈に応じてある程度まで変動することを理解するであろう。これが使用される文脈を考慮しても当業者に明らかでない、この用語の使用がなされる場合、「約」は、特定の値のプラス・マイナス１０％までを意味するであろう。

【0129】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」が、文脈がそれ以外を明らかに指示しない限り、複数形の指示対象を含むことに留意する必要がある。

【0130】

ＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質
ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、足場を提供する、および／またはそのようなＰＫ部分がないヌクレアーゼドメインと比較してＲＮａｓｅドメインのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長するＰＫ部分に作動可能に連結されている、ヒトＲＮａｓｅ １またはその断片もしくはバリアント等の少なくとも１個の酵素活性があるＲＮａｓｅドメインまたはその断片もしくはバリアントを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に融合されていないヌクレアーゼ分子と比較して、それが融合されたヌクレアーゼ分子の血清半減期を変更する、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片等のＦｃドメインに作動可能に連結されているヒトＲＮａｓｅ １またはその断片もしくはバリアント等の少なくとも１個の酵素活性があるＲＮａｓｅドメインまたはその断片もしくはバリアントを含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質である。

【0131】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含め、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、リンカードメインを介して、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に作動可能に連結される。一部の実施形態では、リンカードメインは、リンカーペプチドである。一部の実施形態では、リンカードメインは、リンカーヌクレオチドである。

【0132】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含め、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、リーダー配列、例えば、リーダーペプチドを含む。一部の実施形態では、リーダー分子は、ヌクレアーゼドメインのＮ末端に位置するリーダーペプチドである。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、分子のＮ末端にリーダーペプチドを含み、リーダーペプチドは、インターフェロン受容体Ｆｃ構築物から後に切断される。組換えタンパク質に融合されるリーダーペプチドをコードする核酸配列を生成するための方法は、当技術分野で周知である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、そのＮ末端に融合されたリーダーありまたはなしのいずれかで、発現することができる。融合されたリーダーペプチドの切断後の本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のタンパク質配列は、当業者であれば予測および／または推論することができる。

【0133】

一部の実施形態では、リーダーは、ＶＫ３リーダーペプチド（ＶＫ３ＬＰ）であり、リーダーペプチドは、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＮ末端に融合される。そのようなリーダー配列は、哺乳動物細胞におけるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の合成および分泌のレベルを改善することができる。一部の実施形態では、リーダーは切断され、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を生じる。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、そのＮ末端に融合されたリーダーペプチドなしで発現され、その結果生じるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｎ末端メチオニンを有する。

【0134】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＮ末端に融合されたＶＫ３リーダーペプチド、例えば、配列番号４９（ＲＳＬＶ－１３２）を含む。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、リーダー配列を含まない、例えば、配列番号５０（ＲＳＬＶ－１３２）である。

【0135】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮまたはＣ末端に作動可能に連結されたＲＮａｓｅドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅドメインおよびＤＮａｓｅドメインの両方を含む。
一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、互いにタンデムに作動可能に連結され、同じまたは異なるＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮまたはＣ末端にさらに作動可能に連結された、２個のヌクレアーゼドメイン（例えば、２個のＲＮａｓｅドメイン）を含む。

【0136】

配列表は、様々な構成の例示的なＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。

【0137】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、細胞外免疫複合体に特異的に結合する同じまたは異なるＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に融合された、マルチヌクレアーゼタンパク質（例えば、２種のＲＮＡヌクレアーゼ、またはＲＮａｓｅとＤＮａｓｅ）である。

【0138】

一実施形態では、ヌクレアーゼドメインは、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮ末端に作動可能に連結される（例えば、化学的にコンジュゲートまたは遺伝学的に融合される（例えば、直接的に、またはポリペプチドリンカーを介してのいずれかで））。別の実施形態では、ヌクレアーゼドメインは、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＣ末端に作動可能に連結される（例えば、化学的にコンジュゲートまたは遺伝学的に融合される（例えば、直接的に、またはポリペプチドリンカーを介してのいずれかで））。他の実施形態では、ヌクレアーゼドメインは、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のアミノ酸側鎖を介して、作動可能に連結される（例えば、化学的にコンジュゲートまたは遺伝学的に融合される（例えば、直接的に、またはポリペプチドリンカーを介してのいずれかで））。

【0139】

特定の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、２つまたはそれを超えるヌクレアーゼドメインと、少なくとも１つのＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片とを含む。例えば、ヌクレアーゼドメインは、ヌクレアーゼドメインとＦｃドメイン、そのバリアントまたは断片との間の必要に応じたリンカーとともに、同じまたは異なるＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮ末端およびＣ末端の両方に作動可能に連結され得る。いくつかの態様では、ヌクレアーゼドメインは同一のものである（例えば、ＲＮａｓｅおよびＲＮａｓｅ）。他の実施形態では、ヌクレアーゼドメインは異なるものである（例えば、２つの異なるＲＮＡヌクレアーゼまたはＲＮａｓｅおよびＤＮａｓｅ）。

【0140】

いくつかの実施形態では、２つまたはそれを超えるヌクレアーゼドメインは、シリーズで（例えば、ポリペプチドリンカーを介して）互いに作動可能に連結され、タンデムに整列したヌクレアーゼドメインは、同じまたは異なるＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮ末端またはＣ末端のいずれかに作動可能に連結される（例えば、（例えば、直接的にまたはポリペプチドリンカーを介して）化学的にコンジュゲートされているか、または遺伝子的に融合されている）。他の実施形態では、タンデムに整列したヌクレアーゼドメインは、同じＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片のＮ末端およびＣ末端の両方に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼドメインは、リンカーありまたはなしで同じまたは異なるＦｃドメインのＮ末端またはＣ末端にタンデムに（例えば、Ｎ－ＲＮａｓｅ－ＲＮａｓｅ－Ｃ、Ｎ－ＲＮａｓｅ－ＤＮａｓｅ－ＣまたはＮ－ＤＮａｓｅ－ＲＮａｓｅ－Ｃ）作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成する。

【0141】

他の実施形態では、１つまたはそれを超えるヌクレアーゼドメインは、２つのＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片の間に挿入さる。例えば、１つまたはそれを超えるヌクレアーゼドメインは、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のポリペプチドリンカーの全部または一部を形成し得る。

【0142】

いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも２つのヌクレアーゼドメイン（例えば、ＲＮａｓｅおよびＲＮａｓｅまたはＲＮａｓｅおよびＤＮａｓｅ）、少なくとも１つのリンカードメイン、および少なくとも１つのＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、本明細書に記載されるＦｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含み、それにより、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期およびバイオアベイラビリティを増加させる。いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたはそれを超えるポリペプチド、例えば配列番号４４～５８のいずれかに示されているアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。

【0144】

当業者であれば、ヌクレアーゼドメイン間および／またはヌクレアーゼドメインおよびＦｃドメインの間の必要に応じたリンカーの包接により、ヌクレアーゼドメインおよびＦｃドメインの他の構成が可能であることを理解するであろう。ヌクレアーゼドメインが、検査した特定の構成において活性である限り、ドメイン配向性を変更することができることも理解されるであろう。

【0145】

ある特定の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、生物学的効果を媒介する標的分子に特異的な少なくとも１つのヌクレアーゼドメインを有する。別の実施形態では、標的分子（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）への本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の結合は、例えば、細胞、組織または循環からの、標的分子の低下または排出をもたらす。

【0146】

他の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、一体に、または他のポリペプチドとアセンブルして、２つまたはそれよりも多いポリペプチドを有する結合タンパク質（「多量体」）を形成することができ、多量体の少なくとも１つのポリペプチドは、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質である。例示的な多量体形態は、二量体、三量体、四量体および六量体の変更された結合タンパク質その他を含む。一実施形態では、多量体のポリペプチドは、同じである（すなわち、変更されたホモマー結合タンパク質、例えば、ホモ二量体、ホモ四量体）。別の実施形態では、多量体のポリペプチドは、異なる（例えば、ヘテロマー）。一実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、一体にアセンブルされて、二量体を形成する。一実施形態では、二量体は、ホモ二量体である。一実施形態では、二量体は、ヘテロ二量体である。

【0147】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に融合されていない対応するヌクレアーゼ分子と比べて、少なくとも約１．５倍、例えば、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１０００倍または１０００倍もしくはそれを超えて増加した血清半減期を有する。他の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片に融合されていない対応するヌクレアーゼ分子と比べて、多くても約３分の２、例えば、多くても３分の１、多くても５分の１、多くても１０分の１、多くても約２０分の１、多くても約５０分の１、多くても約１００分の１、多くても約２００分の１、多くても約３００分の１、多くても約４００分の１、多くても約５００分の１または５００分の１もしくはそれよりも低くに減少した血清半減期を有する。常套的な当技術分野で認識される方法を使用して、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を決定することができる。

【0148】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＲＮａｓｅの活性は、対照のＲＮａｓｅ分子の活性の約１０分の１以上の低さ、例えば、９分の１の低さ、８分の１の低さ、７分の１の低さ、６分の１の低さ、５分の１の低さ、４分の１の低さ、３分の１の低さ、または２分の１の低さである。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＲＮａｓｅの活性は、対照のＲＮａｓｅ分子の活性にほぼ等しい。

【0149】

いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、例えば可溶性形態のまたは不溶性複合体として沈着したＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含有する細胞外免疫複合体に対して活性であり得る。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性は、インビトロおよび／またはインビボで検出可能である。

【0151】

別の態様では、酵素、またはＲＮＡまたはＤＮＡにターゲティングされるｓｃＦｖなどの結合特異性を有する別の抗体、または第１のドメインと同じまたは異なる特異性を有する第２のヌクレアーゼドメインに結合された多機能ＲＮａｓｅ分子が提供される。

【0152】

一部の実施形態では、リンカードメインは、５アミノ酸進行によってリンカーの長さを変更する、（ｇｌｙ４ｓｅｒ）３、４または５バリアントを含む。別の実施形態では、リンカードメインは、およそ１８アミノ酸の長さであり、ｉｎ ｖｉｖｏでプロテアーゼ切断に対して感受性となり得るＮ結合型グリコシル化部位を含む。一部の実施形態では、Ｎ結合型グリコシル化部位は、リンカードメインにおける切断からＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を保護することができる。一部の実施形態では、Ｎ結合型グリコシル化部位は、リンカードメインによって分離される独立した機能的ドメインのフォールディングの分離を支援することができる。

【0153】

一部の実施形態では、リンカードメインは、ＮＬＧリンカー（ＶＤＧＡＳＳＰＶＮＶＳＳＰＳＶＱＤＩ）（配列番号３７）である。

【0154】

いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＤＮａｓｅの実質的に全部または少なくとも酵素的に活性な断片を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、Ｉ型分泌ＤＮａｓｅ、好ましくはヒトＤＮａｓｅ、例えば成熟ヒト膵臓ＤＮａｓｅ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢエントリーＰ２４８５５、配列番号６）である。いくつかの実施形態では、減少したアクチン感受性を示す天然に存在するバリアント対立遺伝子Ａ１１４Ｆ（配列番号８）が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＤＮａｓｅ１に含まれる（Ｐａｎら、ＪＢＣ １９９８；２７３：１８３７４－８１；Ｚｈｅｎら、ＢＢＲＣ １９９７；２３１：４９９－５０４；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９７；４２：５０７－１３を参照のこと）。他の実施形態では、野生型ＤＮａｓｅ１と比べて高いＤＮａｓｅ活性を示す天然に存在するバリアント対立遺伝子Ｇ１０５Ｒ（配列番号９）が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＤＮａｓｅ１に含まれる（Ｙａｓｕｄａら、Ｉｎｔ Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２０１０；４２：１２１６－２５を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ヒトＤＮａｓｅ１のより安定な誘導体を生成するために、この変異がＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質に導入される。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、ヒト野生型ＤＮａｓｅ１であるか、またはすべての潜在的なＮ結合型グリコシル化部位、すなわち、配列番号６に示されるＤＮａｓｅ１ドメインの１８および１０６位のアスパラギン残基（これは、天然のリーダーを有する全長膵臓ＤＮａｓｅ１（配列番号５）のそれぞれ４０および１２８位のアスパラギン残基に対応する）を除去するように変異されたヒトＤＮａｓｅ１ Ａ１１４Ｆ（すなわち、ヒトＤＮａｓｅ１ Ｎ１８Ｓ／Ｎ１０６Ｓ／Ａ１１４Ｆ、配列番号１１）である。

【0155】

いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、ＤＮａｓｅ機能性およびクロマチン切断を増加させるための１つまたはそれを超える塩基性（すなわち、正荷電）アミノ酸置換を含むヒトＤＮａｓｅ１である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ基質上の負荷電リン酸との結合を増強するために、塩基性アミノ酸がヒトＤＮａｓｅ１のＤＮＡ結合面に導入される（米国特許第７４０７７８５号；米国特許第６３９１６０７号を参照のこと）。この過活性ＤＮａｓｅ１は、「クロマチンカッター」と称され得る。

【0156】

いくつかの実施形態では、１個、２個、３個、４個、５個または６個の塩基性アミノ酸置換がＤＮａｓｅ１に導入される。例えば、ＤＮＡ結合を増強するために、以下の残基の１つまたはそれよりも多くが変異される：Ｇｌｎ９、Ｇｌｕ１３、Ｔｈｒ１４、Ｈｉｓ４４、Ａｓｎ７４、Ａｓｎ１１０、Ｔｈｒ２０５。いくつかの実施形態では、上記アミノ酸の１つまたはそれよりも多くは、塩基性アミノ酸、例えばアルギニン、リジンおよび／またはヒスチジンで置換される。例えば、ヒトＤＮａｓｅは、以下の置換の１つまたはそれよりも多くを含み得る：Ｑ９Ｒ、Ｅ１３Ｒ、Ｔ１４Ｋ、Ｈ４４Ｋ、Ｎ７４Ｋ、Ｎ１１０Ｒ、Ｔ２０５Ｋ。いくつかの実施形態では、ヒトＤＮａｓｅ１はまた、アクチン感受性を減少させるＡ１１４Ｆ置換を含む（米国特許第６３４８３４３号を参照のこと）。一実施形態では、ヒトＤＮａｓｅ１は、以下の置換を含む：Ｅ１３Ｒ、Ｎ７４Ｋ、Ａ１１４ＦおよびＴ２０５Ｋ。

【0157】

いくつかの実施形態では、ヒトＤＮａｓｅ１は、潜在的なグリコシル化部位、例えば、配列番号６に示されるＤＮａｓｅ１ドメインの１８および１０６位のアスパラギン残基（これは、天然のリーダーを有する全長膵臓ＤＮａｓｅ１のそれぞれ４０および１２８位のアスパラギン残基に対応する）を除去するための変異をさらに含む。一実施形態では、ヒトＤＮａｓｅ１は、以下の置換を含む：Ｅ１３Ｒ／Ｎ７４Ｋ／Ａ１１４Ｆ／Ｔ２０５Ｋ／Ｎ１８Ｓ／Ｎ１０６Ｓ。

【0158】

いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、ＤＮａｓｅ１様（ＤＮａｓｅＬ）酵素１～３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢエントリーＱ１３６０９；配列番号１５）である。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、３プライム修復エキソヌクレアーゼ１（ＴＲＥＸ１；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢエントリーＱ９ＮＳＵ２；配列番号１６）である。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅは、ＤＮａｓｅ２である。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅ２は、ＤＮＡｓｅ２α（すなわち、ＤＮａｓｅ２；ＵｎｉｔＰｒｏｔＫＢエントリーＯ００１１５配列番号１８）またはＤＮａｓｅ２β（すなわち、ＤＮａｓｅ２様酸ＤＮａｓｅ；ＵｎｉｔＰｒｏｔＫＢエントリーＱ８ＷＺ７９；配列番号１９）である。いくつかの実施形態では、ＤＮａｓｅ１Ｌ３、ＴＲＥＸ１、ＤＮａｓｅ２αまたはＤＮａｓｅ２βのＮ結合型グリコシル化部位は、潜在的なＮ結合型グリコシル化部位を除去するように変異されている。いくつかの実施形態では、２０または２５ａａのリンカードメインを含有するＤＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃドメインが作製される。

【0159】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＤＮａｓｅの活性は、対照ＤＮａｓｅ分子の活性の９分の１、８分の１、７分の１、６分の１、５分の１、４分の１、３分の１または２分の１等、約１０分の１以上である。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＤＮａｓｅの活性は、対照ＤＮａｓｅ分子の活性にほぼ等しい。

【0160】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＲＮａｓｅ １ドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅＡファミリーのヒト膵臓ＲＮａｓｅ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢエントリーＰ０７９９８；配列番号１）を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２に示される成熟型のヒト膵臓ＲＮａｓｅ１を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃドメインは、１つまたは複数の変異を有するヒトＲＮａｓｅ １ドメインを含む。一部の実施形態では、ヒトＲＮａｓｅ１は、任意の潜在的なＮ結合型グリコシル化部位、すなわち、天然のリーダーを有する全長膵臓ＲＮａｓｅ１（配列番号１）のそれぞれ６２、１０４および１１６位におけるアスパラギン残基に対応する、配列番号２に示されるＲＮａｓｅ１ドメインの３４、７６および８８位におけるアスパラギン残基を除去するように変異される（ヒトＲＮａｓｅ１ Ｎ３４Ｓ／Ｎ７６Ｓ／Ｎ８８Ｓ、配列番号４）。一部の実施形態では、２０または２５ａａリンカードメインを含有するＲＮａｓｅ１－リンカー－Ｆｃが作製される。

【0161】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、哺乳動物ＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、霊長類ＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、齧歯類ＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、マウスＲＮａｓｅ
１を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ラットＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、サルＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヤギＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ウサギＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ウマＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、イヌＲＮａｓｅ １を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ １ドメインは、変異体ＲＮａｓｅ １ドメインである。

【0162】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、細胞外免疫複合体に特異的に結合するＦｃドメインに結合したＲＮａｓｅ分子を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃγ受容体に有効に結合しない。一態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ１ｑに有効に結合しない。他の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ１由来のインフレームＦｃドメインを含む。他の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインに変異をさらに含む。他の態様では、変異は、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ３３１ＳまたはＮ２９７Ｓであり、３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数に変異を含むことができる。一部のそのような態様では、変異は、ＥＵインデックスに従ってナンバリングして残基２２０、２２６および２２９における３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数にあり、例えば、１つまたは複数のシステイン残基のセリンによる置換、例えば、Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓおよび／またはＣ２２９Ｓである。一部の実施形態では、３個のヒンジ領域システインのうち１個が、セリンによって置き換えられる、例えば、本明細書で「ＳＣＣヒンジ」とも称されるＣ２２０Ｓである。一部の実施形態では、全３個のヒンジ領域システインが、セリンによって置き換えられる、本明細書で「ＳＳＳヒンジ」とも称されるＣ２２０Ｓ、Ｃ２２６ＳおよびＣ２２９Ｓである。他の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＳＣＣヒンジを含有するが、それ以外は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの野生型であり、Ｆｃ受容体に効率的に結合し、それが結合した細胞のエンドサイトーシス区画へのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の取り込みを容易にする。他の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、一本鎖および／または二本鎖ＲＮＡ基質に対する活性を有する。

【0163】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、変異体Ｆｃドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、変異体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインに１つまたは複数の変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓ変異およびＰ３３１Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓを含み、３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数に変異を含むことができる。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓおよび／もしくはＰ３３１Ｓ、ならびに／または３個のヒンジシステインにおける１つもしくは複数の変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓおよび／もしくはＰ３３１Ｓ、ならびに／またはＳＳＳとなるように３個のヒンジシステインもしくはＳＣＣとなるように１個のヒンジシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓ、および３個のヒンジシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓ、およびＳＣＣまたはＳＳＳのいずれかを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓ、およびＳＣＣを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓ ＳＳＳを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ３３１Ｓ、およびＳＣＣまたはＳＳＳのいずれかを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数に変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、３個のヒンジシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ＳＳＳとなるように３個のヒンジシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ＳＣＣとなるように３個のヒンジシステインのうち１個に変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ＳＣＣまたはＳＳＳを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、配列番号２１～２８のいずれかに示す通りである。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４４～５８のいずれかに示す通りである。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＳＣＣ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、またはＳＳＳ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結されている野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４５～４６に示される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５０に示される。

【0164】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４リンカードメインを介して、ＳＣＣ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、またはＳＳＳ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結された野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４７～４８に示される。

【0165】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＣＣ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４リンカードメインを介して連結されたヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ Ａ１１４Ｆドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＳＳ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４リンカードメインを介して連結されたヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ Ａ１１４Ｆドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５１～５２に示される。

【0166】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ
Ａ１１４ＦドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＣＣ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４リンカードメインを介して連結された野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ Ａ１１４ＦドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＳＳ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４リンカードメインを介して連結された野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５３～５４に示される。

【0167】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ
Ａ１１４ＦドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＣＣ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結された野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＤＮａｓｅ１ Ｇ１０５Ｒ Ａ１１４ＦドメインにＮＬＧリンカードメインを介して連結された、ＳＳＳ、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結された野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメインを含む。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５５～５８に示される。

【0168】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで検出可能である。

【0169】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅドメインおよびＦｃドメインを含み、ＲＮａｓｅ１ドメインは、ＦｃのＣＯＯＨ側に位置付けられる。他の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅドメインおよびＦｃドメインを含み、ＲＮａｓｅ１ドメインは、ＦｃのＮＨ２側に位置付けられる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ；Ｆｃ－ＲＮａｓｅ；Ｆｃ－リンカー－ＲＮａｓｅ；ＲＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃ；ＲＮａｓｅ－Ｆｃ－ＤＮａｓｅ；ＤＮａｓｅ－Ｆｃ－ＲＮａｓｅ；ＲＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃ－リンカー－ＤＮａｓｅ；ＤＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃ－リンカー－ＲＮａｓｅ；ＲＮａｓｅ－Ｆｃ－リンカー－ＤＮａｓｅ；ＤＮａｓｅ－Ｆｃ－リンカー－ＲＮａｓｅ；ＲＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃ－ＤＮａｓｅ；ＤＮａｓｅ－リンカー－Ｆｃ－ＲＮａｓｅを含む。

【0170】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の酵素ドメインおよび他のドメインの間の融合接合部は最適化されている。

【0171】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＲＮａｓｅ酵素活性の標的は、主に細胞外にあり、例えば、これは抗ＲＮＰ自己抗体との免疫複合体に含有されるＲＮＡおよびアポトーシスを起こしている細胞の表面に発現されるＲＮＡからなる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、細胞内小胞の酸性環境において活性がある。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、分子がＦｃＲに結合し、免疫複合体によって使用される進入経路を通ってエンドサイトーシス区画に進入することを可能にするために、野生型（ｗｔ）Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、細胞外およびエンドサイトーシス環境（ここでＴＬＲ７が発現され得る）の両方で活性であるように適応されている。一部の態様では、これにより、野生型Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含むＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、事前に貪食された免疫複合体をする、またはウイルス感染後にＴＬＲ７を活性化させるＲＮＡによるＴＬＲ７シグナル伝達を停止させることが可能となる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の野生型ＲＮａｓｅは、ＲＮａｓｅの細胞質阻害因子による阻害に対して抵抗性ではない。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の野生型ＲＮａｓｅは、細胞の細胞質において活性がない。

【0172】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅを含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＤＮａｓｅおよびＲＮａｓｅの両方を含む。一部の実施形態では、これらのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡおよびＤＮＡの両方の組合せを含有する免疫複合体を消化または分解し、細胞外で活性があるため、シェーグレン病の療法を改善する。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、シェーグレン病の患者における疲労を低下させる。

【0173】

一部の実施形態では、本開示は、障害、疾患および状態を処置または予防するための遺伝子療法の方法における使用のための、１種または複数種のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を提供する。遺伝子療法の方法は、本開示のポリペプチド（単数または複数）の発現を達成するための、それを必要とする動物へのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）配列の導入に関する。この方法は、標的組織によるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の発現に必要なプロモーターおよび他の任意の遺伝子的要素に作動可能に連結された、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする１種または複数種のポリヌクレオチドの導入を含むことができる。

【0174】

遺伝子治療の適用では、治療的に有効な遺伝子産物のｉｎ ｖｉｖｏ合成を実現するために、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質遺伝子を細胞に導入する。「遺伝子治療」は、単回処置によって永続効果が実現される従来の遺伝子治療、および治療的に有効なＤＮＡまたはｍＲＮＡを１回または反復投与することを伴う遺伝子治療剤の投与のどちらも含む。オリゴヌクレオチドを、それらの取り込みが増強されるように、例えば、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって修飾することができる。

【0175】

Ｆｃドメイン
一部の実施形態では、１つまたは複数のヌクレアーゼドメインまたはそのバリアントもしくは断片を含むポリペプチドは、リンカードメインありまたはなしで、足場として、また、ポリペプチドの血清半減期を増加させる手段として機能するＦｃドメインに作動可能に連結される。一部の実施形態では、１つまたは複数のヌクレアーゼドメインおよび／またはＦｃドメインは、非グリコシル化、脱グリコシル化または不十分グリコシル化されている。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、変異体もしくはバリアントＦｃドメイン、またはＦｃドメインの断片である。

【0176】

適したＦｃドメインは、当技術分野で周知であり、そのようなものとして、ＷＯ２０１１／０５３９８２、ＷＯ０２／０６０９５５、ＷＯ０２／０９６９４８、ＷＯ０５／０４７３２７、ＷＯ０５／０１８５７２およびＵＳ２００７／０１１１２８１（前述の内容は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているもの等、ＦｃおよびＦｃバリアントが挙げられるがこれらに限定されない。本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（変更されたグリコシル化ありまたはなし）へのＦｃドメインの導入に常套的な方法（例えば、クローニング、コンジュゲーション）を使用することは、当業者の能力の範囲内にある。

【0177】

一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号２０に示されるもの等、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃである。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、１つまたは複数の変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。

【0178】

一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号３０～３１に示されるもの等、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃである。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、１つまたは複数の変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。

【0179】

一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、例えば、アミノ酸付加、欠失または置換をもたらす変異によって変更または改変される。本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃドメインバリアント」は、Ｆｃドメインが由来する野生型Ｆｃと比較して、アミノ酸置換等の少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＦｃドメインを指す。例えば、Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１抗体に由来する場合、バリアントは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の対応する位置における野生型アミノ酸と比較して、少なくとも１つのアミノ酸変異（例えば、置換）を含む。Ｆｃバリアントのアミノ酸置換（単数または複数）は、抗体のＦｃ領域における当該残基に付与される位置番号（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）に対応すると称されるＦｃドメイン内の位置に位置付けることができる。

【0180】

一実施形態では、Ｆｃバリアントは、ヒンジ領域またはその部分に位置付けられるアミノ酸位置（複数可）に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。別の実施形態では、Ｆｃバリアントは、ＣＨ２ドメインまたはその部分に位置付けられるアミノ酸位置（複数可）に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。別の実施形態では、Ｆｃバリアントは、ＣＨ３ドメインまたはその部分に位置付けられるアミノ酸位置（複数可）に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。別の実施形態では、Ｆｃバリアントは、ＣＨ４ドメインまたはその部分に位置付けられるアミノ酸位置（複数可）に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。

【0181】

一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、次のアミノ酸置換のうち１つまたは複数を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、次のアミノ酸置換のうち１つまたは複数を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ。

【0182】

一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｎ８３（すなわち、ＫａｂａｔナンバリングによるＮ２９７）に変異を有し、非グリコシル化Ｆｃ領域（例えば、Ｆｃ Ｎ８３Ｓ；配列番号２１）を生じる。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、３個のヒンジ領域システイン（残基２２０、２２６および２２９、ＥＵインデックスに従ったナンバリング）のうち１つまたは複数に変異を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインにおける３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数は、ＳＣＣ（配列番号２４）またはＳＳＳ（配列番号２５）に変異することができ、「Ｓ」は、セリンによるシステインのアミノ酸置換を表す（ＣＣＣは、野生型ヒンジドメインに存在する３個のシステインを指す）。したがって、「ＳＣＣ」は、３個のヒンジ領域システイン（残基２２０、２２６および２２９、ＥＵインデックスに従ったナンバリング）のうち第１のシステインのみのセリンへのアミノ酸置換を示す一方、「ＳＳＳ」は、ヒンジ領域における全３個のシステインが、セリンに置換されたことを示す（残基２２０、２２６および２２９、ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0183】

一部の態様では、Ｆｃドメインは、１つまたは複数の変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。

【0184】

一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインに１つまたは複数の変異を含む。

【0185】

一部の態様では、Ｆｃドメインは、１つまたは複数の変異を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｆ２９６Ｙ、Ｅ３５６Ｋ、Ｒ４０９ＫおよびＨ３４５Ｒ。一部の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｆ２９６Ｙ、Ｒ４０９ＫおよびＫ４３９Ｅ。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインが変異Ｆ２９６Ｙ、Ｅ３５６Ｋ、Ｒ４０９ＫおよびＨ３４５Ｒを含む、変異体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む第１のポリペプチドと、ＣＨ３ドメインが変異Ｆ２９６Ｙ、Ｒ４０９ＫおよびＫ４３９Ｅを含む変異体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む第２のポリペプチドとを含む。一部の実施形態では、変異体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、ヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインに１つまたは複数の変異を含む。

【0186】

ＣＨ２置換
一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓ変異およびＰ３３１Ｓ変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ＥＵインデックスに従ったナンバリングで、Ｐ２３８Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓを含み、また、３個のヒンジシステイン（残基２２０、２２６および２２９）のうち１つまたは複数に変異を含むことができる。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、ＥＵインデックスに従ったナンバリングで、Ｐ２３８Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓ、および／または３個のヒンジシステイン（残基２２０、２２６および２２９）における１つもしくは複数の変異を含む。一部の態様では変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓ、および／またはＳＣＣとなるようヒンジシステインにおけるもしくはＳＳＳとなるよう３個のヒンジシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓ、ならびに３個のヒンジシステインのうち少なくとも１つにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１ＳおよびＳＣＣを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１ＳおよびＳＳＳを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ２３８ＳおよびＳＣＣまたはＳＳＳを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｐ３３１ＳおよびＳＣＣまたはＳＳＳを含む（ＥＵインデックスに従った全ナンバリング）。

【0187】

一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｎ２９７等のＮ結合型グリコシル化の部位における変異、例えば、セリン等の別のアミノ酸による（ｆｏｒ）アスパラギンの置換、例えば、Ｎ２９７Ｓを含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｎ２９７等のＮ結合型グリコシル化の部位における変異、例えば、セリン等の別のアミノ酸によるアスパラギンの置換、例えば、Ｎ２９７Ｓ、および３個のヒンジシステインのうち１つまたは複数における変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｎ２９７等のＮ結合型グリコシル化の部位における変異、例えば、セリン等の別のアミノ酸によるアスパラギンの置換、例えば、Ｎ２９７Ｓ、およびＳＣＣとなるよう３個のヒンジシステインのうち１個またはＳＳＳとなるよう全３個のシステインにおける変異を含む。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、Ｎ２９７等のＮ結合型グリコシル化の部位における変異、例えば、セリン等の別のアミノ酸によるアスパラギンの置換、例えば、Ｎ２９７、ならびにＰ２３８もしくはＰ３３１またはその両方における変異、例えば、Ｐ２３８ＳもしくはＰ３３１Ｓ、またはＰ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓの両方等、ＦｃγＲ結合および／または補体活性化を減少させるＣＨ２ドメインにおける１つまたは複数の変異を含む。一部の態様では、そのような変異体Ｆｃドメインは、ヒンジ領域における変異、例えば、ＳＣＣまたはＳＳＳをさらに含むことができる（ＥＵインデックスに従った全ナンバリング）。一部の態様では、変異体Ｆｃドメインは、本明細書における配列表または配列リストに示す通りのものである。

【0188】

ＣＨ３置換
一部の実施形態では、ヘテロ二量体は、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＦｃドメインのＣＨ３ドメインにおける変異によって形成される。重鎖を先ず、「ノブ－イントゥ－ホール」戦略を使用してヘテロ二量体化のために操作した（参照により本明細書に組み込まれるＲｉｇｗａｙ Ｂ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．， ９ （１９９６） ｐｐ． ６１７－６２１）。用語「ノブ－イントゥ－ホール」は、突起（ｐｅｒｔｕｂｅｒａｎｃｅ）（ノブ）を一方のポリペプチドへと、空洞（ホール）を他方のポリペプチドへと、両者が相互作用する界面において導入することにより、２個のポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの一体的なペア形成を方向付ける技術を指す。例えば、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、ＵＳ５，７３１，１６８、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ２００９０８９００４、ＵＳ２００９０１８２１２７を参照されたい。特に、ＣＨ３ドメインにおける変異の組合せを使用して、ヘテロ二量体を形成することができ、例えば、「ノブ」重鎖におけるＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、および「ホール」重鎖におけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ。別の例では、「ノブ」重鎖におけるＴ３６６Ｙ、および「ホール」重鎖におけるＹ４０７Ｔ。一部の実施形態では、本明細書に開示されているヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを有する第１のＣＨ３ドメイン、ならびにホール変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを有する第２のＣＨ３ドメインを含む（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ノブ変異Ｔ３６６Ｙを有する第１のＣＨ３ドメイン、およびホール変異Ｙ４０７Ｔを有する第２のＣＨ３ドメインを含む。

【0189】

一部の実施形態では、ＣＨ３変異は、これらは参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２／０１４９８７６Ａ１、ＵＳ２０１７／０１５８７７９、ＵＳ９５７４０１０およびＵＳ９５６２１０９；ならびに参照により本明細書に組み込まれるＶｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ， Ｔ．Ｓ． ｅｔ ａｌ． ｍＡＢｓ， ５ （２０１３）， ｐｐ． ６４６－６５４に記載されている変異であり、次の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ（第１のＣＨ３ドメイン）；ならびにＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗ（第２のＣＨ３ドメイン）。一部の実施形態では、本明細書に開示されているヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ変異を有する第１のＣＨ３ドメイン、ならびにＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗ変異を有する第２のＣＨ３ドメインを含む（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0190】

一部の実施形態では、ヘテロ二量体は、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるＦｃドメインのＣＨ３ドメインにおける変異によって形成される。特に、ＣＨ３ドメインにおける変異の組合せを使用して、高いヘテロ二量体安定性および純度を有するヘテロ二量体を形成することができる；例えば、これらのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ ５：５， ６４６－６５４； Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ－Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３、ならびにＵＳ２０１２／０１４９８７６Ａ１、ＵＳ２０１７／０１５８７７９、ＵＳ９５７４０１０およびＵＳ９５６２１０９を例えば参照されたい。一部の実施形態では、Ｆｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ。一部の実施形態では、Ｆｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを有するＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＨ３ドメインが変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含む、変異体Ｆｃドメインを含む第１のポリペプチドと、ＣＨ３ドメインが変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む、変異体Ｆｃドメインを含む第２のポリペプチドとを含む。

【0191】

ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにおける他の変異は、ヘテロ二量体を優先的に形成することが企図される。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＶｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ ５：５， ６４６－６５４； Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ－Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３を例えば参照されたい。一部の実施形態では、第１のポリペプチドのＦｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含み：Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ、第２のポリペプチドのＦｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗ。一部の実施形態では、第１のポリペプチドのＦｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含み：Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ、第２のポリペプチドのＦｃドメインにおける変異は、変異の次の群から選択される１つまたは複数の変異を含む：Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗ。

【0192】

一部の実施形態では、ＣＨ３変異は、Ｍｏｏｒｅ， Ｇ．Ｌ． ｅｔ ａｌ． （ｍＡＢｓ， ３ （２０１１）， ｐｐ． ５４６－５５７）によって記載されている変異であり、次の変異を含む：Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａ（第１のＣＨ３ドメイン）；ならびにＹ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ（第２のＣＨ３ドメイン）。一部の実施形態では、本明細書に開示されているヘテロ二量体ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａ変異を有する第１のＣＨ３ドメイン、ならびにＹ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ変異を有する第２のＣＨ３ドメインを含む（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0193】

一部の実施形態では、ＣＨ３変異は、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ， Ｋ． ｅｔ ａｌ． （Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２８５ （２０１０）， ｐｐ． １９６３７－１９６４６）によって記載されてい変異であり、次の変異を含む：Ｋ４０９ＤおよびＫ３９２Ｄ（第１のＣＨ３ドメイン）；ならびにＤ３９９ＫおよびＥ３６５Ｋ（第２のＣＨ３ドメイン）。一部の実施形態では、本明細書に開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｋ４０９ＤおよびＫ３９２Ｄ変異を有する第１のＣＨ３ドメイン、ならびにＤ３９９ＫおよびＥ３６５Ｋ変異を有する第２のＣＨ３ドメインを含む（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0194】

本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能および／またはＦｃＲ結合に変更を付与することが公知である当技術分野で認識されるＦｃバリアントを用いることができる。例えば、これらのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０７０８９Ａ１、ＷＯ９６／１４３３９Ａ１、ＷＯ９８／０５７８７Ａ１、ＷＯ９８／２３２８９Ａ１、ＷＯ９９／５１６４２Ａ１、ＷＯ９９／５８５７２Ａ１、ＷＯ００／０９５６０Ａ２、ＷＯ００／３２７６７Ａ１、ＷＯ００／４２０７２Ａ２、ＷＯ０２／４４２１５Ａ２、ＷＯ０２／０６０９１９Ａ２、ＷＯ０３／０７４５６９Ａ２、ＷＯ０４／０１６７５０Ａ２、ＷＯ０４／０２９２０７Ａ２、ＷＯ０４／０３５７５２Ａ２、ＷＯ０４／０６３３５１ Ａ２、ＷＯ０４／０７４４５５Ａ２、ＷＯ０４／０９９２４９Ａ２、ＷＯ０５／０４０２１７Ａ２、ＷＯ０４／０４４８５９、ＷＯ０５／０７０９６３Ａ１、ＷＯ０５／０７７９８１Ａ２、ＷＯ０５／０９２９２５Ａ２、ＷＯ０５／１２３７８０Ａ２、ＷＯ０６／０１９４４７Ａ１、ＷＯ０６／０４７３５０Ａ２、およびＷＯ０６／０８５９６７Ａ２；米国特許出願公開番号第ＵＳ２００７／０２３１３２９、ＵＳ２００７／０２３１３２９、ＵＳ２００７／０２３７７６５、ＵＳ２００７／０２３７７６６、ＵＳ２００７／０２３７７６７、ＵＳ２００７／０２４３１８８、ＵＳ２００７０２４８６０３、ＵＳ２００７０２８６８５９、ＵＳ２００８００５７０５６；または米国特許第５，６４８，２６０； ５，７３９，２７７； ５，８３４，２５０； ５，８６９，０４６； ６，０９６，８７１； ６，１２１，０２２； ６，１９４，５５１； ６，２４２，１９５； ６，２７７，３７５； ６，５２８，６２４； ６，５３８，１２４； ６，７３７，０５６； ６，８２１，５０５； ６，９９８，２５３； ７，０８３，７８４；および同第７，３１７，０９１号に開示されているアミノ酸位置のうち１つまたは複数における変化（例えば、置換）。一実施形態では、特異的変化（例えば、当技術分野に開示されている１つまたは複数のアミノ酸の特異的置換）を、開示されているアミノ酸位置のうち１つまたは複数になすことができる。別の実施形態では、開示されているアミノ酸位置のうち１つまたは複数における異なる変化（例えば、当技術分野に開示されている１つまたは複数のアミノ酸位置の異なる置換）をなすことができる。

【0195】

Ｆｃドメインにおける他のアミノ酸変異は、Ｆｃガンマ受容体およびＦｃガンマ受容体サブタイプへの結合を低下させることが企図される。Ｆｃドメインへのアミノ酸残基番号の割り当ては、Ｋａｂａｔの定義に従う。例えば、これらのそれぞれがあらゆる目的のため参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｔａｂｌｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ， Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｓｅｃｔｉｏｎｓ）， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ：ＮＩＨ ｖｏｌ． １：６４７－７２３ （１９９１）；Ｋａｂａｔ ｅｔ
ａｌ．， ”Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ” Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ ｖｏｌ． １：ｘｉｉｉ－ｘｃｖｉ （１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７ （１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３ （１９８９）を参照されたい。

【0196】

例えば、Ｆｃ領域の位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２２、３２４、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３５６、３６０、３７３、３７６、３７８、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９における変異は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２００４年５月１８日に発行された米国特許第６，７３７，０５６号に記載されている通り、結合を変更することができる。この特許は、ＩｇＧ３におけるＰｒｏ３３１をＳｅｒに変化させると、変異していないＩｇＧ３と比較して、６分の１の親和性がもたらされたことを報告し、ＦｃガンマＲＩ結合におけるＰｒｏ３３１の関与を示す。加えて、位置２３４、２３５、２３６および２３７、２９７、３１８、３２０および３２２におけるアミノ酸改変は、１９９７年４月２９日に発行された、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵ．Ｓ．５，６２４，８２１において、受容体結合親和性を潜在的に変更するものとして開示されている（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0197】

使用に企図されるさらに別の変異は、例えば、２００６年１０月１９日に公開された、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／０２３５２０８号に記載されている変異を含む。この刊行物は、２３２Ｇ、２３４Ｇ、２３４Ｈ、２３５Ｄ、２３５Ｇ、２３５Ｈ、２３６Ｉ、２３６Ｎ、２３６Ｐ、２３６Ｒ、２３７Ｋ、２３７Ｌ、２３７Ｎ、２３７Ｐ、２３８Ｋ、２３９Ｒ、２６５Ｇ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、２７０Ｈ、２９７Ｓ、２９９Ａ、２９９Ｉ、２９９Ｖ、３２５Ａ、３２５Ｌ、３２７Ｒ、３２８Ｒ、３２９Ｋ、３３０Ｉ、３３０Ｌ、３３０Ｎ、３３０Ｐ、３３０Ｒ、および３３１Ｌ（ナンバリングは、ＥＵインデックスに従う）、ならびに二重変異体２３６Ｒ／２３７Ｋ、２３６Ｒ／３２５Ｌ、２３６Ｒ／３２８Ｒ、２３７Ｋ／３２５Ｌ、２３７Ｋ／３２８Ｒ、３２５Ｌ／３２８Ｒ、２３５Ｇ／２３６Ｒ、２６７Ｒ／２６９Ｒ、２３４Ｇ／２３５Ｇ、２３６Ｒ／２３７Ｋ／３２５Ｌ、２３６Ｒ／３２５Ｌ／３２８Ｒ、２３５Ｇ／２３６Ｒ／２３７Ｋ、および２３７Ｋ／３２５Ｌ／３２８Ｒを含む、Ｆｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸改変を含む、Ｆｃガンマ受容体への低下した結合、低下した抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、または低下した補体依存性細胞傷害を示すＦｃバリアントについて記載する。この刊行物に記載されている使用に企図される他の変異は、２２７Ｇ、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｇ、２３４Ｉ、２３４Ｙ、２３５Ｄ、２３５Ｉ、２３５Ｓ、２３６Ｓ、２３９Ｄ、２４６Ｈ、２５５Ｙ、２５８Ｈ、２６０Ｈ、２６４１、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２７２Ｈ、２７２Ｉ、２７２Ｒ、２８１Ｄ、２８２Ｇ、２８３Ｈ、２８４Ｅ、２９３Ｒ、２９５Ｅ、３０４Ｔ、３２４Ｇ、３２４Ｉ、３２７Ｄ、３２７Ａ、３２８Ａ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｍ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｔ、３２８Ｖ、３２８Ｙ、３３０Ｉ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、３３５Ｄ、位置２３５および２３６の間へのＧの挿入、位置２３５および２３６の間へのＡの挿入、位置２３５および２３６の間へのＳの挿入、位置２３５および２３６の間へのＴの挿入、位置２３５および２３６の間へのＮの挿入、位置２３５および２３６の間へのＤの挿入、位置２３５および２３６の間へのＶの挿入、位置２３５および２３６の間へのＬの挿入、位置２３５および２３６の間へのＧの挿入、位置２３５および２３６の間へのＡの挿入、位置２３５および２３６の間へのＳの挿入、位置２３５および２３６の間へのＴの挿入、位置２３５および２３６の間へのＮの挿入、位置２３５および２３６の間へのＤの挿入、位置２３５および２３６の間へのＶの挿入、位置２３５および２３６の間へのＬの挿入、位置２９７および２９８の間へのＧの挿入、位置２９７および２９８の間へのＡの挿入、位置２９７および２９８の間へのＳの挿入、位置２９７および２９８の間へのＤの挿入、位置３２６および３２７の間へのＧの挿入、位置３２６および３２７の間へのＡの挿入、位置３２６および３２７の間へのＴの挿入、位置３２６および３２７の間へのＤの挿入、ならびに位置３２６および３２７の間へのＥの挿入を含む（ナンバリングは、ＥＵインデックスに従う）。その上、米国特許出願公開第２００６／０２３５２０８号に記載されている変異は、２２７Ｇ／３３２Ｅ、２３４Ｄ／３３２Ｅ、２３４Ｅ／３３２Ｅ、２３４Ｙ／３３２Ｅ、２３４Ｉ／３３２Ｅ、２３４Ｇ／３３２Ｅ、２３５Ｉ／３３２Ｅ、２３５Ｓ／３３２Ｅ、２３５Ｄ／３３２Ｅ、２３５Ｅ／３３２Ｅ、２３６Ｓ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ｓ／３３２Ｄ、２３６Ａ／３３２Ｄ、２３９Ｄ／２６８Ｅ、２４６Ｈ／３３２Ｅ、２５５Ｙ／３３２Ｅ、２５８Ｈ／３３２Ｅ、２６０Ｈ／３３２Ｅ、２６４Ｉ／３３２Ｅ、２６７Ｅ／３３２Ｅ、２６７Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｄ／３３２Ｄ、２６８Ｅ／３３２Ｄ、２６８Ｅ／３３２Ｅ、２６８Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｅ／３３０Ｙ、２６８Ｄ／３３０Ｙ、２７２Ｒ／３３２Ｅ、２７２Ｈ／３３２Ｅ、２８３Ｈ／３３２Ｅ、２８４Ｅ／３３２Ｅ、２９３Ｒ／３３２Ｅ、２９５Ｅ／３３２Ｅ、３０４Ｔ／３３２Ｅ、３２４Ｉ／３３２Ｅ、３２４Ｇ／３３２Ｅ、３２４Ｉ／３３２Ｄ、３２４Ｇ／３３２Ｄ、３２７Ｄ／３３２Ｅ、３２８Ａ／３３２Ｅ、３２８Ｔ／３３２Ｅ、３２８Ｖ／３３２Ｅ、３２８Ｉ／３３２Ｅ、３２８Ｆ／３３２Ｅ、３２８Ｙ／３３２Ｅ、３２８Ｍ／３３２Ｅ、３２８Ｄ／３３２Ｅ、３２８Ｅ／３３２Ｅ、３２８Ｎ／３３２Ｅ、３２８Ｑ／３３２Ｅ、３２８Ａ／３３２Ｄ、３２８Ｔ／３３２Ｄ、３２８Ｖ／３３２Ｄ、３２８Ｉ／３３２Ｄ、３２８Ｆ／３３２Ｄ、３２８Ｙ／３３２Ｄ、３２８Ｍ／３３２Ｄ、３２８Ｄ／３３２Ｄ、３２８Ｅ／３３２Ｄ、３２８Ｎ／３３２Ｄ、３２８Ｑ／３３２Ｄ、３３０Ｌ／３３２Ｅ、３３０Ｙ／３３２Ｅ、３３０Ｉ／３３２Ｅ、３３２Ｄ／３３０Ｙ、３３５Ｄ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｉ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２６８Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３２７Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２８４Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２６８Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３２７Ａ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２６８Ｅ／３２７Ａ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ／３２７Ａ、３３２Ｅ／３３０Ｙ／２６８ Ｅ／３２７Ａ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／２６８Ｅ／３３０Ｙ／３２７Ａ、挿入Ｇ＞２９７－２９８／３３２Ｅ、挿入Ａ＞２９７－２９８／３３２Ｅ、挿入Ｓ＞２９７－２９８／３３２Ｅ、挿入Ｄ＞２９７－２９８／３３２Ｅ、挿入Ｇ＞３２６－３２７／３３２Ｅ、挿入Ａ＞３２６－３２７／３３２Ｅ、挿入Ｔ＞３２６－３２７／３３２Ｅ、挿入Ｄ＞３２６－３２７／３３２Ｅ、挿入Ｅ＞３２６－３２７／３３２Ｅ、挿入Ｇ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ａ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｓ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｔ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｎ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｄ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｖ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｌ＞２３５－２３６／３３２Ｅ、挿入Ｇ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ａ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ｓ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ｔ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ｎ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ｄ＞２３５－２３６／３３２Ｄ、挿入Ｖ＞２３５－２３６／３３２Ｄおよび挿入Ｌ＞２３５－２３６／３３２Ｄを含み（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）、使用に企図される。変異体Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａは、例えば、２００３年６月１２日に公開された、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００３／０１０８５４８号に記載されている。実施形態では、記載されている改変は、個々にまたは組み合わせてのいずれかで含まれる（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）。

【0198】

ＰＫ部分
一部の実施形態では、ＲＮａｓｅは、足場として、また、ＲＮａｓｅの血清半減期を増加させる手段として機能するＰＫ部分に作動可能に連結される。

【0199】

適したＰＫ部分は、当技術分野で周知であり、そのようなものとして、アルブミン、トランスフェリン、Ｆｃおよびそれらのバリアント、ならびにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびその誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。適したＰＫ部分として、ＵＳ５，８７６，９６９、ＷＯ２０１１／１２４７１８およびＷＯ２０１１／０５１４７８９に開示されているもの等、ＨＳＡまたはそのバリアントもしくは断片；ＷＯ２０１１／０５３９８２、ＷＯ０２／０６０９５５、ＷＯ０２／０９６９４８、ＷＯ０５／０４７３２７、ＷＯ０５／０１８５７２およびＵＳ２００７／０１１１２８１に開示されているもの等、ＦｃおよびＦｃバリアント；ＵＳ７，１７６，２７８およびＵＳ８，１５８，５７９に開示されているトランスフェリンまたはそのバリアントもしくは断片；ならびにＺａｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ． （”Ｕｓｅ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｐｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌｓ） ｆｏｒ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ” ｉｎ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ： Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｊ． Ｍ． Ｈａｒｒｉｓ， Ｐｌｅｎｕｓ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９２））およびＺａｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ． Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９５：１６： １５７－１８２）ならびに米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、同第４，１７９，３３７号および同第５，９３２，４６２号（前述の内容は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているもの等、ＰＥＧまたは誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。常套的な方法を使用して、ＰＫ部分を本発明のＲＮａｓｅに作動可能に結合させること（例えば、クローニング、コンジュゲーション）は、当業者の能力の範囲内にある。

【0200】

一部の実施形態では、ＰＫ部分は、天然に非グリコシル化されたＨＳＡである。

【0201】

一部の実施形態では、ＰＫ部分は、野生型Ｆｃ（配列番号２０）である。

【0202】

ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、例えば、アミノ酸変異（例えば、付加、欠失または置換）によって変更または改変される。本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃドメインバリアント」は、Ｆｃドメインが由来する野生型Ｆｃと比較して、アミノ酸置換等の少なくとも１つのアミノ酸改変を有するＦｃドメインを指す。例えば、Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１抗体に由来する場合、バリアントは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の対応する位置における野生型アミノ酸と比較して、少なくとも１つのアミノ酸変異（例えば、置換）を含む。例えば、Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ４抗体に由来する場合、バリアントは、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域の対応する位置に、野生型アミノ酸と比較して、少なくとも１個のアミノ酸変異（例えば、置換）を含む。

【0203】

一部の実施形態では、ＰＫ部分は、本明細書に記載されているＦｃバリアントのいずれかである。

【0204】

一部の実施形態では、ＰＫ部分は、野生型ＨＳＴである。他の実施形態では、ＰＫ部分は、Ｎ４１３および／またはＮ６１１および／またはＳ１２（Ｓ１２は、潜在的なＯ結合型グリコシル化部位である）に変異を有するＨＳＴであり、変更されたグリコシル化を有するＨＳＴを生じる（すなわち、ＨＳＴ Ｎ４１３Ｓ、ＨＳＴ Ｎ６１１Ｓ、ＨＳＴ Ｎ４１３Ｓ／Ｎ６１１ＳおよびＨＳＴ Ｓ１２Ａ／Ｎ４１３Ｓ／Ｎ６１１Ｓ）。

【0205】

リンカードメイン
いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、リンカードメインを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、複数のリンカードメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカードメインは、ポリペプチドリンカーである。特定の態様では、ポリペプチドリンカーを用いて、Ｆｃまたはそのバリアントもしくは断片を１つまたはそれを超えるヌクレアーゼドメインに融合し、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を形成することが望ましい。

【0206】

一実施形態では、ポリペプチドリンカーは、合成である。本明細書で使用される場合、ポリペプチドリンカーに関する用語「合成」は、これが自然状態では天然に連結されていない配列（これは天然に存在しても存在しなくてもよい）（例えば、Ｆｃ配列）に、アミノ酸の線状配列において連結されるアミノ酸配列（これは天然に存在しても存在しなくてもよい）を含むペプチド（またはポリペプチド）を含む。例えば、ポリペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの改変形態である（例えば、付加、置換または欠失等の変異を含む）、または第１のアミノ酸配列（これは天然に存在しても存在しなくてもよい）を含む、天然に存在しないポリペプチドを含むことができる。本発明のポリペプチドリンカーを用いて、例えば、Ｆｃまたはそのバリアントもしくは断片が並置されることを確実にして、機能的Ｆｃまたはそのバリアントもしくは断片の適正なフォールディングおよび形成を確実にすることができる。好ましくは、本発明と適合性であるポリペプチドリンカーは、相対的に非免疫原性であり、結合タンパク質の単量体サブユニットの間のいかなる非共有結合的会合も阻害しないであろう。

【0207】

特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号３７に示されるＮＬＧリンカーを用いる。

【0208】

特定の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ポリペプチドリンカーを用いて、単一ポリペプチド鎖においてインフレームで任意の２つまたはそれを超えるドメインを接続する。一実施形態では、２つまたはそれを超えるドメインは、本明細書で議論されるＦｃドメインもしくはそのバリアントもしくは断片またはヌクレアーゼドメインのいずれかから独立して選択され得る。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＲＮａｓｅドメインは、Ｆｃドメインにリンカードメインを介して作動可能に連結される。一実施形態では、ポリペプチドリンカーは、同一のＦｃ断片を融合し、それによりホモ二量体Ｆｃ領域を形成するために使用され得る。他の実施形態では、ポリペプチドリンカーは、異なるＦｃ断片を融合し、それによりヘテロ二量体Ｆｃ領域を形成するために使用され得る。他の実施形態では、本発明のポリペプチドリンカーは、第１のＦｃ断片のＣ末端を第２のＦｃ断片のＮ末端に遺伝子的に融合して、完全Ｆｃドメインを形成するために使用され得る。

【0209】

一実施形態では、ポリペプチドリンカーは、Ｆｃドメインまたはそのバリアントもしくは断片の部分を含む。例えば、一実施形態では、ポリペプチドリンカーは、Ｆｃ断片（例えば、ＣまたはＮドメイン）、またはＦｃドメインもしくはそのバリアントの異なる部分を含むことができる。

【0210】

別の実施形態では、ポリペプチドリンカーは、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカーを含むまたはこれからなる。本明細書で使用される場合、用語「ｇｌｙ－ｓｅｒリンカー」は、グリシンおよびセリン残基からなるペプチドを指す。例示的なｇｌｙ／ｓｅｒリンカーは、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）ｎのアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、正の整数（例えば、１、２、３、４または５）である。好まれるｇｌｙ／ｓｅｒリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）４である。別の好まれるｇｌｙ／ｓｅｒリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）３である。別の好まれるｇｌｙ／ｓｅｒリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）５である。ある特定の実施形態では、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカーは、ポリペプチドリンカー（例えば、本明細書に記載されているポリペプチドリンカー配列のいずれか）の２個の他の配列の間に挿入することができる。他の実施形態では、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカーは、ポリペプチドリンカー（例えば、本明細書に記載されているポリペプチドリンカー配列のいずれか）の別の配列の一方または両方の末端に付着される。さらに他の実施形態では、２つまたはそれよりも多いｇｌｙ－ｓｅｒリンカーが、ポリペプチドリンカーにおいて連続して取り込まれる。

【0211】

他の実施形態では、本発明のポリペプチドリンカーは、生物学的に関連するペプチド配列またはその配列部分を含む。例えば、生物学的に関連するペプチド配列として、抗拒絶反応または抗炎症性ペプチドに由来する配列を挙げることができるがこれらに限定されない。前記抗拒絶反応または抗炎症性ペプチドは、サイトカイン阻害性ペプチド、細胞接着阻害性ペプチド、トロンビン阻害性ペプチドおよび血小板阻害性ペプチドからなる群から選択され得る。好まれる実施形態では、ポリペプチドリンカーは、ＩＬ－１阻害性またはアンタゴニストペプチド配列、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ミメティックペプチド配列、トロンボポエチン（ＴＰＯ）ミメティックペプチド配列、Ｇ－ＣＳＦミメティックペプチド配列、ＴＮＦアンタゴニストペプチド配列、インテグリン結合ペプチド配列、セレクチンアンタゴニストペプチド配列、抗病原性ペプチド配列、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）ミメティックペプチド配列、カルモジュリンアンタゴニストペプチド配列、マスト細胞アンタゴニスト、ＳＨ３アンタゴニストペプチド配列、ウロキナーゼ受容体（ＵＫＲ）アンタゴニストペプチド配列、ソマトスタチンまたはコルチスタチンミメティックペプチド配列、ならびにマクロファージおよび／またはＴ細胞阻害ペプチド配列からなる群から選択されるペプチド配列を含む。そのうちいずれか１種をポリペプチドリンカーとして用いることができる例示的なペプチド配列は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，６６０，８４３号に開示されている。

【0212】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質における使用に適した他のリンカーは、当技術分野で公知であり、例えば、ＵＳ５，５２５，４９１に開示されているセリンリッチリンカー、Ａｒａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ２００１；１４：５２９－３２に開示されているヘリックス形成ペプチドリンカー（例えば、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５））、ならびにＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ ２０１１；８：４５７－６５に開示されている安定したリンカー、すなわち、ジペプチドリンカーＬＥ、トロンビン感受性ジスルフィドシクロペプチドリンカーおよびアルファ－ヘリックス形成リンカーＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥ（配列番号３９）が挙げられる。

【0213】

他の例示的なリンカーは、ＧＳリンカー（すなわち、（ＧＳ）ｎ）、ＧＧＳＧ（配列番号４０）リンカー（すなわち、（ＧＧＳＧ）ｎ）、ＧＳＡＴリンカー（配列番号４１）、ＳＥＧリンカーおよびＧＧＳリンカー（すなわち、（ＧＧＳＧＧＳ）ｎ）を含み、式中、ｎは、正の整数（例えば、１、２、３、４または５）である。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質における使用のための他の適したリンカーは、リンカーデータベース（ｉｂｉ．ｖｕ．ｎｌ／ｐｒｏｇｒａｍｓ／ｌｉｎｋｅｒｄｂｗｗｗ）等、公開データベースを使用して見出すことができる。リンカーデータベースは、新規融合タンパク質において潜在的なリンカーとして機能する多機能性酵素におけるドメイン間リンカーのデータベースである（例えば、Ｇｅｏｒｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２００２；１５：８７１－９を参照）。

【0214】

１つまたは複数のアミノ酸置換、付加または欠失が、ポリペプチドリンカーに導入されるように、ポリペプチドリンカーをコードするヌクレオチド配列に１つまたは複数のヌクレオチド置換、付加または欠失を導入することにより、これらの例示的なポリペプチドリンカーのバリアント形態を作製することができることが理解されるであろう。変異は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発等、標準技法によって導入することができる。

【0215】

本開示のポリペプチドリンカーは、少なくとも１アミノ酸の長さであり、変動的な長さとなり得る。一実施形態では、本発明のポリペプチドリンカーは、約１～約５０アミノ酸の長さである。この文脈で使用される場合、用語「約」は、＋／－２アミノ酸残基を示す。リンカーの長さは正の整数でなければならないため、約１～約５０アミノ酸の長さという長さは、１から４８～５２アミノ酸の長さという長さを意味する。別の実施形態では、本開示のポリペプチドリンカーは、約１０～２０アミノ酸の長さである。別の実施形態では、本開示のポリペプチドリンカーは、約１５～約５０アミノ酸の長さである。

【0216】

別の実施形態では、本開示のポリペプチドリンカーは、約２０～約４５アミノ酸の長さである。別の実施形態では、本開示のポリペプチドリンカーは、約１５～約２５アミノ酸の長さである。別の実施形態では、本開示のポリペプチドリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０もしくは６１またはそれよりも多いアミノ酸の長さである。

【0217】

ポリペプチドリンカーは、当技術分野で公知の技法を使用して、ポリペプチド配列に導入することができる。改変は、ＤＮＡ配列解析によって確認することができる。プラスミドＤＮＡを使用して、産生されるポリペプチドの安定した産生のために宿主細胞を形質転換することができる。

【0218】

変更されたグリコシル化を有するＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質
グリコシル化（例えば、Ｏ結合型（Ｏ－ｌｉｎｅｄ）またはＮ結合型グリコシル化）は、例えば、マンノースおよびアシアロ糖タンパク質受容体ならびに他のレクチン様受容体による、その循環からの除去を最小化することにより、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の血清半減期に影響を与えることができる。したがって、一部の実施形態では、本開示の可溶性インターフェロン受容体は、非グリコシル化、脱グリコシル化または不十分グリコシル化形態で調製される。好ましくは、Ｎ結合型グリコシル化は変更され、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙａｔｅｄ）される。

【0219】

一部の実施形態では、Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｘは、Ｐｒｏを除く他のいずれかの天然に存在するアミノ酸であり得る）コンセンサスに適合するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質における全てのアスパラギン残基は、Ｎ結合型グリコシル化のアクセプターとして機能しない残基（例えば、セリン、グルタミン）に変異され、これにより、タンパク質をグリコシル化する細胞において合成されたときに、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化を排出する。

【0220】

一部の実施形態では、Ｎ結合型グリコシル化部位を欠くＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、哺乳動物細胞において産生される。一実施形態では、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞である。したがって、特異的な実施形態では、非グリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＨＯ細胞において産生される。

【0221】

他の実施形態では、Ｎ－グリコシル化の低下または欠如は、例えば、宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ等の細菌）、グリコシル化に重要な１種もしくは複数の酵素を欠くように操作された哺乳動物細胞、またはツニカマイシン（Ｄｏｌ－ＰＰ－ＧｌｃＮＡｃ形成の阻害剤）等のグリコシル化を防止する薬剤で処置された哺乳動物細胞においてＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を産生することによって達成される。

【0222】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、高マンノース型糖ではなく複合Ｎ－グリカンを有する糖タンパク質を産生するように操作された下等真核生物において産生される（例えば、ＵＳ２００７／０１０５１２７を参照）。

【0223】

一部の実施形態では、グリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＣＨＯ細胞等の哺乳動物細胞において産生された受容体）は、化学的にまたは酵素的に処置されて、１つもしくは複数の炭水化物残基（例えば、１つまたは複数のマンノース、フコースおよび／またはＮ－アセチルグルコサミン残基）を除去する、または１つもしくは複数の炭水化物残基を修飾もしくは遮蔽する。そのような修飾または遮蔽は、マンノース受容体および／またはアシアロ糖タンパク質受容体および／または他のレクチン様受容体へのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の結合を低下させることができる。化学的脱グリコシル化は、例えば、Ｓｏｊａｒ ｅｔ ａｌ．， ＪＢＣ １９８９；２６４：２５５２－９およびＳｏｊａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９８７；１３８：３４１－５０に開示されている通り、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳ）でＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を処置することにより、またはＳｏｊａｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７、上記参照）に開示されている通り、フッ化水素で処置することにより達成することができる。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質からのＮ結合型炭水化物の酵素による除去は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ． （Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ
１９８７；１３８：３５０－９）に開示されている通り、タンパク質Ｎ－グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）ＡまたはＦでＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を処置することにより達成することができる。使用に適した他の当技術分野で認識されている市販の脱グリコシル化酵素は、エンド－アルファ－Ｎ－アセチル－ガラクトサミニダーゼ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３およびエンドグリコシダーゼＨを含む。一部の実施形態では、これらの酵素のうち１種または複数を使用して、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を脱グリコシル化することができる。脱グリコシル化のための代替方法は、例えば、ＵＳ８，１９８，０６３に開示されている。

【0224】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、部分的に脱グリコシル化されている。部分的脱グリコシル化は、複合型炭水化物ではなくＮ結合型高マンノース炭水化物を切断するエンドグリコシダーゼ（例えば、エンドグリコシダーゼＨ）でＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を処置し、アスパラギンに連結される単一ＧｌｃＮＡｃ残基を残すことにより達成することができる。エンドグリコシダーゼＨで処置されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、高マンノース炭水化物を欠き、肝マンノース受容体との相互作用低下をもたらすであろう。この受容体は、末端ＧｌｃＮＡｃを認識するが、タンパク質表面における単一ＧｌｃＮＡｃとの生産的相互作用の確率は、インタクト高マンノース構造との生産的相互作用の確率ほど大きくはない。

【0225】

他の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化は、例えば、酸化、還元、脱水、置換、エステル化、アルキル化、シアリル化、炭素間結合切断その他によって修飾されて、血液からのＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のクリアランスを低下させる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、過ヨウ素酸塩および水素化ホウ素ナトリウムで処置されて、炭水化物構造を修飾する。過ヨウ素酸塩処置は、近接ジオールを酸化し、炭素間結合を切断し、ヒドロキシル基をアルデヒド基に置き換える；水素化ホウ素は、アルデヒドをヒドロキシルに還元する。多くの糖残基は、近接ジオールを含み、したがって、この処置によって切断される。過ヨウ素酸塩および水素化ホウ素ナトリウムによる延長された血清半減期は、これらの薬剤によるリソソーム酵素β－グルクロニダーゼの逐次処置によって例証される（例えば、Ｈｏｕｂａ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １９９６：７：６０６－１１；Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ． ＰＮＡＳ １９７６；７３：４０４５－９；Ａｃｈｏｒｄ ｅｔ ａｌ． Ｐｅｄｉａｔ． Ｒｅｓ １９７７；１１：８１６－２２；Ａｃｈｏｒｄ ｅｔ ａｌ．
Ｃｅｌｌ １９７８；１５：２６９－７８を参照）。過ヨウ素酸塩および水素化ホウ素ナトリウムによる処置のための方法は、Ｈｉｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ＢＢＲＣ １９７４；５７：５５－６１に開示されている。リシンの血清半減期および組織分布を増加させる、過ヨウ素酸塩およびシアノ水素化ホウ素による処置のための方法は、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９８５；１４７：１９７－２０６に開示されている。

【0226】

一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の炭水化物構造は、マンノースもしくはアシアロ糖タンパク質受容体または他のレクチン様受容体による構造の認識に干渉する１つまたは複数の追加的な部分（例えば、炭水化物基、リン酸基、アルキル基等）の付加によって遮蔽することができる。

【0227】

一部の実施形態では、１つまたは複数の潜在的グリコシル化部位は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸の変異によって除去され、これにより、タンパク質をグリコシル化する細胞、例えば、ＣＨＯ細胞等の哺乳動物細胞において合成されるときに、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化を低下させる（不十分グリコシル化）。一部の実施形態では、例えば、不十分グリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、増加した活性を示す場合、または増加した血清半減期に寄与する場合、その中の潜在的Ｎ結合型グリコシル化部位を変異させることにより、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を選択的に不十分グリコシル化することが望ましくなり得る。他の実施形態では、例えば、そのような修飾が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を改善する場合、ある特定のドメインがＮ－グリコシル化を欠くように、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の部分を不十分グリコシル化することが望ましくなり得る。あるいは、グリコシル化アクセプター近傍の他のアミノ酸を修飾し、正常にグリコシル化されるであろうアミノ酸を必ずしも変化させなくても、グリコシル化酵素のための認識モチーフを破壊することができる。

【0228】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化は、グリコシル化部位を導入することにより変更することができる。例えば、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は、Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｘは、プロリン以外のいずれかのアミノ酸である）のＮ結合型グリコシル化のためのコンセンサス配列を導入するように修飾することができる。追加的なＮ結合型グリコシル化部位は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列のどの箇所に付加してもよい。好ましくは、グリコシル化部位は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性を実質的に低下させないアミノ酸配列における位置に導入される。

【0229】

Ｏ結合型グリコシル化部位の付加は、成長ホルモン、卵胞刺激ホルモン、ＩＧＦＢＰ－６、第ＩＸ因子およびその他多く等、タンパク質の血清半減期を変更することが報告された（例えば、Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ ２０１１；３２：２－３４２；Ｗｅｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２００４；８９：５２０４－１２；Ｍａｒｉｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２０００；１４２：５１２－６；ＵＳ２０１１／０１５４５１６に開示されている通り）。したがって、一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のＯ結合型グリコシル化（セリン／スレオニン残基における）が変更される。Ｏ結合型グリコシル化を変更するための方法は、当技術分野で常套的であり、例えば、ベータ－排出によって（例えば、Ｈｕａｎｇ ｅｔ
ａｌ．， Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ２００２；１６：１１９９－２０４；Ｃｏｎｒａｄ， Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００１； Ｃｈａｐｔｅｒ １７：Ｕｎｉｔ１７．１５Ａ；Ｆｕｋｕｄａ， Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００１；Ｃｈａｐｔｅｒ １７；Ｕｎｉｔ １７．１５Ｂ；Ｚａｃｈａｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１１； Ｕｎｉｔ １７．６； を参照）；市販のキット（例えば、ＧｌｙｃｏＰｒｏｆｉｌｅ（商標）ベータ－排出キット、Ｓｉｇｍａ）を使用することによって；またはＧａｌ β１－３ＧａｌＮＡｃおよび／またはＧｌｃＮＡｃ β１－３ＧａｌＮＡｃのみが残るまで、β１－４ガラクトシダーゼおよびβ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ等が挙げられるがこれらに限定されない一連のエキソグリコシダーゼによる処置に続く、例えば、エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ（すなわち、Ｏ－グリコシダーゼ）による処置にＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を付すことによって、達成することができる。そのような酵素は、例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓから市販されている。さらに他の実施形態では、例えば、Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．（上記参照）、Ｗｅｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ．（上記参照）、ＵＳ２００８／０２７４９５８；およびＵＳ２０１１／０１７１２１８に開示されている通り、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質にＯ結合型グリコシル化を導入するように変更される。一部の実施形態では、ＣＸＸＧＧＴ／Ｓ－Ｃ（配列番号５９）（ｖａｎ ｄｅｎ Ｓｔｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｍｉｃｈａｅｌ Ｃｏｘ， ｅｄ．， １９９８；３３：１５１－２０８）、ＮＳＴ－Ｅ／Ｄ－Ａ（配列番号６０）、ＮＩＴＱＳ（配列番号６１）、ＱＳＴＱＳ（配列番号６２）、Ｄ／Ｅ－ＦＴ－Ｒ／Ｋ－Ｖ（配列番号６３）、Ｃ－Ｅ／Ｄ－ＳＮ（配列番号６４）およびＧＧＳＣ－Ｋ／Ｒ（配列番号６５）等、１つまたは複数のＯ結合型グリコシル化コンセンサス部位が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質に導入される。追加的なＯ結合型グリコシル化部位は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列のどの箇所に付加してもよい。好ましくは、グリコシル化部位は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性を実質的に低下させないアミノ酸配列における位置に導入される。あるいは、Ｏ結合型糖部分は、例えば、ＷＯ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ＣＲＣ
Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９８１；２５９－３０６）に記載されている通り、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるアミノ酸を化学修飾することにより導入される。

【0230】

一部の実施形態では、Ｎ結合型およびＯ結合型グリコシル化部位の両方が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質に、好ましくは、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性を実質的に低下させないアミノ酸配列における位置に導入される。

【0231】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質におけるグリコシル化（例えば、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化）を導入、低下または排出し、当技術分野で常套的な方法を使用して、グリコシル化状態におけるそのような修飾が、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性または血清半減期を増加または減少させるか決定することは、十分に当業者の能力の範囲内にある。

【0232】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、変更されたグリコフォーム（例えば、不十分フコシル化（ｕｎｄｅｒｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）またはフコース不含グリカン）を含むことができる。

【0233】

一部の実施形態では、変更されたグリコシル化を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、対応するグリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、潜在的Ｎ結合型グリコシル化部位が変異されていないＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質）と比べて、少なくとも約１．５倍、例えば、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１０００倍もしくは１０００倍またはそれを超えて増加した血清半減期を有する。常套的な当技術分野で認識される方法を使用して、変更されたグリコシル化状態を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を決定することができる。

【0234】

一部の実施形態では、変更されたグリコシル化を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、非グリコシル化、脱グリコシル化または不十分グリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質）は、対応するグリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、潜在的Ｎ結合型グリコシル化部位が変異されていないＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質）の活性の少なくとも５０％、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％を保持する。

【0235】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化状態の変更は、活性を直接的に増加させることにより、またはバイオアベイラビリティ（例えば、血清半減期）を増加させることにより、活性を増加させることができる。したがって、一部の実施形態では、変更されたグリコシル化を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性は、対応するグリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、潜在的Ｎ結合型グリコシル化部位が変異されていないＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質）と比べて、少なくとも１．３倍、例えば、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９倍、少なくとも９．５倍もしくは１０倍またはそれを超えて増加される。

【0236】

当業者は、当技術分野で認識される方法を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化状態を容易に決定することができる。好まれる実施形態では、グリコシル化状態は、質量分析を使用して決定される。他の実施形態では、コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）との相互作用を評価して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が不十分グリコシル化されているか決定することができる。不十分グリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、対応するグリコシル化されたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、Ｃｏｎ Ａ－セファロースへの結合低下を示すと予想される。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を使用して、不十分グリコシル化されたタンパク質および対応するグリコシル化されたタンパク質の移動度を比較することもできる。不十分グリコシル化されたタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質と比較して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおけるより大きい移動度を有すると予想される。タンパク質グリコシル化状態を解析するための、他の適した当技術分野で認識される方法は、例えば、Ｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１２；１－１０に開示されている。

【0237】

異なるグリコシル化状態を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期等の薬物動態は、常套的な方法を使用して、例えば、マウスに、例えば、静脈内にＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を導入し、所定の時点で血液試料を採取し、試料におけるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のレベルおよび／または活性をアッセイおよび比較することにより、アッセイすることができる。

【0238】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法
ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含めＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、組換えＤＮＡ技法を使用して、形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞において作製される。これをなすために、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする組換えＤＮＡ分子が調製される。そのようなＤＮＡ分子を調製する方法は、当技術分野で周知である。例えば、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードする配列は、適した制限酵素を使用して、ＤＮＡから切除することができる。あるいは、ＤＮＡ分子は、ホスホロアミド酸塩方法等、化学合成技法を使用して合成することができる。また、これらの技法の組合せを使用することができる。

【0239】

本発明は、また、適切な宿主においてＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を発現することができるベクターを含む。ベクターは、適切な発現制御配列に作動可能に連結される、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ分子を含む。ＤＮＡ分子がベクターに挿入される前または後に、この作動可能な連結に影響を与える方法が周知である。発現制御配列は、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、オペレーター、リボソームヌクレアーゼドメイン、開始シグナル、終止シグナル、キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル、および転写または翻訳の制御に関与する他のシグナルを含む。

【0240】

ＤＮＡ分子を有するその結果生じるベクターは、適切な宿主の形質転換またはトランスフェクトに使用される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを含む２種またはそれよりも多い発現ベクターを適切な宿主にコトランスフェクトまたは同時形質転換することにより作製することができる。この形質転換またはトランスフェクションは、当技術分野で周知の方法を使用して行うことができる。

【0241】

多数の利用でき周知の宿主細胞のいずれかを、本発明の実施において使用することができる。特定の宿主の選択は、当技術分野で認識される多数の因子に依存する。そのようなものとして、例えば、選ばれた発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によってコードされるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の毒性、形質転換またはトランスフェクションの率、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の回収の容易さ、発現特徴、バイオセイフティーおよび費用が挙げられる。これらの因子は、全ての宿主が特定のＤＮＡ配列の発現に等しく有効となり得るとは限らないことの理解と均衡を取らなければならない。これらの一般ガイドライン内で、有用な微生物宿主は、細菌（Ｅ．ｃｏｌｉ等）、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ等）および他の真菌、昆虫、植物、培養中の哺乳動物（ヒトを含む）細胞、または当技術分野で公知の他の宿主を含む。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＨＯ細胞において産生される。

【0242】

次に、形質転換またはトランスフェクトされた宿主が培養され、精製される。宿主細胞は、所望の化合物が発現されるように、従来の発酵または培養条件下で培養することができる。そのような発酵および培養条件は、当技術分野で周知である。最後に、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が、当技術分野で周知の方法によって培養物から精製される。

【0243】

化合物は、合成方法によって作製することもできる。例えば、固相合成技法を使用することができる。適した技法は、当技術分野で周知であり、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ （１９７３）， Ｃｈｅｍ． Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ， ｐｐ． ３３５－６１ （Ｋａｔｓｏｙａｎｎｉｓ ａｎｄ Ｐａｎａｙｏｔｉｓ ｅｄｓ．）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ （１９６３）， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５： ２１４９；Ｄａｖｉｓ
ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ １９８５；１０： ３９４－４１４；Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ （１９６９）， Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第３，９４１，７６３号；Ｆｉｎｎ ｅｔ ａｌ． （１９７６）， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ （３ｒｄ ｅｄ．） ２： １０５－２５３；およびＥｒｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９７６）， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ （３ｒｄ ｅｄ．） ２： ２５７－５２７に記載されている技法を含む。一部の実施形態では、誘導体化ペプチドを含有するまたは非ペプチド基を含有する化合物は、周知の有機化学技法によって合成することができる。

【0244】

分子発現／合成の他の方法は、当業者にとって一般に当技術分野で公知である。

【0245】

医薬組成物
ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質を単独で投与する。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの他の治療剤の投与前に投与する。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの他の治療剤の投与と同時に投与する。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの他の治療剤の投与の後に投与する。他の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの他の治療剤の投与前に投与する。当業者には理解されるように、一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を他の薬剤／化合物と組み合わせる。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と他の薬剤を同時に投与する。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と他の薬剤を同時には投与せず、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を、薬剤を投与する前、またはその後に投与する。一部の実施形態では、対象は、同じ防止期間、障害の発症、および／または処置期間中、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と他の薬剤の両方を受ける。

【0246】

本開示の医薬組成物は、併用療法で、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することができる。ある特定の実施形態では、併用療法は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と少なくとも１つの他の薬剤の組合せを含む。薬剤としては、これだけに限定されないが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成により調製された化学組成物、抗体、抗原結合性領域、ならびにその組合せおよびコンジュゲートが挙げられる。ある特定の実施形態では、薬剤は、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックなモジュレーター、または毒素としての機能を果たし得る。

【0247】

ある特定の実施形態では、本開示は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）、防腐剤および／またはアジュバントと共に含む医薬組成物を提供する。

【0248】

ある特定の実施形態では、本発明は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および治療有効量の少なくとも１つの追加的な治療剤を、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤および／またはアジュバントと共に含む医薬組成物を提供する。

【0249】

ある特定の実施形態では、許容される製剤材料は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性であることが好ましい。一部の実施形態では、製剤材料（単数または複数）は、ｓ．ｃ．投与用および／またはＩ．Ｖ．投与用である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、重量オスモル濃度、粘度、清澄性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、吸着または透過を改変する、維持するまたは保存するための製剤材料を含有し得る。ある特定の実施形態では、適切な製剤材料としては、これだけに限定されないが、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリジン等）；抗菌薬；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムもしくは亜硫酸水素ナトリウム等）；緩衝液（例えば、ホウ酸、炭酸水素、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸、リン酸もしくは他の有機酸等）；増量剤（例えば、マンニトールもしくはグリシン等）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等）；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリンもしくはヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン等）；充填剤；単糖；二糖；および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースもしくはデキストリン等）；タンパク質（例えば、ゼラチン等）；着色剤、香味剤および希釈剤；乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン等）；低分子量ポリペプチド；塩形成性対イオン（例えば、ナトリウム等）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸もしくは過酸化水素等）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール等）；糖アルコール（例えば、マンニトールもしくはソルビトール等）；懸濁化剤；界面活性物質もしくは湿潤剤（例えば、プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０等のポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール等）；安定性増強剤（例えば、スクロースもしくはソルビトール等）；張度増強剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは塩化ナトリウムもしくは塩化カリウム、マンニトールソルビトール等）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤および／または医薬アジュバントが挙げられる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ， ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ （１９９５））。一部の実施形態では、製剤は、ＰＢＳ；２０ｍＭのＮａＯＡＣ、ｐＨ５．２、５０ｍＭのＮａＣｌ；および／または１０ｍＭのＮＡＯＡＣ、ｐＨ５．２、９％スクロースを含む。

【0250】

ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および／または治療用分子を当技術分野で公知の半減期延長ビヒクルと連結する。そのようなビヒクルとしては、これだけに限定されないが、ポリエチレングリコール、グリコーゲン（例えば、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のグリコシル化）、およびデキストランが挙げられる。そのようなビヒクルは、例えば、米国特許出願第０９／４２８，０８２号、現在米国特許第６，６６０，８４３号およびＰＣＴ特許公開第ＷＯ９９／２５０４４号に記載されている。

【0251】

ある特定の実施形態では、最適な医薬組成物は、当業者により、例えば、意図された投与経路、送達形式および所望の投与量に基づいて決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記を参照されたい。ある特定の実施形態では、そのような組成物は、本開示の融合タンパク質の物理的な状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出の速度およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を及ぼす可能性がある。

【0252】

ある特定の実施形態では、医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、水性であっても非水性であってもよい。例えば、ある特定の実施形態では、適切なビヒクルまたは担体は、場合によって非経口投与用の組成物によく見られる他の材料を補充した、注射用水、生理的食塩水または人工脳脊髄液であり得る。一部の実施形態では、生理食塩水は、等張性リン酸緩衝食塩水を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約ｐＨ７．０～８．５のトリス緩衝液または約ｐＨ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、したがって、ソルビトールまたは適切な代用物をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む組成物を、保管のために、所望の程度の純度を有する選択された組成物を必要に応じた製剤化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記）と混合することにより、凍結乾燥したケーキまたは水溶液の形態で調製することができる。さらに、ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む組成物を、スクロース等の妥当な賦形剤を使用し、凍結乾燥物として製剤化することができる。

【0253】

ある特定の実施形態では、医薬組成物を非経口送達のために選択することができる。ある特定の実施形態では、組成物を、経口的に等の、吸入または消化管を通じた送達のために選択することができる。そのような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の能力の範囲内に入る。

【0254】

ある特定の実施形態では、製剤構成成分は、投与の部位に許容される濃度で存在する。ある特定の実施形態では、組成物を生理的ｐＨまたはわずかに低いｐＨ、典型的には約５～約８までのｐＨ範囲内に維持するために緩衝液を使用する。

【0255】

ある特定の実施形態では、非経口投与が企図されている場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中の、パイロジェンフリーであり、所望のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む、非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。ある特定の実施形態では、非経口注射用のビヒクルは、適正に保存された、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに滅菌等張性溶液として製剤化された滅菌蒸留水である。ある特定の実施形態では、調製は、所望の分子を、製品の制御放出または持続放出をもたらすことができ、そしてデポ注射によって送達することができる注射用マイクロスフェア、生物侵食性粒子、高分子化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸等）、ビーズまたはリポソーム等の薬剤と共に製剤化することを伴う。ある特定の実施形態では、ヒアルロン酸を使用することもでき、これには、循環中の長期にわたる持続時間を促進する効果がある。ある特定の実施形態では、埋め込み型薬物送達デバイスを使用して所望の分子を導入することができる。

【0256】

ある特定の実施形態では、医薬組成物を吸入用に製剤化することができる。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を、少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに、吸入用の乾燥粉末として製剤化することができる。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む吸入溶液を、エアロゾル送達用の噴射剤を用いて製剤化することができる。ある特定の実施形態では、溶液を噴霧することができる。経肺投与は、化学修飾されたタンパク質の経肺送達について記載されているＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５号にさらに記載されている。

【0257】

ある特定の実施形態では、製剤を経口投与できることが企図されている。ある特定の実施形態では、この方式で投与される、少なくとも１つの追加的な治療剤を伴うまたは伴わないＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、錠剤およびカプセル剤等の固体剤形の配合において習慣的に使用される担体を伴ってまたは伴わずに製剤化することができる。ある特定の実施形態では、カプセル剤を、製剤の活性部分が、胃腸管内で生物学的利用能が最大化され、かつ前全身性（ｐｒｅ－ｓｙｓｔｅｍｉｃ）分解が最小化される時点で放出されるように設計することができる。ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および／または任意の追加的な治療剤の吸収を容易にするために、少なくとも１つの追加的な薬剤を含めることができる。ある特定の実施形態では、希釈剤、香味剤、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤も使用することができる。

【0258】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、有効な数量のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を、少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに、錠剤の製造に適した無毒性賦形剤との混合物として伴い得る。ある特定の実施形態では、錠剤を滅菌水または別の妥当なビヒクルに溶解させることにより、溶液を単位用量形態で調製することができる。ある特定の実施形態では、適切な賦形剤として、これだけに限定されないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素、ラクトースもしくはリン酸カルシウム等の不活性希釈剤；またはデンプン、ゼラチンもしくはアラビアゴム等の結合剤；またはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルク等の潤滑剤が挙げられる。

【0259】

持続送達または制御送達製剤としての、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに伴う製剤を含めた追加的な医薬組成物が当業者には明らかになろう。ある特定の実施形態では、リポソーム担体、生物侵食性微小粒子または多孔質ビーズおよびデポ注射等の種々の他の持続送達または制御送達手段を製剤化するための技法も当業者には公知である。例えば、医薬組成物を送達するための多孔質ポリマー微小粒子の制御放出について記載されているＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号を参照されたい。ある特定の実施形態では、持続放出調製物は、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスを含み得る。持続放出マトリックスとしては、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号およびＥＰ０５８，４８１）、Ｌ－グルタミン酸とガンマエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２２：５４７－５５６ （１９８３））、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリル酸）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｒｅｓ， １５： １６７－２７７ （１９８１）およびＬａｎｇｅｒ， Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈ， １２：９８－１０５ （１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，、上記）またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。ある特定の実施形態では、持続放出組成物は、リポソームも含み得、これは、当技術分野で公知のいくつかの方法のいずれかによって調製することができる。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ， ＰＮＡＳ， ８２：３６８８－３６９２ （１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６およびＥＰ１４３，９４９を参照されたい。

【0260】

ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は、典型的には滅菌されている。ある特定の実施形態では、これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって実現することができる。ある特定の実施形態では、組成物を凍結乾燥させる場合、この方法を使用した滅菌を凍結乾燥前、または凍結乾燥および再構成後のいずれかに行うことができる。ある特定の実施形態では、非経口投与用の組成物を凍結乾燥形態でまたは溶液として保存することができる。ある特定の実施形態では、非経口用組成物は、一般に、滅菌された、アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針で穴をあけることができる止め栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに入れられる。

【0261】

ある特定の実施形態では、医薬組成物を製剤化したら、溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体、または脱水もしくは凍結乾燥した粉末として滅菌バイアル中に保管する。ある特定の実施形態では、そのような製剤は、すぐに使える形態で保管することもでき、投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥した形態）で保管することもできる。

【0262】

ある特定の実施形態では、単回用量の投与単位を生産するためのキットが提供される。ある特定の実施形態では、キットは、乾燥させたタンパク質を有する第１の容器と水性製剤を有する第２の容器の両方を含有し得る。ある特定の実施形態では、単一チャンバーおよびマルチチャンバー充填済みシリンジ（例えば、液体シリンジおよび分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含有するキットが含まれる。

【0263】

ある特定の実施形態では、治療的に使用される、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む医薬組成物の有効量は、例えば、治療の状況および目的に依存する。したがって、ある特定の実施形態によると、処置のために妥当な投与量レベルは、送達される分子、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質が少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに使用される適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表または臓器サイズ）および／または状態（年齢および全体的な健康）に一部応じて変動することが当業者には理解されよう。ある特定の実施形態では、最適な治療効果を得るために、臨床医が投与量を用量設定し、投与経路を改変することができる。ある特定の実施形態では、典型的な投与量は、上記の因子に応じて、約０．５μｇ／ｋｇから最大約５０ｍｇ／ｋｇまたはそれよりも多くまでにわたり得る。ある特定の実施形態では、投与量は、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約３～６ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇにわたり得る。

【0264】

ある特定の実施形態では、投薬の頻度については、使用される製剤中のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および／または任意の追加的な治療剤の薬物動態パラメーターを考慮する。ある特定の実施形態では、臨床医が組成物を所望の効果が実現される投与量に達するまで投与する。ある特定の実施形態では、したがって、組成物を、単回用量として、または２回またはそれよりも多くの用量として（所望の分子を同じ量含有してもよく同じ量含有しなくてもよい）、経時的に、または埋め込み型デバイスまたはカテーテルを介した連続注入として投与することができる。妥当な投与量のさらなる精密化が当業者によって常套的に行われ、当業者が常套的に実施する課題の範囲内に入る。ある特定の実施形態では、妥当な用量応答データを使用することによって妥当な投与量を確認することができる。

【0265】

ある特定の実施形態では、医薬組成物の投与経路は、公知の方法と一致して、例えば、経口的に、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、皮下、眼内、動脈内、門脈内、または病巣内経路による注射によるもの；持続放出系によるもの、または埋め込み型デバイスによるものである。ある特定の実施形態では、組成物をボーラス注射によって、または注入によってもしくは埋め込み型デバイスによって連続的に投与することができる。

【0266】

ある特定の実施形態では、組成物を、所望の分子を吸収させたまたは封入した膜、海綿または別の妥当な材料を埋め込むことによって局所的に投与することができる。埋め込み型デバイスを使用するある特定の実施形態では、デバイスを任意の適切な組織または臓器に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散、持効性ボーラス、または連続投与であり得る。

【0267】

ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む医薬組成物をｅｘ ｖｉｖｏ様式で使用することが望ましい場合がある。そのような例では、患者から取り出した細胞、組織および／または臓器を、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を少なくとも１つの追加的な治療剤を伴ってまたは伴わずに含む医薬組成物に曝露させ、その後に続けて、細胞、組織および／または臓器を患者に埋め込み戻す。

【0268】

ある特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および／または任意の追加的な治療剤を、遺伝子操作されたある特定の細胞を本明細書に記載のもの等の方法を使用して埋め込んでポリペプチドを発現および分泌させることによって送達することができる。ある特定の実施形態では、そのような細胞は、動物またはヒト細胞であってよく、また、自己、異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）、または異種（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）であってよい。ある特定の実施形態では、細胞を不死化することができる。ある特定の実施形態では、免疫学的応答の可能性を低下させるために、細胞を封入して周囲の組織の浸潤を回避することができる。ある特定の実施形態では、封入材料は、典型的には、タンパク質製品（単数または複数）の放出を可能にするが、患者の免疫系によるまたは周囲の組織に由来する他の有害因子による細胞の破壊は防止する生体適合性の半透性ポリマー封入物または膜である。
ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0269】

当技術分野で公知の種々のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む、本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の有効性を評価することができる。

【0270】

例えば、正常対象由来の培養ヒトＰＢＭＣ、ループス患者ＰＢＭＣ、またはシューグレンＰＢＭＣを単離し、培養し、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の存在下または非存在下、様々な刺激（例えば、ＴＬＲリガンド、共刺激抗体、免疫複合体および正常血清または自己免疫血清）で処理する。刺激した細胞によるサイトカイン産生は、様々なサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－α）のための市販の試薬、例えばＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製の抗体ペアキットを使用して測定され得る。アッセイのために適切な種々の時点（例えば、２４時間、４８時間またはそれよりも後の時点）において培養上清を回収して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質がサイトカイン産生に及ぼす効果を決定する。ＩＦＮ－α産生は、例えば、ＰＢＬ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｓｏｕｒｃｅ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から入手可能な抗ヒトＩＦＮ－α抗体および標準曲線試薬を使用して測定される。同様のアッセイが、例えばＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）から入手可能な市販の磁気ビーズベースの単離キットを使用して、精製されたヒトリンパ球亜集団（単離された単球、Ｂ細胞、ｐＤＣ、Ｔ細胞など）を使用して実施される。

【0271】

当技術分野で認められている常套的な方法を使用して、刺激後の様々な時点において、ＰＢＭＣまたは単離された細胞亜集団におけるリンパ球活性化受容体、例えばＣＤ５、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ２５の発現を測定することによって、免疫細胞活性化に対するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の効果を評価するために、マルチカラーフローサイトメトリーが使用され得る。

【0272】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効性はまた、例えば、Ａｈｌｉｎら、Ｌｕｐｕｓ
２０１２：２１：５８６－９５；Ｍａｔｈｓｓｏｎら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７；１４７：５１３－２０；およびＣｈｉａｎｇら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
２０１１；１８６：１２７９－１２８８に記載されているように、ＳＬＥまたはシューグレン患者血清を正常ヒトｐＤＣと共にインキュベートして、ＩＦＮアウトプットを活性化することによって試験され得る。理論に縛られるものではないが、ＳＬＥまたはシューグレン患者血清中の循環核酸含有免疫複合体は、Ｆｃ受容体媒介性エンドサイトーシスを介したｐＤＣエンドソームへの核酸抗原侵入、続いて、エンドソームＴＬＲ７、８および９に対する核酸の結合およびそれらの活性化を促進する。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の影響を評価するために、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質でＳＬＥまたはシューグレン患者血清または血漿を前処理し、その後、健常志願者から単離されたｐＤＣ細胞の培養物に添加する。次いで、複数の時点において、産生されたＩＦＮ－αのレベルを決定する。核酸含有免疫複合体を分解することによって、有効なＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、産生されるＩＦＮ－αの量を減少させると予想される。

【0273】

ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効性は、本明細書に開示されるＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処理された細胞からのアッセイの結果と、対照製剤で処理された細胞からのアッセイの結果とを比較することによって実証される。処理後、上記様々なマーカー（例えば、サイトカイン、細胞表面受容体、増殖）のレベルは、概して、有効なＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質処理群では、処理前に存在するマーカーレベルと比べて、または対照群において測定されたレベルと比べて改善される。

【0274】

処置方法
本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、自己免疫障害または異常な免疫応答の処置において特に有効である。この点について、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、外部抗原および自己抗原の両方に対する望まれない免疫応答を制御、抑制、モジュレート、処置または排除ために使用されることが理解される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、自己免疫障害の患者における疲労の処置または低下に使用される。一部の実施形態では、疲労は、シェーグレン症候群関連の疲労である。

【0275】

一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質等の本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質を有効量または十分量でそれを必要とするヒト患者に投与し、これにより疾患を処置することによる、ヒト患者における自己免疫疾患の処置に有用である。所望の効果を実現するために適切な任意の投与経路が本開示により企図されている（例えば、静脈内、筋肉内、皮下）。疾患状態の処置により、状態に付随する症状の低減をもたらすことができ、これは、長期もしくは短期のものであり得る、またはさらには一過性の有益な効果であり得る。一部の実施形態では、シェーグレン病の処置は、この疾患または状態に関連する疲労の減少をもたらす。

【0276】

生化学的アッセイ
一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質は、それを必要とするヒト患者に投与されて、シェーグレン症候群を処置する。一部の態様では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の効果は、プラセボと比較して、本明細書で開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置したヒト患者におけるＩＦＮ－アルファレベル、ＩＦＮ－アルファ応答遺伝子レベル、自己抗体価、腎臓機能および病理学、ならびに／または循環免疫複合体レベルを比較することにより実証される。

【0277】

例えば、処置を必要とするヒト対象を選択または同定する（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａを満たす患者）。対象は、例えば、シェーグレン症候群の原因または症状、例えばｐＳＳを低減する必要があり得る。一部の実施形態では、患者は、シェーグレン症候群を有し、疲労の低減を必要とする。対象の同定は、臨床的状況で行うこともでき、他の場所で、例えば、対象の自宅において、対象自身が自己検査キットを使用することによって行うこともできる。

【0278】

ベースライン（１日目）において、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の適切な第１の用量は、それを必要とする患者に投与される。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、本明細書に記載されている通りに製剤化される。患者の状態は、例えば、ＩＦＮ－アルファレベル、ＩＦＮ－アルファ応答遺伝子レベル、自己抗体価、腎臓機能および病理学、ならびに／または循環する免疫複合体レベルを測定することにより、ベースライン（１日目）においておよび第１の用量からある期間の後に、例えば、８日目、１５日目、２９日目、４３日目、５７日目、７１日目、８５日目、９９日目にまたは試験の終わりに評価される。他の関連する判断基準を測定することもできる。用量の回数および濃さは、対象の必要に従って調整される。処置後に、対象のＩＦＮ－アルファレベル、ＩＦＮ－アルファ応答遺伝子レベル、自己抗体価、腎臓機能および病理学、ならびに／または循環する免疫複合体レベルは、処置前に存在するレベルと比べて、または同様に罹患したが無処置の／対照の対象において測定されるレベルと比べて低減および／または改善される。

【0279】

疲労アッセイ
様々な患者報告成績（ＰＲＯ）計測手段が、慢性疾患の対象における疲労の測定において使用および検証されてきた。そのようなＰＲＯは、当技術分野で公知であり、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の有効性の評価に使用することができる。

【0280】

ＥＵＬＡＲシェーグレン症候群患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）
欧州リウマチ対策連盟（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ）（ＥＵＬＡＲ）シェーグレン症候群（ＳＳ）患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）を開発して、原発性シェーグレン症候群の患者の症状を評価した（Ｓｅｒｏｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ． ２０１１；７０：９６８－９７２）。ＥＳＳＰＲＩは、原発性シェーグレン症候群の重要なかつ機能障害を引き起こす症状：乾燥、四肢疼痛および疲労を全て測定するための包括的なスコアとして開発した。ＥＳＳＰＲＩは、内容妥当性を損失することのない、症状のそれぞれの測定に十分であることが示され、スコアは、計算し易い。

【0281】

ＥＳＳＰＲＩは、原発性シェーグレン症候群の患者の症状を評価する患者記入質問票である。質問票は、次の症状のそれぞれにつき１つの、３つの尺度を含む：（１）乾燥、（２）四肢疼痛および（３）疲労。ＥＳＳＰＲＩの各構成成分は、単一の０～１０の数値的尺度により測定され、包括的ＥＳＳＰＲＩスコアは、３つの尺度の平均である：（乾燥＋四肢疼痛＋疲労）／３。ＥＳＳＰＲＩスコアの少なくとも１ポイントの減少は、臨床的に有意義である。

【0282】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物による処置後の患者における疲労の改善を評価することにより実証される。処置後に、疲労は一般に、処置前の患者における疲労のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＥＳＳＰＲＩによって測定された際に患者において低下する。

【0283】

ＦＡＣＩＴ－疲労
慢性疾患治療の機能評価疲労尺度（ＦＡＣＩＴ－疲労）は、ここ１週間にわたる通常の日常活動における個体の疲労レベルの評価に使用される。ＦＡＣＩＴ－疲労質問票ならびにスコアリングおよび解釈材料（Ｓｃｏｒｉｎｇ ＆ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）は、ＦＡＣＩＴ．ｏｒｇ（Ｅｌｍｈｕｒｓｔ、Ｉｌｌ．、ＵＳＡ）から入手できる。ＦＡＣＩＴ－疲労質問票は、数々の汎用のおよび標的化された尺度を提供する。ＦＡＣＩＴ疲労尺度は、高い内部妥当性、高い検査－再検査信頼性、種々の慢性健康状態を有する患者の変化に対する信頼性および感度、使用の容易さ、ならびに種々の設定での使用を含む多くの利益を有する（Ｋ．Ｆ． Ｔｅｎｎａｎｔ， Ｔｒｙ Ｔｈｉｓ： ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ ｉｎ Ｎｕｒｓｉｎｇ Ｃａｒｅ ｔｏ Ｏｌｄｅｒ Ａｄｕｌｔｓ， Ｉｓｓｕｅ ３０， ２０１２；Ｃｈａｎｄｒａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ． ２００７； ６６： ９３６－９３９）。

【0284】

ＦＡＣＩＴ－疲労は、がん患者における疲労を測定するために本来開発された、１３項目の質問票であり、現在、疲労を測定するためにシェーグレン病患者において使用されている。患者は、０～４（０＝全く当てはまらない、１＝ごく僅かに当てはまる、２＝若干当てはまる、３＝大いに当てはまる、４＝非常に当てはまる）にスコアリングされた１３個の質問に答えるように求められる。疲労尺度は、１３項目を有し、５２が最高の可能なスコアである。疲労尺度におけるより高いスコアは、より低いレベルの疲労に対応し、より良いクオリティ・オブ・ライフを指し示す。

【0285】

ＦＡＣＩＴ－疲労スコアを計算するために、否定的な言い回しの質問での応答スコアは、反転され、次いで、１３項目の応答を足す。応答を有する１１項目は、それらのスコアを反転させ（応答が抜けていない場合、項目スコア＝４－応答）、２項目（項目７～８）は、それらの応答を変化させない。より高いスコアがより少ない疲労に対応するように、全項目を足す。個々の質問がスキップされた場合、尺度における他の答えの平均を使用してスコアを案分する。
ＦＡＣＩＴ－疲労＝１３＊［和（反転された項目）＋和（項目７～８）］／答えた項目の数

【0286】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物で処置した患者における疲労の改善を評価することにより実証される。処置後に、疲労は一般に、処置前の患者における疲労のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＦＡＣＩＴ疲労尺度によって測定された際に患者において低下する。

【0287】

疲労のプロファイル
疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）を開発して、原発性シェーグレン症候群に関連する疲労の特徴付けにおいて有効な評価ツールを確立した。したがって、疲労、不快感および疼痛の患者の愁訴を表すように使用される原発性シェーグレン症候群の患者という言葉は、ＰｒｏＦ質問票において使用された。ＰｒｏＦは、原発性シェーグレン症候群の患者における疲労および全身の不快感の重症度を測定するための信頼できるかつ妥当な計測手段であることが示された。

【0288】

ＰｒｏＦは、１つは身体的疲労に関し、もう１つは精神的疲労に関する、２つのドメインに分けられる１６項目の自己記入質問票である。身体的疲労ドメインは、４つのファセット：（ａ）休息が必要（４項目）、（ｂ）始動（ｓｔａｒｔｉｎｇ）不良（３項目）、（ｃ）スタミナが低い（３項目）および（ｄ）筋肉が弱い（２項目）に分けられる１２項目を含む。精神的疲労ドメインは、２つのファセット：（ａ）集中力が乏しい（２項目）および（ｂ）記憶力が乏しい（２項目）に分けられる４項目を含む。尺度０～７（０＝「全く問題ない」および７＝「考え得る限りの最悪」）における項目毎の患者のスコアは、ここ２週間にわたる最悪の状態で患者がどのように感じたかに基づく。ファセット毎のスコアは、各ファセット内の項目スコアを合計し、和を各ファセットにおける項目の数で割ることにより得ることができる。ドメイン（例えば、身体的、精神的）毎のスコアは、各ドメイン内のファセットスコアを合計し、和を各ドメイン内のファセットの数で割ることにより得ることができる。より高いスコアは、より大きい疲労を指し示す（Ｂｏｗｍａｎ
ｅｔ ａｌ．， Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００４； ４３： ７５８－７６４；Ｓｔｒｏｍｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． ２００５；３４：４５５－４５９；Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ． ２００８ Ｄｅｃ． １５； ５９（１２）：１７８０－１７８７）。

【0289】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物で処置した患者における疲労の改善を評価することにより実証される。処置後に、疲労は一般に、処置前の患者における疲労のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＰｒｏＦによって測定された際に患者において低下する。

【0290】

シェーグレン症候群関連の（Ａｓｓｏｃｉａｔｅ）疲労の低下の評価
一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含むＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質で処置した患者における疲労の低下を評価することにより実証される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者は、処置前の患者における疲労のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、疲労の低下を実証するであろう。一部の実施形態では、疲労は、シェーグレン症候群関連の疲労である。

【0291】

一部の実施形態では、患者の状態は、処置前の患者における疲労のレベルと比較して、または同様に罹患した無処置もしくは対照患者における疲労のレベルと比べて、１種または複数種の患者報告指標（例えば、ＥＳＳＰＲＩ、ＰｒｏＦ、ＦＡＣＩＴ）によって患者における疲労を測定することにより評価される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の実効性は、対照製剤で処置した患者と比較した場合に、本明細書で開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者におけるＥＵＬＡＲ ＳＳ患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）、疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）および／または慢性疾患治療の機能評価（ＦＡＣＩＴ）疲労尺度を評価することにより実証される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者は、処置前の患者のＥＳＳＰＲＩ指標、ＰｒｏＦおよび／もしくはＦＡＣＩＴ疲労尺度と比較した場合に、または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＥＳＳＰＲＩ指標、ＰｒｏＦおよび／またはＦＡＣＩＴ疲労尺度の改善を実証するであろう。

【0292】

例えば、処置を必要とするヒト対象を選択または同定する（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ＳＬＥを満たす患者、またはＡｍｅｒｉｃａｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａを満たす患者）。対象は、例えば、疲労などのＳＬＥまたはシェーグレン症候群の原因または症状を低減する必要があり得る。対象の同定は、臨床的状況で行うこともでき、他の場所で、例えば、対象の自宅において、対象自身が自己検査キットを使用することによって行うこともできる。

【0293】

ベースライン（１日目）において、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合物の適切な第１の用量が、対象に投与される。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、本明細書に記載されている通りに製剤化される。患者の状態は、例えば、ＥＳＳＰＲＩ指標、ＰｒｏＦおよび／またはＦＡＣＩＴ疲労尺度によって、ベースライン（１日目）においておよび第１の用量からある期間の後に、例えば、８日目、１５日目、２９日目、４３日目、５７日目、７１日目、８５日目、９９日目にまたは試験の終わりに評価される。他の関連性のある判断基準も測定することができる。用量の数および強度を対象の必要性に応じて調整する。処置後に、以下の転帰の１つまたは複数の改善を認めることができる：（１）処置前のＥＳＳＰＲＩ指数と比べた、または同様に罹患しているが無処置の／対照の対象と比べたＥＳＳＰＲＩ指数の改善、（２）処置前のＰＲＯＦと比べた、または同様に罹患しているが無処置の／対照の対象と比べたＰＲＯＦの改善、（３）処置前のＦＡＣＩＴ疲労尺度と比べた、または同様に罹患しているが無処置の／対照の対象と比べたＦＡＣＩＴ疲労尺度の改善を認めることができる。一部の実施形態では、ＥＳＳＰＲＩ指標の改善は、臨床的に有意義な改善である。ＥＳＳＰＲＩ指標の臨床的に有意義な改善は、ＥＳＳＰＲＩスコアの少なくとも１ポイントの減少である。

【0294】

疲労アッセイの神経心理学的解析
当技術分野で公知の様々な神経心理学的アッセイを使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の有効性を評価することができる。

【0295】

数字符号置換検査
数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）は、多くのドメインによって影響された認知機能不全を測定するための妥当なかつ高感度な検査を提供する。ＤＳＳＴは、認知機能不全の存在と、シェーグレン症候群患者を含むある範囲の臨床集団にわたる認知機能の変化の両方に対して高感度である。この神経心理学的検査は、実行機能関連の入力において読み取る、広く使用され、高度に検証され、極めて高感度な検査である。

【0296】

ＤＳＳＴは、１枚の紙に記された、時間制限のある筆記による認知検査である。検査は、患者に、紙面の最初に書かれた鍵に従って、符号を数字にマッチさせることを要求する。患者は、数字の列の下にあるスペースに符号を複写し、規定時間（例えば、９０または１２０秒間）内の正しい符号の数が計算される。検査は、課題実行の正確性および速度に関するデータを提供する。ＤＳＳＴにおける患者実行は、日常的な課題を達成する能力、およびある範囲の精神医学状態における機能的な能力障害からの回復等、現実世界での機能的転帰と相関する。ＤＳＳＴ検査を使用して、患者における注意力および／または集中力を評価することができる。

【0297】

ＤＳＳＴは、ある範囲の認知操作を測定する多因子（ｐｏｌｙｆａｃｔｏｒｉａｌ）検査であり、経時的な認知機能をモニタリングするための実用的かつ有効な方法を提供する。ＤＳＳＴにおいて良い成績を挙げるには、患者は、スキャニング、および書くまたは描く能力（すなわち、基本的な精神的器用さ）を含む、インタクトな運動速度（ｍｏｔｏｒ
ｓｐｅｅｄ）、注意力および視知覚機能を有する必要がある。ＤＳＳＴは、認知機能障害を検出する高い感度を提供し、簡潔さ、信頼性、変化に対する感度、ならびに検査性能における言語、文化および教育での影響が最小であることを含む多くの利益を有する（Ｊａｅｇｅｒ， Ｊ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｓｙｃｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ３８（５）， ５１３－５１８， Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１８）。

【0298】

さらに、ＤＳＳＴは、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）関係性を定義するために臨床開発において使用される。この検査は、ＣＮＳ試験におけるＰＤバイオマーカーとしても使用され、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）の２用量間を識別することができる。

【0299】

一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質またはその医薬組成物で処置した患者における認知機能の改善を評価することにより実証される。処置後に、認知機能は一般に、処置前の患者における認知機能のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＤＳＳＴ検査によって測定された際に患者において改善される。

【0300】

シェーグレン症候群関連の認知機能の改善の評価
一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の実効性は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質で処置した患者における認知機能の改善を評価することにより実証される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者は、処置前の患者における認知機能のレベルと比較した場合、および／または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、認知機能の改善を実証する。一部の実施形態では、患者は、シェーグレン症候群を有する。

【0301】

一部の実施形態では、患者の状態は、処置前の患者における認知機能のレベルと比較して、または同様に罹患した無処置もしくは対照患者における認知機能のレベルと比べて、１種または複数種の神経心理学的アッセイ（例えば、ＤＳＳＴ）によって患者における認知機能を測定することにより評価される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の実効性は、対照製剤で処置した患者と比較した場合の、本明細書で開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者におけるＤＳＳＴ検査の結果を評価することにより実証される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質で処置した患者は、処置前の患者のＤＳＳＴ検査スコアと比較した場合に、または対照製剤で処置した患者と比較した場合に、ＤＳＳＴ検査の改善を実証するであろう。

【0302】

例えば、処置を必要とするヒト対象は、選択または同定される（例えば、米国・ヨーロッパ改訂シェーグレン分類基準（Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）を満たす患者）。対象は、例えば、認知機能不全等、シェーグレン症候群の原因または症状の低下を必要とし得る。対象の同定は、臨床設定で、または他の場所、例えば、対象の家で、対象自身による自己検査キットの使用により起こり得る。

【0303】

ベースライン（１日目）において、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合物の適切な第１の用量は、対象に投与される。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、本明細書に記載されている通りに製剤化される。患者の状態は、例えば、ＤＳＳＴによって、ベースライン（１日目）においておよび第１の用量からある期間の後に、例えば、８日目、１５日目、２９日目、４３日目、５７日目、７１日目、８５日目、９９日目にまたは試験の終わりに評価される。他の関連する判断基準を測定することもできる。用量の回数および濃さは、対象の必要に従って調整される。処置後に、処置前のＤＳＳＴ検査スコアと比べた、または同様に罹患したが無処置の／対照の対象と比べたＤＳＳＴ検査スコアの改善が得られる。

【0304】

投薬レジメン
本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質および／または本開示の医薬組成物は、当業者にとって公知の従来方法によって、ヒト対象のための薬学的に許容される剤形へと製剤化される。一部の実施形態では、本開示の医薬組成物における活性成分（すなわち、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合）の実際の投薬量レベルは、患者にとって許容し難いほど毒性となることなく、特定のヒト患者のための所望の治療応答、組成物および／または投与機序の達成に有効な活性成分の量を得ることができるように変動される。

【0305】

選択された投薬量レベルは、特定のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の活性、投与経路、投与時間、投与されている特定のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の排泄または代謝の速度、吸収の速度および程度、投与される特定のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用される処置、他の薬物、化合物および／または材料の持続時間、処置されている患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康および前病歴、ならびに医術分野で周知の同様の因子を含む種々の因子に依存するであろう。

【0306】

一般に、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物の適切な用量は、ヒト対象における治療効果を生じるのに有効な最低用量である活性成分の量である。そのような有効用量は、一般に、上述の因子に依存するであろう。一般に、ヒト患者のための本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物の静脈内、経口および皮下用量は、指し示されている効果のために使用される場合、１週間当たり体重１キログラム当たり約０．５ｍｇ～約５０ｍｇに及ぶ。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物は、注射により（例えば、静脈内注射により、例えば、注入により）、それを必要とするヒト患者に、１週間当たり体重１キログラム当たり約０．５ｍｇ～約５０ｍｇの用量で投与される。

【0307】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、一般に、１週間当たり約１～２０ｍｇ／ｋｇ、１週間当たり２～１０ｍｇ／ｋｇ、１週間当たり５～１５ｍｇ／ｋｇ、１週間当たり５～１０ｍｇ／ｋｇ、または１週間当たり２～５ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、１週間当たり１０ｍｇ／ｋｇを超えるまたは１５ｍｇ／ｋｇを超えるまたは２０ｍｇ／ｋｇを超える用量が必要となり得る。一部の実施形態では、１週間当たり２０ｍｇ／ｋｇ未満のまたは１５ｍｇ／ｋｇ未満のまたは１０ｍｇ／ｋｇ未満の用量が必要となり得る。一部の実施形態では、例えば、ヒト患者へのｉ．ｖ．投与等の非経口用量は、１週間当たり約５～１０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇの毎週、隔週、毎月または半月毎（ｓｅｍｉ－ｍｏｎｔｈｌｙ）（例えば、２ヶ月毎、３ヶ月毎）の用量で、ヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、１ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、２ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、３ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、４ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、５ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、６ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、７ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、８ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、９ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、１０ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、１２ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、毎週、隔週、毎月または半月毎に、１５ｍｇ／ｋｇの用量でヒト患者に投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0308】

所望であれば、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物の有効な毎週、隔週、毎月または半月毎の用量は、必要に応じて単位剤形において、１日を通して適切な間隔で別々に投与される（例えば、静脈内注射または注入として）、２、３、４、５、６またはそれよりも多い副用量（ｓｕｂ－ｄｏｓｅ）としてヒト患者に投与される。一部の実施形態では、投薬は、１日当たり１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果（例えば、自己抗体および／またはＲＮＡ含有免疫複合体と複合体形成した循環するＲＮＡの消化に十分な）を得るために、適宜、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日毎に、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間毎に、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月毎に１回または複数回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、１週間毎に１回の、１回の投与（例えば、静脈内注射または注入）である。一部の実施形態では、投薬は、２週間毎に１回の、１回または複数回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、２週間毎に１回の、１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、１ヶ月毎に、１回または複数回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、１ヶ月毎に、１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、半月毎（例えば、２ヶ月毎、３ヶ月毎）に、１回または複数回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、２ヶ月毎または３ヶ月毎に、１回の投与である。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0309】

一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、２週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与（例えば、静脈内注射または注入）、次いでその後に、２週間毎に１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、３週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与、次いでその後に、２週間毎に１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、４週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与、次いでその後に、２週間毎に１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、２週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与、次いでその後に、１ヶ月毎に１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、３週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与、次いでその後に、１ヶ月毎に１回の投与である。一部の実施形態では、投薬は、治療効果を達成または維持するために、４週間にわたる１週間毎に１回の、１回の投与、次いでその後に、１ヶ月毎に１回の投与である。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。本明細書で使用される場合、初期毎週投与と、続く隔週、毎月または半月毎の投薬は、「負荷用量」と称される。

【0310】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約４ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約６ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約７ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約８ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約９ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。本明細書で使用される場合、毎週は、当技術分野で受け入れられる１週間毎の意義を有するものと理解される。

【0311】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約４ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約６ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約７ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約８ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約９ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１２ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。本明細書で使用される場合、隔週は、当技術分野で受け入れられる２週間毎の意義を有するものと理解される。

【0312】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約４ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約６ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約７ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約８ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約９ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１２ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で３週間毎に投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。本明細書で使用される場合、３週間毎は、当技術分野で受け入れられる３週間毎に１回の意義を有するものと理解される。

【0313】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約４ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約６ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約７ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約８ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約９ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１２ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。本明細書で使用される場合、毎月は、当技術分野で受け入れられる１ヶ月毎の意義を有するものと理解される。

【0314】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約２ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0315】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約５ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0316】

一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される（例えば、静脈内注射または注入によって）。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、２週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、３週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、本開示のＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質または組成物は、４週間にわたり約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週、次いで、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎月投与される。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0317】

当技術分野で理解される通り、毎週、隔週、３週間毎または毎月の投与は、上に記す通り、１回もしくは複数回の投与または副用量においてなすことができる。

【0318】

一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約２ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約３ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約４ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約５ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約６ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約７ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約８ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約９ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、１週間当たりヒト対象当たり約１０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0319】

一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約２ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約３ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約４ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約５ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約６ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約７ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約８ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約９ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、２週間毎にヒト対象当たり約１０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、前述の用量は、静脈内注射のために製剤化される。

【0320】

炎症関連分子の方法および使用
本明細書に記載されている炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子、炎症関連タンパク質、炎症促進性分子）の診断および治療方法および使用が本明細書に提供される。対象から得られた試料における１種または複数種の炎症関連分子の存在を検出する、またはその量もしくは発現レベル（例えば、量または発現レベル）を決定することにより、本明細書に記載されているＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の対象を同定する方法であって、１種または複数種の炎症関連分子の存在またはその量もしくは発現レベルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置に応答する可能性があることを指し示す方法が本明細書にさらに提供される。

【0321】

炎症関連分子
一部の態様では、本開示は、対象由来の試料（例えば、シェーグレン症候群の対象由来の試料）における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の存在を検出する、またはその量もしくは発現レベルを決定するための方法を提供する。一部の態様では、本開示は、対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、対象から得られた試料において決定された炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較することにより、ＲＮａｓｅヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、炎症関連遺伝子発現プロファイルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置の候補であることを指し示す方法を提供する。

【0322】

本明細書で使用される場合、用語「炎症関連分子」は、炎症または炎症応答において機能する分子を指す。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症促進性分子である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、抗炎症性分子である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症メディエーターである。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連タンパク質である。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連サイトカインである。一部の実施形態では、炎症関連分子は、炎症関連遺伝子である。

【0323】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２、および／またはＣＣＲ２．

【0324】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４、および／またはＳＴＡＴ５Ｂである。

【0325】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２、および／またはＣＣＲ２である。

【0326】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５である。

【0327】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＮＦ受容体である。

【0328】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－６受容体である。

【0329】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－１アクセサリータンパク質である。

【0330】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１である。

【0331】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－１７受容体Ａである。

【0332】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＬＴＢＲ４である。

【0333】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ５Ｂである。

【0334】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）である。

【0335】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤ１６３である。

【0336】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＩＰＫ２である。

【0337】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＣＲ２である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「インターロイキン５（ＩＬ－５）」をコードする遺伝子であるＩＬ５である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ」をコードする遺伝子であるＴＮＦＲＳＦ１Ａである。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「インターロイキン６受容体 （ＩＬ－６受容体）」をコードする遺伝子であるＩＬ６Ｒである。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質」をコードする遺伝子であるＩＬ１ＲＡＰである。

【0338】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカカインリガンド１（ＣＸＣＬ１）」をコードする遺伝子であるＣＸＣＬ１である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「インターロイキン１７受容体Ａ」をコードする遺伝子であるＩＬ１７ＲＡである。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「ロイコトリエンＢ４受容体」をコードする遺伝子であるＬＴＢ４Ｒである。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「シグナル伝達兼転写活性化因子５Ｂ （転写因子ＳＴＡＴ ５Ｂ）」をコードする遺伝子であるＳＴＡＴ５Ｂである。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカカインリガンド１０（ＩＰ－１０）」をコードする遺伝子であるＣＸＣＬ１０である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「ＣＤ１６３」をコードする遺伝子であるＣＤ１６３である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「受容体相互作用セリン／スレオニンキナーゼ２」をコードする遺伝子であるＲＩＰＫ２である。
一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、タンパク質「Ｃ－Ｃモチーフケモカカイン受容体２（ＣＣＲ２）」をコードする遺伝子であるＣＣＲ２である。

【0339】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２、および／またはＣＣＲ２である。

【0340】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒ、および／またはＳＴＡＴ５Ｂである。

【0341】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２、および／またはＣＣＲ２である。

【0342】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＰＯＬ３、ＨＧＦ、ＴＢＣ１Ｄ２３、ＳＥＴＤ６、ＣＣＲ２、ＣＤ４７、ＣＤ１６３、ＣＤ３６、ＣＹＢＢ、ＰＬＡ２Ｇ７、ＩＤＯ１、ＲＩＰＫ２、ＡＣＥＲ３、ＣＸＣＬ１０、ＡＩＭＰ１、ＢＩＲＣ３、ＳＮＸ４、ＰＴＰＮ２、ＶＡＭＰ７、ＡＰＰＬ１、ＣＳＦ１、ＧＢＡ、ＧＰＳ２、ＡＫＴ１、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＰＧＬＹＲＰ１、ＮＵＰＲ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＭＡＰＫ１３、ＯＲＭ２、ＣＣＮ３、Ｆ１１Ｒ、ＮＦＡＭ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＭＭＰ２５、ＡＤＡＭ８、ＮＤＳＴ１、ＦＯＳ、ＮＬＲＰ１２、ＰＩＫ３ＣＤ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１Ｒ２、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＴＲＥＭ１、ＳＩＲＰＡ、ＩＬ６Ｒ、ＳＬＣ１１Ａ１、ＬＴＢ４Ｒ、ＢＣＬ６、ＭＭＰ９、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＮＯＤ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ５、ＣＸＣＬ１、ＴＰＳＴ１、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＴＹＲＯＢＰ、および／またはＣＤＫ１９である。

【0343】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＰＯＬ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＧＦである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＢＣ１Ｄ２３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＥＴＤ６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＣＲ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤ４７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤ１６３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤ３６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＹＢＢである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＬＡ２Ｇ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＤＯ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＩＰＫ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＥＲ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＩＭＰ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＢＩＲＣ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＮＸ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＴＰＮ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＶＡＭＰ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＰＰＬ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＳＦ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＢＡである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＰＳ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＫＴ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰＫＡＰＫ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＧＬＹＲＰ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＵＰＲ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＮＦＲＳＦ１Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰＫ１３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＯＲＭ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＣＮ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、Ｆ１１Ｒである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＦＡＭ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ１７ＲＡである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＭＰ２５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＤＡＭ８である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＤＳＴ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＯＳである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＬＲＰ１２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＩＫ３ＣＤである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ１ＲＡＰである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ１Ｒ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ５Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＥＭ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＩＲＰＡである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ６Ｒである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＬＣ１１Ａ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＬＴＢ４Ｒである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＢＣＬ６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＭＰ９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＰＲ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＰＲ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＢＸＡ２Ｒである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＯＤ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ１ＲＮである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＰＳＴ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＣ３Ｈ１２Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＹＲＯＢＰである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤＫ１９である。

【0344】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３、および／またはＭＡＰ３Ｋ８．

【0345】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２である。

【0346】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１である。

【0347】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ２である。

【0348】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０６およびＴＲＩＭ３７である。

【0349】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０６である。

【0350】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＩＭ３７である。

【0351】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＫＲ３およびＭＡＰ３Ｋ８である。

【0352】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＫＲ３である。

【0353】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ３Ｋ８である。

【0354】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、サイトカインシグナル伝達経路の鍵となるメディエーターであるタンパク質「シグナル伝達因子兼転写活性化因子１」をコードする遺伝子である、「ＳＴＡＴ１」である。

【0355】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、サイトカインシグナル伝達経路の鍵となるメディエーターであるタンパク質「シグナル伝達因子兼転写活性化因子２」をコードする遺伝子である、「ＳＴＡＴ２」である。

【0356】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ウイルス感染に対する宿主応答において機能するタンパク質「ジンクフィンガータンパク質６０６」をコードする遺伝子である、「ＺＮＦ６０６」である。

【0357】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、クラスＩ ＭＨＣ媒介性抗原提示経路において機能するタンパク質「三要素モチーフ含有タンパク質３７」をコードする遺伝子である、「ＴＲＩＭ３７」である。

【0358】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＦκＢ、ＴＮＦ、ＩＬ－２およびＴＬＲ４シグナル伝達の誘導因子であるタンパク質「マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼキナーゼ８」をコードする遺伝子である、「ＭＡＰ３Ｋ８」である。

【0359】

一部の実施形態では、「ＡＣＫＲ３」は、ＣＸＣＬ１１およびＣＸＣＬ１２のための受容体として機能するタンパク質「非定型ケモカイン受容体３」をコードする遺伝子を指す。

【0360】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＲＥＬＤ１、ＰＡＲＶＧ、ＡＣＡＰ１、ＲＸＲＢ、ＣＯＸ１９、ＣＥＲＳ４、Ｂ４ＧＡＬＴ７、ＺＮＦ３２９、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＮＥＬＦＢ、ＥＭＤ、ＵＢＴＦ、ＰＹＣＲ２、ＲＮＦ２１６、ＳＥＣ２４Ｃ、ＮＵＭＡ１、ＣＡＲＤ１１、ＥＭＧ１、ＺＮＦ５７６、ＴＲＡＦ２、ＭＡＰ２Ｋ７、ＣＤＫ４、ＫＨＤＣ４、ＧＩＰＣ１、ＩＬＦ３、ＧＢＰ４、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＤＴＸ３Ｌ、ＥＰＳＴＩ１、ＰＡＲＰ９、ＴＲＩＭ２２、ＳＰ１４０、ＴＲＩＭ５、ＰＳＭＢ９、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＯＴ９、ＸＲＣＣ２、ＫＬＦ５、ＮＢＰＦ１０、ＰＲＵＮＥ２、ＬＡＣＴＢ、ＦＡＭ２４１Ａ、ＣＣＤＣ１６９、ＫＬＨＬ３３、ＫＤＭ１Ｂ、ＦＡＮＣＬ、ＭＲ１、および／またはＴＲＩＭ１３である。

【0361】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＬＣＢ１、ＥＦＨＣ２、ＲＩＮＧ１、ＲＥＶ１、ＨＩＢＡＤＨ、Ｃ２ＯＲＦ６８、ＰＰＰ２Ｒ２Ａ、ＨＡＤＨＡ、ＥＮＹ２、ＺＮＦ６７１、ＥＲＰ２９、ＴＯＢ１、ＮＵＤＴ１６Ｌ１、ＺＮＦ３２９、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＹＩＰＦ２、ＳＮＵＰＮ、ＺＮＦ６０６、ＥＬＡＣ１、ＥＣＩ１、ＨＡＸ１、ＰＦＤＮ６、ＣＯＱ８Ｂ、ＧＯＬＧＡ８Ｎ、ＴＯＭＭ７、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ、ＬＯＸＨＤ１、ＦＡＭ１２２Ｃ、ＩＧＨＤ、ＳＹＳ１、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ１、ＩＬ４Ｒ、ＧＲＢ１０、ＲＡＢ２０、ＭＯＢ３Ｃ、ＫＬＨＬ３３、ＵＳＦ３、ＰＦＦＩＢＰ１、ＣＤ４０、ＰＬＥＫＨＡ２、ＡＢＬ２、ＰＩ３、ＴＩＭＥＬＥＳＳ、ＣＬＨＣ１、ＫＭＴ５Ａ、ＢＣＬ７Ａ、ＨＡＣＥ１、ＴＲＩＭ３７、および／またはＣ５ＯＲＦ２２である。

【0362】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＨＤＣ４、ＰＭＳ２、ＧＩＭＡＰ１－ＧＩＭＡＰ５、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＥＭＬ２、ＺＮＦ７９０、ＶＳＩＧ１、ＡＸＩＮ２、ＤＨＲＳ３、ＴＥＳＰＡ１、ＲＧＰＤ５、ＳＰＯＵＴ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＮＵＤＴ１６Ｌ１、ＡＣＫＲ３、ＴＦＰＴ、ＳＰＡＧ７、ＴＯＢ１、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＺＮＦ３２９、ＵＢＴＦ、ＨＩＣ２、ＴＲＭＴ６１Ａ、ＺＮＦ３２４Ｂ、ＰＲＫＣＥ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＢＣＬ７Ａ、ＺＮＦ６０８、ＴＩＭＥＬＥＳＳ、ＦＣＨＳＤ２、ＳＭＧ７、ＡＴＸＮ１、ＣＮＮＭ２、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＤＫＬ５、ＴＳＫＵ、ＧＧＡ３、ＴＥＳＫ２、ＢＴＮ２Ａ２、ＵＢＸＮ７、ＣＨＰ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＰＯＵ５Ｆ２、ＮＦ１、ＸＲＣＣ２、ＮＭＥ９、ＫＬＨＬ３３、ＭＲ１、および／またはＵＳＦ３である。

【0363】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＲＥＬＤ１、ＰＡＲＶＧ、ＡＣＡＰ１、ＲＸＲＢ、ＣＯＸ１９、ＣＥＲＳ４、Ｂ４ＧＡＬＴ７、ＺＮＦ３２９、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＮＥＬＦＢ、ＥＭＤ、ＵＢＴＦ、ＰＹＣＲ２、ＲＮＦ２１６、ＳＥＣ２４Ｃ、ＮＵＭＡ１、ＣＡＲＤ１１、ＥＭＧ１、ＺＮＦ５７６、ＴＲＡＦ２、ＭＡＰ２Ｋ７、ＣＤＫ４、ＫＨＤＣ４、ＧＩＰＣ１、ＩＬＦ３、ＧＢＰ４、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＤＴＸ３Ｌ、ＥＰＳＴＩ１、ＰＡＲＰ９、ＴＲＩＭ２２、ＳＰ１４０、ＴＲＩＭ５、ＰＳＭＢ９、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＯＴ９、ＸＲＣＣ２、ＫＬＦ５、ＮＢＰＦ１０、ＰＲＵＮＥ２、ＬＡＣＴＢ、ＦＡＭ２４１Ａ、ＣＣＤＣ１６９、ＫＬＨＬ３３、ＫＤＭ１Ｂ、ＦＡＮＣＬ、ＭＲ１、ＴＲＩＭ１３、ＰＬＣＢ１、ＥＦＨＣ２、ＲＩＮＧ１、ＲＥＶ１、ＨＩＢＡＤＨ、Ｃ２ＯＲＦ６８、ＰＰＰ２Ｒ２Ａ、ＨＡＤＨＡ、ＥＮＹ２、ＺＮＦ６７１、ＥＲＰ２９、ＴＯＢ１、ＮＵＤＴ１６Ｌ１、ＺＮＦ３２９、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＹＩＰＦ２、ＳＮＵＰＮ、ＺＮＦ６０６、ＥＬＡＣ１、ＥＣＩ１、ＨＡＸ１、ＰＦＤＮ６、ＣＯＱ８Ｂ、ＧＯＬＧＡ８Ｎ、ＴＯＭＭ７、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ、ＬＯＸＨＤ１、ＦＡＭ１２２Ｃ、ＩＧＨＤ、ＳＹＳ１、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ１、ＩＬ４Ｒ、ＧＲＢ１０、ＲＡＢ２０、ＭＯＢ３Ｃ、ＫＬＨＬ３３、ＵＳＦ３、ＰＦＦＩＢＰ１、ＣＤ４０、ＰＬＥＫＨＡ２、ＡＢＬ２、ＰＩ３、ＴＩＭＥＬＥＳＳ、ＣＬＨＣ１、ＫＭＴ５Ａ、ＢＣＬ７Ａ、ＨＡＣＥ１、ＴＲＩＭ３７、Ｃ５ＯＲＦ２２、ＫＨＤＣ４、ＰＭＳ２、ＧＩＭＡＰ１－ＧＩＭＡＰ５、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＥＭＬ２、ＺＮＦ７９０、ＶＳＩＧ１、ＡＸＩＮ２、ＤＨＲＳ３、ＥＳＰＡ１、ＲＧＰＤ５、ＳＰＯＵＴ１、ＴＲＡＦ３ＩＰ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＮＵＤＴ１６Ｌ１、ＡＣＫＲ３、ＴＦＰＴ、ＳＰＡＧ７、ＴＯＢ１、ＺＦＡＮＤ２Ｂ、ＺＮＦ３２９、ＵＢＴＦ、ＨＩＣ２、ＴＲＭＴ６１Ａ、ＺＮＦ３２４Ｂ、ＰＲＫＣＥ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＢＣＬ７Ａ、ＺＮＦ６０８、ＴＩＭＥＬＥＳＳ、ＦＣＨＳＤ２、ＳＭＧ７、ＡＴＸＮ１、ＣＮＮＭ２、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＤＫＬ５、ＴＳＫＵ、ＧＧＡ３、ＴＥＳＫ２、ＢＴＮ２Ａ２、ＵＢＸＮ７、ＣＨＰ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＰＯＵ５Ｆ２、ＮＦ１、ＸＲＣＣ２、ＮＭＥ９、ＫＬＨＬ３３、ＭＲ１、および／またはＵＳＦ３である。

【0364】

一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＲＥＬＤ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＡＲＶＧである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＡＰ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＸＲＢである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＯＸ１９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＥＲＳ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、Ｂ４ＧＡＬＴ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ３２９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＦＡＮＤ２Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＥＬＦＢである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＭＤである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＵＢＴＦである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＹＣＲ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＮＦ２１６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＥＣ２４Ｃである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＵＭＡ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＡＲＤ１１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＭＧ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ５７６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＡＦ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ２Ｋ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤＫ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＨＤＣ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＩＰＣ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬＦ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＢＰ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＣＥＲ１Ｇである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＤＴＸ３Ｌである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＰＳＴＩ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＡＲＰ９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＩＭ２２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＰ１４０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＩＭ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＳＭＢ９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ３Ｋ８である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＯＴ９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＸＲＣＣ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＬＦ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＢＰＦ１０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＲＵＮＥ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＬＡＣＴＢである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＡＭ２４１Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＣＤＣ１６９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＬＨＬ３３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＤＭ１Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＡＮＣＬである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＲ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＩＭ１３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＬＣＢ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＦＨＣ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＩＮＧ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＥＶ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＩＢＡＤＨである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、Ｃ２ＯＲＦ６８である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＰＰ２Ｒ２Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＡＤＨＡである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＮＹ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６７１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＲＰ２９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＯＢ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＵＤＴ１６Ｌ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ３２９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＦＡＮＤ２Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＹＩＰＦ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＮＵＰＮである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＬＡＣ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＣＩ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＡＸ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＦＤＮ６である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＯＱ８Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＯＬＧＡ８Ｎである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＯＭＭ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＬＯＸＨＤ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＡＭ１２２Ｃである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＧＨＤである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＹＳ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＯＲ２Ａ４２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＯＲ２Ａ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ４Ｒである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＲＢ１０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＡＢ２０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＯＢ３Ｃである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＬＨＬ３３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＵＳＦ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＦＦＩＢＰ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤ４０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＬＥＫＨＡ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＢＬ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＩ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＩＭＥＬＥＳＳである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＬＨＣ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＭＴ５Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＢＣＬ７Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＡＣＥ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＩＭ３７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、Ｃ５ＯＲＦ２２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＨＤＣ４である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＭＳ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＩＭＡＰ１－ＧＩＭＡＰ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＬＣ２５Ａ２５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＭＬ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ７９０である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＶＳＩＧ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＸＩＮ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＤＨＲＳ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＥＳＰＡ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＧＰＤ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＰＯＵＴ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＡＦ３ＩＰ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＲＰＬ１３Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＵＤＴ１６Ｌ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＣＫＲ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＦＰＴである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＰＡＧ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＯＢ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＦＡＮＤ２Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ３２９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＵＢＴＦである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＨＩＣ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＲＭＴ６１Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ３２４Ｂである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＲＫＣＥである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＬＥＫＨＡ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＢＣＬ７Ａである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０８である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＩＭＥＬＥＳＳである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＦＣＨＳＤ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＭＧ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＡＴＸＮ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＮＮＭ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＩＰＡ１Ｌ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＤＫＬ５である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＳＫＵである。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＧＧＡ３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＴＥＳＫ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＢＴＮ２Ａ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＵＢＸＮ７である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＣＨＰ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ３Ｋ８である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＰＯＵ５Ｆ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＦ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＸＲＣＣ２である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＮＭＥ９である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＫＬＨＬ３３である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＭＲ１である。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＵＳＦ３である。

【0365】

したがって、一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少をもたらす方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４および／またはＳＴＡＴ５Ｂである。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒおよび／またはＳＴＡＴ５Ｂである。

【0366】

したがって、一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の減少および疲労の改善をもたらす方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４および／またはＳＴＡＴ５Ｂである。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒおよび／またはＳＴＡＴ５Ｂである。

【0367】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加をもたらす方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２である。

【0368】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の増加および疲労の改善をもたらす方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２である。

【0369】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加をもたらす方法を提供する。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）である。

【0370】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者におけるシェーグレン病を処置するための方法であって、有効量のＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を患者に投与するステップを含み、処置が、１種または複数種のサイトカインの増加および疲労の改善をもたらす方法を提供する。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）である。

【0371】

一部の態様では、本開示は、対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、シェーグレン病の対象由来の炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較することにより、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、炎症関連遺伝子発現プロファイルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補であることを指し示す方法を提供する。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７および／またはＺＮＦ６０６を含む。

【0372】

したがって、一部の態様では、本開示は、対象から得られた試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の存在を検出することにより、本明細書に記載されているＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるシェーグレン（Ｓｊｏｇｅｎ）症候群の対象を同定する方法であって、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の存在が、対象が、この薬剤による処置に応答する可能性があることを指し示す方法を提供する。一部の態様では、試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の量または発現レベルが決定され、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の参照量または参照発現レベルと比較される。一部の態様では、試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の量または発現レベルが、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の参照量または参照発現レベルと比べて増加する場合、患者は、本明細書で開示されているＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置に応答する可能性がある。一部の態様では、試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の量または発現レベルが、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の参照量または参照発現レベルと比べて減少する場合、患者は、本明細書で開示されているＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置に応答する可能性がある。

【0373】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されているＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性がある患者を同定する方法であって、患者由来の試料が、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）のＤＮＡまたはＲＮＡにおける相補的標的配列とハイブリダイズする核酸プローブと接触され、これにより、核酸プローブおよび炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）のＤＮＡまたはＲＮＡの間でハイブリダイゼーション複合体を形成する、方法を提供する。炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の標的ＤＮＡまたはＲＮＡ配列へのプローブのハイブリダイゼーションを検出するために、プローブは、分子マーカー；例えば、放射性マーカー、蛍光マーカー、酵素マーカーまたはジゴキシゲニンで標識される。一部の態様では、プローブ－標的複合体の存在は、患者が、処置に応答する可能性があることを指し示す。一部の態様では、試料におけるプローブ－標的複合体の量は、対照と比較される。一部の態様では、試料におけるプローブ－標的複合体の量が、対照と比べて増加する場合、患者は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性がある。一部の態様では、試料におけるプローブ－標的複合体の量が、対照と比べて減少する場合、患者は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性がある。

【0374】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されているＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン症候群患者を同定する方法であって、患者由来の試料が、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片と接触され、これにより、炎症関連分子と複合体を形成し、抗体－炎症関連分子複合体の存在が検出され、複合体の存在が、患者が、処置に応答する可能性があることを指し示す方法を提供する。一部の態様では、試料における抗体－炎症関連分子複合体の量は、対照と比較される。一部の態様では、試料における抗体－炎症関連分子複合体の量が、対照と比べて増加する場合、患者は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性がある。一部の態様では、試料における抗体－炎症関連分子複合体の量が、対照と比べて減少する場合、患者は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性がある。

【0375】

診断方法
本開示は、１種または複数種の試料における本明細書に記載されている１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）（例えば、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３および／またはＭＡＰ３Ｋ８）を検出するおよび／または定量化するステップに関する方法であって、個々のまたは組み合わせた１種または複数種の炎症関連分子の検出および／または定量化は、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）が、シェーグレン病の患者に治療効果または利益を提供する見込みを指し示すであろう、方法を提供する。

【0376】

対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、シェーグレン病の対象由来の炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較することにより、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、炎症関連遺伝子発現プロファイルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置の候補であることを指し示す方法が本明細書に提供される。一部の態様では、遺伝子発現プロファイルにおける炎症関連遺伝子は、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７および／またはＺＮＦ６０６を含む。

【0377】

対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、シェーグレン病の対象由来の炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較することにより、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、シェーグレン病の対象由来の試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量が、適切な対照の対象から得られた試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量に等しいまたはこれを上回る場合、炎症関連遺伝子発現プロファイルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置の候補であることを指し示す方法が、本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、遺伝子発現プロファイルにおける炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０６および／またはＡＣＫＲ３を含む。

【0378】

対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、シェーグレン病の対象由来の炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較することにより、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、シェーグレン病の対象由来の試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量が、適切な対照の対象から得られた試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量未満である場合、炎症関連遺伝子発現プロファイルが、対象が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補であることを指し示す方法が、本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、遺伝子発現プロファイルにおける炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７および／またはＭＡＰ３Ｋ８を含む。

【0379】

対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルを決定し、シェーグレン病の対象由来の炎症関連遺伝子発現プロファイルを、適切な対照の対象から得られた試料における炎症関連遺伝子発現プロファイルと比較し、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補として対象を同定することにより、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置の候補としてシェーグレン病の対象を同定するための方法であって、プロファイルにおける炎症関連遺伝子が、ＭＡＰ３Ｋ８、ＡＣＫＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７および／またはＺＮＦ６０６を含み、ａ）試料におけるＺＮＦ６０６の発現レベルが、対照と比べて増加する；ｂ）試料におけるＡＣＫＲ３の発現レベルが、対照と比べて増加する；ｃ）試料におけるＳＴＡＴ１の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｄ）試料におけるＳＴＡＴ２の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｅ）試料におけるＴＲＩＭ３７の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｆ）試料におけるＭＡＰ３Ｋ８の発現レベルが、対照と比べて減少する；またはｇ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のいずれかの組合せである、方法が、本明細書にさらに提供される。

【0380】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の参照量と比べて、患者から得られた試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）（例えば、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３および／またはＭＡＰ３Ｋ８）の量を決定するステップを含み、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の参照量と比べた試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の量が、患者が処置に応答する見込みを指し示す方法が、本明細書にさらに提供される。

【0381】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、患者から得られた試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量を決定するステップと、試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量を、１種または複数種の炎症関連遺伝子の参照量と比較するステップとを含み、試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の参照量に等しいまたはこれを上回る場合、患者が、処置に応答する可能性がある、方法が、本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＺＮＦ６０６および／またはＡＣＫＲ３である。

【0382】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、患者から得られた試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量を決定するステップと、試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量を、１種または複数種の炎症関連遺伝子の参照量と比較するステップとを含み、試料における１種または複数種の炎症関連遺伝子の量が、１種または複数種の炎症関連遺伝子の参照量未満である場合、患者が、処置に応答する可能性がある、方法が、本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、炎症関連遺伝子は、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＲＩＭ３７および／またはＭＡＰ３Ｋ８である。

【0383】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、患者由来の試料における炎症関連遺伝子のパネルの発現レベルを決定するステップであって、パネルが、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３および／またはＭＡＰ３Ｋ８を含む、ステップと、試料におけるパネルの発現レベルを、対照におけるパネルの発現レベルと比較するステップであって、対照における炎症関連遺伝子の量と比べた試料における炎症関連遺伝子の量が、患者が処置に応答する見込みを指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。

【0384】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、患者由来の試料における炎症関連遺伝子のパネルの発現レベルを決定するステップであって、パネルが、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３および／またはＭＡＰ３Ｋ８を含む、ステップと、試料におけるパネルの発現レベルを、対照におけるパネルの発現レベルと比較するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置に応答する可能性があると患者を同定するステップであって、ａ）試料におけるＺＮＦ６０６の発現レベルが、対照と比べて増加する；ｂ）試料におけるＡＣＫＲ３の発現レベルが、対照と比べて増加する；ｃ）試料におけるＳＴＡＴ１の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｄ）試料におけるＳＴＡＴ２の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｅ）試料におけるＴＲＩＭ３７の発現レベルが、対照と比べて減少する；ｆ）試料におけるＭＡＰ３Ｋ８の発現レベルが、対照と比べて減少する；またはｇ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のいずれかの組合せである、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。

【0385】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、試料を、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）のＤＮＡまたはＲＮＡにおける相補的標的配列にハイブリダイズする核酸プローブと接触させ、これにより、核酸プローブおよび炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）のＤＮＡまたはＲＮＡの間でハイブリダイゼーション複合体を形成するステップと、参照試料における複合体の量と比べた試料における複合体の量を決定するステップであって、参照試料における複合体の量と比べた試料における複合体の量が、患者が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に対して感受性である見込みを指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。

【0386】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に応答する可能性があるとシェーグレン病の患者を同定する方法であって、試料を、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）に特異的に結合する少なくとも１種の診断抗体またはその抗原結合性断片と接触させ、これにより、診断抗体－炎症関連分子複合体を形成するステップと、参照試料における複合体の量と比べた試料における複合体の量を決定するステップであって、参照試料における複合体の量と比べた試料における複合体の量が、患者が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）による処置に対して感受性である見込みを指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。

【0387】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性の変化が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連分子は、炎症関連遺伝子である。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２である。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２である。

【0388】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性の減少が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連分子は、炎症関連遺伝子である。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４および／またはＳＴＡＴ５Ｂである。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒおよび／またはＳＴＡＴ５Ｂである。

【0389】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルおよび／または活性の増加が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。一部の態様では、１種または複数種の炎症関連分子は、炎症関連遺伝子である。一部の態様では、炎症関連遺伝子は、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２である。

【0390】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性の増加が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）である。

【0391】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性の減少が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。

【0392】

ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）で処置したシェーグレン病の患者の応答をモニタリングするための方法であって、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置前に得られた患者由来の第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、ＲＮＡヌクレアーゼ剤による処置後に得られた患者由来の第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を決定するステップと、第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性を、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比較するステップであって、第１の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性と比べた第２の試料における１種または複数種のサイトカインの発現レベルおよび／または活性の変化が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤で処置した患者の応答を指し示す、ステップとを含む方法が、本明細書にさらに提供される。一部の態様では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）である。

【0393】

炎症関連分子の決定
試料における本明細書に記載されている１種または複数種の炎症関連分子（例えば、炎症促進性遺伝子または炎症促進性タンパク質等、炎症関連遺伝子、炎症関連タンパク質、炎症促進性分子）の存在またはその量もしくは発現レベルは、免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）、免疫蛍光法（ＩＦ）、ウエスタンブロット解析、免疫沈降、分子結合アッセイ、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素結合免疫濾過（ｉｍｍｕｎｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）アッセイ（ＥＬＩＦＡ）、フローサイトメトリー、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、定量的な血液に基づくアッセイ（例えば、血清ＥＬＩＳＡ）、生化学的酵素活性アッセイ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、サザン解析、ノーザン解析、全ゲノム配列決定、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡその他等の他の増幅型検出方法、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、マイクロアレイ解析、遺伝子発現プロファイリング、および／または遺伝子発現の連続的解析（ｓｅｒｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）（ＳＡＧＥ）、ならびにタンパク質、遺伝子および／または組織アレイ解析によって行うことができる多種多様なアッセイのうちいずれか１種を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知であり当業者によって理解されている、多数の方法論および技法によって検出または決定することができる。遺伝子および遺伝子産物の状態を評価するための典型的なプロトコールは、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １ ９９５， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙのユニット２（ノーザンブロッティング）、４（サザンブロッティング）、１５（イムノブロッティング）および１８（ＰＣＲ解析）に見出される。Ｒｕｌｅｓ Ｂａｓｅｄ ＭｅｄｉｃｉｎｅまたはＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）から入手できるイムノアッセイ等のマルチプレックス化されたイムノアッセイを使用することもできる。本開示の炎症関連分子に結合する診断抗体は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ａｂｃａｍその他等の種々の商業的供給源から入手できる。

【0394】

核酸炎症関連分子技法
一部の実施形態では、本明細書に記載されている炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルは、核酸発現レベルとなることができる。一部の実施形態では、核酸発現レベルは、ｑＰＣＲ、ｒｔＰＣＲ、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、マルチプレックスｑＰＣＲまたはＲＴ－ｑＰＣＲ、マイクロアレイ解析、遺伝子発現プロファイリング、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技法またはｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（例えば、ＦＩＳＨ）を使用して決定される。一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルは、シェーグレン病の患者由来の細胞において決定される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）の発現レベルは、シェーグレン病の患者由来の血液細胞において決定される。

【0395】

細胞におけるｍＲＮＡの評価のための方法は、当技術分野で公知であり、例えば、相補的ＤＮＡプローブを使用したハイブリダイゼーションアッセイ（１種または複数種の遺伝子に特異的な標識されたリボプローブを使用したｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロットおよび関連技法等）および様々な核酸増幅アッセイ（遺伝子のうち１種または複数種に特異的な相補的プライマーを使用したＲＴ－ＰＣＲ、および例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡその他等の他の増幅型検出方法等）を含む。加えて、そのような方法は、生体試料における標的ｍＲＮＡのレベルを決定させることができる１または複数のステップを含むことができる（例えば、アクチンファミリーメンバー等の「ハウスキーピング」遺伝子の比較対照ｍＲＮＡ配列のレベルを同時に試験することにより）。

【0396】

本開示の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子、炎症促進性遺伝子）の核酸配列は、当技術分野で公知である。一部の実施形態では、本開示の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）は、ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２を含む。一部の実施形態では、本開示の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）は、ＩＬ５、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、ＣＸＣＬ１、ＩＬ１７ＲＡ、ＬＴＢ４Ｒ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２および／またはＣＣＲ２を含む。一部の実施形態では、本開示の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子）は、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＺＮＦ６０６、ＴＲＩＭ３７、ＡＣＫＲ３および／またはＭＡＰ３Ｋ８を含む。

【0397】

一部の実施形態では、増幅された標的ｃＤＮＡの配列を決定することができる。方法は、マイクロアレイ技術によって組織または細胞試料における標的ｍＲＮＡ等のｍＲＮＡを試験または検出するプロトコールを含む。核酸マイクロアレイを使用して、被験および対照組織試料由来の被験および対照ｍＲＮＡ試料を逆転写および標識して、ｃＤＮＡプローブを生成する。次にプローブを、固体支持体に固定化された核酸のアレイにハイブリダイズさせる。アレイは、アレイの各メンバーの配列および位置が分かるように構成されている。例えば、その発現が、ＲＮＡヌクレアーゼ剤（例えば、ＲＳＬＶ－１３２）を含む処置の臨床利益増加または低下と相関する遺伝子の選択は、固体支持体上にアレイ化することができる。特定のアレイメンバーと標識プローブとのハイブリダイゼーションは、プローブが派生した試料が、当該遺伝子を発現することを指し示す。

【0398】

そのメンバーが、処置を必要とするおよび／もしくは必要としない、処置から利益を得るおよび／もしくは得ない、または処置に応答するおよび／もしくは応答しないと予測される患者集団を同定することができるという点において、本明細書に記載されている処置から利益を得る可能性がある患者を同定するための方法（例えば、治療的処置または介入の選択）、または処置の開発（例えば、臨床試験における患者の登録）を対象にする、いずれかの方法の一部としての本明細書に記載されている診断方法のいずれかの算入は、診断方法を含まない方法を上回る利点を提供する。

【0399】

したがって、一部の実施形態では、本開示における使用に適した炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、診断用炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））である。一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、モニタリング用炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））である。一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、予測用炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））である。

【0400】

炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、その検出が特定の生理的状況（例えば、疾患状況）を指し示す物質または生物学的事象となることができる。例えば、患者の血清における炎症関連遺伝子の存在は、疾患（例えば、シェーグレン症候群）を指し示すことができる。処置前に患者において測定された炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））を使用して、臨床試験における算入に適した患者を同定することができる。処置後の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））変化は、候補薬物に関する安全性問題を予測もしくは同定することができる、または処置の最終的な利益を予測すると予想される薬理活性をまたは明らかにすることができる。炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、薬物性能に関する定量化可能な予測を提供することにより、薬物開発および評価における不確実性を低下させることができ、用量選択に寄与することができる。単一の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））が、評価に要求される関連する情報の全てを提供することができるとは限らない場合、複合炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））は、単一の解釈的読み出し情報に達する記述アルゴリズムにおける、いくつかの個々の炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））を含む。

【0401】

代理のエンドポイントは、臨床エンドポイントの代用となることが意図され、疫学的、治療的、病態生理学的または他の科学的証拠に基づき、臨床利益を予測すると予想される炎症関連分子（例えば、炎症関連遺伝子または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性遺伝子））である。

【0402】

タンパク質炎症関連分子技法
一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質）の量は、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））のタンパク質発現レベルを決定することにより測定される。本開示によって提供される方法において使用することができる、当技術分野で公知でありかつ本明細書に記載されているタンパク質発現レベルを測定または決定する多数の技法が存在する。例えば、一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））のタンパク質発現レベルは、フローサイトメトリー（例えば、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ（商標）））、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）、免疫蛍光法、ラジオイムノアッセイ、ドットブロッティング、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析およびＨＰＬＣからなる群から選択される方法を使用して決定される。

【0403】

一部の実施形態では、試料は、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））の結合に許容的な条件下で、本明細書に記載されている炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））に特異的に結合する抗体と接触させられ、抗体および炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））によって形成された複合体の存在が検出される。一部の実施形態では、試料は、本明細書に記載されている炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））の組合せに特異的に結合する抗体の組合せと接触させられる。一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））のタンパク質発現レベルは、シェーグレン病の患者由来の細胞において決定される。一部の実施形態では、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））のタンパク質発現レベルは、シェーグレン病の患者由来の血液細胞において決定される。

【0404】

一部の実施形態では、試料における炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））の量は、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））に結合する診断抗体を使用して決定される。一部の実施形態では、抗炎症関連分子診断抗体は、炎症関連分子（例えば、炎症関連タンパク質または炎症促進性分子（例えば、炎症促進性タンパク質））に特異的に結合する。一部の実施形態では、診断抗体は、非ヒト抗体である。一部の実施形態では、診断抗体は、ラット、マウスまたはウサギ抗体である。一部の実施形態では、診断抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、診断抗体は、直接的に標識される。他の実施形態では、診断抗体は、間接的に標識される。

【0405】

キット
本開示は、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含む本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質と、使用説明書とを含むキットを提供する。キットは、適切な容器内に、本明細書で開示されているＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質、１種または複数種の対照、ならびに様々な緩衝液、試薬、酵素、および当技術分野で周知の他の標準成分を含むことができる。一部の実施形態では、キットは、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む注射用溶液を含む。一部の実施形態では、注射用溶液は、静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態では、キットは、使用説明書を含む。

【0406】

容器は、その中にＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を置くことができ、一部の実例では、適切に分注することができる、少なくとも１個のバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の容器手段を含むことができる。追加的な構成成分が提供される場合、キットは、その中にこの構成成分を置くことができる、追加的な容器を含有することができる。キットは、商業販売のための厳重に封じ込めたＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を含有するための手段および他のいずれかの試薬容器を含むこともできる。そのような容器は、その中に所望のバイアルが保持される、注射またはブロー成形プラスチック容器を含むことができる。容器および／またはキットは、使用説明書および／または警告を示す表示を含むことができる。

【実施例0407】

以下は、本発明を実行するための特定の実施形態の例である。実施例は、単に例示的な目的で提供されており、いかなる形でも本発明の範囲を限定するものではない。使用される数字（例えば、量、温度等）に関しては正確さを確実にするための試みが行われているが、いくらかの実験的誤差および偏差は当然許容されるべきである。

【0408】

本発明の実施には、別段の指定のない限り、当技術分野の範囲内に入るタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技法および薬理学の従来の方法を使用する。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ （Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９３）；Ａ．Ｌ．
Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｉｎｃ．， ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ
ａｌ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （Ｓ． Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ． Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９０）；Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３^ｒｄ Ｅｄ． （Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ） Ｖｏｌｓ Ａ
ａｎｄ Ｂ （１９９２）を参照されたい。

【0409】

（実施例１）
ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質コード発現ベクターの生成
本開示のＲＮａｓｅ含有ヌクレアーゼ融合タンパク質の様々な実施形態は、配列表（表１）に示されている。例示的なＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であるＲＳＬＶ－１３２を構築し、これは、図１に示す構成を有する。具体的には、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列から始めて、哺乳動物細胞における最適な発現を可能にするためのＧｅｎｅｓｃｒｉｐｔ（Ｇｅｎｅｓｃｒｉｐｔ、Ｐｉｓｃａｔａｗｙ、Ｎ．Ｊ．）によるコドン最適化を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを直接的に合成した。最適化のプロセスは、例えば、可能であれば非常に高い（＞８０％）または非常に低い（＜３０％）ＧＣ含量の領域の回避、ならびに高等真核生物における内部ＴＡＴＡ－ボックス、カイ－部位およびリボソーム進入部位、ＡＴ－リッチまたはＧＣ－リッチ配列ストレッチ、ＲＮＡ不安定性モチーフ、反復配列およびＲＮＡ二次構造ならびに潜在的スプライスドナーおよびアクセプター部位等のシス作用性配列モチーフの回避が関与した。ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡは、ｐｃＤＮＡ３．１＋哺乳動物発現ベクターにクローニングされる。ＲＳＬＶ－１３２は、次の構成を有するＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質であり、生成された（図１）。

【0410】

ＲＳＬＶ－１３２は、配列番号５０として示されるアミノ酸配列をそれぞれ有する２個のポリペプチドを含むホモ二量体である。ホモ二量体の各ポリペプチドは、構成ＲＮａｓｅ－Ｆｃを有し、野生型ヒトＲＮａｓｅ１ドメイン（配列番号２）は、リンカーなしで、ＳＣＣヒンジならびにＣＨ２変異Ｐ２３８ＳおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（配列番号２２）のＮ末端に作動可能に連結される。

【0411】

（実施例２）
ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の一過性発現およびこれを発現する安定した哺乳動物細胞系
一過性発現のため、製造業者推奨のトランスフェクションプロトコールを使用して、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質挿入物を含有する実施例１の発現ベクターを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えば、ＣＨＯ－Ｓ細胞（例えば、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ－Ｓ細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へと一過性にトランスフェクトした。２ｍＭ Ｌ－グルタミンおよびペニシリン－ストレプトマイシンを含有するＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ発現培地においてＣＨＯ－Ｓ細胞を維持した。

【0412】

当技術分野で公知の常套的な方法を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を発現する安定したＣＨＯ－Ｓ細胞系を生成した。例えば、ＣＨＯ－Ｓ細胞に、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の核酸配列と共に、例えば、フローサイトメトリーまたは磁気ビーズ分離（例えば、ＭＡＣＳｅｌｅｃｔ（商標）システム）を使用して選択されるマーカー（例えば、ＧＦＰ、磁気ビーズによって選択可能な表面マーカー）をコードする核酸配列を含むウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス）を感染させることができる。あるいは、ＣＨＯ－Ｓ細胞に、電気穿孔（Ｌｏｎｚａ）等の当技術分野で公知のいずれかのトランスフェクション方法または上に言及されているＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質および選択可能なマーカーの核酸配列を含むベクターをトランスフェクトし、続いて、例えば、フローサイトメトリーを使用して選択を行うことができる。選択可能なマーカーは、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするベクターと同じベクターにまたは別々のベクターに取り込むことができる。

【0413】

プロテインＡセファロースビーズを充填したカラムを使用して分子を捕捉し、続いてカラム洗浄緩衝液（例えば、９０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％アジ化ナトリウム）において洗浄し、適切な溶出緩衝液（例えば、０．１Ｍクエン酸緩衝液、ｐＨ３．０）を使用してカラムから分子を放出させることにより、培養上清からＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質を精製した。溶出された材料は、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ濃縮器を使用したＰＢＳにおける連続スピンによる緩衝液交換と、それに続く０．２μｍフィルターデバイスを通した濾過によってさらに濃縮した。標準分光光度的方法（例えば、ブラッドフォード、ＢＣＡ、ローリー、ビウレットアッセイ）を使用して、ＲＮａｓｅ－Ｆｃ融合タンパク質の濃度を決定した。

【0414】

（実施例３）
試験設計および患者特徴
２８名の原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）患者におけるＲＳＬＶ－１３２の８回の静脈内注入の影響を評価するための多施設二重盲検プラセボ対照試験を行った。試験参加者は、１８～８５歳であり、２００２ Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｇｒｏｕｐ（ＡＥＧＣ）に従って原発性シェーグレン症候群と診断された。具体的には、血液細胞における抗Ｒｏ ５２／６０自己抗体の上昇したレベルおよび上昇したインターフェロン刺激遺伝子発現のパターン（例えば、スクリーニングにおける陽性インターフェロンシグネチャー）を有したシェーグレン患者のサブセットにおいて、試験を実行した。試験対象は、ベースライン来診前に３０日間、併用薬物療法を安定に維持することを要求された。ベースラインの３０日以内のヒドロキシクロロキン；ベースラインの９０日以内のベリムマブ、アバタセプトもしくはＴＮＦ阻害剤；またはベースラインの１８０日以内のシクロホスファミドもしくはリツキシマブの使用が禁止された。患者は、過去の頭頸部放射線照射、リンパ腫、移植片対宿主病またはＩｇＧ４関連疾患がなかったことをさらに要求された。試験エントリー前（すなわち、ベースライン来診前）６０日以内に、潜在的な対象をスクリーニングして、試験に参加するためのその適格性を評価した。３０名の対象をスクリーニングし、試験へとランダム化した。２名の対象は、試験処置を受ける前に同意を撤回した。２８名の対象をこのランダム化二重盲検プラセボ対照第２相試験（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０３２４７６８６）に登録した。試験の１日目にベースライン評価を行った。ベースライン評価後に、患者は、ＲＳＬＶ－１３２またはプラセボの１回目の注入を受けた。

【0415】

対象のそれぞれを３：１（活性：プラセボ）にランダム化し、試験のベースラインに、２週間にわたり毎週（３用量）、次いで次の１０週間にわたり２週間毎に１回（すなわち、静脈内注入は、１（ベースライン）、８、１５、２９、４３、５７、７１および８５日目に投与した）、１０ｍｇ／ｋｇのＲＳＬＶ－１３２またはプラセボの８回の注入を受けた。ＥＥＳＰＲＩ、ＦＡＣＩＴおよび疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）によって測定される患者報告成績を使用して、ベースラインおよび試験の９９日目を比較して、活性、対、対照群を評価した。１、２９、５７、８５および９９日目（または処置の終わり）に、当該日の用量を受ける前に、患者報告成績を測定した。９９日目に有効性エンドポイントを測定し、１４１、１７６および２１１日目に安全性経過観察を実行した。

【0416】

ＲＳＬＶ－１３２は、静脈内注入のための希釈のための緩衝液を含む５．３ｍＬの保存料不含滅菌溶液を含有する使い捨てバイアル内に９．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提示された。注入のためのプラセボとして０．９％塩化ナトリウム溶液を使用した。

【0417】

Ｄｅｃｌａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｌｓｉｎｋｉ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅの原理に従って試験を実行した。倫理委員会および施設内審査委員会の承認を得て、全患者が書面によるインフォームドコンセントを出した。

【0418】

（実施例４）
ベースラインにおける患者特徴の評価
処置群（すなわち、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者と比較してプラセボで処置した患者）の間の差を評価し、解析のためのベースラインレベルを確立するために、処置前に個体群統計および疾患特徴を得た。ベースラインにおける患者特徴の解析は、補体Ｃ３および補体Ｃ４レベル、ＩｇＧレベル（ｍｇ／ｄＬ）、ＥＳＲレベル、ＥＳＳＤＡＩスコア、ＥＳＳＰＲＩスコア、ＦＡＣＩＴスコアおよび疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）の解析を含んだ。
補体Ｃ３および補体Ｃ４（Ｃ３／Ｃ４）測定が使用されて、免疫系の活性化を評価する。血液におけるＣ３／Ｃ４の測定は、免疫活性のための読み出し情報として使用される。血液検査は、特異的補体タンパク質（Ｃ３またはＣ４）を測定し、１デシリットル当たりのミリグラム数として報告する。血液における低レベルのＣ３／Ｃ４は、疾患または自己免疫を指し示すことができる。

【0419】

免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、血清免疫グロブリンの約８０パーセントを占める。血液試料からのＩｇＧレベルの測定は、病状を指し示すことができる。血液におけるＩｇＧの量は典型的に、１デシリットル当たりのミリグラム数として報告される。

【0420】

赤血球沈降速度（ＥＳＲ）は、身体における炎症のスクリーニングとして使用される。典型的には、赤血球細胞は、一部の病状において、血漿フィブリノーゲン、免疫グロブリンおよび他の急性期反応タンパク質の増加が原因で、より急速に沈殿する。赤血球細胞の形状または数の変化も、ＥＳＲに影響を与え得る。抗凝固剤処置された全血を、細い垂直管内に立たせておくと、重力の影響下にある赤血球細胞は、血漿から沈殿する。赤血球細胞が沈殿する速度は、１時間後にカラム上部に存在する清澄な血漿のミリメートル数（ｍｍ／時間）として測定される。

【0421】

欧州リウマチ対策連盟（ＥＵＬＡＲ）シェーグレン症候群（ＳＳ）疾患活動性指標（ＥＳＳＤＡＩ）を全身活動性の均質評価として開発した（Ｓｅｒｏｒ ｅｔ ａｌ． ， Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ． ２０１０； ６９（６）：１１０３－１１０９）。ＥＳＳＤＡＩは、１２種のドメイン（すなわち、臓器系：皮膚、呼吸器、腎、関節、筋肉、末梢神経系、中枢神経系、血液学的、腺、体質的、リンパ節症（ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｉｃ）、生物学的）を含む。各ドメインは、３～４レベルの活動性に分けられる。各活動性レベルの定義は、当該ドメインにおいて考慮されるべきものの詳細な説明によって提供される。可能なスコアは、０～１２３の間に及び、患者の約８０パーセントが、スコア≦１３を有する。

【0422】

ベースライン個体群統計、疾患特徴および生化学的データは、処置群間で同様であった（表２）。具体的には、試験集団は、ＥＳＳＤＡＩスコアによって決定される軽度～中等度の疾患およびＥＳＳＰＲＩスコアによる高い疾患活動性を有していた。試験対象は、著明な疲労も報告した。プラセボ群におけるＥＳＳＤＡＩおよびＥＳＳＰＲＩスコアは、ＲＳＬＶ－１３２群におけるスコアよりもやや高かった。補体３、補体４、ＥＳＲおよびＩｇＧ測定は、健康な値に匹敵し、２群間で同様であった。表２。

【表2】

【0423】

（実施例５）
ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＥＳＳＰＲＩスコアの臨床的に有意義な改善およびＥＳＳＰＲＩ疲労の改善を経験した

【0424】

ｐＳＳは、唾液腺および涙腺のリンパ性浸潤と、その後の、ドライアイおよび口渇を引き起こす腺の炎症、損傷および機能喪失によって特徴付けされる自己免疫障害である。ｐＳＳの臨床特色は、２群に分離することができる：（１）機能障害を引き起こし大部分の患者が罹患し得る、乾燥、疼痛および疲労等の良性症状；ならびに（２）重篤であり患者の２０～４０％が罹患し得る、全身性顕在化（Ｓｅｒｏｒ ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２０１１； ７０：９６８－９７２）。

【0425】

ＥＵＬＡＲ ＳＳ患者報告指標（ＥＳＳＰＲＩ）は、原発性シェーグレン症候群における患者の症状を評価するために開発されており、ＦＤＡによって検証および認容された。ＥＳＳＰＲＩは、患者における乾燥、疼痛および疲労を評価し、各症状は、０～１０の数値的尺度で評価される。ＥＳＳＰＲＩスコアの少なくとも１ポイントの減少は、臨床的に有意義である。

【0426】

ＲＳＬＶ－１３２処置患者は、試験の経過にわたりＥＳＳＰＲＩスコアの１ポイントを超える減少を経験した（図２）。具体的には、ＲＳＬＶ－１３２を受けている患者のＥＳＳＰＲＩスコアは、ベースラインにおけるおよそ６から、９９日目におけるおよそ４．５へと減少し（図２）、患者のベースラインからの変化は、－１．２０であった（図３および表３）。このＥＳＳＰＲＩスコアの改善は、臨床的に有意義であった。対照的に、図３および表３に示す通り、プラセボで処置した患者は、－０．５４のベースラインからの変化を生じた。さらに、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、プラセボ群における０と比較して、ベースラインから試験の９９日目へと、およそ－１．４のＥＳＳＰＲＩ疲労の改善を経験した（図４）。ＥＳＳＰＲＩスコアの３種の構成成分を個々に評価した場合、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、プラセボで処置した対照患者と比較して、シェーグレンに関係する疲労の減少を経験した（図５Ａ～図５Ｃ）。対象レベルデータは、プラセボ群における対象の２５％およびＲＳＬＶ－１３２処置対象の５５％が、ＥＳＳＰＲＩの最小の臨床的に重要な改善（ＭＣＩＩ）を有した（≧１ポイント減少）ことを明らかにした（表３）。これらのデータは、ＲＳＬＶ－１３２処置がｐＳＳ患者における症状を改善すること、また、疲労の臨床的に有意義な低下が存在することの証拠を提供する。

【表3】

【0427】

（実施例６）
ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＦＡＣＩＴ疲労スコアの臨床的に有意義な改善を経験した
慢性疾患検査の機能評価（ＦＡＣＩＴ）疲労尺度は、慢性疾患における疲労の測定に使用されており、シェーグレン（Ｓｊｏｒｇｒｅｎ）症候群の患者において広く使用されている。ＦＡＣＩＴ疲労質問票は、４ポイントのリッカート尺度で測定される疲労に関する１３個の質問を含む。総スコアは、０～５２に及び、より高いスコアは、より少ない疲労を表す（Ｃｈａｎｄｒａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ２００７；
６６：９３６－９３９）。

【0428】

図６に描写されている通り、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＦＡＣＩＴ疲労スコアの臨床的に有意義な改善を経験した。特に、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者のＦＡＣＩＴスコアは、ベースラインおよび試験の５７日目の間でおよそ６ポイント増加した。対照的に、試験の５７日目に、プラセボで処置した患者のＦＡＣＩＴスコアは、およそ１ポイント増加した。試験の９９日目に、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者のＦＡＣＩＴスコアは、ベースラインからおよそ６ポイント増加した（平均５．９増加）。対照的に、試験の９９日目に、プラセボで処置した患者のＦＡＣＩＴスコアは、ベースラインからおよそ１ポイント増加した（平均増加１．１３）。対象レベルデータは、プラセボ対象の２５％およびＲＳＬＶ－１３２処置対象の４５％が、ＦＡＣＩＴスコアの最小の臨床的に重要な改善（ＭＣＩＩ）を有した（≧６ポイント増加）ことを明らかにした（表３）。これらのデータは、ＲＳＬＶ－１３２処置が、ｐＳＳ患者における疲労を改善することの証拠を提供する。

【0429】

（実施例７）
ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＰｒｏＦの改善を経験した
疲労のプロファイル（ＰｒｏＦ）は、慢性疾患に関連する疲労の測定に使用されており、シェーグレン症候群患者における疲労の評価に使用された。ＰｒｏＦは、２つのドメイン：（１）身体的疲労および（２）精神的疲労へと分けられる１６項目からなる。ＰｒｏＦは、０～７にスコアリングされ、高いスコアは、より大きい疲労を表す。スコアリングは、プロファイルとしてまたは計算された総スコアとして示すことができる（Ｓｔｒｏｍｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２００５； ３４：４５５－４５９）。

【0430】

ＲＳＬＶ－１３２処置患者は、試験の持続時間にわたりＰｒｏＦの改善を経験した。具体的には、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者のＰｒｏＦスコアは、ベースラインから試験の９９日目へと、１ポイントを超えて減少した（１．０４ポイントの平均低下）（図７）。対照的に、プラセボで処置した患者は、ＰｒｏＦの減少を経験せず、平均低下は０．０２ポイントであった（図７）。

【0431】

注目すべきことに、精神的スコアは、ベースラインから試験の９９日目へと、およそ１．５ポイント減少したため（精神的疲労構成成分の１．５３ポイントの平均減少）（図８）、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、試験の経過にわたりＰｒｏＦの精神的構成成分の臨床的に有意義な改善を経験した。対照的に、プラセボで処置した患者は、０．０６ポイントのＰｒｏＦスコアの平均減少を経験した（図８）。表３に示す通り、精神的疲労応答（≧１ポイント減少）は、９９日目にプラセボ患者の２５％およびＲＳＬＶ－１３２処置患者の５５％において観察された。これらのデータは、活性群（ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者）が、ＰｒｏＦの精神的構成成分の臨床的に有意義な改善（≧１ポイント減少）を経験したことの証拠を提供する。

【0432】

身体的スコアは、ベースラインから試験の経過にわたりおよそ０．８ポイント減少したため（図９）、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＰｒｏＦの身体的構成成分の改善も経験した。表３に示す通り、身体的疲労応答（≧１ポイント減少）は、９９日目にプラセボ患者の２５％およびＲＳＬＶ－１３２処置患者の５０％において観察された。プラセボで処置した患者は、ＰｒｏＦの精神的または身体的構成成分のいずれにおいても減少を経験しなかった。これらのデータは、ＲＳＬＶ－１３２処置が、ｐＳＳ患者における疲労を改善することの証拠を提供する。

【0433】

（実施例８）
ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ＤＳＳＴの統計的に有意な改善を経験した
数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）を使用して、シェーグレン症候群患者における認知機能（例えば、注意力および集中力）を測定した。ＤＳＳＴは、実行機能に関する読み出し情報としてＣＮＳ薬物が関与する臨床試験において広く使用されている、高度に検証された高感度計測手段である。ＤＳＳＴは、時間制限のある筆記による認知検査である。検査は、患者に、紙面の最初に書かれた鍵に従って、符号を数字にマッチさせることを要求する。患者は、数字の列の下にあるスペースに符号を複写し、規定時間内の正しい符号の数が計算される。

【0434】

１２名の患者のサブセットに、数字符号置換検査（ＤＳＳＴ）を実施した。ＤＳＳＴ神経心理学的検査の結果は、上述の疲労結果を支持する。患者に、ベースラインおよび経過観察（９９日目）においてＤＳＳＴを実施した。９０秒間で完了した数字にマッチした符号の総数を測定すると共に、秒単位で表す検査を完了するまでの時間を測定した。持ち時間で完了したマッチの数の増加は、改善を実証する。検査を完了するまでの時間の減少も、改善を実証する。注目すべきことに、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、プラセボで処置した患者の－２．８０の変化と比較して１６．４０の変化により、ベースラインおよび経過観察の間で検査を完了するまでの時間の統計的に有意な改善を実証した（図１０Ａ）。図１０Ｂに示す通り、ＲＳＬＶ－１３２患者は、ベースラインよりも１６．４０秒間速く（１６．４秒減）課題を完了した一方、プラセボ患者は、ベースラインにおける本来の時間よりも２．８０秒間遅かった（２．８０秒増）。ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者は、ベースラインおよび経過観察の間での９０秒間で完了したマッチの数の改善も実証した（図１０Ａ）。疲労の低下は、認知能力改善と対応するため、ＤＳＳＴ検査の改善は、シェーグレン症候群患者における疲労低下の知見を支持する。

【0435】

（実施例９）
ＲＳＬＶ－１３２に対する応答者は、鍵となる炎症性遺伝子を発現する
遺伝子発現解析を行って、ＲＳＬＶ－１３２処置したシェーグレン症候群患者における炎症低下の生化学的証拠をアッセイし、これを次の通りに行った。

【0436】

Ｑ^２ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ｜ＥＡ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ、ＮＣ．において全血試料のＲＮＡ配列決定を行った。１および９９日目に、試験処置前に、ＰＡＸＧｅｎｅ（登録商標）収集管内に全血を収集した。ＲＮＡを抽出し、Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒのＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００を使用した分光光度法によって定量化し、Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００におけるＲＮＡ ６０００ Ｎａｎｏ Ａｓｓａｙを使用して統合性を評価した。ｒＲＮＡのＲｉｂｏＺｅｒｏ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｇｏｌｄ枯渇によるＩｌｌｕｍｉｎａ ＴｒｕＳｅｑ Ｓｔｒａｎｄｅｄ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡプロトコールを使用して、５０塩基対ストランドのペアードエンド配列決定ライブラリーを生成した。５千万個の読み取りデータの標的深度までＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑにおいてライブラリーを配列決定した。マッピング前に、アダプタートリミング、ホモポリマーフィルタリングおよび低品質読み取りデータフィルタリングを行った。次に、ＳＴＡＲ ｖ２．４を使用して、処理された読み取りデータをｈｇ１９ゲノムにマッピングした。ＲＳＥＭ １．２．１４を使用して、遺伝子および転写物定量化を行った。

【0437】

遺伝子発現解析の結果は、ＲＳＬＶ－１３２に対して臨床応答を経験するＲＳＬＶ－１３２処置患者における炎症の低下の生化学的証拠を提供した（図１１）。これらの患者は、鍵となる炎症経路の幅広い低下を実証し、これは、臨床応答を達成していないＲＳＬＶ－１３２処置患者においては観察されなかった。臨床応答は、３種の計測手段のうち２種において最小の臨床的に重要な改善（ＭＣＩＩ）を経験する患者として定義された；ＥＳＳＰＲＩ（≧１ポイント減少）、ＦＡＣＩＴ（≧６ポイント増加）またはＰｒｏＦ（≧１ポイント減少）。これらの判断基準を使用して、ＲＳＬＶ－１３２群における９／２０名（４５％）の患者およびプラセボ群における２／８名（２５％）の患者が、臨床応答を経験した。

【0438】

臨床応答を達成したまたは達成しなかったＲＳＬＶ－１３２対象に関して、９９日目における遺伝子発現の変化を１日目と比較した。非応答者群における７名の患者および応答群由来の７名の患者から全血を採取し、上述のプロトコールに従ってＲＮＡｓｅｑを使用して遺伝子発現解析のために処理した。図１１におけるヒートマップに示す遺伝子は、自然免疫系の制御に関与する鍵となる炎症性遺伝子であり、ＦＡＣＩＴ計測手段成績との高い程度の相関を有した（Ｒ^２＞０．６）。臨床応答を達成するＲＳＬＶ－１３２処置患者は、炎症関連遺伝子発現の広範囲にわたる減少を呈し、臨床応答を達成しなかった対象においては観察されなかった（図１１）。ＩＬ－５、ＴＮＦ受容体、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１アクセサリータンパク質、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１７受容体Ａ、ＬＴＢＲ４およびＳＴＡＴ５Ｂ等の鍵となる炎症性遺伝子の発現は、臨床応答を経験したＲＳＬＶ－１３２処置患者において低下するが、経験していない患者においては低下しないことが観察された。ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）、ＣＤ１６３、ＲＩＰＫ２およびＣＣＲ２等、他の遺伝子の増加も、臨床応答を達成する患者において観察された。プラセボ群における２名の対象は、臨床応答を経験したが、ＲＳＬＶ－１３２処置した応答者と同様の遺伝子発現プロファイルを有しなかった（データは示していない）。

【0439】

これらのデータは、臨床応答を達成するＲＳＬＶ－１３２処置対象が、炎症関連遺伝子発現の減少を呈することの証拠を提供する。

【0440】

（実施例１０）
ＲＳＬＶ－１３２に対する応答者は、別個の遺伝子発現プロファイルを示す
遺伝子発現プロファイルを試験して、ＲＳＬＶ－１３２による処置に応答する可能性がある患者の同定に有用な遺伝子発現「フィンガープリント」を同定した。臨床応答を有しなかったＲＳＬＶ－１３２処置対象のベースライン遺伝子発現プロファイルと比較して、その後９９日目に臨床応答（ＭＣＩＩ）を有したＲＳＬＶ－１３２処置対象のベースライン遺伝子発現プロファイル（試験薬投与前）の間で、遺伝子発現の別個のパターンが観察された。

【0441】

ベースラインにおいて（ＲＳＬＶ－１３２投与前）において患者から採取された血液試料、実施例９に記載されている通りにＲＮＡｓｅｑを行った。非応答者（臨床応答を示さなかった、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者）および応答者（臨床応答を有した、ＲＳＬＶ－１３２で処置した患者）のベースライン遺伝子発現プロファイルを解析した。応答者対非応答者ＲＳＬＶ－１３２サブグループの遺伝子発現プロファイルの試験は、応答者の間で興味深いプロファイルを明らかにした。図１２Ａ～図１２Ｃおよび表４に示す通り、１日目に、試験薬の投与前に、その後試験の９９日目に陽性臨床応答を有した患者において、別個の遺伝子発現プロファイルが観察された。

【0442】

ベースライン遺伝子発現が、ＦＡＣＩＴ（図１２Ａ）、ＰｒｏＦ（図１２Ｂ）またはＥＳＳＰＲＩ（図１２Ｃ）のいずれかと相関した場合、ＲＳＬＶ－１３２応答者の間で特異的なプロファイルが明らかになった。ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２の発現の減少は、ＦＡＣＩＴ検査と相関し（図１２Ａ）、ＺＮＦ６０６の発現の増加およびＴＲＩＭ３７の発現の減少は、ＰｒｏＦ検査と相関し（図１２Ｂ）、ＡＣＫＲ３の発現の増加およびＭＡＰＫ３Ｋ８の発現の減少は、ＥＳＳＰＲＩ検査と相関した（図１２Ｃ）。表４に示す通り、ＭＡＰ３Ｋ８およびＡＣＫＲ３は、ＥＳＳＰＲＩと高度に相関し（Ｒ^２＞０．９）、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２は、ＦＡＣＩＴと高度に相関し（Ｒ^２＞０．７６）、ＴＲＩＭ３７およびＺＮＦ６０６は、ＰｒｏＦと高度に相関した（Ｒ^２＞０．７１）。これらのデータは、一部の患者において、当該患者における炎症経路の慢性活性化を促進する、循環する特異的なＲＮＡ分子が存在することの証拠を提供する。

【表4】

【0443】

（実施例１１）
ＲＳＬＶ－１３２処置の安全性および忍容性
ＲＳＬＶ－１３２による処置の全体的な安全性および忍容性を評価するために、試験を通して有害事象を測定した。最終処置後２１１日間、有害事象をモニタリングした。処置中に発生した有害事象、重篤有害事象および薬物関連の有害事象の発生率は、ＲＳＬＶ－１３２およびプラセボ処置群の間で匹敵した（表５）。試験中に死亡は生じなかった。疲労は、試験における最も一般的な有害事象（ＡＥ）であった。疲労ＡＥの大部分は、試験初期に報告された。試験中にいずれの処置群においても、重篤な感染も注入反応も観察されなかった。有害事象ＡＥが原因で試験薬を中止した患者はいなかった。ＲＳＬＶ－１３２群における１名の患者は、重篤有害事象を経験し、試験薬の最後の用量の８８日後に耳下腺炎のため入院した。この有害事象は、ＲＳＬＶ－１３２処置と相関するように思われなかった。

【表5】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【配列表】

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【外国語明細書】