特開 2024-122740 特発性後天性全身性無汗症治療薬及び特発性後天性全身性無汗症病態モデルマウス

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024122740

(43)【公開日】2024-09-09

(54)【発明の名称】特発性後天性全身性無汗症治療薬及び特発性後天性全身性無汗症病態モデルマウス

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20240902BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240902BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240902BHJP

   A01K 67/027 20240101ALI20240902BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P17/00

A61P37/02

A01K67/027

【審査請求】未請求

【請求項の数】6

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023030454

(22)【出願日】2023-02-28

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和４年４月１０日 第３４７回皮膚科学会長崎地方会にて公開 令和４年６月４日 第１２１回皮膚科学会総会にて公開 令和４年７月１１日 ＡＭＥＤ難治性疾患実用化研究事業２０２１年度成果報告会にて公開 令和４年１０月２６日 第７回ＡＭＥＤ－Ｆｌｕｘ（アカデミア医薬品シーズ開発推進会議）にて公開 令和４年１２月２日 日本研究皮膚科学会第４７回年次学術大会・総会にて公開

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和４年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構「難治性疾患実用化研究事業」、「高解像度３次元イメージングによる特発性後天性全身性無汗症の神経病態解析」委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願

(71)【出願人】

【識別番号】504179255

【氏名又は名称】国立大学法人 東京医科歯科大学

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】飯田 忠恒

(72)【発明者】

【氏名】並木 剛

(72)【発明者】

【氏名】井川 奈緒子

(72)【発明者】

【氏名】横関 博雄

【テーマコード（参考）】

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084NA14

4C084ZC541

4C084ZC542

(57)【要約】

【課題】ＡＩＧＡに有効な治療薬、及び、その研究に必要なＡＩＧＡ病態モデルマウスを提供する。
【解決手段】ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とする、特発性後天性全身性無汗症治療薬、及び、足底皮下に２５０μｇ／ｋｇ以上かつ１，０００μｇ／ｋｇ以下のリポポリサッカライドを投与して２日を経過したマウスである、特発性後天性全身性無汗症病態モデルマウス。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とする、特発性後天性全身性無汗症治療薬。

【請求項2】

前記阻害剤はＪＡＫ阻害剤である、請求項１に記載の特発性後天性全身性無汗症治療薬。

【請求項3】

前記阻害剤はＳＴＡＴ阻害剤である、請求項１に記載の特発性後天性全身性無汗症治療薬。

【請求項4】

前記阻害剤はＩＦＮγに対する阻害剤である、請求項１に記載の特発性後天性全身性無汗症治療薬。

【請求項5】

前記阻害剤はＩＬ－６に対する阻害剤である、請求項１に記載の特発性後天性全身性無汗症治療薬。

【請求項6】

足底皮下に２５０μｇ／ｋｇ以上かつ１，０００μｇ／ｋｇ以下のリポポリサッカライドを投与して２日を経過したマウスである、特発性後天性全身性無汗症病態モデルマウス。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、特発性後天性全身性無汗症治療薬及び特発性後天性全身性無汗症病態モデルマウスに関する。

【背景技術】

【0002】

運動時又は高温高湿環境下において発汗が生じない疾患は無汗症と称される。無汗症は大きく先天性無汗症と、後天性無汗症とに分類される。後天性無汗症のうち、特発性後天性全身性無汗症（Acquired Idiopathic Generalized Anhidrosis、以下「ＡＩＧＡ」と略す。）は、後天的に、明らかな原因がなく発汗が見られなくなり、低血圧などの他の自律神経異常及び神経学的以上を伴わない疾患と定義される。ＡＩＧＡ患者は発汗による体温調節が困難になるため、運動時又は高温高湿環境下で容易に体温が上昇し、熱中症になりやすい。

【0003】

ＡＩＧＡは指定難病１６３に指定されており、国内患者数は約１００～２００名とされている（非特許文献１、通し番号１３０、告示番号１６３）。また、ＡＩＧＡ患者には１０代から３０代の若い男性が多いとされている。ＡＩＧＡの原因は今のところ明らかではないが、ＡＩＧＡ患者はステロイドパルス療法（以下「ステロイド治療」と略す）により治療効果が見られるため、何らかの免疫学的機序が病態に関与している可能性が指摘されている（非特許文献２）。

【0004】

ＡＩＧＡ患者に対するステロイド治療では、約７割の患者が治療に反応して発汗面積の拡大が見られるものの、そのうち半数は１年以内に再燃すると報告されている（非特許文献３）。また、ステロイド治療による発汗面積の拡大は部分的にとどまる患者が半数以上とされる（非特許文献４）。しかし、ステロイド治療以外の治療法は確立されていない（非特許文献５）。

【0005】

病勢マーカーとして血清ＣＥＡの測定が有用である。これについては、患者の汗腺で病勢に応じてＣＥＡの発現が亢進するために、血清ＣＥＡが上昇するとの報告がある（非特許文献６）。

【0006】

ＡＩＧＡは疾患概念が日本以外ではあまり知られていないため、海外では未分類の無汗症や、発汗障害が見過ごされた結果、コリン性蕁麻疹と診断されていると考えられる。よって、潜在的には海外にも多数の患者が存在する可能性は高いと考えられる。実際、日本で治療ガイドラインが制定された２０１３年以降は、東アジアを中心に症例報告が増えている（非特許文献７）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】厚生労働省ホームページ「平成２７年７月１日施行の指定難病（告示番号１１１～３０６）」（https://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/0000079293.html）

【非特許文献2】Nakazato Y, Tamura N, Ohkuma A, Yoshimaru K, Shimazu K. Idiopathic pure sudomotor failure: anhidrosis due to deficits in cholinergic transmission. Neurology. 2004;63(8):1476-1480.

【非特許文献3】Iida T, Nakamura M, Inazawa M, et al. Prognosis after steroid pulse therapy and seasonal effect in acquired idiopathic generalized anhidrosis. J Dermatol. 2021;48(3):271-278.

【非特許文献4】Sano K, Asahina M, Uehara T, Matsumoto K, Araki N, Okuyama R. Degranulation and shrinkage of dark cells in eccrine glands and elevated serum carcinoembryonic antigen in patients with acquired idiopathic generalized anhidrosis. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2017;31(12):2097-2103.

【非特許文献5】Munetsugu T, Fujimoto T, Oshima Y, et al. Revised guideline for the diagnosis and treatment of acquired idiopathic generalized anhidrosis in Japan. J Dermatol. 2017;44(4):394-400.

【非特許文献6】Honma M, Iinuma S, Kanno K, et al. Serum carcinoembryonic antigen (CEA) as a clinical marker in acquired idiopathic generalized anhidrosis: a close correlation between serum CEA level and disease activity. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2016;30(8):1379-1383.

【非特許文献7】Cao R, Tey HL. Prognosis of acquired idiopathic generalized anhidrosis. J Dtsch Dermatol Ges. 2017;15(9):942-945.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本開示の実施態様は、ＡＩＧＡに有効な治療薬、及び、その研究に必要なＡＩＧＡ病態モデルマウスを提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本開示の実施態様のＡＩＧＡ治療薬は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とする。この阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤又はＳＴＡＴ阻害剤であることが望ましい。

【0010】

本開示の実施態様のＡＩＧＡ病態モデルマウスは、足底皮下に２５０μｇ／ｋｇ以上かつ１，０００μｇ／ｋｇ以下のリポポリサッカライド（以下、「ＬＰＳ」と略す。）を投与して２日を経過したマウスである

【発明の効果】

【0011】

本開示の実施態様によると、ＡＩＧＡに有効な治療薬、及び、その研究に必要なＡＩＧＡ病態モデルマウスを提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】ＡＩＧＡ患者及び健常者におけるＪＡＫ３発現を示すグラフである。

【図2】ＡＩＧＡ患者及び健常者におけるＳＴＡＴ１発現を示すグラフである。

【図3】ＡＩＧＡ患者における発現変動遺伝子の機能をパスウェイ解析した結果を示すグラフである。

【図4】ＡＩＧＡ患者と健常者との、汗腺周囲のマクロファージ密度の測定結果を示すグラフである。

【図5】ＬＰＳ投与前後のマウス足底の発汗量を比較したグラフである。

【図6】マウスの汗腺分泌細胞におけるＬＰＳによる遺伝子発現変動をシングルセルＲＮＡ－ｓｅｑにより観察した結果を示すグラフである。

【図7】ＡＩＧＡ患者の汗腺分泌細胞における遺伝子発現変動をシングルセルＲＮＡ－ｓｅｑにより観察した結果を示すグラフである。

【図8】ＡＩＧＡ病態モデルマウスにおけるＪＡＫ阻害試験結果を示すグラフである。

【図9】ＡＩＧＡ病態モデルマウスにおける各種ＪＡＫ阻害剤及びＳＴＡＴ阻害剤の効果を示すグラフである。

【図10】ＡＩＧＡ病態モデルマウスにおけるインターフェロンγ阻害の効果を示すグラフである。

【図11】ＡＩＧＡ病態モデルマウスにおけるインターロイキン６阻害の効果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本開示の実施形態に係る特発性後天性全身性無汗症（ＡＩＧＡ）治療薬は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とする。ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路は、細胞外からの化学シグナルを核に伝え、ＤＮＡの転写と発現を促す情報伝達系である。

【0014】

ＡＩＧＡ患者において、ＪＡＫ３遺伝子発現を解析したグラフが図１であり、ＳＴＡＴ１遺伝子発現を解析したグラフが図２である。健常者７名及びＡＩＧＡ患者２２名からそれぞれ摘出した汗腺組織のトータルＲＮＡを抽出した。抽出したトータルＲＮＡから、ＲＮＡ－ｓｅｑライブラリー調整キット（ＳＭＡＲＴ－ｓｅｑ（登録商標）Ｓｔｒａｎｄｅｄ Ｋｉｔ、タカラバイオ）でサンプルを調整した。調整したサンプルについて、次世代シーケンサー（Ｎｏｖａｓｅｑ ６０００ Ｓｙｓｔｅｍ、イルミナ）で１サンプルあたり１０００万リード（ペアエンド、１５０塩基長）以上の配列を取得した。この取得した配列をヒトゲノム配列上にマッピングして、全遺伝子発現量を算出したデータから、ＪＡＫ３遺伝子及びＳＴＡＴ１遺伝子を抜き出したものがそれぞれ図１及び図２に示すグラフである。各グラフの縦軸は該当する遺伝子のカウント数を、全遺伝子発現量のデータを用いて、ＴＣＣによる多段階正規化法（Sun J, Nishiyama T, Shimizu K, Kadota K. TCC: an R package for comparing tag count data with robust normalization strategies. BMC Bioinformatics. 2013;14:219. Published 2013 Jul 9.）を使用して患者間及び比較群間での補正を行った値を示している。

【0015】

図１及び図２のいずれのグラフにおいても、ＡＩＧＡ患者ではＪＡＫ３遺伝子及びＳＴＡＴ１遺伝子の発現が、健常者群に対して高い傾向が見られた。また、補正した遺伝子のカウント数を用いてｅｄｇｅＲ法（Robinson MD, McCarthy DJ, Smyth GK. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics. 2010;26(1):139-140.）での発現変動遺伝子の抽出（Ｆａｌｓｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒａｔｅ １０％未満を基準とした）を行った。その結果、ＪＡＫ３遺伝子及びＳＴＡＴ１遺伝子はいずれも、健常者よりもＡＩＧＡ患者で発現が増加する遺伝子として抽出された。

【0016】

以上より、ＡＩＧＡ患者ではＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化が起こっていることが示唆されたため、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤がＡＩＧＡ治療に有効であると推測される。このような阻害剤としては、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化を阻害する作用を有する物質であれば特に制限はされないが、具体的にはＪＡＫ阻害剤、ＳＴＡＴ阻害剤、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）阻害薬及びインターロイキン６（ＩＬ－６）阻害薬が特に有効であると推測される。ＪＡＫ阻害剤としては、たとえば、トファシチニブ（ファイザー）、バリチシニブ（イーライリリー）及びウパダシチニブ（アッヴィ）等が挙げられる。ＳＴＡＴ阻害剤としては、たとえば、Ｓｔａｔｔｉｃ（別名：ＳＴＡＴ３ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｖ）及びＣ１８８－９（別名：ＴＴＩ－１０１）等が挙げられる。ＩＦＮγ阻害薬としてはＩＦＮγ中和抗体、たとえばエマパルマブ（Novimmune SA）等が挙げられる。ＩＬ－６阻害薬としては抗ＩＬ－６受容体抗体、たとえばトシリズマブ（中外製薬）及びサリルマブ（サノフィ）等が挙げられる。

【0017】

また、上記のＡＩＧＡ治療薬の検索には、ＡＩＧＡ病態モデルマウスを使用した試験が有効と考えられる。後述するように、ＡＩＧＡ病態モデルマウスとしては、足底皮下に２５０μｇ／ｋｇ以上かつ１，０００μｇ／ｋｇ以下のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を投与して２日を経過したマウスを使用することができる。

【実施例0018】

（１）ＡＩＧＡ患者遺伝子解析
ＡＩＧＡ患者２２名及び健常者７名の比較から得られた発現変動遺伝子がどのような機能を持つものなのかをパスウェイ解析で調べた結果を図３に示す。なお、遺伝子発現量の定量と及び発現変動遺伝子の抽出方法は、前記図１及び図２の説明で述べた通りとした。抽出した発現変動遺伝子に対するパスウェイ解析には、Ｒｅａｃｔｏｍｅ ｐａｔｈｗａｙ ｄａｔａｂａｓｅ（Fabregat A, Jupe S, Matthews L, et al. The Reactome Pathway Knowledgebase. Nucleic Acids Res. 2018;46(D1):D649-D655.）を用いた。このグラフでは、棒グラフが長いほど遺伝子が当該機能に関与する可能性が高いことを示し、右方向は発現増加、左方向は発現低下を示す。その結果、患者群で発現が高かった遺伝子は、免疫系、特にＩＦＮγなどのサイトカインシグナル伝達に関与していることが示唆された。なお、ＩＦＮγなどのサイトカインシグナルにはＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路が関わることが知られる。

【0019】

ＩＦＮγはマクロファージの活性化因子であることから、ＡＩＧＡの病態にはマクロファージが関与していることが示唆された。ここで、発明者らが汗腺組織の切片を免疫蛍光染色で観察したところ、汗腺の周囲にはマクロファージが多く存在することが分かった。そして、健常者１１名及びＡＩＧＡ患者２３名の汗腺組織においてマクロファージの数の相違を観察した結果が図４のグラフである。なお、パラフィン切片上でのマクロファージの検出には抗Ｉｂａ１抗体（富士フィルム和光純薬）を用い、蛍光標識した二次抗体（ヤギ由来抗ウサギ抗体、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を反応させることで可視化し、蛍光顕微鏡で観察を行った。グラフの縦軸は高倍率視野当たりのマクロファージ数を示し、統計学的検定にはウェルチのｔ検定を用いて危険率５％未満で有意差を判断した。本図に示すように、患者群では健常者群に比べ、汗腺組織のマクロファージが有意に増加していることが分かった。これにより、ＡＩＧＡ患者ではマクロファージの活性化が発汗に影響を与えている可能性が示唆された。

【0020】

（２）ＡＩＧＡ病態モデルマウス
次に、ＡＩＧＡの病態を解析するために、ＡＩＧＡ病態モデルマウスの作出を試みた。マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、８週齢、オス）の足底皮下に、５００μｇ／ｋｇの投与量でＬＰＳ（リポポリサッカリド、大腸菌Ｏ１１１由来、富士フィルム和光純薬）を投与し、ヨウ素デンプン反応を利用した発汗の検出方法であるミノール法（Matsui S, Murota H, Takahashi A, et al. Dynamic analysis of histamine-mediated attenuation of acetylcholine-induced sweating via GSK3β activation. J Invest Dermatol. 2014;134(2):326-334.）にて経時的に足底の発汗を観察した。なお、ＬＰＳはＴｏｌｌ―Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ４を介してマクロファージなど単球系の免疫細胞を活性化することが知られる。

【0021】

具体的には、全身麻酔下（塩酸メデトミジン０．７５ｍｇ／ｋｇ、ミタゾラム４ｍｇ／ｋｇ、酒石酸アチバメゾール５ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与）のマウス足底にポピドンヨードを塗布し乾燥させたのち、オリーブ油１ｍＬにコーンスターチ０．５ｇを懸濁した液体を塗布した状態で、ピロカルピン３ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与し、その１０分後に足底を実体顕微鏡で撮影するという手順で行い、撮影した画像を用いて足底に見られる黒点を数えることで、発汗量を評価した。

【0022】

図５は、ＬＰＳの投与前及び投与後２日後の発汗量を７頭のマウスで比較したグラフである。このグラフから分かるように、投与後２日後の発汗量は投与前に比べ有意に（ｐ＜０．００５）低下した。このことから、ＡＩＧＡ病態モデルマウスでは、足底へのＬＰＳ投与により、足底の局所的に免疫系（特にマクロファージ）が活性化し、それによって発汗の抑制が生ずることが示唆された。

【0023】

次に、マウスの汗腺分泌細胞において、ＬＰＳによってどういう遺伝子の発現に変動があったのかをシングルセルＲＮＡ－ｓｅｑにより観察したのが図６である。具体的には、シングルセルＲＮＡ－ｓｅｑは、マウスの足底から汗腺を周囲組織とともに採取し、酵素処理により単細胞懸濁液を作成したのち、ＢＤ Ｒｈａｐｓｏｄｙ Ｗｈｏｌｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び次世代シーケンサー（Ｈｉｓｅｑ Ｘ Ｓｙｓｔｅｍ、イルミナ）を用いて１細胞あたり２万リード（ペアエンド、１５０塩基長）以上のｍＲＮＡ配列を取得し、これをマウスゲノム配列上にマッピングして全遺伝子発現量を算出することで行った。

【0024】

各細胞の細胞種の推定は、細胞間での発現変動が大きかった上位２０００遺伝子の発現パターンを基に、解析ツールＳｅｕｒａｔ ４．０を用いて行い、汗腺分泌細胞に特異的なマーカー分子であるＡＱＰ５遺伝子の発現を指標に、汗腺分泌細胞を同定した。図６は、縦軸に示す各遺伝子について、ＬＰＳを投与していないマウス及びＬＰＳ投与２日後のマウスそれぞれ３頭から得られた汗腺細胞における１細胞あたりの平均発現量の比（ｌｏｇ２ ｆｏｌｄ－ｃｈａｎｇｅ）を横軸に示したもので、０より大きい場合（右に伸長する棒グラフ）はＬＰＳ投与後のマウスで発現が上昇し、０より小さい場合（左に伸長する棒グラフ）はＬＰＳ投与後のマウスで発現が低下したことを示す。

【0025】

その結果、図６に示すように、汗腺分泌細胞において、ＡＩＧＡの疾患マーカー遺伝子であるＣＥＡの、マウスでのオルソログであるＣｅａｃａｍ１の発現が、ＬＰＳ投与マウスでは上昇している。なお、図７は、ＡＩＧＡ患者２名及び健常者５名の汗腺分泌細胞における遺伝子発現の比をシングルセルＲＮＡ－ｓｅｑにより観察した結果を示すグラフである。図６と図７とを比較すると、ＬＰＳ投与マウスではＡＩＧＡ患者と同様に、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２及びＳＴＡＴ３を主とした遺伝子の活性化が見られた。さらに、汗腺分泌細胞からの汗の分泌に関係が予想されるイオンチャネルの制御分子ＦＸＹＤ３（マウスでのオルソログＦｘｙｄ３）や、細胞のエネルギー源であるアデノシン三リン酸合成に関わる解糖系酵素ＡＬＤＯＡ（マウスでのオルソログＡｌｄｏａ）の発現が、ＡＩＧＡ患者と同様に、ＬＰＳ投与マウスでは減少した。よって、本開示のＡＩＧＡ病態モデルマウスでは、ＡＩＧＡ患者とかなり似た病態が示されており、ＡＩＧＡを模した新しい無汗症の疾患動物モデルとして有用であることが示唆された。

【0026】

次いで、このＡＩＧＡ病態モデルマウスを用いて、ＡＩＧＡ治療薬として有用と考えられる物質を検索した。まず、汎ＪＡＫ阻害剤として知られるトファシチニブの効果を調べた。マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、８週齢、オス）の背部皮下に浸透圧ミニポンプを埋め込み、１５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でトファシチニブ（Ａｄｉｐｏｇｅｎ）を、投与開始日を第１日として第４日までの３日間（７２時間）、持続投与した。その間、第２日に、足底皮下に５００μｇ／ｋｇの投与量でＬＰＳ（リポポリサッカリド、大腸菌Ｏ１１１由来、富士フィルム和光純薬）を投与した。そして、ＬＰＳ投与前（第１日）とＬＰＳ投与２日後（第４日）に、前記したミノール法にて足底の発汗を観察した。本実験は、トファシチニブもＬＰＳも投与しない対照群７頭（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＬＰＳのみを投与した群７頭（ＬＰＳ）並びにＬＰＳ及びトファシチニブを投与した群６頭（ＬＰＳ＋Ｔｏｆ）のマウスについて実施した。その結果を図８のグラフに示す。なお、本図の縦軸は、第４日の発汗量を、第１日の発汗量で除した値を表す。統計学的検定はウェルチのｔ検定を用い、ボンフェローニ法で多重比較の補正を行った。

【0027】

その結果、ＬＰＳ群は対照群に比べ有意な発汗の低下が見られたのは前記図５に示した結果と同様であったが、ＬＰＳ＋Ｔｏｆ群で、有意な発汗の回復が認められた。

【0028】

なお、図８に示した実験方法と同様にして、トファシチニブに加えて、ＪＡＫ阻害剤として知られるバリシチニブ（Ａｄｉｐｏｇｅｎ）及びウパダシチニブ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓ）の効果も観察した。各薬剤のマウスへの皮下持続投与量は、トファシチニブは１５ｍｇ／ｋｇ／日、バリシチニブは２０ｍｇ／ｋｇ／日、ウパダシチニブは６ｍｇ／ｋｇ／日とした。また、ＳＴＡＴ３阻害剤として知られるＳｔａｔｔｉｃ（ａｂｃａｍ）及びＣ１８８－９（Ｍｅｒｃｋ）の各薬剤の効果も観察した。各薬剤のマウスへの皮下持続投与量は、Ｓｔａｔｔｉｃは１０ｍｇ／ｋｇ／日、Ｃ１８８－９は２５ｍｇ／ｋｇ／日とした。

【0029】

ＬＰＳのみを投与した群１２頭、ＬＰＳ及びにバリシチニブを投与した群５頭、ＬＰＳ及びウパダシチニブを投与した群６頭、ＬＰＳ及びにＳｔａｔｔｉｃを投与した群７頭、ＬＰＳ及びＳｔａｔｔｉｃを投与した群６頭の結果を図９に示す。なお、本図の縦軸は、図８と同様、第４日の発汗量を、第１日で除した値を表す。統計学的検定はマン・ホイットニーのＵ検定を用い、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法で多重比較の補正を行った。

【0030】

その結果、いずれの薬剤についても、ＬＰＳ群に対して有意な発汗の回復が認められた。以上より、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とする薬剤、特にＪＡＫ阻害剤又はＳＴＡＴ阻害剤が、ＡＩＧＡ治療薬として有用であることが示唆された。なお、トファシチニブはＪＡＫ１、ＪＡＫ２及びＪＡＫ３のいずれも阻害し、バリシチニブはＪＡＫ１及びＪＡＫ２への阻害作用は高いものの、ＪＡＫ３の阻害作用は低く、そしてウパダシチニブはＪＡＫ１を阻害することが知られている（T Virtanen A, Haikarainen T, Raivola J, Silvennoinen O. Selective JAKinibs: Prospects in Inflammatory and Autoimmune Diseases. BioDrugs. 2019;33(1):15-32.）。よって、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とするＡＩＧＡ治療薬として、少なくともＪＡＫ１又はＳＴＡＴ３を含む経路を阻害することが有効であることが示唆された。

【0031】

なお、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の上流に位置するサイトカインのうち、ＩＦＮγ及びＩＬ－６のＡＩＧＡへの関与を、今回のＡＩＧＡ病態モデルマウスを使用して検索した。なお、ＩＦＮγはＪＡＫ１及びＪＡＫ２を介してＳＴＡＴ１を活性化させることが知られ、ＩＬ－６はＪＡＫ１及びＴＹＫ２を介してＳＴＡＴ３を活性化させることが知られている（Tanaka Y, Luo Y, O'Shea JJ, Nakayamada S. Janus kinase-targeting therapies in rheumatology: a mechanisms-based approach. Nat Rev Rheumatol. 2022;18(3):133-145.）。

【0032】

具体的には、抗ＩＦＮγ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩＦＮγ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）又は抗ＩＬ－６受容体抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩＬ－６Ｒ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を投与して、又はコントロール用に抗Ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ＫＬＨ）抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ ｒａｔ ＩｇＧ２b ｉｓｏｔｙｐｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｔｉ－ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を２日間隔で２回投与し（第１日と第３日）、第２日にＬＰＳの足底皮下投与を同時に行った。ミノール法による発汗量の評価は薬剤投与開始前（第１日）と、ＬＰＳ投与２日後（第４日）に行った。

【0033】

ＬＰＳと抗ＫＬＨ抗体を投与した群７頭と、ＬＰＳと抗ＩＦＮγ抗体を投与した群６頭との結果を図１０に示す。また、ＬＰＳと抗ＫＬＨ抗体を投与した群６頭と、ＬＰＳと抗ＩＬ－６受容体抗体を投与した群６頭の結果を図１１に示す。なお、両図の縦軸は、ＬＰＳ投与２日後の発汗量を、ＬＰＳ投与前の発汗量で除した値を表す。統計学的検定はマン・ホイットニーのＵ検定を用いた。

【0034】

その結果、図１０に示すように、抗ＩＦＮγ抗体の投与で有意な発汗の回復が見られた。また、図１１に示すように、抗ＩＬ－６受容体抗体の投与でも有意な発汗の回復が見られた。以上より、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害剤を有効成分とするＡＩＧＡ治療薬として、ＩＦＮγ阻害薬及びＩＦＮγの下流で働くＪＡＫ１、ＪＡＫ２及びＳＴＡＴ１、又はＩＬ－６阻害薬及びＩＬ－６の下流で働くＪＡＫ１、ＴＹＫ２、ＳＴＡＴ３を含む経路を阻害することが有効であることが示唆された。

【産業上の利用可能性】

【0035】

本発明は、ＡＩＧＡ治療薬及びＡＩＧＡ病態モデルマウスとして利用可能である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】