特開 2024-112889 Ｄ－リボース及びビタミンＢ３により哺乳動物におけるＮＡＤレベルを上昇する方法及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024112889

(43)【公開日】2024-08-21

(54)【発明の名称】Ｄ－リボース及びビタミンＢ３により哺乳動物におけるＮＡＤレベルを上昇する方法及び組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7004 20060101AFI20240814BHJP

   A61K 31/455 20060101ALI20240814BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240814BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7004

A61K31/455

A61P43/00 107

A61P43/00 111

A61P43/00 121

【審査請求】有

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024080104

(22)【出願日】2024-05-16

(62)【分割の表示】P 2020563708の分割

【原出願日】2019-05-10

(31)【優先権主張番号】62/669,962

(32)【優先日】2018-05-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/756,405

(32)【優先日】2018-11-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】515101832

【氏名又は名称】バイオエナジー ライフ サイエンス，インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】ヨンチュアン シュエ

(57)【要約】

【課題】哺乳動物においてＮＡＤレベルを増加する。
【解決手段】Ｄ－リボース又はビタミンＢ３を伴うＤ－リボースの有効量を哺乳動物へ投与する。ここで前記ビタミンＢ３は、ナイアシン、ニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドであることができる。Ｄ－リボースとビタミンＢ３の間の比は、０．５：１０～１０：０．５の間を変動することができる。哺乳動物への投与のタイミングは、哺乳動物が昼行性か又は夜行性かにかかわらず、哺乳動物が活動的又は活動寸前である時点である。
【選択図】図５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｄ－リボース又はビタミンＢ３を伴うＤ－リボースの有効量を哺乳動物へ投与することにより、哺乳動物におけるＮＡＤレベルを増加する方法であって、ここで前記ビタミンＢ３が、ナイアシン、ニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドのいずれかを含む、方法。

【請求項2】

前記有効量が、ビタミンＢ３のＤ－リボースに対する比が０．５：１０～１０：０．５となる量である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記有効量が、ビタミンＢ３のＤ－リボースに対する比が１：５～５：１となる量である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記有効量が、２０ｍｇ～５４００ｍｇ／日である、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記有効量が、１００ｍｇ～４０００ｍｇ／日である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記哺乳動物が活動的又は活動寸前である時点で、前記有効量が前記哺乳動物へ投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記哺乳動物が昼行性である場合、前記有効量が日中に前記哺乳動物へ投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記有効量が午前中に投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記哺乳動物が夜行性である場合、前記有効量が夜間に前記哺乳動物へ投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

Ｄ－リボース又はビタミンＢ３を伴うＤ－リボースの有効量を含む、哺乳動物におけるＮＡＤレベルを増加するために投与される組成物であって、ここで前記ビタミンＢ３が、ナイアシン、ニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドのいずれかを含む、組成物。

【請求項11】

前記有効量が、ビタミンＢ３のＤ－リボースに対する比が０．５：１０～１０：０．５となる量である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記有効量が、ビタミンＢ３のＤ－リボースに対する比が１：５～５：１となる量である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項13】

前記有効量が、２０ｍｇ～５４００ｍｇ／日である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項14】

前記有効量が、１００ｍｇ～４０００ｍｇ／日である、請求項１０に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

背景
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）は、細胞生命の中心であり；第一に、分解され且つ栄養分をアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の形状のエネルギーへ変換することにより、酸化－還元（レドックス）反応及びエネルギー産生のための再利用可能な補酵素として；第二に、遺伝子発現、ＤＮＡ修復、細胞死及び細胞周期、カルシウムシグナル伝達、グルコースホメオスタシス、及び概日リズムを含む、極めて重要な生物学的プロセスを制御する酵素反応において消費可能な基質としてである。

【背景技術】

【0002】

ＮＡＤは、以下の３種のタンパク質群の主要基質であることが、最近発見された：（１）ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）；（２）ｃＡＤＰ－リボースシンターゼ（ＣＤ３８）；及び、（３）サーチュイン（ＳＩＲＴ１－７）。これらのタンパク質群の各々は、ＤＮＡ修復、ミトコンドリア機能障害、神経変性、及び年齢に関連した代謝障害を含む、広い範囲の機能を制御する。例えば、補酵素としての、ＮＡＤ＋並びにその関連代謝産物であるＮＡＤＨ、ＮＡＤＰ＋、及びＮＡＤＰＨは、細胞代謝における反応の６０％以上に関与し、且つそれらのホメオスタシスは、酸化、対、還元の、並びに同化作用、対、異化作用のバランスの決定因子である。消費可能な基質として、ＮＡＤの濃度は、加齢及び脂肪組成に直接関連している。加えて、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、サーチュイン（ＳＩＲＴ１－７）、及びｃＡＤＰ－リボースシンターゼ（ＣＤ３８）を含むＮＡＤを消費する酵素は、健康及び疾患に関する広範な分岐(ramification)を有する。従ってＮＡＤは、様々な代謝状態又は年齢に関連した状態の治療に関する治療的標的として役立ち、且つ健康及び長寿を促進することができる。

【0003】

哺乳動物を操作する４種のＮＡＤ生合成経路が存在し、これはアミノ酸トリプトファンから始まるデノボ経路、及び３種のピリジンサルベージの代替ルートである。これらのピリジンは、ニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミド（Ｎａｍ）、及びニコチンアミドリボシド（ＮＲ）であり、これらは集合的にビタミンＢ３と称され、食餌による供給及び／又は細胞内ＮＡＤ異化作用から生じ得る。デノボ経路に関する出発物質は、トリプトファンであり、これも同じくタマゴ、肉及びチーズなどの食餌によるタンパク質給源に由来する。

【0004】

４種全てのＮＡＤ生合成ルートは、体内のＮＡＤレベルを増加するが、異なるルートを介して生成されたＮＡＤは、臓器及び組織中に異なるように分布される。肝臓においては、４種の経路の酵素の全てが存在することがわかっており、全てのＮＡＤ前駆体からＮＡＤへの転換が可能であり、且つ血流の循環を通じてＮＡＤを全ての臓器へ補給する(re-fuel)ことができる。他の組織においては、逆に、異なる酵素レベルが、特別で固有の代謝の必要性を反映しており、同じく外来性ピリジン給源（複数可）の利用可能性にも左右される。トリプトファンは、デノボＮＡＤ合成のための唯一認められた給源であるが、これは概して、正常なＮＡＤホメオスタシスを維持するには不充分であると考えられる。哺乳動物におけるほとんどのＮＡＤは、アミド化されたサルベージルートを介して、ニコチンアミド（Ｎａｍ）から合成される。肝臓は再度、その上昇したＮＡＤ代謝回転により、Ｎａｍ再利用が主流であり、且つ同じく時計機構による概日転写制御を基に、ＮＡＤ再合成が、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）により制御されるという、極めて重要な組織を表す。従って、Ｎａｍ及びＮＲ由来のＮＡＤは、デノボ合成由来のものよりも、際立って局所的且つ一時的分布を有することが理解可能である。

【0005】

ＮＡＤ代謝産物の臓器及び組織の分布は、それらの生物学的機能に関して重要である。運動しているマウスにおける肝臓と筋肉の間のＮＡＤＰＨ変動に関する最新の文献は、最良の例である。ＮＡＤ欠損症は、様々な病的状態と結びつけられているが、ニコチンアミドモノヌクレオチドアデノシルトランスフェラーゼ（ＮＭＮＡＴ）の遺伝子の変質(alterations)が最近、ウォラー変性モデルを含む、いくつかの神経変性及び急性損傷モデルにおける、癌、レーベル先天黒内障、及び軸索保護と結びつけられている。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1】図１は、各群同じ用量の異なる化合物を給餌した後の雄ラットの４群から、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間の増分(increment)で採取した血液試料中で測定したＮＡＤレベルを示すグラフであり；第１群は、Ｄ－リボースを給餌し、第２群は、ナイアシンを給餌し、第３群は、ナイアシンと組合せたＤ－リボースを給餌し、第４群は、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）を給餌する。

【0007】

【図2】図２は、図１に確定した増分で採取した各血液試料からの血液中で測定したＮＲレベルを示すグラフである。

【0008】

【図3】図３は、異なる濃度のニコチンアミド（Ｎａｍ）と組合せたＤ－リボースを給餌した後、１、２、３、及び４時間の増分で、雄及び雌のラットの４群の血液中で測定したＮＲレベルを示すグラフである。

【0009】

【図4】図４は、ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース（例えば、ＲｉａＧｅｖ（商標））及びその代謝産物に関して提唱された経路を図示している。

【0010】

【図5】図５は、ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース（例えば、ＲｉａＧｅｖ）による経口補給後の血液中のＮＡＤ＋濃度を示す折れ線グラフである。

【0011】

【図6】図６は、ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース（例えば、ＲｉａＧｅｖ）による経口補給後の血液中のＮＲ濃度を示す折れ線グラフである。

【0012】

【図7】図７は、ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース（例えば、ＲｉａＧｅｖ）による経口補給後の血液中のＮＭＮ濃度を示す折れ線グラフである。

【0013】

【図8】図８は、異なる投与量のＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）の投与後の、肝臓、筋肉及び脳組織中のＮＡＤ＋分布を示す棒グラフである。

【0014】

【図9】図９は、異なる投与量のＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）の投与後の、肝臓、筋肉、脳及び脂肪組織中のＮＲ分布を示す棒グラフである。

【0015】

【図10】図１０は、異なる投与量のＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）の投与後の、肝臓、筋肉、脳及び脂肪組織中のＮＭＮ分布を示す棒グラフである。

【0016】

【図11】図１１は、ＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）と血液中のＮＡＤ＋の投与量－反応関係を示す折れ線グラフである。

【発明の概要】

【0017】

説明
ＮＡＤ合成に関して４種の経路が存在する：
経路＃１：以下のように示される、ニコチンアミド（Ｎａｍ）のサルベージ経路：
Ｎａｍ ＋ ＰＲＰＰ → ＮＭＮ ＋ ＡＴＰ → ＮＡＤ
経路＃２：以下のように示される、ニコチン酸（Ｎａ）のサルベージ経路：
Ｎａ ＋ ＰＲＰＰ →ＮａＭＮ ＋ ＡＴＰ →ＮａＡＤ →ＮＡＤ
経路＃３：以下のように示される、アミノ酸トリプトファンからのデノボ生合成経路：
トリプトファン(tryptophin) →ＮＡＤ
経路＃４：以下のように示される、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）：
ＮＲ ＋ ＡＴＰ →ＮＡＤ
ここで：
Ｎａｍ＝ニコチンアミド；
ＰＲＰＰ＝ホスホリボシルピロリン酸(phosphor-ribose-pyrophosphate)；
ＮＭＮ＝ニコチンアミドモノヌクレオチド；
ＮＡＤ＝ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド；
Ｎａ＝ニコチン酸（ナイアシン）；
ＰＰ＝ピロリン酸。

【0018】

３種の経路（経路＃１－＃３）において、体内のＮＡＤレベルは、Ｎａ、Ｎａｍ、ＮＲ又はＮＭＮなどの前駆体又は中間体の供給により増大されることが認められている。実際、ＮＡＤに関連した強化のためのこれらの構成成分を含有する食餌性補給品が存在する。

【0019】

３種の生合成経路（経路＃１－３）及びＮＲ経路（経路＃４）の各々においては、ＰＲＰＰ及び／又はＡＴＰが、必要とされる。ＰＲＰＰ及びＡＴＰの両方は、Ｄ－リボースの拡大産物(extension product)である（すなわち、Ｄ－リボース＋ＡＴＰ→ＰＲＰＰ）ことはわかっている。従って出願人は、Ｄ－リボースを投与することにより、体内のＮＡＤレベルを増加することは実行可能であるはずであると仮定した。出願人は、Ｄ－リボースの経口投与により体内のＮＡＤレベルを増加するという誰の先行する試みも知らない。

【0020】

この仮説を試験するために、出願人は、Ｄ－リボース、又は他の化合物と組合せたＤ－リボースの経口投与は、哺乳動物の、具体的にはスプラーグダルウェイラットの体内のＮＡＤレベルを増加することができるかどうか、並びにＤ－リボース単独、又は他の化合物と組合せたＤ－リボースが、哺乳動物の体内のＮＡＤレベルを向上するために利用することができる条件を試験するために、実験を設計した。

【実施例0021】

実験１
４匹の雄のスプラーグダルウェイラットの４群に、用量１００ｍｇ／ｋｇ体重で、下記表に確定した異なる化合物を各々ボーラス投与した：

【表1】

【0022】

血液試料０．１ｍｌを、給餌後０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間の増分で、各群の各ラットから採取した。その後各血液試料を、ＮＡＤレベルに関して、液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定した。測定したＮＡＤレベルを、図１に図示し、各データポイントは、各群の４匹のラットの平均である。

【0023】

図１について、各被験群は、ベースライン（図１の破線、被験化合物を投与しないＮＡＤレベルを表す）と比べ、２４時間にわたり、有意に高いレベルのＮＡＤを有したことを示している。特に、第３群（Ｄ－リボース＋ナイアシン給餌したラット）のＮＡＤレベルは、投与後に増加し、且つ他の群よりもより長い期間にわたり上昇したレベルに留まった。これは、リボース及びナイアシンからのＮＡＤの生合成機序と一致する。陽性対照群（第４群）は、最高のピーク値を有した。しかし、第４群のＮＡＤレベルは、第３群のＮＡＤレベルのように定常であるようには留まらない。Ｄ－リボース単独の給餌（すなわち、第１群ラット）又はナイアシン単独の給餌（すなわち、第２群ラット）もまた、上昇したＮＡＤレベルを生じ、生合成機序と一致した。しかし、第１群及び第２群ラットのＮＡＤレベルは、鋭く変動し、これはおそらく給餌又は点灯時間のためであろう（以下に考察）。

【0024】

先に言及した増分で各群から採取した血液はまた、ＮＲレベルについても、ＬＣ／ＭＳにより測定した。測定したＮＲレベルを、図２に図示し、各データポイントは、同じ性別の３匹の動物の平均である。

【0025】

図２について、各被験群のＮＲレベルは、ベースライン（図２の破線）を上回り、これはＤ－リボース、ナイアシン、又はナイアシンと組合せたＤ－リボースは、ラットにおけるＮＲレベルを増強することを指摘している。ＮＲの全般的傾向は、ＮＡＤ代謝産物の代謝時計のタイミングにうまく従っている。

【0026】

実験２
４匹の雄のスプラーグダルウェイラットの３群に、下記表に確定したようなニコチンアミド（ナイアシンアミドとしても公知）と組合わせたＤ－リボースを３つの異なる投与量でボーラス投与した：

【表2】

【0027】

血液試料０．１ｍｌを、給餌後１、２、３及び４時間の増分で各ラットから採取した。その後各血液試料を、ＮＡＤ及びＮＲのレベルについて、ＬＣ／ＭＳにより測定した。測定したＮＲレベルを、図３に図示し、各データポイントは、各群からの４匹のラットの４つの平均である。

【0028】

図３について、ニコチンアミド＋リボースの３００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量は、ラットに関する至適投与量であることが示されている。投与量レベルの１０００ｍｇ／ｋｇまでの更なる増加は、ＮＲレベルを有意に増強しなかった。１００ｍｇ／ｋｇ投与量の投与量は、ＮＲレベルの上昇に有効ではなく、このことは、Ｄ－リボース＋ナイアシンの１００ｍｇ／ｋｇが、図２において示したように実験１においては良好な結果を明らかにしたので、やや驚きである。

【0029】

全般的に、これらの実験は、Ｄ－リボース単独、又はビタミンＢ３（ナイアシンもしくはニコチンアミド）と組合せたＤ－リボースは、哺乳動物においてＮＡＤレベルを増加することを明らかにしている。しかし、出願人は、補給のタイミング及び試料採取時刻が、実験結果に大きい役割を果たすように見えたので、至適投与量及びタイミングを含む正確な投与量スキームは、今後の実験において精緻化される必要があることを決定した。

【0030】

例えば、実験２において、図２に示したように、この実験は、単に４時間かけて実施し、且つ血液試料は、午前中の補給後１、２、３及び４時間に採取した。この補給及び試料採取の時点は、意味のある結果を生じなかった。それに対し、実験１において、この実験は、２４時間かけて実施した。このＮＡＤレベルは、夜間の時間(night time hour)のみより高かった。

【0031】

出願人は、ラットは夜行性であるために（以下により詳細に考察する）、午前時間は、ＮＡＤ代謝時計において示されるように、ラットにおけるＮＡＤの減少傾向におさまるので、夜間(evening)の給餌時間（図２の８～２４時間の間）は、午前時間よりも、ラットについてのＤ－リボース＋ビタミンＢ３（ナイアシン又はニコチンアミド）補給に関するより良いタイミング枠であり得ると考える。この期間中のＮＡＤ生合成経路中の酵素の量は、ラット及び他の夜行性動物に関してＮＡＤ代謝産物が自然に増加する夜間の給餌時間よりもはるかに少ない。

【0032】

この仮説を試験するために、出願人は、夜間給餌時間中に、より少ないＤ－リボース＋ビタミンＢ３投与量を使用し、且つ新規投薬スキームのためにＤ－リボースとビタミンＢ３の間の比を調節する、追加実験を実施した。これらの追加実験を実施する際に、出願人は、ＮＡＤ代謝産物の薬力学及び組織分布を決定するために、ＲｉａＧｅｖ（商標）として公知の製品を使用することにより、ニコチンアミドとＤ－リボースの最適化され且つ固定された比（先の実験を基に）を利用した。ＲｉａＧｅｖは、Bioenergy Life Science社(13840 Johnson Street NE, Ham Lake, MN USA 55304)から入手可能である。

【0033】

代謝分析は、ＲｉａＧｅｖ補給は、ニコチンアミドサルベージ経路を介して、ＮＡＤ＋、ＮＭＮ、及びＮＲのレベルを増加することを推定している。図４に示したように、ＲｉａＧｅｖは、主にニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）によりＮＭＮへ転換され、次にこれはＮＭＮアデノシルホスホトランスフェラーゼ（ＮＭＮＡＴ）によりＮＡＤ＋へ転換される。ＮＭＮの溢流(overflow)は、そのリン酸部分を喪失し、ＮＲを生じ、これはその後一連の工程において、ＮＡＤへ転換される－ＮＲＫ：ＮＲキナーゼ、ＮＡＤＳ：ＮＡＤシンターゼ。

【0034】

実験は、５日間にわたり１日２回経口投与された３つの投与量レベルの各々について、ラット血液中のナイアシンアミド／リボース代謝産物を測定するように設計した。

【0035】

実験３
１８匹の雄のスプラーグダルウェイラットを、本試験の被験動物として選択し、６つの処置群の各々について３匹とした。雄のスプラーグダルウェイラットは、信頼できる結果を伴う類似の実験において広範に使用されているので、これを選択した。１群につき３匹のラットの使用は、データのグラフ表示について有用な平均及び標準偏差を計算するのに必要な最小数をもたらす。

【0036】

５連続日について、ラットは、ほぼ午前７：３０～８：３０に、及びほぼ午後４：３０～５：４５に投薬された。血液は、各午後の投薬後およそ０．５～１．５時間に採取し、直ちに処理し、且つＮＡＤ＋、ＮＭＮ、及びＮＲについて、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより、アッセイした。午前中に朝食を及び夕方に夕食を食べる、ヒト及び他の夜行性でない哺乳動物（すなわち、昼行性哺乳動物）の行動を模倣するように、ほぼそのような時刻に動物に投与量を投与することにより、補給品投与量のタイミングを選択した。試料採取時刻は、夜行性動物が典型的には最も活動的又は活動寸前となり始める時である、ラット及び他の夜行性哺乳動物においてＮＡＤ代謝産物が自然に増加する時点（すなわち夜間）に対応するように選択した。ヒト及び他の昼行性動物については、ＮＡＤ代謝産物は、昼行性哺乳動物が典型的には最も活動的又は活動寸前となり始める時である、午前中に自然に増加する。従って、ラットに関する夜間試料採取時点は、ヒト及び他の昼行性哺乳動物に関する午前に対応するであろう。

【0037】

これらの動物には、最終の血液採取後、人道的に麻酔をかけ、且つ肝臓、二頭筋、末梢脂肪組織、及び全脳の代表的試料を収集し、瞬間凍結し、抽出し、且つＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより、ＮＡＤ＋、ＮＭＮ、及びＮＲについてアッセイした。表３は、これらの群及び投薬スケジュールを確定している。
参加基準：５日間の投薬期間中、１８匹のラットは全て生存し、外見上は健康に見えた。
盲検：全ての試験は、盲検方式で行った。本試験に関与した研究スタッフは全員、自分達が試験するラットの群割付けを知らない。１名のスタッフメンバーが、投薬溶液(dose solution)を調製し、溶液のシリンジをコード化し（例えば、１－６）、及び盲検（処置キー）を作製した。
群割付け：ラットは、－１日目の体重を基に、その群の平均がほぼ同等となるように、処置群に割付けた。ラットは、体重、並びに本試験の処置群の総数に従い階層化された亜群内で無作為に割付けられた処置によりランク化した。
対照物質：ビヒクル（水中０．５％ＭＣ／０．１％Ｔｗｅｅｎ８０）；被覆されたニコチンアミド。
被験物質：投与容積１０ｍｌ／ｋｇで、投与量１００、３００、９００及び２７００ｍｇ／ｋｇの強制的に経口により、５連続日１日２回投与される、１２％ニコチンアミド＋Ｄ－リボース。
投薬：注入される被験物質又は対照物質の容積は、１０ｍｌ／ｋｇであった。所定の動物セットにわたる処置の分布が推定されないように、ラットには、動物番号を基にした順番で投薬した。

【表3】

【0038】

結果
１．ＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）の薬力学
経時的な血中のＮＡＤレベルを、図５に表した。ＲｉａＧｅｖ摂取後、ＮＡＤレベルは、投与量に依存した様式で、全ての用量で安定して増加した。ＮＡＤレベルは、４日目の補給（８投与量）後に、それらのプラトーに達した。

【0039】

経時的な血中のＮＲレベルを、図６に表した。血中のＮＲ測定値もまた、経時的に増加したが、より小さい規模であった。これは、ＮＲは、ＮＡＤ生合成における溢流の短絡生成物(overflow shunt product)であるという事実と一致している（図１参照）。経時的な血中のＮＭＮレベルを、図７に表した。血中のＮＭＮレベルは、有意に変化せず、これは他の文献と一致している。

【0040】

２．ＲｉａＧｅｖ代謝産物の組織分布
５日目の補給の終了時に、組織を採取し、且つそれらのＮＡＤ代謝産物の含量について分析した。肝臓、筋肉及び脳内のＮＡＤ含量を、図８に表している。図８に示したように、ＲｉａＧｅｖ由来のＮＡＤの最高レベルが、肝臓において検出された。肝臓はまた、バックグラウンドＮＡＤの最高レベルも有する。脳は、ＮＡＤプールに関する二番目の臓器であり、筋肉はそれよりやや少なかった。

【0041】

肝臓、筋肉、脳及び脂肪組織中のＮＲ濃度を、図９に表している。ＲｉａＧｅｖ由来のＮＲの最高レベルが、肝臓において検出された。脳及び脂肪組織は、次に高いＮＲレベルを有し、それに筋肉組織が続いた。

【0042】

肝臓、筋肉、脳及び脂肪組織中のＮＭＮ濃度を、図１０に表している。ＲｉａＧｅｖ由来のＮＭＮの最高レベルが、肝臓において検出された。脳は、次に高いＮＭＮレベルを有し、それに筋肉組織が続き、次に脂肪組織が続いた。対照群の動物、又は１００ｍｇ ＲｉａＧｅｖ群もしくは３００ｍｇ ＲｉａＧｅｖ群の動物は、脂肪組織において測定可能なＮＭＮレベルを有さなかった。

【0043】

結論及び考察
本実験は、ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース（ＲｉａＧｅｖ）は、体内において、ＮＡＤ、ＭＮＮ、及びＮＲを含む、ＮＡＤ代謝産物のレベルを効果的に上昇することを明らかにしている。分析した全ての臓器及び組織に関して、正の投与量－反応関係が、ＲｉａＧｅｖとＮＡＤ代謝産物の含量の間に存在する。５日間の時間経過実験は、ＲｉａＧｅｖ由来のＮＡＤレベルは、累積し、且つ経口補給の４日目（８投与量）以後、血液中でプラトーに達することを指摘している。投与量に対する血液中のＮＡＤのプラトー濃度は、図１１にまとめている。

【0044】

図１１について、ｘ－軸は、ＲｉａＧｅｖ投与量を表し、並びにｙ－軸は、そのベース（水対照）レベルを上回る血液ＮＡＤ濃度の変化を示している。最も感度の良い投与量範囲は、３００ｍｇ／ｋｇ～９００ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤであるが、ＲｉａＧｅｖ（ニコチンアミドと組合せたＤ－リボース）は、試験した全ての投与量レベル（１００ｍｇ／ｋｇ～２７００ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）で、ＮＡＤレベルを増加するということを、結論付けることができる。ニコチンアミド対照は、このラインの外側であることは明らかであり、これはニコチンアミドと組合せたＤ－リボースは、ニコチンアミドそれ単独よりもはるかに優れていることを意味する。

【0045】

最終（５日目）の血中ＮＡＤ濃度を、肝臓、筋肉、及び脳中の同時に起こるＮＡＤ含量と比べると、血液及び肝臓は、最高投与量のＲｉａＧｅｖにより飽和されるように見えるのに対し、脳及び筋肉はそうではないことは注目される。これは、肝臓及び血液は、ＮＡＤの生成及び輸送の場所であるのに対し、筋肉及び脳は、ＮＡＤ利用の臓器であるという事実を反映しているであろう。

【0046】

ＲｉａＧｅｖの薬力学は、ビタミンＢ３又はＮＲ単独の薬力学とは明白に異なる。ＮＲは、消費後約８時間でそのピークに達する。しかし、２４時間分析は、ＲｉａＧｅｖは、有意なピークを伴わなずに、ＮＡＤレベルの広範な上昇を生じることを指摘した。このことは、ＮＡＤ合成経路へ入るために、ＮＲＫ又はＮＡＭＰＴなどの単独の酵素に頼る他のＮＡＤをブーストする化合物よりも、ＲｉａＧｅｖのはるかにより複雑な代謝を暗示している。実際、ＲｉａＧｅｖの主要成分であるＤ－リボースの代謝の運命により注目すると、これは複数の入口からＮＡＤ合成経路へ侵入し得ることを明らかにしている。

【0047】

Ｄ－リボースはＰＲＰＰを介しピリジンサルベージの効力を増強するとは、反応を達成するために、より少ない量のピリジンが必要であることを意味する。ナイアシン、ニコチンアミド、又はニコチンアミドリボシドを含むビタミンＢ３の大量の投与量に関する一つの懸念は、これが、体の解毒能、特に肝臓のメチル化及びヒドロキシル化の能力に対する働き(taxation)を上回る可能性があることである。ＲｉａＧｅｖ中のＤ－リボースの存在は、この懸念を軽減する。従って、ビタミンＢ３と組合わさせたＤ－リボースは、ＮＡＤレベルの増加に有効なだけでなく、ヒトを含む哺乳動物に対し、より安全により多い投与量のビタミンＢ３補給ももたらす。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【手続補正書】

【提出日】2024-06-14

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

哺乳動物においてＮＡＤを生成するための組成物であって、前記組成物は、ニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドのいずれかとの組み合わせにおいて有効量のＤ－リボースを含む、組成物。

【請求項2】

前記有効量が、Ｄ－リボースのニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドのいずれかに対する重量比が０．５：１０～１０：０．５となる量である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記有効量が、Ｄ－リボースのニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド又はニコチンアミドモノヌクレオチドのいずれかに対する重量比が１：５～５：１となる量である、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記有効量が、２０ｍｇ～５４００ｍｇ／日である、請求項２又は３に記載の組成物。

【請求項5】

前記有効量が、１００ｍｇ～４０００ｍｇ／日である、請求項２又は３に記載の組成物。

【請求項6】

前記哺乳動物が昼行性であり、そして、前記有効量が午前中に前記哺乳動物に投与される、請求項４又は５に記載の組成物。

【請求項7】

前記哺乳動物が夜行性であり、そして、前記有効量が夜間に前記哺乳動物に投与される、請求項４又は５に記載の組成物。

【外国語明細書】