特開2024-107076微粒子水酸化マグネシウムを含む殺菌性組成物及び破骨細胞分化抑制用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024107076
(43)【公開日】2024-08-08
(54)【発明の名称】微粒子水酸化マグネシウムを含む殺菌性組成物及び破骨細胞分化抑制用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 33/08 20060101AFI20240801BHJP
A01N 59/06 20060101ALI20240801BHJP
A01P 3/00 20060101ALI20240801BHJP
C11D 3/48 20060101ALI20240801BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20240801BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240801BHJP
A61Q 11/00 20060101ALI20240801BHJP
A61K 8/19 20060101ALI20240801BHJP
A61Q 19/10 20060101ALI20240801BHJP
A61P 31/02 20060101ALI20240801BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240801BHJP
【ＦＩ】
A61K33/08
A01N59/06 Z
A01P3/00
C11D3/48
A61P1/02
A61P17/00 101
A61Q11/00
A61K8/19
A61Q19/10
A61P31/02
A61P31/04 ZNA
A61P31/04
A61K33/08 ZNA
【審査請求】有
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024090642
(22)【出願日】2024-06-04
(62)【分割の表示】P 2021094799の分割
【原出願日】2021-06-04
(71)【出願人】
【識別番号】722010585
【氏名又は名称】セトラスホールディングス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100139022
【弁理士】
【氏名又は名称】小野田 浩之
(74)【代理人】
【識別番号】100192463
【弁理士】
【氏名又は名称】奥野 剛規
(74)【代理人】
【識別番号】100169328
【弁理士】
【氏名又は名称】藤本 健治
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(72)【発明者】
【氏名】工藤 大輔
(72)【発明者】
【氏名】ダオ グエン ズィ フオン
(72)【発明者】
【氏名】岩本 禎士
(72)【発明者】
【氏名】有吉 渉
(72)【発明者】
【氏名】山▲崎▼ 亮太
(72)【発明者】
【氏名】吉岡 香絵
(57)【要約】
【課題】種々の利点を有する新たな組成物を提供する。
【解決手段】下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
【選択図】なし
【解決手段】下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する殺菌性組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
【請求項2】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、請求項１に記載の殺菌性組成物。
【請求項3】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、請求項１又は２に記載の殺菌性組成物。
【請求項4】
前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、請求項１～３の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
【請求項5】
水酸化マグネシウム濃度が０．０００３ｇ／Ｌ以上の水性懸濁液である、請求項１～４の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項6】
感染症細菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、請求項１～５の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項7】
歯周病原因菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、請求項６に記載の殺菌性組成物。
【請求項8】
生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び／又は抑制する作用を有する、請求項１～７の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項9】
破骨細胞の分化抑制作用を有する、請求項１～８の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項10】
下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
【請求項11】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、請求項１０に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
【請求項12】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、請求項１０又は１１に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
【請求項13】
前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、請求項１０～１２の何れか一項に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
【請求項14】
液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、請求項１～１３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項15】
生体及び／又は環境に使用するための、請求項１～１４の何れか一項に記載の組成物。
【請求項16】
医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、請求項１～１５の何れか一項に記載の組成物。
【請求項17】
洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、請求項１～１６の何れか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、微粒子水酸化マグネシウムを含む殺菌性組成物及び破骨細胞分化抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
細菌は様々な感染症を引き起こすことが知られているところ、その治療には主に抗生物質が使用されている。しかし、抗生物質に対する抵抗性や寛容を獲得した細菌が多数登場し、人類に多大な影響をもたらしている。事実、先進国の感染症の約６０％は、多剤寛容になった細菌によって引き起こされるといわれている。細菌の多剤寛容の多くは、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）と呼ばれる、集団の中でもごく一部（０．０１％未満）の確率で出現する表現型によって説明できる。抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）は自らの増殖を抑制している状態の細菌であり、細胞増殖を標的とする従来の抗生物質に高い抵抗性を示す。この表現型は殺菌が極めて困難であり、消毒処理などを行った場合でも、ｐｅｒｓｉｓｔｅｒが生存してしまうために、再増殖し、病気の再発や食品の汚染などが引き起こされる。遺伝子変異による一般的な薬剤耐性菌に対して有効な薬剤に関する種々の試みがなされているが（例えば特許文献１等）、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する有効性等の観点から改善の余地があった。
【0003】
細菌感染症としては種々知られているが、一例として口腔内細菌感染症について説明する。口腔内細菌感染症は主に歯周病と齲蝕に分類される。歯周病は歯周組織に発生する慢性炎症性疾患の総称であり、齲蝕はいわゆる虫歯を指す。いずれも世界的に高齢者人口の割合が増加するにつれ、罹患率は増加の一途をたどっている。歯周病は歯周組織を破壊するのみならず、細菌性心内膜炎、不顕性肺炎、糸球体腎炎、関節炎などといった全身の疾患の原因にもなり得ることが知られつつある。歯周病は種々の複合的要因によって発生するが、特定の口腔内細菌が形成するバイオフィルムの蓄積が、主な原因の一つであることが判明している。かかる歯周病の原因となる口腔内細菌（歯周病原因細菌）としては、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリスＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓなどが知られている。また、齲蝕の原因細菌としては、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ）等が知られている。
【0004】
斯かる背景の下、歯周病に対する様々な取り組みがなされている。例えば、特許文献２では水不溶性アルカリ化合物を主成分とする歯磨剤、特許文献３では塩化セチルピリジニウムとリポソームを成分とする口腔用組成物、特許文献４では溶融シリカと亜鉛塩を含む口腔ケア組成物がそれぞれ提供されている。また、特許文献５及び６では歯周病原因菌がバイオフィルムを形成し、口腔内へ蓄積することを防ぐ技術が記載されている。しかし、何れの技術も、主成分の安定性や人体への安全性について改良の余地があり、その有効性についても課題が残っている。
【0005】
また、歯周病における歯槽骨吸収は、破骨細胞の活性化によるものであることが知られている。骨細胞には骨を作る骨芽細胞と骨を壊す破骨細胞とが存在し、これらの細胞の働きが常に繰り返されることで骨が再構築されているが、これらの細胞のバランスが崩れ、骨形成量に比べて相対的に破骨細胞による骨吸収量が上回って骨量が減少すると、歯周病の原因の一つとなるのみならず、骨粗鬆症の発症にもつながることが知られている（非特許文献１）。
【0006】
斯かる背景の下、破骨細胞分化抑制作用を持つ成分が、骨粗鬆症や歯周病等の骨吸収性疾患に有効な薬剤として検討されている。骨吸収を抑制する薬剤としては、既に経口ビスホスホネート製剤やカルシトニン製剤が用いられているが（非特許文献２）、前者については顎骨の炎症を招くおそれがあり、後者についてはポリペプチド製剤であるためショック症状などの副作用のおそれがある。より安全性の高い食品素材等の中から、破骨細胞分化抑制作用を有し、骨粗鬆症の治療に有効な成分も報告されているが（特許文献７～９）、十分な薬効を発揮するには至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】国際公開第２０１９－１９４３０６号
【特許文献2】特開平０９－００２９２７号公報
【特許文献3】特開２０１８－１１５１７９号公報
【特許文献4】特表２０１２－５０９８９５号公報
【特許文献5】特開２００５－３２５０７１号公報
【特許文献6】特開２００５－２３２０５７号公報
【特許文献7】特開２００９－２１５２５０号公報
【特許文献8】特開２００９－１０７９９５号公報
【特許文献9】特開２０２０－１７２４７４号公報
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】禹済等、生物機能開発研究所紀要、２００４年、第４号、第１１～１４頁
【非特許文献2】佐伯等、日薬理誌、２０１４年、第１４４巻，第２７７～２８０頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明は、上記の課題に鑑みてなされたものであり、下記の少なくとも１つの利点を有する新たな殺菌性組成物を提供することを、その目的の一つとする。
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
【0010】
また、本発明は、生体において破骨細胞の分化抑制作用を示す組成物であって、安全性及び有効性に優れた新たな組成物を提供することを、その目的の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明者等は鋭意検討の結果、所定の粒度分布を有する水酸化マグネシウム微粒子を主成分として用いた組成物が、広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示すと共に、種々の利点を有する殺菌性組成物となりうることを見出し、本発明を完成させた。
【0012】
即ち、本発明の趣旨は、例えば以下に関する。
［項１］下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する殺菌性組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
［項２］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、項１に記載の殺菌性組成物。
［項３］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、項１又は２に記載の殺菌性組成物。
［項４］前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、項１～３の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
［項５］水酸化マグネシウム濃度が０．０００３ｇ／Ｌ以上の水性懸濁液である、項１～４の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項６］感染症細菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、項１～５の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項７］歯周病原因菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、項６に記載の殺菌性組成物。
［項８］生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び／又は抑制する作用を有する、項１～７の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項９］破骨細胞の分化抑制作用を有する、項１～８の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項１０］下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
［項１１］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、項１０に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
［項１２］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、項１０又は１１に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
［項１３］前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、項１０～１２の何れか一項に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
［項１４］液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、項１～１３の何れか一項に記載の組成物。
［項１５］生体及び／又は環境に使用するための、項１～１４の何れか一項に記載の組成物。
［項１６］医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、項１～１５の何れか一項に記載の組成物。
［項１７］洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、項１～１６の何れか一項に記載の組成物。
［項１］下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する殺菌性組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
［項２］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、項１に記載の殺菌性組成物。
［項３］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、項１又は２に記載の殺菌性組成物。
［項４］前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、項１～３の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
［項５］水酸化マグネシウム濃度が０．０００３ｇ／Ｌ以上の水性懸濁液である、項１～４の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項６］感染症細菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、項１～５の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項７］歯周病原因菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、項６に記載の殺菌性組成物。
［項８］生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び／又は抑制する作用を有する、項１～７の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項９］破骨細胞の分化抑制作用を有する、項１～８の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
［項１０］下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
［項１１］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、項１０に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
［項１２］前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、項１０又は１１に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
［項１３］前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、項１０～１２の何れか一項に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
［項１４］液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、項１～１３の何れか一項に記載の組成物。
［項１５］生体及び／又は環境に使用するための、項１～１４の何れか一項に記載の組成物。
［項１６］医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、項１～１５の何れか一項に記載の組成物。
［項１７］洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、項１～１６の何れか一項に記載の組成物。
【発明の効果】
【0013】
微粒子水酸化マグネシウムを主成分として含む本発明の殺菌性組成物は、下記の少なくとも１つの利点を有する。
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
・広範な種類の細菌に対して殺菌作用を示す。
・抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対して殺菌作用を示す。
・生体において抗炎症作用を示す。
・生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。
【0014】
また、微粒子水酸化マグネシウムを主成分として含む本発明の破骨細胞分化抑制用組成物は、安全性及び有効性に優れる利点を有する。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【0023】
【0024】
【発明を実施するための形態】
【0025】
以下、本発明を具体的な実施の形態に即して詳細に説明する。但し、本発明は以下の実施の形態に束縛されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において、任意の形態で実施することが可能である。また、以下に説明する本発明の種々の態様は何ら択一的又は排他的なものではなく、論理的に明らかに矛盾する場合を除き、任意の２つ以上の態様を適宜組み合わせて実施することが可能である。なお、斯かる任意の２つ以上の態様を適宜組み合わせた態様についても、当然ながら本発明の範囲に含まれるものとする。
【0026】
本発明の一側面は、後述する特定の粒度分布を有する水酸化マグネシウム微粒子を主成分として含有する殺菌性組成物（以下適宜「本発明の殺菌性組成物」という）に関する。
【0027】
本発明の別の一側面は、後述する特定の粒度分布を有する水酸化マグネシウム微粒子を主成分として含有する、破骨細胞の分化を抑制するための組成物（以下適宜「本発明の破骨細胞分化抑制用組成物」という）に関する。
【0028】
本発明の殺菌性組成物と、本発明の破骨細胞分化抑制用組成物は、その用途及び一部の好ましい物性を除けば、その他は概ね共通である。よって、以下の記載では、本発明の殺菌性組成物と本発明の破骨細胞分化抑制用組成物の双方を纏めて「本発明の組成物」とし、共通の特徴については纏めて説明するものとする。なお、本発明の組成物には、殺菌作用及び破骨細胞分化抑制作用を併有し、本発明の殺菌性組成物及び本発明の破骨細胞分化抑制用組成物の双方に該当する組成物も存在する。
【0029】
ある態様によれば、本発明の組成物が主成分として含有する水酸化マグネシウムは、動的光散乱法粒度分布測定により測定される粒度分布に関する以下のパラメータが、以下の特定の条件を満たす。
【0030】
一態様によれば、動的光散乱法粒度分布測定により測定される水酸化マグネシウムの体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）は、通常１０００ｎｍ以下である。一態様によれば、同Ｄ50は、例えば８００ｎｍ以下、又は７００ｎｍ以下、又は６００ｎｍ以下、又は５００ｎｍ以下、又は４００ｎｍ以下、又は３５０ｎｍ以下である。同Ｄ50が前記上限以下であると、例えば、種々の細菌に対する殺菌・抗菌作用の向上、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用の向上、生体細胞に対する抗炎症作用の向上、及び／又は、生体における破骨細胞形成の抑制作用の向上等の利点が得られる場合がある。一方、同Ｄ50の下限は制限されないが、一態様によれば、製造効率等の観点から、同Ｄ50は、通常２０ｎｍ以上である。一態様によれば、同Ｄ50は、例えば３０ｎｍ以上、又は４０ｎｍ以上である。
【0031】
一態様によれば、動的光散乱法粒度分布測定により測定される水酸化マグネシウムの体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）は、例えば８００ｎｍ以下、又は６００ｎｍ以下、又は４００ｎｍ以下、又は３００ｎｍ以下である。同Ｄ10が前記上限以下であると、種々の細菌に対する殺菌・抗菌作用の向上、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用の向上、生体細胞に対する抗炎症作用の向上、及び／又は、生体における破骨細胞形成の抑制作用の向上等の利点が得られる場合がある。一方、同Ｄ10の下限は制限されないが、一態様によれば、製造効率等の観点から、同Ｄ10は、例えば１０ｎｍ以上、又は２０ｎｍ以上、又は３０ｎｍ以上である。
【0032】
一態様によれば、動的光散乱法粒度分布測定により測定される水酸化マグネシウムの体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）は、例えば２０００ｎｍ以下、又は１７００ｎｍ以下、又は１５００ｎｍ以下、又は１３００ｎｍ以下、又は１０００ｎｍ以下である。同Ｄ90が前記上限以下であると、種々の細菌に対する殺菌・抗菌作用の向上、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用の向上、生体細胞に対する抗炎症作用の向上、及び／又は、生体における破骨細胞形成の抑制作用の向上等の利点が得られる場合がある。一方、同Ｄ90の下限は制限されないが、一態様によれば、製造効率等の観点から、同Ｄ90は、例えば４０ｎｍ以上、又は６０ｎｍ以上、又は８０ｎｍ以上である。
【0033】
一態様によれば、動的光散乱法粒度分布測定により測定される水酸化マグネシウムの体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。一態様によれば、同Ｄ90／Ｄ10は、例えば４．５以下、又は４以下、又は３．７以下、又は３．５以下である。同Ｄ90／Ｄ10が前記上限以下である。このようにＤ90／Ｄ10が所定上限値以下の水酸化マグネシウム微粒子は、粒子径が小さく且つ均一であることから分散性に優れ、惹いては種々の細菌に対する殺菌・抗菌作用の向上、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用の向上、生体細胞に対する抗炎症作用の向上、及び／又は、生体における破骨細胞形成の抑制作用の向上等の利点が得られる場合がある。一方、同Ｄ90／Ｄ10の下限は制限されないが、一態様によれば、製造効率等の観点から、同Ｄ90／Ｄ10は、例えば０.９５以上、又は１以上、又は１．５以上である。
【0034】
ある態様によれば、本発明の組成物が主成分として含有する水酸化マグネシウムは、下記式（Ｉ）で表される沈降度が、所定範囲内である。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
なお、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
なお、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ0、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。
【0035】
一態様によれば、前記式で求められる水酸化マグネシウムの沈降度は、例えば０．３以上、又は０．４以上、又は０．５以上である。沈降度が前記下限以上であると、種々の細菌に対する殺菌・抗菌作用の向上、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用の向上、生体細胞に対する抗炎症作用の向上、及び／又は、生体における破骨細胞形成の抑制作用の向上等の利点が得られる場合がある。一方、水酸化マグネシウムの沈降度の上限は限定されないが、通常は１以下である。
【0036】
本発明の組成物における水酸化マグネシウムの濃度は、限定されるものではなく、その用途等に応じて適宜選択することができる。但し、ある態様によれば、本発明の組成物における水酸化マグネシウムの濃度の下限は、例えば０．０００３ｇ／Ｌ以上、０．０００５ｇ／Ｌ以上、又は０．００１ｇ／Ｌ以上である。ある態様によれば、本発明の組成物における水酸化マグネシウムの濃度の上限は、例えば１．５ｇ／Ｌ以下、又は１．０ｇ／Ｌ以下、又は０．８ｇ／Ｌ以下である。特に本発明の組成物を、ヒトに投与される医薬品や医薬部外品、又は、非ヒト動物に投与される動物用医薬品等の製品として提供する場合には、医薬品・医薬部外品・動物用医薬品の安全基準に応じて、水酸化マグネシウムの濃度を所定範囲内に抑える必要がある。実際、本発明者等は、後述する実施例において、本発明の殺菌性組成物に該当する試験例の水酸化マグネシウムスラリーが、極めて低濃度であっても殺菌作用を発揮することを確認している（後記実施例III－２等参照）。一方、例えば本発明の組成物を濃縮型製品として提供し、水や溶剤で希釈することにより所望の最終製品を用事調製することを意図する場合等は、本発明の組成物は濃縮倍率に応じた高濃度の水酸化マグネシウムを含んでいてもよい。
【0037】
ある態様によれば、本発明の組成物は、水酸化マグネシウムの懸濁液の形態である。懸濁液の形態は限定されないが、ある態様によれば、水や生理緩衝液等の水性媒体に水酸化マグネシウム微粒子が懸濁された水性懸濁液の形態である。なお、水酸化マグネシウムの水に対する溶解度は１８℃条件下で０．００９ｇ／Ｌであるので、通常はこれより高濃度とすることで水酸化マグネシウムの懸濁液を調製することができる。
【0038】
以上説明した、特定の粒度分布を有する水酸化マグネシウムを主成分として含有する本発明の組成物は、以下に説明する種々の利点を有する。
【0039】
ある態様によれば、本発明の殺菌性組成物は、広範な種類の細菌に対して殺菌及び／又は抗菌作用を示す。ある態様によれば、本発明の殺菌性組成物は、腸内感染症細菌や歯周病原因菌等を含む各種の感染症細菌に対して殺菌及び／又は抗菌作用を示す。ある態様によれば、本発明の殺菌性組成物は、グラム陰性細菌及び／又はグラム陰性細菌に対して殺菌及び／又は抗菌作用を示す。実際、本発明者等は、後述する実施例において、本発明の殺菌性組成物に該当する試験例の水酸化マグネシウムスラリーが、広範な水酸化マグネシウムの粒子径及び濃度において、腸内感染症原因菌（大腸菌）や歯周病原因細菌（ＡＡ菌）、齲蝕原因細菌（ＳＳ菌）にも殺菌作用を発揮すること、グラム陰性細菌（大腸菌、ＡＡ菌）にもグラム陽性細菌（ＳＳ菌）にも殺菌作用を発揮することを確認している（後記実施例III－１、III－２、IV等参照）。
【0040】
ある態様によれば、本発明の殺菌性組成物は、極めて広範な種類の細菌に対する殺菌及び／又は抗菌用途に使用することができる。対象となる細菌は、制限されるものではないが、例えば以下が挙げられる。
【0041】
まず、細胞膜の構造に基づく分類では、本発明の殺菌性組成物は、前述のように、グラム陰性細菌にも、グラム陽性細菌にも、更にはその他の細菌にも使用することができる。
【0042】
グラム陰性細菌としては、限定されるものではないが、例えばナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）属、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）属、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、赤痢（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）属、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）属、クラミドフィラ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）属、アグリゲイティバクター（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ）属、ポルフィロモナス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属等の細菌が挙げられる。
【0043】
ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、ナイセリア・エロンガタ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｅｌｏｎｇａｔａ）等が挙げられる。
【0044】
ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、パラインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）等が挙げられる。
【0045】
ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、パラ百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）等が挙げられる。
【0046】
エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）等が挙げられる。
【0047】
サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ）の各種血清型、例えば
ブタコレラ菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、チフス菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｔｙｐｈｉ）、パラチフス菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ， Ｂ， Ｃ）、腸炎菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）等が挙げられる。
ブタコレラ菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、チフス菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｔｙｐｈｉ）、パラチフス菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ， Ｂ， Ｃ）、腸炎菌（ｓｅｒｏｖａｒ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）等が挙げられる。
【0048】
赤痢（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、フレキシネル赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、ボイド赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）、ソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）等が挙げられる。
【0049】
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばクレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）等が挙げられる。
【0050】
エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばエンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）等が挙げられる。
【0051】
プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばプロテウス・インコンスタンス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｉｎｃｏｎｓｔａｎｓ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、プロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、
等が挙げられる。
等が挙げられる。
【0052】
エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば腸炎エルシニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、偽結核菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）等が挙げられる。
【0053】
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）等が挙げられる。
【0054】
ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばブルセラ・メリテンシス（Ｂ． ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）等が挙げられる。
【0055】
レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばレジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、レジオネラ・ミクダデイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｍｉｃｄａｄｅｉ）等が挙げられる。
【0056】
クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばクラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）等が挙げられる。
【0057】
クラミドフィラ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばクラミジア肺炎菌（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等が挙げられる。
【0058】
アグリゲイティバクター（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）等が挙げられる。
【0059】
ポルフィロモナス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）等が挙げられる。
【0060】
一方、グラム陽性細菌としては、限定されるものではないが、例えばブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属、等の細菌が挙げられる。
【0061】
ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・ヘモリチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、スタフィロコッカス・サッカロリティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）等が挙げられる。
【0062】
連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・アガラクティアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・アンギノーサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、ストレプトコッカス・コンステラタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）、ストレプトコッカス・クリスタタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｓｔａｔｕｓ）、ストレプトコッカス・ゴルドニイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ）、ストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・パラサングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ）、ストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ）等が挙げられる。
【0063】
腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばエンテロコッカス・アビウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ａｖｉｕｍ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・ガリナルム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、エンテロコッカス・カセリフラブス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）等が挙げられる。
【0064】
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えばジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、結膜乾燥症菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｒｏｓｉｓ）等が挙げられる。
【0065】
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・アンシラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）等が挙げられる。
【0066】
クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・イノキュウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｉｎｎｏｃｕｕｍ）、クロストリジウム・スポロゲネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）、クロストリジウム・ラモーザム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｒａｍｏｓｕｍ）、クロストリジウム・ソルデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）、クロストリジウム・シンビオサム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｙｍｂｉｏｓｕｍ）、クロストリジウム・オロティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｏｒｏｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・インドーリス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｉｎｄｏｌｉｓ）、ヒストリチカム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）等が挙げられる。
【0067】
また、その他の細菌としては、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）属の細菌等が挙げられる。マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）属の細菌の具体例としては、限定されるものではないが、例えば肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ ジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）等が挙げられる。
【0068】
また、感染症の種類に基づく観点からも、本発明の殺菌性組成物は、種々の感染症の原因菌に対して殺菌・抗菌作用を発揮する。例としては、限定されるものではないが、前述のように、歯周病原因細菌（例えばアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）等）、齲蝕原因細菌（例えばストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ）等）、腸内感染症原因菌（例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ）各種血清型、赤痢（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属細菌等）、呼吸器感染症原因菌（例えば肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア肺炎菌（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等）、尿路感染症・性感染症原因菌（例えばマイコプラズマ ジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）等）等が挙げられる。
【0069】
ある態様によれば、本発明の殺菌性組成物は、抗生物質に対する抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対して殺菌作用を示す。実際、本発明者等は、後述する実施例において、本発明の殺菌性組成物に該当する試験例の水酸化マグネシウムスラリーが、ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ化した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株（薬剤抵抗性大腸菌）にも殺菌作用を発揮することを確認している（後記実施例III－３等参照）。
【0070】
本発明の殺菌性組成物により、広範な種類の細菌に対する殺菌作用や、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用が発揮される理由は定かではないが、特定の粒度分布を有する水酸化マグネシウム微粒子が、細菌の細胞壁を物理的に傷害することで、広範な種類の細菌に対する殺菌作用や、抵抗性菌（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌作用を発揮するものと推測される。
【0071】
ある態様によれば、本発明の組成物は、生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び／又は抑制する作用（抗炎症作用）を示す。実際、本発明者等は、後述する実施例において、本発明の組成物に該当する試験例の水酸化マグネシウムスラリーが、広範な水酸化マグネシウムの粒子径及び濃度において、細菌由来リポ多糖（ＬＰＳ）により誘導した単球・マクロファージ様細胞による炎症性サイトカイン（ＩＬ－１β）発現の抑制作用を発揮することを確認している（後記実施例Ｖ等参照）。
【0072】
ある態様によれば、本発明の破骨細胞分化抑制用組成物は、生体において破骨細胞形成の抑制作用を示す。実際、本発明者等は、後述する実施例において、本発明の破骨細胞分化抑制用組成物に該当する試験例の水酸化マグネシウムスラリーが、広範な水酸化マグネシウムの粒子径及び濃度において、破骨細胞分化誘導因子（ＲＡＮＫＬ、Ｍ－ＣＳＦ）により誘導された骨髄細胞による破骨細胞形成の抑制作用を発揮することを確認している（後記実施例VI等参照）。
【0073】
本発明の組成物は、特定の粒度分布を有する水酸化マグネシウムを主成分とすることで、人体への安全性、水や生理緩衝液等の媒体への分散性、及び／又は、保存安定性等にも優れる。
【0074】
本発明の組成物は、活性成分たる水酸化マグネシウムの他に、１種又は２種以上の任意の補助成分を含有していてもよい。補助成分の例としては、限定されるものではないが、溶剤、等張化剤、緩衝剤、湿潤剤、滑沢剤、着色剤、香味剤、保存剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、抗微生物剤などが挙げられる。これらの補助成分は、何れか１種を単独で使用してもよく、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で使用してもよい。斯かる補助成分は、後述する本発明の組成物の性状・製品用途・施用対象・製品形態等に応じて、当業者であれば適宜選択して実施することができる。
【0075】
本発明の組成物の性状としては、限定されるものではないが、液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状等が挙げられる。斯かる本発明の組成物の性状は、後述する本発明の組成物の製品用途・施用対象・製品形態等に応じて、当業者であれば適宜選択して実施することができる。
【0076】
本発明の組成物の調製方法は、限定されるものではないが、例えば以下の手順で調製することが可能である。即ち、活性成分たる水酸化マグネシウムと、任意により使用される1種又は２種以上の任意の補助成分を、任意により使用される水やその他の各種溶剤と混合し、所望の剤形に製剤化すればよい。また、各成分の粒径・形状の調整や微細化等の前処理や、加熱・濾過等による滅菌等の後処理を適宜加えてもよい。具体的な製剤化手法は種々公知であり、当業者であれば目的とする剤形、用途、製品形態等に応じ、適宜選択して実施することができる。
【0077】
本発明の組成物の施用対象としては、限定されるものではないが、生体及び／又は環境が挙げられる。本発明の組成物の製品用途としても、限定されるものではないが、医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、日用製品等が挙げられる。特に、本発明の組成物を医薬品又は医薬部外品として実施する場合、その投与・施用対象はヒト対象となり、本発明の組成物を動物用医薬品として実施する場合、その投与・施用対象は非ヒト動物（例としては、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ウマ、ウシ、ブタ等の哺乳類や、ニワトリ等の鳥類などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。）となる。一方、本発明の組成物を日用製品として使用する場合、その投与・施用対象は制限されず、ヒト又は非ヒト動物等の生体でもよく、環境でもよい。斯かる本発明の組成物の製品用途・施用対象は、本発明の組成物の目的等に応じて、当業者であれば適宜選択して実施することができる。
【0078】
本発明の組成物をヒト又は非ヒト動物に投与する場合、その剤形や投与経路は特に制限されず、上述した本発明の組成物の使用目的や、施用対象・製品用途等に応じて、当業者であれば適宜選択して実施することができる。例えば、本発明の組成物を殺菌又は抗菌用途に使用する場合、ヒト又は非ヒト動物の皮膚（例えば顔、手、足、首等の他、身体の任意の部位の皮膚に使用できる。）、粘膜（例えば歯肉、口腔内、咽頭部、肛門、尿道口、膣口等）、歯、毛髪等に局所投与することができる。この場合、本発明の組成物の剤形としては、局所投与用の任意の剤形、例えば液剤、スラリー、ペースト、ジェル、クリーム、スプレー等の剤形を選択することが出来る。また、本発明の組成物をインビボでの破骨細胞の分化抑制用途に使用する場合、ヒト又は非ヒト動物の口腔内（歯や歯肉）への局所投与、骨近傍の皮膚又は粘膜への局所投与、各種部位の骨又はその近傍への局所注射等による直接投与等が考えられる。もちろん、生体から分離培養した組織や細胞に対して本発明の組成物を適用することにより、インビトロでの破骨細胞の分化抑制用途に使用することも可能である。
【0079】
また、本発明の組成物を環境の殺菌又は抗菌用途に使用する場合、その剤形や施用形態は何等制限されず、任意の剤形及び施用形態とすることが可能である。例えば、液剤やスプレーの剤形として、環境中の任意の部位に噴霧又は塗布等することができる。本発明の組成物の施用対象となる部位も何等制限されない。例としては、ヒトの接触可能性がある部位やヒトの滞在領域の近傍部位（例えば部屋の壁面、日用品の表面等）、更には最近等の繁殖可能性がある部位（例えばキッチンのシンクやトイレ等）等が挙げられるが、これらに制限されるものではない。
【0080】
本発明の組成物の製品形態としては、限定されるものではないが、洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤等が挙げられる。斯かる本発明の組成物の製品形態は、上述した本発明の組成物の施用対象・製品用途等に応じて、当業者であれば適宜選択して実施することができる。
【0081】
本発明の一側面によれば、生体又は環境の殺菌又は抗菌を行う方法であって、水酸化マグネシウムを含む上述の本発明の組成物を生体又は環境に施用することを含む方法が提供される。本発明の組成物の詳細、その施用対象となる生体又は環境の詳細、生体又は環境への本発明の組成物の施用態様の詳細等については、上述したとおりである。
【0082】
本発明の一側面によれば、破骨細胞の分化抑制を行う方法であって、水酸化マグネシウムを含む上述の本発明の組成物を生体に投与することを含む方法が提供される。本発明の組成物の詳細、その施用対象となる生体又は環境の詳細、生体への本発明の組成物の投与用態様の詳細等については、上述したとおりである。
【実施例0083】
以下、本発明を実施例に則して更に詳細に説明するが、これらの実施例はあくまでも説明のために便宜的に示す例に過ぎず、本発明は如何なる意味でもこれらの実施例に限定されるものではない。
【0084】
［Ｉ．水酸化マグネシウムスラリーの合成］
以下の手順により、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）を合成し、その後の各評価に供した。
以下の手順により、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）を合成し、その後の各評価に供した。
【0085】
・試験例１：
０．２ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液１０００ｍＬ及び０．５ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液６４０ｍＬを、それぞれ１２２ｍＬ／分及び７８ｍＬ／分の流量で、オーバーフローが２００ｍＬである連続反応槽に滞留時間が１分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて５００ｒｐｍで攪拌すると共に、常時２０℃となるように温度調整を行った。また、反応系のｐＨが１０．２～１０．４となるように、水酸化ナトリウム水溶液の流量調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを１０００ｍＬ採取し、５．６６ｇの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを２２０ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、５００ｍＬのスラリーを得た。その後、温度を５０℃に調節しながら５００ｒｐｍの攪拌下で４時間熟成させることにより、試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
０．２ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液１０００ｍＬ及び０．５ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液６４０ｍＬを、それぞれ１２２ｍＬ／分及び７８ｍＬ／分の流量で、オーバーフローが２００ｍＬである連続反応槽に滞留時間が１分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて５００ｒｐｍで攪拌すると共に、常時２０℃となるように温度調整を行った。また、反応系のｐＨが１０．２～１０．４となるように、水酸化ナトリウム水溶液の流量調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを１０００ｍＬ採取し、５．６６ｇの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを２２０ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、５００ｍＬのスラリーを得た。その後、温度を５０℃に調節しながら５００ｒｐｍの攪拌下で４時間熟成させることにより、試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
【0086】
・試験例２：
２．０ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液５００ｍＬを反応層内で３００ｒｐｍ攪拌下、１２．０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液１５０ｍＬを２５ｍＬ／分の流量で添加するバッチ反応を行った。反応期間中、常時２０℃となるように温度調整を行った。この反応により５２．７６ｇの水酸化マグネシウムを含む反応スラリーを６５０ｍＬ得た。得られたスラリーを３００ｒｐｍの攪拌下、９０℃で２時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを１０５５ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例２の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
２．０ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液５００ｍＬを反応層内で３００ｒｐｍ攪拌下、１２．０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液１５０ｍＬを２５ｍＬ／分の流量で添加するバッチ反応を行った。反応期間中、常時２０℃となるように温度調整を行った。この反応により５２．７６ｇの水酸化マグネシウムを含む反応スラリーを６５０ｍＬ得た。得られたスラリーを３００ｒｐｍの攪拌下、９０℃で２時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを１０５５ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例２の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
【0087】
・試験例３：
１．８ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液２８２５ｍＬ及び２．２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液２５５３ｍＬを、それぞれ４９ｍＬ／分及び３６ｍＬ／分の流量で、オーバーフローが８４０ｍＬである連続反応槽に滞留時間が１０分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて６００ｒｐｍで攪拌すると共に、常時４０℃となるように温度調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを６００ｍＬ採取し、３２．１９ｇの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、攪拌翼付きオートクレーブを用いて６２０ｒｐｍの攪拌下、１７０℃で２時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを１６００ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例３の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
１．８ｍｏｌ／Ｌの塩化マグネシウム水溶液２８２５ｍＬ及び２．２ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液２５５３ｍＬを、それぞれ４９ｍＬ／分及び３６ｍＬ／分の流量で、オーバーフローが８４０ｍＬである連続反応槽に滞留時間が１０分間となるように供給し、連続反応を行った。反応期間中、連続反応槽内を攪拌翼を用いて６００ｒｐｍで攪拌すると共に、常時４０℃となるように温度調整を行った。オーバーフローより得られた反応スラリーを６００ｍＬ採取し、３２．１９ｇの水酸化マグネシウムを得た。得られたスラリーを、攪拌翼付きオートクレーブを用いて６２０ｒｐｍの攪拌下、１７０℃で２時間熟成をさせた。熟成後のスラリーを、濾紙を用いて吸引ろ過し、得られたケーキを１６００ｍＬのイオン交換水で洗浄した後、固形分濃度が１０ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水を加え、ホモジナイザーを用いて５０００ｒｐｍで３０分間攪拌して再懸濁させることにより、試験例３の水酸化マグネシウムスラリーを得た。
【0088】
［II．水酸化マグネシウムスラリーの物性評価］
・粒度分布測定：
前処理として、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）１０ｍＬを０．２重量％ヘキサメタリン酸ナトリウム水溶液６０ｍＬで希釈し、超音波ホモジナイザー（日本精機製作所製）を用いて、３５０μＡで３分間超音波処理を行った。前処理後、動的光散乱法粒度分布測定システムＥＬ－ＳＺ２０００（大塚電子社製）を用いて粒度分布を測定し、体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）、同５０％粒子径（Ｄ50）、及び同９０％粒子径（Ｄ90）を求めた。
・粒度分布測定：
前処理として、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）１０ｍＬを０．２重量％ヘキサメタリン酸ナトリウム水溶液６０ｍＬで希釈し、超音波ホモジナイザー（日本精機製作所製）を用いて、３５０μＡで３分間超音波処理を行った。前処理後、動的光散乱法粒度分布測定システムＥＬ－ＳＺ２０００（大塚電子社製）を用いて粒度分布を測定し、体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）、同５０％粒子径（Ｄ50）、及び同９０％粒子径（Ｄ90）を求めた。
【0089】
・ＳＥＭ写真撮影：
試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ：ＳＥＭ）写真を、日本電子株式会社製ＳＥＭ（ＪＳＭ－７６００Ｆ）を使用して撮影した。ＳＥＭによる測定時の倍率は、制限されるものではないが、例えば1０，０００～５０，０００倍とすることができる。
試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ：ＳＥＭ）写真を、日本電子株式会社製ＳＥＭ（ＪＳＭ－７６００Ｆ）を使用して撮影した。ＳＥＭによる測定時の倍率は、制限されるものではないが、例えば1０，０００～５０，０００倍とすることができる。
【0090】
・沈降度測定：
試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの沈降度を、以下の手順により測定した。即ち、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（濃度１０ｇ／Ｌ）を１０分間撹拌後、１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後の内容物の高さＨ0及び１０分間静置後の内容物の高さＨを測定し、下記式（Ｉ）から沈降度を求めた。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの沈降度を、以下の手順により測定した。即ち、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリー（濃度１０ｇ／Ｌ）を１０分間撹拌後、１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後の内容物の高さＨ0及び１０分間静置後の内容物の高さＨを測定し、下記式（Ｉ）から沈降度を求めた。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ0 式（Ｉ）
【0091】
・結果：
上記手順で測定された試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの粒度分布をそれぞれ図１Ａ～１Ｃに示し、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーのＳＥＭ写真をそれぞれ図２Ａ～２Ｃに示す。また、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーの体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）、同５０％粒子径（Ｄ50）、同９０％粒子径（Ｄ90）、同９０％粒子径（Ｄ90）と同１０％粒子径（Ｄ10）との比（Ｄ90／Ｄ10）、及び沈降度を以下の表１に示す。
上記手順で測定された試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーの粒度分布をそれぞれ図１Ａ～１Ｃに示し、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーのＳＥＭ写真をそれぞれ図２Ａ～２Ｃに示す。また、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーの体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）、同５０％粒子径（Ｄ50）、同９０％粒子径（Ｄ90）、同９０％粒子径（Ｄ90）と同１０％粒子径（Ｄ10）との比（Ｄ90／Ｄ10）、及び沈降度を以下の表１に示す。
【0092】
【表1】
【0093】
［III．水酸化マグネシウムスラリーの殺菌性評価１：大腸菌に対する殺菌性］
（III－１．水酸化マグネシウムの粒度分布に関する検討）
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
（III－１．水酸化マグネシウムの粒度分布に関する検討）
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
【0094】
・水酸化マグネシウムスラリー
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0095】
・細菌
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株（国立遺伝学研究所 ＮＢＲＰから入手）を用いた。
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株（国立遺伝学研究所 ＮＢＲＰから入手）を用いた。
【0096】
・培地
以下の２種の培地を用いた。
ＬＢ寒天培地：トリプトン（Ｔｒｙｐｔｏｎ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）５ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）１０ｇ及び寒天（Ｗａｋｏ社製）１５ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した後、１０ｃｍディッシュに２０ｍＬずつ分注した。
ＬＢ培地：トリプトン（Ｔｒｙｐｔｏｎ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）５ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）１０ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した。
以下の２種の培地を用いた。
ＬＢ寒天培地：トリプトン（Ｔｒｙｐｔｏｎ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）５ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）１０ｇ及び寒天（Ｗａｋｏ社製）１５ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した後、１０ｃｍディッシュに２０ｍＬずつ分注した。
ＬＢ培地：トリプトン（Ｔｒｙｐｔｏｎ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）５ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）１０ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した。
【0097】
・菌液の準備
細菌をグリセロールストックからＬＢ寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、３７℃で２４時間培養した。形成したシングルコロニーをＬＢ培地（１０ｍＬ）に播種し、３７℃の条件下で一晩培養した。一晩培養した菌液２５０μＬをＬＢ培地２５ｍＬに播種し、６００ｎｍの吸光度が０．６（ＯＤ600＝０．６）になるまで３７℃、１８０ｒｐｍで培養した。
細菌をグリセロールストックからＬＢ寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、３７℃で２４時間培養した。形成したシングルコロニーをＬＢ培地（１０ｍＬ）に播種し、３７℃の条件下で一晩培養した。一晩培養した菌液２５０μＬをＬＢ培地２５ｍＬに播種し、６００ｎｍの吸光度が０．６（ＯＤ600＝０．６）になるまで３７℃、１８０ｒｐｍで培養した。
【0098】
・殺菌性の評価方法
菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１×ＰＢＳ（リン酸緩衝液：１３７ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、８．１ｍｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）、２．６８ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化カリウム（ＫＣｌ）、１．４７ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）、ｐＨ７．４）を等量加え、再懸濁させた後、３，５００ｇで１０分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）にそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を１ｍＬずつ１．５ｍＬのマイクロチューブに移し、３７℃の条件下で培養した。０、１、３、６、及び１８時間後の菌液を回収し、それぞれ１０倍連続希釈（１×ＰＢＳ）することにより、菌濃度１０0～１０9の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を１０μＬずつＬＢ寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、３７℃の条件下で２４時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から１ｍＬ中の菌数（細胞／ｍＬ）を計算した。
菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１×ＰＢＳ（リン酸緩衝液：１３７ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、８．１ｍｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）、２．６８ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化カリウム（ＫＣｌ）、１．４７ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）、ｐＨ７．４）を等量加え、再懸濁させた後、３，５００ｇで１０分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）にそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を１ｍＬずつ１．５ｍＬのマイクロチューブに移し、３７℃の条件下で培養した。０、１、３、６、及び１８時間後の菌液を回収し、それぞれ１０倍連続希釈（１×ＰＢＳ）することにより、菌濃度１０0～１０9の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を１０μＬずつＬＢ寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、３７℃の条件下で２４時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から１ｍＬ中の菌数（細胞／ｍＬ）を計算した。
【0099】
また、比較例として、各水酸化マグネシウムスラリーを含む試験液の代わりに、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ4）スラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（硫酸マグネシウム濃度５００ ｍｇ／Ｌ）を用いると共に、対照例として１×ＰＢＳ単独を用いて、それぞれ上記と同様の試験を行った。
【0100】
・評価結果
得られた結果を以下の表２及び図３のグラフに示す。１×ＰＢＳ単独を用いた対照例を基準として、硫酸マグネシウムスラリーを用いた比較例では、大腸菌に対する殺菌作用は殆ど見られなかったのに対し、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを用いた群では、何れも顕著な殺菌作用が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
得られた結果を以下の表２及び図３のグラフに示す。１×ＰＢＳ単独を用いた対照例を基準として、硫酸マグネシウムスラリーを用いた比較例では、大腸菌に対する殺菌作用は殆ど見られなかったのに対し、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを用いた群では、何れも顕著な殺菌作用が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
【0101】
【表2】
【0102】
（III－２．水酸化マグネシウムの濃度に関する検討］
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの濃度の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、水酸化マグネシウムの濃度の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
【0103】
・水酸化マグネシウムスラリー
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0104】
・細菌株
前記III－１と同じく大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３を用いた。
前記III－１と同じく大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３を用いた。
【0105】
・培地、菌液の準備、細菌の培養方法
前記III－１と同様に実施した。
前記III－１と同様に実施した。
【0106】
・殺菌性の評価方法
前記III－１と同様に実施した。
前記III－１と同様に実施した。
【0107】
・評価結果
得られた結果を以下の表３及び図４のグラフに示す。水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１０ｍｇ／Ｌ→５０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ→５００ｍｇ／Ｌ）に従い、水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用が向上する傾向が認められた。
得られた結果を以下の表３及び図４のグラフに示す。水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１０ｍｇ／Ｌ→５０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ→５００ｍｇ／Ｌ）に従い、水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用が向上する傾向が認められた。
【0108】
【表3】
【0109】
（III－３．抵抗性菌（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）に対する殺菌効果の検討］
試験例１の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒに対する殺菌効果の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
試験例１の水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の大腸菌に対する殺菌性を、Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒに対する殺菌効果の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
【0110】
・水酸化マグネシウムスラリー
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0111】
・細菌株
前記III－１、III－２と同じく大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用いた。
前記III－１、III－２と同じく大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用いた。
【0112】
・培地、菌液の準備、細菌の培養方法
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用い、前記III－１と同様の操作を実施し、ＯＤ６００＝０．６の菌液を準備した。Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌を誘導するために、菌液にリファンピシンを終濃度１００μｇ／ｍＬで加え、３７℃、１８０ｒｐｍで３０分間培養した。菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地で３時間培養することで、非Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌を排除した。
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用い、前記III－１と同様の操作を実施し、ＯＤ６００＝０．６の菌液を準備した。Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌を誘導するために、菌液にリファンピシンを終濃度１００μｇ／ｍＬで加え、３７℃、１８０ｒｐｍで３０分間培養した。菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地で３時間培養することで、非Ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌を排除した。
【0113】
・殺菌性の評価方法
Pｅｒｓｉｓｔｅｒ化した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株及び大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用い、前記III－１と同様に実施した。
Pｅｒｓｉｓｔｅｒ化した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株及び大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株を用い、前記III－１と同様に実施した。
【0114】
・評価結果
得られた結果を以下の表４及び図５のグラフに示す。水酸化マグネシウムスラリーは、pｅｒｓｉｓｔｅｒ化した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株に対しても、非pｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株に対するのと同様の殺菌作用が認められた。
得られた結果を以下の表４及び図５のグラフに示す。水酸化マグネシウムスラリーは、pｅｒｓｉｓｔｅｒ化した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株に対しても、非pｅｒｓｉｓｔｅｒ大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＷ２５１１３株に対するのと同様の殺菌作用が認められた。
【0115】
【表4】
【0116】
［IV．水酸化マグネシウムスラリーの殺菌性評価２：口腔内細菌に対する殺菌性］
口腔内細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：以下適宜「ＡＡ菌」と略す。）及びストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ：以下適宜「ＳＳ菌」と略す。）に対する水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
口腔内細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：以下適宜「ＡＡ菌」と略す。）及びストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ：以下適宜「ＳＳ菌」と略す。）に対する水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）の殺菌性を、水酸化マグネシウムの粒度分布の観点から評価した。なお、各群についてｎ＝３で評価した。
【0117】
・水酸化マグネシウムスラリー
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0118】
・細菌種
以下の２種の口腔内細菌を用いた。
・アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：ＡＡ菌）Ｙ４株（ＡＴＣＣ４３７１８；ＡＴＣＣから入手）（以下適宜「細菌種１」とする。）
・ストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ：ＳＳ菌）ＡＴＣＣ１０５５６株（ＡＴＣＣから入手）（以下適宜「細菌種２」とする。）
以下の２種の口腔内細菌を用いた。
・アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：ＡＡ菌）Ｙ４株（ＡＴＣＣ４３７１８；ＡＴＣＣから入手）（以下適宜「細菌種１」とする。）
・ストレプトコッカス・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ：ＳＳ菌）ＡＴＣＣ１０５５６株（ＡＴＣＣから入手）（以下適宜「細菌種２」とする。）
【0119】
・培地
以下の２種の培地を用いた。
ＢＨＩ寒天培地：ブレインハートインフュージョン（Ｂｒａｉｎ ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ；ＢＨＩ）培地（ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）３７ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ及び寒天（Ｗａｋｏ社製）１５ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した後、１０ｃｍディッシュに２０ｍＬずつ分注した。
ＢＨＩ培地：ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）培地（ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）３７ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した。
以下の２種の培地を用いた。
ＢＨＩ寒天培地：ブレインハートインフュージョン（Ｂｒａｉｎ ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ；ＢＨＩ）培地（ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）３７ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇ及び寒天（Ｗａｋｏ社製）１５ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した後、１０ｃｍディッシュに２０ｍＬずつ分注した。
ＢＨＩ培地：ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）培地（ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）３７ｇ、酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ；ＢＤ Ｂａｃｔｏ社製）１０ｇを１Ｌの純水に溶解させ、オートクレーブ（１２１℃、２０分）で滅菌した。
【0120】
・菌液の準備
細菌をグリセロールストックからＢＨＩ寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、３７℃、５％ＣＯ2で２４時間培養した。形成したシングルコロニーをＢＨＩ培地（１０ｍＬ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
細菌をグリセロールストックからＢＨＩ寒天培地に白金耳を用いて画線培養し、３７℃、５％ＣＯ2で２４時間培養した。形成したシングルコロニーをＢＨＩ培地（１０ｍＬ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
【0121】
・殺菌性の評価方法
細菌種１及び２に対し行った。菌液は１６時間培養したものを使用した。菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１×ＰＢＳ（リン酸緩衝液：１３７ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、８．１ｍｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）、２．６８ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化カリウム（ＫＣｌ）、１．４７ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）、ｐＨ７．４）を等量加え、再懸濁させた後、３，５００ｇで１０分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーを５００ｍｇ／Ｌ含む１×ＰＢＳにそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を１ｍＬずつ１．５ｍＬのマイクロチューブに移し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で培養した。０、１、２、及び３時間後の菌液を回収し、それぞれ１０倍連続希釈（１×ＰＢＳ）することにより、菌濃度１０0～１０9の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を１０μＬずつＢＨＩ寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２４時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から１ｍＬ中の菌数（細胞／ｍＬ）を計算した。０時間目の菌数を１００％としたときのそれぞれの時間での細菌の減少率から殺菌効果を検証した。
細菌種１及び２に対し行った。菌液は１６時間培養したものを使用した。菌液を３，５００ｇで１０分間遠心し、細菌を回収した。上清を破棄し、１×ＰＢＳ（リン酸緩衝液：１３７ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、８．１ｍｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）、２．６８ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化カリウム（ＫＣｌ）、１．４７ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）、ｐＨ７．４）を等量加え、再懸濁させた後、３，５００ｇで１０分間遠心した。その後、上清の破棄、再懸濁、及び遠心分離という操作をもう一度繰り返した。上清を破棄し、得られた菌体を、試験例１～３の水酸化マグネシウムスラリーを５００ｍｇ／Ｌ含む１×ＰＢＳにそれぞれ再懸濁した。それぞれの菌液を１ｍＬずつ１．５ｍＬのマイクロチューブに移し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で培養した。０、１、２、及び３時間後の菌液を回収し、それぞれ１０倍連続希釈（１×ＰＢＳ）することにより、菌濃度１０0～１０9の段階希釈菌液を準備した。すべての希釈菌液を１０μＬずつＢＨＩ寒天培地に滴下し、室温で乾燥させた後、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２４時間培養した。形成したコロニーをカウントし、希釈倍率と滴下した液量から１ｍＬ中の菌数（細胞／ｍＬ）を計算した。０時間目の菌数を１００％としたときのそれぞれの時間での細菌の減少率から殺菌効果を検証した。
【0122】
・評価結果
得られた結果を以下の表５並びに図６Ａ（ＡＡ菌Ｙ４株）及び図６Ｂ（ＳＳ菌ＡＴＣＣ１０５５６株）のグラフに示す。試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーは、ＡＡ菌Ｙ４株及びＳＳ菌ＡＴＣＣ１０５５６株の何れに対しても、顕著な殺菌作用を示した。また、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
得られた結果を以下の表５並びに図６Ａ（ＡＡ菌Ｙ４株）及び図６Ｂ（ＳＳ菌ＡＴＣＣ１０５５６株）のグラフに示す。試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーは、ＡＡ菌Ｙ４株及びＳＳ菌ＡＴＣＣ１０５５６株の何れに対しても、顕著な殺菌作用を示した。また、各水酸化マグネシウムスラリーの殺菌作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って殺菌性が向上する傾向が認められた。
【0123】
【表5】
【0124】
［Ｖ．水酸化マグネシウムスラリーの炎症応答抑制作用（抗炎症性）評価］
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による生体細胞の炎症応答抑制作用（抗炎症作用）を、歯周病原性細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：ＡＡ菌）由来のリポ多糖（ＬＰＳ）によりマウス単球・マクロファージ様細胞に誘導した炎症性サイトカイン・インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）発現の抑制作用に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による生体細胞の炎症応答抑制作用（抗炎症作用）を、歯周病原性細菌であるアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ：ＡＡ菌）由来のリポ多糖（ＬＰＳ）によりマウス単球・マクロファージ様細胞に誘導した炎症性サイトカイン・インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）発現の抑制作用に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
【0125】
・水酸化マグネシウムスラリー：
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0126】
・細菌株
ＩＬ－１産生マウス単球・マクロファージ様細胞Ｊ７７４．１株（ＲＩＫＥＮ ＣＥＬＬ ＢＡＮＫから入手）を用いた。
ＩＬ－１産生マウス単球・マクロファージ様細胞Ｊ７７４．１株（ＲＩＫＥＮ ＣＥＬＬ ＢＡＮＫから入手）を用いた。
【0127】
・インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）の発現量の測定：
マウス単球・マクロファージ様細胞Ｊ７７４．１株を６ウェルプレート（ＣＥＬＬＳＴＡＲ社製）に細胞数１×１０6個／ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、歯周病原性細菌であるＡＡ菌由来リポ多糖（ＬＰＳ）を濃度２ｎｇ／ｍＬとなるよう加えると共に、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）となるように添加して２時間の培養を行った。また、対照例としてＡＡ菌由来ＬＰＳを加えないと共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例、及び、未処置例としてＡＡ菌由来ＬＰＳを濃度２ｎｇ／ｍＬとなるよう加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、炎症性サイトカインであるインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）遺伝子の発現を検出した。
マウス単球・マクロファージ様細胞Ｊ７７４．１株を６ウェルプレート（ＣＥＬＬＳＴＡＲ社製）に細胞数１×１０6個／ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、歯周病原性細菌であるＡＡ菌由来リポ多糖（ＬＰＳ）を濃度２ｎｇ／ｍＬとなるよう加えると共に、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、及び５００ｍｇ／Ｌ）となるように添加して２時間の培養を行った。また、対照例としてＡＡ菌由来ＬＰＳを加えないと共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例、及び、未処置例としてＡＡ菌由来ＬＰＳを濃度２ｎｇ／ｍＬとなるよう加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、炎症性サイトカインであるインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）遺伝子の発現を検出した。
【0128】
・リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子発現検出方法：
ＲＮＡの採取：培養２時間後の細胞から、ＲＮＡ抽出試薬（シカジーニアス（登録商標）、関東化学株式会社製）を用いて、推奨のプロトコールに従い、１．５ｍＬマイクロチューブ（ＷＡＴＳＯＮ社製）内にＲＮＡを抽出した。抽出されたＲＮＡの濃度を、超微量分光分析装置ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて計測した。
ＲＮＡの採取：培養２時間後の細胞から、ＲＮＡ抽出試薬（シカジーニアス（登録商標）、関東化学株式会社製）を用いて、推奨のプロトコールに従い、１．５ｍＬマイクロチューブ（ＷＡＴＳＯＮ社製）内にＲＮＡを抽出した。抽出されたＲＮＡの濃度を、超微量分光分析装置ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて計測した。
【0129】
逆転写反応：ＲＮＡの変性は、冷却・加温アルミブロックインキュベーター（プチクール ＭｉｎｉＴ－Ｃ、ワケンビーテック株式会社製）上で、６５℃で５分間加熱後、氷冷することにより行った。０．２ｍＬのＰＣＲチューブ（日本ジェネティクス株式会社製）に、変性させたＲＮＡ １μｇと、逆転写酵素（ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ（登録商標） ｑＰＣＲ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、東洋紡株式会社製）４μＬとを入れ、ＤＥＰＣ処理水（ナカライテスク株式会社製）を加えて総量２０μＬとして、混和させた。混和後のＲＮＡを、サーマルサイクラー（ジーンアトラス、株式会社アステック社製）を用いて、３７℃・１０分間→５０℃・５分間→９８℃・５分間→４℃からなる温度変化に供して反応させ、ｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡは４℃で保存した。
【0130】
Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑＰＣＲ：ＰＣＲ反応プレート（Ｂｉｏｐｌａｓｔｉｃｓ社製）の各ウェル内で、合成したｃＤＮＡ ２μＬ、増幅ターゲットに対するプライマー０．４μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ III Ｕｌｔｒａ－Ｆａｓｔ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ ＱＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ＳＹＢＲ（登録商標）用ＲＯＸ Ｐｌｕｓ（アジレント・テクノロジー株式会社製）１０μＬ、及びＤＥＰＣ処理水７．６μＬを混和した。ＰＣＲ反応は、ＡｒｉａＭｘリアルタイムＰＣＲシステム（アジレント・テクノロジー株式会社製）を用いて行った。９５℃・３分間の初期変性の後、９５℃・５秒間→６０℃・３０秒間からなるＰＣＲ反応を４０サイクル行った。遺伝子の発現量の評価は、Ａｒｉａ ＭＸ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（アジレント・テクノロジー株式会社製）を用い、ハウスキーピング遺伝子をＧＡＰＤＨとして、相対定量解析を行った。
【0131】
使用したプライマー（ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー、並びに、ＩＬ－１β遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー）の塩基配列を以下の表６に示す。
【0132】
【表6】
【0133】
・結果：
得られた結果を以下の表７及び図７のグラフに示す。ＡＡ菌由来ＬＰＳを加えない対照群に対して、ＡＡ菌由来ＬＰＳを加えた未処置群では、ＡＡ株由来ＬＰＳにより炎症性サイトカインであるインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）遺伝子の発現量が増加しており、炎症が誘導されたことが示された。これに対し、ＡＡ菌由来ＬＰＳ及び試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、未処置群と比較してＩＬ－１β遺伝子の発現量が低減されており、何れも顕著な炎症応答抑制作用（抗炎症作用）が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの炎症応答抑制作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。また、各試験例の水酸化マグネシウムスラリーについて水酸化マグネシウム濃度の影響を検討すると、何れも水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１０ｍｇ／Ｌ→５０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ→５００ｍｇ／Ｌ）に従って、炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。
得られた結果を以下の表７及び図７のグラフに示す。ＡＡ菌由来ＬＰＳを加えない対照群に対して、ＡＡ菌由来ＬＰＳを加えた未処置群では、ＡＡ株由来ＬＰＳにより炎症性サイトカインであるインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）遺伝子の発現量が増加しており、炎症が誘導されたことが示された。これに対し、ＡＡ菌由来ＬＰＳ及び試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、未処置群と比較してＩＬ－１β遺伝子の発現量が低減されており、何れも顕著な炎症応答抑制作用（抗炎症作用）が認められた。なお、各水酸化マグネシウムスラリーの炎症応答抑制作用は、試験例３（水酸化マグネシウムのＤ50＝４３７ｎｍ）→試験例２（同Ｄ50＝１９０ｎｍ）→試験例１（同Ｄ50＝５７ｎｍ）の順に向上しており、水酸化マグネシウムの粒径が小さくなるに従って炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。また、各試験例の水酸化マグネシウムスラリーについて水酸化マグネシウム濃度の影響を検討すると、何れも水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１０ｍｇ／Ｌ→５０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ→５００ｍｇ／Ｌ）に従って、炎症応答抑制作用が向上する傾向が認められた。
【0134】
【表7】
【0135】
［VI．水酸化マグネシウムスラリーの破骨細胞分化修飾作用評価１］
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による破骨細胞の分化修飾作用を、破骨細胞分化誘導因子（ＲＡＮＫＬ、Ｍ－ＣＳＦ）によりマウス骨髄細胞に誘導した破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子発現の抑制作用に基づき評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による破骨細胞の分化修飾作用を、破骨細胞分化誘導因子（ＲＡＮＫＬ、Ｍ－ＣＳＦ）によりマウス骨髄細胞に誘導した破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子発現の抑制作用に基づき評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
【0136】
・水酸化マグネシウムスラリー：
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液を調製して用いた。
試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液を調製して用いた。
【0137】
・骨髄細胞
ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社から入手）の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社から入手）の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
【0138】
・破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現量の測定：
マウス骨髄細胞を６ウェルプレート（ＣＥＬＬＳＴＡＲ社製）に細胞数１×１０5個／ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、破骨細胞分化誘導因子であるＲＡＮＫＬ（濃度４０ｎｇ／ｍＬ）及びＭ－ＣＳＦ（濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を加えると共に、試験例１の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１０ｍｇ／Ｌ及び１００ｍｇ／Ｌ）となるように添加して２時間の培養を行った。また、未処置例としてＲＡＮＫＬ（濃度４０ｎｇ／ｍＬ）及びＭ－ＣＳＦ（濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、破骨細胞の形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現を検出した。
マウス骨髄細胞を６ウェルプレート（ＣＥＬＬＳＴＡＲ社製）に細胞数１×１０5個／ウェルとなるように播種した。播種した細胞に、破骨細胞分化誘導因子であるＲＡＮＫＬ（濃度４０ｎｇ／ｍＬ）及びＭ－ＣＳＦ（濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を加えると共に、試験例１の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１０ｍｇ／Ｌ及び１００ｍｇ／Ｌ）となるように添加して２時間の培養を行った。また、未処置例としてＲＡＮＫＬ（濃度４０ｎｇ／ｍＬ）及びＭ－ＣＳＦ（濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を加えると共に、水酸化マグネシウムスラリーを含まない１×ＰＢＳを用いた例についても、上記と同様の培養を行った。培養後の細胞より、下記の方法を用いて、破骨細胞の形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現を検出した。
【0139】
・ＴＲＡＰ染色：
酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）染色は以下の手順で行った。即ち、ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のＴＲＡＰ陽性細胞を染色し、ＢＺ－９０００ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (Ｋｅｙａｎｃｅ製)で観察した。さらに３核以上のＴＲＡＰ陽性細胞数を目視でカウントした。
酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）染色は以下の手順で行った。即ち、ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のＴＲＡＰ陽性細胞を染色し、ＢＺ－９０００ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (Ｋｅｙａｎｃｅ製)で観察した。さらに３核以上のＴＲＡＰ陽性細胞数を目視でカウントした。
【0140】
・リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子発現検出方法：
リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法は、使用したプライマーを除き、前記Ｖと同様の手順で実施した。使用したプライマー（ＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー、並びに、破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー）の塩基配列を以下の表８に示す。
リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法は、使用したプライマーを除き、前記Ｖと同様の手順で実施した。使用したプライマー（ＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー、並びに、破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の増幅用Ｆｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅプライマー）の塩基配列を以下の表８に示す。
【0141】
【表8】
【0142】
・結果：
リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法による破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現抑制効果を図８及び以下の表９及び表１０に示す。水酸化マグネシウムスラリーを加えない対照群では、破骨細胞分化誘導因子（ＲＡＮＫＬ、Ｍ－ＣＳＦ）によりマウス骨髄細胞に破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子発現が誘導されたのに対し、試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、対照群と比較して破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現量が何れも抑制されており、顕著な破骨細胞分化修飾作用が認められた。
リアルタイムＲＴ－ｑＰＣＲ法による破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現抑制効果を図８及び以下の表９及び表１０に示す。水酸化マグネシウムスラリーを加えない対照群では、破骨細胞分化誘導因子（ＲＡＮＫＬ、Ｍ－ＣＳＦ）によりマウス骨髄細胞に破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子発現が誘導されたのに対し、試験例１の水酸化マグネシウムスラリーを加えた群では、対照群と比較して破骨細胞形成及び破骨細胞分化マーカー（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ＮＦＡＴｃ１）遺伝子の発現量が何れも抑制されており、顕著な破骨細胞分化修飾作用が認められた。
【0143】
【表9】
【0144】
また、得られたＴＲＡＰ染色写真を図９Ａに示すと共に、本写真に基づくＴＲＡＰ陽性細胞数（破骨細胞数）の計測結果を下記の表１０並びに図９Ｂに示す。これらの結果からも、試験例１の水酸化マグネシウムスラリーには、顕著な破骨細胞分化修飾作用が認められた。
【0145】
【表10】
【0146】
［VII．水酸化マグネシウムスラリーの破骨細胞分化修飾作用評価２］
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による破骨細胞の分化修飾作用を、ＴＲＡＰ染色写真に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
水酸化マグネシウムスラリー（殺菌性組成物）による破骨細胞の分化修飾作用を、ＴＲＡＰ染色写真に基づき、水酸化マグネシウムの粒度分布及び濃度の観点から評価した。なお、各試験の各群についてｎ＝３で評価した。
【0147】
・水酸化マグネシウムスラリー：
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１ｍｇ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ、及び１００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーを１×ＰＢＳと混合した試験液（水酸化マグネシウム濃度１ｍｇ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ、及び１００ｍｇ／Ｌ）を調製して用いた。
【0148】
・骨髄細胞
前記実施例VIと同様に、ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社から入手）の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
前記実施例VIと同様に、ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社から入手）の大腿骨、脛骨から採取した骨髄細胞を用いた。
【0149】
・ＴＲＡＰ染色：
前記実施例VIと同様に、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）染色は以下の手順で行った。即ち、ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のＴＲＡＰ陽性細胞を染色し、ＢＺ－９０００ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (Ｋｅｙａｎｃｅ製)で観察した。さらに３核以上のＴＲＡＰ陽性細胞数を目視でカウントした。
前記実施例VIと同様に、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）染色は以下の手順で行った。即ち、ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いてメーカーのプロトコールに従い、多核のＴＲＡＰ陽性細胞を染色し、ＢＺ－９０００ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (Ｋｅｙａｎｃｅ製)で観察した。さらに３核以上のＴＲＡＰ陽性細胞数を目視でカウントした。
【0150】
・結果：
得られたＴＲＡＰ染色写真を図１０Ａに示すと共に、本写真に基づくＴＲＡＰ陽性細胞数（破骨細胞数）の計測結果を下記の表１１並びに図１０Ｂに示す。即ち、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーは、水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１ｍｇ／Ｌ→１０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ）に従い、破骨細胞形成（ＴＲＡＰ陽性細胞数）が抑制されており、破骨細胞分化作用の抑制効果が認められた。
得られたＴＲＡＰ染色写真を図１０Ａに示すと共に、本写真に基づくＴＲＡＰ陽性細胞数（破骨細胞数）の計測結果を下記の表１１並びに図１０Ｂに示す。即ち、試験例１～３の各水酸化マグネシウムスラリーは、水酸化マグネシウム濃度が高くなる（濃度１ｍｇ／Ｌ→１０ｍｇ／Ｌ→１００ｍｇ／Ｌ）に従い、破骨細胞形成（ＴＲＡＰ陽性細胞数）が抑制されており、破骨細胞分化作用の抑制効果が認められた。
【0151】
【表11】
【産業上の利用可能性】
【0152】
本発明は、口腔内細菌やその他の感染症細菌等の殺菌・抗菌用医薬品・医薬部外品、破骨細胞分化抑制用医薬品・医薬部外品、除菌・抗菌用生活用品など、種々の分野に利用可能であり、その有用性は高い。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-06-04
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有すると共に、前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である殺菌性組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ 0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ 0 、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ 0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ 0 、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
【請求項2】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、請求項１に記載の殺菌性組成物。
【請求項3】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、請求項１又は２に記載の殺菌性組成物。
【請求項4】
水酸化マグネシウム濃度が０．０００３ｇ／Ｌ以上の水性懸濁液である、請求項１～３の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項5】
感染症細菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、請求項１～４の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項6】
歯周病原因菌に対する殺菌及び／又は抗菌作用を有する、請求項５に記載の殺菌性組成物。
【請求項7】
生体細胞からの炎症性因子の放出を低減及び／又は抑制する作用を有する、請求項１～６の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項8】
破骨細胞の分化抑制作用を有する、請求項１～７の何れか一項に記載の殺菌性組成物。
【請求項9】
下記（Ａ）及び（Ｂ）を充足する水酸化マグネシウムを主成分として含有すると共に、前記水酸化マグネシウムの下記式（Ｉ）で表される沈降度が０．３以上である、破骨細胞の分化を抑制するための組成物。
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ 0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ 0 、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
（Ａ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積５０％粒子径（Ｄ50）が２０～１０００ｎｍである。
（Ｂ）動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）と体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）との比（Ｄ90／Ｄ10）が５以下である。
・沈降度＝Ｈ／Ｈ 0 式（Ｉ）
（但し、当該水酸化マグネシウムを１０ｇ／Ｌの割合で水と混合し、１０分間撹拌して得られたスラリー１００ｍＬをメスシリンダーに入れ、直後に測定される内容物の高さをＨ 0 、１０分間静置後に測定される内容物の高さをＨとする。）
【請求項10】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積１０％粒子径（Ｄ10）が１０～８００ｎｍである、請求項９に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
【請求項11】
前記水酸化マグネシウムの動的光散乱法粒度分布測定による体積基準累積９０％粒子径（Ｄ90）が４０～２０００ｎｍである、請求項９又は１０に記載の破骨細胞分化抑制用組成物。
【請求項12】
液体状、スラリー状、ペースト状、粉末状、又は顆粒状である、請求項１～１１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項13】
生体及び／又は環境に使用するための、請求項１～１２の何れか一項に記載の組成物。
【請求項14】
医薬品、医薬部外品、動物用医薬品、又は日用製品である、請求項１～１３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項15】
洗口剤、歯磨剤、身体用洗剤、洗濯用洗剤、身体用殺菌剤、日用品用殺菌剤、医療機器用殺菌剤、又は環境用除菌・抗菌剤である、請求項１～１４の何れか一項に記載の組成物。
【手続補正書】
【提出日】2024-07-25
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】