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特開2024-119083ＨＭＧＢ１の免疫学的測定時にＨＭＧＢ２の測りこみを抑制する方法及びＨＭＧＢ１を特異的に測定する免疫学的測定方法及びＨＭＧＢ１を特異的に測定する免疫学的測定試薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024119083
(43)【公開日】2024-09-03
(54)【発明の名称】ＨＭＧＢ１の免疫学的測定時にＨＭＧＢ２の測りこみを抑制する方法及びＨＭＧＢ１を特異的に測定する免疫学的測定方法及びＨＭＧＢ１を特異的に測定する免疫学的測定試薬
(51)【国際特許分類】
G01N 33/53 20060101AFI20240827BHJP
【ＦＩ】
G01N33/53 D
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023025707
(22)【出願日】2023-02-22
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】000131474
【氏名又は名称】株式会社シノテスト
(72)【発明者】
【氏名】小野 幸恵
(57)【要約】
【課題】ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法及びＨＭＧＢ２の測り込みを抑制したＨＭＧＢ１測定試薬を提供する。
【解決手段】試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とするものである。
【選択図】なし
【解決手段】試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とするものである。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
【請求項2】
ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である請求項１記載のＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
【請求項3】
試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１を測定する方法。
【請求項4】
ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である請求項３記載のＨＭＧＢ１を測定する方法。
【請求項5】
試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１測定試薬。
【請求項6】
ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である請求項５記載のＨＭＧＢ１測定試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、敗血症等の疾患のマーカーとなりうる試料中のＨＭＧＢ１（ハイモビリティーグループプロテイン－１；Ｈｉｇｈ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ－１；ＨＭＧ－１）の免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬並びにＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法に関するものである。
本発明は、臨床検査、臨床病理学及び医学などの生命科学分野等において有用なものである。
本発明は、臨床検査、臨床病理学及び医学などの生命科学分野等において有用なものである。
【背景技術】
【0002】
ハイモビリティーグループプロテイン（Ｈｉｇｈ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ）は、クロマチン構造に含まれる大量の非ヒストンタンパク質として１９６４年に発見され、すべての高等動植物に普遍的に含まれるタンパク質であり、種族間で一次構造の保存性は極めて高い。
また、核内ばかりではなく、細胞質内にも豊富に存在することが分かっている。
生理作用ははっきりとは分かっていないが、ＨＭＧＢ１はＤＮＡと結合する際に二重螺旋構造を緩めることから、転写反応の際にＤＮＡの高次構造を最適構造に変化させて転写活性を高めるという、極めて広範囲の転写促進因子及びヌクレオソーム弛緩因子として機能すると考えられている。
また、核内ばかりではなく、細胞質内にも豊富に存在することが分かっている。
生理作用ははっきりとは分かっていないが、ＨＭＧＢ１はＤＮＡと結合する際に二重螺旋構造を緩めることから、転写反応の際にＤＮＡの高次構造を最適構造に変化させて転写活性を高めるという、極めて広範囲の転写促進因子及びヌクレオソーム弛緩因子として機能すると考えられている。
【0003】
ハイモビリティーグループプロテインには、いくつかの種類が存在する。例えば、ハイモビリティーグループプロテイン－１（ＨＭＧＢ１）、ハイモビリティーグループプロテイン－２（ＨＭＧＢ２）、ハイモビリティーグループプロテイン－３（ＨＭＧＢ３）、ハイモビリティーグループプロテイン－８（ＨＭＧＢ８）、ハイモビリティーグループプロテイン－１７（ＨＭＧＢ１７）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｉ（ＨＭＧＢＩ）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｙ（ＨＭＧＢＹ）、ハイモビリティーグループプロテイン－Ｉ（Ｙ）（ＨＭＧＢＩ（Ｙ））、ハイモビリティーグループプロテイン Ｉ－Ｃ（ＨＭＧＢ Ｉ－Ｃ）等を挙げることができる。
【0004】
ワングらは１９９９年に、ＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体を使用したウエスタンブロット法により、初めて血清中（血液中）のＨＭＧＢ１の定量測定を行った。
その結果、ワングらは、ＨＭＧＢ１が敗血症のマーカーとなりうることを示した。
そして、敗血症の患者において、生き残る患者と、死に至る患者を判別することが、精密に血液中のＨＭＧＢ１を測定することによって可能であることを示した。
その結果、ワングらは、ＨＭＧＢ１が敗血症のマーカーとなりうることを示した。
そして、敗血症の患者において、生き残る患者と、死に至る患者を判別することが、精密に血液中のＨＭＧＢ１を測定することによって可能であることを示した。
【0005】
即ち、ただ単に血液中でのＨＭＧＢ１の存在を確認するだけではなく、精密に定量することの有用性が明らかにされた（非特許文献１参照）。
【0006】
なお、先に、ＨＭＧＢ１の測定に用いる抗体、即ちＨＭＧＢ１に特異的に結合する抗体（抗ＨＭＧＢ１抗体）については、パーキネンらや、レップらによって調製可能なことが示されていた（非特許文献２、非特許文献３参照。）。
この抗体を用いてレップらはＨＭＧＢ１に関して固相酵素免疫測定法（Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）が可能であることを述べている。（なお、この固相酵素免疫測定法は、精製したＨＭＧＢ１をマイクロプレート（マイクロタイタープレート）のウェルに固相化し、これに酵素標識したＨＭＧＢ１に結合する抗体を接触させ、作用させて、ＨＭＧＢ１に結合する抗体が精製したＨＭＧＢ１に結合することを確かめたものである。）
また、ルーヒアイネンらは２０００年に、遺伝子工学によって組換えＤＮＡより調製したラットのＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体と、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の一部「Lys Phe Lys Asp Pro Asn Ala Pro Lys Arg Pro Pro Ser Ala」よりなるペプチドを免疫原として調製したポリクローナル抗体を各々使用して、ＥＬＩＳＡ法のサンドイッチ法により、ヒト血液中のＨＭＧＢ１を測定した（非特許文献４参照）。
この抗体を用いてレップらはＨＭＧＢ１に関して固相酵素免疫測定法（Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）が可能であることを述べている。（なお、この固相酵素免疫測定法は、精製したＨＭＧＢ１をマイクロプレート（マイクロタイタープレート）のウェルに固相化し、これに酵素標識したＨＭＧＢ１に結合する抗体を接触させ、作用させて、ＨＭＧＢ１に結合する抗体が精製したＨＭＧＢ１に結合することを確かめたものである。）
また、ルーヒアイネンらは２０００年に、遺伝子工学によって組換えＤＮＡより調製したラットのＨＭＧＢ１自体を免疫原として調製したポリクローナル抗体と、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の一部「Lys Phe Lys Asp Pro Asn Ala Pro Lys Arg Pro Pro Ser Ala」よりなるペプチドを免疫原として調製したポリクローナル抗体を各々使用して、ＥＬＩＳＡ法のサンドイッチ法により、ヒト血液中のＨＭＧＢ１を測定した（非特許文献４参照）。
【0007】
また、本願出願人は、ＨＭＧＢ１には結合するがＨＭＧＢ２には結合しない抗体、並びにこの抗体を用いるＨＭＧＢ２は測定せずＨＭＧＢ１のみを測定するＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬を開示した（特許文献１。）。
【0008】
更に、本願出願人は、陽イオン及び陰イオンを各々、それぞれのモル濃度にイオンの価数の絶対値を乗じた値が１５０ｍＭ以上となるような濃度で共存させることを特徴とする、試料中に含まれるＨＭＧＢ１及び／又はＨＭＧＢ２の測定方法及び測定試薬を開示した（特許文献２。）。
この測定方法及び測定試薬により測定の感度を高めることができるものである。
この測定方法及び測定試薬により測定の感度を高めることができるものである。
【0009】
更に、本願出願人は、ヒトＨＭＧＢ１の次式（Ｉ）：Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ（Ｉ）で表されるアミノ酸配列に特異的に結合する鳥類由来の抗体よりなる、鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体等を開示した（特許文献３。）。
この鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体は、ヒトＨＭＧＢ１との結合能力が高い高力価の抗体を高い確率で取得し得る、その生産性が高いものである。
この鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体は、ヒトＨＭＧＢ１との結合能力が高い高力価の抗体を高い確率で取得し得る、その生産性が高いものである。
【0010】
しかしながら、この鳥類由来抗ヒトＨＭＧＢ１ポリクローナル抗体は高力価のため測定の感度は高いものの、ポリクローナル抗体のため、測定の特異性は低いものであった。
【0011】
更に、本願出願人は、抗ＨＭＧＢ１抗体を固定化した担体を用いる試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬において、受託番号がＮＩＴＥ Ｐ－０２８４３であるハイブリドーマ１８１２０８ ２Ｈ６株より産生される抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体と受託番号がＮＩＴＥ Ｐ－０２８４２であるハイブリドーマ１８１２１２ ２Ｄ４株より産生される抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体とを同じ担体に固定化したことを特徴とする、試料中のＨＭＧＢ１の測定方法及び測定試薬を開示した（特許文献４。）。
この測定方法及び測定試薬より、多量のシグナルを得ることができ、試料中のＨＭＧＢ１を高感度に測定を行えるものであり、その結果として、再現性よく、そして、低濃度域も正確に測定することができるものである。
この測定方法及び測定試薬より、多量のシグナルを得ることができ、試料中のＨＭＧＢ１を高感度に測定を行えるものであり、その結果として、再現性よく、そして、低濃度域も正確に測定することができるものである。
【0012】
なお、本願出願人が、遺伝情報処理ソフトウェア「ＧＥＮＥＴＹＸ」（Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社）を使用してアミノ酸配列の相同性の解析を行ったところ、ヒトのＨＭＧ１に対して、ヒトのＨＭＧＢ２の相同性は８１．２％であった。
【0013】
このように、ＨＭＧＢ１とＨＭＧＢ２のアミノ酸配列の相同性は高いので、ＨＭＧＢ１又はその一部を免疫源として抗ＨＭＧＢ１抗体を作成し、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１のみならず、試料に含まれるＨＭＧＢ２も測り込んでしまうものであった。
すなわち、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬においては、試料に含まれるＨＭＧＢ２も測り込んでしまうものであったため、その測定値には正の誤差が生じるものであった。
すなわち、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬においては、試料に含まれるＨＭＧＢ２も測り込んでしまうものであったため、その測定値には正の誤差が生じるものであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0014】
【特許文献1】特開２００３－９６０９９号公報
【特許文献2】特開２００４－１４４７２８号公報
【特許文献3】ＷＯ２００８／０７５７８８号公報
【特許文献4】特開２０２０－１４８５５７号公報
【非特許文献】
【0015】
【非特許文献1】Ｈ．Ｗａｎｇら，ＳＣＩＥＮＣＥ，２８５巻，９号，２４８～２５１頁，１９９９年発行
【非特許文献2】Ｊ．Ｐａｒｋｋｉｎｅｎら，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６８巻，２６号，１９７２６～１９７３８頁，１９９３年発行
【非特許文献3】Ｗ．Ａ．Ｌｅｐｐら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，１０巻，４号，４４９～４６５頁，１９８９年発行
【非特許文献4】Ａ．Ｒｏｕｈｉａｉｎｅｎら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，８４巻，１０８７～１０９４頁，２０００年発行
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0016】
前述のとおり、ＨＭＧＢ１とＨＭＧＢ２のアミノ酸配列の相同性は高いため、ＨＭＧＢ１又はその一部を免疫源として抗ＨＭＧＢ１抗体を作成し、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１のみならず、試料に含まれるＨＭＧＢ２も測り込んでしまうものであった。
これに対して、本発明の課題は、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法及びＨＭＧＢ２の測り込みを抑制したＨＭＧＢ１測定試薬を提供することである。
これに対して、本発明の課題は、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法及びＨＭＧＢ２の測り込みを抑制したＨＭＧＢ１測定試薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0017】
本発明者らは、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法及びＨＭＧＢ２の測り込みを抑制したＨＭＧＢ１測定試薬について検討を重ねたところ、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0018】
すなわち、本発明は、以下の発明よりなる。
（１） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
（２） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（１）記載のＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
（３） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１を測定する方法。
（４） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（３）記載のＨＭＧＢ１を測定する方法。
（５） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１測定試薬。
（６） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（５）記載のＨＭＧＢ１測定試薬。
（１） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
（２） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（１）記載のＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法。
（３） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１を測定する方法。
（４） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（３）記載のＨＭＧＢ１を測定する方法。
（５） 試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１測定試薬。
（６） ホウ素及びその化合物が、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物である前記（５）記載のＨＭＧＢ１測定試薬。
【発明の効果】
【0019】
本発明のＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法は、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる方法である。
【0020】
本発明のＨＭＧＢ１を測定する方法は、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる方法である。
【0021】
本発明のＨＭＧＢ１測定試薬は、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる測定試薬である。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に各種化合物をそれぞれ共存させた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）を各々示した図である。
【0023】
【図2】試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に各種濃度のホウ酸をそれぞれ共存させた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）を各々示した図である。
【0024】
【図3】試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に各種のホウ素及びその化合物をそれぞれ共存させた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）を各々示した図である。
【発明を実施するための形態】
【0025】
以下、本発明を詳細に説明する。
【0026】
〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」である。
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」である。
【0027】
前記の本発明は、その技術的構成より、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる方法である。
【0028】
（２） ホウ素及びその化合物
本発明においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に「ホウ素及びその化合物」からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とするものである。
本発明においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に「ホウ素及びその化合物」からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とするものである。
【0029】
「ホウ素及びその化合物」としては、特に限定はないが、例えば、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物等を挙げることができる。
【0030】
ホウ酸の塩としては、特に限定はないが、例えば、メタホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ酸アンモニウム、八ホウ酸二ナトリウム四水和物、又はポリホウ酸ナトリウム等を挙げることができる。
【0031】
ホウ酸の無水物としては、特に限定はないが、例えば、三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）等を挙げることができる。
【0032】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度の下限値としては、４２.４ｍＭ以上が好ましく、７１.７ｍＭ以上がより好ましく、そして１３０．４ｍＭ以上が特に好ましい。
【0033】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度の上限値としては、特に限定はないが、５１６.４ｍＭ［溶解度から算出したホウ酸溶解量上限値］以下が好ましく、高濃度共存させるとコストもかかるので、２６０.８ｍＭ以下がより好ましい。
【0034】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度域としては、それぞれ次の濃度域を好ましい濃度域として挙げることができる。
【0035】
４２．４ｍＭ～５１６.４ｍＭ、４２.４ｍＭ～２６０.８ｍＭ、７１．７ｍＭ～５１６.４ｍＭ、７１.７ｍＭ～２６０.８ｍＭ、１３０.４ｍＭ～５１６.４ｍＭ、又は１３０.４ｍＭ～２６０.８ｍＭ。
【0036】
（３） 免疫学的測定方法
本発明における免疫学的測定方法としては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うものであれば特に限定はないが、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、及び粒子凝集反応法等を挙げることができる。
本発明における免疫学的測定方法としては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うものであれば特に限定はないが、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、及び粒子凝集反応法等を挙げることができる。
【0037】
そして、前記の免疫学的測定方法においては、サンドイッチ法、競合法又は均一系法（ホモジニアス系法）等のいずれの手法においても、本発明の測定方法を適用することができる。
また、本発明の測定方法における測定は、用手法により行ってもよいし、又は分析装置等の装置を用いて行ってもよい。
また、本発明の測定方法における測定は、用手法により行ってもよいし、又は分析装置等の装置を用いて行ってもよい。
【0038】
（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、ポリクローナル抗体、ポリクローナル抗体よりなる抗血清又はモノクローナル抗体のいずれのタイプのものであってもよく、また、これらの抗体のフラグメント（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2又はＦａｂ’等）又は一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）であってもよい。
なお、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、モノクローナル抗体であることが、その調製操作において吸収操作などを省略できること等から好ましい。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、ポリクローナル抗体、ポリクローナル抗体よりなる抗血清又はモノクローナル抗体のいずれのタイプのものであってもよく、また、これらの抗体のフラグメント（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2又はＦａｂ’等）又は一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）であってもよい。
なお、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体は、モノクローナル抗体であることが、その調製操作において吸収操作などを省略できること等から好ましい。
【0039】
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の調製方法について、以下詳述する。
【0040】
［１］ 免疫原
抗ＨＭＧＢ１抗体を調製する際の免疫原であるが、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部又は一部を含むタンパク質又はペプチドを免疫原として用いることができる。
抗ＨＭＧＢ１抗体を調製する際の免疫原であるが、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部又は一部を含むタンパク質又はペプチドを免疫原として用いることができる。
【0041】
なお、この抗ＨＭＧＢ１抗体を産生させるための免疫原は、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部又は一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等であってもよい。
【0042】
また、抗体は、３個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を認識できるとの報告（Ｆ．Ｈｕｄｅｃｚら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４７巻，２０１～２１０頁，１９９２年発行）がある。
【0043】
よって、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原のアミノ酸配列の最小単位としては、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列、又はこれらのアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列の内、連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列を考えることができるので、これらの連続する３つのアミノ酸残基よりなるアミノ酸配列よりなるトリペプチド、又はこれに他のアミノ酸若しくはペプチドが付加したもの等を、本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体の免疫原の最小単位として考えることができる。
【0044】
前記の免疫原としての、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等、又はＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列に１ないし数個（通常１～８個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個、特に好ましくは１～２個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加若しくは修飾を施すことにより得られるアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質等は、ヒトの体液、細胞、組織若しくは臓器等より、公知の方法等により抽出、精製等して、取得することができる。
なお、本発明において、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質を取得する方法としては特に限定はなく、如何なる方法によるものでもよく、例えば、公知の方法により取得することができる。
なお、本発明において、ＨＭＧＢ１のアミノ酸配列の全部若しくは一部のアミノ酸配列を含むペプチド又はタンパク質を取得する方法としては特に限定はなく、如何なる方法によるものでもよく、例えば、公知の方法により取得することができる。
【0045】
なお、前記の免疫原は、液相法及び固相法等のペプチド合成の方法により合成することができ、更にペプチド自動合成装置を用いてもよく、日本生化学会編「生化学実験講座１ タンパク質の化学ＩＶ」，東京化学同人，１９７５年、泉屋ら「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，１９８５年、日本生化学会編「続生化学実験講座２ タンパク質の化学 下」，東京化学同人，１９８７年等に記載された方法に従い合成することができ、前記のアミノ酸配列に、欠失、置換、挿入又は付加を施した変異体を作製することも容易である。
また、非天然型アミノ酸の導入、各アミノ酸残基の化学修飾やシステイン残基を導入することにより分子内を環化させて構造を安定化させる等の修飾を施してもよい。
また、非天然型アミノ酸の導入、各アミノ酸残基の化学修飾やシステイン残基を導入することにより分子内を環化させて構造を安定化させる等の修飾を施してもよい。
【0046】
更に、前記の免疫原は、対応する核酸塩基配列を持つＤＮＡ又はＲＮＡより遺伝子工学技術を用いて調製してもよく、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法Ｉ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法ＩＩ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学実験講座１ 遺伝子研究法ＩＩＩ」，東京化学同人，１９８７年等を参照して調製すればよい。
【0047】
ところで、免疫原が低分子物質の場合には、免疫原に担体（キャリア）を結合させたものを動物等に免疫するのが一般的ではあるが、アミノ酸数５のペプチドを免疫原としてこれに対する特異抗体を産生させたとの報告（木山ら，「日本薬学会第１１２回年会講演要旨集３」，１２２頁，１９９２年発行）もあるので、担体を使用することは必須ではない。
【0048】
なお、抗体を産生させる際に担体（キャリア）を使用する場合の担体としては、スカシガイのヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ニワトリ血清アルブミン、ポリ－Ｌ－リシン、ポリアラニルリシン、ジパルミチルリシン、破傷風トキソイド又は多糖類等の担体として公知なものを用いることができる。
【0049】
免疫原と担体の結合法は、グルタルアルデヒド法、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド法、マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシサクシニミドエステル法、ビスジアゾ化ベンジジン法又はＮ－サクシミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸法等の公知の結合法を用いることができる。
また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン又はリポソーム等の担体に免疫原を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン又はリポソーム等の担体に免疫原を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
【0050】
また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン又はリポソーム等の免疫原結合用担体に免疫原を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
【0051】
［２］ ポリクローナル抗体、抗血清
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体において、ポリクローナル抗体又は抗血清は、以下の操作により取得することができる。
まず、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を哺乳動物(マウス、ウサギ、ラット、ヒツジ、ヤギ、ウマ等)又は鳥類(ニワトリ等)等に免疫する。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体において、ポリクローナル抗体又は抗血清は、以下の操作により取得することができる。
まず、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を哺乳動物(マウス、ウサギ、ラット、ヒツジ、ヤギ、ウマ等)又は鳥類(ニワトリ等)等に免疫する。
【0052】
この前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物の免疫量は、免疫動物の種類、免疫注射部位等により決められるものであるが、マウスの場合には約５～１０週齢のマウス一匹当り一回につき０．１μｇ～数ｍｇ、好ましくは５０μｇ～１ｍｇの前記免疫原、又は前記免疫原と担体の結合物を免疫注射する。また、ウサギの場合はウサギ一匹当り一回につき１０μｇ～数十ｍｇの前記免疫原、又は前記免疫原と担体の結合物を免疫注射する。
【0053】
なお、この前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物は、アジュバントと添加混合して免疫注射することが好ましい。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント又は百日咳菌アジュバント等の公知のものを用いることができる。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
【0054】
初回免疫後、２～３週間間隔で皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を追加免疫注射する。この場合も、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物は、アジュバントを添加混合して追加免疫注射することが好ましい。
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら全採血を行い、血清を分離して本発明の抗体を含む抗血清を得る。
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら全採血を行い、血清を分離して本発明の抗体を含む抗血清を得る。
【0055】
この抗血清を、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム等による塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過法又はアフィニティークロマトグラフィー等の方法、あるいはこれらの方法を組み合わせて抗体の精製を行い、ポリクローナル抗体を得る。
【0056】
なお、ここで得られたポリクローナル抗体は、ＨＭＧＢ１には結合するが、ＨＭＧＢ２には結合しないポリクローナル抗体と、ＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２のいずれにも結合するポリクローナル抗体の両方よりなるものである。
【0057】
なお、免疫原と担体の結合物を用いて動物等に免疫した場合には、得られた抗血清又はポリクローナル抗体中に、この担体に対する抗体が存在するので、このような担体に対する抗体の除去処理を行うことが好ましい。この除去処理方法としては、担体を、得られたポリクローナル抗体又は抗血清の溶液中に添加して生成した凝集物を取り除くか、担体を不溶化固相に固定化してアフィニティークロマトグラフィーにより除去する方法等を用いることができる。
【0058】
［３］ モノクローナル抗体
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体において、モノクローナル抗体は、以下の操作により取得することができる。
モノクローナル抗体は、ケラーらの細胞融合法（Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６巻，４９５～４９７頁，１９７５年発行）によるハイブリドーマ、又はエプスタン－バーウイルス等のウイルスによる腫瘍化細胞等の抗体産生細胞により得ることができる。
細胞融合法によるモノクローナル抗体の調製は、以下の操作により行うことができる。
本発明における抗ＨＭＧＢ１抗体において、モノクローナル抗体は、以下の操作により取得することができる。
モノクローナル抗体は、ケラーらの細胞融合法（Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６巻，４９５～４９７頁，１９７５年発行）によるハイブリドーマ、又はエプスタン－バーウイルス等のウイルスによる腫瘍化細胞等の抗体産生細胞により得ることができる。
細胞融合法によるモノクローナル抗体の調製は、以下の操作により行うことができる。
【0059】
まず、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を、哺乳動物（マウス、ヌードマウス、ラットなど、例えば近交系マウスのＢＡＬＢ／ｃ）又は鳥類（ニワトリなど）等に免疫する。この前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物の免疫量は、免疫動物の種類、免疫注射部位等により適宜決められるものであるが、例えば、マウスの場合には一匹当り一回につき０．１μｇ～５ｍｇの前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を免疫注射するのが好ましい。
【0060】
なお、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物は、アジュバントを添加混合して免疫注射することが好ましい。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント又は百日咳菌アジュバント等の公知なものを用いることができる。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
免疫注射は、皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に行えばよい。
【0061】
初回免疫後、１～２週間間隔で皮下、静脈内、腹腔内又は背部等の部位に、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を追加免疫注射する。この追加免疫注射の回数としては２～６回が一般的である。この場合も前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物は、アジュバントを添加混合して追加免疫注射することが好ましい。
【0062】
初回免疫の後、免疫動物の血清中の抗体価の測定をＥＬＩＳＡ法等により繰り返し行い、抗体価がプラトーに達したら、前記の免疫原、又は前記の免疫原と担体の結合物を生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）に溶解したものを静脈内又は腹腔内に注射し、最終免疫とする。この最終免疫の３～５日後に、免疫動物の脾細胞、リンパ節細胞又は末梢リンパ球等の抗体産生能を有する細胞を取得する。
【0063】
この免疫動物より得られた抗体産生能を有する細胞と哺乳動物等（マウス、ヌードマウス、ラットなど）の骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）とを細胞融合させるのであるが、ミエローマ細胞としてはヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシル・トランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）又はチミジンキナーゼ（ＴＫ）等の酵素を欠損した細胞株のものが好ましく、例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス由来のＨＧＰＲＴ欠損細胞株である、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８株（ＡＴＣＣ ＴＩＢ９）、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８－Ｕ１株（癌研究リサーチソースバンク（ＪＣＲＢ）９０８５）、Ｐ３－ＮＳ１－１－Ａｇ４－１株（ＪＣＲＢ ０００９）、Ｐ３－Ｘ６３－Ａｇ８・６５３株（ＪＣＲＢ ００２８）又はＳＰ２／Ｏ－Ａｇ－１４株（ＪＣＲＢ ００２９）等を用いることができる。
【0064】
細胞融合は、各種分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リポソームもしくはセンダイウイルス（ＨＶＪ）等の融合促進剤を用いて行うか、又は電気融合法により行うことができる。
ミエローマ細胞がＨＧＰＲＴ欠損株又はＴＫ欠損株のものである場合には、ヒポキサンチン・アミノプテリン・チミジンを含む選別用培地（ＨＡＴ培地）を用いることにより、抗体産生能を有する細胞とミエローマ細胞の融合細胞（ハイブリドーマ）のみを選択的に培養し、増殖させることができる。
ミエローマ細胞がＨＧＰＲＴ欠損株又はＴＫ欠損株のものである場合には、ヒポキサンチン・アミノプテリン・チミジンを含む選別用培地（ＨＡＴ培地）を用いることにより、抗体産生能を有する細胞とミエローマ細胞の融合細胞（ハイブリドーマ）のみを選択的に培養し、増殖させることができる。
【0065】
このようにして得られたハイブリドーマの培養上清を、前記の免疫原、前記の免疫原と担体の結合物、又はＨＭＧＢ１等を用いてＥＬＩＳＡ法やウエスタンブロット法等の免疫学的測定法により測定することにより、ＨＭＧＢ１等に結合する抗体を産生するハイブリドーマを選択することができる。
【0066】
このハイブリドーマ選択方法と限界希釈法等の公知のクローニングの方法を組み合わせて行うことにより、抗ＨＭＧＢ１抗体（モノクローナル抗体）、即ちＨＭＧＢ１に結合する抗体（モノクローナル抗体）の産生細胞株を単離して得ることができる。
【0067】
このモノクローナル抗体産生細胞株を適当な培地で培養して、その培養上清から抗ＨＭＧＢ１抗体（モノクローナル抗体）を得ることができるが、培地としては無血清培地又は低濃度血清培地等を用いてもよく、この場合は抗体の精製が容易となる点で好ましく、ＤＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地又はＡＳＦ培地１０３等の培地を用いることができる。
また、モノクローナル抗体産生細胞株を、これに適合性がありプリスタン等であらかじめ刺激した哺乳動物の腹腔内に注入し、一定期間の後、腹腔にたまった腹水より抗ＨＭＧＢ１抗体（モノクローナル抗体）を得ることもできる。
また、モノクローナル抗体産生細胞株を、これに適合性がありプリスタン等であらかじめ刺激した哺乳動物の腹腔内に注入し、一定期間の後、腹腔にたまった腹水より抗ＨＭＧＢ１抗体（モノクローナル抗体）を得ることもできる。
【0068】
このようにして得られたモノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウムなどによる塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過法又はアフィニティークロマトグラフィーなどの方法、あるいはこれらの方法を組み合わせること等により、精製された抗ＨＭＧＢ１抗体（モノクローナル抗体）を得ることができる。
【0069】
（５） 測定試料
本発明における試料としては、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗、涙、腹水若しくは羊水などの体液；大便；血管若しくは肝臓などの臓器；組織；細胞；又は大便、臓器、組織若しくは細胞などの抽出液等、ＨＭＧＢ１が含まれる可能性のある生体試料であれば対象となる。
本発明における試料としては、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗、涙、腹水若しくは羊水などの体液；大便；血管若しくは肝臓などの臓器；組織；細胞；又は大便、臓器、組織若しくは細胞などの抽出液等、ＨＭＧＢ１が含まれる可能性のある生体試料であれば対象となる。
【0070】
（６） 標識抗体を用いた免疫学的測定方法
本発明における免疫学的測定方法を酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、発光免疫測定法、又はイムノクロマトグラフィー法等の標識抗体を用いた免疫学的測定方法により実施する場合には、サンドイッチ法又は競合法等により行うことができるが、サンドイッチ法により実施する時には、固相化抗体及び標識抗体の両方が抗ＨＭＧＢ１抗体である必要がある。
本発明における免疫学的測定方法を酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、発光免疫測定法、又はイムノクロマトグラフィー法等の標識抗体を用いた免疫学的測定方法により実施する場合には、サンドイッチ法又は競合法等により行うことができるが、サンドイッチ法により実施する時には、固相化抗体及び標識抗体の両方が抗ＨＭＧＢ１抗体である必要がある。
【0071】
前記測定方法に用いる固相担体としては、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリビニルトルエン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ナイロン、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ラテックス、リポソーム、ゼラチン、アガロース、セルロース、セファロース、ガラス、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなるマイクロカプセル、ビーズ、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）、試験管、スティック又は試験片等の形状の固相担体を用いることができる。
固相化抗体は、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させて調製することができる。
固相化抗体は、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させて調製することができる。
【0072】
物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を緩衝液などの溶液中で混合し接触させたり、又は緩衝液などに溶解した抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を接触させること等により行うことができる。また、化学的結合法により行う場合は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させること等により行うことができる。
【0073】
また、更に非特異的反応や固相担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させた固相担体の表面又は内壁面に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミン若しくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、固相担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。
【0074】
標識物質としては、酵素免疫測定法の場合には、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸脱水素酵素又はアミラーゼ等を用いることができる。また、蛍光免疫測定法の場合には、フルオレセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミンイソチオシアネート、置換ローダミンイソチオシアネート又はジクロロトリアジンイソチオシアネート等を用いることができる。そして、放射免疫測定法の場合には、トリチウム、ヨウ素１２５又はヨウ素１３１等を用いることができる。また、発光免疫測定法においては、ＮＡＤＨ－ＦＭＮＨ2－ルシフェラーゼ系、ルミノール－過酸化水素－ＰＯＤ系、アクリジニウムエステル系又はジオキセタン化合物系等を用いることができる。更に、イムノクロマトグラフィー法においては、金コロイド粒子、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸脱水素酵素又はアミラーゼ等を用いることができる。
【0075】
抗ＨＭＧＢ１抗体等の抗体と酵素等の標識物質との結合法は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗体と標識物質をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗体と標識物質のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させることにより結合を行うことができる。
【0076】
測定の操作法は公知の方法等（日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；石川榮治ら編「酵素免疫測定法」，第３版，医学書院，１９８７年発行；北川常廣ら編「蛋白質核酸酵素別冊Ｎｏ．３１ 酵素免疫測定法」，共立出版，１９８７年発行）により行うことができる。
【0077】
例えば、固相化抗体と試料を反応させ、同時に標識抗体を反応させるか、又は洗浄の後に標識抗体を反応させることにより、「固相担体＝固相化抗体＝ＨＭＧＢ１＝標識抗体」の複合体を形成させる。そして、未結合の標識抗体を洗浄分離して、「固相化抗体＝ＨＭＧＢ１」を介して固相担体に結合した標識抗体の量又は未結合の標識抗体の量より試料中に含まれていたＨＭＧＢ１の量（濃度）のみを測定することができる。
【0078】
具体的には、酵素免疫測定法の場合は、抗体に標識した酵素に、その至適条件下で基質を反応させ、その酵素反応生成物の量を光学的方法等により測定する。また、蛍光免疫測定法の場合には蛍光物質標識による蛍光強度を、放射免疫測定法の場合には放射性物質標識による放射線量を測定する。そして、発光免疫測定法の場合は発光反応系による発光量を測定する。更に、イムノクロマトグラフィー法の場合は検出箇所における呈色等を測定する。
【0079】
（７） 凝集反応法による免疫学的測定方法
本発明における免疫学的測定方法を、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測る測定法により実施する場合には、溶媒としてリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液又はグッド緩衝液等を用いることができ、更にポリエチレングリコール等の反応促進剤や非特異的反応抑制剤を含ませてもよい。
本発明における免疫学的測定方法を、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測る測定法により実施する場合には、溶媒としてリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液又はグッド緩衝液等を用いることができ、更にポリエチレングリコール等の反応促進剤や非特異的反応抑制剤を含ませてもよい。
【0080】
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させて用いる場合には、固相担体としては、ポリスチレン、スチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体、アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体、塩化ビニル－アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル－アクリル酸共重合体、ポリアクロレイン、スチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－グリシジル（メタ）アクリル酸共重合体、スチレン－ブタジエン共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、ラテックス、ゼラチン、リポソーム、マイクロカプセル、赤血球、シリカ、アルミナ、カーボンブラック、金属化合物、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなる粒子を使用することができる。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させる方法としては、物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により行うことができる。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させる方法としては、物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により行うことができる。
【0081】
物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を緩衝液等の溶液中で混合し接触させたり、又は緩衝液等に溶解した抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を接触させること等により行うことができる。また、化学的結合法により行う場合は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させること等により行うことができる。
【0082】
また、更に非特異的反応や固相担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させた固相担体の表面又は内壁面に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミンもしくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、固相担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。
【0083】
なお、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、固相担体として用いるラテックス粒子の粒径については、特に制限はないものの、ラテックス粒子が測定対象物質（ＨＭＧＢ１）を介して結合し、凝集塊を生成する程度、及びこの生成した凝集塊の測定の容易さ等の理由より、ラテックス粒子の粒径は、その平均粒径が、０．０４～１μｍであることが好ましい。
【0084】
また、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子を含ませる濃度については、試料中のＨＭＧＢ１の濃度、本発明の抗体のラテックス粒子表面上での分布密度、ラテックス粒子の粒径、試料と測定試薬の混合比率等の各種条件により最適な濃度は異なるので一概にいうことはできない。
【0085】
しかし、通常は、試料と測定試薬が混合され、ラテックス粒子に固相化された抗ＨＭＧＢ１抗体と試料中に含まれていたＨＭＧＢ１との抗原抗体反応が行われる測定反応時に、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子の濃度が、反応混合液中において０．００５～１％（ｗ／ｖ）となるようにするのが一般的であり、この場合、反応混合液中においてこのような濃度になるような濃度の「抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子」を測定試薬に含ませる。
【0086】
また、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合、固相担体として用いる粒子の粒径については、特に制限はないものの、その平均粒子径が０．０１～１００μｍの範囲内にあることが好ましく、０．５～１０μｍの範囲内にあることがより好ましい。そして、これらの粒子の比重は、１～１０の範囲内にあることが好ましく、１～２の範囲内にあることがより好ましい。
【0087】
なお、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合の測定に使用する容器としては、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリメタクリレートなどからなる、試験管、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）又はトレイ等を挙げることができる。これらの容器の溶液収容部分（マイクロプレートのウェル等）の底面は、Ｕ型、Ｖ型又はＵＶ型等の底面中央から周辺にかけて傾斜を持つ形状であることが好ましい。
【0088】
測定の操作法は公知の方法等により行うことができるが、例えば、光学的方法により測定する場合には、試料と抗ＨＭＧＢ１抗体、又は試料と固相担体に感作させた抗ＨＭＧＢ１抗体を反応させ、エンドポイント法又はレート法により、透過光や散乱光を測定する。また、目視的に測定する場合には、プレートやマイクロプレート等の前記容器中で、試料と固相担体に感作させた抗ＨＭＧＢ１抗体を反応させ、凝集の状態を目視的に判定する。なお、この目視的に測定する代わりにマイクロプレートリーダー等の機器を用いて測定を行ってもよい。
【0089】
〔２〕 ＨＭＧＢ１を測定する方法
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ１を測定する方法」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１を測定する方法」である。
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ１を測定する方法」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１を測定する方法」である。
【0090】
前記の本発明は、その技術的構成より、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる方法である。
【0091】
（２） ホウ素及びその化合物
ホウ素及びその化合物については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（２） ホウ素及びその化合物」に記載したとおりである。
ホウ素及びその化合物については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（２） ホウ素及びその化合物」に記載したとおりである。
【0092】
（３） 本発明の免疫学的測定方法
本発明の測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（３） 免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
本発明の測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（３） 免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
【0093】
（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体
抗ＨＭＧＢ１抗体については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体」に記載したとおりである。
抗ＨＭＧＢ１抗体については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体」に記載したとおりである。
【0094】
（５） 測定試料
測定試料については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（５）測定試料」に記載したとおりである。
測定試料については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（５）測定試料」に記載したとおりである。
【0095】
（６） 標識抗体を用いた免疫学的測定方法
標識抗体を用いた免疫学的測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（６）標識抗体を用いた免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
標識抗体を用いた免疫学的測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（６）標識抗体を用いた免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
【0096】
（７） 凝集反応法による免疫学的測定方法
凝集反応法による測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（７）凝集反応法による免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
凝集反応法による測定方法については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（７）凝集反応法による免疫学的測定方法」に記載したとおりである。
【0097】
〔３〕 ＨＭＧＢ１測定試薬
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ１測定試薬」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１測定試薬」である。
（１） 総論
本発明における「ＨＭＧＢ１測定試薬」は、「試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とする、ＨＭＧＢ１測定試薬」である。
【0098】
前記の本発明は、その技術的構成より、試料に含まれるＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができ、ＨＭＧＢ１の測定値に正の誤差が生じるのを低減することができる測定試薬である。
【0099】
（２） ホウ素及びその化合物
本発明においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、「ホウ素及びその化合物」からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とするものである。
本発明においては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うための免疫学的測定試薬において、「ホウ素及びその化合物」からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有させることを特徴とするものである。
【0100】
「ホウ素及びその化合物」としては、特に限定はないが、例えば、ホウ酸若しくはその塩又はホウ酸の無水物等を挙げることができる。
【0101】
ホウ酸の塩としては、特に限定はないが、例えば、メタホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ酸アンモニウム、八ホウ酸二ナトリウム四水和物、又はポリホウ酸ナトリウム等を挙げることができる。
【0102】
ホウ酸の無水物としては、特に限定はないが、例えば、三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）等を挙げることができる。
【0103】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度の下限値としては、４２.４ｍＭ以上が好ましく、７１.７ｍＭ以上がより好ましく、そして１３０．４ｍＭ以上が特に好ましい。
【0104】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度の上限値としては、特に限定はないが、５１６.４ｍＭ［溶解度から算出したホウ酸溶解量上限値］以下が好ましく、高濃度共存させるとコストもかかるので、２６０.８ｍＭ以下がより好ましい。
【0105】
「試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存させる」際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度域としては、それぞれ次の濃度域を好ましい濃度域として挙げることができる。
【0106】
４２．４ｍＭ～５１６.４ｍＭ、４２.４ｍＭ～２６０.８ｍＭ、７１．７ｍＭ～５１６.４ｍＭ、７１.７ｍＭ～２６０.８ｍＭ、１３０.４ｍＭ～５１６.４ｍＭ、又は１３０.４ｍＭ～２６０.８ｍＭ。
【0107】
なお、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を共存させる際の「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度が前記の濃度となるよう、本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させることが好ましい。
【0108】
本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬が一つの構成試薬からなる場合、本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させる濃度をＸｍＭとし、測定に用いる本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬の容量をＡｍＬとし、測定に用いる試料の容量をＢｍＬとし、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時における「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度をＣｍＭとすると、次の式が成り立つ。
Ｃ＝（Ｘ×Ａ）÷（Ａ＋Ｂ）
よって、Ｘ＝［Ｃ×（Ａ＋Ｂ）］÷Ａとなる。
Ｃ＝（Ｘ×Ａ）÷（Ａ＋Ｂ）
よって、Ｘ＝［Ｃ×（Ａ＋Ｂ）］÷Ａとなる。
【0109】
本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬が第１試薬と第２試薬の二つの構成試薬からなり、「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」が当該第１試薬のみに含有される場合、当該第１試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させる濃度をＸ１ｍＭとし、測定に用いる当該第１試薬の容量をＡ１ｍＬとし、測定に用いる当該第２試薬の容量をＡ２ｍＬとし、測定に用いる試料の容量をＢｍＬとし、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時における「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度をＣｍＭとすると、次の式が成り立つ。
Ｃ＝（Ｘ１×Ａ１）÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ１＝［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］÷Ａ１となる。
Ｃ＝（Ｘ１×Ａ１）÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ１＝［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］÷Ａ１となる。
【0110】
本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬が第１試薬と第２試薬の二つの構成試薬からなり、「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」が当該第２試薬のみに含有される場合、当該第２試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させる濃度をＸ２ｍＭとし、測定に用いる当該第１試薬の容量をＡ１ｍＬとし、測定に用いる当該第２試薬の容量をＡ２ｍＬとし、測定に用いる試料の容量をＢｍＬとし、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時における「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度をＣｍＭとすると、次の式が成り立つ。
Ｃ＝（Ｘ２×Ａ２）÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ２＝［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］÷Ａ２となる。
Ｃ＝（Ｘ２×Ａ２）÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ２＝［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］÷Ａ２となる。
【0111】
本発明のＨＭＭＧＢ１測定試薬が第１試薬と第２試薬の二つの構成試薬からなり、「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」が当該第１試薬及び当該第２試薬に含有される場合、当該第１試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させる濃度をＸ１ｍＭとし、当該第２試薬に「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」を含有させる濃度をＸ２ｍＭとし、測定に用いる当該第１試薬の容量をＡ１ｍＬとし、測定に用いる当該第２試薬の容量をＡ２ｍＬとし、測定に用いる試料の容量をＢｍＬとし、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時における「ホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物」の濃度をＣｍＭとすると、次の式が成り立つ。
Ｃ＝［（Ｘ１×Ａ１）＋（Ｘ２×Ａ２）］÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ１＝{［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］－（Ｘ２×Ａ２）｝÷Ａ１となる。
また、Ｘ２＝{［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］－（Ｘ１×Ａ１）｝÷Ａ２となる。
Ｃ＝［（Ｘ１×Ａ１）＋（Ｘ２×Ａ２）］÷（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）
よって、Ｘ１＝{［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］－（Ｘ２×Ａ２）｝÷Ａ１となる。
また、Ｘ２＝{［Ｃ×（Ａ１＋Ａ２＋Ｂ）］－（Ｘ１×Ａ１）｝÷Ａ２となる。
【0112】
（３） 本発明における免疫学的測定試薬の測定原理
本発明における免疫学的測定試薬の測定原理としては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うものであれば特に限定はないが、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、粒子凝集反応法等を挙げることができる。
本発明における免疫学的測定試薬の測定原理としては、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行うものであれば特に限定はないが、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、酵素抗体法、蛍光抗体法、イムノクロマトグラフィー法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応測定法、赤血球凝集反応法、粒子凝集反応法等を挙げることができる。
【0113】
そして、前記の本発明における免疫学的測定試薬の測定原理においては、サンドイッチ法、競合法又は均一系法（ホモジニアス系法）等のいずれの手法においても、本発明の測定試薬を適用することができる。
また、本発明の免疫学的測定試薬における測定は、用手法により行ってもよいし、又は分析装置等の装置を用いて行ってもよい。
また、本発明の免疫学的測定試薬における測定は、用手法により行ってもよいし、又は分析装置等の装置を用いて行ってもよい。
【0114】
（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体
抗ＨＭＧＢ１抗体については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体」に記載したとおりである。
抗ＨＭＧＢ１抗体については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（４） 抗ＨＭＧＢ１抗体」に記載したとおりである。
【0115】
（５） 測定試料
測定試料については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（５）測定試料」に記載したとおりである。
測定試料については、前記「〔１〕 ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制しＨＭＧＢ１を測定する方法」の「（５）測定試料」に記載したとおりである。
【0116】
（６） 標識抗体を用いた免疫学的測定試薬
本発明における免疫学的測定試薬を酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、発光免疫測定法、又はイムノクロマトグラフィー法等の標識抗体を用いた免疫学的測定方法を測定原理とする場合には、サンドイッチ法又は競合法等により行うことができるが、サンドイッチ法により実施する時には、固相化抗体及び標識抗体の両方が抗ＨＭＧＢ１抗体である必要がある。
本発明における免疫学的測定試薬を酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、発光免疫測定法、又はイムノクロマトグラフィー法等の標識抗体を用いた免疫学的測定方法を測定原理とする場合には、サンドイッチ法又は競合法等により行うことができるが、サンドイッチ法により実施する時には、固相化抗体及び標識抗体の両方が抗ＨＭＧＢ１抗体である必要がある。
【0117】
前記測定試薬に用いる固相担体としては、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリビニルトルエン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ナイロン、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ラテックス、リポソーム、ゼラチン、アガロース、セルロース、セファロース、ガラス、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなるマイクロカプセル、ビーズ、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）、試験管、スティック又は試験片等の形状の固相担体を用いることができる。
固相化抗体は、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させて調製することができる。
固相化抗体は、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体とを物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により吸着、結合させて調製することができる。
【0118】
物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を緩衝液などの溶液中で混合し接触させたり、又は緩衝液などに溶解した抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を接触させること等により行うことができる。また、化学的結合法により行う場合は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させること等により行うことができる。
【0119】
また、更に非特異的反応や固相担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させた固相担体の表面又は内壁面に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミン若しくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、固相担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。
【0120】
標識物質としては、酵素免疫測定法を測定原理とする場合には、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸脱水素酵素又はアミラーゼ等を用いることができる。また、蛍光免疫測定法を測定原理とする場合には、フルオレセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミンイソチオシアネート、置換ローダミンイソチオシアネート又はジクロロトリアジンイソチオシアネート等を用いることができる。そして、放射免疫測定法を測定原理とする場合には、トリチウム、ヨウ素１２５又はヨウ素１３１等を用いることができる。また、発光免疫測定法を測定原理とする場合には、ＮＡＤＨ－ＦＭＮＨ2－ルシフェラーゼ系、ルミノール－過酸化水素－ＰＯＤ系、アクリジニウムエステル系又はジオキセタン化合物系等を用いることができる。更に、イムノクロマトグラフィー法においては、金コロイド粒子、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸脱水素酵素又はアミラーゼ等を用いることができる。
【0121】
抗ＨＭＧＢ１抗体等の抗体と酵素等の標識物質との結合法は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗体と標識物質をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗体と標識物質のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させることにより結合を行うことができる。
【0122】
本発明の測定試薬を使用する試料中のＨＭＧＢ１測定の操作法は公知の方法等（日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；石川榮治ら編「酵素免疫測定法」，第３版，医学書院，１９８７年発行；北川常廣ら編「蛋白質核酸酵素別冊Ｎｏ．３１ 酵素免疫測定法」，共立出版，１９８７年発行）により行うことができる。
【0123】
例えば、固相化抗体と試料を反応させ、同時に標識抗体を反応させるか、又は洗浄の後に標識抗体を反応させることにより、「固相担体＝固相化抗体＝ＨＭＧＢ１＝標識抗体」の複合体を形成させる。そして、未結合の標識抗体を洗浄分離して、「固相化抗体＝ＨＭＧＢ１」を介して固相担体に結合した標識抗体の量又は未結合の標識抗体の量より試料中に含まれていたＨＭＧＢ１の量（濃度）のみを測定することができる。
【0124】
具体的には、酵素免疫測定法を測定原理とする場合は、抗体に標識した酵素に、その至適条件下で基質を反応させ、その酵素反応生成物の量を光学的方法等により測定する。また、蛍光免疫測定法を測定原理とする場合には蛍光物質標識による蛍光強度を、放射免疫測定法を測定原理とする場合には放射性物質標識による放射線量を測定する。そして、発光免疫測定法を測定原理とする場合は発光反応系による発光量を測定する。更に、イムノクロマトグラフィー法の場合は検出箇所における呈色等を測定する。
【0125】
（７） 凝集反応法による免疫学的測定試薬
本発明における免疫学的測定試薬を、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測る測定法を測定原理とする場合には、溶媒としてリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液又はグッド緩衝液等を用いることができ、更にポリエチレングリコール等の反応促進剤や非特異的反応抑制剤を含ませてもよい。
本発明における免疫学的測定試薬を、免疫比濁法、ラテックス比濁法、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の免疫複合体凝集物の生成を、その透過光や散乱光を光学的方法により測るか、又は目視的に測る測定法を測定原理とする場合には、溶媒としてリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液又はグッド緩衝液等を用いることができ、更にポリエチレングリコール等の反応促進剤や非特異的反応抑制剤を含ませてもよい。
【0126】
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させて用いる場合には、固相担体としては、ポリスチレン、スチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体、アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合体、塩化ビニル－アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル－アクリル酸共重合体、ポリアクロレイン、スチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－グリシジル（メタ）アクリル酸共重合体、スチレン－ブタジエン共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、ラテックス、ゼラチン、リポソーム、マイクロカプセル、赤血球、シリカ、アルミナ、カーボンブラック、金属化合物、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなる粒子を使用することができる。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させる方法としては、物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により行うことができる。
抗ＨＭＧＢ１抗体を固相担体に感作させる方法としては、物理的吸着法、化学的結合法又はこれらの併用等の公知の方法により行うことができる。
【0127】
物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を緩衝液等の溶液中で混合し接触させたり、又は緩衝液等に溶解した抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体を接触させること等により行うことができる。また、化学的結合法により行う場合は、日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイムノアッセイ－技術と応用－」，臨床病理刊行会，１９８３年発行；日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパク質IV」，東京化学同人，１９９１年発行等に記載の公知の方法に従い、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、抗ＨＭＧＢ１抗体と固相担体のそれぞれのアミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基又は水酸基等と反応させること等により行うことができる。
【0128】
また、更に非特異的反応や固相担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させた固相担体の表面又は内壁面に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミンもしくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、固相担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。
【0129】
なお、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、固相担体として用いるラテックス粒子の粒径については、特に制限はないものの、ラテックス粒子が測定対象物質（ＨＭＧＢ１）を介して結合し、凝集塊を生成する程度、及びこの生成した凝集塊の測定の容易さ等の理由より、ラテックス粒子の粒径は、その平均粒径が、０．０４～１μｍであることが好ましい。
【0130】
また、ラテックス比濁法を測定原理とする場合、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子を含ませる濃度については、試料中のＨＭＧＢ１の濃度、本発明の抗体のラテックス粒子表面上での分布密度、ラテックス粒子の粒径、試料と測定試薬の混合比率等の各種条件により最適な濃度は異なるので一概にいうことはできない。
【0131】
しかし、通常は、試料と測定試薬が混合され、ラテックス粒子に固相化された抗ＨＭＧＢ１抗体と試料中に含まれていたＨＭＧＢ１との抗原抗体反応が行われる測定反応時に、抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子の濃度が、反応混合液中において０．００５～１％（ｗ／ｖ）となるようにするのが一般的であり、この場合、反応混合液中においてこのような濃度になるような濃度の「抗ＨＭＧＢ１抗体を固相化させたラテックス粒子」を測定試薬に含ませる。
【0132】
また、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合、固相担体として用いる粒子の粒径については、特に制限はないものの、その平均粒子径が０．０１～１００μｍの範囲内にあることが好ましく、０．５～１０μｍの範囲内にあることがより好ましい。そして、これらの粒子の比重は、１～１０の範囲内にあることが好ましく、１～２の範囲内にあることがより好ましい。
【0133】
なお、ラテックス凝集反応法、赤血球凝集反応法又は粒子凝集反応法等の間接凝集反応法を測定原理とする場合の測定に使用する容器としては、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリメタクリレートなどからなる、試験管、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）又はトレイ等を挙げることができる。これらの容器の溶液収容部分（マイクロプレートのウェル等）の底面は、Ｕ型、Ｖ型又はＵＶ型等の底面中央から周辺にかけて傾斜を持つ形状であることが好ましい。
【0134】
測定の操作法は公知の方法等により行うことができるが、例えば、光学的方法により測定する場合には、試料と抗ＨＭＧＢ１抗体、又は試料と固相担体に感作させた抗ＨＭＧＢ１抗体を反応させ、エンドポイント法又はレート法により、透過光や散乱光を測定する。また、目視的に測定する場合には、プレートやマイクロプレート等の前記容器中で、試料と固相担体に感作させた抗ＨＭＧＢ１抗体を反応させ、凝集の状態を目視的に判定する。なお、この目視的に測定する代わりにマイクロプレートリーダー等の機器を用いて測定を行ってもよい。
【0135】
（８） その他の試薬成分
本発明の測定試薬において、溶媒としては、各種の水系溶媒を用いることができる。この水系溶媒としては、例えば、精製水、生理食塩水、又は、トリス緩衝液、リン酸緩衝液もしくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩衝液等を挙げることができる。
この緩衝液のｐＨについては、適宜適当なｐＨを選択して用いればよく、特に制限はないものの、通常は、ｐＨ３～１２の範囲内のｐＨを選択して用いることが一般的である。
本発明の測定試薬において、溶媒としては、各種の水系溶媒を用いることができる。この水系溶媒としては、例えば、精製水、生理食塩水、又は、トリス緩衝液、リン酸緩衝液もしくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩衝液等を挙げることができる。
この緩衝液のｐＨについては、適宜適当なｐＨを選択して用いればよく、特に制限はないものの、通常は、ｐＨ３～１２の範囲内のｐＨを選択して用いることが一般的である。
【0136】
また、本発明の測定試薬には、前記の抗ＨＭＧＢ１抗体などの抗体を固相化した固相担体、前記の抗ＨＭＧＢ１抗体などの抗体を感作した固相担体、及び／又は前記の抗ＨＭＧＢ１抗体などの抗体と酵素などの標識物質を結合させた標識抗体等の試薬成分の他に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、カゼイン若しくはその塩などのタンパク質；各種塩類；各種糖類；脱脂粉乳；正常ウサギ血清などの各種動物血清；アジ化ナトリウム若しくは抗生物質などの各種防腐剤；活性化物質；反応促進物質；ポリエチレングリコールなどの感度増加物質；非特異的反応抑制物質；又は、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤若しくは陰イオン性界面活性剤などの各種界面活性剤等の１種又は２種以上を適宜含有させてもよい。そして、これらを測定試薬に含有させる際の濃度は特に限定されるものではないが、０．００１～１０％（Ｗ／Ｖ）が好ましく、特に０．０１～５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。
【0137】
なお、前記の界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、デカグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンフィトステロール、フィトスタノール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油若しくはポリオキシエチレンラノリンなどの非イオン性界面活性剤；酢酸ベタインなどの両性界面活性剤；又は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩若しくはポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩などの陰イオン性界面活性剤等を挙げることができる。
【0138】
（９） 測定試薬の構成
本発明の測定試薬は、そのもの単独にて、試料中のＨＭＧＢ１の測定に使用することができる。そして、そのもの単独にて、販売することができる。また、本発明の測定試薬は、他の試薬と組み合わせて、試料中のＨＭＧＢ１の測定に使用することもできる。そして、他の試薬と組み合わせて、販売することもできる。前記の他の試薬としては、例えば、緩衝液、試料希釈液、試薬希釈液、標識物質を含有する試薬、発色などのシグナルを生成する物質を含有する試薬、発色などのシグナルの生成に関与する物質を含有する試薬、校正（キャリブレーション）を行うための物質を含有する試薬、又は精度管理を行うための物質を含有する試薬等を挙げることができる。そして、前記の他の試薬を第１試薬とし、本発明の測定試薬を第２試薬としたり、又は本発明の測定試薬を第１試薬とし、前記の他の試薬を第２試薬としたりして、適宜様々な組合せにて使用、及び販売を行うことができる。
本発明の測定試薬は、そのもの単独にて、試料中のＨＭＧＢ１の測定に使用することができる。そして、そのもの単独にて、販売することができる。また、本発明の測定試薬は、他の試薬と組み合わせて、試料中のＨＭＧＢ１の測定に使用することもできる。そして、他の試薬と組み合わせて、販売することもできる。前記の他の試薬としては、例えば、緩衝液、試料希釈液、試薬希釈液、標識物質を含有する試薬、発色などのシグナルを生成する物質を含有する試薬、発色などのシグナルの生成に関与する物質を含有する試薬、校正（キャリブレーション）を行うための物質を含有する試薬、又は精度管理を行うための物質を含有する試薬等を挙げることができる。そして、前記の他の試薬を第１試薬とし、本発明の測定試薬を第２試薬としたり、又は本発明の測定試薬を第１試薬とし、前記の他の試薬を第２試薬としたりして、適宜様々な組合せにて使用、及び販売を行うことができる。
【0139】
なお、本発明のＨＭＧＢ１測定試薬は、測定試薬キットであってもよい。
【実施例0140】
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【0141】
〔参考例１〕（ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２の調製）
ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２を調製した。
（１） まず、ウシの胸腺５００ｇを、１４０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．５ｍＭのＰＭＳＦを含む６００ｍＬの緩衝液中で破砕を行った。
ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２を調製した。
（１） まず、ウシの胸腺５００ｇを、１４０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．５ｍＭのＰＭＳＦを含む６００ｍＬの緩衝液中で破砕を行った。
【0142】
（２） 次に、この破砕物を遠心分離機で遠心分離を行い、その上澄み液を除去した。
【0143】
（３） これに、１４０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．５ｍＭのＰＭＳＦを含む緩衝液を加えて撹拌した後、遠心分離機で遠心分離を行い、その上澄み液を除去した。
この洗浄操作を２回繰り返して行った。
この洗浄操作を２回繰り返して行った。
【0144】
（４） 次に、得られた沈殿物に、０．７５Ｍの過塩素酸の３００ｍＬを加えた。
そして、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液を分取した。
残った沈殿物に０．７５Ｍの過塩素酸の４００ｍＬを加えた。
これについても、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液を分取した。
この上澄み液と先に分取した上澄み液とを合わせた。
なお、沈殿物は廃棄した。
そして、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液を分取した。
残った沈殿物に０．７５Ｍの過塩素酸の４００ｍＬを加えた。
これについても、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液を分取した。
この上澄み液と先に分取した上澄み液とを合わせた。
なお、沈殿物は廃棄した。
【0145】
（５） 前記の合わせた上澄み液に０．７５Ｍの過塩素酸を加えて、全体の容量を１，０００ｍＬとした。
次に、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液をグラスフィルター（グレード４）で濾過した。
次に、遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液をグラスフィルター（グレード４）で濾過した。
【0146】
（６） 前記の濾過の濾液に、３，５００ｍＬのアセトンと２１ｍＬの濃塩酸の混合液を加えた。
濁りが生じてくるので、遠心分離機で遠心分離して、上澄み液を分取した。
この上澄み液に、アセトン２，５００ｍＬを加えた。
そして、再度、濁りが生じてくるので、これを遠心分離機で遠心分離して、上澄み液を分離し、残った沈殿物を集めた。
濁りが生じてくるので、遠心分離機で遠心分離して、上澄み液を分取した。
この上澄み液に、アセトン２，５００ｍＬを加えた。
そして、再度、濁りが生じてくるので、これを遠心分離機で遠心分離して、上澄み液を分離し、残った沈殿物を集めた。
【0147】
（７） この集めた沈殿物を室温で自然乾燥させた。
以上の操作により、ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２を含むタンパク質画分が、およそ２００ｍｇ得られた。
以上の操作により、ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２を含むタンパク質画分が、およそ２００ｍｇ得られた。
【0148】
（８） 前記のウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２を含むタンパク質画分を、２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む７．５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）の１０ｍＬに溶解した後、この２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む７．５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）で充分に透析を行った。
【0149】
（９） この透析の後、７．５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）で平衡化しておいたＣＭ－セファデックスＣ２５のカラムに添加した。
そしてその後、２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む７．５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）により溶出させて、陽イオン交換クロマトグラフィーを行った。
そしてその後、２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む７．５ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）により溶出させて、陽イオン交換クロマトグラフィーを行った。
【0150】
（１０） ここで溶出した各画分を、ＳＤＳ－ポリアクリルアミド電気泳動にかけ、その易動度よりウシＨＭＧＢ１を含む画分、及びウシＨＭＧＢ２を含む画分を各々特定した。
以上の操作により、ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２それぞれを分取した。
以上の操作により、ウシＨＭＧＢ１及びウシＨＭＧＢ２それぞれを分取した。
【0151】
〔参考例２〕（抗体（２Ｈ６）の調製）
（１） 前記参考例１により調製したウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を免疫原として用いた。
（１） 前記参考例１により調製したウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を免疫原として用いた。
【0152】
なお、このウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）は、ヒトＨＭＧＢ１（全体長のもの）とアミノ酸配列の相同性が９９．５％であり、ヒトＨＭＧＢ１の替りに用いても問題ないものである。
【0153】
この免疫原としての前記参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）の１容量に対して、化学合成アジュバントとしてのＦＲＥＵＮＤアジュバント（ＤＩＦＣＯ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社）を１容量の割合で混合した。
【0154】
（２） 次に、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ）の腹腔内に免疫原として、３００～５００μｇ／匹／回の前記のＨＭＧＢ１溶液とＦＲＥＵＮＤ完全アジュバントとの混合物を注射し、２週間後及び４週間後に、マウスの腹腔内に前記のＨＭＧＢ１溶液とＦＲＥＵＮＤ不完全アジュバントとの混合物を注射した。
【0155】
（３） 最終免疫より４週間後に、前記参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）の原液を３００μｇ／匹によりブースターを行い、その翌日に、免疫したマウスの脾臓の細胞と、ミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を１対１から１０対１の割合で混合し、一般的な方法でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕を加えて細胞融合させ、生育したハイブリドーマコロニーを選別した。
【0156】
なお、具体的には、細胞融合は次のように行った。
混合した前記脾臓細胞とミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を遠心して上清を除き、室温でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕１ｍＬに１分間かけて懸濁した後、３７℃で１分間撹拌した。
混合した前記脾臓細胞とミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）を遠心して上清を除き、室温でポリエチレングリコール〔ＰＥＧ１５００；Ｒｏｃｈｅ社（スイス国）〕１ｍＬに１分間かけて懸濁した後、３７℃で１分間撹拌した。
【0157】
血清不含培地１ｍＬを１分間かけて加える作業を２回行い、その後、血清不含培地７ｍＬを２分間かけて加えた。
【0158】
細胞を数回洗浄した後、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン含有培地に懸濁して９６穴マイクロタイタープレートに分注して、３７℃において５％ＣＯ２存在下で培養した。
【0159】
生育したモノクローナル抗体産生細胞株（融合細胞株）の選別の方法としては、細胞融合から７～１４日後、ウシＨＭＧＢ１（全体長のもの）を固相化し、融合細胞培養上清を一次抗体としたＥＬＩＳＡ法の系にて行った。
【0160】
なお、このＥＬＩＳＡ法は具体的には、次のように行った。
（ｉ） 前記の参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１、及びウシＨＭＧＢ２（ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性１００.０％）のそれぞれをリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）により１μｇ／ｍＬの濃度となるように調製したもの、又は対照としてのリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を、各々９６穴マイクロタイタープレート〔Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ社（米国・イリノイ州）〕のウェルに１００μＬ注入し、５℃、１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれを、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化し、更に１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水にて５℃で１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、ブロッキングした。
（ｉ） 前記の参考例１で調製したウシＨＭＧＢ１、及びウシＨＭＧＢ２（ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性１００.０％）のそれぞれをリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）により１μｇ／ｍＬの濃度となるように調製したもの、又は対照としてのリン酸緩衝生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を、各々９６穴マイクロタイタープレート〔Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ社（米国・イリノイ州）〕のウェルに１００μＬ注入し、５℃、１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれを、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化し、更に１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水にて５℃で１６～２４時間（又は３７℃２時間）静置し、ブロッキングした。
【0161】
（ｉｉ） 次に、前記（ｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを洗浄液〔０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水〕で３回洗浄した。
【0162】
（ｉｉｉ） 次に、前記（ｉｉ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートのウェルに、これらの融合細胞培養上清溶液のそれぞれを試料として１００μＬ注入し、３７℃で２時間静置し、前記マイクロタイタープレートのウェルに固相化された前記のＨＭＧＢ１、及びＨＭＧＢ２のそれぞれと、前記の各融合細胞培養上清溶液に含まれるモノクローナル抗体とを各々反応させた。
【0163】
（ｉｖ） 次に、前記（ｉｉｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを前記の洗浄液で３回洗浄した。
【0164】
（ｖ） 次に、前記（ｉｖ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートの各ウェルに、１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝生理食塩水によって１０００倍希釈したＰＯＤ標識抗マウスＩｇＧ抗体〔ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ社（デンマーク国）〕を１００μＬ注入し、３７℃で２時間静置し、反応を行わせた。
【0165】
（ｖｉ） 次に、前記（ｖ）のマイクロタイタープレートの各ウェルを前記の洗浄液で３回洗浄した。
【0166】
（ｖｉｉ） 次に、０．２ｍＭのＥＤＴＡ・２ナトリウムを含む０．０４５％の３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン塩酸塩水溶液（ｐＨ２．０）よりなる発色液と、５ｍＭ過酸化水素、４１ｍＭクエン酸、０．２ｍＭのＥＤＴＡ・２ナトリウムを含む６０ｍＭリン酸二ナトリウム水溶液（ｐＨ４．３）よりなる基質液とを、１：１で混合して調製した発色基質液の１００μＬを、前記（ｖｉ）で洗浄を行ったマイクロタイタープレートの各ウェルに注入し、室温にて３０分間静置し、反応を行わせ、発色させた。
【0167】
その後、０．７Ｎ硫酸よりなる反応停止液を各ウェルに１００μＬ分注し、発色反応を停止させた。
【0168】
（ｖｉｉｉ） 次に、前記（ｖｉｉ）のマイクロタイタープレートの各ウェルについて、分光光度計を用いて、主波長４５０ｎｍ及び副波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【0169】
上記の測定により、ＨＭＧＢ１に結合する抗体を産生する融合細胞株を選別し、そして、生育した融合細胞株の中から１つのクローンを確立し、２Ｈ６株と命名した。
【0170】
（４） この選別したモノクローナル抗体産生細胞株からＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を次のように精製した。
【0171】
このモノクローナル抗体産生細胞株を、ＰＦＨＭ－ＩＩ（ＧＩＢＣＯ社）を用いてＣＯ２インキュベータ内３７℃で培養した。
【0172】
培養後、上清中のＩｇＧをプロテインＡカラム〔ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社（スウェーデン国）〕に結合させた。
【0173】
結合させたＩｇＧを、１００ｍＭクエン酸水溶液（ｐＨ３．０）で溶出した。
【0174】
溶出液１容量に対して、０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）緩衝液１容量を添加し、精製ＩｇＧとして、ＨＭＧＢ１に結合する抗体をモノクローナル抗体産生細胞株（２Ｈ６）より取得した。
【0175】
このモノクローナル抗体を抗体（２Ｈ６）と名付けた。
【0176】
「抗体（２Ｈ６）」のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２０８ ２Ｈ６株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４３」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0177】
〔参考例３〕（抗体（２Ｄ４）の調製）
前記参考例２とは別の時に、前記参考例２の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、再度、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の調製を行った。
前記参考例２とは別の時に、前記参考例２の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、再度、抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体の調製を行った。
【0178】
その結果、生育した融合細胞株の中から一つのクローンを確立し、２Ｄ４株と命名した。
【0179】
そして、２Ｄ４株のモノクローナル抗体産生細胞株から抗ＨＭＧＢ１モノクローナル抗体を得ることができた。
【0180】
このモノクローナル抗体を抗体（２Ｄ４）と名付けた。
【0181】
「抗体（２Ｄ４）」のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２１２ ２Ｄ４株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４２」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0182】
〔参考例４〕（抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体（５Ｄ１）の調製）
前記参考例２及び参考例３とは別の時に、前記参考例２の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、ＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体の調製を行った。
前記参考例２及び参考例３とは別の時に、前記参考例２の（１）～（４）の記載の通りに操作を行い、ＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体の調製を行った。
【0183】
その結果、生育した融合細胞株の中から一つのクローンを確立し、５Ｄ１株と命名した。
【0184】
そして、５Ｄ１株のモノクローナル抗体産生細胞株からＨＭＧＢ１とＨＭＧＢ２に結合するモノクローナル抗体を得ることができた。
【0185】
このモノクローナル抗体を抗ＨＭＧＢ１，２モノクローナル抗体（５Ｄ１）（以下、「抗体（５Ｄ１）」と記載することがある。）と名付けた。
【0186】
「抗体（５Ｄ１）」のモノクローナル抗体産生細胞株である１８１２１２ ５Ｄ１株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センター［ＮＰＭＤ］（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足二丁目５番８号）に、「受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０２８４４」として２０１８年１２月２０日付けにて寄託されている。
【0187】
〔実施例１〕（本発明の効果の確認－１）
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種化合物を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種化合物を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
【0188】
１．試薬
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）
４００ｍＭのＰＩＰＥＳを含む、４００ｍＭＰＩＰＥＳ水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）」とした。
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）
４００ｍＭのＰＩＰＥＳを含む、４００ｍＭＰＩＰＥＳ水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）」とした。
【0189】
（ＩＩ）第１試薬－２（イミダゾール）
４００ｍＭのイミダゾールを含む、４００ｍＭイミダゾール水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（イミダゾール）」とした。
４００ｍＭのイミダゾールを含む、４００ｍＭイミダゾール水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（イミダゾール）」とした。
【0190】
（ＩＩＩ）第１試薬－３（トリス）
４００ｍＭのトリス［トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］を含む、４００ｍＭトリス水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（トリス）」とした。
４００ｍＭのトリス［トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］を含む、４００ｍＭトリス水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（トリス）」とした。
【0191】
（ＩＶ）第１試薬－４（ホウ酸）
４００ｍＭのホウ酸を含む、４００ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（ホウ酸）」とした。
４００ｍＭのホウ酸を含む、４００ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（ホウ酸）」とした。
【0192】
ｉｉ）第２試薬
（ａ） 前記参考例２で取得した抗体（２Ｈ６）と前記参考例３で取得した抗体（２Ｄ４）の等量混合物を、緩衝液を加えて、２０００μｇ／ｍＬに希釈した。
（ａ） 前記参考例２で取得した抗体（２Ｈ６）と前記参考例３で取得した抗体（２Ｄ４）の等量混合物を、緩衝液を加えて、２０００μｇ／ｍＬに希釈した。
【0193】
（ｂ） 次に、前記の希釈物の１.０ｍＬを、ラテックス粒子〔藤倉化成社（日本国）〕の１.０ｍＬと混合して、接触させて、２～８℃で１６時間静置し、各モノクローナル抗体をラテックス粒子に感作した。
【0194】
（ｃ） 次に、これらの各モノクローナル抗体を感作したラテックス粒子を、２％ＢＳＡを含むトリス緩衝液（ｐＨ７.０）６.０ｍＬに添加混合し、ブロッキング処理を行った。
このようにして抗体（２Ｈ６）及び抗体（２Ｄ４）を感作させたラテックス粒子液（４０μｇ／ｍＬ）を調製した。
このようにして抗体（２Ｈ６）及び抗体（２Ｄ４）を感作させたラテックス粒子液（４０μｇ／ｍＬ）を調製した。
【0195】
（ｄ） 別途、前記参考例４で取得した抗体（５Ｄ１）を、緩衝液を加えて、１０００μｇ／ｍＬに希釈した。
【0196】
（ｅ） 次に、前記の希釈物の１.０ｍＬを、ラテックス粒子〔藤倉化成社（日本国）〕の１．０ｍＬと混合して、接触させて、２～８℃で１６間静置し、前記モノクローナル抗体をラテックス粒子に感作した。
【0197】
（ｆ） 次に、このモノクローナル抗体を感作したラテックス粒子を、２％ＢＳＡを含むトリス緩衝液（ｐＨ７.０）６.０ｍＬに添加混合し、ブロッキング処理を行った。
このようにして抗体（５Ｄ１）を感作させたラテックス粒子液（２０μｇ／ｍＬ）を調製した。
このようにして抗体（５Ｄ１）を感作させたラテックス粒子液（２０μｇ／ｍＬ）を調製した。
【0198】
（ｇ） 次に、前記（ｃ）で調製した抗体（２Ｈ６）及び抗体（２Ｄ４）を感作させたラテックス粒子液の５０ｍＬと、前記（ｆ）で調製した抗体（５Ｄ１）を感作させたラテックス粒子液の５０ｍＬとを、混合し、第２試薬を調製した。
【0199】
２．試料
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、８０ｎｇ／ｍＬになるように希釈液（市販のＨＭＧＢ１測定試薬「ＨＭＧＢ１ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＩＩ」〔シノテスト社（日本国）〕の「検体希釈液」）にて希釈して「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
精製ブタＨＭＧＢ１（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ１とのアミノ酸配列の相同性９９．１％］を、８０ｎｇ／ｍＬになるように希釈液（市販のＨＭＧＢ１測定試薬「ＨＭＧＢ１ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＩＩ」〔シノテスト社（日本国）〕の「検体希釈液」）にて希釈して「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
【0200】
ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）
精製ブタＨＭＧＢ２（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性８７.９％］を、８０ｎｇ／ｍＬになるように希釈液（市販のＨＭＧＢ１測定試薬「ＨＭＧＢ１ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＩＩ」〔シノテスト社（日本国）〕の「検体希釈液」）にて希釈して「試料（ＨＭＧＢ２）」を調製した。
精製ブタＨＭＧＢ２（胸腺由来）［ヒトＨＭＧＢ２とのアミノ酸配列の相同性８７.９％］を、８０ｎｇ／ｍＬになるように希釈液（市販のＨＭＧＢ１測定試薬「ＨＭＧＢ１ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＩＩ」〔シノテスト社（日本国）〕の「検体希釈液」）にて希釈して「試料（ＨＭＧＢ２）」を調製した。
【0201】
ｉｉｉ）試料（生理食塩水）
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
【0202】
３.測定
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
【0203】
ｉｉ） 試料として前記２のｉ）試料（ＨＭＧＢ１）、前記２のｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）及び前記２のｉｉｉ）試料（生理食塩水）のそれぞれの２４μＬを用い、第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）の１２０μＬを用い、そして、第２試薬として前記１のｉｉ）の第２試薬の４０μＬを用い、２ポイント－エンド法にて前記試料に前記第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）を添加、混合し、３７℃で５分間静置後、前記第２試薬を添加、混合し、３７℃で５分間静置し、前記第２試薬添加後５分間の吸光度変化量の測定を行った。反応時間は計１０分間、測定波長は８００ｎｍにて行った。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
【0204】
次の計算式によりＨＭＧＢ２測り込み（％）を算出した。
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
【0205】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するＰＩＰＥＳの濃度は、２６１ｍＭである。
【0206】
ｉｉｉ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩ）第１試薬－２（イミダゾール）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－２（イミダゾール）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0207】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するイミダゾールの濃度は、２６１ｍＭである。
【0208】
ｉｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩＩ）第１試薬－３（トリス）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－３（トリス）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0209】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するトリス［トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］の濃度は、２６１ｍＭである。
【0210】
ｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）に替えて前記１のｉ）の（ＩＶ）第１試薬－４（ホウ酸）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－４（ホウ酸）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0211】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、２６１ｍＭである。
【0212】
４．測定結果
前記３における測定の結果を、図１に示した。
前記３における測定の結果を、図１に示した。
【0213】
この図１において、縦軸はＨＭＧＢ２測り込み（％）の数値を示し、横軸は左側から順に第１試薬として、第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）を用いた場合、第１試薬－２（イミダゾール）を用いた場合、第１試薬－３（トリス）を用いた場合、そして第１試薬－４（ホウ酸）を用いた場合をそれぞれ示す。
【0214】
（１）第１試薬として第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）を用いた場合
図１において、第１試薬として第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１６．５％に達していた。
図１において、第１試薬として第１試薬－１（ＰＩＰＥＳ）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１６．５％に達していた。
【0215】
（２）第１試薬として第１試薬－２（イミダゾール）を用いた場合
図１において、第１試薬として第１試薬－２（イミダゾール）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１１．０％に達していた。
図１において、第１試薬として第１試薬－２（イミダゾール）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１１．０％に達していた。
【0216】
（３）第１試薬として第１試薬－３（トリス）を用いた場合
図１において、第１試薬として第１試薬－３（トリス）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、９.４％に達していた。
図１において、第１試薬として第１試薬－３（トリス）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、９.４％に達していた。
【0217】
（４）第１試薬として第１試薬－４（ホウ酸）を用いた場合
図１において、第１試薬として第１試薬－４（ホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１．９％に抑えられていた。
図１において、第１試薬として第１試薬－４（ホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、１．９％に抑えられていた。
【0218】
以上の測定結果から、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法又は免疫学的測定試薬において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存又は含有させることにより、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができることが確かめられた。
【0219】
〔実施例２〕（本発明の効果の確認－２）
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種濃度のホウ酸を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種濃度のホウ酸を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
【0220】
１．試薬
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）
６５ｍＭのホウ酸を含む、６５ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）」とした。
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）
６５ｍＭのホウ酸を含む、６５ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）」とした。
【0221】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、４２．４ｍＭであった。
【0222】
（ＩＩ）第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）
１１０ｍＭのホウ酸を含む、１１０ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）」とした。
１１０ｍＭのホウ酸を含む、１１０ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）」とした。
【0223】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、７１．７ｍＭであった。
【0224】
（ＩＩＩ）第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）
１５５ｍＭのホウ酸を含む、１５５ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）」とした。
１５５ｍＭのホウ酸を含む、１５５ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）」とした。
【0225】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、１０１．１ｍＭであった。
【0226】
（ＩＶ）第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）
２００ｍＭのホウ酸を含む、２００ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）」とした。
２００ｍＭのホウ酸を含む、２００ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）」とした。
【0227】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、１３０．４ｍＭであった。
【0228】
ｉｉ）第２試薬
前記実施例１の１の「ｉｉ）第２試薬」の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。
前記実施例１の１の「ｉｉ）第２試薬」の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。
【0229】
２．試料
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
前記実施例１の２の「ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
前記実施例１の２の「ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
【0230】
ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）
前記実施例１の２の「ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
前記実施例１の２の「ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
【0231】
ｉｉｉ）試料（生理食塩水）
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
【0232】
３.測定
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
【0233】
ｉｉ） 試料として前記２のｉ）試料（ＨＭＧＢ１）、前記２のｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）及び前記２のｉｉｉ）試料（生理食塩水）のそれぞれの２４μＬを用い、第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）の１２０μＬを用い、そして、第２試薬として前記１のｉｉ）の第２試薬の４０μＬを用い、２ポイント－エンド法にて前記試料に前記第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）を添加、混合し、３７℃で５分間静置後、前記第２試薬を添加、混合し、３７℃で５分間静置し、前記第２試薬添加後５分間の吸光度変化量の測定を行った。反応時間は計１０分間、測定波長は８００ｎｍにて行った。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
【0234】
次の計算式によりＨＭＧＢ２測り込み（％）を算出した。
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
【0235】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、４２．４ｍＭである。
【0236】
ｉｉｉ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩ）第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0237】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、７１．７ｍＭである。
【0238】
ｉｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩＩ）第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0239】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、１０１．１ｍＭである。
【0240】
ｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＶ）第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0241】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、１３０．４ｍＭである。
【0242】
４．測定結果
前記３における測定の結果を、図２に示した。
前記３における測定の結果を、図２に示した。
【0243】
この図２において、縦軸はＨＭＧＢ２測り込み（％）の数値を示し、横軸は左側から順に第１試薬として、第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）を用いた場合、第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合、第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）を用いた場合、そして第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）を用いた場合をそれぞれ示す。
【0244】
（１）第１試薬として第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）を用いた場合
図２において、第１試薬として第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、８．０％に抑えられていた。
図２において、第１試薬として第１試薬－１（４２．４ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、８．０％に抑えられていた。
【0245】
（２）第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合
図２において、第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７．４％に抑えられていた。
図２において、第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７．４％に抑えられていた。
【0246】
（３）第１試薬として第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）を用いた場合
図２において、第１試薬として第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．６％に抑えられていた。
図２において、第１試薬として第１試薬－３（１０１．１ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．６％に抑えられていた。
【0247】
（４）第１試薬として第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）を用いた場合
図２において、第１試薬として第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．３％に抑えられていた。
図２において、第１試薬として第１試薬－４（１３０．４ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．３％に抑えられていた。
【0248】
以上の測定結果からも、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法又は免疫学的測定試薬において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存又は含有させることにより、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができることが確かめられた。
【0249】
〔実施例３〕（本発明の効果の確認－３）
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種のホウ素及びその化合物を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
ラテックス比濁法により、本発明の効果の確認を行った。
より詳細には、ラテックス比濁法により、各種のホウ素及びその化合物を含む第１試薬を用いてＨＭＧＢ１及びＨＭＧＢ２の測定を行い、ＨＭＧＢ２の測り込み量を求め、本発明の効果の確認を行った。
【0250】
１．試薬
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）
１１０ｍＭのホウ酸を含む、１１０ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）」とした。
ｉ）第１試薬
（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）
１１０ｍＭのホウ酸を含む、１１０ｍＭホウ酸水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）」とした。
【0251】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、７１．７ｍＭであった。
【0252】
（ＩＩ）第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）
１１０ｍＭの三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）を含む、１１０ｍＭ三酸化二ホウ素水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）」とした。
１１０ｍＭの三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）を含む、１１０ｍＭ三酸化二ホウ素水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）」とした。
【0253】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存する三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）の濃度は、７１．７ｍＭであった。
【0254】
（ＩＩＩ）第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）
１１０ｍＭのメタホウ酸ナトリウム四水和物を含む、１１０ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）」とした。
１１０ｍＭのメタホウ酸ナトリウム四水和物を含む、１１０ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）」とした。
【0255】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するメタホウ酸ナトリウム四水和物の濃度は、７１．７ｍＭであった。
【0256】
（ＩＶ）第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）
１１０ｍＭのホウ酸アンモニウムを含む、１１０ｍＭホウ酸アンモニウム水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）」とした。
１１０ｍＭのホウ酸アンモニウムを含む、１１０ｍＭホウ酸アンモニウム水溶液（ｐＨ８.０）を「第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）」とした。
【0257】
なお、後記の「３.測定」に記載のとおり、日立７１８０形自動分析装置で測定を行った場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸アンモニウムの濃度は、７１．７ｍＭであった。
【0258】
ｉｉ）第２試薬
前記実施例１の１の「ｉｉ）第２試薬」の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。
前記実施例１の１の「ｉｉ）第２試薬」の記載のとおりに行い、第２試薬を調製した。
【0259】
２．試料
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
前記実施例１の２の「ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）
前記実施例１の２の「ｉ）試料（ＨＭＧＢ１）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
【0260】
ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）
前記実施例１の２の「ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
前記実施例１の２の「ｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）」の記載のとおりに行い、「試料（ＨＭＧＢ１）」を調製した。
【0261】
ｉｉｉ）試料（生理食塩水）
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
生理食塩水［０.９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液］を、「試料（生理食塩水）」とした。
【0262】
３.測定
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
ｉ） 測定は日立７１８０形自動分析装置〔日立ハイテクノロジーズ社（日本国）〕を使用して行った。
【0263】
ｉｉ） 試料として前記２のｉ）試料（ＨＭＧＢ１）、前記２のｉｉ）試料（ＨＭＧＢ２）及び前記２のｉｉｉ）試料（生理食塩水）のそれぞれの２４μＬを用い、第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）の１２０μＬを用い、そして、第２試薬として前記１のｉｉ）の第２試薬の４０μＬを用い、２ポイント－エンド法にて前記試料に前記第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）を添加、混合し、３７℃で５分間静置後、前記第２試薬を添加、混合し、３７℃で５分間静置し、前記第２試薬添加後５分間の吸光度変化量の測定を行った。反応時間は計１０分間、測定波長は８００ｎｍにて行った。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
前記の試料（生理食塩水）の吸光度変化量を、試薬ブランク（試薬盲検）とした。
【0264】
次の計算式によりＨＭＧＢ２測り込み（％）を算出した。
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
ＨＭＧＢ２測り込み(％)＝［試料（ＨＭＧＢ２）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］÷［試料（ＨＭＧＢ１）測定時の吸光度変化量－試薬ブランク］
【0265】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸の濃度は、７１．７ｍＭである。
【0266】
ｉｉｉ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩ）第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0267】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存する三酸化二ホウ素（無水ホウ酸）の濃度は、７１．７ｍＭである。
【0268】
ｉｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＩＩ）第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0269】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するメタホウ酸ナトリウム四水和物の濃度は、７１．７ｍＭである。
【0270】
ｖ） 第１試薬として前記１のｉ）の（Ｉ）第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）に替えて前記１のｉ）の（ＩＶ）第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）を用いる他は、前記ｉｉ）の記載のとおりに実施し、第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）使用時のＨＭＧＢ２測り込み（％）を求めた。
【0271】
なお、この場合の試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時に共存するホウ酸アンモニウムの濃度は、７１．７ｍＭである。
【0272】
４．測定結果
前記３における測定の結果を、図３に示した。
前記３における測定の結果を、図３に示した。
【0273】
この図３において、縦軸はＨＭＧＢ２測り込み（％）の数値を示し、横軸は左側から順に第１試薬として、第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合、第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）を用いた場合、第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）を用いた場合、そして第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）を用いた場合をそれぞれ示す。
【0274】
（１）第１試薬として第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合
図３において、第１試薬として第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７.４％に抑えられていた。
図３において、第１試薬として第１試薬－１（７１．７ｍＭホウ酸）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７.４％に抑えられていた。
【0275】
（２）第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）を用いた場合
図３において、第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６.５％に抑えられていた。
図３において、第１試薬として第１試薬－２（７１．７ｍＭ三酸化二ホウ素）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６.５％に抑えられていた。
【0276】
（３）第１試薬として第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）を用いた場合
図３において、第１試薬として第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７.０％に抑えられていた。
図３において、第１試薬として第１試薬－３（７１．７ｍＭメタホウ酸ナトリウム四水和物）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、７.０％に抑えられていた。
【0277】
（４）第１試薬として第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）を用いた場合
図３において、第１試薬として第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．２％に抑えられていた。
図３において、第１試薬として第１試薬－４（７１．７ｍＭホウ酸アンモニウム）を用いた場合のＨＭＧＢ２測り込み（％）は、６．２％に抑えられていた。
【0278】
以上の測定結果からも、試料に含まれるＨＭＧＢ１を抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応を利用して測定を行う免疫学的測定方法又は免疫学的測定試薬において、試料に含まれていたＨＭＧＢ１と抗ＨＭＧＢ１抗体との抗原抗体反応時にホウ素及びその化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物を共存又は含有させることにより、ＨＭＧＢ２の測り込みを抑制することができることが確かめられた。
【図1】
【図2】
【図3】