知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024108185
(43)【公開日】2024-08-13
(54)【発明の名称】イオン液体、及び医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4152 20060101AFI20240805BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240805BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240805BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240805BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20240805BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4152
A61P9/10
A61K9/08
A61K47/22
A61K47/24
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023012408
(22)【出願日】2023-01-31
(71)【出願人】
【識別番号】308038613
【氏名又は名称】公立大学法人和歌山県立医科大学
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】福田 達也
(72)【発明者】
【氏名】今福 真由美
(72)【発明者】
【氏名】岩尾 康範
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076CC11
4C076DD49Q
4C076DD50Q
4C076DD60Q
4C076DD62Q
4C076FF33
4C076FF63
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC36
4C086MA02
4C086MA05
4C086MA17
4C086NA03
4C086NA11
4C086ZA36
4C086ZA44
(57)【要約】 （修正有）
【課題】本開示の目的は、水に対する溶解性に優れる、エダラボンアニオンを含むイオン液体を提供することである。
【解決手段】本実施形態の一つは、下記一般式（２－２）で表されるアニオンとカチオンを含む、イオン液体である。
Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。
【選択図】図８
【解決手段】本実施形態の一つは、下記一般式（２－２）で表されるアニオンとカチオンを含む、イオン液体である。
Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。
【選択図】図８
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記一般式（１）で表されるアニオンを含む、イオン液体。
【化1】
【請求項2】
下記一般式（２－１）及び下記一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含む、イオン液体。
（一般式（２－１）において、Ｘ＋は、下記一般式（３）、（４）、（５）、又は（６）で表される１価のカチオンである。）
（一般式（３）において、Ｒ１は、炭素数１～４のアルキル基であり、Ｒ２は、炭素数２～１０のアルキル基であり、
一般式（４）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基であり、
一般式（５）において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基であり、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよく、
一般式（６）において、Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
（一般式（７）において、Ｒ７は、炭素数２～４のアルキレン基であり、Ｒ８は、炭素数１～３のアルキル基であり、波線はリンカチオン（Ｐ＋）への結合部位である。）
（一般式（２－２）において、Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
【化2】
【化3】
一般式（４）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基であり、
一般式（５）において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基であり、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよく、
一般式（６）において、Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
【化4】
【化5】
【請求項3】
前記Ｘ＋は、前記一般式（３）又は（４）で表される１価のカチオンである、請求項２に記載のイオン液体。
【請求項4】
前記Ｘ＋は、式（３－１）～（３－５）、式（４－１）～（４－４）、式（５－１）～（５－５）及び式（６－１）～（６－２）から選択される１価のカチオンである、請求項２に記載のイオン液体。
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【請求項5】
前記Ｘ＋は、式（３－１）又は（４－１）で表される１価のカチオンである、請求項２に記載のイオン液体。
【化10】
【請求項6】
前記一般式（２－２）を構成する下記一般式（Ｚ）で表されるカチオンが、式（Ｚ－１）又は式（Ｚ－２）で表されるカチオンである、請求項２に記載のイオン液体。
（一般式（Ｚ）において、Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
【化11】
【請求項7】
請求項１に記載のイオン液体を含有する、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、イオン液体、及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
エダラボン（３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン）は、フリーラジカルスカベンジャーとして作用する物質であり、例えば脳保護薬として使用されている。エダラボンは水への溶解度が約２ｍｇ／ｍＬであり、やや難溶性の物質であり、且つ水溶液中で酸化を受けやすい等の課題が存在した。
【0003】
国際公開２０１９／０７３０５２号（特許文献１）には、エダラボンの塩として、ヘミナパジシル酸３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン又はナパジシル酸３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オンである、塩が開示されている。特許文献１には、前記塩が、容易に製造され、遊離エダラボン塩基よりも水中でより急速に溶けること、前記塩が極めて安定であり、取り扱いやすいことが開示されている。
【0004】
国際公開２０１９／２０５７００号（特許文献２）には、有効成分としてのエダラボン又はその塩、充填剤、結合剤及び崩壊剤を含む医薬組成物が開示されており、充填剤としてマンニトールが好ましいことが開示されている。特許文献２に開示された医薬組成物は舌下投与に適した製剤であり、舌下錠剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開２０１９／０７３０５２号
【特許文献2】国際公開２０１９／２０５７００号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
エダラボン、その塩又はこれらを含む医薬組成物としては従来から様々な検討が行われていた。しかしながら、本発明者らの調査によると、従来の検討はエダラボン或いはその塩としては固体を前提とした検討のみが行われていた。一方で、本発明者らは、仮にエダラボンの塩等の誘導体を、液体として得ることができれば、溶解性の向上や、取り扱い性の向上が見込めるのではないかと推測した。
【0007】
そこで本開示の目的は、水に対する溶解性に優れる、エダラボンアニオンを含むイオン液体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行ったところ、以下のイオン液体、及び医薬組成物を見出し、本開示に至った。
【0009】
本実施形態の態様例は、以下の通りに記載される。
［１］ 下記一般式（１）で表されるアニオンを含む、イオン液体。
［２］ 下記一般式（２－１）及び下記一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含む、イオン液体。
（一般式（２－１）において、Ｘ＋は、下記一般式（３）、（４）、（５）、又は（６）で表される１価のカチオンである。）
（一般式（３）において、Ｒ１は、炭素数１～４のアルキル基であり、Ｒ２は、炭素数２～１０のアルキル基であり、
一般式（４）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基であり、
一般式（５）において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基であり、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよく、
一般式（６）において、Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
（一般式（７）において、Ｒ７は、炭素数２～４のアルキレン基であり、Ｒ８は、炭素数１～３のアルキル基であり、波線はリンカチオン（Ｐ＋）への結合部位である。）
（一般式（２－２）において、Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
［３］ 前記Ｘ＋は、前記一般式（３）又は（４）で表される１価のカチオンである、［２］に記載のイオン液体。
［４］ 前記Ｘ＋は、式（３－１）～（３－５）、式（４－１）～（４－４）、式（５－１）～（５－５）及び式（６－１）～（６－２）から選択される１価のカチオンである、［２］に記載のイオン液体。
［５］ 前記Ｘ＋は、式（３－１）又は（４－１）で表される１価のカチオンである、［２］に記載のイオン液体。
［６］ 前記一般式（２－２）を構成する下記一般式（Ｚ）で表されるカチオンが、式（Ｚ－１）又は式（Ｚ－２）で表されるカチオンである、［２］～［５］のいずれかに記載のイオン液体。
（一般式（Ｚ）において、Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
［７］ ［１］～［６］のいずれかに記載のイオン液体を含有する、医薬組成物。
［１］ 下記一般式（１）で表されるアニオンを含む、イオン液体。
【化1】
【化2】
【化3】
一般式（４）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基であり、
一般式（５）において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基であり、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよく、
一般式（６）において、Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
【化4】
【化5】
［３］ 前記Ｘ＋は、前記一般式（３）又は（４）で表される１価のカチオンである、［２］に記載のイオン液体。
［４］ 前記Ｘ＋は、式（３－１）～（３－５）、式（４－１）～（４－４）、式（５－１）～（５－５）及び式（６－１）～（６－２）から選択される１価のカチオンである、［２］に記載のイオン液体。
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
［７］ ［１］～［６］のいずれかに記載のイオン液体を含有する、医薬組成物。
【発明の効果】
【0010】
本開示により、水に対する溶解性に優れる、エダラボンアニオンを含むイオン液体を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】エダラボンの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図2】エダラボンのＦＴ－ＩＲ測定の結果を示す。
【図3】テトラブチルホスホニウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図4】テトラブチルホスホニウムクロリドのＦＴ－ＩＲ測定の結果を示す。
【図5】１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図6】１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドのＦＴ－ＩＲ測定の結果を示す。
【図7】１－ブチル－１－メチルピロリジニウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図8】カチオンとしてテトラブチルホスホニウムクロリドを用いたイオン液体の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図9】カチオンとしてテトラブチルホスホニウムクロリドを用いたイオン液体のＦＴ－ＩＲ測定の結果を示す。
【図10】カチオンとして１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドを用いたイオン液体の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図11】カチオンとして１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドを用いたイオン液体のＦＴ－ＩＲ測定の結果を示す。
【図12】カチオンとして１－ブチル－１－メチルピロリジニウムクロリドを用いたイオン液体の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。
【図13】実施例の（４）エダラボンイオン液体のラジカルスカベンジ活性評価のラジカル消去率（％）を示す。
【図14】実施例の（６）エダラボンイオン液体の安定性評価のラジカル消去率（％）を示す。
【図15】実施例の（６）エダラボンイオン液体の安定性評価の残存エダラボン濃度を示す。
【図16】実施例の（７）エダラボンイオン液体の体内分布評価の結果を示す。
【図17】実施例の（８）エダラボンイオン液体の脳保護効果の評価のフローを示す。
【図18】実施例の（８）エダラボンイオン液体の脳保護効果の評価の脳傷害領域（ｃｍ３）を示す。
【図19】実施例の（８）エダラボンイオン液体の脳保護効果の評価の運動機能試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本実施形態の一態様は、一般式（１）で表されるアニオンを含む、イオン液体である。また、別の一態様は、一般式（２－１）及び一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含む、イオン液体である。一般式（２－１）を含むイオン液体及び一般式（２－２）を含むイオン液体は、一般式（１）で表されるアニオンを含むイオン液体に包含される概念である。また、別の一態様は、前述のイオン液体を含有する、医薬組成物である。
【0013】
以下、本実施形態の各態様について、詳細に説明する。
（イオン液体）
イオン液体は、下記一般式（１）で表されるアニオンを含む。また、ある態様において、イオン液体は、下記一般式（２－１）及び下記一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含む。一般式（１）で表されるアニオンを含むイオン液体は、そのカチオンとしては特に制限はないが、医薬組成物の構成成分としてイオン液体を使用する場合には、生体適合性に優れたカチオンであることが好ましい。一般式（１）で表されるアニオンを含むイオン液体としては、一般式（２－１）及び一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含むイオン液体が好ましい。なお、一般式（１）で表されるアニオンは、エダラボンアニオンである。
（イオン液体）
イオン液体は、下記一般式（１）で表されるアニオンを含む。また、ある態様において、イオン液体は、下記一般式（２－１）及び下記一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含む。一般式（１）で表されるアニオンを含むイオン液体は、そのカチオンとしては特に制限はないが、医薬組成物の構成成分としてイオン液体を使用する場合には、生体適合性に優れたカチオンであることが好ましい。一般式（１）で表されるアニオンを含むイオン液体としては、一般式（２－１）及び一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含むイオン液体が好ましい。なお、一般式（１）で表されるアニオンは、エダラボンアニオンである。
【0014】
【化12】
【0015】
【化13】
【0016】
【化14】
一般式（４）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基であり、
一般式（５）において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基であり、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよく、
一般式（６）において、Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基であり、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基である。）
【0017】
【化15】
【0018】
【化16】
【0019】
前記Ｒ１は、炭素数１～４のアルキル基であり、炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基が挙げられる。炭素数１～４のアルキル基は、炭素数１又は２のアルキル基であってもよく、炭素数１のアルキル基（メチル基）であってもよい。
【0020】
前記Ｒ２は、炭素数２～１０のアルキル基であり、炭素数２～１０のアルキル基としては、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基が挙げられる。炭素数２～１０のアルキル基は、炭素数４～１０のアルキル基であってもよく、炭素数８～１０のアルキル基であってもよい。
【0021】
前記Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は下記一般式（７）で表される基である。炭素数４～１４のアルキル基としては、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基が挙げられる。炭素数４～１４のアルキル基は、炭素数４～１０のアルキル基であってもよく、炭素数４～８のアルキル基であってもよい。Ｒ７は、炭素数２～４のアルキレン基であり、炭素数２～４のアルキレン基としては、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基が挙げられる。Ｒ８は、炭素数１～３のアルキル基であり、炭素数１～３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基が挙げられる。
【0022】
前記Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、炭素数４～１４のアルキル基、又は一般式（７）で表される基であるが、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の全てが炭素数４～１４のアルキル基であること、又はＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６の三つが炭素数４～１４のアルキル基であり、且つ一つが一般式（７）で表される基であることが好ましい態様の一つである。
【0023】
前記Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、炭素数１～１０のアルキル基、又は炭素数２～４のヒドロキシアルキル基である。また、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２の２つは、互いに結合してこれらが結合するＮ＋と共に環を形成してもよい。炭素数１～１０のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基が挙げられる。炭素数１～１０のアルキル基は、炭素数１～８のアルキル基であってもよく、炭素数１～６のアルキル基であってもよい。炭素数２～４のヒドロキシアルキル基としては、炭素数２～４のアルキル基の水素原子の一つをヒドロキシ基（－ＯＨ）で置換した基が挙げられ、エチル基の水素原子の一つをヒドロキシ基（－ＯＨ）で置換した基（ヒドロキシエチル基）であってもよい。ヒドロキシ基は、アルキル基の末端に存在することが好ましい態様の一つである。
【0024】
前記Ｒ１３は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基である。炭素数２～６のアルキレン基としては、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、ヘキシレン基が挙げられる。１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基としては、例えば、－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－、－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－であってもよい。
【0025】
前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基であり、水素原子又はメチル基であってもよく、水素原子であってもよい。前記Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８が、水素原子であると、イオン液体の合成が容易であるため好ましい。
【0026】
前記Ｒ１９は、炭素数２～６のアルキレン基、又は１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基である。炭素数２～６のアルキレン基としては、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、ヘキシレン基が挙げられる。１若しくは２個の－ＮＨ－が挿入された炭素数２～６のアルキレン基としては、例えば、－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－、－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－ＮＨ－Ｃ２Ｈ４－であってもよい。
【0027】
前記Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５はそれぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１若しくは２のアルキル基であり、水素原子又はメチル基であってもよく、水素原子であってもよい。前記Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５が、水素原子であると、イオン液体の合成が容易であるため好ましい。
【0028】
本開示において、炭素数が３以上のアルキル基、アルキレン基、ヒドロキシアルキル基としては、炭素骨格が直鎖状であってもよく、分岐を有していてもよい。各基は、直鎖状の基であることが好ましい態様の一つである。
【0029】
前記Ｘ＋は、前記一般式（３）又は（４）で表される１価のカチオンであることが好ましい態様の一つである。前記Ｘ＋が、前記一般式（３）又は（４）で表される１価のカチオンであると、イオン液体の合成が容易であるため、また、イオン液体が室温付近において取り扱いやすい粘性を示す傾向があるため好ましい。
【0030】
前記Ｘ＋のより具体的な例としては、式（３－１）～（３－５）、式（４－１）～（４－４）、式（５－１）～（５－５）及び式（６－１）～（６－２）から選択される１価のカチオンが挙げられる。前記Ｘ＋としては、式（３－１）～（３－５）及び式（４－１）～（４－４）から選択される１価のカチオンであってもよく、式（３－１）又は（４－１）で表される１価のカチオンであってもよい。
【0031】
【化17】
【0032】
【化18】
【0033】
【化19】
【0034】
【化20】
【0035】
前記一般式（２－１）及び一般式（２－２）から選択される少なくとも一種を含むイオン液体としては、一般式（２－１）で表されるイオン液体でも、一般式（２－２）で表されるイオン液体でも、一般式（２－１）で表される成分と、一般式（２－２）で表される成分とを含むイオン液体であってもよい。一般式（２－１）で表されるイオン液体が好ましい態様の一つである。また、一般式（２－１）において、Ｘ＋が一般式（６）で表される１価のカチオンである場合には、その製造時、保存時、使用時の条件、例えば使用する試薬の種類や量、温度、ｐＨ等によって、一般式（６）で表される１価のカチオンの一部が２価のカチオンとなる場合がある。該２価のカチオンは、例えば前述の一般式（Ｚ）で表すことができる。すなわち、このような場合にはイオン液体は、一般式（２－１）で表される成分（但し、Ｘ＋が一般式（６）で表される１価のカチオンである）と、一般式（２－２）で表される成分（例えば一般式（Ｚ）で表されるカチオンが、式（Ｚ－１）又は式（Ｚ－２）で表されるカチオンである）とを含むイオン液体である。
【0036】
本実施形態のイオン液体は、エダラボンアニオンをその一部として含むため、エダラボンと同様に医薬用途で使用することができる。具体的には、本実施形態のイオン液体は、脳保護薬、血栓溶解剤、抗血小板薬等の医薬組成物の有効成分として使用することができる。
【0037】
（イオン液体の製造方法）
本実施形態のイオン液体を製造する方法としては、特に制限はなく、例えば後述の実施例に記載の方法により製造することができる。前記イオン液体を製造する方法の一例としては、エダラボンは、例えば生理的条件下では、約５０％がエダラボンアニオンとして存在し、約５０％がエノール型のエダラボンとして存在するとの知見に基づき、エダラボン及び、特定のカチオン、例えば一般式（３）、（４）、（５）、（６）、又は（Ｚ）で表されるカチオンを反応系中に供給することが可能な物質を、水、エタノール等の溶媒中に加え、溶液を調製し、反応させることによりエダラボンアニオンを前記カチオンで中和し、次いで、反応系中の溶媒、他の塩等を除去することにより、イオン液体を得ることができる。
本実施形態のイオン液体を製造する方法としては、特に制限はなく、例えば後述の実施例に記載の方法により製造することができる。前記イオン液体を製造する方法の一例としては、エダラボンは、例えば生理的条件下では、約５０％がエダラボンアニオンとして存在し、約５０％がエノール型のエダラボンとして存在するとの知見に基づき、エダラボン及び、特定のカチオン、例えば一般式（３）、（４）、（５）、（６）、又は（Ｚ）で表されるカチオンを反応系中に供給することが可能な物質を、水、エタノール等の溶媒中に加え、溶液を調製し、反応させることによりエダラボンアニオンを前記カチオンで中和し、次いで、反応系中の溶媒、他の塩等を除去することにより、イオン液体を得ることができる。
【0038】
（医薬組成物）
医薬組成物は、前述のイオン液体を含有する。医薬組成物の用途としては、限定するものではないが、例えば脳保護薬、血栓溶解剤、抗血小板薬が挙げられる。
医薬組成物は、前述のイオン液体を含有する。医薬組成物の用途としては、限定するものではないが、例えば脳保護薬、血栓溶解剤、抗血小板薬が挙げられる。
【0039】
医薬組成物は、前述のイオン液体と、他の成分とを含むが、他の成分としては特に制限はされず、投与形体に応じて、医薬分野で通常使用されている溶剤、担体、賦形剤、緩衝剤、安定化剤等を挙げることができる。医薬組成物の剤形としては、特に制限はないが、イオン液体を好適に体内に投与する観点から液体が好ましい。溶剤としては、水性溶剤、有機溶剤が挙げられるが、イオン液体を容易に溶解することが可能な水性溶剤が好ましい。水性溶剤としては、水（通常は蒸留水等の精製された水）、生理食塩水等が挙げられる。
【0040】
医薬組成物の投与方法としては、特に制限はないが、例えば従来のエダラボンと同様に静脈内投与が可能である。また、イオン液体の医薬成分の一般的特性として知られる高い粘膜透過性から、経口投与製剤として医薬組成物を使用してもよい。医薬組成物の投与量としては、投与方法等によっても異なるが、従来のエダラボンと同様の投与量、例えば、３ｍｇ／ｋｇの投与量で十分な脳保護効果が発揮できる。
【実施例0041】
以下に本発明を実施例によって更に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【0042】
（１）エダラボンイオン液体の創製
エダラボンは生理的条件下では約５０％がアニオンとして存在し、電子を供与して種々のラジカルを消去するという知見に基づき、エダラボン（東京化成工業）をアニオンとして使用した。
エダラボンは生理的条件下では約５０％がアニオンとして存在し、電子を供与して種々のラジカルを消去するという知見に基づき、エダラボン（東京化成工業）をアニオンとして使用した。
【0043】
カチオンとしては、テトラブチルホスホニウムクロリド（Ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（８０％水溶物）（東京化成工業）、１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリド（１－Ｄｅｃｙｌ－３－ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（東京化成工業）、又は１－ブチル－１－メチルピロリジニウムクロリド（１－Ｂｕｔｙｌ－１－ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（東京化成工業）を使用した。
【0044】
アニオン：カチオンがモル比として１：１となるように分取し、エタノールに溶解した。得られた溶液を、室温にて１時間撹拌した後、６０℃の条件下で４時間エバポレーターにて溶媒を留去し、次いで残留溶媒を完全に除去するために６０℃の条件下で４８時間真空乾燥した。得られた液体を室温に戻すことにより、目的とするエダラボンイオン液体を得た。
【0045】
（２）エダラボンイオン液体の生成確認
エダラボンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプル（得られたエダラボンイオン液体及び原料）を１Ｈ－ＮＭＲ及びＦＴ－ＩＲにて測定した。１Ｈ－ＮＭＲ測定は、サンプルをＮＭＲ管に任意の量を分取し、重クロロホルムに溶解することで行った。ＦＴ－ＩＲ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、 ＦＴ－ＩＲ ＩＲｐｒｅｓｔｉｇｅ－２１）測定時は、試料テーブルにサンプルを必要量滴下することで行った。
エダラボンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプル（得られたエダラボンイオン液体及び原料）を１Ｈ－ＮＭＲ及びＦＴ－ＩＲにて測定した。１Ｈ－ＮＭＲ測定は、サンプルをＮＭＲ管に任意の量を分取し、重クロロホルムに溶解することで行った。ＦＴ－ＩＲ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、 ＦＴ－ＩＲ ＩＲｐｒｅｓｔｉｇｅ－２１）測定時は、試料テーブルにサンプルを必要量滴下することで行った。
【0046】
原料として使用したエダラボンの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図１に示し、ＦＴ－ＩＲ測定の結果を図２に示し、テトラブチルホスホニウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図３に示し、ＦＴ－ＩＲ測定の結果を図４に示し、１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図５に示し、ＦＴ－ＩＲ測定の結果を図６に示し、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムクロリドの１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図７に示す。カチオンとしてテトラブチルホスホニウムクロリドを用いたイオン液体（以下、Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬとも記す）の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図８に示し、ＦＴ－ＩＲ測定の結果を図９に示す。カチオンとして１－デシル－３－メチルイミダゾリウムクロリドを用いたイオン液体（以下、Ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ－ＩＬとも記す）の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図１０に示し、ＦＴ－ＩＲ測定の結果を図１１に示す。また、カチオンとして１－ブチル－１－メチルピロリジニウムクロリドを用いたイオン液体（以下、Ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｉｕｍ－ＩＬとも記す）の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を図１２に示す。Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬの化学式を下記式（Ａ）に示し、Ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ－ＩＬの化学式を下記式（Ｂ）に示し、Ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｉｕｍ－ＩＬの化学式を下記式（Ｃ）に示す。なお、各１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す図において、下線を付した数字は、各シグナルの積分値を意味する。
【0047】
【化21】
【0048】
（３）エダラボンイオン液体の溶解性試験
過剰量のエダラボン粉末、又はエダラボンイオン液体を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに秤量し、１ｍＬの超純水を加え、２５℃の条件下で撹拌混合した。２４時間後、０．２２μｍのメンブレンフィルターにて濾過したサンプル中のエダラボン濃度を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ ２９９６）にて測定した。すなわち、本開示では、０．２２μｍのメンブレンフィルターを通過したエダラボン、及びエダラボンイオン液体を、溶解したものと定義した。ＨＰＬＣの測定条件は以下の通りである。カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧＩＩＩ（５μｍ，４．６×１５０ｍｍ）（資生堂）、移動相組成：０．５％酢酸含有蒸留水／メタノール＝５０／５０、流速：０．９５ｍＬ／分、カラム温度：４０℃、測定波長：２４０ｎｍ、サンプル注入量：２０μＬ、測定時間：１０分。なお、各サンプル中のエダラボン濃度は、既知濃度のエダラボン溶液のＨＰＬＣ測定から得られた検量線を基に算出した。溶解性試験の結果を表１に示す。下記表１より、本実施形態のイオン液体は、エダラボンよりも溶解性に優れることが分かる。
過剰量のエダラボン粉末、又はエダラボンイオン液体を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに秤量し、１ｍＬの超純水を加え、２５℃の条件下で撹拌混合した。２４時間後、０．２２μｍのメンブレンフィルターにて濾過したサンプル中のエダラボン濃度を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ ２９９６）にて測定した。すなわち、本開示では、０．２２μｍのメンブレンフィルターを通過したエダラボン、及びエダラボンイオン液体を、溶解したものと定義した。ＨＰＬＣの測定条件は以下の通りである。カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＭＧＩＩＩ（５μｍ，４．６×１５０ｍｍ）（資生堂）、移動相組成：０．５％酢酸含有蒸留水／メタノール＝５０／５０、流速：０．９５ｍＬ／分、カラム温度：４０℃、測定波長：２４０ｎｍ、サンプル注入量：２０μＬ、測定時間：１０分。なお、各サンプル中のエダラボン濃度は、既知濃度のエダラボン溶液のＨＰＬＣ測定から得られた検量線を基に算出した。溶解性試験の結果を表１に示す。下記表１より、本実施形態のイオン液体は、エダラボンよりも溶解性に優れることが分かる。
【0049】
【表1】
【0050】
（４）エダラボンイオン液体のラジカルスカベンジ活性評価
エダラボン粉末を任意の量測り取った後、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を加え速やかに溶解させ、その後１Ｎの塩酸を加えることでｐＨを７．４付近に調整した。エダラボンイオン液体は超純水を加え１０秒間撹拌混合することで溶解し、得られた懸濁液（ｐＨ≒３～４）のｐＨを１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にて７．４付近に調整した。それぞれのサンプルを、エダラボン濃度として１２５、２５０、５００μＭとなるように超純水にて希釈した。ラジカルスカベンジ活性の評価には、１，１－ジフェニル－２－ピクリルヒドラジル（１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）（ＤＰＰＨ）法を用いた。具体的には、１２５μＭのＤＰＰＨ溶液（エタノールに溶解）１２０μＬに対し、１０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）１５６μＬを９６－ｗｅｌｌプレートに添加し、エダラボン濃度として最終濃度１０、２０、４０μＭとなるように各濃度（１２５、２５０、５００μＭ）のサンプル溶液を２４μＬ添加した。２０分室温にて撹拌混合後、プレートリーダーにて吸光度（λ＝５１７ｎｍ）を測定し、以下の式に従ってラジカル消去率を算出した。
ラジカル消去率（％）＝（各サンプル添加群の吸光度÷エダラボン未添加群の吸光度）×１００
エダラボン粉末を任意の量測り取った後、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を加え速やかに溶解させ、その後１Ｎの塩酸を加えることでｐＨを７．４付近に調整した。エダラボンイオン液体は超純水を加え１０秒間撹拌混合することで溶解し、得られた懸濁液（ｐＨ≒３～４）のｐＨを１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にて７．４付近に調整した。それぞれのサンプルを、エダラボン濃度として１２５、２５０、５００μＭとなるように超純水にて希釈した。ラジカルスカベンジ活性の評価には、１，１－ジフェニル－２－ピクリルヒドラジル（１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）（ＤＰＰＨ）法を用いた。具体的には、１２５μＭのＤＰＰＨ溶液（エタノールに溶解）１２０μＬに対し、１０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）１５６μＬを９６－ｗｅｌｌプレートに添加し、エダラボン濃度として最終濃度１０、２０、４０μＭとなるように各濃度（１２５、２５０、５００μＭ）のサンプル溶液を２４μＬ添加した。２０分室温にて撹拌混合後、プレートリーダーにて吸光度（λ＝５１７ｎｍ）を測定し、以下の式に従ってラジカル消去率を算出した。
ラジカル消去率（％）＝（各サンプル添加群の吸光度÷エダラボン未添加群の吸光度）×１００
【0051】
ラジカル消去率（％）（Ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を図１３に示す。図１３より、本実施形態のイオン液体は、ラジカルスカベンジャーとして知られるエダラボンと同程度の、ラジカル消去率を有することが分かる。
【0052】
以降の検討では、室温における流動性、扱いやすさの観点から、Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬを用いた。
【0053】
（５）Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬのナノ粒子形成確認
Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬを超純水に任意の濃度（３．２４ｍｇ／ｍＬ）となるように秤量し、１０秒間撹拌混合することで溶解した後、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ＝７．４に調整した。得られたエダラボンイオン液体懸濁液の粒子径、ゼータ電位を動的光散乱法にて測定した（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ＰＲＯ、Ｍａｌｖｅｒｎ）。
Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ－ＩＬを超純水に任意の濃度（３．２４ｍｇ／ｍＬ）となるように秤量し、１０秒間撹拌混合することで溶解した後、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ＝７．４に調整した。得られたエダラボンイオン液体懸濁液の粒子径、ゼータ電位を動的光散乱法にて測定した（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ＰＲＯ、Ｍａｌｖｅｒｎ）。
【0054】
【表2】
【0055】
表２より、本実施形態のイオン液体は、水中で２００ｎｍ程度のナノ粒子を形成していることが分かった。このため本実施形態のイオン液体は血中に投与した場合であっても、腎糸球体濾過を回避することが可能であり、腎移行性が低いことが示唆された。
【0056】
（６）エダラボンイオン液体の安定性評価
上記（４）と同様の方法でエダラボン粉末、及びエダラボンイオン液体を超純水に溶解させた。次いでラジカット（登録商標）注３０ｍｇ（製造販売元：田辺三菱製薬株式会社）のインタビューフォームに従い、エダラボン濃度として最終濃度８．６１ｍＭとなるように混合し、１Ｎの塩酸又は水酸化ナトリウムでｐＨ≒４とした。また、添加剤を用いた例では、エダラボン濃度として最終濃度８．６１ｍＭとなるように、酸化防止剤として亜硫酸水素ナトリウム、Ｌ－システイン（図中ではこれら酸化防止剤を添加剤と記している）をそれぞれ最終濃度９．６１ｍＭ、２．８５ｍＭとなるように混合し、１Ｎの塩酸又は水酸化ナトリウムでｐＨ≒４とした。作製した溶液２０ｍＬを２５℃暗所にて静置し、その０、１、３、７、１４、２１、２８日後、５００μＬを分取し、上記（４）と同様の方法でＤＰＰＨ法によりラジカルスカベンジ活性を評価した。また０、７、１４、２１、２８日静置させたサンプルについては、上記（３）の方法に従って、残存エダラボン濃度をＨＰＬＣにて測定した。
上記（４）と同様の方法でエダラボン粉末、及びエダラボンイオン液体を超純水に溶解させた。次いでラジカット（登録商標）注３０ｍｇ（製造販売元：田辺三菱製薬株式会社）のインタビューフォームに従い、エダラボン濃度として最終濃度８．６１ｍＭとなるように混合し、１Ｎの塩酸又は水酸化ナトリウムでｐＨ≒４とした。また、添加剤を用いた例では、エダラボン濃度として最終濃度８．６１ｍＭとなるように、酸化防止剤として亜硫酸水素ナトリウム、Ｌ－システイン（図中ではこれら酸化防止剤を添加剤と記している）をそれぞれ最終濃度９．６１ｍＭ、２．８５ｍＭとなるように混合し、１Ｎの塩酸又は水酸化ナトリウムでｐＨ≒４とした。作製した溶液２０ｍＬを２５℃暗所にて静置し、その０、１、３、７、１４、２１、２８日後、５００μＬを分取し、上記（４）と同様の方法でＤＰＰＨ法によりラジカルスカベンジ活性を評価した。また０、７、１４、２１、２８日静置させたサンプルについては、上記（３）の方法に従って、残存エダラボン濃度をＨＰＬＣにて測定した。
【0057】
ラジカル消去率（％）を図１４に示す。図１４より、本実施形態のイオン液体は、ラジカルスカベンジャーとして知られるエダラボンと同程度の、ラジカル消去率を有することが分かる。静置０日のサンプルのエダラボン濃度を１００％とした、残存エダラボン濃度を図１５に示す。
【0058】
（７）エダラボンイオン液体の体内分布評価
上記（４）と同様の方法で、エダラボン溶液、及びエダラボンイオン液体懸濁液を調整し、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雄性、５週齢）に対して０．２ｍＬ尾静脈内投与した（投与量：エダラボンとして３ｍｇ／ｋｇ）。各サンプル投与５、１０、３０、６０分後に、イソフルラン吸入麻酔下マウス下大静脈から血液を回収した後、腎臓を回収した。血液については、遠心分離（２，０００×ｇ、１０分、４℃）することで血漿を回収し、その後、血漿に対して２倍量の除タンパク液（メタノール／アセトニトリル＝１／１）と混合し、３０分室温で放置することで除タンパク処理を行った。腎臓は、（組織重量（ｍｇ）×３）μＬの５０％メタノール含有超純水を加えホモジナイズした。得られた液を２倍量の除タンパク液（メタノール／アセトニトリル＝１／１）と混合し、３０分室温で放置することで除タンパク処理を行った。除タンパク処理を行った各サンプルを遠心分離（２０，０００×ｇ、１０分、４℃）し、得られた上清中のエダラボン濃度を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＳＣＩＥＸ，Ｔｒｉｐｌｅ ＱｕａｄＴＭ ５５００＋）を用いてＥＳＩ法により測定した。測定条件を以下に示す。また、内部標準としてフェナセチンを定量した。結果を図１６に示す。図１６より、本実施形態のイオン液体は、エダラボンと比べ、血中に長期間存在することが可能であり、且つ腎移行性が低いことが分かった。本結果より、エダラボン投与時の重篤な副作用として報告されている急性腎不全のリスクを軽減できる可能性が示唆された。
上記（４）と同様の方法で、エダラボン溶液、及びエダラボンイオン液体懸濁液を調整し、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雄性、５週齢）に対して０．２ｍＬ尾静脈内投与した（投与量：エダラボンとして３ｍｇ／ｋｇ）。各サンプル投与５、１０、３０、６０分後に、イソフルラン吸入麻酔下マウス下大静脈から血液を回収した後、腎臓を回収した。血液については、遠心分離（２，０００×ｇ、１０分、４℃）することで血漿を回収し、その後、血漿に対して２倍量の除タンパク液（メタノール／アセトニトリル＝１／１）と混合し、３０分室温で放置することで除タンパク処理を行った。腎臓は、（組織重量（ｍｇ）×３）μＬの５０％メタノール含有超純水を加えホモジナイズした。得られた液を２倍量の除タンパク液（メタノール／アセトニトリル＝１／１）と混合し、３０分室温で放置することで除タンパク処理を行った。除タンパク処理を行った各サンプルを遠心分離（２０，０００×ｇ、１０分、４℃）し、得られた上清中のエダラボン濃度を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＳＣＩＥＸ，Ｔｒｉｐｌｅ ＱｕａｄＴＭ ５５００＋）を用いてＥＳＩ法により測定した。測定条件を以下に示す。また、内部標準としてフェナセチンを定量した。結果を図１６に示す。図１６より、本実施形態のイオン液体は、エダラボンと比べ、血中に長期間存在することが可能であり、且つ腎移行性が低いことが分かった。本結果より、エダラボン投与時の重篤な副作用として報告されている急性腎不全のリスクを軽減できる可能性が示唆された。
【0059】
測定条件
カラム：ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８ （ＴＡ１２Ｓ０５－０５０２ＷＴ）（５μｍ、２．０×５０ｍｍ）（ＹＭＣ）、移動相組成：溶媒Ａ ０．５％ギ酸含有蒸留水、溶媒Ｂ ０．５％ギ酸含有メタノール、流速：０．２ｍＬ／分、移動相プログラム：開始０分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝９０／１０、０分－５分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝９０／１０→２０／８０、５分－７分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝２０／８０、７分－１０分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝２０／８０→９０／１０、カラム温度：４０℃、サンプル注入量：５μＬ、測定時間：１０分。ＥＳＩイオンモードはＭＲＭモード下、ポジティブで行った（エダラボン：ｍ／ｚ：１７５．０→ｍ／ｚ：６５．１、フェナセチン：ｍ／ｚ：１８０．０→ｍ／ｚ：１１０．１）。
カラム：ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８ （ＴＡ１２Ｓ０５－０５０２ＷＴ）（５μｍ、２．０×５０ｍｍ）（ＹＭＣ）、移動相組成：溶媒Ａ ０．５％ギ酸含有蒸留水、溶媒Ｂ ０．５％ギ酸含有メタノール、流速：０．２ｍＬ／分、移動相プログラム：開始０分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝９０／１０、０分－５分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝９０／１０→２０／８０、５分－７分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝２０／８０、７分－１０分；溶媒Ａ／溶媒Ｂ＝２０／８０→９０／１０、カラム温度：４０℃、サンプル注入量：５μＬ、測定時間：１０分。ＥＳＩイオンモードはＭＲＭモード下、ポジティブで行った（エダラボン：ｍ／ｚ：１７５．０→ｍ／ｚ：６５．１、フェナセチン：ｍ／ｚ：１８０．０→ｍ／ｚ：１１０．１）。
【0060】
（８）エダラボンイオン液体の脳保護効果の評価
作製したエダラボンイオン液体の脳保護効果を、脳虚血／再灌流障害モデルラット（一過性中大脳動脈閉塞（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ；ｔ－ＭＣＡＯ）ラット）を用いて評価した。具体的には、イソフルラン吸入麻酔下、Ｗｉｓｔａｒラット（雄性、８週齢）の右内頚動脈を露出、切り込みを入れた部位から、右中大脳動脈起始部に対してシリコンコーティングナイロンフィラメントを挿入することで、脳虚血を起こした。１時間後、中大脳動脈起始部よりナイロンフィラメントを引き抜くことで血流を再開通（再灌流）させ、ｔ－ＭＣＡＯラットを作製した。ｔ－ＭＣＡＯラットに対して、再灌流直後にエダラボン濃度として３ｍｇ／ｋｇとなるようにエダラボン溶液あるいはエダラボンイオン液体溶液を尾静脈内投与した。なお、コントロールとしてＰＢＳを尾静脈内投与した。サンプル投与２４時間後、計２１点の運動機能試験（Ｈｕｎｔｅｒ ＡＪ他，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３９，８０６－８１６（２０００））を実施することで運動機能評価を行った（正常ラットは２１点を獲得する）。その後、イソフルラン麻酔下断頭し脳を摘出後、ブレインスライサーにて２ｍｍスライスを作製し、２％の２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（２，３，５－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）含有リン酸緩衝生理食塩水中で３７℃、２０分間振盪させ、生細胞を染色した。画像解析ソフトＩｍａｇｅ Ｊにて脳傷害領域を算出した。本評価のフローを図１７に示し、脳傷害領域（ｃｍ３）を図１８に示し、運動機能試験の結果を図１９に示す。本評価より本実施形態のイオン液体は、エダラボンと同等以上の効果を発揮することが分かる。
作製したエダラボンイオン液体の脳保護効果を、脳虚血／再灌流障害モデルラット（一過性中大脳動脈閉塞（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ；ｔ－ＭＣＡＯ）ラット）を用いて評価した。具体的には、イソフルラン吸入麻酔下、Ｗｉｓｔａｒラット（雄性、８週齢）の右内頚動脈を露出、切り込みを入れた部位から、右中大脳動脈起始部に対してシリコンコーティングナイロンフィラメントを挿入することで、脳虚血を起こした。１時間後、中大脳動脈起始部よりナイロンフィラメントを引き抜くことで血流を再開通（再灌流）させ、ｔ－ＭＣＡＯラットを作製した。ｔ－ＭＣＡＯラットに対して、再灌流直後にエダラボン濃度として３ｍｇ／ｋｇとなるようにエダラボン溶液あるいはエダラボンイオン液体溶液を尾静脈内投与した。なお、コントロールとしてＰＢＳを尾静脈内投与した。サンプル投与２４時間後、計２１点の運動機能試験（Ｈｕｎｔｅｒ ＡＪ他，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３９，８０６－８１６（２０００））を実施することで運動機能評価を行った（正常ラットは２１点を獲得する）。その後、イソフルラン麻酔下断頭し脳を摘出後、ブレインスライサーにて２ｍｍスライスを作製し、２％の２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（２，３，５－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）含有リン酸緩衝生理食塩水中で３７℃、２０分間振盪させ、生細胞を染色した。画像解析ソフトＩｍａｇｅ Ｊにて脳傷害領域を算出した。本評価のフローを図１７に示し、脳傷害領域（ｃｍ３）を図１８に示し、運動機能試験の結果を図１９に示す。本評価より本実施形態のイオン液体は、エダラボンと同等以上の効果を発揮することが分かる。
【0061】
本明細書中に記載した数値範囲の上限値及び／又は下限値は、それぞれ任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができる。例えば、数値範囲の上限値及び下限値を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができ、数値範囲の上限値同士を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができ、また、数値範囲の下限値同士を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができる。また、本願において、記号「～」を用いて表される数値範囲は、記号「～」の前後に記載される数値のそれぞれを下限値及び上限値として含む。
【0062】
以上、本実施形態を詳述したが、具体的な構成はこの実施形態に限定されるものではなく、本開示の要旨を逸脱しない範囲における設計変更があっても、それらは本開示に含まれるものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】