特開 2024-112893 耳適応症の治療のためのＡＡＶ１ベクター及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024112893

(43)【公開日】2024-08-21

(54)【発明の名称】耳適応症の治療のためのＡＡＶ１ベクター及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/10 20060101AFI20240814BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240814BHJP

   C12N 5/079 20100101ALN20240814BHJP

   C12N 5/071 20100101ALN20240814BHJP

【ＦＩ】

C12N5/10 ZNA

C12N15/864 100Z

C12N5/10

C12N5/079

C12N5/071

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024080330

(22)【出願日】2024-05-16

(62)【分割の表示】P 2021519808の分割

【原出願日】2019-10-11

(31)【優先権主張番号】62/744,604

(32)【優先日】2018-10-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/911,885

(32)【優先日】2019-10-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】520299511

【氏名又は名称】デシベル セラピューティクス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＤＥＣＩＢＥＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 美樹

(72)【発明者】

【氏名】バーンズ、ジョセフ

(72)【発明者】

【氏名】エリス、キャサリン

(72)【発明者】

【氏名】グエン、マシュー

(72)【発明者】

【氏名】パレルモ、アダム

(72)【発明者】

【氏名】プレーゲルニッヒ、ガブリエラ

(72)【発明者】

【氏名】シー、フーシン

(72)【発明者】

【氏名】ホイットン、ジョナサン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ヒト対象において発達した内耳細胞を形質導入する方法を提供する。
【解決手段】対象に、有効量の血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される３つ以上の内耳細胞型を形質導入する量で投与することを含む、方法である。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象において発達した内耳細胞を形質導入する方法であって、前記対象に、有効量の血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される３つ以上の内耳細胞型を形質導入する量で投与することを含む、前記方法。

【請求項2】

前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される５つ以上の細胞型を形質導入する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１０以上の細胞型を形質導入する、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１５以上の細胞型を形質導入する、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される２０以上の細胞型を形質導入する、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記ＡＡＶ１ベクターが、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％を形質導入する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＡＡＶ１ベクターが、前記対象の中耳または内耳に局所投与される、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＡＡＶ１ベクターが、経鼓膜または鼓膜内投与される、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記ＡＡＶ１ベクターが、表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記ＡＡＶ１ベクターが、偏在的なプロモーターを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択されるポリヌクレオチドを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

ヒト対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項13】

前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ９、Ｓｐａｌｔ様転写因子２（Ｓａｌｌ２）、カルモジュリン結合転写活性化因子１（Ｃａｍｔａ１）、ＹＲＰＷモチーフ２を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子２（Ｈｅｙ２）、Ｇａｔａ結合タンパク質２（Ｇａｔａ２）、ＹＲＰＷモチーフ１を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子ｌ（Ｈｅｙ１）、セラミドシンターゼ２（Ｌａｓｓ２）、ＳＲＹ－Ｂｏｘ１０（Ｓｏｘ１０）、ＧＡＴＡ結合タンパク質３（Ｇａｔａ３）、Ｃｕｔ様ホメオボックス１（Ｃｕｘ１）、核受容体サブファミリー２群Ｆメンバー（Ｎｒ２ｆ１）、ＨｅｓファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ｈｅｓ１）、ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｂ（Ｒｏｒｂ）、Ｊｕｎがん原遺伝子ＡＰ－１転写因子サブユニット（Ｊｕｎ）、亜鉛フィンガータンパク質６６７（Ｚｆｐ６６７）、ＬＩＭホメオボックス（Ｌｈｘ３）、新生ヘリックス－ループ－ヘリックス１（Ｎｈｌｈ１）、ＭＡＸ二量体化タンパク質４（Ｍｘｄ４）、亜鉛フィンガーＭＩＺ型含有１（Ｚｍｉｚ１）、ミエリン転写因子１（Ｍｙｔ１）、シグナル伝達兼転写活性化因子３（Ｓｔａｔ３）、ＢａｒＨ様ホメオボックス１（Ｂａｒｈｌ１）、胸腺細胞選択関連高移動度群ボックス（Ｔｏｘ）、Ｐｒｏｓｐｅｒｏホメオボックス１（Ｐｒｏｘ１）、核因子Ｉ Ａ（Ｎｆｉａ）、甲状腺ホルモン受容体ベータ（Ｔｈｒｂ）、ＭＹＣＬがん原遺伝子ＢＨＬＨ転写因子（Ｍｙｃｌ１）、リジン脱メチル化酵素５Ａ（Ｋｄｍ５ａ）、ＣＡＭＰ応答配列結合タンパク質３様４（Ｃｒｅｂ３Ｉ４）、ＥＴＳバリアント１（Ｅｔｖ１）、父性発現３（Ｐｅｇ３）、ＢＴＢドメイン及びＣＮＣホモログ２（Ｂａｃｈ２）、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス（Ｉｓｌ１）、亜鉛フィンガー及びＢＴＢドメイン含有３８（Ｚｂｔｂ３８）、肢芽及び心臓発達（Ｌｂｈ）、Ｔｕｂｂｙ Ｂｉｐａｒｔｉｔｅ転写因子（Ｔｕｂ）、ユビキチンＣ（Ｈｍｇ２０）、ＲＥ１サイレンシング転写因子（Ｒｅｓｔ）、亜鉛フィンガータンパク質８２７（Ｚｆｐ８２７）、ＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー３（Ａｆｆ３）、ＰＢＸ／Ｋｎｏｔｔｅｄ１ホメオボックス２（Ｐｋｎｏｘ２）、ＡＴリッチ相互作用ドメイン３Ｂ（Ａｒｉｄ３ｂ）、ＭＬＸ相互作用タンパク質（Ｍｌｘｉｐ）、亜鉛フィンガータンパク質（Ｚｆｐ５３２）、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子１（Ｓａｌｌ１）、ＳＩＸホメオボックス２（Ｓｉｘ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子３（Ｓａｌｌ３）、Ｌｉｎ－２８ホモログＢ（Ｌｉｎ２８ｂ）、Ｐｏｕ４ｆ３、調節因子Ｘ７（Ｒｆｘ７）、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４で変異を含むＡｔｏｈ１バリアント、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、またはヌクレアーゼをコードするか、あるいはマイクロＲＮＡである、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

ヒト対象の内耳の有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項15】

前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（Ｔｍｔｃ４）、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

ヒト対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項17】

前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、Ｃｌｒｎ１、プロトカドヘリン関連１５（Ｐｃｄｈ１５）、カドヘリン関連２３（Ｃｄｈ２３）、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

ヒト対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項19】

前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、オトフェリン（Ｏｔｏｆ）、溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（Ｖｇｌｕｔ３）、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ヒト対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＯＴＯＦプロモーター、線維芽細胞成長因子８（ＦＧＦ８）プロモーター、及び溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（ＳＬＣ１７Ａ８）プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項21】

前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｔｍｃ１、Ｕｓｈ１ｃ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ヒト対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項23】

前記ポリヌクレオチドが、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

ヒト対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項25】

前記ポリヌクレオチドが、神経成長因子受容体（Ｎｇｆｒ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、テクトリン（Ｔｅｃｔｏｒｉｎ）ベータ（Ｔｅｃｔｂ）、テクトリンアルファ（Ｔｅｃｔａ）、Ｇｊｂ２、またはギャップ結合タンパク質ベータ６（Ｇｊｂ６）をコードする、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

ヒト対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項27】

前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡもしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡである、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

ヒト対象の血管条の周辺細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＫＣＮＥ１プロモーター、及びＧＪＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項29】

ヒト対象の血管条の基底細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項30】

ヒト対象の血管条の中間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項31】

前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｔｙｒ、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、請求項２８～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

ヒト対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項33】

前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、膜貫通タンパク質１６Ａ（Ｔｍｅｍ１６ａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

ヒト対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項35】

前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ヒト対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項37】

前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードする、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

ヒト対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項39】

前記ポリヌクレオチドが、Ｓｌｃ２６ａ４である、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ヒト対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項41】

前記ポリヌクレオチドが、Ｃｅａｃａｍ１６、オトアンコリン（Ｏｔｏａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

ヒト対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＭＰ２２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項43】

前記ポリヌクレオチドが、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはミエリンタンパク質ゼロ（Ｍｐｚ）をコードする、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

ヒト対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＥ１プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項45】

前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードする、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

ヒト対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項47】

前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードする、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

ヒト対象のスカルパ神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項49】

前記ポリヌクレオチドが、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするか、または斥力ガイダンス分子ＢＭＰ共受容体Ａ（ＲＧＭＡ）に指向されたｓｈＲＮＡである、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

ヒト対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ９、Ｓａｌｌ２、Ｃａｍｔａ１、Ｈｅｙ２、Ｇａｔａ２、Ｈｅｙ１、Ｌａｓｓ２、Ｓｏｘ１０、Ｇａｔａ３、Ｃｕｘ１、Ｎｒ２ｆ１、Ｈｅｓ１、Ｒｏｒｂ、Ｊｕｎ、Ｚｆｐ６６７、Ｌｈｘ３、Ｎｈｌｈ１、Ｍｘｄ４、Ｚｍｉｚ１、Ｍｙｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｂａｒｈｌ１、Ｔｏｘ、Ｐｒｏｘ１、Ｎｆｉａ、Ｔｈｒｂ、Ｍｙｃｌ１、Ｋｄｍ５ａ、Ｃｒｅｂ３Ｉ４、Ｅｔｖ１、Ｐｅｇ３、Ｂａｃｈ２、Ｉｓｌ１、Ｚｂｔｂ３８、Ｌｂｈ、Ｔｕｂ、Ｈｍｇ２０、Ｒｅｓｔ、Ｚｆｐ８２７、Ａｆｆ３、Ｐｋｎｏｘ２、Ａｒｉｄ３ｂ、Ｍｌｘｉｐ、Ｚｆｐ５３２、Ｉｋｚｆ２、Ｓａｌｌ１、Ｓｉｘ２、Ｓａｌｌ３、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｒｆｘ７、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４に変異を含むＡｔｏｈ１バリアント、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作用可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項51】

前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択される、請求項５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

ヒト対象の内耳の有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項53】

前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

ヒト対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項55】

前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

ヒト対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項57】

前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７ａプロモーターからなる群から選択される、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

ヒト対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１４、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ｔｍｃ１、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項59】

前記プロモーターが、ＯＴＯＦプロモーター、ＦＧＦ８プロモーター、及びＳＬＣ１７Ａ８プロモーターからなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

ヒト対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項61】

前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

ヒト対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｎｇｆｒ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項63】

前記プロモーターが、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

ヒト対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド、またはマイクロＲＮＡもしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項65】

前記プロモーターが、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

ヒト対象の血管条の細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、Ｔｙｒ、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項67】

前記細胞が、前記血管条の周辺細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、またはＫＣＮＥ１プロモーターからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記細胞が、前記血管条の基底細胞であり、前記プロモーターが、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項６６に記載の方法。

【請求項69】

前記細胞が、前記血管条の中間細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。

【請求項70】

ヒト対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｔｍｅｍ１６ａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項71】

前記プロモーターが、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

ヒト対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｉｋｚｆ２、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項73】

前記プロモーターが、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

ヒト対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項75】

前記プロモーターが、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

ヒト対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項77】

前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターである、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

ヒト対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｃｅａｃａｍ１６、Ｏｔｏａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項79】

前記プロモーターが、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

ヒト対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはＭｐｚをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項81】

前記プロモーターが、ＰＭＰ２２プロモーターである、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

ヒト対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項83】

前記プロモーターが、ＫＣＮＥ１プロモーターである、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

ヒト対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項85】

前記プロモーターが、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

ヒト対象のスカルパ神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするポリヌクレオチド、またはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【請求項87】

前記プロモーターが、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択される、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む、請求項１～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

前記ＡＡＶ１ベクターが、ＡＡＶ２逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む、請求項１～８８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを含む、ＡＡＶ１ベクター。

【請求項91】

前記ポリヌクレオチドが、表２に列記されるポリヌクレオチドから選択される、請求項９０に記載のＡＡＶ１ベクター。

【請求項92】

表２に列記されるポリヌクレオチドから選択されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、ＡＡＶ１ベクター。

【請求項93】

前記プロモーターが、表５のプロモーターのリストから選択される、請求項９２に記載のＡＡＶ１ベクター。

【請求項94】

前記ＡＡＶ１ベクターが、ＡＡＶ２ ＩＴＲを含む、請求項９０～９３のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【請求項95】

前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む、請求項９０～９４のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【請求項96】

請求項８８～９３のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項97】

前記薬学的組成物が、内耳または中耳への局所投与用に製剤化される、請求項９６のいずれかに記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、複数の内耳細胞型を形質導入するために使用することができるＡＡＶ１ベクター、ならびに難聴、耳鳴、及び前庭機能障害の治療のためのそれらの使用を提供する。

【背景技術】

【0002】

遺伝子療法は、難聴及び前庭機能障害などの内耳の障害を治療するための有望なアプローチとして最近浮上してきたが、それは、これらの障害の遺伝的原因を治療し、治療用タンパク質をコードする遺伝子の発現を誘導し、蝸牛インプラントよりも自然な音認識を伴う聴覚の温存または回復につながり得るからである。しかしながら、難聴及び／または前庭機能障害を引き起こす変異は、内耳の様々な異なる細胞型において特定されており、げっ歯類モデルにおける前臨床研究は、内耳のほとんどまたはすべての細胞型を形質導入するために使用することができる単一のウイルスベクターをまだ特定していない。さらに、ヒト治療をさらに予測するより大きな動物モデルにおいて行われている研究は最小限である。したがって、臨床的に関連する動物モデルにおいて内耳細胞の向汎性形質導入を呈するウイルスベクターが必要である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型を有するＡＡＶ１ベクター（例えば、ＡＡＶ１キャプシド）が、非ヒト霊長類の内耳において意外にも向汎性であるという発明者の発見に基づく。ＡＡＶ１ベクターは、マウスの内耳におけるＡＡＶ１向性と比較して、また非ヒト霊長類における他のＡＡＶ血清型（例えば、ＡＡＶ２及びＡＡＶ７ｍ８）の向性と比較して、非ヒト霊長類の内耳の複数の細胞型において強い発現及び予想外に優れた向性を呈した。したがって、本発明は、ＡＡＶ１ベクターを使用して霊長類（例えば、ヒト）内耳の細胞型を形質導入するための組成物及び方法を提供する。本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、１種以上の霊長類（例えば、ヒト）の内耳細胞において、内耳細胞の機能、再生、維持、発達、増殖、または生存を促進または改善する遺伝子に対応するポリヌクレオチドなどのポリヌクレオチドの発現を促進するために、霊長類（例えば、ヒト）対象に投与することができる。本明細書に記載の組成物及び方法は、難聴（例えば、感音難聴）及び／または前庭機能障害（例えば、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、または不均衡）を治療または予防するために、霊長類（例えば、ヒト）患者に投与することができる。

【0004】

本発明の例示的実施形態は、以下に列挙される段落に記載される。
Ｅ１．霊長類対象において発達した内耳細胞を形質導入する方法であって、前記対象に、有効量の血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上）の内耳細胞型を形質導入する量で投与することを含む、前記方法。

【0005】

Ｅ２．前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される３つ以上の内耳細胞型を形質導入する、Ｅ１に記載の方法。

【0006】

Ｅ３．前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される５つ以上の細胞型を形質導入する、Ｅ２に記載の方法。

【0007】

Ｅ４．前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１０以上の細胞型を形質導入する、Ｅ３に記載の方法。

【0008】

Ｅ５．前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１５以上の細胞型を形質導入する、Ｅ４に記載の方法。

【0009】

Ｅ６．前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される２０以上の細胞型を形質導入する、Ｅ５に記載の方法。

【0010】

Ｅ７．前記ＡＡＶ１ベクターが、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％を形質導入する、Ｅ１～Ｅ６のいずれか１項に記載の方法。

【0011】

Ｅ８．前記ＡＡＶ１ベクターが、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型のすべての細胞を形質導入する、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ９．形質導入が、蝸牛の長さ全体（例えば、前記蝸牛の基底から頂軸）にわたって生じる、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１項に記載の方法。

【0012】

Ｅ１０．前記ＡＡＶ１ベクターが、前記蝸牛の基底から頂軸の長さにわたって、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％）を形質導入する、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１項に記載の方法。

【0013】

Ｅ１１．前記ＡＡＶ１ベクターが、前記蝸牛の基底において、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％）を形質導入する、Ｅ１～Ｅ１０のいずれか１項に記載の方法。

【0014】

Ｅ１２．前記ＡＡＶ１ベクターが、前記蝸牛の中央において、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％）を形質導入する、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１項に記載の方法。

【0015】

Ｅ１３．前記ＡＡＶ１ベクターが、前記蝸牛の頂部において、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％）を形質導入する、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１項に記載の方法。

【0016】

Ｅ１４．前記ＡＡＶ１ベクターが、表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターを含む、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ１５．前記プロモーターが、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターである、Ｅ１４に記載の方法。

【0017】

Ｅ１６．前記プロモーターが、シナプシン（ＳＹＮ）プロモーターである、Ｅ１４に記載の方法。
Ｅ１７．前記プロモーターが、Ｊａｇｇｅｄ１（ＪＡＧ１）プロモーター、Ｎｏｔｃｈ１（ＮＯＴＣＨ１プロモーター）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）プロモーター、溶質輸送体ファミリー１メンバー３（ＧＬＡＳＴ）プロモーター、及びＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１４に記載の方法。

【0018】

Ｅ１８．前記ＡＡＶ１ベクターが、プレスチン（ＳＬＣ２６Ａ５）プロモーター、オンコモジュリン（ＯＣＭ）プロモーター、ステレオシリン（ＳＴＲＣ）プロモーター、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）プロモーター、成長因子非依存性１転写抑制因子（ＧＦＩ１）プロモーター、カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＱメンバー１（ＫＣＮＱ１）プロモーター、カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＪメンバー１０（ＫＣＮＪ１０）プロモーター、チロシナーゼ（ＴＹＲ）プロモーター、ＳＲＹ－Ｂｏｘ２（ＳＯＸ２）プロモーター、カルビンジン２（ＣＡＬＢ２）プロモーター、塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスファミリーメンバーＥ２２（ＢＨＬＨＥ２２）プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質結合受容体５（ＬＧＲ５）プロモーター、ＨｅｓファミリーＢＨＬＨ転写因子１（ＨＥＳ１）プロモーター、ＨｅｓファミリーＢＨＬＨ転写因子５（ＨＥＳ５）プロモーター、ＳＲＹ－Ｂｏｘ９（ＳＯＸ９）プロモーター、ＡＴＰａｓｅ血漿膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰ２Ｂ２）プロモーター、ＣＤ４４分子（ＣＤ４４）プロモーター、線維芽細胞成長因子受容体３（ＦＧＦＲ３）プロモーター、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質（ＦＲＺＢ）プロモーター、溶質輸送体ファミリー２６メンバー４（ＳＬＣ２６Ａ４）プロモーター、がん胎児性抗原関連細胞接着分子１６（ＣＥＡＣＡＭ１６）プロモーター、クラウディン１１（ＣＬＤＮ１１）プロモーター、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）プロモーター、カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＥ調節サブユニット１（ＫＣＮＥ１）プロモーター、ＰＯＵクラス３ホメオボックス４（ＰＯＵ３Ｆ４）プロモーター、ギャップ結合タンパク質ベータ２（ＧＪＢ２）プロモーター、及びチューブリンベータ３クラスＩＩＩ（ＴＵＢＢ３）プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、Ｅ１４に記載の方法。

【0019】

Ｅ１９．前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。
Ｅ２０．前記プロモーターが、前記ＯＣＭプロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。

【0020】

Ｅ２１．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。
Ｅ２２．前記プロモーターが、前記ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。

【0021】

Ｅ２３．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。
Ｅ２４．前記プロモーターが、前記ＴＹＲプロモーターである、Ｅ１８に記載の方法。

【0022】

Ｅ２５．前記プロモーターが、偏在的なプロモーターである、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２６．前記プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、Ｅ２５に記載の方法。

【0023】

Ｅ２７．前記プロモーターが、ニワトリベータ－アクチン遺伝子のＣＭＶ初期エンハンサー要素、プロモーター、第１のエクソン、及び第１のイントロン、ならびにウサギベータ－グロビン遺伝子のスプライスアクセプター（ＣＡＧプロモーター）に由来するハイブリッドプロモーターである、Ｅ２５に記載の方法。

【0024】

Ｅ２８．前記プロモーターが、切断型ＣＭＶ－ニワトリベータ－アクチン（ｓｍＣＢＡ）プロモーターである、Ｅ２５に記載の方法。
Ｅ２９．前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択されるポリヌクレオチドを含む、Ｅ１～Ｅ２８のいずれか１項に記載の方法。

【0025】

Ｅ３０．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃをコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３１．前記ポリヌクレオチドが、膜貫通チャネル様１（Ｔｍｃ１）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0026】

Ｅ３２．前記ポリヌクレオチドが、ハーモニン（Ｕｓｈ１ｃ）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３３．前記ポリヌクレオチドが、アトナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（Ａｔｏｈ１）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0027】

Ｅ３４．前記ポリヌクレオチドが、クラリン１（Ｃｌｒｎ１）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３５．前記ポリヌクレオチドが、ＳＲＹ－Ｂｏｘ４（Ｓｏｘ４）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0028】

Ｅ３６．前記ポリヌクレオチドが、脳由来神経栄養因子（Ｂｄｎｆ）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３７．前記ポリヌクレオチドが、ニューロトロフィン３（Ｎｔｆ３）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0029】

Ｅ３８．前記ポリヌクレオチドが、ＳＲＹ－Ｂｏｘ１１（Ｓｏｘ１１）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３９．前記ポリヌクレオチドが、ミオシン７Ａ（Ｍｙｏ７ａ）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0030】

Ｅ４０．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ４１．前記ポリヌクレオチドが、コリン作動性受容体ニコチン性アルファ９サブユニット（Ｃｈｒｎａ９）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0031】

Ｅ４２．前記ポリヌクレオチドが、コリン作動性受容体ニコチン性アルファ１０サブユニット（Ｃｈｒｎａ１０）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ４３．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｃｍをコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0032】

Ｅ４４．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｙｒをコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ４５．前記ポリヌクレオチドが、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（Ｔｍｔｃ４）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0033】

Ｅ４６．前記ポリヌクレオチドが、ＴＥＡドメイン転写因子２（Ｔｅａｄ２）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ４７．前記ポリヌクレオチドが、Ｙｅｓ関連タンパク質１（Ｙａｐ１）をコードする、Ｅ２９に記載の方法。

【0034】

Ｅ４８．霊長類対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0035】

Ｅ４９．前記プロモーターが、前記ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ４８に記載の方法。
Ｅ５０．前記プロモーターが、前記ＨＥＳ１プロモーター、前記ＬＧＲ５プロモーター、前記ＳＯＸ２プロモーター、前記ＨＥＳ５プロモーター、及び前記ＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択される、Ｅ４８に記載の方法。

【0036】

Ｅ５１．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ９、Ｓｐａｌｔ様転写因子２（Ｓａｌｌ２）、カルモジュリン結合転写活性化因子１（Ｃａｍｔａ１）、ＹＲＰＷモチーフ２を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子（Ｈｅｙ２）、Ｇａｔａ結合タンパク質２（Ｇａｔａ２）、ＹＲＰＷモチーフ１を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子（Ｈｅｙ１）、セラミドシンターゼ２（Ｌａｓｓ２）、ＳＲＹ－Ｂｏｘ１０（Ｓｏｘ１０）、ＧＡＴＡ結合タンパク質３（Ｇａｔａ３）、Ｃｕｔ様ホメオボックス１（Ｃｕｘ１）、核受容体サブファミリー２群Ｆメンバー（Ｎｒ２ｆ１）、ＨｅｓファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ｈｅｓ１）、ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｂ（Ｒｏｒｂ）、Ｊｕｎがん原遺伝子ＡＰ－１転写因子サブユニット（Ｊｕｎ）、亜鉛フィンガータンパク質６６７（Ｚｆｐ６６７）、ＬＩＭホメオボックス３（Ｌｈｘ３）、新生ヘリックス－ループ－ヘリックス１（Ｎｈｌｈ１）、ＭＡＸ二量体化タンパク質４（Ｍｘｄ４）、亜鉛フィンガーＭＩＺ型含有１（Ｚｍｉｚ１）、ミエリン転写因子１（Ｍｙｔ１）、シグナル伝達兼転写活性化因子３（Ｓｔａｔ３）、ＢａｒＨ様ホメオボックス１（Ｂａｒｈｌ１）、胸腺細胞選択関連高移動度群ボックス（Ｔｏｘ）、Ｐｒｏｓｐｅｒｏホメオボックス１（Ｐｒｏｘ１）、核因子Ｉ Ａ（Ｎｆｉａ）、甲状腺ホルモン受容体ベータ（Ｔｈｒｂ）、ＭＹＣＬがん原遺伝子ＢＨＬＨ転写因子（Ｍｙｃｌ１）、リジン脱メチル化酵素５Ａ（Ｋｄｍ５ａ）、ＣＡＭＰ応答配列結合タンパク質３様４（Ｃｒｅｂ３Ｉ４）、ＥＴＳバリアント１（Ｅｔｖ１）、父性発現３（Ｐｅｇ３）、ＢＴＢドメイン及びＣＮＣホモログ２（Ｂａｃｈ２）、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス（Ｉｓｌ１）、亜鉛フィンガー及びＢＴＢドメイン含有３８（Ｚｂｔｂ３８）、肢芽及び心臓発達（Ｌｂｈ）、Ｔｕｂｂｙ Ｂｉｐａｒｔｉｔｅ転写因子（Ｔｕｂ）、ユビキチンＣ（Ｈｍｇ２０）、ＲＥ１サイレンシング転写因子（Ｒｅｓｔ）、亜鉛フィンガータンパク質８２７（Ｚｆｐ８２７）、ＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー３（Ａｆｆ３）、ＰＢＸ／Ｋｎｏｔｔｅｄ１ホメオボックス２（Ｐｋｎｏｘ２）、ＡＴリッチ相互作用ドメイン３Ｂ（Ａｒｉｄ３ｂ）、ＭＬＸ相互作用タンパク質（Ｍｌｘｉｐ）、亜鉛フィンガータンパク質（Ｚｆｐ５３２）、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子１（Ｓａｌｌ１）、ＳＩＸホメオボックス２（Ｓｉｘ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子３（Ｓａｌｌ３）、Ｌｉｎ－２８ホモログＢ（Ｌｉｎ２８ｂ）、Ｐｏｕ４ｆ３、調節因子Ｘ７（Ｒｆｘ７）、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４で変異を含むＡｔｏｈ１バリアント（例えば、Ｓ３２８Ａ、Ｓ３３１Ａ、Ｓ３３４Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３４Ａ、Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４Ａ、及びＳ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４、例えば、配列番号４～１０のいずれか１つの配列を有するバリアント）、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、またはヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））をコードするか、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ、例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、またはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ４８～Ｅ５０のいずれか１項に記載の方法。

【0037】

Ｅ５２．前記支持細胞が、前庭支持細胞である、Ｅ４８～Ｅ５１のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ５３．前記前庭支持細胞が、卵形嚢内にある、Ｅ５２に記載の方法。

【0038】

Ｅ５４．前記支持細胞が、蝸牛支持細胞であり、前記プロモーターが、ＳＯＸ２である、Ｅ４８～Ｅ５１のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ５５．霊長類対象の内耳の有毛細胞（例えば、前庭有毛細胞及び／または蝸牛有毛細胞）内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0039】

Ｅ５６．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ５５に記載の方法。
Ｅ５７．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲＮＡ、例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ５５またはＥ５６に記載の方法。

【0040】

Ｅ５８．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ５５～Ｅ５７のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ５９．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ５８に記載の方法。

【0041】

Ｅ６０．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ５８に記載の方法。
Ｅ６１．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ５５～Ｅ５７のいずれか１項に記載の方法。

【0042】

Ｅ６２．霊長類対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0043】

Ｅ６３．前記プロモーターが、前記ＳＬＣ２６Ａ５プロモーターである、Ｅ６２に記載の方法。
Ｅ６４．前記プロモーターが、前記ＯＣＭプロモーターである、Ｅ６２に記載の方法。

【0044】

Ｅ６５．前記プロモーターが、前記ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ６２に記載の方法。
Ｅ６６．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、Ｃｌｒｎ１、プロトカドヘリン関連１５（Ｐｃｄｈ１５）、カドヘリン関連２３（Ｃｄｈ２３）、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、またはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ６２～Ｅ６５のいずれか１項に記載の方法。

【0045】

Ｅ６７．霊長類対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0046】

Ｅ６８．前記プロモーターが、前記ＧＦＩ１プロモーターである、Ｅ６７に記載の方法。
Ｅ６９．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ６７に記載の方法。

【0047】

Ｅ７０．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、オトフェリン（Ｏｔｏｆ）、溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（Ｖｇｌｕｔ３）、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン（Ｗｈｒｎ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ６７～Ｅ６９のいずれか１項に記載の方法。

【0048】

Ｅ７１．霊長類対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＯＴＯＦプロモーター、線維芽細胞成長因子８（ＦＧＦ８）プロモーター、及び溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（ＳＬＣ１７Ａ８）プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0049】

Ｅ７２．前記プロモーターが、前記ＯＴＯＦプロモーターである、Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７３．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｔｍｃ１、Ｕｓｈ１ｃ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ７２またはＥ７２に記載の方法。

【0050】

Ｅ７４．霊長類対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0051】

Ｅ７５．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ７４に記載の方法。
Ｅ７６．前記プロモーターが、前記ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ７４に記載の方法。

【0052】

Ｅ７７．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞であり、前記プロモーターが、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ７４に記載の方法。
Ｅ７８．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞であり、前記プロモーターが、ＣＡＬＢ２プロモーターである、Ｅ７４に記載の方法。

【0053】

Ｅ７９．前記ポリヌクレオチドが、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ７４～Ｅ７８のいずれか１項に記載の方法。

【0054】

Ｅ８０．霊長類対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0055】

Ｅ８１．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ８０に記載の方法。
Ｅ８２．前記ポリヌクレオチドが、神経成長因子受容体（Ｎｇｆｒ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、テクトリン（Ｔｅｃｔｏｒｉｎ）ベータ（Ｔｅｃｔｂ）、テクトリンアルファ（Ｔｅｃｔａ）、Ｇｊｂ２、またはギャップ結合タンパク質ベータ６（Ｇｊｂ６）をコードする、Ｅ８０またはＥ８１に記載の方法。

【0056】

Ｅ８３．霊長類対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0057】

Ｅ８４．前記プロモーターが、前記ＳＹＮプロモーターである、Ｅ８３に記載の方法。
Ｅ８５．前記らせん神経節ニューロンが、高い自発発火速度を有し、前記プロモーターが、ＣＡＬＢ２プロモーターである、Ｅ８３に記載の方法。

【0058】

Ｅ８６．前記らせん神経節ニューロンが、求心性らせん神経節ニューロンであり、前記プロモーターが、ＢＨＬＨＥ２２プロモーターである、Ｅ８３に記載の方法。
Ｅ８７．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ、例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）もしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡである、Ｅ８３～Ｅ８６のいずれか１項に記載の方法。

【0059】

Ｅ８８．霊長類対象の血管条の周辺細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＫＣＮＥ１プロモーター、及びＧＪＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0060】

Ｅ８９．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ８８に記載の方法。
Ｅ９０．霊長類対象の血管条の基底細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0061】

Ｅ９１．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ９０に記載の方法。
Ｅ９２．霊長類対象の血管条の中間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0062】

Ｅ９３．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ９２に記載の方法。
Ｅ９４．前記プロモーターが、前記ＴＹＲプロモーターである、Ｅ９２に記載の方法。

【0063】

Ｅ９５．前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｔｙｒ、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ９０～Ｅ９４のいずれか１項に記載の方法。

【0064】

Ｅ９６．霊長類対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0065】

Ｅ９７．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９８．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、膜貫通タンパク質１６Ａ（Ｔｍｅｍ１６ａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、Ｅ９６またはＥ９７に記載の方法。

【0066】

Ｅ９９．霊長類対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0067】

Ｅ１００．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ９９に記載の方法。
Ｅ１０１．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、Ｅ９９またはＥ１００に記載の方法。

【0068】

Ｅ１０２．霊長類対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0069】

Ｅ１０３．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１０２に記載の方法
Ｅ１０４．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードする、Ｅ１０２またはＥ１０３に記載の方法。

【0070】

Ｅ１０５．霊長類対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0071】

Ｅ１０６．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｌｃ２６ａ４である、Ｅ１０５に記載の方法。
Ｅ１０７．霊長類対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0072】

Ｅ１０８．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１０７に記載の方法
Ｅ１０９．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｅａｃａｍ１６、オトアンコリン（Ｏｔｏａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、Ｅ１０７またはＥ１０８に記載の方法。

【0073】

Ｅ１１０．霊長類対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＭＰ２２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0074】

Ｅ１１１．前記ポリヌクレオチドが、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはミエリンタンパク質ゼロ（Ｍｐｚ）をコードする、Ｅ１１０に記載の方法。
Ｅ１１２．霊長類対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＥ１プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0075】

Ｅ１１３．前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードする、Ｅ１１２に記載の方法。
Ｅ１１４．霊長類対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0076】

Ｅ１１５．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１１４に記載の方法
Ｅ１１６．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードする、Ｅ１１４またはＥ１１５に記載の方法。

【0077】

Ｅ１１７．霊長類対象のスカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0078】

Ｅ１１８．前記プロモーターが、前記ＳＹＮプロモーターである、Ｅ１１７に記載の方法。
Ｅ１１９．前記ポリヌクレオチドが、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするか、または斥力ガイダンス分子ＢＭＰ共受容体Ａ（ＲＧＭＡ）に指向されたｓｈＲＮＡである、Ｅ１１７またはＥ１１８に記載の方法。

【0079】

Ｅ１２０．霊長類対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ９、Ｓａｌｌ２、Ｃａｍｔａ１、Ｈｅｙ２、Ｇａｔａ２、Ｈｅｙ１、Ｌａｓｓ２、Ｓｏｘ１０、Ｇａｔａ３、Ｃｕｘ１、Ｎｒ２ｆ１、Ｈｅｓ１、Ｒｏｒｂ、Ｊｕｎ、Ｚｆｐ６６７、Ｌｈｘ３、Ｎｈｌｈ１、Ｍｘｄ４、Ｚｍｉｚ１、Ｍｙｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｂａｒｈｌ１、Ｔｏｘ、Ｐｒｏｘ１、Ｎｆｉａ、Ｔｈｒｂ、Ｍｙｃｌ１、Ｋｄｍ５ａ、Ｃｒｅｂ３Ｉ４、Ｅｔｖ１、Ｐｅｇ３、Ｂａｃｈ２、Ｉｓｌ１、Ｚｂｔｂ３８、Ｌｂｈ、Ｔｕｂ、Ｈｍｇ２０、Ｒｅｓｔ、Ｚｆｐ８２７、Ａｆｆ３、Ｐｋｎｏｘ２、Ａｒｉｄ３ｂ、Ｍｌｘｉｐ、Ｚｆｐ５３２、Ｉｋｚｆ２、Ｓａｌｌ１、Ｓｉｘ２、Ｓａｌｌ３、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｒｆｘ７、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４に変異を含むＡｔｏｈ１バリアント（例えば、Ｓ３２８Ａ、Ｓ３３１Ａ、Ｓ３３４Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３４Ａ、Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４Ａ、及びＳ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４、例えば、配列番号４～１０のいずれか１つの配列を有するバリアント）、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0080】

Ｅ１２１．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。
Ｅ１２２．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ４をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。

【0081】

Ｅ１２３．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ１１をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。
Ｅ１２４．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ１２０に記載の方法。

【0082】

Ｅ１２５．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。
Ｅ１２６．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｅａｄ２をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。

【0083】

Ｅ１２７．前記ポリヌクレオチドが、Ｙａｐ１をコードする、Ｅ１２０に記載の方法。
Ｅ１２８．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１２０～Ｅ１２７のいずれか１項に記載の方法。

【0084】

Ｅ１２９．前記プロモーターが、前記ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ１２８に記載の方法。
Ｅ１３０．前記プロモーターが、前記ＨＥＳ１プロモーター、前記ＬＧＲ５プロモーター、前記ＳＯＸ２プロモーター、前記ＨＥＳ５プロモーター、及び前記ＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１２８に記載の方法。

【0085】

Ｅ１３１．前記支持細胞が、前庭支持細胞である、Ｅ１２０～Ｅ１３０のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ１３２．前記前庭支持細胞が、卵形嚢内にある、Ｅ１３１に記載の方法。

【0086】

Ｅ１３３．前記支持細胞が、蝸牛支持細胞であり、前記プロモーターが、ＳＯＸ２である、Ｅ１２０～Ｅ１３０のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ１３４．霊長類対象の内耳の有毛細胞（例えば、前庭有毛細胞及び／または蝸牛有毛細胞）内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0087】

Ｅ１３５．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ１３４に記載の方法。
Ｅ１３６．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ１３４に記載の方法。
Ｅ１３７．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ１３４に記載の方法。

【0088】

Ｅ１３８．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択される、Ｅ１３４～Ｅ１３７のいずれか１項に記載の方法。

【0089】

Ｅ１３９．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ１３４～Ｅ１３８のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ１４０．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ１３９に記載の方法。

【0090】

Ｅ１４１．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ１３９に記載の方法。
Ｅ１４２．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ１３４～Ｅ１３８のいずれか１項に記載の方法。

【0091】

Ｅ１４３．霊長類対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0092】

Ｅ１４４．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃをコードする、Ｅ１４３に記載の方法。
Ｅ１４５．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ９をコードする、Ｅ１４３に記載の方法。

【0093】

Ｅ１４６．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ１０をコードする、Ｅ１４３に記載の方法。
Ｅ１４７．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｃｍをコードする、Ｅ１４３に記載の方法。

【0094】

Ｅ１４８．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｃ１をコードする、Ｅ１４３に記載の方法。
Ｅ１４９．前記ポリヌクレオチドが、Ｍｙｏ７ａをコードする、Ｅ１４３に記載の方法。

【0095】

Ｅ１５０．前記ポリヌクレオチドが、Ｕｓｈ１ｃをコードする、Ｅ１４３に記載の方法。
Ｅ１５１．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ１４３に記載の方法。

【0096】

Ｅ１５２．前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１４３～Ｅ１５１のいずれか１項に記載の方法。

【0097】

Ｅ１５３．霊長類対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0098】

Ｅ１５４．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１５５．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｌｒｎ１をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。

【0099】

Ｅ１５６．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆをコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１５７．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｃ１をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１５８．前記ポリヌクレオチドが、Ｕｓｈ１ｃをコードする、Ｅ１５３に記載の方法。

【0100】

Ｅ１５９．前記ポリヌクレオチドが、Ｍｙｏ７ａをコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１６０．前記ポリヌクレオチドが、Ｖｇｌｕｔ３をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。

【0101】

Ｅ１６１．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃをコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１６２．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ９をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。

【0102】

Ｅ１６３．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ１０をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１６４．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ１５３に記載の方法。

【0103】

Ｅ１６５．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｃｍをコードする、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１６６．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７ａプロモーターからなる群から選択される、Ｅ１５３～Ｅ１６５のいずれか１項に記載の方法。

【0104】

Ｅ１６７．前記プロモーターが、前記ＧＦＩ１プロモーターである、Ｅ１６６に記載の方法。
Ｅ１６８．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ１６６に記載の方法。

【0105】

Ｅ１６９．霊長類対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１４、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ｔｍｃ１、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0106】

Ｅ１７０．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆをコードする、Ｅ１６９に記載の方法。
Ｅ１７１．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１をコードする、Ｅ１６９に記載の方法。

【0107】

Ｅ１７２．前記ポリヌクレオチドが、Ｖｇｌｕｔ３をコードする、Ｅ１６９に記載の方法。
Ｅ１７３．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｌｒｎ１をコードする、Ｅ１６９に記載の方法。

【0108】

Ｅ１７４．前記プロモーターが、ＯＴＯＦプロモーター、ＦＧＦ８プロモーター、及びＳＬＣ１７Ａ８プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１６９～Ｅ１７３のいずれか１項に記載の方法。

【0109】

Ｅ１７５．霊長類対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0110】

Ｅ１７６．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ１７５に記載の方法。
Ｅ１７７．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ１７５に記載の方法。
Ｅ１７８．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ１７５に記載の方法。

【0111】

Ｅ１７９．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１７５～Ｅ１７８のいずれか１項
に記載の方法。

【0112】

Ｅ１８０．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞であり、前記プロモーターが、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ１７５～Ｅ１７９のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ１８１．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞であり、前記プロモーターが、ＣＡＬＢ２プロモーターである、Ｅ１７５～Ｅ１７９のいずれか１項に記載の方法。

【0113】

Ｅ１８２．霊長類対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｎｇｆｒ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0114】

Ｅ１８３．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ１８２に記載の方法。
Ｅ１８４．前記プロモーターが、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１８２またはＥ１８３に記載の方法。

【0115】

Ｅ１８５．霊長類対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）もしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0116】

Ｅ１８６．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ１８５に記載の方法。
Ｅ１８７．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ１８５に記載の方法。
Ｅ１８８．前記プロモーターが、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１８５～Ｅ１８７のいずれか１項に記載の方法。

【0117】

Ｅ１８９．前記らせん神経節ニューロンが、高い自発発火速度を有し、前記プロモーターが、ＣＡＬＢ２プロモーターである、Ｅ１８５～Ｅ１８８のいずれか１項に記載の方法。

【0118】

Ｅ１９０．前記前庭有毛細胞が、求心性らせん神経節ニューロンであり、前記プロモーターが、ＢＬＨＬＥ２２プロモーターである、Ｅ１８５～Ｅ１８８のいずれか１項に記載の方法。

【0119】

Ｅ１９１．霊長類対象の血管条内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、Ｔｙｒ、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）であるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0120】

Ｅ１９２．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ１９１に記載の方法。
Ｅ１９３．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｙｒをコードする、Ｅ１９１に記載の方法。
Ｅ１９４．前記細胞が、前記血管条の周辺細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＫＣＮＥ１プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１９１～Ｅ１９３のいずれか１項に記載の方法。

【0121】

Ｅ１９５．前記細胞が、前記血管条の基底細胞であり、前記プロモーターが、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１９１～Ｅ１９３のいずれか１項に記載の方法。

【0122】

Ｅ１９６．前記細胞が、前記血管条の中間細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択される、Ｅ１９１～Ｅ１９３のいずれか１項に記載の方法。

【0123】

Ｅ１９７．霊長類対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｔｍｅｍ１６ａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0124】

Ｅ１９８．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ１９７に記載の方法。
Ｅ１９９．前記プロモーターが、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ１９７またはＥ１９６に記載の方法。

【0125】

Ｅ２００．霊長類対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｉｋｚｆ２、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0126】

Ｅ２０１．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ２００に記載の方法。
Ｅ２０２．前記プロモーターが、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ２００またはＥ２０１に記載の方法。

【0127】

Ｅ２０３．霊長類対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0128】

Ｅ２０４．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ２０３に記載の方法。
Ｅ２０５．前記プロモーターが、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ２０３またはＥ２０４に記載の方法。

【0129】

Ｅ２０６．霊長類対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0130】

Ｅ２０７．前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターである、Ｅ２０６に記載の方法。
Ｅ２０８．霊長類対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｃｅａｃａｍ１６、Ｏｔｏａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0131】

Ｅ２０９．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ２０８に記載の方法。
Ｅ２１０．前記プロモーターが、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ２０８またはＥ２０９に記載の方法。

【0132】

Ｅ２１１．霊長類対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはＭｐｚをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0133】

Ｅ２１２．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ２１１に記載の方法。
Ｅ２１３．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ２１１に記載の方法。
Ｅ２１４．前記プロモーターが、ＰＭＰ２２プロモーターである、Ｅ２１１～Ｅ２１３のいずれか１項に記載の方法。

【0134】

Ｅ２１５．霊長類対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0135】

Ｅ２１６．前記プロモーターが、ＫＣＮＥ１プロモーターである、Ｅ２１５に記載の方法。
Ｅ２１７．霊長類対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0136】

Ｅ２１８．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ２１７に記載の方法。
Ｅ２１９．前記プロモーターが、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ２１７またはＥ２１８に記載の方法。

【0137】

Ｅ２２０．霊長類対象のスカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするポリヌクレオチド、またはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0138】

Ｅ２２１．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ２２０に記載の方法。
Ｅ２２２．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ２２０に記載の方法。
Ｅ２２３．前記プロモーターが、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２２０～Ｅ２２２のいずれか１項に記載の方法。

【0139】

Ｅ２２４．ＯＴＯＦにおける変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｏｔｏｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0140】

Ｅ２２５．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター、ＭＹＯ１５プロモーター、及びＯＴＯＦプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２２４に記載の方法。

【0141】

Ｅ２２６．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーターまたはＯＴＯＦプロモーターである、Ｅ２２５に記載の方法。
Ｅ２２７．ＳＴＲＣにおける変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｔｒｃをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0142】

Ｅ２２８．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター、ＭＹＯ１５プロモーター、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択される、Ｅ２２７に記載の方法。

【0143】

Ｅ２２９．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターを含む群から選択される、Ｅ２２８に記載の方法。

【0144】

Ｅ２３０．アミノグリコシド誘発性両側性前庭機能低下を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0145】

Ｅ２３１．両側性前庭機能低下を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0146】

Ｅ２３２．加齢性前庭障害を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0147】

Ｅ２３３．前庭障害を有するか、または前庭障害を発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0148】

Ｅ２３４．難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0149】

Ｅ２３５．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター、及びＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２３０～Ｅ２３４のいずれか１項に記載の方法。

【0150】

Ｅ２３６．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ２３５に記載の方法。
Ｅ２３７．ＧＪＢ２における変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0151】

Ｅ２３８．ＧＪＢ２における変異に関連する加齢性難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0152】

Ｅ２３９．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター、及びＧＪＢ２プロモーターからなる群から選択される、Ｅ２３７またはＥ２３８に記載の方法。

【0153】

Ｅ２４０．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ２３９に記載の方法。
Ｅ２４１．ＳＬＣ１７Ａ８における変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｌｃ１７ａ８をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0154】

Ｅ２４２．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター、ＭＹＯ１５プロモーター、及びＯＴＯＦプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２４１に記載の方法。

【0155】

Ｅ２４３．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターまたは前記ＯＴＯＦプロモーターである、Ｅ２４２に記載の方法。
Ｅ２４４．ＴＭＣ１における変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｔｍｃ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0156】

Ｅ２４５．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２４４に記載の方法。
Ｅ２４６．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ２４４に記載の方法。

【0157】

Ｅ２４７．難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｎｔｆ３をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0158】

Ｅ２４８．耳鳴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｎｔｆ３をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0159】

Ｅ２４９．雑音下の発話を理解するのが困難であるか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｎｔｆ３をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0160】

Ｅ２５０．シャルコー・マリー・トゥース病を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｎｔｆ３をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0161】

Ｅ２５１．フリードライヒ運動失調症を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｎｔｆ３をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0162】

Ｅ２５２．前記プロモーターが、ＳＹＮプロモーターである、Ｅ２４７～Ｅ２５１のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２５３．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２４７～Ｅ２５１のいずれか１項に記載の方法。

【0163】

Ｅ２５４．難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0164】

Ｅ２５５．耳鳴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0165】

Ｅ２５６．雑音下の発話を理解するのが困難であるか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0166】

Ｅ２５７．シャルコー・マリー・トゥース病を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0167】

Ｅ２５８．フリードライヒ運動失調症を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0168】

Ｅ２５９．前記プロモーターが、ＳＹＮプロモーターである、Ｅ２５４～Ｅ２５８のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２６０．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２５４～Ｅ２５８のいずれか１項に記載の方法。

【0169】

Ｅ２６１．両側性前庭機能低下を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0170】

Ｅ２６２．加齢性前庭障害を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0171】

Ｅ２６３．前庭障害を有するか、または前庭障害を発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0172】

Ｅ２６４．難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0173】

Ｅ２６５．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ２６１～Ｅ２６４のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２６６．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２６１～Ｅ２６４のいずれか１項に記載の方法。

【0174】

Ｅ２６７．両側性前庭機能低下を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ１１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0175】

Ｅ２６８．加齢性前庭障害を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ１１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0176】

Ｅ２６９．前庭障害を有するか、または前庭障害を発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ１１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0177】

Ｅ２７０．難聴を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ１１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0178】

Ｅ２７１．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ２６７～Ｅ２７０のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２７２．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２６７～Ｅ２７０のいずれか１項に記載の方法。

【0179】

Ｅ２７３．ＵＳＨ１Ｃにおける変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｕｓｈ１ｃをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0180】

Ｅ２７４．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ２７３に記載の方法。
Ｅ２７５．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２７３に記載の方法。

【0181】

Ｅ２７６．ＭＹＯ７Ａにおける変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｍｙｏ７ａをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0182】

Ｅ２７７．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ２７６に記載の方法。
Ｅ２７８．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２７６に記載の方法。

【0183】

Ｅ２７９．ＣＬＲＮ１における変異に関連する単性聴覚消失を有するか、またはそれを発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、Ｃｌｒｎ１をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0184】

Ｅ２８０．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ２７９に記載の方法。
Ｅ２８１．前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、及びｓｍＣＢＡプロモーターからなる群から選択される、Ｅ２７９に記載の方法。

【0185】

Ｅ２８２．前庭機能障害を有するか、または前庭障害を発症するリスクがある霊長類対象を治療する方法であって、前記対象に、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。

【0186】

Ｅ２８３．前記プロモーターが、表５に列記される支持細胞プロモーター、スカルパ神経節プロモーター、前庭有毛細胞プロモーター、または前庭支持細胞プロモーターである、Ｅ２８２に記載の方法。

【0187】

Ｅ２８４．前記プロモーターが、ＭＹＯ１５である、Ｅ２８３に記載の方法。
Ｅ２８５．前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択される前庭及び蝸牛有毛細胞、蝸牛及び前庭支持細胞、またはスカルパ神経節での発現のためのポリヌクレオチドを含む、Ｅ２８２～Ｅ２８４のいずれか１項に記載の方法。

【0188】

Ｅ２８６．前記ポリヌクレオチドが、ウィルリン、Ｓｏｘ９、Ｓａｌｌ２、Ｃａｍｔａ１、Ｈｅｙ２、Ｇａｔａ２、Ｈｅｙ１、Ｌａｓｓ２、Ｓｏｘ１０、Ｇａｔａ３、Ｃｕｘ１、Ｎｒ２ｆ１、Ｈｅｓ１、Ｒｏｒｂ、Ｊｕｎ、Ｚｆｐ６６７、Ｌｈｘ３、Ｎｈｌｈ１、Ｍｘｄ４、Ｚｍｉｚ１、Ｍｙｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｂａｒｈｌ１、Ｔｏｘ、Ｐｒｏｘ１、Ｎｆｉａ、Ｔｈｒｂ、Ｍｙｃｌ１、Ｋｄｍ５ａ、Ｃｒｅｂ３Ｉ４、Ｅｔｖ１、Ｐｅｇ３、Ｂａｃｈ２、Ｉｓｌ１、Ｚｂｔｂ３８、Ｌｂｈ、Ｔｕｂ、Ｈｍｇ２０、Ｒｅｓｔ、Ｚｆｐ８２７、Ａｆｆ３、Ｐｋｎｏｘ２、Ａｒｉｄ３ｂ、Ｍｌｘｉｐ、Ｚｆｐ５３２、Ｉｋｚｆ２、Ｓａｌｌ１、Ｓｉｘ２、Ｓａｌｌ３、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｒｆｘ７、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４に変異を含むＡｔｏｈ１バリアント（例えば、Ｓ３２８Ａ、Ｓ３３１Ａ、Ｓ３３４Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ、Ｓ３２８Ａ／Ｓ３３４Ａ、Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４Ａ、及びＳ３２８Ａ／Ｓ３３１Ａ／Ｓ３３４、例えば、配列番号４～１０のいずれか１つの配列を有するバリアント）、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、Ｔｍｔｃ４、Ｓｏｘ１１、もしくはヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、もしくはｇＲＮＡ）をコードするか、またはマイクロＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、もしくはｍｉＲ－１８２）である、Ｅ２８２～Ｅ２８５のいずれか１項に記載の方法。

【0189】

Ｅ２８７．前記前庭機能障害が、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、または不均衡である、Ｅ２８２～Ｅ２８６のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ２８８．難聴（例えば、感音難聴、聴覚消失、または聴覚神経障害）を有するか、またはそれらを発症するリスクがある霊長類対象を、前記対象に、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することによって治療する方法。

【0190】

Ｅ２８９．前記プロモーターが、表５に列記されるＩＨＣプロモーター、ＯＨＣプロモーター、支持細胞プロモーター、蝸牛支持細胞サブタイププロモーター、蝸牛有毛細胞プロモーター、またはＳＧＮプロモーターである、Ｅ２８８に記載の方法。

【0191】

Ｅ２９０．前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択されるＩＨＣ、ＯＨＣ、蝸牛有毛細胞、前庭及び蝸牛有毛細胞、蝸牛及び前庭支持細胞、蝸牛支持細胞サブタイプ、またはらせん神経節ニューロンでの発現のためのポリヌクレオチドを含む、Ｅ２８８またはＥ２８９に記載の方法。

【0192】

Ｅ２９１．前記難聴、聴覚消失、前庭障害、前庭機能障害、または前庭機能低下が、有毛細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭有毛細胞）の喪失に関連している、Ｅ２２４～Ｅ２９０のいずれか１項に記載の方法。

【0193】

Ｅ２９２．促進を必要とする霊長類対象の線維細胞において有毛細胞の再生を、前記対象に、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することによって促進する方法。

【0194】

Ｅ２９３．前記プロモーターが、表５に列記される支持細胞プロモーター、前庭支持細胞プロモーター、または蝸牛支持細胞サブタイププロモーターである、Ｅ２９２に記載の方法。

【0195】

Ｅ２９４．前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択されるＩＨＣ、ＯＨＣ、蝸牛有毛細胞、前庭及び蝸牛有毛細胞、蝸牛支持細胞サブタイプ、または蝸牛及び前庭支持細胞での発現のためのポリヌクレオチドを含有する、Ｅ２９２またはＥ２９３に記載の方法。

【0196】

Ｅ２９５．増加を必要とする霊長類対象の支持細胞の数を、前記対象に、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することによって増加させる（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞、例えば、支持細胞増殖を増加させる）方法。

【0197】

Ｅ２９６．前記プロモーターが、表５に列記される支持細胞プロモーター、蝸牛支持細胞サブタイププロモーター、または前庭支持細胞プロモーターである、Ｅ２９５に記載の方法。

【0198】

Ｅ２９７．前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択される、蝸牛及び前庭支持細胞、または蝸牛支持細胞サブタイプでの発現のためのポリヌクレオチドを含有する、Ｅ２９５またはＥ２９６に記載の方法。

【0199】

Ｅ２９８．予防または低減を必要とする霊長類対象の内耳細胞の損傷または死を、前記対象に、有効量の、本発明のＡＡＶ１ベクターまたは本発明の組成物を投与することによって予防または低減する方法。

【0200】

Ｅ２９９．前記内耳細胞の損傷または死が、聴覚毒性薬物誘発性損傷または死である、Ｅ２９８に記載の方法。
Ｅ３００．前記聴覚毒性薬物が、アミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、カナマイシン、バンコマイシン、及びアミカシン）、抗悪性腫瘍薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチンなどの白金含有化学療法剤）、エタクリン酸、フロセミド、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、特に高用量で）、及びキニンを含む群から選択される、Ｅ２９９に記載の方法。

【0201】

Ｅ３０１．前記内耳細胞の損傷または死が、音響外傷、疾患もしくは感染、頭部外傷、または老化に起因する、Ｅ２９８に記載の方法。
Ｅ３０２．耳鳴を有するか、または耳鳴を発症するリスクがある霊長類対象を、前記対象に、有効量の、本発明のＡＡＶ１ベクターまたは本発明の組成物を投与することによって治療する方法。

【0202】

Ｅ３０３．増加を必要とする霊長類対象の内耳細胞の生存を、前記対象に、有効量の、本発明のＡＡＶ１ベクターまたは本発明の組成物を投与することによって増加させる方法。

【0203】

Ｅ３０４．前記ＡＡＶ１ベクターが、前記対象の前記中耳または内耳に局所投与される、Ｅ１～Ｅ３０３のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３０５．前記ＡＡＶ１ベクターが、経鼓膜または鼓膜内投与される、Ｅ３０４に記載の方法。

【0204】

Ｅ３０６．前記ＡＡＶ１ベクターが、外リンパに投与される、Ｅ３０４に記載の方法。
Ｅ３０７．前記ＡＡＶ１ベクターが、内リンパに投与される、Ｅ３０４に記載の方法。
Ｅ３０８．前記ＡＡＶ１ベクターが、卵円窓に、またはそれを通して投与される、Ｅ３０４に記載の方法。

【0205】

Ｅ３０９．前記ＡＡＶ１ベクターが、正円窓に、またはそれを通して投与される、Ｅ３０４に記載の方法。
Ｅ３１０．前記ＡＡＶ１ベクターが、内リンパ嚢に投与される、Ｅ３０４に記載の方法。

【0206】

Ｅ３１１．前記ＡＡＶ１ベクターが、三半規管に、またはそれを通して投与される、Ｅ３０４に記載の方法。
Ｅ３１２．前記ＡＡＶ１ベクターが、血清型２アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ２）ベクターからの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む、Ｅ１～Ｅ３１１のいずれか１項に記載の方法。

【0207】

Ｅ３１３．前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む（例えば、前記ＡＡＶ１ベクターが、配列番号１～３のアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含有する）、Ｅ１～Ｅ３１２のいずれか１項に記載の方法。

【0208】

Ｅ３１４．前記ＡＡＶ１ベクターが、約１×１０^９ベクターゲノム（ＶＧ）／ｍＬ～１×１０^１５ＶＧ／ｍＬ（例えば、１×１０^９ＶＧ／ｍＬ、２×１０^９ＶＧ／ｍＬ、３×１０^９ＶＧ／ｍＬ、４×１０^９ＶＧ／ｍＬ、５×１０^９ＶＧ／ｍＬ、６×１０^９ＶＧ／ｍＬ、７×１０^９ＶＧ／ｍＬ、８×１０^９ＶＧ／ｍＬ、９×１０^９ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、または１×１０^１５ＶＧ／ｍＬ）の力価を有し、１μＬ～２００μＬ（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００μＬ）の体積で投与される、Ｅ１～Ｅ３１３のいずれか１項に記載の方法。

【0209】

Ｅ３１５．前記ＡＡＶ１ベクターが、１×１０^７ＶＧ／耳～２×１０^１４ＶＧ／耳（例えば、１×１０^７ＶＧ／耳、２×１０^７ＶＧ／耳、３×１０^７ＶＧ／耳、４×１０^７ＶＧ／耳、５×１０^７ＶＧ／耳、６×１０^７ＶＧ／耳、７×１０^７ＶＧ／耳、８×１０^７ＶＧ／耳、９×１０^７ＶＧ／耳、１×１０^８ＶＧ／耳、２×１０^８ＶＧ／耳、３×１０^８ＶＧ／耳、４×１０^８ＶＧ／耳、５×１０^８ＶＧ／耳、６×１０^８ＶＧ／耳、７×１０^８ＶＧ／耳、８×１０^８ＶＧ／耳、９×１０^８ＶＧ／耳、１×１０^９ＶＧ／耳、２×１０^９ＶＧ／耳、３×１０^９ＶＧ／耳、４×１０^９ＶＧ／耳、５×１０^９ＶＧ／耳、６×１０^９ＶＧ／耳、７×１０^９ＶＧ／耳、８×１０^９ＶＧ／耳、９×１０^９ＶＧ耳、１×１０^１０ＶＧ／耳、２×１０^１０ＶＧ／耳、３×１０^１０ＶＧ／耳、４×１０^１０ＶＧ／耳、５×１０^１０×ＶＧ／耳、６×１０^１０ＶＧ／耳、７×１０^１０ＶＧ／耳、８×１０^１０ＶＧ／耳、９×１０^１０ＶＧ／耳、１×１０^１１ＶＧ／耳、２×１０^１１ＶＧ／耳、３×１０^１１ＶＧ／耳、４×１０^１１ＶＧ／耳、５×１０^１１ＶＧ／耳、６×１０^１１ＶＧ／耳、７×１０^１１ＶＧ／耳、８×１０^１１ＶＧ／耳、９×１０^１１ＶＧ／耳、１×１０^１２ＶＧ／耳、２×１０^１２ＶＧ／耳、３×１０^１２ＶＧ／耳、４×１０^１２ＶＧ／耳、５×１０^１２ＶＧ／耳、６×１０^１２ＶＧ／耳、７×１０^１２ＶＧ／耳、８×１０^１２ＶＧ／耳、９×１０^１２ＶＧ／耳、１×１０^１３ＶＧ／耳、２×１０^１３ＶＧ／耳、３×１０^１３ＶＧ／耳、４×１０^１３ＶＧ／耳、５×１０^１３ＶＧ／耳、６×１０^１３ＶＧ／耳、７×１０^１３ＶＧ／耳、８×１０^１３ＶＧ／耳、９×１０^１３ＶＧ／耳、１×１０^１４ＶＧ／耳、または２×１０^１４ＶＧ／耳）の用量で投与される、Ｅ１～
Ｅ３１４に記載の方法。

【0210】

Ｅ３１６．前記霊長類が、ヒトである、Ｅ１～Ｅ３１５のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３１７．前記対象が、成人である、Ｅ１～Ｅ３１６のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３１８．前記対象が、青少年である、Ｅ１～Ｅ３１６のいずれか１項に記載の方法。

【0211】

Ｅ３１９．前記対象が、小児である、Ｅ１～Ｅ３１６のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３２０．前記対象が、乳児または満期新生児である、Ｅ１～Ｅ３１６のいずれか１項に記載の方法。

【0212】

Ｅ３２１．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ５５～Ｅ５７及びＥ１３４～Ｅ１３８のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３２２．前記蝸牛有毛細胞が、ＩＨＣである、Ｅ３２１に記載の方法。

【0213】

Ｅ３２３．前記蝸牛有毛細胞が、ＯＨＣである、Ｅ３２１に記載の方法。
Ｅ３２４．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ５５～Ｅ５７及びＥ１３４～Ｅ１３８のいずれか１項に記載の方法。

【0214】

Ｅ３２５．前記支持細胞が、前庭支持細胞である、Ｅ４８～Ｅ５１及びＥ１２０～Ｅ１３０のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３２６．前記支持細胞が、蝸牛支持細胞（例えば、ヘンゼン細胞、ダイテルス細胞、柱細胞、内指節細胞、及び／または境界細胞）である、Ｅ４８～Ｅ５１及びＥ１２０～Ｅ１３０のいずれか１項に記載の方法。

【0215】

Ｅ３２７．前記方法が、前記ＡＡＶ１ベクターまたは組成物を投与する前に、前記対象の聴力を評価すること（例えば、聴力測定、聴性脳幹応答（ＡＢＲ）、蝸電図検査（ＥＣＯＧ）、または耳音響放射などの標準的な試験を使用して、聴力を評価すること）をさらに含む、Ｅ１～Ｅ３２６のいずれか１項に記載の方法。

【0216】

Ｅ３２８．前記方法が、前記ＡＡＶ１ベクターまたは組成物を投与した後に、前記対象の聴力を評価すること（例えば、聴力測定、ＡＢＲ、ＥＣＯＧ、または耳音響放射などの標準的な試験を使用して、聴力を評価すること）をさらに含む、Ｅ１～Ｅ３２７のいずれか１項に記載の方法。

【0217】

Ｅ３２９．前記方法が、前記ＡＡＶ１ベクターまたは組成物を投与する前に、前記対象の前庭機能を評価すること（例えば、電気眼振図（ＥＮＧ）またはビデオ眼振計（ＶＮＧ）、姿勢図検査、回転椅子試験（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、前庭誘発筋電位（ＶＥＭＰ）、または特殊臨床平衡試験などの標準的な試験を使用して、前庭機能を評価すること）をさらに含む、Ｅ１～Ｅ３２８のいずれか１項に記載の方法。

【0218】

Ｅ３３０．前記方法が、前記ＡＡＶ１ベクターまたは組成物を投与した後に、前記対象の前庭機能を評価すること（例えば、ＥＮＧまたはＶＮＧ、姿勢図検査、回転椅子試験、ＥＣＯＧ、ＶＥＭＰ、または特殊臨床平衡試験などの標準的な試験を使用して、前庭機能を評価すること）をさらに含む、Ｅ１～Ｅ３２９のいずれか１項に記載の方法。

【0219】

Ｅ３３１．前記ＡＡＶ１ベクターまたは組成物が、難聴の予防もしくは低減、前庭機能障害の予防もしくは低減、耳鳴の予防もしくは低減、難聴の発症の遅延、前庭機能障害の発症の遅延、難聴の進行の緩徐、前庭機能障害の進行の緩徐、聴力の改善、前庭機能の改善（例えば、平衡の改善またはめまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）もしくはめまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）の改善）、内耳細胞再生（例えば、蝸牛有毛細胞、前庭有毛細胞、もしくはらせん神経節ニューロンの再生）の促進もしくは誘導、有毛細胞数（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、及び／または前庭有毛細胞数）の増加、ＳＧＮ数の増加、支持細胞数の増加（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞、例えば、支持細胞増殖の増加）、支持細胞の有毛細胞への分化の増加（例えば、ＩＨＣ及び／またはＯＨＣへの蝸牛支持細胞分化の誘導、及び／または前庭有毛細胞への前庭支持細胞分化の誘導）、内耳細胞の損傷もしくは死（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、ＳＧＮ、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／または前庭有毛細胞の損傷もしくは死）の予防もしくは低減、内耳細胞の発達の促進もしくは増加、内耳細胞生存の促進もしくは増加（例えば、損傷した内耳細胞の生存の増加、損傷した内耳細胞の修復の促進、または内耳細胞の損傷または変性もしくは喪失のリスクがある対象の内耳細胞の保護）、内耳細胞機能の改善、リボンシナプスの保護、リボンシナプス形成の促進もしくは増加、有毛細胞とニューロン（例えば、ＳＧＮ及び／または前庭神経節ニューロン）との間の結合（例えば、シナプス結合）の維持、あるいは有毛細胞とニューロン（例えば、ＳＧＮ及び／または前庭神経節ニューロン）との間の結合（例えば、シナプス結合）の増加もしくは回復に十分な量で投与される、Ｅ１～Ｅ３３０のいずれか１項に記載の方法。

【0220】

Ｅ３３２．前記対象が、難聴（例えば、感音難聴、聴覚消失、または聴覚神経障害）を有するか、またはそれを発症するリスクがある、Ｅ１～Ｅ３３１のいずれか１項に記載の方法。

【0221】

Ｅ３３３．前記対象が、前庭機能障害（例えば、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、または不均衡）を有するか、またはそれを発症するリスクがある、Ｅ１～Ｅ３３２のいずれか１項に記載の方法。

【0222】

Ｅ３３４．前記対象が、前庭機能障害（例えば、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、または不均衡）を有すると以前に診断されている、Ｅ１～Ｅ３３３のいずれか１項に記載の方法。

【0223】

Ｅ３３５．前記対象が、難聴（例えば、感音難聴、聴覚消失、または聴覚神経障害）を有すると以前に診断されている、Ｅ１～Ｅ３３４のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３３６．前記難聴が、遺伝的難聴である、Ｅ２３４～Ｅ２３６、Ｅ２３８、Ｅ２４７、Ｅ２５４、Ｅ２６４、Ｅ２７０、Ｅ２８８～Ｅ２９１、及びＥ３３１～Ｅ３３５のいずれか１項に記載の方法。

【0224】

Ｅ３３７．前記遺伝的難聴が、常染色体優性難聴、常染色体劣性難聴、またはＸ連鎖性難聴である、Ｅ３３６に記載の方法。
Ｅ３３８．前記難聴が、後天性難聴である、Ｅ２３４～Ｅ２３６、Ｅ２３８、Ｅ２４７、Ｅ２５４、Ｅ２６４、Ｅ２７０、Ｅ２８８～Ｅ２９１、及びＥ３３１～Ｅ３３５のいずれか１項に記載の方法。

【0225】

Ｅ３３９．前記後天性難聴が、騒音性難聴、加齢性難聴、疾患もしくは感染による難聴、頭部外傷による難聴、または聴覚毒性薬物誘発性難聴である、Ｅ３３８に記載の方法。
Ｅ３４０．前記後天性難聴が、加齢性難聴である、Ｅ３３９に記載の方法。

【0226】

Ｅ３４１．前記難聴が、騒音性難聴である、Ｅ３３９のいずれか１項に記載の方法。
Ｅ３４２．前記難聴が、聴覚毒性薬物誘発性難聴である、Ｅ３３９に記載の方法。
Ｅ３４３．表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを含む、ＡＡＶ１ベクター。

【0227】

Ｅ３４４．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ３４３に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３４５．前記プロモーターが、ＳＹＮプロモーターである、Ｅ３４３に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0228】

Ｅ３４６．前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、ＭＹＯ１５プロモーター、ＯＴＯＦプロモーター、ＳＬＣ１７Ａ８プロモーター、ＦＧＦ８プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＴＹＲプロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＣＡＬＢ２プロモーター、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、ＳＯＸ９プロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、ＣＤ４４プロモーター、ＦＧＦＲ３プロモーター、ＦＲＺＢプロモーター、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーター、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーター、ＣＬＤＮ１１プロモーター、ＰＭＰ２２プロモーター、ＫＣＮＥ１プロモーター、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＵＢＢ３プロモーターからなる群から選択される、Ｅ３４３に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0229】

Ｅ３４７．前記プロモーターが、前記ＳＬＣ２６Ａ５プロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３４８．前記プロモーターが、前記ＯＣＭプロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0230】

Ｅ３４９．前記プロモーターが、前記ＯＴＯＦプロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３５０．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0231】

Ｅ３５１．前記プロモーターが、前記ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３５２．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0232】

Ｅ３５３．前記プロモーターが、前記ＴＹＲプロモーターである、Ｅ３４６に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３５４．前記ポリヌクレオチドが、表２に列記されるポリヌクレオチドから選択される、Ｅ３４３～Ｅ３５３のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0233】

Ｅ３５５．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３５６．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0234】

Ｅ３５７．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３５８．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0235】

Ｅ３５９．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｌｃ１７ａ８をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３６０．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｃ１をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0236】

Ｅ３６１．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３６２．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0237】

Ｅ３６３．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ４をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３６４．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ１１をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0238】

Ｅ３６５．前記ポリヌクレオチドが、Ｕｓｈ１ｃをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３６６．前記ポリヌクレオチドが、Ｍｙｏ７ａをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0239】

Ｅ３６７．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｌｒｎ１をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３６８．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ９をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0240】

Ｅ３６９．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ１０をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３７０．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0241】

Ｅ３７１．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｃｍをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３７２．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｙｒをコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0242】

Ｅ３７３．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｅａｄ２をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３７４．前記ポリヌクレオチドが、Ｙａｐ１をコードする、Ｅ３５４に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0243】

Ｅ３７５．表２に列記される前記ポリヌクレオチドから選択されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、ＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３７６．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0244】

Ｅ３７７．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３７８．前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0245】

Ｅ３７９．前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３８０．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｌｃ１７ａ８をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0246】

Ｅ３８１．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｃ１をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３８２．前記ポリヌクレオチドが、Ｎｔｆ３をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0247】

Ｅ３８３．前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３８４．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ４をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0248】

Ｅ３８５．前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ１１をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３８６．前記ポリヌクレオチドが、Ｕｓｈ１ｃをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0249】

Ｅ３８７．前記ポリヌクレオチドが、Ｍｙｏ７ａをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３８８．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｌｒｎ１をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0250】

Ｅ３８９．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ９をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３９０．前記ポリヌクレオチドが、Ｃｈｒｎａ１０をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0251】

Ｅ３９１．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｍｔｃ４をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３９２．前記ポリヌクレオチドが、Ｏｃｍをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0252】

Ｅ３９３．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｙｒをコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３９４．前記ポリヌクレオチドが、Ｔｅａｄ２をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0253】

Ｅ３９５．前記ポリヌクレオチドが、Ｙａｐ１をコードする、Ｅ３７５に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３９６．プロモーターが、表５のプロモーターのリストから選択される、Ｅ３７５～Ｅ３９５のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0254】

Ｅ３９７．前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーターである、Ｅ３９６に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ３９８．前記プロモーターが、ＳＹＮプロモーターである、Ｅ３９６に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0255】

Ｅ３９９．前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、ＭＹＯ１５プロモーター、ＯＴＯＦプロモーター、ＳＬＣ１７Ａ８プロモーター、ＦＧＦ８プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＴＹＲプロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＣＡＬＢ２プロモーター、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、ＳＯＸ９プロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、ＣＤ４４プロモーター、ＦＧＦＲ３プロモーター、ＦＲＺＢプロモーター、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーター、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーター、ＣＬＤＮ１１プロモーター、ＰＭＰ２２プロモーター、ＫＣＮＥ１プロモーター、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＵＢＢ３プロモーターからなる群から選択される、Ｅ３９６に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0256】

Ｅ４００．前記プロモーターが、前記ＳＬＣ２６Ａ５プロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ４０１．前記プロモーターが、前記ＯＣＭプロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0257】

Ｅ４０２．前記プロモーターが、前記ＯＴＯＦプロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ４０３．前記プロモーターが、前記ＭＹＯ１５プロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0258】

Ｅ４０４．前記プロモーターが、前記ＡＴＰ２Ｂ２プロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ４０５．前記プロモーターが、前記ＧＪＢ２プロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0259】

Ｅ４０６．前記プロモーターが、前記ＴＹＲプロモーターである、Ｅ３９９に記載のＡＡＶ１ベクター。
Ｅ４０７．前記ＡＡＶ１ベクターが、ＡＡＶ２ ＩＴＲを含む、Ｅ３４３～Ｅ４０６のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0260】

Ｅ４０８．前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む（例えば、前記ＡＡＶ１ベクターが、配列番号１～３のアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含有する）、Ｅ３４３～Ｅ４０７のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクター。

【0261】

Ｅ４０９．Ｅ３４３～Ｅ４０８のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクターを含む、薬学的組成物。
Ｅ４１０．薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、Ｅ４０９に記載の薬学的組成物。

【0262】

Ｅ４１１．前記薬学的組成物が、前記内耳または中耳への局所投与用に製剤化される、Ｅ４０９またはＥ４１０に記載の薬学的組成物。
Ｅ４１２．Ｅ３４３～Ｅ４０８のいずれか１項に記載のＡＡＶ１ベクターまたはＥ４０９～Ｅ４１１のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含有する、キット。

【0263】

本発明のこれら及び他の態様は、以下の説明、特許請求の範囲、及び図面において当業者に明らかである。
定義
本明細書で使用する場合、「約」という用語は、記載される値を上回るまたは下回る１０％以内の値を指す。

【0264】

本明細書で使用する場合、「投与」は、任意の有効な経路によって、対象に治療剤（例えば、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクター）を提供または与えることを指す。例示的な投与経路を本明細書において以下に記載する。

【0265】

本明細書で使用する場合、「アデノ随伴ウイルス血清型１ベクター」及び「ＡＡＶ１ベクター」という用語は、ＡＡＶ１キャプシドを有するアデノ随伴ウイルスベクターを指す。「アデノ随伴ウイルス血清型１ベクター」及び「ＡＡＶ１ベクター」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３）を有するＡＡＶベクターだけでなく、霊長類の内耳において広範な向性の野生型ＡＡＶ１を有する配列修飾を伴う、ＡＡＶ１キャプシドタンパク質を有するＡＡＶベクターも指す。本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができるＡＡＶ１ベクターとしては、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３のアミノ酸配列に対して９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を有するＡＡＶ１キャプシドタンパク質を有するもの、ならびに野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３のアミノ酸配列に対して１つ以上の保存的アミノ酸置換（例えば、最大５、最大１０、最大１５、最大２０、最大２５、最大３０、最大３５、最大４０、最大４５、または最大５０の保存的アミノ酸置換）、及び／または１つ以上の非保存的アミノ酸置換（例えば、最大５、最大１０、最大１５、最大２０、最大２５、最大３０、最大３５、最大４０、最大４５、または最大５０の非保存的アミノ酸置換）を有するＡＡＶ１キャプシドタンパク質を有するものが挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができるＡＡＶ１ベクターは、以下のアミノ酸置換：Ｌ１２９Ｆ、Ｅ４１８Ｄ、Ｅ５３１Ｋ、Ｆ５８４Ｌ、Ａ５９８Ｖ、及びＮ６４２Ｈの６つすべてを含有しない。本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができるＡＡＶ１ベクターは、プロテオソーム分解を低減するＴｙｒ２５２～Ｐｈｅ２７２（Ｙ２５２Ｆ）、Ｔｙｒ２７２～Ｐｈｅ２７２（Ｙ２７２Ｆ）、Ｔｙｒ４４４～Ｐｈｅ４４４（Ｙ４４４Ｆ）、Ｔｙｒ５００～Ｐｈｅ５００（Ｙ５００Ｆ）、Ｔｙｒ７００～Ｐｈｅ７００（Ｙ７００Ｆ）、Ｔｙｒ７０４～Ｐｈｅ７０４（Ｙ７０４Ｆ）、Ｔｙｒ７３０～Ｐｈｅ７３０（Ｙ７３０Ｆ）、及びＴｙｒ７３３～Ｐｈｅ７３３（Ｙ７３３Ｆ）などのキャプシドタンパク質上の１つ以上の表面露出チロシン残基に変異を有し得る。本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるＡＡＶ１ベクターのキャプシドタンパク質は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，７５９，２３７号に記載のアミノ酸配列を有し、ポリヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＡＡＶ１キャプシドタンパク質はまた、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，７４９，４９２号に記載されるように修飾され得る。内耳の向性は、本明細書に記載の方法を使用して評価することができる。

【0266】

本明細書で使用する場合、「細胞型」という用語は、遺伝子発現データに基づいて統計的に分離可能な表現型を共有する細胞群を指す。例えば、共通の細胞型の細胞は、類似の遺伝子活性化パターン及び抗原提示プロファイルなどの類似の構造的及び／または機能的特徴を共有し得る。共通の細胞型の細胞は、生物における共通の組織（例えば、上皮組織、神経組織、結合組織、または筋肉組織）から単離されたもの、及び／または共通の臓器、組織系、血管、または他の構造及び／または領域から単離されたものを含み得る。

【0267】

本明細書で使用する場合、「保存的変異」、「保存的置換」、及び「保存的アミノ酸置換」という用語は、極性、静電電荷、及び立体体積などの類似の物理化学的特性を呈する１つ以上の異なるアミノ酸に対する１つ以上のアミノ酸の置換を指す。これらの特性を、以下の表１に２０の天然に存在するアミノ酸の各々について要約する。

【0268】

【表1】

【0269】

この表から、保存的アミノ酸ファミリーには、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、及びＩ；（ｉｉ）Ｄ及びＥ；（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ、及びＴ；（ｉｖ）Ｈ、Ｋ、及びＲ；（ｖ）Ｎ及びＱ；ならびに（ｖｉ）Ｆ、Ｙ、及びＷが含まれることが理解される。したがって、保存的変異または置換は、同じアミノ酸ファミリーのメンバーに対して１つのアミノ酸を置換するものである（例えば、Ｔｈｒに対するＳｅｒの置換またはＡｒｇに対するＬｙｓの置換）。

【0270】

本明細書で使用する場合、「発達した内耳細胞」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）における３７週間以降（例えば、３７週間、３８週間、３９週間、４０週間、４１週間、４２週間以降）の分娩の開始として定義される、満期妊娠中に生じる発達プロセスを完了した内耳細胞を指す。ヒト成人、青少年、小児、乳児、及び満期新生児の耳は、発達した内耳細胞を含有する。発達した内耳細胞は、細胞特異的マーカーを発現し、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）を使用して形質導入することができる。

【0271】

本明細書で使用する場合、本明細書に記載の組成物、ベクター構築物、またはウイルスベクターの「有効量」、「治療有効量」、及び「十分な量」という用語は、対象に投与されると、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量を指し、したがって、「有効量」またはそれに対する同義語は、それが適用される文脈に依存する。例えば、感音難聴、耳鳴、または前庭機能障害を治療する文脈において、それは、組成物、ベクター構築物、またはウイルスベクターを投与せずに得られた応答と比較して、治療応答を達成するのに十分な組成物、ベクター構築物、またはウイルスベクターの量である。内耳細胞を形質導入する文脈において、それは、１つ以上の内耳細胞型（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上の内耳細胞型）を形質導入するのに十分な組成物、ベクター構築物、またはウイルスベクターの量である。そのような量に対応する本明細書に記載の所与の組成物の量は、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患または障害の種類、治療される対象（例えば、年齢、性別、体重）または宿主の同一性などの様々な要因に応じて変化するが、それでも、当該技術分野で既知の日常的な方法によって、当業者によって日常的に決定することができる。投薬レジメンを調整して、最適な治療応答を提供することができる。

【0272】

本明細書で使用する場合、「エンハンサー」という用語は、転写開始部位に対するエンハンサーの距離または定位にかかわらず、転写の効率を増加させることができる調節エレメントの種類を指す。したがって、エンハンサーは、転写開始部位の上流もしくは下流、またはプロモーターからかなりの距離に配置され得る。エンハンサーはまた、物理的及び機能的にプロモーターと重複してもよい。プロモーター配列（例えば、ＣＭＶプロモーター）を含むいくつかのポリヌクレオチドは、エンハンサー配列も含有する。

【0273】

本明細書で使用する場合、「発現する」という用語は、以下の事象のうちの１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；及び（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。

【0274】

本明細書で使用する場合、「異種」という用語は、天然に存在しない要素の組み合わせを指す。例えば、異種導入遺伝子は、それが作動可能に連結されるプロモーターによって天然に発現されない導入遺伝子を指す。

【0275】

本明細書で使用する場合、「増加する」及び「減少する」という用語は、それぞれ、参照に対する測定基準より大きいまたは小さい量の機能、発現、または活性をもたらす調節を指す。例えば、本明細書に記載の方法で組成物を投与した後、本明細書に記載される測定基準のマーカー（例えば、導入遺伝子発現）の量は、投与前のマーカーの量に対して、対象において少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％以上増加または減少し得る。一般に、測定基準は、投与が列挙された効果を有した時点で、例えば、治療レジメンが開始された少なくとも１週間、１ヶ月、３ヶ月、または６ヶ月後の投与後に測定される。

【0276】

本明細書で使用する場合、「内耳細胞型」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）対象の内耳（例えば、蝸牛及び／または前庭系）に見られる細胞型を指す。内耳細胞型には、内有毛細胞、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞が含まれる。

【0277】

本明細書で使用する場合、「局所的に」または「局所投与」は、全身効果ではなく局所効果を意図する身体の特定の部位における投与を意味する。局所投与の例は、皮膚、吸入、関節内、髄腔内、膣内、硝子体内、子宮内、病巣内投与、リンパ節投与、腫瘍内投与、内耳への投与（例えば、卵円窓、正円窓、または水平管などを介した外リンパまたは内リンパへの投与、例えば、鼓膜内または経鼓膜投与）、ならびに対象の粘膜への投与であり、投与は、全身効果ではなく局所効果を有することを意図する。

【0278】

本明細書で使用する場合、「作動可能に連結された」という用語は、第２の分子に結合された第１の分子を指し、分子は、第１の分子が第２の分子の機能に影響を及ぼすように配置される。２つの分子は、単一の連続する分子の一部であってもなくてもよく、隣接していてもいなくてもよい。例えば、プロモーターが細胞内の目的の転写可能なポリヌクレオチド分子の転写を調節する場合、プロモーターは、転写可能なポリヌクレオチド分子に作動可能に連結される。加えて、転写調節エレメントの２つの部分が、一方の部分の転写活性化機能性が他方の部分の存在によって悪影響を受けないように結合される場合、互いに動作可能に連結される。２つの転写調節エレメントは、リンカー核酸（例えば、介在する非コード核酸）によって互いに作動可能に連結され得るか、または介在するヌクレオチドが存在しない状態で互いに作動可能に連結され得る。

【0279】

本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシドのポリマーを指す。典型的には、ポリヌクレオチドは、ホスホジエステル結合によって結合されたＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）に天然に見られるヌクレオシドから構成される。本用語は、天然に存在する核酸に見られるか否かにかかわらず、化学的または生物学的に修飾された塩基、修飾された骨格等を含有するヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体を含有する分子を包含し、そのような分子は、ある特定の用途に好ましい場合がある。本出願がポリヌクレオチドを指す場合、ＤＮＡ、ＲＮＡの両方、ならびに各場合において、一本鎖及び二本鎖形態（及び各一本鎖分子の補体）の両方が提供されることが理解される。本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド配列」は、ポリヌクレオチド材料自体、及び／または特定の核酸を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、塩基の略語として使用される一連の文字）を指し得る。本明細書に提示されるポリヌクレオチド配列は、別途示されない限り、５’から３’の方向に提示される。

【0280】

本明細書で使用する場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼによって結合されるＤＮＡ上の認識部位を指す。ポリメラーゼは、プロモーターに作動可能に連結された導入遺伝子の転写を駆動する。

【0281】

参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列中の核酸またはアミノ酸と同一である候補配列中の核酸またはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。核酸またはアミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするための適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成され得る。例示として、所与の核酸またはアミノ酸配列Ａの、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する配列同一性パーセント（代替的に、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに、それと、またはそれに対してある特定の配列同一性パーセントを有する所与の核酸またはアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、以下のように計算される：
１００に（分数Ｘ／Ｙ）を掛けたもの
式中、Ｘは、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおける配列アライメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）によって同一の一致としてスコア化されたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂにおける核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡとＢの配列同一性パーセントは、ＢとＡの配列同一性パーセントと等しくないことが理解されるであろう。

【0282】

本明細書で使用する場合、「薬学的組成物」という用語は、任意選択で、対象に影響を及ぼす、または影響を及ぼし得る特定の疾患または状態を予防、治療、または制御するために、対象に投与される１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及び／または担体と組み合わせて、治療剤を含有する混合物を指す。

【0283】

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、及び合理的な利益／リスク比に見合った他の問題のある合併症を伴わずに対象の組織との接触に好適な、それらの化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指す。

【0284】

本明細書で使用する場合、「試料」という用語は、対象から単離された検体（例えば、血液、血液構成要素（例えば、血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、神経組織、胎盤組織、または真皮組織）、膵液、絨毛膜絨毛試料、及び細胞（例えば、内耳細胞または幹細胞）を指す。

【0285】

本明細書で使用する場合、「転写調節エレメント」という用語は、ポリヌクレオチドの転写を少なくとも部分的に制御する核酸を指す。転写制御エレメントは、遺伝子転写を制御するか、または制御するのに役立つプロモーター、エンハンサー、及び他の核酸（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含み得る。転写調節エレメントの例は、例えば、Ｌｏｒｅｎｃｅ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ
ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，２０１２）に記載されている。

【0286】

本明細書で使用する場合、「対象」及び「患者」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）を指す。本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、難聴（例えば、感音難聴、聴覚神経障害、もしくは聴覚消失）、耳鳴、もしくは前庭機能障害（例えば、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、もしくは平衡喪失）と診断されたもの、またはこれらの状態を発症するリスクがあるもの（例えば、年齢、頭部外傷、聴覚外傷（例えば、大きな騒音への暴露）、疾患もしくは感染、聴覚毒性薬物による治療、遺伝的変異、または難聴、耳鳴、もしくは前庭機能障害の家族歴に起因する難聴、耳鳴、もしくは前庭機能障害を発症するリスクがある対象）であり得る。診断は、当該技術分野で既知の任意の方法または技法によって行うことができる。当業者は、本開示に従って治療される対象が、標準的な試験を受けている場合があるか、または疾患または状態に関連する１つ以上のリスク因子の存在に起因するリスクがあるため、検査なしに特定されている場合があることを理解するであろう。

【0287】

本明細書で使用する場合、「形質導入」及び「形質導入する」という用語は、ベクター構築物またはその一部を細胞に導入する方法を指す。ベクター構築物が、ウイルスベクター、例えば、ＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）に含有される場合、形質導入は、細胞のウイルス感染、ならびにその後のベクター構築物またはその一部の細胞への移入及び／または組み込みを指す。本明細書で使用する場合、「内耳細胞型を形質導入する」ために必要なＡＡＶ１ベクターの量は、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％（例えば、所与の細胞型の細胞の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％、例えば、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の２０～２５％、２０～３０％、２０～３５％、２０～４０％、２０～４５％、２０～５０％、２０～５５％、２０～６０％、２０～６５％、２０～７０％、２０～７５％、２０～８０％、２０～８５％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、２５～３０％、２５～３５％、２５～４０％、２５～４５％、２５～５０％、２５～５５％、２５～６０％、２５～６５％、２５～７０％、２５～７５％、２５～８０％、２５～８５％、２５～９０％、２５～９５％、２５～１００％、３０～３５％、３０～４０％、３０～４５％、３０～５０％、３０～５５％、３０～６０％、３０～６５％、３０～７０％、３０～７５％、３０～８０％、３０～８５％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、３５～４０％、３５～４５％、３５～５０％、３５～５５％、３５～６０％、３５～６５％、３５～７０％、３５～７５％、３５～８０％、３５～８５％、３５～９０％、３５～９５％、３５～１００％、４０～４５％、４０～５０％、４０～５５％、４０～６０％、４０～６５％、４０～７０％、４０～７５％、４０～８０％、４０～８５％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、４５～５０％、４５～５５％、４５～６０％、４５～６５％、４５～７０％、４５～７５％、４５～８０％、４５～８５％、４５～９０％、４５～９５％、４５～１００％、５０～５５％、５０～６０％、５０～６５％、５０～７０％、５０～７５％、５０～８０％、５０～８５％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、５５～６０％、５５～６５％、５５～７０％、５５～７５％、５５～８０％、５５～８５％、５５～９０％、５５～９５％、５５～１００％、６０～６５％、６０～７０％、６０～７５％、６０～８０％、６０～８５％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、６５～７０％、６５～７５％、６５～８０％、６５～８５％、６５～９０％、６５～９５％、６５～１００％、７０～７５％、７０～８０％、７０～８５％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、７５～８０％、７５～８５％、７５～９０％、７５～９５％、７５～１００％、８０～８５％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、または９５％～１００％）を形質導入するのに必要な量として定義される。

【0288】

本明細書で使用する場合、疾患または状態に関して「治療」及び「治療すること」は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果を得るためのアプローチを指す。有益なまたは所望の結果は、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の症状または状態の軽減または回復、疾患または状態の程度の減少、疾患、障害、または状態の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患または状態の拡散の防止、疾患または状態の進行の遅延または緩徐、疾患または状態の回復または緩和、ならびに寛解（部分的または完全であるかにかかわらず）を含み得るが、これらに限定されない。疾患または状態を「回復させること」または「緩和すること」は、治療の不在下での程度または時間経過と比較して、疾患、障害、または状態の程度及び／または望ましくない臨床症状が軽減され、及び／または進行の時間経過が緩徐もしくは延長されることを意味する。「治療」はまた、治療を受けていない場合、予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味し得る。治療を必要とするものには、既にその状態もしくは障害を患っているもの、ならびにその状態もしくは障害を患いやすいもの、またはその状態もしくは障害が予防されるべきであるものが含まれる。

【図面の簡単な説明】

【0289】

【図1A】ＣＭＶプロモーターの制御下でＥＧＦＰを発現するＡＡＶ１ベクターで処置された９～１０週齢のマウスの内耳の一連の蛍光画像である。ＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝６）において、０．１μＬ／分の流量で、１μＬのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（２．９４×１０^１３ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の後溝に投与するために、片側注射を使用した。注射の２週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。ＥＧＦＰ発現は、蝸牛の頂部、中央、及び基底部の回転で観察された（図１Ａ、左上パネル：蝸牛の頂部、下部パネル：蝸牛の中回転、右上パネル：蝸牛の基底回転）。

【図1B】ＣＭＶプロモーターの制御下でＥＧＦＰを発現するＡＡＶ１ベクターで処置された９～１０週齢のマウスの内耳の一連の蛍光画像である。ＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝６）において、０．１μＬ／分の流量で、１μＬのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（２．９４×１０^１３ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の後溝に投与するために、片側注射を使用した。注射の２週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。高倍率画像は、ＥＧＦＰが、内有毛細胞（ＩＨＣ）、頂部領域における外有毛細胞（ＯＨＣ）、及びらせん板縁の細胞において発現されることを示す（図１Ｂ）。

【図2A】ＣＡＧプロモーターの制御下でＥＧＦＰを発現するＡＡＶ７ｍ８ベクターで処置された９～１０週のマウスの内耳の一連の蛍光画像である。９～１０週齢のＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝８）において、０．１μＬ／分の流量で、１μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の後溝に投与するために、片側注射を行った。注射の２週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。ＥＧＦＰ発現は、蝸牛の頂部、中央、及び基底部の回転において観察された（図２Ａ）。

【図2B】ＣＡＧプロモーターの制御下でＥＧＦＰを発現するＡＡＶ７ｍ８ベクターで処置された９～１０週のマウスの内耳の一連の蛍光画像である。９～１０週齢のＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝８）において、０．１μＬ／分の流量で、１μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の後溝に投与するために、片側注射を行った。注射の２週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。高倍率画像は、蝸牛の基底から頂部の範囲全体にわたってＩＨＣ、ＯＨＣ、ならびにらせん神経節及びらせん板縁の細胞を含む複数の細胞型におけるＥＧＦＰ発現を示す（図２Ｂ；左側パネル：蝸牛の頂部；中央パネル：蝸牛の中回転；右側パネル：蝸牛の基底回転）。

【図3A】ＣＭＶプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するＡＡＶ２ベクターで処置されたアカゲザルの内耳の一連の蛍光画像である。１５μＬ／分の流量で、３０μＬのＡＡＶ２－ＣＭＶ－ＧＦＰ（３．３９×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の正円窓に投与するために、片側（ｎ＝１匹の動物）及び両側（ｎ＝２匹の動物）注射を使用した。注射の４週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。Ｍｙｏ７Ａの免疫組織化学を使用して、有毛細胞を特定し（図３Ａ、右列のパネル）、ＧＦＰ発現を使用して、ＡＡＶ１感染性を監視した（図３Ａ、左列のパネル）。アカゲザルの内耳のＡＡＶ２－ＣＭＶ－ＧＦＰ形質導入は、蝸牛の基底－頂軸にわたってＧＦＰ発現をもたらした（図３Ａ、左上パネル：蝸牛の頂部、左中パネル：蝸牛の中回転、左下パネル：蝸牛の基底回転）。蝸牛ＧＦＰ発現は、ＩＨＣ内及びらせん板縁内の一部の細胞内で観察された（図３Ａ、左列のパネル）。

【図3B】ＣＭＶプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するＡＡＶ２ベクターで処置されたアカゲザルの内耳の一連の蛍光画像である。１５μＬ／分の流量で、３０μＬのＡＡＶ２－ＣＭＶ－ＧＦＰ（３．３９×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の正円窓に投与するために、片側（ｎ＝１匹の動物）及び両側（ｎ＝２匹の動物）注射を使用した。注射の４週間後、内耳を除去し、基底膜の表面調製を行った。代表的な耳の１つが示される。ＧＦＰ発現を、蝸牛の周波数マップに沿ってＩＨＣにおいて定量化し、ＩＨＣの４０～８０％におけるＧＦＰの発現を示した（図３Ｂ）。

【図4A】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。１匹の動物において、ＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰでの内耳の形質導入の２週間後、ＥＧＦＰの免疫染色を使用して可視化されるように、ＥＧＦＰ発現が蝸牛の基底回転で観察された（図４Ａ、上部パネル：破線の正方形は蝸牛の基底回転を示す）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯におけるＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において発現された（図４Ｂ、図４Ａの破線正方形の拡大；左上の挿入図：コルチ器官（ｏｒｇａｎ ｏｆ Ｃｏｒｔｉ）の拡大図）。

【図4B】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。１匹の動物において、ＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰでの内耳の形質導入の２週間後、ＥＧＦＰの免疫染色を使用して可視化されるように、ＥＧＦＰ発現が蝸牛の基底回転で観察された（図４Ａ、上部パネル：破線の正方形は蝸牛の基底回転を示す）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯におけるＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において発現された（図４Ｂ、図４Ａの破線正方形の拡大；左上の挿入図：コルチ器官（ｏｒｇａｎ ｏｆ Ｃｏｒｔｉ）の拡大図）。

【図4C】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。異なる動物では、注射の４週間後、ＥＧＦＰの発現が蝸牛の基底－頂軸にわたって観察された（図４Ｃ、破線の正方形は蝸牛の基底回転を表し、図４Ｄで拡大される）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯におけるＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において発現された（図４Ｄ、パネルの左上縁部の挿入図において拡大されたコルチ器官）。

【図4D】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。異なる動物では、注射の４週間後、ＥＧＦＰの発現が蝸牛の基底－頂軸にわたって観察された（図４Ｃ、破線の正方形は蝸牛の基底回転を表し、図４Ｄで拡大される）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯におけるＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において発現された（図４Ｄ、パネルの左上縁部の挿入図において拡大されたコルチ器官）。

【図4E】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。図４Ｅに示されるように、一次抗ＧＦＰ抗体の不在下での二次抗体は、蝸牛を染色しなかった（破線の正方形は、蝸牛の基底回転を示す）。基底において染色は観察されなかった（図４Ｆ、図４Ｅの正方形の拡大；左上の挿入図において拡大されたコルチ器官）。

【図4F】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するアデノ随伴ウイルス血清型７ｍ８（ＡＡＶ７ｍ８）ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ（９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。図４Ｅに示されるように、一次抗ＧＦＰ抗体の不在下での二次抗体は、蝸牛を染色しなかった（破線の正方形は、蝸牛の基底回転を示す）。基底において染色は観察されなかった（図４Ｆ、図４Ｅの正方形の拡大；左上の挿入図において拡大されたコルチ器官）。

【図5】ＣＡＧプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するＡＡＶ１ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ（９．９×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の４週間後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。図５Ａに示されるように、抗ＧＦＰ抗体の不在下での二次抗体単独での染色は、蝸牛を染色せず、抗体の特異性を確認した。内耳のＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ形質導入は、ＧＦＰの免疫染色を使用して可視化されるように、内耳の蝸牛及び球形嚢全体にわたって強固なＧＦＰ発現をもたらした（図５Ｂ、左上の大きな円は蝸牛の頂回転を示し、左側の小さな楕円は血管条を示し、右下の小さな円は球形嚢を示す）。ＧＦＰの免疫染色は、蝸牛の頂回転（図５Ｃ、図５Ｂからの左上の円の拡大）及び球形嚢のすべての層（図５Ｅ、図５Ｂからの右下の円の拡大）において検出された。強固なＧＦＰの発現が、らせん靭帯、ならびに血管条の周辺細胞及び中間細胞で検出された。血管条の基底細胞は、この切片においてＧＦＰの発現を呈さなかったが、ＧＦＰの発現は、蝸牛の他の回転の基底細胞において可視であった（図５Ｄ）。

【図6】ＣＭＶプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するＡＡＶ１ベクターで処置されたアカゲザルの内耳の一連の蛍光画像である。１５μＬ／分の流量で、３０μＬのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（２．０１×１０^１３ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価）を内耳の正円窓に投与するために、片側（ｎ＝１匹の動物）及び両側（ｎ＝２匹の動物）注射を使用した。注射の４週間後、内耳を除去し、基底膜、卵形嚢、及び内襞の表面調製を行った。代表的な内耳の１つが示される。Ｍｙｏ７Ａの免疫組織化学を使用して、有毛細胞を可視化し、ＧＦＰ発現を使用して、ＡＡＶ１感染性を監視した（図６Ａ～６Ｃ）。アカゲザルの内耳のＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ形質導入は、蝸牛の基底－頂軸全体にわたってＧＦＰの強い向汎性発現をもたらした（図６Ａ）。内有毛細胞（ＩＨＣ）、外有毛細胞（ＯＨＣ）、及び支持細胞内、ならびに非感覚らせん靭帯及びらせん板縁において、蝸牛ＧＦＰ発現が観察された（図６Ｂ、図６Ａの中回転におけるボックス領域の拡大）。卵形嚢及び内襞などの前庭構造はまた、感覚及び非感覚領域の両方において顕著なＧＦＰ発現を示した（図６Ｃ）。

【図7】ＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するＡＡＶ１ベクターで処置されたカニクイザルの内耳のパラフィン切片の一連の画像である。３０μＬのＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ（３．１５×１０^１０または３．１５×１０^１１ゲノムコピー／耳）を１５μＬ／分の流量で内耳の正円窓に投与するために、両側注射を使用した。注射の４週間後、内耳を除去し、切片化、取り付け、抗ＧＦＰ抗体による免疫染色、及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。図７Ａに示されるように、抗ＧＦＰ抗体は、非ＡＡＶ注射した耳の蝸牛を染色せず、抗体の特異性を確認した。図７Ｂは、ＧＦＰの免疫染色を使用して可視化されるように、内耳のＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ（３．１５×１０^１０ゲノムコピー／耳）形質導入が、蝸牛全体にわたって強固なＧＦＰ発現をもたらしたことを示す。ＧＦＰの免疫染色は、有毛細胞、支持細胞、内溝細胞、外溝細胞、及びらせん靭帯の細胞において検出された。より高用量のＡＡＶ－ＣＡＧ－ＧＦＰ（３．１５×１０^１１ゲノムコピー／耳）は、図７Ｃに示されるように、これらの細胞型においてより強いＧＦＰ発現を示した。図７Ｄ～７Ｆは、それぞれ、核染色が除去された図７Ａ～７Ｃと同じ画像を示す（すなわち、これらの画像は、ＧＦＰ標識のみを示す）。すべてのスケールバーは１００μｍである。

【発明を実施するための形態】

【0290】

発達した霊長類（例えば、ヒト）の内耳細胞（例えば、内有毛細胞、外有毛細胞、前庭有毛細胞、蝸牛支持細胞、及び前庭支持細胞などの蝸牛及び／または前庭系の細胞）を形質導入するための組成物及び方法が本明細書に記載される。本発明は、血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを使用して、霊長類（例えば、ヒト）対象において発達した内耳細胞（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上の異なる種類の発達した内耳細胞）を形質導入する方法を特徴とする。本発明はまた、ＡＡＶ１ベクター、ならびにプロモーター（例えば、１つ以上の内耳細胞型において遺伝子発現を誘導するプロモーター）及び／またはポリヌクレオチド（例えば、治療用タンパク質をコードする遺伝子、例えば、正常な内耳細胞で発現する遺伝子、または内耳細胞の生存、再生、細胞運命、及び／または細胞増殖を調節するタンパク質をコードする遺伝子に対応するポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶ１ベクターを使用して、霊長類（例えば、ヒト）対象の特定の内耳細胞型（例えば、外有毛細胞、前庭有毛細胞、または前庭支持細胞）においてポリヌクレオチドを発現させる方法を特徴とする。本明細書に記載の組成物及び方法は、霊長類（例えば、ヒト）の内耳細胞のすべてまたはサブセットにおいて１つ以上のポリヌクレオチドを発現させるために使用することができ、したがって、本明細書に記載の組成物は、難聴（例えば、感音難聴）、耳鳴、または前庭機能障害などの内耳細胞の損傷、変性、喪失、及び／または機能障害によって引き起こされる障害を治療するために、霊長類（例えば、ヒト）対象に投与することができる。

【0291】

内耳細胞
内耳にはいくつかの特殊細胞が存在する。蝸牛及び前庭系の両方は、内耳の主要な感覚細胞である有毛細胞を含有する。蝸牛有毛細胞は、音を感知することを担う内有毛細胞（ＩＨＣ）と、低レベルの音を増幅すると考えられる外有毛細胞（ＯＨＣ）の２つの主要な細胞型で構成されている。前庭有毛細胞は、前庭系の三半規管及び耳石器（例えば、卵形嚢及び球形嚢）に位置し、平衡感覚及び空間定位に寄与する運動感覚に関与している。らせん神経節ニューロンは、蝸牛有毛細胞を神経支配し、軸索を中枢神経系に送り、一方で、前庭神経節のニューロンは、前庭有毛細胞を神経支配する。支持細胞と呼ばれる非感覚細胞は、蝸牛及び前庭系の有毛細胞の間に存在し、有毛細胞の機械的刺激を可能にする構造的足場を提供すること、内リンパ及び外リンパのイオン組成を維持すること、ならびにリボンシナプスのシナプス形成を調節することなど、いくつかの重要な機能を行う。蝸牛内では、支持細胞は、５つの異なる種類：１）ヘンゼン細胞、２）ダイテルス細胞、３）柱細胞、４）内指節細胞、及び５）境界細胞に細分化することができ、これらはすべて、異なる形態及び遺伝子発現パターンを有する。蝸牛有毛細胞、蝸牛支持細胞、及び／またはらせん神経節ニューロンにおいて発現される遺伝子の変異は、これらの細胞の損傷、傷害、変性、または喪失（例えば、死）を有するため、難聴（例えば、感音難聴）、聴覚神経障害、聴覚消失、及び耳鳴と関連している。同様に、前庭系の細胞（例えば、前庭有毛細胞、前庭支持細胞、及び／または前庭神経節ニューロン）内で発現される遺伝子の変異、ならびに前庭系の細胞の損傷、傷害、変性、または喪失（例えば、死）は、前庭機能障害（例えば、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、及び／または平衡喪失）と関連している。遺伝子療法は、最近、難聴及び前庭機能障害を治療するための魅力的な治療アプローチとして浮上してきたが、難聴及び前庭機能障害の様々な原因に対処するために標的化される必要があり得る多数の細胞型を考慮すると、霊長類（例えば、ヒト）の内耳の多くの細胞型を形質導入するために広範な向性を有するウイルスベクターが必要である。

【0292】

本発明は、部分的には、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）に作動可能に連結された偏在的なプロモーターを含有するＡＡＶ１ベクターを成体非ヒト霊長類の内耳に投与することにより、他のＡＡＶ血清型を使用して観察される向性とは対照的に、内耳のほとんどまたはすべての細胞型において向汎性質形質導入及びＧＦＰの強い発現がもたらされるという発見に基づく。理論に束縛されることを望まないが、ヒトと非ヒト霊長類との間の高い類似度は、ＡＡＶ１ベクターが、ほとんどまたはすべての発達したヒトの内耳細胞（例えば、ヒト成人、青少年、小児、または満期新生児におけるほとんどまたはすべての内耳細胞）を形質導入するために使用することができることを示す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、発達した霊長類（例えば、ヒト）の内耳のすべての細胞内でポリヌクレオチドの発現を誘導することができるか、またはそれらを使用して、ＡＡＶ１ベクターに含有されるプロモーターに基づいて、内耳の特定の領域（例えば、蝸牛もしくは前庭系）もしくは細胞型（例えば、内有毛細胞、外有毛細胞、前庭有毛細胞、蝸牛支持細胞、及び／または前庭支持細胞などの１つ以上の内耳細胞型）においてポリヌクレオチドの発現を誘導することができる。したがって、本明細書に記載の方法及び組成物は、内耳のすべての細胞型における遺伝的変異またはその損傷、変性、喪失、及び／または機能障害によって引き起こされる障害を治療するために、あるいは内耳細胞型の１つもしくはサブセットにおける遺伝的変異またはその損傷、変性、喪失、及び／または機能障害によって引き起こされる障害を治療するために、霊長類（例えば、ヒト）対象に投与することができる。

【0293】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）は、霊長類（例えば、ヒト）対象の発達した内耳細胞に、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞を含む群から選択される３つ以上（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０以上）の内耳細胞型を形質導入するのに十分な量で投与される。ＡＡＶ１ベクターによる内耳細胞の向汎性形質導入は、内耳全体にわたって（例えば、ポリヌクレオチドが偏在的なプロモーターに作動可能に連結されるＡＡＶ１ベクターにおいて）ポリヌクレオチドの発現を誘導するために使用され得る。３つ以上（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上）の異なる内耳細胞型を形質導入する能力は、例えば、すべての内耳細胞型において変異する遺伝子の野生型バージョンを送達するか、または高濃度で治療効果をもたらす大量の分泌タンパク質を産生するために、内耳の多くのまたはほとんどの細胞型においてポリヌクレオチドを発現することが望ましい治療アプローチに有益である。

【0294】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）は、特定の細胞型（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞などの支持細胞、ＯＨＣ、前庭有毛細胞、またはらせん神経節ニューロン）または領域（例えば、蝸牛または前庭系）においてポリヌクレオチドを発現させるために霊長類（例えば、ヒト）対象に投与される。細胞型特異的プロモーターは、１つ以上の細胞型における遺伝子発現を誘導するために、ＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）に含まれ得る。細胞型特異的発現を使用して、１つまたはいくつかの細胞型でのみ自然に発現されるポリヌクレオチドの内因性発現パターンを模倣することができる。このアプローチは、通常発現しない細胞におけるポリヌクレオチドの異所性発現を回避するために使用することができるという点で有益である。

【0295】

ヒト細胞における外因性ポリヌクレオチドの発現
ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（ＳＬＣ１７Ａ８）、ギャップ結合タンパク質ベータ２（ＧＪＢ２）、クラウディン１４（ＣＬＤＮ１４）、コクリン（ＣＯＣＨ）、プロトカドヘリン関連１５（ＰＣＤＨ１５）、及び膜貫通１（ＴＭＣ１）などの様々な遺伝子における変異は、感音難聴及び／または聴覚消失に関連付けられており、ＭＹＯ７Ａ、ＰＯＵ４Ｆ３、及びＣＯＣＨにおける変異などのこれらの変異のいくつかも、前庭機能不全と関連している。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、発達したヒトの内耳細胞内で、ポリヌクレオチド（例えば、難聴及び／または前庭機能障害に関連する遺伝子、または内耳細胞の発達、機能、細胞運命特定、再生、生存、増殖、及び／または維持に関与する遺伝子の野生型形態などの健常な内耳細胞内で発現する遺伝子に対応する核酸）によってコードされるタンパク質の発現を誘導または増加させることができる。ポリヌクレオチドを含有するＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）は、１つ以上の内耳細胞型におけるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現を誘導または増加させるために、ヒト対象に（例えば、対象の内耳に）投与することができる。ヒト細胞へのタンパク質の送達、及びヒト細胞におけるタンパク質をコードするポリヌクレオチドの安定した発現のための幅広い方法が確立されている。

【0296】

本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、１つ以上の内耳細胞型においてポリヌクレオチドを発現させるために使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、１つ以上の細胞型において２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ以上）のポリヌクレオチドを発現させるために使用することができる。各細胞型において発現し得る内耳細胞型及びポリヌクレオチドのリストを以下の表２に提供する。表２のポリヌクレオチドの受入番号を表３に提供する。

【0297】

【表2-1】

【0298】

【表2-2】

【0299】

【表2-3】

【0300】

【表2-4】

【0301】

【表3-1】

【0302】

【表3-2】

【0303】

【表3-3】

【0304】

【表3-4】

【0305】

【表3-5】

【0306】

【表3-6】

【0307】

【表3-7】

【0308】

【表3-8】

【0309】

【表3-9】

【0310】

【表3-10】

【0311】

【表3-11】

【0312】

【表3-12】

【0313】

【表3-13】

【0314】

【表3-14】

【0315】

【表3-15】

【0316】

【表3-16】

【0317】

【表3-17】

【0318】

【表3-18】

【0319】

【表4-1】

【0320】

【表4-2】

【0321】

【表4-3】

【0322】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、遺伝子編集系の構成要素であるか、またはそれをコードする。細胞型特異的プロモーター（例えば、表５に列記される細胞型特異的プロモーター）に作動可能に連結された遺伝子編集系の構成要素を含有するＡＡＶ１ベクターを、細胞型特異的遺伝子編集に使用することができる。例えば、遺伝子編集系の構成要素を使用して、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子などの内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子において改変（例えば、挿入、欠失（例えば、ノックアウト）、転座、反転、単一点変異、または他の変異）を導入することができる。例示的な遺伝子編集系としては、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターに基づくヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びクラスター化された規則的な配置の短い回文リピート（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔ）（ＣＲＩＳＰＲ）系が挙げられる。ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、及びＣＲＩＳＰＲに基づく方法は、例えば、Ｇａｊ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１：３９７－４０５，２０１３に記載されている。

【0323】

ＣＲＩＳＰＲは、クラスター化された規則的な配置の短い回文リピートのセット（またはセットを含む系）を指す。ＣＲＩＳＰＲ系は、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質）、または本明細書に記載の遺伝子を発現停止させるかまたは変異させるために使用することができる別のヌクレアーゼに由来する系を指す。ＣＲＩＳＰＲ系は、細菌及び古細菌ゲノムに見られる天然に存在する系である。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座は、交互のリピート及びスペーサー配列で構成されている。天然に存在するＣＲＩＳＰＲ系では、スペーサーは、典型的には、細菌にとって異種の配列（例えば、プラスミドまたはファージ配列）である。ＣＲＩＳＰＲ系は、真核生物における遺伝子編集（例えば、特定の遺伝子の変更、サイレンシング、及び／または増強）での使用のために修飾されている。例えば、Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４８２：３３１，２０１２を参照されたい。例えば、系のそのような修飾は、具体的に設計されたＣＲＩＳＰＲ及び１つ以上の適切なＣａｓタンパク質を含有するプラスミドを真核細胞に導入することを含む。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座は、ＲＮＡに転写され、Ｃａｓタンパク質によって、スペーサーに隣接する反復配列を含む小さなＲＮＡにプロセシングされる。ＲＮＡは、スペーサー配列に応じて、特定のＤＮＡ／ＲＮＡ配列を発現停止させるようにＣａｓタンパク質を指向するガイドとして機能する。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２７：１６７，２０１０、Ｍａｋａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｄｉｒｅｃｔ １：７，２００６、Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８３３，２０１３を参照されたい。いくつかの例において、ＣＲＩＳＰＲ系は、Ｃａｓ９タンパク質、ＤＮＡの両方の鎖を切断するヌクレアーゼを含む。例えば、同上を参照されたい。

【0324】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の使用のためのＣＲＩＳＰＲ系において、例えば、本明細書に記載の１つ以上の方法に従って、ＣＲＩＳＰＲのスペーサーは、標的遺伝子配列、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子などの内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子に由来する。

【0325】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、遺伝子編集のためのクラスター化された規則的な配置の短い回文リピート（ＣＲＩＳＰＲ）系に使用するためのガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子の核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）を標的とする（例えば、切断する）亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）またはＺＦＮをコードするｍＲＮＡを含むか、またはそれらをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子の核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）を標的とする（例えば、切断する）ＴＡＬＥＮまたはＴＡＬＥＮをコードするｍＲＮＡを含むか、またはそれらをコードする。

【0326】

例えば、ｇＲＮＡは、遺伝子（例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子）の改変を操作するために、ＣＲＩＳＰＲ系において使用され得る。他の例では、ＺＦＮ及び／またはＴＡＬＥＮは、遺伝子（例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子）の改変を操作するために使用され得る。例示的な改変としては、挿入、欠失（例えば、ノックアウト）、転座、反転、単一点変異、または他の変異が挙げられる。改変は、細胞内の遺伝子に、例えば、インビトロ、エクスビボ、またはインビボで導入され得る。いくつかの実施形態では、改変は、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴もしくは前庭機能障害に関与する遺伝子のレベル及び／または活性を低下させ（例えば、ノックダウンまたはノックアウト）、例えば、改変は機能の負の調節因子である。さらに別の例では、改変は、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子における欠損（例えば、欠損を引き起こす変異）を修正する。

【0327】

ある特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、標的遺伝子、例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子を編集する（例えば、塩基対を付加または削除する）ために使用される。他の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、未成熟停止コドンを導入するために使用され、例えば、それによって標的遺伝子の発現を減少させる。さらに他の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、例えば、ＲＮＡ干渉と同様に、可逆的に標的遺伝子をオフにするために使用される。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、標的遺伝子、例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子のプロモーターにＣａｓを指向するために使用され、それによってＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断する。

【0328】

いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、例えば、米国公開第２０１４００６８７９７号、Ｃｏｎｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９，２０１３；Ｔｓａｉ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：５６９，２０１４、ならびに米国特許第８，８７１，４４５号、同第８，８６５，４０６号、同第８，７９５，９６５号、同第８，７７１，９４５号、及び同第８，６９７，３５９号に記載の技術を使用して、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子を編集するために生成され得る。

【0329】

いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ干渉（ＣＲＩＳＰＲｉ）技術は、特定の遺伝子、例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子をコードする遺伝子の転写抑制のために使用され得る。ＣＲＩＳＰＲｉにおいて、操作されたＣａｓ９タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ－ヌルｄＣａｓ９、またはｄＣａｓ９融合タンパク質、例えば、ｄＣａｓ９－ＫＲＡＢまたはｄＣａｓ９－ＳＩＤ４Ｘ融合物）は、配列特異的ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と対合し得る。Ｃａｓ９－ｇＲＮＡ複合体は、ＲＮＡポリメラーゼを遮断することができ、それによって転写伸長を妨げる。複合体はまた、転写因子結合を妨げることによって転写開始を遮断することができる。ＣＲＩＳＰＲｉ法は、最小限のオフターゲット効果で特異的であり、多重可能であり、例えば、２つ以上の遺伝子を同時に抑制することができる（例えば、複数のｇＲＮＡを使用して）。また、ＣＲＩＳＰＲｉ法は、可逆的遺伝子抑制を可能にする。

【0330】

いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ媒介遺伝子活性化（ＣＲＩＳＰＲａ）は、例えば、本明細書に記載の１つ以上の遺伝子、例えば、内耳細胞機能を調節することが知られている遺伝子、例えば、感音難聴または前庭機能障害に関与する遺伝子の転写活性化に使用され得る。ＣＲＩＳＰＲａ技術において、ｄＣａｓ９融合タンパク質は、転写活性化因子を動員する。例えば、ｄＣａｓ９を使用して、ＶＰ６４またはｐ６５活性化ドメイン（ｐ６５Ｄ）などのポリペプチド（例えば、活性化ドメイン）を動員し、遺伝子（複数可）、例えば、内因性遺伝子（複数可）を活性化するために、ｓｇＲＮＡ（例えば、単一のｓｇＲＮＡまたは複数のｓｇＲＮＡ）と共に使用することができる。複数の活性化因子は、複数のｓｇＲＮＡを使用することによって動員され得、これは、活性化効率を増加させることができる。様々な活性化ドメイン及び単一または複数の活性化ドメインを使用することができる。活性化因子を動員するためにｄＣａｓ９を操作することに加えて、ｓｇＲＮＡは、活性化因子を動員するように操作され得る。例えば、ＲＮＡアプタマーをｓｇＲＮＡに組み込んで、ＶＰ６４などのタンパク質（例えば、活性化ドメイン）を動員することができる。いくつかの例では、相乗活性化媒介物（ＳＡＭ）系は、転写活性化に使用することができる。ＳＡＭにおいて、ＭＳ２アプタマーは、ｓｇＲＮＡに付加される。ＭＳ２は、ｐ６５ＡＤ及び熱ショック因子１（ＨＳＦ１）に融合したＭＳ２コートタンパク質（ＭＣＰ）を動員する。ＣＲＩＳＰＲｉ及びＣＲＩＳＰＲａ技法は、例えば、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１７：５，２０１６により詳細に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。

【0331】

目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチド
霊長類（例えば、ヒト）の細胞における目的のタンパク質の治療有効細胞内濃度を達成するために使用され得る１つのプラットフォームは、目的のタンパク質をコードする核酸の安定した発現を介して（例えば、霊長類（例えば、ヒト）の細胞の核もしくはミトコンドリアゲノムへの組み込みによって、または霊長類（例えば、ヒト）の細胞の核内のエピソームコンカテーマー形成によって）のものである。核酸は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。外因性遺伝子を霊長類（例えば、ヒト）の細胞に導入するために、遺伝子を、ベクター、例えば、ＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）に組み込むことができる。内耳細胞への導入のために、ＡＡＶ１ベクターは、霊長類（例えば、ヒト）対象の内耳に局所的に投与することができる。

【0332】

霊長類（例えば、ヒト）のＲＮＡポリメラーゼによる目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチドの認識及び結合は、遺伝子発現に重要である。したがって、ＲＮＡポリメラーゼを動員し、転写開始部位での転写複合体のアセンブリを促進する転写因子に対して高い親和性を呈するポリヌクレオチド内の配列要素を含めることができる。そのような配列要素には、例えば、プロモーターが含まれ、その配列は、特異的な転写開始因子、及び最終的にはＲＮＡポリメラーゼによって認識及び結合され得る。プロモーターの例は、オンライン刊行物のＳｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｓｙｓ．Ｂｉｏｌ．，３：７３に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるプロモーターは、偏在的なプロモーター（例えば、内耳のすべての細胞においてポリヌクレオチドの発現を誘導または増加させるため）または細胞型特異的プロモーター（例えば、１つ以上の内耳細胞型におけるポリヌクレオチドの発現を誘導または増加させるため）であり得る。偏在的なプロモーターとしては、ＣＡＧプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ｓｍＣＢＡプロモーター（Ｈａｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４７：３７４５－３７５３，２００６に記載される）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）プロモーター、β－アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１αプロモーターが挙げられる。あるいは、ウイルスゲノムに由来するプロモーターも、霊長類（例えば、ヒト）の細胞内でのポリヌクレオチドの安定した発現に使用することができる。霊長類（例えば、ヒト）の細胞内でのポリヌクレオチドの発現に使用することができる機能的ウイルスプロモーターの例としては、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター、ＨＳＶのｔｋプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ＨＩＶのＬＴＲプロモーター、モロニーウイルスのプロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターが挙げられる。

【0333】

１つ以上の内耳細胞型において目的のタンパク質（例えば、表２に列記されるポリヌクレオチド）をコードする核酸を発現させるために本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターに含まれ得る細胞型特異的プロモーターを、以下の表５に提供する。

【0334】

【表5-1】

【0335】

【表5-2】

【0336】

目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチドが霊長類（例えば、ヒト）の細胞に組み込まれると、このポリヌクレオチドの転写は、当該技術分野で既知の方法によって誘導され得る。例えば、発現は、霊長類（例えば、ヒト）の細胞を外部化学試薬、例えば、転写因子及び／またはＲＮＡポリメラーゼのプロモーターへの結合を調節し、したがって遺伝子発現を調節する薬剤に曝露することによって誘導することができる。化学試薬は、例えば、プロモーターに結合した抑制タンパク質を除去することによって、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子のプロモーターへの結合を容易にする役割を果たし得る。あるいは、化学試薬は、プロモーターの下流に位置する遺伝子の転写速度が、化学試薬の存在下で増加するように、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子に対するプロモーターの親和性を増強する役割を果たし得る。上記の機構によってポリヌクレオチド転写を増強する化学試薬の例としては、テトラサイクリン及びドキシサイクリンが挙げられる。これらの試薬は、市販されており（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、確立されたプロトコルに従って遺伝子発現を促進するために霊長類（例えば、ヒト）の細胞に投与することができる。

【0337】

本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのポリヌクレオチドに含まれ得る他のＤＮＡ配列要素は、エンハンサー配列を含む。エンハンサーは、ＤＮＡが転写開始部位での転写因子及びＲＮＡポリメラーゼの結合に好ましい三次元定位を採用するように、ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドの立体構造変化を誘導する別のクラスの調節エレメントを表す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのポリヌクレオチドには、目的のタンパク質をコードするものが含まれ、さらにエンハンサー配列が含まれる。多くのエンハンサー配列が現在知られており、例としては、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－胎児性タンパク質、及びインスリンをコードする遺伝子からのエンハンサーが挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのエンハンサーには、真核細胞に感染することができるウイルスの遺伝材料に由来するものも含まれる。例としては、複製起点の後半側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後半側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核遺伝子転写の活性化を誘導する追加のエンハンサー配列としては、ＣＭＶエンハンサー及びＲＳＶエンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、例えば、この遺伝子の５’または３’位に、目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するベクターにスプライシングされ得る。好ましい定位では、エンハンサーは、プロモーターの５’側に位置し、プロモーターは、目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチドに対して５’側に位置する。

【0338】

本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、ウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含み得る。ＷＰＲＥは、転写物の核外輸送を促進することによって、及び／または新生転写物のポリアデニル化の効率を増加させることによって、転写レベルで作用し、したがって細胞中のｍＲＮＡの総量を増加させる。ベクターへのＷＰＲＥの付加は、インビトロ及びインビボの両方で、いくつかの異なるプロモーターからの導入遺伝子発現レベルの実質的な改善をもたらすことができる。

【0339】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、レポーター配列を含み、このレポーター配列は、ＡＡＶ１ベクター、例えば、細胞及び組織（例えば、蝸牛及び／または前庭系、または特定の内耳細胞型、例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、蝸牛支持細胞、前庭有毛細胞、及び／または前庭支持細胞）中に含有される核酸の発現を検証するのに有用であり得る。導入遺伝子に提供され得るレポーター配列としては、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（Ｃａｔ）、ルシフェラーゼ、及び当該技術分野で周知の他のものをコードするＤＮＡ配列が挙げられる。本明細書に記載の偏在的なまたは細胞型特異的プロモーターなどのそれらの発現を駆動する調節エレメントと関連する場合、レポーター配列は、酵素、放射線、比色、蛍光、または他の分光アッセイ、蛍光活性化細胞選別アッセイ、ならびに酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学を含む免疫学的アッセイを含む、従来の手段によって検出可能なシグナルを提供する。例えば、マーカー配列がＬａｃＺ遺伝子である場合、シグナルを担持するベクターの存在は、β－ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイによって検出される。導入遺伝子が緑色蛍光タンパク質またはルシフェラーゼである場合、シグナルを担持するベクターは、ルミノメーターにおいて色または光産生によって視覚的に測定され得る。

【0340】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、表２に列記される２つ以上のポリヌクレオチド、例えば、ＡＡＶ１ベクターは、２つの異なる目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する）を発現させるために使用される。いくつかの実施形態では、２つ以上のポリヌクレオチドは、バイシストロン性またはポリシストロン性発現カセットを使用して発現される。いくつかの実施形態では、ポリシストロン性発現カセットは、２つ以上のポリヌクレオチドの間に配置された内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、２つの異なる目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチドの間に配置されたＩＲＥＳ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリシストロン性発現カセットは、２つ以上のポリヌクレオチドの間に配置された口蹄疫ウイルス２Ａ（ＦＭＤＶ２Ａ）ポリヌクレオチド（例えば、目的のタンパク質をコードする各核酸の間に配置されたＦＭＤＶ２Ａポリヌクレオチド）を含む。

【0341】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の２つ以上のＡＡＶ１ベクター（例えば、２、３、４以上のＡＡＶ１ベクター）は、３ｋｂ以上（例えば、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、５ｋｂ、５．５ｋｂ、６ｋｂ、６．５ｋｂ以上）のコード配列を有するポリヌクレオチドなどの単一のポリヌクレオチド（例えば、表２に列記される単一のポリヌクレオチド）を発現させるために使用され得る。例えば、２つ以上のＡＡＶ１ベクターは、約６ｋｂのコード配列を有するオトフェリンをコードするポリヌクレオチドを発現させるために使用され得る。２つ以上のＡＡＶ１ベクターが単一のポリヌクレオチドを発現させるために使用される実施形態では、ポリヌクレオチドのコード配列は、全長コード配列がインビボで再構成され得るようにベクター間で分割される。いくつかの実施形態では、２つのＡＡＶ１ベクターを含む二重ベクター系は、単一のポリヌクレオチド（例えば、表２に列記される単一のポリヌクレオチド）を発現させるために使用され得る。ポリヌクレオチドのコード配列の一部（例えば、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、５ｋｂ、５．５ｋｂ、６ｋｂ、６．５ｋｂ以上のコード配列を有するポリヌクレオチド）は、各ＡＡＶ１ベクター内に含有され得る（例えば、一方のＡＡＶ１ベクターは、コード配列のＮ末端部分を含んでもよく、他方のＡＡＶ１ベクターは、コード配列のＣ末端部分を含んでもよい）。例示的な二重ベクター系としては、断片化された二重ベクター、重複する二重ベクター、トランススプライシング二重ベクター、及び二重ハイブリッドベクターが挙げられる。これらのシステムは、ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ ａｎｄ ＭａｃＬａｒｅｎ，Ｙａｌｅ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．９０：６１１－６２３，２０１７に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0342】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターは、ポリヌクレオチドの翻訳速度を増強させるか、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列要素には、例えば、ベクターに担持される核酸の効率的な転写を指向するために、５’及び３’非翻訳領域、ＩＲＥＳ、ならびにポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法との使用に好適なベクターは、そのようなベクターを含有する細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドも含有し得る。好適なマーカーの例としては、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、またはノーセオスリシン（ｎｏｕｒｓｅｏｔｈｒｉｃｉｎ）などの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。

【0343】

核酸送達のためのＡＡＶ１ベクター
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、難聴及び／または前庭機能障害に関与する遺伝子、または内耳細胞の発達、機能、細胞運命特定、再生、生存、増殖、及び／または維持に関与する遺伝子の野生型形態などの健常な内耳細胞内で発現する遺伝子に対応するポリヌクレオチド）は、細胞へのそれらの導入を容易にするために、ＡＡＶ１ベクター及び／またはビリオン（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法に有用なＡＡＶ１ベクターは、以下に示すように、アミノ酸配列番号１～３を有する野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質を含有する。

【0344】

いくつかの実施形態では、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有する：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＴＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＴＰＡＡＶＧＰＴＴＭＡＳＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＡＳＴＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＶＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＳＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＥＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＮＲＴＱＮＱＳＧＳＡＱＮＫＤＬＬＦＳＲＧＳＰＡＧＭＳＶＱＰＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＫＴＤＮＮＮＳＮＦＴＷＴＧＡＳＫＹＮＬＮＧＲＥＳＩＩＮＰＧＴＡＭＡＳＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＭＩＦＧＫＥＳＡＧＡＳＮＴＡＬＤＮＶＭＩＴＤＥＥＥＩＫＡＴＮＰＶＡＴＥＲＦＧＴＶＡＶＮＦＱＳＳＳＴＤＰＡＴＧＤＶＨＡＭＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＮＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＡＥＦＳＡＴＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＡＫＳＡＮＶＤＦＴＶＤＮＮＧＬＹＴＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ（配列番号１）
いくつかの実施形態では、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有する：
ＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＴＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＴＰＡＡＶＧＰＴＴＭＡＳＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＡＳＴＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＶＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＳＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＥＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＮＲＴＱＮＱＳＧＳＡＱＮＫＤＬＬＦＳＲＧＳＰＡＧＭＳＶＱＰＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＫＴＤＮＮＮＳＮＦＴＷＴＧＡＳＫＹＮＬＮＧＲＥＳＩＩＮＰＧＴＡＭＡＳＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＭＩＦＧＫＥＳＡＧＡＳＮＴＡＬＤＮＶＭＩＴＤＥＥＥＩＫＡＴＮＰＶＡＴＥＲＦＧＴＶＡＶＮＦＱＳＳＳＴＤＰＡＴＧＤＶＨＡＭＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＮＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＡＥＦＳＡＴＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＡＫＳＡＮＶＤＦＴＶＤＮＮＧＬＹＴＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ（配列番号２）
いくつかの実施形態では、野生型ＡＡＶ１キャプシドタンパク質ＶＰ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有する：
ＭＡＳＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＡＳＴＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＶＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＳＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＥＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＮＲＴＱＮＱＳＧＳＡＱＮＫＤＬＬＦＳＲＧＳＰＡＧＭＳＶＱＰＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＫＴＤＮＮＮＳＮＦＴＷＴＧＡＳＫＹＮＬＮＧＲＥＳＩＩＮＰＧＴＡＭＡＳＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＭＩＦＧＫＥＳＡＧＡＳＮＴＡＬＤＮＶＭＩＴＤＥＥＥＩＫＡＴＮＰＶＡＴＥＲＦＧＴＶＡＶＮＦＱＳＳＳＴＤＰＡＴＧＤＶＨＡＭＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＮＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＡＥＦＳＡＴＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＡＫＳＡＮＶＤＦＴＶＤＮＮＧＬＹＴＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ（配列番号３）
本明細書に記載の組成物及び方法に有用なＡＡＶ１ベクターは、（１）本明細書に記載のプロモーター（例えば、偏在的なプロモーターまたは細胞型特異的プロモーター）、（２）発現される異種配列（例えば、表２に列記されるポリヌクレオチド）、及び（３）異種遺伝子の組み込み及び発現を容易にするウイルス配列のうちの１つ以上を含む組換え核酸構築物である。ウイルス配列は、ＤＮＡの複製及びビリオンへのパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶのそれらの配列を含み得る。典型的な用途では、異種導入遺伝子は、内耳細胞の発達、機能、細胞運命特定、再生、生存、増殖、及び／または維持を促進することができる健常な内耳細胞で発現するタンパク質、あるいは遺伝性もしくは遺伝的難聴、聴覚消失、及び／または前庭機能障害（例えば、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、または不均衡）を有する対象において変異する有毛細胞タンパク質の野生型形態をコードする。そのようなＡＡＶ１ベクターはまた、マーカーまたはレポーター遺伝子を含有し得る。有用なＡＡＶ１ベクターは、全体的または部分的に欠失しているが、機能的隣接ＩＴＲ配列を保持するＡＡＶ ＷＴ遺伝子のうちの１つ以上を有する。本明細書に記載のＡＡＶ１ベクターに含まれるＡＡＶ ＩＴＲは、特定の用途に好適な任意の血清型のものであり得る（例えば、ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１ ＩＴＲであり得る）。本明細書に記載の方法及び組成物での使用に関して、ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲであり得る。ＡＡＶベクターを使用する方法は、例えば、Ｔａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．７：２７９（２０００）及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４ （２０００）に記載されており、これらのそれぞれの開示は、遺伝子送達のＡＡＶベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれる。

【0345】

本明細書に記載のプロモーター及びポリヌクレオチドは、プロモーター及び／またはポリヌクレオチドを霊長類（例えば、ヒト）の内耳細胞に導入するのを容易にするために、ＡＡＶ１ビリオンに組み込むことができる。ＡＡＶ１のキャプシドタンパク質は、ビリオンの外部非核酸部分を構成し、ＡＡＶ１キャップ遺伝子によってコードされる。キャップ遺伝子は、ビリオンアセンブリに必要な、３つのウイルスコートタンパク質、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３をコードする。ＡＡＶビリオンの構築は、例えば、ＵＳ５，１７３，４１４、ＵＳ５，１３９，９４１、ＵＳ５，８６３，５４１、ＵＳ５，８６９，３０５、ＵＳ６，０５７，１５２、及びＵＳ６，３７６，２３７、ならびにＲａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：７９１（２００２）及びＢｏｗｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：４２３（２００３）に記載されており、それらのそれぞれの開示は、遺伝子送達のＡＡＶベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのＡＡＶ１ベクターのキャプシドタンパク質は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，７５９，２３７号に記載のアミノ酸配列を有し得る（及びポリヌクレオチド配列によってコードされ得る）。

【0346】

本明細書に記載の組成物及び方法と併せて有用なＡＡＶビリオンには、ＡＡＶ血清型１に由来するもの（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）が含まれる。異なる血清型のＡＡＶベクター及びＡＡＶタンパク質の構築及び使用は、例えば、Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：６１９（２０００）、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：３４２８（２０００）、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：２２２４（１９９８）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：６６１５ （２００１）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されており、それらのそれぞれの開示は、遺伝子送達のＡＡＶベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれる。

【0347】

本明細書に記載の組成物及び方法と併せて有用なのは、偽型ｒＡＡＶベクターである。偽型ベクターとしては、ＡＡＶ１に由来するキャプシド遺伝子（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシド）を用いて偽型された所与の血清型（例えば、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶ８）のＡＡＶベクターが挙げられる。偽型ｒＡＡＶビリオンの構築及び使用を伴う技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７６６２（２００１）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８：１５８（２００２）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されている。

【0348】

薬学的組成物
本明細書に記載のＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）は、感音難聴、聴覚消失、聴覚神経障害、耳鳴、及び／または前庭機能障害を患う霊長類（例えば、ヒト）患者などの患者に投与するためのビヒクルに組み込むことができる。ＡＡＶ１ベクターなどのベクターを含有する薬学的組成物は、当該技術分野で既知の方法を使用して調製することができる。例えば、そのような組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｅｄ．（２０１３）、参照により本明細書に組み込まれる）を使用して、及び所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製され得る。

【0349】

ＡＡＶ１ベクターの混合物は、１つ以上の賦形剤、担体、または希釈剤と好適に混合した水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ならびにそれらの混合物中及び油中で調製され得る。通常の保管及び使用条件下では、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含有し得る。注射の使用に好適な医薬形態には、滅菌水溶液または分散液、ならびに滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる（ＵＳ５，４６６，４６８に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。いずれの場合でも、製剤は無菌であってもよく、容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する範囲で流体であってもよい。製剤は、製造及び保管条件下で安定していてもよく、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されてもよい。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、及び／または植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合、必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの組成物における使用によってもたらされ得る。

【0350】

例えば、本明細書に記載の医薬組成物を含有する溶液は、必要に応じて好適に緩衝され得、液体希釈剤は、最初に、十分な生理食塩水またはグルコースで等張性を付与され得る。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に特に好適である。この関連において、用いることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に既知である。例えば、１回の投薬量は、１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解され、１０００ｍｌの皮下注射液に添加されるか、または提案される注入部位に注射されるかのいずれかであり得る。投薬量のある程度の変動は、治療される対象の状態に応じて必然的に生じるであろう。内耳への局所投与のために、組成物は、合成外リンパ液を含有するように製剤化され得る。例示的な合成外リンパ液としては、約６～９のｐＨ及び約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する２０～２００ｍＭのＮａＣｌ、１～５ｍＭのＫＣｌ、０．１～１０ｍＭのＣａＣｌ_２、１～１０ｍＭのグルコース、及び２～５０ｍＭのＨＥＰＥが挙げられる。投与の責任者は、いずれにしても、個々の対象に適切な用量を決定する。さらに、霊長類（例えば、ヒト）の投与に関して、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの基準によって要求されるように、滅菌、発熱性、一般的な安全性、及び純度基準を満たし得る。

【0351】

治療方法
本明細書に記載のＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）は、内耳または中耳への局所投与（例えば、卵円窓、内リンパ嚢、正円窓、または三半規管などを通した外リンパまたは内リンパへの投与、例えば、経鼓膜または鼓膜内注射）、静脈内、非経口、皮内、経皮、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び経口投与などの様々な経路によって、感音難聴、聴覚神経障害、聴覚消失、耳鳴、及び／または前庭機能障害を有する対象に投与され得る。任意の所与の場合での投与に最も好適な経路は、投与される特定の組成物、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄速度に依存する。組成物は、１回、または２回以上（例えば、年に１回、年に２回、年に３回、隔月、または毎月）投与され得る。

【0352】

本明細書に記載されるように治療され得る対象は、感音難聴、聴覚消失、聴覚神経障害、耳鳴、及び／または前庭機能障害を有するか、またはそれらを発症するリスクがある対象（例えば、難聴、前庭機能障害、またはその両方を有するか、またはそれらを発症するリスクがある対象）である。本明細書に記載の組成物及び方法は、内耳の細胞に対する損傷（例えば、蝸牛有毛細胞、前庭有毛細胞、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／またはらせん神経節ニューロン、例えば、聴覚外傷、疾患もしくは感染、頭部外傷、聴覚毒性薬物、または老化に関連する損傷）を有するか、またはそれを発症するリスクがある対象、感音難聴、聴覚消失、耳鳴、もしくは聴覚神経障害を有するか、またはそれらを発症するリスクがある対象、前庭機能障害（例えば、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、もしくは不均衡）を有するか、またはそれを発症するリスクがある対象、耳鳴（例えば、耳鳴のみ、または感音難聴もしくは前庭機能障害に関連する耳鳴）を有する対象、難聴及び／または前庭機能障害に関連する遺伝的変異を有する対象、あるいは遺伝性難聴、聴覚消失、聴覚神経障害、耳鳴、もしくは前庭機能の家族歴を有する対象を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、対象は、内耳細胞（例えば、蝸牛有毛細胞、前庭有毛細胞、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／またはらせん神経節ニューロン）の損傷、変性、機能障害、または喪失に関連する、またはそれらに起因する難聴及び／または前庭機能障害を有する。本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の組成物での治療または投与の前に、難聴または前庭機能障害に関連することが既知である遺伝子における１つ以上の変異について対象をスクリーニングするステップを含み得る。対象を、当業者に既知の標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して遺伝的変異についてスクリーニングすることができる。本明細書に記載の方法はまた、本明細書に記載の組成物での治療または投与の前に対象の聴力及び／または前庭機能を評価するステップを含み得る。聴力は、聴力測定、聴性脳幹応答（ＡＢＲ）、蝸電図検査（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射などの標準的な検査を使用して評価することができる。前庭機能は、眼球運動試験（例えば、電気眼振図（ＥＮＧ）またはビデオ眼振計（ＶＮＧ））、姿勢図検査、回転椅子試験、ＥＣＯＧ、前庭誘発筋電位（ＶＥＭＰ）、ならびに特殊臨床平衡試験、例えば、Ｍａｎｃｉｎｉ ａｎｄ Ｈｏｒａｋ，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，４６：２３９（２０１０）に記載のものなどの標準的な試験を使用して評価され得る。これらの試験はまた、本明細書に記載の組成物での治療または投与の後に、対象の聴力及び／または前庭機能を評価するために使用することができる。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、難聴及び／または前庭機能障害を発症するリスクがある患者、例えば、難聴もしくは前庭機能障害（例えば、遺伝性難聴もしくは前庭機能障害）の家族歴を有する患者、聴覚障害もしくは前庭機能障害をまだ呈さない、難聴もしくは前庭機能障害に関連する遺伝的変異を有する患者、または後天性難聴（例えば、聴覚外傷、疾患もしくは感染、頭部外傷、聴覚毒性薬物、または老化）もしくは前庭機能障害（例えば、疾患もしくは感染、頭部外傷、聴覚毒性薬物、または老化）のリスク因子にさらされる患者に予防的治療として投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、自己免疫性内耳疾患、炎症（例えば、内耳炎（ｌａｂｒｙｎｔｈｉｔｉｓ）または前庭神経炎）、またはメニエール病に起因する難聴または前庭機能障害を治療するために使用される。

【0353】

本明細書に記載の組成物及び方法は、霊長類（例えば、ヒト）対象における内耳細胞の再生（例えば、蝸牛有毛細胞、前庭有毛細胞、またはらせん神経節ニューロンの再生）を促進または誘導するために、及び／または霊長類（例えば、ヒト）対象の有毛細胞（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、及び／または前庭有毛細胞）及び／またはＳＧＮの数を増加させるために使用することができる。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、支持細胞の数を増加させる（例えば、支持細胞増殖を誘導もしくは増加させることによって、蝸牛及び／または前庭支持細胞）、または支持細胞の有毛細胞への分化を誘導する（例えば、蝸牛支持細胞のＩＨＣ及び／またはＯＨＣへの分化を誘導する、及び／または前庭支持細胞の前庭有毛細胞への分化を誘導する）ために使用することができる。内耳細胞の再生を促進もしくは誘導する、有毛細胞、ＳＧＮ、及び／または支持細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞）の数を増加させる、及び／または支持細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞）の有毛細胞への分化を誘導する組成物から利益を受け得る対象には、内耳細胞（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、ＳＧＮ、前庭有毛細胞、もしくは支持細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞）の損傷、変性、機能障害、もしくは喪失、例えば、外傷（例えば、聴覚外傷もしくは頭部外傷）、疾患もしくは感染、聴覚毒性薬物、または老化）に関連する内耳細胞の損傷、変性、または喪失の結果として難聴もしくは前庭機能障害を患う対象、ならびに異常な内耳細胞（例えば、正常で健常な内耳細胞と比較して適切に機能しない内耳細胞）、または遺伝的変異もしくは先天性異常に起因する内耳細胞数の低減を有する対象が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、内耳細胞の生存を促進または増加させる（例えば、損傷した内耳細胞の生存を増加させる、損傷した内耳細胞の修復を促進する、または内耳細胞の損傷、または変性もしくは喪失（例えば、老化に起因する内耳細胞の喪失、大きな騒音への曝露、疾患もしくは感染、頭部外傷、または聴覚毒性薬物）のリスクがある対象の内耳細胞を保護する）ために使用することができる。

【0354】

本明細書に記載の組成物及び方法はまた、聴覚毒性薬物で治療された、または現在聴覚毒性薬物による治療を受けている、またはすぐに治療を開始する対象における聴覚毒性薬物誘導性内耳細胞損傷または死（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、ＳＧＮ、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／または前庭有毛細胞の損傷もしくは死）を予防または低減するために使用することができる。聴覚毒性薬物は、内耳の細胞に対して毒性であり、感音難聴、前庭機能障害（例えば、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、または不均衡）、耳鳴、またはそれらの症状の組み合わせを引き起こし得る。聴覚毒性であることが見出された薬物としては、アミノグリコシド抗生物質（例えば、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、カナマイシン、バンコマイシン、及びアミカシン）、ビオマイシン、抗悪性腫瘍薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチンなどの白金含有化学療法剤）、ループ利尿剤（例えば、エタクリン酸及びフロセミド）、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、特に高用量で）、及びキニンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、聴覚外傷、疾患もしくは感染、頭部外傷、または老化に関連する内耳細胞損傷または死（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、ＳＧＮ、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／または前庭有毛細胞の損傷もしくは死）を予防または低減する。

【0355】

本明細書に記載の組成物及び方法はまた、内耳の有毛細胞とニューロンとの間の結合（例えば、蝸牛有毛細胞（ＩＨＣ及び／またはＯＨＣ）とＳＧＮまたは前庭有毛細胞と前庭神経節ニューロンとの間のシナプス結合）を維持または改善するために使用することもできる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、リボンシナプスを保護するか、またはリボンシナプス形成を促進もしくは増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、内耳のニューロン（例えば、ＳＧＮまたは前庭神経節ニューロン）による有毛細胞（例えば、蝸牛有毛細胞（ＩＨＣ及び／またはＯＨＣ）または前庭有毛細胞）の神経支配を維持または増加させる。

【0356】

治療は、本明細書に記載のＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）を含有する組成物を様々な単位用量で投与することを含み得る。各単位用量は、通常、所定量の治療用組成物を含有する。投与される量、ならびに特定の投与経路及び製剤は、臨床分野の当業者の技能内である。単位用量は、単回注射として投与される必要はないが、設定された期間にわたる連続注入を含み得る。投与は、内耳（例えば、蝸牛）への損傷を最小限に抑えるために、注入速度を制御するためのシリンジポンプを使用して行われ得る。ＡＡＶ１ベクターは、例えば、約１×１０^９ベクターゲノム（ＶＧ）／ｍＬ～１×１０^１５ＶＧ／ｍＬ（例えば、１×１０^９ＶＧ／ｍＬ、２×１０^９ＶＧ／ｍＬ、３×１０^９ＶＧ／ｍＬ、４×１０^９ＶＧ／ｍＬ、５×１０^９ＶＧ／ｍＬ、６×１０^９ＶＧ／ｍＬ、７×１０^９ＶＧ／ｍＬ、８×１０^９ＶＧ／ｍＬ、９×１０^９ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１０ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１１ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１２ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１３ＶＧ／ｍＬ、１×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、２×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、３×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、４×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、５×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、６×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、７×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、８×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、９×１０^１４ＶＧ／ｍＬ、または１×１０^１５ＶＧ／ｍＬ）の力価を有し得、１μＬ～２００μＬ（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００μＬ）の体積で投与され得る。ＡＡＶ１ベクターは、１×１０^７ＶＧ／耳～２×１０^１４ＶＧ／耳（例えば、１×１０^７ＶＧ／耳、２×１０^７ＶＧ／耳、３×１０^７ＶＧ／耳、４×１０^７ＶＧ／耳、５×１０^７ＶＧ／耳、６×１０^７ＶＧ／耳、７×１０^７ＶＧ／耳、８×１０^７ＶＧ／耳、９×１０^７ＶＧ／耳、１×１０^８ＶＧ／耳、２×１０^８ＶＧ／耳、３×１０^８ＶＧ／耳、４×１０^８ＶＧ／耳、５×１０^８ＶＧ／耳、６×１０^８ＶＧ／耳、７×１０^８ＶＧ／耳、８×１０^８ＶＧ／耳、９×１０^８ＶＧ／耳、１×１０^９ＶＧ／耳、２×１０^９ＶＧ／耳、３×１０^９ＶＧ／耳、４×１０^９ＶＧ／耳、５×１０^９ＶＧ／耳、６×１０^９ＶＧ／耳、７×１０^９ＶＧ／耳、８×１０^９ＶＧ／耳、９×１０^９ＶＧ耳、１×１０^１０ＶＧ／耳、２×１０^１０ＶＧ／耳、３×１０^１０ＶＧ／耳、４×１０^１０ＶＧ／耳、５×１０^１０×ＶＧ／耳、６×１０^１０ＶＧ／耳、７×１０^１０ＶＧ／耳、８×１０^１０ＶＧ／耳、９×１０^１０ＶＧ／耳、１×１０^１１ＶＧ／耳、２×１０^１１ＶＧ／耳、３×１０^１１ＶＧ／耳、４×１０^１１ＶＧ／耳、５×１０^１１ＶＧ／耳、６×１０^１１ＶＧ／耳、７×１０^１１ＶＧ／耳、８×１０^１１ＶＧ／耳、９×１０^１１ＶＧ／耳、１×１０^１２ＶＧ／耳、２×１０^１２ＶＧ／耳、３×１０^１２ＶＧ／耳、４×１０^１２ＶＧ／耳、５×１０^１２ＶＧ／耳、６×１０^１２ＶＧ／耳、７×１０^１２ＶＧ／耳、８×１０^１２ＶＧ／耳、９×１０^１２ＶＧ／耳、１×１０^１３ＶＧ／耳、２×１０^１３ＶＧ／耳、３×１０^１３ＶＧ／耳、４×１０^１３ＶＧ／耳、５×１０^１３ＶＧ／耳、６×１０^１３ＶＧ／耳、７×１０^１３ＶＧ／耳、８×１０^１３ＶＧ／耳、９×１０^１３ＶＧ／耳、１×１０^１４ＶＧ／耳、または２×１０^１４ＶＧ／耳）の用量で対象に投与され得る。

【0357】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞を含む群から選択される３つ以上（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上）の発達した内耳細胞型を形質導入するのに十分な量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、すべてまたはほとんどの発達した内耳細胞型を形質導入するのに十分な量で投与される。

【0358】

本明細書に記載の組成物は、聴力の改善、前庭機能の改善（例えば、平衡の改善、またはめまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）もしくはめまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）の低減）、耳鳴の低減、ＡＡＶ１ベクターに含有されるポリヌクレオチドの発現の増加、ＡＡＶ１ベクターに含有されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の機能の増加、内耳細胞再生（例えば、蝸牛有毛細胞、前庭有毛細胞、またはらせん神経節ニューロンの再生）の促進もしくは誘導、有毛細胞数（例えば、ＩＨＣ、ＯＨＣ、及び／または前庭有毛細胞数）の増加、ＳＧＮ数の増加、支持細胞数の増加（例えば、蝸牛及び／または前庭支持細胞、例えば、支持細胞増殖の増加）、支持細胞の有毛細胞への分化の増加（例えば、ＩＨＣ及び／またはＯＨＣへの蝸牛支持細胞分化の誘導、及び／または前庭有毛細胞への前庭支持細胞分化の誘導）、内耳細胞の損傷もしくは死（例えば、聴覚外傷、頭部外傷、聴覚毒性薬物、疾患もしくは感染、または老化に関連するＩＨＣ、ＯＨＣ、ＳＧＮ、蝸牛支持細胞、前庭支持細胞、及び／または前庭有毛細胞の損傷もしくは死）の予防もしくは低減、内耳細胞の発達の促進もしくは増加、内耳細胞生存の促進もしくは増加（例えば、損傷した内耳細胞の生存の増加、損傷した内耳細胞の修復の促進、または内耳細胞の損傷または変性もしくは喪失（例えば、老化に起因する内耳細胞の喪失、大きな騒音への曝露、疾患もしくは感染、頭部外傷、または聴覚毒性薬物）のリスクがある対象の内耳細胞の保護）、内耳細胞機能の改善、リボンシナプスの保護、リボンシナプス形成の促進もしくは増加、有毛細胞とニューロン（例えば、ＳＧＮ及び／または前庭神経節ニューロン）との間の結合（例えば、シナプス結合）の維持、または有毛細胞とニューロン（例えば、ＳＧＮ及び／または前庭神経節ニューロン）との間の結合（例えば、シナプス結合）の増加もしくは回復に十分な量で投与される。聴力は、標準的な聴力検査（例えば、聴力測定、ＡＢＲ、蝸電図検査（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射）を使用して評価され得、治療前に得られた聴力測定と比較して、５％以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％以上）改善され得る。前庭機能は、平衡及びめまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）（例えば、眼球運動試験（例えば、ＥＮＧまたはＶＮＧ）、姿勢図検査、回転椅子試験、ＥＣＯＧ、ＶＥＭＰ、及び特殊臨床平衡試験）の標準的な試験を使用して評価され得、治療前に得られた測定と比較して、５％以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％以上）改善され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、対象の発話を理解する能力を改善するのに十分な量で投与される。本明細書に記載の組成物はまた、感音難聴及び／または前庭機能障害（例えば、難聴もしくは前庭機能障害に関連する遺伝的変異を有する対象、難聴もしくは前庭機能障害（例えば、遺伝性難聴もしくは前庭機能障害）の家族歴を有する対象、または難聴もしくは前庭機能障害（例えば、聴覚毒性薬物、頭部外傷、疾患もしくは感染、または聴覚外傷）に関連するリスク因子にさらされたが、聴力障害もしくは前庭機能障害（例えば、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）もしくは不均衡）を呈さない対象、または軽度～中等度の難聴もしくは前庭機能障害を呈する対象）の発症または進行を緩徐または予防するのに十分な量で投与され得る。ポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現は、免疫組織化学、ウェスタンブロット分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、または検出タンパク質もしくはｍＲＮＡの技術分野で既知の他の方法を使用して評価され得、本明細書に記載の組成物の投与前の発現と比較して、５％以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％以上）増加し得る。内耳細胞数、内耳細胞機能、有毛細胞もしくはＳＧＮ再生、またはＡＡＶ１ベクターに含有されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の機能は、聴力検査または前庭機能の検査に基づいて間接的に評価され得、本明細書に記載の組成物の投与前の内耳細胞数、内耳細胞機能、有毛細胞もしくはＳＧＮ再生、またはポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の機能と比較して、５％以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％以上）増加し得る。内耳細胞損傷または死は、未治療の対象において典型的に観察される内耳細胞損傷及び死と比較して、５％以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％以上）低減し得、聴力及び／または前庭機能の標準的な試験に基づいて間接的に評価され得る。これらの効果は、例えば、本明細書に記載の組成物の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１５週間、２０週間、２５週間以上以内に生じ得る。患者は、治療に使用される投与の用量及び経路に応じて、組成物の投与の１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月以上後に評価され得る。評価の結果に応じて、患者は追加の治療を受けることができる。

【0359】

キット
本明細書に記載の組成物は、感音難聴または前庭機能障害の治療に使用するためのキットにおいて提供され得る。組成物は、プロモーター及び／またはポリヌクレオチドの核酸配列を含有するＡＡＶ１ベクターを含み得、単位剤形で、任意選択で、薬学的に許容される賦形剤（例えば、生理食塩水または人工外リンパ液）において、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン（前庭神経節ニューロン）、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞を含む群から選択される３つ以上（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上）の発達した内耳細胞型を形質導入するのに十分な量で提供され得る。キットは、本明細書に記載の方法を行うために、医師などのキットの使用者に指示する添付文書をさらに含み得る。キットは、任意選択で、組成物を投与するためのシリンジまたは他のデバイスを含み得る。

【実施例0360】

以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法がどのように使用、作製、及び評価され得るかの説明を当業者に提供するために提示され、本発明の純粋に例示であることが意図され、本発明者が本発明として見なす範囲を限定することを意図するものではない。

【0361】

以下の実施例は、ＡＡＶ２及びＡＡＶ７ｍ８血清型ベクターの向性と比較して、非ヒト霊長類の内耳におけるＡＡＶ１ウイルスベクターの予想外の優れた向性を示す。内耳のいくつかの細胞型の限定的な形質導入を呈したマウスにおけるＡＡＶ１向性とは異なり、非ヒト霊長類の内耳へのＡＡＶ１媒介導入遺伝子送達は、複数の細胞型の広範な形質導入を呈した。これは、マウスにおいて複数の内耳細胞型の広範な形質導入を呈したが、非ヒト霊長類の内耳においてはるかに制限された向性を示したＡＡＶ７ｍ８などの血清型とは対照的である。

【0362】

以下に記載の実施例のすべてにおいて、ＡＡＶ１ベクターは、配列番号１～３のアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含有する。
実施例１．導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ウイルスベクターを含有する組成物のマウス蝸牛へのインビボ投与
マウスの内耳内のＡＡＶ１ウイルスベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＣＭＶプロモーターの制御下でＥＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＥＧＦＰ）を含有する組成物を、内耳の後溝に注射することによって、９～１０週齢のＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝６匹のマウス）の内耳の片側に送達した。２．９４×１０^１３ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価の注射（１μＬ）を、０．１μＬ／分の注入速度で行った。注射の２週間後、内耳を外科的に除去し、基底膜の表面調製を行った。内耳のＡＡＶ－１媒介形質導入を評価するために、ＥＧＦＰ発現を蛍光顕微鏡法を使用して直接観察した。ＥＧＦＰの発現は、蝸牛の基底－頂軸全体を通して観察されたが、周波数マップの長さに沿って細胞型にわたって変化した。（図１Ａ、左上パネル：蝸牛の頂部、下部パネル：蝸牛の中回転、右上パネル：蝸牛の基底回転）。内有毛細胞（ＩＨＣ）は、蝸牛の基底－頂軸にわたってＥＧＦＰを発現したが、外有毛細胞（ＯＨＣ）は主に蝸牛の頂部領域でＧＦＰ発現を呈した。ＥＧＦＰの発現は、らせん板縁のいくつかの細胞内でも観察された（図１Ｂ）。

【0363】

実施例２．導入遺伝子を担持するＡＡＶ７ｍ８ベクターを含有する組成物のマウス蝸牛へのインビボ投与
マウスの内耳内のＡＡＶ７ｍ８ウイルスベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＣＡＧプロモーターの制御下でＥＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ７ｍ８ベクター（ＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰ）を含有する組成物を、内耳の後溝に注射することによって、９～１０週齢のＣＢＡ／ＣａＪマウス（ｎ＝８匹のマウス）の内耳の片側に送達した。９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価の注射（１μＬ）を、０．１μＬ／分の注入速度で行った。注射の２週間後、内耳を外科的に除去し、基底膜の表面調製を行った。ＥＧＦＰの発現は、全蝸牛にわたって観察された（図２Ａ）。高倍率画像は、蝸牛の基底から頂部の範囲全体にわたってＩＨＣ、ＯＨＣ、ならびにらせん神経節及びらせん板縁の細胞を含む複数の細胞型におけるＥＧＦＰ発現を示す（図２Ｂ；左側パネル：蝸牛の頂部；中央パネル：蝸牛の中回転；右側パネル：蝸牛の基底回転）。

【0364】

実施例３．導入遺伝子を担持するＡＡＶ２ベクターを含有する組成物の成体非ヒト霊長類の内耳へのインビボ投与
成体非ヒト霊長類の内耳内のＡＡＶ２ウイルスベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＣＭＶプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ２ベクターを含有する組成物を、正円窓膜を通して注射することによって、アカゲザルの内耳の片側（ｎ＝１匹の動物）及び両側（ｎ＝２匹の動物）に送達した。３．３９×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価の注射（３０μＬ）を、１５μＬ／分の注入速度で行った。注射の４週間後、内耳を外科的に除去し、基底膜の表面調製を行った。Ｍｙｏ７Ａの免疫標識を使用して、内耳の有毛細胞を特定し（図３Ａ、右列のパネル）、内耳細胞のＡＡＶ２媒介形質導入を、直接ＧＦＰ蛍光によって測定した（図３Ａ、左列のパネル）。ＧＦＰの発現は、特にＩＨＣ及びらせん板縁のいくつかの細胞内で、蝸牛の基底－頂軸にわたって観察された（図３Ａ、左列のパネル）。アカゲザルの内耳のＩＨＣにおけるＡＡＶ２－ＣＭＶ－ＧＦＰベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＧＦＰの発現を、蝸牛の周波数マップに沿ってＩＨＣにおいて定量化し、４０～８０％の細胞においてＧＦＰの発現が示された（図３Ｂ）。

【0365】

実施例４．導入遺伝子を担持するＡＡＶ７ｍ８ベクターを含有する組成物の成体非ヒト霊長類の内耳へのインビボ投与
成体非ヒト霊長類の内耳内のＡＡＶ７ｍ８ウイルスベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＣＡＧプロモーターの制御下でＥＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ７ｍ８ベクターを含有する組成物を、正円窓膜を通して注射することによって、アカゲザルの内耳の両側に送達した。９．４×１０^１２ゲノムコピー／ｍＬのウイルス力価の注射（３０μＬ）を、１５μＬ／分の注入速度で行った。注射の２週間（ｎ＝１匹の動物）または４週間（ｎ＝１匹の動物）後、内耳を外科的に除去し、切片化、取り付け、及び組織学的分析のための抗ＧＦＰ抗体による免疫染色のためにパラフィンに埋め込んだ。１匹の動物において、ＡＡＶ７ｍ８－ＣＡＧ－ＥＧＦＰでの内耳の形質導入の２週間後、ＥＧＦＰの発現がほとんど蝸牛の基底回転で観察された（図４Ａ、上部パネル：破線の正方形は蝸牛の基底回転を示す）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯のＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において観察された（図４Ｂ、図４Ａの破線の正方形の拡大；左上の挿入図：コルチ器官の拡大図）。異なる動物では、注射の４週間後、ＥＧＦＰの発現が蝸牛の基底－頂軸にわたって観察された（図４Ｃ、破線の正方形は蝸牛の基底回転を表し、図４Ｄで拡大される）。ＥＧＦＰは、らせん靭帯のＩＨＣ、ＯＨＣ、及び線維細胞において発現された（図４Ｄ、パネルの左上縁部の挿入図で拡大されたコルチ器官）。陰性対照として、抗ＧＦＰ一次抗体の不在下での二次抗体での免疫染色は、蝸牛内で染色を示さなかった（図４Ｅ～Ｆ）。

【0366】

実施例５．導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ウイルスベクターを含有する組成物の成体非ヒト霊長類の内耳へのインビボ投与
成体非ヒト霊長類の内耳内のＡＡＶ１ウイルスベクターの形質導入の有効性を決定するために、ＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ）を含有する組成物を、正円窓膜を通して注射することによって、アカゲザルの内耳の両側に送達した。９．９×１０^１２ＧＣ／ｍＬのウイルス力価の注射（３０μＬ）を、１５μＬ／分の注入速度で行った。注射の４週間後、内耳を外科的に除去し、切片化及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。内耳のＡＡＶ１媒介形質導入を評価するために、パラフィン切片をウサギモノクローナル抗ＧＦＰ抗体（Ａｂｃａｍ ＥＰＲ１４１０４）で免疫標識した。ＧＦＰの発現は、蝸牛（図５Ｂ及び５Ｃ）及び球形嚢（図５Ｂ及び５Ｅ）を含む複数の内耳構造において観察された。強固なＧＦＰの発現が、らせん靭帯、ならびに血管条の周辺細胞及び中間細胞で検出された。血管条の基底細胞は、画像に示される切片においてＧＦＰの発現を呈さなかったが、ＧＦＰの発現は、蝸牛の他の回転の基底細胞において可視であった（図５Ｄ）。抗ＧＦＰ抗体の不在下での二次抗体単独での染色を陰性対照として使用して、抗体の特異性を確認した（図５Ａ）。

【0367】

カニクイザルの内耳で観察されたＡＡＶ１ベクターの広範な形質導入が他の霊長類種で観察され得るかどうかを決定するために、ＣＭＶプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ）の注射を使用して、アカゲザルにおいて別の一組の実験を行った。２．０１×１０^１３ＧＣ／ｍＬのウイルス力価を、内耳の正円窓を通して片側に（ｎ＝１匹の動物）及び両側に（ｎ＝２匹の動物）注射し、１５μＬ／分の注入速度で３０μＬの組成物を送達した。ＡＡＶ１ベクターの向性を、注射の４週間後、内耳の外科的除去、ならびに基底膜、卵形嚢、及び内襞の表面調製によってアッセイした。ＡＡＶ１媒介ＧＦＰ発現をＧＦＰ蛍光によって直接監視し、内耳の有毛細胞をＭｙｏ７ａの抗体で免疫標識することによって特定した。蛍光イメージングは、内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）層において強く顕著であった（図６Ｂ）、蝸牛の基底－頂軸全体にわたって強固なＧＦＰの発現を明らかにした（図６Ａ）。ＧＦＰの発現は、支持細胞ならびに非感覚らせん靭帯及びらせん板縁においても観察された（図６Ｂ）。さらに、内耳の前庭構造は、卵形嚢及び内襞の感覚及び非感覚細胞において強いＧＦＰの発現を示した（図６Ｃ）。

【0368】

したがって、図５及び図６に示されるように、ＡＡＶ１は、非ヒト霊長類の内耳内で強固な向汎性形質導入を呈する。蝸牛及び前庭の感覚及び非感覚細胞におけるこの広範な向性は、治療的利益のために活用することができる。異なるＡＡＶキャプシドを使用して非ヒト霊長類の内耳で観察された向性の要約を以下の表６に提供する。

【0369】

【表6】

【0370】

実施例６．低及び高ウイルス力価を使用した導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ウイルスベクターを含有する組成物の成体非ヒト霊長類の内耳へのインビボ投与
成体非ヒト霊長類の内耳内のＡＡＶ１ウイルスベクターの形質導入の有効性に対するウイルス力価の効果を決定するために、ＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を担持するＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＧＦＰ）を含有する組成物を、正円窓膜を通して注射することによって、アカゲザルの内耳の両側に送達した。１．０５×１０^１２ＧＣ／ｍＬ（３．１５×１０^１０ＧＣ／耳、「ＡＡＶ１低」）または１．０５×１０^１３ＧＣ／ｍＬ（３．１５×１０^１１ＧＣ／耳、「ＡＡＶ１高」）のいずれかでのウイルス力価の注射（３０μＬ）を、１５μＬ／分の注入速度で行った。注射の４週間後、内耳を外科的に除去し、切片化及び組織学的分析のためにパラフィンに埋め込んだ。内耳のＡＡＶ１媒介形質導入を評価するために、パラフィン切片をウサギモノクローナル抗ＧＦＰ抗体（Ａｂｃａｍ ＥＰＲ１４１０４）で免疫標識した。図７Ａ～７Ｃは、非ＡＡＶ注射耳（図７Ａ）、ＡＡＶ低注射耳（図７Ｂ）、及びＡＡＶ高注射耳（図７Ｃ）におけるＧＦＰ標識を示す。図７Ｄ～７Ｆは、核染色なし（すなわち、ＧＦＰ染色のみ）で、それぞれ図７Ａ～７Ｃと同じ画像を示す。抗ＧＦＰ抗体は、非ＡＡＶ注射耳の蝸牛を標識せず、抗体の特異性を確認した（図７Ａ及び７Ｄ）。ＡＡＶ１低注射耳は、有毛細胞、支持細胞、内溝細胞、外溝細胞、及びらせん靭帯を含む様々な細胞型において、蝸牛の基底から頂部まで強固なＧＦＰの発現を示した（図７Ｂ及び７Ｅ）。ウイルス力価の増加は、前述の細胞型におけるより強いＧＦＰの発現、ならびに追加の細胞及び細胞型におけるＧＦＰの発現をもたらした（図７Ｃ及び７Ｆ）。したがって、ＡＡＶ１は、ウイルス力価を増加させることによって増強され得る非ヒト霊長類の内耳内に強固な向汎性形質導入を呈する。

【0371】

実施例７．ヒト対象の内耳の外有毛細胞におけるポリヌクレオチドの発現
本明細書に開示される方法及び組成物によれば、当該技術分野の医師は、ＯＨＣ内のポリヌクレオチドの発現を誘導するために、ヒト対象に、ＡＡＶ１ベクターを含有する組成物（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）を投与することができる。この目的のために、当該技術分野の医師は、ヒト対象の内耳に（例えば、正円窓、卵円窓、もしくは水平管への、またはそれを介した投与、あるいは経鼓膜または鼓膜内注射などによって、内リンパまたは外リンパに）局所的に、ＯＨＣ特異的プロモーター（例えば、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、またはＡＴＰ２Ｂ２プロモーター）に作動可能に連結されたポリヌクレオチド（例えば、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、またはＵｓｈ１ｃをコードするポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶ１ベクターを含有する組成物を投与することができる。ＯＨＣ内でポリヌクレオチドの発現を誘導するために、ＡＡＶ１ベクターは、例えば、１×１０^７ＶＧ／耳～２×１０^１４ＶＧ／耳（例えば、１×１０^７ＶＧ／耳、２×１０^７ＶＧ／耳、３×１０^７ＶＧ／耳、４×１０^７ＶＧ／耳、５×１０^７ＶＧ／耳、６×１０^７ＶＧ／耳、７×１０^７ＶＧ／耳、８×１０^７ＶＧ／耳、９×１０^７ＶＧ／耳、１×１０^８ＶＧ／耳、２×１０^８ＶＧ／耳、３×１０^８ＶＧ／耳、４×１０^８ＶＧ／耳、５×１０^８ＶＧ／耳、６×１０^８ＶＧ／耳、７×１０^８ＶＧ／耳、８×１０^８ＶＧ／耳、９×１０^８ＶＧ／耳、１×１０^９ＶＧ／耳、２×１０^９ＶＧ／耳、３×１０^９ＶＧ／耳、４×１０^９ＶＧ／耳、５×１０^９ＶＧ／耳、６×１０^９ＶＧ／耳、７×１０^９ＶＧ／耳、８×１０^９ＶＧ／耳、９×１０^９ＶＧ耳、１×１０^１０ＶＧ／耳、２×１０^１０ＶＧ／耳、３×１０^１０ＶＧ／耳、４×１０^１０ＶＧ／耳、５×１０^１０×ＶＧ／耳、６×１０^１０ＶＧ／耳、７×１０^１０ＶＧ／耳、８×１０^１０ＶＧ／耳、９×１０^１０ＶＧ／耳、１×１０^１１ＶＧ／耳、２×１０^１１ＶＧ／耳、３×１０^１１ＶＧ／耳、４×１０^１１ＶＧ／耳、５×１０^１１ＶＧ／耳、６×１０^１１ＶＧ／耳、７×１０^１１ＶＧ／耳、８×１０^１１ＶＧ／耳、９×１０^１１ＶＧ／耳、１×１０^１２ＶＧ／耳、２×１０^１２ＶＧ／耳、３×１０^１２ＶＧ／耳、４×１０^１２ＶＧ／耳、５×１０^１２ＶＧ／耳、６×１０^１２ＶＧ／耳、７×１０^１２ＶＧ／耳、８×１０^１２ＶＧ／耳、９×１０^１２ＶＧ／耳、１×１０^１３ＶＧ／耳、２×１０^１３ＶＧ／耳、３×１０^１３ＶＧ／耳、４×１０^１３ＶＧ／耳、５×１０^１３ＶＧ／耳、６×１０^１３ＶＧ／耳、７×１０^１３ＶＧ／耳、８×１０^１３ＶＧ／耳、９×１０^１３ＶＧ／耳、１×１０^１４ＶＧ／耳、または２×１０^１４ＶＧ／耳）の用量で投与され得る。

【0372】

組成物のヒト対象への投与後、当該技術分野の開業医は、様々な方法によって、遺伝子発現及び／またはポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現、ならびに療法に応答する患者の改善を監視することができる。例えば、医師は、遺伝子発現及び／またはタンパク質産生を間接的に評価し、組成物の投与後に、聴力測定、ＡＢＲ、蝸電図検査（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）の歪成分などの標準的な試験を行うことによって患者の聴力を監視することができる。治療後に収集された聴力測定値は、治療前に得られた測定値と比較され得る。組成物の投与前の聴力検査結果と比較して、組成物の投与後の試験のうちの１つ以上において、患者が改善された聴力を呈するという所見（例えば、ＤＰＯＡＥ測定によって指標とされる改善されたＯＨＣ機能）は、患者が治療に良好に応答していることを示す。その後の用量は、必要に応じて決定され、投与され得る。

【0373】

実施例８．ＡＡＶ１ベクターの投与によるヒト対象の前庭機能障害の治療
本明細書に開示される方法によれば、当該技術分野の医師は、前庭機能（例えば、平衡、空間定位、正しい向き、歩行、及び／または前庭動眼反射）を改善または回復させるために、前庭機能障害（例えば、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）、または平衡喪失）を有する対象、例えば、ヒト患者を治療することができる。この目的のために、当該技術分野の医師は、前庭細胞型特異的プロモーター（例えば、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、もしくはＳＯＸ９プロモーターなどの卵形嚢支持細胞特異的プロモーター、またはミオシン１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、もしくはミオシン７Ａプロモーターなどの前庭有毛細胞特異的プロモーター、）に動作可能に連結された導入遺伝子をコードするポリヌクレオチド（例えば、Ａｔｏｈ１、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ１１、Ｎｔｆ３、Ｂｄｎｆ、ウィルリン、Ｓｏｘ１１、Ｔｍｔｃ４、もしくはＰｏｕ４ｆ３をコードするポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶ１ベクター（例えば、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含有するＡＡＶ１ベクター）を含有する組成物をヒト患者に投与することができる。ＡＡＶベクターを含有する組成物は、前庭機能障害を治療するために、例えば、内耳への（例えば、正円窓、卵円窓、もしくは水平管への、またはそれを介した投与、または三半規管への投与などにより、内リンパまたは外リンパへの）局所投与によって患者に投与され得る。前庭機能障害を治療するために、ＡＡＶ１ベクターは、例えば、１×１０^７ＶＧ／耳～２×１０^１４ＶＧ／耳（例えば、１×１０^７ＶＧ／耳、２×１０^７ＶＧ／耳、３×１０^７ＶＧ／耳、４×１０^７ＶＧ／耳、５×１０^７ＶＧ／耳、６×１０^７ＶＧ／耳、７×１０^７ＶＧ／耳、８×１０^７ＶＧ／耳、９×１０^７ＶＧ／耳、１×１０^８ＶＧ／耳、２×１０^８ＶＧ／耳、３×１０^８ＶＧ／耳、４×１０^８ＶＧ／耳、５×１０^８ＶＧ／耳、６×１０^８ＶＧ／耳、７×１０^８ＶＧ／耳、８×１０^８ＶＧ／耳、９×１０^８ＶＧ／耳、１×１０^９ＶＧ／耳、２×１０^９ＶＧ／耳、３×１０^９ＶＧ／耳、４×１０^９ＶＧ／耳、５×１０^９ＶＧ／耳、６×１０^９ＶＧ／耳、７×１０^９ＶＧ／耳、８×１０^９ＶＧ／耳、９×１０^９ＶＧ耳、１×１０^１０ＶＧ／耳、２×１０^１０ＶＧ／耳、３×１０^１０ＶＧ／耳、４×１０^１０ＶＧ／耳、５×１０^１０×ＶＧ／耳、６×１０^１０ＶＧ／耳、７×１０^１０ＶＧ／耳、８×１０^１０ＶＧ／耳、９×１０^１０ＶＧ／耳、１×１０^１１ＶＧ／耳、２×１０^１１ＶＧ／耳、３×１０^１１ＶＧ／耳、４×１０^１１ＶＧ／耳、５×１０^１１ＶＧ／耳、６×１０^１１ＶＧ／耳、７×１０^１１ＶＧ／耳、８×１０^１１ＶＧ／耳、９×１０^１１ＶＧ／耳、１×１０^１２ＶＧ／耳、２×１０^１２ＶＧ／耳、３×１０^１２ＶＧ／耳、４×１０^１２ＶＧ／耳、５×１０^１２ＶＧ／耳、６×１０^１２ＶＧ／耳、７×１０^１２ＶＧ／耳、８×１０^１２ＶＧ／耳、９×１０^１２ＶＧ／耳、１×１０^１３ＶＧ／耳、２×１０^１３ＶＧ／耳、３×１０^１３ＶＧ／耳、４×１０^１３ＶＧ／耳、５×１０^１３ＶＧ／耳、６×１０^１３ＶＧ／耳、７×１０^１３ＶＧ／耳、８×１０^１３ＶＧ／耳、９×１０^１３ＶＧ／耳、１×１０^１４ＶＧ／耳、または２×１０^１４ＶＧ／耳）の用量で投与され得る。

【0374】

組成物の患者への投与後、当該技術分野の開業医は、様々な方法によって、療法に応答して患者の改善を監視することができる。例えば、医師は、電気眼振検査、ビデオ眼振検査、回転試験、前庭誘発筋原性電位、またはコンピュータ化された動的姿勢図検査などの標準的な試験を行うことによって、患者の前庭機能を監視することができる。組成物の投与前の試験結果と比較して、組成物の投与後の試験のうちの１つ以上において、患者が改善された平衡、歩行、姿勢、及び／または前庭動眼反射を呈する所見は、患者が治療に良好に応答していることを示す。その後の用量は、必要に応じて決定され、投与され得る。

【0375】

他の実施形態
記載される本発明の様々な修正及び変形は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、当業者に明らかであろう。本発明は、特定の実施形態に関連して説明されているが、特許請求される本発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、当業者に明らかな、本発明を実施するための記載のモードの様々な修正は、本発明の範囲内であることが意図される。他の実施形態は、特許請求の範囲にある。

【0376】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１９年１０月１１日に作成され、５１１２４－０５４ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１０．１１．２０１９＿ＳＴ２５という名前で、サイズは３８，３５８バイトである。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

2024112893000001.app

【手続補正書】

【提出日】2024-06-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

ヒト対象において発達した内耳細胞を形質導入する方法であって、前記対象に、有効量の血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される３つ以上の内耳細胞型を形質導入する量で投与することを含む、方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３７６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0376】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１９年１０月１１日に作成され、５１１２４－０５４ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１０．１１．２０１９＿ＳＴ２５という名前で、サイズは３８，３５８バイトである。
以下に、上記実施形態から把握できる技術思想を付記として記載する。
［付記１］
ヒト対象において発達した内耳細胞を形質導入する方法であって、前記対象に、有効量の血清型１アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ１）ベクターを、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される３つ以上の内耳細胞型を形質導入する量で投与することを含む、前記方法。
［付記２］
前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される５つ以上の細胞型を形質導入する、付記１に記載の方法。
［付記３］
前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１０以上の細胞型を形質導入する、付記２に記載の方法。
［付記４］
前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される１５以上の細胞型を形質導入する、付記３に記載の方法。
［付記５］
前記ＡＡＶ１ベクターが、外有毛細胞、前庭有毛細胞、前庭暗細胞、前庭線維細胞、スカルパ神経節ニューロン、前庭毛細血管の内皮細胞、前庭支持細胞、境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、らせん隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の周辺細胞、らせん神経節ニューロン、蝸牛毛細血管の内皮細胞、線維細胞、ライスナー膜の細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される２０以上の細胞型を形質導入する、付記４に記載の方法。
［付記６］
前記ＡＡＶ１ベクターが、所与の細胞型またはすべての内耳細胞型の細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％を形質導入する、付記１～５のいずれか１つに記載の方法。
［付記７］
前記ＡＡＶ１ベクターが、前記対象の中耳または内耳に局所投与される、付記１～６のいずれか１つに記載の方法。
［付記８］
前記ＡＡＶ１ベクターが、経鼓膜または鼓膜内投与される、付記７に記載の方法。
［付記９］
前記ＡＡＶ１ベクターが、表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターを含む、付記１～８のいずれか１つに記載の方法。
［付記１０］
前記ＡＡＶ１ベクターが、偏在的なプロモーターを含む、付記１～８のいずれか１つに記載の方法。
［付記１１］
前記ＡＡＶ１ベクターが、表２のリストから選択されるポリヌクレオチドを含む、付記１～１０のいずれか１つに記載の方法。
［付記１２］
ヒト対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記１３］
前記ポリヌクレオチドが、Ｓｏｘ９、Ｓｐａｌｔ様転写因子２（Ｓａｌｌ２）、カルモジュリン結合転写活性化因子１（Ｃａｍｔａ１）、ＹＲＰＷモチーフ２を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子２（Ｈｅｙ２）、Ｇａｔａ結合タンパク質２（Ｇａｔａ２）、ＹＲＰＷモチーフ１を有するＨｅｓ関連ファミリーＢＨＬＨ転写因子ｌ（Ｈｅｙ１）、セラミドシンターゼ２（Ｌａｓｓ２）、ＳＲＹ－Ｂｏｘ１０（Ｓｏｘ１０）、ＧＡＴＡ結合タンパク質３（Ｇａｔａ３）、Ｃｕｔ様ホメオボックス１（Ｃｕｘ１）、核受容体サブファミリー２群Ｆメンバー（Ｎｒ２ｆ１）、ＨｅｓファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ｈｅｓ１）、ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｂ（Ｒｏｒｂ）、Ｊｕｎがん原遺伝子ＡＰ－１転写因子サブユニット（Ｊｕｎ）、亜鉛フィンガータンパク質６６７（Ｚｆｐ６６７）、ＬＩＭホメオボックス（Ｌｈｘ３）、新生ヘリックス－ループ－ヘリックス１（Ｎｈｌｈ１）、ＭＡＸ二量体化タンパク質４（Ｍｘｄ４）、亜鉛フィンガーＭＩＺ型含有１（Ｚｍｉｚ１）、ミエリン転写因子１（Ｍｙｔ１）、シグナル伝達兼転写活性化因子３（Ｓｔａｔ３）、ＢａｒＨ様ホメオボックス１（Ｂａｒｈｌ１）、胸腺細胞選択関連高移動度群ボックス（Ｔｏｘ）、Ｐｒｏｓｐｅｒｏホメオボックス１（Ｐｒｏｘ１）、核因子Ｉ Ａ（Ｎｆｉａ）、甲状腺ホルモン受容体ベータ（Ｔｈｒｂ）、ＭＹＣＬがん原遺伝子ＢＨＬＨ転写因子（Ｍｙｃｌ１）、リジン脱メチル化酵素５Ａ（Ｋｄｍ５ａ）、ＣＡＭＰ応答配列結合タンパク質３様４（Ｃｒｅｂ３Ｉ４）、ＥＴＳバリアント１（Ｅｔｖ１）、父性発現３（Ｐｅｇ３）、ＢＴＢドメイン及びＣＮＣホモログ２（Ｂａｃｈ２）、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス（Ｉｓｌ１）、亜鉛フィンガー及びＢＴＢドメイン含有３８（Ｚｂｔｂ３８）、肢芽及び心臓発達（Ｌｂｈ）、Ｔｕｂｂｙ Ｂｉｐａｒｔｉｔｅ転写因子（Ｔｕｂ）、ユビキチンＣ（Ｈｍｇ２０）、ＲＥ１サイレンシング転写因子（Ｒｅｓｔ）、亜鉛フィンガータンパク質８２７（Ｚｆｐ８２７）、ＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー３（Ａｆｆ３）、ＰＢＸ／Ｋｎｏｔｔｅｄ１ホメオボックス２（Ｐｋｎｏｘ２）、ＡＴリッチ相互作用ドメイン３Ｂ（Ａｒｉｄ３ｂ）、ＭＬＸ相互作用タンパク質（Ｍｌｘｉｐ）、亜鉛フィンガータンパク質（Ｚｆｐ５３２）、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子１（Ｓａｌｌ１）、ＳＩＸホメオボックス２（Ｓｉｘ２）、Ｓｐａｌｔ様転写因子３（Ｓａｌｌ３）、Ｌｉｎ－２８ホモログＢ（Ｌｉｎ２８ｂ）、Ｐｏｕ４ｆ３、調節因子Ｘ７（Ｒｆｘ７）、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４で変異を含むＡｔｏｈ１バリアント、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、またはヌクレアーゼをコードするか、あるいはマイクロＲＮＡである、付記１２に記載の方法。
［付記１４］
ヒト対象の内耳の有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記１５］
前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（Ｔｍｔｃ４）、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記１４に記載の方法。
［付記１６］
ヒト対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記１７］
前記ポリヌクレオチドが、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、Ｃｌｒｎ１、プロトカドヘリン関連１５（Ｐｃｄｈ１５）、カドヘリン関連２３（Ｃｄｈ２３）、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記１６に記載の方法。
［付記１８］
ヒト対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記１９］
前記ポリヌクレオチドが、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、オトフェリン（Ｏｔｏｆ）、溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（Ｖｇｌｕｔ３）、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記１８に記載の方法。
［付記２０］
ヒト対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＯＴＯＦプロモーター、線維芽細胞成長因子８（ＦＧＦ８）プロモーター、及び溶質輸送体ファミリー１７メンバー８（ＳＬＣ１７Ａ８）プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記２１］
前記ポリヌクレオチドが、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｔｍｃ１、Ｕｓｈ１ｃ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記２０に記載の方法。
［付記２２］
ヒト対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記２３］
前記ポリヌクレオチドが、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記２２に記載の方法。
［付記２４］
ヒト対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記２５］
前記ポリヌクレオチドが、神経成長因子受容体（Ｎｇｆｒ）、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、テクトリン（Ｔｅｃｔｏｒｉｎ）ベータ（Ｔｅｃｔｂ）、テクトリンアルファ（Ｔｅｃｔａ）、Ｇｊｂ２、またはギャップ結合タンパク質ベータ６（Ｇｊｂ６）をコードする、付記２４に記載の方法。
［付記２６］
ヒト対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記２７］
前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡもしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡである、付記２６に記載の方法。
［付記２８］
ヒト対象の血管条の周辺細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＫＣＮＥ１プロモーター、及びＧＪＢ２プロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記２９］
ヒト対象の血管条の基底細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３０］
ヒト対象の血管条の中間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３１］
前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｔｙｒ、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡである、付記２８～３０のいずれか１つに記載の方法。
［付記３２］
ヒト対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３３］
前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、膜貫通タンパク質１６Ａ（Ｔｍｅｍ１６ａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、付記３２に記載の方法。
［付記３４］
ヒト対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３５］
前記ポリヌクレオチドが、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、ＩＫＡＲＯＳファミリー亜鉛フィンガー２（Ｉｋｚｆ２）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、付記３４に記載の方法。
［付記３６］
ヒト対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３７］
前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードする、付記３６に記載の方法。
［付記３８］
ヒト対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記３９］
前記ポリヌクレオチドが、Ｓｌｃ２６ａ４である、付記３８に記載の方法。
［付記４０］
ヒト対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記４１］
前記ポリヌクレオチドが、Ｃｅａｃａｍ１６、オトアンコリン（Ｏｔｏａ）、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードする、付記４０に記載の方法。
［付記４２］
ヒト対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＭＰ２２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記４３］
前記ポリヌクレオチドが、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはミエリンタンパク質ゼロ（Ｍｐｚ）をコードする、付記４２に記載の方法。
［付記４４］
ヒト対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＫＣＮＥ１プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記４５］
前記ポリヌクレオチドが、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードする、付記４４に記載の方法。
［付記４６］
ヒト対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記４７］
前記ポリヌクレオチドが、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードする、付記４６に記載の方法。
［付記４８］
ヒト対象のスカルパ神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結された前記ポリヌクレオチドを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記４９］
前記ポリヌクレオチドが、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするか、または斥力ガイダンス分子ＢＭＰ共受容体Ａ（ＲＧＭＡ）に指向されたｓｈＲＮＡである、付記４８に記載の方法。
［付記５０］
ヒト対象の支持細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｏｘ９、Ｓａｌｌ２、Ｃａｍｔａ１、Ｈｅｙ２、Ｇａｔａ２、Ｈｅｙ１、Ｌａｓｓ２、Ｓｏｘ１０、Ｇａｔａ３、Ｃｕｘ１、Ｎｒ２ｆ１、Ｈｅｓ１、Ｒｏｒｂ、Ｊｕｎ、Ｚｆｐ６６７、Ｌｈｘ３、Ｎｈｌｈ１、Ｍｘｄ４、Ｚｍｉｚ１、Ｍｙｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｂａｒｈｌ１、Ｔｏｘ、Ｐｒｏｘ１、Ｎｆｉａ、Ｔｈｒｂ、Ｍｙｃｌ１、Ｋｄｍ５ａ、Ｃｒｅｂ３Ｉ４、Ｅｔｖ１、Ｐｅｇ３、Ｂａｃｈ２、Ｉｓｌ１、Ｚｂｔｂ３８、Ｌｂｈ、Ｔｕｂ、Ｈｍｇ２０、Ｒｅｓｔ、Ｚｆｐ８２７、Ａｆｆ３、Ｐｋｎｏｘ２、Ａｒｉｄ３ｂ、Ｍｌｘｉｐ、Ｚｆｐ５３２、Ｉｋｚｆ２、Ｓａｌｌ１、Ｓｉｘ２、Ｓａｌｌ３、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｒｆｘ７、Ａｔｏｈ１、アミノ酸３２８、３３１、及び／または３３４に変異を含むＡｔｏｈ１バリアント、Ｇｆｉ１、Ｓｏｘ４、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｓｏｘ１１、Ｔｅａｄ２、Ｙａｐ１、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作用可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記５１］
前記プロモーターが、ＧＦＡＰプロモーター、ＧＬＡＳＴプロモーター、ＨＥＳ１プロモーター、ＪＡＧ１プロモーター、ＮＯＴＣＨ１プロモーター、ＬＧＲ５プロモーター、ＳＯＸ２プロモーター、ＨＥＳ５プロモーター、及びＳＯＸ９プロモーターからなる群から選択される、付記５０のいずれか１つに記載の方法。
［付記５２］
ヒト対象の内耳の有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記５３］
前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７Ａプロモーターからなる群から選択される、付記５２に記載の方法。
［付記５４］
ヒト対象の外有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｔｒｃ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記５５］
前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ５プロモーター、ＯＣＭプロモーター、ＳＴＲＣプロモーター、及びＡＴＰ２Ｂ２プロモーターからなる群から選択される、付記５４に記載の方法。
［付記５６］
ヒト対象の蝸牛有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１５、Ｃｄｈ２３、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、Ｓｔｒｃ、Ｃｈｒｎａ９、Ｃｈｒｎａ１０、Ｏｃｍ、Ｔｍｃ１、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記５７］
前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、及びＭＹＯ７ａプロモーターからなる群から選択される、付記５６に記載の方法。
［付記５８］
ヒト対象の内有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｏｔｏｆ、Ｖｇｌｕｔ３、ウィルリン、Ａｔｏｈ１、Ｐｏｕ４ｆ３、Ｇｆｉ１、Ｉｓｌ１、Ｃｌｒｎ１、Ｐｃｄｈ１４、Ｃｄｈ２３、Ｍｙｏ７ａ、Ｕｓｈ１ｃ、Ｔｍｃ１、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記５９］
前記プロモーターが、ＯＴＯＦプロモーター、ＦＧＦ８プロモーター、及びＳＬＣ１７Ａ８プロモーターからなる群から選択される、付記５８に記載の方法。
［付記６０］
ヒト対象の前庭有毛細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ウィルリン、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｍｔｃ４、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記６１］
前記プロモーターが、ＭＹＯ１５プロモーター、ＧＦＩ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＡＴＰ２Ｂ２プロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、付記６０に記載の方法。
［付記６２］
ヒト対象の柱細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｎｇｆｒ、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記６３］
前記プロモーターが、ＣＤ４４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記６２に記載の方法。
［付記６４］
ヒト対象のらせん神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、もしくはヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド、またはマイクロＲＮＡもしくはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記６５］
前記プロモーターが、ＢＨＬＨＥ２２プロモーター、ＳＹＮプロモーター、及びＣＡＬＢ２プロモーターからなる群から選択される、付記６４に記載の方法。
［付記６６］
ヒト対象の血管条の細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、Ｔｙｒ、もしくはヌクレアーゼをコードするか、またはマイクロＲＮＡであるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記６７］
前記細胞が、前記血管条の周辺細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＱ１プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、またはＫＣＮＥ１プロモーターからなる群から選択される、付記６６に記載の方法。
［付記６８］
前記細胞が、前記血管条の基底細胞であり、前記プロモーターが、ＣＬＤＮ１１プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記６６に記載の方法。
［付記６９］
前記細胞が、前記血管条の中間細胞であり、前記プロモーターが、ＫＣＮＪ１０プロモーター、ＧＪＢ２プロモーター、及びＴＹＲプロモーターからなる群から選択される、付記６６に記載の方法。
［付記７０］
ヒト対象の境界細胞及び／または内指節細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｔｍｅｍ１６ａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記７１］
前記プロモーターが、ＧＬＡＳＴプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記７０に記載の方法。
［付記７２］
ヒト対象のダイテルス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、Ｔｅｃｔｂ、Ｔｅｃｔａ、Ｉｋｚｆ２、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記７３］
前記プロモーターが、ＦＧＦＲ３プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記７２に記載の方法。
［付記７４］
ヒト対象のヘンゼン細胞及び／またはクラウディウス細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記７５］
前記プロモーターが、ＦＲＺＢプロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記７４に記載の方法。
［付記７６］
ヒト対象のらせん隆起細胞及び／または根細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｓｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記７７］
前記プロモーターが、ＳＬＣ２６Ａ４プロモーターである、付記７６に記載の方法。
［付記７８］
ヒト対象の歯間細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｃｅａｃａｍ１６、Ｏｔｏａ、Ｇｊｂ２、またはＧｊｂ６をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記７９］
前記プロモーターが、ＣＥＡＣＡＭ１６プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記７８に記載の方法。
［付記８０］
ヒト対象のグリア細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｐｍｐ２２、Ｂｄｎｆ、Ｎｔｆ３、またはＭｐｚをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記８１］
前記プロモーターが、ＰＭＰ２２プロモーターである、付記８０に記載の方法。
［付記８２］
ヒト対象の前庭暗細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｋｃｎｑ１、Ｋｃｎｅ１、またはＳｌｃ２６ａ４をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記８３］
前記プロモーターが、ＫＣＮＥ１プロモーターである、付記８２に記載の方法。
［付記８４］
ヒト対象の線維細胞内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、Ｇｊｂ２、Ｇｊｂ６、またはコラーゲンをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記８５］
前記プロモーターが、ＰＯＵ３Ｆ４プロモーターまたはＧＪＢ２プロモーターである、付記８４に記載の方法。
［付記８６］
ヒト対象のスカルパ神経節ニューロン内でポリヌクレオチドを発現させる方法であって、前記対象に、ＢｄｎｆもしくはＮｔｆ３をコードするポリヌクレオチド、またはＲＧＭＡに指向されたｓｈＲＮＡに作動可能に連結されたプロモーターを含む、有効量のＡＡＶ１ベクターを投与することを含む、前記方法。
［付記８７］
前記プロモーターが、ＴＵＢＢ３プロモーター及びＳＹＮプロモーターからなる群から選択される、付記８６に記載の方法。
［付記８８］
前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む、付記１～８７のいずれか１つに記載の方法。
［付記８９］
前記ＡＡＶ１ベクターが、ＡＡＶ２逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む、付記１～８８のいずれか１つに記載の方法。
［付記９０］
表５のプロモーターのリストから選択されるプロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを含む、ＡＡＶ１ベクター。
［付記９１］
前記ポリヌクレオチドが、表２に列記されるポリヌクレオチドから選択される、付記９０に記載のＡＡＶ１ベクター。
［付記９２］
表２に列記されるポリヌクレオチドから選択されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む、ＡＡＶ１ベクター。
［付記９３］
前記プロモーターが、表５のプロモーターのリストから選択される、付記９２に記載のＡＡＶ１ベクター。
［付記９４］
前記ＡＡＶ１ベクターが、ＡＡＶ２ ＩＴＲを含む、付記９０～９３のいずれか１つに記載のＡＡＶ１ベクター。
［付記９５］
前記ＡＡＶ１ベクターが、野生型ＡＡＶ１キャプシドを含む、付記９０～９４のいずれか１つに記載のＡＡＶ１ベクター。
［付記９６］
付記８８～９３のいずれか１つに記載のＡＡＶ１ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
［付記９７］
前記薬学的組成物が、内耳または中耳への局所投与用に製剤化される、付記９６のいずれかに記載の薬学的組成物。

【外国語明細書】