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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024116239
(43)【公開日】2024-08-27
(54)【発明の名称】ホスホ抗原プロドラッグ化合物
(51)【国際特許分類】
C07F 9/44 20060101AFI20240820BHJP
A61K 31/664 20060101ALI20240820BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240820BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240820BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240820BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20240820BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240820BHJP
【ＦＩ】
C07F9/44 CSP
A61K31/664
A61P37/02
A61P35/00
A61P19/10
A61P31/00
A61P43/00 111
【審査請求】有
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024091593
(22)【出願日】2024-06-05
(62)【分割の表示】P 2020573466の分割
【原出願日】2019-07-03
(31)【優先権主張番号】1810965.2
(32)【優先日】2018-07-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(71)【出願人】
【識別番号】501125275
【氏名又は名称】ユニバーシティ カレッジ カーディフ コンサルタンツ リミテッド
(71)【出願人】
【識別番号】520512546
【氏名又は名称】ユニバーシティ・オブ・バーミンガム
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100119253
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 賢教
(74)【代理人】
【識別番号】100124855
【弁理士】
【氏名又は名称】坪倉 道明
(74)【代理人】
【識別番号】100129713
【弁理士】
【氏名又は名称】重森 一輝
(74)【代理人】
【識別番号】100137213
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 健司
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100160255
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 祐輔
(74)【代理人】
【識別番号】100146318
【弁理士】
【氏名又は名称】岩瀬 吉和
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】メヘロー，ユーセフ
(72)【発明者】
【氏名】ウィルコックス，ベンジャミン
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ＨＭＢＰ ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ活性化合物の貧弱な血清安定性に対処しながら、Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の強力な活性化を保持する代替のＰｒｏＰＡｇｅｎｓを提供する。
【解決手段】一般式（Ｉ）の化合物を提供する。この化合物、および当該化合物を含む組成物は、高い血清安定性およびγδＴ細胞免疫応答の強力な活性化を示し、免疫療法における使用に好適である。また、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物を用いる免疫療法の方法も提供する。
【選択図】図１３
【解決手段】一般式（Ｉ）の化合物を提供する。この化合物、および当該化合物を含む組成物は、高い血清安定性およびγδＴ細胞免疫応答の強力な活性化を示し、免疫療法における使用に好適である。また、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物を用いる免疫療法の方法も提供する。
【選択図】図１３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
全ての互変異性体を含む一般式（Ｉ）の化合物またはその塩：
式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、一般式（ＩＩ）のアミノ酸エステル基ま
たは一般式（ＩＩＩ）のアリールオキシ基を表し、
式中、Ｒ６は、Ｈ、または、飽和もしくは不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化
水素鎖を表し；Ｒ７は、飽和または不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化水素鎖を
表し；Ｒ８は、任意に置換されていてもよいＣ5-25アリールまたは５～２５員のヘテロア
リール基を表し；
Ｒ３は、任意に置換されていてもよいＣ2-20 アルキル基、Ｃ4-20アルケニル基または
Ｃ2-20アルコール基を表し；Ｒ４およびＲ５の各々は、独立してＨまたはハロを表す。
式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、一般式（ＩＩ）のアミノ酸エステル基ま
たは一般式（ＩＩＩ）のアリールオキシ基を表し、
式中、Ｒ６は、Ｈ、または、飽和もしくは不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化
水素鎖を表し；Ｒ７は、飽和または不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化水素鎖を
表し；Ｒ８は、任意に置換されていてもよいＣ5-25アリールまたは５～２５員のヘテロア
リール基を表し；
Ｒ３は、任意に置換されていてもよいＣ2-20 アルキル基、Ｃ4-20アルケニル基または
Ｃ2-20アルコール基を表し；Ｒ４およびＲ５の各々は、独立してＨまたはハロを表す。
【請求項2】
前記化合物が一般式（ＩＶ）で表され、
式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は請求項１に定義されるとおりである
、請求項１に記載の化合物。
式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は請求項１に定義されるとおりである
、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｒ３が、式（Ｖ）、式（ＶＩ）または式（ＶＩＩ）の基であり、
式中、Ｒ９は、ＯＨ、ＯＲ10、ＳＨ、ＳＲ10、ＮＨ2またはＮＨＲ10から選択され；Ｒ1
0は、Ｃ1-4 アルキルを表す、請求項１または２に記載の化合物。
式中、Ｒ９は、ＯＨ、ＯＲ10、ＳＨ、ＳＲ10、ＮＨ2またはＮＨＲ10から選択され；Ｒ1
0は、Ｃ1-4 アルキルを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｒ９がＯＨである、請求項３に記載の化合物。
【請求項5】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方、好ましくは両方がハロを表す、請求項１～４のいず
れか１に記載の化合物。
れか１に記載の化合物。
【請求項6】
前記ハロ置換基がフルオロ基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項7】
Ｒ６がＣ1-4アルキル鎖である、請求項１～６のいずれか１に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒ７が非置換Ｃ1-4アルキル鎖または非置換ベンジル基である、請求項１～７のいずれ
か１に記載の化合物。
か１に記載の化合物。
【請求項9】
以下の群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか１に記載の化合物と、薬学的に許容される賦形剤または担体と
を含む、医薬組成物。
を含む、医薬組成物。
【請求項11】
免疫療法に使用するための、請求項１～９のいずれか１に記載の化合物、または請求項
１０に記載の医薬組成物。
１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
感染症、増殖性疾患または骨粗鬆症の治療に使用するための、請求項１１に記載の化合
物または医薬組成物。
物または医薬組成物。
【請求項13】
前記増殖性疾患が癌である、請求項１２に記載の使用のための化合物または医薬組成物
。
。
【請求項14】
γδＴ細胞免疫反応を活性化するために、請求項１～９のいずれか１に記載の化合物ま
たは請求項１０に記載の医薬組成物の有効量を患者に投与することを含む、免疫療法の方
法。
たは請求項１０に記載の医薬組成物の有効量を患者に投与することを含む、免疫療法の方
法。
【請求項15】
治療を必要とする個体から取得したサンプルに前記化合物または組成物を生体外（ｅｘ
ｖｉｖｏ）で投与し、当該サンプルが体内に戻される前にγδＴ細胞の増殖を誘導する
、請求項１４に記載の方法。
ｖｉｖｏ）で投与し、当該サンプルが体内に戻される前にγδＴ細胞の増殖を誘導する
、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
感染症、増殖性疾患または骨粗鬆症を治療するための、請求項１４または１５に記載の
方法。
方法。
【請求項17】
前記増殖性疾患が癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
患者においてγδＴ細胞免疫反応を活性化する薬剤の調製における、請求項１～９のい
ずれか１に記載の化合物または請求項１０に記載の医薬組成物の使用。
ずれか１に記載の化合物または請求項１０に記載の医薬組成物の使用。
【請求項19】
患者における感染、増殖性疾患または骨粗鬆症の治療のための薬剤の調製における、請
求項１８に記載の使用。
求項１８に記載の使用。
【請求項20】
前記増殖性疾患が癌である、請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、高い血清安定性およびγδＴ細胞免疫応答の強力な活性化を示すホスホアン
チゲン（ＰＡｇ）プロドラッグ化合物および医薬組成物に関する。化合物および組成物は
、免疫療法、特に感染症、癌、骨粗鬆症および他の増殖性疾患の治療に使用するためのも
のである。また、γδＴ細胞免疫反応を活性化するために、本発明の化合物または組成物
を使用することを含む免疫療法も提供される。
チゲン（ＰＡｇ）プロドラッグ化合物および医薬組成物に関する。化合物および組成物は
、免疫療法、特に感染症、癌、骨粗鬆症および他の増殖性疾患の治療に使用するためのも
のである。また、γδＴ細胞免疫反応を活性化するために、本発明の化合物または組成物
を使用することを含む免疫療法も提供される。
【背景技術】
【0002】
現在、成人末梢血におけるヒトγδＴ細胞の出生から優勢なサブタイプまで、Ｖγ９／
Ｖδ２Ｔ細胞は現在、結核、らい、腸チフス、マラリア、およびトキソプラズマ（非特許
文献１）などの多くの疾患との闘いに関与するγδＴ細胞の重要なサブセットとして確立
されている。霊長類モデルにおける研究はまた、Mycobacterium tuberculosis（非特許文
献２）に対する免疫におけるＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞に関与している。これらの細胞はまた
、インビトロで多様なガン細胞を標的化し、溶解することができることを示している（非
特許文献１）。合わせて、これらの観察は、Ｖγ９／Ｖδ２サブセットを、γδＴ細胞の
治療的利用において主要な焦点とした（非特許文献３）。
Ｖδ２Ｔ細胞は現在、結核、らい、腸チフス、マラリア、およびトキソプラズマ（非特許
文献１）などの多くの疾患との闘いに関与するγδＴ細胞の重要なサブセットとして確立
されている。霊長類モデルにおける研究はまた、Mycobacterium tuberculosis（非特許文
献２）に対する免疫におけるＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞に関与している。これらの細胞はまた
、インビトロで多様なガン細胞を標的化し、溶解することができることを示している（非
特許文献１）。合わせて、これらの観察は、Ｖγ９／Ｖδ２サブセットを、γδＴ細胞の
治療的利用において主要な焦点とした（非特許文献３）。
【0003】
現在までに、Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の多数の小分子アクチベーターが報告されている。
これらの中には、天然に存在するＰＡｇ（Ｅ）－４－ヒドロキシ－３－メチルブト－２－
エニルピロリン酸（ＨＭＢＰＰ）およびイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）、ならびに
２つの合成分子、リセドロネートおよびゾレドロネート（図１）があり、これらは現在、
骨粗鬆症およびいくつかの型の癌（非特許文献４～６）を処置するために臨床において使
用されている。
これらの中には、天然に存在するＰＡｇ（Ｅ）－４－ヒドロキシ－３－メチルブト－２－
エニルピロリン酸（ＨＭＢＰＰ）およびイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）、ならびに
２つの合成分子、リセドロネートおよびゾレドロネート（図１）があり、これらは現在、
骨粗鬆症およびいくつかの型の癌（非特許文献４～６）を処置するために臨床において使
用されている。
【0004】
今日までに報告された最も強力なＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化因子はＨＭＢＰＰ、ＥＣ
50 ＝ ０．０００５１μＭであり、これは、１型膜貫通蛋白質ブチロフィリン３Ａ１を結
合することによってこれらのＴ細胞を活性化する。これらのＰＡｇの結合部位はこの膜貫
通タンパク質の細胞外ドメインまたは細胞内ドメインと結合するかどうかに関して相反す
る報告がある中で不明のままであったが、現在ではＨＭＢＰＰがブチロフィリン３Ａ１の
細胞内Ｂ３０．２ドメインと結合するという概念を支持する説得力のある証拠がある。
50 ＝ ０．０００５１μＭであり、これは、１型膜貫通蛋白質ブチロフィリン３Ａ１を結
合することによってこれらのＴ細胞を活性化する。これらのＰＡｇの結合部位はこの膜貫
通タンパク質の細胞外ドメインまたは細胞内ドメインと結合するかどうかに関して相反す
る報告がある中で不明のままであったが、現在ではＨＭＢＰＰがブチロフィリン３Ａ１の
細胞内Ｂ３０．２ドメインと結合するという概念を支持する説得力のある証拠がある。
【0005】
Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の活性化におけるＨＭＢＰＰの効力によって促進されて、アリー
ルオキシトリエステルホスホラミデートプロドラッグテクノロジーは、近年、その薬物様
特性を改善するための手段として、ＨＭＢＰＰのモノホスフェート誘導体、すなわちＨＭ
ＢＰに適用された（非特許文献６）。このプロドラッグアプローチでは、モノホスフェー
ト基はアリール基および／またはアミノ酸エステルによってマスクされ（図２）、これら
は両方とも細胞内で酵素的に切断されてモノホスフェートまたはモノホスホネート種を放
出する。そのような化合物はＰＡｇのプロドラッグであるので、それらは、ヌクレオチド
のプロドラッグであるＰｒｏＴｉｄｅｓからそれらを区別するためにＰｒｏＰＡｇｅｎｓ
と呼ばれる。
ルオキシトリエステルホスホラミデートプロドラッグテクノロジーは、近年、その薬物様
特性を改善するための手段として、ＨＭＢＰＰのモノホスフェート誘導体、すなわちＨＭ
ＢＰに適用された（非特許文献６）。このプロドラッグアプローチでは、モノホスフェー
ト基はアリール基および／またはアミノ酸エステルによってマスクされ（図２）、これら
は両方とも細胞内で酵素的に切断されてモノホスフェートまたはモノホスホネート種を放
出する。そのような化合物はＰＡｇのプロドラッグであるので、それらは、ヌクレオチド
のプロドラッグであるＰｒｏＴｉｄｅｓからそれらを区別するためにＰｒｏＰＡｇｅｎｓ
と呼ばれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Morita, C. T.; Jin, C.; Sarikonda, G.; Wang, H. Nonpeptide antigens, presentation mechanisms, and immunological memory of human Vgamma2Vdelta2 T cells: discriminating friend from foe through the recognition of prenyl pyrophosphate antigens. Immunol Rev 2007, 215, 59-76.
【非特許文献2】Shen, Y.; Zhou, D.; Qiu, L.; Lai, X.; Simon, M.; Shen, L.; Kou, Z.; Wang, Q.; Jiang, L.; Estep, J.; Hunt, R.; Clagett, M.; Sehgal, P. K.; Li, Y.; Zeng, X.; Morita, C. T.; Brenner, M. B.; Letvin, N. L.; Chen, Z. W. Adaptive immune response of Vgamma2Vdelta2+ T cells during mycobacterial infections. Science (New York, N.Y.) 2002, 295, 2255-8.
【非特許文献3】Fisher, J. P.; Heuijerjans, J.; Yan, M.; Gustafsson, K.; Anderson, J. gammadelta T cells for cancer immunotherapy: A systematic review of clinical trials. Oncoimmunology 2014, 3, e27572
【非特許文献4】Maraka, S.; Kennel, K. A. Bisphosphonates for the prevention and treatment of osteoporosis. BMJ (Clinical research ed.) 2015, 351, h3783.
【非特許文献5】Roelofs, A. J.; Jauhiainen, M.; Monkkonen, H.; Rogers, M. J.; Monkkonen, J.; Thompson, K. Peripheral blood monocytes are responsible for gammadelta T cell activation induced by zoledronic acid through accumulation of IPP/DMAPP. British journal of haematology 2009, 144, 245-50.
【非特許文献6】Davey, M. S.; Malde, R.; Mykura, R. C.; Baker, A. T.; Taher, T. E.; Le Duff, C. S.; Willcox, B. E.; Mehellou, Y. Synthesis and Biological Evaluation of ( E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl Phosphate (HMBP) Aryloxy Triester Phosphoramidate Prodrugs as Activators of Vgamma9/Vdelta2 T-Cell Immune Responses. J Med Chem 2018, 61, 2111-2117.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
これらのHMBP ProPAgensはＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞（ＥＣ50 ＝ ０．４５～１１ ｎＭ）
の強力な活性化を示したが、主にこれらの活性化合物の‐Ｐ‐Ｏ結合の切断のために、そ
れらの血清安定性はかなり低かった（非特許文献６）。従って、本発明の目的は以前に報
告されたHMBP ProPAgens活性化合物の貧弱な血清安定性に対処しながら、Ｖγ９／Ｖδ２
Ｔ細胞の強力な活性化を保持する代替のＰｒｏＰＡｇｅｎｓを設計することである。
の強力な活性化を示したが、主にこれらの活性化合物の‐Ｐ‐Ｏ結合の切断のために、そ
れらの血清安定性はかなり低かった（非特許文献６）。従って、本発明の目的は以前に報
告されたHMBP ProPAgens活性化合物の貧弱な血清安定性に対処しながら、Ｖγ９／Ｖδ２
Ｔ細胞の強力な活性化を保持する代替のＰｒｏＰＡｇｅｎｓを設計することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明の第１の態様によれば、その全ての互変異性体を含む一般式（Ｉ）の化合物または
その塩が提供される。
その塩が提供される。
【0009】
式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、一般式（ＩＩ）のアミノ酸エステル基ま
たは一般式（ＩＩＩ）のアリールオキシ基を表し、
式中、Ｒ６は、Ｈ、または、飽和もしくは不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化
水素鎖を表し；Ｒ７は、飽和または不飽和の、任意に置換されていてもよい炭化水素鎖を
表し；Ｒ８は、任意に置換されていてもよいＣ5-25アリールまたは５～２５員のヘテロア
リール基を表し；
Ｒ３は、任意に置換されていてもよいＣ2-20 アルキル基、Ｃ4-20アルケニル基または
Ｃ2-20アルコール基を表し；Ｒ４およびＲ５の各々は、独立してＨまたはハロゲン原子を
表す。
【0010】
上述した従来のリン酸基含有プロＰＡｇｅｎとは対照的に、一般式（Ｉ）の化合物はア
リール基および／またはアミノ酸エステル基によってマスクされるホスホネート基を含み
、これは、活性ホスホネート化合物を放出するために細胞内部で酵素的に切断される。不
安定な－Ｏ－Ｐ結合を－Ｃ－Ｃ結合で置換すると、活性ホスホネート化合物の安定性が有
意に改善されることが示されており、これはＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞の強力な活性化因子
であることが示された。さらに、この活性はin vitroで膀胱癌細胞の強力な溶解に翻訳さ
れた。
一般式（Ｉ）の化合物は高い特異性でＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を活性化することが示され
ているので、それらは免疫療法剤としての開発のための理想的な候補である。特に、一般
式（Ｉ）の化合物は、感染症、癌などの増殖性疾患、および／または骨粗鬆症の治療に有
用である。
リール基および／またはアミノ酸エステル基によってマスクされるホスホネート基を含み
、これは、活性ホスホネート化合物を放出するために細胞内部で酵素的に切断される。不
安定な－Ｏ－Ｐ結合を－Ｃ－Ｃ結合で置換すると、活性ホスホネート化合物の安定性が有
意に改善されることが示されており、これはＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞の強力な活性化因子
であることが示された。さらに、この活性はin vitroで膀胱癌細胞の強力な溶解に翻訳さ
れた。
一般式（Ｉ）の化合物は高い特異性でＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を活性化することが示され
ているので、それらは免疫療法剤としての開発のための理想的な候補である。特に、一般
式（Ｉ）の化合物は、感染症、癌などの増殖性疾患、および／または骨粗鬆症の治療に有
用である。
【0011】
Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化免疫療法による治療に適した感染症には、細菌、ウイルス
および真菌感染がある。特に適切な感染は、細菌感染、特にＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
属および／またはSalmonella enterica種の細菌感染である。したがって、一般式（Ｉ）
の化合物は、結核、ハンセン病および腸チフスの１つ以上の治療に特に有用である。
および真菌感染がある。特に適切な感染は、細菌感染、特にＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
属および／またはSalmonella enterica種の細菌感染である。したがって、一般式（Ｉ）
の化合物は、結核、ハンセン病および腸チフスの１つ以上の治療に特に有用である。
【0012】
あるいは、感染は寄生虫感染である可能性がある。特に好適な寄生虫感染は、Ｐｌａｓ
ｍｏｄｉｕｍ属および／またはＴｏｘｏｐｌａｓｍａ属のものである。したがって、一般
式（Ｉ）の化合物は、マラリアおよびトキソプラズマ症の一方または両方の治療に特に有
用である。
ｍｏｄｉｕｍ属および／またはＴｏｘｏｐｌａｓｍａ属のものである。したがって、一般
式（Ｉ）の化合物は、マラリアおよびトキソプラズマ症の一方または両方の治療に特に有
用である。
【0013】
一般式（Ｉ）の化合物は、癌、特に膀胱癌、前立腺癌、肺癌、頸癌、皮膚癌および乳癌
ならびに中皮腫の治療に特に有用である。
ならびに中皮腫の治療に特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図7】図７は、ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄおよび９ｄによるヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性化。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄ（左）および９ｄ（右）と共に１８時間インキュベートした結果である。
【図8】図８は、ヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞がＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄによって用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデータである。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄと共に１８時間（図８Ａ）または２０時間（図８Ｂおよび８Ｃ）インキュベートした結果。
【図9】図９は、ヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞がＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ｄによって用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデータ。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ｄと共に１８時間（図９Ａ）または２０時間（図９Ｂおよび９Ｃ）インキュベートした結果。
【図10】図１０は、ＨＭＢＰＰによるヒトＶγ９／Ｖδ２+Ｔ細胞の活性化を用量依存的に示した。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＨＭＢＰＰと共に２０時間インキュベートした結果である。データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１０Ａに示すドナー（１）の結果、図１０Ｂに示すドナー（２）の結果。
【図11】図１１は、ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄによるヒトＣＤ８+ T細胞の活性化の欠如を示すＦＡＣＳデータである。データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１１Ａに示すドナー（１）の結果、図１１Ｂに示すドナー（２）の結果。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本明細書で使用される「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード
、より適切には、フルオロまたはクロロ、および、最も適切には、フルオロを意味する。
、より適切には、フルオロまたはクロロ、および、最も適切には、フルオロを意味する。
【0016】
本明細書で使用される「Ｃ2-20 アルキル」という語は、２～２０個の炭素原子を含む
直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素鎖を指す。例としては、エチル、ｎ－プロピル、イソプ
ロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルおよびｎ－
デシルが挙げられる。
直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素鎖を指す。例としては、エチル、ｎ－プロピル、イソプ
ロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルおよびｎ－
デシルが挙げられる。
【0017】
本明細書で使用される「Ｃ4-20アルケニル」という語は、４～２０個の炭素原子を含む
直鎖または分枝鎖不飽和炭化水素鎖を指す。例としては、ブテニル、ペンテニルなどが挙
げられる。
直鎖または分枝鎖不飽和炭化水素鎖を指す。例としては、ブテニル、ペンテニルなどが挙
げられる。
【0018】
本明細書で使用される「Ｃ2-20アルコール」という語は２～２０個の炭素原子を含み、
１つ以上の水酸基（ＯＨ）官能基を含む、直鎖または分枝鎖および飽和または不飽和炭化
水素鎖を指す。
１つ以上の水酸基（ＯＨ）官能基を含む、直鎖または分枝鎖および飽和または不飽和炭化
水素鎖を指す。
【0019】
本明細書で使用される「飽和または不飽和炭化水素鎖」という用語は、前記鎖内に１つ
以上の二重結合または三重結合を含んでも含まなくてもよい脂肪族または芳香族炭化水素
基を指す。したがって、この用語は、アルキル、アルケニルアルキニルまたはアリール基
をカプセル化する。
以上の二重結合または三重結合を含んでも含まなくてもよい脂肪族または芳香族炭化水素
基を指す。したがって、この用語は、アルキル、アルケニルアルキニルまたはアリール基
をカプセル化する。
【0020】
本明細書で使用される「Ｃ5-25アリール」という語は５～２５個の炭素原子を含み、１
つ以上の炭素環式芳香族環を含む任意の炭化水素基を指す。より適切には、アリール基は
Ｃ6-14であり、好ましくはＣ6-10アリール基である。
つ以上の炭素環式芳香族環を含む任意の炭化水素基を指す。より適切には、アリール基は
Ｃ6-14であり、好ましくはＣ6-10アリール基である。
【0021】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は前記環の一部として１つ以上の
ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含む１つ以上の芳香族環を含む任意の炭化水素
基を指す。ヘテロアリール基の特に適切な例は、ピリジン、フラン、チオフェンおよびイ
ンドール基である。５～２５員ヘテロアリール基とは、環形成原子（炭素およびヘテロ原
子）の総数が５～２５である基をいう。
ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含む１つ以上の芳香族環を含む任意の炭化水素
基を指す。ヘテロアリール基の特に適切な例は、ピリジン、フラン、チオフェンおよびイ
ンドール基である。５～２５員ヘテロアリール基とは、環形成原子（炭素およびヘテロ原
子）の総数が５～２５である基をいう。
【0022】
他のアルキル基、アルケニル基、アリール基および／またはアルコール基は定義される
通りであるが、異なる数の炭素原子を有する。例えば、Ｃ1-4アルキルは、１～４個の炭
素原子を有する。
通りであるが、異なる数の炭素原子を有する。例えば、Ｃ1-4アルキルは、１～４個の炭
素原子を有する。
【0023】
炭化水素鎖および／またはアリール、ヘテロアリール、アルキル、アルケニルまたはア
ルコール基は、任意に、１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはＮ）含有官能基
で置換されていてもよい。適切なヘテロ原子含有基の例としてはニトロ、ニトロン、ハロ
、アミノ、アミド、シアノ、カルボキシル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、ケ
トン、アルデヒド、チオール、チオエーテル、および非芳香族複素環基が挙げられるが、
これらに限定されない。炭化水素鎖は飽和または不飽和環状環を含んでいてもよいし、含
んでいなくてもよい。本明細書中で使用される場合、炭化水素鎖、アルキル、アルケニル
、アリールまたはアルコールラジカルの任意の炭素数は、置換基中に存在する任意の炭素
原子を含む。好ましい実施形態では炭化水素鎖および／またはアリール、ヘテロアリール
、アルキル、アルケニルまたはアルコール基はチオール、チオエーテル、アルコキシおよ
びアミノ（第一級または第二級アミノ基であってもよい）から選択される１つ以上のヘテ
ロ原子含有官能基で任意に置換される。
ルコール基は、任意に、１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはＮ）含有官能基
で置換されていてもよい。適切なヘテロ原子含有基の例としてはニトロ、ニトロン、ハロ
、アミノ、アミド、シアノ、カルボキシル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、ケ
トン、アルデヒド、チオール、チオエーテル、および非芳香族複素環基が挙げられるが、
これらに限定されない。炭化水素鎖は飽和または不飽和環状環を含んでいてもよいし、含
んでいなくてもよい。本明細書中で使用される場合、炭化水素鎖、アルキル、アルケニル
、アリールまたはアルコールラジカルの任意の炭素数は、置換基中に存在する任意の炭素
原子を含む。好ましい実施形態では炭化水素鎖および／またはアリール、ヘテロアリール
、アルキル、アルケニルまたはアルコール基はチオール、チオエーテル、アルコキシおよ
びアミノ（第一級または第二級アミノ基であってもよい）から選択される１つ以上のヘテ
ロ原子含有官能基で任意に置換される。
【0024】
一般式（Ｉ）の化合物の塩は、適切には薬学的または獣医学的に許容される塩である。
Ｒ1～Ｒ8の種類に応じて、これらは、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミ
ニウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩および他の金属塩、ならびにコリン塩、ジエタノール
アミン塩、エタノールアミン塩、エチルジアミン塩、メグルミン塩、およびＰａｕｌｅｋ
ｕｈｎら（２００７)Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５０： ６６６５－６６７２に要約されてい
るような他の周知の塩基性付加塩および／または当業者に公知である塩基性付加塩であっ
てもよい。あるいは、一般式（Ｉ）の化合物がアミノ基を含む場合、これを４級化してハ
ロゲン化物、水酸化物、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸
塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、マンデル酸塩、メタ
ンスルホン酸塩およびｐ－トルエンスルホン酸塩などの対イオンを有する塩を形成するこ
とができる。
Ｒ1～Ｒ8の種類に応じて、これらは、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミ
ニウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩および他の金属塩、ならびにコリン塩、ジエタノール
アミン塩、エタノールアミン塩、エチルジアミン塩、メグルミン塩、およびＰａｕｌｅｋ
ｕｈｎら（２００７)Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５０： ６６６５－６６７２に要約されてい
るような他の周知の塩基性付加塩および／または当業者に公知である塩基性付加塩であっ
てもよい。あるいは、一般式（Ｉ）の化合物がアミノ基を含む場合、これを４級化してハ
ロゲン化物、水酸化物、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸
塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、マンデル酸塩、メタ
ンスルホン酸塩およびｐ－トルエンスルホン酸塩などの対イオンを有する塩を形成するこ
とができる。
【0025】
一般式（Ｉ）による化合物の好ましいサブセットにおいて、ホスホネート基は、アミノ
酸エステルおよびアリール基によってマスクされる。このような化合物は一般式（ＩＶ）
のものであり、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、上記で定義した通り
である：
一般式（Ｉ）または一般式（ＩＶ）のいくつかの化合物において、Ｒ３は、Ｃ4-16であ
り、好ましくはＣ4-8、アルキル、アルケニルまたはアルコール基である。より好ましく
は、Ｒ３は上記定義のアルコール基である。
酸エステルおよびアリール基によってマスクされる。このような化合物は一般式（ＩＶ）
のものであり、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、上記で定義した通り
である：
一般式（Ｉ）または一般式（ＩＶ）のいくつかの化合物において、Ｒ３は、Ｃ4-16であ
り、好ましくはＣ4-8、アルキル、アルケニルまたはアルコール基である。より好ましく
は、Ｒ３は上記定義のアルコール基である。
【0026】
特に好ましい化合物において、Ｒ３は、式（Ｖ）、式（ＶＩ）または式（ＶＩＩ）によ
る基であり、式中、Ｒ９はＯＨ、ＯＲ10、ＳＨ、ＳＲ10、ＮＨ2またはＮＨＲ10から選択
され、好ましくはＯＨであり、Ｒ10は、Ｃ1-4 アルキルを表す：
これらのＲ３置換基は、天然に存在するPAgsIPP(式（Ｖ））、ＨＭＢＰＰ(式（ＶＩ）
）およびＩＰＰ異性体ジメチルアリルジホスフェートＤＭＡＰＰ（式（ＶＩＩ）に見出さ
れるものに類似している。
る基であり、式中、Ｒ９はＯＨ、ＯＲ10、ＳＨ、ＳＲ10、ＮＨ2またはＮＨＲ10から選択
され、好ましくはＯＨであり、Ｒ10は、Ｃ1-4 アルキルを表す：
これらのＲ３置換基は、天然に存在するPAgsIPP(式（Ｖ））、ＨＭＢＰＰ(式（ＶＩ）
）およびＩＰＰ異性体ジメチルアリルジホスフェートＤＭＡＰＰ（式（ＶＩＩ）に見出さ
れるものに類似している。
【0027】
特に好ましい態様において、Ｒ３は、式（ＶＩ）の基である。
【0028】
上記のように、一般式（Ｉ）または一般式（ＩＶ）の化合物は、－Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）
－Ｐｂｏｎｄを含むマスクされたホスホネート基を含み、これは、従来のＰｒｏＰＡｇｅ
ｎｓの－Ｏ－Ｐｂｏｎｄよりも安定であることが示されている。好ましい実施形態では、
Ｒ３およびＲ５の少なくとも１つ、より好ましくは両方がハロを表す。
－Ｐｂｏｎｄを含むマスクされたホスホネート基を含み、これは、従来のＰｒｏＰＡｇｅ
ｎｓの－Ｏ－Ｐｂｏｎｄよりも安定であることが示されている。好ましい実施形態では、
Ｒ３およびＲ５の少なくとも１つ、より好ましくは両方がハロを表す。
【0029】
-O-P結合から－ＣＨ2 －Ｐ結合への変化により、活性物質の安定性が向上することが示
されているが、ホスホネート基の２回目の脱プロトネーション（pKa＝７．４９）のpKa値
はリン酸基のもの（pKa＝６．３１）と大きく異なっている（図３）。この結果、生理的
ｐＨ(＜７．４）下での活性化合物の完全なイオン化、したがって標的タンパク質に対す
る結合親和性に影響を及ぼし、これは、ブチロフィリン３Ａ１細胞内ドメイン上の正に荷
電したポケット（アルギニンリッチ）に結合するためにリン酸基の完全なイオン化を必要
とする。
されているが、ホスホネート基の２回目の脱プロトネーション（pKa＝７．４９）のpKa値
はリン酸基のもの（pKa＝６．３１）と大きく異なっている（図３）。この結果、生理的
ｐＨ(＜７．４）下での活性化合物の完全なイオン化、したがって標的タンパク質に対す
る結合親和性に影響を及ぼし、これは、ブチロフィリン３Ａ１細胞内ドメイン上の正に荷
電したポケット（アルギニンリッチ）に結合するためにリン酸基の完全なイオン化を必要
とする。
【0030】
しかしながら、ジフルオロメチルホスホネート（－ＣＦ2－Ｐ－）結合を提供すること
により、活性化合物は、生理学的環境での優れた安定性と、天然のリン酸化合物自身の２
回目の脱プロトン化に非常に近い２回目の脱プロトン化のpKa（６．７）とを結合させる
ことが分かった（図３）。したがって、一般式（Ｉ）または（ＩＶ）の化合物のモノおよ
び／またはジハロメチルホスホネート誘導体は、優れた安定性をＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の
強力な活性化と組み合わせる。
により、活性化合物は、生理学的環境での優れた安定性と、天然のリン酸化合物自身の２
回目の脱プロトン化に非常に近い２回目の脱プロトン化のpKa（６．７）とを結合させる
ことが分かった（図３）。したがって、一般式（Ｉ）または（ＩＶ）の化合物のモノおよ
び／またはジハロメチルホスホネート誘導体は、優れた安定性をＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の
強力な活性化と組み合わせる。
【0031】
一般式（Ｉ）または（ＩＶ）の化合物は、モノホスホネート基がアリール基および／ま
たはアミノ酸エステルによってマスクされているプロドラッグであり、これらは両方とも
細胞内で酵素的に切断されて活性モノホスホネート種を放出する。
たはアミノ酸エステルによってマスクされているプロドラッグであり、これらは両方とも
細胞内で酵素的に切断されて活性モノホスホネート種を放出する。
【0032】
適切なアミノ酸エステルマスキング基には、多種多様なアミノ酸側鎖（Ｒ６）基が含ま
れる。典型的には、Ｒ６は、タンパク質産生アミノ酸の側鎖、好ましくは非極性側鎖であ
る。特に好ましいＲ６基は、Ｃ1-4アルキル鎖を含む。このようなＲ６群の事例としては
、－ＣＨ3 （アラニン）、－ＣＨ（ＣＨ3）2（バリン）、－ＣＨ2 ＣＨ（ＣＨ3）2（ロイ
シン）、－ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2 ＣＨ3（アイソルーチン）および－ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ3
（メソニン）がある。Ｒ６がメチル（ＣＨ3）を表す化合物が特に好適である。
れる。典型的には、Ｒ６は、タンパク質産生アミノ酸の側鎖、好ましくは非極性側鎖であ
る。特に好ましいＲ６基は、Ｃ1-4アルキル鎖を含む。このようなＲ６群の事例としては
、－ＣＨ3 （アラニン）、－ＣＨ（ＣＨ3）2（バリン）、－ＣＨ2 ＣＨ（ＣＨ3）2（ロイ
シン）、－ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2 ＣＨ3（アイソルーチン）および－ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ3
（メソニン）がある。Ｒ６がメチル（ＣＨ3）を表す化合物が特に好適である。
【0033】
Ｒ７は、飽和または不飽和であり、任意に置換されていてもよい炭化水素鎖であり、脂
肪族または芳香族であってもよい。好ましくは、Ｒ７は、Ｃ1-6のアルキルまたはＣ6-14
のアリールグループである。特に好ましい実施形態では、Ｒ７は、Ｃ6-10アリール基であ
り、最も好ましくはベンジル基である。ベンジルエステルを含む一般式（Ｉ）または（Ｉ
Ｖ）の化合物は、脂肪族エステル系化合物と比較して、より高い分解速度および改善され
た親油性（したがって、改善された細胞取り込み）を有する。
肪族または芳香族であってもよい。好ましくは、Ｒ７は、Ｃ1-6のアルキルまたはＣ6-14
のアリールグループである。特に好ましい実施形態では、Ｒ７は、Ｃ6-10アリール基であ
り、最も好ましくはベンジル基である。ベンジルエステルを含む一般式（Ｉ）または（Ｉ
Ｖ）の化合物は、脂肪族エステル系化合物と比較して、より高い分解速度および改善され
た親油性（したがって、改善された細胞取り込み）を有する。
【0034】
特に好適な一般式（ＩＶ）の化合物には、以下の化合物が含まれる：
本発明の第１の態様の化合物は一般に、医薬組成物の一部として投与されることが理解
されるのであろう。したがって、本発明の第２の態様によれば、本発明の第１の態様の化
合物および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む医薬が提供される。
本発明の第１の態様の化合物は一般に、医薬組成物の一部として投与されることが理解
されるのであろう。したがって、本発明の第２の態様によれば、本発明の第１の態様の化
合物および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む医薬が提供される。
【0035】
適切な医薬賦形剤は、当業者に周知である。医薬組成物は任意の適切な経路、例えば、
経口、直腸、経鼻、気管支（吸入）、局所（点眼剤、口腔および舌下を含む）、膣または
非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与によって投与するために製剤化す
ることができ、薬学分野で周知の任意の方法によって調製することができる。
経口、直腸、経鼻、気管支（吸入）、局所（点眼剤、口腔および舌下を含む）、膣または
非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与によって投与するために製剤化す
ることができ、薬学分野で周知の任意の方法によって調製することができる。
【0036】
組成物は、本発明の第１の態様の化合物を担体と混合させることによって調製すること
ができる。一般に、製剤は、前記化合物を液体担体または微細に分割された固体担体また
はその両方と均一かつ緊密に会合させ、次いで必要に応じて生成物を成形することによっ
て調製される。
ができる。一般に、製剤は、前記化合物を液体担体または微細に分割された固体担体また
はその両方と均一かつ緊密に会合させ、次いで必要に応じて生成物を成形することによっ
て調製される。
【0037】
本発明における経口投与のための製剤は、それぞれ所定量の化合物を含有するカプセル
、小袋または錠剤などの別個の単位として；粉末または顆粒として；水性液体または非水
性液体中の化合物の溶液または懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンまたは油
中水型液体エマルジョンとして；またはボーラスなどとして提供され得る。
、小袋または錠剤などの別個の単位として；粉末または顆粒として；水性液体または非水
性液体中の化合物の溶液または懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンまたは油
中水型液体エマルジョンとして；またはボーラスなどとして提供され得る。
【0038】
経口投与用の組成物（例えば、錠剤およびカプセル剤）については、用語「許容される
担体」は一般的な賦形剤などのビヒクルを含み、例えば、結合剤、例えば、シロップ、ア
カシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、
メチルセルロース、エチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロース、スクロースおよびデンプン；充填剤および担体、例えば
、トウモロコシデンプン、ゼラチン、ラクトース、スクロース、微結晶セルロース、カオ
リン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸；ならびに
滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムおよび他の金属ス
テアリン酸塩、グリセロールステアリン酸、ステアリン酸、シリコーン流体、タルクワッ
クス、油およびコロイダルシリカを含む。ペパーミント、ウィンターグリーン油、チェリ
ーフレーバーなどのフレーバー剤を使用することもできる。投薬形態を容易に同定可能に
するために着色剤を添加することが望ましい場合がある。錠剤はまた、当該分野で周知の
方法によってコーティングされ得る。
担体」は一般的な賦形剤などのビヒクルを含み、例えば、結合剤、例えば、シロップ、ア
カシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、
メチルセルロース、エチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロース、スクロースおよびデンプン；充填剤および担体、例えば
、トウモロコシデンプン、ゼラチン、ラクトース、スクロース、微結晶セルロース、カオ
リン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸；ならびに
滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムおよび他の金属ス
テアリン酸塩、グリセロールステアリン酸、ステアリン酸、シリコーン流体、タルクワッ
クス、油およびコロイダルシリカを含む。ペパーミント、ウィンターグリーン油、チェリ
ーフレーバーなどのフレーバー剤を使用することもできる。投薬形態を容易に同定可能に
するために着色剤を添加することが望ましい場合がある。錠剤はまた、当該分野で周知の
方法によってコーティングされ得る。
【0039】
錠剤は任意選択で１つまたは複数の補助成分と共に、圧縮または成形によって作製する
ことができる。圧縮錠剤は、適当な機械で、化合物を粉末または顆粒のような自由流動形
態で、場合により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混
合して圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿
らせた粉末化合物の混合物を適切な機械で成形することによって製造することができる。
錠剤は、必要に応じて、コーティングされ得るか、または刻み目が付けられ得、そして活
性薬剤の徐放または制御放出を提供するように処方され得る。
ことができる。圧縮錠剤は、適当な機械で、化合物を粉末または顆粒のような自由流動形
態で、場合により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混
合して圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿
らせた粉末化合物の混合物を適切な機械で成形することによって製造することができる。
錠剤は、必要に応じて、コーティングされ得るか、または刻み目が付けられ得、そして活
性薬剤の徐放または制御放出を提供するように処方され得る。
【0040】
経口投与に適した他の製剤には、活性剤を風味付けされた基剤、通常はスクロースおよ
びアカシアまたはトラガント中に含むロゼンジ；活性剤を不活性基剤、例えばゼラチンお
よびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア中に含むパステル；および活性剤を適
当な液状担体中に含むマウスウォッシュが含まれる。
びアカシアまたはトラガント中に含むロゼンジ；活性剤を不活性基剤、例えばゼラチンお
よびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア中に含むパステル；および活性剤を適
当な液状担体中に含むマウスウォッシュが含まれる。
【0041】
経口製剤は、一般に無菌である。
【0042】
皮膚への局所適用のために、組成物は、クリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液な
どに調製され得る。薬物に使用することができるクリームまたは軟膏製剤は例えば、英国
薬局方などの薬学の標準的教科書に記載されているような、当技術分野で周知の従来の製
剤である。
どに調製され得る。薬物に使用することができるクリームまたは軟膏製剤は例えば、英国
薬局方などの薬学の標準的教科書に記載されているような、当技術分野で周知の従来の製
剤である。
【0043】
本発明のこの局面の好ましい実施形態において、組成物は、経口送達のために処方され
る。
る。
【0044】
治療的に有効である本明細書に定義される組成物の正確な量、およびそのような化合物
が最良に投与される経路は、当業者によって容易に決定される。そのような量は、もちろ
ん、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、身体状態、サイズおよび体重を含む個
々の患者のパラメータ、治療の持続時間、同時治療の性質（もしあれば）、特定の投与経
路、および医療従事者の知識および専門知識内の同様の因子に依存する。これらの因子は
当業者に周知であり、日常的な実験のみで対処することができる。一般に、個々の成分ま
たはそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、健全な医学的判断による最高安全用量が
使用されることが好ましい。しかし、患者は医学的理由、心理学的理由、または実質的に
任意の他の理由のために、より低い用量または許容用量を主張し得ることが、当業者によ
って理解される。
が最良に投与される経路は、当業者によって容易に決定される。そのような量は、もちろ
ん、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、身体状態、サイズおよび体重を含む個
々の患者のパラメータ、治療の持続時間、同時治療の性質（もしあれば）、特定の投与経
路、および医療従事者の知識および専門知識内の同様の因子に依存する。これらの因子は
当業者に周知であり、日常的な実験のみで対処することができる。一般に、個々の成分ま
たはそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、健全な医学的判断による最高安全用量が
使用されることが好ましい。しかし、患者は医学的理由、心理学的理由、または実質的に
任意の他の理由のために、より低い用量または許容用量を主張し得ることが、当業者によ
って理解される。
【0045】
患者に投与される本発明の化合物または組成物の用量は、異なるパラメータに従って、
特に使用される投与様式および被験体の状態に従って選択され得る。他の因子には、所望
の治療期間が含まれる。患者における応答が適用される最初の用量で不十分である場合、
より高い用量（または異なる、より局所化された送達経路による、事実上より高い用量）
が患者の寛容が許容する程度まで使用され得る。
特に使用される投与様式および被験体の状態に従って選択され得る。他の因子には、所望
の治療期間が含まれる。患者における応答が適用される最初の用量で不十分である場合、
より高い用量（または異なる、より局所化された送達経路による、事実上より高い用量）
が患者の寛容が許容する程度まで使用され得る。
【0046】
上述のように、本発明の第１の局面の化合物は、Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の高度に安定な
強力なアクチベーターのプロドラッグを表す。したがって、本発明の第３の態様によれば
、免疫療法に使用するための、第１の態様の化合物または第２の態様の医薬組成物が提供
される。特に、すでに上記に示したように、化合物または組成物は感染、増殖性疾患（例
えば、癌および／または骨粗鬆症）の処置における使用のためのものである。
強力なアクチベーターのプロドラッグを表す。したがって、本発明の第３の態様によれば
、免疫療法に使用するための、第１の態様の化合物または第２の態様の医薬組成物が提供
される。特に、すでに上記に示したように、化合物または組成物は感染、増殖性疾患（例
えば、癌および／または骨粗鬆症）の処置における使用のためのものである。
【0047】
第４の態様によれば、本発明は免疫療法の方法に及ぶものであり、この方法はγδＴ細
胞免疫反応を活性化するために、第１の態様による化合物または第２の態様による医薬組
成物の有効量を投与することを含む。
胞免疫反応を活性化するために、第１の態様による化合物または第２の態様による医薬組
成物の有効量を投与することを含む。
【0048】
好ましい方法において、本発明の化合物または医薬組成物は、任意の適切な手段によっ
て、そのような処置を必要とする患者に投与される。理解されるように、このようにして
γδＴ細胞免疫反応の活性化が生体内で起こり、免疫反応をもたらす。
て、そのような処置を必要とする患者に投与される。理解されるように、このようにして
γδＴ細胞免疫反応の活性化が生体内で起こり、免疫反応をもたらす。
【0049】
あるいは、治療を必要とする個体から取得したサンプルに前記化合物または組成物を生
体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で投与し、当該サンプルが体内に戻される前にγδＴ細胞の増殖
を誘導することを含むことができる、ｅｘ ｖｉｖｏ方法が提供される。例えば、前記サ
ンプルは個体由来の血液サンプル由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のサンプルを含み（
これに限定されるものではないが）、ここで、化合物または組成物の投与は前記個体の体
内に戻る前にγδＴ細胞の増殖および活性化がもたらされる。
体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で投与し、当該サンプルが体内に戻される前にγδＴ細胞の増殖
を誘導することを含むことができる、ｅｘ ｖｉｖｏ方法が提供される。例えば、前記サ
ンプルは個体由来の血液サンプル由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のサンプルを含み（
これに限定されるものではないが）、ここで、化合物または組成物の投与は前記個体の体
内に戻る前にγδＴ細胞の増殖および活性化がもたらされる。
【0050】
免疫療法の方法は、感染症、増殖性疾患または骨粗鬆症を治療するために実施され得る
。特に、本方法は癌、特に膀胱癌の治療、および／または以下の感染症：結核、らい、チ
フス、マラリア、およびトキソプラズマ症のいずれかの治療に使用され得る。
。特に、本方法は癌、特に膀胱癌の治療、および／または以下の感染症：結核、らい、チ
フス、マラリア、およびトキソプラズマ症のいずれかの治療に使用され得る。
【0051】
また、被験体における感染、癌もしくは他の増殖性疾患または骨粗鬆症の治療のための
薬剤の調製における、第１の局面に従う化合物または第２の局面に従う医薬組成物の使用
が提供される。
薬剤の調製における、第１の局面に従う化合物または第２の局面に従う医薬組成物の使用
が提供される。
【0052】
本発明のこの局面の好ましい実施形態において、前記患者は哺乳動物である。理想的に
は、前記哺乳動物はヒトである。
は、前記哺乳動物はヒトである。
【0053】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通して、用語「含む」および「含む」、ならび
に用語の変形、例えば「含む」および「含む」は「含むがこれに限定されない」を意味し
、他の部分、添加剤、成分、整数またはステップを排除しない。本明細書の記載および特
許請求の範囲を通して、単数形はその状況が他のことを要求していない限り、複数形を含
む。特に、不定冠詞が使用される場合は本明細書がその状況が他のことを要求していない
限り、単数だけでなく複数も意図していると理解されたい。
に用語の変形、例えば「含む」および「含む」は「含むがこれに限定されない」を意味し
、他の部分、添加剤、成分、整数またはステップを排除しない。本明細書の記載および特
許請求の範囲を通して、単数形はその状況が他のことを要求していない限り、複数形を含
む。特に、不定冠詞が使用される場合は本明細書がその状況が他のことを要求していない
限り、単数だけでなく複数も意図していると理解されたい。
【0054】
本明細書に引用された、任意の特許または特許出願を含む全ての参考文献は、参照によ
り本明細書に組み込まれる。いかなる参考文献も先行技術を構成することは許可されない
。さらに、先行技術のいずれも、当該技術分野における一般的な知識の一部を構成するこ
とを認めるものではない。
り本明細書に組み込まれる。いかなる参考文献も先行技術を構成することは許可されない
。さらに、先行技術のいずれも、当該技術分野における一般的な知識の一部を構成するこ
とを認めるものではない。
【0055】
本発明の各局面の好ましい特徴は、他の局面のいずれかに関連して記載されるとおりで
あり得る。
あり得る。
【0056】
本発明の他の特徴は、以下の実施例から明らかになるであろう。一般的に言えば、本発
明は、本明細書（添付の特許請求の範囲および図面を含む）に開示された特徴の任意の新
規なもの、または任意の新規な組み合わせに及ぶ。したがって、本発明の特定の態様、実
施形態または例に関連して記載される特徴、整数、特性、化合物または化学部分は、本明
細書に記載される任意の他の態様、実施形態または例に適合しない限り適用可能であると
理解されるべきである。
明は、本明細書（添付の特許請求の範囲および図面を含む）に開示された特徴の任意の新
規なもの、または任意の新規な組み合わせに及ぶ。したがって、本発明の特定の態様、実
施形態または例に関連して記載される特徴、整数、特性、化合物または化学部分は、本明
細書に記載される任意の他の態様、実施形態または例に適合しない限り適用可能であると
理解されるべきである。
【0057】
さらに、特に断らない限り、本明細書に開示される任意の特徴は、同じまたは同様の目
的を果たす代替の特徴によって置き換えられてもよい。
的を果たす代替の特徴によって置き換えられてもよい。
【実施例0058】
本発明は、以下の実施例および以下の図面を参照して、あくまで例示として記載される
：
図１：報告されている小分子Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化因子の化学構造：
天然に存在するＰＡｇｓ(Ｅ)‐４‐ヒドロキシ‐３‐メチルブト‐２‐エニルピロリン
酸（ＨＭＢＰＰ）およびイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）；合成分子リセドロネート
およびゾレドロネート。
：
図１：報告されている小分子Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化因子の化学構造：
天然に存在するＰＡｇｓ(Ｅ)‐４‐ヒドロキシ‐３‐メチルブト‐２‐エニルピロリン
酸（ＨＭＢＰＰ）およびイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）；合成分子リセドロネート
およびゾレドロネート。
【0059】
図２：アリールオキシトリエステルホスホラミデートプロドラッグ技術のＨＭＢＰＰ(Ｈ
ＭＢＰ)のモノホスフェート誘導体への適用：
モノホスフェート基はアリール基およびアミノ酸エステルによってマスクされ、これら
は両方とも細胞内で酵素的に切断されて活性モノホスフェート種を放出する。不安定性は
、これらの化合物の－Ｐ－Ｏｂｏｎｄの切断に起因して観察された（陰影）。
図３：リン酸基および異なるホスホン酸基のｐＫＡ値。
ＭＢＰ)のモノホスフェート誘導体への適用：
モノホスフェート基はアリール基およびアミノ酸エステルによってマスクされ、これら
は両方とも細胞内で酵素的に切断されて活性モノホスフェート種を放出する。不安定性は
、これらの化合物の－Ｐ－Ｏｂｏｎｄの切断に起因して観察された（陰影）。
図３：リン酸基および異なるホスホン酸基のｐＫＡ値。
【0060】
図４：（Ａ）ＨＭＢＰメチルホスホネート（４ａ～ｄ）のアリールオキシホスファラミデ
ートプロＰＡｇｅｎ；および(Ｂ)ＨＭＢＰジフルオロメチルホスホネート（９ａ～ｄ）の
合成：
試薬および条件下:(ｉ)ＴＭＳＢｒ、ＤＣＭ、ｒｔ、２時間、次いで（ＣＯＣｌ）2、Ｄ
ＭＦカタログ、ＤＣＭ、ｒｔ、１８時間; ii) ａ．フェノール、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、－７
８℃、３０分間、次いでｒｔ、３時間；ｂ．置換Ｌ－アラニンエステル塩酸塩、Ｅｔ3 Ｎ
、ＤＣＭ、ｒｔ、１２時間、収率：３８～６１％；（ｉｉ）２－メチル－２－プロペノー
ル、１，４－ベンゾキノン、ホベイダ－グラブス触媒２生成、ＤＣＭ、ｒｔ、収率：５７
～６４%;(ｉｖ)ジエチル（ブロモジフルオロメチル）ホスホネート、ＤＭＦ、亜鉛粉末、
ｒｔ、Ｎ2、３時間、次いでＣｕＢｒ、臭化アリル、ｒｔ、４０時間;(ｖ)(ｉ)ＴＭＳＢｒ
、ＤＣＭ、ｒｔ、２時間、次いで（ＣＯＣｌ）2、ＤＭＦネコ、ＤＣＭ、ｒｔ、１８時間;
ii)ａ．フェノール、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、－７８℃、３０分、ｒｔ、３時間；ｂ．置換Ｌ
－アラニンエステル塩酸塩、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、ｒｔ、１２時間収率：２４～４６%;(ｉ
ｉｉ)２－メチル－２－プロペノール、１，４－ベンゾキノン、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕ
ｂｂｓ触媒第２世代、ＤＣＭ、ｒｔ、収率：５８～６９％。
図５：ヒト血清中のＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄの安定性（３７℃、１
２時間）を31 P NMRでモニターした：
プロドラッグ４ｄ（５．０ｍｇ）をＤＭＳＯ－ｄ6（０．１０ｍＬ）およびＤ2 Ｏ（０
．１５ｍＬ）に溶解した。全ての31 P NMRスペクトルを３７℃で記録した。最初に、ＤＭ
ＳＯ－ｄ6（０．１０ｍＬ）およびＤ2 Ｏ（０．１５ｍＬ）中のプロドラッグ４ｄ（５．
０ｍｇ）の31 P NMR走査を記録した（化合物４ｄ単独として図示）。これに続いて、予め
解凍したヒト血清（０．３０ｍＬ）をＮＭＲチューブに添加し、直ちにスペクトルを測定
した。スペクトルは、添加後３０分で、次いで１２時間にわたる均等な時間隔で記録した
。
ートプロＰＡｇｅｎ；および(Ｂ)ＨＭＢＰジフルオロメチルホスホネート（９ａ～ｄ）の
合成：
試薬および条件下:(ｉ)ＴＭＳＢｒ、ＤＣＭ、ｒｔ、２時間、次いで（ＣＯＣｌ）2、Ｄ
ＭＦカタログ、ＤＣＭ、ｒｔ、１８時間; ii) ａ．フェノール、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、－７
８℃、３０分間、次いでｒｔ、３時間；ｂ．置換Ｌ－アラニンエステル塩酸塩、Ｅｔ3 Ｎ
、ＤＣＭ、ｒｔ、１２時間、収率：３８～６１％；（ｉｉ）２－メチル－２－プロペノー
ル、１，４－ベンゾキノン、ホベイダ－グラブス触媒２生成、ＤＣＭ、ｒｔ、収率：５７
～６４%;(ｉｖ)ジエチル（ブロモジフルオロメチル）ホスホネート、ＤＭＦ、亜鉛粉末、
ｒｔ、Ｎ2、３時間、次いでＣｕＢｒ、臭化アリル、ｒｔ、４０時間;(ｖ)(ｉ)ＴＭＳＢｒ
、ＤＣＭ、ｒｔ、２時間、次いで（ＣＯＣｌ）2、ＤＭＦネコ、ＤＣＭ、ｒｔ、１８時間;
ii)ａ．フェノール、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、－７８℃、３０分、ｒｔ、３時間；ｂ．置換Ｌ
－アラニンエステル塩酸塩、Ｅｔ3 Ｎ、ＤＣＭ、ｒｔ、１２時間収率：２４～４６%;(ｉ
ｉｉ)２－メチル－２－プロペノール、１，４－ベンゾキノン、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕ
ｂｂｓ触媒第２世代、ＤＣＭ、ｒｔ、収率：５８～６９％。
図５：ヒト血清中のＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄの安定性（３７℃、１
２時間）を31 P NMRでモニターした：
プロドラッグ４ｄ（５．０ｍｇ）をＤＭＳＯ－ｄ6（０．１０ｍＬ）およびＤ2 Ｏ（０
．１５ｍＬ）に溶解した。全ての31 P NMRスペクトルを３７℃で記録した。最初に、ＤＭ
ＳＯ－ｄ6（０．１０ｍＬ）およびＤ2 Ｏ（０．１５ｍＬ）中のプロドラッグ４ｄ（５．
０ｍｇ）の31 P NMR走査を記録した（化合物４ｄ単独として図示）。これに続いて、予め
解凍したヒト血清（０．３０ｍＬ）をＮＭＲチューブに添加し、直ちにスペクトルを測定
した。スペクトルは、添加後３０分で、次いで１２時間にわたる均等な時間隔で記録した
。
【0061】
図６：ヒト血清中のＨＭＢＰホスホン酸プロＰＡｇｅｎ ９ａの３７℃で１２時間の安定
性を、31 P NMRでモニターした：
上記化合物４ｄと同じである。プロドラッグ９ａの31 P NMRは、フッ素－リン間の結合
のために６つのリンピークを示す。実際、これらは、予測されるような８つのピークであ
り、これらのピークにズームして、このような化合物の予測される８つのリンピークを作
ると、２つの余分なピークが見られる。
性を、31 P NMRでモニターした：
上記化合物４ｄと同じである。プロドラッグ９ａの31 P NMRは、フッ素－リン間の結合
のために６つのリンピークを示す。実際、これらは、予測されるような８つのピークであ
り、これらのピークにズームして、このような化合物の予測される８つのリンピークを作
ると、２つの余分なピークが見られる。
【0062】
図７.ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄおよび９ｄによるヒトＶγ９／Ｖδ
２+ Ｔ細胞の活性化：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄ（左）
および９ｄ（右）と共に１８時間インキュベートした。次いで、Ｖγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞
の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マーカー、ＣＤ６
９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。両ＰｒｏＰＡｇｅｎｓの
ＥＣ50は約８ ｐＭ(ピコモル）である。
２+ Ｔ細胞の活性化：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄ（左）
および９ｄ（右）と共に１８時間インキュベートした。次いで、Ｖγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞
の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マーカー、ＣＤ６
９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。両ＰｒｏＰＡｇｅｎｓの
ＥＣ50は約８ ｐＭ(ピコモル）である。
【0063】
図８.ヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞がＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄによっ
て用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデータ：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄと共に
１８時間（図８Ａ）または２０時間（図８Ｂおよび８Ｃ）インキュベートした。２０時間
のインキュベーションの間、データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：
図８Ｂに示すドナー（１）の結果、図８Ｃに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／
Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マ
ーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。これの定
量化を図７に示す。
て用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデータ：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ｄと共に
１８時間（図８Ａ）または２０時間（図８Ｂおよび８Ｃ）インキュベートした。２０時間
のインキュベーションの間、データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：
図８Ｂに示すドナー（１）の結果、図８Ｃに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／
Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マ
ーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。これの定
量化を図７に示す。
【0064】
図９.ヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞がＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ｄによっ
て用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデーター：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ｄと共に
１８時間（図９Ａ）または２０時間（図９Ｂおよび９Ｃ）インキュベートした。２０時間
のインキュベーションの間、データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：
図９Ｂに示すドナー（１）の結果、図９Ｃに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／
Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マ
ーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。これの定
量化を図７に示す。
て用量依存的に活性化されることを示すＦＡＣＳデーター：
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ｄと共に
１８時間（図９Ａ）または２０時間（図９Ｂおよび９Ｃ）インキュベートした。２０時間
のインキュベーションの間、データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：
図９Ｂに示すドナー（１）の結果、図９Ｃに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／
Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マ
ーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。これの定
量化を図７に示す。
【0065】
図１０.ＨＭＢＰＰによるヒトＶγ９／Ｖδ２+Ｔ細胞の活性化を用量依存的に示した。ヒ
ト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＨＭＢＰＰと共に２０時間インキュベ
ートした：
データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１０Ａに示すドナー（１
）の結果、図１０Ｂに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性
化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マーカー、ＣＤ６９およ
びＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。
ト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、示された濃度のＨＭＢＰＰと共に２０時間インキュベ
ートした：
データを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１０Ａに示すドナー（１
）の結果、図１０Ｂに示すドナー（２）の結果。次いで、Ｖγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞の活性
化の読み出しとして、TCR Vγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞を、細胞表面マーカー、ＣＤ６９およ
びＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。
【0066】
図１１.ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄによるヒトＣＤ８+ T細胞の活性化
の欠如を示すＦＡＣＳデータ：
ヒトＰＢＭＣを、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと共に２０時間インキュベー
トした。次いで、TCR CD８+ Ｔ細胞を、ＣＤ８+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、細胞
表面マーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。デ
ータを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１１Ａに示すドナー（１）の
結果、図１１Ｂに示すドナー（２）の結果。
の欠如を示すＦＡＣＳデータ：
ヒトＰＢＭＣを、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと共に２０時間インキュベー
トした。次いで、TCR CD８+ Ｔ細胞を、ＣＤ８+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、細胞
表面マーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。デ
ータを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１１Ａに示すドナー（１）の
結果、図１１Ｂに示すドナー（２）の結果。
【0067】
図１２.ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ｄによるヒトＣＤ８+ T細胞の活性化
の欠如を示すＦＡＣＳデータ：
ヒトＰＢＭＣを、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ｄと共に２０時間インキュベー
トした。次いで、TCR CD８+ Ｔ細胞を、ＣＤ８+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、細胞
表面マーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。デ
ータを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１２Ａに示すドナー（１）の
結果、図１２Ｂに示すドナー（２）の結果。
の欠如を示すＦＡＣＳデータ：
ヒトＰＢＭＣを、示された濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ｄと共に２０時間インキュベー
トした。次いで、TCR CD８+ Ｔ細胞を、ＣＤ８+ Ｔ細胞の活性化の読み出しとして、細胞
表面マーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５のアップレギュレーションについて評価した。デ
ータを収集し、２つの別々のドナーから個別に分析した：図１２Ａに示すドナー（１）の
結果、図１２Ｂに示すドナー（２）の結果。
【0068】
図１３.ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄとのインキュベーション後に膀胱癌
細胞の強力な溶解を示す細胞傷害性アッセイ
ＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄはＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞によるＴ２４膀胱癌細胞の特異的溶解
を媒介する。ヒトＴ２４膀胱癌細胞株（標的）を、１０μＭのゾレドロネート、１００
ｐＭのＨＭＢＰＰまたは１００ ｐＭのＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと共に４時間インキュベー
トした後、培地中で５回洗浄し、予め増殖させたＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞と１０：１のエフ
ェクター標的比で１８時間共培養した。
細胞の強力な溶解を示す細胞傷害性アッセイ
ＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄはＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞によるＴ２４膀胱癌細胞の特異的溶解
を媒介する。ヒトＴ２４膀胱癌細胞株（標的）を、１０μＭのゾレドロネート、１００
ｐＭのＨＭＢＰＰまたは１００ ｐＭのＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと共に４時間インキュベー
トした後、培地中で５回洗浄し、予め増殖させたＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞と１０：１のエフ
ェクター標的比で１８時間共培養した。
【0069】
材料及び方法：
全ての試薬および溶媒は汎用または分析グレードのものであり、Sigma-Aldrich Ltd、Fis
her Scientific、ＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍまたはＡｃｒｏｓから購入した。31 Ｐ、1 Ｈお
よび13 C NMRデータを、２０２、５００および１２５ＭＨｚで作動するブルーカーアバン
スＤＰＸ５００分光計に記録した。化学シフト（δ）はｐｐｍで示され、Ｊ値はＨｚで示
される。スペクトルデータを報告する際に、以下の略語を使用した: s(一重項）、ｄ（二
重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｄｄ(二重項の二重項）、ｔｄ(二重項の三重項）
、およびｍ（多重項）。全ての反応を窒素雰囲気下で実施し、プレコートシリカプレート
（キーゼルゲル６０ Ｆ２５４、ＢＤＨ）上の分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で
モニターした。化合物は紫外線（２５４ナノメートル）で照射することにより、またはＫ
ＭｎＯＯＯＡ染色を使用し、続いて加熱することにより可視化した。フラッシュカラムク
ロマトグラフィーを、シリカゲル６０（２３０－４００網）（メルク）を用いて行った。
質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Cardiff UniversityのSchool of Chemistryによってサ
ービスとして決定された。
全ての試薬および溶媒は汎用または分析グレードのものであり、Sigma-Aldrich Ltd、Fis
her Scientific、ＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍまたはＡｃｒｏｓから購入した。31 Ｐ、1 Ｈお
よび13 C NMRデータを、２０２、５００および１２５ＭＨｚで作動するブルーカーアバン
スＤＰＸ５００分光計に記録した。化学シフト（δ）はｐｐｍで示され、Ｊ値はＨｚで示
される。スペクトルデータを報告する際に、以下の略語を使用した: s(一重項）、ｄ（二
重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｄｄ(二重項の二重項）、ｔｄ(二重項の三重項）
、およびｍ（多重項）。全ての反応を窒素雰囲気下で実施し、プレコートシリカプレート
（キーゼルゲル６０ Ｆ２５４、ＢＤＨ）上の分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で
モニターした。化合物は紫外線（２５４ナノメートル）で照射することにより、またはＫ
ＭｎＯＯＯＡ染色を使用し、続いて加熱することにより可視化した。フラッシュカラムク
ロマトグラフィーを、シリカゲル６０（２３０－４００網）（メルク）を用いて行った。
質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Cardiff UniversityのSchool of Chemistryによってサ
ービスとして決定された。
【0070】
実施例１：ＨＭＢＰメチルホスホネートのアリールオキシホスファラミデートＰｒｏＰＡ
ｇｅｎｓの合成
Ｒ４およびＲ５がそれぞれＨを表す一般式（ＶＩ）の化合物を、グラブスオレフィンメ
タセシス（非特許文献７）を用いた合成法によって調製した。図４（Ａ）に概略的に要約
されているＰｒｏＰＡｇｅｎｓ４Ａ～ｄの合成は、市販のジエチル３－ブテニルホスホネ
ート（１）をブロモトリメチルシラン（ＴＭＳＢｒ）で室温で処理してエトキシ基を除去
することによって達成された（非特許文献８）。これに続いて、触媒量のＤＭＦの存在下
で塩化オキサリルを用いて塩素化反応を行った。次に、この反応の生成物２を、トリエチ
ルアミンの存在下で、次いで適切なアミノ酸エステルでフェノール処理して、中程度の収
率（３８～６１％）でホスホンアミデート３ａ～ｄを得た。その後、これらの化合物は、
１，４‐ベンゾキノンの存在下でＨｏｖｅｙｄａ‐Ｇｒｕｂｂｓ第二世代触媒を用いて２
‐メチル‐２‐プロペノールによるＧｒｕｂｂｓオレフィンメタセシスを受けた。これに
より、ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ａ～ｄは良好な収率（５７～６４％）のを得た（非特許文
献９）。
ｇｅｎｓの合成
Ｒ４およびＲ５がそれぞれＨを表す一般式（ＶＩ）の化合物を、グラブスオレフィンメ
タセシス（非特許文献７）を用いた合成法によって調製した。図４（Ａ）に概略的に要約
されているＰｒｏＰＡｇｅｎｓ４Ａ～ｄの合成は、市販のジエチル３－ブテニルホスホネ
ート（１）をブロモトリメチルシラン（ＴＭＳＢｒ）で室温で処理してエトキシ基を除去
することによって達成された（非特許文献８）。これに続いて、触媒量のＤＭＦの存在下
で塩化オキサリルを用いて塩素化反応を行った。次に、この反応の生成物２を、トリエチ
ルアミンの存在下で、次いで適切なアミノ酸エステルでフェノール処理して、中程度の収
率（３８～６１％）でホスホンアミデート３ａ～ｄを得た。その後、これらの化合物は、
１，４‐ベンゾキノンの存在下でＨｏｖｅｙｄａ‐Ｇｒｕｂｂｓ第二世代触媒を用いて２
‐メチル‐２‐プロペノールによるＧｒｕｂｂｓオレフィンメタセシスを受けた。これに
より、ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ａ～ｄは良好な収率（５７～６４％）のを得た（非特許文
献９）。
【0071】
ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ａ－ｄの合成において選択されるアミノ酸としてＬ－アラニン
を使用したが、これは歴史的に最適な生物学的活性を示したためであり、一方、フェノー
ルモチーフは２つのＦＤＡ認可薬物、ソホスブビルおよびテノホビルアラフェナミドの発
見において首尾よく使用されたため、アリールオキシマスキング基について選択された。
４つの異なったエステルモチーフをＰｒｏＰＡｇｅｎｓ‐４ａ：メチル（Ｍｅ）；４ｂ：
イソプロピル（ｉＰｒ）；４c: tert‐ブチル（ｔＢｕ）；および４ｄ：ベンジル（Ｂｎ
）の合成において選択したが、それはこれらが最低活性（ｔＢｕ）から最高活性（Ｂｎ）
まで変化する様々な生物学的活性を示すからである（非特許文献６）。
を使用したが、これは歴史的に最適な生物学的活性を示したためであり、一方、フェノー
ルモチーフは２つのＦＤＡ認可薬物、ソホスブビルおよびテノホビルアラフェナミドの発
見において首尾よく使用されたため、アリールオキシマスキング基について選択された。
４つの異なったエステルモチーフをＰｒｏＰＡｇｅｎｓ‐４ａ：メチル（Ｍｅ）；４ｂ：
イソプロピル（ｉＰｒ）；４c: tert‐ブチル（ｔＢｕ）；および４ｄ：ベンジル（Ｂｎ
）の合成において選択したが、それはこれらが最低活性（ｔＢｕ）から最高活性（Ｂｎ）
まで変化する様々な生物学的活性を示すからである（非特許文献６）。
【0072】
上記の合成のさらなる詳細は、付録（Appendix）に見出すことができる。
【0073】
実施例２：ＨＭＢＰジフルオロメチルホスホネートのアリールオキシホスファラミデート
プロパンの合成
Ｒ４およびＲ５がそれぞれＦを表す一般式（ＶＩ）の化合物も、Ｇｒｕｂｂｓオレフィ
ンメタセシス7を用いた合成法を用いて調製した。図４（Ｂ）に概略的に要約されている
ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ａ－ｄの合成は最初に、既報に従いＤＭＦ中の亜鉛および臭化銅
の存在下で、市販のジエチル（ブロモジフルオロメチル）ホスホネート（５）を臭化アリ
ルと反応させることによって達成された(非特許文献１０)。生成した化合物６を続いて塩
素化し、次いでフェノールおよび適切なアミノ酸エステルで処理して、化合物３ａ～ｄの
合成について記載したように、ホスホラミデート８ａ～ｄを良好な収率（２４～４６％）
で得た。続いて、これらのホスホンアミデートを１，４‐ベンゾキノンおよびＨｏｖｅｙ
ｄａ‐Ｇｒｕｂｂｓ第二世代触媒の存在下で２‐メチル‐２‐プロペノールで処理した(
非特許文献９)。最終ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ａ－ｄは良好な収率（５８－６９％）で生成
した。Ｌ－アラニンは歴史的に最適な生物学的活性を示したので、これらのプロドラッグ
の合成において選択されるアミノ酸として使用され、一方、フェノールモチーフは２つの
ＦＤＡ認可薬物、ソホスブビルおよびテノホビルアラフェナミドの発見において首尾よく
使用されたので選択された。
プロパンの合成
Ｒ４およびＲ５がそれぞれＦを表す一般式（ＶＩ）の化合物も、Ｇｒｕｂｂｓオレフィ
ンメタセシス7を用いた合成法を用いて調製した。図４（Ｂ）に概略的に要約されている
ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ａ－ｄの合成は最初に、既報に従いＤＭＦ中の亜鉛および臭化銅
の存在下で、市販のジエチル（ブロモジフルオロメチル）ホスホネート（５）を臭化アリ
ルと反応させることによって達成された(非特許文献１０)。生成した化合物６を続いて塩
素化し、次いでフェノールおよび適切なアミノ酸エステルで処理して、化合物３ａ～ｄの
合成について記載したように、ホスホラミデート８ａ～ｄを良好な収率（２４～４６％）
で得た。続いて、これらのホスホンアミデートを１，４‐ベンゾキノンおよびＨｏｖｅｙ
ｄａ‐Ｇｒｕｂｂｓ第二世代触媒の存在下で２‐メチル‐２‐プロペノールで処理した(
非特許文献９)。最終ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ａ－ｄは良好な収率（５８－６９％）で生成
した。Ｌ－アラニンは歴史的に最適な生物学的活性を示したので、これらのプロドラッグ
の合成において選択されるアミノ酸として使用され、一方、フェノールモチーフは２つの
ＦＤＡ認可薬物、ソホスブビルおよびテノホビルアラフェナミドの発見において首尾よく
使用されたので選択された。
【0074】
ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ａ－ｄに関しては、ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ９ａ－ｄの合成におい
て選択されるアミノ酸としてＬ－アラニンを使用し、アリールオキシマスキング基につい
てフェノールモチーフを選択した。再び、４つの異なるエステルモチーフを、ＰｒｏＰＡ
ｇｅｎｓ－９ａの合成において選択した：メチル（Ｍｅ）；９ｂ：イソプロピル（ｉＰｒ
）；９c: tert－ブチル（ｔＢｕ）；および４ｄ：ベンジル（Ｂｎ）。
て選択されるアミノ酸としてＬ－アラニンを使用し、アリールオキシマスキング基につい
てフェノールモチーフを選択した。再び、４つの異なるエステルモチーフを、ＰｒｏＰＡ
ｇｅｎｓ－９ａの合成において選択した：メチル（Ｍｅ）；９ｂ：イソプロピル（ｉＰｒ
）；９c: tert－ブチル（ｔＢｕ）；および４ｄ：ベンジル（Ｂｎ）。
【0075】
上記の合成のさらなる詳細は、付録（Appendix）に見出すことができる。
【0076】
実施例３：ＨＭＢＰメチルホスホネートおよびＨＭＢＰジフルオロメチルホスホネートの
安定性試験
ＨＭＢＰリン酸プロパジェンスの安定性試験で以前に見られた不安定さ(非特許文献６)
に対処するための主要な目的であったため、例１および例２における新規化合物の合成が
完了した時点で実施した。
安定性試験
ＨＭＢＰリン酸プロパジェンスの安定性試験で以前に見られた不安定さ(非特許文献６)
に対処するための主要な目的であったため、例１および例２における新規化合物の合成が
完了した時点で実施した。
【0077】
３７℃で１２時間、ヒト血清を用いてＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄを行い、事前に報告され
たように、31Ｐ－ＮＭＲによって試料をモニターした。図５に示すように、ＰｒｏＰＡｇ
ｅｎ ４ｄは、これらのプロドラッグに典型的なキラルリン中心から生じる２つのジアス
テレオ異性体に対応する31Ｐ－ＮＭＲ上で、dP = ３３．６０および３４．０５ｐｐｍに
２つの一重項を有していた。ヒト血清を加え、試料を31Ｐ－ＮＭＲでモニターした後、試
験した時間（１２時間）の間、新たなリンピークは検出されなかったので、分解は観察さ
れなかった。
たように、31Ｐ－ＮＭＲによって試料をモニターした。図５に示すように、ＰｒｏＰＡｇ
ｅｎ ４ｄは、これらのプロドラッグに典型的なキラルリン中心から生じる２つのジアス
テレオ異性体に対応する31Ｐ－ＮＭＲ上で、dP = ３３．６０および３４．０５ｐｐｍに
２つの一重項を有していた。ヒト血清を加え、試料を31Ｐ－ＮＭＲでモニターした後、試
験した時間（１２時間）の間、新たなリンピークは検出されなかったので、分解は観察さ
れなかった。
【0078】
ジフルオロメチルホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎ ９ａについても同様の安定性プロフ
ィールが観察された（図６）。まとめると、これらのデータは、著者らが以前に.開示し
たＨＭＢＰリン酸プロＰＡゲン(非特許文献６)に比べて、これらのプロドラッグの優れた
安定性を示すものである。
ィールが観察された（図６）。まとめると、これらのデータは、著者らが以前に.開示し
たＨＭＢＰリン酸プロＰＡゲン(非特許文献６)に比べて、これらのプロドラッグの優れた
安定性を示すものである。
【0079】
実施例４：ＰｒｏＰＡｇｅｎｓ ４ａ－ｄおよび９ａ－ｄによるヒトＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ
細胞の活性化
実施例１および２のＰｒｏＰＡｇｅｎがＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の強力な活性化を保持し
たことを実証するために、健康なドナーに由来するＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を含有する末梢
血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、漸増する濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ４ｄおよび９ｄと共にイン
キュベートした（図７、８および９）。
細胞の活性化
実施例１および２のＰｒｏＰＡｇｅｎがＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞の強力な活性化を保持し
たことを実証するために、健康なドナーに由来するＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を含有する末梢
血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、漸増する濃度のＰｒｏＰＡｇｅｎ４ｄおよび９ｄと共にイン
キュベートした（図７、８および９）。
【0080】
末梢血γδ Ｔ細胞は定常状態条件下ではかなりのレベルの表面ＣＤ６９またはＣＤ２
５を欠いているが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激により、７２時間以内に両Ｔ細胞活性化
マーカーがアップレギュレートされる。次いで、ＰＡｇ応答性Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を、
TCR Vγ９およびＶδ２発現によって識別し、アップレギュレーションＣＤ６９およびＣ
Ｄ２５について評価した。
５を欠いているが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激により、７２時間以内に両Ｔ細胞活性化
マーカーがアップレギュレートされる。次いで、ＰＡｇ応答性Ｖγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を、
TCR Vγ９およびＶδ２発現によって識別し、アップレギュレーションＣＤ６９およびＣ
Ｄ２５について評価した。
【0081】
図７、８および９に示されるように、ＨＭＢＰホスホネートプロＰＡｇｅｎｓ４ｄおよ
び９ｄは、これらのクラスのプロドラッグの代表として、ＨＭＢＰホスフェートプロＰＡ
ｇｅｎｓＯＯＢについて報告されたものよりはるかに優れた強力なＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細
胞活性化を示した。
び９ｄは、これらのクラスのプロドラッグの代表として、ＨＭＢＰホスフェートプロＰＡ
ｇｅｎｓＯＯＢについて報告されたものよりはるかに優れた強力なＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細
胞活性化を示した。
【0082】
実施例５（比較）：ＨＭＢＰＰによるヒトＶγ９／Ｖδ２+Ｔ細胞の活性化
実施例１および２のＰｒｏＰＡｇｅｎの増強されたＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化効力を
実証するために、健康なドナーに由来するＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を含有する末梢血単核細
胞（ＰＢＭＣ）を、比較目的のために、増加する濃度のＨＭＢＰＰと共にインキュベート
した（図１０）。
実施例１および２のＰｒｏＰＡｇｅｎの増強されたＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞活性化効力を
実証するために、健康なドナーに由来するＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞を含有する末梢血単核細
胞（ＰＢＭＣ）を、比較目的のために、増加する濃度のＨＭＢＰＰと共にインキュベート
した（図１０）。
【0083】
【0084】
実施例６：ＰｒｏＰＡｇｅｎ４ａ－ｄおよび９ａ－ｄによるヒトＣＤ８+ T細胞の活性化
の欠如
実施例１および２のプロジェンがＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞特異的活性化因子であることを
実証するために、ドナー由来のＣＤ８+ T細胞を含むＰＢＭＣを、プロジェン４ｄおよび
９ｄの濃度を増加させてインキュベートした（図１１および１２）。
の欠如
実施例１および２のプロジェンがＶγ９／Ｖδ２Ｔ細胞特異的活性化因子であることを
実証するために、ドナー由来のＣＤ８+ T細胞を含むＰＢＭＣを、プロジェン４ｄおよび
９ｄの濃度を増加させてインキュベートした（図１１および１２）。
【0085】
末梢血γδ Ｔ細胞と同様に、末梢血ＣＤ８+ T細胞は定常状態条件下ではかなりのレベ
ルの表面ＣＤ６９またはＣＤ２５を欠いているが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激により、
７２時間以内に両Ｔ細胞活性化マーカーがアップレギュレートされる。次いで、ＰＡｇ応
答性ＣＤ８ Ｔ細胞をTCR CD８発現によって区別し、アップレギュレーションＣＤ６９お
よびＣＤ２５について評価した。
ルの表面ＣＤ６９またはＣＤ２５を欠いているが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激により、
７２時間以内に両Ｔ細胞活性化マーカーがアップレギュレートされる。次いで、ＰＡｇ応
答性ＣＤ８ Ｔ細胞をTCR CD８発現によって区別し、アップレギュレーションＣＤ６９お
よびＣＤ２５について評価した。
【0086】
図１１および１２に示すように、ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏｐＡｇｅｎｓ ４ｄおよ
び９ｄはこれらのクラスのプロドラッグの代表として、１μＭ、すなわち、両方のＰｒｏ
ＰＡｇｅｎｓについて計算されたＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞活性化ＥＣ50値より約１００，
０００倍大きい濃度でインキュベートした場合でさえ、ＣＤ８+ T細胞の活性化を示さな
かった。
び９ｄはこれらのクラスのプロドラッグの代表として、１μＭ、すなわち、両方のＰｒｏ
ＰＡｇｅｎｓについて計算されたＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞活性化ＥＣ50値より約１００，
０００倍大きい濃度でインキュベートした場合でさえ、ＣＤ８+ T細胞の活性化を示さな
かった。
【0087】
実施例７：Ｖγ９／Ｖδ２ Ｔ－細胞によるＴ２４膀胱癌細胞の溶解はＰｒｏＰＡｇｅｎ
４ａ－ｄおよび９ａ－ｄによって媒介され、増強される
上記原理のさらなる証拠として、そして上記に示される実施例１および２のＰｒｏＰＡ
ｇｅｎの優れたＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞活性化効力が有益な治療効果に翻訳されることを
実証するために、ヒトＴ２４膀胱癌細胞株を１０μＭゾレドロネート、１００ ｐＭのＨ
ＭＢＰＰまたは１００ ｐＭのＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと４時間インキュベートした後、Ｖ
γ９／Ｖδ２Ｔ細胞による癌細胞の特異的溶解を比較した。
４ａ－ｄおよび９ａ－ｄによって媒介され、増強される
上記原理のさらなる証拠として、そして上記に示される実施例１および２のＰｒｏＰＡ
ｇｅｎの優れたＶγ９／Ｖδ２+ Ｔ細胞活性化効力が有益な治療効果に翻訳されることを
実証するために、ヒトＴ２４膀胱癌細胞株を１０μＭゾレドロネート、１００ ｐＭのＨ
ＭＢＰＰまたは１００ ｐＭのＰｒｏＰＡｇｅｎ ４ｄと４時間インキュベートした後、Ｖ
γ９／Ｖδ２Ｔ細胞による癌細胞の特異的溶解を比較した。
【0088】
このin vitro細胞毒性アッセイのさらなる詳細は、付録（Appendix）に見出すことがで
きる。
きる。
【0089】
図１３に示すように、ＨＭＢＰホスホネートＰｒｏｐＡｇｅｎ ４ｄとのインキュベー
ションはゾレドロネートとのインキュベーションで観察されたものと比較して、また驚く
べきことに、ＨＭＢＰＰとのインキュベーションで観察されたものと比較して、Ｔ２４膀
胱癌溶解の有意な増強をもたらした。
ションはゾレドロネートとのインキュベーションで観察されたものと比較して、また驚く
べきことに、ＨＭＢＰＰとのインキュベーションで観察されたものと比較して、Ｔ２４膀
胱癌溶解の有意な増強をもたらした。
【0090】
まとめ：
新規メチルおよびジフルオロメチルホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎｓの合成について報
告する。これらのＰｒｏＰＡｇｅｎｓは、これまで報告されていたリン酸ＰｒｏＰＡｇｅ
ｎｓ誘導体（非特許文献６）に比べて優れた血清安定性を示した。これらのプロドラッグ
は、Ｖγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞の特異的アクチベーターであるだけでなく、過去に報告され
たＨＭＢＰリン酸プロＰＡｇｅｎｓよりもはるかに強力なＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞のアク
チベーターであることが示された。このＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞活性化効果の増加は、in
vitroでの癌細胞の非常に強力な溶解に翻訳されることも示された。
新規メチルおよびジフルオロメチルホスホネートＰｒｏＰＡｇｅｎｓの合成について報
告する。これらのＰｒｏＰＡｇｅｎｓは、これまで報告されていたリン酸ＰｒｏＰＡｇｅ
ｎｓ誘導体（非特許文献６）に比べて優れた血清安定性を示した。これらのプロドラッグ
は、Ｖγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞の特異的アクチベーターであるだけでなく、過去に報告され
たＨＭＢＰリン酸プロＰＡｇｅｎｓよりもはるかに強力なＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞のアク
チベーターであることが示された。このＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞活性化効果の増加は、in
vitroでの癌細胞の非常に強力な溶解に翻訳されることも示された。
【0091】
これらの新しいホスホネートＰｒｏｇｅｎの高い、特異性、血清安定性および効力プロ
フィールの組合せは、癌、骨粗鬆症および／または結核、らい、チフス、マラリア、およ
びトキソプラズマ症などの種々の感染症などの増殖性疾患を含む種々の状態を治療するた
めの新しい免疫療法薬としての開発に適している。
フィールの組合せは、癌、骨粗鬆症および／または結核、らい、チフス、マラリア、およ
びトキソプラズマ症などの種々の感染症などの増殖性疾患を含む種々の状態を治療するた
めの新しい免疫療法薬としての開発に適している。
【0092】
付録（Appendix）：ＰｒｏＰＡｇｅｎ化合物４ａ－ｄおよび９ａ－ｄの合成および評価
Ｂｕｔ－３－ｅｎ－１－イルホスホン酸二塩化物（２）
臭化トリメチルシリル（１３．７２ｍＬ、１０４．０６ｍｍｏｌ、１０当量）を、窒素
下、室温で、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のジエチルｂｕｔ－３－ｅｎ－１－イルホスホ
ネート１（２ｇ、１０．４０ｍｍｏｌ、１当量）に３０分間かけてゆっくりと添加した。
混合物を２時間撹拌し、次いで減圧下で揮発性物質を除去し、黄色液δPＮＭＲ（２０２
ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２４．７０を得た。次いで、これを５０ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2に溶解
し、２滴の乾燥ＤＭＦを添加し、混合物を０℃に冷却した。次に、塩化オキサリル（２．
６８ｍＬ、３１．２０ｍｍｏｌ、３当量）を滴下して加え、反応混合物を室温まで温め、
１８時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、追加のＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）をさらに３
回蒸発させて、粗生成物（１．７９ｇ、１００％）を茶色の液として得、これをさらに精
製することなく次工程で使用した。δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ４９．６
６．
Ｂｕｔ－３－ｅｎ－１－イルホスホン酸二塩化物（２）
臭化トリメチルシリル（１３．７２ｍＬ、１０４．０６ｍｍｏｌ、１０当量）を、窒素
下、室温で、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のジエチルｂｕｔ－３－ｅｎ－１－イルホスホ
ネート１（２ｇ、１０．４０ｍｍｏｌ、１当量）に３０分間かけてゆっくりと添加した。
混合物を２時間撹拌し、次いで減圧下で揮発性物質を除去し、黄色液δPＮＭＲ（２０２
ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２４．７０を得た。次いで、これを５０ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2に溶解
し、２滴の乾燥ＤＭＦを添加し、混合物を０℃に冷却した。次に、塩化オキサリル（２．
６８ｍＬ、３１．２０ｍｍｏｌ、３当量）を滴下して加え、反応混合物を室温まで温め、
１８時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、追加のＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）をさらに３
回蒸発させて、粗生成物（１．７９ｇ、１００％）を茶色の液として得、これをさらに精
製することなく次工程で使用した。δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ４９．６
６．
【0093】
一般手順１：アリルホスホノアミデート３ａ－ｄの合成
粗生成物であるが－３－エン－１－イルホスホンジクロリド（２）を５ｍＬのＣＨ2 Ｃ
ｌ2に溶解し、フェノール（１当量）、乾燥Ｅｔ3 Ｎ（２当量）およびＣＨ2 Ｃｌ2（１０
ｍＬ）の水溶液に－７８℃で滴下した。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応混合物を室
温に温め、撹拌をさらに３時間続けた。31P NMR[δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
：～３９．９３］により示されるように反応が完了したら、混合物を濾過し、揮発性物質
を減圧下で除去し、Ｅｔ2 Ｏで２回洗浄し、続いて減圧下で除去して、粗油状物を得た。
次に、この生成物をＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）に溶解し、Ｌ－アラニンエステル塩化水素
（１当量）と乾燥Ｅｔ3 Ｎ（２当量）の乾燥ＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）中の攪拌混合物に
－７８℃で１５分かけて滴下した。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応物を室温に温め
、一晩撹拌したままにした。溶媒を減圧下で除去し、濾過し、Ｅｔ2 Ｏで洗浄した後、減
圧下で除去し、粗油状物を得た。次いで、最終生成物をカラムクロマトグラフィー（６：
４ Hex/ EtOAc)により無色油として精製した。
粗生成物であるが－３－エン－１－イルホスホンジクロリド（２）を５ｍＬのＣＨ2 Ｃ
ｌ2に溶解し、フェノール（１当量）、乾燥Ｅｔ3 Ｎ（２当量）およびＣＨ2 Ｃｌ2（１０
ｍＬ）の水溶液に－７８℃で滴下した。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応混合物を室
温に温め、撹拌をさらに３時間続けた。31P NMR[δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
：～３９．９３］により示されるように反応が完了したら、混合物を濾過し、揮発性物質
を減圧下で除去し、Ｅｔ2 Ｏで２回洗浄し、続いて減圧下で除去して、粗油状物を得た。
次に、この生成物をＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）に溶解し、Ｌ－アラニンエステル塩化水素
（１当量）と乾燥Ｅｔ3 Ｎ（２当量）の乾燥ＣＨ2 Ｃｌ2（１０ｍＬ）中の攪拌混合物に
－７８℃で１５分かけて滴下した。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応物を室温に温め
、一晩撹拌したままにした。溶媒を減圧下で除去し、濾過し、Ｅｔ2 Ｏで洗浄した後、減
圧下で除去し、粗油状物を得た。次いで、最終生成物をカラムクロマトグラフィー（６：
４ Hex/ EtOAc)により無色油として精製した。
【0094】
メチル（but－３－エン－１－イル（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（３ａ
）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンメチルエ
ステル塩化水素（０．３７３ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に従
って合成し、生成物３ａ（０．２４８ｇ、３８％）を無色油として得た。
）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンメチルエ
ステル塩化水素（０．３７３ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に従
って合成し、生成物３ａ（０．２４８ｇ、３８％）を無色油として得た。
【0095】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．８８、３１．２２．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ），５．８２ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．００ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．１１－３．８６ （ｍ、１Ｈ，ＣＨ－ＮＨ）、３．６０ （ｄ、J = ６．
６ Ｈｚ、３Ｈ、ＯＣＨ3）、３．１８ （ｍ、１Ｈ，ＮＨ）、２．４８－２．２７ （ｍ、
２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．９２ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．２１ （２ｄ、J =
７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７４．６８ （ｄ、J = ６．３ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１７４．３８ （ｄ、J = ５．１ Ｈｚ、Ｃ＝Ｏ）、１５０．７２ （ｄ、J = ９．
１ Ｈｚ）、１５０．５１ （ｄ、J = ９．４ Ｈｚ）、１２９．７８、１２４．７８ （ｄ
、J = ５．５ Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ2）、１２０．８６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ、Ｃ－Ａｒ）
、１２０．７１ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．５６、５２．５２ （ｄ、J = ３．
１ Ｈｚ、ＣＨ3 －Ｏ）、４９．５８ （ｄ、J = １４．７ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２７．
８８ （ｄ、J = １３０．９ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ） ２７．６０ （ｄ、J = １３１．６ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５９ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．
６８ （２ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ），５．８２ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．００ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．１１－３．８６ （ｍ、１Ｈ，ＣＨ－ＮＨ）、３．６０ （ｄ、J = ６．
６ Ｈｚ、３Ｈ、ＯＣＨ3）、３．１８ （ｍ、１Ｈ，ＮＨ）、２．４８－２．２７ （ｍ、
２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．９２ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．２１ （２ｄ、J =
７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７４．６８ （ｄ、J = ６．３ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１７４．３８ （ｄ、J = ５．１ Ｈｚ、Ｃ＝Ｏ）、１５０．７２ （ｄ、J = ９．
１ Ｈｚ）、１５０．５１ （ｄ、J = ９．４ Ｈｚ）、１２９．７８、１２４．７８ （ｄ
、J = ５．５ Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ2）、１２０．８６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ、Ｃ－Ａｒ）
、１２０．７１ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．５６、５２．５２ （ｄ、J = ３．
１ Ｈｚ、ＣＨ3 －Ｏ）、４９．５８ （ｄ、J = １４．７ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２７．
８８ （ｄ、J = １３０．９ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ） ２７．６０ （ｄ、J = １３１．６ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５９ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．
６８ （２ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
【0096】
イソプロピル（but－３－エン－１－イル（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸
（３ｂ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンイソプロ
ピルエステル塩化水素（０．３７３ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順
１に従って合成し、生成物３ｂ（０．３４８ｇ、４８％）を無色油として得た。
（３ｂ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンイソプロ
ピルエステル塩化水素（０．３７３ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順
１に従って合成し、生成物３ｂ（０．３４８ｇ、４８％）を無色油として得た。
【0097】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．９３、３１．２４．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８１ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１１ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．９６ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰｒ，）、４．０４－ ３．９４ （ｍ、１
Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２１ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．４５ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ
2）、２．０２－１．８８ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．２９－１．１８ （ｍ、９Ｈ
、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．６７ （ｄ、J = ６．３ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７４ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ）、１２９．７６ （ｄ、J = ６．７ Ｈｚ）
、１２４．７３ （ｄ、J = ５．０ Ｈｚ）、１２０．８６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１
２０．６９ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１１５．５０、６９．２３ （ｄ、J = ５．６ Ｈ
ｚ、ＣＨｉＰｒ）、４９．７５ （ｄ、J = ９．５ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２７．８９ （
ｄ、J = １３０．９ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．５４ （ｄ、J = １３１．４ Ｈｚ、Ｃ
Ｈ2 －Ｐ）、２６．７４ （ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５７
（ｄ、J = ４．０ Ｈｚ 、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．５８ （２ｄ、J = ４．４ Ｈｚ
、ＣＨＣＨ3）．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８１ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１１ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．９６ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰｒ，）、４．０４－ ３．９４ （ｍ、１
Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２１ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．４５ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ
2）、２．０２－１．８８ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．２９－１．１８ （ｍ、９Ｈ
、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．６７ （ｄ、J = ６．３ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７４ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ）、１２９．７６ （ｄ、J = ６．７ Ｈｚ）
、１２４．７３ （ｄ、J = ５．０ Ｈｚ）、１２０．８６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１
２０．６９ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１１５．５０、６９．２３ （ｄ、J = ５．６ Ｈ
ｚ、ＣＨｉＰｒ）、４９．７５ （ｄ、J = ９．５ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２７．８９ （
ｄ、J = １３０．９ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．５４ （ｄ、J = １３１．４ Ｈｚ、Ｃ
Ｈ2 －Ｐ）、２６．７４ （ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５７
（ｄ、J = ４．０ Ｈｚ 、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．５８ （２ｄ、J = ４．４ Ｈｚ
、ＣＨＣＨ3）．
【0098】
ｔｅｒｔ－ブチル（but－３－エン－１－イル（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニ
ン酸（３ｃ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンｔｅｒｔ
－ブチルエステル塩化水素（０．４０５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般
手順１に従って合成し、生成物３ｃ（０．４６１ｇ、６１％）を無色油として得た。
ン酸（３ｃ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンｔｅｒｔ
－ブチルエステル塩化水素（０．４０５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般
手順１に従って合成し、生成物３ｃ（０．４６１ｇ、６１％）を無色油として得た。
【0099】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．９５、３１．２１．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３２ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８７ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2
＝ＣＨ）、４．００－３．８６ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２６ （ｍ、１Ｈ、Ｎ
Ｈ）、２．４５ （ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０４－１．８５ （ｍ、２Ｈ、Ｐ－
ＣＨ2）、１．４２ （ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ－Ｈ）、１．２２ （２ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３
Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．１３ （ｄ、J = ５．５ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７７ （ｄ、J = ９．２ Ｈｚ）、１３７．４３ （ｄ、J = ７．１ Ｈｚ）
、１３７．３２ （ｄ、J = ７．６ Ｈｚ）、１２９．７６ （ｄ、J = ６．２ Ｈｚ）、１
２４．７１ （ｄ、J = ４．０ Ｈｚ）、１２０．８８ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０
．７２ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．４７、８１．９９ （ｄ、J = ８．２ Ｈｚ）
、６０．５４、５０．１８ （ｄ、J = ４．０ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２８．０５、２７．
９１ （ｄ、J = １３１．６ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．２０ （ｄ、J = １３０．２ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 -Ｐ)、２１．８２ （２ｄ、J = ４．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３２ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８７ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2
＝ＣＨ）、４．００－３．８６ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２６ （ｍ、１Ｈ、Ｎ
Ｈ）、２．４５ （ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０４－１．８５ （ｍ、２Ｈ、Ｐ－
ＣＨ2）、１．４２ （ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ－Ｈ）、１．２２ （２ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３
Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．１３ （ｄ、J = ５．５ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７７ （ｄ、J = ９．２ Ｈｚ）、１３７．４３ （ｄ、J = ７．１ Ｈｚ）
、１３７．３２ （ｄ、J = ７．６ Ｈｚ）、１２９．７６ （ｄ、J = ６．２ Ｈｚ）、１
２４．７１ （ｄ、J = ４．０ Ｈｚ）、１２０．８８ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０
．７２ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．４７、８１．９９ （ｄ、J = ８．２ Ｈｚ）
、６０．５４、５０．１８ （ｄ、J = ４．０ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２８．０５、２７．
９１ （ｄ、J = １３１．６ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．２０ （ｄ、J = １３０．２ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 -Ｐ)、２１．８２ （２ｄ、J = ４．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
【0100】
ベンジル（but－３－エン－１－イル（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（３
ｄ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンベンジル
エステル塩化水素（０．４０５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に
従って合成し、生成物３ｄ（０．４６１ｇ、５５％）を無色油として得た。
ｄ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンベンジル
エステル塩化水素（０．４０５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に
従って合成し、生成物３ｄ（０．４６１ｇ、５５％）を無色油として得た。
【0101】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．８５、３１．２１．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３８－７．２７ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２１－７．１８ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１６－７．０９ （ｍ、１Ｈ、Ａｒ）、５
．８５ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．０４ （ｍ、４Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ、－ＯＣＨ2
）、４．２８－４．０３ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２４ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２
．５６－２．３４ （ｍ、２Ｈ、，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０８－１．８２ （ｍ、２Ｈ、
Ｐ－ＣＨ2）、１．２４ （２ｄ、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．７４ （ｄ、J = ５．２ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７０ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ）、１３７．３５、１３５．４０ （ｄ、J =
６．７ Ｈｚ）、１２９．７９ （ｄ、J = ６．１ Ｈｚ）、１２８．７９ （ｄ、J = ２
．８ Ｈｚ）、１２８．６４ （ｄ、J = ６．４ Ｈｚ）、１２８．３３、１２０．８６ （
ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０．６８ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．５５、６７
．３１ （ｄ、J = ３．０ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｏ）、４９．７２ （ｄ、J = １１．１ Ｈｚ、
ＣＨ－ＮＨ）、２７．８８ （ｄ、J = １３０．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．５７（ｄ
、J = １３１．３ Ｈｚ 、ＣＨ2 －Ｐ）、２６．７４ （ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨ2 －
ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５７ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．７０
（２ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３８－７．２７ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２１－７．１８ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１６－７．０９ （ｍ、１Ｈ、Ａｒ）、５
．８５ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．０４ （ｍ、４Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ、－ＯＣＨ2
）、４．２８－４．０３ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．２４ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２
．５６－２．３４ （ｍ、２Ｈ、，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０８－１．８２ （ｍ、２Ｈ、
Ｐ－ＣＨ2）、１．２４ （２ｄ、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．７４ （ｄ、J = ５．２ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７０ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ）、１３７．３５、１３５．４０ （ｄ、J =
６．７ Ｈｚ）、１２９．７９ （ｄ、J = ６．１ Ｈｚ）、１２８．７９ （ｄ、J = ２
．８ Ｈｚ）、１２８．６４ （ｄ、J = ６．４ Ｈｚ）、１２８．３３、１２０．８６ （
ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０．６８ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、１１５．５５、６７
．３１ （ｄ、J = ３．０ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｏ）、４９．７２ （ｄ、J = １１．１ Ｈｚ、
ＣＨ－ＮＨ）、２７．８８ （ｄ、J = １３０．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．５７（ｄ
、J = １３１．３ Ｈｚ 、ＣＨ2 －Ｐ）、２６．７４ （ｄ、J = ４．３ Ｈｚ、ＣＨ2 －
ＣＨ2 －Ｐ）、２６．５７ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２１．７０
（２ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
【0102】
一般手順２：Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓ交差複分解によるホスホノアミデート４ａ－
ｄの合成
アリルホスホノアミデート３ａ-ｄ(１当量）および２－メチル－２プロペン－１－オー
ル（８５μＬ、１ｍｍｏｌ、２当量）、１，４－ベンゾキノン（５．４０ｍｇ、１０ｍｏ
ｌ％）の乾燥ＤＣＭ(１０ｍＬ）溶液に、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓ触媒第２世代（
２３．５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、７．５ｍｏｌ％）を加えた。触媒を、２．５ｍｏｌ
%(７．８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）の３等量ずつ、t = ０、２および４時間、反応の過
程にわたって添加した。次いで、この溶液を、窒素雰囲気下、４５℃で１８時間加熱還流
した。室温に冷却した後、活性炭のスクープを添加し、混合物をさらに２時間撹拌し、次
いでセライトパッドを通して濾過した。揮発性物質を蒸発させ、残渣を広範なシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３～０：１０）によって精製し
て、４ａ～ｄを無色の油として得た。
ｄの合成
アリルホスホノアミデート３ａ-ｄ(１当量）および２－メチル－２プロペン－１－オー
ル（８５μＬ、１ｍｍｏｌ、２当量）、１，４－ベンゾキノン（５．４０ｍｇ、１０ｍｏ
ｌ％）の乾燥ＤＣＭ(１０ｍＬ）溶液に、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓ触媒第２世代（
２３．５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、７．５ｍｏｌ％）を加えた。触媒を、２．５ｍｏｌ
%(７．８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）の３等量ずつ、t = ０、２および４時間、反応の過
程にわたって添加した。次いで、この溶液を、窒素雰囲気下、４５℃で１８時間加熱還流
した。室温に冷却した後、活性炭のスクープを添加し、混合物をさらに２時間撹拌し、次
いでセライトパッドを通して濾過した。揮発性物質を蒸発させ、残渣を広範なシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３～０：１０）によって精製し
て、４ａ～ｄを無色の油として得た。
【0103】
メチル（（（Ｅ）－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エン－１－イル）（フェノ
キシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸塩（４ａ）
３ａ（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って合成し、４
ａ（９１ｍｇ、５７％）を無色油状物として得た。
キシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸塩（４ａ）
３ａ（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って合成し、４
ａ（９１ｍｇ、５７％）を無色油状物として得た。
【0104】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．８９、３１．３１．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３１ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１８ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．４８ （ｍ，１Ｈ、＝ＣＨ）、４．２４ － ３．９８ （ｍ、３Ｈ
、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６８ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、３Ｈ、ＯＣＨ3）、３
．３９－３．１８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．５５－２．４１ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ
2）、２．１２－１．８７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．７１ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ
、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．２７ （２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－Ｃ
Ｈ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７１ （ｄ、J = ５．９ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７２、１２９．８１ （ｄ、J = ６．９ Ｈｚ）、１２４．８１ （ｄ、J =
８．６ Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ2）、１２４．１７、１２４．０４、１２０．９４、１２０．
６９ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、６８．５６ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、
５２．６４ （ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨ3 －Ｏ）、４９．５１ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ
、ＣＨ－ＮＨ）、２８．３３ （ｄ、J = １２９．６ Hz CH2 －Ｐ）、２８．０６ （ｄ、
J = １３０．２ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．８６ （２ｄ、J = ４．９ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3
）、２１．００ （ｄ、J = ４ ．８ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２０．８９ （ｄ、J
= ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ），１３．８７．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C16 Ｈ24 ＮＯ5 ＮａＰ： ３６４．１２９０； 検出
： ３６４．１２９３
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３１ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１８ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．４８ （ｍ，１Ｈ、＝ＣＨ）、４．２４ － ３．９８ （ｍ、３Ｈ
、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６８ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、３Ｈ、ＯＣＨ3）、３
．３９－３．１８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．５５－２．４１ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ
2）、２．１２－１．８７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．７１ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ
、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．２７ （２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－Ｃ
Ｈ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７１ （ｄ、J = ５．９ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７２、１２９．８１ （ｄ、J = ６．９ Ｈｚ）、１２４．８１ （ｄ、J =
８．６ Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ2）、１２４．１７、１２４．０４、１２０．９４、１２０．
６９ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、６８．５６ （ｄ、J = ９．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、
５２．６４ （ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨ3 －Ｏ）、４９．５１ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ
、ＣＨ－ＮＨ）、２８．３３ （ｄ、J = １２９．６ Hz CH2 －Ｐ）、２８．０６ （ｄ、
J = １３０．２ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．８６ （２ｄ、J = ４．９ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3
）、２１．００ （ｄ、J = ４ ．８ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２０．８９ （ｄ、J
= ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ），１３．８７．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C16 Ｈ24 ＮＯ5 ＮａＰ： ３６４．１２９０； 検出
： ３６４．１２９３
【0105】
イソプロピル（（（Ｅ）－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エン－１－イル）（
フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｂ）
化合物３ｂ（０．１５０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物４ｂ（９７ｍｇ、５９％）を無色油として得た。
フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｂ）
化合物３ｂ（０．１５０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物４ｂ（９７ｍｇ、５９％）を無色油として得た。
【0106】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３１．１１、３１．４９．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．２８ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．４６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．９５ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰ
ｒ）、４．０８ － ３．７９ （ｍ、３Ｈ、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４７－３．
２５ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．５１－２．３５ （ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０
２－１．８５ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．７３－１．５６ （ｄ、J = ６．０ Ｈｚ
、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．３５－１．０８ （ｍ、９Ｈ、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ
、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．６２ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７４ （ｄ、J = ９．０ Ｈｚ），１３６．７６、１２４．７５、１２３．
９５ （ｄ、J = ５．４ Ｈｚ）、１２３．８４ （ｄ、J = ６．９ Ｈｚ）、１２０．９０
（ｄ、J = ４．５ Ｈｚ）、１２０．６７ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ），１１９．８３、１
１５．５８、６９．４１ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ、ＣＨｉＰｒ） ６８．３９ （ｄ、J =
７．０ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、４９．６５、２８．３６ （ｄ、J = １２９．７ Ｈｚ、
ＣＨ2 －Ｐ）、２７．９２ （ｄ、J = １３１．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．８３ （
２ｄ、J = ６．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、２０。９０ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｃ
Ｈ2 －Ｐ）、２０．８４ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ），１３．８４．
ＨＲＭＳ （ＥＳ＋、ｍ／ｚ）計算値：(M+Na)+ C18 Ｈ28 ＮＯ5 ＮａＰ： ３９２．１６
０３； 検出： ３９２．１６１３
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．２８ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．４６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．９５ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰ
ｒ）、４．０８ － ３．７９ （ｍ、３Ｈ、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４７－３．
２５ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．５１－２．３５ （ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０
２－１．８５ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）、１．７３－１．５６ （ｄ、J = ６．０ Ｈｚ
、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．３５－１．０８ （ｍ、９Ｈ、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ
、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．６２ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７４ （ｄ、J = ９．０ Ｈｚ），１３６．７６、１２４．７５、１２３．
９５ （ｄ、J = ５．４ Ｈｚ）、１２３．８４ （ｄ、J = ６．９ Ｈｚ）、１２０．９０
（ｄ、J = ４．５ Ｈｚ）、１２０．６７ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ），１１９．８３、１
１５．５８、６９．４１ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ、ＣＨｉＰｒ） ６８．３９ （ｄ、J =
７．０ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、４９．６５、２８．３６ （ｄ、J = １２９．７ Ｈｚ、
ＣＨ2 －Ｐ）、２７．９２ （ｄ、J = １３１．１ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．８３ （
２ｄ、J = ６．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、２０。９０ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｃ
Ｈ2 －Ｐ）、２０．８４ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ），１３．８４．
ＨＲＭＳ （ＥＳ＋、ｍ／ｚ）計算値：(M+Na)+ C18 Ｈ28 ＮＯ5 ＮａＰ： ３９２．１６
０３； 検出： ３９２．１６１３
【0107】
ｔｅｒｔ－ブチル（（（Ｅ）－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エン－１－イル
）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｃ）
化合物３ｃ（０．１５０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物４ｃ（１０８ｍｇ、６４％）を無色油として得た。
）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｃ）
化合物３ｃ（０．１５０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物４ｃ（１０８ｍｇ、６４％）を無色油として得た。
【0108】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３１．０５、３１．４２．
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１７
（ｍ、３Ｈ，Ａｒ）、５．４６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１７－３．７８ （ｍ、３Ｈ
、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４１－３．１８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．６０－２
．３０ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０１－１．８７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）
、１．６９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．４２ （ｓ、９
Ｈ、ｔＢｕ）、１．２７ （２ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．３４ （ｄ、J = ６．０ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７９ （ｄ、J = ９．０ Ｈｚ）、１３６．８１ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）
、１１５．５９、８２．２２ （ｄ、J = ５．６ Ｈｚ）、６８．４５ （ｄ、J = １０．
４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、５０．０７ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２８．
０１ （ｄ、J = １２９．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．２６ （ｄ、J = １３０．４ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．９８ （ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）、２０．９７ （
ｄ、J = ４．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２０．８８ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、Ｃ
Ｈ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、１３．８６(ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C19 Ｈ30 ＮＯ5 ＮａＰ： ４０６．１７５９； 検出
： ４０６．１７６２
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）： ７．３０ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．１７
（ｍ、３Ｈ，Ａｒ）、５．４６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１７－３．７８ （ｍ、３Ｈ
、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４１－３．１８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．６０－２
．３０ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０１－１．８７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 －Ｐ）
、１．６９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．４２ （ｓ、９
Ｈ、ｔＢｕ）、１．２７ （２ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．３４ （ｄ、J = ６．０ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１５０．７９ （ｄ、J = ９．０ Ｈｚ）、１３６．８１ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）
、１１５．５９、８２．２２ （ｄ、J = ５．６ Ｈｚ）、６８．４５ （ｄ、J = １０．
４ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＯＨ）、５０．０７ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、２８．
０１ （ｄ、J = １２９．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２７．２６ （ｄ、J = １３０．４ Ｈ
ｚ、ＣＨ2 －Ｐ）、２１．９８ （ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）、２０．９７ （
ｄ、J = ４．７ Ｈｚ、ＣＨ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、２０．８８ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ、Ｃ
Ｈ2 －ＣＨ2 －Ｐ）、１３．８６(ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C19 Ｈ30 ＮＯ5 ＮａＰ： ４０６．１７５９； 検出
： ４０６．１７６２
【0109】
ベンジル（（（Ｅ）－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エン－１－イル）（フェ
ノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｄ）
一般手順２に従って、３日間（０．１５０ｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）を用いて合成
し、生成物４日間（１００ｍｇ、５９％）を無色油状物として得た。
ノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（４ｄ）
一般手順２に従って、３日間（０．１５０ｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）を用いて合成
し、生成物４日間（１００ｍｇ、５９％）を無色油状物として得た。
【0110】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ３０．９０、３１．３２
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３９－７．２８ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２２－７．１７ （ｍ、２Ｈ，Ａｒ）、７．１２ （ｍ、１Ｈ、Ａｒ）、５．４４ （
ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．０９ （ｍ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、４．２２－３．８６ （ｍ、３
Ｈ、ｍ、３Ｈ、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４９－３．１７ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、
２．６４ －２．３６ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０４－１．８０ （ｍ、２Ｈ、
ＣＨ2 －Ｐ）、１．６９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．
３３ （２ｄ、J = ７．０ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７６、１２９．８１ （ｄ、J = ７
．４ Ｈｚ）、１２８．７５ （ｄ、J = １４．９ Ｈｚ）、１２８．３９、１２４．７７
、１２４．１５ （ｄ、J = １５．０ Ｈｚ）、１２０．９３－１２０．８４、１２０．６
７ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、６８．５７ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）、６７．４２ （ｄ
、J = ２．９ Ｈｚ）、４９．６５、２８．０５ （ｄ、J = １２９．９ Ｈｚ）、２１．
７７ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ）、２０．８７ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、１３．８７．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C22 Ｈ28 ＮＯ5 ＮａＰ： ４４０．１６０３； 検出
： ４４０．１６０９
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３９－７．２８ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２２－７．１７ （ｍ、２Ｈ，Ａｒ）、７．１２ （ｍ、１Ｈ、Ａｒ）、５．４４ （
ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．０９ （ｍ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、４．２２－３．８６ （ｍ、３
Ｈ、ｍ、３Ｈ、ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ－ＮＨ）、３．４９－３．１７ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、
２．６４ －２．３６ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、２．０４－１．８０ （ｍ、２Ｈ、
ＣＨ2 －Ｐ）、１．６９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝）、１．
３３ （２ｄ、J = ７．０ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７６、１２９．８１ （ｄ、J = ７
．４ Ｈｚ）、１２８．７５ （ｄ、J = １４．９ Ｈｚ）、１２８．３９、１２４．７７
、１２４．１５ （ｄ、J = １５．０ Ｈｚ）、１２０．９３－１２０．８４、１２０．６
７ （ｄ、J = ４．７ Ｈｚ）、６８．５７ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）、６７．４２ （ｄ
、J = ２．９ Ｈｚ）、４９．６５、２８．０５ （ｄ、J = １２９．９ Ｈｚ）、２１．
７７ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ）、２０．８７ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、１３．８７．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C22 Ｈ28 ＮＯ5 ＮａＰ： ４４０．１６０３； 検出
： ４４０．１６０９
【0111】
ジエチル（１，１－ジフルオロブト－３－エン－１－イル）ホスホネート（６）（非特許
文献１０）
活性亜鉛粉末（２．５０ｇ、３８．２３ミリモル、１当量）を含む２５０ｍＬ丸底フラ
スコに、無水ＤＭＦ(２０ｍＬ）を窒素下で加えた。これに続いて、ジエチル（ブロモジ
フルオロメチル）ホスホネート（６．８０ｍＬ、３８．２３ｍｍｏｌ、１当量）をゆっく
りと滴下し、混合物を室温で３時間撹拌した。CuBr (５．４８ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ、
１当量）を添加し、続いて発熱反応を防ぐために臭化アリル（３．９６ｍＬ、４５．８７
ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと滴下した。４０時間攪拌した後、濾過し、次いで、
ＤＣＭと１０％ＮＨ4Ｃｌ水溶液との間で分配した。水相をＤＣＭで３回抽出した。合わ
せた有機相を無水ＭｇＳＯＯＯＡで乾燥させ、減圧濃縮し、得られた残渣を、ヘキサン中
２０% EtOAcを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６（５．４１ｇ、
６２％）を淡黄色油状物として得た。
文献１０）
活性亜鉛粉末（２．５０ｇ、３８．２３ミリモル、１当量）を含む２５０ｍＬ丸底フラ
スコに、無水ＤＭＦ(２０ｍＬ）を窒素下で加えた。これに続いて、ジエチル（ブロモジ
フルオロメチル）ホスホネート（６．８０ｍＬ、３８．２３ｍｍｏｌ、１当量）をゆっく
りと滴下し、混合物を室温で３時間撹拌した。CuBr (５．４８ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ、
１当量）を添加し、続いて発熱反応を防ぐために臭化アリル（３．９６ｍＬ、４５．８７
ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと滴下した。４０時間攪拌した後、濾過し、次いで、
ＤＣＭと１０％ＮＨ4Ｃｌ水溶液との間で分配した。水相をＤＣＭで３回抽出した。合わ
せた有機相を無水ＭｇＳＯＯＯＡで乾燥させ、減圧濃縮し、得られた残渣を、ヘキサン中
２０% EtOAcを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６（５．４１ｇ、
６２％）を淡黄色油状物として得た。
【0112】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ６．９３ （ｔ、J = １０７．４ Ｈｚ）．
δHＮＭＲ(５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ５．８４ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．２６
（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 ＝）、４．３２－４．２１ （ｍ、４Ｈ、２x OCH2 ＣＨ3）、２．８
２ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．３７ （ｔ、J = ７．１Ｈｚ、６Ｈ、２ X OCH2
ＣＨ3）
δHＮＭＲ(５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ５．８４ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．２６
（ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 ＝）、４．３２－４．２１ （ｍ、４Ｈ、２x OCH2 ＣＨ3）、２．８
２ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．３７ （ｔ、J = ７．１Ｈｚ、６Ｈ、２ X OCH2
ＣＨ3）
【0113】
（１，１－ジフルオロブト－３－エン－１－イル）ホスホン酸二塩化物（７）
化合物６（２．５ｇ、１０．９５ｍｍｏｌ、１当量）を使用して２について記載したよ
うに合成して、粗生成物７（２．２８ｇ、１００％）を褐色液体として得、これをさらに
精製することなく次の工程で使用した。
化合物６（２．５ｇ、１０．９５ｍｍｏｌ、１当量）を使用して２について記載したよ
うに合成して、粗生成物７（２．２８ｇ、１００％）を褐色液体として得、これをさらに
精製することなく次の工程で使用した。
【0114】
δP ＮＭＲ(２０２ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）： ３１．５６ （ｔ、J = １３８．８ Ｈｚ）
．
．
【0115】
メチル（（１，１－ジフルオロブト－３－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）
－Ｌ－アラニン酸（８ａ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンメチルエ
ステル塩化水素（０．２６１ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順１に従っ
て合成し、製品８ａ（０．１５０ｇ、２４％）を無色油として得た。
－Ｌ－アラニン酸（８ａ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンメチルエ
ステル塩化水素（０．２６１ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順１に従っ
て合成し、製品８ａ（０．１５０ｇ、２４％）を無色油として得た。
【0116】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．０５ （ｄｄ、J = １０１．１、４９．
９）、８．４１ （ｄｄ、J = １００．０、５１．１Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２９ （ｍ、ＣＨ２＝Ｃ
Ｈ）、４．１４ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６９ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ、３Ｈ、
ＯＣＨ3），３．６４ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．１３－２．８４ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－
ＣＨ2）、１．３８ （２x d、７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ-ＣＨ)
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．７６ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１３０．０２ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ）、１２７．４０－１２７．０７ （ｍ）、
１２５．６４、１２１．５４ （ｄ、J = ９．３ Ｈｚ）、１２０．５４ （ｔ、J = ４．
８ Ｈｚ）、５２．６９、５０．０９ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ）、３９．３９－３７．２
２ （ｍ）、２１．７４（２ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨ３）．
９）、８．４１ （ｄｄ、J = １００．０、５１．１Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２９ （ｍ、ＣＨ２＝Ｃ
Ｈ）、４．１４ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６９ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ、３Ｈ、
ＯＣＨ3），３．６４ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．１３－２．８４ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－
ＣＨ2）、１．３８ （２x d、７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ-ＣＨ)
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．７６ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１３０．０２ （ｄ、J = ４．１ Ｈｚ）、１２７．４０－１２７．０７ （ｍ）、
１２５．６４、１２１．５４ （ｄ、J = ９．３ Ｈｚ）、１２０．５４ （ｔ、J = ４．
８ Ｈｚ）、５２．６９、５０．０９ （ｄ、J = ６．６ Ｈｚ）、３９．３９－３７．２
２ （ｍ）、２１．７４（２ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨ３）．
【0117】
イソプロピル（（１，１－ジフルオロブト－３－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホ
リル）－Ｌ－アラニン酸（８ｂ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンイソプロ
ピルエステル塩化水素（０．３１４ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順
１に従って合成し、生成物８ｂ（０．１６５ｇ、２５％）を無色油として得た。
リル）－Ｌ－アラニン酸（８ｂ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンイソプロ
ピルエステル塩化水素（０．３１４ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順
１に従って合成し、生成物８ｂ（０．１６５ｇ、２５％）を無色油として得た。
【0118】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．１７ （ｄｄ、J = １０１．１、３０．
３Ｈｚ）、８．４６ （ｄｄ、J = ９９．９、３８．０Ｈｚ）
δHＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）。７．３４ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０（ｍ
、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２９ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2
＝ＣＨ）、４．９９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰｒ）、４．１４－３．９９ （ｍ、１Ｈ、Ｃ
Ｈ－ＮＨ）、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．００－２．８９ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－
ＣＨ2）、１．３５－１．１７ （ｍ、９Ｈ、ＣＨ３－ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．６８ （ｄ、J = ５．９ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．４６、１２９．８８ （ｄ、J = ４．２ Ｈｚ）、１２７．１１ （ｄ、J =
５．４ Ｈｚ）、１２５．４６、１２１．３６ （ｄ、J = ８．９ Ｈｚ）、１２０．４０
（ｔ、J = ４．９ Ｈｚ）、６９．３９ （ｄ、J = ２．８ Ｈｚ、ＣＨｉＰｒ）、５０．
１５、３８．６３－３７．９９ （ｍ）、２１．５８ （ｄ、J = １．６ Ｈｚ）、２１．
４４ （２ｄ、J = ３．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
３Ｈｚ）、８．４６ （ｄｄ、J = ９９．９、３８．０Ｈｚ）
δHＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）。７．３４ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２０（ｍ
、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２９ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2
＝ＣＨ）、４．９９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰｒ）、４．１４－３．９９ （ｍ、１Ｈ、Ｃ
Ｈ－ＮＨ）、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．００－２．８９ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－
ＣＨ2）、１．３５－１．１７ （ｍ、９Ｈ、ＣＨ３－ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．６８ （ｄ、J = ５．９ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．４６、１２９．８８ （ｄ、J = ４．２ Ｈｚ）、１２７．１１ （ｄ、J =
５．４ Ｈｚ）、１２５．４６、１２１．３６ （ｄ、J = ８．９ Ｈｚ）、１２０．４０
（ｔ、J = ４．９ Ｈｚ）、６９．３９ （ｄ、J = ２．８ Ｈｚ、ＣＨｉＰｒ）、５０．
１５、３８．６３－３７．９９ （ｍ）、２１．５８ （ｄ、J = １．６ Ｈｚ）、２１．
４４ （２ｄ、J = ３．２ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
【0119】
ｔｅｒｔ‐Ｂｕｔｙｌ((１，１‐ジフルオロバスト‐３‐ｅｎ‐１‐ｙｌ）（フェノキシ
）ホスホリル）‐Ｌ‐アラニン酸（８ｃ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンｔｅｒｔ
ブチルエステル塩化水素（０．３４０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手
順１に従って合成し、生成物８ｃ（０．３２０ｇ、４６％）を無色油として得た。
）ホスホリル）‐Ｌ‐アラニン酸（８ｃ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンｔｅｒｔ
ブチルエステル塩化水素（０．３４０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手
順１に従って合成し、生成物８ｃ（０．３２０ｇ、４６％）を無色油として得た。
【0120】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．２３ （ｄｄ、J = １０１．０、３４．
４Ｈｚ）、８．５２ （ｄｄ、J = ９９．６、３６．０Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３４ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ），７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２８ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．０８ － ３．９８ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６７ （ｍ、１Ｈ、
ＮＨ）、３．０１－２．８４ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．４２ （ｄ、J = ５．
２ Ｈｚ，９Ｈ、ｔＢｕ）、１．３０ （ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．４８ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．７２、１２９．９９ （ｄ、J = ２．１ Ｈｚ）、１２８．５９－１２６．
９５ （ｍ）、１２５．５４、１２１．４６ （ｄ、J = ９．２ Ｈｚ）、１２０．５４ （
ｔ、J = ４．８ Ｈｚ）、８２．３２ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ）、５０．６９ （ｄ、J =
２．８ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３８．８０－３８．１２ （ｍ）、２７．９９、２１．８５
（２ｄ、J = ３．１ Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）．
４Ｈｚ）、８．５２ （ｄｄ、J = ９９．６、３６．０Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３４ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ），７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．２８ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ
2 ＝ＣＨ）、４．０８ － ３．９８ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、３．６７ （ｍ、１Ｈ、
ＮＨ）、３．０１－２．８４ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．４２ （ｄ、J = ５．
２ Ｈｚ，９Ｈ、ｔＢｕ）、１．３０ （ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．４８ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．７２、１２９．９９ （ｄ、J = ２．１ Ｈｚ）、１２８．５９－１２６．
９５ （ｍ）、１２５．５４、１２１．４６ （ｄ、J = ９．２ Ｈｚ）、１２０．５４ （
ｔ、J = ４．８ Ｈｚ）、８２．３２ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ）、５０．６９ （ｄ、J =
２．８ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３８．８０－３８．１２ （ｍ）、２７．９９、２１．８５
（２ｄ、J = ３．１ Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）．
【0121】
ベンジル（（１，１－ジフルオロブト－３－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル
）－Ｌ－アラニン酸（８ｄ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンベンジル
エステル塩化水素（０．４０３ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に
従って合成し、生成物８ｄ（０．３５０ｇ、４５ ％収率）を無色油として得た。
）－Ｌ－アラニン酸（８ｄ）
フェノール（０．２１０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬ－アラニンベンジル
エステル塩化水素（０．４０３ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）を使用して一般手順１に
従って合成し、生成物８ｄ（０．３５０ｇ、４５ ％収率）を無色油として得た。
【0122】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．０８ （ｄｄ、J = １０１．２、４５．
４Ｈｚ）、８．３９ （ｄｄ、J = １００．１、４６．５Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．４１－７．２９ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２５－７．１７ （ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８７ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．
２７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１１ （ｍ、２Ｈ、－ＯＣＨ2）、４．３３４．
０９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ-ＮＨ)、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．９３ （ｍ、２Ｈ、
Ｐ－ＣＨ2）、１．３６ （ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．１５ （ｄ、J = ３．２ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．６８、１３５．２６ （ｄ、J = ６．４ Ｈｚ）、１３０．０１ （ｄ、J =
４．１ Ｈｚ）、１２８．８７－１２８．５２ （ｍ）、１２８．３５ （ｄ、J = １．１
Ｈｚ）、１２７．３８－１２７．０３ （ｍ）、１２５．６２、１２２．２４－１２０．
３８ （ｍ）、１２０．５１、６７．４９、５０．２０、３８．７４－３８．０７ （ｍ）
、２１．９６ （２ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
４Ｈｚ）、８．３９ （ｄｄ、J = １００．１、４６．５Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．４１－７．２９ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２５－７．１７ （ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．８７ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．
２７ （ｍ、２Ｈ、ＣＨ2 ＝ＣＨ）、５．１１ （ｍ、２Ｈ、－ＯＣＨ2）、４．３３４．
０９ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ-ＮＨ)、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、２．９３ （ｍ、２Ｈ、
Ｐ－ＣＨ2）、１．３６ （ｄ、J = ７．２ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．１５ （ｄ、J = ３．２ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４９．６８、１３５．２６ （ｄ、J = ６．４ Ｈｚ）、１３０．０１ （ｄ、J =
４．１ Ｈｚ）、１２８．８７－１２８．５２ （ｍ）、１２８．３５ （ｄ、J = １．１
Ｈｚ）、１２７．３８－１２７．０３ （ｍ）、１２５．６２、１２２．２４－１２０．
３８ （ｍ）、１２０．５１、６７．４９、５０．２０、３８．７４－３８．０７ （ｍ）
、２１．９６ （２ｄ、J = ３．５ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）．
【0123】
メチル（（（Ｅ）－１，１－ジフルオロ－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エン
－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸塩（９ａ）
化合物８ａ（０．１５０ｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ａ（９７ｍｇ、５８％）を無色油として得た。
－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸塩（９ａ）
化合物８ａ（０．１５０ｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ａ（９７ｍｇ、５８％）を無色油として得た。
【0124】
δPＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3） δ９．２７ （ｄｄ、J = １１２．１、１８．４
Ｈｚ）、８．４４ （ｄｄ、J = １２６．４、２０．２Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１８ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ
）、４．０７ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．７５－３．４６ （ｍ、４Ｈ、ＮＨ、
ＯＣＨ3）、３．１０－２．７９ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８３ （ｍ，１Ｈ、
ＯＨ）、１．７６ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ），１．３７ （２x d、J = ７
．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７６、１４１．３８ （ｄ、J = ７
．６ Ｈｚ）、１３０．０４ （ｄ、J = ３．２ Ｈｚ）、１２５．６５ （ｄ、J = ４．０
Ｈｚ）、１２０．５６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０．４７ （ｄ、J = ４．７ Ｈ
ｚ）、６８．２５ （ｄ、J = １．９ Ｈｚ）、５２．８０ （ＣＨ3 －Ｏ）、５０．０９
（ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３２．８２、２１．８２ （２ｄ、J = ２．６
Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、１４．１５ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C16 Ｈ22 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４００．１１０１；
検出： ４００．１１０９
Ｈｚ）、８．４４ （ｄｄ、J = １２６．４、２０．２Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１８ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ
）、４．０７ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．７５－３．４６ （ｍ、４Ｈ、ＮＨ、
ＯＣＨ3）、３．１０－２．７９ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８３ （ｍ，１Ｈ、
ＯＨ）、１．７６ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ），１．３７ （２x d、J = ７
．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７６．７６、１４１．３８ （ｄ、J = ７
．６ Ｈｚ）、１３０．０４ （ｄ、J = ３．２ Ｈｚ）、１２５．６５ （ｄ、J = ４．０
Ｈｚ）、１２０．５６ （ｄ、J = ４．６ Ｈｚ）、１２０．４７ （ｄ、J = ４．７ Ｈ
ｚ）、６８．２５ （ｄ、J = １．９ Ｈｚ）、５２．８０ （ＣＨ3 －Ｏ）、５０．０９
（ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３２．８２、２１．８２ （２ｄ、J = ２．６
Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、１４．１５ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C16 Ｈ22 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４００．１１０１；
検出： ４００．１１０９
【0125】
イソプロピル（（（Ｅ）－１，１－ジフルオロ－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３
－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｂ）
化合物８ｂ（０．１５０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｂ（１１７ｍｇ、６９％）を無色油として得た。
－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｂ）
化合物８ｂ（０．１５０ｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｂ（１１７ｍｇ、６９％）を無色油として得た。
【0126】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．３０ （ｄｄ、J = １０９．１、３４．
４Ｈｚ）、８．４２ （ｄｄ、J = １１１．１、３８．４Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．００（ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰ
ｒ）、４．１７－３．９１ （ｍ、３Ｈ、ＣＨ－ＮＨ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６７ （ｍ
、１Ｈ、ＮＨ）、３．０８－２．７５ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８６ （ｍ、
１Ｈ、ＯＨ）、１．７０ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．３４－１．１９
（ｍ、９Ｈ、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．０９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４１．３７ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ）、１３０．０３ （ｄ、J = ２．６ Ｈｚ）
、１２５．６０ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、１２０．５０ （ｄｄ、J = １０．６、４．
７ Ｈｚ）、１１３．７９ － １１３．４３ （ｍ）、６９．７１ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ
）、６８．２５、５０．２９ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）、３０．８８－２８．７２ （ｍ
）、２１．７３ （ｄ、J = ８．２ Ｈｚ）、２１．８４ （２ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ
ＣＨ3）、１４．１８ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C18 Ｈ26 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４２８．１４１４；
検出： ４２８．１４１４
４Ｈｚ）、８．４２ （ｄｄ、J = １１１．１、３８．４Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３５ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２１ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、５．００（ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ｉＰ
ｒ）、４．１７－３．９１ （ｍ、３Ｈ、ＣＨ－ＮＨ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６７ （ｍ
、１Ｈ、ＮＨ）、３．０８－２．７５ （ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８６ （ｍ、
１Ｈ、ＯＨ）、１．７０ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．３４－１．１９
（ｍ、９Ｈ、ＣＨ3 －ＣＨ－ＮＨ、ＣＨ－ｉＰｒ）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．０９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１４１．３７ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ）、１３０．０３ （ｄ、J = ２．６ Ｈｚ）
、１２５．６０ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、１２０．５０ （ｄｄ、J = １０．６、４．
７ Ｈｚ）、１１３．７９ － １１３．４３ （ｍ）、６９．７１ （ｄ、J = ４．５ Ｈｚ
）、６８．２５、５０．２９ （ｄ、J = ９．６ Ｈｚ）、３０．８８－２８．７２ （ｍ
）、２１．７３ （ｄ、J = ８．２ Ｈｚ）、２１．８４ （２ｄ、J = ４．１ Ｈｚ、ＣＨ
ＣＨ3）、１４．１８ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C18 Ｈ26 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４２８．１４１４；
検出： ４２８．１４１４
【0127】
ｔｅｒｔ－ブチル（（（Ｅ）－１，１－ジフルオロ－５－ヒドロキシ－４－メチルペント
－３－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｃ）
化合物８ｃ（０．１５０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｃ（１０５ｍｇ、６３％）を無色油状物として得た。
－３－エン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｃ）
化合物８ｃ（０．１５０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｃ（１０５ｍｇ、６３％）を無色油状物として得た。
【0128】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．３６ （ｄｄ、J = １０９．１、３４．
４Ｈｚ）、８．４８ （ｄｄ、J = １１１．１、３６．４Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３６ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２２ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１６－３．９３ （ｍ、３Ｈ、
ＣＨ－ＮＨ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６３ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．０８－２．７７ （
ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．９０ （ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、１．７１ （ｓ、３Ｈ、Ｃ
Ｈ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．４３ （ｄ、J = ５．２ Ｈｚ，９Ｈ、t Bu)、１．３０
（２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．７９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１３０．０２、１２５．５６ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ）、１２０．５５ （ｄ、J =
４．６ Ｈｚ）、１２０．４７ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、８２．５９、６８．２６、５
０．７２ （ｄ、J = ７．４ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３２．９７－３２．８０ （ｍ）、２
８．０２ （ｄ、J = １．１ Ｈｚ、３x CH３）、２１．９８ （２ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、
ＣＨＣＨ3）、１４．１６．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C19 Ｈ28 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４４２．１５７１；
検出： ４４２．１５７８
４Ｈｚ）、８．４８ （ｄｄ、J = １１１．１、３６．４Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３６ （ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．２２ （
ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５６ （ｍ、１Ｈ、＝ＣＨ）、４．１６－３．９３ （ｍ、３Ｈ、
ＣＨ－ＮＨ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６３ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．０８－２．７７ （
ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．９０ （ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、１．７１ （ｓ、３Ｈ、Ｃ
Ｈ3 （ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．４３ （ｄ、J = ５．２ Ｈｚ，９Ｈ、t Bu)、１．３０
（２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７２．７９ （ｄ、J = ６．８ Ｈｚ、Ｃ＝
Ｏ）、１３０．０２、１２５．５６ （ｄ、J = ５．８ Ｈｚ）、１２０．５５ （ｄ、J =
４．６ Ｈｚ）、１２０．４７ （ｄ、J = ４．４ Ｈｚ）、８２．５９、６８．２６、５
０．７２ （ｄ、J = ７．４ Ｈｚ、ＣＨ－ＮＨ）、３２．９７－３２．８０ （ｍ）、２
８．０２ （ｄ、J = １．１ Ｈｚ、３x CH３）、２１．９８ （２ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、
ＣＨＣＨ3）、１４．１６．
HRMS (ES+、ｍ／ｚ）計算：(M+Na)+ C19 Ｈ28 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４４２．１５７１；
検出： ４４２．１５７８
【0129】
ベンジル（（（Ｅ）－１，１－ジフルオロ－５－ヒドロキシ－４－メチルペント－３－エ
ン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｄ）
化合物８ｄ（０．１５０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｄ（１０１ｍｇ、６１％）を無色油状物として得た。
ン－１－イル）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニン酸（９ｄ）
化合物８ｄ（０．１５０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１当量）を用いて一般手順２に従って
合成し、生成物９ｄ（１０１ｍｇ、６１％）を無色油状物として得た。
【0130】
δP ＮＭＲ(２０２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ 3）： ９．２１ （ｄｄ、J = １１３．２、２２．
３Ｈｚ）、８．３７ （ｄｄ、J = １１１．１、２４．３Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３９－７．２８ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２４－７．１６ （ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５５ （ｍ，１Ｈ、＝ＣＨ）、５．１３
（ｍ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、４．２７－４．１４ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、４．０６ （
ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．０５ －２．７３ （ｍ
、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８０ （ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、１．６９ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3
（ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．３５ （２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC （１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．３８ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、Ｃ＝Ｏ）
、１４９．７１、１４１．３７ （ｄ、J = ８．３ Ｈｚ）、１３０．０４ （ｄ、J = ３
．１ Ｈｚ）、１２８．７６ （ｄ、J = １２．８ Ｈｚ）、１２８．３５ （ｓ）、１２５
．６３ （ｄ、J = ５．５ Ｈｚ）、１２０．４９ （ｄｄ、J = １３．７、４．６ Ｈｚ）
、１１３．７５－１１３．３４ （ｍ）、６８．２５ （ｄ、J = ２．４ Ｈｚ）、６７．
６１、５０．２２ （ｄ、J = ８．０ Ｈｚ）、３４．３２－３１．１８ （ｍ）、２１．
８４ （ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、１４．１５ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+, m/z)計算：(M+Na)+ C22 Ｈ26 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４７６．１４１４； 検出
： ４７６．１４２１
３Ｈｚ）、８．３７ （ｄｄ、J = １１１．１、２４．３Ｈｚ）
δH ＮＭＲ(５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： ７．３９－７．２８ （ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、
７．２４－７．１６ （ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５５ （ｍ，１Ｈ、＝ＣＨ）、５．１３
（ｍ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、４．２７－４．１４ （ｍ、１Ｈ、ＣＨ－ＮＨ）、４．０６ （
ｍ、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、３．６８ （ｍ、１Ｈ、ＮＨ）、３．０５ －２．７３ （ｍ
、２Ｈ、＝ＣＨ－ＣＨ2）、１．８０ （ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、１．６９ （ｓ、３Ｈ、ＣＨ3
（ＣＨ2）Ｃ＝ＣＨ）、１．３５ （２x d、J = ７．１ Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ－ＣＨ3）．
δC （１２６ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）： １７３．３８ （ｄ、J = ７．９ Ｈｚ、Ｃ＝Ｏ）
、１４９．７１、１４１．３７ （ｄ、J = ８．３ Ｈｚ）、１３０．０４ （ｄ、J = ３
．１ Ｈｚ）、１２８．７６ （ｄ、J = １２．８ Ｈｚ）、１２８．３５ （ｓ）、１２５
．６３ （ｄ、J = ５．５ Ｈｚ）、１２０．４９ （ｄｄ、J = １３．７、４．６ Ｈｚ）
、１１３．７５－１１３．３４ （ｍ）、６８．２５ （ｄ、J = ２．４ Ｈｚ）、６７．
６１、５０．２２ （ｄ、J = ８．０ Ｈｚ）、３４．３２－３１．１８ （ｍ）、２１．
８４ （ｄ、J = ３．８ Ｈｚ、ＣＨＣＨ3）、１４．１５ （ＣＨ3）．
HRMS (ES+, m/z)計算：(M+Na)+ C22 Ｈ26 Ｆ2 ＮＯ5 ＮａＰ： ４７６．１４１４； 検出
： ４７６．１４２１
【0131】
細胞単離
血液を、抗凝固剤としてのヘパリンおよびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の混合
物（２Ｕ／ｍｌヘパリン、１．５mM EDTA)の存在下で、同意された健康なドナー(NRES Co
mmittee West Midlands倫理委員会によって承認された; REC参考文献１４／ＷＭ／１２５
４）から得た。次いで、血液を密度勾配培地上に重層し、リンホプレップ(Stem Cell Tec
hnologies)および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を勾配遠心分離によって精製した。細胞を
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、次いで、２mM L－グルタミン、２５mM H
EPES、１％ピルビン酸ナトリウム、５０μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地に再
懸濁した。
血液を、抗凝固剤としてのヘパリンおよびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の混合
物（２Ｕ／ｍｌヘパリン、１．５mM EDTA)の存在下で、同意された健康なドナー(NRES Co
mmittee West Midlands倫理委員会によって承認された; REC参考文献１４／ＷＭ／１２５
４）から得た。次いで、血液を密度勾配培地上に重層し、リンホプレップ(Stem Cell Tec
hnologies)および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を勾配遠心分離によって精製した。細胞を
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、次いで、２mM L－グルタミン、２５mM H
EPES、１％ピルビン酸ナトリウム、５０μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地に再
懸濁した。
【0132】
フローサイトメトリー解析
未処理および処理ＰＢＭＣをZombie aqua生存染料（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識し、
続いてＢＶ４２１結合抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＢＶ６５０結合抗
ＣＤ８（ＳＫ１; BD Bioscience)、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ２５（Ｍ－Ａ２５、Ｂｉｏｌｅｇ
ｅｎｄ）、ＰＥ結合抗ＣＤ６９（ＴＰ１．５５．３; Beckman Coulter)およびPE Cy５結
合抗Ｖγ９ ＴＣＲ(ＩＭＭＵ３６０、Beckman Coulter)およびＡＰＣ結合抗Ｖδ２ ＴＣ
Ｒ(１２３Ｒ３、Miltenyi Biotech)抗体の混合物で染色した。ＣＤ８+ Ｔ細胞サブセット
またはＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞集団内のＣＤ６９+ ＣＤ２５+のパーセンテージを、フローサ
イトメーターを使用して測定した。データは、FlowJo V１０ソフトウェアを用いて分析し
た。
未処理および処理ＰＢＭＣをZombie aqua生存染料（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識し、
続いてＢＶ４２１結合抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＢＶ６５０結合抗
ＣＤ８（ＳＫ１; BD Bioscience)、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ２５（Ｍ－Ａ２５、Ｂｉｏｌｅｇ
ｅｎｄ）、ＰＥ結合抗ＣＤ６９（ＴＰ１．５５．３; Beckman Coulter)およびPE Cy５結
合抗Ｖγ９ ＴＣＲ(ＩＭＭＵ３６０、Beckman Coulter)およびＡＰＣ結合抗Ｖδ２ ＴＣ
Ｒ(１２３Ｒ３、Miltenyi Biotech)抗体の混合物で染色した。ＣＤ８+ Ｔ細胞サブセット
またはＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞集団内のＣＤ６９+ ＣＤ２５+のパーセンテージを、フローサ
イトメーターを使用して測定した。データは、FlowJo V１０ソフトウェアを用いて分析し
た。
【0133】
細胞毒性アッセイ
Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞を、５μＭゾレドロネートの存在下でＰＢＭＣから１４日間増殖さ
せ、１００ Ｕ／ｍｌのＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を２～３日毎に培地に添加し、
約８５％のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞を得た。膀胱癌細胞株Ｔ２４(ATCC HTB４）を０．１μＭ
のＣＦＳＥで標識し、１０μＭのゾレドロネート、１００ ｐＭのＨＭＢＰＰまたは１０
０ ｐＭの示されたプロドラッグと共に４時間インキュベートした後、培地中で５回洗浄
し、予め増殖させたＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞と１０：１のエフェクター標的比で１８時間共
培養した。次いで、全ての細胞をｅＦｌｕｏｒ７８０生存色素で標識し、ＣＦＳＥ+ ｅ
Ｆｌｕｏｒ７８０生存色素+細胞をフローサイトメトリーを用いて測定した。データは、F
lowJo V１０を用いて分析した。
Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞を、５μＭゾレドロネートの存在下でＰＢＭＣから１４日間増殖さ
せ、１００ Ｕ／ｍｌのＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を２～３日毎に培地に添加し、
約８５％のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞を得た。膀胱癌細胞株Ｔ２４(ATCC HTB４）を０．１μＭ
のＣＦＳＥで標識し、１０μＭのゾレドロネート、１００ ｐＭのＨＭＢＰＰまたは１０
０ ｐＭの示されたプロドラッグと共に４時間インキュベートした後、培地中で５回洗浄
し、予め増殖させたＶγ９Ｖδ２ Ｔ細胞と１０：１のエフェクター標的比で１８時間共
培養した。次いで、全ての細胞をｅＦｌｕｏｒ７８０生存色素で標識し、ＣＦＳＥ+ ｅ
Ｆｌｕｏｒ７８０生存色素+細胞をフローサイトメトリーを用いて測定した。データは、F
lowJo V１０を用いて分析した。
【0134】
参考文献（非特許文献）
1. Morita, C. T.; Jin, C.; Sarikonda, G.; Wang, H. Nonpeptide antigens, prese
ntation mechanisms, and immunological memory of human Vgamma2Vdelta2 T cells: di
scriminating friend from foe through the recognition of prenyl pyrophosphate ant
igens. Immunol Rev 2007, 215, 59-76.
2. Shen, Y.; Zhou, D.; Qiu, L.; Lai, X.; Simon, M.; Shen, L.; Kou, Z.; Wang
, Q.; Jiang, L.; Estep, J.; Hunt, R.; Clagett, M.; Sehgal, P. K.; Li, Y.; Zeng,
X.; Morita, C. T.; Brenner, M. B.; Letvin, N. L.; Chen, Z. W. Adaptive immune re
sponse of Vgamma2Vdelta2+ T cells during mycobacterial infections. Science (New
York, N.Y.) 2002, 295, 2255-8.
3. Fisher, J. P.; Heuijerjans, J.; Yan, M.; Gustafsson, K.; Anderson, J. ga
mmadelta T cells for cancer immunotherapy: A systematic review of clinical trial
s. Oncoimmunology 2014, 3, e27572.
4. Maraka, S.; Kennel, K. A. Bisphosphonates for the prevention and treatme
nt of osteoporosis. BMJ (Clinical research ed.) 2015, 351, h3783.
5. Roelofs, A. J.; Jauhiainen, M.; Monkkonen, H.; Rogers, M. J.; Monkkonen,
J.; Thompson, K. Peripheral blood monocytes are responsible for gammadelta T ce
ll activation induced by zoledronic acid through accumulation of IPP/DMAPP. Brit
ish journal of haematology 2009, 144, 245-50.
6. Davey, M. S.; Malde, R.; Mykura, R. C.; Baker, A. T.; Taher, T. E.; Le D
uff, C. S.; Willcox, B. E.; Mehellou, Y. Synthesis and Biological Evaluation of
( E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl Phosphate (HMBP) Aryloxy Triester Phosphoramid
ate Prodrugs as Activators of Vgamma9/Vdelta2 T-Cell Immune Responses. J Med Che
m 2018, 61, 2111-2117.
7. Vougioukalakis, G. C.; Grubbs, R. H. Ruthenium-based heterocyclic carben
e-coordinated olefin metathesis catalysts. Chem Rev 2010, 110, 1746-87.
8. McKenna, C. E.; Higa, M. T.; Cheung, N. H.; McKenna, M.-C. The facile de
alkylation of phosphonic acid dialkyl esters by bromotrimethylsilane. Tetrahedro
n Letters 1977, 18, 155-158.
9. Bessieres, M.; Sari, O.; Roy, V.; Warszycki, D.; Bojarski, A. J.; Nolan,
S. P.; Snoeck, R.; Andrei, G.; Schinazi, R. F.; Agrofoglio, L. A. Sonication-As
sisted Synthesis of (E)-2-Methyl-but-2-enyl Nucleoside Phosphonate Prodrugs. Che
mistrySelect 2016, 1, 3108-3813.
10. Mehellou, Y. The ProTides Boom. ChemMedChem 2016, 11, 1114-6.
11. Osgerby, L.; Lai, Y. C.; Thornton, P. J.; Amalfitano, J.; Le Duff, C. S.
; Jabeen, I.; Kadri, H.; Miccoli, A.; Tucker, J. H. R.; Muqit, M. M. K.; Mehello
u, Y. Kinetin Riboside and Its ProTides Activate the Parkinson's Disease Associa
ted PTEN-Induced Putative Kinase 1 (PINK1) Independent of Mitochondrial Depolari
zation. J Med Chem 2017, 60, 3518-3524.
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S. P.; Snoeck, R.; Andrei, G.; Schinazi, R. F.; Agrofoglio, L. A. Sonication-As
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u, Y. Kinetin Riboside and Its ProTides Activate the Parkinson's Disease Associa
ted PTEN-Induced Putative Kinase 1 (PINK1) Independent of Mitochondrial Depolari
zation. J Med Chem 2017, 60, 3518-3524.
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図10A】
【図10B】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図13】
【手続補正書】
【提出日】2024-06-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
全ての互変異性体を含む一般式（ＩＶ）の化合物又は塩：
式中、Ｒ３は、式（Ｖ）、式（ＶＩ）または式（ＶＩＩ）の基であって、ここで、Ｒ９は、ＯＨであり；
Ｒ４およびＲ５の各々は、独立してＨまたはハロを表し；
Ｒ６は、Ｃ1-4アルキル鎖であり；
Ｒ７は、非置換Ｃ1-4アルキル鎖または非置換ベンジル基であり；
Ｒ８は、任意に置換されていてもよいＣ5-25アリールまたは５～２５員のヘテロアリール基を表す。
Ｒ６は、Ｃ1-4アルキル鎖であり；
Ｒ７は、非置換Ｃ1-4アルキル鎖または非置換ベンジル基であり；
Ｒ８は、任意に置換されていてもよいＣ5-25アリールまたは５～２５員のヘテロアリール基を表す。
【請求項2】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方又は両方がハロを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
前記ハロ置換基がフルオロ基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項4】
以下の群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
以下の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項6】
以下の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか１に記載の化合物と、薬学的に許容される賦形剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項8】
免疫療法に使用するための、請求項１～６のいずれか１に記載の化合物、または請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項9】
感染症、増殖性疾患または骨粗鬆症の治療に使用するための、請求項８に記載の化合物または医薬組成物。
【請求項10】
前記増殖性疾患が癌である、請求項９に記載の使用のための化合物または医薬組成物。
【請求項11】
患者においてγδＴ細胞免疫反応を活性化する薬剤の調製における、請求項１～６のいずれか１に記載の化合物または請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項12】
患者における感染、増殖性疾患または骨粗鬆症の治療のための薬剤の調製における、請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
前記増殖性疾患が癌である、請求項１２に記載の使用。
【請求項14】
前記化合物または組成物が、治療を必要とする個体から取得したサンプルに生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で投与され、当該サンプルが体内に戻される前にγδＴ細胞の増殖を誘導する、請求項１１～１３のいずれか１に記載の使用。