特開 2024-113337 変形性関節症治療用医薬組成物及びキット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024113337

(43)【公開日】2024-08-22

(54)【発明の名称】変形性関節症治療用医薬組成物及びキット

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20240815BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 31/728 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240815BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P19/02

A61P43/00 121

A61K31/728

A61K31/506

A61P43/00 111

C12N15/12

【審査請求】未請求

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023018237

(22)【出願日】2023-02-09

(71)【出願人】

【識別番号】504145342

【氏名又は名称】国立大学法人九州大学

(74)【代理人】

【識別番号】100165179

【弁理士】

【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡

(74)【代理人】

【識別番号】100188558

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100175824

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100152272

【弁理士】

【氏名又は名称】川越 雄一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100181722

【弁理士】

【氏名又は名称】春田 洋孝

(72)【発明者】

【氏名】中島 康晴

(72)【発明者】

【氏名】赤▲崎▼ 幸穂

(72)【発明者】

【氏名】内田 泰輔

(72)【発明者】

【氏名】居石 卓也

(72)【発明者】

【氏名】津嶋 秀俊

(72)【発明者】

【氏名】倉員 市郎

(72)【発明者】

【氏名】遠矢 政和

(72)【発明者】

【氏名】桑原 正成

(72)【発明者】

【氏名】筒井 知明

(72)【発明者】

【氏名】廣瀬 良太

(72)【発明者】

【氏名】兵藤 裕貴

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZA961

4C084ZC202

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC50

4C086EA25

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA12

4C086ZA96

4C086ZC20

4C086ZC75

(57)【要約】

【課題】変形性関節症の治療技術を提供する。
【解決手段】ＩκＢキナーゼε（ＩＫＫε）阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する、変形性関節症治療用医薬組成物；ＩＫＫε阻害薬がＢＡＹ－９８５（ＣＡＳ番号：２４０９４７９－２９－２）である、変形性関節症治療用医薬組成物；関節内注射用である、変形性関節症治療用医薬組成物；ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を備える、変形性関節症治療用キット。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩκＢキナーゼε（ＩＫＫε）阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する、変形性関節症治療用医薬組成物。

【請求項2】

前記ＩＫＫε阻害薬がＢＡＹ－９８５（ＣＡＳ番号：２４０９４７９－２９－２）である、請求項１に記載の変形性関節症治療用医薬組成物。

【請求項3】

関節内注射用である、請求項１又は２に記載の変形性関節症治療用医薬組成物。

【請求項4】

ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を備える、変形性関節症治療用キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、変形性関節症治療用医薬組成物及びキットに関する。

【背景技術】

【0002】

変形性関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ、以下、「ＯＡ」という場合がある。）は、進行性の軟骨変性により関節機能を著しく障害する不可逆性疾患である。日本には、約８００万人の変形性関節症患者がいると推計されている。現在、ＯＡの治療方法として、薬物内服（ＮＳＡＩＤ、非麻薬性鎮痛薬）と関節内注射（ヒアルロン酸、ステロイド）が行われている。

【0003】

ところで、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）は、古典的にはＩＫＫα、ＩＫＫβ、ＩＫＫγの３つのサブユニットからなり、細胞内タンパク質であるＩκＢαのリン酸化を介して、ＮＦκＢ経路を活性化させる因子である。新たなサブユニットであるＩκＢキナーゼε（ＩＫＫε）もＮＦκＢ経路を活性化させるものと考えられている。

【0004】

発明者らは、ＩＫＫεが、ＯＡ軟骨に特異的に高発現してＮＦκＢ経路による異化反応により軟骨変性を増悪させることを初めて明らかにした（非特許文献１を参照。）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Uchida T et al., IkappaB kinase epsilon contributes to the pathogenesis of osteoarthritis by promoting cartilage degradation, Arthritis and Rheumatology, 2022, PMID: 36530063.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

上述した薬物内服（ＮＳＡＩＤ、非麻薬性鎮痛薬）と関節内注射（ヒアルロン酸、ステロイド）は、いずれも症候改善薬であり、現在、進行する軟骨変性を構造的に抑制できる疾患修飾治療薬は存在しない。例えば、ヒアルロン酸製剤（ＨＡ）の関節内投与は、除痛効果は期待できるが、軟骨の変性を抑制する効果はなく、現状では対症療法の位置づけである。

【0007】

発明者らは、ＩＫＫε阻害薬の関節内投与が、変形性関節症における軟骨変性を構造的に抑制できる治療薬となりうることを明らかにした。しかしながら、ＩＫＫε阻害薬による変形性関節症の治療には改善の余地がある。そこで、本発明は、変形性関節症の治療技術を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は以下の態様を含む。
［１］ＩκＢキナーゼε（ＩＫＫε）阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する、変形性関節症治療用医薬組成物。
［２］前記ＩＫＫε阻害薬がＢＡＹ－９８５（ＣＡＳ番号：２４０９４７９－２９－２）である、［１］に記載の変形性関節症治療用医薬組成物。
［３］関節内注射用である、［１］又は［２］に記載の変形性関節症治療用医薬組成物。
［４］ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を備える、変形性関節症治療用キット。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、変形性関節症の治療技術を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、実験例１における定量的リアルタイムＰＣＲの結果を示すグラフである。

【図2】図２は、実験例２におけるマウスＯＡモデルの膝関節組織切片の染色結果を示す顕微鏡写真、及び、国際変形性関節症学会（ＯＡＲＳＩ）が推奨している病理組織学的等級付けに基づいて、染色切片を評価し、ＯＡの重症度を定量化した結果を示すグラフである。

【図3】図３は、実験例３において、マウスＯＡモデルの圧痛の測定結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0011】

［変形性関節症治療用医薬組成物］
一実施形態において、本発明は、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する、変形性関節症治療用医薬組成物を提供する。

【0012】

実施例において後述するように、発明者らは、本実施形態の医薬組成物をヒト軟骨細胞に作用させることにより、ＩＫＫε阻害薬を単独で投与した場合と比較して、炎症性サイトカインであるインターロイキン６（ＩＬ６）及びタンパク質分解酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ１３（ＭＭＰ１３）の遺伝子発現が相乗的に抑制されることを明らかにした。

【0013】

発明者らはまた、本実施形態の医薬組成物をマウスＯＡモデルに関節内投与することにより、ＩＫＫε阻害薬を単独で投与した場合と比較して、ＯＡにおける軟骨変性を構造的に抑制する効果及び疼痛を低下させる効果が相乗的に増強されることを明らかにした。したがって、本実施形態の医薬組成物は、インビトロ及びインビボにおいて、ＩＫＫε阻害薬の単独投与と比較して、相乗的に高い変形性関節症の治療効果を示すことができる。

【0014】

本実施形態の医薬組成物において、「有効成分として含有する」とは、治療的に有効量のＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸をそれぞれ含有することを意味する。

【0015】

ＯＡは、全身のあらゆる関節に起こり得る。特にＯＡの発症によりＱＯＬの低下に繋がり、健康寿命を脅かす可能性が高い部位は、体を支える役割を担い、体重の負荷が大きい関節であり、具体的には、膝関節、股関節、脊椎等が挙げられ、それぞれ、変形性膝関節症（膝ＯＡ）、変形性股関節症、変形性脊椎症と呼ばれる。本実施形態の医薬組成物は、なかでも、変形性膝関節症に対して特に好適に用いられる。

【0016】

ＯＡは、その原因によって、一次性関節症と二次性関節症とに分けられる。一次性関節症は、原因は特定されていないが、肥満や加齢等の要因により発病したＯＡであると考えられている。変形性膝関節症の多くは、一次性関節症である。一方、二次性関節症は、病気やケガ等が原因で発症するＯＡである。発症原因として具体的には、例えば、関節リウマチ、痛風、骨折、靭帯や半月板の損傷、先天性の関節構造の異常等が挙げられる。変形性股関節症の多くは、二次性関節症である。本実施形態の医薬組成物は、なかでも、一次性関節症に対して特に好適に用いられる。

【0017】

本実施形態の医薬組成物において、ＩＫＫε阻害薬としては、ＩＫＫεの活性を阻害する物質が挙げられ、例えば、低分子化合物、ＩＫＫε発現阻害剤等が挙げられる。低分子化合物であるＩＫＫε阻害薬としては、例えば、ＢＡＹ－９８５（ＣＡＳ番号：２４０９４７９－２９－２）、ＢＸ－７９５（ＣＡＳ番号：７０２６７５－７４－９）、ＭＲＴ６７３０７（ＣＡＳ番号：１１９０３７８－５７－４）等が挙げられる。

【0018】

また、ＩＫＫε発現阻害剤としては、例えば、ＩＫＫε遺伝子のｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、アンチセンス核酸等が挙げられる。

【0019】

本実施形態の医薬組成物において、ＩＫＫε阻害薬の含有割合は特に限定されず、例えば０．１～１００μＭであってもよく、１～５０μＭであってもよく、１～２０μＭであってもよい。

【0020】

ヒアルロン酸は、ヒトや非ヒト脊椎動物等の皮膚、関節、眼球の硝子体等に存在するムコ多糖の一種であり、ヒアルロナンとも呼ばれる。ヒアルロン酸は、基本的にはβ－Ｄ－グルクロン酸の１位とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものでかつβ－Ｄ－グルクロン酸とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンとから基本的に構成され、２糖単位が複数個結合したものである。該糖は不飽和糖であってもよく、不飽和糖としては、非還元末端糖、通常、グルクロン酸の４，５位炭素間が不飽和のもの等が挙げられる。

【0021】

ヒアルロン酸としては、具体的には動物等の天然物から抽出されたもの、微生物を培養して得られたもの、化学的若しくは酵素的に合成されたもの等のいずれも使用することができる。ヒアルロン酸は、例えば、鶏冠、臍帯、皮膚、関節液等の生体組織から公知の抽出法と精製法によって得ることができる。ヒアルロン酸はまた、ストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法によっても製造することができる。

【0022】

ヒアルロン酸にはヒアルロナンオリゴ糖も包含され、上記２糖単位１個からなる２糖及びその誘導体のような低分子量のヒアルロン酸から、重量平均分子量４００万程度の高分子量のヒアルロン酸まで使用することができる。組織における浸透性等の点で優れることから、重量平均分子量３８０以上４，０００，０００以下程度のヒアルロン酸が好ましく、２糖以上２０糖以下程度のヒアルロン酸がより好ましい。

【0023】

ヒアルロン酸のうち分子量の低いものは、具体的には、酵素分解法、アルカリ分解法、加熱処理法、超音波処理法等の公知の方法によってヒアルロン酸を低分子化する方法、化学的若しくは酵素的に合成する方法等で製造することができる。例えば、酵素分解法としては、ヒアルロン酸分解酵素（ヒアルロニダーゼ（睾丸由来）、ヒアルロニダーゼ（ストレプトマイセス由来）、ヒアルロニダーゼＳＤ等）、コンドロイチナーゼＡＣ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩＩ、コンドロイチナーゼＡＢＣ等のヒアルロン酸を分解する酵素をヒアルロナンに作用させてヒアルロナンオリゴ糖を生成する方法等が挙げられる。

【0024】

また、アルカリ分解法としては、例えばヒアルロン酸の溶液に１Ｎ程度の水酸化ナトリウム等の塩基を加え、数時間加温して、低分子化させた後、塩酸等の酸を加えて中和して、低分子量のヒアルロン酸を得る方法等が挙げられる。

【0025】

ヒアルロン酸は、塩の形態であってもよい。製剤上の必要に応じて、その薬学上許容できる塩を用いることができる。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、トリ（ｎ－ブチル）アミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、アミノ酸塩等のアミン塩等が挙げられる。

【0026】

市販品で臨床使用されているヒアルロン酸としては、例えば、アルツディスポ（精製ヒアルロン酸ナトリウム、重量平均分子量５０万以上１２０万以下）、スベニール（精製ヒアルロン酸ナトリウム、重量平均分子量１５０万以上３９０万以下）等が挙げられる。

【0027】

本実施形態の医薬組成物において、ヒアルロン酸の含有割合は、特に限定されず、例えば０．１～１００ｍｇ／ｍＬであってもよく、１～５０ｍｇ／ｍＬであってもよく、約１０ｍｇ／ｍＬであってもよい。

【0028】

本実施形態の医薬組成物は、経口的に使用される剤型であってもよく、非経口的に使用される剤型であってもよいが、非経口的に使用される剤型が好ましい。経口的に使用される剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤等が挙げられる。非経口的に使用される剤型としては、例えば、注射剤等が挙げられる。

【0029】

薬学的に許容される担体としては、通常医薬組成物の製剤に用いられるものを特に制限なく用いることができる。より具体的には、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴム等の結合剤；デンプン、結晶性セルロース等の賦形剤；アルギン酸等の膨化剤；水、エタノール、グリセリン等の注射剤用溶剤等が挙げられる。

【0030】

医薬組成物は添加剤を含んでいてもよい。添加剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；ショ糖、乳糖、サッカリン、マルチトール等の甘味剤；ペパーミント、アカモノ油等の香味剤；ベンジルアルコール、フェノール等の安定剤；リン酸塩、酢酸ナトリウム等の緩衝剤；安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の溶解補助剤；酸化防止剤；防腐剤等が挙げられる。

【0031】

医薬組成物は、ＩＫＫε阻害薬、ヒアルロン酸、上記薬学的に許容される担体及び添加剤を適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。

【0032】

医薬組成物は、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸、以外の抗炎症作用を有する治療薬及び他の疾患の治療薬からなる群より選択される少なくとも１つと組合せて、使用してもよい。これらの治療薬は混合して単一の医薬組成物として投与してもよいし、別々の製剤として投与してもよい。また、各製剤は、同一の投与経路で投与してもよいし、別々の投与経路で投与してもよい。更に、各製剤は、同時に投与してもよいし、逐次的に投与してもよいし、一定の時間乃至期間を空けて別々に投与してもよい。一実施態様において、変形性関節症治療用医薬組成物と他の薬剤とは、これらを包含するキットとしてもよい。

【0033】

本実施形態の医薬組成物を投与する対象としては、特に限定されず、例えば、ヒト、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウサギ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター及びそれらの細胞等が挙げられる。中でも、哺乳動物又は哺乳動物細胞が好ましく、ヒト又はヒト細胞が特に好ましい。

【0034】

投与経路は、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、関節内投与等の非経口投与経路が好ましく、関節内投与が特に好ましい。すなわち、本実施形態の医薬組成物は、関節内注射用であることが好ましい。

【0035】

変形性関節症治療用医薬組成物の投与量は、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸の種類、投与対象の症状、投与部位、投与方法等により変動する。当業者であれば適当な投与量を適宜選択することが可能であるが、例えば、局所投与を行う場合は、ＩＫＫε阻害薬については、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり、通常約０．００１ｍｇ以上１０ｍｇ以下程度であり、約０．０１ｍｇ以上５ｍｇ以下程度が好ましく、約０．０２ｍｇ以上２ｍｇ以下程度がより好ましい。ヒアルロン酸については、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり、通常約０．０８ｍｇ以上８００ｍｇ以下程度であり、約０．８ｍｇ以上４００ｍｇ以下程度が好ましく、約１．６ｍｇ以上１００ｍｇ以下程度がより好ましい。

【0036】

あるいは、通常、臨床において、１回あたり、１シリンジ（２．５ｍＬ）（精製ヒアルロン酸ナトリウムとして２５ｍｇ程度を含有する）を投与していることから、ヒアルロン酸を１回あたり２５ｍｇ以上又は２５ｍｇ以下の範囲で投与することができる。

【0037】

変形性関節症治療用医薬組成物の投与は、単回投与であってもよく、複数回投与であってもよい。複数回投与である場合は、例えば、２時間以上１２時間以下の期間毎、毎日、又は２日、５日、１週間、１．５週間、数週間、１か月又は数か月に１回等の頻度で投与することができる。

【0038】

通常、臨床において、ＯＡ治療のために、成人１回１シリンジ（精製ヒアルロン酸ナトリウムとして１回２５ｍｇ）を１週間ごとに連続５回膝関節腔内に投与し、その後、症状の維持を目的とする場合は、２週間隔以上４週間隔以下で投与している。本実施形態の変形性関節症治療用医薬組成物も同様の投与スケジュールで投与することができる。

【0039】

［変形性関節症治療用キット］
一実施形態において、本発明は、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を備える、変形性関節症治療用キットを提供する。

【0040】

本実施形態のキットにおいて、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸は、組成物として混合されておらず、別々の容器に収容されている。本実施形態のキットは、使用時にＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を混合することにより、上述した変形性関節症治療用医薬組成物を調製することができる。

【0041】

本実施形態のキットにおいて、変形性関節症、ＩＫＫε阻害薬、ヒアルロン酸、投与対象、投与量等については、上述したものと同様である。本実施形態のキットは、薬学的に許容される担体、添加剤を更に含んでいてもよい。薬学的に許容される担体、添加剤については、上述したものと同様である。

【0042】

［その他の実施形態］
一実施形態において、本発明は、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する医薬組成物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、変形性関節症の治療方法を提供する。

【0043】

一実施形態において、本発明は、変形性関節症の治療における使用のための医薬組成物であって、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。

【0044】

一実施形態において、本発明は、変形性関節症治療用医薬組成物を製造するためのＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸の使用を提供する。

【0045】

これらの各実施形態において、変形性関節症、ＩＫＫε阻害薬、ヒアルロン酸、投与対象、投与量等については、上述したものと同様である。

【実施例0046】

次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【0047】

［材料］
（ヒト軟骨細胞）
人工膝関節置換術後に通常では破棄される切除軟骨片より、ヒト軟骨細胞を単離培養した。すべてのドナーに対して、倫理審査委員会において承認を受けた臨床研究に参加することに同意を得た。すべてのドナーの個人情報に取り扱いには十分に配慮した。ドナーの膝関節は、レントゲン写真に基づいて、ＯＡグレード（Ｋｅｌｌｇｒｅｎ－ｌａｗｒｅｎｃｅ）ＩＩＩ～ＩＶと判断された。

【0048】

［実験例１］
（ヒト軟骨細胞におけるＩＬ６及びＭＭＰ１３の発現に対する、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸による相乗的抑制効果）
ＯＡ患者の軟骨組織から分離培養したヒト軟骨細胞を用いて、ＯＡの病態形成に関わる代表的な炎症性サイトカインであるインターロイキン６（ＩＬ６）、及び、タンパク質分解酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ１３（ＭＭＰ１３）の発現に対する、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸の影響を検討した。ＩＫＫε阻害薬として、ＢＡＹ－９８５を使用した。また、使用したヒアルロン酸の重量平均分子量は５０万以上１４９万以下であった。

【0049】

ヒト軟骨細胞の培地に、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を添加し、４８時間インキュベートした。ＢＡＹ－９８５は１０μＭ、ヒアルロン酸は１ｍｇ／ｍＬとなるように培地に添加した。

【0050】

続いて、ヒト軟骨細胞よりｍＲＮＡを回収し逆転写した。続いて、ＩＬ６及びＭＭＰ１３のｍＲＮＡ発現を、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ２．０システム（ロシュ社）を用いた定量的リアルタイムＰＣＲ法により解析した。使用したプライマーの塩基配列を下記表１に示す。グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）遺伝子のｍＲＮＡ発現を内部標準に使用した。

【0051】

【表1】

【0052】

図１は、定量的リアルタイムＰＣＲの結果を示すグラフである。その結果、ＢＡＹ－９８５の単独投与によって、ＩＬ６及びＭＭＰ１３の発現量が低下したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、ＩＬ６の発現量は６１．７％に低下し、ＭＭＰ１３は７２．７％に低下した。

【0053】

また、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、ＩＬ６及びＭＭＰ１３の発現量が更に低下したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、ＩＬ６の発現量は３０．６％に低下し、ＭＭＰ１３は２５．９％に低下した。また、ＢＡＹ－９８５を単独投与した場合と比較して、ＩＬ６の発現量は４９．６％に低下し、ＭＭＰ１３は３５．６％に低下した。

【0054】

以上の結果は、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、ＩＬ６及びＭＭＰ１３の発現が相乗的に抑制されたことを示す。

【0055】

［実験例２］
（マウスＯＡモデルの軟骨変性進行に対する、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸による相乗的抑制効果１）
マウスＯＡモデルの軟骨変性進行に対する、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸の影響を検討した。ＩＫＫε阻害薬として、ＢＡＹ－９８５を使用した。また、使用したヒアルロン酸の重量平均分子量は５０万以上１４９万以下であった。

【0056】

マウスＯＡモデルとして、１２週齢雄の野生型マウスの膝内側半月板前節基部及び内側側副靱帯を切離するＯＡ誘導手術を施行したマウスを使用した。マウスＯＡモデルを３群に分けた。１つ目の群には、手術の直後及び手術後５日おきに８週間、ヒアルロン酸溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１０μＬ）を関節内投与した。２つ目の群には、手術の直後及び手術後５日おきに８週間、ＢＡＹ－９８５溶液（５μＭ、１０μＬ）を関節内投与した。３つ目の群には、手術の直後及び手術後５日おきに８週間、ＢＡＹ－９８５溶液及びヒアルロン酸溶液の混合溶液（ＢＡＹ－９８５ ５μＭ、ヒアルロン酸１０ｍｇ／ｍＬ、１０μＬ）を関節内投与した。

【0057】

ＯＡ誘導手術から８週間後に、各群のマウスから膝関節組織を採取し、切片をサフラニンＯで染色した。

【0058】

図２上段は、各群のマウスの膝関節組織切片の染色結果を示す顕微鏡写真である。図２下段は、国際変形性関節症学会（ＯＡＲＳＩ）が推奨している病理組織学的等級付けに基づいて、図２上段に示す染色切片を評価し、ＯＡの重症度を定量化した結果を示すグラフである。図２中、「ＨＡ」はヒアルロン酸溶液のみを投与した群の結果であることを示し、「ＢＡＹ ５μＭ」はＢＡＹ－９８５溶液のみを投与した群の結果であることを示し、「ＢＡＹ ５μＭ＋ＨＡ」はＢＡＹ－９８５溶液及びヒアルロン酸溶液の混合溶液を投与した群の結果であることを示す。

【0059】

その結果、ＢＡＹ－９８５の単独投与によって、ＯＡＲＳＩスコアが低下したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、ＯＡＲＳＩスコアは６６．７％に低下した。

【0060】

また、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、ＯＡＲＳＩスコアが更に低下したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、ＯＡＲＳＩスコアは４５．２％に低下した。また、ＢＡＹ－９８５を単独投与した場合と比較して、ＯＡＲＳＩスコアは６７．９％に低下した。

【0061】

以上の結果は、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、インビボにおいて軟骨変性が相乗的に抑制されたことを示す。

【0062】

［実験例３］
（マウスＯＡモデルの軟骨変性進行に対する、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸による相乗的抑制効果２）
実験例２における３群のマウスＯＡモデルについて、小動物用アルゴメータ（Ｂｉｏｓｅｂ社製、型番「ＢＩＯ－ＳＭＡＬＧＯ＋」）を用いて、膝関節への圧刺激に対する痛み（圧痛）の閾値を測定した。具体的には、マウスが足を引っ込めるまでの圧（ｇ）を記録した。ＯＡ誘導手術前及び手術から２週間後に測定を行った。図３は、圧痛の閾値の測定結果を示すグラフである。図３中、数値が低いほど疼痛過敏性が低いことを意味する。

【0063】

その結果、ＢＡＹ－９８５の単独投与によって、疼痛が改善したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、疼痛は６３．１％に低下した。

【0064】

また、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、疼痛が更に低下したことが明らかとなった。対照であるヒアルロン酸のみを投与した場合と比較して、疼痛は３８．９％に低下した。また、ＢＡＹ－９８５を単独投与した場合と比較して、疼痛は６１．５％に低下した。

【0065】

以上の結果は、ＢＡＹ－９８５及びヒアルロン酸を混合投与することによって、インビボにおいてＯＡによる疼痛が相乗的に改善されたことを示す。

【0066】

ＢＡＹ－９８５の溶媒をヒアルロン酸にすることにより、関節内投与後のＢＡＹ－９８５の関節内からの吸収を緩徐にすることができることが重要であると推測している。ヒアルロン酸の関節液中半減期は約２０時間であり、投与後約３日間まで関節液中より検出される。ＢＡＹ－９８５は分子量５５４の低分子化合物であり、半減期は０．７９時間である。ＢＡＹ－９８５とヒアルロン酸を混合することにより、持続する薬効を得ることができ、ＢＡＹ－９８５単独投与よりも効果が得られたものと考えられた。

【0067】

以上の結果から、ＩＫＫε阻害薬及びヒアルロン酸を有効成分とする医薬組成物は、進行する軟骨変性を構造的に抑制できる疾患修飾治療薬として有用であることが明らかとなった。上述したように、現在、進行する軟骨変性を構造的に抑制できる疾患修飾治療薬は存在しない。

【産業上の利用可能性】

【0068】

本発明によれば、変形性関節症の治療技術を提供することができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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