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▶ ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024001073
(43)【公開日】2024-01-09
(54)【発明の名称】抗グリコＭＵＣ１抗体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20231226BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20231226BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20231226BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20231226BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20231226BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20231226BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20231226BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20231226BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231226BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231226BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20231226BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231226BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20231226BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20231226BHJP
A61K 31/427 20060101ALI20231226BHJP
A61K 31/537 20060101ALI20231226BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20231226BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231226BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20231226BHJP
G01N 33/574 20060101ALI20231226BHJP
C12N 5/0783 20100101ALN20231226BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/12
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N15/867 Z
C07K16/30
C07K19/00
C07K16/46
C12N5/10
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K47/68
A61K45/00
A61K38/07
A61K38/08
A61K31/427
A61K31/537
A61K39/39
A61P35/00
G01N33/531 A
G01N33/574 B
C12N5/0783
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023165289
(22)【出願日】2023-09-27
(62)【分割の表示】P 2020543460の分割
【原出願日】2017-10-24
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．プルロニック
３．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520145399
【氏名又は名称】ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100181168
【弁理士】
【氏名又は名称】丸山 智裕
(72)【発明者】
【氏名】ホワイト，セイヤー
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントに特異的に結合する抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに関連の融合タンパク質および抗体－薬物コンジュゲート、加えてこのような生体分子をコードする核酸を提供する。さらに、がん療法のための、抗体、抗原結合フラグメント、融合タンパク質、抗体－薬物コンジュゲートおよび核酸の使用を提供する。
【解決手段】ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合し；ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、特定の配列の重鎖可変（ＶＨ）配列および軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【選択図】なし
【解決手段】ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合し；ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、特定の配列の重鎖可変（ＶＨ）配列および軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優
先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項2】
ａ．精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、
ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化さ
れたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（以下
、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する、
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化さ
れたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（以下
、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する、
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項3】
配列番号３３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２９のア
ミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列
番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ
２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項１または２に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列
番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ
２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項１または２に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項4】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ
１抗体または抗原結合フラグメント。
１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項5】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項6】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項7】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項8】
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ
１抗体または抗原結合フラグメント。
１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項9】
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項10】
ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵＣ
１抗体または抗原結合フラグメント。
１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項11】
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項12】
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項13】
ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項14】
ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項15】
前記ＶＨが、配列番号５～７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番
号８～１０のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原
結合フラグメント。
号８～１０のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原
結合フラグメント。
【請求項16】
前記ＶＨが、配列番号２３～２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、
配列番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭ
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
配列番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭ
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項17】
前記ＶＨが、配列番号２８、２９、および２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前
記ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗
グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
記ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の抗
グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項18】
キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体
または抗原結合フラグメント。
または抗原結合フラグメント。
【請求項19】
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項20】
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項21】
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項22】
前記ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４のアミノ酸配
列を含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
。
列を含む、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
。
【請求項23】
多価である、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ント。
ント。
【請求項24】
単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、請求項１または２に記載の抗グリコ
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項25】
前記ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、請
求項２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
求項２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項26】
前記ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、４～１５アミノ
酸のリンカー配列に共有結合している、請求項２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または
抗原結合フラグメント。
酸のリンカー配列に共有結合している、請求項２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または
抗原結合フラグメント。
【請求項27】
多重特異性抗体の形態である、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または
抗原結合フラグメント。
抗原結合フラグメント。
【請求項28】
前記多重特異性抗体が、前記第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二
重特異性抗体である、請求項２７に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ント。
重特異性抗体である、請求項２７に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ント。
【請求項29】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞
誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、請求項２８に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、請求項２８に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項30】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、請求項２９に記載の抗グリコＭＵＣ
１抗体または抗原結合フラグメント。
１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項31】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、請求項３０に記載の抗グリコ
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項32】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬである、請求項３０に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項33】
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬである、請求項３０に記載の抗
グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項34】
前記二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、請求項２９に記載の抗グリコＭ
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項35】
前記二重特異性抗体が、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、請求項２９に記
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項36】
前記二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）である、請求項２９に記
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項37】
前記第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、請求項２８に記載の抗グリコＭ
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項38】
前記第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＭＵＣ１
エピトープである、請求項２８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメン
ト。
エピトープである、請求項２８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメン
ト。
【請求項39】
前記第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、請求項２８に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項40】
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ
、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、請求
項３９に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、請求
項３９に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項41】
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、前記ＣＤ３エピトープは、任意選
択でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、請求項４０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体
または抗原結合フラグメント。
択でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、請求項４０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体
または抗原結合フラグメント。
【請求項42】
前記ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ３
イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、請求項４１に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、請求項４１に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項43】
検出可能な部分にコンジュゲートされている、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
Ｃ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項44】
検出可能なマーカーが、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、請求項４３に記
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項45】
少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、請求項１または２に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
【請求項46】
前記第２のアミノ酸配列が、４－１ＢＢ、ＣＤ３－ゼータ、またはそのフラグメントの
アミノ酸配列である、請求項４５に記載の融合タンパク質。
アミノ酸配列である、請求項４５に記載の融合タンパク質。
【請求項47】
前記第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、請求項４５に記載の
融合タンパク質。
融合タンパク質。
【請求項48】
前記融合ペプチドが、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドまたは４－１ＢＢ（ＣＤ
１３７）－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、請求項４７に記載の融合タンパク質。
１３７）－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、請求項４７に記載の融合タンパク質。
【請求項49】
前記第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメント
のアミノ酸配列である、請求項４５に記載の融合タンパク質。
のアミノ酸配列である、請求項４５に記載の融合タンパク質。
【請求項50】
前記Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａである、請
求項４９に記載の融合タンパク質。
求項４９に記載の融合タンパク質。
【請求項51】
請求項２４に記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項52】
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、ヒトＣＤ８リーダーペプチド、前記ｓｃＦｖ、
ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナル
伝達ドメインを含む、請求項５１に記載のＣＡＲ。
ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナル
伝達ドメインを含む、請求項５１に記載のＣＡＲ。
【請求項53】
細胞傷害性物質にコンジュゲートした、請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗
体または抗原結合フラグメントを含む抗体－薬物コンジュゲート。
体または抗原結合フラグメントを含む抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項54】
前記細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エンジイ
ン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイ
ド、またはビンカアルカロイドである、請求項５３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
ン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイ
ド、またはビンカアルカロイドである、請求項５３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項55】
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントが、リンカーを介して前記細胞
傷害性物質にコンジュゲートされている、請求項５４に記載の抗体－薬物コンジュゲート
。
傷害性物質にコンジュゲートされている、請求項５４に記載の抗体－薬物コンジュゲート
。
【請求項56】
前記リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、請求項５５に記載の抗体－薬物コン
ジュゲート。
ジュゲート。
【請求項57】
切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、請求項５６に
記載の抗体－薬物コンジュゲート。
記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項58】
前記リンカーが、ジペプチドを含む、請求項５７に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項59】
前記ジペプチドが、ｖａｌ－ｃｉｔまたはｐｈｅ－ｌｙｓである、請求項５８に記載の
抗体－薬物コンジュゲート。
抗体－薬物コンジュゲート。
【請求項60】
切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、請求項５６に記載の抗
体－薬物コンジュゲート。
体－薬物コンジュゲート。
【請求項61】
加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、請求項６０に記載の抗体－薬物
コンジュゲート。
コンジュゲート。
【請求項62】
切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、請求項５６に記載の抗体－薬物
コンジュゲート。
コンジュゲート。
【請求項63】
請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのコード
領域を含む核酸。
領域を含む核酸。
【請求項64】
前記コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、請求項６
３に記載の核酸。
３に記載の核酸。
【請求項65】
請求項６３に記載の核酸を含むベクター。
【請求項66】
ウイルスベクターである、請求項６５に記載のベクター。
【請求項67】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項６６に記載のベクタ
ー。
ー。
【請求項68】
請求項６３に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
【請求項69】
請求項５１に記載のＣＡＲを発現するように操作されたヒトＴ細胞である宿主細胞。
【請求項70】
請求項６５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項71】
請求項５１に記載のＣＡＲをコードするベクターを含むＴ細胞である宿主細胞。
【請求項72】
（ａ）請求項１または２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、
および
（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤
を含む医薬組成物。
および
（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤
を含む医薬組成物。
【請求項73】
がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１または２に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む方法。
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む方法。
【請求項74】
前記対象が、乳がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、または結腸
直腸がんを罹っている、請求項７３に記載の方法。
直腸がんを罹っている、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
生物学的サンプルにおいてがんを検出する方法であって、サンプルを、請求項１または
２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法
。
２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法
。
【請求項76】
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することをさら
に含む、請求項７５に記載の方法。
に含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項77】
前記結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、および／
または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、請求項７５に記載の方法。
または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、請求項７５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
１．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、これによりそ
の全体が参照により組み入れられる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１７年１０月２４日
に作成され、ＧＯＴ－００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと名付け
られ、３３，２６５バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、これによりそ
の全体が参照により組み入れられる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１７年１０月２４日
に作成され、ＧＯＴ－００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと名付け
られ、３３，２６５バイトのサイズである。
【背景技術】
【0002】
２．背景
ヒトムチンＭＵＣ１は、単層上皮および腺上皮の頂端表面上に発現される多形性の膜貫
通糖タンパク質である（Taylor-Papadimitriou et al., 1999）。ＭＵＣ１は、腺癌で高
度に過剰発現され、異常にＯ－グリコシル化される。ムチンの細胞外ドメインは、５つの
可能性のあるＯ－グリコシル化のための部位を有する２０アミノ酸残基の可変数タンデム
リピート（ＴＲ）（２５～１２５）を含有する。Ｏ－グリカンは、がん細胞中で不完全に
プロセシングされ、結果として汎癌（pancarcinoma）炭水化物抗原Ｔｎ（ＧａｌＮＡｃα
１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）の発現が起こる（Springer, 1984）。単純なムチン型Ｏ－グリ
カンであるＴｎは腺癌（乳房および卵巣がんを含む）で広く発現され、正常な成人組織で
は限定された分布を示す（Springer, 1984）。がんにおけるこれらのＯ－グリカンの発現
は、予後不良と相関しており、がん患者ではこれらの炭水化物ハプテンに対する天然抗体
が増加する（Miles et al., 1995；Soares et al., 1996；Werther et al., 1996）。当
業界においてがん細胞で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープを利用する治療法への
必要性がある。
ヒトムチンＭＵＣ１は、単層上皮および腺上皮の頂端表面上に発現される多形性の膜貫
通糖タンパク質である（Taylor-Papadimitriou et al., 1999）。ＭＵＣ１は、腺癌で高
度に過剰発現され、異常にＯ－グリコシル化される。ムチンの細胞外ドメインは、５つの
可能性のあるＯ－グリコシル化のための部位を有する２０アミノ酸残基の可変数タンデム
リピート（ＴＲ）（２５～１２５）を含有する。Ｏ－グリカンは、がん細胞中で不完全に
プロセシングされ、結果として汎癌（pancarcinoma）炭水化物抗原Ｔｎ（ＧａｌＮＡｃα
１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）の発現が起こる（Springer, 1984）。単純なムチン型Ｏ－グリ
カンであるＴｎは腺癌（乳房および卵巣がんを含む）で広く発現され、正常な成人組織で
は限定された分布を示す（Springer, 1984）。がんにおけるこれらのＯ－グリカンの発現
は、予後不良と相関しており、がん患者ではこれらの炭水化物ハプテンに対する天然抗体
が増加する（Miles et al., 1995；Soares et al., 1996；Werther et al., 1996）。当
業界においてがん細胞で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープを利用する治療法への
必要性がある。
【発明の概要】
【0003】
３．要約
本開示は、グリコＭＵＣ１のがん特異的なエピトープに選択的な抗体および抗原結合フ
ラグメントに基づく治療剤および診断剤を提供することによって、グリコペプチドバリア
ントの腫瘍特異性を獲得するものである。
本開示は、グリコＭＵＣ１のがん特異的なエピトープに選択的な抗体および抗原結合フ
ラグメントに基づく治療剤および診断剤を提供することによって、グリコペプチドバリア
ントの腫瘍特異性を獲得するものである。
【0004】
本発明の開示は、ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントに結合する抗グリコ
ＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の開示はさらに、抗グ
リコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質および抗体－薬物コ
ンジュゲート、ならびに抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメントおよび融合タンパ
ク質をコードする核酸を提供する。
ＭＵＣ１抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の開示はさらに、抗グ
リコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質および抗体－薬物コ
ンジュゲート、ならびに抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメントおよび融合タンパ
ク質をコードする核酸を提供する。
【0005】
本発明の開示はさらに、がん療法のための、抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメ
ント、融合タンパク質、抗体－薬物コンジュゲートおよび核酸の使用方法を提供する。
ント、融合タンパク質、抗体－薬物コンジュゲートおよび核酸の使用方法を提供する。
【0006】
特定の態様において、本開示は、ＭＵＣ１のがん特異的なグリコシル化バリアントと、
第２のエピトープとに結合する、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体および抗原結合フラグメントを提供する。第２のエピトープは、ＭＵＣ１それ自
体、がん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質、または活性化Ｔ細胞などの異
なる細胞上に存在する別のタンパク質のいずれの上にあるものでもよい。さらに、コドン
最適化されたコード領域を含む核酸、および特定の宿主細胞における発現にコドン最適化
されていないコード領域を含む核酸などの抗体をコードする核酸も開示される。
第２のエピトープとに結合する、二重特異性および他の多重特異性を有する抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体および抗原結合フラグメントを提供する。第２のエピトープは、ＭＵＣ１それ自
体、がん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質、または活性化Ｔ細胞などの異
なる細胞上に存在する別のタンパク質のいずれの上にあるものでもよい。さらに、コドン
最適化されたコード領域を含む核酸、および特定の宿主細胞における発現にコドン最適化
されていないコード領域を含む核酸などの抗体をコードする核酸も開示される。
【0007】
抗グリコＭＵＣ１抗体および結合フラグメントは、融合パートナーを含有する融合タン
パク質の形態であり得る。融合パートナーは、第２の機能、例えば、Ｔ細胞シグナル伝達
タンパク質のシグナル伝達ドメインのシグナル伝達機能、Ｔ細胞活性化のペプチドモジュ
レーター、または標識システムの酵素的な要素を提供するのに有用であり得る。例示的な
Ｔ細胞シグナル伝達タンパク質としては、４－１ＢＢ、ＣＯ３Ｃ、ならびに融合ペプチド
、例えば、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータおよび４－１ＢＢ－ＣＤ３－ゼータが挙げられる。
４－１ＢＢ、またはＣＤ１３７は、Ｔ細胞の共刺激受容体であり、ＣＤ３－ゼータは、Ｔ
細胞抗原受容体のシグナル伝達要素である。第２の機能を提供する部分は、Ｔ細胞活性化
のモジュレーター、例えばＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａ、またはＩＬ－１５／ＩＬ－１５
Ｒａ融合であってもよく、またはインビボまたはインビトロでの結合の程度および／また
は場所をモニターするのに有用な標識システムの標識または酵素的な要素をコードしてい
てもよい。Ｔ細胞、例えば自己Ｔ細胞の状況下に置かれた、これらの予防および治療活性
を有する生体分子をコードするコンストラクトは、本開示の一部の実施形態において、様
々ながんを防止または処置するための、養子導入されたＴ細胞を補充するための強力なプ
ラットフォームを提供する。
パク質の形態であり得る。融合パートナーは、第２の機能、例えば、Ｔ細胞シグナル伝達
タンパク質のシグナル伝達ドメインのシグナル伝達機能、Ｔ細胞活性化のペプチドモジュ
レーター、または標識システムの酵素的な要素を提供するのに有用であり得る。例示的な
Ｔ細胞シグナル伝達タンパク質としては、４－１ＢＢ、ＣＯ３Ｃ、ならびに融合ペプチド
、例えば、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータおよび４－１ＢＢ－ＣＤ３－ゼータが挙げられる。
４－１ＢＢ、またはＣＤ１３７は、Ｔ細胞の共刺激受容体であり、ＣＤ３－ゼータは、Ｔ
細胞抗原受容体のシグナル伝達要素である。第２の機能を提供する部分は、Ｔ細胞活性化
のモジュレーター、例えばＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａ、またはＩＬ－１５／ＩＬ－１５
Ｒａ融合であってもよく、またはインビボまたはインビトロでの結合の程度および／また
は場所をモニターするのに有用な標識システムの標識または酵素的な要素をコードしてい
てもよい。Ｔ細胞、例えば自己Ｔ細胞の状況下に置かれた、これらの予防および治療活性
を有する生体分子をコードするコンストラクトは、本開示の一部の実施形態において、様
々ながんを防止または処置するための、養子導入されたＴ細胞を補充するための強力なプ
ラットフォームを提供する。
【0008】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
表１に記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によって
コードされる）。明確にするために、この文書中で用語「抗グリコＭＵＣ１抗体」が使用
される場合、それは、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重
特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体、単一特異性および多重特異性抗体の抗原結合フラ
グメント、ならびに抗体およびその抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およ
びコンジュゲートを含むことが意図される。同様に、用語「抗グリコＭＵＣ１抗体または
抗原結合フラグメント」が使用される場合、それはまた、文脈上別段の指示がない限り、
単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原
結合フラグメントに加えて、このような抗体および抗原結合フラグメントを含有する融合
タンパク質およびコンジュゲートも含むことが意図される。
表１に記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によって
コードされる）。明確にするために、この文書中で用語「抗グリコＭＵＣ１抗体」が使用
される場合、それは、文脈上別段の指示がない限り、単一特異性および多重特異性（二重
特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体、単一特異性および多重特異性抗体の抗原結合フラ
グメント、ならびに抗体およびその抗原結合フラグメントを含有する融合タンパク質およ
びコンジュゲートを含むことが意図される。同様に、用語「抗グリコＭＵＣ１抗体または
抗原結合フラグメント」が使用される場合、それはまた、文脈上別段の指示がない限り、
単一特異性および多重特異性（二重特異性を含む）抗グリコＭＵＣ１抗体およびその抗原
結合フラグメントに加えて、このような抗体および抗原結合フラグメントを含有する融合
タンパク質およびコンジュゲートも含むことが意図される。
【0009】
他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、表
１～３に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチド配列によ
ってコードされる）。表１に記載のＣＤＲ配列は、ＣＤＲの境界を定義するための、ＩＭ
ＧＴ（Lefranc et al., 2003, Dev Comparat Immunol 27:55-77, Kabat （Kabat et al.,
1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Se
rvice, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）、およびChothia（Al-Lazikan
i et al., 1997, J. Mol. Biol 273:927-948）のスキームに従って定義されるＣＤＲ配列
を含む。表２に記載のＣＤＲ配列は、表１に示されるＣＤＲ配列の組み合わされたオーバ
ーラップ領域であり、ＩＭＧＴ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ配列は下線の太字で示
される。表３に記載のＣＤＲ配列は、表１に示されるＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ
領域である。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントのフレームワ
ーク配列は、表１に記載の天然マウスのフレームワーク配列であってもよいし、または非
天然（例えば、ヒト化された、またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
１～３に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチド配列によ
ってコードされる）。表１に記載のＣＤＲ配列は、ＣＤＲの境界を定義するための、ＩＭ
ＧＴ（Lefranc et al., 2003, Dev Comparat Immunol 27:55-77, Kabat （Kabat et al.,
1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Se
rvice, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）、およびChothia（Al-Lazikan
i et al., 1997, J. Mol. Biol 273:927-948）のスキームに従って定義されるＣＤＲ配列
を含む。表２に記載のＣＤＲ配列は、表１に示されるＣＤＲ配列の組み合わされたオーバ
ーラップ領域であり、ＩＭＧＴ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ配列は下線の太字で示
される。表３に記載のＣＤＲ配列は、表１に示されるＣＤＲ配列の共通のオーバーラップ
領域である。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントのフレームワ
ーク配列は、表１に記載の天然マウスのフレームワーク配列であってもよいし、または非
天然（例えば、ヒト化された、またはヒト）フレームワーク配列であってもよい。
【0010】
【表1-1】
【0011】
【表1-2】
【0012】
【表1-3】
【0013】
【表1-4】
【0014】
【表2】
【0015】
【表3】
【0016】
特定の態様において、本開示は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メントは、番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ
酸配列を含むＣＤＲを含むことを提供する。したがって、特定の実施形態において、本開
示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３３のアミノ酸配列
を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の
アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列
番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣ
ＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号５、２３、２８
、または３２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番
号６または２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列
番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号３０
または２６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号
２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１０の
アミノ酸配列を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合
フラグメントは、配列番号５～７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号８～１０の軽鎖ＣＤＲを含
む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
配列番号２３～２５の重鎖ＣＤＲならびに配列番号２６、２７、および１０の軽鎖ＣＤＲ
を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
は、配列番号２８、２９、および２５の重鎖ＣＤＲならびに配列番号３０、９、および３
１の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結
合フラグメントは、配列番号３２、２４、および７の重鎖ＣＤＲならびに配列番号２６、
２７、および１０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗
体または抗原結合フラグメントは、配列番号３３、２９、および２５の重鎖ＣＤＲならび
に配列番号８、９、および３１の軽鎖ＣＤＲを含む。抗体または抗原結合フラグメントは
、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはこれらの抗原結合フラグ
メントであってもよい。
メントは、番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ
酸配列を含むＣＤＲを含むことを提供する。したがって、特定の実施形態において、本開
示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３３のアミノ酸配列
を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の
アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列
番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣ
ＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号５、２３、２８
、または３２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番
号６または２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列
番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号３０
または２６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号
２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１０の
アミノ酸配列を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合
フラグメントは、配列番号５～７の重鎖ＣＤＲおよび配列番号８～１０の軽鎖ＣＤＲを含
む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
配列番号２３～２５の重鎖ＣＤＲならびに配列番号２６、２７、および１０の軽鎖ＣＤＲ
を含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
は、配列番号２８、２９、および２５の重鎖ＣＤＲならびに配列番号３０、９、および３
１の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結
合フラグメントは、配列番号３２、２４、および７の重鎖ＣＤＲならびに配列番号２６、
２７、および１０の軽鎖ＣＤＲを含む。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗
体または抗原結合フラグメントは、配列番号３３、２９、および２５の重鎖ＣＤＲならび
に配列番号８、９、および３１の軽鎖ＣＤＲを含む。抗体または抗原結合フラグメントは
、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはこれらの抗原結合フラグ
メントであってもよい。
【0017】
さらなる態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは
、それぞれ配列番号３および４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラ
グメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号３および４
の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖およ
び軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
、それぞれ配列番号３および４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体または抗原結合フラ
グメントと競合する。さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号３および４
の少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖およ
び軽鎖可変領域を有する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【0018】
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメ
ントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重
鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に
共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞誘導体の形態であってもよいし、また
はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメ
ントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重
鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に
共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞誘導体の形態であってもよいし、また
はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
【0019】
抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメントの多量体
、二重特異性単鎖可変フラグメント、および二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体の
形態であってもよい。一部の実施形態において、単鎖可変フラグメントの多量体は、２価
単鎖可変フラグメント、トリボディ（tribody）またはテトラボディ（tetrabody）から選
択される。これらの実施形態の一部において、二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体
は、二重特異性Ｔ細胞誘導体である。
、二重特異性単鎖可変フラグメント、および二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体の
形態であってもよい。一部の実施形態において、単鎖可変フラグメントの多量体は、２価
単鎖可変フラグメント、トリボディ（tribody）またはテトラボディ（tetrabody）から選
択される。これらの実施形態の一部において、二重特異性単鎖可変フラグメントの多量体
は、二重特異性Ｔ細胞誘導体である。
【0020】
本開示の他の態様は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントをコ
ードする核酸に関心を寄せている。一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体また
は抗原結合フラグメントをコードする核酸の部分は、ヒト細胞における発現のためにコド
ン最適化されている。特定の態様において、本開示は、配列番号１１または配列番号１３
と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖ヌク
レオチド配列、および配列番号１２または配列番号１４と少なくとも９５％、９８％、９
９％、または９９．５％の配列同一性を有する軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされ
た重鎖および軽鎖可変領域を有する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを
提供する。核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクタ
ー）および宿主細胞も本開示の範囲内である。重鎖および軽鎖をコードする配列は、単一
のベクターに存在していてもよいし、または別個のベクターに存在していてもよい。
ードする核酸に関心を寄せている。一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体また
は抗原結合フラグメントをコードする核酸の部分は、ヒト細胞における発現のためにコド
ン最適化されている。特定の態様において、本開示は、配列番号１１または配列番号１３
と少なくとも９５％、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖ヌク
レオチド配列、および配列番号１２または配列番号１４と少なくとも９５％、９８％、９
９％、または９９．５％の配列同一性を有する軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされ
た重鎖および軽鎖可変領域を有する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを
提供する。核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクタ
ー）および宿主細胞も本開示の範囲内である。重鎖および軽鎖をコードする配列は、単一
のベクターに存在していてもよいし、または別個のベクターに存在していてもよい。
【0021】
本開示のさらに別の態様は、抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸（ま
たは核酸の対）、ベクター（またはベクターの対）または本開示による宿主細胞、および
生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物である。
たは核酸の対）、ベクター（またはベクターの対）または本開示による宿主細胞、および
生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物である。
【0022】
本開示のさらに別の態様は、キメラ抗原受容体を作製する方法であって、コード領域の
発現に好適な条件下で、本開示による核酸またはベクターを含む細胞をインキュベートす
ること、およびキメラ抗原受容体を収集することを含む方法である。
発現に好適な条件下で、本開示による核酸またはベクターを含む細胞をインキュベートす
ること、およびキメラ抗原受容体を収集することを含む方法である。
【0023】
本開示の別の態様は、がんを検出する方法であって、細胞または組織サンプルを、本開
示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗体が
細胞または組織サンプルに結合しているかどうかを検出することを含む方法である。
示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および抗体が
細胞または組織サンプルに結合しているかどうかを検出することを含む方法である。
【0024】
本開示のさらに別の態様は、がんを処置する方法であって、予防的または治療的有効量
の本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細
胞または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法である。
の本開示による抗グリコＭＵＣ１抗体、抗原結合フラグメント、核酸、ベクター、宿主細
胞または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法である。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】ＭＵＣ１に対するグリコＭＵＣ１へのＧＯ２の結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。
【図2】結腸がん組織へのＧＯ２の結合を示す図である。ｍＡｂのＧＯ２を使用する浸潤性の結腸癌組織および隣接する健康な組織の免疫組織化学的な標識。ｍＡｂのＧＯ２は、結腸がん組織への別個の結合を示し、がん細胞の細胞内と表面構造の両方で高い反応性を有する。対照的に、健康な結腸細胞の表面構造への反応性は見られない。
【図3】膵臓がん組織へのＧＯ２の結合を示す図である。ｍＡｂのＧＯ２を使用する膵臓がん組織の免疫組織化学的な標識。ｍＡｂ ＧＯ２は、膵臓がん細胞への別個の結合を示す。対照的に、周囲の健康な組織への反応性はないかまたは限定的であった。
【図4】乳がん組織へのＧＯ２の結合を示す図である。ｍＡｂのＧＯ２を使用する乳がん組織の免疫組織化学的な標識。ｍＡｂ ＧＯ２は、浸潤性の乳がん細胞への別個の結合を示した。
【図5】抗体ＧＯ２および抗チューブリン剤であるモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）にコンジュゲートした二次抗体を用いた抗体依存性細胞傷害アッセイの結果を示す図である。
【図6】ＧＯ２を使用して循環腫瘍細胞を定量化するＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。Ｘ軸は、細胞の数を示し、Ｙ軸は、ＯＤ４５０値を示す。
【図8】例示的な抗グリコＭＵＣ１および抗ＣＤ３Ｔ細胞二重特異性抗体（ＴＣＢ）の略図である。
【図9A】未消化の患者由来の腫瘍サンプル（気管支および肺の悪性新生物：中葉、気管支または肺、扁平上皮癌）および５０ｎＭの異なるＴＣＢを用いたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ活性化アッセイを示す図である。
【図9B】未消化の患者由来の腫瘍サンプル（気管支および肺の悪性新生物：中葉、気管支または肺、扁平上皮癌）および５ｎＭの異なるＴＣＢを用いたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ活性化アッセイを示す図である。
【図10】未消化の患者由来の腫瘍サンプル（気管支および肺の悪性新生物：下葉、気管支または肺、非角化型扁平上皮癌）および５０ｎＭの異なるＴＣＢを用いたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ活性化アッセイを示す図である。
【図11】未消化の患者由来の腫瘍サンプル（気管支および肺の悪性新生物：上葉、気管支または肺、腺房型を有する腺癌）および５０ｎＭの異なるＴＣＢを用いたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ活性化アッセイを示す図である。
【図12A】フローサイトメトリーによって測定された、ＭＣＦ７ ｃｓ細胞上で発現されたＭＵＣ１へのＧＯ２ ＴＣＢの結合を示す図である。
【図12B】フローサイトメトリーによって測定された、Ｔ３Ｍ４ ｐｚｆｖ細胞上で発現されたＭＵＣ１へのＧＯ２ ＴＣＢの結合を示す図である。
【図13-1】２人の健康なドナー由来のＰＢＭＣの存在下における、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞上のＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、加えて、Ｔ３Ｍ４ ｐｚｆｖ上でのＧＯ２ ＴＣＢによるＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの放出によって測定された、腫瘍細胞の致死およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である（ドナー１ 図１３Ａ～１３Ｌ）。図１３Ａ～１３Ｘのそれぞれにつき凡例は同じである。
【図13-2】２人の健康なドナー由来のＰＢＭＣの存在下における、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞上のＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、加えて、Ｔ３Ｍ４ ｐｚｆｖ上でのＧＯ２ ＴＣＢによるＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの放出によって測定された、腫瘍細胞の致死およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である（ドナー１ 図１３Ａ～１３Ｌ）。図１３Ａ～１３Ｘのそれぞれにつき凡例は同じである。
【図13-3】２人の健康なドナー由来のＰＢＭＣの存在下における、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞上のＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、加えて、Ｔ３Ｍ４ ｐｚｆｖ上でのＧＯ２ ＴＣＢによるＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの放出によって測定された、腫瘍細胞の致死およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である（ドナー２ 図１３Ｍ～１３Ｘ）。図１３Ａ～１３Ｘのそれぞれにつき凡例は同じである。
【図13-4】２人の健康なドナー由来のＰＢＭＣの存在下における、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞上のＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、加えて、Ｔ３Ｍ４ ｐｚｆｖ上でのＧＯ２ ＴＣＢによるＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの放出によって測定された、腫瘍細胞の致死およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である（ドナー２ 図１３Ｍ～１３Ｘ）。図１３Ａ～１３Ｘのそれぞれにつき凡例は同じである。
【図14】ＰＢＭＣの存在下におけるＭＣＦ７ ｃｓ上のＧＯ２ ＴＣＢを用いたＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ４Ｔ細胞上のＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節によって測定された、腫瘍細胞の致死（図１４Ａ～１４Ｂ）およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である（それぞれ図１４Ｃ～１４Ｆ）。図１４Ａ～１４Ｆのそれぞれにつき凡例は同じである。
【図16】ＰＢＭＣの存在下における、ＭＣＦ１０Ａ細胞上のＧＯ２ ＴＣＢおよびＨＭＦＧ１ ＴＣＢによる、ＣＤ４Ｔ細胞（図１６Ｂ）およびＣＤ８Ｔ細胞（図１６Ｃ）上でのＣＤ２５の上方調節によって測定された、腫瘍細胞の致死（図１６Ａ）およびＴ細胞の活性化の誘導を示す図である。
【図17】グリコペプチドがカップリングされたフローセルを通って流動するＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢのイラストである。
【図18A】ヒトおよびカニクイザル（cynomolgous）のグリコペプチドへのＧＯ２の結合を示すセンサーグラムである。
【図18B】ヒトおよびカニクイザルのグリコペプチドへのＧＯ２ ＴＣＢの結合を示すセンサーグラムである。
【発明を実施するための形態】
【0026】
５．詳細な説明
５．１ 抗体
本発明者は、腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコフォームに向けられた新規の抗
体を開発した。これらは抗体５Ｆ７によって例示され、本明細書では「ＧＯ２」と称され
る。腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコシル化パターンを模擬するように、精製さ
れた組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるポリペプチドのＧａｌＮＡｃ－Ｔ２
、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された、ＭＵＣ１中に
存在するタンデムリピートの１つ、ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番
号５０）のグリコシル化された６０－ｍｅｒの代表的な３つのコピーに結合する抗体に関
するスクリーニングでＧＯ２を同定した。
５．１ 抗体
本発明者は、腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコフォームに向けられた新規の抗
体を開発した。これらは抗体５Ｆ７によって例示され、本明細書では「ＧＯ２」と称され
る。腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリコシル化パターンを模擬するように、精製さ
れた組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるポリペプチドのＧａｌＮＡｃ－Ｔ２
、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された、ＭＵＣ１中に
存在するタンデムリピートの１つ、ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ（配列番
号５０）のグリコシル化された６０－ｍｅｒの代表的な３つのコピーに結合する抗体に関
するスクリーニングでＧＯ２を同定した。
【0027】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、抗体ＧＯ２によって例示され、がんの診断および療
法におけるツールとして有用である。
法におけるツールとして有用である。
【0028】
したがって、特定の態様において、本開示は、腫瘍細胞上に提示されるＭＵＣ１のグリ
コフォーム（本明細書では「グリコＭＵＣ１」と称される）に、好ましくは、米国特許第
６，４６５，２２０号明細書に記載される、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、
およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された６０－ｍｅｒのペプチド（ＶＴＳＡＰＤ
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列番号４７）に結合する抗体および抗原結合フラ
グメントを提供する。
コフォーム（本明細書では「グリコＭＵＣ１」と称される）に、好ましくは、米国特許第
６，４６５，２２０号明細書に記載される、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、
およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された６０－ｍｅｒのペプチド（ＶＴＳＡＰＤ
ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列番号４７）に結合する抗体および抗原結合フラ
グメントを提供する。
【0029】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作され
た、および／またはそれ以外の方法で性質が改変されたものであってもよく、例えば、こ
れらに限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、単鎖抗体、
二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体などが挙げられる。様々な実施形態において、抗
体は、抗体の定常領域の全部または一部を含む。一部の実施形態において、定常領域は、
ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、およびＩｇＭから選択されるアイソタイプで
ある。具体的な実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、ＩｇＧ１の定常領
域のアイソタイプを含む。
た、および／またはそれ以外の方法で性質が改変されたものであってもよく、例えば、こ
れらに限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、単鎖抗体、
二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体などが挙げられる。様々な実施形態において、抗
体は、抗体の定常領域の全部または一部を含む。一部の実施形態において、定常領域は、
ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、およびＩｇＭから選択されるアイソタイプで
ある。具体的な実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、ＩｇＧ１の定常領
域のアイソタイプを含む。
【0030】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術を介
して産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、あらゆる真核、原核、また
はファージクローンを含み、これらは、当業界において利用可能な、または公知のあらゆ
る手段によって単一のクローンから誘導される。本発明の開示において有用なモノクロー
ナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれら
の組合せの使用を含む当業界において公知の様々な技術を使用して調製することができる
。ヒトにおける抗グリコＭＵＣ１抗体のインビボでの使用を含む本発明の開示の多くの使
用において、キメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を、好適に使用す
ることができる。
して産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、あらゆる真核、原核、また
はファージクローンを含み、これらは、当業界において利用可能な、または公知のあらゆ
る手段によって単一のクローンから誘導される。本発明の開示において有用なモノクロー
ナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれら
の組合せの使用を含む当業界において公知の様々な技術を使用して調製することができる
。ヒトにおける抗グリコＭＵＣ１抗体のインビボでの使用を含む本発明の開示の多くの使
用において、キメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を、好適に使用す
ることができる。
【0031】
用語「キメラ」抗体は、本明細書で使用される場合、非ヒト免疫グロブリン、例えばラ
ットまたはマウス抗体由来の可変配列と、典型的にはヒト免疫グロブリンテンプレートか
ら選ばれるヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するた
めの方法は、当業界において公知である。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細
書に組み入れられる、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi et al., 1986, B
ioTechniques 4:214-221；Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；
米国特許第５，８０７，７１５号明細書；第４，８１６，５６７号明細書；および第４，
８１６３９７号明細書を参照されたい。
ットまたはマウス抗体由来の可変配列と、典型的にはヒト免疫グロブリンテンプレートか
ら選ばれるヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するた
めの方法は、当業界において公知である。例えば、この参照によりそれらの全体が本明細
書に組み入れられる、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi et al., 1986, B
ioTechniques 4:214-221；Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；
米国特許第５，８０７，７１５号明細書；第４，８１６，５６７号明細書；および第４，
８１６３９７号明細書を参照されたい。
【0032】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化された」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来
の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領
域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に相当し、ＦＲ領域の
全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの
、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体は、免
疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセ
ンサス配列の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化の方法は、当業界において
公知である。例えば、全てが参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Riec
hmann et al., 1988, Nature 332:323-7；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１
号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６１号明細書；第５，６９
３，７６２号明細書；および第６，１８０，３７０号明細書；欧州特許第２３９４００号
明細書；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；米国特許第５，２２５，５
３９号明細書；欧州特許第５９２１０６号明細書；欧州特許第５１９５９６号明細書；Pa
dlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-
814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；ならびに米国特許第
５，５６５，３３２号明細書を参照されたい。
の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領
域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に相当し、ＦＲ領域の
全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの
、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体は、免
疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセ
ンサス配列の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化の方法は、当業界において
公知である。例えば、全てが参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Riec
hmann et al., 1988, Nature 332:323-7；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１
号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６１号明細書；第５，６９
３，７６２号明細書；および第６，１８０，３７０号明細書；欧州特許第２３９４００号
明細書；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；米国特許第５，２２５，５
３９号明細書；欧州特許第５９２１０６号明細書；欧州特許第５１９５９６号明細書；Pa
dlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-
814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；ならびに米国特許第
５，５６５，３３２号明細書を参照されたい。
【0033】
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、さらに、ヒ
ト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グ
ロブリンに関してトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを発現しない動物か
ら単離された抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリー
を使用するファージディスプレイ方法などの当業界において公知の様々な方法によって作
製することができる。これらのそれぞれが参照によりその全体が本明細書に組み入れられ
る、米国特許第４，４４４，８８７号明細書および第４，７１６，１１１号明細書；なら
びにＰＣＴ国際公開第９８／４６６４５号パンフレット；国際公開第９８／５０４３３号
パンフレット；国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９８／１６６５
４号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３
７３５号パンフレット；および国際公開第９１／１０７４１号パンフレットを参照された
い。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブ
リン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用することにより産生することも
できる。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開
第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際
公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；
米国特許第５，４１３，９２３号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３
，４２５号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６６１，０１６号明細書；第
５，５４５，８０６号明細書；第５，８１４，３１８号明細書；第５，８８５，７９３号
明細書；第５，９１６，７７１号明細書；および第５，９３９，５９８号明細書を参照さ
れたい。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「ガイドされる選択」と称さ
れる技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒト
モノクローナル抗体、例えばマウス抗体は、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選
択をガイドするのに使用される（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903を参
照）。
ト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グ
ロブリンに関してトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを発現しない動物か
ら単離された抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリー
を使用するファージディスプレイ方法などの当業界において公知の様々な方法によって作
製することができる。これらのそれぞれが参照によりその全体が本明細書に組み入れられ
る、米国特許第４，４４４，８８７号明細書および第４，７１６，１１１号明細書；なら
びにＰＣＴ国際公開第９８／４６６４５号パンフレット；国際公開第９８／５０４３３号
パンフレット；国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９８／１６６５
４号パンフレット；国際公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３
７３５号パンフレット；および国際公開第９１／１０７４１号パンフレットを参照された
い。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブ
リン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用することにより産生することも
できる。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開
第９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際
公開第９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；
米国特許第５，４１３，９２３号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３
，４２５号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６６１，０１６号明細書；第
５，５４５，８０６号明細書；第５，８１４，３１８号明細書；第５，８８５，７９３号
明細書；第５，９１６，７７１号明細書；および第５，９３９，５９８号明細書を参照さ
れたい。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「ガイドされる選択」と称さ
れる技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒト
モノクローナル抗体、例えばマウス抗体は、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選
択をガイドするのに使用される（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903を参
照）。
【0034】
「霊長類化抗体」は、サル可変領域およびヒト定常領域を含む。霊長類化抗体を産生す
るための方法は、当業界において公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細
書に組み入れられる、米国特許第５，６５８，５７０号明細書；第５，６８１，７２２号
明細書；および第５，６９３，７８０号明細書を参照されたい。
るための方法は、当業界において公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細
書に組み入れられる、米国特許第５，６５８，５７０号明細書；第５，６８１，７２２号
明細書；および第５，６９３，７８０号明細書を参照されたい。
【0035】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、全長（無傷）抗体分子と、グリコＭＵＣ１と結合す
ることが可能な抗原結合フラグメントの両方を含む。抗原結合フラグメントの例としては
、一例として、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラ
グメント、単鎖Ｆｖフラグメントおよび単一ドメインフラグメントが挙げられる。
ることが可能な抗原結合フラグメントの両方を含む。抗原結合フラグメントの例としては
、一例として、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラ
グメント、単鎖Ｆｖフラグメントおよび単一ドメインフラグメントが挙げられる。
【0036】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖（ＣＬ）の定常ドメイン、および重鎖の第１の定常ドメイ
ン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域からの１つまたは
複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付
加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２
ペプシン消化生成物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって産生さ
れる。抗体フラグメントの追加の化学的カップリングは、当業者公知である。Ｆａｂおよ
びＦ（ａｂ’）１フラグメントは無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、無傷抗体より迅速
に動物の循環から排除され、無傷抗体より少ない非特異的な組織結合を有する可能性があ
る（例えば、Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316を参照）。
ン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域からの１つまたは
複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付
加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２
ペプシン消化生成物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって産生さ
れる。抗体フラグメントの追加の化学的カップリングは、当業者公知である。Ｆａｂおよ
びＦ（ａｂ’）１フラグメントは無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、無傷抗体より迅速
に動物の循環から排除され、無傷抗体より少ない非特異的な組織結合を有する可能性があ
る（例えば、Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316を参照）。
【0037】
「Ｆｖ」フラグメントは、完全な標的認識および結合部位を含有する抗体の最小フラグ
メントである。この領域は、しっかりとした非共有結合による会合での１つの重鎖および
１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。この立体配置で、各可
変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位が
規定される。しばしば６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら
、一部の場合において、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを
含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より低い親和性ではあるが標的を認識してそ
れに結合する能力を有する場合がある。
メントである。この領域は、しっかりとした非共有結合による会合での１つの重鎖および
１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。この立体配置で、各可
変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位が
規定される。しばしば６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら
、一部の場合において、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを
含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より低い親和性ではあるが標的を認識してそ
れに結合する能力を有する場合がある。
【0038】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗原結合フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメ
インを含み、この場合、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般的
に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを
さらに含み、これは、ｓｃＦｖが標的結合にとって望ましい構造を形成することを可能に
する。
インを含み、この場合、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般的
に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを
さらに含み、これは、ｓｃＦｖが標的結合にとって望ましい構造を形成することを可能に
する。
【0039】
「単一ドメイン抗体」は、グリコＭＵＣ１に十分な親和性を示す単一のＶＨまたはＶＬ
ドメインで構成される。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ化抗体
である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参
照）。
ドメインで構成される。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ化抗体
である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参
照）。
【0040】
また本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、二重特異性および他の多重特異性抗体であって
もよい。二重特異性抗体は、同一または異なる抗原上の２つの異なるエピトープに対する
結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くの場合、ヒトまたはヒト化抗体抗体である
。本発明の開示において、結合特異性の一方は、グリコＭＵＣ１に向けられていてもよく
、他方は、他のあらゆる抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニッ
ト、組織特異的抗原、ウイルス由来のタンパク質、ウイルスによってコードされたエンベ
ロープタンパク質、細菌由来のタンパク質、または細菌表面タンパク質などに向けられて
いてもよい。特定の好ましい実施形態において、二重特異性および他の多重特異性を有す
る抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントは、第２のＭＵＣ１エピトープ、が
ん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質上のエピトープ、または活性化Ｔ細胞
などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。本開
示の二重特異性抗体は、ＩｇＧ様式の二重特異性抗体および単鎖ベースの二重特異性抗体
を含む。
もよい。二重特異性抗体は、同一または異なる抗原上の２つの異なるエピトープに対する
結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くの場合、ヒトまたはヒト化抗体抗体である
。本発明の開示において、結合特異性の一方は、グリコＭＵＣ１に向けられていてもよく
、他方は、他のあらゆる抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニッ
ト、組織特異的抗原、ウイルス由来のタンパク質、ウイルスによってコードされたエンベ
ロープタンパク質、細菌由来のタンパク質、または細菌表面タンパク質などに向けられて
いてもよい。特定の好ましい実施形態において、二重特異性および他の多重特異性を有す
る抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントは、第２のＭＵＣ１エピトープ、が
ん細胞上でＭＵＣ１と共発現される別のタンパク質上のエピトープ、または活性化Ｔ細胞
などの異なる細胞上に存在する別のタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。本開
示の二重特異性抗体は、ＩｇＧ様式の二重特異性抗体および単鎖ベースの二重特異性抗体
を含む。
【0041】
ＩｇＧ様式の本開示の二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類のＩｇＧ様
式の二重特異性抗体のいずれか、例えば、クアドローマ二重特異性抗体、「ノブ－イン－
ホール（knobs-in-hole）」二重特異性抗体、ＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体、電荷対
を有する二重特異性抗体、一般的な軽鎖二重特異性抗体、１アームの単鎖Ｆａｂ－免疫グ
ロブリンガンマ二重特異性抗体、ジスルフィドで安定化されたＦｖ二重特異性抗体、Ｄｕ
ｅｔＭａｂ、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体、鎖交換操作されたドメインボ
ディの二重特異性抗体、２アームのロイシンジッパーヘテロ二量体モノクローナル二重特
異性抗体、κλボディの二重特異性抗体、二重可変ドメイン二重特異性抗体、および交差
二重可変ドメイン二重特異性抗体であってもよい。例えば、この参照によりそれらの全体
が本明細書に組み入れられる、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497；Milst
ein and Cuello, 1983, Nature 305:537-40；Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9:61
7-621；Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran e
t al., 2010, J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al., 2015 Nature Commun 6:6113
；Schanzer et al., 2014, J Biol Chem 289:18693-706；Metz et al., 2012 Protein En
g Des Sel 25:571-80；Mazor et al., 2015 MAbs 7:377-89；Labrijn et al., 2013 Proc
Natl Acad Sci USA 110:5145-50；Davis et al., 2010 Protein Eng Des Sel 23:195-20
2；Wranik et al., 2012, J Biol Chem 287:43331-9；Gu et al., 2015, PLoS One 10(5
):e0124135；Steinmetz et al., 2016, MAbs 8(5):867-78；Klein et al., 2016, mAbs,
8(6):1010-1020；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017,
Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
式の二重特異性抗体のいずれか、例えば、クアドローマ二重特異性抗体、「ノブ－イン－
ホール（knobs-in-hole）」二重特異性抗体、ＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体、電荷対
を有する二重特異性抗体、一般的な軽鎖二重特異性抗体、１アームの単鎖Ｆａｂ－免疫グ
ロブリンガンマ二重特異性抗体、ジスルフィドで安定化されたＦｖ二重特異性抗体、Ｄｕ
ｅｔＭａｂ、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体、鎖交換操作されたドメインボ
ディの二重特異性抗体、２アームのロイシンジッパーヘテロ二量体モノクローナル二重特
異性抗体、κλボディの二重特異性抗体、二重可変ドメイン二重特異性抗体、および交差
二重可変ドメイン二重特異性抗体であってもよい。例えば、この参照によりそれらの全体
が本明細書に組み入れられる、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497；Milst
ein and Cuello, 1983, Nature 305:537-40；Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9:61
7-621；Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran e
t al., 2010, J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al., 2015 Nature Commun 6:6113
；Schanzer et al., 2014, J Biol Chem 289:18693-706；Metz et al., 2012 Protein En
g Des Sel 25:571-80；Mazor et al., 2015 MAbs 7:377-89；Labrijn et al., 2013 Proc
Natl Acad Sci USA 110:5145-50；Davis et al., 2010 Protein Eng Des Sel 23:195-20
2；Wranik et al., 2012, J Biol Chem 287:43331-9；Gu et al., 2015, PLoS One 10(5
):e0124135；Steinmetz et al., 2016, MAbs 8(5):867-78；Klein et al., 2016, mAbs,
8(6):1010-1020；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et al., 2017,
Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
【0042】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂである。Ｃｒ
ｏｓｓＭａｂ技術は、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公
開第２００９／０８０２５１号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５２号パン
フレット、国際公開第２００９／０８０２５３号パンフレット、国際公開第２００９／０
８０２５４号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、国際公
開第２０１６／０２０３０９号パンフレット、およびSchaefer et al., 2011, Proc Natl
Acad Sci USA 108:11187-92で詳細に記載されている。簡単に言えば、ＣｒｏｓｓＭａｂ
技術は、正しい鎖会合を促進する二重特異性ＩｇＧの１つのＦａｂアーム内の重鎖と軽鎖
との間のドメインの交差に基づく。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特
異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖が交換されている「Ｃｒｏ
ｓｓＭａｂＦＡＢ」抗体であってもよい。他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭ
ａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および
軽鎖の可変ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ」抗体であって
もよい。さらに他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二
重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の定常ドメインのみが
交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ」抗体であってもよい。ＣｒｏｓｓＭａ
ｂＣＨ１－ＣＬ抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢおよびＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬとは
対照的に、予測された副産物を有さず、それゆえに、一部の実施形態において、Ｃｒｏｓ
ｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ二重特異性抗体が好ましい。Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):101
0-1020を参照されたい。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂのさらなる実施形態は、セクション５
．２で後述される。
ｏｓｓＭａｂ技術は、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公
開第２００９／０８０２５１号パンフレット、国際公開第２００９／０８０２５２号パン
フレット、国際公開第２００９／０８０２５３号パンフレット、国際公開第２００９／０
８０２５４号パンフレット、国際公開第２０１３／０２６８３３号パンフレット、国際公
開第２０１６／０２０３０９号パンフレット、およびSchaefer et al., 2011, Proc Natl
Acad Sci USA 108:11187-92で詳細に記載されている。簡単に言えば、ＣｒｏｓｓＭａｂ
技術は、正しい鎖会合を促進する二重特異性ＩｇＧの１つのＦａｂアーム内の重鎖と軽鎖
との間のドメインの交差に基づく。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二重特
異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖が交換されている「Ｃｒｏ
ｓｓＭａｂＦＡＢ」抗体であってもよい。他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭ
ａｂ二重特異性抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および
軽鎖の可変ドメインのみが交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ」抗体であって
もよい。さらに他の実施形態において、本開示のＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体は、二
重特異性ＩｇＧ抗体の一方のアームのＦａｂ部分の重鎖および軽鎖の定常ドメインのみが
交換されている「ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ」抗体であってもよい。ＣｒｏｓｓＭａ
ｂＣＨ１－ＣＬ抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢおよびＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬとは
対照的に、予測された副産物を有さず、それゆえに、一部の実施形態において、Ｃｒｏｓ
ｓＭａｂＣＨ１－ＣＬ二重特異性抗体が好ましい。Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):101
0-1020を参照されたい。本開示のＣｒｏｓｓＭａｂのさらなる実施形態は、セクション５
．２で後述される。
【0043】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、制御されたＦａｂアーム交換二
重特異性抗体である。Ｆａｂアーム交換二重特異性抗体を作製するための方法は、参照に
よりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２０１１／１３１７４
６号パンフレットおよびLabrijn et al., 2014 Nat Protoc. 9(10):2450-63に記載されて
いる。簡単に言えば、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメイン中
に単一の一致する点突然変異を含有する２つの親ＩｇＧ１を別々に発現させること、イン
ビトロで、酸化還元条件下で親ＩｇＧ１を混合して、半分の分子の組換えを可能にするこ
と、および還元体を除去して鎖間のジスルフィド結合を再酸化し、それにより二重特異性
抗体を形成することによって作製することができる。
重特異性抗体である。Ｆａｂアーム交換二重特異性抗体を作製するための方法は、参照に
よりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２０１１／１３１７４
６号パンフレットおよびLabrijn et al., 2014 Nat Protoc. 9(10):2450-63に記載されて
いる。簡単に言えば、制御されたＦａｂアーム交換二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメイン中
に単一の一致する点突然変異を含有する２つの親ＩｇＧ１を別々に発現させること、イン
ビトロで、酸化還元条件下で親ＩｇＧ１を混合して、半分の分子の組換えを可能にするこ
と、および還元体を除去して鎖間のジスルフィド結合を再酸化し、それにより二重特異性
抗体を形成することによって作製することができる。
【0044】
本開示の二重特異性抗体は、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメイン
を含んでいてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインであ
る。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実
施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形
態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２
２８Ｐ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインであ
る。このアミノ酸置換は、インビボにおいてＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減させ
る（Stubenrauch et al., 2010, Drug Metabolism and Disposition 38:84-91を参照）。
さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。よりさら
に特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。ヒト
ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号４２に示される。
を含んでいてもよい。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインであ
る。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実
施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形
態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２
２８Ｐ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）を含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインであ
る。このアミノ酸置換は、インビボにおいてＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減させ
る（Stubenrauch et al., 2010, Drug Metabolism and Disposition 38:84-91を参照）。
さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。よりさら
に特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。ヒト
ＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号４２に示される。
【0045】
特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニ
ットの会合を促進する改変を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の
最も大規模なタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＣＨ３ドメイン中にある。した
がって、一実施形態において、前記改変は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン中にある。
ットの会合を促進する改変を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の
最も大規模なタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＣＨ３ドメイン中にある。した
がって、一実施形態において、前記改変は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン中にある。
【0046】
具体的な実施形態において、前記Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合
を促進する改変は、いわゆる「ノブ－イントゥー－ホール（knob-into-hole）」改変であ
り、これは、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」の改変、およびＦｃド
メインの２つのサブユニットの他方に「ホール（whole）」の改変を含む。ノブ－イント
ゥー－ホール技術は、例えば米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第７，６
９５，９３６号明細書；Ridgway et al., 1996, Prot Eng 9:617-621、およびCarter, J,
2001, Immunol Meth 248:7-15に記載されている。一般的に、本方法は、ヘテロ二量体
形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように、突起部が空洞に入ることができるよう
に、第１のポリペプチドの境界に突起部（「ノブ」）、および第２のポリペプチドの境界
に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含む。突起部は、第１のポリペプチドの
境界からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン
）で置き換えることによって構築される。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖
（例えばアラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの
境界に、突起部と同一または類似のサイズを有するそれに見合った空洞が作り出される。
を促進する改変は、いわゆる「ノブ－イントゥー－ホール（knob-into-hole）」改変であ
り、これは、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」の改変、およびＦｃド
メインの２つのサブユニットの他方に「ホール（whole）」の改変を含む。ノブ－イント
ゥー－ホール技術は、例えば米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第７，６
９５，９３６号明細書；Ridgway et al., 1996, Prot Eng 9:617-621、およびCarter, J,
2001, Immunol Meth 248:7-15に記載されている。一般的に、本方法は、ヘテロ二量体
形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように、突起部が空洞に入ることができるよう
に、第１のポリペプチドの境界に突起部（「ノブ」）、および第２のポリペプチドの境界
に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含む。突起部は、第１のポリペプチドの
境界からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン
）で置き換えることによって構築される。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖
（例えばアラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの
境界に、突起部と同一または類似のサイズを有するそれに見合った空洞が作り出される。
【0047】
したがって、一部の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ド
メイン中のアミノ酸残基を、より大きい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えるこ
とによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第２のサブユニットのＣＨ３ド
メイン内の空洞に入ることができる突起部が生じ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットの
ＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き
換えることによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第１のサブユニットの
ＣＨ３ドメイン内の突起部を入れることができる空洞が生じる。好ましくは、より大きい
側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、
チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、
より小さい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、ス
レオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起部および空洞は、
例えば部位特異的突然変異誘発によってポリペプチドをコードする核酸を変更することに
より、またはペプチド合成により作製することができる。例示的な置換は、Ｙ４７０Ｔで
ある。
メイン中のアミノ酸残基を、より大きい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えるこ
とによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第２のサブユニットのＣＨ３ド
メイン内の空洞に入ることができる突起部が生じ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットの
ＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基を、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き
換えることによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に、第１のサブユニットの
ＣＨ３ドメイン内の突起部を入れることができる空洞が生じる。好ましくは、より大きい
側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、
チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、
より小さい側鎖の体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、ス
レオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起部および空洞は、
例えば部位特異的突然変異誘発によってポリペプチドをコードする核酸を変更することに
より、またはペプチド合成により作製することができる。例示的な置換は、Ｙ４７０Ｔで
ある。
【0048】
特定のこのような実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、３６６
位におけるスレオニン残基は、トリプトファン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃ
ドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位におけるチロシン残基は、バリン残基
で置き換えられ（Ｙ４０７Ｖ）、任意選択で３６６位におけるスレオニン残基は、セリン
残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位におけるロイシン残基は、アラニン残基で
置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらなる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、加えて、３５４位
におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｓ３５４Ｃ）、または３５６位
におけるグルタミン酸残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）（特に３５
４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられている）、Ｆｃドメインの第
２のサブユニットにおいて、加えて、３４９位におけるチロシン残基は、システイン残基
によって置き換えられている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号
付け）。特定の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換
Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置
換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵイン
デックスによる番号付け）。
位におけるスレオニン残基は、トリプトファン残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃ
ドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位におけるチロシン残基は、バリン残基
で置き換えられ（Ｙ４０７Ｖ）、任意選択で３６６位におけるスレオニン残基は、セリン
残基で置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位におけるロイシン残基は、アラニン残基で
置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらなる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、加えて、３５４位
におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｓ３５４Ｃ）、または３５６位
におけるグルタミン酸残基は、システイン残基で置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）（特に３５
４位におけるセリン残基は、システイン残基で置き換えられている）、Ｆｃドメインの第
２のサブユニットにおいて、加えて、３４９位におけるチロシン残基は、システイン残基
によって置き換えられている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号
付け）。特定の実施形態において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換
Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置
換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵイン
デックスによる番号付け）。
【0049】
一部の実施形態において、固定のステアリング（例えば、Gunasekaran et al., 2010,
J Biol Chem 285(25):19637-46に記載される通り）を使用して、Ｆｃドメインの第１およ
び第２のサブユニットの会合を促進することができる。
J Biol Chem 285(25):19637-46に記載される通り）を使用して、Ｆｃドメインの第１およ
び第２のサブユニットの会合を促進することができる。
【0050】
一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機
能への結合を低減する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
能への結合を低減する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
【0051】
特定の実施形態において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態において、
Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ
受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であ
り、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａであり、
最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、エフェクター機能
は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体
依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つまたは複
数である。特定の実施形態において、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ
受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であ
り、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａであり、
最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、エフェクター機能
は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体
依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つまたは複
数である。特定の実施形態において、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
【0052】
典型的には、同じ１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｆｃドメインの２つのサブユニッ
トのそれぞれに存在する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ
ドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減する。一実施形態において、１つまたは複数
のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を、少なくとも２分の１、
少なくとも５分の１、または少なくとも１０分の１にする。
トのそれぞれに存在する。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ
ドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減する。一実施形態において、１つまたは複数
のアミノ酸置換は、ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を、少なくとも２分の１、
少なくとも５分の１、または少なくとも１０分の１にする。
【0053】
一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ
３３１およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｌ２
３４、Ｌ２３５およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａ
ｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、ア
ミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番
号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイ
ン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ
３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ３
２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる
番号付け）。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、
Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなる
アミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実
施形態において、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２
３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態において、Ｆ
ｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂ
ａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施形態において、Ｆｃドメイン
は、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（「Ｐ３２９Ｇ
ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）。具体的には、特定の実施形態
において、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａおよ
びＰ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）、すなわち、Ｆｃドメ
インの第１および第２のサブユニットのそれぞれにおいて、２３４位におけるロイシン残
基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、２３５位におけるロイシン残基は、
アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、３２９位におけるプロリン残基は、グリシ
ン残基によって置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによ
る番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃド
メイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
３３１およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｌ２
３４、Ｌ２３５およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａ
ｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、ア
ミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番
号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイ
ン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ
３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ３
２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる
番号付け）。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、
Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなる
アミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実
施形態において、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２
３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態において、Ｆ
ｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂ
ａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施形態において、Ｆｃドメイン
は、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含む（「Ｐ３２９Ｇ
ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）。具体的には、特定の実施形態
において、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａおよ
びＰ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスの番号付け）、すなわち、Ｆｃドメ
インの第１および第２のサブユニットのそれぞれにおいて、２３４位におけるロイシン残
基は、アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、２３５位におけるロイシン残基は、
アラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、３２９位におけるプロリン残基は、グリシ
ン残基によって置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによ
る番号付け）。このような実施形態の一つにおいて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃド
メイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0054】
本開示の単鎖ベースの二重特異性抗体は、当業界において公知の様々な種類の単鎖ベー
スの二重特異性抗体、例えば二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）（二重特異性Ｔ細胞誘
導（ＢｉＴＥ）抗体）、ダイアボディ、タンデム（tandam）ダイアボディ（ｔａｎｄａｂ
）、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ：dual-affinity retargeting molecule）、およ
び二重特異性キラー細胞誘導体のいずれかであり得る。例えば、参照によりそれらの全体
が本明細書に組み入れられる、Loffler et al., 2000, Blood 95:2098-103；Holliger et
al., 1993, Proc Natl Acad Sci USA, 90:6444-8；Kipriyanov et al., 1999, Mol Biol
293:41-56；Johnson et al., 2010, Mol Biol 399:436-49；Wiernik et al., 2013, Cli
n Cancer Res 19:3844-55；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et a
l., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
スの二重特異性抗体、例えば二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）（二重特異性Ｔ細胞誘
導（ＢｉＴＥ）抗体）、ダイアボディ、タンデム（tandam）ダイアボディ（ｔａｎｄａｂ
）、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ：dual-affinity retargeting molecule）、およ
び二重特異性キラー細胞誘導体のいずれかであり得る。例えば、参照によりそれらの全体
が本明細書に組み入れられる、Loffler et al., 2000, Blood 95:2098-103；Holliger et
al., 1993, Proc Natl Acad Sci USA, 90:6444-8；Kipriyanov et al., 1999, Mol Biol
293:41-56；Johnson et al., 2010, Mol Biol 399:436-49；Wiernik et al., 2013, Cli
n Cancer Res 19:3844-55；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；およびYang et a
l., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48を参照されたい。
【0055】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞誘導体（Ｂｉ
ＴＥ）である。ＢｉＴＥは、２つの抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子
であり、抗原結合ドメインの一方がＴ細胞抗原に結合し、第２の抗原結合ドメインが標的
の表面上に提示される抗原に結合する（参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れら
れる、ＰＣＴ国際公開第０５／０６１５４７号パンフレット；Baeuerle et al., 2008, D
rugs of the Future 33: 137-147；Bargou, et al., 2008, Science 321:974-977を参照
）。したがって、本開示のＢｉＴＥは、Ｔ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、および
グリコＭＵＣ１に向けられた第２の抗原結合ドメインを有する。
ＴＥ）である。ＢｉＴＥは、２つの抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子
であり、抗原結合ドメインの一方がＴ細胞抗原に結合し、第２の抗原結合ドメインが標的
の表面上に提示される抗原に結合する（参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れら
れる、ＰＣＴ国際公開第０５／０６１５４７号パンフレット；Baeuerle et al., 2008, D
rugs of the Future 33: 137-147；Bargou, et al., 2008, Science 321:974-977を参照
）。したがって、本開示のＢｉＴＥは、Ｔ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、および
グリコＭＵＣ１に向けられた第２の抗原結合ドメインを有する。
【0056】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、二重親和性再標的化分子（ＤＡ
ＲＴ）である。ＤＡＲＴは、会合して（特に共有結合による相互作用を介して）少なくと
も２つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これら
のエピトープ結合部位は、同一のエピトープを認識してもよいし、または異なるエピトー
プを認識してもよい。ＤＡＲＴのポリペプチド鎖のそれぞれは、免疫グロブリン軽鎖可変
領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は、相互作用してエピト
ープ結合部位を形成しない。そうではなく、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、
第１の）免疫グロブリン重鎖可変領域は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポ
リペプチド鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成
する。同様に、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）の免疫グロブリン軽
鎖可変領域は、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の異なる（例えば、第２の）免疫グロブリン重鎖
可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴは、単一特異性、二
重特異性、三重特異性などであってもよく、したがって、１、２、３またはそれより多く
の異なるエピトープ（これらは、同じまたは異なる抗原のものであってもよい）と同時に
結合することができる。ＤＡＲＴは、加えて、１価、２価、３価、４価、５価、６価など
であってもよく、したがって、１、２、３、４、５、６つまたはそれより多くの分子と同
時に結合することができる。ＤＡＲＴのこれら２つの特性（すなわち、特異性の程度およ
び原子価を組み合わせて、例えば、４価の（すなわち、エピトープの４つのセットと結合
することが可能な）二重特異性抗体（すなわち、２つのエピトープと結合することが可能
な）などを産生することができる。ＤＡＲＴ分子は、参照によりそれらの全体が本明細書
に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２００６／１１３６６５号パンフレット、国際公開
第２００８／１５７３７９号パンフレット、および国際公開第２０１０／０８０５３８号
パンフレットに開示されている。
ＲＴ）である。ＤＡＲＴは、会合して（特に共有結合による相互作用を介して）少なくと
も２つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これら
のエピトープ結合部位は、同一のエピトープを認識してもよいし、または異なるエピトー
プを認識してもよい。ＤＡＲＴのポリペプチド鎖のそれぞれは、免疫グロブリン軽鎖可変
領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は、相互作用してエピト
ープ結合部位を形成しない。そうではなく、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、
第１の）免疫グロブリン重鎖可変領域は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポ
リペプチド鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成
する。同様に、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の一方の（例えば、第１の）の免疫グロブリン軽
鎖可変領域は、ＤＡＲＴポリペプチド鎖の異なる（例えば、第２の）免疫グロブリン重鎖
可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴは、単一特異性、二
重特異性、三重特異性などであってもよく、したがって、１、２、３またはそれより多く
の異なるエピトープ（これらは、同じまたは異なる抗原のものであってもよい）と同時に
結合することができる。ＤＡＲＴは、加えて、１価、２価、３価、４価、５価、６価など
であってもよく、したがって、１、２、３、４、５、６つまたはそれより多くの分子と同
時に結合することができる。ＤＡＲＴのこれら２つの特性（すなわち、特異性の程度およ
び原子価を組み合わせて、例えば、４価の（すなわち、エピトープの４つのセットと結合
することが可能な）二重特異性抗体（すなわち、２つのエピトープと結合することが可能
な）などを産生することができる。ＤＡＲＴ分子は、参照によりそれらの全体が本明細書
に組み入れられる、ＰＣＴ国際公開第２００６／１１３６６５号パンフレット、国際公開
第２００８／１５７３７９号パンフレット、および国際公開第２０１０／０８０５３８号
パンフレットに開示されている。
【0057】
本開示の二重特異性抗体の一部の実施形態において、結合特異性の１つは、グリコＭＵ
Ｃ１に向けられ、他方は、免疫エフェクター細胞上で発現される抗原に向けられる。用語
「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」は、本明細書で使用される場合、
活性化されて標的細胞の生存能に影響を与えることができる、哺乳類免疫系中の細胞の天
然レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、リンパ球系細胞、例え
ば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、またはＢ細胞が挙
げられることに加えて、単球またはマクロファージ、樹状細胞および好中性顆粒球などの
骨髄系細胞も、免疫エフェクター細胞とみなすことができる。したがって、前記エフェク
ター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞
または好中性顆粒球である。異常な細胞へのエフェクター細胞の補充は、エフェクター細
胞が、それらが補充される異常な細胞を直接致死させるか、またはその致死を間接的に開
始させることができるように、免疫エフェクター細胞が、異常な標的細胞に近接して取り
込まれることを意味する。非特異的な相互作用を回避するために、本開示の二重特異性抗
体は、体内の他の細胞と比較して、これらの免疫エフェクター細胞によって少なくとも過
剰発現される免疫エフェクター細胞上の抗原を特異的に認識することが好ましい。免疫エ
フェクター細胞上に提示される標的抗原としては、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ２５
、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫｐ４６を挙げることができる。
好ましくは、免疫エフェクター細胞上の抗原は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３である。
Ｃ１に向けられ、他方は、免疫エフェクター細胞上で発現される抗原に向けられる。用語
「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」は、本明細書で使用される場合、
活性化されて標的細胞の生存能に影響を与えることができる、哺乳類免疫系中の細胞の天
然レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、リンパ球系細胞、例え
ば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、またはＢ細胞が挙
げられることに加えて、単球またはマクロファージ、樹状細胞および好中性顆粒球などの
骨髄系細胞も、免疫エフェクター細胞とみなすことができる。したがって、前記エフェク
ター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞
または好中性顆粒球である。異常な細胞へのエフェクター細胞の補充は、エフェクター細
胞が、それらが補充される異常な細胞を直接致死させるか、またはその致死を間接的に開
始させることができるように、免疫エフェクター細胞が、異常な標的細胞に近接して取り
込まれることを意味する。非特異的な相互作用を回避するために、本開示の二重特異性抗
体は、体内の他の細胞と比較して、これらの免疫エフェクター細胞によって少なくとも過
剰発現される免疫エフェクター細胞上の抗原を特異的に認識することが好ましい。免疫エ
フェクター細胞上に提示される標的抗原としては、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ２５
、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫｐ４６を挙げることができる。
好ましくは、免疫エフェクター細胞上の抗原は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３である。
【0058】
「ＣＤ３」は、本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、霊長類（例えばヒ
ト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）およびげっ歯類（例えばマウスおよびラット
）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のあらゆる天然ＣＤ３を指す。この用語
は、「全長」のプロセシングされていないＣＤ３に加えて、細胞中でのプロセシングに起
因するＣＤ３のあらゆる形態を包含する。この用語はまた、ＣＤ３の天然に存在するバリ
アント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。免疫エ
フェクター細胞上の最も好ましい抗原は、ＣＤ３イプシロン鎖である。この抗原は、異常
な細胞へのＴ細胞の補充において非常に有効であることが示されている。したがって、本
開示の二重特異性抗体は、好ましくは、ＣＤ３イプシロンを特異的に認識する。ヒトＣＤ
３イプシロンのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（www.uniprot.org）受託番号Ｐ０７７
６６（バージョン１４４）、またはＮＣＢＩ（www.ncbi.nlm.nih.gov/）ＲｅｆＳｅｑ
ＮＰ＿０００７２４．１で示される。カニクイザル［カニクイザル（Macaca fasciculari
s）］ＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８
４９．１で示される。ヒトの治療的使用の場合、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３（例え
ば、ヒトＣＤ３イプシロン鎖）に特異的に結合する二重特異性抗体が使用される。非ヒト
動物や細胞株における前臨床試験の場合、前臨床試験に利用される種（例えば、霊長類の
試験の場合、カニクイザルＣＤ３）においてＣＤ３結合ドメインがＣＤ３に特異的に結合
する二重特異性抗体を使用することができる。
ト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）およびげっ歯類（例えばマウスおよびラット
）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のあらゆる天然ＣＤ３を指す。この用語
は、「全長」のプロセシングされていないＣＤ３に加えて、細胞中でのプロセシングに起
因するＣＤ３のあらゆる形態を包含する。この用語はまた、ＣＤ３の天然に存在するバリ
アント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。免疫エ
フェクター細胞上の最も好ましい抗原は、ＣＤ３イプシロン鎖である。この抗原は、異常
な細胞へのＴ細胞の補充において非常に有効であることが示されている。したがって、本
開示の二重特異性抗体は、好ましくは、ＣＤ３イプシロンを特異的に認識する。ヒトＣＤ
３イプシロンのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（www.uniprot.org）受託番号Ｐ０７７
６６（バージョン１４４）、またはＮＣＢＩ（www.ncbi.nlm.nih.gov/）ＲｅｆＳｅｑ
ＮＰ＿０００７２４．１で示される。カニクイザル［カニクイザル（Macaca fasciculari
s）］ＣＤ３イプシロンのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８
４９．１で示される。ヒトの治療的使用の場合、ＣＤ３結合ドメインがヒトＣＤ３（例え
ば、ヒトＣＤ３イプシロン鎖）に特異的に結合する二重特異性抗体が使用される。非ヒト
動物や細胞株における前臨床試験の場合、前臨床試験に利用される種（例えば、霊長類の
試験の場合、カニクイザルＣＤ３）においてＣＤ３結合ドメインがＣＤ３に特異的に結合
する二重特異性抗体を使用することができる。
【0059】
本明細書で使用される場合、特定の種由来の標的抗原に「特異的に結合する」またはそ
れを「特異的に認識する」結合ドメインは、他の種由来の抗原への結合またはその認識を
除外せず、したがって、結合ドメインの１つまたは複数が種間の交差反応性を有する抗体
を包含する。例えば、ヒトＣＤ３に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識す
る」ＣＤ３結合ドメインはまた、カニクイザル（cyomolgus）ＣＤ３に結合する、または
それを認識することもでき、逆もまた同様である。
れを「特異的に認識する」結合ドメインは、他の種由来の抗原への結合またはその認識を
除外せず、したがって、結合ドメインの１つまたは複数が種間の交差反応性を有する抗体
を包含する。例えば、ヒトＣＤ３に「特異的に結合する」またはそれを「特異的に認識す
る」ＣＤ３結合ドメインはまた、カニクイザル（cyomolgus）ＣＤ３に結合する、または
それを認識することもでき、逆もまた同様である。
【0060】
一部の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に
関して、モノクローナル抗体Ｈ２Ｃ（ＰＣＴ国際公開第２００８／１１９５６７号パンフ
レットに記載される）と競合することができる。他の実施形態において、本開示の二重特
異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｖ９（Rodrigue
s et al., 1992, Int J Cancer Suppl 7:45-50および米国特許第６，０５４，２９７号明
細書に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二
重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＦＮ１８（
Nooij et al., 1986, Eur J Immunol 19:981-984に記載される）と競合することができる
。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結
合に関して、モノクローナル抗体ＳＰ３４（Pessano et al., 1985, EMBO J 4:337-340に
記載される）と競合することができる。
関して、モノクローナル抗体Ｈ２Ｃ（ＰＣＴ国際公開第２００８／１１９５６７号パンフ
レットに記載される）と競合することができる。他の実施形態において、本開示の二重特
異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体Ｖ９（Rodrigue
s et al., 1992, Int J Cancer Suppl 7:45-50および米国特許第６，０５４，２９７号明
細書に記載される）と競合することができる。さらに他の実施形態において、本開示の二
重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結合に関して、モノクローナル抗体ＦＮ１８（
Nooij et al., 1986, Eur J Immunol 19:981-984に記載される）と競合することができる
。さらに他の実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３のエピトープとの結
合に関して、モノクローナル抗体ＳＰ３４（Pessano et al., 1985, EMBO J 4:337-340に
記載される）と競合することができる。
【0061】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、誘導体化された抗体を含む。例えば、ただし限定さ
れないが、誘導体化された抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リ
ン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解による
切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結によって改変される。様々な化学修飾
のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、
ツニカマイシンの代謝合成などの公知の技術によって行うことができる。加えて、誘導体
は、例えばａｍｂｒｘの技術を使用して、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有してい
てもよい（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を参照）。
れないが、誘導体化された抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リ
ン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解による
切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結によって改変される。様々な化学修飾
のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、
ツニカマイシンの代謝合成などの公知の技術によって行うことができる。加えて、誘導体
は、例えばａｍｂｒｘの技術を使用して、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有してい
てもよい（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を参照）。
【0062】
抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、少なくとも１つの定常領域が媒介す
る生物学的なエフェクター機能を変更するようにその配列が改変されている抗体またはフ
ラグメントであり得る。例えば、一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体は、改
変されていない抗体と比べて、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェク
ター機能を低減するように改変されてもよく、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合
を低減するように改変される。ＦｃγＲへの結合は、ＦｃγＲ相互作用に必要な特定の領
域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって低減させる
ことができる（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491；
およびLund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662を参照）。抗体のＦｃγＲ結合能
の低減はまた、ＦｃγＲ相互作用を頼る他のエフェクター機能、例えばオプソニン化、貪
食および抗原依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）も低減することができる。
る生物学的なエフェクター機能を変更するようにその配列が改変されている抗体またはフ
ラグメントであり得る。例えば、一部の実施形態において、抗グリコＭＵＣ１抗体は、改
変されていない抗体と比べて、少なくとも１つの定常領域が媒介する生物学的なエフェク
ター機能を低減するように改変されてもよく、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合
を低減するように改変される。ＦｃγＲへの結合は、ＦｃγＲ相互作用に必要な特定の領
域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって低減させる
ことができる（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491；
およびLund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662を参照）。抗体のＦｃγＲ結合能
の低減はまた、ＦｃγＲ相互作用を頼る他のエフェクター機能、例えばオプソニン化、貪
食および抗原依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）も低減することができる。
【0063】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、少なくとも１
つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を獲得するか、または改変されてい
ない抗体に比べて改善する、例えば、ＦｃγＲ相互作用を強化するように改変された抗体
および／または結合フラグメントを含む（例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３
４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、対応する野生型
定常領域より大きい親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩ
ＩＩＡと結合する定常領域を有していてもよい。
つの定常領域が媒介する生物学的なエフェクター機能を獲得するか、または改変されてい
ない抗体に比べて改善する、例えば、ＦｃγＲ相互作用を強化するように改変された抗体
および／または結合フラグメントを含む（例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３
４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、対応する野生型
定常領域より大きい親和性でＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩ
ＩＩＡと結合する定常領域を有していてもよい。
【0064】
したがって、本開示の抗体は、オプソニン化、貪食、またはＡＤＣＣの増加または減少
を引き起こす生物学的活性における変更を有していてもよい。このような変更は、当業界
において公知である。例えば、ＡＤＣＣ活性を低減する抗体における改変は、米国特許第
５，８３４，５９７号明細書に記載されている。例示的なＡＤＣＣを低下させるバリアン
トは、残基２３６が欠失し、残基２３４、２３５および２３７（ＥＵの番号付けを使用）
がアラニンで置換された「突然変異体３」に相当する（米国特許第５，８３４，５９７号
明細書の図４に示される）。
を引き起こす生物学的活性における変更を有していてもよい。このような変更は、当業界
において公知である。例えば、ＡＤＣＣ活性を低減する抗体における改変は、米国特許第
５，８３４，５９７号明細書に記載されている。例示的なＡＤＣＣを低下させるバリアン
トは、残基２３６が欠失し、残基２３４、２３５および２３７（ＥＵの番号付けを使用）
がアラニンで置換された「突然変異体３」に相当する（米国特許第５，８３４，５９７号
明細書の図４に示される）。
【0065】
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、低いレベルのフコースを
有するか、またはフコースを欠く。フコースを欠く抗体は、特に低用量の抗体で、ＡＤＣ
Ｃ活性の強化との相関が示されている。Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:267
33-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73を参照されたい。フコ
ースが少ない抗体を調製する方法としては、ラット骨髄腫ＹＢ２／０細胞（ＡＴＣＣ Ｃ
ＲＬ１６６２）での増殖が挙げられる。ＹＢ２／０細胞は、ポリペプチドのフコシル化に
必要な酵素であるα－１，６－フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８ ｍＲ
ＮＡを低いレベルで発現する。
有するか、またはフコースを欠く。フコースを欠く抗体は、特に低用量の抗体で、ＡＤＣ
Ｃ活性の強化との相関が示されている。Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:267
33-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73を参照されたい。フコ
ースが少ない抗体を調製する方法としては、ラット骨髄腫ＹＢ２／０細胞（ＡＴＣＣ Ｃ
ＲＬ１６６２）での増殖が挙げられる。ＹＢ２／０細胞は、ポリペプチドのフコシル化に
必要な酵素であるα－１，６－フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８ ｍＲ
ＮＡを低いレベルで発現する。
【0066】
さらに別の態様において、抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、例えば、
ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異
させることによって、胎児Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎへのその結合親和性を増加または減少さ
せる改変を含む（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを参照）。
特定の実施形態において、ＩｇＧクラスの抗グリコＭＵＣ１抗体は、重鎖定常領域のアミ
ノ酸残基２５０、３１４、および４２８の少なくとも１つが、例えば２５０および４２８
位、または２５０および３１４位、または３１４および４２８位、または２５０、３１４
、および４２８位で、単独で、またはそれらのいずれかの組合せで置換されるように突然
変異しており、具体的な組合せは２５０および４２８位である。２５０位の場合、置換さ
れるアミノ酸残基は、スレオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、
これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェ
ニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、
アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、
またはチロシンなどであってもよい。３１４位の場合、置換されるアミノ酸残基は、ロイ
シン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、ア
ラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒ
スチジン、イソロイシン、リシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、
アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであっ
てもよい。４２８位の場合、置換されるアミノ酸残基は、メチオニン以外のいずれのアミ
ノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン
、リシン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレ
オニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。好適なアミノ酸
置換の具体的な組合せは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，２１７，
７９７号明細書の表１で特定されている。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの結合を増
加させ、それにより抗体を分解から保護し、その半減期を増加させる。
ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異
させることによって、胎児Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎへのその結合親和性を増加または減少さ
せる改変を含む（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを参照）。
特定の実施形態において、ＩｇＧクラスの抗グリコＭＵＣ１抗体は、重鎖定常領域のアミ
ノ酸残基２５０、３１４、および４２８の少なくとも１つが、例えば２５０および４２８
位、または２５０および３１４位、または３１４および４２８位、または２５０、３１４
、および４２８位で、単独で、またはそれらのいずれかの組合せで置換されるように突然
変異しており、具体的な組合せは２５０および４２８位である。２５０位の場合、置換さ
れるアミノ酸残基は、スレオニン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、
これらに限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェ
ニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、
アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、
またはチロシンなどであってもよい。３１４位の場合、置換されるアミノ酸残基は、ロイ
シン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、ア
ラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒ
スチジン、イソロイシン、リシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、
アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであっ
てもよい。４２８位の場合、置換されるアミノ酸残基は、メチオニン以外のいずれのアミ
ノ酸残基であってもよく、例えば、これらに限定されないが、アラニン、システイン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン
、リシン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレ
オニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンなどであってもよい。好適なアミノ酸
置換の具体的な組合せは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，２１７，
７９７号明細書の表１で特定されている。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの結合を増
加させ、それにより抗体を分解から保護し、その半減期を増加させる。
【0067】
さらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グリコＭＵＣ１抗体は、
例えばJung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki et al.
, 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug. 17；および米国特許出願
第２００７／０２８０９３１号明細書に記載されるように、その高度可変領域の１つまた
は複数に挿入された１つまたは複数のアミノ酸を有する。
例えばJung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki et al.
, 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug. 17；および米国特許出願
第２００７／０２８０９３１号明細書に記載されるように、その高度可変領域の１つまた
は複数に挿入された１つまたは複数のアミノ酸を有する。
【0068】
診断適用に特に有用なさらに他の態様において、本開示の抗原結合フラグメントの抗グ
リコＭＵＣ１抗体は、検出可能な部分に取り付けられている。検出可能な部分としては、
放射性部分、比色分子、蛍光部分、化学発光部分、抗原、酵素、検出可能なビーズ（例え
ば磁気または高電子密度（例えば、金）ビーズ）、または別の分子に結合する分子（例え
ば、ビオチンまたはストレプトアビジン））が挙げられる。
リコＭＵＣ１抗体は、検出可能な部分に取り付けられている。検出可能な部分としては、
放射性部分、比色分子、蛍光部分、化学発光部分、抗原、酵素、検出可能なビーズ（例え
ば磁気または高電子密度（例えば、金）ビーズ）、または別の分子に結合する分子（例え
ば、ビオチンまたはストレプトアビジン））が挙げられる。
【0069】
放射性同位体または放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ
、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉを挙げることができる。
、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉを挙げることができる。
【0070】
蛍光標識としては、ローダミン、ランタニド蛍光、フルオレセインおよびその誘導体、
蛍光色素、ＧＦＰ（ＧＦＰは「Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ（
緑色蛍光タンパク質）」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フ
ィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド（phthaldehyde）、およびフ
ルオレサミンを挙げることができる。
蛍光色素、ＧＦＰ（ＧＦＰは「Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ（
緑色蛍光タンパク質）」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フ
ィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド（phthaldehyde）、およびフ
ルオレサミンを挙げることができる。
【0071】
酵素標識としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、ルシ
フェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ
６ＰＤＨ」）、アルファ－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース
アミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒド
ロゲナーゼおよびペルオキシダーゼを挙げることができる。
フェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ
６ＰＤＨ」）、アルファ－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース
アミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒド
ロゲナーゼおよびペルオキシダーゼを挙げることができる。
【0072】
化学発光標識または化学発光物質（chemiluminescer）、例えばイソルミノール、ルミ
ノールおよびジオキセタン
ノールおよびジオキセタン
【0073】
他の検出可能な部分としては、ビオチン、ジゴキシゲニンまたは５－ブロモデオキシウ
リジンなどの分子が挙げられる。
リジンなどの分子が挙げられる。
【0074】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
ＧＯ２またはＧＯ２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント
（それぞれ配列番号３および４）と競合する。
ＧＯ２またはＧＯ２の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体もしくは抗原結合フラグメント
（それぞれ配列番号３および４）と競合する。
【0075】
競合は、ＧＯ２と結合するグリコＭＵＣ１エピトープを発現する細胞で、またはＧＯ２
と結合するエピトープを含有するグリコシル化ＭＵＣ１ペプチド、例えば、米国特許第６
，４６５，２２０号明細書に記載される、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、お
よびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された６０－ｍｅｒのペプチド（ＶＴＳＡＰＤＴ
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３でアッセイすることができる。対照として、エピトープ
を発現しない細胞またはグリコシル化されていないペプチドを使用することができる。
と結合するエピトープを含有するグリコシル化ＭＵＣ１ペプチド、例えば、米国特許第６
，４６５，２２０号明細書に記載される、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、お
よびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１でグリコシル化された６０－ｍｅｒのペプチド（ＶＴＳＡＰＤＴ
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３でアッセイすることができる。対照として、エピトープ
を発現しない細胞またはグリコシル化されていないペプチドを使用することができる。
【0076】
競合アッセイを行うことができる細胞としては、これらに限定されないが、乳がん細胞
株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄ、およびグリコＭＵＣ１エピトープを発現するように操作され
る組換え細胞が挙げられる。１つの非限定的な例において、ＣＨＯ ＩｄＩＤ細胞は、Ｕ
ＤＰ－Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃエピメラーゼを欠き、それぞれＧａｌＮＡｃおよびＧａｌの
外因性の付加の非存在下でＧａｌＮＡｃのＯ－グリコシル化およびガラクトシル化が不十
分なものであり、これは、ＭＵＣ１を発現するように操作され、ＧａｌＮＡｃの非存在ま
たは存在下で増殖し、後者の場合、ＧＯ２が結合するＭＵＣ１のＴｎグリコフォームを発
現する細胞を生じる。ＭＵＣ１のグリコシル化されていない形態を発現する細胞は、陰性
対照として使用することができる。
株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄ、およびグリコＭＵＣ１エピトープを発現するように操作され
る組換え細胞が挙げられる。１つの非限定的な例において、ＣＨＯ ＩｄＩＤ細胞は、Ｕ
ＤＰ－Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃエピメラーゼを欠き、それぞれＧａｌＮＡｃおよびＧａｌの
外因性の付加の非存在下でＧａｌＮＡｃのＯ－グリコシル化およびガラクトシル化が不十
分なものであり、これは、ＭＵＣ１を発現するように操作され、ＧａｌＮＡｃの非存在ま
たは存在下で増殖し、後者の場合、ＧＯ２が結合するＭＵＣ１のＴｎグリコフォームを発
現する細胞を生じる。ＭＵＣ１のグリコシル化されていない形態を発現する細胞は、陰性
対照として使用することができる。
【0077】
競合に関するアッセイとしては、これらに限定されないが、放射活性物質標識によるイ
ムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩ
ＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイおよびＢｉａｃｏｒｅアッセイ
が挙げられる。
ムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩ
ＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイおよびＢｉａｃｏｒｅアッセイ
が挙げられる。
【0078】
参照抗体と試験抗体との間の抗体競合アッセイ（種またはアイソタイプに関わりなく）
を実行することにおいて、最初に、後続の同定が可能になるように、検出可能な標識、例
えばフルオロフォア、ビオチンまたは酵素標識（または放射性標識でも）で参照を標識し
てもよい。この場合、グリコＭＵＣ１を発現する細胞は、標識されていない試験抗体とイ
ンキュベートされ、標識された参照抗体が添加され、結合した標識の強度が測定される。
試験抗体が、オーバーラップするエピトープに結合することによって標識された参照抗体
と競合する場合、強度は、試験抗体なしで行われた対照反応と比較して減少すると予想さ
れる。
を実行することにおいて、最初に、後続の同定が可能になるように、検出可能な標識、例
えばフルオロフォア、ビオチンまたは酵素標識（または放射性標識でも）で参照を標識し
てもよい。この場合、グリコＭＵＣ１を発現する細胞は、標識されていない試験抗体とイ
ンキュベートされ、標識された参照抗体が添加され、結合した標識の強度が測定される。
試験抗体が、オーバーラップするエピトープに結合することによって標識された参照抗体
と競合する場合、強度は、試験抗体なしで行われた対照反応と比較して減少すると予想さ
れる。
【0079】
このアッセイの具体的な実施形態において、アッセイ条件（例えば、特定された細胞密
度）下における最大の結合の８０％をもたらす標識された参照抗体の濃度（「ｃｏｎｃ８
０％」）がまず決定され、競合アッセイは、標識されていない試験抗体の１０×ｃｏｎｃ
８０％および標識された参照抗体のｃｏｎｃ８０％行われる。
度）下における最大の結合の８０％をもたらす標識された参照抗体の濃度（「ｃｏｎｃ８
０％」）がまず決定され、競合アッセイは、標識されていない試験抗体の１０×ｃｏｎｃ
８０％および標識された参照抗体のｃｏｎｃ８０％行われる。
【0080】
阻害は、阻害定数、またはＫｉとして表すことができ、これは、以下の式：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照Ａｂ濃度］／Ｋｄ）
に従って計算され、式中、ＩＣ５０は、参照抗体の結合の５０％低減をもたらす試験抗体
の濃度であり、Ｋｄは、参照抗体の解離定数であり、これは、グリコＭＵＣ１に対するそ
の親和性の尺度である。本明細書で開示される抗グリコＭＵＣ１抗体と競合する抗体は、
本明細書に記載されるアッセイ条件下で、１０ｐＭから１０ｎＭのＫｉを有し得る。
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照Ａｂ濃度］／Ｋｄ）
に従って計算され、式中、ＩＣ５０は、参照抗体の結合の５０％低減をもたらす試験抗体
の濃度であり、Ｋｄは、参照抗体の解離定数であり、これは、グリコＭＵＣ１に対するそ
の親和性の尺度である。本明細書で開示される抗グリコＭＵＣ１抗体と競合する抗体は、
本明細書に記載されるアッセイ条件下で、１０ｐＭから１０ｎＭのＫｉを有し得る。
【0081】
様々な実施形態において、使用される特定のアッセイ条件下で最大の結合の８０％であ
る参照抗体濃度、および参照抗体濃度の１０倍高い試験抗体濃度で、少なくとも約２０％
またはそれより多く、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、９５％もしくはそれよりさらに多く、または前述の値のいずれ
かの間の範囲のパーセンテージで、試験抗体が参照抗体の結合を減少させる場合、試験抗
体は参照抗体と競合するとみなされる。
る参照抗体濃度、および参照抗体濃度の１０倍高い試験抗体濃度で、少なくとも約２０％
またはそれより多く、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、９５％もしくはそれよりさらに多く、または前述の値のいずれ
かの間の範囲のパーセンテージで、試験抗体が参照抗体の結合を減少させる場合、試験抗
体は参照抗体と競合するとみなされる。
【0082】
競合アッセイの一例では、グリコシル化ＭＵＣ１である６０－ｍｅｒのペプチドを、プ
レートをペプチドの溶液と接触させることによって（例えば、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの濃
度で４℃で一晩）、固体表面、例えばマイクロウェルプレート上に接着させる。プレート
を洗浄し（例えば、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）、ブロックする（例えば、Ｓ
ｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬで
）。ＥＬＩＳＡ緩衝液（例えば、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０
）中の飽和未満の量のビオチン化ＧＯ２（例えば、８０ｎｇ／ｍＬの濃度での）および連
続希釈した（例えば、２．８μｇ／ｍＬ、８．３μｇ／ｍＬ、または２５μｇ／ｍＬの濃
度での）標識されていないＧＯ２（「参照」抗体）または競合する抗グリコＭＵＣ１抗体
（「試験」抗体）抗体の混合物をウェルに添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１時
間インキュベートする。プレートを洗浄し、各ウェルにＥＬＩＳＡ緩衝液で希釈した１μ
ｇ／ｍＬのＨＲＰがコンジュゲートしたストレプトアビジンを添加し、プレートを１時間
インキュベートする。プレートを洗浄し、基質（例えば、ＴＭＢ、Ｂｉｏｆｘ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって結合し
た抗体を検出した。停止緩衝液（例えば、Ｂｉｏ ＦＸ Ｓｔｏｐ試薬、Ｂｉｏｆｘ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって
反応を止め、マイクロプレートリーダー（例えば、ＶＥＲＳＡｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、吸光度を６５０ｎｍで測
定する。
レートをペプチドの溶液と接触させることによって（例えば、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの濃
度で４℃で一晩）、固体表面、例えばマイクロウェルプレート上に接着させる。プレート
を洗浄し（例えば、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０）、ブロックする（例えば、Ｓ
ｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬで
）。ＥＬＩＳＡ緩衝液（例えば、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０
）中の飽和未満の量のビオチン化ＧＯ２（例えば、８０ｎｇ／ｍＬの濃度での）および連
続希釈した（例えば、２．８μｇ／ｍＬ、８．３μｇ／ｍＬ、または２５μｇ／ｍＬの濃
度での）標識されていないＧＯ２（「参照」抗体）または競合する抗グリコＭＵＣ１抗体
（「試験」抗体）抗体の混合物をウェルに添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１時
間インキュベートする。プレートを洗浄し、各ウェルにＥＬＩＳＡ緩衝液で希釈した１μ
ｇ／ｍＬのＨＲＰがコンジュゲートしたストレプトアビジンを添加し、プレートを１時間
インキュベートする。プレートを洗浄し、基質（例えば、ＴＭＢ、Ｂｉｏｆｘ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって結合し
た抗体を検出した。停止緩衝液（例えば、Ｂｉｏ ＦＸ Ｓｔｏｐ試薬、Ｂｉｏｆｘ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｏｗｉｎｇｓ Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加によって
反応を止め、マイクロプレートリーダー（例えば、ＶＥＲＳＡｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、吸光度を６５０ｎｍで測
定する。
【0083】
ＧＯ２と別の抗グリコＭＵＣ１抗体との競合を試験するのに、この競合アッセイにおけ
るバリエーションも使用することができる。例えば、特定の態様において、抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体は参照抗体として使用され、ＧＯ２は試験抗体として使用される。加えて、グリ
コシル化ＭＵＣ１である６０－ｍｅｒのペプチドの代わりに、培養中に細胞表面上で（例
えば上述の細胞型の１つの表面上で）発現される膜結合型グリコＭＵＣ１を使用してもよ
い。一般的に、約１０４から１０６個の形質転換体、例えば、約１０５個の形質転換体が
使用される。競合アッセイの他の様式は当業界において公知であり、採用することができ
る。
るバリエーションも使用することができる。例えば、特定の態様において、抗グリコＭＵ
Ｃ１抗体は参照抗体として使用され、ＧＯ２は試験抗体として使用される。加えて、グリ
コシル化ＭＵＣ１である６０－ｍｅｒのペプチドの代わりに、培養中に細胞表面上で（例
えば上述の細胞型の１つの表面上で）発現される膜結合型グリコＭＵＣ１を使用してもよ
い。一般的に、約１０４から１０６個の形質転換体、例えば、約１０５個の形質転換体が
使用される。競合アッセイの他の様式は当業界において公知であり、採用することができ
る。
【0084】
様々な実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、抗グリコＭＵＣ１抗体が
、０．０８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／
ｍＬ、１００μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例え
ば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、標識されたＧＯ
２の結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０
％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパー
センテージで低減させる（例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、標識されたＧＯ２
の結合を、５０％から７０％低減させる）。
、０．０８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／
ｍＬ、１００μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の濃度で（例え
ば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、標識されたＧＯ
２の結合を、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０
％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパー
センテージで低減させる（例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、標識されたＧＯ２
の結合を、５０％から７０％低減させる）。
【0085】
他の実施形態において、ＧＯ２が、０．４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ
、５０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の
濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、Ｇ
Ｏ２は、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、少なくとも４０％、少なく
とも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０
％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、ＧＯ
２は、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、５０％から７０％低減させる
）。
、５０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬの濃度で、または前述の値のいずれかの間の範囲の
濃度で（例えば、２μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で）使用される場合、Ｇ
Ｏ２は、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、少なくとも４０％、少なく
とも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０
％、または前述の値のいずれかの間の範囲のパーセンテージで低減させる（例えば、ＧＯ
２は、本開示の標識された抗グリコＭＵＣ１抗体の結合を、５０％から７０％低減させる
）。
【0086】
前述のアッセイにおいて、ＧＯ２抗体は、ＧＯ２のＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変領
域を含むあらゆる抗体または抗原結合フラグメント、例えばＧＯ２のヒト化またはキメラ
カウンターパートで置き換えることができる。
域を含むあらゆる抗体または抗原結合フラグメント、例えばＧＯ２のヒト化またはキメラ
カウンターパートで置き換えることができる。
【0087】
特定の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントは、
表１に記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によって
コードされる）。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラ
グメントは、表１に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチ
ド配列によってコードされる）。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグ
メントのフレームワーク配列は、表１に記載の天然マウスフレームワーク配列であっても
よいし、または非天然（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい
。
表１に記載の重鎖および／または軽鎖可変配列を含む（またはヌクレオチド配列によって
コードされる）。他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラ
グメントは、表１に記載の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ配列を含む（またはヌクレオチ
ド配列によってコードされる）。このような抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグ
メントのフレームワーク配列は、表１に記載の天然マウスフレームワーク配列であっても
よいし、または非天然（例えば、ヒト化またはヒト）フレームワーク配列であってもよい
。
【0088】
さらに他の態様において、本開示は、それぞれ配列番号３および４と少なくとも９５％
、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有
する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
、９８％、９９％、または９９．５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域を有
する抗ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【0089】
さらに他の態様において、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント
は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメ
ントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重
鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に
共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞誘導体の形態であってもよいし、また
はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的なｓｃＦｖは、軽鎖可変フラグメ
ントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｃＦｖの重
鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントは、４～１５アミノ酸のリンカー配列に
共有結合している。ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞誘導体の形態であってもよいし、また
はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内であってもよい。
【0090】
５．２ 抗グリコＭＵＣ１および抗ＣＤ３二重特異性抗体
一部の態様において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３（例えば、表４に記載のＣＤ
ＲまたはＶＨおよびＶＬを含むもの）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、およ
びグリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含んでいてもよい。第２
の抗原結合ドメインは、上記でグリコＭＵＣ１抗体に関して記載された特徴を、単独で、
または組み合わせて含んでいてもよい（例えば、表１～３で同定されたＣＤＲの組合せ、
例えば下記の番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミ
ノ酸配列を含むＣＤＲの組合せ、または表１で特定されたＶＨおよびＶＬ配列を含む）。
一部の態様において、本開示の二重特異性抗体は、ＣＤ３（例えば、表４に記載のＣＤ
ＲまたはＶＨおよびＶＬを含むもの）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、およ
びグリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含んでいてもよい。第２
の抗原結合ドメインは、上記でグリコＭＵＣ１抗体に関して記載された特徴を、単独で、
または組み合わせて含んでいてもよい（例えば、表１～３で同定されたＣＤＲの組合せ、
例えば下記の番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミ
ノ酸配列を含むＣＤＲの組合せ、または表１で特定されたＶＨおよびＶＬ配列を含む）。
【0091】
【表4-1】
【0092】
【表4-2】
【0093】
一部の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ－Ｈ
１、配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領
域；ならびに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列
番号３９のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
１、配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領
域；ならびに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列
番号３９のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
【0094】
一部の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、例えば番号付けされた実施形態
３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ、例えば（ｉ）
配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ
－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）１、配列番
号９のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ、例えば（ｉ）
配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ
－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）１、配列番
号９のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
【0095】
特定の実施形態において、二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配
列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ
－Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３９のアミノ
酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、第１の抗原結合ドメイン；ならび
に
（ｉｉ）グリコＭＵＣ１に特異的に結合し、（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む
ＣＤＲ－Ｈ１、より好ましくは配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号
２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、より好ましくは配列番号６のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｈ１、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、より好ましく
は配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号
８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２お
よび配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、より好ましくは配列番号１０のア
ミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、第２の抗原結合ドメイン
を含む。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配
列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ
－Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３９のアミノ
酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、第１の抗原結合ドメイン；ならび
に
（ｉｉ）グリコＭＵＣ１に特異的に結合し、（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む
ＣＤＲ－Ｈ１、より好ましくは配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号
２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、より好ましくは配列番号６のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｈ１、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、より好ましく
は配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号
８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２お
よび配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、より好ましくは配列番号１０のア
ミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、第２の抗原結合ドメイン
を含む。
【0096】
一部の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列と
少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領
域配列、および配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領
域配列、および配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
【0097】
一部の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０の重鎖可変領域配
列および配列番号４１の軽鎖可変領域配列を含む。
列および配列番号４１の軽鎖可変領域配列を含む。
【0098】
一部の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列と少
なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域
配列、および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域
配列、および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
【0099】
一部の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、配列番号３の重鎖可変領域配列
および配列番号４の軽鎖可変領域配列を含む。
および配列番号４の軽鎖可変領域配列を含む。
【0100】
一部の実施形態において、第１および／または第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ分子
である。一部の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ
重鎖の可変または定常領域のいずれかが交換されている交差Ｆａｂ分子である。このよう
な実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、好ましくは、従来のＦａｂ分子である
。
である。一部の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ
重鎖の可変または定常領域のいずれかが交換されている交差Ｆａｂ分子である。このよう
な実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、好ましくは、従来のＦａｂ分子である
。
【0101】
一部の実施形態において、二重特異性抗体の第１および第２の抗原結合ドメインが両方
ともＦａｂ分子であり、抗原結合ドメインの一方（特に第１の抗原結合ドメイン）におい
て、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置き換えられて
おり、
ｉ）第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）；または
ｉｉ）第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の
抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１
３位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。
ともＦａｂ分子であり、抗原結合ドメインの一方（特に第１の抗原結合ドメイン）におい
て、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置き換えられて
おり、
ｉ）第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）；または
ｉｉ）第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の
抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１
３位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。
【0102】
二重特異性抗体は、ｉ）およびｉｉ）で述べる改変の両方を含まない。ＶＨ／ＶＬの交
換を有する抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互いに置き換えられて
いない（すなわち、それらは交換されないままである）。
換を有する抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互いに置き換えられて
いない（すなわち、それらは交換されないままである）。
【0103】
より具体的な実施形態において、
ｉ）第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており
（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において
、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、
またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
による番号付け）；または
ｉｉ）第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）
、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデック
スによる番号付け）。
ｉ）第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており
（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において
、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、
またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
による番号付け）；または
ｉｉ）第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）
、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデック
スによる番号付け）。
【0104】
このような実施形態の一つにおいて、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにお
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン
（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメイ
ンの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている
（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン
（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメイ
ンの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている
（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0105】
さらなる実施形態において、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１
２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で
独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常
ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはア
スパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番
号付け）。
２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で
独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常
ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはア
スパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番
号付け）。
【0106】
特定の実施形態において、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２
４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独
立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リ
シン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａ
ｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４
７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して
置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている
（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独
立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リ
シン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａ
ｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４
７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して
置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている
（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0107】
さらに特定の実施形態において、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて
、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号
付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによ
る番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけ
るアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスに
よる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（
Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号
付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによ
る番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけ
るアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスに
よる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（
Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0108】
よりさらに特定の実施形態において、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにお
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる
番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂ
ａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７
位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデ
ックスによる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換され
ている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる
番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂ
ａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７
位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデ
ックスによる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換され
ている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0109】
特定の実施形態において、上記の実施形態によるアミノ酸置換が、第２の抗原結合ドメ
インの定常ドメインＣＬおよび定常ドメインＣＨ１においてなされる場合、第２の抗原結
合ドメインの定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプの定常ドメインＣＬである。
インの定常ドメインＣＬおよび定常ドメインＣＨ１においてなされる場合、第２の抗原結
合ドメインの定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプの定常ドメインＣＬである。
【0110】
一部の実施形態において、第１および第２の抗原結合ドメインは、任意選択でペプチド
リンカーを介して、互いに融合している。
リンカーを介して、互いに融合している。
【0111】
一部の実施形態において、第１および第２の抗原結合ドメインは、それぞれＦａｂ分子
であり、（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメ
インのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは
、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している
かのいずれかである。
であり、（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメ
インのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは
、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している
かのいずれかである。
【0112】
一部の実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＤ３への１価の結合を提供する。
【0113】
特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する単一の抗原結
合ドメイン、およびグリコＭＵＣ１に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインを含む。
したがって、一部の実施形態において、二重特異性抗体は、グリコＭＵＣ１に特異的に結
合する第３の抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、第３の抗原部分は、第
１の抗原結合ドメインと同一である（例えば、Ｆａｂ分子でもあり、同じアミノ酸配列を
含む）。
合ドメイン、およびグリコＭＵＣ１に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインを含む。
したがって、一部の実施形態において、二重特異性抗体は、グリコＭＵＣ１に特異的に結
合する第３の抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、第３の抗原部分は、第
１の抗原結合ドメインと同一である（例えば、Ｆａｂ分子でもあり、同じアミノ酸配列を
含む）。
【0114】
特定の実施形態において、二重特異性抗体は、第１および第２のサブユニットで構成さ
れるＦｃドメインをさらに含む。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃド
メインである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインであ
る。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体
的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ
酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
の番号付け）。さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインで
ある。よりさらに特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイ
ンである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号４２に示される。
れるＦｃドメインをさらに含む。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃド
メインである。特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインであ
る。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体
的な実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換、特にアミノ
酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
の番号付け）。さらなる特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインで
ある。よりさらに特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイ
ンである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号４２に示される。
【0115】
一部の実施形態において、第１、第２、および存在する場合、第３の抗原結合ドメイン
は、それぞれＦａｂ分子であり、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖の
Ｃ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結
合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融
合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２
の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２の抗原結合ドメインは、
Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているかの
いずれかであり；（ｂ）第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、Ｆａｂ重鎖のＣ末端
で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
は、それぞれＦａｂ分子であり、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖の
Ｃ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結
合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融
合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２
の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２の抗原結合ドメインは、
Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているかの
いずれかであり；（ｂ）第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、Ｆａｂ重鎖のＣ末端
で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
【0116】
特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、例えば、セクション５．１に記載される通
り、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変を含む。
り、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変を含む。
【0117】
一部の実施形態において、Ｆｃドメインは、例えばセクション５．１に記載されるよう
な、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減する１つまたは複数のア
ミノ酸置換を含む。
な、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減する１つまたは複数のア
ミノ酸置換を含む。
【0118】
特定の実施形態において、二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインであって、第１の抗原結合ド
メインは、交差Ｆａｂ分子であり、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変または定常領域の
いずれか、特に可変領域は、交換されている、第１の抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）グリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２および第３の抗原結合ドメインであっ
て、配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣ
ＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９の
ＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２および
第３の抗原結合ドメインは、それぞれＦａｂ分子であり、特に従来のＦａｂ分子である、
第２および第３の抗原結合ドメイン；
（ｉｉｉ）安定な会合が可能な、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメ
イン
を含み、
第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ
重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃ
ドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合ドメインは、Ｆ
ａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインであって、第１の抗原結合ド
メインは、交差Ｆａｂ分子であり、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変または定常領域の
いずれか、特に可変領域は、交換されている、第１の抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）グリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２および第３の抗原結合ドメインであっ
て、配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣ
ＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９の
ＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２および
第３の抗原結合ドメインは、それぞれＦａｂ分子であり、特に従来のＦａｂ分子である、
第２および第３の抗原結合ドメイン；
（ｉｉｉ）安定な会合が可能な、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメ
イン
を含み、
第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ
重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃ
ドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合ドメインは、Ｆ
ａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
【0119】
一実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、
配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；
ならびに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号
３９のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；
ならびに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号
３９のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。
【0120】
一実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列と少な
くとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配
列、および配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
くとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配
列、および配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。
【0121】
一実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０の重鎖可変領域配列お
よび配列番号４１の軽鎖可変領域配列を含む。
よび配列番号４１の軽鎖可変領域配列を含む。
【0122】
一実施形態において、第２および第３の抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配
列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可
変領域配列、および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。好ましくは、抗原結合ド
メインは、番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ
酸配列を含むＣＤＲを含む。一実施形態において、第２および第３の抗原結合ドメインは
、配列番号３の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む。
列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可
変領域配列、および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む。好ましくは、抗原結合ド
メインは、番号付けされた実施形態３から１７に記載のＣＤＲ組合せのいずれかのアミノ
酸配列を含むＣＤＲを含む。一実施形態において、第２および第３の抗原結合ドメインは
、配列番号３の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む。
【0123】
上記の実施形態によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関して上記で説明した特徴の全
てを単独で、または組み合わせて含んでいてもよい。
てを単独で、または組み合わせて含んでいてもよい。
【0124】
一部の実施形態において、抗原結合ドメインおよびＦｃ領域は、ペプチドリンカーによ
って、例えば配列番号４５および配列番号４６におけるようなペプチドリンカーによって
、互いに融合している。
って、例えば配列番号４５および配列番号４６におけるようなペプチドリンカーによって
、互いに融合している。
【0125】
一実施形態において、（ｉｉ）の第２および第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにお
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる
番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）で、特
にアルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、（ｉｉ）の第２お
よび第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グ
ルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、
２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。
いて、１２４位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる
番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）で、特
にアルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、（ｉｉ）の第２お
よび第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グ
ルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、
２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）。
【0126】
一実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号４３の配列と少なくとも８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペ
プチド（好ましくは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミ
ノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を
含む）、配列番号４４の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド（好ましくは、表４に記載の
ＣＤ３重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を含む）、配列番号４５の配列と少なくとも８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペ
プチド（好ましくは、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９の
アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含
む）、および配列番号４６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド（好ましくは、配列番号
３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ
２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３９
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む）を含む。
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペ
プチド（好ましくは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミ
ノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を
含む）、配列番号４４の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド（好ましくは、表４に記載の
ＣＤ３重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を含む）、配列番号４５の配列と少なくとも８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペ
プチド（好ましくは、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９の
アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含
む）、および配列番号４６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド（好ましくは、配列番号
３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ
２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含
むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３９
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む）を含む。
【0127】
一実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号４３の配列を含むポリペプチド（特
に２つのポリペプチド）、配列番号４４の配列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列
を含むポリペプチド、および配列番号４６の配列を含むポリペプチドを含む。
に２つのポリペプチド）、配列番号４４の配列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列
を含むポリペプチド、および配列番号４６の配列を含むポリペプチドを含む。
【0128】
５．３ 抗体－薬物コンジュゲート
本開示の別の態様は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含
む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。ＡＤＣは、一般的に、１つまたは複数の
リンカーを介して１つまたは複数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が
それに連結された、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体および／または結合フラ
グメントを含む。具体的な実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ
による化合物またはその塩であり、式中、各「Ｄ」は、それぞれ独立して、細胞傷害性物
質および／または細胞増殖抑制性物質（「薬物」）を表し；各「Ｌ」は、それぞれ独立し
て、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗グリコＭＵＣ１抗原結合ドメイン、例えば本明細書
に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントを表し；各「ＸＹ」は、リン
カー上の官能基Ｒｘと抗体上の「相補的」官能基Ｒｙとの間で形成された連結を表し、ｎ
は、ＡＤＣに連結された薬物の数、またはＡＤＣの薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）を表す。
本開示の別の態様は、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメントを含
む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。ＡＤＣは、一般的に、１つまたは複数の
リンカーを介して１つまたは複数の細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が
それに連結された、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体および／または結合フラ
グメントを含む。具体的な実施形態において、ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ
による化合物またはその塩であり、式中、各「Ｄ」は、それぞれ独立して、細胞傷害性物
質および／または細胞増殖抑制性物質（「薬物」）を表し；各「Ｌ」は、それぞれ独立し
て、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗グリコＭＵＣ１抗原結合ドメイン、例えば本明細書
に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントを表し；各「ＸＹ」は、リン
カー上の官能基Ｒｘと抗体上の「相補的」官能基Ｒｙとの間で形成された連結を表し、ｎ
は、ＡＤＣに連結された薬物の数、またはＡＤＣの薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）を表す。
【0129】
ＡＤＣを含み得る様々な抗体（Ａｂ）の具体的な実施形態は、上述した抗グリコＭＵＣ
１抗体および／または結合フラグメントの様々な実施形態を含む。
１抗体および／または結合フラグメントの様々な実施形態を含む。
【0130】
構造式（Ｉ）のＡＤＣおよび／または塩の一部の具体的な実施形態において、各Ｄが同
じであり、および／または各Ｌが同じである。
じであり、および／または各Ｌが同じである。
【0131】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣを構成し得る細胞傷害性物質および／または細胞増
殖抑制性物質（Ｄ）およびリンカー（Ｌ）に加えて、ＡＤＣに連結された多数の細胞傷害
性物質および／または細胞増殖抑制性物質の具体的な実施形態を、以下でより詳細に説明
する。
殖抑制性物質（Ｄ）およびリンカー（Ｌ）に加えて、ＡＤＣに連結された多数の細胞傷害
性物質および／または細胞増殖抑制性物質の具体的な実施形態を、以下でより詳細に説明
する。
【0132】
５．３．１．細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質
細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、細胞、特にがんおよび／または
腫瘍細胞の増殖および／または複製を阻害する、および／またはそのような細胞を致死さ
せることがわかっているあらゆる薬剤であり得る。細胞傷害性および／または細胞増殖抑
制特性を有する多数の薬剤が文献公知である。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑
制性物質のクラスの非限定的な例としては、一例として、これらに限定されないが、放射
性核種、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＤＮ
Ａ挿入剤（例えば、副溝結合剤、例えば副溝バインダー）、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質
、細胞周期モジュレーター、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、ヒストンデアセチ
ラーゼ阻害剤、ミトコンドリア阻害剤、および抗有糸分裂剤が挙げられる。
細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、細胞、特にがんおよび／または
腫瘍細胞の増殖および／または複製を阻害する、および／またはそのような細胞を致死さ
せることがわかっているあらゆる薬剤であり得る。細胞傷害性および／または細胞増殖抑
制特性を有する多数の薬剤が文献公知である。細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑
制性物質のクラスの非限定的な例としては、一例として、これらに限定されないが、放射
性核種、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＤＮ
Ａ挿入剤（例えば、副溝結合剤、例えば副溝バインダー）、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質
、細胞周期モジュレーター、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、ヒストンデアセチ
ラーゼ阻害剤、ミトコンドリア阻害剤、および抗有糸分裂剤が挙げられる。
【0133】
これらの様々なクラスのうち特定のものの範囲内の薬剤の具体的な非限定的な例を以下
に示す。
に示す。
【0134】
アルキル化剤：アサレー（asaley）（（Ｌ－ロイシン、Ｎ－［Ｎ－アセチル－４－［ビ
ス－（２－クロロエチル）アミノ］－ＤＬ－フェニルアラニル］－、エチルエステル；Ｎ
ＳＣ１６７７８０；ＣＡＳ登録番号３５７７８９７））；ＡＺＱ（（１，４－シクロヘキ
サジエン－１，４－ジカルバミン酸、２，５－ビス（１－アジリジニル）－３，６－ジオ
キソ－、ジエチルエステル；ＮＳＣ１８２９８６；ＣＡＳ登録番号５７９９８６８２））
；ＢＣＮＵ（（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－クロロエチル）－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ４０
９９６２；ＣＡＳ登録番号１５４９３８））；ブスルファン（１，４－ブタンジオールジ
メタンスルホネート；ＮＳＣ７５０；ＣＡＳ登録番号５５９８１）；（カルボキシフタラ
ト）白金（ＮＳＣ２７１６４；ＣＡＳ登録番号６５２９６８１３）；ＣＢＤＣＡ（（ｃｉ
ｓ－（１，１－シクロブタンジカルボキシラト）ジアンミン白金（ＩＩ））；ＮＳＣ２４
１２４０；ＣＡＳ登録番号４１５７５９４４））；ＣＣＮＵ（（Ｎ－（２－クロロエチル
）－Ｎ’－シクロヘキシル－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ７９０３７；ＣＡＳ登録番号１
３０１０４７４））；ＣＨＩＰ（イプロプラチン；ＮＳＣ２５６９２７）；クロラムブシ
ル（ＮＳＣ３０８８；ＣＡＳ登録番号３０５０３３）；クロロゾトシン（（２－［［［（
２－クロロエチル）ニトロソアミノ］カルボニル］アミノ］－２－デオキシ－Ｄ－グルコ
ピラノース；ＮＳＣ１７８２４８；ＣＡＳ登録番号５４７４９９０５））；シスプラチン
（シスプラチン；ＮＳＣ１１９８７５；ＣＡＳ登録番号１５６６３２７１）；クロメソン
（clomesone）（ＮＳＣ３３８９４７；ＣＡＳ登録番号８８３４３７２０）；シアノモル
ホリノドキソルビシン（ＮＣＳ３５７７０４；ＣＡＳ登録番号８８２５４０７３）；シク
ロジソン（cyclodisone）（ＮＳＣ３４８９４８；ＣＡＳ登録番号９９５９１７３８）；
ジアンヒドロガラクチトール（５，６－ジエポキシズルシトール；ＮＳＣ１３２３１３；
ＣＡＳ登録番号２３２６１２０３）；フルオロドパン（fluorodopan）（（５－［（２－
クロロエチル）－（２－フルオロエチル）アミノ］－６－メチル－ウラシル；ＮＳＣ７３
７５４；ＣＡＳ登録番号８３４９１３）；ヘプスルファム（ＮＳＣ３２９６８０；ＣＡＳ
登録番号９６８９２５７８）；ヒカントン（ＮＳＣ１４２９８２；ＣＡＳ登録番号２３２
５５９３８）；メルファラン（ＮＳＣ８８０６；ＣＡＳ登録番号３２２３０７２）；メチ
ルＣＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（ｔｒａｎｓ－４－メチルシクロヘキサ
ン）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４４１；１３９０９０９６）；マイトマイシンＣ
（ＮＳＣ２６９８０；ＣＡＳ登録番号５００７７）；ミトゾロミド（mitozolamide）（Ｎ
ＳＣ３５３４５１；ＣＡＳ登録番号８５６２２９５３）；ナイトロジェンマスタード（（
ビス（２－クロロエチル）メチルアミンヒドロクロリド；ＮＳＣ７６２；ＣＡＳ登録番号
５５８６７）；ＰＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（２，６－ジオキソ－３－
ピペリジル）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４６６；ＣＡＳ登録番号１３９０９０２
９））；ピペラジンアルキル化薬（（１－（２－クロロエチル）－４－（３－クロロプロ
ピル）－ピペラジンジヒドロクロリド；ＮＳＣ３４４００７））；ピペラジンジオン（Ｎ
ＳＣ１３５７５８；ＣＡＳ登録番号４１１０９８０２）；ピポブロマン（（Ｎ，Ｎ－ビス
（３－ブロモプロピオニル）ピペラジン；ＮＳＣ２５１５４；ＣＡＳ登録番号５４９１１
））；ポルフィロマイシン（Ｎ－メチルマイトマイシンＣ；ＮＳＣ５６４１０；ＣＡＳ登
録番号８０１５２５）；スピロヒダントインマスタード（ＮＳＣ１７２１１２；ＣＡＳ登
録番号５６６０５１６４）；テロキシロン（teroxirone）（トリグリシジルイソシアヌレ
ート；ＮＳＣ２９６９３４；ＣＡＳ登録番号２４５１６２９）；テトラプラチン（ＮＳＣ
３６３８１２；ＣＡＳ登録番号６２８１６９８２）；チオテパ（Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリ
－１，２－エタンジイルチオホスホルアミド；ＮＳＣ６３９６；ＣＡＳ登録番号５２２４
４）；トリエチレンメラミン（ＮＳＣ９７０６；ＣＡＳ登録番号５１１８３）；ウラシル
ナイトロジェンマスタード（デスメチルドパン（desmethyldopan）；ＮＳＣ３４４６２；
ＣＡＳ登録番号６６７５１）；Ｙｏｓｈｉ－８６４（（ビス（３－メシルオキシプロピル
）アミンヒドロクロリド；ＮＳＣ１０２６２７；ＣＡＳ登録番号３４５８２２８）。
ス－（２－クロロエチル）アミノ］－ＤＬ－フェニルアラニル］－、エチルエステル；Ｎ
ＳＣ１６７７８０；ＣＡＳ登録番号３５７７８９７））；ＡＺＱ（（１，４－シクロヘキ
サジエン－１，４－ジカルバミン酸、２，５－ビス（１－アジリジニル）－３，６－ジオ
キソ－、ジエチルエステル；ＮＳＣ１８２９８６；ＣＡＳ登録番号５７９９８６８２））
；ＢＣＮＵ（（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－クロロエチル）－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ４０
９９６２；ＣＡＳ登録番号１５４９３８））；ブスルファン（１，４－ブタンジオールジ
メタンスルホネート；ＮＳＣ７５０；ＣＡＳ登録番号５５９８１）；（カルボキシフタラ
ト）白金（ＮＳＣ２７１６４；ＣＡＳ登録番号６５２９６８１３）；ＣＢＤＣＡ（（ｃｉ
ｓ－（１，１－シクロブタンジカルボキシラト）ジアンミン白金（ＩＩ））；ＮＳＣ２４
１２４０；ＣＡＳ登録番号４１５７５９４４））；ＣＣＮＵ（（Ｎ－（２－クロロエチル
）－Ｎ’－シクロヘキシル－Ｎ－ニトロソウレア；ＮＳＣ７９０３７；ＣＡＳ登録番号１
３０１０４７４））；ＣＨＩＰ（イプロプラチン；ＮＳＣ２５６９２７）；クロラムブシ
ル（ＮＳＣ３０８８；ＣＡＳ登録番号３０５０３３）；クロロゾトシン（（２－［［［（
２－クロロエチル）ニトロソアミノ］カルボニル］アミノ］－２－デオキシ－Ｄ－グルコ
ピラノース；ＮＳＣ１７８２４８；ＣＡＳ登録番号５４７４９９０５））；シスプラチン
（シスプラチン；ＮＳＣ１１９８７５；ＣＡＳ登録番号１５６６３２７１）；クロメソン
（clomesone）（ＮＳＣ３３８９４７；ＣＡＳ登録番号８８３４３７２０）；シアノモル
ホリノドキソルビシン（ＮＣＳ３５７７０４；ＣＡＳ登録番号８８２５４０７３）；シク
ロジソン（cyclodisone）（ＮＳＣ３４８９４８；ＣＡＳ登録番号９９５９１７３８）；
ジアンヒドロガラクチトール（５，６－ジエポキシズルシトール；ＮＳＣ１３２３１３；
ＣＡＳ登録番号２３２６１２０３）；フルオロドパン（fluorodopan）（（５－［（２－
クロロエチル）－（２－フルオロエチル）アミノ］－６－メチル－ウラシル；ＮＳＣ７３
７５４；ＣＡＳ登録番号８３４９１３）；ヘプスルファム（ＮＳＣ３２９６８０；ＣＡＳ
登録番号９６８９２５７８）；ヒカントン（ＮＳＣ１４２９８２；ＣＡＳ登録番号２３２
５５９３８）；メルファラン（ＮＳＣ８８０６；ＣＡＳ登録番号３２２３０７２）；メチ
ルＣＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（ｔｒａｎｓ－４－メチルシクロヘキサ
ン）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４４１；１３９０９０９６）；マイトマイシンＣ
（ＮＳＣ２６９８０；ＣＡＳ登録番号５００７７）；ミトゾロミド（mitozolamide）（Ｎ
ＳＣ３５３４５１；ＣＡＳ登録番号８５６２２９５３）；ナイトロジェンマスタード（（
ビス（２－クロロエチル）メチルアミンヒドロクロリド；ＮＳＣ７６２；ＣＡＳ登録番号
５５８６７）；ＰＣＮＵ（（１－（２－クロロエチル）－３－（２，６－ジオキソ－３－
ピペリジル）－１－ニトロソウレア；ＮＳＣ９５４６６；ＣＡＳ登録番号１３９０９０２
９））；ピペラジンアルキル化薬（（１－（２－クロロエチル）－４－（３－クロロプロ
ピル）－ピペラジンジヒドロクロリド；ＮＳＣ３４４００７））；ピペラジンジオン（Ｎ
ＳＣ１３５７５８；ＣＡＳ登録番号４１１０９８０２）；ピポブロマン（（Ｎ，Ｎ－ビス
（３－ブロモプロピオニル）ピペラジン；ＮＳＣ２５１５４；ＣＡＳ登録番号５４９１１
））；ポルフィロマイシン（Ｎ－メチルマイトマイシンＣ；ＮＳＣ５６４１０；ＣＡＳ登
録番号８０１５２５）；スピロヒダントインマスタード（ＮＳＣ１７２１１２；ＣＡＳ登
録番号５６６０５１６４）；テロキシロン（teroxirone）（トリグリシジルイソシアヌレ
ート；ＮＳＣ２９６９３４；ＣＡＳ登録番号２４５１６２９）；テトラプラチン（ＮＳＣ
３６３８１２；ＣＡＳ登録番号６２８１６９８２）；チオテパ（Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリ
－１，２－エタンジイルチオホスホルアミド；ＮＳＣ６３９６；ＣＡＳ登録番号５２２４
４）；トリエチレンメラミン（ＮＳＣ９７０６；ＣＡＳ登録番号５１１８３）；ウラシル
ナイトロジェンマスタード（デスメチルドパン（desmethyldopan）；ＮＳＣ３４４６２；
ＣＡＳ登録番号６６７５１）；Ｙｏｓｈｉ－８６４（（ビス（３－メシルオキシプロピル
）アミンヒドロクロリド；ＮＳＣ１０２６２７；ＣＡＳ登録番号３４５８２２８）。
【0135】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシン（ＮＳＣ９４６００；ＣＡＳ登録番号７６
８９－０３－４）；様々なカンプトテシン誘導体および類似体（例えば、ＮＳＣ１００８
８０、ＮＳＣ６０３０７１、ＮＳＣ１０７１２４、ＮＳＣ６４３８３３、ＮＳＣ６２９９
７１、ＮＳＣ２９５５００、ＮＳＣ２４９９１０、ＮＳＣ６０６９８５、ＮＳＣ７４０２
８、ＮＳＣ１７６３２３、ＮＳＣ２９５５０１、ＮＳＣ６０６１７２、ＮＳＣ６０６１７
３、ＮＳＣ６１０４５８、ＮＳＣ６１８９３９、ＮＳＣ６１０４５７、ＮＳＣ６１０４５
９、ＮＳＣ６０６４９９、ＮＳＣ６１０４５６、ＮＳＣ３６４８３０、およびＮＳＣ６０
６４９７）；モルホリンイソキソルビシン（morpholinisoxorubicin）（ＮＳＣ３５４６
４６；ＣＡＳ登録番号８９１９６０４３）；ＳＮ－３８（ＮＳＣ６７３５９６；ＣＡＳ登
録番号８６６３９－５２－３）。
８９－０３－４）；様々なカンプトテシン誘導体および類似体（例えば、ＮＳＣ１００８
８０、ＮＳＣ６０３０７１、ＮＳＣ１０７１２４、ＮＳＣ６４３８３３、ＮＳＣ６２９９
７１、ＮＳＣ２９５５００、ＮＳＣ２４９９１０、ＮＳＣ６０６９８５、ＮＳＣ７４０２
８、ＮＳＣ１７６３２３、ＮＳＣ２９５５０１、ＮＳＣ６０６１７２、ＮＳＣ６０６１７
３、ＮＳＣ６１０４５８、ＮＳＣ６１８９３９、ＮＳＣ６１０４５７、ＮＳＣ６１０４５
９、ＮＳＣ６０６４９９、ＮＳＣ６１０４５６、ＮＳＣ３６４８３０、およびＮＳＣ６０
６４９７）；モルホリンイソキソルビシン（morpholinisoxorubicin）（ＮＳＣ３５４６
４６；ＣＡＳ登録番号８９１９６０４３）；ＳＮ－３８（ＮＳＣ６７３５９６；ＣＡＳ登
録番号８６６３９－５２－３）。
【0136】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：ドキソルビシン（ＮＳＣ１２３１２７；ＣＡＳ登録番号
２５３１６４０９）；アモナフィド（ベンゾイソキノリンジオン；ＮＳＣ３０８８４７；
ＣＡＳ登録番号６９４０８８１７）；ｍ－ＡＭＳＡ（（４’－（９－アクリジニルアミノ
）－３’－メトキシメタンスルホンアニリド；ＮＳＣ２４９９９２；ＣＡＳ登録番号５１
２６４１４３））；アントラピラゾール誘導体（（ＮＳＣ３５５６４４）；エトポシド（
ＶＰ－１６；ＮＳＣ１４１５４０；ＣＡＳ登録番号３３４１９４２０）；ピラゾロアクリ
ジン（（ピラゾロ［３，４，５－ｋｌ］アクリジン－２（６Ｈ）－プロパンアミン、９－
メトキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－５－ニトロ－、モノメタンスルホネート；ＮＳＣ３６６１
４０；ＣＡＳ登録番号９９００９２１９）；ビサントレンヒドロクロリド（ＮＳＣ３３７
７６６；ＣＡＳ登録番号７１４３９６８４）；ダウノルビシン（ＮＳＣ８２１１５１；Ｃ
ＡＳ登録番号２３５４１５０６）；デオキシドキソルビシン（ＮＳＣ２６７４６９；ＣＡ
Ｓ登録番号６３９５００６１）；ミトキサントロン（ＮＳＣ３０１７３９；ＣＡＳ登録番
号７０４７６８２３）；メノガリル（ＮＳＣ２６９１４８；ＣＡＳ登録番号７１６２８９
６１）；Ｎ，Ｎ－ジベンジルダウノマイシン（ＮＳＣ２６８２４２；ＣＡＳ登録番号７０
８７８５１２）；オキサントラゾール（oxanthrazole）（ＮＳＣ３４９１７４；ＣＡＳ登
録番号１０５１１８１２５）；ルビダゾン（rubidazone）（ＮＳＣ１６４０１１；ＣＡＳ
登録番号３６５０８７１１）；テニポシド（ＶＭ－２６；ＮＳＣ１２２８１９；ＣＡＳ登
録番号２９７６７２０２）。
２５３１６４０９）；アモナフィド（ベンゾイソキノリンジオン；ＮＳＣ３０８８４７；
ＣＡＳ登録番号６９４０８８１７）；ｍ－ＡＭＳＡ（（４’－（９－アクリジニルアミノ
）－３’－メトキシメタンスルホンアニリド；ＮＳＣ２４９９９２；ＣＡＳ登録番号５１
２６４１４３））；アントラピラゾール誘導体（（ＮＳＣ３５５６４４）；エトポシド（
ＶＰ－１６；ＮＳＣ１４１５４０；ＣＡＳ登録番号３３４１９４２０）；ピラゾロアクリ
ジン（（ピラゾロ［３，４，５－ｋｌ］アクリジン－２（６Ｈ）－プロパンアミン、９－
メトキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－５－ニトロ－、モノメタンスルホネート；ＮＳＣ３６６１
４０；ＣＡＳ登録番号９９００９２１９）；ビサントレンヒドロクロリド（ＮＳＣ３３７
７６６；ＣＡＳ登録番号７１４３９６８４）；ダウノルビシン（ＮＳＣ８２１１５１；Ｃ
ＡＳ登録番号２３５４１５０６）；デオキシドキソルビシン（ＮＳＣ２６７４６９；ＣＡ
Ｓ登録番号６３９５００６１）；ミトキサントロン（ＮＳＣ３０１７３９；ＣＡＳ登録番
号７０４７６８２３）；メノガリル（ＮＳＣ２６９１４８；ＣＡＳ登録番号７１６２８９
６１）；Ｎ，Ｎ－ジベンジルダウノマイシン（ＮＳＣ２６８２４２；ＣＡＳ登録番号７０
８７８５１２）；オキサントラゾール（oxanthrazole）（ＮＳＣ３４９１７４；ＣＡＳ登
録番号１０５１１８１２５）；ルビダゾン（rubidazone）（ＮＳＣ１６４０１１；ＣＡＳ
登録番号３６５０８７１１）；テニポシド（ＶＭ－２６；ＮＳＣ１２２８１９；ＣＡＳ登
録番号２９７６７２０２）。
【0137】
ＤＮＡ挿入剤：アントラマイシン（ＣＡＳ登録番号４８０３２７４）；チカマイシンＡ
（ＣＡＳ登録番号８９６７５３７６）；トマイマイシン（ＣＡＳ登録番号３５０５０５５
６）；ＤＣ－８１（ＣＡＳ登録番号８１３０７２４６）；シビロマイシン（ＣＡＳ登録番
号１２６８４３３２）；ピロロベンゾジアゼピン誘導体（ＣＡＳ登録番号９４５４９００
９５）；ＳＧＤ－１８８２（（Ｓ）－２－（４－アミノフェニル）－７－メトキシ－８－
（３－４（Ｓ）－７－メトキシ－２－（４－メトキシフェニル）－５－オキソ－５，１１
ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－８－イ
ル）オキシ）プロポキシ）－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼ
ピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６；（１１ａＳ，１１ａ’
Ｓ）－８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（７－メトキシ－２
－メチレン－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジ
アゼピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＮＳＣ６９４５０１；ＣＡＳ登録番号２３２９３１
５７６）。
（ＣＡＳ登録番号８９６７５３７６）；トマイマイシン（ＣＡＳ登録番号３５０５０５５
６）；ＤＣ－８１（ＣＡＳ登録番号８１３０７２４６）；シビロマイシン（ＣＡＳ登録番
号１２６８４３３２）；ピロロベンゾジアゼピン誘導体（ＣＡＳ登録番号９４５４９００
９５）；ＳＧＤ－１８８２（（Ｓ）－２－（４－アミノフェニル）－７－メトキシ－８－
（３－４（Ｓ）－７－メトキシ－２－（４－メトキシフェニル）－５－オキソ－５，１１
ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－８－イ
ル）オキシ）プロポキシ）－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼ
ピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６；（１１ａＳ，１１ａ’
Ｓ）－８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（７－メトキシ－２
－メチレン－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジ
アゼピン－５（１１ａＨ）－オン）；ＮＳＣ６９４５０１；ＣＡＳ登録番号２３２９３１
５７６）。
【0138】
ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質：Ｌ－アラノシン（ＮＳＣ１５３３５３；ＣＡＳ登録番号
５９１６３４１６）；５－アザシチジン（ＮＳＣ１０２８１６；ＣＡＳ登録番号３２０６
７２）；５－フルオロウラシル（ＮＳＣ１９８９３；ＣＡＳ登録番号５１２１８）；アシ
ビシン（ＮＳＣ１６３５０１；ＣＡＳ登録番号４２２２８９２２）；アミノプテリン誘導
体Ｎ－［２－クロロ－５－［［（２，４－ジアミノ－５－メチル－６－キナゾリニル）メ
チル］アミノ］ベンゾイル－］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１３２４８３）；アミノプテ
リン誘導体Ｎ－［４－［［（２，４－ジアミノ－５－エチル－６－キナゾリニル）メチル
］アミノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１８４６９２）；アミノプテリン誘
導体Ｎ－［２－クロロ－４－［［（２，４－ジアミノ－６－プテリジニル）メチル］アミ
ノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸一水和物（ＮＳＣ１３４０３３）；葉酸代謝拮抗薬
（antifo）（（Ｎα－（４－アミノ－４－デオキシプテロイル）－Ｎ７－ヘミフタロイル
－Ｌ－オルニチン；ＮＳＣ６２３０１７））；ベーカー（Baker）の可溶性葉酸代謝拮抗
薬（antifol）（ＮＳＣ１３９１０５；ＣＡＳ登録番号４１１９１０４２）；ジクロロア
リルローソン（lawsone）（（２－（３，３－ジクロロアリル）－３－ヒドロキシ－１，
４－ナフトキノン；ＮＳＣ１２６７７１；ＣＡＳ登録番号３６４１７１６０）；ブレキナ
ル（ＮＳＣ３６８３９０；ＣＡＳ登録番号９６２０１８８６）；フトラフル（（プロドラ
ッグ；５－フルオロ－１－（テトラヒドロ－２－フリル）－ウラシル；ＮＳＣ１４８９５
８；ＣＡＳ登録番号３７０７６６８９）；５，６－ジヒドロ－５－アザシチジン（ＮＳＣ
２６４８８０；ＣＡＳ登録番号６２４０２３１７）；メトトレキセート（ＮＳＣ７４０；
ＣＡＳ登録番号５９０５２）；メトトレキセート誘導体（Ｎ－［［４－［［（２，４－ジ
アミノ－６－プテリジニル）メチル］メチルアミノ］－１－ナフタレニル］カルボニル］
Ｌ－グルタミン酸；ＮＳＣ１７４１２１）；ＰＡＬＡ（（Ｎ－（ホスホノアセチル）－Ｌ
－アスパルテート；ＮＳＣ２２４１３１；ＣＡＳ登録番号６０３４２５５６５）；ピラゾ
フリン（ＮＳＣ１４３０９５；ＣＡＳ登録番号３０８６８３０５）；トリメトレキセート
（ＮＳＣ３５２１２２；ＣＡＳ登録番号８２９５２６４５）。
５９１６３４１６）；５－アザシチジン（ＮＳＣ１０２８１６；ＣＡＳ登録番号３２０６
７２）；５－フルオロウラシル（ＮＳＣ１９８９３；ＣＡＳ登録番号５１２１８）；アシ
ビシン（ＮＳＣ１６３５０１；ＣＡＳ登録番号４２２２８９２２）；アミノプテリン誘導
体Ｎ－［２－クロロ－５－［［（２，４－ジアミノ－５－メチル－６－キナゾリニル）メ
チル］アミノ］ベンゾイル－］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１３２４８３）；アミノプテ
リン誘導体Ｎ－［４－［［（２，４－ジアミノ－５－エチル－６－キナゾリニル）メチル
］アミノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸（ＮＳＣ１８４６９２）；アミノプテリン誘
導体Ｎ－［２－クロロ－４－［［（２，４－ジアミノ－６－プテリジニル）メチル］アミ
ノ］ベンゾイル］Ｌ－アスパラギン酸一水和物（ＮＳＣ１３４０３３）；葉酸代謝拮抗薬
（antifo）（（Ｎα－（４－アミノ－４－デオキシプテロイル）－Ｎ７－ヘミフタロイル
－Ｌ－オルニチン；ＮＳＣ６２３０１７））；ベーカー（Baker）の可溶性葉酸代謝拮抗
薬（antifol）（ＮＳＣ１３９１０５；ＣＡＳ登録番号４１１９１０４２）；ジクロロア
リルローソン（lawsone）（（２－（３，３－ジクロロアリル）－３－ヒドロキシ－１，
４－ナフトキノン；ＮＳＣ１２６７７１；ＣＡＳ登録番号３６４１７１６０）；ブレキナ
ル（ＮＳＣ３６８３９０；ＣＡＳ登録番号９６２０１８８６）；フトラフル（（プロドラ
ッグ；５－フルオロ－１－（テトラヒドロ－２－フリル）－ウラシル；ＮＳＣ１４８９５
８；ＣＡＳ登録番号３７０７６６８９）；５，６－ジヒドロ－５－アザシチジン（ＮＳＣ
２６４８８０；ＣＡＳ登録番号６２４０２３１７）；メトトレキセート（ＮＳＣ７４０；
ＣＡＳ登録番号５９０５２）；メトトレキセート誘導体（Ｎ－［［４－［［（２，４－ジ
アミノ－６－プテリジニル）メチル］メチルアミノ］－１－ナフタレニル］カルボニル］
Ｌ－グルタミン酸；ＮＳＣ１７４１２１）；ＰＡＬＡ（（Ｎ－（ホスホノアセチル）－Ｌ
－アスパルテート；ＮＳＣ２２４１３１；ＣＡＳ登録番号６０３４２５５６５）；ピラゾ
フリン（ＮＳＣ１４３０９５；ＣＡＳ登録番号３０８６８３０５）；トリメトレキセート
（ＮＳＣ３５２１２２；ＣＡＳ登録番号８２９５２６４５）。
【0139】
ＤＮＡ代謝拮抗物質：３－ＨＰ（ＮＳＣ９５６７８；ＣＡＳ登録番号３８１４７９７）
；２’－デオキシ－５－フルオロウリジン（ＮＳＣ２７６４０；ＣＡＳ登録番号５０９１
９）；５－ＨＰ（ＮＳＣ１０７３９２；ＣＡＳ登録番号１９４９４８９４）；α－ＴＧＤ
Ｒ（α－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳＣ７１８５１ ＣＡＳ登録番号２１
３３８１５）；アフィジコリングリシネート（ＮＳＣ３０３８１２；ＣＡＳ登録番号９２
８０２８２２）；ａｒａ Ｃ（シトシンアラビノシド；ＮＳＣ６３８７８；ＣＡＳ登録番
号６９７４９）；５－アザ－２’－デオキシシチジン（ＮＳＣ１２７７１６；ＣＡＳ登録
番号２３５３３３５）；β－ＴＧＤＲ（β－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳ
Ｃ７１２６１；ＣＡＳ登録番号７８９６１７）；シクロシチジン（ＮＳＣ１４５６６８；
ＣＡＳ登録番号１０２１２２５６）；グアナゾール（ＮＳＣ１８９５；ＣＡＳ登録番号１
４５５７７２）；ヒドロキシ尿素（ＮＳＣ３２０６５；ＣＡＳ登録番号１２７０７１）；
イノシングリコジアルデヒド（ＮＳＣ１１８９９４；ＣＡＳ登録番号２３５９０９９０）
；マクベシンＩＩ（ＮＳＣ３３０５００；ＣＡＳ登録番号７３３４１７３８）；ピラゾロ
イミダゾール（ＮＳＣ５１１４３；ＣＡＳ登録番号６７１４２９０）；チオグアニン（Ｎ
ＳＣ７５２；ＣＡＳ登録番号１５４４２７）；チオプリン（ＮＳＣ７５５；ＣＡＳ登録番
号５０４４２）。
；２’－デオキシ－５－フルオロウリジン（ＮＳＣ２７６４０；ＣＡＳ登録番号５０９１
９）；５－ＨＰ（ＮＳＣ１０７３９２；ＣＡＳ登録番号１９４９４８９４）；α－ＴＧＤ
Ｒ（α－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳＣ７１８５１ ＣＡＳ登録番号２１
３３８１５）；アフィジコリングリシネート（ＮＳＣ３０３８１２；ＣＡＳ登録番号９２
８０２８２２）；ａｒａ Ｃ（シトシンアラビノシド；ＮＳＣ６３８７８；ＣＡＳ登録番
号６９７４９）；５－アザ－２’－デオキシシチジン（ＮＳＣ１２７７１６；ＣＡＳ登録
番号２３５３３３５）；β－ＴＧＤＲ（β－２’－デオキシ－６－チオグアノシン；ＮＳ
Ｃ７１２６１；ＣＡＳ登録番号７８９６１７）；シクロシチジン（ＮＳＣ１４５６６８；
ＣＡＳ登録番号１０２１２２５６）；グアナゾール（ＮＳＣ１８９５；ＣＡＳ登録番号１
４５５７７２）；ヒドロキシ尿素（ＮＳＣ３２０６５；ＣＡＳ登録番号１２７０７１）；
イノシングリコジアルデヒド（ＮＳＣ１１８９９４；ＣＡＳ登録番号２３５９０９９０）
；マクベシンＩＩ（ＮＳＣ３３０５００；ＣＡＳ登録番号７３３４１７３８）；ピラゾロ
イミダゾール（ＮＳＣ５１１４３；ＣＡＳ登録番号６７１４２９０）；チオグアニン（Ｎ
ＳＣ７５２；ＣＡＳ登録番号１５４４２７）；チオプリン（ＮＳＣ７５５；ＣＡＳ登録番
号５０４４２）。
【0140】
細胞周期モジュレーター：シリビニン（ＣＡＳ登録番号２２８８８－７０－６）；没食
子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ；ＣＡＳ登録番号９８９５１５）；プロシアニジン誘導
体（例えば、プロシアニジンＡ１［ＣＡＳ登録番号１０３８８３０３０］、プロシアニジ
ンＢ１［ＣＡＳ登録番号２０３１５２５７］、プロシアニジンＢ４［ＣＡＳ登録番号２９
１０６５１２］、アレカタニン（arecatannin）Ｂ１［ＣＡＳ登録番号７９７６３２８３
］）；イソフラボン（例えば、ゲニステイン［４％５，７－トリヒドロキシイソフラボン
；ＣＡＳ登録番号４４６７２０］、ダイゼイン［４’，７－ジヒドロキシイソフラボン、
ＣＡＳ登録番号４８６６６８］；インドール－３－カルビノール（ＣＡＳ登録番号７００
０６１）；ケルセチン（ＮＳＣ９２１９；ＣＡＳ登録番号１１７３９５）；エストラムス
チン（ＮＳＣ８９２０１；ＣＡＳ登録番号２９９８５７４）；ノコダゾール（ＣＡＳ登録
番号３１４３０１８９）；ポドフィロトキシン（ＣＡＳ登録番号５１８２８５）；酒石酸
ビノレルビン（ＮＳＣ６０８２１０；ＣＡＳ登録番号１２５３１７３９７）；クリプトフ
ィシン（ＮＳＣ６６７６４２；ＣＡＳ登録番号１２４６８９６５２）。
子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ；ＣＡＳ登録番号９８９５１５）；プロシアニジン誘導
体（例えば、プロシアニジンＡ１［ＣＡＳ登録番号１０３８８３０３０］、プロシアニジ
ンＢ１［ＣＡＳ登録番号２０３１５２５７］、プロシアニジンＢ４［ＣＡＳ登録番号２９
１０６５１２］、アレカタニン（arecatannin）Ｂ１［ＣＡＳ登録番号７９７６３２８３
］）；イソフラボン（例えば、ゲニステイン［４％５，７－トリヒドロキシイソフラボン
；ＣＡＳ登録番号４４６７２０］、ダイゼイン［４’，７－ジヒドロキシイソフラボン、
ＣＡＳ登録番号４８６６６８］；インドール－３－カルビノール（ＣＡＳ登録番号７００
０６１）；ケルセチン（ＮＳＣ９２１９；ＣＡＳ登録番号１１７３９５）；エストラムス
チン（ＮＳＣ８９２０１；ＣＡＳ登録番号２９９８５７４）；ノコダゾール（ＣＡＳ登録
番号３１４３０１８９）；ポドフィロトキシン（ＣＡＳ登録番号５１８２８５）；酒石酸
ビノレルビン（ＮＳＣ６０８２１０；ＣＡＳ登録番号１２５３１７３９７）；クリプトフ
ィシン（ＮＳＣ６６７６４２；ＣＡＳ登録番号１２４６８９６５２）。
【0141】
キナーゼ阻害剤：アファチニブ（ＣＡＳ登録番号８５０１４０７２６）；アキシチニブ
（ＣＡＳ登録番号３１９４６０８５０）；ＡＲＲＹ－４３８１６２（ビニメチニブ）（Ｃ
ＡＳ登録番号６０６１４３８９９）；ボスチニブ（ＣＡＳ登録番号３８０８４３７５４）
；カボザンチニブ（ＣＡＳ登録番号１１４０９０９４８３）；セリチニブ（ＣＡＳ登録番
号１０３２９００２５６）；クリゾチニブ（ＣＡＳ登録番号８７７３９９５２５）；ダブ
ラフェニブ（ＣＡＳ登録番号１１９５７６５４５７）；ダサチニブ（ＮＳＣ７３２５１７
；ＣＡＳ登録番号３０２９６２４９８）；エルロチニブ（ＮＳＣ７１８７８１；ＣＡＳ登
録番号１８３３１９６９９）；エベロリムス（ＮＳＣ７３３５０４；ＣＡＳ登録番号１５
９３５１６９６）；フォスタマチニブ（ＮＳＣ７４５９４２；ＣＡＳ登録番号９０１１１
９３５５）；ゲフィチニブ（ＮＳＣ７１５０５５；ＣＡＳ登録番号１８４４７５３５２）
；イブルチニブ（ＣＡＳ登録番号９３６５６３９６１）；イマチニブ（ＮＳＣ７１６０５
１；ＣＡＳ登録番号２２０１２７５７１）；ラパチニブ（ＣＡＳ登録番号３８８０８２７
８８）；レンバチニブ（ＣＡＳ登録番号８５７８９０３９２）；ムブリチニブ（ＣＡＳ３
６６０１７０９６）；ニロチニブ（ＣＡＳ登録番号９２３２８８９５３）；ニンテダニブ
（ＣＡＳ登録番号６５６２４７１７５）；パルボシクリブ（ＣＡＳ登録番号５７１１９０
３０２）；パゾパニブ（ＮＳＣ７３７７５４；ＣＡＳ登録番号６３５７０２６４６）；ペ
ガプタニブ（ＣＡＳ登録番号２２２７１６８６１）；ポナチニブ（ＣＡＳ登録番号１１１
４５４４３１８）；ラパマイシン（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８
９）；レゴラフェニブ（ＣＡＳ登録番号７５５０３７０３７）；ＡＰ２３５７３（リダフ
ォロリムス）（ＣＡＳ登録番号５７２９２４５４０）；ＩＮＣＢ０１８４２４（ルキソリ
チニブ）（ＣＡＳ登録番号１０９２９３９１７７）；ＡＲＲＹ－１４２８８６（セルメチ
ニブ）（ＮＳＣ７４１０７８；ＣＡＳ登録番号６０６１４３－５２－６）；シロリムス（
ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；ソラフェニブ（ＮＳＣ７２４
７７２；ＣＡＳ登録番号４７５２０７５９１）；スニチニブ（ＮＳＣ７３６５１１；ＣＡ
Ｓ登録番号３４１０３１５４７）；トファシチニブ（ＣＡＳ登録番号４７７６００７５２
）；テムシロリムス（ＮＳＣ６８３８６４；ＣＡＳ登録番号１６３６３５０４３）；トラ
メチニブ（ＣＡＳ登録番号８７１７００１７３）；バンデタニブ（ＣＡＳ登録番号４４３
９１３７３３）；ベムラフェニブ（ＣＡＳ登録番号９１８５０４６５１）；ＳＵ６６５６
（ＣＡＳ登録番号３３０１６１８７０）；ＣＥＰ－７０１（レスタウルチニブ（lesaurti
nib））（ＣＡＳ登録番号１１１３５８８８４）；ＸＬ０１９（ＣＡＳ登録番号９４５７
５５５６６）；ＰＤ－３２５９０１（ＣＡＳ登録番号３９１２１０１０９）；ＰＤ－９８
０５９（ＣＡＳ登録番号１６７８６９２１８）；ＡＴＰ競合ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害
剤、例えばＰＩ－１０３（ＣＡＳ登録番号３７１９３５７４９）、ＰＰ２４２（ＣＡＳ登
録番号１０９２３５１６７１）、ＰＰ３０（ＣＡＳ登録番号１０９２７８８０９４）、Ｔ
ｏｒｉｎ １（ＣＡＳ登録番号１２２２９９８３６８）、ＬＹ２９４００２（ＣＡＳ登録
番号１５４４４７３６６）、ＸＬ－１４７（ＣＡＳ登録番号９３４５２６８９３）、ＣＡ
Ｌ－１２０（ＣＡＳ登録番号８７０２８１３４８）、ＥＴＰ－４５６５８（ＣＡＳ登録番
号１１９８３５７７９７）、ＰＸ８６６（ＣＡＳ登録番号５０２６３２６６８）、ＧＤＣ
－０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４３０７）、ＢＧＴ２２６（ＣＡＳ登録番号１２
４５５３７６８１）、ＢＥＺ２３５（ＣＡＳ登録番号９１５０１９６５７）、ＸＬ－７６
５（ＣＡＳ登録番号９３４４９３７６２）など。
（ＣＡＳ登録番号３１９４６０８５０）；ＡＲＲＹ－４３８１６２（ビニメチニブ）（Ｃ
ＡＳ登録番号６０６１４３８９９）；ボスチニブ（ＣＡＳ登録番号３８０８４３７５４）
；カボザンチニブ（ＣＡＳ登録番号１１４０９０９４８３）；セリチニブ（ＣＡＳ登録番
号１０３２９００２５６）；クリゾチニブ（ＣＡＳ登録番号８７７３９９５２５）；ダブ
ラフェニブ（ＣＡＳ登録番号１１９５７６５４５７）；ダサチニブ（ＮＳＣ７３２５１７
；ＣＡＳ登録番号３０２９６２４９８）；エルロチニブ（ＮＳＣ７１８７８１；ＣＡＳ登
録番号１８３３１９６９９）；エベロリムス（ＮＳＣ７３３５０４；ＣＡＳ登録番号１５
９３５１６９６）；フォスタマチニブ（ＮＳＣ７４５９４２；ＣＡＳ登録番号９０１１１
９３５５）；ゲフィチニブ（ＮＳＣ７１５０５５；ＣＡＳ登録番号１８４４７５３５２）
；イブルチニブ（ＣＡＳ登録番号９３６５６３９６１）；イマチニブ（ＮＳＣ７１６０５
１；ＣＡＳ登録番号２２０１２７５７１）；ラパチニブ（ＣＡＳ登録番号３８８０８２７
８８）；レンバチニブ（ＣＡＳ登録番号８５７８９０３９２）；ムブリチニブ（ＣＡＳ３
６６０１７０９６）；ニロチニブ（ＣＡＳ登録番号９２３２８８９５３）；ニンテダニブ
（ＣＡＳ登録番号６５６２４７１７５）；パルボシクリブ（ＣＡＳ登録番号５７１１９０
３０２）；パゾパニブ（ＮＳＣ７３７７５４；ＣＡＳ登録番号６３５７０２６４６）；ペ
ガプタニブ（ＣＡＳ登録番号２２２７１６８６１）；ポナチニブ（ＣＡＳ登録番号１１１
４５４４３１８）；ラパマイシン（ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８
９）；レゴラフェニブ（ＣＡＳ登録番号７５５０３７０３７）；ＡＰ２３５７３（リダフ
ォロリムス）（ＣＡＳ登録番号５７２９２４５４０）；ＩＮＣＢ０１８４２４（ルキソリ
チニブ）（ＣＡＳ登録番号１０９２９３９１７７）；ＡＲＲＹ－１４２８８６（セルメチ
ニブ）（ＮＳＣ７４１０７８；ＣＡＳ登録番号６０６１４３－５２－６）；シロリムス（
ＮＳＣ２２６０８０；ＣＡＳ登録番号５３１２３８８９）；ソラフェニブ（ＮＳＣ７２４
７７２；ＣＡＳ登録番号４７５２０７５９１）；スニチニブ（ＮＳＣ７３６５１１；ＣＡ
Ｓ登録番号３４１０３１５４７）；トファシチニブ（ＣＡＳ登録番号４７７６００７５２
）；テムシロリムス（ＮＳＣ６８３８６４；ＣＡＳ登録番号１６３６３５０４３）；トラ
メチニブ（ＣＡＳ登録番号８７１７００１７３）；バンデタニブ（ＣＡＳ登録番号４４３
９１３７３３）；ベムラフェニブ（ＣＡＳ登録番号９１８５０４６５１）；ＳＵ６６５６
（ＣＡＳ登録番号３３０１６１８７０）；ＣＥＰ－７０１（レスタウルチニブ（lesaurti
nib））（ＣＡＳ登録番号１１１３５８８８４）；ＸＬ０１９（ＣＡＳ登録番号９４５７
５５５６６）；ＰＤ－３２５９０１（ＣＡＳ登録番号３９１２１０１０９）；ＰＤ－９８
０５９（ＣＡＳ登録番号１６７８６９２１８）；ＡＴＰ競合ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害
剤、例えばＰＩ－１０３（ＣＡＳ登録番号３７１９３５７４９）、ＰＰ２４２（ＣＡＳ登
録番号１０９２３５１６７１）、ＰＰ３０（ＣＡＳ登録番号１０９２７８８０９４）、Ｔ
ｏｒｉｎ １（ＣＡＳ登録番号１２２２９９８３６８）、ＬＹ２９４００２（ＣＡＳ登録
番号１５４４４７３６６）、ＸＬ－１４７（ＣＡＳ登録番号９３４５２６８９３）、ＣＡ
Ｌ－１２０（ＣＡＳ登録番号８７０２８１３４８）、ＥＴＰ－４５６５８（ＣＡＳ登録番
号１１９８３５７７９７）、ＰＸ８６６（ＣＡＳ登録番号５０２６３２６６８）、ＧＤＣ
－０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４３０７）、ＢＧＴ２２６（ＣＡＳ登録番号１２
４５５３７６８１）、ＢＥＺ２３５（ＣＡＳ登録番号９１５０１９６５７）、ＸＬ－７６
５（ＣＡＳ登録番号９３４４９３７６２）など。
【0142】
タンパク質合成阻害剤：アクリフラビン（ＣＡＳ登録番号６５５８９７００）；アミカ
シン（ＮＳＣ１７７００１；ＣＡＳ登録番号３９８３１５５５）；アルベカシン（ＣＡＳ
登録番号５１０２５８５５）；アストロマイシン（ＣＡＳ登録番号５５７７９０６１）；
アジスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３２；ＣＡＳ登録番号８３９０５０１５）；ベカナマ
イシン（ＣＡＳ登録番号４６９６７６８）；クロルテトラサイクリン（ＮＳＣ１３２５２
；ＣＡＳ登録番号６４７２２）；クラリスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３３；ＣＡＳ登録
番号８１１０３１１９）；クリンダマイシン（ＣＡＳ登録番号１８３２３４４９）；クロ
モサイクリン（ＣＡＳ登録番号１１８１５４０）；シクロヘキシミド（ＣＡＳ登録番号６
６８１９）；ダクチノマイシン（ＮＳＣ３０５３；ＣＡＳ登録番号５０７６０）；ダルフ
ォプリスチン（ＣＡＳ登録番号１１２３６２５０２）；デメクロサイクリン（ＣＡＳ登録
番号１２７３３３）；ジベカシン（ＣＡＳ登録番号３４４９３９８６）；ジヒドロストレ
プトマイシン（ＣＡＳ登録番号１２８４６１）；ジリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号６２
０１３０４１）；ドキシサイクリン（ＣＡＳ登録番号１７０８６２８１）；エメチン（Ｎ
ＳＣ３３６６９；ＣＡＳ登録番号４８３１８１）；エリスロマイシン（ＮＳＣ５５９２９
；ＣＡＳ登録番号１１４０７８）；フルリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８３６６４２０
８）；フラマイセチン（ネオマイシンＢ；ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ゲンタマイシ
ン（ＮＳＣ８２２６１；ＣＡＳ登録番号１４０３６６３）；グリシルシクリン、例えばチ
ゲサイクリン（ＣＡＳ登録番号２２０６２００９７）；ハイグロマイシンＢ（ＣＡＳ登録
番号３１２８２０４９）；イセパマイシン（ＣＡＳ登録番号６７８１４７６０）；ジョサ
マイシン（ＮＳＣ１２２２２３；ＣＡＳ登録番号１６８４６２４５）；カナマイシン（Ｃ
ＡＳ登録番号８０６３０７８）；ケトライド、例えばテリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号
１９１１１４４８４）、セスロマイシン（ＣＡＳ登録番号２０５１１０４８１）、および
ソリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号７６０９８１８３７）；リンコマイシン（ＣＡＳ登録
番号１５４２１２）；ライムサイクリン（ＣＡＳ登録番号９９２２１２）；メクロサイク
リン（ＮＳＣ７８５０２；ＣＡＳ登録番号２０１３５８３）；メタサイクリン（ロンドマ
イシン（rondomycin）；ＮＳＣ３５６４６３；ＣＡＳ登録番号９１４００１）；ミデカマ
イシン（ＣＡＳ登録番号３５４５７８０８）；ミノサイクリン（ＮＳＣ１４１９９３；Ｃ
ＡＳ登録番号１０１１８９０８）；ミオカマイシン（ＣＡＳ登録番号５５８８１０７７）
；ネオマイシン（ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ネチルマイシン（ＣＡＳ登録番号５６
３９１５６１）；オレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号３９２２９０５）；オキサゾリジ
ノン、例えばエペレゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００４４）、リネゾリド（ＣＡＳ
登録番号１６５８０００３３）、ポジゾリド（posizolid）（ＣＡＳ登録番号２５２２６
００２９）、ラデゾリド（ＣＡＳ登録番号８６９８８４７８６）、ランベゾリド（ranbez
olid）（ＣＡＳ登録番号３９２６５９３８０）、ステゾリド（ＣＡＳ登録番号１６８８２
８５８８）、テジゾリド（ＣＡＳ登録番号８５６８６７５５５）；オキシテトラサイクリ
ン（ＮＳＣ９１６９；ＣＡＳ登録番号２０５８４６０）；パロモマイシン（ＣＡＳ登録番
号７５４２３７２）；ペニメピサイクリン（ＣＡＳ登録番号４５９９６０４）；ペプチジ
ルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、クロラムフェニコール（ＮＳＣ３０６９；ＣＡＳ
登録番号５６７５７）ならびにアジダムフェニコール（ＣＡＳ登録番号１３８３８０８９
）、フロルフェニコール（ＣＡＳ登録番号７３２３１３４２）、およびチアンフェニコー
ル（ＣＡＳ登録番号１５３１８４５３）、およびプロイロムチリン、例えばレタパムリン
（ＣＡＳ登録番号２２４４５２６６８）、チアムリン（ＣＡＳ登録番号５５２９７９５５
）、バルネムリン（ＣＡＳ登録番号１０１３１２９２９）などの誘導体；ピルリマイシン
（ＣＡＳ登録番号７９５４８７３５）；ピューロマイシン（ＮＳＣ３０５５；ＣＡＳ登録
番号５３７９２）；キヌプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２０１３８５０３）；リボスタマ
イシン（ＣＡＳ登録番号５３７９７３５６）；ロキタマイシン（ＣＡＳ登録番号７４０１
４５１０）；ロリテトラサイクリン（ＣＡＳ登録番号７５１９７３）；ロキシスロマイシ
ン（ＣＡＳ登録番号８０２１４８３１）；シソマイシン（ＣＡＳ登録番号３２３８５１１
８）；スペクチノマイシン（ＣＡＳ登録番号１６９５７７８）；スピラマイシン（ＣＡＳ
登録番号８０２５８１８）；ストレプトグラミン、例えばプリスチナマイシン（ＣＡＳ登
録番号２７００７６６０３）、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２
６６０２８９９）、およびバージニアマイシン（ＣＡＳ登録番号１１００６７６１）；ス
トレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号５７９２１）；テトラサイクリン（ＮＳＣ１０８５７
９；ＣＡＳ登録番号６０５４８）；トブラマイシン（ＣＡＳ登録番号３２９８６５６４）
；トロレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号２７５１０９９）；タイロシン（ＣＡＳ登録番
号１４０１６９０）；ベルダマイシン（verdamicin）（ＣＡＳ登録番号４９８６３４８１
）。
シン（ＮＳＣ１７７００１；ＣＡＳ登録番号３９８３１５５５）；アルベカシン（ＣＡＳ
登録番号５１０２５８５５）；アストロマイシン（ＣＡＳ登録番号５５７７９０６１）；
アジスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３２；ＣＡＳ登録番号８３９０５０１５）；ベカナマ
イシン（ＣＡＳ登録番号４６９６７６８）；クロルテトラサイクリン（ＮＳＣ１３２５２
；ＣＡＳ登録番号６４７２２）；クラリスロマイシン（ＮＳＣ６４３７３３；ＣＡＳ登録
番号８１１０３１１９）；クリンダマイシン（ＣＡＳ登録番号１８３２３４４９）；クロ
モサイクリン（ＣＡＳ登録番号１１８１５４０）；シクロヘキシミド（ＣＡＳ登録番号６
６８１９）；ダクチノマイシン（ＮＳＣ３０５３；ＣＡＳ登録番号５０７６０）；ダルフ
ォプリスチン（ＣＡＳ登録番号１１２３６２５０２）；デメクロサイクリン（ＣＡＳ登録
番号１２７３３３）；ジベカシン（ＣＡＳ登録番号３４４９３９８６）；ジヒドロストレ
プトマイシン（ＣＡＳ登録番号１２８４６１）；ジリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号６２
０１３０４１）；ドキシサイクリン（ＣＡＳ登録番号１７０８６２８１）；エメチン（Ｎ
ＳＣ３３６６９；ＣＡＳ登録番号４８３１８１）；エリスロマイシン（ＮＳＣ５５９２９
；ＣＡＳ登録番号１１４０７８）；フルリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号８３６６４２０
８）；フラマイセチン（ネオマイシンＢ；ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ゲンタマイシ
ン（ＮＳＣ８２２６１；ＣＡＳ登録番号１４０３６６３）；グリシルシクリン、例えばチ
ゲサイクリン（ＣＡＳ登録番号２２０６２００９７）；ハイグロマイシンＢ（ＣＡＳ登録
番号３１２８２０４９）；イセパマイシン（ＣＡＳ登録番号６７８１４７６０）；ジョサ
マイシン（ＮＳＣ１２２２２３；ＣＡＳ登録番号１６８４６２４５）；カナマイシン（Ｃ
ＡＳ登録番号８０６３０７８）；ケトライド、例えばテリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号
１９１１１４４８４）、セスロマイシン（ＣＡＳ登録番号２０５１１０４８１）、および
ソリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号７６０９８１８３７）；リンコマイシン（ＣＡＳ登録
番号１５４２１２）；ライムサイクリン（ＣＡＳ登録番号９９２２１２）；メクロサイク
リン（ＮＳＣ７８５０２；ＣＡＳ登録番号２０１３５８３）；メタサイクリン（ロンドマ
イシン（rondomycin）；ＮＳＣ３５６４６３；ＣＡＳ登録番号９１４００１）；ミデカマ
イシン（ＣＡＳ登録番号３５４５７８０８）；ミノサイクリン（ＮＳＣ１４１９９３；Ｃ
ＡＳ登録番号１０１１８９０８）；ミオカマイシン（ＣＡＳ登録番号５５８８１０７７）
；ネオマイシン（ＣＡＳ登録番号１１９０４０）；ネチルマイシン（ＣＡＳ登録番号５６
３９１５６１）；オレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号３９２２９０５）；オキサゾリジ
ノン、例えばエペレゾリド（ＣＡＳ登録番号１６５８０００４４）、リネゾリド（ＣＡＳ
登録番号１６５８０００３３）、ポジゾリド（posizolid）（ＣＡＳ登録番号２５２２６
００２９）、ラデゾリド（ＣＡＳ登録番号８６９８８４７８６）、ランベゾリド（ranbez
olid）（ＣＡＳ登録番号３９２６５９３８０）、ステゾリド（ＣＡＳ登録番号１６８８２
８５８８）、テジゾリド（ＣＡＳ登録番号８５６８６７５５５）；オキシテトラサイクリ
ン（ＮＳＣ９１６９；ＣＡＳ登録番号２０５８４６０）；パロモマイシン（ＣＡＳ登録番
号７５４２３７２）；ペニメピサイクリン（ＣＡＳ登録番号４５９９６０４）；ペプチジ
ルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、クロラムフェニコール（ＮＳＣ３０６９；ＣＡＳ
登録番号５６７５７）ならびにアジダムフェニコール（ＣＡＳ登録番号１３８３８０８９
）、フロルフェニコール（ＣＡＳ登録番号７３２３１３４２）、およびチアンフェニコー
ル（ＣＡＳ登録番号１５３１８４５３）、およびプロイロムチリン、例えばレタパムリン
（ＣＡＳ登録番号２２４４５２６６８）、チアムリン（ＣＡＳ登録番号５５２９７９５５
）、バルネムリン（ＣＡＳ登録番号１０１３１２９２９）などの誘導体；ピルリマイシン
（ＣＡＳ登録番号７９５４８７３５）；ピューロマイシン（ＮＳＣ３０５５；ＣＡＳ登録
番号５３７９２）；キヌプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２０１３８５０３）；リボスタマ
イシン（ＣＡＳ登録番号５３７９７３５６）；ロキタマイシン（ＣＡＳ登録番号７４０１
４５１０）；ロリテトラサイクリン（ＣＡＳ登録番号７５１９７３）；ロキシスロマイシ
ン（ＣＡＳ登録番号８０２１４８３１）；シソマイシン（ＣＡＳ登録番号３２３８５１１
８）；スペクチノマイシン（ＣＡＳ登録番号１６９５７７８）；スピラマイシン（ＣＡＳ
登録番号８０２５８１８）；ストレプトグラミン、例えばプリスチナマイシン（ＣＡＳ登
録番号２７００７６６０３）、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（ＣＡＳ登録番号１２
６６０２８９９）、およびバージニアマイシン（ＣＡＳ登録番号１１００６７６１）；ス
トレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号５７９２１）；テトラサイクリン（ＮＳＣ１０８５７
９；ＣＡＳ登録番号６０５４８）；トブラマイシン（ＣＡＳ登録番号３２９８６５６４）
；トロレアンドマイシン（ＣＡＳ登録番号２７５１０９９）；タイロシン（ＣＡＳ登録番
号１４０１６９０）；ベルダマイシン（verdamicin）（ＣＡＳ登録番号４９８６３４８１
）。
【0143】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤：アベキシノスタット（ＣＡＳ登録番号７８３３５５６
０２）；ベリノスタット（ＮＳＣ７２６６３０；ＣＡＳ登録番号４１４８６４００９）；
チダミド（chidamide）（ＣＡＳ登録番号７４３４２００２２）；エンチノスタット（Ｃ
ＡＳ登録番号２０９７８３８０２）；ギビノスタット（givinostat）（ＣＡＳ登録番号７
３２３０２９９７）；モセチノスタット（ＣＡＳ登録番号７２６１６９７３９）；パノビ
ノスタット（ＣＡＳ登録番号４０４９５０８０７）；キシノスタット（ＣＡＳ登録番号８
７５３２０２９９）；レスミノスタット（ＣＡＳ登録番号８６４８１４８８０）；ロミデ
プシン（ＣＡＳ登録番号１２８５１７０７７）；スルホラファン（ＣＡＳ登録番号４４７
８９３７）；チオウレイドブチロニトリル（Ｋｅｖｅｔｒｉｎ（商標）；ＣＡＳ登録番号
６６５９８９０）；バルプロ酸（ＮＳＣ９３８１９；ＣＡＳ登録番号９９６６１）；ボリ
ノスタット（ＮＳＣ７０１８５２；ＣＡＳ登録番号１４９６４７７８９）；ＡＣＹ－１２
１５（ロシリノスタット（rocilinostat）；ＣＡＳ登録番号１３１６２１４５２４）；Ｃ
ＵＤＣ－１０１（ＣＡＳ登録番号１０１２０５４５９９）；ＣＨＲ－２８４５（テフィノ
スタット（tefinostat）；ＣＡＳ登録番号９１４３８２６０８）；ＣＨＲ－３９９６（Ｃ
ＡＳ登録番号１２３５８５９１３８）；４ＳＣ－２０２（ＣＡＳ登録番号９１０４６２４
３０）；ＣＧ２００７４５（ＣＡＳ登録番号９３６２２１３３９）；ＳＢ９３９（プラシ
ノスタット；ＣＡＳ登録番号９２９０１６９６６）。
０２）；ベリノスタット（ＮＳＣ７２６６３０；ＣＡＳ登録番号４１４８６４００９）；
チダミド（chidamide）（ＣＡＳ登録番号７４３４２００２２）；エンチノスタット（Ｃ
ＡＳ登録番号２０９７８３８０２）；ギビノスタット（givinostat）（ＣＡＳ登録番号７
３２３０２９９７）；モセチノスタット（ＣＡＳ登録番号７２６１６９７３９）；パノビ
ノスタット（ＣＡＳ登録番号４０４９５０８０７）；キシノスタット（ＣＡＳ登録番号８
７５３２０２９９）；レスミノスタット（ＣＡＳ登録番号８６４８１４８８０）；ロミデ
プシン（ＣＡＳ登録番号１２８５１７０７７）；スルホラファン（ＣＡＳ登録番号４４７
８９３７）；チオウレイドブチロニトリル（Ｋｅｖｅｔｒｉｎ（商標）；ＣＡＳ登録番号
６６５９８９０）；バルプロ酸（ＮＳＣ９３８１９；ＣＡＳ登録番号９９６６１）；ボリ
ノスタット（ＮＳＣ７０１８５２；ＣＡＳ登録番号１４９６４７７８９）；ＡＣＹ－１２
１５（ロシリノスタット（rocilinostat）；ＣＡＳ登録番号１３１６２１４５２４）；Ｃ
ＵＤＣ－１０１（ＣＡＳ登録番号１０１２０５４５９９）；ＣＨＲ－２８４５（テフィノ
スタット（tefinostat）；ＣＡＳ登録番号９１４３８２６０８）；ＣＨＲ－３９９６（Ｃ
ＡＳ登録番号１２３５８５９１３８）；４ＳＣ－２０２（ＣＡＳ登録番号９１０４６２４
３０）；ＣＧ２００７４５（ＣＡＳ登録番号９３６２２１３３９）；ＳＢ９３９（プラシ
ノスタット；ＣＡＳ登録番号９２９０１６９６６）。
【0144】
ミトコンドリア阻害剤：パンクラチスタチン（ＮＳＣ３４９１５６；ＣＡＳ登録番号９
６２８１３１１）；ローダミン－１２３（ＣＡＳ登録番号６３６６９７０９）；エデルフ
ォシン（edelfosine）（ＮＳＣ３２４３６８；ＣＡＳ登録番号７０６４１５１９）；ｄ－
アルファ－コハク酸トコフェロール（ＮＳＣ１７３８４９；ＣＡＳ登録番号４３４５０３
３）；化合物１１β（ＣＡＳ登録番号８６５０７０３７７）；アスピリン（ＮＳＣ４０６
１８６；ＣＡＳ登録番号５０７８２）；エリプチシン（ＣＡＳ登録番号５１９２３３）；
ベルベリン（ＣＡＳ登録番号６３３６５８）；セルレニン（ＣＡＳ登録番号１７３９７８
９６）；ＧＸ０１５－０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ－インドール、２
－（２－（（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピロール－２－イル）メチレン）－３－メトキシ
－２Ｈ－ピロール－５－イル）－；ＮＳＣ７２９２８０；ＣＡＳ登録番号８０３７１２６
７６）；セラストロール（トリプテリン；ＣＡＳ登録番号３４１５７８３０）；メトホル
ミン（ＮＳＣ９１４８５；ＣＡＳ登録番号１１１５７０４）；ブリリアントグリーン（Ｎ
ＳＣ５０１１；ＣＡＳ登録番号６３３０３４）；ＭＥ－３４４（ＣＡＳ登録番号１３７４
５２４５５６）。
６２８１３１１）；ローダミン－１２３（ＣＡＳ登録番号６３６６９７０９）；エデルフ
ォシン（edelfosine）（ＮＳＣ３２４３６８；ＣＡＳ登録番号７０６４１５１９）；ｄ－
アルファ－コハク酸トコフェロール（ＮＳＣ１７３８４９；ＣＡＳ登録番号４３４５０３
３）；化合物１１β（ＣＡＳ登録番号８６５０７０３７７）；アスピリン（ＮＳＣ４０６
１８６；ＣＡＳ登録番号５０７８２）；エリプチシン（ＣＡＳ登録番号５１９２３３）；
ベルベリン（ＣＡＳ登録番号６３３６５８）；セルレニン（ＣＡＳ登録番号１７３９７８
９６）；ＧＸ０１５－０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ－インドール、２
－（２－（（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピロール－２－イル）メチレン）－３－メトキシ
－２Ｈ－ピロール－５－イル）－；ＮＳＣ７２９２８０；ＣＡＳ登録番号８０３７１２６
７６）；セラストロール（トリプテリン；ＣＡＳ登録番号３４１５７８３０）；メトホル
ミン（ＮＳＣ９１４８５；ＣＡＳ登録番号１１１５７０４）；ブリリアントグリーン（Ｎ
ＳＣ５０１１；ＣＡＳ登録番号６３３０３４）；ＭＥ－３４４（ＣＡＳ登録番号１３７４
５２４５５６）。
【0145】
抗有糸分裂剤：アロコルヒチン（allocolchicine）（ＮＳＣ４０６０４２）；オーリス
タチン、例えばＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ；ＣＡＳ登録番号４７４６４５－
２７－７）およびＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ；ＣＡＳ登録番号７４５０１７
－９４－１；ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）；コルヒチン（ＮＳＣ７５７；Ｃ
ＡＳ登録番号６４８６８）；コルヒチン（cholchicine）誘導体（Ｎ－ベンゾイル－デア
セチルベンズアミド；ＮＳＣ３３４１０；ＣＡＳ登録番号６３９８９７５３）；ドラスタ
チン１０（ＮＳＣ３７６１２８；ＣＡＳ登録番号１１０４１７－８８－４）；メイタンシ
ン（ＮＳＣ１５３８５８；ＣＡＳ登録番号３５８４６－５３－８）；リゾキシン（rhozox
in）（ＮＳＣ３３２５９８；ＣＡＳ登録番号９０９９６５４６）；タキソール（ＮＳＣ１
２５９７３；ＣＡＳ登録番号３３０６９６２４）；タキソール誘導体（（２’－Ｎ－［３
－（ジメチルアミノ）プロピル］グルタメート（glutaramate）タキソール；ＮＳＣ６０
８８３２）；チオコルヒチン（３－デメチルチオコルヒチン；ＮＳＣ３６１７９２）；ト
リチルシステイン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号２７９９０７７）；硫酸ビンブラ
スチン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号１４３６７９）；硫酸ビンクリスチン（ＮＳ
Ｃ６７５７４；ＣＡＳ登録番号２０６８７８２）。
タチン、例えばＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ；ＣＡＳ登録番号４７４６４５－
２７－７）およびＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ；ＣＡＳ登録番号７４５０１７
－９４－１；ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）；コルヒチン（ＮＳＣ７５７；Ｃ
ＡＳ登録番号６４８６８）；コルヒチン（cholchicine）誘導体（Ｎ－ベンゾイル－デア
セチルベンズアミド；ＮＳＣ３３４１０；ＣＡＳ登録番号６３９８９７５３）；ドラスタ
チン１０（ＮＳＣ３７６１２８；ＣＡＳ登録番号１１０４１７－８８－４）；メイタンシ
ン（ＮＳＣ１５３８５８；ＣＡＳ登録番号３５８４６－５３－８）；リゾキシン（rhozox
in）（ＮＳＣ３３２５９８；ＣＡＳ登録番号９０９９６５４６）；タキソール（ＮＳＣ１
２５９７３；ＣＡＳ登録番号３３０６９６２４）；タキソール誘導体（（２’－Ｎ－［３
－（ジメチルアミノ）プロピル］グルタメート（glutaramate）タキソール；ＮＳＣ６０
８８３２）；チオコルヒチン（３－デメチルチオコルヒチン；ＮＳＣ３６１７９２）；ト
リチルシステイン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号２７９９０７７）；硫酸ビンブラ
スチン（ＮＳＣ４９８４２；ＣＡＳ登録番号１４３６７９）；硫酸ビンクリスチン（ＮＳ
Ｃ６７５７４；ＣＡＳ登録番号２０６８７８２）。
【0146】
これらの薬剤のうち、抗体への取り付け部位を含むか、または抗体への取り付け部位を
含むように改変できるものはいずれも、本明細書で開示されるＡＤＣに含めることができ
る。
含むように改変できるものはいずれも、本明細書で開示されるＡＤＣに含めることができ
る。
【0147】
具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、抗
有糸分裂剤である。
有糸分裂剤である。
【0148】
別の具体的な実施形態において、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は
、オーリスタチン、例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）またはモノメ
チルオーリスタチンＦ（「ＭＭＡＦ」）である。
、オーリスタチン、例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）またはモノメ
チルオーリスタチンＦ（「ＭＭＡＦ」）である。
【0149】
５．３．２．リンカー
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣにおいて、細胞傷害性物質および／または細胞増殖
抑制性物質は、リンカーによって抗体に連結されている。ＡＤＣの抗体に細胞傷害性物質
および／または細胞増殖抑制性物質を連結するリンカーは、短い、長い、疎水性、親水性
、フレキシブルな、または硬いリンカーであってもよく、またはリンカーが異なる特性を
有するセグメントを含み得るように、それぞれ独立して上述の特性の１つまたは複数を有
するセグメントで構成されていてもよい。リンカーは、それらが１つより多くの薬剤を抗
体上の単一の部位に共有結合で連結するように多価であってもよいし、またはそれらが単
一の薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように１価であってもよい。
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣにおいて、細胞傷害性物質および／または細胞増殖
抑制性物質は、リンカーによって抗体に連結されている。ＡＤＣの抗体に細胞傷害性物質
および／または細胞増殖抑制性物質を連結するリンカーは、短い、長い、疎水性、親水性
、フレキシブルな、または硬いリンカーであってもよく、またはリンカーが異なる特性を
有するセグメントを含み得るように、それぞれ独立して上述の特性の１つまたは複数を有
するセグメントで構成されていてもよい。リンカーは、それらが１つより多くの薬剤を抗
体上の単一の部位に共有結合で連結するように多価であってもよいし、またはそれらが単
一の薬剤を抗体上の単一の部位に共有結合で連結するように１価であってもよい。
【0150】
当業者は理解していると予想されるように、リンカーは、一方の位置で細胞傷害性物質
および／または細胞増殖抑制性物質への共有結合による連結を形成し、他方の位置で抗体
への共有結合による連結を形成することによって、細胞傷害性物質および／または細胞増
殖抑制性物質を抗体に連結する。共有結合による連結は、リンカー上の官能基と薬剤およ
び抗体上の官能基との反応によって形成される。本明細書で使用される場合、「リンカー
」という表現は、（ｉ）リンカーを細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に
共有結合で連結することが可能な官能基と、リンカーを抗体に共有結合で連結することが
可能な官能基とを含む、リンカーのコンジュゲートしていない形態；（ｉｉ）リンカーを
抗体に共有結合で連結することが可能であり、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑
制性物質に共有結合で連結されている官能基を含むか、またはその逆である、リンカーの
部分的にコンジュゲートした形態；および（ｉｉｉ）細胞傷害性物質ならびに／または細
胞増殖抑制性物質および抗体の両方に共有結合で連結されている、リンカーの完全にコン
ジュゲートした形態を含むことが意図される。本開示のリンカーおよび抗グリコＭＵＣ１
ＡＤＣに加えて、リンカー－薬剤を抗体にコンジュゲートするのに使用されるシントン
の一部の具体的な実施形態において、リンカー上の官能基およびリンカーと抗体との間で
形成された共有結合による連結を含む部分は、それぞれＲｘおよびＸＹとして具体的に例
示される。
および／または細胞増殖抑制性物質への共有結合による連結を形成し、他方の位置で抗体
への共有結合による連結を形成することによって、細胞傷害性物質および／または細胞増
殖抑制性物質を抗体に連結する。共有結合による連結は、リンカー上の官能基と薬剤およ
び抗体上の官能基との反応によって形成される。本明細書で使用される場合、「リンカー
」という表現は、（ｉ）リンカーを細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質に
共有結合で連結することが可能な官能基と、リンカーを抗体に共有結合で連結することが
可能な官能基とを含む、リンカーのコンジュゲートしていない形態；（ｉｉ）リンカーを
抗体に共有結合で連結することが可能であり、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑
制性物質に共有結合で連結されている官能基を含むか、またはその逆である、リンカーの
部分的にコンジュゲートした形態；および（ｉｉｉ）細胞傷害性物質ならびに／または細
胞増殖抑制性物質および抗体の両方に共有結合で連結されている、リンカーの完全にコン
ジュゲートした形態を含むことが意図される。本開示のリンカーおよび抗グリコＭＵＣ１
ＡＤＣに加えて、リンカー－薬剤を抗体にコンジュゲートするのに使用されるシントン
の一部の具体的な実施形態において、リンカー上の官能基およびリンカーと抗体との間で
形成された共有結合による連結を含む部分は、それぞれＲｘおよびＸＹとして具体的に例
示される。
【0151】
リンカーは、好ましくは、ただし必ずしもそうでなくてもよいが、細胞の外側の条件に
対して化学的に安定であり、細胞の内部で切断される、破壊される、および／またはそれ
以外の方法で特異的に分解するように設計されていてもよい。代替として、細胞の内部で
特異的に切断または分解されるように設計されていないリンカーを使用してもよい。安定
なリンカーと不安定なリンカーとの選択は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制
性物質の毒性によって決まる場合がある。正常細胞に対して毒性の薬剤の場合、安定なリ
ンカーが好ましい。正常細胞に対して選択的であるかまたはそれを標的化して毒性を低め
る薬剤を利用してもよく、細胞外環境に対するリンカーの化学的安定性は、それほど重要
ではない。ＡＤＣの状態で薬物を抗体に連結するのに有用な様々なリンカーは、当業界に
おいて公知である。これらのリンカーのいずれか、および他のリンカーは、細胞傷害性物
質および／または細胞増殖抑制性物質を、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣの抗体に連
結するのに使用することができる。
対して化学的に安定であり、細胞の内部で切断される、破壊される、および／またはそれ
以外の方法で特異的に分解するように設計されていてもよい。代替として、細胞の内部で
特異的に切断または分解されるように設計されていないリンカーを使用してもよい。安定
なリンカーと不安定なリンカーとの選択は、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制
性物質の毒性によって決まる場合がある。正常細胞に対して毒性の薬剤の場合、安定なリ
ンカーが好ましい。正常細胞に対して選択的であるかまたはそれを標的化して毒性を低め
る薬剤を利用してもよく、細胞外環境に対するリンカーの化学的安定性は、それほど重要
ではない。ＡＤＣの状態で薬物を抗体に連結するのに有用な様々なリンカーは、当業界に
おいて公知である。これらのリンカーのいずれか、および他のリンカーは、細胞傷害性物
質および／または細胞増殖抑制性物質を、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣの抗体に連
結するのに使用することができる。
【0152】
多くの細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を単一抗体分子に連結するの
に使用できる例示的な多価リンカーは、例えば、その内容が参照によりそれらの全体が本
明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開
第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフ
レット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７
１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開
第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフ
レット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９
３６４０号パンフレットに記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらにより開発された
Ｆｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、優れた物理化学的な特性を有する高ＤＡＲのＡＤＣを
可能にする能力を有する。以下に示すように、Ｍｅｒｓａｎａ技術は、エステル結合の配
列を介して可溶性のポリアセタールバックボーンに薬物分子を取り込むことに基づく。こ
の手法は、優れた物理化学的な特性を維持しながら高度にローディングされたＡＤＣ（最
大２０のＤＡＲ）をもたらす。
に使用できる例示的な多価リンカーは、例えば、その内容が参照によりそれらの全体が本
明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット；国際公開
第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフ
レット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット；国際公開第２０１１／１７
１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット；国際公開
第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフ
レット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット；国際公開第２０１４／０９
３６４０号パンフレットに記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらにより開発された
Ｆｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、優れた物理化学的な特性を有する高ＤＡＲのＡＤＣを
可能にする能力を有する。以下に示すように、Ｍｅｒｓａｎａ技術は、エステル結合の配
列を介して可溶性のポリアセタールバックボーンに薬物分子を取り込むことに基づく。こ
の手法は、優れた物理化学的な特性を維持しながら高度にローディングされたＡＤＣ（最
大２０のＤＡＲ）をもたらす。
【0153】
樹枝型のリンカーのさらなる例は、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、
米国特許出願公開第２００６／１１６４２２号明細書；米国特許出願公開第２００５／２
７１６１５号明細書；de Groot et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494；A
mir et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499；Shamis et al.(2004) J. Am.
Chem. Soc. 126:1726-1731；Sun et al.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Let
ters 12:2213-2215；Sun et al.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-176
8；King et al.(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990に見出すことができる。
米国特許出願公開第２００６／１１６４２２号明細書；米国特許出願公開第２００５／２
７１６１５号明細書；de Groot et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494；A
mir et al. (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499；Shamis et al.(2004) J. Am.
Chem. Soc. 126:1726-1731；Sun et al.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Let
ters 12:2213-2215；Sun et al.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-176
8；King et al.(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990に見出すことができる。
【0154】
使用できる例示的な１価リンカーは、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み入
れられる、Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology
1045:71-100；Kitson et al., 2013, CROs/CMOs--Chemica Oggi--Chemistry Today 31(4)
:30-38；Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13；Zhao et al., 2011, J. Me
d. Chem. 54:3606-3623；米国特許第７，２２３，８３７号明細書；米国特許第８，５６
８，７２８号明細書；米国特許第８，５３５，６７８号明細書；および国際公開第２００
４０１０９５７号パンフレットに記載されている。
れられる、Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology
1045:71-100；Kitson et al., 2013, CROs/CMOs--Chemica Oggi--Chemistry Today 31(4)
:30-38；Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13；Zhao et al., 2011, J. Me
d. Chem. 54:3606-3623；米国特許第７，２２３，８３７号明細書；米国特許第８，５６
８，７２８号明細書；米国特許第８，５３５，６７８号明細書；および国際公開第２００
４０１０９５７号パンフレットに記載されている。
【0155】
一例として、これらに限定されないが、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ
得る一部の切断可能および切断不可能なリンカーは、後述される。
得る一部の切断可能および切断不可能なリンカーは、後述される。
【0156】
５．３．３．切断可能なリンカー
特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビボで切断可能である。切断可
能なリンカーは、化学的または酵素的に不安定な、または分解可能な連結を含んでいても
よい。切断可能なリンカーは、一般的に、薬物を開放する細胞の内部のプロセス、例えば
細胞質内での還元、リソソーム中での酸性条件への曝露、または細胞内の特異的なプロテ
アーゼまたは他の酵素による切断を頼る。切断可能なリンカーは、一般的に、化学的また
は酵素的のいずれかで切断可能な１つまたは複数の化学結合を取り込んでおり、それと同
時に、リンカーの残部は、切断不可能である。特定の実施形態において、リンカーは、化
学的に不安定性の基、例えばヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基を含む。化学的に
不安定性の基を含むリンカーは、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることを
利用する。ヒドラゾンを含有するリンカーの場合の薬物放出を容易にする細胞内条件は、
エンドソームおよびリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィドを含有するリンカ
ーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含有するサイトゾル中で還元される。特
定の実施形態において、化学的に不安定性の基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に
不安定性の基付近の置換基を使用して立体障害を導入することによって増加させることが
できる。
特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビボで切断可能である。切断可
能なリンカーは、化学的または酵素的に不安定な、または分解可能な連結を含んでいても
よい。切断可能なリンカーは、一般的に、薬物を開放する細胞の内部のプロセス、例えば
細胞質内での還元、リソソーム中での酸性条件への曝露、または細胞内の特異的なプロテ
アーゼまたは他の酵素による切断を頼る。切断可能なリンカーは、一般的に、化学的また
は酵素的のいずれかで切断可能な１つまたは複数の化学結合を取り込んでおり、それと同
時に、リンカーの残部は、切断不可能である。特定の実施形態において、リンカーは、化
学的に不安定性の基、例えばヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基を含む。化学的に
不安定性の基を含むリンカーは、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることを
利用する。ヒドラゾンを含有するリンカーの場合の薬物放出を容易にする細胞内条件は、
エンドソームおよびリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィドを含有するリンカ
ーは、高いチオール濃度、例えばグルタチオンを含有するサイトゾル中で還元される。特
定の実施形態において、化学的に不安定性の基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に
不安定性の基付近の置換基を使用して立体障害を導入することによって増加させることが
できる。
【0157】
酸不安定性の基、例えばヒドラゾンは、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３～７．５）で
の体循環の間は無傷のままであるが、ＡＤＣが細胞の弱酸性のエンドソーム（ｐＨ５．０
～６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５～５．０）の区画に内在化されると加水分解を
受けて薬物を放出する。このｐＨ依存性の放出メカニズムは、薬物の非特異的な放出と関
連付けられている。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、リンカーは、
循環中での損失を最小化しながらもリソソーム中でのより効率的な放出を達成するように
調整できる化学修飾、例えば置換によって変更してもよい。
の体循環の間は無傷のままであるが、ＡＤＣが細胞の弱酸性のエンドソーム（ｐＨ５．０
～６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５～５．０）の区画に内在化されると加水分解を
受けて薬物を放出する。このｐＨ依存性の放出メカニズムは、薬物の非特異的な放出と関
連付けられている。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、リンカーは、
循環中での損失を最小化しながらもリソソーム中でのより効率的な放出を達成するように
調整できる化学修飾、例えば置換によって変更してもよい。
【0158】
ヒドラゾンを含有するリンカーは、追加の切断部位、例えば追加の酸不安定性の切断部
位および／または酵素不安定性の切断部位を含有していてもよい。例示的なヒドラゾンを
含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
位および／または酵素不安定性の切断部位を含有していてもよい。例示的なヒドラゾンを
含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
【0159】
【化1】
薬物）およびＡｂを表し、ｎは、抗体に連結された薬物－リンカーの数を表す。特定のリ
ンカー、例えばリンカー（Ｉｇ）において、リンカーは、２つの切断可能な基、すなわち
ジスルフィド部分およびヒドラゾン部分を含む。このようなリンカーの場合、改変されて
いない遊離の薬物の有効な放出は、酸性ｐＨまたはジスルフィド還元および酸性ｐＨを必
要とする。（Ｉｈ）および（Ｉｉ）などのリンカーは、単一のヒドラゾン切断部位に有効
であることが示されている。
【0160】
体循環の間は無傷のままであるがＡＤＣが酸性細胞区画の内部に内在化されると加水分
解を受けて薬物を放出する追加のリンカーとしては、カーボネートが挙げられる。このよ
うなリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が、酸素を介して共
有結合で取り付けることができる場合、有用な可能性がある。
解を受けて薬物を放出する追加のリンカーとしては、カーボネートが挙げられる。このよ
うなリンカーは、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質が、酸素を介して共
有結合で取り付けることができる場合、有用な可能性がある。
【0161】
リンカー中に含まれ得る他の酸不安定性の基としては、ｃｉｓ－アコニチルを含有する
リンカーが挙げられる。ｃｉｓ－アコニチル化学は、酸性条件下でのアミド加水分解を促
進するために、アミド結合に並置されたカルボン酸を使用する。
リンカーが挙げられる。ｃｉｓ－アコニチル化学は、酸性条件下でのアミド加水分解を促
進するために、アミド結合に並置されたカルボン酸を使用する。
【0162】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基も含み得る。ジスルフィドは、生理学的な
ｐＨで熱力学的に安定であり、細胞の内部に内在化されると薬物を放出するように設計さ
れ、この場合サイトゾルは、細胞外の環境と比較してより有意に高い還元性の環境を提供
する。ジスルフィド結合の分離は、一般的に、ジスルフィドを含有するリンカーが循環中
で適度に安定であり、サイトゾル中で薬物を選択的に放出するように、細胞質内のチオー
ル補因子、例えば（還元された）グルタチオン（ＧＳＨ）の存在を必要とする。また、細
胞内酵素タンパク質であるジスルフィドイソメラーゼ、またはジスルフィド結合の切断が
可能な類似の酵素も、細胞の内部におけるジスルフィド結合の優先的な切断に寄与する可
能性がある。およそ５つの腫瘍細胞において、循環中でＧＳＨまたはシステイン（これは
最も豊富な低分子量チオールである）がより有意に低い濃度であることと比較して、ＧＳ
Ｈは、０．５～１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが報告されており、この場合
、不規則な血流が低酸素状態を引き起こし、還元性酵素の活性が強化され、それゆえにグ
ルタチオン濃度がより一層高くなる。特定の実施形態において、ジスルフィドを含有する
リンカーのインビボでの安定性は、リンカーの化学修飾によって、例えば、ジスルフィド
結合に隣接する立体障害の使用によって強化することができる。
ｐＨで熱力学的に安定であり、細胞の内部に内在化されると薬物を放出するように設計さ
れ、この場合サイトゾルは、細胞外の環境と比較してより有意に高い還元性の環境を提供
する。ジスルフィド結合の分離は、一般的に、ジスルフィドを含有するリンカーが循環中
で適度に安定であり、サイトゾル中で薬物を選択的に放出するように、細胞質内のチオー
ル補因子、例えば（還元された）グルタチオン（ＧＳＨ）の存在を必要とする。また、細
胞内酵素タンパク質であるジスルフィドイソメラーゼ、またはジスルフィド結合の切断が
可能な類似の酵素も、細胞の内部におけるジスルフィド結合の優先的な切断に寄与する可
能性がある。およそ５つの腫瘍細胞において、循環中でＧＳＨまたはシステイン（これは
最も豊富な低分子量チオールである）がより有意に低い濃度であることと比較して、ＧＳ
Ｈは、０．５～１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが報告されており、この場合
、不規則な血流が低酸素状態を引き起こし、還元性酵素の活性が強化され、それゆえにグ
ルタチオン濃度がより一層高くなる。特定の実施形態において、ジスルフィドを含有する
リンカーのインビボでの安定性は、リンカーの化学修飾によって、例えば、ジスルフィド
結合に隣接する立体障害の使用によって強化することができる。
【0163】
例示的なジスルフィドを含有するリンカーを含むＡＤＣは、以下の構造を含む。
【0164】
【化2】
－リンカーの数を表し、Ｒは、各出現につき、例えば水素またはアルキルから独立して選
択される。特定の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を増加させる
ことは、リンカーの安定性を増加させる。（Ｉｊ）および（Ｉｌ）などの構造は、１つま
たは複数のＲ基が低級アルキルから選択され、例えばメチルである場合、インビボにおけ
る増加した安定性を示す。
【0165】
使用することができる別のタイプの切断可能なリンカーは、酵素によって特異的に切断
されるリンカーである。このようなリンカーは、典型的にはペプチドベースであるか、ま
たは酵素の基質として作用するペプチド領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、血漿
および細胞外環境中で、化学的に不安定性のリンカーより安定である傾向がある。リソソ
ームのタンパク質分解酵素は、内因性阻害剤およびリソソームと比較して都合悪く高いｐ
Ｈ値の血液のために、血液中で非常に低い活性を有するため、一般的に、ペプチド結合は
血清中で優れた安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、具体的にはリソソームのプロ
テアーゼ、例えばカテプシンおよびプラスミンの作用に起因して起こる。これらのプロテ
アーゼは、特定の腫瘍細胞中において高いレベルで存在する場合がある。
されるリンカーである。このようなリンカーは、典型的にはペプチドベースであるか、ま
たは酵素の基質として作用するペプチド領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、血漿
および細胞外環境中で、化学的に不安定性のリンカーより安定である傾向がある。リソソ
ームのタンパク質分解酵素は、内因性阻害剤およびリソソームと比較して都合悪く高いｐ
Ｈ値の血液のために、血液中で非常に低い活性を有するため、一般的に、ペプチド結合は
血清中で優れた安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、具体的にはリソソームのプロ
テアーゼ、例えばカテプシンおよびプラスミンの作用に起因して起こる。これらのプロテ
アーゼは、特定の腫瘍細胞中において高いレベルで存在する場合がある。
【0166】
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ
（配列番号１２８）、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１２９）などのテトラ
ペプチド、またはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（
Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｖａｌ、Ａｓｐ－Ｖａｌ
、Ｈｉｓ－Ｖａｌ、ＮｏｒＶａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ－（Ｄ）Ａｓｐ５、Ｍｅｔ－Ｌ
ｙｓ、Ａｓｎ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ、Ｍｅ３Ｌｙｓ－Ｐｒｏ、フェニルＧｌｙ－（Ｄ
）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅ
ｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＭ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ
）Ｌｙｓ、ＡＷ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、およびＡｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓなどのジペプチド
から選択される。特定の実施形態において、より長いペプチドは疎水性であるため、ジペ
プチドが、より長いポリペプチドより好ましい。
（配列番号１２８）、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１２９）などのテトラ
ペプチド、またはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（
Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｖａｌ、Ａｓｐ－Ｖａｌ
、Ｈｉｓ－Ｖａｌ、ＮｏｒＶａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ－（Ｄ）Ａｓｐ５、Ｍｅｔ－Ｌ
ｙｓ、Ａｓｎ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ、Ｍｅ３Ｌｙｓ－Ｐｒｏ、フェニルＧｌｙ－（Ｄ
）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅ
ｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、ＡＭ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ
）Ｌｙｓ、ＡＷ Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、およびＡｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓなどのジペプチド
から選択される。特定の実施形態において、より長いペプチドは疎水性であるため、ジペ
プチドが、より長いポリペプチドより好ましい。
【0167】
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、タリソ
マイシン（tallysomycin）およびオーリスタチン／オーリスタチンファミリーメンバーな
どの薬物を抗体に連結するのに有用な様々なジペプチドベースの切断可能なリンカーが記
載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Dubowchik et al., 19
98, J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchik et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett.
8(21):3341-3346；Walker et al., 2002, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:217-219；Walk
er et al., 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:4323-4327；Sutherland et al., 2013,
Blood 122: 1455-1463；およびFrancisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465を参照）
。これらのジペプチドリンカー、またはこれらのジペプチドリンカーの改変されたバージ
ョンの全ては、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣで使用することができる。使用できる
他のジペプチドリンカーとしては、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマ
ブベドチン（Vendotin）ＳＧＮ－３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ
ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－７５（抗ＣＤ－７０、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメチルオーリス
タチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ（抗Ｃ
Ｄ－３３、Ｖａｌ－Ａｌａ－（ＳＧＤ－１８８２））、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓのグレンバツムマブ（ＣＤＸ－０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメ
チルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、およびサイトジェン（Cytogen）ＰＳＭＡ－ＡＤＣ
（ＰＳＭＡ－ＡＤＣ－１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ）などのＡＤ
Ｃに見出されるものが挙げられる。
マイシン（tallysomycin）およびオーリスタチン／オーリスタチンファミリーメンバーな
どの薬物を抗体に連結するのに有用な様々なジペプチドベースの切断可能なリンカーが記
載されている（それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Dubowchik et al., 19
98, J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchik et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett.
8(21):3341-3346；Walker et al., 2002, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:217-219；Walk
er et al., 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:4323-4327；Sutherland et al., 2013,
Blood 122: 1455-1463；およびFrancisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465を参照）
。これらのジペプチドリンカー、またはこれらのジペプチドリンカーの改変されたバージ
ョンの全ては、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣで使用することができる。使用できる
他のジペプチドリンカーとしては、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマ
ブベドチン（Vendotin）ＳＧＮ－３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ
ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－７５（抗ＣＤ－７０、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメチルオーリス
タチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ（抗Ｃ
Ｄ－３３、Ｖａｌ－Ａｌａ－（ＳＧＤ－１８８２））、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓのグレンバツムマブ（ＣＤＸ－０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－モノメ
チルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、およびサイトジェン（Cytogen）ＰＳＭＡ－ＡＤＣ
（ＰＳＭＡ－ＡＤＣ－１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ）などのＡＤ
Ｃに見出されるものが挙げられる。
【0168】
酵素的に切断可能なリンカーとしては、酵素的切断部位から薬物を空間的に分離するた
めの自壊性スペーサーを挙げることができる。ペプチドリンカーへの薬物の直接の取り付
けは、タンパク質分解による薬物のアミノ酸付加物の放出を引き起こすことができ、それ
によってその活性が損なわれる。自壊性スペーサーの使用は、アミド結合の加水分解の後
に、十分活性な化学的に改変されていない薬物の脱離を可能にする。
めの自壊性スペーサーを挙げることができる。ペプチドリンカーへの薬物の直接の取り付
けは、タンパク質分解による薬物のアミノ酸付加物の放出を引き起こすことができ、それ
によってその活性が損なわれる。自壊性スペーサーの使用は、アミド結合の加水分解の後
に、十分活性な化学的に改変されていない薬物の脱離を可能にする。
【0169】
１つの自壊性スペーサーは、二機能性のパラアミノベンジルアルコール基であり、これ
は、アミノ基を介してペプチドに連結されてアミド結合を形成するが、アミンを含有する
薬物は、リンカー（ＰＡＢＣ）のベンジルのヒドロキシル基にカルバミン酸官能性を介し
て取り付けられていてもよい。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介の切断で活性
化され、１，６脱離反応を引き起こし、改変されていない薬物、二酸化炭素、およびリン
カー基の残部を放出する。以下のスキームは、ｐ－アミドベンジルエーテルのフラグメン
ト化および薬物の放出を描写する。
は、アミノ基を介してペプチドに連結されてアミド結合を形成するが、アミンを含有する
薬物は、リンカー（ＰＡＢＣ）のベンジルのヒドロキシル基にカルバミン酸官能性を介し
て取り付けられていてもよい。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介の切断で活性
化され、１，６脱離反応を引き起こし、改変されていない薬物、二酸化炭素、およびリン
カー基の残部を放出する。以下のスキームは、ｐ－アミドベンジルエーテルのフラグメン
ト化および薬物の放出を描写する。
【0170】
【化3】
【0171】
この自壊性基の複素環式バリアントも記載されている。例えば参照により本明細書に組
み入れられる米国特許第７，９８９，４３４号明細書を参照されたい。
み入れられる米国特許第７，９８９，４３４号明細書を参照されたい。
【0172】
一部の実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β－グルクロン酸ベースの
リンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ－グルクロニダーゼによ
るβ－グルクロニドグリコシド結合の切断を介して実現することができる。この酵素は、
リソソーム内に豊富に存在し、一部の腫瘍タイプにおいて過剰発現されるが、細胞の外側
での酵素活性は低い。β－グルクロン酸ベースのリンカーは、β－グルクロニドの親水性
の性質のために凝集を受けるＡＤＣの傾向を回避するのに使用することができる。一部の
実施形態において、β－グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤ
Ｃのためのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β－グルクロン酸ベースのリン
カーを含有するＡＤＣからの薬物の放出を描写する。
リンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ－グルクロニダーゼによ
るβ－グルクロニドグリコシド結合の切断を介して実現することができる。この酵素は、
リソソーム内に豊富に存在し、一部の腫瘍タイプにおいて過剰発現されるが、細胞の外側
での酵素活性は低い。β－グルクロン酸ベースのリンカーは、β－グルクロニドの親水性
の性質のために凝集を受けるＡＤＣの傾向を回避するのに使用することができる。一部の
実施形態において、β－グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤ
Ｃのためのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β－グルクロン酸ベースのリン
カーを含有するＡＤＣからの薬物の放出を描写する。
【0173】
【化4】
【0174】
オーリスタチン、カンプトテシンおよびドキソルビシン類似体、ＣＢＩ副溝バインダー
、およびプシムベリン（psymberin）などの薬物を抗体に連結するのに有用な、様々な切
断可能なβ－グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（それぞれが参照により本
明細書に組み入れられる、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug
Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1
045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2
013；Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17:831-840；Jeffrey et al., 2007, Bi
oorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；およびJiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc.
127:11254-11255を参照）。これらのβ－グルクロン酸ベースのリンカーは全て、本開示
の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣで使用することができる。
、およびプシムベリン（psymberin）などの薬物を抗体に連結するのに有用な、様々な切
断可能なβ－グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（それぞれが参照により本
明細書に組み入れられる、Nolting, Chapter 5 “Linker Technology in Antibody-Drug
Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1
045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2
013；Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17:831-840；Jeffrey et al., 2007, Bi
oorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；およびJiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc.
127:11254-11255を参照）。これらのβ－グルクロン酸ベースのリンカーは全て、本開示
の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣで使用することができる。
【0175】
加えて、フェノール基を含有する細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は
、フェノールの酸素を介してリンカーに共有結合で結合させることができる。１つのこの
ようなリンカーは、国際公開第２００７／０８９１４９号パンフレットに記載されており
、ジアミノ－エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を、フェノールを送達するために従来の「Ｐ
ＡＢＯ」ベースの自壊性基と共に使用する手法を頼る。リンカーの切断は、以下に模式的
に描写され、式中、Ｄは、フェノールのヒドロキシル基を有する細胞傷害性物質および／
または細胞増殖抑制性物質を表す。
、フェノールの酸素を介してリンカーに共有結合で結合させることができる。１つのこの
ようなリンカーは、国際公開第２００７／０８９１４９号パンフレットに記載されており
、ジアミノ－エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を、フェノールを送達するために従来の「Ｐ
ＡＢＯ」ベースの自壊性基と共に使用する手法を頼る。リンカーの切断は、以下に模式的
に描写され、式中、Ｄは、フェノールのヒドロキシル基を有する細胞傷害性物質および／
または細胞増殖抑制性物質を表す。
【0176】
【化5】
【0177】
切断可能なリンカーは、切断不可能な部分またはセグメントを含んでいてもよいし、お
よび／または切断可能なセグメントまたは部分は、それを切断可能にするために、それ以
外の切断不可能なリンカー中に含まれていてもよい。単なる例として、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）および関連するポリマーは、ポリマーバックボーン中に切断可能な基を
含んでいてもよい。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、１つま
たは複数の切断可能な基、例えばジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドを含んでい
てもよい。
よび／または切断可能なセグメントまたは部分は、それを切断可能にするために、それ以
外の切断不可能なリンカー中に含まれていてもよい。単なる例として、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）および関連するポリマーは、ポリマーバックボーン中に切断可能な基を
含んでいてもよい。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、１つま
たは複数の切断可能な基、例えばジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドを含んでい
てもよい。
【0178】
リンカー中に含まれ得る他の分解可能な連結としては、ＰＥＧのカルボン酸または活性
化されたＰＥＧのカルボン酸と生物活性薬剤上のアルコール基との反応によって形成され
たエステル連結が挙げられ、この場合、このようなエステル基は一般的に生理学的条件下
で加水分解して生物活性薬剤を放出する。加水分解で分解可能な連結としては、これらに
限定されないが、炭酸連結；アミンとアルデヒドの反応の結果生じるイミン連結；アルコ
ールをリン酸基と反応させることによって形成されたリン酸エステル連結；アルデヒドと
アルコールの反応生成物であるアセタール連結；ギ酸塩とアルコールの反応生成物である
オルトエステル連結；ならびにこれに限定されないが、ポリマーの末端のホスホアミダイ
ト基、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって形成されたオリゴヌクレ
オチド連結が挙げられる。
化されたＰＥＧのカルボン酸と生物活性薬剤上のアルコール基との反応によって形成され
たエステル連結が挙げられ、この場合、このようなエステル基は一般的に生理学的条件下
で加水分解して生物活性薬剤を放出する。加水分解で分解可能な連結としては、これらに
限定されないが、炭酸連結；アミンとアルデヒドの反応の結果生じるイミン連結；アルコ
ールをリン酸基と反応させることによって形成されたリン酸エステル連結；アルデヒドと
アルコールの反応生成物であるアセタール連結；ギ酸塩とアルコールの反応生成物である
オルトエステル連結；ならびにこれに限定されないが、ポリマーの末端のホスホアミダイ
ト基、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって形成されたオリゴヌクレ
オチド連結が挙げられる。
【0179】
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構
造式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）：
造式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）：
【0180】
【化6】
能なペプチド（Ｃ→Ｎで例示され、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されていない）
を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、または
それらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメ
チルスルホネートから選択され；ｐは、０から５の範囲の整数であり；ｑは、０または１
であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；
【0181】
【化7】
；＊は、リンカーの残部への取り付け点を表す。
【0182】
特定の実施形態において、ペプチドは、トリペプチドまたはジペプチドから選択される
。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｖａｌ；Ａｌａ－
Ａｌａ；Ａｌａ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｌａ；Ａｓｎ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｎ；Ｃｉｔ－
Ｃｉｔ；Ｖａｌ－Ｇｌｕ；Ｇｌｕ－Ｖａｌ；Ｓｅｒ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｓｅｒ；Ｌｙｓ－
Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｌｙｓ；Ａｓｐ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｐ；Ａｌａ－Ｖａｌ；Ｖａｌ－
Ａｌａ；Ｐｈｅ－Ｌｙｓ；Ｖａｌ－Ｌｙｓ；Ａｌａ－Ｌｙｓ；Ｐｈｅ－Ｃｉｔ；Ｌｅｕ－
Ｃｉｔ；Ｉｌｅ－Ｃｉｔ；Ｐｈｅ－Ａｒｇ；およびＴｒｐ－Ｃｉｔから選択される。特定
の実施形態において、ジペプチドは、Ｃｉｔ－Ｖａｌ；およびＡｌａ－Ｖａｌから選択さ
れる。
。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｖａｌ；Ａｌａ－
Ａｌａ；Ａｌａ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｌａ；Ａｓｎ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｎ；Ｃｉｔ－
Ｃｉｔ；Ｖａｌ－Ｇｌｕ；Ｇｌｕ－Ｖａｌ；Ｓｅｒ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｓｅｒ；Ｌｙｓ－
Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ｌｙｓ；Ａｓｐ－Ｃｉｔ；Ｃｉｔ－Ａｓｐ；Ａｌａ－Ｖａｌ；Ｖａｌ－
Ａｌａ；Ｐｈｅ－Ｌｙｓ；Ｖａｌ－Ｌｙｓ；Ａｌａ－Ｌｙｓ；Ｐｈｅ－Ｃｉｔ；Ｌｅｕ－
Ｃｉｔ；Ｉｌｅ－Ｃｉｔ；Ｐｈｅ－Ａｒｇ；およびＴｒｐ－Ｃｉｔから選択される。特定
の実施形態において、ジペプチドは、Ｃｉｔ－Ｖａｌ；およびＡｌａ－Ｖａｌから選択さ
れる。
【0183】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【0184】
【化8-1】
【0185】
【化8-2】
【0186】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【0187】
【化9-1】
【0188】
【化9-2】
【0189】
【化9-3】
【0190】
【化9-4】
【0191】
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構
造式（ＩＶｃ）または（ＩＶｄ）：
造式（ＩＶｃ）または（ＩＶｄ）：
【0192】
【化10】
能なペプチド（Ｃ→Ｎで例示され、カルボキシおよびアミノ「末端」は示されていない）
を表し；Ｔは、１つまたは複数のエチレングリコール単位もしくはアルキレン鎖、または
それらの組合せを含むポリマーを表し；Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびメ
チルスルホネートから選択され；ｐは、０から５の範囲の整数であり；ｑは、０または１
であり；ｘは、０または１であり；ｙは、０または１であり；
【0193】
【化11】
；＊は、リンカーの残部への取り付け点を表す。
【0194】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｃ）によるリンカーの
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【0195】
【化12】
【0196】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＩＶｄ）によるリンカーの
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる（例示される
ように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を含む）：
【0197】
【化13-1】
【0198】
【化13-2】
【0199】
特定の実施形態において、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）、または（ＩＶ
ｄ）を含むリンカーは、酸性媒体への曝露によって切断可能なカーボネート部分をさらに
含む。特定の実施形態において、リンカーは、酸素を介して細胞傷害性物質および／また
は細胞増殖抑制性物質に取り付けられる。
ｄ）を含むリンカーは、酸性媒体への曝露によって切断可能なカーボネート部分をさらに
含む。特定の実施形態において、リンカーは、酸素を介して細胞傷害性物質および／また
は細胞増殖抑制性物質に取り付けられる。
【0200】
５．３．４．切断不可能なリンカー
切断可能なリンカーは一定の利点を提供し得るが、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ
を含むリンカーは、必ずしも切断可能でなくてもよい。切断不可能なリンカーの場合、薬
物の放出は、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることに依存しない。薬物の
放出は、抗原媒介エンドサイトーシスを介したＡＤＣの内在化とリソソーム区画への送達
の後に起こり、そこで抗体は、細胞内タンパク質分解を介してアミノ酸レベルに分解され
ると仮定されている。このプロセスは、薬物、リンカー、およびリンカーが共有結合で取
り付けられたアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不可能なリン
カーとのコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物は、切断可能なリンカーとのコンジ
ュゲートと比較して、より親水性であり、一般的にはより低い膜透過性であり、それによ
り、より少ないバイスタンダー作用およびより少ない非特異的な毒性が生じる。一般的に
、切断不可能なリンカーとのＡＤＣは、循環中で切断可能なリンカーとのＡＤＣより大き
い安定性を有する。切断不可能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、または天然
の重合体、例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーベースのもので
あってもよいし、またはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール（glocol）および／ま
たはアミドポリマーのセグメントを含んでいてもよい。
切断可能なリンカーは一定の利点を提供し得るが、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ
を含むリンカーは、必ずしも切断可能でなくてもよい。切断不可能なリンカーの場合、薬
物の放出は、血漿と一部の細胞質内区画との間で特性が異なることに依存しない。薬物の
放出は、抗原媒介エンドサイトーシスを介したＡＤＣの内在化とリソソーム区画への送達
の後に起こり、そこで抗体は、細胞内タンパク質分解を介してアミノ酸レベルに分解され
ると仮定されている。このプロセスは、薬物、リンカー、およびリンカーが共有結合で取
り付けられたアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不可能なリン
カーとのコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物は、切断可能なリンカーとのコンジ
ュゲートと比較して、より親水性であり、一般的にはより低い膜透過性であり、それによ
り、より少ないバイスタンダー作用およびより少ない非特異的な毒性が生じる。一般的に
、切断不可能なリンカーとのＡＤＣは、循環中で切断可能なリンカーとのＡＤＣより大き
い安定性を有する。切断不可能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、または天然
の重合体、例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーベースのもので
あってもよいし、またはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール（glocol）および／ま
たはアミドポリマーのセグメントを含んでいてもよい。
【0201】
薬物を抗体に連結するのに使用される様々な切断不可能なリンカーが記載されている。
それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. C
hem. 17；831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；a
nd Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照されたい。これらの
リンカーはいずれも、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれていてもよい。
それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. C
hem. 17；831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；a
nd Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255を参照されたい。これらの
リンカーはいずれも、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれていてもよい。
【0202】
特定の実施形態において、リンカーは、インビボで切断不可能であり、例えば、構造式
（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）または（ＶＩｄ）によるリンカーであり（例示され
た通り）、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基：
（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）または（ＶＩｄ）によるリンカーであり（例示され
た通り）、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基：
【0203】
【化14】
ネートから選択され；Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合で連結することが可能な官能基
を含む部分であり；
【0204】
【化15】
。
【0205】
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣ中に含まれ得る構造式（ＶＩａ）～（ＶＩｄ）によ
るリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる
（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を
含み、
るリンカーの特定の例示的な実施形態としては、以下で例示されるリンカーが挙げられる
（例示されるように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合で連結するのに好適な基を
含み、
【0206】
【化16】
【0207】
【化17】
【0208】
５．３．５．リンカーを抗体に取り付けるのに使用される基
リンカー－薬物シントンを抗体に取り付けてＡＤＣを得るために、様々な基を使用する
ことができる。取り付け基は、本質的に求電子性であってもよく、その例としては、マレ
イミド基、活性化ジスルフィド、活性エステル、例えばＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエ
ステル、ギ酸ハロゲン化物、酸ハロゲン化物、ハロゲン化アルキルおよびベンジル、例え
ばハロアセトアミドが挙げられる。以下で論じられるように、本開示に従って使用するこ
とができる「自己安定化」マレイミドおよび「架橋形成ジスルフィド」に関する新興の技
術もある。使用される具体的な基は、抗体への取り付け部位に一部依存すると予想される
。
リンカー－薬物シントンを抗体に取り付けてＡＤＣを得るために、様々な基を使用する
ことができる。取り付け基は、本質的に求電子性であってもよく、その例としては、マレ
イミド基、活性化ジスルフィド、活性エステル、例えばＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエ
ステル、ギ酸ハロゲン化物、酸ハロゲン化物、ハロゲン化アルキルおよびベンジル、例え
ばハロアセトアミドが挙げられる。以下で論じられるように、本開示に従って使用するこ
とができる「自己安定化」マレイミドおよび「架橋形成ジスルフィド」に関する新興の技
術もある。使用される具体的な基は、抗体への取り付け部位に一部依存すると予想される
。
【0209】
抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解して安定性が改善されたＡＤＣ種を
生じる「自己安定化」マレイミド基の一例を以下の略図に描写する。米国特許出願公開第
２０１３０３０９２５６号明細書；さらに、Lyon et al., Nature Biotech published on
line, doi:10.1038/nbt.2968も参照されたい。
生じる「自己安定化」マレイミド基の一例を以下の略図に描写する。米国特許出願公開第
２０１３０３０９２５６号明細書；さらに、Lyon et al., Nature Biotech published on
line, doi:10.1038/nbt.2968も参照されたい。
【0210】
【化18】
【0211】
【化19】
【0212】
Ｐｏｌｙｔｈｅｒｉｃｓは、天然ヒンジジスルフィド結合の還元から誘導されたスルフ
ヒドリル基の対を架橋する方法を開示している。Badescu et al., 2014, Bioconjugate C
hem. 25:1124-1136を参照されたい。この反応を以下の略図に描写する。この手法の利点
は、ＩｇＧの完全な還元（スルフヒドリルの４つの対を生じる）とそれに続く４当量のア
ルキル化剤との反応によって富化したＤＡＲ４ ＡＤＣを合成する能力である。「架橋さ
れたジスルフィド」を含有するＡＤＣも、安定性が増加したと述べられている。
ヒドリル基の対を架橋する方法を開示している。Badescu et al., 2014, Bioconjugate C
hem. 25:1124-1136を参照されたい。この反応を以下の略図に描写する。この手法の利点
は、ＩｇＧの完全な還元（スルフヒドリルの４つの対を生じる）とそれに続く４当量のア
ルキル化剤との反応によって富化したＤＡＲ４ ＡＤＣを合成する能力である。「架橋さ
れたジスルフィド」を含有するＡＤＣも、安定性が増加したと述べられている。
【0213】
【化20】
【0214】
同様に、以下で描写されるように、スルフヒドリル基の対を架橋することが可能なマレ
イミド誘導体（１、以下）が開発されている。国際公開第２０１３／０８５９２５号パン
フレットを参照されたい。
イミド誘導体（１、以下）が開発されている。国際公開第２０１３／０８５９２５号パン
フレットを参照されたい。
【0215】
【化21】
【0216】
５．３．６．リンカー選択の考察
当業者公知のように、特定のＡＤＣのための選択されたリンカーは、これらに限定され
ないが、抗体への取り付けの部位（例えば、ｌｙｓ、ｃｙｓまたは他のアミノ酸残基）、
薬物の薬理作用団の構造的な拘束、および薬物の親油性などの様々な要因によって影響を
受ける可能性がある。具体的なＡＤＣのための選択されたリンカーは、具体的な抗体／複
合薬に対してこれらの様々な要因のバランスをとることが求められることになる。ＡＤＣ
におけるリンカーの選択によって影響を受ける要因の総論に関して、Nolting, Chapter 5
“Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates
: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Spri
nger Science & Business Medica, LLC, 2013を参照されたい。
当業者公知のように、特定のＡＤＣのための選択されたリンカーは、これらに限定され
ないが、抗体への取り付けの部位（例えば、ｌｙｓ、ｃｙｓまたは他のアミノ酸残基）、
薬物の薬理作用団の構造的な拘束、および薬物の親油性などの様々な要因によって影響を
受ける可能性がある。具体的なＡＤＣのための選択されたリンカーは、具体的な抗体／複
合薬に対してこれらの様々な要因のバランスをとることが求められることになる。ＡＤＣ
におけるリンカーの選択によって影響を受ける要因の総論に関して、Nolting, Chapter 5
“Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,” In: Antibody-Drug Conjugates
: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Spri
nger Science & Business Medica, LLC, 2013を参照されたい。
【0217】
例えば、ＡＤＣは、抗原陽性腫瘍細胞の近くに存在するバイスタンダー抗原陰性細胞を
致死させることが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞致死のメカニズムは
、ＡＤＣの細胞内プロセシング中に形成された代謝産物が役割を果たし得ることを示した
。抗原陽性細胞中でのＡＤＣの代謝によって生成した中性の細胞傷害性の代謝産物は、バ
イスタンダー細胞致死において役割を果たすようであるが、電荷を有する代謝産物は、膜
を介した媒体への拡散が阻止される可能性があり、それゆえにバイスタンダー致死に影響
を与えることができない。特定の実施形態において、リンカーは、ＡＤＣの細胞代謝産物
によって引き起こされるバイスタンダー致死作用を弱めるように選択される。特定の実施
形態において、リンカーは、バイスタンダー致死作用を増加させるように選択される。
致死させることが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞致死のメカニズムは
、ＡＤＣの細胞内プロセシング中に形成された代謝産物が役割を果たし得ることを示した
。抗原陽性細胞中でのＡＤＣの代謝によって生成した中性の細胞傷害性の代謝産物は、バ
イスタンダー細胞致死において役割を果たすようであるが、電荷を有する代謝産物は、膜
を介した媒体への拡散が阻止される可能性があり、それゆえにバイスタンダー致死に影響
を与えることができない。特定の実施形態において、リンカーは、ＡＤＣの細胞代謝産物
によって引き起こされるバイスタンダー致死作用を弱めるように選択される。特定の実施
形態において、リンカーは、バイスタンダー致死作用を増加させるように選択される。
【0218】
またリンカーの特性も、使用および／または貯蔵条件下でＡＤＣの凝集に影響を与える
可能性がある。典型的には、文献で報告されたＡＤＣは、抗体分子１個当たり３～４個以
下の薬物分子を含有する（例えば、Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107を参照）。よ
り高い薬物対抗体の比率（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは、特に薬物とリンカーの両
方が疎水性の場合、ＡＤＣが凝集するため失敗することが多い（King et al., 2002, J M
ed Chem 45:4336-4343；Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361；Burk
e et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250）。多くの例において、３～４より高
いＤＡＲが、効力増加の手段として有益であり得る。細胞傷害性物質および／または細胞
増殖抑制性物質が本質的に疎水性である例において、特に３～４より大きいＤＡＲが望ま
しい例において、ＡＤＣ凝集を低減させる手段として、相対的に親水性のリンカーを選択
することが望ましい場合がある。したがって、特定の実施形態において、リンカーは、貯
蔵および／または使用中にＡＤＣの凝集を低減する化学成分を取り込んでいる。リンカー
は、ＡＤＣの凝集を低減するために、極性または親水性基、例えば電荷を有する基または
生理学的なｐＨで電荷を有するようになる基を取り込んでいてもよい。例えば、リンカー
は、生理学的なｐＨで、例えばカルボン酸を脱プロトン化する、または例えばアミンをプ
ロトン化する、電荷を有する基、例えば塩または基を取り込んでいてもよい。
可能性がある。典型的には、文献で報告されたＡＤＣは、抗体分子１個当たり３～４個以
下の薬物分子を含有する（例えば、Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107を参照）。よ
り高い薬物対抗体の比率（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは、特に薬物とリンカーの両
方が疎水性の場合、ＡＤＣが凝集するため失敗することが多い（King et al., 2002, J M
ed Chem 45:4336-4343；Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361；Burk
e et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250）。多くの例において、３～４より高
いＤＡＲが、効力増加の手段として有益であり得る。細胞傷害性物質および／または細胞
増殖抑制性物質が本質的に疎水性である例において、特に３～４より大きいＤＡＲが望ま
しい例において、ＡＤＣ凝集を低減させる手段として、相対的に親水性のリンカーを選択
することが望ましい場合がある。したがって、特定の実施形態において、リンカーは、貯
蔵および／または使用中にＡＤＣの凝集を低減する化学成分を取り込んでいる。リンカー
は、ＡＤＣの凝集を低減するために、極性または親水性基、例えば電荷を有する基または
生理学的なｐＨで電荷を有するようになる基を取り込んでいてもよい。例えば、リンカー
は、生理学的なｐＨで、例えばカルボン酸を脱プロトン化する、または例えばアミンをプ
ロトン化する、電荷を有する基、例えば塩または基を取り込んでいてもよい。
【0219】
２０もの高いＤＡＲをもたらすと報告されている、多数の細胞傷害性物質および／また
は細胞増殖抑制性物質を抗体に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、その内
容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３
４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第
２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレ
ット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６
９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第
２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレ
ット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。
は細胞増殖抑制性物質を抗体に連結するのに使用できる例示的な多価リンカーは、その内
容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第２００９／０７３
４４５号パンフレット；国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット；国際公開第
２０１０／１３８７１９号パンフレット；国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレ
ット；国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０９６
９０１号パンフレット；国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット；国際公開第
２０１４／０９３３７９号パンフレット；国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレ
ット；国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されている。
【0220】
特定の実施形態において、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグ
ラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、約１０％未満である。特定の実施形態におい
て、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によ
って決定した場合、１０％未満、例えば、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％
未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．１％未満であるか、またはそれよりさらに低
い。
ラフィー（ＳＥＣ）によって決定した場合、約１０％未満である。特定の実施形態におい
て、貯蔵または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によ
って決定した場合、１０％未満、例えば、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％
未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．１％未満であるか、またはそれよりさらに低
い。
【0221】
５．３．７．抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣを作製する方法
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣは、周知の化学的方法を使用して合成することがで
きる。選択された化学的方法は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖
抑制性物質、リンカーを抗体に取り付けるのに使用されるリンカーおよび基の性質に依存
すると予想される。一般的に、式（Ｉ）によるＡＤＣは、以下のスキームに従って調製す
ることができる：
Ｄ－Ｌ－Ｒｘ＋Ａｂ－Ｒｙ→［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ （Ｉ）
式中、Ｄ、Ｌ、Ａｂ、ＸＹおよびｎはこれまでに定義した通りであり、ＲｘおよびＲｙ
は、上記で論じられたように、互いに共有結合による連結を形成することが可能な補完的
な基を表す。
本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣは、周知の化学的方法を使用して合成することがで
きる。選択された化学的方法は、数ある中でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖
抑制性物質、リンカーを抗体に取り付けるのに使用されるリンカーおよび基の性質に依存
すると予想される。一般的に、式（Ｉ）によるＡＤＣは、以下のスキームに従って調製す
ることができる：
Ｄ－Ｌ－Ｒｘ＋Ａｂ－Ｒｙ→［Ｄ－Ｌ－ＸＹ］ｎ－Ａｂ （Ｉ）
式中、Ｄ、Ｌ、Ａｂ、ＸＹおよびｎはこれまでに定義した通りであり、ＲｘおよびＲｙ
は、上記で論じられたように、互いに共有結合による連結を形成することが可能な補完的
な基を表す。
【0222】
ＲｘおよびＲｙ基の性質は、シントンＤ－Ｌ－Ｒｘを抗体に連結するのに使用される化
学的方法に依存すると予想される。一般的に、使用される化学的方法は、抗体の完全性、
例えばその標的に結合するその能力を変更しないものであるべきである。好ましくは、コ
ンジュゲートした抗体の結合特性は、コンジュゲートしていない抗体の結合特性に極めて
類似していると予想される。分子を抗体などの生体分子にコンジュゲートするための様々
な化学的方法および技術が当業界において公知であり、特に抗体にコンジュゲートするた
めのものが周知である。例えば、Amon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotar
geting Of Drugs In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies And Cancer Therap
y, Reisfeld et al. Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985；Hellstrom et al., “Antibodie
s For Drug Delivery,” in: Controlled Drug Delivery, Robinson et al. Eds., Marce
l Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In
Cancer Therapy: A Review,” in: Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clin
ical Applications, Pinchera et al., Eds., 1985；“Analysis, Results, and Future
Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,”
in: Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., Eds
., Academic Press, 1985；Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；ＰＣＴ国
際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照されたい。これらの化学的方法のいずれ
も、シントンを抗体に連結するのに使用することができる。
学的方法に依存すると予想される。一般的に、使用される化学的方法は、抗体の完全性、
例えばその標的に結合するその能力を変更しないものであるべきである。好ましくは、コ
ンジュゲートした抗体の結合特性は、コンジュゲートしていない抗体の結合特性に極めて
類似していると予想される。分子を抗体などの生体分子にコンジュゲートするための様々
な化学的方法および技術が当業界において公知であり、特に抗体にコンジュゲートするた
めのものが周知である。例えば、Amon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotar
geting Of Drugs In Cancer Therapy,” in: Monoclonal Antibodies And Cancer Therap
y, Reisfeld et al. Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985；Hellstrom et al., “Antibodie
s For Drug Delivery,” in: Controlled Drug Delivery, Robinson et al. Eds., Marce
l Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In
Cancer Therapy: A Review,” in: Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clin
ical Applications, Pinchera et al., Eds., 1985；“Analysis, Results, and Future
Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,”
in: Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., Eds
., Academic Press, 1985；Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；ＰＣＴ国
際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照されたい。これらの化学的方法のいずれ
も、シントンを抗体に連結するのに使用することができる。
【0223】
接近可能なリシン残基にシントンを連結するのに有用な官能基Ｒｘの数および化学的方
法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ＮＨＳ－エステルおよびイソ
チオシアネートが挙げられる。
法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが、ＮＨＳ－エステルおよびイソ
チオシアネートが挙げられる。
【0224】
システイン残基の接近可能な遊離のスルフヒドリル基にシントンを連結するのに有用な
官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが
、ハロアセチルおよびマレイミドが挙げられる。
官能基Ｒｘの数および化学的方法は公知であり、一例としては、これらに限定されないが
、ハロアセチルおよびマレイミドが挙げられる。
【0225】
しかしながら、コンジュゲーションの化学的性質は、利用可能な側鎖基に限定されない
。アミンなどの側鎖は、適切な小分子をアミンに連結することによって、他の有用な基、
例えばヒドロキシルに変換することができる。この戦略は、抗体の接近可能なアミノ酸残
基の側鎖に多官能性の小分子をコンジュゲートすることによって抗体上の利用可能な連結
部位の数を増加させるために使用することができる。次いで、これらの「変換された」官
能基にシントンを共有結合で連結するのに好適な官能基Ｒｘが、シントンに含まれる。
。アミンなどの側鎖は、適切な小分子をアミンに連結することによって、他の有用な基、
例えばヒドロキシルに変換することができる。この戦略は、抗体の接近可能なアミノ酸残
基の側鎖に多官能性の小分子をコンジュゲートすることによって抗体上の利用可能な連結
部位の数を増加させるために使用することができる。次いで、これらの「変換された」官
能基にシントンを共有結合で連結するのに好適な官能基Ｒｘが、シントンに含まれる。
【0226】
抗体はまた、コンジュゲーションのためのアミノ酸残基を含むように操作することがで
きる。ＡＤＣの状態で薬物をコンジュゲートするのに有用な非遺伝子コード化アミノ酸残
基を含むように抗体を操作するためのアプローチは、非コード化アミノ酸にシントンを連
結するのに有用な化学的方法および官能基と共に、Axupet al., 2012, Proc Natl Acad S
ci USA. 109(40):16101-16106によって記載されている。
きる。ＡＤＣの状態で薬物をコンジュゲートするのに有用な非遺伝子コード化アミノ酸残
基を含むように抗体を操作するためのアプローチは、非コード化アミノ酸にシントンを連
結するのに有用な化学的方法および官能基と共に、Axupet al., 2012, Proc Natl Acad S
ci USA. 109(40):16101-16106によって記載されている。
【0227】
典型的には、シントンは、抗体のアミノ酸残基の側鎖に、例えば、接近可能なリシン残
基の一級アミノ基または接近可能なシステイン残基のスルフヒドリル基などに連結されて
いる。遊離のスルフヒドリル基は、鎖間のジスルフィド結合を還元することにより得るこ
とができる。
基の一級アミノ基または接近可能なシステイン残基のスルフヒドリル基などに連結されて
いる。遊離のスルフヒドリル基は、鎖間のジスルフィド結合を還元することにより得るこ
とができる。
【0228】
Ｒｙがスルフヒドリル基である場合（例えば、Ｒｘがマレイミドである場合）の連結で
は、一般的に、抗体はまず完全または部分的に還元して、システイン残基間の鎖間のジス
ルフィド架橋を崩壊させる。
は、一般的に、抗体はまず完全または部分的に還元して、システイン残基間の鎖間のジス
ルフィド架橋を崩壊させる。
【0229】
１つまたは複数のコドンの突然変異によって、ジスルフィド架橋に参加しないシステイ
ン残基が抗体に入るように操作することができる。これらの対応のないシステインの還元
により、コンジュゲーションに好適なスルフヒドリル基が生じる。操作されたシステイン
を取り込むのに好ましい位置としては、一例として、これらに限定されないが、ヒトＩｇ
Ｇ１重鎖上の、Ｓ１１２Ｃ位、Ｓ１１３Ｃ位、Ａ１１４Ｃ位、Ｓ１１５Ｃ位、Ａ１７６Ｃ
位、５１８０Ｃ位、Ｓ２５２Ｃ位、Ｖ２８６Ｃ位、Ｖ２９２Ｃ位、Ｓ３５７Ｃ位、Ａ３５
９Ｃ位、Ｓ３９８Ｃ位、Ｓ４２８Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）、およびヒトＩｇカッパ
軽鎖上の、Ｖ１１０Ｃ位、Ｓ１１４Ｃ位、Ｓ１２１Ｃ位、Ｓ１２７Ｃ位、Ｓ１６８Ｃ位、
Ｖ２０５Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）が挙げられる（例えば、米国特許第７，５２１，
５４１号明細書、米国特許第７，８５５，２７５号明細書および米国特許第８，４５５，
６２２号明細書を参照）。
ン残基が抗体に入るように操作することができる。これらの対応のないシステインの還元
により、コンジュゲーションに好適なスルフヒドリル基が生じる。操作されたシステイン
を取り込むのに好ましい位置としては、一例として、これらに限定されないが、ヒトＩｇ
Ｇ１重鎖上の、Ｓ１１２Ｃ位、Ｓ１１３Ｃ位、Ａ１１４Ｃ位、Ｓ１１５Ｃ位、Ａ１７６Ｃ
位、５１８０Ｃ位、Ｓ２５２Ｃ位、Ｖ２８６Ｃ位、Ｖ２９２Ｃ位、Ｓ３５７Ｃ位、Ａ３５
９Ｃ位、Ｓ３９８Ｃ位、Ｓ４２８Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）、およびヒトＩｇカッパ
軽鎖上の、Ｖ１１０Ｃ位、Ｓ１１４Ｃ位、Ｓ１２１Ｃ位、Ｓ１２７Ｃ位、Ｓ１６８Ｃ位、
Ｖ２０５Ｃ位（Ｋａｂａｔの番号付け）が挙げられる（例えば、米国特許第７，５２１，
５４１号明細書、米国特許第７，８５５，２７５号明細書および米国特許第８，４５５，
６２２号明細書を参照）。
【0230】
当業者により理解されていると予想されるように、抗体分子に連結された多数の細胞傷
害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、一部の抗体は１つの連結された薬剤を含
有する、一部の抗体は２つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は３つの連結された
薬剤を含有するなど（一部の抗体は連結された薬剤を含有しない）、ＡＤＣの集合体が本
質的に不均質であり得るように変更することが可能である。不均質性の程度は、数ある中
でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するのに使用される化学
的方法に依存すると予想される。例えば、抗体が還元されて取り付けのためのスルフヒド
リル基が生じる場合、分子１個当たり０、２、４、６または８個の連結された薬剤を有す
る抗体の不均質な混合物が産生されることが多い。さらに、取り付け化合物のモル比を制
限することによって、分子１個当たり０、１、２、３、４、５、６、７または８個の連結
された薬剤を有する抗体が産生されることが多い。したがって、文脈に応じて、述べられ
るＤＡＲは、抗体の集合体の平均であり得ることが理解されると予想される。例えば、「
ＤＡＲ４」は、特定のＤＡＲピークを単離するために精製に供されておらず、抗体１個当
たりの取り付けられた細胞増殖抑制性物質および／または細胞傷害性物質の数が異なる（
例えば、抗体１個当たり０、２、４、６、８個の薬剤）ＡＤＣ分子の不均質な混合物を含
み得るが、平均の薬物対抗体の比率が４であるＡＤＣ調製物を指すことができる。同様に
、一部の実施形態において、「ＤＡＲ２」は、平均の薬物対抗体の比率が２である不均質
なＡＤＣ調製物を指す。
害性物質および／または細胞増殖抑制性物質は、一部の抗体は１つの連結された薬剤を含
有する、一部の抗体は２つの連結された薬剤を含有する、一部の抗体は３つの連結された
薬剤を含有するなど（一部の抗体は連結された薬剤を含有しない）、ＡＤＣの集合体が本
質的に不均質であり得るように変更することが可能である。不均質性の程度は、数ある中
でも、細胞傷害性物質および／または細胞増殖抑制性物質を連結するのに使用される化学
的方法に依存すると予想される。例えば、抗体が還元されて取り付けのためのスルフヒド
リル基が生じる場合、分子１個当たり０、２、４、６または８個の連結された薬剤を有す
る抗体の不均質な混合物が産生されることが多い。さらに、取り付け化合物のモル比を制
限することによって、分子１個当たり０、１、２、３、４、５、６、７または８個の連結
された薬剤を有する抗体が産生されることが多い。したがって、文脈に応じて、述べられ
るＤＡＲは、抗体の集合体の平均であり得ることが理解されると予想される。例えば、「
ＤＡＲ４」は、特定のＤＡＲピークを単離するために精製に供されておらず、抗体１個当
たりの取り付けられた細胞増殖抑制性物質および／または細胞傷害性物質の数が異なる（
例えば、抗体１個当たり０、２、４、６、８個の薬剤）ＡＤＣ分子の不均質な混合物を含
み得るが、平均の薬物対抗体の比率が４であるＡＤＣ調製物を指すことができる。同様に
、一部の実施形態において、「ＤＡＲ２」は、平均の薬物対抗体の比率が２である不均質
なＡＤＣ調製物を指す。
【0231】
富化した調製物が望ましい場合、既定の数の連結された細胞傷害性物質および／または
細胞増殖抑制性物質を有する抗体は、不均質な混合物の精製を介して、例えば、カラムク
ロマトグラフィー、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーを介して得ることができ
る。
細胞増殖抑制性物質を有する抗体は、不均質な混合物の精製を介して、例えば、カラムク
ロマトグラフィー、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーを介して得ることができ
る。
【0232】
純度は、当業界において公知のように、様々な方法によって評価することができる。具
体的な例として、ＡＤＣ調製物は、ＨＰＬＣまたは他のクロマトグラフィーを介して分析
してもよく、純度は、得られたピークの曲線下面積を分析することによって評価してもよ
い。
体的な例として、ＡＤＣ調製物は、ＨＰＬＣまたは他のクロマトグラフィーを介して分析
してもよく、純度は、得られたピークの曲線下面積を分析することによって評価してもよ
い。
【0233】
５．４ キメラ抗原受容体
本発明の開示は、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
本発明の開示は、本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【0234】
本開示のＣＡＲは、典型的には、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメイン
を含み、これが順にシグナル伝達のための細胞内ドメインに作動可能に連結している。
を含み、これが順にシグナル伝達のための細胞内ドメインに作動可能に連結している。
【0235】
本開示のＣＡＲの細胞外ドメインは、抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメン
トの配列（例えば、セクション５．１または実施形態１から９０に記載される通り）を含
む。
トの配列（例えば、セクション５．１または実施形態１から９０に記載される通り）を含
む。
【0236】
例示的な膜貫通ドメイン配列および細胞内ドメイン配列は、それぞれセクション５．４
．１および５．４．２に記載されている。
．１および５．４．２に記載されている。
【0237】
本明細書に記載される数々の融合タンパク質（例えば、実施形態９２および９４～９６
）は、ＣＡＲであり、ＣＡＲに関連する開示は、このような融合タンパク質に適用される
。
）は、ＣＡＲであり、ＣＡＲに関連する開示は、このような融合タンパク質に適用される
。
【0238】
５．４．１．膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに作動可能に連結された
（例えば、融合した）膜貫通ドメインを含むように設計することができる。
膜貫通ドメインに関して、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに作動可能に連結された
（例えば、融合した）膜貫通ドメインを含むように設計することができる。
【0239】
膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれに由来するものでもよい。源が天然で
ある場合、ドメインは、あらゆる膜結合または膜貫通タンパク質由来であり得る。この開
示における特定の用途の膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、Ｃ
Ｄ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、
ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４のアルファ、ベー
タまたはゼータ鎖由来であってもよい（すなわち、その少なくとも膜貫通領域を含んでい
てもよい）。一部の場合において、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジなどの様々なヒト
ヒンジも同様に採用することができる。
ある場合、ドメインは、あらゆる膜結合または膜貫通タンパク質由来であり得る。この開
示における特定の用途の膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、Ｃ
Ｄ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、
ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４のアルファ、ベー
タまたはゼータ鎖由来であってもよい（すなわち、その少なくとも膜貫通領域を含んでい
てもよい）。一部の場合において、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジなどの様々なヒト
ヒンジも同様に採用することができる。
【0240】
一実施形態において、膜貫通ドメインは、合成である（すなわち、天然に存在しない）
。合成膜貫通ドメインの例は、ロイシンおよびバリンなどの主として疎水性の残基を含む
ペプチドである。好ましくは、合成膜貫通ドメインの各末端に、フェニルアラニン、トリ
プトファンおよびバリンの三つ組が見出されると予想される。任意選択で、短いオリゴま
たはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、膜貫通ドメ
インとＣＡＲの細胞質内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成することができる。グ
リシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
。合成膜貫通ドメインの例は、ロイシンおよびバリンなどの主として疎水性の残基を含む
ペプチドである。好ましくは、合成膜貫通ドメインの各末端に、フェニルアラニン、トリ
プトファンおよびバリンの三つ組が見出されると予想される。任意選択で、短いオリゴま
たはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、膜貫通ドメ
インとＣＡＲの細胞質内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成することができる。グ
リシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
【0241】
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイ
ンである。一実施形態において、ＣＤ８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＹＬＨＬＧＡＬ
ＧＲＤＬＷＧＰＳＰＶＴＧＹＨＰＬＬを含む。
ンである。一実施形態において、ＣＤ８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＹＬＨＬＧＡＬ
ＧＲＤＬＷＧＰＳＰＶＴＧＹＨＰＬＬを含む。
【0242】
一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメ
インである。一実施形態において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶ
ＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶを含む。
インである。一実施形態において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶ
ＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶを含む。
【0243】
一部の場合において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインを
含む。一実施形態において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰ
ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣを含む。
含む。一実施形態において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、アミノ酸配列ＴＴＴＰＡＰＲＰ
ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣを含む。
【0244】
５．４．２．細胞内ドメイン
本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の正常
なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は
、細胞の特殊化した機能を指す。例えばＴ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性また
はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナ
ル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを変換し、細胞が特殊化した機能を実行
するように方向付けるタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体
が採用できるが、多くの場合において、鎖全体を使用することは必ずしも必要ではない。
細胞内シグナル伝達ドメインの短縮化された部分が使用される限りにおいて、このような
短縮化された部分は、それがエフェクター機能シグナルを変換しさえすれば、無傷の鎖の
代わりに使用することができる。したがって細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、
エフェクター機能シグナルを変換するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆ
る短縮化された部分を含むことを意味する。
本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の正常
なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は
、細胞の特殊化した機能を指す。例えばＴ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性また
はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナ
ル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを変換し、細胞が特殊化した機能を実行
するように方向付けるタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体
が採用できるが、多くの場合において、鎖全体を使用することは必ずしも必要ではない。
細胞内シグナル伝達ドメインの短縮化された部分が使用される限りにおいて、このような
短縮化された部分は、それがエフェクター機能シグナルを変換しさえすれば、無傷の鎖の
代わりに使用することができる。したがって細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、
エフェクター機能シグナルを変換するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆ
る短縮化された部分を含むことを意味する。
【0245】
本開示のＣＡＲで使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの好ましい例としては、
抗原受容体と結合した後に協同的に作用してシグナル伝達を開始させるＴ細胞受容体（Ｔ
ＣＲ）および補助受容体の細胞質内配列、加えて、これらの配列のあらゆる誘導体または
バリアント、および同じ機能的な能力を有するあらゆる合成配列が挙げられる。
抗原受容体と結合した後に協同的に作用してシグナル伝達を開始させるＴ細胞受容体（Ｔ
ＣＲ）および補助受容体の細胞質内配列、加えて、これらの配列のあらゆる誘導体または
バリアント、および同じ機能的な能力を有するあらゆる合成配列が挙げられる。
【0246】
ＴＣＲ単独により生成したシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分な場合があり
、二次または共刺激シグナルも必要である。したがって、Ｔ細胞の活性化は、２つの別個
のクラスの細胞質内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性
化を開始させるシグナル伝達配列（一次細胞質内シグナル伝達配列）、および抗原非依存
性の方式で作用して、二次または共刺激シグナルをもたらすシグナル伝達配列（二次細胞
質内シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。
、二次または共刺激シグナルも必要である。したがって、Ｔ細胞の活性化は、２つの別個
のクラスの細胞質内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性
化を開始させるシグナル伝達配列（一次細胞質内シグナル伝達配列）、および抗原非依存
性の方式で作用して、二次または共刺激シグナルをもたらすシグナル伝達配列（二次細胞
質内シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。
【0247】
一次細胞質内シグナル伝達配列は、刺激によるか、または阻害によるかのいずれかでＴ
ＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激による方式で作用する一次細胞質内シグナル伝
達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナ
ル伝達モチーフを含有していてもよい。
ＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激による方式で作用する一次細胞質内シグナル伝
達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナ
ル伝達モチーフを含有していてもよい。
【0248】
本開示のＣＡＲにおいて特定の用途を有するＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル
伝達配列の例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、Ｃ
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣ
Ｄ６６ｄ由来のものが挙げられる。本開示のＣＡＲにおける細胞質内シグナル伝達分子は
、ＣＤ３－ゼータ由来の細胞質内シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。
伝達配列の例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、Ｃ
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣ
Ｄ６６ｄ由来のものが挙げられる。本開示のＣＡＲにおける細胞質内シグナル伝達分子は
、ＣＤ３－ゼータ由来の細胞質内シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。
【0249】
好ましい実施形態において、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＩＴＡＭを含有する一次細
胞質内シグナル伝達配列ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータのもの）そのものを含む、ま
たは本開示のＣＡＲの状況で有用な他のあらゆる望ましい細胞質内ドメインと組み合わせ
て含むように設計される。例えば、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分お
よび共刺激シグナル伝達領域を含んでいてもよい。
胞質内シグナル伝達配列ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータのもの）そのものを含む、ま
たは本開示のＣＡＲの状況で有用な他のあらゆる望ましい細胞質内ドメインと組み合わせ
て含むように設計される。例えば、ＣＡＲの細胞質内ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分お
よび共刺激シグナル伝達領域を含んでいてもよい。
【0250】
共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。
共刺激分子は、リンパ球の抗原への効率的な応答に必要な、抗原受容体またはそのリガン
ド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－
１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球
機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ
３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
共刺激分子は、リンパ球の抗原への効率的な応答に必要な、抗原受容体またはそのリガン
ド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－
１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球
機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ
３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
【0251】
本開示のＣＡＲの細胞質内シグナル伝達部分内の細胞質内シグナル伝達配列は、ランダ
ムな、または特定された順番で互いに連結されていてもよい。任意選択で、短いオリゴま
たはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、連結を形成
することができる。グリシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
ムな、または特定された順番で互いに連結されていてもよい。任意選択で、短いオリゴま
たはポリペプチドリンカー、好ましくは２から１０アミノ酸の長さのものが、連結を形成
することができる。グリシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。
【0252】
一実施形態において、細胞質内ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインお
よびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態において、細胞質内ドメイン
は、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを
含む。
よびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態において、細胞質内ドメイン
は、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを
含む。
【0253】
５．５ 核酸、組換えベクターおよび宿主細胞
本発明の開示は、抗グリコＭＵＣ１抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子をコー
ドする核酸分子、このような核酸を含むベクター、および本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体
を産生することが可能な宿主細胞を包含する。特定の態様において、核酸分子は、本開示
の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメント（例えば、セクション５．１および
実施形態１～９０に記載される通り）、加えて、それらを含有する融合タンパク質（例え
ば、実施形態９１～９６に記載される通り）およびキメラ抗原受容体（例えば、セクショ
ン５．４および実施形態９７～９８に記載される通り）をコードし、宿主細胞は、それら
を発現することが可能である。本開示の例示的なベクターは、実施形態１１１～１１３に
記載されており、例示的な宿主細胞は、実施形態１１４～１１７に記載されている。
本発明の開示は、抗グリコＭＵＣ１抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子をコー
ドする核酸分子、このような核酸を含むベクター、および本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体
を産生することが可能な宿主細胞を包含する。特定の態様において、核酸分子は、本開示
の抗グリコＭＵＣ１抗体および抗原結合フラグメント（例えば、セクション５．１および
実施形態１～９０に記載される通り）、加えて、それらを含有する融合タンパク質（例え
ば、実施形態９１～９６に記載される通り）およびキメラ抗原受容体（例えば、セクショ
ン５．４および実施形態９７～９８に記載される通り）をコードし、宿主細胞は、それら
を発現することが可能である。本開示の例示的なベクターは、実施形態１１１～１１３に
記載されており、例示的な宿主細胞は、実施形態１１４～１１７に記載されている。
【0254】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体は、宿主細胞中での免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝
子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現するために、宿主細胞
は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを有する１つ
または複数の組換え発現ベクターをトランスフェクトされ、それにより、軽鎖および重鎖
が宿主細胞中で発現され、任意選択でそれらは宿主細胞が培養される培地に分泌され、そ
の培地から抗体を回収することができる。標準的な組換えＤＮＡ手法は、抗体重鎖および
軽鎖遺伝子を得て、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、宿主
細胞に、例えば、Molecular Cloning；A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook
, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocol
s in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publishing Associate
s, 1989)および米国特許第４，８１６，３９７号明細書に記載されるものに導入するのに
使用される。
子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現するために、宿主細胞
は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを有する１つ
または複数の組換え発現ベクターをトランスフェクトされ、それにより、軽鎖および重鎖
が宿主細胞中で発現され、任意選択でそれらは宿主細胞が培養される培地に分泌され、そ
の培地から抗体を回収することができる。標準的な組換えＤＮＡ手法は、抗体重鎖および
軽鎖遺伝子を得て、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、宿主
細胞に、例えば、Molecular Cloning；A Laboratory Manual, Second Edition (Sambrook
, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocol
s in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publishing Associate
s, 1989)および米国特許第４，８１６，３９７号明細書に記載されるものに導入するのに
使用される。
【0255】
このような抗グリコＭＵＣ１抗体をコードする核酸を生成するために、まず、軽鎖およ
び重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを得る。これらのＤＮＡは、例えばポリ
メラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、軽鎖および重鎖可変配列をコードする生殖細胞
系ＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅および改変することにより得ることができる。ヒト重鎖お
よび軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、当業界において公知である（例えば
、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照されたい；Kabat et al., 1991
, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Departmen
t of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242；Tomlinson et al., 19
92, J. Mol. Biol. 22T:116-198；and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836
も参照されたい；これらそれぞれの内容は参照により本明細書に組み入れられる）。
び重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを得る。これらのＤＮＡは、例えばポリ
メラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、軽鎖および重鎖可変配列をコードする生殖細胞
系ＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅および改変することにより得ることができる。ヒト重鎖お
よび軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、当業界において公知である（例えば
、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖細胞系配列データベースを参照されたい；Kabat et al., 1991
, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Departmen
t of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242；Tomlinson et al., 19
92, J. Mol. Biol. 22T:116-198；and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836
も参照されたい；これらそれぞれの内容は参照により本明細書に組み入れられる）。
【0256】
抗グリコＭＵＣ１抗体関連のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメン
トが得られたら、これらのＤＮＡフラグメントはさらに、標準的な組換えＤＮＡ技術によ
って操作して、例えば、可変領域遺伝子を、全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝
子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＨまたはＶ
ＬをコードするＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば抗体定常領域またはフレ
キシブルなリンカーをコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結されている。
用語「作動可能に連結される」は、この状況で使用される場合、２つのＤＮＡフラグメン
トによってコードされたアミノ酸配列がフレーム内に残るように２つのＤＮＡフラグメン
トが合体することを意味することが意図される。
トが得られたら、これらのＤＮＡフラグメントはさらに、標準的な組換えＤＮＡ技術によ
って操作して、例えば、可変領域遺伝子を、全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝
子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＨまたはＶ
ＬをコードするＤＮＡフラグメントは、別のタンパク質、例えば抗体定常領域またはフレ
キシブルなリンカーをコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結されている。
用語「作動可能に連結される」は、この状況で使用される場合、２つのＤＮＡフラグメン
トによってコードされたアミノ酸配列がフレーム内に残るように２つのＤＮＡフラグメン
トが合体することを意味することが意図される。
【0257】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域
（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および任意選択でＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子に作
動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常
領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequen
ces of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Heal
th and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含す
るＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は
、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤの定
常領域であってもよいが、特定の実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の定常領域
である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１
定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結されていてもよい。
（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および任意選択でＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子に作
動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常
領域遺伝子の配列は、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequen
ces of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Heal
th and Human Services, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含す
るＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は
、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤの定
常領域であってもよいが、特定の実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の定常領域
である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１
定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結されていてもよい。
【0258】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域
、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子
（加えてＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は
、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of
Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Servi
ces, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメン
トは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラム
ダ定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、カッパ定常領域である。
、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子
（加えてＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は
、当業界において公知であり（例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of
Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Servi
ces, NIH Publication No.91-3242を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメン
トは、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラム
ダ定常領域であってもよいが、特定の実施形態において、カッパ定常領域である。
【0259】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントは
、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＨおよびＶＬ領域がフレキシブルなリンカーによって合体し
た連続する単鎖タンパク質として発現できるように、フレキシブルなリンカーをコードす
る別のフラグメント、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３をコードする別のフラ
グメントに作動可能に連結されていてもよい（例えば、Bird et al., 1988, Science 242
:423-426；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCaffer
ty et al., 1990, Nature 348:552-554を参照）。
、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＨおよびＶＬ領域がフレキシブルなリンカーによって合体し
た連続する単鎖タンパク質として発現できるように、フレキシブルなリンカーをコードす
る別のフラグメント、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３をコードする別のフラ
グメントに作動可能に連結されていてもよい（例えば、Bird et al., 1988, Science 242
:423-426；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCaffer
ty et al., 1990, Nature 348:552-554を参照）。
【0260】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体を発現させるために、上述したようにして得られた部分
的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配
列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。この文脈において、用語「
作動可能に連結した」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写お
よび翻訳を調節するそれらの意図した機能を発揮するように、抗体遺伝子がベクターにラ
イゲートされることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、
使用される発現宿主細胞に適合するように選ばれる。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝
子は、別個のベクターに挿入されていてもよいし、またはより典型的には、両方の遺伝子
が同じ発現ベクターに挿入される。
的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配
列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。この文脈において、用語「
作動可能に連結した」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写お
よび翻訳を調節するそれらの意図した機能を発揮するように、抗体遺伝子がベクターにラ
イゲートされることを意味することが意図される。発現ベクターおよび発現制御配列は、
使用される発現宿主細胞に適合するように選ばれる。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝
子は、別個のベクターに挿入されていてもよいし、またはより典型的には、両方の遺伝子
が同じ発現ベクターに挿入される。
【0261】
抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクター上の相
補的制限部位ライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端のライゲーシ
ョン）によって発現ベクターに挿入される。抗グリコＭＵＣ１抗体関連の軽鎖または重鎖
配列の挿入の前に、発現ベクターは、すでに抗体定常領域配列を有していてもよい。例え
ば、抗グリコＭＵＣ１モノクローナル抗体関連のＶＨおよびＶＬ配列を全長抗体遺伝子に
変換するための１つのアプローチは、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作
動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結され
るように、重鎖定常および軽鎖定常領域をそれぞれ予めコードする発現ベクターにそれら
を挿入することである。加えて、または代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞か
らの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードしていてもよい。抗体鎖遺伝子
は、シグナルペプチドがフレーム内で抗体鎖遺伝子のアミノ末端に連結されるように、ベ
クターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンのシグナ
ルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来の
シグナルペプチド）であってもよい。
補的制限部位ライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端のライゲーシ
ョン）によって発現ベクターに挿入される。抗グリコＭＵＣ１抗体関連の軽鎖または重鎖
配列の挿入の前に、発現ベクターは、すでに抗体定常領域配列を有していてもよい。例え
ば、抗グリコＭＵＣ１モノクローナル抗体関連のＶＨおよびＶＬ配列を全長抗体遺伝子に
変換するための１つのアプローチは、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作
動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結され
るように、重鎖定常および軽鎖定常領域をそれぞれ予めコードする発現ベクターにそれら
を挿入することである。加えて、または代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞か
らの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードしていてもよい。抗体鎖遺伝子
は、シグナルペプチドがフレーム内で抗体鎖遺伝子のアミノ末端に連結されるように、ベ
クターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンのシグナ
ルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来の
シグナルペプチド）であってもよい。
【0262】
抗体鎖遺伝子に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中で抗体鎖遺伝子の
発現を制御する調節配列を有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、
および抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリ
アデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Goedde
l, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Di
ego, Calif., 1990に記載されている。当業者であれば、調節配列の選択を含む発現ベク
ターの設計は、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現のレベ
ルなどのような要因によって決まる可能性があることを理解していると予想される。哺乳
類宿主細胞発現に好適な調節配列としては、哺乳類細胞における高レベルのタンパク質発
現を指示するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロ
モーターおよび／またはエンハンサー（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シ
ミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例え
ばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス由来のプロモーターおよび／
またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、
ならびにポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが挙げられる。ウイ
ルス調節エレメントおよびその配列のさらなる説明に関して、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉに
よる米国特許第５，１６８，０６２号明細書、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，
２４５号明細書、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号明
細書を参照されたい。
発現を制御する調節配列を有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、
および抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリ
アデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Goedde
l, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Di
ego, Calif., 1990に記載されている。当業者であれば、調節配列の選択を含む発現ベク
ターの設計は、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現のレベ
ルなどのような要因によって決まる可能性があることを理解していると予想される。哺乳
類宿主細胞発現に好適な調節配列としては、哺乳類細胞における高レベルのタンパク質発
現を指示するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロ
モーターおよび／またはエンハンサー（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シ
ミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例え
ばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス由来のプロモーターおよび／
またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、
ならびにポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが挙げられる。ウイ
ルス調節エレメントおよびその配列のさらなる説明に関して、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉに
よる米国特許第５，１６８，０６２号明細書、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，
２４５号明細書、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号明
細書を参照されたい。
【0263】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞中で
のベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能マーカー遺伝子な
どの追加の配列を有していてもよい。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された
宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらによる、米国特許第４，３９９，
２１６号明細書、第４，６３４，６６５号明細書および第５，１７９，０１７号明細書を
参照）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシン
またはメトトレキセートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に付
与する。好適な選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ
）遺伝子（ＤＨＦＲ－宿主細胞でメトトレキセート選択／増幅と共に使用するため）およ
びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。軽鎖および重鎖の発現のために、
重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって宿主細胞にトランス
フェクトされる。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、例えば、エレクトロポ
レーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントラン
スフェクションなどの、原核または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的
に使用される様々な技術を包含することが意図される。
のベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能マーカー遺伝子な
どの追加の配列を有していてもよい。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された
宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらによる、米国特許第４，３９９，
２１６号明細書、第４，６３４，６６５号明細書および第５，１７９，０１７号明細書を
参照）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシン
またはメトトレキセートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に付
与する。好適な選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ
）遺伝子（ＤＨＦＲ－宿主細胞でメトトレキセート選択／増幅と共に使用するため）およ
びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。軽鎖および重鎖の発現のために、
重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって宿主細胞にトランス
フェクトされる。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、例えば、エレクトロポ
レーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントラン
スフェクションなどの、原核または真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的
に使用される様々な技術を包含することが意図される。
【0264】
原核または真核宿主細胞のいずれかで本開示の抗体を発現することが考えられる。特定
の実施形態において、抗体の発現、または適切にフォールディングされ免疫学的に活性な
抗体の最適な分泌は、真核細胞、例えば、哺乳類宿主細胞で実行される。本開示の組換え
抗体を発現するための例示的な哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（
ＣＨＯ細胞）（例えば、Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:421
6-4220に記載されるＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞などであり、これは、例えば、Kaufman and Sh
arp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共
に使用される）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺
伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主
細胞中での抗体の発現または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能にするの
に十分な期間にわたり、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的な
タンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞も、無傷抗
体の一部、例えばＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子を産生するために使用すること
ができる。上記の手順のバリエーションは本発明の開示の範囲内であることが理解される
。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（ただし両方では
ない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある
。
の実施形態において、抗体の発現、または適切にフォールディングされ免疫学的に活性な
抗体の最適な分泌は、真核細胞、例えば、哺乳類宿主細胞で実行される。本開示の組換え
抗体を発現するための例示的な哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（
ＣＨＯ細胞）（例えば、Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:421
6-4220に記載されるＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞などであり、これは、例えば、Kaufman and Sh
arp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共
に使用される）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺
伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主
細胞中での抗体の発現または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能にするの
に十分な期間にわたり、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的な
タンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞も、無傷抗
体の一部、例えばＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子を産生するために使用すること
ができる。上記の手順のバリエーションは本発明の開示の範囲内であることが理解される
。例えば、本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体の軽鎖または重鎖のいずれか（ただし両方では
ない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある
。
【0265】
本開示のＣＡＲの発現に関して、例えばセクション５．４として、さらに実施形態９７
および９８に記載される通り、好ましくは、宿主細胞はＴ細胞であり、好ましくはヒトＴ
細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、細胞が腫瘍細胞上のＭＵＣ１と架橋
されると、抗腫瘍免疫を示す。本開示のＴ細胞を産生するための詳細な方法は、セクショ
ン５．５．１に記載されている。
および９８に記載される通り、好ましくは、宿主細胞はＴ細胞であり、好ましくはヒトＴ
細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、細胞が腫瘍細胞上のＭＵＣ１と架橋
されると、抗腫瘍免疫を示す。本開示のＴ細胞を産生するための詳細な方法は、セクショ
ン５．５．１に記載されている。
【0266】
組換えＤＮＡ技術はまた、グリコＭＵＣ１への結合に必ずしも必要ではない軽鎖および
重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用する
こともできる。このような短縮化されたＤＮＡ分子から発現される分子も、本開示の抗体
に包含される。
重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全部を除去するのに使用する
こともできる。このような短縮化されたＤＮＡ分子から発現される分子も、本開示の抗体
に包含される。
【0267】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体の組換え発現のために、宿主細胞は、２つの本開示の発
現ベクター、すなわち、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖
由来のポリペプチドをコードする第２のベクターをコトランスフェクトされてもよい。２
つのベクターは、同一な選択可能マーカーを含有していてもよく、またはそれらは、それ
ぞれ別の選択可能マーカーを含有していてもよい。代替として、両方の重鎖および軽鎖ポ
リペプチドをコードする単一のベクターを使用してもよい。
現ベクター、すなわち、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖
由来のポリペプチドをコードする第２のベクターをコトランスフェクトされてもよい。２
つのベクターは、同一な選択可能マーカーを含有していてもよく、またはそれらは、それ
ぞれ別の選択可能マーカーを含有していてもよい。代替として、両方の重鎖および軽鎖ポ
リペプチドをコードする単一のベクターを使用してもよい。
【0268】
核酸が抗グリコＭＵＣ１抗体の１つまたは複数の部分をコードするようになれば、例え
ば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体、Ｆｃ受容体への親和性が低減した抗体、または異な
るサブクラスの抗体をコードする核酸を生成するように、さらなる変更または突然変異を
コード配列に導入することができる。
ば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体、Ｆｃ受容体への親和性が低減した抗体、または異な
るサブクラスの抗体をコードする核酸を生成するように、さらなる変更または突然変異を
コード配列に導入することができる。
【0269】
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体はまた、化学合成によって（例えば、Solid Phase Pept
ide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載される
方法によって）産生することもできる。バリアント抗体も、無細胞プラットフォームを使
用して生成することができる（例えば、Chu et al., Biochemia No.2, 2001 (Roche Mole
cular Biologicals)およびMurray et al., 2013, Current Opinion in Chemical Biology
, 17:420-426を参照）。
ide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載される
方法によって）産生することもできる。バリアント抗体も、無細胞プラットフォームを使
用して生成することができる（例えば、Chu et al., Biochemia No.2, 2001 (Roche Mole
cular Biologicals)およびMurray et al., 2013, Current Opinion in Chemical Biology
, 17:420-426を参照）。
【0270】
組換え発現によって本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体が産生されたら、免疫グロブリン分
子の精製に関する当業界において公知のあらゆる方法によって、例えば、クロマトグラフ
ィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠
心分離、分別溶解によって、または他のあらゆる標準的なタンパク質精製技術によってこ
れを精製することができる。さらに、本発明の開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／また
は結合フラグメントは、精製を容易にするために、本明細書に記載される、またはそれ以
外の当業界において公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
子の精製に関する当業界において公知のあらゆる方法によって、例えば、クロマトグラフ
ィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠
心分離、分別溶解によって、または他のあらゆる標準的なタンパク質精製技術によってこ
れを精製することができる。さらに、本発明の開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／また
は結合フラグメントは、精製を容易にするために、本明細書に記載される、またはそれ以
外の当業界において公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
【0271】
抗グリコＭＵＣ１抗体は、単離されたら、必要に応じて、例えば高速液体クロマトグラ
フィーによって（Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biol
ogy, Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980を参照）、またはＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標
）７５カラム（Pharmacia Biotech AB、Uppsala、Sweden）でのゲルろ過クロマトグラフ
ィーによってさらに精製してもよい。
フィーによって（Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biol
ogy, Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980を参照）、またはＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標
）７５カラム（Pharmacia Biotech AB、Uppsala、Sweden）でのゲルろ過クロマトグラフ
ィーによってさらに精製してもよい。
【0272】
５．５．１．Ｔ細胞におけるＣＡＲの組換え産生
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＣＡＲをコードする核酸は、レ
トロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現
するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入された細胞を
使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のベクターの無細胞の局所また
は全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送
達することができる。使用される方法は、安定な発現が必要であるかまたは十分なあらゆ
る目的のための方法であり得る。
一部の実施形態において、本開示の抗グリコＭＵＣ１ ＣＡＲをコードする核酸は、レ
トロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現
するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入された細胞を
使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のベクターの無細胞の局所また
は全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織および生物全体にも送
達することができる。使用される方法は、安定な発現が必要であるかまたは十分なあらゆ
る目的のための方法であり得る。
【0273】
他の実施形態において、ＣＡＲ配列は、インビトロで転写されたｍＲＮＡを使用して細
胞に送達される。インビトロで転写されたｍＲＮＡ ＣＡＲは、担体としてトランスフェ
クトされた細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のｍＲＮＡの
無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織およ
び生物全体にも送達することができる。使用される方法は、一過性発現が必要であるかま
たは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
胞に送達される。インビトロで転写されたｍＲＮＡ ＣＡＲは、担体としてトランスフェ
クトされた細胞を使用して、またはカプセル化された、結合した、または裸のｍＲＮＡの
無細胞の局所または全身送達を使用して、異なるタイプの真核細胞に、さらには組織およ
び生物全体にも送達することができる。使用される方法は、一過性発現が必要であるかま
たは十分なあらゆる目的のための方法であり得る。
【0274】
別の実施形態において、望ましいＣＡＲは、トランスポゾンによって細胞中で発現させ
ることができる。
ることができる。
【0275】
本開示のＲＮＡトランスフェクション方法の１つの利点は、ＲＮＡトランスフェクショ
ンは、本質的に一過性であり、ベクターを含まないことであり、すなわちＲＮＡ導入遺伝
子は、リンパ球に送達され、短時間のインビトロにおける細胞活性化の後、いかなる追加
のウイルス配列も必要とせずに、最小限の発現カセットとしてそこで発現される。これら
の条件下で、宿主細胞ゲノムへの導入遺伝子の組込みが起こる可能性は低い。細胞のクロ
ーニングは、必ずしもＲＮＡのトランスフェクション効率やリンパ球集団全体を均一に改
変するその能力によるわけではない。
ンは、本質的に一過性であり、ベクターを含まないことであり、すなわちＲＮＡ導入遺伝
子は、リンパ球に送達され、短時間のインビトロにおける細胞活性化の後、いかなる追加
のウイルス配列も必要とせずに、最小限の発現カセットとしてそこで発現される。これら
の条件下で、宿主細胞ゲノムへの導入遺伝子の組込みが起こる可能性は低い。細胞のクロ
ーニングは、必ずしもＲＮＡのトランスフェクション効率やリンパ球集団全体を均一に改
変するその能力によるわけではない。
【0276】
インビトロで転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ－ＲＮＡ）でのＴ細胞の遺伝学的改変は、両方
とも様々な動物モデルで継続的に試験されている２つの異なる戦略を利用する。細胞に、
リポフェクションまたはエレクトロポレーションによって、インビトロで転写されたＲＮ
Ａをトランスフェクトする。好ましくは、移入されたＩＶＴ－ＲＮＡの持続的な発現を達
成するために、様々な改変を使用してＩＶＴ－ＲＮＡを安定化させることが望ましい。
とも様々な動物モデルで継続的に試験されている２つの異なる戦略を利用する。細胞に、
リポフェクションまたはエレクトロポレーションによって、インビトロで転写されたＲＮ
Ａをトランスフェクトする。好ましくは、移入されたＩＶＴ－ＲＮＡの持続的な発現を達
成するために、様々な改変を使用してＩＶＴ－ＲＮＡを安定化させることが望ましい。
【0277】
一部のＩＶＴベクターが、インビトロでの転写のためのテンプレートとして標準化され
た方式で利用されており、安定化されたＲＮＡ転写物が産生されるように遺伝子改変され
ていることが文献公知である。現在のところ、当業界で使用されるプロトコールは、以下
の構造：ＲＮＡ転写を可能にする５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、それに続き３’
および／または５’のいずれかで非翻訳領域（ＵＴＲ）に隣接する目的の遺伝子、および
５０～７０個のＡヌクレオチドを含有する３’ポリアデニルカセットを有するプラスミド
ベクターに基づく。インビトロでの転写の前に、環状プラスミドを、ポリアデニルカセッ
トの下流でＩＩ型制限酵素（認識配列は切断部位に対応する）によって線形化する。した
がってポリアデニルカセットは、転写物中の後期ポリ（Ａ）配列に対応する。この手順の
結果として、一部のヌクレオチドは、線形化後に酵素切断部位の一部として残り、３’末
端におけるポリ（Ａ）配列を伸長させるかまたはマスキングする。この非生理学的なオー
バーハングが、このようなコンストラクトから細胞内で産生されたタンパク質の量に影響
を与えるかどうかは不明確である。
た方式で利用されており、安定化されたＲＮＡ転写物が産生されるように遺伝子改変され
ていることが文献公知である。現在のところ、当業界で使用されるプロトコールは、以下
の構造：ＲＮＡ転写を可能にする５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、それに続き３’
および／または５’のいずれかで非翻訳領域（ＵＴＲ）に隣接する目的の遺伝子、および
５０～７０個のＡヌクレオチドを含有する３’ポリアデニルカセットを有するプラスミド
ベクターに基づく。インビトロでの転写の前に、環状プラスミドを、ポリアデニルカセッ
トの下流でＩＩ型制限酵素（認識配列は切断部位に対応する）によって線形化する。した
がってポリアデニルカセットは、転写物中の後期ポリ（Ａ）配列に対応する。この手順の
結果として、一部のヌクレオチドは、線形化後に酵素切断部位の一部として残り、３’末
端におけるポリ（Ａ）配列を伸長させるかまたはマスキングする。この非生理学的なオー
バーハングが、このようなコンストラクトから細胞内で産生されたタンパク質の量に影響
を与えるかどうかは不明確である。
【0278】
ＲＮＡは、より伝統的なプラスミドまたはウイルスアプローチを超える数々の利点を有
する。ＲＮＡ源からの遺伝子発現は、転写を必要とせず、タンパク質生成物は、トランス
フェクションのすぐ後に産生される。さらに、ＲＮＡは、核ではなく細胞質に侵入するだ
けでよいため、典型的なトランスフェクション方法は、極めて高いトランスフェクション
率をもたらす。加えて、プラスミドベースアプローチは、研究中の細胞中で目的の遺伝子
の発現を駆動させるプロモーターを活性にすることを必要とする。
する。ＲＮＡ源からの遺伝子発現は、転写を必要とせず、タンパク質生成物は、トランス
フェクションのすぐ後に産生される。さらに、ＲＮＡは、核ではなく細胞質に侵入するだ
けでよいため、典型的なトランスフェクション方法は、極めて高いトランスフェクション
率をもたらす。加えて、プラスミドベースアプローチは、研究中の細胞中で目的の遺伝子
の発現を駆動させるプロモーターを活性にすることを必要とする。
【0279】
別の態様において、ＲＮＡコンストラクトは、エレクトロポレーションによって細胞に
送達することができる。例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４６４５号明細書
、米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号明細書、米国特許出願公開第２００５
／００７０８４１号明細書、米国特許出願公開第２００４／００５９２８５号明細書、米
国特許出願公開第２００４／００９２９０７号明細書で教示されるような、哺乳類細胞へ
の核酸コンストラクトのエレクトロポレーションの配合物および手法を参照されたい。あ
らゆる公知の細胞型のエレクトロポレーションに必要な電場強度などの様々なパラメータ
ーは、一般的に、この分野の関連する研究文献に加えて多数の特許および出願において公
知である。例えば、米国特許第６，６７８，５５６号明細書、米国特許第７，１７１，２
６４号明細書、および米国特許第７，１７３，１１６号明細書を参照されたい。エレクト
ロポレーションの治療適用のための装置、例えば、ＭｅｄＰｕｌｓｅｒ（商標）ＤＮＡエ
レクトロポレーション治療システム（Ｉｎｏｖｉｏ／Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）が商業的に利用可能であり、米国特許第６，５６７，６９４
号明細書；米国特許第６，５１６，２２３号明細書、米国特許第５，９９３，４３４号明
細書、米国特許第６，１８１，９６４号明細書、米国特許第６，２４１，７０１号明細書
、および米国特許第６，２３３，４８２号明細書などの特許に記載されており、エレクト
ロポレーションは、例えば米国特許出願公開第２００７０１２８７０８号明細書で記載さ
れるように、インビトロでの細胞のトランスフェクションのためにも使用することができ
る。またエレクトロポレーションは、インビトロで核酸を細胞に送達することにも利用す
ることができる。したがって、当業者公知の多くの利用可能なデバイスおよびエレクトロ
ポレーションシステムのいずれかを利用する、発現コンストラクトを含む核酸の細胞への
エレクトロポレーション媒介投与は、標的細胞に目的のＲＮＡを送達するためのエキサイ
ティングな新しい手段を提供する。
送達することができる。例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４６４５号明細書
、米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号明細書、米国特許出願公開第２００５
／００７０８４１号明細書、米国特許出願公開第２００４／００５９２８５号明細書、米
国特許出願公開第２００４／００９２９０７号明細書で教示されるような、哺乳類細胞へ
の核酸コンストラクトのエレクトロポレーションの配合物および手法を参照されたい。あ
らゆる公知の細胞型のエレクトロポレーションに必要な電場強度などの様々なパラメータ
ーは、一般的に、この分野の関連する研究文献に加えて多数の特許および出願において公
知である。例えば、米国特許第６，６７８，５５６号明細書、米国特許第７，１７１，２
６４号明細書、および米国特許第７，１７３，１１６号明細書を参照されたい。エレクト
ロポレーションの治療適用のための装置、例えば、ＭｅｄＰｕｌｓｅｒ（商標）ＤＮＡエ
レクトロポレーション治療システム（Ｉｎｏｖｉｏ／Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）が商業的に利用可能であり、米国特許第６，５６７，６９４
号明細書；米国特許第６，５１６，２２３号明細書、米国特許第５，９９３，４３４号明
細書、米国特許第６，１８１，９６４号明細書、米国特許第６，２４１，７０１号明細書
、および米国特許第６，２３３，４８２号明細書などの特許に記載されており、エレクト
ロポレーションは、例えば米国特許出願公開第２００７０１２８７０８号明細書で記載さ
れるように、インビトロでの細胞のトランスフェクションのためにも使用することができ
る。またエレクトロポレーションは、インビトロで核酸を細胞に送達することにも利用す
ることができる。したがって、当業者公知の多くの利用可能なデバイスおよびエレクトロ
ポレーションシステムのいずれかを利用する、発現コンストラクトを含む核酸の細胞への
エレクトロポレーション媒介投与は、標的細胞に目的のＲＮＡを送達するためのエキサイ
ティングな新しい手段を提供する。
【0280】
５．５．１．１ Ｔ細胞源
Ｔ細胞源は、増加させ遺伝学的に改変する前に、対象から得られる。用語「対象」は、
免疫応答を惹起できる生物（例えば、哺乳動物）を含むことが意図される。対象の例とし
ては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げ
られる。好ましくは、対象は、ヒトである。
Ｔ細胞源は、増加させ遺伝学的に改変する前に、対象から得られる。用語「対象」は、
免疫応答を惹起できる生物（例えば、哺乳動物）を含むことが意図される。対象の例とし
ては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げ
られる。好ましくは、対象は、ヒトである。
【0281】
Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の
組織、腹水、胸膜滲出液、脾臓組織、および腫瘍などの多数の源から得ることができる。
本発明の開示の特定の実施形態において、当業界において入手可能な様々なＴ細胞株を使
用することができる。本発明の開示の特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ
（商標）分離などの当業者公知の様々な技術を使用して対象から収集された血液単位から
得ることができる。好ましい一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェ
レーシスにより得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球
、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施
形態において、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、
それに続く処理工程のために、細胞を適切な緩衝液または媒体中に入れることができる。
本開示の一実施形態において、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替
の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていて
もよく、または部分的であっても多くの２価カチオンを欠いていてもよい。ここでも、驚
くべきことに、カルシウムの非存在下における最初の活性化工程は、一層の活性化をもた
らす。当業者であれば容易に理解していると予想されるように、洗浄工程は、当業者公知
の方法によって、例えば、製造元の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（
例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、また
はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによって達成し
てもよい。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性の緩衝液、例えば、Ｃａ非含有、Ｍｇ非含
有ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液含有もしくは非含有の他の塩類溶液
などに再懸濁してもよい。代替として、アフェレーシスサンプルの不要な成分を除去して
、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
組織、腹水、胸膜滲出液、脾臓組織、および腫瘍などの多数の源から得ることができる。
本発明の開示の特定の実施形態において、当業界において入手可能な様々なＴ細胞株を使
用することができる。本発明の開示の特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ
（商標）分離などの当業者公知の様々な技術を使用して対象から収集された血液単位から
得ることができる。好ましい一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェ
レーシスにより得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球
、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施
形態において、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、
それに続く処理工程のために、細胞を適切な緩衝液または媒体中に入れることができる。
本開示の一実施形態において、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替
の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていて
もよく、または部分的であっても多くの２価カチオンを欠いていてもよい。ここでも、驚
くべきことに、カルシウムの非存在下における最初の活性化工程は、一層の活性化をもた
らす。当業者であれば容易に理解していると予想されるように、洗浄工程は、当業者公知
の方法によって、例えば、製造元の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（
例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、また
はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによって達成し
てもよい。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性の緩衝液、例えば、Ｃａ非含有、Ｍｇ非含
有ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液含有もしくは非含有の他の塩類溶液
などに再懸濁してもよい。代替として、アフェレーシスサンプルの不要な成分を除去して
、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
【0282】
別の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）
勾配による遠心分離または対向流遠心溶出法により単球を枯渇させることによって末梢血
リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の部分集団、例えばＣＤ３＋、ＣＤ２８’、ＣＤ
４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技
術によってさらに単離することができる。例えば、一実施形態において、Ｔ細胞は、抗Ｃ
Ｄ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８個の）コンジュゲートビーズ、例えばＤＹＮＡＢ
ＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔと、望ましいＴ細胞の陽性選択に
十分な期間にわたりインキュベートすることによって単離される。一実施形態において、
期間は、約３０分である。さらなる実施形態において、期間は、３０分から、３６時間ま
たはそれより長い時間の範囲、その間の全ての整数値の範囲である。さらなる実施形態に
おいて、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ま
しい実施形態において、期間は、１０から２４時間である。好ましい一実施形態において
、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離
の場合、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用は、細胞収量を上昇さ
せることができる。より長いインキュベーション時間は、腫瘍組織または免疫不全個体か
ら腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比較してＴ細胞が
極めて少ないあらゆる状況でＴ細胞を単離するのに使用することができる。さらに、より
長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を増加させることがで
きる。したがって、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を短くするま
たは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加または減
少させることによって（本明細書でさらに記載される通り）、培養開始のときに、または
プロセス中の他のタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわ
らず優先的に選択することができる。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および
／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、培養開始のときに
、または他の望ましいタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにか
かわらず優先的に選択することができる。当業者であれば、本開示の状況において複数回
の選択も使用できることを認識しているものと予想される。特定の実施形態において、選
択手順を実行し、活性化および増加プロセスで「選択されなかった」細胞を使用すること
が望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞はまた、さらなる回数の選択に供する
こともできる。
勾配による遠心分離または対向流遠心溶出法により単球を枯渇させることによって末梢血
リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の部分集団、例えばＣＤ３＋、ＣＤ２８’、ＣＤ
４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技
術によってさらに単離することができる。例えば、一実施形態において、Ｔ細胞は、抗Ｃ
Ｄ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８個の）コンジュゲートビーズ、例えばＤＹＮＡＢ
ＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔと、望ましいＴ細胞の陽性選択に
十分な期間にわたりインキュベートすることによって単離される。一実施形態において、
期間は、約３０分である。さらなる実施形態において、期間は、３０分から、３６時間ま
たはそれより長い時間の範囲、その間の全ての整数値の範囲である。さらなる実施形態に
おいて、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ま
しい実施形態において、期間は、１０から２４時間である。好ましい一実施形態において
、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離
の場合、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用は、細胞収量を上昇さ
せることができる。より長いインキュベーション時間は、腫瘍組織または免疫不全個体か
ら腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比較してＴ細胞が
極めて少ないあらゆる状況でＴ細胞を単離するのに使用することができる。さらに、より
長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を増加させることがで
きる。したがって、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を短くするま
たは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加または減
少させることによって（本明細書でさらに記載される通り）、培養開始のときに、または
プロセス中の他のタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにかかわ
らず優先的に選択することができる。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および
／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、培養開始のときに
、または他の望ましいタイムポイントで、Ｔ細胞の部分集団を、存在するかしないかにか
かわらず優先的に選択することができる。当業者であれば、本開示の状況において複数回
の選択も使用できることを認識しているものと予想される。特定の実施形態において、選
択手順を実行し、活性化および増加プロセスで「選択されなかった」細胞を使用すること
が望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞はまた、さらなる回数の選択に供する
こともできる。
【0283】
陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択された細胞に固有な表面マーカーに対す
る抗体を併用して達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に提示さ
れる細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接
着またはフローサイトメトリーを介したセルソーティングおよび／または選択である。例
えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは
、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ
８に対する抗体を含む。特定の実施形態において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、Ｃ
Ｄ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化する、ま
たはそれらを陽性選択することが望ましい場合がある。代替として、特定の実施形態にお
いて、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法によっ
て、枯渇される。
る抗体を併用して達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に提示さ
れる細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接
着またはフローサイトメトリーを介したセルソーティングおよび／または選択である。例
えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは
、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ
８に対する抗体を含む。特定の実施形態において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、Ｃ
Ｄ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化する、ま
たはそれらを陽性選択することが望ましい場合がある。代替として、特定の実施形態にお
いて、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法によっ
て、枯渇される。
【0284】
陽性または陰性選択による望ましい細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば
、ビーズなどの粒子）の濃度は、様々であってもよい。特定の実施形態において、ビーズ
および細胞を一緒に混合する体積を顕著に減少させ（すなわち、細胞の濃度を増加させる
）、細胞およびビーズの最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一
実施形態において、１ｍｌ当たり細胞２０億個の濃度が使用される。一実施形態において
、１ｍｌ当たり細胞１０億個の濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当
たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１
０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万
、４５００万、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態におい
て、１ｍｌ当たり細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、
または１億個からの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細
胞１億２５００万または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、
細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高
い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰
性Ｔ細胞のより効率的な捕捉、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白
血病の血液、腫瘍組織など）からの捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価
値を有する可能性があり、入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は
、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
、ビーズなどの粒子）の濃度は、様々であってもよい。特定の実施形態において、ビーズ
および細胞を一緒に混合する体積を顕著に減少させ（すなわち、細胞の濃度を増加させる
）、細胞およびビーズの最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば、一
実施形態において、１ｍｌ当たり細胞２０億個の濃度が使用される。一実施形態において
、１ｍｌ当たり細胞１０億個の濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当
たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１
０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万
、４５００万、または５０００万個の細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態におい
て、１ｍｌ当たり細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、
または１億個からの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細
胞１億２５００万または１億５０００万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、
細胞収量の上昇、細胞の活性化、および細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高
い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰
性Ｔ細胞のより効率的な捕捉、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白
血病の血液、腫瘍組織など）からの捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療的価
値を有する可能性があり、入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は
、通常ＣＤ２８発現が比較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【0285】
関連する実施形態において、より低い細胞濃度を使用することが望ましい場合がある。
Ｔ細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を顕著に希釈することによって
、粒子と細胞との間の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合させようとする望ま
しい抗原を大量に発現する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、より高いレベル
のＣＤ２８を発現し、希薄な濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。一実施形態
において、使用される細胞濃度は、５×１０６／ｍｌである。他の実施形態において、使
用される濃度は、約１×１０５／ｍｌから１×１０６／ｍｌ、およびその間のあらゆる整
数値の範囲であってもよい。
Ｔ細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を顕著に希釈することによって
、粒子と細胞との間の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合させようとする望ま
しい抗原を大量に発現する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、より高いレベル
のＣＤ２８を発現し、希薄な濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。一実施形態
において、使用される細胞濃度は、５×１０６／ｍｌである。他の実施形態において、使
用される濃度は、約１×１０５／ｍｌから１×１０６／ｍｌ、およびその間のあらゆる整
数値の範囲であってもよい。
【0286】
他の実施形態において、細胞は、回転器において、様々な長さの時間にわたり、様々な
速度で、２℃～１０℃または室温のいずれかでインキュベートしてもよい。
速度で、２℃～１０℃または室温のいずれかでインキュベートしてもよい。
【0287】
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後に凍結してもよい。理論に縛られるつもりはな
いが、凍結およびそれに続く融解工程は、細胞集団中の顆粒球やある程度の単球を除去す
ることによって、より均質な生成物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄工程後
に、細胞を凍結溶液中に懸濁してもよい。多くの凍結溶液およびパラメーターが当業界に
おいて公知であり、この状況において有用であると予想されるが、１つの方法は、２０％
ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％デキストラン４
０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、もし
くは３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４
５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アル
ブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含有する培養培地、または例えばＨｅｓｐａｎおよび
ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを含み、次
いで細胞は、１°／分の速度で－８０℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵
される。他の制御冷凍方法も、－２０℃で即座の、または液体窒素中の制御されていない
冷凍と同様に使用することができる。
いが、凍結およびそれに続く融解工程は、細胞集団中の顆粒球やある程度の単球を除去す
ることによって、より均質な生成物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄工程後
に、細胞を凍結溶液中に懸濁してもよい。多くの凍結溶液およびパラメーターが当業界に
おいて公知であり、この状況において有用であると予想されるが、１つの方法は、２０％
ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％デキストラン４
０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、もし
くは３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４
５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アル
ブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含有する培養培地、または例えばＨｅｓｐａｎおよび
ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを含み、次
いで細胞は、１°／分の速度で－８０℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵
される。他の制御冷凍方法も、－２０℃で即座の、または液体窒素中の制御されていない
冷凍と同様に使用することができる。
【0288】
特定の実施形態において、本発明の開示の方法を使用して活性化する前に、低温保存さ
れた細胞を融解し、本明細書に記載される通り洗浄し、室温で１時間そのまま静置する。
れた細胞を融解し、本明細書に記載される通り洗浄し、室温で１時間そのまま静置する。
【0289】
また、本明細書に記載される増加した細胞が必要と思われるときの前の期間に、対象か
ら血液サンプルまたはアフェレーシス生成物を収集することも本開示の状況において予期
される。したがって、増加させようとする細胞の源は、必要なあらゆるタイムポイントで
収集でき、望ましい細胞、例えばＴ細胞を、Ｔ細胞療法によって利益を得ると予想される
様々な疾患または状態、例えば本明細書に記載される疾患または状態のためのＴ細胞療法
での後の使用のために単離および凍結することができる。一実施形態において、血液サン
プルまたはアフェレーシスは、全体的に健康な対象から採取される。特定の実施形態にお
いて、血液サンプルまたはアフェレーシスは、疾患を発症させるリスクがあるが疾患をま
だ発症させていない全体的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために
単離および凍結される。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、その後の時間で増加する、
凍結する、および使用することが可能である。特定の実施形態において、サンプルは、本
明細書に記載される特定の疾患の診断の直後に、ただしいずれかの処置の前に、患者から
収集される。さらなる実施形態において、様々な関連する処置法、例えば、これらに限定
されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、免疫
抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸
塩、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３
抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフ
ェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、および放射線照射などの薬剤での処置の前
に、細胞は、対象からの血液サンプルまたはアフェレーシスから単離される。これらの薬
物は、カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリンを阻害するか（シクロス
ポリンおよびＦＫ５０６）、または増殖因子によって誘導されたシグナル伝達にとって重
要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害するか（ラパマイシン）のいずれかである。（Liu et al.
, Cell 66:807-815, 1991；Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991；Bierer et al
., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993）。さらなる実施形態において、細胞は、化学
療法剤、例えばフルダラビン、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドのいずれか
を使用する骨髄もしくは幹細胞移植またはＴ細胞除去療法を併用する（例えば、その前の
、それと同時の、またはその後の）後の使用のために、患者ごとに単離され、凍結される
。
ら血液サンプルまたはアフェレーシス生成物を収集することも本開示の状況において予期
される。したがって、増加させようとする細胞の源は、必要なあらゆるタイムポイントで
収集でき、望ましい細胞、例えばＴ細胞を、Ｔ細胞療法によって利益を得ると予想される
様々な疾患または状態、例えば本明細書に記載される疾患または状態のためのＴ細胞療法
での後の使用のために単離および凍結することができる。一実施形態において、血液サン
プルまたはアフェレーシスは、全体的に健康な対象から採取される。特定の実施形態にお
いて、血液サンプルまたはアフェレーシスは、疾患を発症させるリスクがあるが疾患をま
だ発症させていない全体的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために
単離および凍結される。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、その後の時間で増加する、
凍結する、および使用することが可能である。特定の実施形態において、サンプルは、本
明細書に記載される特定の疾患の診断の直後に、ただしいずれかの処置の前に、患者から
収集される。さらなる実施形態において、様々な関連する処置法、例えば、これらに限定
されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、免疫
抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸
塩、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３
抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフ
ェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、および放射線照射などの薬剤での処置の前
に、細胞は、対象からの血液サンプルまたはアフェレーシスから単離される。これらの薬
物は、カルシウム依存性ホスファターゼであるカルシニューリンを阻害するか（シクロス
ポリンおよびＦＫ５０６）、または増殖因子によって誘導されたシグナル伝達にとって重
要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害するか（ラパマイシン）のいずれかである。（Liu et al.
, Cell 66:807-815, 1991；Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991；Bierer et al
., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993）。さらなる実施形態において、細胞は、化学
療法剤、例えばフルダラビン、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドのいずれか
を使用する骨髄もしくは幹細胞移植またはＴ細胞除去療法を併用する（例えば、その前の
、それと同時の、またはその後の）後の使用のために、患者ごとに単離され、凍結される
。
【0290】
本発明の開示のさらなる実施形態において、Ｔ細胞は、処置の直後に患者から得られる
。これに関して、特定のがん処置の後、特に免疫系に損傷を与える薬物での処置の後、患
者が通常処置から回復すると予想される期間中の処置の直後に、得られたＴ細胞の品質は
、そのエクスビボで増加する能力に関して最適であるかまたは改善されている可能性があ
ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用するエクスビボでの
操作の後、これらの細胞は、生着およびインビボでの増加の強化にとって好ましい状況に
ある可能性がある。したがって、本発明の開示の状況において、この回復期間中、Ｔ細胞
、樹状細胞、または他の造血系統の細胞を含む血液細胞を収集することが予期される。さ
らに、特定の実施形態において、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦでの動員）およびコンディ
ショニングレジメンは、特に療法後の既定された時間枠中に特定の細胞型の再定着、再循
環、再生、および／または増加にとって好ましい、対象における状態を生じさせるために
使用することができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および他
の免疫系細胞が挙げられる。
。これに関して、特定のがん処置の後、特に免疫系に損傷を与える薬物での処置の後、患
者が通常処置から回復すると予想される期間中の処置の直後に、得られたＴ細胞の品質は
、そのエクスビボで増加する能力に関して最適であるかまたは改善されている可能性があ
ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用するエクスビボでの
操作の後、これらの細胞は、生着およびインビボでの増加の強化にとって好ましい状況に
ある可能性がある。したがって、本発明の開示の状況において、この回復期間中、Ｔ細胞
、樹状細胞、または他の造血系統の細胞を含む血液細胞を収集することが予期される。さ
らに、特定の実施形態において、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦでの動員）およびコンディ
ショニングレジメンは、特に療法後の既定された時間枠中に特定の細胞型の再定着、再循
環、再生、および／または増加にとって好ましい、対象における状態を生じさせるために
使用することができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および他
の免疫系細胞が挙げられる。
【0291】
５．５．１．２ Ｔ細胞の活性化および増加
Ｔ細胞は、一般的に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；第６，５３４
，０５５号明細書；第６，９０５，６８０号明細書；第６，６９２，９６４号明細書；第
５，８５８，３５８号明細書；第６，８８７，４６６号明細書；第６，９０５，６８１号
明細書；第７，１４４，５７５号明細書；第７，０６７，３１８号明細書；第７，１７２
，８６９号明細書；第７，２３２，５６６号明細書；第７，１７５，８４３号明細書；第
５，８８３，２２３号明細書；第６，９０５，８７４号明細書；第６，７９７，５１４号
明細書；第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許公開公報第２００６０１２１０
０５号明細書に記載されるような方法を使用して活性化および増加される。
Ｔ細胞は、一般的に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；第６，５３４
，０５５号明細書；第６，９０５，６８０号明細書；第６，６９２，９６４号明細書；第
５，８５８，３５８号明細書；第６，８８７，４６６号明細書；第６，９０５，６８１号
明細書；第７，１４４，５７５号明細書；第７，０６７，３１８号明細書；第７，１７２
，８６９号明細書；第７，２３２，５６６号明細書；第７，１７５，８４３号明細書；第
５，８８３，２２３号明細書；第６，９０５，８７４号明細書；第６，７９７，５１４号
明細書；第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許公開公報第２００６０１２１０
０５号明細書に記載されるような方法を使用して活性化および増加される。
【0292】
一般的に、本開示のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およ
びＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが取り付けられた表面と接触させること
によって増加される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合
フラグメント、または表面上に固定された抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、また
はカルシウムイオノフォアと共にプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチ
ン）と接触させることによって、本明細書に記載されるように刺激することができる。Ｔ
細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガン
ドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で
、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞または
ＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体
。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ
、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、一般的に当業界で公知の他の方法と同
様に使用できる（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et a
l., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2
):53-63, 1999）。
びＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが取り付けられた表面と接触させること
によって増加される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合
フラグメント、または表面上に固定された抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、また
はカルシウムイオノフォアと共にプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチ
ン）と接触させることによって、本明細書に記載されるように刺激することができる。Ｔ
細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガン
ドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で
、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞または
ＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体
。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ
、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、一般的に当業界で公知の他の方法と同
様に使用できる（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et a
l., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2
):53-63, 1999）。
【0293】
特定の実施形態において、Ｔ細胞に関する一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、
様々なプロトコールによって提供することができる。例えば、各シグナルを提供する薬剤
は、溶液の形態であってもよいし、または表面にカップリングされていてもよい。表面に
カップリングされる場合、薬剤は、同じ表面に（すなわち、「ｃｉｓ」構成で）または別
の表面に（すなわち、「ｔｒａｎｓ」構成で）カップリングされていてもよい。代替とし
て、一方の薬剤が表面にカップリングされ、他方の薬剤が溶液の形態であってもよい。一
実施形態において、共刺激シグナルを提供する薬剤が、細胞表面に結合しており、一次活
性化シグナルを提供する薬剤が、溶液の形態であるかまたは表面にカップリングされてい
る。特定の実施形態において、両方の薬剤が、溶液の形態であってもよい。別の実施形態
において、薬剤は、可溶性の形態であってもよく、次いで、Ｆｃ受容体を発現する細胞な
どの表面に、または薬剤に結合すると予想される抗体もしくは他の結合剤に架橋されても
よい。これに関して、例えば、本発明の開示においてＴ細胞の活性化および増加での使用
に関して予期される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関して、米国特許出願公開公報第２
００４０１０１５１９号明細書および第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい
。
様々なプロトコールによって提供することができる。例えば、各シグナルを提供する薬剤
は、溶液の形態であってもよいし、または表面にカップリングされていてもよい。表面に
カップリングされる場合、薬剤は、同じ表面に（すなわち、「ｃｉｓ」構成で）または別
の表面に（すなわち、「ｔｒａｎｓ」構成で）カップリングされていてもよい。代替とし
て、一方の薬剤が表面にカップリングされ、他方の薬剤が溶液の形態であってもよい。一
実施形態において、共刺激シグナルを提供する薬剤が、細胞表面に結合しており、一次活
性化シグナルを提供する薬剤が、溶液の形態であるかまたは表面にカップリングされてい
る。特定の実施形態において、両方の薬剤が、溶液の形態であってもよい。別の実施形態
において、薬剤は、可溶性の形態であってもよく、次いで、Ｆｃ受容体を発現する細胞な
どの表面に、または薬剤に結合すると予想される抗体もしくは他の結合剤に架橋されても
よい。これに関して、例えば、本発明の開示においてＴ細胞の活性化および増加での使用
に関して予期される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関して、米国特許出願公開公報第２
００４０１０１５１９号明細書および第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい
。
【0294】
一実施形態において、２つの薬剤は、同じビーズ上、すなわち「ｃｉｓ」、または別の
ビーズ上、すなわち「ｔｒａｎｓ」のいずれかで、ビーズ上に固定される。一例として、
一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントで
あり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメン
トであり、両方の薬剤は、同等の分子の量で同じビーズ共に固定される。一実施形態にお
いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加およびＴ細胞増殖のために、１：１比率のビーズに結合した
各抗体が使用される。本発明の開示の特定の態様において、１：１の比率を使用して観察
された増加と比較してＴ細胞増加における上昇が観察されるような、ビーズに結合した抗
ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率が使用される。１つの特定の実施形態において、１：１の比
率を使用して観察された増加と比較して、約１から約３倍の上昇が観察される。一実施形
態において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１００：１から、１：１
００の範囲、およびその間の全ての整数値の範囲である。本発明の開示の一態様において
、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、すなわち、ＣＤ３：Ｃ
Ｄ２８の比率は、１未満である。本開示の特定の実施形態において、ビーズに結合した抗
ＣＤ２８抗体の抗ＣＤ３抗体に対する比率は、２：１より大きい。１つの特定の実施形態
において、１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
別の実施形態において、１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使
用される。さらなる実施形態において、１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結
合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率の
ビーズに結合した抗体が使用される。好ましい一実施形態において、１：１０のＣＤ３：
ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３の
ＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらに別の実施形態にお
いて、３：１のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
ビーズ上、すなわち「ｔｒａｎｓ」のいずれかで、ビーズ上に固定される。一例として、
一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントで
あり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメン
トであり、両方の薬剤は、同等の分子の量で同じビーズ共に固定される。一実施形態にお
いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加およびＴ細胞増殖のために、１：１比率のビーズに結合した
各抗体が使用される。本発明の開示の特定の態様において、１：１の比率を使用して観察
された増加と比較してＴ細胞増加における上昇が観察されるような、ビーズに結合した抗
ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率が使用される。１つの特定の実施形態において、１：１の比
率を使用して観察された増加と比較して、約１から約３倍の上昇が観察される。一実施形
態において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１００：１から、１：１
００の範囲、およびその間の全ての整数値の範囲である。本発明の開示の一態様において
、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、すなわち、ＣＤ３：Ｃ
Ｄ２８の比率は、１未満である。本開示の特定の実施形態において、ビーズに結合した抗
ＣＤ２８抗体の抗ＣＤ３抗体に対する比率は、２：１より大きい。１つの特定の実施形態
において、１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
別の実施形態において、１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使
用される。さらなる実施形態において、１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結
合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８の比率の
ビーズに結合した抗体が使用される。好ましい一実施形態において、１：１０のＣＤ３：
ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。別の実施形態において、１：３の
ＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。さらに別の実施形態にお
いて、３：１のＣＤ３：ＣＤ２８の比率のビーズに結合した抗体が使用される。
【0295】
１：５００から５００：１、およびその間のあらゆる整数値の粒子の細胞に対する比率
が、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激するのに使用することができる。当業者であれば容
易に理解できるように、粒子の細胞に対する比率は、標的細胞に対する粒度によって決ま
る可能性がある。例えば、小さいサイズのビーズは数個の細胞としか結合できないが、よ
り大きいビーズは多くの細胞と結合できる。特定の実施形態において細胞の粒子に対する
比率は、１：１００から１００：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値であり、さら
なる実施形態において、比率は、１：９から９：１の範囲、およびその間のあらゆる整数
値を含み、これらもＴ細胞を刺激するのに使用することができる。Ｔ細胞刺激が起こる抗
ＣＤ３および抗ＣＤ２８がカップリングした粒子とＴ細胞の比率は、上述したように様々
であってもよいが、特定の好ましい値としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：
３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３
、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１
、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの好ましい比率は、少なくとも１：１の粒
子のＴ細胞に対する比率である。一実施形態において、１：１またはそれより低い粒子の
細胞に対する比率が使用される。１つの特定の実施形態において、好ましい粒子：細胞の
比率は、１：５である。さらなる実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の
日に応じて変更することができる。例えば、一実施形態において、粒子の細胞に対する比
率は、１日目に１：１から１０：１であり、その後、１０日まで、追加の粒子が、１：１
から１：１０の最終的な比率で（添加の日の細胞数に基づく）毎日または１日おきに細胞
に添加される。１つの特定の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日
目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。別の実施形態にお
いて、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激
の３日目および５日目に１：５にする。別の実施形態において、粒子の細胞に対する比率
は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。
別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終
的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：１０にする。当業者は、様々な他の比率が
、本発明の開示で使用するのに適している可能性があることを理解しているものと予想さ
れる。特に、比率は、粒度および細胞のサイズおよびタイプに応じて様々であると予想さ
れる。
が、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激するのに使用することができる。当業者であれば容
易に理解できるように、粒子の細胞に対する比率は、標的細胞に対する粒度によって決ま
る可能性がある。例えば、小さいサイズのビーズは数個の細胞としか結合できないが、よ
り大きいビーズは多くの細胞と結合できる。特定の実施形態において細胞の粒子に対する
比率は、１：１００から１００：１の範囲、およびその間のあらゆる整数値であり、さら
なる実施形態において、比率は、１：９から９：１の範囲、およびその間のあらゆる整数
値を含み、これらもＴ細胞を刺激するのに使用することができる。Ｔ細胞刺激が起こる抗
ＣＤ３および抗ＣＤ２８がカップリングした粒子とＴ細胞の比率は、上述したように様々
であってもよいが、特定の好ましい値としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：
３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３
、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１
、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの好ましい比率は、少なくとも１：１の粒
子のＴ細胞に対する比率である。一実施形態において、１：１またはそれより低い粒子の
細胞に対する比率が使用される。１つの特定の実施形態において、好ましい粒子：細胞の
比率は、１：５である。さらなる実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の
日に応じて変更することができる。例えば、一実施形態において、粒子の細胞に対する比
率は、１日目に１：１から１０：１であり、その後、１０日まで、追加の粒子が、１：１
から１：１０の最終的な比率で（添加の日の細胞数に基づく）毎日または１日おきに細胞
に添加される。１つの特定の実施形態において、粒子の細胞に対する比率は、刺激の１日
目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。別の実施形態にお
いて、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終的な比率に、刺激
の３日目および５日目に１：５にする。別の実施形態において、粒子の細胞に対する比率
は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。
別の実施形態において、粒子は、毎日または１日おきに添加され、１日目に１：１の最終
的な比率に、刺激の３日目および５日目に１：１０にする。当業者は、様々な他の比率が
、本発明の開示で使用するのに適している可能性があることを理解しているものと予想さ
れる。特に、比率は、粒度および細胞のサイズおよびタイプに応じて様々であると予想さ
れる。
【0296】
本発明の開示のさらなる実施形態において、細胞、例えばＴ細胞を、薬剤でコーティン
グされたビーズと合わせ、その後、ビーズおよび細胞を分離し、次いで細胞を培養する。
代替の実施形態において、培養の前に、薬剤でコーティングされたビーズおよび細胞を分
離しないが、一緒に培養する。さらなる実施形態において、まず磁力などの力の適用によ
ってビーズおよび細胞を濃縮し、その結果として細胞表面マーカーのライゲーションを増
加させ、それによって細胞の刺激を誘導する。
グされたビーズと合わせ、その後、ビーズおよび細胞を分離し、次いで細胞を培養する。
代替の実施形態において、培養の前に、薬剤でコーティングされたビーズおよび細胞を分
離しないが、一緒に培養する。さらなる実施形態において、まず磁力などの力の適用によ
ってビーズおよび細胞を濃縮し、その結果として細胞表面マーカーのライゲーションを増
加させ、それによって細胞の刺激を誘導する。
【0297】
一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が取り付けられている
常磁性ビーズ（３×２８個のビーズ）をＴ細胞と接触させることによってライゲートさせ
ることができる。一実施形態において、細胞（例えば、１０４から１０９個のＴ細胞）お
よびビーズ（例えば、１：１の比率のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３
／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズ）を、緩衝液中で、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグ
ネシウムなどの２価カチオンを含まない）中で合わせる。ここでも当業者は、あらゆる細
胞濃度が使用できることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、サンプル
中で非常に希少であってもよいし、サンプルの０．０１％を構成するだけでもよく、また
はサンプル全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞で構成されていてもよい。した
がって、あらゆる細胞数が、本発明の開示の内容に含まれる。特定の実施形態において、
粒子および細胞が一緒に混合される体積を有意に減少させて（すなわち、細胞の濃度を増
加させて）、細胞と粒子との最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば
、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞約２０億個の濃度が使用される。別の実施形態
において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、
１ｍｌ当たり、細胞１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３００
０万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞濃度が
使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞７５００万個、８０００
万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞濃度が使用され
る。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万個または１億５０００
万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、およ
び細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原
の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉を可能に
する。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、特定の実施形態におい
て入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比
較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
常磁性ビーズ（３×２８個のビーズ）をＴ細胞と接触させることによってライゲートさせ
ることができる。一実施形態において、細胞（例えば、１０４から１０９個のＴ細胞）お
よびビーズ（例えば、１：１の比率のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３
／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズ）を、緩衝液中で、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグ
ネシウムなどの２価カチオンを含まない）中で合わせる。ここでも当業者は、あらゆる細
胞濃度が使用できることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、サンプル
中で非常に希少であってもよいし、サンプルの０．０１％を構成するだけでもよく、また
はサンプル全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞で構成されていてもよい。した
がって、あらゆる細胞数が、本発明の開示の内容に含まれる。特定の実施形態において、
粒子および細胞が一緒に混合される体積を有意に減少させて（すなわち、細胞の濃度を増
加させて）、細胞と粒子との最大の接触を確実にすることが望ましい場合がある。例えば
、一実施形態において、１ｍｌ当たり細胞約２０億個の濃度が使用される。別の実施形態
において、１ｍｌ当たり細胞１億個より多くが使用される。さらなる実施形態において、
１ｍｌ当たり、細胞１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３００
０万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞濃度が
使用される。さらに別の実施形態において、１ｍｌ当たり、細胞７５００万個、８０００
万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞濃度が使用され
る。さらなる実施形態において、１ｍｌ当たり細胞１億２５００万個または１億５０００
万個の濃度が使用されてもよい。高濃度の使用は、細胞収量の上昇、細胞の活性化、およ
び細胞の増加をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原
の発現が弱い可能性がある細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞のより効率的な捕捉を可能に
する。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、特定の実施形態におい
て入手が望ましいと予想される。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が比
較的弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【0298】
本発明の開示の一実施形態において、混合物は、数時間（約３時間）から約１４日にわ
たり、またはその間の整数値のいずれかの時間で培養することができる。別の実施形態に
おいて、混合物は、２１日間培養することができる。本開示の一実施形態において、ビー
ズおよびＴ細胞は、約８日間、一緒に培養される。別の実施形態において、ビーズおよび
Ｔ細胞は、２～３日間、一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間を６０日またはそれより長
くできるように、数サイクルの刺激が望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適切な条件とし
ては、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、
インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２
、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ－αなどの増殖および生存に必要な因子、または
当業者公知の細胞増殖のための他のあらゆる添加剤を含有していてもよい適切な培地（例
えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０または、Ｘ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ
））が挙げられる。細胞増殖のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界
面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエ
タノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、
およびビタミンが添加された、無血清か、または適切な量の血清（または血漿）または既
定されたセットのホルモン、および／またはＴ細胞の増殖および増加に十分な量のサイト
カインが補充されたかのいずれかの、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ
、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０、Ｏｐｔｉｍ
ｉｚｅｒを挙げることができる。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシ
ンは、実験培養でのみ含まれ、対象に注入しようとする細胞の培養には含まれない。標的
細胞は、増殖を支持するのに必要な条件下で、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）お
よび雰囲気（例えば、空気に加えて５％ＣＯ２）下で維持される。
たり、またはその間の整数値のいずれかの時間で培養することができる。別の実施形態に
おいて、混合物は、２１日間培養することができる。本開示の一実施形態において、ビー
ズおよびＴ細胞は、約８日間、一緒に培養される。別の実施形態において、ビーズおよび
Ｔ細胞は、２～３日間、一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間を６０日またはそれより長
くできるように、数サイクルの刺激が望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適切な条件とし
ては、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、
インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２
、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ－αなどの増殖および生存に必要な因子、または
当業者公知の細胞増殖のための他のあらゆる添加剤を含有していてもよい適切な培地（例
えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０または、Ｘ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ
））が挙げられる。細胞増殖のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界
面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエ
タノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、
およびビタミンが添加された、無血清か、または適切な量の血清（または血漿）または既
定されたセットのホルモン、および／またはＴ細胞の増殖および増加に十分な量のサイト
カインが補充されたかのいずれかの、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ
、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０、Ｏｐｔｉｍ
ｉｚｅｒを挙げることができる。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシ
ンは、実験培養でのみ含まれ、対象に注入しようとする細胞の培養には含まれない。標的
細胞は、増殖を支持するのに必要な条件下で、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）お
よび雰囲気（例えば、空気に加えて５％ＣＯ２）下で維持される。
【0299】
様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液
またはアフェレーシスを受けた末梢血単核細胞生成物は、細胞傷害性またはサプレッサー
Ｔ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有す
る。エクスビボでのＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞の増加は、
約８～９日目の前、主としてＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を産生するが、約８～９日目
の後、Ｔ細胞の集団は、より一層大きいＴＣ細胞の集団を含む。したがって、処置の目的
に応じて、主としてＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが、有利な場合があ
る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的なサブセットが単離された場合、このサブセットをよ
り高度に増加させることが有益な場合がある。
またはアフェレーシスを受けた末梢血単核細胞生成物は、細胞傷害性またはサプレッサー
Ｔ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有す
る。エクスビボでのＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞の増加は、
約８～９日目の前、主としてＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を産生するが、約８～９日目
の後、Ｔ細胞の集団は、より一層大きいＴＣ細胞の集団を含む。したがって、処置の目的
に応じて、主としてＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが、有利な場合があ
る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的なサブセットが単離された場合、このサブセットをよ
り高度に増加させることが有益な場合がある。
【0300】
さらに、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーに加えて、細胞増加プロセスの経過中、他の表現
型マーカーは、顕著に、ただし大部分は再現性よく変化する。したがって、このような再
現性は、活性化Ｔ細胞生成物を特定の目的に合わせる能力を可能にする。
型マーカーは、顕著に、ただし大部分は再現性よく変化する。したがって、このような再
現性は、活性化Ｔ細胞生成物を特定の目的に合わせる能力を可能にする。
【0301】
５．６ 組成物
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／または抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣは、抗グリコ
ＭＵＣ１抗体および／またはＡＤＣ、ならびに１つまたは複数の担体、賦形剤および／ま
たは希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、特定の使用のために、例えば
、獣医学的な使用またはヒトでの医薬的な使用のために製剤化されてもよい。使用される
組成物（例えば、乾燥粉末、液体配合物など）ならびに賦形剤、希釈剤および／または担
体の形態は、抗体および／またはＡＤＣの意図される使用によって、さらに治療的使用、
投与様式ごとに決まると予想される。
本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および／または抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣは、抗グリコ
ＭＵＣ１抗体および／またはＡＤＣ、ならびに１つまたは複数の担体、賦形剤および／ま
たは希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、特定の使用のために、例えば
、獣医学的な使用またはヒトでの医薬的な使用のために製剤化されてもよい。使用される
組成物（例えば、乾燥粉末、液体配合物など）ならびに賦形剤、希釈剤および／または担
体の形態は、抗体および／またはＡＤＣの意図される使用によって、さらに治療的使用、
投与様式ごとに決まると予想される。
【0302】
治療的使用の場合、組成物は、医薬的に許容される担体を含む滅菌された医薬組成物の
一部として供給されてもよい。この組成物は、あらゆる好適な形態であり得る（患者にそ
れを投与する望ましい方法に応じて）。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈
内、筋肉内、腫瘍内、クモ膜下、外用または局所などの様々な経路によって患者に投与す
ることができる。いずれかの所与の場合における最も好適な投与経路は、特定の抗体およ
び／またはＡＤＣ、対象、ならびに対象の疾患および身体的な状態の性質および重症度に
よって決まると予想される。典型的には、医薬組成物は、静脈内または皮下投与されると
予想される。
一部として供給されてもよい。この組成物は、あらゆる好適な形態であり得る（患者にそ
れを投与する望ましい方法に応じて）。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈
内、筋肉内、腫瘍内、クモ膜下、外用または局所などの様々な経路によって患者に投与す
ることができる。いずれかの所与の場合における最も好適な投与経路は、特定の抗体およ
び／またはＡＤＣ、対象、ならびに対象の疾患および身体的な状態の性質および重症度に
よって決まると予想される。典型的には、医薬組成物は、静脈内または皮下投与されると
予想される。
【0303】
医薬組成物は、１用量当たり予め決定された量の本開示の抗グリコＭＵＣ１抗体および
／または抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣを含有する単位剤形で都合よく提供することができる
。単位用量に含まれる抗体および／またはＡＤＣの量は、処置されている疾患、加えて当
業界において周知の他の要因によって決まると予想される。このような単位投薬は、単回
投与に好適な抗体および／またはＡＤＣの量を含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態で
あってもよいし、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末の単位剤形は、キット中に
、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分と共にパッケージ化
されていてもよい。液体形態での単位投薬は、単回投与に好適な量の抗体および／または
ＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で都合よく供給することができる。
／または抗グリコＭＵＣ１ ＡＤＣを含有する単位剤形で都合よく提供することができる
。単位用量に含まれる抗体および／またはＡＤＣの量は、処置されている疾患、加えて当
業界において周知の他の要因によって決まると予想される。このような単位投薬は、単回
投与に好適な抗体および／またはＡＤＣの量を含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態で
あってもよいし、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末の単位剤形は、キット中に
、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分と共にパッケージ化
されていてもよい。液体形態での単位投薬は、単回投与に好適な量の抗体および／または
ＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で都合よく供給することができる。
【0304】
医薬組成物はまた、複数回投与に好適な量のＡＤＣを含有するバルクの形態で供給され
てもよい。
てもよい。
【0305】
医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液として貯蔵するために、望ましい純度を有す
る抗体および／またはＡＤＣを、当業界において典型的に採用される任意選択の医薬的に
許容される担体、賦形剤または安定剤（これらは全て、本明細書では「担体」と称される
）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性デタージェント、抗酸
化剤、および他の混成の添加剤と混合することによって調製してもよい。Remington’s P
harmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed.1980)を参照されたい。このような添
加剤は、受容者に対して、採用された投薬および濃度で非毒性であるべきである。
る抗体および／またはＡＤＣを、当業界において典型的に採用される任意選択の医薬的に
許容される担体、賦形剤または安定剤（これらは全て、本明細書では「担体」と称される
）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性デタージェント、抗酸
化剤、および他の混成の添加剤と混合することによって調製してもよい。Remington’s P
harmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed.1980)を参照されたい。このような添
加剤は、受容者に対して、採用された投薬および濃度で非毒性であるべきである。
【0306】
緩衝剤は、ｐＨを生理学的条件に近い範囲に維持することを助ける。緩衝剤は、様々な
濃度で存在していてもよいが、典型的には約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度で存在す
ると予想される。本発明の開示で使用するために好適な緩衝剤としては、例えば、クエン
酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－ク
エン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩
衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混
合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－
酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混
合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル
酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物
など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グルコン酸ナトリウム（sodium glyco
nate）混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム
（potassium glyuconate）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸
ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混
合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウ
ム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナト
リウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）などの、有機および無機酸の両方な
らびにその塩が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチル
アミン塩、例えばトリスを使用することができる。
濃度で存在していてもよいが、典型的には約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度で存在す
ると予想される。本発明の開示で使用するために好適な緩衝剤としては、例えば、クエン
酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－ク
エン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩
衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混
合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－
酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混
合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル
酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物
など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グルコン酸ナトリウム（sodium glyco
nate）混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム
（potassium glyuconate）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸
ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混
合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウ
ム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナト
リウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）などの、有機および無機酸の両方な
らびにその塩が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチル
アミン塩、例えばトリスを使用することができる。
【0307】
微生物の増殖を妨害するために、保存剤が添加されていてもよく、約０．２％～１％（
ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本発明の開示で使用するために好適な保存
剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロ
ピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウム
ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、お
よびアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノ
ール、シクロヘキサノール、ならびに３－ペンタノールが挙げられる。等張化剤は、時に
は「安定剤」としても公知であり、本発明の開示の液体組成物の等張性を確実にするため
に添加することができ、その例としては、多価糖アルコール、例えば３水酸基またはそれ
より多くの水酸基を有する糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビト
ール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。安定剤は、賦形剤
の広義のカテゴリーを指し、これは、増量剤から、治療剤を可溶化したり、または変性ま
たは容器壁への接着の防止を助けたりする添加剤まで機能面で様々なものであり得る。典
型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記列挙されたもの）；例えばアルギニン、リシン
、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイ
シン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸、例えばラクト
ース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビ
トール、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクチトール、グリセロールなど、例え
ばシクリトール、例えばイノシトールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレング
リコール；アミノ酸ポリマー；例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール
酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム
などの硫黄を含有する還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基またはそれより
少ない残基のペプチド）；例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンま
たは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、例
えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどの単糖；例えばラクトース
、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖類；ならびに例えばラフィノー
スなどの三糖（trisaccacharide）；ならびに例えばデキストランなどの多糖類であり得
る。安定剤は、ＡＤＣの重量に対して０．５から１０ｗｔ％の範囲の量で存在していても
よい。
ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本発明の開示で使用するために好適な保存
剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロ
ピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウム
ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、お
よびアルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノ
ール、シクロヘキサノール、ならびに３－ペンタノールが挙げられる。等張化剤は、時に
は「安定剤」としても公知であり、本発明の開示の液体組成物の等張性を確実にするため
に添加することができ、その例としては、多価糖アルコール、例えば３水酸基またはそれ
より多くの水酸基を有する糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビト
ール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。安定剤は、賦形剤
の広義のカテゴリーを指し、これは、増量剤から、治療剤を可溶化したり、または変性ま
たは容器壁への接着の防止を助けたりする添加剤まで機能面で様々なものであり得る。典
型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記列挙されたもの）；例えばアルギニン、リシン
、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイ
シン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸、例えばラクト
ース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビ
トール、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクチトール、グリセロールなど、例え
ばシクリトール、例えばイノシトールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレング
リコール；アミノ酸ポリマー；例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール
酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム
などの硫黄を含有する還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基またはそれより
少ない残基のペプチド）；例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンま
たは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、例
えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどの単糖；例えばラクトース
、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖類；ならびに例えばラフィノー
スなどの三糖（trisaccacharide）；ならびに例えばデキストランなどの多糖類であり得
る。安定剤は、ＡＤＣの重量に対して０．５から１０ｗｔ％の範囲の量で存在していても
よい。
【0308】
非イオン界面活性剤またはデタージェント（「湿潤剤」としても公知）は、糖タンパク
質の可溶化を助けることに加えて、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護す
るために添加されてもよく、それにより、タンパク質変性を引き起こすことなく配合物が
ストレスを受けた剪断面に曝されることも許容する。好適な非イオン界面活性剤としては
、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８な
ど）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン界面活性剤は、約０．０５
ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬから約０．２ｍ
ｇ／ｍＬの範囲で存在していてもよい。
質の可溶化を助けることに加えて、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護す
るために添加されてもよく、それにより、タンパク質変性を引き起こすことなく配合物が
ストレスを受けた剪断面に曝されることも許容する。好適な非イオン界面活性剤としては
、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８な
ど）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン界面活性剤は、約０．０５
ｍｇ／ｍＬから約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば約０．０７ｍｇ／ｍＬから約０．２ｍ
ｇ／ｍＬの範囲で存在していてもよい。
【0309】
追加の混成の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、Ｅ
ＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶
媒が挙げられる。
ＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶
媒が挙げられる。
【0310】
５．７ 使用方法
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、様々な診断ア
ッセイで使用することができる。例えば、抗体および結合フラグメントは、イムノアッセ
イ、例えば競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降
アッセイ、例えば、免疫組織化学法、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性
化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロットなどで採用することができ
る。
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントは、様々な診断ア
ッセイで使用することができる。例えば、抗体および結合フラグメントは、イムノアッセ
イ、例えば競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降
アッセイ、例えば、免疫組織化学法、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性
化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロットなどで採用することができ
る。
【0311】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメントはまた、インビボ
の放射線撮影画像化にも有用であり、その場合、放射線不透過性の薬剤または放射線同位
体などの検出可能な部分で標識された抗体が、対象に、好ましくは血流に投与され、標識
された抗体の宿主中の存在および位置がアッセイされる。この画像化技術は、悪性腫瘍の
病期分類および処置において有用である。
の放射線撮影画像化にも有用であり、その場合、放射線不透過性の薬剤または放射線同位
体などの検出可能な部分で標識された抗体が、対象に、好ましくは血流に投与され、標識
された抗体の宿主中の存在および位置がアッセイされる。この画像化技術は、悪性腫瘍の
病期分類および処置において有用である。
【0312】
本明細書に記載される抗グリコＭＵＣ１抗体または結合フラグメント、ＡＤＣおよびＣ
ＡＲは、グリコＭＵＣ１を発現するがん、特に上皮がん、例えば乳がん、卵巣がん、膵臓
がん、および肺がんを処置するのに有用である。
ＡＲは、グリコＭＵＣ１を発現するがん、特に上皮がん、例えば乳がん、卵巣がん、膵臓
がん、および肺がんを処置するのに有用である。
【0313】
療法に本開示のＣＡＲを使用する場合、本開示の治療方法は、グリコＭＵＣ１を発現す
る腫瘍を有する対象に、例えばセクション５．４または実施形態９７または実施形態９８
に記載されるように、本開示のＣＡＲを発現するように操作された遺伝子改変細胞の有効
量を投与することを含む。ＣＡＲを発現するように細胞、特にＴ細胞を改変する方法は、
セクション５．５．１に記載されている。
る腫瘍を有する対象に、例えばセクション５．４または実施形態９７または実施形態９８
に記載されるように、本開示のＣＡＲを発現するように操作された遺伝子改変細胞の有効
量を投与することを含む。ＣＡＲを発現するように細胞、特にＴ細胞を改変する方法は、
セクション５．５．１に記載されている。
【実施例0314】
[実施例１]
抗グリコＭＵＣ１抗体の同定
６．１．１．概要
異なるＯ－グリカン密度およびＴｎ（ＧａｌＮＡｃα１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）グリコ
フォームを有する複数反復ＭＵＣ１グリコペプチドの化学酵素的合成を、組換えグリコシ
ルトランスフェラーゼを使用して開発した。異なるポリペプチドであるＧａｌＮＡｃ－ト
ランスフェラーゼアイソフォームを使用して、Ｏ－グリカンの占有部位を割り当てた（Be
nnett et al., 1998）。最適なワクチン設計は、高いＯ－グリカン密度を有するＴｎグリ
コフォームであることが見出され、ＫＬＨにコンジュゲートしたグリコペプチドは、耐性
を克服することが見出された。野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて、完全なＯ－グリカン
占有を有するグリコペプチドは、乳がん細胞株で発現されるＭＵＣ１と反応する最も強い
抗体応答を惹起したことから、これが最も有効なワクチン設計の代表である。惹起された
体液性免疫応答は、がん細胞に驚くべき特異性を示した。
抗グリコＭＵＣ１抗体の同定
６．１．１．概要
異なるＯ－グリカン密度およびＴｎ（ＧａｌＮＡｃα１－Ｏ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）グリコ
フォームを有する複数反復ＭＵＣ１グリコペプチドの化学酵素的合成を、組換えグリコシ
ルトランスフェラーゼを使用して開発した。異なるポリペプチドであるＧａｌＮＡｃ－ト
ランスフェラーゼアイソフォームを使用して、Ｏ－グリカンの占有部位を割り当てた（Be
nnett et al., 1998）。最適なワクチン設計は、高いＯ－グリカン密度を有するＴｎグリ
コフォームであることが見出され、ＫＬＨにコンジュゲートしたグリコペプチドは、耐性
を克服することが見出された。野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて、完全なＯ－グリカン
占有を有するグリコペプチドは、乳がん細胞株で発現されるＭＵＣ１と反応する最も強い
抗体応答を惹起したことから、これが最も有効なワクチン設計の代表である。惹起された
体液性免疫応答は、がん細胞に驚くべき特異性を示した。
【0315】
６．１．２．材料および方法
６．１．２．１ 多量体Ｔｎ ＭＵＣ１グリコペプチドの化学酵素的合成
ＭＵＣ１の６０－ｍｅｒ（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）ｎ＝３（配列
番号４７）ペプチドを、Fontenot et al., 1993によって最初に報告されたようにして合
成した。使用された対照ペプチドは、ＭＵＣ２（ＰＴＴＴＰＩＳＴＴＴＭＶＴＰＴＰＴＰ
ＴＣ）（配列番号５１）およびＭＵＣ４（ＣＰＬＰＶＴＤＴＳＳＡＳＴＧＨＡＴＰＬＰＶ
）（配列番号５２）のタンデムリピート（ＴＲ）から得た。米国特許第６，４６５，２２
０号明細書に記載される通り、精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであ
るポリペプチドのＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１
（Bennett et al., 1998；Schwientek et al., 2002）を使用して、ペプチドをインビト
ロでグリコシル化した。ペプチドのＧａｌＮＡｃグリコシル化を、２５ｍＭのカコジル酸
緩衝液（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、
および２ｍＭのＵＤＰ－ＧａｌＮＡｃを含有する反応混合物（ペプチド１ｍｇ／ｍＬ）中
で実行した。１ｍｇのＴＲ１つ当たり２つのＧａｌＮＡｃを有する６０－ｍｅｒのペプチ
ド（ＭＵＣ１６０Ｔｎ６）のグリコシル化を、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ１を使用して達成した。
ＴＲ１つ当たり３つのＧａｌＮＡｃの取り込み（ＭＵＣ１６０Ｔｎ９）を、ＧａｌＮＡｃ
－Ｔ２を使用して達成した。ＭＵＣ１ ＴＲ（ＭＵＣ１６０Ｔｎ１５）中の全ての５つの
推定上のＯ－グリコシル化部位の置換を、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４との反応で基質としてＭＵ
Ｃ１６０Ｔｎ９を使用して実行した。グリコシル化を、ナノスケールの逆相カラム（Ｐｏ
ｒｏｓ Ｒ３、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、
ＭＡ）およびＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析を使用してモニターした。グリコペプチドを、
０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）および０～８０％アセトニトリルの勾配を使用した
、１１００ Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄシステム（Ａｖｏｎｄａｌｅ、ＰＡ）にお
けるＺｏｒｂａｘ ３００ＳＢ－Ｃ３カラム（９．４ｍｍ×２５ｃｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）での高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）によって精製した。グリコシル化反応の収量の定量化および推測を、標
準として重さ１０μｇのペプチドを使用したＵＶ２１０吸光度によるＨＰＬＣピークの比
較によって実行した。ペプチドのＧａｌＮＡｃグリコシル化の収量は、全体的に８０～９
０％の回収率であった。精製されたグリコペプチドは、ディレイドエクストラクションを
備えたＶｏｙａｇｅｒ ＤＥまたはＶｏｙａｇｅｒ ＤＥ Ｐｒｏ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ
質量分析計（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質
量分析によって特徴付けられた。ＭＡＬＤＩマトリックスは、０．１％ＴＦＡと３０％ア
セトニトリル水溶液との２：１混合物中に溶解した１０ｇ／Ｌの２，５－ジヒドロキシ安
息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）であった。０．１％ＴＦＡ中に約
１ｐｍｏｌ／ｕＬの濃度に溶解したサンプルを、１μＬのサンプル溶液をプローブチップ
に入れ、続いて１ｕＬのマトリックスを入れることによって分析のために調製した。全て
の質量スペクトルをリニアモードで得た。データ処理を、ＧＲＡＭＳ ／３８６ソフトウ
ェア（Ｇａｌａｃｔｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｓａｌｅｍ、ＮＨ）を使用して行った
。
６．１．２．１ 多量体Ｔｎ ＭＵＣ１グリコペプチドの化学酵素的合成
ＭＵＣ１の６０－ｍｅｒ（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）ｎ＝３（配列
番号４７）ペプチドを、Fontenot et al., 1993によって最初に報告されたようにして合
成した。使用された対照ペプチドは、ＭＵＣ２（ＰＴＴＴＰＩＳＴＴＴＭＶＴＰＴＰＴＰ
ＴＣ）（配列番号５１）およびＭＵＣ４（ＣＰＬＰＶＴＤＴＳＳＡＳＴＧＨＡＴＰＬＰＶ
）（配列番号５２）のタンデムリピート（ＴＲ）から得た。米国特許第６，４６５，２２
０号明細書に記載される通り、精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであ
るポリペプチドのＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ１
（Bennett et al., 1998；Schwientek et al., 2002）を使用して、ペプチドをインビト
ロでグリコシル化した。ペプチドのＧａｌＮＡｃグリコシル化を、２５ｍＭのカコジル酸
緩衝液（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、
および２ｍＭのＵＤＰ－ＧａｌＮＡｃを含有する反応混合物（ペプチド１ｍｇ／ｍＬ）中
で実行した。１ｍｇのＴＲ１つ当たり２つのＧａｌＮＡｃを有する６０－ｍｅｒのペプチ
ド（ＭＵＣ１６０Ｔｎ６）のグリコシル化を、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ１を使用して達成した。
ＴＲ１つ当たり３つのＧａｌＮＡｃの取り込み（ＭＵＣ１６０Ｔｎ９）を、ＧａｌＮＡｃ
－Ｔ２を使用して達成した。ＭＵＣ１ ＴＲ（ＭＵＣ１６０Ｔｎ１５）中の全ての５つの
推定上のＯ－グリコシル化部位の置換を、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ４との反応で基質としてＭＵ
Ｃ１６０Ｔｎ９を使用して実行した。グリコシル化を、ナノスケールの逆相カラム（Ｐｏ
ｒｏｓ Ｒ３、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、
ＭＡ）およびＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析を使用してモニターした。グリコペプチドを、
０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）および０～８０％アセトニトリルの勾配を使用した
、１１００ Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄシステム（Ａｖｏｎｄａｌｅ、ＰＡ）にお
けるＺｏｒｂａｘ ３００ＳＢ－Ｃ３カラム（９．４ｍｍ×２５ｃｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）での高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）によって精製した。グリコシル化反応の収量の定量化および推測を、標
準として重さ１０μｇのペプチドを使用したＵＶ２１０吸光度によるＨＰＬＣピークの比
較によって実行した。ペプチドのＧａｌＮＡｃグリコシル化の収量は、全体的に８０～９
０％の回収率であった。精製されたグリコペプチドは、ディレイドエクストラクションを
備えたＶｏｙａｇｅｒ ＤＥまたはＶｏｙａｇｅｒ ＤＥ Ｐｒｏ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ
質量分析計（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質
量分析によって特徴付けられた。ＭＡＬＤＩマトリックスは、０．１％ＴＦＡと３０％ア
セトニトリル水溶液との２：１混合物中に溶解した１０ｇ／Ｌの２，５－ジヒドロキシ安
息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）であった。０．１％ＴＦＡ中に約
１ｐｍｏｌ／ｕＬの濃度に溶解したサンプルを、１μＬのサンプル溶液をプローブチップ
に入れ、続いて１ｕＬのマトリックスを入れることによって分析のために調製した。全て
の質量スペクトルをリニアモードで得た。データ処理を、ＧＲＡＭＳ ／３８６ソフトウ
ェア（Ｇａｌａｃｔｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｓａｌｅｍ、ＮＨ）を使用して行った
。
【0316】
６．１．２．２ 免疫化プロトコール
グリコペプチドを、グルタルアルデヒドを使用してＫＬＨ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆ
ｏｒｄ、ＩＬ）にカップリングした。コンジュゲーションの効率を、画分の抗ＭＵＣ１
ＥＬＩＳＡを使用したＰＤ－１０カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーにより反応を
分析することによって評価した。本質的に全ての反応性が、排除された画分で見出され、
ペプチドを含有することが予測される排除されなかった画分で、有意ではない反応性が見
出された。さらなる評価には、ＥＬＩＳＡでの対応するグリコペプチドとのＫＬＨコンジ
ュゲートの比較滴定分析が含まれていた。コンジュゲーションが完全に近いと、１：３０
０の、ＫＬＨのグリコペプチドに対する比率がもたらすはずであり、両方の分析はコンジ
ュゲーションが完全に近いことを示した。雌Ｂａｌｂ／ｃ野生型マウスに、総体積２００
ｕＬの１０または１５μｇの（糖）ペプチド（フロイントアジュバント、Ｓｉｇｍａとの
１：１の混合物）を皮下注射した。マウスは１４日の間隔をあけて４回の免疫化を受け、
３回目および４回目の免疫化から１週間後に尾部または目からの出血によって血液サンプ
ルを得た。
グリコペプチドを、グルタルアルデヒドを使用してＫＬＨ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆ
ｏｒｄ、ＩＬ）にカップリングした。コンジュゲーションの効率を、画分の抗ＭＵＣ１
ＥＬＩＳＡを使用したＰＤ－１０カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーにより反応を
分析することによって評価した。本質的に全ての反応性が、排除された画分で見出され、
ペプチドを含有することが予測される排除されなかった画分で、有意ではない反応性が見
出された。さらなる評価には、ＥＬＩＳＡでの対応するグリコペプチドとのＫＬＨコンジ
ュゲートの比較滴定分析が含まれていた。コンジュゲーションが完全に近いと、１：３０
０の、ＫＬＨのグリコペプチドに対する比率がもたらすはずであり、両方の分析はコンジ
ュゲーションが完全に近いことを示した。雌Ｂａｌｂ／ｃ野生型マウスに、総体積２００
ｕＬの１０または１５μｇの（糖）ペプチド（フロイントアジュバント、Ｓｉｇｍａとの
１：１の混合物）を皮下注射した。マウスは１４日の間隔をあけて４回の免疫化を受け、
３回目および４回目の免疫化から１週間後に尾部または目からの出血によって血液サンプ
ルを得た。
【0317】
６．１．２．３ マウスＭＡｂ抗Ｔｎ－ＭＵＣ１の生成
ＫＬＨにカップリングされた完全にＧａｌＮＡｃでグリコシル化された６０－ｍｅｒの
ＭＵＣ１グリコペプチドで免疫化された野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスからＭＡｂを産生した
。スクリーニングは、グリコペプチドのＥＬＩＳＡ、それに続く乳がん細胞株（ＭＣＦ７
およびＴ４７Ｄ）を用いた免疫細胞学およびがん組織を用いた免疫組織学に基づいてなさ
れた。選択は、同じマウスの総血清に類似した反応性パターンに基づいてなされた。
ＫＬＨにカップリングされた完全にＧａｌＮＡｃでグリコシル化された６０－ｍｅｒの
ＭＵＣ１グリコペプチドで免疫化された野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスからＭＡｂを産生した
。スクリーニングは、グリコペプチドのＥＬＩＳＡ、それに続く乳がん細胞株（ＭＣＦ７
およびＴ４７Ｄ）を用いた免疫細胞学およびがん組織を用いた免疫組織学に基づいてなさ
れた。選択は、同じマウスの総血清に類似した反応性パターンに基づいてなされた。
【0318】
６．１．２．４ ＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡを、９６－ウェルＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）
を使用して実行した。プレートを、重炭酸－炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）中の１μｇ／ｍＬ
のグリコペプチドで、４℃で一晩コーティングし、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の５％
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックし、続いて血清（ＰＢＳで希釈した）またはＭ
Ａｂと共に室温で２時間インキュベートした。結合した抗体を、ペルオキシダーゼコンジ
ュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｇｌｏｓｔｒ
ｕｐ、Ｄｅｎｍａｒｋ）またはアイソタイプ特異的な抗体であるペルオキシダーゼコンジ
ュゲートヤギ抗マウスＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、またはＩｇＧ３（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇ
ｈａｍ、ＡＬ）で検出した。プレートをＯ－フェニレンジアミンタブレット（ＤａｋｏＣ
ｙｔｏｍａｔｉｏｎ）で展開し、４９２ｎｍで読んだ。対照抗体には、抗ＭＵＣ１抗体で
あるＨＭＦＧ２およびＳＭ３（Burchell et al., 1987）ならびに抗炭水化物抗体５Ｆ４
（Ｔｎ）および３Ｆ１（ＳＴｎ）（Mandel et al., 1991）が含まれていた。対照血清に
は、ＫＬＨに連結されたＭＵＣ４ムチンペプチドで免疫化されたマウスが含まれていた。
ＥＬＩＳＡを、９６－ウェルＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）
を使用して実行した。プレートを、重炭酸－炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）中の１μｇ／ｍＬ
のグリコペプチドで、４℃で一晩コーティングし、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の５％
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックし、続いて血清（ＰＢＳで希釈した）またはＭ
Ａｂと共に室温で２時間インキュベートした。結合した抗体を、ペルオキシダーゼコンジ
ュゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｇｌｏｓｔｒ
ｕｐ、Ｄｅｎｍａｒｋ）またはアイソタイプ特異的な抗体であるペルオキシダーゼコンジ
ュゲートヤギ抗マウスＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、またはＩｇＧ３（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇ
ｈａｍ、ＡＬ）で検出した。プレートをＯ－フェニレンジアミンタブレット（ＤａｋｏＣ
ｙｔｏｍａｔｉｏｎ）で展開し、４９２ｎｍで読んだ。対照抗体には、抗ＭＵＣ１抗体で
あるＨＭＦＧ２およびＳＭ３（Burchell et al., 1987）ならびに抗炭水化物抗体５Ｆ４
（Ｔｎ）および３Ｆ１（ＳＴｎ）（Mandel et al., 1991）が含まれていた。対照血清に
は、ＫＬＨに連結されたＭＵＣ４ムチンペプチドで免疫化されたマウスが含まれていた。
【0319】
６．１．３．結果
ＧａｌＮＡｃ－ＭＵＣ１に対するグリコペプチド特異的なｍＡｂを、免疫原としてＫＬ
ＨにコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃ－ＭＵＣ１の６０－ｍｅｒのグリコペプチドを使用
して産生した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用したところ、生成したｍＡｂ ＧＯ２（５Ｆ７
）は、精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、
ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化さ
れたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列
番号４７）と特異的に反応し、ＧａｌＮＡｃ－残基を有さない対応するＭＵＣ１ペプチド
または同じタイプのＴｎグリコフォームを有する無関係のグリコペプチドとは反応しなか
った。図１に、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
ＧａｌＮＡｃ－ＭＵＣ１に対するグリコペプチド特異的なｍＡｂを、免疫原としてＫＬ
ＨにコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃ－ＭＵＣ１の６０－ｍｅｒのグリコペプチドを使用
して産生した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用したところ、生成したｍＡｂ ＧＯ２（５Ｆ７
）は、精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、
ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化さ
れたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（配列
番号４７）と特異的に反応し、ＧａｌＮＡｃ－残基を有さない対応するＭＵＣ１ペプチド
または同じタイプのＴｎグリコフォームを有する無関係のグリコペプチドとは反応しなか
った。図１に、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【0320】
[実施例２]
抗グリコＭＵＣ１抗体の特徴付け
６．２．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、がん細胞に関連するＭＵＣ１のＴｎグリコフ
ォームへのその結合の特異性に関して特徴付けた。
抗グリコＭＵＣ１抗体の特徴付け
６．２．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、がん細胞に関連するＭＵＣ１のＴｎグリコフ
ォームへのその結合の特異性に関して特徴付けた。
【0321】
６．２．２．材料および方法
６．２．２．１ 免疫細胞化学
細胞株を氷冷したアセトンまたはメタノール：アセトン中で１０分固定した。固定した
細胞を、マウス血清（１：２００／１：４００／１：８００）またはＭＡｂと共に５℃で
一晩インキュベートし、続いてフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュ
ゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）と共に室温で４
５分インキュベートした。スライドをｐ－フェニレンジアミンを含有するグリセロール中
でマウントし、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡（ＦｌｕｏｒｅｓＳｃｉｅｎｃｅ、Ｈａｌｌｂｅｒ
ｇｍｏｏｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で検査した。
６．２．２．１ 免疫細胞化学
細胞株を氷冷したアセトンまたはメタノール：アセトン中で１０分固定した。固定した
細胞を、マウス血清（１：２００／１：４００／１：８００）またはＭＡｂと共に５℃で
一晩インキュベートし、続いてフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュ
ゲートウサギ抗マウス免疫グロブリン（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）と共に室温で４
５分インキュベートした。スライドをｐ－フェニレンジアミンを含有するグリセロール中
でマウントし、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡（ＦｌｕｏｒｅｓＳｃｉｅｎｃｅ、Ｈａｌｌｂｅｒ
ｇｍｏｏｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で検査した。
【0322】
６．２．２．２ 免疫組織化学
乳癌のホルマリン固定したパラフィンワックス包埋組織を得た。全てのケースを組織型
によって慣習的に分類した。免疫染色には、アビジン－ビオチンペルオキシダーゼ複合体
方法を使用した。パラフィン切片からワックスを取り除き、再水和し、メタノール中の０
．５％Ｈ２Ｏ２で３０分処理した。切片をＴＢＳ中で濯ぎ、ウサギ非免疫血清と共に２０
分インキュベートした。切片を濯ぎ、一次抗体と共に５℃で一晩インキュベートした。切
片を濯ぎ、ＴＢＳで１：２００に希釈したビオチンで標識されたウサギ抗マウス血清（Ｄ
ａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）と共に３０分インキュベートし、ＴＢＳで濯ぎ、アビジン
－ビオチンペルオキシダーゼ複合体（ＤａｋｏＣｙｔｏ－ｍａｔｉｏｎ）と共に１時間イ
ンキュベートした。切片をＴＢＳで濯ぎ、０．１％Ｈ２Ｏ２を含有する０．０５Ｍ ＴＢ
Ｓ中の新たに調製した０．０５％３，３’－ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリドを
用いて展開した。切片をヘマトキシリンで染色し、脱水し、マウントした。
乳癌のホルマリン固定したパラフィンワックス包埋組織を得た。全てのケースを組織型
によって慣習的に分類した。免疫染色には、アビジン－ビオチンペルオキシダーゼ複合体
方法を使用した。パラフィン切片からワックスを取り除き、再水和し、メタノール中の０
．５％Ｈ２Ｏ２で３０分処理した。切片をＴＢＳ中で濯ぎ、ウサギ非免疫血清と共に２０
分インキュベートした。切片を濯ぎ、一次抗体と共に５℃で一晩インキュベートした。切
片を濯ぎ、ＴＢＳで１：２００に希釈したビオチンで標識されたウサギ抗マウス血清（Ｄ
ａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）と共に３０分インキュベートし、ＴＢＳで濯ぎ、アビジン
－ビオチンペルオキシダーゼ複合体（ＤａｋｏＣｙｔｏ－ｍａｔｉｏｎ）と共に１時間イ
ンキュベートした。切片をＴＢＳで濯ぎ、０．１％Ｈ２Ｏ２を含有する０．０５Ｍ ＴＢ
Ｓ中の新たに調製した０．０５％３，３’－ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリドを
用いて展開した。切片をヘマトキシリンで染色し、脱水し、マウントした。
【0323】
６．２．３．結果
結腸直腸癌、膵臓癌、および浸潤性乳腺癌の免疫組織化学をＧＯ２を用いて行った。結
腸直腸がん組織の染色（図２）から、がん細胞の大部分における細胞内および表面構造の
強い標識が実証された。対照的に、健康な円柱上皮細胞に対する反応性は、見られなかっ
たか極めて低かった。健康な細胞における標識は、細胞内構造に制限された。これは、結
腸の円柱上皮などの高い分泌能力を有する細胞中に大量の生合成中間体（ＧａｌＮＡｃ改
変糖タンパク質）が存在することに起因すると予想される。類似のパターンが膵臓（図３
）および乳がん組織（図４）で観察され、がん細胞とは強い反応性を示したが、周囲の健
康な上皮または結合組織細胞における細胞内構造とは、反応性がないか限定的な反応性し
かなかった。
結腸直腸癌、膵臓癌、および浸潤性乳腺癌の免疫組織化学をＧＯ２を用いて行った。結
腸直腸がん組織の染色（図２）から、がん細胞の大部分における細胞内および表面構造の
強い標識が実証された。対照的に、健康な円柱上皮細胞に対する反応性は、見られなかっ
たか極めて低かった。健康な細胞における標識は、細胞内構造に制限された。これは、結
腸の円柱上皮などの高い分泌能力を有する細胞中に大量の生合成中間体（ＧａｌＮＡｃ改
変糖タンパク質）が存在することに起因すると予想される。類似のパターンが膵臓（図３
）および乳がん組織（図４）で観察され、がん細胞とは強い反応性を示したが、周囲の健
康な上皮または結合組織細胞における細胞内構造とは、反応性がないか限定的な反応性し
かなかった。
【0324】
[実施例３]
抗グリコＭＵＣ１抗体の配列分析
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を産生するハイブリドーマからのｍＲＮＡを調製
し、逆転写し、シーケンシングした。
抗グリコＭＵＣ１抗体の配列分析
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を産生するハイブリドーマからのｍＲＮＡを調製
し、逆転写し、シーケンシングした。
【0325】
重鎖および軽鎖可変領域をそれらのシグナル配列と共にコードするヌクレオチド配列は
、それぞれ配列番号１１および配列番号１２に記載される。配列番号１１および配列番号
１２によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１および配列番
号２に記載される。予測された成熟可変領域配列（シグナルペプチドの切断後）は、それ
ぞれ配列番号３および配列番号４に記載され、それぞれ配列番号１３および配列番号１４
によってコードされる。予測された重鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列
番号５～７に記載され、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列
番号８～１０に記載される。
、それぞれ配列番号１１および配列番号１２に記載される。配列番号１１および配列番号
１２によってコードされた重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１および配列番
号２に記載される。予測された成熟可変領域配列（シグナルペプチドの切断後）は、それ
ぞれ配列番号３および配列番号４に記載され、それぞれ配列番号１３および配列番号１４
によってコードされる。予測された重鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列
番号５～７に記載され、予測された軽鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴの定義）は、それぞれ配列
番号８～１０に記載される。
【0326】
[実施例４]
抗グリコＭＵＣ１抗体を用いたがん細胞への薬物送達
６．４．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、標的細胞に細胞傷害性物質を送達するその能
力に関して試験した。
抗グリコＭＵＣ１抗体を用いたがん細胞への薬物送達
６．４．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、標的細胞に細胞傷害性物質を送達するその能
力に関して試験した。
【0327】
６．４．２．材料および方法
ＯＶＣａｒヒト卵巣癌細胞を、２４－ウェル細胞培養プレートに細胞１，０００個／ウ
ェルで添加した。モノクローナル抗体ＧＯ２および抗チューブリン剤であるモノメチルオ
ーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）（抗ｍＦｃ－ＮＣ－ＭＭＡＦ）（Ｍｏｒａｄｅｃカタログ番
号ＡＭ－１０１－ＡＦ）にコンジュゲートした二次抗体をプレートに添加して、以下の濃
度（μｇ／ｍｌで）のＧＯ２およびＡＤＣを得た。
ＯＶＣａｒヒト卵巣癌細胞を、２４－ウェル細胞培養プレートに細胞１，０００個／ウ
ェルで添加した。モノクローナル抗体ＧＯ２および抗チューブリン剤であるモノメチルオ
ーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）（抗ｍＦｃ－ＮＣ－ＭＭＡＦ）（Ｍｏｒａｄｅｃカタログ番
号ＡＭ－１０１－ＡＦ）にコンジュゲートした二次抗体をプレートに添加して、以下の濃
度（μｇ／ｍｌで）のＧＯ２およびＡＤＣを得た。
【0328】
【表5】
【0329】
プレートを３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間のインキュベーション後、
ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を各ウェルに添加し、６０
０ｎｍでの蛍光を測定した。
ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を各ウェルに添加し、６０
０ｎｍでの蛍光を測定した。
【0330】
６．４．３．結果
図５に結果を示す。結果は、細胞毒性が、一次抗体（ＧＯ２）の濃度および抗体の存在
、ならびに二次ＡＤＣコンジュゲート抗体の濃度および存在に依存することを示す。言い
換えれば、ＧＯ２は、細胞傷害性物質ＭＭＡＦを有する二次抗体とカップリングされた場
合、このがん細胞株の細胞毒性を誘発する。
図５に結果を示す。結果は、細胞毒性が、一次抗体（ＧＯ２）の濃度および抗体の存在
、ならびに二次ＡＤＣコンジュゲート抗体の濃度および存在に依存することを示す。言い
換えれば、ＧＯ２は、細胞傷害性物質ＭＭＡＦを有する二次抗体とカップリングされた場
合、このがん細胞株の細胞毒性を誘発する。
【0331】
[実施例５]
抗Ｍｕｃ１抗体を用いた循環腫瘍細胞の定量化
６．５．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、循環腫瘍細胞を定量化するのに使用されるそ
の能力に関して試験した。
抗Ｍｕｃ１抗体を用いた循環腫瘍細胞の定量化
６．５．１．概要
モノクローナル抗体ＧＯ２（５Ｆ７）を、循環腫瘍細胞を定量化するのに使用されるそ
の能力に関して試験した。
【0332】
６．５．２．材料および方法
ＧＯ２を磁気分離ビーズにコンジュゲートし、異なる濃度の腫瘍細胞のサンプルと相互
作用させた。細胞およびビーズを磁石を用いて溶液から引き出し、数回洗浄して、未結合
の材料を除去した。次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートされ
たＧＯ２を、結合したがん細胞を含有する磁気分離ビーズにアプライし、インキュベート
し、次いで未結合のコンジュゲートしたＧＯ２を洗浄して除いた。基質としてＴＮＢを使
用して比色反応を実行した。反応を硫酸を用いて終結させ、次いでサンプルのＯＤ４５０
の読み取り値を取った。
ＧＯ２を磁気分離ビーズにコンジュゲートし、異なる濃度の腫瘍細胞のサンプルと相互
作用させた。細胞およびビーズを磁石を用いて溶液から引き出し、数回洗浄して、未結合
の材料を除去した。次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートされ
たＧＯ２を、結合したがん細胞を含有する磁気分離ビーズにアプライし、インキュベート
し、次いで未結合のコンジュゲートしたＧＯ２を洗浄して除いた。基質としてＴＮＢを使
用して比色反応を実行した。反応を硫酸を用いて終結させ、次いでサンプルのＯＤ４５０
の読み取り値を取った。
【0333】
６．５．３．結果
図６に結果を示す。アッセイの結果は、ＧＯ２腫瘍細胞の結合を実証した。
図６に結果を示す。アッセイの結果は、ＧＯ２腫瘍細胞の結合を実証した。
【0334】
[実施例６]
抗グリコＭＵＣ１抗体を使用した腫瘍組織の免疫組織化学的染色
６．６．１．材料および方法
６つのホルマリン固定したパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）
からの切片を２．５μｍの厚さにカットした。乳がん（ＢＣ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）
、卵巣がん（ＯＶＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および前立腺がん（ＰｒＣ）腫瘍
からのＴＭＡを研究に使用した。ＴＭＡ１つ当たり２５～４７個の腫瘍組織コアが評価に
利用可能であった。コアサイズはＴＭＡに応じて１ｍｍ、２ｍｍまたは３ｍｍであった。
各組織コアは、１人の患者の標本である。
抗グリコＭＵＣ１抗体を使用した腫瘍組織の免疫組織化学的染色
６．６．１．材料および方法
６つのホルマリン固定したパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）
からの切片を２．５μｍの厚さにカットした。乳がん（ＢＣ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）
、卵巣がん（ＯＶＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および前立腺がん（ＰｒＣ）腫瘍
からのＴＭＡを研究に使用した。ＴＭＡ１つ当たり２５～４７個の腫瘍組織コアが評価に
利用可能であった。コアサイズはＴＭＡに応じて１ｍｍ、２ｍｍまたは３ｍｍであった。
各組織コアは、１人の患者の標本である。
【0335】
染色を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＸＴオートステイナー（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａ
ｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で実行した。細胞条件１（ＣＣ１）溶液（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた抗原賦活化後、ＧＯ２を、Ｄａｋｏグリーンメディ
ウム（ｇｒｅｅｎ ｍｅｄｉｕｍ）抗体希釈剤中、１μｇ／ｍＬの濃度で適用し、３７℃
で６０分インキュベートした。腫瘍細胞へのＧＯ２の結合を、ＤＡＢで可視化（茶色の沈
殿）したＯｐｔｉｖｉｅｗ ＤＡＢ ＩＨＣ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａ
ｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して検出した。
ｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で実行した。細胞条件１（ＣＣ１）溶液（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた抗原賦活化後、ＧＯ２を、Ｄａｋｏグリーンメディ
ウム（ｇｒｅｅｎ ｍｅｄｉｕｍ）抗体希釈剤中、１μｇ／ｍＬの濃度で適用し、３７℃
で６０分インキュベートした。腫瘍細胞へのＧＯ２の結合を、ＤＡＢで可視化（茶色の沈
殿）したＯｐｔｉｖｉｅｗ ＤＡＢ ＩＨＣ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａ
ｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して検出した。
【0336】
６．６．２．結果
図７に、ＭＵＣ１陽性ＴＭＡ腫瘍コアの代表的な画像を示す。ＢＣおよびＯＶＣ ＴＭ
Ａにおいて、スポットの大部分（＞９０％）が、中程度のまたは強い腫瘍細胞へのＧＯ２
の結合を示した。ＮＳＣＬＣおよびＣＲＣのケースの７０％および５１％が、それぞれ中
程度のおよび強い腫瘍細胞への抗体の結合を示した。前立腺がんでは、抗原の発現はより
少ないようであった。ＴＭＡ１におけるスポットの２８％のみが、ＧＯ－２を適用した場
合、中程度のまたは強い染色強度を示した。染色パターンは常に細胞質内であり、多くの
場合において膜結合型であった。頂端膜染色パターンはほとんどのコアで観察されなかっ
た。
図７に、ＭＵＣ１陽性ＴＭＡ腫瘍コアの代表的な画像を示す。ＢＣおよびＯＶＣ ＴＭ
Ａにおいて、スポットの大部分（＞９０％）が、中程度のまたは強い腫瘍細胞へのＧＯ２
の結合を示した。ＮＳＣＬＣおよびＣＲＣのケースの７０％および５１％が、それぞれ中
程度のおよび強い腫瘍細胞への抗体の結合を示した。前立腺がんでは、抗原の発現はより
少ないようであった。ＴＭＡ１におけるスポットの２８％のみが、ＧＯ－２を適用した場
合、中程度のまたは強い染色強度を示した。染色パターンは常に細胞質内であり、多くの
場合において膜結合型であった。頂端膜染色パターンはほとんどのコアで観察されなかっ
た。
【0337】
[実施例７]
Ｔ細胞の二重特異性（ＴＣＢ）様式での抗ＭＵＣ１抗体の産生および精製
６．７．１．材料および方法
６．７．１．１ 発現ベクターの産生
Ｆｃ領域中にノブ－イントゥー－ホールおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（
「ＰＧＬＡＬＡ」）突然変異、ならびにＭＵＣ１ ＣＨ１（１４７Ｅ／２１３Ｅ；「ＥＥ
」）およびＣＬ（１２３Ｒ／１２４Ｋ；「ＲＫ」）領域中に電荷を有する残基を含むＴＣ
Ｂ様式に、ＧＯ２抗体を変換した（配列番号４３～４６を参照）。図８に、ＴＣＢ抗体を
例示する。簡単に言えば、ＧＯ２ ｍＡｂの可変重鎖および可変軽鎖を合成し（Ｇｅｎｅ
ａｒｔ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、それらが適切なヒト定常重鎖または
ヒト定常軽鎖に融合される好適な発現ベクターに挿入した。これらのベクター中の発現カ
セットは、５’ＵＴＲおよびＢＧＨポリアデニル化部位と共に、ＣＭＶプロモーター、イ
ントロンＡからなる。加えて、プラスミドは、ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）を内包するＨＥ
Ｋ２９３細胞における安定な維持のために、エプスタイン－バーウイルス由来のｏｒｉＰ
領域を含有する。
Ｔ細胞の二重特異性（ＴＣＢ）様式での抗ＭＵＣ１抗体の産生および精製
６．７．１．材料および方法
６．７．１．１ 発現ベクターの産生
Ｆｃ領域中にノブ－イントゥー－ホールおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（
「ＰＧＬＡＬＡ」）突然変異、ならびにＭＵＣ１ ＣＨ１（１４７Ｅ／２１３Ｅ；「ＥＥ
」）およびＣＬ（１２３Ｒ／１２４Ｋ；「ＲＫ」）領域中に電荷を有する残基を含むＴＣ
Ｂ様式に、ＧＯ２抗体を変換した（配列番号４３～４６を参照）。図８に、ＴＣＢ抗体を
例示する。簡単に言えば、ＧＯ２ ｍＡｂの可変重鎖および可変軽鎖を合成し（Ｇｅｎｅ
ａｒｔ、Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、それらが適切なヒト定常重鎖または
ヒト定常軽鎖に融合される好適な発現ベクターに挿入した。これらのベクター中の発現カ
セットは、５’ＵＴＲおよびＢＧＨポリアデニル化部位と共に、ＣＭＶプロモーター、イ
ントロンＡからなる。加えて、プラスミドは、ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）を内包するＨＥ
Ｋ２９３細胞における安定な維持のために、エプスタイン－バーウイルス由来のｏｒｉＰ
領域を含有する。
【0338】
６．７．１．２ 一過性トランスフェクションおよび産生
以下のようにＰＥＩ媒介トランスフェクション手順を使用してＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細
胞中で、抗体を一時的に産生した。ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞は、６ｍＭのＬ－グルタミ
ンを含有するＥｘｃｅｌｌ培養培地中の無血清の懸濁液中で培養される。５００ｍｌ振盪
フラスコでの抗体の産生のために、トランスフェクションの２４時間前に、３億個のＨＥ
Ｋ２９３ＥＢＮＡ細胞をシーディングする（したがって代替のスケールの場合、全量を調
整する）。トランスフェクションのために、細胞を２１０×ｇで１０分遠心分離し、上清
を、予め温めた２０ｍｌのＣＤ ＣＨＯ培地で交換する。発現ベクターを２０ｍｌのＣＤ
ＣＨＯ培地中に混合して、最終的なＤＮＡ量を２００μｇにする。５４０μｌのＰＥＩ
を添加した後、溶液を１５秒ボルテックスで混合し、その後室温で１０分インキュベート
する。その後、細胞をＤＮＡ／ＰＥＩ溶液と混合し、５００ｍｌの振盪フラスコに移し、
５％ＣＯ２雰囲気を含むインキュベーター中で３７℃で３時間インキュベートする。イン
キュベーション後、６ｍＭのグルタミン、１．２５ｍＭのバルプロ酸および１２．５％Ｐ
ｅｐｓｏｙを含有する１６０ｍｌのＥｘ－ｃｅｌｌ（登録商標）培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌ
ｄｒｉｃｈ）を添加し、細胞を２４時間培養する。トランスフェクションの１日後、１２
％フィード７（４８ｍＬ）＋３ｇ／Ｌグルコースを添加する。７日後、３０００×ｇで４
５分の遠心分離による精製のために培養上清を収集する。溶液を滅菌ろ過し（０．２２μ
ｍフィルター）、０．０１％ｗ／ｖの最終濃度のアジ化ナトリウムを添加する。次いで溶
液を４℃で貯蔵する。
以下のようにＰＥＩ媒介トランスフェクション手順を使用してＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細
胞中で、抗体を一時的に産生した。ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞は、６ｍＭのＬ－グルタミ
ンを含有するＥｘｃｅｌｌ培養培地中の無血清の懸濁液中で培養される。５００ｍｌ振盪
フラスコでの抗体の産生のために、トランスフェクションの２４時間前に、３億個のＨＥ
Ｋ２９３ＥＢＮＡ細胞をシーディングする（したがって代替のスケールの場合、全量を調
整する）。トランスフェクションのために、細胞を２１０×ｇで１０分遠心分離し、上清
を、予め温めた２０ｍｌのＣＤ ＣＨＯ培地で交換する。発現ベクターを２０ｍｌのＣＤ
ＣＨＯ培地中に混合して、最終的なＤＮＡ量を２００μｇにする。５４０μｌのＰＥＩ
を添加した後、溶液を１５秒ボルテックスで混合し、その後室温で１０分インキュベート
する。その後、細胞をＤＮＡ／ＰＥＩ溶液と混合し、５００ｍｌの振盪フラスコに移し、
５％ＣＯ２雰囲気を含むインキュベーター中で３７℃で３時間インキュベートする。イン
キュベーション後、６ｍＭのグルタミン、１．２５ｍＭのバルプロ酸および１２．５％Ｐ
ｅｐｓｏｙを含有する１６０ｍｌのＥｘ－ｃｅｌｌ（登録商標）培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌ
ｄｒｉｃｈ）を添加し、細胞を２４時間培養する。トランスフェクションの１日後、１２
％フィード７（４８ｍＬ）＋３ｇ／Ｌグルコースを添加する。７日後、３０００×ｇで４
５分の遠心分離による精製のために培養上清を収集する。溶液を滅菌ろ過し（０．２２μ
ｍフィルター）、０．０１％ｗ／ｖの最終濃度のアジ化ナトリウムを添加する。次いで溶
液を４℃で貯蔵する。
【0339】
６．７．１．３ 抗体精製
分泌されたタンパク質を、プロテインＡを使用するアフィニティークロマトグラフィー
、それに続きサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。アフィニティークロマト
グラフィーのために、上清を、２０ｍＭリン酸ナトリウム、２０ｍＭクエン酸ナトリウム
ｐＨ７．５で平衡化したＰｒｏｔｅｉｎ Ａ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（Ｇ
Ｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングした。平衡緩衝液で洗浄することによって未
結合のタンパク質を除去した。結合したタンパク質を、２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１
００ｍＭ塩化ナトリウム、１００ｍＭグリシン、ｐＨ３．０を用いて作製した段階的（標
準ＩｇＧ）または勾配（二重特異性抗体）溶出のいずれかを使用して溶出させた。収集し
た画分のｐＨを、１／１０（ｖ／ｖ）の０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０を添加する
ことによって調整した。タンパク質を濃縮し、ろ過し、その後、２０ｍＭヒスチジン、１
４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０で平衡化したＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２
００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングした。
分泌されたタンパク質を、プロテインＡを使用するアフィニティークロマトグラフィー
、それに続きサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。アフィニティークロマト
グラフィーのために、上清を、２０ｍＭリン酸ナトリウム、２０ｍＭクエン酸ナトリウム
ｐＨ７．５で平衡化したＰｒｏｔｅｉｎ Ａ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（Ｇ
Ｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングした。平衡緩衝液で洗浄することによって未
結合のタンパク質を除去した。結合したタンパク質を、２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１
００ｍＭ塩化ナトリウム、１００ｍＭグリシン、ｐＨ３．０を用いて作製した段階的（標
準ＩｇＧ）または勾配（二重特異性抗体）溶出のいずれかを使用して溶出させた。収集し
た画分のｐＨを、１／１０（ｖ／ｖ）の０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０を添加する
ことによって調整した。タンパク質を濃縮し、ろ過し、その後、２０ｍＭヒスチジン、１
４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０で平衡化したＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２
００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングした。
【0340】
溶出した画分の集合体の内容物を、分析的サイズ排除クロマトグラフィーによって分析
した。したがって、３０μｌの各画分を、２００ｍＭのアルギニン、２５ｍＭのＫ２ＰＯ
４、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０２％ＮａＮ３、ｐＨ６．７で平衡化したＴＳＫ
Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（東ソー株式会社、７．８ｍｍ×３０ｃｍ）にアプライした
。２％未満のオリゴマーを含有する画分をプールし、遠心濃縮装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）ＵＬＴＲＡ－１５、３０ｋ ＭＷＣＯ）を使用して１～１．
５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に濃縮した。精製されたタンパク質を－８０℃で貯蔵した。
した。したがって、３０μｌの各画分を、２００ｍＭのアルギニン、２５ｍＭのＫ２ＰＯ
４、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０２％ＮａＮ３、ｐＨ６．７で平衡化したＴＳＫ
Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（東ソー株式会社、７．８ｍｍ×３０ｃｍ）にアプライした
。２％未満のオリゴマーを含有する画分をプールし、遠心濃縮装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）ＵＬＴＲＡ－１５、３０ｋ ＭＷＣＯ）を使用して１～１．
５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に濃縮した。精製されたタンパク質を－８０℃で貯蔵した。
【0341】
６．７．２．結果
表５に、ＧＯ２ ＴＣＢ抗体の産生収率および品質を示す。
表５に、ＧＯ２ ＴＣＢ抗体の産生収率および品質を示す。
【0342】
【表6】
【0343】
[実施例８]
エクスビボでの未消化の患者由来の腫瘍サンプルにおける標的発現をモニターするための
Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイ
６．８．１．概要
Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用して、エクスビボでの未消化の初代
ヒト腫瘍サンプルにおける標的発現（グリコＭＵＣ１）を、ＧＯ２ ＴＣＢを使用してモ
ニターした。
エクスビボでの未消化の患者由来の腫瘍サンプルにおける標的発現をモニターするための
Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイ
６．８．１．概要
Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用して、エクスビボでの未消化の初代
ヒト腫瘍サンプルにおける標的発現（グリコＭＵＣ１）を、ＧＯ２ ＴＣＢを使用してモ
ニターした。
【0344】
６．８．２．材料および方法
６．８．２．１ 材料
・ＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７を参照）
・ＤＰ４７ ＴＣＢ（非標的化陰性対照）
・Ｍａｔｒｉｇｅｌ（アイテム番号７３４－１１０１、Ｃｏｒｎｉｎｇ／ＶＷＲ、Ｓｗ
ｉｔｚｅｒｌａｎｄ）
・Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－Ｌｏｗアタッチ
メントマルチウェルプレート（アイテム番号ＣＬＳ７００７－２４ＥＡ、Ｓｉｇｍａ）
・細胞培養マイクロプレート、９６ウェル（アイテム番号６５５０９８、Ｇｒｅｉｎｅ
ｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）
・ＲＰＭＩ１６４０培地（アイテム番号４２４０１－０１８、ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ、Ｓｃｈｗｅｉｚ）
・Ｊｕｒｋａｔ培地：２ｇ／ｌのＤ－グルコース、２ｇ／ｌのＮａＨＣＯ３、１０％Ｆ
ＣＳ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１×ＮＥＡＡ、１×ピルビン酸
ナトリウム、２００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢを含むＲＰＭＩ１６４０培地
・Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）
・Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙから受け取った腫瘍サンプル。サン
プルは一晩かけて輸送培地中で送られた。外科手術の約２４時間後、サンプルを細かくカ
ットした。
６．８．２．１ 材料
・ＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７を参照）
・ＤＰ４７ ＴＣＢ（非標的化陰性対照）
・Ｍａｔｒｉｇｅｌ（アイテム番号７３４－１１０１、Ｃｏｒｎｉｎｇ／ＶＷＲ、Ｓｗ
ｉｔｚｅｒｌａｎｄ）
・Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－Ｌｏｗアタッチ
メントマルチウェルプレート（アイテム番号ＣＬＳ７００７－２４ＥＡ、Ｓｉｇｍａ）
・細胞培養マイクロプレート、９６ウェル（アイテム番号６５５０９８、Ｇｒｅｉｎｅ
ｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）
・ＲＰＭＩ１６４０培地（アイテム番号４２４０１－０１８、ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ、Ｓｃｈｗｅｉｚ）
・Ｊｕｒｋａｔ培地：２ｇ／ｌのＤ－グルコース、２ｇ／ｌのＮａＨＣＯ３、１０％Ｆ
ＣＳ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１×ＮＥＡＡ、１×ピルビン酸
ナトリウム、２００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢを含むＲＰＭＩ１６４０培地
・Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）
・Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙから受け取った腫瘍サンプル。サン
プルは一晩かけて輸送培地中で送られた。外科手術の約２４時間後、サンプルを細かくカ
ットした。
【0345】
６．８．２．２ 方法
９６－ウェル細胞培養マイクロプレートを、１７μｌの冷たいＭａｔｒｉｇｅｌを添加
することによって調製した。プレートを３７℃で２分インキュベートし、その後、腫瘍断
片を添加した（３連）。ウェルごとに３３μｌの冷たいＭａｔｒｉｇｅｌを添加し、プレ
ートを再度３７℃で２分インキュベートした。ウェルごとに１００μｌ（５０ｎＭまたは
５ｎＭ）のＴＣＢ抗体希釈（ハイグロマイシン非含有であるが２×ペニシリン／ストレプ
トマイシンを含有するＪｕｒｋａｔ培地で希釈した）を添加した。Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡ
Ｔレポーター細胞を回収し、ＶｉＣｅｌｌを使用して生存率を評価した。細胞を３５０×
ｇで７分遠心分離し、その後、それらをハイグロマイシン非含有のＪｕｒｋａｔ培地に再
懸濁した。ウェルごとに５０μｌの細胞懸濁液を添加した（細胞５０，０００個／ウェル
）。加湿したインキュベーター中でプレートを３７℃で４から５時間インキュベートし、
その後、発光の読み出しのためにそれを取り出した。５０μｌのＯＮＥ－Ｇｌｏ溶液を各
ウェルに添加し、暗所で、室温で１０分インキュベートした。ＷＡＬＬＡＣ Ｖｉｃｔｏ
ｒ３ ＥＬＩＳＡリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ２０３０）を５秒／ウェルの検出時
間で使用して、発光を検出した。
９６－ウェル細胞培養マイクロプレートを、１７μｌの冷たいＭａｔｒｉｇｅｌを添加
することによって調製した。プレートを３７℃で２分インキュベートし、その後、腫瘍断
片を添加した（３連）。ウェルごとに３３μｌの冷たいＭａｔｒｉｇｅｌを添加し、プレ
ートを再度３７℃で２分インキュベートした。ウェルごとに１００μｌ（５０ｎＭまたは
５ｎＭ）のＴＣＢ抗体希釈（ハイグロマイシン非含有であるが２×ペニシリン／ストレプ
トマイシンを含有するＪｕｒｋａｔ培地で希釈した）を添加した。Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡ
Ｔレポーター細胞を回収し、ＶｉＣｅｌｌを使用して生存率を評価した。細胞を３５０×
ｇで７分遠心分離し、その後、それらをハイグロマイシン非含有のＪｕｒｋａｔ培地に再
懸濁した。ウェルごとに５０μｌの細胞懸濁液を添加した（細胞５０，０００個／ウェル
）。加湿したインキュベーター中でプレートを３７℃で４から５時間インキュベートし、
その後、発光の読み出しのためにそれを取り出した。５０μｌのＯＮＥ－Ｇｌｏ溶液を各
ウェルに添加し、暗所で、室温で１０分インキュベートした。ＷＡＬＬＡＣ Ｖｉｃｔｏ
ｒ３ ＥＬＩＳＡリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ２０３０）を５秒／ウェルの検出時
間で使用して、発光を検出した。
【0346】
６．８．３．結果
図９～１１に、３人の患者からの腫瘍サンプルからの結果を示す。図９に示される結果
は、気管支および肺の悪性新生物：中葉、気管支または肺、扁平上皮癌を有する患者から
得られた腫瘍サンプルからのものである。図１０に示される結果は、気管支および肺の悪
性新生物：下葉、気管支または肺、非角化型扁平上皮癌を有する患者から得られた腫瘍サ
ンプルからのものである。図１１に示される結果は、気管支および肺の悪性新生物：上葉
、気管支または肺、腺房型を有する腺癌を有する患者から得られた腫瘍サンプルからのも
のである。図９～１１に記載の各バーは、３連の平均を表す。標準誤差は、エラーバーに
よって示される。点線は、ＴＣＢをまったく用いずに腫瘍サンプルと共にインキュベート
されたＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ細胞の発光を示す。対応のない両側ｔ検定を統計的分析に
使用した。０．０５未満のＰ値を有意とみなし、星印と共に示した（＊Ｐ≦０．０５；＊
＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊Ｐ≦０．００１）。図９～１１のそれぞれにおいて、ＧＯ２
ＴＣＢと共にインキュベートした腫瘍サンプルは、ＤＰ４７陰性対照ＴＣＢと共にインキ
ュベートしたサンプルより有意に高い発光を呈した。
図９～１１に、３人の患者からの腫瘍サンプルからの結果を示す。図９に示される結果
は、気管支および肺の悪性新生物：中葉、気管支または肺、扁平上皮癌を有する患者から
得られた腫瘍サンプルからのものである。図１０に示される結果は、気管支および肺の悪
性新生物：下葉、気管支または肺、非角化型扁平上皮癌を有する患者から得られた腫瘍サ
ンプルからのものである。図１１に示される結果は、気管支および肺の悪性新生物：上葉
、気管支または肺、腺房型を有する腺癌を有する患者から得られた腫瘍サンプルからのも
のである。図９～１１に記載の各バーは、３連の平均を表す。標準誤差は、エラーバーに
よって示される。点線は、ＴＣＢをまったく用いずに腫瘍サンプルと共にインキュベート
されたＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ細胞の発光を示す。対応のない両側ｔ検定を統計的分析に
使用した。０．０５未満のＰ値を有意とみなし、星印と共に示した（＊Ｐ≦０．０５；＊
＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊Ｐ≦０．００１）。図９～１１のそれぞれにおいて、ＧＯ２
ＴＣＢと共にインキュベートした腫瘍サンプルは、ＤＰ４７陰性対照ＴＣＢと共にインキ
ュベートしたサンプルより有意に高い発光を呈した。
【0347】
[実施例９]
インビトロにおけるＧＯ２ ＴＣＢの特徴付け
６．９．１．概要
腫瘍特異的な異常にグリコシル化されたＭＵＣ１を認識するＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７
）を、ＭＵＣ１を発現する腫瘍細胞で機能的に特徴付けた。
インビトロにおけるＧＯ２ ＴＣＢの特徴付け
６．９．１．概要
腫瘍特異的な異常にグリコシル化されたＭＵＣ１を認識するＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７
）を、ＭＵＣ１を発現する腫瘍細胞で機能的に特徴付けた。
【0348】
６．９．２．材料および方法
６．９．２．１ 細胞株およびＰＢＭＣ
Ｔ３Ｍ４ ｐｆｚｖおよびＭＣＦ７ ｃｓで操作された腫瘍細胞株を、１０％ＦＣＳお
よび２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ中で培養した。ＭＣＦ１０Ａは、ヒト非腫瘍形成性
乳房上皮細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１０３１７）である。ＨＢＥｐｉＣは、
ヒト気管支上皮細胞（Ｓｃｉｅｎｃｅｌｌ番号３２１０）である。健康な志願者からの全
血を使用した勾配遠心分離によってＰＢＭＣを単離した。
６．９．２．１ 細胞株およびＰＢＭＣ
Ｔ３Ｍ４ ｐｆｚｖおよびＭＣＦ７ ｃｓで操作された腫瘍細胞株を、１０％ＦＣＳお
よび２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ中で培養した。ＭＣＦ１０Ａは、ヒト非腫瘍形成性
乳房上皮細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１０３１７）である。ＨＢＥｐｉＣは、
ヒト気管支上皮細胞（Ｓｃｉｅｎｃｅｌｌ番号３２１０）である。健康な志願者からの全
血を使用した勾配遠心分離によってＰＢＭＣを単離した。
【0349】
６．９．２．２ フローサイトメトリーによる標的結合
示された標的細胞を細胞解離緩衝液を用いて回収し、ＰＢＳで洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液
に再懸濁した。９６－ウェルの丸底プレート中で抗体染色を実行した。ウェル１つ当たり
２００，０００個の細胞をシーディングした。プレートを４００ｇで４分遠心分離し、上
清を除去した。試験抗体をＦＡＣＳ緩衝液で希釈し、３０μｌの抗体溶液を、４℃で３０
分かけて細胞に添加した。未結合の抗体を除去するために、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回
洗浄し、その後、希釈した二次抗体（ＰＥコンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａ
ｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγフラグメント特異的、Ｊａｃｋｓｏｎ
ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ番号１０９－１１６－１７０）を添加した。４℃で３０分
インキュベートした後、未結合の二次抗体を洗浄して除去した。測定の前に、細胞を２０
０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａを使用したフローサイトメ
トリーによって分析した。アッセイを３連で実行した。
示された標的細胞を細胞解離緩衝液を用いて回収し、ＰＢＳで洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液
に再懸濁した。９６－ウェルの丸底プレート中で抗体染色を実行した。ウェル１つ当たり
２００，０００個の細胞をシーディングした。プレートを４００ｇで４分遠心分離し、上
清を除去した。試験抗体をＦＡＣＳ緩衝液で希釈し、３０μｌの抗体溶液を、４℃で３０
分かけて細胞に添加した。未結合の抗体を除去するために、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回
洗浄し、その後、希釈した二次抗体（ＰＥコンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａ
ｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγフラグメント特異的、Ｊａｃｋｓｏｎ
ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ番号１０９－１１６－１７０）を添加した。４℃で３０分
インキュベートした後、未結合の二次抗体を洗浄して除去した。測定の前に、細胞を２０
０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａを使用したフローサイトメ
トリーによって分析した。アッセイを３連で実行した。
【0350】
６．９．２．３ Ｔ細胞によって媒介される腫瘍細胞の致死およびＴ細胞の活性化
標的細胞をトリプシン／ＥＤＴＡを用いて回収し、計数し、生存率をチェックした。細
胞をそれらそれぞれの培地に細胞３００，０００個／ｍｌの最終濃度で再懸濁した。次い
で１００μｌの標的細胞懸濁液を９６－平底プレートの各ウェルに移した。インキュベー
ター中で、プレートを３７℃で一晩インキュベートして、細胞をプレートに接着させた。
次の日、ＰＢＭＣを全血から単離した。血液をＰＢＳで２：１に希釈し、Ｌｅｕｃｏｓｅ
ｐチューブ中の１５ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（番号１０７７１、Ｓｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の上に重ね、ブレーキをかけずに４５０ｇで３０分遠心分離した。
遠心分離の後、細胞を含有するバンドを１０ｍｌピペットを用いて収集し、５０ｍｌチュ
ーブに移した。チューブにＰＢＳを５０ｍｌまで満たし、遠心分離した（４００ｇ、１０
分、室温）。上清を除去し、ペレットをＰＢＳに再懸濁した。遠心分離の後（３００ｇ、
１０分、室温）、上清を捨て、２本のチューブをプールし、洗浄工程を繰り返した（この
ときは３５０ｇ、１０分、室温の遠心分離）。その後、細胞を再懸濁し、細胞係数のため
にペレットを５０ｍｌのＰＢＳ中にプールした。細胞を計数した後、遠心分離し（３５０
ｇ、１０分、室温）、２％ＦＣＳおよび２ｎＭグルタミンを含むＲＰＭＩ中に細胞６００
万個／ｍｌで再懸濁した。プレーティングした標的細胞から培地を除去し、２％ＦＣＳお
よび２ｎＭグルタミンを含むＲＰＭＩで希釈した試験抗体を添加した。エフェクター細胞
溶液の３００，０００個の細胞を各ウェルに移し、１０：１の比率のＥ：Ｔを得た。最大
の放出を決定するために、標的細胞をＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で溶解させた。２４時間
および４８時間後、細胞傷害性検出キット（１６４４７９３、Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してＬＤＨ放出を決定した。腫瘍細胞致死後のＴ細胞におけ
る活性化マーカーの上方調節を、フローサイトメトリーによって測定した。簡単に言えば
、ＰＢＭＣを回収し、９６－ウェルの丸底プレートに移し、ＦＡＣＳ緩衝液で希釈したＣ
Ｄ４ＡＰＣ（３００５１４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８ＦＩＴＣ（３４４７０４、Ｂ
ｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５ＢＶ４２１（３０２６３０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ
６９ＰＥ（３１０９０６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）抗体で染色した。４℃で３０分インキュ
ベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ ＩＩを
使用して蛍光を測定する前に、細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。アッセ
イを３連で実行した。
標的細胞をトリプシン／ＥＤＴＡを用いて回収し、計数し、生存率をチェックした。細
胞をそれらそれぞれの培地に細胞３００，０００個／ｍｌの最終濃度で再懸濁した。次い
で１００μｌの標的細胞懸濁液を９６－平底プレートの各ウェルに移した。インキュベー
ター中で、プレートを３７℃で一晩インキュベートして、細胞をプレートに接着させた。
次の日、ＰＢＭＣを全血から単離した。血液をＰＢＳで２：１に希釈し、Ｌｅｕｃｏｓｅ
ｐチューブ中の１５ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（番号１０７７１、Ｓｉｇｍ
ａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の上に重ね、ブレーキをかけずに４５０ｇで３０分遠心分離した。
遠心分離の後、細胞を含有するバンドを１０ｍｌピペットを用いて収集し、５０ｍｌチュ
ーブに移した。チューブにＰＢＳを５０ｍｌまで満たし、遠心分離した（４００ｇ、１０
分、室温）。上清を除去し、ペレットをＰＢＳに再懸濁した。遠心分離の後（３００ｇ、
１０分、室温）、上清を捨て、２本のチューブをプールし、洗浄工程を繰り返した（この
ときは３５０ｇ、１０分、室温の遠心分離）。その後、細胞を再懸濁し、細胞係数のため
にペレットを５０ｍｌのＰＢＳ中にプールした。細胞を計数した後、遠心分離し（３５０
ｇ、１０分、室温）、２％ＦＣＳおよび２ｎＭグルタミンを含むＲＰＭＩ中に細胞６００
万個／ｍｌで再懸濁した。プレーティングした標的細胞から培地を除去し、２％ＦＣＳお
よび２ｎＭグルタミンを含むＲＰＭＩで希釈した試験抗体を添加した。エフェクター細胞
溶液の３００，０００個の細胞を各ウェルに移し、１０：１の比率のＥ：Ｔを得た。最大
の放出を決定するために、標的細胞をＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で溶解させた。２４時間
および４８時間後、細胞傷害性検出キット（１６４４７９３、Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してＬＤＨ放出を決定した。腫瘍細胞致死後のＴ細胞におけ
る活性化マーカーの上方調節を、フローサイトメトリーによって測定した。簡単に言えば
、ＰＢＭＣを回収し、９６－ウェルの丸底プレートに移し、ＦＡＣＳ緩衝液で希釈したＣ
Ｄ４ＡＰＣ（３００５１４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８ＦＩＴＣ（３４４７０４、Ｂ
ｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５ＢＶ４２１（３０２６３０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ
６９ＰＥ（３１０９０６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）抗体で染色した。４℃で３０分インキュ
ベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ ＩＩを
使用して蛍光を測定する前に、細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。アッセ
イを３連で実行した。
【0351】
６．９．２．４ サイトメトリービーズアレイによるサイトカイン／ケモカイン放出
製造元のガイドラインに従ってサイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ）を使用したフロ
ーサイトメトリーによって、上清中のサイトカイン／ケモカイン分泌を測定した。Ｔ細胞
媒介致死アッセイからの上清を収集し、－２０℃で貯蔵した。その後、上清を融解させ、
製造元の説明書に従って試験した。以下のＣＢＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
）を使用した：ＣＢＡヒトインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）Ｆｌｅｘセット（Ｅ７）
、ＣＢＡヒトグランザイムＢ Ｆｌｅｘセット（Ｄ７）、ＣＢＡヒトＩＬ６ Ｆｌｅｘセ
ット（Ａ７）、ＣＢＡヒトＩＬ８ Ｆｌｅｘセット（Ａ９）、ＣＢＡヒトＩＬ１０ Ｆｌ
ｅｘセット（Ｂ７）およびＣＢＡヒト腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）Ｆｌｅｘセット（Ｄ９）。
ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩを使用してサンプルを測定し、Ｄｉｖａソフトウェア
（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析を実行した。アッセイを３連で実行し
た。
製造元のガイドラインに従ってサイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ）を使用したフロ
ーサイトメトリーによって、上清中のサイトカイン／ケモカイン分泌を測定した。Ｔ細胞
媒介致死アッセイからの上清を収集し、－２０℃で貯蔵した。その後、上清を融解させ、
製造元の説明書に従って試験した。以下のＣＢＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
）を使用した：ＣＢＡヒトインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）Ｆｌｅｘセット（Ｅ７）
、ＣＢＡヒトグランザイムＢ Ｆｌｅｘセット（Ｄ７）、ＣＢＡヒトＩＬ６ Ｆｌｅｘセ
ット（Ａ７）、ＣＢＡヒトＩＬ８ Ｆｌｅｘセット（Ａ９）、ＣＢＡヒトＩＬ１０ Ｆｌ
ｅｘセット（Ｂ７）およびＣＢＡヒト腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）Ｆｌｅｘセット（Ｄ９）。
ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩを使用してサンプルを測定し、Ｄｉｖａソフトウェア
（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析を実行した。アッセイを３連で実行し
た。
【0352】
６．９．３．結果
両方とも異常にグリコシル化されたＭＵＣ１を発現するように操作された乳がん細胞株
ＭＣＦ７および膵臓がん細胞株Ｔ３Ｍ４へのＧＯ２ ＴＣＢの結合を確認した（図１２）
。その後、新たに単離したＰＢＭＣを使用して、両方の腫瘍細胞株、ＭＣＦ７およびＴ３
Ｍ４におけるＧＯ２ ＴＣＢの活性を試験した（図１３および図１４）。２４時間後に、
両方の細胞株の腫瘍細胞の致死が検出され、４８時間後にはより一層強くなっていた。こ
れと同時に、２つの活性化マーカーＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、ならびにＩＬ６
、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの上清への放出によって
決定されたＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の強い活性化が起こった。陰性対照として、
それぞれの非標的化ＴＣＢが含まれている。
両方とも異常にグリコシル化されたＭＵＣ１を発現するように操作された乳がん細胞株
ＭＣＦ７および膵臓がん細胞株Ｔ３Ｍ４へのＧＯ２ ＴＣＢの結合を確認した（図１２）
。その後、新たに単離したＰＢＭＣを使用して、両方の腫瘍細胞株、ＭＣＦ７およびＴ３
Ｍ４におけるＧＯ２ ＴＣＢの活性を試験した（図１３および図１４）。２４時間後に、
両方の細胞株の腫瘍細胞の致死が検出され、４８時間後にはより一層強くなっていた。こ
れと同時に、２つの活性化マーカーＣＤ２５およびＣＤ６９の上方調節、ならびにＩＬ６
、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの上清への放出によって
決定されたＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の強い活性化が起こった。陰性対照として、
それぞれの非標的化ＴＣＢが含まれている。
【0353】
ＧＯ２ ＴＣＢが、上皮細胞上の正常にグリコシル化されたＭＵＣ１に結合しないこと
を証明するために、ヒト非腫瘍形成性乳房上皮細胞株であるＭＣＦ１０Ａ、および初代ヒ
ト気管支上皮細胞であるＨＢＥｐｉＣへの結合を試験した。陽性対照として、正常な細胞
上で発現されたＭＵＣ１と腫瘍細胞上で発現されたＭＵＣ１とを識別しないＨＭＦＧ１
ＴＣＢが含まれていた。ＨＦＭＧ１ ＴＣＢは、両方の試験した細胞に結合することが見
出されたことから、ＭＵＣ１の発現が確認されるが、ＧＯ２ ＴＣＢはこれらの細胞に結
合することができなかった（図１５）。加えて、ＧＯ２ ＴＣＢを試験して、それがＭＵ
Ｃ１を発現する正常な上皮細胞の存在下で致死またはＴ細胞の活性化を誘導するかどうか
を見た。これをＭＣＦ１０Ａ細胞で試験したところ、ＧＯ２ ＴＣＢで検出可能な致死ま
たはＴ細胞の活性化はなく、それに対してＨＭＦＧ１ ＴＣＢは、致死に加えてＴ細胞の
活性化も誘導した（図１６）。
を証明するために、ヒト非腫瘍形成性乳房上皮細胞株であるＭＣＦ１０Ａ、および初代ヒ
ト気管支上皮細胞であるＨＢＥｐｉＣへの結合を試験した。陽性対照として、正常な細胞
上で発現されたＭＵＣ１と腫瘍細胞上で発現されたＭＵＣ１とを識別しないＨＭＦＧ１
ＴＣＢが含まれていた。ＨＦＭＧ１ ＴＣＢは、両方の試験した細胞に結合することが見
出されたことから、ＭＵＣ１の発現が確認されるが、ＧＯ２ ＴＣＢはこれらの細胞に結
合することができなかった（図１５）。加えて、ＧＯ２ ＴＣＢを試験して、それがＭＵ
Ｃ１を発現する正常な上皮細胞の存在下で致死またはＴ細胞の活性化を誘導するかどうか
を見た。これをＭＣＦ１０Ａ細胞で試験したところ、ＧＯ２ ＴＣＢで検出可能な致死ま
たはＴ細胞の活性化はなく、それに対してＨＭＦＧ１ ＴＣＢは、致死に加えてＴ細胞の
活性化も誘導した（図１６）。
【0354】
[実施例１０]
表面プラズモン共鳴によるＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢ抗体の機能的な特徴付け
６．１０．１．概要
ＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７）を、表面プラズモン共鳴によって特徴付けた
。
表面プラズモン共鳴によるＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢ抗体の機能的な特徴付け
６．１０．１．概要
ＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢ（実施例７）を、表面プラズモン共鳴によって特徴付けた
。
【0355】
６．１０．２．材料および方法
６．１０．２．１ 固定されたグリコペプチドへのＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢの結合
ヒトおよびカニクイザルのグリコペプチドへのＧＯ２抗体およびＧＯ２ ＴＣＢの結合
（表６）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価した。全てのＳＰＲ実験を、Ｂ
ｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で、２５℃で、ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ（０．０１
ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％
界面活性剤Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ／Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実行
した。
６．１０．２．１ 固定されたグリコペプチドへのＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢの結合
ヒトおよびカニクイザルのグリコペプチドへのＧＯ２抗体およびＧＯ２ ＴＣＢの結合
（表６）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価した。全てのＳＰＲ実験を、Ｂ
ｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で、２５℃で、ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ（０．０１
ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％
界面活性剤Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ／Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実行
した。
【0356】
【表7】
【0357】
ビオチン化したグリコペプチドをＰＢＳ中に溶解し、最終濃度を０．９から１．８ｍｇ
／ｍｌの間にした（表６）。ビオチン化したグリコペプチドをストレプトアビジン（ＳＡ
）センサーチップのフローセルに直接カップリングした。最大８８０共鳴単位（ＲＵ）の
固定レベルを使用した。フローセルを通る３０μＬ／分のフローを用いて、２４０秒にわ
たり、１０００ｎＭの濃度で、ＧＯ２抗体またはＧＯ２ ＴＣＢを注入した（図１７）。
解離を５００秒にわたりモニターした。バルクの屈折率差を、タンパク質が固定されてい
ない参照フローセルで得られた応答を引くことによって補正した。
／ｍｌの間にした（表６）。ビオチン化したグリコペプチドをストレプトアビジン（ＳＡ
）センサーチップのフローセルに直接カップリングした。最大８８０共鳴単位（ＲＵ）の
固定レベルを使用した。フローセルを通る３０μＬ／分のフローを用いて、２４０秒にわ
たり、１０００ｎＭの濃度で、ＧＯ２抗体またはＧＯ２ ＴＣＢを注入した（図１７）。
解離を５００秒にわたりモニターした。バルクの屈折率差を、タンパク質が固定されてい
ない参照フローセルで得られた応答を引くことによって補正した。
【0358】
６．１０．２．２ 固定されたグリコペプチドへのＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢの結合活
性
ＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢの結合活性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評
価した。全てのＳＰＲ実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で、２５℃で、ランニング緩衝
液としてＨＢＳ－ＥＰ（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、
３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ
／Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実行した。ビオチン化したグリコペプチド（表６）をストレ
プトアビジン（ＳＡ）センサーチップのフローセルに直接カップリングした。最大２００
共鳴単位（ＲＵ）の固定レベルを使用した。
性
ＧＯ２およびＧＯ２ ＴＣＢの結合活性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評
価した。全てのＳＰＲ実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で、２５℃で、ランニング緩衝
液としてＨＢＳ－ＥＰ（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、
３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ
／Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実行した。ビオチン化したグリコペプチド（表６）をストレ
プトアビジン（ＳＡ）センサーチップのフローセルに直接カップリングした。最大２００
共鳴単位（ＲＵ）の固定レベルを使用した。
【0359】
フローセルを通る３０μＬ／分のフローを用いて、１２０秒にわたり、３．９から１０
００ｎＭ範囲の濃度で（１：２希釈）、ＧＯ２抗体またはＧＯ２ ＴＣＢを注入した。解
離を４００秒モニターした。バルクの屈折率差を、タンパク質が固定されていない参照フ
ローセルで得られた応答を引くことによって補正した。相互作用の２価性にもかかわらず
、Ｂｉａｅｖａｌソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して曲線を１：１
のラングミュア結合に当てはめることによって、ＫＤを得た。それゆえに「見かけの」Ｋ
Ｄは、比較目的でのみ使用することができる。
００ｎＭ範囲の濃度で（１：２希釈）、ＧＯ２抗体またはＧＯ２ ＴＣＢを注入した。解
離を４００秒モニターした。バルクの屈折率差を、タンパク質が固定されていない参照フ
ローセルで得られた応答を引くことによって補正した。相互作用の２価性にもかかわらず
、Ｂｉａｅｖａｌソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して曲線を１：１
のラングミュア結合に当てはめることによって、ＫＤを得た。それゆえに「見かけの」Ｋ
Ｄは、比較目的でのみ使用することができる。
【0360】
６．１０．３．結果
図１８のセンサーグラムから見ることができるように、ＧＯ２抗体（図１８Ａ）および
ＧＯ２ ＴＣＢ（図１８Ｂ）は、ヒトおよびカニクイザルグリコペプチドの両方と結合す
る。ＧＯ２抗体およびＧＯ２ ＴＣＢは、ヒトグリコペプチドより高い結合活性で、カニ
クイザルグリコペプチドに結合する。
図１８のセンサーグラムから見ることができるように、ＧＯ２抗体（図１８Ａ）および
ＧＯ２ ＴＣＢ（図１８Ｂ）は、ヒトおよびカニクイザルグリコペプチドの両方と結合す
る。ＧＯ２抗体およびＧＯ２ ＴＣＢは、ヒトグリコペプチドより高い結合活性で、カニ
クイザルグリコペプチドに結合する。
【0361】
図１９から見ることができるように、ヒトグリコペプチドへの２価のＧＯ２バインダー
（ＩｇＧ、ＴＣＢ）の結合は、３桁のナノモル濃度であり（図１９Ａおよび１９Ｃ）、そ
れに対してカニクイザルグリコペプチドへの結合は、２桁のナノモル濃度である（図１９
Ｂおよび１９Ｄ）。
（ＩｇＧ、ＴＣＢ）の結合は、３桁のナノモル濃度であり（図１９Ａおよび１９Ｃ）、そ
れに対してカニクイザルグリコペプチドへの結合は、２桁のナノモル濃度である（図１９
Ｂおよび１９Ｄ）。
【0362】
[実施例１１]
カニクイザルにおけるＧＯ２ ＴＣＢの探索的単回用量の薬物動態学的および忍容性研究
６．１１．１．概要
この研究の目的は、カニクイザルへの単回の静脈注射によって与えられる場合の、実施
例７に記載されるＧＯ２ ＴＣＢの薬物動態学および忍容性を決定するためである。
カニクイザルにおけるＧＯ２ ＴＣＢの探索的単回用量の薬物動態学的および忍容性研究
６．１１．１．概要
この研究の目的は、カニクイザルへの単回の静脈注射によって与えられる場合の、実施
例７に記載されるＧＯ２ ＴＣＢの薬物動態学および忍容性を決定するためである。
【0363】
６．１１．２．材料および方法
６．１１．２．１ ＧＯ２ ＴＣＢの調製
ＧＯ２ ＴＣＢ（２．１２ｍｇ／ｍＬ）および配合緩衝液（２０ｍＭのヒスチジン、１
４０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０；ｐＨ６．０）の凍結したストック溶
液の融解を、４℃で維持されるように設定された冷蔵庫で一晩行う。試験項目の投与配合
物を、滅菌条件下で、配合緩衝液での希釈によって用量レベルの必要条件を満たす適切な
濃度に調製する。
６．１１．２．１ ＧＯ２ ＴＣＢの調製
ＧＯ２ ＴＣＢ（２．１２ｍｇ／ｍＬ）および配合緩衝液（２０ｍＭのヒスチジン、１
４０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０；ｐＨ６．０）の凍結したストック溶
液の融解を、４℃で維持されるように設定された冷蔵庫で一晩行う。試験項目の投与配合
物を、滅菌条件下で、配合緩衝液での希釈によって用量レベルの必要条件を満たす適切な
濃度に調製する。
【0364】
投与配合物は、注射前の２時間以内に調製され、使用まで室温で貯蔵される。投与配合
物の調製および貯蔵には、吸着を防止するためにポリプロピレン容器が使用される。投与
配合物は、ろ過すべきではなく、撹拌または振盪もすべきではない。いずれの混合も、穏
やかなピペッティングまたは穏やかな容器のスイングのいずれかによってなされる。
物の調製および貯蔵には、吸着を防止するためにポリプロピレン容器が使用される。投与
配合物は、ろ過すべきではなく、撹拌または振盪もすべきではない。いずれの混合も、穏
やかなピペッティングまたは穏やかな容器のスイングのいずれかによってなされる。
【0365】
６．１１．２．２ 動物
２～４歳であり体重４ｋｇ未満のカニクイザル（カニクイザル（Macaca fascicularis
））が研究に使用される。動物は、投与開始前の少なくとも６週間、試験施設である霊長
類毒物学施設に順化させる。
２～４歳であり体重４ｋｇ未満のカニクイザル（カニクイザル（Macaca fascicularis
））が研究に使用される。動物は、投与開始前の少なくとも６週間、試験施設である霊長
類毒物学施設に順化させる。
【0366】
投与開始の前の週の間、動物は、十分な獣医学的検査（到着直後に実行される）、臨床
的な観察記録、体重のプロファイルおよび臨床病理学的調査に基づき、実験への参加につ
いて承認を受ける。
的な観察記録、体重のプロファイルおよび臨床病理学的調査に基づき、実験への参加につ
いて承認を受ける。
【0367】
研究のために選択された動物は、供給されたグループ適合性の情報と次いで支給された
個々の研究数に基づいてランダムにケージに割り当てられる。動物は、最大５つのグルー
プでケージに割り当てられる。
個々の研究数に基づいてランダムにケージに割り当てられる。動物は、最大５つのグルー
プでケージに割り当てられる。
【0368】
６．１１．２．３ 管理
動物を、可能であれば、２つの階の動物群の囲いに性別ごとに最大５つのグループに社
会的に隔離し、下の階で１．６１×１．６６×２．５ｍ、上の階で１．６１×１．６６×
２．０３ｍを測定する。土台の材料は、木材の削りくずである。土台中には研究目的に干
渉すると予想される公知の汚染物質はない。
動物を、可能であれば、２つの階の動物群の囲いに性別ごとに最大５つのグループに社
会的に隔離し、下の階で１．６１×１．６６×２．５ｍ、上の階で１．６１×１．６６×
２．０３ｍを測定する。土台の材料は、木材の削りくずである。土台中には研究目的に干
渉すると予想される公知の汚染物質はない。
【0369】
動物室の環境の標的化条件は、以下の通りである：
温度：１８～２４℃
湿度：４０～７０％
換気：１時間当たり最低限１０回の空気交換
光サイクル：１２時間の明期および１２時間の暗期（研究手順／活動により中断されると
きを除く）。
温度：１８～２４℃
湿度：４０～７０％
換気：１時間当たり最低限１０回の空気交換
光サイクル：１２時間の明期および１２時間の暗期（研究手順／活動により中断されると
きを除く）。
【0370】
温度および湿度の自動制御が行われ、これは、連続的にモニターされ、記録される。光
サイクルの自動制御が行われる。
サイクルの自動制御が行われる。
【0371】
特別食供給（ＳＤＳ：Special Diets Service）ＭＰ（Ｅ）ショートＳＱＣ食（Short S
QC Diet）が、研究中にわたり１日分の配給として提供される。動物１匹当たりおよそ２
００グラムの餌の配給が１日１回提供される。餌中には研究目的に干渉すると予想される
公知の汚染物質はない。動物は、共同の供給源から制限なく水を摂取する。水中には研究
目的に干渉すると予想される公知の汚染物質はない。
QC Diet）が、研究中にわたり１日分の配給として提供される。動物１匹当たりおよそ２
００グラムの餌の配給が１日１回提供される。餌中には研究目的に干渉すると予想される
公知の汚染物質はない。動物は、共同の供給源から制限なく水を摂取する。水中には研究
目的に干渉すると予想される公知の汚染物質はない。
【0372】
社会的相互作用、遊び、および調査が促進されるように、動物の室内環境を豊かにする
。動物は、安全な場所、およびプラスチックのおもちゃ、ボール、よじ登りのためのフレ
ームおよびステンレス鋼の鏡などの資材を有する。これらは、慣れを低減するために頻繁
に交換される。交換の前に、全てのおもちゃおよびよじ登りのためのフレームは、交差汚
染を回避するために徹底的にクリーニングされる。動物はまた、通常は毎日、飼料混合物
、野菜、堅果、ビスケットおよび果物などの様々な他のごほうびも提供される。
。動物は、安全な場所、およびプラスチックのおもちゃ、ボール、よじ登りのためのフレ
ームおよびステンレス鋼の鏡などの資材を有する。これらは、慣れを低減するために頻繁
に交換される。交換の前に、全てのおもちゃおよびよじ登りのためのフレームは、交差汚
染を回避するために徹底的にクリーニングされる。動物はまた、通常は毎日、飼料混合物
、野菜、堅果、ビスケットおよび果物などの様々な他のごほうびも提供される。
【0373】
研究の経過中にわたり、獣医学的ケアを受けることが可能であり、臨床徴候または他の
変化により当然と認められた場合、動物は獣医科のスタッフによる検査を受ける。
変化により当然と認められた場合、動物は獣医科のスタッフによる検査を受ける。
【0374】
６．１１．２．４ 実験設計
１匹の雄および１匹の雌の動物にＧＯ２ ＴＣＢを投与する。
１匹の雄および１匹の雌の動物にＧＯ２ ＴＣＢを投与する。
【0375】
【表8】
【0376】
ＧＯ２ ＴＣＢは、少なくとも８日間あけて、伏在静脈または尾静脈における単回の静
脈内へのゆっくりとしたボーラス注射（１～２分）によって適切な動物に投与される。こ
れは、どの１日においても１匹の雄および１匹の雌のみが新しい用量レベルを受けるよう
に時間差でなされる。以前の用量レベルからの観察（臨床病理学データを含む）に基づい
て、次の用量グループでは用量を増加または減少させる。各用量レベルにはナイーブ動物
が使用される。用量は、Ｖｙｇｏｎ注射針が取り付けられたシリンジを使用して与えられ
る。
脈内へのゆっくりとしたボーラス注射（１～２分）によって適切な動物に投与される。こ
れは、どの１日においても１匹の雄および１匹の雌のみが新しい用量レベルを受けるよう
に時間差でなされる。以前の用量レベルからの観察（臨床病理学データを含む）に基づい
て、次の用量グループでは用量を増加または減少させる。各用量レベルにはナイーブ動物
が使用される。用量は、Ｖｙｇｏｎ注射針が取り付けられたシリンジを使用して与えられ
る。
【0377】
投与の約７２時間後（最後の計画的なサンプルを採取した後）に動物の検死を行う。重
度の臨床症状のために計画的な日付の前に終結させなければならない全ての動物に関して
、臨床病理学（可能であれば終結前の追加のサンプリング）および組織病理学の完全なパ
ネルが分析される。
度の臨床症状のために計画的な日付の前に終結させなければならない全ての動物に関して
、臨床病理学（可能であれば終結前の追加のサンプリング）および組織病理学の完全なパ
ネルが分析される。
【0378】
静脈注射による投与経路は、臨床的な適用の可能な経路であるため、この経路がこの研
究に選択されている。臨床的に重要な用量範囲を網羅し、動物への起こり得る傷害を最小
化するような低用量および高用量レベルを選択した。低用量は、類似の効力を有する類似
のＴ細胞二重特異性抗体を用いたカニクイザルにおける経験に基づき選択され、高用量は
、それを３倍に増加した量に相当する。
究に選択されている。臨床的に重要な用量範囲を網羅し、動物への起こり得る傷害を最小
化するような低用量および高用量レベルを選択した。低用量は、類似の効力を有する類似
のＴ細胞二重特異性抗体を用いたカニクイザルにおける経験に基づき選択され、高用量は
、それを３倍に増加した量に相当する。
【0379】
６．１１．３．結果
ＧＯ２ ＴＣＢは、試験した用量で許容される。
ＧＯ２ ＴＣＢは、試験した用量で許容される。
【0380】
７．具体的な実施形態、参考文献の引用
様々な具体的な実施形態を例示し記載したが、本開示の本質および範囲から逸脱するこ
となく様々な変更をなすことができることが理解されると予想される。本発明の開示は、
以下に記載の番号付けされた実施形態によって例示される。
様々な具体的な実施形態を例示し記載したが、本開示の本質および範囲から逸脱するこ
となく様々な変更をなすことができることが理解されると予想される。本発明の開示は、
以下に記載の番号付けされた実施形態によって例示される。
【0381】
１．ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープ
に優先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
に優先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0382】
２．ａ．精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ
１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル
化されたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（
以下、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル
化されたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（
以下、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（
ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメ
ントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0383】
３．配列番号３３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２９
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ
－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態１また
は実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ
－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態１また
は実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0384】
４．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載の抗グリコ
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0385】
５．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載の抗グリ
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0386】
６．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載の抗グリ
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0387】
７．ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載の抗グリ
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0388】
８．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から７のいずれか
一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0389】
９．ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、実施形態３から７のいずれ
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0390】
１０．ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施形態３から９のいずれ
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0391】
１１．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１０のい
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0392】
１２．ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１０のい
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0393】
１３．ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１２のい
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0394】
１４．ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態３から１３のい
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0395】
１５．ＶＨが、配列番号５～７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＶＬが、配列番号
８～１０のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体ま
たは抗原結合フラグメント。
８～１０のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体ま
たは抗原結合フラグメント。
【0396】
１６．ＶＨが、配列番号２３～２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＶＬが、配列
番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0397】
１７．ＶＨが、配列番号２８、２９、および２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、実施形態１または実施形態２に
記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0398】
１８．キメラ抗体またはヒト化抗体である、実施形態１から１７のいずれか一つに記載
の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0399】
１９．ＶＨが、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
【0400】
２０．ＶＨが、配列番号３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
【0401】
２１．ＶＨが、配列番号３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
み、ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
実施形態１から１８のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグ
メント。
【0402】
２２．ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列
を含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラ
グメント。
を含む、実施形態１または実施形態２に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラ
グメント。
【0403】
２３．多価である、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体また
は抗原結合フラグメント。
は抗原結合フラグメント。
【0404】
２４．単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、実施形態１から２２のいずれ
かに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
かに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0405】
２５．ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、
実施形態２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
実施形態２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0406】
２６．ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、４～１５アミ
ノ酸のリンカー配列に共有結合している、実施形態２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体ま
たは抗原結合フラグメント。
ノ酸のリンカー配列に共有結合している、実施形態２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体ま
たは抗原結合フラグメント。
【0407】
２７．多重特異性抗体の形態である、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗グリコ
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0408】
２８．多重特異性抗体が、第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重
特異性抗体である、実施形態２７に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ント。
特異性抗体である、実施形態２７に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメ
ント。
【0409】
２９．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細
胞誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態２
８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
胞誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態２
８に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0410】
３０．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、実施形態２９に記載の抗グリコＭ
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
ＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0411】
３１．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、実施形態３０に記載の抗グ
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
リコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0412】
３２．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬである、実施形態３０に記載の
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0413】
３３．二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬである、実施形態３０に記載
の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0414】
３４．二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、実施形態２９に記載の抗グリ
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
コＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0415】
３５．二重特異性抗体が、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、実施形態２９
に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0416】
３６．二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）である、実施形態２９
に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0417】
３７．第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、実施形態２８から３５のいず
れか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
れか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0418】
３８．第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＭＵＣ
１エピトープである、実施形態２８から３５のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗
体または抗原結合フラグメント。
１エピトープである、実施形態２８から３５のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗
体または抗原結合フラグメント。
【0419】
３９．第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、実施形態２８から３６のいずれ
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
か一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0420】
４０．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトー
プ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、実
施形態３９に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
プ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、実
施形態３９に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0421】
４１．Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、ＣＤ３エピトープは、任意選択
でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、実施形態４０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体
または抗原結合フラグメント。
でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、実施形態４０に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体
または抗原結合フラグメント。
【0422】
４２．ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ
３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、実施形態４１に記載の
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、実施形態４１に記載の
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0423】
４３．検出可能な部分にコンジュゲートされている、実施形態１から４２のいずれか一
つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0424】
４４．検出可能なマーカーが、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、実施形態
４３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
４３に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
【0425】
４５．ＣＤ３（任意選択でヒトＣＤ３）に結合する第１の抗原結合ドメインおよびグリ
コＭＵＣ１に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、二重特異
性抗体は、乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可
変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラ
グメントと競合し、第１の抗原結合ドメインは、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列
番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；なら
びに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号３９
のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。
コＭＵＣ１に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、二重特異
性抗体は、乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可
変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラ
グメントと競合し、第１の抗原結合ドメインは、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列
番号３５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；なら
びに配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号３９
のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性抗体。
【0426】
４６．第２の抗原結合ドメインが、（ｉ）配列番号５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣ
ＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８
の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含
む軽鎖可変領域を含む、実施形態４５に記載の二重特異性抗体。
ＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８
の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含
む軽鎖可変領域を含む、実施形態４５に記載の二重特異性抗体。
【0427】
４７．第１の抗原結合ドメインが、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列
番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４５または実施形態４６に記載の二重
特異性抗体。
、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列
番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４５または実施形態４６に記載の二重
特異性抗体。
【0428】
４８．第１の抗原結合ドメインが、配列番号４０の重鎖可変領域配列および配列番号４
１の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４７に記載の二重特異性抗体。
１の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４７に記載の二重特異性抗体。
【0429】
４９．第２の抗原結合ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列番
号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４５から４８のいずれか一つに記載の二重
特異性抗体。
９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列番
号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４５から４８のいずれか一つに記載の二重
特異性抗体。
【0430】
５０．第２の抗原結合ドメインが、配列番号３の重鎖可変領域配列および配列番号４の
軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４９に記載の二重特異性抗体。
軽鎖可変領域配列を含む、実施形態４９に記載の二重特異性抗体。
【0431】
５１．第１および／または第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ分子である、実施形態４
５から５０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
５から５０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0432】
５２．第１の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変または定常領域
のいずれかが交換されている交差Ｆａｂ分子である、実施形態５１に記載の二重特異性抗
体。
のいずれかが交換されている交差Ｆａｂ分子である、実施形態５１に記載の二重特異性抗
体。
【0433】
５３．二重特異性抗体の第１および第２の抗原結合ドメインが両方ともＦａｂ分子であ
り、抗原結合ドメインの一方（特に第１の抗原結合ドメイン）において、Ｆａｂ軽鎖およ
びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置き換えられており、
ａ．第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）；または
ｂ．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）、
ＶＨ／ＶＬの交換を有する抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互い
に置き換えられていない、実施形態５２に記載の二重特異性抗体。
り、抗原結合ドメインの一方（特に第１の抗原結合ドメイン）において、Ｆａｂ軽鎖およ
びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置き換えられており、
ａ．第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）；または
ｂ．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、正電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗
原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸または２１３
位におけるアミノ酸は、負電荷を有するアミノ酸で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵイ
ンデックスによる番号付け）、
ＶＨ／ＶＬの交換を有する抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互い
に置き換えられていない、実施形態５２に記載の二重特異性抗体。
【0434】
５４．ａ．第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるア
ミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換され
ており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１に
おいて、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（
Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデ
ックスによる番号付け）；または
ｂ．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており
（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において
、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、
またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
による番号付け）、実施形態５３に記載の二重特異性抗体。
ミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換され
ており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１に
おいて、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（
Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデ
ックスによる番号付け）；または
ｂ．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ酸
は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており
（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において
、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、
またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス
による番号付け）、実施形態５３に記載の二重特異性抗体。
【0435】
５５．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）
、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデック
スによる番号付け）、実施形態５４に記載の二重特異性抗体。
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸または２１３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）
、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデック
スによる番号付け）、実施形態５４に記載の二重特異性抗体。
【0436】
５６．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で
独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、実施形態５
５に記載の二重特異性抗体。
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１におい
て、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で
独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、実施形態５
５に記載の二重特異性抗体。
【0437】
５７．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギ
ニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付
け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ
酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋ
ａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミ
ン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）、実施形態５５に記載の二重特異性抗体。
酸は、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されてお
り（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位におけるアミノ酸は、リシン（Ｋ）、アルギ
ニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で独立して置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付
け）、第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ
酸は、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されており（Ｋ
ａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるアミノ酸は、グルタミ
ン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で独立して置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵ
インデックスによる番号付け）、実施形態５５に記載の二重特異性抗体。
【0438】
５８．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位における
アミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原
結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン
酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位
におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデッ
クスによる番号付け）、実施形態５７に記載の二重特異性抗体。
酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位における
アミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原
結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン
酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位
におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデッ
クスによる番号付け）、実施形態５７に記載の二重特異性抗体。
【0439】
５９．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるアミノ
酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位における
アミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の
抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタ
ミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１
３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵイン
デックスによる番号付け）、実施形態５７に記載の二重特異性抗体。
酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位における
アミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の
抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタ
ミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１
３位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵイン
デックスによる番号付け）、実施形態５７に記載の二重特異性抗体。
【0440】
６０．第２の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＬが、カッパアイソタイプの定常ドメ
インＣＬである、実施形態５３から５９のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
インＣＬである、実施形態５３から５９のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0441】
６１．第１および第２の抗原結合ドメインが、任意選択でペプチドリンカーを介して、
互いに融合している、実施形態４５から６０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
互いに融合している、実施形態４５から６０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0442】
６２．第１および第２の抗原結合ドメインが、それぞれＦａｂ分子であり、（ｉ）第２
の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖の
Ｎ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末
端で、第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているかのいずれかである
、実施形態６１に記載の二重特異性抗体。
の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖の
Ｎ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末
端で、第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているかのいずれかである
、実施形態６１に記載の二重特異性抗体。
【0443】
６３．二重特異性抗体が、ＣＤ３への１価の結合を提供する、実施形態４５から６２の
いずれか一つに記載の二重特異性抗体。
いずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0444】
６４．グリコＭＵＣ１に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインを含む、実施形態６
３に記載の二重特異性抗体。
３に記載の二重特異性抗体。
【0445】
６５．グリコＭＵＣ１に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインが、同じアミノ酸配
列を含む、実施形態６４に記載の二重特異性抗体。
列を含む、実施形態６４に記載の二重特異性抗体。
【0446】
６６．二重特異性抗体が、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインを
さらに含む、実施形態４５から６５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
さらに含む、実施形態４５から６５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0447】
６７．Ｆｃドメインが、ＩｇＧ Ｆｃドメインである、実施形態６６に記載の二重特異
性抗体。
性抗体。
【0448】
６８．Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態６７に記載の二重特
異性抗体。
異性抗体。
【0449】
６９．Ｆｃドメインが、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、実施形態６７に記載の二重特
異性抗体。
異性抗体。
【0450】
７０．ＩｇＧ４ Ｆｃドメインが、Ｓ２２８位におけるアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ Ｅ
Ｕインデックスの番号付け）、好ましくはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む、実施形態６９
に記載の二重特異性抗体。
Ｕインデックスの番号付け）、好ましくはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む、実施形態６９
に記載の二重特異性抗体。
【0451】
７１．Ｆｃドメインが、ヒトＦｃドメインである、実施形態６６に記載の二重特異性抗
体。
体。
【0452】
７２．Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメ
インは、任意選択で、配列番号４２を含んでいてもよい、実施形態７１に記載の二重特異
性抗体。
インは、任意選択で、配列番号４２を含んでいてもよい、実施形態７１に記載の二重特異
性抗体。
【0453】
７３．第１、第２、および存在する場合、第３の抗原結合ドメインが、それぞれＦａｂ
分子であり、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗
原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａ
ｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているか、また
は（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合ドメイン
のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端
で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているかのいずれかであり；（
ｂ）第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの
第２のサブユニットのＮ末端に融合している、実施形態６６から７２のいずれか一つに記
載の二重特異性抗体。
分子であり、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗
原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａ
ｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているか、また
は（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合ドメイン
のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端
で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているかのいずれかであり；（
ｂ）第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの
第２のサブユニットのＮ末端に融合している、実施形態６６から７２のいずれか一つに記
載の二重特異性抗体。
【0454】
７４．Ｆｃドメインが、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進す
る改変を含む、実施形態６６から７３のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
る改変を含む、実施形態６６から７３のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0455】
７５．Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減す
る１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、実施形態６６から７４のいずれか一つに記載の
二重特異性抗体。
る１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、実施形態６６から７４のいずれか一つに記載の
二重特異性抗体。
【0456】
７６．ａ．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインであって、第１の抗原結
合ドメインは、交差Ｆａｂ分子であり、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変または定常領
域のいずれか、好ましくは可変領域は、交換されている、第１の抗原結合ドメイン；
ｂ．グリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２および第３の抗原結合ドメインであって、
配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ
－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のＣＤ
Ｒ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２および第３
の抗原結合ドメインは、それぞれＦａｂ分子である、第２および第３の抗原結合ドメイン
；
ｃ．安定な会合が可能な、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメイン
を含み、
第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ
重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃ
ドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合ドメインは、Ｆ
ａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、実施
形態４５に記載の二重特異性抗体。
合ドメインは、交差Ｆａｂ分子であり、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変または定常領
域のいずれか、好ましくは可変領域は、交換されている、第１の抗原結合ドメイン；
ｂ．グリコＭＵＣ１に特異的に結合する第２および第３の抗原結合ドメインであって、
配列番号５の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号７のＣＤＲ
－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のＣＤ
Ｒ－Ｌ２および配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２および第３
の抗原結合ドメインは、それぞれＦａｂ分子である、第２および第３の抗原結合ドメイン
；
ｃ．安定な会合が可能な、第１および第２のサブユニットで構成されるＦｃドメイン
を含み、
第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合ドメインのＦａｂ
重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃ
ドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合ドメインは、Ｆ
ａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、実施
形態４５に記載の二重特異性抗体。
【0457】
７７．第１の抗原結合ドメインが、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３５の
ＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番
号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号３９のＣＤＲ－
Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態７７に記載の二重特異性抗体。
ＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域；ならびに配列番
号３７の軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号３９のＣＤＲ－
Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態７７に記載の二重特異性抗体。
【0458】
７８．第１の抗原結合ドメインが、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列
番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７７に記載の二重特異性抗体。
、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、および配列
番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７７に記載の二重特異性抗体。
【0459】
７９．第１の抗原結合ドメインが、配列番号４０の重鎖可変領域配列および配列番号４
１の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７８に記載の二重特異性抗体。
１の軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７８に記載の二重特異性抗体。
【0460】
８０．第２および第３の抗原結合ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも
約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、お
よび配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７６から７９のいずれか一つに
記載の二重特異性抗体。
約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な重鎖可変領域配列、お
よび配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
または１００％同一な軽鎖可変領域配列を含む、実施形態７６から７９のいずれか一つに
記載の二重特異性抗体。
【0461】
８１．第２および第３の抗原結合ドメインが、配列番号３の重鎖可変領域および配列番
号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態８０に記載の二重特異性抗体。
号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態８０に記載の二重特異性抗体。
【0462】
８２．Ｆｃドメインが、Ｆｃドメインに関してセクション５．１および５．２に記載さ
れる特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて含む、実施形態７６から８１のいず
れか一つに記載の二重特異性抗体。
れる特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて含む、実施形態７６から８１のいず
れか一つに記載の二重特異性抗体。
【0463】
８３．抗原結合ドメインおよびＦｃ領域が、ペプチドリンカーによって互いに融合して
いる、実施形態７６から８２のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
いる、実施形態７６から８２のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0464】
８４．ペプチドリンカーが、配列番号４５および／または配列番号４６におけるような
ペプチドリンカーを含む、実施形態８３に記載の二重特異性抗体。
ペプチドリンカーを含む、実施形態８３に記載の二重特異性抗体。
【0465】
８５．第２および第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位におけるア
ミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位にお
けるアミノ酸は、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）で、好ましくはアルギニン（Ｒ）
で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、（ｉｉ）の第２および第３のＦａｂ分
子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で
置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる
番号付け）、実施形態７６から８４のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
ミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位にお
けるアミノ酸は、リシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）で、好ましくはアルギニン（Ｒ）
で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、（ｉｉ）の第２および第３のＦａｂ分
子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位におけるアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で
置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位におけるア
ミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる
番号付け）、実施形態７６から８４のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
【0466】
８６．配列番号４３の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド、配列番号４４の配列と少な
くとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な
配列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド、および配
列番号４６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、または９９％同一な配列を含むポリペプチドを含む、実施形態７６から８５のいずれ
か一つに記載の二重特異性抗体。
７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド、配列番号４４の配列と少な
くとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な
配列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な配列を含むポリペプチド、および配
列番号４６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、または９９％同一な配列を含むポリペプチドを含む、実施形態７６から８５のいずれ
か一つに記載の二重特異性抗体。
【0467】
８７．二重特異性抗体が、配列番号４３の配列を含むポリペプチド、配列番号４４の配
列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列を含むポリペプチド、および配列番号４６の
配列を含むポリペプチドを含む、実施形態８６に記載の二重特異性抗体。
列を含むポリペプチド、配列番号４５の配列を含むポリペプチド、および配列番号４６の
配列を含むポリペプチドを含む、実施形態８６に記載の二重特異性抗体。
【0468】
８８．配列番号４３の配列を含む２つのポリペプチドを含む、実施形態８７に記載の二
重特異性抗体。
重特異性抗体。
【0469】
８９．検出可能な部分にコンジュゲートされている、実施形態４５から８８のいずれか
一つに記載の二重特異性抗体。
一つに記載の二重特異性抗体。
【0470】
９０．検出可能なマーカーが、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、実施形態
８９に記載の二重特異性抗体。
８９に記載の二重特異性抗体。
【0471】
９１．少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、実施形態１から４４のい
ずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメント、または実施形態４
５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体のアミノ酸配列を含む融合タンパク質
。
ずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメント、または実施形態４
５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体のアミノ酸配列を含む融合タンパク質
。
【0472】
９２．第２のアミノ酸配列が、４－１ＢＢ、ＣＤ３－ゼータ、またはそのフラグメント
のアミノ酸配列である、実施形態９１に記載の融合タンパク質。
のアミノ酸配列である、実施形態９１に記載の融合タンパク質。
【0473】
９３．第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、実施形態９１に記
載の融合タンパク質。
載の融合タンパク質。
【0474】
９４．融合ペプチドが、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータまたは４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）－
ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、実施形態９３に記載の融合タンパク質。
ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、実施形態９３に記載の融合タンパク質。
【0475】
９５．第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメン
トのアミノ酸配列である、実施形態９１に記載の融合タンパク質。
トのアミノ酸配列である、実施形態９１に記載の融合タンパク質。
【0476】
９６．Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａである、
実施形態９５に記載の融合タンパク質。
実施形態９５に記載の融合タンパク質。
【0477】
９７．実施形態２４から２６のいずれか一つに記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体
（ＣＡＲ）。
（ＣＡＲ）。
【0478】
９８．アミノ末端からカルボキシ末端の順で、ヒトＣＤ８リーダーペプチド、ｓｃＦｖ
、ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナ
ル伝達ドメインを含む、実施形態９７に記載のＣＡＲ。
、ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナ
ル伝達ドメインを含む、実施形態９７に記載のＣＡＲ。
【0479】
９９．細胞傷害性物質にコンジュゲートした、実施形態１から４４のいずれかに記載の
抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメント、または実施形態４５から９０のい
ずれか一つに記載の二重特異性抗体、または実施形態９１から９６のいずれか一つに記載
の融合タンパク質を含む抗体－薬物コンジュゲート。
抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメント、または実施形態４５から９０のい
ずれか一つに記載の二重特異性抗体、または実施形態９１から９６のいずれか一つに記載
の融合タンパク質を含む抗体－薬物コンジュゲート。
【0480】
１００．細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エン
ジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシ
ノイド、またはビンカアルカロイドである、実施形態９９に記載の抗体－薬物コンジュゲ
ート。
ジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシ
ノイド、またはビンカアルカロイドである、実施形態９９に記載の抗体－薬物コンジュゲ
ート。
【0481】
１０１．抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは二重特異性抗体が
、リンカーを介して細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、実施形態１００に記載
の抗体－薬物コンジュゲート。
、リンカーを介して細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、実施形態１００に記載
の抗体－薬物コンジュゲート。
【0482】
１０２．リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、実施形態１０１に記載の抗体－
薬物コンジュゲート。
薬物コンジュゲート。
【0483】
１０３．切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、実施
形態１０２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
形態１０２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【0484】
１０４．リンカーが、ジペプチドを含む、実施形態１０３に記載の抗体－薬物コンジュ
ゲート。
ゲート。
【0485】
１０５．ジペプチドが、ｖａｌ－ｃｉｔまたはｐｈｅ－ｌｙｓである、実施形態１０４
に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【0486】
１０６．切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、実施形態１０
２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
【0487】
１０７．加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態１０６に記載
の抗体－薬物コンジュゲート。
の抗体－薬物コンジュゲート。
【0488】
１０８．切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態１０２に記載
の抗体－薬物コンジュゲート。
の抗体－薬物コンジュゲート。
【0489】
１０９．実施形態１から４４のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体もしくは抗原結
合フラグメント、または実施形態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、
実施形態９１から９６のいずれか一つに記載の融合タンパク質、または実施形態９７また
は実施形態９８に記載のＣＡＲのコード領域を含む核酸。
合フラグメント、または実施形態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、
実施形態９１から９６のいずれか一つに記載の融合タンパク質、または実施形態９７また
は実施形態９８に記載のＣＡＲのコード領域を含む核酸。
【0490】
１１０．コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、実施
形態１０９に記載の核酸。
形態１０９に記載の核酸。
【0491】
１１１．実施形態１０９または実施形態１１０に記載の核酸を含むベクター。
【0492】
１１２．ウイルスベクターである、実施形態１１１に記載のベクター。
【0493】
１１３．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１１２に記載
のベクター。
のベクター。
【0494】
１１４．実施形態１０９または実施形態１１０に記載の核酸を発現するように操作され
た宿主細胞。
た宿主細胞。
【0495】
１１５．実施形態９７または実施形態９８に記載のＣＡＲを発現するように操作された
ヒトＴ細胞である、実施形態１１４に記載の宿主細胞。
ヒトＴ細胞である、実施形態１１４に記載の宿主細胞。
【0496】
１１６．実施形態１１１から１１３のいずれか一つに記載のベクターを含む宿主細胞。
【0497】
１１７．宿主細胞が、Ｔ細胞であり、ベクターが、実施形態９７または実施形態９８に
記載のＣＡＲをコードする、実施形態１１６に記載の宿主細胞。
記載のＣＡＲをコードする、実施形態１１６に記載の宿主細胞。
【0498】
１１８．（ａ）実施形態１から４４のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗
原結合フラグメント、実施形態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実
施形態９１から９６のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態９７または実施形
態９８に記載のＣＡＲ、実施形態９９から１０８のいずれか一つに記載の抗体－薬物コン
ジュゲート、実施形態１０９または実施形態１１０に記載の核酸、実施形態１１１から１
１３のいずれか一つに記載のベクター、または実施形態１１４から１１７のいずれか一つ
に記載の実施形態の宿主細胞、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまた
は希釈剤を含む医薬組成物。
原結合フラグメント、実施形態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実
施形態９１から９６のいずれか一つに記載の融合タンパク質、実施形態９７または実施形
態９８に記載のＣＡＲ、実施形態９９から１０８のいずれか一つに記載の抗体－薬物コン
ジュゲート、実施形態１０９または実施形態１１０に記載の核酸、実施形態１１１から１
１３のいずれか一つに記載のベクター、または実施形態１１４から１１７のいずれか一つ
に記載の実施形態の宿主細胞、および（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまた
は希釈剤を含む医薬組成物。
【0499】
１１９．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の実施形態１
から４４のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形
態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実施形態９１から９６のいずれ
か一つに記載の融合タンパク質、実施形態９７または実施形態９８に記載のＣＡＲ、実施
形態９９から１０８のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態１０９
または実施形態１１０に記載の核酸、実施形態１１１から１１３のいずれか一つに記載の
ベクター、実施形態１１４から１１７のいずれか一つに記載の実施形態の宿主細胞、また
は実施形態１１８に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
から４４のいずれかに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、実施形
態４５から９０のいずれか一つに記載の二重特異性抗体、実施形態９１から９６のいずれ
か一つに記載の融合タンパク質、実施形態９７または実施形態９８に記載のＣＡＲ、実施
形態９９から１０８のいずれか一つに記載の抗体－薬物コンジュゲート、実施形態１０９
または実施形態１１０に記載の核酸、実施形態１１１から１１３のいずれか一つに記載の
ベクター、実施形態１１４から１１７のいずれか一つに記載の実施形態の宿主細胞、また
は実施形態１１８に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【0500】
１２０．対象が、乳がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、または
結腸直腸がんに罹っている、実施形態１１９に記載の方法。
結腸直腸がんに罹っている、実施形態１１９に記載の方法。
【0501】
１２１．生物学的サンプルでがんを検出する方法であって、サンプルを、実施形態１か
ら４４のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触
させること、および抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出する
ことを含む方法。
ら４４のいずれか一つに記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触
させること、および抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出する
ことを含む方法。
【0502】
１２２．抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することを
さらに含む、実施形態１２１に記載の方法。
さらに含む、実施形態１２１に記載の方法。
【0503】
１２３．結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、およ
び／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、実施形態１２１または実施形
態１２２に記載の方法。
び／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、実施形態１２１または実施形
態１２２に記載の方法。
【0504】
本出願で引用された全ての公報、特許、特許出願および他の文書は、それぞれ個々の公
報、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的のために参照により組み入れられるこ
とが個々に示されたのと同程度に、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明
細書に組み入れられる。本明細書に組み入れられる参考文献の１つまたは複数の教示と本
発明の開示との間に不一致がある事象では、本明細書の教示が意図される。
本発明は次の実施態様を含む。
［１］
ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２］
ａ．精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化されたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（以下、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３］
配列番号３３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［５］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［６］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［７］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［８］
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［９］
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１０］
ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１１］
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１２］
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１３］
ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１４］
ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１５］
前記ＶＨが、配列番号５～７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番号８～１０のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１６］
前記ＶＨが、配列番号２３～２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、 配列番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１７］
前記ＶＨが、配列番号２８、２９、および２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１８］
キメラ抗体またはヒト化抗体である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１９］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２０］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２１］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２２］
前記ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２３］
多価である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２４］
単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２５］
前記ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、上記［２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２６］
前記ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、４～１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している、上記［２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２７］
多重特異性抗体の形態である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２８］
前記多重特異性抗体が、前記第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、上記［２７］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２９］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３０］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３１］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３２］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３３］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３４］
前記二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３５］
前記二重特異性抗体が、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３６］
前記二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３７］
前記第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３８］
前記第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＭＵＣ１エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３９］
前記第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４０］
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、上記［３９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４１］
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、前記ＣＤ３エピトープは、任意選択でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、上記［４０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４２］
前記ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、上記［４１］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４３］
検出可能な部分にコンジュゲートされている、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４４］
検出可能なマーカーが、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、上記［４３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４５］
少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
［４６］
前記第２のアミノ酸配列が、４－１ＢＢ、ＣＤ３－ゼータ、またはそのフラグメントのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［４７］
前記第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［４８］
前記融合ペプチドが、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドまたは４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、上記［４７］に記載の融合タンパク質。
［４９］
前記第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメントのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［５０］
前記Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａである、上記［４９］に記載の融合タンパク質。
［５１］
上記［２４］に記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
［５２］
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、ヒトＣＤ８リーダーペプチド、前記ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含む、上記［５１］に記載のＣＡＲ。
［５３］
細胞傷害性物質にコンジュゲートした、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを含む抗体－薬物コンジュゲート。
［５４］
前記細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイド、またはビンカアルカロイドである、上記［５３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５５］
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントが、リンカーを介して前記細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、上記［５４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５６］
前記リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、上記［５５］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５７］
切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５８］
前記リンカーが、ジペプチドを含む、上記［５７］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５９］
前記ジペプチドが、ｖａｌ－ｃｉｔまたはｐｈｅ－ｌｙｓである、上記［５８］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６０］
切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６１］
加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、上記［６０］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６２］
切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６３］
上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのコード領域を含む核酸。
［６４］
前記コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、上記［６３］に記載の核酸。
［６５］
上記［６３］に記載の核酸を含むベクター。
［６６］
ウイルスベクターである、上記［６５］に記載のベクター。
［６７］
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、上記［６６］に記載のベクター。
［６８］
上記［６３］に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
［６９］
上記［５１］に記載のＣＡＲを発現するように操作されたヒトＴ細胞である宿主細胞。
［７０］
上記［６５］に記載のベクターを含む宿主細胞。
［７１］
上記［５１］に記載のＣＡＲをコードするベクターを含むＴ細胞である宿主細胞。
［７２］
（ａ）上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、および
（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤
を含む医薬組成物。
［７３］
がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む方法。
［７４］
前記対象が、乳がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、または結腸直腸がんを罹っている、上記［７３］に記載の方法。
［７５］
生物学的サンプルにおいてがんを検出する方法であって、サンプルを、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法。
［７６］
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することをさらに含む、上記［７５］に記載の方法。
［７７］
前記結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、および／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、上記［７５］に記載の方法。
報、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的のために参照により組み入れられるこ
とが個々に示されたのと同程度に、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明
細書に組み入れられる。本明細書に組み入れられる参考文献の１つまたは複数の教示と本
発明の開示との間に不一致がある事象では、本明細書の教示が意図される。
本発明は次の実施態様を含む。
［１］
ａ．正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるグリコＭＵＣ１エピトープに優先的に結合し；
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２］
ａ．精製された組換えヒトグリコシルトランスフェラーゼであるＧａｌＮＡｃ－Ｔ１、ＧａｌＮＡｃ－Ｔ２、およびＧａｌＮＡｃ－Ｔ４を使用してインビトロでグリコシル化されたＭＵＣ１タンデムリピート（ＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧ）３（以下、「第１のエピトープ」と称する）に結合し；かつ、
ｂ．乳がん細胞株ＭＣＦ７またはＴ４７Ｄへの結合に関して、配列番号３の重鎖可変（ＶＨ）配列および配列番号４の軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体または抗原結合フラグメントと競合する、
抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３］
配列番号３３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［５］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［６］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［７］
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［８］
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［９］
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１０］
ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１１］
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１２］
ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１３］
ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１４］
ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、上記［３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１５］
前記ＶＨが、配列番号５～７の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番号８～１０のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１６］
前記ＶＨが、配列番号２３～２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、 配列番号２６、２７、および１０のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１７］
前記ＶＨが、配列番号２８、２９、および２５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番号３０、９、および３１のＣＤＲを含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１８］
キメラ抗体またはヒト化抗体である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［１９］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２０］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２１］
前記ＶＨが、配列番号３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２２］
前記ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２３］
多価である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２４］
単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の形態である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２５］
前記ｓｃＦｖが、軽鎖可変フラグメントのＮ末端側に重鎖可変フラグメントを含む、上記［２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２６］
前記ｓｃＦｖの重鎖可変フラグメントおよび軽鎖可変フラグメントが、４～１５アミノ酸のリンカー配列に共有結合している、上記［２４に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２７］
多重特異性抗体の形態である、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２８］
前記多重特異性抗体が、前記第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する二重特異性抗体である、上記［２７］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［２９］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｆａｂアーム交換抗体、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）、または二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３０］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂである、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３１］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＦＡＢである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３２］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３３］
前記二重特異性抗体が、ＣｒｏｓｓＭａｂＣＨ１－ＣＬである、上記［３０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３４］
前記二重特異性抗体が、Ｆａｂアーム交換抗体である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３５］
前記二重特異性抗体が、二重親和性再標的化分子（ＤＡＲＴ）である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３６］
前記二重特異性抗体が、二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）である、上記［２９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３７］
前記第２のエピトープが、ＭＵＣ１エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３８］
前記第２のエピトープが、正常細胞と比較して、がん細胞上で過剰発現されるＭＵＣ１エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［３９］
前記第２のエピトープが、Ｔ細胞エピトープである、上記［２８］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４０］
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープ、ＣＤ８エピトープ、ＣＤ１６エピトープ、ＣＤ２５エピトープ、ＣＤ２８エピトープ、またはＮＫＧ２Ｄエピトープを含む、上記［３９］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４１］
前記Ｔ細胞エピトープが、ＣＤ３エピトープを含み、前記ＣＤ３エピトープは、任意選択でヒトＣＤ３に存在するエピトープである、上記［４０］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４２］
前記ＣＤ３エピトープが、ＣＤ３ガンマエピトープ、ＣＤ３デルタエピトープ、ＣＤ３イプシロンエピトープ、またはＣＤ３ゼータエピトープを含む、上記［４１］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４３］
検出可能な部分にコンジュゲートされている、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４４］
検出可能なマーカーが、酵素、放射線同位体、または蛍光標識である、上記［４３］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント。
［４５］
少なくとも第２のアミノ酸配列に作動可能に連結した、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列を含む融合タンパク質。
［４６］
前記第２のアミノ酸配列が、４－１ＢＢ、ＣＤ３－ゼータ、またはそのフラグメントのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［４７］
前記第２のアミノ酸配列が、融合ペプチドのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［４８］
前記融合ペプチドが、ＣＤ２８－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドまたは４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）－ＣＤ３－ゼータ融合ペプチドである、上記［４７］に記載の融合タンパク質。
［４９］
前記第２のアミノ酸配列が、Ｔ細胞の活性化のモジュレーターまたはそのフラグメントのアミノ酸配列である、上記［４５］に記載の融合タンパク質。
［５０］
前記Ｔ細胞の活性化のモジュレーターが、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａである、上記［４９］に記載の融合タンパク質。
［５１］
上記［２４］に記載のｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
［５２］
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、ヒトＣＤ８リーダーペプチド、前記ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８ヒンジドメイン、ヒトＣＤ８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含む、上記［５１］に記載のＣＡＲ。
［５３］
細胞傷害性物質にコンジュゲートした、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを含む抗体－薬物コンジュゲート。
［５４］
前記細胞傷害性物質が、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、アルキル化剤、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ドラスタチン、メイタンシノイド、またはビンカアルカロイドである、上記［５３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５５］
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントが、リンカーを介して前記細胞傷害性物質にコンジュゲートされている、上記［５４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５６］
前記リンカーが、細胞内条件下で切断可能である、上記［５５］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５７］
切断可能なリンカーが、細胞内のプロテアーゼによって切断可能である、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５８］
前記リンカーが、ジペプチドを含む、上記［５７］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［５９］
前記ジペプチドが、ｖａｌ－ｃｉｔまたはｐｈｅ－ｌｙｓである、上記［５８］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６０］
切断可能なリンカーが、５．５未満のｐＨで加水分解性である、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６１］
加水分解性のリンカーが、ヒドラゾンリンカーである、上記［６０］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６２］
切断可能なリンカーが、ジスルフィドリンカーである、上記［５６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
［６３］
上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントのコード領域を含む核酸。
［６４］
前記コード領域が、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている、上記［６３］に記載の核酸。
［６５］
上記［６３］に記載の核酸を含むベクター。
［６６］
ウイルスベクターである、上記［６５］に記載のベクター。
［６７］
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、上記［６６］に記載のベクター。
［６８］
上記［６３］に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
［６９］
上記［５１］に記載のＣＡＲを発現するように操作されたヒトＴ細胞である宿主細胞。
［７０］
上記［６５］に記載のベクターを含む宿主細胞。
［７１］
上記［５１］に記載のＣＡＲをコードするベクターを含むＴ細胞である宿主細胞。
［７２］
（ａ）上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメント、および
（ｂ）生理学的に好適な緩衝液、アジュバントまたは希釈剤
を含む医薬組成物。
［７３］
がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントを投与することを含む方法。
［７４］
前記対象が、乳がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、膵臓がん、食道がん、または結腸直腸がんを罹っている、上記［７３］に記載の方法。
［７５］
生物学的サンプルにおいてがんを検出する方法であって、サンプルを、上記［１］または［２］に記載の抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントと接触させること、および前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出することを含む方法。
［７６］
前記抗グリコＭＵＣ１抗体または抗原結合フラグメントの結合を定量化することをさらに含む、上記［７５］に記載の方法。
［７７］
前記結合が、陰性／ベースライン対照としての正常な組織対照と比較される、および／または陽性対照としてのがん性組織対照と比較される、上記［７５］に記載の方法。
【0505】
８．参考文献
【表9】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図13-1】
【図13-2】
【図13-3】
【図13-4】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18A】
【図18B】
【図19-1】
【図19-2】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-10-27
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
本明細書に記載された発明。